KR20010013355A - 조류용 생균제의 투여 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 락토바실러스 레우테리 및 락토바실러스 존소니이에 속하는 생 유산균을 포함하는 생균제를 신생 햇병아리 단계에 투여하는 단계; 및 바실러스 서브틸리스에 속하는 생균을 포함하는 생균제를 투여하는 단계를 포함하여, 조류용 생균제를 투여하는 방법에 관한 것이다.

Description

조류용 생균제의 투여 방법 {Method for administering viable microorganism composition for poultry}
브로일러(broiler) 등의 양계에 있어서는, 생산 비용을 절감하기 위하여, 일반적으로 양계장 1평(약 3.3㎡)당 40 내지 60마리를 조밀하게 양계하고 있다. 더욱이, 신속하게 성장되도록, 즉 평균 1일 체중 증가분이 40 내지 55g이 되도록 양계하여 부화한지 약 2개월이 되면 상기 조류를 출하할 수 있다. 이러한 상황하에서, 상기 조류는 항상 극도의 스트레스를 받게 되어, 종종 병이 들게 되며, 이러한 질병이 종종 조류 전체로 확산되기도 한다. 마루에서 사육하는 경우에는, 조류가 사료 등을 쪼아 먹기 때문에, 마루가 배설물로 더렵혀져 독성 세균이 사육 시설 내의 모든 조류에 매우 용이하게 전염된다. 또한, 개방된 사육 시설, 또는 몇몇 경우에는 창문이 없는 사육 시설에서는, 독성 세균이 이러한 사육 시설 전반에 용이하게 전염될 수 있다. 또한, 예를 들면, 브로일러 사육장을 브로일러가 출하될 때마다 매번 살균 소독한다 할지라도, 주변 지역에 있는 랫트와 같은 작은 동물들은 이러한 처리에 영향을 받지 않기 때문에, 브로일러 병아리가 사육 시설 내로 다시 들어갈 때, 상기 작은 동물들은 살모넬라(salmonella) 등의 세균을 양계장내로 옮긴다.
사육 기간 동안 성장율 저하 등을 방지하면서 높은 생산성을 유지시키고 또한 조류가 이들 조건하에서 독성 세균에 오염되는 것을 방지하기 위해서는, 항생제, 항균제 등의 각종 약물을 일반적으로 조류에게 투여한다.
그러나, 이들 약물이 고기와 계란에 잔류할 가능성이 있고 또한 이러한 약물에 대해 내성이 있는 세균성 균주가 발생될 위험(실제로 많은 경우에 보고된 바 있음)이 있기 때문에, 약물을 사용하지 않고 생산된, 약물-비함유 축산물에 대한 소비자의 요구가 증가하고 있다.
한편, 다수의 조류를 조밀하게 사육하지 않고 방목시킨 경우에는, 높은 생산성을 기대할 수 없다. 그러나, 항생제, 항균제 등의 약물을 사용하지 않고서도 닭 등의 조류를 사육할 수 있다. 방목 하에 사육된, 즉 소위 안마당 태생의 닭고기와 계란이 안전성과 우수한 맛으로 인해 현재 가장 많이 팔리고 있으며, 시장에서 높은 가격으로 거래되고 있다.
결과적으로, 약물-비함유 사육법(항생제, 항균제 등의 약물을 일정 사육 기간 또는 전체 사육 기간 내내 사용하지 않으므로, 적어도 출하시에는 이러한 약물이 조류에 잔존하지 않게 하는 사육법)에 의해, 높은 생산성을 유지시키면서 독성 세균으로의 오염을 야기시키지 않고 닭 등의 조류를 사육하는 방법의 개발에 지대한 관심이 모아지고 있다.
단순히 약물 투여만을 하지 않음으로써 다수의 조류를 통상적으로 조밀하게 사육하는 경우에는, 이러한 조류가 독성 세균에 쉽게 감염된다. 따라서, 독성 세균으로의 오염을 야기시키지 않으면서 상업적으로 허용되는 수준으로 생산성을 유지시키는 것이 가능하지 않다.
항생제, 항균제 등의 약물에 의존하지 않고 조류가 독성 세균에 감염되는 것을 저하시키기 위한 한 방법으로서, 각종 조류의 성장에 유용한 미생물 등을 투여하는 방법이 제안된 바 있다. 바실러스(Bacillus) 속에 속하는 세균, 락토바실러스(Lactobacillus) 속에 속하는 유산균, 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속에 속하는 세균 등이 사료용 첨가제에 유용한 미생물로서 또는 각종 CE(경쟁적 배제) 제제로서 공지되어 있다. 이들 미생물 중 일부는 조류용의 사료용 첨가제 생균제로서 시판되고 있다. 그러나, 이러한 효과가 어느 정도 인정되긴 하지만, 충분하지는 않다. 특히, 이들 생균제를 제공함으로써 상업적으로 허용되는 수준의 생산성을 나타내고 다수의 조류를 조밀하게 사육하면서 조류를 약물-비함유 사육법으로 사육시킬 수 있는 어떠한 방법도 보고된 바 없다.
예를 들면, 등록된 일본 특허 제2528055호 및 JP-B-3-79988[본원에서 사용된 바와 같은 용어 "JP-B"는 "심사된 일본 특허공보"를 의미한다]에는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)를 포함하는 생균제를 동물에 투여함으로써, 동물의 체중 증가와 사료 전환율을 향상시킬 수 있고, 장 기능 조절 작용 등의 효과를 획득할 수 있다고 기재되어 있다. 이러한 방법을, 브로일러를 대규모로 생산하지 않는 특정의 제한된 지역에서도, 예를 들면, 브로일러에 적용함으로써 약물-비함유 사육법을 수행하는 것이 가능하다. 그러나, 브로일러를 자주 사육하는 많은 지역에서는, 앞서 기재된 바와 같이 사육 시설 전반에 용이하게 전염되는 독성 세균에 종종 감염되기 때문에, 상기 방법을 이용하여 브로일러를 상업적으로 약물-비함유 사육시키는 것이 상당히 어렵다. 또한, 상기 방법을 이용하여 브로일러를 약물-비함유 사육시키는 것이 가능한 경우일지라도, 이러한 조류의 체중 증가율은 약물을 이용한 사육 보다 느리다. 그 결과, 약물이 적용된 사육법의 높은 생산성을 얻지 못한다.
또한, 현재 시판되고 있는 생균제는, 예를 들면, 살포 단계 동안 생존수가 감소하거나, 장내 세균상이 형성된 후에 전이 증식력(colonization ability)이 떨어지거나, 이러한 생균제를 장시간 동안 연속적으로 투여해야 할 필요가 있는 등의 문제점을 지니고 있다. 특히, 장내 세균상이 형성된 후에 전이 증식력이 떨어지는 것으로 인해, 생균제를 장기간 동안 연속적으로 투여해야 할 필요가 있다는 것은 현재, 경제적인 측면에서 볼 때 실제적인 사용에 심각한 장해 요인이 된다.
본 발명은 조류(poultry)의 성장에 유용한 생균제를 조류에게 투여함으로써, 항생제, 항균제 등과 같은 약물의 양을 감소시키거나 이러한 약물을 투여하지 않으면서도 높은 생산성으로 조류를 사육하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 목적은 생균제를 조류에 투여함으로써, 높은 생산성을 유지하면서 조류를 약물-비함유 사육시킬 수 있는 방법을 제공하는 것이다.
상기 언급된 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명의 발명자들은 광범위한 천연 공급원으로부터 유용한 세균을 스크리닝한 결과, 닭의 장관으로부터 분리된 특정의 유산균이 부화 직후의 신생 닭의 장관에서 용이하게 전이 증식할 수 있다는 사실을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은 닭의 회장으로부터 분리된 이종발효 유산균 및 닭의 맹장으로부터 분리된 동종발효 유산균이 신생 햇병아리의 장관 상에서 용이하게 전이 증식할 수 있으며, 독성 세균의 성장 억제, 설사 방지, 성장 증강, 성장율 증진, 사료 전환율 증진 등의 각종 효과를 나타낸다는 사실을 밝혀내었다. 또한, 본 발명자들은 이들 락토바실러스 속의 유산균의 생균 현탁액을 부화한지 4일 이내의 신생 병아리에게 단지 1회만을 분무함으로써, 유산균이 부화 직후의 신생 병아리의 장관 상에 전이 증식할 수 있다는 사실을 발견하였다.
추가로, 본 발명자들은 유용한 유산균을, 조류의 약물-비함유 사육에 있어서 햇병아리 단계에서부터 성숙한 새의 단계까지의 기간 동안에 바실러스 서브틸리스 생균 투여와 함께 전이 증식시키는 경우에는, 바실러스 서브틸리스 생균만을 단독으로 투여한 경우와 비교해서 초기 사육 단계에서의 체중 증가가 향상될 수 있고 충분한 성장율이 획득될 수 있기 때문에, 상업적으로 효과적인 높은 생산성을 제공하면서 다수의 조류를 조밀하게 사육함으로써 조류를 약물-비함유 사육하는 것이 가능해짐을 발견하였다. 본 발명은 이러한 발견들을 기초로 하여 완성되었다.
따라서, 본 발명은 락토바실러스 레우테리(Lactobacillus reuteri) 및 락토바실러스 존소니이(Lactobacillus johnsonii)에 속하는 생균을 포함하는 제1 조성물을 신생 햇병아리 단계에서 조류에 투여하는 단계를 포함하여, 생균을 조류에게 투여하는 방법에 관한 것이다.
추가로, 본 발명은 락토바실러스 레우테리 및 락토바실러스 존소니이에 속하는 생 유산균을 포함하는 조류용 생균제를 신생 햇병아리 단계에서 투여하는 단계; 및 바실러스 서브틸리스에 속하는 생균을 포함하는 조류용 생균제를 투여하는 단계를 포함하여, 조류용 생균제를 투여하는 방법에 관한 것이다.
조류용 생균제를 투여하는 본 발명의 방법은 락토바실러스 레우테리 및 락토바실러스 존소니이에 속하는 생 유산균을 포함하는 조류용 생균제(종종 "유산균의 생균제"로서 후술됨)를 신생 햇병아리에게 투여하는 것을 포함한다.
상기 언급된 락토바실러스 속에 속하는 유산균은 조건 혐기성 세균이다. 조류의 장관으로부터 분리된 것 뿐만 아니라 천연 공급원으로부터 분리된 다른 균주도 효과적으로 사용될 수 있다. 락토바실러스 레우테리에 속하는 균주의 바람직한 예로는 락토바실러스 레우테리 CP-720(기탁 번호 FERM 제BP-6332호), 락토바실러스 레우테리 CP-722(기탁 번호 FERM 제BP-6334호) 등이 있다. 락토바실러스 존소니이에 속하는 균주의 바람직한 예로는 락토바실러스 존소니이 CP-721(기탁 번호 FERM 제BP-6333호) 등이 있다. 이들 3가지 균주는 1998년 4월 27일자로 기탁기관[National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology; 1-3, Higashi 1 chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken 305-8566, Japan]에 기탁되어 있다. 락토바실러스 레우테리 및 락토바실러스 존소니이의 기타 균주가, 예를 들면, 본원에 참조문헌으로 삽입된 문헌[참조; ATCC Bacteria and Bacteriophages, 19thed., 1996, pages 195 and 197]으로부터 공지되어 있다.
락토바실러스 레우테리 CP-720 및 CP-722 및 락토바실러스 존소니이 CP-721의 세균학적 성질은 다음 표 1에 제시되어 있다.
세균 특성 CP-720 CP-721 CP-722
(형태학적 성질)
1) 세포 형태 간상 간상 간상
2) 운동성 존재 여부 없음 없음 없음
3) 포자 존재 여부 없음 없음 없음
4) 그람 염색 양성 양성 양성
(생리학적 특성)
1) 카탈라제 - - -
2) 인돌 형성 - - -
3) 산소에 대한 행위 조건혐기균 조건혐기균 조건혐기균
4) 15℃에서의 성장 - - -
5) 45℃에서의 성장 + + +
6) 락트산의 광회전 DL DL DL
7) 가스 생성 + - +
8) 사카라이드로부터의산 형성글루코오스락토오스만노스프럭토오스갈락토오스수크로오스아라비노오스말토오스셀로비오스람노오스크실로오스트레할로오스멜리비오스라피노오스만니톨소르비톨에스쿨린살리신전분 ++-+++++-±+±++----+ ++-+++-++---++--+++ ++-+++++-±+±++----+
유산균의 생균제는 락토바실러스 레우테리 이외의 락토바실러스 속에 속하는 이종발효 유산균, 예를 들면, 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 부흐네리(Lactobacillus buchneri) 등, 및 또한 락토바실러스 존소니이 이외의 락토바실러스 속에 속하는 동종발효 유산균, 예를 들면, 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophillus) 그룹에 속하는 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 크리스파투스(Lactobacillus crispatus) 등을 추가로 함유할 수 있다. 상이한 많은 락토바실러스 속의 상이한 많은 균주가, 예를 들면, 본원에 참조문헌으로 삽입된 문헌[참조; ATCC Bacteria and Bacteriophages, 19thed., 1996, pages 192-199]으로부터 공지되어 있다.
유산균의 생균을 배양하는데 사용될 수 있는 배지의 바람직한 예로는 소젖, 염소젖, 말젖 등의 유제 배지, 이의 탈지유 및 유산균용 배지, 예를 들면, BL 배지, 브릭스(Briggs) 간 브로쓰 배지, MRS 배지, GAM 배지, TTY 배지 등이 있다.
이러한 유산균을 25 내지 45℃, 보다 바람직하게는 30 내지 40℃에서 6 내지 30시간, 더욱 바람직하게는 10 내지 24시간 동안 배양할 수 있다. 이로써 수득된 배양 브로쓰를 그 자체로서 사용할 때까지 약 5℃에서 저장함으로써 유산균의 생균제로서 직접적으로 사용할 수 있다. 또 다른 한편, 이러한 미생물을 원심분리시켜 회수하고, 보호제와 혼합한 다음 진공하에서 동결 건조시킬 수 있다. 이로써 생성된 세균 분제를 차고 어두운 방에서 저장하고, 사용시 상기 분제를 현탁, 혼합 또는 용해시킴으로써 유산균의 생균제로서 사용할 수 있다. 이러한 방식으로 제조된 무수 미생물 분제가 더욱 바람직한데, 이는 이러한 분제가 장기간의 저장에도 견딜 수 있기 때문이다.
유산균의 생균제는 담체 및 희석제를 함유할 수 있다. 이러한 담체 및 희석제는 특별히 제한되지 않으며, 약제학적으로 또는 영양학적으로 허용되는 담체 및 희석제 중에서 선택된다. 또한, 유산균의 생균제는 조류용 사료(양식)을 함유할 수 있다.
본 발명에서는, 락토바실러스 레우테리 및 락토바실러스 존소니이에 속하는 미생물을 대상으로 하여 적절한 돌연변이 처리(예를 들면, 자외선, X선 또는 방사선에 노출시킴) 및 변이유발원성 화합물(예: 니트로소구아니딘, 아크리딘 염료)로의 화학적 처리를 수행할 수 있다. 자연 돌연변이에 의해서 뿐만 아니라 뉴클레오티드를 삽입, 결실 또는 치환시킴으로써 돌연변이체를 제조할 수 있다. 락토바실러스 레우테리 및 락토바실러스 존소니이란 용어는 이들 돌연변이체를 포함한다.
용어 "신생 햇병아리 단계"란 갓 부화한 햇병아리[예를 들면, 병아리, 포울트(poult), 스쿼브(squab) 등], 특히 부화한지 0 내지 약 4일되는 햇병아리를 의미한다. 유산균의 생균제의 투여 시간은 신생 햇병아리 단계 동안에 이루어지기만 하면 특별히 제한되지는 않으나, 햇병아리의 장관에서 장내 세균상이 전이 증식하기 전인 부화한지 4일 이내, 보다 바람직하게는 부화한지 2일 이내에 상기 조성물을 투여하는 것이 바람직하다. 투여 횟수는 특별히 제한되지 않으나, 일반적으로 1회 투여에 의해서도 충분한 효과가 획득될 수 있다. 이로써 획득된 효과는 투여 횟수가 증가함에 따라 보다 안정적이고 확실해진다. 그러나, 3회 이상 투여하는 것은 경제적이지 못하고, 이로써 획득된 효과 역시 2회 투여와 거의 동일하다.
특별하게 제한되지는 않지만, 유산균의 생균제의 투여는 경구 투여에 의해 수행될 수 있다. 구체적으로 언급하면, 상기 조성물을 음료수 등에 가한 다음, 햇병아리들이 이를 자유롭게 마시도록 하거나, 또는 이를 분무기 등을 이용하여 햇병아리들 위에서 분무시킴으로써 경구 투여할 수 있다. 이러한 분무 투여 방법이 바람직한데, 이는 햇병아리들이 이들의 부리를 위로 벌리면서 짹짹거리는 습성으로 인해 고농도의 상기 생균제가 신생 햇병아리 단계에서 용이하고도 안전하게 경구 투여될 수 있기 때문이다.
투여를 수행하는데 있어서, 유산균의 생균제 중의 유산균의 총 밀도는 바람직하게는 1ml당 106내지 1010개 생균, 보다 바람직하게는 1ml당 107내지 109개 생균이다. 또한, 유산균의 생균제는 바람직하게는 햇병아리 1마리당 1 x 103내지 1 x 1010개 생균, 보다 바람직하게는 햇병아리 1마리당 1 x 104내지 1 x 106개 생균의 양으로 투여한다.
본 발명의 방법에서는, 상기 언급된 유산균의 생균제의 투여에 덧붙여, 바실러스 서브틸리스에 속하는 생균을 포함하는 조류용 생균제(종종 "바실러스 서브틸리스의 생균제"로서 후술됨)를 투여한다.
바실러스 서브틸리스의 균주의 바람직한 예로는 1986년 6월 28일자로 기탁기관[Institute of Bioscience and Human-Technology(구 명칭: Fermentation Research Institute), Agency of Industrial Science and Technology; 1-3, Higashi 1 chome, Tsukuba-shi(옛날 주소: Yatabe-machi, Tsukuba-gun), Ibaraki-ken 305-8566(구 우편번호:305), Japan]에 기탁된 바실러스 서브틸리스 C-3102(기탁 번호 FERM 제BP-1096호)가 있다. 바실러스 서브틸리스 C-3102의 세균학적 성질은 이미 등록된 일본 특허 제2528055호, JP-B-3-79988 및 미국 특허 제(Re)34,837호에 기재되어 있다. 바실러스 서브틸리스의 상이한 많은 균주가, 예를 들면, 본원에 참조문헌으로 삽입된 문헌[참조; ATCC Bacteria and Bacteriophages, 19thed., 1996, pages 57-63]으로부터 공지되어 있다.
바실러스 서브틸리스 C-3102를 배양하는데 있어서, 일반적으로 미생물 배양에 사용되는 탄소원, 질소원, 무기 물질 등의 물질을 함유하는 수성 또는 고체 배지를 배양 배지로서 사용할 수 있다. 탄소원의 예로는 동화될 수 있는 것들, 예를 들면, 글루코오스, 프럭토오스, 수크로오스, 전분, 몰라세 등이 있다. 질소원의 예로는 펩톤, 고기 추출물, 카제인 가수분해물, 황산암모늄 등이 있다. 경우에 따라, 인산염, 마그네슘 염, 칼륨 염, 나트륨 염, 칼슘 염, 철 염, 망간 염 등; 비타민; 아미노산; 소포제; 계면활성제 등을 무기 성분으로서 추가로 가할 수 있다. 배양은 호기적으로 수행하는 것이 바람직하다. 배지의 출발 pH는 바람직하게는 5 내지 9, 더욱 바람직하게는 6 내지 8이고; 배양 온도는 바람직하게는 20 내지 50℃, 더욱 바람직하게는 35 내지 40℃이고; 배양 기간은 바람직하게는 12시간 내지 7일이다.
이러한 방식으로 수득된 배양 혼합물을 그 자체로서 바실러스 서브틸리스의 생균제로서, 이의 농축된 생성물로서, 또는 직접적으로 또는 충전제 등의 첨가제를 가한 후에 이들로부터 분리된 세포로서 사용할 수 있다. 이러한 충전제는 특별히 제한되지 않으며, 이의 예로는 탄산칼슘, 탈지 쌀겨, 옥수수 알갱이, 옥수수 가루, 밀기울, 탈지 분유 등이 있다.
바실러스 서브틸리스의 생균제는 담체 및 희석제를 함유할 수 있다. 이러한 담체 및 희석제는 특별히 제한되지 않으며, 약제학적으로 또는 영양학적으로 허용되는 담체 및 희석제 중에서 선택된다. 또한, 바실러스 서브틸리스의 생균제는 조류용 사료를 함유할 수 있다.
본 발명에서는, 바실러스 서브틸리스에 속하는 미생물을 대상으로 하여 적절한 돌연변이 처리(예를 들면, 자외선, X선 또는 방사선에 노출시킴) 및 변이유발원성 화합물(예: 니트로소구아니딘, 아크리딘 염료)로의 화학적 처리를 수행할 수 있다. 자연 돌연변이에 의해서 뿐만 아니라 뉴클레오티드를 삽입, 결실 또는 치환시킴으로써 돌연변이체를 제조할 수 있다. 바실러스 서브틸리스란 용어는 이들 돌연변이체를 포함한다.
바실러스 서브틸리스의 생균제의 투여 시간은 특별히 제한되지 않으나, 장내 세균상의 적절한 전이 증식을 획득하기 위해서는, 상기 언급된 유산균의 생균제를 투여한 후에 바실러스 서브틸리스의 생균제를 투여하는 것이 바람직하다. 또한, 항생제, 항균제 등을 신생 햇병아리 단계와 마무리 단계 사이 기간 동안에 투여하지 않은 사육법의 경우에는, 이러한 기간 동안에 바실러스 서브틸리스의 생균제를 투여하는 것이 바람직하다. 예를 들면, 브로일러 사육의 경우에는, 신생 햇병아리 단계와 마무리 단계 사이의 임의의 기간 동안에 투여할 수 있으나, 성장 단계와 마무리 단계 동안에만 약물-비함유 사육을 수행하여 브로일러 출하시에 상기 약물이 브로일러 체내에 잔존하지 않도록 하는 경우에는, 바실러스 서브틸리스의 생균제를 성장 단계와 마무리 단계 동안에 투여할 수 있다.
바실러스 서브틸리스의 생균제의 투여는 이를 사료, 음료수 등에 가한 후에 경구 섭취하도록 함으로써 수행할 수 있다.
예를 들면, 투여를 수행하는데 있어서 바실러스 서브틸리스 C-3102를 함유하는 바실러스 서브틸리스의 생균제를 사료와 혼합하는 경우, 이러한 사료가 포자 및/또는 증식성(vegetable) 세포 형태로 1g당 105내지 108개 생균의 미생물 밀도를 지니는 것이 바람직하다.
조류용 생균제를 투여하는 본 발명의 방법은 다수의 조류를 조밀하게 사육하는 방식으로 사육되는 닭 뿐만 아니라 기타 조건 하에서 사육되는 닭 및 오리, 거위, 메추라기, 야생 오리, 타조 등의 기타 사육용 조류 및 애완용 조류 등에 적용할 수 있다.
조류용 생균제를 상기 언급된 방법으로 투여하는 경우, 조류 성장에 유용한 세균이 우세한 장내 세균상이 장에 형성될 수 있기 때문에, 이러한 조류가 매우 건강하게 성장한다. 독성 세균의 성장 억제, 설사 방지, 성장 증강, 사료 전환율 증진 등의 각종 효과가 획득될 수 있으며, 닭을 약물-비함유 사육하는 것이 가능해진다. 또한, 유용한 세균이 장내 세균상을 점유하고 있기 때문에, 조류가 건강하게 성장하여, 현저하게 개선된 양질의 생산물로 인해 식용 조류의 경우에는 맛있는 고기, 계란 등이 수득될 수 있다. 또한, 이러한 고기, 계란 등은 안전하며 독성의 식중독 세균에 오염되지 않는다.
본 발명이 일반적으로 기재되긴 하였지만, 본원에 예시 목적으로만 제공되고 달리 언급하지 않는 한 제한되지 않는 특정의 실시예를 참조로 하여 추가의 지식이 획득될 수 있다.
제조 실시예 1
탈지유 4.5g 분획을 물 50g에 용해시키고, 100℃에서 10분 동안 저온 살균시킨 다음, 실온으로 냉각시킨다. 이로써 제조된 용액에 1백금이량의 락토바실러스 레우테리 CP-720을 접종하고 37℃에서 24시간 동안 정적으로 배양하여 제1 발단배양균(유산균: 1g당 1 x 108개 생균)을 수득한다. 이어서, 이러한 제1 발단배양균 15g을 90℃에서 저온 살균시킨 탈지유(고체 함량, 9중량%) 500g에 접종한 다음, 37℃에서 20시간 동안 배양하여 제2 발단배양균을 수득한다. 이러한 제2 발단배양균은 1g당 2 x 108개 생균을 함유하고 있다.
카제인 펩톤 200g, 효모 추출물 200g, 나트륨 시트레이트 100g 및 글루코오스 200g을 물 20kg에 용해시키고, 1N 수산화나트륨 용액을 이용하여 배지의 pH를 7.0로 조정시킴으로써 제조된 배지를 자르(jar) 발효기에 넣고, 95℃에서 15분 동안 저온 살균시킨 다음, 실온으로 냉각시킨다. 이어서, 상기 언급된 제2 발단배양균 3중량부를 상기 배지 100중량부에 접종하고 37℃에서 20시간 동안 정적으로 배양한다.
이로써 수득된 배양 브로쓰를 원심분리시켜 미생물을 회수하고, 이를 연속적으로 분산 배지로서, 미리 90℃에서 저온 살균시킨 탈지유 10중량%와 나트륨 글루타메이트 1중량%를 함유하는 용액 1kg을 이용하여 동결건조시킴으로써, 락토바실러스 레우테리 CP-720 생균 분제 146g을 수득한다. 이러한 생균 분제는 1g당 7.0 x 1010개 생균을 함유하고 있다.
제조 실시예 2
소고기 펩톤 200g, 대두 펩톤 60g, 효모 추출물 100g, 나트륨 아세테이트 100g, 인산이칼륨 40g, 디암모늄 시트레이트 60g 및 글루코오스 400g을 물 20kg에 용해시키고, 1N 수산화나트륨 용액을 이용하여 배지의 pH를 7.0로 조정시킴으로써 제조된 배지를 자르 발효기에 넣고, 95℃에서 15분 동안 저온 살균시킨 다음, 실온으로 냉각시킨다. 이어서, 제조 실시예 1에서와 동일한 과정에 의해 미리 예비-배양시킨 락토바실러스 존소니이 CP-721의 제2 발단배양균 500g을 상기 배지에 접종하고 35℃에서 18시간 동안 정치시켜 둔다.
이로써 수득된 배양 브로쓰를 원심분리시켜 미생물을 회수하고, 이를 연속적으로 분산 배지로서, 미리 90℃에서 저온 살균시킨 탈지유 10중량%와 나트륨 글루타메이트 1중량%를 함유하는 용액을 이용하여 동결건조시킴으로써, 락토바실러스 존소니이 CP-721 생균 분제 141g을 수득한다. 이러한 생균 분제는 1g당 6.5 x 1010개 생균을 함유하고 있다.
제조 실시예 3
제조 실시예 1에서와 동일한 과정에 의해 제조된 락토바실러스 레우테리 CP-722의 제2 발단배양균을 동일한 조성 및 중량의 성분을 갖는 제조 실시예 1에 기재된 바와 동일한 방식으로 제조된 배지에 접종하고 저온 살균한 다음, 37℃에서 20시간 동안 정적으로 배양한다. 이로써 수득된 배양 브로쓰를 원심분리시켜 미생물을 회수하고, 이를 연속적으로 분산 배지로서, 미리 95℃에서 저온 살균시킨 탈지유 10중량%와 나트륨 글루타메이트 1중량%를 함유하는 용액을 이용하여 동결건조시킴으로써, 락토바실러스 레우테리 CP-722 생균 분제 151g을 수득한다. 이러한 생균 분제는 1g당 6.8 x 1010개 생균을 함유하고 있다.
제조 실시예 4
제조 실시예 1 내지 3에서 수득된 생균 분제를 1부 분획으로 합하고 덱스트린 7부와 철저하게 혼합하여 3가지 락토바실러스 균주를 함유하는 조류용 유산균의 생균제를 수득한다. 이러한 생균제는 1g당 2.0 x 1010개 생균을 함유하고 있다.
제조 실시예 5
대두 펩톤 200g, 인산이칼륨 10g 및 몰라세 200g을 물 10kg에 용해시키고, 1N 수산화나트륨 용액을 이용하여 배지의 pH를 7.5로 조정시킴으로써 제조된 배지를 자르 발효기에 넣고, 95℃에서 60분 동안 저온 살균시킨 다음, 37℃로 냉각시킨다. 이어서, 미리 예비-배양시킨 바실러스 서브틸리스 C-3102의 배양 브로쓰 100g을 상기 배지에 접종하고 37℃에서 40시간 동안 호기적으로 교반시킨다. 이로써 수득된 배양 브로쓰를 원심분리시켜 미생물을 회수하고, 이를 동일한 중량의 탈지유와 혼합하고 진공하에 동결건조시킴으로써, 조류용 바실러스 서브틸리스의 생균제 750g을 수득한다. 이러한 조류용 바실러스 서브틸리스 생균제는 1g당 1.2 x 1010개 생균을 함유하고 있다.
실시예 1
필드 효과 시험 Ⅰ(성장 단계 동안 및 후에 약물을 전혀 사용하지 않는 시험)
본 시험은 청키(Chunky; 상표명, 시판용 품종)를 이용하여 수행한다. 병아리 우리 내의 병아리(부화한지 0일째 되는 병아리)에, 정제수 4kg에 균질하게 현탁시킨 제조 실시예 4에서 제조된 조류용 유산균의 생균제(유산균의 총 수: 1g당 2.0 x 1010개 생균) 12g을 분무 제공한다. 규정 사료로서, 발단배양균 사료용 "병아리 예비 발단배양균 사료(Hina Ezuke)"(항생제 함유) 및 발단배양 단계용 "발단배양 AT(Zenki AT)"(항생제 함유)를 각각 발단 사육 단계(부화한지 0일 내지 5일) 및 발단배양 단계(부화한지 5일 내지 21일)에 사용한다. 제조 실시예 5에서 제조된 조류용 바실러스 서브틸리스의 생균제 9 x 105개 세포/g과 혼합시킨 마무리용 "브로고울(Brogoal) A"(항생제를 함유하지 않음)를 성장 단계(부화한지 21일 내지 43일)에서부터 마무리 단계(43일 내지 출하일)까지의 기간 동안에 사용한다(이들 시판용 사료 제품 모두는 Chubu Shiryo가 제조한 것이다). 양계장에서 통상적으로 수행된 양계 방법에 따라서 기타 사육을 수행한다. 본 시험의 결과가 다음 표 2에 제시되어 있다.
비교 실시예 1
유산균의 생균제를 투여하지 않고, 마무리용 "브로고울 A" 대신 성장 단계에서의 사료로서 성장 단계용 "그로우어(Grower) AT(Kohki AT)"(항생제 함유)(Chubu Shiryo, Co. 제조)를 사용하며, 단계 전반에 걸쳐 바실러스 서브틸리스의 생균제가 제공되지 않는다는 것을 제외하고는, 실시예 1에서와 동일한 방식으로 사육을 수행한다. 그 결과가 표 2에 제시되어 있다. 이와 관련하여, "그로우어 AT(Kohki AT)"는 항생제를 제외하고는 "브로고울 A"와 동일한 조성을 갖는 사료 제품이다.
비교 실시예 1 실시예 1 비율
정해진 병아리의 수 8,250 8,250 100
병아리의 체중(g/병아리) 41.9 38.4 92
출하된 조류 수 7,721 7,830 101
출하될 때의 연령(일) 54 55 102
평(tsubo) 당 병아리의 수 58.9 58.9 100
평균 체중(kg/조류) 2.766 2.797 101
증가율(%) * 93.59 94.91 101
사료 전환율 ** 2.061 2.055 100
생산 스코어 *** 233 235 101
체중 증가(g/일·병아리) 51.22 50.86 99
* 증가율:(출하된 조류 수/정해진 병아리의 수) x 100** 사료 전환율:(사육 동안에 섭취된 사료의 총량(g)/총 체중 증가량(g)) x 100*** 생산 스코어:(평균 체중 x 증가율/사료 전환율 x 출하될 때의 연령(일)) x 100
실시예 1에서의 평균 체중 증가치는 비교 실시예 1의 평균 체중 증가치 보다 약 1% 정도 더 적은데, 이는 시험된 병아리의 질에 차이가 있는 것으로 추정된다. 즉, 비교 실시예 1에서의 병아리의 체중은 표준(41.9g/병아리)이지만, 실시예 1에서의 주니어 병아리의 체중(38.4g/병아리)과 근접하기 때문에, 이들의 성장은 열악해진다. 실시예 1의 다른 결과들은 비교 실시예 1의 결과 보다 우수하기 때문에, 생산성은 증진되었다.
실시예 2
필드 효과 시험 Ⅱ(발단배양 단계 동안 및 후에 약물을 전혀 사용하지 않는 시험)
본 시험은 청키(상표명, 시판용 품종)를 이용하여 수행한다. 병아리 우리 내의 병아리(부화한지 0일째 되는 병아리)에, 정제수 4kg에 균질하게 현탁시킨 제조 실시예 4에서 제조된 조류용 유산균의 생균제(유산균의 총 수: 1g당 2.0 x 1010개 생균) 12g을 분무 제공한다. 규정 사료로서, 발단배양균 사료용 "병아리 예비 발단배양균 사료"를 발단배양 사육 단계(부화한지 0일 내지 5일)에 사용한다. 항생제를 제거시킨 발단배양 단계용 "발단배양 AT(Zenki AT)" 및 제조 실시예 5에서 제조된 조류용 바실러스 서브틸리스의 생균 9 x 105개 세포/g과 혼합시킨 마무리용 "브로고울 A"를 각각 발단배양 단계(부화한지 5일 내지 21일) 및 성장 단계(부화한지 21일 내지 43일)에서부터 마무리 단계(43일 내지 출하일)까지의 기간 동안에 사용한다. 양계장에서 통상적으로 수행된 양계 방법에 따라서 기타 사육을 수행한다. 본 시험의 결과가 다음 표 3에 제시되어 있다.
비교 실시예 2
발단배양 단계용 "발단배양 AT(Zenki AT)" 및 성장 단계용 "그로우어 AT(Kohki AT)"를 각각 사용하고, 단계 전반에 걸쳐 바실러스 서브틸리스의 생균제가 제공되지 않는다는 것을 제외하고는, 실시예 2에서와 동일한 방식으로 사육을 수행한다. 그 결과가 표 3에 제시되어 있다.
비교 실시예 2 실시예 2 비율
정해진 병아리의 수 8,300 8,300 100
병아리의 체중(g/병아리) 43.6 43.6 100
출하될 때의 연령(일) 54 55 102
평 당 병아리의 수 59.3 59.3 100
평균 체중(kg/조류) 2.886 2.838 98
증가율(%) 95.7 97.0 101
사료 전환율 2.007 2.048 102
생산 스코어 255 244 96
체중 증가(g/일·병아리) 53.4 51.6 97
실시예 2에서는 약물-비함유 사료가 발단배양 단계 동안 및 후에 사용된 반면, 비교 실시예 2에서는 약물-함유 사료가 사용되었기 때문에, 실시예 2에서의 체중 증가량은 51.6g/일·병아리의 값으로 약간 적지만, 증가율은 97%로 우수하며 생산 스코어는 244이므로, 경제적인 생산 결과를 나타내고 있다.
실시예 3
필드 효과 시험 Ⅲ(약물을 전혀 사용하지 않는 시험)
본 시험은 청키(상표명, 시판용 품종)를 이용하여 수행한다. 병아리 우리 내의 병아리(부화한지 0일째 되는 병아리)에, 정제수 4kg에 균질하게 현탁시킨 제조 실시예 4에서 제조된 조류용 유산균의 생균제(유산균의 총 수: 1g당 2.0 x 1010개 생균) 40g을 분무 제공한다. 규정 사료로서, 항생제를 제거시킨 발단배양 단계용 "발단배양 AT(Zenki AT)" 및 제조 실시예 5에서 제조된 조류용 바실러스 서브틸리스의 생균제 1g당 9 x 105개 생균과 혼합시킨 마무리용 "브로고울 A"를 각각 발단배양 사육 단계에서부터 발단배양 단계(부화한지 0일 내지 21일)까지의 기간 동안 및 성장 단계에서부터 마무리 단계(21일 내지 출하일)까지의 기간 동안에 사용한다. 양계장에서 통상적으로 수행된 양계 방법에 따라서 기타 사육을 수행한다. 본 시험의 결과가 다음 표 4에 제시되어 있다.
비교 실시예 3
발단배양 단계용 "발단배양 AT(Zenki AT)", 성장 단계용 "그로우어 AT(Kohki AT)" 및 마무리용 "그로우어 A"를 각각, 발단배양 사육 단계에서부터 발단배양 단계까지의 기간 동안의 사료, 성장 단계(부화한지 21일 내지 43일)에서의 사료 및 마무리 단계(43일 내지 출하일)에서의 사료로서 사용하고, 단계 전반에 걸쳐 바실러스 서브틸리스의 생균제가 제공되지 않는다는 것을 제외하고는, 실시예 3에서와 동일한 방식으로 사육을 수행한다. 그 결과가 표 4에 제시되어 있다.
비교 실시예 3 실시예 3 비율
정해진 병아리의 수 7,220 7,220 100
병아리의 체중(g/병아리) 41.5 44.9 108
출하될 때의 연령(일) 54 55 102
평 당 병아리의 수 51.6 51.6 100
평균 체중(kg/조류) 2.768 2.805 101
증가율(%) 97.1 97.0 100
사료 전환율 2.017 2.020 100
생산 스코어 247 245 99
체중 증가(g/일·병아리) 51.3 51.0 99
실시예 3의 시험을 비교 실시예 3의 시험과 동시에 수행하지는 않지만, 비교 실시예 3의 사육을 완료한 후에 수행하고, 실시예 3의 사육 기간 동안 한파가 필드를 덮치기 때문에, 비교 실시예 3의 최종 성장률과 증가율이 이러한 한파에 영향을 받는다. 그러나, 전체 사육 기간 내내 항생제 및 항균제를 투여하지 않고 사육하긴 하지만, 실시예 3의 생산성 결과는 비교 실시예 3의 것과 동일하다.
또한, 약물을 사용하지 않고 조류용 유산균의 생균제와 조류용 바실러스 서브틸리스의 생균제를 투여하지 않고 사육을 수행한 실시예 1 내지 3에 상응하는 비교 시험을 수행하지 않았는데, 이는 이러한 사육 조건하에서는 정상적인 성장이 이루어질 수 없기 때문이다.
실시예 4
실시예 3 및 비교 실시예 3에서는, 출하하기 전날 닭의 신선한 변을 수집하고, 하나의 샘플로서 3마리 새의 변을 이용하여 이러한 변에서의 대장균군 및 살모넬라 속 세균을 측정한다. 그 결과가 표 5에 제시되어 있다. 이러한 경우, 살모넬라 속의 모든 세균의 혈청형은 O7이다.
비교 실시예 3의 병아리 실시예 3의 병아리
1g 변 당 세균 수(로그값) 엔테로박테리아세애 7.32 ± 0.53 6.93 ± 0.52 **
살모넬라 3.54 ± 0.80 3.07 ± 0.69
살모넬라의 검출 경우/전체 경우 18/29 9/30 *
* p ＜ 0.05** p ＜ 0.01
비교 실시예 3과 비교하면, 대장균군은 실시예 3에서 현저하게 감소되었고, 살모넬라 속 세균의 탐지율이 또한 현저하게 저하되었다.
실시예 5
실시예 3 및 비교 실시예 3에서 사육시킨 닭고기가 맛이 있는가에 대해 비교한다. 고기 자체를 시험하였을 때에는 각종 처리 요인들로 인해 정확한 감각 시험을 수행할 수 없기 때문에, 온전한 닭고기 수프를 준비하여, 이를 대상으로 감각 시험을 수행한다. 내장 Ⅲ(닭을 희생시켜 방혈시킨 다음 가죽, 머리, 발가락 및 기관을 제거한 후에 남은 식용 가능한 부분)을 온전한 닭으로서 본 시험에 사용하고, 이러한 샘플 1중량부를 물 4중량부 및 1.8%의 물과 혼합한 다음, 2시간 동안 비등시킨다. 이 혼합물을 표백된 면을 통하여 여과시킨 후, 여액(수프)을 시험된 닭의 중량의 3배로 준비하여 수프 농도를 조정한다. 이로써 수득된 수프 샘플을 대상으로 하여 감각 시험을 수행하는데, 여기서는 38명의 패널리스트가 가장 맛있는 샘플을 선택하게 된다. 그 결과가 표 6에 제시되어 있다.
선택하는 패널리스트의 수 선택 비율
실시예 3의 닭 33 0.868 **
비교 실시예 3의 닭 5 0.132
** p ＜ 0.01
비교 실시예 3의 닭과 비교하여, 상당히 다수의 패널리스트에 의해 맛이 있는 것으로 실시예 3의 닭을 선택함으로써, 약물-비함유 사육을 통하여 생산된 닭이 맛있다는 사실을 확인할 수 있다.
이와 관련하여, 동시에 수행된, 항목별로 나눠진 맛 평가에서는, 실시예 3의 닭고기 수프에 대해서 우수하게 평가되었는데, (1) 선호도, (2) 풍부한 맛 및 (3) 적절한 맛 각각에 대한 통계적 유의도는 1%이다.
참조 실시예 1
조류용 바실러스 서브틸리스의 생균제만에 의한 완전하게 약물을 함유하지 않는 시험
다수의 브로일러를 사육하는 지역에서 청키 조류를 사용하여 본 시험을 수행한다. 규정 사료로서, 각각 제조 실시예 5에서 제조된 조류용 바실러스 서브틸리스의 생균제 1g당 1 x 106개 생균과 혼합시키고 비타민과 미네랄이 풍부한, 항생제를 제거시킨 "브로일러 골드 스타팅 크럼블(Broiler Gold Starting Crumble)( Broiler Gold Zenki Crumble)" 및 "브로일러 피니셔(Broiler Shiage)"(항생제 등을 전혀 함유하지 않음)(이들 모두는 Shikoku Haigo Shiryo, Co.에 의해 제조됨)를 각각, 발단배양 사육 단계에서부터 발단배양 단계(부화한지 0일 내지 21일)까지의 기간 동안 및 성장 단계에서부터 마무리 단계(21일 내지 출하일)까지의 기간 동안에 사용한다. 양계장에서 통상적으로 수행된 양계 방법에 따라서 기타 사육을 수행한다. 본 시험의 결과가 다음 표 7에 제시되어 있다.
비교 실시예 4
"브로일러 골드 스타팅 크럼블( Broiler Gold Zenki Crumble)"(항생제 함유), "브로일러 S"(항생제 함유) 및 "브로일러 피니셔(Broiler Shiage)"(이들 각각은 Shikoku Haigo Shiryo, Co.에 의해 제조됨)를 각각, 발단배양 사육 단계에서부터 발단배양 단계까지의 기간 동안, 성장 단계(부화한지 21일 내지 32일) 및 마무리 단계(부화한지 32일 부터 출하일 까지)에서 사용하고, 바실러스 서브틸리스의 생균제가 제공되지 않는다는 것을 제외하고는, 참조 실시예 1에서와 동일한 방식으로 사육을 수행한다. 그 결과가 표 7에 제시되어 있다.
비교 실시예 4 참조 실시예 1 비율
정해진 병아리의 수 6,800 6,800 100
출하된 조류의 수 6,571 6,662 101
증가율(%) 96.6 98.0 101
출하될 때의 연령(일) 39.6 41.0 104
평균 체중(kg/조류) 1.71 1.58 92
사료 전환율 2.03 2.22 109
생산 스코어 205 170 83
비교 실시예 4에서 보다 참조 실시예 1에서 보다 높은 증가율이 수득되지만, 발단배양 사육 단계에서의 체중 증가량은 지연되고 이러한 지연은 끝까지 가기 때문에, 그 결과로서 사육 기간 내내 체중 증가율이 낮으며 이는 상업적으로 허용되는 수준이 아니다.
또한, 조류용 바실러스 서브틸리스의 생균제는 투여하지 않고 조류용 유산균의 생균제만을 투여하는 약물-비함유 사육 시험은 수행되지 않는데, 이는 이러한 시험이 집약적인 양계장 필드에서 수행되는 것이 아니라 환경상 오염이 존재하지 않는 지역, 예를 들면, 완전히 위생적인 조건하의 실험실에서 수행될 수 있기 때문이다.
특정의 생 유산균을 포함하는 조류용 생균제의 투여가 생 바실러스 서브틸리스를 포함하는 조류용 생균제의 투여와 함께 특정 단계에서 수행되기 때문에, 이러한 조류용 생균제를 투여하는 본 발명의 방법은 독성 세균의 성장 억제, 설사 방지, 성장 증강, 사료 전환율 증진 등의 각종 효과를 나타낼 수 있으며, 또한 높은 생산성으로 닭을 약물-비함유 사육하는 것이 가능하게 만들고, 특히 식용 닭의 경우에는, 맛있고 안전한 고기와 계란을 높은 생산성으로 생산시킬 수 있게 한다. 결과적으로, 조류용 생균제를 투여하는 본 발명의 방법은 식용 조류, 예를 들면, 닭, 특히 브로일러 등의 사육에 유용하다.
명백하게, 본 발명의 수 많은 변형 및 변화가 상기 교시 측면에서 가능하다. 따라서, 첨부된 청구의 범위 내에서, 본원에서 구체적으로 언급된 것 이외의 것을 본 발명은 실시할 수 있다.
본원의 우선권 서류, 즉 1997년 6월 3일자로 출원된 일본 특허원 제(평)9-145372호가 본원에 참조문헌으로 삽입되어 있다.

Claims (26)

  1. 락토바실러스 레우테리(Lactobacillus reuteri) 및 락토바실러스 존소니이(Lactobacillus johnsonii)에 속하는 생균을 포함하는 제1 조성물을 신생 햇병아리 단계에서 조류에게 투여하는 단계; 및
    바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)에 속하는 생균을 포함하는 제2 조성물을 상기 조류에게 투여하는 단계를 포함하여, 생균제를 조류에게 투여하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 조류가 부화한지 4일 이내에 투여되는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 조류가 부화한지 2일 이내에 투여되는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 락토바실러스 레우테리가 (a) 락토바실러스 레우테리 CP-720(기탁 번호 FERM 제BP-6332호) 및 이의 돌연변이체, (b) 락토바실러스 레우테리 CP-722(기탁 번호 FERM 제BP-6334호) 및 이의 돌연변이체로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 구성원인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 락토바실러스 존소니이가 락토바실러스 존소니이 CP-721(기탁 번호 FERM 제BP-6333호) 또는 이의 돌연변이체인 방법.
  6. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 방법.
  7. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 조류용 사료를 추가로 포함하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 경구 투여되는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 분무에 의해 투여되는 방법.
  10. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 1g당 세균 106내지 1010개를 포함하는 방법.
  11. 제1항에 있어서, 1 x 103내지 1 x 1010개의 세균이 조류에게 투여되는 방법.
  12. 제1항에 있어서, 제1 조성물이 단지 1회 또는 2회 투여되는 방법.
  13. 제1항에 있어서, 바실러스 서브틸리스가 바실러스 서브틸리스 C-3102(기탁 번호 FERM 제BP-1096호) 또는 이의 돌연변이체인 방법.
  14. 제1항에 있어서, 제2 조성물이 담체 또는 희석제를 추가로 포함하는 방법.
  15. 제1항에 있어서, 제2 조성물이 조류용 사료를 추가로 포함하는 방법.
  16. 제1항에 있어서, 제2 조성물이 경구 투여되는 방법.
  17. 제1항에 있어서, 제2 조성물이 1g당 바실러스 서브틸리스 105내지 108개를 포함하는 방법.
  18. 제1항에 있어서, 제2 조성물이 제1 조성물의 투여 후에 투여되는 방법.
  19. 제1항에 있어서, 조류가 닭, 오리, 거위, 메추라기, 야생 오리, 타조 또는 애완용 조류인 방법.
  20. 제4항에 있어서, 락토바실러스 존소니이가 락토바실러스 존소니이 CP-721(기탁 번호 FERM 제BP-6333호) 또는 이의 돌연변이체이고, 바실러스 서브틸리스가 바실러스 서브틸리스 C-3102(기탁 번호 FERM 제BP-1096호) 또는 이의 돌연변이체인 방법.
  21. 락토바실러스 레우테리 및 락토바실러스 존소니이에 속하는 생균을 포함하는 제1 조성물을 신생 햇병아리 단계에서 조류에게 투여하는 단계를 포함하여, 생균을 조류에게 투여하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 락토바실러스 레우테리가 (a) 락토바실러스 레우테리 CP-720(기탁 번호 FERM 제BP-6332호) 및 이의 돌연변이체, (b) 락토바실러스 레우테리 CP-722(기탁 번호 FERM 제BP-6334호) 및 이의 돌연변이체로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 하나 이상의 구성원인 방법.
  23. 제21항에 있어서, 락토바실러스 존소니이가 락토바실러스 존소니이 CP-721(기탁 번호 FERM 제BP-6333호) 또는 이의 돌연변이체인 방법.
  24. 제21항의 방법에 의해 제조된, 신생 햇병아리 단계의 조류.
  25. 제22항의 방법에 의해 제조된, 신생 햇병아리 단계의 조류.
  26. 제23항의 방법에 의해 제조된, 신생 햇병아리 단계의 조류.
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