JPH0449243A - コレステロール低下剤、動物用コレステロール低下剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 が開発されているが、冠篠患発症に有効と認めら［産業
上の利用分野コ 本発明は、コレステロール低下剤、動物用コレステロー
ル低下剤に間する。

［従来の技術］ コレステロールはを椎動物等に見いだされる代表的なス
テロールであり、人間では、はとんど全ての細胞の通常
成分として遊離状もしくは脂肪酸とのエステルの形で存
在している。

疫学的にみると、血清コレステロール値と１血性心疾患
の頻度の間には強い相関があり、臨床治検から試算する
と、その値が１％低下すると冠動脈疾患は２％減少する
といわれている。しかもこの効果は、リスクの高いもの
ほど顕著であるといわれている。（１９８６年に南江堂
から発行された、安田寿−等編の「循環器疾患最新の治
療′８６−’　８７Ｊの４２４〜４２５頁）。

従って、従来より種々のコレステロール低下剤れた薬剤
はニコチン酸のみである（前掲の［循環器疾患最新の治
療’８６−’８７Ｊの４２５頁）。

［発明が解決しようとする課！ｌ］ ニコチン酸には、しかし、副作用の点や、重症低血圧患
者や動脈出血のある患者には投与できない（１９８６年
に履用書店から発行された、日本公定書協会監修の「第
十−改正日本薬局方解説書」のＣ−１２０７頁）等の点
に問題があり、常に新たなコレステロール低下剤の開発
が強く望まれている。

かかる現状に鑑み、本発明は、コレステロール低下効果
が高くて副作用が少なく、従って化学療法係数が高く、
持続性があり、かつ、生産コストが低く、しかも、経口
、経皮、注射て投与が可能な、大量に供給可能な新規な
コレステロール低下剤、動物用コレステロール低下を提
供するために完成されたものである。

［課題を解決するための手段］ 本発明により、ＬＰＳを含むコレステロール低下剤、動
物用コレステロール低下剤が提供される。

このコレステロール低下剤、動物用コレステロール低下
剤には、 インビトロで培養されるマクロファージのＴＮＦ産生能
を活性化するＬＰＳのマクロファージ活性化能を指標と
し、 縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファージ
のＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を０％
、マクロファージのＴＮＦ産生量を最大かつ一定のｉｆ
ｉ　（本明細書の他の箇所においては、「最大恒量」と
称す）にする時のＬＰＳのマクロファージ活性化能を１
００％とするマクロファージ活性化能（％）を表し、横
軸に、そのＬＰＳのリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を
対数尺で表すシグモイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤｓｅを与えるリムラステ
スト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜ｂ含まれる。

ここて「少なくとも１種を含む」とは、本発明のＬＰＳ
は各別に使用できることはもちろん、その意図される用
途が阻害されない限り、それらの２種以上を任意に組み
合わせて、又、更には他のいずれの物質とも組み合わせ
て使用できることを意味する。

「マクロファージ」は、免疫担当細胞の一種であり、動
物体内のほとんと全ての３Ａｍに分布し、粒子状の異物
や体内の老廃細胞などを捕食して消化する大型のアメー
バ状細胞の総称である。「ＴＮＦＪは、マクロファージ
により産生される腫瘍障害因子（Ｔｕｍｏｒ　　Ｎｅｃ
ｒｏｓｉｓＦａｃｔｏｒ）の総称であり［１９８５年に
発行された　ザ　ジャーナル　オブ　バイオロジカルケ
ミストリー（Ｔｈｅ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆＢｉｏ
ｌ、Ｃｈｅｍ、　、２６０．２３４５〜２３５４頁］、
マクロファージの活性が高まるにつれてその産生量は増
していく。

「リムラステスト」は、１９６８年にレヴイン（Ｌｅｖ
ｉｎ）により創案された、カブトガニ血球抽出液と発色
合成基質を用いたエンドトキシン定量法である。

本発明のコレステロール低下剤、動物用コレステロール
低下剤の活性成分として使用できるＬＰＳは特にその採
取源、生産方法、精製方法を限定されることはない。例
えば、細菌や植物から採取されるＬＰＳてあっても、或
は合成リピドＡのような合成品であってもよい。なお、
本明細書、特にその特許請求の範囲において、採取源は
特に名称で特定されたそのものに限定されることなく、
その採取源の成長、保存、流通の過程で付着、共存する
ａｉｍその他の全てのものが含まれる。例えば、「小麦
ＬＰＳＪと特定された場合には、小麦そのものから採取
されたＬＰＳのみならず、小麦の成長、保存、流通の過
程で付着、共存する細菌その他の全てのものが含まれる
ものと理解されたい。なぜならば、特に寄生植物、寄生
動物という関係が解明されているもの以外にも、特定の
植物、動物、菌界生物、地衣界生物に、それらにより付
着、共存を許されたものが棲息している例が多く存在し
得ることは当業界で良く知られていることであるからで
ある。

これらＬＰＳのうちから、本発明のコレステロール低下
剤、動物用コレステロール低下剤の活性成分として使用
できるＬＰＳｆｅ選択するには、インビトロで培養され
るマクロファージのＴＮＦ産生能を活性化するＬＰＳの
マクロファージ活性化能を指標とし、 縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファージ
のＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を０％
、マクロファージのＴＮＦ＆生量を最大恒量にする時の
ＬＰＳのマクロファージ活性化能を１００％とするマク
ロファージ活性化能（％ンを表し、横軸に、そのＬＰＳ
のリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を対数尺で表すシグ
モイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤ５１Ｉを与えるリムラス
テスト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜１０Ｑｎｇ／培［ｉ
液ｍｌＬであるものを選択すればよい。

ツムラステスト陽性！細菌ｉ！ＬＰＳ 従来より知られている大ｌｉｌ菌ＬＰＳ、百日咳菌ＬＰ
Ｓ、リヒトへ等が該当する。

大腸菌ＬＰＳは、例えば、米国デイフコ（Ｄ−ｉｆｃｏ
）社から市販されている。

百日咳菌ＬＰＳは、例えば、フナコシ薬品から市販され
ている。又、公知の百日咳菌、例えば、東浜株１ｔ［］
ｇの死菌体から、例えば、下記文献記載の公知方法によ
り調製することもてきる。

ウェブスター（Ｗｅｂｓｔｅｒ）等著の「ジェイ、イミ
ュノル（Ｊ、［ｍｍｕｎｏ　１．）　、７４４．５５　
（１９５５）； ウエストファル（Ｗｅ−ｓｔｐｈａｌ）等著の「ツエト
、ナツールフォルシュ（Ｚ、Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ’
）Ｊ、７６．１４８　（１９５２）。

リピｌ”　Ａは、例えば、第一化学薬品から市販されて
いる。

ツムラステスト陽性植物源ＬＰＳ 原料植物として使用できるものを下記に例示する。なお
、本明細書に記載した植物が帰属する科名、厘毛は、次
の文献の記載を照合して決定された。

裸子植物、単子葉類、双子葉類、ンダ植物、ソウ類：昭
和５７年（正編）、昭和５８年（続編）に北隆館から発
行された「原色牧野植物大図鑑」の記載を照合して所属
を決定した。但し、「燕麦」は、昭和４５年に女子栄養
大学出版部から発行された「食用植寮図説」と、昭和５
８年に至文堂がら発行された「新日本植物誌顕花層」の
記載を照合し、「裸麦」は、昭和４６年に東京同文書院
から発行された「総合食品事典」の記載を照合し、「鳩
麦」、「カラスビシャク」、「ジャノヒゲ」、「ウコン
」、「マツタヒ」、「アマチャヅル」、「ドクダミ」、
「胡椒」、「トウカラシ」、「ダイウィキョウ」、「ダ
イダイ」、「クズ」、「ナンキンカンゾウ」、「オタネ
ニンジン」、「ボウフウ」、「オオツヅラフジ」、「ウ
ンカリア・ヒルスタ」は、昭和６３年に北隆館から発行
された「原色牧野和漢薬草大図鑑」の記載を叩合し、「
アボガド」は、昭和５３年に財団法人農林統計協会から
発行された熱帯農業技術叢書第１５号「ブラジルの果実
」の記載を曜合し、「カイワレダイコン」は、昭和５９
年に北隆館から発行された「原色園芸植物大図鑑」の記
載を照合し、「ニクズク」は、昭和４４年に履用書店か
ら発行された「図説熱帯植物集成」の記載を照合し、「
クロレラ」は、財団法人日本健康食品協会が昭和６１年
に公示した、「クロレラ規格基準」の記載を照合して所
属を決定した。

菌類：昭和６２年に保育社から発行された「原色日本新
菌類図鑑」の記載を照合して所属を決定した。但し、酵
母は、昭和３７年に技報堂から発行された「微生物学ハ
ンドブック」の記載を照合し、「冬虫夏草」は、前掲の
「原色牧野和漢薬草大図鑑」の記載を照合して所属を決
定した。

本発明で使用できる原料植物は、例えば、裸子植物、単
子葉類、双子葉類、シダ植物、ソウ類、菌類の植物であ
り、これらは個別に或は混合して使用できる。

裸子植物としては、例えば、マツ科マツｒｉ、ｌＩｉ＃
５であるマツを使用できる。

重子葉類植物としては、例えば、イネ科イネ属植物であ
るイネ、イネ科コムギ属植物である小麦、イネ科オオム
ギ属植物である大麦、裸麦、イネ科カラス表置ｈＮ物で
ある烏麦、燕麦、イネ科ササ属植物であるクサ笹、イネ
科ジュズダマ属植物である鳩麦、アヤメ科アヤメ属植物
であるアヤメ、ユリ科ネギ属植物であるニンニク、ユリ
科キジカクシ属植物であるアスパラガス、ユリ科ジャノ
ヒゲ属植物であるジャノヒゲ、ショウガ科ショウ力属植
物であるミョウガ、ショウガ科ウコン属植物であるウコ
ン、サトイモ科ハンゲ属植物であるカラスビシャクを使
用できる。

双子葉類植物としては、マメ科ダイズ属植物である大豆
、マメ科インゲンマメ属植物である小豆、マメ科ソラマ
メ属植物であるそら豆、マメ科クズ属植物であるクズ、
マメ科カンゾウ属植物であるナンキンカンゾウ、ナス科
ナス属植物であるジャガイモ、トウガラシ、ナス科トマ
ト属植物であるトマト、ナス科トウカラシ属植物である
トウカラン、ハラ科ヒワ属植物であるビワ、バラ科サク
ラ属植物であるモモ、クスノキ科アボガド属植物である
アボカド、クルミ科クルミ属植物であるクルミ、ウリ科
トウナス属植物であるカボチャ、ウリ科アマチャヅル属
植物であるアマチャヅル、アブラナ科ダイコン属植物で
あるカイワレダイコン、マツタヒ科マタタビ属植物であ
るマタタビ、ドクダミ科ドクダミ属植物であるドクダミ
、コシヨウ科コシヨウ属植物である胡徹、シキミ科シキ
ミ属植物であるダイウィキョウ、ニクズク科ニクズク属
植物であるニクズク、ミカン科ミカン属植物であるダイ
ダイ、ウコギ科オタネニンジン属植物であるオタネニン
ジン、セリ科サポシュニコビア属植物であるボウフウ、
ツヅラフジ科オオツヅラフジ属植物であるオオツヅラフ
ジ、アカネ科カギカズラ属植物であるウンカリア・ヒル
スタを使用できる。

シダ植物としては、例えば、トクサ科トクサ属植物であ
るスギナ、ゼンマイ科ゼンマイ属植物であるゼンマイを
使用できる。

ソウ類植物としては、例えば、カッソウ類植物、紅ソウ
類植物、緑ソウ類植物、ランソウ項植物を使用できる。

カッソウ類植物としては、例えば、コンブ科ワカメ属植
物であるワカメ、コンブ科コンブ属植物であるコンブ、
ホンダワラ科ヒジキ属植物であるヒジキを使用できる。

紅ソウ類植物としては、例えば、ウシヶノリ科アマノリ
属植物であるアサクサノリを使用できる。緑ソウ類植物
としては、例えば、オオシステイス科クロレラ属植物で
あるクロレラを使用できる。

菌類植物としては、例えば、担子菌類植物、子ノウ菌類
植物を使用できる。担子菌類植物としては、例えば、ヒ
ラタケ科マツオウジ属植物である椎茸、キシメジ科エノ
キタケ属植物であるエノキ茸、キシメジ科シメジ属植物
であるシメジ、タコウキン科マイタケ属植物であるマイ
茸、サルノコシカケ科ポリポラス属植物であるアワビ茸
、ハラタケ科ハラタケ属植物であるマツシュルーム、キ
クラゲ科キクラゲ属植物であるキクラゲ、モエギタケ科
スギタケ属植物であるナメコを使用できる。

子ノウ菌類植物としては、例えば、エンドミセタセア科
サツカロミセス属植物であるパン酵母、醸造用酵母を使
用できる。醸造用酵母にはビール酵母、清酒酵母、葡萄
酒酵母、醤油酵母、味噌酵母等の他、サツカロミセス　
セレヴイシドに属する多くの酵母（例えば、ウィスキー
や老酒の製造に使用される酵母）が含まれる。又、バッ
カクキン科ノムシタケ属植物である冬虫夏革も使用でき
る。

以上に述べた原料植物中のリムラステスト陽性ＬＰＳの
検出、含量測定は、例えば、生化学工業株式会社からト
キシカラーシステムという名称で市販されている試薬セ
ットを使用して実施できる。

即ち、原料植物を同システムのＬＳ−１セツトと合わせ
て発色させ、その発色の強さを、同じく同セットのＥｔ
−２セツトを使用して作成した検量線と対比させればよ
い。

植物［ＬＰＳは、以下に述べる方法で分離、精製できる
。

■原料植物を必要に応して適宜細切、乾燥、粉砕した後
に蒸留水によく懸濁し、上清を回収する。

例えば、原料植物が穀類の種子である場合は、種皮をつ
けたまま、或は、種皮を除いた後に簡単に砕くか、又は
、食用に供せられている程度の粉末になるまで粉砕し、
得られた粉末に水を加えて分散液とし、攪拌した後に沈
降物を静置又は遠心分離により除去するか、粉末に水を
加えて練って得られるトウをミキサー中でゆるやかに水
洗し、沈降物を除去すればよい。

原料植物がクロレラである場合には、まず細胞膜を破砕
し、エタノール洗浄により脂溶性物質を除去した後に水
抽出するとよい。

この水抽出の際の原料植物の粒度、水の温度、液性、添
加量、攪拌の速度、時閉、遠心分離の際の条件等は特に
制限する必要はなく、原料植物の種類に応じて適宜調整
すればよい。又、抽出水の温度は高い方がＬＰＳの採取
量、純度ともに高い傾向があるが、操作の便宜上、原料
植物に含まれる澱粉の糊化を招来しない５０℃以下とす
ることが好ましい。又、水の添加量は、原料植物の種類
、粒度により異なるが、穀類種子の場合にはその割合が
７０　ｗ　／　ｖ％以下、望ましくは２０〜５０ｗ／Ｖ
％程度とすると操作上便宜である。更に、攪拌の速度は
、起泡を引き起こさない程度のものとすることが好まし
い。なお、この段階の操作迄で、本発明のリムラステス
ト陽性植物ＬＰＳの純度は、ツムラステスト活性データ
から判断して、例えば小麦種子の場合には約３０倍に上
昇する。

以下、穀類種子を原料として使用する場合を例にとり説
明するが、いわゆる当業者であれば、以下の記載を参考
にして、他植物から夾雑する糖、蛋白等を除去してリム
ラステスト陽性ＬＰＳを高純度で回収する方法を実施す
ることは極めて容易である。

■純度を更に上げるためには、上記■て得られた上清を
常法に従って限外濾過に付して分子量５０００以下の画
分を除去すればよい。

■得られた乾燥品を、５０ｍｇ／ｍｕ＋こなるように蒸
留水に懸濁し、遠心分離操作に付して上清を回収する。

■この上清を氷水で冷却し、酸を添加して酸性にすると
沈殿が生しる。この際使用する酸は特定のものである必
要はなく、例えば、トリクロロ酢Ｍ（以下、ＴＣＡと称
す）、過塩素酸、トリフルオロ酢酸、酢酸、ジクロロ酢
酸を使用できる。

■次いて、遠心分離操作に付して沈殿を回収して蒸留水
で洗浄し、再度遠心分離操作に付して沈殿を回収する。

■沈殿を蒸留水に懸濁し、沈殿が溶解するまでアルカリ
を加える。この際使用するアルカリも特定のものである
必要はなく、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム
、アンモニア、Ｋｍナトリウム、酢酸ナトリウムを使用
できる。沈殿の溶解時に塩基性がＩ）Ｈｌｌより大きく
なると目的のＬＰＳが失活するので注意が必要である。

■次いて酸を加えてｐＨ８としてから３７℃に加温し、
更に酸を加えて酸性にすると沈殿が生ずるので、３７℃
に保温した遠心分離器を使用して遠心分離操作に付す。

なお、この際使用する酸も特定のものである必要はない
。

■上清を回収して水冷し、４℃で再び遠心分層操作に付
す′ ■上清を回収し、アルカリを添加して中和し、常法に従
って限外濾過で濃縮する。この際使用するアルカリも特
定のものである必要はない。

［相］次いて常法に従ってゲル濾過に付して、リムラス
テスト陽性画分を回収して併せる。ゲル濾適用の担体と
しては、例えばセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ
−７５、Ｇ−１００゜セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙ
ｌ）Ｓ−２００、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）
６Ｂ　［以上は米国ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａＩｎｃ、）１１コ、バイオゲル（Ｂｊｏｇｅｌ）Ｐ−
１００Ｃ米国バイオラット（ＢｉｏｒａｄＩｎｃ、）社
製コ、トーヨーパールＨＷ−５０゜ＨＷ−５５（東洋曹
達工業社製）を使用できる。

緩衝液はｐＨ３〜１０のものならいずれてもよい。

例えば、トリス−ＨＣλ又はリン酸緩衝液を使用できる
。

０次いてこの両分に蛋白分解酵素を加え、３７℃て２時
間以上インキユヘーンヨンして残存蛋白質を分解し、得
られた酵素処理液を常法に従って限外濾過により濃縮す
る。なお、この際に使用する蛋白分解酵素も特定なもの
である必要はなく、例えば、■８プロテアーゼ、キモト
リプシン、トリプシン、サーモライシンを単独で、或は
任意に鞘み合わせて使用できる。市販品としては、例え
ば、プロナーゼＥ（科研化学社）、プロティネースＫ（
メルク社）を使用できる。

＠吹いてこの両分を常法に従って、例えば、米国ファル
マシア社製のＦＰＬＣシステムでファルマシア社製のモ
ノＱ−セファロース（Ｓ　ｅ　ｐ　ｂ　−ａｒｏｓｅ）
、Ｑ−セファロース（Ｓ　ｅ　ｐ　ｈ　ａ−ｒｏｓｅ）
を使用して陰イオン交換クロマトグラフィーに付してリ
ムラステスト陽性画分を得る。

０次いて、常法に従って脱塩のためにケル濾過に付して
リムラステスト陽性画分を回収する。

以上の操作により、小麦種子の場合には、当初のリムラ
ス活性の約２０％が回収され、純度約９５％の精製標品
が得られる。又、段階■終了時の純度に比へ、ｖ″Ｉ　
Ｉ　０００　＠の純度く小麦種子の場合）になる。

以上の方法によって得られたリムラステスト陽性植物Ｌ
ＰＳはそのまま、或いは任意の程度に濃縮した形で提供
できる。又、保存性を高めるために、凍結乾燥や噴霧乾
燥なとの任意の手段により乾燥粉末として提供すること
もてきる。これらはいずれも常法で生産できる。

動物体内にＴＮＦを産生させるためには、産生前駆（ブ
ライミング）段階と産生開始（トリガリング）段階とが
必要であることは、カーズウエル（Ｃａｒｓｗｅｌｌ）
らにより、プロシーディング　オブ　ナショナル　アカ
デミ−サイエンスオブ　ニーニスニー［Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔ　Ｉ。

Ａｃａｄ、Ｓｃ　ｉ、ＵＳＡ、、７２．３６６６〜３６
７０頁（１９７５年）］に報告されている。

ブライミング段階開始のために投与される薬剤が［ブラ
イマーＪ　（内因性ＴＮＦ産生促進剤）であり、トリカ
ｇング段階開始のために投与される薬剤が「トリガー」
　（内因性ＴＮＦ産生剤）である。

ＬＰＳがマクロファージのインビトロＴＮＦ産生能を活
性化する能力を測定するには、マウスのマクロファージ
腹腔常在細胞を採取し、これにブライマーとしての組み
換えマウスＩＦＮ−γを添加し、ン欠いて、トリガーと
してのＬＰＳを添加し、そのＴＮＦ活性を測定すればよ
い。

ＴＮＦ活性は、Ｌ−９２９細胞［プロシーディング　オ
ブ　ナショナル　アカデミ−サイエンス　オブ　ニーニ
スニー　７２、３６６６〜３６７０頁］に対する細胞毒
性を基にして、次のようにして＋１１定する。

Ｌ９２９細胞を、５％仔牛脂児血清を加えたイーグルミ
ニマムエツセンシャル培地（以下、ＭＥＭ培地と表す）
で育成し、８Ｘ１（１個の細胞が１００ｕＬＬの同上培
地に含まれる様にし、９６穴の平底プレートで育種する
。育種条件は３７℃、２時閏、５％ＣＯ２，１００％Ｈ
２ｏであり、通常の細胞培養に用いられる方法でよい、
その後、アクチノマイシンＤを培地中に終１度ｌμｇ　
／　ｍ気となるように加え、培養液の液量を１５０μ交
とする。即座に、検体を適当にＭＥＮ培地で稀釈したも
のを５０μ免加える（この際稀釈率を適宜調製し、ＥＤ
５１Ｉを求める事ができる）。更に、最終液量２００μ
地となったＬ９２９纏胞を上記条件で１８時間培養する
。

細胞障害活性を測定するには、まず全培地を除去し、つ
いて０．１％クリスタルバイオレットを含む１％メチル
アルコール溶液を加えて固定染色する。クリスタルバイ
オレットは全有核細胞を染色するが、死細胞は染色後に
プレート底面より水洗で除去されるので、生存細胞の結
果から細胞障害活性を直接測定できる。この染色度を０
Ｄ５９θ、ての吸光度を指標として測定し、対照群に対
する染色度と比較する事で細胞障害活性を測定する。活
性の定義は次の様に行う。

Ｌ９２９！ｉｆ胞が５０％生存できる検体の稀釈率（Ｎ
）を求める。対照としてウサギＴＮＳ　［腫瘍障害血清
（Ｔｕｍｏｒ　　ＮｅｃｒｏｓｉｓＳｅｒｕｍ）］を使
用し、このウサギＴＮＳの活性ｎ（単Ｉｎ　／　ｍ　Ａ
）を２．４ＸＪＯ６単ｂｍλのＴＮＦ−αを用いて決定
する。このウサギＴＮＳのＥＤ５１１を与える稀釈率（
Ｃ）を求める。

検体活性（，１１位／　ｍ　ｌ＞は　−×　ｎ　て計算
する。

提供できる剤の製造方法 本発明の抗すュウマチ剤は、常法の製剤技術により、散
剤、顆粒剤、火剤、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、液
剤、貼付剤、軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、串
刺、注射剤等の形態で提供できる。又、動物用としては
、更に、飼料添加剤、プレミックス製剤、飲水添加剤と
して￥Ａ製することもてきる。飼料添加剤とする場合に
は、粉剤が顆粒剤とすることが好ましい。又、プレミツ
ジス製剤とは、飼料との混合を容易にするため５こ澱粉
なとの飼料成分で希釈されたものを指す。本発明の抗す
ュウマチ剤を飼料添加剤、プレミックス製剤として添加
できる飼料は市販されているｉｉｉ科のいずれてもよい
。又、ミネラル、ヒタミン、アミノ酸等の飼料添加物を
含む飼料であってもよい。

これら製剤には、所望ならば、保存性、均質性を保持す
るために、常法により、賦形剤、保存剤、緩衝剤等の添
加剤を加えることもてきる。更に、矯味剤、矯臭剤、着
色剤を含めることもてきる。

賦形剤としては、例えば、乳糖、デンプンを使用できる
。保存剤としては、例えば、バラオキシ安息香酸メチル
、バラオキシ安息香酸エチル、バラオキシ安息香酸プロ
ピル等のバラオキシ安息香酸エステル類、デヒドロ酢酸
ナトリウム、フェノール、メチルハラヘン、エチルバラ
ヘン、プロピルバラヘン等を使用できる。緩衝剤として
は、例えば、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩等が使用で
きる。

以下、製造例、実施例、実験例により本発明を例示する
。

製造例Ｉ（小麦ＬＰＳの製造） ■小型ニーダに、１．０９％の灰分を含む硬質小麦粉（
アメリカ又はカナダ産のハートレットスプリング）（３
，１２０ｇ）を入れ、２．０３ｕの蒸留水を加えて１０
分間練ってトウとした。１５分間の静置後に１０ｉの水
を加えてゆるやかに攪拌してデンプン乳液を洗い出し、
同時に可溶性成分を溶出させた。この溶出液を５℃の冷
蔵庫中で１２時間静置した後、デンプン等の沈降部を除
去した。上澄み液を凍結乾燥して２０１．１ｇの粉末を
得た（粉末Ａ）。

更に、残留トウに５Ｑ、の蒸留水を加えてゆるやかに攪
拌し、以下、上記と同様に処理して４０゜１ｇの粉末を
得た（粉末Ｂ）。

■これら粉末Ａ、Ｂを米国アミコン社製限外濾過機ＨＦ
−Ｌａｂｌに供し、分子量画分５，０００については中
空系カートリッジＨＦ−ＬａｂｌＰＭ５を、分子量画分
１０，０００については中空系カートリッジＨＦ−Ｌａ
ｂｌＰＭｌｏを取り付けて限外ｍ過を行った［温度５〜
ＩＯ’Ｃ０入圧２５ｐｓ　ｉ　　（１，７６ｋｇ／ｃｍ
２）、比圧１５ｐｓ　ｉ　（１，０６ｋｇ／ｃｍ２）］
　、その結果に基づき、各部分を次のように命名した。

粉末Ａ２分子量５，０００以下の部分をａ分子量５，０
００以上の部分をａ２ 粉末Ｂ：分子ｊ１５，０００以下の部分をｂ１分子量５
，０００以上の部分をｂ２ 粉末Ａ：分子量１０，０００以下の部分を８３分子量１
０，０００以上の部分をａ４ 粉末Ｂ：分子量１０，０００以下の部分をｂ３３分子量
１，０００以上の部分をｂ４ これら各画分を後記実験例１に詳述する方法に準拠して
リムラステストに付したら、分子量５゜０００以上の両
分には多量のリムラステスト陽性成分が存在するが、分
子量５，０００以下の画分にはほとんど存在しないこと
が確認された。

■上記粉末ａ２の３０ｇを１北三角フラスコに入れ、６
００ｍλの蒸留水を注いて、６０分間スターラーで攪拌
した後、日立冷却高速遠心機５ＣＲ−２０Ｂ　（ロータ
ーＲＰＲ１６を事前に４℃に冷却しておいた）で４℃で
遠心分離操作（１０，０００ｇＸ１０分）に付して上清
を回収した。

■この上清を】λ三角フラスコに入れ、水冷下（液温約
２℃）、スターラーで攪拌しながら、事前に２℃に冷却
してあった１００％ＴＣＡ水溶液２０．５ｍ＋Ｌを滴下
し、滴下終了後氷水中に１０分間放置した。

■次いで前記と同様にして４℃で遠心分離操作（１０，
０００ｇＸ１Ｏ分）に付して沈殿を回収し、氷水中で冷
却下、３００ｍ５Ｌの蒸留水と共に５００　ｍ　ＩＬの
ビーカーに入れて懸濁し、氷水中で冷却し、前記と同様
にして４℃で遠心分離操作（１０，０００ｇＸ１０分）
に付して沈殿を回収した。

■この沈殿を１９．ビーカーに入れ、蒸留水５００ｍλ
で懸濁し、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液約３゜５　ｍ　ｌ
を使用して中和（ｐＨ７＞　し、ついで、氷水中で冷却
しながら、ＩＮ水酸化ナトリウム溶液約２ｍ１Ｌを添加
して０．０２Ｎ水酸化ナトリウム溶液になるようにして
沈殿を溶解した。

■ＩＮ塩酸塩酸約１．５モｌえてｐＨ８とし、次いて１
００ｍｆｂの蒸留水を加えた後に］λ三角フラスコに移
して３７℃のインキュヘーター内で３０分間ゆっくり振
盪した。

■１００％ＴＣＡ水溶濠３０ｍ１を加えて混合した後、
３７℃のインキュヘーター内で１０分間ゆっくりＳ盪し
てから、約３７℃に保温した遠心分離器トミーＣＤ　１
００Ｒ（トミー精器社！７ｉ）を使用して遠心分ｌ！１
ｉ操作（３，０００ｇＸ１０分）に付した。

■上清を回収して氷冷し、４℃で遠心分離操作（１０，
０００ｇＸ１０分）に−付した。

０上清を回収してＩＯＮ水酸化ナトリウム溶液約３．６
ｍｌで中和してｐＨ７とし、限外濾過器（東洋濾紙ＵＨ
Ｐ−１５０、フィルター：　ＵＫ−１０、Ｎ２圧：４．
０ｋｇ／ｃｍ２）で濃縮した。

■得られた濃縮液６０ｍ１Ｌｅ、セファロース（Ｓｅｐ
ｈａｒｏｓｅ）６Ｂカラム［米国ファルマシア社（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ　　Ｉｎｃ、）製、カラムサイズ：５ｃ
ｍ（内径）Ｘ１００ｃｍ（２応）コを使い、ケル濾過ｃ
！ｌ衝ｉ＆：１０ｍＭトリス−ＨＣａ／１０ｍＭＮａＣ
！Ｌ（＋）Ｎ７．５）、流速：６０ｍ１Ｌ／時］に付し
て、各２０ｍｌの画分を得た。

■初めから４３番目から５６番目迄の画分２８０　ｍ　
Ｑ、を併せ、プロナーゼＥ（科研化学社）４５０μｇを
加え、振盪下、３７℃に２時間保温した後に、限外濾過
器（東洋濾紙ＵＨＰ−６２、フィルター：ＵＫ　　１０
．Ｎ２圧：４．Ｏｋｇ／ｃｒｎ２）で濃縮した。次いで
、ファルマシア社製ＦＰＬＣシステム（カラム：モ／Ｑ
ＨＲ１０／１０）を使って陰イオン交換クロマトグラフ
ィーに付した。即ち、１０ｍＭ）リス−ＨＣｆＬ（ｐＨ
７゜５）とｌ０ｍＭのＮａＣＱを含む緩衝液で試料をカ
ラムに付した後、上記緩衝液でＮａＣｌ量が１６５ｍＭ
に増加された組成を持つ緩衝液（２００ｍλ）でカラム
を洗フた。次いて、ＮａＣｕ濃度を、１６５ｍＭからＩ
ＭのＮ　ａ　Ｃ１ｉｌｊ度勾配になるように増加させな
がら全量４００ｍλで目的ＬＰＳを溶出させ、各２ｍｌ
の両分を回収した。リムラステスト陽性が確認された、
濃度勾配をかけてから５〜８番目の画分を併せて′、Ｌ
ＰＳ純度約９２％の８ｍｌ［ＬＰＳ　：　３．０３ｍｇ
　（リムラステストによる大腸菌ＬＰＳ換算値である。

以下のＬＰＳ量も全てこの換算１１である）、糖：０．
２３ｍｇ、蛋白：０．０４ｍｇ）を回収した。

０イ欠いてその８ｍλを、セファデックス（Ｓｅｐｈａ
ｄｅｘ）Ｇ−２５［カラム：２．０ｃｍ（内径）Ｘ２０
．２　ｃｍ　（６６ｍ５Ｌ）コを使ってゲル濾過（緩衝
液：水）に付して各３ｍｌの両分を回収した。リムラス
テスト陽性の確認された第９〜１２番目の両分を併せて
、ＬＰＳ純度約９５％の１２ｍ１（ＬＰＳ　：　２．７
ｍｇ、糖＝０゜１８ｍｇ、蛋白：０．０３ｍｇ）を回収
した。糖はフェノール−硫酸法で、蛋白はローリ−法で
測定した。なお、この画分は、陰イオン交換クロマトグ
ラフィーにより酸性であることを確認した。

又、ＳＤＳゲル電気泳動法による分子量は６，０００〜
１０，０００だった。

０上記画分を一８０℃で凍結後に恒量になるまてイ東結
乾燥し、重量を測定したら０．７５ｍｇあった。（以下
、この凍結乾燥標品を小麦ＬＰＳと称す） この小麦ＬＰＳのリムラス活性を後記実験例１記載の方
法で測定したら２．７ｍｇに相当するのて、その比活性
は ２　、７　÷　０．　７５＝３．　６ になる。

また、夾雑物として存在し得る単独の糖は、以上の精製
により実質下金て除去されたと考えられるので、検出さ
れた糖は全て、小麦ＬＰＳを構成している糖と考えられ
る。従って、この段階での小麦ＬＰＳの純度を重量に基
づいて計算すると、蛋白＝０．０３ｍｇ ＬＰＳ＝０．７５−０．０３＝０．７２ｍｇだから、 ０．７２÷０．７５Ｘ１００＝９６　（％）である。

小麦ＬＰＳの物性 ■分子量 小麦ＬＰＳを蒸留水に溶解して１　ｒＱ　ｇ　／　ｍ　
９゜溶液を：Ａ！！シ、その４μ免を１．５ｍｌのトレ
フチューブに入れた。これに、別途、１ｍＭのＥＤＴＡ
に２．５％ＳＤＳ、５％メルカプトエタノール、１０ｍ
Ｍ）リス塩酸（ｐＨ８，０）を加えて調製したＳＤＳ処
理ｆ１１μλを加え、この混液を３分間沸騰水に浸した
。ファルマシア社製のファストシステム（Ｐｈａｓｔ　
　Ｓｙｓｔｅｍ）を使用し、電極との間に５ＤＳ−バッ
ファー　ストリップ（Ｂｕｆｆｅｒ　　５ｔｒｉｐ）（
ファルマシア社製）が介在せられた１μ史の上記混液を
ゲル［ファルマシア社製のファスト　ゲル　グラデイエ
ン）（ＰｈａｓｔＧｅｌＧｒａｄｉｅｎｔ８−２５）に
塗付し、最大電圧２５０ｖ、最大電流１０ｍＡにセット
して泳動を開始させた。泳動終了後、クマシー染色と銀
染色における挙動を観察した。

クマシー染色では、染色液としてファルマシア製の０．
１％ファスト　ゲル　ブルー　（Ｐｈａ　ｓ　ｔ　　Ｇ
　ｅ　ｌ　　Ｂ　Ｉ　ＩＪ　ｅ　）　　Ｒを、脱色液と
して、メタノール：酢酸：蒸留水（容量比３：ｌ：６）
混液を使用し、次の順序で染色・脱色を行った。

■）５０℃で８分間染色 ２）５０℃で５分間脱色 ３）５０℃で８分間染色 ４）５０℃で１０分間脱色 ５）５０℃で５分間保護（グリセロール、酢酸、蒸留水
の容量比５：１０：８５混液） ６）乾燥 銀染色は、次の順序で行った。

１）５０℃で２分間、洗浄液（エタノール、酢酸、蒸留
水の容量比５：１：４混液）で処理２）５０℃で２分間
、洗浄液（エタノール、酢酸、蒸留水の容量比１０：５
：８５混液）で処理３）５０℃で４分間、洗浄ｆ１（エ
タノール、酢酸蒸留水の容量比１０：５：８５混液）で
処理４）５０℃で６分間、増感液（８，３％グルタルジ
アルデヒド）て処理 ５）５０℃で３分間、洗浄液（エタノール、酢酸蒸留水
の容量比１０：５４８５混？＆）で処理６）５０℃で５
分間、洗浄液（エタノール、酢酸蒸留水の容量比１０：
５：８５混液）で処理７ン５０℃で２分間、洗浄液（脱
イオン水）で処理 ８〕５０℃で２分間、洗浄液（脱イオン水）で処理 ９〕４０℃で１３分間、０．２５ｗ／ｖ％硝酸銀で処理 １０１３０℃で３０秒間、洗浄液（脱イオン水）で処理 １１１３０℃で３０秒間、洗浄液（脱イオン水）で処理 ＋２）３０℃で３０秒間、現像液（０，０４ｖ／ｖ％ホ
ルムアルデヒ）’＋２．５ｗ／ｖ％炭酸ナトリウム洗浄
液）て処理 １３１３０℃で４分間、現像液（０，０４ｖ／ｖ％ホル
ムアルデヒド＋２．５　ｗ　／　ｖ％炭酸ナトリウム洗
摩Ｍ）で処理 １４１５０℃で２分間、反応停止Ｊ：Ｊ（５％ｖ　／　
ｖ％酢酸）て処理 １５１５０℃で３分間、保護液（酢酸、グリセロール、
蒸留水の容量比１０：８：８５混液）で処理 １６）乾燥 ＬＰＳは銀染色に染まるが、クマシー染色には染まらな
い性質を利用して染色帯を観察したら、分子量８，００
０の位置に小麦ＬＰＳの主要染色帯が検出された。

［株］リン含有量 チェンートリバラ（Ｃｈｅｎ−Ｔｏｒｉｂａ−ｒａ）法
［チェン等著、「アナリティ力ル　ケミストリ（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓ−ｔｒｙ）、ｖｏｌ、
２Ｂ、１７５６〜１７５８頁（１９５６年）に４拠して
次の通りに行った。

小麦ＬＰＳを蒸留水に溶解して、２５μｇの小麦ＬＰＳ
を含む２０μ化の溶液を調製し、小試験管に入れた。２
０μ克の５０　ｖ　／　ｖ％ｆＲ酸を添加し、１６０℃
で２時間加熱した６次いて、２０μ庇の１０　ｖ　／　
ｖ％過塩素酸を添加した後にガスバーナーて１分間加熱
して灰化させた。その後に０゜５ｍｌの著留水、次いて
０．５ｍＡの反応試薬（１ｍｌＬの６Ｎ硫酸、２ｍ１Ｌ
の蒸留水、２ｍａの２５Ｖ　／　Ｗ％モリブデン酸アン
モニウム及び１　ｍ　９＋の１０ｖ／ｗ％のアスコルビ
ン酸を混合して調製し、その０．５ｍ１Ｌを使用）を添
加して室温で３０分間放置した後に、８２０ｎｒｎての
吸光度（ＯＤ　ｅ２１１０）を測定した。なお、検量線
作製用の試料としては、リン酸二水素カリウム（和光純
薬社製）を蒸留水で希釈し、リン重量としてそれぞれ２
．５μｇ、ｌｕｇ、０．２５μｇ、ｏμｇを含む０．５
ｍλの溶液を調製して使用した。なお、リン１ｇはリン
酸二水素カリウム４．３９ｇに相当する。得られた結果
を次表１に示す。

表　　　１ 注：小麦ＬＰＳのデータは、ｙＩＥ４１！リンの混入（
例えば、リン酸緩衝液に由来する）による誤差を避ける
ために、加熱処理をしていない対照のデータを減した値
である。

小麦ＬＰＳの分子量をｓ、ｏｏｏと仮定し、上表の結果
に基づいてその１分子当たりのリン数を次式により計算
すると１−４になる。

２５ＸＩＯ−３２ 上記実験でリン数が１〜４と変動している原因の１つと
しては、精製段階でのモノフォスフオニステラーゼの混
入により、リン酸が脱離したことも考えられる。

０ヘキソサミン含有量 エルソンーモルガン（Ｅｌｓｏｎ−Ｍａｒ　−ｇａｎ）
法（東京化学同人出版「生化学実験講座」Ｎｏ、４の３
７７〜３７９頁）に準拠して次の通りに行った。

小麦ＬＰＳを蒸留水に溶解して１　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌ
の溶液をｐ！製し、その１００μ化をスクリューキャッ
プ付きスピッツ（イワキガラス社製）に入れ、これに１
００μ地の８ＮＨＣＩＬを添加して１１０℃で１６時間
加熱した。４ＮＮａＯＨを約２００μ免添加してｐＨ７
とした。その１００μ艷を分取し、別のスクリューキャ
ップ付きスピッツに入れ、２００μ込の下記試薬Ａを加
えた後に、１０５℃で１．５時間加熱し、次いて流水で
冷却した。次いて、１００μ免を分取し、６７０μλの
９６％エタノールを加え、更に、６７μ艷の下記試薬Ｂ
を加えた後に室温で１時前放置し、５３５ｎｒｐで吸光
度を測定した。検量線作製用試料としては０．２０〜２
００μｇ　／　ｍ　ＬのＮ−アセチル　グルコサミン（
和光純薬社８１）を使用した。

（試薬Ａ）７５μ鼠のアセチルアセトンと２．５ｍ５Ｌ
の１．２５Ｎ炭酸ナトリウムを混合して調製。

（試薬Ｂ）１．６ｇのｐ−ジメチルヘンズアルデヒドと
３０ｍＱ、の濃塩酸と３０ｍλの９６％エタノールを混
合して調製。

結果、小麦ＬＰＳのへキソサミン数は６±２／分子（仮
定分子量８，０００）だった。

０脂肪酸含有量 ９０μ交の小麦ＬＰＳ蒸留水溶液（１ｍ　ｇ　／ｍλ）
に１０μ良の内部標準（０，５５ｍＭのマルガリン酸）
を加えた。１．０ｍ１ｌの０．５Ｍナトノウムメチラー
トを加えて脂肪酸エステルの加水分解とエステル化を行
った。室温で１時、間放置後に９６０μ免の０．５ＮＨ
Ｃｉを加えて中和した。

これに２ｒｒ＋１のヘキサンを加えて１５分間激しく攪
拌した。次いて、１，０００ｇで５分間遠心分離を行い
ヘキサン層を分取した。窒素ガスてヘキサンを蒸発させ
て、約２０μ鱈こなるまで濃縮した。

このサンプルをガスクロマトグラフィー［本体：島津社
製のＧＣ８ＡＰＦ、キャピラリーカラム：カナダのスベ
ルコ（Ｓｐｅｌｃｏ）社製ＦＳＣＡＰ　　５ｐ２３３０
、キャリヤーガス：窒素コに付して脂肪酸量を測定した
。脂肪酸量測定の基準としては、第一化学薬品社製の合
成リビＦＡである大ｉｉ菌型ＬＡ−１５−ＰＰ　（分子
量２，０００で、１分子中の脂肪酸数は６であることが
知られている）を用いた。

結果、小麦ＬＰＳの脂肪酸数は６±２７分子（仮定分子
ｆｌＢ、０００）であると推定された。

上記ガスクロマトグラフィーで観察されたチャートを添
付図面第１シ３図に示す。第１図は小麦ＬＰＳの、第２
図は大腸菌ＬＰＳの、第３図は百日咳菌ＬＰＳのチャー
トである。

第１〜３図において、図示されている主要ピーク番号に
対応する保持時間（分）は次の通りであった・ 第１図：　ピーク番号　　保持時間（分）１　　　　　
　　２．４５０ ２　　　　　　　２．７５８ 第２図：　ピーク番号　　保持時間（分）１　　　　　
　　２．４１７ ２　　　　　　　２．７４２ 第３図：　ピーク番号　　保持時間（分）１　　　　　
　　２．４３３ ２　　　　　　　３．０２８ 第１〜３図の比較により、小麦ＬＰＳのチャートは大腸
１ｒＬＰｓのチャートに似ているが、百日咳菌ＬＰＳの
ものとは大きく異なることは明白である。

＠ＫＤＯ含有量 ＫＤＯ（２−ケト−３−デオキシオクトネート）含有量
をジフェニルアミン法［シャビ　アール（Ｓｈａｂｙ　
　Ｒ，）等著、アナリテイ力ルバイオケム（Ａｎａｌｙ
ｔｉｃａｌ　　Ｂｉｏ　−ｃｈｅｍ、）　、５８　（１
）　、１２３〜１２９頁（１９７４年）］に準拠して次
の通りに行った。

５００ｍｇのジフェニルアミン、５ｍλのエタノール、
４５ｍ１Ｌの氷酢酸、５０ｍλの濃塩酸（全て和光純薬
社製）を合わせてＫＤＯ検出試薬を調製した。その５０
０４ａに、１．０５ｍｇ／ｍｌＬの小麦ＬＰＳを含む蒸
留水２５０μ交を合わせ、１００℃の沸騰水浴中で３０
分間加熱後に冷水（２３℃）中で３０分１冷却し、つい
で日立分光光度計３２０を使フて４２０．４７０．６３
０．６５０ｎｍでの紫外部吸収を測定した（それぞれＡ
、２．、Ａｊ７１１．Ａ６３８、Ａａｓ＋＋とする）。

標準試料としては、１２７μｇ／ｍｌのＫＤＯアンモニ
ウム塩［米国シグマ（Ｓ　ｉ　ｇｍａ）社製］を含む蒸
留水２５０μ気を使用した。

検体試料、標準試料それぞれについて、次式の値を求め
た。

Ｓ　＝　Ａ　４２１１Ａ　ａ７Ｌｌ＋　Ａ　６３１１　
　Ａ　ａｓ＠検体試料の値（ＳＴ）は０．３７９、標準
試料の値（Ｓｓ）は０．２９４であった。この値の比較
により、小麦ＬＰＳには５±１モル／分子量８千のＫＤ
Ｏが含まれると推定された。

製造例２（クロレラＬＰＳの製造） ■細胞膜破砕クロレラ（■マンナンツーズ社ＩＩ）３０
ｇを、洗浄液が緑色に着色しなくなるまでエタノールで
洗浄した。

■この洗浄残渣２６ｇを１００　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｑ、
の濃度で蒸留水に溶かし、４５℃で２時間振盪後に遠心
分離操作（４℃、１０，０００ｇＸ３０分）に付した。

■上清を回収し、東洋濾紙Ｎ０９２で濾過し、次いで蒸
留水で抽出した。

■抽出液２９０ｍｆＬを下記条件で陰イオン交換クロマ
トグラフィーに付した。

カラム：Ｑ−セファロース（φ３ｃｍＸ２３ｃｍ、容量
約１８０ｍ込） 破衝剤：］ＯｍＭ）リス−ＨＣＩＩ（＋）Ｈ７，５）、
Ｎａ　Ｃｌｉ＃１度勾配：１０ｍＭ、４００　ｍ　Ｍ、
１Ｍ 流速：１００〜２００ｍ１／時 温度゛室温 ■素通りした画分３１０ｒｒ＋ＩＬをグルコアミラーゼ
で処理して澱粉を分解した（ｐＨ５，０，４０℃、約２
時間）。澱粉の分解は、ヨウ素澱粉反応で着色が生じな
いことにより確認した。

■遠心分ＩＩ　（１０、ＯＯＯｇ　Ｘ　１０分）に付し
て上溝を回収し、１０ＮＮａＯＨ溶液て中和してｐＨ７
とし、分子量１２０万力・ントのポアサイズを有するウ
ルトラフィルターを使って限外濾過して、分解物の除去
及び濃縮を行った。

■得られた濃縮液３０ｍ１Ｌをファルマシア社製ＦＰＬ
Ｃシステム（カラム：モ／ＱＨＲ１０／１０）を使って
陰イオン交換クロマトグラフィーに付した。即ち、１０
　ｍ　Ｍ　）リス−ＨＣλと１０ｍＭのＮａＣ免を含む
緩衝液（ｐＨ７，５）で試料をカラムに付した後、上記
緩衝液でＮａＣｌ量が１６５ｍＭに増加された組成をし
た？＆（２００ｍＱ、）てカラムを洗った。次いて、目
的ＬＰＳを溶出するため、１６５ｍＭからＩＭのＮ　ａ
　Ｃａｍ濃度勾配なるようにＮ　ａ　Ｃａｍ度を増加さ
せながら全量４００ｍＱ、てカラムを洗い、各２ｍ１Ｌ
の両分を回収した。リムラステスト陽性が確認された、
濃度勾配をかけてから５〜８番目の両分を併せた。

■次いてその８ｍｕを、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ）Ｇ−２５［カラム：２．Ｏｃｍ（内径）Ｘ２０．
２ｃｍ　（６６ｍｌＬ）］を使ってゲル濾過（緩衝液：
水少に付して各３　ｍ　ＩＬの画分を回収した。リムラ
ステスト陽性の確認された第９〜１２番目の両分を併せ
て１２ｍ１４を回収した（ＬＰＳ　：１４．３ｍｇ、糖
：２．０ｍｇ、蛋白：０．５３ｍｇ）、ＬＰＳは後記実
験例１記載の方法で、糖はフェノール−硫酸法で、蛋白
はローリ−法で測定した。

■上記画分を一８０℃で凍結後に恒量になるまて凍結乾
燥し、重量を測定したら５．８ｍｇあった。（以下、こ
の１東結乾燥標品をクロレラＬＰＳと称す） このクロレラＬＰＳのリムラス活性は１４．３ｍｇに相
当するので、その比活性は １４．３÷５．８＝２．５ になる。

また、以上の精製で、夾雑物として存在し得る単独の糖
は実質下金て除去されたと考えられるので、検出された
糖は全て、クロレラＬＰＳを構成している糖と考えられ
る。従って、この段階でのクロレラＬＰＳの純度を重量
に基づいて計算すると、 蛋白＝０．５３ｍｇ ＬＰＳ＝５．８−０．５３＝５．２７ｍｇだから、 ５．２７÷５．８Ｘ１００＝９１　（％）である。

クロレラＬＰＳの物性 製造例１に記載の方法と同様にして、次の値が得られた
。

分子量＝４０，０００〜９０，０００ リン数＝４±ｌ／分子量１万 ヘキソサミン数＝７±１７分子量１万 脂肪酸数＝６±ｌ／分子量１万 ＫＤＯ数＝２±１７分子量１万 製造例３（百日咳菌ＬＰＳの製　） 千葉県血清研究所から入手した試験用百日咳菌液（２，
０Ｘ１０’ａ細胞／　ｍ　ＩＬ）を死菌体として用いた
。

上記死菌体を２５ｍｇ（乾燥ＩＩ）／ｍｌとなるように
滅菌水に懸濁した。これに等量の９０％熱フェノール液
（６８〜７０℃）を添加し、６８℃で１時間Ｓ盪しなが
ら抽出した。８，０００ｇ、４℃で２０分間遠心分離し
て水層を分取した。残りのフェノール層に、上記水層と
等量の滅菌水を加えて同様の抽出を行った。得られた水
層を先の水層と合わせて流水中で一晩透析後に、ロータ
リーエバポレータで１／１０に濃縮した。これを８゜０
００ｇ、４℃で２０分間遠心分離した。上清を分取し、
酢酸ナトリウムを少量加え、０〜４℃の冷エタノールを
６倍量加えて一２０℃で一晩放置した。４，０００ｇ、
４℃で３０分間遠心分離して回収した沈殿物をエタノー
ルで２回、次いてアセトンで１回遠心洗浄し、アスピレ
ータで乾燥させた。

残さを、２０ｍｇ／ｍｌとなるように蒸留水に懸濁し、
米国ブランソン（Ｂｒａｎｓｏｎ）社製のソニファイア
１８５型で超音波処理（出力コントロール５．１５分、
室温）に付した。次いて２゜５００ｇ、４℃で１０分間
遠心分離し、上清を分取した。

この上清を４℃で、米国シグマ（Ｓ　ｉ　ｇｍａ）社製
の核酸分解酵素ＤＮａｓｅ　　Ｉ、ＲｎａｓｅＡて１５
〜１６時間処理した（最終的には１０μｇ　／ｍ　Ｌの
ＤＮａｓｅ　　　Ｉ　と、２０ｇｇ／ｍｌのＲｎａｓｅ
Ａを使用した）。更に同し濃度の核酸分解酵素を加えて
３７℃で２時間加温した。次いて２．５００ｇ、４℃で
１０分間遠心分離１ノ、上清を分取した。

この上清を米国ゲルマン（Ｇｅ　１ｍａｎ）社のアクロ
ディスク（Ａｃ　ｒｏｄ　ｉ　ｓ　ｃ）を使い、孔径０
．２μｍで濾過した。濾液を分子篩にかけ［樹脂：米国
ファルマシア（Ｐｈａｒｍａ　ｃ　ｉ　ａ）社製セファ
ロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）６Ｂ。

カラムサイズ＝内径５ｃｍＸ長さ１００ｃｍ、緩衝液＝
１０ｍＭのトリス−ＨＣＩＩ、１０ｍＭのＮａｃＱ、（
ｐＨ７，５）−流速＝約３ｍｌ／ｃｒｎ２／時）、生化
学工業社製のＬＳ−１キツトを用いてツムラス活性陽性
画分を調べて合わせ、上記ゲルマン社のアクロディスク
を使い、孔径０．２μｍで濾過した。濾液をイオン交換
にかけ［装置：米国ファルマシア（Ｐｂａｒｍａｃｉａ
）社製ＦＰＬＣ１樹脂：米国ファルマシア社製モノＱ　
　ＨＲ１０／１０、緩？ｌ液＝１０ｍＭのトリス−ＨＣ
ｇＬ＋１０ｍＭのＮａＣ１（ｐＨ７，５）で１５分洗浄
し、次いて、ＮａＣＩＬ量を１６５ｍＭに増加して３０
分洗浄し、次いて、２０分かけて、ＮａＣ免量が１６５
ｍＭからＩＭの１度勾配になるようにＮａＣＱ、量を増
加させながら洗浄し、次いて、ＩＭのＮａＣＩＬ量で３
０洗浄する、流速＝　２　ｍ　ＩＬ／分］、生化学工業
社製のＬＳ−１キツトを用いてリムラス活性陽性画分を
調べて合わせた。

合わせた画分をカラムて脱塩し［樹脂：米国ファルマシ
ア（Ｐｂａｒｍａｃ　ｉａ）社製セファデックスＧ−２
５フアイン（ｆｉｎｅ）、カラムサイズ＝内径２ｃｍＸ
長さ２５　ｃｍ、溶出液：蒸留水コ、次いで凍結乾燥し
た。

この凍結乾燥標品（４，５０ｍｇ）に混入している可能
性の最も高い物質は核酸である。そこで、紫外吸収曲線
（２００〜４００ｎｍ）をとり、２６０ｎｍでの吸光度
を求めた。吸光度１のときの核酸濃度が５０μｇ／ｍ＋
Ｌであることを用いて上記吸光度から核酸濃度を算出し
たら１％以下であった。又、ＳＤＳ電気泳動ては蛋白質
は明確には検出されなかった。従って、検出感度を考慮
すると、上記凍結乾燥標品に混入している蛋白質は高々
０〜３％と推定される。従って、上記凍結乾燥標品の純
度は９６％以上と推定された。

製造例１に記載の方法と同様にして測定されたこの百日
咳菌ＬＰＳの物性は次の通りであった。

百日咳菌ＬＰＳの物性 分子量＝６，０００±１，０００． ９．０００±１，０００ （複数観察されたクマシー染色帯のうち、染色強度が最
高の２つの染色帯の値である。） リン数＝５／分子量８千 ヘキソサミン数＝１６±２７分子量８千脂肪酸数＝５／
分子量８千 ＫＤＯ数＝２±１／分子量８千 なお、製造例１に記載の方法と同様にして測定された大
ｉ細菌ＬＰＳ　［米国デイフコ（Ｄｉｒｃｏ）社１１０
１２８：Ｂ８］の物性は次の通りであった。

大Ｉ細菌ＬＰＳの物性 分子量＝３０，０００±５，０００ （ＦＷ段状に連続したクマシー染色帯のうち、染色強度
が最高のものの値である。）ノン数＝１２／分子量３万 ヘキソサミン数＝４５±６／分子量３万脂肪ｌ！ｌｌ数
＝１８／分子量３万 ＫＤＯ数＝５±１７分子量１３万 以下は、本発明のＬＰＳを含む製剤の処方例である。な
お、ＬＰＳ量は、リムラステストによる大ｍＭＬＰｓ換
算量である。

実施例２（内用液剤） クロレラＬＰＳ　　　　　　　　　ＩｍｇＭＩ！水　　
　　　　　　　　１００ｍ１Ｌ実施例３（軟膏剤） 小麦ＬＰＳ 精製ラノリン ０　、１　ｇ ０ｇ １　０００ｇ 実施例４（注射剤） 小麦ＬＰＳ ０、　５ｍｇ 実施例１（錠剤） 小麦ＬＰＳ　　　　　　　　　Ｏ，０４ｇ６％ＲＰＣ乳
糖　　　　　　　１７８ｇステアリン酸タルク　　　　
　　　８ｇバレイショデンブン　　　　　　１４ｇ以上
を混和し、打錠して、０．１ｍｇの小麦ＬＰＳを含む０
．５ｇの錠剤４００個を調製した。

合計 １０００ｍ　免 実験例１（リムラステスト陽性植物ＬＦ’Ｓの定量）各
種植物に含まれるリムラステスト陽性ＬＰＳの定量を、
生化学工業株式会社のトキシカラーシステムを使って行
った。

■９６穴の平底または丸底プレートに注射用薫留水な１
穴当たり１８０μ免入れた。試料２０μｉ（試料が固体
の場合には注射用蒸留水に溶解して調製した）をプレー
トの穴の１つに加えた。プレートミキサーで攪拌しなが
らピペッティングを行って１０倍希釈液を調製した。（
以後、順次希釈試料を２０μ免ずつとり、同様に処理す
ることで１００倍、１０００倍、・・・と１０倍希釈系
列液を＊ａできる。また、注射用蒸留水と試料の電比を
変えることにより希釈率は任意に設定できる。）■内部
標準として１．５μｇ／ｍ宛の大腸菌ＬＰＳ溶液のｉｏ
ｏ、ｏｏｏ倍希釈液を調製し、希釈やリムラステスト発
色が正常であることを確認した。

■上記■の１０倍希釈液３５μ鼠を別のプレートの穴に
とり、生化学工業株式会社のトキシカラーシステムのＬ
Ｓ−１セツト３５μ琵を添加し、３７℃で３０分間放置
した。ついて１０５μ交の１Ｍ酢酸水を加えて攪拌して
反応を停止させた。

この試料液の波長４１５ｎｍでの吸光度を、９６穴用吸
光度計プレートリーダーＭＴＰ−１００（コロナ電気株
式会社Ｉりて測定した。パックグランドとしては蒸留水
を、検量線作成用としては４２ｐｇ／ｍｌの生化学工業
株式会社のトキシカラーシステムのＥＴ−１セツトを使
用して検量線を作成し、この検量線を基準にして各試料
中のリムラステスト陽性ＬＰＳの定量を行った。（試料
が蒸留水である場合の吸光度を０とした。）なお、この
方法で前記ＬＳ−１セツトを使用した場合には】Ｏ〜４
５　ｐ　ｇ／ｍ５Ｌの範囲内で発色に定量性があること
が確認されたので、この範囲に入らないときは、希釈率
を変えて再実験した。

希釈試料の定量値は、 （検量線から読み取った値）Ｘ（希釈率）で計算した。

得られた結果を、固体試料の場合にはｎｇ／ｇ単位で、
液体試料の場合にはｎ　ｇ　／　ｍλ短単位次表１に示
す。

なお、表中の試料の欄の会社名、地名等は、当該試料の
入手先、産地をさす。かかる記載がない品はスーパース
トアー忠実屋の神奈川県津久井郡中野町店で購入した品
て、製造者が不明なものを指す。

表　　１ ツムラステスト陽性 試料（固体）　　　　　ＬＰＳＩ　　輸　）裸子植物 松の実（真南貿易）　　　　　　　　　　　１２５単子
葉類 硬質系小麦種子（千葉製粉）　　　　２，２５０硬質系
小麦種子（千葉製粉） （分子量５０００以上）　　１，０００，０００硬質系
小麦粉（千葉製粉）　　　　　７，５００小麦ふすま（
千葉製粉） （分子量５０００以上〉　　　　　　　　３００小麦胚
芽（千葉製粉）　　　　　　　　　１，６００小麦胚芽
（千葉製粉） （分子量５０００以上）　　　　　＜１０，０００玄米
　　　　　　　　　　　　　　　１，１００米粉（日の
本穀粉） （分子量５０００以上）３１ 米ぬか 米ぬか（分子量５０００以上） コーンフラワー（大洋飼料） （分子量５０００以上） コーングリッツ（大ン羊飼Ｎ） （分子量５０００以上） コーン（和光食糧） クマ笹（開本物産） アヤメ（種子） ニンニク（鱗茎） アスパラガス（芽） ミョウガ（花房） ヨクイニン（ウチダ和漢薬） （原植物は鳩麦） ハンゲ（松浦薬業） （原植物はカラスビシャク） バクモントウ（栃木天海堂） （原植物はジャノヒゲ） 、　　ｏｏｏ、　　ｏｏ。

２９、　０００ ５００、　０００ 〈　０　、３ １５、　０００ ３、　３００ ４、　５００ ４１、　０００ ２、　３００ ５、　５００ ４、　０００ ターメリック（エスピー食品）　　　１９５．０００（
原植物はウコン） 双子葉類 大豆（王女食品）　　　　　　　　　　　　１５０大豆
（はくれん）（分子量５０００以上）４００丹波黒大豆
（和光食糧）８５ 小豆（和光食糧）　　　　　　　　　　　４５０小豆（
和光食糧） （分子量５０００以上）　　３６，０００，０００ひた
し豆（和光食糧）　　　　　　　　　８ｏＯ大正全正金
和光食糧）　　　　　　　　　　５５０大福豆（和光食
糧）　　　　　　　　　　３５０そら豆（生）　　　　
　　　　　　　　　７５０ジヤガイモ（はくれん） （分子量５０００以上＞　　　　　　　　＜Ｏ，ａビワ
（種子）　　　　　　　　　　　　　　８００アボガド
（種子）　　　　　　　　　　　９５０モモ（種子）　
　　　　　　　　　　　４，５００クルミ（種子）　　
　　　　　　　　　１，９００ソラ豆（種子）　　　　
　　　　　　　　７５０カポチヤ（ｆｌ子） トマト（生の実） カイワレダイコン（根を除く） マタタビ（丸久物産） アマチャズル（Ｋ、に、桜井） ドクダミ（湿潤重量当たり） （帝京大学薬用植物園） 胡Ｉ！２（白）　（エスピー食品） トウガラシ（真南貿易） 六角（真南貿易） ナツメグ（ライオン） （原植物はニクズク） トウヒ（ウチダ和漢薬） （原植物はダイダイ） カッコン（栃木天海堂） （原植物はクズ） ナンキンカンゾウ（ウチダ和漢薬） オタネニンジン（ウチダ和漢薬） ボウフウ（栃木天海堂） カンボウイ（栃木天＊！り １Ｂ。

４５　。

５０　。

６００゜ １０゜ １０゜ ５０　。

４０　。

７３゜ １、　２００ ２、　３００ ２、　３００ ５、　５００ ２、　０００ ８　。

３　。

　ＯＯ （原植物はオオッッラフシ） チョウトウコラ（ウチダ和漢薬）　　　７，０００（原
植物はウンカリア・ヒルスタ） 八味地黄丸くカネボウ薬品’）　　　　　１７　０００
小柴胡７１　＜ツム：ｔ）　　　　　　　　　ｌ　３．
０００五苓１（ツムラ）　　　　　　　　　　１２，０
００猪苓湯くツムラ）　　　　　　　　　１４，０００
十全大補！ｌＩ（ツムラ）　　　　　　　　　８．００
０八味地黄丸（ツムラ’Ｉ　　　　　　　　　８．００
０ローヤルゼリー　　　　　　　　　　１，０００［ペ
キン　ローヤル　ゼリー （Ｐｅｋｉｎ　　Ｒｏｙａｌ　　Ｊｅｌ　Ｉｙ）ハチミ
ツ（加藤美峰園本舖）　　　　　　　８００シダ植物 スギナ（湿潤重量当たり）　　　　　　　　７００（帝
京大学薬用植物園） ゼンマイ（開本物産）　　　　　　　　１０，０００ソ
ウ類 わかめ（三陸天然品）　　　　　　　ｊｌ、０００わか
め芽株（森谷健康食品）　　　２００，０００ひしき（
生） 芽ひしき（小善本店） コブ（ヤマトタカハシ） アサクサノリ（乾燥相ノリ） クロレラ （■ヘルスタージャパンＹＳ） クロレラ （■マンナンフーズＹＳ） 椎茸（下仁田産） えのき茸（長野県中懸重） しめじ（勢多郡宮城町） まいたけ（大利根） あわび茸（羽生） マツシュルーム きくらげ ナメコ エビオス（アサヒビール社製 ビール酵母） ８５、　０００ １０５、　０００ ２３５、　０００ １３０．０００ １、　９００．　０００ １、　０００．　０００ １６．０００ ２０、　０００ ４０、　　ＱＯＯ ２０５、０００ ｓ、　　ｏｏ。

２０、　０００ ７５、　０００ ２１．０００ ２５０、　０００ 冬虫夏Ｍ！　　　　　　　　　　　　２４０，０００そ
の他 官印ナチュレヨーグルト（■官印）　　５，０００グリ
コビフイズスヨーグルト（−グリコ）５０Ｊムラステス
ト陽性 試料（液体） ＬＰＳ量　（ｎｇ） ビール キリン アサヒ ファインピルスナー ラガービール ハートランド ファインドラフト スーパーイースト ワイン １、　１５０ １、　２５０ １、　５５０ １．４００ サントリー サントネージュ（白） （赤） ジードル（アップル） 日本酒 大間−級 黄桜二級 （大間酒造〉 （黄桜酒造） ２　、４ １　、７ 大寒吟醸二級（玉泉堂酒造） 玄米酒 日々−献（大間酒造） 薬味酒 陶陶酒デルカップ（陶陶酒本舖） 宝焼耐（宝酒造） その他 キョーレオビン（湧水製薬） ニンニク抽出液（湧水製薬） グロスキュー（クロレラ工業） 大麦健康メツコール（韓国・−和） サクロンハーブ液（エーザイ） ヘチマ水（自家１１） パイオアルゲン（クロレラ工業） パンシロン内服液（ロート製薬） ユンケルファンティー（佐原製薬） コリホグス（小林製薬） ツディ（三共） ミオＤコーワ１００（コーリ） ２、　　１ １．２ ＜２．０ ６、　０００ ２、　０００ １．０００ ノゲイン（三共）　　　　　　　　　　　　　９０ブレ
ン５０（第−製薬）　　　　　　　　　　７ソルマツク
（大ＩＩ製薬）　　　　　　　　　　　６０−ゼリーゴ
ールト（中外製薬）　　　　　　５バスビタン３０（常
盤製薬）　　　　　　　　５チオヒタ（大Ｉ！製薬）　
　　　　　　　　５未溝リボビタン（大正製薬）　　　
　　　　　５未満アスパラゴールド（田辺製薬）　　　
　　５未満実験例２（マクロファージのインビトロＴＮ
Ｆ産生能を活性化する際のＥＤＳＩＩを与えるリムラス
テスト陽性ＬＰＳの含有量が０゜４〜１１００ｎ／培養
液ｍａであるＬＰＳの選択方法） ９週齢の、平均体重２９ｇの各群３匹のオスのＣ３Ｈ／
ＨｅマウスのマクロファージＭＷｇ常在細胞２００μ交
（２Ｘ　１０５個）／穴を９６穴の平底プレートに入れ
、ブライマーとしての絹換えマウスＩＦＮ−ｒ　（１０
０単位／　ｍ　ｌ）を６穴に１０μ９宛加えた。別途、
各種ＬＰＳ源を６５℃の熱水（ｇ／ｍＱ）で５時間抽出
してｙ４製し１こ抽出液を各種希釈し、その１０μ見／
穴をブライマー投与の３時間後にトリカーとして加えた
。２時間培養後に遠心分離操作に付した（３０００ｇ、
２０分）。６穴から得られた１３０μ２の、ＴＮＦ活性
はＬ９２９細胞に対する毒性に基づいて測定し、又、リ
ムラステスト陽性ＬＰＳ含ｐ量は生化学工業株式会社の
トキシカラーシステムを使用して測定した。

測定値を、縦軸にＴＮＦ産生１（単位／培養液ｍｌ）を
、横軸（対数尺）に対応リムラステスト陽性ＬＰＳ含有
量（ｎｇ／培！ｉ５液ｍｌ）を表す座標にプロットし、
プロットされた各点から推定されるシグモイド曲線を描
いた。トリガーを投与しなかった場合のＴＮＦ産生量を
与える各トリガーのマクロファージ活性化能を０％とし
、トリガ投与の効果として増大するＴＮＦ産生量が最大
恒量に達したときの各トリガーのマクロファージ活性化
能を１００％とし、その５０％に相当するマクロファー
ジ活性化能を与えるリムラステスト陽性ＬＰＳ含有＠を
曲線から読み取った。

マクロファージ活性化能とリムラステスト陽性ＬＰＳ含
有量との相間関係が上記条件を満たし、たＬＰＳ採取源
の結果を次の表２に示す。表中で、ｒＴＮＦ」はＴＮＦ
産生量（単位／培養液ｍ１Ｌ）を、「活性化能」はマク
ロファージ活性化能（％）を、ｒＬＰｓ」はリムラステ
スト陽性ＬＰＳ含有量（ｎｇ／培Ｎ液ｍ１Ｌ）を表す。

なお、トリガー無添加時のＴＮＦ産生量は０．７５単位
／ｍｌｌであったので、ＴＮＦ産生量が０．７５単位／
ｍｌＬ以下である場合をマクロファージ活性化能０％と
し、マクロファージ活性化能（％）は次式により計算し
た。

表　　２ 表２に示された結果を第４〜７図に示す。

第４〜７図において、縦軸はマクロファージ活性化能（
％）を表し、横軸（対数尺）はリムラステスト陽性ＬＰ
Ｓ含有＠（ｎｇ／培ｉＩ液ｍｌ）を表している。

第４図において、○はターメリ・ンクの、・はカンボー
、ｆの、口はコンブの、■はアサクサノリのデータを示
す。

第５図において、○はワカメ芽株エキスの、口は芽ヒジ
キの、■はエビオスのデータを示す。

第６図において、○は冬虫夏草の、・はワカメ芽株の、
口はクロレラのデータを示す。

第７１！Ｉにおいて、○は大Ｉ細菌ＬＰＳの、・は小麦
ＬＰＳの、口は百日咳ＭＬＰＳの、■はりピトＡのデー
タを示す。

も約５００　ｍ　Ｑ、／日であり、特に差は観察されな
かった。又、観察間間中、体重の変動もほとんどなかっ
た。

血清コレステロールは■コレスターゼにッスイ社製）を
使用して測定した。結果を各群３匹の平均として次表３
に示す。

表　３（血清コレステロール量：ｍｇ／ｍ＋Ｌ）実験例
３（コレステロール低下効果の測定）各ａ３匹の、平均
体重４ｋｇの雌のＷＨＨＬラビットに飲用水のみ（対照
群）か、製造例１て製造された粉末Ａａ２を１ｍｇ　（
リムラス換算で９００ｕｇ／ｇのＬＰＳを含む）　／ｍ
＋１含む飲用水（薬剤投与群）を自由に与えた。薬剤投
与期間は４５日間とした。吸飲量はいずれの群において
第８図は、上記表３の結果をグラフに表したものである
。第８図から、本発明のコレステロール低下剤、動物用
コレステロール低下剤の優れたコレステロール低下作用
、及びその持続性が明らかである。

投与量、投与間隔、毒性値 本発明のＬＰＳをコレステロール低下剤、動物用コレス
テロール低下剤として投与するさいの量、投与間隔は、
当然、担当医師或いは獣医師の厳重な管理下、投与対象
の年齢、症状、体重、投与効果を勘案して個別に決定さ
れるが、人間の成人（６０ｋｇ）で、経口投与で１μｇ
−１００ｍｇ、静脈投与でｌｏｎｇ−１ｍｇ、経皮投与
て１１００ｎ〜１ｍｇが１日１回の投与量の一応の目安
となる。なお、動物では、牛、馬等の大型動物は上記の
量の６０分の１を体重１ｋｇ当たりの量の目安とし、豚
、犬、猫等の中型、小型の動物ではその２倍量を体重１
ｋｇ当たりの量の目安とし、鶏等の鳥類では更にその２
倍量を体重１ｋｇ当たりの量の目安とし投与できる。

又、小麦ＬＰＳ　（製造例１）、クロレラＬＰＳ（製造
例２）、大腸１ＬＰｓ［米国デイフコ（Ｄｉｆｃｏ）社
１１０１２８：Ｂ８）、百日咳菌ＬＰＳ（製造例３）の
毒性値ＬＤ５９（１群２匹の雄ＢＡＬＢ／Ｃマウス、平
均体重４５ｇ、における平均値）は次の通りであった。

［発明の効果コ 本発明により、抗コレステロール低下効果が高くて副作
用が少なく、従って化学療法係数が高く、持続性があり
、生産コストが低く、しかも、経口、経皮、注射て投与
が可能な、大量に供給可能な新規なコレステロール低下
剤、動物用コレステロール低下剤が櫂供される。

【図面の簡単な説明】

第１図は、小麦ＬＰＳをガスクロマトグラフィーにかけ
て得られる、分子中における脂肪酸の存在を示すピーク
を図示したチャートである。 第２図は、大腸菌ＬＰＳをガスクロマトグラフィーにか
けて得られる、分子中における脂肪酸の存在を示すピー
クを図示したチャートである。 第３図は、百日咳菌ＬＰＳをガスクロマトグラフィーに
かけて得られる、分子中における脂肪酸の存在を示すピ
ークを図示したチャートである。 第４〜７図は、マクロファージ活性化能とリムラステス
ト陽性ＬＰＳ含有量との相関間係が本発明の条件を満た
している各種ＬＰＳの当該相関間係を示すグラフである
。 第８図は、本発明によるコレステロール低下作用を示す
グラフである。 第４〜７図において、縦軸はマクロファージ活性化能（
％）を表し、横軸（対数尺）はリムラステスト陽性ＬＰ
Ｓ含有量（ｎｇ／培養液ｍｌ）を表し・ている。 第４図において、○はターメリックの、・は力ンボーイ
の、口はコンブの、■はアサクサノリのデータをボす。 第５図において、○はワカメ芽株エキスの、・は芽ヒジ
キの、口はエビオスのデータを示す。 第６図において、○は冬虫夏草の、・はワカメ芽株の、
口はクロレラのデータを示す。 第７図において、○は大腸菌ＬＰＳの、・は小麦ＬＰＳ
の、口は百日咳菌ＬＰＳの、■はリピトＡのデータを示
す。 第８図において、・は対照群（飲用水のみ投与）の、○
は薬剤投与群（本発明のコレステロール低下剤を投与）
のデータを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）ＬＰＳを含むコレステロール低下剤であり、 インビトロで培養されるマクロファージのＴＮＦ産生能
   を活性化するＬＰＳのマクロファージ活性化能を指標と
   し、 縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファージ
   のＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を０％
   、マクロファージのＴＮＦ産生量を最大恒量にする時の
   ＬＰＳのマクロファージ活性化能を１００％とするマク
   ロファージ活性化能（％）を表し、横軸に、そのＬＰＳ
   のリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を対数尺で表すシグ
   モイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤ＿５＿０のを与えるリム
   ラステスト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜１００ｎｇ／培
   養液ｍｌであるＬＰＳの少なくとも１種を含むコレステ
   ロール低下剤。 （２）ＬＰＳが、植物から得られるＬＰＳ、細菌から得
   られるＬＰＳ及びリピドＡからなる群から選択される、
   請求項１記載のコレステロール低下剤。 （３）植物が裸子植物、単子葉類植物、双子葉類植物、
   シダ植物、ソウ類植物、菌類植物及びそれらの混合物か
   らなる群から選択されるものである、請求項２記載のコ
   レステロール低下剤。 （４）裸子植物がマツ科マツ属植物である、請求項３記
   載のコレステロール低下剤。 （５）マツ科マツ属植物がマツである、請求項４記載の
   コレステロール低下剤。 （６）単子葉類植物がイネ科のイネ属植物、コムギ属植
   物、オオムギ属植物、カラス麦属植物、ササ属植物、ジ
   ュズダマ属植物、アヤメ科のアヤメ属植物、ユリ科のネ
   ギ属植物、キジカクシ属植物、ジャノヒゲ属植物、ショ
   ウガ科のショウガ属植物、ウコン属植物、サトイモ科ハ
   ンゲ属植物及びそれらの混合物からなる群から選択され
   るものである、請求項３記載のコレステロール低下剤。 （７）イネ科イネ属植物がイネである、請求項６記載の
   コレステロール低下剤。 （８）イネ科コムギ属植物が小麦である、請求項６記載
   のコレステロール低下剤。 （９）イネ科オオムギ属植物が大麦、裸麦及びそれらの
   混合物からなる群から選択されるものである、請求項６
   記載のコレステロール低下剤。 （１０）イネ科カラス麦属植物が烏麦、燕麦及びそれら
   の混合物からなる群から選択される、請求項６記載のコ
   レステロール低下剤。 （１１）イネ科ササ属植物がクサ笹である、請求項６記
   載のコレステロール低下剤。 （１２）イネ科ジュズダマ属植物が鳩麦である、請求項
   ６記載のコレステロール低下剤。（１３）アヤメ科アヤ
   メ属植物がアヤメである、請求項６記載のコレステロー
   ル低下剤。（１４）ユリ科ネギ属植物がニンニクである
   、請求項６記載のコレステロール低下剤。 （１５）ユリ科キジカクシ属植物がアスパラガスである
   、請求項６記載のコレステロール低下剤。 （１６）ユリ科ジャノヒゲ属植物がジャノヒゲである、
   請求項６記載のコレステロール低下剤。 （１７）ショウガ科ショウガ属植物がミョウガである、
   請求項６記載のコレステロール低下剤。 （１８）ショウガ科ウコン属植物がウコンである、請求
   項６記載のコレステロール低下剤。 （１９）サトイモ科ハンゲ属植物がカラスビシャクであ
   る、請求項６記載のコレステロール低下剤。 （２０）小麦から得られるＬＰＳが次の物性を有するも
   のである、請求項８記載のコレステロール低下剤。 分子量：８，０００±１，０００（ＳＤＳ電気泳動法） リン数：１以上／分子量８千 ヘキソサミン数：６±２／分子量８千 脂肪酸数：６±２／分子量８千 ＫＤＯ数：５±１／分子量８千 （２１）双子薬類植物がマメ科のダイズ属植物、インゲ
   ンマメ属植物、ソラマメ属植物、クズ属植物、カンゾウ
   属植物、ナス科のナス属植物、トマト属植物、トウガラ
   シ属植物、バラ科のビワ属植物、サクラ属植物、クスノ
   キ科アボガド属植物、クルミ科クルミ属植物、ウリ科の
   トウナス属植物、アマチャヅル属植物、アブラナ科ダイ
   コン属植物、マタタビ科マタタビ属植物、ドクダミ科ド
   クダミ属植物、コショウ科コショウ属植物、シキミ科シ
   キミ属植物、ニクズク科ニクズク属植物、ミカン科ミカ
   ン属植物、ウコギ科オタネニンジン属植物、セリ科サポ
   シュニコビア属植物、ツヅラフジ科オオツヅラフジ属植
   物、アカネ科カギカズラ属植物及びそれらの混合物から
   なる群から選択されるものである、請求項３記載のコレ
   ステロール低下剤。 （２２）マメ科ダイズ属植物が大豆である、請求項２１
   記載のコレステロール低下剤。 （２３）マメ科インゲンマメ属植物が小豆である、請求
   項２１記載のコレステロール低下剤。 （２４）マメ科ソラマメ属植物がそら豆である、請求項
   ２１記載のコレステロール低下剤。 （２５）マメ科クズ属植物がクズである、請求項２１記
   載のコレステロール低下剤。 （２６）マメ科カンゾウ属植物がナンキンカンゾウであ
   る、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （２７）ナス科ナス属植物がジャガイモ、トウガラシ及
   びそれらの混合物からなる群から選択されるものである
   、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （２８）ナス科トマト属植物がトマトである、請求項２
   １記載のコレステロール低下剤。（２９）ナス科トウガ
   ラシ属植物がトウガラシである、請求項２１記載のコレ
   ステロール低下剤。 （３０）バラ科ビワ属植物がビワである、請求項２１記
   載のコレステロール低下剤。 （３１）バラ科サクラ属植物がモモである、請求項２１
   記載のコレステロール低下剤。 （３２）クスノキ科アボガド属植物がアボガドである、
   請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （３３）クルミ科クルミ属植物がクルミである、請求項
   ２１記載のコレステロール低下剤。 （３４）ウリ科トウナス属植物がカボチャである、請求
   項２１記載の抗コレステロール低下剤。 （３５）ウリ科アマチャヅル属植物がアマチャヅルであ
   る、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （３６）アブラナ科ダイコン属植物がカイワレダイコン
   である、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （３７）マタタビ科マタタビ属植物がマタタビである、
   請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （３８）ドクダミ科ドクダミ属植物がドクダミである、
   請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （３９）コショウ科コショウ属植物が胡椒である、請求
   項２１記載のコレステロール低下剤。 （４０）シキミ科シキミ属植物がダイウイキョウである
   、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （４１）ニクズク科ニクズク属植物がニクズクである、
   請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （４２）ミカン科ミカン属植物がダイダイである、請求
   項２１記載のコレステロール低下剤。 （４３）ウコギ科オタネニンジン属植物がオタネニンジ
   ンである、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （４４）セリ科サポシュニコビア属植物がボウフウであ
   る、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （４５）ツヅラフジ科オオツヅラフジ属植物がオオツヅ
   ラフジである、請求項２１記載のコレステロール低下剤
   。 （４６）アカネ科カギカズラ属植物がウンカリア・ヒル
   スタである、請求項２１記載のコレステロール低下剤。 （４７）シダ植物がトクサ科トクサ属植物、ゼンマイ科
   ゼンマイ属植物及びそれらの混合物からなる群から選択
   されるものである、請求項３記載のコレステロール低下
   剤。 （４８）トクサ科トクサ属植物がスギナである、請求項
   ４７記載のコレステロール低下剤。 （４９）ゼンマイ科ゼンマイ属植物がゼンマイである、
   請求項４７記載のコレステロール低下剤。 （５０）ソウ類植物がカッソウ類植物、紅ソウ類植物、
   緑ソウ類植物、ランソウ類植物及びそれらの混合物から
   なる群から選択されるものである、請求項３記載のコレ
   ステロール低下剤。 （５１）カッソウ類植物がコンブ科のワカメ属植物、コ
   ンブ属植物、ホンダワラ科ヒジキ属植物及びそれらの混
   合物からなる群から選択されるものである、請求項５０
   記載のコレステロール低下剤。 （５２）コンブ科ワカメ属植物がワカメである、請求項
   ５１記載のコレステロール低下剤。 （５３）コンブ科コンブ属植物がコンブである、請求項
   ５１記載のコレステロール低下剤。 （５４）ホンダワラ科ヒジキ属植物がヒジキである、請
   求項５１記載のコレステロール低下剤。 （５５）紅ソウ類植物がウシケノリ科アマノリ属植物で
   ある、請求項５０記載のコレステロール低下剤。 （５６）ウシケノリ科アマノリ属植物がアサクサノリで
   ある、請求項５５記載のコレステロール低下剤。 （５７）緑ソウ類植物がオオシスティス科クロレラ属植
   物である、請求項５０記載のコレステロール低下剤。 （５８）オオシスティス科クロレラ属植物がクロレラで
   ある、請求項５７記載のコレステロール低下剤。 （５９）クロレラから得られるＬＰＳが次の物性を有す
   るものである、請求項５８記載のコレステロール低下剤
   。 分子量＝４０，０００〜９０，０００（ＳＤＳ電気泳動
   法） リン数＝４±１／分子量１万 ヘキソサミン数＝７±１／分子量１万 脂肪酸数＝６±１／分子量１万 ＫＤＯ数＝２±１／分子量１万 （６０）菌類植物が担子菌類植物、子ノウ菌類植物及び
   それらの混合物からなる群から選択されるものである、
   請求項３記載のコレステロール低下剤。 （６１）担子菌類植物がヒラタケ科マツオウジ属植物、
   キシメジ科のエノキタケ属植物、シメジ属植物、タコウ
   キン科マイタケ属植物、サルノコシカケ科ポリポラス属
   植物、ハラタケ科ハラタケ属植物、キクラゲ科キクラゲ
   属植物、モエギタケ科スギタケ属植物及びそれらの混合
   物である、請求項６０記載のコレステロール低下剤。 （６２）ヒラタケ科マツオウジ属植物が椎茸である、請
   求項６１記載のコレステロール低下剤。 （６３）キシメジ科エノキタケ属植物がエノキ茸である
   、請求項６１記載のコレステロール低下剤。 （６４）キシメジ科シメジ属植物がシメジである、請求
   項６２記載のコレステロール低下剤。 （６５）タコウキン科マイタケ属植物がマイ茸である、
   請求項６１記載のコレステロール低下剤。 （６６）サルノコシカケ科ポリポラス属植物がアワビ茸
   である、請求項６１記載のコレステロール低下剤。 （６７）ハラタケ科ハラタケ属植物がマッシュルームで
   ある、請求項６１記載のコレステロール低下剤。 （６８）キクラゲ科キクラゲ属植物がキクラゲである、
   請求項６１記載のコレステロール低下剤。 （６９）モエギタケ科スギタケ属植物がナメコである、
   請求項６１記載のコレステロール低下剤。 （７０）子ノウ菌類植物がエンドミセタセア科サッカロ
   ミセス属植物、バッカクキン科ノムシタケ属植物及びそ
   れらの混合物である、請求項６０記載のコレステロール
   低下剤。 （７１）エンドミセタセア科サッカロミセス属植物が、
   パン酵母、醸造用酵母及びそれらの混合物である、請求
   項７０記載のコレステロール低下剤。 （７２）バッカクキン科ノムシタケ属植物が冬虫夏草で
   ある、請求項７０記載のコレステロール低下剤。 （７３）細菌が大腸菌、百日咳菌及びそれらの混合物か
   らなる群から選択されるものである、請求項３記載のコ
   レステロール低下剤。 （７４）大腸菌から得られるＬＰＳが次の物性を有する
   ものである、請求項７３記載のコレステロール低下剤。 分子量＝３０，０００±５，０００（ＳＤ Ｓ電気泳動法） リン数＝１２／分子量３万 ヘキソサミン数＝４５±６／分子量３万 脂肪酸数＝１８／分子量３万 ＫＤＯ数＝５±１／分子量３万 （７５）百日咳菌から得られるＬＰＳが次の物性を有す
   るものである、請求項７３記載のコレステロール低下剤
   。 分子量＝６，０００±１，０００ ９，０００±１，０００ （ＳＤＳ電気泳動法） リン数＝５／分子量８千 ヘキソサミン数＝１６±２／分子量８千 脂肪酸数＝５／分子量８千 ＫＤＯ数＝２±１／分子量８千 （７６）ＬＰＳを含む動物用コレステロール低下剤であ
   り、 インビトロで培養されるマクロファージのＴＮＦ産生能
   を活性化するＬＰＳのマクロファージ活性化能を指標と
   し、縦軸に、そのＬＰＳを添加しないときのマクロファ
   ージのＴＮＦ産生量を与えるマクロファージ活性化能を
   ０％、マクロファージのＴＮＦ産生量を最大恒量にする
   時のＬＰＳのマクロファージ活性化能を１００％とする
   マクロファージ活性化能（％）を表し、横軸に、そのＬ
   ＰＳのリムラステスト陽性ＬＰＳ含有量を対数尺で表す
   シグモイド曲線を描くとき、 マクロファージ活性化能のＥＤ＿５＿０を与えるリムラ
   ステスト陽性ＬＰＳ含有量が０．４〜１００ｎｇ／培養
   液ｍｌであるＬＰＳの少なくとも１種を含む動物用コレ
   ステロール低下剤。