CN114524772B - 一种含杂环串联类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种含杂环串联类化合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种含杂环串联类化合物及其制备方法与应用。含有通式I的杂环串联类化合物及其药学上可接受的盐、对映异构体、非异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药；本发明基于SHP099为先导化合物，制备出一类末端为杂环串联的全新化合物，以解决目前SHP2抑制剂结构骨架单一等问题；本发明重要意义在于提供很多修饰位点，为后期结构改造提供基础。同时本发明的实施例证实了化合物对SHP2磷酸酶具有变构抑制作用，为后续开发SHP2磷酸酶抑制剂提供骨架支持。

Description

一种含杂环串联类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种含杂环串联类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
SHP2是一个在体内广泛存在的非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶，具有两个N末端Src同源性2结构域(N-SH2和C-SH2)、催化结构域(PTP)和C末端尾部。这两个SH2结构域控制SHP2的亚细胞定位和功能调节。作为血小板源性生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞因子(FGF)、白细胞介素-3(IL-3)、白血病抑制因子(LIF)及α-干扰素(INF-α)等生长因子的下游信号分子，SHP2参与RAS/MAPK通路、PI3K/AKT通路、JAK/STAT通路、JNK通路等在内的多条信号通路。因此，发现和寻找具有较好成药性的SHP2抑制剂逐渐成为工业界和学术界的一大热点研究领域。
发明内容
本发明需要解决的技术问题之一是提供一类末端为杂环串联的全新SHP2抑制剂，以解决目前SHP2抑制剂结构骨架单一等问题。
解决上述技术问题的方案如下：
一种如通式I所示的化合物，及其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、溶剂化物、多晶型物或前药
Figure BDA0003523234410000011
R1、R2和R3分别独立地为氢、卤素、氨基；
X为N或CH；
L为键、O或S；
Figure BDA0003523234410000012
独立地是单键或双键:
当
Figure BDA0003523234410000013
为双键时，Y1为N，Y2为CH；
当
Figure BDA0003523234410000014
为单键时，Y1为C＝O,Y2为NRa或CRbRc，其中Ra,Rb和Rc分别独立地为氢、C1-C3的烷基、C1-C3的羟烷基、C1-C3的烷氧基；
R4为
Figure BDA0003523234410000015
或
Figure BDA0003523234410000021
其中，n＝0或1；
所述的化合物，其特征在于所述化合物为如下结构式中任意一个：
Figure BDA0003523234410000022
Figure BDA0003523234410000031
。
一种药物组合物，其特征在于含有所述的杂环串联类化合物和药学可接受的辅料。
所述的药物组合物，其特征在于药物组合物制成片剂、胶囊剂、注射液或冻干粉剂。
所述的杂环串联类化合物、所述的药物组合物在制备治疗抗肿瘤药物、作为抗肿瘤药物的前药或作为抗肿瘤药物的中间体中应用。
有益效果
本发明首次公开一系列含有新骨架的含杂环串联类化合物，该类化合物为SHP2抑制剂，该类化合物具有一定抗肿瘤活性，为后续开发抗肿瘤药物提供支持。
具体实施方式
中间体3-氯-4-碘-2-吡啶胺(A1)的合成：
Figure BDA0003523234410000032
步骤一：2-氟-3-氯-4-碘吡啶(A1-2)的合成：
-78℃下，将正丁基锂(38mL,1.25eq)缓慢滴加到A1-1(10.00g,76.3mmol)的THF(75mL)溶液中。反应1h后缓慢滴加I2的THF(30mL)溶液。反应30min后监测。监测反应完全后，滴加饱和Na2SO3水溶液淬灭，浓缩除THF，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物A1-2(7.76g，收率41％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ7.77(dd,J＝5.2,0.9Hz,1H),7.67(d,J＝5.2Hz,1H).ESI-MS m/z:257.9[M+H]+.
步骤二：3-氯-4-碘-2-吡啶胺(A1)的合成
将NH3·H2O(38mL)缓慢滴加到A1-2(7.56g,29.4mmol)的DMSO(38mL)溶液中。加毕，80℃封管反应过夜。监测反应完全后，将反应体系倒入水(200mL)中搅拌30min，抽滤干燥得化合物A1(6.79g，收率91％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.57(d,J＝5.2Hz,1H),7.12(d,J＝5.2Hz,1H),5.05(s,2H).ESI-MS m/z:254.9[M+H]+.
中间体6-氯-3-(2,3-二氯丙基)吡嗪-2-氨基叔丁酯(B1)的合成：
Figure BDA0003523234410000041
步骤一：6-氯-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺(B1-2)的合成
将化合物B1-1(5.00g,24.0mmol,1.0eq)、2,3-二氯苯硼酸(5.04g,26.4mmol,1.1eq)、Pd(dppf)Cl2(350.1mg,2mol％)和K3PO4(10.18g,48.0mmol,2.0eq)置于200mL单口瓶中，将体系抽真空置换氮气，加入1,4-二氧六环(54mL)和水(6mL)于120℃油浴中反应过夜，监测至原料转化完全。硅藻土过滤，滤液浓缩，加入30mL乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠水溶液水洗3次，浓缩，柱层析纯化，得化合物B1-2(5.94g，收率91％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.03(s,1H),7.60(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),7.36(dd,J＝7.7,7.6Hz,1H),7.32(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),4.65(s,2H).ESI-MS m/z:274.1[M+H]+.
步骤二：6-氯-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-氨基叔丁酯(B1)的合成
将化合物B1-2(5.30g,19.4mmol)和DMAP(118.0mg,0.97mmol,0.05eq)置于200mL单口瓶中，加入二氯甲烷(50mL)，在0℃加入二碳酸二叔丁酯，加毕，移至室温反应2h，监测至原料转化完全。饱和氯化钠水溶液水洗3次(15mL×3)，有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物B1(7.50g，收率82％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.68(s,1H),7.57(d,J＝7.5Hz,1H),7.46–7.24(m,2H),1.37(s,18H).ESI-MS m/z:474.1[M+H]+.中间体B2的合成：
Figure BDA0003523234410000042
步骤一：6-氨基-3-甲基嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮(B2-2)的合成
将浓H2SO4(0.1mL)缓慢滴加到4-氨基-2,6-二羟基嘧啶(5.18g,40.8mmol)的HMDS(25mL)溶液中。130℃反应6h后，浓缩除HMDS。加入DMF(25mL)，碘甲烷(8.5mL,3.5eq)，室温反应过夜。监测反应完全后，滴加NaHCO3(a.q.)至无气泡产生，抽滤，滤饼水洗，干燥得化合物B2-2(3.60g，收率63％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ10.43(s,1H),6.23(brs,2H),4.59(s,1H),3.00(s,3H).
步骤二：6-氨基-5-碘-3-甲基嘧啶-2,4(1H，3H)-二酮(B2)的合成
将化合物B2-2(1.95g,13.83mmol)溶于DMF(14mL)和AcOH(44mL)中，加入NIS(3.73g,1.2eq)。室温反应2h，监测反应完全后，抽滤，滤饼水洗干燥，得中间体B2(3.06g,收率83％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),6.26(s,2H),3.10(s,3H).
中间体B3-A,B3-B的合成
Figure BDA0003523234410000051
步骤一：
0℃下，将NBS(23.3g)和Ts-OH(2.05g)加入到DCM(60mL)溶液中，搅拌10h，将化合物B3-1(10g)的DCM(120mL)溶液加入到体系中，50℃回流过夜，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得油状化合物B3-2(17.35g,crude)。
步骤二：
0℃下，将氢化钠(4.14g,103.4mmol)加入到化合物B3-2(16.76g,103.4mmol)的DMF(150mL)溶液中，室温反应1h后，0℃下缓慢加(15g,86.2mmol)，室温过夜。监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物B3-3(4.43g,15％over2 steps)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.37(dd,J＝9.7,2.7Hz,1H),7.26(d,J＝2.7Hz,1H),6.48(d,J＝9.7Hz,1H),4.47–4.37(m,1H),2.71–2.55(m,1H),2.49–2.20(m,4H),2.00–1.81(m,1H).
步骤三：
室温下，将Ti(OPr-i)4(8.88g,9.25mL)加入到化合物B3-3(4g,15.6mmol)的氨的甲醇溶液(20mL)中，反应4h后，缓慢加入硼氢化钠(886mg,1.5eq)室温反应3h。监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得先洗脱产物B3-A(1.04g,26％)，1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.61(d,J＝2.7Hz,1H),7.37(dd,J＝9.6,2.7Hz,1H),6.50(d,J＝9.6Hz,1H),5.07–4.88(m,1H),3.84–3.71(m,1H),2.24–1.44(m,2H).后洗脱产物B3-B(1.25g,31％)，1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.46(d,J＝2.7Hz,1H),7.33(dd,J＝9.6,2.7Hz,1H),6.50(d,J＝9.6Hz,1H),5.07–4.97(m,1H),3.60–3.49(m,1H),2.32–2.16(m,2H),2.03–1.68(m,4H).
中间体6-溴-3-(4-(4-丁氧基羰基)哌嗪-1-基)吡嗪-2-羧酸甲酯(B4)的合成：
Figure BDA0003523234410000061
将3,6-二溴吡嗪-2-甲酸甲酯(500.0mg,1.69mmol)、N-Boc哌嗪(346.2mg,1.1eq)及DIPEA(1.09g,5eq)溶于乙腈(8mL)，室温搅拌过夜。监测反应完全后，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物B4(498.6mg，收率74％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),3.97(s,3H),3.59–3.41(m,8H),1.48(s,9H).ESI-MS m/z:498.2[M+H]+.
中间体5-氯吡嗪-2-硫醇钠(B5)的合成：
Figure BDA0003523234410000062
步骤一：3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)丙酸乙酯(B5-1)的合成
将3-巯基丙酸乙酯(4.45mL,1.05eq)缓慢滴加到2,5-二氯吡嗪(5.00g,33.6mmol)和K2CO3(4.64g,1eq)的DMF(42mL)溶液中。室温反应4h。监测反应完全后，乙酸乙酯稀释，饱和食盐水水洗5次，有机相浓缩，柱层析分离得化合物B5-1(7.78g,收率94％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.39(d,J＝1.5Hz,1H),8.22(d,J＝1.5Hz,1H),4.17(q,J＝7.2Hz,2H),3.42(t,J＝7.0Hz,2H),2.75(t,J＝7.0Hz,2H),1.27(t,J＝7.2Hz,3H).ESI-MS m/z:247.0[M+H]+.
步骤二：5-氯吡嗪-2-硫醇钠(B5)的合成
将乙醇钠(2.24g,1.1eq)缓慢滴加到B5-1(7.38g,30mmol)的THF(100mL)溶液中。室温反应2h。监测反应完全后，加正己烷(100mL)打浆抽滤，固体干燥得化合物B5(5.13g，粗品)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.82(d,J＝1.3Hz,1H),7.77(d,J＝1.3Hz,1H).ESI-MS m/z:147.0[M+H]+.
中间体C1的合成：
Figure BDA0003523234410000071
0℃下，将甘氨酸甲酯盐酸盐(1eq)，HATU(1.1eq)，DIPEA(1.5eq)加到C1-1(5.00g,21.62mmol)的DCM溶液中，室温反应5h。TLC板监测反应完全后，CH2Cl2稀释，饱和食盐水水洗5次，有机相浓缩，柱层析分离得化合物C1-2(6.4g,收率98％)。ESI-MS m/z:303.1[M+H]+.
将HCl(30mL,2M in EtOAc)加入到化合物C1-2(80mg,0.11mmol)的EtOAc(20mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，抽滤除滤液，固体干燥得化合物C1-3(4.7g,90％)。ESI-MS m/z:203.1[M+H]+.
将DIPEA(3eq)加到化合物C1-3(4.70g,23.3mmol)的甲醇(70mL)溶液中，35℃反应过夜。TLC板监测至原料转化完全后，将反应液浓缩，加入EtOAc(20mL)打浆得化合物C1-4(5.8g,Crude)。ESI-MS m/z:171.1[M+H]+.
将LiAlH4(4eq)加到化合物C1-4(5.80g,34.1mmol)的THF(70mL)溶液中，70℃反应过夜。TLC板监测至原料转化完全后，饱和NH4Cl(5mL)缓慢加入。抽滤除固体，滤液浓缩得化合物C1-5(3.3g,Crude)。ESI-MS m/z:143.1[M+H]+.
将Cbz-Cl(0.6eq)，NaOH(20mL,2M in EtOAc)加到C1-5(3.3g,23.2mmol)的THF(20mL)溶液中，室温反应过夜。TLC板监测反应完全后，加入EtOAc(15mL)和水(10mL)萃取分液。合并有机层并用盐水(3×10mL)洗涤，有机相经Na2SO4干燥，减压蒸馏除去溶剂。残余物通过柱色谱纯化，得到化合物C1-6(330.0mg，15％over 3steps)。ESI-MS m/z:277.1[M+H]+.
0℃下，将邻苯二甲酰亚胺(1.5eq)和三苯基膦(1.5eq)加入到化合物C1-6(315.2mg,1.14mmol)的THF(4mL)中，氮气保护后，加入DEAD(1.5eq)的THF(2mL)溶液,加毕室温反应过夜。监测反应完全后，有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物C1-7(1.07g,Crude)。ESI-MS m/z:406.2[M+H]+.
将Pd/C(10％wt)加入到化合物C1-7(1.07g,2.64mmol)的甲醇(5mL)溶液中。将反应体系置换氢气后，室温搅拌过夜。监测反应完全后，抽滤，浓缩，柱层析纯化,得化合物C1(45.6mg,18％over 2steps)。1H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.86–7.70(m,4H),4.94–4.79(m,1H),3.40–2.11(m,11H).ESI-MS m/z:272.1[M+H]+.
中间体C2
Figure BDA0003523234410000081
的合成：
参照中间体C1的合成方法，得到C2。1H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.87–7.68(m,4H),4.98–4.84(m,1H),3.41–2.49(m,9H),2.23–2.13(m,1H),1.95–1.80(m,1H).ESI-MSm/z:272.1[M+H]+。
实施例1：
Figure BDA0003523234410000082
步骤一：
将苄溴(1.1eq)和碳酸钾(3eq)加入到化合物1-1(3g,16.8mmol)的乙腈(50mL)溶液中，80℃反应3h。TLC板监测至原料转化完全，萃取，柱层析纯化，得化合物1-2(3.74g,96％)。ESI-MS m/z:232.1[M+H]+.
步骤二：
将碳酸氢钠(3.6eq)和((1R，2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.1eq)加入到化合物1-2(1g,4.33mmol)的乙醇(15mL)溶液中，氮气保护，90℃回流5h。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物1-3(880.1mg,55％)。ESI-MS m/z:374.3[M+H]+.
步骤三：
将Pd/C(10％wt)和水合肼(2eq)加入到化合物1-3(700mg,1.87mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，80℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物1-4(420mg,85％)。ESI-MS m/z:284.2[M+H]+.
步骤四：
将化合物B1(0.66eq)和碳酸铯(2.5eq)加入到化合物1-4(180mg,0.63mmol)的DMSO(3mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物1-5(181.2mg，60％)。ESI-MS m/z:721.3[M+H]+.
步骤五：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物1-5(80mg,0.11mmol)的EtOAc(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物1(33mg,71％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.50(dd,J＝7.4,2.2Hz,1H),7.37–7.25(m,2H),4.24(s,2H),3.69–3.47(m,4H),2.87–2.65(m,3H),2.59–2.46(m,2H),2.23–2.11(m,1H),2.06–1.94(m,4H),1.88–1.76(m,2H),1.30–1.07(m,4H).ESI-MS m/z:421.2[M+H]+。
实施例2：
Figure BDA0003523234410000091
步骤一：
将Boc酸酐(3.16g,14.5mmol)加入到化合物2-1(2.0g,13.2mmol)的DCM(30mmol)溶液中，滴加三乙胺(2.9g,29mmol),室温过夜。监测反应完全后，DCM萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物2-2(3.14g,粗品)。ESI-MS m/z:216.2[M+H]+.
步骤二：
将邻苯二甲酰亚胺(2.98g,20.25mmol)和三苯基膦(5.3g,20.25mmol)加入到化合物2-2(2.9g,13.5mmol)的THF(40mL)中，氮气保护，0℃下加入DEAD(3.5g,20.25mmol)的THF,15min后移至室温，反应过夜。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物2-3(3.15g,68％)。ESI-MS m/z:345.2[M+H]+.
步骤三：
将水合肼(585mg,11.7mmol)加入到化合物2-3(3.1g,9.01mmol)的甲苯(20mL)溶液中，80℃回流过夜。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物2-4(1.09g,56％)。ESI-MS m/z:215.2[M+H]+.
步骤四：
将碳酸氢钠(1.79g,21.30mmol)和化合物1-2(1.24g,4.63mmol)加入到化合物2-4(1.09g,5.09mmol)的乙醇(15mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物2-5(1.18g,62％)。ESI-MS m/z:374.3[M+H]+.
步骤五：
将Pd/C(200mg,20％wt)和水合肼(295mg,5.9mmol)加入到化合物2-5(1.1g,2.95mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，80℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物2-6(0.99g,粗品)。ESI-MS m/z:284.2[M+H]+.
步骤六：
将化合物B1(300mg，0.634mmol)和碳酸铯(310mg,0.95mmol)加入到化合物2-6(197mg，0.697mmol)的DMSO(3mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物2-7(215mg，47％)。ESI-MS m/z:721.2[M+H]+.
步骤七：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物2-7(215mg,mmol)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物2(91.2mg，73％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.50(dd,J＝7.4,2.3Hz,1H),7.35–7.28(m,2H),4.24(s,2H),3.58(t,J＝5.1Hz,4H),3.41–3.35(m,1H),2.76–2.54(m,4H),2.12–2.01(m,1H),1.88–1.70(m,3H),1.56–1.33(m,4H),1.31–1.12(m,1H).ESI-MS m/z:421.2[M+H]+。
实施例3:
Figure BDA0003523234410000111
步骤一：
将化合物2-6(334.4mg,1.18mmol,)、BOP(990.7mg,2.24mmol)和DBU(1.2g,7.84mmol)溶于DMF(3mL)中，室温反应过夜,TLC板监测至原料转化完全，加EtOAc(15mL)，有机相用饱和氯化钠溶液(5mL)洗几次，柱层析纯化，得化合物3-2(247mg，42％)。ESI-MS m/z:533.2[M+H]+.
步骤二：
将2,3-二氯苯硫醇(107.4mg,0.6mmol)、CuI(1.5mg,0.007mmol)、TMEDA(1.9mg,0.016mmol)和磷酸钾(254.7mg,1.2mmol)溶于化合物3-2(212.4mg,0.4mmol)的Dioxane(2.5mL)溶液中，氮气保护，100℃反应过夜。TLC板监测至原料转化完全，抽滤除去固体，柱层析纯化，得化合物3-3(68.4mg,29％)。ESI-MS m/z:583.2[M+H]+.
步骤三：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物3-3(53.7mg,0.09mmol)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物3(43.1mg,97％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.19(dd,J＝7.8Hz,1.2Hz,1H),7.02(t,J＝7.8Hz,1H),6.81(dd,J＝7.8Hz,1.2Hz,1H),5.30(s,2H),3.44(s,3H),3.40–3.23(m,5H),2.79–2.57(m,4H),2.15–2.05(m,1H),1.89–1.69(m,3H),1.51–1.33(m,4H),1.30–1.16(m,1H).ESI-MS m/z:406.2[M+H]+.ESI-MS m/z:483.1[M+H]+。
实施例4：
Figure BDA0003523234410000121
步骤一：
将Boc酸酐(3.6g,16.3mmol)和盐酸(1mL)加入到化合物4-1(1.53g，13.6mmol)的甲醇(23mL)溶液中，滴加4M的HCl异丙醇溶液1.7mL,室温过夜。监测反应完全后，萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得化合物4-2(415mg,14％)。ESI-MS m/z:201.2[M+H]+.
步骤二：
将碳酸氢钠(697.2mg,8.3mmol)和化合物1-2(483mg,1.8mmol)加入到化合物4-2(380mg,1.8mmol)的乙醇(5.2mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物4-3(506.1mg,65％)。ESI-MS m/z:374.3[M+H]+.
步骤三：
将Pd/C(96mg,20％wt)和水合肼(130mg,2.6mmol)加入到化合物4-3(480mg,1.3mmol)的乙醇(4mL)溶液中，氮气保护，80℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物4-4(267.7mg,73％)。ESI-MS m/z:284.2[M+H]+.
步骤四：
将化合物B1(200mg,0.42mmol)和碳酸铯(205.4mg,0.63mmol)加入到化合物4-4(133.5mg，0.42mmol)的DMSO(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物4-5(129.9mg，43％)。ESI-MS m/z:721.3[M+H]+.
步骤五：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物4-5(106.4mg,0.15mmol)的EtOAc(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物4(55mg,89％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.50(dd,J＝7.4,2.2Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),4.23(s,2H),3.70–3.48(m,4H),2.88–2.76(m,2H),2.75–2.64(m,1H),2.59–2.47(m,2H),2.23–2.11(m,1H),2.06–1.96(m,1H),1.74–1.63(m,1H),1.29–1.05(m,4H).ESI-MS m/z:421.2[M+H]+。
实施例5：
Figure BDA0003523234410000131
步骤一：
将Boc酸酐(1.5g,6.82mmol)加入到化合物5-1(1.0g,6.22mmol)的DCM溶液中，滴加三乙胺(752.9mg,7.44mmol),室温过夜。监测反应完全后，EtOAc萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物5-2(1.9g,粗品)。ESI-MS m/z:250.1[M+H]+.
步骤二：
将邻苯二甲酰亚胺(1.59g,10.8mmol)和三苯基膦(2.84g,10,83mmol)加入到化合物5-2(1.8g,7.22mmol)的THF(18mL)中，氮气保护，0℃下加入DIAD(2.19g,10.83mmol)的THF(4mL),15min后移至室温，反应过夜。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物5-3(1.8g,67％)。ESI-MS m/z:379.2[M+H]+.
步骤三：
将水合肼(480mg,9.6mmol)加入到化合物5-3(1.8g,4.8mmol)的甲苯(14mL)溶液中，80℃回流过夜。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物5-4(637mg,54％)。ESI-MS m/z:249.2[M+H]+.
步骤四：
将碳酸氢钠(1.04g，12.42mmol)和化合物1-2(725.2mg,2.7mmol)加入到化合物5-4(663mg,2.7mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物5-5(768.3mg,70％)。ESI-MS m/z:407.2[M+H]+.
步骤五：
将Pd/C(143.04mg,20％wt)和水合肼(575mg,11.5mmol)加入到化合物5-5的乙醇(8mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物5-6(559.7mg,98％)。ESI-MS m/z:317.2[M+H]+.
步骤六：
将化合物B1(146.2mg，0.46mmol)和碳酸铯(205.3mg,0.63mmol)加入到化合物5-6(200mg，0.42mmol)的DMSO(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物5-7(184.4mg,58％)。ESI-MS m/z:755.3[M+H]+.
步骤七：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物5-7(100mg,0.132mmol)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物5(47.8mg，80％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.61(s,1H),7.51(dd,J＝7.4,2.2Hz,1H),7.42–7.37(m,1H),7.36–7.28(m,2H),7.26–7.19(m,3H),4.31(d,J＝5.1Hz,1H),4.26(s,2H),3.67(t,J＝4.7Hz,4H),3.04–2.86(m,3H),2.83–2.58(m,4H).ESI-MS m/z:455.1[M+H]+。
实施例6：
Figure BDA0003523234410000141
步骤一：
将Boc酸酐(1.1eq)加入到化合物6-1(0.96g,6.98mmol)的DCM(15mL)溶液中，滴加三乙胺(2.2eq),室温过夜。监测反应完全后，EtOAc萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物6-2(1.6g,粗品)。ESI-MS m/z:202.1[M+H]+.
步骤二：
将邻苯二甲酰亚胺(1.5eq)和三苯基膦(1.5eq)加入到化合物6-2(1.4g,6.9mmol)的THF(20mL)中，氮气保护，0℃下加入DEAD(1.5eq)的THF(2mL),15min后移至室温，反应过夜。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物6-3(1.73g,75％)。ESI-MS m/z:331.2[M+H]+.
步骤三：
将水合肼(1.3eq)加入到化合物6-3(1.7g,5.15mmol)的甲苯(15mL)溶液中，80℃回流过夜。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物6-4(1.005g,97％)。ESI-MSm/z:201.2[M+H]+.
步骤四：6-5的合成
将碳酸氢钠(4.6eq)和化合物1-2(1eq)加入到化合物6-4(1g,5mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物6-5(1.07g,59％)。ESI-MS m/z:360.3[M+H]+.
步骤五：
将Pd/C(20％wt)和水合肼(2eq)加入到化合物6-5(1g,2.78mmol)的乙醇(9mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物6-6(550mg,73％)。ESI-MS m/z:270.2[M+H]+.
步骤六：
将化合物B1(0.83eq)和碳酸铯(1.5eq)加入到化合物6-6(135mg,0.5o mmol)的DMSO(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物6-7(207mg,84％)。ESI-MS m/z:707.2[M+H]+.
步骤七：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物6-7(100mg,0.132mmol)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物6(42.6mg,79％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.50(dd,J＝7.3,2.3Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),4.26(s,2H),3.61(t,J＝5.0Hz,4H),3.43(t,J＝4.3Hz,1H),2.72–2.50(m,4H),2.39–2.26(m,1H),1.97–1.55(m,6H).ESI-MS m/z:407.2[M+H]+。
实施例7：
Figure BDA0003523234410000161
步骤一：
将Boc酸酐(1.1eq)加入到化合物7-1(1g，8.68mmol)的DCM(15mL)溶液中，滴加三乙胺(1.2eq),室温过夜。监测反应完全后，EtOAc萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩得化合物7-2(2.1g,粗品)。ESI-MS m/z:216.2[M+H]+.
步骤二：
将邻苯二甲酰亚胺(1.5eq)和三苯基膦(1.5eq)加入到化合物7-2(1.4g,6.51mmol)的THF(20mL)中，氮气保护，0℃下加入DEAD(1.5eq)的THF(2mL),15min后移至室温，反应过夜。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物7-3(1.26g,56％)。ESI-MS m/z:345.2[M+H]+.
步骤三：
将水合肼(3eq)加入到化合物7-3(1.26g,3.64mmol)的甲苯(15mL)溶液中，80℃回流2h。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物7-4(757mg,99％)。ESI-MS m/z:215.2[M+H]+.
步骤四：
将碳酸氢钠(4.6eq)和化合物1-2(1.1eq)加入到化合物7-4(757mg,3.6mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物7-5(0.85g,74％)。ESI-MS m/z:374.2[M+H]+.
步骤五：
将Pd/C(20％wt)和水合肼(2eq)加入到化合物7-5(0.75g,2mmol)的乙醇(9mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物7-6(620mg,crude)。ESI-MS m/z:284.2[M+H]+.
步骤六：
将化合物B1(1eq)和碳酸铯(1.5eq)加入到化合物7-6(143mg,0.5mmol)的DMSO(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物7-7(116.4mg，49％)。ESI-MS m/z:721.3[M+H]+.
步骤七：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物7-7(116.4mg,0.25mmol)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物7(42.6mg)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.50(dd,J＝7.4,2.2Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),4.25(s,2H),3.70–3.53(m,4H),3.45–3.39(m,1H),2.76–2.56(m,4H),2.14–2.05(m,1H),1.94–1.72(m,4H),1.54–1.40(m,3H),1.32–1.18(m,1H).ESI-MS m/z:421.2[M+H]+。
实例8：
Figure BDA0003523234410000171
步骤一：
将Boc酸酐(6.3g,28.93mmol)和加入到化合物8-1(3g，26.3mmol)的甲醇(50mL)溶液中，滴加三乙胺3.98g，室温过夜。监测反应完全后，萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化得化合物8-2(1.79g,32％)。ESI-MS m/z:215.2[M+H]+.
步骤二：
将碳酸氢钠(1.3g，15.37mmol)和化合物1-2(1g,4.27mmol)加入到化合物8-2(1g,4.70mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物8-3(1.32g,80％)。ESI-MS m/z:374.2[M+H]+
步骤三：
将Pd/C(165mg,20％wt)和水合肼(187mg,3.74mmol)加入到化合物8-3(700mg,1.87mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，80℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物8-4(320mg,60％)。ESI-MS m/z:284.2[M+H]+.
步骤四：
将化合物B1(209mg，0.44mmol)和碳酸铯(215mg,0.66mmol)加入到化合物8-4(150mg，0.53mmol)的DMSO(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物8-5(136mg，43％)。ESI-MS m/z:721.3[M+H]+.
步骤五：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物8-5(136mg,0.15mmol)的EtOAc(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物8(56mg,89％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.50(dd,J＝7.4,2.3Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),4.24(s,2H),3.58(t,J＝5.1Hz,4H),3.42–3.36(m,1H),2.75–2.54(m,4H),2.08(dt,J＝11.9,3.4Hz,1H),1.92–1.81(m,2H),1.58–1.14(m,6H).ESI-MS m/z:421.2[M+H]+。
实施例9：
Figure BDA0003523234410000181
步骤一：
将中间体A1(3.00g,11.8mmol)、中间体B5(1.99g,1eq)、Pd2(dba)3(216.3mg,2mol％)、XantPhos(273.2mg,4mol％)、DIPEA(3.04g，2eq)置于封管中,氮气保护后加入无水二氧六环(50mL)于100℃反应过夜。监测反应完全后，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物9-1(2.33g，收率72％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δ8.52(d,J＝1.5Hz,1H),8.36(d,J＝1.5Hz,1H),7.90(d,J＝5.2Hz,1H),6.58(d,J＝5.2Hz,1H),5.04(brs,2H).ESI-MS m/z:273.0[M+H]+.
步骤二：
将化合物9-1(100.0mg，0.37mmol)和化合物2-6(124.5mg，0.44mmol)溶于DIPEA：NMP(1：1，2mL)溶液中，95℃反应过夜，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物9-2(78.5mg,41％)。ESI-MS m/z:520.2[M+H]+.
步骤三：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物9-2(65.1mg,0.13mmol)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物9(20.2mg，38％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝1.3Hz,1H),8.20(d,J＝1.3Hz,1H),7.69(d,J＝5.4Hz,1H),6.01(d,J＝5.4Hz,1H),4.88(s,2H),3.71–3.64(m,4H),3.41–3.35(m,1H),2.77–2.59(m,4H),2.12–2.04(m,1H),1.87–1.76(m,3H),1.51–1.38(m,4H),1.26–1.17(m,1H).ESI-MS m/z:420.2[M+H]+。
实例10：
Figure BDA0003523234410000191
步骤一：
将Boc酸酐(1.1eq)加入到化合物10-1(1g,3.89mmol)的DCM(15mL)溶液中，滴加三乙胺(1.2eq),室温过夜。监测反应完全后，EtOAc萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化，得化合物10-2(606.1mg,41％)。ESI-MS m/z:357.1[M+H]+.
步骤二：
将Bpin(1.5eq)，Pd(dppf)Cl2(5mol％)和CH3COOK(2.5eq)加入到化合物10-2(300mg，0.84mmol)的无水二氧六环(3mL)液体中，90℃反应1.5h，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物10-3(141.2mg，42％)。ESI-MS m/z:405.2[M+H]+.
步骤三：
将Pd(dppf)Cl2(5mol％),Na2CO3(2eq)和中间体B1(1eq)加入到化合物10-3(141.2mg)的二氧六环和水的混合溶液中，90℃反应1.5h，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物10-4(106.9mg，43％)。ESI-MS m/z:716.3[M+H]+.
步骤四：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物10-4(79mg)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物10(43.8mg,95％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.36(d,J＝2.4Hz,1H),8.30(s,1H),7.97(dd,J＝9.5,2.5Hz,1H),7.62–7.55(m,1H),7.41–7.34(m,2H),6.68(d,J＝9.5Hz,1H),5.14–5.02(m,1H),4.64(s,2H),3.90–3.79(m,1H),2.33–2.16(m,2H),2.14–1.96(m,2H),1.73–1.52(m,2H).ESI-MS m/z:416.1[M+H]+。
实例11：
Figure BDA0003523234410000201
步骤一：
将Boc酸酐(1.1eq)加入到化合物11-1(1.2g,4.7mmol)的DCM(15mL)溶液中，滴加三乙胺(1.2eq),室温过夜。监测反应完全后，EtOAc萃取，无水硫酸钠干燥，柱层析纯化，得化合物11-2(1.12mg,67％)。ESI-MS m/z:357.1[M+H]+.
步骤二：
将Bpin(1.5eq)，Pd(dppf)Cl2(5mol％)和CH3COOK(2.5eq)加入到化合物11-2(450mg，1.26mmol)的无水二氧六环(5mL)液体中，90℃反应1.5h，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物11-3(243.7mg，48％)。ESI-MS m/z:405.2[M+H]+.
步骤三：
将Pd(dppf)Cl2(5mol％),Na2CO3(2eq)和中间体B1(1eq)加入到化合物11-3(120mg，0.3mmol)的二氧六环和水的混合溶液中，90℃反应1.5h，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物11-4(91.3mg，41％)。ESI-MS m/z:716.3[M+H]+.
步骤四：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物11-4(91.3mg)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物11(53.1mg,99％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.28(s,1H),8.20(d,J＝2.5Hz,1H),7.93(dd,J＝9.5,2.5Hz,1H),7.64–7.55(m,1H),7.42–7.34(m,2H),6.69(d,J＝9.5Hz,1H),5.06–4.94(m,1H),4.59(s,2H),3.49(q,J＝8.4Hz,1H),2.39–2.12(m,2H),1.99–1.81(m,3H),1.57–1.49(m,1H).ESI-MS m/z:416.1[M+H]+。
实施例12：
Figure BDA0003523234410000211
步骤一：
将化合物2-6(131mg，0.46mmol)和碳酸钾(127.1mg，0.92mmol)加入到化合物12-1(132.5mg，0.46mmol)的NMP(2mL)溶液中，100℃反应过夜，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物12-2(79.1mg,38％)。ESI-MS m/z:535.2[M+H]+.
步骤二：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物12-2(65mg，0.143mmol)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物12(43.2mg，85％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.63(d,J＝5.4Hz,1H),7.60(s,1H),6.27(s,2H),6.18(s,2H),5.72(d,J＝5.4Hz,1H),3.59–3.51(m,4H),3.34–3.24(m,1H),2.63–2.51(m,4H),2.01–1.92(m,1H),1.74–1.09(m,8H).ESI-MS m/z:435.2[M+H]+。
实施例13：
Figure BDA0003523234410000221
步骤一：
将(PhO)2P(＝O)N3(1.13eq)，Et3N(1.6eq),加入到化合物13-1(2g,8.22mmol)的甲苯(40mL)溶液中，室温反应3h。再加入苯甲醇(2eq)，100℃反应过夜。监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物13-2(2.53g,88％)。ESI-MS m/z:349.2[M+H]+.
步骤二：
将Pd/C(20％wt)加入到化合物13-2(1.5g,4.3mmol)的甲醇(20mL)溶液中，氢气条件下室温反应过夜，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物13-3(613.2mg,66％)。ESI-MS m/z:215.2[M+H]+.
步骤三：
将碳酸氢钠(1.1eq)和化合物1-2(1.1eq)加入到化合物13-3(600mg,2.3mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，85℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物13-4(730mg，80％)。ESI-MS m/z:374.3[M+H]+.
步骤四：
将Pd/C(20％wt)和水合肼(4eq)加入到化合物13-4(690mg,1.85mmol)的乙醇(10mL)溶液中，氮气保护，80℃回流过夜。监测反应完全后抽滤浓缩，柱层析纯化,得化合物13-5(320mg,62％)。ESI-MS m/z:284.2[M+H]+。
步骤五：
将化合物B1(1eq)和碳酸铯(1.5eq)加入到化合物13-5(119.1mg，0.42mmol)的DMSO(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(10mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(3mL×6)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物13-6(170.3mg,56％)。ESI-MS m/z:721.3[M+H]+.
步骤六：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物13-6(79mg)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物13(45mg，95％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.50(dd,J＝7.4,2.3Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),4.24(s,2H),3.60(t,J＝5.1Hz,4H),2.81–2.61(m,5H),2.49–2.37(m,1H),2.11–2.02(m,1H),1.90–1.71(m,2H),1.40–0.92(m,5H).ESI-MS m/z:421.2[M+H]+。
实施例14：
Figure BDA0003523234410000231
步骤一：
将3,6-二溴吡嗪-2-甲酸甲酯(800.0mg,2.7mmol)、化合物2-6(1.1eq)及DIPEA(5eq)溶于乙腈(12mL)，室温搅拌过夜。监测反应完全后，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物14-1(1.22g,91％)。ESI-MS m/z:498.2[M+H]+.
步骤二：
将2-氨基-3-氯吡啶-4-硫代硫酸钠(1.5eq),Pd2(dba)3(2mol％)、XantPhos(6mol％)、DIPEA(3eq)加入到化合物14-1(1.1g,2.21mmol)的无水二氧六环(10mL)溶液中,氮气保护后于100℃反应过夜。监测反应完全后，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物14-2(1.0g,85％)。ESI-MS m/z:578.2[M+H]+.
步骤三：
将DIBAL-H(4eq)加入到化合物14-2(900mg,1.56mmol)的DCM(15mL)溶液中，室温反应过夜。监测反应完全后，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析分离得化合物14-3(137mg,15％)。ESI-MS m/z:550.2[M+H]+.
步骤四：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物14-3(65mg)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物14(12mg,23％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.28(s,1H),7.70(d,J＝5.4Hz,1H),6.05(d,J＝5.4Hz,1H),5.01(s,2H),4.67(s,2H),3.51–3.30(m,4H),2.82–2.59(m,4H),2.20–2.09(m,1H),1.98–1.72(m,3H),1.59–1.14(m,6H).ESI-MS m/z:450.2[M+H]+。
实施例15：
Figure BDA0003523234410000241
步骤一：
将化合物9-1(64.1mg，0.23mmol)和化合物2-6(75.0mg，0.23mmol)溶于DIPEA：NMP(1：1，1.5mL)溶液中，95℃反应过夜，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物15-1(58.5mg,45％)。ESI-MS m/z:554.2[M+H]+.
步骤二：
将HCl(3mL,2M in EtOAc)加入到化合物15-1(65mg)的EtOAc(1mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物15(12mg,23％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.29(d,J＝1.3Hz,1H),8.23(d,J＝1.3Hz,1H),7.70(d,J＝5.4Hz,1H),7.42–7.36(m,1H),7.26–7.20(m,3H),6.03(d,J＝5.4Hz,1H),4.89(s,2H),4.31(d,J＝4.9Hz,1H),3.82–3.73(m,4H),3.05–2.88(m,3H),2.86–2.76(m,2H),2.72–2.63(m,2H).ESI-MS m/z:454.2[M+H]+。
实施例16：
Figure BDA0003523234410000242
步骤一：
将化合物C1(95.1mg,0.35mmol)和碳酸铯(228.2mg,0.7mmol)加入到化合物B1(165.6mg,0.35mmol)的DMSO(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全,加入乙酸乙酯(30mL)，饱和氯化钠水溶液水洗多次(6×3mL)，合并有机相，浓缩，柱层析纯化,得化合物16-2(91.2mg，37％)。ESI-MS m/z:709.2[M+H]+.
步骤二：
将HCl(2mL,2M in EtOAc)加入到化合物16-2(91.2mg,0.13mmol)的EtOAc(2mL)溶液中，室温过夜。TLC板监测至原料转化完全，用水萃取，水相用饱和碳酸钠溶液调碱，再用EtOAc萃水相，合并有机相，浓缩得化合物16-3(58.2mg,粗品)。
步骤三：
将水合肼(3eq)加入到化合物16-3(58.2mg,0.12mmol)的乙醇(1mL)溶液中，60℃反应3h。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物16(20.2mg,41％over2steps)。ESI-MS m/z:379.1[M+H]+。
实施例17：
Figure BDA0003523234410000251
步骤一：
将化合物C1(45.6mg，0.17mmol)和碳酸钾(34.8mg，0.25mmol)加入到化合物12-1(53.9mg，0.19mmol)的NMP(2mL)溶液中，95℃反应过夜，监测反应完全后，萃取，柱层析纯化，得化合物17-1(30.0mg,34％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.88–7.69(m,5H),7.66(s,1H),6.05(d,J＝5.4Hz,1H),4.92(brs,2H),4.84(brs,2H),4.49–4.41(m,1H),4.28–4.20(m,1H),3.46–3.39(m,1H),3.36–2.99(m,3H),2.78–2.68(m,1H),2.50–2.15(m,5H).ESI-MS m/z:523.1[M+H]+.
步骤二：
将水合肼(3eq)加入到化合物17-1(30.0mg,0.057mmol)的乙醇(1mL)溶液中，60℃反应3h。监测反应完全后有机相浓缩，柱层析纯化,得化合物16(14.8mg,66％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.67–7.62(m,2H),6.28(brs,2H),6.19(brs,2H),5.73(d,J＝5.3Hz,1H),4.49–4.40(m,1H),4.34–4.24(m,1H),3.57–3.33(m,1H),3.07–2.59(m,4H),2.33–1.86(m,4H),1.20–1.07(m,1H).ESI-MS m/z:393.1[M+H]+。
实施例18
Figure BDA0003523234410000252
的合成：
参照实施例17的合成方法，得到实施例18。1H NMR(300MHz,Chloroform-d)δ7.70(d,J＝5.4Hz,1H),7.64(s,1H),6.03(d,J＝5.4Hz,1H),4.87(brs,2H),4.84(brs,2H),4.47–4.39(m,1H),4.33–4.22(m,1H),3.73–3.63(m,1H),3.53–3.45(m,1H),3.13–3.00(m,2H),2.73–2.62(m,1H),2.41–2.27(m,2H),2.00–1.83(m,2H),1.64–1.55(m,1H).ESI-MS m/z:393.1[M+H]+。
实施例19
Figure BDA0003523234410000261
的合成：/>
参照实施例17的合成方法，得到实施例19。H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝1.4Hz,1H),8.31(d,J＝1.4Hz,1H),7.65(d,J＝5.4Hz,1H),6.36(brs,2H),5.80(d,J＝5.4Hz,1H),4.60–4.33(m,1H),4.41(d,J＝12.9Hz,1H),3.57–3.46(m,1H),3.12–2.69(m,4H),2.37–1.95(m,4H),1.29–1.18(m,1H).ESI-MS m/z:378.1[M+H]+。
实施例20体外SHP2酶水平活性测试
对上述实施例中化合物的SHP2酶水平活性进行测试，具体操作如下：
4.1化合物配制
化合物溶解在100％DMSO中，配制成30mM储存液，于-20度冰箱避光保存。
4.2SHP2反应过程
(1)配制1×REtOAcctionBuffer。
(2)化合物浓度梯度的配制：受试化合物测试起始浓度为30μM，3倍稀释，10个浓度，单孔测试。在384source板中稀释成100倍终浓度的100％DMSO溶液，用Precision 3倍稀释化合物，10个浓度。使用分液器Echo 550向目的板384板中转移250nL 100倍终浓度的化合物。正对照加入250nL DMSO，负对照加入250nL 1mM SHP099。
(3)用1×REtOAcctionBuffer配制5倍终浓度的激活肽溶液，分别加入5μL到反应板中，
1000rpm离心1min。
(4)用1×REtOAcctionBuffer配制2.5倍终浓度的酶溶液，分别加入10μL到反应板中，1000rpm离心1min，室温孵育60分钟。
(5)用1×REtOAcctionBuffer配制2.5倍终浓度的底物溶液，分别加入10μL到反应板中，1000rpm离心1min，室温孵育20分钟。
(6)用EnSight读取Ex355/Em460荧光数值
4.3数据分析
计算公式
Figure BDA0003523234410000271
其中：RFU：样品的荧光值；MEtOAcn(NC)：含10μM SHP099的对照孔荧光值均值；MEtOAcn(PC)：阳性对照孔荧光值均值。
拟合量效曲线以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。
计算公式是Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
具体结果如表所示：
Figure BDA0003523234410000272
Figure BDA0003523234410000281
A<500nM，500nM≤B≤1000nM，C>1000nM。
实验结论：以上数据显示，本发明实施例化合物对SHP2磷酸酶具有变构抑制作用。
化合物体外抗增殖活性
实施例21细胞毒性实验
1、实验步骤
(1)PBS溶液进行高压灭菌，置于冰箱4℃保存。
(2)称量胰蛋白酶和胰酶消化液，加入超纯水充分溶解，用微孔过滤器过滤得液体，置于冰箱-20℃保存。
(3)分别称取培养基粉和NaHCO3，加入超纯水充分溶解，加入10％双抗，用微孔滤膜过滤得培养液，置于冰箱4℃保存，待使用前加入10％胎牛血清。
(4)将NCI-H358细胞从液氮罐中取出，立刻置于37摄氏度恒温水浴锅中，摇晃使其融化，再将细胞倒入培养瓶中，加入培养液(含10％胎牛血清)稀释。将稀释后的培养基转入离心管中，1000r/min离心5分钟，舍弃上清液，再加入新鲜的培养基吹打混匀，移入培养瓶中培置于5％CO2、37℃培养箱中培养。待细胞贴壁快铺满瓶底时开始进行传代，加入少量新鲜的培养基(含10％胎牛血清)终止消化，倒掉培养瓶中的液体，PBS洗两遍，加入新鲜培养基吹打混匀，均分到两个培养瓶中继续培养。
(5)取对数期细胞，倒掉旧培养基，加入胰蛋白酶溶液消化3分钟，加入含10％胎牛血清的新鲜培养基终止消化，将溶液转移至离心管，1000r/min离心5分钟，舍弃上清液。加入培养基将其配制成细胞悬浊液，进行细胞计数。计数完成后，按照每孔5000-10000个细胞浓度将细胞植于96孔板中。将铺好细胞的96孔板置于37℃、5％CO2培养箱中继续培养24h。用培养基将药物梯度稀释为90μmol/L,30μmol/L,10μmol/L,3.3μmol/L,1.1μmol/L,0.37μmol/L随后将它们加入到96孔板中，每孔100μL，每个浓度设置三个复孔。对照组加入相应浓度的含溶媒的培养基，调零孔加入相同体积的空白培养基，置于5％CO2、37℃培养箱孵育3天，每两天更换一次培养基。每孔加入20μL MTT(5mg/mL)，混合均匀后，于5％CO2、37℃培养箱避光培养4h。将96孔板中的液体移除，每孔加入150μL DMSO，置于微型振荡器上震荡，使底部的结晶完全溶解。随后将96孔板放入酶标仪中检测，于490nm处测定吸光度。
2、数据处理
绘制曲线并计算药物对细胞的抑制率及IC50。
抑制率＝[(对照组平均OD值-实验组平均OD值)/(对照组平均OD值-空白对照组平均OD值)]×100％。
3、实验结果
化合物对非小细胞肺癌细胞株NCI-H358细胞的抑制活性如下：
化合物编号 抑制率(10μM) 抑制率(50μM)
2 41.8％ 53.1％
3 39.5％ 60.0％
5 58.2％ 60.2％
14 16.4％ 53.9％
17 6.64％ 26.5％
SHP099 -3％ 41％
实验结论：以上数据显示，本发明实施例化合物对NCI-H358细胞的增殖具有良好的抑制作用。相比较SHP099而言，本发明实施例5具备新颖的结构和更优越的活性。

Claims (5)

1.一种如通式I所示的化合物，及其药学上可接受的盐、对映异构体、非对映异构体、互变异构体或多晶型物
Figure FDA0004223190630000011
R1、R2和R3分别独立地为氢、卤素、氨基；
X为N或CH；
L为键、O或S；
Figure FDA0004223190630000015
独立地是单键或双键：
当
Figure FDA0004223190630000016
为双键时，Y1为N，Y2为CH；
当
Figure FDA0004223190630000017
为单键时，Y1为C＝O,Y2为NRa或CRbRc，其中Ra、Rb和Rc分别独立地为氢、C1-C3的烷基、C1-C3的羟烷基、C1-C3的烷氧基；
R4为
Figure FDA0004223190630000012
Figure FDA0004223190630000013
其中，n＝0或1。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于所述化合物为如下结构式中任意一个：
Figure FDA0004223190630000014
Figure FDA0004223190630000021
。
3.一种药物组合物，其特征在于含有如权利要求1所述的化合物和药学可接受的辅料。
4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于药物组合物制成片剂、胶囊剂、注射液或冻干粉剂。
5.如权利要求1或2所述的化合物、权利要求3或4所述的药物组合物在制备治疗抗肿瘤药物中应用。
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