JPWO2019098393A1 - ポリエチレングリコールにより修飾されたヒアルロン酸誘導体 - Google Patents
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Abstract
Description
医薬品の経粘膜投与は、全身用途もしくは局所用途で用いられるが、全身用途の場合は非侵襲であることからQOLの観点において有益であり、また、局所用途の場合は目的組織への高暴露および全身毒性の低減が可能であることから有益である。しかしながら、多くの場合、投与された薬物の粘膜への接着性および透過性は低く、充分な効果が得られない。特に点眼投与においては、涙による排泄により、透過性が非常に低いことが知られている(非特許文献1)。
経粘膜用のドラッグデリバリー製剤としてリポソーム(非特許文献2〜4)や、表面修飾したナノサスペンジョン(非特許文献5)、ポリマーミセル(非特許文献6)が報告されている。しかしながら、これらの製剤は低分子薬物に適した技術であり、タンパク質、ペプチド医薬品に対しては、封入量が低い、変性が起こるなどの理由から適しておらず、低分子からペプチド、タンパク質まで汎用的に用いることができる技術とは言えない。
また、安全性の面から、製剤に用いる基材は、非抗原性、非変異原性、無毒性、生分解性を併せ持つものでなければならない。
近年、多糖を薬物担体の基材として用いるという報告がある。その中でも、ヒアルロン酸(HA)は、1934年、K.Meyerによって牛の眼の硝子体から単離された生体材料(多糖)であり、細胞外マトリックスの主成分として古くから知られている。HAは、D−グルクロン酸とN−アセチルグルコサミンとがβ(1→3)グリコシド結合により連結された二糖単位から成るグリコサミノグリカンの一種である。HAは、化学的、物理的構造に種差が無く、ヒトもその代謝系を有しており、免疫性および毒性といった面でも最も安全な医用生体材料(Biomaterial)の一つである。
上述の安全性という特性に加え、近年、細胞の接着、増殖、移動の誘導に関するヒアルロン酸の生理活性物質としての側面も注目されている。更に製造の観点からも、微生物による高分子量のヒアルロン酸の大量生産が可能となっており、ヒアルロン酸を基剤として用いたドラッグデリバリーシステム(DDS)の研究が盛んに行われている。薬物をヒアルロン酸とコンジュゲートすることで、薬物の癌組織へのターゲティング(特許文献4)、肝臓へのターゲティング(特許文献5)、抗原性の低減等(特許文献6)が達成できるという報告がなされている。また、生体内にはCD44、RHAMM(Receptor for Hyaluronic Acid−Mediated Motility)、LYVE−1(Lymphatic Vessel Endothelial HA Receptor−1)、HARE(Hyaluronic Acid Receptor for Endocytosis)などのHAレセプターが存在することが報告されている(非特許文献16および17)。特にCD44やRHAMMは多くの癌細胞において過剰発現しており、それゆえHAを癌ターゲティングキャリアの基材として用いる試みがなされている。その例として、パクリタキセル−HAコンジュゲート(非特許文献18〜20および特許文献11)、カンプトテシン−HAコンジュゲート(特許文献12)、ドキソルビシン−HPMA[N−(2−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド]−HAコンジュゲート(非特許文献21)、酪酸−HAコンジュゲート(非特許文献22)、ドキソルビシン封入HA−PEG−PLGAナノパーティクル(非特許文献23)、siRNA封入HAゲル(非特許文献24)、ドキソルビシン封入HA被覆リポソーム(非特許文献25)などが挙げられる。さらに、アミド結合により導入したエチレンジアミンリンカーを介してコール酸をコンジュゲートしたHA誘導体について報告されている(非特許文献26)。これらHAを基材としたキャリアは、in vitroにおけるCD44高発現細胞において効率良く取り込まれることが報告されている(例えば非特許文献18)。また、ヒトの角膜や結膜にもCD44やRHAMMが発現しており(非特許文献7)、ヒアルロン酸を用いて核酸の取り込みが亢進されることが報告されている(非特許文献8)。一方で、血中滞留性を高めるためにヒアルロン酸のグルクロン酸部分のカルボキシを高度に修飾したヒアルロン酸が開発され、その有用性が示されてきた(特許文献7)。
その他、多糖由来の薬物担体として、コレステリル基などを導入したプルラン誘導体が、水溶液中においてナノサイズの微粒子を形成し、疎水性低分子、ペプチド、タンパク質などと複合化するホスト分子として機能することが報告されている(非特許文献13)。タンパク質取り込み後の当該プルラン誘導体についての熱力学的評価により、取り込まれたタンパク質が、プルランのヒドロキシとの水素結合により安定化されることが示されている(非特許文献14)。
また、カルボキシメチルセルロース(CMC)(特許文献9)およびリノレイン酸を導入したキトサン(非特許文献15)をタンパク質との複合体形成の材料として利用する報告もある。さらに、特許文献10には、架橋性基を有するヒアルロン酸誘導体、および疎水性基を有する親水性多糖類誘導体を含む組成物であって、架橋性基を有するヒアルロン酸誘導体が、親水性多糖類誘導体の存在下、ヒアルロン酸または架橋形成が可能な基を有するその誘導体の架橋形成反応により調製される組成物が報告されており、特許文献13には、疎水性基としてコレステリル基を有する基をヒアルロン酸に導入したヒアルロン酸誘導体が、水中で会合により微粒子を形成し、薬物と複合体を形成することが報告されている。特許文献1には、アミノ酸と疎水性基を有する基をヒアルロン酸に導入したヒアルロン酸誘導体が、水中で会合により微粒子を形成し、薬物と複合体を形成し、かつ血中滞留性が高いことが報告されている。
カチオン性多糖であるキトサンに疎水性基を導入し、薬物封入キャリアとして利用する報告(非特許文献9および10)や、疎水化プルランをカチオン化した報告もある(非特許文献11)。カチオン化したヒアルロン酸としては、アルギニンを導入した報告(非特許文献12、特許文献8)や、4級アミンを導入した報告(特許文献2および3)がある。
一方、ヒアルロン酸のカルボキシとコハク酸モノトコフェロールエステルのカルボキシとが、H2N−(CH2)6−NH2、H2N−(CH2)2−S−S−(CH2)2−NH2、またはH2N−(CH2)3−COOHを介して結合したヒアルロン酸誘導体が、水溶液中でミセルを形成し、水不溶性薬物を送達させるための担体として使用できることが知られている(特許文献14)。
また、デキストラン等にスペルミンまたはそのアンモニウム塩を導入し、その一部にさらにコレステリルまたは長鎖アルキルアミンを導入したカチオン性多糖により、プラスミドDNAのトランスフェクション効率が向上したこと(特許文献15)、低分子ヒアルロン酸のカルボキシに疎水性の長鎖アミンおよびカチオン性素子としてのスペルミンを導入したものがsiRNAとの複合体形成に有用であること(非特許文献27)、商品としてのカチオン化されたセルロース:ポリオクタニウム10(特許文献16)、ヒアルロン酸のカルボキシとコール酸がエチレンジアミンを介して結合したものが薬物キャリアとして有用であること(特許文献17)、ヒアルロン酸のカルボキシと脂溶性化合物であるトコフェロールのヒドロキシとがジアミンまたはヒドロキシアルキルアミンを介して結合したものが、薬物キャリアとして利用できること(特許文献18)が、それぞれ知られている。
ポリエチレングリコール(PEG)を薬剤分子に導入することによる薬剤の誘導体化(PEG化技術)はこれまでにさまざまな医薬品開発に用いられてきた。その効果としては、1)薬剤の分子量が大きくなることで腎排出を抑制し、薬剤の体内動態を改善する、2)酵素による分解を防ぐ、3)不溶性化合物・タンパク質が可溶化する等が挙げられる。これまでに小分子薬剤・タンパク質・核酸・ナノ粒子等がPEG化され、そのうちのいくつかは医薬品として承認されている(非特許文献28)。
PEGでグラフトされたヒアルロン酸が、インスリンの注射剤として使用されている(非特許文献29)。
蛍光物質であるシアニン5.5でラベルされたPEG化ヒアルロン酸ナノゲル(ヒアルロン酸−5β−コラン酸コンジュゲートにさらにPEGが化学的にコンジュゲートした物質)が、in vivoで、癌への集積性を改善したことが示されいる(非特許文献30)。なお、該物質においては、エチレンジアミンは5β−コラン酸およびとヒアルロン酸のカルボキシとアミド結合を形成している(非特許文献31)。
SiRNA分子等の核酸の効率的な送達のための、PEG化ヒアルロン酸でコーティングされたカチオン性リポソームについて報告がされている(非特許文献32)。
SiRNA分子等の核酸の効率的な送達および癌等の様々な病態を治療するための、カチオン性脂質、膜安定化脂質、およびPEG誘導体に共有結合した少なくとも1つの脂質を含む複数の脂質を含み、PEG誘導体に結合しているグリコサミノグリカンでコーティングされたリポソームについて報告がされている(特許文献19)。
コラン酸−エチレンジアミン誘導体およびPEG−NH2誘導体を、それぞれアミド結合でヒアルロン酸のカルボキシと結合させたヒアルロン酸誘導体が、抗腫瘍薬のバイオアベイラビリティーを改善し、毒性を軽減し、半減期を伸長させることが報告されている(特許文献20)。
デキストラン−スペルミン誘導体のスペルミン末端のアミノをコレステロールなどの疎水性化合物またはPEGで修飾したヒアルロン酸誘導体が、生分解性のポリカチオン組成物として、遺伝子治療における遺伝子の目標細胞への送達に有用であることが知られている(特許文献21)。
すなわち本発明は、粘膜への接着性と粘膜透過性とを併せ持つヒアルロン酸誘導体、および、該ヒアルロン酸誘導体および薬理活性を有する化合物を含有する複合体に関する。さらに本発明は、該ヒアルロン酸誘導体の製造方法、ならびに薬物および該ヒアルロン酸誘導体を含む経粘膜投与に適した医薬組成物およびその製造方法に関する。
本発明の1つの側面において、以下の(1)〜(14)のヒアルロン酸誘導体および該ヒアルロン酸を含む(15)の医薬組成物が提供される。
(1)式(Ia):
R1x、R2x、R3xおよびR4xは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R5xは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X1は、−NR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1を表し;
R7は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R8は、水素原子、−CONR9R10および−CO2R11から選択され;
A1は、単結合、−(Y1−CH2−CH2)n2−および−(Y2−CH2−CH2−(CH2)na)n3−から選択され;
B1は、−NR12R13、−N+R12R13R14Q−、−N(−A2−NR12R13)2、窒素原子を1〜4個含む5〜10員のヘテロアリール、−NHC(=NH)NH2および基
Y1およびY2は、独立に、酸素原子または−NR16−を表し;
n1は、1〜6の整数を表し、n2およびn3は、独立に、1〜10の整数を表し、naは、1または2の整数を表し、n4は0〜3の整数を表し;
A2は、C2−10アルキレンを表し;
R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15およびR16は、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Q−は、カウンターアニオンを表す]で表される繰り返し単位、
式(Ib):
R1y、R2y、R3yおよびR4yは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R5yは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルがら選択され;
X2は、−O−Z3、−ORa、−NRaR5z、−O−Z1−Z2、−O−Z0−Z1−Z2、−O−Z0−Z2、−NRb−Z3、−NR6−Z1−Z2および−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2から選択され;
R5zおよびR6は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Raは、C8−50アルキル、C8−50アルケニルおよびC8−50アルキニルから選択され;
Z0は、以下の基:
Z1は、C1−30アルキレン、または−(CH2CH2O)m−CH2CH2−であり、ここで該アルキレンは、独立に、−O−、−NRg−および−S−S−から選択される1〜5の基が挿入されていてもよく、mは、1〜100から選択される整数であり;
Z2は、以下の基:
−NRb−Z3、
−NRb−COO−Z3、
−NRb−CO−Z3、
−NRb−CO−NRc−Z3、
−COO−Z3、
−CO−NRc−Z3、
−O−Z3、
−O−CO−NRc−Z3、
−O−COO−Z3、
−S−Z3、
−CO−Za−S−Z3、
−O−CO−Zb−S−Z3、
−NRb−CO−Zb−S−Z3、および
−S−S−Z3、
から選択され;
RbおよびRcは、独立に、水素原子、C1−20アルキル、アミノC2−20アルキルおよびヒドロキシC2−20アルキルから選択され、ここで当該基のアルキル部分は、独立に、−O−および−NRf−から選択される1〜3個の基が挿入されていてもよく;
Rdは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Rfは、独立に、水素原子、C1−12アルキル、アミノC2−12アルキル、およびヒドロキシC2−12アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は−O−および−NH−から選択される1〜2個の基が挿入されていてもよく;
Rgは、独立に、水素原子、C1−20アルキル、アミノC2−20アルキルまたはヒドロキシC2−20アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は、独立に、−O−および−NH−から選択される1〜3個の基が挿入されていてもよく;
Z3は、ステリル基であり;
Zaは、C1−5アルキレンであり;
Zbは、C2−8アルキレンまたはC2−8アルケニレンであり;
R31は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R32は、水素原子、−CONR33R34および−CO2R35から選択され;
A3は、単結合、−(Y3−CH2−CH2)n12−および−(Y4−CH2−CH2−(CH2)n14)n13−から選択され;
B2は、−NR36−X4、−N(−X4)2、−N(−A4−NR36R37)(−A4−NR36−X4)、−N(−A4−NR36−X4)2および−NHC(=NH)NH−X4から選択され;
Y3およびY4は、独立に、酸素原子または−NR16a−を表し;
n11は、1〜6の整数を表し、n12およびn13は、独立に、1〜10の整数を表し、n14は、1または2の整数を表し;
A4は、C2−10アルキレンを表し;
R33、R34、R35、R36、R37およびR16aは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
X4は、−CO2−Z3、−CO2−Z1−Z2、−CO2−Z0−Z1−Z2、−CO2−Z0−Z2、−CO−Z1−Z2、−CO−Z0−Z1−Z2、−CO−Z0−Z2、−CORa、−Z3、−O−Z3、−Z1−Z2、−Z0−Z1−Z2または−Z0−Z2を表す]で表される繰り返し単位、および
式(Ic):
R1z、R2z、R3zおよびR4zは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R4zaは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X3は、−O−PG1、−S−PG1、−NR38−PG1および−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3から選択され;
R38、およびR39は、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R40は、水素原子、−CONR43R44および−CO2R45から選択され;
A5は、単結合、−(Y5−CH2−CH2)n16−および−(Y6−CH2−CH2−(CH2)n18)n17−から選択され;
B3は、−NR41−X6、−N(−A6−NR41R42)(−A6−NR41−X6)、−N(−A6−NR41−X6)2および−NHC(=NH)NH−X6から選択され;
Y5およびY6は、独立に、酸素原子または−NR16b−を表し;
n15は、1〜6の整数を表し、n16およびn17は、独立に、1〜10の整数を表し、n18は、1または2の整数を表し;
R41、R42、R43、R44、R45およびR16bは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
A6は、C2−10アルキレンを表し;
X6は、−PG2、−CO2−PG2、−C(=O)S−PG2または−CO−PG2であり;
PG1は、以下の式(Z)、式(Y)、式(Xa)、式(Xb)、式(Xc)、式(Xd)、式(W1)、式(W2)、式(W3)、式(W4)、式(V1)、式(V2)、式(V3)および式(V4)で表される基から選択され;
PG2は、以下の式(Z)、式(Y)、式(U1)、式(U2)、式(U3)、式(U4)、式(U5)、式(U6)、式(U7)、式(U8)、式(U9)、式(T1)、式(T2)、式(T3)、式(T4)、式(T5)、式(T6)、式(T7)、式(T8)、式(T9)、式(T10)、式(T11)および式(T12)で表される基から選択され;
−CH2CH2(OCH2CH2)nz−Ta (Z)
Taは、−NRhR、−CORiおよび−ORnから選択され、
Tbは、−ORnを表し、
nzは、20〜1500の整数であり、
nyおよびnxは、その和が20〜1500となる、それぞれ10以上の整数であり、
Xは、以下の式(X1)または式(X2)で表される2価の基であり(式中、「***」は、隣接するメチンとの結合位置を示す)、
−CH2− (X1)
***−CH2O(CH2)nw− (X2)
R、R’およびRnは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し、
Rhは、水素原子、C1−6アルキル、式(Xa)、式(Xb)、式(Xc)、式(Xd)、式(W1)、式(W2)、式(W3)、式(W4)、式(V1)、式(V2)、式(V3)および式(V4)で表される基から選択され、
R1は、ヒドロキシ、C1−6アルコキシ、式(U1)、式(U2)、式(U3)、式(U4)、式(U5)、式(U6)、式(U7)、式(U8)、式(U9)、式(T1)、式(T2)、式(T3)、式(T4)、式(T5)、式(T6)、式(T7)、式(T8)、式(T9)、式(T10)、式(T11)および式(T12)で表される基から選択され、
nwは、2〜10の整数を表し、
nは、1または2であり、
Tは、−NRR’、−CORo、および−ORから選択され、
Roは、ヒドロキシまたはC1−6アルコキシを表す]
で表される繰り返し単位を、それぞれ1以上含む、ヒアルロン酸誘導体。
(2)式(II)
R5aは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
Xaは、ヒドロキシおよび−O−Q+から選択され、ここでQ+は、カウンターカチオンを表す]
で表わされる1以上の繰り返し単位をさらに含む、(1)に記載のヒアルロン酸誘導体。
(3)式(III)
R1b、R2b、R3bおよびR4bは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され、
R5bは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され、
X5は、−NR17−R18を表し、
R17は、水素原子またはC1−6アルキルを表し、
R18は、1以上のヒドロキシで置換されていてもよいC1−10アルキルを表す]
で表される1以上の繰り返し単位をさらに含む、(1)または(2)に記載のヒアルロン酸誘導体。
(4)X1が、以下の式:
から選択される、(1)〜(3)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(5)X5が、以下の式:
(6)ステリル基が、以下の式:
のいずれかで表される、請求項1〜5のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
(7)X2が、−NR6−Z1−Z2であり、X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1から選択される、(1)〜(6)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(8)X2が、X4が−CO−Z1−Z2または−Z3である−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2であり、X3が、X6が−CO−PG2である−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3である、(1)〜(6)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(9)存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ib)で表される繰り返し単位の割合が、3〜55%である、(1)〜(8)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(10)X2が、−O−Z3、−O−Z1−Z2および−NR6−Z1−Z2から選択され、X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1から選択され、存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ia)で表される繰り返し単位の割合が、1〜75%である、(1)〜(6)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(11)存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ia)で表される繰り返し単位の割合、およびX2が−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である式(Ib)で表される繰り返し単位の割合、およびX3が−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3である式(Ic)で表される繰り返し単位の割合の和が、30〜100%である、(1)〜(6)、(8)および(9)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(12)存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ic)で表される繰り返し単位の割合が、1〜30%である、(1)〜(11)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(13)X1が、以下の式:
(14)X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1で表される基から選択され、PG1が、式(Z)で表される基である、(1)〜(7)、(9)、(10)、(12)および(13)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(15)(1)〜(14)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体を含む、医薬組成物。
R8が水素原子であり、B1が−NR12R13であり、かつ、A1が単結合である時、n1は1〜2であるのが好ましい。
R18が、1以上のヒドロキシで置換されている時は、C2−10アルキルであるのが好ましい。
n3個あるnaおよびn13個あるn14は、それぞれ、同一であっても、異なっていてもよい。
X4が−Z3である時、−Z3は、コラノイル基であるのが好ましい。
n4は、0、1および2であるのが好ましく、0および1であるのが更に好ましく、1であるのがさらに好ましい。
nyおよびnxは、その和が20〜1500となる、それぞれ10以上の整数であるが、nyおよびnxの組み合わせとしては、例えば、10および10、10および25、10および50、10および100、10および150、10および250、10および500、10および1000、10および1200、20および10、20および25、20および50、20および100、20および150、20および250、20および500、20および1000、20および1200、60および10、60および25、60および50、60および100、60および150、60および250、60および500、60および1000、60および1200、100および10、100および25、100および50、100および100、100および150、100および250、100および500、100および1000、100および1200、125および10、200および25、125および50、200および100、125および150、200および250、125および500、200および1000、125および1200、500および10、600および25、500および50、600および100、500および150、600および250、500および500、750および750、500および1000、1000および10、1200および25、1000および50、1200および100、1000および150、1200および250ならびに1000および500が挙げられる。
nz、nyおよびnxの組み合わせとしては、例えば、20、10および10;50、10および10;70、10および10;150、10および10;300、10および10;500、10および10;800、10および10;20、50および10;50、70および10;70、50および10;150、70および10;300、50および10;500、70および10;800、50および10;20、50および50;50、70および70;70、50および70;150、70および50;300、50および50;500、70および70;800、50および50、20、100および100;50、150および150;70、100および150;150、150および100;300、100および100;500、150および150;800、100および100;20、300および300;50、500および500;70、300および500;150、500および300;300、300および300;500、500および500;800、300および300;20、700および700;50、700および700;70、700および700;150、700および700;300、700および700;500、700および700;ならびに800、700および700が挙げられる。
本発明のヒアルロン酸誘導体を薬物と複合化することにより得られる医薬組成物により、薬物の粘膜透過性を向上させることができる。また、本発明のヒアルロン酸誘導体を薬物と複合化することにより、薬物の粘膜付着性を向上させた医薬組成物、薬物の吸収性を向上させた医薬組成物、薬物のバイオアベイラビリティーを向上させた医薬組成物、薬物の毒性または副作用を低減させた医薬組成物、薬物の粘膜内滞留性を向上させた医薬組成物、薬物の眼内移行性を含む組織内移行性を向上させた医薬組成物、薬物の組織内滞留性を向上させた医薬組成物、薬物の化学的安定性を向上させた医薬組成物、薬物の物理安定性を向上させた医薬組成物、薬物の徐放性を向上させた医薬組成物および薬物の薬効を向上させた医薬組成物など、性能を向上させた医薬組成物を製造することもできる。なお、これらの医薬組成物は、経粘膜投与にも適している。また、安全な医用生体材料であるヒアルロン酸を原料とすることから、本発明のヒアルロン酸誘導体自体の安全性は、高いと言える。
薬物と本発明のヒアルロン酸誘導体とを含む、経粘膜投与に用いるための医薬組成物においては、好ましくは、a)水溶液中において、本発明のヒアルロン酸誘導体の自己会合により形成されたナノサイズ(1〜1,000nm)の微粒子(ナノゲル)と薬物を混合することにより、薬物をナノゲル内に封入もしくはナノゲル表面に接着すること、b)薬物を微粉砕化することで得られる粒子を本発明のヒアルロン酸誘導体で被覆すること、c)薬物を乾燥状態の本発明のヒアルロン酸誘導体と混合または混和することなどにより、本発明のヒアルロン酸誘導体と薬効を有する低分子化合物やタンパク質やペプチドなどの薬物とを複合化することができる。薬物の結晶やアモルファスの微粒子、乳酸・グリコール酸共重合体(PLGA)などの他の基材と薬物との複合体を、本発明のヒアルロン酸誘導体で被覆することで、薬物を本発明のヒアルロン酸誘導体と複合化することもできる。乾燥状態の薬物と乾燥状態の本発明のヒアルロン酸誘導体を混合して複合化することもできる。これらの複合化により、粘膜透過性を向上させた医薬組成物や経粘膜投与に用いるための医薬組成物を製造することができる。
本発明のヒアルロン酸誘導体は、カチオン性の部位を有する基X1を導入した式(Ia)、疎水性の部位を有する基X2を導入した式(Ib)、および親水性の部位を有する基X3を導入した式(Ic)で表される二糖単位(繰り返し単位でもある)をそれぞれ1以上含むヒアルロン酸誘導体である。
本発明の一つの態様において、ヒアルロン酸誘導体は、上記式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)に加えて、式(II)、基X5を導入した式(III)、または式(II)および式(III)で表される二糖単位をさらに含む。
本発明の一つの態様において、ヒアルロン酸誘導体は、(1)上記式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)、(2)上記式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、および式(II)、(3)上記式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、および式(III)、または(4)上記式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(II)、および式(III)の繰り返し単位から実質的に構成される。当該ヒアルロン酸誘導体は、当該誘導体に含まれるD−グルクロン酸とN−アセチルグルコサミンとから成る二糖の繰り返し単位のうちの、例えば65%以上が、好ましくは80%以上が、より好ましくは90%以上が式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(II)、または式(III)の繰り返し単位である。本発明の一つの態様において、ヒアルロン酸誘導体は、(1)上記式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)、(2)上記式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、および式(II)、(3)上記式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、および式(III)、または(4)上記式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(II)、および式(III)で表される繰り返し単位のみから構成される。
本発明のヒアルロン酸誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する特定の二糖単位の割合は、二糖単位を繰り返し単位とする多糖類である本発明のヒアルロン酸誘導体の一定量に含まれる全ての二糖単位に対する特定の二糖単位の割合を意味する。
本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式(Ia)、(Ib)および式(Ic)において、R1x、R2x、R3x、およびR4x、R1y、R2y、R3y、およびR4y、ならびにR1z、R2z、R3zおよびR4zは、好ましくはいずれも水素原子である。R5x、R5yおよびR4zaは、好ましくは水素原子または(C1−6アルキル)カルボニルであり、さらに好ましくは水素原子またはアセチルであり、より好ましくはアセチルである。また、本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式(II)および(III)において、R1a、R2a、R3aおよびR4a、ならびにR1b、R2b、R3bおよびR4bは、好ましくはいずれも水素原子である。R5aおよびR5bは、好ましくは水素原子または(C1−6アルキル)カルボニルであり、さらに好ましくは水素原子またはアセチルであり、より好ましくはいずれもアセチルである。
本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式(Ia)におけるX1、式(Ib)におけるX2、式(Ic)におけるX3、および/または式(III)におけるX5に不斉中心が存在する場合は、それぞれの光学異性体およびそれらの混合物も、本発明の範囲に含まれる。
本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式(Ia)におけるカチオン性基X1の具体例としては、好ましくは以下の式:
X1の具体例として、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)および(ah)で表される基、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(m)、(n)、(s)、(t)、(u)、(y)、(z)および(ah)で表される基が挙げられる。さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)および(h)で表される基が挙げられる。これらのX1は、経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点でも好ましいものである。前記の観点でさらに好ましいX1としては、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(u)、(z)および(ah)で表される基が挙げられる。前記の観点で好ましいX1の導入率は、例えば3〜95%であり、さらに好ましくは6〜84%である。例えば、X1が式(a)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは10〜50%であり、さらに好ましくは19〜45%である。X1が式(b)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜90%であり、さらに好ましくは28〜74%である。X1が式(c)、(d)、(e)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは13〜75%であり、さらに好ましくは25〜63%である。X1が式(f)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは10〜90%であり、さらに好ましくは22〜84%である。X1が式(g)、(h)、(i)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは3〜60%であり、さらに好ましくは6〜46%である。X1が式(l)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは45〜65%、さらに好ましくは52〜54%である。X1が式(m)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは35〜67%、さらに好ましくは45〜57%、さらに好ましくは50〜52%である。X1が式(n)、(o)、(p)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは46〜90%、さらに好ましくは56〜80%、さらに好ましくは66〜70%である。X1が式(q)、(r)、(s)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜85%であり、さらに好ましくは20〜85%、さらに好ましくは45〜85%、さらに好ましくは67〜71%ある。X1が式(t)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜85%であり、さらに好ましくは20〜85%、さらに好ましくは38〜82%、さらに好ましくは48〜72%、さらに好ましくは58〜62%である。X1が式(u)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは5〜80%であり、さらに好ましくは8〜70%、さらに好ましくは10〜43%、さらに好ましくは15〜27%である。X1が式(w)、(x)、(y)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは30〜70%、さらに好ましくは40〜63%である。X1が式(z)、(aa)、(ab)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜95%であり、さらに好ましくは20〜95%、さらに好ましくは50〜95%、さらに好ましくは60〜90%、さらに好ましくは74〜78%である。X1が式(ac)、(ad)、(ah)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは30〜70%、さらに好ましくは39〜64%、さらに好ましくは49〜54%である。
点眼投与に適するヒアルロン酸誘導体の観点で好ましいX1としては、例えば式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)および(ah)で表される基が挙げられ、式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(l)、(m)、(n)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(z)、(ac)、(ad)および(ah)で表される基がさらに好ましく、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(m)、(n)、(s)、(u)、(z)および(ah)で表される基がさらに好ましく、式(a)、(b)、(c)、(h)、(s)、(u)および(ah)で表される基がさらに好ましく、式(a)、(b)、(c)、(h)、(s)および(ah)で表される基がさらに好ましく、式(a)、(b)、(c)および(h)で表される基がさらに好ましい。
口内炎治療を含む、口腔投与に適するヒアルロン酸誘導体を製造するための、好ましいX1としては、例えば式(b)で表される基が挙げられる。
X1の別の好ましい具体例として、以下の式で表される基が挙げられる。ここで、「*」は、結合位置を表す:
式−O−PG1で表される基としては、例えば以下の式:
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ja)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (jb)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (jc)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (jd)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (je)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (jf)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (jg)
式−S−PG1で表される基としては、例えば以下の式:
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ka)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (kb)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (kc)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (kd)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ke)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (kf)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (kg)
で表される基が挙げられ、好ましくは、式(ka)および(kb)で表される基である。
式−NR38−PG1で表される基としては、例えば以下の式:
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ga)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (gb)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (gc)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (gd)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ge)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (gf)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (gg)
式−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3で表される基としては、例えば以下の式:
なお、X3が−NR38−PG1である時(例えば、式(U6a)、(U6b)、(U6c)および(U6d)で表される基である時)または−CO−PG2を含む基である時、該基はリジン残基を含む基となる場合がある。ここで、リジン残基におけるαアミノとεアミノの間の炭素数は5であるが、これを、2〜4や6〜20に変更することもできる。
基X3の他の具体例として、以下の式で表される基を挙げることもできる。
また、式−O−PG1で表される他の基として、以下の基を挙げることもできる。
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (jh)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ji)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (jj)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (jk)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (jl)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (jm)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (jn)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (kh)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ki)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (kj)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (kk)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (kl)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (km)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (kn)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (gh)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (gi)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (gj)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (gk)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (gl)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (gm)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (gn)
本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式(III)における基X5の具体例としては、好ましくは以下の式:
点眼投与に適するヒアルロン酸誘導体においては、式(III)で表される二糖単位は、含んでいてもいなくてもよく、含んでいる場合は、基X5が式(ba)、(bd)および(be)で表される基である式(III)で表される繰り返し単位を含むのが好ましく、基X5がi)式(ba)および(be)、またはii)式(ba)および(bd)で表される基である式(III)で表される繰り返し単位を含むのがさらに好ましい。
点眼投与に適するヒアルロン酸誘導体においては、式(III)で表される二糖単位は、含んでいるのが好ましく、基X5が式(ba)、(be)で表される基である式(III)で表される繰り返し単位を含むのがさらに好ましい。X5の導入率は、5〜70%であるのが好ましく、7〜63%であるのがさらに好ましい。
経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点では、式(III)で表される繰り返し単位は、含まないか、基X5が式(ba)で表される基である式(III)で表される繰り返し単位を含むのが好ましい。本発明のヒアルロン酸誘導体が式(III)で表される繰り返し単位を含まない時、カチオン性の部位を有する基X1の導入率は、好ましくは10〜90%であり、さらに好ましくは19〜84%である。本発明のヒアルロン酸誘導体が式(III)で表される繰り返し単位を含む時、X1の導入率は、好ましくは4〜60%であり、さらに好ましくは6〜46%である。また、X1の導入率とX5の導入率の組み合わせ(X1の導入率:X5の導入率)は、好ましくは(4〜60%:2〜80%)であり、さらに好ましくは(6〜46%:4〜67%)である。なお、X1の導入率とX5の導入率の和の上限は、99%である。下限は6%以上であればよい。
本発明において「C1−20アルキル」とは、炭素数1〜20の直鎖状、分岐鎖状のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、n−プロピル、i−プロピル、n−ブチル、s−ブチル、i−ブチル、t−ブチルなどの「C1−4アルキル」が含まれ、さらに、n−ペンチル、3−メチルブチル、2−メチルブチル、1−メチルブチル、1−エチルプロピル、n−ヘキシル、4−メチルペンチル、3−メチルペンチル、2−メチルペンチル、1−メチルペンチル、3−エチルブチル、2−エチルブチルなどが含まれる。C1−20アルキルには、炭素数が1〜12の「C1−12アルキル」、炭素数が1〜10の「C1−10アルキル」、炭素数が1〜6の「C1−6アルキル」も含まれる。同様に、「C8−50アルキル」とは、炭素数8〜50の直鎖状、分岐鎖状のアルキル基を意味する。
本発明において「C8−50アルケニル」とは、炭素−炭素二重結合を1以上含む炭素数8〜50の直鎖状、分岐鎖状のアルケニル基を意味し、「C8−50アルキニル」とは、炭素−炭素三重結合を1以上含む炭素数8〜50の直鎖状、分岐鎖状のアルキニル基を意味する。C8−50アルキル、C8−50アルケニルおよびC8−50アルキニルにおいては、C8−50アルキルが好ましい。また、炭素数は、10〜30が好ましく、10〜20がより好ましい。具体例としては、ラウリル基、ミリスチル基、セチル基、ステアリル基などが挙げられる。
本発明において「(C1−6アルキル)カルボニル」とは、アルキル部分がC1−6アルキルであるアルキルカルボニル基を意味し、例えば、アセチル、プロピオニル、n−プロピルカルボニル、i−プロピルカルボニル、n−ブチルカルボニル、s−ブチルカルボニル、i−ブチルカルボニル、t−ブチルカルボニルなどが含まれる。
本発明において「ヘテロアリール」とは、環を構成する原子中に、1または複数個の、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子から選択されるヘテロ原子を含有する芳香族性の環の基を意味し、部分的に飽和されていてもよい。環は単環、またはベンゼン環または単環ヘテロアリール環と縮合した2環式ヘテロアリールであってもよい。環を構成する原子の数は、例えば5〜10である。ヘテロアリールの例としては、たとえば、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾジオキソリル、インドリジニル、イミダゾピリジルなどが挙げられ、好ましくはイミダゾリルが挙げられる。
本発明において「窒素原子を1〜4個含む5〜10員のヘテロアリール」とは、環を構成する5〜10の原子中に、1〜4の窒素原子を含有するヘテロアリールを意味し、例えば、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、インドリジニル、イミダピリジルなどが挙げられ、好ましくはイミダゾリルが挙げられる。
本発明において「C2−30アルキレン」とは、炭素数2〜30の直鎖状または分岐鎖状の2価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、エチレン、プロピレンなどが含まれ、炭素数が2〜10の「C2−10アルキレン」、炭素数が2〜8の「C2−8アルキレン」も含まれる。
本発明において「C1−30アルキレン」とは、炭素数1〜30の直鎖状または分岐鎖状の2価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチレン、エチレン、プロピレンなどが含まれ、炭素数が2〜30の「C2−30アルキレン」も含まれる。
本発明において「C1−5アルキレン」とは、炭素数1〜5の直鎖状または分岐鎖状の2価の飽和炭化水素基を意味し、例えば、エチレン(エタン−1,2−ジイル、エタン−1,1−ジイル)、プロピレン(プロパン−1,1−ジイル、プロパン−1,2−ジイル、プロパン−1,3−ジイル)、ブタン−1,4−ジイル、ペンタン−1,5−ジイルなどが含まれる。
本発明において「アミノC2−20アルキル」とは、置換基としてアミノを有する炭素数2〜20の直鎖状、分岐鎖状のアルキルを意味し、例えば、アミノはアルキルの末端の炭素原子上に位置していてもよい。アミノC2−20アルキルには、炭素数が2〜12の「アミノC2−12アルキル」も含まれる。
本発明において「ヒドロキシC2−20アルキル」とは、置換基としてヒドロキシを有する炭素数2〜20の直鎖状、分岐鎖状のアルキル基を意味し、例えば、ヒドロキシはアルキルの末端の炭素原子上に位置していてもよい。ヒドロキシC2−20アルキルには、炭素数が2〜12の「ヒドロキシC2−12アルキル」も含まれる。
本発明において「ステリル基」とは、ステロイド骨格を有する基であれば特に制限されない。ここでステロイドとしては、具体的には、コレステロール、デヒドロコレステロール、コプロステノール、コプロステロール、コレスタノール、カンペスタノール、エルゴスタノール、スチグマスタノール、コプロスタノール、スチグマステロール、シトステロール、ラノステロール、エルゴステロール、シミアレノール、胆汁酸(コラン酸、リトコール酸、ヒオデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、アポコール酸、コール酸、デヒドロコール酸、グリココール酸、タウロコール酸)、テストステロン、エストラジオール、プロゲストロン、コルチゾール、コルチゾン、アルドステロン、コルチコステロン、デオキシコルチステロンなどが挙げられる。ステリル基としては、コレステリル基、スチグマステリル基、ラノステリル基、エルゴステリル基、コラノイル基、コロイル基などが挙げられ、好ましくは以下の式:
Q+はカルボキシと水中で塩を形成するカウンターカチオンであれば特に限定されず、2価以上の場合は価数に応じて複数のカルボキシと塩を形成する。カウンターカチオンの例としては、リチウムイオン、ナトリウムイオン、ルビジウムイオン、セシウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオンなどの金属イオン;式:N+RjRkRlRm(式中、Rj、Rk、RlおよびRmは、それぞれ独立に、水素原子およびC1−6アルキルから選択される)で表されるアンモニウムイオンなどが挙げられ、好ましくは、ナトリウムイオン、カリウムイオン、テトラアルキルアンモニウムイオン(例えば、テトラn−ブチルアンモニウムイオンなど)が挙げられる。Rj、Rk、RlおよびRmは、C1−6アルキルから選択される同一の基であるのが好ましく、n−ブチルであるのが好ましい。
Q−はアンモニウム塩と塩を形成するカウンターアニオンであれば特に限定されない。カウンターアニオンの例としては、例えば、フッ素イオン、塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオン等のハロゲンイオンおよび水酸化物イオンなどが挙げられる。
本発明のヒアルロン酸誘導体は薬物担体として使用することができる。当該薬物担体は好ましくは生分解性である。また、本発明のヒアルロン酸誘導体は粘膜透過性が向上したものであり、薬物と複合化することで、薬物の粘膜透過性を向上させることができる。
ここで粘膜透過性が向上するとは、哺乳動物、特にマウス、ラット、ウサギ、ブタおよび/またはヒトに経粘膜投与後、粘膜層を透過し、上皮層もしくはさらに内部の組織への到達度合が増すことを意味する。「上皮層もしくはさらに内部の組織への到達度合」は、例えば、蛍光標識した本発明のヒアルロン酸誘導体もしくは蛍光標識した薬物の上皮層中、内部組織中での存在度合を顕微鏡で確認することにより評価できる。経口投与の場合は、薬物や本発明のヒアルロン酸誘導体の血中濃度を定量することによっても評価できる。In vitroで評価する場合は、角膜などの粘膜を産生している多層細胞を透過する度合を評価する方法や、粘膜無産生細胞上に粘膜成分を重層し、その粘膜成分を、本発明のヒアルロン酸誘導体や薬物が透過する度合を評価する方法を用いることができる。
本発明において、「経粘膜投与」としては、結膜または角膜上への点眼、鼻腔を覆っている粘膜を経由する経鼻吸入、肺胞の粘膜を経由する経肺吸入、気管粘膜や気管支粘膜に対する吸入、口腔内の粘膜を経由する口腔投与や舌下投与、膣内の粘膜を経由する経膣投与、胃、十二指腸、小腸、結腸および直腸を含む大腸などの消化管粘膜を経由する経口投与や直腸投与、ならびに中耳粘膜に対する中耳投与などが挙げられる。好ましい投与は、点眼、経鼻吸入、経肺吸入、気管または気管支吸入、口腔投与、舌下投与および経口投与であり、さらに好ましい投与は、点眼、経鼻吸入、経肺吸入、気管または気管支吸入、口腔投与および舌下投与である。
本発明の別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、X2が、−O−Z3、−O−Z1−Z2および−NR6−Z1−Z2から選択され(式中、Z3、Z1およびR6は本明細書に既に定義されたとおりである)、X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1から選択され(式中、PG1およびR38は本明細書に既に定義されたとおりである)、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、カチオン性の部位を有する基X1(−NR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1:式中、R7、R8、n1、A1、およびB1は本明細書に既に定義されたとおりである)を有する式(Ia)の繰り返し単位の割合(基X1の導入率)が例えば1〜75%である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、疎水性の部位を有する基X2を有する式(Ib)の繰り返し単位の割合(疎水性の部位を有する基X2の導入率)が例えば3〜55%である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、親水性の部位を有する基X3を有する式(Ic)の繰り返し単位の割合(親水性の部位を有する基X3の導入率)が例えば1〜30%である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、式(Ia)で表される繰り返し単位の割合、−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である基X2(式中、R31、R32、n11、A3、およびB2は本明細書に既に定義されたとおりである)を有する式(Ib)の繰り返し単位の割合、および−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3である基X3(式中、R39、R40、n15、A5、およびB3は本明細書に既に定義されたとおりである)を有する式(Ic)で表される繰り返し単位の割合の和が例えば30〜100%である、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
カチオン性の部位を有する基X1の導入率は、例えば1〜90%、好ましくは1〜75%であり、具体的には、1、2.5、6、7.4、11、17、21、28、35、44、53、61、65、70、73、または75%である。また、好ましい基X1の導入率は、2〜90%でもあり、具体的には、3、6、8、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25、26、28、29、30、31、32、34、35、40、41、42、43、45、46、48、49、50、51、52、54、60、63、65、66、67、68、70、71、75、76、79または85%でもある。
点眼投与に適するヒアルロン酸においては、好ましい基X1の導入率は、2〜80%、さらに好ましくは3〜76%であり、さらに好ましくは13〜67%であり、具体的には、3、11、13、17、22、24、28、31、41、43、46、51、52、67、68、75または76%、好ましくは、13、17、24、28、31、41、43、46、51または67%である。
口腔投与に適するヒアルロン酸においては、好ましい基X1の導入率は、5〜50%、さらに好ましくは10〜30%であり、具体的には、16、20および28%である。
疎水性の部位を有する基X2の導入率は、例えば3〜55%であり、具体的には、3、8、12、16、21、25、30、34、39、43、48、51、または55%である。X2がこれらの導入率である時、X2は、−O−Z3、−O−Z1−Z2、および−NR6−Z1−Z2であるのが好ましい。さらに、X2がこれらの基である時、X1の導入率とX2の導入率の和は、100%以下である。例えば、X2の導入率が55%である時、X1の導入率は45%以下である。
点眼投与および口腔投与に適するヒアルロン酸においては、X2は、−NR6−Z1−Z2であるのが好ましく、その導入率は、点眼投与では、例えば8〜50%、好ましくは12〜44%であり、口腔投与では、例えば5〜40%、好ましくは10〜20%である。具体的な導入率としては、12、15、16、17、18、26、39および44%が挙げられる。
−O−Z1−Z2および−NR6−Z1−Z2において、Z1と結合するZ2中の原子が酸素原子または窒素原子である場合、C1−30アルキレンであるZ1は、C2−30アルキレンであるのが好ましい。同様に、−O−Z0−Z1−Z2において、Z1と結合する、Z0およびZ2中の原子が、それぞれ酸素原子または窒素原子である場合、C1−30アルキレンであるZ1は、C2−30アルキレンであるのが好ましい。Z1がC1アルキレン(−CH2−)である時、その炭素原子は、ヒドロキシまたはC1−6アルキルで修飾されていてもよく、あるいは、−CH2−は、アミノ酸残基に置き換えられてもよい。例えば、−CH2−は、セリン残基である−CH(CH2OH)−に置き換えられてもよい。
基X2の一例である基−NRb−Z3の具体例としては、例えば、以下の式
基X2の一例である基−NR6−Z1−Z2としては、例えば、以下の式
基X2の一例である基−O−Z1−Z2、−O−Z0−Z1−Z2および−O−Z0−Z2としては、例えば、以下の式
X2が−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である場合、その導入率は、例えば3〜55%であり、具体的には、3、4、8、12、16、18、21、23、25、30、34、39、43、47、48、51、または55%である。
基X2が−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である場合、基X1、および基X2の導入率の和は、例えば30〜100%であり、具体的には、30、36、41、44、49、56、61、66、70、75、79、83、88、92、96、または100%である。
ここで、基X2の導入率は、例えば3、8、12、16、21、25、30、34、39、43、48、51、または55%であり、基X1の導入率は、例えば15、20、25、30、35、40、45、50,55、60、72、84,95または97%である。
基X2が−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である場合、R32は−CONH2、A3は、単結合、B2は、−NH−X4、X4は−Z3、−CO2−Z3および−CO−(C2−6アルキレン)−COO−Z3であるのが好ましく、具体例としては、以下の式
基X2が−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である場合、基X1と基X2の組み合わせは、X1が、式(a)で表される基であり、X2が、式(fa)、(fb)および(fc)で表される基であるのがさらに好ましく、X1が、式(a)で表される基であり、X2が、式(fa)および(fb)で表される基であるのがさらに好ましい。該基の組み合わせは、経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点で好ましい組み合わせである。X1の導入率とX2の導入率の組み合わせ(X1の導入率:X2の導入率)は、好ましくは(30〜90%:2〜70%)であり、さらに好ましくは(42〜83%:3〜50%)である。
本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、基X1を有する式(Ia)、基X2を有する式(Ib)および基X3を有する式(Ic)に加えて、さらに基Xa(ヒドロキシまたは−O−Q+:Q+は、カウンターカチオンを表す)を有する式(II)、または基Xaを有する式(II)および基X5(−NR17−R18:式中、R17およびR18は本明細書に既に定義されたとおりである)を有する式(III)で表される二糖の繰り返し単位を含む、前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。
本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、当該誘導体に存在する二糖の繰り返し単位に対する、基X5を有する式(III)の繰り返し単位の割合(X5の導入率)は、例えば0〜90%であり、好ましくは0および1〜90%であり、より好ましくは0および4〜62%である。
ここで、基X1の導入率、基X2の導入率、基X3の導入率または基X5の導入率は、以下の式:
本明細書で示される繰り返し単位の存在比や基X、基X2、基X3または基X5導入率においては、製造される本発明のヒアルロン酸誘導体中に含まれる繰り返し単位全てが考慮される。すなわち、式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)の繰り返し単位のうち、式(Ia)、式(Ib)、または式(Ic)のみを含むヒアルロン酸分子、式(Ia)および式(Ib)、式(Ia)および式(Ic)、および式(Ib)および式(Ic)のみを含むヒアルロン酸分子、ならびに式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)を含むヒアルロン酸分子の組み合わせであってよく、そのような組み合わせに含まれる全ての繰り返し単位を考慮して、各繰り返し単位の存在比や各基の導入率が決定される。
本発明の一つの側面において、式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)の繰り返し単位を含むヒアルロン酸誘導体は、一分子中に3つの繰り返し単位を含まなくともよく、それぞれの繰り返し単位を含む分子の組み合わせであってもよい。本発明の一つの態様において、式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)の繰り返し単位を含むヒアルロン酸誘導体は、少なくとも1つの分子において式(Ia)、式(Ib)、および式(Ic)の繰り返し単位を同時に含む。
本発明のヒアルロン酸誘導体を製造するための原料としては、ヒアルロン酸(HA)またはその塩を使用することができる。ヒアルロン酸塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属塩、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)を挙げることができ、例えば、医薬品として繁用されているナトリウム塩をテトラブチルアンモニウム(TBA)塩などのテトラアルキルアンモニウム塩に変換して使用することができる。HAまたはその薬学的に許容される塩は、鶏冠や豚皮下等の生物由来のものを抽出する方法や生物発酵法等の各種公知の方法を用いて製造することができ、あるいは市販のものを購入して(例えば、電気化学工業株式会社、株式会社資生堂、生化学工業株式会社、R&D system社等から)入手することも可能である。
原料として用いられる、式(II)で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸(塩を含む)の重量平均分子量は、例えば1kDa〜2,000kDaである。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは3kDa〜1000Daであり、さらに好ましくは5kDa〜200kDaであり、より好ましくは5kDa〜150kDaであり、さらに好ましくは10kDa〜100kDaである。粒子径や粘度をより小さくする、または溶解性を高める場合には、該重量平均分子量は、1kDa〜500kDaが好ましく、5kDa〜200kDaがさらに好ましく、5kDa〜150kDaがさらに好ましい。粘度を大きくする、または皮下や関節腔内、眼内、耳内、鼻腔内、膣内、口腔内での滞留性を高める場合には、該重量平均分子量は、45kDa〜2000kDaが好ましく、50kDa〜2000kDaがさらに好ましく、100kDa〜1000kDaがさらに好ましく、200kDa〜1000kDaがさらに好ましい。重量平均分子量の具体例としては、例えば、1kDa、3kDa、5kDa、8kDa、10kDa、25kDa、40kDa、45kDa、50kDa、65kDa、78kDa、89kDa、92kDa、99kDa、100kDa、112kDa、126kDa、134kDa、150kDa、168kDa、182kDa、200kDa、230kDa、271kDa、314kDa、379kDa、423kDa、468kDa、500kDa、651kDa、786kDa、824kDa、915kDa、1000kDa、1058kDa、1265kDa、1355kDa、1412kDa、1500kDa、1617kDa、1768kDa、1853kDa、1945kDaおよび2000kDaが挙げられる。「kDa」は「キロダルトン」の略号である。
なお、式(II)で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸(塩を含む)の重量平均分子量とは、本発明のヒアルロン酸誘導体の主鎖構造を保持したまま、式(II)における、R1a、R2a、R3a、およびR4aの全てを水素原子とし、R5aをアセチルとし、かつ、Xaを−O−Na+として換算した場合の重量平均分子量を意味する。従って、例えば、実際に用いる原料における一部または全ての二糖単位においてXaが−O−(テトラn−ブチルアンモニウムイオン)であり、その重量平均分子量を上記に従って換算して算出された値が前記の重量平均分子量の範囲に含まれる場合は、本発明の好ましい1態様に含まれることになる。
本発明の1つの側面において、本発明のヒアルロン酸誘導体に主鎖構造が対応する誘導体化されていないヒアルロン酸の重量平均分子量が1kDa〜2,000kDaである。ここで誘導体化されていないヒアルロン酸は、既に定義した式(II)においてR1a、R2a、R3aおよびR4aが水素原子であり、R5aがアセチルであり、Xaが−O−Na+である繰り返し単位のみからなるヒアルロン酸である。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは3kDa〜1000Daであり、さらに好ましくは5kDa〜200kDaであり、より好ましくは5kDa〜150kDaであり、さらに好ましくは10kDa〜100kDaである。粒子径や粘度をより小さくする、または溶解性を高める場合には、該重量平均分子量は、1kDa〜500kDaが好ましく、5kDa〜200kDaがさらに好ましく、5kDa〜150kDaがさらに好ましい。粘度を大きくする、または皮下や関節腔内、眼内、耳内、鼻腔内、膣内、口腔内での滞留性を高める場合には、該重量平均分子量は、45kDa〜2000kDaが好ましく、50kDa〜2000kDaがさらに好ましく、100kDa〜1000kDaがさらに好ましく、200kDa〜1000kDaがさらに好ましい。該重量平均分子量の具体例としては、例えば、1kDa、3kDa、5kDa、8kDa、10kDa、25kDa、40kDa、45kDa、50kDa、65kDa、78kDa、89kDa、92kDa、99kDa、100kDa、112kDa、126kDa、134kDa、150kDa、168kDa、182kDa、200kDa、230kDa、271kDa、314kDa、379kDa、423kDa、468kDa、500kDa、651kDa、786kDa、824kDa、915kDa、1000kDa、1058kDa、1265kDa、1355kDa、1412kDa、1500kDa、1617kDa、1768kDa、1853kDa、1945kDaおよび2000kDaが挙げられる。
なお、一般的に、ヒアルロン酸(塩を含む)は単一品として得ることが難しいため、その分子量は、数平均分子量または重量平均分子量として算出する。本発明においては、重量平均分子量として算出している。重量平均分子量の測定方法については、例えば、中浜精一他著「エッセンシャル高分子科学」(講談社発行、ISBN4−06−153310−X)に記載された、光散乱法、浸透圧法、粘度法等、各種の公知の方法を利用することができ、本明細書において示される粘度平均分子量もウベローデ粘度計を使用するなど、本発明が属する技術分野において通常用いられる方法により測定することができる。従って、原料として用いられるヒアルロン酸(塩を含む)や本発明のヒアルロン酸誘導体の分子量も、重量平均分子量として算出されることになる。分子量を明示して市販されているヒアルロン酸(塩を含む)を使用する場合は、その明示された数値を分子量とすることもできる。
本発明のヒアルロン酸誘導体の分子量は特に限定はされないが、粘膜透過性が求められる場合には粘度および分子量の低いヒアルロン酸が好ましく、投与部位での滞留性が求められる場合には、粘度および分子量の高いヒアルロン酸が好ましい。例えば、本発明のヒアルロン酸誘導体の重量平均分子量は、例えば2kDa〜2,000kDaである。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは3kDa〜1000Daであり、さらに好ましくは5kDa〜200kDaであり、より好ましくは5kDa〜150kDaであり、さらに好ましくは10kDa〜100kDaである。粒子径や粘度をより小さくする、または溶解性を高める場合には、該重量平均分子量は、2kDa〜500kDaが好ましく、5kDa〜200kDaがさらに好ましく、5kDa〜150kDaがさらに好ましい。粘度を大きくする、または皮下や関節腔内、眼内、耳内、鼻腔内、膣内、口腔内での滞留性を高める場合には、該重量平均分子量は、45kDa〜2000kDaが好ましく、50kDa〜2000kDaがさらに好ましく、100kDa〜1000kDaがさらに好ましく、200kDa〜1000kDaがさらに好ましい。また、薬物の放出制御の観点では、好ましくは5kDa〜200kDa、さらに好ましくは8kDa〜120kDa、さらに好ましくは8kDa〜30kDaであるである。
本発明のヒアルロン酸誘導体の合成に用いられる、ポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を有する化合物の分子量(重量平均分子量であってもよい)は、例えば1kDa〜60kDaである。薬物の粘膜透過性の観点では、好ましくは1kDa〜5kDaである。
本発明において、式(Ia)で表される二糖単位におけるカチオン性の部位を有する基X1は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミドに変換することにより導入することができる(工程1)。例えば、原料のヒアルロン酸(塩などを含む)、好ましくは、式(II)で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式:HNR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1(式中、R7、R8、n1、A1、およびB1は本明細書に既に定義されたとおりである)で表される化合物と反応させる方法が挙げられる。
本発明において、式(Ib)で表される二糖単位における疎水性の部位を有する基X2は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミドまたはエステルに変換することにより導入することができる(工程2)。
アミドへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式:HNR6−Z1−Z2(式中、R6、Z1、およびZ2は本明細書で既に定義したとおりである)で表される疎水性基を導入したアミン、または、式:HNRb−Z3、式:HNR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2もしくは式:HNRaR5z(式中、Rb、Z3、R31、R32、n11、A3、B2、RaおよびR5zは本明細書で既に定義したとおりである)で表されるアミンと反応させる方法が挙げられる。
エステルへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式:Hal−Z3、Hal−Ra、Hal−Z1−Z2、Hal−Z0−Z1−Z2またはHal−Z0−Z2(式中、Z3、Ra、Z0、Z1、およびZ2は本明細書で既に定義したとおりであり、Halはハロゲン原子を表す)で表される疎水性基を導入したハライドとを反応させる方法(方法1)、または原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、必要に応じてテトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換後、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式HO−Z3、HO−Ra、HO−Z1−Z2、HO−Z0−Z1−Z2またはHO−Z0−Z2(式中、Z3、Ra、Z0、Z1、およびZ2は本明細書で既に定義したとおりである)で表される疎水性基を導入したアルコールとを反応させる方法(方法2)が挙げられる。
本発明において、式(Ic)で表される二糖単位における親水性の部位を有する基X3は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミド、エステル、またはチオエステルに変換することにより導入することができる(工程3)。
アミドへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式:HNR38−PG1または式:HR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3(式中、R38、PG1、R39、R40、n15、A5およびB3は本明細書で既に定義したとおりである)で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したアミンと反応させる方法(方法1a)が挙げられる。
エステルへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式:Hal−PG1(式中、PG1は本明細書で既に定義したとおりであり、Halはハロゲン原子を表す)で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したハライドとを反応させる方法(方法1a)、または原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、必要に応じてテトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換後、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式:HO−PG1(式中、PG1は本明細書で既に定義したとおりである)で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したアルコールとを反応させる方法(方法2a)が挙げられる。
チオエステルへの変換は、例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式:HS−PG1(式中、PG1は本明細書で既に定義したとおりである)で表されるポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基を導入したチオールと反応させる方法(方法3a)が挙げられる。
本発明において、式(III)で表される二糖単位における基X5は、グルクロン酸部分のカルボキシをアミドに変換することにより導入することができる(工程4)。例えば、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩を、式:HNR17−R18(式中、R17、およびR18は本明細書で既に定義したとおりである)で表される基を導入したアミンと反応させる方法が挙げられる。
式(Ia)における基X1、式(Ib)における基X2、式(Ic)における基X3、および式(III)における基X5は、複数存在する二糖単位の各々において同一であっても異なっていてもよい。例えば、異なる種類の式で表される化合物を用いて上記反応を行ってもよい。また、式(II)における基Xaも、複数存在する二糖単位の各々において同一であっても異なっていてもよい。
上記のアミドへの変換反応において使用することができる縮合剤は特に限定されず、例えば、4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン)−4−メチルモルホリウム(DMT−MM)、N,N’−カルボニルジイミダゾール(CDI)、N,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、N−エトキシカルボニル−2−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリン(EEDQ)、2−ベンゾトリアゾール−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム4フッ化ホウ酸塩(TBTU)、3,4−ジヒドロ−3−ヒドロキシ−4−オキソ−1,2,3−ベンゾトリアジン(HODhbt)、ベンゾトリアゾール−1−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム6フッ化リン酸塩(PyBOP)、ベンゾトリアゾール−1−イル−オキシ−トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート(BOP)、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)またはN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)などを挙げることができる。
特に、限定はされないが、DMT−MMは水および有機溶媒の混合溶媒中でも反応が高効率に進む点において好ましい。また、DMT−MMを縮合剤として使用することにより、多数のヒドロキシが共存する系において、エステル結合形成を抑えつつ、高選択的にアミノとカルボキシによるアミド結合形成を行うことができる。この縮合剤の使用により、例えば、溶媒であるアルコールがヒアルロン酸部分のカルボキシと反応することや、ヒアルロン酸部分に同時に存在するカルボキシとヒドロキシとが、分子内もしくは分子間で結合して、望まない架橋を形成してしまうことを防ぐことができる。
上記のアミドへの変換反応において用いる溶媒としては、水、ジメチルスルホキシド(DMSO)、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルアセトアミド(DMAc)、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン(DMI)、スルホラン(SF)、N−メチルピロリドン(NMP)、ジオキサン(例えば1,4−ジオキサン)、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン(THF)、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。出発物質、修飾試薬および生成物の溶解性と、縮合剤の反応性の観点からは、DMSO単独もしくは水/DMSO混合溶媒を使用するのが好ましい。修飾試薬の種類によっては、それをメタノール溶液やジオキサン溶液として反応に用いてもよい。
上記のエステルへの変換反応において用いる縮合剤としては、例えば、4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン)−4−メチルモルホリウム(DMT−MM)、N,N’−カルボニルジイミダゾール(CDI)、N,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、N−エトキシカルボニル−2−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリン(EEDQ)、2−ベンゾトリアゾール−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム4フッ化ホウ酸塩(TBTU)、3,4−ジヒドロ−3−ヒドロキシ−4−オキソ−1,2,3−ベンゾトリアジン(HODhbt)、ベンゾトリアゾール−1−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム6フッ化リン酸塩(PyBOP)、ベンゾトリアゾール−1−イル−オキシ−トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート(BOP)または1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)またはN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)などを挙げることができ、好ましくは、DMT−MMを挙げることができる。
上記のエステルへの変換反応において用いる溶媒としては、水、DMSO、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、DMF、THF、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
上記のチオエステルへの変換反応において用いる縮合剤としては、例えば、4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン)−4−メチルモルホリウム(DMT−MM)、N,N’−カルボニルジイミダゾール(CDI)、N,N’−ジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)、N−エトキシカルボニル−2−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリン(EEDQ)、2−ベンゾトリアゾール−1,1,3,3−テトラメチルウロニウム4フッ化ホウ酸塩(TBTU)、3,4−ジヒドロ−3−ヒドロキシ−4−オキソ−1,2,3−ベンゾトリアジン(HODhbt)、ベンゾトリアゾール−1−オキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウム6フッ化リン酸塩(PyBOP)、ベンゾトリアゾール−1−イル−オキシ−トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート(BOP)または1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC)またはN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)などを挙げることができ、好ましくは、DMT−MMを挙げることができる。
上記のチオエステルへの変換反応において用いる溶媒としては、DMSO、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、DMF、THF、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
アミドへの変換反応は、基X2が−NR6−Z1−Z2である場合は、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩とスペーサー部分を反応させ(この際、必要に応じて保護および脱保護反応を行ってもよい)、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシ(−COOH)またはその塩を変換し、その後に適当な試薬と反応させてもよい。カルボキシから変換される基と、反応試薬の組み合わせの例を以下に示す。
−CONR6−Z1−NRbH + Hal−Z3、
−CONR6−Z1−NRbH + Hal−COOZ3、
−CONR6−Z1−NRbH + HOCO−Z3、
−CONR6−Z1−NRbH + Hal−CO−Z3、
−CONR6−Z1−COOH + HO−Z3、
−CONR6−Z1−OH + Hal−COO−Z3、
−CONR6−Z1−COOH + NRc−Z3、
−CONR6−Z1−OCO−Hal + NRc−Z3、
−CONR6−Z1−OCOOH + HO−Z3、
−CONR6−Z1−OCOOH + Hal−Z3、
−CONR6−Z1−OCO−Hal + HO−Z3、
−CONR6−Z1−SH + Hal−Z3、
−CONR6−Z1−Hal + HS−Z3、
−CONR6−Z1−CO−Za−Hal + HS−Z3
−CONR6−Z1−CO−Za−SH + Hal−Z3、
−CONR6−Z1−O−CO−CH=CH2 + HS−Z3、
−CONR6−Z1−NRb−CO−C(CH3)=CH2 + HS−Z3、
−CONR6−Z1−SH + HS−R、
(式中、R6、Z1、Rb、RcおよびZ3は本明細書で既に定義したとおりであり、Halは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素から選択されるハロゲン原子を表す)。
反応様式としては、脱ハロゲン化水素反応、縮合反応、脱水反応、マイケル付加等の求核付加反応、酸化的なジスルフィド形成反応等が挙げられ、これらは周知な反応であり、当業者が適宜選択し、好ましい反応条件を見出して行うことができる。変換体または反応物がカルボキシを有する場合は、N−ヒドロキシコハク酸イミド(以下、「NHS」とも称す)エステルとし、反応させてもよい。
また、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシに、2−アミノエチル 2−ピリジル ジスルフィドを反応させて、末端に脱離基で修飾されたメルカプトを有するスペーサーが導入されたヒアルロン酸誘導体を調製し、これにチオコレステロールを求核置換反応させてジスルフィド結合を形成する方法を挙げることもできる。
さらに、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシにスペーサーの一部を導入したものと、ステリル基にスペーサーの一部を導入したものを調製し、これらを反応させる方法を挙げることもできる。具体例の一部は上述したが、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシに、末端にメルカプトを有するスペーサーが導入されたヒアルロン酸誘導体と、末端にメルカプトを有するスペーサーが導入されたステリル基をそれぞれ調製し、これらを酸化的に反応させてジスルフィド結合を形成させる方法を挙げることもできる。このとき、一方のメルカプトを2−メルカプトピリジンと反応させてジスルフィドとした後に、他方のメルカプトと置換させることもできる。
エステルへの変換反応は、X2が−O−Z1−Z2である場合は、原料のヒアルロン酸またはその誘導体を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩とスペーサー部分を反応させ(この際、必要に応じて保護および脱保護反応を行ってもよい)、原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシ(−COOH)を変換し、その後に適当な試薬と反応させてもよい。カルボキシ基から変換される基と、反応試薬の組み合わせの例を以下に示す。
−COO−Z1−NRbH + Hal−Z3、
−COO−Z1−NRbH + Hal−COO−Z3、
−COO−Z1−NRbH + HOCO−Z3、
−COO−Z1−NRbH + Hal−CO−Z3、
−COO−Z1−NRb−COOH + HNRc−Z3、
−COO−Z1−NRb−CONRcH + Hal−Z3、
−COO−Z1−NRbH + HOCO−NRc−Z3、
−COO−Z1−NRbH + Hal−CO−NRc−Z3、
−COO−Z1−COOH + HO−Z3、
−COO−Z1−COOH + H2NRc−Z3、
−COO−Z1−OH +Hal−CO−NRc−Z3、
−COO−Z1−OH + Hal−COO−Z3、
−COO−Z1−OCOOH + Hal−Z3、
−COO−Z1−OCO−Hal + HO−Z3、
−COO−Z1−SH + Hal−Z3、
−COO−Z1−Hal + HS−Z3、
−COO−Z1−CO−Za−Hal + HS−Z3、
−COO−Z1−CO−Za−SH + Hal−Z3、
−COO−Z1−O−CO−CH=CH2 + HS−Z3、
−COO−Z1−NRb−CO−C(CH3)=CH2 + HS−Z3、および
−COO−Z1−SH + HS−Z3、
(式中、Z1、Z2、Z3、Rb、RcおよびZaは本明細書で既に定義したとおりであり、Halは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素から選択されるハロゲン原子を表す)。
反応様式としては、脱ハロゲン化水素反応、縮合反応、脱水反応、マイケル付加等の求核付加反応、酸化的なジスルフィド形成反応等が挙げられ、これらは周知な反応であり、当業者が適宜選択し、好ましい反応条件を見出して行うことができる。変換体または反応物がカルボキシ基を有する場合は、N−ヒドロキシコハク酸イミド(以下、「NHS」とも称す)エステルとし、反応させてもよい。
上記反応において用いられる保護基の具体例は、例えばT.W.Greene,P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Third Edition,John Wiley & Sons,Inc.,New York,1999に記載されている。
ヒドロキシの保護基の例としては、(C1−6アルキル)カルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、(C1−6アルコキシ)カルボニル、(C1−6アルコキシ)C1−6アルキル、(C1−6アルキル)アミノカルボニル、ジ(C1−6アルキル)アミノカルボニル、アリール(C1−6アルキル)、ヘテロアリール(C1−6アルキル)、(アリール(C1−6アルキル))アミノカルボニル、C1−6アルキル、C1−6アルキルスルホニル、((アミノC1−6アルキル)カルボニルオキシ)C1−6アルキル、不飽和ヘテロ環カルボニルオキシC1−6アルキル、アリールジ(C1−6アルキル)シリル、トリ(C1−6アルキル)シリルなどが挙げられる。好ましいヒドロキシの保護基としては、アセチルなどが挙げられる。
−NH−またはアミノの保護基の例には、(C1−6アルキル)カルボニル、アリール(C1−6アルキル)カルボニル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、(C1−6アルコキシ)カルボニル、(C1−6アルキル)アミノカルボニル、ジ(C1−6アルキル)アミノカルボニル、アリール(C1−6アルキル)、ヘテロアリール(C1−6アルキル)、(アリール(C1−6アルキル))アミノカルボニルなどが含まれる。好ましいアミノの保護基としては、アセチル、t−ブトキシカルボニル、9−フルオレニルメトキシカルボニルなどが挙げられる。また、アミノは保護されることにより、フタル酸イミド、コハク酸イミド、グルタル酸イミド、1−ピロリルなどの飽和または不飽和ヘテロ環基を形成していてもよい。
メルカプトは、例えば、エチルチオおよびt−ブチルチオ等のC1−6アルキルチオ、2−ニトロフェニルチオおよび2−カルボキシフェニルチオ等の置換フェニルチオ、ならびに2−ピリジルチオ等のヘテロアリールチオに変換することにより保護することができる。好ましい例は、2−ピリジルチオである。
カルボキシは、例えば、メチルエステル、エチルエステル、t−ブチルエステル、アリルエステル、フェニルエステル、ベンジルエステル、メチルチオエステル、エチルチオエステルに変換することにより保護することができる。好ましい例はエチルエステルである。
工程1、工程2、工程3および工程4はいかなる順番で行われてもよく、また、工程4の有無も問われない。例えば、原料のヒアルロン酸(塩などを含む)、好ましくは、式(IIb)で表される二糖単位のみから構成されるヒアルロン酸を、テトラアルキルアンモニウム塩(例えば、テトラブチルアンモニウム(TBA)塩)にイオン交換し、適当な縮合剤存在下、溶媒中で当該ヒアルロン酸塩と式:HNR6−Z1−Z2(式中、R6、Z1、およびZ2は本明細書で既に定義したとおりである)で表される疎水性基を導入したアミンと反応させ、次いで、適当な縮合剤存在下、溶媒中で、当該反応物と式:HNR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1(式中、R7、R8、n1、A1、およびB1は本明細書に既に定義されたとおりである)で表される化合物と反応させ、次いで、適当な縮合剤存在下、溶媒中で、当該反応物と式:HNR38−PG1(式中、R38およびPG1は本明細書に既に定義されたとおりである)で表される化合物と反応させてもよい。
さらに工程1によりカチオン性の部位を有する基X1を導入した後、基X1の末端に存在するアミノの一部と、(i)式:Hal2−PG2、式:Hal2−CO2−PG2、式:Hal2−C(=O)S−PG2、または式:Hal2−CO−PG2(式中、PG2は本明細書に既に定義されたとおりであり、Hal2はハロゲン原子またはスクシンイミジルオキシを表す)で表される化合物とを、塩基の存在下、反応させることにより、あるいは、(ii)式:HO−CO−PG2で表される化合物(式中、PG2は本明細書に既に定義されたとおりである)とを、縮合剤の存在下、反応させることにより、基X1の一部を、−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3である基X3に変換することもできる。
塩基としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、炭酸カリウムなどが挙げられる。縮合剤としては、DMT−MMをはじめとする上述の各種縮合剤を使用できる。
式:Hal2−PG2で表される化合物は、式:HO−PG2で表される化合物を、PPh3の存在下、溶媒中で、CCl4,CBr4等の四ハロゲン化炭素と反応させることで、得ることができる。溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルアセトアミド(DMAc)、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン(DMI)、スルホラン(SF)、N−メチルピロリドン(NMP)、ジオキサン(例えば1,4−ジオキサン)、アセトニトリル、テトラヒドロフラン(THF)、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
式:Hal2−CO2−PG2または式:Hal2−C(=O)S−PG2で表される化合物は、式:HO−PG2または式HS−PG2で表される化合物を、塩基存在下、溶媒中で、ホスゲン、クロロギ酸エステル、カルボニルジイミダゾール等を反応させることで得ることができる。塩基としては、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、炭酸カリウム等が挙げられ、溶媒としては、例えば、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルアセトアミド(DMAc)、1,3−ジメチル−2−イミダゾリジノン(DMI)、スルホラン(SF)、N−メチルピロリドン(NMP)、ジオキサン(例えば1,4−ジオキサン)、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン(THF)、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。さらに、得られた化合物を、塩基存在下、溶媒中で、N−スクシンイミドと反応させることで、Hal2がスクシンイミジルオキシである式:Hal2−CO2−PG2または式:Hal2−C(=O)S−PG2で表される化合物を得ることができる。この工程で用いられる塩基としては、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン等が挙げられ、溶媒としては、例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン等が挙げられる。
Hal2−CO−PG2で表される化合物は、式:HO−CO−PG2で表される化合物を、溶媒中で、PCl3、PBr3、SOCl2、(COCl)2等のハロゲン化剤と反応させることで得ることができる。溶媒としては、例えば、ジオキサン(例えば1,4−ジオキサン)、アセトニトリル、テトラヒドロフラン(THF)、ジクロロメタン、クロロホルム、ヘキサン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、およびこれらの混合溶媒を挙げることができる。
式:HNR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1で表される化合物としては、例えば以下の式
なお、式(b’)および(k’)で表される化合物は、その大部分が式(b)および(k)で表される基として原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシに導入されるが、一部は、グアニジノ中のアミノが原料のヒアルロン酸またはその誘導体のカルボキシと結合し、下記式で表される基として導入される場合がある。
式:HNR6−Z1−Z2で表される化合物としては、例えば以下の式
式:HNRb−Z3、で表される化合物としては、例えば以下の式
式:HNR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2で表される化合物としては、例えば以下の式
式:Hal−Z3で表される化合物としては、例えば以下の式
式:Hal−Z1−Z2で表される化合物としては、例えば以下の式
さらに、式:Hal−Z1−Z2、Hal−Z0−Z1−Z2およびHal−Z0−Z2で表される化合物として、例えば以下の式
式:HO−Z1−Z2で表される化合物としては、例えば以下の式
さらに、式:HO−Z1−Z2、HO−Z0−Z1−Z2およびHO−Z0−Z2で表される化合物として、例えば以下の式
式:HNR38−PG1で表される化合物としては、例えば以下の式:
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ga’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (gb’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (gc’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (gd’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ge’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (gf’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (gg’)
また、アミノの反応性を向上させた、式(Ybb’)で表される化合物を、HNR38−PG1で表される化合物に代えて使用することもできる:
式:Hal−PG1で表される化合物としては、例えば以下の式:
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ia’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ib’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (ic’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (id’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ie’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (if’)
Br−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ig’)
I−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ih’)
Br−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (ii’)
Br−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (ij’)
F−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ik’)
I−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (il’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (im’)
で表される化合物などが挙げられる。
式:HO−PG1で表される化合物としては、例えば以下の式:
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ja’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (jb’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (jc’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (jd’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (je’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (jf’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (jg’)
また、ヒドロキシの反応性を向上させた、式(Yaa’)および(Yab’)で表される化合物を、HO−PG1で表される化合物で表される化合物に代えて使用することもできる:
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ka’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (kb’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (kc’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (kd’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ke’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (kf’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (kg’)
で表される化合物などが挙げられ、好ましくは、式(kb’)で表される化合物である。
式:HO−PG2で表される化合物としては、式(ja’)、(jb’)、(jc’)、(jd’)、(je’)、(jf’)で表される化合物などが挙げられる。
式:HS−PG2で表される化合物としては、式(ka’)、(kb’)、(kc’)、(kd’)、(ke’)、(kf’)で表される化合物などが挙げられる。
HO−CO−PG2で表される化合物としては、例えば以下の式:
式:HNR17−R18で表される化合物としては、例えば以下の式:
ヒアルロン酸のカルボキシに導入される置換基の種類が複数のときは、それらの置換基は、同時導入しても、順次に導入してもよい。
本発明のさらに別の側面によれば、本明細書に定義したヒアルロン酸誘導体であって、水中で会合により微粒子を形成することを特徴とする前記ヒアルロン酸誘導体が提供される。特に限定はされないが、導入された基−O−Z3、−O−Z1−Z2、−NR6−Z1−Z2および−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2、または、−O−Z3、−O−Z1−Z2、−O−Z0−Z1−Z2、−O−Z0−Z2、−NR6−Z1−Z2および−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2の疎水性相互作用により水中において自発的会合が起こり、ナノスケールの微粒子を形成するという特性を有する。望まれるドラッグデリバリーシステムの構築のために、本発明のヒアルロン酸誘導体により形成されるナノ微粒子は非常に有力な手段の一つであり、形成される疎水ドメインに活性成分であるタンパク質、ペプチド、低分子化合物を保持したまま目的の部位に送達するカプセルとして使用することができる。また、薬物を本発明のヒアルロン酸誘導体に共有結合させてコンジュゲートとすることにより目的の部位に薬物を送達することができる。
ナノスケールの微粒子は、経粘膜投与、皮下投与、経皮投与、静脈内投与が可能であり、封入(複合化)した薬物の粘膜透過、組織透過、薬物徐放、また、標的臓器および細胞へ薬物を選択的にデリバリーさせる、ターゲティング用の担体として使用できる。ターゲティング用の担体として使用する場合、ターゲット素子を加えることにより各臓器および細胞へターゲティングすることもできる。ターゲット素子としては、例えば、標的組織特異的なペプチド、抗体、断片化抗体、アプタマー、がん細胞に対するRGDペプチド、葉酸、アニサミド、トランスフェリン、肝臓に対するガラクトース、トコフェロールなどがある。血中での薬物の保持を強固にするために、さらにヒアルロン酸誘導体を化学架橋させることもできる。
ヒアルロン酸誘導体による微粒子は、水溶液中で自己会合により形成するので、固体のヒアルロン酸誘導体を水または塩水溶液に溶解することによって形成することができる。また、別の方法では、他の溶媒(例えばDMSO)に溶解させたあと、水、または塩水溶液に置換することによっても微粒子を形成することができる。形成した微粒子のサイズを均一化するために超音波処理を行ってもよい。
ヒアルロン酸誘導体の疎水性基導入率が高くなるに従って、水への溶解性が減少する。そのため水溶液中で分散性の微粒子を形成させるためには、疎水性基の導入率は80%以下であり、導入率が60%以下になるように調製されたヒアルロン酸誘導体を用いることが好ましい。
本発明のヒアルロン酸誘導体は疎水性基を有するため、系中のイオン強度が高いほど、溶解性が低くなる。したがって、疎水性基の導入率をコントロールすることにより、低塩濃度下あるいは無塩条件下では溶解し、生理食塩濃度にて凝集・沈殿するヒアルロン酸誘導体の調製が可能であり、これは、皮下および局所での徐放製剤の基材となり得る。また、生理塩濃度下においても安定な微粒子を形成する程度の疎水性基を導入したヒアルロン酸誘導体は、全身投与型の薬物担体となり得る。
本発明のヒアルロン酸誘導体を用いて、PLGAや脂質といった添加剤、薬物の結晶粒子、アモルファス粒子と複合化させて新たな粒子を形成させることも可能である。
本発明のヒアルロン酸誘導体は、医薬組成物における薬物担体として使用することができ、本発明のヒアルロン酸誘導体と薬物とを含む、医薬組成物を提供することができる。また、本発明のヒアルロン酸誘導体そのものを有効成分として含む、医薬組成物を提供することもできる。これらの医薬組成物中に含まれる本発明のヒアルロン酸誘導体は、(1)〜(14)に記載のヒアルロン酸誘導体である。本発明のヒアルロン酸誘導体は、水溶液中で自発的に薬物と複合体を形成できるため、特別な操作を必要とせず、当該ヒアルロン酸誘導体と薬物を水溶液中で混合し、インキュベートすることにより、担体−薬物の複合体を容易に形成させ、薬物を担持できる。複合体形成の駆動力は、主にヒアルロン酸誘導体の疎水性基と薬物との疎水性相互作用であるが、薬物が塩基性または酸性の場合、ヒアルロン酸誘導体のカルボン酸またはカチオン性基との静電的相互作用が寄与する場合がある。生体塩濃度では、静電的相互作用は弱く、疎水性相互作用は強くなるため、主に疎水性相互作用により複合体が形成すると考えられる。
上記式(Ib)において、Z1がアルキレンの場合、アルキレンの炭素鎖が長いほど、当該基の疎水性が高くなり、強い疎水性相互作用により強固な微粒子を形成することができる。また、アルキレンが長いほど分子間での絡み合いが大きくなり、粘度を上昇させることができる。さらに、アルキレンの長さを変更することで、微粒子のサイズを制御することもできる。
疎水性基中のリンカー(スペーサー)部分がエステルまたはカーボネートである場合(例えば、X2に、−COO−Z3または−O−COO−Z3が含まれる場合)、生体内においてエステルまたはカーボネートが分解し、ヒアルロン酸誘導体の疎水性が低下することによってさらに生分解性が高まり、安全性の面から好ましい。また、腫瘍組織周辺ではpHが低下していることが知られており、このようなスペーサーを有している場合、目的薬物を担持した本発明のヒアルロン酸誘導体の会合体は腫瘍周辺にて崩壊し、薬物を腫瘍周辺で放出することができる。
特に、−O−CO−CH2−CH2−S−のようなβチオカルボン酸エステル構造を有するリンカーの場合、わずかなpHの低下(pH6程度)においても分解が促進される。このため、通常のエステルよりもpH応答がシャープである。また、細胞内への薬物の送達を目指す場合、エンドソームにおけるpH低下にも応答し、細胞に取り込まれた後にのみ薬物を放出させることができる。
リンカー(スペーサー)部分がジスルフィド結合を有する場合(例えば、X2に、−S−S−Z3が含まれる場合)、還元条件下においてリンカーが分解し、ヒアルロン誘導体の疎水性が低下することによって本発明のヒアルロン酸誘導体の会合体が崩壊する。細胞質は還元環境であることが知られているため、このリンカーを用いたヒアルロン酸誘導体に薬物を封入し、投与することによって、組織中および血中では薬物を放出せず、細胞質内でのみ薬物を放出させることができる。
担体−薬物複合体を形成するときの、溶媒、塩濃度、pH、温度、時間、変性剤の添加などの条件は、用いる薬物により適宜変更することができる。例えば、薬物封入時の塩濃度やpHによって、ヒアルロン酸誘導体は密度が変わるとともに、薬物もその電離状態などが変動する。使用する変性剤の例としては、尿素、塩酸グアニジン、ドデシル硫酸ナトリウムなどが挙げられる。変性剤を添加した場合は、複合体形成後に、過剰の水などで洗浄することにより余剰の変性剤を除去することができる。
特に限定されないが、例えば、本発明のヒアルロン酸誘導体とタンパク質の複合体を形成する場合、その等電点付近で複合体形成を行うことにより、ヒアルロン酸誘導体とタンパク質の静電反発を抑制することが可能なため、複合体に含まれるタンパク質の量を増加させることができる。また、ヒアルロン酸誘導体のカルボキシのpKa(およそ4.0)以下の条件で複合体形成工程を行うことにより、ヒアルロン酸誘導体が有する負電荷を弱めることができるので、タンパク質が当該条件下で負電荷に帯電している場合には静電反発を抑制することが可能であり、複合体に含まれるタンパク質の量を増加させることができる。さらに、例えば生体内よりも低い塩濃度において複合体形成工程を行うことにより、水溶液中で形成されるヒアルロン酸誘導体の微粒子の密度が低下するため、複合体に含まれるタンパク質の量を増加させることができる。また、その状態で塩濃度を上げることにより微粒子の密度を向上させ、強固にタンパク質を封入することができる。
ヒアルロン酸誘導体とタンパク質との複合体形成は、タンパク質の分子量にも影響され得る。一般に、タンパク質が低分子量であるほど、当該タンパク質のヒアルロン酸誘導体の微粒子内部へ移行速度は高い。また、疎水性基の導入率に依存する微粒子の密度も、タンパク質との複合体形成の速度、および複合体に含まれるタンパク質の量に影響を与えうる。
ヒアルロン酸誘導体と核酸との複合体形成は、核酸の分子量や疎水性にも影響され得る。一般に二本鎖核酸よりも一本鎖核酸のほうが容易にヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する。また、siRNAのような低分子二本鎖核酸よりもプラスミドのような高分子量二本鎖核酸のほうが容易にヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する。
ヒアルロン酸誘導体と薬物の複合体からの生体内における薬物放出は、複合体からの薬物の拡散に加えて、生体成分が薬物と置換することにより促進される。微粒子の密度を増減させて、この拡散や置換を制御することにより、薬物の徐放性を制御することが可能となる。
生体内には血漿タンパク質や脂質などの生体成分が存在し、ヒアルロン酸誘導体と薬物の複合体を皮下や血中などの生体内に投与した場合、この生体成分が複合体内の薬物と置換することにより薬物が放出される場合がある。当該置換を生じさせる主な生体内タンパク質としてアルブミンが想定される。
本発明のヒアルロン酸誘導体を薬物担体として使用する方法としては、前述の水溶性液中で自発的に薬物と複合体を形成させる方法の他、薬物と本発明のヒアルロン酸誘導体とを共有結合などにより結合させたコンジュゲートにする方法を挙げることもできる。すなわち、本発明の別の側面において、式(Ia)で表される二糖単位および式(Ib)で表される二糖単位を含むヒアルロン酸誘導体に、上記薬物の1以上が結合した、ヒアルロン酸誘導体−薬物コンジュゲートが提供される。この側面の1つの態様において、ヒアルロン酸誘導体として、(1)式(Ia)、式(Ib)および式(Ic)、(2)式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)および式(II)、(3)式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)および式(III)、ならびに、(4)式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(II)、および式(III)で表される1以上の二糖単位をそれぞれ含むヒアルロン酸誘導体を用いることができる。
本発明のヒアルロン酸誘導体の主鎖の末端に存在するグルクロン酸4位およびアセチルグルコサミン1位のヒドロキシは、別の基に変換されていてもよく、例えば、C1−6アルコキシ、ホルミルオキシ、(C1−6アルキル)カルボニルオキシなどであってもよい。
本発明のヒアルロン酸誘導体と薬物とからなるコンジュゲートの調製方法は、既知のポリマーと薬物とのコンジュゲートの調製で使用されている方法を用いることができ、例えば、以下の反応を利用することができる。
ヒアルロン酸誘導体のグルクロン酸部分のカルボキシと、薬物のアミノ、ヒドロキシ、ヨード、ブロモ、または、薬物に導入したアミノ、ヒドロキシ、ブロモ、ヨードとの反応;
ヒアルロン酸誘導体のN−アセチルグルコサミン部分の6位のヒドロキシと、薬物のカルボキシまたは薬物に導入したカルボキシとの反応;
ヒアルロン酸誘導体に導入したアミノと、薬物のカルボキシまたは薬物に導入したカルボキシとの反応;
ヒアルロン酸誘導体に導入したアミノと、修飾によりイソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、NHSエステル、エポキシドなどに変換された薬物との反応;
薬物のアミノまたは薬物に導入したアミノと、修飾によりイソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、カルボニル、NHSエステル、エポキシドなどに変換されたヒアルロン酸誘導体との反応;
ヒアルロン酸誘導体のアミノと、カルボニルを有するまたは導入された薬物(アルデヒドおよびケトンなど)とのシッフ塩基形成および還元的アミノ化反応;
薬物のアミノまたは薬物に導入したアミノと、修飾によりカルボニルが導入されたヒアルロン酸誘導体とのシッフ塩基形成および還元アミノ化反応;
ヒアルロン酸誘導体に導入したメルカプトと、不飽和結合を有する化合物(マレイミド、アクリルエステル、アクリルアミド、メタクリルエステル、メタクリルアミド、アリル化物、ビニルスルホンなど)、ハロゲン化物(クロロ酢酸エステル、ブロモ酢酸エステル、ヨード酢酸エステル、クロロ酢酸アミド、ブロモ酢酸アミド、ヨード酢酸アミドなど)、またはチオールである薬物または修飾により当該化合物に変換された薬物との反応;および
薬物に導入したメルカプトと、修飾により、不飽和結合を有する化合物(マレイミド、アクリルエステル、アクリルアミド、メタクリルエステル、メタクリルアミド、アリル化物、ビニルスルホンなど)、ハロゲン化物(クロロ酢酸エステル、ブロモ酢酸エステル、ヨード酢酸エステル、クロロ酢酸アミド、ブロモ酢酸アミド、ヨード酢酸アミドなど)、またはチオールに変換されたヒアルロン酸誘導体との反応。
さらに、前述の疎水性基をヒアルロン酸誘導体に導入する際に用いたエステルまたはカーボネート、βチオエステル、ジスルフィド、特定の部位で切断するペプチドを含むリンカー(スペーサー)を、薬物とのコンジュゲート用のリンカーとして使用することもできる。これらのリンカーは前述の通り、標的部位において切断され、薬物が放出される。
コンジュゲートの調製のためにヒアルロン酸誘導体または薬物の修飾に使用する試薬は、コンジュゲートの調製において不都合な反応を生じさせないものであれば、特に限定されない。該化合物は試薬として入手可能であるか、または文献公知の方法を参考にして合成してもよい。
具体的には、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらにアミノを有する薬物またはアミノを導入した薬物をDMT−MMなどの縮合剤を用いて反応させ、アミド結合により薬物をコンジュゲートすることができる。この際、薬物と疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を同時に導入してもよい。また、薬物の後もしくは前に当該化合物を加えてもよい。また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に薬物を反応させても、薬物を導入したヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入してもよい。
また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらにヒドロキシを有する薬物またはヒドロキシを導入した薬物をDMT−MM、1,3−ジクロロヘキシルカルボジイミト゛(DCC)などの縮合剤を用いて反応させ、エステル結合によりヒアルロン酸誘導体に薬物をコンジュゲートすることができる。この際、薬物と疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を同時に導入してもよい。また、薬物の後もしくは前に当該化合物を加えてもよい。しかし、エステル、アミドなどの加水分解を回避するためには、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入後、薬物をコンジュゲートすることが望ましい。上記の方法は、例えば、パクリタキセルがヒアルロン酸にエステルで導入された報告(Bioconjugate 第19巻、第1319−1325項、2008年)などを参考にして行うことができる。
また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらに臭化物もしくはヨウ化物である薬物または、修飾により臭化物もしくはヨウ化物に変換された薬物を反応させ、ヒアルロン酸誘導体のカルボキシをエステルに変換することにより薬物をコンジュゲートすることができる。エステル、アミドなどの加水分解を回避するためには、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入後、薬物をコンジュゲートすることが望ましい。
本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、さらにカルボキシを有する薬物またはカルボキシを導入した薬物をNHSエステルとし、N−アセチルグルコサミン部分の6位のヒドロキシと反応させ、エステル結合により薬物をコンジュゲートすることができる。この際、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基をヒアルロン酸に導入した後に薬物を加えても、導入の前に加えてもよい。また、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に薬物を反応させても、薬物を導入したヒアルロン酸誘導体を合成・精製後に疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入してもよい。エステル結合、アミド結合などの加水分解を回避するためには、疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基を導入後、薬物をコンジュゲートすることが望ましい。上記の方法は、例えば、カンプトテシンがヒアルロン酸にエステルで導入された報告(国際公開第WO2009/074678号)などを参考にして行うことができる。
1つの態様において、本発明のヒアルロン酸誘導体を合成後、グルクロン酸部分のカルボキシをエチレンジアミンなどのジアミンと脱水縮合させ、アミノを導入することができる。エチレンジアミンなどのジアミンは、カチオン性基を導入するための式:HNR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1で表される化合物の一部を利用してもよく、また、薬物をコンジュゲートするためのエチレンジアミンなどのジアミンの一部を、式:HNR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1で表される化合物として利用してもよい。さらに、N−スクシンイミジル ヨードアセテート(PIERCE社)やN−スクシンイミジル [4−ヨードアセチル]アミノベンゾエート(PIERCE社)をアミノに反応させ、ヨードアセチルが導入されたヒアルロン酸誘導体を合成することができる。このヒアルロン酸誘導体に対して、メルカプトを有する薬物を、コンジュゲートすることができる。この方法はタンパク質、ペプチド、核酸などのアミノなどの反応性基を多く含む高分子薬物においてもメルカプト選択的にコンジュゲートできるため特に有効である。この際、薬物の導入は疎水性基、カチオン性基、親水性基などの導入基をヒアルロン酸に導入する前でも後でもよい。
本発明のヒアルロン酸誘導体を合成し、ここで、ヒアルロン酸誘導体のグルクロン酸部分のカルボキシの一部を2−アミノエチル 2−ピリジル ジスルフィド塩酸塩と反応させる。このヒアルロン酸誘導体に対してメルカプトを有する薬物およびメルカプトを導入した薬物をジスルフィド結合交換反応、すなわち置換反応により導入することが可能である。
ここで、当該コンジュゲートの生物活性を有効に保つために、薬物とヒアルロン酸誘導体間のリンカーの長さを調節することもできる。また、生体内の特定部位にて酵素等で切断されるペプチドリンカーを導入することもできる。例えば、メトトレキセートがHAにペプチドを含むリンカーを介して導入された報告(国際公開第WO2005/095464号)、ドキソルビシンがHPMA(N−(2−ヒドロキシプロピル)メタクリルアミド)およびペプチドを含むリンカーを介して導入された報告(国際公開第WO2002/090209号)などを参考にして行うことができる。
また、抗体に低分子化合物をコンジュゲートさせたADC(抗体薬物コンジュゲート)に関する報告(国際公開第WO2009/026274号;Expert Opinion.第15巻、第1087−1103頁、2005年;Bioconjugate Chem.第19巻、第1960−1963頁、2008年;Bioconjugate Chem.in press、Bernhard Stumpら、Antibody−Drug Conjugates:Linking Cytotoxic Payloads to Monoclonal Antibodies)が多数あり、これらを参考にして、ヒアルロン酸誘導体と低分子化合物とのコンジュゲートを調製することもできる。
本発明のヒアルロン酸誘導体と1以上の薬物とを含む医薬組成物、本発明のヒアルロン酸誘導体と1以上の薬物との複合体または本発明のヒアルロン酸誘導体と1以上の薬物とが結合したコンジュゲートは、ナノ微粒子、ミクロ微粒子、溶液、カプセル、錠剤、散剤、パッチ、エマルジョン、懸濁液、ゲル、ミセル、インプラント、粉末、またはフィルムの形態にあってよい。粉末は、凍結乾燥または噴霧乾燥により得た固体を粉砕して製造してもよく、沈殿物を乾燥したものから製造してもよい。
本発明の医薬組成物において、薬物は、ヒアルロン酸誘導体中に封入されていても、ヒアルロン酸誘導体に接着していても、ヒアルロン酸誘導体で被覆されていても、ヒアルロン酸誘導体と混合または混和されていてもよい。さらに、例えば口内炎の予防又は治療に使用する場合、ヒアルロン酸誘導体自体が薬物として、他の薬物を含んで又は含まずして、本発明の医薬組成物中に含まれていてもよい。
本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、経口、腸管外、鼻腔内、肺腔内、気管、気管支、膣内、直腸内、眼内、点眼、結膜下、テノン嚢下、耳内、皮下、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、関節腔内、脳内または口腔内の経路を経て投与されてよいが、いずれの経路においても、粘膜を経由または透過させて投与されるのが好ましい。
本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、特に粘膜透過性を高めることを目的とした場合は、その溶解状態でのサイズは1μm以下であることが好ましく、500nm以下であることが好ましく、300nm、200nm、100nm、50nm以下であることが好ましい。
本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、粘膜付着性、もしくは徐放性を高めることを目的とした場合、その溶解状態でのサイズは200μm以下であることが好ましい。粘膜付着性の観点からは、用いるヒアルロン酸誘導体のカチオン性基導入率は高い方が好ましい。
本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、注射投与による特定組織、器官への集積性を目的とする場合、そのサイズは500nm以下であることが好ましく、さらに好ましくは200nm以下、さらに100nm以下であることが好ましい
本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、特にCD44をはじめとするヒアルロン酸レセプターへのターゲティングを目的とした場合、そのサイズは5μm以下であることが好ましい。
本発明のヒアルロン酸誘導体と複合体を形成する薬物は、複合化可能な薬物であれば特に限定されない。また、本発明のヒアルロン酸誘導体と結合させる薬物は、コンジュゲートが調製可能であれば特に限定されない。当該薬物の例としては、タンパク質および/またはペプチド、多糖類、核酸類、低分子化合物などが挙げられ、好ましくは、タンパク質および/またはペプチド、低分子化合物が挙げられる。
低分子化合物の例としては、限定されるわけではないが、例えば、制癌剤(例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、パクリタキセル等のアルカロイドなど)、シクロスポリンなどの免疫抑制剤、抗炎症剤(ステロイド剤、非ステロイド剤系抗炎症剤など)、抗リウマチ剤、抗菌剤(β−ラクタム系抗生物質、アミノグリコシド系抗生物質、マクロライド系抗生物質、テトラサイクリン系抗生物質、新キノロン系抗生物質、サルファ剤など)などを挙げることができる。
タンパク質およびペプチドの例としては、限定されるわけではないが、例えば、エリスロポエチン(EPO)、グラニュロサイトコロニー刺激因子(G−CSF)、インターフェロン−α、β、γ、(INF−α、β、γ)、トロンボポエチン(TPO)、シリアリーニュートロフィクファクター(CNTF)、チューマーネクローシスファクター(TNF)、チューマーネクローシスファクター結合タンパク質(TNFbp)、インターロイキン−10(IL−10)、FMS類似チロシンカイネース(Flt−3)、成長ホルモン(GH)、インシュリン、インシュリン類似成長因子−1(IGF−1)、血小板由来成長因子(PDGF)、インターロイキン−1レセプターアンタゴニスト(IL−1ra)、ブレイン由来ニューロトロフィクファクター(BDNF)、ケラチノサイト成長因子(KGF)、幹細胞因子(SCF)、メガカリオサイト成長分化因子(MGDF)、オステオプロテゲリン(OPG)、レプチン、副甲状腺ホルモン(PTH)、塩基性フィブロブラスト成長因子(b−FGF)、骨形成タンパク質(BMP)、心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)、脳性ナトリウム利尿ペプチド(BNP)、C型ナトリウム利尿ペプチド(CNP)、グルカゴン様ペプチド−1(GLP−1)、抗体、ダイアボディー、ミニボディー、断片化抗体などを挙げることができる。
核酸類の例としては、限定されるわけではないが、例えば、DNA、RNA、アンチセンス、デコイ、リボザイム、低分子干渉RNA、RNAアプタマー、メッセンジャーRNAなどを挙げることができる。また、また、ホスホロチオエート、メトキシメチル体およびLNA等の、前記核酸類を化学的に処理した核酸誘導体などを挙げることもできる。
薬物が低分子干渉RNAを含む核酸類である場合、本発明のヒアルロン酸誘導体を低分子干渉RNAなどの核酸類と複合化することで、核酸類を、標的とする細胞内に送達させることができる。
核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、カチオン性の部位を有する基X1の好ましい具体例としては、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(m)、(s)、(t)、(u)、(y)、(z)および(ah)で表される基、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(m)、(s)、(t)、(y)、(z)および(ah)で表される基、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(m)および(s)で表される基、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(f)、(l)、(m)および(s)で表される基、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(l)、(m)および(s)で表される基、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(l)および(m)で表される基、さらに好ましくは、式(b)、(c)および(m)で表される基が挙げられる。カチオン性の部位を有する基X1の別の好ましい具体例としては、式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(ai)、(aj)、(ak)、(al)および(am)で表される基が挙げられる。核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、ポリエチレングリコールを含む親水性の部位を有する基X3の好ましい具体例としては、式(ga)、(gb)、(ja)、(jb)、(kb)および(ka)で表される基が挙げられる。
核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、X1の導入率は、好ましくは4〜85%、さらに好ましくは6〜78%である。疎水性の部位を有する基X2の導入率は、好ましくは10〜60%であり、さらに好ましくは14〜48%である。親水性の部位を有する基X3の導入率は、好ましくは1〜50%であり、さらに好ましくは1〜40%であり、さらに好ましくは1〜30%であり、さらに好ましくは1〜20%であり、さらに好ましくは1〜15%であり、さらに好ましくは5〜15%である。X1のカチオン性を制御する観点では、X3の導入率は、0.0001〜10%が好ましく、さらに好ましくは0.001〜5%であり、さらに好ましくは0.01〜1%である。なお、例えばX3の導入率が低い場合、ヒアルロン酸誘導体のすべての分子中にX3が導入されるとは限らない。本発明の1つの態様において、ヒアルロン酸誘導体の中に、X1、X2およびX3のすべてが導入されているヒアルロン酸誘導体の分子が1以上存在している。
核酸類と複合体を形成するヒアルロン酸誘導体において、X1の導入率、X2の導入率およびX3の導入率の組み合わせ(X1の導入率:X2の導入率:X3の導入率)は、X1が式(b)で表される基である時、好ましくは(5〜85%:10〜55%:0.001〜50%)であり、さらに好ましくは(11〜74%:17〜47%:0.001〜15%)である。X1が式(c)で表される基である時は、好ましくは(10〜45%:15〜65%:0.001〜50%)であり、さらに好ましくは(19〜31%:29〜48%:0.001〜15%)である。X1が式(m)で表される基である時は、好ましくは(5〜65%:10〜50%:0.001〜50%)であり、さらに好ましくは(6〜52%:14〜17%:0.001〜15%)である。なお、X1の導入率、X2の導入率およびX3の導入率の和の上限は、100%である。下限は7%以上であればよい。 本発明のヒアルロン酸誘導体、ヒアルロン酸誘導体と薬物との複合体、またはヒアルロン酸誘導体−薬物コンジュゲートは、1種もしくはそれ以上の薬学的に許容し得る希釈剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定剤、界面活性剤、脂質、基材などを含む医薬組成物として、目的とする投与経路に応じ、適当な任意の形態にして投与することができる。投与経路は非経口的経路であっても経口的経路であってもよい。
本発明の医薬組成物は、スプレー、ドライパウダーインヘーラー、滴下、イオントフォレーシス、エレクトロポレーション、ソノフォレーシス(超音波)などのデバイスを用いる経粘膜または経皮投与方法や、マイクロカニューレ、マイクロニードル、無針注射、研磨などによる経粘膜または経皮投与方法により、投与できる。錠剤やタブレットによる経口投与、経膣投与、直腸投与もできる。注射器を用いた投与も可能である。クリームや軟膏、シップ剤も可能である。
本発明により、従来の医薬組成物では見られない、薬物を粘膜へ接着させ透過させて標的部位に到達させることが可能であり、薬物を長期間徐放することが可能であり、および/または、適切な生分解性を有する、安全性の高い医薬組成物を提供することが可能である。
以下の記載中のHAユニットとは、ヒアルロン酸(HA)中のN−アセチルグルコサミン−グルクロン酸の繰り返し単位(1ユニット)を意味する。1H−NMRスペクトルの測定には、日本電子製JNM−ECX500IIを用いた。透析には再生セルロース製透析膜(スペクトラム社製、分子量50kDaおよび99kDaのヒアルロン酸ナトリウム塩を出発原料とする時はスペクトラポア4:分画分子量12k〜14kDa、分子量10kDaのヒアルロン酸ナトリウム塩を出発原料とする時はスペクトラポア3:分画分子量3.5kDa、スペクトラポア7:分画分子量1kDaもしくは2kDa)を用いた。
〔実施例1〕コレステリル 6−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の合成およびHAのTBA塩の調製
(実施例1−1)コレステリル 6−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の調製
WO2014/038641記載の方法に準じてコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメート(Chol−C6)塩酸塩を合成した。
(実施例1−2)HAのTBA塩の調製
分子量10kDa、50kDaおよび99kDaのヒアルロン酸ナトリウム塩(HA−Na、資生堂製もしくはコンティプロ社製)を原料として用い、WO2014/038641記載の方法に準じてHAのTBA塩を調製した。
〔実施例2〕HA誘導体の合成
(実施例2−1)L−アルギニンアミド(H−ArgNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/ArgNH 2 )の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩および4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリニウムクロリド(DMT−MM)をHAユニットに対して以下の表1に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表1に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表1に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、ArgNH2の導入率が31%の生成物)を図1に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表1)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたArgNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとArgNH2中のメチン由来のピーク(−NH−CH(CONH2)CH2−、4.2ppm;1H)の積分値を1/1したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(4.2ppm)×1/1)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表2に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表2に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表2に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、EDAの導入率が37%の生成物)を図2に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表2)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表3に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、ジエチレントリアミン(東京化成工業製)およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム(PyBOP、和光純薬工業製)をHAユニットに対して以下の表3に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DET)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表3に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)またはD2Oを用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が15%、DETの導入率69%の生成物)をそれぞれ図3−1、図3−2に示す。0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液でのNMRスペクトルにおいて、HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表3)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
(実施例2−4)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )およびコレステリル6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/LysNH 2 )の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表4に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表4に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表4に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が16%、LysNH2の導入率が36%の生成物)を図4に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表4)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたLysNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとLysNH2中のメチレン由来のピーク(−CH2−、2.8ppm;2H)の積分値を1/2したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(2.8ppm)×1/2)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表5に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表5に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表5に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表5に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が38%、ArgNH2の導入率が22%、Meの導入率が17%の生成物)を図5に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表5)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたArgNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとArgNH2中のメチン由来のピーク(−NH−CH(CONH2)CH2−、4.2ppm;1H)の積分値を1/1したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(4.2ppm)×1/1)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表6に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表6に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表6に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/EDA/Me)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表6に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が33%、EDAの導入率が30%、Meの導入率が10%の生成物)を図6に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表6)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表7に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表7に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、ジエチレントリアミン(東京化成工業製)およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム(PyBOP、和光純薬工業製)をHAユニットに対して以下の表7に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DET/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表7に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)またはD2Oを用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、DETの導入率が29%、Meの導入率が43%の生成物)をそれぞれ図7−1、図7−2に示す。0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液でのNMRスペクトルにおいて、HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表7)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
(実施例2−8)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )、メチルアミン(MeAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/LysNH 2 /Me)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表8に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表8に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表8に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。
反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/LysNH2/Me)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表8に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が37%、LysNH2の導入率が22%、Meの導入率が11%の生成物)を図8に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表8)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたLysNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとLysNH2中のメチレン由来のピーク(−CH2−、2.8ppm;2H)の積分値を1/2したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(2.8ppm)×1/2)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
HA−TBAの無水DMSO溶液に対して、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩、メチルアミン塩酸塩、Chol−C6塩酸塩の順で添加し合成したこと以外は、実施例2−8と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/LysNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表9に記載した。
実施例2−8と同様にして、コレステリル基導入率、LysNH2導入率、Me導入率を算出した(表9)。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表10に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表10に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、スペルミン(アルドリッチ社製)およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム(PyBOP、和光純薬工業製)をHAユニットに対して以下の表10に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/SPR/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表10に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が27%、SPRの導入率が37%、Meの導入率が16%の生成物)を図9に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表10)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたSPR由来のピーク(6H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとSPR中のメチレン由来のピーク(−CH2−、2.1ppm;2H)の積分値を6/2したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(2.1ppm)×6/2)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表11に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表11に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、3−アミノプロピルトリメチルアザニウムクロライド(UkrOrgSyntez社製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表11に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/PTMA/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表11に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が29%、PTMAの導入率が29%、Meの導入率が31%の生成物)を図10に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表11)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたPTMA由来のピーク(2H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとPTMA中のメチル由来のピーク(−N+−(CH 3 )3、3.1ppm;9H)の積分値を2/9したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(3.1ppm)×2/9)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表12に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表12に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液を透析膜に移し、DMSOで透析した。さらに、WO2014/038641記載の方法に準じて調製したTBA塩化したカチオン交換樹脂をHAユニットのモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で5モル等量添加した。30分間室温撹拌後、遠心し、上澄みを回収した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表12に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表12に記載した。
実施例2−5と同様にして、コレステリル基導入率、ArgNH2導入率、Me導入率を算出した(表12)。
(実施例2−13)L−アルギニンアミド(H−ArgNH 2 )、メチルアミン(MeAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/ArgNH 2 /Me)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表13に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表13に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液を透析膜に移し、DMSOで透析した。さらに、WO2014/038641記載の方法に準じて調製したTBA塩化したカチオン交換樹脂をHAユニットのモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で5モル等量添加した。30分間室温撹拌後、遠心し、上澄みを回収した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表13に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表13に記載した。
実施例2−5と同様にして、コレステリル基導入率、ArgNH2導入率、Me導入率を算出した(表13)。
メチルアミン塩酸塩の代わりにプロパノールアミン塩酸塩を用いたこと以外は、実施例2−13と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/ArgNH2/PrOH)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表14に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトル(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が31%、PrOHの導入率が19%の生成物(中間体)と10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が31%、ArgNH2の導入率が11%、PrOHの導入率が19%の生成物)をそれぞれ図11−1と図11−2に示す。図11−2において、HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表14)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたArgNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとArgNH2中のメチン由来のピーク(−NH−CH(CONH2)CH2−、4.2ppm;1H)の積分値を1/1したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(4.2ppm)×1/1)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/ArgNH2を実施例2−1と同様の方法で合成した(表15)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表15に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/EDAを実施例2−2と同様の方法で合成した(表16)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表16に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/DETを実施例2−3と同様の方法で合成した(表17)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表17に記載した。
(実施例2−18)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/LysNH 2 )の合成
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/LysNH2を実施例2−4と同様の方法で合成した(表18)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表18に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/ArgNH2/Meを実施例2−5と同様の方法で合成した(表19)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表19に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/EDA/Meを実施例2−6と同様の方法で合成した(表20)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表20に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/DET/Meを実施例2−7と同様の方法で合成した(表21)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表21に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/LysNH2/Meを実施例2−8と同様の方法で合成した(表22)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表22に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/SPR/Meを実施例2−10と同様の方法で合成した(表23)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表23に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/PTMA/Meを実施例2−11と同様の方法で合成した(表24)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表24に記載した。
メチルアミン塩酸塩の代わりにエタノールアミン塩酸塩を用いたこと以外は、実施例2−5と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/ArgNH2/EtOH)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表25に記載した。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトル(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が16%、ArgNH2の導入率が16%、EtOH基の導入率が69%の生成物)を図12に示す。図12において、N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表25)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたArgNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとArgNH2中のメチン由来のピーク(4.2ppm;1H)の積分値を1/1したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(4.2ppm)×1/1)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
Chol−C6塩酸塩を加える前に、5−アミノメチルフルオレセイン(FL、インビトロジェン社製)塩酸塩とDMT−MMをHAユニット100に対してそれぞれ2、4モル等量加え、室温で2時間撹拌したこと以外は、実施例2−25と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/ArgNH2/EtOH/FL)を黄色固体として得、導入率を算出した(表26)。得られた黄色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表26に記載した。
〔実施例4〕HA誘導体の合成2
(実施例4−1−1)2,2’−(エチレンジオキシ)ビス(エチルアミン)(EDOBEAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/EDOBEA)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表27に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、2,2’−(エチレンジオキシ)ビス(エチルアミン)(Sigma−Aldrich製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表27に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、2,2’−(エチレンジオキシ)ビス(エチルアミン)およびPyBOPを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてHA−Cholを得た。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/EDOBEA)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表27に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表27に記載した。
以下、溶液状態の観察において、フィルターを通過した試料は水溶性であり、薬物と水中で混合することにより複合化することが簡便にでき、有用である。また、超音波処理を実施し、沈殿が確認されなかったサンプルは水溶性であり、薬物と水中で混合することにより複合化することが簡便にでき、有用である。なお、超音波処理を実施してもなお沈殿が確認されたサンプルについても、DMSOなどの有機溶媒に溶解し、その後、薬物と複合体を形成させ、水溶液に置換した組成物、もしくは投与可能なその他の溶媒で置換した組成物において粘膜透過性等の機能を有する可能性がある。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、EDOBEAの導入率が52%の生成物)を図13−1に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表27)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表28に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、2,2’−オキシビス(エチルアミン)(東京化成工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表28に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、2,2’−オキシビス(エチルアミン)およびPyBOPを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてHA−Cholを得た。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DEG)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表28に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表28に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、DEGの導入率が51%の生成物)を図13−2に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表28)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表29に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、アグマチン二塩酸塩(Ark pharm製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表29に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、アグマチン二塩酸塩およびDMT−MMを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてHA−Cholを得た。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/AGMT)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表29に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表29に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、AGMTの導入率68%の生成物)を図13−3に示す。0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液でのNMRスペクトルにおいて、HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表29)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表30に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、ヒスタミン(ナカライテスク製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表30に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/IMD)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表30に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表30に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が16%、IMDの導入率が367%の生成物)を図13−4に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表30)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表31に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にビス(3−アミノプロピル)アミン(和光純薬工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表31に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DPT)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表31に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表31に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が15%、DPTの導入率が60%の生成物)を図13−5に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表31)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表32に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、トリス(2−アミノエチル)アミン(和光純薬工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表32に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/BAEA)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表32に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表32に記載した。フィルターを通過せず、超音波処理を実施していない試料は(×)と表32に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、BAEAの導入率が63%の生成物)を図13−6に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表32)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表33に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にN,N−ジメチルエチレンジアミン(和光純薬工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表33に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DMA)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表33に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表33に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が17%、DMAの導入率が76%の生成物)を図13−7に示す。0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液でのNMRスペクトルにおいて、HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表33)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表34に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、2−(1−メチルピペリジン−4−イル)エタンアミン(Ark Pharm製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表34に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/MPD)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表34に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表34に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が12%、MPDの導入率が51%の生成物)を図13−8に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表34)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表35に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的中間体(HA−LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いて1H−NMRスペクトルを測定し、HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたLysNH2中のメチレン由来のピーク(−CH2−、2.8ppm;2H)あるいはメチレンおよびメチン由来のピーク(−CH2−CH2−CH−、1.2〜1.7ppm;5H)の積分値より、HAユニットにおけるリジンアミドの導入率(LysNH2導入率)を算出した(表35)。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、LysNH2の導入率が91%、CAの導入率が23%の生成物)を図13−9に示す。LysNH2中のメチレン由来のピーク(−CH2−、2.8ppm;2H)の積分値と、導入されたCA中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するCAの導入率を算出した(表36)。
(実施例5−1)I−C 3 H 6 −OCOO−Chol:10,13−ジメチル−17−(6−メチルヘプタン−2−イル)−2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17−テトラデカヒドロ−1H−シクロペンタ[a]フェナントレン−3−イル (3−ヨードプロピル)カーボネートの合成
(実施例5−2)HA−C 3 H 6 −OCOO−Chol/LysNH 2 の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表37に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌し、DMSOに対して透析した。実施例5−1で調製したI−C3H6−OCOO−CholをHAユニットに対して以下の表37に示す比率で各溶液に添加し、室温で1時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−C3H6−OCOO−Chol/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表37に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が20%、LysNH2の導入率が29%の生成物)を図14−1に示す。実施例2−8と同様にして、コレステリル基導入率、リジンアミド導入率を算出した(表37)。
(実施例5−4)HA−CH 2 −COO−Chol/LysNH 2 の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表38示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌し、DMSOに対して透析した。実施例5−3で調製したI−CH2−COO−CholをHAユニットに対して以下の表38に示す比率で各溶液に添加し、室温で1時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−CH2−COO−Chol/LysNH2)を淡黄色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表38に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が13%、LysNH2の導入率が70%の生成物)を図14−2に示す。実施例2−8と同様にして、コレステリル基導入率、リジンアミド導入率を算出した(表38)。
(実施例11−1)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )およびオクタデシルアミンにより修飾したHA誘導体(HA−C 18 /LysNH 2 )の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。オクタデシルアミン(CH3(CH2)17NH2、シグマアルドリッチ製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で各溶液に添加し、室温で30分間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−C18/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は○と表39に記載した。
測定溶媒として0.02N DCl DMSO−d6/D2O混液(2N DCl D2O:DMSO−d6=1:99)を用いた1H−NMRスペクトルよりオクタデシル導入率およびLysNH2導入率を算出した。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜1.9ppm;3H)の積分値と、導入されたオクタデシル中のメチル由来のピーク(−CH3、0.8ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するオクタデシル導入率を算出した(表39)。
なお、N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜1.9ppm付近のピークには導入されたLysNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜1.9ppm付近のピークの積分値からLysNH2中のメチレン由来のピーク(−CH2−、2.8ppm;2H)の積分値を1/2したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜1.9ppm)−積分値(2.8ppm)×1/2)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
(実施例12−1)HOPEGNH 2 、L−アルギニンアミド(H−ArgNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HOPEGNH−HA−Chol/ArgNH 2 )(並列型)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩および4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリニウムクロリド(DMT−MM)をHAユニットに対して以下の表40に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表40に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表40に示したHOPEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(分子量5000Daまたは5475Da);Iris製、Art−No.:PEG1008)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表40に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/ArgNH2)を白色固体として得た。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が42%、ArgNH2の導入率が16%、5k HOPEGNH基の導入率が0.39%の生成物)を図15−1に示す。HAにおけるN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表40)。N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたArgNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとArgNH2中のメチン由来のピーク(−NH−CH(CONH2)CH2−、4.2ppm;1H)の積分値を1/1したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(4.2ppm)×1/1)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量5000DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=112をnzとした。 分子量5475DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=123をnzとした。
分子量2000DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=44をnzとした。
(実施例12−1a)HOPEGNH 2 、L−アルギニンアミド(H−ArgNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HOPEGNH−HA−Chol/ArgNH 2 )(並列型)の合成(別法)
実施例1−2で合成した、HA−Na(99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩および4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリニウムクロリド(DMT−MM)をHAユニットに対して表40に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、表40に示したHOPEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(分子量5475Da);Iris製、Art−No.:PEG1008)およびDMT−MMをHAユニットに対して表40に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表40に示したL−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して表40に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/ArgNH2)を白色固体として得た。
なお、表40に挙げた目的物(略称)のほか、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、および
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%
を調製することもできる。
(実施例12−2)各種PEGNH 2 、エチレンジアミン(EDAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(各種PEGNH−HA−Chol/EDA)(並列型)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表41に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表41に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次に、表41に示した各種PEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(分子量10000Da)(Iris製、Art−No.:PEG1006)、HOPEGアミン(分子量5000Da)(Aldrich製、カタログNo.:672130)、MeOPEGアミン(分子量5000Da)(Iris製、Art−No.:PEG1154)、MeOPEGアミン(分子量2000Da)(Iris製、Art−No.:PEG1152)、MeOPEGアミン(分子量1000Da)(Iris製、Art−No.:PEG1670)、HOPEGアミン(分子量2000Da)(BroadPharm製、カタログNo.:BP23642)またはHOPEGアミン(分子量1000Da)(Iris製、Art−No.:PEG3740)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表41に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して各種目的物(PEGNH−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
測定溶媒として DMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が40%、EDAの導入率が23%、5k HOPEGNH基の導入率が5%の生成物、および10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が26%、EDAの導入率が9%、1k MeOPEGNH基の導入率が4%の生成物)を、図15−2および図15−3にそれぞれ示す。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量5000DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=112をnzとした。
分子量2000DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=44をnzとした。
分子量1000DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=21をnzとした。
分子量5000DaのMeOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=112をnzとした。
分子量2000DaのMeOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=44をnzとした。
分子量1000DaのMeOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=21をnzとした。
分子量9515DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=215をnzとした。
分子量5516DaのMeOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=124をnzとした。
分子量1074DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=23をnzとした。
分子量5475DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=123をnzとした。
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−30%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、および
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%
を調製することもできる。
(実施例12−3)HOPEGNH 2 、L−リジンアミド(H−LysNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HOPEGNH−HA−Chol/LysNH 2 )(並列型)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表42に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表42に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。一部の調製例においては、ここで、DMSO透析を行った。次に、表42に示したHOPEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(5000Daまたは5475Da;Iris製、Art−No.:PEG1008)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表42に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が42%、LysNH2の導入率が19%、5k HOPEGNH基の導入率が6%の生成物)を図15−4に示す。N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク(−COCH3、1.7〜2.0ppm;3H)の積分値と、導入されたコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値より、下に示す式からHAユニットに対するコレステリル基の導入率を算出した(表42)。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)と導入されたLysNH2由来のピーク(1H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものとLysNH2中のメチレン由来のピーク(−CH2−、2.8ppm;2H)の積分値を1/2したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3−積分値(2.8ppm)×1/2)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量5000DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=112をnzとした。
分子量5475DaのHOPEGNH2を用いた場合、分子量からH2NCH2CH2(分子量44)およびHO(分子量17)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=123をnzとした。
なお、表42に挙げた目的物(略称)のほか、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、および
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%
を調製することもできる。
(実施例12−4)MeOPEGSH、エチレンジアミン(EDAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(MeOPEGS−HA−Chol/EDA)(並列型)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表43に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表43に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。一部の調製例においては、ここで、DMSO透析を行った。次に、表43に示したMeOPEGS基を導入するために、MeOPEGチオール(2000Da;Aldrich製、カタログNo.:729140)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表43に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(MeOPEGS−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が46%、EDAの導入率が16%、2k MeOPEGS基の導入率が0.03%の生成物)を図15−5に示す。N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量2000DaのMeOPEGSHを用いた場合、分子量からHSCH2CH2(分子量61)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=43をnzとした。
(実施例12−5)MeOPEGOH、エチレンジアミン(EDAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(MeOPEGO−HA−Chol/EDA)(並列型)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表44に示したMeOPEGO基を導入するために、MeOPEGアルコール(1823Da;Iris製、Art−No.1034)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(MeOPEGO−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(10kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が20%、EDAの導入率が28%、2k MeOPEGO基の導入率が0.2%の生成物)を図15−6に示す。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量1823DaのMeOPEGOHを用いた場合、分子量からHOCH2CH2(分子量45)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=40をnzとした。
分子量5567DaのMeOPEGOHを用いた場合、分子量からHOCH2CH2(分子量45)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=125をnzとした。
実施例1−2で合成した、HA−Na(99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表45に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表45に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表45に示したMeOPEGO基を導入するために、MeOPEGBr(2000Da;Iris製、Art−No.:PEG1132)をHAユニットに対して以下の表45に示す比率で加え、室温で7日間撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(MeOPEGO−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が16%、EDAの導入率が41%、2k MeOPEGO基の導入率が1%の生成物)を図15−7に示す。なおN−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量2000DaのMeOPEGBrを用いた場合、分子量からBrCH2CH2(分子量108)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=42をnzとした。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMを100HAユニットに対して、それぞれ48,96の比率で添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMを100HAユニットに対して、それぞれ20,40の比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次に、HOPEGNH基を導入するためのHOPEGアミン(Iris製、分子量5kDa)およびDMT−MMを100HAユニットに対して、それぞれ10、50の比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。さらに、エタノールアミン塩酸塩(シグマアルドリッチ製)およびDMT−MMを100HAユニットに対して300、300の比率で添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/EDA/EtOH)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
(実施例12−8)2−BranchPEGNH 2 、エチレンジアミン(EDAm)、およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(2−BranchPEGNH−HA−Chol/EDA)(並列型)の合成
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が41%、EDAの導入率が28%、20k 2−BranchPEGNH基の導入率が3%の生成物)を図15−8に示す。N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量20000Daの2−BranchPEGNH2を用いた場合、分子量からCH2OCH2CH2CH2NH(分子量73)およびMeO(分子量31×2)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=451をnxとnyの和とした。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が25%、EDAの導入率が6%、1k MeOPEGCONHCH2CH2NH基の導入率が0.1%の生成物)を図15−9に示す。
N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量1000DaのMeOPEGCO2Hを用いた場合、分子量からCH2CH2CO2H(分子量73)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=20をnzとした。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が37%、EDAの導入率が40%、20k Lys−linkerPEGNHCH2CH2NH基の導入率が4%の生成物)を図15−10に示す。
N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量40000DaのLys−linkerPEGNHSを用いた場合、分子量から、以下の部分構造式S−1(分子量297)およびMeO(分子量31×2)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=901をnxとnyの和とした。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(99kDaのHAを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が13%、EDAの導入率が42%、2k MeOPEGNHCOCH2CH2CONHCH2CH2NH基の導入率が9%の生成物)を図15−11に示す。
N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピークが含まれる1.7〜2.0ppm付近のピークにはコレステリル基由来のピーク(5H)が重なっているため、1.7〜2.0ppm付近のピークの積分値からコレステリル基中のメチル由来のピーク(−CH3、0.7ppm;3H)の積分値を5/3したものを差し引いて算出した値(即ち、積分値(1.7〜2.0ppm)−積分値(0.7ppm)×5/3)をHA由来のアセチルの積分値として、導入率の計算に使用した。
分子量1931DaのMeOPEGNHSを用いた場合、分子量からCH2CH2NHCOCH2CH2CO−OSU(分子量241)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=38をnzとした。
本願HA誘導体との対比目的にて、PEG及びコレスレロールで修飾されたキトサンを合成した。キトサンは単糖構造内にアミノ基を有した塩基性の高分子であり、それをPEG及びコレスレロールで修飾した誘導体は、PEG化カチオン性HA誘導体と比較するためのコンポーネントを含んでいる。また、ヒアルロン酸は、N−アセチルグルコサミンとグルクロン酸の2成分を構成分子としている。PEG及びコレスレロールで修飾するために利用される官能基はグルクロン酸中のカルボキシであり、構成分子の半分を占めるN−アセチルグルコサミンは修飾に関与していない。それに対して、対応するキトサンは、グルコサンミンの1成分であり、その全てのアミノが修飾するための官能基として利用され得る。したがって、10DaのHAに対応する物として5kDaのキトサンを選択した。
コレステリル基の導入率は、Journal of pharmaceutical and biomedical analysis.1149−1158.Vol.32,no.6(2003)を引用して計算した。
試薬として、5kDaキトサン(WAKO、036−20302、lot.:ALK2782)、MeOPEGNHS(Iris製、Art−No.:PEG1165 0005、5056Da)、コレステリルヘミスクシネート(Cholesteryl hemisuccinate)(Sigma−Aldrich、C6512)を使用した。これら以外はHA誘導体:10k HA−Chol−17%/EDA−34%/5k HOPEGNH−2%、10k HA−Chol−18%/EDA−61%/5k HOPEGNH−10%、10k HA−Chol−20%/Lys−54%/5k HOPEGNH−4%の合成で使用した試薬と同様の物を使用した。
キトサン(5kDa)を50mM HCl水溶液に溶かし、コレステリルヘミスクシネートのDMF溶液およびDMT−MMのDMF−H2O(9/1)溶液を100CSユニットに対して、それぞれ30、30の比率で添加し、室温で6日間撹拌した。反応溶液は、DMF、50mM NaNO3/DMF、純水、300mM NaCl水溶液、超純水,300mM NaCl水溶液の順で透析し、得られた透析液にp−トルエンスルホン酸一水和物(TsOH Monohydrate)を1当量加えて、室温で一晩撹拌した。反応溶液は、超純水で透析後、凍結乾燥して中間体(CS−Chol)を白色固体として得た。得られた固体を無水DMSO溶液に調製した。MeOPEGNHS(5056Da)を以下の表50に示す比率で各溶液に添加し、室温で5日間撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、300mM NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(MeOPEGNHCOCH2CH2CO−CS−Chol)を白色固体として得た。
測定溶媒としてDMSO−d6を用いた1H−NMRスペクトルの代表例(5kDaのCSを出発原料として用い、コレステリル基の導入率が27%、5k MeOPEGNHCOCH2CH2CO基の導入率が3%の生成物)を図15−12に示す。
使用した原料由来のN−アセチルグルコサミンの比率は、Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis 32(2003)1149−1158に記載の方法に従い、18%と算出した。
CS−Cholのコレステリル基の導入率は、N−アセチルグルコサミンのアセチル基由来のピーク(CH3、1.7〜2.0ppm;3H)((1.7〜2.0ppmのピークの積分値−(コレステロールのピーク0.6〜0.7ppmのピークの積分値)×5/3))とコレステリル基中の18位のメチル由来の(CH3、0.6〜0.7ppm;3H)のピークの積分値から算出(コレステリル基中のメチルの積分値/N−アセチルグルコサミンのアセチル由来のピーク積分値×0.18×100)した(27%)。
MeOPEGNHCOCH2CH2CO−CS−CholにおけるMeOPEGNHCOCH2CH2CO基の導入率は、コレステリル基の導入率を元にCSにおけるコレステリル基中のメチル由来のピーク(CH3、0.6〜0.7ppm;3H)の積分値と、導入されたMeOPEGNHCOCH2CH2CO基中のエチレン由来のピーク(−O−CH2CH2−(O−CH 2CH 2)nz´−、3.5ppm;4nz´H)の積分値より、下に示す式からHAユニットにおける導入率として算出した(表50)。
分子量5056DaのMeOPEGNHSを用いた場合、分子量からNHSCOCH2CH2CONHCH2CH2(分子量241)およびMeO(分子量31)を引き、OCH2CH2(分子量44)で割った値=108をnz´とした。
(実施例13−1)ソラフェニブ含有HA誘導体の調製
HA−Na(10kDa)を出発原料として実施例12−2で合成したHA誘導体を50mg/mLとなるようにDMSO溶液に溶解し、さらにソラフェニブを加えた。透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2K)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、終濃度1.0mg/mLに調製し、投与溶液とした。
逆相クロマトグラフィー分析条件
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV254nm
注入量:50μL
(比較例13−1)ソラフェニブナノ粒子の調製
国際公開WO2013/166436号に従って、粘膜透過性粒子(MPP)を調製した。具体的にはガラスチューブに、200mgの直径0.2mmジルコニアボール(ニッカトー、YTZ−0.2)を入れ、さらに11mgのソラフェニブを加え、200μLのF127含有水溶液(5%F127,0.9%NaCl,0.05%EDTA,2.4%グリセロール溶液)をさらに加えた。攪拌子を入れ、スターラーにて室温で、終夜撹拌した。0.8μmフィルターを通し、実施例13−1に記載の逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、終濃度1.0mg/mLに調製し、投与溶液とした。動的光散乱(DLS)法によりサイズ測定(マルバーン社、ゼータサイザーS)を行ったところ、直径271nmと算出された。
(実施例13−2)ウサギ点眼投与後のソラフェニブの眼内移行性評価(両目)
15から16週齢のニュージーランドホワイト種SPFウサギ(北山ラベス株式会社)を保定器で固定し、実施例13−1で調製したソラフェニブ含有HA誘導体、比較例13−1で調製したソラフェニブナノ粒子(MPP)を、それぞれ両眼(50μL/眼)に単回点眼投与した。各群3匹(6眼球)で行った。ペントバルビタールナトリウム液(共立製薬株式会社)の静脈内投与による麻酔下で腹大動静脈切断により安楽致死させた後、眼球を摘出した。眼瞼結膜を採取し、その後、ドライアイス上で眼球を凍結させて、角膜、眼球結膜、網膜および脈絡膜を採材した。
破砕用ビーズを用いて眼組織ホモジネートを作成し、液体クロマトグラフ質量分析計(LC−MS)にて組織中ソラフェニブ濃度を定量した(表51)。
〔実施例14〕ナノゲル誘導体の薬物封入量評価
(実施例14−1)蛍光標識インスリン含有ナノゲルの調製
Alexa Fluor(登録商標) 488 Carboxylic Acid,Succinimidyl Ester,mixed isomers(Thermo Fisher Scientific製)を100mM炭酸緩衝液(pH9)中でインスリン(ウシ脾臓由来)(Sigma−Aldrich製)と反応させ、脱塩カラムで精製、限外濾過により溶媒置換および濃縮し、蛍光標識インスリン水溶液を調製した。実施例12および比較例12−12で得られたHA誘導体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、これに水および100mMリン酸緩衝液、蛍光標識インスリン水溶液を加えた。終溶液組成としてHA誘導体1mg/mL、10mMリン酸緩衝液(pH7)、蛍光標識インスリン50μg/mLにした。穏やかに撹拌した後、37℃で終夜静置して、蛍光標識インスリン含有ナノゲル誘導体溶液を調製した。
SECクロマトグラフィー分析条件
分析カラム:TSKgel QC−PAK GFC300、7.8mmI.D.×15cm、5μm(TOSOH)
移動相:PBS水溶液
流速:1.2mL/min
検出:蛍光494nm
注入量:70μL
実施例12および比較例12−12で得られたHA誘導体に4mg/mLの濃度となるようにDMSOに溶解し、さらにソラフェニブの1mg/ml DMSO溶液を50μL加えて最終濃度が、HA誘導体は2mg/mL、ソラフェニブは100μg/mLになるように調整した。さらに常温の水浴中、30分間ソニケーションして、透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2kDa)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。透析膜内の溶液を2倍希釈して以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量した。
逆相クロマトグラフィー分析条件
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV280nm
実施例12および比較例12−12で得られたHA誘導体を4mg/mLの濃度となるようにDMSOに溶解し、さらにシクロスポリンの1mg/mLDMSO溶液を50μL加えて最終濃度が、HA誘導体は2mg/mL、シクロスポリンは100μg/mLになるように調整した。さらに常温の水浴中、30分間ソニケーションして、透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2kDa)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。透析膜内の溶液を2倍希釈して以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりシクロスポリン濃度を定量した。
逆相クロマトグラフィー分析条件
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV215nm
(実施例15−1)ソラフェニブ含有HA誘導体の調製
HA−Na(99kDa)を出発原料として実施例12−1,3,4、6および8で合成したHA誘導体を2mg/mLとなるようにDMSO溶液に溶解し、さらにソラフェニブを加えた。透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2kDa)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。得られたサンプルを遠心機で遠心濃縮(VIVASPIN 20,VS2002,10000MWCO PES,Centrifugal concentrator)した。以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、適宜濃度調整して、投与溶液とした。
また、実施例12−2で合成したHA誘導体(10k HA−Chol−42%/EDA−12%/2k HOPEGNH−6%)は、実施例13−2と同様の方法で調整して、終濃度を0.4mg/mLとした。
比較例であるソラフェニブナノ粒子(MPP)は、比較例13−1と同様に調製し、終濃度0.40mg/mLに調整した。
逆相クロマトグラフィー分析条件
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV280nm
注入量:50μL
(実施例15−2)ウサギ点眼投与後のソラフェニブの眼内移行性評価(両目)
15から16週齢のニュージーランドホワイト種SPFウサギ(北山ラベス株式会社)を保定器で固定し、実施例15−1で調製したソラフェニブ含有HA誘導体および比較例としてのソラフェニブナノ粒子(MPP)を、それぞれ両眼(50μL/眼)に単回点眼投与した(各群3匹(6眼球))。ペントバルビタールナトリウム液(共立製薬株式会社)の静脈内投与による麻酔下で腹大動静脈切断により安楽致死させた後、眼球を摘出した。眼瞼結膜を採取し、その後、ドライアイス上で眼球を凍結させて、角膜、眼球結膜、網膜、脈絡膜、虹彩および毛様体を採材した。
破砕用ビーズを用いて眼組織ホモジネートを作成し、液体クロマトグラフ質量分析計(LC−MS)にて組織中ソラフェニブ濃度を定量した(表55)。
近年、多糖を薬物担体の基材として用いるという報告がある。その中でも、ヒアルロン酸(HA)は、1934年、K.Meyerによって牛の眼の硝子体から単離された生体材料(多糖)であり、細胞外マトリックスの主成分として古くから知られている。HAは、D−グルクロン酸とN−アセチルグルコサミンとがβ(1→3)グリコシド結合により連結された二糖単位から成るグリコサミノグリカンの一種である。HAは、化学的、物理的構造に種差が無く、ヒトもその代謝系を有しており、免疫性および毒性といった面でも最も安全な医用生体材料(Biomaterial)の一つである。
蛍光物質であるシアニン5.5でラベルされたPEG化ヒアルロン酸ナノゲル(ヒアルロン酸−5β−コラン酸コンジュゲートにさらにPEGが化学的にコンジュゲートした物質)が、in vivoで、癌への集積性を改善したことが示されいる(非特許文献30)。なお、該物質においては、エチレンジアミンは5β−コラン酸およびとヒアルロン酸のカルボキシとアミド結合を形成している(非特許文献31)。
SiRNA分子等の核酸の効率的な送達および癌等の様々な病態を治療するための、カチオン性脂質、膜安定化脂質、およびPEG誘導体に共有結合した少なくとも1つの脂質を含む複数の脂質を含み、PEG誘導体に結合しているグリコサミノグリカンでコーティングされたリポソームについて報告がされている(特許文献19)。
(1)式(Ia):
R1x、R2x、R3xおよびR4xは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R5xは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X1は、−NR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1を表し;
R7は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R8は、水素原子、−CONR9R10および−CO2R11から選択され;
A1は、単結合、−(Y1−CH2−CH2)n2−および−(Y2−CH2−CH2−(CH2)na)n3−から選択され;
B1は、−NR12R13、−N+R12R13R14Q−、−N(−A2−NR12R13)2、窒素原子を1〜4個含む5〜10員のヘテロアリール、−NHC(=NH)NH2および基
Y1およびY2は、独立に、酸素原子または−NR16−を表し;
n1は、1〜6の整数を表し、n2およびn3は、独立に、1〜10の整数を表し、naは、1または2の整数を表し、n4は0〜3の整数を表し;
A2は、C2−10アルキレンを表し;
R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15およびR16は、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Q−は、カウンターアニオンを表す]で表される繰り返し単位、
式(Ib):
R1y、R2y、R3yおよびR4yは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R5yは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X2は、−O−Z3、−ORa、−NRaR5z、−O−Z1−Z2、−O−Z0−Z1−Z2、−O−Z0−Z2、−NRb−Z3、−NR6−Z1−Z2および−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2から選択され;
R5zおよびR6は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Raは、C8−50アルキル、C8−50アルケニルおよびC8−50アルキニルから選択され;
Z0は、以下の基:
Z1は、C1−30アルキレン、または−(CH2CH2O)m−CH2CH2−であり、ここで該アルキレンは、独立に、−O−、−NRg−および−S−S−から選択される1〜5の基が挿入されていてもよく、mは、1〜100から選択される整数であり;
Z2は、以下の基:
−NRb−Z3、
−NRb−COO−Z3、
−NRb−CO−Z3、
−NRb−CO−NRc−Z3、
−COO−Z3、
−CO−NRc−Z3、
−O−Z3、
−O−CO−NRc−Z3、
−O−COO−Z3、
−S−Z3、
−CO−Za−S−Z3、
−O−CO−Zb−S−Z3、
−NRb−CO−Zb−S−Z3、および
−S−S−Z3、
から選択され;
RbおよびRcは、独立に、水素原子、C1−20アルキル、アミノC2−20アルキルおよびヒドロキシC2−20アルキルから選択され、ここで当該基のアルキル部分は、独立に、−O−および−NRf−から選択される1〜3個の基が挿入されていてもよく;
Rdは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Rfは、独立に、水素原子、C1−12アルキル、アミノC2−12アルキル、およびヒドロキシC2−12アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は−O−および−NH−から選択される1〜2個の基が挿入されていてもよく;
Rgは、独立に、水素原子、C1−20アルキル、アミノC2−20アルキルまたはヒドロキシC2−20アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は、独立に、−O−および−NH−から選択される1〜3個の基が挿入されていてもよく;
Z3は、ステリル基であり;
Zaは、C1−5アルキレンであり;
Zbは、C2−8アルキレンまたはC2−8アルケニレンであり;
R31は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R32は、水素原子、−CONR33R34および−CO2R35から選択され;
A3は、単結合、−(Y3−CH2−CH2)n12−および−(Y4−CH2−CH2−(CH2)n14)n13−から選択され;
B2は、−NR36−X4、−N(−X4)2、−N(−A4−NR36R37)(−A4−NR36−X4)、−N(−A4−NR36−X4)2および−NHC(=NH)NH−X4から選択され;
Y3およびY4は、独立に、酸素原子または−NR16a−を表し;
n11は、1〜6の整数を表し、n12およびn13は、独立に、1〜10の整数を表し、n14は、1または2の整数を表し;
A4は、C2−10アルキレンを表し;
R33、R34、R35、R36、R37およびR16aは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
X4は、−CO2−Z3、−CO2−Z1−Z2、−CO2−Z0−Z1−Z2、−CO2−Z0−Z2、−CO−Z1−Z2、−CO−Z0−Z1−Z2、−CO−Z0−Z2、−CORa、−Z3、−O−Z3、−Z1−Z2、−Z0−Z1−Z2または−Z0−Z2を表す]で表される繰り返し単位、および
式(Ic):
R1z、R2z、R3zおよびR4zは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R4zaは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X3は、−O−PG1、−S−PG1、−NR38−PG1および−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3から選択され;
R38、およびR39は、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R40は、水素原子、−CONR43R44および−CO2R45から選択され;
A5は、単結合、−(Y5−CH2−CH2)n16−および−(Y6−CH2−CH2−(CH2)n18)n17−から選択され;
B3は、−NR41−X6、−N(−A6−NR41R42)(−A6−NR41−X6)、−N(−A6−NR41−X6)2および−NHC(=NH)NH−X6から選択され;
Y5およびY6は、独立に、酸素原子または−NR16b−を表し;
n15は、1〜6の整数を表し、n16およびn17は、独立に、1〜10の整数を表し、n18は、1または2の整数を表し;
R41、R42、R43、R44、R45およびR16bは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
A6は、C2−10アルキレンを表し;
X6は、−PG2、−CO2−PG2、−C(=O)S−PG2または−CO−PG2であり;
PG1は、以下の式(Z)、式(Y)、式(Xa)、式(Xb)、式(Xc)、式(Xd)、式(W1)、式(W2)、式(W3)、式(W4)、式(V1)、式(V2)、式(V3)および式(V4)で表される基から選択され;
PG2は、以下の式(Z)、式(Y)、式(U1)、式(U2)、式(U3)、式(U4)、式(U5)、式(U6)、式(U7)、式(U8)、式(U9)、式(T1)、式(T2)、式(T3)、式(T4)、式(T5)、式(T6)、式(T7)、式(T8)、式(T9)、式(T10)、式(T11)および式(T12)で表される基から選択され;
−CH2CH2(OCH2CH2)nz−Ta (Z)
Taは、−NRhR、−CORiおよび−ORnから選択され、
Tbは、−ORnを表し、
nzは、20〜1500の整数であり、
nyおよびnxは、その和が20〜1500となる、それぞれ10以上の整数であり、
Xは、以下の式(X1)または式(X2)で表される2価の基であり(式中、「***」は、隣接するメチンとの結合位置を示す)、
−CH2− (X1)
***−CH2O(CH2)nw− (X2)
R、R’およびRnは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し、
Rhは、水素原子、C1−6アルキル、式(Xa)、式(Xb)、式(Xc)、式(Xd)、式(W1)、式(W2)、式(W3)、式(W4)、式(V1)、式(V2)、式(V3)および式(V4)で表される基から選択され、
Riは、ヒドロキシ、C1−6アルコキシ、式(U1)、式(U2)、式(U3)、式(U4)、式(U5)、式(U6)、式(U7)、式(U8)、式(U9)、式(T1)、式(T2)、式(T3)、式(T4)、式(T5)、式(T6)、式(T7)、式(T8)、式(T9)、式(T10)、式(T11)および式(T12)で表される基から選択され、
nwは、2〜10の整数を表し、
nは、1または2であり、
Tは、−NRR’、−CORo、および−ORから選択され、
Roは、ヒドロキシまたはC1−6アルコキシを表す]
で表される繰り返し単位を、それぞれ1以上含む、ヒアルロン酸誘導体。
R5aは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
Xaは、ヒドロキシおよび−O−Q+から選択され、ここでQ+は、カウンターカチオンを表す]
で表わされる1以上の繰り返し単位をさらに含む、(1)に記載のヒアルロン酸誘導体。
R1b、R2b、R3bおよびR4bは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され、
R5bは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され、
X5は、−NR17−R18を表し、
R17は、水素原子またはC1−6アルキルを表し、
R18は、1以上のヒドロキシで置換されていてもよいC1−10アルキルを表す]
で表される1以上の繰り返し単位をさらに含む、(1)または(2)に記載のヒアルロン酸誘導体。
から選択される、(1)〜(3)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(6)ステリル基が、以下の式:
のいずれかで表される、(1)〜(5)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(7)X2が、−NR6−Z1−Z2であり、X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1から選択される、(1)〜(6)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(10)X2が、−O−Z3、−O−Z1−Z2および−NR6−Z1−Z2から選択され、X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1から選択され、存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ia)で表される繰り返し単位の割合が、1〜75%である、(1)〜(6)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
(13)X1が、以下の式:
(14)X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1で表される基から選択され、PG1が、式(Z)で表される基である、(1)〜(7)、(9)、(10)、(12)および(13)のいずれかに記載のヒアルロン酸誘導体。
R8が水素原子であり、B1が−NR12R13であり、かつ、A1が単結合である時、n1は1〜2であるのが好ましい。
n3個あるnaおよびn13個あるn14は、それぞれ、同一であっても、異なっていてもよい。
n4は、0、1および2であるのが好ましく、0および1であるのが更に好ましく、1であるのがさらに好ましい。
本発明のヒアルロン酸誘導体は、カチオン性の部位を有する基X1を導入した式(Ia)、疎水性の部位を有する基X2を導入した式(Ib)、および親水性の部位を有する基X3を導入した式(Ic)で表される二糖単位(繰り返し単位でもある)をそれぞれ1以上含むヒアルロン酸誘導体である。
X1の具体例として、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(d)、(e)、(f)、(g)、(h)、(i)、(l)、(m)、(n)、(o)、(p)、(q)、(r)、(s)、(t)、(u)、(w)、(x)、(y)、(z)、(aa)、(ab)、(ac)、(ad)および(ah)で表される基、さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(m)、(n)、(s)、(t)、(u)、(y)、(z)および(ah)で表される基が挙げられる。さらに好ましくは、式(a)、(b)、(c)および(h)で表される基が挙げられる。これらのX1は、経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点でも好ましいものである。前記の観点でさらに好ましいX1としては、式(a)、(b)、(c)、(f)、(h)、(l)、(u)、(z)および(ah)で表される基が挙げられる。前記の観点で好ましいX1の導入率は、例えば3〜95%であり、さらに好ましくは6〜84%である。例えば、X1が式(a)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは10〜50%であり、さらに好ましくは19〜45%である。X1が式(b)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜90%であり、さらに好ましくは28〜74%である。X1が式(c)、(d)、(e)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは13〜75%であり、さらに好ましくは25〜63%である。X1が式(f)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは10〜90%であり、さらに好ましくは22〜84%である。X1が式(g)、(h)、(i)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは3〜60%であり、さらに好ましくは6〜46%である。X1が式(l)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは45〜65%、さらに好ましくは52〜54%である。X1が式(m)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは35〜67%、さらに好ましくは45〜57%、さらに好ましくは50〜52%である。X1が式(n)、(o)、(p)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは46〜90%、さらに好ましくは56〜80%、さらに好ましくは66〜70%である。X1が式(q)、(r)、(s)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜85%であり、さらに好ましくは20〜85%、さらに好ましくは45〜85%、さらに好ましくは67〜71%ある。X1が式(t)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜85%であり、さらに好ましくは20〜85%、さらに好ましくは38〜82%、さらに好ましくは48〜72%、さらに好ましくは58〜62%である。X1が式(u)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは5〜80%であり、さらに好ましくは8〜70%、さらに好ましくは10〜43%、さらに好ましくは15〜27%である。X1が式(w)、(x)、(y)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは30〜70%、さらに好ましくは40〜63%である。X1が式(z)、(aa)、(ab)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜95%であり、さらに好ましくは20〜95%、さらに好ましくは50〜95%、さらに好ましくは60〜90%、さらに好ましくは74〜78%である。X1が式(ac)、(ad)、(ah)で表される基である時、X1の導入率は、好ましくは15〜80%であり、さらに好ましくは20〜70%、さらに好ましくは30〜70%、さらに好ましくは39〜64%、さらに好ましくは49〜54%である。
X1の別の好ましい具体例として、以下の式で表される基が挙げられる。ここで、「*」は、結合位置を表す:
式−O−PG1で表される基としては、例えば以下の式:
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ja)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (jb)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (jc)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (jd)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (je)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (jf)
−O−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (jg)
式−S−PG1で表される基としては、例えば以下の式:
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ka)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (kb)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (kc)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (kd)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ke)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (kf)
−S−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (kg)
で表される基が挙げられ、好ましくは、式(ka)および(kb)で表される基である。
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ga)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (gb)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (gc)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (gd)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ge)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (gf)
−NH−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (gg)
式−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3で表される基としては、例えば以下の式:
なお、X3が−NR38−PG1である時(例えば、式(U6a)、(U6b)、(U6c)および(U6d)で表される基である時)または−CO−PG2を含む基である時、該基はリジン残基を含む基となる場合がある。ここで、リジン残基におけるαアミノとεアミノの間の炭素数は5であるが、これを、2〜4や6〜20に変更することもできる。
また、式−O−PG1で表される他の基として、以下の基を挙げることもできる。
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (jh)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ji)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (jj)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (jk)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (jl)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (jm)
−O−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (jn)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (kh)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ki)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (kj)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (kk)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (kl)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (km)
−S−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (kn)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (gh)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (gi)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (gj)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (gk)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (gl)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (gm)
−NH−CH2CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (gn)
本発明のヒアルロン酸誘導体に含まれる二糖単位を表す式(III)における基X5の具体例としては、好ましくは以下の式:
基X2の一例である基−NR6−Z1−Z2としては、例えば、以下の式
基X2の一例である基−O−Z1−Z2、−O−Z0−Z1−Z2および−O−Z0−Z2としては、例えば、以下の式
基X2が−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である場合、基X1と基X2の組み合わせは、X1が、式(a)で表される基であり、X2が、式(fa)、(fb)および(fc)で表される基であるのがさらに好ましく、X1が、式(a)で表される基であり、X2が、式(fa)および(fb)で表される基であるのがさらに好ましい。該基の組み合わせは、経粘膜投与に用いるための医薬組成物の観点で好ましい組み合わせである。X1の導入率とX2の導入率の組み合わせ(X1の導入率:X2の導入率)は、好ましくは(30〜90%:2〜70%)であり、さらに好ましくは(42〜83%:3〜50%)である。
−CONR6−Z1−NRbH + Hal−COOZ3、
−CONR6−Z1−NRbH + HOCO−Z3、
−CONR6−Z1−NRbH + Hal−CO−Z3、
−CONR6−Z1−COOH + HO−Z3、
−CONR6−Z1−OH + Hal−COO−Z3、
−CONR6−Z1−COOH + NRc−Z3、
−CONR6−Z1−OCO−Hal + NRc−Z3、
−CONR6−Z1−OCOOH + HO−Z3、
−CONR6−Z1−OCOOH + Hal−Z3、
−CONR6−Z1−OCO−Hal + HO−Z3、
−CONR6−Z1−SH + Hal−Z3、
−CONR6−Z1−Hal + HS−Z3、
−CONR6−Z1−CO−Za−Hal + HS−Z3
−CONR6−Z1−CO−Za−SH + Hal−Z3、
−CONR6−Z1−O−CO−CH=CH2 + HS−Z3、
−CONR6−Z1−NRb−CO−C(CH3)=CH2 + HS−Z3、
−CONR6−Z1−SH + HS−R、
(式中、R6、Z1、Rb、RcおよびZ3は本明細書で既に定義したとおりであり、Halは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素から選択されるハロゲン原子を表す)。
−COO−Z1−NRbH + Hal−COO−Z3、
−COO−Z1−NRbH + HOCO−Z3、
−COO−Z1−NRbH + Hal−CO−Z3、
−COO−Z1−NRb−COOH + HNRc−Z3、
−COO−Z1−NRb−CONRcH + Hal−Z3、
−COO−Z1−NRbH + HOCO−NRc−Z3、
−COO−Z1−NRbH + Hal−CO−NRc−Z3、
−COO−Z1−COOH + HO−Z3、
−COO−Z1−COOH + H2NRc−Z3、
−COO−Z1−OH +Hal−CO−NRc−Z3、
−COO−Z1−OH + Hal−COO−Z3、
−COO−Z1−OCOOH + Hal−Z3、
−COO−Z1−OCO−Hal + HO−Z3、
−COO−Z1−SH + Hal−Z3、
−COO−Z1−Hal + HS−Z3、
−COO−Z1−CO−Za−Hal + HS−Z3、
−COO−Z1−CO−Za−SH + Hal−Z3、
−COO−Z1−O−CO−CH=CH2 + HS−Z3、
−COO−Z1−NRb−CO−C(CH3)=CH2 + HS−Z3、および
−COO−Z1−SH + HS−Z3、
(式中、Z1、Z2、Z3、Rb、RcおよびZaは本明細書で既に定義したとおりであり、Halは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およびヨウ素から選択されるハロゲン原子を表す)。
式:HNR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2で表される化合物としては、例えば以下の式
式:HO−Z1−Z2で表される化合物としては、例えば以下の式
式:HNR38−PG1で表される化合物としては、例えば以下の式:
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ga’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (gb’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (gc’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (gd’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ge’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (gf’)
H2N−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (gg’)
また、アミノの反応性を向上させた、式(Ybb’)で表される化合物を、HNR38−PG1で表される化合物に代えて使用することもできる:
式:Hal−PG1で表される化合物としては、例えば以下の式:
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ia’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ib’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (ic’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (id’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ie’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (if’)
Br−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ig’)
I−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (ih’)
Br−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (ii’)
Br−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (ij’)
F−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ik’)
I−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (il’)
Cl−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (im’)
で表される化合物などが挙げられる。
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ja’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (jb’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (jc’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (jd’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (je’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (jf’)
HO−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (jg’)
また、ヒドロキシの反応性を向上させた、式(Yaa’)および(Yab’)で表される化合物を、HO−PG1で表される化合物で表される化合物に代えて使用することもできる:
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OH (ka’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−OCH3 (kb’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2H (kc’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−CO2C(CH3)3 (kd’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NH2 (ke’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−NHCH3 (kf’)
HS−CH2CH2(OCH2CH2)nz−SCH3 (kg’)
で表される化合物などが挙げられ、好ましくは、式(kb’)で表される化合物である。
式:HS−PG2で表される化合物としては、式(ka’)、(kb’)、(kc’)、(kd’)、(ke’)、(kf’)で表される化合物などが挙げられる。
ヒアルロン酸のカルボキシに導入される置換基の種類が複数のときは、それらの置換基は、同時導入しても、順次に導入してもよい。
本発明のヒアルロン酸誘導体は、医薬組成物における薬物担体として使用することができ、本発明のヒアルロン酸誘導体と薬物とを含む、医薬組成物を提供することができる。また、本発明のヒアルロン酸誘導体そのものを有効成分として含む、医薬組成物を提供することもできる。これらの医薬組成物中に含まれる本発明のヒアルロン酸誘導体は、(1)〜(14)に記載のヒアルロン酸誘導体である。本発明のヒアルロン酸誘導体は、水溶液中で自発的に薬物と複合体を形成できるため、特別な操作を必要とせず、当該ヒアルロン酸誘導体と薬物を水溶液中で混合し、インキュベートすることにより、担体−薬物の複合体を容易に形成させ、薬物を担持できる。複合体形成の駆動力は、主にヒアルロン酸誘導体の疎水性基と薬物との疎水性相互作用であるが、薬物が塩基性または酸性の場合、ヒアルロン酸誘導体のカルボン酸またはカチオン性基との静電的相互作用が寄与する場合がある。生体塩濃度では、静電的相互作用は弱く、疎水性相互作用は強くなるため、主に疎水性相互作用により複合体が形成すると考えられる。
ヒアルロン酸誘導体のN−アセチルグルコサミン部分の6位のヒドロキシと、薬物のカルボキシまたは薬物に導入したカルボキシとの反応;
ヒアルロン酸誘導体に導入したアミノと、薬物のカルボキシまたは薬物に導入したカルボキシとの反応;
ヒアルロン酸誘導体に導入したアミノと、修飾によりイソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、NHSエステル、エポキシドなどに変換された薬物との反応;
薬物のアミノまたは薬物に導入したアミノと、修飾によりイソチオシアネート、イソシアネート、アシルアジド、カルボニル、NHSエステル、エポキシドなどに変換されたヒアルロン酸誘導体との反応;
ヒアルロン酸誘導体のアミノと、カルボニルを有するまたは導入された薬物(アルデヒドおよびケトンなど)とのシッフ塩基形成および還元的アミノ化反応;
薬物のアミノまたは薬物に導入したアミノと、修飾によりカルボニルが導入されたヒアルロン酸誘導体とのシッフ塩基形成および還元アミノ化反応;
ヒアルロン酸誘導体に導入したメルカプトと、不飽和結合を有する化合物(マレイミド、アクリルエステル、アクリルアミド、メタクリルエステル、メタクリルアミド、アリル化物、ビニルスルホンなど)、ハロゲン化物(クロロ酢酸エステル、ブロモ酢酸エステル、ヨード酢酸エステル、クロロ酢酸アミド、ブロモ酢酸アミド、ヨード酢酸アミドなど)、またはチオールである薬物または修飾により当該化合物に変換された薬物との反応;および
薬物に導入したメルカプトと、修飾により、不飽和結合を有する化合物(マレイミド、アクリルエステル、アクリルアミド、メタクリルエステル、メタクリルアミド、アリル化物、ビニルスルホンなど)、ハロゲン化物(クロロ酢酸エステル、ブロモ酢酸エステル、ヨード酢酸エステル、クロロ酢酸アミド、ブロモ酢酸アミド、ヨード酢酸アミドなど)、またはチオールに変換されたヒアルロン酸誘導体との反応。
本発明の医薬組成物、複合体およびコンジュゲートは、特にCD44をはじめとするヒアルロン酸レセプターへのターゲティングを目的とした場合、そのサイズは5μm以下であることが好ましい。
以下の記載中のHAユニットとは、ヒアルロン酸(HA)中のN−アセチルグルコサミン−グルクロン酸の繰り返し単位(1ユニット)を意味する。1H−NMRスペクトルの測定には、日本電子製JNM−ECX500IIを用いた。透析には再生セルロース製透析膜(スペクトラム社製、分子量50kDaおよび99kDaのヒアルロン酸ナトリウム塩を出発原料とする時はスペクトラポア4:分画分子量12k〜14kDa、分子量10kDaのヒアルロン酸ナトリウム塩を出発原料とする時はスペクトラポア3:分画分子量3.5kDa、スペクトラポア7:分画分子量1kDaもしくは2kDa)を用いた。
(実施例1−1)コレステリル 6−アミノヘキシルカーバメート塩酸塩の調製
WO2014/038641記載の方法に準じてコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメート(Chol−C6)塩酸塩を合成した。
分子量10kDa、50kDaおよび99kDaのヒアルロン酸ナトリウム塩(HA−Na、資生堂製もしくはコンティプロ社製)を原料として用い、WO2014/038641記載の方法に準じてHAのTBA塩を調製した。
(実施例2−1)L−アルギニンアミド(H−ArgNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/ArgNH 2 )の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩および4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリニウムクロリド(DMT−MM)をHAユニットに対して以下の表1に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表1に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表1に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表2に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表2に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表2に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表3に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、ジエチレントリアミン(東京化成工業製)およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム(PyBOP、和光純薬工業製)をHAユニットに対して以下の表3に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DET)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表3に記載した。
(実施例2−4)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/LysNH 2 )の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表4に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表4に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表4に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表5に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表5に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表5に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表5に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表6に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表6に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表6に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/EDA/Me)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表6に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表7に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表7に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、ジエチレントリアミン(東京化成工業製)およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム(PyBOP、和光純薬工業製)をHAユニットに対して以下の表7に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DET/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表7に記載した。
(実施例2−8)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )、メチルアミン(MeAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/LysNH 2 /Me)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表8に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表8に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表8に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。
HA−TBAの無水DMSO溶液に対して、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩、メチルアミン塩酸塩、Chol−C6塩酸塩の順で添加し合成したこと以外は、実施例2−8と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/LysNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表9に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表10に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表10に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、スペルミン(アルドリッチ社製)およびヘキサフルオロリン酸トリピロリジノホスホニウム(PyBOP、和光純薬工業製)をHAユニットに対して以下の表10に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/SPR/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表10に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表11に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表11に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、3−アミノプロピルトリメチルアザニウムクロライド(UkrOrgSyntez社製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表11に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/PTMA/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表11に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表12に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表12に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液を透析膜に移し、DMSOで透析した。さらに、WO2014/038641記載の方法に準じて調製したTBA塩化したカチオン交換樹脂をHAユニットのモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で5モル等量添加した。30分間室温撹拌後、遠心し、上澄みを回収した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表12に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表12に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表13に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にメチルアミン塩酸塩(東京化成工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表13に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液を透析膜に移し、DMSOで透析した。さらに、WO2014/038641記載の方法に準じて調製したTBA塩化したカチオン交換樹脂をHAユニットのモル数に対し樹脂のイオン交換能換算で5モル等量添加した。30分間室温撹拌後、遠心し、上澄みを回収した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表13に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/ArgNH2/Me)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表13に記載した。
メチルアミン塩酸塩の代わりにプロパノールアミン塩酸塩を用いたこと以外は、実施例2−13と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/ArgNH2/PrOH)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表14に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/ArgNH2を実施例2−1と同様の方法で合成した(表15)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表15に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/EDAを実施例2−2と同様の方法で合成した(表16)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表16に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/DETを実施例2−3と同様の方法で合成した(表17)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表17に記載した。
(実施例2−18)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/LysNH 2 )の合成
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/LysNH2を実施例2−4と同様の方法で合成した(表18)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表18に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/ArgNH2/Meを実施例2−5と同様の方法で合成した(表19)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表19に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/EDA/Meを実施例2−6と同様の方法で合成した(表20)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表20に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/DET/Meを実施例2−7と同様の方法で合成した(表21)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表21に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/LysNH2/Meを実施例2−8と同様の方法で合成した(表22)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表22に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/SPR/Meを実施例2−10と同様の方法で合成した(表23)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表23に記載した。
In vitro、In vivo試験用のHA−Chol/PTMA/Meを実施例2−11と同様の方法で合成した(表24)。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表24に記載した。
メチルアミン塩酸塩の代わりにエタノールアミン塩酸塩を用いたこと以外は、実施例2−5と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/ArgNH2/EtOH)を白色固体として得た。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表25に記載した。
Chol−C6塩酸塩を加える前に、5−アミノメチルフルオレセイン(FL、インビトロジェン社製)塩酸塩とDMT−MMをHAユニット100に対してそれぞれ2、4モル等量加え、室温で2時間撹拌したこと以外は、実施例2−25と同様の方法で行い、目的物(HA−Chol/ArgNH2/EtOH/FL)を黄色固体として得、導入率を算出した(表26)。得られた黄色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表26に記載した。
(実施例4−1−1)2,2’−(エチレンジオキシ)ビス(エチルアミン)(EDOBEAm)およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HA−Chol/EDOBEA)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表27に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、2,2’−(エチレンジオキシ)ビス(エチルアミン)(Sigma−Aldrich製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表27に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、2,2’−(エチレンジオキシ)ビス(エチルアミン)およびPyBOPを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてHA−Cholを得た。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/EDOBEA)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表27に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表27に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表28に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、2,2’−オキシビス(エチルアミン)(東京化成工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表28に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、2,2’−オキシビス(エチルアミン)およびPyBOPを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてHA−Cholを得た。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DEG)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表28に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表28に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表29に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、アグマチン二塩酸塩(Ark pharm製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表29に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。この時、一部を分取し、アグマチン二塩酸塩およびDMT−MMを加えず以下同様に行い、導入率算出における比較対象としてHA−Cholを得た。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/AGMT)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表29に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表29に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表30に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、ヒスタミン(ナカライテスク製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表30に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/IMD)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表30に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表30に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表31に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にビス(3-アミノプロピル)アミン(和光純薬工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表31に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DPT)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表31に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表31に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表32に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、トリス(2-アミノエチル)アミン(和光純薬工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表32に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/BAEA)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表32に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表32に記載した。フィルターを通過せず、超音波処理を実施していない試料は(×)と表32に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表33に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次にN,N−ジメチルエチレンジアミン(和光純薬工業製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表33に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/DMA)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表33に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表33に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表34に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、2−(1−メチルピペリジン−4−イル)エタンアミン(Ark Pharm製)およびPyBOPをHAユニットに対して以下の表34に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−Chol/MPD)を白色固体として得た。凍結乾燥前の透析液の溶液状態を孔径0.45μmあるいは5μmのフィルターに通し、通過した試料は○と表34に記載した。フィルターを通過しなかった試料については、凍結乾燥固体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表34に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表35に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的中間体(HA−LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
(実施例5−1)I−C 3 H 6 −OCOO−Chol:10,13−ジメチル−17−(6−メチルヘプタン−2−イル)−2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17−テトラデカヒドロ−1H−シクロペンタ[a]フェナントレン−3−イル (3−ヨードプロピル)カーボネートの合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表37に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌し、DMSOに対して透析した。実施例5−1で調製したI−C3H6−OCOO−CholをHAユニットに対して以下の表37に示す比率で各溶液に添加し、室温で1時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−C3H6−OCOO−Chol/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表37に記載した。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表38示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌し、DMSOに対して透析した。実施例5−3で調製したI−CH2−COO−CholをHAユニットに対して以下の表38に示す比率で各溶液に添加し、室温で1時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−CH2−COO−Chol/LysNH2)を淡黄色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表38に記載した。
(実施例11−1)L−リジンアミド(H−LysNH 2 )およびオクタデシルアミンにより修飾したHA誘導体(HA−C 18 /LysNH 2 )の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。オクタデシルアミン(CH3(CH2)17NH2、シグマアルドリッチ製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表39に示す比率で各溶液に添加し、室温で30分間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表39に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HA−C18/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。得られた白色個体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、溶液状態を確認した。沈殿が確認された試料は×、確認されなかった試料は〇と表39に記載した。
(実施例12−1)HOPEGNH 2 、L−アルギニンアミド(H−ArgNH 2 )およびコレステリル 6−アミノヘキシルカーバメートにより修飾したHA誘導体(HOPEGNH−HA−Chol/ArgNH 2 )(並列型)の合成
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩および4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリニウムクロリド(DMT−MM)をHAユニットに対して以下の表40に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、L−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表40に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表40に示したHOPEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(分子量5000Daまたは5475Da);Iris製、Art-No.:PEG1008)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表40に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/ArgNH2)を白色固体として得た。
実施例1−2で合成した、HA−Na(99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩および4−(4,6−ジメトキシ−1,3,5−トリアジン−2−イル)−4−メチルモルホリニウムクロリド(DMT−MM)をHAユニットに対して表40に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、表40に示したHOPEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(分子量5475Da);Iris製、Art-No.:PEG1008)およびDMT−MMをHAユニットに対して表40に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表40に示したL−アルギニンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して表40に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/ArgNH2)を白色固体として得た。
10k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、および
99k HA−Chol−42%/ArgNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%
を調製することもできる。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表41に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表41に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次に、表41に示した各種PEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(分子量 10000Da)(Iris製、Art-No.:PEG1006)、HOPEGアミン(分子量 5000Da)(Aldrich製、カタログNo.:672130)、MeOPEGアミン(分子量 5000Da)(Iris製、Art-No.:PEG1154)、MeOPEGアミン(分子量2000Da)(Iris製、Art-No.:PEG1152)、MeOPEGアミン(分子量 1000Da)(Iris製、Art-No.:PEG1670)、HOPEGアミン(分子量 2000Da)(BroadPharm製、カタログNo.:BP23642)またはHOPEGアミン(分子量1000Da)(Iris製、Art-No.:PEG3740)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表41に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して各種目的物(PEGNH−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−16%/EDA−50%/5k HOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−42%/EDA−50%/5k HOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−16%/EDA−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−30%/1k HOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/EDA−50%/2k HOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−42%/EDA−30%/5k MeOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−42%/EDA−50%/1k MeOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−16%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−42%/EDA−30%/5k MeOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−16%/EDA−30%/1k MeOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−16%/EDA−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/EDA−30%/2k MeOPEGNH−10%、および
99k HA−Chol−42%/EDA−50%/ 2k MeOPEGNH−10%
を調製することもできる。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表42に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmoc−L−リジンアミド塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表42に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。一部の調製例においては、ここで、DMSO透析を行った。次に、表42に示したHOPEGNH基を導入するために、HOPEGアミン(5000Daまたは5475Da;Iris製、Art-No.:PEG1008)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表42に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/LysNH2)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
10k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
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10k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k HOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
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99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k HOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/5k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/1k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−16%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%、
99k HA−Chol−42%/LysNH2−30%/2k MeOPEGNH−10%、および
99k HA−Chol−42%/LysNH2−50%/2k MeOPEGNH−10%
を調製することもできる。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表43に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表43に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。一部の調製例においては、ここで、DMSO透析を行った。次に、表43に示したMeOPEGS基を導入するために、MeOPEGチオール(2000Da;Aldrich製、カタログNo.:729140)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表43に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(MeOPEGS−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa、99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表44に示したMeOPEGO基を導入するために、MeOPEGアルコール(1823Da;Iris製、Art-No.:PEG1034)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表44に示す比率で加え、室温で17時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(MeOPEGO−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
実施例1−2で合成した、HA−Na(99kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表45に示す比率で各溶液に添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMをHAユニットに対して以下の表45に示す比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSOで透析後、表45に示したMeOPEGO基を導入するために、MeOPEGBr(2000Da;Iris製、Art-No.:PEG1132)をHAユニットに対して以下の表45に示す比率で加え、室温で7日間撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.3M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(MeOPEGO−HA−Chol/EDA)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
実施例1−2で合成した、HA−Na(10kDa)を出発原料とするHA−TBAの無水DMSO溶液を調製した。実施例1−1で調製したChol−C6塩酸塩およびDMT−MMを100HAユニットに対して、それぞれ48,96の比率で添加し、室温で2時間以上撹拌した。次に、モノFmocエチレンジアミン塩酸塩(渡辺化学工業製)およびDMT−MMを100HAユニットに対して、それぞれ20,40の比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。次に、HOPEGNH基を導入するためのHOPEGアミン(Iris製、分子量5kDa)およびDMT−MMを100HAユニットに対して、それぞれ10、50の比率で加え、室温で2時間以上撹拌した。さらに、エタノールアミン塩酸塩(シグマアルドリッチ製)およびDMT−MMを100HAユニットに対して300、300の比率で添加し、室温で2時間以上撹拌した。反応溶液は、DMSO、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液、DMSO、純水、0.15M NaCl水溶液、超純水の順で透析し、得られた透析液を凍結乾燥して目的物(HOPEGNH−HA−Chol/EDA/EtOH)を白色固体として得た。なお、0.3M 酢酸アンモニア/DMSO溶液における透析により、Fmoc体の脱保護がなされた。
本願HA誘導体との対比目的にて、PEG及びコレステロールで修飾されたキトサンを合成した。キトサンは単糖構造内にアミノ基を有した塩基性の高分子であり、それをPEG及びコレステロールで修飾した誘導体は、PEG化カチオン性HA誘導体と比較するためのコンポーネントを含んでいる。また、ヒアルロン酸は、N-アセチルグルコサミンとグルクロン酸の2成分を構成分子としている。PEG及びコレステロールで修飾するために利用される官能基はグルクロン酸中のカルボキシであり、構成分子の半分を占めるN-アセチルグルコサミンは修飾に関与していない。それに対して、対応するキトサンは、グルコサンミンの1成分であり、その全てのアミノが修飾するための官能基として利用され得る。したがって、10kDaのHAに対応する物として5kDaのキトサンを選択した。
試薬として、5kDaキトサン(WAKO、036-20302、lot.:ALK2782)、MeOPEGNHS(Iris製、Art-No.:PEG1165 0005、5056Da)、コレステリルヘミスクシネート(Cholesteryl hemisuccinate)(Sigma−Aldrich、C6512)を使用した。これら以外はHA誘導体:10k HA−Chol−17%/EDA−34%/5k HOPEGNH−2%、10k HA−Chol−18%/EDA−61%/5k HOPEGNH−10%、10k HA−Chol−20%/Lys−54%/5k HOPEGNH−4%の合成で使用した試薬と同様の物を使用した。
(実施例13−1)ソラフェニブ含有HA誘導体の調製
HA−Na(10kDa)を出発原料として実施例12−2で合成したHA誘導体を50mg/mLとなるようにDMSO溶液に溶解し、さらにソラフェニブを加えた。透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2K)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、終濃度1.0mg/mLに調製し、投与溶液とした。
逆相クロマトグラフィー分析条件
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV254nm
注入量:50μL
(比較例13−1)ソラフェニブナノ粒子の調製
国際公開WO2013/166436号に従って、粘膜透過性粒子(MPP)を調製した。具体的にはガラスチューブに、200mgの直径0.2mmジルコニアボール(ニッカトー、YTZ−0.2)を入れ、さらに11mgのソラフェニブを加え、200μLのF127含有水溶液(5%F127,0.9%NaCl,0.05%EDTA,2.4%グリセロール溶液)をさらに加えた。攪拌子を入れ、スターラーにて室温で、終夜撹拌した。0.8μmフィルターを通し、実施例13−1に記載の逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、終濃度1.0mg/mLに調製し、投与溶液とした。動的光散乱(DLS)法によりサイズ測定(マルバーン社、ゼータサイザーS)を行ったところ、直径271nmと算出された。
15から16週齢のニュージーランドホワイト種SPFウサギ(北山ラベス株式会社)を保定器で固定し、実施例13−1で調製したソラフェニブ含有HA誘導体、比較例13−1で調製したソラフェニブナノ粒子(MPP)を、それぞれ両眼(50μL/眼)に単回点眼投与した。各群3匹(6眼球)で行った。ペントバルビタールナトリウム液(共立製薬株式会社)の静脈内投与による麻酔下で腹大動静脈切断により安楽致死させた後、眼球を摘出した。眼瞼結膜を採取し、その後、ドライアイス上で眼球を凍結させて、角膜、眼球結膜、網膜および脈絡膜を採材した。
(実施例14−1)蛍光標識インスリン含有ナノゲルの調製
Alexa Fluor(登録商標) 488 Carboxylic Acid,Succinimidyl Ester,mixed isomers(Thermo Fisher Scientific製)を100mM炭酸緩衝液(pH9)中でインスリン(ウシ脾臓由来)(Sigma−Aldrich製)と反応させ、脱塩カラムで精製、限外濾過により溶媒置換および濃縮し、蛍光標識インスリン水溶液を調製した。実施例12および比較例12−12で得られたHA誘導体に2mg/mLの濃度となるように水を加え、超音波処理(コバリス社製、E220X)を実施し、これに水および100mMリン酸緩衝液、蛍光標識インスリン水溶液を加えた。終溶液組成としてHA誘導体1mg/mL、10mMリン酸緩衝液(pH7)、蛍光標識インスリン50μg/mLにした。穏やかに撹拌した後、37℃で終夜静置して、蛍光標識インスリン含有ナノゲル誘導体溶液を調製した。
分析カラム:TSKgel QC−PAK GFC300、7.8mmI.D.×15cm、5μm(TOSOH)
移動相:PBS水溶液
流速:1.2mL/min
検出:蛍光494nm
注入量:70μL
実施例12および比較例12−12で得られたHA誘導体に4mg/mLの濃度となるようにDMSOに溶解し、さらにソラフェニブの1mg/ml DMSO溶液を50μL加えて最終濃度が、HA誘導体は2mg/mL、ソラフェニブは100μg/mLになるように調整した。さらに常温の水浴中、30分間ソニケーションして、透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2kDa)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。透析膜内の溶液を2倍希釈して以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量した。
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV280nm
実施例12および比較例12−12で得られたHA誘導体を4mg/mLの濃度となるようにDMSOに溶解し、さらにシクロスポリンの1mg/mLDMSO溶液を50μL加えて最終濃度が、HA誘導体は2mg/mL、シクロスポリンは100μg/mLになるように調整した。さらに常温の水浴中、30分間ソニケーションして、透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2kDa)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。透析膜内の溶液を2倍希釈して以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりシクロスポリン濃度を定量した。
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV215nm
(実施例15−1)ソラフェニブ含有HA誘導体の調製
HA−Na(99kDa)を出発原料として実施例12−1,3,4、6および8で合成したHA誘導体を2mg/mLとなるようにDMSO溶液に溶解し、さらにソラフェニブを加えた。透析キット(Slide−A−Lyzer、分画分子量2kDa)に移し、超純水、10%スクロース溶液に対して透析した。得られたサンプルを遠心機で遠心濃縮(VIVASPIN 20,VS2002,10000 MWCO PES,Centrifugal concentrator)した。 以下の条件による逆相クロマトグラフィー分析分析によりソラフェニブ濃度を定量し、適宜濃度調整して、投与溶液とした。
逆相クロマトグラフィー分析条件
分析カラム:PLRP−S 1000Å(Agilent社)
カラム温度:40℃
移動相A:0.1%TFA水溶液、移動相B:0.1%TFAアセトニトリル溶液
流速:2mL/min
検出:UV280nm
注入量:50μL
(実施例15−2)ウサギ点眼投与後のソラフェニブの眼内移行性評価(両目)
15から16週齢のニュージーランドホワイト種SPFウサギ(北山ラベス株式会社)を保定器で固定し、実施例15−1で調製したソラフェニブ含有HA誘導体および比較例としてのソラフェニブナノ粒子(MPP)を、それぞれ両眼(50μL/眼)に単回点眼投与した(各群3匹(6眼球))。ペントバルビタールナトリウム液(共立製薬株式会社)の静脈内投与による麻酔下で腹大動静脈切断により安楽致死させた後、眼球を摘出した。眼瞼結膜を採取し、その後、ドライアイス上で眼球を凍結させて、角膜、眼球結膜、網膜、脈絡膜、虹彩および毛様体を採材した。
Claims (15)
- 式(Ia):
R1x、R2x、R3xおよびR4xは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R5xは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X1は、−NR7−CHR8−(CH2)n1−A1−B1を表し;
R7は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R8は、水素原子、−CONR9R10および−CO2R11から選択され;
A1は、単結合、−(Y1−CH2−CH2)n2−および−(Y2−CH2−CH2−(CH2)na)n3−から選択され;
B1は、−NR12R13、−N+R12R13R14Q−、−N(−A2−NR12R13)2、窒素原子を1〜4個含む5〜10員のヘテロアリール、−NHC(=NH)NH2および基
Y1およびY2は、独立に、酸素原子または−NR16−を表し;
n1は、1〜6の整数を表し、n2およびn3は、独立に、1〜10の整数を表し、naは、1または2の整数を表し、n4は0〜3の整数を表し;
A2は、C2−10アルキレンを表し;
R9、R10、R11、R12、R13、R14、R15およびR16は、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Q−は、カウンターアニオンを表す]で表される繰り返し単位、
式(Ib):
R1y、R2y、R3yおよびR4yは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R5yは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X2は、−O−Z3、−ORa、−NRaR5z、−O−Z1−Z2、−O−Z0−Z1−Z2、−O−Z0−Z2、−NRb−Z3、−NR6−Z1−Z2および−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2から選択され;
R5zおよびR6は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Raは、C8−50アルキル、C8−50アルケニルおよびC8−50アルキニルから選択され;
Z0は、以下の基:
Z1は、C1−30アルキレン、または−(CH2CH2O)m−CH2CH2−であり、ここで該アルキレンは、独立に、−O−、−NRg−および−S−S−から選択される1〜5の基が挿入されていてもよく、mは、1〜100から選択される整数であり;
Z2は、以下の基:
−NRb−Z3、
−NRb−COO−Z3、
−NRb−CO−Z3、
−NRb−CO−NRc−Z3、
−COO−Z3、
−CO−NRc−Z3、
−O−Z3、
−O−CO−NRc−Z3、
−O−COO−Z3、
−S−Z3、
−CO−Za−S−Z3、
−O−CO−Zb−S−Z3、
−NRb−CO−Zb−S−Z3、および
−S−S−Z3、
から選択され;
RbおよびRcは、独立に、水素原子、C1−20アルキル、アミノC2−20アルキルおよびヒドロキシC2−20アルキルから選択され、ここで当該基のアルキル部分は、独立に、−O−および−NRf−から選択される1〜3個の基が挿入されていてもよく;
Rdは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
Rfは、独立に、水素原子、C1−12アルキル、アミノC2−12アルキル、およびヒドロキシC2−12アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は−O−および−NH−から選択される1〜2個の基が挿入されていてもよく;
Rgは、独立に、水素原子、C1−20アルキル、アミノC2−20アルキルまたはヒドロキシC2−20アルキルから選択され、当該基のアルキル部分は、独立に、−O−および−NH−から選択される1〜3個の基が挿入されていてもよく;
Z3は、ステリル基であり;
Zaは、C1−5アルキレンであり;
Zbは、C2−8アルキレンまたはC2−8アルケニレンであり;
R31は、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R32は、水素原子、−CONR33R34および−CO2R35から選択され;
A3は、単結合、−(Y3−CH2−CH2)n12−および−(Y4−CH2−CH2−(CH2)n14)n13−から選択され;
B2は、−NR36−X4、−N(−X4)2、−N(−A4−NR36R37)(−A4−NR36−X4)、−N(−A4−NR36−X4)2および−NHC(=NH)NH−X4から選択され;
Y3およびY4は、独立に、酸素原子または−NR16a−を表し;
n11は、1〜6の整数を表し、n12およびn13は、独立に、1〜10の整数を表し、n14は、1または2の整数を表し;
A4は、C2−10アルキレンを表し;
R33、R34、R35、R36、R37およびR16aは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
X4は、−CO2−Z3、−CO2−Z1−Z2、−CO2−Z0−Z1−Z2、−CO2−Z0−Z2、−CO−Z1−Z2、−CO−Z0−Z1−Z2、−CO−Z0−Z2、−CORa、−Z3、−O−Z3、−Z1−Z2、−Z0−Z1−Z2または−Z0−Z2を表す]で表される繰り返し単位、および
式(Ic):
R1z、R2z、R3zおよびR4zは、それぞれ独立に、水素原子、C1−6アルキル、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
R4zaは、水素原子、ホルミルおよび(C1−6アルキル)カルボニルから選択され;
X3は、−O−PG1、−S−PG1、−NR38−PG1および−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3から選択され;
R38、およびR39は、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
R40は、水素原子、−CONR43R44および−CO2R45から選択され;
A5は、単結合、−(Y5−CH2−CH2)n16−および−(Y6−CH2−CH2−(CH2)n18)n17−から選択され;
B3は、−NR41−X6、−N(−A6−NR41R42)(−A6−NR41−X6)、−N(−A6−NR41−X6)2および−NHC(=NH)NH−X6から選択され;
Y5およびY6は、独立に、酸素原子または−NR16b−を表し;
n15は、1〜6の整数を表し、n16およびn17は、独立に、1〜10の整数を表し、n18は、1または2の整数を表し;
R41、R42、R43、R44、R45およびR16bは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し;
A6は、C2−10アルキレンを表し;
X6は、−PG2、−CO2−PG2、−C(=O)S−PG2または−CO−PG2であり;
PG1は、以下の式(Z)、式(Y)、式(Xa)、式(Xb)、式(Xc)、式(Xd)、式(W1)、式(W2)、式(W3)、式(W4)、式(V1)、式(V2)、式(V3)および式(V4)で表される基から選択され;
PG2は、以下の式(Z)、式(Y)、式(U1)、式(U2)、式(U3)、式(U4)、式(U5)、式(U6)、式(U7)、式(U8)、式(U9)、式(T1)、式(T2)、式(T3)、式(T4)、式(T5)、式(T6)、式(T7)、式(T8)、式(T9)、式(T10)、式(T11)および式(T12)で表される基から選択され;
−CH2CH2(OCH2CH2)nz−Ta (Z)
Taは、−NRhR、−CORiおよび−ORnから選択され、
Tbは、−ORnを表し、
nzは、20〜1500の整数であり、
nyおよびnxは、その和が20〜1500となる、それぞれ10以上の整数であり、
Xは、以下の式(X1)または式(X2)で表される2価の基であり、
−CH2− (X1)
***−CH2O(CH2)nw− (X2)
R、R’およびRnは、独立に、水素原子またはC1−6アルキルを表し、
Rhは、水素原子、C1−6アルキル、式(Xa)、式(Xb)、式(Xc)、式(Xd)、式(W1)、式(W2)、式(W3)、式(W4)、式(V1)、式(V2)、式(V3)および式(V4)で表される基から選択され、
Riは、ヒドロキシ、C1−6アルコキシ、式(U1)、式(U2)、式(U3)、式(U4)、式(U5)、式(U6)、式(U7)、式(U8)、式(U9)、式(T1)、式(T2)、式(T3)、式(T4)、式(T5)、式(T6)、式(T7)、式(T8)、式(T9)、式(T10)、式(T11)および式(T12)で表される基から選択され、
nwは、2〜10の整数を表し、
nは、1または2であり、
Tは、−NRR’、−CORo、および−ORから選択され、
Roは、ヒドロキシまたはC1−6アルコキシを表す]
で表される繰り返し単位を、それぞれ1以上含む、ヒアルロン酸誘導体。 - X2が、−NR6−Z1−Z2であり、X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1から選択される、請求項1〜6のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
- X2が、X4が−CO−Z1−Z2または−Z3である−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2であり、X3が、X6が−CO−PG2である−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3である、請求項1〜6のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
- 存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ib)で表される繰り返し単位の割合が、3〜55%である、請求項1〜8のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
- X2が、−O−Z3、−O−Z1−Z2および−NR6−Z1−Z2から選択され、X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1から選択され、存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ia)で表される繰り返し単位の割合が、1〜75%である、請求項1〜6のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
- 存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ia)で表される繰り返し単位の割合、およびX2が−NR31−CHR32−(CH2)n11−A3−B2である式(Ib)で表される繰り返し単位の割合、およびX3が−NR39−CHR40−(CH2)n15−A5−B3である式(Ic)で表される繰り返し単位の割合の和が、30〜100%である、請求項1〜6、8および9のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
- 存在する二糖の繰り返し単位における、式(Ic)で表される繰り返し単位の割合が、1〜30%である、請求項1〜11のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
- X3が、−O−PG1、−S−PG1および−NR38−PG1で表される基から選択され、PG1が、式(Z)で表される基である、請求項1〜7、9、10、12および13のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体。
- 請求項1〜14のいずれか1項に記載のヒアルロン酸誘導体を含む、医薬組成物。
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---|---|---|---|---|
US11795320B2 (en) * | 2019-09-20 | 2023-10-24 | Bausch + Lomb Ireland Limited | Grafted polymer and use thereof |
TWI834948B (zh) * | 2020-02-05 | 2024-03-11 | 日商旭化成股份有限公司 | 玻尿酸衍生物組合物、醫藥組合物及玻尿酸衍生物-藥物結合體組合物 |
CN114945600A (zh) * | 2020-02-07 | 2022-08-26 | 旭化成株式会社 | 透明质酸衍生物、药物组合物和透明质酸衍生物-药物结合体 |
WO2024019118A1 (ja) * | 2022-07-20 | 2024-01-25 | 旭化成株式会社 | ヒアルロン酸誘導体医薬品組成物及び医薬品組成物 |
Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001233901A (ja) * | 1999-12-14 | 2001-08-28 | Kibun Food Chemifa Co Ltd | ヒアルロン酸プロピレングリコールエステルおよびそれを用いた皮膚外用剤 |
WO2003087019A1 (fr) * | 2002-04-18 | 2003-10-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisya | Produit de modification d'acide hyaluronique |
WO2005023906A1 (ja) * | 2003-09-08 | 2005-03-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ヒアルロン酸修飾物、及びそれを用いた薬物担体 |
JP2007153944A (ja) * | 2005-12-01 | 2007-06-21 | Shiseido Co Ltd | カチオン化ヒアルロン酸 |
WO2008133267A1 (ja) * | 2007-04-24 | 2008-11-06 | Q.P. Corporation | カチオン化ヒアルロン酸および/またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを用いた毛髪改質剤、キューティクル修復剤、皮膚改質剤および化粧料 |
JP2009518498A (ja) * | 2006-01-19 | 2009-05-07 | ソウル ナショナル ユニバーシティー オブ テクノロジー センター フォー インダストリー コラボレーション | キトサンまたはヒアルロン酸−ポリ(エチレンオキサイド)及びキトサン−ヒアルロン酸−ポリ(エチレンオキサイド)を基底にするハイドロゲルとその製造方法 |
WO2010053140A1 (ja) * | 2008-11-05 | 2010-05-14 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | ヒアルロン酸誘導体、およびその医薬組成物 |
WO2012118189A1 (ja) * | 2011-03-03 | 2012-09-07 | 中外製薬株式会社 | アミノ-カルボン酸により修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
WO2014038641A1 (ja) * | 2012-09-05 | 2014-03-13 | 中外製薬株式会社 | アミノ酸およびステリル基が導入されたヒアルロン酸誘導体 |
CN106265510A (zh) * | 2016-08-17 | 2017-01-04 | 宁夏医科大学 | 一种肿瘤细胞内pH触发式释药的多级靶向聚合物胶束及其制备方法 |
JP6893918B2 (ja) * | 2016-05-11 | 2021-06-23 | 中外製薬株式会社 | カチオン性基および疎水性基が導入されたヒアルロン酸誘導体 |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2766303B2 (ja) | 1989-04-13 | 1998-06-18 | 生化学工業株式会社 | グリコサミノグリカンで修飾されたスーパーオキシドジスムターゼ及びその製造法 |
AU652784B2 (en) | 1990-10-18 | 1994-09-08 | Shiseido Company Ltd. | Combination of hyaluronic acid with medicinal ingredient and production thereof |
JP2001081103A (ja) | 1999-09-13 | 2001-03-27 | Denki Kagaku Kogyo Kk | ヒアルロン酸結合薬剤 |
US6710038B1 (en) | 1999-12-14 | 2004-03-23 | Kibun Food Chemifa Co., Ltd. | Emulsification method using propylene glycol hyaluronate |
DE60012866T2 (de) | 1999-12-14 | 2005-09-08 | Kibun Food Chemifa Co., Ltd. | Propylenglykolhyaluronat und äusserlich anzuwendendes Hautpflegemittel, das dieses enthält |
DE10032329A1 (de) | 2000-07-04 | 2002-02-07 | Kahl Johan Valentin | Oberflächenbeschichtung auf einer Flüssig-/Fest-Grenzfläche |
ATE552859T1 (de) | 2000-09-13 | 2012-04-15 | Praecis Pharm Inc | Pharmazeutische formulierungen zur kontinuierlichen abgabe von peptiden |
IL140844A0 (en) | 2001-01-10 | 2002-02-10 | Polygene Ltd | Cationic polysaccharide compositions |
WO2002090209A1 (en) | 2001-05-07 | 2002-11-14 | Australian Postal Corporation | Packaging system |
ITPD20020271A1 (it) | 2002-10-18 | 2004-04-19 | Fidia Farmaceutici | Composti chimico-farmaceutici costituiti da derivati dei taxani legati covalentemente all'acido ialuronico o ai suoi derivati. |
EP1683812B1 (en) | 2003-11-14 | 2014-11-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Crosslinked polysaccharide microparticles and method for their preparation |
TW200536861A (en) | 2004-04-02 | 2005-11-16 | Denki Kagaku Kogyo Kk | Hyaluronic acid/methotrexate compound |
TW200612991A (en) | 2004-09-07 | 2006-05-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Process for producing water-soluble hyaluronic acid modification |
US8987230B2 (en) | 2007-05-01 | 2015-03-24 | National University Corporation Tokyo Medical And Dental University | Hybrid gel comprising chemically crosslinked hyaluronic acid derivative and pharmaceutical composition comprising the same |
US8865875B2 (en) | 2007-08-22 | 2014-10-21 | Medarex, L.L.C. | Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with C-terminal extensions |
IE20070900A1 (en) | 2007-12-12 | 2009-06-24 | Eurand Pharmaceuticals Ltd | New anticancer conjugates |
US20110177017A1 (en) | 2010-01-15 | 2011-07-21 | Timothy Woodrow Coffindaffer | Non-Aerosol Personal Care Compositions Comprising A Hydrophobically Modified Cationic Polysaccharide |
WO2011148116A2 (fr) | 2010-05-27 | 2011-12-01 | Laboratoire Idenov | Acide hyaluronique modifie, procede de fabrication et utilisations |
EP2844223A1 (en) | 2012-05-03 | 2015-03-11 | Kala Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical nanoparticles showing improved mucosal transport |
CN103143027A (zh) | 2013-02-28 | 2013-06-12 | 厦门大学 | 一种基于透明质酸的双靶向纳米复合物药物制备及其应用 |
US10583084B2 (en) | 2014-06-26 | 2020-03-10 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Liposomal formulations for delivery of nucleic acids |
CN104945538A (zh) | 2015-06-25 | 2015-09-30 | 浙江大学 | 一种透明质酸维生素e衍生物及制备和应用 |
-
2018
- 2018-11-15 WO PCT/JP2018/043306 patent/WO2019098393A1/ja unknown
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- 2018-11-15 EP EP18879912.6A patent/EP3712181B1/en active Active
Patent Citations (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001233901A (ja) * | 1999-12-14 | 2001-08-28 | Kibun Food Chemifa Co Ltd | ヒアルロン酸プロピレングリコールエステルおよびそれを用いた皮膚外用剤 |
WO2003087019A1 (fr) * | 2002-04-18 | 2003-10-23 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisya | Produit de modification d'acide hyaluronique |
WO2005023906A1 (ja) * | 2003-09-08 | 2005-03-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | ヒアルロン酸修飾物、及びそれを用いた薬物担体 |
JP2007153944A (ja) * | 2005-12-01 | 2007-06-21 | Shiseido Co Ltd | カチオン化ヒアルロン酸 |
JP2009518498A (ja) * | 2006-01-19 | 2009-05-07 | ソウル ナショナル ユニバーシティー オブ テクノロジー センター フォー インダストリー コラボレーション | キトサンまたはヒアルロン酸−ポリ(エチレンオキサイド)及びキトサン−ヒアルロン酸−ポリ(エチレンオキサイド)を基底にするハイドロゲルとその製造方法 |
WO2008133267A1 (ja) * | 2007-04-24 | 2008-11-06 | Q.P. Corporation | カチオン化ヒアルロン酸および/またはその塩、およびその製造方法、ならびにこれを用いた毛髪改質剤、キューティクル修復剤、皮膚改質剤および化粧料 |
WO2010053140A1 (ja) * | 2008-11-05 | 2010-05-14 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | ヒアルロン酸誘導体、およびその医薬組成物 |
WO2012118189A1 (ja) * | 2011-03-03 | 2012-09-07 | 中外製薬株式会社 | アミノ-カルボン酸により修飾されたヒアルロン酸誘導体 |
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