JPH0246599B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は次式（）で示される5′―デオキシ―
5′―メチルチオアデノシン（MTA）またはその
スルホキシドの新規な製造方法に関する： （式中、ｎは０または１である）。

本発明の新規製造方法によつて得られる5′―デ
オキシ―5′―メチルチオアデノシン（MAT）は
生体中に存在することが既に知らている生理的化
合物であり、本発明者らによつて、有用な薬理活
性を有する化合物であることが確認された。すな
わち、上記式（）で示される化合物は後に詳述
するように有用な薬理活性、特に鎮痛活性および
解熱活性と共に強力な抗炎症活性を有するもので
ある。

従来、MATおよびそのスルホキシドを含む式
（） 〔式中、Ｒは１〜18個の炭素原子を有する直鎖状
または分枝鎖状アルキル基であるか、あるいはア
ルキレン鎖が１〜６個の炭素原子を有するフエニ
ルアルキレンであり、R₁はＨまたは１〜６個の
炭素原子の脂肪族アシル基または芳香族アシル基
であり、 R₂はＨまたは１〜６個の炭素原子を有する脂
肪族アシル基または芳香族アシル基であるか、あ
るいはR₂基は一緒になつてイソプロピリデン鎖
を形成しており、ｎは０または１である〕 で示される化合物の製造法としては、R₁、R₂等
の種々の置換基の種類によつて種々の方法が考え
られる。例えば、式（ａ） 〔上記式（ａ）中、Ｒは上記の意味を有する〕
の化合物群は、アデノシンをヘキサメチルホスホ
ルアミド中で塩化チオニルと反応させて5′―クロ
ロ―5′―デオキシアデノシンに転化させ〔レグラ
ベランドM.イバネズS.（Legraverand M.Ibanez
S.）他（1977）、Eur.J.Med.Chem.12，105〜
108〕、この5′―クロロ―5′―デオキシアデノシン
を次に80℃に於て2N水酸化ナトリウム溶液中で
対応するメルカプタンと反応させて所要のチオエ
ーテルに変えることにより製造することができ
る。

得られたチオエーテルを水または低級脂肪族ア
ルコールから再結晶によつて精製する。

化合物（ａ）は次に化学量論量の所要の酸で
塩にすることができる。

一般式（ｂ） 〔上記式（ｂ）中、Ｒ、R₁、R₂は前に定義し
た通りである〕 の化合物はサトムおよびマキノ（Satom and
Makino）法〔サトムK.，マキノK.（Satom K.，
Makino K.）（1951）、ネーチヤー（Nature）
167，238〕で、式（ａ）の対応する化合物を無
水ピリジン中で所要の塩化アセチルと反応させる
ことによつて得られる。生成物は好ましくは１：
１クロロホルム／石油エーテル混合物から再結晶
される。

式（ｃ） 〔上記式（ｃ）中、ＲおよびR₁は前に定義し
た通りである〕の化合物は、サトムおよびマキノ
（Satom and Makino）法（前掲）により、R₂が
Ｈである式（）の対応する化合物をZncl₂の存
在下でアセトンと反応させることによつて製造さ
れる。得られた生成物は好ましくは１：１クロロ
ホルム／石油エーテル混合物から再結晶によつて
精製される。

式（ｄ） 〔上記式（ｄ）中、Ｒ、R₁、R₂は前に定義し
た通りである〕 の化合物は、前述の方法で得られた対応するチオ
エーテルを水溶液中で臭素または過酸化水素で酸
化することによつて製造される〔グリーンスタイ
ンJ.P.，ウイニツツM.（Green Stein J.P.，
Winitz M.）著（1961）、ケミストリー・オブ・
ザ・アミノアシド（Chemistry of the Amino
Acids）、ジヨン ウイリーアンドサンズ社
（John Wiley＆Sons Inc.）2146〕。得られた生成
物は水から再結晶によつて精製する。

本発明者らは、工業的観点から特に簡単でかつ
経済的なMTAの製造方法を見い出すことに成功
した。この新規方法は、本質的に、厳密に制御さ
れた臨界的条件の下でＳ―アデノシルメチオニン
（SAME）の加水分解を実施し、ほぼ完全な加水
分解およびMTAの完全な結晶化を導くことから
なる。

この制御された加水分解方法はどんな方法で製
造されたSAMEにも適用することができる。

しかし、経済的に便利なやり方でこの新規方法
を実施する場合に、SAME溶液の調製方法も１
つの影響因子である。

下記の操作工程がこの方法の最も経済的な実施
態様を与える。

(a) シユレンク法（Schlenk method）〔シユレ
ンクF.（Schlenk F.）（1965）、エンジモロギー
（Enzymologie）29，283〕によりメチオニンで
処理することによつてパン酵母のSAMEの含
量を豊富化する。

(b) 水中に懸濁されている酵母細胞を周囲温度で
酢酸エチルまたは酢酸メチルで処理する（DT
―OS P23 36401.4）。

PHを４〜６に調節しかつ過することによつ
て初期酵母中に存在しているほとんどすべての
SAMEを含む水溶液が得られる。

(c) この溶液を減圧下で初期体積の約1/10に濃縮
する。

(d) この濃縮液を約30分間還流下に沸騰させかつ
ソーダでPHを７に調節する。

(e) この溶液を０〜５℃で放置し、沈殿した
MTAをほぼ完全にかつ良好な純度で集める。

上記したように、副生成物の生成なしに
SAMEのMTAへの完全な選択的加水分解を得る
ために臨界的な必要である工程ｃおよびｄおよび
ｅは新規工程である。

次例は本発明の方法を例示するものである。

実施例 １ 5′―デオキシ―5′―メチルチオアデノシン
（MTA）の製造 SAME含量が6.88ｇ／Kgになるまでメチオニン
を添加することによつてSAMEの含量を豊富化
してある酵母90Kgに、周囲温度において、11の
酢酸エチルと11の水とを添加する。

30分間機械的撹拌を行つた後、希硫酸でPHを
4.5に調節し、混合物を過し、残留物を水洗し
てSAME含量4.40ｇ／の溶液140を得る。こ
れは初期原料中に存在していたSAMEの99.5％に
等しい。

かくして得られた生成物を減圧下に濃縮（30mm
Hg、35〜40℃）して体積を14にする。この濃
縮液を常圧で30分間還流下に沸騰させる。これを
20℃に冷却し、40％ソーダでPHを７に調節し、冷
蔵セル（＋３℃）内で１晩放置する。

生成した白色沈殿を過し、10の沸騰蒸留水
に溶解し、この溶液を冷却することによつて結晶
化させる。

高純度の結晶性MTA410ｇを得る。これは加
水分解を受けたSAMEに対して90％の収率に相
当する。得られた生成物の特性は他の方法で得ら
れた純MTAの特性と一致する。

実施例 ２ MTAスルホキシドの製造 １KgのMTAを10の水中に懸濁し、冷却しな
がら臭素を添加する。

臭素を含む水溶液はMTAのスルホキシドへの
酸化によつて直ちに脱色する。

溶液がもはや脱色しなくなるまで臭素の添加を
続ける。

この溶液を、少量のMTAの添加によつて脱色
させる。

この水溶液をアンバーライトIRA 93樹脂（ポ
リスチレンマトリツクスを有する弱塩基性イオン
交換樹脂に対するロームアンドハース社の登録商
標）で、臭化物の反応が無くなるまで処理する。

この混合物を過し、残留物を水洗する。水溶
液を10に濃縮し、活性炭（100ｇ）で処理し、
凍結乾燥する。

0.950Kg（収率90％）の生成物が得られる。

前述したように、式（）の化合物は、特に鎮
痛活性および解熱活性と共に強力な抗炎症活性を
有する。

この抗炎症活性はカラゲーン（carragen）に
よるラツトの実験的浮腫の試験により、ウインタ
ー法（Winter method）（J.Pharm.exper.
Therap.141，369，1963）による保護百分率の測
定によつて確認された。この試験結果から、
MTAのED₅₀は37mg／Kgであることが見い出さ
れ、このED₅₀値は経口投与する場合、類似構造
の化合物のED₅₀の中で最小である。

同じ試験において、インドメタシンのED₅₀は
９mg／Kgであるがこの量で重大な胃の病変が現わ
れる。しかしながら、MTAはED₅₀に於いて胃腸
系になんらの副作用も生じない。ラツトに於ける
インドメタシンのED₅₀は12mg／Kg〔マルテリA.
（Martelli A.）著、イン・アスペツチ・デイ・フ
アルマコロギア・デルインフイアマジオン（in
Aspetti di farmacologia dell'infammazione）、
73頁、タンブリニ（Tamburini）出版、ミラン
市、1973〕であるが、MTAのラツトに於ける
ED₅₀は＞200mg／Kg／oaであることも注目すべき
である。

従つて次の治療指数（TI）が得られる。

インドメタシン TI＝1.3 MTA TI＝＞54.03 本発明の方法により製造される式で示される
化合物の抗炎症活性の確認のためおよびその鎮痛
活性および解熱活性を示すために一連の薬理学的
試験も行つた。

MTAについてのこれらの試験の幾つかで得ら
れた結果を後で示す。この物質はあらゆる場合に
経口投与時に最も活性であり、かつこの物質は既
述のように生体内に生理的に存在するので確かに
最も安定である。

工業的生産の観点から、SAMEからMTAを製
造する本発明の方法は、極めて簡単で、かつ、経
済的であり、特に、低価格でMTAを市場に出す
ことを可能にする点において優れたものである。

上記試験において、メチルチオアデノシンスル
ホキシドは筋肉内投与時に8.6のED₅₀を示し、特
に活性である。筋肉内投与に於ける該化合物の大
きい活性は実施したすべての試験で確証された。
MTAスルホキシドに関する幾つかの重要なデー
タを下記に示す。

Ａ―抗炎症活性 ベロの方法（Velo method）〔ベロG.P.（Velo
G.P.、ダンC.J.（Dunn C.J.）他（1973）、J.
Path.111，149〕によりカラギーンでラツトに誘
発した胸膜炎によつて試験した。

75mg／Kgの量に於ける経口投与によるMTAは
滲出液の体積について計算して42.4％の保護を与
え、滲出液中に存在する全細胞数について計算し
て48.8％の保護を与えた。

インドメタシンでは10mg／Kgで、すなわちずつ
とLD₅₀に近い量で同程度の保護が得られた。同
じ試験に於いて、MTAは、80mg／Kgの量で筋肉
内投与するとき、滲出液の体積について計算して
75.8％の保護を与え、また滲出液中に存在する全
細胞数について計算して76.4％の保護を与えた。

Ｂ―抗炎症活性 慢性炎症にとつて重要な、綿ペレツトによるラ
ツトの肉芽腫試験〔ライズリーE.A.（Riseley E.
A.）他（1963）、J.Pharm.Exper.Ther.141、369〕
に於いて、９mg／Kgの経口投与量で30％の保護を
与え、TIは222であつた。

Ｃ―生成物の鎮痛活性は極めて重要だと考えられ
る２つの試験で試験した。

―ロバーツによるマウスのホツトプレート試験
〔ロバーツE.（Roberts E.）、シモンセンD.G.
（SimonsenD.G.）（1966）、Biochem.
Pharmac.15、1875〕に於いて、MTAは37mg／
Kgの経口投与量で50％の保護を与える。アミドピ
リンの100mg／Kgの経口投与により、ほぼ同等の
58％の保護が得られる。

同じ試験に於いて、MTAスルホキシドは筋肉
内投与の場合は20mg／Kgの投与量で50％の保護を
与え、経口投与の場合には100mg／Kgの投与量で
50％の保護を与える。

―フエニルキノンによる緊張試験〔ジーグムン
ドE.（Siegmund E.）、カドムスR.（Cadmus R.）、
GO―LU（1957）、Rroc.Soc.Exp.Biol.Med.95，
729〕に於いて、MTAは37mg／Kgの経口投与量
で51％の保護を与える。

同じ試験に於いて、MTAスルホキシドは筋肉
内投与の場合10mg／KgのED₅₀を有する。

Ｄ―解熱活性 解熱活性はビール酵母によつてラツトに誘発さ
せた熱により〔ウインダーC.V.（Winder C.V.）
他（1961）、J.Pharmacol.Exp.Ther.133，117〕
測定された。

300mg／Kgの投与量でMTAを経口投与させて
１時間後に評価した解熱効果は、酵母だけで処理
された対照に対して4.59％の温度低下を与えた。
この百分率は38.8℃から37.4℃へ温度が低下した
ことに相当する。比較のため、アミドピリンを
200mg／Kgの投与量で経口投与したところ4.69％
の温度低下を生じた。MTAの80mg／Kgの投与量
での筋肉内投与は2.35％の温度低下を与えた。

Ｅ―血小板抗凝集活性 本発明に係る化合物をその可能な血小板抗凝集
能力についても評価した。

血小板凝集は複雑な現象であることが知られて
おり、刺激（例えばアデノシン二燐酸塩すなわち
ADPまたはエピネフリン）の直接作用による第
１期と血小板によつて放出されたADPによつて
誘発される凝集による第２期とに分けることがで
きる。これに関して、血小板が内皮下コラーゲン
と接触するとき、コラーゲンは１つの完全な反応
系列を開始し、血小板によるADPの放出に導く。
このADPが血小板凝集の第２波を起こさせる。
新規化合物の抗凝集効果を評価するため下記の試
験(a)、(b)を行つた。

(a) 式（）の化合物の存在下に於ける、ADP
およびコラーゲンによつて誘発される血小板凝
集に関する“試験管内”試験 (b) アラキドン酸（AA）によつて誘発される血
小板凝集に関する“試験管内”試験 (1) (a)の試験について 血行停止なしに血液を採り、抗凝固剤（3.8
％クエン酸ナトリウム）を血液：クエン酸ナト
リウム比が９：１になるように添加した。包囲
温度で遠心分離して血小板に富む血漿と血小板
に乏しい血漿とを得た。血小板に富む血漿画分
についてボルンおよびクロス法（Born＆Cross
method）〔G.V.R.ボルンおよびM.J.クロス
（G.V.R.Born and M.J.Cross）、J.Physiol
Lond.168，178，1963〕を用いて血小板凝集を
概算した。凝集剤を下記濃度で用いた。ADP
（シグマ）1μM、コラーゲン（角質）5μg／ml、
アラキドン酸（AA）４×10^-4M。抗凝集活性
標準物質として１×10^-5Mの濃度のアデノシン
を用いた。

MTAはADPによる第１期血小板凝集を強力
に減少させ、かつ結果として第２期凝集波を抑
制することが見い出された。

コラーゲンについて行つた同じ試験は陰性の
結果を与えた。すなわちMTAはコラーゲンに
よつて誘発される血小板凝集に対しては抑制力
を示さなかつた。このことは注目する価値があ
る。

(2) (b)の試験について この試験でMTAの血小板凝集抑制効果はそ
の濃度に比例することが見い出された。

MTAが“生体内”でADP（1μM）によつて
誘発される血小板凝集を強力に抑制することが
明らかにされた。

血液に5μg／mlのコラーゲンを添加して反覆
した同じ試験はMTAがコラーゲンで誘発され
る血小板凝集を抑制するのではなく、この現象
の潜伏時間を長くするだけであることを示す。

MTAがADPによつて誘発される血小板凝集
を強力に抑制するがコラーゲンによつて誘発さ
れる凝集に対してはほとんど無効であるという
事実はMTAは第１期凝集波を抑制するが、第
２期凝集波に対する直接的影響は無視できるこ
とを示す。

従つて、第２期凝集波に対して一般に活性で
あるが第１期凝集波に対して貧弱な影響しかな
い公知の他の抗凝集剤と共にMTAを使用する
ことが特に興味がある。

示された活性は、血小板と血管壁との間の変
化された関係が血栓形成機構の基礎である以外
に、アテローム性動脈硬化症に於いても重要な
役割を演じている点で、MTAを血小板抗凝集
薬としてばかりでなく、抗血栓形成薬および抗
アテローム性動脈硬化薬としても使用できるこ
とを示唆する。

Ｆ―催眠活性 モリス試験〔モリスR.W.（Morris R.W.）
（1966）、Arch.Int.Pharmacodyn.161，No.2380〕
を用いた。この試験で、MTAは20mg／Kgの筋肉
内投与で、マウスに於けるペントバルビタールに
よつて誘発された睡眠の期間を87％増加した。

Ｇ―急性毒性 MTAおよびMTAスルホキシドは経口投与さ
れる場合、急性毒性がほとんど無い。これらの化
合物はどんな投与方法でも治療量に於ける毒性が
ほとんど無い。

MTAおよびMTAスルホキシドで下記の値が
得られる。

MTA―マウスに於けるED₅₀ 経口投与＞2000mg／Kg 静脈内投与 360mg／Kg MTAスルホキシド―マウスに於けるLD₅₀ 経口投与＞2000mg／Kg 静脈内投与 400mg／Kg MTAおよびMTAスルホキシドは、適当な薬
理学的に受容できる賦形剤で希釈し、任意の治療
上有用な形で、経口または非経口あるいは静脈手
段または直腸手段で投与することができる。これ
らの化合物は局所塗布による外用製剤にも使用す
ることができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式（） （式中、ｎは０または１である） で示される5′―デオキシ―5′―メチルチオアデノ
   シンおよびそのスルホキシドの製造方法であつ
   て、Ｓ―アデノシルメチオニンの水溶液を濃縮
   し、次いで、還流下に加熱することによつてＳ―
   アデノシルメチオニンを加水分解し、次いで反応
   混合物を中和した後に、生成した5′―デオキシ―
   5′―メチルチオアデノシンを冷却によつて分離す
   ることを特徴とする5′―デオキシ―5′―メチルチ
   オアデノシンおよびそのスルホキシドの製造方
   法。 ２ 前記のＳ―アデノシルメチオニンの水溶液の
   濃縮を減圧の下で、35〜40℃に加熱することによ
   つて行うことを特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の製造方法。 ３ 前記の生成した5′―デオキシ―5′―メチルチ
   オアデノシンの冷却、分離を０〜５℃に冷却する
   ことによつて沈殿させることを特徴とする特許請
   求の範囲第１項記載の製造方法。