CN103113264B

CN103113264B - 厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物及其制备方法和应用

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Publication number: CN103113264B
Application number: CN201310024170.9A
Authority: CN
Inventors: 王银叶; 刘晔; 张平平; 童卫民; 蔡阳
Original assignee: Beijing Honghui Meditech Co Ltd
Current assignee: Beijing Honghui Meditech Co Ltd
Priority date: 2013-01-22
Filing date: 2013-01-22
Publication date: 2015-01-14
Anticipated expiration: 2033-01-22
Also published as: CN103113264A

Abstract

本发明公开了厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物及其制备方法和应用，属于厚朴酚或和厚朴酚衍生物领域。本发明针对厚朴酚以及和厚朴酚所存在的水溶解性较差的缺陷，对厚朴酚以及和厚朴酚进行了结构修饰或改造，引入了相应的功能分子，得到了式Ⅰ所示的厚朴酚或和厚朴酚衍生物。水溶解性实验表明，式Ⅰ所示的厚朴酚或和厚朴酚衍生物具有良好的水溶解性。药效学试验表明，式Ⅰ所示的厚朴酚或和厚朴酚衍生物具有优异的抗血栓活性并对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

Description

厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及酚类衍生物，尤其涉及厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物，本发明进一步涉及它们的制备方法及其在制备抗血栓、抗脑缺血或脑缺血再灌注损伤保护药物中的用途，属于厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物及其医药应用领域。

背景技术

厚朴酚以及和厚朴酚是中国传统中药厚朴的主要活性成分，厚朴酚以及和厚朴酚的化学结构式为图1所示。1930年日本杉井首先从中国厚朴树皮中分离得到了厚朴酚。1989年中国的孟丽珍等也从厚朴分离到和厚朴酚（中成药：1989,11（8）：223.）。

厚朴酚以及和厚朴酚具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、肌肉松弛、降胆固醇和抗衰老等广泛的药理作用（中草药；2005，36,10,1591-1594）。但是厚朴酚以及和厚朴酚水溶性很差、生物利用度低，严重限制了它们在医药上的广泛应用，有待改进。

发明内容

本发明的目的之一是提供一类水溶性良好的厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物；

本发明的目的之二是提供一种制备所述厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物的方法；

本发明的目的之三是将所述的厚朴酚衍生物以及和厚朴酚衍生物应用于血栓栓塞性疾病（包括：缺血性脑卒中、心肌梗死、静脉血栓栓塞等）的防治等。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

厚朴酚衍生物或和厚朴酚衍生物，其结构式为式Ⅰ所示：

R₁、R₂、R₃、R₄或R₅选自氢、羟基、修饰的羟基、氨基、修饰的氨基或氨基盐酸盐;其中，当R₁、R₄、R₅为氢时，R₂和R₃不同时为羟基；当R₁、R₃、R₄为氢时，R₂和R₅不同时为羟基。

优选的，当R₁、R₂、R₄、R₅为氢时，R₃为氢、修饰的羟基、氨基、修饰的氨基或氨基盐酸盐；当R₁、R₂、R₃、R₄为氢时，R₅为氢、修饰的羟基、氨基、修饰的氨基或氨基盐酸盐；当R₁、R₂、R₄、R₅为氢时，R₃为甘氨酸或甘氨酸修饰的羟基；所述修饰的羟基是用单一氨基酸、多肽或1-7个碳酰基修饰的羟基；所述的修饰的氨基是是用单一氨基酸、多肽或1-7个碳酰基修饰的氨基；

所述的修饰的羟基是用单一氨基酸、多肽或1-7个碳酰基修饰的羟基；所述的修饰的氨基是是用单一氨基酸、多肽或1-7个碳酰基修饰的氨基；

所述的氨基酸优选为赖氨酸或天冬氨酸。

进一步优选的，式Ⅰ所示的化合物选自以下化合物中的任意一种：

[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-2-联苯酚]酯；

[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-2-联苯酚]酯·盐酸盐；

2-N-Boc-氨基-4-（5,5’-二丙烯基-2，2’-二羟基-3-联苯胺）代-4-氧代-1-丁酸；

2-氨基-4-（5,5’-二丙烯基-2，2’-二羟基-3-联苯胺）代-4-氧代-1-丁酸盐酸盐；

[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3-联苯胺]酰胺；

[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3-联苯胺]酰胺；

二[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3，3’-联苯二胺]二酰胺；

二[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3，3’-联苯二胺]二酰胺盐酸盐；

[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-4-联苯酚]酯；

[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-4-联苯酚]酯·盐酸盐；

3'，5-二丙烯基-3-氨基-2，4'-二羟基-1，1'-二联苯；

[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,4’-二羟基-3-联苯胺]酰胺；

3'，5-二丙烯基-5'-氨基-2，4'-二羟基-1，1'-二联苯；

[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2'，4-二羟基-2-联苯胺]酰胺。

本发明的另外一个目的是提供一种合成所述式Ⅰ化合物的方法；

本发明的另外一个目的是通过以下技术方案来实现的：

一种合成式Ⅰ所述化合物的方法，包括：

氨基叔丁氧羰基保护的氨基酸与厚朴酚或和厚朴酚进行酯化反应，

得到酯化产物；将酯化产物在酸性条件下脱叔丁氧羰基保护，即得；

或者将厚朴酚或和厚朴酚经硝化-还原，得到氨基取代衍生物；氨基叔丁氧羰基保护的氨基酸与氨基取代衍生物的氨基进行缩合反应，得到氨基酰化产物；氨基酰化产物在酸性条件下脱叔丁氧羰基保护，即得。

所述的氨基酸优选为赖氨酸或天冬氨酸。

厚朴酚以及和厚朴酚在水中不溶，溶解度测定试验结果表明，本发明式Ⅰ化合物易溶解于水，部分化合物的水溶解度甚至达到40-50g/100g（易溶），具有良好的水溶解性。

药效学实验表明：本发明式Ⅰ化合物不仅具有良好的抗血栓作用，还可显著地减轻脑缺血或脑缺血再灌注损伤，可将本发明式Ⅰ化合物应用于制备抗血栓、治疗脑缺血或脑缺血再灌注损伤的药物，应用于血栓栓塞性疾病（包括：缺血性脑卒中、心肌梗死、静脉血栓栓塞等）的治疗。

由此，本发明还提供一种抗血栓、抗脑缺血或脑缺血再灌注损伤保护的药物组合物，该药物组合物由有效量的本发明式Ⅰ化合物与药学上可接受的载体或辅料组成；将有效量的本发明式Ⅰ化合物与药学上可接受的载体或辅料组合在一起后可得到所述的抗血栓、抗脑缺血或脑缺血再灌注损伤保护的药物组合物。

将本发明式Ⅰ化合物中加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接受的赋形剂或载体后，以常规的药物制剂方法将其制备成任何一种临床可接受的适宜制剂，例如，可以是注射制剂（粉针、冻干粉针、水针、输液等）、片剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊或滴丸等；其中，所述的辅料可以是抗氧络合剂、填充剂、骨架材料等；所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。

本发明中所涉及到的缩略术语：

DCC：1，3-二环己基碳二亚胺；

DMF：二甲基甲酰胺；

HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯；

DIEA：N,N-二异丙基乙胺。

附图说明

图1厚朴酚以及和厚朴酚的结构式。

图2本发明式Ⅰ化合物的结构式。

图3本发明式Ⅰ化合物对脑缺血再灌注大鼠脑梗塞体积的影响。

图4本发明式Ⅰ化合物的合成路线图。

图5本发明式Ⅰ化合物的另一种合成路线图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-2-联苯酚]酯（化合物1）的制备

将Boc-Lys(Boc)-OH（3.097g，8.9mmol）溶解在80ml二氯甲烷中，并加入DCC搅拌10min。向溶液中加入Magnolol（厚朴酚）（1.9737g，7.3mmol），室温下搅拌15小时。过滤沉淀，滤液浓缩，残留柱层析（PE:EA=10:1）得到2.3g化合物1。

化合物1：C₃₄H₄₆N₂O₇=594.33，MS：595.2[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，DMSO₃)δ7.21-7.16（2H,t），7.11（1H,s），6.99-6.91（2H,t），6.81-6.76（3H,t）,6.0-5.83（2H，m），5.09-4.98（4H，m），3.87-3.82（1H，t），3.39-3.23(4H,m),2.79(2H,1s),1.37(18H,s),1.28-1.04(8H,m).

实施例2[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-2-联苯酚]酯·盐酸盐（化合物2）的制备

于100ml单口瓶中加入化合物1（2.3g，3.9mmol），氯化氢的二氧六环饱和溶液（50ml），室温搅拌3小时，减压除去溶剂，粗品经柱层析（C₁₈，洗脱剂：水/甲醇=30%-50%）得到1.7g化合物2。

化合物2：C₂₄H₃₁Cl₂N₂O₂=449.18，MS：395.2[M+H-2HCl]⁺。¹H--NMR(300MHz，DMSO)δ9.44（1H，s），8.64（3H，s），8.00（3H，s），7.85-6.83（6H，m），6.08-5.86（2H，m），5.16-5.01（4H，m），4.01（1H，m），3.42-3.26（4H，m），2.62（2H，m），156-138（4H，m），117-099（4H，m）

实施例35,5’-二丙烯基-3-硝基-1,1’-联苯-2,2’-二酚和5,5’-二丙烯基-3，3’-二硝基-2,2’-联苯二酚（化合物3a和3b）的制备

于100ml单口瓶中加入厚朴酚（0.5g，1.88mmol）的醋酸酐（500ml）溶液，在0℃不断搅拌下缓慢滴加冷的发烟硝酸（5.9ml）和冰醋酸（6ml）的醋酸酐（5ml）溶液。滴加完毕，将反应液倒入冰水中，自然升至室温，用乙醚（500ml×3）萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到的粗品经柱层析分离（硅胶：200-300目，洗脱剂：石油醚-石油醚/乙酸乙酯100:1）得到150mg化合物3a以及250mg化合物3b。

化合物3a：C₁₈H₁₇NO₄=311.12，MS：329[M+NH₄]⁺,¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.01（1H,d），7.50（1H，d），7.18（1H，dd），7.01（1H，dd），6.91（1H，dd），6.04-5.88（2H，m），5.18-5.06（4H，m），3.42（4H，dd）.

化合物3b：C₁₈H₁₆N₂O₆=356.10，MS：374[M+NH₄]⁺。¹H-NMR(300MHz，CDCl₃)δ10.87（2H,dd），8.01（1H,d），7.45（1H，d），6.91（1H，dd），6.04-5.88（2H，m），5.18-5.06（4H，m），3.42（4H，dd）.

实施例45,5’-二丙烯基-3-氨基-2,2’-联苯二酚·盐酸盐（化合物4a）的制备

于250ml单口瓶中加入化合物3a(444mg1.35mmol)、二水合氯化亚锡(966mg，4.28mmol)、浓盐酸（0.5ml）和乙醇（130ml），氮气保护下于80℃回流反应8小时。将反应液冷至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液调pH值为7，减压除去溶剂，粗品经柱层析（C₁₈，洗脱剂：水/甲醇=30%-50%）得到300mg化合物4a。

化合物4a：C₁₈H₁₉NO₂=281.14，MS：282[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，MeOD)δ7.08（1H，s），7.02（1H，dd），6.84（1H，dd），6.40（1H，s），6.51（1H，s），603-591（2H，m），509-500（4H，m），335（4H，dd）.

实施例55,5’-二丙烯基-3，3’-二氨基-2,2’-联苯二酚·盐酸盐（化合物4b）的制备

于250ml单口瓶中加入化合物3b（400mg，1.12mmol）、二水合氯化亚锡(1.52g，6.74mmol)、浓盐酸（1ml）和乙醇（180ml），氮气保护下于80℃回流反应8小时，将反应液冷至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液调pH值为7，减压除去溶剂，粗品用C18柱层析（洗脱剂：水/甲醇=30%-50%）得到290mg化合物4b。

化合物4b：C₁₈H₂₀N₂O₂=296.15，MS：297[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ6.61（2H，s），6.52（2H，s），6.01-5.88（2H，m），5.11-5.03（4H，t），3.28（4H，dd）.

实施例62-N-Boc-氨基-4-（5,5’-二丙烯基-2，2’-二羟基-3-联苯胺）代-4-氧代-1-丁酸（化合物5）的制备

于250ml三口瓶中加入化合物4a(280mg,1mmol)、N-Boc-L-天冬氨酸(233mg,1mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(380mg,1mmo l)、干燥的DMF（20ml）和二异丙基乙胺(650mg,5mmol)，将反应液室温搅拌过夜，蒸干，加30ml二氯甲烷，用水（10ml×3）洗，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，粗品经柱层析（硅胶：200-300目，洗脱剂：二氯甲烷/甲醇=100:1-50:1），得100mg化合物5。

化合物5：C₂₇H₃₂N₂O₇=496.22，MS:495.0[M-H]^-。¹H-NMR(300MHz，MeOD)δ7.61(1H,s)，7.068（2H,d），6.88（2H,d），6.05（2H,m），5.16（4H,m），4.59（1H,m），3.35（4H,m），2.97（2H,m），1.44（9H,s）.

实施例72-氨基-4-（5,5’-二丙烯基-2，2’-二羟基-3-联苯胺）代-4-氧代-1-丁酸盐酸盐（化合物6）的制备

于100ml单口瓶中加入化合物5(100mg,0.13mmol)，氯化氢的二氧六环饱和溶液（10ml），室温搅拌6小时，减压除去溶剂，粗品经乙醚重结晶得到30mg化合物6。

化合物6：C₂₂H₂₄N₂O₅=396.17，MS:397.0[M-H]^-。¹H-NMR(300MHz，MeOD)δ7.73（1H,s），7.08（2H,d），6.89（2H,d），6.01（2H,m），5.11（4H,m），4.36（1H,t），3.50（4H,m），3.20（2H,m）.

实施例8[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3-联苯胺]酰胺（化合物7）的制备

于250ml三口瓶中加入化合物4a（2.37g，8.45mmol）、Boc-Lys(Boc)-OH(3.7g，10.69mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（3.38g，8.89mmol）和干燥的二氯甲烷（200ml），氮气保护下滴加二异丙基乙胺（3.44g，26.7mmol），将反应液室温搅拌过夜，用水（100ml×3）洗，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，粗品经柱层分离（硅胶：200-300目，洗脱剂：二氯甲烷/甲醇=100:1-50:1），得2.0g化合物7。

化合物7：C₃₄H₄₇N₃O₇=609.34，MS：610[M+H]⁺。¹H-NMR(300MHz，MeOD)δ7.84（1H，s），7.06（2H，d），6.88（2H，d），6.06-5.91（2H，m），5.12-5.01（4H，m），4.16-4.15（1H，m），3.36-3.31（4H，m），3.07-3.05（2H，m），1.89（2H，m），1.71（2H，m），1.47（2H，m），1.42（2H，m）.

实施例9[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3-联苯胺]酰胺（化合物8）的制备

于100ml单口瓶中加入化合物7（1g，1.64mmol），氯化氢的二氧六环饱和溶液（50ml），室温搅拌6小时，减压除去溶剂，粗品用C₁₈柱层分离（洗脱剂：水/甲醇=30%-50%）得到680mg化合物8。

化合物8：C₂₄H₃₁N₃O₃=409.24，MS：410[M+H]⁺，¹H-NMR(300MHz，MeOD)δ7.80（1H，s），711-707（2H，d），693-689（2H，d），602-593（2H，m），512-505（4H，m），4.26-4.22（1H，m），3.31（4H，d），2.98-2.93（2H，m），2.06-2.00（2H，m），1.75-1.73（2H，m），1.63-1.61（2H，m）.

实施例10二[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3，3’-联苯二胺]二酰胺（化合物9）的制备

于250ml三口瓶中加入化合物4b(150mg,0.41mmol)、(S)-2,6-二BOC氨基己酸(400mg,1.16mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(527mg,1.39mmol)和干燥的DMF（10ml），氮气保护下滴加二异丙基乙胺(846mg,6.56mmol)，将反应液室温搅拌过夜。旋蒸，残留加入30ml二氯甲烷，用1N盐酸（5ml×3）洗，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，粗品经柱层分离（硅胶：200-300目，洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯=2.5:1），得90mg化合物9。

化合物9：C₅₀H₇₆N₆O₁₂=952.55，MS：970[M+NH₄]⁺.

实施例11二[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,2’-二羟基-3，3’-联苯二胺]二酰胺盐酸盐（化合物10）的制备

于100ml单口瓶中加入化合物9(90mg,0.09mmol),氯化氢的二氧六环饱和溶液（10ml），室温搅拌6小时，减压除去溶剂，粗品经重结晶得到26mg化合物10。

化合物10：¹H-NMR(300MHz，MeOD)δ7.80（1H，s），7.11-7.07（2H，d），6.93-6.89（2H，d），6.02-5.93（2H，m），5.12-5.05（4H，m），4.26-4.22（1H，m），3.31（4H，d），2.98-2.93（2H，m），2.06-2.00（2H，m），1.75-1.73（2H，m），1.63-1.61（2H，m）.

实施例12[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-4-联苯酚]酯（化合物11）的制备

将(S)-2,6-二BOC氨基己酸（1g，3.8mmol）溶解在30ml二氯甲烷中，并加入DCC（824m，3.82mmol）搅拌10min。向反应液中加入Honokiol（和厚朴酚）（1.5g，4.2mmol），室温下搅拌36小时。过滤沉淀，滤液浓缩，残留柱层析（石油醚:乙酸乙酯=8:1）纯化得产物1.2g，产率55%。

化合物11：C₃₄H₄₆N₂O₇=594.74,MS：595[M+H]⁺。1H-NMR(300MHz，DMSO)δ9.379（1H，s），7.48（1H，d），7.36（1H，s），7.38（1H，s），7.007-6.931（2H，m），6.845-6.800(2H，m），5.987-5.733（2H，m），5.097-4.972（4H，m），4.134-4.120（1H，m），3.277-3.257(4H,m),2.905（2H，m），1.78（2H,m）,1.3386-1.124(22H,m).

实施例13[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2’-羟基-4-联苯酚]酯·盐酸盐（化合物12）的制备

将化合物12（1.2g，2mmol）溶解在(20ml)4N HCl/二氧六环中，搅拌过夜。溶液旋干,得940mg化合物12，产率100%。

化合物12：C24H32Cl2N2O3=467.43，MS：395[M+H]⁺（游离态）1H-NMR(300MHz，DMSO)δ9.502（1H，s），8.85（3H，s），8.038（3H，s），7.44-7.335（2H，m），7.195-7.166（2H，m），7.017（1H，s），6.965-6.804（2H，m），5.988（2H，m），5.105-4.973（4H，m），4.320（1H，t），2.789（2H，t）,2.013(2H,m),1.628(4H,m).

实施例143',5-二丙烯基-3-硝基-2,4'-二羟基-1',1-联苯（化合物

13a）和（化合物13b）的制备

将和厚朴酚(17g,63.88mmol)溶于26ml醋酐中，放入冰盐浴下搅拌，向其中缓慢滴加2.5ml发烟硝酸，滴完后再搅拌15分钟。反应混合物倒入冰水混合物，等碎冰融化至室温后加入少量氯化钠，加入200ml乙酸乙酯，分液，有机相蒸干，粗品经柱层析（乙酸乙酯：石油醚=1:50）得到1.0g化合物13a和924mg化合物13b。

化合物13a：C₁₈H₁₇NO₄=311.33,MS：312[M+H]⁺。¹H NMR(300MHz，DMSO)δ10.513（1H，s），9.564（1H，s），8.048（1H，s），7.705（1H，s），7.094（1H，d），7.6.873（1H，d），6.035（2H，m），5.133（4H，m），3.469（4H，m）.

化合物13b：C₁₈H₁₇NO₄=311.33,MS：312[M+H]⁺。1H NMR(300MHz，DMSO)δ10.385（1H，s），9.579（3H，s），7.707（1H，s），7.422（1H，s），7.200（2H，m），6.869（1H，s），5.974（2H，m），5.062（4H，m），3.398（4H，m）.

实施例153'，5-二丙烯基-3-氨基-2，4'-二羟基-1，1'-二联苯(化合物14a)的制备

将化合物13a（1g,3.2mmol）和二水合氯化亚锡(6.53g,28.9mmol)加入170ml乙醇中，再向其中滴入2ml浓盐酸，在氮气保护下加热至80℃，搅拌三个小时。将混合物冷却至室温后倒入冰水中，加入氢氧化钠调pH至中性，加入乙酸乙酯，铺硅藻土减压抽滤，滤液用分液漏斗分层，有机相蒸干，粗品经柱层析（乙酸乙酯：石油醚=1:15-1:6）得到511mg化合物14a。

化合物14a：C₁₈H₁₉NO₂=281.35,MS282[M+H]⁺.

实施例16[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,4’-二羟基-3-联苯胺]酰胺(化合物15a)的制备

将Boc-Lys(Boc)-OH(677mg,1.96mmol)溶于20ml DMF中，然后加入化合物14a（500mg,1.75mmol）,HATU(676mg)和DIEA（700mg，5.34mmol）。室温反应过夜。减压蒸馏出DMF，加入乙酸乙酯和稀盐酸（pH=4-5），分液，有机相蒸干，粗品经柱层析(乙酸乙酯：石油醚=1:10)得到273mg化合物15a,产率25%。

化合物15a：C₃₄H₄₇N₃O₇=609.75，MS：610[M+H]⁺。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.637（1H，s），7.316（5H，s），6.892（2H，s），6.099（3H，m），5.357（1H，s），5.206（4H，m），4.670（1H，s），4.288（1H，m），3.445（2H，d），3.314（2H，d），3.133（2H，t）,2.056(2H,m),1.460(22H,m).

实施例17[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2,4’-二羟基-3-联苯胺]酰胺(化合物16a)的制备

将化合物15a（273mgg，0.448mmol）溶解在(20ml)4N HCl/二氧六环中，搅拌过夜，溶液旋干，得215mg化合物16a，产率100%。

化合物16a：C24H33Cl2N3O3=482.44，MS：410[M+H]⁺(游离态)。¹HNMR(300MHz，MeOH)δ7.480（1H，s），8.85（1H，s），7.199（2H，s），6.902（2H，m），6.082（2H，m），5.116（4H，s），4.263（1H，m），3.49（2H，m），2.981（2H，t），2。063（2H，m），1.409（2H，m）,2.34(2H,m).

实施例183'，5-二丙烯基-5'-氨基-2，4'-二羟基-1，1'-二联苯(化合物14b)的制备

将化合物13b（900mg,2.89mmol）和二水合氯化亚锡(6.53g,29.02mmol)加入170ml乙醇中，再向其中滴入1.8ml浓盐酸，在氮气保护下加热至80℃，搅拌三个小时。将混合物冷却至室温后倒入冰水中，加入氢氧化钠调pH至中性，加入乙酸乙酯，铺硅藻土减压抽滤，滤液用分液漏斗分层，有机相蒸干，粗品经柱层析（乙酸乙酯：石油醚=1:15-1:6）得到522mg化合物14b，产率58%。

化合物14b：C₁₈H₁₉NO₂=281.35,MS282[M+H]⁺.

实施例19[(S)-2,6-N-Boc-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2'，4-二羟基-2-联苯胺]酰胺(化合物15b)

将Boc-Lys(Boc)-OH(677mg,1.96mmol)溶于20ml DMF中，然后加入化合物145（500mg,1.75mmol）,HATU(676mg)和DIEA（700mg，5.34mmol）。室温反应过夜。减压蒸馏出DMF，加入乙酸乙酯和稀盐酸（pH=4-5），分液，有机相蒸干，粗品经柱层析(乙酸乙酯：石油醚=1:10)得到350mg化合物15b,产率32%。

化合物15b：C₃₄H₄₇N₃O₇=609.75，MS：610[M+H]⁺。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.956（1H，s），8.832（1H，s），7.026（5H，m），6.066（2H，m），5.149（4H，m），4.313（1H，t），3.47-3.25（4H，m），3.133（2H，m），1.938（1H，m），1.752（1H，m），1.461（22H，m）.

实施例20[(S)-2,6-二氨基-1-己酸]-[5,5’-二丙烯基-2'，4-二羟基-2-联苯胺]酰胺(化合物16b)

将化合物15b（350mg，0.575mmol）溶解在(30ml)4N HCl/二氧六环中，搅拌过夜，溶液旋干，得333mg化合物16b，产率100%。

化合物16b：C₂₄H₃₃C_l2N₃O₃=482.44，MS：410[M+H]⁺(游离态)¹H NMR(300MHz，DMSO)δ7.568（1H，d），7.225（1H，d），7.027（1H，s），6.978（1H，d），6.825（1H，m），6.083（1H，m），5.122（1H，m），4.292（1H，m），3.488（2H，d），3.364（2H，d），3.009（2H，t）,2.106(2H,m),1.782(2H,m),1.669.(2H,m).

实验例1本发明式Ⅰ化合物的水溶解度测定实验

一、供试化合物：分别为实施例2、实施例5、实施例7、实施例9、实施例11、实施例13、实施例17和实施例20所制备的化合物2、化合物4b、化合物6、化合物8、化合物10、化合物12、化合物16a和化合物16b。

二、实验方法

称取研成细粉的供试化合物，置于25±2℃一定容量的蒸馏水中，每隔5分钟强力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴，即视为完全溶解。

三、实验结果

实验结果见表1。

表1本发明式Ⅰ化合物的水溶解度实验结果

化合物	水溶解度（g/100g）
		化合物2	50.0
化合物4b	20.0
		化合物6	微溶
化合物8	40.0
		化合物10	20.0
厚朴酚（母核1）	不溶
		化合物12	29.0
化合物16a	32.0
		化合物16b	38.0
和厚朴酚（母核2）	不溶

从试验结果可见，本发明式Ⅰ化合物在水中易溶，相比于母核厚朴酚或和厚朴酚，式Ⅰ化合物的水溶性有显著改善。

实验例2本发明式Ⅰ化合物对大鼠动静脉旁路血栓形成的作用实验

一、供试化合物:分别为实施例2、实施例5、实施例7、实施例9以及实施例11所制备的化合物2、化合物4b、化合物6、化合物8和化合物10。

二、实验方法

雄性SD大鼠，用水合氯醛（350mg/kg）麻醉，仰卧位固定，分离右颈总动脉及左颈外静脉，并结扎左颈外静脉分支，颈总动脉用动脉夹夹闭。舌下静脉给药或溶媒（生理盐水）一次。在聚乙烯管的中段放入一根长6cm已称重的丝线，两侧接口处用封口膜缠紧，以肝素(50μ/ml)充满聚乙烯管。当聚乙烯管的一端插入左颈外静脉，经管准确注入肝素(50μ/kg)抗凝，然后再将管的另一端插入右颈总动脉。打开动脉夹，形成循环血流。15分钟后中断血流，迅速取出丝线称重，总重减去丝线重可得血栓湿重。

三、实验结果

实验结果如表2所示。根据实验结果可见，化合物2和化合物8的三个剂量均可显著减轻血栓重量，并呈一定量效关系，而厚朴酚只有在高剂量时才可减轻血栓重量。化合物2和8的作用均明显强于同剂量的母核厚朴酚,结果提示厚朴酚经结构改造后所得到的供试化合物具有更强的抗血栓作用。

表2本发明式Ⅰ化合物（i.v.）对颈动脉旁路血栓形成的影响（n=10）

与溶媒（生理盐水）组比较：^*P＜0.05,^**P＜0.05,与同剂量的厚朴酚比较：^#P＜0.05，^##P＜0.01.

实验例3本发明厚朴酚衍生物对电刺激大鼠颈动脉内皮损伤血栓形成的影响

一、供试化合物：本发明实施例所制备的化合物2、化合物8、化合物12、化合物16a和化合物16b。

二、实验方法

雄性SD大鼠静注给药后15min或灌胃给药后1h用水合氯醛（350mg/kg）麻醉，固定。手术暴露左侧颈总动脉，在动脉下面衬一小块保鲜膜，以保护周围组织，将BT87-4型实验性体内血栓形成测定仪的刺激电极置于血管的近心端，用2mA电流，刺激2分钟，刺激开始时仪器自动开始计时。刺激结束关闭刺激开关，取下刺激电极，将温控探头置于刺激部位动脉血管远心端。在计时600秒时将温控表指针缓慢移到示数为0的位置，记录由刺激开始至仪器报警所用的时间为血管堵塞时间（OT），药物如有抗血栓作用，血管堵塞时间延长。实验数据用SPSS软件进行t检验。

三、实验结果

实验结果见表3。

表3本发明式Ⅰ化合物静注（i.v.）对电刺激颈动脉内皮损伤血栓形成的影响（n=10）

与溶媒（生理盐水）组比较：^*P＜0.05,^**P＜0.05,与同剂量的厚朴酚比较：^#P＜0.05

由表3的实验结果可见，本发明化合物静脉单次给药均具有延长血管堵塞时间的作用，其中化合物2和化合物8的延长血管堵塞时间的作用强于母核厚朴酚。

表4.本发明式Ⅰ化合物灌胃（i.g.）对电刺激颈动脉内皮损伤血栓形成的影响（n=10）

与溶媒（生理盐水）组比较：^**P＜0.05

由表4的实验结果可见，本发明化合物12,16a和16b单次灌胃给药均具有延长血管堵塞时间的作用，这些化合物的摩尔剂量仅为母核和厚朴酚摩尔剂量的55%或57%,其作用效果就与母核和厚朴酚的作用相当。实验结果提示：通过结构改造获得的厚朴酚衍生物口服活性强于母核和厚朴酚。

实验例4本发明厚朴酚衍生物对脑缺血再灌注损伤保护作用实验

一、供试化合物：本发明实施例所制备的化合物2和化合物8。

二、实验方法:雄性SD大鼠，大鼠用10％水合氯醛（350mg·kg^-1，ip）麻醉后，仰卧位固定。暴露颈总动脉（CCA）和迷走神经、颈内动脉（ICA）和颈外动脉（ECA）。分别夹闭颈内动脉和颈总动脉。于颈外动脉剪一小口，将栓线经切口处缓慢插向颈外动脉近心端，松开颈内动脉的动脉夹，将颈外动脉拉向与颈内动脉呈直线，将栓线经颈总动脉分叉处插入颈内动脉，平均进线20±2mm，感到轻微阻力时，即达到大脑前动脉，阻断大脑中动脉（MCA）血流，固定栓线。2h后，先静注给药，即刻取出栓线，完成缺血再灌注损伤手术。术中动物体温用恒温鼠板维持在37℃。假手术组只分离血管，不插入栓线。

大鼠缺血再灌注24h后，按照Bederson评分标准，对大鼠的神经功能行为进行评分。继而用10%水合氯醛麻醉，冰冷生理盐水从心脏灌注，以冲洗干净脑组织血液，快速开颅取出全脑，-20℃冷冻15-20min，置于冰盒上沿冠状面切片，每片厚度2mm，置于2％TTC溶液中37℃避光孵育20mi n（10mi n翻面一次使染色均匀），将脑片置10％福尔马林中固定24h。正常脑组织呈鲜红色，梗死脑组织呈白色。用数码相机照相，利用Project1.2软件测量各脑片梗死面积，再乘以厚度得出梗塞体积。

在染色的脑片被用相机拍照后，置110℃烘箱中烘干16h，然后称出湿重W2。按如下公式计算脑水含量：脑水含量（%）=（W2－W1）/W2×100%；

三、实验结果

实验结果见图3、表5-表7。

表5.本发明式Ⅰ化合物（i.v.）对脑缺血再灌注大鼠神经功能评分的影响（n=10）

与伪模型组比较：^&&P＜0.01；与模型组比较：^**P＜0.01;与同摩尔母核比较：^##P＜0.01。

从表5数据可见：10,50μg/kg的化合物2可明显降低脑缺血再灌注大鼠的神经行为学评分，其药效明显强于同摩尔剂量的母核。化合物8未明显改善神经行为学评分。

表6.本发明式Ⅰ化合物（i.v.）对脑缺血再灌注大鼠脑梗塞体积的影响（n=10）

表7.本发明式Ⅰ化合物（i.v.）对脑缺血再灌注大鼠脑含水量的影响（n=10）

与伪模型组比较：^##P＜0.01；与模型组比较：^*P＜0.05,^**P＜0.01

从表6结果可见，化合物2可明显降低脑缺血再灌注大鼠的脑梗塞体积，其作用明显强于同摩尔剂量的母核。

从表7结果可见，化合物2可明显降低脑缺血再灌注大鼠的脑含水量，而同摩尔剂量的母核厚朴酚未明显影响脑含水量；化合物8也可降低脑含水量。这些结果提示：经结构改造得到的化合物2获得了比母核厚朴酚更优良的脑保护作用。

Claims

1.厚朴酚衍生物或和厚朴酚衍生物及其盐酸盐，其特征在于，选自以下化合物：

2.权利要求1所述厚朴酚衍生物或和厚朴酚衍生物及其盐酸盐在制备抗血栓药物中的用途。

3.权利要求1所述厚朴酚衍生物或和厚朴酚衍生物及其盐酸盐在制备抗脑缺血或脑缺血再灌注损伤保护药物中的用途。

4.一种抗血栓药物组合物，其特征在于：由有效量的权利要求1所述厚朴酚衍生物或和厚朴酚衍生物及其盐酸盐和药学上可接受的载体组成。

5.一种抗脑缺血或脑缺血再灌注损伤保护的药物组合物，其特征在于：由有效量的权利要求1所述厚朴酚衍生物或和厚朴酚衍生物及其盐酸盐和药学上可接受的载体组成。