CN108546653B - 一种新型发酵乳酸杆菌及其在饲料领域和处理污水领域的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种新型发酵乳酸杆菌及其在饲料领域和处理污水领域的应用，属于微生物领域。本发明的新型发酵乳酸杆菌为Lactobacillus Fermentum菌株LBF128，具有耐酸、耐盐、耐高温性能，在厌氧、好氧及兼氧状态下均可繁殖的特性，在pH＝2.0的条件下，仍能存活2小时以上，且可以在厌氧和好氧及兼氧状态下繁殖，故可通过胃后保持70％以上活菌到达肠道，能用于畜禽类饲料的添加剂，还能用于粪便的生物除臭，效果稳定，可将原粪尿中污染物(COD 25000以上)降解到1500以下；还可以用于生活污水、酸性高盐污水、流域污水的处理，耐酸性和耐盐性好，成活率高，处理效果显著，在盐分高达6％的环境中仍能存活和工作。

Description

一种新型发酵乳酸杆菌及其在饲料领域和处理污水领域的 应用
技术领域
本发明属于微生物领域，更具体地说，涉及一种新型发酵乳酸杆菌及其在饲料领域和处理污水领域的应用。
背景技术
乳酸杆菌是指能使糖类发酵产生乳酸的细菌，是一群生活在机体内益于宿主健康的微生物，它维护人体健康和调节免疫功能的作用已被广泛认可。乳酸杆菌属乳酸杆菌科，因发酵糖产生大量乳酸而命名。在自然界分布广泛，是动物和人肠道等处重要的生理性菌群之一。该类群细菌绝大多数对动物和人无毒、无害，负担着动物体内重要的生理功能。在乳酸菌中，乳酸杆菌是最大的一个属，其定义为杆形乳酸杆菌。乳杆菌属与动物关系最密切，它是动物和人类肠道和阴道中占优势的菌群之一。乳杆菌分布广泛，动物和人类从口腔到直肠始终都有该菌存在。乳酸杆菌己知的生理功能主要表现为：阻止病原菌对肠道的入侵和定植，抑制病原菌，抗感染，维持肠道的微生态平衡，预防和抑制肿瘤的发生，增强机体免疫力，促进消化，合成氨基酸和维生素，降低胆固醇，抑制内毒素的生产，延缓衰老和抗辐射等。
乳酸杆菌常被用于食品饮料中，如酸奶，能活化肠道益生菌群。随着基因工程技术的发展，改造乳酸菌使其更适合人体的需要，再制成微生态制剂和活菌疫苗等保健品或药品，将为人类健康做出更大贡献，重组乳酸杆菌基因工程菌将在未来食品和医药工业中得到更广泛的应用。不仅如此，乳酸杆菌在畜牧生产中的应用也越来越多，许多实验及实际应用都表明了乳酸杆菌作为单一制剂或复合制剂中的一种可以提高畜禽生产性能、发挥预付及治疗腹泻的作用。
如中国专利申请号为201110448525.8，申请公布日为2013年7月3日的专利申请文件公开了一种新型乳酸杆菌LY-73及其应用，其保藏号为：CCTCC M2011481，该菌株具有高产EPS的特性，可应用于微生态制剂、食品、医药制备、保健品等多个领域。中国专利申请号为201310036200.8，申请公布日为2013年6月26日的专利申请文件公开一种乳酸杆菌菌株及其应用。乳酸杆菌CGMCC6495从泡菜污水中分离得到，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2012年9月3日，保藏编号CGMCC No.6495。该菌株经常规的活化培养与扩大发酵培养可应用于粪便的生物除臭。乳酸杆菌CGMCC6495作为单一菌株即可应用于人粪便原位除臭，除臭效果稳定，受温度影响小。
目前现有发现的乳酸杆菌在实际应用时存在耐酸耐盐性能不佳、繁殖条件要求高等问题，通过胃后，大部分乳酸杆菌失活，真正能达到肠道的活菌数量比较少，因此在肠胃中发挥的作用比较有限。
发明内容
1.要解决的问题
针对现有的乳酸杆菌存在耐酸、耐盐性能不佳、容易失活的问题，本发明提供一种新型发酵乳酸杆菌及其在饲料领域和处理污水领域的应用，本发明的发酵乳酸杆菌LBF128具有耐酸、耐盐、耐高温性能，在厌氧、好氧及兼氧状态下均可繁殖的菌株LBF128或其突变体，耐酸性能是指在pH低至2.0的环境中能存活2小时以上，耐盐性能是指在盐分高达6％的环境中仍能存活和工作。
2.技术方案
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种新型发酵乳酸杆菌，其为Lactobacillus Fermentum菌株LBF128，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.15061。
一种新型发酵乳酸杆菌，是具有耐酸、耐盐、耐高温性能，在厌氧、好氧及兼氧状态下均可繁殖的菌株LBF128或其突变体，耐酸性能是指在pH低至2.0的环境中仍能存活和工作，耐盐性能是指在盐分高达6％的环境中仍能存活和工作。
上述的一种新型发酵乳酸杆菌在微生态制剂、污水处理剂、畜禽类饲料和畜禽类饲料添加剂领域中的应用。
一种微生态制剂，所述的微生态制剂包含上述的乳酸杆菌或上述的突变体。
一种畜禽类饲料，所述的畜禽类饲料中含有上述的乳酸杆菌或上述的突变体。
更进一步地，畜禽类饲料中新型发酵乳酸杆菌LBF128或其突变体的添加量为0.012％～5％，质量分数。
一种畜禽类饲料添加剂，所述的畜禽类饲料添加剂中包含上述的乳酸杆菌或上述的突变体。
一种污水处理剂，所述的污水处理剂含有上述的乳酸杆菌或上述的突变体。
一种由上述的发酵乳酸杆菌LBF128或其突变体得到的代谢产物。
上述的发酵乳酸杆菌LBF128或其突变体的代谢产物微生态制剂、污水处理剂、畜禽类饲料和畜禽类饲料添加剂领域中的应用。
一种处理污水的方法，采用上述的污水处理剂，处理步骤为：
(1)将污水处理剂加入待处理污水中，对待处理污水进行曝气处理；
(2)对曝气处理之后的污水依次进行沉淀和消毒处理，然后排出。
更进一步地，曝气处理的方式为：先进行弱曝气处理，控制溶解氧浓度在1-1.5mg/L；然后进行强曝气处理，控制溶解氧浓度在2mg/L以上。
一种饲养畜禽类的方法，向畜禽类喂食上述的畜禽类饲料；或者向畜禽类喂食含有菌株LBF128或其突变体或其代谢物的水。
生物材料保藏信息
发酵乳酸杆菌LBF128，分类名为Lactobacillus Fermentum，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国北京，保藏日期为2017年12月13日，保藏号为CGMCC No.15061。
3.有益效果
相比于现有技术，本发明的有益效果为：
(1)本发明中提供的发酵乳酸杆菌是乳酸菌科12属200多个种中最为耐酸、耐盐品种，在pH＝2.0的条件下，仍能存活2小时以上，且可以在厌氧和好氧及兼氧状态下繁殖，故可通过胃后保持70％以上活菌到达肠道，从而有效地在肠道通过分泌乳酸抑制有害菌群，增加肠道活性，促进消化代谢，并抑制氨气的产生，保持肠道的健康，即使在作为粪尿被排除体内时，仍可保留有20～30％的活菌；
(2)本发明的发酵乳酸杆菌用于畜禽类饲料的添加剂，能抑制饲料中细菌的生长，减少饲料中化学杀菌药剂的添加量，可以完全替代饲料中的抗生素，为食品安全提供保障；
(3)本发明的发酵乳酸杆菌用于畜禽类饲料的添加剂，消化效率提高：饲料的利用率提高；粪尿量的降低；氮排泄量的降低；无机物排泄量的降低；恶臭物质的降低；有害菌的抑制；甲烷排放量降低；
(4)本发明的发酵乳酸杆菌能增强机体的免疫力，用于畜禽类饲料的添加剂，能提高肉类的味道和风味，彻底提高家畜的食用健康，降低饲料的成本，提高产量；
(5)本发明的发酵乳酸杆菌能应用于粪便的生物除臭，效果稳定，可将原粪尿中污染物(COD25000以上)降解到1500以下；还可以用于生活污水、酸性高盐污水、流域污水的处理，耐酸性和耐盐性好，成活率高，处理效果显著，在盐分高达6％的环境中仍能存活和工作；
(6)本发明中的发酵乳酸杆菌能耐受高温，在80℃的温度以下可进行活动；粪尿中氨，基梅尔卡丁烷，硫化氢，三甲胺带来恶臭味道，而使用本发明乳酸杆菌的复合饲料可在猪肠道内就开始分解臭味成分，以致粪尿排出体外时异味显著减轻。
附图说明
图1为育肥期间的体重增长示意图；
图2为饲料的差异和饲养方式对里脊肉中维生素E含量带来的影响示意图；
图3为饲料的差异和饲养方式给里脊肉脂肪中维生素E含量带来的影响示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
本发明的乳酸杆菌LBF128，是一种分离的全新的菌株，从腌渍米糠酱中分离获得，对分离得到的菌进行形态观察和生理性状测试，另外，提取分离菌的DNA，用PCR法扩增16SrRNA区域的DNA。关于扩增的DNA，使用ABIPRISM 310遗传分析仪[Life TechnologiesCorporation]分析碱基序列。将获得的序列与国际碱基序列数据库(DDBJ/EMBL/GenBank)中登记的序列和MicroSeqID分析利用软件[Life Technologies Corporation]的数据库进行同源性检索，通过邻接法(NJ法)建立与亲缘关系最近的系统树，经过分析确定菌株与Lactobacillus Fermentum最接近(符合率为99.99％)。
本发明中的的菌株LBF128委托中国科学院微生物研究所进行了菌种鉴定，根据送检菌种的细胞形态、生理生化特征、16S rRNA基因序列、pheS基因序列等实验数据综合分析，参考《伯杰氏系统细菌学手册》以及International Journal of Systematic andevolutionary Microbiology有关研究论文，鉴定结果为Lactobacillus fermentum发酵乳杆菌((2018)微检字第035号)。
本发明通过相关生物活性实验表明，乳酸杆菌LBF128是一种耐强酸性、耐高盐分的菌株，而且耐高温性能好，适用于应用于微生态制剂、食品、保健品、医药制备、畜禽类饲料添加剂、污水处理剂等多个领域。
微生态制剂(Porbioties)，也叫活菌制剂(Bigone)或生菌剂，是指运用微生态学原理，利用对宿主有益无害的益生菌或益生菌的促生长物质，经特殊工艺制成的制剂。目前微生态制剂已被应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域中。
本发明提供的乳酸杆菌LBF128可用于制备相关利用乳酸杆菌及其代谢产物EPS发挥作用的微生态制剂，具有良好的应用前景。比如，本发明提供的乳酸杆菌LBF128可用作兽用微生态制剂，用于防治畜、禽、鱼的消化道、泌尿道疾病及用于猪、牛、鸡、兔等禽畜的育肥、抗病，可替代抗生素，减少有毒物质在体内的残留量。例如，可在饲料中添加适量的乳酸杆菌LBF128也可作为生物制品类微生态制剂用于医药方面。
乳酸菌EPS是乳酸杆菌的一种代谢产物，其对形成各种酸乳的质构和特有的营养保健发挥着极其重要甚至是不可替代的作用，它可以增加酸奶的粘度、稳定性和保水性，使产品具有良好的口感、质地和风味。因此，本发明提供的乳酸杆菌LBF128在食品及其加工中也有很好的应用。
相关研究进一步表明乳酸菌EPS可以改善菌株对肠道黏膜的非特异性粘附，增强菌株对肠道的定殖作用；抗肿瘤作用；调节免疫系统作用；对细胞体具有保护作用；抑制肠道腐败菌的繁殖，防治结肠癌的作用。因此，本发明提供的乳酸杆菌LBF128可应用于肠道疾病、癌症、免疫系统等方面的药物制备。例如可将本发明乳酸杆菌LBF128作为有效组分以医药有效剂量加入到药物组合物或试剂中，也可将本发明乳酸杆菌LBF128的代谢产物(例如乳酸菌EPS)作为有效组分以医药有效剂量加入到药物组合物或试剂中。
本发明提供的乳酸杆菌LBF128还可根据其特点应用于食品添加剂、保健品等领域中，例如将本发明的乳酸杆菌LBF128制成乳酸杆菌干粉，即可作为食品添加剂或保健药中的有效成分，发挥乳酸杆菌及其乳酸菌EPS的多种作用和效果。
作为本发明制备微生态制剂、畜禽类饲料添加剂、污水处理剂的活性成分，可以使用利用离心等收集方法从培养物中分离的本发明的乳酸菌。本发明的乳酸菌的菌体处理物也可以作为本发明中包括的活性成分。本发明菌体处理物包括经浓缩、干燥、冻干等处理的本发明的乳酸菌。此外，不仅分离的菌体，细菌的破碎产物、和细菌破碎后通过离心去除碎片后的匀浆也可用作本发明的菌体处理物。作为培养物的形态，不仅可以使用根据上述培养条件获得的培养物和用一般用于培养乳酸菌的培养基获得的培养物，也可以使用乳制品等如奶酪、发酵乳、乳酸菌饮料等，本发明的乳酸菌可通过己知的方法分离。
本发明的乳酸菌等作为活性成分应用时，可以根据用途适当添加赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等进行配制，并选择形态(固体、液体等)。
作为赋形剂的例子，包括动物和植物油，如豆油、红花油、橄榄油、胚芽油、葵花油、牛油、沙丁鱼油等，多元醇如聚乙二醇、丙二醇、甘油、山梨醇等，作为表面活性剂，如脂肪酸山梨醇醋、蔗糖脂肪酸酷、甘油脂肪酸酷,聚甘油脂肪酸酷等，纯净水、乳糖、淀粉、微晶纤维素、D-甘露醇、卵磷脂、阿拉伯胶、山梨糖醇溶液、糖溶液等。
作为粘合剂的例子，包括羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、明胶、预胶化淀粉、聚乙烯毗咯烷酮、聚乙烯醇等。
作为崩解剂的例子，包括羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、玉米淀粉等。
作为润滑剂的例子，包括滑石粉、氢化植物油、蜡、轻质无水硅酸等来自天然存在的物质及其衍生物、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸铝等。
本发明的乳酸菌等作为活性成分应用时还可以进一步含有甜味剂、着色剂、pH调节剂、香料、多种氨基酸等。此外，固态产品可以通过公知的方法进行包衣。在摄入时，液体可溶解或悬浮在水中或其他合适的介质中。
上述包含乳酸菌等活性成分的组合物可以用于饲料、污水处理剂等，但并不限于这些。
下面通过具体实施例对本发明作进一步详细说明。以下实施例仅仅对本发明进行进一步的说明，不应理解为对本发明的限制。
实施例1
耐酸性实验
实验过程：在培养皿中用稀释的琼脂培养基对LBF128乳酸菌进行培养，调节培养皿中LBF128乳酸菌的含量为107/mL，用稀盐酸分别调制培养基的pH值为3.0和2.0。培养1个小时和2个小时后分别检测培养皿中的LBF128乳酸菌含量，结果如下：
实验结果
表1乳酸杆菌的耐酸性实验结果
Figure GDA0001723023390000061
上述实验证实LBF128乳酸菌的抗酸性很强，在pH＝2.0的环境下仍能存活2个小时以上，在pH＝3.0的酸性条件下，LBF128乳酸菌适应酸性环境后，不仅能存活，而且还能保持繁殖能力。因此认为基本上可以顺利通过强酸性的胃部环境。
实施例2
耐盐性实验
实验过程：在培养皿中用稀释的琼脂培养基对LBF128乳酸菌进行培养，调节培养皿中LBF128乳酸菌的含量为107/mL，然后用食盐调制成含盐度6％(质量浓度)的食盐水环境，分别培养2个小时和4个小时后检测培养皿中的LBF128乳酸菌含量，结果如下：
表2乳酸杆菌的耐盐性实验结果
Figure GDA0001723023390000062
上述实验证实LBF128乳酸菌的抗盐能力很强，在盐浓度高达6％的环境下，仍能存活4小时以上，表明本发明的LBF128乳酸菌可以在海水等高盐度水中存活和工作。
实施例3
耐高温实验
实验过程：在培养皿中用稀释的琼脂培养基对LBF128乳酸菌进行培养，调节培养皿中LBF128乳酸菌的含量为107/mL，然后将培养皿放置在60℃和80℃的环境中培养，培养1个小时和2个小时后分别检测培养皿中的LBF128乳酸菌含量，结果如下：
表3乳酸杆菌的耐盐性实验结果
Figure GDA0001723023390000071
上述实验证实LBF128乳酸菌的抗高温能力很强，在80℃的高温环境下仍然可以保持存活和工作。
实施例4
家禽饲养实验
实验过程：以出生10天的交趾鸡cochin·军鸡作为养殖对象，随机将600只鸡雏分成两组，每组300只，第一组鸡雏喂食添加抗生素的饲料，饲料中抗生素的添加量为0.025％(质量分数)；第二组鸡雏喂食添加LBF128乳酸菌的饲料，饲料中LBF128乳酸菌的添加量为0.025％(质量分数)；饲养过程中参数条件如下表所示
实验结果：
表4家禽分别用抗生素和乳酸杆菌饲养至第49天时的体征
Figure GDA0001723023390000072
使用LBPL植物性乳酸菌添加在育肥鸡、蛋鸡饲料和饮用水中，明显增强动物的免疫力和抗病力，促进生长，提高饲料的利用率，增加蛋重及产蛋率，并且可以消除鸡场异味，净化环境。
饲养的蛋鸡所产出的鸡蛋，因其蛋白质含量高，组织结构紧密，胆固醇及脂肪含量低，鸡蛋黄可用手指捻起也不会破裂，这是普通鸡蛋所无法做到的。
总结：本发明的LBF128乳酸菌作为饲料的添加剂，用于饲养禽畜，具有以下功能：
(1)促进粗料蛋白质的吸收，促进畜禽增重，缩短饲料周期；
(2)提高畜禽的抗病力和免疫力，可提升防治疫病的作用；
(3)大幅度提升饲料的使用率，降低成本经费；
(4)有效地改善畜禽栏舍的环境，最大限度地消除异味，净化畜禽生活环境之作用显箸；
(5)畜禽排泄物的无污染排放同时，保护了周围环境的生态化；
(6)大幅度提高畜禽肉的质量，经济效益明显突出；
实施例5
以乳酸杆菌LBF128作为饲料添加剂，对猪的养育以及肉质带来的影响
材料及方法
1)饲养管理概要
测试猪是LWD猪(90日年龄，引进时，平均体重26.3kg)的36头(阉割雄性19头，雌性17头)。
测试猪在饲养时，分为四个区，分别为舍饲对照区(15头测试猪)、舍饲处理区(15头测试猪)、放牧对照区(3头测试猪)、放牧处理区(3头测试猪)，舍饲对照区的测试猪给予普通购买的饲料喂养，舍饲处理区的测试猪给予添加了0.012％乳酸杆菌LBF128的饲料喂养；同样的，在放牧对照区，测试猪给予普通购买的饲料喂养；放牧处理区的测试猪给予添加了0.012％乳酸杆菌LBF128的饲料喂养。
其中，关于舍饲对照区1头，放牧对照区1头，共计雄性2头，试验期间中暴毙。全都在日本冲绳县中央家畜保险卫生所进行行政解剖，1头是胃溃疡，还有1头怀疑是尿毒症或者尿道结石的病变，确认均非投加乳酸菌所致。
培养处理区的乳酸菌，Lactobacillus fermentum
对畜禽的饲料添加以活菌数108-1010cfu/g的原菌粉和米糠混合后的混合饲料。使用量为每吨饲料中添加上述菌粉120克(即，乳酸杆菌LBF128在饲料中的添加量为0.012％(质量分数))，饲料给予量按照日本饲养标准表(猪)的生长体重。两舍饲区除了饲料不同以外，所有的饲营养管理是同样的。放牧的两区，加上和舍饲同量的饲料，79天的纳皮尔草(Pennisetum purpureum Schumach.)草地全日进行着放牧，在期间内摄取量是平均0.1kgDM/日/头(总摄取量的21％)。
2)生长调查
12月1日从引进后第40日到出栏为止每周星期二早上从8点开始进行了全个体的体重测量。翌年2月25日的体重测量后，达到100kg的测试猪(舍饲对照区7头，舍饲处理区8头)第一批出栏。关于剩下的舍饲对照区7头，舍饲处理区7头，放牧对照区2头，放牧处理区3头，3月11日第二批全部出栏。
3)胴体肉成绩
从引进日到第一批出栏为止的日数为87日，到第二批出栏为止的日数是101日。屠宰及解体委托日本冲绳县肉食中心。被屠宰及解体的测试猪，1晚上在5℃的冰箱内保管后，采用右半身圆头胴体肉根据日本肉食分等级协会的胴体肉重量，胴体肉成品率，脊背及腹脂肪的厚度和体长，里脊肉横截面面积，以及分等级进行了调查。胴体肉成品率，通过将体重除以运送体重乘以100而获得的值作为该值。关于里脊肉横截面面积从肉的第4，5胸椎间的横切面为描图纸抄里脊肉断面，自动面积分析软件测量了面积。
肉质的分析
肉的pH，水分及肉色的测量，从肉食中心带回之后立即进行了。pH，食品用针形pH仪表(HORIBA6252-10D)测量了胸最长筋部分的红肉部分及脂肪部分各3处。肉的水分用了常法，保水性，保水性测量法的离心法。
肉色用COLER READER(MINORTA,CR-10)测量了L值(明度)，a值(红度)，b值(黄度)。
还有，肌肉中的游离氨基酸测量，氨基酸自动分析机进行了对测试肉加上3倍量的水，一边冰冷一边匀浆中～高速1分×3次，加上等量的10三氯乙酸溶液使蛋白质沉淀，做离心分离(15,000rpm，30min)的上面的澄清部分用过滤器过滤(0.45μm)的东西的分析。
肌肉及脊背脂肪部的维生素E含量，进行了在厌氧的条件下用60％碱溶液皂化后，由己烷抽出·浓缩的东西由HPLC分析进行了定量分析。
脂肪熔点，测试肉切丝儿70℃热融化周边皮下脂肪填充毛细血管冷却后，升温方面根据目测进行了上升熔点及透明熔点的测量。还有脂肪胸最长筋横截面及该部附近的脊背脂肪内层·外层和肾脏周围脂肪的脂肪酸组织进行甲基酯化，根据气体色谱(岛津制作所制GC-15A)分析了。(以脂肪的抽出Floch的方法(1957)为基准。脂肪酸甲基酯化处理按照AOCS(1973)的公定法，用酸和碱进行分解处理，用有机溶媒提取脂肪，用三氟化硼酸甲醇法甲基酯化之后，向煤气色谱法注入。)填充剂Unisole300(80-100目)柱温195℃，查出温度250℃，载气40mL/分，各自使用了氢电离探测器。各脂肪酸甲基酯化的顶峰面积测量后，用内部标准方法定量计算。
1)肉的抗氧化性的测量
为了评价肉的过氧化性和抗氧化性，使用里脊肉部位，关于过氧化脂肪，抗氧化力及α-生育酚测量。
a)过氧化脂质：为了氧化生成物的过氧化脂肪的测量，作为硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)测量。试料肉用1.15％KCl溶液悬浮后，离心分离(3,000rpm，10min)，使用Poritron冰上一边冷却，一边为上清液0.5mL里混合0.4％TBA溶液(pH3.5调整的2M醋酸Na)3mL，10％SDS(十二烷基硫酸钠)160μL，纯净水0.5mL。以100℃1个小时使之作出反应，冷却后，添加正丁醇5mL，持续15分的震动，被离心分离(3,000rpm，10min)的上清液用分光光度计(波长532nm)测量。
b)组织中，抗氧化力：依据Benzie&Strain的方法，进行了组织中抗氧化力FerricReducation/Antioxidant Power(以下，FRAP)的测量。
结果
1.生长和饲料要求率的比较
1)体重的增长
在各试验区的群体的养肥期间的平均体重的增长如图1所示。
体重在试验期间中大体上同样的增长趋势。第一批出栏的猪表现出稍高的体量增加。
体重的增长(不同出栏)
2)日增加体重，每天的饲料摄取量及饲料增加的推移
对于日增加体重，每天的饲料摄取量，1kg增加体重的每天的饲料摄取量作为饲料要求量，按出栏时期不同以及合并两者为各自表4-1，表4-2所示。
同样育肥日数的出栏体重，放牧对照区有最高的倾向，放牧处理区则有最低的倾向。在舍饲对照区和舍饲处理区间，由于出栏体重，平均日增加体重量，饲料摄取量无显著差异，购买饲料的饲料要求率(饲料摄取量除以平均日增体重)定为同样的值。对此，摄取牧草的放牧对照区和放牧处理区的饲料要求率各自显示2.7，2.9的低值。
表4-1.育肥成绩(出栏第1次)
Figure GDA0001723023390000111
表4-2.育肥成绩(出栏第1次和第2次的合并)
Figure GDA0001723023390000112
※放牧的饲料摄取量以及饲料要求率除去牧草的值。
2.胴体肉成绩和肉质
1)胴体肉成绩
胴体肉成绩在放牧对照区，脊背脂肪厚度关联最低的事，有关联等级最高的倾向。
表4-3胴体肉成绩
Figure GDA0001723023390000113
※数值是平均值±标准偏差。
1)同行间不同的小字间(a，b)存在有意差(p<0.05)；
2)脊背脂肪厚度是脊背、肩膀、腰的平均值，腹脂肪是前、中、后边的平均值；
3)评级等级是上3，中2，普通1，等外为0。
2)里脊肉的肉质
胴体肉，关于里脊肉比较肉质的地方，如表4-4所示，舍饲处理区明度(L值)显著性差异很低(p<0.05)，红度，黄度全都有很低的倾向。pH的值在舍饲处理区显著性差异很高(p<0.05)。比较肉的水分含有率和保水性的地方，水分含有率由高到低的顺序为放牧对照区、舍饲处理区、放牧处理区、舍饲对照区。对于肉质的离心保水性，低离心和高速心全都维持了高值的是，舍饲处理区和放牧对照区。
表4-4里脊肉的肉质
Figure GDA0001723023390000121
※数值是平均值±标准偏差；
※同行间不同的小字间(a，b)存在有意差(p<0.05)。
表4-5里脊肉的水分含有率和保水性
Figure GDA0001723023390000122
※数值是平均值±标准偏差。
3.肉质关联成分的比较
1)抗氧化力和过氧化脂肪的比较
添加乳酸菌的舍饲处理区与作为通常购买饲料给予区的舍饲对照区比较，FRAP(抗氧化力)高，过氧化脂肪值低。即，可以推定舍饲处理区的肉食不容易氧化。生育酚值(抗氧化力的指标)与舍饲的2个区比较，在放牧区更高一些，在放牧处理区最高。
1)里脊肉的维生素E
比较处理区的值的话，按舍饲对照区<舍饲处理区<放牧对照区<放牧处理区的顺序(如图2所示)，添加乳酸菌育养的两个区中(舍饲处理区、放牧处理区)的里脊肉的维生素E(α-Toc，α-Toc T，γ-Toc，Tocol)的值，比舍饲对照区都高。还有，放牧对照区比舍饲对照区也高。并且，放牧处理区能看到极高的增加。考虑前述的抗氧化力的值，也能考虑维生素E＝抗氧化力。
2)里脊肉脂肪的维生素E
关于里脊肉的脂肪，与舍饲对照区的值比较，舍饲处理区，放牧对照区的值的增加不能被承认，不过放牧处理区变得显著增高(如图3所示)。
3)游离氨基酸含量
游离氨基酸含量(总量)与舍饲对照区比较，舍饲处理区明显提高。还有，放牧处理区，越发变得高。还有，所示的美味成分的氨基酸(牛磺酸，天冬氨酸，苏氨酸，丝氨酸，谷氨酸，甘氨酸，丙氨酸)在添加乳酸菌育养的两个区中(舍饲处理区、放牧处理区)较高。红色所示的氨基酸代谢物，抗氧化力强的安丝氨酸(即，鹅肌肽，Anserine)，肌肽含量在舍饲处理区高，放牧处理区也越发显著。
4)脂肪熔点
有一点点脂肪熔点，不过，舍饲处理区，放牧对照区及放牧处理区的脂肪熔点，比舍饲对照区高。一般的话，脂肪熔点高的，肉的紧实度被认为很好。因此添加适量乳酸LBF128，放牧饲养可以使肉的紧实度有提高的倾向。
表4-6饲料的差异和放牧的有无对里脊肉中的抗氧化力和过氧化脂肪质带来的影响
Figure GDA0001723023390000131
表4-7饲料的差异和放牧的有无给氨基酸含量带来的影响
Figure GDA0001723023390000132
Figure GDA0001723023390000141
单位：mg/100g
＊牛磺酸，天冬氨酸，苏氨酸，丝氨酸，谷氨酸，甘氨酸，丙氨酸与呈美味的氨基酸被评价。安丝氨酸，肌肽被认为是涉及抗氧化性的氨基酸。
表4-8饲料的差异和放牧给里脊肉的脂肪熔点带来的影响
Figure GDA0001723023390000142
如上述，从测量与肉质有关的各项目的结果，通过添加适量的乳酸菌LBF128，暗示了与高抗氧化力一起与美味成分的增加相连。通过放牧更进一步能考虑增强效果。可是，乳酸菌(Lactobacillus fermentum,Enterococcus faecium,)LBF128用怎样的机制提高肉质还不清楚。
实施例6
处理污水的实验
LBF128可在厌氧，好氧及兼氧环境中发挥作用，即在进入畜禽体内时就开始发挥作用，在作为粪尿被排除体内时，仍可保留有20％-30％的活菌；如果在猪圈内使用水泡粪模式，猪粪尿会在猪圈下方粪尿池中浸泡达3-6个月之久，其中的LBF128活菌可将原粪尿中污染物(COD25000以上)降解到1500以下，大大降低了后段污水处理的负荷。
重庆畜牧研究院九峰山实验基地养猪废水处理样板：
一、实验过程：
使用实验基地现有的沼液污水蓄水池(500立方米，两个)，在第一池(沼气发酵罐之后)加入一台VSJ300型微纳米曝气装置进行弱爆气(控制溶解氧浓度在1-1.5mg/L)；在第二池对角线处加入两台VSJ300微纳米曝气装置(控制溶解氧浓度在2mg/L以上)；最后在第二池之后建造一个40立方米的沉淀池和一个40立方米的消毒池。各生化处理池中发酵乳杆菌组合菌粉(每克含活菌1亿个以上)添加量均为每立方米池容40克。
二、实验数据及试验前后的污水检测指标数据如表4-9所示。
如下：
表4-9乳酸菌LBF128应用效果数据表(mg/L)
Figure GDA0001723023390000151
实施例7
本发明的中乳酸菌LBF128还具有除臭功能，除臭方法以猪场为例进行说明。
在炎热夏季，通常会进行喷雾降温，在喷雾水中加入0.05-1％(质量分数)的乳酸菌粉LBF128，混匀后放置1天；然后利用混有乳酸菌粉的水对养猪场所进行喷雾，不仅能降温，还可有效去除异味臭气。

Claims (10)

1.一种新型发酵乳酸杆菌，其特征在于，其为Lactobacillus Fermentum菌株LBF128，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.15061。
2.权利要求1所述的一种新型发酵乳酸杆菌在制备微生态制剂、污水处理剂、畜禽类饲料和畜禽类饲料添加剂中的应用。
3.一种微生态制剂，其特征在于：所述的微生态制剂包含权利要求1中所述的发酵乳酸杆菌。
4.一种污水处理剂，其特征在于：所述的污水处理剂含有权利要求1中所述的发酵乳酸杆菌。
5.一种畜禽类饲料，其特征在于：所述的畜禽类饲料中含有权利要求1中所述的发酵乳酸杆菌。
6.根据权利要求5所述的一种畜禽类饲料，其特征在于：新型发酵乳酸杆菌LBF128的添加量为0.012％～5％，以质量分数计。
7.一种畜禽类饲料添加剂，其特征在于：所述的畜禽类饲料添加剂中包含权利要求1中所述的发酵乳酸杆菌。
8.一种处理污水的方法，其特征在于，采用权利要求4所述的污水处理剂，处理步骤为：
(1)将污水处理剂加入待处理污水中，对待处理污水进行曝气处理；
(2)对曝气处理之后的污水依次进行沉淀和消毒处理，然后排出。
9.根据权利要求8所述的一种处理污水的方法，其特征在于：曝气处理的方式为：先进行弱曝气处理，控制溶解氧浓度在1-1.5mg/L；然后进行强曝气处理，控制溶解氧浓度在2mg/L以上。
10.一种饲养畜禽类的方法，其特征在于：向畜禽类喂食权利要求5-6中任意一项所述的畜禽类饲料；或者向畜禽类喂食含有权利要求1中所述菌株LBF128的水。
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