WO2019098393A1

WO2019098393A1 - ポリエチレングリコールにより修飾されたヒアルロン酸誘導体

Info

Publication number: WO2019098393A1
Application number: PCT/JP2018/043306
Authority: WO
Inventors: 服部　一夫; 貴士中井; 中村　輝郎; 剛下房地
Original assignee: 中外製薬株式会社
Priority date: 2017-11-15
Filing date: 2018-11-15
Publication date: 2019-05-23
Also published as: JP7221211B2; US20210371548A1; EP3712181A4; EP3712181A1; EP3712181B1; JPWO2019098393A1; US11512147B2

Abstract

本発明は、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）および式（Ｉｃ）で表される繰り返し単位を、それぞれ１以上含む、特定のカチオン性基、特定の疎水性基および特定の親水性基を導入したヒアルロン酸誘導体を提供する。また、該ヒアルロン酸誘導体と薬物との複合体および該ヒアルロン酸誘導体を含む医薬組成物、特に、該ヒアルロン酸誘導体と薬物との複合体を提供する。

Description

ポリエチレングリコールにより修飾されたヒアルロン酸誘導体

　本発明は、カチオン性基およびポリエチレングリコールにより修飾され、さらに疎水性基を導入したヒアルロン酸誘導体、該ヒアルロン酸誘導体と薬物との複合体、該ヒアルロン酸誘導体および薬物を含む医薬組成物、および該ヒアルロン酸誘導体を有効成分として含む医薬組成物に関する。

　体内には消化管粘膜、咽喉粘膜、口腔粘膜、鼻腔粘膜、耳腔粘膜、角膜粘膜、結膜粘膜、肺粘膜、膣粘膜、肛門粘膜などの粘膜が、外部環境や内部臓器に面するさまざまな部位に存在している。粘膜は粘弾性を有するゲルであり、乾燥・温熱などの物理化学的な刺激や、ウイルスや病原体といった外敵から身を守るバリアとして機能している。
　医薬品の経粘膜投与は、全身用途もしくは局所用途で用いられるが、全身用途の場合は非侵襲であることからＱＯＬの観点において有益であり、また、局所用途の場合は目的組織への高暴露および全身毒性の低減が可能であることから有益である。しかしながら、多くの場合、投与された薬物の粘膜への接着性および透過性は低く、充分な効果が得られない。特に点眼投与においては、涙による排泄により、透過性が非常に低いことが知られている（非特許文献１）。
　経粘膜用のドラッグデリバリー製剤としてリポソーム（非特許文献２~４）や、表面修飾したナノサスペンジョン（非特許文献５）、ポリマーミセル（非特許文献６）が報告されている。しかしながら、これらの製剤は低分子薬物に適した技術であり、タンパク質、ペプチド医薬品に対しては、封入量が低い、変性が起こるなどの理由から適しておらず、低分子からペプチド、タンパク質まで汎用的に用いることができる技術とは言えない。
　また、安全性の面から、製剤に用いる基材は、非抗原性、非変異原性、無毒性、生分解性を併せ持つものでなければならない。
　近年、多糖を薬物担体の基材として用いるという報告がある。その中でも、ヒアルロン酸（ＨＡ）は、１９３４年、Ｋ．Ｍｅｙｅｒによって牛の眼の硝子体から単離された生体材料（多糖）であり、細胞外マトリックスの主成分として古くから知られている。ＨＡは、Ｄ−グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとがβ（１→３）グリコシド結合により連結された二糖単位から成るグリコサミノグリカンの一種である。ＨＡは、化学的、物理的構造に種差が無く、ヒトもその代謝系を有しており、免疫性および毒性といった面でも最も安全な医用生体材料（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ）の一つである。
　上述の安全性という特性に加え、近年、細胞の接着、増殖、移動の誘導に関するヒアルロン酸の生理活性物質としての側面も注目されている。更に製造の観点からも、微生物による高分子量のヒアルロン酸の大量生産が可能となっており、ヒアルロン酸を基剤として用いたドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の研究が盛んに行われている。薬物をヒアルロン酸とコンジュゲートすることで、薬物の癌組織へのターゲティング（特許文献４）、肝臓へのターゲティング（特許文献５）、抗原性の低減等（特許文献６）が達成できるという報告がなされている。また、生体内にはＣＤ４４、ＲＨＡＭＭ（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｆｏｒ　Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　Ａｃｉｄ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ　Ｍｏｔｉｌｉｔｙ）、ＬＹＶＥ−１（Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ　Ｖｅｓｓｅｌ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ＨＡ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１）、ＨＡＲＥ（Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｆｏｒ　Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ）などのＨＡレセプターが存在することが報告されている（非特許文献１６および１７）。特にＣＤ４４やＲＨＡＭＭは多くの癌細胞において過剰発現しており、それゆえＨＡを癌ターゲティングキャリアの基材として用いる試みがなされている。その例として、パクリタキセル−ＨＡコンジュゲート（非特許文献１８~２０および特許文献１１）、カンプトテシン−ＨＡコンジュゲート（特許文献１２）、ドキソルビシン−ＨＰＭＡ［Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド］−ＨＡコンジュゲート（非特許文献２１）、酪酸−ＨＡコンジュゲート（非特許文献２２）、ドキソルビシン封入ＨＡ−ＰＥＧ−ＰＬＧＡナノパーティクル（非特許文献２３）、ｓｉＲＮＡ封入ＨＡゲル（非特許文献２４）、ドキソルビシン封入ＨＡ被覆リポソーム（非特許文献２５）などが挙げられる。さらに、アミド結合により導入したエチレンジアミンリンカーを介してコール酸をコンジュゲートしたＨＡ誘導体について報告されている（非特許文献２６）。これらＨＡを基材としたキャリアは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＣＤ４４高発現細胞において効率良く取り込まれることが報告されている（例えば非特許文献１８）。また、ヒトの角膜や結膜にもＣＤ４４やＲＨＡＭＭが発現しており（非特許文献７）、ヒアルロン酸を用いて核酸の取り込みが亢進されることが報告されている（非特許文献８）。一方で、血中滞留性を高めるためにヒアルロン酸のグルクロン酸部分のカルボキシを高度に修飾したヒアルロン酸が開発され、その有用性が示されてきた（特許文献７）。
　その他、多糖由来の薬物担体として、コレステリル基などを導入したプルラン誘導体が、水溶液中においてナノサイズの微粒子を形成し、疎水性低分子、ペプチド、タンパク質などと複合化するホスト分子として機能することが報告されている（非特許文献１３）。タンパク質取り込み後の当該プルラン誘導体についての熱力学的評価により、取り込まれたタンパク質が、プルランのヒドロキシとの水素結合により安定化されることが示されている（非特許文献１４）。
　また、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）（特許文献９）およびリノレイン酸を導入したキトサン（非特許文献１５）をタンパク質との複合体形成の材料として利用する報告もある。さらに、特許文献１０には、架橋性基を有するヒアルロン酸誘導体、および疎水性基を有する親水性多糖類誘導体を含む組成物であって、架橋性基を有するヒアルロン酸誘導体が、親水性多糖類誘導体の存在下、ヒアルロン酸または架橋形成が可能な基を有するその誘導体の架橋形成反応により調製される組成物が報告されており、特許文献１３には、疎水性基としてコレステリル基を有する基をヒアルロン酸に導入したヒアルロン酸誘導体が、水中で会合により微粒子を形成し、薬物と複合体を形成することが報告されている。特許文献１には、アミノ酸と疎水性基を有する基をヒアルロン酸に導入したヒアルロン酸誘導体が、水中で会合により微粒子を形成し、薬物と複合体を形成し、かつ血中滞留性が高いことが報告されている。
　カチオン性多糖であるキトサンに疎水性基を導入し、薬物封入キャリアとして利用する報告（非特許文献９および１０）や、疎水化プルランをカチオン化した報告もある（非特許文献１１）。カチオン化したヒアルロン酸としては、アルギニンを導入した報告（非特許文献１２、特許文献８）や、４級アミンを導入した報告（特許文献２および３）がある。
　一方、ヒアルロン酸のカルボキシとコハク酸モノトコフェロールエステルのカルボキシとが、Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_６−ＮＨ_２、Ｈ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_２−Ｓ−Ｓ−（ＣＨ_２）_２−ＮＨ_２、またはＨ_２Ｎ−（ＣＨ_２）_３−ＣＯＯＨを介して結合したヒアルロン酸誘導体が、水溶液中でミセルを形成し、水不溶性薬物を送達させるための担体として使用できることが知られている（特許文献１４）。
　また、デキストラン等にスペルミンまたはそのアンモニウム塩を導入し、その一部にさらにコレステリルまたは長鎖アルキルアミンを導入したカチオン性多糖により、プラスミドＤＮＡのトランスフェクション効率が向上したこと（特許文献１５）、低分子ヒアルロン酸のカルボキシに疎水性の長鎖アミンおよびカチオン性素子としてのスペルミンを導入したものがｓｉＲＮＡとの複合体形成に有用であること（非特許文献２７）、商品としてのカチオン化されたセルロース：ポリオクタニウム１０（特許文献１６）、ヒアルロン酸のカルボキシとコール酸がエチレンジアミンを介して結合したものが薬物キャリアとして有用であること（特許文献１７）、ヒアルロン酸のカルボキシと脂溶性化合物であるトコフェロールのヒドロキシとがジアミンまたはヒドロキシアルキルアミンを介して結合したものが、薬物キャリアとして利用できること（特許文献１８）が、それぞれ知られている。
　ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を薬剤分子に導入することによる薬剤の誘導体化（ＰＥＧ化技術）はこれまでにさまざまな医薬品開発に用いられてきた。その効果としては、１）薬剤の分子量が大きくなることで腎排出を抑制し、薬剤の体内動態を改善する、２）酵素による分解を防ぐ、３）不溶性化合物・タンパク質が可溶化する等が挙げられる。これまでに小分子薬剤・タンパク質・核酸・ナノ粒子等がＰＥＧ化され、そのうちのいくつかは医薬品として承認されている（非特許文献２８）。
　ＰＥＧでグラフトされたヒアルロン酸が、インスリンの注射剤として使用されている（非特許文献２９）。
　蛍光物質であるシアニン５．５でラベルされたＰＥＧ化ヒアルロン酸ナノゲル（ヒアルロン酸−５β−コラン酸コンジュゲートにさらにＰＥＧが化学的にコンジュゲートした物質）が、ｉｎ　ｖｉｖｏで、癌への集積性を改善したことが示されいる（非特許文献３０）。なお、該物質においては、エチレンジアミンは５β−コラン酸およびとヒアルロン酸のカルボキシとアミド結合を形成している（非特許文献３１）。
　ＳｉＲＮＡ分子等の核酸の効率的な送達のための、ＰＥＧ化ヒアルロン酸でコーティングされたカチオン性リポソームについて報告がされている（非特許文献３２）。
　ＳｉＲＮＡ分子等の核酸の効率的な送達および癌等の様々な病態を治療するための、カチオン性脂質、膜安定化脂質、およびＰＥＧ誘導体に共有結合した少なくとも１つの脂質を含む複数の脂質を含み、ＰＥＧ誘導体に結合しているグリコサミノグリカンでコーティングされたリポソームについて報告がされている（特許文献１９）。
　コラン酸−エチレンジアミン誘導体およびＰＥＧ−ＮＨ_２誘導体を、それぞれアミド結合でヒアルロン酸のカルボキシと結合させたヒアルロン酸誘導体が、抗腫瘍薬のバイオアベイラビリティーを改善し、毒性を軽減し、半減期を伸長させることが報告されている（特許文献２０）。
　デキストラン−スペルミン誘導体のスペルミン末端のアミノをコレステロールなどの疎水性化合物またはＰＥＧで修飾したヒアルロン酸誘導体が、生分解性のポリカチオン組成物として、遺伝子治療における遺伝子の目標細胞への送達に有用であることが知られている（特許文献２１）。

国際公開第２０１４／０３８６４１号国際公開２００８／１３３２６７号国際公開２００７／６３７２５号国際公開９２／０６７１４号特開２００１−８１１０３号公報特開平２−２７３１７６号公報国際公開２００６／０２８１１０号国際公開２０１１／１４８１１６号国際公開第２００２／０２２１５４号国際公開第２００８／１３６５３６号国際公開第２００４／０３５６２９号国際公開第２００９／０７４６７８号国際公開第２０１０／０５３１４０号中国特許出願公開第１０４９４５５３８号明細書米国特許第６９５８３２５号明細書特表２０１３−５１６４９８号公報中国特許出願公開第１０３１４３０２７号明細書中国特許出願公開第１０４９４５５３８号明細書特表２０１７−５２０５４９号公報中国特許出願公開第１０３１４３０２７号明細書欧州特許出願公開第１２２２９２６号明細書

Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　第６１巻、第１５８−１７１頁、２００９年Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　第４７巻、第３９−５４頁、２００１年Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ　第８６巻、第１１５−１１９頁、２０１４年Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ　第１３６巻、第２４７−２５３頁、２００９年Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ　Ｖｉｓｉｏｎ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　第４巻第３号Ａｒｔｉｃｌｅ　１１、第１−１２頁、２０１５年Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ　第１０巻、第６０２７−６０３７頁、２０１５年Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　第１３７巻、第１６５−１７６頁、２０１２年Ｇｅｎｅ　Ｔｈｅｒａｐｙ　第１５巻、第６６８−６７６頁、２００８年Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　第６２巻、第２８−４１頁、２０１０年Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　第３３巻、第３４８５−３４９３頁、２０１２年Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　第１９巻、第８８２−８９０頁、２００８年ＣＡＲＢＯＨＹＤＲＡＴＥ　Ｐｏｌｙｍｅｒｓ　第８７巻、第２２１１−２２１６頁、２０１２年Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　第２６巻、第３０６２−３０６８頁、１９９３年Ｃｏｌｌｏｉｄｓ　ａｎｄ　Ｓｕｒｆａｃｅｓ　第１１２巻、第９１−９５頁、１９９６年Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｐｏｌｙｍｅｒｓ　第６２巻、第２９３−２９８頁、２００５年ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ　ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＳ　第５巻、第４７４−４８６頁、２００８年Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｄｒｕｇ　Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　第１６巻、第９１−１０７頁、２００８年Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　第１０巻、第７５５−７６３頁、１９９９年Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　第１４巻、第３５９８−３６０６頁、２００８年Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　第１９巻、第１３１９−１３２５頁、２００８年Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　第１９巻、第３９６−４０２頁、２００２年Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　第１０巻、第４８２２−４８３０頁、２００４年Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　第３巻、第２４６−２５７頁、２００７年Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ　第１１９巻、第２４５−２５２頁、２００７年Ｎｅｏｐｌａｓｉａ　第６巻、第３４３−３５３頁、２００４年Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　第１９巻、第４１０２−４１０７頁、２００９年Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｐｏｌｙｍｅｒｓ　第７７巻（第１号）、第９５−１０４頁、２００９年Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍ　第３１巻（第４号）、第２６８−２７４頁、２０１６年Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ　第５９巻、第７７−８６頁、１９９９年Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　第３２巻、第１８８０−１８８９頁、２０１１年Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　第３１巻、第１０６−１１４頁、２０１０年Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ　第４７７巻、第５９０−６００頁、２０１４年

　本発明が解決しようとする課題は、安全性と粘膜への接着性・粘膜透過性の両方を兼ね備えたヒアルロン酸誘導体を提供することである。また本発明が解決しようとするさらなる課題は、該ヒアルロン酸誘導体を含む医薬組成物、特に、該ヒアルロン酸誘導体と薬物との複合体を提供することである。

　本発明者は、かかる課題を解決する為に鋭意研究を進めたところ、特定のポリエチレングリコールを含む親水性基、特定のカチオン性基および特定の疎水性基を導入したヒアルロン酸誘導体が、安全性と粘膜への接着性・粘膜透過性を有すること、および該ヒアルロン酸誘導体と薬物との複合体が、薬物を徐放化するといった、医薬組成物として良好な特性を有することを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち本発明は、粘膜への接着性と粘膜透過性とを併せ持つヒアルロン酸誘導体、および、該ヒアルロン酸誘導体および薬理活性を有する化合物を含有する複合体に関する。さらに本発明は、該ヒアルロン酸誘導体の製造方法、ならびに薬物および該ヒアルロン酸誘導体を含む経粘膜投与に適した医薬組成物およびその製造方法に関する。
　本発明の１つの側面において、以下の（１）~（１４）のヒアルロン酸誘導体および該ヒアルロン酸を含む（１５）の医薬組成物が提供される。
　（１）式（Ｉａ）：

［式中、
　Ｒ^１ｘ、Ｒ^２ｘ、Ｒ^３ｘおよびＲ^４ｘは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^５ｘは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｘ^１は、−ＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１を表し；
　Ｒ^７は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^８は、水素原子、−ＣＯＮＲ^９Ｒ^１０および−ＣＯ_２Ｒ^１１から選択され；
　Ａ^１は、単結合、−（Ｙ^１−ＣＨ_２−ＣＨ_２）_ｎ２−および−（Ｙ^２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎａ）_ｎ３−から選択され；
　Ｂ^１は、−ＮＲ^１２Ｒ^１３、−Ｎ^＋Ｒ^１２Ｒ^１３Ｒ^１４Ｑ⁻、−Ｎ（−Ａ^２−ＮＲ^１２Ｒ^１３）_２、窒素原子を１~４個含む５~１０員のヘテロアリール、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２および基

から選択され；
　Ｙ^１およびＹ^２は、独立に、酸素原子または−ＮＲ^１６−を表し；
　ｎ１は、１~６の整数を表し、ｎ２およびｎ３は、独立に、１~１０の整数を表し、ｎａは、１または２の整数を表し、ｎ４は０~３の整数を表し；
　Ａ^２は、Ｃ_２−１０アルキレンを表し；
　Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４、Ｒ^１５およびＲ^１６は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｑ⁻は、カウンターアニオンを表す］で表される繰り返し単位、
　式（Ｉｂ）：

［式中、
　Ｒ^１ｙ、Ｒ^２ｙ、Ｒ^３ｙおよびＲ^４ｙは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^５ｙは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルがら選択され；
　Ｘ^２は、−Ｏ−Ｚ^３、−ＯＲ^ａ、−ＮＲ^ａＲ^５ｚ、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^２、−ＮＲ^ｂ−Ｚ^３、−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２から選択され；
　Ｒ^５ｚおよびＲ^６は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^ａは、Ｃ_８−５０アルキル、Ｃ_８−５０アルケニルおよびＣ_８−５０アルキニルから選択され；
　Ｚ^０は、以下の基：

から選択され（式中、「＊」は、酸素原子との結合位置を示し、「＊＊」は、Ｚ^１またはＺ^２との結合位置を示す）；
　Ｚ^１は、Ｃ_１−３０アルキレン、または−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｍ−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、ここで該アルキレンは、独立に、−Ｏ−、−ＮＲ^ｇ−および−Ｓ−Ｓ−から選択される１~５の基が挿入されていてもよく、ｍは、１~１００から選択される整数であり；
　Ｚ^２は、以下の基：
　−ＮＲ^ｂ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−Ｏ−Ｚ^３、
　−Ｏ−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−Ｏ−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−Ｓ−Ｚ^３、
　−ＣＯ−Ｚ^ａ−Ｓ−Ｚ^３、
　−Ｏ−ＣＯ−Ｚ^ｂ−Ｓ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−Ｚ^ｂ−Ｓ−Ｚ^３、および
　−Ｓ−Ｓ−Ｚ^３、
から選択され；
　Ｒ^ｂおよびＲ^ｃは、独立に、水素原子、Ｃ_１−２０アルキル、アミノＣ_２−２０アルキルおよびヒドロキシＣ_２−２０アルキルから選択され、ここで当該基のアルキル部分は、独立に、−Ｏ−および−ＮＲ^ｆ−から選択される１~３個の基が挿入されていてもよく；
　Ｒ^ｄは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^ｆは、独立に、水素原子、Ｃ_１−１２アルキル、アミノＣ_２−１２アルキル、およびヒドロキシＣ_２−１２アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は−Ｏ−および−ＮＨ−から選択される１~２個の基が挿入されていてもよく；
　Ｒ^ｇは、独立に、水素原子、Ｃ_１−２０アルキル、アミノＣ_２−２０アルキルまたはヒドロキシＣ_２−２０アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は、独立に、−Ｏ−および−ＮＨ−から選択される１~３個の基が挿入されていてもよく；
　Ｚ^３は、ステリル基であり；
　Ｚ^ａは、Ｃ_１−５アルキレンであり；
　Ｚ^ｂは、Ｃ_２−８アルキレンまたはＣ_２−８アルケニレンであり；
　Ｒ^３１は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^３２は、水素原子、−ＣＯＮＲ^３３Ｒ^３４および−ＣＯ_２Ｒ^３５から選択され；
　Ａ^３は、単結合、−（Ｙ^３−ＣＨ_２−ＣＨ_２）_ｎ１２−および−（Ｙ^４−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎ１４）_ｎ１３−から選択され；
　Ｂ^２は、−ＮＲ^３６−Ｘ^４、−Ｎ（−Ｘ^４）_２、−Ｎ（−Ａ^４−ＮＲ^３６Ｒ^３７）（−Ａ^４−ＮＲ^３６−Ｘ^４）、−Ｎ（−Ａ^４−ＮＲ^３６−Ｘ^４）_２および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｘ^４から選択され；
　Ｙ^３およびＹ^４は、独立に、酸素原子または−ＮＲ^１６ａ−を表し；
　ｎ１１は、１~６の整数を表し、ｎ１２およびｎ１３は、独立に、１~１０の整数を表し、ｎ１４は、１または２の整数を表し；
　Ａ^４は、Ｃ_２−１０アルキレンを表し；
　Ｒ^３３、Ｒ^３４、Ｒ^３５、Ｒ^３６、Ｒ^３７およびＲ^１６ａは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｘ^４は、−ＣＯ_２−Ｚ^３、−ＣＯ_２−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ_２−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ_２−Ｚ^０−Ｚ^２、−ＣＯ−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ−Ｚ^０−Ｚ^２、−ＣＯＲ^ａ、−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^３、−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２または−Ｚ^０−Ｚ^２を表す］で表される繰り返し単位、および
　式（Ｉｃ）：

［式中、
　Ｒ^１ｚ、Ｒ^２ｚ、Ｒ^３ｚおよびＲ^４ｚは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^４ｚａは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｘ^３は、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１、−ＮＲ^３８−ＰＧ１および−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３から選択され；
　Ｒ^３８、およびＲ^３９は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^４０は、水素原子、−ＣＯＮＲ^４３Ｒ^４４および−ＣＯ_２Ｒ^４５から選択され；
　Ａ^５は、単結合、−（Ｙ^５−ＣＨ_２−ＣＨ_２）_ｎ１６−および−（Ｙ^６−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎ１８）_ｎ１７−から選択され；
　Ｂ^３は、−ＮＲ^４１−Ｘ^６、−Ｎ（−Ａ^６−ＮＲ^４１Ｒ^４２）（−Ａ^６−ＮＲ^４１−Ｘ^６）、−Ｎ（−Ａ^６−ＮＲ^４１−Ｘ^６）_２および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｘ^６から選択され；
　Ｙ^５およびＹ^６は、独立に、酸素原子または−ＮＲ^１６ｂ−を表し；
　ｎ１５は、１~６の整数を表し、ｎ１６およびｎ１７は、独立に、１~１０の整数を表し、ｎ１８は、１または２の整数を表し；
　Ｒ^４１、Ｒ^４２、Ｒ^４３、Ｒ^４４、Ｒ^４５およびＲ^１６ｂは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ａ^６は、Ｃ_２−１０アルキレンを表し；
　Ｘ^６は、−ＰＧ２、−ＣＯ_２−ＰＧ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−ＰＧ２または−ＣＯ−ＰＧ２であり；
　ＰＧ１は、以下の式（Ｚ）、式（Ｙ）、式（Ｘａ）、式（Ｘｂ）、式（Ｘｃ）、式（Ｘｄ）、式（Ｗ１）、式（Ｗ２）、式（Ｗ３）、式（Ｗ４）、式（Ｖ１）、式（Ｖ２）、式（Ｖ３）および式（Ｖ４）で表される基から選択され；
　ＰＧ２は、以下の式（Ｚ）、式（Ｙ）、式（Ｕ１）、式（Ｕ２）、式（Ｕ３）、式（Ｕ４）、式（Ｕ５）、式（Ｕ６）、式（Ｕ７）、式（Ｕ８）、式（Ｕ９）、式（Ｔ１）、式（Ｔ２）、式（Ｔ３）、式（Ｔ４）、式（Ｔ５）、式（Ｔ６）、式（Ｔ７）、式（Ｔ８）、式（Ｔ９）、式（Ｔ１０）、式（Ｔ１１）および式（Ｔ１２）で表される基から選択され；
−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−Ｔａ　（Ｚ）

それぞれの式中、
　Ｔａは、−ＮＲ^ｈＲ、−ＣＯＲ^ｉおよび−ＯＲ^ｎから選択され、
　Ｔｂは、−ＯＲ^ｎを表し、
　ｎｚは、２０~１５００の整数であり、
　ｎｙおよびｎｘは、その和が２０~１５００となる、それぞれ１０以上の整数であり、
　Ｘは、以下の式（Ｘ１）または式（Ｘ２）で表される２価の基であり（式中、「＊＊＊」は、隣接するメチンとの結合位置を示す）、
−ＣＨ_２−　（Ｘ１）
＊＊＊−ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_ｎｗ−　（Ｘ２）
　Ｒ、Ｒ’およびＲ^ｎは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し、
　Ｒ^ｈは、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、式（Ｘａ）、式（Ｘｂ）、式（Ｘｃ）、式（Ｘｄ）、式（Ｗ１）、式（Ｗ２）、式（Ｗ３）、式（Ｗ４）、式（Ｖ１）、式（Ｖ２）、式（Ｖ３）および式（Ｖ４）で表される基から選択され、
　Ｒ^１は、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ、式（Ｕ１）、式（Ｕ２）、式（Ｕ３）、式（Ｕ４）、式（Ｕ５）、式（Ｕ６）、式（Ｕ７）、式（Ｕ８）、式（Ｕ９）、式（Ｔ１）、式（Ｔ２）、式（Ｔ３）、式（Ｔ４）、式（Ｔ５）、式（Ｔ６）、式（Ｔ７）、式（Ｔ８）、式（Ｔ９）、式（Ｔ１０）、式（Ｔ１１）および式（Ｔ１２）で表される基から選択され、
　ｎｗは、２~１０の整数を表し、
　ｎは、１または２であり、
　Ｔは、−ＮＲＲ’、−ＣＯＲ^ｏ、および−ＯＲから選択され、
　Ｒ^ｏは、ヒドロキシまたはＣ_１−６アルコキシを表す］
で表される繰り返し単位を、それぞれ１以上含む、ヒアルロン酸誘導体。
　（２）式（ＩＩ）

［式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２ａ、Ｒ^３ａおよびＲ^４ａは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^５ａは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｘ^ａは、ヒドロキシおよび−Ｏ⁻Ｑ^＋から選択され、ここでＱ^＋は、カウンターカチオンを表す］
で表わされる１以上の繰り返し単位をさらに含む、（１）に記載のヒアルロン酸誘導体。
　（３）式（ＩＩＩ）

［式中、
　Ｒ^１ｂ、Ｒ^２ｂ、Ｒ^３ｂおよびＲ^４ｂは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され、
　Ｒ^５ｂは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され、
　Ｘ^５は、−ＮＲ^１７−Ｒ^１８を表し、
　Ｒ^１７は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し、
　Ｒ^１８は、１以上のヒドロキシで置換されていてもよいＣ_１−１０アルキルを表す］
で表される１以上の繰り返し単位をさらに含む、（１）または（２）に記載のヒアルロン酸誘導体。
　（４）Ｘ^１が、以下の式：

［式中、Ｒ^１９およびＲ^２０は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し、Ｑ⁻は、カウンターアニオンを表す］
から選択される、（１）~（３）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（５）Ｘ^５が、以下の式：

で表されるいずれか１つ以上の基である、（３）または（４）に記載のヒアルロン酸誘導体。
　（６）ステリル基が、以下の式：

［式中、Ｒ^２１は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表す］
のいずれかで表される、請求項１~５のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　（７）Ｘ^２が、−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２であり、Ｘ^３が、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１および−ＮＲ^３８−ＰＧ１から選択される、（１）~（６）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（８）Ｘ^２が、Ｘ^４が−ＣＯ−Ｚ^１−Ｚ^２または−Ｚ^３である−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２であり、Ｘ^３が、Ｘ^６が−ＣＯ−ＰＧ２である−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３である、（１）~（６）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（９）存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉｂ）で表される繰り返し単位の割合が、３~５５％である、（１）~（８）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（１０）Ｘ^２が、−Ｏ−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２から選択され、Ｘ^３が、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１および−ＮＲ^３８−ＰＧ１から選択され、存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉａ）で表される繰り返し単位の割合が、１~７５％である、（１）~（６）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（１１）存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉａ）で表される繰り返し単位の割合、およびＸ^２が−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２である式（Ｉｂ）で表される繰り返し単位の割合、およびＸ^３が−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３である式（Ｉｃ）で表される繰り返し単位の割合の和が、３０~１００％である、（１）~（６）、（８）および（９）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（１２）存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉｃ）で表される繰り返し単位の割合が、１~３０％である、（１）~（１１）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（１３）Ｘ^１が、以下の式：

から選択される、（１）~（１２）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（１４）Ｘ^３が、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１および−ＮＲ^３８−ＰＧ１で表される基から選択され、ＰＧ１が、式（Ｚ）で表される基である、（１）~（７）、（９）、（１０）、（１２）および（１３）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
　（１５）（１）~（１４）のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体を含む、医薬組成物。
　Ｒ^８が水素原子であり、Ｂ^１が−ＮＲ^１２Ｒ^１３であり、かつ、Ａ^１が単結合である時、ｎ１は１~２であるのが好ましい。
　Ｒ^１８が、１以上のヒドロキシで置換されている時は、Ｃ_２−１０アルキルであるのが好ましい。
　ｎ３個あるｎａおよびｎ１３個あるｎ１４は、それぞれ、同一であっても、異なっていてもよい。
　Ｘ^４が−Ｚ^３である時、−Ｚ^３は、コラノイル基であるのが好ましい。
　ｎ４は、０、１および２であるのが好ましく、０および１であるのが更に好ましく、１であるのがさらに好ましい。
　ｎｙおよびｎｘは、その和が２０~１５００となる、それぞれ１０以上の整数であるが、ｎｙおよびｎｘの組み合わせとしては、例えば、１０および１０、１０および２５、１０および５０、１０および１００、１０および１５０、１０および２５０、１０および５００、１０および１０００、１０および１２００、２０および１０、２０および２５、２０および５０、２０および１００、２０および１５０、２０および２５０、２０および５００、２０および１０００、２０および１２００、６０および１０、６０および２５、６０および５０、６０および１００、６０および１５０、６０および２５０、６０および５００、６０および１０００、６０および１２００、１００および１０、１００および２５、１００および５０、１００および１００、１００および１５０、１００および２５０、１００および５００、１００および１０００、１００および１２００、１２５および１０、２００および２５、１２５および５０、２００および１００、１２５および１５０、２００および２５０、１２５および５００、２００および１０００、１２５および１２００、５００および１０、６００および２５、５００および５０、６００および１００、５００および１５０、６００および２５０、５００および５００、７５０および７５０、５００および１０００、１０００および１０、１２００および２５、１０００および５０、１２００および１００、１０００および１５０、１２００および２５０ならびに１０００および５００が挙げられる。
　ｎｚ、ｎｙおよびｎｘの組み合わせとしては、例えば、２０、１０および１０；５０、１０および１０；７０、１０および１０；１５０、１０および１０；３００、１０および１０；５００、１０および１０；８００、１０および１０；２０、５０および１０；５０、７０および１０；７０、５０および１０；１５０、７０および１０；３００、５０および１０；５００、７０および１０；８００、５０および１０；２０、５０および５０；５０、７０および７０；７０、５０および７０；１５０、７０および５０；３００、５０および５０；５００、７０および７０；８００、５０および５０、２０、１００および１００；５０、１５０および１５０；７０、１００および１５０；１５０、１５０および１００；３００、１００および１００；５００、１５０および１５０；８００、１００および１００；２０、３００および３００；５０、５００および５００；７０、３００および５００；１５０、５００および３００；３００、３００および３００；５００、５００および５００；８００、３００および３００；２０、７００および７００；５０、７００および７００；７０、７００および７００；１５０、７００および７００；３００、７００および７００；５００、７００および７００；ならびに８００、７００および７００が挙げられる。
　本発明のヒアルロン酸誘導体を薬物と複合化することにより得られる医薬組成物により、薬物の粘膜透過性を向上させることができる。また、本発明のヒアルロン酸誘導体を薬物と複合化することにより、薬物の粘膜付着性を向上させた医薬組成物、薬物の吸収性を向上させた医薬組成物、薬物のバイオアベイラビリティーを向上させた医薬組成物、薬物の毒性または副作用を低減させた医薬組成物、薬物の粘膜内滞留性を向上させた医薬組成物、薬物の眼内移行性を含む組織内移行性を向上させた医薬組成物、薬物の組織内滞留性を向上させた医薬組成物、薬物の化学的安定性を向上させた医薬組成物、薬物の物理安定性を向上させた医薬組成物、薬物の徐放性を向上させた医薬組成物および薬物の薬効を向上させた医薬組成物など、性能を向上させた医薬組成物を製造することもできる。なお、これらの医薬組成物は、経粘膜投与にも適している。また、安全な医用生体材料であるヒアルロン酸を原料とすることから、本発明のヒアルロン酸誘導体自体の安全性は、高いと言える。
　薬物と本発明のヒアルロン酸誘導体とを含む、経粘膜投与に用いるための医薬組成物においては、好ましくは、ａ）水溶液中において、本発明のヒアルロン酸誘導体の自己会合により形成されたナノサイズ（１~１，０００ｎｍ）の微粒子（ナノゲル）と薬物を混合することにより、薬物をナノゲル内に封入もしくはナノゲル表面に接着すること、ｂ）薬物を微粉砕化することで得られる粒子を本発明のヒアルロン酸誘導体で被覆すること、ｃ）薬物を乾燥状態の本発明のヒアルロン酸誘導体と混合または混和することなどにより、本発明のヒアルロン酸誘導体と薬効を有する低分子化合物やタンパク質やペプチドなどの薬物とを複合化することができる。薬物の結晶やアモルファスの微粒子、乳酸・グリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）などの他の基材と薬物との複合体を、本発明のヒアルロン酸誘導体で被覆することで、薬物を本発明のヒアルロン酸誘導体と複合化することもできる。乾燥状態の薬物と乾燥状態の本発明のヒアルロン酸誘導体を混合して複合化することもできる。これらの複合化により、粘膜透過性を向上させた医薬組成物や経粘膜投与に用いるための医薬組成物を製造することができる。

　本発明のヒアルロン酸誘導体を用いることで、薬物、特に低分子化合物、核酸、および薬効を有するタンパク質やペプチドをその生物活性を維持したまま多量に封入した経粘膜投与用製剤を提供することが可能となる。また、本発明のヒアルロン酸誘導体は、安全性の面においても優れており、薬物の粘膜接着性・粘膜透過性と細胞毒性の双方において、医薬組成物の担体として特に優れた特性を有している。

実施例２−１で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２のＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率：３１％）である。実施例２−２で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＥＤＡの導入率：３７％）である。実施例２−３で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１５％、ＤＥＴの導入率：６９％）である。実施例２−３で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴのＤ_２Ｏ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１５％、ＤＥＴの導入率：６９％）である。実施例２−４で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２のＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１６％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率：３６％）である。実施例２−５で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／ＭｅのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：３８％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率：２２％、Ｍｅの導入率：１７％）である。実施例２−６で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ／ＭｅのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：３３％、ＥＤＡの導入率：３０％、Ｍｅの導入率：１０％）である。実施例２−７で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ／ＭｅのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＤＥＴの導入率：２９％、Ｍｅの導入率：４３％）である。実施例２−７で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ／ＭｅのＤ_２Ｏ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＤＥＴの導入率：２９％、Ｍｅの導入率：４３％）である。実施例２−８で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２／ＭｅのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：３７％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率：２２％、Ｍｅの導入率：１１％）である。実施例２−１０で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＳＰＲ／ＭｅのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：２７％、ＳＰＲの導入率：３７％、Ｍｅの導入率：１６％）である。実施例２−１１で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＰＴＭＡ／ＭｅのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：２９％、ＰＴＭＡの導入率：２９％、Ｍｅの導入率：３１％）である。実施例２−１４で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＰｒＯＨのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：３１％、ＰｒＯＨの導入率：１９％）である。実施例２−１４で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／ＰｒＯＨのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：３１％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率：１１％、ＰｒＯＨの導入率：１９％）である。実施例２−２５で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／ＥｔＯＨのＤＭＳＯ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１６％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率：１６％、ＥｔＯＨの導入率：６９％）である。実施例４−１−１で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＯＢＥＡのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＥＤＯＢＥＡの導入率：５２％）である。実施例４−１−２で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＧのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＤＥＧの導入率：５１％）である。実施例４−１−３で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡＧＭＴのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＡＧＭＴの導入率：６８％）である。実施例４−１−４で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＩＭＤのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１６％、ＩＭＤの導入率：６７％）である。実施例４−１−５で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＰＴのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１５％、ＤＰＴの導入率：６０％）である。実施例４−１−６で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＢＡＥＡのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＢＡＥＡの導入率：６３％）である。実施例４−１−７で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＭＡのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１７％、ＤＭＡの導入率：７６％）である。実施例４−１−８で調製したＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＭＰＤのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１２％、ＭＰＤの導入率：５１％）である。実施例４−２で調製したＨＡ−ＬｙｓＮＨ_２／ＣＡのＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（ＬｙｓＮＨ_２の導入率：９１％、ＣＡの導入率：２３％）である。実施例５−２で調製したＨＡ−Ｃ_３Ｈ_６−ＯＣＯＯ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２のＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：２０％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率：２９％）である。実施例５−４で調製したＨＡ−ＣＨ_２−ＣＯＯ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２のＤＣｌ／ＤＭＳＯ／Ｄ_２Ｏ混液中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１３％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率：７０％）である。実施例１２−１で調製したＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２のＤＭＳＯ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：４２％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率：１６％、５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−の導入率：０．３９％）である。実施例１２−２で調製したＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：４０％、ＥＤＡの導入率：２３％、５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−の導入率：５％）である。実施例１２−２で調製したＭｅＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：２６％、ＥＤＡの導入率：９％、１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−の導入率：４％）である。実施例１２−３で調製したＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２のＤＭＳＯ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：４２％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率：１９％、５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−の導入率：６％）である。実施例１２−４で調製したＭｅＯＰＥＧＳ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：４６％、ＥＤＡの導入率：１６％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−の導入率：０．０３％）である。実施例１２−５で調製したＭｅＯＰＥＧＯ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：２０％、ＥＤＡの導入率：２８％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＯ−の導入率：０．２％）である。実施例１２−６で調製したＭｅＯＰＥＧＯ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１６％、ＥＤＡの導入率：４１％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＯ−の導入率：１％）である。実施例１２−８で調製した２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：４１％、ＥＤＡの導入率：２８％、２０ｋ　２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ基の導入率：３％）である。実施例１２−９で調製したＭｅＯＰＥＧＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：２５％、ＥＤＡの導入率：６％、１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基の導入率：０．１％の生成物）である。実施例１２−１０で調製したＬｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中のＨ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：３７％、ＥＤＡの導入率：４０％、４０ｋ　Ｌｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基の導入率が４％の生成物）である。参考例１２−１１で調製したＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡのＤＭＳＯ中の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：１３％、ＥＤＡの導入率：４２％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基の導入率：９％）である。比較例１２−１２で調製したＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ−ＣＳ−ＣｈｏｌのＤＭＳＯ中の^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの一例（コレステリル基の導入率：２７％、５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ基の導入率：３％）である。

　以下、本発明を更に具体的に説明する。
　本発明のヒアルロン酸誘導体は、カチオン性の部位を有する基Ｘ^１を導入した式（Ｉａ）、疎水性の部位を有する基Ｘ^２を導入した式（Ｉｂ）、および親水性の部位を有する基Ｘ^３を導入した式（Ｉｃ）で表される二糖単位（繰り返し単位でもある）をそれぞれ１以上含むヒアルロン酸誘導体である。
　本発明の一つの態様において、ヒアルロン酸誘導体は、上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）に加えて、式（ＩＩ）、基Ｘ^５を導入した式（ＩＩＩ）、または式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）で表される二糖単位をさらに含む。
　本発明の一つの態様において、ヒアルロン酸誘導体は、（１）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）、（２）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、および式（ＩＩ）、（３）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、および式（ＩＩＩ）、または（４）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（ＩＩ）、および式（ＩＩＩ）の繰り返し単位から実質的に構成される。当該ヒアルロン酸誘導体は、当該誘導体に含まれるＤ−グルクロン酸とＮ−アセチルグルコサミンとから成る二糖の繰り返し単位のうちの、例えば６５％以上が、好ましくは８０％以上が、より好ましくは９０％以上が式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（ＩＩ）、または式（ＩＩＩ）の繰り返し単位である。本発明の一つの態様において、ヒアルロン酸誘導体は、（１）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）、（２）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、および式（ＩＩ）、（３）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、および式（ＩＩＩ）、または（４）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（ＩＩ）、および式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位のみから構成される。
　本発明のヒアルロン酸誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する特定の二糖単位の割合は、二糖単位を繰り返し単位とする多糖類である本発明のヒアルロン酸誘導体の一定量に含まれる全ての二糖単位に対する特定の二糖単位の割合を意味する。
　本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式（Ｉａ）、（Ｉｂ）および式（Ｉｃ）において、Ｒ^１ｘ、Ｒ^２ｘ、Ｒ^３ｘ、およびＲ^４ｘ、Ｒ^１ｙ、Ｒ^２ｙ、Ｒ^３ｙ、およびＲ^４ｙ、ならびにＲ^１ｚ、Ｒ^２ｚ、Ｒ^３ｚおよびＲ^４ｚは、好ましくはいずれも水素原子である。Ｒ^５ｘ、Ｒ^５ｙおよびＲ^４ｚａは、好ましくは水素原子または（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルであり、さらに好ましくは水素原子またはアセチルであり、より好ましくはアセチルである。また、本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）において、Ｒ^１ａ、Ｒ^２ａ、Ｒ^３ａおよびＲ^４ａ、ならびにＲ^１ｂ、Ｒ^２ｂ、Ｒ^３ｂおよびＲ^４ｂは、好ましくはいずれも水素原子である。Ｒ^５ａおよびＲ^５ｂは、好ましくは水素原子または（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルであり、さらに好ましくは水素原子またはアセチルであり、より好ましくはいずれもアセチルである。
　本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式（Ｉａ）におけるＸ^１、式（Ｉｂ）におけるＸ^２、式（Ｉｃ）におけるＸ^３、および／または式（ＩＩＩ）におけるＸ^５に不斉中心が存在する場合は、それぞれの光学異性体およびそれらの混合物も、本発明の範囲に含まれる。
　本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式（Ｉａ）におけるカチオン性基Ｘ^１の具体例としては、好ましくは以下の式：

で表される基が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す。
　Ｘ^１の具体例として、さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｗ）、（ｘ）、（ｙ）、（ｚ）、（ａａ）、（ａｂ）、（ａｃ）、（ａｄ）および（ａｈ）で表される基、さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｙ）、（ｚ）および（ａｈ）で表される基が挙げられる。さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｈ）で表される基が挙げられる。これらのＸ^１は、経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点でも好ましいものである。前記の観点でさらに好ましいＸ^１としては、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｌ）、（ｕ）、（ｚ）および（ａｈ）で表される基が挙げられる。前記の観点で好ましいＸ^１の導入率は、例えば３~９５％であり、さらに好ましくは６~８４％である。例えば、Ｘ^１が式（ａ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１０~５０％であり、さらに好ましくは１９~４５％である。Ｘ^１が式（ｂ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~９０％であり、さらに好ましくは２８~７４％である。Ｘ^１が式（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１３~７５％であり、さらに好ましくは２５~６３％である。Ｘ^１が式（ｆ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１０~９０％であり、さらに好ましくは２２~８４％である。Ｘ^１が式（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは３~６０％であり、さらに好ましくは６~４６％である。Ｘ^１が式（ｌ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~８０％であり、さらに好ましくは２０~７０％、さらに好ましくは４５~６５％、さらに好ましくは５２~５４％である。Ｘ^１が式（ｍ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~８０％であり、さらに好ましくは２０~７０％、さらに好ましくは３５~６７％、さらに好ましくは４５~５７％、さらに好ましくは５０~５２％である。Ｘ^１が式（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~８０％であり、さらに好ましくは２０~７０％、さらに好ましくは４６~９０％、さらに好ましくは５６~８０％、さらに好ましくは６６~７０％である。Ｘ^１が式（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~８５％であり、さらに好ましくは２０~８５％、さらに好ましくは４５~８５％、さらに好ましくは６７~７１％ある。Ｘ^１が式（ｔ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~８５％であり、さらに好ましくは２０~８５％、さらに好ましくは３８~８２％、さらに好ましくは４８~７２％、さらに好ましくは５８~６２％である。Ｘ^１が式（ｕ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは５~８０％であり、さらに好ましくは８~７０％、さらに好ましくは１０~４３％、さらに好ましくは１５~２７％である。Ｘ^１が式（ｗ）、（ｘ）、（ｙ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~８０％であり、さらに好ましくは２０~７０％、さらに好ましくは３０~７０％、さらに好ましくは４０~６３％である。Ｘ^１が式（ｚ）、（ａａ）、（ａｂ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~９５％であり、さらに好ましくは２０~９５％、さらに好ましくは５０~９５％、さらに好ましくは６０~９０％、さらに好ましくは７４~７８％である。Ｘ^１が式（ａｃ）、（ａｄ）、（ａｈ）で表される基である時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは１５~８０％であり、さらに好ましくは２０~７０％、さらに好ましくは３０~７０％、さらに好ましくは３９~６４％、さらに好ましくは４９~５４％である。
　点眼投与に適するヒアルロン酸誘導体の観点で好ましいＸ^１としては、例えば式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｏ）、（ｐ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｚ）、（ａａ）、（ａｂ）、（ａｃ）、（ａｄ）および（ａｈ）で表される基が挙げられ、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｑ）、（ｒ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｚ）、（ａｃ）、（ａｄ）および（ａｈ）で表される基がさらに好ましく、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｎ）、（ｓ）、（ｕ）、（ｚ）および（ａｈ）で表される基がさらに好ましく、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｈ）、（ｓ）、（ｕ）および（ａｈ）で表される基がさらに好ましく、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｈ）、（ｓ）および（ａｈ）で表される基がさらに好ましく、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｈ）で表される基がさらに好ましい。
　口内炎治療を含む、口腔投与に適するヒアルロン酸誘導体を製造するための、好ましいＸ^１としては、例えば式（ｂ）で表される基が挙げられる。
　Ｘ^１の別の好ましい具体例として、以下の式で表される基が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す：

　本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式（Ｉｃ）における親水性の部位を有する基Ｘ^３の具体例としては、好ましくは以下の式で表される基が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す：
　式−Ｏ−ＰＧ１で表される基としては、例えば以下の式：
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｊａ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｊｂ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｊｃ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｊｄ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｊｅ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｊｆ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｊｇ）

で表される基が挙げられ、好ましくは、式（ｊａ）、および（ｊｂ）で表される基である。
　式−Ｓ−ＰＧ１で表される基としては、例えば以下の式：
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｋａ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｋｂ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｋｃ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｋｄ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｋｅ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｋｆ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｋｇ）
で表される基が挙げられ、好ましくは、式（ｋａ）および（ｋｂ）で表される基である。
　式−ＮＲ^３８−ＰＧ１で表される基としては、例えば以下の式：
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｇａ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｇｂ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｇｃ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｇｄ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｇｅ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｇｆ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｇｇ）

で表される基が挙げられ、好ましくは、式（ｇａ）および（ｇｂ）で表される基である。ここで、「＊」は、結合位置を表す。
　式−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３で表される基としては、例えば以下の式：

で表される基が挙げられ、好ましくは、式（ａ１）、（ａ２）、（ｂ１）、（ｂ２）、（ｅ１）、および（ｅ２）で表される基である。ここで、「＊」は、結合位置を表す。
　なお、Ｘ^３が−ＮＲ^３８−ＰＧ１である時（例えば、式（Ｕ６ａ）、（Ｕ６ｂ）、（Ｕ６ｃ）および（Ｕ６ｄ）で表される基である時）または−ＣＯ−ＰＧ２を含む基である時、該基はリジン残基を含む基となる場合がある。ここで、リジン残基におけるαアミノとεアミノの間の炭素数は５であるが、これを、２~４や６~２０に変更することもできる。
　基Ｘ^３の他の具体例として、以下の式で表される基を挙げることもできる。

　ここで、「＊」は、結合位置を表す。Ｒ^３８は、好ましくは水素原子であり、ｎｚは、好ましくは、４０~４５および１１０~１１５である。
　また、式−Ｏ−ＰＧ１で表される他の基として、以下の基を挙げることもできる。
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｊｈ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｊｉ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｊｊ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｊｋ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｊｌ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｊｍ）
−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｊｎ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｋｈ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｋｉ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｋｊ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｋｋ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｋｌ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｋｍ）
−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｋｎ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｇｈ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｇｉ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｇｊ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｇｋ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｇｌ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｇｍ）
−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｇｎ）
　本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式（ＩＩＩ）における基Ｘ^５の具体例としては、好ましくは以下の式：

で表される基が挙げられ、さらに好ましくは式（ｂａ）、（ｂｂ）、（ｂｃ）、（ｂｄ）および（ｂｆ）で表される基が挙げられる。また、式（ｂａ）、（ｂｂ）、（ｂｃ）、（ｂｄ）および（ｂｅ）で表される基も、別のさらに好ましい基として挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す。
　点眼投与に適するヒアルロン酸誘導体においては、式（ＩＩＩ）で表される二糖単位は、含んでいてもいなくてもよく、含んでいる場合は、基Ｘ^５が式（ｂａ）、（ｂｄ）および（ｂｅ）で表される基である式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含むのが好ましく、基Ｘ^５がｉ）式（ｂａ）および（ｂｅ）、またはｉｉ）式（ｂａ）および（ｂｄ）で表される基である式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含むのがさらに好ましい。
　点眼投与に適するヒアルロン酸誘導体においては、式（ＩＩＩ）で表される二糖単位は、含んでいるのが好ましく、基Ｘ^５が式（ｂａ）、（ｂｅ）で表される基である式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含むのがさらに好ましい。Ｘ^５の導入率は、５~７０％であるのが好ましく、７~６３％であるのがさらに好ましい。
　経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点では、式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位は、含まないか、基Ｘ^５が式（ｂａ）で表される基である式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含むのが好ましい。本発明のヒアルロン酸誘導体が式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含まない時、カチオン性の部位を有する基Ｘ^１の導入率は、好ましくは１０~９０％であり、さらに好ましくは１９~８４％である。本発明のヒアルロン酸誘導体が式（ＩＩＩ）で表される繰り返し単位を含む時、Ｘ^１の導入率は、好ましくは４~６０％であり、さらに好ましくは６~４６％である。また、Ｘ^１の導入率とＸ^５の導入率の組み合わせ（Ｘ^１の導入率：Ｘ^５の導入率）は、好ましくは（４~６０％：２~８０％）であり、さらに好ましくは（６~４６％：４~６７％）である。なお、Ｘ^１の導入率とＸ^５の導入率の和の上限は、９９％である。下限は６％以上であればよい。
　本発明において「Ｃ_１−２０アルキル」とは、炭素数１~２０の直鎖状、分岐鎖状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルなどの「Ｃ_１−４アルキル」が含まれ、さらに、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３−エチルブチル、２−エチルブチルなどが含まれる。Ｃ_１−２０アルキルには、炭素数が１~１２の「Ｃ_１−１２アルキル」、炭素数が１~１０の「Ｃ_１−１０アルキル」、炭素数が１~６の「Ｃ_１−６アルキル」も含まれる。同様に、「Ｃ_８−５０アルキル」とは、炭素数８~５０の直鎖状、分岐鎖状のアルキル基を意味する。
　本発明において「Ｃ_８−５０アルケニル」とは、炭素−炭素二重結合を１以上含む炭素数８~５０の直鎖状、分岐鎖状のアルケニル基を意味し、「Ｃ_８−５０アルキニル」とは、炭素−炭素三重結合を１以上含む炭素数８~５０の直鎖状、分岐鎖状のアルキニル基を意味する。Ｃ_８−５０アルキル、Ｃ_８−５０アルケニルおよびＣ_８−５０アルキニルにおいては、Ｃ_８−５０アルキルが好ましい。また、炭素数は、１０~３０が好ましく、１０~２０がより好ましい。具体例としては、ラウリル基、ミリスチル基、セチル基、ステアリル基などが挙げられる。
　本発明において「（Ｃ_１−６アルキル）カルボニル」とは、アルキル部分がＣ_１−６アルキルであるアルキルカルボニル基を意味し、例えば、アセチル、プロピオニル、ｎ−プロピルカルボニル、ｉ−プロピルカルボニル、ｎ−ブチルカルボニル、ｓ−ブチルカルボニル、ｉ−ブチルカルボニル、ｔ−ブチルカルボニルなどが含まれる。
　本発明において「ヘテロアリール」とは、環を構成する原子中に、１または複数個の、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を含有する芳香族性の環の基を意味し、部分的に飽和されていてもよい。環は単環、またはベンゼン環または単環ヘテロアリール環と縮合した２環式ヘテロアリールであってもよい。環を構成する原子の数は、例えば５~１０である。ヘテロアリールの例としては、たとえば、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾジオキソリル、インドリジニル、イミダゾピリジルなどが挙げられ、好ましくはイミダゾリルが挙げられる。
　本発明において「窒素原子を１~４個含む５~１０員のヘテロアリール」とは、環を構成する５~１０の原子中に、１~４の窒素原子を含有するヘテロアリールを意味し、例えば、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、インドリジニル、イミダピリジルなどが挙げられ、好ましくはイミダゾリルが挙げられる。
　本発明において「Ｃ_２−３０アルキレン」とは、炭素数２~３０の直鎖状または分岐鎖状の２価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、エチレン、プロピレンなどが含まれ、炭素数が２~１０の「Ｃ_２−１０アルキレン」、炭素数が２~８の「Ｃ_２−８アルキレン」も含まれる。
　本発明において「Ｃ_１−３０アルキレン」とは、炭素数１~３０の直鎖状または分岐鎖状の２価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレンなどが含まれ、炭素数が２~３０の「Ｃ_２−３０アルキレン」も含まれる。
　本発明において「Ｃ_１−５アルキレン」とは、炭素数１~５の直鎖状または分岐鎖状の２価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、エチレン（エタン−１，２−ジイル、エタン−１，１−ジイル）、プロピレン（プロパン−１，１−ジイル、プロパン−１，２−ジイル、プロパン−１，３−ジイル）、ブタン−１，４−ジイル、ペンタン−１，５−ジイルなどが含まれる。
　本発明において「アミノＣ_２−２０アルキル」とは、置換基としてアミノを有する炭素数２~２０の直鎖状、分岐鎖状のアルキルを意味し、例えば、アミノはアルキルの末端の炭素原子上に位置していてもよい。アミノＣ_２−２０アルキルには、炭素数が２~１２の「アミノＣ_２−１２アルキル」も含まれる。
　本発明において「ヒドロキシＣ_２−２０アルキル」とは、置換基としてヒドロキシを有する炭素数２~２０の直鎖状、分岐鎖状のアルキル基を意味し、例えば、ヒドロキシはアルキルの末端の炭素原子上に位置していてもよい。ヒドロキシＣ_２−２０アルキルには、炭素数が２~１２の「ヒドロキシＣ_２−１２アルキル」も含まれる。
　本発明において「ステリル基」とは、ステロイド骨格を有する基であれば特に制限されない。ここでステロイドとしては、具体的には、コレステロール、デヒドロコレステロール、コプロステノール、コプロステロール、コレスタノール、カンペスタノール、エルゴスタノール、スチグマスタノール、コプロスタノール、スチグマステロール、シトステロール、ラノステロール、エルゴステロール、シミアレノール、胆汁酸（コラン酸、リトコール酸、ヒオデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、アポコール酸、コール酸、デヒドロコール酸、グリココール酸、タウロコール酸）、テストステロン、エストラジオール、プロゲストロン、コルチゾール、コルチゾン、アルドステロン、コルチコステロン、デオキシコルチステロンなどが挙げられる。ステリル基としては、コレステリル基、スチグマステリル基、ラノステリル基、エルゴステリル基、コラノイル基、コロイル基などが挙げられ、好ましくは以下の式：

で表される基（ここで、Ｒ^２１は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し、「＊」は、結合位置を表す。）が挙げられ、さらに好ましくは式（ｃｋ）、（ｃｌ）および（ｃｍ）で表される基が挙げられ、さらに好ましくはコレステリル基（特に、下式で示されるコレスタ−５−エン−３β−イル基）、コラノイル基（特に、下式で示される５β−コラン−２４−オイル基）が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す。

　本発明において「Ｃ_２−８アルケニレン」とは、炭素数２~８の直鎖状または分岐鎖状の、１以上の二重結合を含む、２価の炭化水素基を意味し、例えば、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ−、２−ブテン−１，４−ジイル、ヘプタ−２，４−ジエン−１，６−ジイル、オクタ−２，４，６−トリエン−１，８−ジイルなどが含まれる。幾何異性が存在する場合は、それぞれの異性体およびそれらの混合物も含まれる。
　Ｑ^＋はカルボキシと水中で塩を形成するカウンターカチオンであれば特に限定されず、２価以上の場合は価数に応じて複数のカルボキシと塩を形成する。カウンターカチオンの例としては、リチウムイオン、ナトリウムイオン、ルビジウムイオン、セシウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオンなどの金属イオン；式：Ｎ^＋Ｒ^ｊＲ^ｋＲ^ｌＲ^ｍ（式中、Ｒ^ｊ、Ｒ^ｋ、Ｒ^ｌおよびＲ^ｍは、それぞれ独立に、水素原子およびＣ_１−６アルキルから選択される）で表されるアンモニウムイオンなどが挙げられ、好ましくは、ナトリウムイオン、カリウムイオン、テトラアルキルアンモニウムイオン（例えば、テトラｎ−ブチルアンモニウムイオンなど）が挙げられる。Ｒ^ｊ、Ｒ^ｋ、Ｒ^ｌおよびＲ^ｍは、Ｃ_１−６アルキルから選択される同一の基であるのが好ましく、ｎ−ブチルであるのが好ましい。
　Ｑ⁻はアンモニウム塩と塩を形成するカウンターアニオンであれば特に限定されない。カウンターアニオンの例としては、例えば、フッ素イオン、塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオン等のハロゲンイオンおよび水酸化物イオンなどが挙げられる。
　本発明のヒアルロン酸誘導体は薬物担体として使用することができる。当該薬物担体は好ましくは生分解性である。また、本発明のヒアルロン酸誘導体は粘膜透過性が向上したものであり、薬物と複合化することで、薬物の粘膜透過性を向上させることができる。
　ここで粘膜透過性が向上するとは、哺乳動物、特にマウス、ラット、ウサギ、ブタおよび／またはヒトに経粘膜投与後、粘膜層を透過し、上皮層もしくはさらに内部の組織への到達度合が増すことを意味する。「上皮層もしくはさらに内部の組織への到達度合」は、例えば、蛍光標識した本発明のヒアルロン酸誘導体もしくは蛍光標識した薬物の上皮層中、内部組織中での存在度合を顕微鏡で確認することにより評価できる。経口投与の場合は、薬物や本発明のヒアルロン酸誘導体の血中濃度を定量することによっても評価できる。Ｉｎ　ｖｉｔｒｏで評価する場合は、角膜などの粘膜を産生している多層細胞を透過する度合を評価する方法や、粘膜無産生細胞上に粘膜成分を重層し、その粘膜成分を、本発明のヒアルロン酸誘導体や薬物が透過する度合を評価する方法を用いることができる。
　本発明において、「経粘膜投与」としては、結膜または角膜上への点眼、鼻腔を覆っている粘膜を経由する経鼻吸入、肺胞の粘膜を経由する経肺吸入、気管粘膜や気管支粘膜に対する吸入、口腔内の粘膜を経由する口腔投与や舌下投与、膣内の粘膜を経由する経膣投与、胃、十二指腸、小腸、結腸および直腸を含む大腸などの消化管粘膜を経由する経口投与や直腸投与、ならびに中耳粘膜に対する中耳投与などが挙げられる。好ましい投与は、点眼、経鼻吸入、経肺吸入、気管または気管支吸入、口腔投与、舌下投与および経口投与であり、さらに好ましい投与は、点眼、経鼻吸入、経肺吸入、気管または気管支吸入、口腔投与および舌下投与である。
　本発明の別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、Ｘ^２が、−Ｏ−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２から選択され（式中、Ｚ^３、Ｚ^１およびＲ^６は本明細書に既に定義されたとおりである）、Ｘ^３が、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１および−ＮＲ^３８−ＰＧ１から選択され（式中、ＰＧ１およびＲ^３８は本明細書に既に定義されたとおりである）、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、カチオン性の部位を有する基Ｘ^１（−ＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１：式中、Ｒ^７、Ｒ^８、ｎ１、Ａ^１、およびＢ^１は本明細書に既に定義されたとおりである）を有する式（Ｉａ）の繰り返し単位の割合（基Ｘ^１の導入率）が例えば１~７５％である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
　本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、疎水性の部位を有する基Ｘ^２を有する式（Ｉｂ）の繰り返し単位の割合（疎水性の部位を有する基Ｘ^２の導入率）が例えば３~５５％である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
　本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、親水性の部位を有する基Ｘ^３を有する式（Ｉｃ）の繰り返し単位の割合（親水性の部位を有する基Ｘ^３の導入率）が例えば１~３０％である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
　本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、式（Ｉａ）で表される繰り返し単位の割合、−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２である基Ｘ^２（式中、Ｒ^３１、Ｒ^３２、ｎ１１、Ａ^３、およびＢ^２は本明細書に既に定義されたとおりである）を有する式（Ｉｂ）の繰り返し単位の割合、および−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３である基Ｘ^３（式中、Ｒ^３９、Ｒ^４０、ｎ１５、Ａ^５、およびＢ^３は本明細書に既に定義されたとおりである）を有する式（Ｉｃ）で表される繰り返し単位の割合の和が例えば３０~１００％である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
　カチオン性の部位を有する基Ｘ^１の導入率は、例えば１~９０％、好ましくは１~７５％であり、具体的には、１、２．５、６、７．４、１１、１７、２１、２８、３５、４４、５３、６１、６５、７０、７３、または７５％である。また、好ましい基Ｘ^１の導入率は、２~９０％でもあり、具体的には、３、６、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３２、３４、３５、４０、４１、４２、４３、４５、４６、４８、４９、５０、５１、５２、５４、６０、６３、６５、６６、６７、６８、７０、７１、７５、７６、７９または８５％でもある。
　点眼投与に適するヒアルロン酸においては、好ましい基Ｘ^１の導入率は、２~８０％、さらに好ましくは３~７６％であり、さらに好ましくは１３~６７％であり、具体的には、３、１１、１３、１７、２２、２４、２８、３１、４１、４３、４６、５１、５２、６７、６８、７５または７６％、好ましくは、１３、１７、２４、２８、３１、４１、４３、４６、５１または６７％である。
　口腔投与に適するヒアルロン酸においては、好ましい基Ｘ^１の導入率は、５~５０％、さらに好ましくは１０~３０％であり、具体的には、１６、２０および２８％である。
　疎水性の部位を有する基Ｘ^２の導入率は、例えば３~５５％であり、具体的には、３、８、１２、１６、２１、２５、３０、３４、３９、４３、４８、５１、または５５％である。Ｘ^２がこれらの導入率である時、Ｘ^２は、−Ｏ−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、および−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２であるのが好ましい。さらに、Ｘ^２がこれらの基である時、Ｘ^１の導入率とＸ^２の導入率の和は、１００％以下である。例えば、Ｘ^２の導入率が５５％である時、Ｘ^１の導入率は４５％以下である。
　点眼投与および口腔投与に適するヒアルロン酸においては、Ｘ^２は、−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２であるのが好ましく、その導入率は、点眼投与では、例えば８~５０％、好ましくは１２~４４％であり、口腔投与では、例えば５~４０％、好ましくは１０~２０％である。具体的な導入率としては、１２、１５、１６、１７、１８、２６、３９および４４％が挙げられる。
　−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２において、Ｚ^１と結合するＺ^２中の原子が酸素原子または窒素原子である場合、Ｃ_１−３０アルキレンであるＺ^１は、Ｃ_２−３０アルキレンであるのが好ましい。同様に、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２において、Ｚ^１と結合する、Ｚ^０およびＺ^２中の原子が、それぞれ酸素原子または窒素原子である場合、Ｃ_１−３０アルキレンであるＺ^１は、Ｃ_２−３０アルキレンであるのが好ましい。Ｚ^１がＣ_１アルキレン（−ＣＨ_２−）である時、その炭素原子は、ヒドロキシまたはＣ_１−６アルキルで修飾されていてもよく、あるいは、−ＣＨ_２−は、アミノ酸残基に置き換えられてもよい。例えば、−ＣＨ_２−は、セリン残基である−ＣＨ（ＣＨ_２ＯＨ）−に置き換えられてもよい。
　基Ｘ^２の一例である基−ＮＲ^ｂ−Ｚ^３の具体例としては、例えば、以下の式

で表される基が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す。
　基Ｘ^２の一例である基−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２としては、例えば、以下の式

で表される基が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す。Ｒ^ｙは、後述する、式（ｃａ）、（ｃｂ）、（ｃｃ）、（ｃｄ）、（ｃｅ）、（ｃｆ）および（ｃｇ）で表される基である。基−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２としては、好ましくは、それぞれＲ^ｙが（ｃａ）である式（ｄａａ）、（ｄｂａ）、（ｄｃａ）および（ｄｄａ）で表される基、ならびにそれぞれＲ^ｙが（ｃｇ）である式（ｄａａ）、（ｄｂａ）および（ｄｄａ）で表される基が挙げられ、さらに好ましくは、以下の式

で表される基が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す。
　基Ｘ^２の一例である基−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２および−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^２としては、例えば、以下の式

および

で表される基が挙げられる。ここで、「＊」は、結合位置を表す。Ｒ^ｙｂは、後述する式（ｃｋ）、（ｃｌ）および（ｃｍ）で表される基である。−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２および−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^２としては、式（ｅｃ）、（ｅｅ）、（ｅｐ）、（ｅｑ）、（ｅｒ）、（ｅｆ３）、（ｅｇ３）および（ｅｚ）で表される基が好ましく、（ｅｑ）、（ｅｆ３）、（ｅｇ３）および（ｅｚ）で表される基がさらに好ましい。また、式（ｅａ）、（ｅｂ）、（ｅｃ）、（ｅｄ）、（ｅｅ）、（ｅｎ）、（ｅｐ）、（ｅｒ）、（ｅｓ）、（ｅｆ３）、（ｅｂ２）、（ｅｃ２）、（ｅｄ２）、（ｅｅ２）、（ｅｆ２）、（ｅｇ２）、（ｅｈ２）、（ｅｋ２）および（ｅｑ２）で表される基においては、Ｒ^ｙｂは、（ｃｌ）および（ｃｍ）であるのが好ましく、式（ｅｆ）、（ｅｇ）、（ｅｈ）、（ｅｉ）、（ｅｊ）、（ｅｋ）、（ｅｌ）、（ｅｍ）、（ｅｏ）、（ｅｑ）、（ｅｔ）、（ｅｕ）、（ｅｖ）、（ｅｗ）、（ｅｘ）、（ｅｙ）、（ｅｇ３）、（ｅｚ）、（ｅａ２）、（ｅｉ２）、（ｅｊ２）、（ｅｌ２）、（ｅｍ２）、（ｅｎ２）、（ｅｏ２）、（ｅｐ２）、（ｅｒ２）、（ｅｓ２）、（ｅｔ２）、（ｅｕ２）、（ｅｖ２）、（ｅｗ２）、（ｅｘ２）、（ｅｙ２）、（ｅｚ２）、（ｅａ３）、（ｅｂ３）、（ｅｃ３）、（ｅｄ３）および（ｅｅ３）で表される基においては、Ｒ^ｙｂは、（ｃｋ）であるのが好ましい。−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２および−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^２としては、Ｒ^ｙｂが（ｃｌ）および（ｃｍ）である式（ｅｆ３）で表される基、ならびに、Ｒ^ｙｂが（ｃｋ）である式（ｅｑ）、（ｅｇ３）および（ｅｚ）で表される基が好ましく、Ｒ^ｙｂが（ｃｋ）である式（ｅｇ３）および（ｅｚ）で表される基がさらに好ましい。
　Ｘ^２が−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２である場合、その導入率は、例えば３~５５％であり、具体的には、３、４、８、１２、１６、１８、２１、２３、２５、３０、３４、３９、４３、４７、４８、５１、または５５％である。
　基Ｘ^２が−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２である場合、基Ｘ^１、および基Ｘ^２の導入率の和は、例えば３０~１００％であり、具体的には、３０、３６、４１、４４、４９、５６、６１、６６、７０、７５、７９、８３、８８、９２、９６、または１００％である。
　ここで、基Ｘ^２の導入率は、例えば３、８、１２、１６、２１、２５、３０、３４、３９、４３、４８、５１、または５５％であり、基Ｘ^１の導入率は、例えば１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０，５５、６０、７２、８４，９５または９７％である。
　基Ｘ^２が−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２である場合、Ｒ^３２は−ＣＯＮＨ_２、Ａ^３は、単結合、Ｂ^２は、−ＮＨ−Ｘ^４、Ｘ^４は−Ｚ^３、−ＣＯ_２−Ｚ^３および−ＣＯ−（Ｃ_２−６アルキレン）−ＣＯＯ−Ｚ^３であるのが好ましく、具体例としては、以下の式

で表される基であるのが好ましい。ここで、「＊」は、結合位置を表す。
　基Ｘ^２が−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２である場合、基Ｘ^１と基Ｘ^２の組み合わせは、Ｘ^１が、式（ａ）で表される基であり、Ｘ^２が、式（ｆａ）、（ｆｂ）および（ｆｃ）で表される基であるのがさらに好ましく、Ｘ^１が、式（ａ）で表される基であり、Ｘ^２が、式（ｆａ）および（ｆｂ）で表される基であるのがさらに好ましい。該基の組み合わせは、経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点で好ましい組み合わせである。Ｘ^１の導入率とＸ^２の導入率の組み合わせ（Ｘ^１の導入率：Ｘ^２の導入率）は、好ましくは（３０~９０％：２~７０％）であり、さらに好ましくは（４２~８３％：３~５０％）である。
　本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、基Ｘ^１を有する式（Ｉａ）、基Ｘ^２を有する式（Ｉｂ）および基Ｘ^３を有する式（Ｉｃ）に加えて、さらに基Ｘ^ａ（ヒドロキシまたは−Ｏ⁻Ｑ^＋：Ｑ^＋は、カウンターカチオンを表す）を有する式（ＩＩ）、または基Ｘ^ａを有する式（ＩＩ）および基Ｘ^５（−ＮＲ^１７−Ｒ^１８：式中、Ｒ^１７およびＲ^１８は本明細書に既に定義されたとおりである）を有する式（ＩＩＩ）で表される二糖の繰り返し単位を含む、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
　本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、基Ｘ^５を有する式（ＩＩＩ）の繰り返し単位の割合（Ｘ^５の導入率）は、例えば０~９０％であり、好ましくは０および１~９０％であり、より好ましくは０および４~６２％である。
　ここで、基Ｘ^１の導入率、基Ｘ^２の導入率、基Ｘ^３の導入率または基Ｘ^５の導入率は、以下の式：

により算出される。ここで、「当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位」には、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（ＩＩ）、および式（ＩＩＩ）の繰り返し単位が含まれる。当該導入率は、反応条件、例えば試薬の比率により制御することができ、例えば、ＮＭＲ測定などにより決定することができる。
　本明細書で示される繰り返し単位の存在比や基Ｘ、基Ｘ^２、基Ｘ^３または基Ｘ^５導入率においては、製造される本発明のヒアルロン酸誘導体中に含まれる繰り返し単位全てが考慮される。すなわち、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）の繰り返し単位のうち、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、または式（Ｉｃ）のみを含むヒアルロン酸分子、式（Ｉａ）および式（Ｉｂ）、式（Ｉａ）および式（Ｉｃ）、および式（Ｉｂ）および式（Ｉｃ）のみを含むヒアルロン酸分子、ならびに式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）を含むヒアルロン酸分子の組み合わせであってよく、そのような組み合わせに含まれる全ての繰り返し単位を考慮して、各繰り返し単位の存在比や各基の導入率が決定される。
　本発明の一つの側面において、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）の繰り返し単位を含むヒアルロン酸誘導体は、一分子中に３つの繰り返し単位を含まなくともよく、それぞれの繰り返し単位を含む分子の組み合わせであってもよい。本発明の一つの態様において、式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）の繰り返し単位を含むヒアルロン酸誘導体は、少なくとも１つの分子において式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、および式（Ｉｃ）の繰り返し単位を同時に含む。
　本発明のヒアルロン酸誘導体を製造するための原料としては、ヒアルロン酸（ＨＡ）またはその塩を使用することができる。ヒアルロン酸塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）を挙げることができ、例えば、医薬品として繁用されているナトリウム塩をテトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩などのテトラアルキルアンモニウム塩に変換して使用することができる。ＨＡまたはその薬学的に許容される塩は、鶏冠や豚皮下等の生物由来のものを抽出する方法や生物発酵法等の各種公知の方法を用いて製造することができ、あるいは市販のものを購入して（例えば、電気化学工業株式会社、株式会社資生堂、生化学工業株式会社、Ｒ＆Ｄ　ｓｙｓｔｅｍ社等から）入手することも可能である。
　原料として用いられる、式（ＩＩ）で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸（塩を含む）の重量平均分子量は、例えば１ｋＤａ~２，０００ｋＤａである。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは３ｋＤａ~１０００Ｄａであり、さらに好ましくは５ｋＤａ~２００ｋＤａであり、より好ましくは５ｋＤａ~１５０ｋＤａであり、さらに好ましくは１０ｋＤａ~１００ｋＤａである。粒子径や粘度をより小さくする、または溶解性を高める場合には、該重量平均分子量は、１ｋＤａ~５００ｋＤａが好ましく、５ｋＤａ~２００ｋＤａがさらに好ましく、５ｋＤａ~１５０ｋＤａがさらに好ましい。粘度を大きくする、または皮下や関節腔内、眼内、耳内、鼻腔内、膣内、口腔内での滞留性を高める場合には、該重量平均分子量は、４５ｋＤａ~２０００ｋＤａが好ましく、５０ｋＤａ~２０００ｋＤａがさらに好ましく、１００ｋＤａ~１０００ｋＤａがさらに好ましく、２００ｋＤａ~１０００ｋＤａがさらに好ましい。重量平均分子量の具体例としては、例えば、１ｋＤａ、３ｋＤａ、５ｋＤａ、８ｋＤａ、１０ｋＤａ、２５ｋＤａ、４０ｋＤａ、４５ｋＤａ、５０ｋＤａ、６５ｋＤａ、７８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９２ｋＤａ、９９ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１２ｋＤａ、１２６ｋＤａ、１３４ｋＤａ、１５０ｋＤａ、１６８ｋＤａ、１８２ｋＤａ、２００ｋＤａ、２３０ｋＤａ、２７１ｋＤａ、３１４ｋＤａ、３７９ｋＤａ、４２３ｋＤａ、４６８ｋＤａ、５００ｋＤａ、６５１ｋＤａ、７８６ｋＤａ、８２４ｋＤａ、９１５ｋＤａ、１０００ｋＤａ、１０５８ｋＤａ、１２６５ｋＤａ、１３５５ｋＤａ、１４１２ｋＤａ、１５００ｋＤａ、１６１７ｋＤａ、１７６８ｋＤａ、１８５３ｋＤａ、１９４５ｋＤａおよび２０００ｋＤａが挙げられる。「ｋＤａ」は「キロダルトン」の略号である。
　なお、式（ＩＩ）で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸（塩を含む）の重量平均分子量とは、本発明のヒアルロン酸誘導体の主鎖構造を保持したまま、式（ＩＩ）における、Ｒ^１ａ、Ｒ^２ａ、Ｒ^３ａ、およびＲ^４ａの全てを水素原子とし、Ｒ^５ａをアセチルとし、かつ、Ｘ^ａを−Ｏ⁻Ｎａ^＋として換算した場合の重量平均分子量を意味する。従って、例えば、実際に用いる原料における一部または全ての二糖単位においてＸ^ａが−Ｏ⁻（テトラｎ−ブチルアンモニウムイオン）であり、その重量平均分子量を上記に従って換算して算出された値が前記の重量平均分子量の範囲に含まれる場合は、本発明の好ましい１態様に含まれることになる。
　本発明の１つの側面において、本発明のヒアルロン酸誘導体に主鎖構造が対応する誘導体化されていないヒアルロン酸の重量平均分子量が１ｋＤａ~２，０００ｋＤａである。ここで誘導体化されていないヒアルロン酸は、既に定義した式（ＩＩ）においてＲ^１ａ、Ｒ^２ａ、Ｒ^３ａおよびＲ^４ａが水素原子であり、Ｒ^５ａがアセチルであり、Ｘ^ａが−Ｏ⁻Ｎａ^＋である繰り返し単位のみからなるヒアルロン酸である。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは３ｋＤａ~１０００Ｄａであり、さらに好ましくは５ｋＤａ~２００ｋＤａであり、より好ましくは５ｋＤａ~１５０ｋＤａであり、さらに好ましくは１０ｋＤａ~１００ｋＤａである。粒子径や粘度をより小さくする、または溶解性を高める場合には、該重量平均分子量は、１ｋＤａ~５００ｋＤａが好ましく、５ｋＤａ~２００ｋＤａがさらに好ましく、５ｋＤａ~１５０ｋＤａがさらに好ましい。粘度を大きくする、または皮下や関節腔内、眼内、耳内、鼻腔内、膣内、口腔内での滞留性を高める場合には、該重量平均分子量は、４５ｋＤａ~２０００ｋＤａが好ましく、５０ｋＤａ~２０００ｋＤａがさらに好ましく、１００ｋＤａ~１０００ｋＤａがさらに好ましく、２００ｋＤａ~１０００ｋＤａがさらに好ましい。該重量平均分子量の具体例としては、例えば、１ｋＤａ、３ｋＤａ、５ｋＤａ、８ｋＤａ、１０ｋＤａ、２５ｋＤａ、４０ｋＤａ、４５ｋＤａ、５０ｋＤａ、６５ｋＤａ、７８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９２ｋＤａ、９９ｋＤａ、１００ｋＤａ、１１２ｋＤａ、１２６ｋＤａ、１３４ｋＤａ、１５０ｋＤａ、１６８ｋＤａ、１８２ｋＤａ、２００ｋＤａ、２３０ｋＤａ、２７１ｋＤａ、３１４ｋＤａ、３７９ｋＤａ、４２３ｋＤａ、４６８ｋＤａ、５００ｋＤａ、６５１ｋＤａ、７８６ｋＤａ、８２４ｋＤａ、９１５ｋＤａ、１０００ｋＤａ、１０５８ｋＤａ、１２６５ｋＤａ、１３５５ｋＤａ、１４１２ｋＤａ、１５００ｋＤａ、１６１７ｋＤａ、１７６８ｋＤａ、１８５３ｋＤａ、１９４５ｋＤａおよび２０００ｋＤａが挙げられる。
　なお、一般的に、ヒアルロン酸（塩を含む）は単一品として得ることが難しいため、その分子量は、数平均分子量または重量平均分子量として算出する。本発明においては、重量平均分子量として算出している。重量平均分子量の測定方法については、例えば、中浜精一他著「エッセンシャル高分子科学」（講談社発行、ＩＳＢＮ４−０６−１５３３１０−Ｘ）に記載された、光散乱法、浸透圧法、粘度法等、各種の公知の方法を利用することができ、本明細書において示される粘度平均分子量もウベローデ粘度計を使用するなど、本発明が属する技術分野において通常用いられる方法により測定することができる。従って、原料として用いられるヒアルロン酸（塩を含む）や本発明のヒアルロン酸誘導体の分子量も、重量平均分子量として算出されることになる。分子量を明示して市販されているヒアルロン酸（塩を含む）を使用する場合は、その明示された数値を分子量とすることもできる。
　本発明のヒアルロン酸誘導体の分子量は特に限定はされないが、粘膜透過性が求められる場合には粘度および分子量の低いヒアルロン酸が好ましく、投与部位での滞留性が求められる場合には、粘度および分子量の高いヒアルロン酸が好ましい。例えば、本発明のヒアルロン酸誘導体の重量平均分子量は、例えば２ｋＤａ~２，０００ｋＤａである。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは３ｋＤａ~１０００Ｄａであり、さらに好ましくは５ｋＤａ~２００ｋＤａであり、より好ましくは５ｋＤａ~１５０ｋＤａであり、さらに好ましくは１０ｋＤａ~１００ｋＤａである。粒子径や粘度をより小さくする、または溶解性を高める場合には、該重量平均分子量は、２ｋＤａ~５００ｋＤａが好ましく、５ｋＤａ~２００ｋＤａがさらに好ましく、５ｋＤａ~１５０ｋＤａがさらに好ましい。粘度を大きくする、または皮下や関節腔内、眼内、耳内、鼻腔内、膣内、口腔内での滞留性を高める場合には、該重量平均分子量は、４５ｋＤａ~２０００ｋＤａが好ましく、５０ｋＤａ~２０００ｋＤａがさらに好ましく、１００ｋＤａ~１０００ｋＤａがさらに好ましく、２００ｋＤａ~１０００ｋＤａがさらに好ましい。また、薬物の放出制御の観点では、好ましくは５ｋＤａ~２００ｋＤａ、さらに好ましくは８ｋＤａ~１２０ｋＤａ、さらに好ましくは８ｋＤａ~３０ｋＤａであるである。
　本発明のヒアルロン酸誘導体の合成に用いられる、ポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を有する化合物の分子量（重量平均分子量であってもよい）は、例えば１ｋＤａ~６０ｋＤａである。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは１ｋＤａ~５ｋＤａである。
　本発明において、式（Ｉａ）で表される二糖単位におけるカチオン性の部位を有する基Ｘ^１は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミドに変換することにより導入することができる（工程１）。例えば、原料のヒアルロン酸（塩などを含む）、好ましくは、式（ＩＩ）で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式：ＨＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１（式中、Ｒ^７、Ｒ^８、ｎ１、Ａ^１、およびＢ^１は本明細書に既に定義されたとおりである）で表される化合物と反応させる方法が挙げられる。
　本発明において、式（Ｉｂ）で表される二糖単位における疎水性の部位を有する基Ｘ^２は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミドまたはエステルに変換することにより導入することができる（工程２）。
　アミドへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式：ＨＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２（式中、Ｒ^６、Ｚ^１、およびＺ^２は本明細書で既に定義したとおりである）で表される疎水性基を導入したアミン、または、式：ＨＮＲ^ｂ−Ｚ^３、式：ＨＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２もしくは式：ＨＮＲ^ａＲ^５ｚ（式中、Ｒ^ｂ、Ｚ^３、Ｒ^３１、Ｒ^３２、ｎ１１、Ａ^３、Ｂ^２、Ｒ^ａおよびＲ^５ｚは本明細書で既に定義したとおりである）で表されるアミンと反応させる方法が挙げられる。
　エステルへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式：Ｈａｌ−Ｚ^３、Ｈａｌ−Ｒ^ａ、Ｈａｌ−Ｚ^１−Ｚ^２、Ｈａｌ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２またはＨａｌ−Ｚ^０−Ｚ^２（式中、Ｚ^３、Ｒ^ａ、Ｚ^０、Ｚ^１、およびＺ^２は本明細書で既に定義したとおりであり、Ｈａｌはハロゲン原子を表す）で表される疎水性基を導入したハライドとを反応させる方法（方法１）、または原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、必要に応じてテトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換後、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式ＨＯ−Ｚ^３、ＨＯ−Ｒ^ａ、ＨＯ−Ｚ^１−Ｚ^２、ＨＯ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２またはＨＯ−Ｚ^０−Ｚ^２（式中、Ｚ^３、Ｒ^ａ、Ｚ^０、Ｚ^１、およびＺ^２は本明細書で既に定義したとおりである）で表される疎水性基を導入したアルコールとを反応させる方法（方法２）が挙げられる。
　本発明において、式（Ｉｃ）で表される二糖単位における親水性の部位を有する基Ｘ^３は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミド、エステル、またはチオエステルに変換することにより導入することができる（工程３）。
　アミドへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式：ＨＮＲ^３８−ＰＧ１または式：ＨＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３（式中、Ｒ^３８、ＰＧ１、Ｒ^３９、Ｒ^４０、ｎ１５、Ａ^５およびＢ^３は本明細書で既に定義したとおりである）で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したアミンと反応させる方法（方法１ａ）が挙げられる。
　エステルへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式：Ｈａｌ−ＰＧ１（式中、ＰＧ１は本明細書で既に定義したとおりであり、Ｈａｌはハロゲン原子を表す）で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したハライドとを反応させる方法（方法１ａ）、または原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、必要に応じてテトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換後、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式：ＨＯ−ＰＧ１（式中、ＰＧ１は本明細書で既に定義したとおりである）で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したアルコールとを反応させる方法（方法２ａ）が挙げられる。
　チオエステルへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式：ＨＳ−ＰＧ１（式中、ＰＧ１は本明細書で既に定義したとおりである）で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したチオールと反応させる方法（方法３ａ）が挙げられる。
　本発明において、式（ＩＩＩ）で表される二糖単位における基Ｘ^５は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミドに変換することにより導入することができる（工程４）。例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式：ＨＮＲ^１７−Ｒ^１８（式中、Ｒ^１７、およびＲ^１８は本明細書で既に定義したとおりである）で表される基を導入したアミンと反応させる方法が挙げられる。
　式（Ｉａ）における基Ｘ^１、式（Ｉｂ）における基Ｘ^２、式（Ｉｃ）における基Ｘ^３、および式（ＩＩＩ）における基Ｘ^５は、複数存在する二糖単位の各々において同一であっても異なっていてもよい。例えば、異なる種類の式で表される化合物を用いて上記反応を行ってもよい。また、式（ＩＩ）における基Ｘ^ａも、複数存在する二糖単位の各々において同一であっても異なっていてもよい。
　上記のアミドへの変換反応において使用することができる縮合剤は特に限定されず、例えば、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン）−４−メチルモルホリウム（ＤＭＴ−ＭＭ）、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、２−ベンゾトリアゾール−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム４フッ化ホウ酸塩（ＴＢＴＵ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＤｈｂｔ）、ベンゾトリアゾール−１−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム６フッ化リン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム　ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）などを挙げることができる。
　特に、限定はされないが、ＤＭＴ−ＭＭは水および有機溶媒の混合溶媒中でも反応が高効率に進む点において好ましい。また、ＤＭＴ−ＭＭを縮合剤として使用することにより、多数のヒドロキシが共存する系において、エステル結合形成を抑えつつ、高選択的にアミノとカルボキシによるアミド結合形成を行うことができる。この縮合剤の使用により、例えば、溶媒であるアルコールがヒアルロン酸部分のカルボキシと反応することや、ヒアルロン酸部分に同時に存在するカルボキシとヒドロキシとが、分子内もしくは分子間で結合して、望まない架橋を形成してしまうことを防ぐことができる。
　上記のアミドへの変換反応において用いる溶媒としては、水、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、スルホラン（ＳＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジオキサン（例えば１，４−ジオキサン）、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。出発物質、修飾試薬および生成物の溶解性と、縮合剤の反応性の観点からは、ＤＭＳＯ単独もしくは水／ＤＭＳＯ混合溶媒を使用するのが好ましい。修飾試薬の種類によっては、それをメタノール溶液やジオキサン溶液として反応に用いてもよい。
　上記のエステルへの変換反応において用いる縮合剤としては、例えば、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン）−４−メチルモルホリウム（ＤＭＴ−ＭＭ）、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、２−ベンゾトリアゾール−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム４フッ化ホウ酸塩（ＴＢＴＵ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＤｈｂｔ）、ベンゾトリアゾール−１−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム６フッ化リン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム　ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）などを挙げることができ、好ましくは、ＤＭＴ−ＭＭを挙げることができる。
　上記のエステルへの変換反応において用いる溶媒としては、水、ＤＭＳＯ、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
　上記のチオエステルへの変換反応において用いる縮合剤としては、例えば、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン）−４−メチルモルホリウム（ＤＭＴ−ＭＭ）、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、２−ベンゾトリアゾール−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム４フッ化ホウ酸塩（ＴＢＴＵ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＤｈｂｔ）、ベンゾトリアゾール−１−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム６フッ化リン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム　ヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）またはＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）などを挙げることができ、好ましくは、ＤＭＴ−ＭＭを挙げることができる。
　上記のチオエステルへの変換反応において用いる溶媒としては、ＤＭＳＯ、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
　アミドへの変換反応は、基Ｘ^２が−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２である場合は、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩とスペーサー部分を反応させ（この際、必要に応じて保護および脱保護反応を行ってもよい）、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシ（−ＣＯＯＨ）またはその塩を変換し、その後に適当な試薬と反応させてもよい。カルボキシから変換される基と、反応試薬の組み合わせの例を以下に示す。
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　Ｈａｌ−ＣＯＯＺ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　ＨＯＣＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　Ｈａｌ−ＣＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＣＯＯＨ　＋　ＨＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＯＨ　＋　Ｈａｌ−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＣＯＯＨ　＋　ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＯＣＯ−Ｈａｌ　＋　ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＯＣＯＯＨ　＋　ＨＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＯＣＯＯＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＯＣＯ−Ｈａｌ　＋　ＨＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＳＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−Ｈａｌ　＋　ＨＳ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＣＯ−Ｚ^ａ−Ｈａｌ　＋　ＨＳ−Ｚ^３
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＣＯ−Ｚ^ａ−ＳＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ_２　＋　ＨＳ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ_２　＋　ＨＳ−Ｚ^３、
　−ＣＯＮＲ^６−Ｚ^１−ＳＨ　＋　ＨＳ−Ｒ、
（式中、Ｒ^６、Ｚ^１、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＺ^３は本明細書で既に定義したとおりであり、Ｈａｌは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素から選択されるハロゲン原子を表す）。
　反応様式としては、脱ハロゲン化水素反応、縮合反応、脱水反応、マイケル付加等の求核付加反応、酸化的なジスルフィド形成反応等が挙げられ、これらは周知な反応であり、当業者が適宜選択し、好ましい反応条件を見出して行うことができる。変換体または反応物がカルボキシを有する場合は、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（以下、「ＮＨＳ」とも称す）エステルとし、反応させてもよい。
　また、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシに、２−アミノエチル　２−ピリジル　ジスルフィドを反応させて、末端に脱離基で修飾されたメルカプトを有するスペーサーが導入されたヒアルロン酸誘導体を調製し、これにチオコレステロールを求核置換反応させてジスルフィド結合を形成する方法を挙げることもできる。
　さらに、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシにスペーサーの一部を導入したものと、ステリル基にスペーサーの一部を導入したものを調製し、これらを反応させる方法を挙げることもできる。具体例の一部は上述したが、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシに、末端にメルカプトを有するスペーサーが導入されたヒアルロン酸誘導体と、末端にメルカプトを有するスペーサーが導入されたステリル基をそれぞれ調製し、これらを酸化的に反応させてジスルフィド結合を形成させる方法を挙げることもできる。このとき、一方のメルカプトを２−メルカプトピリジンと反応させてジスルフィドとした後に、他方のメルカプトと置換させることもできる。
　エステルへの変換反応は、Ｘ^２が−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２である場合は、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩とスペーサー部分を反応させ（この際、必要に応じて保護および脱保護反応を行ってもよい）、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシ（−ＣＯＯＨ）を変換し、その後に適当な試薬と反応させてもよい。カルボキシ基から変換される基と、反応試薬の組み合わせの例を以下に示す。
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　Ｈａｌ−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　ＨＯＣＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　Ｈａｌ−ＣＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂ−ＣＯＯＨ　＋　ＨＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂ−ＣＯＮＲ^ｃＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　ＨＯＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂＨ　＋　Ｈａｌ−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＣＯＯＨ　＋　ＨＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＣＯＯＨ　＋　Ｈ_２ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＯＨ　＋Ｈａｌ−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＯＨ　＋　Ｈａｌ−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＯＣＯＯＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＯＣＯ−Ｈａｌ　＋　ＨＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＳＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−Ｈａｌ　＋　ＨＳ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＣＯ−Ｚ^ａ−Ｈａｌ　＋　ＨＳ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＣＯ−Ｚ^ａ−ＳＨ　＋　Ｈａｌ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ_２　＋　ＨＳ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−Ｃ（ＣＨ_３）＝ＣＨ_２　＋　ＨＳ−Ｚ^３、および
　−ＣＯＯ−Ｚ^１−ＳＨ　＋　ＨＳ−Ｚ^３、
（式中、Ｚ^１、Ｚ^２、Ｚ^３、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｃおよびＺ^ａは本明細書で既に定義したとおりであり、Ｈａｌは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素から選択されるハロゲン原子を表す）。
　反応様式としては、脱ハロゲン化水素反応、縮合反応、脱水反応、マイケル付加等の求核付加反応、酸化的なジスルフィド形成反応等が挙げられ、これらは周知な反応であり、当業者が適宜選択し、好ましい反応条件を見出して行うことができる。変換体または反応物がカルボキシ基を有する場合は、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（以下、「ＮＨＳ」とも称す）エステルとし、反応させてもよい。
　上記反応において用いられる保護基の具体例は、例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，１９９９に記載されている。
　ヒドロキシの保護基の例としては、（Ｃ_１−６アルキル）カルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、（Ｃ_１−６アルコキシ）カルボニル、（Ｃ_１−６アルコキシ）Ｃ_１−６アルキル、（Ｃ_１−６アルキル）アミノカルボニル、ジ（Ｃ_１−６アルキル）アミノカルボニル、アリール（Ｃ_１−６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ_１−６アルキル）、（アリール（Ｃ_１−６アルキル））アミノカルボニル、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルキルスルホニル、（（アミノＣ_１−６アルキル）カルボニルオキシ）Ｃ_１−６アルキル、不飽和ヘテロ環カルボニルオキシＣ_１−６アルキル、アリールジ（Ｃ_１−６アルキル）シリル、トリ（Ｃ_１−６アルキル）シリルなどが挙げられる。好ましいヒドロキシの保護基としては、アセチルなどが挙げられる。
　−ＮＨ−またはアミノの保護基の例には、（Ｃ_１−６アルキル）カルボニル、アリール（Ｃ_１−６アルキル）カルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、（Ｃ_１−６アルコキシ）カルボニル、（Ｃ_１−６アルキル）アミノカルボニル、ジ（Ｃ_１−６アルキル）アミノカルボニル、アリール（Ｃ_１−６アルキル）、ヘテロアリール（Ｃ_１−６アルキル）、（アリール（Ｃ_１−６アルキル））アミノカルボニルなどが含まれる。好ましいアミノの保護基としては、アセチル、ｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニルなどが挙げられる。また、アミノは保護されることにより、フタル酸イミド、コハク酸イミド、グルタル酸イミド、１−ピロリルなどの飽和または不飽和ヘテロ環基を形成していてもよい。
　メルカプトは、例えば、エチルチオおよびｔ−ブチルチオ等のＣ_１−６アルキルチオ、２−ニトロフェニルチオおよび２−カルボキシフェニルチオ等の置換フェニルチオ、ならびに２−ピリジルチオ等のヘテロアリールチオに変換することにより保護することができる。好ましい例は、２−ピリジルチオである。
　カルボキシは、例えば、メチルエステル、エチルエステル、ｔ−ブチルエステル、アリルエステル、フェニルエステル、ベンジルエステル、メチルチオエステル、エチルチオエステルに変換することにより保護することができる。好ましい例はエチルエステルである。
　工程１、工程２、工程３および工程４はいかなる順番で行われてもよく、また、工程４の有無も問われない。例えば、原料のヒアルロン酸（塩などを含む）、好ましくは、式（ＩＩｂ）で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸を、テトラアルキルアンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡ）塩）にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式：ＨＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２（式中、Ｒ^６、Ｚ^１、およびＺ^２は本明細書で既に定義したとおりである）で表される疎水性基を導入したアミンと反応させ、次いで、適当な縮合剤存在下、溶媒中で、当該反応物と式：ＨＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１（式中、Ｒ^７、Ｒ^８、ｎ１、Ａ^１、およびＢ^１は本明細書に既に定義されたとおりである）で表される化合物と反応させ、次いで、適当な縮合剤存在下、溶媒中で、当該反応物と式：ＨＮＲ^３８−ＰＧ１（式中、Ｒ^３８およびＰＧ１は本明細書に既に定義されたとおりである）で表される化合物と反応させてもよい。
　さらに工程１によりカチオン性の部位を有する基Ｘ^１を導入した後、基Ｘ^１の末端に存在するアミノの一部と、（ｉ）式：Ｈａｌ２−ＰＧ２、式：Ｈａｌ２−ＣＯ_２−ＰＧ２、式：Ｈａｌ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−ＰＧ２、または式：Ｈａｌ２−ＣＯ−ＰＧ２（式中、ＰＧ２は本明細書に既に定義されたとおりであり、Ｈａｌ２はハロゲン原子またはスクシンイミジルオキシを表す）で表される化合物とを、塩基の存在下、反応させることにより、あるいは、（ｉｉ）式：ＨＯ−ＣＯ−ＰＧ２で表される化合物（式中、ＰＧ２は本明細書に既に定義されたとおりである）とを、縮合剤の存在下、反応させることにより、基Ｘ^１の一部を、−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３である基Ｘ^３に変換することもできる。
　塩基としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、炭酸カリウムなどが挙げられる。縮合剤としては、ＤＭＴ−ＭＭをはじめとする上述の各種縮合剤を使用できる。
　式：Ｈａｌ２−ＰＧ２で表される化合物は、式：ＨＯ−ＰＧ２で表される化合物を、ＰＰｈ_３の存在下、溶媒中で、ＣＣｌ_４，ＣＢｒ_４等の四ハロゲン化炭素と反応させることで、得ることができる。溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、スルホラン（ＳＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジオキサン（例えば１，４−ジオキサン）、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
　式：Ｈａｌ２−ＣＯ_２−ＰＧ２または式：Ｈａｌ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−ＰＧ２で表される化合物は、式：ＨＯ−ＰＧ２または式ＨＳ−ＰＧ２で表される化合物を、塩基存在下、溶媒中で、ホスゲン、クロロギ酸エステル、カルボニルジイミダゾール等を反応させることで得ることができる。塩基としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、炭酸カリウム等が挙げられ、溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、スルホラン（ＳＦ）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジオキサン（例えば１，４−ジオキサン）、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。さらに、得られた化合物を、塩基存在下、溶媒中で、Ｎ−スクシンイミドと反応させることで、Ｈａｌ２がスクシンイミジルオキシである式：Ｈａｌ２−ＣＯ_２−ＰＧ２または式：Ｈａｌ２−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−ＰＧ２で表される化合物を得ることができる。この工程で用いられる塩基としては、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン等が挙げられ、溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン等が挙げられる。
　Ｈａｌ２−ＣＯ−ＰＧ２で表される化合物は、式：ＨＯ−ＣＯ−ＰＧ２で表される化合物を、溶媒中で、ＰＣｌ_３、ＰＢｒ_３、ＳＯＣｌ_２、（ＣＯＣｌ）_２等のハロゲン化剤と反応させることで得ることができる。溶媒としては、例えば、ジオキサン（例えば１，４−ジオキサン）、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
　式：ＨＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１で表される化合物としては、例えば以下の式

で表される化合物などが挙げられ、好ましくは式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｆ’）、（ｈ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｏ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｕ’）、（ｖ’）、（ｙ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｄ’）、（ｆ’）、（ｈ’）、（ｊ’）、（ｋ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｎ’）、（ｏ’）、（ｐ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｕ’）、（ｖ’）、（ｙ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｄ’）、（ｆ’）、（ｊ’）、（ｋ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｎ’）、（ｏ’）、（ｐ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｖ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｄ’）、（ｆ’）、（ｊ’）、（ｋ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｎ’）、（ｏ’）、（ｐ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｆ’）、（ｈ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｏ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｙ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｆ’）、（ｈ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｏ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｕ’）、（ｙ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｆ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｏ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｕ’）、（ｖ’）、（ｙ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｆ’）、（ｈ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｏ’）、（ｓ’）、（ｔ’）、（ｕ’）、（ｖ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｆ’）、（ｈ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｏ’）、（ｓ’）、（ｕ’）、（ｖ’）、（ｙ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｆ’）、（ｈ’）、（ｌ’）、（ｍ’）、（ｏ’）、（ｕ’）、（ｖ’）、（ｙ’）、（ｚ’）、（ａｅ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ａ’）、（ｂ’）、（ｊ’）、（ｋ’）、（ｎ’）、（ｏ’）および（ｐ’）で表される化合物、式（ｃ’）、（ｄ’）、（ｌ’）および（ｍ’）で表される化合物、式（ｆ’）、（ｔ’）（ｕ’）および（ｖ’）で表される化合物、式（ｑ’）、（ｒ’）、（ｓ’）、（ｚ’）、（ａａ’）、（ａｂ’）、（ａｃ’）、（ａｄ’）、（ａｅ’）、（ａｆ’）、（ａｇ’）および（ａｈ’）で表される化合物、式（ｇ’）、（ｈ’）および（ｉ’）で表される化合物、式（ｗ’）、（ｘ’）および（ｙ’）で表される化合物、ならびに式（ａ’）、（ｂ’）、（ｃ’）、（ｄ’）、（ｅ’）、（ａｉ’）、（ａｊ’）、（ａｋ’）、（ａｌ’）および（ａｍ’）で表される化合物が、それぞれ挙げられる。
　なお、式（ｂ’）および（ｋ’）で表される化合物は、その大部分が式（ｂ）および（ｋ）で表される基として原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシに導入されるが、一部は、グアニジノ中のアミノが原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシと結合し、下記式で表される基として導入される場合がある。

そのような繰り返し単位を含むヒアルロン酸誘導体も本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれ、また、（１）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）および式（Ｉｃ）、（２）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）および式（ＩＩ）、（３）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）および式（ＩＩＩ）、または（４）上記式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（ＩＩ）、および式（ＩＩＩ）の繰り返し単位から実質的に構成されるヒアルロン酸誘導体にも含まれる。
　式：ＨＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２で表される化合物としては、例えば以下の式

で表される化合物などが挙げられる。Ｒ^ｙは、以下の式

で表される基である。式：ＨＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２で表される化合物としては、好ましくは、それぞれＲ^ｙが（ｃａ）である式（ｄａ）、（ｄｂ）、（ｄｃ）および（ｄｄ）で表される化合物、ならびにそれぞれＲ^ｙが（ｃｇ）である式（ｄａ）、（ｄｂ）および（ｄｄ）で表される化合物が挙げられる。Ｒ^ｙが（ｃａ）である式（ｄａ）で表される化合物は、本明細書において、Ｃｈｏｌ−Ｃ_６とも称される。
　式：ＨＮＲ^ｂ−Ｚ^３、で表される化合物としては、例えば以下の式

で表される化合物が好ましい。
　式：ＨＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２で表される化合物としては、例えば以下の式

で表される化合物などが挙げられ、好ましくは式（ａ２）、（ｂ２）、（ｃ２）、（ｄ２）、（ｆ２）、（ｊ２）、（ｋ２）、（ｌ２）、（ｍ２）、（ｎ２）、（ｏ２）、（ｐ２）、（ｔ２）、（ｕ２）、（ｖ２）、（ｙ２）および（ａｅ）で表される化合物が挙げられ、さらに好ましくは式（ａ２）、（ｂ２）、（ｃ２）、（ｄ２）、（ｆ２）、（ｌ２）、（ｍ２）、（ｏ２）、（ｔ２）、（ｕ２）、（ｖ２）、（ｙ２）および（ａｅ）で表される化合物が挙げられる。Ｒ^ｚは、以下の式

で表される基、あるいは（ｃｃ）、（ｃｉ）または（ｃｈ）で表される基を表す。Ｒ^ｚａ、Ｒ^ｚｂは、独立に、水素原子、（ｃｃ）、（ｃｉ）、（ｃｈ）または（ｃｊ）で表される基、あるいは水素原子、（ｃｃ）、（ｃｉ）または（ｃｈ）で表される基を表す。ただし、Ｒ^ｚａとＲ^ｚｂが同時に水素原子であることはない。
　式：Ｈａｌ−Ｚ^３で表される化合物としては、例えば以下の式

で表される化合物などが挙げられ、好ましくは式（ｃｗ）で表される化合物が挙げられる。Ｐ^１およびＰ^２は、独立に、水素原子またはヒドロキシの保護基を表し、Ｐ^３は、カルボキシの保護基を表す。
　式：Ｈａｌ−Ｚ^１−Ｚ^２で表される化合物としては、例えば以下の式

で表される化合物などが挙げられる。Ｒ^ｙａは、式（ｃａ）、（ｃｂ）、（ｃｃ）、（ｃｄ）、（ｃｆ）および（ｃｇ）で表される基である。式：Ｈａｌ−Ｚ^１−Ｚ^２で表される化合物としては、好ましくは、それぞれＲ^ｙａが（ｃａ）である式（ｄａ１）、（ｄａ２）、（ｄｂ１）、（ｄｂ２）、（ｄｄ１）および（ｄｄ２）で表される化合物、ならびにそれぞれＲ^ｙａが（ｃｇ）である式（ｄａ１）、（ｄａ２）、（ｄｂ１）、（ｄｂ２）、（ｄｄ１）および（ｄｄ２）で表される化合物が挙げられる。
　さらに、式：Ｈａｌ−Ｚ^１−Ｚ^２、Ｈａｌ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２およびＨａｌ−Ｚ^０−Ｚ^２で表される化合物として、例えば以下の式

および

で表される化合物などが挙げられる。Ｒ^ｙｂは、は本明細書に既に定義されたとおりである。
　式：ＨＯ−Ｚ^１−Ｚ^２で表される化合物としては、例えば以下の式

で表される化合物などが挙げられ、好ましくはそれぞれＲ^ｙが（ｃａ）である式（ｄａ’）、（ｄｂ’）および（ｄｄ’）で表される化合物、ならびにそれぞれＲ^ｙが（ｃｇ）である式（ｄａ’）、（ｄｂ’）および（ｄｄ’）で表される化合物が挙げられる。
　さらに、式：ＨＯ−Ｚ^１−Ｚ^２、ＨＯ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２およびＨＯ−Ｚ^０−Ｚ^２で表される化合物として、例えば以下の式

および

で表される化合物などが挙げられる。Ｒ^ｙｂは、本明細書に既に定義されたとおりである。
　式：ＨＮＲ^３８−ＰＧ１で表される化合物としては、例えば以下の式：
Ｈ_２Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｇａ’）
Ｈ_２Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｇｂ’）
Ｈ_２Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｇｃ’）
Ｈ_２Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｇｄ’）
Ｈ_２Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｇｅ’）
Ｈ_２Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｇｆ’）
Ｈ_２Ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｇｇ’）

で表される化合物などが挙げられ、好ましくは、式（ｇａ’）および（ｇｂ’）で表される化合物である。
　また、アミノの反応性を向上させた、式（Ｙｂｂ’）で表される化合物を、ＨＮＲ^３８−ＰＧ１で表される化合物に代えて使用することもできる：

　式：ＨＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３で表される化合物としては、例えば以下の式：

で表される化合物などが挙げられる。好ましくは、式（ａ１’）、（ａ２’）、（ｂ１’）、（ｃ１’）および（ｃ２’）で表される化合物である。
　式：Ｈａｌ−ＰＧ１で表される化合物としては、例えば以下の式：
Ｃｌ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｉａ’）
Ｃｌ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｉｂ’）
Ｃｌ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｉｃ’）
Ｃｌ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｉｄ’）
Ｃｌ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｉｅ’）
Ｃｌ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｉｆ’）
Ｂｒ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｉｇ’）
Ｉ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｉｈ’）
Ｂｒ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｉｉ’）
Ｂｒ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｉｊ’）
Ｆ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｉｋ’）
Ｉ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｉｌ’）
Ｃｌ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｉｍ’）
で表される化合物などが挙げられる。
　式：ＨＯ−ＰＧ１で表される化合物としては、例えば以下の式：
ＨＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｊａ’）
ＨＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｊｂ’）
ＨＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｊｃ’）
ＨＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｊｄ’）
ＨＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｊｅ’）
ＨＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｊｆ’）
ＨＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｊｇ’）

で表される化合物などが挙げられ、好ましくは、式（ｊｂ’）で表される化合物である。
　また、ヒドロキシの反応性を向上させた、式（Ｙａａ’）および（Ｙａｂ’）で表される化合物を、ＨＯ−ＰＧ１で表される化合物で表される化合物に代えて使用することもできる：

　式：ＨＳ−ＰＧ１で表される化合物としては、例えば以下の式：
ＨＳ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＨ　（ｋａ’）
ＨＳ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＯＣＨ_３　（ｋｂ’）
ＨＳ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｈ　（ｋｃ’）
ＨＳ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＣＯ_２Ｃ（ＣＨ_３）_３　（ｋｄ’）
ＨＳ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨ_２　（ｋｅ’）
ＨＳ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＮＨＣＨ_３　（ｋｆ’）
ＨＳ−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−ＳＣＨ_３　（ｋｇ’）
で表される化合物などが挙げられ、好ましくは、式（ｋｂ’）で表される化合物である。
　式：ＨＯ−ＰＧ２で表される化合物としては、式（ｊａ’）、（ｊｂ’）、（ｊｃ’）、（ｊｄ’）、（ｊｅ’）、（ｊｆ’）で表される化合物などが挙げられる。
　式：ＨＳ−ＰＧ２で表される化合物としては、式（ｋａ’）、（ｋｂ’）、（ｋｃ’）、（ｋｄ’）、（ｋｅ’）、（ｋｆ’）で表される化合物などが挙げられる。
　ＨＯ−ＣＯ−ＰＧ２で表される化合物としては、例えば以下の式：

で表される化合物などが挙げられ、好ましくは、式（Ｕ６’）および（Ｕ６ｃ’）で表される化合物である。これらの化合物は、リジンの２つのアミノをＰＥＧ化することで得ることができる。必要に応じ、リジンのカルボキシに、保護・脱保護を施してもよい。
　式：ＨＮＲ^１７−Ｒ^１８で表される化合物としては、例えば以下の式：

で表される化合物などが挙げられ、好ましくは式（ｂａ’）、（ｂｂ’）、（ｂｃ’）、（ｂｄ’）および（ｂｆ’）で表される化合物が挙げられる。
　ヒアルロン酸のカルボキシに導入される置換基の種類が複数のときは、それらの置換基は、同時導入しても、順次に導入してもよい。
　本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、水中で会合により微粒子を形成することを特徴とする前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。特に限定はされないが、導入された基−Ｏ−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２、または、−Ｏ−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^２、−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２の疎水性相互作用により水中において自発的会合が起こり、ナノスケールの微粒子を形成するという特性を有する。望まれるドラッグデリバリーシステムの構築のために、本発明のヒアルロン酸誘導体により形成されるナノ微粒子は非常に有力な手段の一つであり、形成される疎水ドメインに活性成分であるタンパク質、ペプチド、低分子化合物を保持したまま目的の部位に送達するカプセルとして使用することができる。また、薬物を本発明のヒアルロン酸誘導体に共有結合させてコンジュゲートとすることにより目的の部位に薬物を送達することができる。
　ナノスケールの微粒子は、経粘膜投与、皮下投与、経皮投与、静脈内投与が可能であり、封入（複合化）した薬物の粘膜透過、組織透過、薬物徐放、また、標的臓器および細胞へ薬物を選択的にデリバリーさせる、ターゲティング用の担体として使用できる。ターゲティング用の担体として使用する場合、ターゲット素子を加えることにより各臓器および細胞へターゲティングすることもできる。ターゲット素子としては、例えば、標的組織特異的なペプチド、抗体、断片化抗体、アプタマー、がん細胞に対するＲＧＤペプチド、葉酸、アニサミド、トランスフェリン、肝臓に対するガラクトース、トコフェロールなどがある。血中での薬物の保持を強固にするために、さらにヒアルロン酸誘導体を化学架橋させることもできる。
　ヒアルロン酸誘導体による微粒子は、水溶液中で自己会合により形成するので、固体のヒアルロン酸誘導体を水または塩水溶液に溶解することによって形成することができる。また、別の方法では、他の溶媒（例えばＤＭＳＯ）に溶解させたあと、水、または塩水溶液に置換することによっても微粒子を形成することができる。形成した微粒子のサイズを均一化するために超音波処理を行ってもよい。
　ヒアルロン酸誘導体の疎水性基導入率が高くなるに従って、水への溶解性が減少する。そのため水溶液中で分散性の微粒子を形成させるためには、疎水性基の導入率は８０％以下であり、導入率が６０％以下になるように調製されたヒアルロン酸誘導体を用いることが好ましい。
　本発明のヒアルロン酸誘導体は疎水性基を有するため、系中のイオン強度が高いほど、溶解性が低くなる。したがって、疎水性基の導入率をコントロールすることにより、低塩濃度下あるいは無塩条件下では溶解し、生理食塩濃度にて凝集・沈殿するヒアルロン酸誘導体の調製が可能であり、これは、皮下および局所での徐放製剤の基材となり得る。また、生理塩濃度下においても安定な微粒子を形成する程度の疎水性基を導入したヒアルロン酸誘導体は、全身投与型の薬物担体となり得る。
　本発明のヒアルロン酸誘導体を用いて、ＰＬＧＡや脂質といった添加剤、薬物の結晶粒子、アモルファス粒子と複合化させて新たな粒子を形成させることも可能である。
　本発明のヒアルロン酸誘導体は、医薬組成物における薬物担体として使用することができ、本発明のヒアルロン酸誘導体と薬物とを含む、医薬組成物を提供することができる。また、本発明のヒアルロン酸誘導体そのものを有効成分として含む、医薬組成物を提供することもできる。これらの医薬組成物中に含まれる本発明のヒアルロン酸誘導体は、（１）~（１４）に記載のヒアルロン酸誘導体である。本発明のヒアルロン酸誘導体は、水溶液中で自発的に薬物と複合体を形成できるため、特別な操作を必要とせず、当該ヒアルロン酸誘導体と薬物を水溶液中で混合し、インキュベートすることにより、担体−薬物の複合体を容易に形成させ、薬物を担持できる。複合体形成の駆動力は、主にヒアルロン酸誘導体の疎水性基と薬物との疎水性相互作用であるが、薬物が塩基性または酸性の場合、ヒアルロン酸誘導体のカルボン酸またはカチオン性基との静電的相互作用が寄与する場合がある。生体塩濃度では、静電的相互作用は弱く、疎水性相互作用は強くなるため、主に疎水性相互作用により複合体が形成すると考えられる。
　上記式（Ｉｂ）において、Ｚ^１がアルキレンの場合、アルキレンの炭素鎖が長いほど、当該基の疎水性が高くなり、強い疎水性相互作用により強固な微粒子を形成することができる。また、アルキレンが長いほど分子間での絡み合いが大きくなり、粘度を上昇させることができる。さらに、アルキレンの長さを変更することで、微粒子のサイズを制御することもできる。
　疎水性基中のリンカー（スペーサー）部分がエステルまたはカーボネートである場合（例えば、Ｘ^２に、−ＣＯＯ−Ｚ^３または−Ｏ−ＣＯＯ−Ｚ^３が含まれる場合）、生体内においてエステルまたはカーボネートが分解し、ヒアルロン酸誘導体の疎水性が低下することによってさらに生分解性が高まり、安全性の面から好ましい。また、腫瘍組織周辺ではｐＨが低下していることが知られており、このようなスペーサーを有している場合、目的薬物を担持した本発明のヒアルロン酸誘導体の会合体は腫瘍周辺にて崩壊し、薬物を腫瘍周辺で放出することができる。
　特に、−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｓ−のようなβチオカルボン酸エステル構造を有するリンカーの場合、わずかなｐＨの低下（ｐＨ６程度）においても分解が促進される。このため、通常のエステルよりもｐＨ応答がシャープである。また、細胞内への薬物の送達を目指す場合、エンドソームにおけるｐＨ低下にも応答し、細胞に取り込まれた後にのみ薬物を放出させることができる。
　リンカー（スペーサー）部分がジスルフィド結合を有する場合（例えば、Ｘ^２に、−Ｓ−Ｓ−Ｚ^３が含まれる場合）、還元条件下においてリンカーが分解し、ヒアルロン誘導体の疎水性が低下することによって本発明のヒアルロン酸誘導体の会合体が崩壊する。細胞質は還元環境であることが知られているため、このリンカーを用いたヒアルロン酸誘導体に薬物を封入し、投与することによって、組織中および血中では薬物を放出せず、細胞質内でのみ薬物を放出させることができる。
　担体−薬物複合体を形成するときの、溶媒、塩濃度、ｐＨ、温度、時間、変性剤の添加などの条件は、用いる薬物により適宜変更することができる。例えば、薬物封入時の塩濃度やｐＨによって、ヒアルロン酸誘導体は密度が変わるとともに、薬物もその電離状態などが変動する。使用する変性剤の例としては、尿素、塩酸グアニジン、ドデシル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。変性剤を添加した場合は、複合体形成後に、過剰の水などで洗浄することにより余剰の変性剤を除去することができる。
　特に限定されないが、例えば、本発明のヒアルロン酸誘導体とタンパク質の複合体を形成する場合、その等電点付近で複合体形成を行うことにより、ヒアルロン酸誘導体とタンパク質の静電反発を抑制することが可能なため、複合体に含まれるタンパク質の量を増加させることができる。また、ヒアルロン酸誘導体のカルボキシのｐＫａ（およそ４．０）以下の条件で複合体形成工程を行うことにより、ヒアルロン酸誘導体が有する負電荷を弱めることができるので、タンパク質が当該条件下で負電荷に帯電している場合には静電反発を抑制することが可能であり、複合体に含まれるタンパク質の量を増加させることができる。さらに、例えば生体内よりも低い塩濃度において複合体形成工程を行うことにより、水溶液中で形成されるヒアルロン酸誘導体の微粒子の密度が低下するため、複合体に含まれるタンパク質の量を増加させることができる。また、その状態で塩濃度を上げることにより微粒子の密度を向上させ、強固にタンパク質を封入することができる。
　ヒアルロン酸誘導体とタンパク質との複合体形成は、タンパク質の分子量にも影響され得る。一般に、タンパク質が低分子量であるほど、当該タンパク質のヒアルロン酸誘導体の微粒子内部へ移行速度は高い。また、疎水性基の導入率に依存する微粒子の密度も、タンパク質との複合体形成の速度、および複合体に含まれるタンパク質の量に影響を与えうる。
　ヒアルロン酸誘導体と核酸との複合体形成は、核酸の分子量や疎水性にも影響され得る。一般に二本鎖核酸よりも一本鎖核酸のほうが容易にヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する。また、ｓｉＲＮＡのような低分子二本鎖核酸よりもプラスミドのような高分子量二本鎖核酸のほうが容易にヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する。
　ヒアルロン酸誘導体と薬物の複合体からの生体内における薬物放出は、複合体からの薬物の拡散に加えて、生体成分が薬物と置換することにより促進される。微粒子の密度を増減させて、この拡散や置換を制御することにより、薬物の徐放性を制御することが可能となる。
　生体内には血漿タンパク質や脂質などの生体成分が存在し、ヒアルロン酸誘導体と薬物の複合体を皮下や血中などの生体内に投与した場合、この生体成分が複合体内の薬物と置換することにより薬物が放出される場合がある。当該置換を生じさせる主な生体内タンパク質としてアルブミンが想定される。
　本発明のヒアルロン酸誘導体を薬物担体として使用する方法としては、前述の水溶性液中で自発的に薬物と複合体を形成させる方法の他、薬物と本発明のヒアルロン酸誘導体とを共有結合などにより結合させたコンジュゲートにする方法を挙げることもできる。すなわち、本発明の別の側面において、式（Ｉａ）で表される二糖単位および式（Ｉｂ）で表される二糖単位を含むヒアルロン酸誘導体に、上記薬物の１以上が結合した、ヒアルロン酸誘導体−薬物コンジュゲートが提供される。この側面の１つの態様において、ヒアルロン酸誘導体として、（１）式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）および式（Ｉｃ）、（２）式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）および式（ＩＩ）、（３）式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）および式（ＩＩＩ）、ならびに、（４）式（Ｉａ）、式（Ｉｂ）、式（Ｉｃ）、式（ＩＩ）、および式（ＩＩＩ）で表される１以上の二糖単位をそれぞれ含むヒアルロン酸誘導体を用いることができる。
　本発明のヒアルロン酸誘導体の主鎖の末端に存在するグルクロン酸４位およびアセチルグルコサミン１位のヒドロキシは、別の基に変換されていてもよく、例えば、Ｃ_１−６アルコキシ、ホルミルオキシ、（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルオキシなどであってもよい。
　本発明のヒアルロン酸誘導体と薬物とからなるコンジュゲートの調製方法は、既知のポリマーと薬物とのコンジュゲートの調製で使用されている方法を用いることができ、例えば、以下の反応を利用することができる。
　ヒアルロン酸誘導体のグルクロン酸部分のカルボキシと、薬物のアミノ、ヒドロキシ、ヨード、ブロモ、または、薬物に導入したアミノ、ヒドロキシ、ブロモ、ヨードとの反応；
　ヒアルロン酸誘導体のＮ−アセチルグルコサミン部分の６位のヒドロキシと、薬物のカルボキシまたは薬物に導入したカルボキシとの反応；
　ヒアルロン酸誘導体に導入したアミノと、薬物のカルボキシまたは薬物に導入したカルボキシとの反応；
　ヒアルロン酸誘導体に導入したアミノと、修飾によりイソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、ＮＨＳエステル、エポキシドなどに変換された薬物との反応；
　薬物のアミノまたは薬物に導入したアミノと、修飾によりイソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、カルボニル、ＮＨＳエステル、エポキシドなどに変換されたヒアルロン酸誘導体との反応；
　ヒアルロン酸誘導体のアミノと、カルボニルを有するまたは導入された薬物（アルデヒドおよびケトンなど）とのシッフ塩基形成および還元的アミノ化反応；
　薬物のアミノまたは薬物に導入したアミノと、修飾によりカルボニルが導入されたヒアルロン酸誘導体とのシッフ塩基形成および還元アミノ化反応；
　ヒアルロン酸誘導体に導入したメルカプトと、不飽和結合を有する化合物（マレイミド、アクリルエステル、アクリルアミド、メタクリルエステル、メタクリルアミド、アリル化物、ビニルスルホンなど）、ハロゲン化物（クロロ酢酸エステル、ブロモ酢酸エステル、ヨード酢酸エステル、クロロ酢酸アミド、ブロモ酢酸アミド、ヨード酢酸アミドなど）、またはチオールである薬物または修飾により当該化合物に変換された薬物との反応；および
　薬物に導入したメルカプトと、修飾により、不飽和結合を有する化合物（マレイミド、アクリルエステル、アクリルアミド、メタクリルエステル、メタクリルアミド、アリル化物、ビニルスルホンなど）、ハロゲン化物（クロロ酢酸エステル、ブロモ酢酸エステル、ヨード酢酸エステル、クロロ酢酸アミド、ブロモ酢酸アミド、ヨード酢酸アミドなど）、またはチオールに変換されたヒアルロン酸誘導体との反応。
　さらに、前述の疎水性基をヒアルロン酸誘導体に導入する際に用いたエステルまたはカーボネート、βチオエステル、ジスルフィド、特定の部位で切断するペプチドを含むリンカー（スペーサー）を、薬物とのコンジュゲート用のリンカーとして使用することもできる。これらのリンカーは前述の通り、標的部位において切断され、薬物が放出される。
　コンジュゲートの調製のためにヒアルロン酸誘導体または薬物の修飾に使用する試薬は、コンジュゲートの調製において不都合な反応を生じさせないものであれば、特に限定されない。該化合物は試薬として入手可能であるか、または文献公知の方法を参考にして合成してもよい。
　具体的には、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらにアミノを有する薬物またはアミノを導入した薬物をＤＭＴ−ＭＭなどの縮合剤を用いて反応させ、アミド結合により薬物をコンジュゲートすることができる。この際、薬物と疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を同時に導入してもよい。また、薬物の後もしくは前に当該化合物を加えてもよい。また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に薬物を反応させても、薬物を導入したヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入してもよい。
　また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらにヒドロキシを有する薬物またはヒドロキシを導入した薬物をＤＭＴ−ＭＭ、１，３−ジクロロヘキシルカルボジイミト゛（ＤＣＣ）などの縮合剤を用いて反応させ、エステル結合によりヒアルロン酸誘導体に薬物をコンジュゲートすることができる。この際、薬物と疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を同時に導入してもよい。また、薬物の後もしくは前に当該化合物を加えてもよい。しかし、エステル、アミドなどの加水分解を回避するためには、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入後、薬物をコンジュゲートすることが望ましい。上記の方法は、例えば、パクリタキセルがヒアルロン酸にエステルで導入された報告（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　第１９巻、第１３１９−１３２５項、２００８年）などを参考にして行うことができる。
　また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらに臭化物もしくはヨウ化物である薬物または、修飾により臭化物もしくはヨウ化物に変換された薬物を反応させ、ヒアルロン酸誘導体のカルボキシをエステルに変換することにより薬物をコンジュゲートすることができる。エステル、アミドなどの加水分解を回避するためには、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入後、薬物をコンジュゲートすることが望ましい。
　本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらにカルボキシを有する薬物またはカルボキシを導入した薬物をＮＨＳエステルとし、Ｎ−アセチルグルコサミン部分の６位のヒドロキシと反応させ、エステル結合により薬物をコンジュゲートすることができる。この際、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基をヒアルロン酸に導入した後に薬物を加えても、導入の前に加えてもよい。また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に薬物を反応させても、薬物を導入したヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入してもよい。エステル結合、アミド結合などの加水分解を回避するためには、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入後、薬物をコンジュゲートすることが望ましい。上記の方法は、例えば、カンプトテシンがヒアルロン酸にエステルで導入された報告（国際公開第ＷＯ２００９／０７４６７８号）などを参考にして行うことができる。
　１つの態様において、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成後、グルクロン酸部分のカルボキシをエチレンジアミンなどのジアミンと脱水縮合させ、アミノを導入することができる。エチレンジアミンなどのジアミンは、カチオン性基を導入するための式：ＨＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１で表される化合物の一部を利用してもよく、また、薬物をコンジュゲートするためのエチレンジアミンなどのジアミンの一部を、式：ＨＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１で表される化合物として利用してもよい。さらに、Ｎ−スクシンイミジル　ヨードアセテート（ＰＩＥＲＣＥ社）やＮ−スクシンイミジル　［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート（ＰＩＥＲＣＥ社）をアミノに反応させ、ヨードアセチルが導入されたヒアルロン酸誘導体を合成することができる。このヒアルロン酸誘導体に対して、メルカプトを有する薬物を、コンジュゲートすることができる。この方法はタンパク質、ペプチド、核酸などのアミノなどの反応性基を多く含む高分子薬物においてもメルカプト選択的にコンジュゲートできるため特に有効である。この際、薬物の導入は疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基をヒアルロン酸に導入する前でも後でもよい。
　本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、ここで、ヒアルロン酸誘導体のグルクロン酸部分のカルボキシの一部を２−アミノエチル　２−ピリジル　ジスルフィド塩酸塩と反応させる。このヒアルロン酸誘導体に対してメルカプトを有する薬物およびメルカプトを導入した薬物をジスルフィド結合交換反応、すなわち置換反応により導入することが可能である。
　ここで、当該コンジュゲートの生物活性を有効に保つために、薬物とヒアルロン酸誘導体間のリンカーの長さを調節することもできる。また、生体内の特定部位にて酵素等で切断されるペプチドリンカーを導入することもできる。例えば、メトトレキセートがＨＡにペプチドを含むリンカーを介して導入された報告（国際公開第ＷＯ２００５／０９５４６４号）、ドキソルビシンがＨＰＭＡ（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド）およびペプチドを含むリンカーを介して導入された報告（国際公開第ＷＯ２００２／０９０２０９号）などを参考にして行うことができる。
　また、抗体に低分子化合物をコンジュゲートさせたＡＤＣ（抗体薬物コンジュゲート）に関する報告（国際公開第ＷＯ２００９／０２６２７４号；Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ．第１５巻、第１０８７−１１０３頁、２００５年；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｃｈｅｍ．第１９巻、第１９６０−１９６３頁、２００８年；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｃｈｅｍ．ｉｎ　ｐｒｅｓｓ、Ｂｅｒｎｈａｒｄ　Ｓｔｕｍｐら、Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ｌｉｎｋｉｎｇ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｐａｙｌｏａｄｓ　ｔｏ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）が多数あり、これらを参考にして、ヒアルロン酸誘導体と低分子化合物とのコンジュゲートを調製することもできる。
　本発明のヒアルロン酸誘導体と１以上の薬物とを含む医薬組成物、本発明のヒアルロン酸誘導体と１以上の薬物との複合体または本発明のヒアルロン酸誘導体と１以上の薬物とが結合したコンジュゲートは、ナノ微粒子、ミクロ微粒子、溶液、カプセル、錠剤、散剤、パッチ、エマルジョン、懸濁液、ゲル、ミセル、インプラント、粉末、またはフィルムの形態にあってよい。粉末は、凍結乾燥または噴霧乾燥により得た固体を粉砕して製造してもよく、沈殿物を乾燥したものから製造してもよい。
　本発明の医薬組成物において、薬物は、ヒアルロン酸誘導体中に封入されていても、ヒアルロン酸誘導体に接着していても、ヒアルロン酸誘導体で被覆されていても、ヒアルロン酸誘導体と混合または混和されていてもよい。さらに、例えば口内炎の予防又は治療に使用する場合、ヒアルロン酸誘導体自体が薬物として、他の薬物を含んで又は含まずして、本発明の医薬組成物中に含まれていてもよい。
　本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、経口、腸管外、鼻腔内、肺腔内、気管、気管支、膣内、直腸内、眼内、点眼、結膜下、テノン嚢下、耳内、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、関節腔内、脳内または口腔内の経路を経て投与されてよいが、いずれの経路においても、粘膜を経由または透過させて投与されるのが好ましい。
　本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、特に粘膜透過性を高めることを目的とした場合は、その溶解状態でのサイズは１μｍ以下であることが好ましく、５００ｎｍ以下であることが好ましく、３００ｎｍ、２００ｎｍ、１００ｎｍ、５０ｎｍ以下であることが好ましい。
　本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、粘膜付着性、もしくは徐放性を高めることを目的とした場合、その溶解状態でのサイズは２００μｍ以下であることが好ましい。粘膜付着性の観点からは、用いるヒアルロン酸誘導体のカチオン性基導入率は高い方が好ましい。
　本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、注射投与による特定組織、器官への集積性を目的とする場合、そのサイズは５００ｎｍ以下であることが好ましく、さらに好ましくは２００ｎｍ以下、さらに１００ｎｍ以下であることが好ましい
　本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、特にＣＤ４４をはじめとするヒアルロン酸レセプターへのターゲティングを目的とした場合、そのサイズは５μｍ以下であることが好ましい。
　本発明のヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する薬物は、複合化可能な薬物であれば特に限定されない。また、本発明のヒアルロン酸誘導体と結合させる薬物は、コンジュゲートが調製可能であれば特に限定されない。当該薬物の例としては、タンパク質および／またはペプチド、多糖類、核酸類、低分子化合物などが挙げられ、好ましくは、タンパク質および／またはペプチド、低分子化合物が挙げられる。
　低分子化合物の例としては、限定されるわけではないが、例えば、制癌剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、パクリタキセル等のアルカロイドなど）、シクロスポリンなどの免疫抑制剤、抗炎症剤（ステロイド剤、非ステロイド剤系抗炎症剤など）、抗リウマチ剤、抗菌剤（β−ラクタム系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、新キノロン系抗生物質、サルファ剤など）などを挙げることができる。
　タンパク質およびペプチドの例としては、限定されるわけではないが、例えば、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、グラニュロサイトコロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、インターフェロン−α、β、γ、（ＩＮＦ−α、β、γ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、シリアリーニュートロフィクファクター（ＣＮＴＦ）、チューマーネクローシスファクター（ＴＮＦ）、チューマーネクローシスファクター結合タンパク質（ＴＮＦｂｐ）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、ＦＭＳ類似チロシンカイネース（Ｆｌｔ−３）、成長ホルモン（ＧＨ）、インシュリン、インシュリン類似成長因子−１（ＩＧＦ−１）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インターロイキン−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、ブレイン由来ニューロトロフィクファクター（ＢＤＮＦ）、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、メガカリオサイト成長分化因子（ＭＧＤＦ）、オステオプロテゲリン（ＯＰＧ）、レプチン、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、塩基性フィブロブラスト成長因子（ｂ−ＦＧＦ）、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）、Ｃ型ナトリウム利尿ペプチド（ＣＮＰ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、抗体、ダイアボディー、ミニボディー、断片化抗体などを挙げることができる。
　核酸類の例としては、限定されるわけではないが、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス、デコイ、リボザイム、低分子干渉ＲＮＡ、ＲＮＡアプタマー、メッセンジャーＲＮＡなどを挙げることができる。また、また、ホスホロチオエート、メトキシメチル体およびＬＮＡ等の、前記核酸類を化学的に処理した核酸誘導体などを挙げることもできる。
　薬物が低分子干渉ＲＮＡを含む核酸類である場合、本発明のヒアルロン酸誘導体を低分子干渉ＲＮＡなどの核酸類と複合化することで、核酸類を、標的とする細胞内に送達させることができる。
　核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、カチオン性の部位を有する基Ｘ^１の好ましい具体例としては、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｕ）、（ｙ）、（ｚ）および（ａｈ）で表される基、さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｌ）、（ｍ）、（ｓ）、（ｔ）、（ｙ）、（ｚ）および（ａｈ）で表される基、さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｈ）、（ｌ）、（ｍ）および（ｓ）で表される基、さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｆ）、（ｌ）、（ｍ）および（ｓ）で表される基、さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｌ）、（ｍ）および（ｓ）で表される基、さらに好ましくは、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｌ）および（ｍ）で表される基、さらに好ましくは、式（ｂ）、（ｃ）および（ｍ）で表される基が挙げられる。カチオン性の部位を有する基Ｘ^１の別の好ましい具体例としては、式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ａｉ）、（ａｊ）、（ａｋ）、（ａｌ）および（ａｍ）で表される基が挙げられる。核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、ポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基Ｘ^３の好ましい具体例としては、式（ｇａ）、（ｇｂ）、（ｊａ）、（ｊｂ）、（ｋｂ）および（ｋａ）で表される基が挙げられる。
　核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、Ｘ^１の導入率は、好ましくは４~８５％、さらに好ましくは６~７８％である。疎水性の部位を有する基Ｘ^２の導入率は、好ましくは１０~６０％であり、さらに好ましくは１４~４８％である。親水性の部位を有する基Ｘ^３の導入率は、好ましくは１~５０％であり、さらに好ましくは１~４０％であり、さらに好ましくは１~３０％であり、さらに好ましくは１~２０％であり、さらに好ましくは１~１５％であり、さらに好ましくは５~１５％である。Ｘ^１のカチオン性を制御する観点では、Ｘ^３の導入率は、０．０００１~１０％が好ましく、さらに好ましくは０．００１~５％であり、さらに好ましくは０．０１~１％である。なお、例えばＸ^３の導入率が低い場合、ヒアルロン酸誘導体のすべての分子中にＸ^３が導入されるとは限らない。本発明の１つの態様において、ヒアルロン酸誘導体の中に、Ｘ^１、Ｘ^２およびＸ^３のすべてが導入されているヒアルロン酸誘導体の分子が１以上存在している。
　核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、Ｘ^１の導入率、Ｘ^２の導入率およびＸ^３の導入率の組み合わせ（Ｘ^１の導入率：Ｘ^２の導入率：Ｘ^３の導入率）は、Ｘ^１が式（ｂ）で表される基である時、好ましくは（５~８５％：１０~５５％：０．００１~５０％）であり、さらに好ましくは（１１~７４％：１７~４７％：０．００１~１５％）である。Ｘ^１が式（ｃ）で表される基である時は、好ましくは（１０~４５％：１５~６５％：０．００１~５０％）であり、さらに好ましくは（１９~３１％：２９~４８％：０．００１~１５％）である。Ｘ^１が式（ｍ）で表される基である時は、好ましくは（５~６５％：１０~５０％：０．００１~５０％）であり、さらに好ましくは（６~５２％：１４~１７％：０．００１~１５％）である。なお、Ｘ^１の導入率、Ｘ^２の導入率およびＸ^３の導入率の和の上限は、１００％である。下限は７％以上であればよい。　本発明のヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸誘導体と薬物との複合体、またはヒアルロン酸誘導体−薬物コンジュゲートは、１種もしくはそれ以上の薬学的に許容し得る希釈剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、界面活性剤、脂質、基材などを含む医薬組成物として、目的とする投与経路に応じ、適当な任意の形態にして投与することができる。投与経路は非経口的経路であっても経口的経路であってもよい。
　本発明の医薬組成物は、スプレー、ドライパウダーインヘーラー、滴下、イオントフォレーシス、エレクトロポレーション、ソノフォレーシス（超音波）などのデバイスを用いる経粘膜または経皮投与方法や、マイクロカニューレ、マイクロニードル、無針注射、研磨などによる経粘膜または経皮投与方法により、投与できる。錠剤やタブレットによる経口投与、経膣投与、直腸投与もできる。注射器を用いた投与も可能である。クリームや軟膏、シップ剤も可能である。
　本発明により、従来の医薬組成物では見られない、薬物を粘膜へ接着させ透過させて標的部位に到達させることが可能であり、薬物を長期間徐放することが可能であり、および／または、適切な生分解性を有する、安全性の高い医薬組成物を提供することが可能である。

　以下、本発明の好適な具体的態様を実施例として説明する。
　以下の記載中のＨＡユニットとは、ヒアルロン酸（ＨＡ）中のＮ−アセチルグルコサミン−グルクロン酸の繰り返し単位（１ユニット）を意味する。^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの測定には、日本電子製ＪＮＭ−ＥＣＸ５００ＩＩを用いた。透析には再生セルロース製透析膜（スペクトラム社製、分子量５０ｋＤａおよび９９ｋＤａのヒアルロン酸ナトリウム塩を出発原料とする時はスペクトラポア４：分画分子量１２ｋ~１４ｋＤａ、分子量１０ｋＤａのヒアルロン酸ナトリウム塩を出発原料とする時はスペクトラポア３：分画分子量３．５ｋＤａ、スペクトラポア７：分画分子量１ｋＤａもしくは２ｋＤａ）を用いた。
　〔実施例１〕コレステリル　６−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の合成およびＨＡのＴＢＡ塩の調製
　（実施例１−１）コレステリル　６−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の調製
　ＷＯ２０１４／０３８６４１記載の方法に準じてコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメート（Ｃｈｏｌ−Ｃ_６）塩酸塩を合成した。
　（実施例１−２）ＨＡのＴＢＡ塩の調製
　分子量１０ｋＤａ、５０ｋＤａおよび９９ｋＤａのヒアルロン酸ナトリウム塩（ＨＡ−Ｎａ、資生堂製もしくはコンティプロ社製）を原料として用い、ＷＯ２０１４／０３８６４１記載の方法に準じてＨＡのＴＢＡ塩を調製した。
　〔実施例２〕ＨＡ誘導体の合成
　（実施例２−１）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩および４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ）をＨＡユニットに対して以下の表１に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、Ｌ−アルギニンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率が３１％の生成物）を図１に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表１）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＡｒｇＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値を１／１したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（４．２ｐｐｍ）×１／１）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるアルギニンアミドの導入率（ＡｒｇＮＨ_２導入率）を算出した（表１）。

　（実施例２−２）エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表２に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表２に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＥＤＡの導入率が３７％の生成物）を図２に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表２）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表２）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　（実施例２−３）ジエチレントリアミン（ＤＥＴＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、ジエチレントリアミン（東京化成工業製）およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢＯＰ、和光純薬工業製）をＨＡユニットに対して以下の表３に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）またはＤ_２Ｏを用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１５％、ＤＥＴの導入率６９％の生成物）をそれぞれ図３−１、図３−２に示す。０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液でのＮＭＲスペクトルにおいて、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表３）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　Ｄ_２ＯでのＮＭＲスペクトルにおいて、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＤＥＴ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．９ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるジエチレントリアミンの導入率（ＤＥＴ導入率）を算出した（表３）。

　なお、「導入率算出できず」とは、溶媒に対する溶解性が充分でなく、ＮＭＲ分析ができなかったことを指す。
　（実施例２−４）Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）およびコレステリル６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表４に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１６％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率が３６％の生成物）を図４に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表４）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＬｙｓＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値を１／２したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（２．８ｐｐｍ）×１／２）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるリジンアミドの導入率（ＬｙｓＮＨ_２導入率）を算出した（表４）。

　（実施例２−５）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表５に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表５に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、Ｌ−アルギニンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表５に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／Ｍｅ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表５に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が３８％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率が２２％、Ｍｅの導入率が１７％の生成物）を図５に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表５）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＡｒｇＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値を１／１したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（４．２ｐｐｍ）×１／１）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるアルギニンアミドの導入率（ＡｒｇＮＨ_２導入率）を算出した（表５）。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅ由来のピーク（−ＣＨ_３、２．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるメチルアミンの導入率（Ｍｅ導入率）を算出した（表５）。

　（実施例２−６）エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表６に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表６に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表６に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ／Ｍｅ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表６に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が３３％、ＥＤＡの導入率が３０％、Ｍｅの導入率が１０％の生成物）を図６に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表６）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表６）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅ由来のピーク（−ＣＨ_３、２．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるメチルアミンの導入率（Ｍｅ導入率）を算出した（表６）。

　（実施例２−７）ジエチレントリアミン（ＤＥＴＡｍ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表７に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表７に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、ジエチレントリアミン（東京化成工業製）およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢＯＰ、和光純薬工業製）をＨＡユニットに対して以下の表７に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ／Ｍｅ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表７に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）またはＤ_２Ｏを用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＤＥＴの導入率が２９％、Ｍｅの導入率が４３％の生成物）をそれぞれ図７−１、図７−２に示す。０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液でのＮＭＲスペクトルにおいて、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表７）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　Ｄ_２ＯでのＮＭＲスペクトルにおいて、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＤＥＴ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．９ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるジエチレントリアミンの導入率（ＤＥＴ導入率）を算出した（表７）。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅ由来のピーク（−ＣＨ_３、２．８ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるメチルアミンの導入率（Ｍｅ導入率）を算出した（表７）。なおＭｅ由来のピークが含まれる２．８ｐｐｍ付近のピークには導入されたＤＥＴのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、ＤＥＴ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．９ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値を１／１したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（２．８ｐｐｍ）−積分値（２．９ｐｐｍ）×１／１）をＭｅの積分値として、導入率の計算に使用した。

　なお、「導入率算出できず」とは、溶媒に対する溶解性が充分でなく、ＮＭＲ分析ができなかったことを指す。
　（実施例２−８）Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表８に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表８に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表８に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。
　反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２／Ｍｅ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表８に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が３７％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率が２２％、Ｍｅの導入率が１１％の生成物）を図８に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表８）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＬｙｓＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値を１／２したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（２．８ｐｐｍ）×１／２）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるリジンアミドの導入率（ＬｙｓＮＨ_２導入率）を算出した（表８）。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅ由来のピーク（−ＣＨ_３、２．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるメチルアミンの導入率（Ｍｅ導入率）を算出した（表８）。

　（実施例２−９）Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２）の合成
　ＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液に対して、モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩、メチルアミン塩酸塩、Ｃｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩の順で添加し合成したこと以外は、実施例２−８と同様の方法で行い、目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２／Ｍｅ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表９に記載した。
　実施例２−８と同様にして、コレステリル基導入率、ＬｙｓＮＨ_２導入率、Ｍｅ導入率を算出した（表９）。

　（実施例２−１０）スペルミン（Ｈ−ＳＰＲ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＳＰＲ／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１０に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１０に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、スペルミン（アルドリッチ社製）およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢＯＰ、和光純薬工業製）をＨＡユニットに対して以下の表１０に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＳＰＲ／Ｍｅ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１０に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が２７％、ＳＰＲの導入率が３７％、Ｍｅの導入率が１６％の生成物）を図９に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表１０）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＳＰＲ由来のピーク（６Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＳＰＲ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．１ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値を６／２したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（２．１ｐｐｍ）×６／２）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、ＳＰＲ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．１ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＳＰＲの導入率（ＳＰＲ導入率）を算出した（表１０）。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、Ｍｅ中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、２．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるメチルアミンの導入率（Ｍｅ導入率）を算出した（表１０）。

　（実施例２−１１）３−アミノプロピルトリメチルアザニウム（ＡｍＰＴＭＡ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＰＴＭＡ／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１１に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１１に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、３−アミノプロピルトリメチルアザニウムクロライド（ＵｋｒＯｒｇＳｙｎｔｅｚ社製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１１に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＰＴＭＡ／Ｍｅ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１１に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が２９％、ＰＴＭＡの導入率が２９％、Ｍｅの導入率が３１％の生成物）を図１０に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表１１）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＰＴＭＡ由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＰＴＭＡ中のメチル由来のピーク（−Ｎ^＋−（ＣＨ _３）_３、３．１ｐｐｍ；９Ｈ）の積分値を２／９したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（３．１ｐｐｍ）×２／９）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＰＴＭＡ中のメチル由来のピーク（−Ｎ^＋−（ＣＨ _３）_３、３．１ｐｐｍ；９Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおける３−アミノプロピルトリメチルアザニウムの導入率（ＰＴＭＡ導入率）を算出した（表１１）。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅ中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、２．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるメチルアミンの導入率（Ｍｅ導入率）を算出した（表１１）。

　（実施例２−１２）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１２に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、Ｌ−アルギニンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１２に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液を透析膜に移し、ＤＭＳＯで透析した。さらに、ＷＯ２０１４／０３８６４１記載の方法に準じて調製したＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂をＨＡユニットのモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で５モル等量添加した。３０分間室温撹拌後、遠心し、上澄みを回収した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１２に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／Ｍｅ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１２に記載した。
　実施例２−５と同様にして、コレステリル基導入率、ＡｒｇＮＨ_２導入率、Ｍｅ導入率を算出した（表１２）。

　コレステリル６−アミノヘキシルカーバメート、Ｌ−アルギニンアミド、メチルアミンの順で添加してもＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／Ｍｅが合成できることが明らかとなった。
　（実施例２−１３）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２／Ｍｅ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１３に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩（東京化成工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１３に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液を透析膜に移し、ＤＭＳＯで透析した。さらに、ＷＯ２０１４／０３８６４１記載の方法に準じて調製したＴＢＡ塩化したカチオン交換樹脂をＨＡユニットのモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で５モル等量添加した。３０分間室温撹拌後、遠心し、上澄みを回収した。次に、Ｌ−アルギニンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表１３に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／Ｍｅ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１３に記載した。
　実施例２−５と同様にして、コレステリル基導入率、ＡｒｇＮＨ_２導入率、Ｍｅ導入率を算出した（表１３）。

　（実施例２−１４）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）、プロパノールアミン（ＰｒＯＨＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２／ＰｒＯＨ）の合成
　メチルアミン塩酸塩の代わりにプロパノールアミン塩酸塩を用いたこと以外は、実施例２−１３と同様の方法で行い、目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／ＰｒＯＨ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１４に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が３１％、ＰｒＯＨの導入率が１９％の生成物（中間体）と１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が３１％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率が１１％、ＰｒＯＨの導入率が１９％の生成物）をそれぞれ図１１−１と図１１−２に示す。図１１−２において、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表１４）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＡｒｇＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値を１／１したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（４．２ｐｐｍ）×１／１）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるアルギニンアミドの導入率（ＡｒｇＮＨ_２導入率）を算出した（表１４）。

　図１１−１において、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＰｒＯＨ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２、１．６ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるプロパノールアミンの導入率（ＰｒＯＨ導入率）を算出した（表１４）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　（実施例２−１５）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２を実施例２−１と同様の方法で合成した（表１５）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１５に記載した。

　（実施例２−１６）エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡを実施例２−２と同様の方法で合成した（表１６）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１６に記載した。

　（実施例２−１７）ジエチレントリアミン（ＤＥＴＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴを実施例２−３と同様の方法で合成した（表１７）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１７に記載した。

　なお、「導入率算出できず」とは、溶媒に対する溶解性が充分でなく、ＮＭＲ分析ができなかったことを指す。
　（実施例２−１８）Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２を実施例２−４と同様の方法で合成した（表１８）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１８に記載した。

　（実施例２−１９）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２／Ｍｅ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／Ｍｅを実施例２−５と同様の方法で合成した（表１９）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表１９に記載した。

　（実施例２−２０）エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ／Ｍｅ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ／Ｍｅを実施例２−６と同様の方法で合成した（表２０）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２０に記載した。

　（実施例２−２１）ジエチレントリアミン（ＤＥＴＡｍ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ／Ｍｅ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＴ／Ｍｅを実施例２−７と同様の方法で合成した（表２１）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２１に記載した。

　（実施例２−２２）Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２／Ｍｅ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２／Ｍｅを実施例２−８と同様の方法で合成した（表２２）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２２に記載した。

　（実施例２−２３）スペルミン（Ｈ−ＳＰＲ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＳＰＲ／Ｍｅ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＳＰＲ／Ｍｅを実施例２−１０と同様の方法で合成した（表２３）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２３に記載した。

　（実施例２−２４）３−アミノプロピルトリメチルアザニウム（ＡｍＰＴＭＡ）、メチルアミン（ＭｅＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＰＴＭＡ／Ｍｅ）の合成
　Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ、Ｉｎ　ｖｉｖｏ試験用のＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＰＴＭＡ／Ｍｅを実施例２−１１と同様の方法で合成した（表２４）。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２４に記載した。

　（実施例２−２５）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）、エタノールアミン（ＥｔＯＨＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２／ＥｔＯＨ）の合成
　メチルアミン塩酸塩の代わりにエタノールアミン塩酸塩を用いたこと以外は、実施例２−５と同様の方法で行い、目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／ＥｔＯＨ）を白色固体として得た。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２５に記載した。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１６％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率が１６％、ＥｔＯＨ基の導入率が６９％の生成物）を図１２に示す。図１２において、Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表２５）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＡｒｇＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値を１／１したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（４．２ｐｐｍ）×１／１）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるアルギニンアミドの導入率（ＡｒｇＮＨ_２導入率）を算出した（表２５）。

　図１２において、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアミド由来のピーク（−ＮＨＣＯＣＨ_３、７．４ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値と、導入されたＥｔＯＨ中のアミド由来のピーク（−ＣＯＮＨＣＨ_２−、７．９ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエタノールアミンの導入率（ＥｔＯＨ導入率）を算出した（表２５）。

　（実施例２−２６）Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）、エタノールアミン（ＥｔＯＨＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾した蛍光標識ＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２／ＥｔＯＨ／ＦＬ）の合成
　Ｃｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩を加える前に、５−アミノメチルフルオレセイン（ＦＬ、インビトロジェン社製）塩酸塩とＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニット１００に対してそれぞれ２、４モル等量加え、室温で２時間撹拌したこと以外は、実施例２−２５と同様の方法で行い、目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２／ＥｔＯＨ／ＦＬ）を黄色固体として得、導入率を算出した（表２６）。得られた黄色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２６に記載した。

　沈殿が確認されなかったサンプルは水溶性であり、薬物と水中で混合することにより複合化することが簡便にでき、有用である。なお、沈殿が確認されたサンプルについても、ＤＭＳＯなどの有機溶媒に溶解し、その後、薬物と複合体を形成させ、水溶液に置換した組成物、もしくは投与可能なその他の溶媒で置換した組成物において粘膜透過性等の機能を有する可能性がある。
　〔実施例４〕ＨＡ誘導体の合成２
　（実施例４−１−１）２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（ＥＤＯＢＥＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＯＢＥＡ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表２７に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）およびＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表２７に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）およびＰｙＢＯＰを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてＨＡ−Ｃｈｏｌを得た。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＯＢＥＡ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表２７に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２７に記載した。
　以下、溶液状態の観察において、フィルターを通過した試料は水溶性であり、薬物と水中で混合することにより複合化することが簡便にでき、有用である。また、超音波処理を実施し、沈殿が確認されなかったサンプルは水溶性であり、薬物と水中で混合することにより複合化することが簡便にでき、有用である。なお、超音波処理を実施してもなお沈殿が確認されたサンプルについても、ＤＭＳＯなどの有機溶媒に溶解し、その後、薬物と複合体を形成させ、水溶液に置換した組成物、もしくは投与可能なその他の溶媒で置換した組成物において粘膜透過性等の機能を有する可能性がある。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＥＤＯＢＥＡの導入率が５２％の生成物）を図１３−１に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表２７）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＯＢＥＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ _２−、２．９~３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおける２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）の導入率（ＥＤＯＢＥＡ導入率）を算出した（表２７）。なお、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）中のメチレン由来のピークにはＨＡ由来のピークが重なっているため、比較対象として得たＨＡ−Ｃｈｏｌにおける２．９~３．０ｐｐｍの積分値を除した値をＥＤＯＢＥＡの積分値として導入率の計算に使用した。

　（実施例４−１−２）２，２’−オキシビス（エチルアミン）（ＯＢＥＡ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＧ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表２８に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、２，２’−オキシビス（エチルアミン）（東京化成工業製）およびＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表２８に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、２，２’−オキシビス（エチルアミン）およびＰｙＢＯＰを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてＨＡ−Ｃｈｏｌを得た。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＥＧ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表２８に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２８に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＤＥＧの導入率が５１％の生成物）を図１３−２に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表２８）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入された２，２’−オキシビス（エチルアミン）中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ _２−、２．９~３．１ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおける２，２’−オキシビス（エチルアミン）の導入率（ＤＥＧ導入率）を算出した（表２８）。なお、ＤＥＧ中のメチレン由来のピークにはＨＡ由来のピークが重なっているため、比較対象として得たＨＡ−Ｃｈｏｌにおける２．９~３．１ｐｐｍの積分値を除した値をＤＥＧの積分値として導入率の計算に使用した。

　（実施例４−１−３）アグマチン（Ｈ−ＡＧＭＴ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡＧＭＴ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表２９に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、アグマチン二塩酸塩（Ａｒｋ　ｐｈａｒｍ製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表２９に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、アグマチン二塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてＨＡ−Ｃｈｏｌを得た。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡＧＭＴ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表２９に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表２９に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＡＧＭＴの導入率６８％の生成物）を図１３−３に示す。０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液でのＮＭＲスペクトルにおいて、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表２９）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＡＧＭＴ中のエチレン由来のピーク（−ＣＨ _２−ＣＨ _２−、１．５~１．６ｐｐｍ；４Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるアグマチンの導入率（ＡＧＭＴ導入率）を算出した（表２９）。なお、ＡＧＭＴ中のエチレン由来のピークにはＣｈｏｌ由来のピークが重なっているため、比較対象として得たＨＡ−Ｃｈｏｌにおける１．５~１．６ｐｐｍの積分値を除した値をＡＧＭＴの積分値として導入率の計算に使用した。

　（実施例４−１−４）ヒスタミン（ＨＩＳ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＩＭＤ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３０に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、ヒスタミン（ナカライテスク製）およびＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表３０に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＩＭＤ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表３０に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３０に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１６％、ＩＭＤの導入率が３６７％の生成物）を図１３−４に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表３０）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＩＭＤ中のメチン由来のピーク（−ＣＨ＝、８．９~９．０ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるヒスタミンの導入率（ＩＭＤ導入率）を算出した（表３０）。

　（実施例４−１−５）ビス（３−アミノプロピル）アミン（ＢＡＰＡ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＰＴ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３１に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次にビス（３−アミノプロピル）アミン（和光純薬工業製）およびＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表３１に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＰＴ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表３１に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３１に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１５％、ＤＰＴの導入率が６０％の生成物）を図１３−５に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表３１）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＤＰＴ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ _２−、２．０~２．１ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるビス（３−アミノプロピル）アミンの導入率（ＤＰＴ導入率）を算出した（表３１）。

　（実施例４−１−６）トリス（２−アミノエチル）アミン（ＴＡＥＡ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＢＡＥＡ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３２に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、トリス（２−アミノエチル）アミン（和光純薬工業製）およびＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表３２に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＢＡＥＡ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表３２に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３２に記載した。フィルターを通過せず、超音波処理を実施していない試料は（×）と表３２に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＢＡＥＡの導入率が６３％の生成物）を図１３−６に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表３２）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＢＡＥＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．７ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるトリス（２−アミノエチル）アミンの導入率（ＢＡＥＡ導入率）を算出した（表３２）。

　（実施例４−１−７）Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（ＤＭＥＤＡ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＭＡ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３３に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次にＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（和光純薬工業製）およびＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表３３に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＤＭＡ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表３３に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３３に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１７％、ＤＭＡの導入率が７６％の生成物）を図１３−７に示す。０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液でのＮＭＲスペクトルにおいて、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表３３）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＤＭＡ中のメチル由来のピーク（ＣＨ_３−、２．８ｐｐｍ；６Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＮ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンの導入率（ＤＭＡ導入率）を算出した（表３３）。

　（実施例４−１−８）２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エタンアミン（ＭＰＥＡ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＭＰＤ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３４に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エタンアミン（Ａｒｋ　Ｐｈａｒｍ製）およびＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表３４に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＭＰＤ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表３４に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３４に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１２％、ＭＰＤの導入率が５１％の生成物）を図１３−８に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表３４）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭＰＤのメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、２．７０~２．７５ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおける２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エタンアミンの導入率（ＭＰＤ導入率）を算出した（表３４）。

　（実施例４−２）Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）および５β−コラン酸により修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−ＬｙｓＮＨ _２／ＣＡ）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３５に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的中間体（ＨＡ−ＬｙｓＮＨ_２）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ６を用いて^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを測定し、ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）あるいはメチレンおよびメチン由来のピーク（−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ−、１．２~１．７ｐｐｍ；５Ｈ）の積分値より、ＨＡユニットにおけるリジンアミドの導入率（ＬｙｓＮＨ_２導入率）を算出した（表３５）。

　ＨＡ−ＬｙｓＮＨ_２の無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。５β−コラン酸およびＤＭＴ−ＭＭあるいはＰｙＢＯＰをＨＡユニットに対して以下の表３６に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−ＬｙｓＮＨ_２／ＣＡ）を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径０．４５μｍあるいは５μｍのフィルターに通し、通過した試料は○と表３６に記載した。フィルター透過性を確認していない試料は−と表３６に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、ＬｙｓＮＨ_２の導入率が９１％、ＣＡの導入率が２３％の生成物）を図１３−９に示す。ＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値と、導入されたＣＡ中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するＣＡの導入率を算出した（表３６）。

　〔実施例５〕ＨＡ誘導体の合成３
　（実施例５−１）Ｉ−Ｃ _３Ｈ _６ −ＯＣＯＯ−Ｃｈｏｌ：１０，１３−ジメチル−１７−（６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル　（３−ヨードプロピル）カーボネートの合成

　８，１０，１３−トリメチル−１７−（６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル　カルボノクロリデート（１００ｍｇ，０．２２３ｍｍｏｌ），３−ヨード−１−プロパノール（０．１７３ｍＬ，１．７８１ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．０２２ｍＬ，０．２６７ｍｍｏｌ）をトルエン（１ｍＬ）に溶解させて、室温で２４時間撹拌した。反応溶液をＰｒｅ−ＴＬＣ（１ｍｍシリカゲルプレート，展開溶媒：ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）にて精製して、１０，１３−ジメチル−１７−（６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル　（３−ヨードプロピル）カーボネート（１２８ｍｇ，収率９９％）を白色固体として得た。ＥＳＩ（ポジティブモード）ｍ／ｚ　６２１．２７７５［Ｍ＋Ｎａ］^＋。
　（実施例５−２）ＨＡ−Ｃ _３Ｈ _６ −ＯＣＯＯ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２の合成
実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３７に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌し、ＤＭＳＯに対して透析した。実施例５−１で調製したＩ−Ｃ_３Ｈ_６−ＯＣＯＯ−ＣｈｏｌをＨＡユニットに対して以下の表３７に示す比率で各溶液に添加し、室温で１時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃ_３Ｈ_６−ＯＣＯＯ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３７に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が２０％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率が２９％の生成物）を図１４−１に示す。実施例２−８と同様にして、コレステリル基導入率、リジンアミド導入率を算出した（表３７）。

　（実施例５−３）Ｉ−ＣＨ _２ −ＣＯＯ−Ｃｈｏｌ：１０，１３−ジメチル−１７−（６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル　２−ヨードアセテートの合成

　Ｉ−ＣＨ_２−ＣＯＯ−Ｃｈｏｌ：１０，１３−ジメチル−１７−（６−メチルヘプタン−２−イル）−２，３，４，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル　２−ヨードアセテートは、既存の合成法（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７（２０），８４２１~８４４４）にて調製した。
　（実施例５−４）ＨＡ−ＣＨ _２ −ＣＯＯ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表３８示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌し、ＤＭＳＯに対して透析した。実施例５−３で調製したＩ−ＣＨ_２−ＣＯＯ−ＣｈｏｌをＨＡユニットに対して以下の表３８に示す比率で各溶液に添加し、室温で１時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−ＣＨ_２−ＣＯＯ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２）を淡黄色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３８に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１３％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率が７０％の生成物）を図１４−２に示す。実施例２−８と同様にして、コレステリル基導入率、リジンアミド導入率を算出した（表３８）。

　〔実施例１１〕ＨＡ誘導体の合成４
　（実施例１１−１）Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）およびオクタデシルアミンにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＡ−Ｃ _１８／ＬｙｓＮＨ _２）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。オクタデシルアミン（ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１７ＮＨ_２、シグマアルドリッチ製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４４に示す比率で各溶液に添加し、室温で３０分間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４４に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＡ−Ｃ_１８／ＬｙｓＮＨ_２）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。得られた白色個体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表３９に記載した。
　測定溶媒として０．０２Ｎ　ＤＣｌ　ＤＭＳＯ−ｄ_６／Ｄ_２Ｏ混液（２Ｎ　ＤＣｌ　Ｄ_２Ｏ：ＤＭＳＯ−ｄ_６＝１：９９）を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルよりオクタデシル導入率およびＬｙｓＮＨ_２導入率を算出した。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~１．９ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたオクタデシル中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．８ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するオクタデシル導入率を算出した（表３９）。
　なお、Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~１．９ｐｐｍ付近のピークには導入されたＬｙｓＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~１．９ｐｐｍ付近のピークの積分値からＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値を１／２したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~１．９ｐｐｍ）−積分値（２．８ｐｐｍ）×１／２）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~１．９ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるリジンアミドの導入率（ＬｙｓＮＨ_２導入率）を算出した（表３９）。

　〔実施例１２〕ＨＡ誘導体の合成５
　（実施例１２−１）ＨＯＰＥＧＮＨ _２、Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２）（並列型）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩および４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ）をＨＡユニットに対して以下の表４０に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、Ｌ−アルギニンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４０に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯで透析後、表４０に示したＨＯＰＥＧＮＨ基を導入するために、ＨＯＰＥＧアミン（分子量５０００Ｄａまたは５４７５Ｄａ）；Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１００８）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４０に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２）を白色固体として得た。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が４２％、ＡｒｇＮＨ_２の導入率が１６％、５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ基の導入率が０．３９％の生成物）を図１５−１に示す。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表４０）。Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＡｒｇＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値を１／１したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（４．２ｐｐｍ）×１／１）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＡｒｇＮＨ_２中のメチン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯＮＨ_２）ＣＨ_２−、４．２ｐｐｍ；１Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるアルギニンアミドの導入率（ＡｒｇＮＨ_２導入率）を算出した（表４０）。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＨＯＰＥＧＮＨ中のエチレン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＨＯＰＥＧアミンの導入率（ＨＯＰＥＧＮＨ導入率）を算出した（表４０）。
　分子量５０００ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１１２をｎｚとした。　分子量５４７５ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１２３をｎｚとした。
　分子量２０００ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝４４をｎｚとした。

　ただし、表４０中、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｏｌ−２２％／ＡｒｇＮＨ_２−２１％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１１％（５４７５Ｄａ）および９９ｋ　ＨＡ−Ｃｏｌ−２３％／ＡｒｇＮＨ_２−２７％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１１％（５４７５Ｄａ）は、以下の実施例１２−１ａに示した別法にて合成した。
　（実施例１２−１ａ）ＨＯＰＥＧＮＨ _２、Ｌ−アルギニンアミド（Ｈ−ＡｒｇＮＨ _２）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ _２）（並列型）の合成（別法）
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩および４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ）をＨＡユニットに対して表４０に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、表４０に示したＨＯＰＥＧＮＨ基を導入するために、ＨＯＰＥＧアミン（分子量５４７５Ｄａ）；Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１００８）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して表４０に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯで透析後、表４０に示したＬ−アルギニンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して表４０に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＡｒｇＮＨ_２）を白色固体として得た。
　なお、表４０に挙げた目的物（略称）のほか、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、および
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＡｒｇＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％
を調製することもできる。
　（実施例１２−２）各種ＰＥＧＮＨ _２、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（各種ＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（並列型）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４１に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４１に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。次に、表４１に示した各種ＰＥＧＮＨ基を導入するために、ＨＯＰＥＧアミン（分子量１００００Ｄａ）（Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１００６）、ＨＯＰＥＧアミン（分子量５０００Ｄａ）（Ａｌｄｒｉｃｈ製、カタログＮｏ．：６７２１３０）、ＭｅＯＰＥＧアミン（分子量５０００Ｄａ）（Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１１５４）、ＭｅＯＰＥＧアミン（分子量２０００Ｄａ）（Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１１５２）、ＭｅＯＰＥＧアミン（分子量１０００Ｄａ）（Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１６７０）、ＨＯＰＥＧアミン（分子量２０００Ｄａ）（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍ製、カタログＮｏ．：ＢＰ２３６４２）またはＨＯＰＥＧアミン（分子量１０００Ｄａ）（Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ３７４０）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４１に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して各種目的物（ＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　測定溶媒として　ＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が４０％、ＥＤＡの導入率が２３％、５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ基の導入率が５％の生成物、および１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が２６％、ＥＤＡの導入率が９％、１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ基の導入率が４％の生成物）を、図１５−２および図１５−３にそれぞれ示す。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４１）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおける各種ＰＥＧアミンの導入率（各種ＰＥＧＮＨ導入率）を算出した（表４１）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入された各種ＰＥＧＮＨ中のエチレン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおける各種ＰＥＧＮＨ導入率を算出した（表４１）。
　分子量５０００ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１１２をｎｚとした。
　分子量２０００ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝４４をｎｚとした。
　分子量１０００ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝２１をｎｚとした。
　分子量５０００ＤａのＭｅＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１１２をｎｚとした。
　分子量２０００ＤａのＭｅＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝４４をｎｚとした。
　分子量１０００ＤａのＭｅＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝２１をｎｚとした。
　分子量９５１５ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝２１５をｎｚとした。
　分子量５５１６ＤａのＭｅＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１２４をｎｚとした。
　分子量１０７４ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝２３をｎｚとした。
　分子量５４７５ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１２３をｎｚとした。

　なお、表４１に挙げた目的物（略称）のほか、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、および
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％
を調製することもできる。
　（実施例１２−３）ＨＯＰＥＧＮＨ _２、Ｌ−リジンアミド（Ｈ−ＬｙｓＮＨ _２）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ _２）（並列型）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４２に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃ−Ｌ−リジンアミド塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４２に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。一部の調製例においては、ここで、ＤＭＳＯ透析を行った。次に、表４２に示したＨＯＰＥＧＮＨ基を導入するために、ＨＯＰＥＧアミン（５０００Ｄａまたは５４７５Ｄａ；Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１００８）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４２に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＬｙｓＮＨ_２）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が４２％、ＬｙｓＮＨ_２の導入率が１９％、５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ基の導入率が６％の生成物）を図１５−４に示す。Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した（表４２）。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）と導入されたＬｙｓＮＨ_２由来のピーク（１Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものとＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値を１／２したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３−積分値（２．８ｐｐｍ）×１／２）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＬｙｓＮＨ_２中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、２．８ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるリジンアミドの導入率（ＬｙｓＮＨ_２導入率）を算出した（表４２）。

　下に示す式からＨＡユニットにおけるＨＯＰＥＧアミンの導入率（ＨＯＰＥＧＮＨ導入率）を算出した（表４２）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＨＯＰＥＧＮＨ中のエチレン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＨＯＰＥＧＮＨ導入率を算出した（表４２）。
　分子量５０００ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１１２をｎｚとした。
　分子量５４７５ＤａのＨＯＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＨ_２ＮＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）およびＨＯ（分子量１７）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１２３をｎｚとした。

　なお、上記「一部の調製例」とは、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−２０％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−８％（５４７５Ｄａ）、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−２０％／ＬｙｓＮＨ_２−７２％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−７％（５４７５Ｄａ）、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−３７％／ＬｙｓＮＨ_２−２２％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−７％（５４７５Ｄａ）および、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−３７％／ＬｙｓＮＨ_２−５２％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−３％（５４７５Ｄａ）の調製を指す。
　なお、表４２に挙げた目的物（略称）のほか、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−３０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％、および
　９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＬｙｓＮＨ_２−５０％／２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨ−１０％
を調製することもできる。
　（実施例１２−４）ＭｅＯＰＥＧＳＨ、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＭｅＯＰＥＧＳ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（並列型）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４３に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４３に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。一部の調製例においては、ここで、ＤＭＳＯ透析を行った。次に、表４３に示したＭｅＯＰＥＧＳ基を導入するために、ＭｅＯＰＥＧチオール（２０００Ｄａ；Ａｌｄｒｉｃｈ製、カタログＮｏ．：７２９１４０）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４３に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＭｅＯＰＥＧＳ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が４６％、ＥＤＡの導入率が１６％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ基の導入率が０．０３％の生成物）を図１５−５に示す。Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４３）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧチオールの導入率（ＭｅＯＰＥＧＳ導入率）を算出した（表４３）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅＯＰＥＧＳ基中のエチレン由来のピーク（−Ｓ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧＳＨ導入率を算出した（表４３）。
　分子量２０００ＤａのＭｅＯＰＥＧＳＨを用いた場合、分子量からＨＳＣＨ_２ＣＨ_２（分子量６１）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝４３をｎｚとした。

　なお、上記「一部の調製例」とは、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１７％／ＥＤＡ−１３％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−０．２％、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−２０％／ＥＤＡ−２７％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−０．３％、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−３２％／ＥＤＡ−１５％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−０．２％、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−３７％／ＥＤＡ−３１％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−０．１％、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−３７％／ＥＤＡ−３１％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−０．１％、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１６％／ＥＤＡ−３５％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−２％、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１７％／ＥＤＡ−２４％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−２％、９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４１％／ＥＤＡ−２７％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−３％および９９ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４３％／ＥＤＡ−４３％／６ｋ　ＭｅＯＰＥＧＳ−３％の調製を指す。
　（実施例１２−５）ＭｅＯＰＥＧＯＨ、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＭｅＯＰＥＧＯ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（並列型）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ、９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４４に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４４に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯで透析後、表４４に示したＭｅＯＰＥＧＯ基を導入するために、ＭｅＯＰＥＧアルコール（１８２３Ｄａ；Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．１０３４）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４４に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＭｅＯＰＥＧＯ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（１０ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が２０％、ＥＤＡの導入率が２８％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＯ基の導入率が０．２％の生成物）を図１５−６に示す。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４４）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧアルコールの導入率（ＭｅＯＰＥＧＯ導入率）を算出した（表４４）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅＯＰＥＧＯ基中のエチレン由来のピーク（−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧＯ導入率を算出した（表４４）。
　分子量１８２３ＤａのＭｅＯＰＥＧＯＨを用いた場合、分子量からＨＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４５）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝４０をｎｚとした。
　分子量５５６７ＤａのＭｅＯＰＥＧＯＨを用いた場合、分子量からＨＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４５）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１２５をｎｚとした。

　（実施例１２−６）ＭｅＯＰＥＧＯＨ、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＭｅＯＰＥＧＯ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（並列型）の合成（その２；試薬変更）
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４５に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４５に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯで透析後、表４５に示したＭｅＯＰＥＧＯ基を導入するために、ＭｅＯＰＥＧＢｒ（２０００Ｄａ；Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１１３２）をＨＡユニットに対して以下の表４５に示す比率で加え、室温で７日間撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＭｅＯＰＥＧＯ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１６％、ＥＤＡの導入率が４１％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＯ基の導入率が１％の生成物）を図１５−７に示す。なおＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４５）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧアルコールの導入率（ＭｅＯＰＥＧＯ導入率）を算出した（表４５）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅＯＰＥＧＯ基中のエチレン由来のピーク（−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧＯ導入率を算出した（表４５）。
　分子量２０００ＤａのＭｅＯＰＥＧＢｒを用いた場合、分子量からＢｒＣＨ_２ＣＨ_２（分子量１０８）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝４２をｎｚとした。

　（実施例１２−７）ＨＯＰＥＧＮＨ _２、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）、エタノールアミン（ＥｔＯＨＡｍ）およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ／ＥｔＯＨ）（並列型）の合成
　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭを１００ＨＡユニットに対して、それぞれ４８，９６の比率で添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭを１００ＨＡユニットに対して、それぞれ２０，４０の比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。次に、ＨＯＰＥＧＮＨ基を導入するためのＨＯＰＥＧアミン（Ｉｒｉｓ製、分子量５ｋＤａ）およびＤＭＴ−ＭＭを１００ＨＡユニットに対して、それぞれ１０、５０の比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。さらに、エタノールアミン塩酸塩（シグマアルドリッチ製）およびＤＭＴ−ＭＭを１００ＨＡユニットに対して３００、３００の比率で添加し、室温で２時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．１５Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＨＯＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ／ＥｔＯＨ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　（実施例１２−８）２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ _２、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）、およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（並列型）の合成

　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４６に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、モノＦｍｏｃエチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４６に示す比率で加え、室温で２時間以上撹拌した。次に、反応溶液はＤＭＳＯで透析して、表４６に示した２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ_２基を導入するために、２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ_２（２００００Ｄａ；日油製、カタログＮｏ．：ＳｕｎｂｒｉｇｈｔＧＬ２−２００ＰＡ）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４６に示す比率で加え、室温で１０日間撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。なお、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液における透析により、Ｆｍｏｃ体の脱保護がなされた。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が４１％、ＥＤＡの導入率が２８％、２０ｋ　２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ基の導入率が３％の生成物）を図１５−８に示す。Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４６）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおける２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ基の導入率（２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ導入率）を算出した（表４６）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入された２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ基中のｎｘ＋ｎｙ個のエチレン由来のピーク、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおける２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ導入率を算出した（表４６）。
　分子量２００００Ｄａの２−ＢｒａｎｃｈＰＥＧＮＨ_２を用いた場合、分子量からＣＨ_２ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ（分子量７３）およびＭｅＯ（分子量３１×２）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝４５１をｎｘとｎｙの和とした。

　（実施例１２−９）ＭｅＯＰＥＧＣＯ _２Ｈ、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）、およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＭｅＯＰＥＧＣＯＮＨＣＨ _２ＣＨ _２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（直列型）の合成

　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４７に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、エチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４７に示す比率で各溶液に添加し、室温で一晩撹拌した。次に、反応溶液をＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯの順で透析し、ＭｅＯＰＥＧＣＯ２Ｈ（１０００Ｄａ；Ａｐｏｌｌｏ製、ＢＩＰＧ１９０１）をＨＡユニットに対して以下の表４７に示す比率で加え、室温で１１日間撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＭｅＯＰＥＧＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が２５％、ＥＤＡの導入率が６％、１ｋ　ＭｅＯＰＥＧＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基の導入率が０．１％の生成物）を図１５−９に示す。
　Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４７）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧＣＯの導入率（ＭｅＯＰＥＧＣＯ導入率）を算出した（表４６）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅＯＰＥＧＣＯ基中のエチレン由来のピーク（−ＣＯ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧＮＨ導入率を算出した（表４７）。
　分子量１０００ＤａのＭｅＯＰＥＧＣＯ_２Ｈを用いた場合、分子量からＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ（分子量７３）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝２０をｎｚとした。

　（実施例１２−１０）Ｌｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＳ、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）、およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（Ｌｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ _２ＣＨ _２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（直列型）の合成

　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４８に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、エチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭを１００ＨＡユニットに対して、１００、２００の比率で加え、室温で一晩撹拌した。次に、反応溶液をＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯの順で透析し、Ｌｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＳ（４００００Ｄａ；日油製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＳｕｎｂｒｉｇｈｔＬＹ−４００ＮＳ）をＨＡユニットに対して以下の表４８に示す比率で加え、室温で１１日間撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（Ｌｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が３７％、ＥＤＡの導入率が４０％、２０ｋ　Ｌｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基の導入率が４％の生成物）を図１５−１０に示す。
　Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４８）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおけるＬｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨの導入率（Ｌｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ導入率）を算出した（表４８）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＬｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基中のエチレン由来のピーク（−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＬｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ導入率を算出した（表４８）。
　分子量４００００ＤａのＬｙｓ−ｌｉｎｋｅｒＰＥＧＮＨＳを用いた場合、分子量から、以下の部分構造式Ｓ−１（分子量２９７）およびＭｅＯ（分子量３１×２）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝９０１をｎｘとｎｙの和とした。

　（参考例１２−１１）ＭｅＯＰＥＧＮＨＳ、エチレンジアミン（ＥＤＡｍ）、およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したＨＡ誘導体（ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ _２ＣＨ _２ＣＯＮＨＣＨ _２ＣＨ _２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）（直列型）の合成

　実施例１−２で合成した、ＨＡ−Ｎａ（９９ｋＤａ）を出発原料とするＨＡ−ＴＢＡの無水ＤＭＳＯ溶液を調製した。実施例１−１で調製したＣｈｏｌ−Ｃ_６塩酸塩およびＤＭＴ−ＭＭをＨＡユニットに対して以下の表４９に示す比率で各溶液に添加し、室温で２時間以上撹拌した。次に、エチレンジアミン塩酸塩（渡辺化学工業製）およびＤＭＴ−ＭＭを１００ＨＡユニットに対して、１００、２００の比率で加え、室温で一晩撹拌した。次に、反応溶液をＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯの順で透析し、ＭｅＯＰＥＧＮＨＳ（１９３１Ｄａ；Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ　１１６３）をＨＡユニットに対して以下の表４９に示す比率で加え、室温で１７時間以上撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、０．３Ｍ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−ＨＡ−Ｃｈｏｌ／ＥＤＡ）を白色固体として得た。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（９９ｋＤａのＨＡを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が１３％、ＥＤＡの導入率が４２％、２ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基の導入率が９％の生成物）を図１５−１１に示す。
　Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル基由来のピーク（５Ｈ）が重なっているため、１．７~２．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を５／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（１．７~２．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×５／３）をＨＡ由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。

　ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＥＤＡ中のメチレン由来のピーク（−ＣＨ_２−、３．０ｐｐｍ；２Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるエチレンジアミンの導入率（ＥＤＡ導入率）を算出した（表４９）。なおＥＤＡ中のメチレン由来のピークが含まれる３．０ｐｐｍ付近のピークにはコレステリル　６−アミノヘキシルのメチレン由来のピーク（２Ｈ）が重なっているため、３．０ｐｐｍ付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク（−ＣＨ_３、０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値を２／３したものを差し引いて算出した値（即ち、積分値（３．０ｐｐｍ）−積分値（０．７ｐｐｍ）×２／３）をＥＤＡ中のメチレンの積分値として、導入率の計算に使用した。

　下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２の導入率（ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ導入率）を算出した（表４９）。ＨＡにおけるＮ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク（−ＣＯＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ基中のエチレン由来のピーク（−ＮＨ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２−）_ｎｚ−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚＨ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおけるＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ導入率を算出した（表４９）。
　分子量１９３１ＤａのＭｅＯＰＥＧＮＨＳを用いた場合、分子量からＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ−ＯＳＵ（分子量２４１）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝３８をｎｚとした。

　なお、Ｘ^３が以下の式で表されるＨＡ誘導体も、本参考例と同様の方法で調製することができる。

　（比較例１２−１２）ＭｅＯＰＥＧＮＨＳ、およびコレステリル　６−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したキトサン（ＣＳ）誘導体（ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ _２ＣＨ _２ＣＯ−ＣＳ−Ｃｈｏｌ）の合成
　本願ＨＡ誘導体との対比目的にて、ＰＥＧ及びコレスレロールで修飾されたキトサンを合成した。キトサンは単糖構造内にアミノ基を有した塩基性の高分子であり、それをＰＥＧ及びコレスレロールで修飾した誘導体は、ＰＥＧ化カチオン性ＨＡ誘導体と比較するためのコンポーネントを含んでいる。また、ヒアルロン酸は、Ｎ−アセチルグルコサミンとグルクロン酸の２成分を構成分子としている。ＰＥＧ及びコレスレロールで修飾するために利用される官能基はグルクロン酸中のカルボキシであり、構成分子の半分を占めるＮ−アセチルグルコサミンは修飾に関与していない。それに対して、対応するキトサンは、グルコサンミンの１成分であり、その全てのアミノが修飾するための官能基として利用され得る。したがって、１０ＤａのＨＡに対応する物として５ｋＤａのキトサンを選択した。
　コレステリル基の導入率は、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ．１１４９−１１５８．Ｖｏｌ．３２，ｎｏ．６（２００３）を引用して計算した。
　試薬として、５ｋＤａキトサン（ＷＡＫＯ、０３６−２０３０２、ｌｏｔ．：ＡＬＫ２７８２）、ＭｅＯＰＥＧＮＨＳ（Ｉｒｉｓ製、Ａｒｔ−Ｎｏ．：ＰＥＧ１１６５　０００５、５０５６Ｄａ）、コレステリルヘミスクシネート（Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ　ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃ６５１２）を使用した。これら以外はＨＡ誘導体：１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１７％／ＥＤＡ−３４％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−２％、１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−１８％／ＥＤＡ−６１％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−１０％、１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−２０％／Ｌｙｓ−５４％／５ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−４％の合成で使用した試薬と同様の物を使用した。
　キトサン（５ｋＤａ）を５０ｍＭ　ＨＣｌ水溶液に溶かし、コレステリルヘミスクシネートのＤＭＦ溶液およびＤＭＴ−ＭＭのＤＭＦ−Ｈ_２Ｏ（９／１）溶液を１００ＣＳユニットに対して、それぞれ３０、３０の比率で添加し、室温で６日間撹拌した。反応溶液は、ＤＭＦ、５０ｍＭ　ＮａＮＯ_３／ＤＭＦ、純水、３００ｍＭ　ＮａＣｌ水溶液、超純水，３００ｍＭ　ＮａＣｌ水溶液の順で透析し、得られた透析液にｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ＴｓＯＨ　Ｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）を１当量加えて、室温で一晩撹拌した。反応溶液は、超純水で透析後、凍結乾燥して中間体（ＣＳ−Ｃｈｏｌ）を白色固体として得た。得られた固体を無水ＤＭＳＯ溶液に調製した。ＭｅＯＰＥＧＮＨＳ（５０５６Ｄａ）を以下の表５０に示す比率で各溶液に添加し、室温で５日間撹拌した。反応溶液は、ＤＭＳＯ、０．３Ｍ　酢酸アンモニア／ＤＭＳＯ溶液、ＤＭＳＯ、純水、３００ｍＭ　ＮａＣｌ水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物（ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ−ＣＳ−Ｃｈｏｌ）を白色固体として得た。
　測定溶媒としてＤＭＳＯ−ｄ_６を用いた^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルの代表例（５ｋＤａのＣＳを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が２７％、５ｋ　ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ基の導入率が３％の生成物）を図１５−１２に示す。
　使用した原料由来のＮ−アセチルグルコサミンの比率は、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　３２（２００３）１１４９−１１５８に記載の方法に従い、１８％と算出した。
　ＣＳ−Ｃｈｏｌのコレステリル基の導入率は、Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル基由来のピーク（ＣＨ_３、１．７~２．０ｐｐｍ；３Ｈ）（（１．７~２．０ｐｐｍのピークの積分値−（コレステロールのピーク０．６~０．７ｐｐｍのピークの積分値）×５／３））とコレステリル基中の１８位のメチル由来の（ＣＨ_３、０．６~０．７ｐｐｍ；３Ｈ）のピークの積分値から算出（コレステリル基中のメチルの積分値／Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク積分値×０．１８×１００）した（２７％）。
　ＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ−ＣＳ−ＣｈｏｌにおけるＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ基の導入率は、コレステリル基の導入率を元にＣＳにおけるコレステリル基中のメチル由来のピーク（ＣＨ_３、０．６~０．７ｐｐｍ；３Ｈ）の積分値と、導入されたＭｅＯＰＥＧＮＨＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯ基中のエチレン由来のピーク（−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２−（Ｏ−ＣＨ _２ＣＨ _２）_ｎｚ´−、３．５ｐｐｍ；４ｎｚ´Ｈ）の積分値より、下に示す式からＨＡユニットにおける導入率として算出した（表５０）。
　分子量５０５６ＤａのＭｅＯＰＥＧＮＨＳを用いた場合、分子量からＮＨＳＣＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２（分子量２４１）およびＭｅＯ（分子量３１）を引き、ＯＣＨ_２ＣＨ_２（分子量４４）で割った値＝１０８をｎｚ´とした。

　〔実施例１３〕ウサギ点眼投与後のソラフェニブの眼内移行性評価によるＨＡ誘導体の粘膜透過性の確認
　（実施例１３−１）ソラフェニブ含有ＨＡ誘導体の調製
　ＨＡ−Ｎａ（１０ｋＤａ）を出発原料として実施例１２−２で合成したＨＡ誘導体を５０ｍｇ／ｍＬとなるようにＤＭＳＯ溶液に溶解し、さらにソラフェニブを加えた。透析キット（Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ、分画分子量２Ｋ）に移し、超純水、１０％スクロース溶液に対して透析した。以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、終濃度１．０ｍｇ／ｍＬに調製し、投与溶液とした。
逆相クロマトグラフィー分析条件
　分析カラム：ＰＬＲＰ−Ｓ　１０００Å（Ａｇｉｌｅｎｔ社）
　カラム温度：４０℃
　移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液
　流速：２ｍＬ／ｍｉｎ
　検出：ＵＶ２５４ｎｍ
　注入量：５０μＬ
　（比較例１３−１）ソラフェニブナノ粒子の調製
　国際公開ＷＯ２０１３／１６６４３６号に従って、粘膜透過性粒子（ＭＰＰ）を調製した。具体的にはガラスチューブに、２００ｍｇの直径０．２ｍｍジルコニアボール（ニッカトー、ＹＴＺ−０．２）を入れ、さらに１１ｍｇのソラフェニブを加え、２００μＬのＦ１２７含有水溶液（５％Ｆ１２７，０．９％ＮａＣｌ，０．０５％ＥＤＴＡ，２．４％グリセロール溶液）をさらに加えた。攪拌子を入れ、スターラーにて室温で、終夜撹拌した。０．８μｍフィルターを通し、実施例１３−１に記載の逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、終濃度１．０ｍｇ／ｍＬに調製し、投与溶液とした。動的光散乱（ＤＬＳ）法によりサイズ測定（マルバーン社、ゼータサイザーＳ）を行ったところ、直径２７１ｎｍと算出された。
　（実施例１３−２）ウサギ点眼投与後のソラフェニブの眼内移行性評価（両目）
　１５から１６週齢のニュージーランドホワイト種ＳＰＦウサギ（北山ラベス株式会社）を保定器で固定し、実施例１３−１で調製したソラフェニブ含有ＨＡ誘導体、比較例１３−１で調製したソラフェニブナノ粒子（ＭＰＰ）を、それぞれ両眼（５０μＬ／眼）に単回点眼投与した。各群３匹（６眼球）で行った。ペントバルビタールナトリウム液（共立製薬株式会社）の静脈内投与による麻酔下で腹大動静脈切断により安楽致死させた後、眼球を摘出した。眼瞼結膜を採取し、その後、ドライアイス上で眼球を凍結させて、角膜、眼球結膜、網膜および脈絡膜を採材した。
　破砕用ビーズを用いて眼組織ホモジネートを作成し、液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）にて組織中ソラフェニブ濃度を定量した（表５１）。

　いずれの眼組織においても、ソラフェニブ含有ＨＡ誘導体は、ソラフェニブナノ粒子（ＭＰＰ）と比較して、顕著にソラフェニブ濃度が高いことが示された。網膜および脈絡膜といった眼内部の組織においてソラフェニブ濃度が高いこと、また、角膜におけるソラフェニブ濃度が高いことから、ＨＡ誘導体は粘膜に接着しソラフェニブを透過させる能力を有することが示された。
　〔実施例１４〕ナノゲル誘導体の薬物封入量評価
　（実施例１４−１）蛍光標識インスリン含有ナノゲルの調製
　Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ（登録商標）　４８８　Ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　Ａｃｉｄ，Ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ　Ｅｓｔｅｒ，ｍｉｘｅｄ　ｉｓｏｍｅｒｓ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を１００ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ９）中でインスリン（ウシ脾臓由来）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）と反応させ、脱塩カラムで精製、限外濾過により溶媒置換および濃縮し、蛍光標識インスリン水溶液を調製した。実施例１２および比較例１２−１２で得られたＨＡ誘導体に２ｍｇ／ｍＬの濃度となるように水を加え、超音波処理（コバリス社製、Ｅ２２０Ｘ）を実施し、これに水および１００ｍＭリン酸緩衝液、蛍光標識インスリン水溶液を加えた。終溶液組成としてＨＡ誘導体１ｍｇ／ｍＬ、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）、蛍光標識インスリン５０μｇ／ｍＬにした。穏やかに撹拌した後、３７℃で終夜静置して、蛍光標識インスリン含有ナノゲル誘導体溶液を調製した。
　ＳＥＣクロマトグラフィー分析条件
　分析カラム：ＴＳＫｇｅｌ　ＱＣ−ＰＡＫ　ＧＦＣ３００、７．８ｍｍＩ．Ｄ．×１５ｃｍ、５μｍ（ＴＯＳＯＨ）
　移動相：ＰＢＳ水溶液
　流速：１．２ｍＬ／ｍｉｎ
　検出：蛍光４９４ｎｍ
　注入量：７０μＬ

　（実施例１４−２）ソラフェニブ含有ナノゲル誘導体の調製
　実施例１２および比較例１２−１２で得られたＨＡ誘導体に４ｍｇ／ｍＬの濃度となるようにＤＭＳＯに溶解し、さらにソラフェニブの１ｍｇ／ｍｌ　ＤＭＳＯ溶液を５０μＬ加えて最終濃度が、ＨＡ誘導体は２ｍｇ／ｍＬ、ソラフェニブは１００μｇ／ｍＬになるように調整した。さらに常温の水浴中、３０分間ソニケーションして、透析キット（Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ、分画分子量２ｋＤａ）に移し、超純水、１０％スクロース溶液に対して透析した。透析膜内の溶液を２倍希釈して以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量した。
　逆相クロマトグラフィー分析条件
　分析カラム：ＰＬＲＰ−Ｓ　１０００Å（Ａｇｉｌｅｎｔ社）
　カラム温度：４０℃
　移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液
　流速：２ｍＬ／ｍｉｎ
　検出：ＵＶ２８０ｎｍ

　（実施例１４−３）シクロスポリン含有ナノゲル誘導体の調製
　実施例１２および比較例１２−１２で得られたＨＡ誘導体を４ｍｇ／ｍＬの濃度となるようにＤＭＳＯに溶解し、さらにシクロスポリンの１ｍｇ／ｍＬＤＭＳＯ溶液を５０μＬ加えて最終濃度が、ＨＡ誘導体は２ｍｇ／ｍＬ、シクロスポリンは１００μｇ／ｍＬになるように調整した。さらに常温の水浴中、３０分間ソニケーションして、透析キット（Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ、分画分子量２ｋＤａ）に移し、超純水、１０％スクロース溶液に対して透析した。透析膜内の溶液を２倍希釈して以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりシクロスポリン濃度を定量した。
　逆相クロマトグラフィー分析条件
　分析カラム：ＰＬＲＰ−Ｓ　１０００Å（Ａｇｉｌｅｎｔ社）
　カラム温度：４０℃
　移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液
　流速：２ｍＬ／ｍｉｎ
　検出：ＵＶ２１５ｎｍ

　〔実施例１５〕ウサギ点眼投与後のソラフェニブの眼内移行性評価によるＨＡ誘導体の粘膜透過性の確認
　（実施例１５−１）ソラフェニブ含有ＨＡ誘導体の調製
　ＨＡ−Ｎａ（９９ｋＤａ）を出発原料として実施例１２−１，３，４、６および８で合成したＨＡ誘導体を２ｍｇ／ｍＬとなるようにＤＭＳＯ溶液に溶解し、さらにソラフェニブを加えた。透析キット（Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ、分画分子量２ｋＤａ）に移し、超純水、１０％スクロース溶液に対して透析した。得られたサンプルを遠心機で遠心濃縮（ＶＩＶＡＳＰＩＮ　２０，ＶＳ２００２，１００００ＭＷＣＯ　ＰＥＳ，Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ）した。以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、適宜濃度調整して、投与溶液とした。
　また、実施例１２−２で合成したＨＡ誘導体（１０ｋ　ＨＡ−Ｃｈｏｌ−４２％／ＥＤＡ−１２％／２ｋ　ＨＯＰＥＧＮＨ−６％）は、実施例１３−２と同様の方法で調整して、終濃度を０．４ｍｇ／ｍＬとした。
　比較例であるソラフェニブナノ粒子（ＭＰＰ）は、比較例１３−１と同様に調製し、終濃度０．４０ｍｇ／ｍＬに調整した。
　逆相クロマトグラフィー分析条件
　分析カラム：ＰＬＲＰ−Ｓ　１０００Å（Ａｇｉｌｅｎｔ社）
　カラム温度：４０℃
　移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ水溶液、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液
　流速：２ｍＬ／ｍｉｎ
　検出：ＵＶ２８０ｎｍ
　注入量：５０μＬ
　（実施例１５−２）ウサギ点眼投与後のソラフェニブの眼内移行性評価（両目）
　１５から１６週齢のニュージーランドホワイト種ＳＰＦウサギ（北山ラベス株式会社）を保定器で固定し、実施例１５−１で調製したソラフェニブ含有ＨＡ誘導体および比較例としてのソラフェニブナノ粒子（ＭＰＰ）を、それぞれ両眼（５０μＬ／眼）に単回点眼投与した（各群３匹（６眼球））。ペントバルビタールナトリウム液（共立製薬株式会社）の静脈内投与による麻酔下で腹大動静脈切断により安楽致死させた後、眼球を摘出した。眼瞼結膜を採取し、その後、ドライアイス上で眼球を凍結させて、角膜、眼球結膜、網膜、脈絡膜、虹彩および毛様体を採材した。
　破砕用ビーズを用いて眼組織ホモジネートを作成し、液体クロマトグラフ質量分析計（ＬＣ−ＭＳ）にて組織中ソラフェニブ濃度を定量した（表５５）。

　いずれの眼組織においても、ソラフェニブ含有ＨＡ誘導体は、ソラフェニブナノ粒子（ＭＰＰ）と比較して、顕著にソラフェニブ濃度が高いことが示された。網膜、脈絡膜、虹彩および毛様体といった眼内部の組織においてソラフェニブ濃度が高いこと、また、角膜および眼瞼結膜におけるソラフェニブ濃度が高いことから、ＨＡ誘導体は粘膜に接着しソラフェニブを透過させる能力を有することが示された。

Claims

　式（Ｉａ）：

［式中、
　Ｒ^１ｘ、Ｒ^２ｘ、Ｒ^３ｘおよびＲ^４ｘは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^５ｘは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｘ^１は、−ＮＲ^７−ＣＨＲ^８−（ＣＨ_２）_ｎ１−Ａ^１−Ｂ^１を表し；
　Ｒ^７は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^８は、水素原子、−ＣＯＮＲ^９Ｒ^１０および−ＣＯ_２Ｒ^１１から選択され；
　Ａ^１は、単結合、−（Ｙ^１−ＣＨ_２−ＣＨ_２）_ｎ２−および−（Ｙ^２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎａ）_ｎ３−から選択され；
　Ｂ^１は、−ＮＲ^１２Ｒ^１３、−Ｎ^＋Ｒ^１２Ｒ^１３Ｒ^１４Ｑ⁻、−Ｎ（−Ａ^２−ＮＲ^１２Ｒ^１３）_２、窒素原子を１~４個含む５~１０員のヘテロアリール、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２および基

から選択され；
　Ｙ^１およびＹ^２は、独立に、酸素原子または−ＮＲ^１６−を表し；
　ｎ１は、１~６の整数を表し、ｎ２およびｎ３は、独立に、１~１０の整数を表し、ｎａは、１または２の整数を表し、ｎ４は０~３の整数を表し；
　Ａ^２は、Ｃ_２−１０アルキレンを表し；
　Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、Ｒ^１３、Ｒ^１４、Ｒ^１５およびＲ^１６は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｑ⁻は、カウンターアニオンを表す］で表される繰り返し単位、
　式（Ｉｂ）：

［式中、
　Ｒ^１ｙ、Ｒ^２ｙ、Ｒ^３ｙおよびＲ^４ｙは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^５ｙは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｘ^２は、−Ｏ−Ｚ^３、−ＯＲ^ａ、−ＮＲ^ａＲ^５ｚ、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｏ−Ｚ^０−Ｚ^２、−ＮＲ^ｂ−Ｚ^３、−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２から選択され；
　Ｒ^５ｚおよびＲ^６は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^ａは、Ｃ_８−５０アルキル、Ｃ_８−５０アルケニルおよびＣ_８−５０アルキニルから選択され；
　Ｚ^０は、以下の基：

から選択され；
　Ｚ^１は、Ｃ_１−３０アルキレン、または−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｍ−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、ここで該アルキレンは、独立に、−Ｏ−、−ＮＲ^ｇ−および−Ｓ−Ｓ−から選択される１~５の基が挿入されていてもよく、ｍは、１~１００から選択される整数であり；
　Ｚ^２は、以下の基：
　−ＮＲ^ｂ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−Ｏ−Ｚ^３、
　−Ｏ−ＣＯ−ＮＲ^ｃ−Ｚ^３、
　−Ｏ−ＣＯＯ−Ｚ^３、
　−Ｓ−Ｚ^３、
　−ＣＯ−Ｚ^ａ−Ｓ−Ｚ^３、
　−Ｏ−ＣＯ−Ｚ^ｂ−Ｓ−Ｚ^３、
　−ＮＲ^ｂ−ＣＯ−Ｚ^ｂ−Ｓ−Ｚ^３、および
　−Ｓ−Ｓ−Ｚ^３、
から選択され；
　Ｒ^ｂおよびＲ^ｃは、独立に、水素原子、Ｃ_１−２０アルキル、アミノＣ_２−２０アルキルおよびヒドロキシＣ_２−２０アルキルから選択され、ここで当該基のアルキル部分は、独立に、−Ｏ−および−ＮＲ^ｆ−から選択される１~３個の基が挿入されていてもよく；
　Ｒ^ｄは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^ｆは、独立に、水素原子、Ｃ_１−１２アルキル、アミノＣ_２−１２アルキル、およびヒドロキシＣ_２−１２アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は−Ｏ−および−ＮＨ−から選択される１~２個の基が挿入されていてもよく；
　Ｒ^ｇは、独立に、水素原子、Ｃ_１−２０アルキル、アミノＣ_２−２０アルキルまたはヒドロキシＣ_２−２０アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は、独立に、−Ｏ−および−ＮＨ−から選択される１~３個の基が挿入されていてもよく；
　Ｚ^３は、ステリル基であり；
　Ｚ^ａは、Ｃ_１−５アルキレンであり；
　Ｚ^ｂは、Ｃ_２−８アルキレンまたはＣ_２−８アルケニレンであり；
　Ｒ^３１は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^３２は、水素原子、−ＣＯＮＲ^３３Ｒ^３４および−ＣＯ_２Ｒ^３５から選択され；
　Ａ^３は、単結合、−（Ｙ^３−ＣＨ_２−ＣＨ_２）_ｎ１２−および−（Ｙ^４−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎ１４）_ｎ１３−から選択され；
　Ｂ^２は、−ＮＲ^３６−Ｘ^４、−Ｎ（−Ｘ^４）_２、−Ｎ（−Ａ^４−ＮＲ^３６Ｒ^３７）（−Ａ^４−ＮＲ^３６−Ｘ^４）、−Ｎ（−Ａ^４−ＮＲ^３６−Ｘ^４）_２および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｘ^４から選択され；
　Ｙ^３およびＹ^４は、独立に、酸素原子または−ＮＲ^１６ａ−を表し；
　ｎ１１は、１~６の整数を表し、ｎ１２およびｎ１３は、独立に、１~１０の整数を表し、ｎ１４は、１または２の整数を表し；
　Ａ^４は、Ｃ_２−１０アルキレンを表し；
　Ｒ^３３、Ｒ^３４、Ｒ^３５、Ｒ^３６、Ｒ^３７およびＲ^１６ａは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｘ^４は、−ＣＯ_２−Ｚ^３、−ＣＯ_２−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ_２−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ_２−Ｚ^０−Ｚ^２、−ＣＯ−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２、−ＣＯ−Ｚ^０−Ｚ^２、−ＣＯＲ^ａ、−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^３、−Ｚ^１−Ｚ^２、−Ｚ^０−Ｚ^１−Ｚ^２または−Ｚ^０−Ｚ^２を表す］で表される繰り返し単位、および
　式（Ｉｃ）：

［式中、
　Ｒ^１ｚ、Ｒ^２ｚ、Ｒ^３ｚおよびＲ^４ｚは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^４ｚａは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｘ^３は、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１、−ＮＲ^３８−ＰＧ１および−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３から選択され；
　Ｒ^３８、およびＲ^３９は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ｒ^４０は、水素原子、−ＣＯＮＲ^４３Ｒ^４４および−ＣＯ_２Ｒ^４５から選択され；
　Ａ^５は、単結合、−（Ｙ^５−ＣＨ_２−ＣＨ_２）_ｎ１６−および−（Ｙ^６−ＣＨ_２−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎ１８）_ｎ１７−から選択され；
　Ｂ^３は、−ＮＲ^４１−Ｘ^６、−Ｎ（−Ａ^６−ＮＲ^４１Ｒ^４２）（−Ａ^６−ＮＲ^４１−Ｘ^６）、−Ｎ（−Ａ^６−ＮＲ^４１−Ｘ^６）_２および−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ−Ｘ^６から選択され；
　Ｙ^５およびＹ^６は、独立に、酸素原子または−ＮＲ^１６ｂ−を表し；
　ｎ１５は、１~６の整数を表し、ｎ１６およびｎ１７は、独立に、１~１０の整数を表し、ｎ１８は、１または２の整数を表し；
　Ｒ^４１、Ｒ^４２、Ｒ^４３、Ｒ^４４、Ｒ^４５およびＲ^１６ｂは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し；
　Ａ^６は、Ｃ_２−１０アルキレンを表し；
　Ｘ^６は、−ＰＧ２、−ＣＯ_２−ＰＧ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ−ＰＧ２または−ＣＯ−ＰＧ２であり；
　ＰＧ１は、以下の式（Ｚ）、式（Ｙ）、式（Ｘａ）、式（Ｘｂ）、式（Ｘｃ）、式（Ｘｄ）、式（Ｗ１）、式（Ｗ２）、式（Ｗ３）、式（Ｗ４）、式（Ｖ１）、式（Ｖ２）、式（Ｖ３）および式（Ｖ４）で表される基から選択され；
　ＰＧ２は、以下の式（Ｚ）、式（Ｙ）、式（Ｕ１）、式（Ｕ２）、式（Ｕ３）、式（Ｕ４）、式（Ｕ５）、式（Ｕ６）、式（Ｕ７）、式（Ｕ８）、式（Ｕ９）、式（Ｔ１）、式（Ｔ２）、式（Ｔ３）、式（Ｔ４）、式（Ｔ５）、式（Ｔ６）、式（Ｔ７）、式（Ｔ８）、式（Ｔ９）、式（Ｔ１０）、式（Ｔ１１）および式（Ｔ１２）で表される基から選択され；
−ＣＨ_２ＣＨ_２（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｎｚ−Ｔａ　（Ｚ）

それぞれの式中、
　Ｔａは、−ＮＲ^ｈＲ、−ＣＯＲ^ｉおよび−ＯＲ^ｎから選択され、
　Ｔｂは、−ＯＲ^ｎを表し、
　ｎｚは、２０~１５００の整数であり、
　ｎｙおよびｎｘは、その和が２０~１５００となる、それぞれ１０以上の整数であり、
　Ｘは、以下の式（Ｘ１）または式（Ｘ２）で表される２価の基であり、
−ＣＨ_２−　（Ｘ１）
＊＊＊−ＣＨ_２Ｏ（ＣＨ_２）_ｎｗ−　　（Ｘ２）
　Ｒ、Ｒ’およびＲ^ｎは、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し、
　Ｒ^ｈは、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、式（Ｘａ）、式（Ｘｂ）、式（Ｘｃ）、式（Ｘｄ）、式（Ｗ１）、式（Ｗ２）、式（Ｗ３）、式（Ｗ４）、式（Ｖ１）、式（Ｖ２）、式（Ｖ３）および式（Ｖ４）で表される基から選択され、
　Ｒ^ｉは、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ、式（Ｕ１）、式（Ｕ２）、式（Ｕ３）、式（Ｕ４）、式（Ｕ５）、式（Ｕ６）、式（Ｕ７）、式（Ｕ８）、式（Ｕ９）、式（Ｔ１）、式（Ｔ２）、式（Ｔ３）、式（Ｔ４）、式（Ｔ５）、式（Ｔ６）、式（Ｔ７）、式（Ｔ８）、式（Ｔ９）、式（Ｔ１０）、式（Ｔ１１）および式（Ｔ１２）で表される基から選択され、
　ｎｗは、２~１０の整数を表し、
　ｎは、１または２であり、
　Ｔは、−ＮＲＲ’、−ＣＯＲ^ｏ、および−ＯＲから選択され、
　Ｒ^ｏは、ヒドロキシまたはＣ_１−６アルコキシを表す］
で表される繰り返し単位を、それぞれ１以上含む、ヒアルロン酸誘導体。
　式（ＩＩ）

［式中、Ｒ^１ａ、Ｒ^２ａ、Ｒ^３ａおよびＲ^４ａは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｒ^５ａは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され；
　Ｘ^ａは、ヒドロキシおよび−Ｏ⁻Ｑ^＋から選択され、ここでＱ^＋は、カウンターカチオンを表す］
で表わされる１以上の繰り返し単位をさらに含む、請求項１に記載のヒアルロン酸誘導体。
　式（ＩＩＩ）

［式中、
　Ｒ^１ｂ、Ｒ^２ｂ、Ｒ^３ｂおよびＲ^４ｂは、それぞれ独立に、水素原子、Ｃ_１−６アルキル、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され、
　Ｒ^５ｂは、水素原子、ホルミルおよび（Ｃ_１−６アルキル）カルボニルから選択され、
　Ｘ^５は、−ＮＲ^１７−Ｒ^１８を表し、
　Ｒ^１７は、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し、
　Ｒ^１８は、１以上のヒドロキシで置換されていてもよいＣ_１−１０アルキルを表す］
で表される１以上の繰り返し単位をさらに含む、請求項１または２に記載のヒアルロン酸誘導体。
　Ｘ^１が、以下の式：

［式中、Ｒ^１９およびＲ^２０は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表し、Ｑ⁻は、カウンターアニオンを表す］
から選択される、請求項１~３のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　Ｘ^５が、以下の式：

で表されるいずれか１つ以上の基である、請求項３または４に記載のヒアルロン酸誘導体。
　ステリル基が、以下の式：

［式中、Ｒ^２１は、独立に、水素原子またはＣ_１−６アルキルを表す］
のいずれかで表される、請求項１~５のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　Ｘ^２が、−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２であり、Ｘ^３が、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１および−ＮＲ^３８−ＰＧ１から選択される、請求項１~６のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　Ｘ^２が、Ｘ^４が−ＣＯ−Ｚ^１−Ｚ^２または−Ｚ^３である−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２であり、Ｘ^３が、Ｘ^６が−ＣＯ−ＰＧ２である−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３である、請求項１~６のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉｂ）で表される繰り返し単位の割合が、３~５５％である、請求項１~８のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　Ｘ^２が、−Ｏ−Ｚ^３、−Ｏ−Ｚ^１−Ｚ^２および−ＮＲ^６−Ｚ^１−Ｚ^２から選択され、Ｘ^３が、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１および−ＮＲ^３８−ＰＧ１から選択され、存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉａ）で表される繰り返し単位の割合が、１~７５％である、請求項１~６のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉａ）で表される繰り返し単位の割合、およびＸ^２が−ＮＲ^３１−ＣＨＲ^３２−（ＣＨ_２）_ｎ１１−Ａ^３−Ｂ^２である式（Ｉｂ）で表される繰り返し単位の割合、およびＸ^３が−ＮＲ^３９−ＣＨＲ^４０−（ＣＨ_２）_ｎ１５−Ａ^５−Ｂ^３である式（Ｉｃ）で表される繰り返し単位の割合の和が、３０~１００％である、請求項１~６、８および９のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　存在する二糖の繰り返し単位における、式（Ｉｃ）で表される繰り返し単位の割合が、１~３０％である、請求項１~１１のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　Ｘ^１が、以下の式：

から選択される、請求項１~１２のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　Ｘ^３が、−Ｏ−ＰＧ１、−Ｓ−ＰＧ１および−ＮＲ^３８−ＰＧ１で表される基から選択され、ＰＧ１が、式（Ｚ）で表される基である、請求項１~７、９、１０、１２および１３のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体。
　請求項１~１４のいずれか１項に記載のヒアルロン酸誘導体を含む、医薬組成物。