SU638243A3 - Способ очистки гамма- -глутамилтаурина - Google Patents

Description

железе. Любые фракции, получающиес  в Р ду оиераций очистки, также могут быть 1 спользовань дл  терапевтических целей.

Результаты элементарного анализа и определени  молекзл рного веса хорошо согласуютс  с рассчитанными значени ми дл  формулы C7H 4N2O6S и следующего состава, %:

С 33,07; Н 5,55; N 11,02; О 37,75; S 12,61; М 254,27.

Из ИК-спектра (КВг) следует, что 1 NH имеют цвиттерионную структуру; свободна  карбоксильна  группа недиссоциирована .

Характеристические полосы поглощени : и (ОН), (ЫНз)около 3600--2400 cмU (NH)около 3315 с.

и (СО) валентные колебани  карбоксильной группы около 1758 и (СО) амидный карбонил 1

около 1662 с.

S(NH3)+около 1576 с.ки (5Оз)-около 1296-1031

Данные спектра ЯМР гамма-Ь-глутамилтаурина:

химическое смещение (5) : 4,15 (tJ, СН); 3.65 (от, 2, 2СН); 3,12 (т 2, СН); 2,7-2, (т 4, ,).

ПротоныХимическое Относисмеи-1 ,ение тельна  интенсивность

СН-NHa4,15 (() 1

СНг-SOsH3,65 (т) 2

СН-NH3,12 (т) 2

0 С-СНг-СН2-ОН 2,7-2.1 (т) 4

Соединение, нерекристаллизованное из содержащей 80 об. % этанола смеси этанола и воды, имеет следующие кристаллографические данные: размер элементарной  чейки (определен фотографическим методом Вайссенберга): а 6,69 А, Ь 7,87 А,

с 11,38 А, р 101°. Кристаллы прина.з:лежат к моноклинной кристаллической системе и к классу P2i. Плотность измеренна  1,55 г1см, плотность рассчнтанна  1,552г/ /см.

Скорость электрофоретической миграции хорощо согласуетс  с рассчитанным значением. В случае применени  цистеиновой кислоты в качестве стандартного вещества она составл ет в рассчете на это вещество 0,74 (рН 6,5, напр жение 1500 V врем  90 мин, нагрузка 0,03 ,iM/cM, бумага: ватман 3 мм).

Оптическое вращение + 14° (вода , с 1,021 %).

Т. разл. 223-226° С.

После гидролиза в гидролизате с помощью аминокислотного анализа тора можно обнаружить глутаминовую кислоту, а посредством хроматографического определени  в тонком слое можно обнаружить та урин.

Стабильность чистого, выделенного из околощитовидной железы продукта удовлетвор ет требовани м, пред-ь вл емым при применении продукта фармацевтических целей. У пробы, оставленной на 8 дней в термоетате при 70° С, после определени  температуры плавлени , измерени  оптического вращени , а также исследовани  с помощью хроматографии в тонком слое и проведенного на бумаге электрофореза, не удалось обнаружить разложени .

Выделенное биологически активное вещество обладает щироким спектром терапевтического и профилактического действи  на пр мые или косвенные патологические изменени , св занные с повреждением «АГАС (аэробиосферически-генетическа 

система адаптации).

Соединение оказывает на органы и ткани указанной системы благопри тное биологическое или терапевтическое действие.

Соединение оказывает защитное дсйствие от излучений от посто нно возрастающей опасности заражени  и загр зиевн.  кожи и слизистых оболочек, действие, способствующее заживлению ран, активирующее зародышевую соединительную ткань,

активирование мерцательного эпители  а дыхательных пут х и так далее, а также обладает повышенной защитой от инфекций , вызываемой грибками.

Соединение активно против посто нно

существующих и возрастающих в большой степени етрессовых воздействий (например , метеорологические воздействи , большие различи  между дневной и ночной температурой , больша  опасность повреждени ) на

материке.

Соединение частично про вл ет свое действие непосредственно, частично через регулирование, витамина А в обмене веществ .

Врем  лечени  полученным препаратом может быть самым различным.

Симптомы некоторых заболеваний (например , Rhino-Iaryngopharyngitis Sicca) исчезают при оральном введении ежесуточно 3x5 мкг уже через две недели; дл  си.мптоматического улучщени  других болезней (например, парадентозе, Sjogren-Syndrom ) необходимо до двух мес цев; прч других болезн х (например, Spondylosis

Ankylopoltica) лечение необходимо проводить от трех мес цев до полугода.

Препарат может содержать одно биологически активное вещество или же комбинацию биологически активных веществ. Дозы чистого биологически активного вещества составл ют 50-500 нг на день на килограмм веса тела и примен ютс  разделенными на три разовые дозы.

Таблетки содержат 2-20 мкг, 10 мкг

биологичееки активного вещества и, кроме

того, инертный в биологическом отношении носитель (наиример, молочный сахар, крахмал), а также обычные при приготовлении таблеток вспомогательные вещества (гранулирующие вещества и вещества, придающие скользкость, например, поливинилпирролидон , желатина, тальк, стеарат магни , аэросил и так далее). При очень малых дозах целесообразно перед гранулированием прибавл ть биологически ак ивное веп ество в форме раствора к массе дл  таблетировани  и производить гомогенизацию в смесителе. Малое содержание биологически активного вещества дает возможность производить приготовление препарата в больщой лаборатории. Биологически активное вещество стабильно, поэтому таблетки могут быть выпущены в продажу без указани  срока применени . Содержание биологически активного вещества таблеток замедленного действи , или спансул рных капсул может составл ть 10-20 мкг. В случае препаратов дл  инъекций наиболее целесообразна  доза на ампулу составл ет 5-10 мкг. Парентеральное применение может быть произведено впутримыщечно, подкожно или внутривенно . В указанных концентраци х биологически активное вещество не повреледает ткани и стенки сосудов, в св зи с чём оно может быть применено в виде препарата дл  вливанп .

Пример 1. Получение гамма-Ь-глутамплтаурина из природных веществ.

10 г лиофилизованного и перемолотого порошка, полученного из околощитовидной железы, обезжиривают известным способом Ауербаха следующим образом: полученный из желез порощок при комнатной температуре осповательно перемешивают г 25 мл ацетона и затем суспензию фильтруют через стекл нный фильтр. Хорошо отжатый порошок желез тщательно растирают с хлороформом и полученную суспензию вновь фильтруют через стекл нны; фильтр. Эту стадию повтор ют еще раз. Непосредственно после этого отфильтрованное вещество еще раз суспендируют в 25 мл ацетона и основательно отсасываю с помощью стекл нного фильтра. Очищенный порошок суп1Ут в вакууме при комнатной температуре. Получают примерно 7-9 г сухого обезжиренного порощка желез . Вес продукта зависит от содержании в исходном материале.

10 г сухого обезжиренного порощка желез эстрагируют три раза при 30° С по 300.1гл дистиллированной воды. Кажда  операци  экстрагировани  длитс  1 ч. После каждой экстракции водный раствор отдел ют от порощка желез с помощью цечтрифуги с большим числом оборотов. До последующего применени  водный экстракт хран т в атмосфере азота в холодильнике при (-3) - (-5)° С. Водный экстракт

дает положительные реакции с нингидрином , бпуретом и трихлоруксусной кислотой .

Незадолго до операции водные экстракты объедин ют. К объединенному экстракту при посто нном встр хивании прибавл ЮТ ио капл м столько 50%-ного по объему раствора трихлоруксусной кнслоты. чтобы конечна  концентраци 

трихлоруксусной кислоты составл ла 15%. Содержащий осадок водный раствор выдерживают в течение 2 ( в холодильнике при 3-5° С и затем посредством центрифугировани  отдел ют осадок, образовавшпйс  в результате воздействи  трпхлоруксусной кислоты. Прозрачный раствор при добавлении трихлоруксусной кислоты не дает осадка.

Нзбыточное количество трихлоруксусной кислоты удал ют многократной экстракцией при комнатной температуре. Дл  экстракции примен ют диэтиловый эфир. Дл  того, чтобы удалить весь избыток трихлоруксусной кислоты, необходимо провести 17-18-кратное, в некоторых случа х, даже 20-25-кратное экстрагирование. После последней экстракции водна  фаза имеет рН -К5-5.

Дл  удалещт  эфира через водную фазу пропускают при С с помощью водоструйного пасоса ток азота. Примерно через 6 ч удал ют весь эфир, полноту удалени  провер ют по запаху.

После этого водный раствор подвергают

ЛИОф ЛЬНОГ| сушке П ВеП1,есТБО, ПОС ОЛЬКУ

оно гигроскопично, хран т в хорошо закрытом сосуде. Выход вещества в расчете на еще необезжиренный порощок составл е 10-15%, что завнспт от содержани  жиров в исходном, полученном из жиров порошке. Полученное лиофилизованное вещество подвергают гель-фильтрации на сефадексе G-15 нисход щим методом.

Диаграмму элюпровани  определ ют измерением экстинкции при 280 нм. При этом суммарно получают 7 максимумов (ппков) (А-G).

Характеристические параметры фильтрации приведены ниже. Исходна  смесь лпофилизованиого вещества, растворенного в 10 .. дистиллирован5 ,1 ной воды, г

4,85 Диаметр колонки, см Высота колонки, см 149

0.78 10

Скорость истечени , мл1мин Врем , мин

Величина фракций, ,1/./пробирку 7.8 Л1;1кспм м (пик), число

пробирок77-103

А77-103

В104-128

С129-134

D135-162

Е163-189