DK159453B - Fremgangsmaade til fremstilling af 5'-deoxy-5'-methylthioadenosin - Google Patents

Description

DK 159453 B

Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af 5'-deoxy-5'-methylthioadenosin (MTA) med formlen NH,

JL

CH2-S-CH3 b

OH OH

der er en fysiologisk forbindelse, der allerede findes i den levende organisme, og som er terapeutisk aktiv.

5 Man har nu fundet en fremgangsmåde til fremstilling af denne forbindelse, der er særlig simpel og økonomisk set udfra et industrielt synspunkt, fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved at en vandig opløsning af S-adenosylmethionin (SAM) med formlen: nh2

Li/··' Γ2 ch„-s-ch9-ch9-ch-cooh 2,22 <rf “>.

OH OH

10 koncentreres ved opvarmning under vakuum ved 35-40 °C, den koncentrerede vandige opløsning hydrolyseres ved opvarmning med'tilbagesvaling, og det dannede 5'-deoxy-

DK 159453 B

2 51 -methylthioadenosin fraskilles ved afkøling til 0-5 °C.

' Som omtalt ovenfor omfatter den omhandlede fremgangsmåde specielt at udføre hydrolysen af S-adenosylmethio-nin (SAM) under strengt regulerede kritiske betingel-5 ser, der fører til praktisk taget total hydrolyse og fuldstændig udkrystallisation af MTA.

nh2 Αλ

kl/' NH

xmAn/ ' + f 1 h9o I CH2-S-CH2-CH2-CH-C00H --^

OH OH

m2 LT> ch -s-ch, o - yH2

Sp + H0-CH2-CH2-CH-C00H + H+ OH oh

Den kontrollerede hydrolysemetode kan anvendes på SAM fremstillet på en hvilken som helst måde.

Imidlertid har fremstillingsmetoden af SAM-opløsnin-10 gen også betydning ved udførelsen af den omhandlede fremgangsmåde på en økonomisk og bekvem måde.

DK 159453B

3 Følgende arbejdstrin udgør den mest økonomiske udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen: a) almindelig brødgær beriges med SAM ved behandling med methionin i overensstemmelse med Schlenk-metoden 5 (Schlenk F. (1965) Enzymologie 29, 283).

b) Gærcellerne opslæmmes i vand og lyseres ved behandling med ethyl- eller methylacetat ved stuetemperatur (DT-offentliggørelsesskrift nr. 23 36401).

Ved at indstille pH til mellem 4 og 6 og filtrere 10 fås en vandig opløsning, der indeholder praktisk talt alt tilstedeværende SAM i den oprindelige gær.

c) Opløsningen koncentreres i vakuum ved 35 - 40 °C til ca. 1/10 af det oprindelige rumfang.

15 d) Koncentratet koges med tilbagesvaling ca. 30 minut ter, og pH indstilles til 7 med soda.

e) Opløsningen henstår ved 0-5 °C, og det udfældede^ MTA opsamles næsten fuldstændig og med god renhed.

Trinene c, d og e, der som angivet er kritisk nødvendi-20 ge for at få fuldstændig selektiv hydrolyse af SAM til MTA uden dannelse af biprodukter, er hidtil ukendte.

Opfindelsen er nærmere illustreret nedenfor.

EK5EMPEL

Fremstilling af 51-deoxy-51-methylthioadenosin (MTA) 25 11 Liter et.hylacetat og 11 liter vand sættes ved stuetem-

DK 159453 B

4 peratur til 90 kg brødgær, der er beriget med SAM ved at tilsætte methionin, indtil SAM-indholdet er 6,88 g/kg.

Efter kraftig omrøring i 30 minutter indstilles pH til 5 4,5 med fortyndet H2S0^, blandingen filtreres, remanen sen vaskes med vand, hvorved der opnås 140 liter opløsning med et SAM-indhold på 4,40 g/1, svarende til 99,5¾ af SAM-indholdet i det oprindelige materiale.

Det fremstillede lysat koncentreres i vakuum (30 mm 10 Hg; 35 - 40 °C) til rumfang på ca. 14 liter. Den koncen trerede opløsning koges med tilbagesvaling ved normalt tryk i 30 minutter. Der afkøles til 20 °C, pH indstilles til 7 med 40¾ soda, og opløsningen henstår natten over i køleskab (+3 °C).

15 Det hvide bundfald, der er dannet, filtreres fra, der opløses i 10 liter kogende destilleret vand og udkrystalliseres ved at afkøle opløsningen.

Der opnås 410 g krystallinsk MTA med stor renhed, hvilket svarer til 90¾ udbytte i forhold til det SAM, der. blev 20 hydrolyseret. Egenskaberne ved den fremstillede forbindelse svarer helt til egenskaberne for rent MTA, der er fremstillet ved andre metoder.

Den terapeutiske virkning af den fremstillede forbindelse er beskrevet i dansk patentansøgning nr. 251/84.

Claims (2)

1. DK 159453 B Patentkrav : Fremgangsmåde til fremstilling af 5'-deoxy-5'-methyl-thioadenosin med formlen: NB^ CH -S-CH, bl DH OH kendetegnet ved, at en vandig opløsning af 5 S-adenosylmethionin med formlen: p, 0> . n CH—S-CH —CH—CH-COOH
2. 2 I 2 2 λ) Λ OH OH koncentreres ved opvarmning under vakuum ved 35-40 °C, den koncentrerede vandige opløsning hydrolyseres ved opvarmning med tilbagesvaling, og det dannede 5'-deoxy-5'-methylthioadenosin fraskilles under afkøling til 10 0-5 °C.