PT2287156E

PT2287156E - 2,4-di(fenilamino)-pirimidinas úteis no tratamento de doenças neoplásicas, desordens inflamatórias e do sistema imunitário

Info

Publication number: PT2287156E
Application number: PT100102912T
Authority: PT
Inventors: Carlos Garcia-Echeverria; Jiqing Jiang; Eiji Kawahara; Takahiro Miyake; Osamu Ohmori; Ruo Steensma; Donald Karanewsky; Ichiro Umemura; Takanori Kanazawa; Naoko Matsuura; Keiichi Masuya; Greg Chopiuk; Yongqin Wan; Qiang Ding; Qiong Zhang; Nathanael Schiander Gray
Original assignee: Novartis Ag; Irm Llc
Priority date: 2003-08-15
Filing date: 2004-08-13
Publication date: 2013-08-26
Also published as: ES2424881T3; KR20060039938A; BRPI0413616B8; US20110098280A1; HK1091813A1; TW200526598A; MA27994A1; PL1660458T3; NZ585188A; TNSN06052A1; US20080132504A1; RU2395500C2; SG145749A1; EP2287156A1; ES2380206T3; EP1660458A1; CO5680434A2; CA2533320A1; SI1660458T1; AU2008229685B2

Description

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ

DESCRIÇÃO "2,4-Di(fenilamino)-pirimidinas úteis no tratamento de doenças neoplásicas, desordens inflamatórias e do sistema imunitário" A presente invenção refere-se à utilização de novos derivados de pirimidina, a determinados novos derivados de pirimidina, a processos para a sua produção, à sua utilização como produtos farmacêuticos e a composições farmacêuticas que os compreendem.

Em WO 00/39101 AI descrevem-se compostos da fórmula geral (I) para utilização como agentes anti-cancro.

Em WO 03/078404 AI descrevem-se compostos de fórmula (I) para utilização em desordens em que a inibição de ZAP-70 e/ou Syk desempenham um papel ou causadas por um mau funcionamento das cascatas de sinais relacionadas com FAK.

Sumário da invenção

Em conformidade, num primeiro aspecto, a presente invenção proporciona um composto de Fórmula I'

V 2 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ em que : η' é seleccionado entre 1 e 2; R' i é seleccionado de fenilo, piridinilo, pirazolilo e pirimidinilo; em que R'i é substituído por 2 ou 3 radicais seleccionados independentemente de etoxi, etilo, propilo, metilo, t-butilo, trifluorometilo, nitrilo, ciclobutiloxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, isobutiloxi, t-butiloxi, isopropiloxi, metil-amino-carbonilo, ciclopropil-metoxi, dimetilamino-propil-amino, metoxi-etoxi, -X'R'4, -C(0)R,4 e -OX'R'4; em que X' é uma liqação, metileno ou etileno; R' 4 é seleccionado de piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, azepanilo e 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-ilo; em que R'4 é opcionalmente substituído por 1 a 3 radicais seleccionados independentemente de metilo, isopropilo, acetilo, acetil-metil-amino, 3-dimetilamino-2,2-dimetil-propilamino, etil-metil-amino-etoxi, dietil-amino-etoxi, amino-carbonilo, etilo, 2-oxo-pirrolidin-l-ilo, pirrolidinilo, pirrolidinil-metilo, piperidinilo opcionalmente substituído com metilo ou etilo, morfolino, dimetilamino, dimetilamino-propil-amino, metil-amino e etil-amino; R'2 é seleccionado de hidroqénio e haloqéneo; R'3 é seleccionado de dimetil-sulfamoílo, isobutil-sulfamorlo, etil-sulfamoílo, propilsulfonilo, etil-amino-carbonilo, 1-etil-propil-sulfamoílo, ciclopentil-sulfamoílo, isopropil-sulfamoílo, ciclo-hexil-sulfonilo, ciclopropil-metil- sulfamoílo, ciclobutil-sulfamoílo e isopropil-sulfonilo; ou seus sais, hidratos, solvatos e estereoisómeros farmaceuticamente aceitáveis.

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto da Fórmula I' tal como aqui definido como ingrediente activo, juntamente com um ou mais diluentes ou transportadores farmaceuticamente aceitáveis.

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona a utilização de um composto da Fórmula I' tal como aqui definido para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças neoplásicas e desordens do sistema imunitário. 3 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona uma combinação que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da Fórmula 1' tal como aqui definido e uma ou mais substâncias de fármaco adicionais, sendo as referidas substâncias de fármaco úteis no tratamento de doenças neoplásicas ou desordens do sistema imunitário.

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona a utilização de um composto da Fórmula 1' tal como aqui definido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença que responde à inibição de IGF-1R ou ALK. Em algumas concretizações, a doença pode ser uma doença proliferativa tal como um tumor, da mama, renal, da próstata, colorrectal, da tiróide, ovariano, do pâncreas, neuronal, do pulmão, uterino ou tumores gastro-intestinais, assim como osteossarcomas e melanomas. Noutras concretizações, a doença pode ser uma doença do sistema imunitário.

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona a utilização de um composto da Fórmula I' tal como aqui definido ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de desordens inflamatórias e/ou do sistema imunitário. Exemplos de desordens inflamatórias e/ou do sistema imunitário incluem rejeição de transplante, alergia e desordens autoimunes mediadas por células imunes que incluem linfócitos T, linfócitos B, macrófagos, células dendriticas, mastócitos e eosinófilos.

Num aspecto adicional, a presente invenção proporciona um composto da Fórmula 1' tal como aqui definido para utilização num método de tratamento ou prevenção de uma doença neoplásica, uma desordem do sistema imunitário, uma doença inflamatória ou uma doença proliferativa.

Os termos genéricos aqui utilizados, anteriormente e adiante, têm preferivelmente, dentro do contexto da presente divulgação, os significados seguintes, a menos que indicado em contrário: 4 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ

Quando se utiliza a forma plural para compostos, sais e similares, deve entender-se que esta também significa um único composto, sal, ou similares.

Quaisquer átomos de carbono assimétricos podem estar presentes na configuração (R) , (S) ou (R,S), preferivelmente na configuração (R) ou (S) . Os compostos podem assim estar presentes na forma de misturas de isómeros ou na forma de isómeros puros, preferivelmente na forma de diastereoisómeros enantiomericamente puros. A invenção refere-se também a possíveis tautómeros dos compostos de fórmula I'. 0 heterociclilo de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído compreendendo 1, 2 ou 3 heteroátomos seleccionados entre N, 0 e S pode ser insaturado, parcialmente insaturado ou saturado, e adicionalmente estar condensado com um grupo benzo ou um grupo heterociclilo de 5 ou 6 membros, e pode estar ligado através de um heteroátomo ou um átomo de carbono, e é, por exemplo, pirrolilo, indolilo, pirrolidinilo, imidazolilo, benzimidazolilo, pirazolilo, triazolilo, benzotriazolilo, tetrazolilo, piridilo, quinolinilo, isoquinolinilo, 1,2,3,4-tetra-hidroquinolinilo, piperidilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, purinilo, tetrazinilo, oxazolilo, isoxalilo, morfolinilo, tiazolilo, benzotiazolilo, oxadiazolilo e benzoxadiazolilo. Os substituintes considerados são alquilo-Ci-Cs, hidroxialquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alcoxi-Ci-Cs, halogenoalquilo-Ci-C8, hidroxi, amino, amino substituído, alcoxi-Ci-Cs, halogéneo, carboxi, alquilcarbonilo-Ci-Cs, alcoxicarbonilo-Ci-C8, carbamoílo, alquilcarbamoílo-Ci-Cs, ciano, oxo, ou heterociclilo de 5 ou 6 membros não substituído ou substituído como definido neste parágrafo. 0 heterociclilo de 5 ou 6 membros preferivelmente compreende 1 ou 2 heteroátomos seleccionados entre N, 0 e S, e é especialmente indolilo, pirrolidinilo, pirrolidonilo, imidazolilo, N-metilimidazolilo, benzimidazolilo, S,S-dioxo-isotiazolidinilo, piperidilo, 4-acetilaminopiperidilo, 4-metilcarbamoílpiperidilo, 4-piperidinopiperidilo, 4-ciano-piperidilo, piperazinilo, N-metilpiperazinilo, N-(2-hidroxietil)piperazinilo, morfolinilo, l-aza-2,2-dioxo-2- 5 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ tiaciclo-hexilo ou sulfolanilo.

Em heterocicliloxi não substituído ou substituído, heterociclilo tem o significado acima definido, e é especialmente N-metil-4-piperidiloxi. Em heterociclilalcoxi-Ci-Cs não substituído ou substituído, heterociclilo tem o significado acima definido, e é especialmente 2-pirrolidinoetoxi, 2-morfolinoetoxi, 3-morfolinopropoxi, 1- metilpiperidin-3-ilmetoxi, 3-(N-metilpiperazino)propoxi ou 2- (1-imidazolil)etoxi.

Num anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros compreendendo 0, 1, 2 ou 3 heteroátomos seleccionados entre N, O e S, e formado por dois substituintes adjacentes conjuntamente com o anel benzeno, o anel pode estar adicionalmente substituído, e.g. com alquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-C8, halogenoalquilo-Ci-Cs, hidroxi, amino, amino substituído, alcoxi-Ci-Cs, halogéneo, carboxi, alcoxicarbonilo-Ci-Cs, carbamoílo, ciano ou oxo. Os dois substituintes adjacentes que formam este anel são preferivelmente propileno, butileno, l-aza-2-propilideno, 3- aza-l-propilideno, 1,2-diaza-2-propilideno, 2,3-diaza-l-propilideno, 1-oxapropileno, 1-oxapropilideno, metilenodioxi, difluorometilenodioxi, 2-aza-l-oxopropileno, 2-aza-2-metil-l-oxopropileno, l-aza-2-oxopropileno, 2-aza-l,1-dioxo-l-tiapropileno ou os correspondentes derivados de butileno que formam um anel de 6 membros.

Os sais são especialmente os sais farmaceuticamente aceitáveis de compostos de fórmula I.

Estes sais são formados, por exemplo, como sais de adição de ácido, preferivelmente com ácidos orgânicos ou inorgânicos, a partir de compostos de fórmula I' com um átomo de azoto básico, especialmente os sais farmaceuticamente aceitáveis. Os ácidos inorgânicos adequados são, por exemplo, ácidos de halogéneo, tal como ácido clorídrico, ácido sulfúrico ou ácido fosfórico. Os ácidos orgânicos adequados são, por exemplo, os ácidos carboxílicos, fosfónicos, sulfónicos ou sulfâmicos, por exemplo ácido acético, ácido propiónico, ácido octanóico, ácido decanóico, ácido dodecanóico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido fumárico, 6 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ ácido succínico, ácido adipico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, aminoácidos, tais como ácido glutâmico ou ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido ciclo-hexanocarboxílico, ácido adamantanocarboxílico, ácido benzóico, ácido salicílico, ácido 4-aminossalicílico, ácido ftálico, ácido fenilacético, ácido mandélico, ácido cinâmico, ácido metanossulfónico ou etanossulfónico, ácido 2-hidroxietanossulfónico, ácido etano-1,2-dissulfónico, ácido benzenossulfónico, ácido 2-naftalenossulfónico, ácido 1,5-naftalenodissulfónico, ácido 2-, 3- ou 4-metilbenzenossulfónico, ácido metilsulfúrico, ácido etilsulfúrico, ácido dodecilsulfúrico, ácido N-ciclo-hexilsulfâmico, ácido N-metil-, N-etil- ou N-propilsulfâmico, ou outros ácidos orgânicos protónicos, tais como ácido ascórbico.

Para fins de isolamento ou purificação é também possível utilizar sais não farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo picratos ou percloratos. Para uso terapêutico, apenas são empregues sais farmaceuticamente aceitáveis ou compostos livres (quando aplicável, na forma de preparações farmacêuticas), e estes são portanto preferidos.

Tendo em conta a estreita relação entre os novos compostos na forma livre e na forma dos seus sais, incluindo os sais que podem ser utilizados como intermediários, por exemplo na purificação ou na identificação dos novos compostos, qualquer referência aqui, acima ou adiante, aos compostos livres, deve ser entendida como referindo-se também aos correspondentes sais, conforme apropriado e expedito.

Os compostos de fórmula I' possuem valiosas propriedades farmacológicas, como aqui descrito acima e adiante.

Os sais de um composto de fórmula 1' com um grupo formador de sal podem ser preparados de uma maneira conhecida per se. Os sais de adição de ácido de compostos de fórmula I' podem assim ser obtidos por tratamento com um ácido ou com um reagente de permuta aniónica adequado. 7 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ

Os sais podem usualmente ser convertidos em compostos na forma livre, e.g. por tratamento com agentes básicos adequados, por exemplo com carbonatos de metais alcalinos, hidrogenocarbonatos de metais alcalinos ou hidróxidos de metais alcalinos, tipicamente carbonato de potássio ou hidróxido de sódio.

Misturas estereoisoméricas, e.g. misturas de diastereoisómeros, podem ser separadas nos seus isómeros correspondentes de uma maneira conhecida per se por meio de métodos de separação adequados. As misturas diastereoisoméricas por exemplo podem ser separadas nos seus diastereoisómeros individuais por meio de cristalização fraccionada, cromatografia, distribuição por solventes, e procedimentos similares. Esta separação pode ter lugar quer ao nivel de um composto de partida quer ao do próprio composto de fórmula I'. Os enantiómeros podem ser separados através da formação de sais diastereoisoméricos, por exemplo por formação de um sal com um ácido quiral enantiomericamente puro, ou por meio de cromatograf ia, por exemplo por HPLC, utilizando substratos cromatográficos com ligandos quirais.

Deve enfatizar-se que reacções análogas às conversões mencionadas neste capitulo podem também tomar lugar ao nivel dos intermediários apropriados.

Os compostos de fórmula I', incluindo seus sais, são também obteníveis na forma de hidratos, ou os seus cristais podem incluir por exemplo o solvente utilizado para a cristalização (presentes na forma de solvatos). A Quinase de Adesão Focal (FAK, do inglês Focal Adhesion Kinase) é uma enzima chave na cascata de sinais mediada por integrina "outside-in" (D. Schlaepfer et al., Prog Blophys Mol Biol 1999, 71, 435-478). A interacção entre células e proteínas da matriz extracelular (ECM) é transduzida como sinais intracelulares importantes para o crescimento, a sobrevivência e a migração através de receptores da superfície celular, integrinas. A FAK desempenha um papel essencial nestas cascatas de sinais mediadas por integrina "outside-in0 "gatilho" na cascata de transdução de sinais é a autofosforilação de Y397. A Y397 fosforilada é um local 8 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ de ancoragem SH2 para tirosina-quinases da família Src. A quinase c-Src ligada fosforila outros resíduos de tirosina na FAK. Entre eles, a Y925 fosforilada torna-se um local de ligação para o local SH2 da proteína adaptadora pequena Grb2. Esta ligação directa de Grb2 a FAK é um dos passos chave para a activação de alvos a jusante tais como a cascata de quinases Ras-ERK2/MAP. A inibição da sinalização de FAK endógena resulta em motilidade reduzida e em alguns casos induz morte celular. Por outro lado, aumentar a sinalização de FAK por expressão exógena aumenta a motilidade celular e transmite um sinal de sobrevivência celular a partir da ECM. Em adição a FAK é sobre-expressa em cancros epiteliais, mesenquimatosos, da tiróide e da próstata, invasivos e metastáticos. Consequentemente, um inibidor de FAK será provavelmente um fármaco contra crescimento tumoral e metástase. Os compostos da invenção estão assim indicados, por exemplo, para prevenir e/ou tratar um vertebrado e mais particularmente um mamífero, afectado por uma doença neoplásica, em particular tumor da mama, cancro dos intestinos (cólon e recto), cancro do estômago e cancro dos ovários e da próstata, cancro do pulmão de células não pequenas, cancro do pulmão de células pequenas, cancro do fígado, melanoma, tumor da bexiga e cancro da cabeça e pescoço. A relação entre a inibição de FAK e o sistema imunitário está descrita e.g. em G.A. van Seventer et al., Eur. J. Immunol. 2001, 31, 1417-1427. Portanto, os compostos da invenção são, por exemplo, úteis para prevenir e/ou tratar um vertebrado e mais particularmente um mamífero, afectado por desordens do sistema imunitário, doenças ou desordens mediadas por linfócitos T, linfócitos B, mastócitos e/ou eosinófilos e.g. rejeição aguda ou crónica de alo- ou xenoenxertos de tecidos ou órgãos, aterosclerose, oclusão vascular devido a lesão vascular tal como angioplastia, restenose, hipertensão, insuficiência cardíaca, doença pulmonar obstrutiva crónica, doença do CNS tal como doença de Alzheimer ou esclerose amiotrófica lateral, cancro, doença infecciosa tal como SIDA, choque séptico ou síndrome da dificuldade respiratória do adulto, lesão por isquemia/reperfusão e.g. enfarte do miocárdio, icto, isquemia 9 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ do intestino, insuficiência renal ou choque hemorrágico, ou choque traumático. Os agentes da invenção são também úteis no tratamento e/ou prevenção de doenças ou desordens inflamatórias ou doenças auto-imunes, agudas ou crónicas, e.g. artrite reumatóide, osteoartrite, lúpus eritematoso sistémico, tiroidite de Hashimoto, esclerose múltipla, miastenia grave, diabetes (tipo I e II) e as desordens associadas, doenças respiratórias tais como asma ou lesão inflamatória do figado, lesão inflamatória glomerular, manifestações cutâneas de desordens ou enfermidades imunologicamente mediadas, doenças inflamatórias e hiperproliferativas da pele (tais como psoriase, dermatite atópica, dermatite de contacto alérgica, dermatite de contacto irritante e outras dermatites eczematosas, dermatite seborreica), doenças inflamatórias oculares, e.g. sindrome de Sjoegren, queratoconjunctivite ou uveite, doença inflamatória dos intestinos, doença de Crohn ou colite ulcerativa.

Os compostos da invenção são activos num sistema de ensaio de FAK como descrito nos Exemplos, e apresentam uma inibição IC5o na gama de 1 nM a 100 nM.

Alguns dos compostos da invenção exibem também actividade inibidora da proteína-tirosina-quinase ZAP-70 (proteína associada à cadeia zeta de 70 kD). A interacção com proteína-tirosina-quinase ZAP-70 dos agentes da invenção pode ser demonstrada pela sua capacidade de prevenir a fosforilação de e.g. LAT-11 (ligante para activação de células T) por proteína-tirosina-quinase ZAP-70 humana em solução aquosa, como descrito nos Exemplos. Os compostos da invenção estão assim também indicados para a prevenção ou tratamento de desordens ou doenças em que a inibição de ZAP-70 desempenha um papel.

Os compostos da invenção são activos num sistema de ensaio com ZAP-70 como descrito nos Exemplos, e apresentam uma inibição IC50 na gama de 1 μΜ a 10 μΜ.

Os compostos da presente invenção são também bons inibidores do IGF-1R (receptor 1 do factor de crescimento semelhante a insulina) e são portanto úteis no tratamento de doenças mediadas por IGF-1R. Estas doenças incluem por 10 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ exemplo doenças proliferativas, tais como tumores, como por exemplo tumores da mama, renais, da próstata, colorrectais, da tiróide, ovarianos, do pâncreas, neuronais, do pulmão, uterinos e gastrointestinais assim como osteossarcomas e melanomas. A eficácia dos compostos da invenção como inibidores da actividade de tirosina-quinase de IGF-1R pode ser demonstrada utilizando um "ELISA de Captura" celular. Neste ensaio é determinada a actividade dos compostos da invenção contra a autofosforilação do IGF-1R induzida pelo factor I de crescimento semelhante a insulina (IGF-I).

Os compostos de fórmula I e seus sais farmaceuticamente aceitáveis exibem propriedades farmacológicas valiosas guando testados in vitro em ensaios com guinase isentos de células e em ensaios celulares, e são portanto úteis como produtos farmacêuticos. Em particular, os compostos da invenção são inibidores de Quinase de Linfoma Anaplásico (ALK), e são úteis como produtos farmacêuticos para tratar condições causadas por um mau funcionamento de cascatas de sinais ligadas a quinase de linfoma anaplásico, em particular tumores como se descreve adiante. A sinalização mediada por ALK pode desempenhar um papel no desenvolvimento e/ou progressão de vários tumores sólidos comuns (Pulford, K., et al., J. Cell. Physiol. 2004 Jun; 199(3):330-58). Os compostos da presente invenção também exibem uma poderosa inibição da actividade de tirosina-quinase da quinase de linfoma anaplásico (ALK) e suas proteínas de fusão, particularmente a proteina de fusão NPM-ALK. Esta proteina-tirosina-quinase resulta de uma fusão génica de nucleofosmina (NPM) e da quinase de linfoma anaplásico (ALK), tornando a actividade de proteina-tirosina-quinase da ALK independente dos ligandos. A NPM-ALK desempenha um papel chave na transmissão de sinais em várias células hematopoéticas e outras células humanas que conduz a doenças hematológicas e neoplásicas, por exemplo em linfoma anaplásico de grandes células (ALCL) e linfomas não hodgkinianos (NHL), especificamente em ALK+ NHL ou Alcomas, em tumores miofibroblásticos inflamatórios (IMT) e neuroblastomas. (Duyster J et al. 2001 Oncogene 20, 5623-5637). Mostrou-se que NPM-ALK é um potente oncogene in vitro, sendo capaz de transformar várias linhas celulares e células 11 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ hematopoiéticas primárias. Adicionalmente, células da medula óssea transduzidas com NPM-ALK são capazes de induzir uma doença do tipo linfoma após transplantação em ratinhos recebedores irradiados. As vias de sinalização activadas por NPM-ALK incluem as vias ras, PLC e PI3K e, em adição, mostrou-se que STAT5 é fosforilada por NPM-ALK. em adição a NPM-ALK, foram identificadas outras fusões genicas em doenças hematológicas e neoplásicas humanas; principalmente TPM3-ALK (uma fusão de tropomiosina 3 não muscular com ALK) . Adicionalmente, a proteina de fusão de ALK, CLTC-ALK, está associada a doenças que incluem tumores clássicos de células T ou ALCL null, ALK+ DLBCL e miofibroblásticos inflamatórios. Também se pensa que CLTCL-ALK desempenha um papel na patogénese de linfomas de células B grandes.

Adicionalmente, a proteina de fusão de ALK, CLTC-ALK, está associada a doenças que incluem tumores clássicos de células T ou ALCL null, ALK+ DLBCL e miofibroblásticos inflamatórios. Também se pensa que CLTCL-ALK desempenha um papel na patogénese de linfomas de células B grandes.

Uma actividade aberrante de ALK está envolvida no

desenvolvimento de tumores cerebrais e foi reportada sobre-expressão de ALK em neuroblastomas e várias linhas celulares derivadas de tecido neural. A sinalização mediada por ALK pode desempenhar um papel no desenvolvimento e/ou progressão de vários tumores sólidos comuns (Pulford, K., et al., J. Cell. Physiol. 2004 Jun; 199(3) :330-58) . A inibição da actividade de tirosina-quinase da ALK pode ser demonstrada utilizando métodos conhecidos, por exemplo utilizando o domínio de quinase recombinante da ALK em analogia com o ensaio da quinase VEGF-R descrito em J. Wood et al. Câncer Res. 60, 2178-2189 (2000). Ensaios enzimáticos in vitro utilizando proteína-tirosina-quinase GST-ALK são realizados em placas de 96 poços na forma de um ensaio de ligação a filtros em Tris*HCl 20 mM, pH = 7,5, MgCl2 3 mM, MnCl2 10 mM, DTT 1 mM, [γ-33Ρ]-ATP a 0,1 yCl/ensaio ( = 30 μΐ) , ATP 2 μΜ, poli (Glu, Tyr 4:1) Poly-EY a 3 pg/ml (Sigma P-0275) , DMSO a 1%, 25 ng de enzima ALK. Os ensaios são incubados durante 10 min à temperatura ambiente. As reacções são terminadas por adição de 50 μΐ de EDTA 125 mM, e a 12 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ mistura reaccional é transferida para uma placa MAIP Multiscreen (Millipore, Bedford, MA, EUA), previamente molhada com metanol, e re-hidratada durante 5 min com H2O. Após lavagem (H3PO4 a 0,5%), contam-se as placas num contador de cintilação liquida. Os valores de IC50 são calculados por análise de regressão linear da percentagem de inibição. Em comparação com o controlo sem inibidor, os compostos de fórmula I inibem a actividade enzimática em 50% (IC50) , por exemplo numa concentração de 0,001 a 0,5 μΜ, especialmente de 0,01 a 0,1 μΜ.

Os compostos de fórmula I' inibem potentemente o crescimento de células BaF3 murinas que sobre-expressam NPM-ALK humana (DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zolikulturen GmbH, Braunschweig, Alemanha). A expressão de NPM-ALK é conseguida por transfecção da linha celular BaF3 com um vector de expressão pCIneo™ (Promega Corp., Madison WI, EUA) que codifica para NPM-ALK e subsequente selecção de células resistentes a G418. Células BaF3 não transfectadas dependem de IL-3 para a sobrevivência celular. Em contraste, células BaF3 que expressam NPM-ALK (denominadas adiante BaF3-NPM-ALK) podem proliferar na ausência de IL-3 porque obtêm o sinal proliferativo através de quinase NPM-ALK. Inibidores putativos da quinase NPM-ALK eliminam portanto o sinal de crescimento e resultam em actividade antiproliferativa. A actividade antiproliferativa de inibidores putativos da quinase NPM-ALK pode contudo ser ultrapassada por adição de IL-3 que proporciona sinais de crescimento através de um mecanismo independente de NPM-ALK. [Para um sistema celular análogo utilizando quinase FLT3 veja-se E Weisberg et al. Câncer Cell; 1, 433-443 (2002)]. A actividade inibidora dos compostos de fórmula I é determinada, resumidamente, como se segue: células BaF3-NPM-ALK (15 000/poço de placa de microtitulo) são transferidas para placas de microtitulo de 96 poços. Os compostos de teste [dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO)] são adicionados numa série de concentrações (diluições em série) de maneira a que a concentração final de DMSO não seja superior a 1% (v/v). Após a adição, as placas são incubadas durante dois dias durante os quais as culturas de controlo sem composto de teste são capazes de sofrer dois ciclos de divisão celular. O crescimento das células BaF3-NPM-ALK é medido por meio de 13 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ coloração com Yopro™ [T Idziorek et al. J. Immunol. Methods; 185: 249-258 (1995) ] : adicionam-se a cada poço 25 μΐ de tampão de lise consistindo em citrato de sódio 20 mM, pH 4,0, cloreto de sódio 26,8 mM, NP40 a 0,4%, EDTA 20 mM e 20 mM. A lise celular fica completa em 60 min à temperatura ambiente e a quantidade total de Yopro ligado a ADN é determinada por medição utilizando o leitor de 98 poços Cytofluor II (PerSeptive Biosystems) com a seguinte regulação: Excitação (nm) 485/20 e Emissão (nm) 530/25.

Os valores de IC5o são determinados por um sistema auxiliado por computador utilizando a fórmula: IC50 = [ (ABSteste-ABSinício) / (ABScontrolo—ABSiníci0) ] ] ><100 . (ABS=absorção) 0 valor de IC50 nestas experiências é dado como a concentração do composto de teste em questão que resulta numa contagem de células que é 50% inferior à obtida utilizando o controlo sem inibidor. Os compostos de fórmula I' exibem actividade inibidora com uma IC5o na gama de aproximadamente 0,01 a 1 μΜ. A acção antiproliferativa dos compostos de fórmula I' pode também ser determinada na linha celular de linfoma humano KARPAS-299 (DSMZ Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemanha) [descrita em WG Dirks et al. Int. J. Câncer 100, 49-56 (2002)] utilizando a mesma metodologia descrita acima para a linha celular BaF3-NPM-ALK. Os compostos de fórmula I exibem actividade inibidora com uma IC5o na gama de aproximadamente 0,01 a 1 μΜ. A acção dos compostos de fórmula I' na autofosforilação da ALK pode ser determinada na linha celular de linfoma humano KARPAS-299 por meio de um immunoblot como descrito em WG Dirks et al. Int J. Câncer 100, 49-56 (2002). Nesse teste os compostos de fórmula I exibem uma IC50 de aproximadamente de 0,001 a 1 μΜ.

Para as utilizações anteriores no tratamento de doenças neoplásicas e desordens do sistema imunitário, a dosagem 14 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ necessária variará evidentemente dependendo do modo de administração, da condição particular a tratar e do efeito pretendido. Em geral, está indicado que se obtêm resultados satisfatórios por via sistémica com dosagens diárias de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal. Uma dosagem diária indicada nos grandes mamíferos, e.g. seres humanos, está na gama de cerca de 0,5 mg a cerca de 2000 mg, convenientemente administrada, por exemplo, em doses divididas até quatro vezes por dia ou de forma retardada.

Os compostos da invenção podem ser administrados por qualquer via convencional, em particular pela via parentérica, por exemplo na forma de soluções ou suspensões injectáveis, entérica, preferivelmente oral, por exemplo na forma de comprimidos ou cápsulas, tópica, e.g. na forma de loções, géis, unguentos ou cremes, ou numa forma nasal ou num supositório. As composições farmacêuticas compreendendo um composto da invenção em associação com pelo menos um transportador ou diluente farmacêuticos aceitáveis podem ser fabricadas da maneira convencional por mistura com um transportador ou diluente farmaceuticamente aceitável. As formas de dosagem unitária para administração oral contêm, por exemplo, de cerca de 0,1 mg a cerca de 500 mg de substância activa. A administração tópica é e.g. na pele. Uma outra forma de administração tópica é no olho.

As composições farmacêuticas da presente invenção são preparadas de uma maneira conhecida per se, por exemplo por meio de processos convencionais de mistura, granulação, revestimento, dissolução ou liofilização. É dada preferência à utilização de soluções do ingrediente activo, e também suspensões ou dispersões, especialmente soluções aquosas isotónicas, dispersões ou suspensões que, por exemplo no caso de composições liofilizadas compreendendo o ingrediente activo sozinho ou juntamente com um transportador, por exemplo manitol, podem ser preparadas antes da utilização. As composições farmacêuticas podem ser esterilizadas e/ou podem compreender excipientes, por exemplo conservantes, estabilizantes, agentes molhantes e/ou emulsionantes, solubilizantes, sais para regulação da pressão osmótica e/ou tampões e são 15 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ preparadas de uma maneira conhecida per se, por exemplo por meio de processos convencionais de dissolução e liofilização. As referidas soluções ou suspensões podem compreender agentes aumentadores da viscosidade, tipicamente carboximetilcelulose de sódio, carboximetilcelulose, dextrano, polivinil-pirrolidona ou gelatinas, ou também solubilizantes, e.g. Tween 80® (polioxietileno(20) mono-oleato de sorbitano).

As suspensões em óleo compreendem como componente oleoso os óleos vegetais, sintéticos ou semi-sintéticos usuais para fins de injecção. Em relação a estes, pode fazer-se menção especial aos ésteres de ácidos gordos liquidos que contêm como componente ácido um ácido gordo de cadeia longa possuindo de 8 a 22, especialmente de 12 a 22 átomos de carbono, por exemplo ácido láurico, ácido tridecilico, ácido miristico, ácido pentadecilico, ácido palmitico, ácido margárico, ácido esteárico, ácido araquídico, ácido beénico ou os ácidos insaturados correspondentes, por exemplo ácido oleico, ácido elaidico, ácido erúcico, ácido brassidico ou ácido linoleico, se pretendido, com a adição de antioxidantes, por exemplo vitamina E, β-caroteno ou 3,5-di-terc-butil-4-hidroxitolueno. O componente álcool destes ésteres de ácidos gordos possui um máximo de 6 átomos de carbono e é um álcool monovalente ou polivalente, por exemplo um álcool mono-, di- ou trivalente, por exemplo metanol, etanol, propanol, butanol ou pentanol ou os seus isómeros, mas especialmente glicol e glicerol. Como ésteres de ácidos gordos, portanto, mencionam-se os seguintes: oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, "Labrafil M 2375" (polioxietilenoglicerol), "Labrafil M 1944 CS" (glicéridos insaturados poliglicolizados preparados por alcoólise de óleo de caroço de alperce e consistindo em glicéricos e éster de polietilenoglicol), "Labrasol" (glicéricos saturados poliglicolizados preparados por alcoólise de TCM e consistindo em glicéricos e éster de polietilenoglicol; todos disponíveis de Gattefossé, França), e/ou "Miglyol 812" (triglicérido de ácidos gordos saturados de comprimento de cadeia Cg a C12 de Hiils AG, Alemanha) , mas especialmente óleos vegetais tais como óleo de semente de algodão, óleo de amêndoa, azeite, óleo de ricino, óleo de sésamo, óleo de soja e mais especialmente óleo de amendoim. 16 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Ο fabrico de preparações injectáveis é usualmente realizado sob condições estéreis, tal como o enchimento, por exemplo, de ampolas ou frascos, e a selagem dos recipientes.

As composições farmacêuticas para administração oral podem ser obtidas, por exemplo, por combinação do ingrediente activo com um ou mais transportadores sólidos, se desejado, granulação da mistura resultante e processamento da mistura ou dos grânulos, se desejado ou necessário, por inclusão de excipientes adicionais, para formar comprimidos ou núcleos de comprimidos.

Os transportadores adequados são especialmente enchimentos, tais como açúcares, por exemplo lactose, sacarose, manitol ou sorbitol, preparações de celulose, e/ou fosfatos de cálcio, por exemplo fosfato tricálcico ou hidrogenofosfato de cálcio, e também aglutinantes, tais como amidos, por exemplo amido de milho, de trigo, de arroz ou de batata, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose sódica e/ou polivinilpirrolidona e/ou, se desejado, disintegrantes, tais como os amidos acima mencionados, também carboximetil-amido, polivinilpirrolidona reticulada, ácido alginico ou um seu sal, tal como alginato de sódio. Os excipientes adicionais são especialmente condicionadores de escoamento e lubrificantes, por exemplo ácido silicico, talco, ácido esteárico ou seus sais, tais como estearato de magnésio ou cálcio e/ou polietilenoglicol, ou seus derivados.

Os núcleos de comprimidos podem ser proporcionados com revestimentos adequados, opcionalmente entéricos, através da utilização, inter alia, de soluções concentradas de açúcar que podem compreender goma-arábica, talco, polivinilpirrolidona, polietilenoglicol e/ou dióxido de titânio, ou soluções de revestimento em solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes, ou, para a preparação de revestimentos entéricos, soluções de preparações de celulose adequadas, tais como ftalato de acetilcelulose ou ftalato de hidroxipropilmetilcelulose. Podem ser adicionados corantes ou pigmentos aos comprimidos ou revestimentos de comprimidos, por exemplo para fins de identificação ou para indicar diferentes doses de ingrediente activo. 17 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ

As composições farmacêuticas para administração oral também incluem cápsulas duras consistindo em gelatina, e também cápsulas moles, seladas, consistindo em gelatina e um plastificante, tal como glicerol ou sorbitol. As cápsulas duras podem conter o ingrediente activo na forma de grânulos, por exemplo em mistura com enchimentos, tais como amido de milho, aglutinantes, e/ou deslizantes, tais como talco ou estearato de magnésio, e opcionalmente estabilizantes. Em cápsulas moles, o ingrediente activo é preferivelmente dissolvido ou suspendo em excipientes líquidos adequados, tais como óleos gordos, óleo de parafina ou polietilenoglicóis líquidos ou ésteres de ácido gordo de etileno ou propilenoglicol, aos quais podem também ser adicionados estabilizantes e detergentes, por exemplo do tipo de ésteres de ácido gordo de polioxietileno-sorbitano.

As composições farmacêuticas adequadas para administração rectal são, por exemplo, supositórios que consistem numa combinação do ingrediente activo e uma base de supositório. As bases de supositório adequadas são, por exemplo, triglicéricos naturais ou sintéticos, hidrocarbonetos parafínicos, polietilenoglicóis ou alcanóis superiores.

Para administração parentérica, são especialmente adequadas soluções aquosas de um ingrediente activo numa forma solúvel em água, por exemplo de um sal solúvel em água, ou suspensões aquosas para injecção que contêm substâncias aumentadoras da viscosidade, por exemplo carboximetilcelulose de sódio, sorbitol e/ou dextrano, e, se desejado, estabilizantes. 0 ingrediente activo, opcionalmente em conjunto com excipientes, pode também estar na forma de um liofilizado e pode ser posto numa solução antes da administração parentérica pela adição de solventes adequados.

As soluções tal como são utilizadas, por exemplo, para administração parentérica, podem também ser empregues na forma de soluções de infusão.

Os conservantes preferidos são, por exemplo, antioxidantes, tais como ácido ascórbico, ou microbicidas, 18 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ tais como ácido sórbico ou ácido benzóico.

Os compostos da invenção podem ser administrados na forma do ingrediente activo sozinho ou em conjunto com outros fármacos úteis contra doenças neoplásicas ou úteis em regímenes de imunomodulação. Por exemplo, os agentes da invenção podem ser utilizados de acordo com a invenção em combinação com composições farmacêuticas eficazes em várias doenças como descrito acima, e.g. com ciclofosfamida, 5-fluorouracilo, fludarabina, gencitabina, cisplatina, carboplatina, vincristina, vimblastina, etoposido, irinotecano, paclitaxel, docetaxel, rituxano, doxorubicina, gefitinib ou imatinib; ou também com ciclosporinas, rapamicinas, ascomicinas ou seis análogos imunossupressores, e.g. ciclosporina A, ciclosporina g, FK-506, sirolimus ou everolimus, corticosteróide, e.g. prednisona, ciclofosfamida, azatiopreno, metotrexato, sais de ouro, sulfasalazina, antimaláricos, brequinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato, mofetilo, 15-desoxiespergualina, anticorpos monoclonais imunossupressores, e.g. anticorpos monoclonais contra receptores de leucócitos, e.g. MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD25, CD28, CD40, CD45, CD58, CD80, CD86, CD152, CD137, CD154, ICOS, LFA-1, VLA-4 ou seus ligandos, ou outros compostos imunomoduladores, e.g. CTLA4Ig.

Um composto adicionalmente preferido de acordo com a presente invenção que é útil como aqui acima descrito é um composto especificamente mencionado nos exemplos.

Os Exemplos seguintes servem para ilustrar a invenção, sem a limitar no seu âmbito.

Exemplos

Abreviaturas

AcOH = ácido acético, ALK = quinase de linfoma anaplásico, ATP = adenosina-5'-trifosfato, salmoura = solução saturada de cloreto de sódio, BSA = albumina sérica bovina, DIAD = azodicarboxilato de di-isopropilo, DIPCDI = Ν,Ν'-di-isopropilcarbodi-imida, DMAP = 4-dimetilaminopiridina, DMF = N,N-dimetilformamida, DTT = 1,4-ditio-D,L-treitol, EDTA = 19 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ ácido etilenodiaminotetra-acético, Et = etilo, EtOAc = acetato de etilo, EtOH = etanol, Eu-PT66 = anticorpo anti-fosfotirosina marcado com európio-W1024 LANCE (Perkin Elmer), FAK = quinase de adesão focal, FRET = transferência de energia de ressonância de fluorescência, HEPES = ácido N-2-hidroxietilpiperazino-N'-2-etanossulfónico, HOAt = 1-hidroxi-7-azabenzotriazole, Me = metilo, RT-PCR = reacção em cadeia pela polimerase com transcrição inversa, SA-(SL)APC = estreptavidina conjugada com aloficocianina SuperLight™ (Perkin Elmer), subst. = substituído, TBTU = tetrafluoroborato de 0-(benzotriazol-l-il)-N,N,Ν',Ν' -tetrametilamónio, THF = tetra-hidrofurano.

Exemplo 1

Numero do Composto 5

Estrutura

6 7 ci h4n^eza°xx

EtO

Dados Físicos XH RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 2H RMN 400 MH; 2 (CDC13) δ 12, 5 (s, ig, 1H) , 10, 3 (s, 1H) , 8, 39 (d, 1H, J=8, 38 Hz) , 7 ,97 (s, 1H) , 7 ,87 (dd, 1H, J=l, 63 , 7 ,55 Hz) , 7, 49 (d, 1H r J=8, 69 Hz) , 6 ,54 (d, 1H, J= 2,49 Hz), 6, 43 (dd f 1H, J=2 ,51, 8, 73 Hz), 4 ,70 (s, 1H) , 4 ,04 (q, 2H, J= 6,98 Hz), 3, 51 (m, 2H) , 3 ,29 (d, 1H, J= 19, 2 Hz), 3, 18 (m, 2H) , 2 ,89 (d, 3H, J= 3,26 Hz), 2, 77 (s, 6H) , 2 ,39 (m, 2H) , 2 ,22 (m, 2H), 1,40 (t, 3H, J=6, 97 Hz), EM m/z 561, 4(M+l) . EM m ./2 589 ,4 (M+l ) . EM m/z 633,4/635,4 (M + 1).

Br N 11

EtO EM m/z 561,4 (M + 1). 02S. 20 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número Estrutura do Composto

EM m/z 603,4 (M + 1). EM m/z 601,4 (M + 1). 31

H

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 575,4 (M + 1). EM m/z 532,4 (M + 1). EM m/z 633,4/635,3 (M + 1). (M + 1) . 21 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto32

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 601,4 (M + 1). 33 34 35

EM m/z 561,4 (M + 1). EM m/z 575,4 (M + 1). 1H RMN 600 MHz (acetona-c/6) δ 8,47 (d, J=7, 13, 1H) , 8 ,43 (s, 1H) , 8 , 09 (d, J=7, 85 Hz , 1H) , 7, 83 (m, 1H) , 7, 73 (t J=7, 67 Hz , 1H) , 7, 50 (m, 1H) , 6, 87 (m 1H) , 6, 71 (m, 1H) , 5, 46 (d, J=31 ,2 Hz 1H) , 4, 22 (m, 3H) , 3, 55 (m, 5H) , 2, 51 (m, 1H) r 2,49 (m, 1H) , 2 ,21 (m, 1H) r 1,50 (m í, 6H) , 1,10 (d , J =6,56 Hz , 6H) EM m/z 575,4 (M + 1). EM m/z 574,4 (M + 1). 36 37

EM m/z 562,4 (M + 1).

H 38 EM m/z 560,4 (M + 1) .

NH 22 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número Estrutura do Composto

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 546,4 (M + 1). EM m/z 560,4 (M + 1). EM m/z 559,4 (M + 1). EM m/z 547,4 (M + 1). EM m/z 559,4 (M + 1). EM m/z 600,4 (M + 1). EM m/z 586,4 (M + 1). EM m/z 600,4 (M + 1). 23 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto47

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 48

EM m/z 599,4 (M+l), EM m/z 587,4 (M + 1) . 49

XH RMN 600 MHz (acetona-d6) δ 10,35 (m, 1H) , 8 ,72 (s, lg, 1H) , 8 ,42 (s, 1H), 8, 00 (d, J=7,93 Hz, 1H) , 7, 73 (m 1H), 7, 64 (m, 1H), 7, 50 (t, J=7, 77 Hz 1H), 6, 55 (s, 1H), 6, 43 (d, J=8, 5 Hz, 1H), 4, 31 (m, 1H), 4, 22 (q, J=6, 93 Hz 2H), 3, 97 (m, 2H), 3, 80 (t, J=8, 45 Hz 1H), 3, 58 (q, J=8,38 Hz, 1H) , 3, 36 (m 1H), 3, 17 (s, 1H), 2, 78 (m, 1H) , 2, 66 (m, 1H) , 2 ,15 (m, 2H) , 1 ,73 (d, J=12,9 Hz, 2H) , 1,59 (d, J=12,9 Hz, 1H), 1, 55 (m, 2H), 1, 43 (m, 3H) , 1, 35 (m, 2H) , 1 ,25 (m, 1H) , EM m/ z 599,4 (M + 1) . EM m/z 562,4 (M + 1) . 50

EtON xs oV N'

51

EM m/z 614,5 (M + 1). 52

EM m/z 640,5 (M + 1). 24 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto53

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 54 57 58 59 60

EM m/z 640,5 (M + 1). EM m/z 628,5 (M + 1). EM m/z 613,5 (M + 1). EM m/z 578,5 (M + 1). EM m/z 560,4 (M + 1). EM m/z 586,4 (M + 1). 25 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto61

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 62 65 66 67

EM m/z 586,4 (M + 1). EM m/z 574,4 (M + 1). EM m/z 559,4 (M + 1). 2H RMN 600 MHz (CD3OD) δ 8,65 (lg, 1H), 8,03 (lg, 1H), 7,78 (d, J=7,76 Hz, 1H), 7,49 (lg, 1H), 7,30 (s, 1H), 6,38 (m, 1H), 6,33 (dd, J=1,69, 8,64 Hz, 1H), 4,12 (q, J=6,96 Hz, 2H), 4,06 (m, 1H), 3,71 (dd, J=6,68, 10,74 Hz, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,56 (dd, J=4,71, 10,76 Hz, 1H), 3,42 (m, 3H), 3,22 (q, J=7,28 Hz, 2H), 2,57 (m, 1H), 2,26 (m, 1H), 1,39 (t, J=7,28 Hz, 3H), 1,34 (t, J=6,96 Hz, 3H), EM m/z 524,4 (M + 1). EM m/z 574,4 (M + 1). 26 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto68

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 69 70 73 74 75

XH RMN 600 MHz (CD3OD) δ 8,23 (s, 1H), 8, 18 (d • r KO i—1 co II •"D Hz f 1H) , 7,98 (d r J=8, 44 Hz , 2H) , 7, 68 (m, 1H) , 7, 43 (m, 1H) , 7, 22 (d, J·· =2, 29 Hz, 1H) , 6, 97 (dd, J= :2, 30, 8, 81 Hz , 1H), 4, 20 (q, J=6, 99 Hz , 2H) , 3, 77 (m, 2H) , 3, 58 (m, 2H) , 2, 75 (d, J: =7, 03 Hz, 2H) , 2, 72 (m, 1H) , 2, 18 (m, 4H) , 1 ,47 (t, J = 6, 97 Hz, 3H) , 0, 75 (m, 1H), 0 , 30 (m, 2H), 0, 00 (m, 2H) EM m/z 600, 4 (M + D EM m/z 600,4 (M + 1). EM m/z 588,4 (M + 1). EM m/z 573,4 (M + 1). EM m/z 538,4 (M + 1). EM m/z 573,4 (M + 1). 27 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto76

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 77 78 79 80 81

EM m/z 578,5 (M + 1). EM m/z 613,5 (M + 1). EM m/z 511,4 (M + 1). EM m/z 525,5 (M + 1). EM m/z 524,5 (M + 1). EM m/z 510,5 (M + 1). 28 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto82

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 525,4 (M + 1). 83

O

EM m/z 627,5 (M + 1). 0 84

XH RMN 600 MHz (CD3OD) δ 9,18 (m, 2H), 8, 05 (d, J=7,93 Hz, 1H) , 7,93 (t, J=7, 64 Hz , 1H) r 7,78 (m, 1H) , 7,68 (m 2H) , 7,58 (t, J: =7,54 Hz, 1H) , 4,72 (s 2H) , 4,07 (d, = 12,4 Hz, 2H) , 3,34 (ig, 4H) , 2,96 (t, J = 12, 3 Hz, 2H) , 2,87 (s, 6H) , m , 2H) , 2, 28 (s, - 1H) , 2,00 (ig, 7H) , 1,81 (ig, 2H) . EM m/ z 627,5 (M + 1). 85

EM m/z 591,5 (M + 1). 86

EM m/z 601,5 (M + 1). cr nh2 29 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto87

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 602,4 (M + 1). cr nh2 88 CI^^N EM m/z 566, 5 (M + 1) .

N 92 cr NH2

XH RMN 600 MHz (CD3OD) δ 8,31 (d, J=7, 65 Hz , 1H) , 8, 19 (s, 1H) , 7, 94 (dd, J: = 1, 33, 7 , 96 Hz, 1H), 7, 67 (t J=7, 70 Hz , 1H) , 7, 49 (t, J=7, 68 Hz 1H) , 7 ,44 (d, J=8, 56 Hz, 1H) , 6, 83 J=l, 37 Hz , 1H) , 6, 65 (d, J=8, 66 Hz 1H) , 4 , 69 (m, 1H) , 4, 11 (lg, 2H) r (d, J= 12, 68 Hz , 2H) , 3,83 (lg , 2H) 93

3,58 (lg, 2H), 3,46 (m, 1H), 3,23 (lg, 2H), 3,00 (t, J=12,19 Hz, 2H), 2,73 (s, 6H), 2,33 (d, J=12,14 Hz, 2H), 1,97 (m, 2H), 1,30 (d, J=6,04 Hz, 6H) . EM m/z 630,5 (M + 1). EM m/z 629,5 (M + 1). 94

EM m/z 594,5 (M + 1). 30 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 103

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 111 112 115 116

EM m/z 547,1 (M + 1) . EM m/z 557,3 (M + 1) . EM m/z 559,3 (M + 1) . EM m/z 529,2 (M + 1) . 117 118

EM m/z 556,2 (M + 1). XH RMN 400 MHz (DMSO-de) δ 9,91 (s lg, 1H), 9,50 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,49 (s lg, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,74 (d, 1H, J=7,6 Hz), 7,41 (s lg, 1H), 7,23 (t, 1H, J=7,2 Hz), 7,18 (d, 1H, J=8,0 Hz), 6,89 (m, 2H), 3,84 (d, 2H, J=ll,4 Hz), 3,54 (d, 2H, J=11,4 Hz), 3,18 (q, 2H, J=8,0 Hz), 2,95 (t, 2H, J=ll,4 Hz), 2,88 (s, 3H), 2,64 (s, 6H), 2,53 (m, 2H), 1,06 (t, 3H, J=8,0 Hz); EM m/z 530,2 (M + 1). EM m/z 556,2 (M + 1). 121 125

(M + 1) . (M + 1) . 126

EM m/z 574,2 (M + 1). H ÇV "γ**γΝΗ0'Ύ 127

X EM m/z 573,2 (M + 1) .

31 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 129

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 576, 2 (M + 1) .

NH 130 133 134 135 •a

EM m/z 588,2 (M + 1). EM m/z 589,2 (M + 1). EM m/z 575,2 (M + 1). EM m/z 574,2 (M + 1). 136 137

EM m/z 601,2 (M + 1). EM m/z 560,2 (M + 1). 138 139

EM m/z 575,2 (M + 1). XH RMN 600 MHz (DMSO-de) δ 10,35 (s ig, ih), 9, 45 (s r 1H) , 8 ,47 (d, 1H r J=7,2 Hz) r 8,33 (S , 1H) , 8, 23 (s r 1H) 7,79 (d, 1H , J=8 ,4 Hz) , 7,57 (t, 1H, J=7,2 Hz) r 7,52 (d , 1H, J=9 ,6 Hz) , 7,23 (t, 1H , J=7 ,2 Hz) , 6,68 (s, 0,4H) , 6, 64 (s, 0, 6H) , 6 , 50 (s, 0, 6H) 6,49 (s, 0, 4H) , 5, 19 (s, 0, 6H) , 5, 15 (s, 0 ,4H) r 4,58 (m , 1H) , 3, 99 (m f 0,4H) , 3, 73 (m, 1, 6H) , 3 , 36 (m, 0, 6H) 3,26 (m, 0, 8H) , 3, 15 (m, 0, 6H) , 2, 96 (s, 1 ,2H) r 2,89 (s , 1,8H), 2,64 (s r 6H) , 2,60 (m, 1H) , 2,24 (m, 0,6H), 2,07 (m, 0, 4H) , 1, 20 (d, 6H r J=6, 0 Hz) r EM m/ z 561,2 (M + D . 32 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 140

Estrutura 141

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 587,2 (M + 1). EM m/z 587,2 (M + 1). 142 143 144 145

EM m/z 560,2 (M + 1). EM m/z 575,2 (M + 1). EM m/z 561,2 (M + 1). EM m/z 587,2 (M + 1). 146

EM m/z 587,2 (M + 1). 147

X γ

XH RMN 600 MHz (DMSO-de) 3 9,81 (s lg, 0, 4H) , 9, 74 (s lg, 0,6H), 9,59 (s lg, 1H) , 8,48 (s lg, 1H) , 8,34 (s r 0,4H), 8, 33 (s, 0,6H), 8,232 (s, 0, 6H) , 8,228 (s , o ,4H) , 7 ,82 (d, 1H , J =7,8 Hz) , 7, 59 (m, 1H) , 7, 49 (d, 0, 6H, J= :8,4 Hz) , 7 ,47 (d, 0, 4H, J=8 ,4 Hz) , 7, 34 (q, 1H, J=7 ,2 Hz) , 6 ,75 (s , 1H) , 6, 68 (s, 1H) , 6, 57 (dd , o , 6H, J t ~ 2, 4 Hz, J 2 8, ,4 Hz), 6,! 54 (dd, 0, ,4H, J, = 2,4 Hz, J2 = 8 ,4 : Hz) , , 4, ,73 (m, 0, 6H) , 4, 58 (m, 1H) , 4 ,52 (m, 0 ,4H) , 3, 52 (m, 1H) , 3, 43 (m, 1H) , 3 , 35 (m, 0, 4H) , 3, 33 (m, 0,6H), 3, 21 (m, 1H) , 3, 11 (m, 1H) , 2, 85 (d, 1, 8H, J= :4, 8 Hz) , 2 ,82 (d, 1, 2H, J=3 , o Hz) , 2, 25 (m, 1H) , 2, 07 (m, 0, 4H) , 2 , 05 (m, 0, 6H) , 1, 98 (m, 1H) , 1 ,76 (m, 1H) , 1, 20 (d, 3,6H, J = 6, 0 Hz) , 1,18 (d, 2, 4H, J=6 ,0 Hz) , 1, 15 (d, 6H, J= :7,2 Hz) ; EM m/ z 574, 2 (M + D 33 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 148

Estrutura

149 150 151 156

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 589,3 (M + 1) . EM m/z 575,2 (M + 1) . EM m/z 601,3 (M + 1) . EM m/z 601,3 (M + 1) . EM m/z 587,2 (M + 1). 157

XH RMN 400 MHz (DMSO-de) δ 10,05 (s lg, 1H) , 9,42 (s, 1H) , 8,43 (d, 1H, J=7, 6 Hz) , 8, 35 (s , 1H) , 8,31 (s , 1H), 7,91 (s, 1H) , 7,79 (dd, 1H, Ji=l, ,6 Hz, J2=8, ,0 Hz), 7, ,58 (t, 1H, , J=8; ,0 Hz), 7,32 (t, 1H, J=8,4 Hz) , 7,15 (m, 2H) , 4,70 (m, 1H) , 4,07 (m, 2H) , 3, 45 (m, 2H) , 3,21 (m, 2H) , 3, 06 (m, 2H) , 2,83 (s, 3H) , 2,65 (s, 6H) , 1,27 (d, 6H, J=6, 0 Hz) ; EM m/z 588,2 (M + D . EM m/z 614,2 (M + 1) . 158 159

EM m/z 573,2 (M+l), XH RMN 600 MHz (DMSO-d6) δ 9,45 (s, 1H) , 8,44 (d, co r- II •"D i—1 Hz) r 8,38 (s, 1H) , 8,27 (s, 1H) , 7,81 (d, 1H, J=7, 8 Hz) , 7, 66 (d, 1H, J=8 ,4 Hz) r 7,64 (t, 1H, J=7,2 Hz) , 7,35 (t, 1H, J=7, 2 Hz) , 6, 97 (s, 1H) , 6, 76 (d, 1H, J=8, 4 Hz) , 4, 06 (q, 2H, J=7 ,2 Hz) r 3,59 (m, 6H) , 3,29 (m, 4H) , 2 , 92 (m, 2H) , 2,86 (s, 3H) , 2,64 (s, 6H) , 1,31 (t, 3H, J = 6, 6 Hz) ; EM m/z 574 ,2 (M + D . 160 34 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 161

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 600,2 (M+l),

Oc 162 163

Ον * H Vn Vo ry NH O

EM m/z 600,2 (M+l), EM m/z 627,5 (M+l), 164 165

EM m/z 654,5 (M + 1). EM m/z 628,5 (M + 1). 166

EM m/z 654,5 (M+l), 167 168 169

EM m/z 592,3 (M + 1). EM m/z 588,2 (M + 1). EM m/z 614,2 (M + 1).

XH RMN 600 MHz (DMSO-de) δ 9,66 (s, 1H), 8,48 (s lg, 1H), 8,40 (d, 1H, J=8,8 Hz), 8,30 (s, 1H), 7,66 (dd, 1H, J=1,6 Hz, J2 = 7,6 Hz), 7,71 (t, 1H, J=8,4 Hz), 7,46 (s, 1H), 7,41 (t, 1H, J=8,0 Hz), 7,17 (s lg, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,93 (s lg, 1H), 4,67 (m, 1H), 4,02 (q, 1H, J=7,2 Hz), 3,65 (m, 2H), 3,46 (m, 1H), 3,34 (m, 1H), 2,54 (m, 1H), 1,94 (m, 4H), 1,26 (d, 6H, J=6,0 Hz), 1,15 (d, 6H, J=6,0 Hz); EM m/z 587,2 (M +1), 171 35 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 183

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 184

EM m/z 615,3 (M + 1). XH RMN 400 MHz (DMSO-de) δ 9,94 (s lg, 1H) , 9,53 (s, 1H), 8,49 (m, 2H), 8,23 (s, 1H) , 7,79 (dd, 1H, Jr =2, 0 Hz, co II "D 0 Hz) , 7, 58 (t, 1H, J= =7,6 Hz) , 7,38 (d, 1H, J=9, 2 Hz) 7,32 (t, 1H, J=8 ,0 Hz), 6, 68 (d, 1H, J=2, 0 Hz) , 6,51 (dd, 1H, Ji=2 , 0 Hz, J2=8; ,4 Hz) , 421 (m, 2H) , 4, 04 (q, 2H t Ch II σ 8 Hz) , 3,86 (d, 2H, J=12 Hz), 3, 68 (t 2H, J=12 Hz), 3,51 (d, 2H, J=ll,2 Hz), 3,38 (t, 1H, J=12 Hz), 3,13 (m, 2H), 2,73 (t, 2H, J=11,2 Hz); 2,64 (s, 6H), 2,16 (d, 2H, J=11,2 Hz), 1,73 (m, 2H), 1,24 (t, 3H, J=7,2 Hz); EM m/z 616,3 (M + 1) . 185 187

EM m/z 642,3 (M+l), EM m/z 599,3 (M+l), 188 189 191 192

EM m/z 600,3 (M+l), EM m/z 626,3 (M+l), EM m/z 599,3 (M + 1). XH RMN 400 MHz (DMSO-de) δ 9,86 (s lg, 1H), 9,56 (s, 1H), 8,59 (s lg, 1H) , 8,47 (s lg, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,79 (dd, 1H, Ji=l,6 Hz, J2=8,0 Hz), 7,58 (t, 1H, J=8,0 Hz), 7,38 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,33 (t, 1H, J=7,2Hz), 6,70 (d, 1H, J=2,4 Hz), 6,51 (dd, 1H, Ji=2,4 Hz, J2=8,4 Hz), 4,03 (q, 2H, J=6,8 Hz), 3,81 (d, 2H, J=12,4 Hz), 3,58 (m, 2H), 3,28 (m, 1H), 3,11 (m, 2H), 2,74 (t, 2H, J=12 Hz), 2,64 (s, 6H), 2,15 (d, 2H, J=ll,6 Hz), 2,03 (m, 2H), 1,86 (m, 2H) , 1,73 (m, 2H), 1,24 (t, 3H, J=6,8 Hz); EM m/z 600,2 (Μ + 1). 36 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 193

Estrutura 219

ΠΝ-S

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 626, 2 (M + 1) . EM m/z 561,40 (M + 1) . 223 224 OEt

EM m/z 573,40 (M + 1). EM m/z 547,40 (M + 1).

225

EM m/z 547,40 (M + 1) O, α 226

Cl EM m/z 546,40 (M + 1) v O HN N NH<T O,.Ol 227

EM m/z 546,40 (M + 1) & 37 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 234

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 561,4 (M + 1). 251

EM m/z, 573,4 (M + 1). 252

EM m/z,573,4 (M + 1).

OEt 253

EM m/z,573,4 (M + 1). 254

EM m/z, 519,1 (M + 1). 255

EM m/z, 563,1 (M + 1).

38 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 256

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z)

EM m/z, 577,1 (M + 1). 259

EM m/z, 588,2 (M + 1). 275

2H RMN 400 MHz (CD3OD) δ 8,17 (d, 1H, J= 8, 0 Hz) , 7, 93 (s, 1H) , 7, 74 (dd, 1H, J= 1, 6, 8, 0Hz) , 7 ,47 (t, 1H, J = 8, 0 Hz) , 7, 25 (m, 1H) , 7, 13 (d, 1H, 8, 8Hz) , 6, 48 (d, 1H, J=2 ,4 Hz) , 6, 37 (dd, 1H, J= 2, 4, 8, 8Hz) , 3 , 66 (m, 4H) r 3,34 (m, 2H) , 3, 14 (m, 4H) , 2,81 (m, 2H) , 2 , 65 (m f 2H) , 2,98 (d , 2H, J= 12Hz) I—1 CO (m f 7H) , 1,30 (m , 1H), 1 ,02 (d, 6H r J= 6, 8 Hz) , o, 99 (m, 1H) , 0, 32 (m, 2H) , 0, 04 (m, 2H) ; EM m/ z 639 ,5 (M + D 276

XH RMN 400 MHz (CD30D) δ 8,32 (d, 1H, J=8, 0 Hz) , 8, 11 (s , 1H), 7, 92 (dd, 1H J=l, 6, 8, 0Hz) , 7,65 (t, 1H, J=7, 6Hz) , 7,43 (t, 1H, J=7,6Hz), 7,28 (d, 1H, J=8, 4Hz) , 6,67 (d, 1H, J=2, 4Hz) , 6, 56 (dd, 1H, J=2, 4, 8, 8Hz) , 4,03 (m, 2H) , 3, 86 (m, 4H) , 3,73 (m, 2H), 3, 36 (m, 2H) , 3,35 (m, 2H) , 3,23 (m, 2H) , 2,85 (m, 2H) , 2,23 (m, 2H), 1,83 (m, 2H) , 1,19 (d, 6H) , 1,13 (m, 1H) , 0, 48 (m, 2H) , 0,21 (m, 2H) ; EM m/z 641,5 (M + D 641,5 (M + 1) 279

39 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 281

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z)

O^ MMS m/z, 600,5 (M + 1) o 282 C'Y^N O ΗΝΓ'Ν^

NH

Os/

298

O

RMN 400 MHz (CD3OD) δ 8,30 (d, 1H, J=8,0Hz), 8,21 (s, 1H), 8,00 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,91 (dd, 1H, J=l,63, 8,0 Hz), 7,71 (m, 1H), 7,42 (m, 1H), 7,08 (d, 1H, J=2,0 Hz), 6,91 (dd, 1H, J=1,6, 8,4 Hz), 4,30 (m, 2H), 4,13(q, 2H, J=7,2 Hz), 3,60 (m, 4H), 3,16 (m, 2H),1,41 (t, 3H, J=7,2 Hz), 1,90 9d, 6H, J=6,8 Hz); EM m/z 573,40 (M + 1) EM m/z, 590,4 (M + 1)

309 EM m/z, 576,2 (M + 1)

OEt 40 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 313

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) a.n. EM m/z, 616,5(M+1) O HN N NH II HN-Jk

OEt

Q N—

Ac 325 EM m/z, 589,4 (M + 1) O HN N NH~í ,

Cl

OEt 326

\ C'Y^N O HN^N^NH EM m/z, 589,4 (M + 1)

HN-S n O

OEt Q, α 327 cx 9

CU HN' "Ν' 'NH EM m/z, 587,4 (M + 1)

^ OEl & 328

Cl EM m/z, 587,4 (M + 1) C\ 9

O HN N NH

HN-J

OEt O, O- 329

EM m/z, 586,4 (M + 1) 41 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 330

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) 331

EM m/z, 587,1 (M+ 1) EM m/z, 586,4 (M + 1) α 332 340

EM m/z, 600,2 (M + 1) EM m/z, 588,4 (M + 1) 341

EM m/z, 600,4 (M + 1) 342

EM m/z, 602,4 (M + 1) 42 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) Número Estrutura do

Composto 368 372 373 374

EM m/z 563,20 / 565,20 EM m/z 519,20 / 521,20 EM m/z 533,20 / 535,20 EM m/z 605,20 / 607,20 (M + 1) (M + 1) (M +1) (M + 1) 375 376

EM m/z 476,20 / 478,20 (M + 1) XH RMN 600 MHz (DMSO-de) δ 9,39 (s, 1H), 8,37 (s, 1H) , 8, 27 (s, 1H) , 8, 25 (s, 1H) , 7,88 (t, J= 6,02 Hz , 1H), 7, 78 (dd, J=7, 94, 1 ,35 Hz, 1H), 7 ,50 (dt r J=8, ,24, 1,89 Hz, 1H) , 7, 40 (s, 1H) , 7, 25 (t, J=7, 39 Hz , 1H) r 6,90 (d , J= =8, 92 Hz, 1H) 5,65 (dd, J=8, 87 , 3,03 Hz, 1H) r 3, 70 (s, 3H) , 3, 54 (s r EM m ,/z 605,30 / 607,20 (M + 1 ) 377 43 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto378

Estrutura 379

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 591,20 / 593,20 (M + 1) EM m/z 547,20 / 549,20 (M + 1) r

380 EM m/z 561,20 / 563,20 (M +1)

381

Br

Η H

EM m/z 548,20 / 550,20 / 552,20 (M + 1)

382 383

EM m/z 577,30 / 579,30 (M + 1) 384 r 44 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto385

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 591,40 / 593,30 (M + 1)

386

EM m/z 605,40 / 607,40 (M + 1)

387

EM m/z 617,40 / 619,40 (M + 1)

388

(M + 1) 389 390

(M + 1) 391

EM m/z 560,40 / 562,40 (M + 1) 392

O EM m/z 574,40 / 576,50 (M + 1) 45 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto393

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z)

XH RMN 400 MHz (DMSO- ~d6) δ 9, 47 (s, 1H) , 8, 45 (d, J=7, 37 Hz , 1H) , 8, 36 (s, 1H) , 8, 20 (s, 1H) , 7 , 83 (d, J=7, 93 Hz, 1H) , 7, 59 (t, J=8, 07 Hz , 1H) , 7, 47 (d, J=8, 69 Hz, 1H) , 7, 32 (t , J=7 ,54 Hz, 1H) , 6, 63 (dd, J=12, 67, 2,42 Hz, 1H) , 6,49 (m, 1H) , 5, 16 (m, 1H) , 4, 01 -3, 68 (m, 3H) , 3 ,48- EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1) 394

HN 395 EM m/z 573,40 / 575,40 (M + 1) vy: 1

Cl õ-s. 396 EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1)

397 398 399

EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1) EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1) EM m/z 560,40 / 562,40 (M + 1) ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 4 6 Número do Composto400

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z)

401

XH RMN 400 MHz (DMSO-de) δ 10,30 (s, lg, 1H), 9,53 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,41 (d, J=7,90 Hz, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,90 (dd, J=7,91, 1,25 Hz, 1H), 7,64 (t, J=7,93 Hz, 1H), 7,46 (d, J=8,70 Hz, 1H), 7,38 (t, J=7,48 Hz, 1H), 6,67 (dd, J=13,68, 2,49 Hz, 1H), 6,46 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 4,04 (m, EM m/z 573,20 / 575,20 (M + 1)

402

EM m/z 573,20 / 575,20 (M + 1) 403

EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1) 404 405

EM m/z 573,401575,40 (M + 1) EM m/z 587,40 / 589,40 (M + 1) 406

EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1) 47 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 407

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z)

EM m/z 586,40 / 588,40 (M + 1) 411 412 413

414

415 416

EM m/z 584,40 / 586,40 (M + 1) 417 48 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto418

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z)

EM m/z 548,40 / 550,40 (M + 1) 419 tX EM m/z 540,40 / 542,40 (M + 1)

420 421

EM m/z 667,30 / 669,30 (M + 1) 422

423 EM m/z 632,30 / 634,30 (M + 1)

424

EM m/z 573,40 / 575,40 (M + 1) 427

EM m/z 504,20 (M + 1). 49 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 428

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z)

EM m/z 585,30 (M + 1). 429

EM m/z 627,20 (M + 1). 431

EM m/z 602,20 (M + 1). 50 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 432

Estrutura 434 440 441

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 562,10 (M + 1). EM m/z 421,1 (M + 1). EM m/z 468,20 (M + 1). EM m/z 552,30 (M + 1). 51 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 442

Estrutura

N ^ Λ > HN N'

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 592,30 (M + 1)

Cr° 443 EM m/z 504,20 (M + 1) lo HNN^V HN^N^

Cl

444 445

EM m/z 588,30 (M + 1) EM m/z 628,30 (M + 1) 52 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 447

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 503,20 (M + 1)

XI

Λ J HN N

448 EM m/z 587,20 (M + 1) .Cl

Λ J HN N 449

EM m/z 627,30 (M + 1) 451

Cr° O EM m/z 549,30 (M + 1)

53 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 452

Estrutura 453 454 455

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 509,30 (M + 1) EM m/z 495,20 (M + 1) EM m/z 495,20 (M + 1) EM m/z 585,20 (M + 1) 54 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 456

Estrutura

O II I O HN

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 545,20 (M + 1)

N A HN N

Cl 457

O tlI o HN EM m/z 531,20 (M + 1)

N 1 HN N

t! HN 458 EM m/z 531,20 (M + 1)

Cl ηνΛν^

o 459

EM m/z 584,30 (M + 1) 55 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 55 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ Número do Composto 460

Estrutura

Dados Físicos ΧΗ RMN 400 MHz (DMSO-d6) e/ou EM (m/z) EM m/z 544,20 (M + 1) 461

EM m/z 530,20 (M + 1) 462

EM m/z 530,20 (M + 1)

Exemplo 2: Ensaio com Quinase ZAP-70 isento de células 0 ensaio com quinase ZAP-70 baseia-se na transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) resolvida no tempo. Incubam-se a ZAP-70 80 nM com a Lck 80 nM (proteína-tirosina-quinase de células T linfóides) e ATP 4 μΜ em tampão de quinase ZAP-70 (Tris 20 mM, pH 7,5, Na3V04 10 μΜ, DTT 1 mM, MnCl2 1 mM, BSA a 0,01%, Tween-20 a 0,05%) durante 56 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 1 hora à temperatura ambiente num tubo de polipropileno siliconizado. Depois, adiciona-se o inibidor selectivo de Lck, PP2 (l-terc-butil-3-(4-clorofenil)-lH-pirazolo[3,4-d]-pirimidin-4-ilamina; Alexis Biochemicals) (concentração final de 1,2 μΜ) e incuba-se durante mais 10 min. Misturam-se 10 pL desta solução com os 10 pL de péptido biotinilado LAT-11 (1 pM) como substrato e 20 pL de diluições em série de inibidores e incuba-se durante 4 horas à temperatura ambiente. A reacção pela quinase é terminada com 10 pL de uma solução de EDTA 10 mM em tampão de detecção (Tris 20 mM, pH 7,5, BSA a 0,01%, Tween-20 a 0,05%). Adicionam-se 50 pL de anticorpo anti-fosfotirosina marcado com európio (Eu-PT66; concentração final de 0,125 nM); e 50 pL de estreptavidina-aloficocianina (SA-APC; concentração final de 40 nM) em tampão de detecção. Após 1 hora de incubação à temperatura ambiente mede-se a fluorescência no contador Victor2 Multilabel Counter (Wallac) a 665 nm. Os valores de ruido de fundo (controlo inferior) são obtidos na ausência de amostras de teste e ATP e são subtraidos a todos os valores. Os sinais obtidos na ausência de amostras de teste são tomados como 100% (controlo superior). A inibição obtida na presença de compostos de teste é calculada como a percentagem de inibição do controlo superior. A concentração de compostos de teste que resulta em 50% de inibição (IC50) é determinada a partir das curvas de resposta à dose. Neste ensaio, os agentes da invenção têm valores de IC50 na gama de 10 nM a 2 pM, preferivelmente de 10 nM a 100 nM. A quinase ZAP-70 recombinante é obtida como se segue: um ácido nucleico que codifica ZAP-70 humana de comprimento completo (GenBank #L05148) é amplificado a partir de uma biblioteca de ADNc de Jurkat por RT-PCR e é clonado no vector pBluescript KS (Stratagene, Califórnia, EUA). A autenticidade da inserção do ADNc de ZAP-70 é validada por análise da sequência completa. Este plasmideo dador é então utilizado para construir um vector de transferência de baculovirus recombinante com base no plasmideo pVL1392 (Pharmingen, Califórnia, EUA) que possui em adição uma marca de hexa-histidina N-terminal. Após co-transfecção com ADN virai de AcNPV, 10 isolados virais independentes são derivados por via de purificação por formação de placas virais, amplificados em pequenas escala e subsequentemente são analisados quanto a 57 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ expressão de ΖΑΡ-70 recombinante por Western Blot utilizando um anticorpo anti-ZAP-70 comercialmente disponível (Clone 2F3.1, Upstate Biotechnology, Lake Placid, NY, EUA). Por amplificação adicional de uma placa virai recombinante positiva, preparam-se reservas de virus tituladas que se utilizam para infecção de células Sf9 crescidas em meio SF900 II isento de soro (Life Technologies, Basel, Suiça) sob condições optimizadas definidas. A proteina ZAP-70 é isolada do lisado de células Sf9 infectadas por cromatografia de afinidade numa coluna Ni-NTA (Qiagen, Basel, Suiça). A ZAP-70 recombinante marcada com His está também disponível em PanVera LLC, Madison, Wisconsin, EUA. LAT-11 (ligante para activação de células T): 0 péptido LAT-11 biotinilado (Biotina-EEGAPDYENLQELN) utilizado como substrato no ensaio com quinase ZAP-70 é preparado em analogia com métodos conhecidos de síntese peptídica. 0 grupo Fmoc N-α de Fmoc-Asn(Trt)-oximetil-4-fenoximetil-co (poliestireno-l%-divinilbenzeno), com teor de Asn de aprox. 0,5 mmol/g, é clivado utilizando piperidina, a 20% em DMF. Quatro equivalentes por grupo amino de Fmoc-aminoácido protegido nas suas cadeias laterais [Asp(OtBu), Glu (OtBu), Asn (Trt), Gin(Trt) e Tyr(tBu)] são acoplados utilizando DIPCDI e HOBt em DMF. Após montagem completa da cadeia peptídica o grupo protector Fmoc terminal é removido com piperidina em DMF como anteriormente. É então acoplado ácido L ( + )-biotinilamino-hexanóico ao grupo amino terminal utilizando DIPCDI e HOBt em DMF utilizando quatro equivalentes dos reagentes durante quatro dias à TA. O péptido é clivado da resina de suporte e todos os grupos protectores das cadeias laterais são removidos simultaneamente utilizando um reagente consistindo em dodecilmetilsulfureto a 5% e água a 5% em TFA durante duas horas à TA. As partículas de resina são removidas por filtração, lavadas com TFA e o produto é precipitado a partir dos filtrados combinados pela adição de 10 a 20 volumes de éter dietílico, é lavado com éter e seco. O produto é purificado por cromatografia numa coluna C-18 de sílica de poros largos utilizando um gradiente de acetonitrilo em ácido fosfórico aquoso a 2%. As fracções contendo o composto puro são recolhidas, filtradas através de uma resina de permuta 58 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ aniónica (Biorad, AG4-X4 na forma de acetato) e liofilizadas para obter o composto do título. EM: 1958,0 (M-H)_1

Exemplo 3: Ensaio de crescimento de células tumorais independente de ancoragem Células 4T1 de carcinoma mamário de ratinho (5 x 103) são plaqueadas em placas de 96 poços Ultra low Attachment (#3474, Corning Inc.) em 100 pL de meio de Eagle modificado por Dulbecco contendo FBS a 10%. As células são cultivadas durante 2 h e adicionam-se inibidores em várias concentrações numa concentração final de DMSO de 0,1%. Após 48 h, ensaia-se o crescimento celular com o kit-8 de contagem de células (Wako Pure Chemical), que utiliza um sal de tetrazólio solúvel em água WST8. Adicionam-se 20 pL do reagente a cada poço e as células são adicionalmente cultivadas durante 2 h. A densidade óptica é medida a 450 nm. Determina-se a concentração de composto que causa 50% de inibição do crescimento.

Exemplo 4: Actividade in vivo no modelo de xenoenxerto no ratinho nu

Ratinhos nus BALB/c fêmeas ou machos (5-8 semanas de idade, Charles River Japan, Inc., Yokohama, Japão) são mantidos sob condições estéreis com água e alimento ad libitum. Os tumores são induzidos por injecção subcutânea de células tumorais (linha celular epitelial humana MIA PaCa-2; European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, RU, Número de Catálogo 85062806; linha celular de um indivíduo do sexo masculino Caucasiano de 65 anos de idade; linha celular de carcinoma pancreático humano indiferenciado) no flanco esquerdo ou direito de ratinhos sob anestesia com Forene® (Abbott Japan Co., Ltd., Tokyo, Japão). O tratamento com o composto de teste é iniciado quando os volumes tumorais médios atingem aproximadamente 100 mm3. O crescimento tumoral é medido duas vezes por semana e 1 dia após o último tratamento por determinação do comprimento de dois eixos perpendiculares. Os volumes tumorais são calculados de acordo com métodos publicados (veja-se Evans et al., Brit. J. Câncer 45, 466-8, 1982). A eficácia antitumoral é determinada como o aumento médio do volume tumoral dos 59 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ animais tratados dividido pelo aumento médio do volume tumoral dos animais não tratados (controlos) e, após multiplicação por 100, é expressa como delta T/C [%] . A regressão do tumor é reportada como as alterações médias do volume tumoral dos animais tratados dividido pelo volume tumoral médio no inicio do tratamento e, após multiplicação por 100, é expressa como regressão [%]. O composto de teste é administrado por via oral diariamente com ou sem dias de folga de fármaco.

Como alternativa à linha celular MIA PaCa-2, pode também utilizar-se outra linha celular da mesma maneira, por exemplo: • a linha celular de carcinoma da mama 4T1 (Número ATCC CRL-2539; veja-se também Câncer. 88(12 Sup.), 2979-2988, 2000) com ratinhos BALB/c fêmea (injecção na almofada de gordura mamária).

Com base nestes estudos, um composto de fórmula I de acordo com a invenção apresenta eficácia terapêutica especialmente contra doenças proliferativas responsivas a uma inibição de uma tirosina-quinase.

Exemplo 5: Comprimidos

Preparam-se da maneira usual comprimidos compreendendo 50 mg de ingrediente activo, por exemplo um dos compostos de fórmula I' descritos nos Exemplos 1 a 131, e possuindo a seguinte composição.

Composição: ingrediente activo 50 mg amido de trigo 150 mg lactose 125 mg ácido silicico coloidal 12,5 mg talco 22,5 mg estearato de magnésio 2,5 mg

Total: 3 62,5 mg

Preparação: O ingrediente activo é misturado com uma porção do amido de trigo, com a lactose e o ácido silicico coloidal e a mistura é forçada através de um peneiro. Uma 60 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ outra porção do amido de trigo é transformada em pasta, num banho água, com cinco vezes a quantidade de água e a mistura de pós é amassada com a pasta até se obter uma massa ligeiramente plástica. A massa plástica é prensada através de um peneiro de cerca de 3 mm dimensão da rede e seca, e os resultantes grânulos secos são novamente forçados através de um peneiro. Depois, o restante do amido de trigo, o talco e o estearato de magnésio são misturados e a mistura é prensada para formar comprimidos pesando 145 mg e possuindo uma fenda de partição.

Exemplo 6: Cápsulas de gelatina

Preparam-se da maneira usual 5000 cápsulas de gelatina moles compreendendo cada uma 50 mg de ingrediente activo, por exemplo um dos compostos de fórmula 1' descritos nos Exemplos 1 a 131: 250 g 2 litros

Composição: ingrediente activo Lauroglykol

Preparação: O ingrediente activo pulverizado é suspenso em Lauroglykol® (laurato de propilenoglicol, Gattefossé S.A., Saint Priest, França) e moido num pulverizador em húmido até um tamanho de partícula de aprox. 1 a 3 ym. Porções de 0,419 g da mistura são então dispensadas em cápsulas de gelatina mole utilizando uma máquina de enchimento de cápsulas.

Lisboa, 2013-08-02

Claims

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 1/27 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula I'

em que: n' é seleccionado entre 1 e 2; R'! é seleccionado de fenilo, piridinilo, pirazolilo e pirimidinilo; em que R'i é substituído por 2 ou 3 radicais seleccionados independentemente de etoxi, etilo, propilo, metilo, t-butilo, trifluorometilo, nitrilo, ciclobutiloxi, 2,2,2-trifluoroetoxi, isobutiloxi, t-butiloxi, isopropiloxi, metil-amino-carbonilo, ciclopropil-metoxi, dimetilamino-propil-amino, metoxi-etoxi, -X'R'4, -C(0)R'4 e -OX'R'4; em que X' é uma ligação, metileno ou etileno; R'4 é seleccionado de piperazinilo, piperidinilo, pirrolidinilo, morfolino, azepanilo e 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-ilo; em que R'4 é opcionalmente substituído por 1 a 3 radicais seleccionados independentemente de metilo, isopropilo, acetilo, acetil-metil-amino, 3-dimetilamino-2,2-dimetil-propilamino, etil-metil-amino-etoxi, dietil-amino-etoxi, amino-carbonilo, etilo, 2-oxo-pirrolidin-l-ilo, pirrolidinilo, pirrolidinil-metilo, piperidinilo opcionalmente substituído com metilo ou etilo, morfolino, dimetilamino, dimetilamino-propil-amino, metil-amino e etil-amino; R' 2 é seleccionado de hidrogénio e halogéneo; R'3 é seleccionado de dimetil-sulfamoílo, isobutil-sulfamoílo, etil-sulfamoílo, propilsulfonilo, etil-amino-carbonilo, 1-etil-propil-sulfamoílo, ciclopentil-sulfamoílo, isopropil-sulfamoílo, ciclo-hexil-sulfonilo, ciclopropil-metil- sulfamoílo, ciclobutil-sulfamoílo e isopropil-sulfonilo; estereoisómeros solvatos e ou seus sais, hidratos, farmaceuticamente aceitáveis. ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 2/27
2. Composto de Fórmula 1' de acordo com a reivindicação 1, em que o composto é:

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 3/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 4/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 5/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 6/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 7/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 8/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ

Cl ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 10/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 11/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 12/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 13/27

225 226 227 234

OEt

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 14/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 15/27 279 281

282 298

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 16/27 325

CU Ο ΗΝ Ν ΝΗ HN-S^ Ο Et 326

Ο ΗΝ Ν ΝΗ Η Ν—Ο Et 6

327

328 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 17/27

368 ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 18/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 19/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 20/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 21/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 22/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 23/27

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 24/27

455 456 / Ο

ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 25/27

e ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 26/27
3. Composição farmacêutica que compreende um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 2, como ingrediente activo juntamente com um ou mais diluentes ou transportadores farmaceuticamente aceitáveis.
4. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 2 para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças neoplásicas e desordens do sistema imunitário.
5. Combinação que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 2 e uma ou mais substâncias de fármaco adicionais, sendo as referidas substâncias de fármaco adicionais úteis no tratamento de doenças neoplásicas ou desordens do sistema imunitário.
6. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 2 ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença que responde à inibição de IGF-1R ou ALK.
7. Utilização de acordo com a reivindicação 6, em que a doença a ser tratada é seleccionada de uma doença proliferativa.
8. Utilização de acordo com a reivindicação 7, em que a doença proliferativa a ser tratada é seleccionada de um tumor, da mama, renal, da próstata, colorrectal, da tiróide, ovariano, do pâncreas, neuronal, do pulmão, uterino e tumores ΕΡ 2 287 156/ΡΤ 27/27 gastro-intestinais, assim como osteossarcomas e melanomas.
9. Utilização de acordo com a reivindicação 6, em que a doença a ser tratada é uma doença imunitária.
10. Utilização de um composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 2 ou um seu sal f armaceuticamente aceitável, para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma desordem inflamatória e/ou imunitária.
11. Utilização de acordo com a reivindicação 10, em que a desordem inflamatória e/ou imunitária é seleccionada de rejeição de transplante, alergia e desordens autoimunes mediadas por células imunes incluindo linfócitos T, linfócitos B, macrófagos, células dendríticas, mastócitos e eosinófilos.
12. Composto de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 2 para utilização num método de tratamento ou prevenção de uma doença neoplásica, uma desordem do sistema imunitário, uma doença inflamatória ou uma doença proliferativa. Lisboa, 2013-08-02