JPH01301692A - ５’―デオキシ―５’―メチルチオアデノシンの新規な製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は次式（Ｉ）で示される５′−デオキシ−５′−
メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）またはそのスルホキシ
ドの新規な製造方法に関する：（Ｊ　ｆｌ　２　１Ｊ　
Ｉ’１２ （式中、ｎはＯまたは１である）。

本発明の新規製造方法によって得られる５′−デオキシ
−５′−メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）は生体中に存
在することが既に知られている生理的化合物であり、本
発明者らによって、有用な薬理活性を有する化合物であ
ることが確認された。すなわち、上記式（１）で示され
る化合物は後に詳述するように有用な薬理活性、特に鎮
痛活性および解熱活性と共に強力な抗炎症活性を有する
ものである。

従来、ＭＴＡおよびそのスルホキシドを含む式〔式中、
Ｒは１〜１８個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖
状アルキル基であるか、あるいはアルキレン鎖が１〜６
個の炭素原子を有するフェニルアルキレンであり、Ｒ１
はＨまたは１〜６個の炭素原子の脂肪族アシル基または
芳香族アシル基であり、 Ｒ２はＨまたは１〜６個の炭素原子を有する脂肪族アシ
ル基または芳香族アシル基であるか、あるいはＲ２基は
一緒になってインプロピリデン鎖を形成しており、ｎは
０またはｌである〕で示される化合物の製造法としては
、Ｒ１、Ｒ２等の種々の置換基の種類によって種々の方
法が考えられる。例えば、式（Ｉａ） ＮＨ。

〔上記式（Ｉａ）中、Ｒは上記の意味を有する〕の化合
物群は、アデノシンをヘキサメチルホスホルアミド中で
塩化チオニルと反応させて５′−クロロ−５′−デオキ
シアデノシンに転化させ〔レグラベランドＭ　イバ不ズ
Ｓ、（ＬｅｇｒａｖｅｒａｎｄＭ、　　１ｂａｎｅｚ　
Ｓ、）他　（１９７７）、Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、　
Ｃｈｅｍ。

１２、１０５〜１０８〕、この５′−クロロ−５７−デ
オキシアデノシンを次に８０℃に於て２Ｎ水酸化ナトリ
ウム溶液中で対応するメルカプタンと反応させて所要の
チオエーテルに変えることにより製造することができる
。

得られたチオエーテルを水または低級脂肪族アルコール
から再結晶によって精製する。

化合物（Ｉａ）は次に化学量論量の所要の酸で塩にする
ことかできる。

一般式（Ｉｂ） 〔上記式（Ｉｂ）中、Ｒ４Ｐ＋、Ｒ２は前に定義した通
りである〕 の化合物はサトムおよびマキノ（Ｓａｔｏｍ　　ａｎｄ
Ｍａｋｉｎｏ）法〔サトムに、、マキノに、　（Ｓａｔ
ｏｍ　Ｋ、。

Ｍａｋｉｎｏ　Ｋ、）　（１９５１）、不一チャー（Ｎ
ａｔｕｒｅ）　１６７゜２３８〕で、式（Ｉａ）の対応
する化合物を無水ピリジン中で所要の塩化アセチルと反
応させることによって得られる。生成物は好ましくはｌ
：ｌクロロホルム／石油エーテル混合物から再結晶され
る。

式（Ｉｃ） 〔上記式（Ｉｃ）中、ＲおよびＲ１は前に定義した通り
である〕の化合物は、サトムおよびマキノ（Ｓａｔｏｍ
　ａｎｄ　Ｍａｋｉｎｏ）法（前掲）により、Ｒ２がＨ
である式（Ｉ）の対応する化合物をＺｎＣＱ、の存在下
でアセトンと反応させることによって製造される。得ら
れた生成物は好ましくはｌ：ｌクロロホルム／石油エー
テル混合物から再結晶によって精製される。

式（Ｉｄ） 〔上記式（Ｉｄ）中、Ｒ，Ｒ，、Ｒ２は前に定義した通
りである〕 の化合物は、前述の方法で得られた対応するチオエーテ
ルを水溶液中で臭素または過酸化水素で酸化することに
よって製造される〔グリーンスタインＪ、Ｐ、　、　　
ウイニツツＭ、（Ｇｒｅｅｎ　５ｔｅｉｎＪ、Ｐ、、　
Ｗｉｎｉｔｚ　Ｍ、）著　（１９６１）、ケミストリー
・オブ・ザ・アミノアシド（ＣｈｅｍｉｓＬｒｙ　ｏｆ
　ｔｈｅＡｍ１ｎｏ　Ａｃ１ｄｓ）、ジョン　ウイリー
アンドサンズ社（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ
　Ｉｎｃ、）　２１４６）　ａ得られた生成物は水から
再結晶によって精製する。

本発明者らは、工業的観点から特に簡単でかつ経済的な
ＭＴＡの製造方法を見い出すことに成功した。この新規
方法は、本質的に、厳密に制御された臨界的条件の下で
Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＶＥ）の加水分解を実
施し、はぼ完全な加水分解およびＭＴＡの完全な結晶化
を導くことからなる。

ＮＩ＋＋ この制御された加水分解方法はどんな方法で製造された
ＳＡＭＨにも適用することができる。

しかし、経済的に便利なやり方でこの新規方法を実施す
る場合に、５ＡＶＥ溶液の調製方法も１つの影響因子で
ある。

下記の操作工程がこの方法の最も経済的な実施態様を与
える。

ａ）　シュシンク法（Ｓｃｈｌｅｎｋ　ｍｅｔｈｏｄ）
　　（シユレツダＦ、　（Ｓｃｈｌｅｎｋ　Ｆ、）　（
１９６５）、エンジモロギー（Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｉｅ
）　２９．２８３）によりメチオニンで処理することに
よってパン酵母のＳＡＭＨの含量を豊富化する。

ｂ）水中に懸濁されている酵母細胞を周囲温度で酢酸エ
チルまたは酢酸メチルで処理する（ＤＴ−Ｏ５Ｒ２３３
６４０１，４）。

ｐＨを４〜６に調節しかつ濾過することによって初期酵
母中に存在しているほとんどすべてのＳＡＭＥを含む水
溶液が得られる。

Ｃ）この溶液を減圧下で初期体積の約１７１０に濃縮す
る。

ｄ）この濃縮液を約３０分間還流下に沸騰させかつソー
ダでｐＨを７に調節する。

ｅ）　この溶液を０〜５℃で放置し、沈殿したＭＴＡを
ほぼ完全にかつ良好な純度で集める。

上記したように、副生成物の生成なしにＳＡＭＥのＭＴ
Ａへの完全な選択的加水分解を得るために臨界的な必要
である工程Ｃおよびｄおよびｅは新規工程である。

次側は本発明の方法を例示するものである。

実施例　１ ５′−デオキシづ′−メチルチオアデノシン（ＭＴＡ）
の製造 ＳＡＭＥ含量が６．８８ｇ／ｋｇになるまでメチオニン
を添加することによってＳＡＭＥの含量を豊富化しであ
る酵母９０に９に、周囲温度において、ｌＩＱの酢酸エ
チルと１１１２の水とを添加する。

３０分間機械的撹拌を行った後、希硫酸でｐＨを４．５
に調節し、混合物を濾過し、残留物を水洗してＳＡＭＥ
含量４．４０ｇ／（ｌの溶液１４０αを得る。これは初
期原料中に存在していたＳＡＭＨの９９．５％に等しい
。

かくして得られた生成物を減圧下に濃縮（３０ｍｍＨｇ
、　３５−４０°ｃ）して体積を１４Ｒにする。この濃
縮液を常圧で３０分間還流下に沸騰させる。これを２０
℃に冷却し、４０％ソーダでｐＨを７に調節し、冷蔵セ
ル（＋３℃）内で１晩放置する。

生成した白色沈殿を濾過し、１．ＯＭの沸騰蒸留水に溶
解し、この溶液を冷却することによって結晶化させる。

高純度の結晶性ＭＴＡ　４１０ｇを得る。これは加水分
解を受けたＳＡＭＥに対して９０％の収率に相当する。

得られた生成物の特性は他の方法で得られた純ＭＴＡの
特性と一致する。

実施例　２ ＭＴＡスルホキ／ドの製造 １ｋｇのＭＴＡを１０１２の水中に懸濁し、冷却しなが
ら臭素を添加する。

臭素を含む水溶液はＭＴＡのスルホキシドへの酸化によ
って直ちに脱色する。

溶液がもはや脱色しなくなるまで臭素の添加を続ける。

この溶液を、少量のＭＴＡの添加によって脱色させる。

この水溶液をアンバーライトＩＲＡ　９３樹脂（ポリス
チレンマトリックスを有する弱塩基性イオン交換樹脂に
対するロームアンドハース社の登録商標）で、臭化物の
反応が無くなるまで処理する。

この混合物を濾過し、残留物を水洗する。水溶液を１０
Ｑに濃縮し、活性炭（ｌｏＯｇ）で処理し、凍結乾燥す
る。

０−９５０７＋ｇ（収率９０％）の生成物が得られる。

前述したように、式（Ｉ）の化合物は、特に鎮痛活性お
よび解熱活性と共に強力な抗炎症活性を有する。

この抗炎症活性はカラゲーン（ｃａｒｒａｇｅｎ）によ
るラットの実験的浮腫の試験により、ウィンター法（Ｗ
ｉｒ＋ｔｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ）　（Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、
　ｅｘｐｅｒ。

１ｌ− Ｔｈｅｒａｐ、１４１．３６９．１９６３）による保護
百分率の測定によって確認された。この試験結果がら、
ＭＴＡのＥＤ、ｏは３７ＩＩ１ｇ／ｋｇであることが見
い出され、このＥＤ５．値は経口投与する場合、類似構
造の化合物のＥＤ５ｏの中で最小である。

同じ試験において、インドメタシンのＥＤｓｏは９ｍｇ
／ｋｇであるがこの量で重大な胃の病変が現われる。し
かしながら、ＭＴＡはＥＤｓｏに於いて胃腸系になんら
の副作用も生じない。ラットに於けるインドメタシンの
ＬＤｓｏは１２ｍｇ／　ｈｇＣマルテリＡ、（Ｍａｒｔ
ｅｌｌｉ　Ａ、）著、イン・アスペッチ・デイ・ファル
マコロギア・デルインフイアマジオン（ｉｎ　Ａｓｐｅ
ｔｔｉ　ｄｉ　ｆａｒｍａｃｏｌｏｇｉａ　ｄｅｌｌ’
ｉｎｆａ−ｍｍａｚｉｏｎｅ）、７３頁、タンブリニ（
Ｔａｍｂｕｒｉｎｉ）出版、ミラン市、１９７３〕であ
るが、ＭＴＡのラットに於けるＬＤ５ｏは＞　２００　
ｍ　ｇ／　ｋ　ｇ／　ｏ　ａ　テあるコトモ注目すべき
である。

従って次の治療指数（ＴＩ）か得られる。

インドメタシン　ＴＩ＝１．３ ＭＴＡ　　　　　ＴＩ　＝　＞　５４．０３本発明の方
法により製造される式Ｉで示される化合物の抗炎症活性
の確認のためおよびその鎮痛活性および解熱活性を示す
ために一連の薬理学的試験も行った。

ＭＴＡについてのこれらの試験の幾つかで得られた結果
を後で示す。この物質はあらゆる場合に経口投与時に最
も活性であり、かつこの物質は既述のように生体内に生
理的に存在するので確かに最も安定である。

工業的生産の観点から、ＳＡＭＥからＭＴＡを製造する
本発明の方法は、極めて簡単で、かつ、経済的であり、
特に、低価格でＭＴＡを市場に出すことを可能にする点
において優れたものである。

上記試験において、メチルチオアデノシンスルホキシド
は筋肉的投与時に８．６のＥＤｓｏを示し、特に活性で
ある。筋肉的投与に於ける該化合物の大きい活性は実施
したすべての試験で確証された。ＭＴＡスルホキシドに
関する幾つかの重要なデータを下記に示す。

Ａ−抗炎症活性 べ口の方法（Ｖｅｌｏ　ｍｅｔｈｏｄ）　　（ベロＧ、
Ｐ、（Ｖｅｌ。

Ｇ、Ｐ、、　　ダンＣ１，（Ｄｕｎｎ　Ｃ，Ｊ、）他（
１９７３）、Ｊ、　Ｐａｔｈ。

１１．１．１４９：］によりカラギーンでラットに誘発
した胸膜炎によって試験した。

７５　ｍ　ｇ／　ｋ　ｇの量に於ける経口投与によるＭ
ＴＡは滲出液の体積について計算して４２．４％の保護
を与え、滲出液中に存在する全細胞数について計算して
４８．８％の保護を与えた。

インドメタシンでは１０ｍｇ／ｋｇで、すなわちずっと
ＬＤ、、に近い量で同程度の保護が得られた。

同じ試験に於いて、ＭＴＡは、８０　ｍ　９　／　ｈ　
ｇの量で筋肉的投与するとき、滲出液の体積について計
算して７５．８％の保護を与え、また滲出液中に存在す
る全細胞数について計算して７６．４％の保護を与えた
。

Ｂ−抗炎症活性 慢性炎症にとって重要な、綿ペレットによるラットの肉
芽腫試験〔ライズリ−Ｅ、Ａ、（ＲｉｓｅｌｅｙＥ、Ａ
、）他（１９６３）、Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｅｘｐｅｒ
、　Ｔｈｅｒ、　１４１．３６９〕に於いて、９ｍｇ／
ｋｇの経口投与量で３０％の保護を与え、ＴＩは２２２
であった。

Ｃ−生成物の鎮痛活性は極めて重要だと考えられる２つ
の試験で試験した。

一ロバーツによるマウスのホットプレート試験〔ロバー
ツＥ、（Ｒｏｂｅｒｔｓ　Ｅ、）、シモンセンＤ、Ｇ。

（Ｓｉｍｏｎｓｅｎ　Ｄ、Ｇ）（１９６６）、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃ、１５．１８７５）に於いて
、ＭＴＡは３７ｍｇ／ｋｇの経口投与量で５０％の保護
を与える。アミドピリンの１００ｍ１＋／ｈｇの経口投
与により、はぼ同等の５８％の保護が得られる。

同じ試験に於いて、ＭＴＡスルホキシドは筋肉的投与の
場合は２０ｍｇ／ｋｇの投与量で５０％の保護を与え、
経口投与の場合には１００　ｍ　ｇ／　ｋ　ｇの投与量
で５０％の保護を与える。

一フェニルキノンによる緊張試験〔ジーグムノドＥ、（
Ｓｉｅｇｍｕｎｄ　Ｅ、）、カドムスＲ，（Ｃａｄｍｕ
ｓ　Ｒ，）、Ｇｏ−ＬＵ　（１９５７）　、Ｒｒｏｃ、
　Ｓｏｃ、　Ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、　Ｍｅｄ。

９５、７２９）に於いて、ＭＴＡは３７ｍｇ／ｂｇの経
口投与量で５１％の保護を与える。

同じ試験に於いて、ＭＴＡスルホキシドは筋肉的投与の
場合１０ｍｇ／　ｈｇのＬＤ５゜を有する。

Ｄ−解熱活性 解熱活性はビール酵母によってラットに誘発させた熱に
より〔ウィンダ−Ｃ，Ｖ、（Ｗｉｎｄｅｒ　Ｃ，Ｖ、）
他（１９５１）　、Ｊ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｅｘ
ｐ、　Ｔｈｅｒ、　１３３゜１１７〕測定された。

３００ｍｇ／ｋｇの投与量でＭＴＡを経口投与させて１
時間後に評価した解熱効果は、酵母だけで処理された対
照に対して４，５９％の温度低下を与えた。

この百分率は３８．８℃から３７．４℃へ温度が低下し
たことに相当する。比較のため、アミドピリンを２００
ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与したところ４．６９％の
温度低下を生した。ＭＴＡの８０　ｍ　ｇ／　ｋ　ｇの
投与量での筋肉的投与は２．３５％の温度低下を与えｌ
こ。

Ｅ−血小板抗凝集活性 本発明に係る化合物をその可能な血小板抗凝集能力につ
いても評価した。

血小板凝集は複雑な現象であることが知られており、刺
激（例えばアデノシンニ燐酸塩すなわちＡＤＰまたはエ
ピネフリン）の直接作用による第１期と血小板によって
放出されたＡＤＰによって誘発される凝集による第２期
とに分けることができる。これに関して、血小板が内皮
下コラーゲンと接触するとき、コラーゲンは１つの完全
な反応系列を開始し、血小板によるＡＤＰの放出に導く
。このＡＤＰが血小板凝集の第２波を起こさせる。新規
化合物の抗凝集効果を評価するため下記の試験（ａ）、
（ｂ）を行った。

（ａ）式（Ｉ）の化合物の存在下に於ける、ＡＤＰおよ
びコラーゲンによって誘発される血小板凝集に関する“
試験管内″試験 （ｂ）アラキドン酸（ＡＡ）によって誘発される血小板
凝集に関するパ試験管内″試験 １）　　（ａ）の試験について 血行停止なしに血液を採り、抗凝固剤（３，８％クエン
酸ナトリウム）を血液：クエン酸ナトリウム比が９＝１
になるように添加した。

包囲温度で遠心分離して血小板に富む血漿と血小板に乏
しい血漿とを得た。血小板に富む血漿画分についてホル
ンおよびクロス法（Ｂｏｒｎ　＆　Ｃｒｏｓｓ　ｍｅｔ
ｈｏｄ）（Ｇ、Ｖ、Ｒ，ホルンおよびＭ、Ｊ、クロス（
Ｇ、Ｖ、Ｒ，Ｂｏｒｎ　ａｎｄ　Ｍ、Ｊ、　Ｃｒｏｓｓ
）、Ｊ、　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｌｏｎｄ、　１６８．１７
８．１９６３）を用いて血小板凝集を概算した。凝集剤
を下記濃度で用いた。ＡＤＰ（シグマ）ｌｕｌＪ、コラ
ーゲン（角質）　５　μｇ／　ｍＱ、アラキドン酸（Ａ
Ａ）　４　Ｘ　１０−’Ｍ０抗凝集活性標準物質として
ｌ　Ｘ　１０−’Ｍの濃度のアデノシンを用いた。

ＭＴＡはＡＤＰによる第１期血小板凝集を強力に減少さ
せ、かつ結果として第２期凝集波を抑制することが見い
出された。

コラーゲンについて行った同じ試験は陰性の結果を与え
た。すなわちＭＴＡはコラーゲンによって誘発される血
小板凝集に対しては抑制力を示さなかった。このことは
注目する価値がある。

２）　　（ｂ）の試験について この試験でＭＴＡの血小板凝集抑制効果はその濃度に比
例することが見い出された。

ＭＴＡが“生体内″でＡＤＰ（ｌμＭ）によって誘発さ
れる血小板凝集を強力に抑制することが明らかにされた
。

血液に５μｇ／ｍＱのコラーゲンを添加して反覆した同
じ試験はＭＴＡがコラーゲンで誘発される血小板凝集を
抑制するのではなく、この現象の潜伏時間を長くするだ
けであることを示す。

ＭＴＡがＡＤＰによって誘発される血小板凝集を強力に
抑制するがコラーゲンによって誘発される凝集に対して
はほとんど無効であるという事実はＭＴＡは第１期凝集
波を抑制するが、第２期凝集波に対する直接的影響は無
視できることを示す。

従って、第２期凝集波に対して一般に活性であるが第１
期凝集波に対して貧弱な影響しかない公知の他の抗凝集
剤と共にＭＴＡを使用することが特に興味がある。

示された活性は、血小板と血管壁との間の変化された関
係が血栓形成機構の基礎である以外に、アテローム性動
脈硬化症に於いても重要な役割を演じている点で、ＭＴ
Ａを血小板抗凝集薬としてばかりでなく、抗血栓形成薬
および抗アテローム性動脈硬化薬としても使用できるこ
とを示唆する。

Ｆ−催眠活性 モリス試験〔モリスＲ，Ｗ、（Ｍｏｒｒｉｓ　Ｒ，Ｗ、
）（１９６６）、Ａｒｃｈ、　　Ｉｎｔ、　Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｄｙｎ、　　１６１．　Ｎｏ、２，３８０）を用
いた。この試験で、ＭＴＡは２０　ｍ　９　／　ｋ　ｇ
の筋肉内投与で、マウスに於けるペンドパルビクールに
よって誘発された睡眠の期間を８７％増加した。

Ｇ−急性毒性 ＭＴＡおよびＭＴＡスルホキシドは経口投与される場合
、急性毒性がほとんど無い。これらの化合物はどんな投
与方法でも治療量に於ける毒性がほとんど無い。

ＭＴＡおよびＭＴＡスルホキシドで下記の値が得られる
。

ＭＴＡ−マウスに於けるＬＤ、。

経口投与＞　２０００ｍｇ／　ｋｇ 静脈内投与３６０ｍｇ／ｋｇ ＭＴＡスルホキシド−マウスに於けるＬＤｓ。

経口投与＞　２０００ｍｇ／　ｂｇ 静脈内投与４００ｍｇ／ｋｇ ＭＴＡおよびＭＴＡスルホキシドは、適当な薬理学的に
受容できる賦形剤で希釈し、任意の治療上有用な形で、
経口または非経口あるいは静脈手段または直腸手段で投
与することができる。これらの化合物は局所塗布による
外用製剤にも使用することができる。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ｎは０または１である） で示される５′−デオキシ−５′−メチルチオアデノシ
   ンおよびそのスルホキシドの製造方法であって、Ｓ−ア
   デノシルメチオニンの水溶液を濃縮し、次いで、還流下
   に加熱することによってＳ−アデノシルメチオニンを加
   水分解し、次いで反応混合物を中和した後に、生成した
   ５′−デオキシ−５′−メチルチオアデノシンを冷却に
   よって分離することを特徴とする５′−デオキシ−５′
   −メチルチオアデノシンおよびそのスルホキシドの製造
   方法。
2. （２）前記のＳ−アデノシルメチオニンの水溶液の濃縮
   を減圧の下で、３５〜４０℃に加熱することによって行
   うことを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の製造方
   法。
3. （３）前記の生成した５′−デオキシ−５′−メチルチ
   オアデノシンの冷却、分離を０〜５℃に冷却することに
   よって沈殿させることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項記載の製造方法。