JPH1198978A - トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌 - Google Patents

トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌

Info

Publication number
JPH1198978A
JPH1198978A JP9277949A JP27794997A JPH1198978A JP H1198978 A JPH1198978 A JP H1198978A JP 9277949 A JP9277949 A JP 9277949A JP 27794997 A JP27794997 A JP 27794997A JP H1198978 A JPH1198978 A JP H1198978A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
lactic acid
pro
acid bacterium
lactobacillus helveticus
milk
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP9277949A
Other languages
English (en)
Other versions
JP3028411B2 (ja
Inventor
Naoyuki Yamamoto
直之 山本
Natsue Kawakami
夏江 河上
Masaru Ishida
優 石田
Yuichi Okuda
裕一 屋田
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Asahi Soft Drinks Co Ltd
Original Assignee
Calpis Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to JP9277949A priority Critical patent/JP3028411B2/ja
Application filed by Calpis Co Ltd filed Critical Calpis Co Ltd
Priority to CNB988115301A priority patent/CN1149279C/zh
Priority to SK435-2000A priority patent/SK284755B6/sk
Priority to KR10-2000-7003224A priority patent/KR100404154B1/ko
Priority to PCT/JP1998/000481 priority patent/WO1999016862A1/ja
Priority to ES98901520T priority patent/ES2237834T3/es
Priority to CA002304985A priority patent/CA2304985C/en
Priority to TR2000/00854T priority patent/TR200000854T2/xx
Priority to DK98901520T priority patent/DK1016709T3/da
Priority to CZ20001082A priority patent/CZ291067B6/cs
Priority to PT98901520T priority patent/PT1016709E/pt
Priority to US09/508,840 priority patent/US6534304B1/en
Priority to HU0003744A priority patent/HU225980B1/hu
Priority to PL98339343A priority patent/PL188675B1/pl
Priority to AT98901520T priority patent/ATE294230T1/de
Priority to EP98901520A priority patent/EP1016709B1/en
Priority to SI9830779T priority patent/SI1016709T1/xx
Priority to BR9813218-0A priority patent/BR9813218A/pt
Priority to AU57802/98A priority patent/AU734422B2/en
Priority to DE69829983T priority patent/DE69829983T2/de
Priority to IN2795DE1998 priority patent/IN188418B/en
Priority to TW087115782A priority patent/TW526268B/zh
Priority to MYPI98004363A priority patent/MY118157A/en
Priority to ZA988659A priority patent/ZA988659B/xx
Priority to ARP980104806A priority patent/AR017153A1/es
Publication of JPH1198978A publication Critical patent/JPH1198978A/ja
Publication of JP3028411B2 publication Critical patent/JP3028411B2/ja
Application granted granted Critical
Priority to BG104382A priority patent/BG64422B1/bg
Priority to US10/310,628 priority patent/US7282354B2/en
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/13—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using additives
    • A23C9/137—Thickening substances
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/147—Helveticus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】ラクトトリペプチドを大量に産生しうる乳酸菌
株及び血圧降下活性及びストレス緩和作用を有する成分
を多く含み、かつ飲食に供しやすい発酵乳製品を提供す
る。 【解決手段】特定の菌学的性質を有し、無脂乳固形分を
９重量％以上含む獣乳を培地として培養した際に、培養
液中にトリペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ及び／又は
Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏを、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ換
算量で６０μｇ／ｍｌ以上生産し、且つ菌体外プロテイ
ナーゼ活性４００Ｕ／ＯＤ590以上を示すことを特徴と
するラクトバチルス・ヘルベチカスに属する乳酸菌、ラ
クトバチルス・ヘルベチカスＣＭ４株（工業技術院生命
工学工業技術研究所 寄託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０
６０）、及び獣乳をこれら乳酸菌を用いて発酵させて得
た発酵乳製品。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、獣乳培地中におい
て培養することにより、強い血圧降下作用及びストレス
緩和作用を有するトリペプチドを産生することができ、
かつ菌体外プロテイナーゼ活性が高いラクトバチルス・
ヘルベチカス(Lactobacillus helveticus)に属する乳酸
菌に関する。
【０００２】
【従来の技術】ラクトバチルス・ヘルベチカスは、古く
から代表的な酪農乳製品用乳酸菌スターターとして、発
酵乳等の製造に用いられている。ラクトバチルス・ヘル
ベチカスは強い蛋白分解活性を有し、特に高い活性を有
する菌体外プロティナーゼは、獣乳の発酵性に対して重
要な働きをする。即ち、菌体外プロティナーゼは獣乳蛋
白質を分解し各種のペプチド断片を生成する。生成され
たペプチドはペプチダーゼ群の作用を受けて、さらに低
分子のペプチドになる。蛋白質分解酵素群の作用により
培地中に生成したペプチドの一部は、乳酸菌菌体内へ取
り込まれて、窒素源として利用されることが知られてい
る。一方、培地中に生成したペプチドには、血圧上昇作
用の原因物質であるアンギオテンシン変換酵素(Angiote
nsin Converting Enzyme、以下ＡＣＥと称す）に対して
阻害活性を有するものが存在することが報告されている
（J. Dairy Sci. 78:777-783(1995))。
【０００３】ＡＣＥの酵素活性を阻害し、血圧上昇を抑
制することを目的としたペプチドについては、既に乳蛋
白質、大豆蛋白質あるいは魚肉蛋白質分解物等から、多
くの有効ペプチドが報告されているが、ラクトバチルス
・ヘルベチカス発酵乳中のＡＣＥ阻害活性を有するペプ
チドは、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＰｒｏとＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏ（以下、それぞれＶＰＰ及びＩＰＰと略す。またこ
れらを合わせてラクトトリペプチドと称す。）であるこ
と、さらにこれらラクトトリペプチドは強い血圧降下作
用を有することが自然発症高血圧ラット（ＳＨＲ）を用
いた実験により確認されている(J. Dairy Sci.78:1253-
1257(1995))。さらに、ラクトトリペプチドは、血圧降
下活性に加え、ストレス緩和作用を有することが示唆さ
れている。
【０００４】従って、ラクトトリペプチドについては、
天然物由来の、低毒性で安全性が高く、経口的に摂取で
きる降圧剤又はストレス緩和剤として、実用化が検討さ
れている。
【０００５】しかしながら、獣乳等を従来のラクトバチ
ルス・ヘルベチカス株により発酵させて得たラクトトリ
ペプチド含有発酵乳は、発酵の進行に従い多量に生成さ
れる乳酸に起因して高い酸度を示すため、直接飲食する
ことは困難であるという問題点がある。
【０００６】生成乳酸量に対してラクトトリペプチドを
より多く含む発酵乳を製造することができれば、各種の
飲食品へ発酵乳を少量配合することによっても、機能性
を維持したまま飲食しやすい形態の製品を簡便に製造し
消費者へ提供することが可能になる。従って、ラクトト
リペプチドをより多く産生する乳酸菌株が求められてい
る。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ラク
トトリペプチドを大量に産生しうる乳酸菌株を提供する
ことにある。
【０００８】本発明の別の目的は、血圧降下活性及びス
トレス緩和作用を有する成分を多く含み、かつ飲食に供
しやすい発酵乳製品を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、以下の
菌学的性質を有し、無脂乳固形分を９重量％以上含む獣
乳を培地として培養した際に、培養液中にトリペプチド
Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ及び／又はＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐ
ｒｏを、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ換算量で６０μｇ／ｍ
ｌ以上生産し、且つ菌体外プロテイナーゼ活性４００Ｕ
／ＯＤ590以上を示すことを特徴とするラクトバチルス
・ヘルベチカスに属する乳酸菌が提供される。
【００１０】形態学的性質 １）細胞の形状；桿菌 ２）運動性；なし ３）胞子の有無；なし ４）グラム染色性；陽性生理学的性質 １）カタラーゼ；陰性 ２）インドール生成；陰性 ３）硝酸塩の還元；陰性 ４）酸素に対する態度；通性嫌気性菌 ５）グルコースによりホモ乳酸発酵によりＤ（−）乳酸
を生成し、ガスの産生はない； ６）各種炭水化物の分解性 グルコース；＋ ラクトース；＋ マンノース；＋ フラクトース；＋ ガラクトース；＋ シュークロース；− マルトース；− キシロース；− ラムノース；− セルビオース；− トレハロース；− メルビオース；− ラフィノース；− スタキオース；− マンニトール；− ソルビトール；− ユースクリン；− サリシン；− また、本発明によれば、前記ラクトバチルス・ヘルベチ
カスに属する乳酸菌であって、ラクトバチルス・ヘルベ
チカスＣＭ４株（工業技術院生命工学工業技術研究所
寄託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０６０）であることを特
徴とするラクトバチルス・ヘルベチカスに属する乳酸菌
が提供される。
【００１１】さらに本発明では、前記ラクトバチルス・
ヘルベチカスに属する乳酸菌であって、その染色体ＤＮ
Ａの制限酵素ＰｓｔＩ及びＥｃｏＲＩによる二重分解物
が１５〜１７ｋｂの特徴的ＤＮＡ断片を含むことを特徴
とするラクトバチルス・ヘルベチカスに属する乳酸菌が
提供される。
【００１２】さらに本発明では、獣乳を、前記乳酸菌を
用いて発酵させて得た発酵乳製品が提供される。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明の乳酸菌は、ラクトバチル
ス・ヘルベチカスに属する乳酸菌であり、無脂乳固形分
を９重量％以上含む獣乳を培地として培養することによ
り、培養液中にトリペプチドＶＰＰ及び／又はＩＰＰ
を、ＶＰＰ換算量で６０μｇ／ｍｌ以上、好ましくは７
０μｇ／ｍｌ以上生産し、且つ菌体外プロテイナーゼ活
性４００Ｕ／ＯＤ590以上、好ましくは４３０Ｕ／ＯＤ
590以上を示す。ＶＰＰ及び／又はＩＰＰの生産量の上
限については、特に限定されないが、培地中の蛋白質に
含まれる全てのＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ及びＩｌｅ−Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏの配列がトリペプチドとして切り出された
際の量が上限となる。また、菌体外プロテイナーゼ活性
の上限については、特に限定されないが、通常は８００
Ｕ／ＯＤ590である。
【００１４】前記無脂乳固形分を９重量％以上含む獣乳
としては、通常の、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ及びＩｌｅ
−Ｐｒｏ−Ｐｒｏの配列を含む蛋白質を含む獣乳を挙げ
ることができる。
【００１５】また、前記培養の方法としては、前記獣乳
に乳酸菌を接種後、３７℃で２４時間培養する方法を挙
げることができる。
【００１６】本発明の乳酸菌の一例として、ラクトバチ
ルス・ヘルベチカスＣＭ４株が工業技術院生命工学工業
技術研究所 寄託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０６０とし
て寄託されている。ラクトバチルス・ヘルベチカスＣＭ
４株は、以下に示す菌学的性質を有する。
【００１７】菌学的性質： １．形態学的性質 １）細胞の形状；桿菌 ２）運動性；なし ３）胞子の有無；なし ４）グラム染色性；陽性 ２．生理学的性質 １）カタラーゼ；陰性 ２）インドール生成；陰性 ３）硝酸塩の還元；陰性 ４）酸素に対する態度；通性嫌気性菌 ５）グルコースによりホモ乳酸発酵によりＤ（−）乳酸
を生成し、ガスの産生はない。
【００１８】６）各種炭水化物の分解性 グルコース；＋ ラクトース；＋ マンノース；＋ フラクトース；＋ ガラクトース；＋ シュークロース；− マルトース；− キシロース；− ラムノース；− セルビオース；− トレハロース；− メルビオース；− ラフィノース；− スタキオース；− マンニトール；− ソルビトール；− ユースクリン；− サリシン；− 以上の菌学的性質を光岡らの方法（臨床検査１８、１１
６３（１９７４））により同定すると公知株ラクトバチ
ルス・ヘルベチカスＮＣＤＯ−０９９と同一である。但
し、光岡らの方法に記載されていない下記の性質につい
ては明らかにＮＣＤＯ−０９９とは異なっている。
【００１９】７）低温殺菌乳での発酵性；９５℃、５分
間殺菌後の９重量％脱脂乳を用いて３７℃、２４時間発
酵した場合の乳酸酸度２．０重量％以上を示す発酵性 ８）菌体外プロティナーゼ活性；４００Ｕ／ＯＤ590以
上の活性 ９）ラクトトリペプチド生産性；９重量％脱脂乳を用い
３７℃で２４時間培養した発酵液中に２種のトリペプチ
ド（ＶＰＰ及び／又はＩＰＰ）を、ＶＰＰ換算量で６０
μｇ／ｍｌ以上含有 なお、前記菌体外プロティナーゼ活性は、Twiningらの
方法(Twining,S. Anal.Biochem. 143 3410（1984）)を
もとにしたYamamotoらの方法(Yamamoto,N.ら J.Bioche
m.(1993)114,740)に従った反応条件において、１％の蛍
光強度を生じる酵素量を１Ｕ／ＯＤ590とした場合の値
である。
【００２０】また、ラクトトリペプチド生産性は、９重
量％脱脂乳培地で３７℃、２４時間培養した発酵乳を１
ｍｌとり、そのまま１５，０００ｒｐｍで１０分間遠心
分離して得た上清中のＶＰＰ及びＩＰＰ量を測定し、Ｖ
ＰＰ量に換算した値である。前記換算は、ＩＰＰの重量
当りのＡＣＥ阻害活性はＶＰＰの１．７倍であることか
ら、以下の式によりＶＰＰ換算量を求める。
【００２１】ラクトトリペプチド換算量（ＶＰＰ換算μ
ｇ／ｍｌ）＝ＩＰＰ量（μｇ／ｍｌ）×１．７＋ＶＰＰ
量（μｇ／ｍｌ） 本発明の乳酸菌株は、例えば以下に示すスクリーニング
方法により得ることができる。
【００２２】（１）一次スクリーニング （ＡＣＥ阻害活性の高い発酵乳の選択）９重量％脱脂乳
培地を用いてスクリーニング株を３７℃、２４時間培養
する。培養終了後に乳酸菌数、乳酸酸度、ＡＣＥ阻害活
性を測定する。乳酸菌数１×１０8個／ｍｌ以上、乳酸
酸度１．６重量％以上、ＡＣＥ阻害活性４０ユニット／
ｍｌ以上の菌株を選択する。なお、ＡＣＥ阻害活性は、
CushmanとCheungの方法(Cushman,D.W. and Cheung,H.S.
Pharmacol., 20 1637(1971))に基づいて測定する。
【００２３】（２）二次スクリーニング （ラクトトリペプチド高生産性株の選択）一次スクリー
ニングにより選択された菌株の培養液を遠心分離機にて
１５，０００ｒｐｍ、１０分間処理後の上清を用いて、
ＨＰＬＣによりラクトトリペプチドの定量分析を行う。
ラクトトリペプチド含量（ＶＰＰ換算量）３０μｇ／ｍ
ｌ以上の菌株を選択する。
【００２４】（３）三次スクリーニング （菌体外プロティナーゼ高活性株の選択）二次スクリー
ニングにより選択された菌株を９重量％脱脂乳培地中で
ｐＨ６に維持しながら培養して、対数増殖期中期でサン
プリング後に、クエン酸ナトリウムを１重量％になるよ
うに添加し、５，０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を
行い菌体を回収する。次いで、５０ｍＭβ−グリセロリ
ン酸にて菌体を洗浄後に、菌体を５０ｍＭトリス塩酸
（ｐＨ７．８）緩衝液に懸濁して、濁度（ＯＤ590）１
に調整し菌体表面のプロティナーゼ活性を測定する。測
定結果は、二次スクリーニングにおいて選択されるラク
トトリペプチド高生産株と相関することが確認できる。
【００２５】以上のスクリーニング方法により選択され
たラクトバチルス・ヘルベチカスに属する乳酸菌株と他
の乳酸菌株との識別は、前記ラクトトリペプチド生産
性、菌体外プロティナーゼ活性等から同定することがで
きる。
【００２６】また、選択されたラクトバチルス・ヘルベ
チカスに属する乳酸菌の染色体ＤＮＡの制限酵素による
分解物のＤＮＡ断片の特徴的分子量分布より、同種に属
する他の菌株とはより明確に識別することができる。具
体的には例えば、染色体ＤＮＡの制限酵素ＰｓｔＩ及び
ＥｃｏＲＩによる二重分解物が１５〜１７ｋｂの特徴的
ＤＮＡ断片を含むものを、本発明の乳酸菌として識別す
ることができる。
【００２７】前記１５〜１７ｋｂの特徴的ＤＮＡ断片
は、具体的には、染色体ＤＮＡをLeenhoutsらの方法(Le
enhouts,K.(1990) Appl.Environ.Microbiol. 56:2726)
で抽出し、ＥｃｏＲＩとＰｓｔＩによる切断を行い０．
８％のアガロースゲル電気泳動し、その泳動パターンの
分析を行うことにより確認することができる。その際、
ＤＮＡのサイズマーカーとして、λファージＤＮＡの制
限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ分解物等を平行して泳動すること
により、明確にその存在を確認することができる。
【００２８】本発明の発酵乳製品は、培地を、前記乳酸
菌を用いて発酵させて得たものである。
【００２９】本発明の発酵乳製品を得るための前記培地
としては、牛乳、山羊乳、馬乳又はこれらの脱脂乳等の
乳培地等を挙げることができる。
【００３０】前記発酵の条件としては、発酵温度は２５
−５０℃、さらに好ましくは３０−４５℃とすることが
でき、発酵時間は６−３０時間、さらに好ましくは１０
−２４時間とすることができる。また、前記発酵は、好
ましくは、乳製品中のラクトトリペプチド量がＶＰＰ換
算量で６０μｇ／ｍｌ以上となるよう行うことが好まし
い。具体的には例えば培地として牛乳を使用した場合、
２５−４０℃で１２−４８時間発酵させることにより、
ラクトトリペプチド量をＶＰＰ換算量で７０μｇ／ｍｌ
以上含有する発酵乳製品を得ることができる。
【００３１】前記発酵により得られた本発明の発酵乳製
品は、そのまま製品とすることができるが、必要に応じ
約５℃に冷却し保存した後、他の成分との配合などを行
い、チルド商品等の製品とすることもできる。また、加
熱殺菌処理等を行い、さらに必要に応じて噴霧乾燥等に
より粉末化して常温流通商品とすることもできる。
【００３２】本発明の発酵乳製品は、ヨーグルト、乳性
乳酸菌飲料、チーズ、酸乳配合の加工食品、健康食品、
粉末、顆粒状食品、錠剤等の形態として製品にすること
ができる。
【００３３】本発明の発酵乳製品は、高い濃度のラクト
トリペプチドを含むので、ヒトに摂取された場合、血圧
降下作用、抗ストレス作用等を発現することができる。
例えば、血圧が高いヒトの場合、日常の食生活において
本発明の発酵乳製品を１００ｍｌ程度摂取することによ
り、健康を図ることができる。また、ストレスが多いヒ
トの場合にも、同様の摂取量により、効果を発揮させる
ことができる。
【００３４】
【発明の効果】本発明の乳酸菌は、獣乳を培地として培
養することによりラクトトリペプチドを大量に産生する
ことができるので、血圧降下活性及びストレス緩和作用
を有する成分を多く含み、かつ飲食に供しやすい発酵乳
製品を生産することができる。
【００３５】また、本発明の発酵乳製品は、ラクトトリ
ペプチドを多く含有するので、血圧降下作用、抗ストレ
ス作用を有する食品として、機能性食品、健康食品、特
定保健用食品、高齢者用の特別用途食品又はこれらの材
料等に用いることができる。
【００３６】
【実施例】以下実施例によりさらに詳細に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３７】なお、実施例中のラクトバチルス・ヘルベ
ティカス株のうち、ＣＭ４株は工業技術院生命工学工業
技術研究所 寄託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０６０とし
て寄託されており、ＡＴＣＣ１５００９、ＮＣＤＯ−０
９９、ＪＣＭ１００６、ＡＴＣＣ１０７９７、ＪＣＭ１
０６２、ＪＣＭ１１０３、ＪＣＭ１１２０及びＪＣＭ１
００４は公知株である。実施例中のこれ以外の株は、出
願人が保有する菌株コレクションより選択されたもので
ある。
【００３８】
【実施例１】（ＡＣＥ阻害活性の高い発酵乳を与える菌
株の選択）各種酪農製品から分離されたラクトバチルス
・ヘルベティカス３６株について、その発酵乳のＡＣＥ
阻害活性を以下の方法で調べた。各ラクトバチルス・ヘ
ルベチカス株を９重量％脱脂粉乳培地で３７℃、２４時
間培養し、新しい同培地に３重量％添加し、さらに３７
℃、２４時間培養した。発酵終了後、乳酸酸度（重量
％）、ホエー内のペプチド量（ｍｇ／ｍｌ）、菌数及び
ＡＣＥ阻害活性（Ｕ／ｍｌ）を測定した。結果を表１に
示す。３６株中７株については発酵性が極めて弱かっ
た。乳酸酸度生成量が１．６重量％以上のものは１５株
であり、さらにそのなかで発酵乳内ホエーのＡＣＥ阻害
活性が４０Ｕ／ｍｌ以上のもの８株を選択した。
【００３９】（発酵乳内ＡＣＥ阻害活性の測定法）ＡＣ
Ｅ阻害活性の測定は、CushmanとCheungの方法(Cushman,
D.W. and Cheung,H.S. Pharmacol., 20 1637(1971))に
基づいて行った。即ち、各種発酵乳を１５，０００ｒｐ
ｍ、５分間の遠心により上清（ホエー）を調製した。そ
のホエーを、測定可能な倍率に適宜希釈した後、その８
０μｌを試験管に移し、次に基質として０．１Ｍホウ酸
緩衝液（０．３Ｍ ＮａＣｌを含む、ｐＨ７．３）で５
ｍＭに調製したヒプリル・ヒスチジン・ロイシン(Hip-H
is-Leu、シグマ社製）０．２ｍｌを加えて、さらに酵素
溶液（０．１Ｕ／ｍｌ、シグマ社製）２０μｌを添加し
て３７℃で３０分間反応させた。その後、１Ｎ塩酸を２
５０μｌ加えて反応を停止させた後、１．７ｍｌの酢酸
エチルを加えて約２０秒間撹拌した。次いで３，０００
ｒｐｍで１０分間遠心分離し、酢酸エチル層（上層）
１．４ｍｌを回収し、１２０℃で４０分間加熱し、溶媒
を除去した。溶媒除去後、蒸留水１ｍｌを加えて、約２
０秒間撹拌し抽出されたヒプリル酸の２２８ｎｍにおけ
る吸収の値を測定した。酵素活性ユニットはＡＣＥ活性
の５０％阻害を与える量を１ユニットとして、下記式に
より算出した。
【００４０】酵素量（ユニット）＝（（Ａ−Ｂ）／（Ａ
−Ｃ））×１００×１／５０ Ａ：試料を含まない場合の２２８ｎｍの吸光度 Ｂ：試料を添加した場合の２２８ｎｍの吸光度 Ｃ：酵素及び試料を添加しない場合の２２８ｎｍの吸光
度 （発酵乳内ペプチド量の定量法）ペプチドの定量はＯＰ
Ａ法（Charch,F.C.らJ.Dairy.Sci.66 1219(1883))によ
り行った。検量線の作成には、標準物質として、カゼイ
ンのトリプシン分解物を用いた。
【００４１】
【表１】
【００４２】（ラクトトリペプチド生産性の高い菌株の
選択）続いて、上記ＡＣＥ阻害活性の高い発酵乳使用菌
株８株について、発酵乳内のＶＰＰ及びＩＰＰを測定し
た。
【００４３】発酵乳１ｍｌを、そのまま１５，０００ｒ
ｐｍで１０分間遠心分離し、その上清即ちホエーを回収
した。このホエー０．３ｍｌをSep-Pak Cartridge（ウ
ォーターズ社製）に吸着させ、蒸留水で洗浄した。メタ
ノール５ｍｌで溶出し、遠心処理下で減圧、乾燥させ
た。乾燥物を０．３ｍｌの０．０５％トリフルオロ酢酸
の水溶液に溶解し、以下の条件でＨＰＬＣ分析した。
【００４４】使用機種：日立Ｌ４０００ＵＶディテクタ
ー（２１５ｎｍで検出）Ｌ６２００インテリジェントポ
ンプＬ５０３０カラムオーヴン（３５℃）分離条件：流
速０．５ｍｌ／分溶離液：０．３Ｍ ＮａＣｌ、０．０
５％トリフルオロ酢酸の水溶液カラム：Asahipak GS320
(Φ3.9×600mm)結果を表２に示す。
【００４５】また、ＩＰＰの重量当りのＡＣＥ阻害活性
はＶＰＰの１．７倍であることから、ＩＰＰ量及びＶＰ
Ｐ量からラクトトリペプチドを以下の式によりＶＰＰ換
算量として求めた。結果を表２に示す。
【００４６】ラクトトリペプチド換算量（ＶＰＰ換算μ
ｇ／ｍｌ）＝ＩＰＰ量（μｇ／ｍｌ）×１．７＋ＶＰＰ
量（μｇ／ｍｌ）
【００４７】
【表２】
【００４８】ラクトトリペプチドのＶＰＰ換算量は、Ｃ
Ｍ４株発酵乳のもので最も高く、７８．５μｇ／ｍｌホ
エーであった。それ以外の７株の平均値は３４．２μｇ
／ｍｌホエーであった。
【００４９】（乳内増殖性の比較）上記ラクトバチルス
・ヘルベチカス株の内の分離株１８、分離株２０、分離
株２３、分離株２４、分離株２５、分離株２６、ＪＣＭ
１００６及びＣＭ４、並びに公知株のＪＣＭ１１２０及
びＪＣＭ１００４の計１０株を用いてＣＭ４株の乳内で
の発酵性（増殖性）を評価した。すなわち、９重量％脱
脂粉乳培地で３７℃、２４時間培養したものを、１１５
℃で１５分間、又は９５℃で５分間殺菌した新しい同培
地に３％植菌後、３７℃で２４時間発酵させた。培養終
了後、乳酸酸度を滴定し発酵性を評価した。その結果、
試験された株のうち、９５℃殺菌乳の発酵性が１１５℃
殺菌乳のものより高いものは分離株２５、分離株２６と
ＣＭ４株であった。またさらに９５℃殺菌乳での最終酸
度が２．０重量％以上のものはＣＭ４株発酵乳のみであ
った。
【００５０】（菌体外プロティナーゼ活性の測定）表１
に示した発酵性についての試験結果が比較的良好であっ
た株１６株の菌体外プロティナーゼを、Twiningらの方
法(Twining,S. Anal.Biochem. 143 3410（1984）)をも
とにしたYamamotoらの方法(Yamamoto,N.ら J.Biochem.
(1993)114,740)に従って行った。即ち、各種菌株を９重
量％脱脂粉乳中でｐＨを６．０に維持して培養し、対数
増殖期の中期で集菌した。クエン酸ナトリウムを終濃度
１％になるように添加し、乳培地を透明化し、５，００
０ｒｐｍで１０分間の遠心分離を行い菌体を回収した。
次に、５０ｍＭβ−グリセロリン酸により菌体を洗浄
後、菌体を５０ｍＭのトリス塩酸ｐＨ７．８の緩衝液に
懸濁し濁度（ＯＤ590即ち５９０ｎｍの吸収で測定）を
１に合わせた。０．４％のフルオレセイン−カゼイン
（シグマ社製）２０μｌに菌体懸濁液３０μｌを加え４
２℃で１時間インキュベートし、５％トリクロロ酢酸を
１２０μｌ加え室温にて約２０分間放置し、１５，００
０回転で１０分間の遠心分離を行った。上清６０μｌを
３ｍｌの５００ｍＭトリス塩酸ｐＨ８．３に加え、蛍光
強度を測定した。蛍光強度は励起波長４９０ｎｍで生じ
る５２５ｎｍの蛍光を測定した。活性は上記反応条件
で、１％の蛍光強度を生じる酵素量を１ユニットと定義
し、それぞれの菌体外プロティナーゼのユニット数を求
めた。結果を表３に示す。
【００５１】
【表３】
【００５２】ラクトバチルス・ヘルベチカスＣＭ４株の
活性が最も高く４５０Ｕ／ＯＤ590であった。一方、そ
の他の１６株の活性平均値は１４１Ｕ／ＯＤ590とＣＭ
４株に比べ約３分の１程度であった。
【００５３】
【実施例２】実施例１で選択したラクトバチルス・ヘル
ベチカス３６株の中から選択した１１株について、染色
体ＤＮＡをLeenhoutsらの方法(Leenhouts,K.(1990) App
l.Environ.Microbiol. 56:2726)で抽出し、いくつかの
制限酵素による切断を行い０．８％のアガロースゲル電
気泳動し、その泳動パターンの分析を行った。
【００５４】その結果、ＥｃｏＲＩとＰｓｔＩとによる
二重分解物についてＣＭ４株の染色体について特徴的Ｄ
ＮＡ断片が認められた（図１中矢印１）。ＣＭ４以外の
菌株の染色体にはこの断片は認められず、ほとんどの株
でそれより短い断片が認められた（図１中矢印２）。こ
こでＤＮＡのサイズマーカーとしてλファージＤＮＡの
制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ分解物（移動度の低いものから
２３．１ｋｂ、９．４ｋｂ、６．６ｋｂ、４．４ｋｂ、
２．３ｋｂ及び２．０ｋｂ）を同時に電気泳動し、特徴
的断片の分子量を測定したところ約１６ｋｂであった。
従って、ＣＭ４株はその染色体のＥｃｏＲＩとＰｓｔＩ
による二重分解物として、分子量約１６ｋｂの特徴的な
断片を有することが確認された。また、他の株における
ＣＭ４株の前記特徴的断片より短い断片の分子量は、約
１３ｋｂであった。
【００５５】
【実施例３】実施例１で選択されたラクトバチルス・ヘ
ルベチカスＣＭ４株を用いて発酵乳の製造を行った。Ｃ
Ｍ４株を９重量％脱脂乳１００ｇを用いて３７℃、１２
時間培養したものを、新しい同培地３ｋｇに接種し、３
７℃、１２時間培養した。培養終了した発酵乳全量をス
ターターとして用い、９重量％脱脂乳１００ｋｇを３２
℃、２０時間発酵させた。発酵終了時の発酵乳中には、
ラクトトリペプチドが７４．８μｇ／ｍｌ含まれてい
た。
【００５６】得られた発酵乳４３ｋｇにグラニュウ糖４
ｋｇ、水３ｋｇ、ハイメトキシペクチン０．１５ｋｇを
加えた後に均質化して、ドリンクヨーグルト５０ｋｇを
得た。このドリンクヨーグルトはマイルドな好ましい風
味を有し、ｐＨ３．６で、ＣＭ４の生菌数は４．６×１
０8個／ｇであった。
【００５７】
【実施例４】実施例３で得られた発酵乳２６．５ｋｇに
グラニュウ糖４５．０ｋｇ、ハイマルトース液糖４．７
ｋｇ、水１３．８ｋｇを加えて、撹拌しながら３重量％
ハイメトキシペクチン溶液１０ｋｇを加えた。得られた
混合液をラボラトリーホモゲナイザー（マントンゴーリ
ン社製、形式１５Ｍ−８ＢＡ）を用いて、処理圧力１５
０ｋｇ／ｃｍ2、処理流量２５００ｍｌ／分で均質化処
理を行った。均質化処理液にバニラ系香料を加えて８５
℃達温殺菌を行った。殺菌処理発酵乳を２００ｌ用ガラ
ス壜に熱時充填した。得られた殺菌処理発酵乳製品中の
ラクトトリペプチド量を測定したところ、殺菌前の発酵
乳配合量中に含まれるラクトトリペプチド相当量が含ま
れていた。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例２における、各種ラクトバチル
ス・ヘルベチカス株の染色体ＤＮＡの断片のアガロース
ゲル電気泳動による分析結果を示す写真である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 屋田 裕一 神奈川県相模原市淵野辺５丁目11番10号 カルピス株式会社基盤技術研究所内

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 以下の菌学的性質を有し、無脂乳固形分
    を９重量％以上含む獣乳を培地として培養した際に、培
    養液中にトリペプチドＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ及び／又
    はＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏを、Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ
    換算量で６０μｇ／ｍｌ以上生産し、且つ菌体外プロテ
    イナーゼ活性４００Ｕ／ＯＤ590以上を示すことを特徴
    とするラクトバチルス・ヘルベチカスに属する乳酸菌： 形態学的性質 １）細胞の形状；桿菌 ２）運動性；なし ３）胞子の有無；なし ４）グラム染色性；陽性 生理学的性質 １）カタラーゼ；陰性 ２）インドール生成；陰性 ３）硝酸塩の還元；陰性 ４）酸素に対する態度；通性嫌気性菌 ５）グルコースによりホモ乳酸発酵によりＤ（−）乳酸
    を生成し、ガスの産生はない； ６）各種炭水化物の分解性 グルコース；＋ ラクトース；＋ マンノース；＋ フラクトース；＋ ガラクトース；＋ シュークロース；− マルトース；− キシロース；− ラムノース；− セルビオース；− トレハロース；− メルビオース；− ラフィノース；− スタキオース；− マンニトール；− ソルビトール；− ユースクリン；− サリシン；−。
  2. 【請求項２】 請求項１に記載のラクトバチルス・ヘル
    ベチカスに属する乳酸菌であって、ラクトバチルス・ヘ
    ルベチカスＣＭ４株（工業技術院生命工学工業技術研究
    所 寄託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−６０６０）であること
    を特徴とするラクトバチルス・ヘルベチカスに属する乳
    酸菌。
  3. 【請求項３】 請求項１又は２に記載のラクトバチルス
    ・ヘルベチカスに属する乳酸菌であって、その染色体Ｄ
    ＮＡの制限酵素ＰｓｔＩ及びＥｃｏＲＩによる二重分解
    物が１５〜１７ｋｂの特徴的ＤＮＡ断片を含むことを特
    徴とするラクトバチルス・ヘルベチカスに属する乳酸
    菌。
  4. 【請求項４】 獣乳を、請求項１〜３のいずれか１項記
    載の乳酸菌を用いて発酵させて得た発酵乳製品。
JP9277949A 1997-09-26 1997-09-26 トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌 Expired - Lifetime JP3028411B2 (ja)

Priority Applications (27)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP9277949A JP3028411B2 (ja) 1997-09-26 1997-09-26 トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌
BR9813218-0A BR9813218A (pt) 1997-09-26 1998-02-05 Bactéria de ácido lático de lactobacillus helveticus tendo elevada capacidade de produção de tripeptìdeo, produto de leite fermentado, e processo para preparação do mesmo
EP98901520A EP1016709B1 (en) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same
PCT/JP1998/000481 WO1999016862A1 (fr) 1997-09-26 1998-02-05 Bacterie du genre lactobacillus helveticus ayant une grande capacite de production de tripeptides, produit laitier fermente et son procede de preparation
ES98901520T ES2237834T3 (es) 1997-09-26 1998-02-05 Bacteria lactobacillus helveticus que tiene alta capacidad de produccion de un tripeptido, producto lacteo fermentado y procedimiento para su preparacion.
CA002304985A CA2304985C (en) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same
TR2000/00854T TR200000854T2 (tr) 1997-09-26 1998-02-05 Yüksek tripeptid, lactobacıllus helvetıcus bakterileri ve bunların hazırlanması
DK98901520T DK1016709T3 (da) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus-bakterie med höj evne til at producere tripeptider, syrnet mælkeprodukt og fremgangsmåde til fremstilling heraf
CZ20001082A CZ291067B6 (cs) 1997-09-26 1998-02-05 Bakterie Lactobacillus helveticus produkující kyselinu mléčnou, fermentovaný mléčný výrobek a způsob jeho výroby
PT98901520T PT1016709E (pt) 1997-09-26 1998-02-05 Bacteria lactobacillus helveticus possuindo eleveda capacidade de producao de tripeptido, produto de leite fermentado e processo para a preparacao do mesmo
US09/508,840 US6534304B1 (en) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same
SK435-2000A SK284755B6 (sk) 1997-09-26 1998-02-05 Baktérie Lactobacillus helveticus produkujúce kyselinu mliečnu s vysokou produktivitou tripeptidu, fermentovaný mliečny výrobok a spôsob jeho výroby
PL98339343A PL188675B1 (pl) 1997-09-26 1998-02-05 Nowy szczep bakterii kwasu mlekowego-Lactobacillus helveticus, fermentowany produkt mleczny oraz sposób wytwarzania fermentowanego produktu mlecznego
AT98901520T ATE294230T1 (de) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticum mit hoher kapazität für die produktion von tripeptiden, fermentiertes miclchprodukt, und verfahren für seine herstellung.
CNB988115301A CN1149279C (zh) 1997-09-26 1998-02-05 一种具有三肽生产能力的瑞士乳杆菌、发酵奶制品及其制备方法
KR10-2000-7003224A KR100404154B1 (ko) 1997-09-26 1998-02-05 트리펩티드 고생산성 락토바실루스·헬베티커스 유산균 및발효유 제품, 그리고 그 제조법
SI9830779T SI1016709T1 (en) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same
AU57802/98A AU734422B2 (en) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same
DE69829983T DE69829983T2 (de) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus mit hoher kapazität für die produktion von tripeptiden, fermentiertes milchprodukt, und verfahren für seine herstellung
HU0003744A HU225980B1 (en) 1997-09-26 1998-02-05 Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same
IN2795DE1998 IN188418B (ja) 1997-09-26 1998-09-17
TW087115782A TW526268B (en) 1997-09-26 1998-09-22 Method for producing a fermented milk product
MYPI98004363A MY118157A (en) 1997-09-26 1998-09-23 Lactic acid bacteria of lactobacillus helveticus having high tripeptide productivity, fermented milk product, and production method thereof.
ZA988659A ZA988659B (en) 1997-09-26 1998-09-25 Lactic acid bacteria of lactobacillus helveticus having high tripeptide productivity fermented milk product and production method thereof
ARP980104806A AR017153A1 (es) 1997-09-26 1998-09-25 Producto de leche fermentada que comprende bacterias de acido lactico lactobacillus helveticus y metodo para producirlo.
BG104382A BG64422B1 (bg) 1997-09-26 2000-04-26 Бактерия lастоbacillus неlvетiсus, притежаваща висока способност да продуцира трипептид, ферментационен млечен продукт и метод за получаването му
US10/310,628 US7282354B2 (en) 1997-09-26 2002-12-05 Method for producing fermented milk product

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP9277949A JP3028411B2 (ja) 1997-09-26 1997-09-26 トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPH1198978A true JPH1198978A (ja) 1999-04-13
JP3028411B2 JP3028411B2 (ja) 2000-04-04

Family

ID=17590526

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP9277949A Expired - Lifetime JP3028411B2 (ja) 1997-09-26 1997-09-26 トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌

Country Status (24)

Country Link
US (2) US6534304B1 (ja)
EP (1) EP1016709B1 (ja)
JP (1) JP3028411B2 (ja)
KR (1) KR100404154B1 (ja)
CN (1) CN1149279C (ja)
AR (1) AR017153A1 (ja)
AT (1) ATE294230T1 (ja)
AU (1) AU734422B2 (ja)
BG (1) BG64422B1 (ja)
BR (1) BR9813218A (ja)
CA (1) CA2304985C (ja)
CZ (1) CZ291067B6 (ja)
DE (1) DE69829983T2 (ja)
ES (1) ES2237834T3 (ja)
HU (1) HU225980B1 (ja)
IN (1) IN188418B (ja)
MY (1) MY118157A (ja)
PL (1) PL188675B1 (ja)
PT (1) PT1016709E (ja)
SK (1) SK284755B6 (ja)
TR (1) TR200000854T2 (ja)
TW (1) TW526268B (ja)
WO (1) WO1999016862A1 (ja)
ZA (1) ZA988659B (ja)

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2793257A1 (fr) * 1999-05-06 2000-11-10 Gervais Danone Sa Bacteries lactiques a proprietes anxiolytiques, et leurs utilisations
JP2001136995A (ja) * 1999-11-11 2001-05-22 Calpis Co Ltd トリペプチドの製造方法
JP2003513621A (ja) * 1999-11-01 2003-04-15 ヴァリオ・オサケ・ユキテュア 抗高血圧性ジペプチドおよびトリペプチドを産生するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ
WO2005063196A1 (ja) * 2003-12-25 2005-07-14 Calpis Co., Ltd. 経口摂取用皮膚保湿剤及び機能性飲食品
WO2005094848A1 (ja) * 2004-03-31 2005-10-13 Calpis Co., Ltd. 肝障害予防又は抑制剤及び肝障害予防又は抑制用機能性食品
JP2005535321A (ja) * 2002-08-09 2005-11-24 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ 抗高血圧特性を有するペプチドの製造方法
WO2006095764A1 (ja) * 2005-03-09 2006-09-14 Calpis Co., Ltd. 皮膚における紫外線感受性抑制剤及び機能性飲食品
WO2006137513A1 (ja) * 2005-06-24 2006-12-28 Calpis Co., Ltd. 表皮細胞分化及び角化促進剤、並びに表皮角化促進用機能性飲食品
WO2008029505A1 (fr) 2006-09-04 2008-03-13 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Agent d'accélération de l'accroissement et/ou la prévention de diminution dans le niveau d'adiponectine dans le sang, et inhibiteur de l'accumulation de graisse viscérale
JPWO2006004105A1 (ja) * 2004-07-05 2008-04-24 カルピス株式会社 ペプチド混合物の製造法、抗高血圧ペプチド含有発酵乳の製造法及び抗高血圧ペプチド製剤の製造法
WO2008108298A1 (ja) 2007-03-02 2008-09-12 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. 内臓脂肪減少剤
JP2009532018A (ja) * 2006-02-20 2009-09-10 コンパニ・ジェルベ・ダノン ヘルベティカス乳酸桿菌の新規株
JP2010183918A (ja) * 2010-06-01 2010-08-26 Calpis Co Ltd トリペプチドの製造方法
JP4891069B2 (ja) * 2004-03-31 2012-03-07 カルピス株式会社 内因性メラトニン分泌リズムの位相調整又は振幅増強剤、及び概日リズム改善剤
WO2012063553A1 (ja) * 2010-11-09 2012-05-18 カルピス株式会社 Non-dipper型血圧日内変動による疾病発症リスク軽減剤
JP5681341B2 (ja) * 2005-07-26 2015-03-04 カルピス株式会社 発酵乳の製造方法及び発酵乳飲食品
CN111227049A (zh) * 2018-11-29 2020-06-05 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 一种维持褐色植物基酸奶货架期内组织状态稳定性的方法

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2000041572A1 (fr) 1999-01-11 2000-07-20 Calpis Co., Ltd. Procede de production de lait fermente renfermant un peptide inhibiteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine et procede de production de lactoserum
FI112031B (fi) 2002-02-25 2003-10-31 Valio Oy Biologisesti aktiivisen tuotteen uusi käyttö
EP1492409A2 (en) * 2002-04-03 2005-01-05 Chr. Hansen A/S Peptides with anti-hypertensive properties
PL378232A1 (pl) 2003-01-06 2006-03-20 Unilever N.V. Fermentowany produkt mleczny, zawierający tripeptydy VPP i/albo IPP
TWI344371B (en) * 2003-03-18 2011-07-01 Suntory Holdings Ltd Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptides
US7718171B2 (en) 2003-04-07 2010-05-18 Chr. Hansen A/S Reducing heart rate in mammals using milk derived fermentation products produced using Lactobacillus helveticus
JP2006525003A (ja) * 2003-05-05 2006-11-09 ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ Ｉｐｐおよび／またはｖｐｐを含む加水分解カゼイン製品
ATE532416T1 (de) 2004-09-03 2011-11-15 Chr Hansen As Fermentierte milchproteine mit rezeptor-ligand und ihre verwendungen
CN1903052B (zh) * 2005-07-26 2010-04-28 天津科技大学 具有酪蛋白磷酸肽、抗血管紧张素转化酶肽和低聚半乳糖乳清粉的制备方法
BRPI0707827A2 (pt) 2006-02-14 2011-05-10 Calpis Co Ltd vasodilatador
US20090299036A1 (en) * 2006-02-14 2009-12-03 Calpis Co, Ltd Agent for preventing arteriosclerosis, agent for suppressing vascular intimal thickening and agent for improving vascular endothelial function
DE602006004956D1 (de) 2006-02-20 2009-03-12 Gervais Danone Sa Neue Stämme von Lactobacillus helveticus
ATE423840T1 (de) * 2006-02-20 2009-03-15 Gervais Danone Sa Neue stämme von lactobacillus helveticus
EP1820405B1 (fr) * 2006-02-20 2011-03-30 Compagnie Gervais Danone Nouvelles souches de Lactobacillus Helveticus
US20090111758A1 (en) * 2006-05-15 2009-04-30 Valio Ltd. Use of therapeutically useful peptides
AU2007258872A1 (en) 2006-06-16 2007-12-21 Danisco A/S Bacterium
JP5292633B2 (ja) * 2007-03-27 2013-09-18 カルピス株式会社 腎不全予防剤
TWI414305B (zh) * 2007-03-27 2013-11-11 Calpis Co Ltd 腎衰竭預防劑
JP2011524744A (ja) * 2008-06-12 2011-09-08 ネステク ソシエテ アノニム 降圧ペプチドを産生するためのラクトバチルス・ヘルベティカス株
ATE544350T1 (de) * 2008-12-29 2012-02-15 Unilever Nv GEFRORENE SÜßWARENPRODUKTE UND GETRÄNKE, DIE THEOBROMIN UND KOFFEIN ENTHALTEN
EP2531195A1 (en) * 2010-02-04 2012-12-12 Unilever NV Use of theobromine for lowering central blood pressure
US11806352B2 (en) 2010-05-19 2023-11-07 Upfield Europe B.V. Theobromine for increasing HDL-cholesterol
CN103221531B (zh) * 2010-11-09 2018-03-16 朝日集团控股株式会社 具有高蛋白质水解活性的瑞士乳杆菌
RU2453593C1 (ru) * 2011-04-21 2012-06-20 Общество с ограниченной ответственностью "Бифилюкс" Штамм lactobacillus helveticus, используемый для получения продукции, содержащей лактобактерии
US20120328735A1 (en) * 2011-06-24 2012-12-27 Naoto Uchida Process for preparing casein-derived peptides by fermentation of lactic acid bacteria
DE202012012998U1 (de) 2011-08-31 2014-06-13 Daniel Elias Bioaktive, regenerative Mischung zur Herstellung eines Ergänzungsnahrungsmittels
WO2014031842A1 (en) 2012-08-22 2014-02-27 Kraft Foods Group Brands Llc Processed cheese with cultured dairy components and method of manufacturing
CN102960444A (zh) * 2012-11-19 2013-03-13 陕西科技大学 一种基于瑞士乳杆菌发酵的含ace抑制肽的羊奶的制备方法
CN104450574B (zh) * 2014-12-10 2017-05-10 生合生物科技（南京）有限公司 一种瑞士乳杆菌lh43及其制作乳酸菌饮料的方法
RU2577112C1 (ru) * 2014-12-25 2016-03-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" Штамм lactobacillus helveticus вкпм в-11175, полученный на доступных питательных средах
CN107674848A (zh) * 2017-09-20 2018-02-09 云南乍甸乳业有限责任公司 一种酸奶发酵菌种的制备方法
CN109517763B (zh) * 2018-12-27 2022-03-22 内蒙古农业大学 瑞士乳杆菌h11及其应用
CN110226687A (zh) * 2019-06-12 2019-09-13 宁波依萃健生物科技有限公司 一种解酒护肝组合物及制备方法
DK3845069T3 (da) * 2019-12-30 2022-11-28 Gervais Danone Sa Saccharosenegativ streptococcus thermophilus til anvendelse i fremstilling af fermenterede produkter
CN111979286B (zh) * 2020-08-31 2021-11-26 鲁东大学 一种发酵法与酶法联合制备贝类高f值寡肽的方法
CN112616925A (zh) * 2020-12-30 2021-04-09 光明乳业股份有限公司 一种双蛋白发酵乳及其制备方法

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3846560A (en) * 1971-07-22 1974-11-05 Quaker Oats Co Process of making a base for protein beverages
US3876806A (en) * 1971-10-14 1975-04-08 Quaker Oats Co Process for the preparation of acid soluble polypeptides and carbonated beverages containing same
US4107334A (en) * 1976-10-13 1978-08-15 Pfizer Inc. Modified protein
CH636248A5 (fr) * 1979-03-09 1983-05-31 Nestle Sa Procede de preparation d'un hydrolysat de proteines purifie.
JPS60262561A (ja) * 1984-06-08 1985-12-25 House Food Ind Co Ltd 大豆蛋白質水溶液の処理方法
US4585757A (en) * 1984-07-27 1986-04-29 Texas Tech University Health Sciences Center Hypotensive active peptides
US4687840A (en) * 1986-02-11 1987-08-18 Texas Tech University Health Sciences Center Hypotensive active peptides
GB8823429D0 (en) * 1988-10-05 1988-11-09 Agricultural Genetics Co Method for accelerated ripening of cheddar & related hard type cheese
MY109493A (en) * 1989-07-07 1997-02-28 Nestle Sa Protein hydrolysis.
NL9000422A (nl) * 1990-02-21 1991-09-16 Nl Zuivelonderzoek Inst Werkwijze voor de bereiding van een gefermenteerd melkprodukt.
EP0445606B1 (en) * 1990-02-27 1997-01-22 The Agency of Industrial Science and Technology Novel oligopeptides, pharmaceutical composition and food containing the same, and use of oligopeptides
EP0457565B1 (en) * 1990-05-18 1997-07-30 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Milk-protein hydrolyzates and compositions for use as hair and skin treating agent
JP2571734B2 (ja) * 1991-08-23 1997-01-16 株式会社ヤクルト本社 乳酸菌飲料
US5486461A (en) * 1991-11-08 1996-01-23 Novo Nordisk A/S Casein hydrolyzate and method for production of such casein hydrolyzate
FI94088C (fi) * 1992-03-13 1995-07-25 Valio Oy Menetelmä fenyylialaniinin poistamiseksi proteiinipitoisista koostumuksista
US5418218A (en) * 1992-07-10 1995-05-23 The University Of Maryland At Baltimore Histidyl-proline diketopiperazine (cyclo his-pro) a cns-active pharmacologic agent
JP2782142B2 (ja) * 1992-07-23 1998-07-30 カルピス株式会社 アンジオテンシン変換酵素阻害剤及びその製造法
JP2782153B2 (ja) 1992-11-09 1998-07-30 カルピス株式会社 アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチドの製造法
US5656268A (en) * 1995-04-21 1997-08-12 Sorodsky; Michael Biological product
US5618689A (en) * 1995-05-25 1997-04-08 Nestec S.A. Enhanced procedures for preparing food hydrolysates
ES2178041T3 (es) * 1996-12-23 2002-12-16 Dsm Nv Procedimiento de preparacion de hidrolizados proteicos.
US6221423B1 (en) * 1998-04-13 2001-04-24 Protein Technologies Int'l Inc. Short-chained peptide material
AU2001247334A1 (en) 2000-03-10 2001-09-24 Monsanto Company Novel peptides with anti-hypertensive activity
AU2001245537A1 (en) 2000-03-10 2001-09-24 Monsanto Company Anti-hypertensive peptides
US6908633B2 (en) 2000-03-13 2005-06-21 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Protein hydrolyzates, process for producing the same and drinks and foods containing the protein hydrolyzates
US20030040475A1 (en) 2001-01-16 2003-02-27 Yasuhiro Toba Agents for improving lipid metabolism and reducing high blood pressure
US6815426B2 (en) 2001-02-16 2004-11-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Angiogenesis-inhibitory tripeptides, compositions and their methods of use
WO2002071854A1 (en) 2001-03-09 2002-09-19 Unilever N.V. Fermented milk product
US6589574B2 (en) 2001-03-19 2003-07-08 Council Of Scientific & Industrial Research Process for preparation of protein-hydrolysate from milk protein

Cited By (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2793257A1 (fr) * 1999-05-06 2000-11-10 Gervais Danone Sa Bacteries lactiques a proprietes anxiolytiques, et leurs utilisations
US6541027B1 (en) 1999-05-06 2003-04-01 Compagnie Gervais Danone Lactic acid bacteria with anxiolytic properties and uses thereof
WO2000067696A3 (fr) * 1999-05-06 2001-03-22 Gervais Danone Sa Bacteries lactiques a proprietes anxiolytiques, et leurs utilisations
WO2000067696A2 (fr) * 1999-05-06 2000-11-16 Compagnie Gervais Danone Bacteries lactiques a proprietes anxiolytiques, et leurs utilisations
US6972282B1 (en) * 1999-11-01 2005-12-06 Valio Ltd. Process for producing a product containing antihypertensive tripeptides
JP2003513621A (ja) * 1999-11-01 2003-04-15 ヴァリオ・オサケ・ユキテュア 抗高血圧性ジペプチドおよびトリペプチドを産生するＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ
JP2001136995A (ja) * 1999-11-11 2001-05-22 Calpis Co Ltd トリペプチドの製造方法
JP4633876B2 (ja) * 1999-11-11 2011-02-16 カルピス株式会社 トリペプチドの製造方法
JP2005535321A (ja) * 2002-08-09 2005-11-24 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ 抗高血圧特性を有するペプチドの製造方法
JP2010142231A (ja) * 2002-08-09 2010-07-01 Chr Hansen As 抗高血圧特性を有するペプチドの製造方法
AU2004308816B2 (en) * 2003-12-25 2010-08-26 Calpis Co., Ltd. Skin moisturizing agent for oral intake and functional foods and drinks
JP2005206578A (ja) * 2003-12-25 2005-08-04 Calpis Co Ltd 経口摂取用保湿剤及び機能性飲食品
JP4680571B2 (ja) * 2003-12-25 2011-05-11 カルピス株式会社 経口摂取用保湿剤
WO2005063196A1 (ja) * 2003-12-25 2005-07-14 Calpis Co., Ltd. 経口摂取用皮膚保湿剤及び機能性飲食品
AU2004308816C1 (en) * 2003-12-25 2011-02-10 Calpis Co., Ltd. Skin moisturizing agent for oral intake and functional foods and drinks
JP4891069B2 (ja) * 2004-03-31 2012-03-07 カルピス株式会社 内因性メラトニン分泌リズムの位相調整又は振幅増強剤、及び概日リズム改善剤
JPWO2005094848A1 (ja) * 2004-03-31 2008-02-14 カルピス株式会社 肝障害予防又は抑制剤及び肝障害予防又は抑制用機能性食品
US7785633B2 (en) 2004-03-31 2010-08-31 Calpis Co., Ltd Agent for preventing or suppressing hepatopathy and functional food for preventing or suppressing hepatopathy
WO2005094848A1 (ja) * 2004-03-31 2005-10-13 Calpis Co., Ltd. 肝障害予防又は抑制剤及び肝障害予防又は抑制用機能性食品
JP4723501B2 (ja) * 2004-07-05 2011-07-13 カルピス株式会社 ペプチド混合物の製造法、抗高血圧ペプチド含有発酵乳の製造法及び抗高血圧ペプチド製剤の製造法
JPWO2006004105A1 (ja) * 2004-07-05 2008-04-24 カルピス株式会社 ペプチド混合物の製造法、抗高血圧ペプチド含有発酵乳の製造法及び抗高血圧ペプチド製剤の製造法
JPWO2006095764A1 (ja) * 2005-03-09 2008-08-14 カルピス株式会社 皮膚における紫外線感受性抑制剤及び機能性飲食品
WO2006095764A1 (ja) * 2005-03-09 2006-09-14 Calpis Co., Ltd. 皮膚における紫外線感受性抑制剤及び機能性飲食品
US8097246B2 (en) 2005-06-24 2012-01-17 Calpis Co., Ltd. Promoter of differentiation and keratinization of epidermic cell and functional beverage/food for promotion of keratinization of epidermis
JP5160889B2 (ja) * 2005-06-24 2013-03-13 カルピス株式会社 表皮細胞分化及び角化促進剤
EA013926B1 (ru) * 2005-06-24 2010-08-30 Калпис Ко., Лтд. Промотор дифференциации и кератинизации эпидермальной клетки и функциональный напиток/питание для ускорения кератинизации эпидермиса
WO2006137513A1 (ja) * 2005-06-24 2006-12-28 Calpis Co., Ltd. 表皮細胞分化及び角化促進剤、並びに表皮角化促進用機能性飲食品
JP5681341B2 (ja) * 2005-07-26 2015-03-04 カルピス株式会社 発酵乳の製造方法及び発酵乳飲食品
JP2009532018A (ja) * 2006-02-20 2009-09-10 コンパニ・ジェルベ・ダノン ヘルベティカス乳酸桿菌の新規株
WO2008029505A1 (fr) 2006-09-04 2008-03-13 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Agent d'accélération de l'accroissement et/ou la prévention de diminution dans le niveau d'adiponectine dans le sang, et inhibiteur de l'accumulation de graisse viscérale
AU2007292786B2 (en) * 2006-09-04 2013-02-14 Megmilk Snow Brand Co., Ltd. Agent for accelerating the increase in and/or preventing the decrease in blood adiponectin level, and visceral fat accumulation inhibitor
WO2008108298A1 (ja) 2007-03-02 2008-09-12 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. 内臓脂肪減少剤
US8440179B2 (en) 2007-03-02 2013-05-14 Megmilk Snow Brand Co., Ltd. Agent for reducing visceral fat
JP2010183918A (ja) * 2010-06-01 2010-08-26 Calpis Co Ltd トリペプチドの製造方法
WO2012063553A1 (ja) * 2010-11-09 2012-05-18 カルピス株式会社 Non-dipper型血圧日内変動による疾病発症リスク軽減剤
JP2012102037A (ja) * 2010-11-09 2012-05-31 Calpis Co Ltd Ｎｏｎ−ｄｉｐｐｅｒ型血圧日内変動による疾病発症リスク軽減剤
CN111227049A (zh) * 2018-11-29 2020-06-05 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 一种维持褐色植物基酸奶货架期内组织状态稳定性的方法
CN111227049B (zh) * 2018-11-29 2022-08-12 内蒙古伊利实业集团股份有限公司 一种维持褐色植物基酸奶货架期内组织状态稳定性的方法

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0003744A3 (en) 2001-11-28
AU734422B2 (en) 2001-06-14
AU5780298A (en) 1999-04-23
EP1016709B1 (en) 2005-04-27
DE69829983D1 (de) 2005-06-02
KR20010024311A (ko) 2001-03-26
BG104382A (en) 2000-12-29
US7282354B2 (en) 2007-10-16
PL339343A1 (en) 2000-12-18
WO1999016862A1 (fr) 1999-04-08
TR200000854T2 (tr) 2000-07-21
CZ20001082A3 (cs) 2001-01-17
DE69829983T2 (de) 2006-05-04
SK4352000A3 (en) 2001-05-10
CN1279712A (zh) 2001-01-10
PT1016709E (pt) 2005-08-31
US6534304B1 (en) 2003-03-18
EP1016709A1 (en) 2000-07-05
HU225980B1 (en) 2008-02-28
ZA988659B (en) 1999-03-31
ATE294230T1 (de) 2005-05-15
AR017153A1 (es) 2001-08-22
CN1149279C (zh) 2004-05-12
KR100404154B1 (ko) 2003-11-01
US20030064501A1 (en) 2003-04-03
SK284755B6 (sk) 2005-11-03
EP1016709A4 (en) 2002-09-11
CA2304985C (en) 2007-05-08
IN188418B (ja) 2002-09-21
PL188675B1 (pl) 2005-03-31
HUP0003744A2 (en) 2001-03-28
CZ291067B6 (cs) 2002-12-11
JP3028411B2 (ja) 2000-04-04
BR9813218A (pt) 2000-08-29
TW526268B (en) 2003-04-01
CA2304985A1 (en) 1999-04-08
BG64422B1 (bg) 2005-01-31
MY118157A (en) 2004-09-30
ES2237834T3 (es) 2005-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3028411B2 (ja) トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌
KR100704441B1 (ko) 항고혈압성 디펩타이드 및 트리펩타이드를 생산하는락토바실러스 헬베티쿠스
Hati et al. Comparative growth behaviour and biofunctionality of lactic acid bacteria during fermentation of soy milk and bovine milk
RU2422509C2 (ru) ЛАКТОЗОНЕГАТИВНЫЕ ШТАММЫ Lactobacillus helveticus, СПОСОБНЫЕ ОБРАЗОВЫВАТЬ ГИПОТЕНЗИВНЫЕ ТРИПЕПТИДЫ IPP И VPP, И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ, ПРИМЕНЕНИЕ ШТАММОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ КИСЛОМОЛОЧНОГО ПРОДУКТА, КИСЛОМОЛОЧНЫЙ ПРОДУКТ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
JP4525754B2 (ja) 代謝能力が低減した微生物を用いた生物活性食品成分の保護
EP1529114A1 (en) Process for preparing peptides with anti-hypertensive properties
CN115927075B (zh) 一株具高ace抑制活性的嗜热链球菌及其应用
Kathiriya et al. Significance of growth rate, acceptability of fermented milk and release of peptides by lactic cultures
MXPA00002575A (en) Lactobacillus helveticus bacterium having high capability of producing tripeptide, fermented milk product, and process for preparing the same
PL241893B1 (pl) Sposób przeprowadzenia selekcji mikroorganizmów proteolitycznych, sposób wytwarzania hydrolizatu białek serwatkowych, zawierającego bioaktywne peptydy i hydrolizat białek serwatkowych
CN116828988A (zh) 用于制备发酵产品的乳酸菌组合物

Legal Events

Date Code Title Description
R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080204

Year of fee payment: 8

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090204

Year of fee payment: 9

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100204

Year of fee payment: 10

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100204

Year of fee payment: 10

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110204

Year of fee payment: 11

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120204

Year of fee payment: 12

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120204

Year of fee payment: 12

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130204

Year of fee payment: 13

FPAY Renewal fee payment (event date is renewal date of database)

Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140204

Year of fee payment: 14

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

S531 Written request for registration of change of domicile

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

S111 Request for change of ownership or part of ownership

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111

R350 Written notification of registration of transfer

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

EXPY Cancellation because of completion of term