JP2012504697A

JP2012504697A - 疎水性アルコール誘導体により置換されたカルボキシル官能基を含有する多糖類

Info

Publication number: JP2012504697A
Application number: JP2011530586A
Authority: JP
Inventors: スーラ，レミ; スーラ，オリビエ; スーラ，ジエラル; シヤルベ，リシヤル
Original assignee: アドシア
Priority date: 2008-10-06
Filing date: 2009-10-06
Publication date: 2012-02-23
Anticipated expiration: 2029-10-06
Also published as: CN102216334B; FR2936800A1; BRPI0914008A2; AU2009302160A1; CA2739546A1; EP2344547B1; CA2739546C; RU2011118338A; CN102216334A; FR2936800B1; MX2011003650A; JP5695568B2; IL212165A; PL2344547T3; WO2010041119A1; EP2344547A1; ZA201103176B; IL212165A0; KR20110067157A; KR101587521B1

Abstract

【課題】疎水性アルコール誘導体により置換されたカルボキシル官能基を含有する多糖類を提供する。
【解決手段】本発明は、少なくとも１つが疎水性アルコール誘導体により置換された複数のカルボキシル官能基を含有する多糖類に関する。本発明はまた、本発明の多糖類の１種及び少なくとも１種の活性成分を含有する医薬組成物にも関する。本発明はさらに、前記活性成分が、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド及び非ペプチド治療用分子からなる群より選択されることを特徴とする医薬組成物にも関する。本発明はまた、上記医薬組成物を製造するための、本発明の官能化された多糖類の使用にも関する。
【選択図】なし

Description

本発明は、特に、治療及び／又は予防目的のための、ヒト又は動物に対する活性成分（群）（ＡＰ（ｓ））の投与のために使用し得る、カルボキシル官能基を含有する多糖類をベースとした新規な生体適合性のポリマーに関する。

疎水性アルコールは、特にその生体適合性、及びそれがグラフトされるポリマーの疎水性を調節できるその疎水性のため、医薬成分の製剤において有利である。

それらの生体適合性は、多数の生化学的過程において役立ち、そして大部分の組織においてエステル化形態で存在する限り、優れている。

Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ，Ｓ．他，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｐｏｌｙｍ．，２０００，４３，３４３−３４９Ｄｅｌｌａｃｈｅｒｉｅ，Ｅｄｉｔｈ他，Ｌａｎｇｍｕｉｒ，２００１，１７，１３８４−１３９１Ｎｉｃｈｉｆｏｒ，Ｍａｒｉｅｔａ他，Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．，１９９９，３５，２１２５−２１２９Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２００７，８，２３６６−２３７３Ｈｅｉｎｚｅ，Ｔｈｏｍａｓ他，Ａｄｖ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，２００６，２０５，１９９−２９１

しかしながら、多糖類のヒドロキシル官能基と疎水性アルコールのヒドロキシル官能基との間を選択性とすることは困難であるため、カルボキシル官能基を含有する多糖類にアルコールをグラフトすることは困難であることが当業者に既知である。ポリマーのアルコールの保護／脱保護のための技術に頼らなければ、グラフト中にポリマーのアルコールがグラフトのアルコールと競合してしまい、そしてこの副反応がポリマー鎖の架橋を起こすだろう。従って、今まで、コレステロールのような有利な疎水性アルコールは、カルボキシル官能基を含有する多糖類にグラフトされ得なかった。

Ｄｅｌｌａｃｈｅｒｉｅ他は、アルキルα−ハライド、ブロモドデカン及びブロモオクタデカンを用いた合成法によって、多糖類の、即ち、アルギネートの、ヒアルロネートの（非特許文献１）又はガラクツロナンの（非特許文献２）エステルを開発した。それらエステルの合成は、テトラブチルアンモニウムカルボキシレートによってハライドを置換することから成る。かかる方法は、疎水性アルコールのエステルを得ることを可能にするが、求核置換を受け得るハロゲン化アルキル誘導体に限定される。従ってこの方法は、コレステロールのような疎水性アルコールをグラフトするのに使用され得ない。さらには、これらハロゲン化誘導体は毒性の危険性を示し、そしてそのため、医薬製品の開発において使用するには安全ではない。

他の研究者は、疎水性アルコールの代わりに疎水性酸をグラフトすることによって、この困難を克服した。Ｎｉｃｈｉｆｏｒ他は、例えば、デキストランアルコールに対して直接にグラフトするために、ステロイド誘導体であるコール酸を用いた（非特許文献３）。この方法は、多糖類のアルコールと反応し得るカルボン酸誘導体を用いることによって、コレステロールの問題を克服するものである。しかしながら、コール酸は、コレステロールとは対照的に、注射についてＦＤＡによって承認されておらず、かかる方策は、カルボキシル官能基を含有する多糖類について使用され得ない。

他の研究者は、疎水性アルコールをグラフトすることを可能とするために、非アニオン性多糖類を使用した。例えば、秋吉他は、求核性であるコレステロールを、求電子性誘導体へと転換した（非特許文献４）。このコレステロールの求電子性誘導体は、中性多糖類であるプルラン又はマンナンのアルコール官能基にグラフトし得る。かかる方策もまた、カルボキシル官能基を含有する多糖類について使用され得ない。

官能性デキストランをベースとしたポリマーの最近の研究（非特許文献５）が、疎水性酸による変性を報告しているが、とりわけ、疎水性アルコールにより官能化されたデキストランについて報告していない。

本発明は、少なくとも１つの疎水性アルコール誘導体により部分的に置換されたカルボキシル官能基を含有する新規な両親媒性多糖類の誘導体に関する。カルボキシル官能基を含有するこの新規な多糖類誘導体は、良好な生体適合性を有しており、そしてその疎水性は、生体適合性に悪影響することなくたやすく調節され得る。

本発明はまた、上記合成上の課題を解決し得る合成法にも関する。本方法によって、例えばコレステロールを含む疎水性アルコールにより部分的に置換されたカルボキシル官能基を包含する多糖類を得ることが可能となる。

本発明は従って、少なくとも１つが疎水性アルコール（ＨＡと記す）誘導体により置換された複数のカルボキシル官能基を含有する多糖類であって、
前記アルコール（ＨＡ)は、カップリングアームＲを介してアニオン性多糖類にグラフトするか又は結合しており、前記カップリングームは、官能基Ｆを介して前記アニオン性多糖類に結合しており、前記官能基Ｆは、前記結合アームＲのアミン官能基と前記アニオン性多糖類のカルボキシル官能基との間のカップリング由来のものであり、そして前記カップリングアームは、そのカルボキシル官能基、イソシアネート官能基、チオ酸官能基又はアルコール官能基と、前記疎水性アルコールの官能基との間のカップリング由来の官能基Ｇを介して前記疎水性アルコールに結合しており、前記アニオン性多糖類の未置換のカルボキシル官能基は、カルボン酸カチオン塩の形態にあり、前記カチオンは、好ましくはＮａ^＋又はＫ^＋のようなアルカリ金属であり、
Ｆは、アミド官能基であり、
Ｇは、エステル官能基、チオエステル官能基、カーボネート官能基又はカルバメート官能基であり、
Ｒは、枝分れ状であっても、及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を含有していてもよく、そして少なくとも１つの酸官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を含有する鎖を表し、
ＨＡは、疎水性アルコールの残基であって、該疎水性アルコールのヒドロキシル官能基と、基Ｒにより保有される少なくとも１つの求電子性官能基との間のカップリングの生成物であり、
前記多糖類は、中性ｐＨにおいて両親媒性であるカルボキシル官能基を含有するものである、多糖類に関する。

一の態様において、Ｇはエステル官能基である。

本発明に従うと、疎水性アルコールにより部分的に置換されたカルボキシル官能基を含有する前記多糖類は、一般式Ｉ：

［式中、
ｎは、Ｆ−Ｒ−Ｇ−ＨＡにより置換された多糖類のカルボキシル官能基のモル分率を表すものであって、０．０１ないし０．７であり、
Ｆ、Ｒ、Ｇ及びＨＡは、上記定義に対応しており、且つ、前記多糖類のカルボキシル官能基がＦ−Ｒ−Ｇ−ＨＡにより置換されていない場合、前記多糖類のカルボキシル官能基（群）は、カルボン酸カチオンであって、前記カチオンは、好ましくは、Ｎａ^＋又はＫ^＋のようなアルカリ金属である］
で表される、カルボキシル官能基を含有する多糖類より選択される。

一の態様において、カルボキシル官能基を含有する前記多糖類は、カルボキシル官能基を天然に保有する多糖類であって、アルギネート、ヒアルロナン及びガラクツロナンから成る群より選択される。

一の態様において、カルボキシル官能基を含有する前記多糖類は、一般式ＩＩ：

［式中、
天然多糖類は、大部分が（１，６）型及び／又は（１，４）型及び／又は（１，３）型及び／又は（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類群より選択され、
Ｌは、結合アームＱと、前記多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであって、エステル官能基、チオエステル官能基、カーボネート官能基、カルバメート官能基又はエーテル官能基であり、
ｉは、前記多糖類の糖単位当りのＬ−Ｑ置換基のモル分率を表し、
Ｑは、枝分れ状であっても、及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を含有していてもよく、そして少なくとも１つのカルボキシル官能基−ＣＯ_２Ｈを有する１ないし１８個の炭素原子を含有する鎖を表す］
で表される、１００の糖単位当り少なくとも１５のカルボキシル官能基がグラフトされた、カルボキシル官能基を天然に含有する多糖類から得られるか、又は中性多糖類から得られる合成多糖類である。

一の態様において、ｎは、０．０５ないし０．５である。

一の態様において、多糖類は、大部分が（１，６）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成るものである。

一の態様において、前記大部分が（１，６）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、デキストランである。

一の態様において、多糖類は、大部分が（１，４）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成るものである。

一の態様において、前記大部分が（１，４）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、プルラン、アルギネート、ヒアルロナン、キシラン、ガラクツロナン及び水溶性セルロースから成る群より選択される。

一の態様において、多糖類は、プルランである。

一の態様において、多糖類は、アルギネートである。

一の態様において、多糖類は、ヒアルロナンである。

一の態様において、多糖類は、キシランである。

一の態様において、多糖類は、ガラクツロナンである。

一の態様において、多糖類は、水溶性セルロースである。

一の態様において、多糖類は、大部分が（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成るものである。

一の態様において、前記大部分が（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、カードランである。

一の態様において、多糖類は、大部分が（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成るものである。

一の態様において、前記大部分が（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、イヌリンである。

一の態様において、多糖類は、大部分が（１，４）型及び（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成るものである。

一の態様において、前記大部分が（１，４）型及び（１，３）のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、グルカンである。

一の態様において、多糖類は、大部分が（１，４）型及び（１，３）型及び（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成るものである。

一の態様において、前記大部分が（１，４）型及び（１，３）及び（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、マンナンである。

一の態様において、本発明に従う多糖類の基Ｑは、下記基：

より選択される。

一の態様において、ｉは、０．１ないし２である。

一の態様において、ｉは、０．２ないし１．５である。

一の態様において、本発明に従う基Ｒは、アミノ酸より選択されることを特徴とする。

一の態様において、前記アミノ酸は、α−アミノ酸より選択される。

一の態様において、前記α−アミノ酸は、天然のα−アミノ酸より選択される。

一の態様において、前記天然のα−アミノ酸は、ロイシン、アラニン、イソロイシン、グリシン、フェニルアラニン、トリプトファン又はバリンより選択される。

一の態様において、疎水性アルコールは、脂肪アルコールより選択される。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、飽和の又は不飽和の、及び枝分れ状の又は枝分れしていない４ないし１８個の炭素原子を含有するアルキル鎖から成るアルコールより選択される。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、飽和の又は不飽和の、及び枝分れ状の又は枝分れしていない６ないし１８個の炭素原子を含有するアルキル鎖から成るアルコールより選択される。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、飽和の又は不飽和の、及び枝分れ状の又は枝分れしていない８ないし１６個の炭素原子を含有するアルキル鎖から成るアルコールより選択される。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、オクタノールである。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、２−エチルブタノールである。

一の態様において、前記脂肪アルコールは、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、セテアリルアルコール、ブチルアルコール、オレイルアルコール又はラノリンより選択される。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、コレステロール誘導体より選択される。

一の態様において、前記コレステロール誘導体は、コレステロールである。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、メントール誘導体より選択される。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、ラセミ体形態にあるメントールである。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、メントールのＤ異性体である。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、メントールのＬ異性体である。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、トコフェロールより選択される。

一の態様において、前記トコフェロールは、α−トコフェロールである。

一の態様において、前記α−トコフェロールは、α−トコフェロールのラセミ化合物である。

一の態様において、前記トコフェロールは、α−トコフェロールのＤ異性体である。

一の態様において、前記トコフェロールは、α−トコフェロールのＬ異性体である。

一の態様において、前記疎水性アルコールは、アリール基を保有するアルコールより選択される。

一の態様において、前記アリール基を保有するアルコールは、ベンジルアルコール又はフェネチルアルコールより選択される。

多糖類は、１０ないし１００００の重合度ｍを有し得る。

一の態様において、多糖類は、１０ないし１０００の重合度ｍを有し得る。

別の態様において、多糖類は、１０ないし５００の重合度ｍを有し得る。

本発明はまた、本発明に従い部分的に置換されたカルボキシル官能基を含有する多糖類の合成に関する。

前記合成は、アミノ中間体ＨＡ−Ｇ−Ｒ−ＮＨ_２又はアンモニウム塩ＨＡ−Ｇ−Ｒ−ＮＨ_３ ^＋であって、その対イオンが、ハロゲン化物塩、硫酸塩、スルホン酸塩又はカルボン酸塩より選択されるアニオンであるものを得る段階、及びかかるアミノ中間体を、多糖類のカルボキシル官能基にグラフトする段階を含み、ここで、Ｒ、Ｇ及びＨＡは上記定義に対応する。

一の態様において、１００の糖単位当り少なくとも１５のカルボキシル官能基によって多糖類を官能化する段階は、式Ｑ−Ｌ’（Ｌ’は無水物官能基、ハライド官能基、カルボン酸官能基、チオ酸官能基又はイソシアネート官能基を表す）で表される化合物を、多糖類の１００の糖単位当り少なくとも１５のアルコール官能基にグラフトすることにより行われ、ここで、Ｑ及びＬは、上記定義に対応する。

一の態様において、式ＨＡ−Ｇ−Ｒ−ＮＨ_２又はＨＡ−Ｇ−Ｒ−ＮＨ_３ ^＋で表されるアミノ中間体は、Ｇ’−Ｒ−ＮＨ_２（Ｇ’は、カルボン酸、イソシアネート、チオ酸又はアルコール官能基を表す）で表される化合物と、疎水性アルコールのアルコール官能基との反応により得られ、ここで、Ｒ、Ｇ及びＨＡは、上記定義に対応する。

必要であれば、前記アミノ中間体を得るための段階において、ペプチド合成の当業者に既知である保護／脱保護技術が使用される。

好ましくは、前記アミノ中間体を多糖類の酸官能基にグラフトする段階は、有機媒体中で行われる。

本発明はまた、上記の医薬組成物の製造における本発明に従う官能化された多糖類の使用にも関する。

本発明はまた、上記の本発明に従う多糖類の１種及び少なくとも１種の活性成分を含有する医薬組成物にも関する。

本発明はまた、活性成分が、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド及び非ペプチド治療用分子から成る群より選択される、上記の発明に従う医薬組成物にも関する。

活性成分は、単一の化学的成分の形態にあるか、又は生理活性を有する組み合わせの形態にある生成物を意味するものと理解される。前記活性成分は、外因性であり得、即ち、本発明に従う組成物によって導入されるものである。それはまた、例えば、治療の初期段階中に創傷中に分泌され、そして本発明に従う組成物によって前記創傷上で保持され得る内因性の成長因子であり得る。

標的とされる病状に応じて、それは、局所的又は全身的治療が意図される。

局所的又は全身的放出の場合、予測される投与法は、静脈内、皮下、皮内、経皮、筋肉内、経口、鼻腔、膣内、眼球、口腔又は肺経由等による。

本発明に従う医薬組成物は、液体形態、水溶液、又は粉末、インプラント又はフィルム形態にある。それらはさらに、当業者に既知の慣用の医薬用賦形剤を含有する。

病状及び投与法に応じて、医薬組成物は、ゲル、スポンジ、注射液、飲用液、凍結乾燥されたタブレット等の形態でそれらを処方することを可能にさせる賦形剤を、さらに有利に含有し得る。

本発明はまた、ステント、フィルム又は移植可能な生体材料のコーティング、又はインプラントの形態で投与され得る、上記の本発明に従う医薬組成物にも関する。

実施例１：ロイシン酸コレステロールにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、ロイシン酸コレステロール・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

およそ４０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（フルカ（Ｆｌｕｋａ））の８ｇ（即ち、ヒドロキシル官能基１４８ｍｍｏｌ）を水中に溶解して、４２ｇ／Ｌとした。１０ＮＮａＯＨの１５ｍＬ（１４８ｍｍｏｌのＮａＯＨ）を、かかる溶液に添加した。該混合物を３５℃に上げ、そしてその後、クロロ酢酸ナトリウムの２３ｇ（１９８ｍｍｏｌ）を添加した。反応媒体の温度を、０．５℃／分にて６０℃まで上げ、そしてその後、６０℃にて１００分間維持した。該反応媒体を２００ｍＬの水で希釈し、酢酸で中和し、そして６倍量の水に対する５ｋＤＰＥＳメンブランによる限外濾過によって精製した。乾燥抽出物により最終溶液を定量的に測定して、ポリマー濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によって定量的に測定して、メチルカルボキシレートによる置換度を決定した。

乾燥抽出物に従うと：［ポリマー］＝３１．５ｍｇ／ｇであった。

酸／塩基滴定に従うと：メチルカルボキシレート官能基によるヒドロキシル官能基の置換度は、糖単位当り１．０４であった。

ナトリウムデキストランメチルカルボキシレート溶液を、プロライト（Ｐｕｒｏｌｉｔｅ）樹脂（アニオン性）に通して、デキストランメチルカルボン酸を得、それをその後、１８時間凍結乾燥した。

デキストランメチルカルボン酸の８ｇ（即ち、メチルカルボン酸官能基の３７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に溶解して、４５ｇ／Ｌとし、そしてその後、０℃に冷却した。ロイシン酸コレステロール・パラ−トルエンスルホン酸塩の０．７３ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に懸濁して、１００ｇ／Ｌとした。トリエチルアミンの０．１１ｇ（１ｍｍｏｌ）をその後、かかる懸濁液に添加した。一旦、ポリマー溶液を０℃とし、ＮＭＭの０．１０９ｇ（１ｍｍｏｌ）及びＥｔＯＣＯＣｌの０．１１７ｇ（１ｍｍｏｌ）をその後添加した。１０分間の反応後、ロイシン酸コレステロール懸濁液を添加した。該媒体をその後、４℃にて１５分間維持した。該媒体をその後、３０℃に加熱した。該媒体をその後、一旦３０℃にて、激しく攪拌しながら、ＮＭＭの３．７６ｇ（３７ｍｍｏｌ）の５ｇ／Ｌ溶液に入れた。該溶液を、０．９％ＮａＣｌ溶液の１０倍容量、そしてその後の５倍容量の水に対する１０ｋＤのＰＥＳメンブランに通して限外濾過した。ポリマー溶液の濃度を、乾燥抽出物にて決定した。溶液のフラクションを凍結乾燥し、そしてＤ_２Ｏでの^１ＨＮＭＲにより解析して、ロイシン酸コレステロールアミドに転換した酸官能基の度合いを決定した。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝１２．９ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのロイシン酸コレステロールにより変性された酸のモル分率は、０．０３であった。

実施例２：ロイシン酸コレステロールにより変性されたナトリウムデキストランスクシネートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、ロイシン酸コレステロール・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃｈａｖｅｓ他による論文（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃｈｅｖｅｓ，Ｍａｎｕｅｌ他，Ｐｏｌｙｍｅｒ，１９９８，３９（１３），２７５１−２７５７）に記載の方法に従い、ナトリウムデキストランスクシネートをデキストラン４０から得た。Ｄ_２Ｏ／ＮａＯＤでの^１ＨＮＭＲに従うと、糖単位当りの酸官能基の度合い（ｉ）は１．４６であった。

ナトリウムデキストランスクシネート溶液を、プロライト樹脂（アニオン性）に通して、デキストランコハク酸を得、それをその後、１８時間凍結乾燥した。

デキストランコハク酸の７．１ｇ（２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に溶解して、４４ｇ／Ｌとした。該溶液を０℃に冷却した。ロイシン酸コレステロール・パラ−トルエンスルホン酸塩の０．７７ｇ（１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に懸濁して、１００ｇ／Ｌとした。トリエチルアミン（ＴＥＡ）の０．１２ｇ（１ｍｍｏｌ）をその後、かかる懸濁液に添加した。一旦、ポリマー溶液を０℃とし、ＮＭＭの０．１１６ｇ（１ｍｍｏｌ）及びＥｔＯＣＯＣｌの０．１２４ｇ（１ｍｍｏｌ）をその後添加した。１０分間の反応後、ロイシン酸コレステロール懸濁液を添加した。該媒体をその後、４℃にて１５分間維持した。該媒体をその後、３０℃に加熱した。該媒体をその後、一旦３０℃にて、激しく攪拌しながら、ＮＭＭの３．３９ｇ（３３ｍｍｏｌ）の５ｇ／Ｌ溶液に入れた。該溶液を、０．９％ＮａＣｌ溶液の１０倍容量、そしてその後の５倍容量の水に対する１０ｋＤのＰＥＳメンブランに通して限外濾過した。ポリマー溶液の濃度を、乾燥抽出物にて決定した。溶液のフラクションを凍結乾燥し、そしてＤ_２Ｏでの^１ＨＮＭＲにより解析して、ロイシン酸コレステロールアミドに転換した酸官能基の度合いを決定した。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝１７．５ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのロイシン酸コレステロールにより変性された酸のモル分率は、０．０５であった。

実施例３：ロイシン酸コレステロールにより変性されたナトリウムプルランスクシネートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、ロイシン酸コレステロール・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

およそ１００ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するプルラン（フルカ）の１０ｇをＤＭＳＯ中に６０℃にて溶解して、４００ｍｇ／ｇの濃度とした。かかる溶液を、４０℃にて平衡化し、そしてその後、９．２７ｇの無水コハク酸を含有するＤＭＦ溶液（３７１ｇ／Ｌ）と、９．３７ｇのＮＭＭを含有するＤＭＦ溶液（３７５ｇ／Ｌ）の２種の溶液を、該プルラン溶液に添加した。反応時間を、ＮＭＭ溶液の添加から２４０分とした。こうして得られた溶液を、１Ｌの水中に希釈し、そして０．９％塩化ナトリウム溶液、そしてその後の２倍の蒸留水に対する１０ｋＤのＰＥＳメンブランに通して限外濾過した。乾燥抽出物により最終溶液中のナトリウムプルランスクシネートの濃度を決定し、そして乾燥生成物を、Ｄ_２Ｏ／ＮａＯＤでの^１ＨＮＭＲにより解析して、糖単位当りのコハク酸エステルに転換したヒドロキシル官能基の度合いを決定した。

乾燥抽出物に従うと：［プルランスクシネート］＝１５．８ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのコハク酸ナトリウムを保有するアルコールのモル分率は、１．３５であった。

ナトリウムプルランスクシネート溶液を、プロライト樹脂（アニオン性）により酸性化し、そしてその後、１８時間凍結乾燥した。

プルランコハク酸の５ｇをＤＭＦ中に溶解して、５１ｇ／Ｌとした。該溶液を０℃に冷却した。ＮＭＭの０．０８ｇ及びＥｔＯＣＯＣｌの０．０８ｇをその後添加した。１０分間の反応後、５．１ｍＬのＤＭＦ中のロイシン酸コレステロール・パラ−トルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）塩の０．５１ｇ、及びＴＥＡの０．０８ｇを含有する懸濁液を添加した。コレステロール誘導体の導入後にグラフト時間を２０分とした。該媒体をその後、３０℃に加熱し、そしてその後、ＮＭＭの水溶液（２．０９ｇを５ｍｇ／ｍＬ）に入れた。得られた溶液を、１００ｍＬの水を添加することにより希釈し、そしてその後、０．９％ＮａＣｌ溶液、そしてその後の２倍の蒸留水に対する１０ｋＤのＰＥＳメンブランに通してダイアフィルター濾過（ｄｉａｆｉｌｔｅｒ）した。最終溶液中のコレステロールにより変性されたナトリウムプルランスクシネートの濃度を乾燥抽出物により決定し、そして乾燥生成物を、Ｄ_２Ｏ／ＮａＯＤでの^１ＨＮＭＲにより解析して、ロイシン酸コレステロ−ルアミドに転換した酸官能基の度合いを決定した。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝２．９ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのロイシン酸コレステロールにより変性された酸のモル分率は、０．０４であった。

実施例４：セチルアルコールアラニネートにより変性されたナトリウムプルランスクシネートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、セチルアルコールアラニネートを得た。

実施例３に記載のとおりに得られたナトリウムプルランスクシネート溶液を、プロライト樹脂（アニオン性）により酸性化し、そしてその後、１８時間凍結乾燥した。

プルランコハク酸の５ｇをＤＭＦ中に溶解して、５１ｇ／Ｌとした。該溶液を０℃に冷却した。ＮＭＭの０．３２ｇ（３．２ｍｍｏｌ）及びＥｔＯＣＯＣｌの０．３２ｇ（３．２ｍｍｏｌ）をその後添加した。１０分間の反応後、２０．４ｍＬのＤＭＦ中のセチルアルコールアラニネート・パラ−トルエンスルホン酸塩の１．５５ｇ（３．２ｍｍｏｌ）及びＴＥＡの０．３２ｇ（３．２ｍｍｏｌ）を含有する懸濁液を添加した。セチルアルコール誘導体の導入後にグラフト時間を２０分とした。該媒体をその後、３０℃に加熱し、そしてその後、ＮＭＭの水溶液（８．３６ｇを５ｍｇ／ｍＬ）に入れた。得られた溶液を、１００ｍＬの水を添加することにより希釈し、そしてその後、０．９％塩化ナトリウム溶液、そしてその後の２倍の蒸留水に対する１０ｋＤのＰＥＳメンブランに通してダイアフィルター濾過した。乾燥抽出物により、最終溶液中のセチルアルコールアラニネートにより変性されたナトリウムプルランスクシネートの濃度を決定し、そして乾燥生成物を、Ｄ_２Ｏ／ＮａＯＤでの^１ＨＮＭＲにより解析して、セチルアルコールアラニネートアミドに転換した酸官能基の度合いを決定した。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝５．２ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのセチルアルコールアラニネートにより変性された酸のモル分率は、０．１８であった。

実施例５：ドデカノールアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、ドデカノールアラニネート・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

実施例１に記載のとおりに得られたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート溶液を、プロライト樹脂（アニオン性）に通してデキストランメチルカルボン酸を得、それをその後、１８時間凍結乾燥した。

デキストランメチルカルボン酸の５ｇ（メチルカルボン酸官能基の２３．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に溶解して、４５ｇ／Ｌとし、そしてその後、０℃に冷却した。ドデカノールアラニネート・パラ−トルエンスルホン酸塩の１．９９ｇ（４．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に懸濁して、１００ｇ／Ｌとした。トリエチルアミンの０．４７ｇ（４．６ｍｍｏｌ）をその後、かかる懸濁液に添加した。一旦、ポリマー溶液を０℃とし、ＮＭＭの２．３５ｇ（２３．２ｍｍｏｌ）及びＥｔＯＣＯＣｌの２．５２ｇ（２３．２ｍｍｏｌ）をその後添加した。１０分間の反応後、ドデカノールアラニネート懸濁液を添加した。該媒体をその後、４℃にて１５分間維持した。該媒体をその後、３０℃に加熱した。一旦３０℃にて、反応媒体にイミダゾール溶液（９．３ｍLの水中の３．２ｇ）を添加した。ポリマー溶液を、０．９％ＮａＣｌ溶液の１０倍容量、そしてその後の５倍容量の水に対する１０ｋＤのＰＥＳメンブランに通して限外濾過した。ポリマー溶液の濃度を、乾燥抽出物にて決定した。溶液のフラクションを凍結乾燥し、そしてＤ_２Ｏでの^１ＨＮＭＲにより解析して、ドデカノールアラニネートにより変性された酸官能基の度合いを決定した。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝２２ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのドデカノールアラニネートにより変性された酸のモル分率は、０．１９であった。

実施例６：Ｌ−メントールグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、L-メントールグリシネート・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

得られたオイルは不純物を含んでいるため、水酸化ナトリウムの化学量論的添加によってアミン塩を中和し、そしてジイソプロピルエーテルによって抽出した。有機層をその後、エチルエーテル中のＨＣｌ溶液を用いて酸性化し、そしてメントール誘導体のＨＣｌ塩を水により抽出した。凍結乾燥後、Ｌ−メントールグリシネート・塩酸塩が得られた。

デキストランメチルカルボン酸の１２ｇ（メチルカルボン酸官能基の５９．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に溶解して、６０ｇ／Ｌとし、そしてその後、０℃に冷却した。Ｌ−メントールグリシネート・塩酸塩の１．３２ｇ（５．２９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に懸濁して、１００ｇ／Ｌとした。トリエチルアミンの０．５４ｇ（５．２９ｍｍｏｌ）をその後、かかる懸濁液に添加した。一旦、ポリマー溶液を０℃とし、ＤＭＦ中のＮＭＭ（６．５９ｇ，６５．１ｍｍｏｌ）の溶液（５３０ｇ／Ｌ）及びＥｔＯＣＯＣｌの７．０７ｇ（６５．１ｍｍｏｌ）をその後添加した。１０分間の反応後、Ｌ−メントールグリシネート懸濁液を添加した。該媒体をその後、１０℃にて４５分間維持した。該媒体をその後、５０℃に加熱した。イミダゾール溶液（２２ｍＬの水中の１４．７ｇ）及び水の６５ｍＬを反応媒体に添加した。ポリマー溶液を、０．９％ＮａＣｌ溶液の６倍容量、０．０１Ｎ水酸化ナトリウム溶液の４倍容量、０．９％ＮａＣｌ溶液の７倍容量、そしてその後の３倍容量の水に対する１０ｋＤのＰＥＳメンブランに通して限外濾過した。ポリマー溶液の濃度を、乾燥抽出物にて決定した。溶液のフラクションを凍結乾燥し、そしてＤ_２Ｏでの^１ＨＮＭＲにより解析して、Ｌ−メントールグリシネートアミドに転換した酸官能基の度合いを決定した。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝２５．７ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのＬ−メントールグリシネートにより変性された酸のモル分率は、０．０９であった。

実施例７：（±）−α−トコフェロールアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，１９９５，８４（１），９６−１００に記載の方法に従い、（±）−α−トコフェロールアラニネート・塩酸塩を得た。

実施例６に記載された方法と同様の方法により、（±）−α−トコフェロールアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝２８．１ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りの（±）−α−トコフェロールアラニネートにより変性された酸のモル分率は、０．０４であった。

実施例８：オクタノールグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、オクタノールグリシネート・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

実施例６に記載の方法と同様の方法により、オクタノールグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝３４．１ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのオクタノールグリシネートにより変性された酸のモル分率は、０．２７であった。

実施例９：オクタノールフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、オクタノールフェニルアラニネート・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

実施例６に記載の方法と同様の方法により、オクタノールフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝３０．２ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのオクタノールフェニルアラニネートにより変性された酸のモル分率は、０．０９であった。

実施例１０：ベンジルアルコールフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
ベンジルアルコールフェニルアラニネート・塩酸塩（バケム（Ｂａｃｈｅｍ））を用いて、実施例６に記載の方法と同様の方法によって、ベンジルアルコールフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝４７．７ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのベンジルアルコールフェニルアラニネートにより変性された酸のモル分率は、０．４１であった。

実施例１１：イソヘキサノールフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの合成
特許明細書中（森憲治他，米国特許第４８２６８１８号明細書）に記載の方法に従い、イソヘキサノールフェニルアラニネート・パラ−トルエンスルホン酸塩を得た。

実施例６に記載の方法と同様の方法によって、イソヘキサノールフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。

乾燥抽出物に従うと：［変性されたポリマー］＝２９．８ｍｇ／ｇであった。

^１ＨＮＭＲに従うと：糖単位当りのイソヘキサノールフェニルアラニネートにより変性された酸のモル分率は、０．１８であった。

実施例１２：ＢＭＰ−２凍結乾燥物の溶解
生理学的ｐＨにある種々のポリマーの溶解力を示すために、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）凍結乾燥物の溶解試験を開発した。ＢＭＰ−２を、ショ糖（シグマ（Ｓｉｇｍａ））、グリシン（シグマ）、グルタミン酸（シグマ）、塩化ナトリウム（リーデルデエン（Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ−Ｈａｅｎ））及びポリソルベート８０（フルカ）を含有する緩衝液中に溶解した。かかる溶液のｐＨを、水酸化ナトリウムの添加によってｐＨ４．５に調節し、そしてその後、該溶液を凍結乾燥した。２８３．２ｍｇの凍結乾燥物は、およそ１２ｍｇのＢＭＰ−２を含有していた。

本発明に従ったポリマーを該試験に用いた。対照として、仏国特許ＦＲ０７０２３１６号明細書に記載のポリマーである、エチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを該試験において使用した。

該試験は、ＢＭＰ−２の０．１６８ｍｇを含有する凍結乾燥物のおよそ４ｍｇを正確に導入することから成る。凍結乾燥物をその後、ＢＭＰ−２の最終濃度を生理学的ｐＨにある０．８ｍｇ／ｍＬとするために２１０μＬの水溶液とし、ポリマーの最終濃度は５ｍｇ／ｍＬであった。

ロール上で低速にて５分間の攪拌後、溶液の外観を記録した。

種々の溶液についての結果を下記表にまとめた。

水の添加は清澄なＢＭＰ−２溶液を生じるが、酸性ｐＨである。

該試験によって、本発明に従うポリマーによる生理学的ｐＨでのＢＭＰ−２の溶解における改善が示され得た。他方、エチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートによっては、清澄なＢＭＰ−２溶液を得ることができなかった。

Claims

少なくとも１つが疎水性アルコール（ＨＡと記す）誘導体により置換された複数のカルボキシル官能基を含有する多糖類であって、
前記アルコール（ＨＡ)は、カップリングアームＲを介してアニオン性多糖類にグラフトするか又は結合しており、前記カップリングームは、官能基Ｆを介して前記アニオン性多糖類に結合しており、前記官能基Ｆは、前記結合アームＲのアミン官能基と前記アニオン性多糖類のカルボキシル官能基との間のカップリング由来のものであり、そして前記カップリングアームは、そのカルボキシル官能基、イソシアネート官能基、チオ酸官能基又はアルコール官能基と、前記疎水性アルコールの官能基との間のカップリング由来の官能基Ｇを介して前記疎水性アルコールに結合しており、前記アニオン性多糖類の未置換のカルボキシル官能基は、カルボン酸カチオン塩の形態にあり、前記カチオンは、好ましくはＮａ^＋又はＫ^＋のようなアルカリ金属カチオンであり、
Ｆは、アミド官能基であり、
Ｇは、エステル官能基、チオエステル官能基、カーボネート官能基又はカルバメート官能基であり、
Ｒは、枝分れ状であっても、及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を含有していてもよく、そして少なくとも１つの酸官能基を有する１ないし１８個の炭素原子を含有する鎖を表し、
ＨＡは、疎水性アルコールの残基であって、該疎水性アルコールのヒドロキシル官能基と、基Ｒにより保有される少なくとも１つの求電子性官能基との間のカップリングの生成物であり、
前記多糖類は、中性ｐＨにおいて両親媒性であるカルボキシル官能基を含有するものである、多糖類。
一般式Ｉ：

［式中、
ｎは、Ｆ−Ｒ−Ｇ−ＨＡにより置換された多糖類のカルボキシル官能基のモル分率を表すものであって、０．０１ないし０．７であり、
Ｆ、Ｒ、Ｇ及びＨＡは、上記請求項１の定義に対応しており、且つ、前記多糖類の１つ以上のカルボキシル官能基がＦ−Ｒ−Ｇ−ＨＡにより置換されていない場合、前記多糖類のカルボキシル官能基（群）は、カルボン酸カチオンであって、前記カチオンは、好ましくは、Ｎａ^＋又はＫ^＋のようなアルカリ金属カチオンである］
で表される、少なくとも１つが疎水性アルコール誘導体により置換された複数のカルボキシル官能基を含有する多糖類より選択される、請求項１に記載の多糖類。
前記アニオン性多糖類は、天然に酸官能基を保有しており、且つ、アルギネート、ヒアルロナン及びガラクツロナンから成る群より選択される、請求項１又は２に記載の多糖類。
前記アニオン性多糖類は、一般式ＩＩ：

［式中、
天然多糖類は、大部分が（１，６）型及び／又は（１，４）型及び／又は（１，３）型及び／又は（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類群より選択され、
Ｌは、結合アームＱと、中性又はアニオン性多糖類の−ＯＨ官能基との間のカップリング由来のものであって、エステル官能基、チオエステル官能基、カーボネート官能基、カルバメート官能基又はエーテル官能基であり、
Ｑは、枝分れ状であっても、及び／又は不飽和であっても、Ｏ、Ｎ及び／又はＳのような１つ以上のヘテロ原子を含有していてもよく、そして少なくとも１つの酸官能基ＣＯ_２Ｈを有する１ないし１８個の炭素原子を含有する鎖を表す］
で表される、少なくとも１つの酸官能基がグラフトされた、アニオン性又はノニオン性の（中性の）天然多糖類から得られた合成のアニオン性多糖類である、請求項１ないし３のうちいずれか１項に記載の多糖類。
前記多糖類は、大部分が（１，６）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る、請求項４に記載の多糖類。
前記大部分が（１，６）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、デキストランである、請求項５に記載の多糖類。
前記多糖類は、大部分が（１，４）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る、請求項４に記載の多糖類。
前記大部分が（１，４）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、プルラン、アルギネート、ヒアルロナン、キシラン、ガラクツロナン及び水溶性セルロースから成る群より選択される、請求項７に記載の多糖類。
前記多糖類は、大部分が（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る、請求項４に記載の多糖類。
前記大部分が（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、カードランである、請求項９に記載の多糖類。
前記多糖類は、大部分が（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る、請求項４に記載の多糖類。
前記大部分が（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、イヌリンである、請求項１１に記載の多糖類。
前記多糖類は、大部分が（１，４）型及び（１，３）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る、請求項４に記載の多糖類。
前記大部分が（１，４）型及び（１，３）のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、グルカンである、請求項１３に記載の多糖類。
前記多糖類は、大部分が（１，４）型及び（１，３）型及び（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る、請求項４に記載の多糖類。
前記大部分が（１，４）型及び（１，３）及び（１，２）型のグリコシド結合を介して結合したグリコシドモノマーから成る多糖類は、マンナンである、請求項１５に記載の多糖類。
式中の基Ｑは、下記基：

より選択される、請求項４ないし１６のうちいずれか１項に記載の多糖類。
前記基Ｒは、アミノ酸より選択される、請求項１ないし１７のうちいずれか１項に記載の多糖類。
前記基Ｒは、α−アミノ酸より選択される、請求項１ないし１７のうちいずれか１項に記載の多糖類。
前記α−アミノ酸は、ロイシン、アラニン、イソロイシン、グリシン、フェニルアラニン、トリプトファン又はバリンを含む天然のα−アミノ酸より選択される、請求項１９に記載の多糖類。
前記疎水性アルコールは、脂肪アルコールより選択される、請求項１ないし２０のうちいずれか１項に記載の多糖類。
前記疎水性アルコールは、飽和の又は不飽和の、及び枝分れ状の又は枝分れしていない４ないし１８個の炭素原子を含有するアルキル鎖から成るアルコールより選択される、請求項２１に記載の多糖類。
前記脂肪アルコールは、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、セテアリルアルコール、ブチルアルコール、オレイルアルコール又はラノリンより選択される、請求項１ないし２１のうちいずれか１項に記載の多糖類。
前記疎水性アルコールは、コレステロールである、請求項２１に記載の多糖類。
前記疎水性アルコールは、メントールである、請求項２１に記載の多糖類。
前記疎水性アルコールは、トコフェロールより選択されるものであって、好ましくはα−トコフェロールである、請求項２１に記載の多糖類。
前記疎水性アルコールは、アリール基を保有するアルコールより選択される、請求項２１に記載の多糖類。
前記アリール基を保有するアルコールは、ベンジルアルコール又はフェネチルアルコールより選択される、請求項２７に記載の多糖類。
医薬組成物の製造における、請求項１ないし２８のうちいずれか１項に記載の官能化された多糖類の使用。
請求項１ないし２９のうちいずれか１項に記載の多糖類及び少なくとも１種の活性成分を含有する、医薬組成物。
経口、鼻腔、膣内又は口腔経路により投与され得る、請求項３０に記載の医薬組成物。
前記活性成分は、タンパク質、糖タンパク質、ペプチド及び非ペプチド治療用分子から成る群より選択される、請求項３０又は３１に記載の医薬組成物。