ES2271996T3 - Metodo para administrar una composicion de microorganismos viables a aves de corral. - Google Patents
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Abstract
La invención se refiere a un procedimiento para la administración a aves de una composición a base de microorganismos viables que consiste en administrar una composición a base de microorganismos viables que incluye bacterias lácteas viables del género Lactobacilus reuteri y Lactobacilus johnsonii en un estado de ave recién nacida; y la administración de microorganismos viable que incluye un microorganismo viable perteneciente al Bacilus subtilis.
Description
Método para administrar una composición de
microorganismos viables a aves de corral.
La presente invención se refiere a un método de
administración de composiciones de microorganismos viables a aves
de corral a las que se administra composiciones de microorganismos
viables útiles para el crecimiento de las aves, con lo que las aves
reciben una alimentación con una alta productividad mientras se
reduce las cantidades de medicamentos, tales como antibióticos,
agentes antibacterianos y similares, o no se administran
medicamentos.
En la alimentación de las aves de corral, tales
como pollos tomateros y similares, se lleva a cabo en general una
crianza intensiva de 40 a 60 aves por 1 tubo (aproximadamente 3,3
m^{2}) en una granja avícola con el fin de reducir los costes de
producción. Además, las aves de corral se alimentan para conseguir
un rápido crecimiento, una ganancia diaria en peso corporal de 40 a
55 g diarios como media, de manera que las aves se pueden enviar
para la venta en aproximadamente 2 meses después de la incubación.
En estas condiciones, el ave está siempre bajo un enorme stress, y
frecuentemente enferma y las enfermedades se extienden entre las
aves de corral. Cuando el pienso se echa al suelo, dado que las aves
pican el alimento y similar, que se mezcla con los excrementos del
suelo, las bacterias tóxicas se extienden muy fácilmente a todas las
aves que se encuentran en el recinto de alimentación. Además, en
una instalación de alimentación abierta, o incluso en algunos casos
en una instalación de alimentación sin ventanas, se pueden extender
bacterias tóxicas por el recinto de alimentación. Además, por
ejemplo, aunque se desinfecte el corral de pollos cada vez que los
pollos se llevan a vender, dado que animales pequeños tales como
ratas y similares de las áreas circundantes no quedan afectados por
este tratamiento, estos animales portan bacterias tales como
salmonella y similares que transmiten a las aves del corral
cuando de nuevo se colocan polluelos en la instalación de
alimentación.
Con el fin de mantener una elevada
productividad, evitando al mismo tiempo una reducción de la tasa de
crecimiento y similar durante el período de alimentación, así como
para prevenir la contaminación de las aves de corral con bacterias
tóxicas bajo estas condiciones, se administran por lo general a las
aves diversos medicamentos, tales como antibióticos, agentes
antibacterianos y similares.
Sin embargo, dado que existe la posibilidad de
que queden medicamentos residuales en la carne y huevos, y también
por el peligro de generar cepas bacterianas resistentes a los
medicamentos (como ha sido publicado en muchos casos), ha ido
aumentando entre los usuarios la demanda de productos de granja de
ganado libres de fármacos, que estén producidos sin utilizar
medicamentos.
Por otra parte, en condiciones naturales, sin
utilizar una crianza intensiva de un gran número de aves, no puede
esperarse una elevada productividad. Sin embargo, es posible la
crianza de aves de corral, tales como pollos y similares, sin
utilizar medicamentos tales como antibióticos, agentes
antibacterianos y similares. Existe ahora una gran demanda de carne
de pollo y huevos criados en condiciones naturales, es decir, los
llamados pollos de corral naturales, debido a la seguridad y buen
sabor, y se venden en el mercado a alto precio.
Como consecuencia, se ha dirigido el interés
hacia el desarrollo de un método de alimentación en la crianza de
las aves de corral, tales como pollos y similares, que no dé lugar a
contaminación con bacterias tóxicas, al mismo tiempo que se
mantiene una alta productividad, por un método de alimentación libre
de fármacos (alimentación en la que no se usan medicamentos tales
como antibióticos, agentes antibacterianos y similares, durante
parte o durante todo el período de alimentación, de manera que los
medicamentos no permanezcan en las aves al menos en el momento de
su envío para la venta).
Cuando la crianza intensiva convencional de un
gran número de aves se lleva a cabo evitando simplemente la
administración de medicamentos, las aves quedan fácilmente
infectadas con bacterias tóxicas. Por tanto, no es posible mantener
la productividad a un nivel comercialmente aceptable sin que haya
contaminación con bacterias tóxicas.
Como un medio para reducir la infección de las
aves con bacterias tóxicas sin depender de medicamentos, tales como
antibióticos, agentes antibacterianos y similares, ha sido propuesto
el de administrar microorganismos y similares útiles para el
crecimiento de varios tipos de aves de corral. Se sabe que bacterias
que pertenecen al género Bacillus, bacterias de ácido
láctico que pertenecen al género Lactobacillus, bacterias que
pertenecen al género Bifidobacterium y similares son
microorganismos útiles para aditivos a los piensos o como diversas
preparaciones CE (exclusión competitiva). Algunos de estos
microorganismos están disponibles comercialmente como preparaciones
de microorganismos viables de aditivos de piensos para aves. Sin
embargo, aunque están reconocidos los efectos en alguna medida,
estos no son suficientes. En particular no se ha informado de ningún
medio que permita llevar a cabo una alimentación de aves libre de
fármacos en una crianza intensiva de un gran número de aves de
corral y con un nivel comercialmente aceptable, para proporcionar
estas preparaciones de microorganismos viables.
Por ejemplo, la Patente japonesa registrada No.
2528055 y
JP-B-3-79988 (el
término "JP-B" tal como aquí se usa significa
"publicación de Patente japonesa examinada") describen que la
ganancia en peso corporal y las relaciones de conversión del
alimento en animales pueden mejorar y que pueden obtenerse efectos
tales como acción de control de la función intestinal y similares,
por administración de una preparación de microorganismos viables
que comprenden Bacillus subtilis a los animales. Es posible
llevar a cabo una alimentación libre de fármacos aplicando el medio
a, por ejemplo, pollos tomateros, pero solamente en ciertas regiones
limitadas donde estos pollos no se producen a gran escala. Sin
embargo, en muchas regiones donde se lleva a cabo la alimentación
de los pollos con frecuencia, dado que se infectan frecuentemente
con bacterias tóxicas que se extienden fácilmente a través de las
instalaciones de alimentación como se ha descrito antes, es
extremadamente difícil llevar a cabo una alimentación comercial
libre de fármacos de los pollos tomateros empleando este medio.
Además, incluso si la alimentación libre de fármacos de los pollos
tomateros utilizando este medio fuera posible, la velocidad de
ganancia del peso corporal de las aves es más baja que con una
alimentación utilizando medicamentos. Como resultado de ello, no se
obtiene la alta productividad de la alimentación con fármaco
aplicado.
Además, las preparaciones de microorganismos
viables actualmente en el mercado tienen problemas, tales como la
reducción del número viable durante las etapas de distribución, la
pobre capacidad de colonización después de la formación de flora
bacteriana intestinal, la necesidad de una administración continuada
de las preparaciones de microorganismos viables durante un período
de tiempo prolongado, y similares. En particular, la necesidad de
una administración continuada de las preparaciones de
microorganismos viables durante un período de tiempo prolongado,
debido a la pobre capacidad de colonización después de la formación
de flora bacteriana intestinal, es actualmente un obstáculo serio
para el uso práctico desde el punto de vista económico.
Un objeto de la presente invención es
proporcionar un método para la administración de composiciones de
microorganismos viables a aves de corral, de manera que la
alimentación libre de fármacos de las aves se puede llevar a cabo
mientras se mantiene una buena productividad.
Para resolver los problemas antes mencionados,
los autores de la presente invención han llevado a cabo un análisis
de selección de las bacterias útiles de una amplia gama de fuentes
naturales y han encontrado que determinadas bacterias de ácido
láctico aisladas del tracto intestinal de un pollo pueden colonizar
fácilmente el tracto intestinal de pollos recién nacidos enseguida
de la incubación. Además, los autores de la presente invención han
encontrado que, en particular, una bacteria de ácido láctico de
heterofermentación aislada del íleon de un pollo y una bacteria de
ácido láctico de homofermentación aislada del cecum de un pollo
pueden colonizar fácilmente el tracto intestinal de los polluelos
recién nacidos y tener varios efectos, tales como inhibición del
crecimiento de bacterias tóxicas, prevención de diarrea,
potenciación del crecimiento, mejora de la tasa de crianza, mejora
de las relaciones de conversión del alimento y similares. Además,
los autores de la presente invención han encontrado que las
bacterias de ácido láctico pueden colonizar el tracto intestinal de
los polluelos recién nacidos enseguida tras el nacimiento por simple
pulverización de una suspensión de microorganismos viables de estas
bacterias de ácido láctico del género Lactobacillus solamente
una vez a los polluelos recién nacidos dentro de los cuatro días
después de la incubación.
Además, los autores de la presente invención han
encontrado que, cuando se utilizan bacterias de ácido láctico cuya
colonización tiene lugar en combinación con la administración de
microorganismos viables de Bacillus subtilis durante el
período desde el estadio de cría recién nacida al estadio de ave
madura en la alimentación libre de fármacos de las aves de corral,
la ganancia de peso corporal en la etapa de alimentación inicial
puede ser mejorada y se puede obtener una tasa de crianza suficiente
en comparación con la sola administración de microorganismos
viables de Bacillus subtilis, de manera que puede realizarse
una alimentación libre de fármaco de las aves de corral en crianza
intensiva de un gran número de aves con alta productividad
comercialmente rentable. La presente invención se ha llevado a cabo
sobre la base de estos hallazgos.
Según esto, la presente invención se refiere a
un método para la administración de microorganismos viables a las
aves de corral que comprende:
administrar a las aves de corral una primera
composición que comprende bacterias viables pertenecientes a
Lactobacillus reuteri y Lactobacillus johnsonii, en la
estadio de crías recién nacidas.
Además, la presente invención se refiere a un
método para la administración de composiciones de microorganismos
viables para aves de corral, que comprende:
administración de una composición de
microorganismos viables para aves de corral que comprende bacterias
de ácido láctico viables pertenecientes a Lactobacillus
reuteri y Lactobacillus johnsonii en el estadio de crías
recién nacidas; y
administración de una composición de
microorganismos viables para aves de corral que comprende un
microorganismo viable que pertenece a Bacillus subtilis.
El método de la presente invención para
administrar composiciones de microorganismos viables para aves de
corral, incluye la administración de una composición de
microorganismos viables para aves de corral que comprende bacterias
de ácido láctico viables que pertenecen a Lactobacillus
reuteri y Lactobacillus johnsonii (que se citará de aquí
en adelante como una "composición de microorganismos viables de
bacterias de ácido láctico") a crías recién nacidas.
Las bacterias de ácido láctico antes descritas
pertenecientes al género Lactobacillus son bacterias
anaerobias facultativas. Se pueden utilizar eficazmente no
solamente las aisladas del tracto intestinal de las aves de corral
sino también otras cepas aisladas de una fuente natural. Entre los
ejemplos preferidos de la cepa que pertenece a Lactobacillus
reuteri se incluyen Lactobacillus reuteri
CP-720 (No. de Depósito FERM
BP-6332), Lactobacillus reuteri
CP-722 (No. de Depósito FERM
BP-6334) y similares. Un ejemplo preferido de cepa
perteneciente a Lactobacillus johsonii incluye
Lactobacillus johnsoii CP-721 (No. de
Depósito FERM BP-6333) y similares. Estas tres
cepas han sido depositadas en el Instituto Nacional de Biociencia y
Tecnología Humana (dirección 1-3 Higashi 1 chome,
Taukuba-shi, Ibaraki-kan
305-8566, Japón) el 27 de abril de 1998. Se conocen
otras cepas de Lactobacillus reuteri y Lactobacillus
johnsonii, tales como las descritas en "ATCC Bacteria and
Bacteriophages", 19ª edición, 1996, páginas 195 y 197,
incorporado aquí como referencia.
Las propiedades bacteriológicas de
Lactobacillus reuteri CP-720 y
CP-722 y Lactobacillus johnsonii
CP-721 se muestran en la Tabla 1.
La composición de microorganismos viables de
bacterias de ácido láctico puede contener además bacterias de ácido
láctico de heterofementación pertenecientes al género
Lactobacillus distinto a Lactobacillus reuteri tales
como Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri y
similares, así como bacterias de ácido láctico de homofermentación
pertenecientes al género Lactobacillus distintas a los
Lactobacillus johnsonii, tales como Lactobacillus
gasseri, Lactobacillus crispatus y similares, pertenecientes al
grupo de Lactobacillus acidophillus. Se conocen muchas cepas
diferentes de muchos géneros diferentes de Lactobacillus, tales como
las descritas en "ATCC Bacteria and Bacteriophages" 19ª
edición, 1996, páginas 192-199, que se incorpora
aquí como referencia.
Entre los ejemplos del medio preferido que puede
utilizarse para cultivar los microorganismos viables de bacterias
de ácido láctico se incluye un medio de leche, tal como leche de
vaca, leche de cabra, leche de yegua y similares, leches desnatadas
de aquellas y un medio para bacterias de ácido láctico, tal como
medio BL, medio de caldo de hígado Briggs, medio MRS, medio GAM,
medio TTY y similares.
Las bacterias de ácido láctico se pueden
cultivar a 25 a 45ºC, más preferiblemente 30 a 40ºC, y durante 6 a
30 horas, más preferiblemente 10 a 24 horas. El caldo de cultivo así
obtenido se puede utilizar directamente como composición de
microorganismos viables de bacterias de ácido láctico, almacenándolo
como tal a aproximadamente 5ºC hasta su uso. Alternativamente, los
microorganismos pueden recuperarse por centrifugación, mezclarse con
un agente protector y después liofilizarse al vacío. El polvo de
bacterias resultante se puede almacenar en una cámara fría y oscura
y usarse como composición de microorganismos viables de bacterias de
ácido láctico por suspensión, mezclado o disolución del polvo
cuando se utiliza. El polvo de los microorganismos secos preparado
de esta manera es más preferido debido a que resiste largos períodos
de almacenamiento.
La composición de microorganismos viables de
bacterias de ácido láctico puede contener un vehículo y diluyente.
El vehículo y el diluyente no están limitados en particular, y se
seleccionan entre vehículos y diluyentes farmacéutica o
nutricionalmente aceptables. Además, la composición de
microorganismos viables de bacterias de ácido láctico puede
contener un pienso para ave de corral (ración).
En la presente invención, los microorganismos
pertenecientes a Lactobacillus reuteri y Lactobacillus
johnsonii pueden someterse a un tratamiento de mutación
apropiado, tal como exposición a luz ultravioleta, rayos X o
radiación, y a un tratamiento químico con un compuesto mutágeno (por
ejemplo nitroso guanidina, colorante de acridina). También se
pueden preparar mutantes por inserción, supresión o sustitución de
nucleótidos, así como por mutación espontánea. Los términos
Lactobacillus reuteri y Lactobacillus johnsonii
incluyen estos mutantes.
El término "estadio de crías recién
nacidas" significa el periodo inmediato a la incubación de las
crías (por ejemplo polluelo, pavipollo, pichón o similar),
específicamente un período de 0 a aproximadamente 4 días después de
la incubación. El tiempo de administración de la composición de
microorganismos viables de bacterias de ácido láctico no está
particularmente limitado en tanto que sea dentro de la etapa de
crías recién nacidas; sin embargo, se prefiere administrar la
composición dentro de los 4 días después de la incubación, más
preferiblemente dentro de los 2 días después de la incubación, un
período antes de la colonización de la flora bacteriana intestinal
en el tracto intestinal de la cría recién nacida. El número de veces
de la administración no está particularmente limitado; sin embargo,
se pueden tener generalmente suficientes efectos por una sola
administración. Los efectos obtenidos se hacen más estables y
seguros a medida que aumenta el número de veces de administración.
Sin embargo, tres o más veces de administración no resulta
económica, y los efectos así obtenidos son casi los mismos que con
dos veces de administración.
Aunque no está limitada en particular, la
administración de la composición de microorganismos viables de
bacterias de ácido láctico se puede llevar a cabo por
administración oral. Específicamente, la composición se puede
administrar oralmente por su adición al agua de bebida o similar y
dejar que las crías la ingieran libremente, o se puede pulverizar
desde una posición por encima de las crías empleando un pulverizador
o similar. El método de administración por pulverización es el
preferido debido al hábito de las crías de gorjear mientras abren
sus picos hacia arriba, de manera que la composición de
microorganismos viables que tiene una alta concentración se puede
administrar oralmente en la etapa de crías recién nacidas de manera
fácil y segura.
Al llevar a cabo la administración, la densidad
total de bacterias de ácido láctico en la composición de
microorganismos viables de bacterias de ácido láctico es
preferiblemente de 10^{6} a 10^{10} microorganismos viables
por gramo, más preferiblemente 10^{7} a 10^{9} microorganismos
viables por gramo. Además, la composición de microorganismos
viables de bacterias de ácido láctico se administra preferiblemente
en una cantidad de 1x10^{3} a 1x10^{10} microorganismos
viables por cría, más preferiblemente 1x10^{4} a 1x10^{6} de
microorganismos viables por cría.
En el método de la presente invención, la
composición de microorganismos viables para aves de corral comprende
un microorganismo viable perteneciente a Bacillus subtilis
(citada en adelante como "composición de microorganismos viables
de Bacillus subtilis") se administra en adición a la
administración de la composición de microorganismos viables de
bacterias de ácido láctico antes descrita.
Entre los ejemplos preferidos de la cepa de
Bacillus subtilis se incluyen Bacillus subtilis
C-3102 (No. de Depósito FERM
BP-1096) que ha sido depositada en el Instituto de
Biociencia y Tecnología humana (antiguo nombre: Instituto de
Investigación de Fermentaciones), Agencia de Ciencia Industrial y
Tecnología (Dirección: 1-3, Higashi 1 chome,
Tsukuba-shi (antigua dirección:
Yatabe-machi, Tsukuba gun),
Ibaraki-ken 305-8566 (antiguo
código en vigor:305), Japón) el 28 de junio, 1986, y similares. Las
propiedades bacteriológicas de Bacillus subtilis
C-3102 están ya descritas en la Patente japonesa
registrada No. 2528055,
JP-B-3-79988 y
Patente estadounidense Re. 34.837. Se conocen muchas cepas
diferentes de Bacillus subtilis, tales como las descritas en
"ATCC Bacteria and Bacteriophages", 19ª edición, 1996, páginas
57-63, que se incorpora aquí como referencia.
Al cultivar Bacillus subtilis
C-3102, se puede utilizar como medio de cultivo un
medio acuoso o sólido que contiene materiales, tales como fuentes
de carbono, fuentes de nitrógeno, substancias inorgánicas y
similares, que se utilizan por lo general en el cultivo de
microorganismos como medio de cultivo. Entre los ejemplos de
fuentes de carbono se incluyen aquellas que pueden asimilarse, tales
como glucosa, fructosa, sacarosa, almidón, melazas y similares.
Entre los ejemplos de fuentes de nitrógeno se incluyen peptona,
extracto de carne, hidrolizado de caseína, sulfato de amonio y
similares. Según el caso lo demande, se pueden añadir además, como
componentes inorgánicos, sales de magnesio, potasio, sodio, calcio,
hierro, manganeso y similares, vitaminas, amino ácidos, agentes
antiespuma, agentes tensioactivos y similares. El cultivo se lleva a
cabo preferiblemente aerobiamente. El pH de partida del medio es,
preferiblemente 5 a 9, más preferiblemente 6 a 8; la temperatura de
cultivo es, preferiblemente 20 a 50ºC, más preferiblemente 35 a
40ºC; y el período de cultivo es, preferiblemente de 12 horas a 7
días.
La mezcla de cultivo obtenida de esta manera se
puede utilizar como la composición de microorganismo viable de
Bacillus subtilis como tal o como su producto concentrado o
como células aisladas del mismo, directamente o después de añadir
aditivos tales como cargas y similares. Las cargas no están
limitadas en particular, y entre sus ejemplos se incluyen carbonato
de calcio, salvado de arroz desengrasado, sémola de maíz, harina de
maíz, salvado de trigo, leche en polvo desnatada y similares.
La composición de microorganismo viable de
Bacillus subtilis puede contener un vehículo o diluyente. El
vehículo y diluyente no están limitados en particular, y se
seleccionan entre vehículos y diluyentes farmacéutica o
nutricionalmente aceptables. Además, la composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis puede contener
un pienso de ave.
En la presente invención, el microorganismo
perteneciente a Bacillus subtilis puede ser sometido a un
tratamiento apropiado de mutación, tal como exposición a luz
ultravioleta, rayos X o radiación, y un tratamiento químico con un
compuesto mutágeno (por ejemplo, nitrosoguanidina, colorante de
acridina). Los mutantes se pueden preparar también por inserción,
supresión o sustitución de nucleótidos, así como mutación
espontánea. El término Bacillus subtilis incluye estos
mutantes.
El tiempo de administración de la composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis no está limitado
en particular; sin embargo, para obtener una colonización apropiada
de flora bacteriana intestinal, es preferible administrar la
composición de microorganismos viables de Bacillus subtilis
después de la administración de la composición de microorganismos
viables de bacterias de ácido láctico antes descrita. Asimismo, en
el caso de un método de alimentación en que no se administren
antibióticos, agentes antibacterianos y similares durante un
período de tiempo entre el estadio de crías recién nacidas y la
etapa de terminación, es preferible administrar la composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis durante este
período. En el caso de la alimentación de pollos tomateros, por
ejemplo, se puede administrar durante un período opcional entre el
estadio de crías recién nacidas y la etapa de terminación; sin
embargo cuando se lleva a cabo una alimentación libre de fármacos
solamente durante el estadio de más crecimiento y la etapa de
terminación de manera que los medicamentos no permanecen en el
cuerpo del pollo tomatero en el momento de envío de los pollos para
su venta, la composición de microorganismos viables de Bacillus
subtilis se puede administrar durante el estadio de más
crecimiento y la etapa de terminación.
La administración de la composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis se puede llevar
a cabo por ingestión oral después de su adición al pienso, agua de
bebida o similar.
Por ejemplo, cuando la composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis que contiene
Bacillus subtilis C-3102 se mezcla con
pienso al llevar a cabo la administración, se prefiere que el pienso
tenga una densidad de microorganismos de 10^{5} a 10^{8}
microorganismos viables por gramo en la forma de esporas y/o células
vegetales.
El método de la presente invención para
administración de las composiciones de microorganismos viables para
aves de corral puede aplicarse no solo a pollos tomateros a los que
se alimenta en régimen de crianza intensiva con un gran número de
aves sino también a pollos tomateros a los que se alimenta en otras
condiciones y a otras aves domésticas tales como patos, gansos,
codornices, patos silvestres, avestruces y similares, así como a
pájaros de compañía y similares.
Cuando las composiciones de microorganismos
viables para aves de corral se administran por el método antes
descrito, se puede formar una flora bacteriana intestinal en la que
predominan en los intestinos las bacterias útiles para el
crecimiento de las aves, de manera que las aves crecen sanas. Se
puede obtener varios efectos, tales como inhibición del crecimiento
de bacterias tóxicas, prevención de diarreas, potenciación del
crecimiento, mejora de las relaciones de conversión del alimento y
similares, y se hace posible la alimentación libre de fármaco de
los pollos tomateros. Además, dado que las bacterias útiles dominan
la flora bacteriana intestinal, el ave de corral crece con buena
salud, por lo que se pueden obtener de ella deliciosos huevos, carne
y similares en el caso de aves comestibles debido a la calidad
notablemente mejorada de los productos. Además, la carne, huevos y
similares son seguros y no están contaminados con bacterias tóxicas
que envenenan el alimento.
Habiendo descrito en términos generales esta
invención, se puede comprender aún mejor con referencia a
determinados ejemplos específicos que se dan aquí con propósitos
ilustrativos solamente y que no han de entenderse como limitativos
a menos que se especifique otra cosa.
Ejemplo 1 de
Producción
Se disolvió una porción de 4,5 g de leche
desnatada en 50 g de agua, se pasteurizó a 100ºC durante 10 minutos
y después se enfrió a temperatura ambiente. Se inoculó una lazada de
Lactobacillus reuteri CP-720 en la solución
así preparada y se cultivó estáticamente durante 24 horas a 37ºC
para obtener un primer iniciador (bacterias de ácido láctico:
1x10^{9} microorganismos viables por gramo). A continuación se
inocularon 15 g del primer iniciador en 500 g de leche desnatada
(contenido de sólidos, 9% en peso) que había sido pasteurizado a
90ºC y se cultivó durante 20 horas a 37ºC para obtener un segundo
iniciador. El segundo iniciador contenía 2x10^{8} microorganismos
viables por gramo.
Se colocó en un fermentador de cubeta, un medio
preparado por disolución de 200 g de peptona de caseina, 200 g de
extracto de levadura, 100 g de citrato de sodio, y 200 g de glucosa
en 20 kg de agua y ajuste del pH del medio a 7,0 con solución de
hidróxido sódico 1 N, se pasteurizó a 95ºC durante 15 minutos y se
enfrió entonces a temperatura ambiente. Se inocularon después 3
partes en peso del segundo iniciador antes descrito en 100 partes
en peso del medio y se cultivó estáticamente durante 20 horas a
37ºC.
El caldo de cultivo así obtenido se centrifugó
para recuperar los microorganismos que se liofilizaron
subsiguientemente utilizando, como medio de dispersión, 1 kg de
solución que contenía 10% en peso de leche desnatada y 1% en peso
de glutamato de sodio, que había sido pasteurizado a 90ºC
previamente, obteniendo así 146 g de polvo de microorganismos
viables de Lactobacillus reuteri CP-720. El
polvo de microorganismos viables contenía 7x10^{10}
microorganismos viables por gramo.
Ejemplo 2 de
Producción
Un medio, preparado por disolución de 200 g de
peptona de buey, 60 g de peptona de soja, 100 g de extracto de
levadura, 100 g de acetato de sodio, 40 g de fosfato de dipotasio,
60 g de citrato de diamonio y 400 g de glucosa en 20 kg de agua y
ajustando el pH del medio a 7,0 con solución de hidróxido de sodio 1
N, se colocó en un fermentador de cubeta, se pasteurizó a 95ºC
durante 15 minutos y se enfrió después a temperatura ambiente. Se
inocularon después 500 g de un segundo iniciador de Lactobacillus
johnsonii CP-721 que había sido previamente
pre-cultivado por el mismo procedimiento que el
Ejemplo 1 de Producción en el medio para realizar un cultivo
estacionario de 18 horas a 35ºC.
El caldo de cultivo así obtenido se centrifugó
para recoger los microorganismos que se liofilizaron
subsiguientemente utilizando como medio de dispersión una solución
que contenía 10% en peso de leche desnatada y 1% en peso de
glutamato de sodio, que había sido pasteurizado a 90ºC previamente,
obteniendo con ello 141 g de polvo de microorganismos viables de
Lactobacillus johnsonii CP-721. El polvo de
microorganismos contenía 6,5x10^{10} microorganismos viables por
gramo.
Ejemplo 3 de
Producción
Un segundo iniciador de Lactobacillus
reuteri CP-722 preparado por el mismo
procedimiento del Ejemplo de Producción 1 se inoculó en un medio
preparado y pasteurizado de la misma manera que la descrita en el
Ejemplo 1 de Producción que tenía la misma composición y pesos de
los componentes, y se cultivó estáticamente durante 20 horas a
37ºC. El caldo de cultivo así obtenido se centrifugó para recuperar
las células que fueron subsiguientemente liofilizadas, utilizando
como medio de dispersión, una solución que contenía 10% en peso de
leche desnatada y 1% en peso de glutamato de sodio, que había sido
pasteurizada a 95ºC previamente, obteniéndose con ello 151 g de
polvo de microorganismos viables de Lactobacillus reuteri
CP-722. El polvo de microorganismos viables
contenía 6,8x10^{10} microorganismos viables por gramo.
Ejemplo 4 de
Producción
Los polvos de microorganismos viables obtenidos
en los Ejemplos de Producción 1 a 3 se combinaron en porciones de 1
parte y se mezclaron cuidadosamente con 7 partes de dextrina para
obtener una composición de microorganismos viables de bacterias de
ácido láctico para aves de corral que contenía tres cepas de
Lactobacillus. La composición de microorganismos viables
contenía 2,0x10^{10} microorganismos viables por gramo.
Ejemplo de Producción
5
Un medio, preparado por disolución de 200 g de
peptona de soja, 10 g de fosfato de dipotasio y 200 g de melazas en
10 kg de agua y ajuste del pH del medio a 7,5 con solución de
hidróxido de sodio 1 N, se colocó en un fermentador de cubeta, se
pasteurizó a 95ºC durante 60 minutos y se enfrió entonces a 37ºC. Se
inocularon después 100 g de caldo de cultivo de Bacillus
subtilis C-3102, que habían sido pre.cultivados
por anticipado, en el medio y se agitó aerobiamente durante 40
horas a 37ºC. El caldo de cultivo así obtenido se centrifugó para
recuperar el microorganismo que se mezcló subsiguientemente con el
mismo peso de leche desnatada y se liofilizó al vacío, obteniéndose
con ello 750 g de la composición de microorganismos viables de
Bacillus subtilis para aves de corral. La composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis para aves de
corral contenía 1,2x10^{10} microorganismos viables por
gramo.
El ensayo se llevó a cabo utilizando Chunky
(Nombre de marca, estirpe comercial). Se les proporcionó por
pulverización a los polluelos (0 días después de incubación),
colocados en una jaula de pollos, 12 g de la composición de
microorganismos viables de bacterias de ácido láctico para aves de
corral preparada en el Ejemplo 4 de Producción 4 (número total de
bacterias de ácido láctico: 2,0x10^{10} microorganismos viables
por gramo) que habían sido suspendidos uniformemente en 4 kg de
agua pura. Como pienso de provisión se utilizaron "Pienso de
pre-iniciación para pollos (Hina Ezuke)" para
uso como pienso iniciador (que contenía antibiótico) y "AT de
iniciación (Zenki AT)" para uso el estadio de iniciación (que
contenía antibiótico) en la etapa de alimentación de comienzo (de 0
a 5 días después de incubación) y estadio de de iniciación (de 5 a
21 días después de la incubación), respectivamente. Se empleó
"Brogoal A" (que no contenía antibióticos) para uso en la etapa
de terminación y que había sido mezclado con 9x10^{5}
células/gramo de la composición de microorganismos viables de
Bacillus subtilis para aves de corral preparada en el
Ejemplo 5 de Producción, durante el período del estadio de mayor
crecimiento (de 21 días a 43 días tras la incubación) a la etapa de
terminación (de 43 días a l día de envío para venta) (todos estos
artículos de piensos comerciales estaban fabricados por Chubu
Shiryo). Se llevó a cabo otro manejo del pienso de acuerdo con el
método de alimentación de los pollos que es el realizado
convencionalmente en las granjas de aves de corral. Los resultados
del ensayo se muestran en la Tabla 2.
Ejemplo 1
Comparativo
La alimentación se llevó a cabo de la misma
manera que en el Ejemplo 1, excepto en que no se realizó
administración de la composición de microorganismos viables de
bacterias lácticas, se utilizó un "Producto del mayor crecimiento
AT (Kohki AT)" para uso en el estadio de mayor crecimiento (que
contenía antibióticos) (fabricado por Chubu Shiryo, Co.) como
pienso en el stadio de mayor crecimiento en lugar del "Brogoal
A" para uso de terminación, y no se proporcionó la composición
de microorganismos viables de Bacillus subtilis a lo largo de
las etapas completas. Los resultados se muestran en la Tabla 2. En
relación con esto, el "producto del mayor crecimiento AT (Kohki
AT)" es un artículo de un pienso que tiene la misma composición
que el "Brogoal A" excepto en los antibióticos.
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
* \+ Tasa de crianza (el número de aves enviadas para venta y el
número de aves de la partida) x 100\cr ** \+
\begin{minipage}[t]{145mm}Relación de conversión del alimento:
cantidad total del pienso ingerido durante la alimentación (g)/total
de ganancia de peso corporal (g) x 100\end{minipage} \cr ***
\+ \begin{minipage}[t]{145mm}Puntuación de la producción: (peso
corporal medio x tasa de crianza/relación de conversión del
alimento x edad en días cuando se envían para venta) x
100\end{minipage} \cr}
El valor de la ganancia media de peso corporal
en el Ejemplo 1 fue menor que el del Ejemplo 1 Comparativo en un
factor de aproximadamente 1%, que se supuso debido a la calidad de
los polluelos ensayados. Es decir, el peso corporal de los
polluelos era el normal (41,9 g/pollo) en el Ejemplo Comparativo 1
pero era más cercano al de los polluelos jóvenes (38,4 g/pollo) del
Ejemplo 1, de manera que su crecimiento se hizo inferior. Dado que
otros resultados del Ejemplo 1 eran superiores a los del Ejemplo
Comparativo 1, la productividad quedaba mejorada.
El ensayo se llevó a cabo utilizando Chunky
(nombre de marca, estirpe comercial). Los polluelos (el día 0
después de la incubación), colocados en una jaula para pollos,
recibieron, por pulverizado, 12 g de la composición de
microorganismos viables de bacterias de ácido láctico para aves
preparada en el Ejemplo 4 de Producción (número total de bacterias
de ácido láctico; 2,0 x 10^{10} microorganismos viables por gramo)
que había sido suspendida uniformemente en 4 kg de agua pura. Como
pienso de provisión, se utilizó el "Chick Prestarter Feed"
para uso como pienso iniciador en la etapa de alimentación de
comienzo (de 0 a 5 días tras la incubación). El "AT de iniciación
(Zenki AT)" para uso en la etapa iniciación del que se habían
eliminado los antibióticos y el "Brogoal A" para uso de
terminación, que había sido mezclado con 9x10^{5} microorganismos
viables por gramo de la composición de microorganismos viables de
Bacillus subtilis para aves preparada en el Ejemplo 5 de
Producción, se utilizaron en la etapa de iniciación (de 5 a 21 días
después de la incubación) y durante el período de la etapa de mayor
crecimiento (de 21 días a 43 días después de la incubación) a la
etapa de terminación (de 43 días a la etapa de envío para venta),
respectivamente. Se llevó a cabo otro manejo de la alimentación
siguiendo el método de alimentación de pollos llevado a cabo
convencionalmente en las granjas avícolas. Los resultados del
ensayo se muestran en la Tabla 3.
Ejemplo 2
Comparativo
Se llevó a cabo la alimentación de la misma
manera que la descrita en el Ejemplo 2, excepto en que el "AT de
iniciación (Zenki AT)" para utilizarlo en la etapa inicial y el
"AT de mayor crecimiento (Kohki AT)" para etapa de mayor
crecimiento se utilizaron en la etapa inicial y en la etapa de mayor
crecimiento respectivamente, y no se proporcionó la composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis a lo largo de
las etapas completas. Los resultados se muestran en la Tabla 3.
\vskip1.000000\baselineskip
Dado que se utilizó pienso libre de fármaco en
estadio de iniciación y después de la iniciación en el Ejemplo 2,
mientras que en el Ejemplo 2 Comparativo se utilizó el pienso que
contenía fármaco, la ganancia de peso corporal en el primer caso
era ligeramente inferior al valor de 51,6 g/día.pollo, pero la tasa
de crianza era del 97%, lo cual es un dato excelente y la
puntuación de producción era 244, mostrándose así resultados de
una producción económica.
El ensayo se llevó a cabo utilizando Chunky
(nombre de marca, estirpe comercial). Se les proporcionó por
pulverización a los polluelos (día 0 después de la incubación),
colocados en una jaula para pollos, 40 g de la composición de
microorganismos viables de bacterias de ácido láctico para aves de
corral preparada en el Ejemplo 4 de Producción (número total de
bacterias de ácido láctico: 2x10^{10} microorganismos viables por
gramo) que habían sido suspendidos uniformemente en 4 kg de agua
pura. Como alimentación de provisión se emplearon el "AT de
iniciación (Zenki AT)", de donde se habían eliminado los
antibióticos, para la etapa de iniciación y el "Brogoal A"
para uso de terminación, que había sido mezclado con 9x10^{5}
microorganismos viables por gramo de la composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis para aves de
corral preparado en el Ejemplo 5 de Producción, durante el periodo
desde el estadio de alimentación del comienzo a la etapa de
iniciación (de 0 a 21 días después de la incubación) y durante el
período de la etapa de mayor crecimiento a la etapa de terminación
(desde los 21 días al día del envío para venta), respectivamente.
Se realizó otro manejo de la alimentación de acuerdo con el método
de alimentación convencional de pollos en las granjas avícolas. Los
resultados del ensayo se muestran en la Tabla 4.
Ejemplo 3
Comparativo
Se llevó a cabo la alimentación de la misma
manera que la descrita en el Ejemplo 3, excepto en que se utilizó
"AT de iniciación (Zenki AT)" para uso en el estado de
iniciación, "El AT de mayor crecimiento (Kohki AT)" para la
estadio de mayor crecimiento y el "Brogoal A" para uso de
terminación, respectivamente, como pienso durante el período desde
el estadio de alimentación del comienzo a la etapa de iniciación, en
la etapa de mayor crecimiento (de 21 a 43 días después de la
incubación) y en la etapa de terminación (de 43 días al día de
envío para la venta), respectivamente y no se proporcionó la
composición de microorganismos viables de Bacillus subtilis
a lo largo de las etapas completas. Los resultados se muestran en
la Tabla 4.
El ensayo del Ejemplo 3 no se llevó a cabo al
mismo tiempo que el ensayo del Ejemplo 3 Comparativo sino después
de completarse la alimentación del Ejemplo 3 Comparativo, y, dado
que hubo un golpe de frío durante el período de alimentación del
Ejemplo 3, el crecimiento final y la tasa de crianza en el Ejemplo 3
Comparativo fueron influenciados por la ola de frío. Sin embargo,
aunque la alimentación se llevó a cabo sin administración de
antibióticos y agentes antibacterianos a través del período
completo, los resultados de producción del Ejemplo 3 eran idénticos
a los del Ejemplo 3 Comparativo.
Además, no se realizaron los ensayos
comparativos correspondientes a los Ejemplos 1 a 3 con una
alimentación llevada a cabo sin fármacos y sin administrar la
composición de microorganismos viables de bacterias de ácido
láctico para aves y la composición de microorganismos viables de
Bacillus subtilis para aves de corral, porque no se puede
obtener un crecimiento normal en estas condiciones.
En el Ejemplo 3 y Ejemplo 3 Comparativo, se
recogieron excrementos recientes de los pollos el día antes de su
envío para venta y, se emplearon los excrementos de tres aves como
muestra, se midieron el grupo de bacterias coliformes y bacterias
del género Salmonella en los excrementos. Los resultados se
muestran en la Tabla 5. En este caso, el serotipo de cada bacteria
del género Salmonella era 07.
En comparación con el Ejemplo Comparativo 3, el
grupo de coliformes decreció significativamente en el Ejemplo 3, y
la relación de detección de bacterias del género Salmonella
se redujo también significativamente.
Se hizo una comparación sobre la sensación al
paladar de la carne de los pollos criados en el Ejemplo 3 y Ejemplo
3 Comparativo. Dado que no se puede llevar a cabo un ensayo
sensorial preciso cuando la propia carne está sometida a ensayo
debido a varios factores de tratamiento, se preparó una sopa de
pollo completo y se sometió a ensayo sensorial. Se utilizó en el
ensayo la parte comestible que queda después de sacrificio, sangrado
y subsiguiente eliminación de plumas, cabezas, patas y órganos
(gutting III), como pollo completo y se mezcló una parte en peso de
la muestra con 4 partes en peso de agua y un 1,8% de sal y se hirvió
durante 2 horas. Después de filtrar la mezcla a través de algodón
blanqueador, se preparó el filtrado (sopa) y se ajustó la
concentración de la sopa a tres veces el peso del pollo. Las
muestras de sopa así obtenidas se sometieron a ensayo sensorial en
el que 38 panelistas pudieron seleccionar la muestra de sabor más
delicioso. Los resultados se muestran en la Tabla 6.
En comparación con el pollo del Ejemplo 3
Comparativo, el pollo del Ejemplo 3 fue seleccionado por la
sensación que producía al paladar por un gran número de panelistas,
confirmando así la naturaleza deliciosa del pollo producido con un
alimento libre de fármacos.
En una evaluación del sabor llevada a cabo al
mismo tiempo en conexión con esto, se obtuvieron buenas evaluaciones
para la sopa de pollo del Ejemplo 3, estadísticamente
significativas con un nivel de significación de 1%, sobre cada uno
de los puntos: (1) preferencia, (2) riqueza del sabor y (3) sabor
adecuado.
\newpage
Ejemplo 1 de
referencia
El ensayo se llevó a cabo utilizando aves Chunky
de un distrito donde se alimentaba a los pollos tomateros en gran
número. Como pienso de provisión se utilizaron "Migas de
iniciación Gold para pollos tomateros (Broiler Gold Zenki
Crumble)" de las que se habían eliminado los antibióticos y "
Producto para última etapa para pollos (Broiler Shiage)" (que no
contenía antibióticos ni similares) (ambos fabricados por Shikoku
Haigo Shiryo, Co.), cada uno de los cuales había sido mezclado con
1x10^{6} microorganismos viables por gramo de composición de
microorganismos viables de Bacillus subtilis para aves de
corral preparada en el Ejemplo 5 de Producción y enriquecida con
vitaminas y minerales, durante el período desde la etapa de
alimentación de comienzo a la etapa de iniciación (de 0 a 21 días
después de la incubación) y durante el período de la etapa de mayor
crecimiento a la etapa de acabado (de 21 días después de la
incubación al día del envío para venta), respectivamente. Se llevó
a cabo otro manejo del alimento de acuerdo con el método
convencional de alimentación de pollos llevado a cabo en granjas
avícolas. Los resultados del ensayo se muestran en la Tabla 7.
Ejemplo 4
Comparativo
La alimentación se llevó a cabo de la misma
manera que en Ejemplo 1 de referencia, excepto en que se utilizaron
"Migas de iniciación Gold para pollos" "(Broiler Gold Zenki
Crumble)" (que contenía antibióticos), "Broiler S" que
contenía antibióticos y "Broiler Finisher (Broiler Shiage)"
cada uno de ellos fabricado por Shikoku Haigo Shiryo, Co.) como
pienso durante el período de la etapa de alimentación de comienzo a
la etapa de iniciación, en la etapa de mayor crecimiento (de 21 a
32 días después de la incubación al día del envío para venta), y en
la etapa de terminación (de 32 días después de la incubación al día
de envío para venta), respectivamente, y no se proporcionó la
composición de microorganismos viables de Bacillus subtilis.
Los resultados se muestran en la Tabla 7.
Se obtuvo una tasa de crianza más alta en el
Ejemplo 1 de Referencia que en el Ejemplo 4 Comparativo, pero la
ganancia en peso corporal en la etapa de iniciación de la
alimentación se retrasó y el retraso dejó una huella hasta el
final, de manera que la ganancia del peso corporal fue baja a través
del período de alimentación como resultado de ello y no se alcanzó
un nivel comercialmente aceptable.
Tampoco se realizó el ensayo de crianza libre de
fármaco proporcionando solamente la composición de microorganismos
viables de bacterias de ácido láctico para aves de corral sin
administración de la composición de microorganismos viables de
Bacillus subtilis para aves de corral, debido a que este
ensayo solo puede llevarse a cabo en un lugar donde no exista
contaminación ambiental tal como en una instalación experimental en
condiciones sanitarias completas pero no en el campo de granjas
avícolas de explotación intensiva.
Dado que la administración de una composición de
microorganismos viables para aves de corral que comprende bacterias
de ácido láctico específicas viables se lleva a cabo en una etapa
específica en combinación con la administración de una composición
de microorganismos viables para aves de corral que comprende
Bacillus subtilis viables, el método de la presente
invención para la administración de las composiciones de
microorganismos viables para aves puede ejercer varios efectos,
tales como inhibición del crecimiento de bacterias tóxicas,
prevención de diarreas, potenciación del crecimiento, mejora de las
relaciones de conversión del alimento y similares, haciendo posible
también la alimentación libre de fármacos para los pollos con alta
productividad y, particularmente en el caso de pollos comestibles,
producción de huevos y carne deliciosos y seguros con alta
productividad. Por consiguiente, el método de la presente invención
para la administración de composiciones de microorganismos viables
para aves es útil para la alimentación de aves comestibles, tales
como pollos, particularmente pollos tomateros, y similares.
Claims (16)
1. Utilización de una composición de
microorganismos viables para la preparación de una composición
farmacéutica para inhibición del crecimiento de bacterias tóxicas,
prevención de diarrea y/o potenciación del crecimiento de aves de
corral, donde se administra a las aves una primera composición que
comprende bacterias viables pertenecientes a Lactobacillus
reuteri y Lactobacillus johnsonii en la etapa de crias
recién nacidas y donde se administra a las citadas aves una segunda
composición que comprende un microorganismo viable perteneciente a
Bacillus subtilis.
2. Una utilización según la reivindicación
1, donde la citada primera composición se administra dentro de los
cuatro días de haber sido incubadas las aves
3. La utilización según la reivindicación
1, donde la citada primera composición se administra dentro de los
2 días después de la incubación de la citadas aves.
4. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3, donde el citado Bacillus reuteri es
al menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en
- (a)
- Lactobacillus reuteri CP-720, No. de Depósito FERM BP-6332, y un mutante del mismo,
- (b)
- Lactobacillus reuteri CP-722, No. de Depósito FERM BP-6334, y un mutante del mismo.
5. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, donde el citado Lactobacillus
johnsonii es Lactobacillus johnsonii
CP-721, No. de Depósito FERM
BP-6333, o un mutante del mismo.
6. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5, donde la citada primera composición y/o la
citada segunda composición comprende además un vehículo o
diluyente.
7. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, donde la citada primera composición y/o la
citada segunda composición comprende además un pienso para aves de
corral.
8. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, donde la citada primera composición y/o la
citada segunda composición se administra por vía oral.
9. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 7, donde la citada primera composición se
administra por pulverización.
10. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9, donde la citada primera composición
comprende de 10^{6} a 10^{10} de las citadas bacterias por
gramo.
11. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 10, donde se administran a las aves de corral
1x10^{3} a 1x10^{10} de las citadas.
12. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11, donde la citada primera composición se
administra solo una vez o dos veces.
13. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 12 donde el citado Bacillus subtilis es
Bacillus subtilis C-3102, No. de Depósito
FERM BP-1096, o un mutante del mismo.
14. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 13, donde la citada segunda composición
comprende de 10^{5} a 10^{8} del citado Bacillus subtilis
viable por gramo.
15. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 14, donde la citada segunda composición se
administra tras la administración de la citada primera
composición.
16. La utilización según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 15, donde la citada ave es un pollo, pato,
ganso, codorniz, pato salvaje, avestruz o ave de compañía.
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