KR100531586B1 - 세포부착억제제 - Google Patents

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피. 아담스 스티븐
씨. 카스트로 알프레도
엔. 짐머만 크레이그
헤르난 쿠에르보 줄리오
리 웬-청
이. 하몬드 찰스
베스 카터 마리
지. 앨름퀴스트 로날드
리 엔싱거 캐롤
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바이오겐 아이덱 엠에이 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 세포 부착 및 세포 부착 매개 병리의 억제와 방지에 유용한 신규 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 세포 부착 및 세포 부착-매개 병리의 억제와 방지를 위한, 이들 화합물을 포함하는 약학 제제와 그들을 이용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 화합물과 약학 조성물은 치료 또는 예방 제제로 이용될 수 있다. 그들은 많은 염증 및 자가면역 질병의 치료에 특히 적합하다.

Description

세포 부착 억제제
본 발명은 세포 부착 및 세포 부착에 의해 매개되는 병리의 억제와 예방에 유용한 신규 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이들 화합물을 포함하는 약학적 제제와 세포 부착 및 세포 부착에 의해 매개되는 병리의 억제와 예방을 위해 이들을 이용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 화합물과 약학 조성물은 치료제 또는 예방제로 이용될 수 있다. 그들은 특히 많은 염증 및 자가면역 질병의 치료에 적합하다.
세포 부착은 세포가 서로 연합하여, 특정 표적으로 이동하거나 세포외 기질내에 위치하는 과정이다. 세포 부착은 많은 생물학적 현상의 기본 기작 중의 하나를 구성한다. 예를 들어, 세포 부착은 조혈세포가 내피세포에 부착하여 혈관으로부터 손상 부위로 이동하도록 한다. 이처럼, 세포 부착은 포유 동물에서 염증과 면역 반응같은 병리에서 역할을 한다.
세포 부착의 분자적 기초에 대한 연구 결과 다양한 세포 표면 거대분자(세포 부착 분자 또는 수용체로 총칭함)가 세포-세포 및 세포-기질간 상호작용을 매개함이 밝혀졌다. 예를 들어, "인테그린(integrins)"으로 불리는 수퍼패밀리(superfamily)의 단백질은 조혈 세포와 그들의 미세환경 사이의 부착 상호 작용에서 주된 매개자이다(M.E. Hemler, "VLA Proteins in the Integrin Family: Structures, Functions, and Their Role on Leukocytes.", Ann. Rev. Immunol., 8, p.365(1990)). 인테그린은 α와 β로 불리는 두 단위체로 이루어진 비공유성 이종이량 복합체이다. 적어도 12개의 다른 α단위체(α1-α6, α-L, α-M, α-X, α-IIB, α-V 및 α-E)와 적어도 9개의 다른 β(β1-β9)단위체가 있다. 인테그린의 α와 β단위체 성분의 종류에 따라, 각 인테그린 분자는 서브패밀리(subfamily)로 분류된다.
말기 항원 4("VLA-4") 또는 CD46d/CD29로도 알려진, α4β1 인테그린은 다양한 세포-세포 및 세포-기질 부착 상호작용 둘다에 참여하는 백혈구 세포 표면 수용체이다(M.E. Hemler, Ann. Rev. Immunol., 8, p.365(1990)). 이것은 세포외 기질 단백질 피브로넥틴("FN")뿐만 아니라 사이토카인-유도 내피 세포 표면 단백질, 혈관 세포 부착 분자-1("VCAM-1")을 위한 수용체로 작용한다(Ruegg et al., J.Cell Biol., 177, p.179(1991); Wayner et al., J.Cell Biol., 105, p. 1873 (1987); Kramer et al., J.Biol. Chem., 264, p.4684(1989); Gehlsen et al., Science, 24, p.1228(1988)). 항-VLA4 단일클론 항체("mAb's")는 시험관내와 생체내 둘다에서 VLA4-의존성 부착 상호작용을 억제하는 것으로 나타났다(Ferguson et al. Proc. Natl. Acad. Sci., 88, p.8072 (1991); Ferguson et al., J. Immunol., 150, p.1172(1993)). 생체내 실험의 결과들은 VLA4-의존성 세포 부착의 이러한 억제가 몇몇 염증 및 자가면역 병리를 예방하거나 억제할 수도 있음을 제안한다(R.L.Lobb et al., "The Pathophysiologic Role of α4 Integrins In Vivo", J.Clin. Invest., 94, pp. 1722-28(1994)).
VLA-4에 결합하는 데 필요한 최소한의 활성 아미노산 서열을 동정하기 위해, 고모리야 등("The Minimal Essential Sequence for a Major Cell Type-Specific Adhesion Site(CS1) Within the Alternatively Spliced Type III Connecting Segment Domain of Fibronectin Is Leucine-Aspartic Acid-Valine", J. Biol. Chem., 266(23), pp. 15075-79(1991))은 특정 종류의 피브로넥틴의 CS-1 부분(VLA-4 결합 도메인)의 아미노산 서열에 기초한 다양한 중복 펩티드를 합성했다. 그들은 FN-의존성 세포 부착에 대한 억제 활성을 갖는 두 개의 작은 중복되는 펜타펩티드, Glu-Ile-Leu-Asp-Val[서열 번호 2]와 Leu-Asp-Val-Pro-Ser[서열 번호 3]뿐만 아니라 8-아미노산 펩티드, Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr[서열 번호 1]을 확인했다. 이들 결과들이 제시하는 바는, 트리펩티드 Leu-Asp-Val이 세포-부착 활성을 위한 최소 서열이라는 것이다. Leu-Asp-Val이 VLA-4의 활성화된 형태를 발현하는 림프구에만 결합함이 나중에 밝혀졌으며, 따라서 그러한 펩티드가 생체내에서 유용할지에 대한 의문점이 야기되었다(E.A. Wayner et al., "Activation-Dependent Recognition by Hematopoietic Cells of the LDV Sequence in the V Region of Fibronectin", J. Cell. Biol., 116(2), pp. 489-497(1992)). 하지만, LDV 서열을 함유하는 일부 더 큰 펩티드가 생체내에서 활성을 가짐이 이어서 밝혀졌다[T.A. Ferguson et al., "Two Integrin Binding Peptides Abrogate T-Cell-Mediated Immune Response In Vivo", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, pp. 8072-76(1991); S.M.Wahl et al., "Synthetic Fibronectin Peptides Suppress Arthritis in Rats by Interrupting Leukocyte Adhesion and Recruitment", J.Clin.Invest., 94, pp. 655-62(1994)].
VLA-4와 VLA-5 둘다의 FN에의 부착을 억제할 수 있는 환형 펜타펩티드, (TPro는 4-티오프롤린을 나타낸다)가 또한 개시되었다(D.M. Nowlin et al. "A Novel Cyclic Pentapeptide Inhibits α4β1 and α5β1 Integrin-mediated Cell Adhesion", J.Biol.Chem. , 268(27), pp. 20352-59(1993); and PCT publication PCT/US91/04862). 이 펩티드는 몇몇 세포외-기질 단백질을 위한 인지 부위의 공통 모티프로 알려진 FN 유래의 트리펩티드 서열 Arg-Gly-Asp에 기초했다.
이러한 발전에도 불구하고, VLA-4-의존성 세포 부착에 대한 작고, 특이적인 억제제가 필요하다. 이상적으로는, 그러한 억제제들은 그들이 경구 투여될 수 있도록 반(semi)펩티드성 또는 비(non)펩티드성일 것이다. 그러한 화합물은 세포 부착과 VLA-4 결합에 의해 매개되는 다양한 병리의 치료, 예방 또는 억제에 유용한 제제를 제공할 것이다. 공계류중인 미국 특허 출원 제08/376,372호는 세포 부착 억제 활성을 갖는 β-아미노산 함유 직쇄 펩티드 화합물을 설명한다. 국제출원 공개 번호 94/15958호와 92/00995호는 세포 부착 조절 활성을 갖는 환형 펩티드와 펩티드 유사 화합물을 설명한다. 국제출원 공개 번호 93/08823호와 92/08464호는 구아니디닐-, 우레아-, 티오우레아-함유 세포 부착 조절 화합물을 설명한다. 미국 특허 제 5,260,277호는 구아니디닐 세포 부착 조절 화합물을 설명한다.
본 발명은 리간드가 VLA-4에 결합하는 것을 억제하는 신규의 반 펩티드성 화합물을 제공함으로써 상기 문제점을 해결한다. 이들 화합물들은 VLA-4-매개 세포 부착과, 염증과 면역 반응처럼 이러한 부착과 관련된 병리의 억제, 에방 및 저해에 유용하다. 본 발명의 화합물은 세포 부착을 억제, 예방 또는 저해하기 위해 혼자서 또는 다른 치료제 또는 예방제와 함께 이용될 수 있다. 본 발명은 또한 이들 VLA-4-매개 세포 부착 억제제를 함유하는 약학 조성물과, 세포 부착의 억제를 위해 본 발명의 화합물과 조성물을 이용하는 방법을 제공한다.
본 발명의 한 구체예에 따르면, 이들 신규의 화합물, 조성물 및 방법은 염증과 면역 질병을 치료하기 위하여 유용하게 이용된다. 본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 제조 방법과 이들 방법에서 유용한 중간체를 제공한다.
하기 약어들이 명세서에서 이용된다:
명칭 반응물 또는 단편
Ac 아세틸
Bn 벤질
Boc tert-부톡시카르보닐
Bu 부틸
Cbz 카르보벤질옥시
Cy 시클로헥실
CyM 시클로헥실메틸
DIPEA 디이소프로필에틸아민
EDC 1-(3-디에틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드
HOBT 1-히드록시벤조트리아졸 히드레이트
i-amyl 이소아밀
i-Pn 이소펜틸
i-Pr 이소프로필
Me 메틸
2-MPUBA 4-(N'-(2-메틸페닐)우레아)-페닐메틸아미노
2-MPUPA 4-(N'-(2-메틸페닐)우레아)-페닐아세틸
NMP N-메틸피롤리디논
NMM N-메틸모르포린
Ph 페닐
PUPA 4-(N'-페닐우레아)페닐아세틸
Su 숙신이미딜
TBTU 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄
테트라플루오로보레이트
TEA 트리에틸아민
TFA 트리플루오로아세트산
THAM 트리스(히드록시)메틸아미노메탄
정의
본 명세서에서 사용될 때, "알킬"은 혼자서 또는 결합하여, 1 내지 10개, 바람직하게는 1 내지 6개, 그리고 더욱 바람직하게는 1 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 라디칼을 의미한다. 그러한 라디칼의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소-아밀, 헥실, 데실 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"알케닐"은 혼자서 또는 결합하여, 2 내지 10개, 바람직하게는 2 내지 6개 그리고 더욱 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 알케닐 라디칼을 의미한다. 그러한 라디칼의 예는 에테닐, E- 및 Z-프로페닐, 이소프로페닐, E- 및 Z-부테닐, E- 및 Z-이소부테닐, E- 및 Z-펜테닐, 데세닐 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"알키닐"은 혼자서 또는 결합하여, 2 내지 10개, 바람직하게는 2 내지 6개, 그리고 더욱 바람직하게는 2 내지 4개의 탄소 원자를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 알키닐 라디칼을 의미한다. 그러한 라디칼의 예는 에티닐(아세틸레닐), 프로피닐, 프로파질, 부티닐, 헥시닐, 데시닐 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"시클로알킬"은 혼자서 또는 결합하여, 3 내지 10개, 바람직하게는 3 내지 8개, 그리고 더욱 바람직하게는 3 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 시클릭 알킬 라디칼을 의미하며 선택적으로 아릴-융합될 수도 있다. 그러한 라디칼의 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"시클로알케닐"은 혼자서 또는 결합하여 4 내지 8개, 바람직하게는 5 또는 6 개의 탄소 원자와 하나 이상의 이중 결합을 함유하는 시클릭 카르보사이클을 의미한다. 그러한 시클로알케닐 라디칼의 예는 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, 시클로펜타디에닐 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"아릴"은 페닐, 나프틸, 인데닐, 인다닐, 아줄레닐, 플루오레닐, 안트라세닐로 이루어진 군으로부터 선택된 카르보시클릭 방향족기; 또는 퓨릴, 티에닐, 피리딜, 피롤릴, 옥사졸릴, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 2-피라졸리닐, 피라졸리디닐, 이속사졸릴, 이소티아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 1,3,5-트리아지닐, 1,3,5-트리티아닐, 인돌리지닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 인돌리닐, 벤조[b]푸라닐, 2,3-디히드로벤조푸라닐, 벤조[b]티오페닐, 1H-인다졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤즈티아졸릴, 푸리닐, 4H-퀴놀리지닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 시놀리닐, 프탈라지닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹사리닐, 1,8-나프티리디닐, 프테리디닐, 카르바졸릴, 아크리디닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 피라조로[1,5-c]트리아지닐 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 헤테로시클릭 방향족기를 의미한다.
"아릴", "시클로알킬" 및 "시클로알케닐"기는 할로겐, 히드록실, 아미노, 니트로, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 시아노, 카르복시, 카르보알콕시, Ar'-치환된 알킬, Ar'-치환된 알케닐 또는 알키닐, 1,2-디옥시메틸렌, 1,2-디옥시에틸렌, 알콕시, 알켄옥시 또는 알킨옥시, Ar'-치환된 알콕시, Ar'-치환된 알켄옥시 또는 알킨옥시, 알킬아미노, 알케닐아미노, 또는 알키닐아미노, Ar'-치환된 알킬아미노, Ar'-치환된 알케닐아미노 또는 알카닐아미노, Ar'-치환된 카르보닐옥시, 알킬카르보닐옥시, 지방족 또는 방향족 아실, Ar'-치환된 아실, Ar'-치환된 알킬카르보닐옥시, Ar'-치환된 카르보닐아미노, Ar'-치환된 아미노, Ar'-치환된 옥시, Ar'-치환된 카르보닐, 알킬카르보닐아미노, Ar'-치환된 알킬카르보닐아미노, 알콕시-카르보닐아미노, Ar'-치환된 알콕시카르보닐-아미노, Ar'-옥시카르보닐아미노, 알킬술포닐아미노, 모노- 또는 비스-(Ar'-술포닐)아미노, Ar'-치환된 알킬-술포닐아미노, 모르폴리노카르보닐아미노, 티오모르폴리노카르보닐아미노, N-알킬 구아니디노, N-Ar'구아니디노, N-N-(Ar',알킬)구아니디노, N,N-(Ar',Ar')구아니디노, N,N-디알킬 구아니디노, N,N,N-트리알킬 구아니디노, N-알킬 우레아, N,N-디알킬 우레아, N-Ar'우레아, N,N-(Ar',알킬)우레아, N,N-(Ar')2우레아, 아르알킬옥시카르보닐-치환된 알킬, 아르알킬아미노카르보닐, 티오아릴옥시 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 최대 세 개의 치환기를 독립적으로 포함할 수 있으며; 상기에서 "Ar'"은 아릴과 유사하게 정의되지만, 할로겐, 히드록실, 아미노, 니트로, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 1,2-디옥시메틸렌, 1,2-디옥시에틸렌, 알콕시, 알켄옥시, 알킨옥시, 알킬아미노, 알케닐아미노 또는 알키닐아미노, 알킬카르보닐옥시, 지방족 또는 방향족 아실, 알킬카르보닐아미노, 알콕시카르보닐아미노, 알킬술포닐아미노, N-알킬 또는 N,N-디알킬 우레아로 이루어진 군으로부터 선택되는 최대 세 개의 치환기를 함유한다.
"아르알킬"은 혼자서 또는 결합하여, 아릴 치환된 알킬 라디칼을 의미하며, 이때 "알킬"과 "아릴"은 전술한 대로이다. 적절한 아르알킬 라디칼의 예는 페닐메틸, 펜에틸, 페닐헥실, 디페닐메틸, 피리딜메틸, 테트라졸릴메틸, 푸릴메틸, 이미다졸릴메틸, 인돌릴메틸, 티에닐프로필 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"알콕시"는 혼자서 또는 결합하여, 알킬 에테르 라디칼을 의미하며, 이때 "알킬"은 전술한 것과 같다. 적절한 알킬 에테르 라디칼의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소-프로폭시, n-부톡시, 이소-부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"알켄옥시"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알케닐-O-의 라디칼을 의미하며, 이때 "알케닐"은 라디칼이 에놀 에테르가 아닌 것을 조건으로, 전술한 대로이다. 적절한 알켄옥시 라디칼의 예는 알릴옥시, E- 및 Z-3-메틸-2-프로페녹시 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"알키닐옥시"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알키닐-O- 의 라디칼을 의미하며, 이때 "알키닐"은 라디칼이 이놀 에테르가 아닌 것을 조건으로, 전술한 대로이다. 적절한 알킨옥시 라디칼의 예는 프로파질옥시, 2-부티닐옥시 등을 포함한, 이에 한정되지 않는다.
"티오알콕시"는 식 알킬-S- 의 티오에테르 라디칼을 의미하며, 이때 알킬은 전술한 대로이다.
"알킬아민"은 혼자서 또는 결합하여, 모노- 또는 디-알킬-치환된 아미노 라디칼(즉, 알킬-NH- 또는 (알킬)2-N- 라디칼)을 의미하며, 이때 "알킬"은 전술한 대로이다. 적절한 알킬아미노 라디칼의 예는 메틸아미노, 에틸아미노, 프로필아미노, 이소프로필아미노, t-부틸아미노, N,N-디에틸아미노 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"알케닐아미노"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알케닐-NH- 또는 (알케닐)2N- 라디칼을 의미하며, 이때 "알케닐"은 라디칼이 엔아민이 아닌 것을 조건으로, 전술한 대로이다. 그러한 알케닐아미노 라디칼의 예는 알릴아미노 라디칼이다.
"알키닐아미노"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알키닐-NH- 또는 (알키닐)2N- 라디칼을 의미하며, 이때 "알키닐"은 라디칼이 인아민이 아닌 것을 조건으로, 전술한 대로이다. 그러한 알키닐아미노 라디칼의 예는 프로파질 아미노 라디칼이다.
"아릴옥시"는 혼자서 또는 결합하여, 식 아릴-O- 라디칼을 의미하며, 이때 아릴은 전술한 대로이다. 아릴옥시 라디칼의 예는 페녹시, 나프톡시, 피리딜옥시 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"아릴아미노"는 혼자서 또는 결합하여, 식 아릴-NH- 라디칼을 의미하며, 이때 아릴은 전술한 대로이다. 아릴아미노 라디칼의 예는 페닐아미노(아닐리도), 나프틸아미노, 2-, 3- 및 4-피리딜아미노 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"바이(bi)아릴"은 혼자서 또는 결합하여, 식 아릴-아릴- 라디칼을 의미하며, 이때 "아릴"은 전술한 대로이다.
"티오아릴"은 혼자서 또는 결합하여, 식 아릴-S- 라디칼을 의미하며, "아릴"은 전술한 대로이다. 티오아릴 라디칼의 예는 티오페닐 라디칼이다.
"아릴-융합된 시클로알킬"은 혼자서 또는 결합하여, 아릴 라디칼과 두 개의 이웃한 원자를 공유하는 시클로알킬 라디칼을 의미하며, 이때 "시클로알킬"과 "아릴"은 전술한 대로이다. 아릴-융합된 시클로알킬 라디칼의 예는 벤조-융합된 시클로부틸 라디칼이다.
"지방족 아실"은 혼자서 또는 결합하여, 알칸-, 알켄-, 또는 알킨카르복실산으로부터 유래된 식 알킬-CO-, 알케닐-CO- 및 알키닐-CO- 라디칼을 의미하며, 이때 "알킬", "알케닐" 및 "알키닐"은 전술한 대로이다. 그러한 지방족 아실 라디칼의 예는 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 발레릴, 4-메틸발레릴, 아크릴로일, 크로틸, 프로피올릴, 메틸프로피올릴 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"방향족 아실" 또는 "아로일"은 혼자서 또는 결합하여, 아릴-CO- 라디칼을 의미하며, 이때 "아릴"은 전술한 대로이다. 적절한 방향족 아실 라디칼의 예는 벤조일, 4-할로벤조일, 4-카르복시벤조일, 나프토일, 피리딜카르보닐 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"헤테로시클로일"은 혼자서 또는 결합하여, 식 헤테로사이클-CO- 라디칼을 의미하며, 이때 "헤테로사이클"은 전술한 대로이다. 적절한 헤테로시클로일 라디칼의 예는 테트라히드로푸라닐카르보닐, 피페리디닐카르보닐, 테트라히드로티오펜카르보닐 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"모르폴리노카르보닐"과 "티오모르폴리노카르보닐"은 혼자서 또는 다른 용어와 결합하여, N-카르보닐화된 모르폴리노와 N-카르보닐화된 티오모르폴리노 라디칼을 각각 의미한다.
"알킬카르보닐아미노"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알킬-CONH 라디칼을 의미하며, 이때 "알킬"은 전술한 대로이다.
"알콕시카르보닐아미노"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알킬-OCONH- 라디칼을 의미하며, 이때 "알킬"은 전술한 대로이다.
"알킬술포닐아미노"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알킬-SO2NH- 라디칼을 의미하여, 이때 "알킬"은 전술한 대로이다.
"아릴술포닐아미노"는 혼자서 또는 결합하여, 식 아릴-SO2NH- 라디칼을 의미하며, 이때 "아릴"은 전술한 대로이다.
"N-알킬우레아"는 혼자서 또는 결합하여, 식 알킬-NH-CO-NH- 라디칼을 의미하며, 이때 "알킬"은 전술한 대로이다.
"N-아릴우레아"는 혼자서 또는 결합하여, 식 아릴-NH-CO-NH- 라디칼을 의미하며, 이때 "아릴"은 전술한 대로이다.
"할로겐"은 불소, 염소, 브롬 및 요오드를 의미한다.
"헤테로사이클"과 "헤테로시클릭 고리"는 혼자서 또는 결합하여, 적어도 하나의 엔도시클릭 N, O 또는 S 원자를 함유하는 비(non)방향족 3 내지 10원 환을 의미한다. 헤테로사이클은 선택적으로 아릴-융합될 수도 있다. 헤테로사이클은 또한 수소, 할로겐, 히드록실, 아미노, 니트로, 트리플루오로메틸, 트리플루오로메톡시, 알킬, 아르알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 시아노, 카르복시, 카르보알콕시, Ar'-치환된 알킬, Ar'-치환된 알케닐 또는 알키닐, 1,2-디옥시메틸렌, 1,2-디옥시에틸렌, 알콕시, 알켄옥시 또는 알킨옥시, Ar'-치환된 알콕시, Ar'-치환된 알켄옥시 또는 알킨옥시, 알킬아미노, 알케닐아미노 또는 알키닐아미노, Ar'-치환된 알킬아미노, Ar'-치환된 알케닐아미노 또는 알키닐아미노, Ar'-치환된 카르보닐옥시, 알킬카르보닐옥시, 지방족 또는 방향족 아실, Ar'-치환된 아실, Ar'-치환된 알킬카르보닐옥시, Ar'-치환된 카르보닐아미노, Ar'-치환된 아미노, Ar'-치환된 옥시, Ar'-치환된 카르보닐, 알킬카르보닐아미노, Ar'-치환된 알킬카르보닐아미노, 알콕시-카르보닐아미노, Ar'-치환된 알콕시카르보닐-아미노, Ar'-옥시카르보닐아미노, 알킬술포닐아미노, 모노- 또는 비스-(Ar'-술포닐)아미노, Ar'-치환된 알킬-술포닐아미노, 모르폴리노카르보닐아미노, 티오모르폴리노카르보닐아미노, N-알킬 구아니디노, N-Ar'구아니디노, N-N-(Ar',알킬)구아니디노, N,N-(Ar',Ar')구아니디노, N,N-디알킬 구아니디노, N,N,N-트리알킬 구아니디노, N-알킬 우레아, N,N-디알킬 우레아, N-Ar'우레아, N,N-(Ar',알킬)우레아, N,N-(Ar')2우레아, 아르알콕시카르보닐-치환된 알킬, 카르복시알킬, 옥소, 아릴술포닐 및 아르알킬아미노카르보닐 등으로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 하나 내지 세 개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있다.
"이탈기"는 일반적으로 아민 같은 친핵체, 및 알콜 또는 티올 친핵체에 의해 쉽게 치환될 수 있는 기를 의미한다. 그러한 이탈기는 잘 알려져 있으며 카르복실레이트, N-히드록시숙신이미드, N-히드록시벤조트리아졸, 할로겐(할로겐화물), 트리플레이트, 토실레이트, 메실레이트, 알콕시, 티오알콕시 등을 포함한다.
"소수성기"는 물과 결합하거나 물을 흡수하는 것에 대해 저항성을 가진 기를 의미한다. 그러한 소수성 기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 페닐, 벤질, 나프틸, N-벤질이미다졸릴, 메틸티오에틸 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"산성 작용기"는 그 안에 산성 수소를 가진 기를 의미한다. 그러한 기의 예는 카르복실산, 테트라졸, 이미다졸, 히드록실, 머캅토, 히드록실아미노카르보닐, 술폰산, 술핀산, 인산 및 포스폰산을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"적절하게 보호된 α-아미노산의 활성화된 유도체"와 "활성화된 치환-페닐아세트산 유도체"는 -OH기가 상위의 이탈기에 의해 치환된 카르복실산 유도체를 의미한다. 활성화된 산유도체의 예는 상응하는 아실 할로겐화물(예를 들어 산 불화물, 산 염화물 및 산 브롬화물), 상응하는 활성화된 에스테르(예를 들어 니트로페닐 에스테르, 1-히드록시벤조트리아졸의 에스테르, HOBT, 또는 히드록시숙신이미드의 에스테르, HOSu) 및 기타 당업계에 공지된 통상의 유도체를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
"보호된" 또는 "보호기"는 한 분자의 작용기에 부착되고, 이어서 본래의 작용기와 분자를 드러내기 위해 나중 단계에서 제거될 수 있는 적절한 화학기를 의미한다. 다양한 작용기를 위한 적절한 보호기의 예는 T.W.Greene and P.G.M.Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons(1991); L.Fieser and M.Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1994); L.Paquette, ed.Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1995)에 설명된다.
본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 탄소 원자를 포함하며 따라서 라세미체와 라세믹 혼합물, 단일 거울상이성질체, 부분 입체 이성질체 혼합물 및 개개의 부분 입체 이성질체로 존재한다. 이들 화합물의 모든 그러한 이성체 형태는 본 발명에 명백하게 포함된다. 각 키랄(stereogenic) 탄소는 R 또는 S 배열일 수 있다. 본 발명에서 예시되는 특정 화합물은 특정 입체화학적 배열로 묘사될 수 있지만, 임의의 주어진 키랄 센터(chiral center)에서 반대 입체화학을 갖는 화합물 또는 그들의 혼합물도 본 발명의 일부로 간주된다. 아미노산과 아미노산 측쇄가 특정 배열로 묘사될 수 있지만, 천연 형태 및 비천연 형태 둘다 본 발명의 일부로 간주된다.
상기 정의로 비추어볼 때, 본 명세서 전반에 걸쳐 사용되는 다른 화학적 개념들은 당업자에게 쉽게 이해될 수 있다. 그러한 개념들은 혼자서 또는 조합되어 이용될 수도 있다. 라디칼의 바람직한 그리고 더욱 바람직한 쇄의 길이는 모든 그러한 조합에 적용된다.
본 발명은 리간드가 상기 수용체에 결합하는 것을 억제하여 VLA-4-매개 세포 부착을 억제할 수 있는 화합물을 제공한다. 이들 화합물은 화학식 I로 표시되는 화합물 및 그들의 약학적 허용 유도체이다:
Z-(Y 1 )-(Y 2 )-(Y 3 ) n -X
상기 식에서,
Z는 알킬; N-알킬- 또는 N-아릴아미도로 선택적으로 치환된 지방족 아실; 아로일; 헤테로시클로일; 알킬- 또는 아릴술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 아르알킬카르보닐; 헤테로시클로알킬카르보닐; 알콕시카르보닐; 아르알킬옥시카르보닐; 아릴과 선택적으로 융합된 시클로알킬카르보닐; 헤테로시클로알콕시카르보닐; 알킬아미노카르보닐; 비스(알킬술포닐)아미노, 알콕시카르보닐아미노 또는 알케닐로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노카르보닐과 아릴아미노 카르보닐; 알킬술포닐; 아르알킬술포닐; 아릴술포닐; 아릴과 선택적으로 융합된 시클로알킬술포닐; 헤테로시클릴술포닐; 헤테로시클릴알킬술포닐; 아르알킬카르보닐; 아릴옥시카르보닐; 시클로알킬옥시카르보닐; 헤테로시클릴옥시카르보닐; 헤테로시클릴알콕시카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 모노- 또는 디-알킬아미노카르보닐; (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐; 모노- 또는 디- 아르알킬아미노카르보닐; 모노- 또는 디-아릴아미노카르보닐; (아릴)(알킬)아미노카르보닐; 모노- 또는 디-시클로알킬아미노카르보닐; 헤테로시클릴아미노카르보닐; 헤테로시클릴알킬아미노카르보닐; (알킬)(헤테로시클릴)아미노카르보닐; (알킬)(헤테로시클릴알킬)아미노카르보닐; (아르알킬)(헤테로시클릴)아미노카르보닐; (아르알킬)(헤테로시클릴알킬)아미노카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알케노일; 아릴로 선택적으로 치환된 알케닐술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알키노일; 아릴로 선택적으로 치환된 알키닐술포닐; 시클로알케닐카르보닐; 시클로알케닐술포닐; 시클로알킬알카노일; 시클로알킬알킬술포닐; 아릴아로일, 비아릴술포닐; 알콕시술포닐; 아르알콕시술포닐; 알킬아미노술포닐; 아릴옥시술포닐; 아릴아미노술포닐; N-아릴우레아-치환된 알카노일; N-아릴우레아-치환된 알킬술포닐; 시클로알케닐-치환된 카르보닐; 시클로알케닐-치환된 술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알켄옥시카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알켄옥시술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알킨옥시카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알킨옥시술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알케닐- 또는 알키닐-아미노카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알케닐- 또는 알키닐-아미노술포닐; 아실아미노-치환된 알카노일; 아실아미노-치환된 알킬술포닐; 아미노카르보닐-치환된 알카노일; 카르바모일-치환된 알카노일; 카르바모일-치환된 알킬술포닐; 헤테로시클릴알카노일; 헤테로시클릴아미노술포닐; 카르복시알킬-치환된 아르알코일; 카르복시알킬-치환된 아르알킬술포닐; 옥소카르보시클릴-융합된 아로일; 옥소카르보시클릴-융합된 아릴술포닐; 헤테로시클릴알카노일; N',N'-알킬, 아릴히드라지노카르보닐; 아릴옥시-치환된 알카노일 및 헤테로시클릴알킬술포닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Y1은 -N(R1)-C(R2)(A1)-C(O)-이며;
Y2는 -N(R1)-C(R2)(A2)-C(O)-이고;
각 Y3는 식 -N(R1)-C(R2)(A3)-C(O)-로 표시되며;
각 R1은 수소, 알킬 및 아르알킬; 알케닐; 알키닐; 시클로알킬; 시클로알케닐; 시클로알킬알킬; 아릴; 아미노알킬; 모노- 또는 디-알킬-치환된 아미노알킬; 모노- 또는 디-아르알킬-치환된 아미노알킬; 히드록시알킬; 알콕시알킬; 머캅토알킬; 티오알콕시알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고;
A1은 아미노산 측쇄 및 상응하는 보호된 유도체; 시클로알킬; 아미노, 아실아미노, 아미노-치환된 아실아미노, 알콕시카르보닐아미노, 아릴, 시클로알킬, 카르복시, 알콕시, 아르알킬옥시, 알콕시카르보닐, 아르알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐, 아르알킬아미노카르보닐, 디아르알킬아미노카르보닐, 히드록실, 카르복시알킬아미노카르보닐, 히드록실아미노카르보닐, 머캅토, 티오알콕시 또는 헤테로사이클로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
A2는 산성 작용기 그리고 산성 작용기, 보호된 산성 작용기 또는 아릴로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각 A3는 아미노산 측쇄 그리고 상응하는 보호된 유도체; 아릴; 시클로알킬; 아미노, 아실아미노, 아미노-치환된 아실아미노, 아릴, 시클로알킬, 카르복시, 알콕시, 아르알킬옥시, 알콕시카르보닐, 아르알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐, 아르알킬아미노카르보닐, 디아르알킬아미노카르보닐, 히드록실, 카르복시알킬아미노카르보닐, 히드록실아미노카르보닐, 머캅토, 티오알콕시 또는 헤테로사이클로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
또는 R1과 임의의 A는 그들이 부착하는 원자와 연결되어 3- 내지 6-원 환 헤테로사이클을 형성하고;
각 R2는 수소와 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되며;
n은 0 내지 8의 정수이고;
X는 알콕시; 아릴옥시; 아르알킬옥시; 히드록실; 아미노; 히드록시, 아미노카르보닐, N-알킬아미노카르보닐, 카르복시 또는 알콕시카르보닐로 선택적으로 치환된 알킬아미노; 디알킬아미노; 시클로알킬아미노; 디시클로알킬아미노; 시클로알킬알킬아미노; (알킬)(아릴)아미노; 카르복시로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노; 디아르알킬아미노; 아릴아미노; 헤테로사이클; 그리고 (모노- 또는 비스-카르복실산)-치환된 알킬아민; 헤테로시클릴아미노; 헤테로시클릴-치환된 알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택되며, 화학식 I의 화합물은 N'-카르복시메틸-N-(페닐아세틸-L-루이실-L-아스파틸-L-페닐알라닐-L-프롤릴)피페라진(즉, Z=페닐아세틸, Y1=L, Y2=D, Y3=F/P, n=2, X=4-카르복시메틸피페라지닐인 경우)이 아니며 페닐아세틸-L-루이실-L-아스파틸-L-페닐알라닐-D-프롤린 아미드(즉, Z=페닐아세틸, Y1=L, Y2=D, Y3=F/p, n=2, X=NH2인 경우)가 아니다.
"약학적 허용 유도체"는 본 발명의 화합물의 약학적 허용 염, 에스테르, 그러한 에스테르의 염, 아미드 또는 그러한 아미드의 염을 의미한다. 본 발명은 또한 환자에게 투여시, 본 발명의 화합물을 (직접 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 임의의 다른 화합물(예를 들어, 프로드러그(prodrug))을 포함한다. 본 발명은 또한 세포 부착과 세포 부착에 의해 매개되는 병리를 억제, 예방 또는 저해하는 능력을 특징으로 하는 본 발명의 화합물의 대사물 또는 잔기를 포함한다.
본 발명의 바람직한 구체예에서, A1은 시클로알킬; 헤테로시클릭 환(A1과 R1이 결합될 때); 그리고 아미노, 아실아미노, 아미노-치환된 아실아미노, 아릴, 카르복시, 시클로알킬, 히드록시, 알콕시, 아르알킬옥시, 알콕시카르보닐, 아르알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐, 아르알킬아미노카르보닐, 디아르알킬아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 머캅토, 티오알콕시 또는 헤테로사이클로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.
더욱 바람직하게는, A1은 아미노카르보닐에틸, 벤질, n-부틸, 이소부틸, 카르복시에틸, 시클로헥실, 1-히드록시에틸, 히드록시메틸, 머캅토메틸, 1-메틸프로필, 메틸티오에틸, n-프로필, 이소프로필, 메톡시카르보닐아미노부틸, 6-아미노헥사노일아미노부틸 그리고 (A1과 R1이 결합될 때) 아제티딘, 아지리딘, 피롤리딘, 및 피페리딘으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
더욱 더 바람직하게는, A1은 벤질, n-부틸, 이소부틸, 메틸티오에틸, 시클로헥실, 1-메틸프로필, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 바람직한 A1은 (A1과 R1이 결합될 때) 피롤리딘이다.
다른 바람직한 구체예에서, A2는 아미노, 아미노카르보닐, 아릴, 알콕시카르보닐, 아르알킬옥시카르보닐, 히드록실아미노카르보닐, 카르복시, NH-함유 헤테로사이클, 히드록시, 또는 머캅토로 선택적으로 치환된 알킬; 아미노, 아미노카르보닐, 카르복시, NH-함유 헤테로사이클, 히드록시, 또는 머캅토로 선택적으로 치환된 아르알킬; 그리고 헤테로시클릭 환(A2와 R1이 결합될 때)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
더욱 바람직하게는, A2는 카르복시메틸, 2-카르복시에틸, 1-카르복시에틸, 히드록실아미노카르보닐메틸, 히드록시메틸, 머캅토메틸, 이미다졸릴메틸, N-Bn-이미다졸릴메틸, 페닐, 카르보메톡시메틸, 카르보벤질옥시메틸, 그리고 (A2와 R1이 결합될 때)아제티딘, 아지리딘, 피롤리딘, 그리고 피페리딘으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
더욱 더 바람직하게는, A2는 카르복시메틸, 2-카르복시에틸, 1-카르복시에틸, 히드록실아미노카르보닐메틸, 히드록시메틸, 머캅토메틸, 이미다졸릴메틸로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 바람직한 구체예에 따르면, A3는 아미노산 측쇄 그리고 상응하는 보호된 유도체; 시클로알킬; 그리고 아릴, 시클로알킬, 카르복시, 히드록실아미노카르보닐, 알콕시, 아르알킬옥시, 머캅토, N-함유 헤테로사이클, 카르복시알킬아미노카르보닐 또는 아미노-치환된 아실아미노로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
더욱 바람직하게는, A3는 아미노산 측쇄 그리고 상응하는 보호된 유도체; 시클로헥실; 그리고 페닐, 시클로헥실, 카르복시, 히드록실아미노카르보닐, 메톡시, 벤질옥시, 머캅토, N-벤질이미다졸릴, 비오티닐, 테트라졸릴, 발리닐-N-카르보닐 또는 6-아미노헥사노일아미노로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
다른 바람직한 구체예에 따르면, 각 Y3는 아미노산 그리고 상응하는 보호된 유도체로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된다.
다른 바람직한 구체예에 따르면, Y1은 루이시닐(R1=H, R2=H, A1=i-Bu)이고; Y2는 아스파틸(R1=H, R2=H, A2=카르복시메틸)이고; n=2이고; Y3는 발리닐프롤리닐(R1=H, R2=H, A3=i-Pr)/(R2=H, A2와 결합한 R1=프롤린)이다.
다른 바람직한 구체예에서, X는 알콕시; 아릴옥시; 아르알킬옥시; 히드록실; 아미노; 히드록시, 아미노카르보닐, N-알킬아미노카르보닐, 카르복시 또는 알콕시카르보닐로 선택적으로 치환된 모노- 및 디알킬아미노; 디알킬아미노; 시클로알킬아미노; 시클로알킬알킬아미노; 디시클로알킬아미노; (알킬)(아릴)아미노; 카르복시로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노; 디아르알킬아미노; 아릴아미노; N-함유 헤테로사이클; 비스-카르복실산-치환된 알킬아민 그리고 (모노- 또는 비스-카르복시)메틸아미노카르보닐-치환된-N-함유 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택된다.
더욱 바람직하게는, X는 아미노, 메틸아미노, 이소프로필아미노, 이소부틸아미노, n-부틸아미노, t-부틸아미노, 이소아밀아미노, 이소펜틸아미노, 헥실아미노, 시클로헥실아미노, 시클로헥실메틸아미노, 메틸페닐아미노, 페닐메틸아미노, 페닐아미노, 4-메톡시페닐메틸아미노, 디메틸아미노, 디이소프로필아미노, 디이소부틸아미노, 히드록시, 메톡시, n-부톡시, t-부톡시, 벤질옥시, 2-피페리딘카르복실산, N'-(α,α'-비스-카르복시메틸)-2-피페리딘카르복사미드, N'-카르복시메틸-2-피페리딘카르복사미드, 1-히드록시메틸-2-메틸프로필아미노, 1-N'-메틸아미도-1-메틸에틸아미노, 3,3-디메틸부틸아미노, 1-N'-메틸아미도부틸아미노, 1-아미도-2-메틸부틸아미노, 1-카르보메톡시-2-메틸부틸아미노, 1-N'-메틸아미도-2-메틸부틸아미노, 1-카르복시-1-페닐메틸아미노, 모르폴리노, 피페리디닐, N-페닐피페라지닐, 피페콜리닐, 그리고 피페라지닐로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 바람직한 구체예에 따르면, Z는 지방족 아실, 아로일, 아르알킬카르보닐, 헤테로시클로일, 알콕시카르보닐, 아르알킬옥시카르보닐, 헤테로시클로알킬카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는 Z는 (N-Ar'-우레아)-파라-치환된 아르알킬카르보닐 기이고, 더욱 더 바람직하게는 Z는 (N-Ar'-우레아)-파라-치환된 페닐메틸카르보닐 기 또는 (N-Ar'-우레아)-파라-치환된 피리딜메틸카르보닐 기이다. 더 더욱 바람직하게는, Z는 (N-오르소-치환된-Ar'-우레아)-파라-치환된 페닐메틸카르보닐 기 또는 (N-메타-치환된-Ar'-우레아)-파라-치환된 페닐메틸카르보닐 기이다. 본 발명의 일부 특정 바람직한 화합물의 예가 표 1에 제공된다.
표 1에서 Het1, Het2, Het3, Het4, Het5는 하기와 같이 정의된다:
화학식 I의 더욱 바람직한 화합물은 표 1에서 확인된 화합물 번호 1, 2, 4, 144, 145, 146, 147, 148, 206, 315, 316, 317, 337, 338, 345, 346, 347, 357, 358 및 359로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 I의 더욱 바람직한 화합물은 표 1에서 확인된 화합물 번호 1, 206, 316, 358 및 359로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 I의 가장 바람직한 화합물은 표 1에서 확인된 화합물 번호 358과 359로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명의 다른 화합물은 화학식 II의 화합물과 그들의 약학적 허용 유도체이다:
K-(Y 1 )-(Y 2 )-(Y 3 ) n -J
상기 식에서,
K는 수소, 알킬, 지방족 아실, 아로일, 아르알킬카르보닐, 헤테로시클로일, 술포닐, 아르알킬카르보닐, 헤테로시클로알킬카르보닐, 알콕시카르보닐, 아르알킬옥시카르보닐, 헤테로시클로알콕시카르보닐, 알킬아미노카르보닐 및 아르알킬아미노카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
J는 알콕시; 아릴옥시; 아르알킬옥시; 히드록실; 아미노; 히드록시, 아미노카르보닐, N-알킬아미노카르보닐, 카르복시 또는 알콕시카르보닐로 선택적으로 치환된 알킬아미노; 디알칼아미노; 시클로알킬아미노; 디시클로알킬아미노; (알킬)(아릴)아미노; 카르복시로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노; 디아르알킬아미노; 아릴아미노; 그리고 (모노- 또는 비스-카르복실산)-치환된 알칼아민으로 이루어진 군으로부터 선택되며;
각 Y1, Y2, Y3, R1, A1, A2, A3, R2 및 n은 독립적으로 상기 화학식 I에서처럼 정의된다.
본 발명의 화합물은 임의의 통상적인 기술을 이용하여 합성할 수 있다. 바람직하게는, 이들 화합물은 α-아미노산과 그들의 작용 등가물 같이 쉽게 입수할 수 있는 출발 물질로부터 화학적으로 합성된다. 이들 화합물의 합성을 위한 조립 및 수렴 방법 역시 바람직하다. 예를 들어 수렴 방법에서는, 증가중인 분자쇄에 작은 조각을 점점 첨가시키기보다는 최종 산물의 큰 부분들을 합성의 마지막 단계에서 결합시킨다.
한 가지 구체예에 따르면, 본 발명의 화합물은 다음 방법으로 합성될 수도 있다. 보호된 아미노산 또는 작용성 등가물을 적절한 활성화된 에스테르 부분에 결합시킨다. 적절하게 작용화되면, 결합된 산물은 다른 활성화된 에스테르 부분과 추가로 반응될 수 있다. 이 물질을 추가로 조작하여 원하는 본 발명의 화합물을 얻을 수 있다. 상기 순서의 각 단계에서, 에스테르는 상응하는 산으로 가수분해되어 본 발명의 다른 화합물이 될 수 있다. 이 산은 또한 표준 방법에 의하여 상응하는 산 유도체로 전환될 수도 있다.
한편, 전술한 활성화된 에스테르 부분이 먼저 부착될 수 있으며, 이어서 얻어진 화합물을 추가의 아미노산 또는 그들의 작용기 등가물에 부착시킬 수 있다. 이 부분에서 최종 조작 및/또는 필요한 탈보호 단계가 수행될 수 있다.
다른 구체예에서는, 적절한 조건하에서 원하는 작용기가 활성화된 에스테르 부분 중 하나에 (보호되거나 또는 비보호된 상태로)혼입될 수 있다. 상기 에스테르는 이어서 아미노산 유도체 또는 활성화된 에스테르에 미리 결합된 아미노산 유도체로 이루어진 부분에 결합된다. 그 다음, 필요에 따라 얻어진 산물에 임의의 탈보호 단계를 실시하여 본 발명의 화합물을 얻을 수 있다.
한편, 본 발명의 화합물은 고체 지지체 기술을 이용하여 합성될 수 있다. 코어(core) 아미노산 또는 그들의 작용성 등가 기를 수지에서 표준 반복 결합 방법을 이용하여 모은다. 원하는 코어가 완성되면, 얻어진 단편은 활성화된 에스테르 부분에 결합될 수 있으며 및/또는 상기 단편의 테더(tethered) 말단을 추가로 유도화하여 원하는 산물을 얻을 수도 있다. 적절한 보호/탈보호 방법은 합성 순서동안 임의의 부분에서 이용될 수 있다.
본 발명의 화합물은 또한 선택적인 생물학적 특성을 증진시키기 위해 부속된 적절한 작용기를 부속시킴으로써 변형될 수도 있다. 그러한 변형은 당업계에 공지되어 있으며 주어진 생물학적 시스템(예, 혈액, 림프계, 중추 신경계)으로의 생물학적 투과를 증가시키는 것, 경구용 이용성을 증가시키는 것, 주사에 의해 투여가 가능하도록 용해도를 증가시키는 것, 대사를 바꾸고 분비의 속도를 바꾸는 것들을 포함한다. 이들 변형의 예는 폴리에틸렌 글리콜을 이용한 에스테르화, 피보레이트 또는 지방산 치환기를 이용한 유도화, 카르바메이트로의 전환, 방향족 환의 히드록실화 및 방향족환에서의 헤테로원자-치환을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 명세서에서 이용되는 것처럼, "환자"는 인체를 포함하는 포유동물을 의미한다. 그리고 "세포"는 인체 세포를 비롯한 포유동물 세포를 의미한다.
일단 합성되면, 본 발명에 따른 화합물의 활성과 VLA-4 특이성은 시험관내 및 생체내 분석을 이용하여 결정할 수 있다.
예를 들어, 이들 화합물의 세포 부착 억제 활성은 VLA-4-발현 세포가 피브로넥틴- 또는 CS1-피복된 플레이트에 결합하는 것을 막는데 요구되는 억제제의 농도를 결정함으로써 측정될 수 있다. 이 분석에서 마이크로타이터 웰(microtiter well)은 피브로넥틴(CS-1 서열 함유) 또는 CS-1으로 피복된다. 만일 CS-1이 이용되면, 그것은 웰에 결합시키기 위해 소 혈청 알부민 같은 담체 단백질에 연결되어야 한다. 일단 웰이 피복되면, 다양한 농도의 시험 화합물이 적절하게 표식된 VLA-4 -발현 세포와 함께 첨가된다. 한편, 시험 화합물이 먼저 첨가되고 세포 첨가전에 피복된 웰에서 항온처리될 수도 있다. 세포는 적어도 30분 동안 웰에서 항온처리된다. 항온처리 후, 웰을 비우고 세척한다. 결합의 억제는, 시험 화합물을 함유하지 않은 대조군과 다양한 농도의 시험 화합물 각각에 대해 플레이트에 결합된 형광 또는 방사능을 정량하여 측정한다.
이 분석에 이용될 수 있는 VLA-4-발현 세포는 라모스(Ramos) 세포, 주카(Jurkat) 세포, A375 흑색종 세포, 인체 말초 혈액 림프구(PBLs)를 포함한다. 이 분석에서 이용되는 세포는 형광으로 또는 방사성 동위원소로 표식될 수 있다.
또한 본 발명의 화합물의 억제 활성을 정량하기 위해 직접적인 결합 분석이 이용될 수 있다. 이 분석에서는, IgG1 분자의 힌지 부분 위에 부착된 VCAM의 첫 번째 두 면역글로불린 도메인(D1D2)을 함유하는 VCAM-IgG 융합 단백질("VCAM 2D-IgG")이 알카라인 포스파타아제("AP") 같은 표지 효소에 연결된다. 이 VCAM-IgG 융합 단백질의 합성은 국제특허출원 공개 번호 90/13300에 개시되며, 그 내용은 본 명세서에 참고로 통합된다. 상기 융합 단백질의 표식 효소에의 연결은 공지된 교차-결합 방법에 의해 이루어진다.
이어서 상기 VCAM-IgG 효소 연결체는 밀리포아 멀티스크린 분석 시스템(Millipore Corp., Bedford, MA)에 포함된 것과 같은 다수-웰(well) 여과 플레이트의 웰에 놓이게 된다. 그 다음 다양한 농도의 시험 억제 화합물을 웰에 첨가하고 VLA-4-발현 세포를 첨가한다. 상기 세포, 화합물 및 VCAM-IgG 효소 연결체는 혼합되어 실온에서 항온처리된다.
항온처리 후, 웰을 진공 배수하여 세포와 임의의 결합된 VCAM을 남긴다. 결합된 VCAM의 정량은 VCAM-IgG에 연결된 효소의 적절한 발색 기질을 첨가하고 반응 산물의 양을 결정하여 결정된다. 감소된 반응 산물은 증가된 결합 억제 활성을 나타낸다.
본 발명의 화합물의 VLA-4 억제 특이성을 평가하기 위해, VLA-5, VLA-6 및 α4β7 같은 다른 β1인테그린뿐만 아니라 다른 주요 인테그린 군, 즉, β2와 β3에 대한 분석을 수행한다. 적절한 인테그린-발현 세포 및 상응하는 리간드를 치환하면, 이들 분석은 전술한 부착 억제 및 직접적인 결합 분석과 유사하다. 예를 들어, 다형핵 세포(PMNs)는 그들의 표면에 β2 인테그린을 발현하며 ICAM에 결합한다. β3 인테그린은 혈소판 응집에 관련되며 억제는 표준 혈소판 응집 분석으로 측정될 수 있다. VLA-5는 Arg-Gly-Asp 서열에 특이적으로 결합하며, VLA-6는 라미닌에 결합한다. α4β7은 최근에 발견된 VLA-4의 동족체이며, 역시 피브로넥틴과 VCAM에 결합한다. α4β7에 대한 특이성은, VLA-4는 발현하지 않고 α4β7을 발현하는 RPMI-8866 세포 같은 세포주와 전술한 VCAM-IgG-효소 표지 연결체를 이용하는 결합 분석으로 결정된다.
일단 VLA-4-특이적 억제제가 확인되면, 그들은 생체내 분석으로 추가로 특성이 밝혀질 수 있다. 한 가지 그러한 분석은 동물에서 접촉 과민증의 억제를 시험하며, 이는 P.L.Chisholm 등의 문헌["Monoclonal Antibodies to the Integrin α-4 Subunit Inhibit the Murine Contact Hypersensitivity Response", Eur.J.Immunol., 23, pp.682-688 (1993)과 "Current Protocols in Immunology", J.E.Coligan, et al., Eds., John Wiley & Sons, New York, 1, pp. 4.2.1-4.2.5 (1991)]에 설명되며, 그 내용은 참고로 본문에 통합된다. 이 분석에서, 동물의 피부를 디니트로플루오로벤젠 같은 자극제에 노출시키고, 이어서 날카로운 모서리로 피부를 가볍게 긁는 것과 같은 가벼운 물리적 자극을 주어 감작시킨다. 회복기 후, 동물을 동일한 과정으로 재감작시킨다. 감작 며칠후, 동물의 한쪽 귀를 화학 자극에 노출시키고, 다른 쪽 귀를 비(非)자극성 대조 용액으로 처리한다. 귀를 처리한 직후, 동물에게 다양한 투여량의 VLA-4 억제제를 피하 주사한다. 세포 부착-관련 염증의 생체내 억제는 처리된 귀와 미처리된 귀의 팽윤 반응을 측정함으로써 평가된다. 팽윤은 캘리퍼 또는 귀 두께를 측정하는 다른 적절한 기구를 이용하여 측정된다. 이러한 방법으로, 염증을 억제하는 데 가장 적절한 본 발명의 억제제를 확인할 수 있다.
본 발명의 억제제를 시험하는 데 이용될 수 있는 다른 생체내 분석은 양 천식 분석이다. 이 분석은 W.M.Abraham 등의 문헌["α-Integrins Mediate Antigen-induced Late Bronchial Responses and Prolonged Airway Hyperresponsiveness in Sheep", J.Clin.Invest., 93, pp. 776-87 (1994)에 설명되며 그 내용은 참고로 본문에 통합된다. 이 분석은 천식 양에서 Ascaris 항원-유도된 후기 기도 반응과 기도 과민반응성의 억제를 측정한다.
본 발명의 화합물은 무기 또는 유기 산 및 염기로부터 유도된 약학적 허용염의 형태로 이용될 수도 있다. 그러한 산 염에는 하기와 같은 것들이 포함된다: 아세테이트, 아디페이트, 알지네이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 벤젠술포네이트, 비설페이트, 부티레이트, 시트레이트, 캄포레이트, 캄포술포네이트, 시클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄술포네이트, 푸마레이트, 글루코헵타노에이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오다이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 락테이트, 말레이트, 메탄술포네이트, 2-나프탈렌술포네이트, 니코티네이트, 옥살레이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐-프로피오네이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 토실레이트 및 운데카노에이트. 염기 염은 암모늄 염, 나트륨염 및 칼륨염 같은 알카리 금속 염, 칼슘염 및 마그네슘염 같은 알카리 토금속 염, 디시클로헥실아민 염, N-메틸-D-글루카민, 트리스(히드록시메틸)메틸아민 같은 유기염기 염, 아르지닌, 라이신같은 아미노산 염 등을 포함한다. 또한 염기성 질소-함유 기는, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 염화물, 브롬화물 및 요오드화물 같은 저급 알킬 할로겐화물, 디메틸, 디에틸, 디부틸 및 디아밀 설페이트 같은 디알킬 설페이트, 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 염화물, 브롬화물 및 요오드화물 같은 장쇄 할로겐화물, 벤질 및 펜에틸 브롬화물 등과 같은 아르알킬 할로겐화물로 4차화될 수 있다. 물 또는 오일-용해성 또는 분산성 산물이 얻어진다.
본 발명의 화합물은 경구, 비경구, 흡입 분무, 국소, 직장, 비강, 협측, 질 또는 이식된 저장기를 통해 투여될 수 있는 약학 조성물로 제제화될 수 있다. 본문에서 사용되는 "비경구"는 피하, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액내, 흉골내, 초내, 간장내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입 기술을 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 임의의 약학적 허용 담체와 함께 본 발명의 화합물 또는 그들의 약학적 허용 유도체를 포함한다. "담체"는 허용 보조제와 부형제를 포함한다. 본 발명의 약학 조성물에 이용될 수 있는 약학적 허용 담체는 이온 교환제, 알루미나, 알루미늄 스테아레이트, 레시틴, 인체 혈청 단백질 같은 혈청 단백질, 완충 물질, 예컨대 인산염, 글리신, 소르브산, 포타슘 소르베이트, 포화 식물 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 염 또는 전해질, 예컨대 프로타민 설페이트, 디소듐 하이드로겐 포스페이트, 포타슘 하이드로겐 포스페이트, 소듐 클로라이드, 아연 염, 교질 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로즈-기제 물질, 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카르복시메틸셀룰로즈, 폴리아크릴레이트, 왁스, 폴리에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, 폴리에틸렌 글리콜 및 양모지를 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 따르면, 약학 조성물은 멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액 같은 멸균 주사 제제 형태일 수 있다. 이 현탁액은 적절한 분산제 또는 습윤제와 현탁제를 이용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사 제제는 또한 1,3-부탄디올내의 용액 같은 비-독성 비경구-허용 희석제 또는 용매내의 멸균 주사 용액 또는 현탁액일 수도 있다. 허용되는 부형제와 용매중에는 물, 링거 용액 및 등장 소듐 클로라이드 용액이 있다. 추가로, 멸균, 불휘발성유가 용매 또는 현탁매로서 통상적으로 이용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디-글리세리드를 포함하여 임의의 부드러운 불휘발성유가 이용될 수 있다. 올레산과 그것의 글리세리드 유도체 같은 지방산이 주사 제제에서 유용하며, 올리브유 또는 피마자유 같은 천연 약학적-허용 유지도 특히 그들의 폴리옥시에틸화된 형태로 유용하다. 이들 유지 용액 또는 현탁액은 또한 Ph. Helv 같은 장쇄 알콜 희석제 또는 분산제 또는 유사한 알콜을 함유할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 캡슐, 정제, 수성 현탁액 또는 용액을 포함하나, 이에 한정되지 않는 임의의 경구 허용 제형으로 경구 투여될 수 있다. 경구 투여를 위한 정제의 경우, 일반적으로 이용되는 담체는 락토즈와 옥수수 전분을 포함한다. 마그네슘 스테아레이트 같은 윤활제가 또한 통상적으로 첨가된다. 캡슐 형태의 경구 투여를 위해 유용한 희석제는 락토즈와 건조 옥수수 전분을 포함한다. 수성 현탁액이 경구 용도를 위해 요구될 때, 활성 성분은 유화제 및 현탁제와 결합된다. 필요하면, 일부 감미료, 향료 또는 착색제가 첨가될 수도 있다.
한편, 본 발명의 약학 조성물은 직장 투여를 위한 좌약 형태로 투여될 수도 있다. 이들은 실온에서 고체이나 직장 온도에서 액체여서 직장에서 용해되어 약을 방출할 수 있는 적절한 비자극성 부형제와 제제를 혼합함으로써 제조될 수 있다. 그러한 물질은 코코아 버터, 밀랍 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 또한 국소로 투여될 수 있으며, 특히 치료 부위가 눈, 피부, 또는 하부 내장 질병을 비롯하여 국소 투여에 의해 쉽게 접근할 수 있는 부분 또는 기관을 포함할 때 그러하다. 적절한 국소 제제는 이들 부분 또는 기관 각각을 위하여 쉽게 제조된다.
하부 내장을 위한 국소 투여는 직장 좌약 제제(상기 참조)로 또는 적절한 관장 제제로 실시될 수 있다. 국소-경피 투여 패취가 또한 이용될 수도 있다.
국소 투여를 위해, 약학 조성물은 하나 이상의 담체에 현탁되거나 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 연고로 제제화될 수도 있다. 본 발명의 화합물의 국소 투여를 위한 담체는 광유, 액체 와셀린, 백색 와셀린, 프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌 화합물, 유화 왁스 및 물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 한편, 약학 조성물은 하나 이상의 약학적 허용 담체에 현탁되거나 용해된 활성 성분을 포함하는 적절한 로션 또는 크림으로 제제화될 수 있다. 적절한 담체는 광유, 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리소르베이트 60, 세틸 에스테르 왁스, 세테아릴 알콜, 2-옥틸도데카놀, 벤질 알콜 및 물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
눈에 이용하기 위해서, 약학 조성물은 벤질알코늄 클로라이드 같은 방부제의 존재 또는 부재 하에 등장의 pH 조절된 멸균 염수내의 미세 현탁액으로, 또는 바람직하게는 등장의 pH 조절된 멸균 염수내의 용액으로 제제화될 수도 있다. 한편, 눈에 이용하기 위해, 약학 조성물은 와세린 같은 연고로 제제화될 수도 있다.
본 발명의 약학 조성물은 또한 비강 에어로졸에 의해 또는 분무기, 건조 분말 흡입기 또는 투여량 계량 흡입기를 통한 흡입에 의해 투여될 수 있다. 그러한 조성물은 약학 제제 분야에 잘 공지된 기술에 따라 제조되며 벤질 알콜 또는 다른 적절한 방부제, 생체이용률 증진을 위한 흡수 촉진제, 플루오로카르본, 및/또는 다른 통상의 용해제 또는 분산제를 이용하여 염수내의 용액으로 제조될 수 있다.
단일 제형을 생성하기 위해 담체 물질과 결합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주와 투여 양상에 따라 달라질 것이다. 하지만, 특정 환자를 위한 특정 투여량과 치료 계획은 이용되는 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 건강 상태, 성, 식이, 투여 시간, 분비 속도, 약제 조합 및 담당 의사의 판단과 치료될 특정 질병의 심각성을 비롯한 다양한 요소에 의존할 것이다. 활성 성분의 양은 또한 그 성분과 함께 투여되는 치료제 또는 예방제가 있다면, 이러한 치료제 또는 예방제에 의존할 것이다.
세포 부착을 예방, 저해 또는 억제하기 위한 본 발명의 화합물의 투여량과 투여 속도는 억제제의 특성, 환자의 체격, 치료의 목적, 치료되어야 할 병리의 특성, 이용되는 특정 약학 조성물 및 담당 의사의 판단등과 같은 다양한 요소에 의존할 것이다. 약 0.001 내지 약 100mg/kg체중/일, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 10mg/kg체중/일의 투여량의 활성 성분 화합물이 유용하다.
다른 구체예에 따르면, 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 또한 코르티코스테로이드, 기관지 확장제제, 항천식제(마스트 세포 안정화제), 항염증제, 항류마티즘제, 면역억제제, 항대사제, 면역조절제, 항건선제 및 항당뇨제로 이루어진 군으로부터 선택되는 추가 제제를 포함할 수도 있다. 이들 부류 각각내의 특정 화합물은 문헌["Comprehensive Medicinal Chemistry", Pergamon Press, Oxford, England, pp. 970-986(1990)]에서 적절한 군의 제목하에 나열된 것들중 임의의 것으로부터 선택될 수 있으며, 상기 문헌의 내용은 참고로 본문에 통합된다. 테오필린, 설파살라진 및 아미노살리실레이트(항염증제); 사이클로스포린, FK-506 및 라파마이신(면역 억제제); 사이클로포스파미드와 메토트렉세이트(항대사제); 및 인터페론(면역 조절제) 같은 화합물 역시 이 그룹내에 포함된다.
다른 구체예에 따르면, 본 발명은 세포 부착-관련 염증과 세포 부착-관련 면역 반응 또는 자가면역 반응을 예방하거나 억제하거나 저해하는 방법을 제공한다. VLA-4-관련 세포 부착은 다양한 염증, 면역 및 자가면역 질환에서 중심 역할을 한다. 따라서, 본 발명의 화합물에 의한 세포 부착의 억제는 염증, 면역 및 자가면역 질환을 치료하거나 예방하는 방법에서 이용될 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 방법으로 치료되는 질병은 천식, 관절염, 건선, 이식 거부, 다발성 경화증, 당뇨병 및 염증성 장 질환으로부터 선택된다.
이 방법들에서는 단독치료로 본 발명의 화합물을 이용하거나 항-염증제 또는 면역억제제와 함께 본 발명의 화합물을 이용할 수도 있다. 그러한 병용 치료는 단일 제형으로 제제를 투여하거나, 또는 동시에 또는 시차를 두고 투여되는 다수 제형의 투여를 포함한다.
본 발명이 더욱 완전히 이해될 수 있도록, 하기 실시예가 개시된다. 이들 실시예는 단지 예시의 목적이며 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다.
용액에서 아미드 결합 형성을 위한 일반 과정
과정 A: EDC/HOBt와의 결합
0℃의 DMF내의 카르복실산 용액(1.2eq)을 HOBT(1.8eq.)와 EDC(1.4eq.)로 처리했다. 혼합액을 0℃에서 1 내지 2시간 동안 교반하고 이어서 유리 아민(1.0 eq., TEA 또는 DIPEA로 중화됨)을 첨가했다. 실온에서 3시간 이상 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물(1X), 5% 수성 시트르산(2X), 포화 NaHCO3(2X) 및 염수(1X)로 세척하고, Na2SO4 또는 MgSO4에서 건조하고, 진공에서 농축했다.
과정 B: 활성화된 에스테르(N-히드록시숙시네이트 또는 염화물)를 이용한 결합
CH2Cl2내의 유리 아민 용액(1-1.2 eq., TEA 또는 DIPEA로 중화됨)을 0℃ 또는 실온에서 활성화된 에스테르 또는 아실 할로겐화물(1 eq.)로 처리했다. 1시간 이상 실온에서 교반한 후, 반응 혼합물을 5% 수성 시트르산(2X), 포화 NaHCO3(2X) 및 염수(1X)로 세척하고, Na2SO4 또는 MgSO4에서 건조하고, 진공에서 농축했다.
용액에서 우레아 형성을 위한 일반 과정:
과정 C: 이소시아네이트와 아민으로 우레아 형성하기.
CH2Cl2내의 아민(1 eq.)과 TEA (1 eq.) 용액을 이소시아네이트 (1 eq.)로 처리하고 0.5시간 이상 실온에서 교반했다. 진공에서 농축한 후, 산물을 그대로 이용하거나 또는 크로마토그래피에 의해 정제했다.
용액에서의 탈보호를 위한 일반 과정:
과정 D: TFA로 BOC 제거하기
0℃에서 CH2Cl2내의 tBuOC(O)NH-R(R은 적절한 작용기로 선택적으로 치환된 알킬임) 용액을 트리플루오로아세트산으로 처리했다. 반응액을 실온까지 가온한 뒤 1 내지 2시간 동안 교반했다. 진공에서 농축한 후 얻어진 아민/TFA 염을 저장하고 사용하기 전에 TEA 또는 DIPEA로 중화시켰다.
과정 E: HCl로 BOC 제거하기
0℃에서 디옥산내의 tBuOC(O)NH-R(R은 임의의 수의 적절한 작용기로 선택적으로 치환된 알킬임) 용액을 디옥산내의 4N HCl로 처리했다. 반응액을 실온까지 가온하고 1 내지 2시간 동안 교반했다. 진공에서 농축한 후 얻어진 아민/HCl염을 저장하고 사용하기 전에 TEA 또는 DIPEA로 중화시켰다.
과정 F: 수소화반응
메탄올, 물, 에틸 아세테이트, 및/또는 DMF내의 출발 물질과 10% Pd/C의 혼합물을 수소하에서(40 내지 50psi) 2시간 이상 실온에서 격렬하게 교반했다. 얻어진 혼합물을 셀라이트 플러그를 통해 여과한 뒤 여액을 진공에서 농축했다.
고체 지지체 상에서 아미드 결합 형성을 위한 일반 과정:
과정 G: DCC/HOBt와의 결합
NMP내의 수지(수지 MCBl의 제조 방법은 하기 참조), tBuOC(O)NH-AAx-COyH(AA는 아미노산 또는 작용성 등가물) 또는 R-COyH(10eq.), HOBt(10eq.), DCC(10eq.) 및 N-메틸모르포린(3eq.)의 혼합물을 실온에서 0.5시간 이상 섞었다. 이어서 수지를 NMP(2X)와 CH2Cl2(3X)로 세척했다.
과정 H: 아민을 이용한 수지의 치환
DMF내의 수지와 아민(xs)의 혼합물을 실온에서 6시간 동안 섞었다. 이어서 수지를 메탄올(3X)로 세척하고 혼합된 용액을 진공에서 농축했다.
고체 지지체 상에서의 탈보호를 위한 일반 과정:
과정 I: TFA/CH2Cl2로 BOC 제거하기
수지와 50% TFA/CH2Cl2의 혼합액을 실온에서 0.5시간 이상 섞었다. 이어서 수지를 CH2Cl2(2X), 이소프로판올(1X) 및 CH2Cl2(3X)로 세척했다.
과정 J: 스캐빈저와 함께 HF의 처리
보호된 산물을 -10 내지 0℃에서 1.5시간 이상 스캐빈저로서 아니솔 또는 티오아니솔 존재하에서 HF로 처리했다. 0℃에서 N2 기류로 HF를 제거했다.
실시예 1
공통된 중간체의 합성
숙신이미딜 3-이소퀴놀린카르복실레이트(iOn-OSu):
0℃의 DMF내의 3-이소퀴놀린카르복실산(1.2eq.) 용액을 EDC(1.4eq.)로 처리했다. 혼합액을 0℃에서 1 내지 2시간 동안 교반하고 이어서 N-히드록시숙신이미드(1.0eq.)를 첨가했다. 실온에서 3시간 이상 교반한 후, 반응 혼합물을 60% 포화 NaHCO3에 붓고 산물을 여과했다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 9.35 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.09 (m, 1H), 7.96 (m, 1H), 7.82 (m, 2H), 2.94 (s, 4H).
숙신이미딜 2-퀴놀린카르복실레이트 (On-OSu):
0℃에서 DMF내의 2-퀴놀린 카르복실산(1.2eq.)용액을 EDC(1.4eq.)로 처리했다. 혼합액을 0℃에서 1 내지 2시간 동안 교반하고 이어서 N-히드록시숙신이미드(1.0eq.)를 첨가했다. 실온에서 3시간 이상 교반한 후, 반응 혼합물을 60% 포화 NaHCO3에 붓고 산물을 여과했다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 8.35 (d, 1H), 8.27 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.80 (m, 1H), 7.68 (m, 1H), 2.91 (s, 4H).
메틸 4-이소시아나토페닐아세테이트(KCl):
TEA(25㎖, 18g, 178.2 mmol)와 CH2Cl2(200㎖)내의 메틸 p-아미노페닐아세테이트(9.8g, 59.4mmol)의 잘 교반된 차가운 용액을 COCl2(톨루엔내의 1.9M 용액 96㎖)로 1시간에 걸쳐 처리했다. 반응 혼합물을 0℃에서 추가로 1시간 동안 교반했다. 반응 혼합물을 농축하고 3:1 에테르/페트 에테르(125㎖)를 첨가했다. 혼합물을 여과하고 여과액을 농축하여 갈색 액체의 KCl을 얻었다. 미정제 산물을 증류(118-120℃/1.0mm)에 의해 정제하여 순수 KCl(8.5g, 75%)을 무색의 액체로 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.20 (d, J=8.4Hz), 7.02 (d, J=8.4Hz), 3.69 (s, 3H), 3.48 (s, 2H).
4-페닐우레이도페닐아세트산:
과정 C를 이용하여 4-아미노-페닐아세트산과 페닐 이소시아네이트로 4-페닐우레이도페닐아세트산을 제조했다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 8.72-8.64 (m, 2H), 7.44 (d, 2H), 7.36 (d, 2H), 7.28 (d, 2H), 7.16 (d, 2H), 6.96 (t, 1H), 3.52 (s, 2H); m/z 272.
4-o-톨릴우레이도페닐아세트산:
과정 C를 이용하여 4-아미노-페닐아세트산과 o-톨릴 이소시아네이트로 4-o-톨릴우레이도페닐아세트산을 제조했다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 8.97 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.38 (d, 2H), 7.17-7.09 (m, 4H), 6.92 (t, 1H), 3.48 (s, 2H), 2.23 (s, 3H); m/z 285.
4-(2-플루오로페닐)우레이도페닐아세트산:
과정 C를 이용하여 2-플루오로아닐린과 KCl로 4-(2-플루오로페닐)우레이도페닐아세트산을 제조했다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 9.00 (s, 1H), 8.51 (d, 2.4Hz, 1H), 8.14 (dd, 8.3Hz, 1.5Hz, 1H), 7.37 (d, 8.5Hz, 2H), 7.07-7.25 (m, 4H), 6.99 (m, 1H), 3.48 (s, 2H).
4-(2-히드록시페닐우레이도)페닐아세트산:
과정 C를 이용하여 2-히드록시아닐린과 KCl로 4-(2-히드록시페닐우레이도)페닐아세트산을 제조했다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 9.90 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.02 (bd, 1H), 7.37 (d, 2H), 7.13 (d, 2H), 6.70-6.97 (m, 3H), 3.48 (s, 2H).
N-숙신이미딜 4-(2-(3-메틸피리딜우레이도)페닐아세테이트:
하기와 같은 세 단계로 제조되었다:
2-아미노-3-메틸피리딘과 KCl을 이용한 과정 C로 메틸 4-(2-(3-메틸피리딜-우레이도)페닐아세테이트를 얻었다.
메탄올내의 메틸 4-(2-(3-메틸피리딜우레이도)페닐아세테이트(1eq.)용액을 1N NaOH(2eq.)로 처리했다. 반응액을 16시간 동안 교반하고, 이어서 1N HCl로 pH 7까지 주의깊게 산성화시키고 이어서 아세트산으로 pH 3까지 산성화시켰다. 산물을 여과하고 메탄올 이어서 에테르로 세척하여 4-(2-(3-메틸피리딜우레이도)페닐아세트산을 얻었다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 11.97 (s, 1H), 8.64 (brs, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.62 (d, 8.4Hz, 2H), 7.33 (d, 8.4Hz, 2H), 7.09 (m, 1H), 3.62 (s, 2H), 2.38 (s, 3H); m/z 286.
DMF내의 4-(2-(3-메틸피리딜우레이도)페닐아세트산(1eq.), N-히드록시숙신이미드(1.2eq.) 및 EDC(1.2eq.) 용액을 TEA로 염기성(pH 10)으로 만들었다. 실온에서 12시간 이상 교반한 후, 반응물을 60% 포화 NaHCO3에 붓고 산물을 여과했다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 12.04 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.72 (m, 3H), 7.42 (m, 2H), 7.10 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 2.98 (3, 4H), 2.38 (s, 3H); m/z 383.
N-숙신이미딜 4-(2-피리딜우레이도)페닐아세테이트:
하기의 세 단계로 제조하였다:
2-아미노피리딘과 KCl로 과정 C를 이용하여 메틸 4-(2-피리딜우레이도)페닐아세테이트를 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 8.20 (s, 2H), 7.62-7.51 (m, 3H), 7.33 (d, 2H), 7.01 (d, 2H), 6.89-6.85 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.59 (s, 2H).
메탄올(20㎖)내의 메틸 4-(2-피리딜우레이도)페닐아세테이트 (5.7g, 20.0 mmol) 용액을 1N NaOH(40㎖)로 처리했다. 반응물을 16시간 동안 교반하고, 이어서 1N HCl로 pH 7까지 주의깊게 산성화시키고 이어서 아세트산으로 pH 3까지 산성화시켰다. 산물을 여과하고 메탄올과 에테르로 세척하여 4-(2-피리딜)우레이도페닐아세트산(4.7g, 87%)을 백색 분말로 얻었다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 10.62 (bs, 1H), 9.53 (bs, 1H), 8.39 (d, 1H), 7.82 (t, 1H), 7.63-7.55 (m, 1H), 7.33-7.27 (d, 2H), 7.14-7.08 (m, 1H), 3.62 (s, 3H).
DMF내의 4-(2-피리딜)우레이도페닐아세트산 (1eq.), N-히드록시숙신이미드(1.2eq.) 및 EDC(1.2eq.)의 용액을 TEA로 염기성(pH 10)으로 만들었다. 실온에서 12시간 이상 교반한 후, 반응물을 60% 포화 NaHCO3에 붓고 산물을 여과했다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 10.08 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.39 (m, 1H), 7.86 (m, 1H), 7.62 (m, 3H), 7.38 (d, 2H), 7.12 (m, 1H), 4.15 (s, 2H), 2.91 (s, 4H); m/z 369.
3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세트산:
3-메톡시-4-니트로벤조산으로부터 하기와 같은 여섯 단계로 제조되었다:
3-메톡시-4-니트로벤조산(2.01g, 10.2mmol)과 티오닐 클로라이드(2.3㎖, 31.5mmol)의 혼합액을 80-90℃에서 1.5시간 동안 교반했다. 반응물을 농축하고 잔여물을 에테르로 희석했다. 상기 유기 용액을 포화 수성 NaHCO3(2X), 물, 이어서 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 황산마그네슘에서 건조시키고 농축하여 3-메톡시-4-니트로벤조일 클로라이드(1.92g, 87%)를 백색 고체로 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.95-7.70 (m, 3H), 4.06 (s, 3H).
TMSCHN2(헥산내의 2M, 1.5 ㎖, 3.0 mmol)와 트리에틸아민(420㎕, 3.0 mmol)의 차가운(0℃) 용액을 아세토니트릴(8.5㎖)내의 3-메톡시-4-니트로벤조일 클로라이드(0.52g, 2.4 mmol)용액으로 처리했다. 반응물을 0℃에서 24시간 동안 교반하고 이어서 농축했다. 잔여물을 포화 수성 NaHCO3로 슬러리화고 혼합물을 에테르(3X)로 추출했다. 결합된 에테르 세척물을 물로 세척하고 이어서 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 황산마그네슘에서 건조하고 농축하여 ω-디아조-3-메톡시-4-니트로아세토페논(0.53g, 100%)을 황색 포옴으로 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.88 (d, 10Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.27 (d, 10Hz, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.02 (s, 3H).
t-BuOH(100㎖)내의 ω-디아조-3-메톡시-4-니트로아세토페논(7.95 g, 35.9 mmol) 환류 용액을 트리에틸아민(15 ㎖)내의 실버 벤조에이트(2.50g, 10.9 mmol) 여과 용액으로 1시간에 걸쳐 적가하면서 처리했다. 45분 동안 환류한 후, 탈색 탄소를 첨가하고 뜨거운 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과했다. 여액을 농축하고 잔여물을 에틸 아세테이트로 희석했다. 상기 유기 용액을 5% 수성 탄산수소 나트륨(2X), 물, 5% 수성 시트르산, 물, 이어서 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 황산마그네슘에서 건조시키고 농축하여 t-부틸 3-메톡시-4-니트로페닐아세테이트(8.92g, 93%)를 갈색유로 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.83 (d, 8.3Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.93 (d, 8.3Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 1.45 (s, 9H).
에틸 아세테이트(8 ㎖)와 메탄올(2 ㎖)내의 t-부틸 3-메톡시-4-니트로페닐아세테이트(0.144g, 0.539 mmol)와 탄소상의 10% Pd(0.155 g)의 혼합물을 2시간 동안 수소(40-60psi)하에서 교반했다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고 여액을 농축하여 t-부틸 4-아미노-3-메톡시페닐아세테이트(0.123g, 96%)를 연한 황색유로 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 6.70 (m, 3H), 4.04 (bs, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.42 (s, 2H), 1.43 (s, 9H).
t-부틸 4-아미노-3-메톡시페닐아세테이트와 페닐 이소시아네이트를 이용한 과정 C를 통해 t-부틸 3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세테이트를 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 8.00 (d, 11Hz, 1H), 7.65-6.94 (m, 7H), 6.80 (d, 9.0Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.45 (s, 2H), 1.44 (s, 9H).
트리플루오로아세트산(5.0 ㎖)내의 t-부틸 3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세테이트(0.108 g, 0.303 mmol)용액을 30분 동안 교반했다. 반응물을 농축하고 잔여물을 메틸렌 클로라이드(2X), 이어서 에테르와 함께 동시 증발시켜 3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세트산(0.090g, 99%)을 백색 포옴(foam)으로 얻었다: 1H NMR (CD3SOCD3, 300MHz, ppm) 9.28 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (d, 7.5Hz, 1H), 7.58-7.15 (m, 5H), 6.91 (bm, 2H), 6.77 (d, 7.5Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3,49 (s, 2H).
N-숙신이미딜 3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세테이트:
0℃의 DMF내의 3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세트산(1eq.) 용액을 EDC(1.1eq.)로 처리했다. 혼합물을 0℃에서 1 내지 2시간 동안 교반한 후 N-히드록시숙신이미드(1.1eq.)를 첨가했다. 실온에서 3시간 이상 교반한 후, 반응 혼합물을 60% 포화 탄산수소나트륨에 붓고 N-숙신이미딜 3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세테이트를 여과했다.
N-숙신이미딜 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세테이트:
2,6-디클로로-3-니트로피리딘으로부터 하기의 6단계로 제조했다:
메탄올(100 ㎖)내의 2,6-디클로로-3-니트로피리딘(92%, 9.9 g, 47mmol)과 K2CO3분말(6.5 g, 47 mmol)의 슬러리를 실온에서 1주일 동안 교반했다. 반응물을 여과하고 농축했다. 잔여물을 에틸아세테이트와 60% 포화 수성 탄산수소나트륨에서 분배시켰다. 상기 유기 용액을 60% 포화 수성 탄산수소나트륨(2X), 물, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산마그네슘에서 건조하고 농축하여 2-클로로-6-메톡시-5-니트로피리딘과 2-클로로-6-메톡시-3-니트로피리딘(8.9g, 100%)을 연황색 고체로 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 8.31 (d, 8.3Hz, 1H), 8.28 (d, 8.9Hz, 1H), 7.10 (d, 8.3Hz, 1H), 6.82 (d, 8.9Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 4.06 (s, 3H).
THF(250 ㎖)내의 2-클로로-6-메톡시-5-니트로피리딘과 2-클로로-6-메톡시-3-니트로피리딘(8.9g, 47 mmol), t-부틸 메틸 말로네이트(10 ㎖, 60 mmol) 및 NaH(95%, 3.1 g, 120 mmol)의 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반했다. 반응물을 농축하고 잔여물을 트리플루오로아세트산(200 ㎖)으로 2시간 동안 처리했다. 반응물을 농축하고 산물을 플래쉬 크로마토그래피(실리카겔, 95:5 핵산-에틸아세테이트)에 의해 분리하여 메틸 6-(2-메톡시-3-니트로)피리딜아세테이트(3.3g, 62%)를 황색유로 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 8.27 (d, 8.0Hz, 1H), 7.04 (d, 8.0Hz, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H).
에틸 아세테이트(2 ㎖)와 에탄올(1 ㎖)내의 메틸 6-(2-메톡시-3-니트로)피리딜아세테이트(0.047g, 0.21 mmol)와 탄소상 10% Pd(0.063 g)의 혼합물을 수소(40-50 psi)하에서 6시간 동안 교반했다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시키고 여액을 농축하여 메틸 6-(2-메톡시-3-아미노)피리딜아세테이트(0.041g, 100%)를 연황색유로서 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 6.82 (d, 7.6Hz, 1H), 6.65 (d, 7.6Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.65 (s, 2H).
메틸 6-(2-메톡시-3-아미노)피리딜아세테이트와 o-톨릴 이소시아네이트로 과정 C를 이용하여 메틸 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세테이트를 얻었다: 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 8.33 (d, 7.9Hz, 1H), 7.51 (d, 7.8Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.17 (m, 2H), 7.08 (m, 2H), 6.77 (d, 7.9Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.67 (s, 2H), 2.20 (s, 3H).
메탄올 (1.0 ㎖)내의 메틸 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세테이트(0.023 g, 0.070 mmol) 용액을 2M LiOH(90 ㎕, 0.18 mmol)으로 처리했다. 반응물을 18시간 동안 교반하고, 물(5.0 ㎖)로 희석하고, 에테르(2X)로 세척했다. 이어서 상기 수용액을 5% 수성 시트르산으로 산성화시켰다. 산물을 여과하고 물과 에테트로 차례로 세척하여 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세트산(0.014g, 64%)을 백색고체로 얻었다: 1H NMR (CDOD3, 300MHz, ppm) 8.50-8.25 (m, 3H), 7.60 (bd, 1H), 7.28-7.00 (m, 3H), 4.01 (s, 3H), 3.69 (s, 2H), 2.30 (s, 3H); MS, m/z 316.
0℃에서 DMF내의 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세트산(1.61g, 5.10 mmol)용액을 EDC(1.00 g, 5.2 mmol)로 처리했다. 혼합물을 0℃에서 1 내지 2 시간 동안 교반하고 이어서 N-히드록시숙신이미드(0.60 g, 5.2 mmol)를 첨가했다. 3시간 이상 실온에서 교반한 후 반응 혼합물을 60% 포화 탄산수소나트륨에 붓고 N-숙신이미딜 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세테이트를 여과했다.
H-LD(OBn)V-NHCH 3 :
BOC-Val-OSu와 메틸아민을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-LD(OBn)V-NHCH3를 제조했다.
H-LD(OBn)V-OCH 3 :
BOC-Asp(OBn)-OSu와 H-Val-OMe를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-LD(OBn)V-OCH3를 제조했다.
H-LD(OBn)V-OBn:
BOC-Asp(OBn)-OSu와 H-Val-OBn을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 그리고 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-LD(OBn)V-OBn를 제조했다.
H-LD(OBn)VP-OBn:
BOC-Val-OSu와 H-Pro-OBn을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 그리고 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-LD(OBn)VP-OBn를 제조했다.
H-LD(OBn)VP-OMe:
BOC-Val-OH와 H-Pro-OMe를 이용한 과정 A, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 그리고 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-LD(OBn)VP-OMe를 제조했다.
H-LDVP-OH:
BOC-Val-OSu와 H-Pro-OBn을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 F, 그리고 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-LDVP-OH를 제조했다.
H-MD(OBn)VP-OBn:
BOC-Val-OSu와 H-Pro-OBn을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Met-OSu를 이용한 과정 B, 그리고 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-MD(OBn)VP-OBn를 제조했다.
H-LD(OBn)VP-NH 2 :
BOC-Val-OSu와 H-Pro-NH2를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 그리고 과정 D를 순차적으로 이용하여 H-LD(OBn)VP-NH2를 제조했다.
수지(MBC1):
변형된 수지 MBC1(0.437mmol/g)을 문헌에 기재된 과정[Richter, L.S., et al., Tetrahedron Lett. 35, p.5547 (1994)]에 따라 합성했다. MBC1을 사용하기 전에 50TFA/CH2Cl2와 트리에틸실란으로 실온에서 2시간 동안 처리하고 이어서 CH2Cl2(2X), 이소프로판올(1X), CH2Cl2(3X)로 세척했다.
MBC2:
BOC-Asp(OBn)-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, BOC-Leu-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, 이어서 4-페닐우레이도페닐아세트산을 이용한 과정 G를 순차적으로 이용하여 MBC2를 제조했다.
MBC3:
BOC-Val-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, BOC-Asp(OBn)-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, BOC-Leu-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, 이어서 4-페닐우레이도페닐아세트산을 이용한 과정 G를 순차적으로 이용하여 MBC3를 제조했다.
MBC4:
BOC-Pro-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, BOC-Val-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, BOC-Asp(OBn)-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, BOC-Leu-OH를 이용한 과정 G, 과정 I, 이어서 4-페닐우레이도페닐아세트산을 이용한 과정 G를 순차적으로 이용하여 MBC4를 제조했다.
실시예 2
화합물 77:
피콜린산과 H-LD(OBn)V-OBn을 이용한 과정 A 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 77을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 77을 얻었다: m/z 451.
실시예 3
화합물 64:
히드로신남산과 H-LD(OBn)V-OBn을 이용한 과정 A 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 64를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 64를 얻었다: m/z 478.
실시예 4:
화합물 155:
클로로 4-페닐부티레이트와 H-LD(OBn)V-OBn을 이용한 과정 B 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 155를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 155를 얻었다: m/z 492.
실시예 5
화합물 157:
BOC-Asp(OBn)-OSu와 이소부틸아민을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, iQn-OSu를 이용한 과정 B, 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 157을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 157을 얻었다: m/z 457.
실시예 6
화합물 164:
Qn-OSu와 H-LD(OBn)V-NHCH3를 이용한 과정 B 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 164를 제조했다. HPLC에 의한 정제로 표제 화합물 164를 얻었다: m/z 514.
실시예 7
화합물 174:
BOC-Asp(OBn)-OSu와 바리놀을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, Qn-OSu를 이용한 과정 B, 과정 F를 이용하여 화합물 174를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 174를 얻었다: m/z 487.
실시예 8
화합물 177:
BOC-Asp(OBn)-OSu와 H-Thr-OCH를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, 4-메톡시벤젠술포닐 클로라이드를 이용한 과정 B, 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 177을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 177을 얻었다: m/z 532.
실시예 9
화합물 180:
BOC-Val-OSu와 메틸아민을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-N-MeLeu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, 페닐아세틸 클로라이드를 이용한 과정 B, 과정 F를 이용하여 화합물 180을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 180을 얻었다: m/z 491.
실시예 10
화합물 189:
BOC-Val-OSu와 메틸아민을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, 페닐술포닐 클로라이드를 이용한 과정 B, 과정 F를 이용하여 화합물 189를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 189를 얻었다: m/z 499.
실시예 11
화합물 345:
4-o-톨릴우레이도페닐아세트산과 H-LD(OBn)V-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 345를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 345를 얻었다: m/z 606.
실시예 12
화합물 206:
4-o-톨릴우레이도페닐아세트산과 H-LD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 206을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 206을 얻었다: m/z 709.
실시예 13
화합물 144:
4-(2-히드록시페닐우레이도)페닐아세트산과 H-LD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 144를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 144를 얻었다: m/z 711, 24.6분(구배 8).
실시예 14
화합물 145:
4-페닐우레이도페닐아세트산과 H-LD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 145를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 145를 얻었다: m/z 695, 26.8분(구배 8).
실시예 15
화합물 146:
4-(2-히드록시페닐우레이도)페닐아세트산과 H-MD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 146을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물 146을 얻었다: m/z 729, 22.4분(구배 8).
실시예 16
화합물 1:
3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세트산과 H-LD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 1을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물을 얻었다: m/z 725, 28.5분(구배 8).
실시예 17
화합물 2:
3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세트산과 H-MD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 2를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물을 얻었다: m/z 743, 27.0분(구배 8).
실시예 18
화합물 315:
4-o-톨릴우레이도페닐아세트산과 H-MD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 315를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 표제 화합물을 얻었다: m/z 727.
실시예 19
화합물 346:
N-히드록시숙신이미딜 4-(2-(3-메틸피리딜-우레이도)페닐아세테이트와 H-LDVP-OH를 이용한 과정 B를 이용하여 화합물 346을 제조했다. HPLC로 정제하여 화합물 346을 얻었다: m/z 710.
실시예 20
화합물 316:
N-히드록시숙신이미딜 4-(2-피리딜우레이도)페닐아세테이트와 H-LDVP-OH를 이용한 과정 B를 이용하여 화합물 316을 제조했다. HPLC로 정제하여 화합물 316을 얻었다: m/z 696.
실시예 21
화합물 4:
N-히드록시숙신이미딜 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세테이트와 H-LDVP-OH를 이용한 과정 B를 이용하여 화합물 4를 제조했다. HPLC로 정제하여 표제 화합물을 얻었다: m/z 740, 30.7분 (구배 8).
실시예 22
화합물 147:
N-히드록시숙신이미딜 3-메톡시-4-페닐우레이도페닐아세테이트와 H-LD(OBn)VP-NH2를 이용한 과정 B와 과정 F를 이용하여 화합물 147을 제조했다. HPLC로 정제하여 표제 화합물을 얻었다:m/z 724, 26.7 분 (구배 8).
실시예 23
화합물 148:
4-o-톨릴우레이도페닐아세트산과 H-LD(OBn)VP-NH2를 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 이용하여 화합물 148을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 화합물 148을 얻었다: m/z 708, 26.0분 (구배 8).
실시예 24
화합물 317:
N-히드록시숙신이미딜 6-(2-메톡시-3-o-톨릴우레이도)피리딜아세테이트와 H-LD(OBn)VP-NH2를 이용한 과정 B 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 317을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 화합물 317을 얻었다: m/z 739, 28.0분 (구배 8).
실시예 25
화합물 336:
4-(2-플루오로페닐)우레이도페닐아세트산과 H-LD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 A 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 336을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 화합물 336을 얻었다: m/z 713.
실시예 26
화합물 32:
iQn-OSu와 H-LD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 B 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 32를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 화합물 32를 얻었다: m/z 598, 24.7분 (구배 8).
실시예 27
화합물 34:
페닐아세틸 클로라이드와 H-LD(OBn)VP-OBn을 이용한 과정 B 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 34를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 화합물 34를 얻었다: m/z 561, 23.7분 (구배 8).
실시예 28
화합물 39:
3-(-4-히드록시페닐)프로피온산과 H-LD(OBn)VP-OMe를 이용한 과정 A 그리고 이어서 과정 F를 이용하여 화합물 39를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의해 화합물 39를 얻었다: m/z 591, 21.5분 (구배 8).
실시예 29
화합물 42:
BOC-Val-OH와 H-homoPro-OBn을 이용한 과정 A, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, 페닐 아세틸 클로라이드를 이용한 과정 B 이어서 과정 F를 순차적으로 이용하여 미정제 화합물 42를 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의하여 화합물 42를 얻었다: m/z 575, 26.4분 (구배 8).
실시예 30
화합물 52:
BOC-norVal-OH와 메틸아민을 이용한 A, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, Qn-OSu를 이용한 과정 B 그리고 과정 F를 순차적으로 이용하여 화합물 52를 제조했다. HPLC에 의한 정제를 통해 화합물 52를 얻었다: m/z 518, 30.2분 (구배 8).
실시예 31
화합물 46:
BOC-Val-OH와 메틸아민을 이용한 과정 A, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-N-MeLeu-OH를 이용한 과정 A, 과정 D, 3-(4-히드록시페닐)프로피온산을 이용한 과정 A 그리고 과정 F를 순차적으로 이용하여 화합물 46을 제조했다. HPLC에 의한 정제에 의하여 화합물 46을 얻었다: m/z 521, 18.7분 (구배 8).
실시예 32
화합물 61:
BOC-Thr-OSu와 모르포린을 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Asp(OBn)-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, BOC-Leu-OSu를 이용한 과정 B, 과정 D, Qn-OSu를 이용한 과정 B 그리고 과정 F를 순차적으로 이용하여 화합물 61을 제조했다. HPLC에 의한 정제를 통해 화합물 61을 얻었다: m/z 572, 24.0분 (구배 8).
실시예 33
화합물 213:
MBC2 및 벤지아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 213을 제조했다: m/z 588.
실시예 34
화합물 214:
MBC2 및 모르포린을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 214를 제조했다: m/z 568.
실시예 35
화합물 215:
MBC2 및 이소프로필아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 215를 제조했다: m/z 540.
실시예 36
화합물 216:
MBC2 및 시클로헥실아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 216을 제조했다: m/z 580.
실시예 37
화합물 217:
MBC2 및 이소부틸아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 217을 제조했다: m/z 554.
실시예 38
화합물 218:
MBC2 및 피페리딘을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 218을 제조했다: m/z 566.
실시예 39
화합물 318:
MBC3 및 모르포린을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 318을 제조했다: m/z 667.
실시예 40
화합물 319:
MBC3 및 이소프로필아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 319를 제조했다: m/z 640.
실시예 41
화합물 320:
MBC3 및 시클로헥실아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 320을 제조했다: m/z 679.
실시예 42
화합물 321:
MBC3 및 벤질아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 321을 제조했다: m/z 687.
실시예 43
화합물 322:
MBC3 및 피페리딘을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 322를 제조했다: m/z 665.
실시예 44
화합물 323:
MBC3 및 이소부틸아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 323을 제조했다: m/z 653.
실시예 45
화합물 324:
MBC4 및 시클로헥실아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 324를 제조했다: m/z 777.
실시예 46
화합물 325:
MBC4 및 피페리딘을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 325를 제조했다: m/z 763.
실시예 47
화합물 326:
MBC4 및 벤질아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 326을 제조했다: m/z 785.
실시예 48
화합물 327:
MBC 및 이소프로필아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 327을 제조했다: m/z 736.
실시예 49
화합물 328:
MBC4 및 이소부틸아민을 이용한 과정 H와 과정 J를 이용하여 화합물 328을 제조했다: m/z 750.
실시예 50
화합물 363
A. DMF(25㎖)내의 o-톨릴우레이도페닐아세테산(3.53g, 12.4 mmol), H-Leu-OtBu·HCl(2.78g, 12.4 mmol), TBTU(3.98g, 12.4 mmol) 및 iPr2NEt(4.32 mL, 24.8 mmol) 혼합물을 실온에서 밤새 교반했다. 물(10 ㎖)을 첨가하여 산물을 침전시켰다. 미디엄(medium) 프릿(frit)상에서의 여과에 의해 고체를 모으고, 2:1 DMF/H2O(35 ㎖), H2O(25 ㎖), Et2O(2X25 ㎖)로 세척하고 필터(4.18g, 74%)상에서 건조시켰다. 이 산물 모두를 CH2Cl2(16 ㎖)에 현탁하고 TFA(16 ㎖)로 처리하고 실온에서 2시간 동안 교반했다. 반응물을 시럽으로 농축하고 CH2Cl2(2X20 ㎖)로부터 증발시켰다. 잔여물을 Et2O(100 ㎖)로 실온에서 2시간 동안 분쇄했다. 고체를 미디엄 프릿상에서 여과하여 모으고, Et2O(50 ㎖)로 세척하고, 필터(3.40g, 93%)상에서 건조시켰다: MS(FAB) 398.
B. EtOAc(6 ㎖)내의 DCC(0.206g, 1.0 mmol) 및 HOBT(0.135 g, 1.0 mmol) 혼합물을 균질해질 때까지 실온에서 20분 동안 교반했다. Fmoc-Asp-OtBu(0.411g, 1.0 mmol), 피페로닐아민(0.12 ㎖, 1.0 mmol) 및 N-메틸모르포린(0.22 ㎖, 2.0 mmol)을 첨가했다. 밤새 교반한 후, 반응물을 여과하여 고체를 제거하고 케이크를 신선한 EtOAc(10 ㎖)로 세척했다. 여액을 물(2X), 5% 시트르산(1X), 5NaHCO3(1X) 및 염수(1X)로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조했다. 100% CHCl3로 시작하여 2% MeOH/CHCl3로 용출하는 SiO2상에서의 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 순수한 산물 0.54g(100%)을 고체로 얻었다: mp=128-130℃; TLC(2% MeOH/CHCl3) Rf=0.10; MS (FAB) 545; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.75-7.72 (m, 2H), 7.59-7.56 (m, 2H), 7.40-7.34 (m, 2H), 7.30-7.25 (m, 2H), 6.71-6.66 (m, 3H), 6.13-6.10 (m, 2H), 5.84 (s, 2H), 4.46 (m, 1H), 4.38-4.16 (m, 5H), 2.86 (dd, 1H, J=4.7, 15.6Hz), 2.72 (dd, 1H, J=4.16, 15.6Hz), 1.45 (s, 9H).
C. 실시예 50B의 산물(0.25g, 0.46 mmol), 피페리딘(0.45 ㎖, 4.6 mmol) 및 CH2Cl2(0.45 ㎖)를 실온에서 90분 동안 교반했다. 반응물을 고체 잔여물로 증발시켰다. MeOH/EtOAc 구배를 이용한 SiO2상에서의 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 무색유의 산물(0.138g, 93%)을 얻었다: MS (FAB) 323; TLC(10% MeOH/EtOAc) Rr=0.15; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.63 (brs, 1H), 6.75-6.68 (m, 3H), 5.90 (s, 2H), 4.34 (dd, 1H, J=5.7, 14.7Hz), 4.28 (dd, 1H, J=5.7, 14.7Hz), 3.65 (dd, 1H, J=3.4, 9.3Hz), 2.62 (dd, 1H, J=3.4, 15.7Hz), 2.38 (dd, 1H, J=9.3, 15.7Hz), 1.74 (s, 2H), 1.42 (s, 9H).
D. 실시예 50C의 산물(2.55g, 7.91 mmol)과 에센모세르(Eschenmoser's) 염(1.61g, 8.70 mmol)을 MeCN(80 ㎖)에서 불활성 분위기하에서 42시간 동안 환류했다. 반응물을 실온까지 냉각하고 증발시켜 건조시켰다. 잔여물을 5% NaHCO3로 희석하고 EtOAc(3X)로 추출했다. 결합된 유기 추출물을 5% NaHCO3(1X), H2O(1X) 및 염수(1X)로 세척하고 황산마그네슘에서 건조했다. 미정제 산물을 Et2O(250㎖)에 용해하고 Et2O와 EtOAc로 용출하면서 SiO2의 짧은 패드를 통해 통과시켰다. 그렇게 얻어진 다소 불순한 산물을 냉장 Et2O(30 ㎖)로 분쇄하여 추가로 정제하고 여과에 의해 모아서 백색 고체(0.904 g, 34%)를 얻었다: mp=121-123℃; TLC (10% MeOH/CHCl3) Rf=0.59; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 6.75-6.66 (m, 3H), 5.92 (s, 2H), 4.66 (A of AB, 1H, J=14.7Hz), 4.23 (B of AB, 1H, J=14.7Hz), 4.15 (ABq, 2H, J=11.9Hz), 3.68 (dd, dd, 1H, J=5.2, 10.9Hz), 2.72 (dd, 1H, J=5.2, 17.3Hz), 2.41 (dd, 1H, J=10.9, 17.3Hz), 1.45 (s, 9H); C, H, N for C17H22N2O5, 이론값-- C:61.07, H:6.63, N:8.38, 실측값-- C:60.80, H:6.59, N:8.22.
E. 실시예 50D의 산물(0.50 g, 1.5 mmol), 실시예 50A의 산물(0.596 g, 1.5 mmol) 및 EDC(0.314 g, 1.64 mmol)를 NMP(3 ㎖)에서 실온에서 48시간 동안 교반했다. 반응물을 EtOAc(60 ㎖)에 붓고, H2O(8X6 ㎖), 염수(1X)로 세척하고, 황산 마그네슘에서 건조시켰다. 100% CHCl3로 시작하여 30% EtOAc/CHCl3로 용출하는 SiO2상의 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 산물(0.94g, 88%)을 연황색유로 얻었다: MS (FAB) 714; TLC (10% MeOH/CHCl3) Rf=0.40; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) (부분입체 이성질체의 구조 및 표시와 일치함)
F. 실시예 50E(0.94g, 1.32mmol)의 산물을 TFA(10㎖)에서 실온에서 3시간 동안 교반했다. 반응물을 농축 건조하고, 잔여물을 CH2Cl2(3X10 ㎖)로부터 증발시켰다. 미정제 산물을 실온에서 Et2O로 분쇄하고, 여과하여 모으고 필터상에서 건조시켰다(0.733g, 84%): MS (FAB) 658 (M+H), 680 (M+Na); TLC (5% HOAc/EtOAc), Rf=0.15; 1H NMR (d6-DMSO, 300MHz, ppm) (부분입체 이성질체의 구조 및 표시와 일치함)
실시예 51
화합물 364:
A. 실시예 50B에 설명된 것과 동일한 방법으로, Fmoc-Asp-OtBu(8.23 g, 20.0 mmol)를 H-Gly-OBn·HCl(4.03 g, 20.0 mmol)과 반응시켰다. EtOAc/헥산 구배를 이용한, SiO2상에서의 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 산물(9.8 g, 88%)을 유연한 고체로 얻었다: MS (FAB) 559; TLC (10% MeOH/CHCl3) Rf=0.71;
1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.73 (d, 2H, J=7.5Hz), 7.59 (d, 2H, J=7.4Hz), 7.40-7.26 (m, 9H), 6.44 (br s, 1H), 6.09 (d, 1H, J=8.3Hz), 5.13 (s, 2H), 4.52-4.49 (m, 1H), 4.41-4.29 (m, 2H), 4.21 (t, 1H, J=7.1Hz), 4.04 (d, 2H, J=5.2Hz), 2.95 (dd, 1H, J=4.6, 15.7Hz), 2.79 (dd, 1H, J=4.3, 15.7Hz), 1.46 (s, 9H).
B. 실시예 51A의 산물(9.8g, 17.54 mmol)을 실시예 50C에 설명된 것과 동일한 방법으로 탈보호시켰다. 100% EtOAc와 5% MeOH/CHCl3를 이용하여 SiO2 패드를 통해 여과시켜 산물(4.24 g, 72%)을 오일로서 얻었다: MS (FAB) 337; TLC (3% MeOH/EtOAc) Rf=0.15; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 8.00 (t, 1H, J=5.4Hz), 7.30-7.21 (m, 5H), 5.07 (s, 2H), 3.98 (AB of ABX, 2H, J=5.4, 18.1Hz), 3.60 (dd, 1H, J=3.4, 9.2Hz), 2.60 (dd, 1H, J=3.4, 5.4Hz), 2.38 (dd, 1H, J=9.2, 15.4Hz), 1.79(br s, 2H), 1.36 (s, 9H).
C. 실시예 51B의 산물(4.24g, 12.60 mmol)을 실시예 50D에 설명된 것과 동일한 방법으로 고리화시켰다. EtOAc/CHCl3 구배를 이용한 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 산물을 시럽(1.4g, 32%)으로 얻었다: MS (FAB) 349; TLC (1:1 EtOAc/CHCl3) Rf=0.53; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) 7.35-7.25 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.21 (A of AB, 1H, J=17.5Hz), 3.95 (B of AB, 1H, J=17.5Hz), 3.71 (dd, 1H, J=5.1, 11.2Hz), 2.68 (dd, 1H, J=5.1, 17.2Hz), 2.36 (dd, 1H, J=11.2, 17.2Hz), 1.43 (s, 9H).
D. 실시예 51C의 산물(1.40g, 4.02 mmol)을 실시예 50E의 과정을 이용하여 실시예 50A의 산물과 결합시켰다. CHCl3/EtOAc 구배를 이용한 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 산물을 약한, 연황색 포옴(2.21 g, 76%)으로 얻었다: MS (FAB) 728; TLC (1:1 CHCl3/EtOAc) Rf=0.28; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm) (부분입체 이성질체의 구조 및 표시와 일치함)
E. 실시예 51D의 산물(0.15 g, 0.21 mmol)을 실시예 50F에 설명된 대로 탈보호하고 정제했다. 산물은 회색을 띤 백색 고체(0.127 g, 90%)로 얻어졌다: MS(FAB) 672(M+H), 695(M+Na); TLC(9:1:0.1 CHCl3/MeOH/AcOH) Rf=0.54; 1H NMR(d-DMSO, 300MHz, ppm) (부분 입체 이성질체의 구조 및 표시와 일치함).
실시예 52
화합물 365
A. NMP(0.3 ㎖)내의 실시예 51E의 산물(0.100 g, 0.15 mmol), 4-메톡시벤질아민(20 ㎕, 0.15 mmol), TBTU(0.0482 g, 0.15 mmol)을 iPr NEt(78 ㎕, 0.45 mmol)로 처리했다. 실온에서 밤새 교반한 후, 반응물을 EtOAc(10 ㎖)로 희석하고, 물(5X2 ㎖), 5% 시트르산(2X2 ㎖), 5% NaHCO3(2X2 ㎖)와 염수(1X2 ㎖)으로 세척하고 황산 마그네슘에서 건조했다. 2% MeOH/CHCl3로 용출하고 이어서 4% MeOH/CHCl3로 용출하면서 SiO2의 짧은 패드를 통해 여과시켜 산물을 포옴(0.087g, 73%)으로 얻었다: MS(FAB) 792; TLC(9:1 CHCl3/MeOH) Rf=0.41; 1H NMR (CDCl3, 300MHz, ppm)(부분 입체 이성질체의 구조 및 표시와 일치함).
B. MeOH(10 ㎖)내의 실시예 52A의 산물(0.087 g, 0.11 mmol)과 데구사 타입(Degussa type) E101 NE/W 10% Pd/C(0.017 g)의 현탁액을 18시간 동안 25psi하에서 수소화 처리했다. 반응물을 MeOH로 세척하면서 셀라이트를 통해 여과시켰다. 여액을 증발 건조시켰다. 잔여물을 Et2O로 분쇄하고 얻어진 베이지색 고체를 여과하여 모았다(36.1 mg, 47%): MS(FAB) 701(M+H), 723(M+Na); 1H NMR (d6-DMSO, 300MHz, ppm)(부분 입체 이성질체의 구조 및 표시와 일치함).
실시예 53
BSA-CS1에 대한 VLA4-의존성 부착의 억제
이 분석은 본 발명의 VLA4-지향성 억제 화합물의 성능을 평가하기 위해 이용되었다.
1. CS1의 BSA에의 연결
BSA-SMCC(Pierce Chemical, Rockford, IL; Catalog # 77115)를 10 mg/mL의 농도로 물에 용해시켰다. 통상적인 고체상 화학에 의해 합성하고 HPLC에 의해 정제한 [서열 번호 4]: Cys-Tyr-Asp-Glu-Leu-Pro-Gln-Leu-Val-Thr-Leu-Pro-His-Pro-Asn- Leu-His-Gly-Pro-Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr("Cys-Tyr-CS1 펩티드")를 10mM HEPES pH 5, 50 mM NaCl 및 0.1mM EDTA에 10 mg/㎖ 농도로 용해시켰다. 이어서 BSA-SMCC 500 ㎕, Cys-Tyr-CS1 펩티드 250 ㎕ 및 1mM HEPES pH 7.5 75 ㎕를 혼합하고 30분동안 연결 반응을 진행시켰다. 베타-머컵토에탄올 1㎕를 첨가하여 반응을 정지시켰다. SDS-PAGE로 가교에 대해 시료를 분석했다. 이 반응은 각 BSA 분자에 연결된 다수의 Cys-Tyr-CS1 분자를 생성했다.
2. 부착 분석을 위한 플레이트의 준비
린브로 타이터텍(Linbro titertek) 폴리스티렌 96-웰 평면 바닥 플레이트(Flow Laboratories, Maclean, VA; catalog #76-231-05)의 웰을 0.05M NaHCO3(15mM NaHCO3, 35mM Na2CO3) pH9.2내에 1㎍/㎖로 희석된 전술한 BSA-CS1 용액으로 피복했다. 비특이적인 세포 결합(NSB)을 평가하기 위해 일부 웰은 CS1으로 피복하지 않았다. 이어서 플레이트를 4℃에서 밤새 교반했다.
배양후, 플레이트를 뒤집어 블롯팅하여 웰의 내용물을 제거했다. 이어서 모든 웰을 실온에서 최소 한 시간 동안 PBS, 0.02% NaN3내의 1% BSA 100㎕로 차단하였다.
3. 형광으로 표지된 라모스(Ramos) 세포의 제조
라모스 세포를 1% BSA를 함유한 RPMI 1640 배양 배지에서 배양하고, 유지하고 표식했다. 분석하기 바로 전에, 2',7'-비스-(2-카르복시에틸)-5( 및 -6)카르복시플루오르세인 아세톡시메틸 에스테르("BCECF-AM"; Molecular Probes Inc., Eugene, Oregon; catalog #B-1150)를 라모스 세포 배양액(4X106 세포/㎖)에 2 ㎛의 최종 농도로 첨가했다. 37℃에서 20분 동안 세포를 배양했다.
표식후, 세포를 분석 완충액(24mM TRIS, 137mM NaCl, 2.7mM KCl, pH 7.4, 0.1%BSA와 2mM 글루코스 함유)으로 두 번 세척하여 배양 배지에서 유래된 임의의 양이온을 제거했다. 이어서 세포를 4X106 세포/㎖가 되도록 분석 완충액에 현탁하고 세포의 표면상의 VLA4를 상승 조절하기 위해 2mM MnCl2를 첨가했다.
4. 분석의 실행
분석을 실행하기 바로 전에, 96-웰 플레이트로부터 BSA 차단 용액을 제거하고 100 ㎕의 분석 완충액으로 웰을 세척했다. 이어서 각 웰에 시험 세포 부착 억제 화합물 25 ㎕를 2X 최종 농도로 첨가하고 표식된 라모스 세포 25 ㎕를 첨가했다. 최종 농도는 일반적으로 0.01nM-10㎛의 예상 IC50 범위에서 선택되었다. 화합물의 각 농도는 3중으로 시험되었다. 화합물과 세포를 실온에서 30분 동안 배양했다.
이어서 플레이트의 내용물을 비우고 웰을 분석 완충액으로 4번 세척했다. 광학 현미경으로 NSB 웰을 검사했다. 만일 수 개 이상의 세포가 NSB웰에 결합하면, 과다한 비-특이적 결합 세포를 제거하기 위해 플레이트를 한 번 더 세척했다.
CS1 펩티드-피복된 웰에의 라모스 세포의 결합은, 각 웰에 100 ㎕의 분석 완충액을 첨가하고 485nm 여기와 530nm 방출로 설정된 밀리포아 사이토플루오르 2300 시스템 플레이트 판독기에서 형광을 정량하여 측정했다. 결합은 IC50--대조군 결합의 50%가 일어나는 억제제 농도로 표현되었다. 결합율(%)은 하기 식에 의해 계산된다:[(FTB-FNS)-(FI-FNS)]/[(FTB-FNS)] x 100=결합율(%), 이때, FTB는 첨가된 억제제 없이 CS1-함유 웰에 결합된 총 형광이며; FNS는 CS1이 없는 웰에서 결합된 형광이며; FI는 본 발명의 억제제를 함유한 웰에서 결합된 형광이다.
본 발명에 따른 다른 화합물은 유사하게 분석되었다. 이들 화합물의 각각을 위한 IC50 범위는 하기 표에 나타내진다:
표 약어: A - ＜50 nm; B- 50 nm-10 ㎛; C-＞10 ㎛; nd: 미결정.
이 표에서 시험된 모든 화합물은 IC50＜1 mM임이 입증되었다.
실시예 54
VLA4-제시 세포의 VCAM-IgG에의 직접 결합
이어서, 본 발명의 화합물이 VCAM/VLA4 결합을 억제하는 능력을 VCAM-IgG-알카라인 포스파타아제(alkaline phosphatase) 연결체를 이용하여 검사했다. 이 분석을 수행하기 위하여, 밀리포아 멀티스크린 분석 시스템(Millipore Coro., Bedford, MA)을 이용하여 효율적으로 세포를 세척했다.
1. VCAM-IgG-AP 연결체의 제조
VCAM 2D-IgG 발현 벡터의 제조, 상기 발현 벡터로 CHO 세포의 형질감염 및 얻어진 발현 산물의 정제는 국제 출원 공개 제90/13300에 개시되며, 그 내용은 본문에 참고로 통합된다.
정제된 VCAM 2D-IgG(10mM HEPES, pH7.5내의 5mg/㎖) 1.2㎖을 트라우트(Traut) 시약(수중 2-이미노티오레인, 20mg/㎖; Pierce Chemical, Rockford, IL.) 44 ㎕와 30분 동안 실온에서 반응시켰다. 시료를 100mM NaCl, 10mM MES, pH 5.0으로 평형된 15 ㎖ 세파덱스 G-25 칼럼에서 탈염시켰다. 1㎖ 분획들을 모으고 280nm에서의 흡광도를 결정했다. 두 개의 피크 분획을 모았다.
송아지 장 알카라인 포스파타아제(19mg/㎖; Pierce Chemical, Rockford, IL) 1 ㎖를 술포-SMCC(수중 30 mg/㎖) 100 ㎕ 및 1M HEPES, pH 7.5 100 ㎕와 실온에서 35분 동안 반응시켰다. 반응 혼합물을 150mM NaCl, 10mM HEPES, pH 6.0으로 평형된 12 ㎖ 세파덱스 G-25 칼럼상에서 탈염시켰다. 1 ㎖ 분획을 모으고 280nm에서의 흡광도를 결정했다. 두 개의 피크 분획을 모아서 얼음에 저장했다.
알카라인-포스파타아제-SMCC와 VCAM 2D-IgG-이미노티레인 부가물을 30분 동안 실온에서 배양하여 Tris-HCL, pH7.5에서 2:1의 몰비로 가교시켰다. 가교의 정도는 SDS-PAGE로 결정했다. 가교된 산물을 2mM MgCl2와 0.25mM ZnCl2를 첨가하여 안정화시키고 4℃에서 저장했다.
2. 결합 분석
먼저 0.1% 트윈(Tween)20과 2%BSA를 함유한 PBS 275 ㎕("차단 완충액")를 각 웰에 첨가하고 1시간 동안 실온에서 배양하여 96-웰 여과 플레이트를 차단했다. 이어서 플레이트를 진공 다기관에 놓고 차단 완충액을 여과 웰의 바닥을 통해 폐기물 수집 쟁반으로 배수했다. 이어서 웰을 0.1% BSA, 2mM 글루코스 및 1mM HEPES,pH7.5를 함유한 트리스-완충 염수("분석 완충액") 200-250㎕로 세 번 세척했다. 이어서 플레이트를 배수시키고 플레이트의 밑면에 있는 완충액을 제거하기 위해 종이 타월로 플레이트 밑면의 액을 흡수하였다.
이어서 VCAM-IgG-AP의 저장 용액(분석 완충액내에 4㎍/㎖)을 제조하여 0.2μ 저 단백질 결합 시린지 필터(Gelman Sciences, Ann Arbor, MI # 4454)를 통해 여과시켰다. 이 용액을 분석 완충액에 1:10으로 희석하고 25 ㎕를 세척된 플레이트의 각 웰에 첨가했다.
시험될 세포 부착 억제제를 2X 최종 농도로 분석 완충액으로 희석하고 각 희석액 25 ㎕를 플레이트의 웰 세 개씩에 첨가했다. 이용된 최종 농도는 0.01nM- 10㎛범위였다. 전체 결합 및 비-특이적 결합을 위한 대조 웰에는 억제제 대신 분석 완충액 25 ㎕를 첨가했다. 전체 결합 웰은 분석 완충액내의 VCAM-IgG-AP와 세포를 함유했다. 비-특이적 결합 웰은 분석 완충액 중에 VCAM-IgG-AP만을 함유했다.
성장 배지를 제거하기 위해 주카(Jurkat) 세포를 분석 완충액으로 한 번 세척하고 2mM MnCl2를 함유한 분석 완충액내에 8 x 106/㎖로 재현탁했다. 주카 세포 50㎕를 비-특이적 결합 웰을 제외한 각 웰에 첨가하여, 웰당 100 ㎕의 최종 분석 부피를 유지하기 위하여 50 ㎕의 분석 완충액을 첨가했다. 플레이트의 측면을 가볍게 두드려 웰의 내용물을 혼합했다. 이어서 플레이트를 실온에서 60분 동안 배양했다.
60분 배양의 마지막에 웰을 배수하기 위하여 플레이트를 진공 다기관에 놓았다. 바닥의 세포를 방해하지 않도록 주의깊게 1mM MnCl2를 함유한 분석 완충액(세척 완충액) 100 ㎕를 각 웰에 첨가했다. 세척 완충액을 진공에 의해 제거하고 플레이트를 다시 세척 완충액 150 ㎕로 세척했다. 세척 완충액을 다시 배수시킨 후, 플레이트의 바닥면을 종이 타월로 닦았냈다.
이어서, 0.1M 글리신, 1mM ZnCl2, pH 10.5(기질 완충액)내의 4-니트로페닐포스페이트 용액 10mg/㎖을 제조하고 즉시 100 ㎕를 각 웰에 첨가했다. 플레이트를 실온에서 30분 동안 배양하여 비색 반응을 진행시켰다. 3N NaOH 100 ㎕를 각 웰에 첨가하여 반응을 정지시켰다.
이어서 96-웰 여과 플레이트의 내용물을 진공 다기관을 이용하여 96-웰 평면 바닥 플레이트로 직접 옮겼다. 세포에 결합된 VCAM 연결체의 양을 결정하기 위하여 405nm의 파장에서 플레이트를 읽었다. 결합율(%)은 하기 식에 의해 계산된다:
[(ATB-ANS)-(AI-ANS)]/[(ATB-ANS)] x 100=결합율(%), 이때 ATB는 첨가된 억제제 없이 CS1-함유 웰의 405nm에서의 흡광도이며; ANS는 CS1이 없는 웰의 405nm에서의 흡광도이며; AI는 본 발명의 억제제를 함유한 웰의 405nm에서의 흡광도이다.
동일한 분석으로 본 발명의 다른 화합물을 분석했다. 일부 화합물은 이전 분석에서보다 이 분석에서 10배나 더 큰 결합을 나타내기도 하지만, IC50 값은 전술한 실시예에서 설명된 CS1 결합 분석으로부터 유도된 것과 유사하다.
실시예 55
마우스 접촉 과민증의 억제
20g 자성 Balb/c 마우스(Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME)를 소듐 펜토바르비탈(90mg/kg, i.p.)로 마취시켰다. 털을 완전히 면도하여 복부 피부 3cm2 패취를 노출시켰다. 이어서 상기 피부를 70% 에탄올로 문지르고, 4:1 v/v 아세톤:올리브유내의 0.5% DNFB 25 ㎕를 드러난 복부 피부에 가했다. 이어서 약한 염증을 야기하기 위해 피펫 팁으로 피부를 가볍게 긁었다. 처음 감작후 24시간후에 동일한 복부 피부 위치에서 0.5% DNFB 25 ㎕로 마우스를 다시 자극하고, 피펫 팁으로 가볍게 긁었다. 두 번째 감작은 마취되지 않은 마우스를 억제한 상태에서 이루어졌다.
5일 째에(처음 감작후 120시간 후), 마우스를 90:10 mg/kg 케타민:크실라진 복강내 주사로 마취하고 좌측 귀의 뒷면에 0.2% DNFB 10 ㎕ 저자극 투여량을 가했다. 오른쪽 귀에는 4:1 v/v 아세톤:올리브유 부형제를 유사하게 가했다.
면역 반응을 야기하고 4시간 후, 0.5% 소듐 포스페이트 완충액, pH8.8 100 ㎕내의 다양한 농도의 본 발명의 억제제와 3% v/v DMSO를 피하 주사로 마우스에게 투여했다. 용해성이 떨어지는 억제제에는 때때로 시험된 최고 농도인 30%까지의 DMSO를 첨가해야 했다. 8마리 마우스군을 각 시험될 처리를 위해 이용했다. 양성(PS2 항-마우스 VLA4 항체, 8mg/kg, i.v.)과 음성 대조군(포스페이트-완충된 생리 식염수, PBS, 100 ㎕ i.v.; PBS내의 DMSO, 100 ㎕ s.c.)을 시험 화합물의 분석의 일부로서 비교를 위하여 시험했다.
항원 투여하고 24시간 후, 마우스를 다시 케타민:크실라진으로 마취하고 양쪽 귀의 두께를 10-4인치의 정확도까지 엔지니어 마이크로미터로 측정했다. 각 마우스를 위한 귀의 팽창 반응은 대조군으로 항원투여된 귀 두께와 DNFB로 항원투여된 귀 두께사이의 차이였다. 일반적인 비억제된 귀 팽창 반응은 65-75 x 10-4인치였다. 귀 팽창 반응의 억제는 처리된 군과 그들의 음성 대조군을 비교하여 판단했다. 억제율(%)은 하기와 같이 계산되었다;
처리군 사이의 차이의 통계적 유의성은 일원 변량 분석과 p<0.05를 이용한 Tukey-Kramer Honestly Significant Difference(JMP, SAS Institute)의 계산에 의해 평가되었다.
본 발명의 억제제는 비억제된 대조군 동물과 비교하여 DNFB로 처리된 마우스에서 통계학적으로 유의적인 귀 팽창 반응의 감소를 나타낸다.
실시예 56
알레르기성 양에서 아스카리스 (Ascaris ) 항원-유도된 후기 기도 민감증의 억제
Ascaris suum 항원에 대해 초기 및 후기 기관지 반응을 나타낸 적이 있었던 양을 본 연구에서 이용했다. 실험을 위해 이용된 프로토콜은, 동물에게 투여된 본 발명의 억제제가 50% 수성 에탄올 3-4 ㎖에 용해되어 에어로졸 분무에 의해 투여되는 것을 제외하고는 W.M.Abraham et al., J.Clin.Invest., 93,pp.776-87 (1994)에 설명된 것과 같다.
그 결과, 본 발명의 모든 VLA-4 억제제가 Ascaris suum 항원의 투여와 관련된 기도 반응을 억제함을 확인하였다.
본 발명에 대한 많은 구체예를 본 명세서에 기재했지만, 본 발명의 기본적인 구성은 본 발명의 화합물을 이용하는 방법과 다른 화합물을 제공하기 위해 변형될 수 있다. 따라서, 본 발명의 범위는 실시예에 의해 본 명세서에 제공되는 특정 구체예보다는 청구항에 의해 정의되어야 한다.
서 열 목 록
(1) 일반 정보
(i) 출원인:
(A) 성명 : 바이오겐, 인코오퍼레이티드(미국을 제외함)
(B) 스트리트 : 14 캠브리지 센터
(C) 도시 : 캠브리지
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 02142
(G) 전화 : 617-679-2200
(H) 텔레팩스 : 617-679-2838
(A) 성명 : 코-청 린(미국)
(B) 스트리트 : 253 링컨 스트리트
(C) 도시 : 렉싱턴
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 02173
(A) 성명 : 스티븐 피. 아담스(미국)
(B) 스트리트 : 12 버클리 레인
(C) 도시 : 앤도버
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 01810
(A) 성명 : 알프레도 씨. 카스트로(미국)
(B) 스트리트 : 31 글렌우드 애븐뉴
(C) 도시 : 워번
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 01801
(A) 성명 : 크레이그 엔.짐머만(미국)
(B) 스트리트 : 134 하이랜드 애븐뉴 #6
(C) 도시 : 소머빌
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 02143
(A) 성명 : 줄리오 헤르난 쿠에르보(미국)
(B) 스트리트 : 16 엘머 스트리트 #303
(C) 도시 : 캠브리지
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 02138
(A) 성명 : 웬-청 리(미국)
(B) 스트리트 : 192 스프링 스트리트
(C) 도시 : 렉싱턴
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 02173
(A) 성명 : 찰스 이. 하몬드(미국)
(B) 스트리트 : 4 체스터 애븐뉴
(C) 도시 : 불링턴
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 01803
(A) 성명 : 마리 베스 카터(미국)
(B) 스트리트 : 106 시카모어 스트리트
(C) 도시 : 벨몬트
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 02178
(A) 성명 : 로날드 지. 앨름퀴스트(미국)
(B) 스트리트 : 50 솔로몬 피어스 로드
(C) 도시 : 렉싱턴
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 02173
(A) 성명 : 캐롤 리 엔싱거(미국)
(B) 스트리트 : 732 프린스톤 불레바드 Apt #20
(C) 도시 : 로웰
(D) 주 : 매사츄세츠
(E) 국가 : 미국
(F) ZIP : 01851
(ii) 발명의 명칭 : 세포 부착 억제제
(iii) 서열의 수 : 4
(iv) 컴퓨터 판독 형태 :
(A) 매체 유형 : 플로피디스크
(B) 컴퓨터 : IBM PC 호환기종
(C) 작동 체계 : PC-DOS/MS-DOS
(D) 소프트웨어 : 페이턴트인 릴리즈 #1.0, 버전 #1.30(EPO)
(v) 우선권 자료 :
(A) 출원 번호 : US 08/498,237
(B) 출원일 : 1995년 7월 11일
(2) 서열 번호 1의 정보 :
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 8아미노산
(B) 서열형 : 아미노산
(C) 쇄의 수 : 단일쇄
(D) 형태 : 직쇄
(iii) 가정 : 없음
(xi) 서열 : 서열 번호 1
[서열 1]
(2) 서열 번호 2의 정보:
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 5아미노산
(B) 서열형 : 아미노산
(C) 쇄의 수 : 단일쇄
(D) 형태 : 직쇄
(ii) 분자 형태: 펩티드
(iii) 가정 : 없음
(iv) 안티-센스 : 없음
(xi) 서열 : 서열 번호 2
[서열 2]
(2) 서열 번호 3의 정보
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 5아미노산
(B) 서열형 : 아미노산
(C) 쇄의 수 : 단일쇄
(D) 형태 : 직쇄
(ii) 분자 형태: 펩티드
(iii) 가정 : 없음
(iv) 안티-센스 : 없음
(xi) 서열 : 서열 번호 3
[서열 3]
(2) 서열 번호 4의 정보:
(i) 서열 특성 :
(A) 길이 : 27아미노산
(B) 서열형 : 아미노산
(C) 쇄의 수 : 단일쇄
(D) 형태 : 직쇄
(ii) 분자 형태: 펩티드
(iii) 가정 : 없음
(xi) 서열 : 서열 번호 4:
[서열 4]

Claims (27)

  1. 하기 화학식 I의 세포 부착 억제 화합물 및 이의 약학적 허용 유도체;
    화학식 I
    Z-(Y 1 )-(Y 2 )-(Y 3 ) n -X
    상기 식에서,
    Z는 알킬; N-알킬- 또는 N-아릴아미도로 선택적으로 치환된 지방족 아실; 아로일; 헤테로시클로일; 알킬- 또는 아릴술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 아르알킬카르보닐; 헤테로시클로알킬카르보닐; 알콕시카르보닐; 아르알킬옥시카르보닐; 아릴과 선택적으로 융합된 시클로알킬카르보닐; 헤테로시클로알콕시카르보닐; 알킬아미노카르보닐; 비스(알킬술포닐)아미노, 알콕시카르보닐아미노 또는 알케닐로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노카르보닐 및 아릴아미노카르보닐; 알킬술포닐; 아르알킬술포닐; 아릴술포닐; 아릴과 선택적으로 융합된 시클로알킬술포닐; 헤테로시클릴술포닐; 헤테로시클릴알킬술포닐; 아르알콕시카르보닐; 아릴옥시카르보닐; 시클로알킬옥시카르보닐; 헤테로시클릴옥시카르보닐; 헤테로시클릴알콕시카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 모노- 또는 디-알킬아미노카르보닐; (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐; 모노- 또는 디- 아르알킬아미노카르보닐; 모노- 또는 디-아릴아미노카르보닐; (아릴)(알킬)아미노카르보닐; 모노- 또는 디-시클로알킬아미노카르보닐; 헤테로시클릴아미노카르보닐; 헤테로시클릴알킬아미노카르보닐; (알킬)(헤테로시클릴)아미노카르보닐; (알킬)(헤테로시클릴알킬)아미노카르보닐; (아르알킬)(헤테로시클릴)아미노카르보닐; (아르알킬)(헤테로시클릴알킬)아미노카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알케노일; 아릴로 선택적으로 치환된 알케닐술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알키노일; 아릴로 선택적으로 치환된 알키닐술포닐; 시클로알케닐카르보닐; 시클로알케닐술포닐; 시클로알킬알카노일; 시클로알킬알킬술포닐; 아릴아로일, 비아릴술포닐; 알콕시술포닐; 아르알콕시술포닐; 알킬아미노술포닐; 아릴옥시술포닐; 아릴아미노술포닐; N-아릴우레아-치환된 알카노일; N-아릴우레아-치환된 알킬술포닐; 시클로알케닐-치환된 카르보닐; 시클로알케닐-치환된 술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알켄옥시카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알켄옥시술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알킨옥시카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알킨옥시술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알케닐- 또는 알키닐-아미노카르보닐; 아릴로 선택적으로 치환된 알케닐- 또는 알키닐-아미노술포닐; 아실아미노-치환된 알카노일; 아실아미노-치환된 알킬술포닐; 아미노카르보닐-치환된 알카노일; 카르바모일-치환된 알카노일; 카르바모일-치환된 알킬술포닐; 헤테로시클릴알카노일; 헤테로시클릴아미노술포닐; 카르복시알킬-치환된 아르알코일; 카르복시알킬-치환된 아르알킬술포닐; 옥소카르보시클릴-융합된 아로일; 옥소카르보시클릴-융합된 아릴술포닐; 헤테로시클릴알카노일; N',N'-알킬, 아릴히드라지노카르보닐; 아릴옥시-치환된 알카노일 및 헤테로시클릴알킬술포닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    Y1은 -N(R1)-C(R2)(A1)-C(O)-이며;
    Y2는 -N(R1)-C(R2)(A2)-C(O)-이고;
    각 Y3는 화학식 -N(R1)-C(R2)(A3)-C(O)-로 표시되며;
    각 R1은 독립적으로 수소, 알킬 및 아르알킬; 알케닐; 알키닐; 시클로알킬; 시클로알케닐; 시클로알킬알킬; 아릴; 아미노알킬; 모노- 또는 디-알킬-치환된 아미노알킬; 모노- 또는 디-아르알킬-치환된 아미노알킬; 히드록시알킬; 알콕시알킬; 머캅토알킬; 티오알콕시알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    A1은 아미노산 측쇄 및 상응하는 보호된 유도체; 시클로알킬; 아미노, 아실아미노, 아미노-치환된 아실아미노, 알콕시카르보닐아미노, 아릴, 시클로알킬, 카르복시, 알콕시, 아르알킬옥시, 알콕시카르보닐, 아르알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐, 아르알킬아미노카르보닐, 디아르알킬아미노카르보닐, 히드록실, 카르복시알킬아미노카르보닐, 히드록실아미노카르보닐, 머캅토, 티오알콕시 또는 헤테로사이클로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    A2는 산성 작용기 그리고 산성 작용기, 보호된 산성 작용기 또는 아릴로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각 A3는 독립적으로 아미노산 측쇄 및 상응하는 보호된 유도체; 아릴; 시클로알킬; 아미노, 아실아미노, 아미노-치환된 아실아미노, 아릴, 시클로알킬, 카르복시, 알콕시, 아르알킬옥시, 알콕시카르보닐, 아르알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐, 아르알킬아미노카르보닐, 디아르알킬아미노카르보닐, 히드록실, 카르복시알킬아미노카르보닐, 히드록실아미노카르보닐, 머캅토, 티오알콕시 또는 헤테로사이클로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    또는 R1과 임의의 A는 그들이 부착된 원자와 함께 3원 내지 6원 고리 헤테로사이클을 형성하고;
    각 R2는 독립적으로 수소와 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    n은 0 내지 8의 정수이고;
    X는 알콕시; 아릴옥시; 아르알킬옥시; 히드록실; 아미노; 히드록시, 아미노카르보닐, N-알킬아미노카르보닐, 카르복시 또는 알콕시카르보닐로 선택적으로 치환된 알킬아미노; 디알킬아미노; 시클로알킬아미노; 디시클로알킬아미노; 시클로알킬알킬아미노; (알킬)(아릴)아미노; 카르복시로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노; 디아르알킬아미노; 아릴아미노; 헤테로사이클; (모노- 또는 비스-카르복실산)-치환된 알킬아민; 헤테로시클릴아미노; 헤테로시클릴-치환된 알킬아미노로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    여기서, 알킬은 C1-10 알킬이고; 아릴은 C3-14 아릴기이며; 아실은 C1-15 아실기이고; 알콕시는 C1-10 알콕시기이며; 알케닐은 C2-10 알케닐기이고;
    화학식 I의 화합물은 N'-카르복시메틸-N-(페닐아세틸-L-루이실-L-아스파틸-L-페닐알라닐-L-프롤릴)피페라진(즉, Z=페닐아세틸, Y1=L, Y2=D, Y3=F/P, n=2, X=4-카르복시메틸피페라지닐인 경우)이 아니며, 페닐아세틸-L-루이실-L-아스파틸-L-페닐알라닐-D-프롤린 아미드(즉, Z=페닐아세틸, Y1=L, Y2=D, Y3=F/p, n=2, X=NH2인 경우)가 아니다.
  2. 제1항에 있어서,
    Z는 알킬; N-알킬- 또는 N-아릴아미도로 선택적으로 치환된 지방족 아실; 아로일; 헤테로시클로일; 알킬- 및 아릴술포닐; 아릴로 선택적으로 치환된 아르알킬카르보닐; 헤테로시클로알킬카르보닐; 알콕시카르보닐; 아르알킬옥시카르보닐; 아릴과 선택적으로 융합된 시클로알킬카르보닐; 헤테로시클로알콕시카르보닐; 알킬아미노카르보닐; 비스-(알킬술포닐)아미노, 알콕시카르보닐아미노 또는 알케닐로 선택적으로 치환된 아릴아미노카르보닐 및 아르알킬아미노카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각 R1은 독립적으로 수소, 알킬 및 아르알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
    X는 알콕시; 아릴옥시; 아르알킬옥시; 히드록실; 아미노; 히드록시, 아미노카르보닐, N-알킬아미노카르보닐, 카르복시 또는 알콕시카르보닐로 선택적으로 치환된 알킬아미노; 디아킬아미노; 시클로알킬아미노; 디시클로알킬아미노; 시클로알킬알킬아미노; (알킬)(아릴)아미노; 카르복시로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노; 디아르알킬아미노; 아릴아미노; 헤테로사이클; 및 (모노- 또는 비스-카르복실산)-치환된 알킬아민으로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  3. 제1항에 있어서, A1은 시클로알킬; 헤테로시클릭 고리(A1과 R1이 결합될 때); 아미노, 아실아미노, 아미노-치환된 아실아미노, 아릴, 카르복시, 시클로알킬, 히드록시, 알콕시, 아르알킬옥시, 알콕시카르보닐, 아르알콕시카르보닐, 아미노카르보닐, 알킬아미노카르보닐, 디알킬아미노카르보닐, (알킬)(아르알킬)아미노카르보닐, 아르알킬아미노카르보닐, 디아르알킬아미노카르보닐, 알콕시카르보닐아미노, 머캅토, 티오알콕시 또는 헤테로사이클로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  4. 제3항에 있어서, A1은 아미노카르보닐에틸, 벤질, n-부틸, 이소부틸, 카르복시에틸, 시클로헥실, 1-히드록시에틸, 히드록시메틸, 머캅토메틸, 1-메틸프로필, 메틸티오에틸, n-프로필, 이소프로필, 메톡시카르보닐아미노부틸, 6-아미노헥사노일아미노부틸과 (A1과 R1이 결합될 때) 아제티딘, 아지리딘, 피롤리딘 및 피페리딘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  5. 제4항에 있어서, A1은 벤질, n-부틸, 이소부틸, 메틸티오에틸, 시클로헥실, 1-메틸프로필, n-프로필 및 이소프로필로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  6. 제4항에 있어서, A1이 (A1과 R1이 결합될 때) 피롤리딘인 세포 부착 억제 화합물.
  7. 제1항에 있어서, A2는 아미노, 아미노카르보닐, 아릴, 알콕시카르보닐, 아르알킬옥시카르보닐, 히드록실아미노카르보닐, 카르복시, NH-함유 헤테로사이클, 히드록시, 또는 머캅토로 선택적으로 치환된 알킬; 아미노, 아미노카르보닐, 카르복시, NH-함유 헤테로사이클, 히드록시, 또는 머캅토로 선택적으로 치환된 아르알킬; 헤테로시클릭 고리(A2와 R1이 결합될 때)로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  8. 제7항에 있어서, A2는 카르복시메틸, 2-카르복시에틸, 1-카르복시에틸, 히드록실아미노카르보닐메틸, 히드록시메틸, 머캅토메틸, 이미다졸릴메틸, N-Bn-이미다졸릴메틸, 페닐, 카르보메톡시메틸, 카르보벤질옥시메틸, 그리고 (A2와 R1이 결합될 때) 아제티딘, 아지리딘, 피롤리딘 및 피페리딘으로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  9. 제8항에 있어서, A2는 카르복시메틸, 2-카르복시에틸, 1-카르복시에틸, 히드록실아미노카르보닐메틸, 히드록시메틸, 머캅토메틸 및 이미다졸릴메틸로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  10. 제1항에 있어서, A3는 독립적으로 아미노산 측쇄 및 상응하는 보호된 유도체; 시클로알킬; 아릴, 시클로알킬, 카르복시, 히드록실아미노카르보닐, 알콕시, 아르알킬옥시, 머캅토, N-함유 헤테로사이클, 카르복시알킬아미노카르보닐 또는 아미노-치환된 아실아미노로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  11. 제10항에 있어서, A3은 독립적으로 아미노산 측쇄 및 상응하는 보호된 유도체; 시클로헥실; 페닐, 시클로헥실, 카르복시, 히드록실아미노카르보닐, 메톡시, 벤질옥시, 머캅토, N-벤질이미다졸릴, 비오티닐, 테트라졸릴, 발리닐-N-카르보닐 또는 6-아미노헥사노일아미노로 선택적으로 치환된 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  12. 제1항에 있어서, 각 Y3은 독립적으로 아미노산 및 상응하는 보호된 유도체로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  13. 제1항에 있어서,
    n은 2이고;
    Y1은 루이시닐이며;
    Y2는 아스파틸이고;
    Y3는 발리닐프롤리닐인 세포 부착 억제 화합물.
  14. 제1항에 있어서, X는 알콕시; 아릴옥시; 아르알킬옥시; 히드록실; 아미노; 히드록시, 아미노카르보닐, N-알킬아미노카르보닐, 카르복시 또는 알콕시카르보닐로 선택적으로 치환된 모노- 및 디알킬아미노; 디알킬아미노; 시클로알킬아미노; 시클로알킬알킬아미노; 디시클로알킬아미노; (알킬)(아릴)아미노; 카르복시로 선택적으로 치환된 아르알킬아미노; 디아르알킬아미노; 아릴아미노; N-함유 헤테로사이클; 비스-카르복실산-치환된 알킬아민 그리고 (모노- 또는 비스-카르복시)메틸아미노카르보닐-치환된-N-함유 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  15. 제14항에 있어서, X는 아미노, 메틸아미노, 이소프로필아미노, 이소부틸아미노, n-부틸아미노, t-부틸아미노, 이소아밀아미노, 이소펜틸아미노, 헥실아미노, 시클로헥실아미노, 시클로헥실메틸아미노, 메틸페닐아미노, 페닐메틸아미노, 페닐아미노, 4-메톡시페닐메틸아미노, 디메틸아미노, 디이소프로필아미노, 디이소부틸아미노, 히드록시, 메톡시, n-부톡시, t-부톡시, 벤질옥시, 2-피페리딘카르복실산, N'-(α,α'-비스-카르복시메틸)-2-피페리딘카르복사미드, N'-카르복시메틸-2-피페리딘카르복사미드, 1-히드록시메틸-2-메틸프로필아미노, 1-N'-메틸아미도-1-메틸에틸아미노, 3,3-디메틸부틸아미노, 1-N'-메틸아미도부틸아미노, 1-아미도-2-메틸부틸아미노, 1-카르보메톡시-2-메틸부틸아미노, 1-N'-메틸아미도-2-메틸부틸아미노, 1-카르복시-1-페닐메틸아미노, 모르폴리노, 피페리디닐, N-페닐피페라지닐, 피페콜리닐, 그리고 피페라지닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  16. 제1항에 있어서, Z는 지방족 아실, 아로일, 아르알킬카르보닐, 헤테로시클로일, 알콕시카르보닐, 아르알킬옥시카르보닐 및 헤테로시클로알킬카르보닐로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  17. 제16항에 있어서, Z는 (N-Ar'-우레아)-파라-치환된 아르알킬카르보닐기인 세포 부착 억제 화합물.
  18. 제17항에 있어서, Z는 (N-Ar'-우레아)-파라-치환된 페닐메틸카르보닐기인 세포 부착 억제 화합물.
  19. 제2항에 있어서, 화합물 번호 1(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[페닐아미노]카르보닐]아미노](3-메톡시페닐)]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 2(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[페닐아미노]카르보닐]아미노](3-메톡시페닐)]아세틸]-L-메티오닐]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 4(L-발린, 1-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노](6-메톡시-2-피리딜)]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-), 144(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-히드록시)페닐아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 145(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[페닐아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 146(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-히드록시)페닐아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-메티오닐]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 147(L-프롤린아미드, 1-[N-[N-[N-[[4-[[페닐아미노]카르보닐]아미노](3-메톡시페닐)]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 148(L-프롤린아미드, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 206(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 315(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-메티오닐]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 316(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[페닐아미노]카르보닐]아미노](2-피리딜)]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 317(L-프롤린아미드, 1-[N-[N-[N-[[4-[[페닐아미노]카르보닐]아미노](3-메톡시페닐)]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 337(L-세린, 1-[N-[N-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-L-프롤릴]-), 338(L-트레오닌, 1-[N-[N-[N-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-L-프롤릴]-L-세릴]-), 345(L-발린, 1-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-), 346(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[페닐아미노]카르보닐]아미노](6-메톡시-2-피리딜)]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 347(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-플루오로페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 357(L-프롤린아미드, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-피리딜)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 358(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-), 2-아미노-2(히드록시메틸)- 1,3-프로판디올 2당량을 가진 화합물 및 359(L-프롤린, 1-[N-[N-[N-[[4-[[(2-메틸페닐)아미노]카르보닐]아미노]페닐]아세틸]-L-루이실]-L-a-아스파틸]-L-발릴]-, 이나트륨염)로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  20. 제19항에 있어서, 화합물 번호 1, 206, 316, 358 및 359로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  21. 제20항에 있어서, 화합물 번호 358과 359로 이루어진 군으로부터 선택되는 세포 부착 억제 화합물.
  22. 세포 부착의 예방, 억제 또는 저해를 위한 유효량의 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항의 화합물과 약학적 허용 담체를 포함하는, 세포 부착을 억제함으로써 염증, 면역 또는 자가면역 질병을 치료 및 예방하기 위한 약학 조성물.
  23. 제22항에 있어서, 상기 약학 조성물이 염증을 예방, 억제 또는 저해하기 위해 이용되는 약학 조성물.
  24. 제23항에 있어서, 상기 염증이 세포-부착 관련 염증인 약학 조성물.
  25. 제22항에 있어서, 상기 약학 조성물이 면역 또는 자가면역 반응을 예방, 억제 또는 저해하기 위해 이용되는 약학 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 상기 면역 또는 자가면역 반응이 세포-부착 관련 면역 또는 자가면역 반응인 약학 조성물.
  27. 제22항에 있어서, 상기 약학 조성물이 천식, 관절염, 건선, 이식 거부반응, 다발성 경화증, 당뇨병 및 염증성 장 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질병을 치료 또는 예방하기 위해 이용되는 약학 조성물.
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