LU83307A1 - Derives d'adenosine a activite anti-inflammatoire et analgesique,ainsi que des compositions therapeutiques contenant ces derives comme principe actif - Google Patents

Description

« i“ 1 ' ’ La présente invention concerne des dérivés d'adé— \ nosine à activité anti—inflammatoire, analgésique et :{ antipyrétique, ainsi que des compositions thërapeuti- !! ques contenant ces dérivés comme principe actif.

! i jî S Les composés à activité thérapeutique suivant jj la présente invention répondent à la formule générale : j NH-R, i ' ' ' 10 L 1 / (°>» ; CH0-S-R (I) i. d' , 15 0R2 or2 4 i dans laquelle | R représente un groupe alkyle a chaxne linéaire ou rami- * | fiée contenant 1 à 18 atomes de carbone, ou un groupe , phénylalkylène dans lequel la chaîne alkylène contient f 20 1 à 6 atomes de carbone, | R- représente un atome d1hydrogène, un groupe acyle j aliphatique contenant 1 à 6 atomes de carbone ou un » groupe acyle aromatique, | R2 représente un atome d*hydrogène, un groupe acyle ï « 25 aliphatique contenant 1 à 6 atomes de carbone ou un groupe acyle aromatique, ou encore, en variante, les radicaux R0 ensemble forment une chaîne isopropylidène, n est égal à 0 ou 1.

De plus, lorsque R^ représente un atome d'hy-^ 30 drogène, l*invention concerne également les sels d*ad- I dition d1acide des composés de formule (I).

? De préférence, R représente un groupe méthyle, un groupe éthyle, un groupe propyle, un groupe isopro— î . Pyle, un groupe butyle, un groupe isobutyle, un groupe 35 sec—butyle, un groupe pentyle, un groupe hexyle, un t ' groupe heptyle, un groupe octyle, un groupe décyle, un groupe dodécyle, un groupe hexadécyle, un groupe octa— « 2 :î décyle ou un groupe benzyle.

De préférence, R^ représente un atome d'hydrogène, un groupe acétyle, un groupe propionyle, un groupe butyryle, un groupe benzoyle ou un groupe tosyle, i 5 De préférence, Ro représente un atome d'hydro gène, un groupe acétyle, un groupe propionyle, un groupe butyryle, un groupe benzoyle, ou un groupe tosyle.

De préférence, les sels d'addition d’acide des (composés de formule (i) sont les chlorures, les sulfa-10 tes, les phosphates, les formiates, les acétates, les j | citrates, les tartrates, les méthane—sulfonates ou les | p-toluène—sulfonates.

À | ' Les composés de formule (I) sont, en partie, ί nouveaux.

.1 * ] 15 On prépare les composés de formule (I) par dif- I , I ferents procédés en fonction de la signification des différents radicaux.

j Pour préparer le groupe de composés répondant à la formule : 20 NH2 i f yf ^

; kX/ CH*-E-R

i 0 25 f X (la)

Vr

OH OH

i dans laquelle R a les significations indiquées ci—dessus, 30 on suit le procédé de Legraverand (Legraverand M. Ibanez S., et al. (1977) "Eut. J. Med. Chem.” 12, 105-108) dans !? lequel on transforme l'adénosine en 5’-chloro~5’-déoxy- I adénosine par réaction avec du chlorure de thionyle i dans de 1’hexaméthylphosphoramide.

I · j 35 Ensuite, on transforme la 51-chloro-51-déoxy- ! i adénosine en thioéther requis par réaction avec le mer- captan correspondant dans une solution d’hydroxyde de 3 « » sodium 2N à 80°C.

On purifie les thioéthers obtenus par recristallisation dans l'eau ou dans des alcools aliphatiques inférieurs.

S Ensuite, on peut soumettre les composés de for mule (la) à une salification avec la quantité stoechiométrique de l'acide requis.

On a préparé les composés de formule générale : NH-R.

1° 1 L X (Ib) ch2-s-r

P

0R20Ro dans laquelle R, R^ et R,, ont les significations définies ci-dessus, à condition que R. et R,, soient diffé- 1 é- 20 rents d'un atome d'hydrogène ou d'une chaîne isopropy-lidène, par le procédé de Satom et Makino (Satom K, Makino K (1951) "Rature" 167, 23S) en faisant réagir· les composés correspondants de formule (la) avec le chlorure d'acyle requis dans de la pyridine anhydre, v 25 De préférence, on soumet les produits à une recristal— lisation dans un mélange 1:1 de chloroforme et d'éther ‘ de pétrole.

On prépare les composés de formule : NH-R1 ïV>

V^/o I

35, ^Vr -£> S'\ -< CtÇ CH3 I · j i 4 i dans laquelle R et ont les significations définies ci-dessus, en faisant réagir les composés correspondants de formule (i) dans laquelle représente un atome d'hydrogène, avec de l'acétone en présence de 5 ZnCl„, à nouveau par le procédé de Satom et Makino Aâ (mentionné ci-dessus)· De préférence, on purifie les produits obtenus par cristallisation dans un mélange 1î1 de chloroforme et d'éther de pétrole· j On prépare les composés de formule : j 10 NH-Rj : . |Y% ? (Id)

kA/o CH*-S-R

15 P

i 0R.? 0Ro , i* dans laquelle R, R^^ et R., ont les significations défi-20 nies ci—dessus, par oxydation des thioéthers correspon-! dants obtenus par les procédés indiqués ci-dessus, au j; moyen de brome ou de peroxyde d'hydrogène en solution ! aqueuse (Green Stein J.P., Winitz M. (1961) - Chemistry j, of the amino acids - John Wiley & Sons Inc. 2146), On 25 purifie les produits obtenus par recristallisation j dans l'eau.

Parmi tous les produits préparés, celui qui » s'est avéré particulièrement intéressant pour l'objet j- de la présente invention, est la 51 -déoxy-54—méthyl- 30 ‘ thioadénosine de formule : k [ !i « 5 ψο ; i I >

I ^ Λ / CH -S-CH

Τί N -5 i 5 1^°Χ (II)

TT

OH OH

' 10 qui est un composé physiologique déjà présent dans les organismes vivants.

, Pour préparer ce produit, on a trouvé un procédé particulièrement simple et économique du point de vue industriel. Ce nouveau procédé consiste essentiellement 15 à effectuer l’hydrolyse de la S—adénosylméthionine dans I des conditions critiques strictement réglées pour abou tir à l'hydrolyse pratiquement totale et à la cristallisation complète de la 5 ’ -déoxy-51-méthylthioadénosine NH,,

20 I

Il > + CHo-S-CHo-CH«-CH-C00H — iftl “

OH OH

NH9 6c> CH.-S-CH3 0 J **

^ T -T HO-CH„-CH0-CH-COOH

h-v + «+ ‘ 35 Tn « 6

Le procédé d’hydrolyse contrôlée peut être appliqué à la S-adénosylméthionine préparée de n’importe quelle manière.

Toutefois, le procédé de préparation de la so-5 lution de S-adénosylméthionine est également un fac teur d’influence lors de la mise en oeuvre du nouveau procédé d’une manière économiquement avantageuse.

Les étapes opératoires ci-après constituent la forme de réalisation la plus économique du procédé : I 10 a) La levure normale de boulangerie est enri- : f chie dans la S-adénosylméthionine par traitement avec j de la méthionine conformément au procédé de Schlenk * (Schlenk F. (1965) Enzymologie 29, 283).

b) Les cellules de levure en suspension dans * 15 l’eau sont soumises à une lyse par traitement avec de ! l’acétate d’éthyle ou de l'acétate de méthyle à la j température ambiante (demande de brevet de la Répu blique Fédérale d’Allemagne DT-OS P 23 36 401*4)·

En réglant le pH à une valeur comprise entre 20 4 et 6 et en procédant à une filtration, on obtient une solution aqueuse contenant pratiquement toute la i ! S—adénosylméthionine présente dans la levure initiale.

I£ c) On concentre la solution sous vide à 35-40°C

jusqu’à environ 1/10 de son volume initial.

25 d) On fait bouillir à reflux le concentrât ] pendant environ 30 minutes, puis on règle le pH à 7 ; avec de la soude.

e) On laisse reposer la solution à 0-5°C, tandis que la 5’—déoxy-5méthylthioadénosine préci-30 pitée est recueillie pratiquement complètement et avec une bonne pureté.

Les étapes c, d et e qui, comme on l'a indiqué, sont critiques et nécessaires pour· assurer une hydro-| lyse sélective complète de la S-adénosylméthionine en 135 j 5’-déoxy-5‘-méthylthioadénosine sans aucune formation de sous-produits, sont nouvelles.

üî f i.

Γ 7 «

On décrira ci-après la préparation de certains I ‘ f produits utilisés suivant la présente invention, (EXEMPLE 1

Préparation de 5 *-déoxy-5'-méthylthioadénosine.

5 On ajoute 11 litres d'acétate d'éthyle et 11 li tres d'eau à la température ambiante à 90 kg de levure de boulangerie que l'on a enrichie dans la S-adénosyl-méthionine par addition de méthionine jusqu'à ce que la teneur en S-adénosylméthionine soit de 6,88 g/kg, 10 Après avoir agité vigoureusement pendant 30 minutes, on règle le pH à 4*5 avec du H2S0^ dilué, on filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'eau 1 pour obtenir 140 litres d'une solution ayant une teneur en S-adénosylméthionine de 4*4 g/1* soit 99*5% de la ( 15 S-adénosylméthionine présente dans la matière initiale.

On concentre le lysat ainsi obtenu sous vide (30 mm de Hg 5 35-40°C) jusqu'à un volume d'environ 14 lit res On fait bouillir à reflux la solution con- ; centrée sous pression normale pendant 30 minutes. On 20 la refroidit à 20°C, on règle le pH à / avec de la ; soude à 40% et on la laisse reposer pendant une nuit dans une cellule de réfrigération (+3°C),

Il se forme un précipité blanc que l'on filtre, que l'on dissout dans 10 litres d'eau distillée bouil-25 lante, pour le cristalliser ensuite en refroidissant cette solution.

On obtient 410 g de 5'-déoxy-5*-méthylthio— adénosine cristalline d'une haute pureté, soit un rendement de 90% vis-à-vis de la S-adénosylméthionine 30 soumise à l'hydrolyse, « Les caractéristiques du produit ainsi obtenu t t , concordent avec celles de la 5'—deoxy—5'—méthylthio— adénosine pure obtenue par d'autres moyens, EXEMPLE 2 35 Préparation de 51-déoxy-51-éthylthioadénosine.

j Sous une atmosphère d'azote, on dissout 1 kg ! —^b?· d'adénosine dans 10 litres d'hexaméthvlphosphoramide

J

i · i f i » ! i i ί { et, tout en refroidissant, on ajoute 7>5 litres de chlo rure de thionyle.

On laisse réagir le mélange à la température ambiante pendant 20 heures. On ajoute 10 litres d'eau et 5 on neutralise le mélange avec du NaOH 2N. On laisse cristalliser la S'-déoxy-S’-chloradénosine ainsi formée pendant une nuit à 3°C, puis on la sépare par filtration. On obtient 0,950 kg de 5*~déoxy-5 1-chlor a dénos ine (rendement : 89%)· On dissout 0,950 kg de 5*-déoxy~5’-10 chloradénosine dans 10 litres de NaOH 2N et on ajoute 200 ml d’éthane-thiol. On chauffe le mélange à 80°C et on le laisse réagir pendant une heure. On le neutra— ; lise avec de l’acide acétique glacial. On laisse pré cipiter la j’-déoxy-S’-éthylthioadénosine ainsi formée 15 pendant une nuit à 3°C. Ensuite, on la sépare par filtration et on la recristallise dans l’eau. On obtient 0,830 kg de produit (rendement : 80% vis-à-vis de l’étape précédente).

EXEMPLE 3 f i 20 Préparation d’autres composés de formule la.

I On effectue le procédé décrit à l’exemple 2, î mais en utilisant respectivement le propane-thiol, le butane-thiol,l’isobutane-thiol, le pentane-thiol, ! 1’hexane-thiol et le benzylthiol en lieu et place de 25 1’éthane-thiol.

! · EXEMPLE 4 ί „ Préparation de NÖ,2’,3’-triacétyl-51 —déoxy-5*-thioadé- I ' nosine.

On met 1 kg de 5’—déoxv—5’ —méthylthioadénosine 30 en suspension dans 10 litres de pyridine anhydre et on ajoute 3 litres d’anhydride acétique. On laisse réagir le mélange pendant 4 heures. On ajoute 20 litres d’eau et on concentre le mélange sous vide pour obtenir une masse huileuse exempte de pyridine. On dis— 35 sout cette masse dans 10 litres d’un mélange chaud L1:1 d’éther de pétrole et de chloroforme et on la laisse cristalliser. On recristallise le produit dans il ^ \ » » 9 un mélange 1:1 d’éther de pétrole et de chloroforme.

On obtient 1,140 kg de produit (rendement : 8θ>»). EXEMPLE 5

Préparation d’autres composés de formule Ib.

5 On effectue le procédé décrit à l’exemple 4S

mais en utilisant d’autres thioéthers ou de l'anhydride propionique, de l'anhydride butyrique, du chlorure de : ’ benzoyle ou du chlorure de tosyle en lieu et place de la 5 *-déoxy-5*-méthylthioadénosine.

10 EXEMPLE 6

Préparation de 5’“déoxy-^',3’-isopropylidène-S’-méthylthioadénosine.

On met 1 kg de 5*-déoxy-51—méthylthioadénosine en suspension dans 25 litres d'acétone anhydre et on 15 ajoute 2,5 kg de ZnC^ fondu. On effectue la réaction à reflux pendant 5 heures. Ensuite, on concentre le mélange sous vide à 1/3 de son volume initial, puis on ajoute 7,5 kg d'hvdroxyde de baryum à 8 molécules d'eau en suspension aqueuse. Ensuite, on fait barboter de 20 l’anhydride carbonique jusqu’à neutralité. On filtre le mélange et on lave le résidu avec de l'acétone.

On concentre le filtrat sous vide pour obtenir un résidu sirupeux. On reprend ce dernier dans 10 litres d'un mélange chaud 1:1 de chloroforme et d'éther de 25 pétrole, on le filtre et on le laisse cristalliser. On recristallise le produit obtenu dans un mélange 1:1 de chloroforme et d'éther de pétrole pour obtenir 0,795 kg de produit (rendement : 70%).

EXEMPLE 7 30 Préparation d'autres composés de formule le.

On effectue le procédé décrit à l’exemple 6, mais en partant des dérivés correspondants d'adénosine en lieu et place de la 5'-déoxy-5’—méthylthioadénosine. EXEMPLE S

35 ,] Préparation du sulfoxyde de 5 1 -déoxy-5 * -méthylthioade-

J

nosxne.

« 10 I On met 1 kg de 5'-déoxy-5’-méthylthioadénosine en suspension dans 10 litres d’eau et on ajoute du ; brome tout en refroidissant, j | La solution aqueuse contenant du brome est dé- !, 5 colorée immédiatement par l’oxydation de la 5*~déoxy— | 5’-méthylthioadénosine en sulfoxyde, ! On poursuit l’addition de brome jusqu’à ce que i i la solution ne se décolore plus,

La solution se décolore lorsqu'on ajoute encore 10 de petites quantités de 51-déoxy—5' —méthylthioadénosine, ; On traite la solution aqueuse avec la résine j "Amberlite IRA 93" (marque commerciale déposée de j; "Rohm and Haas" pour une résine échangeuse d’ions fai— i blement basique avec une matrice de polystyrène) jus- 15 qu'à ce que la réaction des ions bromure cesse, | On filtre le mélange et on lave le résidu ji avec de l'eau. On concentre la solution aqueuse à 10 ! litres, on la traite avec 100 g de carbone activé et on la lyophilise, ‘ 20 On obtient 0,950 kg de produit (rendement: 90%).

; EXEMPLE 9

Préparation d'autres composés de formule Id, : On suit le procédé décrit à l'exemple S, mais i ‘ en partant des dérivés correspondants d'adénosine en r 25 lieu et place de la 51-déoxy-5'-méthylthioadénosine.

Comme on l'a indiqué au début, on a constaté que les composés de formule I exerçaient une puissante activité anti—inflammatoire conjointement avec une activité analgésique et antipyrétique, ; 30 L’activité anti-inflammatoire a été démontrée initialement pour certains composés en pratiquant l'es— j sai d'oedème expérimental provoqué chez le rat par ! ; la carraghénine en déterminant le pourcentage de pro tection assurée par le procédé de Winter ("J, Pharm.

35 « exper. Therap." 141, 369, 1963). Les résultats obte-I · nUS Soiyk rePris dans le tableau ci-après,

i ~K

* 11

TABLEAU

Composé de formule X Dose Pourcen— admi- tage de nistrée protec- 5 par voie tion, orale calculé (mg/kg) sur le - dévelop pement de 10 __________11 oedème n = 0 R = -CH2, Rx = Rz = H 37 50 n = 0 R = -CH , Ri = R2 = H 23 (a) 50 n = 0 R = -CH2-C6H5, R1 = R2 = H 47 10 ^CH3 15 n = 0 R - -CH2-CH , Rx = R2 = H 85 62 NVch3 n = 0 R = -(CH2)6-CH3, Rx - R2 = H 95 20 ! n = 0 R = -(CH2)11-CH3J Rx = R2 = H 112 10 n = 0 R = — (CH0 ) —CH , R, = R9 = H 90 25 20 n = 0 R = — CH0-CH3, Rj = R2 = H 50 44 n = 0 R = -(CH0)0-CH , R = R0 = H 8θ 53 /CH3 n = 0 R — -CH , Rx = R2 = H 80 45

^CH

; 25 n = 0 R = -(CH2)3-CH3J = R£ = H 85 39 ' n = 0 R = CH-CH.-CH-, R, = R0 = H 85 35 . CH3 • n = 0 R = -(CH2)7-CH3, Rj_ = R2 = H 100 47 n = 0 R = — (CH0 ) n-CH0 3 R, = R„ = H 106 33 2931 u 30 η = 1 R = -CHOJ R. = R9 = H 150 50 O * ^ η = 1 R = -CH , Rj = R, — K S,6(a) 50 n = 0 R = -CH-, R = R0 = -C0-CH. 114 47

O ** O

n — 0 R = -CH3j Ra = R9 = tosyle 204 15 n = 0 R = -CH^, R1 = R2 = -CO-C6H5 104 10 35 ; n = 0 R = -CH3, R1=H,R0-R?=isopropylidène 91 20 ώΪ Indométhacine 9 50 \ / » 12 (a) signifie que le produit a été administré par voie : intramusculaire.

: i _ — _ »

Comme on peut le constater d’après ce tableau, 5 la dose efficace à 50% (DE^_q) 5 1 —déoxy—5 1 — méthyl- thioadénosine est de 37 mg/kg et, dès lors, cette va-; leur est la plus faible de celles des composés soumis ! ' à l’essai lors d'une administration par voie orale.

| ! Dans le même essai, la valeur DE,-q de l’indo- 10 méthacine est de 9 mg/kg. A ces doses, on voit appa-; raitre des lésions gastriques sérieuses tandis que, aux | valeurs DE,-q, la 5déoxy—5’ —méthylthioadénosine ne j produit aucun effet secondaire sur le système gastro- : intestinal. Il est également à noter que la dose létale ! 15 à 505® (DL50) de 1 ' indométhacine chez le rat est de 12 mg/kg (Martelli A, dans "Aspetti di farmacologia dell* j infiammazione”, page 73j publié par Tamburini - Milan [ 1973) t tandis que la valeur DL^ de la 5’*-déoxy-5 ' - méthylthioadénosine chez le rat est supérieure à 200 i 20 mg/kg/par voie orale.

i En conséquence, on obtient les indices théra peutiques suivants :

Indice thérapeutique de 11indométhacine = 1,3

Indice thérapeutique de la 5’-déoxy~5’-25 méthylthioadénosine = >54j05

On soumet également les composés suivant- l’invention à une série d’essais pharmacologiques afin de î ’ confirmer leur activité anti-inflammatoire et afin de !, démontrer leur activité analgésique et antipyrétique.

30 On donnera ci-après les résultats obtenus dans certains de ces essais avec la 5’—déoxy-5'-méthylthioadénosine, laquelle est un produit qui, dans tous les cas, s’avère être le plus actif lorsqu'il est administré par voie orale et qui, sans aucun doute, 35 est le produit le plus sûr, puisqu’aussi bien, ainsi j qu’on l'a déjà mentionné, il est physiologiquement présent dans l’organisme.

13 j:

De même, du point de vue production industrielle, le procédé de préparation de 51-déoxy-5*-méthylthioadé-nosine à partir de S-adénosylméthionine suivant 1*invention est de loin le plus simple et le plus économique, { 5 tandis qu'il peut être effectué à l'échelle industrielle en consentant des frais particulièrement bas.

Ainsi qu'on peut le constater d'après les don— ï . nées du tableau ci-dessus, le sulfoxyde de méthylthio— , adénosine est particulièrement actif lorsqu'il est ad- 10 ministré par voie intramusculaire. La plus forte acti— ( vité exercée par ce composé lors d'une administration | par voie intramusculaire a été confirmée dans tous les i ! essais qui ont été effectués. On donne également cer- [ taines données significatives relatives au sulfoxyde ‘ 15 de 51-déoxy-5'-méthylthioadénosine ; toutefois, il est | à noter que, dans tous les cas, tous les composés soumis ; aux essais se sont révélés actifs, quoique à des niveaux differents.

A — Activité anti—inflammatoire 20 On a soumis les produits à des essais en provo

quant une pleurite chez le rat par la carraghénine conformément au procédé de Velo (Velo G.P., DUNN

C.J. et al. (1973) "J. Path." 111, 149).

En une dose de 75 mg/kg par administration 25 orale, la 5déoxy—5'—méthylthioadénosine a assuré une protection de 42,4^, calculés sur le volume de l'exsudât, et de 48,8^, calculés sur le nombre total de cellules présentes dans l'exsudât.

^ On a obtenu une protection comparable avec 10 1 3O mg/kg d'indométhacine, c'est-à-dire une dose beau- I coup plus proche de la valeur DL^q. Dans le même 1 essai, le sulfoxyde de 51-déoxy-51-méthylthioadé nosine assure une protection de 75,8%, calculés sur i le volume de l'exsudât, et de 76,4/^* calculés sur P 35 i le nombre total de cellules présentes dans l'exsu- I Jt dat lors d'une administration par voie intramuscu— t * * • ' ^ laire à une dose de 80 mg/kg.

V

t 11 !) 14 j f s B - Activité anti-inflammatoire.

ί i Lors de l'essai du granulome provoqué chez le j rat par des pastilles de coton (Winter C.A., Rise- ley E.A, et al, (1963)5 "J* Pharm, Exper, Ther.", j 5 141? 369), cet essai étant significatif pour une j inflammation chronique, la 5’-déoxy-5’-méthylthio- j adénosine a assuré une protection de 30%> en une dose orale de 9 mg/kg avec un indice thérapeutique de 222.

• 10 C — L’activité analgésique des produits a fait l’objet ' de deux essais considérés comme très significatifs.

' - Dans l’essai à la plaque chauffante pratiqué sur j la souris suivant Roberts (Roberts E, Simonsen D.G. (i960) "Biochem. Pharmac.” 15y 1875)j la S 15 51-déoxy-5’-méthylthioadénosine assure une protec- ? ;j tion de 50% en une dose orale de 37 nig/kg. On »j obtient une protection à peu près équivalente de 58% avec 100 mg/kg d’amidopyrine administrée par voie orale.

20 Au cours du même essai, le sulfoxyde de 5*-déoxy— 5’—méthylthioadénosine assure une protection de 50% en une dose de 20 mg/kg lors d’une adminis-

Itration par voie intramusculaire et en une dose * de 100 mg/kg lors d’une administration par voie 25 orale.

— Au cours de l’essai d’extension à la phénylquinone (Siegmund E., Cadmus R., G0-LU (1957) "Proc. Soc. Exp. Biol. Med." 95 , 729)5 la 5 ’-déoxy-5 ’-méthyl-I thioadénosine assure une protection de en une I 30 dose orale de 37 mg/kg.

I Au cours du même essai, le sulfoxyde de 5’—déoxv— I 51-méthylthioadénosine a une valeur DEr„ de 10 I 50 ? mg/kg loi’s d’une administration par voie intra musculaire.

I 35 D - Activité antipyrétique I f On mesure cette activité pour les nouveaux pro— duits en provoquant la fièvre chez le rat au moyen

Y

» « 15 I de la levure de bière (Winter C.V. et al. (l96l), | "J. Pharmacol. Exp. Ther.” 133, 117)· L’effet antipyrétique évalué pendant une heure | après l’administration orale de 5'-déoxy-51—méthyl- | 5 thioadénosine en une dose de 300 mg/kg, a donné une réduction de température de 4j59% vis-à-vis des i i témoins qui ont été traites uniquement avec la ’ levure. Ce pourcentage correspond à une baisse de température de 38,8°C à 37,4°C· 10 Par comparaison, l’amidopyrine administrée par ’ voie orale en une dose de 200 mg/kg donne une ré duction de température de 4*69$, tandis que l’ad-I ministration intramusculaire de la 51—deoxy—5’ — J: méthylthioadénosine en une dose de 80 mg/kg assure Π ' 15 une réduction de température de 2,35^· 1 E — Activité inhibitrice d’agglomération des plaquettes· ij On a également évalué les composés de l’inven— 1 tion concernant leur aptitude éventuelle à inhiber l’agglomération des plaquettes.

20 On sait que l’agglomération des plaquettes est h un phénomène complexe pouvant être divisé en un j· stade primaire dû à l’action directe d’un stimulus (par exemple, le diphosphate d’adénosine ou l’épi- !' néphrine) et en un stade secondaire dû à l’agglo-

H

25 mération provoquée par le diphosphate d’adénosine | * libéré par les plaquettes. A cet égard, lorsque |: les plaquettes entrent en contact avec le colla- I: gène subendothélial, le collagène déclenche toute une série de réactions conduisant à la libération 30 de diphosphate d’adénosine par les plaquettes.

C’est précisément ce diphosphate d’adénosine qui est la cause de la deuxième vague d'agglomération des plaquettes. On a effectué les essais décrits ci-après afin d’évaluer· les nouveaux composés 35 j concernant leur effet inhibiteur d’agglomération 1k. des plaquettes : a 16 1) Essais "in vitro" sur l'agglomération des plaquet- j tes provoquée par le diphosphate d’adénosine et :| le collagène, en présence des nouveaux produits ; 2) essais "in vitro" sur l’agglomération des pla— 5 quettes provoquée par l’acide arachidonique ; | 3) essais "in vivo" sur 1’agglomération des pla— ! quetbes provoquée par le diphosphate d’adénosine ! et le collagène chez des personnes traitées avec | les nouveaux produits.

j, 10 Dans ce cas, les résultats les plus significa- j tifs sont à nouveau obtenus avec la 5’— déoxy-5’— ^ . méthylthioadénosine ; de ce fait, les résultats obtenus en utilisant ce produit sont donnés pour indiquer le comportement de toute la classe des 15 composés.

1) Essais"in vitro".

On prélève du sang sans stase et on ajoute un ; j anticoagulant (citrate de sodium à 3,8$S) pour· obtenir i ! un rapport de Ç:1 entre le sang et le citrate. On 20 obtient un plasma riche en plaquettes et un plasma : pauvre en plaquettes par centrifugation à la tempéra— ! ture ambiante. On évalue l’agglomération des plaquet- 'I tes en adoptant le procédé de Born & Cross (G.V.R.

J Born et M.J. Cross, "J. Physiol.", Londres 168, 17S, 25 I963) sur la fraction de plasma riche en plaquettes.

|i On utilise les agents provoquant l’agglomération des j! . plaquettes dans les concentrations suivantes : diphos- jl phate d’adénosine (Sigma) 1 jiM ; collagène (Hornj '1 5 ^ig/ntl ; acide arachidonique 4 x 10 ^M.

30 On a utilisé l’adénosine en une concentration . * t~ ' de 1 x ÎO^M comme substance de référence exerçant une I activité inhibitrice d’agglomération des plaquettes.

I Les résultats obtenus avec le diphosphate d’adénosine sont illustrés par les graphiques de la r; 35 figure I où le temps (en minutes) est porté en abs- ! j- cisse, tandis que le pourcentage d’agglomération est f Ji '•1 porté en ordonnée.

: •: \ i.

» 17

La courbe 1 se rapporte aux témoins, la courbe 2, aux échantillons traités avec l’adénosine en une concen- -5 tration de 1 x 10 M et la courbe 3j aux échantillons [ traités avec la 5*-déoxy-5*—méthylthioadénosine en une 5 concentration de 5 x 10~^M.

D’après 1*allure des courbes, on constate que la 5’-déoxy—51 —méthylthioadénosine réduit fortement 1 * agglomération primaire des plaquettes due au diphos-phate d’adénosine et que, par conséquent, elle inhibe 10 le deuxième stade d’agglomération.

Les mêmes essais effectués avec le collagène donnent des résultats négatifs, c’est-à-dire que la 5’-déoxy-51-méthylthioadénosine n’exerce aucun pouvoir inhibiteur sur 1’agglomération des plaquettes provoquée 15 par le collagène, valant la peine d’être noté, 2) La figure 2 illustre les effets exercés par différentes concentrations de 51 —déoxy-51-méthylthioadéno- j sine sur l’agglomération des plaquettes provoquées par l’acide arachidonique à une concentration de 4 x 10 ^M, i 20 La courbe 1 se rapporte aux témoins, la courbe 2, à la 5’—déoxy—51—méthylthioadénosine en une concentration de 2,5 x 10~^M, la courbe 3} à la 5*-déoxy-5’-méthylthio-adénosine en une concentration de 5 x 10*”^M et la courbe 4j à la 5’-déoxy—5*-méthylthioadénosine en une con- —3 25 centration de 10 M, Comme on le constate, l’effet exercé par la 51-déoxy-5’-méthylthioadénosine sur ' 1’inhibition de 1’agglomération des plaquettes est I proportionnel à sa concentration. On a également étudié la capacité de la 51-déoxy-51—méthylthioadéno-30 sine à accroître l’effet inhibiteur· de la prostacycline (PGI0) sur l’agglomération provoquée par l’acide ara- άΛ chidonique. En figure 3j la courbe 1 se rapporte aux témoins, la courbe 2, à la 51-déoxy-5’-méthylthioadé-nosine en une concentration de 5 x 10 la courbe 3,

.Q

35 à la PGI2 en une concentration de 5 x 10 'M et la j courbe 4* à un mélange constitué de 51-déoxy—5’—méthyl-thioadénosine en une concentration de 5 x 10~^M et de « !| i8 _û 1*GI9 en une concentration de 5 x 10 M. D'après la j ^ I figure 3, on constate qu'en utilisant le mélange, on | augmente fortement l'effet inhibiteur d'agglomération j à des concentrations qui, en elles-mêmes, sont inef- 5 ficaces* 3) Essais "in vivo".

Trois sujets volontaires apparemment en bonne * santé, âgés respectivement de 35, 42 et 48 ans et n’ayant pris aucun médicament pendant au moins 15 jours, 10 ont été soumis à des essais d’agglomération des plaquettes avant et après avoir consommé les nouveaux produits en une dose de 100 mg toutes les huit heures ! pendant 3 jours ; on a ensuite procédé aux évaluations.

\ L’échantillon de sang destiné à la détermination de ! 15 l'agglomération des plaquettes a été prélevé deux heu— [ res avant la consommation de la dernière dose du pro- j duit soumis à l’essai. La figure 4 donne les résultats I obtenus avec la 5 *-déoxy-5’-méthylthioadénosine.

Plus précisément, les courbes en trait plein 20 se rapportent aux valeurs obtenues avec des échantillons de sang prélevés chez des patients non traités, ! tandis que les courbes en traits discontinus se rap portent aux valeurs obtenues chez les mêmes patients traités avec la 5’-déoxy-5’-méthylthioadénosine.

;; 25 On constate que la 5 ’-déoxy-5 ’—méthylthioadé— - * nosine inhibe fortement l'agglomération des plaquettes t - provoquée par le diphosphate d’adénosine (l ^iM) "in I vivo".

En répétant les mêmes essais, mais en ajoutant 30 5 yag/ml de collagène au sang, on a constaté que la 5'-déoxy-5’-méthylthioadénosine n’était pas efficace pour inhiber l’agglomération des plaquettes provoquée par le collagène, mais qu’elle prolongeait simplement le temps de latence du phénomène.

35 Le fait que la 5’-déoxy-5'—méthylthioadénosine t (et, d ’ une manière plus ou moins comparable, les autres produits de la même classe) inhibe fortement l'agglomé— « « 19 ration des plaquettes provoquée par le diphosphate d'adénosine, alors qu’elle n’exerce pratiquement aucun effet sur l’agglomération provoquée par le collagène, ; indique que la 5'-déoxy-5’-méthylthioadénosine inhibe iî 5 le premier stade d’agglomération, alors qu'elle exerce un effet direct négligeable sur le deuxième stade d’ag— ;t glomération.

fi | En conséquence, il est particulièrement inté— ; ressant de l’utiliser en association avec d’autres mé- 10 dicaments connus inhibiteurs d’agglomération des pla- t ; quettes qui sont généralement actifs sur le deuxième stade d’agglomération, alors qu’ils n’ont qu'une efficacité médiocre vis—à—vis du premier stade.

‘ L’activité ainsi démontrée suggère d'utiliser 15 la 5 *-déoxy-5 *-méthylthioadénosine (et les autres com-1 posés de la série, même s'ils sont moins efficaces) 5 non seulement comme médicament inhibant 1'agglomérais tion des plaquettes, mais également comme médicament I antithrombotique et anti-athérosclérotique ; en effet, 20 outre le fait qu'elle constitue la base des mécanismes de la thrombogénèse, la relation modifiée entre les plaquettes et les parois des vaisseaux joue également ; un rôle primordial dans les maladies athérosclé- f rotiques.

f 25 F - Activité soporifique.

j | ; On a pratiqué l’essai de Morris (Morris R.W.

f (1966) "Arch. int. Pharmacodyn" l6l, N° 2, 380).

K » Au cours de cet essai, la 5’-déoxy-5’-méthyl- ΐ thioadénosine a augmenté de S7a> la durée du sommeil ? 30 provoquée par le pentobarbital chez la souris en une \ dose intramusculaire de 20 mg/kg.

G — Toxicité aiguë.

< Les composés de la présente invention sont pra tiquement exempts de toxicité aiguë' lorsqu’ils sont 35 administrés par voie orale. Ils sont pratiquement exempts de toxicité à des doses thérapeutiques pour jf n'importe quel procédé d'administration.

-'rv- ! 20 * ! , Les va] eui ,¾ ci-après sont, obtenues pour la 5*~ jr déoxy-5 *—méthy]thioadénosine et le sulfoxyde de 5’ — '1 déoxy— 5 1 — méthy] thioadénosine : t I 5 »-déoxy-5 *-méthylthioadénosine — LDrn chez la souris J 5 par voie orale > 2.000 mg/kg I par voie intraveineuse 360 mg/kg I Sulfoxyde de 5 1 -déoxy—5 * —méthylthioadénosine — LDj-q | , chez la souris par voie orale >2.000 mg/kg

Il 0 par voie intraveineuse 400 mg/kg

Les dérivés d*adénosine de formule (i) peuvent être administrés, en dilution avec des excipients appropriés et pharmacologiquement acceptables, sous n*im- : porte quelle forme thérapeutiquement utile, par voie \i “ 15 orale, par voie parenterale, par voie veineuse ou par : i voie rectale. Iis peuvent également être utilisés dans

N

f| des produits pour usage externe par application topique.

i 1 j On donnera ci-après uniquement à titre d'illus- * tration certains exemples de compositions pharmaceuti— i il j 20 ques spécifiques contenant de la 51-deoxy-5>-méthyl thioadénosine, “ Capsules à 100 mg 51-déoxy-5 *-méthylthioadénosine 100,2 mg if 1 Mannitol 195,0 mg j 25 Stéarate de magnésium 5,0 mg | ; -- \) 300,2 mg 11 - Capsules à 50 mg jl 51 -déoxy-51 -méthylthioadénosine 50,1 mg 30 s Mannitol 100,0 mg | Stéarate de magnésium 30 mg _ : . -t 153,0 mg ! * * I ! ! \

V

« 21 - Comprimés à 100 mg 5 *-déoxy-5*-méthylthioadénosine 100,2 mg

Amidon 100,0 mg

St éarate de magnésium 15*0 mg 5 Lactose 85,0 mg ! _ I 300,2 mg !} ji ‘ - Comprimes a 50 mg I 51-déoxy-5'-méthylthioadénosine 50,1 mg | 10 Amidon 120,0 mg * Stéarate de magnésium 15 >0 mg | Lactose 115»0 mg | 300,1 mg * 15 - Suppositoires à 100 mg j 5'-déoxy-51-méthylthioadénosine 100,2 mg | Masse pour suppositoires 1.700,0 mg ï | 1.800,2 mg 20 -Suppositoires à 50 mg 5 *-déoxy-51-méthylthioadénosine 50,1 mg

Masse pour suppositoires 1.450,0 mg 1.500,1 mg * 25 - Fiole pour injection à 50 mg j ' 5'-déoxy-51-méthylthioadénosine.

j , HCl (56,15 mg fondamentalement I équivalent) 50 mg ? Lidocaïne.HCl 25 mg 30 Eau, pour compléter à 3 ml j “ Fiole pour injection à 25 mg î I 5'-deoxy-5'-methylthioadeno- ! sine . HCl (28,07 mg fondamenta— i lement équivalent. ) 25 mg I 35 ) Lidocaïne . HCl 20 mg 1 . -4. Eau, pour compléter à 2 ml V ^ * ϊ ο Ο ; s ί ' — Dose orale à ÎOQ mg 5 *-déoxy-51-méthylthioadéno-sine . HCl (112,3 mg fondamentalement équivalent) 100 mg 5 Arôme de citron 0,025 mg | Sucre 1 g ! Agent inhibiteur de fermentation 50 mg

Eau, pour compléter à 5 ml î - Dose orale à 50 mg ‘ 10 51-déoxy-51-méthylthioadéno- sine . HCl (56,15 mg fondamentalement équivalant) 50 mg , Arôme de citron 0,015 mg

Sucre 0,5 g 15 Agent inhibiteur de fermentation 30 mg

Eau, pour compléter à 5 ml - Onguent à 100 g 51-déoxy-51-méthylthioadénosine 5 g

Base pour onguent hydrosoluble, 20 pour compléter à 100 g I Antioxydant 0,1 g.

Jh ‘F? Γ^ / : / ! » » \ !i , jj ;

; I

Claims (14)

1. Composition thérapeutique à activité antiinflammatoire, analgésique et antipyrétique, caractérisée en ce qu'elle comprend, comme principe actif, ' 5 au moins un composé répondant à la formule générale : j NH-RX 11/ (0)n i 10 ÇH9-S-R : . $ ! OR2OR2 I 1 15 dans laquelle I R représente un groupe alkyle à chaîne linéaire ou rami- j fiée contenant 1 à 18 atomes de carbone, ou un groupe ! phénylalkylène dans lequel la chaîne alkylène contient ; 1 à 6 atomes de carbone ;

20 Rj^ représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle aliphatique contenant 1 à 6 atomes de carbone ou un i 1 groupe acyle aromatique ; R2 représente un atome d'hydrogène, un groupe acyle ; aliphatique contenant 1 à 6 atomes de carbone ou un ! 25 groupe acyle aromatique, ou encore, en variante, les i j " radicaux R^ ensemble forment une chaîne isopropylidène, n est égal à 0 ou 1.

2. Composition thérapeutique suivant la reven- 1 dication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend, comme 30 principe actif, un composé de formule (Ij dans laquelle R, = R,, = H, R = CH , n — 0. *· - J

3· Composition thérapeutique suivant la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend, comme I principe actif, un composé de formule (i) dans laquelle

35. Rj = R0 = H, R = CH3, n = 1. ; ü * 24 > L·

4· Composition thérapeutique suivant la re- | vendication 1, caractérisée en ce qu’elle comprend, » comme principe actif, un composé de formule (X) dans laquelle R. = R„ = H, R = groupe alkyle à chaîne liné-iî - ï 5 aire ou ramifiée contenant 1 à 12 atomes de carbone et n — 0.

5. Composition thérapeutique suivant la re vendication 1, caractérisée en ce qu’elle comprend, comme principe actif, un composé de formule (l) dans i 10 laquelle = H, R = benzyle, n = 0.

6. Composition thérapeutique suivant la re- || vendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend, jf » comme principe actif, un composé de formule (i) dans il I laquelle R^ = R^ = benzoyle, R = methyle, n = 0. 'f 15

7· Composition thérapeutique suivant la re- i| vendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend, . »! ! comme principe actif, un composé de formule (i) dans laquelle R^ = R9 = t.osyle, R = méthyle, n = 0. • 'SI _ :|i

8. Composition thérapeutique suivant la re- ' Ji !| 20 vendication 1, caractérisée en ce qu’elle comprend, :| comme principe actif, un composé de formule (i) dans ;| laquelle R?- R2 = isopropylidène , R = méthyle, n = O. I

9» Procédé de préparation de 51-déoxy-51- I méthylthioadénosine, caractérisé en ce qu’on hydrolyse I 25 la S-adénosyl-méthionine, sous forme d’une solution ;! . | > aqueuse concentrée,par chauffage à reflux, puis on jf Jf A * · J § sépare la 5 * —deoxy-5’-méthylthioadénosine formée par :'i refroidissement après neutralisation du mélange réac tionnel.

10. Procédé suivant la revendication 9, ca- l ractérïsé en ce qu’on concentre la solution aqueuse i de S-adénosyl-méthionine par chauffage sous vide à ;! une température de 35 à 40° C.

:*! 11* Procédé suivant la revendication 9, ca- 35/ ractérisé en ce qu’on précipite la 51 -déoxy-5 ’ -méthvl- ;J i ... , 1' thioadenosine formée par refroidissement à une tempé- • J* rature de 0-5°C. y\ % 25 m r

12. Utilisation d’un composé répondant à la formule générale : f NH-R i s m I 'S Λ,/ <ï>» 1 " w ch9-s-r (I) ! Ol !: 10 I I OR OR I * dans laquelle U * R représente un groupe alkyle à chaîne linéaire ou rami— H fiée contenant 1 à 18 atomes de carbone, ou un groupe ! 15 phénylalkylène dans lequel la chaîne alkylène contient j! 1 à 6 atomes de carbone ; II A ^ p R^ représente un atome d1hydrogéné, un groupe acyle ali- ! phatique contenant 1 à 6 atomes de carbone ou un groupe I acyle aromatique j I 20 représente un atome d’hydrogène, un groupe acyle ali- i phatique contenant 1 à 6 atomes de carbone ou un groupe 1 acyle aromatique, ou encore, en variante, les radicaux | ensemble forment une chaîne isopropylidène, ! pour la préparation de produits pharmaceutiques à acti- I 25 vité anti-inflammatoire, analgésique et antipyrétique.

13. Utilisation du composé de formule (i) dans fi laquelle R^ = R£ = H, R = CH^j n = 0, pour la prépara- I tion de produits pharmaceutiques à activité anti-inflam- matoire, analgésique et antipyrétique.

14. Utilisation du composé de formule (Ij dans : laquelle R^ = R£ = H, R = CH^, n = 1 > pour· la prépara- Ition de produits pharmaceutiques à activité anti-inflammatoire, analgésique et antipyrétique. _________ i ! ίι