MX2007014970A - Evento mon89788 de soya y metodos para la deteccion del mismo. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a plantas de soya y semillas que comprenden el evento de transformacion MON89788 y moleculas de ADN unicas para estos eventos; la invencion tambien se refiere a metodos para detectar la presencia de estas moleculas de ADN en una muestra.

Description

EVENTO MON89788 DE SOYA Y MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DEL MISMO REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama prioridad de la Solicitud Provisional U.S. No. 60/685,584, presentada el 27 de mayo de 2005, cuya descripción total es incorporada por tanto para referencia.

CAMPO DE LA CNVENCION La presente invención se refiere a un evento de transformación de soya transgénica novedoso y distintivo, designado como MON89788, un cultivo de soya derivado de éste, y partes vegetales, semillas y productos del mismo. La invención también se refiere a ensayos para detectar la presencia de una molécula de ADN específica para MON89788 en un extracto de parte de la planta o extracto de la semilla.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La soya (Glycine max) es un cultivo importante en muchas áreas del mundo. Los métodos de biotecnología se han aplicado a la soya para el mejoramiento de las características agronómicas y la calidad del producto.

Una de dicha característica agronómica importante en la producción de soya es la tolerancia a herbicida, en particular, tolerancia al herbicida de glifosato. Un evento de soya tolerante a herbicida puede ser una característica útil para el manejo de malezas. N-fosfonometilglicina, también conocida como glifosato, es un herbicida bien conocido que tiene actividad en amplio espectro de especies vegetales. Glifosato es el ingrediente activo de Roundup® (Monsanto Co., St. Louis, MO), un herbicida seguro que tiene una vida media deseablemente corta en el ambiente. Cuando se aplica a una superficie vegetal, el glifosato se mueve sistémícamente a través de la planta. Glifosato es fitotóxico debido a su inhibición de la trayectoria de ácido shikímico, que provee un precursor para la síntesis de aminoácidos aromáticos. El glifosato inhibe la enzima 5-enolpiruvil-3-fosfoshikimato sintasa (EPSPS) encontrada en las plantas. La tolerancia a glifosato se puede lograr por medio de la expresión de variantes de EPSPS que tienen afinidad más baja para glifosato y por tanto retienen su actividad catalítica en presencia de glifosato (Patente de E.U.A. Nos. 5,633,435; 5,094,945; 4,535,060 y 6,040,497). Las enzimas que degradan glifosato en tejidos vegetales (Patente de E.U.A. No. 5,463,175) también tienen la capacidad de conferir tolerancia celular a glifosato. Dichos genes se usan para la producción de cultivos transgénicos que sean tolerantes a glifosato, permitiendo de este modo que se use glífosato para el control efectivo de la maleza con una mínima consecuencia en el daño del cultivo. Por ejemplo, la tolerancia a glifosato se ha diseñado genéticamente en maíz (Patente de E.U.A. No. 5,554,798), trigo (Patente de E.U.A. No. 6,689,880), algodón (Patente de E.U.A. No. 6,740,488), soya (WO 9200377) y cañóla (Solicitud de Patente US 20040018518). Los transgenes para tolerancia a glifosato y los transgenes para tolerancia a otros herbicidas, por ejemplo, el gen bar (Toki et al., 1992; Thompson et al., 1987; fosfinotricina acetiltransferasa (DeBlock et al., 1987), para tolerancia a herbicida de glufosinato) también son útiles como marcadores que se pueden seleccionar o marcadores que se pueden marcar y pueden proveer un fenotipo útil para la selección de plantas enlazadas con otras características agronómicamente útiles. La expresión de genes extraños en plantas se sabe que es influenciada por su posición cromosomal, probablemente debido a la estructura de cromatina (por ejemplo, heterocromatina) o la proximidad de elementos de regulación transcripcional (por ejemplo, potenciadores) cerca del sitio de integración (Weisíng et al., 1988). Por esta razón, a veces es necesario seleccionar un número grande de eventos con el fin de identificar un evento caracterizado por expresión óptima de un gen introducido de interés. Por ejemplo, se ha observado en plantas y en otros organismos que puede existir una variación amplia en niveles de expresión de un gen introducido entre eventos. También pueden existir diferencias en patrones espaciales o temporales de expresión, por ejemplo, diferencias en la expresión relativa de un transgen en varios tejidos vegetales, que no pueden corresponder a los patrones esperados de los elementos reguladores transcripcionales presentes en la construcción génica introducida. Por esta razón, es común producir cientos a miles de diferentes eventos y seleccionar aquellos eventos para un evento sencillo que tiene niveles de expresión transgénica deseados y patrones para propósitos comerciales. Un evento que tiene niveles deseados o patrones deseados de expresión transgénica es útil para introgresión del transgen en otros fondos genéticos por medio de cruzamiento de distinto tipo pero de la misma raza sexual usando métodos convencionales de reproducción. La progenie de dichas cruzas mantiene las características de expresión transgénica del transformante original. Esta estrategia se usa para asegurar una expresión génica confiable en un número de variedades que se adaptan bien a condiciones locales de crecimiento. Podría ser conveniente tener la capacidad de detectar la presencia de un evento particular con el fin de determinar si la progenie de una cruza sexual contiene un transgen de interés. Además, un método para detectar un evento particular podría ser útil para cumplir con las regulaciones que requieren la aprobación pre-mercado y etiquetado de alimentos derivados de plantas de cultivo recombinante, por ejemplo. Es posible detectar la presencia de un transgen por cualquier método de detección de ácido polinucleico bien conocido tal como la reacción de cadena polimerasa (PCR) o hibridación de ADN usando sondas de ácido polinucleico. Estos métodos de detección generalmente se enfocan en los elementos genéticos frecuentemente usados, tales como promotores, terminadores, genes marcadores, etc. Como un resultado, dichos métodos no pueden ser útiles para discriminar entre diferentes eventos, particularmente aquellos producidos usando la misma construcción de ADN a menos que la secuencia de ADN cromosomal ("ADN de flanqueo") adyacente al ADN transgénico insertado se conozca. Se discute un ensayo de PCR específico del evento, por ejemplo, por Windels et al. (1999), que identificó el evento 40-3-2 de soya tolerante a glifosato por PCR usando un conjunto de cebadores que expanden la unión entre el transgen inserto y ADN de flanqueo, específicamente un cebador que incluye una secuencia desde el inserto y un segundo cebador que incluye una secuencia del ADN de flanqueo. Los métodos de detección de ADN específico del evento de planta transgénica se han descrito también en la Patente de E.U.A. Nos. 6,893,826; 6,825,400; 6,740,488; 6,733,974 y 6,689,880; 6,900,014 y 6,818,807, incorporadas aquí para referencia de manera íntegra. Esta invención se refiere al evento MON89788 de soya tolerante a glifosato (también referido como MON19788 o GM_A19788) y a las moléculas de ADN contenidas en estas plantas de soya que son útiles en los métodos de detección para la planta y su progenie y tejidos de planta derivados del MON89788.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCiON La presente invención provee un evento transgénico de soya designado como MON89788 (también referido como MON19788) y su progenie que tiene semilla representativa depositada con Colección de Cultivos Tipo Americana (ATCC) con No. de acceso No. PTA-6708. Otro aspecto de la invención son las células vegetales o partes regenerables de la planta y semillas del evento MON89788 de soya. La invención también incluye partes de plantas del evento, pero no se limita a una célula, polen, óvulo, flores, brotes, raíces, hojas, y productos derivados de MON89788, por ejemplo alimento, harina y aceite de soya. Un aspecto de la invención provee composiciones y métodos para detectar la presencia de un ADN transgénico/región de unión genómica de un evento MON89788 de soya, planta o semilla o productos derivados de partes de plantas o semilla. Las moléculas de ADN se proveen comprendiendo al menos una molécula de ADN transgénico/de unión genómica seleccionada del grupo que consta de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, y sus complementos, en donde la molécula de unión extiende el sitio de inserción que comprende un ADN heterólogo insertado en el genoma de la célula de soya y el ADN genómico de la célula de soya que flanquea el evento MON89788 de soya en sitio de inserción. Dichas secuencias de unión pueden, en un aspecto de la invención, definirse como comprendiendo nucleófidos 1093-1113 o 5396-5416 de SEQ ID NO: 9, respectivamente. En otros aspectos de la invención, las uniones se pueden definir como incluyendo porciones adicionales del genoma de flanqueo y transgen, por ejemplo, y se pueden definir como comprendiendo una o más secuencias según se proporciona por los nucleótidos 1073-1113, 1043-1113, 1093-1133, 1093- 1163, 1043-1163, 5376-5416, 5346-5416, 5396-5436, 5396-5416, 5396-5466, o 5346-5466 de SEQ ID NO: 9. Dichas secuencias y plantas y semillas que comprenden estas secuencias por tanto forman un aspecto de la invención. Se provee una molécula de ADN novedosa que es un transgen de ADN/región genómica SEQ ID NO: 3 o su complemento, del evento MON89788 de soya. Una planta y semilla de soya que comprenden SEQ ID NO: 3 en su genoma es un aspecto de esta invención. SEQ ID NO: 3 comprende además SEQ ID NO: 1 de manera íntegra. De acuerdo a otro aspecto de la invención, se provee una molécula de ADN que es un transgen de ADN/región genómica SEQ ID NO: 4, o su complemento, en donde esta molécula de ADN es novedosa en el evento MON89788 de soya. Una planta y semilla de soya que comprenden SEQ ID NO: 4 en su genoma es un aspecto de esta invención. SEQ ID NO: 4 comprende además SEQ ID NO: 2 de manera íntegra. De acuerdo a otro aspecto de la invención, dos moléculas de ácido nucleico se proveen para usarse en un método de detección de ADN, en donde la primera molécula de ácido nucleico comprende al menos 11 o más polinucleótidos contiguos de cualquier porción de la región transgénica de la molécula de ADN de SEQ ID NO: 3 y el segundo ácido nucleico es una molécula de longitud similar de cualquier porción de una región de ADN genómico de soya de flanqueo 5' de SEQ ID NO: 3, en donde estas moléculas de ácido nucleico cuando se usan en conjunto son útiles como cebadores en un método de amplificación de ADN que produce un amplicón. El amplicón producido usando estos cebadores en el método de amplificación de ADN es diagnóstico para el ADN del evento MON89788 de soya. El amplicón producido por los cebadores descritos que es homólogo o complementario a una porción de SEQ ID NO: 3 que comprende SEQ ID NO: 1 es un aspecto de la invención. Se proveen de acuerdo a otro aspecto de la invención, dos moléculas de ácido nucleico para usarse en un método de detección de ADN, en donde la primera molécula de ácido nucleico comprende al menos 11 o más polinucleótidos contiguos de cualquier porción de la región transgénica de la molécula de ADN de SEQ ID NO: 4 y una segunda molécula de ácido nucleico de longitud similar de cualquier porción de ADN genómico de soya de flanqueo 3' de SEQ ID NO: 4, en donde estas moléculas de ácido nucleico cuando se usan en conjunto son útiles como cebadores en un método de amplificación de ADN que produce un amplicón. El amplicón producido usando estos cebadores en el método de amplificación de ADN es diagnóstico para el ADN del evento MON89788. El amplicón producido por los cebadores descritos que es homólogo o complementario a una porción de SEQ ID NO: 4 que comprende SEQ ID NO: 2 es un aspecto de la invención. Cualquier par cebador de ácido nucleico derivado de SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 4, o SEQ ID NO: 9 o sus complementos, que cuando se usa en una reacción de amplificación de ADN produce un amplicón diagóstíco para el tejido derivado del evento MON89788 de soya, tal como un amplicón que comprende SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 o cualquier porción de SEQ ID NO: 9, respectivamente, es otra modalidad de la invención. En una modalidad particular, el par cebador puede consistir de cebador A (SEQ ID NO: 5) y cebador D (SEQ ID NO: 8). Otro aspecto de la invención es una planta de soya, o semilla o producto derivado de una planta o semilla que comprende el evento MON89788, en donde el ADN genómico cuando se aisla de la planta de soya, o semilla, o producto produce un amplicón en un método de amplificación de ADN que comprende SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. Otro aspecto todavía de la invención es una planta de soya, o semilla, o producto derivado de una planta o semilla que comprende MON89788, en donde el ADN genómico cuando se aisla de la planta de soya, o semilla, o producto produce un amplicón en un método de amplificación de ADN, en donde las moléculas de cebador de ADN SEQ ID NO: 5 y SEQ ID NO: 6 se usan en el método de amplificación de ADN. Aún otro aspecto de la invención es una planta de soya, semilla, producto, o mercancía derivada de la planta o semilla, que comprende MON89788, en donde el ADN genómico cuando se aisla de la planta de soya, o semilla, o producto produce un amplícón en un método de amplificación de ADN, en donde las moléculas de cebador de ADN SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 8 se usan en el método de amplificación de ADN. El producto o mercancía puede comprender, sin limitación, un alimento o producto alimenticio que comprende o se deriva de uno o más de los siguientes productos de una planta de soya que comprende el evento MON89788: lecitina, ácidos grasos, glicerol, esterol, aceite comestible, hojuelas de soya desengrasada, alimentos de soya incluyendo alimentos de soya desengrasados y tostados, leche de soya cuajada, tofu, harina de soya, concentrado de proteína de soya, proteína de soya aislada, proteína vegetal hidrolizada, proteína de soya texturizada, y fibra de proteína de soya. De acuerdo con otro aspecto de la invención, un método para detectar la presencia de ADN correspondiente específicamente al ADN del evento MON89788 de soya en una muestra se proporciona. Dicho método comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra que comprende ADN con un par cebador de ADN; (b) realizar una reacción de amplificación de ácido nucleico, produciendo de este modo el amplicón, y (c) detectar el amplicón, en donde dicho amplicón comprende SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. Un equipo que comprende moléculas cebadoras de ADN que cuando se usa en un método de amplificación de ADN produce un amplicón que comprende SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 es un aspecto adicional de la invención. De acuerdo a otro aspecto de la invención, un método para detectar la presencia de ADN que corresponde específicamente al ADN del evento MON89788 de soya en una muestra se proporciona. Dicho método comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra que comprende ADN con una sonda que hibrida bajo condiciones de hibridación rigurosas con ADN genómico del evento MON89788 de soya y no híbrida bajo las condiciones de hibridación rigurosas con un ADN de planta de soya de control; (b) someter la muestra y la sonda a condiciones de hibridación rigurosas; y (c) detectar la hibridación de la sonda al ADN del evento MON89788 de soya, en donde dicha sonda comprende SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. La muestra puede comprender una semilla de progenie, planta, o parte de la planta que comprende el evento MON89788 de soya, o cualquiera de los siguientes productos derivados de una planta que comprende MON89788: lecitina, ácidos grasos, glicerol, esterol, aceite comestible, hojuelas de soya desengrasada, alimentos de soya incluyendo alimentos de soya desengrasados y tostados, leche de soya cuajada, tofu, harina de soya, concentrado de proteína de soya, proteína de soya aislada, proteína vegetal hídrolizada, proteína de soya texturizada, y flbra de proteína de soya. Un equipo que comprende una sonda de ADN que comprende una molécula de ADN que es homologa o complementaria a SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2, es un aspecto de la invención. Un equipo que comprende una molécula de ADN que comprende SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 o SEQ ID NO: 20, o sus complementos, también es un aspecto de la invención. De acuerdo a otro aspecto de la invención, se proporciona un método para producir una planta de soya que tolera una aplicación de glifosato que comprende las etapas de: (a) cruzar sexualmente una primera planta de soya tolerante a glifosato parental que comprende el evento MON89788, y una segunda planta de soya parental que carece de tolerancia a glifosato, produciendo de este modo una pluralidad de plantas de progenie; y (b) seleccionar una planta de progenie que tolera la aplicación de glifosato. Los métodos de reproducción pueden comprender adicionalmente las etapas de cruzar la planta parental que comprende el evento MON89788 de soya a una segunda planta de soya parental que también es tolerante a glifosato y seleccionar la progenie tolerante a glifosato por medio de ADN marcador molecular enlazado de manera genética al fenotipo tolerante a glifostao encontrado en cada madre. Otro aspecto de la invención es un método para controlar las malezas en un campo de plantas de soya que comprenden MON89788, en donde dicho método comprende la planlación de un campo con semilla de soya que comprende el evento MON89788 dicha semilla representativa depositada como No de acceso ATCC PTA-6708, permitiendo que dicha semilla germine y el tratamiento de dichas plantas con una dosis efecíiva de glifosalo para conírolar el crecimiento de la maleza en dicho campo. Los aspectos anteriores y otros de la invención serán más apareníes de la siguiente descripción detallada y dibujos anexos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 muestra la organización de la inserción transgénica en el genoma de una plañía de soya que comprende el evenlo MON89788. Las figuras 2A-2B muestran el procesamiento de productos de consumo de soya.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCBQM La présenle invención se refiere a un evento de transformación de soya novedoso designado como MON89788 que provee tolerancia a glifosato, y las partes de la planta y semilla y productos producidos a partir de las plantas, partes de la plañía, semillas, y producios que comprenden el evenlo. La invención provee moléculas de ADN que son novedosas en el genoma de células de soya que comprenden MON89788 y moléculas de ADN que se pueden usar en varios métodos de delección de ADN para ideníifícar el ADN de MON89788 en una mueslra. La invención provee un mélodo para controlar malezas en un campo de plantas que contienen MON89788 al tratar las malezas en el campo que comprende plantas que comprenden el evento MON89788 con un herbicida glifosato. Las siguientes definiciones y métodos se proporcionan para definir mejor la présenle Invención y guiar a aquellos con experiencia en la íécnica en la práclica de la presente invención. A menos que se indique lo contrario, los términos son para ser entendidos de acuerdo al uso convencional para aquellos con experiencia en la técnica relevante. Las definiciones de términos comunes en la biología molecular también se pueden encontrar en Rieger et al. (1991 ) y Lewin (1994). La nomenclaíura para bases de ADN se exponen en 37CFR§ 1.822, se usa. Como se usa en la présenle, el término "soya" se refiere a glicina max e incluye todas las variedades de la planta que se pueden procrear con soya. Como se usa aquí, el término "que comprende" se refiere a "incluyendo pero sin limitarse a". "Glifosato" se refiere a N-fosfonometílglicina y sus sales, glifosato es el ingrediente activo de herbicida Roundup® (Monsanto Co.). Tratamientos con "herbicida glifosato" se refieren a tratamientos con el herbicida Roundup®, Roundup Ultra®, Roundup Pro® o cualquier olra formulación de herbicida que contiene glifosato. Ejemplos de formulaciones comerciales de glifosato incluyen, sin restricción, aquellas comercializadas por Monsanto Company como herbicidas ROUNDUP®, ROUNDUP® ULTRA, ROUNDUP® ULTRAMAX, ROUNDUP® CT, ROUNDUP® EXTRA, ROUNDUP® BIACTIVE, ROUNDUP® BIOFORCE, RODEO®, POLARIS®, SPARK® y ACCORD®, iodos lo cuales contienen glifosato como sus sal isopropilamonio; ROUNDUP®, WEATHERMAX (sal de potasio glifosato), aquellos comercializadas por Monsanto Company como herbicidas ROUNDUP® DRY y RIVAL®, que contienen glifosato como su sal de amonio; que se comercializa por Monsanto Company como ROUNDUP® GEOFORCE, que contiene glifosato como su sal de sodio; y que se comercializa por Syngenta Crop Prolection como el herbicida TOUCHDOWN®, que contiene glifosato como su sal írimetilsulfonio. El tratamiento de un campo que comprende plantas de soya tolerantes a glifosato que comprenden el evento MON89788 con cualquiera de estas formulaciones de herbicida de glifosato controlaran el crecimiento de la maleza en el campo y no afectan el crecimiento o rendimiento de las plantas de soya que comprenden MON89788. Un "evenlo" íransgénico se produce por la íransformación de células vegetales con ADN heterólogo, por ejemplo, una construcción de ácido nucleico que incluye un transgen de interés, regeneración de una población de plantas que resulta de la inserción del transgen en el genoma de la planta, y selección de una planta particular caracterizada por medio de la inserción en un sitio de genoma particular. El término "evento" se refiere al transformante original y progenie del transformante que incluye el ADN heterólogo. El término "evento" también se refiere a la progenie producida por un cruzamiento sexual entre el transformante y otra variedad que incluye el ADN transgénico heterólogo y el ADN genómico de flanqueo. El término "evento" también se refiere al ADN del transformante original que comprende el ADN insertado y secuencia genómica de flanqueo inmediatamente adyacente al ADN insertado que podría esperarse se transfiera a una progenie que recibe ADN insertado incluyendo el transgen de interés como el resultado de un cruce sexual de una línea parental que incluye el ADN insertado (por ejemplo, el transformante original y progenie que resultan de auto-polinización)y una línea parental que no contiene el ADN insertado. Una plañía de soya tolerante a glifosato se puede procrear por medio de un primer cruce sexualmente de una primera planta de soya parental que consta de una plañía de soya que se desarrolla de una planta de soya tolerante a glifosato íransgéníca que comprende MON89788 o una planta de soya que es una progenie de la cruza de dicha planta que expresa el fenolipo tolerante a glifosalo, y una segunda planta de soya parental que carece de tolerancia a glifosato, produciendo de este modo una pluralidad de primeras plantas de progenie; y después la selección de una planta de progenie que es tolerante a la aplicación de herbicida de glifosato. Estas etapas pueden incluir además el retro-cruzamiento de la planta de progenie tolerante a glifosato a la segunda planta de soya parental o una tercera planta de soya parental, después la selección de la progenie mediante la aplicación con glifosato o por medio de identificación con marcadores moleculares asociados con la característica produciendo de este modo una planta de soya que tolera la aplicación de herbicida glifosato. Los marcadores moleculares se pueden usar comprendiendo las moléculas de ADN de unión identificadas en los sitios 5' y 3' de inserción del transgen en el evenlo MON89788. También se entiende que dos diferentes plantas transgénicas se pueden aparear también para producir descendencia que contiene dos transgenes exógenos de segregación independientemente. El retro-cruce a una plañía parental y un cruzamiento de dislinto tipo pero de la misma raza con una planta no transgénica como se describió previamente también se contempla, como es la propagación vegelativa. Descripciones de otros métodos de procreación que son comúnmente usados para diferentes características y cultivos se pueden encontrar en una de las varias referencias, por ejemplo, Fehr, (1987). Una "sonda" es un ácido nucleico aislado al cual se une una eliqueta detectable convencional o molécula reportera, por ejemplo, un isótopo radioactivo, un ligando, un agente quimio-luminiscente, o una enzima. Dicha sonda es complementaria a una cadena de un ácido nucleico objetivo, en el caso de la presente invención, a una cadena de ADN genómico de una planta de soya que comprende el evento MON89788 ya sea de una planta de soya o semilla o de una muestra o extracto de la planta o semilla que incluye ADN del evento. Las sondas de acuerdo a la presente invención incluyen no solo ácidos desoxirribonucleico o ribonucleico, sino también poliamidas y otros materiales de sonda que se unen específicamente a un a secuencia de ADN objelivo y se pueden usar para detectar la presencia de aquella secuencia de ADN objetivo. "Cebadores" son ácidos polinucleicos aislados que son fijados a una cadena de ácido polinucleico objetivo complementario por medio de hibridación de ácido nucleico para formar un híbrido entre el cebador y la cadena de ácido polinucleico objetivo, y después se extiende a lo largo de la cadena de ácido polinucleico objetivo por medio de polimerasa, por ejemplo, una ADN polimerasa. Los pares de cebador de la presente invención se refieren a su uso para la amplificación de una molécula de ácido polínucleico objetivo, por ejemplo, por medio de la reacción en cadena de polimerasa (PCR) u otros métodos de amplificación de ácido nucleico convencionales. Las sondas y cebadores generalmente son 11 polinucleótidos o más en longitud, preferiblemente 18 polinucleótidos o más, más preferiblemente 24 polinucleótídos o 30 pollnucleólidos o más. Dichas sondas y cebadores hibridan específicamente a una molécula objetivo bajo condiciones de hibridación muy rigurosas. Preferiblemente, las sondas y cebadores de acuerdo a la presente invención tienen identidad de secuencia complete con la molécula objetivo, aunque las sondas que difieren de las condiciones severas y que retienen la capacidad para hibridar a secuencias objetivo bajo condiciones muy rigurosas se pueden diseñar por medio de métodos convencionales. Los métodos para la preparación y uso de las sondas y cebadores se describen, por ejemplo, en Sambrook et al. (1989); Ausubel et al. (1992); e Innis et al. (1990). Los pares PCR-cebador (un conjunto de cebadores) se pude derivar de una secuencia conocida, por ejemplo, al usar programas de computadora destinados para aquel propósito tal como cebador (Versión 0.5, © 1991 , Whilehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA). Los cebadores y sondas basados en el ADN genómico de flanqueo y secuencias de inserto descritos aquí (SEQ ID NOs: 1-4 y 9) se pueden usar para confirmar y, si es necesario, corregir las secuencias descritas por métodos convencionales, por ejemplo, al aislar la molécula de ADN correspondiente de un depósito de semilla que comprende MON89788, y determinar la secuencia de ácido nucleico de dichas moléculas. Las moléculas de ADN asociadas adicionales se pueden aislar del genoma de una célula que comprende MON89788 que comprende el inserto transgénico y regiones de flanqueo genómicas, y fragmentos de estas moléculas se pueden usar como cebadores o sondas.

Las sondas y cebadores de ácido nucleico de la presente invención hibridan bajo condiciones rigurosas a una secuencia de ADN objetivo. Cualquier método de hibridación o amplificación de ácido nucleico convencional se puede usar para identificar la presencia de ADN del evento MON89788 en una muestra. Las moléculas de ácido nucleico o sus fragmentos tienen la capacidad de hibridar específicamente a otras moléculas de ácido nucleico bajo ciertas circunstancias. Como se usa aquí, se dice que dos moléculas de ácido nucleico son capaces de híbridar específicamente a olra si las dos moléculas tienen la capacidad de formar una estructura de ácido nucleico de doble cadena, anti-paralela y son de suficiente longitud para mantener esta estruclura bajo condiciones muy rigurosas. Se dice que una molécula de ácido nucleico es el "complemento" de otra molécula de ácido nucleico si exhiben complementariedad completa. Como se usa en la presente, se dice que las moléculas exhiben "complementariedad compleía" cuando cada nucleótido de una de las moléculas es complementaria a un nucleótido de la otra. Se dice que dos moléculas son "complementarias como mínimo" si pueden hibridar a otra con suficiente estabilidad para permitir que permanezcan fijas entre sí bajo al menos condiciones "poco rigurosas" convencionales. Simílarmente, se dice que las moléculas son "complemenlarias" si pueden hibridar a otra con suficiente estabilidad para permitir que permanezcan fijas entre sí bajo condiciones "muy rigurosas" convencionales. Condiciones de rigurosidad convencional se describen por Sambrook et al., 1989, y por Haymes et al. (1985). Salidas de complementariedad completa son por tanto permisibles, en tanío dichas salidas no eviten complelamente la capacidad de las moléculas para formar una estructura de doble cadena. Con el fin de que una molécula de ácido nucleico sirva como un cebador o sonda necesita únicamente ser complementaria de manera suficiente en la secuencia para tener la capacidad de formar una estrucíura esíable de doble cadena bajo el solvente particular y concenlraciones de sal empleadas. Como se usa en la preseníe, una secuencia homologa suslancialmente es una secuencia de ácido nucleico que específicamente hibridará al complemento de la secuencia de ácido nucleico a la cual se está comparando bajo condiciones muy rigurosas. Condiciones de rigurosidad apropiada que promueven hibridación de ADN, por ejemplo, 6.0 x cloruro de sodio/ citrato de sodio (SSC) a aproximadamente 45°C, seguido por un lavado de 2.0 x SSC a 50°C, se conocen por aquellos con experiencia en la técnica o se pueden encontrar en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6. Por ejemplo, la concentración de sal en la etapa de lavado se puede seleccionar de poco rigurosa de aproximadamente 2.0 x SSC a 50°C a muy rigurosa de aproximadamente 0.2 x SSC a 50°C. Además, la temperaíura en la eíapa de lavado se puede incrementar desde condiciones poco rigurosas a temperatura ambiente, aproximadamente 22°C, a condiciones muy rigurosas a aproximadamente 65°C. Ambas la temperatura y la sal pueden variar, o la temperaíura o la concenlración de la sal se pueden mantener constantes mientras la otra variable se cambia. En una modalidad preferida, un ácido nucleico de la presente invención específicamente hibridará a una o más moléculas de ácido nucleico expuestas en SEQ ID NOs: 1-4, y 9, sus complementos o fragmentos de cualquiera bajo condiciones moderadamente rigurosas, por ejemplo a aproximadamente 2.0 x SSC y aproximadamente 65°C. En una modalidad particularmente preferida, un ácido nucleico de la presente invención hibridará específicamente a una o más de las moléculas de ácido nucleico expuestos en SEQ ID NOs: 1-4, y 9, sus complementos o fragmentos de cualquiera bajo condiciones muy rigurosas. En un aspecto de la presente invención, una molécula de ácido nucleico marcadora preferida de la presente invención comprende la secuencia de ácido nucleico como se expone en SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 o sus complementos o fragmentos de cualquiera. En otro aspecto de la presente invención, una molécula de ácido nucleico marcadora preferida de la presente invención comparte entre el 80% y 100% o 90% y 100% de identidad de secuencia con la secuencia de ácido nucleico expuesta en SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 o sus complementos o fragmentos de cualquiera. Moléculas de ADN marcadoras moleculares que comprenden SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2, o sus complementos o fragmentos de cualquiera se puede usar como marcadores en métodos de procreación de plantas para identificar la progenie de cruces genéticos similares a los métodos descritos para análisis de marcador de ADN de repetición de secuencia simple, en Cregan et al. (1997); lodas las cuales se incorporan aquí para referencia en su totalidad. La hibridación de la sonda a la molécula de ADN objetivo se puede detecíar por cualquier número de métodos conocidos por aquellos con experiencia en la técnica, estos pueden incluir, pero sin limitarse a: etiquetes fluorescentes, etiquetes radioactivas, etiquetas basadas anticuerpo, y etiquetas quimioluminiscentes. Con respecto a la amplificación de una secuencia de ácido nucleico objetivo (por ejemplo, por PCR) usando un par cebador de amplificación particular, "condiciones rigurosas" son condiciones que permiten que el par cebador hibridice únicamente a la secuencia ácido nucleico objetivo a la cual un cebador que tiene la secuencia lipo salvaje correspondiente (o su complemento) se puede unir y preferiblemente producir un producto de amplificación único, el amplicón, en una reacción de amplificación térmica de ADN. El término "específico para (una secuencia objetivo)" indica que una sonda o cebador hibrida bajo condiciones de hibridación rigurosas solamente a la secuencia objetivo en una muestra que comprende la secuencia objetivo. Como se usa en la presente, "ADN amplificado" o "amplicón" se refiere al producto de amplificación de ácido nucleico de una secuencia de ácido nucleico objetivo que es parte de un a plantilla de ácido nucleico. Por ejemplo, para determinar si la planta de soya que resulta de un cruce sexual contiene el evento transgénico MON89788 o si una muestra de soya colectada de un campo comprende MON89788, o un extracío de soya, íal como alimento, harina o aceite comprende MON89788. El ADN extraído de una mueslra de tejido vegetal de soya o extracto se puede someter a un método de amplificación de ácido nucleico usando un par cebador que incluye un cebador derivado de la región genómica adyacente al sitio de inserción de ADN transgénico heterólogo insertado, y un segundo cebador derivado del ADN transgénico heterólogo insertado para producir un amplicón que es diagnóstico para la presencia del ADN del evento. El amplicón es de una longitud y tiene una secuencia que también es diagnóstico para el evento. El amplicón puede variar en longitud de la longilud combinada de los pares cebadores más un par base nucleótido, o más aproximadamente cincuenta pares base nucleótido, o más aproximadamente doscientos cincuenta pares base nucleótidos, o más aproximadamente trescientos cincuenta pares base de nucleótidos o más. Alternativamente, un par cebador se puede derivar de secuencia genómica de flanqueo en ambos lados del ADN insertado para producir un amplicón que incluye la secuencia nucleotídica de inserto completo. Un miembro de un par cebador derivado de la secuencia genómica vegeíal se puede localizar a dislancia de la molécula de ADN íransgénica insertada, esta distancia puede variar de un par base nucleotídico hasta aproximadamente veinte mil pares base nucleolídicos. El uso del lérmino "amplicón" excluye específicamente dímeros cebadores que se pueden formar en la reacción de amplificación térmica de ADN. La amplificación de ácido nucleico se puede realizar por cualquiera de los varios métodos de reacción de amplificación de ácido nucleico conocido en la técnica, incluyendo la reacción de cadena polimerasa (PCR). Una variedad de métodos de amplificación se conocen en la técnica y se describen, inter alia, en la Paíente de E.U.A. Nos. 4,683,195 y 4,683,202 y en Innis et al. (1990). Los métodos de amplificación de PCR se han desarrollado para amplificar hasta 22kb de ADN genómico y hasta 42 kb de ADN bacteriófago (Cheng et al., 1994). Estos métodos así como otros métodos conocidos en la técnica de amplificación de ADN se pueden usar en la práctica de la presente invención. La secuencia del inserto de ADN heterólogo o secuencia de flanqueo del evento MON89788 de soya y se puede verificar, y corregir si es necesario por medio de amplificación de dichas moléculas del genoma del evento usando cebadores derivados de las secuencias provistas aquí seguido por métodos de secuenciación de ADN estándares aplicados al amplicón PCR o al ADN transgéníco/genómico clonado aislado. El amplicón producido por estos métodos se puede detectar por medio de una pluralidad de técnicas. Uno de dicho método es Genetic Bit Analysis (Nikiforov, et al., 1994) donde un oligonucleótido de ADN se diseña para traslapar lanto la secuencia de ADN genómico de flanqueo adyacente como la secuencia transgénica de ADN insertado. El olígonucleóíido se inmoviliza en pozos de una placa de micropozo. Después de PCR de la región de interés (usando un cebador en la secuencia insertada y uno en la secuencia genómica de flanqueo adyacente), un producto PCR de cadena sencilla se puede hibridar al oligonucleótido inmovilizado y servir como una plantilla para una reacción de extensión base sencilla usando un ADN polimerasa y ddNTP específicos etiquetados para la base siguiente esperada. La lectura puede ser fluorescente o con base en ELISA. Una señal indica la presencia de la secuencia genómica inserto/flanqueo debido a la amplificación exitosa, hibridación, y extensión de base sencilla. Otro método es la técnica piro-sequenciación como se describe por Winge (2000). En este método un oligonucleólido se diseña para traslapar el ADN genómico adyacente y la unión de ADN inserto. El oligonucleótido se hibrida a un producto PCR de cadena sencilla de la región de interés (un cebador en la secuencia insertada y uno en la secuencia genómica de flanqueo) y se incuba en presencia de una ADN polimerasa, ATP, sulfurilasa, luciferasa, apirasa, adenosina 5' fosfosulfato y luciferina. Se añaden DNTP de manera individual y la incorporación resulta en una señal ligera que se mide. Una señal ligera indica la presencia de la secuencia inserto íransgénico/flanqueo debido a la amplificación exitosa, hibridación, y extensión sencilla o multi-base. La polarización de fluorescencia como se describe por Chen et al. (1999) es un método que se puede usar para delectar el amplicón de la presente invención. Usando este método se designa un oligonucleótido para íraslapar el flanqueo genómico y la unión de ADN insertado. El oligonucleótido se hibrida a un producto PCR de cadena sencilla de la región de interés (un cebador en el ADN insertado y uno en la secuencia de ADN genómica de flanqueo) y se incuba en presencia de un ADN polimerasa y un ddNTP etiquetado-fluorescente. La extensión de base sencilla resulta en la incorporación del ddNTP. La incorporación se puede medir como un cambio en la polarización usando un fluorómetro. Un cambio en la polarización indica la presencia del inserto transgénico/secuencia genómica de flanqueo debido a la amplificación, hibridación, y extensión de base sencilla exitosas. Taqman® (PE Applied Biosystems, Foster City, CA) se describe como un mélodo para detectar y cuantificar la presencia de una secuencia de ADN y se entiende completamente en las instrucciones proporcionadas por el fabricante. Brevemente, una sonda de oligonucleótido FRET se diseña para traslapar el flanqueo genómico y la unión de ADN inserto. La sonda FRET y los cebadores de PCR (un cebador en la secuencia de ADN inserto y uno en la secuencia genómica de flanqueo) se ciclan en presencia de una polimerasa termoestable y dNTP. La hibridación de la sonda FRET resulta en la escisión y liberación del radical fluorescente a distancia del radical de templado en la sonda FRET. Una señal fluorescente indica la presencia de la secuencia genómica de flanqueo/de inserto transgénico debido a amplificación e hibridación exitosas. Guías moleculares se han descrito para usarse en detección de secuencia como se describe en Tyangí et al (1996). Brevemente, una sonda de oligonucleótido FRET se designa para traslapar la unión genómica de flanqueo y ADN inserto. La estructura única de la sonda FRET resulta en ésta conteniendo una estruclura secundaria que mantienen los radicales fluorescentes y de templado en proximidad cercana. La sonda FRET y cebadores PCR (un cebador en la secuencia de ADN inserto y uno en la secuencia genómica de flanqueo) se ciclan en presencia de una polimerasa termoestable y dNTP. Después de la amplificación de PCR exitosa, la hibridación de la sonda FRET a la secuencia objetivo resulta en la remoción de la estructura secundaria de la sonda y separación espacial de los radicales fluorescente y de templado. Una señal fluorescente resulta. Una señal fluorescente indica la presencia de la secuencia genómica de flanqueo/de inserto íransgéníca debido a amplificación e hibridación exitosas. Otros métodos descritos, tales como, micro-fluidos (Publicación de Patenle US 2006068398, Patente US No. 6,544,734) proveen métodos y dispositivos para separar y amplificar muestras de ADN. Colorantes ópticos usados para deteclar y cuantificar moléculas de ADN específicas (WO/05017181 ). Dispositivos de nanotubo (WO/06024023) que comprenden un sensor electrónico para la detección de moléculas de ADN o nanoperlas que unen moléculas de ADN específicas y que pueden entonces ser detectadas son útiles para detecíar moléculas de ADN de la présenle invención. Los equipos de detección de ADN se pueden desarrollar usando las composiciones descritas en la presente y los métodos descritos o conocidos en la técnica de detección de ADN. Los equipos son úíiles para la idenlificación de ADN del evento de soya en una muestra y se pueden aplicar a métodos para la procreación de plantas de soya que contienen ADN. Los equipos pueden contener cebadores o sondas de ADN que son homólogos o complementarios a SEQ ID NOs:1-4 y 9 o cebadores o sondas de ADN homólogos o complementarios a ADN contenido en los elementos genélicos transgénicos de ADN, estas secuencias de ADN se pueden usar en reacciones de amplificación de ADN o como sondas en un método de hibridación de ADN. La estruclura del ADN de los elementos genéticos transgénicos contenidos en el genoma de soya y que se ilustra en la figura 1 comprende una región genómica 5' del genoma A3244 de soya que flanquea el inserto íransgénico, el inserto comprendiendo una porción de la región de borde derecho (RB) de Agrobacterium tumefaciens, el promotor quimérico FMV/Tsf1 y elementos enlazados relacionados (Patente US 6,660,911 ; también referido como FMV/E1 F1a) se conecta de manera operable a una secuencia de codificación de péptido tránsito de cloroplasto Arabidopsis EPSPS (en adelaníe referida como CTP2 o TS-AIEPSPS CTP2, patente US 5,633,435, conectada operablemente a un EPSPS resistente a glifosato (en adelante referido como CP4 EPSPS o aroA:CP4, aislado de la cepa CP4 Agrobacterium tumefaciens y secuencia de codificación modificada para expresión incrementada en células vegetales, Pateníe de E.U.A. 5,633,435), conectada operablemente a la región de terminación 3' de 1 ,5-bisfosfalo carboxílasa ribulosa de arveja (en adelante referida como E9 3' o T-Ps.RbcS:E9, Coruzzi et al., (1984), una porción de la región (LB) de borde izquierdo de Agrobacterium tumefaciens, y la región genómica 3' del genoma A3244 de soya que flanquea el inserto transgénico. Moléculas de ADN útiles como cebadores en métodos de amplificación de ADN se pueden derivar de la secuencia de los elementos genéticos del inserto transgénico conlenido en el evento MON89788 de soya. Estas moléculas cebadoras se pueden usar como parte de un conjunto de cebadores que también incluye una molécula cebadora de ADN derivada del genoma de soya que flanquea el inserto transgénico. El evento MON89788 de soya se produce por medio de transformación de una línea de soya A3224 (Patenle US 5,659,114) por medio de un método mediado por Agrobacterium, por ejemplo, métodos descritos en las Patentes US 6,384,301 y 7,002,058 (incorporada aquí para referencia en su totalidad). Los inventores de la presente invención han descubierto que una línea de soya que comprende la región genómica tipo T MON89788 (tipo T es una combinación de un transgen y la región haplotipo asociada de un genoma vegetal) en su genoma tiene un rendimiento mejorado relativo a una línea que comprende la región genómica tipo T 40-3-2 previa. Esto se demuestra en los ensayos de campo replicados que incluyen datos de rendimiento colectados de locaciones múltiples en los Estados Unidos (solicitud de pateníe US 60/685584). Los siguientes ejemplos se incluyen para demoslrar ejemplos de ciertas modalidades de la invención. Se podrá apreciar por aquellos con experiencia en la técnica que las íécnicas descriías en los ejemplos que siguen represenlan enfoques que los inventores han encontrado que funcionan bien en la práctica de la invención, y de este modo se pueden considerar que constituyen ejemplos de modos preferidos para su práctica.

Sin embargo, aquellos con experiencia en la técnica podrán, en vista de la presente descripción, apreciar que muchos cambios se pueden realizar en las modalidades específicas que se describen y obtener todavía un resultado similar o parecido sin desviarse de la esencia y alcance de la invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Producción de amplicón diagnóstico para ADN genórnico MON89788 ADN del evento MON89788 de soya transgénica se extrae de tejido que comprende semillas de soya, tejido vegetativo, o alimento. El ADN se aisla del tejido usando un Equipo Miniprep PLant DNeasy de Qiagen de acuerdo a las ¡nslrucciones del fabricante (Qiagen Corp. Valencia, CA). Se produce un producto PCR que comprende una porción del ADN genómico que flanquea el extremo 5' de la inserción de ADN-T (ADN de transferencia que comprende el transgen) en el genoma de una planta que comprende MON89788. Este producto de ADN comprende SEQ ID NO: 3. PCR se puede realizar usando un cebador designado para hibridar a las secuencias de ADN genómico que flanquean el exíremo 3' del inserto íransgénico (cebador A de ADN, SEQ ID NO: 5; ver la figura 1 ) que forma par con un segundo cebador (cebador B de ADN, SEQ ID NO: 6) localizado en la región promotora transgénica (Patente US 6,660,911 , SEQ ID NO: 28, incorporada aquí para referencia y encontrada dentro de SEQ ID NO:9). Se produce un producto PCR del extremo 3' del inserto transgénico que comprende una porción del ADN genómico que flanquea el extremo 3' de la inserción de ADN-T en el genoma de una planta que comprende MON89788. Este producto de ADN comprende SEQ ID NO: 4. PCR se puede realizar usando un cebador designado para hibridar a las secuencias de ADN genómico que flanquean el extremo 3' del inserto de cada evento (cebador D de ADN, SEQ ID NO: 8) y forma par con un segundo cebador (cebador de ADN C, SEQ ID NO: 7) localizado en la secuencia de terminación de transcripción T-Ps.RbcS:E9 3' en el extremo 3' del inserto. La plantilla PCR incluye -50 ng de ADN genómico. Como un control negativo -50 ng de ADN genómíco del cultivo de soya no transgénica se utiliza. Cada reacción PCR contiene 5 µl 10 X regulador de pH para REDAccutaq™ LA ADN Polimerasa Mix (Sigma-Aldrich, Sí. Louis, MO), 200 µM de cada dNTP (Sigma-Aldrich), 0.4 µM de cada cebador, y 2.5 Unidades de JumpSlart™ REDTaq™ ADN Polimerasa (Sigma-Aldrich) en una reacción con volumen total de 50 µl. Las reacciones PCR se llevan a cabo bajo las siguientes condiciones de ciclación; 1 ciclo a 94°C durante 3 minutos (min); 32 o 35 ciclos a 94°C durante 30 segundos (s), 58°C duranle 30 segundos, 72°C durante 30 segundos o 1 minuto; 1 ciclo a 72°C durante 10 minutos. Se usan los pares de cebadores del evento de ADN para producir un amplicón diagnóstico para ADN genómico MON89788. Estos pares cebadores del evento incluyen, pero no se limitan a cebadores A y B (SEQ ID NO: 5 y 6) y pares C y D de cebadores del evento (SEQ ID NO: 7 y 8), que se usan en el método de amplificación de ADN descrito. Además de estos pares cebadores, cualquier par cebador derivado de SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 4, o los complementos de estos, que cuando se usan en una reacción de amplificación de ADN produce un amplicón que comprende SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2 diagnóstico para el tejido derivado del evento MON89788 de soya, respectivamente, se puede utilizar. Las condiciones de amplificación de ADN ilustradas en el cuadro 1 y cuadro 2 se pueden usar para producir un amplicón diagnóstico para MON89788 usando los pares de cebador de evento apropiados. Cualquier modificación de estos métodos usados para producir un amplicón diagnóstico para MON89788 se encuentra dentro de la experiencia ordinaria de la técnica. Un extracto que contiene putativamente ADN de una planta o semilla de soya que comprende MON89788, o un producto derivado de una planta que comprende MON89788 que cuando se analiza en un método de amplificación de ADN produce un amplicón diagnóstico para el evento de soya MON89788 se puede utilizar como una plantilla para la amplificación para deíerminar si esíá présenle MON89788. El amplicón es producido por el uso de al menos una secuencia cebadora derivada de SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 4 que cuando se usa en un méíodo PCR produce un amplicón diagnóstico para el evento MON89788. Por ejemplo, la producción de los amplicones MON89788 se puede realizar usando un Stratagene Robocycler, MJ Engine, Perkin-Elmer 9700, o un termociclador Eppendorf Mastercycler Gradient como se muestra en el cuadro 2, o por métodos y aparatos conocidos por aquellos con experiencia en la técnica.

CUADRO 1 Procedimiento PCR y condiciones de mezclado de reacción para lia identificación de inserto transgénico/región de unión genómica 5' MON89788 de soya Si se necesita mezclado suave (sin calentar la parte superior en el termociclador), agregar 1-2 gotas de aceite mineral en la parte superior de cada reacción. Proceder con el PCR en un Strategene Robocycler (Stralagene, La Jolla, CA), MJ Engine (MJR-Biorad, Hercules, CA), Perkin Elmer 9700 (Perkin-Elmer, Boeston, NA), o Termocíclador Eppendorf Mastercycler Gradient (Eppendorf, Hamburgo, Alemania) usando los siguientes parámetros de ciclación (cuadro 2). El termociclador MJ Engine o Eppendorf Mastercycler Gradient se debe correr en el modo calculado. Se corre el termociclador Perkin-Elmer 9700 con una velocidad en rampa establecida en máximo.

CUADRO 2 Condiciones del termoc?cSador EJEMPLO 2 Determinación de secuencia de región transgénica/genónmica y análisis Southern La secuenciación de ADN de los producios PCR provistos para ADN que se puede usar para diseñar moléculas de ADN adicionales como cebadores y sondas para la identificación de plantas de soya o semillas que comprenden MON89788. Los productos PCR de los tamaños esperados que representan las secuencias transgénicas/genómicas 5' y 3' se aislan por medio de separación de los producios PCR en un gel de agarosa 2.0% por medio de elecírofóresis. Los producios PCR se aislan incluyendo las regiones ADN 5' y 3' que extienden la unión de inserto entre la inserción transgénica en el genoma de soya. Los productos PCR 5'y 3' para MON89788 se purifican por medio de electrofóresis de gel de agarosa seguido por aislamiento de la matriz de agarosa usando el equipo de extracción de gel QIAquick (catálogo # 28704, Quiagen Inc., Valencia, CA). Los productos PCR purificados entonces se secuencian (por ejemplo, ABI Prism™ 377, PE Biosyslems, Foster City, CA) y se analizan (por ejemplo, software de análisis de secuencia DNASTAR Inc., Madison, Wl). Se determina una secuencia de ADN para el segmento par base de nucleótido que represente la región transgénica/genómíca del evento MON89788 como se ilustra en la figura 1 y se identifica como SEQ ID NO: 9. los elementos genómicos y transgénicos que eslán contenidos en SEQ ID NO: 9 se describen en el cuadro 3. Las regiones de flanqueo 5' y 3' están incluidas en SEQ ID NO: 9 y se proporcionan en SEQ ID NOs: 21 y 22. Las secuencias de unión son moléculas de polinucleólído relativamente cortas que son secuencias de ADN novedosas y son diagnóstico para ADN de MON89788 cuando se detectan en un ensayo de detección de ácido polinucleico. Las secuencias de unión en SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2 representan 10 polinucleólidos en cada lado de un sitio de inserción del fragmento transgénico y ADN genómico de soya en MON89788. Las secuencias de unión de polinucleótido más largas o más cortas se pueden seleccionar de SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 4. Las moléculas de unión (región de unión 5' SEQ ID NO: 1 , y región de unión 3' SEQ ID NO: 2) son útiles como sondas de ADN o como moléculas cebadoras de ADN en métodos para la detección de ADN. Los cebadores y sondas usados en un método Taqman® (Roche Molecular Systems, Inc., Pleasenton, CA) para la detección de una molécula de ADN de evento específica se desarrolla para el evento MON89788. Las moléculas cebadoras se refieren como SQ2824 (SEQ ID NO: 10), AQ2826 (SEQ ID NO: 11 ), SQ1141 (SEQ ID NO: 12), SQ1142 (SEQ ID NO: 13), SQ5543 (SEQ ID NO: 14) y las moléculas de sonda son referidas como PB871 -6FAM (SEQ ID NO: 15), PB2191 -VIC (SEQ ID NO: 16), y PB57-VIC (SEQ ID NO: 17). Los cebadores y sondas se usan en el método Taqman® de acuerdo a las instrucciones de los fabricantes para proveer un amplicón diagnóstico para ADN que comprende MON89788. Los tejidos de soya que incluyen productos procesados, por ejemplo alimento, son fuentes útiles de ADN para este método. Los cebadores adicionales usados para producir un amplicón de alimento de soya incluyen SEQ ID NOs: 18-20.

CUADRO 3 Anotación dei elemento genómico y genético del fragmento de transgénico/ genómico (SEQ ID NO: 9) contenido en eB genoma de que comprende MON89788 Análisis Southern Blot ADN genómico de una planta que comprende MON89788 y ADN genómico de soya de control (~15 µg de cada uno) se digiere con varias enzimas de restricción (140 U) en un volumen total de 150 µl incluyendo 15µl del regulador de pH del fabricante correspondiente (NEB, Beverly, MA). Las endonucleasas de restricción, por ejemplo, Bgl11 , BamHl , Ncol , Hind11 1 , y Bc11 , se usan en el análisis Southern de MON89788. Las digestiones de endonucleasa se realizan a la temperatura apropiada por al menos 6 horas. Después de la incubación, el ADN se precipita con acetaío de sodio 3M y 2.5 volúmenes de etanol. Posteriormente, el ADN se lava con etanol al 70%, se seca, y se resuspende en 40 µ1 de TBE. Regulador de pH de carga (0.2X) se añade a las muestras y después se somete a electrofóresis en geles de agarosa (0.8%) duranle 16-18 horas a 30 volís. Los geles se íiñen con etidio-bromuro, después se íraían con una solución de despurinación (0.125 N HCl) durante 10 minutos, con una solución de desnaturalización (hidróxido de sodio 0.5M, cloruro de sodio 1.5M) durante 30 minutos, y finalmente con una solución de neutralización (base Trizima 0.5 M, cloruro de sodio 1.5M) durante 30 minutos. El ADN se transfiere a la membrana Hybond-N (Amersham Pharmacia Biotech, Buckingamshire, Inglaterra) usando un Turboblotter (Schleicher y Schuell, Dassel, Alemania) durante 4-6 horas y después se fija a la membrana usando una luz UV. Las membranas se pre-hibridan con 20 ml de solución DIG Easy Hyb (Roche Molecular Biochemicals, Indianápolis, IN; No. de cat. 1603558) durante 2-4 horas a 45°C. Las sondas de ADN radiactivas (3 P dCTP) homologas o complementarias a SEQ ID NO: 1 , o SEQ ID NO: 2, SEQ o ID NO: 3, o SEQ ID NO: 4, o una porción de las mismas se hace usando un equipo de etiquetado de ADN Radprime (Invitrogen, Carlsbad, CA; No. de cat. 18428-011 ). Los nucleótidos no incorporados se remueven usando columnas SEPHADEX G-50 (Invitrogen). La solución de pre-hibridación se reemplaza con 10 mis de solución DIG Easy Hyb pre-calentada que contiene la sonda desnaturalizada a una concentración final de 1 millón de conteos por ml. Las manchas se hibridan a 45°C durante 16-18 horas. Las manchas se lavan con una solución poco severa (5X SSC, 0.1X SDS) a 45°C y después se lava repetidamente con una solución de severidad muy alta (0.1X SSC, 0.1 % SDS) a 65°C. Las manchas se exponen a un tamiz de fósforo (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) por >2 horas y la lectura de exposición usando una máquina Dala Storm 860 (Amersham Biosciences). Estos métodos y condiciones ejemplificados pueden ser modificados por aquellos con experiencia en la técnica de detección de ADN en una muestra.

EJEMPLO 3 Control de maleza El conlrol del crecimiento de maleza en un campo de soya que comprende MON89788. Un campo se planta con semillas de soya que comprenden MON89788, las semillas se dejan germinar en plantas y el campo de las plantas se trata con una formulación herbicida que contiene glifosato. Una dosis efectiva de una formulación de glifosato a proporciones de tratamiento desde aproximadamente 0.1 kg ae/A (kg de equivalente ácido de glifosato/acre) a 1.36 o más kg ae/A se aplican al campo. Las proporciones aplicadas a veces varían desde aproximadamente 0.34 kg ae/A a 0.68 kg ae/A a una frecuencia de uno o más tratamientos durante la temporada de crecimiento como sea necesario para controlar el crecimiento de maleza en un campo. Las semillas de las plantas que comprenden MON89788 se recolectan de las plantas íratadas. Un depósito del Monsanto Technology LLC, la semilla de soya representativa del evento MON89788 descrito anteriormeníe y recilado en las reivindicaciones se ha realizado bajo el Tratado de Budapest con la Colección de Cultivo Tipo Americana (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110. El número de acceso ATCC para el depósito que comprende el evento MON89788 (lambién conocido como MON19788 o GM_A19788) es PTA-6708, deposiíado el 11 de mayo de 2005. El depósito se mantendrá en el depositario durante un periodo de 30 años, o 5 años después de la última solicitud, o durante la vida efectiva de la patente, lo que sea más duradero, y se reemplazará según sea necesario durante ese periodo. Habiendo ilustrado y descrito los principios de la presente invención, será aparente para aquellos con experiencia en la técnica que la invención se puede modificar en la disposición y detalle sin desviarse de dichos principios. Reclamamos todas las modificaciones que se encuentran dentro de la esencia y alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones y documentos de patente publicadas citadas en esta especificación se incorporan aquí para referencia al mismo grado como si cada publicación o solicitud de patente individual fuera específicamente e individualmente indicada para ser incorporada para referencia.

Referencias Las siguientes referencias, hasta el punto que provean procedimientos ejemplares u otros detalles complementarios a aquellos expuestos aquí, se incorporan específicamente en la presente para referencia. U.S. Patenl 4,535,060 U.S. Paíent 4,683,195 U.S. Patenl 4,683,202 U.S. Patent 5,094,945 U.S. Patent 5,463,175 U.S. Patent 5,554,798 U.S. Patent 5,633,435 U.S. Patent 5,633,435 U.S. Patent 5,659,114 U.S. Patení 6,040,497 U.S. Patent 6,384,301 U.S. Patenl 6,544,734 U.S. Patent 6,660,911 U.S. Patent 6,660,911 U.S. Patent 6,689,880 U.S. Patent 6,689,880 U.S. Patent 6,733,974 U.S. Patent 6,740,488 U.S. Patent 6,740,488 U.S. Patent 6,818,807 U.S. Patent 6,825,400 U.S. Patent 6,893,826 U.S. Patent 6,900,014 U.S. Patent 7,002,058 Solicitud U.S. 60/685584 Publicación U.S. 20040018518 Publicación U.S. 2006068398 Ausubel et al, In: Current Protocols in Molecular Biology, John, Wiley & Sons, Inc, New York, 1992.

Chen et al., Genome Res., 9:492-498, 1999. Cheng et al, Proc. Natl. Acad. ScL USA, 91 :5695-5699, 1994. Coruzzi et al., EMBO J., 3:1671-1679, 1984. Cregan et al., In: DNA markers: Protocols, applications, and overviews, Wiley-Liss NY, 173-185, 1997. DeBlock eí al, EMBO J„ 6:2513-2522, 1987. Fehr, Ih: Breeding Meihods for Cultivar Development, Wilcox (Ed.), Amer. Soc. of Agronomy, Madison Wl, 1987. Haymes et al., In: Nucleic acid hybridization, a practical approach, IRL Press, Washington, DC, 1985. Innis, et al., In: PCR Protocols. A guide to Methods and Application, Academic Press, Inc. San Diego, 1990. Lewin, In: Genes V, Oxford University Press, NY, 1994. Nikiforov, et al. Nucleic Acid Res., 22:4167-4175, 1994. PCT Appln. WO 9200377 PCT AppIn. WO/05017181 Rieger et al., In: Glossary of Genetics: Classical and Molecular, 5* Ed., Springer- Verlag: NY, 1991. Sambrook et al., hi: Molecular cloning: a laboratory manual, 2<n> Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989. Thompson et al, EMBO J. 6:2519-2523, 1987. Toki et al, Plant Physiol, 100:1503-1507, 1992. Tyangi et al, Nature Biotech., 14:303-308, 1996.

Weising et al, Ann. Rev. Genet., 22:421-477, 1988. Windels et al, Med. Fac. Landbouww, 64/5b:459-462, 1999. Wingem, Innov. Pharma. Tech., 00:18-24, 2000.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES 1.- Una secuencia de ácido nucleico que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. 2.- Una planta de soya o parte de la misma que comprende el evento MON89788, en donde la semilla de soya representativa que comprende el evento MON89788 se han depositado bajo el número de acceso ATCC PTA-6708. 3.- Una semilla de la planta de conformidad con la reivindicación 2, en donde la semilla comprende un evento MON89788. 4.- Un producto de consumo soya producido de la semilla de conformidad con la reivindicación 3. 5.- El producto de consumo de soya de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque se define como alimento, harina, hojuelas, o aceite. 6.- La parte de plante de soya de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque se define como una célula, polen, óvulo, flor, brote, raíz, u hoja. 7 '.- La planta de soya de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque se define como una planta de progenie de cualquier generación de una planta de soya que comprende dicho evento MON89788. 8.- La plañía de soya de conformidad con la reivindicación 2, caraclerizada además porque el genoma de dicha planta comprende al menos una molécula de ADN seleccionada del grupo que consta de SEQ ID NO: 1 , SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 21 y SEQ ID NO: 22. 9.- La planta de soya de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el genoma de dicha planta produce un amplicón diagnóstico para el evento MON89788 cuando se analiza en un método de amplificación de ADN, dicho amplicón comprendiendo SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. 10.- La semilla de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque el ADN de la semilla produce un amplicón diagnóslico para el evento MON89788 cuando se analiza en un método de amplificación de ADN, dicho amplicón comprendiendo SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. 11.- El alimento, harina, hojuelas o aceite de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque se define comprendiendo un ácido nucleico que produce un amplicón diagnóstico para el evento MON89788 cuando se analiza en un método de amplificación de ADN, dicho amplicón comprendiendo SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. 12.- Una molécula cebadora polinucleolídica de ADN que comprende al menos 11 nucleótidos contiguos de SEQ ID NO: 3, o su complemento que es útil en un método de amplificación de ADN para producir un amplícón diagnóstico para el evento MON89788. 13.- Una molécula cebadora polinucleotídíca de ADN aislada que comprende al menos 11 nucleótidos contiguos de SEQ ID NO: 4, o su complemento que es útil en un método de amplificación de ADN para producir un amplicón diagnóstico para el evento MON89788. 14.- Un equipo de detección de ADN específico para el evento MON89788 que comprende al menos un ácido nucleico que comprende 11 o más nucleótidos contiguos homólogos o complementarios a SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 4. 15.- Un mélodo para producir una planta de soya tolerante a herbicida de glifosato que comprende la introducción en el genoma de dicho evento MON89788 de planta. 16.- El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque se define comprendiendo las etapas de: (a) cruzar una primera planta de soya que comprende el evento MON89788 con una segunda planta de soya que carece del evento MON89788 para producir plantas de progenie; y (b) seleccionar al menos una primera plañía de progenie que comprende dicho evenlo MON89788 y es tolerante a glifosato. 17.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque comprende auto-polinización de dicha primera plañía de progenie para producir plañías de progenie de segunda generación y seleccionar al menos un primer homocigoso de planta para dicho evento MON89788. 18.- Un método para detectar la presencia de ADN correspondiente al evento MON89788 de soya en una muestra, el método comprendiendo: (a) poner en contacto una muestra que comprende ADN de soya con un conjunto de cebadores, que cuando se usan en una reacción de amplificación de ácido nucleico con ADN genómico del evento MON89788 de soya, produce un amplicón diagnóstico para el evento MON89788 de soya; y (b) realizar una reacción de amplificación de ácido nucleico, produciendo de este modo el amplicón diagnóstico; y (c) detectar el amplicón diagnóstico. 19.- Un método para deteclar la presencia de un ácido nucleico correspondiente al evento MON89788 en una muestra, el método comprendiendo: (a) obtener una mueslra de ADN de soya; y (b) analizar la muestra para la presencia de una secuencia de ADN del evento MON89788. 20.- El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque el análisis de la muestra de ADN comprende la detección de la presencia de la secuencia de ácido nucleico de al menos una de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2, o sus complementos. 21.- Una planta de soya que comprende una característica tolerante a glifosato que se enlaza genéticamente a una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 2. 22.- Un método para producir un producto de consumo de soya que comprende, (a) obtener la planta de soya o parte de la misma de conformidad con la reivindicación 2; y (b) producir un producto de consumo de soya de la planta de soya o parte de la misma. 23.- El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado además porque el producto de consumo se define como alimento, harina, hojuelas, aislado de proteína, o aceite. 24.- Un método para el control del crecimiento de maleza en un campo que comprende plantas de soya que comprenden el evento MON89788, el méíodo comprendiendo el íratamiento del campo con una cantidad de glifosato efectiva para controlar el crecimiento de la maleza, en donde las plantas de soya exhiben tolerancia al glifosato. 25.- El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado además porque el íratamiento del campo se realiza desde la etapa V1 a R4 de crecimiento.