BR112016016432B1 - N-heteroarilas substituídas por n-azaspirocicloalcano, seus usos, e composição farmacêutica - Google Patents

N-heteroarilas substituídas por n-azaspirocicloalcano, seus usos, e composição farmacêutica Download PDF

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Abstract

COMPOSTOS DE N-HETEROARILA SUBSTITUÍDOS POR N-AZASPIROCICLOALCANO E COMPOSIÇÃO PARA INIBIR A ATIVIDADE DE SHP2. A presente invenção refere-se a compostos de fórmula I: I em que p, q, Y1, Y2, R1, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b, R7 e R8 são definidos no Sumário da Invenção; capazes de inibir a atividade de SHP2. A invenção também fornece um processo para a preparação de compostos da invenção, preparações farmacêuticas compreendendo tais compostos e métodos de uso de tais compostos e composições no controle de doenças ou distúrbios associados à atividade aberrante de SHP2.

Description

ANTECEDENTE CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção se refere a compostos capazes de ini bir a atividade de SHP2. A invenção também fornece um processo para a preparação de compostos da invenção, preparações farmacêuticas compreendendo tais compostos e métodos de uso de tais compostos e composições no controle de doenças ou distúrbios associados com a atividade aberrante de SHP2.
ANTECEDENTE DA INVENÇÃO
[002] A Src Homologia-2 fosfatase (SHP2) é uma proteína tirosi- na fosfatase não receptora codificada pelo gene PTPN11 que contribui para multiplicar funções celulares incluindo proliferação, diferenciação, manutenção e migração do ciclo celular. SHP2 está envolvido em sina-lização através da proteína quinase ativada pelo mitógeno Ras, a JAK-STAT ou as séries de reação de fosfoinositol 3-quinase-AKT.
[003] SHP2 tem dois domínios de homologia 2 de Src de terminal N (N-SH2 e C-SH2), um domínio catalítico (PTP), e uma cauda de terminal C. Os dois domínios de SH2 controlam a localização subcelu- lar e regulação funcional de SHP2. A molécula existe em uma conformação autoinibida, inativa, estabilizada por uma rede envolvendo resíduos de ambos os domínios N-SH2 e PTP. Estimulação, por exemplo, por citocinas ou fatores de crescimento leva à exposição do sítio catalítico resultando em ativação enzimática de SHP2.
[004] Mutações no gene PTPN11 e subsequentemente em SHP2 foram identificadas em diversas doenças humanas, tais como Síndro- me Noonan, Síndome Leopard, leucemias mielomonocíticas juvenis, neuroblastoma, melanoma, leucemia mieloide aguda e cânceres da mama, pulmão e cólon. SHP2, portanto, representa um alvo altamente atrativo para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento de várias doenças. Os compostos da presente invenção satisfazem a necessidade de pequenas moléculas para que inibam a atividade de SHP2.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[005] Em um aspecto, a presente invenção fornece compostos de Fórmula I:
Figure img0001
[006] em que: p é selecionado de 0 e 1; q é selecionado de 0 e 1; Yi é selecionado de CH e N; Y2 é selecionado de CR6 e N; Ri é -XRia; em que R1a é selecionado de C6-10 arila, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloal- quenila e um grupo heteroarila de 5 a 9 membros contendo de i a 4 heteroátomos ou grupos independentemente selecionados de N, C(O), O e S; em que o referido arila ou heteroarila de Ria é substituído por i a 5 R9 grupos independentemente selecionados de halo, amino, hidró- xi, N3, Ci-4 alquila, dimetil-amino, Ci-4 alquila substituído por hidróxi, Ci- 4 alquila substituído por halo, Ci-4 alquila substituído por amino, - C(O)ORi0 e -NHC(O)Ri0; e X é selecionado de uma ligação, S(O)m, O, C(O), CORii, CRi0aRi0b, NRii; em que m é selecionado de 0, i e 2; cada Ri0a e Ri0b é independentemente selecionado de halo e Ci- 4alquila; e Rii é selecionado de hidrogênio e Ci-4 alquila; R2a e R2b são independentemente selecionados de hidrogênio, Ci-4 alquila, Ci-4 alcó- xi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e Ci-4alquil-amino; R3a e R3b são independentemente selecionados de halo, carbonila, Ci-4 alquila, Ci-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4alquil-amino; R4a e R4b são independentemente selecionados de hidrogênio, halo, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil-amino; R5a e R5b são independentemente selecionados de hidrogênio, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil- amino; em que quaisquer dois grupos selecionados de R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b e R7 podem formar um anel de 5 a 6 membros insaturado ou parcialmente saturado; R6 é selecionado de hidrogênio, halo, ciano, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino-carbonila, C1-4 alquila substituído por halo, C1-4 alcóxi substituído por halo, C1-4 alquila substituído por hidróxi, C1-4 alquila substituído por amino, -S(O)1-2R6a, - C(S)R6a, -C(O)NR6aR6b, -C(NH)NR6aR6b e -NR6aC(O)R6b; em que R6a e R6b são independentemente selecionados de hidrogênio e C1-4alquila; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parcialmente insatura- do que pode opcionalmente conter 1 a 3 heteroátomos ou grupos independentemente selecionados de N, C(O), O e S(O)m; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados de amino, hidróxi, metóxi, halo, metila, metil-amino e isobutirilóxi.
[007] Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que contém um composto de Fórmula I ou um derivado de N-óxido, tautômero, isômeros individuais e mistura de isômeros dos mesmos; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em mistura com um ou mais excipientes adequados.
[008] Em um terceiro aspecto, a presente invenção fornece um método de tratar uma doença em um animal em que a modulação de atividade de SHP2 pode prevenir, inibir ou melhorar a patologia e/ou sintomatologia das doenças, cujo método compreende administrar ao animal uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto de Fórmula I ou um derivado de N-óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros dos mesmos, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[009] Em um quarto aspecto, a presente invenção fornece um método de tratar uma doença em um animal em que a modulação de atividade de SHP2 pode prevenir, inibir ou melhorar a patologia e/ou sintomatologia das doenças, cujo método compreende administrar ao animal uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto de Fórmula I ou um derivado de N-óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros do mesmo, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação simultânea ou sequencial com um produto terapêutico anticâncer.
[0010] Em um quinto aspecto, a presente invenção provê o uso de um composto de Fórmula I na fabricação de um medicamento para tratar uma doença em um animal em que atividade de SHP2 contribui para a patologia e/ou sintomatologia da doença.
[0011] Em um sexto aspecto, a presente invenção fornece um pro cesso para a preparação de compostos de Fórmula I e os derivados de N-óxido, derivados de profármaco, derivados protegidos, isômeros individuais e mistura de isômeros dos mesmos, e os sais farmaceuti- camente aceitáveis dos mesmos.
Definições
[0012] Os termos gerais usados acima e a seguir preferivelmente têm dentro do contexto desta descrição os seguintes significados, a menos que de outro modo indicado, onde termos mais gerais onde quer que usados, podem, independentemente um do outro, ser substituídos por definições mais específicas ou permanecer, desse modo definindo modalidades mais detalhadas da invenção:
[0013] "Alquila" se refere a uma porção hidrocarboneto ramificada ou não ramificada totalmente saturada tendo até 20 átomos de carbono. A menos que de outro modo fornecido, alquila se refere a porções hidrocarboneto tendo 1 a 7 átomos de carbono (C1-7 alquila), ou 1 a 4 átomos de carbono (C1-4 alquila). Exemplos representativos de alquila incluem, porém não estão limitados a, metila, etila, n-propila, iso- propila, n-butila, sec-butila, iso-butila, terc-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 3-metil-hexila, 2,2-dimetilpentila, 2,3- dimetilpentila, n-heptila, n-octila, n-nonil, n-decila e similares. Uma alquila substituída é um grupo alquila contendo um ou mais, tal como um, dois ou três substituintes selecionados de grupos halogênio, hi- dróxi ou alcóxi. Alquila substituído por halo e alcóxi substituído por halo podem ser de cadeia linear ou ramificado e incluem, metóxi, etóxi, difluorometila, trifluorometila, pentafluoroetila, difluorometóxi, trifluoro- metóxi, e similares.
[0014] "Arila" significa uma montagem de anel aromático bicíclico monocíclico ou fundido contendo seis a dez átomos de carbono de anel. Por exemplo, arila pode ser fenila ou naftila, preferivelmente feni- la. "Arileno" significa um radical divalente derivado de um grupo arila.
[0015] "Heteroarila" é como definido para arila acima onde um ou mais dos membros de anel é um heteroátomo. Por exemplo, C5-10 hete- roarila é um mínimo de 5 members como indicado pelos átomos de carbono porém que estes átomos de carbono podem ser substituídos por um heteroátomo. Consequentemente, C5-10 heteroarila inclui piridi- la, indolila, indazolila, quinoxalinila, quinolinila, benzofuranila, benzopi- ranila, benzotiopiranila, benzo[1,3]dioxol, imidazolila, benzo- imidazolila, pirimidinila, furanila, oxazolila, isoxazolila, triazolila, tetrazolila, pirazolila, tienila, etc.
[0016] "Cicloalquila" significa um saturado ou parcialmente insatu- rado, montagem de anel monocíclico, bicíclico fundido ou policíclico em ponte contendo o número de átomos de anel indicado. Por exem- plo, C3-10 cicloalquila inclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexi- la, cicloexenila, etc.
[0017] "Heterocicloalquila" significa cicloalquila, como definido nes te pedido, contanto que um ou mais carbonos de anel indicados, são substituídos por uma porção selecionada de -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S, -S(O) - ou -S(O)2-, em que R é hidrogênio, C1-4 alquila ou um grupo de proteção de nitrogênio. Por exemplo, C3-8 heterocicloalquila como usado neste pedido para descrever compostos da invenção inclui mor- folino, pirrolidinila, pirrolidinil-2-ona, piperazinila, piperidinila, piperidini- lona, 1,4-dioxa-8-aza-espiro[4.5]dec-8-ila, tiomorfolino, sulfanomorfoli- no, sulfonomorfolino, etc.
[0018] "Halogênio" (ou halo) preferivelmente representa cloro ou flúor, porém pode também ser bromo ou iodo.
[0019] "SHP2" significa "Homologia Src-2 fosfatase" e é também conhecido como SH-PTP2, SH-PTP3, Syp, PTP1D, PTP2C, SAP-2 ou PTPN11.
[0020] Cânceres alojando "mutações PTPN11" incluem, porém não estão limitados a: N58Y; D61Y, V; E69K; A72V, T, D; E76G, Q, K (ALL); G60A; D61Y; E69V; F71K; A72V; T73I; E76G, K; R289G; G503V (AML); G60R, D61Y, V, N; Y62D; E69K; A72T, V; T73I; E76K, V, G, A, Q; E139D; G503A, R; Q506P (JMML); G60V; D61V; E69K; F71L; A72V; E76A (MDS); Y63C (CMML); Y62C; E69K; T507K (neuroblastoma); V46L; N58S; E76V (câncer de pulmão); R138Q (melanoma); E76G (câncer de cólon).
[0021] Compostos de Fórmula I podem ter diferentes formas iso- méricas. Por exemplo, qualquer átomo de carbono assimétrico pode estar presente na (R)-, (S)- ou (R,S)-configuração, preferivelmente na configuração (R) ou (S). Substituintes em uma ligação dupla ou espe-cialmente um anel pode estar presente em forma cis-(= Z-) ou trans (= E-). Os compostos podem desse modo estar presentes como misturas de isômeros ou preferivelmente como isômeros puros, preferivelmente como diastereômeros puros ou enantiômeros puros.
[0022] Onde a forma plural (por exemplo, compostos, sais) é usa do, isto inclui o singular (por exemplo, um composto individual, um sal individual). "Um composto" não exclui que (por exemplo, em uma formulação farmacêutica) mais de um composto da Fórmula I (ou um sal do mesmo) esteja presente, o "um, uma, uns, umas (a)" meramente representando o artigo indefinido. "Um, Uma (A)" pode desse modo preferivelmente ser lido como "um ou mais", menos preferivelmenete alternativamente como "um".
[0023] Onde quer que um composto ou compostos da Fórmula I sejam mencionados, é ainda também pretendido incluir N-óxidos de tais compostos e/ou tautômeros dos mesmos.
[0024] O termo "e/ou um um N-óxido do mesmo, um tautômero do mesmo e/ou um sal (preferivelmente farmaceuticamente aceitável) do mesmo" especialmente significa que um composto da Fórmula I pode estar presente tal como ou em mistura com seu N-óxido, como tautô- mero (por exemplo, devido a ceto-enol, lactam-lactim, ácido amida- imídico ou tautomerismo de enamina-imina) ou em mistura (por exemplo, reação de equivalência causada) com seu tautômero, ou como um sal do composto da Fórmula I e/ou qualquer destas formas ou misturas de duas ou mais de tais formas.
[0025] Para os seguintes compostos, o grupo NH2 ligado ao anel pirazina é crítico para potência. Análise da estrutura cristalográfica mostra o grupo NH2 em uma interação intramolecular com o grupo carbonila esqueleto de resíduo SHP2 E250:
Figure img0002
Figure img0003
[0026] A presente invenção também inclui todas as variações iso- tópicas adequadas dos compostos da invenção, ou sais farmaceuti- camente aceitáveis dos mesmos. Uma variação isotópica de um composto da invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos é definida como aquele em que pelo menos um átomo é substituído por um átomo tendo o mesmo número atômico porém uma massa atômica diferente da massa atômica geralmente encontrada na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos incluem, porém não estão limitados a, isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio e oxigênio tal como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 35S, 18F, 36Cl e 123I. Certas variações isotópicas dos compostos da invenção e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, por exemplo, aqueles em que um isótopo radioativo, tal como 3H ou 14C, é incorporado, são úteis em estudos de distribuição de tecido de substrato e/ou fár- maco. Em exemplos particulares, isótopos 3H e 14C podem ser usados para sua facilidade de preparação e detectabilidade. Em outros exemplos, substituição por isótopos, tal como 2H pode proporcionar vantagens terapêuticas resultantes de mais estabilidade metabólica, tal co-mo meia vida in vivo aumentada ou requisitos de dosagem reduzida. Variações isotópicas dos compostos da invenção ou sais farmaceuti- camente aceitáveis dos mesmos podem geralmente ser preparados por procedimentos convencionais usando variações isotópicas apropriadas de reagentes adequados. Por exemplo, um composto da invenção pode existir em uma forma deutorada como mostrado abaixo:
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Descrição das Modalidades Preferidas
[0027] A presente invenção se refere a compostos capazes de ini bir a atividade de SHP2. Em um aspecto da invenção, com respeito a compostos de Fórmula I, -XRia é -SRia e é selecionado de:
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[0028] Em outro aspecto da invenção, -XR1a é -SR1a e é selecio- nado de:
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[0029] Em outro aspecto da invenção, com respeito a compostos de Fórmula I:
Figure img0007
é selecionado de:
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[0030] Em outro aspecto, com respeito a compostos de Fórmula I, são compostos de Fórmula Ia:
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[0031] em que: n é selecionado de 1, 2, 3 e 4; p é selecionado de 0 e 1; q é selecionado de 0 e 1; Y1 é selecionado de CH e N; Y2 é se-lecionado de CR6 e N; Y4 é independentemente selecionado de N, C(O) e CR9; em que apenas um Y4 é C(O); R6 é selecionado de hidrogênio, halo, metila e amino-carbonila; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parcialmente insaturado que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por um grupo selecio-nado de amino, amino-metila e metil-amino; R9 é selecionado de halo, amino, dimetil-amino, hidróxi, N3, C1-4 alquila, C1-4 alquila substituído por halo, C1-4 alcóxi, -C(O)OR10 e -NHC(O)R10; R10 é selecionado de hidrogênio, fenila e naftila; em que o referido fenila de R10 é não substi-tuído ou substituído por metóxi; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0032] Em outro aspecto da invenção, R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel saturado ou parcialmente insaturado de 5 membros que pode opcionalmente conter 1 a 2 heteroátomos ou grupos independentemente selecionados de N, O, C(O) e S(O)m; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados de amino, hidróxi, metóxi, halo, metila, metil-amino e isobutirilóxi; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0033] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
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[0034] Em outro aspecto da invenção são compostos em que R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados for-mam um anel saturado ou parcialmente insaturado de 6 membros que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído por um grupo selecionado de amino, amino-metila e metil-amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0035] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
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[0036] Em outro aspecto da invenção são compostos em que R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados for-mam um anel saturado ou parcialmente insaturado de 4 membros que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído por um grupo selecionado de amino, amino-metila e metil-amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0037] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
Figure img0018
[0038] Em outro aspecto da invenção são compostos em que p e q são ambos 0; ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0039] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
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[0040] Em outro aspecto da invenção são compostos de Fórmula II:
Figure img0020
[0041] em que: p é selecionado de 0 e 1; q é selecionado de 0 e 1; Y1 é selecionado de CH e N; Y2 é selecionado de CR6 e N; R1 é sele-cionado de C6-10arila, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquenila e um grupo heteroarila de 5 a 9 membros contendo de 1 a 4 heteroátomos seleci-onado de N, O e S; em que o referido arila ou heteroarila de R1a é substituído por 1 a 5 grupos R9 independentemente selecionados de halo, amino, hidróxi, N3, C1-4 alquila, C1-4 alquila substituído por hidróxi, C1-4 alquila substituído por halo, C1-4 alquila substituído por amino, - C(O)OR10 e -NHC(O)R10; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; cada R10a e R10b é independentemente selecionado de halo e C1-4 alquila; e R11 é selecionado de hidrogênio e C1-4 alquila; R2a e R2b são indepen-dentemente selecionados de hidrogênio, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil-amino; R3a e R3b são independen- temente selecionados de halo, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8cicloalquila e C1-4 alquil-amino; R4a e R4b são indepen-dentemente selecionados de hidrogênio, halo, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil-amino; R5a e R5b são independentemente selecionados de hidrogênio, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil-amino; em que quaisquer dois grupos selecionados de R2a, R3a, R4, R5, R6a e R7a podem formar um anel insaturado ou parcialmente insaturado de 5 a 6 membros; R6 é selecionado de hidrogênio, halo, ciano, C1-4 alquila, C1-4alcóxi, amino-carbonila, C1-4 alquila substituído por halo, C1-4 alcóxi substituído por halo, C1-4 alquila substituído para hidróxi e C1-4 alquila substituído por amino; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parcialmente insaturado que pode opcionalmente conter um hete- roátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por um grupo selecionado de amino, amino-metila e metil-amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0042] Em outro aspecto da invenção são compostos de Fórmula IIa:
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[0043] em que: n é selecionado de 1, 2, 3 e 4; p é selecionado de 0 e 1; q é selecionado de 0 e 1; Y1 é selecionado de CH e N; Y2 é se-lecionado de CR6 e N; Y4 é selecionado de N e CR9; R6 é selecionado de hidrogênio, halo, metila e amino-carbonila; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parcialmente insaturado que pode opcio-nalmente conter um heteroátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é selecionado de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado for-mado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por um grupo selecionado de amino, amino-metila e metil-amino; R9 é selecionado de halo, amino, hidróxi, N3, C1-4 alquila, C1-4 alquila substituído por halo, C1-4 alcóxi, -C(O)OR10 e -NHC(O)R10; R10 é selecionado de hidrogênio, fenila e naftila; em que o referido fenila de R10 é não substituído ou substituído por metóxi; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0044] Em outro aspecto da invenção são compostos em que R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados for-mam um anel saturado de 5 membros que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é seleciona-do de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído por um grupo selecionado de amino, amino-metila e metil- amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0045] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
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[0046] Em outro aspecto da invenção são compostos em que R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados for-mam um anel saturado de 6 membros que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é seleciona-do de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído por um grupo selecionado de amino, amino-metila e metil- amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0047] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
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[0048] Em outro aspecto da invenção são compostos em que R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados for-mam um anel saturado de 4 membros que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado de N, O e S(O)m; em que m é seleciona-do de 0, 1 e 2; em que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído por amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0049] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
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[0050] Em outro aspecto da invenção são compostos em que p e q são ambos 0; ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
[0051] Em outro aspecto da invenção são compostos, ou o sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, selecionados de:
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Farmacologia e Utilidade
[0052] A Src Homologia-2 fosfatase (SHP2) é uma proteína tirosi- na fosfatase codificada pelo gene PTPN11 que contribui para multipli-car funções celulares incluindo proliferação, diferenciação, manutenção e migração do ciclo celular. SHP2 está envolvida em sinalização através da proteína quinase ativada pelo mitógeno Ras, a JAK-STAT ou as séries de reação de fosfoinositol 3-quinase-AKT. SHP2 media a ativação de Erkl e Erk2 (Erkl/2, Erk) MAP quinases pelas tirosina qui- nases receptoras, tais como ErbBl, ErbB2 e c-Met.
[0053] SHP2 tem dois domínios de homologia 2 de Src de terminal N (N-SH2 e C-SH2), um domínio catalítico (PTP), e uma cauda de terminal C. Os dois domínios de SH2 controlam a localização subcelu- lar e regulação funcional de SHP2. A molécula existe em uma confor-mação inativa, inibindo sua própria atividade por meio de uma rede de ligação envolvendo resíduos de ambos os domínios de N-SH2 e PTP. Em resposta à estimulação de fator de crescimento, SHP2 liga-se a sítios fosforilados por tirosina específicos em proteínas de ancoragem tal como Gab1 e Gab2 por meio de seus domínios de SH2. Isto induz uma mudança conformacional que resulta em ativação de SHP2.
[0054] Mutações em PTPN11 foram identificadas em diversas do enças humanas, tal como Síndrome Noonan, Síndome Leopard, leu-cemias mielomonocíticas juvenis, neuroblastoma, melanoma, leucemia mieloide aguda e cânceres da mama, pulmão e cólon. SHP2 é uma molécula de sinalização a jusante importante para uma variedade de tirosina quinases receptoras, incluindo os receptores de fator de cres-cimento derivado de plaqueta (PDGF-R), fator de crescimento de fi- broblasto (FGF-R) e fator de crescimento epidérmico (EGF-R). SHP2 é também uma molécula de sinalização a jusante importante para a ati-vação da série de reação de proteína quinase ativada por mitógeno (MAP) que pode levar à transformação celular, um pré-requisito para o desenvolvimento de câncer. A redução de SHP2 significantemente ini-biu o crescimento celular de cepas de célula de câncer de pulmão com mutação de SHP2 ou translocações de EML4/ALK, bem como cânce-res esofágicos e cânceres de mama amplificados por EGFR. SHP2 é também ativada a jusante de oncogenes em carcinoma gástrico, glioblastoma e linfoma de célula grande anaplásico.
[0055] Síndrome Noonan (NS) e Síndome Leopard (LS) - muta ções de PTPN11 causam LS (múltiplos lentigenes, anormalidades de condução eletrocardiográfica, hipertelorismo ocular, estenose pulmôni- ca, genitália anormal, retardo de crescimento, surdez sensorineural) e NS (anomalidades congênitas incluindo defeitos cardíacos, anormali-dades craniofaciais e baixa estatura). Ambos os distúrbios são parte de uma família de síndromes dominantes autossômicas causadas por mutações de linha germinativa em componentes da série de reação de proteína quinase de ativação do mitógeno RAS/RAF/MEK/ERK, reque-ridas para crescimento e diferenciação de célula normal. Regulação aberrante desta série de reação tem profundos efeitos, particularmente em desenvolvimento cardíaco, resultando em várias anormalidades, incluindo defeitos valvuloseptais e/ou cardiomiopatia hipertrófica (HCM). Perturbações da série de reação de sinalização de MAPK fo-ram estabelecidas como central para estes distúrbios e diversos genes candidatos ao longo desta série de reação foram identificados em hu-manos, incluindo mutações em KRAS, NRAS, SOS1, RAF1, BRAF, MEK1, MEK2, SHOC2, e CBL. O gene mais comumente mutado em NS e LS é PTPN11. Mutações de linha germinativa em PTPN11 (SHP2) são encontradas em ~50% dos casos com NS e quase todos os pacientes com LS que compartilham certos aspectos com NS. Para NS, Y62D e Y63C substituições na proteína são amplamente invarian-tes e estão entre as mais comuns mutações. Ambas estas mutações afetam a conformação cataliticamente inativa de SHP2 sem perturbar a ligação da fosfatase a seus parceiros de sinalização fosforilados.
[0056] Leucemias mielomonocíticas juvenis (JMML) - Mutações somáticas em PTPN11 (SHP2) ocorrem em cerca de 35% dos pacien-tes com JMML, um distúrbio mieloproliferativo infantil (MPD). Estas mutações de ganho de função são tipicamente mutações e ponto no domínio de N-SH2 ou no domínio de fosfatase, que previne auto- inibição entre o domínio catalítico e o domínio de N-SH2, resultando em atividade de SHP2.
[0057] Leucemia Mieloide Aguda - mutações de PTPN11 foram identificadas em: ~10% de leucemias agudas pediátricas, tal como síndrome mielodisplástica (MDS); ~7% de leucemia linfoblástica aguda de célula B (B-ALL); e ~4% de leucemia mieloide aguda (AML).
[0058] NS e mutações de leucemia causam mudanças em amino- ácidos localizados na interface formada pelos domínios de N-SH2 e PTP na conformação de SHP2 autoinibida, rompendo a interação in-tramolecular inibitória, levando à hiperatividade do domínio catalítico.
[0059] SHP2 age como um regulator positivo em sinalização de tirosina quinase receptora (RTK). Cânceres contendo alterações RTK (EGFRamp, Her2amp, FGFRamp, Metamp, RTK translocada/ativada, isto é, ALK, BCR/ABL) incluem cânceres esofágicos, de mama, de pulmão, de cólon, gástrico, glioma, de cabeça e pescoço.
[0060] Câncer esofágico (ou câncer de esôfago) é uma malignida de do esôfago. Existem vários subtipos, câncer de célula primariamen- te escamosa (<50%) e adenocarcinoma. Existe uma alta taxa de ex-pressão de RTK em adenocarcinoma esofágico e câncer de célula es-camosa. Um inibidor de SHP2 da invenção pode, portanto, ser empre-gado para estratégias de tratamento inovativas.
[0061] Câncer de mama é um principal tipo de câncer e uma cau sa indutora de morte em mulheres, onde os pacientes desenvolvem resistência a fármacos atuais. Existem quatro principais subtipos de cânceres de mama, incluindo A luminal, B luminal, semelhante a Her2, e semelhante a negativo triplo/basal. O câncer de mama negativo triplo (TNBC) é um câncer de mama agressivo que não possui terapia alve-jada específica. Receptor I de fator de crescimento epidérmico (EGFR) surgiu como um alvo promissor em TNBC. Inibição de Her2, bem como EGFR por meio de SHP2, pode ser uma terapia promissora em câncer de mama.
[0062] Câncer de Pulmão - NSCLC é atualmente uma principal causa de mortalidade relacionada com câncer. Sendo responsável por cerca de 85% de cânceres de pulmão (predominantemente adenocar-cinomas e carcinomas de célula escamosa). Embora quimioterapia citotóxica continue uma parte importante de tratamento, terapias alve-jadas com base em alterações genéticas, tais como EGFR e ALK no tumor são mais prováveis de se beneficirem de uma terapia alvejada.
[0063] Câncer de Cólon - aproximadamente 30% a 50% de tumo res colorretais são conhecidos ter um KRAS mutado (anormal), e mu-tações BRAF ocorrem em 10 a 15% de cânceres colorretais. Para um subgrupo de pacientes cujos tumores colorretais foram demonstrados ter superexpressão de EGFR, estes pacientes exibem uma resposta clínica favorável à terapia antieGFR.
[0064] Câncer Gástrico é um dos mais prevalentes tipos de cân cer. Expressão aberrante de tirosina quinases, como refletiva pela fos- forilação de tirosina aberrante em células de câncer gástrico, é conhe- cida na técnica. Três tirosina quinases receptoras, c-met (receptor de HGF), receptor 2 de FGF, e erbB2/neu são frequentemente amplifica-dos em carcinomas gástricos. Dessse modo, subversão de diferentes séries de reação de sinal pode contribuir para a progressão de diferen-tes tipos de cânceres gástricos.
[0065] Neuroblastoma é um tumor pediátrico do sistema nervoso simpático em desenvolvimento, responsável por cerca de 8% de cân-ceres infantiis. Alterações genômicas do gene de linfoma quinase ana- plásica (ALK) foram posturadas contribuir para a patogênese de neu-roblastoma.
[0066] Carcinoma de célula escamosa da cabeça e pescoço (SCCHN). Níveis elevados de expressão de EGFR são correlaciona-dos mau prognóstico e resistência à terapia de radiação em uma vari-edade de cânceres, principalmente em carcinoma de célula escamosa da cabeça e pescoço (SCCHN). Bloqueio da sinalização de EGFR re-sulta em inibição da estimulação do receptor, proliferação celular, e invasividade e metástases reduzidas. O EGFR é, portanto, um alvo principal para nova terapia anticâncer em SCCHN.
[0067] A presente invenção se refere a compostos capazes de ini bir a atividade de SHP2. A invenção também fornece um processo para a preparação de compostos da invenção e preparações farmacêuticas compreendendo tais compostos. Outro aspecto da presente invenção se refere a um método de tratar distúrbios mediados por SHP2 compreendendo a etapa de administrar a um paciente em necessidade do mesmo, uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto de Fórmula I, como definido no Sumário da Invenção.
[0068] Em certas modalidades, a presente invenção se refere ao método acima mencionado, em que os referidos distúrbios mediados por SHP2 são cânceres selecionados de, porém não limitados a: JMML; AML; MDS; B-ALL; neuroblastoma; câncer esofágico; câncer de mama; câncer de pulmão; câncer de cólon; câncer gástrico, câncer da cabeça e pescoço.
[0069] Os compostos da presente invenção podem também ser úteis no tratamento de outras doenças ou condições relacionadas a uma atividade aberrante de SHP2. Desse modo, como um outro as-pecto, a invenção se refere a um método de tratamento de um distúrbio selecionado de: NS; LS; JMML; AML; MDS; B-ALL; neuroblastoma; câncer esofágico; câncer de mama; câncer de pulmão; câncer de có-lon; câncer gástrico, câncer da cabeça e pescoço..
[0070] Um inibidor de SHP2 da presente invenção pode ser provei tosamente combinado com outro composto farmacologicamente ativo, ou com dois ou mais outros compostos farmacologicamente ativos, particularmente no tratamento de câncer. Por exemplo, um composto da Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, co-mo definido acima, pode ser administrado simultaneamente, sequenci-almente ou separadamente em combinação com um ou mais agentes selecionados de agentes quimioterápicos, por exemplo, inibidores mi- tóticos, tal como um taxano, um alcaloide vinca, paclitaxel, docetaxel, vincristina, vinblastina, vinorelbina ou vinflunina, e outros agentes anti- câncer, por exemplo, cisplatina, 5-fluorouracila ou 5-fluoro-2-4(1 H,3H)-pirimidinadiona (5FU), flutamida ou gencitabina.
[0071] Tais combinações podem oferecer significantes vantagens, incluindo atividade sinérgica, em terapia.
[0072] Em certas modalidades, a presente invenção se refere ao método acima mencionado, em que o referido composto é administra do parenteralmente.
[0073] Em certas modalidades, a presente invenção se refere ao método acima mencionado, em que o referido composto é administra do intramuscularmente, intravenosamente, subcutaneamente, oral-mente, pulmonar, intratecalmente, topicamente ou intranasalmente.
[0074] Em certas modalidades, a presente invenção se refere ao método acima mencionado, em que o referido composto é administrado sistemicamente.
[0075] Em certas modalidades, a presente invenção se refere ao método acima mencionado, em que o referido paciente é um mamífero.
[0076] Em certas modalidades, a presente invenção se refere ao método acima mencionado, em que o referido paciente é um primata.
[0077] Em certas modalidades, a presente invenção se refere ao método acima mencionado, em que o referido paciente é um ser hu-mano.
[0078] Em outro aspecto, a presente invenção se refere a um mé todo de tratar um distúrbio mediado por SHP2, compreendendo a etapa de: administrar a um paciente em necessidade do mesmo uma quantidade terapeuticamente efetiva de um agente quimioterápico em combinação com uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto de Fórmula I como definido no Sumário da invenção.
Composições Farmacêuticas
[0079] Em outro aspecto, a presente invenção fornece composi ções farmaceuticamente aceitáveis que compreende uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais dos compostos descritos aci-ma, formulados junto com um ou mais veículos (aditivos) e/ou diluen- tes farmaceuticamente aceitáveis. Como descrito em detalhes abaixo, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser espe-cialmente formuladas para administração em forma sólida ou líquida, incluindo aquelas adaptadas ao seguinte: (1) administração oral, por exemplo, poções (soluções ou suspensões aquosas ou não aquosas), comprimidos, por exemplo, aqueles alvejados para absorção bucal, sublingual, e sistêmica, bolus, pós, grânulos, pastas para aplicação na língua; (2) administração parenteral, por exemplo, por injeção subcu- tânea, intramuscular, intravenosa ou epidural como, por exemplo, uma solução ou suspensão estéril, ou formulação de liberação contínua; (3) aplicação tópica, por exemplo, como um creme, unguento, ou um em-plastro de liberação controlada ou spray aplicado à pele; (4) intravagi- nalmente ou intrarretalmente, por exemplo, como um pessário, creme ou espuma; (5) sublingualmente; (6) ocularmente; (7) transdermica- mente; (8) nasalmente; (9) pulmonar; ou (10) intratecalmente.
[0080] A frase "quantidade terapeuticamente efefiva" como usada aqui significa que a quantidade de um composto, material, ou compo-sição compreendendo um composto da presente invenção que é efeti-vo para produzir algum efeito terapêutico desejado em pelo menos uma subpopulação de células em um animal em uma relação benefí- cio/risco razoável aplicável a qualquer tratamento médico.
[0081] A frase "farmaceuticamente aceitável" é empregada aqui para se referir àqueles compostos, materiais, composições, e/ou for-mas de dosagem que se incluem, no escopo de diagnóstico médico seguro, adequadas para uso em contato com os tecidos de seres hu-manos e animais sem excessiva toxicidade, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, comensurado com uma relação benefício/risco razoável.
[0082] A frase "veículo farmaceuticamente aceitável" como usada aqui significa um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, tal como uma carga líquida ou sólida, diluente, excipiente, auxiliar de fabricação (por exemplo, lubrificante, magnésio de talco, estearato de cálcio ou zinco, ou ácido esteárico), ou material de en- capsulação de solvente, envolvido em carregamento ou transporte do composto objeto de um órgão, ou porção do corpo, para outro órgão, ou ou parte do corpo. Cada veículo deve ser "aceitável" em o sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudicial ao paciente. Alguns exemplos de materiais que podem ser- vir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) açúcares, tal como lactose, glicose e sacarose; (2) amidos, tal como amido de milho e amido de batata; (3) celulose, e seus derivados, tal como car- boximetil celulose sódica, etil celulose e acetato de celulose; (4) traga- canto em pó; (5) malte; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tal como manteiga de cacau e ceras para supositório; (9) óleos, tal como óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de cártamo, óleo de sésamo, óleo de oliva, óleo de milho e óleo de soja; (10) glicóis, tal como propileno glicol; (11) polióis, tal como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol; (12) ésteres, tal como oleato de etila e laurato de eti- la; (13) ágar; (14) agentes de tamponamento, tal como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; (15) ácido algínico; (16) água livre de pirogênio; (17) salina isotônica; (18) solução de Ringer; (19) álcool etílico; (20) soluções de pH tamponado; (21) poliésteres, policarbonatos e/ou polianidridos; e (22) outras substâncias compatíveis não tóxicas empregadas em formulações farmacêuticas.
[0083] Como mencionado acima, certas modalidades dos presen tes compostos podem conter um grupo funcional básico, tal como ami-no ou alquilamino, e são, desse modo, capazes de formar sais farma- ceuticamente aceitáveis com sais farmaceuticamente aceitáveis. O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" neste contexto, se refere aos sais de adição de ácido relativamente não tóxicos, inorgânicos e orgânicos de compostos da presente invenção. Estes sais podem ser preparados in situ no veículo de administração, ou o processo de fa-bricação da forma de dosagem, ou separadamente reagindo um com-posto da invenção purificado em sua forma de base livre com um ácido orgânico ou inorgânico adequado, e isolando o sal desse modo forma-do durante subsequente purificação. Sais representativos incluem os sais de bromidrato, cloridrato, sulfato, bissulfato, fosfato, nitrato, aceta-to, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, benzoato, lactato, fos- fato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, sucinato, tartarato, naftilato, mesilato, glicoeptonato, lactobionato, e laurilsulfonato e similares. (See, por exemplo, Berge et al. (1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19).
[0084] Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos obje to incluem os sais não tóxicos convencionais ou sais de amônio qua-ternário dos compostos, por exemplo, de ácidos orgânicos ou ácidos inorgânicos. Por exemplo, sais não tóxicos convencionais incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos tais como cloridrato, hi- drobrômicos, sulfuric, sulfâmicos, fosfóricos, nítricos, e similares; e os sais preparados de ácidos orgânicos, tais como acéticos, propiônicos, succínicos, glicólicos, esteáricos, láticos, málicos, tartáricos, cítricos, ascórbicos, palmíticos, maleicos, hidroximaleicos, fenilacéticos, glutâ- micos, benzoico, salicíclicos, sulfanílicos, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenossulfônico, metanossulfônico, etano dissulfônicos, oxálicos, iso- tiônicos, e similares.
[0085] Em outros casos, os compostos da presente invenção po dem conter um ou mais grupos funcionais acídicos e, desse modo, são capazes de formar sais farmaceuticamente aceitáveis com bases far- maceuticamente aceitáveis. O termo "sais farmaceuticamente aceitá-veis" nestes casos se refere aos sais de adição de base relativamente não tóxicos, inorgânicos e orgânicos de compostos da presente inven-ção. Estes podem igualmente ser preparados in situ no veículo de ad-ministração ou no processo de fabricação da forma de dosagem, ou separadamente reagindo o composto purificado em sua forma de ácido livre com uma base adequada, tal como o hidróxido, carbonato ou bicarbonato de um cátion de metal farmaceuticamente aceitável, com amônia, ou com uma amina primária, secundária ou terciária orgânica farmaceuticamente aceitável. Sais de álcali ou alcalinoterrosos repre-sentativos incluem o lítio, sódio, potássio, cálcio, magnésio, e alumínio e similares. Aminas orgânicas representativas úteis para a formação de sais de adição de base incluem etilamina, dietilamina, etilenodiami- na, etanolamina, dietanolamina, piperazina e similares. (veja, por exemplo, Berge et al., supra)
[0086] Agentes umectantes, emulsificantes e lubrificantees, tal como sódio lauril sulfato e estearato de magnésio, bem como agentes de coloração, agentes de liberação, agentes de revestimento, agentes adoçantes, aromatizantes, e perfumantes, conservantes e antioxidan- tes podem também estar presentes nas composições.
[0087] Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: (1) antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbi- co, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e similares; (2) antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato ascorbila, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propila, alfa-tocoferol, e similares; e (3) agentes de quelação de metal, tal como ácido cítrico, ácido tetra- acético de etilenodiamina (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfó-rico, e similares.
[0088] Formulações da presente invenção incluem aqueles ade quados para administração oral, nasal, tópica (incluindo bucal e sub-lingual), retal, vaginal e/ou parenteral. As formulações podem conveni-entemente ser apresentadas em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada cm um material veículo para produzir uma forma de dosagem inividual variará dependendo do hospedeiro qu está sendo tratado, o modo de administração particular. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com um material veículo para produzir uma forma de dosagem individual geralmente será aquela quantidade do composto que produz um efeito terapêutico. Geralmente, de cem por cento, esta quantidade variará de cerca de 0,1 por cento a cerca de noventa e nove por cento de ingrediente ativo, preferivelmente de cerca de 5 por cento a cerca de 70 por cento, mais preferivelmente de cerca de 10 por cento a cerca de 30 por cento.
[0089] Em certas modalidades, uma formulação da presente in venção compreende um excipiente selecionado do grupo que consiste em ciclodextrinas, celuloses, lipossomas, agentes formadores de mice- la, por exemplo, ácidos biliares, e veículos poliméricos, por exemplo, poliésteres e polianidridos; e um composto da presente invenção. Em certas modalidades, uma formulação anteriormente mencionada torna oralmente biodisponível um composto da presente invenção.
[0090] Métodos de preparação destas formulações ou composi ções incluem a etapa de trazer em associação um composto da pre-sente invenção com o veículo e, opcionalmente, um ou mais ingredien-tes auxiliares. Em general, as formulações são preparadas uniforme-mente e intimamente trazendo em associação um composto da pre-sente invenção com veículos líquidos, ou veículos sólidos finamente divididos, ou ambos, e em seguida, se necessário, moldando o produto.
[0091] Formulações da invenção adequadas para administração oral podem ser na forma de cápsulas, drágeas, pílulas, comprimidos, pastilhas (usando uma base aromatizada, geralmente sacarose e acá-cia ou tragacanto), pós, grânulos, ou como uma solução ou a suspen-são em um líquido aquoso ou não aquoso, ou como uma emulsão lí-quida de óleo em água ou água em óleo, ou como um elixir ou xarope, ou como pastilhas (usando uma base inerte, tal como gelatina e glice-rina, ou sacarose e acácia) e/ou como antissépticos bucais e similares, cada um contendo uma quantidade predeterminada de um composto da presente invenção como um ingrediente ativo. Um composto da presente invenção pode também ser administrado como um bolus, ele- tuário ou pasta.
[0092] Em formas de dosagem sólidas da invenção para adminis tração oral (cápsulas, comprimidos, pílulas, drágeas, pós, grânulos, trociscos e similares), o ingrediente ativo é misturado com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tal como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio, e/ou qualquer dos seguintes: (1) cargas ou exten- sores, tal como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol, e/ou ácido silícico; (2) aglutinantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarose e/ou acácia; (3) umectantes, tal como glicerol; (4) agentes desintegrantes, tal como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algí- nico, certos silicatos, e sodium carbonato; (5) agentes retardantes da solução, tal como parafina; (6) aceleradores de absorção, tal como compostos de amônio quaternário e tensoativos, tal como poloxâmero e sódio lauril sulfato; (7) agentes umectantes, tais como, por exemplo, álcool cetílico, monoestearato de glicerol, e tensoativos não iônicos; (8) absorventes, tais como argila de caulim e bentonita; (9) lubrificantes, tais como talc estearato de cálcio, estearato de magnésio, polieti- leno glicóis sólidos, sódio lauril sulfato, estearato de zinco, estearato de sódio, ácido esteárico, e misturas dos mesmos; (10) agentes colo- rantes; e (11) agentes de liberação controlada, tais como crospovidona ou etil celulose. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulass, as com-posições farmacêuticas podem também compreender agentes de tam- ponamento. Composições sólidas de um tipo similar podem também ser empregadas como cargas cápsulas de gelatina de casca macia e dura usando tais excipientes como lactose ou açúcares de leite, bem como polietileno glicóis de alto peso molecular e similares.
[0093] Um comprimido pode ser feito por compressão ou molda gem, opcionalmente com um ou mais ingredientes auxiliares. Compri-midos prensados podem ser preparados usando aglutinante (por exemplo, gelatina ou hidroxipropilmetil celulose), lubrificante, diluente inerte, conservante, disintegrante (por exemplo, glicolato de amido de sódio ou carboximetil celulose sódica reticulada), agente tensoativo ou de dispersão. Comprimidos moldados podem ser feitos moldando em uma máquina adequada uma mistura do compos em pó umidecido com um diluente líquido inerte.
[0094] Os comprimidos, e outras formas de dosagem sólidas das composições farmacêuticas da presente invenção, tal como drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos, podem opcionalmente ser marcados ou preparados com revestimentos e cascas, tais como revestimentos en-téricos e outros revestimentos bem conhecidos na técnica de formula-ção farmacêutica. Eles podem também ser formulados a fim de forne-cer liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo incluso neles usando, por exemplo, hidroxipropilmetil celulose em proporções variá-veis para fornecer o perfil de liberação desejado, outras matrizes polí-meras, lipossomas e/ou microesferas. Eles podem ser formulados para rápida liberação, por exemplo, secados por congelamento. Eles podem ser esterilizados, por exemplo, por filtração através de um filtro de re-tenção de bactéria, ou por incorporação de agentes esterilizantes, na forma de composições sólidas estéreis, que podem ser dissolvidas em água estéril, ou algum outro meio injetável estéril imediatamente antes do uso. Estas composições podem também opcionalmente conter agentes de opacificação e podem ser de uma composição que libere o(s) ingrediente(s) ativo(s) apenas, ou preferencialmente, em uma de-terminada parte do trato gastrointestinal, opcionalmente, de uma ma-neira retardada. Exemplos de composições de embutimento que po-dem ser usados incluem substâncias poliméricas e ceras. O ingrediente ativo pode também ser em forma microencapsulada, se apropriado, com um ou mais dos excipientes acima descritos.
[0095] Formas líquidas de dosagem para administração oral dos compostos da invenção incluem farmaceuticamente aceitáveis emul-sões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixíres. Além do ingrediente ativo, as formas líquidas de dosagem podem conter di- luentes inertes comumente usados na técnica, tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes solubilizantes e emulsificantes, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3- butileno glicol, óleos (em particular, óleos de semente de algodão, amendoim, milho, germe, oliva, rícino e sésamo), glicerol, álcool tetra- hidrofurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano, e misturas dos mesmos.
[0096] Além de diluentes inertes, as composições orais podem também incluir adjuvantes, tais como agentes umectantes, agentes emulsificantes e de suspensão, agentes adoçantes, aromatizantes, colorantes, perfumantes e conservantes.
[0097] Suspensões, em adição aos compostos ativos, podem con ter agentes de suspensão como, por exemplo, álcoois isoestearílicos etoxilados, sorbitol de polioxietileno e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, meta-hidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tra- gacanto, e misturas dos mesmos.
[0098] Formulações das composições farmacêuticas da invenção para administração retal ou vaginal podem ser apresentadas como um supositório, que pode ser preparado misturando-se um ou mais com-postos da invenção com um ou mais excipientes ou veículos não irri-tantes adequados compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau, polietileno glicol, uma cera de supositório ou um salicilato, e que é só-lida em temperatura ambiente, porém líquida em temperatura corporal e, portanto, derreterão no reto ou cavidade vaginal e liberarão o com-posto ativo.
[0099] Formulações da presente invenção que são adequadas pa ra administração vaginal, também incluem pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações spray contendo tais veículos, visto que são conhecidas na técnica ser apropriadas.
[00100] Formas de dosagem para a administração tópica ou trans- dérmica de um composto desta invenção incluem pós, sprays, unguen-tos, pastas, cremes, loções, géis, soluções, emplastros e inalantes. O composto ativo pode ser misturado sob condições estéreis com um veículo farmaceuticamente aceitável, e com quaisquer conservantes, tampões, ou propelentes que podem ser requeridos.
[00101] Os unguentos, pastas, cremes e géis podem conter, em adição a um composto ativo desta invenção, excipientes, tais como gorduras animal e vegetal, óleos, ceras, parafinas, amido, tragacanto, derivados de celulose, polietileno glicóis, silicones, bentonitas, ácido silícico, talco e óxido de zinco, ou misturas dos mesmos.
[00102] Pós e sprays podem conter, além de um composto desta invenção, excipientes tais como lactose, talco, ácido silícico, hidróxido de alumínio, silicatos de cálcio e pó de poliamida, ou misturas destas substâncias. Sprays podem adicionalmente conter propelentes habitu-ais, tais como clorofluoroidrocarbonetos e hidrocarbonetos voláteis não substituídos, tais como butano e propano.
[00103] Emplastros transdérmicos têm a vantagem aicional de fornecer liberação controlada de um composto da presente invenção para o corpo. Tais formas de dosagem podem ser preparadas dissolvendo ou dispersando o composto no meio apropriado. Realçadores de absorção podem também ser usados para aumentar o fluxo do composto através da pele. A taxa de tal fluxo pode ser controlada ou fornecendo uma membrana e controle da taxa ou dispersando o composto em uma matriz polímera ou gel.
[00104] Formulações oftálmicas, unguentos oculares, pós, soluções e similares, são também contempladas com incluídas no escopo desta invenção.
[00105] Composições farmacêuticas desta invenção adequadas para administração parenteral compreendem um ou mais compostos da invenção em combinação com uma ou mais farmaceuticamente acei-táveis soluções aquosas ou não aquosas isotônicas estéreis, disper-sões, suspensões ou emulsões, ou pós estéreis que podem ser re-constituídas em soluções ou dispersões injetáveis estéreis exatamente antes do uso, que pode conter açúcares, álcoois, antioxidantes, tam-pões, bacteriostatos, solutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do receptor pretendido ou agentes de suspensão ou de espes- samento.
[00106] Exemplos de veículos aquosos e não aquosos adequados que podem ser empregados nas composições farmacêuticas da invenção incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno glicol, polietileno glicol, e similares), e misturas adequadas dos mesmos, óleos vegetais, tal como óleo de oliva, e ésteres orgânicos injetáveis, tal como oleato de etila. Fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de materiais de revestimento, tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersões, e pelo uso de tensoativos.
[00107] Estas composições podem também conter adjuvantes, tais como conservantes, agentes umectantes, agentes emulsificantes e agentes de dispersão. Prevenção da ação de microorganismos sobre os compostos objeto pode ser assegurada pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, cloro- butanol, ácido fenol sórbico, e similares. Pode também ser desejável incluir agentes isotônicos, tais como açúcares, cloreto de sódio, e simi-lares nas composições. Além disso, absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser realizada pela inclusão de agentes que retardam a absorção, tal como monoestearato de alumínio e gelatina.
[00108] Em alguns casos, a fim de prolongar o efeito de um fárma- co, é desejável tornar lenta a absorção do fármaco a partir de injeção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser realizado pelo uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo, tendo má solubili-dade em águay. A taxa de absorção do fármaco então depende de sua taxa de dissolução que, por sua vez, pode depender do tamanho do cristal e forma cristalina. Alternativamente, a absorção retardada de uma forma de fármado administrada parenteralmente é realizada dis-solvendo-se ou suspendendo o fármaco em um veículo oleoso.
[00109] Formas de depósito injetáveis são preparadas formando matrizes de microencapsulamento dos compostos objeto em polímeros biodegradáveis, tal como polilactídeo-poliglicolídeo. Dependendo da relação de fármaco para polímero, e a natureza do polímero particular empregado, a taxa de liberação de fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem po- li(ortoésteres) e poli(anidridos). Formulações injetáveis de depósito são também preparadas por captura do fármaco em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com o tecido corporal.
[00110] Quando os compostos da presente invenção são administrados como produtos farmacêuticos, a humanos e animais, eles podem ser administrados de per si ou como uma composição farmacêutica contendo, por exemplo, 0,1 a 99% (mais preferivelmente, 10 a 30%) de ingrediente ativo em combinação com um veículo farmaceuti- camente aceitável.
[00111] As preparações da presente invenção podem ser adminis-tradas oralmente, parenteralmente, topicamente, ou retalmente. Elas são naturalmente administradas em formas adequadas para cada rotina de administração. Por exemplo, elas são administradas em forma de comprimidos ou cápsula, por injeção, inalação, loção oftálmica, un-guento, supositório, etc. administração por injeção, infusão ou inala- ção; tópica por loção ou unguento; e retal por supositórios. As adminis-trações orais são as preferidas.
[00112] As frases "administração parenteral" e "parenteralmente administrado" como usadas aqui significam modos de administração, que não administração enteral e tópica, geralmente por injeção, e in-cluem, sem limitação, injeção e infusão intravenosa, intramuscular, in-tra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiac, intrader-mal, intraperitoneal, transtracheal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoide, intraespinal e intraesternal.
[00113] As frases "administração sistêmica," " sistemicamente ad-ministrado," "administração periférica" e "perifericamente administrado" como usadas aqui significam a administração de um composto, fárma- co ou outro material que não diretamente no sistema nervoso central, de modo que ele entre no sistema do paciente e, desse modo, seja submetido ao metabolismo e outros processos semelhantes, por exemplo, administração subcutânea.
[00114] Estes compostos podem ser administrados a seres humanos e outros animais para terapia por qualquer rotina de administração adequada, incluindo oralmente, nasalmente, como, por exemplo, por um spray, retalmente, intravaginalmente, parenteralmente, intracister- nalmente e topicamente, como por meio de pós, unguentos ou gotas, incluindo bucalmente e sublingualmente.
[00115] Independente da rotina de administração selecionada, os compostos da presente invenção, que podem ser usados em uma for-ma hidratada adequada, e/ou as composições farmacêuticas da pre-sente invenção, são formulados em formas de dosagem farmaceuti- camente aceitáveis por métodos convencionais conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00116] Os níveis de dosagem reais dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas desta invenção podem ser variados a fim de obter uma quantidade do ingrediente ativo que é efetiva para obter a resposta terapêutica desejada de um paciente particular, composição, e modo de administração, sem ser tóxica para o paciente.
[00117] O nível de dosagem selecionado dependerá de uma variedade de fatores que incluem a atividade do composto particular da presente invenção empregado, ou o éster, sal ou amida do mesmo, a rotina de administração, o tempo de administração, a taxa de excreção ou metabolismo do composto particular que está sendo empregado, a taxa e extensão de absorção, a duração do tratamento, outros fárma- cos, compostos e/ou materiais usados em combinação com o composto empregado, a idae, sexo, peso, condição, saúde geral e história médica anterior do paciente que está sendo tratado, e fatores semelhantes, bem conhecidos nas técnicas médicas.
[00118] Um médico ou veterinário versado na técnica pode facilmente determinar e prescreve a quantidade efetiva da composição farmacêutica requerida. Por exemplo, o médico ou veterinário pode iniciar doses dos compostos da invenção empregados na composição farmacêutica em níveis menores do que requerido a fim de obter o efeito terapêutico desejado e gradualmente aumentar a dosagem até o efeito desejado ser obtido.
[00119] Em geral, uma dose diária adequada de um composto da invenção será aquela quantidade do composto que é a menor dose efetiva para produzir um efeito terapêutico. Tal dose efetiva geralmente dependerá dos fatores descritos acima. Geralmente, doses orais, intravenosas, intracerebroventriculares e subcutâneas dos compostos desta invenção para um paciente, quando usadas para os efeitos analgésicos indicados, variará de cerca de 0,0001 a cerca de 100 mg por quilograma de peso corporal por dia.
[00120] Se desejado, a dose diária efetiva do composto ativo pode ser administrada como duas, três, quatro, cinco, seis ou mais subdo ses administradas separadamente em intervalos apropriados durante o dia, opcionalmente, em formas de dosagem unitárias. A dosagem pre-ferida é uma administração por dia.
[00121] Embora seja possível para um composto da presente invenção ser administrado sozinho, é preferível administrar o composto como uma formulação farmacêutica (composição).
[00122] Os compostos de acordo com a invenção podem ser formu-lados para administração de qualquer maneira conveniente para uso em medicina humana ou veterinária, por analogia com outros produtos farmacêuticos.
[00123] Em outro aspecto, a presente invenção fornece composições farmaceuticamente aceitáveis que compreendem uma quantidade terapeuticamente efetiva de um ou mais dos compostos objeto, como descritos acima, formulados junto com um ou mais veículos (aditivos) e/ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis. Como descrito em detalhes abaixo, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser especialmente formulados para administração em forma sólida ou líquida, incluindo aqueles adaptados para os seguintes: (1) administração oral, por exemplo, poções (soluções ou suspensões aquosas ou não aquosas), comprimidos, bolus, pós, grânulos, pastas para aplicação na língua; (2) administração parenteral, por exemplo, por injeção subcutânea, intramuscular ou intravenosa como, por exemplo, uma solução ou suspensão estéril; (3) aplicação tópica, por exemplo, como um creme, unguento ou spray aplicado à pele, pul-mões, ou membranas mucosas; ou (4) intravaginalmente ou intrarre- talmente, por exemplo, como um pessário, creme ou espuma; (5) sub-lingualmente ou bucalmente; (6) ocularmente; (7) transdermicamente; ou (8) nasalmente.
[00124] O termo "tratamento" é destinado a abranger também profi-laxia, terapia e cura.
[00125] O paciente recebendo este tratamento é qualquer animal em necessidade, incluindo primatas, em particular humanos, e outros mamíferos, tais como equinos, gado vacum, suíno e ovelha; e aves domésticas e animais de estimação em general.
[00126] O composto da invenção pode ser administrado como tal, ou em misturas com veículos farmaceuticamente aceitáveis e podem também ser administrados em conjunto com agentes antimicrobianos, tal como penicilinas, cefalosporinas, aminoglicosídeos e glicopeptí- deos. Terapia conjuntiva, desse modo inclui administração sequencial, simultânea e separada do composto ativo, de um modo que os efeitos terapêuticos do primeiro administrado não tenha totalmente desapare-cido quando o subsequente for administrado.
[00127] Tecnologia de microemulsificação pode melhorar a biodis- ponibilidade de alguns agentes farmacêuticos lipofílicos (insolúveis em água). Exemplos incluem Trimetrina (Dordunoo, S. K., et al., Drug De-velopment and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991 e REV 5901 (Sheen, P. C., et al., J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991). Entre outras coisas, microemulsificação fornece biodisponibilidade realçada preferencialmente direcionando a absorção para o sistema linfático ao invés do sistema circulatório, que desse modo ignora o fígado, e impe-de a destruição dos compostos na circulação hepatobiliar.
[00128] Embora todos os veículos anfifílicos adequados sejam con-templados, os veículos no momente preferidos são geralmente aqueles que têm o estado geralmente reconhecido como seguro (GRAS), e que podem tanto solubilizar o composto da presente invenção quanto microemulsificá-lo em um último estágio, quando a solução vem em contato com uma fase de água complexa (tal como aquela encontrada em trato gastrointestinal humano). Geralmente, ingredientes anfifílicos que satisfazem estes requisitos, têm valores HLB (equilíbrio hidrofílico para lipofílico) de 2 a 20, e suas estruturas contêm radicais alifáticos de cadeia linear na faixa de C-6 a C-20. Exemplos são glicerídeos gra- xos polietilenoglicolizados e polietileno glicóis.
[00129] Veículos anfifílicos comercialmente disponíveis são particu-larmente contemplados, incluindo série Gelucire, Labrafil, Labrasol, ou Lauroglicol (todos fabricados e distribuídos por Gattefosse Corporation, Saint Priest, França), PEG-mono-oleato, PEG-di-oleato, PEG- mono-laurato e di-laurato, Lecitina, Polisorbate 80, etc (produzidos e distribuídos por diversas companhias nos USA e em todo o mundo).
[00130] Polímeros hidrofílicos adequados para uso na presente in-venção são aqueles que são facilmente solúveis em água, podem ser covalentemente ligados a um lipídeo formador de veículo, e que são tolerados in vivo sem efeitos tóxicos (isto é, são biocompatíveis). Polí-meros adequados incluem polietileno glicol (PEG), ácido polilático (também denominado polilactídeo), ácido poliglicólico (também deno-minado poliglicolídeo), um copolímero de ácido polilático-poliglicólico, e álcool polivinílico. Polímeros preferidos são aqueles que têm um peso molecular de cerca de 100 ou 120 dáltons até cerca de 5.000 ou 10.000 dáltons, e mais preferivelmente de cerca de 300 dáltons a cerca de 5.000 dáltons. Em uma modalidade particularmente preferida, o polímero é polietilenoglicol tendo um peso molecular de cerca de 100 a cerca de 5.000 dáltons, e mais preferivelmente tendo um peso molecu-lar de cerca de 300 a cerca de 5.000 dáltons. Em uma modalidade par-ticularmente preferida, o polímero é polietilenoglicol de 750 dáltons (PEG(750)). Os polímeros podem também ser definidos pelo número de monômeros inclusos aqui; uma modalidade preferida da presente invenção utiliza polímeros de pelo menos cerca de três monômeros, tais polímeros de PEG consistindo de três monômeros (aproximada-mente 150 dáltons).
[00131] Outros polímeros hidrofílicos podem ser adequados para uso na presente invenção incluem polivinilpirrolidona, polimetoxazoli- na, polietiloxazolina, poli-hidroxipropil metacrilamida, polimetacrilami- da, polidimetilacrilamida, e celuloses derivatizadas, tal como hidroxi- metilcelulose ou hidroxietilcelulose.
[00132] Em certas modalidades, uma formulação da presente invenção compreende um polímero biocompatível selecionado do grupo que consiste em poliamidas, policarbonatos, polialquilenos, polímeros de ésteres acrílicos e metacrílicos, polímeros de polivinila, poliglicolí- deos, polissiloxanos, poliuretanos e copolímeros dos mesmos, celulo-ses, polipropileno, polietilenos, poliestireno, polímeros de ácido lático e ácido glicólico, polianidridos, poli(orto)ésteres, ácido poli(butírico), ácido poli(valérico), poli(lactídeo-co-caprolactona), polissacarídeos, proteínas, ácidos poli-hialurônicos, policianoacrilatos, e combinações, misturas ou copolímeros dos mesmos.
[00133] Ciclodextrinas são oligossacarídeos cíclicos, que consistem em 6, 7 ou 8 unidades de glicose, designadas pela última letra pela letra grega alfa, beta ou gama, respectivamente. Ciclodextrinas com menos de seis unidades de glicose não são conhecidas existir. As unidades de glicose são ligadas por ligações alfa-1,4-glicosídicas. Como uma consequência da conformação da cadeia das unidades de açúcar, todos os grupos hidroxila secundários (em C-2, C-3) são localizados sobre um lado do anel, embora todos grupos hidroxila primária em C-6 são situados sobre o outro lado. Como um resultado, as faces externas são hidrofílicas, tornando as ciclodextrinas solúveis em água. Ao contrário, as cavidades das ciclodextrinas são hidrofóbicas, visto que elas são revestidas pelo hidrogênio de átomos C-3 e C-5, e por oxigênicos semelhantes ao éter. Estas matrizes permitem a complexa- ção com uma variedade de compostos relativamente hidrofóbicos, in-cluindo, por exemplo, compostos esteroides, tal como 17.beta.- estradiol (veja, por exemplo, van Uden et al. Plant Cell Tiss. Org. Cult. 38:1-3-113 (1994)). A complexação ocorre por interações Van der Waals e por formação de ligação de hidrogênio. Para um revisão geral da química de ciclodextrinas, veja, Wenz, Agnew. Chem. Int. Ed. Engl., 33:803-822 (1994).
[00134] As propriedades físico-químicas dos derivados de ciclodex- trina dependem fortemente do tipo e do grau de substituição. Por exemplo, sua solubilidade em água varia de insolúvel (por exemplo, triacetil-beta-ciclodextrina) a 147% solúvel (peso/volume) (G-2-beta- ciclodextrina). Além disso, eles são solúveis em muitos solventes or-gânicos. As propriedades das ciclodextrinas possibilitam o controle so-bre a solubilidade de vários componentes de formulação aumentando ou diminuindo sua solubilidade.
[00135] Numerosas ciclodextrinas e métodos para sua preparação têm sido descritos. Por exemplo, Parmeter (I), et al. (Patente dos Estados Unidos No. 3.453.259) e Gramera, et al. (Patente dos Estados Unidos No. 3.459.731) descreveram ciclodextrinas eletroneutrais. Outros derivados incluem ciclodextrinas com propriedades catiônicas [Parmeter (II), Patente dos Estados Unidos No. 3.453.257], ciclodextri- nas reticuladas insolúveis (Solms, Patente dos Estados Unidos No. 3.420.788), e ciclodextrinas com propriedades aniônicas [Parmeter (III), Patente dos Estados Unidos No. 3.426.011]. Entre os derivados de ciclodextrina com propriedades aniônicas, ácidos carboxílicos, ácidos fosforosos, ácidos fosfinosos, ácidos fosfônicos, ácidos fosfóricos, ácidos tiofosfônicos, ácidos tiosulfínicos, e ácidos sulfônicos foram acrescentados à ciclodextrina origem [veja, Parmeter (III), supra]. Além disso, derivados de ciclodextrina de sulfoalquil éter foram descritos por Stella, et al. (Patente dos Estados Unidos No. 5.134.127).
[00136] Lipossomas consistem em pelo menos uma membrana de bicamada de lipídeo incluindo um compartimento interno aquoso. Li- possomas podem ser caracterizadas pelo tipo da membrana e pelo tamanho. Pequenas vesículas unilamelares (SUVs) têm uma única membrana e tipicamente variam entre 0,02 e 0,05 μM de diâmetro; ve-sículas unilamelares grandes (LUVS) são tipicamente maiores do que 0,05 μM de vesículas grandes oligolamelares e vesículas multilamela- res têm múltiplas, geralmente concêntricas, camadas de membrana e são tipicamente maiores do que 0,1 μM. Lipossomas com diversas membranas não concêntricas, isto é, diversas vesículas menores con-tidas dentro de uma vesícula maior, são denominadas vesículas multi- vesiculares.
[00137] Um aspecto da presente invenção se refere a formulações compreendendo lipossomas contendo um composto da presente in-venção, onde a membrana de lipossoma é formulada para fornecer um lipossoma com capacidade de transporte aumentada. Alternativamente ou em adição, o composto da presente invenção pode ser contido den-tro, ou adsorvido sobre, a bicamada de lipossoma. O composto da presente invenção pode ser agregado com um tensoativo de lipídeo e transportado dentro do espaço interno da lipossoma, nestes casos, a membrana de lipossoma é formulada para resistir os efeitos disrupti- vos do agregado de agente ativo-tensoativo.
[00138] De acordo com uma modalidade da presente invenção, a bicamada de lipídeo de um lipossoma contém lipídeos derivatizados com polietileno glicol (PEG), de modo que as cadeias de PEG esten-dam-se da superfície interna da bicamada de lipídeo no espaço interior encapsulado pela lipossoma, e estendam-se do exterior da bicamada lipídica para o ambiente circundante.
[00139] Agentes ativos contidos nos lipossomas da presente invenção estão em forma solubilizada. Agregados de tensoativo e agente ativo (tais como emulsões ou micelas contendo o agente ativo de interesse) podem ser encapsulados no espaço interior de lipossomas de acordo com a presente invenção. Um tensoativo age para dispersar e solubilizar o agente ativo, e pode ser selecionado de qualquer tensoa- tivo alifático, cicloalifático ou aromático adequado, incluindo, porém não limitado a lisofosfatidilcolinas biocompatíveis (LPCs) de tamanhos de cadeia variáveis (por exemplo, de cerca de C.sub.14 a cerca de C.sub.20). Lipídeos derivatizados por polímero, tais como lipídeos PEG podem também ser utilizados para formação de micela, visto que eles agirão para inibir a fusão de micela/membrana, e como a adição de um polímero a moléculas de tensoativo diminui o CMC do tensoati- vo e auxilia na formação de micela. São preferidos os tensoativos com CMCs na faixa micromolar; tensoativos de maior CMC podem ser utili-zados para preparar micelas encapsuladas nas lipossomas da presente invenção, entretanto, monômeros de tensoativo de micela podem afetar a estabilidade da bicamada de lipossoma e seriam um fator na na concepção de um lipossoma de uma estabilidade desejada.
[00140] Lipossomas de acordo com a presente invenção podem ser preparados por qualquer de uma variedade de técnicas que são co-nhecidas na técnica. Veja, por exemplo, Patente dos Estados Unidos No. 4.235.871; Pedidos PCT publicados WO 96/14057; New RRC, Li-posome: A practical approach, IRL Press, Oxford (1990), páginas 33-104; Lasic DD, Liposomes from physics to applications, Elsevier Sci-ence Publishers BV, Amsterdam, 1993.
[00141] Por exemplo, lipossomas da presente invenção podem ser preparados difundindo um lipídeo derivatizado com um polímero hidro- fílico em lipossomas pré-formados, tal como expondo os lipossomas pré-formados a micelas compostas de polímeros enxertados a lipídeo, em concentrações lipídicas que correspondem ao mole por cento final de lipídeo derivatizado que é desejado no lipossoma. Os lipossomas contendo um polímero hidrofílico podem também ser formados por homegeneirzação, hidratação do campo por lipídeo, ou técnicas de extrusão, como são conhecidas na arte.
[00142] Em um aspecto da presente invenção, os lipossomas são preparados para ter tamanhos substancialmente homogêneos em uma faixa de tamanho selecionada. Um método de delimitação de tamanho eficaz envolve extrusar uma suspensão aquosa dos lipossomas por uma série de membranas de policarbonato tendo um tamanho de poro uniforme selecionado; o tamanho de poro da membrana corresponderá aproximadamente aos maiores tamanhos de lipossomas produzidos por extrusõ por aquela membrana. Veja, por exemplo, Patente dos Es-tados Unidos No. 4.737.323 (12 de abril de 1988).
[00143] As características de liberação de uma formulação da presente invenção dependem do material de encapsulação, da concentração de fármaco encapsulado, e da presença de modificadores de liberação. Por exemplo, a liberação pode ser manipulada para ser dependente do pH, por exemplo, usando um revestimento sensível ao pH que libera apenas em um baixo pH, quando no estômago, ou um maior pH, quando no intestino. Um revestimento entérico pode ser usado para impedir a ocorrência da liberação até após a passagem pelo estômago. Múltiplos revestimentos ou misturas de cianamida encapsulada em diferentes materiais podem ser usados para obter uma liberação inicial no estômago, seguida por posterior liberação no intestino. A liberação pode também ser manipulada por inclusão de sais ou agentes formadores de poro, que podem aumentar a captação de água ou libe-ração e fármaco por difusão da cápsula. Excipientes que modificam a solubilidade do fármaco podem também ser usados controlar a taxa de liberação. Agentes que realçam a degradação da matriz ou liberação da matriz podem também ser incorporados. Eles podem ser adiciona-dos ao fármaco, adicionados como uma fase separada (isto é, como particulados), ou podem ser codissolvidos na fase polímera depen-dendo do composto. Em todos os casos a quantidade deve ser entre 0,1 e trinta por cento (peso/peso polímero). Tipos de realçadores de degradação incluem sais inorgânicos, tais como sulfato de amônio e cloreto de amônio, ácidos orgânicos, tais como ácido cítrico, ácido benzoico, e ácido ascórbico, bases inorgânicas, tais como carbonato de sódio, carbonato de potássio, carbonato de cálcio, carbonato de zinco, e hidróxido de zinco, e bases orgânicas, tais como sulfato de protamina, espermina, colina, etanolamina, dietanolamina, e trietano- lamina e tensoativos, tais como Tween® e Pluronic®. Agentes forma-dores de poro que adicionam microestrutura às matrizes (isto é, com-postos solúveis em água, tais como sais inorgânicos e açúcares) são adicionados como particulatos. A faixa deve ser entre um e trinta por cento (peso/peso de polímero).
[00144] A captação pode também ser manipulada alterando o tempo de residência das partículas no intestino. Isto pode ser obtido, por exemplo, por revestimento da partícula com, ou selecionando como o material de encapsulação, um polímero adesivo mucosal. Exemplos incluem a maior parte dos polímeros com grupos carboxila livres, tal como quitosana, celuloses, e especialmente poliacrilatos (como usado aqui, poliacrilatos referem-se a polímeros incluindo grupos acrilato e grupos acrilatos modificados, tais como cianoacrilatos e metacrilatos).
Combinações Farmacêuticas
[00145] A invenção especialmente se refere ao uso de um composto da Fórmula I (ou uma composição farmacêutica compreendendo um composto da Fórmula I) no tratamento de uma ou mais das doenças mencionadas aqui; nas quais a resposta ao tratamento é benéfica co-mo demonstrado, por exemplo, pela remoção parcial ou completa re-moval de um ou mais dos sintomas da doença até completa cura ou remissão.
[00146] Um composto de Fórmula (I) pode também ser usado em combinação com os seguintes compostos e conjugados de anticorpo- fármaco:
[00147] Inibidores de BCR-ABL: Imatinibe (Gleevec®); Inilotinibe cloridrato; Nilotinibe (Tasigna®); Dasatinibe (BMS-345825); Bosutinibe (SKI-606); Ponatinibe (AP24534); Bafetinibe (INNO406); Danusertibe (PHA-739358), AT9283 (CAS 1133385-83-7); Saracatinibe (AZD0530); e N-[2-[(1S,4R)-6-[[4-(Ciclobutilamino)-5-(trifluorometil)-2-pirimidinil] amino]-1,2,3,4-tetra-hidronaftalen-1,4-imin-9-il]-2-oxoetil]-acetamida (PF-03814735, CAS 942487-16-3); e LGX818.
[00148] Inibidores de ALK: PF-2341066 (XALKORI®; crizotinibe); 5- cloro-N4-(2-(isopropilsulfonil)fenil)-N2-(2-metóxi-4-(4-(4-metilpiperazin- 1-il)piperidin-1-il)fenil)pirimidina-2,4-diamina; GSK1838705A; e CH5424802.
[00149] Inibidores BRAF: Vemurafanibe (PLX4032); e Dabrafenibe.
[00150] Inibidores de FLT3 - malato de sunitinibe (vendido sob a marca comercial Sutent® por Pfizer); PKC412 (midostaurina); tanutini- be, sorafenibe, sunitinibe, midostaurina, lestaurtinibe, KW-2449, qui- zartinibe (AC220) e crenolanibe.
[00151] Inibidor de MEK - trametinibe.
[00152] Inibidores de receptor de Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF): Bevacizumabe (vendido sob a marca comercial Avastin® por Genentech/Roche), axitinibe, (N-metil-2-[[3-[(E)-2-piridin- 2-iletenil]-1H-indazol-6-il]sulfanil]benzamida, também conhecido como AG013736, e descrito na Publicação PCT No. WO 01/002369), Alani- nato de Brivanibe ((S)-((R)-1-(4-(4-Fluoro-2-metil-1H-indol-5-ilóxi)-5- metilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-ilóxi)propan-2-il)2-aminopropanoato, também conhecido como BMS-582664), motesanibe (N-(2,3-dihidro- 3,3-dimetil-1H-indol-6-il)-2-[(4-piridinilmetil)amino]-3- piridinacarboxamida, e descrito na Publicação PCT No. WO 02/066470), pasireotide (também conhecido como SOM230, e descrito na Publicação PCT No. WO 02/010192), sorafenibe (vendido sob a marca comercial Nexavar®);
[00153] Inibidores de receptor de HER2: Trastuzumabe (vendido sob a marca comercial Herceptin® por Genentech/Roche), neratinibe (também conhecido como HKI-272, (2E)-N-[4-[[3-cloro-4-[(piridin-2- il)metoxi]fenil]amino]-3-ciano-7-etoxiquinolin-6-il]-4-(dimetilamino)but-2- enamida, e descrito na Publicação PCT No. WO 05/028443), lapatinibe ou ditosilato de lapatinibe (vendido sob a marca comercial Tykerb® por GlaxoSmithKline); Trastuzumabe entansina (nos Estados Unidos, ado- trastuzumabe entansina, nome comercial Kadcyla) - um conjugado de anticorpo-fármaco que consiste no anticorpo monoclonal trastuzumabe (Herceptina) ligado ao agente citotóxico mertansina (DM1);
[00154] Anticorpos CD20: Rituximabe (vendido sob as marcas co-merciais Riuxan® e MabThera® por Genentech/Roche), tositumomabe (vendido sob as marcas comerciais Bexxar® por GlaxoSmithKline), ofatumumabe (vendido sob a marca comercial Arzerra® por GlaxoS-mithKline);
[00155] Inibidores de tirosina quinase: cloridrato de Erlotinibe (vendido sob a marca comercial Tarceva® por Genentech/Roche), Linifani- be (N-[4-(3-amino-1H-indazol-4-il)fenil]-N'-(2-fluoro-5-metilfenil)ureia, também conhecido como ABT 869, disponível de Genentech), malato de sunitinibe (vendido sob a marca comercial Sutent® por Pfizer), bo- sutinibe (4-[(2,4-dicloro-5-metoxifenil)amino]-6-metóxi-7-[3-(4- metilpiperazin-1-il)propóxi]quinolina-3-carbonitrila, também conhecido como SKI-606, e descrito na Patente dos Estados Unidos No. 6.780.996), dasatinibe (vendido sob a marca comercial Sprycel® por Bristol-Myers Squibb), armala (também conhecido como pazopanibe, vendido sob a marca comercial Votrient® por GlaxoSmithKline), imati- nibe e mesilato de imatinibe (vendido sob as marcas comerciais Gil- vec® e Gleevec® por Novartis);
[00156] Inibidores de Síntese de DNA: Capecitabine (vendido sob a marca comercial Xeloda® por Roche), cloridrato de gencitabina (ven-dido sob a marca comercial Gemzar® por Eli Lilly e Company), nelara- bine ((2R,3S,4R,5R)-2-(2-amino-6-metóxi-purin-9-il)-5-(hidroximetil) oxolano-3,4-diol, vendido sob as marcas comerciais Arranon® e Atri- ance® por GlaxoSmithKline);
[00157] Agentes antineoplásicos: oxaliplatina (vendido sob a marca comercial Eloxatin® por Sanofi-Aventis e descrito na Patente dos Es-tados Unidos No. 4.169.846);
[00158] Inibidores de receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR): Gefitnibe (vendido sob a marca comercial Iressa®), N-[4-[(3- cloro-4-fluorofenil)amino]-7-[[(3''S'')-tetra-hidro-3-furanil]óxi]-6- quinazolinil]-4(dimetilamino)-2-butenamida, vendido sob a marca co-mercial Tovok® por Boehringer Ingelheim), cetuximabe (vendido sob a marca comercial Erbitux® por Bristol-Myers Squibb), panitumumabe (vendido sob a marca comercial Vectibix® por Amgen);
[00159] Inibidores de dimerização de HER: Pertuzumabe (vendido sob a marca comercial Omnitarg®, por Genentech);
[00160] Moduladores de fator de estimulação de colônia de granu- lócito humano (G-CSF): Filgrastim (vendido sob a marca comercial Neupogen® por Amgen);
[00161] Imunomoduladores: Afutuzumabe (disponível de Roche®), pegfilgrastim (vendido sob a marca comercial Neulasta® por Amgen), lenalidomida (também conhecido como CC-5013, vendido sob a marca comercial Revlimid®), talidomida (vendido sob a marca comercial Tha- lomid®);
[00162] Inibidores de CD40: Dacetuzumabe (também conhecido como SGN-40 ou huS2C6, disponível de Seattle Genetics, Inc);
[00163] Agonistas de receptor pró-apoptótico (PARAs): Dulanermi- na (também conhecido como AMG-951, disponível de Am- gen/Genentech);
[00164] Antagonistas de Hedgehog: 2-cloro-N-[4-cloro-3-(2- piridinil)fenil]-4-(metilsulfonil)-benzamida (também conhecido como GDC-0449, e descrito na Publicação PCT No. WO 06/028958);
[00165] Inibidores de PI3K: 4-[2-(1H-Indazol-4-il)-6-[[4- (metilsulfonil)piperazin-1-il]metil]tieno[3,2-d]pirimidin-4-il]morfolina (também conhecido como GDC 0941 e descrito na Publicação PCT Nos. WO 09/036082 e WO 09/055730), 2-Metil-2-[4-[3-metil-2-oxo-8- (quinolin-3-il)-2,3-dihidroimidazo[4,5-c]quinolin-1-il]fenil]propionitrila (também conhecido como BEZ 235 ou NVP-BEZ 235, e descrito na Publicação PCT No. WO 06/122806);
[00166] Inibidores de fosfolipase A2: Anagrelide (vendido sob a marca comercial Agrylin®);
[00167] Inibidores de BCL-2: 4-[4-[[2-(4-clorofenil)-5,5-dimetil-1- cicloexen-1-il]metil]-1-piperazinil]-N-[[4-[[(1R)-3-(4-morfolinil)-1- [(feniltio)metil]propil]amino]-3- [(trifluorometil)sulfonil]fenil]sulfonil]benzamida (também conhecido co-mo ABT-263 e descrito na Publicação PCT No. WO 09/155386);
[00168] Inibidores de proteína quinase quinase (MEK) ativados por mitógeno: XL-518 (Cas No. 1029872-29-4, disponível de ACC Corp.);
[00169] Inibidores de aromatase: Exemestano (vendido sob a marca comercial Aromasin® por Pfizer), letrozol (vendido sob a marca co-mercial Femara® por Novartis), anastrozol (vendido sob a marca co-mercial Arimidex®);
[00170] Inibidores de topoisomerase I: Irinotecano (vendido sob a marca comercial Camptosar® por Pfizer), cloridrato de topotecano (vendido sob a marca comercial Hycamtin® por GlaxoSmithKline);
[00171] Inibidores de topoisomerase II: etoposídeo (também conhecido como VP-16 e fosfato de etoposídeo, vendido sob as marcas co-merciais Toposar®, VePesid® e Etopophos®), teniposídeo (também conhecido como VM-26, vendido sob a marca comercial Vumon®);
[00172] Inibidores de mTOR: Tensirolimus (vendido sob a marca comercial Torisel® por Pfizer), ridaforolimus (formalmente conhecido como deferolimus, dimetilfosfinato de (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2[(1R, 9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S, 35R)-1,18- di-hidróxi-19,30-dimetóxi-15,17,21,23,29,35-hexametil-2,3,10,14,20- pentaoxo-11,36-dioxa-4-azatriciclo[30,3,1,04,9]hexatriaconta- 16,24,26,28-tetraen-12-il]propil]-2-metoxicicloexila, também conhecido como AP23573 e MK8669, e descrito na Publicação PCT No. WO 03/064383), everolimus (vendido sob a marca comercial Afinitor® por Novartis);
[00173] Inibidores de reabsorção óssea osteoclástica: monoidrato de ácido 1-hidróxi-2-imidazol-1-il-fosfonoetil)fosfônico (vendido sob a marca comercial Zometa® por Novartis);
[00174] Conjugados de Anticorpo CD33-Fármaco: Gentuzumabe ozogamicina (vendido sob a marca comercial Mylotarg® por Pfi- zer/Wyeth);
[00175] Conjugados de Anticorpo CD22-Fármaco: Inotuzumabe ozogamicina (também referido como CMC-544 e WAY-207294, dispo-nível de Hangzhou Sage Chemical Co., Ltd.);
[00176] Conjugados de Antidorpo CD20 - Fármaco: Ibritumomabe tiuxetano (vendido sob a marca comercial Zevalin®);
[00177] Análogos de somatostaína: octreotida (também conhecido como acetato de octreotida, vendido sob as marcas comerciais San- dostatin® e Sandostatin LAR®);
[00178] Interleucina-11 sintética (IL-11): oprelvecina (vendido sob a marca comercial Neumega® por Pfizer/Wyeth);
[00179] Eritropoietina sintética: Darbepoetina alfa (vendido sob a marca comercial Aranesp® por Amgen);
[00180] Inibidores de Ativador de Receptor para Fator Nuclear K B (RANK): Denosumabe (vendido sob a marca comercial Prolia® por Amgen);
[00181] Pepticorpos miméticos de trombopoietina: Romiplostim (vendido sob a marca comercial Nplate® por Amgen;
[00182] Estimuladores de crescimento celular: Palifermina (vendido sob a marca comercial Kepivance® por Amgen);
[00183] Anticorpos de receptor de Fator 1 de Crescimento semelhante a anti-insulina (IGF-1R): Figitumumabe (também conhecido como CP-751,871, disponível de ACC Corp), robatumumabe (CAS No. 934235-44-6);
[00184] Aticorpos anti-CS1: Elotuzumabe (HuLuc63, CAS No. 915296-00-3);
[00185] Anticorpos CD52: Alemtuzumabe (vendido sob a marca comercial Campath®);
[00186] Inibidores de CTLA-4: Tremelimumabe (anticorpo monoclonal IgG2 disponível de Pfizer, anteriormente conhecido como ticilimu- mabe, CP-675,206), ipilimumabe (anticorpo de CTLA-4, também co-nhecido como MDX-010, CAS No. 477202-00-9);
[00187] Inibidores de PD1: Nivolumabe (também referidos aqui como MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, BMS0936558, CAS Registry No: 946414-94-4) descritos, por exemplo, na US 8.008.449, e tendo uma sequência descrita aqui (ou uma sequência substancialmente idêntica ou similar a ela ou similar a ela, por exemplo, uma sequência tendo pelo menos 85%, 90%, 95% de identidade ou maior com a se-quência especificada na US 8.008.449); Pembrolizumabe (também referidos aqui como Lambrolizumabe, MK-3475, MK03475, SCH- 900475 ou KEYTRUDA), descrito aqui, por exemplo, na US 8.354.509 e WO 2009/114335, e tendo uma sequência descrita aqui (ou uma se-quência substancialmente idêntica ou similar a ela, por exemplo, uma sequência tendo pelo menos 85%, 90%, 95% de identidade ou maior com a sequência especificada na US 8.354.509 e WO2009/114335); uma imunoadesina (por exemplo, uma imunoadesina que compreende uma porção de ligação extracelular ou a PD-1 de PD-Ll ou PD-L2 fun- dida a uma região constante (por exemplo, uma região Fc de uma se-quência de imunoglobulina); Pidilizumabe (CT-011; Cure Tech) é um anticorpo monoclonal humanizado de IgG1k que se liga a PD1 (Pidili- zumabe e outros anticorpos monoclonais humanizados anti-PD-1 são descritos no WO2009/101611); e AMP-224 (B7-DCIg; Amplimmune), descrito no WO2010/027827 e WO2011/066342), é um receptor solúvel de fusão Fc PD-L2 que bloqueia a interação entre PD1 e B7-H1; outros inibidores de PD-1, por exemplo, anticorpos anti-PD1 descritos nas US 8.609.089, US 2010028330, e/ou US 20120114649.
[00188] Inibidores de PDL1: MSB0010718C (também referidos como A09-246-2; Merck Serono) é um anticorpo monoclonal que se liga a PD-L1 e é descrito, por exemplo, no WO 2013/0179174, (e tendo uma sequência substancialmente idêntica ou similar a ele, por exemplo, uma sequência tendo pelo menos 85%, 90%, 95% de identidade ou maior com a sequência especificada no WO 2013/0179174); e an-tagonista de ligação a anti-PD-LI selecionado de YW243.55.S70, MPDL3280A (Genetech/Roche) é um anticorpo monoclonal de IgG1 otimizado por Fc que se liga a PD-L1 (MDPL3280A e outros anticorpos monoclonais humanos a PD-L1 são descritos na Patente dos Estados Unidos No.: 7.943.743 e Publicação U.S. No.: 20120039906); MEDI- 4736, MSB-0010718C, ou MDX-1105 (MDX-1105, também conhecido como BMS-936559, é um anticorpo anti-PD-LI descrito no WO 2007/005874; anticorpo YW243,55.S70 é um anti-PD-Ll descrito no WO 2010/077634); .
[00189] Inibidores de LAG-3: BMS-986016 (também referido como BMS986016; Bristol-Myers Squibb) é um anticorpo monoclonal que se liga a LAG-3. BMS-986016 e outros anticorpos humanizados anti-LAG- 3 são descritos na US 2011/0150892, WO2010/019570, e WO 2014/008218.
[00190] Agonistas GITR: agonistas exemplares de GITR incluem, por exemplo, proteínas de fusão GITR e anticorpos anti-GITR (por exemplo, anticorpos anti-GITR bivalentes), tais como, uma proteína e fusão GITR descrita na Patente dos Estados Unidos No.: 6.111.090, Patente Europeia No.: 090505B1, Patente dos Estados Unidos No.: 8.586.023, Publicação PCT Nos.: WO 2010/003118 e 2011/090754, ou um anticorpo anti-GITR descrito, por exemplo, na Patente dos Estados Unidos No.: 7.025.962, Patente Europeia No.: 1947183B1, Patente dos Estados Unidos No.: 7.812.135, Patente dos Estados Unidos No.: 8.388.967, Patente dos Estados Unidos No.: 8.591.886, Patente Euro-peia No.: EP 1866339, Publicação PCT No.: WO 2011/028683, Publi-cação PCT No.: WO 2013/039954, Publicação PCT No.: WO 2005/007190, Publicação PCT No.: WO 2007/133822, Publicação PCT No.: WO 2005/055808, Publicação PCT No.: WO 99/40196, Publicação PCT No.: WO 2001/03720, Publicação PCT No.: WO 99/20758, Publicação PCT No.: WO 2006/083289, Publicação PCT No.: WO 2005/115451, Patente dos Estados Unidos No.: 7.618.632, e Publica-ção PCT No.: WO 2011/051726.
[00191] Inibidores de histona desacetilase (HDI): Voninostat (vendido sob a marca comercial Zolinza® por Merck).
[00192] Anticorpos anti-CTLA4 incluem Tremelimumabe (anticorpo monoclonal de IgG2 disponível de Pfizer, anteriormente conhecido como ticilimumabe, CP-675,206); e Ipilimumabe (anticorpo CTLA-4, também conhecido como MDX-010, CAS No. 477202-00-9).
[00193] Anticorpo antitIM-3 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo.
[00194] Agentes de alquilação: Temozolomida (vendido sob as marcas comerciais Temodar® e Temodal® por Schering- Plough/Merck), dactinomicina (também conhecido como actinomicina- D e vendido sob a marca comercial Cosmegen®), melfalan (também conhecido como L-PAM, L-sarcolisina, e mostarda de fenilalanina, vendido sob a marca comercial Alkeran®), altretamina (também co-nhecido como hexametilmelamina (HMM), vendido sob a marca co-mercial Hexalen®), carmustina (vendido sob a marca comercial BiC- NU®), bendamustina (vendido sob a marca comercial Treanda®), bu- sulfan (vendido sob as marcas comerciais Busulfex® e Myleran®), carboplatina (vendido sob a marca comercial Paraplatin®), lomustina (também conhecido como CCNU, vendido sob a marca comercial CeeNU®), cisplatina (também conhecido como CDDP, vendido sob as marcas comerciais Platinol® e Platinol®-AQ), clorambucila (vendido sob a marca comercial Leukeran®), ciclofosfamida (vendido sob as marcas comerciais Cytoxan® e Neosar®), dacarbazina (também co-nhecido como DTIC, DIC e imidazol carboxamida, vendido sob a marca comercial DTIC-Dome®), altretamina (também conhecido como he- xametilmelamina (HMM) vendido sob a marca comercial Hexalen®), ifosfamida (vendido sob a marca comercial Ifex®), procarbazina (ven-dido sob a marca comercial Matulane®), mecloretamina (também co-nhecido como mostarda de nitrogênio, mustina e cloridrato de meclo- roetamina, vendido sob a marca comercial Mustargen®), estreptozoci- na (vendido sob a marca comercial Zanosar®), tiotepa (também co-nhecido como tiofosfoamida, TESPA e TSPA, vendido sob a marca comercial Tioplex®;
[00195] Modificadores de resposta biológica: bacilo calmete-guerina (vendido sob as marcas comerciais theraCys® e TICE® BCG), diftitóxi de denileucina (vendido sob a marca comercial Ontak®);
[00196] Antibióticos antitumor: doxorrubicina (vendido sob as marcas comerciais Adriamicina® e Rubex®), bleomicina (vendido sob a marca comercial lenoxane®), daunorubicina (também conhecido como cloridrato de dauorubicina, daunomicina, e cloridrato de rubidomicina, vendido sob a marca comercial Cerubidine®), daunorubicina lipossô- mica (lipossoma de citrato de daunorubicina, vendido sob a marca co- mercial DaunoXome®), mitoxantrona (também conhecido como DHAD, vendido sob a marca comercial Novantrone®), epirubicina (vendido sob a marca comercial Ellence™), idarubicina (vendido sob as marcas comerciais Idamicina®, Idamicina PFS®), mitomicina C (vendido sob a marca comercial Mutamicina®);
[00197] Agentes antimicrotúbulo: Estramustina (vendido sob a marca comercial Emcyl®);
[00198] Inibidores de Catepsina K: Odanacatibe (também conhecido como MK-0822, N-(1-cianociclopropil)-4-fluoro-N2-{(1S)-2,2,2- trifluoro-1-[4'-(metilsulfonil)bifenil-4-il]etil}-L-leucinamida, disponível de Lanzhou Chon Chemicals, ACC Corp., e ChemieTek, e descrito na Publicação PCT no. WO 03/075836);
[00199] Análogos de Epotilona B: Ixabepilona (vendido sob a marca comercial Lxempra® por Bristol-Myers Squibb);
[00200] Inibidores de Proteína de Choque Térmico (HSP): Tanes- pimicina (17-alilamino-17-demetoxigeldanamicina, também conhecido como KOS-953 e 17-AAG, disponível de SIGMA, e descrito na Patente dos Estados Unidos No. 4.261.989);
[00201] Agonistas de TpoR: Eltrombopag (vendido sob as marcas comerciais Promacta® e Revolade® por GlaxoSmithKline);
[00202] Agentes antimitóticos: Docetaxel (vendido sob a marca co-mercial Taxotere® por Sanofi-Aventis);
[00203] Inibidores esteroides adrenais: aminoglutetimida (vendido sob a marca comercial Cytadren®);
[00204] Antiandrogênios: Nilutamida (vendido sob as marcas co-merciais Nilandron® e Anandron®), bicalutamida (vendido sob a marca comercial Casodex®), flutamida (vendido sob a marca comercial Fule- xin™);
[00205] Androgênios: Fluoximesterona (vendido sob a marca comercial Halotestin®);
[00206] Inibidores de Proteassoma: Bortezomibe (vendido sob a marca comercial Velcade®);
[00207] Inibidores de CDK1: Alvocidibe (também conhecido como flovopirdol ou HMR-1275, 2-(2-clorofenil)-5,7-di-hidróxi-8-[(3S,4R)-3- hidróxi-1-metil-4-piperidinil]-4-cromenona, e descrito na Patente dos Estados Unidos No. 5.621.002);
[00208] Agonistas de receptor de hormônio de liberação de gonado- tropina (GnRH): Leuprolida ou acetato de leuprolida (vendido sob as marcas comerciais Viadure® por Bayer AG, Eligard® por Sanofi- Aventis e Lupron® por Abbott Lab);
[00209] Agentes antineoplásicos de taxano: Cabazitaxel (1-hidróxi- 7β,10β-dimet0xi-9-oxo-5β,20-epoxitax-11 -eno-2α,4,13α-triil-4-acetato- 2-benzoato-13-[(2R,3S)-3-{[(terc-butóxi)carbonil]amino}-2-hidróxi-3- fenilpropanoato), larotaxel (benzoato de (2α,3^4α,5β,7α,10β,13α)- 4,10-bis(acetilóxi)-13-({(2R,3S)-3-[(terc-butoxicarbonil)amino]-2-hidróxi- 3-fenilpropanoil}óxi)-1- hidróxi-9-oxo-5,20-epóxi-7,19-ciclotax-11-en-2- ila);
[00210] Agonistas de receptor 5HT1a: Xaliproden (também conhecido como SR57746, 1-[2-(2-naftil)etil]-4-[3-(trifluorometil)fenil]-1,2,3,6- tetra-hidropiridina, e descrito na Patente dos Estados Unidos No. 5.266.573);
[00211] Vacinas de HPC: Cervarix® vendido por GlaxoSmithKline, Gardasil® vendido por Merck;
[00212] Agentes de quelação de ferro: Deferasinox (vendido sob a marca comercial Exjade® por Novartis);
[00213] Antimetabólitos: Claribina (2-clorodeoxiadenosina, vendido sob a marca comercial leustatin®), 5-fluorouracila (vendido sob a marca comercial Adrucil®), 6-tioguanina (vendido sob a marca comercial Purinethol®), pemetrexed (vendido sob a marca comercial Alimta®), citarabina (também conhecido como arabinosilcitosina (Ara-C), vendi do sob a marca comercial Cytosar-U®), citarabina lipossômica (tam-bém conhecido como Ara-C Lipossômico, vendido sob a marca co-mercial DepoCyt™), decitabina (vendido sob a marca comercial Daco- gen®), hidroxiureia (vendido sob as marcas comerciais Hidrea®, Dro- xia™ e Mylocel™), fludarabina (vendido sob a marca comercial Fluda- ra®), floxuridina (vendido sob a marca comercial FUDR®), cladribina (também conhecido como 2-clorodeoxiadenosina (2-CdA) vendido sob a marca comercial Leustatin™), metotrexato (também conhecido como ametopterina, metotrexato sódico (MTX), vendido sob as marcas co-merciais Rheumatrex® e Trexall™), pentostatina (vendido sob a marca comercial Nipent®);
[00214] Bisfosfonatos: Pamidronato (vendido sob a marca comercial Aredia®), ácido zoledrônico (vendido sob a marca comercial Zome- ta®);
[00215] Agentes de desmetilação: 5-azacitidine (vendido sob a marca comercial Vidaza®), decitabine (vendido sob a marca comercial Dacogen®);
[00216] Alcaloides de planta: ligados à proteína Paclitaxel (vendido sob a marca comercial Abraxane®), vinblastina (também conhecido como sulfato de vinblastina, vincaleukoblastina e VLB, vendido sob as marcas comerciais Alkaban-AQ® e Velban®), vincristina (também co-nhecido como sulfato de vincristina, LCR, e VCR, vendido sob as mar-cas comerciais Oncovin® e Vincasar Pfs®), vinorelbina (vendido sob a marca comercial Navelbine®), paclitaxel (vendido sob as marcas co-merciais Taxol e Onxal™);
[00217] Retinoides: Alitretinoína (vendido sob a marca comercial Panretin®), tretinoína (ácido retinoico totalmente trans, também co-nhecido como ATRA, vendido sob a marca comercial Vesanoid®), Iso- tretinoína (ácido 13-cis-retinoico, vendido sob as marcas comerciais Accutane®, Amnesteem®, Claravis®, Clarus®, Decutan®, Isotane®, Izotech®, Oratane®, Isotret®, e Sotret®), bexaroteno (vendido sob a marca comercial Targretin®);
[00218] Glucocorticosteroides: Hidrocortisona (também conhecido como cortisona, sucinato de hidrocortisona sódica, fosfato de hidrocor- tisona sódica, e vendido sob as marcas comerciais Ala-Cort®, Fosfato de Hidrocortisona, Solu-Cortef®, Hidrocort Acetato® e Lanacort®), de- xametazona ((8S,9R,10S,11S,13S,14S,16R,17R)-9-fluoro-11,17-di- hidróxi-17-(2-hidroxiacetil)-10,13,16-trimetil- 6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecaidro-3H-ciclopenta[a]fenantren- 3-ona), prednisolona (vendido sob as marcas comerciais Delta- Cortel®, Orapred®, Pediapred® e Prelone®), prednisona (vendido sob as marcas comerciais Deltasone®, Liquid Red®, Meticorten® e Ora- sone®), metilprednisolona (também conhecido como 6- Metilprednisolona, Acetato de Metilprednisolona, Sucinato de Metil- prednisolona Sódica, vendido sob as marcas comerciais Duralone®, Medralone®, Medrol®, M-Prednisol® e Solu-Medrol®);
[00219] Citocinas: interleucina-2 (também conhecido como aldes- leucina e IL-2, vendido sob a marca comercial Proleukin®), interleucin- 11 (também conhecido como oprevelcina, vendido sob a marca co-mercial Neumega®), alfa interferon alfa (também conhecido como IFN- alto, vendido sob as marcas comerciais Intron® A, e Roferon-A®);
[00220] Sub-reguladores de receptor de estrogênio: Fulvestrante (vendido sob a marca comercial Faslodex®);
[00221] Antiestrogênios: tamoxifeno (vendido sob a marca comercial Novaldex®);
[00222] Toremifeno (vendido sob a marca comercial Fareston®);
[00223] Moduladores de receptor de estrogênio seletivos (SERMs): Raloxifeno (vendido sob a marca comercial Evista®);
[00224] Agonistas de hormônio de liberação de hormônio leutini- zante (LHRH): Goserelina (vendido sob a marca comercial Zoladex®);
[00225] Progesteronas: megestrol (também conhecido como acetato de megestrol, vendido sob a marca comercial Megace®);
[00226] Agentes citotóxicos heterogêneos: trióxido arsênico (vendido sob a marca comercial Trisenox®), asparaginase (também conhecido como L-asparaginase, Erwinia L-asparaginase, vendido sob as marcas comerciais Elspar® e Kidrolase®);
[00227] Um composto de Fórmula (I) pode também ser usado em combinação com as seguintes terapias auxiliares:
[00228] Fármacos antináusea: antagonistas de receptor NK-1: Ca- sopitante (vendido sob as marcas comerciais Rezonic® e Zunrisa® por GlaxoSmithKline); e
[00229] Agentes citoprotetores: Amifostina (vendido sob a marca comercial Ethyol®), leucovorina (também conhecido como leucovorina cálcica, fator citrovorum e ácido folínico).
[00230] Inibidores de ponto de checagem imune: em uma modalidade, as terapias de combinação descritas aqui incluem um inibidor de uma molécula inibitória de uma molécula de ponto de checagem imune. O termo "pontos de checagem imune" se refere a um grupo de moléculas sobre a superfície celular de células CD4 e CD8 T. Estas moléculas podem efetivamente servir como "freios" para submodular ou inibir uma resposta imune antitumor. Moléculas de ponto de checagem imune incluem, porém não estão limitados a, Morte Programada 1 (PD-1), Antígeno 4 de Linfócito T Citotóxico (CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40, e LAG3, que diretamente inibe células imunes, agentes imunoterapêuticos que podem agir como inibidores de ponto de checagem imune úteis nos métodos da presente invenção, incluem, porém não estão limitados a, inibidores de PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 e/ou TGFR be-ta. Inibição de uma molécula inibitória pode ser realizada por inibição no nível de DNA, RNA ou proteína. Em modalidades, um ácido nuclei- co inibitório (por exemplo, um dsRNA, siRNA ou shRNA), pode ser usado para inibir a expressão de uma molécula inibitória. Em outras modalidades, o inibidor de um sinal inibitório é, um polipeptídeo, por exemplo, um ligante solúvel, ou um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que se liga à molécula inibitória.
[00231] Em certas modalidades, as moléculas anti-PD-1 descritas aqui são administradas em combinação com um ou mais outros inibidores de PD-1, PD-L1 e/ou PD-L2 conhecidos na técnica. O antagonista pode ser um anticorpo, um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, uma imunoadesina, uma proteína de fusão, ou oligopeptídeo.
[00232] Em certas modalidades, as terapias de combinação descritas aqui incluem um modulador de uma molécula coestimulatória ou uma molécula inibitória, por exemplo, um receptor ou ligante coinibitó- rio.
[00233] Em uma modalidade, o modulador coestimulatório, por exemplo, agonista, de uma molécula coestimulatória é selecionado de um agonista (por exemplo, um anticorpo agonístico ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, ou fusão solúvel) de ligante OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 ou CD83.
[00234] Em outra modalidade, as terapias de combinação descritas aqui incluem uma molécula coestimulatória, por exemplo, um agonista associado com um sinal positivo que inclui um domínio coestimulatório de CD28, CD27, ICOS e GITR.
[00235] Em uma modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 é administrada após o tratamento, por exemplo, após tratamento do me-lanoma, com um anticorpo anti-CTLA4 (por exemplo, ipilimumabe) com ou sem um inibidor de BRAF (por exemplo, vemurafenibe ou da- brafenibe). Doses exemplares que podem ser usadas incluem a dose de molécula de anticorpo anti-PD-1 de cerca de 1 a 10 mg/kg, por exemplo, 3 mg/kg, e uma dose de um anticorpo anti-CTLA-4, por exemplo, ipilimumabe, de cerca de 3 mg/kg.
[00236] Em outra modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-LAG-3 ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em outra modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em ainda outras modalidades, a molécula de an-ticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-LAG-3 e um anticorpo anti-TIM-3, ou fragmentos de li-gação a antígeno do mesmo. A combinação de anticorpos citada aqui pode ser administrada separadamente, por exemplo, como anticorpos separados, ou ligados, por exemplo, como uma molécula de anticorpo biespecífica ou triespecífica. Em uma modalidade, um anticorpo bies- pecífico que inclui molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 e um an-ticorpo anti-TIM-3 ou anti-LAG-3, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, é administrado. Em certas modalidades, a combinação de anticorpos citada aqui é usada para tratar um câncer, por exemplo, um câncer como descrito aqui (por exemplo, um tumor sólido). A eficácia das combinações supracitadas pode ser tetada em modelos animais conhecidos na técnica. Por exemplo, os modelos animais para testar o efeito sinérgico de anti-PD-1 e anti-LAG-3 são descritos, por exemplo, em Woo et al. (2012) Cancer Res. 72(4):917-27).
[00237] Em algumas modalidades, a terapia de combinação descrita aqui (por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1, sozinho ou em combinação com outro imunomodulador (por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-LAG-3, ou anti-TIM-3). Em uma moda-lidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-LAG-3 ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em outra modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em ainda outras modalidades, a molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-LAG-3 e um anti-corpo anti-TIM-3, ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo. A combinação de anticorpos citada aqui pode ser administrada separa-damente, por exemplo, como anticorpos separados, ou ligados, por exemplo, como uma molécula de anticorpo biespecífica ou triespecífi- ca. Em uma modalidade, um anticorpo biespecífico que inclui uma mo-lécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 e um anticorpo anti-TIM-3 ou anti-LAG-3, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, é adminis-trado. Em certas modalidades, a combinação de anticorpos citada aqui é usada para tratar um câncer, por exemplo, um câncer como descrito aqui (por exemplo, um tumor sólido). A eficácia das combinações su-pracitadas pode ser tetada em modelos animais conhecidos na técnica. Por exemplo, os modelos animais para testar o efeito sinérgico de anti-PD-1 e anti-LAG-3 são descritos, por exemplo, em Woo et al. (2012) Cancer Res. 72(4):917-27),24.
[00238] Em certas modalidades, a molécula de anticorpo está na forma de uma molécula de anticorpo biespecífica ou multiespecífica. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo biespecífica tem uma primeira especificidade de ligação a PD-1 ou PD-L1 e uma segunda especificidade de ligação, por exemplo, uma segunda especificidade de ligação a TIM-3, LAG-3, ou PD-L2. Em uma modalidade, a molécula de anticorpo biespecífica liga-se a PD-1 ou PD-L1 e TIM-3. Em outra modalidade, a molécula de anticorpo biespecífica liga-se a PD-1 ou PD-L1 e LAG-3. Em outra modalidade, a molécula de anticorpo bies- pecífica liga-se a PD-1 ou PD-L1. Em ainda outra modalidade, a molé-cula de anticorpo biespecífica liga-se a PD-1 e PD-L2. Em outra moda- lidade, a molécula de anticorpo biespecífica liga-se a TIM-3 e LAG-3. Qualquer combinação das moléculas supracitadas pode ser feita uma molécula de anticorpo multiespecífica, por exemplo, um anticorpo tri- específico que inclui uma primeira especificidade de ligação a PD-1 ou PD-1, e uma segunda ou terceira especificidades de ligação a dois ou mais de: TIM-3, LAG-3, ou PD-L2.
[00239] Nenhuma das cotações de referências feitas na presente descrição deve ser entendida como uma admissão de que as referên-cias citadas são técnica anterior que negativamente afetam a patenta- bilidade presente invenção.
Processos para Preparação de Compostos da invenção
[00240] A presente invenção também inclui processos para a prepa-ração de compostos da invenção. Nas reações descritas, pode ser ne-cessário proteger grupos funcionais reativos, por exemplo, grupos hi- dróxi, amino, imino, tio ou carbóxi, onde estes são desejados no pro-duto final, para evitar sua participação indesejada nas reações. Grupos de proteção convencionais podem ser usados de acordo com prática padrão, por exemplo, veja T.W. Greene e P. G. M. Wuts em "Protective Grupos em Organic Chemistry", John Wiley e Sons, 1991.
[00241] Compostos de Fórmula I podem ser preparados procedendo como no seguinte Esquema de Reação I: Esquema de Reação I:
Figure img0026
[00242] em que p, q, Y1, Y2, R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b, R7 e R8 são como definidos para Fórmula I no Sumário da invenção, Q é um halogênio (tipo bromo) ou um tiol, boronato ou estanato que reage com um halogênio no composto 5, e X é um grupo reativo que reage com Q (tal como um boronato, estanano, álcool, tiol, halogênio, e simi-lares). O composto 4 pode ser preparado reagindo o composto 2 com o composto 3 por meio de uma reação sob condições de ácido ou base adequadas na presença ou usência de um metal de transição sob temperatura ambiente, ou sob condições térmicas ou de micro-ondas. Alternativamente, o halogênio de composto 2 pode ser substituído por outros halogênios ou grupos de ativação adequados tais como triflatos, mesilatos, tosilatos, nonaflatos, boronatos, organoestananos, organo- sililas, organozincos, lítio, magnésio, e similares.
[00243] Um composto de Fórmula I pode ser preparado reagindo o composto 4 com um parceiro de acoplamento adequado (por exemplo, o composto 5) dependendo de X. Por exemplo, o composto 5 é mos-trado no Esquema de Reação I como um grupo fenila substituído ligado por meio de X. Alternativamente, o composto 5 pode ser álcool arí- lico, aril-tio, aril-boronato, aril-estanato, álcool heteroarílico, aril-tiol, heteroaril-tiol, aril-boronato, aril-estanano, olefina, ou outros metais de arila ou metais de heteroarila, e similares. Os parceiros de acoplamento podem também ser substituídos. Esta reação pode ser conduzida sob condições de ácido ou base adequadas, na presença ou usência de um metal de transição tal como paládio, sob temperatura ambiente, ou sob condições térmicas ou de micro-ondas. Outros halogênios ou grupos de ativação adequados (por exemplo, triflatos, mesilatos, tosila- tos, e nonaflatos) podem ser usados em lugar de Br para estas trans-formações.
[00244] Alternativamente, os parceiros de acoplamento podem ser invertidos e o composto 2 pode ser derivatizado para um estanano, boronato, organozinco, organolítio, organomagnésio, organossilício, organocuprato e acoplado com um adequado haleto de arila, haleto de heteroarila, olefina ou grupo funcional reativo adequado (por exemplo, triflatos, mesilatos, tosilatos e nonaflatos), e similares.
[00245] Estas reações podem ser conduzidas na ordem descrita ou em ordem inversa, sob uma variedade de solventes, temperaturas, pressões, e sob atmosferas adequadas. As reações podem ser condu-zidas sob condições de ácido, base, e/ou metal de transição.
[00246] Exemplos detalhados da síntese de compostos de Fórmula I podem ser encontrados nos Exemplos, infra.
Processos Adicionais para Preparar Compostos da Invenção
[00247] Um composto da invenção pode ser preparado como um sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável reagindo a forma de base livre do composto com um ácio inorgânico ou orgânico farma- ceuticamente aceitável. Alternativamente, um sal de adição de base farmaceuticamente aceitável de um composto da invenção pode ser preparado reagindo a forma de ácido livre do composto com uma base inorgânica ou orgânica farmaceuticamente aceitável.
[00248] Compostos da Fórmula I podem também ser modificados anexando funcionalidades apropriadas para realçar propriedades bio-lógicas seletivas. Modificações deste tipo são conhecidas na técnica e incluem aquelas que aumentam a penetração em um determinado sis-tema biológico (por exemplo, sangue, sistema linfático, sistema nervo-so central, testículos), aumentar a biodisponibilidade, aumentar a solu-bilidade para permitir a administração parenteral (por exemplo, injeção, infusão), alterar o metabolismo e/ou alterar a taxa de secreção. Exem-plos destes tipos de modificações incluem, porém não estão limitados à esterificação, por exemplo, com polietileno glicóis, derivatização com pivaloilóxi ou substituintes de ácido graxo, conversão em carbamatos, hidroxilação de anéis aromáticos e substituição de heteroátomo em anéis aromáticos. Onde quer que compostos da Fórmula I, e/ou N- óxidos, tautômeros e/ou (preferivelmente farmaceuticamente aceitá-veis) sais dos mesmos sejam mencionados, este compreende tais Fórmulas modificadas, embora preferivelmente as moléculas da Fór-mula I, seus N-óxidos, seus tautômeros e/ou seus sais sejam preten-didas.
[00249] Alternativamente, as formas de sal dos compostos da invenção podem ser preparadas usando sais dos materiais de partida ou intermediários. Em vista da ligação próxima entre os novos compostos da Fórmula I em forma livre e aqueles na forma de seus sais, incluindo aqueles sais que podem ser usados como intermediários, por exemplo, na purificação ou identificação dos novos compostos, qualquer referência aos compostos ou um composto da Fórmula I supracitado e infracitado deve ser entendida como referindo-se ao composto em forma livre e/ou também a um ou mais sais dos mesmos, como apro-priado e conveniente, bem como a um ou mais solvates, por exemplo, hidratos.
[00250] Sais são formados, por exemplo, como sais de adição de ácido, preferivelmente com ácidos orgânicos ou inorgânicos, de com-postos de Fórmula I com um átomo de nitrogênio básico, especialmen-te os sais farmaceuticamente aceitáveis. Ácidos inorgânicos adequa-dos são, por exemplo, ácidos de halogênio, tal como ácido hidroclóri- co, ácido sulfúrico, ou ácido fosfórico. Ácidos orgânicos adequados são, por exemplo, ácidos carboxílicos, fosfônicos, sulfônicos ou sulfâ- micos, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido octanoico, ácido decanoico, ácido dodecanoico, ácido glicólico, ácido lático, ácido fumárico, ácido sucínico, ácido malônico, ácido adípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cí-trico, aminoácidos, tal como ácido glutâmico ou ácido aspártico, ácido maleico, ácido hidroximaleico, ácido metilmaleico, ácido cicloexano- carboxílico, ácido adamantanocarboxílico, ácido benzoico, ácido salicí- lico, ácido 4-aminossalicílico, ácido ftálico, fenilacético, ácido mandéli- co, ácido cinâmico, ácido metano- ou etano-sulfônico, ácido 2- hidroxietanossulfônico, ácido etano-1,2-dissulfônico, ácido benzenos- sulfônico, ácido 4-toluenossulfônico, ácido 2-naftalenossulfônico, ácido 1,5-naftaleno-dissulfônico, ácido 2- ou 3-metilbenzenossulfônico, ácido metilsulfúrico, ácido etilsulfúrico, ácido dodecilsulfúrico, ácido N- cicloexilsulfâmico, ácido N-metil-, N-etil- ou N-propil-sulfâmico, ou ou-tros ácidos protônicos orgânicos, tal como o ácido ascórbico.
[00251] Para os propósitos de isolação ou purificação é também possível usar sais farmaceuticamente inaceitáveis, por exemplo, picra- tos ou percloratos. Para uso terapêutico, apenas sais farmaceutica- mente aceitáveis ou compostos livres são empregados (onde aplicá-veis na forma de preparações farmacêuticas), e estas são, portanto, preferidas.
[00252] As formas de ácido livre ou de base livre dos compostos da invenção podem ser preparadas do correspondente sal de adição de base ou sal de adição de ácido, respectivamente. Por exemplo, um composto da invenção em uma forma de sal de adição de ácido pode ser convertido na correspondente base livre tratando com uma base adequada (por exemplo, solução de hidróxido de amônio, hidróxido de sódio, e similares). Um composto da invenção em uma forma de sal de adição de base pode ser convertido no correspondente ácido livre tra-tando com um ácido adequado (por exemplo, ácido hidroclórico, etc.).
[00253] Compostos da invenção em forma não oxidada podem ser preparados de N-óxidos de compostos da invenção tratando com um agente de redução (por exemplo, enxofre, dióxido de enxofre, trifenil fosfina, boroidreto de lítio, boroidreto de sódio, tricloreto de fósforo, tribrometo, ou similares) em um solvente orgânico inerte adequado (por exemplo, acetonitrila, etanol, dioxano aquoso, ou similares) em 0 a 80°C.
[00254] Derivados de profármaco dos compostos da invenção podem ser preparados por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica (por exemplo, para maiores detalhes, veja Saulnier et al., (1994), Bioorganic e Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985). Por exemplo, profármacos apropriados podem ser preparados reagindo um composto da invenção não derivatizado com um agente de carba- milação adequado (por exemplo, 1,1-aciloxialquilcarbanochloridate, para-nitrofenila carbonato, ou similares).
[00255] Derivados protegidos dos compostos da invenção podem ser preparados por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Uma descrição detalhada de técnicas aplicáveis à criação de grupos de proteção e sua remoção pode ser encontrada em T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3a edição, John Wiley and Sons, Inc., 1999.
[00256] Compostos da presente invenção podem ser conveniente-mente preparados, ou formados durante o processo da invenção, como solvatos (por exemplo, hidratos). Hidratos de compostos da presente invenção podem ser convenientemente preparados por recrista- lização de uma mistura de solvente aquoso/orgânico, usando solventes orgânicos, tais como dioxina, tetra-hidrofurano ou metanol.
[00257] Compostos da invenção podem ser preparados como seus estereoisômeros individuais reagindo uma mistura racêmica do com-posto com um agente de resolução oticamente ativo para formar um par de compostos diastereoisoméricos, separando os diastereômeros e recuperando os enantiômeros oticamente puros. Embora resolução de enantiômeros possa ser realizada usando derivados diastereoméri- cos covalentes dos compostos da invenção, complexos dissociáveis são preferidos (por exemplo, sais diastereoméricos cristalinos). Diaste- reômeros têm propriedades físicas distintas (por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, solubilidades, reatividade, etc.) e podem ser facilmente separados tirando vantagem destas dissimilaridades. Os diastereômeros podem ser separados por cromatografia, ou preferi-velmente, por técnicas de separação/resolução com base em diferen-ças em solubilidade. O enantiômero oticamente puro é então recupe-rado, junto com o agente de resolução, por qualquer método prático que não resultaria em racemização. Uma descrição mais detalhada das técnicas aplicáveis à resolução de estereoisômeros de compostos a partir de sua mistura racêmica pode ser encontrada em Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley e Sons, Inc., 1981.
[00258] Em síntese, os compostos de Fórmula I podem ser preparados por um processo, que envolve: (a) aquele de Esquema de Reação I; e (b) opcionalmente convertendo um composto da invenção em um sal farmaceuticamente aceitável; (c) opcionalmente convertendo uma forma de sal de um composto da invenção em uma forma de não sal; (d) opcionalmente convertendo uma forma não oxidada de um composto da invenção em um N-óxido farmaceuticamente aceitá-vel; (e) opcionalmente convertendo uma forma de N-óxido de um composto da invenção em sua forma não oxidada; (f) opcionalmente resolvendo um isômero individual de um composto da invenção de uma mistura de isômeros; (g) opcionalmente convertendo um composto não derivati- zado da invenção em um derivado de profármaco farmaceuticamente aceitável; e (h) opcionalmente convertendo um derivado de profármaco de um composto da invenção em sua forma não derivatizada.
[00259] Na medida em que a produção dos materiais de partida não é particularmente descrita, os compostos são conhecidos ou podem ser preparados analogamente a métodos conhecidos na técnica ou como descrito nos exemplos infracitados.
[00260] Alguém versado na técnica apreciará que as transformações acima citadas sejam apenas representativas de métodos para a preparação dos compostos da presente invenção, e que outros méto-dos bem conhecidos podem similarmente ser usados.
EXEMPLOS
[00261] Os seguintes exemplos e intermediários servem para ilustrar a invenção sem limitar o escopo da mesma. Algumas abreviações usadas nos exemplos são como segue: ácido acético (AcOH); trietila- mina (TEA); tetra-hidrofurano (THF); aquoso (aq.); atmosfera (atm.); 2,2'-bis-difenilfosfanil-[1,1']binaftalenila (BINAP); 4-dimetilaminopiridina (DMAP); terc-butoxicarbonila (Boc); 1,1-carbonildiimidazol (CDI); di-carbonato de di-terc-butila (BOC2O); hexafluorofosfato de benzotriazol- 1-il-óxi-tris-(dimetilamino)-fosfônio (BOP); diclorometano (DCM); dietil éter (Et2O); ácido p-tolueno sulfônico (PTSA); acetato de etila (EtOAc); etanol (EtOH); bis(trimetilsilil)amida de lítio (LHMDS); diisopropil azodi- carboxilato (DIAD); N,N-diisopropil-etilamina (DIEA ou DIPEA); N,N- dimetilformamida (DMF); sulfóxido de dimetila (DMSO); difenilfosforil azida (DPPA); hora(s) (h); hexafluorofosfato de 2-(1H-7- azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilurônio (HATU); Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC); hidreto de alumínio de lítio (LAH); cromatografia líquida acoplada com espectrometria de massa (LCMS); diisopropilamida de lítio (LDA); metanol (MeOH); mililitro(s) (mL); minuto(s) (min); micro-onda (MW); n-butil lítio (n-BuLi); 1,1- bis(difenilfosfino)-ferrocenodicloropaládio(II) (PdCl2(dppf)); tris(dibenzilideneacetona)dipaládio(0) (Pd2(dba)3); dicloro- bis(trifenilfosfina)paládio (II) (PdCl2(PPh3)2); temperatura ambiente (RT); ácido trifluoroacético (TFA); tetra-hidrofurano (THF); cromatogra- fia de camada fina (TLC); tempo de retenção (tR); & 4,5- bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (Xantophos). Intermediário 1 6-cloro-3-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina
Figure img0027
[00262] Etapa a: A uma solução de 3-bromo-2-(trifluorometil)piridina (1,0 g, 4,42 mmol), XantPhos (256 mg, 0,442 mmol), Pd2(dba)3 (203 mg, 0,221 mmol) em dioxano (12 mL) foi adicionado (em temperatura ambiente e sob N2) 2-etil-hexil-3-mercaptopropanoato (1,1 mL, 4,87 mmol) seguido pela adição de DIPEA (1,55 mL, 8,85 mmol). A solução resultante foi agitada em um reator de micro-onda durante 1 hora a 110 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (25 mL). Os filtrados combinados foram concentrados e o resí-duo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 30% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 3-((2-(trifluorometil)piridin- 3-il)tio)propanoato de 2-etil-hexila (1,41 g, 3,88 mmol). MS m/z 364,0 (M+H)+.
[00263] Etapa b: A uma solução de 3-((2-(trifluorometil)piridin-3- il)tio)propanoato de 2-etil-hexila (1,0 g, 2,75 mmol) em THF (8 mL) foi adicionado a -78 °C e sob N2 terc-butóxido de potássio (1 M em THF, 8,25 mL, 8,25 mmol). Após agitar vigorosamente a -78 °C durante 20 minutos, a reação foi saciada com K2CO3 aq. (2 M, 500 μL) e os volá-teis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi vertido em um funil de separação contendo K2CO3 aq. (2 M, 30 mL) e ele foi extraído com Et2O (2 x 20 mL). A fase aquosa foi acidificada com 6 M de HCl até pH 4 e a suspensão turva resultante foi extraída com CHCl3:IPA (9:1; 3 x 20 mL) para fornecer 2-(trifluorometil)piridina- 3-tiol (380 mg, 2,12 mmol). MS m/z 180,0 (M+H)+.
[00264] Etapa c: A uma solução de 2-(trifluorometil)piridina-3-tiol (285 mg, 1,591 mmol), 3-bromo-6-cloropirazin-2-amina (414 mg, 1,988 mmol), XantPhos (101 mg, 0,175 mmol), e Pd2(dba)3 (72,8 mg, 0,08 mmol) em dioxano (2 mL) foi adicionado (em temperatura ambiente e sob N2) DIPEA (556 μL, 3,18 mmol). A solução resultante foi agitada em um reator de micro-onda durante 1,5 h a 130 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi diluída com EtOAc e ela foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (25 mL). Os filtrados combinados foram concentrados e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 30% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 6-cloro-3-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (1,41 g, 3,88 mmol). 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,64 (dd, J=4,55, 1,26 Hz, 1 H), 7,90 (s, 1 H), 7,82 (dd, J=8,08, 0,76 Hz, 1 H), 7,46 (dd, J=8,08, 4,80 Hz, 1 H); 19F RMN (376 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm -64,34 (s, 1 F). MS m/z 307,1 (M+H)+. Intermediário 2 6-(4-amino-4-metilpiperidin-1-il)-3-(2,3-diclorofenil)pirazin-2-amina
Figure img0028
[00265] Uma suspensão de 3-bromo-6-cloropirazin-2-amina (1,2 g, 5,76 mmol), ácido (2,3-diclofenil)borônico (1,1 g, 5,76 mmol), fosfato de potássio (3,67 g, 17,27 mmol), e aduto de PdCh(dpptyDCM (235 mg, 0,288 mmol) em MeCN:H2O (9:1, 15 mL, desgaseificado) foi agitada em um reator de micro-onda durante 4 h a 120 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (25 mL). Os filtrados combinados foram concentrados e o resíduo resultante foi pu- rificado por cromatografia de sílica (0 a 30% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer 6-(4-amino-4-metilpiperidin-1-il)-3-(2,3- diclorofenil)pirazin-2-amina (633 mg, 2,306 mmol). MS m/z 276,4 (M+H)+. Intermediário 3 6-cloro-3-((2,3-diclorofenil)tio)pirazin-2-amina
Figure img0029
[00266] Uma mistura de 3-bromo-6-cloropirazin-2-amina (5,0 g, 23,99 mmol), 2,3-diclorobenzenotiol (6,44 g, 36,0 mmol), iodeto de co- bre(I) (914 mg, 4,80 mmol), fosfato de potássio (10,18 g, 48,0 mmol), e 1,10-fenantrolina (1,73 mg, 9,59 mmol) em dioxano (50 mL, desgasei- ficado) foi agitada durante 16 horas a 85 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi diluída com EtOAc, e ela foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (50 mL). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 25% de gradiente de DCM/tolueno) para fornecer 6-cloro-3-((2,3- diclorofenil)tio)pirazin-2-amina (3,7 g, 12,07 mmol). MS m/z 306,0 (M+H)+. Intermediário 4 (R) e (S)-2-(7-azaspiro[3.5]nonan-1-il)isoindolina-1,3-diona
Figure img0030
[00267] Etapa a: Uma suspensão de 1-amino-7- azaspiro[3.5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (250 mg, 1,04 mmol), anidrido ftálico (193 mg, 1,3 mmol), peneiras moleculares ativadas (3 angstroms, 250 mg), e DIPEA (545 μL, 3,12 mmol) em tolueno (4 mL) foi agitada durante 16 horas a 105 °C. Após resfriamento para a tem-peratura ambiente, a mistura foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (10 mL). Os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (5 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-7-azaspiro[3.5]nonano-7- carboxila- to de terc-butila (233 mg, 0,629 mmol). MS m/z 370,4 (M+H)+.
[00268] Etapa b: Uma solução de 1-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-7- azaspiro[3.5]nonano-7-carboxilato de terc-butila (233 mg, 0,629 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 800 μL, 3,21 mmol) em dioxano (5 mL) foi agi-tada durante 16 horas a RT. Os voláteis foram removidos no Rotovap para fornecer o sal de HCl do composto do título (195 mg, 0,636 mmol). MS m/z 270,3 (M+H)+.
[00269] Etapa c: Purificação por SFC quiral foi realizada sob as se-guintes condições; coluna: Celulose LUX-2 21x250 mm, taxa de fluxo: 75 g por minuto, fase móvel: 50% de MeOH e 10 mM de NH4OH em CO2, detecção: 220 nm UV para obter dois picos Rt (P1)= 3,6 min (enantiômero R); Rt (P2)= 7,4 min (enantiômero S). Intermediário 5 2-(1,1 -dióxido-1-tia-8-azaspiro[4.5]decan-4-il)isoindolina-1,3-diona
Figure img0031
[00270] Etapa a: Uma solução de 1,1-dióxido de ácido 8-(terc- butoxicarbonil)-1-tia-8-azaspiro[4.5]decano-4-carboxílico (preparada de 4-oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butila em 4 Etapas como descrito em Carreira et al., Org Lett., 2011, 13, 6134-6136; 2,00 g, 6,00 mmol), fosforazidato de difenila (2,0 g, 7,26 mmol), e Et3N (1,0 mL, 7,26 mmol) em tolueno (37 mL) foi agitada durante 1,5 h a 115 °C. Álcool benzílico (1,50 mL, 14,52 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura am-biente, a mistura de reação foi vertida em um funil de separação con-tendo NaH-CO3 sat. aq. (30 mL) e ela foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (10 a 90% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1,1-dióxido de 4- (((benzilóxi)carbonil)amino)-1-tia-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (1,57 g. 3,58 mmol) como um sólido branco. MS m/z 339,4 (M+H)+.
[00271] Etapa b: Uma suspensão de 1,1-dióxido de 4- (((benzilóxi)carbonil)amino)-1-tia-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (570 mg. 1,30 mmol) e Pd/C (10% em carvão vegetal, 138 mg) em THF (8 mL) foi vigorosamente agitada sob atmosfera de H2 durante 16 horas. A reação foi filtrada através de um tampão de Ce- lita seguida por lavagem com EtOAc (20 mL). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 1,1-dióxido de 4-amino-1-tia- 8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação.
[00272] Etapa c: Uma suspensão de 1,1-dióxido de 4-amino-1-tia-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (415 mg, 1,363 mmol), anidrido ftálico (252 mg, 1,704 mmol), e peneiras moleculares ativadas (3 angstroms, 500 mg) em tolueno (7 mL) foi vigorosamente agitada durante 16 horas a 115 °C. Após resfriamento para a temperatura am-biente, a mistura foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (10 mL), e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 10% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 1,1- dióxido de 4-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-1-tia-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila (385 mg, 0,886 mmol) como uma espuma branca. MS m/z 433,1 (M-H)-.
[00273] Etapa d: Uma solução de 1,1-dióxido de 4-(1,3- dioxoisoindolin-2-il)-1-tia-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc- butila (385 mg, 0,886 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 2,22 mL, 8,86 mmol) em dioxano (4 mL) foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com dioxano (20 mL) e filtrada para for-necer 2-(1,1-dióxido-1-tia-8-azaspiro[4.5]decan-4-il)isoindolina-1,3- diona (sal de HCl, 328 mg, 0,884 mmol) como um sólido branco. MS m/z 335,4 (M+H)+. Intermediário 6 (R )-2-metil-N-((S )-7-azaspiro[3.5]nonan-1-il)propano-2-sulfinamida
Figure img0032
[00274] Etapa a: Uma solução de 1-oxo-7-azaspiro[3.5]nonano-7- carboxilato de terc-butila (5,24 g, 21,9 mmol), isopropóxido de titâ- nio(IV) (16,2 mL, 54,7 mmol), e (R)-2-metilpropano-2-sulfinamida (3,45 g, 28,5 mmol) em THF (99 mL) foi agitada durante 12 horas a 65 °C. Após resfriamento até -78 °C, MeOH (9,9 mL) foi adicionado seguido por boroidreto de lítio (1,43 g, 65,7 mmol). A mistura resultante foi agi-tada a -78 °C durante 3 horas e em temperatura ambiente durante 1 hora. MeOH foi lentamente adicionado para saciar o excesso de boroi- dreto seguido pela adição de solução salina. A mistura resultante foi agitada durante 15 minutos e em seguida filtrada através de Celita. A mistura aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As fases orgânicas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cro- matografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano para for-necer 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-7-azaspiro[3.5]nonano-7- carboxilato de (S)-terc-butila (4,79 g. 13,90 mmol) como um sólido branco. MS m/z 345,3 (M+H)+.
[00275] Etapa b: Uma solução de 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)- 7-azaspiro[3.5]nonano-7-carboxilato de (S)-terc-butila (0,4 g, 1,16 mmol) e TFA (450 μL, 5,81 mmol) em DCM (3,5 mL) foi agitada durante 30 minutos a 40 °C. Na2CO3 saturado aquoso foi adicionado até pH 11 e a mistura aquosa foi extraída com DCM (3 x 15 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (R)-2-metil-N-((S)-7-azaspiro[3.5]nonan-1-il)propano-2- sulfinamida (237 mg, 0,97 mmol) como um sólido branco. MS m/z 245,5 (M+H)+. Intermediário 7 N-(4-metoxibenzil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0033
[00276] Etapa a: A uma solução de 1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila (1,8 g, 7,11 mmol), e (4- metoxifenil)metanamina (1,07 g, 7,82 mmol) em DCE (7 mL) foi adicio-nado cianoboroidreto de sódio (2,23 g, 35,5 mmol) em porções e agi-tada em temperatura ambiente durante 65 horas. A mistura foi diluída com solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 mL) e ex-traída com EtOAc (3 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina e concentradas. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 2% de gradiente de MeOH/DCM, 0,25% de Et3N modificado, seguida por 0 a 50% de gra-diente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-((4-metoxibenzil)amino)-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (1,1 g, 2,94 mmol) como uma cera incolor. MS m/z 375,3 (M+H)+.
[00277] Etapa b: Uma solução de 1-((4-metoxibenzil)amino)-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (1,1 g, 2,94 mmol) e TFA (2 mL) em DCM (2 mL) foi agitada durante 15 minutos a 0 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi diluído com NaHCO3 aquoso (10 mL) e extraído com EtOAc (4 x 10 mL) para fornecer N-(4-metoxibenzil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (0,8 g, 2,92 mmol) como um óleo incolor. MS m/z 275,2 (M+H)+.
[00278] N-(4-metoxibenzil)-3-azaspiro[5,5]undecan-7-amina foi obti do seguindo os procedimentos acima partindo de 7-oxo-3- azaspiro[5,5]undecano-3-carboxilato de terc-butila. Intermediário 8 N-((R )-1-(4-metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0034
[00279] Etapa a: A uma solução de 1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila (1,15 g, 4,54 mmol), e (R)-1-(4- metoxifenil)etanamina (961 mg, 6,36 mmol) em DCE (3 mL) foi adicio-nado cianoboroidreto de sódio em porções e agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com solução de bicarbo-nato de sódio aquoso saturado (5 mL) e extraída com EtOAc (3 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina e concentradas. O resíduo resultante contendo uma mistura de 9:1 de diastereômeros foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 20% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc- butila (diastereômero maior; 431 mg, 1,11 mmol) puro. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,18-7,24 (m, 2 H), 6,81-6,86 (m, 2 H), 3,76 (d, J=13,64 Hz, 1 H), 3,72 (s, 3 H), 3,64-3,70 (m, 2 H), 2,65-2,92 (m, 2 H), 2,05-2,14 (m, 1 H), 1,80-1,91 (m, 1 H), 1,65-1,75 (m, 1 H), 1,42-1,60 (m, 4 H), 1,40 (s, 9 H), 1,28-1,35 (m, 1 H), 1,20 (d, J=6,57 Hz, 3 H), 1,09-1,17 (m, 2 H), 0,80 (d, J=11,37 Hz, 1 H). MS m/z 389,6 (M+H)+.
[00280] Etapa b: A uma solução de 1-((( R )-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc- butila (diastereômero maior; 431 mg, 1,11 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado TFA (2 mL) e agitado durante 10 minutos em temperatura ambiente. A reação foi concentrada com outra adição de DCM, em se-guida diluída com NaHCO3 saturado aquoso e extraída com DCM (3 x 20 mL). Orgânicos lavados com solução salina, secados sobre Na2SO4, filtrados e concentrados para fornecer N-((R)-1-(4- metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ 7,25 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 6,87 (d, J=8,7 Hz, 2 H), 3,85-3,78 (m, 1 H), 3,78 (s, 3 H), 3,35 (m, 1 H), 3,28 (m, 1 H), 3,03 (m, 2 H), 2,63 (dd, J=9,6, 7,3 Hz, 1 H), 2,06-1,85 (m, 2 H), 1,83-1,69 (m, 2 H), 1,62 (m, 1 H), 1,54-1,38 (m, 4 H), 1,33 (d, J=6,6 Hz, 3 H), 1,31-1,23 (m, 1 H). MS m/z 289,5 (M+H)+. Intermediário 9 N-((R )-1-(4-metoxifenil)etil)-1-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-amina
Figure img0035
[00281] Etapa a: A uma solução de 4-oxo-1-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (preparada de 4- oxopiperidina-1-carboxilato de terc-butila em 3 etapas como descrito em Carreira et al., Org Lett., 2013, 15, 4766-4769; 200 mg, 0,78 mmol), e (R)-1-(4-metoxifenil)etanamina (474 mg, 3,13 mmol) em DCE (1 mL) foi adicionado cianoboroidreto de sódio em porções (393 mg, 3,13 mmol). A reação resultante foi agitada durante 16 horas à tempe-ratura ambiente. Boroidreto de lítio (34 mg, 1,6 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com MeOH (2 mL) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida (duas vezes). NaHCO3 saturado aquoso (5 mL) foi adicionado e a mistura foi extraída com DCM (3 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. A mistura resultante de diastereômeros de 9:1 foi purificada por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-1-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (65 mg, 0,17 mmol) diastereomericamente puro. Diastereô- mero maior: 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,15 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 6,79 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 3,96-3,76 (m, 2 H), 3,77-3,66 (m, 5 H), 3,60 (t, J=8,1 Hz, 1 H), 2,98 (m, 2 H), 2,76 (t, J=7,8 Hz, 1 H), 1,95 (m, 1 H), 1,67-1,41 (m, 4 H), 1,40 (s, 9 H), 1,33 (d, J=3,1 Hz, 1 H), 1,21 (d, J=6,5 Hz, 3 H), 1,08-0,92 (m, 1 H). MS m/z 391,6 (M+H)+.
[00282] Etapa b: Uma solução de 4-((( R )-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-1-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (diastereômero maior, 65 mg, 0,17 mmol) e TFA (2 mL) em DCM (2 mL) agitada durante 10 minutos à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida, diluídos com NaHCO3 saturado aquoso (5 mL), e extraídos com DCM (3 x 20 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas so-bre Na2SO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão redu-zida para fornecer N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-1-oxa-8- azaspiro[4.5]decan-4-amina (40 mg, 0,13 mmol) que foi usado sem outra purificação. MS m/z 291,5 (M+H)+. Intermediário 10 3-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-6-cloropirazin-2-amina
Figure img0036
[00283] Etapa a: Comercialmente disponível 2,3-dicloro-4- iodopiridina foi convertido para 3-cloro-4-iodopiridin-2-amina pelo pro-cedimento a, como descrito em Marie et al., Molecules, 2012, 17,10683-10707.
[00284] Etapa b: A uma solução de 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (100 mg, 0,619 mmol), 3-cloro-4-iodopiridin-2-amina (315 mg, 1,238 mmol), XantPhos (35,8 mg, 0,062 mmol), e Pd2(dba)3 (28,3 mg, 0,03 mmol) em dioxano (3 mL) foi adicionado (em temperatura ambiente e sob N2) DIPEA (324 μL, 1,856 mmol). A solução resultante foi agitada em um reator de micro-onda durante 2,5 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi diluída com EtOAc e ela foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (10 mL). Os filtrados combinados foram concentrados e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 5% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 3-((2-amino-3-cloropiridin- 4-il)tio)-6-cloropirazin-2-amina (1,41 g, 3,88 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,88 (s, 1 H), 7,68 (d, J=5,56 Hz, 1 H), 6,06 (d, J=5,56 Hz, 1 H), 1,35-1,43 (m, 2 H). MS m/z 288,2 (M+H)+. Intermediário 11 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol
Figure img0037
[00285] Etapa a: Uma solução de 3-bromo-6-cloropirazin-2-amina (4,95 g, 23,74 mmol) em dioxano (119 mL) foi aspergida com nitrogênio durante 10 minutos. Em seguida, 3-mercaptopropanoato de 2-etil- hexila (3,79 mL, 24,92 mmol), Xantphos (1,37 g, 2,37 mmol), Pd2(dba)3 (1,08 g, 1,19 mmol), e DIPEA (8,29 mL, 47,5 mmol) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada a 105 °C durante 24 horas e a mistura de reação foi filtrada através de Celita e concentrada. O bruto foi puri-ficado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para dar origem a 3-((3-amino-5-cloropirazin-2- il)tio)propanoato de 2-etil-hexila (6,24 g, 18,04 mmol) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,82 (s, 1 H), 4,93 (br. s., 2 H), 4,14-3,96 (m, 2 H), 3,47 (t, J=6,9 Hz, 2 H), 2,78 (t, J=6,9 Hz, 2 H), 1,67-1,51 (m, 1 H), 1,44-1,20 (m, 8 H), 0,90 (t, J=7,4 Hz, 6 H). MS m/z 346,0 (M+H)+.
[00286] Etapa b: A uma solução de 3-((3-amino-5-cloropirazin-2- il)tio)propanoato de 2-etil-hexila (2,3 g, 6,65 mmol) em THF (33 mL) a - 78 °C, terc-butóxido de potássio (1 M em THF, 19,95 mL, 19,95 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada a -78 °C durante 1 ho-ra. MeOH (20 mL) foi adicionado e a mistura resultante foi concentrado. O bruto foi dissolvido em MeOH, filtrado, e foi purificado por HPLC (eluição gradiente de 5 a 20%, acetonitrila em água, 0,1% de TFA mo-dificador) para dar origem a 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (sal de TFA: 1,3 g, 4,72 mmol) como um sólido amarelo. MS m/z 162,0 (M+H)+. Intermediário 12 6-cloro-3-((3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-amina
Figure img0038
[00287] Uma solução de 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (sal de TFA: 0,158 g, 0,978 mmol) em dioxano (4,9 mL) foi aspergida com nitrogê- nio durante 10 minutos. Em seguida, 3-cloro-4-iodopiridina (0,468 g, 1,955 mmol), Xantphos (0,057 g, 0,098 mmol), Pd2(dba)3 (0,045 g, 0,049 mmol), e DIPEA (0,512 mL, 2,93 mmol) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada a 105 °C durante 10 horas, filtrada por meio de Celita e concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano; heptano contendo 2% de Et3N) para dar origem a 6-cloro-3-((3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin- 2-amina (75 mg, 0,274 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,46 (s, 1 H), 8,22 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 7,96 (s, 1 H), 6,68 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 5,17 (br. s., 2 H). MS m/z 273,0 (M+H)+. Intermediário 13 6-cloro-3-((2-cloropiridin-3-il)tio)pirazin-2-amina
Figure img0039
[00288] Uma solução de 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (sal de TFA: 0,2 g, 1,238 mmol) em dioxano (6,2 mL) foi aspergida com nitrogênio durante 10 minutos. Em seguida, 2-cloro-3-iodopiridina (0,593 g, 2,475 mmol), Xantphos (0,072 g, 0,124 mmol), Pd2(dba)3 (0,057 g, 0,062 mmol), e DIPEA (0,65 mL, 3,71 mmol) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada a 105 °C durante 10 horas, filtrada por meio de Celita e concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano, contendo 2% de Et3N) para dar origem a 6-cloro-3-((2-cloropiridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (95 mg, 0,348 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CLORO- FÓRMIO-d) δ ppm 8,28-8,38 (m, 1 H), 7,91 (s, 1 H), 7,51-7,59 (m, 1 H), 7,22 (dd, J=7,9, 4,6 Hz, 1 H), 5,25 (br. s., 2 H). MS m/z 273,0 (M+H)+. Intermediário 14 6-cloro-3-((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-amina
Figure img0040
[00289] Uma solução de 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (sal de TFA: 0,50 g, 1,814 mmol) em dioxano (90 mL) foi desgaseificada com nitro-gênio durante 10 minutos. Em seguida, 2,3-dicloro-4-iodopiridina (0,0,99 g, 3,63 mmol), Xantphos (0,105 g, 0,181 mmol), Pd2(dba)3 (0,083 g, 0,091 mmol), e DIPEA (0,95 mL, 5,44 mmol) foram adiciona-dos. A mistura resultante foi agitada a 105 °C durante 10 horas, filtrada através de Celita e concentrada. O bruto foi purificado por cromatogra- fia de sílica (0 a 10% de gradiente de EtOAc/DCM). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,13 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 7,95 (s, 1 H), 7,30 (br. s, 2 H), 6,83 (d, J=5,3 Hz, 1 H). MS m/z 306,9 (M+H)+. Intermediário 15 6-cloro-3-((3-cloro-2-fluoropiridin-4-il)tio)pirazin-2-amina
Figure img0041
[00290] Uma solução de 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (sal de TFA: 50 mg, 0,181 mmol) em dioxano (1,8 mL) foi aspergida com nitrogênio durante 10 minutos. Em seguida, 3-cloro-2-fluro-4-iodopiridina (0,140 g, 0,544 mmol), Xantphos (11 mg, 0,018 mmol), Pd2(dba)3 (8 mg, 0,009 mmol), e DIPEA (95 μL, 0,544 mmol) foram adicionados. A mistura resultante foi agitada a 100 °C durante 10 horas, filtrada através de Celita, e concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano; heptano contendo 2% de Et3N) para dar origem a 6-cloro-3-((3-cloro-2-fluoropiridin-4- il)tio)pirazin-2-amina (41 mg, 0,137 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,06 (s, 1 H), 7,91 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 6,63 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 5,30 (br. s, 2 H). MS m/z 291,0 (M+H)+. Intermediário 17 2-(2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-il)isoindolina-1,3-diona
Figure img0042
[00291] Seguindo os procedimentos de Dirat et al., PCT Int. Appl., 20044078750, 16 Sept 2004, preparou 4-hidróxi-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila. 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 4,13 (dd, J=10,1, 4,6 Hz, 1 H), 4,03 (dd, J=4,6, 2,0 Hz, 1 H), 3,78-3,71 (m, 2 H), 3,69 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 3,67-3,58 (m, 2 H), 3,29 (m, 1 H), 3,16 (m, 1 H), 1,78 (m, 2 H), 1,58 (m, 1 H), 1,50 (m, 2 H), 1,47 (s, 9 H). MS m/z 258,1 (M-H)+ a partir de piperidina-1,4- dicarboxilato de 4-etila de 1-terc-butila em quatro etapas, em seguida converteu para 2-(2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-il)isoindolina-1,3-diona em duas etapas como segue.
[00292] Etapa a: A uma solução de 4-hidróxi-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (306 mg, 1,19 mmol), ftalimida (262 mg, 1,78 mmol) e trifenilfosfina (468 mg, 1,78 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado diisopropilazadicarboxilato (0,374 mL, 1,78 mmol) e agitada durante 16 horas. Concentrada e purificada por cro- matografia de sílica (0 a 50% de gradiente de acetato de etila/heptano) para obter 4-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila racêmico (190 mg, 0,49 mmol). 1H RMN (400 MHz, Clorofórmio-d) δ 7,88 (dd, J=5,4, 3,0 Hz, 2 H), 7,77 (dd, J=5,5, 3,0 Hz, 2 H), 4,65 (dd, J=8,7, 5,6 Hz, 1 H), 4,40 (dd, J=9,5, 5,6 Hz, 1 H), 4,26 (t, J=9,0 Hz, 1 H), 4,08 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 3,98 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 3,84 (m, 1 H), 3,58 (m, 1 H), 3,20 (m, 1 H), 2,94 (m, 1 H), 1,73 (m, 2 H), 1,56 (s, 9 H), 1,42-1,36 (m, 2 H).
[00293] Etapa b: A uma solução de 4-(1,3-dioxoisoindolin-2-il)-2- oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila racêmico (190 mg, 0,49 mmol) em diclorometano (3 mL) foi adicionado ácido trifluo- roacético (1 mL). Concentrada com outra adição de diclorometano, em seguida acetonitrila para obter 2-(2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- il)isoindolina-1,3-diona com um sal de TFA (quantitativa). MS m/z 287,0 (M+H)+. Usado sem outra caracterização. Intermediário 18 2-cloro-3-mercaptobenzamida
Figure img0043
[00294] Etapa a: Uma mistura de 2-cloro-3-fluorobenzonitrila (3,15 g, 20,25 mmol), 2-metilpropano-2-tiol (2,283 mL, 20,25 mmol) e Cs2CO3 (6,598 g, 20,25 mmol) em DMF (100 mL) foi agitada durante 48 horas a 22 °C. A mistura de reação foi diluída com água (200 mL) e EtOAc (300 mL). Camada de EtOAc foi lavada com água (3 x 300 mL), solução salina (3 x 100 mL), secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada. O resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente: 45 a 70% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador), para fornecer 3-(terc-butiltio)-2-clorobenzonitrila (1,33 g, 5,89 mmol). MS m/z 226,1 (M+H)+.
[00295] Etapa b: Uma mistura de 3-(terc-butiltio)-2-clorobenzonitrila (217 mg, 0,961 mmol) e NaOH (1 N, 2,88 mL, 2,88 mmol) em MeOH (11 mL) foi irradiada em um reator de micro-onda durante 35 minutos a 90 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi concentrada e dissolvida em MeOH. O sólido foi filtrado e o filtrado foi concentrado até quase secura e foi purificado por HPLC (eluição gra-diente: 25 a 50% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modifica-dor), para fornecer 3-(terc-butiltio)-2-clorobenzamida (93,6 mg, 0,384 mmol). MS m/z 244 (M+H)+.
[00296] Etapa c: Uma mistura de 3-(terc-butiltio)-2-clorobenzamida (190 mg, 0,779 mmol) e HCl concentrado (2,36 mL, 78 mmol) foi agitada durante 45 minutos a 85 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi concentrada até a secura para produzir 2- cloro-3-mercaptobenzamida bruto (sal de HCl: 156 mg, 0,651 mmol). MS m/z 188 (M+H)+. Intermediário 19 2-(8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decan-4-il)isoindolina-1,3-diona
Figure img0044
[00297] Unindo sal de TFA de 2-(2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- il)isoindolina-1,3-diona com 6-cloro-3-((2-(trifluorometil)piridin-3- il)tio)pirazin-2-amina (151 mg, 0,492 mmol) usando os procedimento padrão descritos acima. Diluído com DCM e purificado por cromatogra- fia de sílica (0 a 60% de gradiente de acetato de etila/heptano) para obter 2-(8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2- oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-il)isoindolina-1,3-diona (0,140 g, 0,178 mmol). MS m/z 557,1 (M+H)+. Purificação por SFC quiral realizada como segue; coluna: OJ-H 21x250mm, taxa de fluxo: 80 g por minuto, fase móvel: 45% de MeOH e 5 mM de NH4OH em CO2, detecção: massa desencadeada para obter enantiômeros únicos pico 1 (P1), Temperatura ambiente: 2,77 min. MS m/z 557,1 (M+H)+, e pico 2 (P2), Temperatura ambiente: 3,91 min. MS m/z 557,2 (M+H)+. Desproteção de ftalimida realizada em cada enantiômero separadamente sem outra caracterização. Intermediário 20 3-cloro-4-iodo-N, N-dimetilpiridin-2-amina
Figure img0045
[00298] Uma solução de 3-cloro-2-fluoro-4-iodopiridina (0,26 g, 1,01 mmol) e dimetilamina (2 M em THF, 1,5 ml, 3,03 mmol) em DMSO (3,4 mL) foi agitada durante 2 horas a 70 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, água foi adicionada e a mistura aquosa foi ex-traída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer 3-cloro-4-iodo-N,N-dimetilpiridin-2- amina (0,26 g, 0,922 mmol) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,75 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 7,33 (d, J=5,0 Hz, 1 H), 3,00 (s, 6 H). MS m/z 282,9 (M+H)+. Intermediário 21 3-cloro-4-iodo-2-metoxipiridina
Figure img0046
[00299] Uma solução de 3-cloro-2-fluoro-4-iodopiridina (150 mg, 0,571 mmol) e NaOMe (0,5 M em MeOH, 3,4 ml, 1,71 mmol) em DMSO (1,9 mL) foi agitada durante 1 hora a 70 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, água foi adicionada e a mistura aquosa foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas, e concen-tradas sob pressão reduzida para fornecer 3-cloro-4-iodo-2- metoxipiridina (123 mg, 0,456 mmol) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,81 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 7,55 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 3,92 (s, 3 H). MS m/z 269,9 (M+H)+. Intermediário 22 6-cloro-3-((3-(trifluorometil)piridin-4-il)tio)pirazin-2-amina
Figure img0047
[00300] Uma mistura de 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (750 mg, 4,09 mmol), 4-bromo-3-(trifluorometil)piridina (1,63 g, 5,31 mmol), Xan- tphos (236 mg, 0,409 mmol), Pd2(dba)3 (187 mg, 0,204 mmol), e DIPEA (2,14 mL, 12,26 mmol) em dioxano (desgaseificado, 50 mL) foi agitada durante 16 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (25 mL). Os filtrados combinados fo-ram concentrados sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi puri-ficado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtO- Ac/DCM) para fornecer 6-cloro-3-((3-(trifluorometil)piridin-4- il)tio)pirazin-2-amina (722 mg, 2,35 mmol) como um sólido amarelo claro. MS m/z 307,0 (M+H)+.
[00301] Os seguintes compostos foram sintetizados usando o pro-cedimento acima mencionado ou modificações ao procedimento acima mencionado usando o iodo- ou bromo-piridil correspondente e tiolato. Tabela 1
Figure img0048
Intermediário 23 6-cloro-3-((3-cloropiridazin-4-il)tio)pirazin-2-amina
Figure img0049
[00302] Uma mistura de 3-amino-5-cloropirazina-2-tiol (100 mg, 0,545 mmol), 3,4-dicloropiridazina (81 mg, 0,545 mmol), e DIPEA (0,142 mL, 0,817 mmol) em MeCN (5,5 mL) foi agitada durante 12 horas a 50 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, o prece- pitado foi coletado por filtração a vácuo para fornecer 6-cloro-3-((3- cloropiridazin-4-il)tio)pirazin-2-amina (101 mg, 0,368 mmol) como um sólido marrom. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,90 (d, J=5,4 Hz, 1 H), 7,95 (s, 1 H), 7,31 (s, 2 H), 7,15 (d, J=5,3 Hz, 1 H). MS m/z 274,1 (M+H)+. Intermediário 24 1-oxo-8-azaspiro[4.5]dec-2-eno-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0050
[00303] Etapa a: Uma mistura de 4-formilpiperidina-1-carboxilato de terc-butila (35,0 g, 164 mmol), terc-butóxido de lítio (15,77 g, 197 mmol), e alilbrometo (11,54 mL, 189 mmol) em DMF (328 mL) foi agi-tada durante 1 hora a 0 °C. A mistura foi vertida em um funil de sepa-ração contendo NH4Cl:H2O aquoso saturado (1:1, 500 mL) e ele foi extraído com Et2O (5 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 25% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-alil- 4-formilpiperidina-1-carboxilato de terc-butila (24 g, 95 mmol) como óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 9,52 (s, 1 H), 5,53-5,76 (m, 1 H), 4,96-5,19 (m, 2 H), 3,80 (br. s., 2 H), 2,97 (t, J=11,49 Hz, 2 H), 2,26 (d, J=7,33 Hz, 2 H), 1,95 (dt, J=13,71, 3,13 Hz, 2 H), 1,38-1,58 (m, 11 H).
[00304] Etapa b: A uma solução de 4-alil-4-formilpiperidina-1- carboxilato de terc-butila (24 g, 95 mmol) em THF (300 mL) foi adicio-nado (a -78 °C e sob N2) brometo de vinil magnésio (1 M em THF, 118 mL, 118 mmol). A solução resultante foi lentamente aquecida até tem-peratura ambiente dentro de 1 hora. A mistura foi vertida em um funil de separação contendo NH4Cl saturado aquoso (250 mL) e ela foi ex-traída com EtOAc (4 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 4-alil-4-(1-hidroxialil)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (26,7 g, 95 mmol) como óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 9,52 (s, 1 H), 5,56-5,75 (m, 1 H), 5,05-5,18 (m, 2 H), 3,80 (br. s., 2 H), 2,97 (t, J=11,49 Hz, 2 H), 2,26 (d, J=7,33 Hz, 2 H), 1,96 (dt, J=13,83, 3,06 Hz, 2 H), 1,49-1,60 (m, 2 H), 1,41-1,49 (m, 9 H). Este composto foi usado na etapa seguinte sem outra purificação.
[00305] Etapa c: Uma mistura de 4-alil-4-(1-hidroxialil)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (26,7 g, 95 mmol) e periodinano Dess-Martin (44,3 g, 105 mmol) em DCM (380 mL) foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. A mistura foi vertida em um funil de separação contendo NaHCO3:Na2SO3 aquoso saturado (1:1, 300 mL) e ela foi ex-traída com DCM (4 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer um sólido branco. Este sólido foi sus-penso em heptano (250 mL) e sonicado durante 5 minutos. A suspen-são branca foi filtrada através de uma almofada de Celita e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 4-acriloil-4- alilpiperidina-1-carboxilato de terc-butila (26,5 g, 95 mmol) como um óleo amarelo. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 6,81 (dd, J=16,93, 10,36 Hz, 1 H), 6,40 (dd, J=16,80, 1,89 Hz, 1 H), 5,71 (dd, J=10,36, 2,02 Hz, 1 H), 5,46-5,66 (m, 1 H), 4,91-5,14 (m, 2 H), 3,78 (br. s., 2 H), 2,96 (br. s., 2 H), 2,25-2,39 (m, 2 H), 1,97-2,15 (m, 2 H), 1,37-1,57 (m, 11 H). Este composto foi usado na etapa seguinte sem outra purificação.
[00306] Etapa d: A uma solução de 4-acriloil-4-alilpiperidina-1- carboxilato de terc-butila (26,5 g, 95 mmol) em tolueno (desgaseifica- do, 850 mL) foi adicionado catalisador Grubbs II (2,02 g, 2,38 mmol) em tolueno (desgaseificado, 100 mL). A mistura resultante foi agitada durante 45 minutos a 85 °C. O solvente foi removido sob pressão re-duzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-oxo-8- azaspiro[4.5]dec-2-eno-8-carboxilato de terc-butila (20,76 g, 83 mmol) como um sólido marrom. Uma solução deste composto e DDQ (565 mg, 2,49 mmol) em tolueno (540 mL) foi agitada durante 15 minutos à temperatura ambiente. A solução resultante vermelho vivo foi filtrada através de uma almofada de Celita. Charcoal (200 g) foi adicionado e a suspensão resultante foi agitada durante 2 horas à temperatura am-biente. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celita e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-oxo-8-azaspiro[4.5]dec-2-eno-8- carboxilato de terc-butila (15,6 g, 62,3 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,63-7,74 (m, 1 H), 6,20 (dt, J=5,81, 2,15 Hz, 1 H), 3,99-4,25 (m, 2 H), 2,92 (t, J=11,62 Hz, 2 H), 2,63 (s, 2 H), 1,72-1,86 (m, 2 H), 1,49 (s, 9 H), 1,29 (d, J=12,88 Hz, 2 H). Intermediário 25 1-(1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-metil-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila
Figure img0051
[00307] Etapa a: A uma suspensão de 1-oxo-8-azaspiro[4.5]dec-2- eno-8-carboxilato de terc-butila (4,2 g, 16,71 mmol) e CuI (6,37 g, 33,4 mmol) em Et2O (100 mL) foi adicionado (a 0 °C e sob N2) MeLi (1,6 M em THF, 31,3 mL, 50,1 mmol). Após agitação durante 90 minutos a 0 °C, a mistura foi vertida em um funil de separação contendo NH4Cl saturado aquoso e ele foi extraído com EtOAc (3 x 15 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os vo-láteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer 3-metil-1-oxo-8-azaspiro[4.5]dec-2-eno-8- carboxilato de terc-butila (4,23 g, 15,82 mmol) como óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 3,89-4,00 (m, 1 H), 3,83 (d, J=13,39 Hz, 1 H), 3,11 (ddd, J=13,64, 10,36, 3,28 Hz, 1 H), 2,99 (ddd, J=13,58, 10,42, 3,54 Hz, 1 H), 2,47-2,59 (m, 1 H), 2,19-2,36 (m, 2 H), 1,74-1,97 (m, 2 H), 1,50-1,65 (m, 2 H), 1,48 (s, 9 H), 1,33-1,44 (m, 2 H), 1,17 (d, J=6,32 Hz, 3 H).
[00308] Etapa b: Uma solução de 3-metil-1-oxo-8-azaspiro[4.5]dec- 2-eno-8-carboxilato de terc-butila (502 mg, 1,878 mmol), etóxido de titânio(IV) (1,57 mL, 7,51 mmol), e 2-metilpropano-2-sulfinamida (455 mg, 3,76 mmol) em THF (12,5 mL) foi agitada durante 16 horas a 65 °C. Após resfriamento para 0 °C, MeOH (3 mL) foi adicionado seguida por boroidreto de lítio (123 mg, 5,63 mmol). A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 1 hora. NH4Cl saturado aquoso foi lentamente adicionado para saciar o excesso de boroidreto seguido pela adição de EtOAc (30 mL). A mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 15 minutos e em seguida filtrada através de uma almofada de Celita. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resul-tante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 75% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-(1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-metil- 8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (463 mg, 1,243 mmol) como um sólido branco. Intermediários 26a/b 1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-metil-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R,3S)-benzila & 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3- metil-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R ,3 R )-benzila
Figure img0052
[00309] Etapa a: Uma mistura de 3-metil-1-oxo-8-azaspiro[4.5]dec- 2-eno-8-carboxilato de terc-butila (4,23 g, 15,82 mmol) e TFA (17 mL) em DCM (80 mL) foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Uma mistura do resíduo resultante, DIPEA (13,82 mL, 79 mmol), e cloroformiato de benzila (3,39 mL, 23,73 mmol) em DCM (80 mL) foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura foi vertida em um funil de se-paração contendo NH4Cl saturado aquoso e ele foi extraído com DCM (3 x 25 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 3-metil-1-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de benzila (4,58 g, 15,20 mmol) co-mo um sólido amarelo claro. MS m/z 302,2 (M+H)+.
[00310] Etapa b: 3-metil-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de benzila (4,58 g, 15,20 mmol) foi novamente purificado por SFC qui- ral como segue: coluna: IA 21 x 250 mm, taxa de fluxo: 70 g por minuto, fase móvel: 45% (9:1 EtOH:MeCN) em CO2, detecção: 220 nm UV para fornecer 3-metil-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (R)-benzila (2,02 g, 6,70 mmol), Temperatura ambiente: 2,0 min; e 3- metil-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (S)-benzila (2,11 g, 7,0 mmol), Temperatura ambiente: 3,6 min.
[00311] Etapa c: Uma solução de 3-metil-1-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (R)-benzila (2,02 g, 6,70 mmol), etóxido de titânio(IV) (5,62 mL, 26,8 mmol), e (R)-2-metilpropano-2- sulfinamida (1,625 g, 13,4 mmol) em THF (67 mL) foi agitada durante 16 horas a 65 °C. Após resfriamento para -78 °C, MeOH (12 mL) foi adicionado seguido por boroidreto de lítio (0,438 g, 20,11 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 16 horas a -78 °C à temperatura ambiente. NH4Cl saturado aquoso foi lentamente adicionado para sa-ciar o excesso de boroidreto seguido pela adição de EtOAc (100 mL). A mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 15 minutos e em seguida filtrada através de uma almofada de Celita. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (5 a 90% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-metil-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-benzila (1,94 g, 4,77 mmol) como um sólido branco. MS m/z 407,3 (M+H)+.
[00312] Etapa c (de enantiômero): O mesmo procedimento foi seguido partindo de 3-metil-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (S)-benzila para fornecer 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-metil-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3S)-benzila. Intermediário 27 3-(( terc-butildimetilsilil)óxi)-1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R ,3 R)-terc-butila)
Figure img0053
[00313] Etapa a: Uma mistura de CuCl (142 mg, 1,432 mmol), (S)- TolBINAP (972 mg, 1,432 mmol), e terc-butóxido de sódio (138 mg, 1,432 mmol) em THF (60 mL) foi agitada durante 30 minutos à tempe-ratura ambiente. B2pin2 (13,34 g, 52,5 mmol) em THF (20 mL) foi adi-cionado e a mistura resultante foi agitada durante 10 minutos à tempe-ratura ambiente. 1-oxo-8-azaspiro[4.5]dec-2-eno-8-carboxilato de terc- butila (12,0 g, 47,7 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado seguido por MeOH (3,9 mL, 95 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. H2O (150 mL) foi adicionado seguido por perborato de sódio (36,7 g, 239 mmol) e a mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. A sus-pensão verde resultante foi filtrada através de uma almofada de Celita, despejada em um funil de separação contendo NaHCO3 saturado aquoso:Na2SO3 saturado aquoso (1:1, 300 mL) e extraída com EtOAc (4 x 40 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o bruto 3-hidróxi-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (R)-terc-butila. Determinação enantiomérica desta mis-tura mostrou 90% de ee (Rt(S): 1,59 min, Temperatura ambiente(R): 1,80 min; SFC quiral; coluna: IA 4,6 x 100 mm, taxa de fluxo: 70 g por minuto, fase móvel: 5-55% de MeOH em CO2, detecção: 220 nm UV).
[00314] Uma mistura de 3-hidróxi-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (R)-terc-butila bruto (teor. 47,7 mmol), imidazol (4,87 g, 71,6 mmol), e TBSCl (8,99 g, 59,6 mmol) em DMF (120 mL) foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi ver-tida em um funil de separação contendo NH4Cl saturado aquoso:H2O (1:1, 250 mL) e ele foi extraído com Et2O (5 x 50 mL). As fases orgâni-cas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purifi-cado por cromatografia de sílica (0 a 30% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer 3-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (R)-terc-butila (13,115 g, 34,2 mmol) como um óleo incolor que solidifica quando em repouso.
[00315] Etapa b: Uma solução de 3-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-oxo- 8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (R)-terc-butila (8 g, 20,86 mmol), etóxido de titânio(IV) (17,49 mL, 83,0 mmol), e (R)-2- metilpropano-2-sulfinamida (5,06 g, 41,7 mmol) em THF (100 mL) foi agitada durante 16 horas a 65 °C. Após resfriamento para -78 °C, MeOH (15 mL) foi adicionado seguido por boroidreto de lítio (1,363 g, 62,6 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 16 horas a -78 °C. NH4Cl saturado aquoso foi lentamente adicionado para saciar o excesso de boroidreto seguido pela adição de EtOAc (100 mL). A mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 15 minutos e em seguida filtrada através de uma almofada de Celita. Os voláteis foram removi-dos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cro- matografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 3-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (5,3 g, 10,84 mmol) como um sólido branco. MS m/z 489,3 (M+H)+. Intermediário 28 1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R ,3 S)-terc-butila)
Figure img0054
[00316] Etapa a: Uma mistura de 3-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-((R)- 1,1-dimetiletilsulfinamido)-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (3,84 g, 7,86 mmol) e TBAF (1 M em THF; 8,64 mL, 8,64 mmol) em THF (40 mL) foi agitada durante 30 minutos à tempera-tura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 10% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R, 3R)-terc-butila (2,94 g, 7,86 mmol). MS m/z 375,3 (M+H)+.
[00317] Etapa b: A uma solução de 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (3,0 g, 8,01 mmol), trifenilfosfina (4,2 g, 16,02 mmol), e ácido isoquinolina-1-carboxílico (4,16 g, 24,03 mmol) em THF (80 mL) foi adicionado DIAD (3,1 mL, 16,02 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. A reação foi diluída com EtOAc (50 mL), filtrada através de uma almofada de Celita, despejada em um funil de separação contendo NaHCO3 saturado aquoso e extraída com EtOAc (3 x 25 mL). As fases orgânicas combi-nadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram remo-vidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 4% de gradiente de MeOH/DCM) para for-necer (2S,4R)-8-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)- 8-azaspiro[4.5]decan-2-il isoquinolina-1-carboxilato (3,65 g, 6,89 mmol) como um sólido laranja. MS m/z 530,3 (M+H)+.
[00318] Etapa c: Uma mistura de (2S,4R)-8-(terc-butoxicarbonil)-4- ((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-8-azaspiro[4.5]decan-2-il isoquinolina-1- carboxilato (3,65 g, 6,89 mmol) e hidróxido de lítio (2,95 g, 68,9 mmol) em THF:H2O (1:1, 70 mL) foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura foi vertida em um funil de separação contendo NH4Cl saturado aquoso e ele foi extraído com EtOAc (3 x 15 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 10% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi- 8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3S)-terc-butila (2,35 g, 6,27 mmol) como um sólido branco. MS m/z 275,2 (M+H-Boc)+. Intermediário 29 1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-(isobutirilóxi)-8-azaspiro[4.5] deca- no-8-carboxilato de (1R ,3 S)-terc-butila)
Figure img0055
[00319] A uma solução de 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3- hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (200 mg, 0,534 mmol), trifenilfosfina (280 mg, 1,068 mmol), e ácido isobutí- rico (146 μL, 1,602 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado DIAD (208 μL, 1,068 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 16 horas à tem-peratura ambiente. A reação foi diluída com EtOAc (50 mL), filtrada através de uma almofada de Celita, despejada em um funil de separa-ção contendo NaHCO3 saturado aquoso, e extraída com EtOAc (3 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtered, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 7% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-(isobutirilóxi)-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R,3S)-terc-butila) (237 mg, 0,534 mmol). MS m/z 345,3 (M+H-Boc)+. Intermediários 30a/b/c 1-(( R)-N ,2-dimetilpropan-2-ilsulfinamido)-3-hidróxi-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila, 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-metóxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R ,3 R)-terc-butila, & 1-(( R)-N ,2-dimetilpropan-2-ilsulfinamido)-3- me- tóxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R ,3 R)-terc-butila
Figure img0056
[00320] Uma mistura de 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi- 8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (142 mg, 0,378 mmol) e NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 19 mg, 0,473 mmol) em THF foi agitada durante 20 minutos a 0 °C. Iodometano (47 μL, 0,756 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada du-rante 4 horas à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 25 a 50% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer 1-((R)-N,2-dimetilpropan-2-ilsulfinamido)-3- hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (15,0 mg, 0,039 mmol). MS m/z 289,2 (M+H-Boc)+; 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-metóxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila. MS m/z 289,2 (M+H-Boc)+; e 1-((R)-N,2- dimetilpropan-2-ilsulfinamido)-3-metóxi-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R,3R)-terc-butila. MS m/z 303,2 (M+H-Boc)+. Intermediário 31 1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-metóxi-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R ,3 S)-terc-butila
Figure img0057
[00321] Uma mistura de 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi- 8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3S)-terc-butila (500 mg, 1,335 mmol), óxido de prata (I) (340 mg, 1,468 mmol), e iodometano (250 μL, 4,0 mmol) em DCM (5 mL) foi agitada (protegida da luz) du-rante 24 horas à temperatura ambiente e 24 horas a 45 °C. Após res-friamento para a temperatura ambiente, a mistura foi filtrada através de uma almofada de Celita, os voláteis foram removidos sob pressão re-duzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 5% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-metóxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3S)-terc-butila (248 mg, 0,638 mmol). MS m/z 289,2 (M+H-Boc)+. Intermediário 32 1-(( terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-difluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila racêmico
Figure img0058
[00322] Etapa a: Uma mistura de 3-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-(1,1- dimetiletilsulfinamido)-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc- butila (365 mg, 0,746 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 1,86 mL, 7,46 mmol) em MeOH (4 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Após res-friamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer um sólido branco. MS m/z 171,1 (M+H)+. Uma mistura deste resíduo, DIPEA (2,6 mL, 14,92 mmol), e Boc2O (407 mg, 1,865 mmol) em THF (15 mL) foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. A mistura foi vertida em um funil de se-paração contendo NH4Cl saturada aquosa e ela foi extraída com Et2O (5 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (10 a 80% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (275 mg, 0,742 mmol). MS m/z 271,3 (M+H-Boc)+.
[00323] Etapa b: Uma mistura de 1-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (275 mg, 0,742 mmol) e periodinano Dess-Martin (472 mg, 1,113 mmol) em DCM (7,5 mL) foi agitada durante 2 horas a 0 °C. A mistura foi vertida em um funil de separação contendo NaHCO3 saturado aquoso e ela foi extraída com DCM (3 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (5 a 75% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1- ((terc-butoxicarbonil)amino)-3-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (135 mg, 0,366 mmol). 1H RMN (400 MHz, CLORO- FÓRMIO-d) δ ppm 4,57 (d, J=9,09 Hz, 1 H), 4,16 (d, J=8,08 Hz, 1 H), 3,89-4,08 (m, 2 H), 2,77-2,93 (m, 2 H), 2,71 (dd, J=18,95, 8,08 Hz, 1 H), 2,50 (d, J=18,19 Hz, 1 H), 2,07-2,24 (m, 2 H), 1,76 (td, J=12,82, 4,67 Hz, 1 H), 1,58-1,70 (m, 1 H), 1,42-1,53 (m, 18 H), 1,25-1,38 (m, 1 H).
[00324] Etapa c: Uma mistura de 1-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (95 mg, 0,258 mmol) e DeoxoFluor (190 μL, 1,031 mmol) em DCM (1 mL) foi agitada durante 48 horas a 50 °C. A mistura foi vertida em um funil de separação contendo NaHCO3 saturado aquoso/gelo e ela foi extraída com EtOAc (3 x 5 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 30% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-((terc- butoxicarbonil)amino)-3,3-difluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (52 mg, 0,133 mmol). 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓR- MIO-d) δ ppm 4,55 (d, J=9,35 Hz, 1 H), 3,78-4,02 (m, 3 H), 2,64-2,86 (m, 2 H), 2,38-2,59 (m, 1 H), 2,10-2,32 (m, 1 H), 1,79-2,10 (m, 2 H), 1,58 (qd, J=12,72, 3,79 Hz, 1 H), 1,27-1,52 (m, 21 H).
[00325] Os seguintes compostos foram sintetizados usando o pro-cedimento acima ou modificações ao procedimento acima usando o quiralmente puro 3-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)- terc-butila como material de partida. Tabela 2
Figure img0059
1-amino-2,8-diazaspiro[4.5]dec-1-en-3-ona
Figure img0060
[00326] Etapa a: Uma solução de diisopropilamina (0,320 mL, 2,245 mmol) em THF (4 mL) foi resfriada para -78 oC e tratada com n-butil lítio (1,3 mL, 2,080 mmol) em seguida agitada durante 5 minutos a -78 oC e aquecida para 0 oC fornecendo uma solução de LDA para ser usada subsequentemente. A uma solução a -78 oC de 4- cianopiperidina-1-carboxilato de terc-butila (153 mg, 0,728 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado a solução preparada de LDA (2,8 mL) gota a gota e a mistura resultante agitada durante 10 minutos a -78 oC, em seguida durante 10 minutos a -10 oC. Reação foi resfriada para -78oC e uma solução de alil-Br (80 μL, 0,924 mmol) em THF (2 mL) foi adicionada gota a gota. A mistura de reação resultante foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O aquoso foi extraído com EtOAc, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com água, solução salina, secadas so- bre Na2SO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-alil-4-cianopiperidina-1-carboxilato de terc-butila (40 mg, 0,16 mmol) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5,99-5,70 (m, 1 H), 5,23 (q, J=1,1 Hz, 1 H), 5,20 (dtd, J=3,3, 2,1, 1,1 Hz, 1 H), 3,96 (d, J=13,7 Hz, 2 H), 2,86 (s, 2 H), 2,36 (dt, J=7,5, 1,3 Hz, 2 H), 1,84 (dq, J=13,7, 2,6 Hz, 2 H), 1,40 (s, 11 H).
[00327] Etapa b: Uma solução de 4-alil-4-cianopiperidina-1- carboxilato de terc-butila (22 mg, 0,088 mmol) em DCM (1,5 mL) e NaOH (2,5 M em MeOH, 0,176 mL, 0,439 mmol) foi aerada com ozônio (aerador de difusão) a -78oC durante 30 minutos. A reação foi purgada com oxigênio em seguida repartida entre água e DCM. As fases foram separadas, o orgânico coletado e o aquoso extraído com DCM (2 x 5 mL). As fases orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi retomado em MeOH e agitado durante 24 horas a 65 oC. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resí-duo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 70% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-ciano-4-(2-metóxi-2- oxoetil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (21 mg, 0,074 mmol) como um óleo incolor. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 4,14 (s, 2 H), 3,75 (s, 3 H), 3,08 (t, J=12,9 Hz, 2 H), 2,62 (s, 2 H), 2,152,02 (m, 2 H), 1,59-1,48 (m, 2 H), 1,46 (s, 9 H). TLC (50% de EtO- Ac/heptano (manchado c/ KMnO4), Rf = 0,5).
[00328] Etapa c: Uma solução de 4-ciano-4-(2-metóxi-2- oxoetil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (287 mg, 1,017 mmol) e NH3 (7 N em MeOH, 3,0 mL, 21,00 mmol) em MeOH (5 mL) foi agitada em um tubo selado durante 48 horas a 120 oC. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão re- duzida para fornecer um sólido branco. O sólido foi triturado com EtO- Ac e filtrado para fornecer 1-amino-3-oxo-2,8-diazaspiro[4.5]dec-1- eno-8-carboxilato de terc-butila (157 mg, 0,587 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,44 (s, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 3,98 (d, J=13,3 Hz, 2 H), 2,71 (s, 2 H), 2,34 (s, 2 H), 1,81 (td, J=12,9, 4,6 Hz, 2 H), 1,49-1,30 (m, 11 H). MS m/z 268 (M+H)+. Intermediários 34a/b 2-fluoro-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila ra- cêmico & 2,2-difluoro-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila
Figure img0061
[00329] A uma solução a -78 °C de NaHMDS (1 M em THF, 8,68 mL, 8,68 mmol) foi adicionado uma solução de 1-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (2,0 g, 7,89 mmol) em THF (5 mL). Após agitação durante 30 minutos a esta temperatura, uma solução de N-fluorobenzenossulfonamida (2,49 g, 7,89 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado. Após 3 horas de agitação a -78 °C, ela foi diluída com NaHCO3 saturado aquoso (100 mL) e extraída com DCM (3 x 100 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 25% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 2- fluoro-1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila racêmi- co (351 mg, 1,29 mmol). MS m/z 272,1 (M+H)+ e difluoro cetona que coelui com material de partida. As frações coeluídas combinadas de difluoro cetona/partida foram repurificadas por cromatografia de sílica (0 a 5% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 2,2-difluoro-1-oxo- 8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (573 mg, 1,98 mmol). MS m/z 290,1 (M+H)+. Intermediário 35 4-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (S)-terc-butila
Figure img0062
[00330] Etapa a: Uma solução de 4-hidróxi-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (544 mg, 2,11 mmol) e periodinano Dess-Martin (1,39 g, 3,17 mmol) em DCM (10 mL) foi agi-tada durante 2 horas a 0 °C. NaHCO3 saturado aquoso:Na2S2O3 satu-rado aquoso (1:1, 10 mL) foi adicionada, a fase orgânica foi separada e a fase aquosa foi extraída com DCM (3 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-oxo-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc- butila (470 mg, 1,84 mmol) como um óleo incolor que cristalizou em repouso. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 4,08 (s, 2 H), 4,05 (s, 2 H), 3,88 (dt, J = 13,7, 4,9 Hz, 2 H), 3,12 (ddd, J = 13,6, 9,8, 3,6 Hz, 2 H), 1,75 (ddd, J = 13,9, 9,7, 4,2 Hz, 2 H), 1,58-1,51 (m, 2 H), 1,48 (s, 9 H). MS m/z 256,2 (M+H)+.
[00331] Etapa b: Uma solução de 4-oxo-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (220 mg, 0,86 mmol), etóxido de titânio(IV) (725 μL, 3,45 mmol), e (R)-2-metilpropano-2- sulfinamida (209 mg, 1,72 mmol) em THF (4 mL) foi agitada durante 1 hora a 90 °C. Após resfriamento para 0 °C, boroidreto de lítio (23 mg, 1,06 mmol) foi adicionado. Após agitação durante 30 minutos, a mistura de reação foi saciada por adição de MeOH. Os voláteis foram remo- vidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi diluído com solu-ção salina e ele foi extraído com EtOAc (4 x 10 mL). As fases orgâni-cas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi puri-ficado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer 4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (S)-terc-butila (170 mg, 0,47 mmol). MS m/z 361,1 (M+H)+.
[00332] Os seguintes compostos foram sintetizados usando proce-dimentos acima ou modificações ao procedimento acima usando a ce- tona e sulfonamida correspondente. Tabela 3
Figure img0063
1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-2-metil-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R)-terc-butila
Figure img0064
[00333] Etapa a: A uma solução de 1-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila (2,2 g, 8,68 mmol) em THF (24 mL) foi adici-onado LiHMDS (1 M em THF, 8,68 mL, 8,68 mmol) a 0 a 5 °C. Após agitação da mistura durante 30 minutos a esta temperatura, iodometa-no (0,543 mL, 8,68 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi dei-xada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante 2 horas. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e saciada com NaHCO3 satu-rado aquoso. A fase orgânica foi lavada com solução salina, secada sobre Na2SO4, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O óleo marrom resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 25% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 2-metil-1-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (1,3 g, 4,86 mmol). MS m/z 268,1. (M+H)+.
[00334] Etapa b: Uma solução de 2-metil-1-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (267 mg, 0,999 mmol), etóxido de titânio(IV) (837 μL, 3,99 mmol), e (R)-2-metilpropano-2- sulfinamida (242 mg, 1,997 mmol) em THF (10 mL) foi agitada durante 24 horas a 85 °C. Após resfriamento para -78 °C, MeOH (12 mL) foi adicionado seguido por boroidreto de lítio (65,3 mg, 3,00 mmol). A mis-tura resultante foi agitada a -78 °C para temperatura ambiente durante 16 horas. NH4Cl saturado aquoso foi lentamente adicionado para saciar o excesso de boroidreto seguido pela adição de EtOAc (100 mL). A mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 15 minutos e em seguida filtrada através de uma almofada de Celita. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 60% de gradiente de EtO- Ac/heptano(contendo 0,25% de Et3N)) para fornecer 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-2-metil-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R)-terc-butila (92 mg, 0,247 mmol). MS m/z 373,1 (M+H)+. Intermediários 37a/b 4-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano- 8-carboxilato de (3 S ,4 S)-terc-butila & 4-(( R )-1,1-dimetiletilsulfinamido)- 3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3 R ,4 S)-terc- butila.
Figure img0065
[00335] Etapa a: A uma solução de 4-oxo-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (2,47 g, 9,67 mmol) em THF (24 mL) foi adicionado LiHMDS (1 M em THF, 9,67 mL, 9,67 mmol) a -78 °C. Após agitação a mistura durante 30 minutos a esta temperatura, iodometano (0,605 mL, 9,67 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado. A mistura resultante foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante 1 hora. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e saciada com NaHCO3 saturado aquoso. A fase orgânica foi lavada com solução salina, secada sobre Na2SO4, filtrada, e concen-trada sob pressão reduzida. O óleo marrom resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 20% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 3-metil-4-oxo-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (318 mg, 1,181 mmol). MS m/z 270,2. (M+H)+.
[00336] Etapa b: Uma solução de 3-metil-4-oxo-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (318 mg, 1,181 mmol), etóxido de titânio(IV) (990 μL, 4,72 mmol), e (R)-2-metilpropano-2- sulfinamida (286 mg, 2,361 mmol) em THF (4 mL) foi agitada durante 90 minutos a 90 °C. Após resfriamento para 0 °C, boroidreto de lítio (65,3 mg, 3,00 mmol) foi adicionado em uma porção e a mistura resul-tante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. NH4Cl sa-turado aquoso foi lentamente adicionado para saciar o excesso de bo- roidreto seguido pela adição de EtOAc (25 mL). A mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 15 minutos e em seguida filtrada através de uma almofada de Celita. A fase orgânica foi lavada com NaHCO3 saturado aquoso, solução salina, secada sobre Na2SO4, fil-trada, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gra-diente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (4S)-terc-butila (88 mg, 0,235 mmol). MS m/z 375,2 (M+H)+.
[00337] Etapa c: Os diastereômeros foram separados por SFC qui- ral como segue: coluna: LUXC4 30 x 250 mm, taxa de fluxo: 80 g por minuto, fase móvel: 20% de MeOH em CO2, detecção: 210 nm para fornecer 4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-metil-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3R,4S)-terc-butila, Tr= 4,0 min; e 4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-metil-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3S,4S)-terc-butila, Tr= 4,55 min. Intermediário 38 4-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano- 8-carboxilato de (3 S ,4 S)-terc-butila
Figure img0066
[00338] Etapa a: A uma solução a -10 °C de diisopropilamina (23,4 mL, 166 mmol) em THF (220 mL) foi adicionado nBuLi (2,5 M em hexano, 64,1 mL, 160 mmol) gota a gota. Após agitação durante 30 minutos a esta temperatura, piperidina-1,4-dicarboxilato de 4-etila de 1- terc-butila (27,5 g, 107 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado gota a gota e a mistura resultante foi agitada durante 30 minutos a 0 °C. (S)- 2-((terc-butildimetilsilil)óxi)propanal (20,47 mL, 102 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada durante 1 hora a 0 °C e 1 hora à temperatura ambiente. A reação foi diluída com NaHCO3 saturado aquoso:H2O (1:4, 125 mL), EtOAc (50 mL) foi adicionado, e as fases foram separadas. A fase aquosa foi novamente extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O resíduo resul- tante foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 346,4 (M+H-Boc)+.
[00339] Etapa b: A uma solução de 4-((2S)-2-((terc- butildimetilsilil)óxi)-1-hidroxipropil)piperidina-1,4-dicarboxilato de 4-etila de 1-terc-butila bruto (95 g, 214 mmol) em THF (600 mL) foi adicionado em porçõs LiBH4 (7,0 g, 321 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Após resfriamento para 0 °C, NaHCO3 saturado aquoso:H2O (1:2, 150 mL) foi adicionado e a mistura resultante foi vigorosamente agitada até mais nenhum borbu- lhamento ser observado. EtOAc (100 mL) foi adicionado, a mistura foi filtrada, as fases foram separadas, e a fase aquosa foi novamente extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 4-((2S)-2- ((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-hidroxipropil)-4-(2-hidroxietil)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (64,8 g, 161 mmol) que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação.
[00340] Etapa c: Uma solução de 4-((2S)-2-((terc- butildimetilsilil)óxi)-1-hidroxipropil)-4-(2-hidroxietil)piperidina-1- carboxilato de terc-butila (64,8 g, 161 mmol) e TBAF (1 M em THF, 242 mL, 242 mmol) em THF (500 mL) foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. NaHCO3 saturado aquoso:H2O (1:2, 150 mL) foram adicionados, as fases foram separadas, e a fase aquosa foi no-vamente extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As fases orgânicas combi-nadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre Na2SO4, fil-tradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (20 a 100% de gra-diente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-((2S)-1,2-di-hidroxipropil)-4- (2-hidroxietil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (39,25 g, 136 mmol) como um óleo incolor semi-sólido.
[00341] Etapa d: A uma suspensão a 0 °C de NaH (10,60 g, 424 mmol) em THF (600 mL) foi adicionado gota a gota uma solução de 4- ((2S)-1,2-di-hidroxipropil)-4-(2-hidroxietil)piperidina-1-carboxilato de terc-butila (35,06 g, 121 mmol) e TsCl (23,10 g, 121 mmol) em THF (200 mL). A mistura resultante foi agitada durante 1 hora a 0 °C. NH4Cl saturado aquoso (~5 mL) foi adicionado lentamente a -20 °C e a reação foi vigorosamente agitada até mais nenhum borbulhamento ser observado. Neste ponto, NH4Cl saturado aquoso (100 mL) foi adicio-nado seguido por solução salina (100 mL) e a mistura foi extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, e o solvente foi removido sob pressão reduzida para fornecer 4-hidróxi-3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (3S)-terc-butila (32,19 g, 119 mmol) que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 171,1 (M-Boc)-.
[00342] Etapa e: Uma solução de 4-hidróxi-3-metil-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3S)-terc-butila (32,19 g, 119 mmol) e periodinano Dess-Martin (67,4 g, 154 mmol) em DCM (300 mL) foi agitada durante 2 horas a 0 °C. Após aquecimento para tempe-ratura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 3-metil-4-oxo-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (S)-terc-butila (27,68 g, 92 mmol) como um óleo pálido amarelo. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 4,09 (d, J=9,60 Hz, 1 H), 3,66-3,86 (m, 4 H), 3,03 (ddd, J=13,77, 9,73, 3,79 Hz, 1 H), 2,90 (ddd, J=13,64, 10,23, 3,41 Hz, 1 H), 1,68 (ddd, J=13,83, 9,92, 4,29 Hz, 1 H), 1,41-1,59 (m, 2 H), 1,30-1,40 (m, 10 H), 1,20-1,25 (m, 3 H).
[00343] Etapa f: Uma solução de 3-metil-4-oxo-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3S)-terc-butila (22,52 g mg, 84 mmol), etóxido de titânio(IV) (70,1 mL, 334 mmol), e (R)-2- metilpropano-2-sulfinamida (21 g, 173 mmol) em THF (300 mL) foi agi-tada durante 21 horas a 90 °C. Após resfriamento para -4 °C, MeOH (30 mL) foi adicionado, seguida por adição gota a gota (mantendo a temperatura da reação abaixo de 2 °C) de boroidreto de lítio (1,82 g, 84 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora a -4 °C. NH4Cl saturado aquoso foi lentamente adicionado para saciar o exe- cesso de boroidreto (formado tipo gelatina) seguido pela adição de EtOAc (500 mL). A mistura resultante foi vigorosamente agitada durante 15 minutos à temperatura ambiente e em seguida filtrada através de uma almofada de Celita seguida por banho de EtOAc (500 mL) .Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-metil- 2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3S,4S)-terc-butila como uma mistura diastereomérica de 95:5 (diastereômero menor 4-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (3R,4S)-terc-butila).
[00344] Etapa g: Os diastereômeros foram separados por SFC qui- ral como segue: coluna: LC-4 30 x 250 mm, taxa de fluxo: 100 g por minuto, fase móvel: 30% de MeOH em CO2, detecção: 225 nm, Tem-peratura ambiente: 0,95 min (diastereômero menor, temperatura ambi-ente: 0,55 min) para fornecer 4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-metil- 2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3S,4S)-terc-butila (19 g, 50,68 mmol). MS m/z 375,2. Intermediário 39 (4 R )-4-amino-2-metil-8-azaspiro[4.5]decan-2-ol
Figure img0067
[00345] Etapa a: Uma mistura de sal de dicloridrato de (2R,4R)-4- amino-8-azaspiro[4.5]decan-2-ol (623 mg, 2,56 mmol), Na2CO3 (1357 mg, 12,80 mmol), e CbzCl (1048 mg, 6,14 mmol) em H2O (5 mL) foi agitada vigorosamente durante 30 min à temperatura ambiente. THF (0,5 mL) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com água e DCM. A fase aquosa separada foi extraída com DCM (2 x 10 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, e con-centradas sob pressão reduzida, e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-(((benzilóxi)carbonil)amino)-3-hidróxi-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-benzila (940 mg, 2,14 mmol) como uma espuma branca. MS m/z 439,3 (M+H)+.
[00346] Etapa b: Uma mistura de 1-(((benzilóxi)carbonil)amino)-3- hidróxi-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-benzila (440 mg, 1,003 mmol) e periodinano Dess-Martin (638 mg, 1,505 mmol) em DCM (6 mL) foi agitada durante 1 hora a 0 °C e durante 18 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com NaHCO3 saturado aquoso:Na2S2O3 saturado aquoso (1:1, 25 mL). A fase aquosa separada foi extraída com DCM (3 x 15 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre MgSO4, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purifi-cado por cromatografia de sílica (0 a 70% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer 1-(((benzilóxi)carbonil)amino)-3-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato (R)-benzila (415 mg, 0,951 mmol) como uma espuma branca. MS m/z 437,2 (M+H)+.
[00347] Etapa c: A uma solução de MeLi (1,2 M em THF, 2,61 mL, 3,13 mmol) em THF (15 mL) foi adicionado gota a gota 1- (((benzilóxi)carbonil)amino)-3-oxo-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (R)-benzila (415 mg, 0,951 mmol) em THF (5 mL) a -30 a -40 °C. A mistura resultante foi agitada durante 20 minutos a -30 a -40 °C. A mis-tura foi diluída com NaHSO4 (10% de solução em H2O), diluída com EtOAc, e deixada aquecer para temperatura ambiente sob agitação vigorosa. A mistura foi diluída com NaHCO3 saturado aquoso e a fase aquosa separada foi extraída com EtOAc (1 x 15 mL). As fases orgâni-cas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, e concentra-das sob pressão reduzida. Uma solução do resíduo resultante (313 mg), Na2CO3 (498 mg, 4,70 mmol), e CbzCl (295 mg, 1,729 mmol) em água (10 mL) e THF (1 mL) foi vigorosamente agitada durante 3 dias à temperatura ambiente. A mistura foi diluída com EtOAc e a fase aquo-sa separada foi extraída com EtOAc (3 x 15 mL). As fases orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida. O resíduo re-sultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer dois diastereômeros: diastereôme- ro A (112 mg, 0,25 mmol) como um semi-sólido incolor, MS m/z 453,3 (M+H)+ e diastereômero B (45 mg, 0,010 mmol) como uma espu- ma/sólido branca, MS m/z 453,3 (M+H)+.
[00348] Etapa d: Uma mistura de diastereômero A (50 mg, 0,11 mmol) e Pd/C (10 peso%; 12 mg, 0,011 mmol) em MeOH (8 mL) foi agitada vigorosamente sob atmosfera de nitrogênio durante 2 horas. Celita foi adicionada e a mistura foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por banho de DCM. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer (4R)-4-amino-2-metil-8- azaspiro[4.5]decan-2-ol como um sólido incolor que foi usado sem ou-tra purificação. MS m/z 185,2 (M+H)+. Intermediário 40 1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-fluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R ,3 S)-terc-butila
Figure img0068
[00349] Uma mistura 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (400 mg, 1,068 mmol) e DAST (1 M em DCM, 1,87 mL, 1,87 mmol) em DCM (8,5 mL) foi agitada durante 90 minutos a 0 °C. A mistura de reação foi saciada por adição de NaHCO3 saturado aquoso (5 mL). Após agitação durante 10 minutos a 0 °C, as fases foram separadas e o aquoso foi extraído com DCM (2 x 5 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3- fluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3S)-terc-butila que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 277,2 (M+H-Boc)+. Intermediário 41 1-(( R )-1,1 -dimetiletilsulfinamido)-3-fluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de (1R ,3 R)-terc-butila
Figure img0069
[00350] Uma mistura 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-3-hidróxi-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3S)-terc-butila (200 mg, 0,534 mmol) e DAST (1 M em DCM, 934 μL, 0,934 mmol) em DCM (5 mL) foi agitada durante 90 minutos a 0 °C. A mistura de reação foi saciada por adição de NaHCO3 saturado aquoso (5 mL). Após agitação durante 10 minutos à temperatura ambiente, as fases foram separadas e o aquoso foi extraído com DCM (2 x 5 mL). As fases orgânicas com-binadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas, e os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida para fornecer 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-fluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila que foi usado na etapa seguinte sem outra purifica-ção. MS m/z 277,2 (M+H-Boc)+. Intermediário 42 3-((6-amino-2,3-dicloropiridin-4-il)tio)-6-cloropirazin-2-amina
Figure img0070
[00351] Etapa a: A uma solução de 5,6-dicloropiridin-2-amina (590 mg, 3,62 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado LiHMDS (1 M em THF, 7,96 mL, 7,96 mmol) a 0 °C. A reação foi agitada durante 10 minutos a 0 °C em seguida uma solução de Boc2O (869 mg, 3,98 mmol) em THF (5 mL) foi adicionada a mistura de reação. A solução resultante foi agitada durante 15 minutos a 0 °C em seguida levado para pH 4 por adição de HCl a 1 M. A solução foi diluída com EtOAc, lavada com NaHCO3 saturado aquoso, solução salina, secada sobre Na2SO4, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer (5,6-dicloropiridin-2-il)carbamato de terc- butila (790 mg, 3,00 mmol). 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 7,86 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 7,70 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 7,20 (br s, 1 H), 1,51 (s, 9 H). MS m/z 232,9 (M+H-tBu)+.
[00352] Etapa b: A uma solução de diisopropilamina (1 mL, 7,07 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado n-BuLi (2,5 M em hexanos, 2,83 mL, 7,07 mmol) a -78 °C e a solução resultante foi agitada durante 1 hora a esta temperatura. (5,6-dicloropiridin-2-il)carbamato de terc- butila (930 mg, 3,53 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado a -78 °C. Após agitação a esta temperatura durante 2 horas, iodina (987 mg, 3,89 mmol) em THF (5 mL) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada durante 30 minutos a -78 °C. Após aquecimento para temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com água e extraída com EtOAc (2 x 50 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com Na2S2O3 saturado aquoso, solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer (5,6-dicloro-4-iodopiridin-2- il)carbamato de terc-butila ( 813 mg, 2,09 mmol). 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,45 (s, 1 H), 7,12 (s, 1 H), 1,52 (s, 9 H). MS m/z 332,9 (M+H-tBu)+.
[00353] Etapa c: Uma mistura de (5,6-dicloro-4-iodopiridin-2- il)carbamato de terc-butila (610 mg, 1,57 mmol), 3-amino-5- cloropirazina-2-tiolato de sódio (302 mg, 1,65 mmol), Pd2(dba)3 (72 mg, 0,08 mmol), Xantphos (91 mg, 0,16 mmol), e DIPEA (0,55 mL, 3,14 mmol) em dioxano (7,8 mL) foi agitada durante 8 horas a 110 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celita e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 40% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer (4-((3-amino-5-cloropirazin-2-il)tio)-5,6-dicloropiridin-2- il)carbamato de terc-butila (470 mg, 1,11 mmol). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ ppm 10,24 (s, 1 H), 7,96 (s, 1 H), 7,31 (br s, 2 H), 7,16 (s, 1 H), 1,38 (s, 9 H). MS m/z 321,9 (M+H-Boc)+.
[00354] Etapa d: Uma mistura de (4-((3-amino-5-cloropirazin-2- il)tio)-5,6-dicloropiridin-2-il)carbamato de terc-butila (470 mg, 1,11 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 5,56 mL, 22,24 mmol) foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer dicloridrato de 3-((6-amino-2,3- dicloropiridin-4-il)tio)-6-cloropirazin-2-amina (411 mg, 1,04 mmol) que foi usado sem outra purificação. MS m/z 324,0 (M+H)+. Exemplo 1 (S) e (R) 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0071
[00355] Etapa a: Uma solução de 6-cloro-3-((2-(trifluorometil)piridin- 3-il)tio)pirazin-2-amina (200 mg, 0,652 mmol) e N-(4-metoxibenzil)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (358 mg, 1,304 mmol) em DIPEA (3 mL) foi agitada durante 60 horas a 130 °C. Após resfriamento para a tem-peratura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em TFA (3 mL) e a solução foi agitada em um reator de micro-onda durante 1 hora a 160 °C e durante 15 minutos a 180 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 25 a 50% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (73 mg, 0,482 mmol; 83% puro baseado em HRMS). 19 mg deste composto foram novamente purificado por HPLC (eluição gradiente 25 a 50% de acetonitrila em água, 0,1% de TFA modificador) para fornecer o composto do título puro (9,5 mg). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,29 (dd, J=4,42, 1,39 Hz, 1 H), 7,48 (s, 1 H), 7,19-7,41 (m, 2 H), 4,06-4,26 (m, 2 H), 2,89-3,14 (m, 2 H), 2,71 (t, J=7,33 Hz, 1 H), 1,86-2,00 (m, 1 H), 1,73-1,84 (m, 1 H), 1,43-1,72 (m, 5 H), 1,27-1,42 (m, 2 H), 1,17-1,27 (m, 1 H). 19F RMN (376 MHz, METANOL-d4) δ ppm -66,45 (s). HRMS calculada para C19H24N6F3S (M+H)+ 425,1735, encontrada 425,1753. IC50 é 0,023 μM.
[00356] Etapa b: Purificação por SFC quiral do composto do título acima mencionado realizada como segue; coluna: ID 21x250 mm, taxa de fluxo: 75 g por minuto, fase móvel: 35% de MeOH e 10 mM de NH4OH em CO2, detecção: 270 nm UV para obter enantiômero simples Tr (P1)= 4,9 min; IC50 é 0,011 μM e Tr (P2)= 6,4 min; IC50 é 0,167 μM.
[00357] Os seguintes compostos de Fórmula I, como identificado na tabela 4, foram feitos usando os procedimentos ou modificações para os procedimentos usando o derivado de tiopirazin-2-amina correspondente e amina protegida. Tabela 4
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Exemplo 8 (R) e (S)-2-(6-amino-5-((2,3-diclorofenil)tio)pirazin-2-il)-2-azaspiro[3.3] heptan-5-amina
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[00358] Etapa a: Uma solução de 6-cloro-3-((2,3- diclorofenil)tio)pirazin-2-amina (140 mg, 0,457 mmol) e 2- azaspiro[3.3]heptan-5-ilcarbamato de terc-butila (sal de HCl, 125 mg, 0,502 mmol) em DIPEA (1 mL) foi agitada durante 24 horas a 130 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram re- movidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em DCM (5 mL), TFA (0,5 mL) foi adicionado e a mistura resultante foi agi-tada durante 30 minutos à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 25 a 50% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer 2-(6-amino-5-((2,3- diclorofenil)tio)pirazin-2-il)-2-azaspiro[3.3]heptan-5-amina (75 mg, 0,186 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,31 (dd, J=8,03, 1,51 Hz, 1 H), 7,18 (s, 1 H), 7,11 (t, J=8,03 Hz, 1 H), 6,60 (dd, J=8,03, 1,51 Hz, 1 H), 4,45 (d, J=8,78 Hz, 1 H), 4,03 (d, J=9,03 Hz, 1 H), 3,96 (d, J=9,03 Hz, 1 H), 3,90 (d, J=8,78 Hz, 1 H), 3,34-3,39 (parcialmente sobreposto com o solvente, m, 1 H), 2,12-2,25 (m, 1 H), 1,902,11 (m, 2 H), 1,52-1,67 (m, 1 H). HRMS calculada para C16H18Cl2N5S (M+H)+ 382,0660, encontrada 382,0585. IC50 é 5,36 μM.
[00359] Etapa b: 2-(6-amino-5-((2,3-diclorofenil)tio)pirazin-2-il)-2- azaspiro[3.3]heptan-5-amina (53,9 mg, 0,141 mmol) foi novamente pu-rificado por SFC quiral; coluna: OJ-H 21x250 mm, taxa de fluxo: 80 g por minuto, fase móvel: 26% de MeOH e 10 mM de NH4OH em CO2, detecção: 269 nm UV para obter enantiômero simples Tr (P1)= 3,7 min; IC50 é 17,49 μM e Tr (P2)= 4,7 min.; IC50 é 3,31 μM.
[00360] Os seguintes compostos de Fórmula I, como identificado na tabela 5, foram feitos usando o procedimento acima mencionado ou modicações ao procedimento acima usando o derivado correspondente de pirazin-2-amina e amina protegida. Tabela 5
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Exemplo 14 7-(6-amino-5-((2,3-diclorofenil)tio)pirazin-2-il)-7-azaspiro[3.5]nonan-1- amina
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[00361] Uma solução de 6-cloro-3-((2,3-diclorofenil)tio)pirazin-2- amina (140 mg, 0,457 mmol) e 2-(7-azaspiro[3.5]nonan-1-il)isoindolina- 1,3-diona (sal de HCl, 154 mg, 0,502 mmol) em DIPEA (1 mL) foi agitada durante 16 horas a 130 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Uma so-lução de o resíduo resultante e hidrato de hidrazina (29 μL, 0,602 mmol) em THF:MeOH (1:1, 1 mL) foi agitada durante 16 horas a 55 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 35 a 60% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer o composto do título (78 mg, 0,502 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,59 (s, 1 H), 7,31 (dd, J=8,03, 1,51 Hz, 1 H), 7,12 (t, J=8,03 Hz, 1 H), 6,62 (dd, J=8,03, 1,51 Hz, 1 H), 4,37 (d, J=13,55 Hz, 1 H), 4,26 (d, J=13,55 Hz, 1 H), 3,24-3,30 (parcialmente sobreposto com o solvente, m, 1 H), 3,07-3,20 (m, 1 H), 2,92 3,06 (m, 1 H), 2,26-2,39 (m, 1 H), 1,87-2,07 (m, 2 H), 1,57-1,87 (m, 4 H), 1,34-1,42 (m, 1 H). HRMS calculada para C18H22Cl2N5S (M+H)+ 410,0973, encontrada 410,1018; (racêmico). IC50 é 0,056 μM.
[00362] Purificação por SFC quiral do composto do título acima mencionado realizada como segue; coluna: AD-H 21x250 mm, taxa de fluxo: 80 g por minuto, fase móvel: 46% de MeOH e 10 mM de NH4OH em CO2, detecção: 274 nm UV para obter enantiômero simples Tr (P1)= 4,0 min e Tr (P2)= 5,5 min. (P1 (S-enantiômero (determinado por raio-X)); IC50 é 0,019μM; (P2 (Enantiômero R)); IC50 é 0,414 μM.
[00363] Os seguintes compostos de Fórmula I, como identificado na tabela 6, foram feitos usando os procedimentos acima mencionados ou modificações ao procedimento acima mencionado usando o derivado correspondente de pirazin-2-amina e ftalamida amina protegida. Tabela 6
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Figure img0081
Figure img0082
Exemplo 20 (S)-7-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-7- azaspiro[3.5]nonan-1-amina
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[00364] Etapa a: Uma mistura de 6-cloro-3-((2-(trifluorometil)piridin- 3-il)tio)pirazin-2-amina (230 mg, 0,750 mmol) e (R)-2-metil-N-((S)-7- azaspiro[3.5]nonan-1-il)propano-2-sulfinamida (238 mg, 0,975 mmol) em DIPEA (3,7 mL) foi agitada durante 10 horas a 105 °C. Após resfri-amento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatogra- fia de sílica (5 a 70% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer (R)-N-((S)-7-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-7- azaspiro[3.5]nonan-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (172 mg, 0,334 mmol) como um sólido branco. MS m/z 515,2 (M+H)+.
[00365] Etapa b: Uma solução de (R)-N-((S)-7-(6-amino-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-7-azaspiro[3.5]nonan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (142 mg, 0,376 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 414 μL, 1,66 mmol) em DCM (1,4 mL) foi agitada durante 20 minutos at 40 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, HCl (1 M em H2O) foi adicionado e a mistura aquosa resultante foi extraída com DCM. A fase aquosa foi basificada com NH4OH (28% em H2O) até pH 12 e ela foi extraída com DCM (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (S)-7-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin- 2-il)-7-azaspiro[3.5]nonan-1-amina (93 mg, 0,227 mmol). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,40-8,53 (m, 1 H), 7,61-7,69 (m, 1 H), 7,55 (dd, J=8,0, 4,5 Hz, 1 H), 7,29 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 6,19 (s, 2 H), 4,114,24 (m, 1 H), 3,99-4,06 (m, 1 H), 3,06-3,20 (m, 2 H), 2,90-3,06 (m, 2 H), 1,50-1,74 (m, 4 H), 1,33-1,49 (m, 2 H). HRMS calculada para C18H21F3N6S (M+H)+ 411,1566, encontrada 411,1579. IC50 é 0,038 μM. Exemplo 21 (S )-5-amino-3-(1-amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carboxamida
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[00366] Etapa a: A uma solução de 6-cloro-3-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (1,2 g, 2,119 mmol) em DCM (30 mL) foi adicionado a 0 °C NBS (745 mg, 4,19 mmol) em uma porção. A mistura resultante foi agitada vigorosamente durante 30 mi-nutos a 0 °C e durante 1 hora à temperatura ambiente. A solução clara foi saciada com água e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram subsequentemente lavadas com água, solução sa-lina, secadas sobre Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo resul-tante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 5-bromo-6-cloro-3-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (938 mg, 2,51 mmol). MS m/z 387,2 (M+H)+.
[00367] Etapa b: Uma mistura de 5-bromo-6-cloro-3-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (750 mg, 1,945 mmol) e cianeto de cobre(I) (348 mg, 3,89 mmol) em DMF (7 mL) foi agitada durante 14 horas a 120 °C. Após resfriamento para a temperatura am-biente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por banho de MeOH (50 mL) .Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtOAc/heptano) para dar origem a 5- amino-3-cloro-6-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carbonitrila (301 mg, 0,907 mmol). MS m/z 332,3 (M+H)+.
[00368] Etapa c: Uma mistura de 5-amino-3-cloro-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carbonitrila (52 mg, 0,157 mmol) e (S)-N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (90 mg, 0,314 mmol) em DIPEA (0,246 mL) foi agitada durante 1 hora a 135 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para dar origem a 5-amino-3-((S)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carbonitrila (77 mg, 0,132 mmol). MS m/z 584,5 (M+H)+.
[00369] Etapa d: Uma mistura de 5-amino-3-((S)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carbonitrila (77 mg, 0,132 mmol) e NaOH (1 M em H2O, 1,451 mL, 1,451 mmol) em MeOH (3,5 mL) foi agitada em um reator de micro-onda durante 35 minutos a 110 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida para fornecer 5-amino-3-((S)-1-(((R)-1- (4-metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carboxamida (79 mg, 0,132 mmol) que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 602,5 (M+H)+.
[00370] Etapa e: Uma solução de 5-amino-3-((S)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carboxamida (79 mg, 0,132 mmol) em TFA (1,2 mL, 15,76 mmol) foi agitada em um reator de micro-onda a 100 oC até que nenhum material de partida restou (3 horas, monitorado por LCMS). Os voláteis foram removidos sob pressão re-duzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradien- te 25 a 50% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (S)-5-amino-3-(1-amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazina-2-carboxamida (18,8 mg, 0,039 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,43 (dd, J=4,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,57 (dd, J=8,1, 1,3 Hz, 1 H), 7,46 (dd, J=8,2, 4,5 Hz, 1 H), 3,92-3,88 (m, 2 H), 3,20-3,08 (m, 2 H), 2,77 (t, J=7,4 Hz, 1 H), 2,041,96 (m, 1 H), 1,829-1,82 (m, 1 H), 1,78-1,61 (m, 4 H), 1,53 (ddd, J=12,3, 9,2, 5,7 Hz, 1 H), 1,43 (ddd, J=9,8, 4,9, 2,0 Hz, 1 H), 1,39-1,32 (m, 1 H), 1,30-1,23 (m, 1 H). HRMS calculada para C20H25F3N7OS (M+H)+ 468,1715, encontrada 468,1761; IC50 é 0,010 μM.
[00371] Os seguintes compostos de Fórmula I, como identificado na tabela 7, foram feitos usando o procedimento acima mencionado ou modificações ao procedimento acima mencionado usando a amina correspondente e o método de desproteção de amina. Tabela 7
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Exemplo 23 (S )-8-(5-amino-6-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)-1,2,4-triazin-3-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
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[00372] Etapa a: Uma mistura de 3-cloro-1,2,4-triazin-5-amina (70 mg, 0,536 mmol), (S)-N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (247 mg, 0,644 mmol), e N-metilmorfolina (177 μL, 1,609 mmol) em MeCN (1 mL) e NMP (0,1 mL) foi irradiado em um reator de micro-onda durante 45 minutos a 90 °C. Após resfri-amento para a temperatura ambiente, o resíduo resultante foi direta-mente purificado por cromatografia de sílica (0 a 5% de gradiente de MeOH/DCM) para dar origem a (S)-8-(5-amino-1,2,4-triazin-3-il)-N- ((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 383,5 (M+H)+.
[00373] Etapa b: A uma solução de (S)-8-(5-amino-1,2,4-triazin-3-il)- N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (194 mg, 0,507 mmol) em DCM (8 mL) foi adicionado, a 0 °C, NBS (97 mg, 0,543 mmol) em uma porção. Após agitação durante 20 minutos a 0 °C, a solução clara foi saciada com algumas gotas de Na2CO3 aquoso e ela foi extraída com DCM. A camada orgânica combinada foi secada sobre MgSO4, filtrada e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer (S)-8-(5- amino-6-bromo-1,2,4-triazin-3-il)-N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (77,9 mg, 0,169 mmol). MS m/z 463,4 (M+H)+.
[00374] Etapa c: Uma mistura de (S)-8-(5-amino-6-bromo-1,2,4- triazin-3-il)-N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (54,1 mg, 0,117 mmol), 2-(trifluorometil)piridina-3-tiol (21 mg, 0,117 mmol), XantPhos (7,46 mg, 0,013 mmol), Pd2(dba)3 (5,37 mg, 0,0058 mmol), e DIPEA (0,041 mL, 0,234 mmol) em dioxano (1 mL) foi agitada em um reator de micro-onda durante 1,5 hora a 130 °C. Após resfria-mento para a temperatura ambiente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (10 mL). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (S)-8-(5- amino-6-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)-1,2,4-triazin-3-il)-N-((R)-1-(4- metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (65 mg, 0,116 mmol). MS m/z 560,5 (M+H)+.
[00375] Etapa d: Uma solução de (S)-8-(5-amino-6-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)-1,2,4-triazin-3-il)-N-((R)-1-(4- metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (65 mg, 0,116 mmol) em TFA (1,253 mL, 16,26 mmol) foi agitada a 100 oC até que nenhum ma-terial de partida permaneceu (1,5 hora, monitorado por LC/MS), os vo-láteis foram removidos sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi diluído com água, e ele foi extraído com Et2O (3 x 10 mL). A camada aquosa foi basificada para pH 12 usando NH4OH (28% em água), e ela foi extraída com DCM (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultan-te foi purificado por HPLC (eluição gradiente 25 a 50% acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (S)-8-(5-amino-6- ((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)-1,2,4-triazin-3-il)-8-azaspiro[4.5]decan- 1-amina (14,5 mg, 0,032 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,50-8,45 (m, 1 H), 7,60-7,54 (m, 1 H), 7,53-7,46 (m, 1 H), 4,64-4,50 (m, 2 H), 3,22-3,09 (m, 2 H), 2,88 (t, J=7,3 Hz, 1 H), 2,11-2,00 (m, 1 H), 1,94-1,86 (m, 1 H), 1,84-1,74 (m, 1 H), 1,74-1,63 (m, 3 H), 1,59-1,46 (m, 2 H), 1,45-1,39 (m, 1 H), 1,39-1,31 (m, 1 H). HRMS calculada para C18H23F3N7S (M+H)+ 426,1688, encontrada 426,1667. IC50 é 0,290 μM. Exemplo 24 (S )-8-(4-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirimidin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
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[00376] Etapa a: Uma mistura de 2-(trifluorometil)piridina-3-tiol (150 mg, 0,837 mmol), 2-cloro-5-iodopirimidin-4-amina (267 mg, 1,047 mmol), XantPhos (53,3 mg, 0,092 mmol), Pd2(dba)3 (38,3 mg, 0,042 mmol), e DIPEA (0,292 mL, 1,674 mmol) em dioxano (1 mL) foi agitada em um reator de micro-onda durante 1,5 hora a 130 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (10 mL). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer 2-cloro- 5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirimidin-4-amina (141 mg, 0,460 mmol). MS m/z 307,4 (M+H)+.
[00377] Etapa b: Uma mistura de 2-cloro-5-((2-(trifluorometil)piridin- 3-il)tio)pirimidin-4-amina (70 mg, 0,228 mmol) e (S)-N-((R)-1-(4- metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (105 mg, 0,274 mmol) em DIPEA (0,359 mL) foi agitada em um reator de micro-onda durante 1,5 hora a 135 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (S)-8-(4- amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirimidin-2-il)-N-((R)-1-(4- metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (128 mg, 0,228 mmol). MS m/z 559,5 (M+H)+.
[00378] Etapa c: Uma solução de (S)-8-(4-amino-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirimidin-2-il)-N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (128 mg, 0,229 mmol) em TFA (2,471 mL, 32,1 mmol) foi agitada a 100 oC até que nenhum material de partida permaneceu (1,5 hora, monitorado por LCMS), os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi diluído com água, e ele foi em seguida extraído com Et2O (3 x 10 mL). A camada aquosa foi basificada para pH 12 usando NH4OH (28% em água), e ele foi extraído com DCM (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultan-te foi purificado por HPLC (eluição gradiente 35 a 60% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador), para fornecer (S)-8-(4-amino- 5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirimidin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1- amina (32 mg, 0,072 mmol). 1H RMN (400MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,41-8,35 (m, 1 H), 8,00 (s, 1 H), 7,47-7,43 (m, 2 H), 4,66-4,45 (m, 2 H), 3,18-3,06 (m, 2 H), 2,81 (t, J=7,3 Hz, 1 H), 2,09-1,97 (m, 1 H), 1,941,86 (m, 1 H), 1,81-1,72 (m, 1 H), 1,69-1,62 (m, 2 H), 1,59-1,53 (m, 2 H), 1,49-1,44 (m, 1 H), 1,40-1,35 (m, 1 H), 1,33-1,25 (m, 1 H). HRMS calculada para C19H24F3N6S (M+H)+ 425,1735, encontrada 425,1741; IC50 é 2,78 μM. Exemplo 25 (R )-5-amino-3-(1-amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((3-cloro-2- (trifluorometil)piridin-4-il)tio)pirazina-2-carboxamida
Figure img0088
[00379] Etapa a: Uma solução de 5-amino-3-cloropirazina-2- carbonitrila (1,55 g, 10,0 mmol) e (R)-N-((R)-1-(4-metoxifenil)etil)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (2,88 g, 10,0 mmol) em DIPEA (10 μL) e NMP (5 mL) foi agitada durante 16 horas a 110 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi vertida em um funil de separação contendo NaHCO3 aquoso e ela foi extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 5% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 5-amino-3-((R)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazina-2-carbonitrila (2,74 g, 6,74 mmol). MS m/z 407,3 (M+H)+.
[00380] Etapa b: (Nota: Esta reação foi levada em 4 banhos de 500 mg cada). Uma solução de 5-amino-3-((R)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazina-2-carbonitrila (500 mg, 1,23 mmol) em MeOH (8 mL) e NaOH (2,5 M em H2O, 5 mL, 12,3 mmol) foi agitada em um reator de micro-onda durante 90 minutos a 130 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a mistura resultante foi purificado por HPLC (35 a 60% de gradiente de aceto- nitrila/água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer 5-amino-3- ((R)-1-(((R)-1-(4-metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8- il)pirazina-2-carboxamida (160 mg/reação, 640 mg total, 1,51 mmol). MS m/z 425,3 (M+H)+.
[00381] Etapa c: Uma solução de 5-amino-3-((R)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazina-2- carboxamida (615 mg, 1,45 mmol) em TFA (11 mL) foi agitada durante 1 hora a 100 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Uma solução do resíduo resultante, DIPEA (1,2 mL, 6,89 mmol), e Boc2O (330 mg, 1,516 mmol) em DCM (15 mL) foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pres-são reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (1 a 10% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer (8-(6- amino-3-carbamoilpirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc-butila (538 mg, 1,378 mmol). MS m/z 391,0 (M+H)+.
[00382] Etapa d: Uma solução de (8-(6-amino-3-carbamoilpirazin-2- il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc-butila (538 mg, 1,378 mmol), e NBS (270 mg, 1,516 mmol) em DCM (5 mL) foi agitada durante 20 minutos a 0 °C. A mistura de reação foi saciada com MeOH (2 mL) e agitada durante 20 minutos à temperatura ambiente. A mistura resultante foi vertida em um funil de separação contendo NaHCO3 aquoso e ela foi extraída com DCM. As fases orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4, filtradas e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (8-(6-amino-5-bromo-3- carbamoilpirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc- butila (627 mg, 1,336 mmol). MS m/z 471,2 (M+H)+.
[00383] Etapa e: A uma solução de (8-(6-amino-5-bromo-3- carbamoilpirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc- butila (627 mg, 1,336 mmol), XantPhos (77 mg, 0,134 mmol), e Pd2(dba)3 (61,2 mg, 0,067 mmol) em dioxano (3 mL) foi adicionado (em temperatura ambiente e sob N2) 2-etil-hexil-3-mercaptopropanoato (334 μL, 1,469 mmol) seguido pela adição de DIPEA (467 μL, 2,67 mmol). A solução resultante foi agitada em um reator de micro-onda durante 1 hora a 90 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por banho de EtOAc (5 mL). Os filtrados combinados foram concentrados e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 10% de gradiente de MeOH/DCM) para fornecer 3-((3-amino-5-((R)-1- ((terc-butoxicarbonil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6- carbamoilpirazin-2-il)tio)propanoato de 2-etil-hexila (574 mg, 0,946 mmol). MS m/z 607,4 (M+H)+.
[00384] Etapa f: A uma solução de 3-((3-amino-5-((R)-1-((terc- butoxicarbonil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-carbamoilpirazin-2- il)tio)propanoato de 2-etil-hexila (574 mg, 0,946 mmol) em THF (3 mL) foi adicionado (a -78 °C e sob N2) terc-butóxido de potássio (1 M em THF, 2,84 mL, 2,84 mmol). Após agitar vigorosamente a -78 °C durante 10 minutos, a reação foi saciada com K2CO3 aquoso (2 M, 500 μL) e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por HPLC (15 a 40% de gradiente de acetonitrila/água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (8-(6-amino-3-carbamoil- 5-mercaptopirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)- terc-butila (280 mg, 0,663 mmol). MS m/z 423,4 (M+H)+.
[00385] Etapa g: A uma solução de (8-(6-amino-3-carbamoil-5- mercaptopirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc- butila (88 mg, 0,208 mmol), 3-cloro-4-iodo-2-(trifluorometil)piridina (80 mg, 0,260 mmol), XantPhos (12,1 mg, 0,021 mmol), e Pd2(dba)3 (9,6 mg, 0,01 mmol) em dioxano (0,5 mL) foi adicionado (em temperatura ambiente e sob N2) DIPEA (110 μL, 0,625 mmol). A solução resultante foi agitada em um reator de micro-onda durante 1 hora a 90 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi diluída com EtOAc e ela foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por banho de EtOAc (5 mL). Os filtrados combinados foram concentrados e secados sob vácuo. Uma solução do resíduo resultante em DCM (1 mL) e TFA (400 μL) foi agitada durante 10 minutos à temperatura am-biente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 25 a 50% de ace- tonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (R)-5- amino-3-(1-amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-6-((3-cloro-2- (trifluorometil)piridin-4-il)tio)pirazina-2-carboxamida (60 mg, 0,120 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,18 (d, J=5,05 Hz, 1 H). 6,85 (d, J=5,31 Hz, 1 H). 3,87 (t, J=13,89 Hz, 2 H). 2,98-3,14 (m, 2 H), 2,72 (t, J=7,33 Hz, 1 H). 1,86-2,02 (m, 1 H). 1,73-1,81 (m, 1 H). 1,43-1,72 (m, 5 H). 1,17-1,41 (m, 3 H). 19F RMN (376 MHz, METANOL- d4) δ ppm -67,22 (s, 1 F). HRMS calculada para C20H24ClF3N7OS (M+H)+ 502,1404, encontrada 502,1398. IC50 é 0,058 μM Exemplo 26 (R )-8-(6-amino-5-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0089
[00386] Uma mistura de 3-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)-6- cloropirazin-2-amina (67 mg, 0,233 mmol) e (R)-2-metil-N-((R)-8- azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2-sulfinamida (120 mg, 0,465 mmol) em DIPEA (2 mL) foi agitada durante 5 horas a 130 °C. Após resfria-mento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Uma solução do resíduo resultante em dioxano (5 mL) e HCl (4 M em dioxano, 1 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resul-tante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 25 a 50% de acetoni- trila em água, 5 mM de NH4OH modificador). O resíduo resultante foi novamente purificado por SFC (Princeton DEAP 20x150mm, taxa de fluxo: 80 g por minuto, fase móvel: 20 a 40% de MeOH em CO2 dentro de 5,7 min, coleção de massa desencadeada, temperatura do forno 40 °C, contrapressão 12 MPa (120 bar)) para fornecer (R)-8-(6-amino-5- ((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1- amina (23 mg, 0,057 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,50-7,64 (m, 2 H), 5,91 (d, J=5,77 Hz, 1 H), 4,26 (t, J=13,18 Hz, 2 H), 3,03-3,20 (m, 2 H), 2,79 (t, J=7,53 Hz, 1 H), 1,95-2,11 (m, 1 H), 1,83-1,95 (m, 1 H), 1,52-1,82 (m, 5 H), 1,37-1,52 (m, 2 H), 1,32 (dd, J=13,30, 2,01 Hz, 1 H). HRMS calculada para C18H25ClN7S (M+H)+ 406,1581, encontrada 406,1576. IC50 é 0,014 μM.
[00387] Os seguintes compostos foram sintetizados usando o pro-cedimento acima ou modificações ao procedimento acima usando a correspondente amina protegida. Tabela 8
Figure img0090
Exemplo 28 (R )-8-(6-amino-5-((3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0091
[00388] Etapa a: A uma suspensão de 6-cloro-3-((3-cloropiridin-4- il)tio)pirazin-2-amina (53 mg, 0,194 mmol) em DIPEA (2 mL) foi adicio-nado (R)-2-metil-N-((R)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2- sulfinamida (65 mg, 0,252 mmol). A mistura resultante foi agitada a 90 °C durante 10 horas e em seguida concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano; EtOAc contendo 10% de MeOH, heptano contendo 2% de Et3N) para dar origem a (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2- il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (40 mg, 0,081 mmol) como um sólidoesbranquiçado. MS m/z 495,0 (M+H)+.
[00389] Etapa b: A uma solução de (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((3- cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (40 mg, 0,081 mmol) em DCM (0,8 mL), uma solução de HCl (4 M em dioxano, 101 μL, 0,404 mmol) foi adicio-nado e a mistura resultante foi agitada a 40 °C durante 1 hora. Uma solução aquosa de HCl (2 M, 2 mL) foi adicionada e a mistura resultan-te foi extraída com DCM (2x). A mistura aquosa foi basificada com hi-dróxido de amônio (28% em água) até pH = 12 e ele foi extraído com DCM (3x). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com so-lução salina, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas para dar origem a (R)-8-(6-amino-5-((3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (24 mg, 0,061 mmol). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,49 (s, 1 H), 8,25 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 7,66 (s, 1 H), 6,56 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 6,24 (s, 2 H), 4,07-4,26 (m, 2 H), 2,98-3,13 (m, 2 H), 2,70 (t, J=7,4 Hz, 1 H), 1,11-1,94 (m, 10 H). HRMS calculada para C18H24ClN6S (M+H)+ 391,1472, encontrada 391,1480. IC50 é 0,023 μM. Exemplo 29 (R )-8-(6-amino-5-((2-cloropiridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0092
[00390] Etapa a: A uma suspensão de 6-cloro-3-((2-cloropiridin-3- il)tio)pirazin-2-amina (85 mg, 0,311 mmol) em DIPEA (1,6 mL), foi adi-cionado (R)-2-metil-N-((R)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2- sulfinamida (105 mg, 0,405 mmol). A mistura resultante foi agitada a 90 °C durante 10 horas e em seguida concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtO- Ac/heptano; EtOAc contendo 10% de MeOH, heptano contendo 2% de Et3N) para dar origem a (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((2-cloropiridin-3- il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (40 mg, 0,081 mmol) como um sólidoesbranquiçado. 1H RMN (400 MHz, CLOROFÓRMIO-d) δ ppm 8,15 (dd, J=4,5, 1,8 Hz, 1 H), 7,64 (s, 1 H), 7,01-7,18 (m, 2 H), 4,87 (br. s, 2 H), 4,24 (s, 2 H), 3,29-3,45 (m, 1 H), 3,20 (d, J=5,8 Hz, 1 H) 2,98-3,13 (m, 2 H), 1,982,21 (m, 1 H), 1,36-1,94 (m, 9 H), 1,22 (s, 9 H). MS m/z 495,0 (M+H)+.
[00391] Etapa b: A uma solução de (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((2- cloropiridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (66 mg, 0,133 mmol) em DCM (2 mL), foi adicionado uma solução de HCl (4 M em dioxano, 167 μL, 0,667 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 40 °C durante 1 hora. Uma solução aquosa de HCl (2 M, 2 mL) foi adicionada e a mistura resultante foi ex-traída com DCM (2x). A mistura aquosa foi basificada com hidróxido de amônio (28% em água) até pH = 12 e ela foi extraída com DCM (3x). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas para dar origem a (R)-8-(6-amino-5-((2-cloropiridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5] decan-1-amina (24 mg, 0,062 mmol) como um sólido castanho. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,01 (dd, J=4,8, 1,8 Hz, 1 H), 7,43-7,52 (m, 1 H), 7,12 (dd, J=7,9, 4,6 Hz, 1 H), 7,00 (dd, J=7,9, 1,6 Hz, 1 H), 4,11-4,26 (m, 2 H), 2,96-3,10 (m, 2 H), 2,67-2,81 (m, 1 H), 1,06-2,05 (m, 10 H). HRMS calculada para C18H24ClN6S (M+H)+ 391,1472, encontrada 391,1470. IC50 é 0,015 μM. Exemplo 30 (R )-8-(6-amino-5-((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0093
[00392] Etapa a: A uma suspensão de 6-cloro-3-((2,3-dicloropiridin- 4-il)tio)pirazin-2-amina (34 mg, 0,111 mmol) em DIPEA (0,55 mL), (R)- 2-metil-N-((R)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2-sulfinamida (37 mg, 0,144 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada a 90 °C durante 10 horas e em seguida concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano; EtO- Ac contendo 10% de MeOH, heptano contendo 2% de Et3N) para dar origem a (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2- il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (33 mg, 0,062 mmol) como um sólidoesbranquiçado. 1H RMN (400 MHz, CLO- ROFÓRMIO-d) δ ppm 8,02 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 7,66 (s, 1 H), 6,60 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 4,82 (s, 2 H), 4,21-4,34 (m, 2 H), 3,34-3,42 (m, 1 H), 3,20 (d, J=5,8 Hz, 1 H), 2,99-3,15 (m, 2 H), 2,08-2,21 (m, 1 H), 1,261,97 (m, 9 H), 1,23 (s, 9 H). MS m/z 529,1 (M+H)+.
[00393] Etapa b: A uma solução de (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((2,3- dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (20 mg, 0,038 mmol) em DCM (0,38 mL), foi adicionado uma solução de HCl (4 M em dioxano, 47 μL, 0,189 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 40 °C durante 1 hora. A mis-tura de reação foi concentrada e dissolvida em MeOH. O bruto foi puri-ficado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para dar origem a (R)-8-(6-amino-5- ((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (7 mg, 0,016 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, META- NOL-d4) δ ppm 7,91-8,04 (m, 1 H), 7,52-7,65 (m, 1 H), 6,61 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 4,29 (t, J=14,2 Hz, 2 H), 3,06-3,22 (m, 2 H), 2,88 (t, J=7,4 Hz, 1 H), 1,21-2,17 (m, 10 H). HRMS calculada para C18H23Cl2N6S (M+H)+ 425,1082, encontrada 425,1095. IC50 é 0,003 μM. Exemplo 31 (S )-7-(6-amino-5-((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-7-azaspiro[3.5] nonan-1-amina
Figure img0094
[00394] Etapa a: A uma suspensão de 6-cloro-3-((2,3-dicloropiridin- 4-il)tio)pirazin-2-amina (54 mg, 0,176 mmol) em DIPEA (1,8 mL), foi adicionado (R)-2-metil-N-((R)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2- sulfinamida (86 mg, 0,351 mmol). A mistura resultante foi agitada a 90 °C durante 10 horas e em seguida concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente EtOAc/heptano; EtOAc contendo 10% de MeOH, heptano contendo 2% de Et3N) para dar origem a (R)-N-((S)-7-(6-amino-5-((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin- 2-il)-7-azaspiro[3.5]nonan-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (52 mg, 0,102 mmol) como um sólidoesbranquiçado. MS m/z 514,9 (M+H)+.
[00395] Etapa b: A uma solução de (R)-N-((S)-7-(6-amino-5-((2,3- dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-7-azaspiro[3.5]nonan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (20 mg, 0,039 mmol) em DCM (0,38 mL), foi adicionado uma solução de HCl (4 M em dioxano, 47 μL, 0,189 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 40 °C durante 1 hora. A mis-tura de reação foi concentrada e dissolvida em MeOH. O bruto foi puri-ficado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para dar origem a (S)-7-(6-amino-5- ((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-7-azaspiro[3.5]nonan-1-amina (7 mg, 0,017 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, META- NOL-d4) δ ppm 7,89 (d, J=5,5 Hz, 1 H), 7,50 (s, 1 H), 6,51 (d, J=5,5 Hz, 1 H), 3,94-4,31 (m, 2 H), 2,76-3,11 (m, 3 H), 2,06-2,24 (m, 1 H), 1,36-1,82 (m, 7 H). HRMS calculada para C17H21Cl2N6S (M+H)+ 411,0925, encontrada 411,0938. IC50 é 0,028 μM. Exemplo 32 (R )-8-(6-amino-5-((2,3-dicloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0095
[00396] Etapa a: A uma suspensão 3-((3-amino-2-clorofenil)tio)-6- cloropirazin-2-amina (60 mg, 0,209 mmol) em DIPEA (1,5 mL) foi adi-cionado (R)-2-metil-N-((R)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2- sulfinamida (70 mg, 0,272 mmol). A mistura resultante foi agitada a 90 °C durante 10 horas e em seguida concentrada. O bruto foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano; heptano contendo 2% de Et3N) para dar origem a (R)-N-((R)-8-(6- amino-5-((3-amino-2-clorofenil)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1- il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (31 mg, 0,061 mmol) como um sólido- esbranquiçado. MS m/z 509,0 (M+H)+.
[00397] Etapa b: A uma solução de (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((3- amino-2-clorofenil)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (31 mg, 0,061 mmol) em DCM (0,6 mL) foi adicionado uma solução de HCl (4 M em dioxano, 76 μL, 0,304 mmol) e a mistura resultante foi agitada a 40 °C durante 1 hora. Uma solução aquosa de HCl (2 M, 2 mL) foi adicionada e a mistura resultante foi extraída com DCM (2x). A mistura aquosa foi basificada com hidróxido de amônio (28% em água) até pH = 12 e ela foi extraída com DCM (3x). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com solução salina, secadas sobre Na2SO4, filtradas, e concentradas para dar origem a (R)-8-(6-amino-5-((3-amino-2-clorofenil)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (18 mg, 0,042 mmol) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,40 (s, 1 H), 6,73 (t, J=8,0 Hz, 1 H), 6,50 (dd, J=8,1, 1,3 Hz, 1 H), 5,90 (dd, J=7,8, 1,3 Hz, 1 H), 4,02-4,18 (m, 2 H), 3,21 (dt, J=3,2, 1,5 Hz, 1 H), 2,98 (d, J=11,4 Hz, 2 H), 2,67 (t, J=7,5 Hz, 1 H), 1,04-2,02 (m, 10 H). HRMS calculada para C19H26ClN6S (M+H)+ 405,1628, encontrada 405,1639. IC50 é 0,011 μM. Exemplo 33 (R )-8-(6-amino-5-((3-cloro-2-fluoropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0096
[00398] A uma suspensão de 6-cloro-3-((3-cloro-2-fluoropiridin-4- il)tio)pirazin-2-amina (40 mg, 0,137 mmol) em DIPEA (0,7 mL) foi adi-cionado (R)-2-metil-N-((R)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2- sulfinamida (71 mg, 0,0275 mmol). A mistura resultante foi agitada a 90 °C durante 10 horas e em seguida concentrada. O bruto foi dissolvido em DCM (0,7 mL), uma solução de HCl (4 M em dioxano, 34 μL, 0,137 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada a 40 °C durante 1 hora. A mistura de reação foi concentrada e o bruto foi purificado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 0,1% de TFA modificador) para dar origem a (R)-8-(6-amino-5-((3- cloro-2-fluoropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (sal de TFA: 17 mg, 0,042 mmol). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,94 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 7,79 (br. s., 3 H), 7,69 (br. s., 1 H), 6,51 (d, J=5,5 Hz, 1 H), 6,34 (br. s., 2 H), 4,12-4,32 (m, 2 H), 2,99-3,24 (m, 3 H), 2,00-2,12 (m, 1 H), 1,30-1,90 (m, 9 H). HRMS calculada para C18H23ClFN6S (M+H)+ 409,1377, encontrada 409,1385. IC50 é 0,005 μM. Exemplo 34
Figure img0097
[00399] Etapa a: A uma solução à temperatura ambiente de 2-oxo- 1,8-diazaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (300 mg, 1,180 mmol) em diclorometano (3 mL) foi adicionado pentassulfureto de fós-foro (110 mg, 0,495 mmol) seguida por hexametildisiloxano (2,256 mL, 10,62 mmol). A reação foi agitada durante 3 horas à temperatura am-biente em seguida diluída com EtOAc e filtrada através de Celita. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. Produto bruto foi purifi-cado por cromatografia de sílica (0 a 80% de gradiente de EtO- Ac/heptano) fornecendo 1-tioxo-2,8-diazaspiro[4.5]decano-8- carboxilato de terc-butila (0,290 g, 1,07 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,39 (s, 1 H), 3,66 (dt, J=13,6, 4,9 Hz, 2 H), 3,09 (s, 2 H), 2,78 (t, J=7,8 Hz, 2 H), 1,95 (t, J=7,8 Hz, 2 H), 1,57 (dd, J=6,6, 4,8 Hz, 4 H), 1,39 (s, 9 H). MS m/z 271 (M+H)+.
[00400] Etapa b: A uma solução de 1-tioxo-2,8- diazaspiro[4.5]decano-8-carboxilato (100 mg, 0,370 mmol) em THF (3 mL) foi adicionado gota a gota iodometano (0,231 mL, 3,70 mmol). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 16 ho-ras. Ao longo do curso da reação a mistura lentamente se tornou mais amarela na cor e resultou em um precipitado amarelo claro após agita-ção o tempo de reação atribuído. A mistura de reação foi concentrada e secada sob vácuo fornecendo um sólido amarelo. O sólido amarelo foi tomada em MeOH (2 mL) e tratado com amônia a 7 M em metanol (3 mL) em seguida aquecida em um tubo selado a 100 oC durante 8 horas. A reação foi resfriada para temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida fornecendo um sólido que sonicado com aceto- nitrila e filtrado. O filtrado foi concentrado e o resíduo purificado por cromatografia de sílica (0 a 30% de gradiente de MeOH/DCM) forne-cendo 1-amino-2,8-diazaspiro[4.5]dec-1-eno-8-carboxilato de terc- butila (87 mg, 0,343 mmol). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,38 (s, 1 H), 8,81 (d, J=25,2 Hz, 2 H), 3,98 (s, 2 H), 3,55 (t, J=7,0 Hz, 2 H), 2,82 (s, 2 H), 2,12 (t, J=7,1 Hz, 2 H), 1,74 (td, J=12,9, 4,7 Hz, 2 H), 1,57 (d, J=12,7 Hz, 2H), 1,41 (s, 9 H). MS m/z 254 (M+H)+.
[00401] Etapa c: A uma solução de 1-amino-2,8-diazaspiro[4.5]dec- 1-ene-8-carboxilato de terc-butila (86 mg, 0,339 mmol) em DCM (3 mL) foi adicionado HCl em dioxano (4 M, 0,500 mL, 2,0 mmol) à temperatu-ra ambiente e a reação agitada durante 16 horas. A mistura de reação foi concentrada e resíduo foi triturado de acetonitrila e filtradas forne-cendo 2,8-diazaspiro[4.5]dec-1-en-1-amina (57,7 mg, 0,254 mmol) como um sólido castanho. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,64 (s, 1 H), 9,39-9,23 (m, 1 H), 9,15 (s, 1 H), 9,07 (s, 1 H), 8,70 (d, J=12,5 Hz, 1 H), 3,54 (t, J=6,9 Hz, 2 H), 3,32 (d, J=13,3 Hz, 2 H), 3,05-2,88 (m, 2 H), 2,18 (t, J=6,9 Hz, 2 H), 2,01 (td, J=13,7, 4,3 Hz, 2 H), 1,80 (d, J=13,8 Hz, 2 H). MS m/z 154 (M+H)+.
[00402] Etapa d: A uma suspensão de 6-cloro-3-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (250 mg, 0,815 mmol) e 2,8-diazaspiro[4.5]dec-1-en-1-amina (210 mg, 1,371 mmol) em N- metil-2-pirrolidinona (4 mL) foi adicionado DIPEA (1,4 mL, 8,02 mmol) e a reação aquecida a 140 oC durante 16 horas. A mistura escura re-sultante foi resfriada para temperatura ambiente e diluída com EtOAc e água. As camadas foram repartidas e o organic descartado. A camada aquosa foi extraída com 20% de mistura de isopropanol/clorofórmio (2 x 30 mL), os orgânicos combinados secados sobre Na2SO4, filtrados e concentrados. O resíduo bruto foi purificado usando HPLC preparativa (gradiente eluição, 5 a 40% de ACN em água, 0,1% de TFA modifica-dor) e metade das frações reunidas foram liofilizadas fornecendo 8-(6- amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2,8- diazaspiro[4.5]dec-1-en-1-amina (TFA salt: 61,4 mg, 0,082 mmol). As frações restantes foram combinadas e neutralizadas por agitação du-rante 10 minutos vigorosamente com 50% de NaHCO3 saturado. A so-lução resultante foi extraída com 20% de mistura de isopropa- nol/clorofórmio (3 x 30mL), os orgânicos combinados secados sobre Na2SO4, filtrados e concentrados fornecendo 8-(6-amino-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2,8-diazaspiro[4.5]dec-1-en-1- amina (22 mg, 0,052 mmol) como a base livre. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,46 (d, J=4,4 Hz, 1 H), 7,67 (s, 1 H), 7,55 (dd, J=8,2, 4,5 Hz, 1 H), 7,31 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 6,19 (s, 2 H), 5,74 (s, 2 H), 4,40 (d, J=13,4 Hz, 2 H), 3,43 - 3,34 (m, 2 H), 2,90 (t, J=12,2 Hz, 2 H), 1,97- 1,89 (m, 2 H), 1,83 (td, J=13,0, 4,1 Hz, 2 H), 1,36 (d, J=12,9 Hz, 2 H). MS m/z 424,1541 (M+H)+. IC50 é 0,032 μM
[00403] O seguinte composto foi feito usando a amina acima men- cionada e unido usando os procedimentos padrões descritos aqui.
Figure img0098
Exemplo 36 racêmico-8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2- oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-amina
Figure img0099
[00404] racêmico-2-(8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3- il)tio)pirazin-2-il)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-il)isoindolina-1,3-diona dissolvido (40 mg, 0,072 mmol) em etanol (1 mL) em um frasco de mi-cro-onda cônico de 5 mL, adicionado hidrato de hidrazina (0,070 mL, 1,44 mmol), tampado e aquecido em um banho de conta de alumínio a 90 °C durante 2 horas. Suspensão filtrada a vácuo através de 0,45 μM PTFE membrana e lavada com etanol. Purificação por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 0,1% de TFA modificador), em seguida diluída com EtOAc e lavada combicarbonato saturado aquoso, e então solução salina. Concentrada, diluída com 1 mL de DCM e adicionado HCl (100 μL, 4 M em dioxano) para obter precipita-do. Concentrada para obter 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil) piridin-3- il)tio)pirazin-2-il)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-amina (sal de HCl: 1 mg, 0,002 mmol). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,43-8,39 (m, 1 H), 7,65 (s, 1 H), 7,46-7,39 (m, 2 H), 4,35-4,14 (m, 2 H), 3,98 (d, J=9,2 Hz, 1 H), 3,90 (d, J=9,2 Hz, 1 H), 3,58 (d, J=5,3 Hz, 1 H), 3,29-3,12 (m, 3 H), 1,76 (m, 4 H). HRMS calculada para C18H22F3N6OS (M+H)+ 427,1528, encontrada 427,1537. IC50 é 0,07μM. Exemplo 37 (R) e (S) - 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2- oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-amina
Figure img0100
[00405] Dissolvido o enantiômero simples P1, 2-(8-(6-amino-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- il)isoindolina-1,3-diona (49 mg, 0,088 mmol) em etanol (1 mL) em um frasco de micro-onda cônico de 5 mL, adicionado hidrato de hidrazina (0,080 mL, 1,65 mmol), tampado e aquecido em um banho de conta de alumínio a 90 °C durante 2 horas.A suspensão filtrada a vácuo através de membrana 0,45 μM PTFE e lavada com etanol. Purificação por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) resultou na isolação de 8-(6-amino-5-((2- (trifluorometil) piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- amina (13 mg, 0,029 mmol). HPLC quiral analítico: LC-3 4,6x100mm, 5 μM, fase móvel: 45% de MeOH com 10 mM amônia, 5 mL/min, enanti- ômero simples pico 1 (P1), Temperatura ambiente: 0,88 min, >99% enantiômero único. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,39 (dd, J=4,3, 1,6 Hz, 1 H), 7,60 (s, 1 H), 7,41 (m, 2 H), 4,21-4,07 (m, 3 H), 3,86 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 3,79 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 3,51 (dd, J=9,0, 5,2 Hz, 1 H), 3,24 (m, 2 H), 3,15 (m, 1 H), 1,73 (m, 2 H), 1,59 (m, 1,8 Hz, 2 H). HRMS calculada para C18H22F3N6OS (M+H)+ 427,1528, encontrada 427,1542. IC50 é 0,025μM. Exemplo 38 (R) e (S) - 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2- oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-amina
Figure img0101
[00406] Dissolvido o enantiômero simples P2, 2-(8-(6-amino-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- il)isoindolina-1,3-diona (42 mg, 0,075 mmol) em etanol (1 mL) em um frasco de micro-onda cônico de 5 mL, adicionado hidrato de hidrazina (0,080 mL, 1,65 mmol), tampado e aquecido em um banho de conta de alumínio a 90 °C durante 2 horas. A suspensão filtrada a vácuo através de 0,45 μM PTFE membrana e lavada com etanol. Purificação por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) resultou na isolação de 8-(6-amino-5-((2- (trifluorometil) piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- amina (13 mg, 0,029 mmol). HPLC quiral analítico: LC-3 4,6x100mm, 5 μM, fase móvel: 45% de MeOH com 10 mM amônia, 5 mL/min, enanti- ômero simples pico 2 (P2), Temperatura ambiente: 1,33 min, >99% enantiômero único. 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,39 (dd, J=4,3, 1,6 Hz, 1 H), 7,60 (s, 1 H), 7,41 (m, 2 H), 4,21-4,07 (m, 3 H), 3,86 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 3,79 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 3,50 (dd, J=9,0, 5,2 Hz, 1 H), 3,24 (m, 2 H), 3,15 (m, 1 H), 1,80-1,67 (m, 2 H), 1,64-1,50 (m, 2 H). HRMS calculada para C18H22F3N6OS (M+H)+ 427,1528, encontrada 427,1536. IC50 é 0,983μM. Exemplo 39 (R)-6-amino-2-(1 -amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)nicotinamida
Figure img0102
[00407] Etapa a: A uma solução de 2,6-dicloropiridina-3- carboxamida (0,728 g, 3,81 mmol) em 1-metila pirrolidinona (7 mL) foi adicionado N-metila morfolina (1,14 mL, 10,40 mmol) e (R)-N-((R)-1- (4-metoxifenil)etil)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (1 g, 3,47 mmol). A mistura resultante foi aquecida para 100 oC sob condições de refluxo durante 24 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila, tratada com bicarbonato de sódio concentrado e filtrada. A camada orgânica foi separada, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e con-centrada sob pressão reduzida. O óleo vermelho escuro resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de acetato de etila/heptano contendo 0,25% de trietilamina) para fornecer 6-cloro- 2-((R)-1-(((R)-1-(4-metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8- il)nicotinamida (0,998 g, 2,25 mmol). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,81 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 7,26 (d, J=8,6 Hz, 2 H), 6,86 (m, 3 H), 3,82 (m, 1 H), 3,77 (s, 3 H), 3,75-3,63 (m, 2 H), 3,03 (m, 2 H), 2,59 (m, 1 H), 2,01-1,92 (m, 1 H), 1,88-1,52 (m, 5 H), 1,51-1,36 (m, 3 H), 1,32 (d, J=6,5 Hz, 3 H), 1,25 (m, 2 H). MS m/z 442,9 (M+H)+.
[00408] Etapa b: A uma solução de 6-cloro-2-((R)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)nicotinamida (242 mg, 0,546 mmol), em tolueno (11 mL), foi adicionado Pd2(dba)3 (97 mg, 0,169 mmol), e (oxibis(2,1-fenileno))bis(difenilfosfina) (103 mg, 0,191 mmol). A mistura de reação foi aspergida com nitrogênio, e benzofe- nona imina (0,11 mL, 0,656 mmol) e terc-butóxido de potássio (0,710 mL, 1 M em tetra-hidrofurano, 0,710 mmol) foram adicionados sob ni-trogênio. A mistura de reação foi aquecida a 80 oC durante 2 horas, e a mistura foi deixada resfriar para temperatura ambiente, filtradas através de uma almofada de Celita, e lavada com acetato de etila. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de acetato de eti- la/heptano) para fornecer 6-((difenilmetileno)amino)-2-((R)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)nicotinamida (250 mg, 0,425 mmol). MS m/z 588,3 (M+H)+.
[00409] Etapa c: A uma suspensão de 6-((difenilmetileno)amino)-2- ((R)-1-(((R)-1-(4-metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8- il)nicotinamida (130 mg, 0,221 mmol) em THF (6 mL), foi adicionado HCl (2 M, 0,1 mL, 0,200 mmol) e a solução resultante agitada à tempe-ratura ambiente durante 30 minutos. A mistura de reação foi concen-trada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de acetato de etila/heptano, contendo 0,25% de trietilamina) para fornecer 6-amino-2-((R)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)nicotinamida (43 mg, 0,102 mmol). MS m/z 424,1 (M+H)+.
[00410] Etapa d: Uma solução de 6-amino-2-((R)-1-(((R)-1-(4- metoxifenil)etil)amino)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)nicotinamida (199 mg, 0,470 mmol) em trifluoroacetic ácido (3 mL) foi aquecida a 100 oC du-rante 30 minutos. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. (R)-6- amino-2-(1-amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)nicotinamida. MS m/z 290,2 (M+H)+.
[00411] Etapa e: A uma solução de (R)-6-amino-2-(1-amino-8- azaspiro[4.5]decan-8-il)nicotinamida em diclorometano (2 mL) foi adi-cionado trietilamina (0,196 mL, 1,410 mmol) e dicarbonato de di-terc- butila (113 mg, 0,517 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 2 horas à temperatura ambiente. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, e o resíduo purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de acetato de etila/heptano, contendo 0,25% de trietilamina) para fornecer (8-(6-amino-3-carbamoilpiridin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc-butila (147 mg, 0,377 mmol). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,88 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 6,19 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 3,66 (t, J=7,7 Hz, 1 H), 3,27-3,15 (m, 2 H), 2,98 (t, J=12,4 Hz, 2 H), 2,05-1,94 (m, 1 H), 1,86-1,46 (m, 8 H), 1,45 (s, 9 H), 1,41 (d, J=6,0 Hz, 1 H). MS m/z 390,3 (M+H)+.
[00412] Etapa f: A uma solução de (8-(6-amino-3-carbamoilpiridin-2- il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc-butila (136 mg, 0,349 mmol) em diclorometano (5 mL), resfriadaem um banho de gelo, foi adicionado N-iodossucinimida (86 mg, 0,384 mmol). A mistura re-sultante foi agitada a 5 oC durante 2 horas. A reação foi saciada por adição de 2 mL de metanol, e a mistura deixada aquecer à temperatura ambiente. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O produto bruto foi extraído com diclorometano e lavado com solução salina. A camada orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para produzir (8-(6-amino-3- carbamoil-5-iodopiridin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc-butila (170 mg, 0,330 mmol) que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 516,1 (M+H)+.
[00413] Etapa g: A uma solução de (8-(6-amino-3-carbamoil-5- iodopiridin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc-butila (177 mg, 0,343 mmol) em dioxano (10 mL), foi adicionado Pd2(dba)3 (31,4 mg, 0,034 mmol), (9,9-dimetil-9H-xanteno-4,5- diil)bis(difenilfosfina) (39,7 mg, 0,069 mmol), 2-(trifluorometil)piridina-3- tiol (67,7 mg, 0,378 mmol), e N,N-diisopropiletilamina (0,120 mL, 0,687 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 120 °C durante 2 horas, em seguida deixada resfriar à temperatura ambiente. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila e filtrada através de uma curta almofada de Celita. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida e purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de acetato de etila/heptano, contendo 0,25% de trietilamina) para fornecer (8-(6- amino-3-carbamoil-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)piridin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-il)carbamato de (R)-terc-butila (115 mg, 0,203 mmol). MS m/z 567,2 (M+H)+.
[00414] Etapa h: A uma solução de (8-(6-amino-3-carbamoil-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)piridin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1- il)carbamato de (R)-terc-butila (110 mL, 0,194 mmol) em diclorometano (2 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (2 mL, 26 mmol) e a mistura resultante foi deixada agitar à temperatura ambiente durante 1 hora. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida, e o resíduo puri-ficado por HPLC (gradiente eluição: 35 a 60% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (R)-6-amino-2-(1-amino-8- azaspiro[4.5]decan-8-il)-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)nicotinamida (40 mg, 0,084 mmol). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 8,38 (dd, J=4,1, 1,9 Hz, 1 H), 7,93 (s, 1 H), 7,56-7,31 (m, 2 H), 3,77-3,55 (m, 2 H), 3,16-2,98 (m, 2 H), 2,82 (t, J=7,4 Hz, 1 H), 2,03 (m, 1 H), 1,94-1,60 (m, 5 H), 1,60-1,20 (m, 4 H). 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -66,48. HRMS calculada para C21H26F3N6OS (M+H)+ 467,1841, encontrada 467,1837. IC50 é 0,118 μM. Exemplo 40 (R )-3-((3-amino-5-(1-amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazin-2-il)tio)-2- clorobenzamida
Figure img0103
[00415] Etapa a: Uma mistura de 2-cloro-3-mercaptobenzamida (sal de HCl, 145 mg, 0,647 mmol), 3-bromo-6-cloropirazin-2-amina (299 mg, 1,436 mmol), iodeto de cobre(I) (49,3 mg, 0,259 mmol), fosfato de potássio (412 mg, 1,941 mmol), e 1,10-fenantrolina (58,3 mg, 0,324 mmol) em dioxano (5 mL, desgaseificado) foi agitada em um reator de micro-onda durante 4 horas a 130 °C. Após resfriamento para a tem-peratura ambiente, a reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por lavagem com EtOAc (50 mL). Os filtrados combina-dos foram concentrados e o resíduo resultante foi purificado por cro- matografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtOAc/heptano) para dar origem a 3-((3-amino-5-cloropirazin-2-il)tio)-2-clorobenzamida (140 mg, 0,444 mmol). MS m/z 315,0 (M+H)+
[00416] Etapa b: Uma mistura de 3-((3-amino-5-cloropirazin-2-il)tio)- 2-clorobenzamida (130 mg, 0,412 mmol) e (R)-2-metil-N-((R)-8- azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2-sulfinamida (139 mg, 0,536 mmol) em DIPEA (0,648 mL) foi agitada em um reator de micro-onda durante 14 horas a 95 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de MeOH/DCM contendo 0,25% de TEA) para dar origem a 3-((3-amino- 5-((R)-1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-8-azaspiro[4.5]decan-8- il)pirazin-2-il)tio)-2-clorobenzamida (65 mg, 0,121 mmol). MS m/z 537,2 (M+H)+.
[00417] Etapa c: 3-((3-amino-5-((R)-1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinami- do)-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazin-2-il)tio)-2-clorobenzamida (65 mg, 0,121 mmol) foi dissolvido em HCl/dioxano (4 M, 0,121 mL, 0,484 mmol) e agitado a 22 oC até que nenhum material de partida permane-ceu (1 hora, monitorado por LCMS). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (gra-diente eluição: 25 a 50% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador), para fornecer R)-3-((3-amino-5-(1-amino-8- azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazin-2-il)tio)-2-clorobenzamida (25,5 mg, 0,058 mmol). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6) □ 7,90 (s, 1 H), 7,63 (s, 1 H), 7,62 (br. s., 1 H), 7,28-7,18 (m, 1 H), 7,18-7,09 (m, 1 H), 6,64 (dd, J=1,6, 7,9 Hz, 1 H), 6,08 (s, 2 H), 4,18-4,07 (m, 2 H), 3,12-2,95 (m, 2 H), 2,74-2,64 (m, 1 H), 1,91-1,73 (m, 2 H), 1,66-1,47 (m, 4 H), 1,391,14 (m, 4 H). HRMS calculada para C H ClN OS (M+H)+ 433,1577, encontrada 433,1598; IC50 é 0,016 μM. Exemplo 41 (2 R ,4 R )-4-amino-8-(6-amino-5-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin- 2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-2-ol
Figure img0104
[00418] Etapa a: Uma mistura de 3-((terc-butildimetilsilil)óxi)-1-((R)- 1,1-dimetiletilsulfinamido)-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3R)-terc-butila (100 mg, 0,205 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 510 μL, 2,05 mmol) em MeOH (1 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo branco resultante foi secado sob vácuo durante 1 hora. MS m/z 171,1 (M+H)+.
[00419] Etapa b: Uma mistura deste resíduo branco e 3-((2-amino- 3-cloropiridin-4-il)tio)-6-cloropirazin-2-amina (65 mg, 0,226 mmol) em DIPEA:NMP (2:1; 1,5 mL) foi vigorosamente agitada durante 40 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o bruto resultante foi purifica-do por HPLC (eluição gradiente 7,5 a 20% de acetonitrila em água, 0,1% de TFA modificador). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi novamente purificado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (2R,4R)-4-amino-8-(6-amino-5-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-2-ol (44 mg, 0,102 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,51-7,64 (m, 2 H), 5,92 (d, J=5,56 Hz, 1 H), 4,16-4,39 (m, 3 H), 3,00-3,21 (m, 2 H), 2,80 (dd, J=8,08, 7,07 Hz, 1 H), 2,33 (dt, J=13,45, 6,79 Hz, 1 H), 1,95 (dd, J=13,89, 7,58 Hz, 1 H), 1,83 (dd, J=14,02, 4,17 Hz, 1 H), 1,61-1,74 (m, 3 H), 1,56 (ddd, J=13,39, 8,08, 5,81 Hz, 1 H), 1,30 (d, J=13,14 Hz, 1 H). HRMS calculada para C18H25ClN7OS (M+H)+ 422,1557, encontrada 422,1569. IC50 é 0,007 μM.
[00420] Os seguintes compostos da tabela 9 foram sintetizados usando o procedimento acima mencionado ou modificações ao procedimento acima mencionado usando a amina protegida correspondente e cloro-pirazina intermediário. Tabela 9
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Exemplo 68 (3R,4S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3- metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-amina
Figure img0116
[00421] Etapa a: Uma mistura de 4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)- 3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3R,4S)-terc- butila (53 mg, 0,142 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 354 μL, 1,415 mmol) em MeOH (5 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Após res-friamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (3R,4S)-3-metil-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-4-amina que foi usado na etapa seguinte sem ou-tra purificação. MS m/z 171,1 (M+H)+.
[00422] Etapa b: Uma mistura de (3R,4S)-3-metil-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-4-amina bruta, 3-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)- 6-cloropirazin-2-amina (35,5 mg, 0,123 mmol), e DIPEA (193 μL, 1,11 mmol) em DMSO (600 μL) foi agitada durante 16 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removi- dos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (3R,4S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- amina (13 mg, 0,030 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,72-7,51 (m, 2 H), 5,92 (d, J=5,5 Hz, 1 H), 4,31 (m, 2 H), 4,01-3,78 (m, 2 H), 3,58 (dq, J=8,1, 6,0 Hz, 1 H), 3,04 (m, 2 H), 2,48 (d, J=8,1 Hz, 1 H), 1,75 (m, 2 H), 1,61-1,47 (m, 2 H), 1,31 (d, J=6,1 Hz, 3 H). HRMS calculada para C18H25ClN7OS (M+H)+ 422,1530, encontrada 422,1505. IC50 é 0,010 μM. Exemplo 69 (3 S ,4 S )-8-(6-amino-5-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3- metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4-amina
Figure img0117
[00423] Etapa a: Uma mistura de 4-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)- 3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (3S,4S)-terc- butila (51 mg, 0,136 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 340 μL, 1,362 mmol) em MeOH (5 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Após res-friamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (3S,4S)-3-metil-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-4-amina que foi usado na etapa seguinte sem ou-tra purificação. MS m/z 171,1 (M+H)+.
[00424] Etapa b: Uma mistura de (3S,4S)-3-metil-2-oxa-8- azaspiro[4.5]decano-4-amina bruta, 3-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)- 6-cloropirazin-2-amina (35,5 mg, 0,123 mmol), e DIPEA (193 μL, 1,11 mmol) em DMSO (600 μL) foi agitada durante 16 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (3S,4S)-8-(6-amino-5-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3-metil-2-oxa-8-azaspiro[4.5]decan-4- amina (11 mg, 0,026 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,67-7,47 (m, 2 H), 5,91 (d, J=5,5 Hz, 1 H), 4,22 (qd, J=6,4, 4,8 Hz, 1 H), 4,03 (ddt, J=13,5, 8,9, 4,7 Hz, 2 H), 3,86 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 3,71 (d, J=8,7 Hz, 1 H), 3,37 (td, J=9,9, 4,9 Hz, 1 H), 3,29-3,23 (m, 1 H), 3,00 (d, J=5,0 Hz, 1H) 1,91-1,56 (m, 4 H), 1,21 (d, J=6,4 Hz, 3 H). HRMS calculada para C18H25ClN7OS (M+H)+ 422,1530, encontrada 422,1514. IC50 é 0,010 μM. Exemplo 70 (1R ,3 R )-8-(6-amino-5-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3- metil-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0118
[00425] Etapa a: Uma mistura de (1R,3R)-benzil 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-metil-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato (100 mg, 0,246 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 1,5 mL, 6,5 mmol) em MeOH (1,5 mL) foi agitada em um reator de micro-onda durante 14 horas a 140 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (1R,3R)-3-metil- 8-azaspiro[4.5]decan-1-amina que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 169,2 (M+H)+.
[00426] Etapa b: Uma mistura de (1R,3R)-3-metil-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina crude (teor. 0,246 mmol) e 3-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)-6-cloropirazin-2-amina (70,9 mg, 0,246 mmol) em DIPEA (1 mL) e DMSO (0,5 mL) foi agitada durante 2 horas a 130 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (1R,3R)-8-(6-amino-5-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3-metil-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (23 mg, 0,055 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,517,64 (m, 2 H), 5,91 (d, J=5,31 Hz, 1 H), 4,18-4,37 (m, 2 H), 3,02-3,18 (m, 2 H), 2,82 (dd, J=9,60, 6,32 Hz, 1 H), 2,09-2,20 (m, 1 H), 2,00-2,09 (m, 1 H), 1,91-2,00 (m, 1 H), 1,58-1,74 (m, 2 H), 1,24-1,48 (m, 3 H), 1,09-1,20 (m, 1 H), 1,01-1,09 (m, 3 H). HRMS calculada para C19H27CIN7S (M+H)+ 420,1737, encontrada 420,1719. IC50 é 0,005 μM. Exemplo 71 (1R ,3 S )-8-(6-amino-5-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3- metil-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0119
[00427] Etapa a: Uma suspensão de 1-((R)-1,1- dimetiletilsulfinamido)-3-metil-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R,3S)-benzila (600 mg, 1,476 mmol) e Pd(OH)2 (104 mg, 0,148 mmol) em EtOAc:THF (1:2 75 mL) foi agitada vigorosamente sob atmosfera de H2 durante 48 horas. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celita seguida por banho de MeOH (50 mL). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Uma solução de o resíduo resultante e HCl (4 M em dioxano, 1,0 mL, 4,0 mmol) foi agitada durante 2 horas a 45 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Uma suspensão de o resíduo resultante e Pd/C (10% em Charcoal, 200 mg) em MeOH (20 mL) foi agitada durante 2 horas sob 4,21 kg/cm2 (60 psi) atmosfera de H2. A mistura de reação foi filtrada através de uma almo-fada de Celita seguida por banho de MeOH (50 mL). Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para dar origem a (1R,3S)-3-metil-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação. MS m/z 169,1 (M+H)+.
[00428] Etapa b: Uma mistura de (1R,3S)-3-metil-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina bruta (0,729 mmol) e 3-((2-amino-3- cloropiridin-4-il)tio)-6-cloropirazin-2-amina (150 mg, 0,521 mmol) em DIPEA (3,2 mL) e DMA (6 mL) foi agitada durante 14 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 10 a 30% de acetonitrila em água, 0,1% de TFA modificador) para fornecer um sólido bruto. Este sólido bruto foi novamente purificado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de ace- tonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (1R,3S)- 8-(6-amino-5-((2-amino-3-cloropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-3-metil-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina (80 mg, 0,189 mmol). 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 7,65-7,49 (m, 2 H), 5,91 (d, J=5,5 Hz, 1 H), 4,30 (ddt, J=12,4, 9,7, 3,6 Hz, 2 H), 3,34 (s, 1 H), 3,19-2,95 (m, 1 H), 2,922,80 (m, 1 H), 2,34-2,16 (m, 2 H), 1,85-1,49 (m, 4 H), 1,41 (dq, J=13,5, 2,7 Hz, 1 H), 1,30 (dq, J=13,5, 2,6 Hz, 1 H), 1,13-0,92 (m, 4 H). HRMS calculada para C19H27ClN7S (M+H)+ 420,1737, encontrada 420,1716. IC50 é 0,005 μM. Exemplo 72 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-1-oxa-3,8- diazaspiro[4.5]dec-2-en-2-amina
Figure img0120
[00429] Etapa a: Uma solução de 6-cloro-3-((2-(trifluorometil)piridin- 3-il)tio)pirazin-2-amina (70 mg, 0,304 mmol), ((4-hidroxipiperidina-4- il)metil)carbamato de terc-butila (103 mg, 0,336 mmol), e DIPEA (2,0 mL, 11,45 mmol) em NMP (1 mL) foi agitada durante 3 horas a 120 oC. Após resfriamento para a temperatura ambiente, a reação foi diluída com EtOAc, a fase orgânica foi lavada com água, solução salina, secada sobre Na2SO4, e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer um resíduo oleoso marrom. Este resíduo foi tomado em DCM (5 mL) e HCl (4 M em dioxano; 760 μL, 3,04 mmol) foi adicionado em duas porções (metade no início da reação e a outra metade 3 horas depois). A reação foi agitada um total de 4 horas. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi triturado com MeCN para fornecer um sólido marrom. O bruto resultante foi suspenso com base livre em 5% de MeOH/DCM e adicionado NaHCO3 saturado aquoso. As camadas resultantes foram separadas e o aquoso foi extraído novamente com 5% de MeOH/DCM. As fases orgânicas combinadas foram concentradas sob pressão reduzida para fornecer 1-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-4- (aminometil)piperidin-4-ol (65 mg, 0,149 mmol) como um sólido es- branquiçado-castanho. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,47 (dd, J=4,6, 1,4 Hz, 1 H), 7,68 (s, 1 H), 7,55 (dd, J=8,3, 4,5 Hz, 1H) 7,32 (dd, J=8,3, 1,4 Hz, 1 H), 4,04 (dt, J=13,8, 4,2 Hz, 2 H), 3,38-3,28 (m, 2 H), 2,83 (s, 2 H), 1,70-1,48 (m, 4 H). MS m/z 401,2 (M+H)+.
[00430] Etapa b: Uma solução de 1-(6-amino-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-4-(aminometil)piperidin-4-ol (65 mg, 0,162 mmol) em EtOH (3 mL) foi tratada em sucessão com brome- to de cianogênio (0,541 mL, 1,623 mmol) seguida por NaHCO3 (68,2 mg, 0,812 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 16 horas à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão redu-zida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-1- oxa-3,8-diazaspiro[4.5]dec-2-en-2-amina (12,5 mg, 0,029 mmol). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8,46 (dd, J=4,5, 1,4 Hz, 1 H), 7,68 (s, 1 H), 7,55 (dd, J=8,3, 4,6 Hz, 1 H), 7,31 (dd, J=8,2, 1,5 Hz, 1 H), 6,22 (s, 2 H), 5,78 (s, 2 H), 3,94-3,73 (m, 2 H), 3,64-3,45 (m, 2 H), 3,36 (s, 2 H), 1,88-1,56 (m, 4 H). HRMS calculada para C17H19F3N7OS (M+H)+ 426,1318, encontrada 426,1296. IC50 é 0,193 μM.
[00431] Os seguintes compostos da Tabela 10 foram sintetizados usando o procedimento acima mencionado ou modificações ao proce-dimento acima mencionado usando a amina protegida correspondente e cloro-pirazina intermediário. Tabela 10
Figure img0121
Figure img0122
Exemplo 75 (R)-8-(6-amino-5-((3-cloro-2-(dimetilamino)piridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0123
[00432] Etapa a: Uma mistura de 6-bromo-3-((3-cloro-2- (dimetilamino)piridin-4-il)tio)pirazin-2-amina (124 mg, 0,392 mmol) e (R)-2-metil-N-((R)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2-sulfinamida (111 mg, 0,431 mmol) em DIPEA (2,6 mL) foi agitada durante 10 horas a 90 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 10% de gradiente de EtOAc (contendo 10% de MeOH)/heptano (contendo 25 de Et3N)) para fornecer (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((3-cloro-2-(dimetilamino)piridin-4-il)tio)pirazin- 2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (75 mg, 0,139 mmol). MS m/z 538,3 (M+H)+.
[00433] Etapa b: Uma mistura de (R)-N-((R)-8-(6-amino-5-((3-cloro- 2-(dimetilamino)piridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (75 mg, 0,139 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 174 μL, 0,697 mmol) em DCM (2 mL) foi agitada durante 30 minu- tos à temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (eluição gradi-ente 35 a 60% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH modificador) para fornecer (R)-8-(6-amino-5-((3-cloro-2-(dimetilamino)piridin-4- il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (28 mg, 0,064 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7,857,92 (m, 1 H), 7,63 (s, 1 H), 6,16 (br. s, 2 H), 6,04-6,10 (m, 1 H), 4,064,23 (m, 2 H), 2,97-3,15 (m, 2 H), 2,87 (s, 6 H), 2,64-2,73 (m, 1 H), 1,11-1,97 (m, 10 H). HRMS calculada para C20H29ClN7S (M+H)+ 434,1894, encontrada 434,1883. IC50 é 0,010 μM.
[00434] Os seguintes compostos da Tabela 11 foram sintetizados usando o procedimento acima mencionado ou as modificações ao pro-cedimento acima mencionado usando a amina protegida correspondente e cloro-pirazina intermediário. Tabela 11
Figure img0124
Figure img0125
Exemplo 81 (R )-4-((3-amino-5-(1-amino-8-azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazin-2-il)tio)-3- cloropiridin-2( 1H)-ona
Figure img0126
[00435] Uma mistura de (S)-N-((R)-8-(6-amino-5-((3-cloro-2- fluoropiridin-4-il)tio)pirazin-2-il)-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (17 mg, 0,033 mmol), hidróxido de lítio (2 mg, 0,040 mmol), e água (0,07 mL) em DMSO (0,3 mL) foi agitada em um reator de micro-onda durante 45 minutos a 90 °C. Após resfriamen- to para a temperatura ambiente, MeOH (0,5 mL) foi adicionado seguido por HCl (4 M em dioxano, 2,0 mL, 8,0 mmol) e a mistura resultante foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (elui- ção gradiente 15 a 40% de acetonitrila em água, 5 mM de NH4OH mo-dificador) para fornecer (R)-4-((3-amino-5-(1-amino-8- azaspiro[4.5]decan-8-il)pirazin-2-il)tio)-3-cloropiridin-2(1H)ona (5 mg, 0,012 mmol) como um sólido branco. 1H RMN (400 MHz, METANOL- d4) δ ppm 7,53-7,61 (m, 1 H), 7,19 (d, J=7,1 Hz, 1 H), 5,72 (d, J=7,1 Hz, 1 H), 4,26 (t, J=13,1 Hz, 2 H), 3,06-3,20 (m, 2 H), 2,81 (t, J=7,5 Hz, 1 H), 1,27-2,11 (m, 10 H). HRMS calculada para C18H24ClN6OS (M+H)+ 407,1448, encontrada 407,1433. IC50 é 0,020 μM. Exemplo 82 racêmico-8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2,2- difluoro-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0127
[00436] Etapa a: Uma solução de 2,2-difluoro-1-oxo-8-azaspiro [4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (220 mg, 0,76 mmol), racêmico 2-metilpropano-2-sulfinamida (184 mg, 1,52 mmol), e etóxido de titâ- nio(IV) (0,640 mL, 3,0 mmol) em THF (4 mL) foi agitada durante 30 minutos a 90 °C. Após resfriamento a 0 °C, boroidreto de lítio (33 mg, 1,5 mmol) foi adicionado em uma porção. Após agitação durante 30 minutos, a mistura de reação foi saciada por adição de MeOH. Os vo-láteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi diluída com solução salina, ele foi extraído com EtOAc (4 x 10 mL), as fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (10 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-(1,1-dimetiletilsulfinamido)-2,2-difluoro-8-azaspiro[4.5] decano-8-carboxilato de terc-butila como um pó branco (190 mg, 0,48 mmol). MS m/z 395,2 (M+H)+.
[00437] Etapa b: Uma solução de 1-(1,1-dimetiletilsulfinamido)-2,2- difluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (190 mg, 0,48 mmol) e TFA (1 mL) em DCM (4 mL) foi agitada durante 20 minutos a 0 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer N-(2,2-difluoro-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida que foi usado na etapa seguinte sem outra purificação.
[00438] Etapa c: Uma solução de N-(2,2-difluoro-8- azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida (teor. 0,48 mmol) e 6-cloro-3-((2-(trifluoro metil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (148 mg, 0,480 mmol) em DIPEA (0,8 mL) foi agitada durante 1 hora a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 100% de gradiente de EtO- Ac/heptano) para fornecer N-(8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3- il)tio)pirazin-2-il)-2,2-difluoro-8-azaspiro [4.5]decan-1-il)-2- metilpropa- no-2-sulfinamida (174 mg, 0,28 mmol) como um pó laranja. Uma porção deste material foi progredida para a Etapa d, o material restante foi separado por cromatografia quiral (ver exemplo 83).
[00439] Etapa d: Uma solução de N-(8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil) piridin-3-il)tio) pirazin-2-il)-2,2-difluoro-8-azaspiro [4.5]decan-1-il)-2- metilpropano-2-sulfinamida (54 mg, 0,096 mmol) e HCl (4 M em dioxano, 0,239 mL, 0,96 mmol) em DCM (1 mL) foi agitada durante 30 minutos a 40 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. Este resíduo foi triturado com MeCN para fornecer racêmico-8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil) pi- ridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2,2-difluoro-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina (sal de HCl, 38 mg, 0,075 mmol) como um pó castanho pálido. 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,52-8,38 (m, 1 H), 7,71 (s, 1 H), 7,50-7,43 (m, 2 H), 4,44 (dd, J=21,0, 14,2 Hz, 2 H), 3,67 (dd, J=15,1, 11,2 Hz, 1 H), 3,23-3,08 (m, 2 H), 2,47-2,34 (m, 2 H), 2,27 (dt, J=14,6, 7,4 Hz, 1 H), 2,01-1,88 (m, 2 H), 1,75-1,54 (m, 3 H). HRMS calculada para C19H22F5N6S (M+H)+ 461,1547, encontrada 461,1540. IC50 é 0,380 μM. Exemplo 83a/b (R) e (S)-8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2,2- difluoro-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0128
[00440] Etapa a: N-(8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3- il)tio)pirazin-2-il)-2,2-difluoro-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano- 2-sulfinamida (100 mg, 0,177 mmol) foi novamente purificado por SFC quiral como segue: coluna: WHO-1 21 x 250 mm, taxa de fluxo: 80 g por minuto, fase móvel: 45% de MeOH e 5 mM de NH4OH em CO2, detecção: massa desencadeada para obter enantiômeros únicos Tr (enantiômero R): 2,6 min (44 mg, 0,078 mmol) e Tr (enantiômero S): 5,8 min (41 mg, 0,073 mmol).
[00441] Etapa b: Uma mistura de enantiômero puro e HCl (4 M em dioxano, 200 μL, 0,8 mmol) em DCM (2 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi triturado com MeCN para fornecer os compostos títulos como sais de HCl:
[00442] (R)-Enantiômero: 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,46 (dd, J=3,7, 2,3 Hz, 1 H), 7,73 (s, 1 H), 7,53-7,45 (m, 2 H), 4,524,36 (m, 2 H), 3,68 (dd, J=15,0, 11,2 Hz, 1 H), 3,24-3,09 (m, 2 H), 2,472,34 (m, 2 H), 2,32-2,21 (m, 1 H), 2,05-1,90 (m, 2 H), 1,74-1,55 (m, 3 H). 19F RMN (376 MHz, METANOL-d4) δ -66,19, -98,51 (d, J=234,5 Hz), -101,83 (d, J=234,6 Hz). HRMS calculada para C19H22F5N6S (M+H)+ 461,1547, encontrada 461,1540. IC50 é 0,882 μM.
[00443] (S)-Enantiômero: 1H RMN (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 8,50-8,41 (m, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 7,47 (m, 2 H), 4,52-4,35 (m, 2 H), 3,67 (dd, J=15,1, 11,2 Hz, 1 H), 3,24-3,05 (m, 2 H), 2,49-2,32 (m, 2 H), 2,31-2,19 (m, 1 H), 2,02-1,88 (m, 2 H), 1,73-1,51 (m, 3 H). 19F RMN (376 MHz, METANOL-d4) δ -66,24, -98,47 (d, J=234,4 Hz), -101,77 (d, J=234,6 Hz). HRMS calculada para C19H22F5N6S (M+H)+ 461,1547, encontrada 461,1541. IC50 é 0,306 μM. Exemplo 84 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-fluoro-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0129
[00444] Etapa a: Uma solução de 2-fluoro-1-oxo-8- azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila racêmico (78 mg, 0,28 mmol), etóxido de titânio(IV) (235 μL, 1,1 mmol), e (R)-2-metilpropano- 2-sulfinamida (68 mg, 0,56 mmol) em THF (1,5 mL) foi agitada durante 1 hora a 90 °C. Após resfriamento a 0 °C, boroidreto de lítio (12 mg, 0,56 mmol) foi adicionado em uma porção. Após agitação durante 30 minutos, a mistura de reação foi saciada por adição de MeOH. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi diluída com solução salina, ele foi extraído com EtOAc (4 x 10 mL), as fases orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4, filtradas, e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de sílica (0 a 50% de gradiente de EtOAc/heptano) para fornecer 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)-2-fluoro-8-azaspiro [4.[5] cano-8-carboxilato de terc-butila (64 mg, 0,17 mmol). MS m/z 377,3 (M+H)+.
[00445] Etapa b: Uma mistura de 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)- 2-fluoro-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de terc-butila (64 mg, 0,17 mmol) e TFA (1 mL) em DCM (4 mL) foi agitada durante 10 minutos a 0 °C. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi usado na próxima Etapa sem outra purificação.
[00446] Etapa c: Uma mistura do resíduo anterior e 6-cloro-3-((2- (trifluoro metil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (51 mg, 0,17 mmol) em DIPEA (0,3 mL) foi agitada durante 2 horas a 100 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por cromatogra- fia de sílica (0 a 10% de gradiente de MeOH/DCM (contendo 0,25% de Et3N)) para fornecer N-(8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3- il)tio)pirazin-2-il)-2-fluoro-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2- sulfinamida (41 mg, 0,075 mmol). MS m/z 547,2 (M+H)+ como mistura de diastereômeros. Outra purificação usando SFC quiral foi realizada como segue: coluna: ID 21 x 250 mm, taxa de fluxo: 80 g por minuto, fase móvel: 45% iPrOH e 10 mM de NH4OH em CO2, detecção: massa desencadeada para fornecer enantiômeros únicos Tr (P1)= 2,7 min (17 mg, 0,031 mmol) e Tr (enant-P1)= 4,4 min (17 mg, 0,031 mmol).
[00447] Etapa d: Uma solução de cada isômero puro e HCl (4 M em dioxano, 100 μL, 0,4 mmol) em DCM (0,1 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi triturado com MeCN para fornecer o composto do títulos como sais de HCl. Tabela 12
Figure img0130
Exemplo 86a/b (1R )-8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-metil-8- azaspiro[4.5]decan-1-amina
Figure img0131
[00448] Etapa a: Uma solução de 1-((R)-1,1-dimetiletilsulfinamido)- 2-metil-8-azaspiro[4.5]decano-8-carboxilato de (1R)-terc-butila (32 mg, 0,086 mmol) e TFA (0,2 mL, 2,60 mmol) em DCM (2 mL) foi agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente. Os voláteis foram re-movidos sob pressão reduzida para fornecer (R)-2-metil-N-((1R)-2- metil-8-azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2-sulfinamida. MS m/z 273,0 (M+H)+. O produto bruto foi usado na etapa seguinte sem outra purificação.
[00449] Etapa b: Uma mistura de (R)-2-metil-N-((1R)-2-metil-8- azaspiro[4.5]decan-1-il)propano-2-sulfinamida (23 mg, 0,084 mmol), 6- cloro-3-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-amina (23 mg, 0,075 mmol), e NMP (0,1 mL) em DIPEA (1 mL) foi agitada durante 6 horas a 115 °C. Após resfriamento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer (R)-N-((1R)-8-(6- amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-metil-8- azaspiro[4.5]decan-1-il)-2-metilpropano-2-sulfinamida como um óleo preto que foi usado na etapa seguinte sem purificação.
[00450] Etapa c: Uma mistura de (R)-N-((1R)-8-(6-amino-5-((2- (trifluorometil)piridin-3-il)tio)pirazin-2-il)-2-metil-8-azaspiro[4.5]decan-1- il)-2-metilpropano-2-sulfinamida e HCl (4 M em dioxano, 84 μL, 0,338 mmol) em DCM (2 mL) foi agitada durante 1 hora a 40 °C. Após resfri-amento para a temperatura ambiente, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo resultante foi purificado por HPLC (elui- ção gradiente 35 a 60% de acetonitrila em água, 0,1% de TFA modifi-cador) para fornecer 8-(6-amino-5-((2-(trifluorometil)piridin-3- il)tio)pirazin-2-il)-2-metil-8-azaspiro[4.5]decan-1-amina sal de TFA. HRMS calculada para C20H26F3N6S 439,1892 (M+H)+, encontrada 439,1872. IC50 é 0,0010 μM.
[00451] Etapa d: Separação quiral (ver Tabela 13 para detalhes). Tabela 13
Figure img0132
Figure img0133
Figure img0134
[00452] Os seguintes exemplos da Tabela 14 podem ser feitos usando os métodos acima mencionados e materiais de partida apro- priados:
Figure img0135
Ensaios
[00453] Compostos da invenção foram avaliados quanto à sua ca-pacidade de seletivamente inibir a atividade de SHP2. As propriedades inibitórias dos compostos da invenção descritos aqui podem ser evi-denciadas por teste em qualquer um dos seguintes ensaios:
Ensaio de inibição alostérica de SHP2
[00454] SHP2 é alostericamente ativado por meio de ligação de peptídeos fosforilados por bis-tirosila a seus domínios de Homologia 2 de Src (SH2). A última etapa de ativação leva à liberação da interfce auto-inibitória de SHP2, que por sua vez torna a SHP2 proteína tirosi- na fosfatase (PTP) ativa e disponível para reconhecimento de substrato e catálise de reação. A atividade catalítica de SHP2 foi monitorada usando o substrato substituto DiFMUP em um formato de ensaio de pronta fluorescência.
[00455] Mais especificamente, as reações de fosfatase foram realizadas em temperatura ambiente em placa de poliestireno preta de 384 cavidades, base plana, de baixo flange, superfície de não ligação (Corning, Cat# 3575), usando um volume de reação final de 25 μL e as seguintes condições de tampão de ensaio: HEPES a 60 mM, pH 7,2, NaCl a 75 mM, KCl a 75 mM, EDTA a 1 mM, 0,05% de P-20, DTT a 5 mM.
[00456] A inibição de SHP2 por compostos da invenção (concentrações variando de 0,003 a 100 μM) foi monitorada usando um ensaio em que 0,5 nM de SHP2 foi incubado com de 0,5 μM de peptídeo IRS1_pY1172(dPEG8)pY1222 (sequência: H2N- LN(pY)IDLDLV(dPEG8)LST(pY)ASINFQK-amida). Após 30 a 60 minu-tos de incubação a 25oC, o substrato substituto DiFMUP (Invitrogen, cat# D6567) foi adicionado à reação e incubado a 25 oC durante 30 minutos. A reação foi então saciada pela adição de 5 μL de uma solução a 160 μM de bpV(Phen) (Enzo Life Sciences cat# ALX-270-204). O sinal de fluorescência foi monitorado usando uma leitora de micro- placa (Envision, Perki-Elmer) usando comprimentos de onda de excitação e emissão de 340 nm e 450 nm, respectivamente. As curvas de dose-resposta do inibidor foram analisadas usando o ajuste de curva de regressão de IC50 normalizada normalização com base no controle. Os resultados de IC50 para os compostos da invenção são mostrados nos exemplos e tabelas 1-7, acima.
Ensaio celular de p-ERK
[00457] Ensaio celular de p-ERK usando o Kit AlphaScreen® SureFire™ Fosfo-ERK 1/2 (PerkinElmer): Células KYSE-520 (30.000 célu- las/cavidade) foram cultivadas em cultura de placa de 96 cavidades durante a noite e tratadas com inibidores de Shp2 em concentrações de 20, 6,6, 2,2, 0,74, 0,24,0,08, 0,027 μM durante 2 horas a 37°C. In-cubações foram terminadas pela adição de 30 μL de tampão de lise (PerkinElmer) fornecido com o kit de ensaio (PerkinElmer) de quinase regulada por sinal fosfo-extracelular SureFire (pERK). As amostras fo-ram processadas de acordo com as direções do fabricante. O sinal de fluorescência de pERK foi medido em duplicata usando uma leitora de multirótulo 2101 (Perkin Elmer Envision). A percentagem de inibição foi normalizada pelo sinal de ERK total e comparada com o controle do veículo DMSO.
Ensaio de formação de colônia e ensaio de proliferação celular
[00458] Células KYSE-520 (1500 células/cavidade) foram semeadas em placas de 24 cavidades em 300 μL de meio (RPMI-1640 contendo 10% de FBS, Lonza). Para tratamento com o fármaco, compostos da invenção em várias concentrações (20, 10, 5, 2,5, 1,25 μM) foram adicionados 24 horas e 5 dias após a semeadura celular. No dia 11, colônias foram manchadas com 0,2% de violeta cristal (MP Biomedicals) e subsequentemente dissolvidas em 20% de ácido acético para quantificação usando uma leitora Spectramax (Thermo Scientific). Em ensaio de proliferação celular, as células (1500-células/cavidade) foram semeadas em placas de 96 cavidades em 100 μL de meio (RPMI- 1640 contendo 10% de FBS, Lonza). No dia 6, 50 μL de reagente Cell- titer-Glo (Promega) foram usados, e o sinal luminescente foi determi-nado de acordo com a instrução do fornecedor (Promega).
[00459] É entendido que os exemplos e modalidades descritos aqui são para os propósitos ilustrativos apenas e que várias modificações ou mudanças à luz dos mesmos serão sugeridas por pessoas versadas na técnica e devem ser incluídas no espírito e âmbito deste pedido e escopo das reivindicações anexas.

Claims (17)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula I:
Figure img0136
na qual: p é selecionado dentre 0 e 1; q é selecionado dentre 0 e 1; Y1 é selecionado dentre CH e N; Y2 é selecionado dentre CR6 e N; RI é -XR1a; sendo que R1a é selecionado dentre C6-10 arila, C3-8 cicloalquila, C3-8 cicloalquenila e um grupo heteroarila de 5 a 9 membros contendo de 1 a 4 heteroátomos ou grupos independente-mente selecionados de N, C(O), O e S; sendo que a referida arila ou heteroarila de R1a é substituída por 1 a 5 grupos R9 independentemente selecionados de halo, amino, hidróxi, N3, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, di- metil-amino, C1-4 alquila substituída por hidróxi, C1-4 alquila substituída por halogênio e C1-4 alquila substituída por amino; e X é selecionado dentre uma ligação, S(O)m, O, C(O), COR11, CR10aR10b, NR11; sendo que m é selecionado dentre 0, 1 e 2; cada R10a e R10b é independen-temente selecionado dentre halo e C1-4alquila; e R11 é selecionado dentre hidrogênio e C1-4 alquila; R2a e R2b são independentemente selecionados de hidrogê-nio, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil- amino; R3a e R3b são independentemente selecionados dentre hi- drogênio, halo, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil-amino; R4a e R4b são independentemente selecionados de hidrogê-nio, halo, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloal- quila e C1-4 alquil-amino; R5a e R5b são independentemente selecionados de hidrogê-nio, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil-amino; sendo que quaisquer dois grupos selecionados de R2a, R2b, R3a, R3b, R4a, R4b, R5a, R5b e R7 podem formar um anel de 5 a 6 mem-bros insaturado ou parcialmente saturado; R6 é selecionado dentre hidrogênio, halo, ciano, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino-carbonila, C1-4 alquila substituída por halo, C1-4 alcóxi substituído por halo, C1-4 alquila substituída por hidróxi, C1-4 alquila substituída por amino, -S(O)1-2R6a, -C(S)R6a, -C(O)NR6aR6b, - C(NH)NR6aR6b e -NR6aC(O)R6b; sendo que R6a e R6b são independen-temente selecionados de hidrogênio e C1-4 alquila; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parci-almente insaturado que pode opcionalmente conter 1 a 3 heteroáto- mos ou grupos independentemente selecionados de N, C(O), O e S(O)m; sendo que m é selecionado dentre 0, 1 e 2; sendo que o refe-rido anel saturado formado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados de ami-no, hidróxi, metóxi, halo, metila, amino-metila, metil-amino e isobutiri- lóxi; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-do pelo fato de que é selecionado dentre:
Figure img0137
Figure img0138
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-do pelo fato de que apresenta a Fórmula Ia:
Figure img0139
na qual n é selecionado dentre 1, 2, 3 e 4; p é selecionado dentre 0 e 1; q é selecionado dentre 0 e 1; Y 1 é selecionado dentre CH e N; Y 2 é selecionado dentre CR6 e N; cada Y 4 é independentemente selecionado dentre N, C(O) e CR9; sendo que apenas um Y4 é C(O); R6 é selecionado dentre hidrogênio, halo, metila e amino carbonila; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parci-almente insaturado que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado dentre N, C(O), O e S(O)m; sendo que m é selecionado dentre 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por 1 a 3 grupos indepen-dentemente selecionados de amino, halo, hidróxi, metóxi, metila, ami- no-metila, metil-amino ou R7 e R8 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados formam um anel de 5 membros, saturado ou parcial-mente insaturado, que pode conter opcionalmente 1 ou 2 heteroáto- mos ou grupos independentemente selecionados a partir de N, O, C(O) e S(O)m; sendo que m é selecionado de 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído com 1 a 3 grupos selecionados independentemente dentre amino, hidróxi, metóxi, halo, metila, metil-amino e isobutirilóxi, ou R7 e R8 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados formam um anel de 6 membros, saturado ou parcial-mente insaturado, que pode conter opcionalmente um heteroátomo selecionado a partir de N, O e S(O)m; sendo que m é selecionado de 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 seja substituído com um grupo selecionado a partir de amino, amino- metilo e metil-amino, ou R7 e R8 em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados formam um anel de 4 membros, saturado ou parcial-mente insaturado, que pode conter opcionalmente um heteroátomo selecionado a partir de N, O e S (O)m; sendo que m é selecionado de 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído com um grupo selecionado a partir de amino, amino-metila e metil-amino; R9 é selecionado dentre halo, amino, hidróxi, N3, dimetil- amino, C1-4 alquila, C1-4 alquila substituída por halo, C1-4alcóxi, - C(O)OR10 e -NHC(O)R10; R10 é selecionado dentre hidrogênio, fenila e naftila; sendo que a referida fenila de R10 é não substituída ou substituída por metóxi; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
4. Composto, de acordo com a reivindicação 3, ou o sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre:
Figure img0140
Figure img0141
Figure img0142
Figure img0143
Figure img0144
Figure img0145
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-do pelo fato de que apresenta a Fórmula II:
Figure img0146
na qual p é selecionado dentre 0 e 1; q é selecionado dentre 0 e 1; Y1 é selecionado dentre CH e N; Y2 é selecionado dentre CR6 e N; R1 é selecionado dentre um grupo C6-10 arila, C3-8 cicloalqui- la, C3-8 cicloalquenila e heteroarila de 5 a 9 membros contendo de 1 a 4 heteroátomos selecionado dentre N, O e S; sendo que a referida ari- la ou heteroarila de R1a é substituída por 1 a 5 grupos R9 independen-temente selecionados de halo, amino, hidróxi, N3, C1-4 alquila, C1-4 al-quila substituída por hidróxi, C1-4 alquila substituída por halogênio e C14 alquila substituída por amino; R2a e R2b são independentemente selecionados de hidrogê-nio, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil- amino; R3a e R3b são independentemente selecionados de hidrogê-nio, halo, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloal- quila e C1-4 alquil-amino; R4a e R4b são independentemente selecionados de hidrogê-nio, halo, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloal- quila e C1-4 alquil-amino; R5a e R5b são independentemente selecionados de hidrogê-nio, carbonila, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, hidróxi, C3-8 cicloalquila e C1-4 alquil-amino; sendo que quaisquer dois grupos selecionados de R2a, R3a, R4, R5, R6a e R7a podem formar um anel insaturado ou parcialmente insaturado de 5 a 6 membros; R6 é selecionado dentre hidrogênio, halo, ciano, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino-carbonila, C1-4 alquila substituída por halo, C1-4 alcóxi substituído por halo, C1-4 alquila substituída por hidróxi e C1-4 alquila substituída por amino; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parci-almente insaturado que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado dentre N, O e S(O)m; sendo que m é selecionado dentre 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por 1 a 3 grupos independentemente selecionados de amino, halo, hidróxi, amino-metila e metil-amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracteriza-do pelo fato de que apresenta a Fórmula IIa:
Figure img0147
na qual n é selecionado dentre 1, 2, 3 e 4; p é selecionado dentre 0 e 1; q é selecionado dentre 0 e 1; Y 1 é selecionado dentre CH e N; Y 2 é selecionado dentre CR6 e N; Y 4 é selecionado dentre N e CR9; R6 é selecionado dentre hidrogênio, halo, metila e amino-carbonila; R7 e R8 junto com o átomo de carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de 3 a 7 membros saturado ou parci-almente insaturado que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado dentre N, O e S(O)m; sendo que m é selecionado dentre 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 pode ser não substituído ou substituído por um grupo selecionado dentre amino, amino-metila e metil-amino, ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados, formam um anel saturado de 5 membros, que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado dentre N, O e S(O)m; sendo que m é selecionado de 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído com um grupo selecionado a partir de amino, amino-metila e metil-amina, ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados, formam um anel saturado com 6 membros, que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado dentre N, O e S(O)m; sendo que m é selecionado de 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído com um grupo selecionado a partir de amino, amino-metila e metil-amino, ou R7 e R8, em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ambos ligados, formam um anel saturado de 4 membros, que pode opcionalmente conter um heteroátomo selecionado dentre N, O e S(O)m; sendo que m é selecionado de 0, 1 e 2; sendo que o referido anel saturado formado por R7 e R8 é substituído com amino; R9 é selecionado dentre halo, amino, hidróxi, N3, C1-4alquila, C1-4 alquila substituída por halo, C1-4 alcóxi, -C(O)OR10 e -NHC(O)R10; R10 é selecionado dentre hidrogênio, fenila e naftila; sendo que a referida fenila de R10 é não substituída ou substituída por metóxi; ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
7. Composto, de acordo com a reivindicação 6, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre:
Figure img0148
8. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre:
Figure img0149
Figure img0150
Figure img0151
Figure img0152
Figure img0153
Figure img0154
Figure img0155
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
9. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre:
Figure img0156
Figure img0157
ou um sal famraceuticamente aceitável do mesmo.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracteri- zado pelo fato de que é: ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
Figure img0158
11. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracteri-zado pelo fato de que é:
Figure img0159
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracteri-zado pelo fato de que é:
Figure img0160
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracteri-zado pelo fato de que é: ,ou um sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.
Figure img0161
14. Composto, de acordo com a reivindicação 4, caracteri-zado pelo fato de que é:
Figure img0162
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
15. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e pelo menos um veículo farmaceuticamente aceitável.
16. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, ou de um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para preparação de um medicamento para tratamento de uma doença ou distúrbio, que é me-diado pela atividade de SHP2.
17. Uso, de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que a doença ou o distúrbio mediado pela atividade de SHP2 é selecionado dentre Síndrome Noonan, Síndome Leopard, leu-cemias mielomonocíticas juvenis, neuroblastoma, melanoma, leucemia mieloide aguda, câncer de mama, câncer esofágico, câncer de pulmão, câncer de cólon, câncer da cabeça, neuroblastoma, carcinoma de célula escamosa da cabeça e do pescoço, carcinoma gástrico, glioblastoma e linfoma de célula grande anaplásico.
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