KR20060064681A - 발효 및 배양 방법, 식물발효 엑기스, 식물발효 엑기스분말 및 이 식물발효 엑기스 배합물 - Google Patents

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Abstract

안전하고, 또한, 저렴하게 고농도로 면역부활물질을 포함하는 식물발효 엑기스를 제조하는 방법을 제공하는 것을 과제로 하여, 본 발명의 발효 및 배양방법은 소맥이나 사과 등의 식물에 공생하고 있는 그램 음성균인 판토에아·아글로메란스를 사용해서 소맥분 등의 식물성분을 발효시킨다. 식물이 갖는 면역부활 작용을 현저하게 증강하는 것이 가능하게 된다. 또한, 이것들에는 동물성분 유래의 불순물의 혼입의 문제가 없으므로 안전성이 높다.
Figure 112006020853200-PCT00024
면역부활물질, 식물발효, 엑기스, 그램 음성균, 판토에아·아글로메란스, 소맥분.

Description

발효 및 배양 방법, 식물발효 엑기스, 식물발효 엑기스 분말 및 이 식물발효 엑기스 배합물{FERMENTATION AND CULTURE METHOD, FERMENTED PLANT EXTRACT, FERMENTED PLANT EXTRACT POWDER AND COMPOSITION CONTAINING THE FERMENTED PLANT EXTRACT}
본 발명은 인간을 포함하는 포유동물(구체적으로는 가축, 애완동물 등), 조류(구체적으로는 양계, 애완 조류 등), 양서류, 파충류, 어류(구체적으로는, 수산 양식어, 애완어류 등), 무척추 동물에 이르는 의약품, 동물용 의약품, 의약부외품, 화장품, 식품, 기능성 식품, 사료 및 목욕용제 등에 첨가해도 안전한 면역부활물질을 얻기 위한 발효 및 배양방법, 식물발효 엑기스의 제조방법, 발효 및 배양방법에 의해 얻어지는 면역부활물질 함유의 식물발효 엑기스, 그 식물발효 엑기스로부터 얻어지는 면역부활물질 함유 분말, 및, 그 식물발효 엑기스를 배합한 식물발효 엑기스 배합물에 관한 것이다.
인간을 포함하는 포유동물(구체적으로는 가축, 애완동물 등), 조류(구체적으로는 양계, 애완 조류 등), 양서류, 파충류, 어류(구체적으로는, 수산 양식어, 애완 어류 등), 무척추 동물에 관하여, 감염 방제 기술을 포함하는 질병예방·치료법을 확립하는 것은 매우 긴요한 과제이다. 게다가 이것을 달성하는 점에서는, 화학 물질을 사용하지 않고, 환경오염이 없고, 내성균을 생기게 하지 않고, 인체에 축적성이 없는 방법이 강하게 요구되고 있다. 본 발명자들은 상술의 과제에 관해, 이미 소맥수 추출물 등의 식물 유래의 면역부활물질이 질병예방·치료 효과를 안전하게 달성하는 것을 발견했다(특허문헌 1, 비특허문헌 1). 또, 이상의 목적을 달성하기 위해서 소맥 공생세균인 판토에아·아글로메란스(Pantoea agglomerans)로부터 얻은 저분자량 리포 다당을 사용할 수 있는 것을 발견했다.(비특허문헌 2). 한편, 최근의 연구에 의해, 리포 다당 이외의 여러 물질이 면역부활 효과를 나타내는 것이 밝혀져, 이들 복수의 면역부활물질을 포함하는 천연물 소재가 주목받고 있다.
그런데, 미생물을 사용한 발효기술은 식품분야뿐만 아니라, 넓은 분야에서 범용되고 있다. 예를 들면 와인을 비롯한 주류의 제조, 간장이나 된장의 제조, 치즈 등 발효 유제품의 제조, 의약품의 제조 등 매우 넓은 분야에 이르고 있다. 이들 발효에 사용되는 미생물은 광범위하게 걸쳐 있어, 누룩(진균) 효모, 유산균 등이 대표적인 것이지만, 그램 음성균을 사용하는 것은 거의 보고되어 오지 않았다. 일반적으로 발효란 유기물이 미생물의 작용에 의해 분해적으로 작용하는 현상이며, 광의로는 미생물에 의한 유용한 물질의 생산을 의미한다(비특허문헌 3). 미생물을 사용한 발효기술로서는 대표적인 것으로서 와인을 들 수 있다. 와인은 포도 과피에 부착되어 있는 와인 효모를 사용한 발효기술이며, 생산물은 알콜이다. 또, 미생물을 사용하는 발효기술 중에서, 그램 음성균을 사용한 것으로서는, 메탄균을 사용한 메탄 발효, 아세트산균을 사용한 아세트산 발효, 자이모모나수·모빌리스(Zymomonas mobilis)를 사용한 용설난의 근경으로부터의 에탄올 발효(테킬라 제조) 등이 알려져 있지만, 식용식물을 소재로 하여, 그 식물에 전적으로 공생하는 것을 특징으로 하는 미생물을 사용하는 발효 배양은 거의 알려져 있지 않아, 발효생산물로서 면역부활물질이 주목받은 경우는 없다. 말할 것도 없이 면역부활물질 생산을 목적으로 한 발효 및 배양법이 주목받은 경우는 없다.
한편 미생물에 의해 발효를 행하는 경우에는 일반적으로는 미생물이 생육하기 위한 발효기질이 만족시켜야 할 영양조건이 있다. 즉 탄소원으로서는 포도당, 과당 등의 단당류를 충분하게 포함하는 것 등 미생물이 영양소로서 이용 가능한 물질의 존재가 필수적이다. 이 때문에 원래 과당을 많이 포함하는 포도와 같은 과실과 같이, 아무런 가공을 가하지 않고 발효기질로서 이용할 수 있는 경우 이외는, 가열 또는 효소처리를 가하는 등 하여, 미생물에 의한 발효의 전단계의 처리가 필요하다. 예를 들면 전술의 자이모모나수·모빌리스(Zymomonasu mobilis)는 테킬라 제조에 사용되는 미생물이지만, 이 경우에는, 식용식물이 아닌 용설난의 근경으로부터 얻어진 다당류를 가열하여 발효성의 단당으로 분해하고, 그 후 이 미생물에 의해 발효하여 발효산물로서 알콜을 얻는다. 따라서 통상의 미생물을 사용하여 발효 배양을 행하는 경우에는, 전분 등의 다당류는 발효기질로서 적절하다고 할 수 있는 것은 아니다. 예를 들면 판토에아·아글로메란스(Pantoea agglomerans)에 관해서는 전분을 분해할 수 없다고 기재하는 문헌이 있다(비특허문헌 4).
본 발명자들은 소맥분의 수추출물에는 면역을 부활화 하는 유효한 성분이 포함되어 있는 것을 지금까지 밝혀 왔다(비특허문헌 5). 또, 곡물(소맥, 쌀), 해초(미역, 다시마, 톳, 김 등), 콩류(콩, 팥)에도 유효한 성분이 포함되어 있는 것을 밝혀 왔다(비특허문헌 6). 이 생물 활성으로서는, 인간이나 마우스의 여러 질환(당뇨병, 고지질혈증, 아토피성 피부염, 암) 등의 예방 효과가 있는 것, 어류나 갑각류, 새의 감염 예방에 유효한 것을 찾아냈다(특허문헌 1, 비특허문헌 1). 그러나, 소맥분 수추출물에서, 상기의 효과를 기대하기 위해서는 다량의 소맥분의 섭취가 필요하게 된다.
한편, 판토에아·아글로메란스는 소맥에 공생하는 세균으로, 소맥에 인, 질소의 공급을 행하므로 소맥 재배에 유용한 균이라고 판단된다(비특허문헌 7). 또, 판토에아·아글로메란스는 소맥뿐만 아니라, 배나 사과의 과실의 표피에 부착되어 있고, 이 균이 부착되어 있으면 곰팡이에 의한 썩음병을 예방할 수 있는 것이 유럽에 서 밝혀져, 본 균을 무독이고, 자연친화적인 방곰팡이제로서 이용하는 개발이 진행되고 있다(비특허문헌 8). 또한, 공생이란 「다른 종의 생물이 함께 생활하고 있는 현상. 이 경우, 서로 행동적 또는 생리적으로 긴밀한 연결을 정상적으로 유지하고 있는 것을 의미하는 것이 보통이다. 따라서, 동일한 생식장소에 살고 있는 것 만으로는 이 개념에 들어가지는 못한다. 공생자에게 있어서의 생활상의 의미·필수성, 관계의 지속성, 공생자의 공간적인 위치관계 등에 따라, 공생은 여러 가지로 유별·구별되고 있다. 보통은, 공생자의 생활상의 이익·불이익의 유무에 기준을 두고, 공생을 상리(相利) 공생, 편리(片利) 공생, 기생의 3가지로 크게 구분한다.」이라고 정의되어 있다(비특허문헌 9). 판토에아·아글로메란스의 경우, 소맥으로부터는 그 산지, 종류를 불문하고 분리되고 있는(비특허문헌 5) 것, 또 과실로부터도 분리되는 것(비특허문헌 10.11)을 알고 있다. 판토에아·아글로메란스는 항생 물질을 생산하여(비특허문헌 12, 13) 곰팡이나 다른 세균으로부터 식물을 보호하는 것, 인, 질소 고정을 행하는 것(비특허문헌 7)이 보고되어 있다. 따라서, 판토에아·아글로메란스는 식물에 항상 존재하고, 식물에 유익한 역할을 담당한다고 판단되고, 「기생」이 아니라 「공생」으로 파악할 수 있다. 또한, 본 발명자들은 판토에아·아글로메란스에는 면역을 부활화 하는 유효한 성분이 포함되어 있는 것을 지금까지 밝혀 왔다. 또, 이 균으로부터 얻은 저분자량 리포 다당은 인간이나 마우스의 여러 질환(당뇨병, 고지질혈증, 아토피성 피부염, 암) 등의 예방 효과가 있는 것, 어류나 갑각류, 새의 감염 예방에 유효한 것을 발견했다(특허문헌 3, 비특허문헌 2).
이러한 상황에서 본 발명자들은, 안전 또한 저렴한 면역부활물질을 제조하는 방법으로서, 판토에아·아글로메란스를 사용한 식물발효 엑기스의 제조방법을 확립하는 것을 착상했다. 즉, (1) 배양액에 포함되는 단백질의 주성분을 식물 유래의 것으로 한 배지를 사용하여 판토에아·아글로메란스를 저코스트로 배양하는 동시에 식물성분을 발효시키고, (2) 식물에 포함되는 판토에아·아글로메란스 또는 발효에 의한 생산물을 많이 포함하는 소재를 조제하고, 이것을 사용함으로써 인간을 포함하는 포유동물(구체적으로는 가축, 애완동물 등), 조류(구체적으로는 양계, 애완 조류 등), 양서류, 파충류, 어류(구체적으로는, 수산 양식어, 애완 어류 등), 무척추 동물에 이르는 의약품, 동물용 의약품, 의약부외품, 화장품, 기능성 식품, 식품, 사료 및 목욕용제를 개발하는 것에 착안했다. 그러나, 식물에 공생하고 있는 미생물이 즉시 식물성분 예를 들면 식용식물에 유래하는 소재를 발효기질로서 이 용할 수 있는 것을 의미하는 것은 아니다. 예를 들면 소맥분은 소맥립 속에 존재하는 전분질 등의 복합 유기물질이지만, 소맥 공생 미생물인 판토에아·아글로메란스와는 외피를 사이에 두고 격리 되어 있어 직접적인 접점은 없는 것이기 때문에, 판토에아·아글로메란스를 소맥분을 사용하여 발효 배양할 수 있는지 아닌지는 단순히 미생물이 소맥에 공생하고 있는 것과의 관련으로 명확하게 할 수 있는 것은 아니고, 사실 판토에아·아글로메란스가 소맥분을 자화할 수 있는 것은 지금까지 알려져 있지 않고, 전혀 보고가 없다. 반대로, 지금까지 공지인 사실에 기초하면 판토에아·아글로메란스는 소맥 전분을 발효기질로서 이용할 수 없다고 되어 있다.
그런데, 식물에 포함되어 있는 당질은 전분 상태에서 유지되는 경우가 많고, 이것은 식용 식물, 특히 곡류에서 현저하다. 통상 미생물은 전분을 자화(資化)하는 기능은 높은 것은 아니다. 이 점에 관해, 일부의 통성 그램 음성균이 전분을 발효할 수 있는 것이 알려져 있다. 예를 들면, 에르위니아(Erwinia)는 전분을 자화할 수 있는 것이 알려져 있다. 그러나 이 발효기술은, 전분을 발효할 때에, 별도로 최적 배지 등에서 대량으로 배양한 미생물을 첨가함으로써, 미생물이 갖는 아밀라제 활성을 이용하는 것이 의도되어 있는 것으로, 배양 그 자체를 전분을 사용하여 행함과 동시에 아울러 발효를 행하는 형태는 지금까지 착상되지 않았다. 공지기술은, 단순히 미생물이 갖는 아밀라제 활성을 효과적으로 이용하는 것이 목적으로 되는 발효라고 파악할 수 있는 것으로서, 전분을 기질로 한 미생물의 증식까지가 예정되어 있는 것은 아니다. 한편 본 발명의 실시예에서는, 전분을 유일한 탄소원으로 함으로써 미생물의 증식에 더하여 발효산물이 생산되는 것이 개시되어 있는 것으로, 본 실시예는 단순한 발효가 아니라 발효 배양인 점이 공지기술과 크게 상이하다.
다른 한편, 가령, 어떤 미생물이 전분을 분해하는 기능을 보유하고 있었다고 해도, 이것이 즉시 이 미생물이 전분을 기질로 하여 증식할 수 있는 것을 의미하는 것은 아니다. 배양시에, 미생물의 증식도 목적으로 하는 경우에는, 배양 출발시점에 첨가하는 미생물량은 극히 소량이다. 이러한 경우에는 가령 미생물이 아밀라제 활성을 약간 가지고 있었다고 해도, 이 활성은 기질을 충분하게 분해하기 위해서는 너무나도 미약하여, 미생물의 증식은 달성되지 않는다. 사실 미생물의 대부분은 전분을 유일한 탄소원으로 하여 증식할 수는 없다고 여겨지고 있다.
그렇지만 만약, 판토에아·아글로메란스를 사용하고, 소맥분을 주성분으로서 포함하는 배지에서 발효 및 배양시켜, 면역부활물질을 많이 포함하는 식물발효 엑기스(이하, 판토에아·아글로메란스를 사용하고, 소맥분을 주성분으로서 포함하는 배지에서 발효 및 배양시켜서 얻은 식물발효 엑기스를 소맥 발효 엑기스라고 부른다.)를 저코스트로 제조할 수 있으면, 구체적인 예로서 인간, 축산·수산 양식의 분야에서 환경친화적이고, 안전하고 감염 예방에 유효한 의약품, 동물용 의약품, 의약부외품, 화장품, 식품, 기능성 식품, 사료 및 목욕용제 등을 제공할 수 있을 것이다. 본 발명은 이상을 배경으로 하고, 판토에아·아글로메란스가 소맥분을 기질로서 생육하는 것을 새롭게 발견한 것을 계기로 하여 수많은 실험을 거듭하여 완성되어진 것이다.
본 발명이 제공하는 식물발효 엑기스란 발효 및 배양을 행하여 얻어지는 배 양액 그 자체, 이것을 고액분리 하여 얻어지는 액체 성분, 및 고액분리 하여 얻어지는 고체 성분에 추출과정을 더하여 얻어지는 액체 성분 등을 총칭하는 명칭이다. 즉, 식물발효 엑기스는 본 발명에 따른 발효 및 배양 방법에 의해 얻어지는 배양액 그 자체, 및, 그 배양액의 전부 또는 일부분을 사용하여 조제할 수 있는 엑기스를 모두 포함하고 있다. 당연하지만 식물발효 엑기스는 건조하여 식물발효 엑기스 분말로서 이용할 수도 있고, 식물발효 엑기스 분말을 임의의 농도로 적당한 용액 예를 들면 생리식염수가 든 인산 완충액 등에 용해하여 이용할 수도 있다.
특허문헌 1: 일본 특개평3-218466호 공보
특허문헌 2: 일본 특개평8-198902호 공보
특허문헌 3: WO 00/57719
특허문헌 4: 일본 특개평6-78756호 공보
특허문헌 5: 일본 특개평4-187640호 공보
특허문헌 6: 일본 특개평4-49240호 공보
특허문헌 7: 일본 특개평4-99481호 공보
특허문헌 8: 일본 특개평5-155778호 공보
비특허문헌 1: 이나가와 히로유키 외 8명, "Biotherapy", 1991년, 제5권, 4호, p617-621
비특허문헌 2: Soma, G-I. 외 1명, "Tumor Necrosis Factor: Molecular and Cellular Biology and Clinical Revevance", 1993년, P203-220
비특허문헌 3: 야마다 쯔네오 외 6명, "생물학사전 제3판", 1983년, p1021
비특허문헌 4: Gavini, F. 외 6명, "lnt. J. Syst. Bacteriol.", 1989년, 제39권, p337-345
비특허문헌 5: Nishizawa, T. 외 7명, "Chem. Pharm. Bull.", 1992년, 제40권, 2호, p479-483
비특허문헌 6: Inagawa, H. 외 8명, "Chem. Pharm. Bull.", 1992년, 제40권, 4호, P994-997
비특허문헌 7: Neilson, A, H. "J. Appl. Bacteriol.", 1979년, 제46권, 3호, p483-491
비특허문헌 8: Nunes, C. 외 3명, "Int. J. Food Microbiol.", 2001년, 제70권, 1,2합병호, P53-61
비특허문헌 9: 야마다 쯔네오 외 6명, "생물학사전 제3판", 1983년, p287-288
비특허문헌 10: Nunes, C. 외 4명, "J. Appl. Microbiol.", 2002년, 제92권, 2호, p247-255
비특허문헌 11: Asis, C. A. Jr. 외 1명, "Lett. Appl, Microbiol. "2004년, 제38권, 1호, p19-23
비특허문헌 12: Vanneste, J. L. 외 3명, "J. Bacteriol." 1992년, 제174권, 9호, p2785-2796
비특허문헌 13: Kearns, L.P. 외 1명, "Appl Environ Microbiol." 1998년, 제64권, 5호, p1837-1844
발명이 해결하고자 하는 과제
전술한 바와 같이, 면역부활물질은 식물 자신이 함유하는 경우와 식물에 공생하는 미생물의 구성성분 또는 생산물인 경우가 많다. 따라서, 섭취해도 안전한 천연물 유래의 면역부활물질을 얻고자 한다면, 식용식물 자신으로부터 성분을 추출하거나(예를 들면, 리물루스 양성 당지질, 특허문헌 1) 식용식물에 공생하는 미생물을 효율적으로 배양하여 그 구성성분 또는 생산물을 취득하는 것(예를 들면 저분자량 리포 다당, 특허문헌 2)이 유용하다. 그러나, 식용식물에 포함되는 면역부활물질의 함량은 적고, 음식에 의해 면역부활 효과를 기대하기 위해서는 극히 다량의 식품을 먹어야 하고, 또 면역부활물질의 섭취량을 적정하게 유지하는 것이 일반적으로는 용이하지 않기 때문에, 효과를 기대할 수 없다. 더욱이 식물로부터 추출하여 식품이나 약제로서 이용하는 경우에도 큰 액수의 비용이 들어 실용성이 부족하다.
한편 식물에 공생하는 미생물에 주목하면 예를 들면, 소맥공생 세균인 판토에아·아글로메란스는 면역부활에 유효한 저분자량 리포 다당을 구성성분으로서 포함하고 있다. 그러나 지금까지 저분자량 리포 다당을 추출하기 위해서는, 배양액에 포함되는 단백질의 주성분이 동물 유래의 것, 예를 들면 NZ 아민이나 트립톤이나 카사미노산 등 고가인 배양액을 사용하여 판토에아·아글로메란스를 배양할 필요가 있었다. 따라서, 범용성이 높은 면역부활물질로서, 저렴하게 공급하는 것이 곤란하고, 동시에 BSE 타동물 유래의 미지의 유해 물질이 혼재되어 갈 가능성을 부정할 수 없었다.
상기 문제점을 감안하여, 본 발명은 안전한 소재를 사용하여 저렴하게 효율적으로 면역부활물질을 얻을 수 있는 발효 및 배양방법, 이 방법에 의해 얻어지는 식물발효 엑기스, 이 식물발효 엑기스로부터 얻어지는 식물발효 엑기스 분말 및 이 식물발효 엑기스 분말이 배합되어 있는 식물발효 엑기스 배합물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
발명을 해결하기 위한 수단
본 발명의 발효 및 배양방법은, 식용식물에 유래하는 소재를 오로지 식물에 공생하는 통성 혐기성 그램 음성균에 의해 발효시키고, 동시에 이 통성 혐기성 그램 음성균을 배양하는 것을 특징으로 한다.
또, 탄소원으로서 전분을 상기 통성 혐기성 그램 음성균에 의해 발효시킴으로써, 단순한 과정으로 발효 및 배양을 할 수 있다.
상기 통성 혐기성 그램 음성균은 통성 혐기성 간균인 것이 바람직하다.
상기 통성 혐기성 간균은 장내세균과에 속하는 것이 바람직하다.
또, 상기 통성 혐기성 간균은 판토에아속, 세라티아속, 또는 엔테로박터속에 속하는 것이 바람직하다.
또, 상기 통성 혐기성 간균은 판토에아·아글로메란스이므로, 전분을 탄소원으로 할 수 있다.
또, 상기 식용식물은 곡물, 해초, 콩류, 또는 이것들의 혼합물인 것이 바람직하다.
또, 상기 곡물에 유래하는 소재는, 소맥분, 미분, 밀기울분, 쌀겨, 또는 술지게미인 것이 바람직하다. 특히, 소맥분은 단백질원으로서 글루텐을 포함하므로, 동물 유래의 소재를 사용하지 않아도 효율적으로 발효 및 배양을 할 수 있다.
또, 상기 해초에 유래하는 소재는 미역분, 미역귀다리분(미역의 포자엽), 또는 다시마분인 것이 바람직하다.
또, 상기 콩류에 유래하는 소재는 비지이므로, 단백질을 다량으로 포함하기 때문에 동물 유래의 소재를 사용하지 않아도 효율적으로 발효 및 배양을 할 수 있다.
또, 본 발명의 식물발효 엑기스는 상기 발효 및 배양방법에 의해 얻어지는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명의 식물발효 엑기스 분말은 상기 식물발효 엑기스로부터 얻어지는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명의 식물발효 엑기스 배합물은 상기 식물발효 엑기스 또는 식물발효 엑기스 분말이 배합되어 있는 것을 특징으로 한다.
또, 상기 식물발효 엑기스 배합물은 의약품, 동물용 의약품, 의약부외품, 화장품, 식품, 기능성 식품, 사료, 또는 목욕용제 이어도 된다.
또, 상기 식물발효 엑기스는 이하의 이화학적 성질을 나타내는 것이 바람직하다.
폴리믹신 B 존재하에서도 매크로파지 활성화 능력을 나타낸다. 또 상기 식물발효 엑기스는 면역부활 효과를 갖는다.
발명의 효과
본 발명에 의하면, 동물 유래의 성분을 포함하지 않는 배지에서 배양할 수 있으므로, 동물성분 유래의 불순물의 혼입의 문제가 없으므로, 예를 들면 BSE나 미지의 유해 물질 혼입의 우려가 없고, 안전성이 높고, 저렴하게 다방면의 용도에 대응하는 것이 가능한 식물발효 엑기스의 제조방법이 제공되어, 안전하고, 저렴하게 면역부활물질 함유 식물발효 엑기스 또는 식물발효 엑기스 분말을 제조할 수 있고, 또한 이 배양액, 면역부활물질 및 엑기스 및 엑기스 분말, 게다가 이 엑기스 또는 엑기스 분말을 배합한 의약품, 동물용 의약품, 의약부외품, 화장품, 식품, 기능성 식품, 사료 및 목욕용제 등을 제공할 수 있다.
식용식물에 유래하는 소재를 오로지 식물에 공생하는 통성 혐기성 그램 음성균에 의해 발효시키고, 동시에 이 통성 혐기성 그램 음성균을 배양한다고 하는 단순한 과정으로 발효 및 배양을 할 수 있는 것은, 지금까지 착상도 되어 있지 않고, 지금까지의 발효기술의 지견으로부터 용이하게 추찰되는 사실이 아니다.
또, 어떤 물질이 면역부활 효과를 나타내는 지표로서 매크로파지로부터 TNF가 생산되는지 아닌지(TNF 유도 활성)를 사용할 수 있다. 또한 TNF 생산량에 의해 면역부활 효과를 정량화할 수 있다. 그래서, 소맥분 유래의 리물루스 양성 식물 당지질, 판토에아·아글로메란스 유래의 저분자량 리포 다당을 사용하여 매크로파지로부터의 TNF 생산을 검토하면, 소맥분 유래의 리물루스 양성 식물 당지질, 판토에아·아글로메란스 유래의 저분자량 리포 다당에서는 모두 폴리믹신 B처리에 의해, 매크로파지로부터 TNF가 생산되지 않게 되지만, 본 발명의 식물발효 엑기스에서는 상기와 같은 처리를 행해도 매크로파지로부터 TNF가 생산되는 것을 많은 실시예에서 나타냈다. 이것은 발효배양을 행한 결과 얻어지는 본 발명의 식물발효 엑기스가, 그 소재가 된 식물자신, 및, 발효에 사용한 미생물 자신의 구성성분 각각에 의한 면역부활 효과와는 질적으로 상이한 면역부활 효과를 갖는 것을 나타낸다.
도 1은 소맥발효 엑기스가 든 사료에 의한 잉어 헤르페스 발증 억제효과를 도시하는 도면이다.
발명을 실시하기 위한 최량의 형태
이하, 본 발명의 바람직한 실시형태에 대해 상세하게 설명한다.
I: 판토에아·아글로메란스를 사용한 식물발효 엑기스의 제조방법의 요점
본건에 있어서, 본 발명자들은 판토에아·아글로메란스가 전분을 직접 탄소원으로서 생육 가능한 것을 처음으로 발견하고, 판토에아·아글로메란스를 사용한 발효 및 배양 생산물로서의 면역부활물질을 많이 포함하는 소맥발효 엑기스를 저렴하게 제조하는 방법을 발명했다. 이것에 의해, 구체적인 예로서 인간, 축산·수산 양식의 분야에서 환경친화적이고, 안전하여 감염 예방에 유효한 의약부외품, 화장품, 식품, 기능성 식품, 사료를 제공할 수 있다.
1: 판토에아·아글로메란스의 분리
소맥분을 물에 현탁하고, 상청액을 L 브로스 한천배지에 넓게 바르고 배양을 행하면, 미생물의 콜로니가 출현한다. 이들 콜로니를 정법으로 미생물의 분류를 행한다. 예를 들면, 그램 염색 음성, 글루코스 혐기적 대사반응 양성, 옥시다제 활성 음성의 콜로니를 선택하고, 또한, ID 테스트·EB-20(닛스이제약) 등을 사용하여, 스탠다드의 판토에아·아글로메란스와 동일한 성질을 갖는 것을 선택한다. 스탠다드가 되는 판토에아·아글로메란스는 이화학연구소 생물기반연구부 미생물계통 보존시설로부터 입수할 수 있다(비특허문헌 4). 이하의 설명에서, 백분률의 표시는 특별히 기재하지 않는 한, 중량에 의한 값이다.
2: 면역부활 활성 평가
본 실시형태에서는 소맥발효 엑기스가 나타내는 면역부활 작용의 지표로서, 매크로파지 활성화 능력을 매크로파지로부터의 TNF 생산으로 평가했다.
3: 판토에아·아글로메란스 유래 저분자 리포 다당
또, 판토에아·아글로메란스를 사용한 발효 및 배양에 의해, 면역 부활하는 유효성분의 하나로서 판토에아·아글로메란스 유래의 저분자량 리포 다당의 함유도 기대된다. 저분자량 리포 다당은 범용되고 있는 고분자량형의 리포 다당(이하 통상의 리포 다당)에 비교하여 극히 안전성이 높고, 또한 생물 활성도 일반적인 리포 다당에 비해 우수하다. 그래서, 저분자량 리포 다당 함량을 측정했다. 저분자량 리포 다당에 대해서는 특허문헌 2에 상세히 기술되어 있다. 또한, 본 실시예는 소맥발효 엑기스에 관한 것이지만, 본 발명은 식물이 소맥, 면역부활물질이 저분자량 리포 다당에 한정되는 것을 의미하는 것은 아니다.
그런데 판토에아·아글로메란스는 공지의 방법을 사용하여 배양할 수 있다.(특허문헌 2, 비특허문헌 8) 그러나 공지의 배양액에 포함되는 단백질의 주성분은 동물 유래의 것으로, 배지의 코스트가 높다. 또한, 동물에게 예를 들면 기능성 식품이나 기능성 사료를 주거나, 또는 경피적으로 사용하는 경우에, BSE로 대표되는 것과 같이 동물 유래의 불순물의 혼입이 음식의 안전성 면에서 문제가 되는 것, 게다가 제조 코스트가 고액이 되어 실용성의 면에서 보면 충분한 방법이 아니다. 그래서 본 발명자들은, 안전하고, 저렴한 면역부활 작용을 갖는 천연물을 얻기 위해서 예의 연구를 진행한 결과, 소맥발효 엑기스를 얻기 위해서 판토에아·아글로메란스를 사용하는 발효 및 배양방법을 실시예에 나타내는 바와 같이 완성했다.
배양액에 포함되는 단백질의 주성분은, 종래는 동물 유래의 것이었지만, 본 발명은 이을 식물 유래의 것으로 했다. 통상, 배양액에는 우유 유래의 카세인 등의 단백질을 소화효소로 분해한 산물을 첨가한다. 이 경우에는 배지 1l당의 원가는 약 250원이 되지만, 이것을 소맥분으로 대체할 수 있으면 원가는 약 16엔이 된다. 지금까지 식물과 그것에 공생하는 미생물 양쪽의 면역부활 활성을 고농도화 하면서 상승적으로 융합화 할 목적에서의 발효는 행하여진 적이 없다.
이하에 실시예로서 발명 내용을 상세히 기술하는데, 본 발명은 실시예 기재의 미생물로서 판토에아·아글로메란스, 식용식물로서 소맥 또는 소재로서 소맥분에 한정된 것은 아니고, 면역부활물질을 다량으로 포함하는 다른 식용식물로부터 통상의 공정을 거쳐서 얻어지는 소재, 예를 들면 미역에도 적응할 수 있고, 곡물(곡물에 유래하는 소재인 소맥분, 미분, 밀기울분, 쌀겨, 또는 술지게미 등을 포함함), 해초(해초에 유래하는 소재인 미역분, 미역귀다리분, 또는 다시마분 등을 포함함), 콩류(콩류에 유래하는 소재인 비지 등을 포함함)에도 적응할 수 있다. 이 들 식물에는 단백질, 당류가 포함되어 있는 것은 잘 알려져 있고, 판토에아·아글로메란스를 사용하는 발효 및 배양에 적응할 수 있다. 또, 이들 식물에 상재성 세균, 예를 들면 세라티아속, 엔테로박터속이 공생하고 있는 것은 널리 알려진 바 이고(비특허문헌 4), 발효에 사용하는 미생물도 그들 식물에 공생하는 통성 혐기성 그램 음성균에도 적응할 수 있는 것은 말할 필요도 없다.
II: 발명의 중요한 점의 정리
(1) 소맥, 그 공생세균인 판토에아·아글로메란스, 및 그것들의 조합에 의한 발효산물의 융합에 의해 만들어지는 면역부활 작용을 갖는 물질로서의 소맥발효 엑기스 그 자체가 신규. 단, 본 발명은 이것에 한정되는 것은 아니다.
(2) 그램 음성균의 판토에아·아글로메란스를 사용하여 식물발효 엑기스를 제조하는 것이 신규하다. 단, 본 발명은 이것에 한정되는 것은 아니다.
III: 소맥발효 엑기스의 구체적 제조방법
(1) 판토에아·아글로메란스는 소맥분으로부터 정법에 따라 단리한다(비특허문헌 1). 또한, 한번, 단리 분류하면, 이 균을 50% 글리세롤 등으로 보존이 가능하다.
(2) 0.05~5%의 식염, 0,005~1몰의 인산완충액, 또는, 혼합염류 용액(0.5~10%의 인산제2나트륨, 0.05~5%의 인산제1칼륨, 0.05에서 5%의 염화나트륨, 0.05~5%의 염화암모늄) 등을 조제한다.
(3) 0.05~10%의 농도가 되도록 소맥분을 물에 현탁한다.
(4) 0.2~3몰의 염화마그네슘 용액을 조제한다.
(5) 0.2~3몰의 염화칼슘 용액을 조제한다.
(6) 2에서 5를 경우에 따라서는 오토클레이브 등에서 멸균 조작을 행한다.
(7) 2에서 5를 적당량 혼합하고, 물을 가하고, 0.1~5%의 소맥분을 포함하는 현탁액으로 한다. 경우에 따라서는 알칼리 용액이나 산성용액을 가하고 pH를 중성으로 한다.
(8) 7에 경우에 따라서는 배지 1리터당 10~50000단위 아밀라제를 가하고 10℃에서부터 80℃에서 1~24시간 보온하여, 소맥 전분을 부분 소화시키는 것도 좋다.
(9) 7 내지 8에 1에서 단리 밑 판토에아·아글로메란스를 첨가한다.
(10) 9를 1~40℃에서 발효시킨다. 경우에 따라서는 정치나 진탕 해도 좋다. 또, 수시간 걸러 교반을 행하는 것도 좋다.
(11) 10을 6시간에서 1주일 발효시킨다. 발효가 진행되면 소맥분 수용액이 황색으로 착색되어 간다.
(12) 11의 발효 도중에 적당하게 알칼리 용액을 첨가하고, pH를 중성으로 하는 것이나, 소맥분 현탁액이나 무기염류를 첨가하는 것도 좋다.
(13) 발효를 완료시키고, 원심분리(1000~5000rpm, 10~60분간) 등의 조작에 의해 고형분을 침전물로서 회수한다. 침전물은 소맥분 발효물로서, 그대로 사료로서 또는 사료에 섞는 원료로서 사용할 수도 있다.
(14) 소맥발효 엑기스를 제조하는 경우는, 13을 물 또는 염류 완충액 등으로 현탁하고, 이것을 80~140℃에서 10분부터 6시간 가열처리 한다. 또한, 이것을 원심분리나 여과함으로써 고형분을 제거해도 좋다. 제거한 침전에 다시 물이나 완충 액을 가하고, 가열추출을 수회 반복해도 좋다.
(15) 14에서 제조한 소맥발효 엑기스는 용도에 따라서는 더욱 간편한 정제를 추가할 수 있다. 즉, 14의 엑기스에 최종농도 0.05~1몰/l가 되도록 염화나트륨 등의 염을 가하고, 그 후에, 에탄올 등의 용매를 엑기스의 1~3배량 첨가하면 침전이 생긴다. 이것을 원심분리기 등으로 회수해도 좋다. 이 침전을 에탄올 등의 용매로 더 세정해도 좋다. 이것을 건조시키면 분말로 만들 수도 있다.
A. 소맥발효 엑기스의 제조방법에 관련되는 실시예
실시예 1
판토에아·아글로메란스의 소맥 배지에서의 생육 시험
소맥분을 탄소원으로서 소맥 상재성의 공생세균인 판토에아·아글로메란스가 증식 가능한지, 확인하기 위해서, 소맥분 고형배지에서의 판토에아·아글로메란스의 생육을 조사했다.
(1) 0.5% 소맥분을 탄소원으로서 포함하는 M9 한천배지를 작성했다.
(2) LB 한천배지로부터, 판토에아·아글로메란스 콜로니를 1개 긁어 취하고, PBS lml에 현탁했다. 이것을 PBS로 10배에서 10000배까지 단계적으로 더 희석하고, 각각의 0.1ml를 1의 M9 한천배지에 뿌렸다.
(3) 37℃에서 6일간 배양한 후, 콜로니의 출현을 관찰했다. 그 결과, 10000배 희석의 0.1ml를 뿌린 샤알레에서 약 300개의 콜로니가 관찰되었다.
이것으로부터, 판토에아·아글로메란스는 소맥을 탄소원으로서 이용할 수 있는 것이 확인되었다.
실시예 2
소맥발효 엑기스의 제조
(1) 소맥분 0.5g에 증류수 5ml를 가하여 현탁하고, 상청액을 L 브로스 한천배지에 0.1ml 첨가하고, 37℃에서 밤새 배양했다.
(2) 황색의 콜로니를 단리하고, 통상의 방법으로 균을 동정하고, 판토에아·아글로메란스를 단리하고, 이것을 50% 글리세롤 용액에 현탁하고, 냉동고에 보존했다. 이 저장의 일부를 LB 한천배지에 취하고, 37℃에 방치하여 판토에아·아글로메란스의 독립 콜로니를 작성했다.
(3) 2리터의 삼각 플라스크에 인산제2나트륨·7결정수 64g, 인산제1칼륨 15g, 염화나트륨 2.5g, 염화암모늄 5g을 취하고, 정제수를 가하여 전량을 1리터로 했다(무기염류 혼합용액). 염화마그네슘·2결정수 13,1g을 취하고, 정제수를 가하여 전량을 100ml로 했다(염화마그네슘 용액). 염화칼슘 11.1g을 취하고, 정제수를 가하여 전량을 100ml로 했다(염화칼슘 용액). 4리터의 정제수를 5리터의 삼각 플라스크에 넣었다(정제수). 상기의 용액, 정제수는 모두 오토클레이브(TOMY BS-325, 120℃, 20분) 하여 멸균 처리를 행했다.
(4) 1리터의 삼각 플라스크에 소맥분(닛신세훈) 24g을 취하고, 정제수를 가하여 전량 600ml로 했다. 이것을 마찬가지로 오토클레이브 한 후, α-아밀라제(SIGMA, Bacillus, 단백질 1mg당 1500-3000 단위의 효소 활성) 3mg을 가하고, 65℃의 수욕에서 4~12시간 가열했다(소맥분 아밀라제 처리액).
(5) 조정한 용액 등을 각각 표 1에 나타낸 양을 무균적으로 멸균한 3리터의 판구 플라스크에 넣고 소맥분 배지로 했다.
Figure 112006020853200-PCT00001
(6) 종균의 조제. 미리 동일한 조성으로 조제해 둔 5의 소맥분 배지 10ml에, 2에서 소맥분으로부터 단리 해 둔 판토에아·아글로메란스의 콜로니를 1개 가하고 37℃에서 밤새(12~15 시간) 천천히 교반하여, 발효시켜서, 소맥분 발효용의 종균을 준비했다.
(7) 5에 6을 전량 가하고 37℃에서 교반하면서, 20~30시간 발효시켰다. 발효액의 pH를 측정하고, 암모니아수를 가하여, pH를 7로 조정했다. 이것에, 150ml의 소맥분 아밀라제 처리액과 무기염류 혼합용액 37.5ml를 무균적으로 첨가하고, 마찬가지로 발효를 20~30시간 행했다. 동일한 조작을 더욱, 또 한번 반복하여, 합계로 65에서 80시간 발효시켰다.
(8) 7의 소맥분 발효용액을 원심분리(히타치, 고속냉각원심기 SCR-20B, 5000rpm, 20분간, 4℃)하고, 침전을 회수했다.
(9) 8의 침전에 인산 완충액을 가하고 현탁하고, 전량을 100ml로 하고, 33ml씩 50ml 원심관에 옮기고, 비등수욕 속에서 30분간 가열 추출했다. 가열 종료후, 실온까지 냉각하고, 본 액을 원심분리(히타치, 고속냉각원심기 SCR-20B, 10000rpm, 20분간, 20℃) 했다. 원심 후, 담황색의 상청액 82ml를 데칸트로 다른 용기에 회수했다.
(10) 9의 상청액 80ml에 8.9ml의 5몰 염화나트륨 용액을 첨가했다. 이것에 178ml의 에탄올을 첨가하자 백탁이 생겼다. 이것을, 냉동고(190℃)에서 밤새 방치 후, 본액을 원심분리(히타치, 고속냉각원심기 SCR-20B, 10000rpm, 20분간, 4℃) 했다. 상청액을 제거하고 침전을 얻었다. 침전에 냉각한 10ml의 70% 에탄올을 가하고, 현탁한 후, 본액을 원심분리(히타치, 고속냉각원심기 SCR-20B, 10000rpm, 20분간, 20℃) 하고, 침전을 세정했다. 침전을 바람에 건조하고, 증류수에 용해하여, 11ml의 소맥발효 엑기스 용액을 얻었다.
(11) 건조중량의 측정: 0.3ml를 미리 칭량한 1.5ml 플라스틱 튜브에 옮기고, 동결후, 동결건조기에서, 동결건조를 행한 결과 7.45mg으로 되었다. 따라서, 10의 소맥발효 엑기스의 건조중량은 용액 1ml당 24.8mg, 전량 11ml당 273mg이었다.
(12) 동일한 방법으로 독립적으로 8회의 소맥발효 엑기스를 제조하고, 각각을 브래드포드법에 의한 단백질 정량 BSA를 표준 단백질로 하여, 각 샘플의 단백질량을 측정했다. 비교 대상으로서 정제한 리물루스 양성 당지질(특허문헌 1)과 저분자 리포 다당(특허문헌 2)을 사용했다. 측정결과를 표 2에 나타냈다. 표 2~5, 7의 소맥발효 엑기스에 관한 수치는 상기 10에서 얻어지는 소맥발효 엑기스를 건조하여 얻어진 중량의 1g당의 함유량을 mg으로 표시했다.
(13) 당함량의 측정: 페놀 황산법에 의해 글루코스를 표준당으로 하여 측정했다. 측정결과를 표 3에 나타냈다.
(14) 핵산함유량의 측정: 100배 희석한 샘플의 210~340nm의 흡광도 측정을 행했다. 260nm의 흡광도로부터 320nm의 흡광도를 뺀 값과, DNA로서의 흡광도 1OD당, 50μg으로 한 최대 함유량을 산출했다. 측정결과를 표 4에 나타냈다.
(15) 리물루스 어세이에 의한 리물루스 활성물질 함유량의 측정: 리물루스 활성물질량은 세카가쿠고교의 톡시 칼라 시스템을 사용하여, 표준 리물루스 활성물질로서, 세카가쿠고교 Et-1을 사용했다. 측정결과를 표 5에 나타냈다.
(16) 요오드 전분 반응: 요오드시약 1N(요오드 12.7g에 요오드화 칼륨 25g과 물 10ml를 가하고, 잘 섞은 후, 물을 가하여 100ml로 만든 것)을 사용시, 물로 200배 희석하고, 이것을, 미리 1mg/ml의 농도로 용해시킨 소맥발효 엑기스 0.1ml에 5μl 가하고 잘 섞는다. 소맥발효 엑기스는 즉시 용액이 담자색으로부터 농자색의 발색을 나타냈다(양성). 리물루스 양성 당지질, 저분자량 리포 다당은 동일한 조작에서 발색은 확인되지 않는다(음성). 이상의 결과를 표 6에 정리했다.
상기 결과로 밝혀진 바와 같이, 소맥발효 엑기스는 리물루스 양성 당지질, 저분자량 리포 다당과는 단백질 함량, 당 함량, 핵산 함량(리물루스 양성 당지질은 데이터가 없으므로 제외함), 리물루스 활성물질 함량, 요오드 전분 반응의 모든 항목에서 상이한 것이 명백하므로, 본 물질이 신규한 것이 명확하다. 이상의 결과를 간단하게 표 7에 정리했다. 즉, 본 실시예의 식물발효 엑기스는 이하의 각각의 이화학적 성질을 나타내는 점에서, 리물루스 양성 당지질 및 저분자량 리포 다당과는 달리 신규한 것이다. 단백질 함량 5~15%, 당 함량 20~45%, 핵산 함량 10-35%, 및 리물루스 양성물질 함량 10~40%를 포함하고, 요오드 전분 반응에 양성이고, 폴리믹신 B 존재하에서도 매크로파지 활성화 능력을 나타낸다.
Figure 112006020853200-PCT00002
Figure 112006020853200-PCT00003
Figure 112006020853200-PCT00004
Figure 112006020853200-PCT00005
Figure 112006020853200-PCT00006
Figure 112006020853200-PCT00007
과소: 소맥발효 엑기스의 수치의 폭(평균±표준 편차)보다도 대폭 적은 값.
과다: 소맥발효 엑기스의 수치의 폭(평균±표준 편차)보다도 대폭 많은 값
실시예 3
소맥발효 엑기스의 면역부활 작용
48웰 플레이트에 인간 매크로파지로서 사용되는 급성 골수성 백혈병 세포주의 THP-1(1×106개/250μl: 10% 소 태아 혈청이 든 RPMI1640 배지)을 넣고, 미리 30분간 사전배양 했다. 각 샘플의 마지막 농도가 1~10000ng/ml이 되도록 배지 250μl(최종량 500μl)를 가했다. 샘플에 폴리믹신 B(12.5μg/ml)를 포함하는 군을 만들었다. 4시간 배양한 후, 배양 상청액과 세포를 회수했다. 상청액의 TNF 활성은 L-929 세포장해 시험에 의해 측정했다. 결과를 표 8에 나타낸다. 소맥발효 엑기스는 폴리믹신 B 존재하에서도 매크로파지로부터 TNF를 생산시켰지만, 저분자량 리포 다당 및 리물루스 양성 당지질은 폴리믹신 B 존재하에서는 매크로파지로부터 TNF를 생산할 수 없었다. 이것으로부터 소맥발효 엑기스는 저분자량 리포 다당이나 리물루스 양성 당지질과는 다른 생물활성을 갖는 것이 명확하다.
Figure 112006020853200-PCT00008
B.소맥발효 엑기스의 사료에의 응용 실시예
실시예 4
소맥발효 엑기스가 든 양계 시료(대규모 시험에 의한 브로일러 사육에 있어서의 폐사 억제효과)
실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 430μg/kg 함유하는 사료를 제작했다. 제공된 닭은 브로일러 실용계를 1군 약 5500-6000 마리로 사용했다. 대조시험 구분은 소맥발효 엑기스를 포함하지 않은 사료이다. 부화후 3주령에 소맥발효 엑기스가 든 먹이의 투여를 개시하여 7주령 까지 매일 투여했다. 사망 마리수를 매일 측정했다. 출하시에 기준에 미치지 못하는 닭은 폐기했다. 결과를 표 9에 나타낸다. 시험구(소맥발효 엑기스가 든 사료)는 제거율은 1.9%로 적고, 대조구에서는 3.3%에 달했다. 육성율은 시험구에서 98.1%가 되고, 대조구에서 96.7%가 되었으므로, 1.4%의 육성율의 향상이 보여졌다. 출하 실제 마리수와 제거 마리수를 시험구와 대조구에서 유의차 검정을 한 바 x2 검정에서 P<0.0001의 유의차가 보여졌다. 상기로부터 소맥발효 엑기스가 든 사료의 브로일러 사육에서의 감염 방제 효과가 나타났다.
Figure 112006020853200-PCT00009
실시예 5
소맥발효 엑기스가 든 양식어용 사료(방어 야외시험에 의한 감염 방제 효과)
실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스가 든 사료의 감염 방제 효과를 야외시험에서 1군당 약 5200 마리의 방어를 사육했다. 결과를 표 10에 나타냈다. 연쇄 구균에 의한 사망은 비투여 대조에서 4.8%에 달했다. 소맥발효 엑기스를 100μg/kg/일(체중 1kg, 1일당)을 섭취시킨 군(시험구)과, 비투여군(대조구)에서는, 소맥발효 엑기스 투여군이 유의적으로(P<0.00001) 사망율을 저하시키는 것이 확인되었다.
Figure 112006020853200-PCT00010
실시예 6
소맥발효 엑기스가 든 양식어용 사료(잉어 헤르페스증에 대한 감염 방제 효과)
(1) 잉어: 체중 70g의 보통 잉어를 사용했다. 시험은 1군 20마리로 행했다.
(2) 잉어 헤르페스 바이러스의 조정: 잉어 헤르페스 감염으로 사망한 잉어의 아기미 1g에 10ml의 행크스 밸런스드 솔트 솔루션(HBSS) 완충액을 가하고 균질화 하고, 0.45 미크론의 필터로 여과하고, 그 여과액을 바이러스 용액으로 했다.
(3) 잉어 헤르페스 바이러스의 감염: 상기 여과액을 600μl/100g 체중으로, 잉어의 복강 내에 주사했다.
(4) 소맥발효 엑기스 함유 사료의 작성: 시판 사료에 0, 5, 10, 20mg/kg 사료의 비율로 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 혼합하고, 작성했다.
(5) 사료 공급 방법: 체중당 1% 중량의 각각의 사료를 1일 1회 공급했다. 이것은, 소맥발효 엑기스량으로 환산하면, 각각, 0, 50, 100, 200μg/kg 체중/일에 상당한다.
(6) 실험: 소맥발효 엑기스 함유 사료를 1주간 공급한 후, 바이러스를 감염시키고, 그 후 10일간 소맥발효 엑기스 함유 사료를 공급했다. 바이러스 감염 조작후 10일간의 잉어의 생존율을 관찰했다. 그 결과를 도 1에 나타낸다.
소맥발효 엑기스 무첨가의 잉어에서는, 6일째까지 모든 잉어가 사망했다. 한편 소맥발효 엑기스 함유 사료를 공급한 군에서는, 감염 10일째에, 생존율은 모두 유의하게 증가하는 것이 보여졌다(카플란마이어법·로그 랭크 시험에서 위험율 0.01% 이하). 특히 소맥발효 엑기스를 100μg/kg 체중/일로 사료를 공급한 군에서는 65%의 생존율을 보였다.
C. 소맥발효 엑기스의 화장품·목욕제에의 응용 실시예
실시예 7
소맥발효 엑기스가 든 핸드 크림의 제조
표 11에 기재한 배합에서 지용성 기재 1의 연고에 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 10% 전후 첨가하고 혼합하여 연고를 얻었다.
Figure 112006020853200-PCT00011
실시예 8
소맥발효 엑기스가 든 보습 크림의 제조
1. 소맥발효 엑기스가 든 보습 크림 처방
사용성분을 표 12에 나타냈다. A조를 70℃에서 가열 용해하고, 이것에 1/4량의 정제수에 풀고 70℃에서 가열 용해한 B조와, 1/4량의 정제수에 풀고 70℃에서 가열 용해한 C조를 가하고, 호모지나이저로 충분히 혼합한 후 40℃까지 냉각하고, D조를 가하고 pH를 6.8까지 조정한 후, 나머지 정제수와 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 적당량 가하고, 충분히 혼합하여 유액을 얻는다. 또한, 소맥발효 엑기스는 5mg/ml이 되도록 미리 정제수에 용해해 두고, 유액 100g에 대해서는, 그 0.1ml를 첨가한다.
Figure 112006020853200-PCT00012
2. 소맥발효 엑기스가 든 보습 크림의 효과
본 크림을 남녀 43인에게 사용하게 하여 앙케이트 조사를 행했다. 그 결과, 보습효과에 대해 확실하게 효과가 있다고 응답한 사람이 18명, 약간 효과가 있다고 응답한 사람이 18명, 효과가 없다고 응답한 사람이 2명, 무기입이 5명 이었다(1표본 부호 검정: P<0.0001). 거친 피부 개선효과에 대해, 확실히 효과가 있어 좋다고 응답한 사람이 6명, 약간 효과가 있다고 응답한 사람이 13명, 효과가 없다고 응답한 사람은 0명, 무기입이 24명 이었다. (1표본 부호 검정: P<0.0001). 사용 후의 피부의 증상의 악화에 대해, 있다고 응답한 사람이 0명이었다. 또, 경미한 아토피성 증상을 갖는 4명에게 본 크림을 사용하게 하고 앙케이트 조사를 행한 바, 아토피성 피부염의 개선에 대해, 확실히 효과가 있다고 응답한 사람이 3명, 약간 효과가 있다고 응답한 사람이 1명 이었다(1표본 부호 검정: P<0.125). 그 밖에는, 여드름 자국의 치료가 빠르다고 하는 사람이 1명 있었다. 또, 본 크림을 9명의 남성에게 면도 후에 사용하게 하고 앙케이트 조사를 행한 바, 8명이 면도 후의 통증의 경감, 버스럭거림의 방지, 면도상처의 조기치유 등에 효과가 있었다고 응답했다(1표본 부호 검정: P<0.01). 또한 오십견(중년기의 어깨통증)의 증상이 있는 2명에게 어깨에 바르고 통증 경감 효과를 시험해 본 바, 1명은 효과가 있다고 응답했다.
또한, 이 크림을 화상 환자에게 사용했다. 양손 피부를 동일한 정도로 화상을 입은 환자에게, 한쪽 손에 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 포함하는 크림을, 다른 한쪽의 손에 소맥발효 엑기스를 포함하지 않은 크림을 바르고 경과를 지켜 본 바, 소맥발효 엑기스를 포함하는 크림을 외용한 쪽이 확실하게 빨리 회복했다. 이 예를 포함하여 10명의 화상 환자에게 외용한 바, 모두 소맥발효 엑기스를 포함하는 크림을 외용한 개소는 소맥발효 엑기스를 포함하지 않은 크림을 외용한 개소보다도 창상이 빨리 회복되었다(피셔의 직접확률: P<0.0001). 이상으로부터 본 소맥발효 엑기스는 화상에 대한 치료 효과를 갖는 것이 보여졌다.
실시예 9
소맥발효 엑기스가 든 화장수의 제조
1. 소맥발효 엑기스가 든 화장수 처방
사용성분을 표 13에 나타냈다. 소맥발효 엑기스는 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 5mg/ml이 되도록 미리 정제수에 용해해 두고, 화장수 100g에 대해서는 그것의 0.1ml를 첨가한다.
Figure 112006020853200-PCT00013
2. 소맥발효 엑기스가 든 화장수의 효과
본 화장수를 5명의 여성에게 사용하게 하고 앙케이트 조사를 행했다. 그 결과, 보습효과에 대해서 좋다고 응답한 사람이 3명, 보통이라고 응답한 사람이 2명이었다. 모두 피부의 문제는 없었다.
실시예 10
소맥발효 엑기스가 든 입욕제의 제조
생체기능의 개선을 목적으로 하여 소맥발효 엑기스를 첨가한 입욕제를 제작했다. 입욕제의 기본 성분을 표 14에 나타냈다.
Figure 112006020853200-PCT00014
소맥발효 엑기스가 든 입욕제로서는 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스의 110μg을 상기 성분에 첨가하여 제작했다. 102명의 피험자에게 블라인드로 엑기스가 든 것과 엑기스가 들어 있지 않은 대조를 건네 주고, 통상의 욕조(160~200리터)에 입욕시에 사용하여 앙케이트((1)몸의 따뜻해짐 정도, (2)목욕 후 한기를 느끼기 어려움, (3)피로회복 효과, (4)잠들기 쉬움, (5)어깨 결림의 경감 정도, (6)근육통에 대한 효과, (7)신경통에 대한 효과, (8)요통에 대한 효과, (9)냉증에 대한 효과, (10)무좀의 개선 효과, (11)피부의 버스럭거림 개선 효과, (12)아토피성 피부염에의 효과)를 행했다. 그 결과, 대조에 비해 7% 이상의 개선이 보여진 것은, (1)몸의 따뜻해짐 정도(10%), (2)목욕 후 한기를 느끼기 어려움(7.9%), (6)근육통에 대한 효과(13%), (8)요통에 대한 효과(16%), (9)냉증(10%), (11)피부의 버스럭거림 개선 효과(7.3%)에 대한 효과이었다(Mantel-Haenszel 검정: P<0.04). 이상의 결과로부터, 소맥발효 엑기스를 입욕제로서 사용함으로써 통증에 대한 완화 효과와, 몸의 따뜻해짐 정도를 개선하는 것이 확인되었다.
D.소맥발효 엑기스의 기능성 식품에의 응용 실시예
실시예 11
소맥발효 엑기스가 든 사탕의 제조
(1) 원재료로서 그라뉴당, 물엿, 물에 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 가한 것을 5:5:5:1의 비율로 혼합하고, 가열하여 120℃~160℃에서 바짝 졸인다.
(2) 1에서 얻은 것을 냉각용 철판 위에서 냉각하고, 막대 형상으로 잡아 늘려서 1g 전후의 입상으로 성형하여 사탕을 얻었다.
본 사탕 적당량을 물 20ml에 넣고, 가열함으로써 용해시켰다. 이 용액중의 소맥발효 엑기스 유효성분으로서 리포 다당량을 측정한 바, 4.6μg/g이었다. 이 사탕을 감기에 걸려서 목의 통증이 있는 남녀 6명에게 섭취시켰다. 그 후에 즉시 목의 통증에 대한 앙케이트 조사를 행했다. 목의 아픔에 대해서는, 6명 모두 통증이 경감되었다고 느꼈다(1표본 부호 검정: P<0.03).
실시예 12
소맥발효 엑기스가 든 알콜분해 기능 증강 식품의 제조
현재, 알콜분해 기능 증강 식품으로서, 시판되고 있는 제품에 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 혼합하고, 새로운 효과로서 인후통의 완화가 확인되는지 아닌지를 검토했다.
시판 제품: 상표 「논데오이끼」
성분을 표 15에 나타냈다.
Figure 112006020853200-PCT00015
현재의 「논데오이끼」에는, 돌외 엑기스 및 녹차 엑기스가 포함되어 있는데, 식물 엑기스의 유효성분중 하나인 리포 다당량은 불과 1봉지당 0.002μg 정도이다. 따라서 리포 다당 함유량이 많은 소맥발효 엑기스를 적정량 첨가함으로써, 새로운 기능을 획득하는 것이 기대된다. 소맥발효 엑기스의 유효성분중 하나인 리포 다당을 1봉지 2g당 1~30μg(소맥발효 엑기스로서 5~150μg) 배합하는 것이 바람직하므로, 우선 1봉지에 50μg의 소맥발효 엑기스가 배합된 제품을 제조했다. 논데오이끼의 제조공정에서 100g의 제품당, 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스 2.5mg을 가했다. 그 결과, 제품 2g당, 50μg의 소맥발효 엑기스를 포함하는 새로운 제품이 제조되었다.
음주하면서 노래를 즐겨 인후통을 호소하는 성인 남녀 20명을 대상으로 하여, 지금까지의 「논데오이끼」와 소맥발효 엑기스를 포함한 「논데오이끼」를 10명식 복용하게 하고, 공지의 효과인 알콜분해능 강화 효과, 및 인후통 완화 효과에 대해 검토했다. 그후, 즉시 인후통 완화 효과에 대한 앙케이트 조사를 행했다. 그 결과, 「소맥발효 엑기스가 든 논데오이끼」에는 인후통의 경감이 10명중 8명 확인되어, 대상인 「논데오이끼」의 10명중 2명의 효과와 비교하여 통계적으로 유의한 차(피셔의 직접확률: P<0.012)이 확인되었다.
E.소맥발효 엑기스의 약효 실시예
실시예 13
소맥발효 엑기스가 든 글리세롤 용액의 제조(아토피성 피부염에 대한 치료 효과)
안면, 수족, 몸통, 목, 팔, 등에 피진이 관찰되고, 자각증상이 중등도에서 고도증상을 보이는 난치성의 아토피성 피부염 환자 남녀 9명(25세부터 34세)에게 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스 50μg/ml를 포함하는 50%글리세롤 용액을 1일당 2~3회, 1회당 2~3ml를 복용시켰다. 자각증상(소양감(가려움))은 환자의 호소에 따라, 경도, 중등도, 고도로 분류했다. 2주부터 2개월 사용 후에 다시 검진하고, 효과를 평가했다. 결과는 저술된 효과(피진의 분명함 개선과 자각증상의 대부분의 소실)가 4명(44%), 유효(피진의 경도개선과 자각증상의 감소)가 4명(44%), 불변이 1명(11%)이고, 악화가 0명 이었다(1표본 부호검정: P<0.03). 이상으로부터 유효율 89%로 판정되었다.
실시예 14
소맥발효 엑기스의 진통작용
실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 증류수에 녹이고, 마우스에 존데를 사용하여 한마리당, 0.2ml를 경구투여 했다. 90분 후에 마우스에 0.7%의 아세트산을 복강내 투여하고, 5분간 상황을 본 후에, 30분 동안에 발생하는 몸부림 수를 측정했다. 결과를 표 16에 증류수 투여 대조의 몸부림 수를 30% 저해하는데 필요한 각 시료의 양으로서 나타냈다. 대장균 유래의 저분자량 리포 다당의 유효 활성을 1로 했을 때에 소맥발효 엑기스는 7이 되어, 소맥발효 엑기스가 우수한 진통작용을 나타내는 것이 확인되었다.
Figure 112006020853200-PCT00016
실시예 15
소맥발효 엑기스의 아토피성 피부염 억제효과
소맥발효 엑기스의 아토피성 피부염에 대한 효과를 조사하기 위해서, I형 알레르기 모델을 도입했다. 1군 3~4마리의 수컷의 BALB/c 마우스에 항디니트로페닐, 마우스 모노클론 항체를 1μg/마우스로 정맥투여 했다. 한시간 후에 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스(4μg/마우스)을 복부피내투여 또는 경구투여(100μg/마우스) 하고, 또 1시간 후에, 마우스의 귓바퀴의 표리에 0.25% 디니트로플루오로벤젠 함유 아세톤올리브오일 혼합용액(4대1)을 알레르겐으로서 20μl 도포했다. 도포 후, 1, 2, 24 및 48시간째의 귓바퀴의 두께를 두께 측정기로 측정하고, 도포 직전의 두께와의 차(△)를 부종의 정도로 했다. 약제 투여의 효과는, 알레르겐 투여 1시간 후에 확인되는 조기 반응과, 24시간 후에 유도되는 지발 반응, 각각의 억제를 이하의 식에 의해 구해지는 억제율로 평가했다. {억제율=(1-약제투여 후의 △귓바퀴의 부종/대조의 △귓바퀴의 부종)×100} 결과를 표 17에 나타낸다. 표로부터 명확한 바와 같이, 소맥발효 엑기스는 피내투여에서도, 경구투여에서도 알레르기 반응을 억제했다.
Figure 112006020853200-PCT00017
실시예 16
소맥발효 엑기스의 감염 예방 효과
소맥발효 엑기스의 감염 예방 효과를 조사하기 위해서, 메티실린내성 황색 포도상 구균(MRSA)감염 모델을 도입했다. 1군 10마리의 수컷의 BALB/c 마우스(6-8주령)에 시클로포스파미드(CY) 200mg/kg을 복강내 투여하고, 5일 후에 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 피내투여 했다. 3시간 후에 MRSA(3×107 콜로니 포밍 유닛(CFU))을 정맥내 투여하고, 생존일수를 조사했다. 결과를 표 18에 나타냈다. 표로부터 명확한 바와 같이 소맥발효 엑기스는 생리식염수(대조)군에 비해 통계학적으로 유의한(x2 검정, P<0.001) 차에서 MRSA에 대한 감염 예방 효과가 확인되었다.
Figure 112006020853200-PCT00018
실시예 17
소맥발효 엑기스의 전이 암 치료 효과
소맥발효 엑기스의 전이 암 치료 효과를 조사하기 위해서, MethA 암 세포의 간 전이 모델을 도입했다. 1군 10마리의 수컷의 BALB/c 마우스(6-8주령)에 MethA 세포를 1×105 세포 정맥내 투여하고, 12일 후부터 4일간 매일, 실시예 2에서 제조한 소맥발효 엑기스를 피내투여 했다. 세포이식 20일 후에 부검하여, 폐를 적출하고, 포르말린 고정을 행했다. 폐를 육안으로 관찰하고, 결절수를 측정했다. 결과를 표 19에 나타냈다. 표로부터 명확한 바와 같이 소맥발효 엑기스는 생리식염수(대조)군에 비해 통계학적으로 유의한(t-검정, P<0.001) 차로 MethA의 간 전이 암에 대한 치료 효과가 확인되었다.
Figure 112006020853200-PCT00019
F.비지발효 엑기스에 관한 실시예
실시예 18
비지 발효 엑기스의 제조
(1) 2리터의 삼각 플라스크에 1.0리터의 물과, 인산제1칼륨 0.2g, 인산제2나트륨 1.15g, 식염 8g, 염화칼륨 0.2g을 가했다.
(2) 1에 건조 비지 20g을 가했다.
(3) 2를 오토클레이브에서 멸균했다.
(4) 종균의 조제. 미리 동일 조성으로 조제한 2% 비지 배지 5ml에 소맥분으로부터 단리 해 둔 판토에아·아글로메란스의 콜로니를 1개 가하고 37℃에서 밤새(15시간) 천천히 교반하고, 발효시켜서, 비지 발효용의 종균을 준비했다.
(5) 3에 4를 전량 가하고 37℃에서 천천히 교반하면서, 48시간 발효시켰다.
(6) 5의 비지발효 용액을 오토클레이브에서 120℃ 20분간의 가열추출을 했다. 이것을 원심분리(구보타 8800, 2000rpm, 10분간) 하고, 상청액을 회수하여, 비지발효 엑기스로 했다.
(7) 건조중량의 측정 0.3ml를 미리 칭량한 1.5ml 플라스틱 튜브에 옮기고, 동결 후, 동결건조기에서, 동결건조를 행한 바 5.97mg이 되었다. 따라서, 6의 비지 발효 엑기스의 건조중량은 용액 1ml당 19.9mg, 전량 1000ml당, 19.9g이었다.
(8) 브래드포드법에 의한 단백질 정량 BSA를 표준 단백질로 하고, 10배 희석한 샘플로 단백질량을 측정했다. 결과를 표 15에 나타냈다.
(9) 핵산 함유량의 측정 100배 희석한 샘플의 210~340nm의 흡광도 측정을 행했다. 260nm의 흡광도에서 320nm의 흡광도를 뺀 값과, DNA로서의 흡광도 1OD당, 50μg으로서의 최대 함유량을 산출했다.
(10) 당 함량의 측정 페놀 황산법에 의해 글루코스를 표준당으로서 측정했다.
(11) 리물루스 어세이에 의한 리물루스 활성물질 함유량의 측정 리물루스 활성물질량은 세카가쿠고교의 톡시 칼라 시스템을 사용하고, 표준 리물루스 활성 물질로서, 세카가쿠고교 Et-1을 사용했다. 결과를 표 20에 나타냈다.
Figure 112006020853200-PCT00020
실시예 19
비지 발효 엑기스의 면역부활 작용
48웰 플레이트에 인간 매크로파지로서 사용되는 급성 골수성 백혈병 세포주의 THP-1(1×106개/250μl:10% 소 태아 혈청이 든 RPMI 1640 배지)을 넣고, 미리 30분간 사전배양 했다. 각 샘플의 마지막 농도가 100~10000ng/ml가 되도록 배지 250μl(최종량 500μl)을 가했다. 샘플에 폴리믹신 B(12.5μg/ml)를 포함하는 군을 만들었다(100ng/ml만 폴리믹신 B를 포함하는 군 없음). 4시간 배양한 후, 배양 상청액과 세포를 회수했다. 상청액의 TNF 활성은 L-929 세포장해 시험에 의해 측정했다. 결과를 표 21에 나타낸다. 비지 발효 엑기스는 폴리믹신 B 존재하에서도 매크로파지로부터 TNF를 생산시켰지만, 저분자량 리포 다당은 폴리믹신 B 존재하에서는 매크로파지로부터 TNF를 생산할 수 없었다. 이것으로부터 비지발효 엑기스는 저분자량 리포 다당과는 달리, 소맥발효 엑기스와 동일한 생물활성을 갖는 것이 명확하다.
Figure 112006020853200-PCT00021
G.미분발효 엑기스에 관한 실시예
실시예 20
미분발효 엑기스의 제조
(1) 2리터의 삼각 플라스크에 1.0리터의 물과, 인산제1칼륨 0.2g, 인산제2나트륨 1.15g, 식염 8g, 염화칼륨 0.2g을 가했다.
(2) 1에 건조 미분을 20g 가했다.
(3) 2를 오토클레이브에서 멸균했다.
(4) 종균의 조제. 미리 동일한 조성으로 조제한 2% 미분 배지 5ml에 소맥분으로부터 단리 해 둔 판토에아·아글로메란스의 콜로니를 1개 가하고 37℃에서 밤새(15시간) 천천히 교반하고, 발효시켜서, 미분발효용의 종균을 준비했다.
(5) 3에 4을 전량 가하고 37℃에서 천천히 교반하면서, 72시간 발효시켰다.
(6) 5의 미분발효 용액을 오토클레이브에서 120℃ 20분간의 가열추출을 했다. 이것을 원심분리(구보타 8800, 2000rpm, 10분간) 하고, 상청액을 회수하여, 미분발효 엑기스로 했다.
(7) 리물루스 어세이에 의한 리물루스 활성물질 함유량의 측정 리물루스 활성물질량은 세카가쿠고교의 톡시칼라시스템을 사용하고, 표준 리물루스 활성물질로서, 세카가쿠고교 Et-1을 사용했다. 미분발효 엑기스중의 리물루스 활성물질 함유량은 1.7μg/ml로 측정되었다.
실시예 21
미분발효 엑기스의 면역부활 작용
48웰 플레이트에 인간 매크로파지로서 사용되는 급성 골수성 백혈병 세포주의 THP-1(1×106개/250μl:10% 소 태아 혈청이 든 RPMI 1640 배지)을 넣고, 미리 30분간 사전배양 했다. 각 샘플의 마지막 농도가 1~10000ng/ml가 되도록 배지 250μl(최종량 500μl)를 가했다. 샘플에 폴리믹신 B(12.5μg/ml)을 포함하는 군을 만들었다. 4시간 배양한 후, 배양 상청액과 세포를 회수했다. 4시간 배양한 후, 배양 상청액 과 세포를 회수했다. 상청액의 TNF 활성은 L-929 세포장해 시험에 의해 측정했다. 결과를 표 22에 나타낸다. 미분발효 엑기스는 폴리믹신 B 존재하에서도 매크로파지로부터 TNF를 생산시켰지만, 저분자량 리포 다당은 폴리믹신 B 존재하에서는 매크로파지로부터 TNF를 생산할 수 없었다. 이것으로부터 미분발효 엑기스는 저분자량 리포 다당이나 리물루스 양성 당지질과는 다른 생물활성을 갖는 것이 명확하다.
Figure 112006020853200-PCT00022
H. 미역 발효 엑기스에 관한 실시예
실시예 22
미역귀다리 발효 엑기스의 제조
(1) 2리터의 삼각 플라스크에 1.0 리터의 물과, 인산제1칼륨 0.2g, 인산제2나트륨 1.15g, 식염 8g, 염화칼륨 0.2g을 가했다.
(2) 1에 건조 미역귀다리 20g을 가했다.
(3) 2를 오토클레이브에서 멸균했다.
(4) 종균의 조제. 미리 동일한 조성으로 조제한 2% 미역귀다리 배지 5ml에 소맥분으로부터 단리 해 둔 판토에아·아글로메란스의 콜로니를 1개 가하고 37℃에서 밤새(15시간) 천천히 교반하고, 발효시켜서, 미역귀다리 발효용의 종균을 준비했다.
(5) 3에 4를 전량 더하고 37℃에서 천천히 교반하면서, 72시간 발효시켰다.
(6) 5의 미역귀다리 발효 용액을 오토클레이브에서 120℃ 20분간의 가열추출을 했다. 이것을 원심분리(구보타 8800, 2000rpm, 10분간) 하고, 상청액을 회수하고, 미역귀다리 발효 엑기스로 했다.
(7) 리물루스 어세이에 의한 리물루스 활성물질 함유량의 측정 리물루스 활성물질량은 세카가쿠고교의 톡시칼라시스템을 사용하고, 표준 리물루스 활성물질로서, 세카가쿠고교 Et-1을 사용했다. 미역귀다리 발효 엑기스중의 리물루스 활성물질 함유량은 132μg/ml로 측정되었다.
실시예 23
미역귀다리 발효 엑기스의 면역부활 작용
48웰 플레이트에 인간 매크로파지로서 사용되는 급성 골수성 백혈병 세포주의 THP-1(1×106개/250μl: 10% 소 태아 혈청이 든 RPMI1640 배지)을 넣고, 미리 30분간 산전배양 했다. 각 샘플의 마지막 농도가 1~10000ng/ml이 되도록 배지 250μl(최종량 500μl)를 가했다. 샘플에 폴리믹신 B(12.5μg/ml)을 포함하는 군을 만들었다. 4시간 배양한 후, 배양 상청액과 세포를 회수했다. 4시간 배양한 후, 배양 상청액 과 세포를 회수했다. 상청액의 TNF 활성은 L-929 세포 장해 시험에 의해 측정했다. 결과를 표 23에 나타낸다. 미역귀다리 발효 엑기스는 폴리믹신 B 존재하에서도 매크로파지로부터 TNF를 생산시켰지만, 저분자량 리포 다당은 폴리믹신 B 존재하에서는 매크로파지로부터 TNF를 생산할 수 없었다. 이것으로부터 미역귀다리 발효 엑기스는 저분자량 리포 다당이나 리물루스 양성 당지질과는 다른 생물활성을 갖는 것이 명확하다.
Figure 112006020853200-PCT00023
본 발명에 의해, 안전한 면역부활 물질인 식물발효 엑기스를 저렴하게 제조하는 것이 가능하게 되고, 이렇게 하여 얻어진 식물발효 엑기스는 인간을 포함하는 포유동물(구체적으로는 가축, 애완동물 등), 조류(구체적으로는 양계, 애완 조류 등), 양서류, 파충류, 어류(구체적으로는, 수산 양식어, 애완 어류 등), 무척추 동물에 이르는 의약품, 동물용 의약품, 의약부외품, 화장품, 식품, 기능성 식품, 사 료 및 목욕용제에 이용할 수 있다.

Claims (17)

  1. 식용식물에 유래하는 소재를 오로지 식물에 공생하는 통성 혐기성 그램 음성균에 의해 발효시켜서, 동시에 이 통성 혐기성 그램 음성균을 배양하는 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 소재는 오로지 식용에 제공되는 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 탄소원으로서 전분을 발효시키는 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 통성 혐기성 그램 음성균이 간균인 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  5. 제 4 항에 있어서, 상기 통성 혐기성 간균이 장내 세균과에 속하는 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  6. 제 4 항에 있어서, 상기 통성 혐기성 간균이 판토에아속, 세라티아속, 또는 엔테로박터속에 속하는 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  7. 제 4 항에 있어서, 상기 통성 혐기성 간균이 판토에아·아글로메란스인 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 식용식물이 곡물, 해초, 혹은 콩류, 또는 이것들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 곡물에 유래하는 소재가 소맥분, 미분, 밀기울분, 쌀겨, 또는 술지게미인 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  10. 제 8 항에 있어서, 상기 해초에 유래하는 소재가 미역분, 미역귀다리분, 또는 다시마분인 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  11. 제 8 항에 있어서, 상기 콩류에 유래하는 소재가 비지인 것을 특징으로 하는 발효 및 배양방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항중 어느 한 항에 기재된 발효 및 배양방법으로 얻어지는 것을 특징으로 하는 식물발효 엑기스.
  13. 제 12 항에 기재된 식물발효 엑기스로부터 얻어지는 것을 특징으로 하는 식 물발효 엑기스 분말.
  14. 제 12 항에 기재된 식물발효 엑기스 또는 제 13 항에 기재된 식물발효 엑기스 분말이 배합되어 있는 것을 특징으로 하는 식물발효 엑기스 배합물.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 식물발효 엑기스 배합물이 의약품, 동물용 의약품, 의약부외품, 화장품, 식품, 기능성 식품, 사료, 또는 목욕용제인 것을 특징으로 하는 식물발효 엑기스 배합물.
  16. 제 12 항에 있어서, 폴리믹신 B 존재하에서도 매크로파지 활성화능력을 보이는 이화학적 성질을 나타내는 것을 특징으로 하는 식물발효 엑기스.
  17. 제 12 항 또는 제 16 항에 있어서, 면역부활 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 식물발효 엑기스.
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