KR102501558B1 - Shp2의 활성을 억제하기 위한 n-아자스피로시클로알칸 치환된 n-헤테로아릴 화합물 및 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 SHP2의 활성을 억제할 수 있는 하기 화학식 I의 화합물에 관한 것이며, 식 중 p, q, Y1, Y2, R1, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b, R7 및 R8은 발명의 내용란에 정의된 바와 같다. 본 발명은 추가로, 본 발명의 화합물의 제조 방법, 이러한 화합물을 포함하는 제약 제제, 및 SHP2의 이상 활성과 연관된 질환 또는 장애의 관리에서의 이러한 화합물 및 조성물의 사용 방법을 제공한다.
<화학식 I>

Description

SHP2의 활성을 억제하기 위한 N-아자스피로시클로알칸 치환된 N-헤테로아릴 화합물 및 조성물 {N-AZASPIROCYCLOALKANE SUBSTITUTED N-HETEROARYL COMPOUNDS AND COMPOSITIONS FOR INHIBITING THE ACTIVITY OF SHP2}
본 발명은 SHP2의 활성을 억제할 수 있는 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로, 본 발명의 화합물의 제조 방법, 이러한 화합물을 포함하는 제약 제제, 및 SHP2의 이상 활성과 연관된 질환 또는 장애의 관리에서의 이러한 화합물 및 조성물의 사용 방법을 제공한다.
Src 상동성-2 포스파타제 (SHP2)는 증식, 분화, 세포 주기 유지 및 이동을 포함한 다중 세포 기능에 기여하는, PTPN11 유전자에 의해 코딩된 비-수용체 단백질 티로신 포스파타제이다. SHP2는 Ras-미토겐-활성화된 단백질 키나제, JAK-STAT 또는 포스포이노시톨 3-키나제-AKT 경로를 통한 신호전달에 수반된다.
SHP2는 2개의 N-말단 Src 상동성 2 도메인 (N-SH2 및 C-SH2), 촉매 도메인 (PTP) 및 C-말단 꼬리를 갖는다. 2개의 SH2 도메인은 SHP2의 세포하 국재화 및 기능적 조절을 제어한다. 분자는 N-SH2 및 PTP 도메인 둘 다로부터의 잔기를 수반하는 결합 네트워크에 의해 안정화된 불활성의 자기-억제된 입체형태로 존재한다. 예를 들어 시토카인 또는 성장 인자에 의한 자극은 촉매 부위의 노출로 이어져 SHP2의 효소적 활성화를 유발한다.
PTPN11 유전자 및 이후 SHP2에서의 돌연변이는 여러 인간 질환, 예컨대 누난 증후군, 레오파드 증후군, 소아 골수단핵구성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 급성 골수성 백혈병, 및 유방암, 폐암 및 결장암에서 확인되었다. 따라서, SHP2는 다양한 질환의 치료를 위한 신규 요법의 개발을 위한 고도로 매력적인 표적을 나타낸다. 본 발명의 화합물은 SHP2의 활성을 억제하는 소분자에 대한 필요성을 충족시킨다.
한 측면에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물을 제공한다:
<화학식 I>
Figure 112016077997066-pct00001
상기 식에서, p는 0 및 1로부터 선택되고; q는 0 및 1로부터 선택되고; Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고; Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고; R1은 -XR1a이고; 여기서 R1a는 C6-10아릴, C3-8시클로알킬, C3-8시클로알케닐, 및 N, C(O), O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자 또는 기를 함유하는 5-9원 헤테로아릴 기로부터 선택되고; 여기서 R1a의 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 할로, 아미노, 히드록시, N3, C1-4알킬, 디메틸-아미노, 히드록시-치환된-C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, 아미노-치환된-C1-4알킬, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 5개의 R9 기로 치환되고; X는 결합, S(O)m, O, C(O), COR11, CR10aR10b, NR11로부터 선택되고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 각각의 R10a 및 R10b는 독립적으로 할로 및 C1-4알킬로부터 선택되고; R11은 수소 및 C1-4알킬로부터 선택되고; R2a 및 R2b는 독립적으로 수소, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; R3a 및 R3b는 독립적으로 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; R4a 및 R4b는 독립적으로 수소, 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; R5a 및 R5b는 독립적으로 수소, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; 여기서 R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b 및 R7로부터 선택된 임의의 2개의 기는 5 내지 6원 불포화 또는 부분 포화 고리를 형성할 수 있고; R6은 수소, 할로, 시아노, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노-카르보닐, 할로-치환된 C1-4알킬, 할로-치환된 C1-4알콕시, 히드록시-치환된 C1-4알킬, 아미노-치환된 C1-4알킬, -S(O)1-2R6a, -C(S)R6a, -C(O)NR6aR6b, -C(NH)NR6aR6b 및 -NR6aC(O)R6b로부터 선택되고; 여기서 R6a 및 R6b는 독립적으로 수소 및 C1-4알킬로부터 선택되고; R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, C(O), O 및 S(O)m으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자 또는 기를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 히드록시, 메톡시, 할로, 메틸, 메틸-아미노 및 이소부티릴옥시로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 기로 치환될 수 있다.
제2 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 N-옥시드 유도체, 호변이성질체, 개별 이성질체 및 이성질체의 혼합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 1종 이상의 적합한 부형제와 혼합하여 함유하는 제약 조성물을 제공한다.
제3 측면에서, 본 발명은 SHP2 활성의 조정이 질환의 병리상태 및/또는 증상을 예방, 억제 또는 개선시킬 수 있는 동물에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 N-옥시드 유도체, 개별 이성질체 및 이성질체의 혼합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 동물에서 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
제4 측면에서, 본 발명은 SHP2 활성의 조정이 질환의 병리상태 및/또는 증상을 예방, 억제 또는 개선시킬 수 있는 동물에게 치료 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 N-옥시드 유도체, 개별 이성질체 및 이성질체 혼합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 항암 치료제와 동시 또는 순차 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 상기 동물에서 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
제5 측면에서, 본 발명은 SHP2 활성이 질환의 병리상태 및/또는 증상의 원인이 되는 동물에서 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다.
제6 측면에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 그의 N-옥시드 유도체, 전구약물 유도체, 보호된 유도체, 개별 이성질체 및 이성질체의 혼합물 및 그의 제약상 허용되는 염을 제조하는 방법을 제공한다.
정의
상기 및 하기 사용된 일반적 용어는, 달리 나타내지 않는 한, 바람직하게는 본 개시내용의 문맥 내에서 하기 의미를 가지며, 보다 일반적 용어가 사용되는 경우에 어디에서나 서로 독립적으로 보다 구체적인 정의에 의해 대체되거나 유지될 수 있으며, 따라서 본 발명의 보다 상세한 실시양태를 정의할 수 있다:
"알킬"은 20개 이하의 탄소 원자를 갖는 완전 포화 분지형 또는 비분지형 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 달리 제공되지 않는 한, 알킬은 1 내지 7개의 탄소 원자 (C1-7알킬) 또는 1 내지 4개의 탄소 원자 (C1-4알킬)를 갖는 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 알킬의 대표적인 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 3-메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 치환된 알킬은 할로겐, 히드록시 또는 알콕시 기로부터 선택된 1개 이상, 예컨대 1, 2 또는 3개의 치환기를 함유하는 알킬 기이다. 할로-치환된-알킬 및 할로-치환된-알콕시는 직쇄형 또는 분지형일 수 있고, 메톡시, 에톡시, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 펜타플루오로에틸, 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시 등을 포함한다.
"아릴"은 6 내지 10개의 고리 탄소 원자를 함유하는 모노시클릭 또는 융합된 비시클릭 방향족 고리 조립체를 의미한다. 예를 들어, 아릴은 페닐 또는 나프틸, 바람직하게는 페닐일 수 있다. "아릴렌"은 아릴 기로부터 유래된 2가 라디칼을 의미한다.
"헤테로아릴"은 고리원 중 1개 이상이 헤테로원자인 것으로 상기 아릴에 대해 정의된 바와 같다. 예를 들어, C5-10헤테로아릴은 탄소 원자에 의해 나타내어진 바와 같이 최소 5개의 구성원이지만, 이들 탄소 원자는 헤테로원자에 의해 대체될 수 있다. 따라서, C5-10헤테로아릴은 피리딜, 인돌릴, 인다졸릴, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 벤조푸라닐, 벤조피라닐, 벤조티오피라닐, 벤조[1,3]디옥솔, 이미다졸릴, 벤조-이미다졸릴, 피리미디닐, 푸라닐, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 피라졸릴, 티에닐 등을 포함한다.
"시클로알킬"은 나타낸 수의 고리 원자를 함유하는 포화 또는 부분 불포화, 모노시클릭, 융합된 비시클릭 또는 가교된 폴리시클릭 고리 조립체를 의미한다. 예를 들어, C3-10시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헥세닐 등을 포함한다.
"헤테로시클로알킬"은, 본 출원에 정의된 바와 같으나, 단 나타낸 고리 탄소 중 1개 이상이 -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O)- 또는 -S(O)2- (여기서 R은 수소, C1-4알킬 또는 질소 보호기임)로부터 선택된 모이어티에 의해 대체된 시클로알킬을 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 화합물을 기재하기 위해 본 출원에 사용된 바와 같은 C3-8헤테로시클로알킬은 모르폴리노, 피롤리디닐, 피롤리디닐-2-온, 피페라지닐, 피페리디닐, 피페리디닐온, 1,4-디옥사-8-아자-스피로[4.5]데스-8-일, 티오모르폴리노, 술파노모르폴리노, 술포노모르폴리노 등을 포함한다.
"할로겐" (또는 할로)은 바람직하게는 클로로 또는 플루오로를 나타내지만, 또한 브로모 또는 아이오도일 수 있다.
"SHP2"는 "Src 상동성-2 포스파타제"를 의미하고, 또한 SH-PTP2, SH-PTP3, Syp, PTP1D, PTP2C, SAP-2 또는 PTPN11로도 알려져 있다.
"PTPN11 돌연변이"를 보유하는 암은 다음을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: N58Y; D61Y, V; E69K; A72V, T, D; E76G, Q, K (ALL); G60A; D61Y; E69V; F71K; A72V; T73I; E76G, K; R289G; G503V (AML); G60R, D61Y, V, N; Y62D; E69K; A72T, V; T73I; E76K, V, G, A, Q; E139D; G503A, R; Q506P (JMML); G60V; D61V; E69K; F71L; A72V; E76A (MDS); Y63C (CMML); Y62C; E69K; T507K (신경모세포종); V46L; N58S; E76V (폐암); R138Q (흑색종); E76G (결장암).
화학식 I의 화합물은 상이한 이성질체 형태를 가질 수 있다. 예를 들어, 임의의 비대칭 탄소 원자가 (R)-, (S)- 또는 (R,S)-배위, 바람직하게는 (R)- 또는 (S)-배위로 존재할 수 있다. 이중 결합 또는 특히 고리에서의 치환기는 시스- (= Z-) 또는 트랜스 (= E-) 형태로 존재할 수 있다. 따라서, 화합물은 이성질체 혼합물로서 또는 바람직하게는 순수한 이성질체로서, 바람직하게는 순수한 부분입체이성질체 또는 순수한 거울상이성질체로서 존재할 수 있다.
복수 형태 (예를 들어, 화합물들, 염들)가 사용되는 경우에, 이는 단수형 (예를 들어, 단일 화합물, 단일 염)을 포함한다. "화합물(a compound)"은 (예를 들어, 제약 제제에서) 화학식 I의 하나 초과의 화합물 (또는 그의 염)이 존재하는 것을 배제하지 않으며, "a"는 단지 부정관사를 나타낸다. 따라서 "a"는 바람직하게는 "하나 이상", 덜 바람직하게는 대안적으로 "하나"로서 간주될 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 화합물들이 언급되는 경우에 어디에서나, 이는 이러한 화합물의 N-옥시드 및/또는 그의 호변이성질체를 포함하는 것으로 추가로 또한 의도된다.
용어 "및/또는 그의 N-옥시드, 그의 호변이성질체 및/또는 그의 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염"은 특히 화학식 I의 화합물이 그 자체로서 또는 그의 N-옥시드와의 혼합물로, 호변이성질체로서 (예를 들어, 케토-엔올, 락탐-락팀, 아미드-이미드산 또는 엔아민-이민 호변이성질현상으로 인함) 또는 그의 호변이성질체와의 (예를 들어, 등가 반응 야기된) 혼합물로, 또는 화학식 I의 화합물의 염 및/또는 임의의 이들 형태 또는 이러한 형태 중 2종 이상의 혼합물로서 존재할 수 있음을 의미한다.
하기 화합물의 경우에, 피라진 고리에 부착된 NH2 기가 효력에 대해 중요하다. 결정학적 구조의 분석은 SHP2 잔기 E250의 백본 카르보닐 기와의 분자내 상호작용에서 NH2 기를 제시한다:
Figure 112016077997066-pct00002
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 모든 적합한 동위원소 변형을 포함한다. 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 동위원소 변형은, 적어도 1개의 원자가 동일한 원자 번호를 갖지만 자연에서 통상적으로 발견되는 원자 질량과 상이한 원자 질량을 갖는 원자에 의해 대체된 것으로 정의된다. 본 발명의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는, 수소, 탄소, 질소 및 산소의 동위원소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 35S, 18F, 36Cl 및 123I를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염의 특정 동위원소 변형, 예를 들어 3H 또는 14C와 같은 방사성 동위원소가 혼입된 것은, 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 특정한 예에서, 3H 및 14C 동위원소는 그의 제조의 용이성 및 검출감도를 위해 사용될 수 있다. 다른 예에서, 2H와 같은 동위원소로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예컨대 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건으로 인한 특정 치료 이점을 제공할 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 동위원소 변형은 일반적으로 적합한 시약의 적절한 동위원소 변형을 사용하여 통상적인 절차에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물은 하기 제시된 바와 같은 중수소화 형태로 존재할 수 있다:
Figure 112016077997066-pct00003
바람직한 실시양태의 설명
본 발명은 SHP2의 활성을 억제할 수 있는 화합물에 관한 것이다. 본 발명의 한 측면에서, 화학식 I의 화합물과 관련하여, -XR1a는 -SR1a이고, 하기로부터 선택된다:
Figure 112016077997066-pct00004
본 발명의 또 다른 측면에서, -XR1a는 -SR1a이고, 하기로부터 선택된다:
Figure 112016077997066-pct00005
본 발명의 또 다른 측면에서, 화학식 I의 화합물과 관련하여,
Figure 112016077997066-pct00006
는 하기로부터 선택된다:
Figure 112016077997066-pct00007
또 다른 측면에서, 화학식 I의 화합물과 관련하여, 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
<화학식 Ia>
Figure 112016077997066-pct00008
상기 식에서, n은 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고; p는 0 및 1로부터 선택되고; q는 0 및 1로부터 선택되고; Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고; Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고; Y4는 독립적으로 N, C(O) 및 CR9로부터 선택되고; 여기서 단지 1개의 Y4는 C(O)이고; R6은 수소, 할로, 메틸 및 아미노-카르보닐로부터 선택되고; R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환될 수 있고; R9는 할로, 아미노, 디메틸-아미노, 히드록시, N3, C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, C1-4알콕시, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 선택되고; R10은 수소, 페닐 및 나프틸로부터 선택되고; 여기서 R10의 상기 페닐은 비치환되거나 또는 메톡시로 치환된다.
본 발명의 추가 측면에서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O, C(O) 및 S(O)m으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자 또는 기를 임의로 함유할 수 있는 5원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노, 히드록시, 메톡시, 할로, 메틸, 메틸-아미노 및 이소부티릴옥시로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 기로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00009
Figure 112016077997066-pct00010
Figure 112016077997066-pct00011
Figure 112016077997066-pct00012
Figure 112016077997066-pct00013
Figure 112016077997066-pct00014
Figure 112016077997066-pct00015
Figure 112016077997066-pct00016
Figure 112016077997066-pct00017
Figure 112016077997066-pct00018
본 발명의 또 다른 측면에서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 6원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00019
본 발명의 또 다른 측면에서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 4원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00020
본 발명의 또 다른 측면에서, p 및 q가 둘 다 0인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00021
본 발명의 또 다른 측면에서, 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
<화학식 II>
Figure 112016077997066-pct00022
상기 식에서, p는 0 및 1로부터 선택되고; q는 0 및 1로부터 선택되고; Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고; Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고; R1은 C6-10아릴, C3-8시클로알킬, C3-8시클로알케닐, 및 N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 5-9원 헤테로아릴 기로부터 선택되고; 여기서 R1a의 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 할로, 아미노, 히드록시, N3, C1-4알킬, 히드록시-치환된-C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, 아미노-치환된-C1-4알킬, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 5개의 R9 기로 치환되고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 각각의 R10a 및 R10b는 독립적으로 할로 및 C1-4알킬로부터 선택되고; R11은 수소 및 C1-4알킬로부터 선택되고; R2a 및 R2b는 독립적으로 수소, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; R3a 및 R3b는 독립적으로 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; R4a 및 R4b는 독립적으로 수소, 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; R5a 및 R5b는 독립적으로 수소, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고; 여기서 R2a, R3a, R4, R5, R6a 및 R7a로부터 선택된 임의의 2개의 기는 5 내지 6원 불포화 또는 부분 불포화 고리를 형성할 수 있고; R6은 수소, 할로, 시아노, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노-카르보닐, 할로-치환된 C1-4알킬, 할로-치환된 C1-4알콕시, 히드록시-치환된 C1-4알킬 및 아미노-치환된 C1-4알킬로부터 선택되고; R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환될 수 있다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기 화학식 IIa의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
<화학식 IIa>
Figure 112016077997066-pct00023
상기 식에서, n은 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고; p는 0 및 1로부터 선택되고; q는 0 및 1로부터 선택되고; Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고; Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고; Y4는 N 및 CR9로부터 선택되고; R6은 수소, 할로, 메틸 및 아미노-카르보닐로부터 선택되고; R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환될 수 있고; R9는 할로, 아미노, 히드록시, N3, C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, C1-4알콕시, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 선택되고; R10은 수소, 페닐 및 나프틸로부터 선택되고; 여기서 R10의 상기 페닐은 비치환되거나 또는 메톡시로 치환된다.
본 발명의 추가 측면에서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 5원 포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00024
본 발명의 또 다른 측면에서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 6원 포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00025
본 발명의 또 다른 측면에서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 4원 포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00026
본 발명의 또 다른 측면에서, p 및 q가 둘 다 0인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 추가 측면에서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure 112016077997066-pct00027
약리학 및 유용성
Src 상동성-2 포스파타제 (SHP2)는 증식, 분화, 세포 주기 유지 및 이동을 포함한 다중 세포 기능에 기여하는, PTPN11 유전자에 의해 코딩된 단백질 티로신 포스파타제이다. SHP2는 Ras-미토겐-활성화된 단백질 키나제, JAK-STAT 또는 포스포이노시톨 3-키나제-AKT 경로를 통한 신호전달에 수반된다. SHP2는 수용체 티로신 키나제, 예컨대 ErbBl, ErbB2 및 c-Met에 의해 Erkl 및 Erk2 (Erkl/2, Erk) MAP 키나제의 활성화를 매개한다.
SHP2는 2개의 N-말단 Src 상동성 2 도메인 (N-SH2 및 C-SH2), 촉매 도메인 (PTP) 및 C-말단 꼬리를 갖는다. 2개의 SH2 도메인은 SHP2의 세포하 국재화 및 기능적 조절을 제어한다. 분자는 N-SH2 및 PTP 도메인 둘 다로부터의 잔기를 수반하는 결합 네트워크를 통해 그 자체의 활성을 억제하는 불활성 입체형태로 존재한다. 성장 인자 자극에 반응하여, SHP2는 그의 SH2 도메인을 통해 도킹 단백질, 예컨대 Gab1 및 Gab2 상의 특이적 티로신-인산화 부위에 결합한다. 이는 SHP2 활성화를 유발하는 입체형태적 변화를 유도한다.
PTPN11에서의 돌연변이는 여러 인간 질환, 예컨대 누난 증후군, 레오파드 증후군, 소아 골수단핵구성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 급성 골수성 백혈병, 및 유방암, 폐암 및 결장암에서 확인되었다. SHP2는 혈소판-유래 성장 인자의 수용체 (PDGF-R), 섬유모세포 성장 인자의 수용체 (FGF-R) 및 표피 성장 인자의 수용체 (EGF-R)를 포함한 다양한 수용체 티로신 키나제를 위한 중요한 하류 신호전달 분자이다. SHP2는 또한 암의 발생을 위한 전제조건인 세포 형질전환으로 이어질 수 있는 미토겐 활성화된 단백질 (MAP) 키나제 경로의 활성화를 위한 중요한 하류 신호전달 분자이다. SHP2의 녹-다운은 SHP2 돌연변이 또는 EML4/ALK 전위를 갖는 폐암 세포주의 세포 성장, 뿐만 아니라 EGFR 증폭된 유방암 및 식도암을 유의하게 억제하였다. SHP2는 또한 위 암종, 역형성 대세포 림프종 및 교모세포종에서의 종양유전자의 활성화된 하류이다.
누난 증후군 (NS) 및 레오파드 증후군 (LS) - PTPN11 돌연변이는 LS (다중 흑색점, 심전도 전도 이상, 양안 격리증, 폐 협착, 비정상적 생식기, 성장 지체, 감각신경성 난청) 및 NS (심장 결손, 두개안면 이상 및 저신장을 포함한 선천성 이상)를 야기한다. 둘 다의 장애는 정상 세포 성장 및 분화에 요구되는 RAS/RAF/MEK/ERK 미토겐 활성화 단백질 키나제 경로의 성분에서의 배선 돌연변이에 의해 야기된 상염색체 우성 증후군 패밀리의 일부이다. 이러한 경로의 이상 조절은 특히 심장 발달에 대해 심오한 효과를 가져, 판팍중격 결손 및/또는 비대성 심근병증 (HCM)을 포함한 다양한 이상을 유발한다. MAPK 신호전달 경로의 교란은 이들 장애에 중요한 것으로 확립되었고, KRAS, NRAS, SOS1, RAF1, BRAF, MEK1, MEK2, SHOC2 및 CBL에서의 돌연변이를 포함한, 상기 경로를 따른 여러 후보 유전자가 인간에서 확인되었다. NS 및 LS에서 가장 통상적으로 돌연변이된 유전자는 PTPN11이다. PTPN11 (SHP2)에서의 배선 돌연변이는 NS를 가진 사례의 ~50% 및 NS와 특정 특색을 공유하는 LS를 가진 거의 모든 환자에서 발견된다. NS의 경우에, 단백질에서의 Y62D 및 Y63C 치환은 대체로 불변하고 가장 통상적인 돌연변이 중에 속한다. 이들 돌연변이는 둘 다 포스파타제의 그의 인산화된 신호전달 파트너에의 결합을 교란하지 않으면서 SHP2의 촉매 불활성 입체형태에 영향을 미친다.
소아 골수단핵구성 백혈병 (JMML) - PTPN11 (SHP2)에서의 체세포 돌연변이는 소아기 골수증식성 장애 (MPD)인 JMML을 가진 환자의 약 35%에서 발생한다. 이들 기능 획득 돌연변이는 전형적으로 N-SH2 도메인 또는 포스파타제 도메인에서의 점 돌연변이며, 이는 촉매 도메인과 N-SH2 도메인 사이의 자기-억제를 방지하여, SHP2 활성을 유발한다.
급성 골수성 백혈병 - PTPN11 돌연변이가 다음과 같이 확인되었다: 소아과 급성 백혈병, 예컨대 골수이형성 증후군 (MDS)의 ~10%; B 세포 급성 림프모구성 백혈병 (B-ALL)의 ~7%; 및 급성 골수성 백혈병 (AML)의 ~4%.
NS 및 백혈병 돌연변이는 자기-억제된 SHP2 입체형태에서 N-SH2 및 PTP 도메인에 의해 형성된 계면에 위치한 아미노산의 변화를 야기하여, 억제성 분자내 상호작용을 파괴함으로써, 촉매 도메인의 과다활성으로 이어진다.
SHP2는 수용체 티로신 키나제 (RTK) 신호전달에서 양성 조절제로서 작용한다. RTK 변경 (EGFRamp, Her2amp, FGFRamp, Metamp, 전위/활성화된 RTK, 즉 ALK, BCR/ABL)을 함유하는 암은 식도암, 유방암, 폐암, 결장암, 위암, 신경교종, 두경부암을 포함한다.
식도암 (또는 식도의 암)은 식도의 악성종양이다. 다양한 하위유형, 주로 편평 세포암 (<50%) 및 선암종이 존재한다. 식도 선암종 및 편평 세포암에는 높은 비율의 RTK 발현이 존재한다. 따라서, 본 발명의 SHP2 억제제는 혁신적 치료 전략을 위해 사용될 수 있다.
유방암은 현행 약물에 대한 내성이 발생한 환자인 여성에서 주요 유형의 암 및 주요 사망 원인이다. 루미날 A, 루미날 B, Her2 유사 및 삼중 음성/기저-유사를 포함한 4종의 주요 유방암 하위유형이 존재한다. 삼중 음성 유방암 (TNBC)은 특이적 표적화 요법이 결여되어 있는 공격성 유방암이다. 표피 성장 인자 수용체 I (EGFR)은 TNBC에서 유망한 표적으로서 나타났다. SHP2를 통한 EGFR뿐만 아니라 Her2의 억제는 유방암에서 유망한 요법일 수 있다.
폐암 - NSCLC는 현재 폐암 (우세하게는 선암종 및 편평 세포 암종)의 약 85%로 설명되는 암-관련 사망률의 주요 원인이다. 세포독성 화학요법이 치료의 중요한 부분으로 남아 있을지라도, 종양에서의 유전자 변경, 예컨대 EGFR 및 ALK를 기반으로 한 표적화 요법은 표적화 요법으로부터 이익을 얻을 가능성이 있다.
결장암 - 결장직장 종양의 대략 30% 내지 50%는 돌연변이된 (비정상적) KRAS를 갖는 것으로 알려져 있고, BRAF 돌연변이는 결장직장암의 10 내지 15%에서 발생한다. 결장직장 종양이 EGFR을 과다발현하는 것으로 입증된 환자의 하위세트의 경우에, 이들 환자는 항-EGFR 요법에 대한 바람직한 임상 반응을 나타낸다.
위암은 가장 보편적인 암 유형 중 하나이다. 위암 세포에서의 이상 티로신 인산화에 의해 반영되는 바와 같은 티로신 키나제의 이상 발현은 관련 기술분야에 알려져 있다. 3종의 수용체-티로신 키나제인 c-met (HGF 수용체), FGF 수용체 2 및 erbB2/neu는 위 암종에서 빈번하게 증폭된다. 따라서, 상이한 신호 경로의 전복은 상이한 유형의 위암의 진행의 원인이 될 수 있다.
신경모세포종은 소아기 암의 약 8%로 설명되는 발달 교감 신경계의 소아과 종양이다. 역형성 림프종 키나제 (ALK) 유전자의 게놈 변경은 신경모세포종 발병기전의 원인이 되는 것으로 상정되었다.
두경부의 편평-세포 암종 (SCCHN). 높은 수준의 EGFR 발현은 다양한 암에서, 대부분 두경부의 편평-세포 암종 (SCCHN)에서의 방사선 요법에 대한 불량한 예후 및 내성과 상관관계가 있다. EGFR 신호전달의 차단은 수용체 자극, 세포 증식의 억제 및 감소된 침습성 및 전이를 유발한다. 따라서, EGFR은 SCCHN에서의 새로운 항암 요법을 위한 중요한 표적이다.
본 발명은 SHP2의 활성을 억제할 수 있는 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 본 발명의 화합물의 제조 방법 및 이러한 화합물을 포함하는 제약 제제를 추가로 제공한다. 본 발명의 또 다른 측면은 SHP2-매개 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 발명의 내용란에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물을 투여하는 단계를 포함하는, SHP2-매개 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 SHP2-매개 장애가 비제한적으로 JMML; AML; MDS; B-ALL; 신경모세포종; 식도암; 유방암; 폐암; 결장암; 위암, 두경부암으로부터 선택된 암인 상기 언급된 방법에 관한 것이다.
본 발명의 화합물은 또한 SHP2의 이상 활성과 관련된 다른 질환 또는 상태의 치료에 유용할 수 있다. 따라서, 추가 측면으로서, 본 발명은 NS; LS; JMML; AML; MDS; B-ALL; 신경모세포종; 식도암; 유방암; 폐암; 결장암; 위암; 두경부암으로부터 선택된 장애의 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명의 SHP2 억제제는, 특히 암의 치료에서 또 다른 약리학적 활성 화합물, 또는 2종 이상의 다른 약리학적 활성 화합물과 유용하게 조합될 수 있다. 예를 들어, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 화학요법제, 예를 들어 유사분열 억제제, 예컨대 탁산, 빈카 알칼로이드, 파클리탁셀, 도세탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈 또는 빈플루닌, 및 다른 항암제, 예를 들어 시스플라틴, 5-플루오로우라실 또는 5-플루오로-2-4(1H,3H)-피리미딘디온 (5FU), 플루타미드 또는 겜시타빈으로부터 선택된 1종 이상의 작용제와 조합되어 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여될 수 있다.
이러한 조합은 요법에서 상승작용적 활성을 포함한 유의한 이점을 제공할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 화합물을 비경구로 투여하는 것인 상기 언급된 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 화합물을 근육내로, 정맥내로, 피하로, 경구로, 폐, 척수강내로, 국소로 또는 비강내로 투여하는 것인 상기 언급된 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 화합물을 전신으로 투여하는 것인 상기 언급된 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 환자가 포유동물인 상기 언급된 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 환자가 영장류인 상기 언급된 방법에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 상기 환자가 인간인 상기 언급된 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 SHP2-매개 장애의 치료를 필요로 하는 환자에게 치료 유효량의 발명의 내용란에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물과 조합된 치료 유효량의 화학요법제를 투여하는 단계를 포함하는, SHP2-매개 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
제약 조성물
또 다른 측면에서, 본 발명은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 (첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제제화된, 치료 유효량의 상기 기재된 화합물 중 1종 이상을 포함하는 제약상 허용되는 조성물을 제공한다. 하기 상세히 기재된 바와 같이, 본 발명의 제약 조성물은 다음에 적합한 것을 포함한, 고체 또는 액체 형태로의 투여를 위해 특별히 제제화될 수 있다: (1) 경구 투여, 예를 들어 드렌치 (수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 정제, 예를 들어 협측, 설하 및 전신 흡수를 위해 표적화된 것, 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; (2) 예를 들어 멸균 용액 또는 현탁액, 또는 지속-방출 제제로서, 예를 들어 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의한 비경구 투여; (3) 예를 들어 피부에 적용하기 위한 크림, 연고, 또는 제어-방출 패치 또는 스프레이로서 국소 적용; (4) 예를 들어 페사리, 크림 또는 폼으로서 질내로 또는 직장내로; (5) 설하로; (6) 눈으로; (7) 경피로; (8) 비강으로; (9) 폐; 또는 (10) 척수강내로.
본원에 사용된 어구 "치료 유효량"은 동물에서 적어도 세포의 하위-집단에서 일부 목적하는 치료 효과를 임의의 의학적 치료에 적용가능한 합리적인 이익/위험 비로 생성시키는데 유효한 본 발명의 화합물, 물질, 또는 화합물을 포함하는 조성물의 양을 의미한다.
어구 "제약상 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하여 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉시켜 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하는 것으로 본원에 사용된다.
본원에 사용된 어구 "제약상 허용되는 담체"는 대상 화합물을 한 기관 또는 신체의 일부로부터 또 다른 기관 또는 신체의 일부로 운반 또는 수송하는데 수반되는, 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 제조 보조제 (예를 들어, 윤활제, 활석 마그네슘, 칼슘 또는 아연 스테아레이트, 또는 스테아르산), 또는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제제의 다른 성분과 상용성이고 환자에 유해하지 않다는 관점에서 "허용되는" 것이어야 한다. 제약상 허용되는 담체로서 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말화 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 활석; (8) 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩 오일, 목화씨 오일, 홍화 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원 무함유 물; (17) 등장성 염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알콜; (20) pH 완충 용액; (21) 폴리에스테르, 폴리카르보네이트 및/또는 폴리무수물; 및 (22) 제약 제제에 사용되는 다른 비-독성 상용성 물질.
상기 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물의 특정 실시양태는 염기성 관능기, 예컨대 아미노 또는 알킬아미노를 함유할 수 있고, 따라서 제약상 허용되는 산과 제약상 허용되는 염을 형성할 수 있다. 이러한 측면에서 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 상대적으로 비-독성인 무기 및 유기 산 부가염을 지칭한다. 이들 염은, 투여 비히클 또는 투여 형태 제조 방법에서 계내 제조될 수 있거나, 또는 유리 염기 형태의 정제된 본 발명의 화합물을 적합한 유기 또는 무기 산과 개별적으로 반응시키고, 후속 정제 동안 이에 따라 형성된 염을 단리시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 염은 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 술페이트, 비술페이트, 포스페이트, 니트레이트, 아세테이트, 발레레이트, 올레에이트, 팔미테이트, 스테아레이트, 라우레이트, 벤조에이트, 락테이트, 포스페이트, 토실레이트, 시트레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 나프틸레이트, 메실레이트, 글루코헵토네이트, 락토비오네이트 및 라우릴술포네이트 염 등을 포함한다. (예를 들어, 문헌 [Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19] 참조).
대상 화합물의 제약상 허용되는 염은, 예를 들어 비-독성 유기 또는 무기 산으로부터의 화합물의 통상적인 비독성 염 또는 4급 암모늄 염을 포함한다. 예를 들어, 이러한 통상적인 비독성 염은 무기 산, 예컨대 히드로클로라이드, 브로민화수소산, 황산, 술팜산, 인산, 질산 등으로부터 유래된 염; 및 유기 산, 예컨대 아세트산, 프로피온산, 숙신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 팔미트산, 말레산, 히드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 술파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 에탄 디술폰산, 옥살산, 이소티온산 등으로부터 제조된 염을 포함한다.
다른 경우에, 본 발명의 화합물은 1개 이상의 산성 관능기를 함유할 수 있고, 따라서 제약상 허용되는 염기와 제약상 허용되는 염을 형성할 수 있다. 이들 경우에 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 상대적으로 비-독성인 무기 및 유기 염기 부가염을 지칭한다. 이들 염은 마찬가지로, 투여 비히클 또는 투여 형태 제조 방법에서 계내 제조될 수 있거나, 또는 유리 산 형태의 정제된 화합물을 적합한 염기, 예컨대 제약상 허용되는 금속 양이온의 히드록시드, 카르보네이트 또는 비카르보네이트와, 암모니아와, 또는 제약상 허용되는 유기 1급, 2급 또는 3급 아민과 개별적으로 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토류 염은 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 및 알루미늄 염 등을 포함한다. 염기 부가염의 형성에 유용한 대표적인 유기 아민은 에틸아민, 디에틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진 등을 포함한다. (예를 들어, 상기 문헌 [Berge et al.] 참조)
습윤제, 유화제 및 윤활제, 예컨대 소듐 라우릴 술페이트 및 스테아르산마그네슘, 뿐만 아니라 착색제, 방출제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 퍼퓸제, 보존제 및 항산화제가 또한 조성물 중에 존재할 수 있다.
제약상 허용되는 항산화제의 예는 다음을 포함한다: (1) 수용성 항산화제, 예컨대 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 중황산나트륨, 메타중아황산나트륨, 아황산나트륨 등; (2) 유용성 항산화제, 예컨대 아스코르빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 등; 및 (3) 금속 킬레이트화제, 예컨대 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등.
본 발명의 제제는 경구, 비강, 국소 (협측 및 설하 포함), 직장, 질 및/또는 비경구 투여에 적합한 것을 포함한다. 제제는 편리하게는 단위 투여 형태로 제공될 수 있고, 제약 기술분야에 널리 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료할 숙주, 특정한 투여 방식에 따라 달라질 것이다. 단일 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 일반적으로 치료 효과를 생성하는 화합물의 양일 것이다. 일반적으로, 100 퍼센트 중에서, 이러한 양은 활성 성분 약 0.1 퍼센트 내지 약 99 퍼센트, 바람직하게는 약 5 퍼센트 내지 약 70 퍼센트, 가장 바람직하게는 약 10 퍼센트 내지 약 30 퍼센트 범위일 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 제제는 시클로덱스트린, 셀룰로스, 리포솜, 미셀 형성제, 예를 들어 담즙산, 및 중합체 담체, 예를 들어 폴리에스테르 및 폴리무수물로 이루어진 군으로부터 선택된 부형제; 및 본 발명의 화합물을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 언급된 제제는 본 발명의 화합물을 경구로 생체이용가능하게 한다.
이들 제제 또는 조성물을 제조하는 방법은 본 발명의 화합물을 담체, 및 임의로, 1종 이상의 보조 성분과 회합되도록 하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제제는 본 발명의 화합물을 액체 담체, 또는 미분된 고체 담체, 또는 이들 둘 다와 균일하고 친밀하게 회합되도록 하고, 이어서 필요한 경우에, 생성물을 형상화함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 본 발명의 제제는 캡슐, 카쉐, 환제, 정제, 로젠지 (풍미 기재, 통상적으로 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸트 사용), 분말, 과립 형태로, 또는 수성 또는 비-수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서, 또는 수중유 또는 유중수 액체 에멀젼으로서, 또는 엘릭시르 또는 시럽으로서, 또는 파스틸 (불활성 기재, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아 사용)로서 및/또는 구강 세정제 등으로서 존재할 수 있으며, 각각은 활성 성분으로서 미리 결정된 양의 본 발명의 화합물을 함유한다. 본 발명의 화합물은 또한 볼루스, 연약 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
경구 투여를 위한 본 발명의 고체 투여 형태 (캡슐, 정제, 환제, 당의정, 분말, 과립, 트로키 등)에서, 활성 성분은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 예컨대 시트르산나트륨 또는 인산이칼슘 및/또는 다음 중 임의의 것과 혼합된다: (1) 충전제 또는 증량제, 예컨대 전분, 락토스, 수크로스, 글루코스, 만니톨 및/또는 규산; (2) 결합제, 예컨대, 예를 들어 카르복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 수크로스 및/또는 아카시아; (3) 함습제, 예컨대 글리세롤; (4) 붕해제, 예컨대 한천-한천, 탄산칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트 및 탄산나트륨; (5) 용해 지연제, 예컨대 파라핀; (6) 흡수 촉진제, 예컨대 4급 암모늄 화합물, 및 계면활성제, 예컨대 폴록사머 및 소듐 라우릴 술페이트; (7) 습윤제, 예컨대, 예를 들어 세틸 알콜, 글리세롤 모노스테아레이트 및 비-이온성 계면활성제; (8) 흡수제, 예컨대 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예컨대 활석, 스테아르산칼슘, 스테아르산마그네슘, 고체 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 라우릴 술페이트, 스테아르산아연, 스테아르산나트륨, 스테아르산 및 그의 혼합물; (10) 착색제; 및 (11) 제어 방출 작용제, 예컨대 크로스포비돈 또는 에틸 셀룰로스. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에, 제약 조성물은 또한 완충제를 포함할 수 있다. 유사한 유형의 고체 조성물은 또한 락토스 또는 유당과 같은 부형제, 뿐만 아니라 고분자량 폴리에틸렌 글리콜 등을 사용하는 연질 및 경질-쉘 젤라틴 캡슐에서의 충전제로서 사용될 수 있다.
정제는 임의로 1종 이상의 보조 성분과 함께 압축 또는 성형에 의해 제조될 수 있다. 압축 정제는 결합제 (예를 들어, 젤라틴 또는 히드록시프로필메틸 셀룰로스), 윤활제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제 (예를 들어, 소듐 스타치 글리콜레이트 또는 가교 소듐 카르복시메틸 셀룰로스), 표면-활성제 또는 분산제를 사용하여 제조될 수 있다. 성형된 정제는 적합한 기계에서 불활성 액체 희석제로 습윤된 분말화 화합물의 혼합물을 성형함으로써 제조될 수 있다.
정제, 및 본 발명의 제약 조성물의 다른 고체 투여 형태, 예컨대 당의정, 캡슐, 환제 및 과립은, 임의로 스코어링될 수 있거나, 또는 코팅 및 쉘, 예컨대 장용 코팅 및 제약-제제화 기술분야에 널리 알려진 다른 코팅을 사용하여 제조될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어 목적하는 방출 프로파일을 제공하기 위한 다양한 비율의 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 다른 중합체 매트릭스, 리포솜 및/또는 마이크로구체를 사용하여, 내부 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다. 이들은 급속 방출을 위해 제제화될 수 있고, 예를 들어 동결-건조될 수 있다. 이들은, 예를 들어 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해, 또는 사용 직전에 멸균수 또는 일부 다른 멸균 주사가능한 매질 중에 용해될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입함으로써 멸균될 수 있다. 이들 조성물은 또한 불투명화제를 임의로 함유할 수 있고, 단지 활성 성분(들)만을, 또는 우선적으로 위장관의 특정 부분에서, 임의로 지연 방식으로 방출하는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 포매 조성물의 예는 중합체 물질 및 왁스를 포함한다. 활성 성분은 또한, 적절한 경우에, 상기 기재된 부형제 중 1종 이상을 갖는 마이크로캡슐화 형태일 수 있다.
본 발명의 화합물의 경구 투여를 위한 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 활성 성분에 추가로, 액체 투여 형태는 관련 기술분야에서 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예컨대, 예를 들어 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예컨대 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자 및 참깨 오일), 글리세롤, 테트라히드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
불활성 희석제 이외에도, 경구 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 감미제, 향미제, 착색제, 퍼퓸제 및 보존제를 포함할 수 있다.
현탁액은, 활성 화합물에 추가로, 현탁화제, 예를 들어 에톡실화 이소스테아릴 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미세결정질 셀룰로스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천-한천 및 트라가칸트, 및 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
직장 또는 질 투여를 위한 본 발명의 제약 조성물의 제제는 좌제로서 제공될 수 있으며, 이는 본 발명의 1종 이상의 화합물을, 예를 들어 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트를 포함하는 1종 이상의 적합한 비자극성 부형제 또는 담체와 혼합함으로써 제조될 수 있고, 이는 실온에서는 고체이지만, 체온에서는 액체이며, 따라서 직장 또는 질강에서 용융되어 활성 화합물을 방출할 것이다.
질 투여에 적합한 본 발명의 제제는 또한 관련 기술분야에 적절한 것으로 알려져 있는 담체를 함유하는 페사리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제제를 포함한다.
본 발명의 화합물의 국소 또는 경피 투여를 위한 투여 형태는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제를 포함한다. 활성 화합물은 멸균 조건 하에 제약상 허용되는 담체, 및 요구될 수 있는 임의의 보존제, 완충제 또는 추진제와 혼합될 수 있다.
연고, 페이스트, 크림 및 겔은, 본 발명의 활성 화합물에 추가로, 부형제, 예컨대 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화아연, 또는 그의 혼합물을 함유할 수 있다.
분말 및 스프레이는, 본 발명의 화합물에 추가로, 부형제, 예컨대 락토스, 활석, 규산, 수산화알루미늄, 규산칼슘 및 폴리아미드 분말, 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다. 스프레이는 추가적으로 통상의 추진제, 예컨대 클로로플루오로히드로카본 및 휘발성 비치환된 탄화수소, 예컨대 부탄 및 프로판을 함유할 수 있다.
경피 패치는 본 발명의 화합물의 신체로의 제어된 전달을 제공하는 추가 이점을 갖는다. 이러한 투여 형태는 화합물을 적절한 매질 중에 용해 또는 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 흡수 증진제가 또한 사용되어 피부를 통한 화합물의 유동을 증가시킬 수 있다. 이러한 유동 속도는 속도 제어 막을 제공하거나 또는 화합물을 중합체 매트릭스 또는 겔 중에 분산시킴으로써 제어될 수 있다.
안과용 제제, 안연고, 분말, 용액 등이 또한 본 발명의 범주 내인 것으로 고려된다.
비경구 투여에 적합한 본 발명의 제약 조성물은 본 발명의 1종 이상의 화합물을 1종 이상의 제약상 허용되는 멸균 등장성 수성 또는 비수성 용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 사용 직전에 멸균 주사가능한 용액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 분말과 조합하여 포함하며, 이는 당, 알콜, 항산화제, 완충제, 정박테리아제, 제제를 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질, 또는 현탁화제 또는 증점제를 함유할 수 있다.
본 발명의 제약 조성물에 사용될 수 있는 적합한 수성 및 비수성 담체의 예는 물, 에탄올, 폴리올 (예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트를 포함한다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅 물질, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다.
이들 조성물은 또한 아주반트, 예컨대 보존제, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 대상 화합물에 대한 미생물의 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀 소르브산 등을 포함시킴으로써 보장될 수 있다. 등장화제, 예컨대 당, 염화나트륨 등을 조성물 내로 포함시키는 것이 또한 바람직할 수 있다. 추가로, 주사가능한 제약 형태의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함시키는 것에 의해 이루어질 수 있다.
일부 경우에, 약물의 효과를 지속시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사로부터 약물의 흡수를 느리게 하는 것이 바람직하다. 이는 불량한 수용해도를 갖는 결정질 또는 무정형 물질의 액체 현탁액을 사용함으로써 달성될 수 있다. 이어서, 약물의 흡수 속도는 그의 용해 속도에 따라 달라지고, 이는 또한, 결정 크기 및 결정질 형태에 좌우될 수 있다. 대안적으로, 비경구-투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 약물을 오일 비히클 중에 용해 또는 현탁시킴으로써 달성된다.
주사가능한 데포 형태는 대상 화합물의 마이크로캡슐화 매트릭스를 생분해성 중합체, 예컨대 폴리락티드-폴리글리콜리드 중에 형성시킴으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비, 및 사용되는 특정한 중합체의 속성에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)을 포함한다. 데포 주사가능한 제제는 또한 약물을 신체 조직과 상용성인 리포솜 또는 마이크로에멀젼 중에 포획시킴으로써 제조된다.
본 발명의 화합물이 인간 및 동물에게 제약으로서 투여되는 경우에, 이들은 그 자체로서 또는 예를 들어 제약상 허용되는 담체와 조합된 0.1 내지 99% (보다 바람직하게는, 10 내지 30%)의 활성 성분을 함유하는 제약 조성물로서 제공될 수 있다.
본 발명의 제제는 경구로, 비경구로, 국소로 또는 직장으로 제공될 수 있다. 이들은 물론 각각의 투여 경로에 적합한 형태로 제공된다. 예를 들어, 이들은 정제 또는 캡슐 형태로, 주사, 흡입, 눈 로션, 연고, 좌제 등에 의해, 주사, 주입 또는 흡입에 의한 투여로; 로션 또는 연고에 의해 국소로; 및 좌제에 의해 직장으로 투여된다. 경구 투여가 바람직하다.
본원에 사용된 어구 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은, 통상적으로 주사에 의한, 경장 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 의미하고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 각피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
본원에 사용된 어구 "전신 투여", "전신 투여된", "말초 투여" 및 "말초 투여된"은 화합물, 약물 또는 다른 물질이 환자의 계로 진입하여 대사 및 다른 유사 과정의 대상이 되게 하는, 중추 신경계로의 직접 투여 이외의 화합물, 약물 또는 다른 물질의 투여, 예를 들어 피하 투여를 의미한다.
이들 화합물은 요법을 위해 인간 및 다른 동물에게 임의의 적합한 투여 경로에 의해, 예컨대 경구로, 예를 들어 스프레이에 의해 비강으로, 직장으로, 질내로, 비경구로, 수조내로, 및 분말, 연고 또는 점적에 의해 국소로, 예컨대 협측으로 및 설하로 투여될 수 있다.
선택된 투여 경로와 관계없이, 적합한 수화 형태로 사용될 수 있는 본 발명의 화합물 및/또는 본 발명의 제약 조성물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 통상적인 방법에 의해 제약상 허용되는 투여 형태로 제제화된다.
본 발명의 제약 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은, 특정한 환자, 조성물 및 투여 방식에 대해 목적하는 치료 반응을 달성하기에 효과적이며 환자에 대한 독성이 없는 활성 성분의 양이 수득되도록 변경될 수 있다.
선택된 투여량 수준은 사용된 본 발명의 특정한 화합물 또는 그의 에스테르, 염 또는 아미드의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용할 특정한 화합물의 배출 또는 대사 속도, 흡수 속도 및 정도, 치료 지속기간, 사용된 특정한 화합물과 조합되어 사용된 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료할 환자의 연령, 성별, 체중, 상태, 일반적 건강 및 과거 병력, 및 의학 기술분야에 널리 알려진 유사 인자를 포함한 다양한 인자에 좌우될 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술을 갖는 의사 또는 수의사는 요구되는 제약 조성물의 유효량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 예를 들어, 의사 또는 수의사는 제약 조성물에 사용되는 본 발명의 화합물의 용량을 목적하는 치료 효과를 달성하는데 요구되는 것보다 더 낮은 수준에서 출발하여 목적하는 효과가 달성될 때까지 투여량을 점진적으로 증가시킬 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 화합물의 적합한 1일 용량은 치료 효과를 생성하는데 효과적인 최저 용량인 화합물의 양일 것이다. 이러한 유효 용량은 일반적으로 상기 기재된 인자에 좌우될 것이다. 일반적으로, 환자에 대한 본 발명의 화합물의 경구, 정맥내, 뇌실내 및 피하 용량은, 지시된 진통 효과를 위해 사용되는 경우에, 1일에 체중 킬로그램당 약 0.0001 내지 약 100 mg 범위일 것이다.
원하는 경우에, 활성 화합물의 유효 1일 용량은 1일에 걸쳐 적절한 간격으로 개별적으로 투여되는 2, 3, 4, 5, 6회 또는 그 초과의 하위-용량으로서, 임의로 단위 투여 형태로 투여될 수 있다. 바람직한 투여는 1일에 1회 투여이다.
본 발명의 화합물을 단독으로 투여하는 것이 가능하지만, 화합물을 제약 제제 (조성물)로서 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 화합물은 다른 제약과 유사하게, 인간 또는 수의학적 의약에 사용하기 위한 임의의 편리한 방식으로의 투여를 위해 제제화될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 (첨가제) 및/또는 희석제와 함께 제제화된, 치료 유효량의 상기 기재된 바와 같은 대상 화합물 중 1종 이상을 포함하는 제약상 허용되는 조성물을 제공한다. 하기 상세히 기재된 바와 같이, 본 발명의 제약 조성물은 다음에 적합한 것을 포함한, 고체 또는 액체 형태로의 투여를 위해 특별히 제제화될 수 있다: (1) 경구 투여, 예를 들어 드렌치 (수성 또는 비-수성 용액 또는 현탁액), 정제, 볼루스, 분말, 과립, 혀에 적용하기 위한 페이스트; (2) 예를 들어 멸균 용액 또는 현탁액으로서, 예를 들어 피하, 근육내 또는 정맥내 주사에 의한 비경구 투여; (3) 예를 들어 피부, 폐 또는 점막에 적용하기 위한 크림, 연고 또는 스프레이로서의 국소 적용; 또는 (4) 예를 들어 페사리, 크림 또는 폼으로서 질내로 또는 직장내로; (5) 설하로 또는 협측으로; (6) 눈으로; (7) 경피로; 또는 (8) 비강으로.
용어 "치료"는 또한 예방, 요법 및 치유를 포괄하는 것으로 의도된다.
이러한 치료를 제공받는 환자는 영장류, 특히 인간, 및 다른 포유동물, 예컨대 말, 소, 돼지 및 양; 및 일반적으로 가금류 및 애완동물을 포함한, 치료를 필요로 하는 임의의 동물이다.
본 발명의 화합물은 그 자체로서 또는 제약상 허용되는 담체와 혼합되어 투여될 수 있고, 또한 항미생물제, 예컨대 페니실린, 세팔로스포린, 아미노글리코시드 및 당펩티드와 함께 투여될 수 있다. 병용 요법은, 따라서 먼저 투여된 것의 치료 효과가 후속적으로 투여되는 경우에 완전히 사라지지는 않는 방식으로의 활성 화합물의 순차, 동시 및 개별 투여를 포함한다.
마이크로유화 기술은 일부 친지성 (수불용성) 제약 작용제의 생체이용률을 개선시킬 수 있다. 예는 트리메트린 (Dordunoo, S. K., et al., Drug Development and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991 and REV 5901 (Sheen, P. C., et al., J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991)을 포함한다. 특히, 마이크로유화는 흡수를 순환계 대신 림프계로 우선적으로 지시하여, 간을 우회하게 하고, 간담도 순환에서의 화합물의 파괴를 방지함으로써, 증진된 생체이용률을 제공한다.
모든 적합한 친양쪽성 담체가 고려되는 한편, 일반적으로 현재 바람직한 담체는 일반적으로 안전한 것으로서 인식되는 (GRAS) 상태를 가지며 용액을 복합 수상 (예컨대 인간 위장관에서 발견되는 것)과 접촉시키는 경우에 이후 단계에서 본 발명의 화합물을 가용화하고 또한 마이크로유화시킬 수 있는 것이다. 통상적으로, 이들 요건을 충족시키는 친양쪽성 성분은 2-20의 HLB (친수성 대 친지성 균형) 값을 갖고, 그의 구조는 C-6 내지 C-20 범위의 직쇄 지방족 라디칼을 함유한다. 예는 폴리에틸렌-글리콜화 지방 글리세리드 및 폴리에틸렌 글리콜이다.
상업적으로 입수가능한 친양쪽성 담체가 특히 고려되며, 겔루시르(Gelucire)-시리즈, 라브라필(Labrafil), 라브라솔(Labrasol) 또는 라우로글리콜(Lauroglycol) (모두 프랑스 세인트 프리스트 소재의 가테포세 코포레이션(Gattefosse Corporation)에 의해 제조 및 분배됨), PEG-모노-올레에이트, PEG-디-올레에이트, PEG-모노-라우레이트 및 디-라우레이트, 레시틴(Lecithin), 폴리소르베이트(Polysorbate) 80 등 (미국 및 전세계의 수많은 회사에 의해 제조 및 분배됨)을 포함한다.
본 발명에 사용하기에 적합한 친수성 중합체는 용이하게 수용성이고, 소포-형성 지질에 공유 부착될 수 있고, 독성 효과 없이 생체내에서 허용되는 (즉, 생체적합성인) 것이다. 적합한 중합체는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리락트산 (폴리락티드로 또한 칭함), 폴리글리콜산 (폴리글리콜리드로 또한 칭함), 폴리락트산-폴리글리콜산 공중합체 및 폴리비닐 알콜을 포함한다. 바람직한 중합체는 약 100 또는 120 달톤 내지 약 5,000 또는 10,000 달톤, 보다 바람직하게는 약 300 달톤 내지 약 5,000 달톤의 분자량을 갖는 것이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 중합체는 약 100 내지 약 5,000 달톤의 분자량을 갖고, 보다 바람직하게는 약 300 내지 약 5,000 달톤의 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 중합체는 750 달톤의 폴리에틸렌글리콜 (PEG(750))이다. 중합체는 또한 내부 단량체의 수에 의해 정의될 수 있으며; 본 발명의 바람직한 실시양태는 3종의 단량체로 이루어진 PEG 중합체 (대략 150 달톤)와 같은 적어도 약 3종의 단량체의 중합체를 이용한다.
본 발명에 사용하기에 적합할 수 있는 다른 친수성 중합체는 폴리비닐피롤리돈, 폴리메톡사졸린, 폴리에틸옥사졸린, 폴리히드록시프로필 메타크릴아미드, 폴리메타크릴아미드, 폴리디메틸아크릴아미드, 및 유도체화 셀룰로스, 예컨대 히드록시메틸셀룰로스 또는 히드록시에틸셀룰로스를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 제제는 폴리아미드, 폴리카르보네이트, 폴리알킬렌, 아크릴산 및 메타크릴산 에스테르의 중합체, 폴리비닐 중합체, 폴리글리콜리드, 폴리실록산, 폴리우레탄 및 그의 공중합체, 셀룰로스, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리스티렌, 락트산 및 글리콜산의 중합체, 폴리무수물, 폴리(오르토)에스테르, 폴리(부티르산), 폴리(발레르산), 폴리(락티드-코-카프로락톤), 폴리사카라이드, 단백질, 폴리히알루론산, 폴리시아노아크릴레이트, 및 그의 블렌드, 혼합물 또는 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 생체적합성 중합체를 포함한다.
시클로덱스트린은 각각 그리스 문자 알파, 베타 또는 감마에 의해 지정되는 6, 7 또는 8개의 글루코스 단위로 이루어진 시클릭 올리고사카라이드이다. 6개 미만의 글루코스 단위를 갖는 시클로덱스트린은 존재하는 것으로 알려져 있지 않다. 글루코스 단위는 알파-1,4-글루코시드 결합에 의해 연결된다. 당 단위의 의자 입체형태의 결과로서, (C-2, C-3에서의) 모든 2급 히드록실 기는 고리의 한 측에 위치하는 반면, C-6에서의 모든 1급 히드록실 기는 다른 측에 놓인다. 결과적으로, 외부 면이 친수성이어서, 시클로덱스트린을 수용성으로 만든다. 대조적으로, 시클로덱스트린의 공동은 소수성인데, 이들은 원자 C-3 및 C-5의 수소 및 에테르-유사 산소가 배열되어 있기 때문이다. 이들 매트릭스는, 예를 들어 스테로이드 화합물 예컨대 17β-에스트라디올을 포함한 다양한 상대적으로 소수성인 화합물과의 복합체화를 가능하게 한다 (예를 들어, 문헌 [van Uden et al. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 38:1-3-113 (1994)] 참조). 복합체화는 반 데르 발스 상호작용 및 수소 결합 형성에 의해 일어난다. 시클로덱스트린의 화학의 일반적 검토를 위해, 문헌 [Wenz, Agnew. Chem. Int. Ed. Engl., 33:803-822 (1994)]을 참조한다.
시클로덱스트린 유도체의 물리-화학적 특성은 치환의 종류 및 정도에 매우 좌우된다. 예를 들어, 물 중 그의 용해도는 불용성 (예를 들어, 트리아세틸-베타-시클로덱스트린) 내지 147% 가용성 (w/v) (G-2-베타-시클로덱스트린) 범위이다. 또한, 이들은 다수의 유기 용매 중에서 가용성이다. 시클로덱스트린의 특성은 그의 용해도를 증가 또는 감소시킴으로써 다양한 제제 성분의 용해도에 대한 제어를 가능하게 한다.
수많은 시클로덱스트린 및 그의 제조 방법이 기재되었다. 예를 들어 미국 특허 번호 3,453,259 (Parmeter (I), et al.) 및 미국 특허 번호 3,459,731 (Gramera, et al.)에는 전기중성 시클로덱스트린이 기재되었다. 다른 유도체는 양이온성 특성을 갖는 시클로덱스트린 (미국 특허 번호 3,453,257 (Parmeter (II))), 불용성 가교 시클로덱스트린 (미국 특허 번호 3,420,788 (Solms)), 및 음이온성 특성을 갖는 시클로덱스트린 (미국 특허 번호 3,426,011 (Parmeter (III)))을 포함한다. 음이온성 특성을 갖는 시클로덱스트린 유도체 중에, 카르복실산, 아인산, 아포스핀산, 포스폰산, 인산, 티오포스폰산, 티오술핀산 및 술폰산은 모 시클로덱스트린에 부가되었다 (상기 문헌 [Parmeter (III)] 참조). 게다가, 술포알킬 에테르 시클로덱스트린 유도체는 미국 특허 번호 5,134,127 (Stella, et al.)에 기재되었다.
리포솜은 수성 내부 구획을 둘러싸는 적어도 1종의 지질 이중층 막으로 이루어진다. 리포솜은 막 유형 및 크기에 의해 특징화될 수 있다. 소형 단층 소포 (SUV)는 단일 막을 가지며 전형적으로 0.02 내지 0.05 μm 직경 범위이고; 대형 단층 소포 (LUV)는 전형적으로 0.05 μm 초과의 소층 대형 소포이고, 다층 소포는 다중의, 통상적으로 동심 막 층을 가지며 전형적으로 0.1 μm 초과이다. 보다 더 큰 소포 내에 함유된 여러 비동심 막, 즉 여러 보다 더 작은 소포를 갖는 리포솜은 다소포성 소포로 칭한다.
본 발명의 한 측면은, 리포솜 막이 리포솜에 증가된 운반 용량을 제공하도록 제제화된, 본 발명의 화합물을 함유하는 리포솜을 포함하는 제제에 관한 것이다. 대안적으로 또는 추가로, 본 발명의 화합물은 리포솜의 리포솜 이중층 내에 함유될 수 있거나 또는 그 위에 흡착될 수 있다. 본 발명의 화합물은 지질 계면활성제와 함께 응집되고, 리포솜의 내부 공간 내에서 운반될 수 있으며; 이들 경우에, 리포솜 막은 활성제-계면활성제 응집체의 파괴 효과를 견디도록 제제화된다.
본 발명의 한 실시양태에 따르면, 리포솜의 지질 이중층은, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 쇄가 지질 이중층의 내부 표면으로부터 리포솜에 의해 캡슐화된 내부 공간까지 연장되고 지질 이중층의 외부로부터 주위 환경까지 연장되도록, PEG로 유도체화된 지질을 함유한다.
본 발명의 리포솜 내에 함유된 활성제는 가용화된 형태로 존재한다. 계면활성제 및 활성제의 응집체 (예컨대 관심 활성제를 함유하는 에멀젼 또는 미셀)는 본 발명에 따라 리포솜의 내부 공간 내에 포획될 수 있다. 계면활성제는 활성제를 분산 및 가용화시키는 작용을 하고, 다양한 쇄 길이 (예를 들어, 약 C14 내지 약 C20)의 생체적합성 리소포스파티딜콜린 (LPC)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 지방족, 시클로지방족 또는 방향족 계면활성제로부터 선택될 수 있다. 중합체-유도체화 지질, 예컨대 PEG-지질이 또한 미셀 형성을 위해 이용될 수 있는데, 이는 이들이 미셀/막 융합을 억제하는 작용을 할 것이고, 계면활성제 분자에 대한 중합체의 첨가가 계면활성제의 CMC를 감소시키며 미셀 형성을 돕기 때문이다. 마이크로몰 범위의 CMC를 갖는 계면활성제가 바람직하고; 보다 높은 CMC 계면활성제가 본 발명의 리포솜 내에 포획되는 미셀을 제조하는데 이용될 수 있지만, 미셀 계면활성제 단량체는 리포솜 이중층 안정성에 영향을 미칠 수 있고, 목적하는 안정성의 리포솜을 설계하는데 있어서 한 인자가 될 것이다.
본 발명에 따른 리포솜은 관련 기술분야에 알려져 있는 임의의 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 4,235,871; 공개된 PCT 출원 WO 96/14057; 문헌 [New RRC, Liposomes: A practical approach, IRL Press, Oxford (1990), pages 33-104; Lasic DD, Liposomes from physics to applications, Elsevier Science Publishers BV, Amsterdam, 1993]을 참조한다.
예를 들어, 본 발명의 리포솜은, 리포솜에서 목적하는 유도체화 지질의 최종 몰 퍼센트에 상응하는 지질 농도에서, 친수성 중합체로 유도체화된 지질을 미리 형성된 리포솜 내로 확산시킴으로써, 예컨대 미리 형성된 리포솜을 지질-그라프트 중합체로 구성된 미셀에 노출시킴으로써 제조될 수 있다. 친수성 중합체를 함유하는 리포솜은 또한 관련 기술분야에 알려져 있는 바와 같은 균질화, 지질-장 수화 또는 압출 기술에 의해 형성될 수 있다.
본 발명의 한 측면에서, 리포솜은 선택된 크기 범위에서 실질적으로 균질한 크기를 갖도록 제조된다. 한 효과적인 사이징 방법은 리포솜의 수성 현탁액을 선택된 균일한 기공 크기를 갖는 일련의 폴리카르보네이트 막을 통해 압출하는 것을 수반하며; 막의 기공 크기는 대략 상기 막을 통한 압출에 의해 생성된 리포솜의 최대 크기에 상응할 것이다. 예를 들어, 미국 특허 번호 4,737,323 (1988년 4월 12일)을 참조한다.
본 발명의 제제의 방출 특징은 캡슐화 물질, 캡슐화된 약물의 농도 및 방출 조절제의 존재에 좌우된다. 예를 들어, 방출은, 예를 들어 위에서와 같은 낮은 pH에서만, 또는 장에서와 같은 보다 높은 pH에서만 방출되게 하는 pH 감수성 코팅을 사용하여, pH 의존성이도록 조작될 수 있다. 장용 코팅은 위를 통한 통과 이후까지 방출이 발생하는 것을 방지하기 위해 사용될 수 있다. 다중 코팅 또는 상이한 물질 내에 캡슐화된 시안아미드의 혼합물은 위에서의 초기 방출에 이어서 장에서의 후속 방출을 수득하기 위해 사용될 수 있다. 방출은 또한 캡슐로부터의 확산에 의해 수분 흡수 또는 약물의 방출을 증가시킬 수 있는, 염 또는 기공 형성제를 포함시키는 것에 의해 조작될 수 있다. 약물의 용해도를 조절하는 부형제가 또한 방출 속도를 제어하는데 사용될 수 있다. 매트릭스의 분해 또는 매트릭스로부터의 방출을 증진시키는 작용제가 또한 혼입될 수 있다. 이들은 약물에 첨가될 수 있거나, 분리된 상으로서 (즉, 미립자로서) 첨가될 수 있거나, 또는 화합물에 따라 중합체 상 중에 공-용해될 수 있다. 모든 경우에 양은 0.1 내지 30 퍼센트 (w/w 중합체)이어야 한다. 분해 증진제의 유형은 무기 염, 예컨대 황산암모늄 및 염화암모늄, 유기 산, 예컨대 시트르산, 벤조산 및 아스코르브산, 무기 염기, 예컨대 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산칼슘, 탄산아연 및 수산화아연, 및 유기 염기, 예컨대 프로타민 술페이트, 스페르민, 콜린, 에탄올아민, 디에탄올아민 및 트리에탄올아민, 및 계면활성제, 예컨대 트윈(Tween)® 및 플루로닉(Pluronic)®을 포함한다. 매트릭스에 마이크로구조를 부가하는 기공 형성제 (즉, 수용성 화합물, 예컨대 무기 염 및 당)는 미립자로서 첨가된다. 범위는 1 내지 30 퍼센트 (w/w 중합체)이어야 한다.
흡수는 또한 장에서의 입자의 체류 시간을 변경시킴으로써 조작될 수 있다. 이는, 예를 들어 입자를 점막 접착 중합체로 코팅하거나, 또는 점막 접착 중합체를 캡슐화 물질로서 선택함으로써 달성될 수 있다. 예는 유리 카르복실 기를 갖는 대부분의 중합체, 예컨대 키토산, 셀룰로스, 및 특히 폴리아크릴레이트 (본원에 사용된 폴리아크릴레이트는 아크릴레이트 기 및 변형된 아크릴레이트 기, 예컨대 시아노아크릴레이트 및 메타크릴레이트를 포함하는 중합체를 지칭함)를 포함한다.
제약 조합물
본 발명은 특히 본원에 언급된 질환 중 1종 이상의 치료에서의 화학식 I의 화합물 (또는 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물)의 용도에 관한 것이며; 여기서 치료에 대한 반응은, 예를 들어 질환의 증상 중 1종 이상의 부분 또는 완전 제거 내지 완전 치유 또는 완화에 의해 입증된 바와 같이 유익하다.
화학식 I의 화합물은 또한 하기 화합물 및 항체-약물 접합체와 조합하여 사용될 수 있다:
BCR-ABL 억제제: 이마티닙 (글리벡(Gleevec)®); 닐로티닙 히드로클로라이드; 닐로티닙 (타시그나(Tasigna)®); 다사티닙 (BMS-345825); 보수티닙 (SKI-606); 포나티닙 (AP24534); 바페티닙 (INNO406); 다누세르팁 (PHA-739358), AT9283 (CAS 1133385-83-7); 사라카티닙 (AZD0530); 및 N-[2-[(1S,4R)-6-[[4-(시클로부틸아미노)-5-(트리플루오로메틸)-2-피리미디닐]아미노]-1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌-1,4-이민-9-일]-2-옥소에틸]-아세트아미드 (PF-03814735, CAS 942487-16-3); 및 LGX818;
ALK 억제제: PF-2341066 (잘코리(XALKORI)®; 크리조티닙); 5-클로로-N4-(2-(이소프로필술포닐)페닐)-N2-(2-메톡시-4-(4-(4-메틸피페라진-1-일)피페리딘-1-일)페닐)피리미딘-2,4-디아민; GSK1838705A; 및 CH5424802;
BRAF 억제제: 베무라페닙 (PLX4032); 및 다브라페닙;
FLT3 억제제: 수니티닙 말레이트 (화이자(Pfizer)에 의해 상표명 수텐트(Sutent)® 하에 판매됨); PKC412 (미도스타우린); 타누티닙, 소라페닙, 수니티닙, 미도스타우린, 레스타우르티닙, KW-2449, 퀴자르티닙 (AC220) 및 크레놀라닙;
MEK 억제제: 트라메티닙;
혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 수용체 억제제: 베바시주맙 (제넨테크(Genentech)/로슈(Roche)에 의해 상표 아바스틴(Avastin)® 하에 판매됨), 악시티닙 (N-메틸-2-[[3-[(E)-2-피리딘-2-일에테닐]-1H-인다졸-6-일]술파닐]벤즈아미드, AG013736으로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO 01/002369에 기재되어 있음), 브리바닙 알라니네이트 ((S)-((R)-1-(4-(4-플루오로-2-메틸-1H-인돌-5-일옥시)-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일옥시)프로판-2-일)2-아미노프로파노에이트, BMS-582664로도 알려져 있음), 모테사닙 (N-(2,3-디히드로-3,3-디메틸-1H-인돌-6-일)-2-[(4-피리디닐메틸)아미노]-3-피리딘카르복스아미드, PCT 공개 번호 WO 02/066470에 기재되어 있음), 파시레오티드 (SOM230으로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO 02/010192에 기재되어 있음), 소라페닙 (상표명 넥사바르(Nexavar)® 하에 판매됨);
HER2 수용체 억제제: 트라스투주맙 (제넨테크/로슈에 의해 상표 헤르셉틴(Herceptin)® 하에 판매됨), 네라티닙 (HKI-272로도 알려져 있음 (2E)-N-[4-[[3-클로로-4-[(피리딘-2-일)메톡시]페닐]아미노]-3-시아노-7-에톡시퀴놀린-6-일]-4-(디메틸아미노)부트-2-엔아미드, PCT 공개 번호 WO 05/028443에 기재되어 있음), 라파티닙 또는 라파티닙 디토실레이트 (글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)에 의해 상표 타이커브(Tykerb)® 하에 판매됨); 트라스투주맙 엠탄신 (미국에서는 아도-트라스투주맙 엠탄신, 상표명 카드실라(Kadcyla)) - 세포독성제 메르탄신 (DM1)에 연결된 모노클로날 항체 트라스투주맙 (헤르셉틴)으로 이루어진 항체-약물 접합체;
CD20 항체: 리툭시맙 (제넨테크/로슈에 의해 상표 리툭산(Rituxan)® 및 맙테라(MabThera)® 하에 판매됨), 토시투모맙 (글락소스미스클라인에 의해 상표 벡사르(Bexxar)® 하에 판매됨), 오파투무맙 (글락소스미스클라인에 의해 상표 아르제라(Arzerra)® 하에 판매됨);
티로신 키나제 억제제: 에를로티닙 히드로클로라이드 (제넨테크/로슈에 의해 상표 타르세바(Tarceva)® 하에 판매됨), 리니파닙 (N-[4-(3-아미노-1H-인다졸-4-일)페닐]-N'-(2-플루오로-5-메틸페닐)우레아, ABT 869로도 알려져 있음, 제넨테크로부터 입수가능함), 수니티닙 말레이트 (화이자에 의해 상표명 수텐트® 하에 판매됨), 보수티닙 (4-[(2,4-디클로로-5-메톡시페닐)아미노]-6-메톡시-7-[3-(4-메틸피페라진-1-일)프로폭시]퀴놀린-3-카르보니트릴, SKI-606으로도 알려져 있고, 미국 특허 번호 6,780,996에 기재되어 있음), 다사티닙 (브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb)에 의해 상표명 스프리셀(Sprycel)® 하에 판매됨), 아르말라 (파조파닙으로도 알려져 있음, 글락소스미스클라인에 의해 상표명 보트리엔트(Votrient)® 하에 판매됨), 이마티닙 및 이마티닙 메실레이트 (노파르티스(Novartis)에 의해 상표명 글리벡(Gilvec)® 및 글리벡(Gleevec)® 하에 판매됨);
DNA 합성 억제제: 카페시타빈 (로슈에 의해 상표 젤로다(Xeloda)® 하에 판매됨), 겜시타빈 히드로클로라이드 (일라이 릴리 앤 캄파니(Eli Lilly and Company)에 의해 상표 겜자르(Gemzar)®와 하에 판매됨), 넬라라빈 ((2R,3S,4R,5R)-2-(2-아미노-6-메톡시-퓨린-9-일)-5-(히드록시메틸)옥솔란-3,4-디올, 글락소스미스클라인에 의해 상표명 아라논(Arranon)® 및 아트리안스(Atriance)® 하에 판매됨);
항신생물제: 옥살리플라틴 (사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis)에 의해 상표명 엘록사틴(Eloxatin)® 하에 판매되고, 미국 특허 번호 4,169,846에 기재되어 있음);
표피 성장 인자 수용체 (EGFR) 억제제: 게피티닙 (상표명 이레사(Iressa)® 하에 판매됨), N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3"S")-테트라히드로-3-푸라닐]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4(디메틸아미노)-2-부텐아미드 (베링거 잉겔하임(Boehringer Ingelheim)에 의해 상표명 토복(Tovok)® 하에 판매됨), 세툭시맙 (브리스톨-마이어스 스큅에 의해 상표명 에르비툭스(Erbitux)® 하에 판매됨), 파니투무맙 (암젠(Amgen)에 의해 상표명 벡티빅스(Vectibix)® 하에 판매됨);
HER 이량체화 억제제: 페르투주맙 (제넨테크에 의해 상표 옴니타르그(Omnitarg)® 하에 판매됨);
인간 과립구 콜로니-자극 인자 (G-CSF) 조정제: 필그라스팀 (암젠에 의해 상표명 뉴포젠(Neupogen)® 하에 판매됨);
면역조정제: 아푸투주맙 (로슈®로부터 입수가능함), 페그필그라스팀 (암젠에 의해 상표명 뉴라스타(Neulasta)® 하에 판매됨), 레날리도미드 (CC-5013으로도 알려져 있음, 상표명 레블리미드(Revlimid)® 하에 판매됨), 탈리도미드 (상표명 탈로미드(Thalomid)® 하에 판매됨);
CD40 억제제: 다세투주맙 (SGN-40 또는 huS2C6으로도 알려져 있음, 시애틀 제네틱스, 인크(Seattle Genetics, Inc)로부터 입수가능함);
아폽토시스촉진 수용체 효능제 (PARA): 둘라네르민 (AMG-951로도 알려져 있음, 암젠/제넨테크로부터 입수가능함);
헷지호그 길항제: 2-클로로-N-[4-클로로-3-(2-피리디닐)페닐]-4-(메틸술포닐)-벤즈아미드 (GDC-0449로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO 06/028958에 기재되어 있음);
PI3K 억제제: 4-[2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸술포닐)피페라진-1-일]메틸]티에노[3,2-d]피리미딘-4-일]모르폴린 (GDC 0941로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO 09/036082 및 WO 09/055730에 기재되어 있음), 2-메틸-2-[4-[3-메틸-2-옥소-8-(퀴놀린-3-일)-2,3-디히드로이미다조[4,5-c]퀴놀린-1-일]페닐]프로피오니트릴 (BEZ 235 또는 NVP-BEZ 235로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO 06/122806에 기재되어 있음);
포스포리파제 A2 억제제: 아나그렐리드 (상표명 아그릴린(Agrylin)® 하에 판매됨);
BCL-2 억제제: 4-[4-[[2-(4-클로로페닐)-5,5-디메틸-1-시클로헥센-1-일]메틸]-1-피페라지닐]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-모르폴리닐)-1-[(페닐티오)메틸]프로필]아미노]-3-[(트리플루오로메틸)술포닐]페닐]술포닐]벤즈아미드 (ABT-263으로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO 09/155386에 기재되어 있음);
미토겐-활성화된 단백질 키나제 키나제 (MEK) 억제제: XL-518 (CAS 번호 1029872-29-4, ACC 코포레이션(ACC Corp.)으로부터 입수가능함);
아로마타제 억제제: 엑세메스탄 (화이자에 의해 상표 아로마신(Aromasin)® 하에 판매됨), 레트로졸 (노파르티스에 의해 상표명 페마라(Femara)® 하에 판매됨), 아나스트로졸 (상표명 아리미덱스(Arimidex)® 하에 판매됨);
토포이소머라제 I 억제제: 이리노테칸 (화이자에 의해 상표 캄프토사르(Camptosar)® 하에 판매됨), 토포테칸 히드로클로라이드 (글락소스미스클라인에 의해 상표명 하이캄틴(Hycamtin)® 하에 판매됨);
토포이소머라제 II 억제제: 에토포시드 (VP-16 및 에토포시드 포스페이트로도 알려져 있음, 상표명 토포사르(Toposar)®, 베페시드(VePesid)® 및 에토포포스(Etopophos)® 하에 판매됨), 테니포시드 (VM-26으로도 알려져 있음, 상표명 부몬(Vumon)® 하에 판매됨);
mTOR 억제제: 템시롤리무스 (화이자에 의해 상표명 토리셀(Torisel)® 하에 판매됨), 리다포롤리무스 (이전에 데페롤리무스로 알려져 있었음, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-디히드록시-19,30-디메톡시-15,17,21,23,29,35-헥사메틸-2,3,10,14,20-펜타옥소-11,36-디옥사-4-아자트리시클로[30.3.1.04,9]헥사트리아콘타-16,24,26,28-테트라엔-12-일]프로필]-2-메톡시시클로헥실 디메틸포스피네이트, 또한 AP23573 및 MK8669로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO 03/064383에 기재되어 있음), 에베롤리무스 (노파르티스에 의해 상표명 아피니토르(Afinitor)® 하에 판매됨);
파골세포 골 흡수 억제제: 1-히드록시-2-이미다졸-1-일-포스포노에틸)포스폰산 1수화물 (노파르티스에 의해 상표명 조메타(Zometa)® 하에 판매됨);
CD33 항체 약물 접합체: 겜투주맙 오조가미신 (화이자/와이어쓰(Wyeth)에 의해 상표명 밀로타르그(Mylotarg)® 하에 판매됨);
CD22 항체 약물 접합체: 이노투주맙 오조가미신 (CMC-544 및 WAY-207294로도 지칭됨, 항저우 세이지 케미칼 캄파니 리미티드(Hangzhou Sage Chemical Co., Ltd.)로부터 입수가능함);
CD20 항체 약물 접합체: 이브리투모맙 티욱세탄 (상표명 제발린(Zevalin)® 하에 판매됨);
소마토스타틴 유사체: 옥트레오티드 (옥트레오티드 아세테이트로도 알려져 있음, 상표명 산도스타틴(Sandostatin)® 및 산도스타틴 라르(Sandostatin LAR)® 하에 판매됨);
합성 인터류킨-11 (IL-11): 오프렐베킨 (화이자/와이어쓰에 의해 상표명 뉴메가(Neumega)® 하에 판매됨);
합성 에리트로포이에틴: 다르베포에틴 알파 (암젠에 의해 상표명 아라네스프(Aranesp)® 하에 판매됨);
핵 인자 κ B에 대한 수용체 활성화제 (RANK) 억제제: 데노수맙 (암젠에 의해 상표명 프롤리아(Prolia)® 하에 판매됨);
트롬보포이에틴 모방체 펩티바디: 로미프롤스팀 (암젠에 의해 상표명 엔플레이트(Nplate)® 하에 판매됨);
세포 성장 자극제: 팔리페르민 (암젠에 의해 상표명 케피반스(Kepivance)® 하에 판매됨);
항-인슐린-유사 성장 인자-1 수용체 (IGF-1R) 항체: 피기투무맙 (CP-751,871로도 알려져 있음, ACC 코포레이션으로부터 입수가능함), 로바투무맙 (CAS 번호 934235-44-6);
항-CS1 항체: 엘로투주맙 (HuLuc63, CAS 번호 915296-00-3);
CD52 항체: 알렘투주맙 (상표명 캄파트(Campath)® 하에 판매됨);
CTLA-4 억제제: 트레멜리무맙 (화이자로부터 입수가능한 IgG2 모노클로날 항체, 이전에 티실리무맙으로 알려져 있었음, CP-675,206), 이필리무맙 (CTLA-4 항체, MDX-010으로도 알려져 있음, CAS 번호 477202-00-9);
PD1 억제제: 예를 들어 US 8,008,449에 개시되어 있고 그 안에 개시된 서열 (또는 그에 대해 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어 US 8,008,449에 명시된 서열에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 서열)을 갖는 니볼루맙 (본원에서 MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, BMS0936558로도 지칭됨, CAS 등록 번호 946414-94-4); 예를 들어 US 8,354,509 및 WO 2009/114335에 개시되어 있고 그 안에 개시된 서열 (또는 그에 대해 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어 US 8,354,509 및 WO2009/114335에 명시된 서열에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 서열)을 갖는 펨브롤리주맙 (본원에서 람브롤리주맙, MK-3475, MK03475, SCH-900475 또는 KEYTRUDA로도 지칭됨); 이뮤노어드헤신 (예를 들어, 불변 영역 (예를 들어, 이뮤노글로불린 서열의 Fc 영역)에 융합된 PD-Ll 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 포함하는 이뮤노어드헤신); PD1에 결합하는 인간화 IgG1k 모노클로날 항체인 피딜리주맙 (CT-011; 큐어 테크(Cure Tech)) (피딜리주맙 및 다른 인간화 항-PD-1 모노클로날 항체는 WO2009/101611에 개시되어 있음); 및 WO2010/027827 및 WO2011/066342에 개시되어 있고 PD1과 B7-H1 사이의 상호작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체인 AMP-224 (B7-DCIg; 암플리뮨(Amplimmune)); 다른 PD-1 억제제, 예를 들어 US 8,609,089, US 2010028330 및/또는 US 20120114649에 개시되어 있는 항-PD1 항체;
PDL1 억제제: PD-L1에 결합하는 모노클로날 항체이고, 예를 들어 WO 2013/0179174에 개시되어 있으며, (그에 대해 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어 WO 2013/0179174에 명시된 서열에 대해 적어도 85%, 90%, 95% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 서열을 갖는) MSB0010718C (A09-246-2로도 지칭됨; 머크 세로노(Merck Serono)); 및 YW243.55.S70, PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 모노클로날 항체인 MPDL3280A (제넨테크/로슈) (MDPL3280A 및 PD-L1에 대한 다른 인간 모노클로날 항체는 미국 특허 번호 7,943,743 및 미국 공개 번호 20120039906에 개시되어 있음); MEDI-4736, MSB-0010718C 또는 MDX-1105 (BMS-936559로도 알려져 있는 MDX-1105는 WO2007/005874에 기재된 항-PD-Ll 항체이고; 항체 YW243.55.S70은 WO 2010/077634에 기재된 항-PD-Ll 항체임)로부터 선택된 항-PD-Ll 결합 길항제;
LAG-3 억제제: LAG-3에 결합하는 모노클로날 항체인 BMS-986016 (BMS986016으로도 알려져 있음; 브리스톨-마이어스 스큅). BMS-986016 및 다른 인간화 항-LAG-3 항체는 US 2011/0150892, WO2010/019570 및 WO2014/008218에 개시되어 있음;
GITR 효능제: 예시적인 GITR 효능제는, 예를 들어 GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체 (예를 들어, 2가 항-GITR 항체), 예컨대 미국 특허 번호 6,111,090, 유럽 특허 번호 090505B1, 미국 특허 번호 8,586,023, PCT 공개 번호 WO 2010/003118 및 2011/090754에 기재된 GITR 융합 단백질, 또는 예를 들어 미국 특허 번호 7,025,962, 유럽 특허 번호 1947183B1, 미국 특허 번호 7,812,135, 미국 특허 번호 8,388,967, 미국 특허 번호 8,591,886, 유럽 특허 번호 EP 1866339, PCT 공개 번호 WO 2011/028683, PCT 공개 번호 WO 2013/039954, PCT 공개 번호 WO2005/007190, PCT 공개 번호 WO 2007/133822, PCT 공개 번호 WO2005/055808, PCT 공개 번호 WO 99/40196, PCT 공개 번호 WO 2001/03720, PCT 공개 번호 WO99/20758, PCT 공개 번호 WO2006/083289, PCT 공개 번호 WO 2005/115451, 미국 특허 번호 7,618,632 및 PCT 공개 번호 WO 2011/051726에 기재된 항-GITR 항체를 포함함;
히스톤 데아세틸라제 억제제 (HDI): 보리노스타트 (머크에 의해 상표명 졸린자(Zolinza)® 하에 판매됨);
항-CTLA4 항체: 트레멜리무맙 (화이자로부터 입수가능한 IgG2 모노클로날 항체, 이전에 티실리무맙으로 알려져 있음, CP-675,206); 및 이필리무맙 (CTLA-4 항체, MDX-010으로도 알려져 있음, CAS 번호 477202-00-9)을 포함함;
항-TIM-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편;
알킬화제: 테모졸로미드 (쉐링-플라우(Schering-Plough)/머크에 의해 상표명 테모다르(Temodar)® 및 테모달(Temodal)® 하에 판매됨), 닥티노마이신 (악티노마이신-D로도 알려져 있고, 상표명 코스메겐(Cosmegen)® 하에 판매됨), 멜팔란 (L-PAM, L-사르코리신 및 페닐알라닌 머스타드로도 알려져 있음, 상표명 알케란(Alkeran)® 하에 판매됨), 알트레타민 (헥사메틸멜라민 (HMM)으로도 알려져 있음, 상표명 헥살렌(Hexalen)® 하에 판매됨), 카르무스틴 (상표명 BiCNU® 하에 판매됨), 벤다무스틴 (상표명 트레안다(Treanda)® 하에 판매됨), 부술판 (상표명 부술펙스(Busulfex)® 및 밀레란(Myleran)® 하에 판매됨), 카르보플라틴 (상표명 파라플라틴(Paraplatin)® 하에 판매됨), 로무스틴 (CCNU로도 알려져 있음, 상표명 CeeNU® 하에 판매됨), 시스플라틴 (CDDP로됨 알려져 있음, 상표명 플라티놀(Platinol)® 및 플라티놀®-AQ 하에 판매됨), 클로람부실 (상표명 류케란(Leukeran)® 하에 판매됨), 시클로포스파미드 (상표명 시톡산(Cytoxan)® 및 네오사르(Neosar)® 하에 판매됨), 다카르바진 (DTIC, DIC 및 이미다졸 카르복스아미드로도 알려져 있음, 상표명 DTIC-돔(DTIC-Dome)® 하에 판매됨), 알트레타민 (헥사메틸멜라민 (HMM)으로도 알려져 있음, 상표명 헥살렌(Hexalen)® 하에 판매됨), 이포스파미드 (상표명 아이펙스(Ifex)® 하에 판매됨), 프로카르바진 (상표명 마툴란(Matulane)® 하에 판매됨), 메클로레타민 (질소 머스타드, 무스틴 및 메클로로에타민 히드로클로라이드로도 알려져 있음, 상표명 머스타르겐(Mustargen)® 하에 판매됨), 스트렙토조신 (상표명 자노사르(Zanosar)® 하에 판매됨), 티오테파 (티오포스포아미드, TESPA 및 TSPA로도 알려져 있음, 상표명 티오플렉스(Thioplex)® 하에 판매됨);
생물학적 반응 조절제: 바실루스 칼메트-게랭 (상표명 테라시스(theraCys)® 및 TICE® BCG 하에 판매됨), 데니류킨 디프티톡스 (상표명 온탁(Ontak)® 하에 판매됨);
항-종양 항생제: 독소루비신 (상표명 아드리아마이신(Adriamycin)® 및 루벡스(Rubex)® 하에 판매됨), 블레오마이신 (상표명 블레녹산(Blenoxane)® 하에 판매됨), 다우노루비신 (다우노루비신 히드로클로라이드, 다우노마이신 및 루비도마이신 히드로클로라이드로도 알려져 있음, 상표명 세루비딘(Cerubidine)® 하에 판매됨), 다우노루비신 리포솜 (다우노루비신 시트레이트 리포솜, 상표명 다우녹솜(DaunoXome)® 하에 판매됨), 미톡산트론 (DHAD로도 알려져 있음, 상표명 노반트론(Novantrone)® 하에 판매됨), 에피루비신 (상표명 엘렌스(Ellence)™ 하에 판매됨), 이다루비신 (상표명 이다마이신(Idamycin)®, 이다마이신 PFS® 하에 판매됨), 미토마이신 C (상표명 뮤타마이신(Mutamycin)® 하에 판매됨);
항미세관제: 에스트라무스틴 (상표명 엠사이트(Emcyt)® 하에 판매됨);
카텝신 K 억제제: 오다나카팁 (MK-0822로도 알려져 있음, N-(1-시아노시클로프로필)-4-플루오로-N2-{(1S)-2,2,2-트리플루오로-1-[4'-(메틸술포닐)비페닐-4-일]에틸}-L-류신아미드, 난저우 촌 케미칼스, 에이씨씨 코포레이션(Lanzhou Chon Chemicals, ACC Corp.) 및 케미텍(ChemieTek)으로부터 입수가능하고, PCT 공개 번호 WO 03/075836에 기재되어 있음);
에포틸론 B 유사체: 익사베필론 (브리스톨-마이어스 스큅에 의해 상표명 익셈프라(Ixempra)® 하에 판매됨);
열 쇼크 단백질 (HSP) 억제제: 타네스피마이신 (17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, KOS-953 및 17-AAG로도 알려져 있음, 시그마로부터 입수가능하고, 미국 특허 번호 4,261,989에 기재되어 있음);
TpoR 효능제: 엘트롬보팍 (글락소스미스클라인에 의해 상표명 프로막타(Promacta)® 및 레볼레이드(Revolade)® 하에 판매됨);
항유사분열제: 도세탁셀 (사노피-아벤티스에 의해 상표명 탁소테레(Taxotere)® 하에 판매됨);
부신 스테로이드 억제제: 아미노글루테티미드 (상표명 시타드렌(Cytadren)® 하에 판매됨);
항안드로겐: 닐루타미드 (상표명 닐란드론(Nilandron)® 및 아난드론(Anandron)® 하에 판매됨), 비칼루타미드 (상표명 카소덱스(Casodex)® 하에 판매됨), 플루타미드 (상표명 풀렉신(Fulexin)™ 하에 판매됨);
안드로겐: 플루옥시메스테론 (상표명 할로테스틴(Halotestin)® 하에 판매됨);
프로테아솜 억제제: 보르테조밉 (상표명 벨케이드(Velcade)® 하에 판매됨);
CDK1 억제제: 알보시딥 (플라보피리돌 또는 HMR-1275로도 알려져 있음, 2-(2-클로로페닐)-5,7-디히드록시-8-[(3S,4R)-3-히드록시-1-메틸-4-피페리디닐]-4-크로메논, 미국 특허 번호 5,621,002에 기재되어 있음);
고나도트로핀-방출 호르몬 (GnRH) 수용체 효능제: 류프롤리드 또는 류프롤리드 아세테이트 (바이엘 아게(Bayer AG)에 의해 상표명 비아두르(Viadur)®, 사노피-아벤티스에 의해 엘리가드(Eligard)® 및 애보트 랩(Abbott Lab)에 의해 루프론(Lupron)® 하에 판매됨);
탁산 항-신생물성 작용제: 카바지탁셀 (1-히드록시-7β,10β-디메톡시-9-옥소-5β,20-에폭시탁스-11-엔-2α,4,13α-트리일-4-아세테이트-2-벤조에이트-13-[(2R,3S)-3-{[(tert-부톡시)카르보닐]아미노}-2-히드록시-3-페닐프로파노에이트), 라로탁셀 ((2α,3ξ,4α,5β,7α,10β,13α)-4,10-비스(아세틸옥시)-13-({(2R,3S)-3-[(tert-부톡시카르보닐)아미노]-2-히드록시-3-페닐프로파노일}옥시)-1-히드록시-9-옥소-5,20-에폭시-7,19-시클로탁스-11-엔-2-일 벤조에이트);
5HT1a 수용체 효능제: 크살리프로덴 (SR57746으로도 알려져 있음, 1-[2-(2-나프틸)에틸]-4-[3-(트리플루오로메틸)페닐]-1,2,3,6-테트라히드로피리딘, 미국 특허 번호 5,266,573에 기재되어 있음);
HPC 백신: 글락소스미스클라인에 의해 판매되는 서바릭스(Cervarix)®, 머크에 의해 판매되는 가르다실(Gardasil)®;
철 킬레이트화제: 데페라시록스 (노파르티스에 의해 상표명 엑스자이드(Exjade)® 하에 판매됨);
항대사물: 클라드리빈 (2-클로로데옥시아데노신, 상표명 류스타틴(leustatin)® 하에 판매됨), 5-플루오로우라실 (상표명 아드루실(Adrucil)® 하에 판매됨), 6-티오구아닌 (상표명 퓨린톨(Purinethol)® 하에 판매됨), 페메트렉세드 (상표명 알림타(Alimta)® 하에 판매됨), 시타라빈 (아라비노실시토신 (Ara-C)으로도 알려져 있음, 상표명 시토사르(Cytosar)-U® 하에 판매됨), 시타라빈 리포솜 (리포솜 Ara-C로도 알려져 있음, 상표명 데포사이트(DepoCyt)™ 하에 판매됨), 데시타빈 (상표명 다코겐(Dacogen)® 하에 판매됨), 히드록시우레아 (상표명 히드레아(Hydrea)®, 드록시아(Droxia)™ 및 밀로셀(Mylocel)™ 하에 판매됨), 플루다라빈 (상표명 플루다라(Fludara)® 하에 판매됨), 플록수리딘 (상표명 FUDR® 하에 판매됨), 클라드리빈 (2-클로로데옥시아데노신 (2-CdA)으로도 알려져 있음, 상표명 류스타틴(Leustatin)™ 하에 판매됨), 메토트렉세이트 (아메토프테린, 메토트렉세이트 소듐 (MTX)으로도 알려져 있음, 상표명 류마트렉스(Rheumatrex)® 및 트렉살(Trexall)™ 하에 판매됨), 펜토스타틴 (상표명 니펜트(Nipent)® 하에 판매됨);
비스포스포네이트: 파미드로네이트 (상표명 아레디아(Aredia)® 하에 판매됨), 졸레드론산 (상표명 조메타(Zometa)® 하에 판매됨);
탈메틸화제: 5-아자시티딘 (상표명 비다자(Vidaza)® 하에 판매됨), 데시타빈 (상표명 다코겐(Dacogen)® 하에 판매됨);
식물 알칼로이드: 파클리탁셀 단백질-결합 (상표명 아브락산(Abraxane)® 하에 판매됨), 빈블라스틴 (빈블라스틴 술페이트, 빈카류코블라스틴 및 VLB로도 알려져 있음, 상표명 알카반-AQ(Alkaban-AQ)® 및 벨반(Velban)® 하에 판매됨), 빈크리스틴 (빈크리스틴 술페이트, LCR 및 VCR로도 알려져 있음, 상표명 온코빈(Oncovin)® 및 빈카사르 Pfs(Vincasar Pfs)® 하에 판매됨), 비노렐빈 (상표명 나벨빈(Navelbine)® 하에 판매됨), 파클리탁셀 (상표명 탁솔(Taxol) 및 온살(Onxal)™ 하에 판매됨);
레티노이드: 알리트레티노인 (상표명 판레틴(Panretin)® 하에 판매됨), 트레티노인 (모두-트랜스 레티노산, ATRA로도 알려져 있음, 상표명 베사노이드(Vesanoid)® 하에 판매됨), 이소트레티노인 (13-시스-레티노산, 상표명 아큐탄(Accutane)®, 암네스팀(Amnesteem)®, 클라라비스(Claravis)®, 클라루스(Clarus)®, 데쿠탄(Decutan)®, 이소탄(Isotane)®, 이조테크(Izotech)®, 오라탄(Oratane)®, 이소트레트(Isotret)® 및 소트레트(Sotret)® 하에 판매됨), 벡사로텐 (상표명 탈그레틴(Targretin)® 하에 판매됨);
글루코코르티코스테로이드: 히드로코르티손 (코르티손, 히드로코르티손 소듐 숙시네이트, 히드로코르티손 소듐 포스페이트로도 알려져 있고, 상표명 알라-코르트(Ala-Cort)®, 히드로코르티손 포스페이트, 솔루-코르테프(Solu-Cortef)®, 히드로코르트 아세테이트(Hydrocort Acetate)® 및 라나코르트(Lanacort)® 하에 판매됨), 덱사메타존 ((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-플루오로-11,17-디히드록시-17-(2-히드록시아세틸)-10,13,16-트리메틸-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-도데카히드로-3H-시클로펜타[a]페난트렌-3-온), 프레드니솔론 (상표명 델타-코르텔(Delta-Cortel)®, 오라프레드(Orapred)®, 페디아프레드(Pediapred)® 및 프레론(Prelone)® 하에 판매됨), 프레드니손 (상표명 델타손(Deltasone)®, 리퀴드 레드(Liquid Red)®, 메티코르텐(Meticorten)® 및 오라손(Orasone)® 하에 판매됨), 메틸프레드니솔론 (6-메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 소듐 숙시네이트로도 알려져 있음, 상표명 듀랄론(Duralone)®, 메드랄론(Medralone)®, 메드롤(Medrol)®, M-프레드니솔(M-Prednisol)® 및 솔루-메드롤(Solu-Medrol)® 하에 판매됨);
시토카인: 인터류킨-2 (알데스류킨 및 IL-2로도 알려져 있음, 상표명 프로류킨(Proleukin)® 하에 판매됨), 인터류킨-11 (오프렐베킨으로도 알려져 있음, 상표명 뉴메가(Neumega)® 하에 판매됨), 알파 인터페론 알파 (IFN-알파로도 알려져 있음, 상표명 인트론(Intron)® A 및 로페론-A(Roferon-A)® 하에 판매됨);
에스트로겐 수용체 하향조절제: 풀베스트란트 (상표명 파슬로덱스(Faslodex)® 하에 판매됨);
항에스트로겐 : 타목시펜 (상표명 놀바덱스(Nolvadex)® 하에 판매됨);
토레미펜 (상표명 파레스톤(Fareston)® 하에 판매됨);
선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM): 랄록시펜 (상표명 에비스타(Evista)® 하에 판매됨);
황체형성 호르몬 방출 호르몬 (LHRH) 효능제: 고세렐린 (상표명 졸라덱스(Zoladex)® 하에 판매됨);
프로게스테론: 메게스트롤 (메게스트롤 아세테이트로도 알려져 있음, 상표명 메게이스(Megace)® 하에 판매됨);
기타 세포독성제: 삼산화비소 (상표명 트리세녹스(Trisenox)® 하에 판매됨), 아스파라기나제 (L-아스파라기나제, 에르위니아 L-아스파라기나제로도 알려져 있음, 상표명 엘스파르(Elspar)® 및 키드롤라제(Kidrolase)® 하에 판매됨).
화학식 I의 화합물은 또한 하기 보조 요법과 조합하여 사용될 수 있다:
항-오심 약물: NK-1 수용체 길항제: 카소피탄트 (글락소스미스클라인에 의해 상표명 레조닉(Rezonic)® 및 준리사(Zunrisa)® 하에 판매됨); 및
세포보호제: 아미포스틴 (상표명 에티올(Ethyol)® 하에 판매됨), 류코보린 (칼슘 류코보린, 시트로보룸 인자 및 폴린산으로도 알려져 있음).
면역 체크포인트 억제제: 한 실시양태에서, 본원에 개시된 조합 요법은 면역 체크포인트 분자의 억제 분자의 억제제를 포함한다. 용어 "면역 체크포인트"는 CD4 및 CD8 T 세포의 세포 표면 상의 분자 군을 지칭한다. 이들 분자는 항종양 면역 반응을 하향-조정하거나 억제하기 위한 "브레이크"로서 효과적으로 역할을 할 수 있다. 면역 체크포인트 분자는 면역 세포를 직접적으로 억제하는 프로그램화된 사멸 1 (PD-1), 세포독성 T-림프구 항원 4 (CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40 및 LAG3을 포함하나, 이에 제한되지는 않으며, 본 발명의 방법에 유용한 면역 체크포인트 억제제로서의 역할을 할 수 있는 면역요법제는 PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및/또는 TGFR 베타의 억제제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 억제 분자의 억제는 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서의 억제에 의해 수행될 수 있다. 실시양태에서, 억제 핵산 (예를 들어, dsRNA, siRNA 또는 shRNA)은 억제 분자의 발현을 억제하는데 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 억제 신호의 억제제는 억제 분자에 결합하는 폴리펩티드, 예를 들어 가용성 리간드, 또는 항체 또는 그의 항원-결합 단편이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항-PD-1 분자는 관련 기술분야에 알려진 PD-1, PD-L1 및/또는 PD-L2의 1종 이상의 다른 억제제와 조합하여 투여된다. 길항제는 항체, 그의 항원 결합 단편, 이뮤노어드헤신, 융합 단백질 또는 올리고펩티드일 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 조합 요법은 공동자극 분자의 조정제 또는 억제 분자, 예를 들어 공동-억제 리간드 또는 수용체를 포함한다.
한 실시양태에서, 공동자극 분자의 공동자극 조정제, 예를 들어 효능제는 OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 또는 CD83 리간드의 효능제 (예를 들어, 효능작용 항체 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 가용성 융합체)로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 조합 요법은 공동자극 분자, 예를 들어 CD28, CD27, ICOS 및 GITR의 공동자극 도메인을 포함하는 양성 신호와 연관된 효능제를 포함한다.
한 실시양태에서, 항-PD-1 항체 분자는 치료 후에, 예를 들어 BRAF 억제제 (예를 들어, 베무라페닙 또는 다브라페닙)와 함께 또는 그 없이 항-CTLA4 항체 (예를 들어, 이필리무맙)를 사용하여 흑색종을 치료한 후에 투여된다. 사용될 수 있는 예시적인 용량은 약 1 내지 10 mg/kg, 예를 들어 3 mg/kg의 항-PD-1 항체 분자의 용량, 및 약 3 mg/kg의 항-CTLA-4 항체, 예를 들어 이필리무맙의 용량을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 항-LAG-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 항-TIM-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 항-LAG-3 항체 및 항-TIM-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 투여된다. 본원에 언급된 항체의 조합은, 예를 들어 별개의 항체로서 개별적으로 투여될 수 있거나, 또는 예를 들어 이중특이적 또는 삼중특이적 항체 분자로서 연결되어 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자 및 항-TIM-3 또는 항-LAG-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 이중특이적 항체가 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 언급된 항체의 조합은 암, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 암 (예를 들어, 고형 종양)을 치료하는데 사용된다. 상기 조합의 효능은 관련 기술분야에 알려진 동물 모델에서 시험될 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1 및 항-LAG-3의 상승작용적 효과를 시험하기 위한 동물 모델은, 예를 들어 문헌 [Woo et al. (2012) Cancer Res. 72(4):917-27]에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 조합 요법 (예를 들어, 단독 또는 또 다른 면역조정제 (예를 들어, 항-LAG-3 또는 항-TIM-3 항체 분자)와 조합한 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자). 한 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 항-LAG-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 항-TIM-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자는 항-LAG-3 항체 및 항-TIM-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 조합하여 투여된다. 본원에 언급된 항체의 조합은, 예를 들어 별개의 항체로서 개별적으로 투여될 수 있거나, 또는 예를 들어 이중특이적 또는 삼중특이적 항체 분자로서 연결되어 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체 분자 및 항-TIM-3 또는 항-LAG-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 이중특이적 항체가 투여된다. 특정 실시양태에서, 본원에 언급된 항체의 조합은 암, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 암 (예를 들어, 고형 종양)을 치료하는데 사용된다. 상기 조합의 효능은 관련 기술분야에 알려진 동물 모델에서 시험될 수 있다. 예를 들어, 항-PD-1 및 항-LAG-3의 상승작용적 효과를 시험하기 위한 동물 모델은, 예를 들어 문헌 [Woo et al. (2012) Cancer Res. 72(4):917-27).24]에 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, 항체 분자는 이중특이적 또는 다중특이적 항체 분자 형태이다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1에 대한 제1 결합 특이성, 및 제2 결합 특이성, 예를 들어 TIM-3, LAG-3 또는 PD-L2에 대한 제2 결합 특이성을 갖는다. 한 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 TIM-3에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1 및 LAG-3에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 또는 PD-L1에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 PD-1 및 PD-L2에 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 이중특이적 항체 분자는 TIM-3 및 LAG-3에 결합한다. 상기 분자의 임의의 조합은 다중특이적 항체 분자, 예를 들어 PD-1 또는 PD-L1에 대한 제1 결합 특이성, 및 TIM-3, LAG-3 또는 PD-L2 중 2종 이상에 대한 제2 및 제3 결합 특이성을 포함하는 삼중특이적 항체로 만들어질 수 있다.
본 개시내용 내의 참고문헌의 어떠한 인용도, 인용된 참고문헌이 본 발명의 특허가능성에 부정적인 영향을 미치는 선행 기술임을 인정하는 것으로 이해되어서는 안된다.
본 발명의 화합물의 제조 방법
본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 제조 방법을 포함한다. 기재된 반응에서, 최종 생성물에서 요망되는 반응성 관능기, 예를 들어 히드록시, 아미노, 이미노, 티오 또는 카르복시 기를 보호하여 반응에서의 이들의 원치않는 참여를 회피하는 것이 필요할 수 있다. 통상적인 보호기가 표준 관례에 따라 사용될 수 있으며, 예를 들어 문헌 [T.W. Greene and P. G. M. Wuts in "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991]을 참조한다.
화학식 I의 화합물은 하기 반응식 I에서와 같은 절차에 의해 제조할 수 있다:
<반응식 1>
Figure 112016077997066-pct00028
상기 식에서, p, q, Y1, Y2, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b, R7 및 R8은 발명의 내용란에서 화학식 I에 대해 정의된 바와 같고, Q는 할로겐 (예컨대 브로민) 또는 화합물 5 상의 할로겐과 반응하는 티올, 보로네이트 또는 스탄네이트이고, X는 Q (예컨대 보로네이트, 스탄난, 알콜, 티올, 할로겐 등)와 반응하는 반응성 기이다. 화합물 4는 주위 온도 하에서 또는 열 또는 마이크로웨이브 조건 하에서 전이 금속의 존재 또는 부재 하에 적합한 산 또는 염기 조건 하 반응을 통해 화합물 2를 화합물 3과 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 대안적으로, 화합물 2의 할로겐은 다른 할로겐 또는 적합한 활성화 기, 예컨대 트리플레이트, 메실레이트, 토실레이트, 노나플레이트, 보로네이트, 오르가노스탄난, 오르가노실릴, 유기아연, 리튬, 마그네슘 등에 의해 대체할 수 있다.
화학식 I의 화합물은 화합물 4를 X에 좌우되는 적합한 커플링 파트너 (예를 들어 화합물 5)와 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 예를 들어, 화합물 5는 반응식 I에서 X를 통해 연결된 치환된 페닐 기로서 제시되어 있다. 대안적으로, 화합물 5는 아릴-알콜, 아릴-티오, 아릴-보로네이트, 아릴-스탄네이트, 헤테로아릴-알콜, 아릴-티올, 헤테로아릴-티올, 아릴-보로네이트, 아릴-스탄난, 올레핀 또는 다른 아릴-금속 또는 헤테로아릴-금속 등일 수 있다. 커플링 파트너는 또한 치환될 수 있다. 이러한 반응은 주위 온도 하에서 또는 열 또는 마이크로웨이브 조건 하에서 전이 금속, 예컨대 팔라듐의 존재 또는 부재 하에 적합한 산 또는 염기 조건 하에서 수행할 수 있다. 다른 할로겐 또는 적합한 활성화 기 (예를 들어, 트리플레이트, 메실레이트, 토실레이트 및 노나플레이트)를 이들 변환을 위해 Br 대신에 사용할 수 있다.
대안적으로, 커플링 파트너를 뒤바꿀 수 있고, 화합물 2를 스탄난, 보로네이트, 유기-아연, 유기-리튬, 유기-마그네슘, 유기-규소, 유기-큐프레이트로 유도체화할 수 있고, 적합한 아릴-할라이드, 헤테로아릴-할라이드, 올레핀 또는 적합한 반응성 관능기 (예를 들어, 트리플레이트, 메실레이트, 토실레이트 및 노나플레이트) 등과 커플링시킬 수 있다.
이들 반응은 다양한 용매, 온도, 압력 하에서 및 적합한 분위기 하에서 기재된 순서로 또는 반대 순서로 수행할 수 있다. 반응은 산, 염기 및/또는 전이 금속 조건 하에서 수행할 수 있다.
화학식 I의 화합물의 합성의 상세한 예는 하기 실시예에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 화합물의 추가의 제조 방법
본 발명의 화합물은 유리 염기 형태의 화합물을 제약상 허용되는 무기 또는 유기 산과 반응시킴으로써 제약상 허용되는 산 부가염으로서 제조할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 염기 부가염은 유리 산 형태의 화합물을 제약상 허용되는 무기 또는 유기 염기와 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
화학식 I의 화합물은 또한 선택적 생물학적 특성을 증진시키기에 적절한 관능기를 부착함으로써 변형시킬 수 있다. 이러한 종류의 변형은 관련 기술분야에 알려져 있고, 주어진 생물계 (예를 들어, 혈액, 림프계, 중추 신경계, 고환) 내로의 침투를 증가시키고/거나, 생체이용률을 증가시키고/거나, 비경구 투여 (예를 들어, 주사, 주입)가 가능하도록 용해도를 증가시키고/거나, 대사를 변경시키고/거나, 분비 속도를 변경시키는 것을 포함한다. 이러한 유형의 변형의 예는, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜에 의한 에스테르화, 피발로일옥시 또는 지방산 치환기에 의한 유도체화, 카르바메이트로의 전환, 방향족 고리의 히드록실화 및 방향족 고리에서의 헤테로원자 치환을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 화학식 I의 화합물, 및/또는 그의 N-옥시드, 호변이성질체 및/또는 (바람직하게는 제약상 허용되는) 염이 언급되는 경우에 어디에서나, 이는 이러한 변형된 화학식을 포함하면서, 바람직하게는 화학식 I의 분자, 그의 N-옥시드, 그의 호변이성질체 및/또는 그의 염을 의미한다.
대안적으로, 염 형태의 본 발명의 화합물은 출발 물질 또는 중간체의 염을 사용하여 제조할 수 있다. 유리 형태의 화학식 I의 신규 화합물과, 중간체로서 사용될 수 있는 염을 포함한 그의 염 형태인 것 사이의 밀접한 관계를 고려하여, 예를 들어 신규 화합물의 정제 또는 확인에서, 상기 및 하기 화학식 I의 화합물들 또는 화합물에 대한 임의의 언급은 적절하고 편리한 것으로서 유리 형태의 화합물 및/또는 또한 그의 1종 이상의 염, 뿐만 아니라 1종 이상의 용매화물, 예를 들어 수화물을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다.
염은, 예를 들어 염기성 질소 원자를 갖는 화학식 I의 화합물로부터, 바람직하게는 유기 또는 무기 산과의 산 부가염, 특히 제약상 허용되는 염으로서 형성된다. 적합한 무기 산은, 예를 들어 할로겐산, 예컨대 염산, 황산 또는 인산이다. 적합한 유기 산은, 예를 들어 카르복실산, 포스폰산, 술폰산 또는 술팜산, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 옥탄산, 데칸산, 도데칸산, 글리콜산, 락트산, 푸마르산, 숙신산, 말론산, 아디프산, 피멜산, 수베르산, 아젤라산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아미노산, 예컨대 글루탐산 또는 아스파르트산, 말레산, 히드록시말레산, 메틸말레산, 시클로헥산카르복실산, 아다만탄카르복실산, 벤조산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 프탈산, 페닐아세트산, 만델산, 신남산, 메탄- 또는 에탄-술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 에탄-1,2-디술폰산, 벤젠술폰산, 4-톨루엔술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 1,5-나프탈렌-디술폰산, 2- 또는 3-메틸벤젠술폰산, 메틸황산, 에틸황산, 도데실황산, N-시클로헥실술팜산, N-메틸-, N-에틸- 또는 N-프로필-술팜산, 또는 다른 유기 프로톤산, 예컨대 아스코르브산이다.
단리 또는 정제 목적을 위해, 제약상 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트를 사용하는 것이 또한 가능하다. 치료 용도를 위해, 단지 제약상 허용되는 염 또는 유리 화합물만이 사용되고 (제약 제제의 형태로 적용가능한 경우에), 따라서 이들이 바람직하다.
유리 산 또는 유리 염기 형태의 본 발명의 화합물은 각각 상응하는 염기 부가염 또는 산 부가염 형태로부터 제조할 수 있다. 예를 들어 산 부가염 형태의 본 발명의 화합물은 적합한 염기 (예를 들어, 수산화암모늄 용액, 수산화나트륨 등)로 처리함으로써 상응하는 유리 염기로 전환시킬 수 있다. 염기 부가염 형태의 본 발명의 화합물은 적합한 산 (예를 들어, 염산 등)으로 처리함으로써 상응하는 유리 산으로 전환시킬 수 있다.
산화되지 않은 형태의 본 발명의 화합물은 0 내지 80℃에서 적합한 불활성 유기 용매 (예를 들어, 아세토니트릴, 에탄올, 수성 디옥산 등) 중 환원제 (예를 들어, 황, 이산화황, 트리페닐 포스핀, 수소화붕소리튬, 수소화붕소나트륨, 삼염화인, 트리브로마이드 등)로 처리함으로써 본 발명의 화합물의 N-옥시드로부터 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물의 전구약물 유도체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 방법에 의해 제조할 수 있다 (예를 들어, 추가의 세부사항에 대해 문헌 [Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985] 참조). 예를 들어, 적절한 전구약물은 본 발명의 비-유도체화 화합물을 적합한 카르바밀화제 (예를 들어, 1,1-아실옥시알킬카르바노클로리데이트, 파라-니트로페닐 카르보네이트 등)와 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물의 보호된 유도체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 알려진 수단에 의해 제조할 수 있다. 보호기의 생성 및 그의 제거에 적용가능한 기술의 상세한 설명은 문헌 [T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999]에서 찾아볼 수 있다.
본 발명의 화합물은 용매화물 (예를 들어, 수화물)로서 편리하게 제조하거나 또는 본 발명의 방법 동안 형성할 수 있다. 본 발명의 화합물의 수화물은 유기 용매, 예컨대 디옥신, 테트라히드로푸란 또는 메탄올을 사용하여 수성/유기 용매 혼합물로부터 재결정화함으로써 편리하게 제조할 수 있다.
본 발명의 화합물은, 화합물의 라세미 혼합물을 광학 활성 분해제와 반응시켜 한 쌍의 부분입체이성질체 화합물을 형성하고, 부분입체이성질체를 분리하고, 광학적으로 순수한 거울상이성질체를 회수함으로써 그의 개별 입체이성질체로서 제조할 수 있다. 거울상이성질체의 분해는 본 발명의 화합물의 공유 부분입체이성질체 유도체를 사용하여 수행할 수 있으나, 해리가능한 복합체 (예를 들어, 결정질 부분입체이성질체 염)가 바람직하다. 부분입체이성질체는 뚜렷한 물리적 특성 (예를 들어, 융점, 비점, 용해도, 반응성 등)을 가지며, 이들 차이를 이용함으로써 용이하게 분리할 수 있다. 부분입체이성질체는 크로마토그래피에 의해, 또는 바람직하게는, 용해도 차이를 기반으로 한 분리/분해 기술에 의해 분리할 수 있다. 이어서, 광학적으로 순수한 거울상이성질체는 라세미화를 초래하지 않는 임의의 실시 수단에 의해 분해제와 함께 회수한다. 화합물의 입체이성질체를 그의 라세미 혼합물로부터 분해하는데 적용가능한 기술의 보다 상세한 설명은 문헌 [Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981]에서 찾아볼 수 있다.
요약하면, 화학식 I의 화합물은 하기를 수반하는 방법에 의해 제조할 수 있다:
(a) 반응식의 I의 단계; 및
(b) 임의로, 본 발명의 화합물을 제약상 허용되는 염으로 전환시키는 단계;
(c) 임의로, 본 발명의 화합물의 염 형태를 비-염 형태로 전환시키는 단계;
(d) 임의로, 본 발명의 화합물의 산화되지 않은 형태를 제약상 허용되는 N-옥시드로 전환시키는 단계;
(e) 임의로, 본 발명의 화합물의 N-옥시드 형태를 그의 산화되지 않은 형태로 전환시키는 단계;
(f) 임의로, 이성질체들의 혼합물로부터 본 발명의 화합물의 개별 이성질체를 분해하는 단계;
(g) 임의로, 본 발명의 비-유도체화된 화합물을 제약상 허용되는 전구약물 유도체로 전환시키는 단계; 및
(h) 임의로, 본 발명의 화합물의 전구약물 유도체를 그의 비-유도체화된 형태로 전환시키는 단계.
출발 물질의 제조가 특별히 기재되어 있지 않는 한, 화합물은 알려져 있거나, 또는 관련 기술분야에 알려진 방법과 유사하게 또는 하기 실시예에 개시된 바와 같이 제조할 수 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 상기 변환이 단지 본 발명의 화합물의 제조 방법을 대표할 뿐이며, 다른 널리 알려진 방법을 유사하게 사용할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
실시예
하기 실시예 및 중간체는 본 발명의 범주를 제한하지 않으면서 본 발명을 예시하고자 한다. 실시예에 사용된 일부 약어는 다음과 같다: 아세트산 (AcOH); 트리에틸아민 (TEA); 테트라히드로푸란 (THF); 수성 (aq.); 분위기 (atm.); 2,2'-비스-디페닐포스파닐-[1,1']비나프탈레닐 (BINAP); 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP); tert-부톡시카르보닐 (Boc); 1,1-카르보닐디이미다졸 (CDI); 디-tert-부틸 디카르보네이트 (BOC2O); 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-(디메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP); 디클로로메탄 (DCM); 디에틸 에테르 (Et2O); p-톨루엔 술폰산 (PTSA); 에틸 아세테이트 (EtOAc); 에탄올 (EtOH); 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 (LHMDS); 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (DIAD); N,N-디이소프로필-에틸아민 (DIEA 또는 DIPEA); N,N-디메틸포름아미드 (DMF); 디메틸 술폭시드 (DMSO); 디페닐포스포릴 아지드 (DPPA); 시간 (h); 2-(1H-7-아자벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU); 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC); 수소화알루미늄리튬 (LAH); 질량 분광측정법과 커플링된 액체 크로마토그래피 (LCMS); 리튬 디이소프로필아미드 (LDA); 메탄올 (MeOH); 밀리리터 (mL); 분 (min); 마이크로웨이브 (MW); n-부틸리튬 (n-BuLi); 1,1-비스(디페닐포스피노)-페로센디클로로팔라듐 (II) (PdCl2(dppf)); 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 (0) (Pd2(dba)3); 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐 (II) (PdCl2(PPh3)2); 실온 (RT); 트리플루오로아세트산 (TFA); 테트라히드로푸란 (THF); 박층 크로마토그래피 (TLC); 체류 시간 (tR); & 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐 (Xantphos).
중간체 1
6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00029
단계 a: 디옥산 (12 mL) 중 3-브로모-2-(트리플루오로메틸)피리딘 (1.0 g, 4.42 mmol), XantPhos (256 mg, 0.442 mmol), Pd2(dba)3 (203 mg, 0.221 mmol)의 용액에 2-에틸헥실-3-메르캅토프로파노에이트 (1.1 mL, 4.87 mmol)를 (실온에서 N2 하에) 첨가하고, 이어서 DIPEA (1.55 mL, 8.85 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (25 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 30% 구배)에 의해 정제하여 2-에틸헥실 3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)프로파노에이트 (1.41 g, 3.88 mmol)를 수득하였다. MS m/z 364.0 (M+H)+.
단계 b: THF (8 mL) 중 2-에틸헥실 3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)프로파노에이트 (1.0 g, 2.75 mmol)의 용액에 포타슘 tert-부톡시드 (THF, 8.25 mL 중 1 M, 8.25 mmol)을 -78℃에서 N2 하에 첨가하였다. -78℃에서 20분 동안 격렬히 교반한 후에, 반응물을 수성 K2CO3 (2 M, 500 μL)으로 켄칭하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 수성 K2CO3 (2 M, 30 mL)을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, Et2O (2 x 20 mL)로 추출하였다. 수성 상을 pH 4가 될 때까지 6 M HCl로 산성화시키고, 생성된 탁한 현탁액을 CHCl3:IPA (9:1; 3 x 20 mL)로 추출하여 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-티올 (380 mg, 2.12 mmol)을 수득하였다. MS m/z 180.0 (M+H)+.
단계 c: 디옥산 (2 mL) 중 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-티올 (285 mg, 1.591 mmol), 3-브로모-6-클로로피라진-2-아민 (414 mg, 1.988 mmol), XantPhos (101 mg, 0.175 mmol) 및 Pd2(dba)3 (72.8 mg, 0.08 mmol)의 용액에 DIPEA (556 μL, 3.18 mmol)를 (실온에서 N2 하에) 첨가하였다. 생성된 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 130℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (25 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 30% 구배)에 의해 정제하여 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (1.41 g, 3.88 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 8.64 (dd, J=4.55, 1.26 Hz, 1 H), 7.90 (s, 1 H), 7.82 (dd, J=8.08, 0.76 Hz, 1 H), 7.46 (dd, J=8.08, 4.80 Hz, 1 H); 19F NMR (376 MHz, 클로로포름-d) δ ppm -64.34 (s, 1 F). MS m/z 307.1 (M+H)+.
중간체 2
6-(4-아미노-4-메틸피페리딘-1-일)-3-(2,3-디클로로페닐)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00030
MeCN:H2O (9:1, 15 mL, 탈기됨) 중 3-브로모-6-클로로피라진-2-아민 (1.2 g, 5.76 mmol), (2,3-디클로로페닐)보론산 (1.1 g, 5.76 mmol), 인산칼륨 (3.67 g, 17.27 mmol) 및 PdCl2(dppf)·DCM 부가물 (235 mg, 0.288 mmol)의 현탁액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (25 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 30% 구배)에 의해 정제하여 6-(4-아미노-4-메틸피페리딘-1-일)-3-(2,3-디클로로페닐)피라진-2-아민 (633 mg, 2.306 mmol)을 수득하였다. MS m/z 276.4 (M+H)+.
중간체 3
6-클로로-3-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00031
디옥산 (50 mL, 탈기됨) 중 3-브로모-6-클로로피라진-2-아민 (5.0 g, 23.99 mmol), 2,3-디클로로벤젠티올 (6.44 g, 36.0 mmol), 아이오딘화구리(I) (914 mg, 4.80 mmol), 인산칼륨 (10.18 g, 48.0 mmol) 및 1,10-페난트롤린 (1.73 mg, 9.59 mmol)의 혼합물을 85℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (50 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (톨루엔 중 DCM의 0%에서 25% 구배)에 의해 정제하여 6-클로로-3-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-아민 (3.7 g, 12.07 mmol)을 수득하였다. MS m/z 306.0 (M+H)+.
중간체 4
(R) 및 (S)-2-(7-아자스피로[3.5]노난-1-일)이소인돌린-1,3-디온
Figure 112016077997066-pct00032
단계 a: 톨루엔 (4 mL) 중 tert-부틸 1-아미노-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (250 mg, 1.04 mmol), 프탈산 무수물 (193 mg, 1.3 mmol), 활성화된 분자체 (3 옹스트롬, 250 mg) 및 DIPEA (545 μL, 3.12 mmol)의 현탁액을 105℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 5%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (233 mg, 0.629 mmol)를 수득하였다. MS m/z 370.4 (M+H)+.
단계 b: 디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 1-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (233 mg, 0.629 mmol) 및 HCl (디옥산, 800 μL 중 4 M, 3.21 mmol)의 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 회전증발기로 제거하여 표제 화합물의 HCl 염 (195 mg, 0.636 mmol)을 수득하였다. MS m/z 270.3 (M+H)+.
단계 c: 키랄 SFC 정제를 하기 조건 하에 수행하고: 셀룰로스 룩스(Cellulose LUX)-2 21x250 mm, 유량: 75 g/분, 이동상: CO2 중 50% MeOH 및 10 mM NH4OH, 검출: 220 nm UV, 이로써 2개의 피크를 수득하였다: Rt (P1)= 3.6분 (거울상이성질체 R); Rt (P2)= 7.4분 (거울상이성질체 S).
중간체 5
2-(1,1-디옥시도-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온
Figure 112016077997066-pct00033
단계 a: 톨루엔 (37 mL) 중 8-(tert-부톡시카르보닐)-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-4-카르복실산 1,1-디옥시드 (문헌 [Carreira et al., Org Lett., 2011, 13, 6134-6136]에 기재된 바와 같이 4 단계로 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트로부터 제조됨; 2.00 g, 6.00 mmol), 디페닐 포스포르아지데이트 (2.0 g, 7.26 mmol) 및 Et3N (1.0 mL, 7.26 mmol)의 용액을 115℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 벤질 알콜 (1.50 mL, 14.52 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (30 mL)을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 10%에서 90% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (1.57 g 3.58 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 339.4 (M+H)+.
단계 b: THF (8 mL) 중 tert-부틸 4-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (570 mg 1.30 mmol) 및 Pd/C (목탄 상의 10%, 138 mg)의 현탁액을 H2 분위기 하에 16시간 동안 격렬히 교반하였다. 반응물을 셀라이트의 플러그를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (20 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 tert-부틸 4-아미노-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 1,1-디옥시드를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 c: 톨루엔 (7 mL) 중 tert-부틸 4-아미노-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (415 mg, 1.363 mmol), 프탈산 무수물 (252 mg, 1.704 mmol) 및 활성화된 분자체 (3 옹스트롬, 500 mg)의 현탁액을 115℃에서 16시간 동안 격렬히 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (10 mL)로 세척하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 10% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (385 mg, 0.886 mmol)를 백색 발포체로서 수득하였다. MS m/z 433.1 (M-H)-.
단계 d: 디옥산 (4 mL) 중 tert-부틸 4-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 1,1-디옥시드 (385 mg, 0.886 mmol) 및 HCl (디옥산, 2.22 mL 중 4 M, 8.86 mmol)의 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 디옥산 (20 mL)으로 희석하고, 여과하여 2-(1,1-디옥시도-1-티아-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온 (HCl 염, 328 mg, 0.884 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 335.4 (M+H)+.
중간체 6
(R)-2-메틸-N-((S)-7-아자스피로[3.5]노난-1-일)프로판-2-술핀아미드
Figure 112016077997066-pct00034
단계 a: THF (99 mL) 중 tert-부틸 1-옥소-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (5.24 g, 21.9 mmol), 티타늄(IV) 이소프로폭시드 (16.2 mL, 54.7 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (3.45 g, 28.5 mmol)의 용액을 65℃에서 12시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시킨 후에, MeOH (9.9 mL)를 첨가하고, 이어서 수소화붕소리튬 (1.43 g, 65.7 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 3시간 동안 교반하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. MeOH를 천천히 첨가하여 과량의 보로히드라이드를 켄칭하고, 이어서 염수를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 셀라이트를 통해 여과하였다. 수성 혼합물을 EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 (S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (4.79 g 13.90 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 345.3 (M+H)+.
단계 b: DCM (3.5 mL) 중 (S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-7-아자스피로[3.5]노난-7-카르복실레이트 (0.4 g, 1.16 mmol) 및 TFA (450 μL, 5.81 mmol)의 용액을 40℃에서 30분 동안 교반하였다. 포화 수성 Na2CO3을 pH 11이 될 때까지 첨가하고, 수성 혼합물을 DCM (3 x 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (R)-2-메틸-N-((S)-7-아자스피로[3.5]노난-1-일)프로판-2-술핀아미드 (237 mg, 0.97 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 245.5 (M+H)+.
중간체 7
N-(4-메톡시벤질)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00035
단계 a: DCE (7 mL) 중 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (1.8 g, 7.11 mmol) 및 (4-메톡시페닐)메탄아민 (1.07 g, 7.82 mmol)의 용액에 소듐 시아노보로히드라이드 (2.23 g, 35.5 mmol)를 조금씩 첨가하고, 실온에서 65시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (10 mL)으로 희석하고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (0.25% Et3N 개질된 DCM 중 MeOH의 0%에서 2% 구배, 이어서 헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-((4-메톡시벤질)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (1.1 g, 2.94 mmol)를 무색 왁스로서 수득하였다. MS m/z 375.3 (M+H)+.
단계 b: DCM (2 mL) 중 tert-부틸 1-((4-메톡시벤질)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (1.1 g, 2.94 mmol) 및 TFA (2 mL)의 용액을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 수성 NaHCO3 (10 mL)으로 희석하고, EtOAc (4 x 10 mL)로 추출하여 N-(4-메톡시벤질)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (0.8 g, 2.92 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다. MS m/z 275.2 (M+H)+.
N-(4-메톡시벤질)-3-아자스피로[5.5]운데칸-7-아민을 tert-부틸 7-옥소-3-아자스피로[5.5]운데칸-3-카르복실레이트로부터 출발하여 상기 절차에 따라 수득하였다.
중간체 8
N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00036
단계 a: DCE (3 mL) 중 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (1.15 g, 4.54 mmol) 및 (R)-1-(4-메톡시페닐)에탄아민 (961 mg, 6.36 mmol)의 용액에 소듐 시아노보로히드라이드를 조금씩 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 중탄산나트륨 용액 (5 mL)으로 희석하고, EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 농축시켰다. 부분입체이성질체의 9:1 혼합물을 함유하는 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 20% 구배)에 의해 정제하여 순수한 tert-부틸 1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (주요 부분입체이성질체; 431 mg, 1.11 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.18-7.24 (m, 2 H), 6.81-6.86 (m, 2 H), 3.76 (d, J=13.64 Hz, 1 H), 3.72 (s, 3 H), 3.64-3.70 (m, 2 H), 2.65-2.92 (m, 2 H), 2.05-2.14 (m, 1 H), 1.80-1.91 (m, 1 H), 1.65-1.75 (m, 1 H), 1.42-1.60 (m, 4 H), 1.40 (s, 9 H), 1.28-1.35 (m, 1 H), 1.20 (d, J=6.57 Hz, 3 H), 1.09-1.17 (m, 2 H), 0.80 (d, J=11.37 Hz, 1 H). MS m/z 389.6 (M+H)+.
단계 b: DCM (2 mL) 중 tert-부틸 1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (주요 부분입체이성질체; 431 mg, 1.11 mmol)의 용액에 TFA (2 mL)를 첨가하고, 실온에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 DCM의 추가의 첨가로 농축시키고, 이어서 포화 수성 NaHCO3으로 희석하고, DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기부를 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.25 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 6.87 (d, J=8.7 Hz, 2 H), 3.85-3.78 (m, 1 H), 3.78 (s, 3 H), 3.35 (m, 1 H), 3.28 (m, 1 H), 3.03 (m, 2 H), 2.63 (dd, J=9.6, 7.3 Hz, 1 H), 2.06-1.85 (m, 2 H), 1.83-1.69 (m, 2 H), 1.62 (m, 1 H), 1.54-1.38 (m, 4 H), 1.33 (d, J=6.6 Hz, 3 H), 1.31-1.23 (m, 1 H). MS m/z 289.5 (M+H)+.
중간체 9
N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-1-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민
Figure 112016077997066-pct00037
단계 a: DCE (1 mL) 중 tert-부틸 4-옥소-1-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (문헌 [Carreira et al., Org Lett., 2013, 15, 4766-4769]에 기재된 바와 같이 3 단계로 tert-부틸 4-옥소피페리딘-1-카르복실레이트로부터 제조됨; 200 mg, 0.78 mmol) 및 (R)-1-(4-메톡시페닐)에탄아민 (474 mg, 3.13 mmol)의 용액에 소듐 시아노보로히드라이드 (393 mg, 3.13 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 생성된 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 수소화붕소리튬 (34 mg, 1.6 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 MeOH (2 mL)로 희석하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다 (2회). 포화 수성 NaHCO3 (5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 부분입체이성질체의 9:1 혼합물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 부분입체이성질체적으로 순수한 tert-부틸 4-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-1-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (65 mg, 0.17 mmol)를 수득하였다. 주요 부분입체이성질체: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.15 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 6.79 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 3.96-3.76 (m, 2 H), 3.77-3.66 (m, 5 H), 3.60 (t, J=8.1 Hz, 1 H), 2.98 (m, 2 H), 2.76 (t, J=7.8 Hz, 1 H), 1.95 (m, 1 H), 1.67-1.41 (m, 4 H), 1.40 (s, 9 H), 1.33 (d, J=3.1 Hz, 1 H), 1.21 (d, J=6.5 Hz, 3 H), 1.08-0.92 (m, 1 H). MS m/z 391.6 (M+H)+.
단계 b: DCM (2 mL) 중 tert-부틸 4-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-1-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (주요 부분입체이성질체, 65 mg, 0.17 mmol) 및 TFA (2 mL)의 용액을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 포화 수성 NaHCO3 (5 mL)으로 희석하고, DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-1-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민 (40 mg, 0.13 mmol)을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 291.5 (M+H)+.
중간체 10
3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00038
단계 a: 상업적으로 입수가능한 2,3-디클로로-4-아이오도피리딘을 문헌 [Marie et al., Molecules, 2012, 17,10683-10707]에 기재된 바와 같은 절차에 의해 3-클로로-4-아이오도피리딘-2-아민으로 전환시켰다.
단계 b: 디옥산 (3 mL) 중 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (100 mg, 0.619 mmol), 3-클로로-4-아이오도피리딘-2-아민 (315 mg, 1.238 mmol), XantPhos (35.8 mg, 0.062 mmol) 및 Pd2(dba)3 (28.3 mg, 0.03 mmol)의 용액에 DIPEA (324 μL, 1.856 mmol)를 (실온에서 N2 하에) 첨가하였다. 생성된 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 100℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 5% 구배)에 의해 정제하여 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (1.41 g, 3.88 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.88 (s, 1 H), 7.68 (d, J=5.56 Hz, 1 H), 6.06 (d, J=5.56 Hz, 1 H), 1.35-1.43 (m, 2 H). MS m/z 288.2 (M+H)+.
중간체 11
3-아미노-5-클로로피라진-2-티올
Figure 112016077997066-pct00039
단계 a: 디옥산 (119 mL) 중 3-브로모-6-클로로피라진-2-아민 (4.95 g, 23.74 mmol)의 용액을 질소로 10분 동안 폭기하였다. 이어서, 2-에틸헥실 3-메르캅토프로파노에이트 (3.79 mL, 24.92 mmol), Xantphos (1.37 g, 2.37 mmol), Pd2(dba)3 (1.08 g, 1.19 mmol) 및 DIPEA (8.29 mL, 47.5 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 24시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0-40% 구배)에 의해 정제하여 2-에틸헥실 3-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)프로파노에이트 (6.24 g, 18.04 mmol)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 7.82 (s, 1 H), 4.93 (br. s., 2 H), 4.14-3.96 (m, 2 H), 3.47 (t, J=6.9 Hz, 2 H), 2.78 (t, J=6.9 Hz, 2 H), 1.67-1.51 (m, 1 H), 1.44-1.20 (m, 8 H), 0.90 (t, J=7.4 Hz, 6 H). MS m/z 346.0 (M+H)+.
단계 b: -78℃에서 THF (33 mL) 중 2-에틸헥실 3-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)프로파노에이트 (2.3 g, 6.65 mmol)의 용액에 포타슘 tert-부톡시드 (THF, 19.95 mL 중 1 M, 19.95 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. MeOH (20 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 농축시켰다. 조 물질을 MeOH 중에 용해시키고, 여과하고, HPLC (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 5-20% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (TFA 염: 1.3 g, 4.72 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다. MS m/z 162.0 (M+H)+.
중간체 12
6-클로로-3-((3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00040
디옥산 (4.9 mL) 중 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (TFA 염: 0.158 g, 0.978 mmol)의 용액을 질소로 10분 동안 폭기하였다. 이어서, 3-클로로-4-아이오도피리딘 (0.468 g, 1.955 mmol), Xantphos (0.057 g, 0.098 mmol), Pd2(dba)3 (0.045 g, 0.049 mmol) 및 DIPEA (0.512 mL, 2.93 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 10시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0-40% 구배; 헵탄은 2%의 Et3N을 함유함)에 의해 정제하여 6-클로로-3-((3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (75 mg, 0.274 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 8.46 (s, 1 H), 8.22 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 6.68 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 5.17 (br. s., 2 H). MS m/z 273.0 (M+H)+.
중간체 13
6-클로로-3-((2-클로로피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00041
디옥산 (6.2 mL) 중 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (TFA 염: 0.2 g, 1.238 mmol)의 용액을 질소로 10분 동안 폭기하였다. 이어서, 2-클로로-3-아이오도피리딘 (0.593 g, 2.475 mmol), Xantphos (0.072 g, 0.124 mmol), Pd2(dba)3 (0.057 g, 0.062 mmol) 및 DIPEA (0.65 mL, 3.71 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 10시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (2%의 Et3N을 함유하는 헵탄 중 EtOAc의 0-40% 구배)에 의해 정제하여 6-클로로-3-((2-클로로피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (95 mg, 0.348 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 8.28-8.38 (m, 1 H), 7.91 (s, 1 H), 7.51-7.59 (m, 1 H), 7.22 (dd, J=7.9, 4.6 Hz, 1 H), 5.25 (br. s., 2 H). MS m/z 273.0 (M+H)+.
중간체 14
6-클로로-3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00042
디옥산 (90 mL) 중 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (TFA 염: 0.50 g, 1.814 mmol)의 용액을 질소로 10분 동안 탈기하였다. 이어서, 2,3-디클로로-4-아이오도피리딘 (0.0.99 g, 3.63 mmol), Xantphos (0.105 g, 0.181 mmol), Pd2(dba)3 (0.083 g, 0.091 mmol) 및 DIPEA (0.95 mL, 5.44 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 105℃에서 10시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 EtOAc의 0-10% 구배)에 의해 정제하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.13 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 7.95 (s, 1 H), 7.30 (br. s, 2 H), 6.83 (d, J=5.3 Hz, 1 H). MS m/z 306.9 (M+H)+.
중간체 15
6-클로로-3-((3-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00043
디옥산 (1.8 mL) 중 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (TFA 염: 50 mg, 0.181 mmol)의 용액을 질소로 10분 동안 폭기하였다. 이어서, 3-클로로-2-플루오로-4-아이오도피리딘 (0.140 g, 0.544 mmol), Xantphos (11 mg, 0.018 mmol), Pd2(dba)3 (8 mg, 0.009 mmol) 및 DIPEA (95 μL, 0.544 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 10시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배; 헵탄은 2% Et3N을 함유함)에 의해 정제하여 6-클로로-3-((3-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (41 mg, 0.137 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 8.06 (s, 1 H), 7.91 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 6.63 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 5.30 (br. s, 2 H). MS m/z 291.0 (M+H)+.
중간체 17
2-(2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온
Figure 112016077997066-pct00044
PCT 국제 출원 20044078750 (Dirat et al., 2004년 9월 16일)의 절차에 따라, 1-tert-부틸 4-에틸 피페리딘-1,4-디카르복실레이트로부터 4 단계로 tert-부틸 4-히드록시-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트를 제조하고 [1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 4.13 (dd, J=10.1, 4.6 Hz, 1 H), 4.03 (dd, J=4.6, 2.0 Hz, 1 H), 3.78-3.71 (m, 2 H), 3.69 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 3.67-3.58 (m, 2 H), 3.29 (m, 1 H), 3.16 (m, 1 H), 1.78 (m, 2 H), 1.58 (m, 1 H), 1.50 (m, 2 H), 1.47 (s, 9 H). MS m/z 258.1 (M-H)+], 이어서 하기와 같이 2 단계로 2-(2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일까지)이소인돌린-1,3-디온으로 전환시켰다.
단계 a: THF (10 mL) 중 tert-부틸 4-히드록시-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (306 mg, 1.19 mmol), 프탈이미드 (262 mg, 1.78 mmol) 및 트리페닐포스핀 (468 mg, 1.78 mmol)의 용액에 디이소프로필아자디카르복실레이트 (0.374 mL, 1.78 mmol)를 첨가하고, 16시간 동안 교반하였다. 농축시키고, 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 에틸 아세테이트의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 라세미 tert-부틸 4-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (190 mg, 0.49 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.88 (dd, J=5.4, 3.0 Hz, 2 H), 7.77 (dd, J=5.5, 3.0 Hz, 2 H), 4.65 (dd, J=8.7, 5.6 Hz, 1 H), 4.40 (dd, J=9.5, 5.6 Hz, 1 H), 4.26 (t, J=9.0 Hz, 1 H), 4.08 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 3.98 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 3.84 (m, 1 H), 3.58 (m, 1 H), 3.20 (m, 1 H), 2.94 (m, 1 H), 1.73 (m, 2 H), 1.56 (s, 9 H), 1.42-1.36 (m, 2 H).
단계 b: 디클로로메탄 (3 mL) 중 라세미 tert-부틸 4-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (190 mg, 0.49 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 디클로로메탄에 이어서 아세토니트릴의 추가의 첨가로 농축시켜 2-(2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일 포함)이소인돌린-1,3-디온을 TFA 염으로서 수득하였다 (정량적). MS m/z 287.0 (M+H)+. 추가의 특징화 없이 사용하였다.
중간체 18
2-클로로-3-메르캅토벤즈아미드
Figure 112016077997066-pct00045
단계 a: DMF (100 mL) 중 2-클로로-3-플루오로벤조니트릴 (3.15 g, 20.25 mmol), 2-메틸프로판-2-티올 (2.283 mL, 20.25 mmol) 및 Cs2CO3 (6.598 g, 20.25 mmol)의 혼합물을 22℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (200 mL) 및 EtOAc (300 mL)로 희석하였다. EtOAc 층을 물 (3 x 300 mL), 염수 (3 x 100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 45%에서 70% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 3-(tert-부틸티오)-2-클로로벤조니트릴 (1.33 g, 5.89 mmol)을 수득하였다. MS m/z 226.1 (M+H)+.
단계 b: MeOH (11 mL) 중 3-(tert-부틸티오)-2-클로로벤조니트릴 (217 mg, 0.961 mmol) 및 NaOH (1 N, 2.88 mL, 2.88 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 90℃에서 35분 동안 조사하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 농축시키고, MeOH 중에 용해시켰다. 고체를 여과해내고, 여과물을 농축시켜 거의 건조시키고, HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25 내지 50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 3-(tert-부틸티오)-2-클로로벤즈아미드 (93.6 mg, 0.384 mmol)를 수득하였다. MS m/z 244 (M+H)+.
단계 c: 3-(tert-부틸티오)-2-클로로벤즈아미드 (190 mg, 0.779 mmol) 및 진한 HCl (2.36 mL, 78 mmol)의 혼합물을 85℃에서 45분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 농축 건조시켜 조 2-클로로-3-메르캅토벤즈아미드 (HCl 염: 156 mg, 0.651 mmol)를 수득하였다. MS m/z 188 (M+H)+.
중간체 19
2-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온
Figure 112016077997066-pct00046
상기 기재된 표준 절차를 사용하여 2-(2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온 TFA 염을 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (151 mg, 0.492 mmol)과 커플링시켰다. DCM으로 희석하고, 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 에틸 아세테이트의 0%에서 60% 구배)에 의해 정제하여 2-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온 (0.140 g, 0.178 mmol)을 수득하였다. MS m/z 557.1 (M+H)+. 키랄 SFC 정제를 하기와 같이 수행하고: 칼럼: OJ-H 21x250mm, 유량: 80 g/분, 이동상: CO2 중 45% MeOH 및 5 mM NH4OH, 검출: 질량 유발, 이로써 단일 거울상이성질체를 수득하였다: 피크 1 (P1), Rt: 2.77분, MS m/z 557.1 (M+H)+, 및 피크 2 (P2), Rt: 3.91분, MS m/z 557.2 (M+H)+. 추가의 특징화 없이 각각의 거울상이성질체에 대해 개별적으로 프탈이미드 탈보호를 수행하였다.
중간체 20
3-클로로-4-아이오도-N,N-디메틸피리딘-2-아민
Figure 112016077997066-pct00047
DMSO (3.4 mL) 중 3-클로로-2-플루오로-4-아이오도피리딘 (0.26 g, 1.01 mmol) 및 디메틸아민 (THF, 1.5 ml 중 2 M, 3.03 mmol)의 용액을 70℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 물을 첨가하고, 수성 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 상을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 3-클로로-4-아이오도-N,N-디메틸피리딘-2-아민 (0.26 g, 0.922 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 7.75 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 7.33 (d, J=5.0 Hz, 1 H), 3.00 (s, 6 H). MS m/z 282.9 (M+H)+.
중간체 21
3-클로로-4-아이오도-2-메톡시피리딘
Figure 112016077997066-pct00048
DMSO (1.9 mL) 중 3-클로로-2-플루오로-4-아이오도피리딘 (150 mg, 0.571 mmol) 및 NaOMe (MeOH, 3.4 ml 중 0.5 M, 1.71 mmol)의 용액을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 물을 첨가하고, 수성 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 상을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 3-클로로-4-아이오도-2-메톡시피리딘 (123 mg, 0.456 mmol)을 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.81 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 7.55 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 3.92 (s, 3 H). MS m/z 269.9 (M+H)+.
중간체 22
6-클로로-3-((3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00049
디옥산 (탈기됨, 50 mL) 중 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (750 mg, 4.09 mmol), 4-브로모-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (1.63 g, 5.31 mmol), Xantphos (236 mg, 0.409 mmol), Pd2(dba)3 (187 mg, 0.204 mmol) 및 DIPEA (2.14 mL, 12.26 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (25 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 6-클로로-3-((3-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (722 mg, 2.35 mmol)을 담황색 고체로서 수득하였다. MS m/z 307.0 (M+H)+.
하기 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 아이오도- 또는 브로모-피리딜 및 티올레이트를 사용하여 합성하였다.
<표 1>
Figure 112016077997066-pct00050
중간체 23
6-클로로-3-((3-클로로피리다진-4-일)티오)피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00051
MeCN (5.5 mL) 중 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올 (100 mg, 0.545 mmol), 3,4-디클로로피리다진 (81 mg, 0.545 mmol) 및 DIPEA (0.142 mL, 0.817 mmol)의 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 침전물을 진공 여과에 의해 수집하여 6-클로로-3-((3-클로로피리다진-4-일)티오)피라진-2-아민 (101 mg, 0.368 mmol)을 갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.90 (d, J=5.4 Hz, 1 H), 7.95 (s, 1 H), 7.31 (s, 2 H), 7.15 (d, J=5.3 Hz, 1 H). MS m/z 274.1 (M+H)+.
중간체 24
tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00052
단계 a: DMF (328 mL) 중 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트 (35.0 g, 164 mmol), 리튬 tert-부톡시드 (15.77 g, 197 mmol) 및 알릴브로마이드 (11.54 mL, 189 mmol)의 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NH4Cl:H2O (1:1, 500 mL)를 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, Et2O (5 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 25% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-알릴-4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트 (24 g, 95 mmol)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 9.52 (s, 1 H), 5.53-5.76 (m, 1 H), 4.96-5.19 (m, 2 H), 3.80 (br. s., 2 H), 2.97 (t, J=11.49 Hz, 2 H), 2.26 (d, J=7.33 Hz, 2 H), 1.95 (dt, J=13.71, 3.13 Hz, 2 H), 1.38-1.58 (m, 11 H).
단계 b: THF (300 mL) 중 tert-부틸 4-알릴-4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트 (24 g, 95 mmol)의 용액에 비닐 마그네슘 브로마이드 (THF, 118 mL 중 1 M, 118 mmol)를 (-78℃에서 N2 하에) 첨가하였다. 생성된 용액을 1시간 내에 실온으로 천천히 가온하였다. 혼합물을 포화 수성 NH4Cl (250 mL)을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (4 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 tert-부틸 4-알릴-4-(1-히드록시알릴)피페리딘-1-카르복실레이트 (26.7 g, 95 mmol)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 9.52 (s, 1 H), 5.56-5.75 (m, 1 H), 5.05-5.18 (m, 2 H), 3.80 (br. s., 2 H), 2.97 (t, J=11.49 Hz, 2 H), 2.26 (d, J=7.33 Hz, 2 H), 1.96 (dt, J=13.83, 3.06 Hz, 2 H), 1.49-1.60 (m, 2 H), 1.41-1.49 (m, 9 H). 이 화합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 c: DCM (380 mL) 중 tert-부틸 4-알릴-4-(1-히드록시알릴)피페리딘-1-카르복실레이트 (26.7 g, 95 mmol) 및 데스-마르틴 퍼아이오디난 (44.3 g, 105 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3:Na2SO3 (1:1, 300 mL)을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, DCM (4 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 백색 고체를 수득하였다. 이 고체를 헵탄 (250 mL) 중에 현탁시키고, 5분 동안 초음파처리하였다. 백색 현탁액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 tert-부틸 4-아크릴로일-4-알릴피페리딘-1-카르복실레이트 (26.5 g, 95 mmol)를 황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 6.81 (dd, J=16.93, 10.36 Hz, 1 H), 6.40 (dd, J=16.80, 1.89 Hz, 1 H), 5.71 (dd, J=10.36, 2.02 Hz, 1 H), 5.46-5.66 (m, 1 H), 4.91-5.14 (m, 2 H), 3.78 (br. s., 2 H), 2.96 (br. s., 2 H), 2.25-2.39 (m, 2 H), 1.97-2.15 (m, 2 H), 1.37-1.57 (m, 11 H). 이 화합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 d: 톨루엔 (탈기됨, 850 mL) 중 tert-부틸 4-아크릴로일-4-알릴피페리딘-1-카르복실레이트 (26.5 g, 95 mmol)의 용액에 톨루엔 (탈기됨, 100 mL) 중 그럽스(Grubbs) II 촉매 (2.02 g, 2.38 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 85℃에서 45분 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트 (20.76 g, 83 mmol)를 갈색 고체로서 수득하였다. 톨루엔 (540 mL) 중 이 화합물 및 DDQ (565 mg, 2.49 mmol)의 용액을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 생성된 밝은 적색 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 목탄 (200 g)을 첨가하고, 생성된 현탁액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트 (15.6 g, 62.3 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 7.63-7.74 (m, 1 H), 6.20 (dt, J=5.81, 2.15 Hz, 1 H), 3.99-4.25 (m, 2 H), 2.92 (t, J=11.62 Hz, 2 H), 2.63 (s, 2 H), 1.72-1.86 (m, 2 H), 1.49 (s, 9 H), 1.29 (d, J=12.88 Hz, 2 H).
중간체 25
tert-부틸 1-(1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00053
단계 a: Et2O (100 mL) 중 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트 (4.2 g, 16.71 mmol) 및 CuI (6.37 g, 33.4 mmol)의 현탁액에 MeLi (THF, 31.3 mL 중 1.6 M, 50.1 mmol)를 (0℃에서 N2 하에) 첨가하였다. 0℃에서 90분 동안 교반한 후에, 혼합물을 포화 수성 NH4Cl을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트 (4.23 g, 15.82 mmol)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 3.89-4.00 (m, 1 H), 3.83 (d, J=13.39 Hz, 1 H), 3.11 (ddd, J=13.64, 10.36, 3.28 Hz, 1 H), 2.99 (ddd, J=13.58, 10.42, 3.54 Hz, 1 H), 2.47-2.59 (m, 1 H), 2.19-2.36 (m, 2 H), 1.74-1.97 (m, 2 H), 1.50-1.65 (m, 2 H), 1.48 (s, 9 H), 1.33-1.44 (m, 2 H), 1.17 (d, J=6.32 Hz, 3 H).
단계 b: THF (12.5 mL) 중 tert-부틸 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트 (502 mg, 1.878 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (1.57 mL, 7.51 mmol) 및 2-메틸프로판-2-술핀아미드 (455 mg, 3.76 mmol)의 용액을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후에, MeOH (3 mL)를 첨가하고, 이어서 수소화붕소리튬 (123 mg, 5.63 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl을 천천히 첨가하여 과량의 보로히드라이드를 켄칭하고, 이어서 EtOAc (30 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 격렬히 교반한 다음, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 75% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-(1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (463 mg, 1.243 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다.
중간체 26a/b
(1R,3S)-벤질 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 & (1R,3R)-벤질 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00054
단계 a: DCM (80 mL) 중 tert-부틸 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트 (4.23 g, 15.82 mmol) 및 TFA (17 mL)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. DCM (80 mL) 중 생성된 잔류물, DIPEA (13.82 mL, 79 mmol) 및 벤질 클로로포르메이트 (3.39 mL, 23.73 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NH4Cl을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, DCM (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 벤질 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (4.58 g, 15.20 mmol)를 담황색 오일로서 수득하였다. MS m/z 302.2 (M+H)+.
단계 b: 벤질 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (4.58 g, 15.20 mmol)를 하기와 같이 키랄 SFC에 의해 추가로 정제하고: 칼럼: IA 21 x 250 mm, 유량: 70 g/분, 이동상: CO2 중 45% (9:1 EtOH:MeCN), 검출: 220 nm UV, 이로써 (R)-벤질 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.02 g, 6.70 mmol), Rt: 2.0분; 및 (S)-벤질 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.11 g, 7.0 mmol), Rt: 3.6분을 수득하였다.
단계 c: THF (67 mL) 중 (R)-벤질 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.02 g, 6.70 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (5.62 mL, 26.8 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (1.625 g, 13.4 mmol)의 용액을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시킨 후에, MeOH (12 mL)를 첨가하고, 이어서 수소화붕소리튬 (0.438 g, 20.11 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃ 내지 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl을 천천히 첨가하여 과량의 보로히드라이드를 켄칭하고, 이어서 EtOAc (100 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 격렬히 교반한 다음, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 5%에서 90% 구배)에 의해 정제하여 (1R,3R)-벤질 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (1.94 g, 4.77 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 407.3 (M+H)+.
단계 c (거울상이성질체로부터임): 동일한 절차를 (S)-벤질 3-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트로부터 출발하여 수행하여 (1R,3S)-벤질 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트를 수득하였다.
중간체 27
(1R,3R)-tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트)
Figure 112016077997066-pct00055
단계 a: THF (60 mL) 중 CuCl (142 mg, 1.432 mmol), (S)-TolBINAP (972 mg, 1.432 mmol) 및 소듐 tert-부톡시드 (138 mg, 1.432 mmol)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. THF (20 mL) 중 B2pin2 (13.34 g, 52.5 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. THF (50 mL) 중 Tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데스-2-엔-8-카르복실레이트 (12.0 g, 47.7 mmol)를 첨가하고, 이어서 MeOH (3.9 mL, 95 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. H2O (150 mL)를 첨가하고, 이어서 과붕산나트륨 (36.7 g, 239 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 격렬히 교반하였다. 생성된 녹색 현탁액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 포화 수성 NaHCO3:포화 수성 Na2SO3 (1:1, 300 mL)을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (4 x 40 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 조 (R)-tert-부틸 3-히드록시-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트를 수득하였다. 이 혼합물의 거울상이성질체 결정은 90% ee (Rt(S): 1.59분, Rt(R): 1.80분; 키랄 SFC; 칼럼: IA 4.6 x 100 mm, 유량: 70 g/분, 이동상: CO2 중 5-55% MeOH, 검출: 220 nm UV)를 나타냈다.
DMF (120 mL) 중 조 (R)-tert-부틸 3-히드록시-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (이론치 47.7 mmol), 이미다졸 (4.87 g, 71.6 mmol) 및 TBSCl (8.99 g, 59.6 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NH4Cl:H2O (1:1, 250 mL)를 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, Et2O (5 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 30% 구배)에 의해 정제하여 (R)-tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (13.115 g, 34.2 mmol)를 무색 오일로서 수득하였으며, 이를 정치하여 고체화하였다.
단계 b: THF (100 mL) 중 (R)-tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (8 g, 20.86 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (17.49 mL, 83.0 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (5.06 g, 41.7 mmol)의 용액을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시킨 후에, MeOH (15 mL)를 첨가하고, 이어서 수소화붕소리튬 (1.363 g, 62.6 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 16시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl을 천천히 첨가하여 과량의 보로히드라이드를 켄칭하고, 이어서 EtOAc (100 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 격렬히 교반한 다음, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 (1R,3R)-tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (5.3 g, 10.84 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 489.3 (M+H)+.
중간체 28
(1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트)
Figure 112016077997066-pct00056
단계 a: THF (40 mL) 중 (1R,3R)-tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (3.84 g, 7.86 mmol) 및 TBAF (THF; 8.64 mL 중 1 M, 8.64 mmol)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 10% 구배)에 의해 정제하여 (1R, 3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.94 g, 7.86 mmol)를 수득하였다. MS m/z 375.3 (M+H)+.
단계 b: THF (80 mL) 중 (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (3.0 g, 8.01 mmol), 트리페닐포스핀 (4.2 g, 16.02 mmol) 및 이소퀴놀린-1-카르복실산 (4.16 g, 24.03 mmol)의 용액에 DIAD (3.1 mL, 16.02 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 포화 수성 NaHCO3을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 4% 구배)에 의해 정제하여 (2S,4R)-8-(tert-부톡시카르보닐)-4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-2-일 이소퀴놀린-1-카르복실레이트 (3.65 g, 6.89 mmol)를 오렌지색 고체로서 수득하였다. MS m/z 530.3 (M+H)+.
단계 c: THF:H2O (1:1, 70 mL) 중 (2S,4R)-8-(tert-부톡시카르보닐)-4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-2-일 이소퀴놀린-1-카르복실레이트 (3.65 g, 6.89 mmol) 및 수산화리튬 (2.95 g, 68.9 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NH4Cl을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 10% 구배)에 의해 정제하여 (1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.35 g, 6.27 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 275.2 (M+H-Boc)+.
중간체 29
(1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-(이소부티릴옥시)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트)
Figure 112016077997066-pct00057
THF (5 mL) 중 (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (200 mg, 0.534 mmol), 트리페닐포스핀 (280 mg, 1.068 mmol) 및 이소부티르산 (146 μL, 1.602 mmol)의 용액에 DIAD (208 μL, 1.068 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 포화 수성 NaHCO3을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 7% 구배)에 의해 정제하여 (1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-(이소부티릴옥시)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트) (237 mg, 0.534 mmol)를 수득하였다. MS m/z 345.3 (M+H-Boc)+.
중간체 30a/b/c
(1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-N,2-디메틸프로판-2-일술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트, (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메톡시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트, & (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-N,2-디메틸프로판-2-일술핀아미도)-3-메톡시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00058
THF 중 (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (142 mg, 0.378 mmol) 및 NaH (광유, 19 mg 중 60% 분산액, 0.473 mmol)의 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 아이오도메탄 (47 μL, 0.756 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 다음을 수득하였다: (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-N,2-디메틸프로판-2-일술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (15.0 mg, 0.039 mmol). MS m/z 289.2 (M+H-Boc)+; (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메톡시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트. MS m/z 289.2 (M+H-Boc)+; 및 (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-N,2-디메틸프로판-2-일술핀아미도)-3-메톡시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트. MS m/z 303.2 (M+H-Boc)+.
중간체 31
(1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메톡시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00059
DCM (5 mL) 중 (1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (500 mg, 1.335 mmol), 산화은(I) (340 mg, 1.468 mmol) 및 아이오도메탄 (250 μL, 4.0 mmol)의 혼합물을 실온에서 24시간 동안 및 45℃에서 24시간 동안 (광으로부터 보호하면서) 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 5% 구배)에 의해 정제하여 (1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메톡시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (248 mg, 0.638 mmol)를 수득하였다. MS m/z 289.2 (M+H-Boc)+.
중간체 32
라세미 tert-부틸 1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3,3-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00060
단계 a: MeOH (4 mL) 중 tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-(1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (365 mg, 0.746 mmol) 및 HCl (디옥산, 1.86 mL 중 4 M, 7.46 mmol)의 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 171.1 (M+H)+. THF (15 mL) 중 이 잔류물, DIPEA (2.6 mL, 14.92 mmol) 및 Boc2O (407 mg, 1.865 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NH4Cl을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, Et2O (5 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 10%에서 80% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (275 mg, 0.742 mmol)를 수득하였다. MS m/z 271.3 (M+H-Boc)+.
단계 b: DCM (7.5 mL) 중 tert-부틸 1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (275 mg, 0.742 mmol) 및 데스-마르틴 퍼아이오디난 (472 mg, 1.113 mmol)의 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 5%에서 75% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (135 mg, 0.366 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 4.57 (d, J=9.09 Hz, 1 H), 4.16 (d, J=8.08 Hz, 1 H), 3.89-4.08 (m, 2 H), 2.77-2.93 (m, 2 H), 2.71 (dd, J=18.95, 8.08 Hz, 1 H), 2.50 (d, J=18.19 Hz, 1 H), 2.07-2.24 (m, 2 H), 1.76 (td, J=12.82, 4.67 Hz, 1 H), 1.58-1.70 (m, 1 H), 1.42-1.53 (m, 18 H), 1.25-1.38 (m, 1 H).
단계 c: DCM (1 mL) 중 tert-부틸 1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (95 mg, 0.258 mmol) 및 데옥소플루오르 (190 μL, 1.031 mmol)의 혼합물을 50℃에서 48시간 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3/얼음을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc (3 x 5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 30% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3,3-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (52 mg, 0.133 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 4.55 (d, J=9.35 Hz, 1 H), 3.78-4.02 (m, 3 H), 2.64-2.86 (m, 2 H), 2.38-2.59 (m, 1 H), 2.10-2.32 (m, 1 H), 1.79-2.10 (m, 2 H), 1.58 (qd, J=12.72, 3.79 Hz, 1 H), 1.27-1.52 (m, 21 H).
하기 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 출발 물질로서의 키랄 순수한 (1R,3R)-tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트를 사용하여 합성하였다.
<표 2>
Figure 112016077997066-pct00061
중간체 33
1-아미노-2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-3-온
Figure 112016077997066-pct00062
단계 a: THF (4 mL) 중 디이소프로필아민 (0.320 mL, 2.245 mmol)의 용액을 -78℃로 냉각시키고, n-부틸리튬 (1.3 mL, 2.080 mmol)으로 처리하고, 이어서 -78℃에서 5분 동안 교반하고, 0℃로 가온하여 후속적으로 사용할 LDA의 용액을 수득하였다. THF (10 mL) 중 tert-부틸 4-시아노피페리딘-1-카르복실레이트 (153 mg, 0.728 mmol)의 -78℃ 용액에 제조된 LDA 용액 (2.8 mL)을 적가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 10분 동안 교반한 다음, -10℃에서 10분 동안 교반하였다. 반응물을 -78℃로 재냉각시키고, THF (2 mL) 중 알릴-Br (80 μL, 0.924 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 수층을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 상을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-알릴-4-시아노피페리딘-1-카르복실레이트 (40 mg, 0.16 mmol)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5.99-5.70 (m, 1 H), 5.23 (q, J=1.1 Hz, 1 H), 5.20 (dtd, J=3.3, 2.1, 1.1 Hz, 1 H), 3.96 (d, J=13.7 Hz, 2 H), 2.86 (s, 2 H), 2.36 (dt, J=7.5, 1.3 Hz, 2 H), 1.84 (dq, J=13.7, 2.6 Hz, 2 H), 1.40 (s, 11 H).
단계 b: DCM (1.5 mL) 중 tert-부틸 4-알릴-4-시아노피페리딘-1-카르복실레이트 (22 mg, 0.088 mmol) 및 NaOH (MeOH, 0.176 mL 중 2.5 M, 0.439 mmol)의 용액을 -78℃에서 30분 동안 오존 (확산 통기기)으로 통기시켰다. 반응물을 산소로 퍼징한 다음, 물과 DCM 사이에 분배하였다. 상을 분리하고, 유기부를 수집하고, 수층을 DCM (2 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 MeOH에 녹이고, 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 70% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-시아노-4-(2-메톡시-2-옥소에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (21 mg, 0.074 mmol)를 무색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 4.14 (s, 2 H), 3.75 (s, 3 H), 3.08 (t, J=12.9 Hz, 2 H), 2.62 (s, 2 H), 2.15-2.02 (m, 2 H), 1.59-1.48 (m, 2 H), 1.46 (s, 9 H). TLC (50% EtOAc/헵탄 (KMnO4로 염색됨), Rf = 0.5).
단계 c: MeOH (5 mL) 중 tert-부틸 4-시아노-4-(2-메톡시-2-옥소에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (287 mg, 1.017 mmol) 및 NH3 (MeOH, 3.0 mL 중 7 N, 21.00 mmol)의 용액을 120℃에서 밀봉된 튜브 내에서 48시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 백색 고체를 수득하였다. 고체를 EtOAc로 연화처리하고, 여과하여 tert-부틸 1-아미노-3-옥소-2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-8-카르복실레이트 (157 mg, 0.587 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.44 (s, 1 H), 8.02 (s, 1 H), 3.98 (d, J=13.3 Hz, 2 H), 2.71 (s, 2 H), 2.34 (s, 2 H), 1.81 (td, J=12.9, 4.6 Hz, 2 H), 1.49-1.30 (m, 11 H). MS m/z 268 (M+H)+.
중간체 34a/b
라세미 tert-부틸 2-플루오로-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 & tert-부틸 2,2-디플루오로-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00063
NaHMDS (THF, 8.68 mL 중 1 M, 8.68 mmol)의 -78℃ 용액에 THF (5 mL) 중 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.0 g, 7.89 mmol)의 용액을 첨가하였다. 이 온도에서 30분 동안 교반한 후에, THF (10 mL) 중 N-플루오로벤젠술폰아미드 (2.49 g, 7.89 mmol)의 용액을 첨가하였다. -78℃에서 3시간 동안 교반한 후에, 포화 수성 NaHCO3 (100 mL)으로 희석하고, DCM (3 x 100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 25% 구배)에 의해 정제하여 라세미 tert-부틸 2-플루오로-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (351 mg, 1.29 mmol), MS m/z 272.1 (M+H)+ 및 출발 물질과 공용리된 디플루오로 케톤을 수득하였다. 디플루오로 케톤/출발 물질의 합한 공용리된 분획을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 5% 구배)에 의해 다시 정제하여 tert-부틸 2,2-디플루오로-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (573 mg, 1.98 mmol)를 수득하였다. MS m/z 290.1 (M+H)+.
중간체 35
(S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00064
단계 a: DCM (10 mL) 중 tert-부틸 4-히드록시-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (544 mg, 2.11 mmol) 및 데스-마르틴 퍼아이오디난 (1.39 g, 3.17 mmol)의 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3:포화 수성 Na2S2O3 (1:1, 10 mL)을 첨가하고, 유기 상을 분리하고, 수성 상을 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-옥소-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (470 mg, 1.84 mmol)를 무색 오일로서 수득하였으며, 이를 정치하여 결정화하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 4.08 (s, 2 H), 4.05 (s, 2 H), 3.88 (dt, J = 13.7, 4.9 Hz, 2 H), 3.12 (ddd, J = 13.6, 9.8, 3.6 Hz, 2 H), 1.75 (ddd, J = 13.9, 9.7, 4.2 Hz, 2 H), 1.58-1.51 (m, 2 H), 1.48 (s, 9 H). MS m/z 256.2 (M+H)+.
단계 b: THF (4 mL) 중 tert-부틸 4-옥소-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (220 mg, 0.86 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (725 μL, 3.45 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (209 mg, 1.72 mmol)의 용액을 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후에, 수소화붕소리튬 (23 mg, 1.06 mmol)을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 MeOH의 첨가에 의해 켄칭하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 염수로 희석하고, EtOAc (4 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 (S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (170 mg, 0.47 mmol)를 수득하였다. MS m/z 361.1 (M+H)+.
하기 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 케톤 및 술폰아미드를 사용하여 합성하였다.
<표 3>
Figure 112016077997066-pct00065
중간체 36
(1R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00066
단계 a: THF (24 mL) 중 tert-부틸 1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (2.2 g, 8.68 mmol)의 용액에 0-5℃에서 LiHMDS (THF, 8.68 mL 중 1 M, 8.68 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반한 후에, 아이오도메탄 (0.543 mL, 8.68 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3으로 켄칭하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 갈색 오일을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 25% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 2-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (1.3 g, 4.86 mmol)를 수득하였다. MS m/z 268.1. (M+H)+.
단계 b: THF (10 mL) 중 tert-부틸 2-메틸-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (267 mg, 0.999 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (837 μL, 3.99 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (242 mg, 1.997 mmol)의 용액을 85℃에서 24시간 동안 교반하였다. -78℃로 냉각시킨 후에, MeOH (12 mL)를 첨가하고, 이어서 수소화붕소리튬 (65.3 mg, 3.00 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃ 내지 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl을 천천히 첨가하여 과량의 보로히드라이드를 켄칭하고, 이어서 EtOAc (100 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 격렬히 교반한 다음, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 (0.25%의 Et3N을 함유함) 중 EtOAc의 0%에서 60% 구배)에 의해 정제하여 (1R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (92 mg, 0.247 mmol)를 수득하였다. MS m/z 373.1 (M+H)+.
중간체 37a/b
(3S,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 & (3R,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00067
단계 a: THF (24 mL) 중 tert-부틸 4-옥소-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-(2.47 g, 9.67 mmol)의 용액에 -78℃에서 LiHMDS (THF, 9.67 mL 중 1 M, 9.67 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반한 후에, THF (10 mL) 중 아이오도메탄 (0.605 mL, 9.67 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3으로 켄칭하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 갈색 오일을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 20% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 3-메틸-4-옥소-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (318 mg, 1.181 mmol)를 수득하였다. MS m/z 270.2. (M+H)+.
단계 b: THF (4 mL) 중 tert-부틸 3-메틸-4-옥소-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (318 mg, 1.181 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (990 μL, 4.72 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (286 mg, 2.361 mmol)의 용액을 90℃에서 90분 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후에, 수소화붕소리튬 (65.3 mg, 3.00 mmol)을 한번에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl을 천천히 첨가하여 과량의 보로히드라이드를 켄칭하고, 이어서 EtOAc (25 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 격렬히 교반한 다음, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 유기 상을 포화 수성 NaHCO3, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 (4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (88 mg, 0.235 mmol)를 수득하였다. MS m/z 375.2 (M+H)+.
단계 c: 부분입체이성질체를 하기와 같이 키랄 SFC로 분리하고: 칼럼: LUXC4 30 x 250 mm, 유량: 80 g/분, 이동상: CO2 중 20% MeOH, 검출: 210 nm, 이로써 (3R,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트, Rt= 4.0분; 및 (3S,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트, Rt= 4.55분을 수득하였다.
중간체 38
(3S,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00068
단계 a: THF (220 mL) 중 디이소프로필아민 (23.4 mL, 166 mmol)의 -10℃ 용액에 nBuLi (헥산, 64.1 mL 중 2.5 M, 160 mmol)를 적가하였다. 이 온도에서 30분 동안 교반한 후에, THF (50 mL) 중 1-tert-부틸 4-에틸 피페리딘-1,4-디카르복실레이트 (27.5 g, 107 mmol)를 적가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. (S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)프로판알 (20.47 mL, 102 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NaHCO3:H2O (1:4, 125 mL)로 희석하고, EtOAc (50 mL)를 첨가하고, 상을 분리하였다. 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 346.4 (M+H-Boc)+.
단계 b: THF (600 mL) 중 조 1-tert-부틸 4-에틸 4-((2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-히드록시프로필)피페리딘-1,4-디카르복실레이트 (95 g, 214 mmol)의 용액에 LiBH4 (7.0 g, 321 mmol)를 조금씩 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후에, 포화 수성 NaHCO3:H2O (1:2, 150 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 더이상 버블링이 관찰되지 않을 때까지 격렬히 교반하였다. EtOAc (100 mL)를 첨가하고, 혼합물을 여과하고, 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 tert-부틸 4-((2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-히드록시프로필)-4-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (64.8 g, 161 mmol)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 c: THF (500 mL) 중 tert-부틸 4-((2S)-2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-히드록시프로필)-4-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (64.8 g, 161 mmol) 및 TBAF (THF, 242 mL 중 1 M, 242 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3:H2O (1:2, 150 mL)를 첨가하고, 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추가로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 20%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-((2S)-1,2-디히드록시프로필)-4-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (39.25 g, 136 mmol)를 반고체 무색 오일로서 수득하였다.
단계 d: THF (600 mL) 중 NaH (10.60 g, 424 mmol)의 0℃ 현탁액에 THF (200 mL) 중 tert-부틸 4-((2S)-1,2-디히드록시프로필)-4-(2-히드록시에틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (35.06 g, 121 mmol) 및 TsCl (23.10 g, 121 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl (~5 mL)을 -20℃에서 천천히 첨가하고, 반응물을 더이상 버블링이 관찰되지 않을 때까지 격렬히 교반하였다. 이 때, 포화 수성 NH4Cl (100 mL)을 첨가하고, 이어서 염수 (100 mL)를 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 (3S)-tert-부틸 4-히드록시-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (32.19 g, 119 mmol)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 171.1 (M-Boc)-.
단계 e: DCM (300 mL) 중 (3S)-tert-부틸 4-히드록시-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (32.19 g, 119 mmol) 및 데스-마르틴 퍼아이오디난 (67.4 g, 154 mmol)의 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 가온한 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 (S)-tert-부틸 3-메틸-4-옥소-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (27.68 g, 92 mmol)를 연황색 오일로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 4.09 (d, J=9.60 Hz, 1 H), 3.66-3.86 (m, 4 H), 3.03 (ddd, J=13.77, 9.73, 3.79 Hz, 1 H), 2.90 (ddd, J=13.64, 10.23, 3.41 Hz, 1 H), 1.68 (ddd, J=13.83, 9.92, 4.29 Hz, 1 H), 1.41-1.59 (m, 2 H), 1.30-1.40 (m, 10 H), 1.20-1.25 (m, 3 H).
단계 f: THF (300 mL) 중 (3S)-tert-부틸 3-메틸-4-옥소-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (22.52 g mg, 84 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (70.1 mL, 334 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (21 g, 173 mmol)의 용액을 90℃에서 21시간 동안 교반하였다. -4℃로 냉각시킨 후에, MeOH (30 mL)를 첨가하고, 이어서 수소화붕소리튬 (1.82 g, 84 mmol)을 적가하고 (반응 온도를 2℃ 미만으로 유지하면서), 생성된 혼합물을 -4℃에서 1시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NH4Cl을 천천히 첨가하여 과량의 보로히드라이드를 켄칭하고 (젤라틴-유형이 형성됨), 이어서 EtOAc (500 mL)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15분 동안 격렬히 교반하고, 이어서 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (500 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 (3S,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트를 95:5 부분입체이성질체 혼합물 (부차 부분입체이성질체 (3R,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트)로서 수득하였다.
단계 g: 부분입체이성질체를 하기와 같이 키랄 SFC에 의해 분리하고: 칼럼: LC-4 30 x 250 mm, 유량: 100 g/분, 이동상: CO2 중 30% MeOH, 검출: 225 nm, Rt: 0.95분 (부차 부분입체이성질체 Rt: 0.55분), 이로써 (3S,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (19 g, 50.68 mmol)를 수득하였다. MS m/z 375.2.
중간체 39
(4R)-4-아미노-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-2-올
Figure 112016077997066-pct00069
단계 a: H2O (5 mL) 중 (2R,4R)-4-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-2-올 디히드로클로라이드 염 (623 mg, 2.56 mmol), Na2CO3 (1357 mg, 12.80 mmol) 및 CbzCl (1048 mg, 6.14 mmol)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 격렬히 교반하였다. THF (0.5 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 및 DCM으로 희석하였다. 분리된 수성 상을 DCM (2 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 (1R,3R)-벤질 1-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (940 mg, 2.14 mmol)를 백색 발포체로서 수득하였다. MS m/z 439.3 (M+H)+.
단계 b: DCM (6 mL) 중 (1R,3R)-벤질 1-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (440 mg, 1.003 mmol) 및 데스-마르틴 퍼아이오디난 (638 mg, 1.505 mmol)의 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3:포화 수성 Na2S2O3 (1:1, 25 mL)으로 희석하였다. 분리된 수성 상을 DCM (3 x 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 70% 구배)에 의해 정제하여 (R)-벤질 1-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (415 mg, 0.951 mmol)를 백색 발포체로서 수득하였다. MS m/z 437.2 (M+H)+.
단계 c: THF (15 mL) 중 MeLi (THF, 2.61 mL 중 1.2 M, 3.13 mmol)의 용액에 THF (5 mL) 중 (R)-벤질 1-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (415 mg, 0.951 mmol)의 용액을 -30 내지 -40℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 -30 내지 -40℃에서 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 NaHSO4 (H2O 중 10% 용액)로 희석하고, EtOAc로 희석하고, 격렬히 교반하면서 실온으로 가온되도록 하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3으로 희석하고, 분리된 수성 상을 EtOAc (1 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 물 (10 mL) 및 THF (1 mL) 중 생성된 잔류물 (313 mg), Na2CO3 (498 mg, 4.70 mmol) 및 CbzCl (295 mg, 1.729 mmol)의 용액을 실온에서 3일 동안 격렬히 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 분리된 수성 상을 EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 2종의 부분입체이성질체를 수득하였다: 무색 반고체로서의 부분입체이성질체 A (112 mg, 0.25 mmol), MS m/z 453.3 (M+H)+ 및 백색 발포체/고체로서의 부분입체이성질체 B (45 mg, 0.010 mmol), MS m/z 453.3 (M+H)+.
단계 d: MeOH (8 mL) 중 부분입체이성질체 A (50 mg, 0.11 mmol) 및 Pd/C (10 wt%; 12 mg, 0.011 mmol)의 혼합물을 수소 분위기 하에 2시간 동안 격렬히 교반하였다. 셀라이트를 첨가하고, 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 DCM으로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 (4R)-4-아미노-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-2-올을 무색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 185.2 (M+H)+.
중간체 40
(1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00070
DCM (8.5 mL) 중 (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (400 mg, 1.068 mmol) 및 DAST (DCM, 1.87 mL 중 1 M, 1.87 mmol)의 혼합물을 0℃에서 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (5 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후에, 상을 분리하고, 수층을 DCM (2 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 277.2 (M+H-Boc)+.
중간체 41
(1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트
Figure 112016077997066-pct00071
DCM (5 mL) 중 (1R,3S)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-히드록시-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (200 mg, 0.534 mmol) 및 DAST (DCM, 934 μL 중 1 M, 0.934 mmol)의 혼합물을 0℃에서 90분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (5 mL)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 실온에서 10분 동안 교반한 후에, 상을 분리하고, 수층을 DCM (2 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (1R,3R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 277.2 (M+H-Boc)+.
중간체 42
3-((6-아미노-2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민
Figure 112016077997066-pct00072
단계 a: THF (5 mL) 중 5,6-디클로로피리딘-2-아민 (590 mg, 3.62 mmol)의 용액에 0℃에서 LiHMDS (THF, 7.96 mL 중 1 M, 7.96 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 10분 동안 교반한 다음, THF (5 mL) 중 Boc2O (869 mg, 3.98 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 이어서 1 M HCl의 첨가에 의해 pH 4에 이르도록 하였다. 용액을 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 (5,6-디클로로피리딘-2-일)카르바메이트 (790 mg, 3.00 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 7.86 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 7.70 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 7.20 (br s, 1 H), 1.51 (s, 9 H). MS m/z 232.9 (M+H-tBu)+.
단계 b: THF (5 mL) 중 디이소프로필아민 (1 mL, 7.07 mmol)의 용액에 -78℃에서 n-BuLi (헥산, 2.83 mL 중 2.5 M, 7.07 mmol)를 첨가하고, 생성된 용액을 이 온도에서 1시간 동안 교반하였다. THF (5 mL) 중 Tert-부틸 (5,6-디클로로피리딘-2-일)카르바메이트 (930 mg, 3.53 mmol)를 -78℃에서 첨가하였다. 이 온도에서 2시간 동안 교반한 후에, THF (5 mL) 중 아이오딘 (987 mg, 3.89 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 실온으로 가온한 후에, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 수성 Na2S2O3, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 (5,6-디클로로-4-아이오도피리딘-2-일)카르바메이트 (813 mg, 2.09 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 8.45 (s, 1 H), 7.12 (s, 1 H), 1.52 (s, 9 H). MS m/z 332.9 (M+H-tBu)+.
단계 c: 디옥산 (7.8 mL) 중 tert-부틸 (5,6-디클로로-4-아이오도피리딘-2-일)카르바메이트 (610 mg, 1.57 mmol), 소듐 3-아미노-5-클로로피라진-2-티올레이트 (302 mg, 1.65 mmol), Pd2(dba)3 (72 mg, 0.08 mmol), Xantphos (91 mg, 0.16 mmol) 및 DIPEA (0.55 mL, 3.14 mmol)의 혼합물을 110℃에서 8시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 (4-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)-5,6-디클로로피리딘-2-일)카르바메이트 (470 mg, 1.11 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 10.24 (s, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 7.31 (br s, 2 H), 7.16 (s, 1 H), 1.38 (s, 9 H). MS m/z 321.9 (M+H-Boc)+.
단계 d: tert-부틸 (4-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)-5,6-디클로로피리딘-2-일)카르바메이트 (470 mg, 1.11 mmol) 및 HCl (디옥산, 5.56 mL 중 4 M, 22.24 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 3-((6-아미노-2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 디히드로클로라이드 (411 mg, 1.04 mmol)를 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 324.0 (M+H)+.
실시예 1
(S) 및 (R) 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00073
단계 a: DIPEA (3 mL) 중 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (200 mg, 0.652 mmol) 및 N-(4-메톡시벤질)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (358 mg, 1.304 mmol)의 용액을 130℃에서 60시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 TFA (3 mL) 중에 용해시키고, 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 160℃에서 1시간 동안 및 180℃에서 15분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (73 mg, 0.482 mmol; HRMS를 기반으로 83% 순도)을 수득하였다. 이 화합물 19 mg을 HPLC (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 추가로 정제하여 순수한 표제 화합물 (9.5 mg)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.29 (dd, J=4.42, 1.39 Hz, 1 H), 7.48 (s, 1 H), 7.19-7.41 (m, 2 H), 4.06-4.26 (m, 2 H), 2.89-3.14 (m, 2 H), 2.71 (t, J=7.33 Hz, 1 H), 1.86-2.00 (m, 1 H), 1.73-1.84 (m, 1 H), 1.43-1.72 (m, 5 H), 1.27-1.42 (m, 2 H), 1.17-1.27 (m, 1 H). 19F NMR (376 MHz, 메탄올-d4) δ ppm -66.45 (s). HRMS C19H24N6F3S (M+H)+ 계산치 425.1735, 실측치 425.1753. IC50은 0.023 μM임.
단계 b: 상기 표제 화합물의 키랄 SFC 정제를 하기와 같이 수행하고: 칼럼: ID 21x250 mm, 유량: 75 g/분, 이동상: CO2 중 35% MeOH 및 10 mM NH4OH, 검출: 270 nm UV, 이로써 단일 거울상이성질체를 수득하였다: Rt (P1)= 4.9분; IC50은 0.011 μM임 및 Rt (P2)= 6.4분; IC50은 0.167 μM임.
하기 표 4에서 확인된 화학식 I의 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 티오피라진-2-아민 유도체 및 보호된 아민을 사용하여 제조하였다.
<표 4>
Figure 112016077997066-pct00074
Figure 112016077997066-pct00075
실시예 8
(R) 및 (S)-2-(6-아미노-5-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-일)-2-아자스피로[3.3]헵탄-5-아민
Figure 112016077997066-pct00076
단계 a: DIPEA (1 mL) 중 6-클로로-3-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-아민 (140 mg, 0.457 mmol) 및 tert-부틸 2-아자스피로[3.3]헵탄-5-일카르바메이트 (HCl 염, 125 mg, 0.502 mmol)의 용액을 130℃에서 24시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 DCM (5 mL) 중에 용해시키고, TFA (0.5 mL)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 2-(6-아미노-5-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-일)-2-아자스피로[3.3]헵탄-5-아민 (75 mg, 0.186 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.31 (dd, J=8.03, 1.51 Hz, 1 H), 7.18 (s, 1 H), 7.11 (t, J=8.03 Hz, 1 H), 6.60 (dd, J=8.03, 1.51 Hz, 1 H), 4.45 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 4.03 (d, J=9.03 Hz, 1 H), 3.96 (d, J=9.03 Hz, 1 H), 3.90 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 3.34-3.39 (용매와 부분적으로 중첩됨, m, 1 H), 2.12-2.25 (m, 1 H), 1.90-2.11 (m, 2 H), 1.52-1.67 (m, 1 H). HRMS C16H18Cl2N5S (M+H)+ 계산치 382.0660, 실측치 382.0585. IC50은 5.36 μM임.
단계 b: 2-(6-아미노-5-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-일)-2-아자스피로[3.3]헵탄-5-아민 (53.9 mg, 0.141 mmol)을 다음 키랄 SFC에 의해 추가로 정제하고: 칼럼: OJ-H 21x250 mm, 유량: 80 g/분, 이동상: CO2 중 26% MeOH 및 10 mM NH4OH, 검출: 269 nm UV, 이로써 단일 거울상이성질체를 수득하였다: Rt (P1)= 3.7분; IC50은 17.49 μM임 및 Rt (P2)= 4.7분; IC50은 3.31 μM임.
하기 표 5에서 확인된 화학식 I의 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 피라진-2-아민 유도체 및 보호된 아민을 사용하여 제조하였다.
<표 5>
Figure 112016077997066-pct00077
Figure 112016077997066-pct00078
Figure 112016077997066-pct00079
실시예 14
7-(6-아미노-5-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-아민
Figure 112016077997066-pct00080
DIPEA (1 mL) 중 6-클로로-3-((2,3-디클로로페닐)티오)피라진-2-아민 (140 mg, 0.457 mmol) 및 2-(7-아자스피로[3.5]노난-1-일)이소인돌린-1,3-디온 (HCl 염, 154 mg, 0.502 mmol)의 용액을 130℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. THF:MeOH (1:1, 1 mL) 중 생성된 잔류물 및 히드라진 수화물 (29 μL, 0.602 mmol)의 용액을 55℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 35-60% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 표제 화합물 (78 mg, 0.502 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.59 (s, 1 H), 7.31 (dd, J=8.03, 1.51 Hz, 1 H), 7.12 (t, J=8.03 Hz, 1 H), 6.62 (dd, J=8.03, 1.51 Hz, 1 H), 4.37 (d, J=13.55 Hz, 1 H), 4.26 (d, J=13.55 Hz, 1 H), 3.24-3.30 (용매와 부분적으로 중첩됨, m, 1 H), 3.07-3.20 (m, 1 H), 2.92 3.06 (m, 1 H), 2.26-2.39 (m, 1 H), 1.87-2.07 (m, 2 H), 1.57-1.87 (m, 4 H), 1.34-1.42 (m, 1 H). HRMS C18H22Cl2N5S (M+H)+ 계산치 410.0973, 실측치 410.1018; (라세미). IC50은 0.056 μM임.
상기 표제 화합물의 키랄 SFC 정제를 하기와 같이 수행하고: 칼럼: AD-H 21x250 mm, 유량: 80 g/분, 이동상: CO2 중 46% MeOH 및 10 mM NH4OH, 검출: 274 nm UV, 이로써 단일 거울상이성질체를 수득하였다: Rt (P1)= 4.0분 및 Rt (P2)= 5.5분. (P1 (S-거울상이성질체 (X선에 의해 결정됨))); IC50은 0.019 μM임; (P2 (R-거울상이성질체)); IC50은 0.414 μM임.
하기 표 6에서 확인된 화학식 I의 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 피라진-2-아민 유도체 및 프탈아미드-보호된 아민을 사용하여 제조하였다.
<표 6>
Figure 112016077997066-pct00081
Figure 112016077997066-pct00082
실시예 20
(S)-7-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-아민
Figure 112016077997066-pct00083
단계 a: DIPEA (3.7 mL) 중 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (230 mg, 0.750 mmol) 및 (R)-2-메틸-N-((S)-7-아자스피로[3.5]노난-1-일)프로판-2-술핀아미드 (238 mg, 0.975 mmol)의 혼합물을 105℃에서 10시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 5%에서 70% 구배)에 의해 정제하여 (R)-N-((S)-7-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (172 mg, 0.334 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 515.2 (M+H)+.
단계 b: DCM (1.4 mL) 중 (R)-N-((S)-7-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (142 mg, 0.376 mmol) 및 HCl (디옥산, 414 μL 중 4 M, 1.66 mmol)의 용액을 40℃에서 20분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, HCl (H2O 중 1 M)을 첨가하고, 생성된 수성 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 수성 상을 pH 12가 될 때까지 NH4OH (H2O 중 28%)로 염기성화시키고, DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (S)-7-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-아민 (93 mg, 0.227 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.40-8.53 (m, 1 H), 7.61-7.69 (m, 1 H), 7.55 (dd, J=8.0, 4.5 Hz, 1 H), 7.29 (d, J=8.0 Hz, 1 H), 6.19 (s, 2 H), 4.11-4.24 (m, 1 H), 3.99-4.06 (m, 1 H), 3.06-3.20 (m, 2 H), 2.90-3.06 (m, 2 H), 1.50-1.74 (m, 4 H), 1.33-1.49 (m, 2 H). HRMS C18H21F3N6S (M+H)+ 계산치 411.1566, 실측치 411.1579. IC50은 0.038 μM임.
실시예 21
(S)-5-아미노-3-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르복스아미드
Figure 112016077997066-pct00084
단계 a: DCM (30 mL) 중 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (1.2 g, 2.119 mmol)의 용액에 NBS (745 mg, 4.19 mmol)를 0℃에서 한번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 실온에서 1시간 동안 격렬히 교반하였다. 투명한 용액을 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 5-브로모-6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (938 mg, 2.51 mmol)을 수득하였다. MS m/z 387.2 (M+H)+.
단계 b: DMF (7 mL) 중 5-브로모-6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (750 mg, 1.945 mmol) 및 시안화구리(I) (348 mg, 3.89 mmol)의 혼합물을 120℃에서 14시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 5-아미노-3-클로로-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르보니트릴 (301 mg, 0.907 mmol)을 수득하였다. MS m/z 332.3 (M+H)+.
단계 c: DIPEA (0.246 mL) 중 5-아미노-3-클로로-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르보니트릴 (52 mg, 0.157 mmol) 및 (S)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (90 mg, 0.314 mmol)의 혼합물을 135℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 5-아미노-3-((S)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르보니트릴 (77 mg, 0.132 mmol)을 수득하였다. MS m/z 584.5 (M+H)+.
단계 d: MeOH (3.5 mL) 중 5-아미노-3-((S)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르보니트릴 (77 mg, 0.132 mmol) 및 NaOH (H2O, 1.451 mL 중 1 M, 1.451 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 110℃에서 35분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 5-아미노-3-((S)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르복스아미드 (79 mg, 0.132 mmol)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 602.5 (M+H)+.
단계 e: TFA (1.2 mL, 15.76 mmol) 중 5-아미노-3-((S)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르복스아미드 (79 mg, 0.132 mmol)의 용액을 출발 물질이 남아있지 않을 때까지 (3시간, LCMS에 의해 모니터링함) 마이크로웨이브 반응기 내에서 100℃에서 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (S)-5-아미노-3-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-카르복스아미드 (18.8 mg, 0.039 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.43 (dd, J=4.5, 1.4 Hz, 1 H), 7.57 (dd, J=8.1, 1.3 Hz, 1 H), 7.46 (dd, J=8.2, 4.5 Hz, 1 H), 3.92-3.88 (m, 2 H), 3.20-3.08 (m, 2 H), 2.77 (t, J=7.4 Hz, 1 H), 2.04-1.96 (m, 1 H), 1.829-1.82 (m, 1 H), 1.78-1.61 (m, 4 H), 1.53 (ddd, J=12.3, 9.2, 5.7 Hz, 1 H), 1.43 (ddd, J=9.8, 4.9, 2.0 Hz, 1 H), 1.39-1.32 (m, 1 H), 1.30-1.23 (m, 1 H). HRMS C20H25F3N7OS (M+H)+ 계산치 468.1715, 실측치 468.1761; IC50은 0.010 μM임.
하기 표 7에서 확인된 화학식 I의 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 아민 및 아민 탈보호 방법을 사용하여 제조하였다.
<표 7>
Figure 112016077997066-pct00085
실시예 23
(S)-8-(5-아미노-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)-1,2,4-트리아진-3-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00086
단계 a: MeCN (1 mL) 및 NMP (0.1 mL) 중 3-클로로-1,2,4-트리아진-5-아민 (70 mg, 0.536 mmol), (S)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (247 mg, 0.644 mmol) 및 N-메틸모르폴린 (177 μL, 1.609 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 90℃에서 45분 동안 조사하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 5% 구배)에 의해 직접 정제하여 (S)-8-(5-아미노-1,2,4-트리아진-3-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 383.5 (M+H)+.
단계 b: DCM (8 mL) 중 (S)-8-(5-아미노-1,2,4-트리아진-3-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (194 mg, 0.507 mmol)의 용액에 0℃에서 NBS (97 mg, 0.543 mmol)를 한번에 첨가하였다. 0℃에서 20분 동안 교반한 후에, 투명한 용액을 몇 방울의 수성 Na2CO3으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 (S)-8-(5-아미노-6-브로모-1,2,4-트리아진-3-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (77.9 mg, 0.169 mmol)을 수득하였다. MS m/z 463.4 (M+H)+.
단계 c: 디옥산 (1 mL) 중 (S)-8-(5-아미노-6-브로모-1,2,4-트리아진-3-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (54.1 mg, 0.117 mmol), 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-티올 (21 mg, 0.117 mmol), XantPhos (7.46 mg, 0.013 mmol), Pd2(dba)3 (5.37 mg, 0.0058 mmol) 및 DIPEA (0.041 mL, 0.234 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 130℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (S)-8-(5-아미노-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)-1,2,4-트리아진-3-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (65 mg, 0.116 mmol)을 수득하였다. MS m/z 560.5 (M+H)+.
단계 d: TFA (1.253 mL, 16.26 mmol) 중 (S)-8-(5-아미노-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)-1,2,4-트리아진-3-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (65 mg, 0.116 mmol)의 용액을 출발 물질이 남아있지 않을 때까지 (1.5시간, LC/MS에 의해 모니터링함) 100℃에서 교반하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 물로 희석하고, Et2O (3 x 10 mL)로 추출하였다. 수성 층을 NH4OH (물 중 28%)를 사용하여 pH 12로 염기성화시키고, DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (S)-8-(5-아미노-6-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)-1,2,4-트리아진-3-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (14.5 mg, 0.032 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.50-8.45 (m, 1 H), 7.60-7.54 (m, 1 H), 7.53-7.46 (m, 1 H), 4.64-4.50 (m, 2 H), 3.22-3.09 (m, 2 H), 2.88 (t, J=7.3 Hz, 1 H), 2.11-2.00 (m, 1 H), 1.94-1.86 (m, 1 H), 1.84-1.74 (m, 1 H), 1.74-1.63 (m, 3 H), 1.59-1.46 (m, 2 H), 1.45-1.39 (m, 1 H), 1.39-1.31 (m, 1 H). HRMS C18H23F3N7S (M+H)+ 계산치 426.1688, 실측치 426.1667. IC50은 0.290 μM임.
실시예 24
(S)-8-(4-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리미딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00087
단계 a: 디옥산 (1 mL) 중 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-티올 (150 mg, 0.837 mmol), 2-클로로-5-아이오도피리미딘-4-아민 (267 mg, 1.047 mmol), XantPhos (53.3 mg, 0.092 mmol), Pd2(dba)3 (38.3 mg, 0.042 mmol) 및 DIPEA (0.292 mL, 1.674 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 130℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (10 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 2-클로로-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리미딘-4-아민 (141 mg, 0.460 mmol)을 수득하였다. MS m/z 307.4 (M+H)+.
단계 b: DIPEA (0.359 mL) 중 2-클로로-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리미딘-4-아민 (70 mg, 0.228 mmol) 및 (S)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (105 mg, 0.274 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 135℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (S)-8-(4-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리미딘-2-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (128 mg, 0.228 mmol)을 수득하였다. MS m/z 559.5 (M+H)+.
단계 c: TFA (2.471 mL, 32.1 mmol) 중 (S)-8-(4-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리미딘-2-일)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (128 mg, 0.229 mmol)의 용액을 출발 물질이 남아있지 않을 때까지 (1.5시간, LCMS에 의해 모니터링함) 100℃에서 교반하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 물로 희석한 다음, Et2O (3 x 10 mL)로 추출하였다. 수성 층을 NH4OH (물 중 28%)를 사용하여 pH 12로 염기성화시키고, DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 35-60% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (S)-8-(4-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리미딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (32 mg, 0.072 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.41-8.35 (m, 1 H), 8.00 (s, 1 H), 7.47-7.43 (m, 2 H), 4.66-4.45 (m, 2 H), 3.18-3.06 (m, 2 H), 2.81 (t, J=7.3 Hz, 1 H), 2.09-1.97 (m, 1 H), 1.94-1.86 (m, 1 H), 1.81-1.72 (m, 1 H), 1.69-1.62 (m, 2 H), 1.59-1.53 (m, 2 H), 1.49-1.44 (m, 1 H), 1.40-1.35 (m, 1 H), 1.33-1.25 (m, 1 H). HRMS C19H24F3N6S (M+H)+ 계산치 425.1735, 실측치 425.1741; IC50은 2.78 μM임.
실시예 25
(R)-5-아미노-3-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((3-클로로-2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)티오)피라진-2-카르복스아미드
Figure 112016077997066-pct00088
단계 a: DIPEA (10 μL) 및 NMP (5 mL) 중 5-아미노-3-클로로피라진-2-카르보니트릴 (1.55 g, 10.0 mmol) 및 (R)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (2.88 g, 10.0 mmol)의 용액을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응 혼합물을 수성 NaHCO3을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 5% 구배)에 의해 정제하여 5-아미노-3-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-카르보니트릴 (2.74 g, 6.74 mmol)을 수득하였다. MS m/z 407.3 (M+H)+.
단계 b: (주: 이 반응은 각각 500 mg의 4개 배치로 실행하였다). MeOH (8 mL) 중 5-아미노-3-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-카르보니트릴 (500 mg, 1.23 mmol) 및 NaOH (H2O, 5 mL 중 2.5 M, 12.3 mmol)의 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 130℃에서 90분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 생성된 혼합물을 HPLC (물, 5 mM NH4OH 개질제 중 아세토니트릴의 35-60% 구배)에 의해 정제하여 5-아미노-3-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-카르복스아미드 (160 mg/반응, 총 640 mg, 1.51 mmol)를 수득하였다. MS m/z 425.3 (M+H)+.
단계 c: TFA (11 mL) 중 5-아미노-3-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-카르복스아미드 (615 mg, 1.45 mmol)의 용액을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. DCM (15 mL) 중 생성된 잔류물, DIPEA (1.2 mL, 6.89 mmol) 및 Boc2O (330 mg, 1.516 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 1%에서 10% 구배)에 의해 정제하여 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (538 mg, 1.378 mmol)를 수득하였다. MS m/z 391.0 (M+H)+.
단계 d: DCM (5 mL) 중 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (538 mg, 1.378 mmol) 및 NBS (270 mg, 1.516 mmol)의 용액을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH (2 mL)로 켄칭하고, 실온에서 20분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 수성 NaHCO3을 함유하는 분리 깔때기 내로 붓고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-5-브로모-3-카르바모일피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (627 mg, 1.336 mmol)를 수득하였다. MS m/z 471.2 (M+H)+.
단계 e: 디옥산 (3 mL) 중 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-5-브로모-3-카르바모일피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (627 mg, 1.336 mmol), XantPhos (77 mg, 0.134 mmol) 및 Pd2(dba)3 (61.2 mg, 0.067 mmol)의 용액에 2-에틸헥실-3-메르캅토프로파노에이트 (334 μL, 1.469 mmol)를 (실온에서 N2 하에) 첨가하고, 이어서 DIPEA (467 μL, 2.67 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (5 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 10% 구배)에 의해 정제하여 2-에틸헥실 3-((3-아미노-5-((R)-1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-카르바모일피라진-2-일)티오)프로파노에이트 (574 mg, 0.946 mmol)를 수득하였다. MS m/z 607.4 (M+H)+.
단계 f: THF (3 mL) 중 2-에틸헥실 3-((3-아미노-5-((R)-1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-카르바모일피라진-2-일)티오)프로파노에이트 (574 mg, 0.946 mmol)의 용액에 포타슘 tert-부톡시드 (THF, 2.84 mL 중 1 M, 2.84 mmol)를 (-78℃에서 N2 하에) 첨가하였다. -78℃에서 10분 동안 격렬히 교반한 후에, 반응물을 수성 K2CO3 (2 M, 500 μL)으로 켄칭하고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 HPLC (물, 5 mM NH4OH 개질제 중 아세토니트릴의 15%에서 40% 구배)에 의해 정제하여 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일-5-메르캅토피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (280 mg, 0.663 mmol)를 수득하였다. MS m/z 423.4 (M+H)+.
단계 g: 디옥산 (0.5 mL) 중 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일-5-메르캅토피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (88 mg, 0.208 mmol), 3-클로로-4-아이오도-2-(트리플루오로메틸)피리딘 (80 mg, 0.260 mmol), XantPhos (12.1 mg, 0.021 mmol) 및 Pd2(dba)3 (9.6 mg, 0.01 mmol)의 용액에 DIPEA (110 μL, 0.625 mmol)를 (실온에서 N2 하에) 첨가하였다. 생성된 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (5 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 진공 하에 건조시켰다. DCM (1 mL) 및 TFA (400 μL) 중 생성된 잔류물의 용액을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (R)-5-아미노-3-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-6-((3-클로로-2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)티오)피라진-2-카르복스아미드 (60 mg, 0.120 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.18 (d, J=5.05 Hz, 1 H). 6.85 (d, J=5.31 Hz, 1 H). 3.87 (t, J=13.89 Hz, 2 H). 2.98-3.14 (m, 2 H), 2.72 (t, J=7.33 Hz, 1 H). 1.86-2.02 (m, 1 H). 1.73-1.81 (m, 1 H). 1.43-1.72 (m, 5 H). 1.17-1.41 (m, 3 H). 19F NMR (376 MHz, 메탄올-d4) δ ppm -67.22 (s, 1 F). HRMS C20H24ClF3N7OS (M+H)+ 계산치 502.1404, 실측치 502.1398. IC50은 0.058 μM임.
실시예 26
(R)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00089
DIPEA (2 mL) 중 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (67 mg, 0.233 mmol) 및 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (120 mg, 0.465 mmol)의 혼합물을 130℃에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 디옥산 (5 mL) 및 HCl (디옥산 중 4 M, 1 mL) 중 생성된 잔류물의 용액을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25-50% 아세토니트릴)에 의해 정제하였다. 생성된 잔류물을 SFC (프린스턴(Princeton) DEAP 20x150mm, 유량: 80 g/분, 이동상: 5.7분 내 CO2 중 20-40% MeOH, 질량 유발 수집, 오븐 온도 40℃, 배압 120 bar)에 의해 추가로 정제하여 (R)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (23 mg, 0.057 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.50-7.64 (m, 2 H), 5.91 (d, J=5.77 Hz, 1 H), 4.26 (t, J=13.18 Hz, 2 H), 3.03-3.20 (m, 2 H), 2.79 (t, J=7.53 Hz, 1 H), 1.95-2.11 (m, 1 H), 1.83-1.95 (m, 1 H), 1.52-1.82 (m, 5 H), 1.37-1.52 (m, 2 H), 1.32 (dd, J=13.30, 2.01 Hz, 1 H). HRMS C18H25ClN7S (M+H)+ 계산치 406.1581, 실측치 406.1576. IC50은 0.014 μM임.
하기 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 아민 보호된 아민을 사용하여 합성하였다.
<표 8>
Figure 112016077997066-pct00090
실시예 28
(R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00091
단계 a: DIPEA (2 mL) 중 6-클로로-3-((3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (53 mg, 0.194 mmol)의 현탁액에 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (65 mg, 0.252 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0-50% 구배; EtOAc는 10% MeOH를 함유하고, 헵탄은 2% Et3N을 함유함)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (40 mg, 0.081 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 495.0 (M+H)+.
단계 b: DCM (0.8 mL) 중 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (40 mg, 0.081 mmol)의 용액에 HCl (디옥산, 101 μL 중 4 M, 0.404 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. HCl 수용액 (2 M, 2 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 DCM (2x)으로 추출하였다. 수성 혼합물을 pH = 12일 때까지 수산화암모늄 (물 중 28%)으로 염기성화시키고, DCM (3x)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (24 mg, 0.061 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.49 (s, 1 H), 8.25 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 6.56 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 6.24 (s, 2 H), 4.07-4.26 (m, 2 H), 2.98-3.13 (m, 2 H), 2.70 (t, J=7.4 Hz, 1 H), 1.11-1.94 (m, 10 H). HRMS C18H24ClN6S (M+H)+ 계산치 391.1472, 실측치 391.1480. IC50은 0.023 μM임.
실시예 29
(R)-8-(6-아미노-5-((2-클로로피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00092
단계 a: DIPEA (1.6 mL) 중 6-클로로-3-((2-클로로피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (85 mg, 0.311 mmol)의 현탁액에 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (105 mg, 0.405 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0-50% 구배; EtOAc는 10% MeOH를 함유하고, 헵탄은 2% Et3N을 함유함)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((2-클로로피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (40 mg, 0.081 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 8.15 (dd, J=4.5, 1.8 Hz, 1 H), 7.64 (s, 1 H), 7.01-7.18 (m, 2 H), 4.87 (br. s, 2 H), 4.24 (s, 2 H), 3.29-3.45 (m, 1 H), 3.20 (d, J=5.8 Hz, 1 H) 2.98-3.13 (m, 2 H), 1.98-2.21 (m, 1 H), 1.36-1.94 (m, 9 H), 1.22 (s, 9 H). MS m/z 495.0 (M+H)+.
단계 b: DCM (2 mL) 중 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((2-클로로피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (66 mg, 0.133 mmol)의 용액에 HCl (디옥산, 167 μL 중 4 M, 0.667 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. HCl 수용액 (2 M, 2 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 DCM (2x)으로 추출하였다. 수성 혼합물을 pH = 12일 때까지 수산화암모늄 (물 중 28%)으로 염기성화시키고, DCM (3x)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (R)-8-(6-아미노-5-((2-클로로피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (24 mg, 0.062 mmol)을 황갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.01 (dd, J=4.8, 1.8 Hz, 1 H), 7.43-7.52 (m, 1 H), 7.12 (dd, J=7.9, 4.6 Hz, 1 H), 7.00 (dd, J=7.9, 1.6 Hz, 1 H), 4.11-4.26 (m, 2 H), 2.96-3.10 (m, 2 H), 2.67-2.81 (m, 1 H), 1.06-2.05 (m, 10 H). HRMS C18H24ClN6S (M+H)+ 계산치 391.1472, 실측치 391.1470. IC50은 0.015 μM임.
실시예 30
(R)-8-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00093
단계 a: DIPEA (0.55 mL) 중 6-클로로-3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (34 mg, 0.111 mmol)의 현탁액에 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (37 mg, 0.144 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0-50% 구배; EtOAc는 10% MeOH를 함유하고, 헵탄은 2% Et3N을 함유함)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (33 mg, 0.062 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ ppm 8.02 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 7.66 (s, 1 H), 6.60 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 4.82 (s, 2 H), 4.21-4.34 (m, 2 H), 3.34-3.42 (m, 1 H), 3.20 (d, J=5.8 Hz, 1 H), 2.99-3.15 (m, 2 H), 2.08-2.21 (m, 1 H), 1.26-1.97 (m, 9 H), 1.23 (s, 9 H). MS m/z 529.1 (M+H)+.
단계 b: DCM (0.38 mL) 중 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (20 mg, 0.038 mmol)의 용액에 HCl (디옥산, 47 μL 중 4 M, 0.189 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, MeOH 중에 용해시켰다. 조 물질을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (R)-8-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (7 mg, 0.016 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.91-8.04 (m, 1 H), 7.52-7.65 (m, 1 H), 6.61 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 4.29 (t, J=14.2 Hz, 2 H), 3.06-3.22 (m, 2 H), 2.88 (t, J=7.4 Hz, 1 H), 1.21-2.17 (m, 10 H). HRMS C18H23Cl2N6S (M+H)+ 계산치 425.1082, 실측치 425.1095. IC50은 0.003 μM임.
실시예 31
(S)-7-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-아민
Figure 112016077997066-pct00094
단계 a: DIPEA (1.8 mL) 중 6-클로로-3-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (54 mg, 0.176 mmol)의 현탁액에 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (86 mg, 0.351 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0-50% 구배; EtOAc는 10% MeOH를 함유하고, 헵탄은 2% Et3N을 함유함)에 의해 정제하여 (R)-N-((S)-7-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (52 mg, 0.102 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 514.9 (M+H)+.
단계 b: DCM (0.38 mL) 중 (R)-N-((S)-7-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (20 mg, 0.039 mmol)의 용액에 HCl (디옥산, 47 μL 중 4 M, 0.189 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, MeOH 중에 용해시켰다. 조 물질을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (S)-7-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-7-아자스피로[3.5]노난-1-아민 (7 mg, 0.017 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.89 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 6.51 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 3.94-4.31 (m, 2 H), 2.76-3.11 (m, 3 H), 2.06-2.24 (m, 1 H), 1.36-1.82 (m, 7 H). HRMS C17H21Cl2N6S (M+H)+ 계산치 411.0925, 실측치 411.0938. IC50은 0.028 μM임.
실시예 32
(R)-8-(6-아미노-5-((2,3-디클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00095
단계 a: DIPEA (1.5 mL) 중 3-((3-아미노-2-클로로페닐)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (60 mg, 0.209 mmol)의 현탁액에 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (70 mg, 0.272 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0-50% 구배; 헵탄은 2% Et3N을 함유함)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((3-아미노-2-클로로페닐)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (31 mg, 0.061 mmol)를 회백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 509.0 (M+H)+.
단계 b: DCM (0.6 mL) 중 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((3-아미노-2-클로로페닐)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (31 mg, 0.061 mmol)의 용액에 HCl (디옥산, 76 μL 중 4 M, 0.304 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. HCl 수용액 (2 M, 2 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 DCM (2x)으로 추출하였다. 수성 혼합물을 pH = 12일 때까지 수산화암모늄 (물 중 28%)으로 염기성화시키고, DCM (3x)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 (R)-8-(6-아미노-5-((3-아미노-2-클로로페닐)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (18 mg, 0.042 mmol)을 황색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.40 (s, 1 H), 6.73 (t, J=8.0 Hz, 1 H), 6.50 (dd, J=8.1, 1.3 Hz, 1 H), 5.90 (dd, J=7.8, 1.3 Hz, 1 H), 4.02-4.18 (m, 2 H), 3.21 (dt, J=3.2, 1.5 Hz, 1 H), 2.98 (d, J=11.4 Hz, 2 H), 2.67 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 1.04-2.02 (m, 10 H). HRMS C19H26ClN6S (M+H)+ 계산치 405.1628, 실측치 405.1639. IC50은 0.011 μM임.
실시예 33
(R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00096
DIPEA (0.7 mL) 중 6-클로로-3-((3-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (40 mg, 0.137 mmol)의 현탁액에 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (71 mg, 0.0275 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반한 다음, 농축시켰다. 조 물질을 DCM (0.7 mL) 중에 용해시키고, HCl (디옥산, 34 μL 중 4 M, 0.137 mmol)의 용액을 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 조 물질을 HPLC (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 15%에서 40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (TFA 염: 17 mg, 0.042 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.94 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 7.79 (br. s., 3 H), 7.69 (br. s., 1 H), 6.51 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 6.34 (br. s., 2 H), 4.12-4.32 (m, 2 H), 2.99-3.24 (m, 3 H), 2.00-2.12 (m, 1 H), 1.30-1.90 (m, 9 H). HRMS C18H23ClFN6S (M+H)+ 계산치 409.1377, 실측치 409.1385. IC50은 0.005 μM임.
실시예 34
Figure 112016077997066-pct00097
단계 a: 디클로로메탄 (3 mL) 중 tert-부틸 2-옥소-1,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (300 mg, 1.180 mmol)의 실온 용액에 오황화인 (110 mg, 0.495 mmol)에 이어서 헥사메틸디실록산 (2.256 mL, 10.62 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, EtOAc로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 80% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-티옥소-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (0.290 g, 1.07 mmol)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.39 (s, 1 H), 3.66 (dt, J=13.6, 4.9 Hz, 2 H), 3.09 (s, 2 H), 2.78 (t, J=7.8 Hz, 2 H), 1.95 (t, J=7.8 Hz, 2 H), 1.57 (dd, J=6.6, 4.8 Hz, 4 H), 1.39 (s, 9 H). MS m/z 271 (M+H)+.
단계 b: THF (3 mL) 중 1-티옥소-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (100 mg, 0.370 mmol)의 용액에 아이오도메탄 (0.231 mL, 3.70 mmol)을 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 과정 전반에 걸쳐 혼합물은 색상이 점점 황색으로 되었고, 할당된 반응 시간을 교반한 후에 담황색 침전물이 생성되었다. 반응 혼합물을 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 황색 고체를 수득하였다. 황색 고체를 MeOH (2 mL)에 녹이고, 메탄올 (3 mL) 중 7 M 암모니아로 처리한 다음, 밀봉된 튜브 내에서 100℃로 8시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켜 고체를 수득하였으며, 이를 아세토니트릴로 초음파처리하고, 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH의 0%에서 30% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-아미노-2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-8-카르복실레이트 (87 mg, 0.343 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.38 (s, 1 H), 8.81 (d, J=25.2 Hz, 2 H), 3.98 (s, 2 H), 3.55 (t, J=7.0 Hz, 2 H), 2.82 (s, 2 H), 2.12 (t, J=7.1 Hz, 2 H), 1.74 (td, J=12.9, 4.7 Hz, 2 H), 1.57 (d, J=12.7 Hz, 2H), 1.41 (s, 9 H). MS m/z 254 (M+H)+.
단계 c: DCM (3 mL) 중 tert-부틸 1-아미노-2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-8-카르복실레이트 (86 mg, 0.339 mmol)의 용액에 실온에서 디옥산 중 HCl (4 M, 0.500 mL, 2.0 mmol)을 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 아세토니트릴로부터 연화처리하고, 여과하여 2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-1-아민 (57.7 mg, 0.254 mmol)을 황갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.64 (s, 1 H), 9.39-9.23 (m, 1 H), 9.15 (s, 1 H), 9.07 (s, 1 H), 8.70 (d, J=12.5 Hz, 1 H), 3.54 (t, J=6.9 Hz, 2 H), 3.32 (d, J=13.3 Hz, 2 H), 3.05-2.88 (m, 2 H), 2.18 (t, J=6.9 Hz, 2 H), 2.01 (td, J=13.7, 4.3 Hz, 2 H), 1.80 (d, J=13.8 Hz, 2 H). MS m/z 154 (M+H)+.
단계 d: N-메틸-2-피롤리디논 (4 mL) 중 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (250 mg, 0.815 mmol) 및 2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-1-아민 (210 mg, 1.371 mmol)의 현탁액에 DIPEA (1.4 mL, 8.02 mmol)를 첨가하고, 반응물을 140℃로 16시간 동안 가열하였다. 생성된 암색 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc 및 물로 희석하였다. 층을 분배하고, 유기부를 버렸다. 수성 층을 20% 이소프로판올/클로로포름 혼합물 (2 x 30 mL)로 추출하고, 합한 유기부를 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 5%에서 40% ACN)를 사용하여 정제하고, 모은 분획 절반을 동결건조시켜 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-1-아민 (TFA 염: 61.4 mg, 0.082 mmol)을 수득하였다. 나머지 분획을 합하고, 50% 포화 NaHCO3과 함께 10분 동안 격렬히 교반하여 중화시켰다. 생성된 용액을 20% 이소프로판올/클로로포름 혼합물 (3 x 30mL)로 추출하고, 합한 유기부를 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데스-1-엔-1-아민 (22 mg, 0.052 mmol)을 유리 염기로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.46 (d, J=4.4 Hz, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.55 (dd, J=8.2, 4.5 Hz, 1 H), 7.31 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 6.19 (s, 2 H), 5.74 (s, 2 H), 4.40 (d, J=13.4 Hz, 2 H), 3.43 - 3.34 (m, 2 H), 2.90 (t, J=12.2 Hz, 2 H), 1.97-1.89 (m, 2 H), 1.83 (td, J=13.0, 4.1 Hz, 2 H), 1.36 (d, J=12.9 Hz, 2 H). MS m/z 424.1541 (M+H)+. IC50은 0.032 μM임.
하기 화합물은 상기 아민을 사용하고 이와 함께 본원에 기재된 표준 절차를 사용하여 제조하였다.
Figure 112016077997066-pct00098
실시예 36
라세미-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민
Figure 112016077997066-pct00099
5 mL 원추형 마이크로웨이브 바이알 내 에탄올 (1 mL) 중에 라세미-2-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온 (40 mg, 0.072 mmol)을 용해시키고, 히드라진 수화물 (0.070 mL, 1.44 mmol)을 첨가하고, 캡핑하고, 90℃ 알루미늄 비드 조 상에서 2시간 동안 가열하였다. 현탁액을 0.45 μm PTFE 막을 통해 진공 여과하고, 에탄올로 세척하였다. HPLC 정제 (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 15%에서 40% 아세토니트릴)를 수행한 다음, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 중탄산염에 이어서 염수로 세척하였다. 농축시키고, 1 mL DCM으로 희석하고, HCl (100 μL, 디옥산 중 4 M)을 첨가하여 침전물을 수득하였다. 농축시켜 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민 (HCl 염: 1 mg, 0.002 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.43-8.39 (m, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.46-7.39 (m, 2 H), 4.35-4.14 (m, 2 H), 3.98 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 3.90 (d, J=9.2 Hz, 1 H), 3.58 (d, J=5.3 Hz, 1 H), 3.29-3.12 (m, 3 H), 1.76 (m, 4 H). HRMS C18H22F3N6OS (M+H)+ 계산치 427.1528, 실측치 427.1537. IC50은 0.07μM임.
실시예 37
(R) 및 (S)-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민
Figure 112016077997066-pct00100
5 mL 원추형 마이크로웨이브 바이알 내 에탄올 (1 mL) 중에 단일 거울상이성질체 P1, 2-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온 (49 mg, 0.088 mmol)을 용해시키고, 히드라진 수화물 (0.080 mL, 1.65 mmol)을 첨가하고, 캡핑하고, 90℃ 알루미늄 비드 조 상에서 2시간 동안 가열하였다. 현탁액을 0.45 μm PTFE 막을 통해 진공 여과하고, 에탄올로 세척하였다. HPLC 정제 (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15%에서 40% 아세토니트릴)를 수행하여 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민 (13 mg, 0.029 mmol)을 단리하였다. 키랄 분석용 HPLC: LC-3 4.6x100mm, 5 μm, 이동상: 45% MeOH와 10 mM 암모니아, 5 mL/분, 단일 거울상이성질체 피크 1 (P1), Rt: 0.88분, >99% 단일 거울상이성질체. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.39 (dd, J=4.3, 1.6 Hz, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 4.21-4.07 (m, 3 H), 3.86 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 3.79 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 3.51 (dd, J=9.0, 5.2 Hz, 1 H), 3.24 (m, 2 H), 3.15 (m, 1 H), 1.73 (m, 2 H), 1.59 (m, 1.8 Hz, 2 H). HRMS C18H22F3N6OS (M+H)+ 계산치 427.1528, 실측치 427.1542. IC50은 0.025μM임.
실시예 38
(R) 및 (S)-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민
Figure 112016077997066-pct00101
5 mL 원추형 마이크로웨이브 바이알 내 에탄올 (1 mL) 중에 단일 거울상이성질체 P2, 2-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-일)이소인돌린-1,3-디온 (42 mg, 0.075 mmol)을 용해시키고, 히드라진 수화물 (0.080 mL, 1.65 mmol)을 첨가하고, 캡핑하고, 90℃ 알루미늄 비드 조 상에서 2시간 동안 가열하였다. 현탁액을 0.45 μm PTFE 막을 통해 진공 여과하고, 에탄올로 세척하였다. HPLC 정제 (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15%에서 40% 아세토니트릴)를 수행하여 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민 (13 mg, 0.029 mmol)을 단리하였다. 키랄 분석용 HPLC: LC-3 4.6x100mm, 5 μm, 이동상: 45% MeOH와 10 mM 암모니아, 5 mL/분, 단일 거울상이성질체 피크 2 (P2), Rt: 1.33분, >99% 단일 거울상이성질체. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.39 (dd, J=4.3, 1.6 Hz, 1 H), 7.60 (s, 1 H), 7.41 (m, 2 H), 4.21-4.07 (m, 3 H), 3.86 (d, J=8.6 Hz, 1 H), 3.79 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 3.50 (dd, J=9.0, 5.2 Hz, 1 H), 3.24 (m, 2 H), 3.15 (m, 1 H), 1.80-1.67 (m, 2 H), 1.64-1.50 (m, 2 H). HRMS C18H22F3N6OS (M+H)+ 계산치 427.1528, 실측치 427.1536. IC50은 0.983μM임.
실시예 39
(R)-6-아미노-2-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)니코틴아미드
Figure 112016077997066-pct00102
단계 a: 1-메틸 피롤리디논 (7 mL) 중 2,6-디클로로피리딘-3-카르복스아미드 (0.728 g, 3.81 mmol)의 용액에 N-메틸 모르폴린 (1.14 mL, 10.40 mmol) 및 (R)-N-((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (1 g, 3.47 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류 조건 하에 24시간 동안 100℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 진한 중탄산나트륨으로 처리하고, 여과하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 암적색 오일을 실리카 크로마토그래피 (0.25% 트리에틸아민을 함유하는 헵탄 중 에틸 아세테이트의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 6-클로로-2-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드 (0.998 g, 2.25 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.81 (d, J=7.8 Hz, 1 H), 7.26 (d, J=8.6 Hz, 2 H), 6.86 (m, 3 H), 3.82 (m, 1 H), 3.77 (s, 3 H), 3.75-3.63 (m, 2 H), 3.03 (m, 2 H), 2.59 (m, 1 H), 2.01-1.92 (m, 1 H), 1.88-1.52 (m, 5 H), 1.51-1.36 (m, 3 H), 1.32 (d, J=6.5 Hz, 3 H), 1.25 (m, 2 H). MS m/z 442.9 (M+H)+.
단계 b: 톨루엔 (11 mL) 중 6-클로로-2-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드 (242 mg, 0.546 mmol)의 용액에 Pd2(dba)3 (97 mg, 0.169 mmol) 및 (옥시비스(2,1-페닐렌))비스(디페닐포스핀) (103 mg, 0.191 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 폭기하고, 벤조페논 이민 (0.11 mL, 0.656 mmol) 및 포타슘 tert-부톡시드 (0.710 mL, 테트라히드로푸란 중 1 M, 0.710 mmol)를 질소 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 80℃로 가열하고, 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 에틸 아세테이트의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 6-((디페닐메틸렌)아미노)-2-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드 (250 mg, 0.425 mmol)를 수득하였다. MS m/z 588.3 (M+H)+.
단계 c: THF (6 mL) 중 6-((디페닐메틸렌)아미노)-2-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드 (130 mg, 0.221 mmol)의 현탁액에 HCl (2 M, 0.1 mL, 0.200 mmol)을 첨가하고, 생성된 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (0.25% 트리에틸아민을 함유하는 헵탄 중 에틸 아세테이트의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 6-아미노-2-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드 (43 mg, 0.102 mmol)를 수득하였다. MS m/z 424.1 (M+H)+.
단계 d: 트리플루오로아세트산 (3 mL) 중 6-아미노-2-((R)-1-(((R)-1-(4-메톡시페닐)에틸)아미노)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드 (199 mg, 0.470 mmol)의 용액을 30분 동안 100℃로 가열하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. (R)-6-아미노-2-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드. MS m/z 290.2 (M+H)+.
단계 e: 디클로로메탄 중 (R)-6-아미노-2-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)니코틴아미드의 용액 (2 mL)에 트리에틸아민 (0.196 mL, 1.410 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트 (113 mg, 0.517 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (0.25% 트리에틸아민을 함유하는 헵탄 중 에틸 아세테이트의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 (R)-tert-부틸(8-(6-아미노-3-카르바모일피리딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (147 mg, 0.377 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 7.88 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 6.19 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 3.66 (t, J=7.7 Hz, 1 H), 3.27-3.15 (m, 2 H), 2.98 (t, J=12.4 Hz, 2 H), 2.05-1.94 (m, 1 H), 1.86-1.46 (m, 8 H), 1.45 (s, 9 H), 1.41 (d, J=6.0 Hz, 1 H). MS m/z 390.3 (M+H)+.
단계 f: 빙조에서 냉각시킨 디클로로메탄 (5 mL) 중 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일피리딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (136 mg, 0.349 mmol)의 용액에 N-아이오도숙신이미드 (86 mg, 0.384 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 5℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 메탄올 2 mL를 첨가하여 켄칭하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 생성물을 디클로로메탄으로 추출하고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일-5-아이오도피리딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (170 mg, 0.330 mmol)를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 516.1 (M+H)+.
단계 g: 디옥산 (10 mL) 중 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일-5-아이오도피리딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (177 mg, 0.343 mmol)의 용액에 Pd2(dba)3 (31.4 mg, 0.034 mmol), (9,9-디메틸-9H-크산텐-4,5-디일)비스(디페닐포스핀) (39.7 mg, 0.069 mmol), 2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-티올 (67.7 mg, 0.378 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.120 mL, 0.687 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 120℃로 가열한 다음, 실온으로 냉각되도록 하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 셀라이트의 짧은 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 감압 하에 농축시키고, 실리카 크로마토그래피 (0.25% 트리에틸아민을 함유하는 헵탄 중 에틸 아세테이트의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (115 mg, 0.203 mmol)를 수득하였다. MS m/z 567.2 (M+H)+.
단계 h: 디클로로메탄 (2 mL) 중 (R)-tert-부틸 (8-(6-아미노-3-카르바모일-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피리딘-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)카르바메이트 (110 mL, 0.194 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (2 mL, 26 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 35%에서 60% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (R)-6-아미노-2-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)니코틴아미드 (40 mg, 0.084 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.38 (dd, J=4.1, 1.9 Hz, 1 H), 7.93 (s, 1 H), 7.56-7.31 (m, 2 H), 3.77-3.55 (m, 2 H), 3.16-2.98 (m, 2 H), 2.82 (t, J=7.4 Hz, 1 H), 2.03 (m, 1 H), 1.94-1.60 (m, 5 H), 1.60-1.20 (m, 4 H). 19F NMR (376 MHz, 메탄올-d4) δ -66.48. HRMS C21H26F3N6OS (M+H)+ 계산치 467.1841, 실측치 467.1837. IC50은 0.118 μM임.
실시예 40
(R)-3-((3-아미노-5-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-일)티오)-2-클로로벤즈아미드
Figure 112016077997066-pct00103
단계 a: 디옥산 (5 mL, 탈기됨) 중 2-클로로-3-메르캅토벤즈아미드 (HCl 염, 145 mg, 0.647 mmol), 3-브로모-6-클로로피라진-2-아민 (299 mg, 1.436 mmol), 아이오딘화구리(I) (49.3 mg, 0.259 mmol), 인산칼륨 (412 mg, 1.941 mmol) 및 1,10-페난트롤린 (58.3 mg, 0.324 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 130℃에서 4시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 EtOAc (50 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 3-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)-2-클로로벤즈아미드 (140 mg, 0.444 mmol)를 수득하였다. MS m/z 315.0 (M+H)+.
단계 b: DIPEA (0.648 mL) 중 3-((3-아미노-5-클로로피라진-2-일)티오)-2-클로로벤즈아미드 (130 mg, 0.412 mmol) 및 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (139 mg, 0.536 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 95℃에서 14시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (0.25% TEA를 함유하는 DCM 중 MeOH의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 3-((3-아미노-5-((R)-1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-일)티오)-2-클로로벤즈아미드 (65 mg, 0.121 mmol)를 수득하였다. MS m/z 537.2 (M+H)+.
단계 c: 3-((3-아미노-5-((R)-1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-일)티오)-2-클로로벤즈아미드 (65 mg, 0.121 mmol)를 HCl/디옥산 (4 M, 0.121 mL, 0.484 mmol) 중에 용해시키고, 출발 물질이 남아있지 않을 때까지 (1시간, LCMS에 의해 모니터링함) 22℃에서 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 25%에서 50% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (R)-3-((3-아미노-5-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-일)티오)-2-클로로벤즈아미드 (25.5 mg, 0.058 mmol)를 수득하였다. 1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (s, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 7.62 (br. s., 1 H), 7.28-7.18 (m, 1 H), 7.18-7.09 (m, 1 H), 6.64 (dd, J=1.6, 7.9 Hz, 1 H), 6.08 (s, 2 H), 4.18-4.07 (m, 2 H), 3.12-2.95 (m, 2 H), 2.74-2.64 (m, 1 H), 1.91-1.73 (m, 2 H), 1.66-1.47 (m, 4 H), 1.39-1.14 (m, 4 H). HRMS C20H26ClN6OS (M+H)+ 계산치 433.1577, 실측치 433.1598; IC50은 0.016 μM임.
실시예 41
(2R,4R)-4-아미노-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-2-올
Figure 112016077997066-pct00104
단계 a: MeOH (1 mL) 중 (1R,3R)-tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (100 mg, 0.205 mmol) 및 HCl (디옥산, 510 μL 중 4 M, 2.05 mmol)의 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 백색 잔류물을 진공 하에 1시간 동안 건조시켰다. MS m/z 171.1 (M+H)+.
단계 b: DIPEA:NMP (2:1; 1.5 mL) 중 이 백색 잔류물 및 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (65 mg, 0.226 mmol)의 혼합물을 100℃에서 40시간 동안 격렬히 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 조 물질을 HPLC (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 7.5-20% 아세토니트릴)에 의해 정제하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 추가로 정제하여 (2R,4R)-4-아미노-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-2-올 (44 mg, 0.102 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.51-7.64 (m, 2 H), 5.92 (d, J=5.56 Hz, 1 H), 4.16-4.39 (m, 3 H), 3.00-3.21 (m, 2 H), 2.80 (dd, J=8.08, 7.07 Hz, 1 H), 2.33 (dt, J=13.45, 6.79 Hz, 1 H), 1.95 (dd, J=13.89, 7.58 Hz, 1 H), 1.83 (dd, J=14.02, 4.17 Hz, 1 H), 1.61-1.74 (m, 3 H), 1.56 (ddd, J=13.39, 8.08, 5.81 Hz, 1 H), 1.30 (d, J=13.14 Hz, 1 H). HRMS C18H25ClN7OS (M+H)+ 계산치 422.1557, 실측치 422.1569. IC50은 0.007 μM임.
하기 표 9의 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 보호된 아민 및 클로로-피라진 중간체를 사용하여 합성하였다.
<표 9>
Figure 112016077997066-pct00105
Figure 112016077997066-pct00106
Figure 112016077997066-pct00107
Figure 112016077997066-pct00108
Figure 112016077997066-pct00109
Figure 112016077997066-pct00110
Figure 112016077997066-pct00111
실시예 68
(3R,4S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민
Figure 112016077997066-pct00112
단계 a: MeOH (5 mL) 중 (3R,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (53 mg, 0.142 mmol) 및 HCl (디옥산, 354 μL 중 4 M, 1.415 mmol)의 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (3R,4S)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 171.1 (M+H)+.
단계 b: DMSO (600 μL) 중 조 (3R,4S)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민, 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (35.5 mg, 0.123 mmol) 및 DIPEA (193 μL, 1.11 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (3R,4S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민 (13 mg, 0.030 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.72-7.51 (m, 2 H), 5.92 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 4.31 (m, 2 H), 4.01-3.78 (m, 2 H), 3.58 (dq, J=8.1, 6.0 Hz, 1 H), 3.04 (m, 2 H), 2.48 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 1.75 (m, 2 H), 1.61-1.47 (m, 2 H), 1.31 (d, J=6.1 Hz, 3 H). HRMS C18H25ClN7OS (M+H)+ 계산치 422.1530, 실측치 422.1505. IC50은 0.010 μM임.
실시예 69
(3S,4S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민
Figure 112016077997066-pct00113
단계 a: MeOH (5 mL) 중 (3S,4S)-tert-부틸 4-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (51 mg, 0.136 mmol) 및 HCl (디옥산, 340 μL 중 4 M, 1.362 mmol)의 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (3S,4S)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 171.1 (M+H)+.
단계 b: DMSO (600 μL) 중 (3S,4S)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민 조 물질, 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (35.5 mg, 0.123 mmol) 및 DIPEA (193 μL, 1.11 mmol)의 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (3S,4S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-2-옥사-8-아자스피로[4.5]데칸-4-아민 (11 mg, 0.026 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.67-7.47 (m, 2 H), 5.91 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 4.22 (qd, J=6.4, 4.8 Hz, 1 H), 4.03 (ddt, J=13.5, 8.9, 4.7 Hz, 2 H), 3.86 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 3.71 (d, J=8.7 Hz, 1 H), 3.37 (td, J=9.9, 4.9 Hz, 1 H), 3.29-3.23 (m, 1 H), 3.00 (d, J=5.0 Hz, 1H) 1.91-1.56 (m, 4 H), 1.21 (d, J=6.4 Hz, 3 H). HRMS C18H25ClN7OS (M+H)+ 계산치 422.1530, 실측치 422.1514. IC50은 0.010 μM임.
실시예 70
(1R,3R)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00114
단계 a: MeOH (1.5 mL) 중 (1R,3R)-벤질 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (100 mg, 0.246 mmol) 및 HCl (디옥산, 1.5 mL 중 4 M, 6.5 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 140℃에서 14시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (1R,3R)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 169.2 (M+H)+.
단계 b: DIPEA (1 mL) 및 DMSO (0.5 mL) 중 조 (1R,3R)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (이론치, 0.246 mmol) 및 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (70.9 mg, 0.246 mmol)의 혼합물을 130℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (1R,3R)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (23 mg, 0.055 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.51-7.64 (m, 2 H), 5.91 (d, J=5.31 Hz, 1 H), 4.18-4.37 (m, 2 H), 3.02-3.18 (m, 2 H), 2.82 (dd, J=9.60, 6.32 Hz, 1 H), 2.09-2.20 (m, 1 H), 2.00-2.09 (m, 1 H), 1.91-2.00 (m, 1 H), 1.58-1.74 (m, 2 H), 1.24-1.48 (m, 3 H), 1.09-1.20 (m, 1 H), 1.01-1.09 (m, 3 H). HRMS C19H27ClN7S (M+H)+ 계산치 420.1737, 실측치 420.1719. IC50은 0.005 μM임.
실시예 71
(1R,3S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00115
단계 a: EtOAc:THF (1:2 75 mL) 중 (1R,3S)-벤질 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (600 mg, 1.476 mmol) 및 Pd(OH)2 (104 mg, 0.148 mmol)의 현탁액을 H2 분위기 하에 48시간 동안 격렬히 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물 및 HCl (디옥산, 1.0 mL 중 4 M, 4.0 mmol)의 용액을 45℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. MeOH (20 mL) 중 생성된 잔류물 및 Pd/C (목탄 중 10%, 200 mg)의 현탁액을 60 psi H2 분위기 하에 2시간 동안 진탕하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 이어서 MeOH (50 mL)로 세척하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (1R,3S)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 169.1 (M+H)+.
단계 b: DIPEA (3.2 mL) 및 DMA (6 mL) 중 조 (1R,3S)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (0.729 mmol) 및 3-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)-6-클로로피라진-2-아민 (150 mg, 0.521 mmol)의 혼합물을 100℃에서 14시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 10-30% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 조 고체를 수득하였다. 이 조 고체를 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 추가로 정제하여 (1R,3S)-8-(6-아미노-5-((2-아미노-3-클로로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-3-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (80 mg, 0.189 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.65-7.49 (m, 2 H), 5.91 (d, J=5.5 Hz, 1 H), 4.30 (ddt, J=12.4, 9.7, 3.6 Hz, 2 H), 3.34 (s, 1 H), 3.19-2.95 (m, 1 H), 2.92-2.80 (m, 1 H), 2.34-2.16 (m, 2 H), 1.85-1.49 (m, 4 H), 1.41 (dq, J=13.5, 2.7 Hz, 1 H), 1.30 (dq, J=13.5, 2.6 Hz, 1 H), 1.13-0.92 (m, 4 H). HRMS C19H27ClN7S (M+H)+ 계산치 420.1737, 실측치 420.1716. IC50은 0.005 μM임.
실시예 72
8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데스-2-엔-2-아민
Figure 112016077997066-pct00116
단계 a: NMP (1 mL) 중 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (70 mg, 0.304 mmol), tert-부틸 ((4-히드록시피페리딘-4-일)메틸)카르바메이트 (103 mg, 0.336 mmol) 및 DIPEA (2.0 mL, 11.45 mmol)의 용액을 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 반응물을 EtOAc로 희석하고, 유기 상을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 갈색 유성 잔류물을 수득하였다. 이 잔류물을 DCM (5 mL)에 녹이고, HCl (디옥산; 760 μL 중 4 M, 3.04 mmol)을 2 부분으로 (반응 시작 시에 절반 및 3시간 이후에 다른 절반) 첨가하였다. 반응물을 총 4시간 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 MeCN으로 연화처리하여 갈색 고체를 수득하였다. 생성된 조 물질을 5% MeOH/DCM 중에 현탁시키고 포화 수성 NaHCO3을 첨가하여 유리염기화하였다. 생성된 층을 분리하고, 수층을 5% MeOH/DCM으로 다시 추출하였다. 합한 유기 상을 감압 하에 농축시켜 1-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-4-(아미노메틸)피페리딘-4-올 (65 mg, 0.149 mmol)을 회백색-황갈색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.47 (dd, J=4.6, 1.4 Hz, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.55 (dd, J=8.3, 4.5 Hz, 1H) 7.32 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1 H), 4.04 (dt, J=13.8, 4.2 Hz, 2 H), 3.38-3.28 (m, 2 H), 2.83 (s, 2 H), 1.70-1.48 (m, 4 H). MS m/z 401.2 (M+H)+.
단계 b: EtOH (3 mL) 중 1-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-4-(아미노메틸)피페리딘-4-올 (65 mg, 0.162 mmol)의 용액을 브로민화시아노겐 (0.541 mL, 1.623 mmol)에 이어서 NaHCO3 (68.2 mg, 0.812 mmol)으로 연속 처리하고, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-1-옥사-3,8-디아자스피로[4.5]데스-2-엔-2-아민 (12.5 mg, 0.029 mmol)을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.46 (dd, J=4.5, 1.4 Hz, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.55 (dd, J=8.3, 4.6 Hz, 1 H), 7.31 (dd, J=8.2, 1.5 Hz, 1 H), 6.22 (s, 2 H), 5.78 (s, 2 H), 3.94-3.73 (m, 2 H), 3.64-3.45 (m, 2 H), 3.36 (s, 2 H), 1.88-1.56 (m, 4 H). HRMS C17H19F3N7OS (M+H)+ 계산치 426.1318, 실측치 426.1296. IC50은 0.193 μM임.
하기 표 10의 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 보호된 아민 및 클로로-피라진 중간체를 사용하여 합성하였다.
<표 10>
Figure 112016077997066-pct00117
실시예 75
(R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(디메틸아미노)피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00118
단계 a: DIPEA (2.6 mL) 중 6-브로모-3-((3-클로로-2-(디메틸아미노)피리딘-4-일)티오)피라진-2-아민 (124 mg, 0.392 mmol) 및 (R)-2-메틸-N-((R)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (111 mg, 0.431 mmol)의 혼합물을 90℃에서 10시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 (25의 Et3N을 함유함) 중 EtOAc (10%의 MeOH를 함유함)의 0%에서 10% 구배)에 의해 정제하여 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(디메틸아미노)피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (75 mg, 0.139 mmol)를 수득하였다. MS m/z 538.3 (M+H)+.
단계 b: DCM (2 mL) 중 (R)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(디메틸아미노)피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (75 mg, 0.139 mmol) 및 HCl (디옥산, 174 μL 중 4 M, 0.697 mmol)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 35-60% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로-2-(디메틸아미노)피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (28 mg, 0.064 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.85-7.92 (m, 1 H), 7.63 (s, 1 H), 6.16 (br. s, 2 H), 6.04-6.10 (m, 1 H), 4.06-4.23 (m, 2 H), 2.97-3.15 (m, 2 H), 2.87 (s, 6 H), 2.64-2.73 (m, 1 H), 1.11-1.97 (m, 10 H). HRMS C20H29ClN7S (M+H)+ 계산치 434.1894, 실측치 434.1883. IC50은 0.010 μM임.
하기 표 11의 화합물은 상기 절차 또는 상기 절차에 대한 변형을 사용하여 상응하는 보호된 아민 및 클로로-피라진 중간체를 사용하여 합성하였다.
<표 11>
Figure 112016077997066-pct00119
실시예 81
(R)-4-((3-아미노-5-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-일)티오)-3-클로로피리딘-2(1H)-온
Figure 112016077997066-pct00120
DMSO (0.3 mL) 중 (S)-N-((R)-8-(6-아미노-5-((3-클로로-2-플루오로피리딘-4-일)티오)피라진-2-일)-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (17 mg, 0.033 mmol), 수산화리튬 (2 mg, 0.040 mmol) 및 물 (0.07 mL)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 90℃에서 45분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, MeOH (0.5 mL)를 첨가하고, 이어서 HCl (디옥산, 2.0 mL 중 4 M, 8.0 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 5 mM NH4OH 개질제 중 15-40% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (R)-4-((3-아미노-5-(1-아미노-8-아자스피로[4.5]데칸-8-일)피라진-2-일)티오)-3-클로로피리딘-2(1H)온 (5 mg, 0.012 mmol)을 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 7.53-7.61 (m, 1 H), 7.19 (d, J=7.1 Hz, 1 H), 5.72 (d, J=7.1 Hz, 1 H), 4.26 (t, J=13.1 Hz, 2 H), 3.06-3.20 (m, 2 H), 2.81 (t, J=7.5 Hz, 1 H), 1.27-2.11 (m, 10 H). HRMS C18H24ClN6OS (M+H)+ 계산치 407.1448, 실측치 407.1433. IC50은 0.020 μM임.
실시예 82
라세미-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00121
단계 a: THF (4 mL) 중 tert-부틸 2,2-디플루오로-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (220 mg, 0.76 mmol), 라세미 2-메틸프로판-2-술핀아미드 (184 mg, 1.52 mmol) 및 티타늄(IV) 에톡시드 (0.640 mL, 3.0 mmol)의 용액을 90℃에서 30분 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후에, 수소화붕소리튬 (33 mg, 1.5 mmol)을 한번에 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 MeOH의 첨가에 의해 켄칭하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 염수로 희석하고, EtOAc (4 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 10%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-(1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (190 mg, 0.48 mmol)를 백색 분말로서 수득하였다. MS m/z 395.2 (M+H)+.
단계 b: DCM (4 mL) 중 tert-부틸 1-(1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (190 mg, 0.48 mmol) 및 TFA (1 mL)의 용액을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 N-(2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 c: DIPEA (0.8 mL) 중 N-(2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (이론치, 0.48 mmol) 및 6-클로로-3-((2-(트리플루오로 메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (148 mg, 0.480 mmol)의 용액을 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 100% 구배)에 의해 정제하여 N-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (174 mg, 0.28 mmol)를 오렌지색 분말로서 수득하였다. 이 물질의 일부는 단계 d로 진행시키고, 나머지 물질은 키랄 크로마토그래피에 의해 분리하였다 (실시예 83 참조).
단계 d: DCM (1 mL) 중 N-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (54 mg, 0.096 mmol) 및 HCl (디옥산, 0.239 mL 중 4 M, 0.96 mmol)의 용액을 40℃에서 30분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 이 잔류물을 MeCN으로 연화처리하여 라세미-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 (HCl 염, 38 mg, 0.075 mmol)을 연황갈색 분말로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.52-8.38 (m, 1 H), 7.71 (s, 1 H), 7.50-7.43 (m, 2 H), 4.44 (dd, J=21.0, 14.2 Hz, 2 H), 3.67 (dd, J=15.1, 11.2 Hz, 1 H), 3.23-3.08 (m, 2 H), 2.47-2.34 (m, 2 H), 2.27 (dt, J=14.6, 7.4 Hz, 1 H), 2.01-1.88 (m, 2 H), 1.75-1.54 (m, 3 H). HRMS C19H22F5N6S (M+H)+ 계산치 461.1547, 실측치 461.1540. IC50은 0.380 μM임.
실시예 83a/b
(R) 및 (S)-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00122
단계 a: N-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2,2-디플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (100 mg, 0.177 mmol)를 하기와 같이 키랄 SFC에 의해 추가로 정제하고: 칼럼: WHO-1 21 x 250 mm, 유량: 80 g/분, 이동상: CO2 중 45% MeOH 및 5 mM NH4OH, 검출: 질량 유발, 이로써 단일 거울상이성질체를 수득하였다: Rt (거울상이성질체 R): 2.6분 (44 mg, 0.078 mmol) 및 Rt (거울상이성질체 S): 5.8분 (41 mg, 0.073 mmol).
단계 b: DCM (2 mL) 중 순수한 거울상이성질체 및 HCl (디옥산, 200 μL 중 4 M, 0.8 mmol)의 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 MeCN으로 연화처리하여 표제 화합물을 HCl 염으로서 수득하였다:
(R)-거울상이성질체: 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.46 (dd, J=3.7, 2.3 Hz, 1 H), 7.73 (s, 1 H), 7.53-7.45 (m, 2 H), 4.52-4.36 (m, 2 H), 3.68 (dd, J=15.0, 11.2 Hz, 1 H), 3.24-3.09 (m, 2 H), 2.47-2.34 (m, 2 H), 2.32-2.21 (m, 1 H), 2.05-1.90 (m, 2 H), 1.74-1.55 (m, 3 H). 19F NMR (376 MHz, 메탄올-d4) δ -66.19, -98.51 (d, J=234.5 Hz), -101.83 (d, J=234.6 Hz). HRMS C19H22F5N6S (M+H)+ 계산치 461.1547, 실측치 461.1540. IC50은 0.882 μM임.
(S)-거울상이성질체: 1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ ppm 8.50-8.41 (m, 1 H), 7.70 (s, 1 H), 7.47 (m, 2 H), 4.52-4.35 (m, 2 H), 3.67 (dd, J=15.1, 11.2 Hz, 1 H), 3.24-3.05 (m, 2 H), 2.49-2.32 (m, 2 H), 2.31-2.19 (m, 1 H), 2.02-1.88 (m, 2 H), 1.73-1.51 (m, 3 H). 19F NMR (376 MHz, 메탄올-d4) δ -66.24, -98.47 (d, J=234.4 Hz), -101.77 (d, J=234.6 Hz). HRMS C19H22F5N6S (M+H)+ 계산치 461.1547, 실측치 461.1541. IC50은 0.306 μM임.
실시예 84
8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00123
단계 a: THF (1.5 mL) 중 라세미 tert-부틸 2-플루오로-1-옥소-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (78 mg, 0.28 mmol), 티타늄(IV) 에톡시드 (235 μL, 1.1 mmol) 및 (R)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (68 mg, 0.56 mmol)의 용액을 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시킨 후에, 수소화붕소리튬 (12 mg, 0.56 mmol)을 한번에 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 MeOH의 첨가에 의해 켄칭하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 염수로 희석하고, EtOAc (4 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (헵탄 중 EtOAc의 0%에서 50% 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (64 mg, 0.17 mmol)를 수득하였다. MS m/z 377.3 (M+H)+.
단계 b: DCM (4 mL) 중 tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (64 mg, 0.17 mmol) 및 TFA (1 mL)의 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 c: DIPEA (0.3 mL) 중 이전 잔류물 및 6-클로로-3-((2-(트리플루오로 메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (51 mg, 0.17 mmol)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 실리카 크로마토그래피 (DCM (0.25% Et3N을 함유함) 중 MeOH의 0%에서 10% 구배)에 의해 정제하여 N-(8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-플루오로-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (41 mg, 0.075 mmol)를 수득하였다. 부분입체이성질체의 혼합물로서 MS m/z 547.2 (M+H)+. 하기와 같이 키랄 SFC를 사용하여 추가의 정제를 수행하고: 칼럼: ID 21 x 250 mm, 유량: 80 g/분, 이동상: CO2 중 45% iPrOH 및 10 mM NH4OH, 검출: 질량 유발, 이로써 단일 거울상이성질체를 수득하였다: Rt (P1)= 2.7분 (17 mg, 0.031 mmol) 및 Rt (거울상이성질체-P1)= 4.4분 (17 mg, 0.031 mmol).
단계 d: DCM (0.1 mL) 중 각각의 순수한 이성질체 및 HCl (디옥산, 100 μL 중 4 M, 0.4 mmol)의 용액을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 MeCN으로 연화처리하여 표제 화합물을 HCl 염으로서 수득하였다.
<표 12>
Figure 112016077997066-pct00124
실시예 86a/b
(1R)-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민
Figure 112016077997066-pct00125
단계 a: DCM (2 mL) 중 (1R)-tert-부틸 1-((R)-1,1-디메틸에틸술핀아미도)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-8-카르복실레이트 (32 mg, 0.086 mmol) 및 TFA (0.2 mL, 2.60 mmol)의 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (R)-2-메틸-N-((1R)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드를 수득하였다. MS m/z 273.0 (M+H)+. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 b: DIPEA (1 mL) 중 (R)-2-메틸-N-((1R)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)프로판-2-술핀아미드 (23 mg, 0.084 mmol), 6-클로로-3-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-아민 (23 mg, 0.075 mmol) 및 NMP (0.1 mL)의 혼합물을 115℃에서 6시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하여 (R)-N-((1R)-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드를 흑색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 정제 없이 사용하였다.
단계 c: DCM (2 mL) 중 (R)-N-((1R)-8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-일)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 및 HCl (디옥산, 84 μL 중 4 M, 0.338 mmol)의 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 휘발성 물질을 감압 하에 제거하고, 생성된 잔류물을 HPLC (구배 용리: 물, 0.1% TFA 개질제 중 35-60% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 8-(6-아미노-5-((2-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)티오)피라진-2-일)-2-메틸-8-아자스피로[4.5]데칸-1-아민 TFA 염을 수득하였다. HRMS C20H26F3N6S (M+H)+ 계산치 439.1892, 실측치 439.1872. IC50은 0.0010 μM임.
단계 d: 키랄 분리 (세부사항에 대해서는 표 13 참조).
<표 13>
Figure 112016077997066-pct00126
Figure 112016077997066-pct00127
하기 표 14의 실시예는 상기 방법 및 적절한 출발 물질을 사용하여 제조할 수 있다:
<표 14>
Figure 112016077997066-pct00128
Figure 112016077997066-pct00129
검정
본 발명의 화합물을 SHP2 활성을 선택적으로 억제하는 그의 능력에 대해 평가하였다. 본원에 기재된 본 발명의 화합물의 억제 특성을 하기 검정 중 어느 한 검정으로 시험함으로써 입증할 수 있다.
SHP2 알로스테릭 억제 검정
SHP2는 비스-티로실-인산화된 펩티드의 그의 Src 상동성 2 (SH2) 도메인에 대한 결합을 통해 알로스테릭하게 활성화된다. 후자의 활성화 단계는 SHP2의 자가-억제 계면의 해제로 이어지고, 이는 차례로 SHP2 단백질 티로신 포스파타제 (PTP)가 활성이 되도록 하고 기질 인식 및 반응 촉매작용에 이용가능하게 한다. SHP2의 촉매 활성은 신속한 형광 검정 포맷에서 대용 기질 DiFMUP를 사용하여 모니터링하였다.
보다 구체적으로, 포스파타제 반응을 실온에서 384-웰 흑색 폴리스티렌 플레이트, 편평 바닥, 저 플랜지, 비-결합 표면 (코닝, Cat# 3575)에서 최종 반응 부피 25 μL 및 하기 검정 완충제 조건: 60 mM HEPES, pH 7.2, 75 mM NaCl, 75 mM KCl, 1 mM EDTA, 0.05% P-20, 5 mM DTT를 사용하여 수행하였다.
본 발명의 화합물 (0.003 - 100 μM로 달리한 농도)에 의한 SHP2의 억제는 0.5 nM의 SHP2를 0.5 μM의 펩티드 IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222 (서열: H2N-LN(pY)IDLDLV(dPEG8)LST(pY)ASINFQK-아미드)와 함께 인큐베이션하는 검정을 사용하여 모니터링하였다. 25℃에서의 30-60분 인큐베이션 후에, 대용 기질 DiFMUP (인비트로젠(Invitrogen), cat# D6567)를 반응물에 첨가하고, 25℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 반응물을 5 μl의 160 μM bpV(Phen) 용액 (엔조 라이프 사이언시스(Enzo Life Sciences) cat# ALX-270-204)을 첨가하여 켄칭하였다. 형광 신호는 각각 340 nm 및 450 nm의 여기 및 방출 파장을 사용하여 마이크로플레이트 판독기 (엔비전(Envision), 퍼킨-엘머(Perkin-Elmer))를 사용하여 모니터링하였다. 억제제 용량 반응 곡선은 대조군 기반 정규화로 정규화된 IC50 회귀 곡선 피팅을 사용하여 분석하였다. 본 발명의 화합물에 대한 IC50 결과는 상기 실시예 및 표 1-7에 제시되어 있다.
p-ERK 세포 검정
알파스크린(AlphaScreen)® 슈어파이어(SureFire)™ 포스포-ERK 1/2 키트 (퍼킨엘머)를 사용하는 p-ERK 세포 검정: KYSE-520 세포 (30,000개 세포/웰)를 밤새 96-웰 플레이트 배양물 중에서 성장시키고, 20, 6.6, 2.2, 0.74, 0.24, 0.08, 0.027 μM 농도의 Shp2 억제제로 37℃에서 2시간 동안 처리하였다. 인큐베이션은 슈어파이어 포스포-세포외 신호-조절된 키나제 (pERK) 검정 키트 (퍼킨엘머)에 공급된 30 μL의 용해 완충제 (퍼킨엘머)의 첨가에 의해 종결시켰다. 샘플을 제조업체의 지침에 따라 진행하였다. pERK로부터의 형광 신호는 2101 다중표지 판독기 (퍼킨 엘머 엔비전)를 사용하여 이중으로 측정하였다. 억제 백분율을 총 ERK 신호에 의해 정규화하고, DMSO 비히클 대조군과 비교하였다.
콜로니 형성 검정 및 세포 증식 검정
KYSE-520 세포 (1500개 세포/웰)를 24-웰 플레이트 상에 300 μL 배지 (10% FBS를 함유하는 RPMI-1640, 론자(Lonza)) 내 플레이팅하였다. 약물 처리를 위해, 다양한 농도 (20, 10, 5, 2.5, 1.25 μM)의 본 발명의 화합물을 세포 플레이팅 24시간 및 5일 후에 첨가하였다. 제11일에, 콜로니를 0.2% 크리스탈 바이올렛 (MP 바이오메디칼스(MP Biomedicals))으로 염색하고, 이후 스펙트라맥스(Spectramax) 판독기 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))를 사용하는 정량화를 위해 20% 아세트산 중에 용해시켰다. 세포 증식 검정에서, 세포 (1500개 세포/웰)를 96-웰 플레이트 상에 100 μL 배지 (10% FBS를 함유하는 RPMI-1640, 론자) 내 플레이팅하였다. 제6일에, 50 μL 셀타이터-글로(Celltiter-Glo) 시약 (프로메가(Promega))을 첨가하고, 발광 신호를 공급업체의 지침 (프로메가)에 따라 결정하였다.
본원에 기재된 실시예 및 실시양태는 단지 예시적 목적을 위한 것이며, 이에 비추어 다양한 변형 또는 변화가 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 시사될 것이고, 본 출원의 취지 및 범위, 및 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함되어야 하는 것으로 이해된다.

Claims (23)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 I>
    Figure 112022068907435-pct00130

    상기 식에서,
    p는 0 및 1로부터 선택되고;
    q는 0 및 1로부터 선택되고;
    Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고;
    Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고;
    R1은 -XR1a이고; 여기서 R1a는 C6-10아릴, C3-8시클로알킬, C3-8시클로알케닐, 및 N, C(O), O 및 S로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자 또는 기를 함유하는 5-9원 헤테로아릴 기로부터 선택되고; 여기서 R1a의 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 할로, 아미노, 히드록시, N3, C1-4알킬, 디메틸-아미노, 히드록시-치환된-C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, 아미노-치환된-C1-4알킬, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 5개의 R9 기로 치환되고; 여기서 R10은 수소, 페닐 및 나프틸로부터 선택되고; 여기서 R10의 상기 페닐은 비치환되거나 또는 메톡시로 치환되고; X는 결합, S(O)m, O, C(O), COR11, CR10aR10b, NR11로부터 선택되고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 각각의 R10a 및 R10b는 독립적으로 할로 및 C1-4알킬로부터 선택되고; R11은 수소 및 C1-4알킬로부터 선택되고;
    R2a 및 R2b는 독립적으로 수소, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    R3a 및 R3b는 독립적으로 수소, 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    R4a 및 R4b는 독립적으로 수소, 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    R5a 및 R5b는 독립적으로 수소, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    여기서 R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b 및 R7로부터 선택된 임의의 2개의 기는 5 내지 6원 불포화 또는 부분 포화 고리를 형성할 수 있고;
    R6은 수소, 할로, 시아노, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노-카르보닐, 할로-치환된 C1-4알킬, 할로-치환된 C1-4알콕시, 히드록시-치환된 C1-4알킬, 아미노-치환된 C1-4알킬, -S(O)1-2R6a, -C(S)R6a, -C(O)NR6aR6b, -C(NH)NR6aR6b 및 -NR6aC(O)R6b로부터 선택되고; 여기서 R6a 및 R6b는 독립적으로 수소 및 C1-4알킬로부터 선택되고;
    R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, C(O), O 및 S(O)m으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자 또는 기를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 히드록시, 메톡시, 할로, 메틸, 메틸-아미노 및 이소부티릴옥시로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 기로 치환될 수 있되,
    단, 화학식 I의 화합물은
    Figure 112022068907435-pct00153
    ,
    Figure 112022068907435-pct00154
    ,
    Figure 112022068907435-pct00155
    ,
    Figure 112022068907435-pct00156
    ,
    Figure 112022068907435-pct00157
    및
    Figure 112022068907435-pct00158
    이 아니다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 Ia>
    Figure 112016077997066-pct00131

    상기 식에서,
    n은 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고;
    p는 0 및 1로부터 선택되고;
    q는 0 및 1로부터 선택되고;
    Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고;
    Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고;
    각각 Y4는 독립적으로 N, C(O) 및 CR9로부터 선택되고; 여기서 단지 1개의 Y4는 C(O)이고;
    R6은 수소, 할로, 메틸 및 아미노-카르보닐로부터 선택되고;
    R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 할로, 히드록시, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 기로 치환될 수 있고;
    R9는 할로, 아미노, 히드록시, N3, 디메틸-아미노, C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, C1-4알콕시, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 선택되고;
    R10은 수소, 페닐 및 나프틸로부터 선택되고; 여기서 R10의 상기 페닐은 비치환되거나 또는 메톡시로 치환된다.
  3. 제2항에 있어서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O, C(O) 및 S(O)m으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 2개의 헤테로원자 또는 기를 임의로 함유할 수 있는 5원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노, 히드록시, 메톡시, 할로, 메틸, 메틸-아미노 및 이소부티릴옥시로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 기로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제3항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00132

    Figure 112016077997066-pct00133

    Figure 112016077997066-pct00134

    Figure 112016077997066-pct00135

    Figure 112016077997066-pct00136

    Figure 112016077997066-pct00137

    Figure 112016077997066-pct00138

    Figure 112016077997066-pct00139

    Figure 112016077997066-pct00140

    Figure 112016077997066-pct00141
  5. 제2항에 있어서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 6원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제5항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00142
  7. 제2항에 있어서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 4원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제7항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00143
  9. 제2항에 있어서, p 및 q가 둘 다 0인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  10. 제9항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00144
  11. 제1항에 있어서, 하기 화학식 II의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 II>
    Figure 112022003166510-pct00145

    상기 식에서,
    p는 0 및 1로부터 선택되고;
    q는 0 및 1로부터 선택되고;
    Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고;
    Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고;
    R1은 C6-10아릴, C3-8시클로알킬, C3-8시클로알케닐, 및 N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는 5-9원 헤테로아릴 기로부터 선택되고; 여기서 R1의 상기 아릴 또는 헤테로아릴은 할로, 아미노, 히드록시, N3, C1-4알킬, 히드록시-치환된-C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, 아미노-치환된-C1-4알킬, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 5개의 R9 기로 치환되고; 여기서 R10은 수소, 페닐 및 나프틸로부터 선택되고; 여기서 R10의 상기 페닐은 비치환되거나 또는 메톡시로 치환되고;
    R2a 및 R2b는 독립적으로 수소, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    R3a 및 R3b는 독립적으로 수소, 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    R4a 및 R4b는 독립적으로 수소, 할로, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    R5a 및 R5b는 독립적으로 수소, 카르보닐, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노, 히드록시, C3-8시클로알킬 및 C1-4알킬-아미노로부터 선택되고;
    여기서 R2a 및 R3a는 5 내지 6원 불포화 또는 부분 불포화 고리를 형성할 수 있고;
    R6은 수소, 할로, 시아노, C1-4알킬, C1-4알콕시, 아미노-카르보닐, 할로-치환된 C1-4알킬, 할로-치환된 C1-4알콕시, 히드록시-치환된 C1-4알킬 및 아미노-치환된 C1-4알킬로부터 선택되고;
    R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 할로, 히드록시, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 기로 치환될 수 있다.
  12. 제11항에 있어서, 하기 화학식 IIa의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 IIa>
    Figure 112016077997066-pct00146

    상기 식에서,
    n은 1, 2, 3 및 4로부터 선택되고;
    p는 0 및 1로부터 선택되고;
    q는 0 및 1로부터 선택되고;
    Y1은 CH 및 N으로부터 선택되고;
    Y2는 CR6 및 N으로부터 선택되고;
    Y4는 N 및 CR9로부터 선택되고;
    R6은 수소, 할로, 메틸 및 아미노-카르보닐로부터 선택되고;
    R7 및 R8은 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m은 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리는 비치환되거나 또는 아미노, 아미노-메틸 및 메틸-아미노로부터 선택된 기로 치환될 수 있고;
    R9는 할로, 아미노, 히드록시, N3, C1-4알킬, 할로-치환된-C1-4알킬, C1-4알콕시, -C(O)OR10 및 -NHC(O)R10으로부터 선택되고;
    R10은 수소, 페닐 및 나프틸로부터 선택되고; 여기서 R10의 상기 페닐은 비치환되거나 또는 메톡시로 치환된다.
  13. 제12항에 있어서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 5원 포화 또는 부분 불포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  14. 제13항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00147
  15. 제12항에 있어서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 6원 포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  16. 제15항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00148
  17. 제12항에 있어서, R7 및 R8이 이들이 둘 다 부착되어 있는 탄소 원자와 함께, N, O 및 S(O)m으로부터 선택된 헤테로원자를 임의로 함유할 수 있는 4원 포화 고리를 형성하고; 여기서 m이 0, 1 및 2로부터 선택되고; 여기서 R7 및 R8에 의해 형성된 상기 포화 고리가 아미노로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  18. 제17항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00149
  19. 제12항에 있어서, p 및 q가 둘 다 0인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  20. 제19항에 있어서, 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112016077997066-pct00150
  21. 누난 증후군, 레오파드 증후군, 소아 골수단핵구성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 식도암, 폐암, 결장암, 두부암, 신경모세포종, 두경부의 편평-세포 암종, 위 암종, 역형성 대세포 림프종 및 교모세포종으로부터 선택되는 질환 또는 장애의 예방적 또는 치유적 치료를 위한, 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  22. 제1항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 SHP2의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 예방적 또는 치유적 치료에 유효한 양으로 포함하는, SHP2의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 장애가 누난 증후군, 레오파드 증후군, 소아 골수단핵구성 백혈병, 신경모세포종, 흑색종, 급성 골수성 백혈병, 유방암, 식도암, 폐암, 결장암, 두부암, 신경모세포종, 두경부의 편평-세포 암종, 위 암종, 역형성 대세포 림프종 및 교모세포종으로부터 선택되는 것인, SHP2의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 장애의 예방적 또는 치유적 치료를 위한 제약 조성물.
  23. 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    Figure 112022003166510-pct00152
KR1020167021977A 2014-01-17 2015-01-16 Shp2의 활성을 억제하기 위한 n-아자스피로시클로알칸 치환된 n-헤테로아릴 화합물 및 조성물 KR102501558B1 (ko)

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