PT1355910E

PT1355910E - Formulação de compostos do ácido borónico

Info

Publication number: PT1355910E
Application number: PT02709145T
Authority: PT
Inventors: Shanker Gupta
Original assignee: Us Of America Represented By The Secretary Dept Of Health And Human Services
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2002-01-25
Publication date: 2011-03-24
Also published as: CY1121142T1; US20020188100A1; WO2002059131A1; EP3078667B1; JP2004517931A; CA2435146C; HK1149936A1; JP2004517932A; PT3078667T; EP1355910A1; CA2435146A1; EP2251344A1; US6958319B2; US20040063623A1; ES2702732T3; FI2251344T4; DK1355910T3; JP4162491B2; TR201819416T4; EP2251344B2

Description

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DESCRIÇÃO "FORMULAÇÃO DE COMPOSTOS DO ÁCIDO BORÓNICO" A presente invenção refere-se à formulação de compostos farmacêuticos. De um modo mais particular, a invenção refere-se a composições estáveis, farmaceuticamente aceitáveis preparadas a partir de compostos do ácido borónico. A invenção também se refere a métodos para preparar tais composições.

Os compostos do éster e ácido borónico apresentam uma variedade de actividades biológicas farmaceuticamente úteis. Shenvi et al., Pat. U.S. N° 4,499,082 (1985) divulga que os ácidos borónicos peptidicos são inibidores de certas enzimas proteoliticas. Os documentos Kettner e Shenvi, Pat. U.S. N° 5,187,157 (1993); Pat. U.S. N° 5,242,904 (1993); e a Pat. U.S. N° 5,250,720 (1993) descrevem uma classe de ácidos borónicos peptidicos que inibem as proteases semelhantes a tripsina. O documento Kleeman et al., Pat. U.S. N° 5,169,841 (1992) divulga os ácidos borónicos peptidicos modificados nas terminações N que inibem a acção da renina. O documento Kinder et al., Pat U.S. N° 5,106,948 (1992), divulga que certos compostos do ácido borónico tripeptidicos inibem o crescimento de células de cancro.

Os documentos Adams et al., Patente U.S. N° 5,780,454 (1998), Patente U.S. N° 6,066,730 (2000), Patente U.S. N° 6,083,903 (2000) e a Patente U.S. N° 6,297,217 (2001), aqui incorporados por referência na sua totalidade, descrevem compostos peptidicos do éster e do ácido borónico, úteis como inibidores do proteassoma. As referências também descrevem o uso de compostos do éster e do ácido borónico para reduzir a velocidade de degradação da proteína 2 muscular, para reduzir a actividade da NF-κΒ numa célula, para reduzir a velocidade de degradação da proteína p53 numa célula, para inibir a degradação da ciclina numa célula, para inibir o crescimento de uma célula de cancro, para inibir a apresentação de um antigénio numa célula, para inibir a adesão celular dependente de NF-κΒ e para inibir a replicação do HIV. 0 documento Brand et al., WO 98/35691 ensina que os inibidores do proteassoma, incluindo os compostos do ácido borónico, são úteis no tratamento de enfartes tais como aqueles que ocorrem durante a apoplexia ou enfarte do miocárdio. 0 documento Elliott et al., WO 99/15183 ensina que os inibidores do proteassoma são úteis no tratamento de doenças inflamatórias e autoimunes.

Infelizmente, os ácidos alquilborónicos são relativamente difíceis de obter na sua forma puramente analítica. 0 documento Snyder et al., J. Am. Chem. Soc., 3611 (1958), ensina que os compostos do ácido alquilborónico formam prontamente boroxinas (anidridos) sob condições de desidratação. Ainda, os ácidos alquilborónicos e as suas boroxinas são normalmente sensíveis ao ar. 0 documento Korcek et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2 242 (1972) ensina que o ácido butilborónico é prontamente oxidado pelo ar para gerar 1-butanol e ácido bórico. Estas dificuldades limitam a utilidade farmacêutica dos compostos do ácido borónico , complicando a caracterização dos agentes farmacêuticos compreendendo compostos do ácido borónico e limitam o seu prazo de validade.

Existe, assim, uma necessidade na arte de formulações melhoradas de compostos do ácido borónico. Idealmente, tais formulações seriam preparadas de um modo conveniente, exibiriam uma estabilidade aumentada e um prazo de validade maior, quando comparadas com o composto de ácido borónico 3 livre e libertariam prontamente o composto de ácido borónico bioactivo quando administrado a um indivíduo com necessidade de terapia com ácido borónico. A presente invenção proporciona composições estáveis, farmaceuticamente aceitáveis preparadas a partir de compostos do ácido borónico. A invenção também proporciona métodos para preparar tais composições. A invenção proporciona a descoberta de que a liofilização de uma mistura aquosa compreendendo um composto do ácido borónico e um composto contendo pelo menos dois grupos hidroxilo produz uma composição estável que liberta prontamente o composto do ácido borónico aquando da dissolução em meios aquosos.

Num primeiro aspecto, a invenção proporciona compostos contendo a fórmula (I):

(1) em que P é hidrogénio ou uma porção protectora do grupo amino; R é hidrogénio ou alquilo C1-12; A é 0, 1 ou 2; R1, R2 e R3 são cada um, de um modo independente, hidrogénio, alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12; arilo C6-14 ou -CH2-R5; R5, em cada momento, é arilo C6-i4, (C6-i4) ar (C1-12) alquilo, (C1-12) alq (C6-14) arilo, cicloalquilo C3-12, heterociclilo compreendendo 3 a 8 átomos, em que um ou mais átomos são seleccionados de N, O e S, heteroarilo compreendendo 5 a 14 átomos, em que 1-4 átomos são seleccionados de N, O e S, ou -W-R6, onde W é um calcogénio e R6 é um alquilo C1-12; 4 em que a porção anel de qualquer um dos referidos arilo, aralquilo, alquilarilo, cicloalquilo, heterociclilo ou heteroarilo em R1, R2, R3 ou R5 pode ser opcionalmente substituída; e Z e Z formam juntos uma porção derivada do manitol, em que o átomo ligado ao boro, em cada caso, é um átomo de oxigénio; e em que o composto de fórmula (1) é opcionalmente liofilizado.

Numa segunda perspectiva, a invenção proporciona um método para a preparação de um composto liofilizado de fórmula (D :

em que P é hidrogénio ou uma porção protectora do grupo amina; R é hidrogénio ou alquilo C1-12; A é 0, 1 ou 2; R1, R2 e R3 são, cada um, de um modo independente, hidrogénio, alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-i4 ou -CH2-R5; R5 é, em cada momento, arilo C6-i4, (Ce-i4) ar (C1-12) alquilo, (C1-12) alq (C6-i4) arilo, cicloalquilo C3-12, heterociclilo compreendendo 3 a 8 átomos, em que um ou mais átomos são seleccionados de N, O e S, heteroarilo compreendendo 5 a 14 átomos, em que 1-4 átomos são seleccionados de N, O e S ou -W-R6, onde W é um calcogénio e R6 é alquilo; em que a porção anel de qualquer um dos referidos arilo, aralquilo, alquilarilo, cicloalquilo, heterociclilo ou heteroarilo em R1, R2, R3 ou R5 podem ser opcionalmente substituídos; e 5 Ζ θ Ζ são derivados de um açúcar, em que o açúcar é o manitol; 0 método compreendendo: (a) preparação de uma mistura compreendendo (i) água, (ii) um composto de fórmula (3)

em que P, R, A, R1, R2 e R3 são como descritos acima; e Z' e Z'' são OH; e (iii) manitol; e (b) liofilizando a mistura.

As formas de realização preferidas são estabelecidas nas reivindicações dependentes.

Numa terceira perspectiva, a invenção proporciona composições preparadas pelos métodos da invenção. A invenção proporciona composições farmacêuticamente aceitáveis, estáveis, preparadas a partir de compostos do ácido borónico e métodos para preparar as composições. A invenção também proporciona novos compostos ésteres de boronato.

Para efeitos da presente invenção, serão usadas as seguintes definições:

Tal como aqui utilizados, os termos "formulado" e "formulação" referem-se à preparação de um composto do ácido borónico numa forma adequada para a administração a 6 um sujeito mamífero, preferencialmente um humano. Normalmente, a formulação do composto do ácido borónico compreende a adição de excipientes, diluentes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis. Nalgumas formas de realização, a formulação do composto do ácido borónico compreende a formação de um derivado químico do composto do ácido borónico, preferencialmente a formação de um éster de boronato. 0 termo "formulação" refere-se a qualquer forma normalmente usada para a administração farmacêutica, incluindo sólidos, líquidos, suspensões, cremes e géis. Para efeitos da presente invenção a formulação é preferencialmente um pó liofilizado.

Tal como aqui usado, o termo "pó liofilizado" refere-se a qualquer material sólido obtido por liofilização de uma mistura aquosa.

Por "formulação estável" pretende-se referir qualquer formulação com estabilidade suficiente para ter utilidade como um agente farmacêutico. Preferencialmente, a formulação tem estabilidade suficiente para permitir o armazenamento a uma temperatura conveniente, preferencialmente entre os 0 °C e os 40 °C, durante um período razoável de tempo, preferencialmente superior a um mês, mais preferencialmente superior a três meses, ainda mais preferencialmente superior a seis meses e mais preferencialmente superior a um ano.

Tal como aqui empregue, o termo "ácido borónico" refere-se a qualquer composto químico compreendendo uma porção -B(OH). O documento Snyder et ai., J. Am. Chem. Soc. 3611 (1958) ensina que os compostos alquilo do ácido borónico formam prontamente anidridos oligoméricos por desidratação da porção do ácido borónico. Assim, a não ser quando é 7 evidente de outro modo pelo contexto, o termo "ácido borónico" é expressamente destinado a englobar ácidos borónicos livres, anidridos oligoméricos, incluindo, mas não se limitando a, dímeros, trímeros e tetrâmeros e suas misturas.

Tal como aqui empregue, o termo "composto contendo pelo menos dois grupos hidroxilo" refere-se a qualquer composto contendo dois ou mais grupos hidroxilo. Para efeitos da presente invenção, os dois grupos hidroxilo são preferencialmente separados por, pelo menos, dois átomos ligantes, preferencialmente desde cerca de 2 a cerca de 5 átomos ligantes, mais preferencialmente 2 ou 3 átomos ligantes. Os átomos ligantes podem estar em cadeia ou num anel, a cadeia ou o anel compreendendo átomos de carbono e, opcionalmente, um heteroátomo ou heteroátomos, os quais podem ser N, S ou 0. Por conveniência, o termo "composto di-hidroxi" pode ser usado para referir um composto contendo, pelo menos, dois grupos hidroxilo, tal como definido acima. Assim, tal como aqui empregue, o termo "composto di-hidroxi" não pretende limitar-se a compostos contendo apenas dois grupos hidroxilo.

Tal como aqui empregue, o termo "porção protectora do grupo amina" refere-se a qualquer grupo usado para derivar um grupo amina, especialmente um grupo N-terminal de um péptido ou aminoácido. Tais grupos incluem, sem limitação, porções alquilo, acilo, alcoxicarbonilo, aminocarbonilo e sulfonilo. No entanto, o termo "porção protectora do grupo amina" não pretende limitar-se a estes grupos protectores em particular, que são normalmente empregues em síntese orgânica, nem pretende limitar-se a grupos que são prontamente cliváveis. 0 termo "calcogénio" tal como aqui empregue refere-se aos elementos oxigénio ou enxofre. 0 termo "alquilo" tal como aqui empregue refere-se a cadeias de 20 grupos alifáticos, lineares ou ramificadas, contendo desde 1 a 12 átomos de carbono, preferencialmente 1-8 átomos de carbono, mais preferencialmente 1-6 átomos de carbono e ainda mais preferencialmente 1-4 átomos de carbono, os quais podem ser opcionalmente substituídos com um, dois ou três substituintes. A não ser quando referido explicitamente de outra forma, o termo "alquilo" pretende incluir grupos alifáticos saturados, insaturados e parcialmente insaturados. Quando se pretendem em particular grupos insaturados, os termos "alcenilo" ou "alcinilo" serão usados. Quando se pretendem apenas grupos saturados, o termo "alquilo saturado" será usado. Os grupos alquilo saturados preferidos incluem, sem limitação, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo e hexilo. O termo "cicloalquilo" tal como aqui empregue inclui grupos de hidrocarbonetos cíclicos saturados e parcialmente insaturados, contendo 3 a 12 carbonos, preferencialmente 3 a 8 carbonos e mais preferencialmente 3 a 6 carbonos, em que o grupo cicloalquilo adicionalmente pode ser substituído de um modo opcional. Os grupos cicloalquilo preferidos incluem, sem limitação, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclo-hexilo, ciclo-hexenilo, ciclo-heptilo e ciclo-octilo.

Um grupo "arilo" é uma porção aromática C6-Ci4 compreendendo um a três anéis aromáticos, os quais podem ser opcionalmente substituídos. Preferencialmente, o grupo arilo é um grupo C6-Cio arilo. Os grupos arilo preferidos 9 incluem, sem limitação, fenilo, naftilo, antracenilo e fluorenilo. Um grupo "aralquilo" ou "arilalquilo" compreende um grupo arilo covalentemente ligado a um grupo alquilo, qualquer um dos quais podendo ser, de um modo independente, opcionalmente substituído ou não substituído. Preferencialmente, o grupo aralquilo é (Ci-Cô)alq (Cê-Cio) arilo, incluindo, sem limitação, benzilo, fenetilo e o naftilmetilo. Um grupo "alcarilo" ou "alquilarilo" é um grupo arilo contendo um ou mais substituintes alquilo. Os exemplos de grupos alcarilo incluem, sem limitação, tolilo, xililo, mesitilo, etilfenilo, terc-butilfenilo e metilnaftilo.

Os termos "heterociclo", "heterocíclico" e "heterociclilo" referem-se a qualquer estrutura estável em anel contendo desde cerca de 3 a 8 átomos, em que um ou mais átomos são seleccionados do grupo que consiste em N, 0 e S. Os heteroátomos de azoto e enxofre da porção heterocíclica podem ser opcionalmente oxidados e os átomos de azoto podem ser opcionalmente quaternizados. 0 anel heterocíclico pode ser ligado ao seu grupo pendente em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono que resulta numa fórmula estável. 0 termo "composto estável" ou "fórmula estável" pretende referir-se a um composto que seja suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento num grau útil de pureza a partir de uma mistura de reacção e formulação num agente terapêutico eficaz. 0 grupo heterocíclico pode ser opcionalmente substituído no carbono de uma ou mais posições com qualquer um dos substituintes citados acima. 0 grupo heterocíclico pode também, de um modo independente, ser substituído no azoto com um alquilo, arilo, aralquilo, alquilcarbonilo, alquilsulfonilo, arilcarbonilo, arilsulfonilo, alcoxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, oxo ou hidroxi ou em 10 enxofre com oxo ou alquilo inferior. Os grupos heterociclicos preferidos incluem, sem limitação, epoxi, aziridinilo, tetra-hidrofuranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, tiazolidinilo, oxazolidinilo, oxazolidinonilo e morfolinilo. O grupo heterocíclico também pode ser fundido com um grupo arilo, heteroarilo ou heterocíclico. Os exemplos de tais heterociclos fundidos incluem, sem limitação, a tetra-hidroquinolina e o di-hidrobenzofurano.

Tal como aqui utilizados, os termos "heteroarilo" e "heterociclo aromático" referem-se aos grupos contendo anéis com 5 a 14 membros, preferencialmente anéis com 5, 6, 9 ou 10 membros; contendo 6, 10 ou 14 electrões π partilhados num arranjo cíclico; e contendo, adicionalmente aos átomos de carbono, desde um a cerca de quatro, preferencialmente desde um a cerca de três, heteroátomos seleccionados do grupo consistindo em N, O e S. O grupo heteroarilo pode ser opcionalmente substituído no carbono numa ou mais posições com qualquer um dos substituintes citados acima. Os grupos heteroarilo preferidos incluem, sem limitação, o tienilo, benzotienilo, furanilo, benzofuranilo, dibenzofuranilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, indolilo, quinolilo, isoquinolilo, quinoxalinilo, tetrazolilo, oxazolilo, tiazolilo e isoxazolilo.

Tal como aqui empregue, um grupo alquilo, cicloalquilo, arilo, heterociclilo ou heteroarilo "substituído" é um que tem desde um a cerca de quatro, preferencialmente desde um a cerca de três, mais preferencialmente um ou dois, substituintes não-hidrogénio. Os substituintes adequados incluem, sem limitação, grupos halo, hidroxi, oxo, nitro, haloalquilo, alquilo, alcarilo, arilo, aralquilo, alcoxi, 11 ariloxi, amino, acilamino, alquilcarbamoilo, arilcarbamoilo, aminoalquilo, alcoxicarbonilo, carboxi, hidroxialquilo, alquilsulfonilo, arenosulfonilo, alcanosulfonamido, arenosulfonamido, aralquilsulfonamido, alquilcarbonilo, aciloxi, ciano e ureido.

Preferencialmente, os substituintes são seleccionados independentemente do grupo que consiste em alquilo C1-C6, cicloalquilo C3-C8, (Ci-Cê) alquil (C3-Cs) cicloalquilo, alcenilo C2-C8, alquinilo C2-C8, ciano, amino, alquilamino Ci-Cê, di(Ci-Cê)alquilamino, benzilamino, dibenzilamino, nitro, carboxi, carbo(Ci-Cê)alcoxi, trifluorometilo, halogénio, alcoxi Ci-Cê, arilo C6-C10, (Cê-Cio) aril (Ci-Cê) alquilo, (Cê-Cio) aril (Ci-Cê) alcoxi, hidroxi, alquiltio Ci-Cê, alquilsulfinilo Cê-Cio, alquilsulfonilo Cê-Cio, ariltio Cê-Cio, arilsulfinilo Cê-Cio, arilsulfonilo Cê-Cio, arilo Cê-Cio, (Ci-Cê) alquil (Cê-Cio) arilo e halo (C6-Ci0) arilo. 0 termo "halogénio" ou "halo" tal como aqui empregue refere-se ao cloro, bromo, flúor ou iodo. 0 termo oxo refere-se a um átomo de oxigénio, 0 qual forma um carbonilo quando ligado ao carbono, um N-óxido quando ligado ao azoto e um sulfóxido ou sulfona quando ligado ao enxofre.

Tal como aqui empregue, o termo "acilo" refere-se a um substituinte alquilcarbonilo ou arilcarbonilo. 0 termo "acilamino" refere-se a um grupo amida ligado ao átomo de azoto. O termo "carbamoilo" refere-se a um grupo amida ligado ao átomo de carbono do carbonilo. 0 átomo de azoto de um substituinte acilamino ou carbamoilo pode ser adicionalmente substituído. 0 termo "sulfonamido" refere-se a um substituinte sulfonamida ligado quer pelo átomo de enxofre quer pelo de azoto. 0 termo "amino" pretende 12 incluir os grupos NH2, alquilamino, arilamino e amina cíclica. 0 termo "ureido" tal como aqui empregue refere-se a uma porção de ureia substituída ou não substituída.

Numa primeira perspectiva, a invenção proporciona compostos contendo a fórmula (I):

de acordo com a reivindicação 1.

Tal como aqui usado, o termo "porção derivada do manitol" refere-se a uma porção formada por remoção dos átomos de hidrogénio dos dois grupos hidroxilo do manitol. A porção derivada do manitol pode estar ligada ao boro por quaisquer dois dos grupos hidroxilo do manitol. Por exemplo, em várias formas de realização, o éster de boronato forma um anel com 5-, 6-, 7-, 8- ou 9- membros. Nalgumas formas de realização preferidas, o éster de boronato forma um anel com 5- ou 6- membros.

Assim, o Z1 e o Z2 do composto de fórmula (I) em conjunto formam uma porção de fórmula em que os átomos de oxigénio dos dois grupos hidroxilo desprotonados formam ligações covalentes com o boro para formar um composto éster de boronato.

Preferencialmente, o composto éster de boronato de manitol tem uma das seguintes estruturas: 13

No entanto, as estruturas com tamanhos maiores de anéis do éster de boronato também são possíveis.

Em certas formas de realização preferidas, o éster de boronato do manitol forma um anel com 5 membros simétrico, contendo a seguinte estrutura:

PH

OH OH

>—0H

Preferencialmente, o manitol tem configuração D, embora a configuração L também possa ser usada. Em certas formas de realização particularmente preferidas, o Z1 e o Z2 formam em conjunto uma porção derivada do D-manitol. Nestas formas de realização, o composto éster de boronato tem preferencialmente uma das seguintes estruturas: 14

Em certas formas de realização particularmente preferidas, o composto éster de boronato tem a seguinte estrutura:

OH A porção P do composto de fórmula (I) é preferencialmente hidrogénio ou um de R7-C(0)-, R7-S(0)-, R7-NH-C(0)-, ou R7-0-C(0)-, em gue R7 é um dos grupos alquilo, arilo, alcarilo ou aralquilo, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído ou quando Y é R7-C(0)- ou R7-S(0)2-, R7 também pode ser um heterociclo com 5- a 10 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado ou aromático. 15

Em certas formas de realização preferidas, P é um de R7-C (O) - ou R7_S (O) 2~ e R7 é um heterociclo com 5 a 10 membros, opcionalmente substituído, saturado, parcialmente insaturado ou aromático. Preferencialmente, R7 é um heterociclo aromático, mais preferencialmente pirazinilo, piridilo, quinolilo ou quinoxalinilo ou um heterociclo saturado, preferencialmente morfolinilo. Nalgumas formas de realização preferidas, P é (2-pirazino)carbonilo ou (2-pirazino)sulfonilo.

Nalgumas formas de realização preferidas R é hidrogénio. Noutras formas de realização preferidas, R é alquilo, preferencialmente C1-C6, alquilo, mais preferencialmente Ci-C4, alquilo e mais preferencialmente metilo ou etilo. A variável A na fórmula (I) pode ser 0, 1 ou 2. Assim, quando A é zero, o resíduo dentro de parêntesis não está presente e o composto éster de boronato é um dipéptido. De um modo semelhante, quando A é 1, o resíduo dentro de parêntesis está presente e o composto é um tripéptido. Quando A é 2, o composto é um tetrapéptido. Em certas formas de realização particularmente preferidas, A é zero.

Para efeitos da presente invenção, os termos "péptido", "dipéptido" e "tripéptido" pretendem englobar compostos que compreendem resíduos de aminoácidos naturais, resíduos de aminoácidos não naturais ou uma combinação de resíduos de aminoácidos naturais e não naturais. Será evidente das fórmulas (1)-(3), que os termos "péptido", "dipéptido" e "tripéptido" são aqui usados para referirem os compostos nos quais a funcionalidade do ácido carboxílico do resíduo de aminoácido C-terminal é substituída por uma funcionalidade de ácido borónico ou éster de boronato. 16 É preferido que os substituintes R1, R2 e R3 na fórmula (I) são cada um, de um modo independente, hidrogénio, alquilo Ci-Cs, cicloalquilo C3-C10 ou arilo C6-Cio ou -CH2-R5, em que cada um dos R1, R2, R3 e R5 podem ser opcionalmente substituídos. De um modo mais preferido, R1, R2 e R3 são, cada um, de um modo independente, um de alquilo C1-C4 ou -CH2-R5 e R5 é um de cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heteroarilo ou -W-R6 em que W é calcogénio e R6 é alquilo. Preferencialmente, R5 é um de arilo C6-Ci0, (C6-Ci0) ar (Ci- C6)alquilo, (Ci—Cô) alq (C6-Ci0) arilo, cicloalquilo C3_Cio, alcoxilo Ci-Cs ou Ci-C3, alquiltio ou um anel heteroarilo com 5 a 10 membros.

Em certas formas de realização particularmente preferidas, o composto de fórmula (I) é um de: N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(2-quinolino)sulfonil-L-homofenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(3-piridino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(4-morfolino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(4-morfolino)carbonil-β-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato de D-manitol; N—(8-quinolino)sulfonil-β-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato de D-manitol; 17 N- (4-morfolino)carbonil-(O-benzil)-L-tirosina-L-leucina boronato de D-manitol; N- (4-morfolino)carbonil-L-tirosina-L-leucina boronato de D-manitol; ou N-(4-morfolino)carbonil-(0-(2-piridilmetil)]-L-tirosina-L-leucina boronato de D-manitol;

Nalgumas formas de realização preferidas, a composição compreende adicionalmente um ou mais de outros excipientes, veículos, diluentes de enchimento, sais, tampões, estabilizadores, solubilizadores farmaceuticamente aceitáveis e outros materiais bem conhecidos na técnica. A preparação de formulações farmaceuticamente aceitáveis contendo estes materiais é descrita em, p.ex., Remíngton's Pharmaceutical Sciences, 18a Edição, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990.

Os compostos e composições de acordo com o primeiro aspecto da invenção podem ser preparados pelos métodos aqui descritos, ou por qualquer método adequado para produzir o composto ou composição. Por exemplo, os ésteres de boronato de fórmula (I) podem ser preparados a partir dos correspondentes ácidos borónicos por liofilização, na presença de manitol, tal como aqui descrito, ou alternativamente, podem ser preparados a partir de outro éster de boronato por transesterificação. Alternativamente, os ésteres de boronato de fórmula (I) podem ser preparados por incorporação de manitol num estádio anterior da síntese. 18

Num segundo aspecto, a invenção proporciona um método para a formulação de um composto ácido borónico, de acordo com a reivindicação 14.

Em certas formas de realização preferidas, a mistura compreende um ou mais co-solventes, além da água. Preferencialmente, o co-solvente é miscivel com água. Mais preferencialmente, o co-solvente é um álcool, incluindo sem limitação, etanol e terc-butanol. A composição da mistura solvente pode estar compreendida entre cerca de 5% a cerca de 95% v/v em álcool. Nalgumas formas de realização, a mistura de solventes aquosos compreende desde cerca de 30% a cerca de 50% de álcool, preferencialmente desde cerca de 35% a cerca de 45% em álcool. Em certas formas de realização preferidas, a mistura de solventes aquosos compreende cerca de 40% de terc-butanol.

Noutras formas de realização, a mistura de solventes aquosos compreende desde cerca de 1% a cerca de 15% em álcool, preferencialmente desde cerca de 5% a cerca de 10% em álcool. Em certas formas de realização preferidas, a mistura de solventes aquosos compreende desde cerca de 5% a cerca de 10% em etanol.

Preferencialmente, o composto tendo pelo menos dois grupos hidroxilo e o composto ácido borónico estão presentes na mistura numa proporção p/p compreendida entre cerca de 1:1 a cerca de 100:1. Em várias formas de realização, a proporção p/p do composto di-hidroxi para o composto ácido borónico é cerca de 10:1, 20:1, 30:1, 40:1, 50:1, 60:1, 70:1, 80:1, 90:1 ou 100:1. Outras proporções também são possíveis. 19 A mistura aquosa pode ser preparada por qualquer ordem de adição. Por exemplo, em algumas formas de realização, o composto di-hidroxi é adicionado a uma mistura aquosa compreendendo um composto ácido borónico. Nalgumas outras formas de realização, o composto ácido borónico é adicionado a uma mistura aquosa compreendendo um composto di-hidroxi. Ainda noutras formas de realização, o composto ácido borónico e o composto di-hidroxi podem ser adicionados ao mesmo tempo, ou quase ao mesmo tempo. Nalgumas formas de realização, pode ser vantajoso adicionar inicialmente o composto ácido borónico e/ou o composto di-hidroxi a uma mistura solvente contendo uma percentagem superior de co-solvente do que a desejada para o passo de liofilização e depois diluir com água.

Nalgumas formas de realização preferidas, a mistura compreende adicionalmente um ou mais excipientes, veículos, diluentes de preenchimento, sais, tampões, estabilizantes, solubilizadores farmaceuticamente aceitáveis e outros materiais bem conhecidos na técnica. A preparação de formulações farmaceuticamente aceitáveis contendo estes materiais é descrita em, p.ex., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edição ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990.

Aquando da reconstituição em meio aquoso, é estabelecido um equilíbrio entre qualquer éster de boronato presente na composição e o correspondente ácido borónico. Tipicamente, o equilíbrio é alcançado rapidamente, p.ex., dentro de 10-15 minutos, após a adição de água. As concentrações relativas do éster de boronato e do ácido borónico presentes em equilíbrio é dependente do pH da solução, temperatura e da proporção do composto di-hidroxi para o composto ácido borónico. 20

Os exemplos seguintes pretendem ilustrar adicionalmente certas formas de realização preferidas da invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Preparação de uma formulação liofilizada do ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico com D-manitol.

Foram pesados aproximadamente 40 mg do ácido N-( 2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico num contentor e foram adicionados 16 mL de terc-butanol. O contentor foi fechado e a suspensão foi aquecida até aproximadamente 45 °C durante 5 minutos até à completa dissolução do composto. Foi adicionada água (24 mL) com agitação, seguida de 0,4 g de manitol, adicionado como um excipiente, 1% p/v. A mistura foi agitada até à completa dissolução e depois arrefecida até à temperatura ambiente. A solução foi filtrada através de uma membrana de nylon 0,45 μιη. Foram colocadas aliquotas de um mililitro em frascos com 5 mL de soro. Foram parcialmente inseridas rolhas de borracha nos frascos e os frascos foram colocados numa secadora a frio com uma temperatura ambiente de -45°C. Após aproximadamente 1 hora, foi aplicado o vácuo. Permitiu-se que a temperatura ambiente fosse aumentada gradualmente até -35°C e mantida a -35°C até o gelo ter desaparecido das amostras (aproximadamente 40 horas). O controlo da temperatura ambiente da secadora foi então desligado e permitiu-se que a temperatura ambiente aumentasse gradualmente até 0°C. Foi realizado um segundo ciclo de secagem através do aumento da temperatura ambiente da secadora em 3 incrementos a 25°C ao longo de um período de tempo de 1,5 horas. A temperatura ambiente foi mantida a 25°C durante 2 horas. As amostras foram seladas sob atmosfera de azoto e removidas da secadora a frio. 21 0 conteúdo em humidade residual das amostras foi determinado por análise de Karl Fischer, usando três produtos liofilizados. 0 conteúdo em água foi de 0,88% em peso. A análise de massa espectral por Bombardeamento Atómico Rápido (FAB) do produto liofilizado apresentou um sinal forte a m/z=531, indicativo de formação de um aduto éster de boronato covalente entre o ácido N-(2-piraino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico e D-manitol. Foi empregue glicerol na matriz e foi observado um sinal para o aduto de glicerol com o ácido N- (2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico a m/z=441. No entanto, a intensidade do sinal a m/z=441 foi muito baixa quando comparada com o sinal a m/z=531, possivelmente indicativo da estabilidade melhorada do aduto de D-manitol.

Exemplo 2: Preparação à escala da Produção de uma formulação liofilizada do ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico com D-manitol

Num recipiente limpo de composição, foi preparada uma solução de terc-butanol 97% /água 3% para injecção, por aquecimento da quantidade necessária de terc-butanol a 35 °C e adição de água para injecção. Foi reservada aproximadamente 5% da solução para uso na lavagem. A solução foi arrefecida a 15-30°C e foi adicionado ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico com agitação. O contentor foi lavado com a solução reservada de terc-butanol/água e os produtos da lavagem foram adicionados ao recipiente principal. A mistura foi agitada até o composto ácido borónico estar completamente dissolvido. Foi adicionado manitol, com manitol residual a ser lavado no recipiente de reacção com água fresca para injecção. Foi adicionada água suficiente para injecção de 22 modo a reduzir o conteúdo total em álcool para 40% v/v. A mistura foi agitada até o manitol estar completamente dissolvido. A mistura foi filtrada através de um filtro de 0,22 micron. Foram colocadas aliquotas da solução filtrada em frascos previamente esterilizados. Os frascos foram selados com rolhas de liofilização e foram colocados nas prateleiras da câmara de liofilização, mantidas a -45 °C. Após duas horas, a câmara de secagem a frio foi evacuada e a pressão da câmara foi ajustada para 100-200 microns com azoto estéril. As prateleiras da câmara de liofilização foram aquecidas até -30°C usando uma velocidade de rampa apropriada e mantida a essa temperatura durante 10-15 horas. Após a leitura de cada um dos termopares produto dar -33 °C ou mais quente, a temperatura da prateleira foi ajustada para -15 °C ao longo de 7 horas, usando uma velocidade de rampa apropriada e mantida a essa temperatura durante 5 horas. Após todos os termopares produto registarem a temperatura ambiente, a prateleira foi aquecida a 0°C ao longo do período de pelo menos 7 horas, usando uma velocidade de rampa apropriada. Quando todos os termopares registaram 0 °C, a prateleira foi aquecida a 27 °C e foi mantida a temperatura durante 4 horas. No final da fase de secagem terminal, a pressão da câmara foi restabelecida usando azoto estéril e os frascos foram selados e removidos.

Exemplo 3: Reconstituição do ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico A formulação liofilizada do ácido N- (2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico com D-manitol foi preparada tal como descrito no Exemplo 1. Uma amostra foi reconstituída com 2 mL de água. A dissolução ficou completa após 1-2 minutos de agitação. Toda a solução foi transferida para um frasco volumétrico, diluída e analisada 23 por HPLC relativamente ao seu conteúdo em ácido N-( 2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico. 0 conteúdo total em fármaco foi de 1,09 mg. Uma segunda amostra foi reconstituída com 1 mL de propilenoglicol:Et0H:H20, 40:10:50. A dissolução ficou completa após 1 minuto de agitação. O conteúdo total em fármaco foi de 1,11 mg. A formulação liofilizada também foi reconstituída com 0,9% de solução salina p/v. O material liofilizado dissolvido prontamente a concentrações até 6 mg/mL. AO contrário, o ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico sólido não foi solúvel em solução salina a 0,9% p/v a uma concentração de 1 mg/mL.

Para garantir que o ácido N- (2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico livre seja rapidamente libertado aquando da reconstituição da formulação liofilizada em solução aquosa, a formulação liofilizada foi dissolvida em DMSO puro e testada no que diz respeito a inibição da actividade semelhante à quimotripsina do proteassoma 20S, tal como descrito no documento U. S. Pat. N° 5,780,454. A inibição do proteassoma apenas pode ser observada se a hidrólise sob as condições de ensaio for rápida. O valor de Ki observado de 0,3 nM é equivalente ao observado para o ácido N- (2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico livre, indicando a hidrólise completa e rápida do aduto de D-manitol sob as condições do ensaio.

Exemplo 4: Análise HPLC do ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico

Parâmetros do Sistema 24

Coluna: Adsorbosphere-HS-Cl8, 5μ, 250 x 4,6 mm

Fase Móvel: 65/35: metanol/água contendo TFA 0,1%

Taxa de fluxo: 1,0 mL/min

Detecção/Sensibilidade: PDA e UV a 255 nm, 0,1 aufs

Volume de injecção: 25 μΙ*

Solução Padrão Interna: 0,18 mg/mL de difenilamina em metanol

Preparação da Amostra: Porções pesadas com precisão de 0,5-1,5 mg da amostra ou do padrão referência foram dissolvidas em 2,00 mL da solução padrão interna.

Parâmetros cromatogrâficos:

Amostra Padrão Interno Tempo de retenção 8,4 min 18,9 min Factor de capacidade, k' O cg 5, 8 Assimetria (10%) 1,7 1,3 Rei. Retenção, oí 0,34 Resolução, Rs=At/Ew1/2 15,1 Ο ΔΤ e o IWi/2 são, respectivamente, as diferenças nos tempos de retenção e a soma da meia largura da amostra e dos picos de padrão interno. A variação menor da fase móvel é permitida para conseguir resultados semelhantes aos dados acima.

Exemplo 5: Estabilidade das formulações 25 Ácido_N- (2-pirazino) carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico sólido 0 ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico foi preparado tal como descrito no documento U.S. Pat. N° 5, 780,454. O produto foi obtido como um pó amorfo branco. O produto ficou estável durante mais de 2 anos, quando armazenado a -20 °C, tal como determinado por análise HPLC (pureza>97%) . Quando armazenado a 2-8 °C, o produto não ficou estável durante mais de 3-6 meses. Ácido_N- (2-pirazino) carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico líquido

Foi preparada uma formulação líquida estéril (0,5 mg/mL) de ácido N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico em solução salina 0,9% p/v, etanol 2% v/v e ácido ascórbico 0,1% p/v. Quando armazenada a 2-8 °C, a formulação líquida não ficou estável durante mais de 6 meses, de acordo com o determinado por análise HPLC.

Boronato de N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina D-manitol liofilizado 0 produto liofilizado foi preparado de acordo com o Exemplo 1 e armazenado a 5 °C, temperatura ambiente, 37 °C e 50 °C. A estabilidade foi monitorizada durante aproximadamente 18 meses através da reconstituição periódica de uma amostra e da análise dos conteúdos totais do frasco, por HPLC. Ao longo deste período de tempo, não houve perda de fármaco no produto liofilizado armazenado a qualquer temperatura e não houve evidência de picos de degradação do produto nos cromatogramas HPLC.

Solução reconstituída de ácido N- (2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico 26 0 produto liofilizado foi preparado de acordo com o Exemplo 1 e as amostras (2,5 mg/frasco) foram reconstituídas com 2,5 mL de solução salina estéril 0,9% p/v. A dissolução ficou completa em 10 segundos e conseguiu-se uma solução límpida e incolor contendo 1 mg/mL de ácido N-( 2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico. A solução não apresentou sinais de degradação quando armazenada à temperatura ambiente (23 °C) durante 43 horas. Não foram tomados cuidados especiais para proteger a solução da luz. O uso dos termos "um" e "uma" e "o/a" e de referências semelhantes no contexto da descrição da invenção (especialmente no contexto das seguintes reivindicações) deve ser construído para cobrir ambos, singular e plural, a não ser quando aqui indicado em contrário ou claramente contradito no contexto. Os termos "compreendendo", "tendo", "incluindo" e "contendo" devem ser construídos como termos abertos (í.e., significando "incluindo, mas não se limitando a") a não ser quando referido de outra forma. A recitação de intervalos de valores aqui pretendem meramente servir como um método simples para referir individualmente cada valor separado a cair dentro de um dado intervalo, a não ser quando aqui indicado em contrário e cada valor separado é incorporado na descrição como se fosse aqui recitado individualmente. Todos os métodos aqui descritos podem ser realizados por qualquer ordem adequada, a não ser quando aqui indicado de outro modo ou contradito claramente no contexto. O uso de todos e quaisquer exemplos, em linguagem exemplar (p.ex., "tal como") aqui proporcionado, pretende meramente iluminar melhor a invenção e não constitui uma limitação ao âmbito da invenção a não ser quando reivindicado de outro modo. Não deve ser construída linguagem na descrição que seja indicativa de qualquer 27 elemento não reivindicado como essencial à prática da invenção.

Lisboa, 17 de Março de 2011.

Claims

1 REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (1):

em que P é hidrogénio ou uma porção protectora do grupo amina; R é hidrogénio ou alquilo Ci_i2; A é 0, 1 ou 2; R1, R1 e R3 são, cada um, de um modo independente, hidrogénio, alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo Ce-14 ou -CH2-R5; R5 é, em cada momento, arilo C6-14, (C6-i4) ar (Ci- 12) alquilo, (C1-12) alq (C6-14) arilo, C3-i2cicloalquilo, heterociclilo compreendendo 3 a 8 átomos, em que um ou mais átomos são seleccionados de N, O e S, heteroarilo compreendendo 5 a 14 átomos, em que 1-4 átomos são seleccionados de N, O e S ou -W-R6, onde W é um calcogénio e R6 é alquilo C1-12; em que a porção anel de qualquer um dos referidos arilo, aralquilo, alquilarilo, cicloalquilo, heterociclilo ou heteroarilo em R1, R1, R3 ou R5 podem ser opcionalmente substituídos; e Z1 e Z1 formam em conjunto uma porção derivada do manitol, em que o átomo ligado ao boro em cada caso é um átomo de oxigénio, e em que o composto de fórmula (1) opcionalmente é liofilizado. 1 Composto da reivindicação 1, em que A é 0. 2

3. Composto da reivindicação 1, em que: R1, R2 e R3 são, cada um de um modo independente, hidrogénio, alquilo Ci-C8, cicloalquilo C3-C10, arilo C6-Cio ou -CH2-R5; R5 em cada instante é arilo C6-Ci0, (C6-Ci0) ar (Ci- C6)alquilo, (Ci-Cô) alq (C6-C10) arilo, cicloalquilo C3-C10, alcoxilo Ci-Cs ou alquiltio Ci-C8; em que a porção anel de quaisquer grupos arilo, aralquilo, alcarilo, cicloalquilo, heterociclilo ou heteroarilo referidos de R1, R2, R3 ou R5 podem ser opcionalmente substituídos.

4. Composto da reivindicação 1, em que P é R1 2-C(0)-, R2-S (0)2-, R2-NH-C(0)-, ou R2-0-C(0)-; em que R2 é alquilo C1-12, arilo C6-i4, (Ci—12) alq (C6- 14) arilo ou (C6~14) ar (Ci—12) alquilo, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído ou quando P é R7_C (0) - ou R7-S (0) 2~r R2 pode também ser um heterociclo com 5 a 10 membros saturado, parcialmente saturado ou aromático, opcionalmente substituído, em que 1 a 4 átomos são seleccionados de N, 0 e S.

5. Composto da reivindicação 4, em que A é zero; R é hidrogénio ou alquilo Ci-C8; e R3 é alquilo C1-C6. 1 Composto da reivindicação 4, em que P é R2-C(0)- ou 2 R7-S (0)2- e R2 é um heterociclo aromático. 3

7. Composto da reivindicação 6, em que P é (2- pirazino)carbonilo. 8. Composto da reivindicação 6, em que P é (2- pirazino)sulfonilo. 9. Composto da reivindicação 1, em que o referido composto é um éster de manitol de: Ácido N- (2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico; Ácido N- (2-quinolino)sulfonil-L-homofenilalanina-L- leucina borónico; Ácido N-( 3-piridino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico; Ácido N- (4-morfolino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico; Ácido N- (4-morfolino)carbonil-β-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico; Ácido N- (8-quinolina)sulfonil-β-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico; Ácido N-(4-morfolino)carbonil-(O-benzil)-L-tirosino-L- leucina borónico; Ácido N-(4-morfolino)carbonil-L-tirosina-L-leucina borónico; ou Ácido N- (4-morfolino)carbonil-[0-(2-piridilmetil)]-L-tirosino-L-leucina borónico.

10. Composto da reivindicação 1, em que o referido composto é: N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(2-quinolino)sulfonil-L-homofenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; 4 Ν-(3-piridino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(4-morfolino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol; N- (4-morfolino)carbonil-β-(l-naftil)-L-alanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(8-quinolino)sulfonil-β-(1-naftil) -L-alanina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(4-morfolino)carbonil-(O-benzil)-L-tirosina-L-leucina boronato de D-manitol; N-(4-morfolino)carbonil-L-tirosina-L-leucina boronato de D-manitol; ou N-(4-morfolino)carbonil-(0-(2-piridilmetil)]-L-tirosina-L-leucina boronato de D-manitol;

11. Composto da reivindicação 1, em que o manitol é D-manitol.

12. Composto de acordo com a reivindicação 1, o qual é N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol.

13. Composto liofilizado de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, 10 e 12.

14. Método de preparação de um composto liofilizado de fórmula (1) :

A em que P é hidrogénio ou uma porção protectora do grupo amina; 5 R é hidrogénio ou alquilo C1-12; A é 0, 1 ou 2; R1, R2 e R3 são, cada um, de um modo independente, hidrogénio, alquilo C1-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-14 ou -CH2-R5; R5 é, em cada momento, arilo Ce-u, (C6-i4) ar (C1-12) alquilo, (C1-12) alq (C6-i4) arilo, cicloalquilo C3-12, heterociclilo compreendendo 3 a 8 átomos, em que um ou mais átomos são seleccionados de N, O e S, heteroarilo compreendendo 5 a 14 átomos, em que 1-4 átomos são seleccionados de N, O e S ou -W-R6, onde W é um calcogénio e R6 é alquilo; em que a porção anel de qualquer um dos referidos arilo, aralquilo, alquilarilo, cicloalquilo, heterociclilo ou heteroarilo em R1, R2, R3 ou R5 podem ser opcionalmente substituídos; e Z1 e Z2 são derivados de um açúcar, em que o açúcar é o manitol; O método compreendendo: (a) preparação de uma mistura compreendendo (i) água, (ii) um composto de fórmula (3)

R3 T

T em que P, R, A, R1, R2 e R3 são como descritos acima; e Z' e Z'' são OH; e (iii) manitol; e (b) liofilizando a mistura. 6

15. Método da reivindicação 14, em que A é zero; R é hidrogénio ou alquilo Ci-C8; e R3 é alquilo Ci-Cê.

16. Método da reivindicação 14, em que R1, R2 e R3 são cada um, de um modo independente, hidrogénio, alquilo Ci-C8, cicloalquilo C3-C10, arilo C6-Cio ou -CH2-R5; R5 é, em cada momento, arilo C6-Ci0, (C8-Ci0) ar (Ci- C6) alquilo, (Ci-C6) alq (C6-Ci0) arilo, cicloalquilo C3-C10, alcoxilo Ci-C8 ou alquiltio Ci-C8; em que a porção anel de qualquer um dos grupos arilo, aralquilo, alcarilo, cicloalquilo, heterociclilo ou heteroarilo referidos de R1, R2, R3 ou R5 podem ser opcionalmente substituídos.

17. Método de qualquer uma das reivindicações 14, em que P é R7-C(0)-, R7-S(0)2-, R7-NH-C(0)-, ou R7-0-C (O) - f em que R7 é alquilo Ci-i2, arilo C6-i4, (Ci~i2) alq (C6- 14) arilo ou (C6-14) ar (Ci—i2) alquilo, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído ou quando P é R7_C (0) - ou R7-S(0)2-, R7 pode também ser um heterociclo com 5 a 10 membros saturado, parcialmente saturado ou aromático, opcionalmente substituído, em que 1 a 4 átomos são seleccionados de N, 0 e S.

18. Método da reivindicação 17, em que P é R7-C(0)-ou R7_S (0)2- e R7 é um heterociclo aromático.

19. Método da reivindicação 18, em que Pé (2-pirazino)carbonilo. 7

20. Método da reivindicação 18, em que P é (2-pirazino)sulfonilo.

21. Método da reivindicação 14, em que o composto da fórmula (3) é: Ácido N-( 2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico; Ácido N- (2-quinolino)sulfonil-L-homofenilalanina-L-leucina borónico; Ácido N-(3-piridino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico; Ácido N- (4-morfolino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico; Ácido N- (4-morfolino)carbonil-β-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico; Ácido N- (8-quinolina)sulfonil-β-(1-naftil)-L-alanina-L-leucina borónico; Ácido N—(4-morfolino)carbonil-(O-benzil)-L-tirosino-L-leucina borónico; Ácido N-(4-morfolino)carbonil-L-tirosina-L-leucina borónico; ou Ácido N- (4-morfolino)carbonil-[O-(2-piridilmetil) ] -L-tirosino-L-leucina borónico.

22. Método da reivindicação 21, em que o composto de fórmula (3) é o ácido N- (2-pirazino)-carbonil-L-fenilalanina-L-leucina borónico.

23. Método da reivindicação 14, em que o composto da fórmula (1) é a N-(2-pirazino)carbonil-L-fenilalanina-L-leucina boronato de D-manitol. 8

24. Método da reivindicação 14, em que a porção derivada do manitol e o composto de fórmula (3) estão presentes numa proporção de, pelo menos, 1:1.

25. Método da reivindicação 14, em que a porção derivada do manitol e o composto de fórmula (3) estão presentes numa proporção de, pelo menos, 5:1.

26. Método de qualquer uma das reivindicações 14, em que a mistura compreende adicionalmente um solvente miscivel em água.

27. Método da reivindicação 26, em que o solvente miscivel em água é um álcool.

28. Método da reivindicação 27, em que o álcool é o terc-butanol.

29. Método da reivindicação 14, em que o manitol é o D-manitol.

30. Método da reivindicação 14 compreendendo adicionalmente (c) a reconstituição da mistura liofilizada com um veiculo farmaceuticamente aceitável.

31. Composição compreendendo (i) o composto da reivindicação 1 e (ii) um veiculo farmaceuticamente aceitável.

32. Composição compreendendo (i) o composto de fórmula (1) preparado de acordo com o método da reivindicação 14 e (ii) um veiculo farmaceuticamente aceitável. 9 33 Bolo liofilizado compreendendo o composto da reivindicação 1. 34 Bolo liofilizado compreendendo o composto de fórmula (1) preparado de acordo com o método da reivindicação 14. Lisboa, 17 de Março de 2011.