CN1202736C - 给家禽服用活性微生物组合物的方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于给家禽服用活性微生物组合物的方法：在新生离巢雏阶段服用一种含有属于路氏乳杆菌和约氏乳杆菌的活性乳酸菌的活性微生物组合物；并服用含有属于枯草芽孢杆菌的活性微生物的活性微生物组合物。

Description

给家禽服用活性微生物组合物的方法
                     技术领域
本发明涉及一种用于给家禽服用活性微生物组合物的方法，其中，服用可用于家禽生长的活性微生物组合物，以便以高生产量饲养家禽，同时减少诸如抗生素、抗细菌剂等的药品的用量，或者不使用药品。
                     背景技术
在诸如仔鸡的家禽饲养中，为了降低生产成本，通常进行每tsubo(大约3.3m2)家禽场饲养40-60只禽的密集饲养。另外，将家禽育肥以实现快速生长，平均每天增加体重50-55克，以便所述家禽能在孵化后大约2个月上市。在以上条件下家禽通常受到较大的压力，它们经常会生病，并且，疾病通常会在家禽之间蔓延。在地面饲养中，由于家禽啄食粘有地面上的粪便的饲料，有毒的细菌很容易传染到饲养场里的所有家禽上。另外，在开放饲养场中，或者有时甚至在无窗户饲养场中，有毒的细菌也很容易在饲养场中扩散。此外，例如，尽管每当仔鸡上市以后都要对鸡舍进行消毒，但由于诸如大鼠等周围地区的小动物不受这种处理的影响，而这些动物带有诸如沙门氏菌之类的细菌，当仔鸡被再次放入该饲养场时，会将这些细菌带入。
为了保持高产量，同时避免在饲养期间生长速度等的下降，也为了避免家禽在上述条件下被有毒的细菌污染，通常要给家禽服用诸如抗生素、和抗细菌剂之类的各种药品。
不过，由于有在肉和蛋中存在残留药品的可能性，并且还有产生抗所述药品的细菌菌株的危险(已在很多事件中实际报导过)，使用者日益要求不使用药品生产的无药物畜产品。
另一方面，在不进行大量家禽的密集饲养的自然条件下，不可能获得高的产量。不过，有可能在不使用诸如抗生素、和抗细菌剂等的药品的情况下饲养诸如鸡等的家禽。在天然状态下饲养的鸡，即所谓舍养本地鸡的肉和蛋由于其安全性和良好的口味，现在有很大的需求，并在市场上以高的价格销售。
因此，人们对不会导致有毒细菌污染，同时保证高产量的饲养诸如鸡等家禽的饲养方法的开发怀有极大兴趣，通过无药物饲养方法进行(在部分或整个饲养期间，不使用诸如抗生素、和抗细菌剂等的药物，以便药品不会残留在家禽体内，至少在销售时是这样)。
当仅仅通过避免使用药品而进行大量家禽的常规密集饲养时，家禽容易感染有毒细菌。因此，在不导致有毒细菌的污染的前提下，不可能将产量维持在商业上可接受的水平。
作为不依赖于诸如抗生素和抗细菌剂之类药品的减少家禽感染有毒细菌的方法，有人提出服用可用于各种家禽生长的微生物等。属于芽孢杆菌属的细菌，属于乳杆菌属的乳酸菌，和属于双歧杆菌属的细菌等已知是用作饲料添加剂或作为各种CE(竞争性排它)制剂的有用微生物。这些微生物中的某一些作为家禽的饲料添加剂活性微生物制剂出售。不过，尽管其效果在一定程度上得到认可，但还不够充分。特别是，尚没有报导说能进行大量家禽的无药物密集饲养，并通过上述活性微生物制剂获得商业上可接受水平的产量。
例如，日本登记专利号2528055和JP-B-3-79988(本文所使用的术语“JP-B”是指“审查过的日本专利公开”)披露了通过给动物服用含有枯草芽孢杆菌的活性微生物制剂可以实现体重增加和动物体内饲料转化率的提高，并可以获得诸如肠道功能控制作用等的效果。通过采用所述方法可以进行诸如仔鸡的无药物饲养，但仅仅能在不进行仔鸡的大规模生产的某些有限的地区进行。不过，在某些地区经常进行仔鸡饲养，由于仔鸡经常感染容易通过如上文所述的饲养场扩散的有毒细菌，用这种方式进行仔鸡的商业化无药物饲养是极其困难的。另外，即使能够用这种方法进行仔鸡的无药物生产，家禽的体重增加速度也低于使用药品的饲养。其结果是，不能获得使用药物饲养的高的产量。
另外，目前市场上销售的活性微生物制剂存在问题，如在分配步骤中活性细菌数的减少，在形成肠道菌群之后定居能力较差，必须长时间连续服用所述活性微生物制剂等。特别是，从经济学角度考虑，由于在形成肠道菌群之后定居能力较差，而必须连续长时间服用活性微生物制剂，这在目前严重妨碍了其实际应用。
                     发明内容
本发明的目的是提供一种用于给家禽服用活性微生物组合物的方法，以便能进行家禽的无药物饲养，同时保持良好的产量。
为了解决上述问题，本发明的发明人业已从多种天然来源进行了有用细菌的筛选，并发现从鸡的肠道分离的某些乳酸菌很容易定居在孵化不久的新生鸡的肠道中。另外，本发明人发现特别是从鸡的回肠中分离的异型发酵乳酸菌和从鸡的盲肠中分离的同型发酵乳酸菌很容易定居在新生离巢雏的肠道中，并具有多种作用，如抑制有毒细菌的生长，预防腹泻，促进生长，提高饲养率，和提高饲料转化率等。另外，本发明人发现乳酸菌可以定居在刚出生不久的新生鸡的肠道上，仅仅通过将乳杆菌属的乳酸菌的活性微生物的悬浮液在孵化之后4天内在新生鸡上喷洒一次即可。
另外，本发明人发现在无药物家禽饲养的离巢雏期至成型期期间同时定居有用的乳酸菌和服用芽孢杆菌活性微生物，可以提高最初饲养阶段的体重增加，与仅服用一次芽孢杆菌活性微生物相比，可以实现充分的饲养率，因此，有可能以商业化有效的高产量通过大量家禽的密集饲养进行家禽的无药物饲养。本发明的完成基于以上发现。
因此，本发明涉及一种给家禽服用活性微生物的方法，包括：
在新生离巢雏期给家禽服用含有属于路氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)和约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)的活性细菌的第一种组合物。
另外，本发明涉及一种给家禽服用活性微生物的方法，包括：
在新生离巢雏期给家禽服用含有属于路氏乳杆菌和约氏乳杆菌的活性乳酸菌的活性微生物组合物；和
给家禽服用含有属于枯草芽孢杆菌的活性微生物的活性微生物组合物。
                     实施本发明的最佳方式
本发明给家禽服用微生物组合物的方法包括给新生离巢雏服用含有属于路氏乳杆菌和约氏乳杆菌的活性乳酸菌的活性微生物组合物(以下通常称之为“乳酸菌的活性微生物组合物”)。
属于乳杆菌属的上述乳酸菌是兼性需氧菌。不仅是从家禽的肠道中分离的细菌，而且从天然来源分离的其它菌株同样能有效使用。属于路氏乳杆菌的菌株的优选例子包括路氏乳杆菌CP-720(保藏号FERM BP-6332)，和路氏乳杆菌CP-722(保藏号FERM BP-6334)等。属于约氏乳杆菌的菌株的优选例子包括约氏乳杆菌CP-721(保藏号FERM BP-6333)等。这三种菌株业已保藏在工业技术院生命工学工业技术研究所(地址：1-3，Higashi 1 chome，Tsukuba-shi，Ibaraki-ken 305-8566，日本)，保藏日期为1998年4月27日。路氏乳杆菌和约氏乳杆菌的其它菌株也是已知的，如披露于ATCC细菌和噬菌体，第19版，1996，p.195-197上的菌株，该文献被收作本文的参考文献。
路氏乳杆菌CP-720和CP-722和约氏乳杆菌CP-721的细菌学特性如表1所示。
                               表1
细菌特征     CP-720     CP-721     CP-722
形态特征
1)细胞形状     杆状     杆状     杆状
2)运动性     无     无     无
3)孢子的存在     无     无     无
4)革兰氏染色     阳性     阳性     阳性
生理学特征
1)过氧化氢酶     -     -     -
2)吲哚生成     -     -     -
3)针对氧的习性     兼性需氧     兼性需氧     兼性需氧
4)在15℃下生长     -     -     -
5)在45℃下生长     +     +     +
6)乳酸旋光性     DL     DL     DL
 7)气体产生     +     -     +
8)由糖产生酸
    葡萄糖     +     +     +
    乳糖     +     +     +
    甘露糖     -     -     -
    果糖     +     +     +
    半乳糖     +     +     +
    蔗糖     +     +     +
    阿拉伯糖     +     -     +
    麦芽糖     +     +     +
    纤维二糖     -     +     -
    鼠李糖     ±     -     ±
    木糖     +     -     +
    海藻糖     ±     -     ±
    蜜二糖     +     +     +
    棉子糖     +     +     +
    甘露醇     -     -     -
    山梨醇     -     -     -
    七叶苷     -     +     -
    水杨苷     -     +     -
    淀粉     +     +     +
乳酸菌的活性微生物组合物还可以含有属于除路氏乳杆菌之外的乳杆菌属的异型发酵乳酸菌，如短乳杆菌(Lactobacillus brevis)，和布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)等，以及属于除约氏乳杆菌之外的乳杆菌属的同型发酵乳酸菌，如加氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)，和卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)等，属于嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophillus)类。乳杆菌的许多不同属的许多不同菌株是已知的，如披露于ATCC细菌和噬菌体，第19版，1996，p.192-199上的菌株，该文献被收作本文的参考文献。
可用于培养乳酸菌的活性微生物的培养基的优选例子包括乳培养基，如牛奶、山羊奶、和马奶等，其脱脂奶，和用于乳酸菌的培养基，如BL培养基，Briggs肝肉汤培养基，MRS培养基，GAM培养基，和TTY培养基等。
所述乳酸菌可以在25-45℃下，优选30-40℃下培养6-30小时，更优选10-24小时。由此获得的培养液可直接用作乳酸菌的活性微生物组合物，将其储存在大约5℃下备用。另外，可以通过离心回收所述微生物，与一种保护剂混合，然后在真空条件下冷冻干燥。所得到的细菌干粉可以储存在凉爽遮光的箱中，并通过在使用时悬浮、混合或溶解所述干粉将其用作乳酸菌的活性微生物组合物。用这种方法制备的干燥微生物粉是比较优选的，因为它可以经受长时间的储存。
所述乳酸菌的活性微生物组合物可以含有载体和稀释剂。所述载体和稀释剂没有特别的限制，并可以选自药理学上或营养学上可以接受的载体和稀释剂。另外，乳酸菌的活性微生物组合物可以含有一种家禽饲料(日粮)。
在本发明中，属于路氏乳杆菌和约氏乳杆菌的微生物可以进行合适的突变处理，如接受紫外线、X-射线或辐射，和用诱变化合物(例如，亚硝基胍，丫啶染料)进行化学处理。还可以通过核苷酸的插入、缺失或取代以及自发突变制备突变型。术语路氏乳杆菌和约氏乳杆菌包括所述突变型。
术语“新生离巢雏期”是指孵化不久的雏(例如，雏禽、幼禽、或雏鸟等)，特别是孵化后0-大约4天阶段。使用乳酸菌的活性微生物组合物的时间没有特别的限定，只要是在新生离巢雏阶段即可；不过，优选在孵化之后4天之内使用所述组合物，更优选在孵化之后2天内使用，即在肠道菌群定居在离巢雏的肠道中之前的一段时间。使用的次数没有特别限制；不过，使用一次一般即可获得足够的效果。随着使用次数的增加所获得的效果会变得更稳定和更可靠。不过，使用三次或三次以上从经济上考虑是不合算的，而所获得的效果几乎与使用两次相同。
尽管没有特别的限定，乳酸菌的活性微生物组合物的使用可以通过口服进行。具体地讲，可以通过将所述组合物添加到饮用水或其它食物中并让离巢雏自由地摄食进行口服，或者使用喷雾器等从离巢雏的上方进行喷雾。喷雾服用方法是优选的，因为离巢雏的习性是向上张着嘴鸣叫，因此，所述具有高浓度的活性微生物组合物在新生离巢雏阶段可以方便地和安全地进行口服。
为了完成所述服用，所述乳酸菌的活性微生物组合物的乳酸菌总密度优选为106-1010活性微生物/g，更优选107-109活性微生物/g。另外，所述乳酸菌的活性微生物组合物的服用量优选为1×103-1×1010活性微生物/只离巢雏，更优选为1×104-1×1016活性微生物/只离巢雏。
在本发明的方法中，除了上述服用乳酸菌的活性微生物组合物之外，还要服用含有属于枯草芽孢杆菌的活性微生物的用于家禽的活性微生物组合物(以下通常称之为“枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物”)。
枯草芽孢杆菌菌株的优选例子包括枯草芽孢杆菌C-3102(保藏号FERM BP-1096)，该菌株业已保藏在工业技术院生命工学工业技术研究所(旧称：发酵研究所)，(地址：1-3，Higashi 1 chome，Tsukuba-shi(旧地址：Yatabe-machi，Tsukuba-gun)，Ibaraki-ken305-8566(旧的邮政编码：305)，日本)，保藏日期为1986年6月28日。枯草芽孢杆菌C-3102的细菌学特性业已披露于日本登记专利号2528055，JP-B-3-79988和美国专利Re.34,837中。枯草芽孢杆菌的很多不同菌株是已知的，如披露于ATCC细菌和噬菌体，第19版，1996，p.57-63上的菌株，该文献被收作本文的参考文献。
在培养枯草芽孢杆菌C-3102时，可将含有通常被用于培养微生物的碳源、氮源、和无机物等材料的液体或固体培养基用作培养基。碳源的例子包括可以被同化的物质，如葡萄糖、果糖、蔗糖、淀粉、和糖蜜等。氮源的例子包括蛋白胨、肉膏、酪蛋白水解物、和硫酸铵等。需要时将磷酸盐，镁、钾、钠、钙、铁、和锰等的盐，维生素，氨基酸，消泡剂，和表面活性剂等进一步加入用作无机成分。培养优选在需氧条件下进行。所述培养基的起始pH优选为5-9，更优选为6-8；培养温度优选为20-50℃，更优选为35-40℃；培养时间优选为12小时至7天。
用这种方法获得的培养混合物可以直接用作枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物，或者作为其浓缩产物形式使用或作为从它里面分离的细胞使用，可以直接使用或者在添加诸如填料之类的添加剂之后使用。所述填料没有特别限制，其例子包括碳酸钙、脱脂稻壳、玉米粗粉、玉米面、麦麸、和脱脂奶粉等。
所述枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物可以含有一种载体或稀释剂。所述载体和稀释剂没有特别的限制，可选自药理学上或营养学上可接受的载体和稀释剂。另外，枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物可以含有一种家禽饲料。
在本发明中，可以对属于枯草芽孢杆菌的微生物进行合适的诱变处理，如接受紫外线、X射线或辐射，和用诱变化合物(例如亚硝酸胍、丫啶染料)进行化学处理。还可以通过核苷酸的插入、缺失或取代以及自发突变制备突变型。术语枯草芽孢杆菌包括以上突变型。
服用枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物的时间没有特别的限制；不过，为了获得合适的肠道菌群的定居，优选在服用上述乳酸菌的活性微生物组合物之后再服用枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物。另外，在新生离巢雏期和育肥期之间的一段时间不使用抗生素、和抗细菌剂等的饲养方法中，优选在这一时期服用枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物。例如，在仔鸡饲养中，可以在新生离巢雏期和育肥期之间的任意阶段服用；不过，在进行无药物饲养时，仅在长成期和育肥期之间服用，以便在仔鸡上市时所述药物不会残留在仔鸡体内，枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物可以在长成期和育肥期服用。
枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物的服用可以通过在将其添加到饲料、或饮用水中之后通过口服摄取完成。
例如，在进行服用让含有枯草芽孢杆菌C-3102的活性微生物组合物与饲料混合时，所述饲料优选具有105-108活性微生物/克的微生物密度，为孢子和/或营养细胞形式。
本发明的用于给家禽服用活性微生物组合物的方法不仅可用于密集饲养大量禽的条件下饲养的雏鸡，而且可应用于在其它条件下饲养的雏鸡，并可用于其它家禽，如鸭、鹅、鹌鹑、野鸭、和鸵鸟等，以及观赏鸟类等。
当用于家禽的活性微生物组合物以上述方法服用时，在肠道中可以形成有利于家禽生长的细菌的肠道菌群，所述家禽在良好的健康状况下生长。可以获得各种效果，如有毒细菌的生长抑制，预防腹泻，促进生长，和提高饲料转化率等，并使得雏禽的无药物饲养成为可能。另外，由于有用的细菌主导着肠道菌群，所述家禽可以在良好的健康状况下生长，由于明显改善了产品的质量，可以获得食用家禽的美味肉类和蛋类。另外，所述肉类和蛋类是安全的，并且没有受到有毒的食品毒性细菌的污染。
                         实施例
在对本发明进行一般性说明之后，通过结合某些特定实例可以进一步理解本发明，这里所提供的实施例，仅用于说明目的，其用意不在于限定，除非另有说明。
                      生产实施例1
将4.5克一份的脱脂乳溶解在50克水中，在100℃下巴氏灭菌10分钟，然后冷却到室温。将一个接种环的路氏乳杆菌CP-720接种到由此制备的溶液中，并在37℃下静止培养24小时，以便获得初级引子(乳酸菌：1×108活性微生物/克)。接着，将15克初级引子接种到500克业已在90℃下进行过巴氏灭菌的脱脂乳(固体含量重量百分比为9％)中，并在37℃下培养20小时，获得二级引子，二级引子含有2×108活性微生物/克。
通过将200克酪蛋白胨、200克酵母膏、100克柠檬酸钠和200克葡萄糖溶解在20kg水中制备一种培养基，并用1N NaOH溶液调节该培养基的pH，将该培养基放入发酵罐中，在95℃下巴氏灭菌15分钟，然后冷却至室温。然后将3份重量的上述二级引子接种到100份重量的该培养基中，并在37℃下静止培养20小时。
对由此获得的培养液进行离心，以便回收微生物，接着对该微生物进行冷冻干燥，使用分散培养基，1kg的溶液含有重量百分比为10％的脱脂乳，和重量百分比为1％的谷氨酸钠，该溶液事先在90℃下进行过巴氏灭菌，因此获得146克路氏乳杆菌CP-720活性微生物干粉。所述活性微生物干粉含有7.0×1010活性微生物/克。
                       生产实施例2
将200克牛肉蛋白胨、60克大豆蛋白胨、100克酵母膏、100克乙酸钠、40克磷酸氢二钾、60克柠檬酸二铵和400克葡萄糖溶解在20kg水中制备一种培养基，并用1N NaOH溶液调节该培养基的pH，将该培养基放入发酵罐中，在95℃下巴氏灭菌15分钟，然后冷却至室温。然后，事先用与生产实施例1的相同方法预培养过的500克约氏乳杆菌CP-721的二级引子接种到所述培养基中，并在35℃下进行18小时的静止培养。
对所获得的培养液进行离心，以便回收微生物，然后使用分散培养基进行冷冻干燥，培养基溶液含有重量百分比为10％的脱脂乳，和重量百分比为1％的谷氨酸钠，该溶液事先在90℃下进行过巴氏灭菌，因此获得141克约氏乳杆菌CP-721活性微生物干粉。所述活性微生物干粉含有6.5×1010活性微生物/克。
                     生产实施例3
将用与生产实施例1的相同方法制备的路氏乳杆菌CP-722的二级引子接种到用生产实施例1所披露的相同方法制备和巴氏灭菌的培养基中，该培养基具有相同的成分组成和重量，并在37℃下静止培养20小时。对由此获得的培养液进行离心，以便收集细胞，然后将该细胞使用分散培养基进行冷冻干燥，该分散培养基为一种含有10wt％脱脂乳，和1wt％谷氨酸钠的溶液，该溶液事先在95℃下进行过巴氏灭菌，因此获得151克路氏乳杆菌CP-722活性微生物干粉。该活性微生物干粉含有6.8×1010活性微生物/克。
                     生产实施例4
将在生产实施例1-3中获得的活性微生物干粉合并成一份，并与7份糊精充分混合，以便获得用于家禽的含有3种乳杆菌菌株的乳酸菌的活性微生物组合物。该活性微生物组合物含有2.0×1010活性微生物/克。
                     生产实施例5
将200克大豆蛋白胨、10克磷酸氢二钾和200克糖蜜溶解在10kg水中制备一种培养基，用1N NaOH溶液调节该培养基的pH至7.5，并将该培养基放入发酵罐中，在95℃下巴氏灭菌60分钟，然后冷却到37℃。然后，将事先预培养过的100克枯草芽孢杆菌C-3102的培养液接种到该培养基中，并在37℃下有氧搅拌40小时。对由此获得的培养液进行离心，以便回收微生物，然后将该微生物与相同重量的脱脂乳混合，并在真空中冷冻干燥，因此获得750克用于家禽的枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物。所述用于家禽的枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物含有1.2×1010活性微生物/克。
                      实施例1
野外效果试验I(在长成期期间和之后不使用药物进行的试验)
用Chunky(商标名称，商业品系)进行该试验。为圈养在禽笼中的雏禽(孵化后0天)喷雾提供12克在生产实施例4中制备的用于家禽的乳酸菌的活性微生物组合物(乳酸菌的总数为2.0×1010活性微生物/克)，该组合物业已均匀悬浮在4kg纯净水中。作为提供的饲料，分别将用作幼雏饲料(含有抗生素)的“幼雏早期饲料(Hina Ezuke)”和用于育雏期的“育雏AT(Zenki AT)”用于育雏饲养期(孵化后0-5天)和育雏期(孵化后5-21天)。在从长成期(孵化后21-43天)至育肥期(孵化后43天到上市日)期间使用用于育肥的“Brogoal A”(不含有抗生素)，该饲料业已与在生产实施例5中制备的用于家禽的枯草芽孢杆菌的9×105细胞/克的活性微生物组合物混合(上述所有商品化饲料制品是由Chubu Shiryo生产的)。其它饲养管理是按照家禽饲养场中常规进行的家禽饲养方法进行的。该试验的结果示于表2中。
                       比较实施例1
用和实施例1相同的方法进行饲养，所不同的是不进行乳酸菌活性微生物组合物的使用，在长成期将用于长成期的“长成期AT(Kohki AT)”(含有抗生素)(由Chubu Shiryo公司生产)用作饲料，取代用于育肥目的的“Brogoal A”，在所有阶段都不提供枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物。其结果示于表2中。在该实施例中，“长成期AT(Kohki AT)”是一种具有与“Brogoal A”相同的组成的饲料，抗生素除外。
                             表2
  比较实施例1   实施例1     比例
投放的禽数     8,250     8,250     100
禽的体重(克/禽)     41.9     38.4     92
上市时禽的数量     7,721     7,830     101
上市时禽龄(日)     54     55     102
每tsubo的禽的数量     58.9     58.9     100
平均体重(kg/禽)     2.766     2.797     101
饲养率(％)★     93.59     94.91     101
饲料转化率★★     2.061     2.055     100
生产等级★★★     233     235     101
体重增加(g/日·禽)     51.22     50.86     99
★饲养率：(上市禽数/投放畜禽的数量)×100
★★饲料转化率：(在饲养期间所摄取的饲料总量(g)/增加的总的体重(g))×100
★★★生产等级：(平均体重×饲养率/饲料转化率×上市时日龄)×100
实施例1中的平均体重增加值低于比较实施例1的平均体重增加值大约1％，这被认为是由于试验禽类的品质所致。就是说，比较实施例1中禽类的体重是标准(41.9克/禽)，但接近实施例1中的新生禽类的体重(38.4克/禽)，因此其生长变差。由于实施例1的其它结果优于比较实施例1的结果，其产量得到提高。
                         实施例2
野外效果试验II(在育雏期期间和之后不使用药物进行的试验)
使用Chunky(商标名称，商业品系)进行该试验。为圈养在禽笼中的雏禽(孵化后0天)喷雾提供12克在生产实施例4中制备的用于家禽的乳酸菌的活性微生物组合物(乳酸菌的总数为2.0×1010活性微生物/克)，该组合物业已均匀悬浮在4kg纯净水中。作为提供的饲料，将用作幼雏饲料的“幼雏早期饲料”用于育雏饲养期(孵化后0-5天)。并分别将不含抗生素的用于育雏期的“育雏AT(Zenki AT)”和业已与在生产实施例5中制备的用于家禽的枯草芽孢杆菌的9×105细胞/克的活性微生物组合物混合的用于育肥的“Brogoal A”，用于育雏期(孵化后5-21天)，和在从长成期(孵化后21-43天)至育肥期(孵化后43天到上市日)期间使用。其它饲养管理是按照家禽饲养场中常规进行的家禽饲养方法进行的。该试验的结果示于表3中。
                       比较实施例2
以与实施例2相同的方法进行饲养，所不同的是分别将用于育雏期的“育雏AT(Zenki AT)”和用于长成期的“长成AT(Kohki AT)”用于育雏期和长成期，并且在整个生长期不提供枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物。其结果示于表3中。
                            表3
  比较实施例2   实施例2     比例
投放的禽数     8,300     8,300     100
禽的体重(克/禽)     43.6     43.6     100
上市时禽龄(日)     54     55     102
每tsubo的禽的数量     59.3     59.3     100
平均体重(kg/禽)     2.886     2.838     98
饲养率(％)     95.7     97.0     101
饲料转化率     2.007     2.048     102
生产等级     255     244     96
体重增加(g/日·禽)     53.4     51.6     97
由于在实施例2中在育雏期期间和之后使用无药物饲料，而在比较实施例2中使用含有药物的饲料，前者的体重增加稍差，其增加值为51.6克/日·禽，但其饲养率为97％，这是良好的，而且生产等级为244，从而证明了经济的生产结果。
                          实施例3
野外效果试验III(不使用药物进行的试验)
使用Chunky(商标名称，商业品系)进行该试验。为圈养在禽笼中的雏禽(孵化后0天)喷雾提供40克在生产实施例4中制备的用于家禽的乳酸菌的活性微生物组合物(乳酸菌的总数为2.0×1010活性微生物/克)，该组合物业已均匀悬浮在4kg纯净水中。作为提供的饲料，分别将不含抗生素的用于育雏期的“育雏AT(Zenki AT)”和业已与在生产实施例5中制备的用于家禽的枯草芽孢杆菌的9×105细胞/克的活性微生物组合物混合的用于育肥的“Brogoal A”，用于育雏饲养期到育雏期(孵化后0-21天)，和在从长成期至育肥期(孵化后21-上市日)期间使用。其它饲养管理是按照家禽饲养场中常规进行的家禽饲养方法进行的。该试验的结果示于表4中。
                      比较实施例3
用实施例3所述相同方法进行饲养，所不同的是将用于育雏期的“育雏AT(Zenki AT)”，用于长成期的“长成AT(Kohki AT)”和用于育肥的“Brogoal A”分别用作从育雏饲养期到育雏期阶段，长成期(孵化后21-43天)和育肥期(孵化后43天到上市日)的饲料，在整个生长期不使用枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物，其结果示于表4中。
                          表4
  比较实施例3   实施例3     比例
  投放的禽数     7,220     7,220     100
  禽的体重(克/禽)     41.5     44.9     108
  上市时禽龄(日)     54     55     102
  每tsubo的禽的数量     51.6     51.6     100
  平均体重(kg/禽)     2.768     2.805     101
  饲养率(％)     97.1     97.0     100
  饲料转化率     2.017     2.020     100
  生产等级     247     245     99
  体重增加(g/日·禽)     51.3     51.0     99
实施例3的试验未与比较实施例3的试验同时进行，而是在比较实施例3的饲养结束之后，并且由于在实施例3的饲养期间寒流袭击野外，比较实施例3的最终的生长和饲养率受到寒流的影响。不过，尽管饲养是在整个生长期间不使用抗生素和抗细菌剂的情况下进行的，实施例3的生产结果与比较实施例3的结果相同。
另外，没有进行与实施例1-3相应的比较试验，因为在这种饲养条件下不能获得正常的生长，其中所述比较试验的饲养是在没有药物并且不服用用于家禽的乳酸菌的活性微生物组合物和用于家禽的枯草芽孢杆菌活性微生物组合物的条件下进行的。
                       实施例4
在实施例3和比较实施例3中，在上市的前一天收集禽类的新鲜粪便，用3只禽的粪便作为一个样品，测定所述粪便中的大肠菌类和沙门氏菌属的细菌。其结果示于表5中，在这种情况下，沙门氏菌属的每一种细菌的血清型为O7。
                                  表5
比较实施例3的禽     实施例3的禽
每克粪便中的细菌数(对数值)     肠杆菌     7.32±0.53     6.93±0.52★★
    沙门氏菌     3.54±0.80     3.07±0.69
    检测到沙门氏菌的次数/总次数     18/29     9/30★
★p＜0.05
★★p＜0.01
与比较实施例3比较，在实施例3中大肠菌类显著减少，而且，沙门氏菌属的细菌的检测比例也明显减少。
                      实施例5
对实施例3和比较实施例3中饲养的禽的肉的适口性进行比较。由于在对所述肉本身进行测试时，由于各种处理因素而不可能进行精确的感官测试，制备全鸡汤，并进行感官测试。将去掉内脏的肉III(在宰杀和放血之后，接着再去掉羽毛、头、脚和器官之后留下的可食用部分)作为全鸡用于该试验，并将一份重量的样品与4份重量的水和1.8％的盐混合，并煮沸2小时。通过漂白的棉花过滤，将滤液(汤)制备成测试鸡的重量的3倍，以便调整汤的浓度。由此获得的汤的样品进行感官测试，其中，让38位品尝师选择最可口的样品。其结果如表6所示。
                         表6
  被评尝师选中的次数     选中比例
    实施例3的禽比较实施例3的禽     335     0.8680.132
★★p＜0.01
与比较实施例3的禽比较，有大量的品尝师选择了实施例3的禽的适口性，因此，证实了通过无药物饲养生产的禽的美味特性。
就此而言，在同时进行的详细口味评价中，实施例3的禽的汤获得了好评，从统计学上讲，其显著水平为1％，其评价等级为1(优良)，2(味道丰满)，和3(合适的味道)。
                      参考实施例1
仅用用于家禽的枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物进行完全无药物的试验。
在大量饲养仔鸡的地区用Chunky家禽进行试验。作为饲料，在从育雏饲养期到育雏期(孵化后0-21天)以及在从长成期到育肥期(孵化后21天到上市日)期间分别使用去掉了抗生素的“Broiler GoldStarting Crumble(Broiler Gold Zenki Crumble)”和“Broiler Finisher(Broiler Shiage)”(不含抗生素等)(这两种饲料均由Shikoku HaigoShiryo公司生产)，这两种饲料分别混合了1×106在生产实施例5中生产的用于家禽的枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物，并且添加了维生素和矿物质。其它饲养管理是按照在家禽饲养场中常用的家禽饲养方法进行的。该试验的结果示于表7中。
                        比较实施例4
按照参考实施例1的方法进行饲养，所不同的是在从育雏饲养期到育雏期，长成期(孵化后21-32天)和育肥期(孵化后32天到上市日)分别将“Broiler Gold Starting Crumble(Broiler Gold ZenkiCrumble)”(含有抗生素)、“Broiler S”(含有抗生素)和“BroilerFinisher(Broiler Shiage)”(均由Shikoku Haigo Shiryo公司生产)用作饲料，不提供枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物。其结果示于表7中。
                        表7
  比较实施例4   参考实施例1     比例
  投放禽数     6,800     6,800     100
  上市禽数     6,571     6,662     101
  饲养率(％)     96.6     98.0     101
  上市时禽龄(日)     39.6     41.0     104
  平均体重(kg/禽)     1.71     1.58     92
  饲料转化率     2.03     2.22     109
  生产等级     205     170     83
在参考实施例1中获得的饲养率高于比较实施例4中的饲养率，但在饲养开始期间的体重增加推迟，并且推迟的迹象一直到结束。因此，其结果是体重增加在整个饲养期间一直较低，并且达到了商业上无法接受的水平。
另外，没有进行不服用用于家禽的枯草芽孢杆菌的活性微生物组合物、仅提供用于家禽的乳酸菌的活性微生物组合物的无药物饲养试验，因为这种试验只能在不存在环境污染的地方进行，如在完全卫生状态下的实验设施中进行，而不是在常见的家禽饲养场中进行。
                       工业应用性
由于服用含有特定活性乳酸菌的用于家禽的活性微生物组合物是在特定时期进行，并结合服用含有活性枯草芽孢杆菌的用于家禽的活性微生物组合物，本发明的用于家禽的服用活性微生物组合物的方法可以产生各种效果，如抑制有毒细菌的生长，预防腹泻，促进生长，提高饲料转化率等，并可以高产量进行禽类的无药物饲养，特别是食用禽类的饲养，以高产量生产美味和安全的肉和蛋。因此，本发明用于给家禽服用活性微生物组合物的方法可用于饲养诸如鸡的食用禽类，特别是仔鸡等。
很显然，通过以上说明可以对本发明进行各种改进和改变。因此，可以理解的是，在所附权利要求的范围内，本发明可以除本文所披露的方式以外的方式进行。
本申请的优先权文件日本专利申请号平9-145372，申请日1997年6月3日，被收作本文的参考文献。

Claims (21)

1.一种用于给家禽服用活性微生物组合物的方法，包括：
在新生离巢维期给家禽服用含有属于路氏乳杆菌和约氏乳杆菌的活性细菌的第一种组合物；和
给所述家禽服用含有属于枯草芽孢杆菌的活性微生物的第二种组合物。
2.如权利要求1的方法，其中所述第一种组合物是在所述家禽孵化之后4天之内服用的。
3.如权利要求1的方法，其中所述第一种组合物是在所述家禽孵化之后2天之内服用的。
4.如权利要求1的方法，其中，路氏乳杆菌是选自下列一组中的至少一员：(a)路氏乳杆菌CP-720，保藏号FERM BP-6332及其突变型，(b)路氏乳杆菌CP-722，保藏号FERM BP-6334及其突变型。
5.如权利要求1的方法，其中，所述约氏乳杆菌是约氏乳杆菌CP-721，保藏号FERM BP-6333，或其突变型。
6.如权利要求1的方法，其中，所述第一种组合物还含有一种载体或稀释剂。
7.如权利要求1的方法，其中，所述第一种组合物还含有一种家禽饲料。
8.如权利要求1的方法，其中，所述第一种组合物是口服的。
9.如权利要求1的方法，其中，所述第一种组合物是通过喷雾使用的。
10.如权利要求1的方法，其中，所述第一种组合物含有106-1010所述细菌/克。
11.如权利要求1的方法，其中，给所述家禽服用1×103-1×1010所述细菌。
12.如权利要求1的方法，其中，所述第一种组合物仅服用一次或两次。
13.如权利要求1的方法，其中，所述枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌C-3102，保藏号FERM-BP-1096，或其突变型。
14.如权利要求1的方法，其中，所述第二种组合物还含有一种载体或稀释剂。
15.如权利要求1的方法，其中，所述第二种组合物还含有一种家禽饲料。
16.如权利要求1的方法，其中，所述第二种组合物是口服的。
17.如权利要求1的方法，其中，所述第二种组合物含有105-108所述活性枯草芽孢杆菌/克。
18.如权利要求1的方法，其中，所述第二种组合物是在服用所述第一种组合物之后服用的。
19.如权利要求1的方法，其中，所述家禽是鸡、鸭、鹅、鹌鹑、野鸭、鸵鸟、或观赏鸟类。
20.如权利要求4的方法，其中，所述约氏乳杆菌是约氏乳杆菌CP-721，保藏号FERM BP-6333，或其突变型，而所述枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌C-3102，FERM BP-1096，或其突变型。
21.一种用于给家禽服用活性微生物组合物的方法，包括：
在新生离巢维期给家禽服用含有分开或一起的属于路氏乳杆菌和约氏乳杆菌的活性细菌的第一种组合物；和
给所述家禽服用含有属于枯草芽孢杆菌的活性微生物的第二种组合物。
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