CN111171174B

CN111171174B - 葡聚糖衍生物及其制备方法和用于制备药剂的附加剂

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Publication number: CN111171174B
Application number: CN202010061004.6A
Authority: CN
Inventors: 赵谦; 翁伟宇; 黄建明; 徐晓珍; 朱沪光; 梁婷婷
Original assignee: Shanghai Tufa Pharmaceutical Technology Co ltd
Current assignee: Shanghai Tufa Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2020-01-14
Filing date: 2020-01-19
Publication date: 2022-02-01
Anticipated expiration: 2040-01-19
Also published as: CN111171174A; WO2021143939A1

Abstract

一种葡聚糖衍生物及包含该葡聚糖衍生物的附加剂，所述葡聚糖衍生物具有式I所示的结构。在本发明中，通过合适的连接基团将两个脂肪酸酯基团键合至所述右旋糖酐的末端还原端，使得本发明所述的两亲性葡聚糖衍生物形成双尾结构，进而获得了一种兼具良好生物可降解性及良好表面活性的两亲性衍生物，可广泛用于医药制剂中。

Description

葡聚糖衍生物及其制备方法和用于制备药剂的附加剂

技术领域

本发明涉及制药领域，特别涉及一种葡聚糖衍生物，尤其是两亲性葡聚糖衍生物，以及包含所述葡聚糖衍生物的用于制备药剂的附加剂。

背景技术

表面活性剂系指能使液体表面张力显著下降的物质，其化学结构中同时含有亲水和疏水基团。表面活性剂用途广泛，可应用于增溶、乳化、润湿、去污、杀菌、消泡和起泡等。高分子表面活性剂一般是指相对分子质量在10³～10⁶的表面活性剂。相较于低分子表面活性剂而言，高分子表面活性剂降低表面张力的能力较弱，但增溶、乳化、增稠、稳泡、成膜性能良好。高分子表面活性剂按来源分类可分为天然高分子表面活性剂(包含半合成的高分子表面活性剂)和合成高分子表面活性剂。天然高分子表面活性剂来源于动植物，经由分离、精制或化学改性而得，通常具有很好的安全性、可降解性和环境友善性。

多糖是生物体中广泛存在的物质，是一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分子多聚物。葡聚糖(Glucan)是指以葡萄糖为单糖组成的同型多糖，葡萄糖单元之间以糖苷键连接，根据糖苷键的类型又可分为α-葡聚糖、β-葡聚糖和α,β-葡聚糖。

右旋糖酐(Dextran)是葡聚糖中的一种，系蔗糖经微生物发酵后生成的一种高分子葡萄糖聚合物，主要是α-1,6-糖苷键连接的葡萄糖，有时也有α-1,3分支结构，具有式II所示的结构。

由于聚合的葡萄糖分子数目不同，右旋糖酐可具有不同的分子量，有高分子右旋糖酐(平均分子量10万-20万)、中分子右旋糖酐(平均分子量6万-8万)、低分子右旋糖酐(平均分子量2万-4万)小分子右旋糖酐(平均分子量1万-2万)。右旋糖酐已作为血容量扩充药用于临床，有提高血浆胶体渗透压、增加血浆容量和维持血压的作用，能阻止红细胞及血小板聚集，降低血液粘滞性，改善微循环。

右旋糖酐安全无毒，且分子中含有大量羟基易于进行化学修饰，因此常作为起始材料来合成功能性聚合物。在右旋糖酐分子中引入疏水基团可以制得两亲性的右旋糖酐衍生物，作为高分子表面活性剂。引入的疏水基团可以是烷基、脂肪酸、胆固醇、胆酸、聚乳酸(PLA)、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯(PCL)、4-己基苯甲酰氯、1,2-环氧-3-苯氧基丙烷等。这些疏水基团可以接在右旋糖酐链的羟基上，也可以接在右旋糖酐的还原端葡萄糖上。

国内已有不少发明专利涉及到葡聚糖的两亲性衍生物。由于右旋糖酐是葡聚糖中的一种，且国内经常对右旋糖酐和葡聚糖未进行严格的区分，因此可以认为这些专利中提及的葡聚糖两亲性衍生物涵盖了右旋糖酐的两亲性衍生物。CN101585888A公开了一种葡聚糖脂肪酸嫁接物及制备方法和应用，其中以脂肪酸作为疏水基团；CN104628885A公开了一种改性葡聚糖及其制备方法、葡聚糖胶束及其制备方法、载药颗粒及其制备方法和水凝胶，以胆固醇为疏水基团；CN110003355A公开了一种具有AIE特征的葡聚糖衍生物及其合成方法和用途，以N-羟乙基-4-(4-甲酰苯基)-1,8-萘酰亚胺为疏水基团；CN102127231A公开了一种葡聚糖/聚己内酯两亲嵌段聚合物及其制法和用途，以聚己内酯为疏水基团；CN104725632A和CN104788670A分别公开了一种葡聚糖-聚氨基酸嵌段共聚物及其制备方法和载药胶束，以聚氨基酸为疏水基团；CN108102004A公开了一种葡聚糖聚合物、聚合物胶束和药物载体系统，以多元脂肪酸为疏水基团；CN101392034B公开了一种葡聚糖-磷脂酰乙醇胺聚合物胶束及其制备方法，以磷脂酰乙醇胺为疏水基团；CN105837836A公开了一种酸敏感型双亲性硬脂酸酰胺化葡聚糖聚合物纳米胶束及其制备方法，以硬脂酸为疏水基团。上述这些已公开的葡聚糖两亲性衍生物存在着一些不足，如：疏水基在葡聚糖上的嫁接位置不确定，溶血性较强，合成较困难等。

因此，有必要提出一种新的葡聚糖衍生物，以解决上述技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种葡聚糖衍生物，尤其是以右旋糖酐作为所述葡聚糖衍生物的亲水基团，通过合适的连接基团，将作为疏水基团的脂肪酸酯基团键合至所述右旋糖酐的末端还原端，以形成两亲性葡聚糖衍生物。在本发明中，尤其是通过合适的连接基团将两个脂肪酸酯基团键合至所述右旋糖酐的末端还原端，使得本发明所述的两亲性葡聚糖衍生物形成双尾结构，进而获得了一种兼具良好生物可降解性及良好表面活性的两亲性衍生物。

为了达到上述目的，根据本发明的一方面，提供一种葡聚糖衍生物，以右旋糖酐为亲水端；以二脂肪酸甘油酯通过一连接基团键合至所述右旋糖酐的末端还原端，而形成所述葡聚糖衍生物的疏水端。

在一些实施例中，作为亲水端的所述右旋糖酐的平均分子量的范围为1000～40000。因此，作为亲水基团的所述右旋糖酐的平均分子量可以是1000～40000中的任意数值，或者具有落入1000～40000范围内的任意数值区间的范围。作为亲水基团的所述右旋糖酐的平均分子量例如但不限于1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10000、20000、30000、40000等，作为亲水基团的所述右旋糖酐的平均分子量的范围例如但不限于1000～15000、2000～10000、2000～5000、5000～10000、15000～25000、25000～35000、35000～40000等。

在一些实施例中，所述二脂肪酸甘油酯为1,2-二脂肪酸甘油酯或1,3-二脂肪酸甘油酯中的至少一种。

在一些实施例中，所述二脂肪酸甘油酯含有具有10～20个碳原子的脂肪酸链。例如，所述二脂肪酸甘油酯为二硬脂酸甘油酯或二肉豆蔻酸甘油酯，例如但不限于1,2-二硬脂酸甘油酯，1,3-二硬脂酸甘油酯，1,2-二肉豆蔻酸甘油酯。

在一些实施例中，所述连接基团具有式I-d所示的结构：

其中，R₃代表直链或支链的取代或未取代的饱和或不饱和的具有2-6个碳原子的烃基。优选地，R₃代表直链或支链的取代或未取代的具有2-6个碳原子的烷基，尤其优选为直链或支链的未取代的具有2-6个碳原子的烷基。

根据本发明的另一方面，提供一种葡聚糖衍生物，具有式I所示的结构：

其中，D基团代表葡聚糖，L基团代表连接基团，R^1a与R^1b各自独立地代表脂肪酸酯基团。

在上述实施例中，所述葡聚糖为ɑ-葡聚糖。

在上述实施例中，所述葡聚糖具有α-1,6-糖苷键。

在上述实施例中，所述D基团平均分子量的范围为1000～40000。

在一些实施例中，作为疏水基团的所述脂肪酸酯基团具有10～22个碳原子。因此，作为疏水基团的所述脂肪酸酯基团具有10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个碳原子。

在上述实施例中，所述葡聚糖衍生物所具有的两个作为疏水基团的所述脂肪酸酯基团可以是相同基团或不同基团。即，所述葡聚糖衍生物所具有两个所述脂肪酸酯基团，每一所述脂肪酸酯基团所含的碳原子数可以相同的或不同的。

在一些实施例中，R^1a与R^1b为相同或不同基团，具有式I-a所示的结构：

其中，R₁为单键或亚甲基，R₂代表直链或支链的取代或未取代的饱和或不饱和的具有9-21个碳原子的烃基。

在上述实施例中，R^1a与R^1b为相同或不同基团，具有式I-a-1或I-a-2所示的结构：

在上述实施例中，R₂代表直链或支链的未取代的具有9-21个碳原子的烷基，尤其优选为直链或支链的未取代的具有15-17个碳原子的烷基。

在一些实施例中，L基团具有式I-b所示的结构：

其中，R₃代表直链或支链的取代或未取代的饱和或不饱和的具有2-6个碳原子的烃基；R₄为具有1-2个碳原子的烷基；并且，所述疏水基团分别与R₄键合。

在上述实施例中，L基团中的R₃代表直链或支链的取代或未取代的饱和或不饱和的具有2-6个碳原子的烃基；R₄为具有1-2个碳原子的烷基；并且，R^1a与R^1b分别与R₄键合。优选地，L基团中的R₃代表直链或支链的取代或未取代的具有2-6个碳原子的烷基，并且尤其优选地，L基团中的R₃为直链的未取代的具有2-6个碳原子的烷基。

在一些实施例中，所述连接基团具有式I-b-1或I-b-2所示的结构：

在上述实施例中，R₃代表直链或支链的取代或未取代的具有2-6个碳原子的烷基，尤其优选为直链或支链的未取代的具有2-6个碳原子的烷基。

在一些实施例中，D基团具有式I-c所示的结构：

其中，m的范围为4～245。

在一些实施例中，本发明所述葡聚糖衍生物，具有式I-1至式I-6所示的结构：

在上述实施例中，R_2a和R_2b为相同或不同基团，分别代表直链或支链的未取代的具有9-21个碳原子的烷基，尤其优选为直链或支链的未取代的具有15-17个碳原子的烷基。

本领域技术人员可以理解的是，本发明所述的葡聚糖衍生物还可以具有上述式I-1-1至式I-1-6以外的其他未穷举的结构。

根据本发明的另一方面，提供一种用于制备药剂的附加剂，所述附加剂例如但不限于表面活性剂、增溶剂、乳化剂、润湿剂、药物载体等。所述附加剂中包含上述任意一种葡聚糖衍生物，或者以上述任意一种葡聚糖衍生物作为有效成分。

本领域技术人员可以理解的是，所述附加剂还可以包含其他常规组份，例如但不限于溶剂、助剂等。

在一些实施例中，本发明所述的上述葡聚糖衍生物在水中可自组装成纳米胶束，以作为一种纳米胶束药物载体。

根据本发明的另一方面，还提供上述葡聚糖衍生物的制备方法，所述制备方法是以二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物与右旋糖酐按照摩尔比为1:1～10:1的比例混合于溶液中，经还原氨化反应后生成目标产物。

在一些实施例中，所述溶液为二甲基亚砜溶液。

在一些实施例中，所述制备方法包括：准备二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物的步骤；以及，合成目标产物的步骤；其中，

在所述准备二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物的步骤中，以过量的两端均含氨基的化合物与二脂肪酸甘油酯在活化剂的作用下室温反应，以获得二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物；所述活化剂与所述二脂肪酸甘油酯的摩尔比为1:1～10:1；

在所述合成目标产物的步骤中，将所述二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物与右旋糖酐按照摩尔比为1:1～10:1的比例混合于溶液中，经还原氨化反应后生成目标产物。

在一些实施例中，所述两端均含氨基的化合物为乙二胺、丙二胺、丁二胺或己二胺。

在一些实施例中，所述活化剂为N,N'-羰基二咪唑、N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺氯甲酸酯中的一种或几种混合。

本领域技术人员可以理解的是，所述制备方法还可以包括产物的提纯步骤，该提纯步骤为本领域常规步骤，在此不再赘述。

在本发明中，以右旋糖酐作为所述葡聚糖衍生物的亲水基团，通过合适的连接基团，将作为疏水基团的脂肪酸酯基团键合至所述右旋糖酐的末端还原端，以形成两亲性葡聚糖衍生物。

与现有的葡聚糖两亲性衍生物相比本发明所述的上述葡聚糖衍生物同时具备以下优点：

1)疏水链在右旋糖酐上的嫁接位置明确，使得疏水链通过还原胺化反应嫁接在右旋糖酐的末端还原端葡聚糖上；

2)具有良好的生物可降解性，在体内酯酶的作用下，疏水脂肪酸链可从右旋糖酐上断裂下来，使得衍生物最终转变成无毒的脂肪酸和右旋糖酐；

3)具有良好的生物相容性，溶血性小，可用于静脉注射；

4)具有良好的表面活性，可用作为乳化剂、增溶剂、润湿剂等；

5)在水中可自组装成纳米胶束，作为药物载体。

附图说明

图1为根据本发明一实施例的所述葡聚糖衍生物的核磁共振氢谱；

图2为根据本发明一实施例的所述葡聚糖衍生物作为载药胶束时的药物累积释放度曲线。

具体实施方式

以下，结合具体实施方式，对本发明的技术进行详细描述。应当知道的是，以下具体实施方式仅用于帮助本领域技术人员理解本发明，而非对本发明的限制。

实施例1.式I-1-1及式I-1-2的葡聚糖衍生物

在本实施例中提供一种葡聚糖衍生物，具有式I-1或式I-2所示的结构。

上述葡聚糖衍生物的制备方法是以二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物与右旋糖酐按照摩尔比为1:1～10:1的比例混合于溶液中，经还原氨化反应后生成目标产物。其中，所述二脂肪酸甘油酯含有具有10～20个碳原子的脂肪酸链。在本实施例中，所述制备方法包括以下步骤：

a.准备二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物的步骤

使二脂肪酸甘油酯与过量化合物1在活化剂作用下室温反应，获得二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物；

在本步骤中，所述二脂肪酸甘油酯为1,2-二脂肪酸甘油酯或1,3-二脂肪酸甘油酯中的至少一种；例如但不限于，1,2-二硬脂酸甘油酯，1,3-二硬脂酸甘油酯或1,2-二肉豆蔻酸甘油酯中的至少一种；

所述化合物1为两端均含氨基的化合物，例如但不限于乙二胺、丙二胺、丁二胺、己二胺；优选为乙二胺、1,3-丙二胺；

所述活化剂与所述二脂肪酸甘油酯的摩尔比为1:1～10:1，优选2:1～5:1；

所述化合物1与所述活化剂的摩尔比为2:1～20:1，优选5:1～10:1；

b.合成目标产物的步骤

将上述二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物与右旋糖酐混合于溶液中，经还原氨化反应后生成目标产物；

其中，所述二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物与右旋糖酐的摩尔比为1:1～10:1，优选3:1～5:1；所述溶液为二甲基亚砜溶液(DMSO溶液)；

所述目标产物即为式I-1-1或式I-1-2所示的葡聚糖衍生物。

在本实施例中，所述活化剂例如但不限于N,N'-羰基二咪唑(CDI)、N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)。

实施例2.具体葡聚糖衍生物

在本实施例中，以不同平均分子量的右旋糖酐及不同的二脂肪酸甘油酯制备葡聚糖衍生物，并分别对获得的葡聚糖衍生物进行标记，以以下表1所示。

表1.不同平均分子量的右旋糖酐与对应的葡聚糖衍生物

上述化合物具有如下通式

其中，n、o的数值范围为8～20，优选14～16；并且，n与o可以是相同或不同数值。

本领域技术人员可以理解的是，表1中所述二硬脂酸甘油酯可以是1,2-二硬脂酸甘油酯或1,3-二硬脂酸甘油酯或两者的混合物。

在本实施例中，根据表1所列的右旋糖酐与二脂肪酸甘油酯，按照以以下具体步骤进行所述葡聚糖衍生物的制备，以获得表1所述葡聚糖衍生物。

取2mmol的二脂肪酸甘油酯置干燥烧瓶中，加二氯甲烷30ml，搅拌使溶解，加入6mmol的N,N'-羰基二咪唑(CDI)，待溶解后继续搅拌约2小时。搅拌下，缓慢滴加到含60mmol乙二胺的10ml二氯甲烷中，搅拌反应约5小时。将反应液加一倍量水反复萃取，直至水液pH近中性，且用茚三酮试液无法检出水中残留氨基为止。分取二氯甲烷层，加无水硫酸钠脱水后，减压去除二氯甲烷，并将所得固体物鼓风干燥，得到二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物。

取右旋糖酐0.1mmol置干燥烧瓶中，加入无水20ml的DMSO，于60℃加热搅拌至溶解；加入0.5mmol二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物，于75℃加热搅拌至溶解，加入0.3ml冰醋酸，加热搅拌反应2小时。加入含0.45mmol三乙酰氧基硼氢化钠的2ml DMSO溶液，室温继续搅拌反应2小时。

将反应液反复过滤至澄明，取滤液加入到约5倍量乙醇中使析出沉淀，过滤，取滤出物用乙醇反复洗涤。最后将产物溶于水中配成浓溶液，过滤至澄明，取滤液加入到约10倍量乙醇沉淀产物，滤取产物鼓风干燥，获得目标产物，为白色或类白色固体。

实施例3.对比实施例

在本实施例中，以十八胺作为疏水基团，键合至平均分子量为10000的右旋糖酐的末端还原端上，以获得一种葡聚糖衍生物DEX10K-OCA，该葡聚糖衍生物为一种单尾型葡聚糖衍生物。

所述葡聚糖衍生物DEX10K-OCA的具体制备方法如下。

取0.1mmol的右旋糖酐1.0g置干燥烧瓶中，加入20ml的无水DMSO，于60℃加热搅拌至溶解；加入0.5mmol的十八胺135mg，于75℃加热搅拌至溶解，加入0.3ml的冰醋酸，加热搅拌反应2小时。加入含0.45mmol的三乙酰氧基硼氢化钠的DMSO溶液(2ml)，室温继续搅拌反应2小时。

将反应液反复过滤至澄明，取滤液加入到约5倍量乙醇中使析出沉淀，过滤，取滤出物用乙醇反复洗涤。最后将产物溶于水中配成浓溶液，过滤至澄明，取滤液加入到约10倍量乙醇沉淀产物，滤取产物鼓风干燥，得目标产物DEX10K-OCA，为白色或类白色固体。

实施例4.各葡聚糖衍生物的表征

在本实施例中，对实施例2及实施例3中获得的各葡聚糖衍生物进行表征。表征主要采用1H核磁共振法(¹HNMR)及疏水基团的取代度两种表征方式。

按照公式Aδ0.85/(Aδ5.0×6)×100％，分别计算DEX2K-DIS、DEX5K-DIS、DEX10K-DIM、DEX10K-DISM、DEX40K-DIS中二脂肪酸甘油酯的取代度(DS％)；按照公式Aδ0.85/(Aδ5.0×3)×100％计算单尾型葡聚糖衍生物DEX10K-OCA中十八胺的取代度(DS％)，并获得如表2所示的计算结果。

表2.各葡聚糖衍生物中疏水基团的取代度

此外，本实施例中，进一步将上述葡聚糖衍生物溶于氘代DMSO中，以进行¹HNMR测定，代表性氢谱见图1。

实施例5.各葡聚糖衍生物的CMC测定

为了考量本发明所述的葡聚糖衍生物作为药物载体，尤其是纳米胶束载体的优异性及可靠性，在本实施例中，对实施例2及实施例3(对照例)的葡聚糖衍生物的临界胶束浓度(CMC)测定。

具体检测方法为：分别取实施例2和实施例3中的葡聚糖衍生物25mg并精密称定，置于25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀后得浓度为1.0mg/ml的贮备液。取贮备液用水稀释至相应浓度，作为供试品。精密称取12.1mg的芘置于100ml量瓶中，加丙酮溶解后定容，得0.121mg/ml(6×10^-4mol/L)的贮备液。取芘贮备液1ml置10ml量瓶中，用丙酮稀释至刻度，得浓度为6×10^-5mol/L的芘/丙酮溶液。精密吸取芘/丙酮溶液100μl置于10ml具塞玻璃试管中，吹干丙酮。

取衍生物各浓度的供试品溶液10ml，分别加入到上述试管中，超声20min，再置于恒温振荡器中70℃振摇1h。以氙灯为激发光源，测定各供试品的荧光吸收强度。仪器参数设置：芘的激发波长为334nm，扫描波长350nm～450nm，激发和发射的狭缝宽度均为10nm，记录第一个电子振动峰(373nm，I₁)和第三个电子振动峰(384nm，I₃)荧光强度的比值为I₁/I₃。以衍生物供试品溶液浓度的对数为横坐标，以I₁/I₃值为纵坐标作图，可得两条直线，其交点所对应的浓度即为供试品的临界胶束浓度(CMC)，结果见表3。

表3.各葡聚糖衍生物的临界胶束浓度(CMC)

葡聚糖衍生物	CMC(μg/ml)
		DEX2K-DIS	6.5
DEX5K-DIS	8.6
		DEX10K-DIS	10.3
DEX10K-DIM	12.7
		DEX10K-DISM	11.8
DEX40K-DIS	50.5
		DEX10K-OCA	65.9

由本上述表3的检测结果表明：相较于对比例的单尾型葡聚糖衍生物DEX10K-OCA，本发明所述的各葡聚糖衍生物均有较低的CMC，表明本发明所述的各葡聚糖衍生物在水中可以自组装成形成纳米胶束，并能经受较高倍数的稀释。此外，由表3所示，右旋糖酐平均分子量相同且疏水基团取代度相近的DEX10K-DIS与DEX10K-OCA，DEX10K-DIS的CMC显著低于DEX10K-OCA，这表明：相较于单尾型葡聚糖衍生物，本发明所述的双尾型葡聚糖衍生物更易形成胶束且胶束的稳定性更好，可应用于药物载体。

实施例6.各葡聚糖衍生物的溶血性

在本实施例中，对实施例2及实施例3(对照例)的葡聚糖衍生物进行溶血性测试。

取实施例2和实施例3的葡聚糖衍生物，用生理盐水配成浓度为40、20、4mg/ml的溶液，作为供试品。

取无菌脱纤维处理的山羊血，加入约10倍量生理盐水，摇匀，1500rpm离心15min，弃去上清。收集底部血红细胞，再次加入生理盐水，按上述方法洗涤2～3次，直至上清液不呈红色。所得红细胞用生理盐水配成2％的混悬液，供试验用。

取洁净10ml具塞试管，编号1为阴性对照管，2为阳性对照管，其余各管为供试品管，每个样品重复3份。各管均加入2％红细胞混悬液1ml，阴性对照管加入生理盐水1ml，阳性对照管加入蒸馏水1ml，其余各管加入各浓度的供试品1ml，混匀后立即置37℃水浴中孵育3小时，冰浴终止溶血反应。

于4℃，1500rpm离心15分钟，收集上清，用紫外分光光度计在540nm处测定细胞溶血释放的血红蛋白程度。以生理盐水作空白调零，按照下面公式计算各组溶血率，各葡聚糖衍生物的溶血率如表4所示。

溶血率(％)＝(A_s-A_nc)/(A_pc-Anc)*100％

式中，A_s为各供试品组的吸光度；A_pc为阳性对照组的吸光度；A_nc为阴性对照组的吸光度。

表4.各葡聚糖衍生物的溶血率

上述表4的数据表明：本发明所述的各葡聚糖衍生物的溶血性均较小，低于同浓度下吐温80的文献报道值(40mg/ml时溶血率约36％～67％)。本领域技术人员理解的是，吐温80作为一种药剂学上常用的表面活性剂而被广泛应用，并可用于静脉注射的产品。可见，本发明所述的各葡聚糖衍生物的溶血性明显低于现已广泛使用的常规表面活性剂的溶血性，性能更佳。

此外，由表4所示，右旋糖酐平均分子量相同且疏水基团取代度相近的DEX10K-DIS与DEX10K-OCA，DEX10K-DIS的溶血性显著低于DEX10K-OCA，这表明：相较于单尾型葡聚糖衍生物，本发明所述的双尾型葡聚糖衍生物具有更好的生物相容性。

因此，本发明所述的双尾型葡聚糖衍生物可用作药剂中的表面活性剂，尤其是静脉注射液中的表面活性剂。

实施例7.各葡聚糖衍生物的增溶试验

在本实施例中，对实施例2及实施例3(对照例)的葡聚糖衍生物进行增溶试验。

以多西他赛作为难溶性药物的模型。取实施例2和实施例3的葡聚糖衍生物适量，加蒸馏水溶解，配成浓度为40mg/ml的溶液。各溶液中加入过量多西他赛，超声后于37℃振摇过夜。离心，取上清液用甲醇适当稀释后，滤过，取续滤液用UV法测定滤液中多西他赛的浓度，计算饱和溶解度，结果见表5。

表5.各葡聚糖衍生物的对多西他赛的增溶效果

溶剂	多西他赛溶解度(μg/ml)
		水	16
含DEX2K-DIS的水溶液	1520
		含DEX5K-DIS的水溶液	864
含DEX10K-DIS的水溶液	434
		含DEX10K-DIM的水溶液	428
含DEX10K-DISM的水溶液	422
		含DEX40K-DIS的水溶液	166
含DEX10K-OCA的水溶液	171

上述表5的数据表明：本发明所述的各葡聚糖衍生物可以显著增大多西他赛在水中的溶解度。并且，由表5所示，右旋糖酐平均分子量相同且疏水基团取代度相近的DEX10K-DIS与DEX10K-OCA，DEX10K-DIS的增溶效果显著优于DEX10K-OCA，这表明：相较于单尾型葡聚糖衍生物，本发明所述的双尾型葡聚糖衍生物具有明显更好的增溶能力。

因此，本发明所述的双尾型葡聚糖衍生物可用作药剂中的增溶剂。

实施例8.各葡聚糖衍生物的乳化试验

在本实施例中，对实施例2及实施例3(对照例)的葡聚糖衍生物进行乳化试验。

以大豆油为油相，蒸馏水为水相，以实施例2和实施例3的葡聚糖衍生物的产物为乳化剂。乳剂体系中油相占10％(W/W)，乳化剂占2％(W/W)。取乳化剂溶于水中，加入油相，用乳匀机制成初乳，再用高压匀质机制成乳剂。所得乳剂经适当稀释后用马尔文激光粒度仪测定平均粒径和多分散指数，所得乳剂于4000rpm离心30min，观察分层情况，结果请见表6。

表6.

葡聚糖衍生物	平均粒径(nm)	多分散指数	离心稳定性*
				DEX2K-DIS	88	0.08	-
DEX5K-DIS	90	0.08	-
				DEX10K-DIS	95	0.10	-
DEX10K-DIM	117	0.14	+-
				DEX10K-DISM	108	0.12	-
DEX40K-DIS	152	0.26	++
				DEX10K-OCA	222	0.35	+++

*注：表中-表示未分层；+表示疑似分层；++表示分层较多；+++表示基本完全分层。

上述表6的数据表明：本发明所述的各葡聚糖衍生物(除DEX40K-DIS外)均可形成稳定的乳剂。并且，由表6所示，右旋糖酐平均分子量相同且疏水基团取代度相近的DEX10K-DIS与DEX10K-OCA，DEX10K-DIS的乳化效果显著优于DEX10K-OCA，这表明：相较于单尾型葡聚糖衍生物，本发明所述的双尾型葡聚糖衍生物具有明显更好的乳化能力。

因此，本发明所述的双尾型葡聚糖衍生物可用作药剂中的乳化剂。

实施例9.应用实施例

在本实施例中，以葡聚糖衍生物DEX5K-DIS作为多西他赛的载药胶束。

取DEX5K-DIS加生理盐水溶解配成浓度为40mg/ml的溶液；取多西他赛用乙醇配成浓度为10mg/ml的溶液。搅拌下，将0.5ml多西他赛乙醇溶液缓慢加入到10ml的DEX5K-DIS溶液中，搅拌1分钟，即得多西他赛载药胶束。

经检测，该载药胶束中药物包封率大于98％，载药量为1.25％，平均粒径为33nm。取该载药胶束2ml，装入截留分子量为3000的透析袋中，以50ml磷酸盐缓冲液(pH 7.4)为释放介质进行释放度检查，结果如图2所示。

由图2所示，以本发明所述的葡聚糖衍生物DEX5K-DIS为材料制成的载药胶束可以延缓药物的释放。由图2显示结果及上述包封率、载药量、粒径、释放度等评价指标可见，本发明所述的葡聚糖衍生物可以作为一种纳米载药胶束。

本发明已由上述相关实施例加以描述，然而上述实施例仅为实施本发明的范例。必需指出的是，已公开的实施例并未限制本发明的范围。相反地，包含于权利要求书的精神及范围的修改及均等设置均包括于本发明的范围内。

Claims

1.一种葡聚糖衍生物，具有式I-1或I-2所示的结构：

其中，

R_2a和R_2b为相同或不同基团，分别代表直链或支链的未取代的具有9-21个碳原子的烷基；

R₃代表直链或支链的取代或未取代的饱和或不饱和的具有2-6个碳原子的烃基；并且，m的范围为4～245。

2.一种用于制备药剂的附加剂，包含权利要求1所述的葡聚糖衍生物。

3.如权利要求2所述的附加剂，其特征在于，所述附加剂包括表面活性剂、增溶剂、乳化剂、润湿剂、药物载体。

4.如权利要求1所述的葡聚糖衍生物的制备方法，所述制备方法是以二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物与右旋糖酐按照摩尔比为1:1～10:1的比例混合于溶液中，经还原氨化反应后生成目标产物；其中，所述制备方法包括：

准备二脂肪酸甘油酯的氨基衍生物的步骤；以及，

合成目标产物的步骤；其中，

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述溶液为二甲基亚砜溶液。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述两端均含氨基的化合物为乙二胺、丙二胺、丁二胺或己二胺。

7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述活化剂为N,N'-羰基二咪唑、N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯、N-羟基琥珀酰亚胺氯甲酸酯中的一种或几种混合。