JP2001081103A - ヒアルロン酸結合薬剤 - Google Patents
ヒアルロン酸結合薬剤Info
- Publication number
- JP2001081103A JP2001081103A JP25894199A JP25894199A JP2001081103A JP 2001081103 A JP2001081103 A JP 2001081103A JP 25894199 A JP25894199 A JP 25894199A JP 25894199 A JP25894199 A JP 25894199A JP 2001081103 A JP2001081103 A JP 2001081103A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hyaluronic acid
- drug
- liver
- reaction
- binding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 肝臓に効率的に指向し、未結合の薬剤より低
用量で効果が得られ、副作用も少なく、肝炎や肝硬変な
どの肝臓疾患の治療又は予防において、高い効果をあげ
ることができるヒアルロン酸結合薬剤を提供すること。 【解決手段】 ヒアルロン酸とアミノ基を有する薬剤と
の結合反応生成物であることを特徴とするヒアルロン酸
結合薬剤を構成とする。
用量で効果が得られ、副作用も少なく、肝炎や肝硬変な
どの肝臓疾患の治療又は予防において、高い効果をあげ
ることができるヒアルロン酸結合薬剤を提供すること。 【解決手段】 ヒアルロン酸とアミノ基を有する薬剤と
の結合反応生成物であることを特徴とするヒアルロン酸
結合薬剤を構成とする。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品として有用
なヒアルロン酸とアミノ基を有する薬剤との結合反応生
成物であることを特徴とするヒアルロン酸結合薬剤に関
する。
なヒアルロン酸とアミノ基を有する薬剤との結合反応生
成物であることを特徴とするヒアルロン酸結合薬剤に関
する。
【０００２】
【従来の技術及びその課題】薬剤を、必要な時に、必要
な場所で、必要な量だけ効率良く作用させる技術はドラ
ッグデリバリーシステムと総称され、薬物の治療効果を
向上させる様々な方法が開発されている。このドラッグ
デリバリーシステムの１つの分野として、薬剤を必要な
場所で作用させる為に、薬剤に標的部位を特異的に認識
する物質を結合し、標的へ能動的に指向させる方法があ
り、特に肝臓を標的としたデリバリーシステムが盛んに
研究されている。
な場所で、必要な量だけ効率良く作用させる技術はドラ
ッグデリバリーシステムと総称され、薬物の治療効果を
向上させる様々な方法が開発されている。このドラッグ
デリバリーシステムの１つの分野として、薬剤を必要な
場所で作用させる為に、薬剤に標的部位を特異的に認識
する物質を結合し、標的へ能動的に指向させる方法があ
り、特に肝臓を標的としたデリバリーシステムが盛んに
研究されている。
【０００３】肝臓は血管系が発達しており、血管内膜に
およそ１００ｎｍの細孔が数多く存在する為に、指向性
を付与した薬剤が肝細胞に容易に到達することができ、
さらに、肝細胞にはガラクトースを認識するアシアロ糖
タンパク質レセプターが存在することから、ガラクトー
スを利用して肝臓指向性を付与させることができる（高
分子 46、843− 1997）。
およそ１００ｎｍの細孔が数多く存在する為に、指向性
を付与した薬剤が肝細胞に容易に到達することができ、
さらに、肝細胞にはガラクトースを認識するアシアロ糖
タンパク質レセプターが存在することから、ガラクトー
スを利用して肝臓指向性を付与させることができる（高
分子 46、843− 1997）。
【０００４】肝臓に指向させる薬剤としては、Ｂ型及び
Ｃ型肝炎の治療に用いられているインターフェロンが、
有効率が低く（３０％程度）、発熱や全身倦怠感などの
副作用が多い等の問題をかかえており、ドラッグデリバ
リーシステム化が望まれていた（医薬ジャーナル 31、1
92− 1995）。インターフェロンは、投与後に一過性に
血中濃度が上昇し、その後速やか腎臓を経て尿に排出さ
れる為、肝臓で十分な効果を得にくく、肝臓以外の部位
での副作用を引き起こしやすいと考えられている。した
がって、インターフェロンを肝臓に能動的に指向させる
事で、治療効果を改善し、副作用を軽減させることが期
待される。
Ｃ型肝炎の治療に用いられているインターフェロンが、
有効率が低く（３０％程度）、発熱や全身倦怠感などの
副作用が多い等の問題をかかえており、ドラッグデリバ
リーシステム化が望まれていた（医薬ジャーナル 31、1
92− 1995）。インターフェロンは、投与後に一過性に
血中濃度が上昇し、その後速やか腎臓を経て尿に排出さ
れる為、肝臓で十分な効果を得にくく、肝臓以外の部位
での副作用を引き起こしやすいと考えられている。した
がって、インターフェロンを肝臓に能動的に指向させる
事で、治療効果を改善し、副作用を軽減させることが期
待される。
【０００５】実際に、インターフェロンにガラクトース
を結合させ、肝臓指向性を付与させる技術は開示されて
いる（特開平6-345795号、特開平7-70195号）。しか
し、動物試験において治療効果は認められず、その原因
は明らかではないが、ガラクトースに問題があったと推
測されている（Drug Delivery System 9,266 199
4)。。
を結合させ、肝臓指向性を付与させる技術は開示されて
いる（特開平6-345795号、特開平7-70195号）。しか
し、動物試験において治療効果は認められず、その原因
は明らかではないが、ガラクトースに問題があったと推
測されている（Drug Delivery System 9,266 199
4)。。
【０００６】一方、ヒアルロン酸は、本来、ヒトの体内
に多量に存在する生体適合性物質であり、鶏冠や微生物
から精製されたヒアルロン酸が眼科手術補助剤、関節注
入剤などの医薬品として長い使用実績がある。ヒアルロ
ン酸を血中に投与した場合、肝臓に集積する事が報告さ
れており（Biochem J.200,415-1981)、これを利用し
て、ヒアルロン酸とポリリジンを結合したキャリアーに
よって、遺伝子を肝臓に送達できることが示されている
（有機合成化学協会誌 55、427- 1997)。
に多量に存在する生体適合性物質であり、鶏冠や微生物
から精製されたヒアルロン酸が眼科手術補助剤、関節注
入剤などの医薬品として長い使用実績がある。ヒアルロ
ン酸を血中に投与した場合、肝臓に集積する事が報告さ
れており（Biochem J.200,415-1981)、これを利用し
て、ヒアルロン酸とポリリジンを結合したキャリアーに
よって、遺伝子を肝臓に送達できることが示されている
（有機合成化学協会誌 55、427- 1997)。
【０００７】しかし、ヒアルロン酸と薬剤（インターフ
ェロン）の結合体に関しては、血中半減期の延長、抗原
性の低減に有用であることは開示されていたが（特開平
5-85942号）、肝臓指向性については検討されていなか
った。
ェロン）の結合体に関しては、血中半減期の延長、抗原
性の低減に有用であることは開示されていたが（特開平
5-85942号）、肝臓指向性については検討されていなか
った。
【０００８】本発明の目的は、投与した薬剤を肝臓へ指
向させ、その治療効果を高め、副作用を軽減させる為に
有用であり、かつ、毒性や抗原性が無く安全な肝臓デリ
バリー製剤を提供することにある。
向させ、その治療効果を高め、副作用を軽減させる為に
有用であり、かつ、毒性や抗原性が無く安全な肝臓デリ
バリー製剤を提供することにある。
【０００９】本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意
研究を重ねた結果、ヒアルロン酸とアミノ基を有する薬
剤とを、水性溶媒中で反応させることにより、安定なヒ
アルロン酸結合薬剤を得ることができ、又、このヒアル
ロン酸結合薬剤は、肝臓への指向性に優れていることを
見い出し、本発明を完成するに至った。
研究を重ねた結果、ヒアルロン酸とアミノ基を有する薬
剤とを、水性溶媒中で反応させることにより、安定なヒ
アルロン酸結合薬剤を得ることができ、又、このヒアル
ロン酸結合薬剤は、肝臓への指向性に優れていることを
見い出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、
（１）ヒアルロン酸とアミノ基を有する薬剤との結合反
応生成物であることを特徴とするヒアルロン酸結合薬
剤、（２）ヒアルロン酸の分子量が２０００〜９０００
である（１）記載のヒアルロン酸結合薬剤、（３）アミ
ノ基を有する薬剤が抗ウイルス剤である（１）又は
（２）記載のヒアルロン酸結合薬剤、（４）アミノ基を
有する薬剤がインターフェロンである（１）又は（２）
記載のヒアルロン酸結合薬剤、（５）肝臓への指向性に
優れた（１）〜（４）のいずれかに記載のヒアルロン酸
結合薬剤である。
（１）ヒアルロン酸とアミノ基を有する薬剤との結合反
応生成物であることを特徴とするヒアルロン酸結合薬
剤、（２）ヒアルロン酸の分子量が２０００〜９０００
である（１）記載のヒアルロン酸結合薬剤、（３）アミ
ノ基を有する薬剤が抗ウイルス剤である（１）又は
（２）記載のヒアルロン酸結合薬剤、（４）アミノ基を
有する薬剤がインターフェロンである（１）又は（２）
記載のヒアルロン酸結合薬剤、（５）肝臓への指向性に
優れた（１）〜（４）のいずれかに記載のヒアルロン酸
結合薬剤である。
【００１１】
【発明の実施の形態】以下、本発明について詳しく説明
する。本発明における薬剤は、アミノ基を少なくとも１
個有する低分子化合物、ペプチド、蛋白質、核酸、脂
質、糖質などからなる薬剤である。
する。本発明における薬剤は、アミノ基を少なくとも１
個有する低分子化合物、ペプチド、蛋白質、核酸、脂
質、糖質などからなる薬剤である。
【００１２】本発明の抗ウイルス剤は、アミノ基を少な
くとも１個有する逆転写酵素阻害剤やウイルスプロテア
ーゼ阻害剤などの抗ウイルス活性を有する物質であり、
例えば、インターフェロン、アシクロビル、アデフォビ
ル、ガンシクロビル、ザルシタビン、ビダラビン、ラミ
ブジン、リバビリン、メシル酸サキナビル、等が挙げら
れる。
くとも１個有する逆転写酵素阻害剤やウイルスプロテア
ーゼ阻害剤などの抗ウイルス活性を有する物質であり、
例えば、インターフェロン、アシクロビル、アデフォビ
ル、ガンシクロビル、ザルシタビン、ビダラビン、ラミ
ブジン、リバビリン、メシル酸サキナビル、等が挙げら
れる。
【００１３】本発明のインターフェロンは特に制限は無
いが、肝炎適応の医薬品として用いられているα型、β
型が好ましい。特に、α型インターフェロンには、天然
由来でアミノ酸配列が異なる亜種や、遺伝子工学的にア
ミノ酸配列を改変したものなど多種類が知られている
が、リジン残基のε−アミノ基又はＮ末端のアミノ基を
有するものであればよい。
いが、肝炎適応の医薬品として用いられているα型、β
型が好ましい。特に、α型インターフェロンには、天然
由来でアミノ酸配列が異なる亜種や、遺伝子工学的にア
ミノ酸配列を改変したものなど多種類が知られている
が、リジン残基のε−アミノ基又はＮ末端のアミノ基を
有するものであればよい。
【００１４】薬剤と反応させるヒアルロン酸は、分子量
が２０００〜９０００のものが好ましい。肝臓のヒアル
ロン酸レセプターはヒアルロン酸の８糖（分子量１６０
０）を認識し、よりヒアルロン酸の分子量が大きいほど
結合しやすいことが示されており（Biochem J.234,653
− 1986)、実際、分子量１６００のヒアルロン酸をイン
ターフェロンに結合した場合、肝臓指向性は認められな
い。又、分子量１００００以上では、溶液中の反応速度
が遅く、十分な量のヒアルロン酸結合薬剤が得られな
い。
が２０００〜９０００のものが好ましい。肝臓のヒアル
ロン酸レセプターはヒアルロン酸の８糖（分子量１６０
０）を認識し、よりヒアルロン酸の分子量が大きいほど
結合しやすいことが示されており（Biochem J.234,653
− 1986)、実際、分子量１６００のヒアルロン酸をイン
ターフェロンに結合した場合、肝臓指向性は認められな
い。又、分子量１００００以上では、溶液中の反応速度
が遅く、十分な量のヒアルロン酸結合薬剤が得られな
い。
【００１５】これらの低分子量のヒアルロン酸は、高分
子量のヒアルロン酸をヒアルロン酸分解酵素により部分
消化し、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、電
気泳動などの精製方法により調製できる（Carbohydrate
Res.239、239− 1993)。ヒアルロン酸はＮ−アセチル
グルコサミンとグルクロン酸の分子量約４００の２糖繰
り返し構造からなる直鎖状の多糖であり、分解酵素によ
ってこの分子量４００単位で切断される為、得られる低
分子量ヒアルロン酸の分子量は１６００（８糖）、２０
００（１０糖）、２４００（１２糖）のように４００単
位となる。
子量のヒアルロン酸をヒアルロン酸分解酵素により部分
消化し、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、電
気泳動などの精製方法により調製できる（Carbohydrate
Res.239、239− 1993)。ヒアルロン酸はＮ−アセチル
グルコサミンとグルクロン酸の分子量約４００の２糖繰
り返し構造からなる直鎖状の多糖であり、分解酵素によ
ってこの分子量４００単位で切断される為、得られる低
分子量ヒアルロン酸の分子量は１６００（８糖）、２０
００（１０糖）、２４００（１２糖）のように４００単
位となる。
【００１６】本発明のヒアルロン酸結合薬剤は、架橋剤
を含まない水性溶媒中で薬剤のアミノ基と、ヒアルロン
酸のアルデヒド基よりＳｃｈｉｆｆ塩基が生成されたも
のである。さらに、水素化ほう素ナトリウムのような還
元剤を用いて還元し、より安定な結合体とすることもで
きる。ヒアルロン酸のアルデヒド基は、還元末端の非環
状構造中のアルデヒド基である。
を含まない水性溶媒中で薬剤のアミノ基と、ヒアルロン
酸のアルデヒド基よりＳｃｈｉｆｆ塩基が生成されたも
のである。さらに、水素化ほう素ナトリウムのような還
元剤を用いて還元し、より安定な結合体とすることもで
きる。ヒアルロン酸のアルデヒド基は、還元末端の非環
状構造中のアルデヒド基である。
【００１７】薬剤のヒアルロン酸結合率は、反応温度、
反応時間、及び反応溶媒組成等の反応条件によって変動
するが、薬剤１分子に少なくとも１分子以上のヒアルロ
ン酸が結合されていればよく、使用目的に応じて種々選
択できる。反応溶媒は、反応を妨害しないものであれば
特に制限されないが、ほう酸緩衝液、リン酸緩衝液、酢
酸緩衝液等の緩衝液が挙げられる。反応温度は、薬剤が
変性しない温度であればよいが、０〜５０℃の範囲が好
ましい。反応のｐＨは、薬剤が変性しないｐＨであれば
よいが、ｐＨ５〜９が好ましい。反応時間は、１〜１４
日程度、好ましくは５〜７日である。反応液は透析、塩
析、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、及び電
気泳動等の精製法で精製し、目的のヒアルロン酸結合薬
剤を得ることができる。
反応時間、及び反応溶媒組成等の反応条件によって変動
するが、薬剤１分子に少なくとも１分子以上のヒアルロ
ン酸が結合されていればよく、使用目的に応じて種々選
択できる。反応溶媒は、反応を妨害しないものであれば
特に制限されないが、ほう酸緩衝液、リン酸緩衝液、酢
酸緩衝液等の緩衝液が挙げられる。反応温度は、薬剤が
変性しない温度であればよいが、０〜５０℃の範囲が好
ましい。反応のｐＨは、薬剤が変性しないｐＨであれば
よいが、ｐＨ５〜９が好ましい。反応時間は、１〜１４
日程度、好ましくは５〜７日である。反応液は透析、塩
析、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、及び電
気泳動等の精製法で精製し、目的のヒアルロン酸結合薬
剤を得ることができる。
【００１８】本発明のヒアルロン酸結合薬剤は、通常自
体公知の医薬用担体や希釈剤等の添加剤とともに製剤と
することができ、非経口的又は経口的にヒトを含む哺乳
動物に投与することができる。
体公知の医薬用担体や希釈剤等の添加剤とともに製剤と
することができ、非経口的又は経口的にヒトを含む哺乳
動物に投与することができる。
【００１９】
【実施例】以下、実施例を掲げて本発明について具体的
に説明するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。
に説明するが、本発明はこれに限定されるものではな
い。
【００２０】調製例１：分子量１６００〜６０００のヒ
アルロン酸の調製 分子量２００万のヒアルロン酸を５ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ
６．０に溶解し、濃度０．５％とした。羊精巣ヒアルロ
ニダーゼ（タイプＶ、Ｓｉｇｍａ社製）を最終濃度２７
ユニット／ｍｌになるように添加し、５０℃で２５．５
時間インキュベートした後、１００℃で２分間煮沸し
た。これを、イオン交換クロマトグラフィー（ＱＳｅｐ
ｈａｒｏｓｅＨＰ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）により分
取し、分子量１６００、２８００、４０００、及び６０
００のヒアルロン酸を得た。
アルロン酸の調製 分子量２００万のヒアルロン酸を５ｍＭ酢酸緩衝液ｐＨ
６．０に溶解し、濃度０．５％とした。羊精巣ヒアルロ
ニダーゼ（タイプＶ、Ｓｉｇｍａ社製）を最終濃度２７
ユニット／ｍｌになるように添加し、５０℃で２５．５
時間インキュベートした後、１００℃で２分間煮沸し
た。これを、イオン交換クロマトグラフィー（ＱＳｅｐ
ｈａｒｏｓｅＨＰ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ社製）により分
取し、分子量１６００、２８００、４０００、及び６０
００のヒアルロン酸を得た。
【００２１】実施例１：ヒアルロン酸結合インターフェ
ロンの合成（１）還元剤無し ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量１６００、２８００、
４０００、６０００）とヒトインタ−フェロン−α（Ｉ
ＦＮ−α、ＰＥＰＲＯ ＴＥＣＨ社製）３×１０8 単位
を溶解し、３５℃攪拌下で７日間反応させた。次いで、
ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５：
アマシャム ファルマシア バイオテク社製）によりヒ
アルロン酸−ＩＦＮ−α結合体を精製し、ＳＤＳポリア
クリルアミドゲル電気泳動した結果、ヒアルロン酸が１
〜３個結合したＩＦＮ−αのバンドが検出された。分子
量１６００と４０００のヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合
体の電気泳動ゲルの結果を図１と図２に示す。
ロンの合成（１）還元剤無し ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量１６００、２８００、
４０００、６０００）とヒトインタ−フェロン−α（Ｉ
ＦＮ−α、ＰＥＰＲＯ ＴＥＣＨ社製）３×１０8 単位
を溶解し、３５℃攪拌下で７日間反応させた。次いで、
ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５：
アマシャム ファルマシア バイオテク社製）によりヒ
アルロン酸−ＩＦＮ−α結合体を精製し、ＳＤＳポリア
クリルアミドゲル電気泳動した結果、ヒアルロン酸が１
〜３個結合したＩＦＮ−αのバンドが検出された。分子
量１６００と４０００のヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合
体の電気泳動ゲルの結果を図１と図２に示す。
【００２２】実施例２：ヒアルロン酸結合インターフェ
ロンの合成（２）還元剤有り ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量４０００）とＩＦＮ−
α３×１０8 単位を溶解し、還元剤（水素化ほう素ナト
リウム）１ｍｇを加え、３５℃攪拌下で７日間反応させ
た。次いで、ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒ
ｄｅｘ７５）によりヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体を
精製し、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動した結
果を図３に示す。ヒアルロン酸が１〜３個結合したＩＦ
Ｎ−αのバンドが検出された。
ロンの合成（２）還元剤有り ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量４０００）とＩＦＮ−
α３×１０8 単位を溶解し、還元剤（水素化ほう素ナト
リウム）１ｍｇを加え、３５℃攪拌下で７日間反応させ
た。次いで、ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒ
ｄｅｘ７５）によりヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体を
精製し、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動した結
果を図３に示す。ヒアルロン酸が１〜３個結合したＩＦ
Ｎ−αのバンドが検出された。
【００２３】調製例２：分子量１００００のヒアルロン
酸の調製 分子量２００万のヒアルロン酸を蒸留水に溶解し、濃度
１％とした。牛精巣ヒアルロニダーゼ（タイプＩ−Ｓ、
Ｓｉｇｍａ社製）を最終濃度０．２ｍｇ／ｍｌになるよ
うに添加し、５０℃で２時間インキュベートした後、１
００℃で２分間煮沸した。これを、ゲルろ過クロマトグ
ラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５、Ｐｈａｒｍａｃｉａ
社製）により分取し、分子量１００００のヒアルロン酸
を得た。
酸の調製 分子量２００万のヒアルロン酸を蒸留水に溶解し、濃度
１％とした。牛精巣ヒアルロニダーゼ（タイプＩ−Ｓ、
Ｓｉｇｍａ社製）を最終濃度０．２ｍｇ／ｍｌになるよ
うに添加し、５０℃で２時間インキュベートした後、１
００℃で２分間煮沸した。これを、ゲルろ過クロマトグ
ラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５、Ｐｈａｒｍａｃｉａ
社製）により分取し、分子量１００００のヒアルロン酸
を得た。
【００２４】比較例１：分子量１００００のヒアルロン
酸での反応 ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量１００００）とＩＦＮ
−α３×１０8 単位を溶解し、還元剤（水素化ほう素ナ
トリウム）１ｍｇを加え、３５℃攪拌下で７日間反応さ
せた。次いで、この反応液をＳＤＳポリアクリルアミド
ゲル電気泳動した結果、ヒアルロン酸結合ＩＦＮ−αの
バンドは認められなかった。
酸での反応 ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量１００００）とＩＦＮ
−α３×１０8 単位を溶解し、還元剤（水素化ほう素ナ
トリウム）１ｍｇを加え、３５℃攪拌下で７日間反応さ
せた。次いで、この反応液をＳＤＳポリアクリルアミド
ゲル電気泳動した結果、ヒアルロン酸結合ＩＦＮ−αの
バンドは認められなかった。
【００２５】実施例３：臓器集積試験 実施例１及び２で作製したヒアルロン酸結合ＩＦＮ−α
（ＨＡ−ＩＦＮ−α）を、０．５％ウシ血清アルブミン
−リン酸緩衝生理食塩水に０．０１ｍｇ／ｍｌに溶解し
た。これを８週齢オスｄｄｙマウスの尾静脈より０．１
ｍｌ投与した。投与３０分後に、尾静脈より採血し血清
を得、さらに、マウスを開腹し灌流・脱血した後に肝臓
と腎臓を摘出した。摘出した臓器は、ホモジナイザーで
破砕し遠心分離により臓器抽出液を得た。血清及び各臓
器中のＩＦＮ−α量を、抗ヒトＩＦＮ−α抗体を用いた
酵素免疫測定法を用いて測定し、投与量に対する各臓器
への集積率（％）を求めた。結果を表１に示す。
（ＨＡ−ＩＦＮ−α）を、０．５％ウシ血清アルブミン
−リン酸緩衝生理食塩水に０．０１ｍｇ／ｍｌに溶解し
た。これを８週齢オスｄｄｙマウスの尾静脈より０．１
ｍｌ投与した。投与３０分後に、尾静脈より採血し血清
を得、さらに、マウスを開腹し灌流・脱血した後に肝臓
と腎臓を摘出した。摘出した臓器は、ホモジナイザーで
破砕し遠心分離により臓器抽出液を得た。血清及び各臓
器中のＩＦＮ−α量を、抗ヒトＩＦＮ−α抗体を用いた
酵素免疫測定法を用いて測定し、投与量に対する各臓器
への集積率（％）を求めた。結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
【００２７】表１より、単独のＩＦＮ−αは肝臓指向性
を示さないが、分子量２８００及び４０００のヒアルロ
ン酸を結合したＩＦＮ−αに高い肝臓指向性が認められ
た。特に、還元剤無しの場合により高い肝臓指向性が認
められた。しかし、分子量１６００のヒアルロン酸を結
合したＩＦＮ−αには肝臓指向性は認められなかった。
を示さないが、分子量２８００及び４０００のヒアルロ
ン酸を結合したＩＦＮ−αに高い肝臓指向性が認められ
た。特に、還元剤無しの場合により高い肝臓指向性が認
められた。しかし、分子量１６００のヒアルロン酸を結
合したＩＦＮ−αには肝臓指向性は認められなかった。
【００２８】実施例４：ヒアルロン酸結合抗ウイルス剤
（アシクロビル）の合成 ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量４０００）と3Ｈ−ア
シクロビル（第一化学社製）６２５ＫＢｑ／０．５ｍｇ
を溶解し、３５℃攪拌下で３日間反応させた。次いで、
ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５：
アマシャム ファルマシア バイオテク社製）により未
結合のアシクロビルを除き、ヒアルロン酸結合アシクロ
ビルを得た。
（アシクロビル）の合成 ４５０μｌの０．１Ｍほう酸緩衝液（ｐＨ８．８）に、
２５ｍｇのヒアルロン酸（分子量４０００）と3Ｈ−ア
シクロビル（第一化学社製）６２５ＫＢｑ／０．５ｍｇ
を溶解し、３５℃攪拌下で３日間反応させた。次いで、
ゲルろ過クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５：
アマシャム ファルマシア バイオテク社製）により未
結合のアシクロビルを除き、ヒアルロン酸結合アシクロ
ビルを得た。
【００２９】実施例５：臓器集積試験 実施例４で作製したヒアルロン酸結合アシクロビルを、
０．５％ウシ血清アルブミン−リン酸緩衝生理食塩水に
１．５Ｍｄｐｍ／ｍｌに溶解した。８週齢オスｄｄｙマ
ウスの尾静脈より０．１ｍｌ投与し、投与３０分後に採
血し肝臓と腎臓を摘出した。血清、及び各臓器の放射活
性を測定し、投与量に対する各臓器への集積率（％）を
求めた。結果を表２に示す。
０．５％ウシ血清アルブミン−リン酸緩衝生理食塩水に
１．５Ｍｄｐｍ／ｍｌに溶解した。８週齢オスｄｄｙマ
ウスの尾静脈より０．１ｍｌ投与し、投与３０分後に採
血し肝臓と腎臓を摘出した。血清、及び各臓器の放射活
性を測定し、投与量に対する各臓器への集積率（％）を
求めた。結果を表２に示す。
【００３０】
【表２】
【００３１】表２より、単独のアシクロビルは肝臓指向
性を示さないが、分子量４０００のヒアルロン酸を結合
したアシクロビルには高い肝臓指向性が認められた。
性を示さないが、分子量４０００のヒアルロン酸を結合
したアシクロビルには高い肝臓指向性が認められた。
【００３２】
【発明の効果】本発明のヒアルロン酸結合薬剤は、肝臓
に効率的に指向するので、未結合の薬剤より低用量で効
果が得られ、副作用も少なく、肝炎や肝硬変などの肝臓
疾患の治療又は予防において、高い効果をあげることが
できる。
に効率的に指向するので、未結合の薬剤より低用量で効
果が得られ、副作用も少なく、肝炎や肝硬変などの肝臓
疾患の治療又は予防において、高い効果をあげることが
できる。
【図１】還元剤無しの条件下で分子量１６００のヒアル
ロン酸とＩＦＮ−αとの結合体を合成し、次いで精製し
たヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体のＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動した結果を示す。
ロン酸とＩＦＮ−αとの結合体を合成し、次いで精製し
たヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体のＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動した結果を示す。
【図２】還元剤無しの条件下で分子量４０００のヒアル
ロン酸とＩＦＮ−αとの結合体を合成し、次いで精製し
たヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体のＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動した結果を示す。
ロン酸とＩＦＮ−αとの結合体を合成し、次いで精製し
たヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体のＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動した結果を示す。
【図３】還元剤有りの条件下で分子量４０００のヒアル
ロン酸とＩＦＮ−αとの結合体を合成し、次いで精製し
たヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体のＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動した結果を示す。
ロン酸とＩＦＮ−αとの結合体を合成し、次いで精製し
たヒアルロン酸−ＩＦＮ−α結合体のＳＤＳポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動した結果を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 平松 裕 神奈川県横浜市磯子区洋光台３−11−13− 507 (72)発明者 丸山 厚 神奈川県横浜市港南区日野６−11−13− 105 (72)発明者 赤池 敏宏 東京都保谷市下保谷４−15−23 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA27 BA34 DA21 MA01 NA05 NA14 ZA752 ZB012 ZB332 4C090 AA02 AA09 BA67 BD37 DA09 DA23
Claims (5)
- 【請求項１】 ヒアルロン酸とアミノ基を有する薬剤と
の結合反応生成物であることを特徴とするヒアルロン酸
結合薬剤。 - 【請求項２】 ヒアルロン酸の分子量が２０００〜９０
００である請求項１記載のヒアルロン酸結合薬剤。 - 【請求項３】 アミノ基を有する薬剤が抗ウイルス剤で
ある請求項１又は２記載のヒアルロン酸結合薬剤。 - 【請求項４】 アミノ基を有する薬剤がインターフェロ
ンである請求項１又は２記載のヒアルロン酸結合薬剤。 - 【請求項５】 肝臓への指向性に優れた請求項１〜４の
いずれか１項に記載のヒアルロン酸結合薬剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25894199A JP2001081103A (ja) | 1999-09-13 | 1999-09-13 | ヒアルロン酸結合薬剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25894199A JP2001081103A (ja) | 1999-09-13 | 1999-09-13 | ヒアルロン酸結合薬剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001081103A true JP2001081103A (ja) | 2001-03-27 |
Family
ID=17327174
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25894199A Pending JP2001081103A (ja) | 1999-09-13 | 1999-09-13 | ヒアルロン酸結合薬剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001081103A (ja) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001005434A3 (en) * | 1999-07-20 | 2001-11-15 | Amgen Inc | Hyaluronic acid-protein conjugates |
| JP2006502988A (ja) * | 2002-07-03 | 2006-01-26 | ペリコール・サイエンス・インコーポレーテッド | ヒアルロン酸の組成物および使用方法 |
| JP2006504747A (ja) * | 2002-10-18 | 2006-02-09 | フィディア ファルマチェウティチ ソシエタ ペル アチオニ | ヒアルロン酸又はヒアルロン酸誘導体に共有結合したタキサン類 |
| WO2006101030A1 (ja) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Q.P. Corporation | 低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物 |
| WO2007099830A1 (ja) * | 2006-02-24 | 2007-09-07 | Q.P. Corporation | 新規な低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、ならびにこれを用いた化粧料、医薬組成物および食品組成物 |
| JP2009051877A (ja) * | 2007-08-23 | 2009-03-12 | Q P Corp | 新規なヒアルロン酸および／またはその塩、ならびにこれを用いた食品組成物および経口医薬品組成物、ならびに該ヒアルロン酸および／またはその塩を有効成分として含有する経口用皮膚改善剤または経口用皮膚含水量増加剤 |
| JP2009155486A (ja) * | 2007-12-27 | 2009-07-16 | Kikkoman Corp | 低分子化ヒアルロン酸とその製造法 |
| WO2012118189A1 (ja) | 2011-03-03 | 2012-09-07 | 中外製薬株式会社 | アミノ－カルボン酸により修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
| WO2014038641A1 (ja) | 2012-09-05 | 2014-03-13 | 中外製薬株式会社 | アミノ酸およびステリル基が導入されたヒアルロン酸誘導体 |
| JP2016529362A (ja) * | 2013-08-29 | 2016-09-23 | ホーリー ストーン バイオテック カンパニー リミテッド | グリコサミノグリカン化合物、その調製方法および使用 |
| JPWO2015133559A1 (ja) * | 2014-03-06 | 2017-04-06 | キユーピー株式会社 | スフィンゴシン１リン酸により修飾されたヒアルロン酸 |
| WO2019098393A1 (ja) | 2017-11-15 | 2019-05-23 | 中外製薬株式会社 | ポリエチレングリコールにより修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6454002A (en) * | 1987-06-11 | 1989-03-01 | Sukandeigen Ab | Hyaluronic acid conjugate and its production |
| JPH02231078A (ja) * | 1989-03-03 | 1990-09-13 | Ube Ind Ltd | ヒアルロン酸修飾スーパーオキシドジスムターゼ |
| WO1992006714A1 (en) * | 1990-10-18 | 1992-04-30 | Shiseido Co., Ltd. | Combination of hyaluronic acid with medicinal ingredient and production thereof |
| JPH0585942A (ja) * | 1991-02-26 | 1993-04-06 | Denki Kagaku Kogyo Kk | インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 |
| WO1994019376A1 (en) * | 1993-02-26 | 1994-09-01 | Drug Delivery System Institute, Ltd. | Polysaccharide derivative and drug carrier |
| JPH09188705A (ja) * | 1995-11-07 | 1997-07-22 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | グリコサミノグリカン誘導体およびその製造法 |
| WO1998055149A1 (fr) * | 1997-06-03 | 1998-12-10 | Shionogi & Co., Ltd. | Utilisation de vecteurs medicamenteux pour produire des medicaments migrants dans les ganglions lymphatiques |
| JPH11124401A (ja) * | 1997-10-22 | 1999-05-11 | Chisso Corp | オリゴヒアルロン酸もしくはその塩の製造法 |
-
1999
- 1999-09-13 JP JP25894199A patent/JP2001081103A/ja active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6454002A (en) * | 1987-06-11 | 1989-03-01 | Sukandeigen Ab | Hyaluronic acid conjugate and its production |
| JPH02231078A (ja) * | 1989-03-03 | 1990-09-13 | Ube Ind Ltd | ヒアルロン酸修飾スーパーオキシドジスムターゼ |
| WO1992006714A1 (en) * | 1990-10-18 | 1992-04-30 | Shiseido Co., Ltd. | Combination of hyaluronic acid with medicinal ingredient and production thereof |
| JPH0585942A (ja) * | 1991-02-26 | 1993-04-06 | Denki Kagaku Kogyo Kk | インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 |
| WO1994019376A1 (en) * | 1993-02-26 | 1994-09-01 | Drug Delivery System Institute, Ltd. | Polysaccharide derivative and drug carrier |
| JPH09188705A (ja) * | 1995-11-07 | 1997-07-22 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | グリコサミノグリカン誘導体およびその製造法 |
| WO1998055149A1 (fr) * | 1997-06-03 | 1998-12-10 | Shionogi & Co., Ltd. | Utilisation de vecteurs medicamenteux pour produire des medicaments migrants dans les ganglions lymphatiques |
| JPH11124401A (ja) * | 1997-10-22 | 1999-05-11 | Chisso Corp | オリゴヒアルロン酸もしくはその塩の製造法 |
Cited By (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001005434A3 (en) * | 1999-07-20 | 2001-11-15 | Amgen Inc | Hyaluronic acid-protein conjugates |
| JP2006502988A (ja) * | 2002-07-03 | 2006-01-26 | ペリコール・サイエンス・インコーポレーテッド | ヒアルロン酸の組成物および使用方法 |
| JP4818608B2 (ja) * | 2002-07-03 | 2011-11-16 | ペリコール・サイエンス・インコーポレーテッド | ヒアルロン酸の組成物および使用方法 |
| JP2006504747A (ja) * | 2002-10-18 | 2006-02-09 | フィディア ファルマチェウティチ ソシエタ ペル アチオニ | ヒアルロン酸又はヒアルロン酸誘導体に共有結合したタキサン類 |
| JP4704753B2 (ja) * | 2002-10-18 | 2011-06-22 | フィディア ファルマチェウティチ ソシエタ ペル アチオニ | ヒアルロン酸又はヒアルロン酸誘導体に共有結合したタキサン類 |
| WO2006101030A1 (ja) * | 2005-03-22 | 2006-09-28 | Q.P. Corporation | 低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物 |
| JP2006265287A (ja) * | 2005-03-22 | 2006-10-05 | Q P Corp | 低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物 |
| US8933054B2 (en) | 2005-03-22 | 2015-01-13 | Q.P. Corporation | Low molecular weight hyaluronic acid and/or salt thereof, method for producing same, and cosmetic preparation and food composition containing same |
| JP4576583B2 (ja) * | 2005-03-22 | 2010-11-10 | キユーピー株式会社 | ヒアルロン酸またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを含有する化粧料および食品組成物 |
| US8367818B2 (en) | 2006-02-24 | 2013-02-05 | Q.P. Corporation | Low molecular weight hyaluronic acid and/or salt thereof, and cosmetic preparation, pharmaceutical composition, and food composition each using same |
| WO2007099830A1 (ja) * | 2006-02-24 | 2007-09-07 | Q.P. Corporation | 新規な低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、ならびにこれを用いた化粧料、医薬組成物および食品組成物 |
| JP5289936B2 (ja) * | 2006-02-24 | 2013-09-11 | キユーピー株式会社 | 新規な低分子ヒアルロン酸および／またはその塩、ならびにこれを用いた化粧料、医薬組成物および食品組成物 |
| JP2009051877A (ja) * | 2007-08-23 | 2009-03-12 | Q P Corp | 新規なヒアルロン酸および／またはその塩、ならびにこれを用いた食品組成物および経口医薬品組成物、ならびに該ヒアルロン酸および／またはその塩を有効成分として含有する経口用皮膚改善剤または経口用皮膚含水量増加剤 |
| JP2009155486A (ja) * | 2007-12-27 | 2009-07-16 | Kikkoman Corp | 低分子化ヒアルロン酸とその製造法 |
| WO2012118189A1 (ja) | 2011-03-03 | 2012-09-07 | 中外製薬株式会社 | アミノ－カルボン酸により修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
| US9243077B2 (en) | 2011-03-03 | 2016-01-26 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Derivative of hyaluronic acid modified with amino-carboxylic acid |
| EP3184553A1 (en) | 2011-03-03 | 2017-06-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Derivative of hyaluronic acid modified with amino-carboxylic acid |
| WO2014038641A1 (ja) | 2012-09-05 | 2014-03-13 | 中外製薬株式会社 | アミノ酸およびステリル基が導入されたヒアルロン酸誘導体 |
| KR20150048238A (ko) | 2012-09-05 | 2015-05-06 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 아미노산 및 스테릴기가 도입된 히알루론산 유도체 |
| US11564971B2 (en) | 2012-09-05 | 2023-01-31 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hyaluronic acid derivative having amino acid and steryl group introduced thereinto |
| JP2016529362A (ja) * | 2013-08-29 | 2016-09-23 | ホーリー ストーン バイオテック カンパニー リミテッド | グリコサミノグリカン化合物、その調製方法および使用 |
| JPWO2015133559A1 (ja) * | 2014-03-06 | 2017-04-06 | キユーピー株式会社 | スフィンゴシン１リン酸により修飾されたヒアルロン酸 |
| US10485874B2 (en) | 2014-03-06 | 2019-11-26 | Kewpie Corporation | Hyaluronic acid modified by sphingosine-1-phosphoric acid |
| WO2019098393A1 (ja) | 2017-11-15 | 2019-05-23 | 中外製薬株式会社 | ポリエチレングリコールにより修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
| US11512147B2 (en) | 2017-11-15 | 2022-11-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hyaluronic acid derivative modified with polyethylene glycol |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2980569B2 (ja) | インターフェロン複合体 | |
| Xi et al. | Liver targeting of interferon through pullulan conjugation | |
| JPH0770195A (ja) | 糖修飾インターフェロン | |
| JPH09506087A (ja) | 改良されたインターフェロン−ポリマー複合体 | |
| JP6913144B2 (ja) | 二重誘導体化キトサンナノ粒子、並びに生体内での遺伝子導入のためのその製造、及び使用方法 | |
| US5372942A (en) | Protease K resistant arginine deiminase, its method of preparation and its use as an anti-neoplastic agent | |
| JP2004522712A (ja) | ヒドロキシアパタイト標的化ポリ（エチレングリコール）および関連重合体 | |
| JP2001081103A (ja) | ヒアルロン酸結合薬剤 | |
| JPH0383583A (ja) | アミロース―リゾチームハイブリッドと活性化糖およびその製造法 | |
| KR0184858B1 (ko) | 폴리믹신 복합체 | |
| CN108853515B (zh) | 短肽水凝胶的制备方法及应用、药物组合物 | |
| CA2720306C (en) | Double-stranded polyethylene glycol modified growth hormone, preparation method and application thereof | |
| JPH02108624A (ja) | 抗ｈｉｖ作用を有するヘパリンフラグメント及びフラクション | |
| US20030103934A1 (en) | Drugs having long-term retention in target tissue | |
| Fiume et al. | Targeting of antiviral drugs to the liver using glycoprotein carriers | |
| JPH0550273B2 (ja) | ||
| JP3209338B2 (ja) | ポリエチレングリコール修飾アルギニンデイミナーゼおよびその製造法 | |
| CN101591649B (zh) | 甲氧基聚乙二醇修饰的精氨酸脱亚氨酶及其制备与应用 | |
| JPH0585942A (ja) | インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体 | |
| JPH0660107B2 (ja) | 凝血塊を溶解するためのグリコシル化されたタンパク質の製薬学的調剤およびその製造法 | |
| JPH1160499A (ja) | 抗腫瘍剤 | |
| JP5798628B2 (ja) | ウシ顆粒球コロニー刺激因子のための製剤およびその変異体 | |
| EP0045285A1 (en) | Non absorbable compounds of mucolytic activity, the process for their preparation and therapeutic compositions which contain them as active principle | |
| JPH02238879A (ja) | Ｎ―ポリオシル―ポリペプチド | |
| JP3522798B2 (ja) | 糖修飾蛋白質の製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20060906 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100119 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100608 |