JPH03218466A - リムラステスト陽性植物糖脂質、それらを含む免疫機能活性化剤、動物用免疫機能活性化剤、免疫機能検査薬、動物用免疫機能検査薬、医薬部外品、化粧品、食品、機能性食品、飲料、飼料 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

［産業上の利用分野］ 本発明は、リムラステスト陽性植物糖脂質に間する． より詳細には、本発明は、リムラステスト陽性植物糖脂
質及びその少なくともｌ種を含む免疫機能活性化剤、動
物用免疫機能活性化剤、免疫機能検査薬、動物用免疫機
能検査薬、医Ｍ＃外品、化粧品、食品、機能性食品、飲
料、飼料壽に関する．［従来の技術］ 生物には、生体の内部環境が外来性及び内因性の異物に
よって攪乱されるのを防ぎ、生体の恒常性を維持するた
めの免疫機能が備わっている．従って、免疫機能の低下
は健康の悪化、各種疾病の発病、老化促進の原因となり
、その活性化は健康向上、各種疾病の発病阻止、治癒、
老化防止につながる． このため、免疫ＩＩ能を活性化させる物質の提供が要請
ざれており、現在、ＰＳＫ　［別名クレスチン（呉羽化
学株式会社の登録商標〉］、レンチナン（味の素株式会
社の登録商標）、ベスタチン（日本化薬株式会社の登録
商標）、ソニフィラン（科研製薬株式会社の登録商標）
　、ＯＫ−４３２［キャンサー　ケモセラビー　レポー
トウ　バートウ１（ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒ−
ａｐｙ　　Ｒｅｐｏｒｔｓ　　Ｐａｒｔｌ）、ｖｏｌ．
５８、Ｎｏ．ｌ、１０頁（１９７２）、別名ビシバニー
ル（中外製薬株式会Ｕの登録商標）］等が知られている
． 又、リムラステスト陽性（後って説明する）の糖脂質と
しては、大ｉＩ菌ＬＰＳ　（脂質多糖体）、百日咳菌Ｌ
．　ｐ　ｓ　，サルモネラｉｉｉＬＰＳ等の薗界源糖脂
質の存在は知られており、各種実験で利用されているが
、毒性が高いために、用途は何ら実用化されていない．
リムラステスト陽性植物糖脂質についてはその存在すら
報告されていない．［発明が解決しようとする課題］ 従来の免疫機能活性化剤のうちで、ＰＳＫ、レンチナン
、ベスタチン、ソニフィランにはＴＮＦ産生能がないの
で、それらの免疫ＩＩＩ能活性化能は低い． 一方、ＯＫ−４３２にはＴＮＦ産生能があるが、大量投
与が必要であることから、発熱、悪寒、血圧低下、血小
板減少等の副作用の発生が避けられず、従って化学療法
係数が小さい．更に、生産工程に、微生物培養と極めて
煩雑な分離、精製とが含まれるために生産コストが高い
という問題点もある．加えて、簡便な経口投与や経皮投
与では効果がないので、投与上の便宜に欠ける．ここて
ｒＴＮＦＪとは、マクロファージにより産生きれる腫瘍
障害因子（Ｔ　ｕｍａ　ｒＮｅｃｒｏｓｉｓ　　Ｆａｃ
ｔｏｒ）の総称［ザジャーナル　オブ　バイオロジカル
　ケミストリ−（Ｔｈｅ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　
　Ｂｊｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０，２３４５〜２３５４
頁（１９８５年）］であり、マクロファージの活性が高
まるにつれてその産生置は増していく．「マクロフ７−
ジ」は、免疫担当纏胞の一種であり、動物体内のほとん
ど全ての絹織に分布し、粒子状の異物や体内の老廃細胞
などを捕食して消化する大型のアメーバ状細胞の総称で
ある．『化学療法係数」は、薬剤に対する宿主の最大耐
量と、病原菌に対する薬剤の最小有効濃度の比をいい、
この値が大きい程すぐれた化学療法剤とされる．本発明
は、これら従来技術の欠点が解消された、高い免疫機能
活性化能を有す、化学療法係数が大きくかつ生産コスト
の低い、しかも、静注投与、経口投与、皮膚塗付が可能
なリムラステスト陽性植物糖脂質を提供するために創案
されたものである．ここで「リムラステスト」とは、１
９６８年にレヴイン（１，ｅｖｉｎ）により創案された
、カブトガニ血球抽出液と発色合成基質を用いたエンド
トキシン定置法である． 従って、本発明の目的は、高い免疫機能活性化能を持ち
、化学療法係数が大きくかつ生産コストの低い、しかも
、静注投与、経口投与、皮膚投与が可能な、リムラステ
スト陽性植物糖脂質を提供すること、及び、このリムラ
ステスト陽性植物糖脂質の少なくとも１種を含む免疫機
能活性化剤、動物用免疫機能活性化剤、免疫機能検査薬
、動物用免疫機能検査薬、医薬部外品、化粧品、食品、
機能性食品、飲料、飼料等を提供することを目的とする
．ここで「少なくとも１種を含む」とは、本発明のリム
ラステスト陽性植物糖脂質は各別に使用できることはも
ちろん、その意図される用途が阻害されない限り、それ
らの２種以上を任意に繍み合わせて、又、更には他のい
ずれの物質とも朝み合わせて使用できることを意味する
。

【課題を解決するための手段］ 原料植物 本発明で使用できる原料植物は、リムラステストで陽性
を示す成分を含むものならばいずれでもよい．ｌ＊えば
、裸子植物、単子葉類、双子葉類、シダ植物、ソウ頚、
ＭＲを個別に或は混合して使用できる． 裸子植物としては、例えば、マツ科植物を使用できる。 単子葉類としては、例えば、イネ科、アヤメ科、ショウ
ガ科、サトイモ科、ユリ科の植物を使用できる．イネ科
植物としては、例えば、イネ、麦を使用できる。麦は小
麦、大麦、裸麦、からす麦５えん麦その他いずれの種類
でもよく、又、それらの混合物でもよい． 双子葉類としては、例えば、アカネ科、アブラナ科、ウ
リ科、クスノキ科、クルミ科、コショウ科、セリ科、ツ
ヅラフジ科、ドクダミ科、ナス科、バラ科、マタタビ科
、マメ科、ミカン科、モクレン科、ニクズク科の植物を
個別に或は混合物して使用できる。 シダ植物としては、例えば、トクサ科、ゼンマイ科の植
物を個別に或は混合して使用できる．ソウ類としては、
例えば、カッソウ類、紅ソウ頌、緑ソウ類、ランソウ類
の植物を個別に或は混合物して使用できる．緑ソウ類と
しては、例えばクロレラを使用できる． ！ｉ類としては、例えば、担子Ｍｕ、子ノウｍｉｌｌの
植物を個別に或は混合して使用できる．リムラステスト
陽性植物糖脂質の検出、含量測定以上に述べた原料植物
中の本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質の検出、含
量測定は、例えば、生化学工業株式会社からトキシカラ
ーシステムという名称で市販されている試薬セットを使
用して実施できる．即ち、原料植物を同システムのＬＳ
−ｌセットと合わせて発色させ、その発色の強さを、同
じく同セットのＥｔ−２セットを使用して作成した検量
線と対比させればよい． 又、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質は、以下に
述べる方法で分離、精製できる．リムラステスト陽性植
物糖脂質の分離、精製■原料植物を必要に応じて適宜細
切、乾燥、粉砕した後に蒸留水によく懸濁し、上清を回
収する。 例えば、原料植物が穀類の種子である場合は、種皮をつ
けたまま、或は、種皮を除いた後に簡単に砕くか、又は
、食用に供せられている程度の粉末になるまで粉砕し、
得られた粉末に水を加えて分散液とし、攪拌した後に沈
降物を静置又は遠心分離により除去するか、粉末に水を
加えて練って得られるトウをミキサー中でゆるやかに水
洗し、沈降物を除去すればよい． この抽出操作の際の種子の粒度、水の温度、液性、添加
量、攪拌の速度、時間、遠心分離の際の条件等は特に制
限する必要はない．しかし、便宜上、抽出水の温度は、
穀類種子に含まれる澱粉の糊化を招来しない５０℃以下
とすることが好ましい。又、水の添加量は、穀類の種類
、粒度により異なるが、穀類種子の割合が７０ｗ／ｖ％
以下、望ましくは２０〜５０ｗ／ｖ％程度とすると操作
上便宜である．更に、攪拌の速度は、起泡を引き起こさ
ない程度のものとすることが好ましい．なお、この段階
の操作迄で、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質の
純度は、リムラステスト活性データから判断して、例え
ば小麦種子の場合には約３０倍に上昇する． ■純度を更に上げるためには、この上清を常法に従って
限外濾過に付して分子量５，０００以下の両分を除去す
ればよい． ■得られた乾燥品を、５０ｍｇ／ｍｌになるように蒸留
水に懸濁し、遠心分離操作に付して上溝を回収する． ■この上清を氷水で冷却し、酸を添加して酸性にすると
沈殿が生じる．この際使用する酸は特定のものである必
要はなく、例えば、トリクロ口酢酸（以下、ＴＣＡと称
す）、過塩素酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、ジクロ口酢
酸を使用できる．■次いで、遠心分離操作に付して沈殿
を回収して蒸冒水で洗浄し、再度遠心分１ｍ？１作に付
して沈殿を回収する． ■沈殿を蒸留水に懸濁し、沈殿が溶解するまでアルカリ
を加える．この際使用するアルカリも特定のものである
必要はなく、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、アンモニア、炭酸ナトリウム、酢酸ナトリウムを使用
できる．沈殿の溶解時に塩基性がｐＨ１１より大きくな
ると目的の糖脂質が失活するので注意が必要である．■
次いで酸を加えてｐＨ８としてから３７℃に加温し、更
に酸を加えて酸性にすると沈殿が生ずるのて、３７℃に
保温した遠心分離器を使用して遠心分離操作に付す。な
お、この際使用する酸も特定のものである必要はない． ■上清を回収して氷冷し、４℃で再び遠心分離操作に付
す゛ ■Ｅ消を回収し、アルカリを添加して中和し、常法に従
って限外濾過で濃縮する．この際使用するアルカリも特
定のものである必要はない．［相］次いて常法に従って
ゲル鑵過に付して、リムラステスト陽性画分を回収して
併せる．ゲル濾過用の担体としては、例えばセファデツ
クス（　Ｓ　ｅ　ｐ　ｈ　ａ　ｄ　ｅ　ｘ　）　Ｇ　−
　７　５、Ｇ−１００、セフアクリル（Ｓｅｐｈａｃｒ
ｙｌ）Ｓ−２００、セブ７ロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
）６Ｂ　［以上は米国ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａＩｎｃ．）Ｉｔ］、バイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ）ｐ
−ｉｏｏ（バイオラツド（ＢｉｏｒａｄＩｎｃ．）社Ｉ
Ｉ］，｝−ヨーバールＨＷ−５０、ＨＷ−５５　（東洋
曾違工業社製）を使用できる．緩衝液はｐＨ３〜ＩＯの
ものならいずれでもよい．例えば、トリスーＨＣＩＬ又
はリン酸緩衝液を使用できる． ■次いでこの両分に蛋白分解酵素を加え、３７℃で２時
間以上インキユベーションして残存蛋白質を分解し、得
られた酵素処理液を常法に従って限外濾過により濃縮す
る．なお、この際に使用する蛋白分解酵素も特定なもの
である必要はなく、例えは、■８プロテアーゼ、キモト
リブシン、トリブシン、サーモライシンを単独で、或は
任意に鞘み合わせて使用できる．市販品としては、例え
ば、ブロナーゼＥ（科研化学社）、プロティネースＫ（
メルク社）を使用できる． Ｏ次いでこの両分を常法に従って、例えば、ファルマシ
ア社製のＦＰＬＣシステムでファルマシア？土製のモノ
Ｑ−セファロース（　Ｓ　ｅ　ｐ　ｂ　ａ　ｒ　−ｏｓ
ｅ）、Ｑ−セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏ−ｓｅ）を使
用して陰イオン交換クロマトグラフィーに付してリムラ
ステスト陽性画分を得る．０次いで、常法に従って脱塩
のためにゲル濾過に付してリムラステスト陽性両分を回
収する．以」一の操作により、例えば小麦種子の場合に
は、当初活性の約２０％が回収され、純度約９５％の精
製標品が得られ、又、段階■終了時の純度に比へ約１　
０　０　０　＋１！の純度（小麦種子の場合）になる．
児（υテスト陽性植　　　　の　性 追って実施例中で詳述する如く，本発明のリムラス陽性
植物糖脂質の９６％純度標品の分子量はおよそｏ，ｏｏ
ｏ±１，０００　（ＳＤＳ電気泳動法）、リン数は１以
上／分子、ヘキソサミン数は６±２７分子、脂肪酸数は
６±２７分子である．提供の形態 本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質はそのまま、或
いはｌｆ．ｔの程度に希釈した形で提供できる．又、保
存性を高めるために、凍結乾燥や噴霧乾燥なとの任意の
手段により乾燥粉末として提供することもてきる．これ
らはいずれも常法で生産できる． 免疫活性化能の測定 本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質の免疫活性化能
は、マクロファージ活性を通じての内因性ＴＮＦ産生促
進能、内因性ＴＮＦ産生能、カーボン除去能、骨杉成促
進能、産卵促進能、卵殻強度増強能により確認した． 内因性ＴＮＦ産生促進能、．舞」１熊 動物体内にＴＮＦを産生させるためには、産生前駆（ブ
ライミング）段階と産生間始（トリ力リング）段階とが
必要であることは、カーズウェル（Ｃａ　ｒ　ｓｗｅ　
Ｉ　ｌ）らにより、プロシーディング　オブ　ナショナ
ル　アカデミー　サイエンス　オブ　ユーエスｘ−（Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ　ｊ．ＵＳＡ．）７
２、３６６６〜３６７０頁（１９７５年）に報告されて
おり、その後、各段階で使用出来る薬剤の検討もすすめ
られている．ブライミング段＃開始のために投与される
薬剤が「ブライマー」　（内因性ＴＮＦ産生促進剤）で
あり、トリガリング段階開始のために投与される薬剤が
「トリガー』　（内因性ＴＮＦ産生剤）である．本発明
のリムラステスト陽性植物糖脂質は、既にその有用性が
確立されているビシバニールと同程度にブライマーとし
て、又、トリガ一としても機能する。 Ｔ　Ｎ　Ｉ”活性は、Ｌ−９２９細胞［プロシーディン
グ　オブ　ナソヨナル　アカデミー　サイエンスオブ　
ユーエスエ−　７２、　３６６６〜３　６　７　（１頁
］に対する細胞毒性を基にして、次のよー）にして測定
する． Ｌ９２９４１胞を、５％１７−牛胎児血清を加えたイー
グルミニマムエッセンシャル培地（以下、ＭＥＭ培地と
表す）で育成し、８Ｘｌ０４個の纏胞が１００μ艷の同
上境地に含まれる様にし、９６大の平底プレートで育種
する．育種条件は３７℃、２時間、５％ＣＯ２、湿度１
００％であり、通常の細胞培養に用いられる方法でよい
．その後、アクナノマイシンＤを培地中に！？濃度１μ
ｇ／ｍｌとなるように加え、培Ｉ液の液量を１５０μ艷
とする．即座に、検体を過当にＭＥＭ培地で稀釈したも
のを５　０　１ｔ　ａ加える（この際罹釈率を適宜講頓
し、ＥＤａ＠を求める事ができる）．更に、最終液量２
００μ鼠となったＬ９２９纏胞を上記条件で１８時間培
養する． 細胞隙害活性を測定するには、まず全培地を除去し、つ
いで０．１％クリスタルバイオレットを含む１％メチル
アルコール溶液を加えて固定染色する．クリスタルバイ
オレットは全有核細胞を染色するが、死ＩＩｌｌｌ！は
染色後にプレート底面より水洗で除去されるので、生存
細胞の結果から細胞障害活性を直接測定できる．この染
色度をＯＤ５９１！ｎ＋＋での吸光度をｒＦ！標として
測定し、対照群に対する染色度と比較する事で細胞障害
活性を測定する．活性の定義は次の様に行う。 Ｌ　９　２　９細胞が６０％生存できる検体の稀釈率（
Ｎ）を求める．　ｆｆｉ４照としてウサキＴＮＳ［Ｉ！
壜ｌｌＩＩＦ血清（　Ｔ　ｕ　ｍ　ｏ　ｒ　　Ｎ　ｅ　
ｃ　ｒ　ｏ　ｓ　ｉ　ｓＳｅｒｕｍ）］を使用し、この
ウサギＴＮＳの活性ｎ（単＋１７／ｍ宛）を２．４Ｘｊ
０６単１α／　ｔｎ　ｇ　／［ｎλのＴＮＦ−αを用い
て決定する。このウサギＴＮＳのＥＤｓ＠を与える稀釈
率（Ｃ）を求める。 Ｎ 横体活性（単位／　ｍ　ａ）は　−　×　ｎ　で計算す
る。 Ｃ Ｌ：ノ租２」Ｌ表ｌ コＵイト状カーボンの血中からの除去がマクロフ７−シ
活性の指標となることは古くから知られている（日本細
菌学会教育委員会編、細菌学技術叢書５『マクロファー
ジの機能と機能測定法」、９８頁、昭和６０年（株）菜
根出版発行）。従って、キャンサー　リサーチ（Ｃａｎ
ｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ）＋　２８＋　　１９６８年８
月号の１５３１〜１５３２記載の方法に準拠し、静注さ
れたカーボンの除去率を指標に、皮＃投与されたリムラ
ステスト陽性植物糖脂質の免疫機能活性化能を測定する
． 骨杉成促進能 破骨纏胞活性化試験で確認する。 破骨纏胞は、骨絹織中の古い骨をこわす骨吸収担当細胞
てある．破骨繕胞の活性化により代償的に骨芽細胞が活
性化され、骨形成が骨吸収よりも優位の状態になる結果
、骨形成が促進されると考えられる． 破骨纏胞活性化試験ては、鶏胚頭頂骨を実験試料としで
使用する．即ち、鶏旺頭頂骨を４５Ｃａて標識した後に
、薬物を含む培地（処理群）と薬物を含まないｔｇ地（
対Ｎ群）で別々に培ＩＩ後に、骨に残存する４　もＣａ
量と、培養中に培地中に流出した”Ｃａ量とを測定し、
処理群、対照群における４’ａＣａ流出率をそれぞれ次
式により計算する．”Ｃａ流出量 薬物の効果は次のＴ／Ｃ比で表す。 理論的には、このＴ／Ｃ比が１より大きければ薬物効果
があることになる．なお、後記実験例においては、個体
間のばらつきによる影響を避けるために、同一鶏の旺頭
頂骨（２本存在する）の一方を対照群で、他方を処理群
で使用した。 産卵促進能、卵殻強度増強能 本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質を投与した鶏か
ら産まれた卵の数及びその殻の強度を測定することによ
り確認する． 鶏卵の取引は農林事務次官通達により規制されている。 現行の昭和５４年１２月２５日付け改正５４畜ＡＦ５１
３６号通達によれば、鶏卵はその重量、外観検査、透光
検査の結果に基づき等級付けされているが、輸送中、取
扱い中、使用中等における鶏卵の破損を防止する目安と
なる般強度についての記載はない。只、外箱について、
ｒＪＩＳ一種破裂度８．８以Ｌのもの」とのみ規定して
いる。しかし、外箱がいくら丈夫であっても、輸送中等
の賑勤、掴みによる鶏卵の破損を防止できないことは自
明である。このため、料亭やスーパー等の大口需要者と
生産者との閏には、一定以上の般強度を有する鶏卵のみ
を取引対象とする例も少なくなく、その際には、４ｋｇ
／ｃｍ２以−ヒであれば申し分ないとされている． なお、現在のところ、鶏卵般強度を高める効果を有する
薬剤、Ｈ料等の開発、販売は知られていない。 リムラステスト隔性植ｖ！Ｊ糖脂質の用途本発明のリム
ラステスト陽性植物糖脂質は様々な用途に使用できる． その第１の理由は、原料が人間その他の動物により常食
ざれているものなので、人閏その他の動物への投与に当
り憂慮すべき問題点が皆無であることにある． 第２の理由は、そのまま、或いは任意の程度に希釈した
形で、又、乾燥粉末として提供することもてきるので、
提供できる形態が極めて多岐に渡っている点にある。 第３の理由は安価であることにある。 このような利点を持つ本発明のリムラステスト陽性植物
糖脂質の一つの用途は、その免疫機能活性化能をそのま
ま生かした免疫機能活性化剤、動物用免疫機能活性化剤
である． 第２の用途は、その免疫機能活性能を指標にして人閏そ
の他の動物の免疫機能をチェックするための免疫機能検
査薬、動物用免疫機能検査薬である． 第３の用途は、その免疫ｍ能活性化能の発現を朋持して
配合される医薬部外品、化粧品、食品、機能性食品、飲
料、飼料等である．例えば、本発明のリムラステスト陽
性植物糖脂質を配合した化粧品は皮膚の老化防止、新陳
代謝促進に役立つので、常に、又、末長く皮膚を新鮮に
保つのに役立つ。 提供できる剤の製造方法 これら免疫機能活性化剤等のいずれもが常法で製造でき
る。例えば、免疫機能活性化剤、動物用免疫機能活性化
剤は医薬或は動物薬製造の常法にｉκって、経口薬とし
て、或いは静注薬、筋注薬として単独で、或いは他薬と
の配合物として処方できる．又、皮膚にはマクロファー
ジが多いので、皮膚塗布剤として投与するとより高い効
果が得られる． 以下、実施例、実験例により本発明を更に詳繍に説明す
る． 実施例！ ■小型二−ダに、１．０９％の灰分を含む硬質小麦粉（
アメリカ又はカナダ産のハードレットスブリング）（３
，１２０ｇ）を入れ、２．０３１１の蒸留水を加えて１
０分間練ってトウとした。１５分間の静置後に１０艷の
水を加えてゆるやかに攪拌してデンブン乳液を洗い出し
、同時に可溶性成分を溶出させた．この溶出液を５℃の
冷蔵庫中で１２時間静置したのちデンブン等の沈降部を
除去した．上澄み液をイ粟結乾燥して２０１．１ｇの粉
末を得た（粉末Ａ）． 更に、残留トウに５地の蒸留水を加えてゆるやかに攪拌
し，以下、上記と同様に処理して４０．１ｇの粉末を得
た（粉末Ｂ）． ■これら事ａ末Ａ．Ｂをアミコン冫上製限外濾過機正｛
Ｆ−Ｌａｂｌに供し、分子量画分５，０００については
中空系カートリッジＨＦ−ＬａｂｌＰＭ５を、分子量画
分１０，０００については中空系カートリッジ｝ｌ　Ｆ
　−　Ｌ　ａ　ｂ　Ｉ　Ｐ　Ｍ　］　０を取り付けて限
外濾過を行った［温度５〜１０℃．人圧２５ｐｓ　ｉ　
（１．７６ｋｇ／ｃｍ２），出圧１５ｐｓ（１．０６ｋ
ｇ／ｃｍ２）］−その結果に基づき、各部分を次のよう
に命名した． 粉末Ａ：分子量５，０００以下の部分をａ１分子量５，
０００以上の部分なａ２ 粉末Ｆ｛；分子１５．０００以下の部分をｂ１分子量５
，０００以上の部分をｂ２ 粉末Ａ：分子量１０．０００以下の部分を８３分子量１
０，０００以上の部分をａ− 粉末Ｂ：分子量１０，０００以下の部分をｂ３分子量１
０．０００以上の部分をｂ４ これら各両分を後記実験例ｌに詳述する方法に準拠して
リムラステストに付したら、分子量５，０００以上の両
分には多置のリムラステスト陽性成分が存在するが、分
子ｔ５，０００以下の両分にはほとんど存在しないこと
が確認された．■上記粉末ａ２０３０ｇをｌａ三角フラ
スコに入れ、６　０　０　ｍ　ｌの蒸留水を注いで、６
０分閏スターラーで攪拌した後、日立冷却高速遠心機Ｓ
ＣＲ−２０Ｂ　（ローターＲＰＲ　１　６を事前に４℃
に冷却しておいた）で４℃で遠心分離操作 （１０　　０００ｇＸ１０分）に付して上溝を回収した
． ■この上清を１１三角フラスコに入れ、水冷下（液温約
２℃）、スターラーで攪拌しながら、事前に２℃に冷却
してあった１００％ＴＣＡ水溶液２０．５ｍｌを滴下し
、滴下終Ｙ後氷水中に１０分間放置した． ■次いで前記と同様にして４℃で遠心分ｌＩＩ操作（ｔ
ｏ．ＯＯＯｇＸ１０分）に付して沈殿を回収し、氷水中
で冷却下、３００ｍｌの蒸留水と共に５００ｍｌのビー
カーに入れて懸濁し、氷水中で冷却し、前記と同様にし
て４℃で遠心分Ｉａ操作（１０，ＯＯＯｇＸｌＯ分）に
付して沈殿を回収した． ■この沈殿をＩＩＬビーカーに入れ、蒸留水５００ｍｌ
で懸濁し、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液約３．５ｍｌを使
用して中＄０（ｐＨ７）Ｌ．、ついで、氷水中で冷却し
ながら、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液約２ｍｌを添加して
０．０２Ｎ水酸化ナトリウム溶液になるようにして沈殿
を溶解した．■ＩＮ塩酸約１．５ｍｌを加えてｐＨ８と
し、次いで１００ｍｌの蒸留水を加えた後にＩｔ三角フ
ラスコに移して３７℃のインキュベーター内で３０分間
ゆっくりｇｕｔ，た． ■１００％Ｔ　Ｃ　Ａ　＊　ｍ　Ｍｌ　３　０　ｍ　Ｑ
を加えて混合した後、３７℃のインキュヘーター内で１
０分間ゆっくりル盪してから、約３７℃に保温した遠心
分Ｉｌｔ器トミーＣＤＩＯＯＲ（｝ミーＩＩ！器社製）
を使用して遠心分Ｍ操作（３，０００ｇＸ　１　０分）
に付した． ■上溝を回収して水冷し、４℃で遠心分ｍ揄作（１０，
０００ｇＸＩＯ分）に付した．［相］上浦を回収してＩ
ＯＮ水酸化ナトリウム溶液約３、６　ｍ　Ｌで中ｌｕシ
て９Ｈ７とし、限外濾過器（東洋濾紙ＬＩＭＰ−　１　
５０，’７−（Ｌ９−　：　ＵＫ−１０．Ｎ２圧：４．
Ｏｋｇ／ｃｍ２）で濃縮した．０得られた瀦縮ＭＩ６　
０　ｍ　ｌを、セ７７ｏ−ス（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）６
ＢカラムＣ米国ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｊａ　
　Ｉｎｃ．）製、カラムサイズ：５ｃｍ（内径）Ｘｊ０
０ｃｍ（２ｔ）］を使い、ゲルＩｌ過ｃｍ＋液：】θｍ
ＭトリスーＨＣＩ／ｌＯｍＭＮａｃ１１（ｐＨ７．５）
、流速：６０ｍｌＬ／時］に付して、各２０ｍｌＬの両
分を得た． ＠初めから４３番目から５６番目迄の両分２　８　０ｍ
ｌｋを併せ、ブロナーゼＥ（科研｛ヒ学社）４５０μｇ
を加え、ｉｉｉｉＩ下、３７℃に２時間保温した後に、
限外濾過Ｗ（東洋繍紙ＵＨＰ−６２、フィルター：ＵＫ
　　１０ＳＮ２圧：４．Ｏｋｇ／ｃｍ２）で１縮した．
次いで、ファルマシア社製ＦＰＬＣシステム（カラム：
モノＱＨＲ　１　０／１０）を使って陰イオン交換クロ
マトグラフィーに付した．即ち、１０ｍＭ｝リスーＨＣ
ｌＬ（ｐ｝１７．５）と１０ｍＭのＮａＣＩＬを含む緩
衝液で試料をカラムに付した後、上記緩衝液に更に１６
５ｍＭのＮａＣｌを含む絹成をした液（２００ｍｌ）で
力ラムを洗った．次いて、１６５ｍＭからＩＭのＮａＣ
ｔ濃度勾配になるようにＮ　ａ　Ｃ　ｔｉｌ１度を増加
させながら全量４００ｍｌで目的糖脂質を溶出させ、各
２ｍｌの両分を回収した．リムラステスト陽性が確認さ
れた、濃度勾配をかけてから５〜８番目の画分を併せて
゛、糖脂質純度約９２％の８ｍ　Ｔ１　［糖脂７Ｊ　：
　３　．　９　：３　ｍ　ｇ（リムラステストによる大
腸菌１．．．　Ｐ　Ｓ換算値てある。以下の糖脂質量も
全てこの喚′＃罐である）、糖：０．２３ｍｇ、蛋白：
０．（１４ｒｎｇｌを回収した００次（ビＣその８ｍ９
を、セフ７デツクス（　Ｓ　ｅ　ｐ　ｈ　ａ　ｄ　ｅ　
ｘ　）　Ｇ　−　２　５　［カラム：２．０ｃｍ（内径
）Ｘ２０．２　ｃｍ　（（ｉ６ｒｎｌｋ）］を使−＞Ｔ
ケル繍過（緩１ｉ漬：水）に付して各３ｍｔの両分を回
収した．リムラステスト陽性の確認された第１）〜１２
ｔｉ目の画分を１ｎせて、糖脂質純度約９　５　％の１
２ｍｌ（糖脂Ｍ：２．７ｍｇ、糖：０．１　８ｍｇ．蛋
白：０．０３ｍｇ）を回収した。糖はフェノールー硫酸
法で、蛋白はローリー法で測定した。なお、この両分は
、陰イオン交換クロマトグラフィーにより酸性であるこ
とを確認した。 又，Ｓ　ＤＳゲル電気泳動法による分子量は６，０００
〜Ｉ（１，０００だった。 ・秒上記画分を−８０℃で凍結後に恒量になるまで凍結
乾燥し、重電を測定したら０．７５ｍｇあった。（以下
、この凍結乾燥標品をＣ　Ｈ　Ｆと称す）二のＣ　ＩＩ
　Ｆのリムラス活性を後記実験例１記載の方法で測定し
たら２．７ｍｇに相当するので、その比活性は　２．７
÷０．７５＝３．６　　になる。 また、以上のＩＩＩ製で、夾雑物として存在し得る単独
の糖は実質上全て除去されたと考えられるので、検出さ
れた糖は全て、糖脂質であるＣＨＦを構成している糖と
考えられる。従って、この段階でのＣ　Ｈ　Ｆの純度を
重量に基づいて計算すると、蛋白＝０．０３ｍｇ　　糖
脂［＝０．７５−０．０３＝０、７　２　ｍ　ｇ　　だ
から、 ０．７２÷０．７５Ｘ　１　００＝９６　（％）である
．Ｃ　ＩＩ　Ｆの物性 ０分子量 Ｃ　Ｈ　Ｆを蒸留水に溶解してｌｍｇ／ｔｎａｉ盲液を
調製し、その・ｌ／７　Ｒを１．５ｍ兄のトレフチ７一
７に入れた。これに、別途、ｌロＩＭのＥＤＴＡに２．
５％ＳＤＳ、５％メルカブトエタノール、］ＯｍＭトリ
ス塩酸（ｐＨ８．０）を加えてｖ４製したＳＤＳ処理ｆ
１１ｔｉＩｋを加え、この混液を３分間沸騰水に浸した
。ファルマシア社製のファストノステム（Ｐｈａｓ　ｔ
　　Ｓｙｓ　ｌｅｍ）をｆｅ　ｎｌ　Ｌ，、電極との間
にＳＤＳ−ハツファー　ストリップ（１’３ｕｆｆｅｒ
　　Ｓｔｒｉｐ）（ファルマシア社製）が介在せられた
暑μ艷の上記混液をゲル［ファルマシア１土製のフ７ス
ト　ゲル　クラディエン｝（Ｐｂａｓｔ　　　　Ｇｅｔ
　　　　　Ｇｒａｄｉｅｎｔ　　　　８−２５）に塗付
し、最大電圧２５０ｖ，最大ｔ流１　１）　ｔｎ　Ａに
セットして泳動を開始させた。泳ａ終了後、クマシー染
色と銀染色における挙動をａｔ；＜した。 クマシー染色では、染色液としてファルマシア製の０．
１％ファスト　ゲル　ブルー　（　Ｐ　ｂ　ａｓＬ　　
Ｇｅｌ　　Ｂｌｕｅ）　　　Ｒを、脱色液として、メタ
ノール二酢酸：蒸留水（容量比３：ｌ：６）７ｎ渣を使
用し７次の順序で染色・脱色を行った。 ■５０℃で８分間染色 ２１５０℃で５分問脱色 ３》５０℃で８分間染色 ４》５０℃でｌＯ分間脱邑 ５）５０℃で５分間保謹（グリセロール、酢酸、蒸留水
の容量比５：１０：８５混液） ６》蛇燥 銀染色は、次の順序で行った。 ■５０℃で２分間、洗ｈｆｉ＜エタノール、酢酸、蒸留
水の容量比５：１：４混液）で処理２》５０℃で２分閏
、洗Ｓ液（エタノール、酢酸、蒸留水の容量比１０：５
：８５混液）で処理３】５０℃で４分間、洗浄液（エタ
ノール、酢酸蒸留水の容量比１０：５：８５混液）で処
理４）５０℃で６分閏、増感液（８．３％グルタルジア
ルデヒド）で処理 ５）５０℃で３分間、洗浄液（エタノール、酢酸蒸留水
の容量比１０：５：８５混液）で処理６）５０℃で５分
閏、洗ｔ９Ｈ＜エタノール、酢酸蒸留水の容量比１０：
５：８５混液）で処理７）５０℃で２分間、洗浄液（脱
イオン水）で処理 ８】５０℃で２分閘、洗浄液（脱イオン水）で処理 ９１４　０℃で１３分問、０．２５ｗ／ｖ％硝＃銀て処
理 １０１３　０℃−Ｃ　３　０秒間、洗浄液（睨イオン水
）で処理 １１１３０’℃て３０秒間、洗浄液（脱イオン水）で処
理 １２１３　０℃で３０秒間、現像液（０．０４ｖ／ｖ％
ホルムアルデヒト＋２．５ｗ／ｖ％炭酸ナトリウム洗浄
液）で処理 １３１３０℃で４分間、現像液（０．０４ｖ／ｖ％ホル
ムアルデヒト＋２．５ｗ／ｖ％炭酸ナトリウム洗浄液）
で処理 １４１５　０℃で２分間、反応停止液（５％ｖ／ｖ％＃
酸）て処理 １５１５　０℃で３分間、保謹液（酢酸、グリセロール
、蒸留水の容量比１　０　：　８　：　８　５混液）で
処理 １６》乾燥 糖脂質はＩＩ染色に染まるが、クマシー染色には梁まら
ない性質を利用して染色帯を観察したら，分子量８，０
００±１，０００の位置にＣＨＦの主要染色帯が検出さ
れた。同様にして大腸菌ＬＰＳの染色帯を観察したら、
階段状に連続する染色帯が観察され、染色強度がＩｋ高
の染色帯の分子量は３０，０００±５，０００であると
推論された百日咳菌ＬＰＳては、分子量６，０００±１
，０００と９，０００±１，０００の位置に染色強度が
最高の染色帯が観察された。 ［相］レ含有一 チェンートリバラ（Ｃｈｅｎ−Ｔｏｒ　ｉｂａｒａ）法
［チｌン等著、ｒアナリティ力ル　ケミストリ（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ）　、ｖｏ　ｌ．２
Ｂ、１７５６　〜１７５Ｂ頁（１９５６年）に４拠して
次の通りに行った。 Ｃ　Ｈ　Ｆを蒸留水に溶解して、２５μｇのＣＨＦを含
む２０μ艷の溶液を調製し、小試験管に入れた．２０μ
艷の５０ｖ／ｖ％硫酸を添加し、１６０℃で２時間加熱
した．次いて、２０μ追の１０ｖ／ｖ％過塩素酸を添加
した後にガスバーナーで１分間加熱して灰化させた。そ
の後に０．５ｍｕの蒸留水、次いて０．５ｍｌの反応試
薬（ｌｍ艷の６Ｎ硫酸、２　ｍ　ａの蒸留水、２ｍＫの
２．５ｖ／Ｗ％モリブデン酸アンモニウム及び１ｍｌＬ
の１０ｖ／ｗ％のアスコルビン酸を混合して調製し、そ
の０．５ｍｌを使用）を添加して室温で３０分間放置し
た後に、８２０ｎｍでの吸光度（　Ｏ　Ｄ　ｓ２１−）
を測定した。なお、横ＩＩＨ作製用の試料としては、リ
ン酸二水素カリウム（和光純薬社製）を蒸留水で希釈し
、リンＮＩｌとしてそれぞれ２．５μｇ，ｌＩｉｇ，０
．２５μｇ．０μｇを含む０　．　５　ｍ　ＩＬの溶液
を調製して使用した．なお、リン１ｇはリン酸二水素カ
リウム４。３９ｇに相当する。得られた結果を次表１に
示す．表　　　１ γ↑：ＣＨＦのデータは、無機リンの混人（例えば、リ
ン酸緩衝液に由来する）による誤差を避けるために、加
Ｉ？！！処理をしていない対照のデータを減じた値であ
る。 Ｃ　ＩＩ　Ｆの分子量を８，０００と仮定し、Ｌ表の結
果に基づいてＣ　Ｈ　Ｆの１分子当たりのリン数を次式
により計算すると１〜４になる． 分子量　　　ｌ ｌン重量ＸＩＯ−６ＸＸ− ２５Ｘ１０−　　３２ 上記実験でリン数が１〜４と変動している原因の１つと
しては、精製段階でのモノフオスフ才エステラーゼの混
入により、リン酸が脱離したことも考えられる。 同様にして求められた大１１１菌ＬＰｓ、百日咳菌ＬＰ
Ｓ　（分子量はそれぞれ３０，０００と８，０００に仮
定）の１分子当たりのリン数はそれぞれ約１２個、５個
であった。 ■ヘキソサミン含有置 エルソンーモルガン（ＥｌｓｏローＭ　ｏ　ｒ　ｇａ　
ｎ　）　ｊｐ．（東京化学同人出版「生化学実験講座」
Ｎ０．４の３７７〜３７９頁）に準拠して次の通りに行
った． ＣＨＦを蒸留水に溶解してｌｍｇ／ｍａの溶液を調製し
、その１００μ交をスクリコーキセッブ付きスピッツ（
イワキガラス社製）に入れ、これに１００μ免の８　Ｎ
　Ｈ　Ｃ　ｆＬｌｔ添加して１１０℃で１６時閏加熱し
た．４ＮＮａＯＨを約２ｏｏμｍ添加してｐＨ７とした
。その１００μ１を分取し、別のスクリューキャップ付
きスピッツに入れ、２００μ化の下記試薬Ａを加えた後
に、１０５℃で１．５時閘加幼し、次いて流水で冷却し
た。次いて、１　０　０　ｌｔ　Ｑを分取し、６７０μ
艷の９６％エタノールを加え、更に、６　７　Ｂ　Ｑ．
の下記試薬Ｂを加えた後に室温でｌ時間放置し、５　３
　５　ｎ　ｍで吸光度を測定した。検量線作製用試料と
しては０．２０〜２００μｇ／ｍｌＬのＮ−ア七子ル　
グルコサミン（ｔロ光純薬？上製）を使用した。 〈試薬Ａ）７５７７．ＩＬのアセチルアセトンと２．５
ｍ　Ｑの１．２５Ｎ倹酸ナトリウムを混合してｙ４製（
試薬Ｂ）１．６ｇのｐ−ジメチルヘンズアルデヒドと３
　０ｍＱの１塩酸と３　０　ｍ　ｌの９６％エタノール
を混合して調製 結果、ＣＨＦのへキソサミン数は６±２７分子（仮定分
子量８，０００）だった。同様にして測定さｈ　タ大ｖ
：ＪｉＬ　Ｐ　Ｓ　（仮定分子量３　０　，　０　０　
０）、百日咳菌ＬＰＳ　（仮定分子量８，０００）のへ
キソサミン数はそれぞれ４５±６／分子、Ｉ６±２／分
子たった。 ０脂肪酸含有量 ９０μ史のＣＨＦ蒸留水溶液（ｌｒｎｇ／ｍｌＬ）にｌ
θμ艷の内部標準（０．５５ｍＭのマルガリンＭ）を加
えた。１　．　０　ｍ覧の０．５Ｍナトリウムメチラー
トを加えて脂肪酸エステルの加水分解とエステル化を行
った。室温で１時間飲置後に９６　０　／ｌ　Ｑの０．
５ＮＨＣｌを加えて中和した。これに２ｍｌのヘキサン
を加えて１５分間激しく攪拌した。次いで、１，０００
ｇで５分間遠心分離を行いヘキサン層を分取した。♀素
ガスでヘキサンを蒸発させて、約２０μ灸になるまで濃
縮した。 このサンプルをガスクロマトグラフィー［本体：島津社
製のＧ　Ｃ　８　Ａ　Ｐ　Ｆ、キャビラリーカラｌ１：
スベノレコ（Ｓｐｅｌｃｏ）冫土くカナダ）製ＦＳＣＡ
Ｐ　　Ｓｐ２３３０、キャリャーガス：窒素］に付して
脂肪酸量を測定した。脂肪酸量測定の基準としては、第
一化学薬品社製の合成リビドＡてある大Ｍｌ薗型ＬＡ−
　１　５−ＰＰ　（分子１２，０００で、１分子中の脂
肪酸数は６てあることが知られている）を用いた。 結果、Ｃ　Ｈ　Ｆの脂肪酸数は６±２／分子（仮定分子
１８　，　０　０　０）であると推定された．同様にし
て推定された大１１１菌ＬＰＳ（仮定分子＠３０，００
０）．百日咳菌ＬＰＳ　（仮定分子量８，０００）の脂
肪酸数はそれぞれ】８／分子、５／分子たー〕た。 上記ガスクロマトグラフィーで観察されたチャートを添
付図面第１〜３図に示す。第１１！ＩはＣＨＦの、第２
図は大Ｉｌｌ菌ＬＰＳの、第３図は百日咳菌Ｌ　Ｐ　Ｓ
のチャートである。 第１〜１３図において、図示されている主要ピーク番号
に対応する保持時間（分）は次の通りであった。 第１図：　ビーク番号　　侃持時蘭（分）１　　　　　
　　　２．４５０ ２　　　　　　　　２．７５８ 第２図： ピーク番号 ？ＬＵ！Ｌ耶間（外Ｑ■ー ２．４１７ ２ ２．　　７４２ 第３図： ピーク番号 堡持時間（分） ｌ ２．　　４３３ ２ ３．　　０２８ 第１〜３図の比較により、Ｃ　Ｈ　Ｆのチャートは大％
Ｉ菌Ｌ　Ｐ　Ｓのチャートに似ているが、百日咳菌ＬＰ
Ｓのものとは大きく異なることは明白である．実験例Ｊ
（リムラステスト陽性植物糖脂質の定量：各種植物に含
まれるリムラステスト陽性植物糖脂質の定量を、生化学
工業株式会社のトキシカラーシステムを使って行った． ■９６穴の平底または丸底プレートに注剖用蒸留水を１
穴当たり１８０μ艷入れた．試料２０μ化（試料が固体
の場合には注射用蒸留水に溶Ｍ　Ｌ／て調製した）をプ
レートの穴の１つに加えた。プレートミキサーで攪拌し
ながらビペッティングを行って１０倍希釈液を調製した
。（以後、順次希駅試料を２０ｔ１９．ずつとり、同様
に処理することで１００倍、１０００倍、・・・と１０
倍希釈系列液を調製できる。また、注利用蒸留水と試料
の量比を変えることにより希釈率は任意に設定できる。 ）■内部標準として１．δ７ｌｇ　／　ｍ鼠の大１１１
ｉ１ＬＰＳ溶液の１００．０００１７！希釈液を調製し
、希釈やリムラステスト発色が正常であることを確認し
た． ■上記■の１０倍希釈液３５μ地を別のプレートの穴に
とり、生化学工業株式会社のトキシカラ一システムのＬ
Ｓ−１セット３５μλを添加し、３７℃て；１０分間放
置した．ついて１０５μ艷のｌＭ＃＄酸水を加えて攪拌
して反応を停止させた。 この試料液の波長４１５ｎｍての吸光度を、９６穴川吸
光度計プレートリーダーＭＴＰ−１００（コロナ電気株
式会社！！）で測定した．パックグラントとしては蒸留
水を、検量線作成用としては４２ｐｇ／ｍｌの生化学工
業株式会社のトキシカラーシステムのＥＴ−１セットを
使用して検量線を作成し、この検量線を基準にして各試
料中のリムラステスト陽性糖脂質の定量を行った．（試
料が蒸留水である場合の吸光度を０とした．）なお、こ
の方法で前記ＬＳ−　１セウトを使用した場合には１０
〜４　５　ｐ　ｇ　／　ｍ　ＩＬの範囲内で発色に定量
性があることが確認されたので、この範囲に入らないと
きは、希釈率を変えて再実験した。 希釈試料の定量値は、 （検量線から読み取った＊）　Ｘ　（希釈率）で計算し
た。 得られた結果を、固体試料の場合にはロｇ／ｇ単位で、
液体試料の場合にはｎ　ｇ／ｍｕ単位で次表２に示す。 なお、表中の試料の欄の会社名、地名等は、当該試料の
人手先、産地をさす．かかる記載がない品はスーパース
トアー忠実屋の神奈川県津久井郡中野町店で購入した品
で、製造者が不明なものを指す． 表　　２ リムラステスト陽性 試料（固体）　　　　　糖脂質量　（ｎ　　）譚子Ｍ物 松の実く興南貿易）　　　　　　　　　　　ｌ２５単子
葉類 硬質系小麦橿子（千葉製粉）　　　　２，２５０硬質系
小麦種子く千葉製粉） （分子量５０００以上）　　　１，０００，０００硬質
系小麦粉（千葉製粉）　　　　　　７，５００小麦ふす
ま（千Ｍｌｌ扮） （分子量５０００以上）　　　　　　　　３００小麦胚
芽（千葉製粉）　　　　　　　　　１，６００小麦胚芽
（千葉製粉） （分子１５　０　０　０以上） 玄米 米粉（日の本穀粉） （分子１５０００以上）　３１， 米ぬか 米ぬか（分子量５０００以上） コーンフラワー（大洋飼料） （分子量５０００１Ｊ上） コーングリッツ（大洋飼料） （分子量５０００以上） コーン（和光食ｔＩ） クマ笹（閏本物産） アヤメ（種子） ニンニク＜ｍ茎〉 アスパラカス（芽） ミョウガ（花房） ヨクイニン（ウチダ和漢薬） ハンゲ（松浦藁業） バクモントウ（栃木天海堂） ＜１０．０００ １，　　１００ ０　０　０　， Ｏ　Ｏ　Ｏ ２　９　， Ｏ　０　０ ５００，　　０００ く０． ３ １　５　， ３　， １２０ ２　０　０ ０　０　０ ３　０　０ ７　０ ５　０　０ ０　０　０ ３　０　０ ５　０　０ ０　０　０ ターメリック（エスビー食品）　　　１９５．０００双
子葉類 大豆（三女食品）　　　　　　　　　　　１５ｏ大豆（
ほくれん）（分子量５０００以上）４００丹波黒大豆（
和光食檀）８６ 小豆（和光食糧）　　　　　　　　　　　４５ｏ小豆（
和光食糧） （分子量５０００以上）　３６，０００，０００ひたし
豆（和光食糧）　　　　　　　　　　８ｏｏ大正金ＦＭ
Ｉ（和光食糧）　　　　　　　　　　５　５　０大福豆
く和光食ｔＩ＞　　　　　　　　　　　　３５０そら豆
（生）　　　　　　　　　　　　　７５ｏジャカイモ（
ほくれん） （分子量５０００以上＞　　　　　　　　＜Ｏ．　ａビ
ワ（種子）　　　　　　　　　　　　　　　８００アボ
ガド（種子）　　　　　　　　　　　９５０モモ（種子
）　　　　　　　　　　　４，５００クルミ（種子）　
　　　　　　　　　　　１．９００ソラ豆（橿子）　　
　　　　　　　　　　７５ｏカボチャ（種子）　　　　
　　　　　　１０，０００トマト（生の実） カイワレダイコン（根を除く） マタタビ（丸久物産） アマチャズル（Ｋ．Ｋ．桜井） トクダミ（温ａ重量当たり） （帝京大学薬用植物園） 胡叡（白）（エスビー食品） トウカラシ（興南貿易） 八角（興南貿易） ナツメグ（ライオン） トウヒ（ウチダ和漢薬） カッコン（栃木天海堂） 甘草（ウチダ和漢薬） ニンジン（ウチダ和漢薬） ボウフウ（栃木天海室） カンボウイ（栃木天海堂） チョウトウコウ（ウチダ和？ＩｒＭ） シダ植物 スギナ（湿潤重量当たり） （帝京大学薬用植物園） １０，　　５００ ５０，　　０００ ４０，　　０００ ？３，　　０００ ｌ　， ２　， ２　， ５　， ２　． ８　， ３　， １８， ４　５　， ５０， ６　０　０　， ７　， ２　０　０ ３　０　０ ３　０　０ ５　０　０ ０　０　０ ０　０　０ ０　０　０ ０　０　０ ０　０　０ ０　０　０ ０　０　０ ０　０　０ ７　０　０ ゼンマイ（閏本物産） Ｄ１ わかめ（三陸天然品） わかめの芽株 ひしき（生） 芽ひじき（小善本店） コブ（ヤマトタカハシ） アサクサノリ（乾燥生ノリ） クロレラ （ヘルスタージャバンＹＳ） （マンナンフーズＹＳ） Ｉ 椎茸（下仁田産） えのき茸（長野県中野市） しめし（勢多郡宮城町） まいたけ（大利Ｉ！） あわび茸（羽生） マッシュルーム き〈らげ ナメコ １０，　　０００ １１，０００ ２００，　　０００ ８５，　　０００ １０５，　　０００ ２３５，　　０００ １３０，　　０００ １，　　９００， １，　　０００， ０　０　０ ０　０　０ １６．　　０００ ２０，　　０００ ４０，　　０００ ２０５，　　０００ Ｂ．　　０００ ２０，　　０００ ７５，　　０００ ２１．　　０００ エヒオス ２５０．　　０００ 冬虫夏草 ２４０，　　０００ リムラステスト陽性 越エ科一（液体）　　　　　　糖脂質量　（ｎ　ｇ）ビ
ール キリン　ファインとルスナー　　　　１，１５０ラガー
ビール　　　　　　　１，２５０ハートラント　　　　
　　　１，５５０ファイントラフト　　　　　１，４０
０アサヒ　スーパーイースト　　　　　　　　６００囚
工λ サントリー　　サントネージュ（白）１３（赤）２４ シ一ドル（アップル）　　　９００ 辻１顕遵 大間一級（大間酒造） 黄桜二級（黄桜酒造） 大寒吟醸二級（玉東堂酒造） ｐ』 ２　．　４ １　．　７ 日々一献（大間酒造）　　　　　　　　　　１２薬味酒 陶陶酒デルカツブ（陶陶酒本舖）１．２０ 宝焼酎（宝酒造）　　　　　　　　　　　＜２．　０そ
の他 キョーレオビン（湧水製薬）　　　　　　６ｏｏニンニ
ク抽出液（湧永製薬）　　　　　　３５ｏ実験例２ Ａ，内因性ＴＮＦ産生促進能の測定 （ｐ各群３匹のマウス（７週齢のメスＣ３Ｈ／Ｈｅ平均
体重２５ｇ）の尾静脈に、ブライマーとしての各検体を
溶解した生理的食塩水０．２ｍλを静γ↑し、その３時
間後にトリガーとしてＯ　Ｋ　−４３２をＩＫＥ　［ク
リニンシュ　アインハイト（Ｋｌｉｎｉｓｃｂｅ　　Ｅ
ｉｎｂｅｉｔ）系単位であり、ＩＫＥは０．１ｍｇの乾
燥細菌を含む製剤量にあたる］を溶解した生理的食塩水
０．２ｍλを同じく尾静脈より投与した。トリガー投与
０２時間後に血清を採取し、Ｌ　９　２　９　ＩＩ胞に
対する毒性に基ついてＴＮＦ活性を測定した。結果を、
各群３匹の平均として添付図面の第４図に示す．この図
から、本発明のリムラステス｝ＦＷ性植物糖脂質がＯＫ
−４３２と同程度の内因性ＴＮＦ産生促進能を示すこと
は明瞭である．叉、本発明のリムラステスト陽性植物糖
脂質が内因性ＴＮＦ産生促進能を発揮する量には最適量
があることも推測される。 ■別途、各群３匹のマウス（７１４齢のメス０３Ｈ　／
　Ｈ　ｅ　．平均体重２５ｇ）に、ブライマーとしての
各検体を経口投与（各検体を２００μ鼠の蒸留水に溶解
して、経口針で宵内に直接に投与）し、その後は、上記
静注の場合と同様に処理した。 結果を、各群３匹の平均として添１１図面の第５図にボ
す。 この図から、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質が
経口投与によっても内因性ＴＮＦ産生促進能を示すこと
は明瞭である。 ■別途、各群３匹のマウス（１２週齢のオスＣ３　Ｈ　
／　Ｈ　ｅ　，平均体重２９ｇ．）の尾静脈に、ブライ
マーとしての実施例１て得られた粉末Ａ−ａ２を様々な
量で含む生理的食塩水０．２ｍｌ１を注射し、その３８
！間後にトリガーとしてのｌ．ＯＫＥ又は３．ＯＫＥの
Ｏ　Ｋ　−　４　３　２を生理的食塩水に溶解して総量
を０．２ｍａとし、同しく尾静脈より投与した。トリガ
ー投与の２時間後に血清を採取し、Ｌ９２９纏胞に対す
る毒性に基づいてＴＮＦ活性を測定した。結果を、各群
３匹の平均として添付図面の第６図に示す． 第６図から、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質が
内因性ＴＮＦ産生促進能を発揮する量には最適量がある
ことが推測される。 ■別途、各群３匹のマウス（９週齢のオスＣ３Ｈ／Ｈｅ
．平均体重２７ｇ．）の尾静脈に、ブライマーとしての
実施例１て得られた粉末Ａａ２を１１解した生理的食塩
水０．２ｍｌ［大１１１ＩＬＰＳ量に換算して１μｇの
本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質を含む）を注射
し、その３時間後にトリカーとしての１．ＯＫＥ又は３
．ＯＫＥの０　ｔ＜　−　４　３　２を生理的食塩水に
溶解して総量を０、２ｍｌとしで、同しく尾静脈より投
与した。 トリガー投与の２時間後に血清を抹取し、Ｌ９２９纏胞
に対する毒性に基づいてＴＮＦ活性を瀾定した．結果を
、各群３匹の平均として添付図面の第７図に示す。第７
図において、横軸は、ブライマーとトリガーとの投与間
閘を示す． 第７図から、本発明のリムラステスト陽性植物１■が最
適の内因性ＴＮＦ産生促進能を発揮するには、ブライマ
ーとトリガーとの投与ｒ：′Ｉ隔を考慮すべきことが推
測される。 Ｂ．内囚性ＴＮＦ産生能の測定 ■各群３匹のマウス（９遍齢のオスＣ３Ｈ／｝｛ｅ．平
均体！２７ｇ．）の尾静脈に、ブライマーとしての実施
例１て得られた粉末Ａａ２を溶解した生理的食塩水０．
２ｍｌＬ（大關菌ＬＰＳ量に換算してｌｎＨの本発明の
リムラステスト陽性植物糖脂質を含む）又は生理的食塩
水のみ０．２ｍｌ（対照群）を注射し、その３時閏後に
トリガーとしての０−１０ｍｇの粉末Ａａ２を生理的食
塩水に溶解して総量を０．２ｍｌとして、同じく尾静脈
より投与した．トリガー投与の１時間後に血清、肝臓、
ひ臓、肺を採取し、Ｌ９２９ＩＩ胞に対する毒性に基づ
いてＴＮＦ活性を測定した．結果を、各群３匹の平均と
して添付図面の第８図に示す．第８図において、左上は
血清の、右上は肝臓の、左下はひ臓の、右下は肺のデー
タを示す。 第８図から、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂貿が
トリガーとしても有用であることが明らかである。 ■別途、各群３匹のマウス（９週齢のオス０３Ｈ／Ｈ　
ｅ．平均体重２９ｇ．）の尾静脈に、次表３に示す種々
のＴＮＦ　（１，０００単位）をブライマーとして含む
生理的食塩水０．２ｍｌ又は生理的食塩水のみＯ−　２
ｍｌ（対照群）を注射し、その３Ｒ閏後に卜リガーとし
てのｌｍｇの実施例１で得られた本発明の粉末Ａ　−　
ａ　２を生理的食塩水に溶解して総量を０．２ｍｌ１と
して、同じく尾静脈より投与した．トリガー投与の１時
間後に血清を採取し、Ｌ９２９纏胞に対する毒性に基づ
いてＴＮＦ活性を測定した。結果を、各群３匹の平均と
して添付図面の第９図に示す． 表　　３ 使用したブライマー ｒ−ＴＮＦ−Ｓ−ＡＭ２　（特開平１−９５７８４号公
報の実施例ｌに記載） マウスＴＮＦ−α（前掲プロシーディング　オブナショ
ナル　アカデミー　サイエンス　オプ　ユーエスエー　
８２、６０６０〜６０６４頁、１９８５年、に記載） サイモシンβａ／ＴＮＦ−Ｓａｎ＋　（Ｂ　ｉ　ｏ　ｃ
　ｈ　ｅ　−ｍｉｓｒｔｙ　　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ，ｖｏｌ．１Ｂ、Ｎｏ．３、５０１　〜５０Ｂ頁、
１９８９年、に記載） 第９図から、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質の
内因性ＴＮＦ産生能が、ブライマーとして各１！ＴＮＦ
を使用することにより、およそ３０倍になることが明ら
かである． ■別途、各０３匹のマウス（９週齢のオスＣ３Ｈ　／　
Ｈ　ｅ　＊平均体重２　９　ｇ　ｍ　）のマクロファー
ジ腹腔常在纏胞２００μａ（２Ｘ１０５個）／穴を９６
穴の平底プレートに入れ、ブライマーとしての組換えマ
ウスＩＦＮ−ｒ　（１００単位／　ｍ　ＩＬ）を各穴に
１０μ気を加え、その３時閏後にトリガーとしての、実
施例ｌ記載の本発明の粉末Ａ　−　８　２（　２　ｍ　
ｇ　／　ｍ　ｌｉ）を１０μ１／穴、又は大關菌ＬＰＳ
　（　１　１１　ｇ／ｍｌ）を１０μ地／穴加えて２時
間培養し、ピペットで各穴から１３０μ気の上溝を回収
し、Ｌ９２９纏胞に対する毒性に基づいてＴＮＦ活性を
測定した．結果を、各群３匹の平均として添付図面の第
１０図に示す．図中、Ｏは本発明のリムラステスト陽性
植物糖脂質である実施例ｌの粉末Ａ−８２の、●は大ｌ
ｌＩ菌ＬＰＳのデータを示す。又、▲は粉末Ａ　−　ａ
　２及び大關鑓Ｌｐｓの、Ｌ９２９に対する直接毒性を
示す（共に値がＯであった）． １１！１０１！Ｉから、本発明のリムラステスト陽性植
物糖脂質の内因性ＴＮＦ産生能が大関菌ＬＰＳと同程度
であることが明らかである。 第１１図は、第ｌθ図に示された本発明のリムラステス
ト陽性植物糖脂質の内因性ＴＮＦ産生能と、リムラステ
ストにより測定された本発明のリムラステスト陽性植物
糖脂質の含量とを対数正規確率紙に示した図である。 第１１図から、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂貿
の含量と内因性ＴＮＦ産生能との相関度が極めて高いこ
と、従って、又、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂
質が内因性ＴＮＦ産生能を有することは明らかである． ■各群２匹のマウスく７週齢のオスＣ３Ｈ／Ｈｅ．平均
体重２５ｇ．）の尾静脈に、リムラス活性量で１又は３
μｇのＣＨＦを含む生理的食塩水０．２ｍｌを注射し、
その１時間後に血清を採取し、Ｌ９２９細胞に対する毒
性に基づいてＴＮＦ活性を測定した．結果を、各群２匹
の平均として次表４に示す． 表　　４ ■各群２匹のマウス（７週齢のオスＢＡＬＢ／ｃ６平均
体１２５ｇ．）の尾静脈に、ブライマーとしての、リン
数が１分子当たり３１１Ｎと推定されるＣＨＦのＩｎｇ
（リムラス活性ｆｆｉ）を含む、又はそれを含まない生
理的食塩水０．２ｍｌを注射し、その３時間後にトリガ
ーとしてのＩＫＥのＯＫ　−　４　３　２を生理的食塩
水に溶解して総量を０．２ｍｌとして、同じく尾静脈よ
り投与した．トリガー投与の２時間後に血清を採取し、
Ｌ９２９細胞に対する毒性に基づいてＴＮＦ活性を測定
した。 結果を、 各群２匹の平均として次表５に示す。 人一一旦 ■各群２匹のマウス（７週齢のオスＢＡＬ［ｌ／Ｃ．平
均体重２５ｇ．）の尾静脈に、ブライマーとしての、リ
ン数が１分子当たり３１１と推定されるＣ　Ｈ　Ｆの］
ｎｇ（リムラス活性量）、又は大關菌１−　Ｐ　Ｓのｌ
ｏｇを含む生理的食塩水０．２ｍｌｋを注射し、その３
時間後にトリガーとしての１μｇ（リムラス活性量）の
ＣＨＦ又は１μｇの大腸菌ＬＰＳを生理的食塩水に溶解
して総量を０．２ｍｌＬとして、同じく尾静脈より投与
した．トリガー投与の１時閏後に血清を採取し、Ｌ９２
９細胞に対する毒性に基づいてＴＮＦ活性を測定した．
結果を、 各群２匹の平均として次表６に示す。 表　　６ 上記表４〜６に示された結果から、Ｃ　Ｉｆ　Ｆの分子
中にリンは最低１個あれば、ＴＮＦ産生促進能、産生能
が低下することはないと推定される．実験例３（ＴＮＦ
産生局所誘導作用の測定）上記実施例ｌて得られた粉末
Ａ　−　ａ　２を生理的食塩水に斐濁し、得られた０．
２ｍｌの懸濁液（２０μｇの本発明のリムラステスト陽
性植物糖脂質を含む）を各群３匹のマウス（繊維芽肉腫
メスＡ担癌７日齢のＢＡＬＢ／ｃ雄マウス．平均体重２
４ｇ．）の尾静脈に注射し、その後６時簡に渡って血清
、腫＃Ｉｉ絹織、肝臓、肺、ひ臓におけるＴ　Ｎ　Ｆ産
生量の経時変化を、これら各朝織抽出液のＬ９２９纏胞
に対する毒性値を指標として測定した。 結果を、各群３匹の平均として添付図面の第１２図に示
す。第１２図において、●は血清の、▲は腫瘍組織の、
は肝臓の、口は肺の、■はひ臓のデータを示す。 第１２図より、腫瘍絹織でのＴＮＦ産生が長時間に渡り
持続されることが明らかである．Ｏ）各群２匹の６週齢
のオスＢＡＬＢ／ｃ　　ｎｕ／ｎｕマウス（体重１９〜
２３ｇ）にブライマーとしての生理的食塩水のみを２　
０　０ｍｌ（Ａ＆ｆｆ）か、前記実施例ｌで得られた１
μｇの粉末Ａ−ａ２を２　０　０　ｍ　ｌの生理的食塩
水に懸濁したもの（Ｂ群）を尾静脈から静注するか、前
記実施例Ｉで得られた粉末Ａａ２をｌｍｇ／ｍａ含む５
０％グリセリン水ｉ液（Ｃ群）を腹部全体に２０分間隔
て３回又は６回塗付した（１回塗付置は１００μｋ）．
■静注又は塗付完了の３時間後にトリガーとしてのＩＫ
ＥのＯＫ−４３２を尾静脈から静注し、その２時閏後に
血清を採取して、各２０μ地のし９２９障害活性に基づ
いてＴＮＦ活性を測定した．結果な各群２匹の平均とし
て次表７に示す．青一一ヱ ＡＩ　　　　　２単位／ｍｌＬ Ｂ群　　２７０単位／ｍ地 Ｃ群　　　　８単位／　ｍ　１ Ｂ．カーボン除去能 ■各群３匹の１０週齢のオスのＢＡＬＢ／ｃマウス（平
均体重２４〜２９ｇ）の腹部に一日一回、５日にわたっ
て各回５０μ鼠の５０％グリセリン水溶ｆｌ（Ａ群）か
、前記実施例ｌで得られた粉末Ａ　−　ａ　２をｌｍｇ
／ｍｌＬ含む５０％グリセリン水溶液（Ｂ群）か、大騙
菌ＬＰＳを２　ｕ　ｇ／ｍａ含む５０％グリセリン水溶
ｊａ（Ｃ群）を塗付し、Ｄ群には５日目のみに大１１ｉ
ｉＬＰｓを１　５　ｕ　ｇ／ｍａ含む２００μ鼠の生理
的食塩水を尾静脈より静注した． ■各検体のｉ後の塗付又は静注の２日後に、力−ボンと
してロットリングインク　アート５９１０１７（西独口
ットリング社製）を生理的食塩水で６倍希釈液として各
マウスに体重の１００分の１量を尾静脈から静注した． ■カーボン静注の５分後に採血し、各全血２０μ良を２
ｍｌのｌ％Ｎ８２ＣＯ３て希釈し、カーボン１度をＯＤ
ａａ＠で光学的に測定した．結果を各群３匹の平均とし
て次表８に示す。 表中、Ｅ群は、カーボン静注直後に採血をした群であり
、カーボン除去率が「Ｏ」の場合に該当する．又、Ｆ群
は、正常マウスの血液２０μ艷の光学的データである（
バックグランド）．カーボン除去率は次式に従って、計
算した．Ｅ群の値一Ｆ群の値 表　　８ 群　　ＯＤａａ＠吸光度　カーボン、去率（％）Ａ　　
　　０．５４７　　　　　　　　　　　　　　２４Ｂ　
　　　Ｏ．４５０　　　　　　　　　　　　　　５３Ｃ
　　　　　Ｏ．４８０　　　　　　　　　　　　　　４
４Ｄ　　　　Ｏ．３２０　　　　　　　　　　　　　　
９３Ｅ　　　　Ｏ．６２５　　　　　　　　　　　　　
　　　０Ｆ　　　　　Ｏ．２９６ 実験例５（骨杉成促道能の測定） ■ふ卵後１８日目の鶏胚の左右の頭頂骨（左右各１本存
在）を採取し、”Ｃ　ａ　（ａ５Ｃ　ａ　Ｃ　１１２と
して０．５μＣｉ／ｍ気）を含む１ｍｌＬの完全合成培
地ＢＧＪｂ−ＨＷ２（Ｉｌ成は以下に示す）の入った別
々の試験官に入れ、水浴中で２時間培養して骨を４％Ｃ
Ｂで標識した． 成　　　　　　　分　　　　　　　　　　　　量　（ｍ
　　ハ）Ｌ−リジンＨＣ鬼 ２　４　０ Ｌ−ヒスチジンＩ｛ＣＩＨｚＯ １　５　０ Ｌ−７ルギニンＨＣＩＬ Ｌ−スレオニン Ｌ−バリン Ｌ一ロイシン Ｌ−イソロイシン Ｌ−メチオニン Ｌ−フエニルアラニン Ｌ−｝リブトフ７ン Ｌ−チロシン Ｌ−システィンＨＣ北◆Ｈ２０ Ｌ−グルタミン グリシン Ｌ−セリン Ｌ−ブロリン ニコチン酸アミド チアミン｝Ｉ　Ｃ免 バントテン酸カルシ１クム Ｊボフラビン ビリドキサールリン酸 葉酸 ７　５ ７　５ ６　５ ５　０ ３　０ ５　０ ５　０ ４　０ ４　０ ９　０ ２００ １　５　０ １０５ １１５ ２　０ ４ ０　． ０　． ０　． ０　， ビチオン　　　　　　　　　　　　　　０．２ｐ−アミ
ノ安息香ｒＩ！ｉ２ α−リン酸トコフェロールＮａ　　　　　１塩化コリン
　　　　　　　　　　　　５０ｍ−イノシトール　　　
　　　　　　　０．２シアノコバラミン　　　　　　　
　　　　０．０４Ｎ　ａ　Ｃ　９．・乾燥物　　　　　
　　８，０００ＫＣｔ１乾燥物　　　　　　　　　　４
００ＣａＣｌＬ２・一水　　　　　　　　　１３９．７
Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ　ａ　１真水　　　　　　　　　　９７
．７ＮａｚＨＰＯａ・２Ｈ２０　　　　　　　　６０．
１同上乾燥物　　　　　　　　　　　　４７．９ＫＨ２
ＰＯ遮　　　　　　　　　　　１６０Ｆ　ｅｃａｘ・６
１１２０　　　　　　　　　　　０．４７７トウ糖・乾
燥物　　　　　　５，０００（以上の成分を蒸留水に溶
解して全量をｌａとした後に、以下の成分を添加する） 牛血清アルブミン　　　　　　　　　ｌＯＮａＨＣＯ３
　　　　　　　　　１，４０ＯＬ−アスコルビン酸Ｎａ
　　　　　　　５０ペニシリンＧ　−　１＜塩 １　０ ストレプトマイシン Ｉ　Ｏ フェノールレッド 適量 ■この標識後、各頭頂骨をＰＢＳ（−）（ニッスイ社製
）で洗い、次いて、各１ｍｌの非標識完全合成培地ＢＧ
Ｊｂ−ＨＷ２を含む培養管に入れて密栓し、回転培養器
を用い、３０℃で一晩ｔｆ！養した。この壇！Ｉ朋閏中
に培地に放出さ九た４６Ｃａは物理化学的交換反応に因
るものであり、真の骨吸収活性を反映するものではない
と考え、ｔＦ！地は廃棄した。 ■左右の頭頂骨の一方を、Ｉｍｌの非標識完全合成培地
ＢＧＪｂ−｝ＩＷ２のみが入った培養管に入れ、他は、
各種１度の実施例１て得られた本発明のリムラステスト
陽性植物糖脂質である粉末Ａを含む１ｍｌ１の非標識完
全合成培地ＢＧＪｂ−ＨＷ２が入った培養管に入れて密
栓し、回転ｉｆｆ　Ｉ　Ｗでざらに−・映培養を続けた
． ■培地（各２　５　０　Ｂ　１１）を４．５ｍｌＬのＡ
ＣＳ　１Ｉシンチレーター（英国アマシャム社！！）に
加え、液体シンチレーションにて計数して、培地中への
”Ｃａｔｌｉ出量を調べた． ■培ｌＩ後の各頭頂骨をＰＢＳ　（−）で洗浄後、ｌｍ
ｌのＩＮＨＣＩＬの入った培養管に移し、密栓後に一晩
室温で放置した。培地（各２５０μ０を４．５ｍｌのＡ
ＣＳＩ１シンチレーターに加え、液体シンチレーション
にて計数して、骨に残存する４５Ｃａ量（４５Ｃａ残存
量）を調べた．結果を各群５試料の結果として次表９に
示す． 表　　９ ＰＴＨ＝既知の骨吸収ホルモンである副甲状腺ホルモン
であり、その１単位は約ｌμｇに相当する． 上記表から明らかな通り、粉末Ａの効果は用量依存的に
高まり、１０μｇの使用で、ＰＴＨ約ｌμｇの効果を越
える，ＰＴＨの供給は極めて少なく、しかも高価である
ので、粉末Ａ即ち本発明のノムラステスト陽性植物糖脂
質はＰＴＨの極めて安価な、しかも大量に供給ざれる代
替品として使用できる。 実験例６（産卵促進能、卵殻強度増強能の測定）前記実
施例ｌで得られた粉末Ａを水にといて一日当たり約３　
５　０ｍｌを１６日閏鶏に与え、投与日を含めて３０日
間に渡り毎日、各鶏の産んだ卯の数、その卵の般強度を
調べた．なお、実験に当たっては、粉末Ａの投与量の相
違によって次の３群に分け、１群は各６羽とした． Ｘ群：　６　０　０　ｍ　ｇ　／　ｍ　ＩＹ群：６０ｍ
ｇ／ｍｌ Ｚｎ：水のみ（対照群） 結果を次表１０に示す． 表 １ ０ 」二表ｌＯより、次の３点が明白である。 ■本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質である粉末Ａ
を投与したＸ群、Ｙ群においては、それを投与しない２
群の場合よりも、産卵数が増加している。特に、Ｘ群の
場合は１．３倍（１６５÷１２９）に達している．従っ
て、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質には産卵促
進能があると判断される。 ■本発明のリムシステスト陽性植物糖脂質である粉末Ａ
を投与したＸ群、Ｙ群においては、それを投与しないＺ
群の場合に比べ、総産卵数に占める、般強度が４　ｋ　
ｇ　／　ｃ　ｍ　２以上である卯の数の割合が２倍以上
になっており、本発明のリムラステス｝ｆ性植物ｔ［ｒ
ｉＩ質には、優れた卵殻強度増強能があると判断される
。 ■」一記産卵促進能、卵殻強度増強能は投与中止１壷も
観察されるので、本発明のリムラステスト曙性晴物糖脂
質の活性には優れた持続性があると判断される。 投与置、投与間隔、毒性値 本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質を免疫機能活性
化剤として、或いは、動物用免疫機能活性化剤として投
与するざいの置、投与間隔は、免疫機能活性化剤の本質
上、当然、担当医師或いは獣医師により、患者の年齢、
症状、産生ＴＮＦＩから推定てきる投与効果を勘案して
個別に決定されるが、人間の成人（５０ｋｇ）では、１
００％純度の精製標品の場合は０．１〜２００μｇが１
回投与量の一応の目安となる。 なお、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質は、純度
９５％の標品の場合、６週齢のマウス３匹（　Ｂ　Ａ　
Ｌ　Ｂ　／　ｃ　，オス、体重１９〜２３ｇ）に５　０
　ｍ　ｇ　／　ｋ　ｇを静注後４８時間観察したが死亡
例はなく、又、人間の成人（５０ｋｇ）１人当り１５ｇ
（活性成分量）を摂取しても特に急性毒性は観察されな
かった．なお、大腸菌ＬＰＳの上記と同種マウスにおけ
るＬＤｓ＠は８．４ｍｇ／ｋｇであるので、本発明のリ
ムラステスＩｌｌ性植物糖脂質は安全性が極めて高いと
言える． ［発明の効果］ 本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質は、従来の免疫
機能活性化剤とは異なり、原料が人間その他の動物が常
食しているものなので安全性の問題は少なく、従って、
化学療法係数が大きい。又静ｌ１のみならず，経口投与
、皮膚塗布もてきるのて段４」二の便宜が大である．加
えて、安価である更に、以上に述べたような特長を持つ
ゆえに、特別の注意を払うことなく、常法により容易に
医薬、動物薬、検査薬、医薬部外品、化粧品、食品機能
性食品、飲料、飼料その他の主成分として或は一成分と
して配合することができる．

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質をカ
スクロマトグラフィーにかけて得られる分子中における
脂肪酸の存在を示すピークを図示したチャートである。 第２図は、大腸ｉｉｆｔＬＰｓをガスクロマトグラフィ
ーにかけて得られる、分子中における脂肪酸の存在を示
すピークを図示したチャートである．第３図は、百日咳
薗ＬＰｓをガスクロマトグラフィーにかけて得られる、
分子中における脂肪酸の存在を示すピークを図示したチ
ャートである．第４図は、静注した場合の、本発明のリ
ムラステスト陽性植物糖脂質の、内因性ＴＮＦ産生促進
能を、対照及び従来の免疫機能活性化剤との対比で示す
グラフである． 第５図は、経口投与した場合の、本発明のリムラステス
ト陽性植物塘脂貢の、内因性ＴＮＦ産生促進能を、対照
及び従来の免疫機能活性化剤との対比で示すグラフであ
る． 第６ｖ４は、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質を
内因性ＴＮＦ産生促進剤として使用する隙の産生促進作
用発現における用量依存性を示すグラフである． 第７図は、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質を内
因性ＴＮＦ産生促進剤として使用する隙の産生促進作用
発現における産生促進剤／産生剤投与閏隔依存性を示す
グラフである． 第８図は、本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質の内
因性ＴＮＦ産生能を示すグラフである．第９図は、本発
明のリムラステスト陽性植物糖脂質の内因性ＴＮＦ産生
能が、産生促進剤として各種ＴＮＦを使用すると飛躍的
に増大することを冫ドすグラフである． 第１０図は、本発明のリムラステスト陽性植物糖ｒ′ｉ
ＩＩ（１）内因ｆｆＴＮＦ産生能ヲ、大Ｉ１ｉ１ＬＰＳ
との比較で示すグラフである。 第１１図は、第ｌＯ図に示された本発明のリムラステス
ト陽性植物糖脂質の内因性ＴＮＦ産生能と、リムラステ
ストによる当該糖脂質の含量とを対数正規確率紙に示し
た図である． 第１２図は、本発明のリムラステスト陽性植物糖詣質の
、ＴＮＦ産生局所誂導作用を示す図である． 第６図において、Ｏは内因性ＴＮＦ産生剤（ＯＫ−４３
２）の投与量がｌ．ＯＫＥの、●はそれが３．０ＫＥの
場合のＴＮＦ活性を示す．１８図において、○は内因性
ＴＮＦ産生促進剤として生理的食塩水を、内因性ＴＮＦ
産生剤として本発明のリムラステスト陽性植物糖脂質を
使った場合の、●は内因性ＴＮＦ産生促進剤、内因性Ｔ
ＮＦ産生剤として本発明のリムラステスト陽性植物糖脂
質を使った場合の内因性ＴＮＦ産生量を示す。左上のグ
ラフは血清の、右上のグラフは肝臓の、左下はひ臓の、
右下は肺のデータを示す．第１０図において、Ｏは本発
明のリムラステスト陽性植物糖脂貿の、●は大腸菌ＬＰ
Ｓのデータを示す。▲は本発明のリムラステスト閘性植
物糖脂質及び大ＩＩｌ菌ＬＰＳの、Ｌ９２９纏胞に対す
る直接毒性を示す（共に値は０である）．第１１図にお
いて、○はＴＮＦ活性を、●はリムラステスト陽性植物
糖ＮｗＬの含量を示す．第１２図において、●は血清の
、▲は腫瘍繕織の、は肝臓の、ロは肺の、■はひ臓のデ
ータを示す．

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）次の物性を有するリムラステスト陽性植物糖脂質
   。 分子量：８，０００±１，０００（ＳＤＳ電気泳動法） リン数：１以上／分子 ヘキソサミン数：６±２／分子 脂肪酸数：６±２／分子 （２）植物が裸子植物、単子葉類、双子葉類、シダ植物
   、ソウ類、菌類及びそれらの混合物からなる群から選択
   されるものである、請求項１記載のリムラステスト陽性
   植物糖脂質。 （３）単子葉類がイネ科植物である、請求項２記載のリ
   ムラステスト陽性植物糖脂質。 （４）イネ科植物がイネである、請求項３記載のリムラ
   ステスト陽性植物糖脂質。 （５）イネ科植物が麦である、請求項３記載のリムラス
   テスト陽性植物糖脂質。 （６）麦が小麦、大麦、裸麦、からす麦、えん麦及びそ
   れらの混合物からなる群から選択されるものである、請
   求項５記載のリムラステスト陽性植物糖脂質。 （７）ソウ類がカッソウ類、紅ソウ類、緑ソウ類、ラン
   ソウ類及びそれらの混合物からなる群から選択されるも
   のである、請求項２記載のリムラステスト陽性植物糖脂
   質。 （８）緑ソウ類がクロレラである、請求項７記載のリム
   ラステスト陽性植物糖脂質。 （９）菌類が担子菌類、子ノウ菌類及びそれらの混合物
   からなる群から選択されるものである、請求項２記載の
   リムラステスト陽性植物糖脂質。 （１０）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む免疫機能活性化剤。 （１１）免疫機能が骨形成促進能である、請求項１０記
   載の免疫機能活性化剤。 （１２）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む動物用免疫機能活性化剤。 （１３）免疫機能が骨形成促進能である、請求項１２記
   載の動物用免疫機能活性化剤。 （１４）免疫機能が産卵促進能である、請求項１２記載
   の動物用免疫機能活性化剤。 （１５）免疫機能が卵殻強度増強能である、請求項１２
   記載の動物用免疫機能活性化剤。（１６）請求項１記載
   のリムラステスト陽性植物糖脂質の少なくとも１種を含
   む免疫機能検査薬。 （１７）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む動物用免疫機能検査薬。 （１８）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む医薬部外品。 （１９）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む化粧品。（２０）請求項１記載
   のリムラステスト陽性植物糖脂質の少なくとも１種を含
   む食品。 （２１）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む機能性食品。 （２２）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む飲料。 （２３）請求項１記載のリムラステスト陽性植物糖脂質
   の少なくとも１種を含む飼料。