JP6899321B2 - 糖脂質を使用するヒトｉＮＫＴ細胞活性化 - Google Patents

Description

本出願は、「糖脂質を使用するヒトｉＮＫＴ細胞活性化」との題名の、２０１４年９月８日に提出された米国仮特許出願第６２／０４７，６０２号の優先権の利益を主張し、その全体を本明細書に援用する。

本発明は一般に、免疫治療剤の分野に関する。特に、本開示は、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞をモジュレートし、かつサイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激し、このように下流の免疫細胞をトランス活性化し、それによって先天性免疫および適応免疫を橋渡しする、糖脂質およびそのバリアントに関する。

ナチュラルキラー様Ｔ（ＮＫＴ）細胞は、疾患、例えば、がんおよび自己免疫障害の処置において非常に多くの治療可能性を有するＴリンパ球の別個の集団である。インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞は、先天性免疫および適応免疫の両方のフィーチャを有する調節性Ｔ細胞のサブセットを形成する。ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子によって提示されるペプチドによって活性化される通常のＴ細胞と対照的に、ｉＮＫＴ細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上で発現している非古典的ＭＨＣ Ｉ分子であるＣＤ１ｄとの関連において存在する脂質誘導体を認識する。

グルコースまたはガラクトースとのアルファ連結を有する特定の糖脂質は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで抗腫瘍活性を示すことが見出されてきており、マウスおよびヒトの両方のインバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）のための公知で最も強力なリガンドであることが示されていた。

インバリアントＮＫＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）は、インバリアントＴＣＲ−α鎖（マウスにおいてＶα１４／Ｊα１８およびヒトにおいてＶα２４／Ｊα１８）を担持し、ＣＤ１６１抗原を同時発現している（マウスにおいてＮＫ細胞マーカーＮＫ１．１およびヒトにおいてＮＫＲ−Ｐ１Ａ）。（１）Ｌａｎｔｚ， Ｏ．；Ｂｅｎｄｅｌａｃ， Ａ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． 、１９９４年、１８０巻、１０９７頁；（２）Ｄｅｌｌａｂｏｎａ， Ｐ．；Ｐａｄｏｖａｎ， Ｅ．；Ｃａｓｏｒａｔｉ， Ｇ．；Ｂｒｏｃｋｈａｕｓ， Ｍ．；Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ， Ａ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、１９９４年、１８０巻、１１７１頁；（３）Ｍａｋｉｎｏ， Ｙ．；Ｋａｎｎｏ， Ｒ．；Ｉｔｏ， Ｔ．；Ｈｉｇａｓｈｉｎｏ， Ｋ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．、Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９５年、７巻、１１５７頁；および（４）Ｄａｖｏｄｅａｕ， Ｆ．；Ｐｅｙｒａｔ， Ｍ． Ａ．；Ｎｅｃｋｅｒ， Ａ．；Ｄｏｍｉｎｉｃｉ， Ｒ．；Ｂｌａｎｃｈａｒｄ， Ｆ．；Ｌｅｇｅｔ， Ｃ．；Ｇａｓｃｈｅｔ， Ｊ．；Ｃｏｓｔａ， Ｐ．；Ｊａｃｑｕｅｓ， Ｙ．；Ｇｏｄａｒｄ， Ａ．；Ｖｉｅ， Ｈ．；Ｐｏｇｇｉ， Ａ．；Ｒｏｍａｇｎｅ， Ｆ．；Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ， Ｍ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９７年、１５８巻、５６０３頁。インバリアントＮＫＴ細胞は、抗原提示細胞上のＣＤ１ｄ分子によって提示されるαＧａｌＣｅｒに応答して大量のＴｈ１（例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２）およびＴｈ２（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−６）サイトカインを分泌する。^５〜９（５）Ｋａｗａｎｏ， Ｔ．；Ｃｕｉ， Ｊ．；Ｋｏｅｚｕｋａ， Ｙ．；Ｔｏｕｒａ， Ｉ．；Ｋａｎｅｋｏ， Ｙ．；Ｍｏｔｏｋｉ， Ｋ．；Ｕｅｎｏ， Ｈ．；Ｎａｋａｇａｗａ， Ｒ．；Ｓａｔｏ， Ｈ．；Ｋｏｎｄｏ， Ｅ．；Ｋｏｓｅｋｉ， Ｈ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９７年、２７８巻、１６２６頁；（６）Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ， Ｔ．；Ｐａｕｌ， Ｗ． Ｅ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、１９９４年、１７９巻、１２８５頁；（７）Ａｒａｓｅ， Ｈ．；Ａｒａｓｅ， Ｎ．；Ｎａｋａｇａｗａ， Ｋ．；Ｇｏｏｄ， Ｒ． Ａ．；Ｏｎｏｅ， Ｋ．、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９３年、２３巻、３０７頁；（８）Ｋａｗａｋａｍｉ， Ｋ．；Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｎ．；Ｋｉｎｊｏ， Ｙ．；Ｍｉｙａｇｉ， Ｋ．；Ｎａｋａｓｏｎｅ， Ｃ．；Ｕｅｚｕ， Ｋ．；Ｋｉｎｊｏ， Ｔ．；Ｎａｋａｙａｍａ， Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．；Ｓａｉｔｏ， Ａ．、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００３年、３３巻、３３２２頁；および（９）Ｎｉｅｕｗｅｎｈｕｉｓ， Ｅ． Ｅ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ， Ｔ．；Ｅｘｌｅｙ， Ｍ．；Ｓｃｈｌｅｉｐｍａｎ， Ｒ． Ａ．；Ｇｌｉｃｋｍａｎ， Ｊ．；Ｂａｉｌｅｙ， Ｄ． Ｔ．；Ｃｏｒａｚｚａ， Ｎ．；Ｃｏｌｇａｎ， Ｓ． Ｐ．；Ｏｎｄｅｒｄｏｎｋ， Ａ． Ｂ．；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ， Ｒ． Ｓ．、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、２００２年、８巻、５８８頁。次いで、これらの分泌されたサイトカインは、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞を含む下流の免疫細胞をトランス活性化することができ、それによって先天性免疫および適応免疫を橋渡しする。^{１０〜１２}（１０）Ｅｂｅｒｌ， Ｇ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ， Ｈ． Ｒ．、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、３０巻、９８５頁；（１１）Ｅｂｅｒｌ， Ｇ．；Ｂｒａｗａｎｄ， Ｐ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ， Ｈ． Ｒ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、１６５巻、４３０５頁；および（１２）Ｋｉｔａｍｕｒａ， Ｈ．；Ｏｈｔａ， Ａ．；Ｓｅｋｉｍｏｔｏ， Ｍ．；Ｓａｔｏ， Ｍ．；Ｉｗａｋａｂｅ， Ｋ．；Ｎａｋｕｉ， Ｍ．；Ｙａｈａｔａ， Ｔ．；Ｍｅｎｇ， Ｈ．；Ｋｏｄａ， Ｔ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ， Ｓ．；Ｋａｗａｎｏ， Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ， Ｔ．、Ｃｅｌｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、１９９巻、３７頁。

しかし、Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカインの均衡は、種々の障害の処置のためのαＧａｌＣｅｒの臨床適用を限定し得る。^{１３〜１６}（１３）Ｔａｈｉｒ， Ｓ． Ｍ．；Ｃｈｅｎｇ， Ｏ．；Ｓｈａｕｌｏｖ， Ａ．；Ｋｏｅｚｕｋａ， Ｙ．；Ｂｕｂｌｅｙ， Ｇ． Ｊ．；Ｗｉｌｓｏｎ， Ｓ． Ｂ．；Ｂａｌｋ， Ｓ． Ｐ．；Ｅｘｌｅｙ， Ｍ． Ａ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１年、１６７巻、４０４６頁；（１４）Ｄｈｏｄａｐｋａｒ， Ｍ． Ｖ．；Ｇｅｌｌｅｒ， Ｍ． Ｄ．；Ｃｈａｎｇ， Ｄ． Ｈ．；Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｋ．；Ｆｕｊｉｉ， Ｓ．；Ｄｈｏｄａｐｋａｒ， Ｋ． Ｍ．；Ｋｒａｓｏｖｓｋｙ， Ｊ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、２００３年、１９７巻、１６６７頁；（１５）Ｇｉａｃｃｏｎｅ， Ｇ．；Ｐｕｎｔ， Ｃ． Ｊ．；Ａｎｄｏ， Ｙ．；Ｒｕｉｊｔｅｒ， Ｒ．；Ｎｉｓｈｉ， Ｎ．；Ｐｅｔｅｒｓ， Ｍ．；ｖｏｎ Ｂｌｏｍｂｅｒｇ， Ｂ． Ｍ．；Ｓｃｈｅｐｅｒ， Ｒ． Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌｉｅｔ， Ｈ． Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｅｒｔｗｅｇｈ， Ａ． Ｊ．；Ｒｏｅｌｖｉｎｋ， Ｍ．；Ｂｅｉｊｎｅｎ， Ｊ．；Ｚｗｉｅｒｚｉｎａ， Ｈ．；Ｐｉｎｅｄｏ， Ｈ． Ｍ．、Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２００２年、８巻、３７０２頁；および（１６）Ｂｒｉｃａｒｄ， Ｇ．；Ｃｅｓｓｏｎ， Ｖ．；Ｄｅｖｅｖｒｅ， Ｅ．；Ｂｏｕｚｏｕｒｅｎｅ， Ｈ．；Ｂａｒｂｅｙ， Ｃ．；Ｒｕｆｅｒ， Ｎ．；Ｉｍ， Ｊ． Ｓ．；Ａｌｖｅｓ， Ｐ． Ｍ．；Ｍａｒｔｉｎｅｔ， Ｏ．；Ｈａｌｋｉｃ， Ｎ．；Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ， Ｊ． Ｃ．；Ｒｏｍｅｒｏ， Ｐ．；Ｐｏｒｃｅｌｌｉ， Ｓ． Ａ．；Ｍａｃｄｏｎａｌｄ， Ｈ． Ｒ．；Ｓｐｅｉｓｅｒ， Ｄ． Ｅ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００９年、１８２巻、５１４０頁。

したがって、多くの類似体が、ｉＮＫＴ細胞の選択的なＴｈ１またはＴｈ２サイトカイン応答を刺激するように設計されてきた。ｉｎ ｖｉｖｏで優れた腫瘍保護をもたらすマウスおよび人の両方において著しいＴｈ１偏向性を有する糖脂質。例えば、切断されたスフィンゴシンテイルを有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は、免疫応答をＴｈ２方向に駆動することができ、自己免疫性脳脊髄炎を予防した。Ｍｉｙａｍｏｔｏ， Ｋ．；Ｍｉｙａｋｅ， Ｓ．；Ｙａｍａｍｕｒａ， Ｔ．、Ｎａｔｕｒｅ、２００１年、４１３巻、５３１頁。他方、アシル鎖上のフェニル環を有するＧＳＬは、マウスおよびヒトにおいてＴｈ１偏向性サイトカインを誘導し、マウスにおける乳房腫瘍、肺腫瘍および黒色腫腫瘍に対してより強力な抗がん活性を示した。（Ｃｈａｎｇ， Ｙ． Ｊ．；Ｈｕａｎｇ， Ｊ． Ｒ．；Ｔｓａｉ， Ｙ． Ｃ．；Ｈｕｎｇ， Ｊ． Ｔ．；Ｗｕ， Ｄ．；Ｆｕｊｉｏ， Ｍ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．；Ｙｕ， Ａ． Ｌ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２００７年、１０４巻、１０２９９頁およびＷｕ， Ｔ． Ｎ．；Ｌｉｎ， Ｋ． Ｈ．；Ｃｈａｎｇ， Ｙ． Ｊ．；Ｈｕａｎｇ， Ｊ． Ｒ．；Ｃｈｅｎｇ， Ｊ． Ｙ．；Ｙｕ， Ａ． Ｌ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２０１１年、１０８巻、１７２７５頁。
ＣＤ１ｄおよび糖脂質の間の二元相互作用、ならびにｉＮＫＴ ＴＣＲおよびＣＤ１ｄ−糖脂質複合体の間の三元相互作用の検査は、これらの構造活性相関（ＳＡＲ）の根底にある機序を解明した。αＧａｌＣｅｒと比較して、同じグリコシル基を有するフェニルＧＳＬは、よりＴｈ１偏向性応答をもたらす、より強い二元および三元相互作用を示し、生物学的応答は、マウスおよびヒトの両方において三元複合体の結合アビディティーとの有意な相関関係を有した。１９〜２１Ｗｕ， Ｔ． Ｎ．；Ｌｉｎ， Ｋ． Ｈ．；Ｃｈａｎｇ， Ｙ． Ｊ．；Ｈｕａｎｇ， Ｊ． Ｒ．；Ｃｈｅｎｇ， Ｊ． Ｙ．；Ｙｕ， Ａ． Ｌ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２０１１年、１０８巻、１７２７５頁；Ｌｉａｎｇ， Ｐ． Ｈ．；Ｉｍａｍｕｒａ， Ｍ．；Ｌｉ， Ｘ．；Ｗｕ， Ｄ．；Ｆｕｊｉｏ， Ｍ．；Ｇｕｙ， Ｒ． Ｔ．；Ｗｕ， Ｂ． Ｃ．；Ｔｓｕｊｉ， Ｍ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、２００８年、１３０巻、１２３４８頁；およびＬｉ， Ｘ．；Ｆｕｊｉｏ， Ｍ．；Ｉｍａｍｕｒａ， Ｍ．；Ｗｕ， Ｄ．；Ｖａｓａｎ， Ｓ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．；Ｈｏ， Ｄ． Ｄ．；Ｔｓｕｊｉ， Ｍ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２０１０年、１０７巻、１３０１０頁。

Ｌａｎｔｚ， Ｏ．；Ｂｅｎｄｅｌａｃ， Ａ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． 、１９９４年、１８０巻、１０９７頁 ）Ｄｅｌｌａｂｏｎａ， Ｐ．；Ｐａｄｏｖａｎ， Ｅ．；Ｃａｓｏｒａｔｉ， Ｇ．；Ｂｒｏｃｋｈａｕｓ， Ｍ．；Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ， Ａ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、１９９４年、１８０巻、１１７１頁 Ｍａｋｉｎｏ， Ｙ．；Ｋａｎｎｏ， Ｒ．；Ｉｔｏ， Ｔ．；Ｈｉｇａｓｈｉｎｏ， Ｋ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．、Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９５年、７巻、１１５７頁 Ｄａｖｏｄｅａｕ， Ｆ．；Ｐｅｙｒａｔ， Ｍ． Ａ．；Ｎｅｃｋｅｒ， Ａ．；Ｄｏｍｉｎｉｃｉ， Ｒ．；Ｂｌａｎｃｈａｒｄ， Ｆ．；Ｌｅｇｅｔ， Ｃ．；Ｇａｓｃｈｅｔ， Ｊ．；Ｃｏｓｔａ， Ｐ．；Ｊａｃｑｕｅｓ， Ｙ．；Ｇｏｄａｒｄ， Ａ．；Ｖｉｅ， Ｈ．；Ｐｏｇｇｉ， Ａ．；Ｒｏｍａｇｎｅ， Ｆ．；Ｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ， Ｍ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９７年、１５８巻、５６０３頁 Ｋａｗａｎｏ， Ｔ．；Ｃｕｉ， Ｊ．；Ｋｏｅｚｕｋａ， Ｙ．；Ｔｏｕｒａ， Ｉ．；Ｋａｎｅｋｏ， Ｙ．；Ｍｏｔｏｋｉ， Ｋ．；Ｕｅｎｏ， Ｈ．；Ｎａｋａｇａｗａ， Ｒ．；Ｓａｔｏ， Ｈ．；Ｋｏｎｄｏ， Ｅ．；Ｋｏｓｅｋｉ， Ｈ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９７年、２７８巻、１６２６頁 Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ， Ｔ．；Ｐａｕｌ， Ｗ． Ｅ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、１９９４年、１７９巻、１２８５頁 Ａｒａｓｅ， Ｈ．；Ａｒａｓｅ， Ｎ．；Ｎａｋａｇａｗａ， Ｋ．；Ｇｏｏｄ， Ｒ． Ａ．；Ｏｎｏｅ， Ｋ．、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９３年、２３巻、３０７頁 Ｋａｗａｋａｍｉ， Ｋ．；Ｙａｍａｍｏｔｏ， Ｎ．；Ｋｉｎｊｏ， Ｙ．；Ｍｉｙａｇｉ， Ｋ．；Ｎａｋａｓｏｎｅ， Ｃ．；Ｕｅｚｕ， Ｋ．；Ｋｉｎｊｏ， Ｔ．；Ｎａｋａｙａｍａ， Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．；Ｓａｉｔｏ， Ａ．、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００３年、３３巻、３３２２頁 Ｎｉｅｕｗｅｎｈｕｉｓ， Ｅ． Ｅ．；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ， Ｔ．；Ｅｘｌｅｙ， Ｍ．；Ｓｃｈｌｅｉｐｍａｎ， Ｒ． Ａ．；Ｇｌｉｃｋｍａｎ， Ｊ．；Ｂａｉｌｅｙ， Ｄ． Ｔ．；Ｃｏｒａｚｚａ， Ｎ．；Ｃｏｌｇａｎ， Ｓ． Ｐ．；Ｏｎｄｅｒｄｏｎｋ， Ａ． Ｂ．；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ， Ｒ． Ｓ．、Ｎａｔ． Ｍｅｄ．、２００２年、８巻、５８８頁 Ｅｂｅｒｌ， Ｇ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ， Ｈ． Ｒ．、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、３０巻、９８５頁 Ｅｂｅｒｌ， Ｇ．；Ｂｒａｗａｎｄ， Ｐ．；ＭａｃＤｏｎａｌｄ， Ｈ． Ｒ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、１６５巻、４３０５頁 Ｋｉｔａｍｕｒａ， Ｈ．；Ｏｈｔａ， Ａ．；Ｓｅｋｉｍｏｔｏ， Ｍ．；Ｓａｔｏ， Ｍ．；Ｉｗａｋａｂｅ， Ｋ．；Ｎａｋｕｉ， Ｍ．；Ｙａｈａｔａ， Ｔ．；Ｍｅｎｇ， Ｈ．；Ｋｏｄａ， Ｔ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ， Ｓ．；Ｋａｗａｎｏ， Ｔ．；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ， Ｍ．；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ， Ｔ．、Ｃｅｌｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０００年、１９９巻、３７頁 Ｔａｈｉｒ， Ｓ． Ｍ．；Ｃｈｅｎｇ， Ｏ．；Ｓｈａｕｌｏｖ， Ａ．；Ｋｏｅｚｕｋａ， Ｙ．；Ｂｕｂｌｅｙ， Ｇ． Ｊ．；Ｗｉｌｓｏｎ， Ｓ． Ｂ．；Ｂａｌｋ， Ｓ． Ｐ．；Ｅｘｌｅｙ， Ｍ． Ａ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１年、１６７巻、４０４６頁 Ｄｈｏｄａｐｋａｒ， Ｍ． Ｖ．；Ｇｅｌｌｅｒ， Ｍ． Ｄ．；Ｃｈａｎｇ， Ｄ． Ｈ．；Ｓｈｉｍｉｚｕ， Ｋ．；Ｆｕｊｉｉ， Ｓ．；Ｄｈｏｄａｐｋａｒ， Ｋ． Ｍ．；Ｋｒａｓｏｖｓｋｙ， Ｊ．、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、２００３年、１９７巻、１６６７頁 Ｇｉａｃｃｏｎｅ， Ｇ．；Ｐｕｎｔ， Ｃ． Ｊ．；Ａｎｄｏ， Ｙ．；Ｒｕｉｊｔｅｒ， Ｒ．；Ｎｉｓｈｉ， Ｎ．；Ｐｅｔｅｒｓ， Ｍ．；ｖｏｎ Ｂｌｏｍｂｅｒｇ， Ｂ． Ｍ．；Ｓｃｈｅｐｅｒ， Ｒ． Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｒ Ｖｌｉｅｔ， Ｈ． Ｊ．；ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｅｒｔｗｅｇｈ， Ａ． Ｊ．；Ｒｏｅｌｖｉｎｋ， Ｍ．；Ｂｅｉｊｎｅｎ， Ｊ．；Ｚｗｉｅｒｚｉｎａ， Ｈ．；Ｐｉｎｅｄｏ， Ｈ． Ｍ．、Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２００２年、８巻、３７０２頁 Ｂｒｉｃａｒｄ， Ｇ．；Ｃｅｓｓｏｎ， Ｖ．；Ｄｅｖｅｖｒｅ， Ｅ．；Ｂｏｕｚｏｕｒｅｎｅ， Ｈ．；Ｂａｒｂｅｙ， Ｃ．；Ｒｕｆｅｒ， Ｎ．；Ｉｍ， Ｊ． Ｓ．；Ａｌｖｅｓ， Ｐ． Ｍ．；Ｍａｒｔｉｎｅｔ， Ｏ．；Ｈａｌｋｉｃ， Ｎ．；Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ， Ｊ． Ｃ．；Ｒｏｍｅｒｏ， Ｐ．；Ｐｏｒｃｅｌｌｉ， Ｓ． Ａ．；Ｍａｃｄｏｎａｌｄ， Ｈ． Ｒ．；Ｓｐｅｉｓｅｒ， Ｄ． Ｅ．、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００９年、１８２巻、５１４０頁 Ｍｉｙａｍｏｔｏ， Ｋ．；Ｍｉｙａｋｅ， Ｓ．；Ｙａｍａｍｕｒａ， Ｔ．、Ｎａｔｕｒｅ、２００１年、４１３巻、５３１頁 Ｃｈａｎｇ， Ｙ． Ｊ．；Ｈｕａｎｇ， Ｊ． Ｒ．；Ｔｓａｉ， Ｙ． Ｃ．；Ｈｕｎｇ， Ｊ． Ｔ．；Ｗｕ， Ｄ．；Ｆｕｊｉｏ， Ｍ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．；Ｙｕ， Ａ． Ｌ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２００７年、１０４巻、１０２９９頁 Ｗｕ， Ｔ． Ｎ．；Ｌｉｎ， Ｋ． Ｈ．；Ｃｈａｎｇ， Ｙ． Ｊ．；Ｈｕａｎｇ， Ｊ． Ｒ．；Ｃｈｅｎｇ， Ｊ． Ｙ．；Ｙｕ， Ａ． Ｌ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２０１１年、１０８巻、１７２７５頁 Ｗｕ， Ｔ． Ｎ．；Ｌｉｎ， Ｋ． Ｈ．；Ｃｈａｎｇ， Ｙ． Ｊ．；Ｈｕａｎｇ， Ｊ． Ｒ．；Ｃｈｅｎｇ， Ｊ． Ｙ．；Ｙｕ， Ａ． Ｌ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２０１１年、１０８巻、１７２７５頁 Ｌｉａｎｇ， Ｐ． Ｈ．；Ｉｍａｍｕｒａ， Ｍ．；Ｌｉ， Ｘ．；Ｗｕ， Ｄ．；Ｆｕｊｉｏ， Ｍ．；Ｇｕｙ， Ｒ． Ｔ．；Ｗｕ， Ｂ． Ｃ．；Ｔｓｕｊｉ， Ｍ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．、２００８年、１３０巻、１２３４８頁 Ｌｉ， Ｘ．；Ｆｕｊｉｏ， Ｍ．；Ｉｍａｍｕｒａ， Ｍ．；Ｗｕ， Ｄ．；Ｖａｓａｎ， Ｓ．；Ｗｏｎｇ， Ｃ． Ｈ．；Ｈｏ， Ｄ． Ｄ．；Ｔｓｕｊｉ， Ｍ．、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ． Ｓ． Ａ．、２０１０年、１０７巻、１３０１０頁

インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞は、おびただしい量のエフェクターサイトカインを産生するこれらの能力によって著しい免疫調節能力を有することが公知である。ヒトインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞を刺激し、かつヒトにおいてサイトカインおよびケモカイン産生をモジュレートする、改善されたスフィンゴ糖脂質が必要とされている。

したがって、本開示は、スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）が、免疫刺激において驚くべき有効性を有するという予想外の発見に基づいている。これらの例示的なＧＳＬによるケモカインのｉＮＫＴ非依存性誘導のための方法が開示される。ＧＳＬを使用したヒトにおける免疫刺激のための方法をまた提供する。

本開示は、抗原の免疫原性を増強させることを必要とする被験体において抗原の免疫原性を増強させる方法であって、一般式１のＧＳＬを含むアジュバント組成物との共投与または合剤としての該抗原の合わせた投与を含む、方法を提供する。

本発明によれば、免疫アジュバントとしてのＧＳＬの使用は、抗原によって誘導される防御免疫の増進および／または持続期間の延長をもたらし、かつ少なくとも部分的に抗原特異的Ｔｈ１−タイプ応答の増進および／または延長によって生じる。

本発明のＧＳＬ含有アジュバントは、任意の抗原、特に、感染物質または腫瘍に由来する抗原と合同して投与することができる。好ましくは、アジュバントおよび抗原は、同時に、最も好ましくは単一の剤形において投与される。

さらなる実施形態では、本発明は、被験体にＧＳＬを含むアジュバント組成物と一緒に免疫保護抗原を投与することを含む、前記被験体において疾患を処置するための予防的方法および／または治療方法を提供する。本明細書において特定するように、この方法は、様々な感染症または新生物疾患を予防および／または処置するのに有効であり得る。

本発明の方法と併せて、また提供するのは、免疫原性的に（immunogenically）有効な量の抗原、および式１内のＧＳＬから選択される免疫原性的に有効な量のアジュバント、ならびに任意選択で、薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を含む医薬組成物およびワクチン組成物である。

したがって、一態様では、本開示は、式（Ｉ）の免疫アジュバント化合物の構造的および機能的見本、

または薬学的に許容されるその塩に関し、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、ｎおよびｍは、本明細書に記載の通りである。

一部の実施形態では、Ｒ^４は、式（ＩＩ）の化合物、

[式中、ｉおよびＲ^６は、本明細書に記載の通りである]である。

一部の実施形態では、Ｒ^４は、式（ＩＩＩ）の化合物、

[式中、ｊ、ｋ、Ｒ^７およびＲ^８は、本明細書に記載の通りである]である。

ある特定の態様では、本開示の実施形態は、図１において列挙する見本のメンバーを含む本明細書において列挙する任意のメンバーまたは見本を含むか、または除外（例えば、外す）ことができる。ある特定の実施形態では、見本は、化合物Ｃ３４、ＩＩ−１〜ＩＩ−１２、ＩＩＩ−１〜ＩＩＩ−２４、および化合物４３および５３の任意の１つまたは複数を含むか、または除外することができる。

ある特定の実施形態では、下記の化合物を提供する。

本開示の態様はまた、（ｉ）ヒトを含む被験体に投与したとき、免疫応答を刺激するのに十分な量の本明細書において開示されている化合物、および（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物に関する。

一部の実施形態では、医薬組成物は、抗原およびワクチンアジュバントを含む。ある特定の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。

一部の実施形態では、医薬組成物は、抗がん治療剤を含む。

医薬組成物の一部の実施形態では、化合物におけるＲ^４は、置換もしくは非置換アリール、および置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択され、化合物は、Ｔｈ２サイトカインの最小の増加を伴って、ヒトにおいてＴｈ１サイトカインを増加させることができる。

本発明の態様は、免疫応答を刺激することを必要とするヒト被験体において免疫応答を刺激する方法であって、被験体に治療上有効な量の本明細書において開示されている組成物を投与することを含む、方法に関する。

一部の態様では、化合物は、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞を高めることができる量で投与される。

一部の態様では、化合物の投与は、ヒトにおいてサイトカインおよび／またはケモカイン産生を増加させる。一部の実施形態では、サイトカイン産生は、下流の免疫細胞をトランス活性化するのに十分である。一部の実施形態では、下流の免疫細胞は、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の１つまたは複数を含む。

一部の態様では、サイトカインは、Ｔｈ１サイトカインを含む。一部の実施形態では、Ｔｈ１サイトカインは、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、インターロイキン１２から選択される。

一部の態様では、ケモカインは、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される。

一部の態様では、組成物の投与は、抗がん効果を有する。一部の実施形態では、がんは、肺がん、乳がん、ヘパトーム、白血病、固形腫瘍および癌腫からなる群から選択される。

一部の実施形態では、化合物におけるＲ^４は、置換もしくは非置換アリール、および置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択され、ヒトにおけるＴｈ１サイトカインの増加は、Ｔｈ２サイトカインのいかなる増加をも上回る。

本発明の態様は、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高めることを必要とするヒト被験体においてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高める方法であって、被験体に治療上有効な量の組成物を投与することを含み、この組成物は、本明細書において開示されている化合物を含む、方法に関する。一部の実施形態では、ｉＮＫＴレベルの上昇は、グリコシルヘッド基としてアルファ−ガラクトース（αＧａｌ）を含む等しい量の糖脂質類似体の投与からもたらされる上昇と比較したときより大きい。

本発明の態様は、サイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激することを必要とするヒト被験体においてサイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激する方法であって、被験体に治療上有効な量の組成物を投与することを含み、この組成物は、サイトカイン／ケモカイン産生を増加させるのに十分な量の本明細書において開示されている化合物を含む、方法に関する。

一部の態様では、サイトカイン産生は、下流の免疫細胞をトランス活性化するのに十分である。一部の実施形態では、下流の免疫細胞は、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の１つまたは複数を含む。

一部の態様では、サイトカインは、Ｔｈ１サイトカインを含む。一部の実施形態では、サイトカインは、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、およびインターロイキン１２から選択される。

一部の態様では、ケモカインは、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される。

下記の図面と併せてこれらおよび他の態様は下記の好ましい実施形態の説明から明らかとなるが、その中の変形および改変は、本開示の新規な概念の精神および範囲から逸脱することなく行い得る。

下記の図面は、本明細書の部分を形成し、本開示の特定の態様をさらに示すために含まれ、本発明は、本明細書において提示されている特定の実施形態の詳細な記載と組み合わせて、これらの図面の１つまたは複数を参照することによってよりよく理解することができる。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
式（Ｉ）の構造を有する免疫アジュバント化合物、

または薬学的に許容されるその塩
［式中、
Ｒ ^１ は、−ＯＨまたはハロゲンであり、
Ｒ ^２ は、−水素またはハロゲンであり、
Ｒ ^３ は、−ＯＨ、水素またはハロゲンであり、
Ｒ ^４ およびＲ ^５ の各実例は、水素、ハロゲン、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、および任意選択で置換されているアシルからなる群から独立に選択され、
ｎは、１〜１５（両端を含む）の整数であり、
ｍは、１〜２０（両端を含む）の整数であり、ただし、該化合物は、ＩＩ−１〜ＩＩ−１２、ＩＩＩ−１〜ＩＩＩ−２４、４３、５３およびＣ３４のいずれかの１つではない］。
（項目２）
Ｒ ^３ が、−ＯＨである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
Ｒ ^３ が、ハロゲンである、項目１に記載の化合物。
（項目４）
Ｒ ^１ が、−ＯＨである、項目１から３のいずれか一項に記載の化合物。
（項目５）
Ｒ ^１ が、ハロゲンである、項目１から３のいずれか一項に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ ^４ が、式（ＩＩ）の化合物、

[式中、
ｉは、０、１、２、３、４、または５であり、
Ｒ ^６ は、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ _２ 、−Ｎ _３ 、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、および任意選択で置換されているアシルからなる群から独立に選択される]である、項目１に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ ^６ が、ハロゲンである、項目６に記載の化合物。
（項目８）
Ｒ ^６ が、Ｆである、項目７に記載の化合物。
（項目９）
Ｒ ^４ が、式（ＩＩＩ）の構造、

[式中、
ｊは、０、１、２、３、または４であり、
ｋは、０、１、２、３、４、または５であり、
Ｒ ^７ およびＲ ^８ の各実例は、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ _２ 、−Ｎ _３ 、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、および任意選択で置換されているアシルからなる群から独立に選択される]を有する、請求
項１に記載の化合物。
（項目１０）
Ｒ ^７ およびＲ ^８ の各実例が、独立に、水素またはハロゲンである、項目９に記載の化合物。
（項目１１）
Ｒ ^７ が、水素であり、Ｒ ^８ が、ハロゲン−Ｆであり、ｋが、１、２または３である、項目９に記載の化合物。
（項目１２）
Ｒ ^７ が、Ｆであり、Ｒ ^８ が、水素であり、ｊが、１、２または３である、項目９に記載の化合物。
（項目１３）
Ｒ ^７ およびＲ ^８ の両方が、ハロゲン−Ｆであり、ｋが、１、２または３であり、ｊが、１、２または３である、項目９に記載の化合物。
（項目１４）
下記の１つではないことを条件とする、項目１に記載の化合物。

（項目１５）
下記の１つから選択される、項目１に記載の化合物。

（項目１６）
（ｉ）ヒト被験体に抗原と共に共投与したとき、免疫応答を刺激するのに十分な量の項目１から１５のいずれかに記載の化合物、および（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目１７）
抗原の免疫原性を増強させることを必要とする被験体において抗原の免疫原性を増強させる方法であって、薬学的に有効な量の該抗原と、一般式ＩのＧＳＬ化合物、

または薬学的に許容されるその塩
[式中、
Ｒ ^１ は、−ＯＨまたはハロゲンであり、
Ｒ ^２ は、水素またはハロゲンであり、
Ｒ ^３ は、−ＯＨ、水素またはハロゲンであり、
Ｒ ^４ およびＲ ^５ の各実例は、水素、ハロゲン、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、および任意選択で置換されているアシルからなる群から独立に選択され、
ｎは、１〜１５（両端を含む）の整数であり、
ｍは、１〜２０（両端を含む）の整数であり、ただし、該化合物は、Ｃ３４、ＩＩ−１〜ＩＩ−１２、ＩＩＩ−１〜ＩＩＩ−２４、４３、および５３のいずれかの１つではない]
を含むアジュバント組成物とを共投与することを含む、方法。
（項目１８）
免疫応答を刺激することを必要とするヒト被験体において免疫応答を刺激する方法であって、該被験体に薬学的に許容されるキャリア中の治療上有効な量の免疫アジュバント組成物を投与することを含み、該組成物が、項目１から１５のいずれかに記載の化合物を含む、方法。
（項目１９）
前記アジュバント組成物が、ワクチンアジュバントである、項目１７に記載の方法。
（項目２０）
前記アジュバント組成物が、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞を高めることができる量で投与される、項目１７に記載の方法。
（項目２１）
前記アジュバント組成物の投与が、ヒトにおいてサイトカインおよび／またはケモカイン産生を増加させる、項目１８に記載の方法。
（項目２２）
前記サイトカイン産生が、下流の免疫細胞をトランス活性化するのに十分である、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４ ^＋ Ｔ細胞およびＣＤ８ ^＋ Ｔ細胞の１つまたは複数を含む、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記サイトカインが、Ｔｈ１サイトカインを含む、項目２１に記載の方法。
（項目２５）
前記Ｔｈ１サイトカインが、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、およびインターロイキン１２を含む群の少なくとも１つから選択される、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記ケモカインが、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧを含む群の少なくとも１つから選択される、項目２１に記載の方法。
（項目２７）
前記抗原／アジュバント組成物の投与が、抗がん効果を有する、項目１７に記載の方法。
（項目２８）
前記抗がん効果が、肺がん、乳がん、ヘパトーム、白血病、固形腫瘍および癌腫からなる群からのがんに向けられている、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
前記式Ｉの化合物におけるＲ ^４ が、置換もしくは非置換アリール、および置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択され、ヒトにおけるＴｈ１サイトカインの増加が、Ｔｈ２サイトカインのいかなる増加をも上回る、項目１７に記載の方法。
（項目３０）
インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高めることを必要とするヒト被験体においてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高める方法であって、該被験体に治療上有効な量の医薬組成物を投与することを含み、該組成物が、項目１から１５のいずれかに記載の化合物を含む、方法。
（項目３１）
サイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激することを必要とするヒト被験体においてサイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激する方法であって、該被験体に治療上有効な量の医薬組成物を投与することを含み、該組成物が、サイトカイン／ケモカイン産生を増加させるのに十分な量で項目１から１５のいずれかに記載の化合物を含む、方法。
（項目３２）
前記サイトカイン産生が、下流の免疫細胞をトランス活性化するのに十分である、項目３１に記載の方法。
（項目３３）
前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４ ^＋ Ｔ細胞およびＣＤ８ ^＋ Ｔ細胞の１つまたは複数を含む、項目３２に記載の方法。
（項目３４）
前記サイトカインが、Ｔｈ１サイトカインを含む、項目３１に記載の方法。
（項目３５）
前記サイトカインが、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、およびインターロイキン１２から選択される、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記ケモカインが、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される、項目３１に記載の方法。
（項目３７）
ワクチンアジュバントである、項目１６に記載の医薬組成物。
（項目３８）
抗がん治療剤である、項目１６に記載の医薬組成物。
（項目３９）
前記化合物におけるＲ ^４ が、置換もしくは非置換アリール、および置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択され、該化合物が、Ｔｈ２サイトカインの最小の増加を伴って、ヒトにおいてＴｈ１サイトカインを増加させることができる、項目１６に記載の医薬組成物。
（項目４０）
被験体において免疫応答を増強させる方法であって、該被験体に、１種もしくは複数種の抗原を含む有効な量のワクチン、および免疫原性的に有効な量の項目１６に記載のアジュバント組成物を投与することを含む、方法。
（項目４１）
前記１種もしくは複数種の抗原が、細菌性抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、プリオン抗原、ネオ抗原、腫瘍抗原および自己抗原からなる群から選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記ワクチンが、核酸、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、炭水化物、融合タンパク質、脂質、糖脂質、炭水化物−タンパク質コンジュゲート；細胞もしくはその抽出物；死細胞もしくは弱毒化細胞、もしくはその抽出物；腫瘍細胞もしくはその抽出物；ウイルス粒子；およびアレルゲンまたはこれらの混合物からなる群から選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
前記抗原が、腫瘍抗原である、項目４０に記載の方法。
（項目４４）
抗原の量が、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ〜１００ｍｇの範囲で投与される、項目４０に記載の方法。
（項目４５）
アジュバントの量が、体重１ｋｇ当たり１０〜１００μｇの範囲である、項目４０に記載の方法。
（項目４６）
前記アジュバント組成物が、式ＩのＧＳＬおよび薬学的に許容されるキャリアを含む共製剤化された薬学的に許容される組成物である、項目４０に記載の方法。
（項目４７）
式ＩのＧＳＬを含む製造品。
（項目４８）
項目１から１５のいずれか一項に記載のＧＳＬ、および使用説明書を含むキット。

図１は、αＧａｌまたはαＧｌｃを有する糖脂質の構造を示す。７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、αＭａｎを有する唯一の化合物である。ある特定の態様では、本開示の実施形態は、本明細書において列挙する任意のメンバーまたは見本を含むか、または除外（例えば、外す）ことができる。 図１は、αＧａｌまたはαＧｌｃを有する糖脂質の構造を示す。７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、αＭａｎを有する唯一の化合物である。ある特定の態様では、本開示の実施形態は、本明細書において列挙する任意のメンバーまたは見本を含むか、または除外（例えば、外す）ことができる。

図２Ａは、ガラクトース連結を有する例示的な代表的なＣ３４ＧＳＬ誘導体（Ｃ３４、Ｋ６９１、Ｋ７０５、Ｋ７０６）である。Ｖα１４Ｔ細胞抗原受容体を有するＣＤ１ｄ反応性Ｔ細胞ハイブリドーマ細胞であるＤＮ３Ａ４−１．２を、９６ウェルにおいてマウスＣＤ１ｄ提示細胞、Ａ２０−ＣＤ１ｄと共に培養し、１μｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、０．０１μｇ／ｍＬの異なる糖脂質で刺激した。１８時間のインキュベーションの後、ｉＮＫＴ細胞活性化の読み出した情報としての培地中に放出されたＩＬ−２を、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。Ｋ６９１は、１μｇ／ｍＬおよび０．１μｇ／ｍＬでＣ３４より有意に少ない量のＩＬ−２を分泌したが、これは、Ｃ３４の第２のフェニル環上のＦの存在の重要性を示唆する。Ｋ７０６は、１μｇ／ｍＬでｉＮＫＴ ＩＬ−２分泌を刺激するのにＣ３４より有意に強力でなかった。マウスＩＬ−２分泌の誘導において、Ｋ７０５は、全ての濃度においてＣ３４と同様であり、１μｇ／ｍＬおよび０．１μｇ／ｍＬでＫ７０６より良好であったが、これは、オルト位における第２のＦが、マウスｉＮＫＴ細胞を活性化させるのに、メタ位におけるより良好であったことを示す。まとめると、第２のフェニル環上のＦ原子の数および位置は、マウスｉＮＫＴ活性化を非常にモジュレートすることができる。

図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。 図２Ｂ−１〜２Ｂ−１９は、例示的なＣ３４誘導体の合成スキームである。

図３は、ＣＤ１ｄ−糖脂質複合体とｉＮＫＴ細胞との三元相互作用を示す。（３Ａ）ＤＮ３Ａ４−１．２Ｖα１４＋ｉＮＫＴハイブリドーマ細胞および（３Ｂ）７ＤＷ８−５−増殖されたＶα２４＋ｉＮＫＴ細胞を、それぞれ、様々な濃度の示した二量体のｍＣＤ１ｄ−糖脂質およびｈＣＤ１ｄ−糖脂質複合体と共に４℃にて３０分間インキュベートした。示した濃度での結合した複合体のレベルを、抗ｍＩｇＧ１二次抗体によって検出し、フローサイトメトリーによって分析した。結合百分率およびＣＤ１ｄジ−糖脂質複合体（CD1ddi-glycolipids complex）の濃度の間の関係を、マウス（３Ａ）およびヒト（３Ｂ）においてプロットした。マウス（３Ｃ）およびヒト（３Ｄ）におけるＫＤ値を、それぞれ、プロット（３Ａ）および（３Ｂ）のスキャッチャード変換から計算した。アッセイを２連で行った。

図４は、ｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄスワッピングアッセイを示す。（４Ａ）マウスＤＮ３Ａ４−１．２Ｖα１４＋ｉＮＫＴハイブリドーマ細胞または（４Ｂ）Ｃ１−展開されたＶα２４＋ｉＮＫＴ細胞を、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、および０．０１μｇ／ｍｌでのｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ細胞）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞）によって提示された示した糖脂質でパルスした。１８時間後、上清を収集し、ＥＬＩＳＡアッセイ（４Ａ）によって、またはＢｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）ヒトサイトカインキットおよびＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００（商標）読取りシステム（４Ｂ）を使用してＩＬ−２分泌を測定した。アッセイを３連で行った。８−５は、７ＤＷ８−５の略語であった。

図５は、ＣＤ１ｄ−ＧＳＬ−ｉＮＫＴ ＴＣＲの三元複合体のコンピューターモデリングを示す。（５Ａ）／（５Ｂ）マウス（５Ａ）およびヒト（５Ｂ）のＣＤ１ｄ−Ｃ１−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体内の水素結合を示した。水素結合の形成が、ＣＤ１ｄのヒトＡｓｐ８０（マウスＡｓｐ８０）、ヒトＴｈｒ１５４（マウスＴｈｒ１５６）、ヒトＡｓｐ１５１（マウスＡｓｐ１５３）、およびｉＮＫＴ ＴＣＲのヒトＧｌｙ９６（マウスＧｌｙ９６）を含む保存された残基において確認された。加えて、ｉＮＫＴ ＴＣＲのマウスＡｓｎ３０、ならびにヒトＰｈｅ２９およびＳｅｒ３０は、Ｃ１の３’−および／または４’−ＯＨとＨ結合相互作用を形成する重要な残基であった。（５Ｃ）グルコースの赤道方向４’−ＯＨは、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ｐｈｅ５１およびｈＣＤ１ｄ−Ｔｒｐ１５３によってトラップされた結晶水とのより強い相互作用による、Ｐｈｅ２９相互作用の喪失を補償することができた。（５Ｄ）芳香族相互作用からのより高いエネルギーは、Ｃ３４またはＣ３４−Ｇｌｃのアシル鎖をＣＤ１ｄ内のＡ’チャネルのより低い位置（Ｃｙｓ１２近傍）へと駆動し、ヘッド基の配向に対して僅かな撹乱にもたらすことができた。（５Ｅ）Ａｕｔｏｄｏｃｋ４．２を使用した三元複合体のコンピュータ計算した自由エネルギー。

図６は、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによってトリガーされる用量依存的なケモカイン分泌を示す。Ｂ６野性型マウスに、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃを０．１μｇ／マウスまたは１μｇ／マウスでｉ．ｖ．注射した。注射の２時間後および１８時間後に集めた血清を、ケモカイン分泌、例えば、ＩＰ−１０（６Ａ）、ＫＣ（６Ｂ）、ＭＣＰ−１（６Ｃ）、およびＭＩＰ−１α（６Ｄ）について分析した。これらのケモカインは、注射の２時間後にピークとなった。

図７は、サイトカインおよびケモカインのｉＮＫＴ依存性産生を示す。Ｂ６野性型およびＪα１８ノックアウトマウスに、示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクルをｉ．ｖ．注射した。注射の２時間後および１８時間後に集めた血清を、サイトカイン様ＩＬ−２（７Ａ）、ＩＬ−６（７Ｂ）、ＧＭ−ＣＳＦ（７Ｃ）およびＴＮＦα（７Ｄ）、ならびにケモカイン、例えば、ＩＰ−１０（７Ｅ）、ＭＩＧ（７Ｆ）、ＫＣ（７Ｇ）およびＭＣＰ−１（７Ｈ）について分析した。ＭＩＧのみが注射の１８時間後にピークとなり、一方、他のものは注射の２時間後においてピークとなった。

図８は、示した糖脂質による刺激の後のＷＴマウス免疫細胞のＦＡＣＳ分析を示す。示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクル（ＰＢＳ中の１％ＤＭＳＯ）で処置したＢ６ＷＴマウスを、注射の７２時間後に屠殺し、それらの脾細胞をＦＡＣＳ分析に供した。（８Ａ）総脾細胞、（８Ｂ）総ＣＤ１１Ｃｈｉ細胞、（８Ｃ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８０＋細胞、（８Ｄ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８６＋細胞、（８Ｅ）ＣＤ４＋Ｔ細胞および（８Ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞。

図９は、示した糖脂質による刺激の後のＪα１８ＫＯマウス免疫細胞のＦＡＣＳ分析を示す。示した糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクル（ＰＢＳ中の％ＤＭＳＯ）で処置したＢ６Ｊα１８ＫＯマウスを、注射の７２時間後に屠殺し、それらの脾細胞をＦＡＣＳ分析に供した。（９Ａ）総脾細胞、（９Ｂ）総ＣＤ１１Ｃｈｉ細胞、（９Ｃ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８０＋細胞、（９Ｄ）ＣＤ１１Ｃｈｉ／ＣＤ８６＋細胞、（９Ｅ）ＣＤ４＋Ｔ細胞および（９Ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞（スチューデントｔ検定：^＊、ｐ＜０．０５、Ｄと比較して）。

図１０は、ｍＣＤ１ｄおよび糖脂質の間の二元複合体の結合強度を示す。（１０Ａ、１０Ｂ）ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした異なる濃度のｍＣＤ１ｄ−糖脂質複合体を、ビオチンとコンジュゲートさせた飽和量のＬ３６３抗体と共にインキュベートし、それに続いてストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定を行った。（１０Ａ）Ｌ３６３抗体結合を反映するＯＤ値およびＣＤ１ｄジ−糖脂質複合体の濃度の間の関係をプロットした。（１０Ｂ）Ｌ３６３抗体および示したｍＣＤ１ｄ−糖脂質複合体の間の解離定数（ＫＤ）を、材料および方法において記載されているように計算した。（１０Ｃ）Ｌ３６３抗体結合を反映するＯＤ値、および糖脂質の濃度の間の関係をプロットした。（１０Ｄ）二元複合体のＫＤ値を、Ｌ３６３抗体結合曲線のスキャッチャード変換の線形回帰から計算した（１０Ｃ）。

図１１は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣ１−パルスした脾細胞のＣＤ１ｄ二量体染色を示す。Ｂ６ＷＴ脾細胞（ｎ＝３）を、Ｃ１（１μｇ／マウス）の注射の３日後に収集し、ＣＤ３、ＣＤ４５Ｒ、およびＲＰＥとコンジュゲートした示した二量体複合体で４摂氏温度にて１時間染色した。（１１Ａ）ＣＤ３＋／ＣＤ４５Ｒ−細胞をゲートし、二量体染色を分析した。（１１Ｂ）負荷していない二量体を、対照として使用した。（１１Ｃ）７ＤＷ８−５−Ｇｌｃを負荷したｍＣＤ１ｄ二量体は、１７．１±０．８％のＣ１−パルスした脾細胞を染色した。（１１Ｄ）７ＤＷ８−５を負荷したｍＣＤ１ｄ二量体は、３６．２±５．０％のＣ１−パルスした脾細胞を染色した。

図１２は、ｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄスワッピングアッセイを示す。Ｃ１−展開されたＶα２４＋ｉＮＫＴ細胞を、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、および０．０１μｇ／ｍｌのｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ細胞）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞）によって提示された示した糖脂質抗原でパルスした。１８時間後、ＩＦＮ−γ（１２Ａ）およびＩＬ−４（１２Ｂ）分泌の測定のために上清を収集した。（１２Ｃ）ＩＦＮ−γとＩＬ−４の比を、異なる濃度の糖脂質において計算した。異なる糖脂質からのＩＦＮ−γとＩＬ−４の比を、スチューデントｔ検定によって、示した濃度でのＣ１からのそれと比較した（^＊、ｐ＜０．０５；^＊＊、ｐ＜０．０１；^＊＊＊、ｐ＜０．００１）。アッセイを３連で行った。

図１３は、Ｋ６９１、Ｋ７０６およびＣ３４によるヒトｉＮＫＴ細胞の刺激によるサイトカイン産生を示す。ヒトＶα２４−制限されたＮＫＴ細胞を、磁気ビーズによってＰＢＭＣから単離し、ｉＮＫＴ細胞を５０μｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ−２と共に培養した。２日後、ｉＮＫＴ細胞を、９６ウェルにおいて１μｇ／ｍＬでの自己単球由来のＤＣおよび異なる糖脂質と共に同時培養した。７２時間において、上清を集め、サイトカインプロファイルをＬｕｍｉｎｅｘによって決定した。（Ａ）ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４の分泌は、全ての糖脂質の間で同様であった。（Ｂ）Ｃ３４、Ｋ６９１、およびＫ７０６におけるＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比は、Ｃ１より有意に高かった。（Ｃ）ＧＭ−ＣＳＦの分泌は、これらの糖脂質の間で統計的有意差を示さなかったが、これは、Ｃ３４のＦ−シリーズ類似体が、骨髄性細胞を活性化させるのにＣ３４と同様の活性を有することを示唆する。（Ｄ）これらの糖脂質の間で、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３の誘導において、統計的有意性は観察されなかったが、これは、Ｃ３４のＦ−シリーズ類似体が、Ｔｈ２抑制性サイトカインの誘導においてＣ３４と匹敵する活性を示したことを示す。一方向ＡＮＯＶＡを、統計分析のために使用した。^＊＊＊ Ｃ１と比較してＰ＜０．００１。＃、Ｃ３４と比較してＰ＜０．０５。

ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）は、ＣＤ１ｄによって提示された天然または合成糖脂質についての反応性、およびインバリアントＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）アルファ鎖の発現を含む、独特な特性を有するＴリンパ球のサブセットを表す。ＮＫＴは、ナチュラルキラー細胞およびＴ細胞の両方の特性を共有し、これらのリガンドによる刺激によってＴＨ１−タイプおよびＴＨ２−タイプ応答の両方を急速に生じさせることができるという点で、機能的に分化した通常のαβＴ細胞と異なる（先天性免疫）。ＮＫＴの活性化は逆説的に、免疫応答の抑制または刺激をもたらすことができる。例えば、ＴＨ１サイトカインの産生は、抗腫瘍、抗ウイルス／抗菌、およびアジュバント活性を伴って細胞性免疫を促進すると考えられ、一方、ＴＨ２サイトカイン産生は、自己免疫疾患を抑え、抗体産生を促進すると考えられる。ＮＫＴは免疫系において調節的役割を果たすため、ＮＫＴは免疫療法のための誘引性の標的である。

したがって、例示的なＧＳＬを含む方法および組成物を、本明細書において提供する。

本発明の実施は、他に示さない限り、当分野の技術の範囲内である分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ、および免疫学の従来の技術を用いる。このような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、Molecular Cloning A Laboratory Manual、第２版、編Sambrook、FritschおよびManiatis（Cold Spring Harbor Laboratory Press、１９８９年）；DNA Cloning、第ＩおよびＩＩ巻（D. N. Glover編、１９８５年）；Culture Of Animal Cells（R. I. Freshney、Alan R. Liss, Inc.、１９８７年）；Immobilized Cells And Enzymes（IRL Press、１９８６年）；B. Perbal、A Practical Guide To Molecular Cloning（１９８４年）；学術論文、Methods In Enzymology（Academic Press, Inc.、N.Y.）；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells（J. H. MillerおよびM. P. Calos編、１９８７年Cold Spring Harbor Laboratory）；Methods In Enzymology、第１５４巻および第１５５巻（Wuら編）、Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology（MayerおよびWalker、編、Academic Press、London、１９８７年）；Antibodies：A Laboratory Manual, by HarlowおよびLanes（Cold Spring Harbor Laboratory Press、１９８８年）；およびHandbook Of Experimental Immunology、第Ｉ〜ＩＶ巻（D. M. WeirおよびC. C. Blackwell、編、１９８６年）を参照されたい。さらに、免疫アジュバントを作製および使用する方法は、その関連性のある開示が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第７，４８８，４９１号および同第７，９２８，０７７号に記載されている。

本明細書において使用する場合、用語「脂質」は、細胞シグナル伝達経路に関与する任意の脂溶性（親油性）分子を指す。本明細書において使用する場合、用語「糖脂質」は、細胞認識のためのマーカーとしての役割を果たす炭水化物付着脂質（carbohydrate-attached lipid）を指す。

本明細書において使用する場合、用語「グリカン」は、多糖類、またはオリゴ糖類を指す。グリカンはまた、本明細書において、糖コンジュゲート、例えば、糖タンパク質、糖脂質、糖ペプチド、糖プロテオーム、ペプチドグリカン、リポ多糖類またはプロテオグリカンの炭水化物部分を指すために使用される。グリカンは通常、もっぱら単糖類の間のＯ−グリコシド連結からなる。例えば、セルロースは、ベータ−１，４−連結Ｄ−グルコースから構成されるグリカン（またはさらに具体的には、グルカン）であり、キチンは、ベータ−１，４−連結Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンから構成されるグリカンである。グリカンは、単糖類残基のホモまたはヘテロポリマーでよく、直鎖状または分岐状でよい。グリカンは、糖タンパク質およびプロテオグリカンにおけるように、タンパク質に付着していることを見出すことができる。グリカンは一般に、細胞の外面上に見出される。Ｏ−およびＮ−連結グリカンは真核生物において非常に一般であるが、原核生物においてより一般ではないがまた見出し得る。Ｎ−連結グリカンは、シークオン中のアスパラギンのＲ基窒素（Ｎ）に付着していることが見出された。シークオンは、Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ配列であり、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である。

本明細書において使用する場合、用語「糖タンパク質」は、グリカン（複数可）で共有結合的に修飾されているタンパク質を指す。４タイプの糖タンパク質が存在する：１）Ｎ−連結糖タンパク質、２）Ｏ−連結糖タンパク質（ムチン）、３）グルコサミノグリカン（ＧＡＧ、プロテオグリカンとまた称される）、４）ＧＰＩアンカー型。大部分の糖タンパク質は、構造的ミクロ不均一性（同じグリコシル化部位内に付着している複数の異なるグリカン構造）、および構造的マクロ不均一性（複数の部位およびタイプのグリカン付着）を有する。

本明細書において使用する場合、用語「類似体」は、その構造が別の化合物の構造と関連するが、その化学的および生物学的特性が、全く異なるものであり得る化合物、例えば、薬物を指す。

本明細書において使用する場合、用語「抗原」は、免疫応答を誘発させることができる任意の物質として定義される。

本明細書において使用する場合、用語「病原体」は、その宿主に対して疾患または疾病をもたらす生物由来物質である。体は、一般の病原体（例えば、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ）のいくつかに対する多くの自然防護をヒト免疫系の形態で含有する。

本明細書において使用する場合、用語「免疫原」は、抗原、または抗原、例えば、ＤＮＡワクチンの産生を誘導することができる物質を指す。

本明細書において使用する場合、用語「免疫原性」は、免疫応答を刺激する免疫原、抗原、またはワクチンの能力を指す。

本明細書において使用する場合、用語「免疫療法」は、予防的および／または治療的ゴールを達成するために免疫系をモジュレートする概念に基づいた一連の処置戦略を指す。
他の定義

用語「処置すること」および「処置」は、本明細書において使用する場合、症状の重症度および／もしくは頻度における低減をもたらし、症状および／もしくはこれらの基礎的原因を排除し、かつ／または損傷の改善もしくは矯正を促進するために、有害な状態、障害、または疾患に苦しんでいる臨床的に症候性の個体への薬剤または製剤の投与を指す。用語「予防すること」および「予防」は、特定の有害な状態、障害、または疾患に影響されやすい臨床的に無症候性の個体への薬剤または組成物の投与を指し、このように、症状および／またはこれらの基礎的原因の出現の予防に関する。明示的にまたは暗示によって本明細書において他に示さない限り、用語「処置」（または「処置すること」）が予防の可能性と無関係に使用される場合、これは予防がまた包含されることを意図する。

「任意選択の」または「任意選択で存在する」は、「任意選択の置換基」または「任意選択で存在する添加剤」におけるように、それに続いて記載する構成要素（例えば、置換基または添加剤）が、存在してもよいか、または存在しなくてもよいことを意味し、それゆえ、記載が、構成要素が存在する場合、および構成要素が存在しない場合を含む。

「薬学的に許容される」とは、生物学的にまたはその他の点で望ましくないことはない材料を意味し、例えば、材料は、望ましくない生物学的効果をもたらすか、または剤形製剤の他の構成要素のいずれかと有害な様式で相互作用することなく、本発明の製剤中に組み込み得る。しかし、用語「薬学的に許容される」が医薬賦形剤を指すように使用されるとき、賦形剤が毒性および製造試験の必要な標準に合致しており、かつ／または賦形剤が米国食品医薬品局によって作成されたInactive Ingredient Guideに含まれることを暗示する。下記でさらに詳細に説明するように、「薬理学的に活性」（または単純に「活性」）は、「薬理学的に活性」な誘導体または類似体におけるように、親薬剤と同じタイプの薬理学的活性を有する誘導体または類似体を指す。

本明細書において使用する場合、用語「免疫原」は、抗原、または抗原、例えば、ＤＮＡワクチンの産生を誘導することができる物質を指す。

本明細書において使用する場合、用語「免疫原性」は、免疫応答を刺激する免疫原、抗原、またはワクチンの能力を指す。

本明細書において使用する場合、用語「免疫療法」は、予防的および／または治療的ゴールを達成するために免疫系をモジュレートする概念に基づいた一連の処置戦略を指す。

本明細書において使用する場合、用語「サイトカイン」は、それによって前駆細胞が別個の特殊化した細胞型となる遺伝子発現における変化が通常関与する、免疫細胞の分化プロセスに影響を与えることによって、免疫応答の強度および持続期間をレギュレートする、多数の小さな分泌されたタンパク質のいずれかを指す。サイトカインは、これらの推定される機能、分泌の細胞、または作用の標的に基づいて、リンフォカイン、インターロイキン、およびケモカインと多様に命名されてきた。例えば、いくつかの一般のインターロイキンには、これらに限定されないが、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１およびＴＧＦ−βが含まれる。「サイトカイン」は、細胞間メディエーターとして別の細胞集団に対して作用する１つの細胞集団によって放出されるタンパク質の群についての総称である。このようなサイトカインの例は、リンフォカイン、モノカイン、および伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、インターフェロン（ＩＦＮ、特に、ＩＦＮ−γ）、インターロイキン（ＩＬ、特に、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、ｋｉｔ−リガンド、成長ホルモン（ＧＨ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、副甲状腺ホルモン、チロキシン、インスリン、リラキシン、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（leutinizing hormone）（ＬＨ）、造血成長因子、肝細胞成長因子（hepatic growth factor）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ミューラー阻害物質、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン、アクチビン、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、インテグリン、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板成長因子、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）、骨誘導性因子などである。

本明細書において使用する場合、用語「ケモカイン」は、リンパ球の動員および活性化のための手段を提供する、感染の部位において放出される様々な小さな走化性サイトカインのいずれかを指す。ケモカインは、白血球を感染部位へと引きつける。ケモカインは、これらを４つの群に割り当てることを可能とする保存されたシステイン残基を有する。代表的なケモカインを伴うこれらの群は、Ｃ−Ｃケモカイン（ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、およびＭＩＰ−１β）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン（ＩＬ−８）、Ｃケモカイン（リンフォタクチン）、ならびにＣＸＸＸＣケモカイン（フラクタルカイン）である。

本明細書において使用する場合、用語「エピトープ」は、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位と接触する抗原分子の部分として定義される。

マウスおよび人における三元複合体の示差的な結合アビディティーをさらに説明するために、それぞれ、マウスおよびヒトのＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体のＸ線構造に基づいてコンピューターモデリングを行った（ＰＤＢアクセスコード３ＨＵＪ、３ＱＵＸ、３ＱＵＹ、３ＱＵＺ、および３ＨＥ６）。^{２７〜２９}（２７）Borg, N. A.；Wun, K. S.；Kjer-Nielsen, L.；Wilce, M. C.；Pellicci, D. G.；Koh, R.；Besra, G. S.；Bharadwaj, M.；Godfrey, D. I.；McCluskey, J.；Rossjohn, J.、Nature、２００７年、４４８巻、４４頁；（２８）Pellicci, D. G.；Patel, O.；Kjer-Nielsen, L.；Pang, S. S.；Sullivan, L. C.；Kyparissoudis, K.；Brooks, A. G.；Reid, H. H.；Gras, S.；Lucet, I. S.；Koh, R.；Smyth, M. J.；Mallevaey, T.；Matsuda, J. L.；Gapin, L.；McCluskey, J.；Godfrey, D. I.；Rossjohn, J.、Immunity、２００９年、３１巻、４７頁；および（２９）Aspeslagh, S.；Li, Y.；Yu, E. D.；Pauwels, N.；Trappeniers, M.；Girardi, E.；Decruy, T.；Van Beneden, K.；Venken, K.；Drennan, M.；Leybaert, L.；Wang, J.；Franck, R. W.；Van Calenbergh, S.；Zajonc, D. M.；Elewaut, D.、EMBO J.、２０１１年、３０巻、２２９４頁。

本明細書において使用する場合、用語「ワクチン」は、生物がもたらす疾患に対して免疫を与えるために使用される、（死滅したもしくは弱毒化した）病原性生物そのもの、またはこのような生物の構成要素、例えば、タンパク質、ペプチド、または多糖類からなる抗原を含有する調製物を指す。ワクチン調製物は、天然であるか、合成であるか、または組換えＤＮＡ技術に由来し得る。

本明細書において使用する場合、用語「免疫アジュバント」は、免疫原に対する免疫応答を増進または改変する免疫原と併せて使用される物質を指す。具体的には、用語「アジュバント」および「免疫アジュバント」は、本発明において互換的に使用され、宿主に単独で投与されたとき非免疫原性であり得るが、その抗原と合同して投与されたとき、別の抗原に対する宿主の免疫応答を増強させる、化合物または混合物を指す。アジュバントが媒介する、免疫応答の増進および／または免疫応答の持続期間の延長は、これらに限定されないが、下記の１つまたは複数を含む当技術分野において公知の任意の方法によってアセスメントすることができる。（ｉ）抗原単独による免疫化に応答して産生された抗体の数の増加に対する、アジュバント／抗原の組合せによる免疫化に応答して産生された抗体の数の増加；（ｉｉ）抗原またはアジュバントを認識するＴ細胞の数の増加；および（ｉｉｉ）１種もしくは複数種のタイプＩサイトカインのレベルの増加。

本発明の例示的なアジュバントは、一般式１によって表すことができる化合物を含む。

好ましくは、本発明の例示的なアジュバントは、ヒトにおける使用のために薬学的に許容される。

本発明のアジュバントは、抗原を含む医薬組成物もしくはワクチン組成物の部分として、または抗原を含有する第２の組成物と合同して投与される別々の製剤として投与することができる。これらの組成物のいずれかにおいて、スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は、他のアジュバントおよび／または賦形剤／キャリアと合わせることができる。これらの他のアジュバントには、これらに限定されないが、油乳剤および乳化剤をベースとするアジュバント、例えば、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、ＭＦ５９、またはＳＡＦ；ミネラルゲル、例えば、水酸化アルミニウム（ａｌｕｍ）、リン酸アルミニウムまたはリン酸カルシウム；微生物に由来するアジュバント、例えば、コレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ易熱性毒素（ＬＴ）、変異毒素（例えば、ＬＴＫ６３またはＬＴＲ７２）、カルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ、ＤＮＡ ＣｐＧモチーフ、ムラミルジペプチド、またはモノホスホリルリピドＡ；微粒子状アジュバント、例えば、免疫刺激性複合体（ＩＳＣＯＭ）、リポソーム、生分解性ミクロスフィア、またはサポニン（例えば、ＱＳ−２１）；サイトカイン、例えば、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２またはＧＭ−ＣＳＦ；合成アジュバント、例えば、非イオン性ブロックコポリマー、ムラミルペプチド類似体（例えば、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン［ｔｈｒ−ＭＤＰ］、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−［１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ］−エチルアミン）、ポリホスファゼン、または合成ポリヌクレオチド、および表面活性物質、例えば、リゾレシチン、ｐｌｕｒｏｎｉｃポリオール、ポリアニオン、ペプチド、炭化水素エマルジョン、またはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）が含まれる。好ましくは、これらのさらなるアジュバントはまた、ヒトにおける使用のために薬学的に許容される。

本発明の意味内で、用語「合同の投与または共投与」は、１つの組成物中で同時に、または異なる組成物中で同時に、または逐次的での、免疫アジュバントおよび抗原の投与を指すために使用される。しかし、逐次投与が「合同」であると考えられるために、抗原およびアジュバントは、アジュバントが抗原に対する免疫応答を増強させることをまだ可能とする時間間隔だけ分離して投与しなければならない。例えば、抗原がポリペプチドであるとき、抗原およびアジュバントは、同じ日に、好ましくは互いに１時間以内に、最も好ましくは、同時に投与される。しかし、核酸が被験体に送達され、ポリペプチド抗原が被験体の細胞において発現しているとき、アジュバントは、核酸投与の２４時間以内、好ましくは、６時間以内に投与される。

本明細書において使用する場合、用語「免疫原性」は、作用剤が体液性免疫応答または細胞性免疫応答、好ましくは、両方を誘発させることができることを意味する。免疫原性の実体はまた、抗原性である。免疫原性組成物は、免疫系を有する動物に投与したとき、体液性免疫応答または細胞性免疫応答、または両方を誘発させる組成物である。

用語「抗原」は、免疫系を有する宿主、動物またはヒトに導入されたとき（直接に、または例えば、ＤＮＡワクチンにおけるように発現によって）、宿主の免疫系によって認識され、かつ免疫応答を誘発させることができる、任意の作用剤（例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、核酸、またはこれらの組合せ）を指す。本明細書に定義されているように、抗原により誘導される免疫応答は、体液性または細胞媒介性、または両方でよい。作用剤は、免疫系の抗原認識分子、例えば、免疫グロブリン（抗体）またはＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）と特異的に相互作用することができるとき「抗原性」と称される。本発明の意味内で、抗原は、好ましくは、「表面抗原」であり、すなわち、病原体の表面、または感染細胞の表面、または腫瘍細胞の表面上に天然に発現している。抗原性である分子は、それ自体が免疫原性である必要がなく、すなわち、アジュバントまたはキャリアを伴わずに免疫応答を誘発させることができる。本明細書において使用する場合、用語「抗原特異的」は、特定の抗原、または抗原の断片の供給が特定の細胞の特徴をもたらすような、細胞集団の特性を指す。

用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、Ｂ細胞、またはＴ細胞、または両方によって認識される抗原の任意の部分を指す。好ましくは、このようなエピトープと、免疫グロブリン（抗体）の抗原認識部位、またはＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）との相互作用は、抗原特異的免疫応答の誘導をもたらす。Ｔ細胞は、タンパク質がより小さなペプチドに切断され、別の細胞の表面上に位置している「主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）」と称される複合体中で提示されるときのみ、タンパク質を認識する。２つのクラスのＭＨＣ複合体であるクラスＩおよびクラスＩＩが存在し、各クラスは多くの異なる対立遺伝子で構成されている。クラスＩ ＭＨＣ複合体は、実質的に全ての細胞上で見出されており、細胞内で産生されるタンパク質からのペプチドを提示する。このように、クラスＩ ＭＨＣ複合体は、ウイルスに感染した細胞、または癌遺伝子の発現の結果として癌化した細胞を死滅させるために有用である。これらの表面上にＣＤ８と称されるタンパク質を有するＴ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介してＭＨＣクラスＩ／ペプチド複合体に特異的に結合する。これは、細胞溶解エフェクター活性をもたらす。クラスＩＩ ＭＨＣ複合体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のみで見出され、使用されて、ＡＰＣによってエンドサイトーシスによって取り込まれた循環病原体からのペプチドを提示する。ＣＤ４と称されるタンパク質を有するＴ細胞は、ＴＣＲを介してＭＨＣクラスＩＩ／ペプチド複合体に結合する。これは、免疫応答を刺激する特定のサイトカインの合成をもたらす。ＭＨＣクラスＩの提示を介して免疫系によって効果的に認識されるために、抗原ポリペプチドは、少なくとも約８〜１０個のアミノ酸のエピトープを含有するはずであり、一方、ＭＨＣクラスＩＩの提示を介して免疫系によって効果的に認識されるために、抗原ポリペプチドは、少なくとも約１３〜２５個のアミノ酸のエピトープを含有するはずである。例えば、Fundamental Immunology、第３版、W. E. Paul編、１９９９年、Lippincott-Raven Publを参照されたい。

用語「種特異的」抗原は、特定の種においてのみ存在するが、または特定の種に由来する抗原を指す。このように、用語「マラリア由来」または「マラリア特異的」抗原は、ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍを構成するタンパク質の任意の１つに由来する少なくとも１つのエピトープ（Ｂ細胞および／またはＴ細胞）を含み（前記ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍは、これらに限定されないが、Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐ．ｖｉｖａｘ、Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ、Ｐ．ｏｖａｌｅ、Ｐ．ｒｅｉｃｈｅｎｏｗｉ、Ｐ．ｋｎｏｗｌｅｓｉ、Ｐ．ｃｙｎｏｍｏｌｇｉ、Ｐ．ｂｒａｓｉｌｉａｎｕｍ、Ｐ．ｙｏｅｌｉｉ、Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ、もしくはＰ．ｃｈａｂａｕｄｉである）、かつ少なくとも５〜１０個のアミノ酸残基を含む、天然（例えば、照射スポロゾイト）または合成（例えば、化学的に生成された複数の抗原ペプチド［ＭＡＰ］もしくは組換えにより合成されたポリペプチド）抗原を指す。抗原生産のための好ましいマラリア原虫のタンパク質は、スポロゾイト周囲（ＣＳ）タンパク質であるが、他のタンパク質、例えば、スポロゾイト表面タンパク質２（ＳＳＰ２）とも称されるトロンボスポンジン関連接着（無名）タンパク質（ＴＲＡＰ）、ＬＳＡ Ｉ、ｈｓｐ７０、ＳＡＬＳＡ、ＳＴＡＲＰ、Ｈｅｐ１７、ＭＳＡ、ＲＡＰ−１、ＲＡＰ−２などをまた使用することができる。

用語「ワクチン」は、レシピエントにおいて防御免疫を誘発させるために使用することができる組成物（例えば、タンパク質またはベクター、例えば、アデノウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター、またはポックスウイルスベクター）を指す。個体によってロバストもしくは防御免疫応答、または場合によって、いかなる免疫応答を開始することができないことがあり得るため、本発明のワクチンは、有効であるために、免疫された集団の部分において免疫を誘発させることができることに留意すべきである。このように免疫応答を開始することができないことは、個体の遺伝的背景から生じ得るか、または免疫不全状態（獲得もしくは先天性）または免疫抑制のためである（例えば、臓器拒絶を予防するか、または自己免疫状態を抑制するための、化学療法または免疫抑制薬の使用による処置による）。ワクチンの有効性は、動物モデルにおいて確立することができる。

用語「ＤＮＡワクチン」は当技術分野の正式でない用語であり、本明細書において組換えベクターによって送達されるワクチンを指すために使用される。本明細書において使用される代替用語、およびより記述用語は、「ベクターワクチン」である（いくつかの可能性のあるベクター、例えば、レトロウイルスおよびレンチウイルスはＲＮＡウイルスであるため、および場合によって、ＤＮＡの代わりに非ウイルスＲＮＡが、ベクターを介して細胞に送達されるため）。一般に、ベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏで投与されるが、ｉｎ ｖｉｖｏでの形質導入された細胞の投与を伴う、ｅｘ ｖｉｖｏでの適当な抗原提示細胞、例えば、樹状細胞（ＤＣ）の形質導入がまた企図される。

用語「処置する」は、本明細書において、被験体における疾患の少なくとも１つの症状を軽減または緩和することを意味するように使用される。本発明の意味内で、用語「処置する」はまた、検出潜伏期、すなわち、感染と疾患の臨床的顕在化との間の期間を延長することを意味し得る。好ましくは、疾患は、感染症（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫、もしくは真菌）または悪性腫瘍（例えば、固形腫瘍もしくは血液腫瘍、例えば、肉腫、癌腫、神経膠腫、芽細胞腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、リンパ腫、白血病、黒色腫など）である。

用語「保護する」は、本明細書において、必要に応じて、被験体における疾患の発生もしくは継続を予防するか、または処置するか、または両方を意味するように使用される。本発明の意味内で、疾患は、感染症（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫、もしくは真菌）および／または悪性腫瘍（例えば、固形腫瘍または血液腫瘍、例えば、肉腫、癌腫、神経膠腫、芽細胞腫、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、リンパ腫、白血病、黒色腫など）からなる群から選択することができる。例えば、本発明によれば、式１の例示的な作用剤を含むアジュバントと合同した腫瘍特異的抗原の治療的投与は、抗腫瘍免疫応答を増進させ、腫瘍成長および転移の減速、またはそれどころか腫瘍退縮をもたらすことができる。

用語「防御免疫」は、前記抗原の負荷における不活性化および／または低減、ならびに持続性免疫（例えば、抗体の産生によって獲得された）の発生をもたらす、宿主動物における免疫応答（能動／獲得もしくは受動／先天性、または両方）を指し、これは、同じまたは関連する抗原への繰り返しの曝露による疾患の発生を予防または遅延させる。「防御免疫応答」は、例えば、病原体もしくは感染細胞の負荷を排除もしくは低減させるか（もしくは感染症の任意の他の測定可能な緩和を生じさせるか）、または免疫された（ワクチン接種された）被験体における腫瘍量を低減させるのに有効である、体液性（抗体）免疫または細胞性免疫、または両方を含む。本発明の意味内で、防御免疫は、部分的であり得る。

免疫系は、２つの一般的な系、「先天性」または「自然」免疫系、および「獲得」または「適応」免疫系に分類される。先天性免疫系は最初に感染症を抑制して、適応免疫系が適当な応答を発生する時間を可能とすると考えられる。最近の研究は、先天性免疫系の様々な構成要素が、抗原特異的ＢおよびＴリンパ球を含む適応免疫系の構成要素をトリガーおよび増強させることを示唆してきた（FearonおよびLocksley、上述；Kos、１９９８年、Immunol. Res.、１７巻：３０３頁；Romagnani、１９９２年、Immunol. Today、１３巻：３７９頁；BanchereauおよびSteinman、１９８８年、Nature、３９２巻：２４５頁）。

用語「先天性免疫」または「自然免疫」は、抗原との従前の接触によって影響を受けない先天性免疫応答を指す。マクロファージおよび樹状細胞（ＤＣ）を含む先天性免疫系の細胞は、パターン認識受容体を介して外来性抗原を取り込み、これらの抗原のペプチド断片と、ＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子とを合わせ、かつそれぞれ、ナイーブＣＤ８^＋およびＣＤ４^＋Ｔ細胞を刺激する（BanchereauおよびSteinman、上述；Holmskovら、１９９４年、Immunol. Today、１５巻：６７頁；UlevitchおよびTobias、１９９５年、Annu. Rev. Immunol.、１３巻：４３７頁）。プロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、これらのＴ細胞と情報交換し、それぞれ、細胞性免疫および体液性免疫を媒介する、ヘルパーＴ１（Ｔｈ１）またはヘルパーＴ２（Ｔｈ２）リンパ球へのナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞の分化がもたらされる（Trinchieri、１９９５年、Annu. Rev. Immunol.、１３巻：２５１頁；HowardおよびO’Garra、１９９２年、Immunol. Today、１３巻：１９８頁；Abbasら、１９９６年、Nature、３８３巻：７８７頁；Okamuraら、１９９８年、Adv. Immunol.、７０巻：２８１頁；MosmannおよびSad、１９９６年、Immunol. Today、１７巻：１３８頁；O’Garra、１９９８年、Immunity、８巻：２７５頁）。

用語「獲得免疫」または「適応免疫」は、本明細書において動物の寿命の間に確立される能動免疫または受動免疫、体液性免疫または細胞性免疫を意味するために使用され、誘導抗原に対して特異的であり、かつ前記抗原との繰り返される遭遇に対する応答の増進によって特徴付けられる。適応免疫系のＴリンパ球の重要なフィーチャは、細胞表面上のＭＨＣ分子によって提示される、微量濃度の病原体に由来するペプチドを検出するこれらの能力である。

本明細書において使用する場合、用語「免疫応答を増強させる」は、免疫応答を増進するか、もしくは免疫応答の持続期間を延長させること、または両方を意味する。作用剤（例えば、アジュバント）の特性に言及するとき、用語「免疫原性を増強させ［ることができる］」は、抗原の免疫原性を増進する能力、または抗原に対する免疫応答の持続期間を延長させる能力、または両方を指す。

語句「免疫応答を増進させる」は、本発明の意味内で、所与の抗原に対する免疫反応性のスケールおよび／または効率を増加させる特性またはプロセスを指し、前記免疫反応性は、体液性免疫または細胞性免疫、または両方である。抗原特異的免疫反応性の任意の測定可能なパラメーター（例えば、抗体力価、Ｔ細胞産生）が少なくとも２倍、好ましくは、１０倍、最も好ましくは、３０倍増加する場合、免疫応答が増進されると考えられる。

用量または量に適用される用語「治療的に有効な」は、それを必要とする哺乳動物への投与によって所望の活性をもたらすのに十分な、化合物または医薬組成物またはワクチンの量を指す。アジュバントおよび抗原含有組成物またはワクチンに関して本明細書において使用する場合、用語「治療上有効な量／用量」は、用語「免疫原性的に有効な量／用量」と互換的に使用され、哺乳動物への投与によって有効な免疫応答を生じさせるのに十分な、化合物（例えば、抗原および／もしくはスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバント）、または医薬組成物もしくはワクチンの量／用量を指す。

語句「薬学的に許容される」は、本発明の組成物に関連して使用されるように、生理学的に忍容でき、かつヒトに投与したとき典型的には有害反応を生じない、分子的実体およびこのような組成物の他の成分を指す。好ましくは、本明細書において使用する場合、用語「薬学的に許容される」は、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認されているか、または哺乳動物、より特定すると、ヒトにおける使用のために、米国薬局方もしくは他の一般に認識されている薬局方において列挙されていることを意味する。

本発明の医薬組成物またはワクチン組成物に適用される用語「キャリア」は、それと共に化合物（例えば、抗原および／またはスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ））を含むアジュバントが投与される、希釈剤、賦形剤、またはビヒクルを指す。このような医薬キャリアは、無菌の液体、例えば、水、および石油、動物、野菜または合成起源のものを含む油、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などでよい。水または水溶液、食塩溶液、およびデキストロース水溶液およびグリセロール溶液が好ましくは、キャリアとして、特に、注射可能な溶液のために用いられる。適切な医薬キャリアは、「Remington’s Pharmaceutical Sciences」、E.W.Martin、第１８版に記載されている。

用語「自然抗体」または「免疫グロブリン」は通常、２個の同一の軽（Ｌ）鎖および２個の同一の重（Ｈ）鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質を指す。各軽鎖は、１個の共有結合的ジスルフィド結合によって重鎖と連結しており、一方、ジスルフィド連結の数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動する。各重鎖および軽鎖はまた、規則的に配置された鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、１つの末端において可変ドメイン（ＶＨ）、それに続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、１つの末端において可変ドメイン（ＶＬ）、およびその他の末端において定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列する。特に、アミノ酸残基は、軽鎖および重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられる（Clothiaら、J Mol. Biol.、１８６巻：６５１〜６６３頁、１９８５年；NovotnyおよびHaber、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、８２巻：４５９２〜４５９６頁、１９８５年）。

用語「抗体」または「Ａｂ」は、最も広い意味で使用され、これらが所望の生物活性を示す限り、自然抗体だけでなく、単一のモノクローナル抗体（アゴニストおよびアンタゴニスト抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖおよびＦｖ）を特にカバーする。

本明細書において使用する場合、用語「ＣＤ１ｄ」は、様々なヒト抗原提示細胞の表面上に発現している、糖タンパク質のＣＤ１（分化クラスター１）ファミリーのメンバーを指す。ＣＤ１ｄによって提示される脂質抗原は、ナチュラルキラーＴ細胞を活性化する。ＣＤ１ｄは、その中に糖脂質抗原が結合する深い抗原結合溝を有する。樹状細胞上に発現しているＣＤ１ｄ分子は、糖脂質を結合し、提示することができる。

本明細書において使用する場合、用語「適応免疫系」は、病原体のチャレンジを排除する高度に特定化された全身の細胞およびプロセスを指す。適応免疫系の細胞は、リンパ球と呼ばれる白血球の１タイプである。Ｂ細胞およびＴ細胞は、主要なタイプのリンパ球である。

本明細書において使用する場合、用語「Ｔ細胞」および「Ｔ」は、細胞媒介性免疫において中心的役割を果たしている、リンパ球として公知の白血球の群を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と称されるこれらの細胞表面上の特別な受容体の存在によって、他のリンパ球タイプ、例えば、Ｂ細胞およびＮＫから区別することができる。Ｔ細胞のいくつかの異なるサブセットについて記載されてきており、それぞれは別個の機能を有する。ヘルパーＴ（Ｔ_Ｈ）細胞は、適応免疫系の「仲介者」である。一旦活性化されると、これらは急速に分裂し、免疫応答をレギュレートまたは「助ける」、サイトカインと称される小さなタンパク質を分泌する。受け取ったサイトカインシグナルによって、これらの細胞は、異なるサイトカインを分泌する、Ｔ_Ｈ１、Ｔ_Ｈ２、Ｔ_Ｈ１７、または他のサブセットの１つに分化する。

本明細書において使用する場合、用語「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）は、その表面上で主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と複合体化した外来性抗原を提示する細胞を指す。Ｔ細胞は、これらのＴＣＲを使用してこの複合体を認識し得る。ＡＰＣは、２つのカテゴリー：プロフェッショナルまたは非プロフェッショナルに分かれる。樹状細胞（ＤＣ）は、プロフェッショナルのカテゴリーに該当し、ＣＤ１との関連において、Ｔ細胞に対して抗原を提示することができる。例示的な実装では、本開示の方法において利用されるＤＣは、一実装では、リンパ球前駆細胞、または別の実装では、骨髄前駆細胞から分化するいくつかのＤＣサブセットのいずれかのものであり得る。

本明細書において使用する場合、用語「ナイーブ細胞」は、未分化の免疫系細胞を指し、例えば、ＣＤ４Ｔ細胞は、特定の病原体を認識するようにまだ特定化されていない。

本明細書において使用する場合、用語「ナチュラルキラー細胞」および「ＮＫ」は、インターフェロンによって活性化され、ウイルスおよび他の細胞内病原体に対する先天性宿主防護の一因となる、リンパ球様細胞のクラスを指す。

本明細書において使用する場合、用語「ナチュラルキラーＴ細胞」（ＮＫＴ）は、通常のＴおよびＮＫの両方と特徴／受容体を共有するＴ細胞のサブセットを指す。これらの細胞の多くは、自己および外来性の脂質および糖脂質を結合する抗原提示分子である非多形のＣＤ１ｄ分子を認識する。ＮＫＴのＴＣＲは、ＣＤ１ｄ分子によって提示（シャペロン）される糖脂質抗原を認識することができる。ＮＫＴの主要な応答は、刺激後のＩＬ−４、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０を含むサイトカインの急速な分泌であり、したがって、多様な免疫応答および病原性プロセスに影響を与える。ＮＫＴは、均質な集団または不均質な集団であり得る。１つの例示的な実装では、集団は「非インバリアントＮＫＴ」でよく、これは、例えば、多様なＴＣＲを発現し、かつまた多量のＩＬ−４およびＩＦＮ−γを産生することができるＣＤ１ｄ反応性非インバリアントＴ細胞である、ヒトおよびマウス骨髄Ｔ細胞集団、ならびにヒト肝臓Ｔ細胞集団を含み得る。ＣＤ１ｄ依存性ＮＫＴの最も公知のサブセットは、インバリアントＴＣＲ−アルファ（ＴＣＲ−α）鎖を発現する。これらは、タイプＩまたはインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）と称される。これらの細胞は、ヒト（Ｖα２４ｉ ＮＫＴ）およびマウス（Ｖα１４ｉ ＮＫＴ）の間で保存されており、多くの免疫学的プロセスにおいて結び付けられている。

本明細書において使用する場合、用語「サイトカイン」は、それによって前駆細胞が別個の特殊化した細胞型となる遺伝子発現における変化が通常関与する免疫細胞分化プロセスに影響を与えることによって免疫応答の強度および持続期間をレギュレートする、多数の小さな分泌されたタンパク質のいずれかを指す。サイトカインは、これらの推定される機能、分泌の細胞、または作用の標的に基づいて、リンフォカイン、インターロイキン、およびケモカインとして多様に命名されてきた。例えば、いくつかの一般のインターロイキンには、これらに限定されないが、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−２１およびＴＧＦ−βが含まれる。

本明細書において使用する場合、用語「ケモカイン」は、感染の部位において放出される様々な小さな走化性サイトカインのいずれかを指し、これはリンパ球の動員および活性化のための手段を提供する。ケモカインは、白血球を感染部位へと引きつける。ケモカインは、保存されたシステイン残基を有し、これによって４つの群に割り当てることが可能となる。代表的なケモカインを伴うこれらの群は、Ｃ−Ｃケモカイン（ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、およびＭＩＰ−１β）、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン（ＩＬ−８）、Ｃケモカイン（リンフォタクチン）、ならびにＣＸＸＸＣケモカイン（フラクタルカイン）である。

本明細書において使用する場合、用語「Ｔ_Ｈ２−タイプ応答」は、特定のタイプのサイトカイン、インターフェロン、ケモカインが産生されるような、サイトカイン発現のパターンを指す。典型的なＴ_Ｈ２サイトカインには、これらに限定されないが、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６およびＩＬ−１０が含まれる。

本明細書において使用する場合、用語「Ｔ_Ｈ１−タイプ応答」は、特定のタイプのサイトカイン、インターフェロン、ケモカインが産生されるような、サイトカイン発現のパターンを指す。典型的なＴ_Ｈ１サイトカインには、これらに限定されないが、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−βが含まれる。

本明細書において使用する場合、用語「Ｔ_Ｈ１偏向性」は、Ｔ_Ｈ２サイトカインおよび／またはケモカインの産生よりも大きな程度まで、Ｔ_Ｈ１サイトカインおよび／またはケモカインの産生が増加する免疫原性応答を指す。

本明細書において使用する場合、用語「抗微生物剤」は、微生物、例えば、細菌、真菌、またはウイルスを死滅させるか、その成長を阻害する物質を指す。

本明細書において使用する場合、用語「トキソイド」は、その毒性が化学処理（ホルマリン）または熱処理によって弱毒化または抑制されている一方、他の特性、典型的には、免疫原性が維持されている細菌毒素を指す。トキソイドは、最初の毒素に対する免疫応答を誘導するか、または別の抗原への応答を増加させるため、ワクチンにおいて使用される。例えば、破傷風トキソイドは、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉによって産生され、破傷風をもたらすテタノスパスミンに由来する。破傷風トキソイドは、血漿に富んだワクチンの開発のために、米国において多くの血漿センターによって使用されている。

本明細書において使用する場合、用語「ＤＮＡワクチン」は、細胞中に導入され、それに続いて特定の抗原タンパク質に翻訳されるＤＮＡ構築体を指す。

本明細書において使用する場合、用語「プラスミド」は、複製することができる、染色体外の環状ＤＮＡを指し、これはクローニングベクターとして使用し得る。

本明細書において使用する場合、用語「微小生物」および「微生物」は、顕微鏡レベルである生物（小さすぎて、ヒトの裸眼によって見られない）を指す。微小生物は信じられないほど多様であり、これらに限定されないが、細菌および真菌が含まれる。

本明細書において使用する場合、用語「アジュバントまたは免疫アジュバント」は、免疫原に対する免疫応答を増進または改変する免疫原と併せて使用される物質を指す。本開示の例示的な化合物／類似体は、ワクチンにより力強く応答するために、ワクチンを投与された患者の免疫系を刺激することによってワクチンの効果を改変または増強させる免疫アジュバントとして使用される。

本明細書において使用する場合、用語「ａｌｕｍアジュバント」は、免疫アジュバント活性を有するアルミニウム塩を指す。この作用剤は、溶液中のタンパク質抗原を吸着および沈殿させる。このように得られた沈殿物は、播種の部位において形成されたワクチンデポーからの抗原の持続放出を促進することによってワクチン免疫原性を改善させる。

本明細書において使用する場合、用語「抗腫瘍免疫療法活性剤」は、腫瘍を阻害し、低減させ、かつ／または排除する本開示の例示的な化合物／類似体を指す。

本明細書において使用する場合、用語「顆粒球マクロファージコロニー刺激因子」（ＧＭ−ＣＳＦ）は、白血球、特に、顆粒球（好中球、好塩基球、および好酸球）、マクロファージ、ならびに血小板の前駆体である骨髄中の細胞の産生を刺激するコロニー刺激因子としての役割を果たすサイトカインを指す。

本明細書において使用する場合、用語「抗原特異的」は、特定の抗原、または抗原の断片の供給が特定の細胞増殖をもたらすような、細胞集団の特性を指す。

本明細書において使用する場合、用語「フローサイトメトリー」または「ＦＡＣＳ」は、光学的および電子的検出装置によって、流体の流れに懸濁された粒子または細胞の物理的および化学的特性を検査するための技術を意味する。

ペプチド中のアミノ酸残基は、本明細書の下記で下のように略するものとする。フェニルアラニンは、ＰｈｅまたはＦであり、ロイシンは、ＬｅｕまたはＬであり、イソロイシンは、ＩｌｅまたはＩであり、メチオニンは、ＭｅｔまたはＭであり、バリンは、ＶａｌまたはＶであり、セリンは、ＳｅｒまたはＳであり、プロリンは、ＰｒｏまたはＰであり、トレオニンは、ＴｈｒまたはＴであり、アラニンは、ＡｌａまたはＡであり、チロシンは、ＴｙｒまたはＹであり、ヒスチジンは、ＨｉｓまたはＨであり、グルタミンは、ＧｌｎまたはＱであり、アスパラギンは、ＡｓｎまたはＮであり、リシンは、ＬｙｓまたはＫであり、アスパラギン酸は、ＡｓｐまたはＤであり、グルタミン酸は、ＧｌｕまたはＥであり、システインは、ＣｙｓまたはＣであり、トリプトファンは、ＴｒｐまたはＷであり、アルギニンは、ＡｒｇまたはＲであり、グリシンは、ＧｌｙまたはＧである。アミノ酸のさらなる記載については、Proteins：Structure and Molecular Properties、Creighton, T. E.、W. H. Freeman & Co.、New York、１９８３年を参照されたい。

哺乳動物およびマイコバクテリアの脂質は、ヒトＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、およびＣＤ１ｄによって提示されることが公知である。海綿Ａｇｅｌａｓ ｍａｕｒｉｔｉａｎｕｓにおいて見出される脂質であるα−ガラクトシルセラミドは、ＣＤ１ｄについて最も広範に研究されているリガンドであった。α−ＧａｌＣｅｒによるマウス脾臓細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでの刺激は、ＮＫＴの増殖、ならびにそれぞれＴ_Ｈ１−タイプおよびＴ_Ｈ２−タイプの応答であるＩＦＮ−γおよびＩＬ−４の両方の産生をもたらしたことが示された。マウスの研究によって、細胞がα−ＧａｌＣｅｒを担持する未熟樹状細胞（ｉＤＣ）によって急速に活性化されることができ、かつ活性化されたｉＮＫＴがＤＣの完全な成熟を誘導することができることが示された。
スフィンゴ糖脂質を含むアジュバントの使用

一態様では、本発明は、式１のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバント組成物と合同して前記抗原を投与することを含む、哺乳動物において抗原の免疫原性を増強させる方法を提供する。本発明によれば、アジュバントとしてのスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）の使用は、抗原によって誘導される防御免疫の増進および／または持続期間の延長をもたらす。例えば、本明細書に開示されている、スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）と、腫瘍抗原もしくはウイルス抗原、またはこれらの抗原を発現しているＤＮＡ構築体のＴ細胞またはＢ細胞エピトープに対応するペプチドとの合同の投与は、抗原特異的免疫応答を増進させる。

本発明のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントは、任意の抗原、特に、感染物質または腫瘍に由来する抗原と合同して投与することができる。

マウスおよびヒトの両方における免疫刺激性効果は、ＣＤ１ｄ分子の発現に依存し得、ＮＫＴ細胞によって媒介される。実際に、アジュバント活性は、ＮＫＴが媒介する抗原特異的Ｔｈ１−タイプＴ細胞応答およびＣＤ８＋Ｔ細胞（またはＴｃ）応答を増進および／または延長させるその能力に少なくとも部分的に起因することを本発明は示す。

免疫療法の観点から、ＮＫＴ細胞系のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）活性化は、下記の理由によって、他の機序を超えた別個の利点を有するように思われる。（ａ）活性化されたＮＫＴ細胞の細胞毒性のレベルは非常に高く、多種多様の腫瘍細胞または感染細胞に対して有効である。（ｂ）スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）によるＮＫＴ細胞の活性化は、個体の間で同一構造であるＣＤ１ｄ分子に完全に依存しており（Porcelli、Adv. Immunol.、５９巻：１〜９８頁、１９９５年）、これは、スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントが、ＭＨＣハプロタイプに関わらず、全ての患者が利用することができることを示す。（ｃ）ヒト患者のＤＣおよびＮＫＴ活性化の抗原提示機能は、Ｖα１４ＮＫＴ細胞の状況を指標として使用して、マウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏのアッセイによって免疫療法の前に評価することができる。

本発明によれば、式１のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバント、および抗原は、２つの別々の製剤として、または同じ組成物の部分として投与することができる。別々に投与される場合、アジュバントおよび抗原は、逐次的にまたは同時に投与することができる。本明細書に開示されているように、スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントと抗原との同時的な投与が好ましく、一般に最も効率的な免疫刺激を達成することが可能となる。

本発明のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントは、複数の異なる抗原と組み合わせてその免疫刺激性活性を発揮するため、予防用途および治療用途の両方のために有用である。したがって、さらなる態様では、本発明は、前記哺乳動物に、抗原、および式１のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントを合同して投与することを含む、哺乳動物における疾患を処置するための予防的方法および／または治療方法を提供する。この方法は、例えば、様々な感染症に対して保護し、かつ／または様々な感染症を処置するために、および様々な新生物疾患を処置するために有用であり得る。

本発明の免疫原性増進方法を使用して、これらに限定されないが、寄生虫感染症（例えば、マラリア原虫種などによってもたらされるもの）、ウイルス感染症（例えば、インフルエンザウイルス、白血病ウイルス、免疫不全ウイルス、例えば、ＨＩＶ、乳頭腫ウイルス、ヘルペスウイルス、肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、ポックスウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、サイトメガロウイルス［ＣＭＶ］、エプスタインバーウイルスなどによってもたらされるもの）、細菌感染（例えば、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓなどによってもたらされるもの）、および真菌感染（例えば、ｃａｎｄｉｄａ、ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ、ｐｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍなどによってもたらされるもの）が含まれる感染症に対処することができる。

本発明の方法はまた、これらに限定されないが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫肉腫（lymphangioendothelio-sarcoma）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、リンパ腫、白血病、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、ヘパトーム、胆管癌、胆管細胞癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫を含む、様々ながんの処置において有用である。

本明細書においてさらに開示するように、本発明の免疫原性を増進させる方法の最大効率は、抗原およびスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントが同時に投与されるときに達成される。

本発明の方法は、他の処置と併せて使用することができる。例えば、腫瘍特異的抗原、および本発明のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントを使用した抗がん処置は、化学療法および／または放射線療法および／またはＩＬ−１２処置と組み合わせて使用することができる。スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントを含む抗ウイルス性ワクチンは、ＩＦＮ−α処置と組み合わせて使用することができる。
スフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有医薬組成物およびワクチン組成物

本発明の方法と併せてまた提供するのは、免疫原性的に有効な量の抗原および免疫原性的に有効な量のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバント、ならびに任意選択で、さらなる免疫賦活剤、キャリアまたは賦形剤（好ましくは、全て薬学的に許容される）を含む医薬組成物およびワクチン組成物である。前記抗原およびアジュバントは、単一の組成物として、または同時にもしくは逐次的に投与することができる２つの別々の組成物として製剤化することができる。

本発明のアジュバントは、スフィンゴグリコリピド（sphingoglycolipids）のクラス、特に、一般式１によって表すことができるスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）に属する化合物を含む。

本発明の免疫原性（例えば、ワクチン）組成物において使用される抗原は、真核細胞（例えば、腫瘍、寄生虫、真菌）、細菌細胞、ウイルス粒子、またはその任意の部分（例えば弱毒化ウイルス粒子もしくはウイルス構成要素）に由来することができる。それに対して免疫原性応答が向けられる材料が不十分に抗原性である場合、これは、標準的な共有結合技術を使用して、例えば、いくつかの市販の試薬キットの１つで、キャリア分子、例えば、アルブミンまたはハプテンへとさらにコンジュゲートし得える。

本発明の好ましい腫瘍抗原の例は、腫瘍特異的タンパク質、例えば、ＥｒｂＢ受容体、Ｍｅｌａｎ Ａ［ＭＡＲＴ１］、ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ−１／ｇｐ７５、およびＴＲＰ−２（黒色腫における）；ＭＡＧＥ−１およびＭＡＧＥ−３（膀胱癌、頭頸部癌、および非小細胞癌における）；ＨＰＶ ＥＧおよびＥ７タンパク質（子宮頸がんにおける）；ムチン［ＭＵＣ−１］（乳がん、膵臓がん、結腸がん、および前立腺がんにおける）；前立腺特異抗原［ＰＳＡ］（前立腺がんにおける）；癌胎児性抗原［ＣＥＡ］（結腸がん、乳がん、および胃腸がんにおける）、ならびにシェアード腫瘍特異的抗原、例えば、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−６、ＭＡＧＥ−１０、ＭＡＧＥ−１２、ＢＡＧＥ−１、ＣＡＧＥ−１，２，８、ＣＡＧＥ−３〜７、ＬＡＧＥ−１、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ−２、ＮＡ−８８、ＧｎＴＶ、およびＴＲＰ２−ＩＮＴ２が含まれる。目的の抗原は、任意の動物またはヒト病原体または腫瘍に由来することができるため、抗原の上記の列挙は、例示的であることを意図する。

特定の実施形態では、本発明の抗原は、前記抗原を発現している組換えウイルスによって提示し得る。好ましくは、ウイルスは、組換えアデノウイルス、組換えポックスウイルス、および組換えシンドビスウイルスからなる群から選択される。

開示されている組成物において、抗原およびスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの両方は、免疫原性的に有効な量で存在する。各特異的抗原について、最適な免疫原性的に有効な量は、実験的に決定されるべきである（所与の患者の特定の特徴および／または処置のタイプを考慮して）。一般に、この量は、体重１ｋｇ当たり抗原０．１μｇ〜１００ｍｇの範囲である。本発明のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントについて、最適な免疫原性的に有効な量は好ましくは、体重１ｋｇ当たりアジュバント１０〜１００μｇの範囲である。

本発明はまた、少なくとも１種の抗原、および式１のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントを含むワクチン組成物を調製するための方法であって、アジュバントおよび抗原、ならびに任意選択で１種もしくは複数種の生理学的に許容されるキャリアおよび／または賦形剤および／または補助物質を混和することを含む、方法を提供する。
製剤および投与

本発明は、本発明の治療剤（単一の組成物として、または同時にもしくは逐次的に投与することができる２つの別々の組成物として、抗原およびスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバント）を含有する医薬製剤およびワクチン製剤であって、上記の感染症または新生物疾患の処置および予防のための抗原特異的防御免疫応答を誘発するための投与のために適している、製剤を提供する。本発明の組成物は、１種もしくは複数種の生理学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を使用して、任意の通常の様式で製剤化することができる。このように、抗原および／または式１のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）を含むアジュバントは、経皮的送達による、またはこれらに限定されないが、経口、口腔内頬側、鼻腔内、目、膣、直腸、脳内、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下経路を含む経粘膜投与による、乱切（例えば、バイファケイテッドニードルを使用した皮膚の最上層を貫く引掻き）を介した、吸入（肺）もしくは吹送（口もしくは鼻を介した）による、またはｅｘ ｖｉｖｏでの抗原提示細胞への投与、それに続く被験体への細胞の投与による、または免疫化の任意の他の標準的な経路による投与のために製剤化することができる。

好ましくは、本発明の免疫原性製剤は、すなわち、静脈内（ｉ．ｖ．）、皮下（ｓ．ｃ．）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、筋内（ｉ．ｍ．）、皮下（ｓ．ｄ．）、または皮内（ｉ．ｄ．）投与によって、例えば、ボーラス注射、持続注入、または遺伝子銃（例えば、ベクターワクチン、例えば、ネイキッドＤＮＡもしくはＲＮＡを被験体に投与する）を介した直接の注射によって非経口的に送達することができる。注射のための製剤は、単位剤形、例えば、アンプル中で、または添加した保存剤を伴う複数用量容器中で提示することができる。組成物は、油性もしくは水性ビヒクル中の、賦形剤、懸濁剤、溶液剤または乳剤などの形態をとることができ、調合剤、例えば、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤を含有することができる。代わりに、活性成分は、使用する前の、適切なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質を含まない水との再構成のための粉末形態でよい。

本発明はまた、様々な粘膜ワクチン接種戦略を企図する。ワクチンの局所送達によって粘膜を標的とすることができる一方、様々な戦略が用いられ、免疫原性組成物が粘膜へと送達されてきた。例えば、特定の実施形態では、免疫原性ポリペプチドまたはベクターワクチンは、コレラ毒素、例えば、コレラ毒素Ｂもしくはコレラ毒素Ａ／Ｂキメラとの混和物中で、またはコレラ毒素、例えば、コレラ毒素Ｂもしくはコレラ毒素Ａ／Ｂキメラとのコンジュゲートもしくはキメラ融合タンパク質として投与することができる（例えば、Hajishengallis、J Immunol.、１５４巻：４３２２〜３２頁、１９９５年；JoblingおよびHolmes、Infect Immun.、６０巻：４９１５〜２４頁、１９９２年；LebensおよびHolmgren、Dev Biol Stand、８２巻：２１５〜２７頁、１９９４年を参照されたい）。別の実施形態では、易熱性エンテロトキシン（ＬＴ）との混和物を、粘膜ワクチン接種のために調製することができる。他の粘膜免疫化戦略は、マイクロカプセル中に免疫原をカプセル化すること（例えば、米国特許第５，０７５，１０９号；同第５，８２０，８８３号、および同第５，８５３，７６３号を参照されたい）、ならびに免疫強化膜性キャリアを使用すること（例えば、ＰＣＴ出願第ＷＯ９８／０５５８号を参照されたい）を含む。経口的に投与された免疫原の免疫原性は、赤血球（ｒｂｃ）もしくはｒｂｃゴーストを使用することによって（例えば、米国特許第５，６４３，５７７号を参照されたい）、またはブルータング抗原を使用することによって（例えば、米国特許第５，６９０，９３８号を参照されたい）、増進させることができる。標的免疫原の全身投与はまた、粘膜免疫化を生じさせることができる（米国特許第５，５１８，７２５号を参照されたい）。様々な戦略をまた使用して、例えば、キメラライノウイルス（例えば、米国特許第５，７１４，３７４号を参照されたい）、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または核酸の特異的ターゲッティング（例えば、ＰＣＴ出願第ＷＯ９７／０５２６７号を参照されたい）を使用して、粘膜組織における発現のために遺伝子を送達することができる。

経口投与のために、本発明の製剤は、例えば、薬学的に許容される賦形剤、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースもしくはリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクもしくはシリカ）；崩壊剤（例えば、バレイショデンプンもしくはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）と共に、通常の手段によって調製した、錠剤またはカプセル剤の形態をとることができる。錠剤は、当技術分野で周知の方法によってコーティングすることができる。本発明の組成物はまた、例えば、ポリ−グリコール酸／乳酸（ＰＧＬＡ）から作製した、ミクロスフィアまたはマイクロカプセルに導入することができる（米国特許第５，８１４，３４４号；同第５，１００，６６９号および同第４，８４９，２２２号；ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１１０１０号および同第ＷＯ９３／０７８６１号を参照されたい）。経口投与のための液体調製物は、例えば、溶液剤、シロップ剤、乳剤もしくは懸濁剤の形態を取ることができるか、またはこれらは使用前の水または他の適切なビヒクルとの再構成のための乾燥生成物として提示することができる。このような液体調製物は、薬学的に許容される添加剤、例えば、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体もしくは硬化食用脂）；乳化剤（例えば、レシチンもしくはアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールもしくは精留された植物性油）；および保存剤（例えば、メチルもしくはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸）と共に、通常の手段によって調製することができる。調製物はまた、緩衝塩、香味剤、着色剤および甘味剤を必要に応じて含有することができる。経口投与のための調製物を適切に製剤化して、活性化合物の制御放出を生じさせることができる。

吸入による投与のために、本発明による治療剤は、適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロ−メタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスの使用を伴って、加圧式パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で好都合に送達することができる。加圧式エアロゾルの場合、投与量単位は、計量した量を送達するバルブを設けることによって決定することができる。吸入器または吹送器において使用するための、例えば、ゼラチンのカプセルおよびカートリッジは、化合物の粉末混合物および適切な粉末基剤、例えば、ラクトースまたはデンプンを含有して製剤化することができる。

本発明の組成物はまた、例えば、通常の坐剤基剤、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドを含有する、直腸用組成物、例えば、坐剤または停留浣腸で製剤化することができる。

上記の製剤に加えて、組成物はまた、デポー調製物として製剤化することができる。このような長時間作用性製剤は、埋込み（例えば、皮下もしくは筋内）によって、または筋内注射によって投与することができる。このように、例えば、化合物は、適切なポリマー材料もしくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）もしくはイオン交換樹脂と共に、またはやや可溶性でない誘導体として、例えば、やや可溶性でない塩として製剤化することができる。

本明細書に開示されている、抗原および／またはスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントは、薬学的に許容され、活性成分と適合性である賦形剤と混合することができる。適切な賦形剤は、例えば、水、食塩水、緩衝化した食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール、無菌の等張水性緩衝液など、およびこれらの組合せである。加えて、必要に応じて、調製物はまた、医薬組成物またはワクチンの有効性を増進させるスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）に加えて、微量の補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および／または免疫刺激剤（例えば、アジュバント）を含み得る。本発明の組成物の有効性を増進し得るさらなる免疫刺激剤の非限定的例は、免疫刺激性、免疫強化性、または炎症誘発性のサイトカイン、リンフォカインもしくはケモカイン、またはこれらをコードする核酸を含む（具体例は、インターロイキン（ＩＬ）−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、顆粒球−マクロファージ（ＧＭ）−コロニー刺激因子（ＣＳＦ）および他のコロニー刺激因子、マクロファージ炎症因子、Ｆｌｔ３リガンドを含む。「定義」と表題を付けたセクションにおける免疫刺激性サイトカインのさらなる例を参照されたい）。これらのさらなる免疫刺激性分子は、タンパク質として全身的もしくは局所的に、または分子の発現をコードするベクターの発現によって送達することができる。抗原およびスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの送達のための上記の技術をまた、さらなる免疫刺激性分子の送達のために用いることができる。

本発明はまた、本発明の免疫原性製剤の成分の１つまたは複数で満たされた１つまたは複数の容器を含む、医薬パックまたはキットを提供する。関連する実施形態では、本発明は、少なくとも１種の抗原およびスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントを含む医薬組成物またはワクチン組成物の調製のためのキットであって、第１の容器中に抗原、および第２の容器中にアジュバント、ならびに任意選択で抗原およびアジュバントを混和するための、ならびに／または組成物の投与のための説明書を含む、キットを提供する。キットの各容器はまた、１種もしくは複数種の生理学的に許容されるキャリアおよび／または賦形剤および／または補助物質を任意選択で含み得る。このような容器（複数可）と関連するのは、医薬品または生物学的製剤の製造、使用または販売を規制する政府機関によって指示された形態の通知でよく、この通知は、ヒト投与のための製造、使用または販売の機関による承認を反映する。

組成物は、必要に応じて、活性成分（すなわち、抗原および／またはスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバント）を含有する１個もしくは複数の単位剤形を含有し得るパックまたはディスペンサー装置中に提示し得る。パックは、例えば、金属またはプラスチックホイル、例えば、ブリスターパックを含み得る。パックまたはディスペンサー装置は、投与のための説明書を伴い得る。適合性の医薬キャリア中で製剤化された本発明の組成物をまた調製し、適当な容器中に配置し、示した状態の処置のためにラベル付けしてもよい。
有効用量および安全性評価

本発明の方法によると、本明細書に記載されている医薬組成物およびワクチン組成物は、免疫原性的に有効な用量で、好ましくは、最少の毒性を伴って、患者に投与される。「定義」と表題を付けているセクションにおいて記載されているように、開示されている製剤の「免疫原性的に有効な用量」または「治療上有効な用量」は、処置された被験体における有効な免疫応答を生じさせるのに十分であり、したがって前記被験体への健康的な利益をもたらすのに十分である、抗原および／またはスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの量を指す。

当技術分野で確立されている方法論に従って（例えば、生物製剤評価センターおよび米国食品医薬品局および国立アレルギー感染症研究所の間の共同努力における、新規なアジュバントを含有するいくつかのワクチン製剤の評価についての報告を参照されたい［Goldenthalら、National Cooperative Vaccine Development Working Group. AIDS Res. Hum. Retroviruses、１９９３年、９巻：５４５〜９頁］）、本発明の化合物および組成物の有効用量および毒性を、抗原およびスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有アジュバントの両方が免疫原性であることが見出されており、かつヒト臨床治験のために提案された同じ経路によって再現性よく免疫化することができる、小動物モデル（例えば、マウス）を使用した前臨床研究において最初に決定する。具体的には、本発明の方法において使用される任意の医薬組成物またはワクチンについて、ＩＣ_５０（すなわち、症状の最大半量阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成する治療上有効な用量は、最初に動物モデルから推定することができる。次いで、動物系に由来する用量応答曲線を使用して、ヒトにおける最初の臨床研究のための試験用量を決定する。各組成物についての安全性の決定において、免疫化の用量および頻度は、臨床治験における使用について予測される用量および頻度を満たすか、または超えるべきである。

本明細書に開示されている、連続的または断続的に投与される用量が、試験動物における結果、および患者の個々の状態を考慮して、特定の量を超えないことが確実となるように、本発明の組成物中のα−グルコース（α−Ｇｌｃ）を有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）、抗原（複数可）および他の構成要素の用量が決定される。特定の用量は、投薬手順、患者または対象動物の状態、例えば、年齢、体重、性別、感受性、食事、投薬期間、組み合わせて使用される薬物、疾患の重篤度によって当然変動する。特定の条件下の適当な用量および投薬時間は、上記の指標に基づいて試験によって決定することができ、標準的な臨床技術による実務家の判断および各患者の状況によって決定すべきである。これに関しては、抗原の用量は一般に、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ〜１００ｍｇの範囲であり、抗原に対する免疫応答を増強させるのに必要とされるスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントの用量は一般に、体重１ｋｇ当たり１０〜１００μｇの範囲である。

本発明のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有免疫原性組成物の毒性および治療有効性は、実験動物における標準的な医薬手順によって、例えば、ＬＤ_５０（集団の５０％に対して致死的である用量）およびＥＤ_５０（集団の５０％において治療的に有効である用量）を決定することによって決定することができる。毒性効果および治療効果の間の用量比は治療指数であり、治療指数は比ＬＤ_５０／ＥＤ_５０として表すことができる。大きな治療指数を示す組成物が好ましい。毒性の副作用を示す治療剤を使用することができる一方（例えば、がんの重症形態または生命を脅かす感染症を処置するとき）、他の組織および器官への可能性のある損傷を最小化し、それによって、副作用を低減させるために、このような免疫原性組成物を特定の部位（例えば、免疫応答を媒介するリンパ組織、感染物質の複製を支持する腫瘍または器官）を標的とする送達系を設計するように注意をすべきである。本明細書に開示されているように（また、背景技術および実施例を参照されたい）、本発明のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）アジュバントは、相対的に低用量（例えば、体重１ｋｇ当たり１０〜１００μｇのアジュバント）で高度に免疫刺激性であるだけでなく、低毒性も有し、かつかなりの副作用を生じさせない。

上記で特定しているように、ヒトにおける使用のために、動物試験から得たデータを、ある範囲の投与量を処方することにおいて使用することができる。ヒトにおける本発明のスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）含有組成物の治療的に有効な投与量は好ましくは、毒性が殆どないか、もしくは毒性がないこと伴うＥＤ_５０を含むある範囲の循環濃度内にある。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路によってこの範囲内で変動することができる。理想的には、単回用量を使用すべきである。

化学構造を対象とする定義
特定の官能基および化学用語の定義を、下記でより詳細に記載する。化学元素は、元素周期表、ＣＡＳバージョン、Handbook of Chemistry and Physics、第７５版、内表紙によって同定し、特定の官能基は一般に、その中に記載されているように定義される。さらに、有機化学の一般的原理、ならびに特定の官能性部分および反応性は、Thomas Sorrell、Organic Chemistry、University Science Books、Sausalito、１９９９年；SmithおよびMarch、March’s Advanced Organic Chemistry、第５版、John Wiley & Sons, Inc.、New York、２００１年；Larock、Comprehensive Organic Transformations、VCH Publishers, Inc.、New York、１９８９年；およびCarruthers、Some Modern Methods of Organic Synthesis、第３版、Cambridge University Press、Cambridge、１９８７年に記載されている。

本明細書に記載されている化合物は、１つまたは複数の不斉中心を含むことができ、このように様々な異性体形態、例えば、エナンチオマーおよび／またはジアステレオマーで存在することができる。例えば、本明細書に記載されている化合物は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは幾何異性体の形態でよいか、またはラセミ混合物、および１種もしくは複数種の立体異性体において富化している混合物を含む立体異性体の混合物の形態でよい。異性体は、例えば、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、ならびにキラル塩の形成および結晶化を含む、当業者に公知の方法によって混合物から単離することができるか；あるいは好ましい異性体は、不斉合成によって調製することができる。例えば、Jacquesら、Enantiomers, Racemates and Resolutions（Wiley Interscience、New York、１９８１年）；Wilenら、Tetrahedron、３３巻：２７２５頁（１９７７年）；Eliel、Stereochemistry of Carbon Compounds（McGraw-Hill、NY、１９６２年）；およびWilen、Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions、２６８頁（E.L. Eliel、編、Univ. of Notre Dame Press、Notre Dame、１９７２年）を参照されたい。本開示は、他の異性体が実質的に存在しない個々の異性体として、および代わりに、様々な異性体の混合物として、本明細書に記載されている化合物をさらに包含する。

ある範囲の値が列挙されるとき、範囲内の各値およびサブ範囲を包含することを意図する。例えば、「Ｃ_１〜６」は、Ｃ_１、Ｃ_２、Ｃ_３、Ｃ_４、Ｃ_５、Ｃ_６、Ｃ_１〜６、Ｃ_１〜５、Ｃ_１〜４、Ｃ_１〜３、Ｃ_１〜２、Ｃ_２〜６、Ｃ_２〜５、Ｃ_２〜４、Ｃ_２〜３、Ｃ_３〜６、Ｃ_３〜５、Ｃ_３〜４、Ｃ_４〜６、Ｃ_４〜５、およびＣ_５〜６を包含することを意図する。

「アルキル」は、１〜２０個の炭素原子を有する直鎖または分岐状飽和炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ_１〜２０アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜１０アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜９アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜８アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜７アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜６アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜５アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜４アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜３アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１〜２個の炭素原子を有する（「Ｃ_１〜２アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、１個の炭素原子を有する（「Ｃ_１アルキル」）。一部の実施形態では、アルキル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜６アルキル」）。Ｃ_１〜６アルキル基の例は、メチル（Ｃ_１）、エチル（Ｃ_２）、ｎ−プロピル（Ｃ_３）、イソ−プロピル（Ｃ_３）、ｎ−ブチル（Ｃ_４）、ｔｅｒｔ−ブチル（Ｃ_４）、ｓｅｃ−ブチル（Ｃ_４）、イソ−ブチル（Ｃ_４）、ｎ−ペンチル（Ｃ_５）、３−ペンタニル（Ｃ_５）、アミル（Ｃ_５）、ネオペンチル（Ｃ_５）、３−メチル−２−ブタニル（Ｃ_５）、第三級アミル（Ｃ_５）、およびｎ−ヘキシル（Ｃ_６）を含む。アルキル基のさらなる例は、ｎ−ヘプチル（Ｃ_７）、ｎ−オクチル（Ｃ_８）などを含む。他に特定しない限り、アルキル基の各実例は、独立に、任意選択で置換されており、すなわち、非置換（「非置換アルキル」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換アルキル」）。ある特定の実施形態では、アルキル基は、非置換Ｃ_１〜１０アルキル（例えば、−ＣＨ_３）である。ある特定の実施形態では、アルキル基は、置換Ｃ_１〜１０アルキルである。

「アルケニル」は、２〜２０個の炭素原子、１個もしくは複数の炭素−炭素二重結合を有し、三重結合を有さない直鎖または分岐状炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ_２〜２０アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜１０アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜９アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜８アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜７アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜６アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜５アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜４アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜３アルケニル」）。一部の実施形態では、アルケニル基は、２個の炭素原子を有する（「Ｃ_２アルケニル」）。１個もしくは複数の炭素−炭素二重結合は、内部（例えば、２−ブテニルにおいて）または末端（例えば、１−ブテニルにおいて）でよい。Ｃ_２〜４アルケニル基の例は、エテニル（Ｃ_２）、１−プロペニル（Ｃ_３）、２−プロペニル（Ｃ_３）、１−ブテニル（Ｃ_４）、２−ブテニル（Ｃ_４）、ブタジエニル（Ｃ_４）などを含む。Ｃ_２〜６アルケニル基の例は、上記のＣ_２〜４アルケニル基、およびペンテニル（Ｃ_５）、ペンタジエニル（Ｃ_５）、ヘキセニル（Ｃ_６）などを含む。アルケニルのさらなる例は、ヘプテニル（Ｃ_７）、オクテニル（Ｃ_８）、オクタトリエニル（Ｃ_８）などを含む。他に特定しない限り、アルケニル基の各実例は、独立に、任意選択で置換されており、すなわち、非置換（「非置換アルケニル」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換アルケニル」）。ある特定の実施形態では、アルケニル基は、非置換Ｃ_２〜１０アルケニルである。ある特定の実施形態では、アルケニル基は、置換Ｃ_２〜１０アルケニルである。

「アルキニル」は、２〜２０個の炭素原子、１個もしくは複数の炭素−炭素三重結合、および任意選択で１個もしくは複数の二重結合を有する直鎖または分岐状炭化水素基のラジカルを指す（「Ｃ_２〜２０アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜１０個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜１０アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜９個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜９アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜８個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜８アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜７個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜７アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜６個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜６アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜５個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜５アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜４個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜４アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２〜３個の炭素原子を有する（「Ｃ_２〜３アルキニル」）。一部の実施形態では、アルキニル基は、２個の炭素原子を有する（「Ｃ_２アルキニル」）。１個もしくは複数の炭素−炭素三重結合は、内部（例えば、２−ブチニルにおいて）または末端（例えば、１−ブチニルにおいて）でよい。Ｃ_２〜４アルキニル基の例には、これらに限定されないが、エチニル（Ｃ_２）、１−プロピニル（Ｃ_３）、２−プロピニル（Ｃ_３）、１−ブチニル（Ｃ_４）、２−ブチニル（Ｃ_４）などが含まれる。Ｃ_２〜６アルケニル基の例は、上記のＣ_２〜４アルキニル基、およびペンチニル（Ｃ_５）、ヘキシニル（Ｃ_６）などを含む。アルキニルのさらなる例は、ヘプチニル（Ｃ_７）、オクチニル（Ｃ_８）などを含む。他に特定しない限り、アルキニル基の各実例は、独立に、任意選択で置換されており、すなわち、非置換（「非置換アルキニル」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換アルキニル」）。ある特定の実施形態では、アルキニル基は、非置換Ｃ_２〜１０アルキニルである。ある特定の実施形態では、アルキニル基は、置換Ｃ_２〜１０アルキニルである。

「カルボシクリル」または「炭素環式」は、非芳香族環系において３〜１０個の環炭素原子（「Ｃ_３〜１０カルボシクリル」）および０個のヘテロ原子を有する非芳香族環状炭化水素基のラジカルを指す。一部の実施形態では、カルボシクリル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３〜８カルボシクリル」）。一部の実施形態では、カルボシクリル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３〜６カルボシクリル」）。一部の実施形態では、カルボシクリル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３〜６カルボシクリル」）。一部の実施形態では、カルボシクリル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_５〜１０カルボシクリル」）。例示的なＣ_３〜６カルボシクリル基には、これらに限定されないが、シクロプロピル（Ｃ_３）、シクロプロペニル（Ｃ_３）、シクロブチル（Ｃ_４）、シクロブテニル（Ｃ_４）、シクロペンチル（Ｃ_５）、シクロペンテニル（Ｃ_５）、シクロヘキシル（Ｃ_６）、シクロヘキセニル（Ｃ_６）、シクロヘキサジエニル（Ｃ_６）などが含まれる。例示的なＣ_３〜８カルボシクリル基には、これらに限定されないが、上記のＣ_３〜６カルボシクリル基、およびシクロヘプチル（Ｃ_７）、シクロヘプテニル（Ｃ_７）、シクロヘプタジエニル（Ｃ_７）、シクロヘプタトリエニル（Ｃ_７）、シクロオクチル（Ｃ_８）、シクロオクテニル（Ｃ_８）、３８イドロキシ（38ydroxy）［２．２．１］ヘプタニル（Ｃ_７）、３８イドロキシ［２．２．２］オクタニル（Ｃ_８）などが含まれる。例示的なＣ_３〜１０カルボシクリル基には、これらに限定されないが、上記のＣ_３〜８カルボシクリル基、およびシクロノニル（Ｃ_９）、シクロノネニル（Ｃ_９）、シクロデシル（Ｃ_１０）、シクロデセニル（Ｃ_１０）、オクタヒドロ−１Ｈ−インデニル（Ｃ_９）、デカヒドロナフタレニル（Ｃ_１０）、スピロ［４．５］デカニル（Ｃ_１０）などが含まれる。上記の例が例証するように、ある特定の実施形態では、カルボシクリル基は、単環式（「単環式カルボシクリル」）であるか、または縮合環、架橋環もしくはスピロ環系、例えば、二環式系（「二環式カルボシクリル」）を含有し、飽和でよいか、または部分不飽和でよい。「カルボシクリル」はまた、環系を含み、上記に定義されているような炭素環式環が、１個もしくは複数のアリールまたはヘテロアリール基に縮合しており、付着点は、炭素環式環上にあり、このような場合、炭素の数は、炭素環式環系中の炭素の数を示し続ける。他に特定しない限り、カルボシクリル基の各実例は、独立に、任意選択で置換されており、すなわち、非置換（「非置換カルボシクリル」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換カルボシクリル」）。ある特定の実施形態では、カルボシクリル基は、非置換Ｃ_３〜１０カルボシクリルである。ある特定の実施形態では、カルボシクリル基は、置換Ｃ_３〜１０カルボシクリルである。

一部の実施形態では、「カルボシクリル」は、３〜１０個の環炭素原子を有する単環式飽和カルボシクリル基である（「Ｃ_３〜１０シクロアルキル」）。一部の実施形態では、シクロアルキル基は、３〜８個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３〜８シクロアルキル」）。一部の実施形態では、シクロアルキル基は、３〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_３〜６シクロアルキル」）。一部の実施形態では、シクロアルキル基は、５〜６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_５〜６シクロアルキル」）。一部の実施形態では、シクロアルキル基は、５〜１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_５〜１０シクロアルキル」）。Ｃ_５〜６シクロアルキル基の例は、シクロペンチル（Ｃ_５）およびシクロヘキシル（Ｃ_５）を含む。Ｃ_３〜６シクロアルキル基の例は、上記のＣ_５〜６シクロアルキル基、ならびにシクロプロピル（Ｃ_３）およびシクロブチル（Ｃ_４）を含む。Ｃ_３〜８シクロアルキル基の例は、上記のＣ_３〜６シクロアルキル基、ならびにシクロヘプチル（Ｃ_７）およびシクロオクチル（Ｃ_８）を含む。他に特定しない限り、シクロアルキル基の各実例は、独立に、非置換（「非置換シクロアルキル」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換シクロアルキル」）。ある特定の実施形態では、シクロアルキル基は、非置換Ｃ_３〜１０シクロアルキルである。ある特定の実施形態では、シクロアルキル基は、置換Ｃ_３〜１０シクロアルキルである。

「ヘテロシクリル」または「複素環式」は、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する３〜１０員の非芳香族環系のラジカルを指し、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、およびケイ素から独立に選択される（「３〜１０員のヘテロシクリル」）。ある特定の実施形態では、ヘテロ原子は、窒素、硫黄、および酸素から独立に選択される。１個もしくは複数の窒素原子を含有するヘテロシクリル基において、付着点は、原子価が許容するような炭素または窒素原子でよい。ヘテロシクリル基は、単環式（「単環式ヘテロシクリル」）または縮合環、架橋環もしくはスピロ環系、例えば、二環式系（「二環式ヘテロシクリル」）でよく、かつ飽和または部分不飽和でよい。ヘテロシクリル二環式環系は、１個または両方の環において１個もしくは複数のヘテロ原子を含むことができる。「ヘテロシクリル」はまた、環系を含み、ここでは、上記に定義されているような複素環式環が、１個もしくは複数のカルボシクリル基（付着点は、カルボシクリルまたは複素環式環上にある）、または環系（上記に定義されているような複素環式環は、１個もしくは複数のアリールもしくはヘテロアリール基と縮合しており、付着点は、複素環式環上にある）と縮合しており、このような場合、環員の数は、複素環式環系における環員の数を示し続ける。他に特定しない限り、ヘテロシクリルの各実例は、独立に、任意選択で置換されており、すなわち、非置換（「非置換ヘテロシクリル」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換ヘテロシクリル」）。ある特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は、非置換３〜１０員のヘテロシクリルである。ある特定の実施形態では、ヘテロシクリル基は、置換３〜１０員のヘテロシクリルである。

一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員の非芳香族環系であり、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン、およびケイ素から独立に選択される（「５〜１０員のヘテロシクリル」）。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜８員の非芳香族環系であり、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択される（「５〜８員のヘテロシクリル」）。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜６員の非芳香族環系であり、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択される（「５〜６員のヘテロシクリル」）。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロシクリルは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。

１個のヘテロ原子を含有する例示的な３員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、アジリジニル（azirdinyl）、オキシラニル、およびチオレニル（thiorenyl）が含まれる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な４員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、アゼチジニル、オキセタニル、およびチエタニルが含まれる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ジヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ジヒドロピロリル、およびピロリル−２，５−ジオンが含まれる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、ジオキソラニル、オキサスルフラニル（oxasulfuranyl）、ジスルフラニル（disulfuranyl）、およびオキサゾリジン−２−オンが含まれる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、トリアゾリニル、オキサジアゾリニル（oxadiazolinyl）、およびチアジアゾリニルが含まれる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、ピペリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピリジニル、およびチアニルが含まれる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、ピペラジニル、モルホリニル、ジチアニル、およびジオキサニルが含まれる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、トリアジナニル（triazinanyl）が含まれる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、アゼパニル、オキセパニル、およびチエパニルが含まれる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な８員ヘテロシクリル基には、これらに限定されないが、アゾカニル（azocanyl）、オキセカニル（oxecanyl）、およびチオカニル（thiocanyl）が含まれる。Ｃ_６アリール環に縮合した例示的な５員ヘテロシクリル基（また本明細書において５，６−二環式複素環式環と称される）には、これらに限定されないが、インドリニル、イソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリノニル（benzoxazolinonyl）などが含まれる。アリール環に縮合した例示的な６員ヘテロシクリル基（また本明細書において６，６−二環式複素環式環と称される）には、これらに限定されないが、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルなどが含まれる。

「アリール」は、芳香族環系中に６〜１４個の環炭素原子および０個のヘテロ原子を有する、単環式または多環式（例えば、二環式もしくは三環式）４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環状アレイにおいて共有される６個、１０個、もしくは１４個のπ電子を有する）のラジカルを指す（「Ｃ_６〜１４アリール」）。一部の実施形態では、アリール基は、６個の環炭素原子を有する（「Ｃ_６アリール」；例えば、フェニル）。一部の実施形態では、アリール基は、１０個の環炭素原子を有する（「Ｃ_１０アリール」；例えば、ナフチル、例えば、１−ナフチルおよび２−ナフチル）。一部の実施形態では、アリール基は、１４個の環炭素原子を有する（「Ｃ_１４アリール」；例えば、アントラシル）。「アリール」はまた、環系を含み、上記に定義されているようなアリール環は、１個もしくは複数のカルボシクリルまたはヘテロシクリル基と縮合しており、ラジカルまたは付着点は、アリール環上にあり、このような場合、炭素原子の数は、アリール環系における炭素原子の数を示し続ける。他に特定しない限り、アリール基の各実例は、独立に、任意選択で置換されており、すなわち、非置換（「非置換アリール」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換アリール」）。ある特定の実施形態では、アリール基は、非置換Ｃ_６〜１４アリールである。ある特定の実施形態では、アリール基は、置換Ｃ_６〜１４アリールである。

「アリールアルキル」は、本明細書に定義されているようなアルキルおよびアリールのサブセットであり、任意選択で置換されているアリール基で置換されている、任意選択で置換されているアルキル基を指す。ある特定の実施形態では、アラルキルは、任意選択で置換されているベンジルである。ある特定の実施形態では、アラルキルは、ベンジルである。ある特定の実施形態では、アラルキルは、任意選択で置換されているフェネチルである。ある特定の実施形態では、アラルキルは、フェネチルである。

「ヘテロアリール」は、芳香族環系において提供される環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する、５〜１０員の単環式または二環式４ｎ＋２芳香族環系（例えば、環状アレイにおいて共有される６個もしくは１０個のπ電子を有する）のラジカルを指し、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択される（「５〜１０員のヘテロアリール」）。１個もしくは複数の窒素原子を含有するヘテロアリール基において、付着点は、原子価が許容するような炭素または窒素原子でよい。ヘテロアリール二環式環系は、１個または両方の環において１個もしくは複数のヘテロ原子を含むことができる。「ヘテロアリール」は、環系を含み、上記に定義されているようなヘテロアリール環は、１個もしくは複数のカルボシクリルまたはヘテロシクリル基と縮合しており、付着点は、ヘテロアリール環上にあり、このような場合、環員の数は、ヘテロアリール環系における環員の数を示し続ける。「ヘテロアリール」はまた、環系を含み、上記に定義されているようなヘテロアリール環は、１個もしくは複数のアリール基と縮合しており、付着点は、アリールまたはヘテロアリール環上にあり、このような場合、環員の数は、縮合（アリール／ヘテロアリール）環系における環員の数を示す。１個の環がヘテロ原子を含有しない二環式ヘテロアリール基において（例えば、インドリル、キノリニル、カルバゾリルなど）、付着点は、いずれかの環、すなわち、ヘテロ原子を担持する環（例えば、２−インドリル）またはヘテロ原子を含有しない環（例えば、５−インドリル）上でよい。

一部の実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香族環系において提供される環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜１０員の芳香族環系であり、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択される（「５〜１０員のヘテロアリール」）。一部の実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香族環系において提供される環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜８員の芳香族環系であり、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択される（「５〜８員のヘテロアリール」）。一部の実施形態では、ヘテロアリール基は、芳香族環系において提供される環炭素原子および１〜４個の環ヘテロ原子を有する５〜６員の芳香族環系であり、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄から独立に選択される（「５〜６員のヘテロアリール」）。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜３個の環ヘテロ原子を有する。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１〜２個の環ヘテロ原子を有する。一部の実施形態では、５〜６員のヘテロアリールは、窒素、酸素、および硫黄から選択される１個の環ヘテロ原子を有する。他に特定しない限り、ヘテロアリール基の各実例は、独立に、任意選択で置換されており、すなわち、非置換（「非置換ヘテロアリール」）であるか、または１個もしくは複数の置換基で置換されている（「置換ヘテロアリール」）。ある特定の実施形態では、ヘテロアリール基は、非置換５〜１４員のヘテロアリールである。ある特定の実施形態では、ヘテロアリール基は、置換５〜１４員のヘテロアリールである。

１個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、ピロリル、フラニルおよびチオフェニルが含まれる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、イミダゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、およびイソチアゾリルが含まれる。３個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、トリアゾリル、オキサジアゾリル、およびチアジアゾリルが含まれる。４個のヘテロ原子を含有する例示的な５員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、テトラゾリルが含まれる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、ピリジニルが含まれる。２個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、ピリダジニル、ピリミジニル、およびピラジニルが含まれる。３個または４個のヘテロ原子を含有する例示的な６員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、それぞれ、トリアジニルおよびテトラジニルが含まれる。１個のヘテロ原子を含有する例示的な７員ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、アゼピニル、オキセピニル、およびチエピニルが含まれる。例示的な５，６−二環式ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、インドリル、イソインドリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾイソフラニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンズチアゾリル（benzthiazolyl）、ベンゾイソチアゾリル、ベンズチアジアゾリル（benzthiadiazolyl）、インドリジニル、およびプリニルが含まれる。例示的な６，６−二環式ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、ナフチリジニル、プテリジニル、キノリニル、イソキノリニル、シンノリニル、キノキサリニル、フタラジニル、およびキナゾリニルが含まれる。

「ヘテロアラルキル」は、本明細書に定義されているようなアルキルおよびヘテロアリールのサブセットであり、任意選択で置換されているヘテロアリール基で置換されている、任意選択で置換されているアルキル基を指す。

二価の架橋基である本明細書に定義されているようなアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリール基は、接尾語−エンを使用してさらに言及され、例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン、カルボシクリレン、ヘテロシクリレン、アリーレン、およびヘテロアリーレンである。

本明細書において使用する場合、用語「任意選択で置換されている」は、置換もしくは非置換部分を指す。

本明細書に定義されているようなアルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリール基は、任意選択で置換されている（例えば、「置換」もしくは「非置換」アルキル、「置換」もしくは「非置換」アルケニル、「置換」もしくは「非置換」アルキニル、「置換」もしくは「非置換」カルボシクリル、「置換」もしくは「非置換」ヘテロシクリル、「置換」もしくは「非置換」アリール、または「置換」もしくは「非置換」ヘテロアリール基）。一般に、用語「置換されている」は、用語「任意選択で」が先行しようとも、またはしなくても、基（例えば、炭素または窒素原子）上に存在する少なくとも１個の水素が、許容できる置換基、例えば、置換によって、安定的な化合物、例えば、転位、環化、脱離、または他の反応によって変換を自発的に受けない化合物をもたらす置換基で置き換えられていることを意味する。他に示さない限り、「置換されている」基は、基の１個もしくは複数の置換可能な位置において置換基を有し、任意の所与の構造における複数の位置が置換されているとき、置換基は、各位置において同じまたは異なる。用語「置換されている」は、有機化合物の全ての許容できる置換基、安定的な化合物の形成をもたらす本明細書に記載されている置換基のいずれかによる置換を含むことを企図する。安定的な化合物に達するために、本発明は、ありとあらゆるこのような組合せを企図する。本発明の目的のために、ヘテロ原子、例えば、窒素は、水素置換基、および／またはヘテロ原子の原子価を満足させ、かつ安定的な部分の形成をもたらす本明細書に記載のような任意の適切な置換基を有し得る。

例示的な炭素原子置換基には、これらに限定されないが、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、−ＳＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−ＯＮ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_３ ^＋Ｘ⁻、−Ｎ（ＯＲ^ｃｃ）Ｒ^ｂｂ、−ＳＨ、−ＳＲ^ａａ、−ＳＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＨＯ、−Ｃ（ＯＲ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＯＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＮＲ^ｂｂＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＮＲ^ｂｂＣ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、−ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２ＯＲ^ａａ、−ＯＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＯＳ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｓｉ（Ｒ^ａａ）_３、−Ｏｓｉ（Ｒ^ａａ）_３ −Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ、−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−ＯＰ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２、−ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−ＮＲ^ｂｂＰ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_３、−ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＯＰ（Ｒ^ｃｃ）_３、−Ｂ（Ｒ^ａａ）_２、−Ｂ（ＯＲ^ｃｃ）_２、−ＢＲ^ａａ（ＯＲ^ｃｃ）、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリール、および５〜１４員のヘテロアリールが含まれ、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｄｄ基で独立に置換されているか、または炭素原子上の２個の水素は、基＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮ（Ｒ^ｂｂ）_２、＝ＮＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、＝ＮＮＲ^ｂｂＣ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ、＝ＮＮＲ^ｂｂＳ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、＝ＮＲ^ｂｂ、もしくは＝ＮＯＲ^ｃｃで置き換えられており、Ｒ^ａａの各実例は、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリール、および５〜１４員のヘテロアリールから独立に選択されるか、あるいは２個のＲ^ａａ基は接合して、３〜１４員のヘテロシクリルまたは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｄｄ基で独立に置換されており、Ｒ^ｂｂの各実例は、水素、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｃｃ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｃｃ、−ＳＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｃｃ）_２、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリール、および５〜１４員のヘテロアリールから独立に選択されるか、あるいは２個のＲ^ｂｂ基は接合して、３〜１４員のヘテロシクリルまたは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｄｄ基で独立に置換されており、Ｒ^ｃｃの各実例は、水素、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリール、および５〜１４員のヘテロアリールから独立に選択されるか、あるいは２個のＲ^ｃｃ基は接合して、３〜１４員のヘテロシクリルまたは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｄｄ基で独立に置換されており、Ｒ^ｄｄの各実例は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、−ＳＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ^ｅｅ、−ＯＮ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_３ ^＋Ｘ⁻、−Ｎ（ＯＲ^ｅｅ）Ｒ^ｆｆ、−ＳＨ、−ＳＲ^ｅｅ、−ＳＳＲ^ｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−ＯＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＮＲ^ｆｆＣ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−ＮＲ^ｆｆＣＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＮＲ^ｆｆＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｆｆ）ＯＲ^ｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｒ^ｅｅ、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）ＯＲ^ｅｅ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＯＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＮＲ^ｆｆＣ（＝ＮＲ^ｆｆ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＮＲ^ｆｆＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｅｅ、−ＯＳＯ_２Ｒ^ｅｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ｅｅ、−Ｓｉ（Ｒ^ｅｅ）_３、−Ｏｓｉ（Ｒ^ｅｅ）_３、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｆｆ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｅｅ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｅｅ、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＲ^ｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ｅｅ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ｅｅ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｒ^ｅｅ）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｅｅ）_２、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１０員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１０アリール、５〜１０員のヘテロアリールから独立に選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｇｇ基で独立に置換されているか、あるいは２個のＲ^ｄｄ置換基は接合して、＝Ｏまたは＝Ｓを形成することができ、Ｒ^ｅｅの各実例は、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、Ｃ_６〜１０アリール、３〜１０員のヘテロシクリル、および３〜１０員のヘテロアリールから独立に選択され、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｇｇ基で独立に置換されており、Ｒ^ｆｆの各実例は、水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１０員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１０アリールおよび５〜１０員のヘテロアリールから独立に選択されるか、あるいは２個のＲ^ｆｆ基は接合して、３〜１４員のヘテロシクリルまたは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｇｇ基で独立に置換されている、
Ｒ^ｇｇの各実例は、独立に、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、−ＳＯ_２Ｈ、−ＳＯ_３Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣ_１〜６アルキル、−ＯＮ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_３ ^＋Ｘ⁻、−ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）_２ ^＋Ｘ⁻、−ＮＨ_２（Ｃ_１〜６アルキル）^＋Ｘ⁻、−ＮＨ_３ ^＋Ｘ⁻、−Ｎ（ＯＣ_１〜６アルキル）（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｎ（ＯＨ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨ（ＯＨ）、−ＳＨ、−ＳＣ_１〜６アルキル、−ＳＳ（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（＝ＮＨ）ＯＣ_１〜６アルキル、−Ｃ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＯＣ（＝ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＯＣ（ＮＨ）ＮＨ_２、−ＮＨＣ（ＮＨ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ_２、−ＮＨＳＯ_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＳＯ_２Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＳＯ_２ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、−ＳＯ_２ＮＨ_２、−ＳＯ_２Ｃ_１〜６アルキル、−ＳＯ_２ＯＣ_１〜６アルキル、−ＯＳＯ_２Ｃ_１〜６アルキル、−ＳＯＣ_１〜６アルキル、−Ｓｉ（Ｃ_１〜６アルキル）_３、−Ｏｓｉ（Ｃ_１〜６アルキル）_３ −Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ（Ｃ_１〜６アルキル）、Ｃ（＝Ｓ）ＮＨ_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｓ（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＣ_１〜６アルキル、−ＳＣ（＝Ｓ）ＳＣ_１〜６アルキル、−Ｐ（＝Ｏ）_２（Ｃ_１〜６アルキル）、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（Ｃ_１〜６アルキル）_２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＣ_１〜６アルキル）_２、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６ペルハロアルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、Ｃ_６〜１０アリール、３〜１０員のヘテロシクリル、５〜１０員のヘテロアリールであるか、あるいは２個のＲ^ｇｇ置換基は接合して、＝Ｏまたは＝Ｓを形成することができ、Ｘ⁻は、対イオンである。

「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）、またはヨウ素（ヨード、−Ｉ）を指す。

「アシル」は、本明細書において使用する場合、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＣＨＯ、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^ｂｂＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、および−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ａａからなる群から選択される部分を指し、Ｒ^ａａおよびＲ^ｂｂは、本明細書に定義されている通りである。

窒素原子は、原子価が許容するように、置換されていても、または置換されていなくてもよく、第一級、第二級、第三級、および第四級窒素原子を含む。例示的な窒素原子置換基には、これらに限定されないが、水素、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｃｃ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｃｃ、−ＳＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｃｃ）_２、Ｃ_１〜１０アルキル、Ｃ_１〜１０ペルハロアルキル、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリール、および５〜１４員のヘテロアリールが含まれるか、あるいは窒素原子に付着した２個のＲ^ｃｃ基は接合して、３〜１４員のヘテロシクリルまたは５〜１４員のヘテロアリール環を形成し、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｄｄ基で独立に置換されており、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂ、Ｒ^ｃｃ、およびＲ^ｄｄは、上記に定義されている通りである。

ある特定の実施形態では、窒素原子上に存在する置換基は、窒素保護基である（またアミノ保護基と称される）。窒素保護基には、これらに限定されないが、−ＯＨ、−ＯＲ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｃｃ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−ＳＯ_２Ｒ^ｃｃ、−ＳＯ_２ＯＲ^ｃｃ、−ＳＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ｃｃ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ^ｃｃ、Ｃ_１〜１０アルキル（例えば、アラルキル、ヘテロアラルキル）、Ｃ_２〜１０アルケニル、Ｃ_２〜１０アルキニル、Ｃ_３〜１０カルボシクリル、３〜１４員のヘテロシクリル、Ｃ_６〜１４アリール、および５〜１４員のヘテロアリール基が含まれ、各アルキル、アルケニル、アルキニル、カルボシクリル、ヘテロシクリル、アラルキル、アリール、およびヘテロアリールは、０個、１個、２個、３個、４個、もしくは５個のＲ^ｄｄ基で独立に置換されており、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂ、Ｒ^ｃｃおよびＲ^ｄｄは、本明細書に定義されている通りである。窒素保護基は当技術分野で周知であり、参照により本明細書中に組み込まれているProtecting Groups in Organic Synthesis、T. W. GreeneおよびP. G. M. Wuts、第３版、John Wiley & Sons、１９９９年に記載されているものを含む。

例えば、窒素保護基、例えば、アミド基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ）には、これらに限定されないが、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトフェニルアセトアミド（nitophenylacetamide）、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシアシルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンアミド（nitrocinnamide）、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、およびｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミドが含まれる。

窒素保護基、例えば、カルバメート基（例えば、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^ａａ）には、これらに限定されないが、メチルカルバメート、エチルカルバメート（carbamante）、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチルカルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチル（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニリル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトベンジル（nitobenzyl）カルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−メチルチオエチルカルバメート、２−メチルスルホニルエチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５−ベンゾイソオキサゾリルメチルカルバメート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、ｔ−アミルカルバメート、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、２，２−ジメトキシアシルビニルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１−ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、２−ヨードエチルカルバメート、イソボルニル（isoborynl）カルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチルシクロブチルカルバメート、１−メチルシクロヘキシルカルバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、および２，４，６−トリメチルベンジルカルバメートが含まれる。

窒素保護基、例えば、スルホンアミド基（例えば、−Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ）には、これらに限定されないが、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、およびフェナシルスルホンアミドが含まれる。

他の窒素保護基には、これらに限定されないが、フェノチアジニル−（１０）−アシル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノアシル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオアシル誘導体、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加体（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ヒドロキシル、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロリン（pyroolin）−３−イル）アミン、第四級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノＮ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタアシルクロム−またはタングステン）アシル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホロアミデート、ジベンジルホスホロアミデート、ジフェニルホスホロアミデート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、および３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）が含まれる。

ある特定の実施形態では、酸素原子上に存在する置換基は、酸素保護基である（また、ヒドロキシル保護基と称される）。酸素保護基には、これらに限定されないが、−Ｒ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｓｉ（Ｒ^ａａ）_３、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_３、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２が含まれ、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂ、およびＲ^ｃｃは、本明細書に定義されている通りである。酸素保護基は当技術分野で周知であり、参照により本明細書中に組み込まれているProtecting Groups in Organic Synthesis、T. W. GreeneおよびP. G. M. Wuts、第３版、John Wiley & Sons、１９９９年に記載されているものを含む。

例示的な酸素保護基には、これらに限定されないが、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアイアコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル Ｓ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル（Ｂｎ）、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリル Ｎ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４”−トリス（４，５−ジクロロフタルイミドフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４”−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４”−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンゾイソチアゾリル Ｓ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート（pivaloate）、アダマントエート（adamantoate）、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート（mesitoate））、メチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、エチルカーボネート、２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、イソブチルカーボネート、ビニルカーボネート、アリルカーボネート、ｔ−ブチルカーボネート（ＢＯＣ）、ｐ−ニトロフェニルカーボネート、ベンジルカーボネート、ｐ−メトキシベンジルカーボネート、３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、ｏ−ニトロベンジルカーボネート、ｐ−ニトロベンジルカーボネート、Ｓ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチル（napththyl）カーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチレート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチレート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチレート、モノスクシノエート（monosuccinoate）、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノエート、ｏ−（メトキシアシル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ニトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミデート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボレート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェネート、スルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネート、およびトシレート（Ｔｓ）が含まれる。

ある特定の実施形態では、硫黄原子上に存在する置換基は、硫黄保護基である（また、チオール保護基と称される）。硫黄保護基には、これらに限定されないが、−Ｒ^ａａ、−Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＣＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｒ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）ＯＲ^ａａ、−Ｃ（＝ＮＲ^ｂｂ）Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ^ａａ、−ＳＯ_２Ｒ^ａａ、−Ｓｉ（Ｒ^ａａ）_３、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_２、−Ｐ（Ｒ^ｃｃ）_３、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｒ^ａａ、−Ｐ（＝Ｏ）（Ｒ^ａａ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ^ｃｃ）_２、−Ｐ（＝Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^ｂｂ）_２、および−Ｐ（＝Ｏ）（ＮＲ^ｂｂ）_２が含まれ、Ｒ^ａａ、Ｒ^ｂｂ、およびＲ^ｃｃは、本明細書に定義されている通りである。硫黄保護基は当技術分野で周知であり、参照により本明細書中に組み込まれているProtecting Groups in Organic Synthesis、T. W. GreeneおよびP. G. M. Wuts、第３版、John Wiley & Sons、１９９９年に記載されているものを含む。

本明細書において使用する場合、用語「脱離基」は、有機合成化学の当技術分野におけるその通常の意味を与えられ、求核試薬によって置き換えることができる原子または基を指す。適切な脱離基の例には、これらに限定されないが、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ（ヨウ素））、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、アルカンスルホニルオキシ、アレーンスルホニルオキシ、アルキル−カルボニルオキシ（例えば、アセトキシ）、アリールカルボニルオキシ、アリールオキシ、メトキシ、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミノ、ピキシル、およびハロホルメートが含まれる。場合によって、脱離基は、スルホン酸エステル、例えば、トルエンスルホネート（トシレート、−ＯＴｓ）、メタンスルホネート（メシレート、−ＯＭｓ）、ｐ−ブロモベンゼンスルホニルオキシ（ブロシレート、−ＯＢｓ）、またはトリフルオロメタンスルホネート（トリフレート、−ＯＴｆ）である。場合によって、脱離基は、ブロシレート、例えば、ｐ−ブロモベンゼンスルホニルオキシである。場合によって、脱離基は、ノシレート、例えば、２−ニトロベンゼンスルホニルオキシである。一部の実施形態では、脱離基は、スルホネート含有基である。一部の実施形態では、脱離基は、トシレート基である。脱離基はまた、ホスフィンオキシド（例えば、光延反応の間に形成される）または内部脱離基、例えば、エポキシドもしくは環状スルフェートであり得る。脱離基の他の非限定的例は、水、アンモニア、アルコール、エーテル部分、チオエーテル部分、ハロゲン化亜鉛、マグネシウム部分、ジアゾニウム塩、および銅部分である。

例示的なα−ＧａｌＣｅｒ類似体（ａ−Ｇｌｃを有するＧＳＬ）を、ワクチン接種されている患者の免疫系を刺激することによって、ワクチンの効果を加速させ、増進させ、延長させ、かつ／または改変もしくは増強させる免疫アジュバントとして使用する。例示的な実装では、類似体Ｃ３４が、アジュバントとして使用される。本明細書において使用する場合、用語「ａｌｕｍアジュバント」は、免疫アジュバント活性を有するアルミニウム塩、例えば、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムを指す。これらの例示的な作用剤は、溶液中のタンパク質抗原を吸着させ、沈殿させることができる。このように得られた沈殿物は、播種の部位において形成されるワクチンデポーからの抗原の持続放出を促進することによってワクチン免疫原性を改善させる。さらに、本明細書において企図されるアジュバントはまた、適切な有機アジュバントおよび適切なビロソームを含むことができる。ある特定の実施形態では、例示的な有機アジュバントは、油をベースとするアジュバント、例えば、スクアレン、ＭＦ５９、ＱＳ−２１およびＡＳ０３を含むことができる。

本明細書において使用する場合、用語「抗腫瘍免疫療法活性剤」は、単独でおよび／または他の相乗作用作用剤と組み合わせて、腫瘍を阻害し、低減させ、かつ／または排除する、本開示のワクチンによって生じる抗体を指す。

α−ガラクトシル基（αＧａｌ）およびアシル鎖上のフェニル環を担持するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は、マウスおよびヒトの両方のインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞を刺激するのに、α−ガラクトシルセラミド（αＧａｌＣｅｒ）より強力であることが公知であった。マウスおよびヒトにおけるこれらの活性は、ｉＮＫＴ ＴＣＲおよびＣＤ１ｄ−ＧＳＬ複合体の間の三元相互作用の結合アビディティーに相関した。

本開示は、グルコース（αＧｌｃ）を有するＧＳＬが、サイトカイン／ケモカインの誘導および免疫細胞の展開／活性化において、ヒトについてαＧａｌを有するグルコース（αＧｌｃ）より強いが、マウスについてより弱いという予想外の発見に関する。ヒトにおけるグルコース（αＧｌｃ）およびαＧｌｃのＦ誘導体を有するＧＳＬ、ならびにこれらの免疫刺激性活性に対するこれらのインパクトは、本明細書において開示されている。各種についての三元相互作用の強度と関連する免疫刺激性効力は、本明細書に記載されている。本明細書において開示されているｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄスワッピングアッセイによって示されるように、種特異的応答に影響を与えるのはＣＤ１ｄではなくｉＮＫＴ ＴＣＲである。αＧｌｃを有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は、より強い三元相互作用を担持し、ヒトにおいてαＧａｌを有するＧＳＬと比較してよりＴｈ１偏向性免疫をトリガーした。マウスにおいて、αＧｌｃを有するＧＳＬは、αＧａｌを有するＧＳＬより刺激性でない。種特異的応答は、本明細書に記載のようなｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄスワッピングアッセイによって支持されるようなマウスおよびヒトｉＮＫＴ ＴＣＲの間の差異を反映する、種の間の三元複合体の示差的な結合アビディティーに起因する。

これらの新規な知見は、種における差異を示し、ヒト治療のためにより有効である、グリコシル基上に修飾を伴うＧＳＬの新規な設計を提供する。
化合物

本開示は、例示的な式（Ｉ）の免疫アジュバント化合物、

または薬学的に許容されるその塩に関し、式中、Ｒ^１は、−ＯＨまたはハロゲンであり、Ｒ^２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンであり、Ｒ^４およびＲ^５は、水素、ハロゲン、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、または任意選択で置換されているアシルからなる群から各々独立に選択され、ｎは、１〜１５（両端を含む）の整数であり、ｍは、１〜２０（両端を含む）の整数である。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２は、水素である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２は、ハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２は、Ｆである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２は、Ｃｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２は、Ｂｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^２は、Ｉである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、−ＯＨである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、ハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、Ｆである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、Ｃｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、Ｂｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、Ｉである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３は、ＯＨである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３は、水素である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３は、ハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３は、Ｆである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３は、Ｃｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３は、Ｂｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^３は、Ｉである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、−ＯＨであり、Ｒ^２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、−ＯＨであり、Ｒ^２は、水素であり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、−ＯＨであり、Ｒ^２は、水素であり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、−ＯＨであり、Ｒ^２は、ハロゲンであり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、ハロゲンであり、Ｒ^２は、水素またはハロゲンであり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、ハロゲンであり、Ｒ^２は、水素であり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、ハロゲンであり、Ｒ^２は、ハロゲンであり、Ｒ^３は、ＯＨ、水素またはハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^１は、ハロゲンであり、Ｒ^２は、ハロゲンであり、Ｒ^３は、水素またはハロゲンである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^４は、フェニルである。一部の実施形態では、Ｒ^４は、式（ＩＩ）の任意選択で置換されているフェニルであり、

式中、ｉ＝０、１、２、３、４、または５であり、Ｒ^６の各実例は、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているフェニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、または任意選択で置換されているアシルからなる群から独立に選択される。ある特定の実施形態では、ｉは、０である。ある特定の実施形態では、ｉは、１である。ある特定の実施形態では、ｉは、２である。ある特定の実施形態では、ｉは、３である。ある特定の実施形態では、ｉは、４である。ある特定の実施形態では、ｉは、５である。ある特定の実施形態では、ｉは、１であり、Ｒ^６は、ハロゲンである。ある特定の実施形態では、ｉは、１であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｉは、２であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｉは、３であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｉは、４であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｉは、５であり、Ｒ^４は、式のものである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６は、ハロゲンである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６は、Ｆである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６は、Ｃｌである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６は、Ｂｒである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^６は、Ｉである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^４は、任意選択で置換されているアリールである。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^４は、式（ＩＩＩ）の化合物、

[式中、ｊは、０、１、２、３、または４であり、ｋは、０、１、２、３、４、または５であり、Ｒ^７およびＲ^８の各実例は、水素、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているフェニル、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、または任意選択で置換されているアシルからなる群から独立に選択される]である。ある特定の実施形態では、ｋは、０である。ある特定の実施形態では、ｋは、１である。ある特定の実施形態では、ｋは、２である。ある特定の実施形態では、ｋは、３である。ある特定の実施形態では、ｋは、４である。ある特定の実施形態では、ｋは、５である。ある特定の実施形態では、ｋは、１であり、Ｒ^８は、ハロゲンである。ある特定の実施形態では、ｋは、１であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｋは、２であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｋは、３であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｋは、４であり、Ｒ^４は、式の１つである。

ある特定の実施形態では、ｋは、５であり、Ｒ^４は、式のものである。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、５〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１０〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１０である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１１である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１２である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１４である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｎは、１５である。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１〜２０（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、５〜２０（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、５〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１０〜１５（両端を含む）の整数である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１０である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１１である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１２である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１４である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、ｍは、１５である。

化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^７は、水素であり、Ｒ^８は、Ｆであり、ｋは、１、２または３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^７は、Ｆであり、Ｒ^８は、水素であり、ｊは、１、２または３である。化合物（Ｉ）の一部の実施形態では、Ｒ^７およびＲ^８の両方は、Ｆであり、ｋは、１、２または３であり、ｊは、１、２または３である。

式（Ｉ）の一部の実施形態では、提供された化合物は、下記の化合物の１つを含むか、または除外し（例えば、外し）得る。

医薬組成物

本開示は、本明細書に記載されている例示的な化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。本明細書において開示されている組成物は、本開示の読取りによって当業者が同定可能であるさらなる活性剤、キャリア、ビヒクル、賦形剤、または助剤と一緒に、医薬組成物または栄養補助食品組成物中に含むことができる。

医薬組成物は、少なくとも１種の薬学的に許容されるキャリアを好ましくは含む。このような医薬組成物において、本明細書において開示されている組成物は、「活性剤」とまた称される「活性化合物」を形成する。本明細書において使用する場合、言い回し「薬学的に許容されるキャリア」は、医薬投与と適合性である、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。補足の活性化合物をまた、組成物中に組み込むことができる。医薬組成物は、その意図する投与経路と適合性であるように製剤化される。投与経路の例は、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮的（局所的）、経粘膜的、および直腸投与を含む。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される溶液剤または懸濁剤は、下記の構成要素：無菌の希釈剤、例えば、注射のための水、食塩溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸、またはリン酸および浸透圧の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースを含むことができる。ｐＨは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムで調整することができる。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックでできたアンプル剤、使い捨て注射器、または複数回用量バイアル中に封入することができる。

被験体は、本明細書において使用する場合、ヒトおよびヒト以外の霊長類（例えば、ゴリラ、マカク、マーモセット）、家畜動物（例えば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ロバ、およびブタ）、ペット動物（例えば、イヌ、ネコ）、実験室試験用動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、ハムスター）、捕らえられた野生動物（例えば、キツネ、シカ）、ならびに本開示の作用剤から利益を得ることができる任意の他の生物を指す。上記の作用剤から利益を得ることができる動物のタイプに対する限定は存在しない。被験体は、ヒトまたはヒトではない生物であるかに関わらず、患者、個体、動物、宿主、またはレシピエントと称し得る。

注射可能である使用に適した医薬組成物は、無菌の注射可能な溶液剤または分散剤の即時調製のための無菌水溶液（水溶性）または分散物および無菌の粉末を含む。静脈内投与のために、適切なキャリアは、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての場合において、組成物は無菌であるべきであり、容易なシリンジ注入性が存在する程度まで流動性であるべきである。組成物は製造および貯蔵の条件下で安定的であるべきであり、微小生物、例えば、細菌および真菌の汚染作用から保存されるべきである。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびに適切なこれらの混合物を含有する、溶媒または分散媒でよい。適当な流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用によって、分散剤の場合は、必要とされる粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微小生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合において、組成物中で、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール（manitol）、ソルビトール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射可能な組成物の持続性吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含むことによってもたらすことができる。
本明細書に記載されている組成物の使用

本発明は、免疫応答を刺激することを必要とするヒト被験体において免疫応答を刺激するのに有用な組成物を提供し、方法は、被験体に治療上有効な量の本明細書において開示されている組成物を投与することを含む。

本明細書に記載されている組成物をまた使用して、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高めることを必要とするヒト被験体においてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高めることができ、方法は、それを必要とする被験体に治療上有効な量の薬学的に許容される組成物を投与することを含み、この組成物は、本明細書において開示されている例示的な化合物を含む。

本明細書に記載されている例示的な組成物をまた使用して、サイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激することを必要とするヒト被験体においてサイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激することができ、方法は、被験体に治療上有効な量の薬学的に許容される組成物を投与することを含み、この組成物は、サイトカイン／ケモカイン産生を増加させるのに十分な量の本明細書において開示されている化合物を含む。

活性剤の「有効」量または「治療的に有効な」量とは、有益な効果を実現する活性剤の無毒性ではあるが、十分な量を意味する。「有効」である活性剤の量は、個体の年齢および全身状態、特定の活性剤（複数可）などによって被験体毎に変動する。他に示さない限り、本明細書において使用する場合、用語「治療的に有効な」量は、すなわち、有害な状態の処置にとって有効である量に加えて、有害な状態の予防および／または有害な状態の寛解にとって有効である量を包含することを意図する。

本明細書に定義されているように、治療上有効な量の活性化合物（すなわち、有効投与量）は、約０．００１〜１００ｇ／ｋｇ体重の範囲でよく、または過度の実験なしに当業者に明白であり、理解される他の範囲でよい。当業者は、これらに限定されないが、疾患または障害の重症度、従前の処置、被験体の身体全体の健康または年齢、および存在する他の疾患を含む特定の要因が、被験体を効果的に処置するのに必要とされる投与量およびタイミングに影響を与えることができることを認識する。

有害な状態は、その用語が本明細書において使用されるように、個体において頻繁に見られる「正常」状態、または言及された疾患と関連してもよいか、関連しなくてもよい病的状態であってもよい。

本明細書において使用する場合、用語「脂質」は、細胞シグナル伝達経路に関与する任意の脂溶性（親油性）分子を指す。

本明細書において使用する場合、用語「糖脂質」は、細胞認識のためのマーカーとしての役割を果たす炭水化物付着脂質を指す。

別の態様によれば、１つまたは複数のパーツのキットを当業者が想定することができ、パーツのキットは、本明細書において開示されている方法の少なくとも１つを行い、パーツのキットは、２種またはそれ超の組成物を含み、組成物は、単独でまたは組み合わせて、上記方法の少なくとも１つによる有効な量の本明細書において開示されている組成物を含む。

キットは、活性剤、生物学的事象の識別子、または本開示の読取りによって当業者が同定可能な他の化合物を含む組成物をまたおそらく含む。キットはまた、有効な量の本明細書において開示されている組成物または細胞系を含む少なくとも１種の組成物を含むことができる。パーツのキットの組成物および細胞系を使用して、当業者が同定可能である手順によって本明細書において開示されている少なくとも１つの方法を行う。

本明細書において使用する場合、用語「特異的結合」は、結合ペア（例えば、抗体および抗原）の間の相互作用を指す。様々な場合において、特異的結合は、約１０^ー６モル／リットル、約１０^ー７モル／リットル、または約１０^ー８モル／リットル、またはそれ未満の親和性定数によって実施することができる。

本発明を読み取ることによって当業者であれば明らかなように、本明細書において記載および例証した個々の実施形態のそれぞれは、別個の構成要素およびフィーチャを有し、これらは、本発明の範囲または精神から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のいずれかのフィーチャから容易に分離し、これらと合わせてもよい。任意の記載された方法は、記載された事象の順序で、または論理的に可能である任意の他の順序で行うことができる。

一態様では、本明細書に記載されている免疫組成物は、非経口的に投与することができる（例えば、静脈内注射、皮下注射または筋内注射）。代わりに、坐剤および経口製剤を含む他の投与方法は、望ましくあり得る。坐剤について、結合剤およびキャリアは、例えば、ポリアルキレン（polyalkalene）グリコールまたはトリグリセリドを含み得る。経口製剤は、通常用いられるインシピエント（incipients）、例えば、医薬グレードのサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含み得る。これらの組成物は、溶液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、持続放出製剤または散剤の形態をとり、１０〜９５％の本明細書に記載されている免疫組成物を含有する。

免疫組成物は、投与製剤と適合性である様式で、および治療的に有効であり、保護的であり、免疫原性である量で投与される。投与される量は、例えば、個体の免疫系が、抗体を合成し、必要に応じて、細胞媒介性免疫応答を生じさせる能力を含めて、処置される被験体によって決まる。投与されることが必要である活性成分の正確な量は、実務家の判断によって決まる。しかし、適切な投与量範囲は、当業者が容易に決定可能である。初回投与およびブースター用量についての適切なレジームはまた可変であるが、初回投与、それに続く引き続く投与を含み得る。ワクチンの投与量はまた、投与経路によって決まってもよく、宿主のサイズによって変化する。

本発明の免疫組成物をまた使用して、抗体の産生のために動物において抗体を生じさせることができ、これはがんの処置および診断の両方において使用することができる。動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、またはウマ）においてモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体およびその断片を作製する方法は、当技術分野で周知である。例えば、HarlowおよびLane、（１９８８年）Antibodies:A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory、New Yorkを参照されたい。用語「抗体」は、インタクトな免疫グロブリン分子、ならびにその断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖抗体）、およびｄＡｂ（ドメイン抗体；Wardら（１９８９年）、Nature、３４１巻、５４４頁）を含む。

別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。矛盾がある場合は、定義を含む本文書が優先する。本明細書に記載されているものと同様または同等である任意の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料をこれから記載する。本明細書において特に記述されている全ての公開資料および特許は、本発明に関連して使用し得る公開資料において報告されている化学物質、細胞系、ベクター、動物、機器、統計解析および方法論を記載および開示することを含めて、全ての目的のために参照により組み込まれている。本明細書において引用されている全ての参照文献は、当技術分野における技量のレベルを示すものとして見なされる。本発明が、先行発明に基づいてこのような開示に先行する資格がないことを本明細書において何ものも認めるとは解釈されない。

本材料および方法を記載する前に、本発明は記載した特定の方法論、プロトコール、材料、および試薬に限定されないことが理解される。それはこれらが変動し得るためである。本明細書において使用する用語法は、単に特定の実施形態を記載する目的のためであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことをまた理解すべきである。

ある範囲の値が提供されている場合、その範囲の上限および下限の間の、文脈によって明らかにそれ以外のことの指示がない限り下限の単位の１０分の１までの、それぞれの間にある値、およびその記述した範囲内の任意の他の記述した値または間にある値は、本発明内に包含されることが理解される。これらのより小さな範囲の上限および下限は、このより小さな範囲中に独立に含まれてもよく、また本発明内に包含されるが、記述した範囲内の特に除外した限度が存在することがある。記述した範囲が限度の１つまたは両方を含む場合、これらのいずれかまたは両方を除外した範囲が含まれる。

下記の実施例は、当業者に、完全な発明、および本発明による実施形態をどのように作製および使用するかの記載を実現するために提供し、本発明者らが本発明者らの発見であると見なすものの範囲を限定することを意図しない。使用した数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確実にするために努力がなされてきているが、いくつかの実験誤差および偏差は説明されるはずである。他に示さない限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は、大気圧またはほぼ大気圧である。

概要：全ての試薬用化学物質は、試薬グレードとして購入し、それ以上精製することなく使用した。無水溶媒、例えば、ジクロロメタン（ＣＨ_２Ｃｌ_２）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、メタノール（ＭｅＯＨ）、ピリジンは、Ａｃｒｏｓから購入した。ＨＰＬＣグレード溶媒であるクロロホルム（ＣＨＣｌ_３）およびメタノールは、Ｍｅｒｃｋから購入した。グリコシル化のための分子篩４Å（ＭＳ４Å）は、Ａｃｒｏｓから購入し、フレームによって活性化した。反応物を、ＥＭシリカゲル６０Ｆ２５４プレートにおける分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターし、ＵＶ（２５４ｎｍ）下で可視化し、かつ／または酸性モリブデン酸セリウムアンモニウムまたはニンヒドリンで染色した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、シリカゲル６０Ｇｅｄｕｒａｎ（４０〜６３μｍ、Ｍｅｒｃｋ）上で行った。最終生成物の精製のためのＢｉｏｇｅｌ ＬＨ２０は、Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ｔｏｐｓｐｉｎ−６００（６００ＭＨｚ）分光計で２０℃にて記録した。化学シフト（δｐｐｍ）は、ＣＤＣｌ_３（δ＝７．２４ｐｐｍ）、ＭｅＯＤ（δ＝３．３１ｐｐｍ）、およびピリジン−ｄ^５（δ＝７．５８ｐｐｍ）の内部標準シグナルによって割り当てた。^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ｔｏｐｓｐｉｎ−６００（１５０ＭＨｚ）分光計上で得て、較正のためにＣＤＣｌ_３（δ＝７７．２３ｐｐｍ）、ＭｅＯＤ（δ＝４９．１５ｐｐｍ）のシグナルを使用してδｐｐｍスケールで報告した。結合定数（Ｊ）は、Ｈｚで報告する。スプリッティングパターンは、下記の略語を使用することによって記載する。ｓ、一重線；ｄ、二重線；ｔ、三重線；ｄｄ、二重線の二重線；ｍ、多重線。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、この順序：化学シフト；多重度；プロトンの数（複数可）；結合定数（複数可）で報告する。

化学合成

本開示の特定の実施形態では、組成物および使用の方法は、下記の化合物、および化合物を作製／使用する方法の任意の１つまたは複数を含むか、または除外することができる。ある特定の実施形態では、α−グルコース（α−Ｇｌｃ）ならびに４位および／または６位においてＦを有するα−Ｇｌｃの誘導体を担持するＧＳＬは、含まれるか、または除外される。

グルコシルドナー８の合成

化合物２：１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノース１（４０ｇ、１０２．５ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（２００ｍＬ）に、ｐ−トルエンチオール（１５．４ｇ、１２３ｍｍｏｌ）およびＢＦ_３ＯＥｔ_２（１５．４ｍＬ、１２３ｍｍｏｌ）を０℃にて添加し、反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。このように得られた溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで直接抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。それに続くＡｃＯＥｔ−ヘキサンの溶液中の再結晶化によって、２を白色の固体（３２．６ｇ、７０％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ 7.36 (2H, d, J = 7.2 Hz), 7.10 (2H, d, J = 7.8 Hz), 5.18 (1H, t, J = 9.0 Hz), 5.00 (1H, t, J = 9.6 Hz), 4.91 (1H, t, J = 9.0 Hz), 4.61 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.14-4.20 (2H, m), 3.67 (1H, s), 2.33 (3H, s), 2.07 (3H, s), 2.06 (3H, s,), 1.99 (3H, s), 1.96 (3H, s). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ 170.78, 170.40, 169.59, 169.45, 139.00, 134.04, 129.88, 127.73, 86.03, 75.94, 74.21, 70.10, 68.38, 62.32, 21.39, 20.97, 20.94, 20.79, 20.78. HRMS (ESI-TOF) for C₂₁H₂₆O₉SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 477.1190, found 477.1201。

化合物３：２（３２．６ｇ、７１．８ｍｍｏｌ）の乾燥ＭｅＯＨ溶液（５００ｍＬ）に、触媒量のナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）を添加し、周囲温度にて３時間撹拌した。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０を添加することによって反応物を中和し、濾過し、このように得られた溶液を濃縮乾燥させ、３（２０．３ｇ、９９％）を白色の固体として得て、これを、それ以上精製することなく次の反応のために直接使用した。¹H NMR (MeOD, 600 MHz) δ 7.46 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.12 (2H, d, J = 7.8 Hz), 4.50 (1H, d, J = 9.6 Hz), 3.85 (1H, d, J = 12.6, 1.8 Hz), 3.66 (1H, dd, J = 12.0, 5.4 Hz), 3.36 (1H, t, J = 9.0 Hz), 3.24-3.28 (2H, m), 3.17 (1H, t, J = 9.0 Hz), 2.13 (3H, s). ¹³C NMR (MeOD, 150 MHz) δ 138.90, 133.66, 131.33, 130.67, 89.79, 82.16, 79.81, 73.82, 71.50, 63.03, 21.24. HRMS (ESI-TOF) for C₁₃H₁₈O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 309.0767, found 309.0772。

化合物４：３（１１．１ｇ、３８．８ｍｍｏｌ）の乾燥ピリジン溶液（４８ｍＬ）に、トリフェニルメチルクロリド（１３．５ｇ、４６．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ、１：１：０．１）によって精製し、４（１２．３ｇ、６０％）を白色の粉末として得た。¹H NMR (MeOD, 600 MHz) δ 7.56 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.47 (6H, d, J = 7.8 Hz), 7.27 (6H, t, J = 7.2 Hz), 7.22 (3H, t, J = 7.2 Hz), 7.05 (2H, d, J = 8.4 Hz), 4.58 (1H, d, J = 9.6 Hz), 3.40-3.43 (2H, m), 3.31 (1H, m), 3.23-3.27 (3H, m), 2.27 (3H, s). ¹³C NMR (MeOD, 150 MHz) δ 145.69, 138.71, 133.62, 131.51, 130.77, 130.16, 128.87, 128.13, 89.46, 87.88, 80.98, 80.02, 73.93, 71.85, 65.14, 21.34. HRMS (ESI-TOF) for C₃₂H₃₂O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 551.1863, found 551.1876。

化合物５：４（２１．１ｇ、３９．９ｍｍｏｌ）の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（２００ｍＬ）に、水素化ナトリウム（鉱油中６０％）（５．８ｇ、１４３．６ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。反応物を１時間撹拌し、それに続いて臭化ベンジル（１７．２ｍＬ、１４３．６ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、アルゴン下で周囲温度にて１６時間撹拌した。反応物をＭｅＯＨによってクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、９：１）によって精製し、５（２２．３ｇ、７０％）を白色の粉末として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ 7.60 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.50 (6H, d, J = 7.8 Hz), 7.42 (2H, d, J = 7.2 Hz), 7.34 (2H, t, J = 7.2 Hz), 7.24-7.32 (12H, m), 7.18-7.23 (4H, m), 7.14-7.17 (2H, m), 7.05 (2H, d, J = 7.8 Hz), 6.82 (2H, d, J = 7.8 Hz), 4.91 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.84 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.80 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.74 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.64 (2H, dd, J = 9.6, 5.4 Hz), 4.30 (1H, d, J = 10.2 Hz), 3.74 (1H, t, J = 9.6 Hz), 3.64 (1H, t, J = 8.4 Hz), 3.60 (1H, d, J = 9.6 Hz), 3.55 (1H, t, J = 9.6 Hz), 3.42 (1H, m), 3.25 (1H, dd, J = 10.2, 4.2 Hz), 2.30 (3H, s). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ 144.14, 138.57, 138.43, 137.94, 137.90, 133.01, 130.10, 129.96, 129.07, 128.73, 128.67, 128.45, 128.42, 128.31, 128.20, 128.16, 128.15, 128.07, 128.01, 127.89, 127.20, 87.90, 87.07, 86.70, 80.96, 79.04, 78.04, 76.25, 75.61, 75.21, 62.68, 45.18, 21.37. HRMS (ESI-TOF) for C₅₃H₅₀O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 821.3271, found 821.3310。

化合物６：５（３０．０ｇ、３７．５ｍｍｏｌ）の酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ、４：１）溶液（１０６５ｍＬ）に、７５℃にて３時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、２：１）によって精製し、６（１６．７ｇ、８０％）を白色の固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ 7.37-7.41 (4H, m), 7.25-7.33 (13H, m), 7.10 (2H, d, J = 7.8 Hz), 4.91 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.89 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.84 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.83 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.74 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.62 (1H, d, J = 10.2 Hz), 3.83-3.86 (1H, m), 3.65-3.71 (2H, m), 3.54 (1H, t, J = 9.6 Hz), 3.44 (1H, t, J = 9.0 Hz), 3.33-3.36 (1H, m), 2.31 (3H, s), 1.87 (1H, t, J = 6.6 Hz). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ 138.51, 138.24, 138.14, 138.02, 132.85, 129.99, 129.63, 128.71, 128.66, 128.63, 128.40, 128.22, 128.16, 128.09, 127.98, 127.94, 87.99, 86.75, 81.27, 79.43, 77.81, 76.01, 75.69, 75.30, 62.34, 21.31. HRMS (ESI-TOF) for C₃₄H₃₆O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 579.2176, found 579.2188。

化合物７：６（５．０ｇ、９．０ｍｍｏｌ）の乾燥ピリジン溶液（１８ｍＬ）に、無水酢酸（１．０ｍＬ）を添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、５：１）によって精製し、７（５．３ｇ、９９％）を白色の固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ 7.44 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.38 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.26-7.34 (11H, m), 7.22-7.24 (2H, m), 7.08 (2H, d, J = 7.8 Hz), 4.91 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.90 (1H, d, J = 11.4 Hz), 4.83 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.82 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.71 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.57 (1H, d, J = 9.6 Hz), 4.55 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.34 (1H, d, J = 12.0 Hz), 4.17-4.20 (1H, m), 3.67-3.70 (1H, m), 3.49-3.50 (2H, m), 3.45 (1H, t, J = 9.6 Hz), 2.32 (3H, s), 2.03 (3H, s). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ 170.90, 138.44, 138.16, 138.13, 137.81, 132.98, 129.85, 128.76, 128.72, 128.68, 128.45, 128.30, 128.26, 128.15, 128.02, 88.00, 86.93, 81.07, 77.74, 76.08, 75.68, 75.32, 63.51, 21.35, 21.09. HRMS (ESI-TOF) for C₃₆H₃₈O₆SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 621.2281, found 621.2301。

化合物８：７（５．５ｇ、９．２ｍｍｏｌ）のアセトン水溶液（アセトン：Ｈ_２Ｏ、４：１）溶液（１２９ｍＬ）に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．７ｇ、９．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を周囲温度にて１時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、チオ硫酸ナトリウム（ＮａＳ_２Ｏ_３）水溶液、ブラインで抽出し、次いで、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、２：１）によって精製し、８（３．１ｇ、６９％、α／β＝１：１）を白色の固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ 7.24-7.35 (30H, m), 5.18 (1H, t, J = 3.0 Hz), 4.96 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.94 (2H, d, J = 10.8 Hz), 4.86 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.85 (1H, d, J = 10.2 Hz), 4.84 ( 1H, d, J = 10.2 Hz), 4.80 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.76 (2H, d, J = 11.4 Hz), 4.71 (1H, dd, J = 7.2, 5.4 Hz), 4.68 (1H, d, J = 12.0 Hz), 4.55 (2H, d, J = 10.8 Hz), 4.34 (1H, dd, J = 12.0, 1.2 Hz), 4.23-4.28 (2H, m), 4.17 (1H, dd, J = 12.0, 4.8 Hz), 4.06-4.09 (1H, m), 3.98 (1H, t, J = 9.6 Hz), 3.67 (1H, t, J = 8.4 Hz), 3.50-3.56 (3H, m), 3.48 (1H, t, J = 9.0 Hz), 3.37-3.40 (2H, m), 3.01 (1H, d, J = 3.0 Hz), 2.02 (3H, s), 2.01 (3H, s). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ 138.64, 138.49, 138.39, 137.96, 137.89, 137.81, 128.75, 128.70, 128.68, 128.65, 128.63, 128.33, 128.29, 128.27, 128.22, 128.20, 128.14, 128.06, 127.99, 127.93, 97.62, 91.33, 84.71, 83.20, 81.82, 80.18, 77.39, 75.96, 75.92, 75.23, 75.21, 74.98, 73.47, 73.19, 69.02, 63.35, 63.27, 21.06. HRMS (ESI-TOF) for C₂₉H₃₂O₇Na⁺ [M + Na]⁺ calcd 515.2040, found 515.2052。

アクセプター１８の合成

化合物１３：Ｄ−リキソース１２（２０ｇ、１３３ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（２００ｍＬ）に、２−メトキシプロペン（１５ｍＬ、１６０ｍｍｏｌ）およびショウノウ−１０−スルホン酸（ＣＳＡ）（３ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）を０℃にて添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶液をトリエチルアミン（Ｅｔ_３Ｎ）でクエンチし、蒸発乾固させ、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ、１：１：０．２）によって直接精製し、１３（２１ｇ、８３％）を白色の固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 5.22 (s, 1H), 4.78 (dd, 1H, J = 6.0, 3.6 Hz), 4.53 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 4.17 (m, 1H, J = 6.6, 4.8 Hz), 3.82 (dd, 1H, J = 11.7, 4.8 Hz), 3.71 (dd, 1H, J = 11.7, 6.6 Hz), 1.40 (s, 3H), 1.29 (s, 3H). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 113.62, 102.27, 87.42, 81.73, 81.35, 61.37, 26.46, 25.02. HRMS (ESI-TOF) for C₈H₁₄O₅Na⁺ [M+Na]⁺ calcd 213.0733, found 213.0751。

化合物１４：撹拌した１３（２１ｇ、１１０ｍｍｏｌ）の乾燥ピリジン溶液（１４０ｍＬ）に、トリフェニルメチルクロリド（３７．８ｇ、１３２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を６０℃にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶液を濃縮乾燥し、残渣を酢酸エチル（ＡｃＯＥｔ）で溶解し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ_４）上で乾燥させ、次いで、蒸発させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、１：２）によって精製し、１４（３６．５ｇ、７７％）を白色の粉末として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 7.46 (m, 6H), 7.27 (m, 6H), 7.21 (m, 3H), 5.36 (d, 1H, J = 1.8 Hz), 4.73 (dd, 1H, J = 6.0, 4.8 Hz), 4.57 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 4.31 (ddd, 1H, J = 4.8, 4.8, 7.8 Hz), 3.41 (dd, 1H, J = 9.6, 4.8 Hz), 3.37 (dd, 1H, J = 9.6, 7.8 Hz), 2.41 (m, 1H, J = 1.8 Hz), 1.27 (s, 3H), 1.25 (s, 3H). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 143.95, 128.82, 127.75, 126.95, 112.48, 101.22, 86.85, 85.41, 80.11, 79.70, 61.85, 26.02, 25.09. HRMS (ESI-TOF) for C₂₇H₂₈O₅Na⁺ [M+Na]⁺ calcd 455.1829, found 455.1833。

化合物１５：撹拌した１４（８．４ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）溶液（４０ｍＬ）に、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＨＭＤＳ）（ＴＨＦ中の２０ｍＬの１Ｍ溶液、２０ｍｍｏｌ）を０℃にて添加し、反応物をアルゴン下で１時間撹拌した。トルエン中で５日間還流させた１−ブロモトリデカン（Ｃ_１３Ｈ_２７Ｂｒ）およびトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ_３）から調製した撹拌したウィティッヒ試薬Ｃ_１３Ｈ_２７ＰＰｈ_３Ｂｒ（２０．１ｇ、３８．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（８３ｍＬ）溶液に、ＬＨＭＤＳ（ＴＨＦ中の４０ｍＬの１Ｍ溶液、４０ｍｍｏｌ）を０℃にて添加し、反応物をアルゴン下で１時間撹拌し、明るいオレンジ色のイリドを生成した。１４の溶液を、イリドに０℃にて滴下で添加し、反応物を周囲温度に温め、アルゴン下で９時間撹拌した。このように得られた溶液をＭｅＯＨでクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏおよびブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、濃縮した。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、１５：１）によって精製し、１５（８．７ｇ、７５％）を無色の油として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 7.40-7.45 (m, 9H), 7.25-7.30 (m, 9H), 7.19-7.23 (m, 5H), 5.49-5.57 (m, 3H, J = 6.6 Hz), 4.90 (t, 1H, J = 6.6 Hz), 4.43 (t, 1.5H, J = 6.6 Hz), 4.25 (dd, 0.5H, J = 6.6, 4.6 Hz), 4.20 (dd, 1H, J = 6.6, 4.5 Hz), 3.74 (m, 1H), 3.68 (m, 0.5H), 3.22 (dd, 0.5H, J = 9.6, 5.0 Hz), 3.15 (dd, 1H, J = 9.3, 5.1 Hz), 3.10 (m, 1.5H), 2.37 (m, 1.5H), 1.90-2.00 (m, 2H), 1.75 (m, 1H), 1.47 (m, 5H), 1.37 (m, 5H), 1.19-1.33 (m, 35H), 0.86 (t, 5H, J = 7.1 Hz). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 144.07, 137.58, 135.56, 128.90, 128.02, 127.24, 125.41, 125.15, 108.58, 108.50, 86.90, 86.84, 79.14, 77.86, 77.74, 73.21, 69.51, 69.43, 65.19, 64.84, 32.45, 32.13, 29.89, 29.86, 29.81, 29.71, 29.69, 29.57, 29.50, 29.47, 29.11, 27.80, 27.59, 27.55, 25.26, 22.91, 14.35. HRMS (ESI-TOF) for C₄₀H₅₄O₄Na⁺ [M+Na]⁺ calcd 621.3914, found 621.3919。

化合物１６：化合物１６を、触媒量の水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）を含有する１０ｍＬの無水ＭｅＯＨ中の１５（１ｇ、１．７ｍｍｏｌ）の接触水素化から調製した。懸濁液をＨ_２雰囲気中で４時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、触媒を除去し、蒸発乾固させ、次いで、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、２０：１）によって精製し、１６（９０３ｍｇ、９０％）を白色の固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 7.43 (m, 6H), 7.27 (m, 6H), 7.21 (m, 3H), 4.12 (dd, 1H, J = 6.4, 3.7 Hz), 4.05 (ddd, 1H, J = 9.9, 6.4, 3.6 Hz), 3.69 (m, 1H, J = 6.0, 6.0, 5.8, 3.7 Hz), 3.18 (m, 2H, J = 9.5, 9.5, 6.0, 5.8 Hz), 2.29 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 1.60-1.67 (m, 1H), 1.45-1.49 (m, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.34-1.38 (m, 1H), 1.33 (s, 3H), 1.20-1.30 (m, 23H), 0.86 (t, 3H, J = 7.2 Hz). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 144.09, 128.91, 128.05, 127.26, 107.95, 87.02, 77.67, 69.15, 65.43, 32.15, 29.92, 29.88, 29.83, 29.77, 29.58, 27.60, 26.99, 25.43, 22.92, 14.36. HRMS (ESI-TOF) for C₄₀H₅₆O₄Na⁺ [M+Na]⁺ calcd 623.4071, found 623.4112。

化合物１７：１６（５ｇ、８．３ｍｍｏｌ）および４Å分子篩（１ｇ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（３９ｍＬ）に、２，６−ルチジン（３．５ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を周囲温度にて添加した。溶液を−４５℃に冷却したとき、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（Ｔｆ_２Ｏ）（２．６７ｍＬ、１５．９ｍｍｏｌ）を滴下で添加し、反応物をアルゴン下で１時間撹拌した。それに続くテトラメチルグアニジニウムアジド（ＴＭＧＡ）（３．９ｇ、２５ｍｍｏｌ）の添加を行い、反応物を周囲温度に温め、アルゴン下で１６時間撹拌した。セライト５４５を通してこのように得られた溶液を濾過し、４Å分子篩を除去し、残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、Ｈ_２Ｏおよびブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、２０：１）によって単純に精製し、不純物の大部分を除去し、次のステップのために直接使用した。

化合物１８：１７の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（２０ｍＬ）に、テトラフルオロ酢酸／テトラフルオロ酢酸無水物（ＣＨ_２Ｃｌ_２中のＴＦＡ／ＴＦＡＡ、１．８Ｍ／１．８Ｍ）（１４ｍＬ、２４．９ｍｍｏｌ）を４℃にて添加し、アルゴン下で１５分間撹拌した。１０ｍＬのＥｔ_３Ｎを添加することによって反応物をクエンチし、次いで、２００ｍＬのメタノール（ＭｅＯＨ）中に注ぎ、さらに１５分間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで抽出し、次いで、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。有機層を真空中で濃縮し、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、１０：１）によって精製し、１８（２ｇ、２ステップ６３％）を黄色の油として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 4.16 (ddd, 1H, J = 9.7, 5.6, 3.6 Hz), 3.97 (dd, 1H, J = 11.6, 4.2 Hz), 3.94 (dd, 1H, J = 9.4, 5.6 Hz), 3.85 (dd, 1H, J = 11.6, 5.4 Hz), 3.45 (ddd, 1H, J = 9.4, 5.4, 4.2 Hz), 1.50-1.62 (m, 2H, J = 9.7, 3.6 Hz), 1.41 (s, 3H), 1.31-1.37 (m, 6H), 1.22-1.30 (m, 22H), 0.86 (t, 3H, J = 6.9, 6.9 Hz). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 108.66, 77.96, 76.91, 64.18, 61.39, 32.14, 29.90, 29.87, 29.81, 29.80, 29.75, 29.60, 29.58, 28.25, 26.74, 25.77, 22.91, 14.34. HRMS (ESI-TOF) for C₂₁H₄₁N₃O₃H⁺ [M + H]⁺ calcd 383.3148, found 356.3157 (-N₂)。

α−グルコシルセラミド類似体２４〜２６の合成

化合物１９：グルコシルドナー８（２．９ｇ、５．９ｍｍｏｌ）、ジメチルスルフィド（５９０μＬ、７．８ｍｍｏｌ）、４Å分子篩（５００ｍｇ）および２−クロロピリジン（１．８ｍＬ、１９．５ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（１５ｍＬ）に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（１ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を−４５℃にてアルゴン下で添加した。反応物を−４５℃にて２０分間、０℃にて２０分間および周囲温度にてさらに２０分間撹拌し、それに続いて５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中のアクセプター１８（１．５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、分子篩を除去した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、１０：１）によって精製し、１９を無色の油（２ｇ、６０％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz) δ 7.36 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.24-7.33 (13H, m), 4.97 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.86 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.85 (1H, d, J = 3.6 Hz), 4.78 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.72 (1H, d, J = 12.0 Hz), 4.68 (1H, d, J = 12.0 Hz), 4.54 (1H, d, J = 10.8 Hz), 4.21-4.26 (2H, m), 4.08-4.11 (1H, m), 4.02-4.07 (2H, m), 3.97 (1H, dd, J = 9.6, 5.4 Hz), 3.84-3.87 (1H, m), 3.60 (1H, dd, J = 10.8, 7.2 Hz), 3.54 (1H, dd, J = 9.6, 3.6 Hz), 3.44-3.48 (2H, m), 2.00 (3H, s), 1.57-1.61 (1H, m), 1.50-1.55 (1H, m), 1.37 (3H, s), 1.22-1.35 (27H, m), 0.86 (3H, t, J = 7.2 Hz). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz) δ 170.93, 138.82, 138.58, 138.05, 128.68, 128.61, 128.59, 128.34, 128.31, 128.13, 127.90, 127.86, 81.82, 80.26, 77.97, 77.30, 75.93, 75.61, 75.24, 72.92, 69.50, 69.34, 63.26, 59.99, 32.13, 29.90, 29.87, 29.82, 29.77, 29.57, 29.54, 28.42, 26.73, 25.89, 22.90, 21.03, 14.33. HRMS (ESI-TOF) for C₅₀H₇₁N₃O₉Na⁺ [M + Na]⁺ calcd 880.5083, found 880.5124。

化合物２０：１９（２６９ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のピリジン／Ｈ_２Ｏ溶液（１０：１、１２ｍＬ）に、トリフェニルホスフィン（１６５ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を４５℃にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。混合物を、従前の精製をせずに次のステップのために使用した。

化合物２１：化合物２０の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（３６ｍＬ）に、ヘキサコサン酸（１５９ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ_３Ｎ（８８μＬ）、ＥＤＣ（９０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）およびＨＢＴｕ（１７８ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、４：１）によって精製し、２１を白色の固体（２９３ｍｇ、７８％、２ステップ）として得た。

化合物２２：２１（２９３ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：１）溶液（５０ｍＬ）に、ナトリウムメトキシド（０．０２４ｍｍｏｌ）を添加し、アルゴン下で周囲温度にて６時間撹拌した。反応物をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０によって中和し、濾過した。溶媒の除去の後、残渣を、従前の精製をせずに次のステップのために使用した。

化合物２３：加水分解した化合物２２を酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ、４：１）（５０ｍＬ）に溶解し、６０℃にて１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ、１：１：０．１）によって精製した。

化合物２４

デアセトニド（deacetonide）誘導体２３を水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）（触媒）を含有する５０ｍＬの共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３、４：１）に溶解し、Ｈ_２雰囲気において１６時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、触媒を除去し、蒸発乾固させ、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３、１：９）によって精製し、ＬＨ２０（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３、１：１）で溶出し、２４（７２ｍｇ、３ステップについて３５％）を白色の固体として得た。¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz) δ: 4.83 (s, 1H), 4.15 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.84 (dd, J =10.8, 4.2 Hz, 1H), 3.76 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.64-3.70 (m, 2H), 3.60 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.51-3.57 (m, 3H), 3.41 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.31 (m, 1H), 2.17 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.50-1.65 (m, 4H), 1.19-1.39 (m, 68H), 0.85 (t, J = 6.6 Hz, 6H). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz) δ: 175.29, 100.06, 75.05, 74.58, 73.03, 72.75, 72.62, 71.01, 67.78, 62.22, 51.11, 37.07, 32.93, 32.62, 30.49, 30.45, 30.40, 30.35, 30.25, 30.13, 30.05, 30.04, 26.61, 26.58, 23.34, 14.47. HRMS (MALDI-TOF) for C₅₀H₉₉NO₉Na⁺ [M + Na]⁺ calcd 880.7223, found 880.7212。

化合物２５

化合物２５を、化合物２４と同様の手順を使用して合成した。¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz) δ: 7.09 (dd, J = 8.4, 5.4 Hz, 2H), 6.90 (t, J = 9.0 Hz, 2H), 4.82 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.14-4.18 (m, 1H), 3.84 (dd, J = 10.2, 4.8 Hz, 1H), 3.76 (dd, J = 12.0, 2.4 Hz, 1H), 3.64-3.68 (m, 2H), 3.60 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 3.51-3.56 (m, 3H), 3.41 (dd, J = 9.6, 3.6 Hz, 1H), 3.31 (m, 1H), 2.54 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.17 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 1.51-1.65 (m, 6H), 1.20-1.39 (m, 36H), 0.85 (t, J = 6.6 Hz, 3H). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz) δ: 175.30, 162.67, 161.07, 139.18, 139.16, 130.34, 130.29, 115.46, 115.32, 100.00, 75.03, 74.52, 72.97, 72.68, 72.55, 70.93, 67.71, 62.15, 51.11, 51.03, 37.06, 37.00, 35.72, 32.90, 32.58, 32.32, 30.45, 30.41, 30.35, 30.30, 30.22, 30.15, 30.11, 30.05, 30.00, 29.82, 26.57, 26.53, 23.29, 14.44. HRMS (ESI-TOF) for C₄₁H₇₂FNO₉Na⁺ [M + Na]⁺ calcd 764.5083, found 764.5066。

化合物２６

化合物２６を、化合物２４と同様の手順を使用して合成した。¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz) δ: 7.10 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.99 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.92 (m, 2H), 6.84 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.83 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 3.85 (dd, J = 10.2, 4.2 Hz, 1H), 3.77 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.67 (m, 2H), 3.61 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.55 (m, 3H), 3.42 (dd, J = 9.0, 3.0 Hz, 1H), 3.33 (m, 1H), 2.55 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.18 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 1.50-1.64 (m, 6H), 1.20-1.40 (m, 36H), 0.85 (t, J = 6.6 Hz, 3H). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz) δ: 175.34, 160.27, 158.67, 156.22, 154.38, 138.73, 130.34, 120.76, 120.71, 119.10, 116.87, 116.72, 100.15, 75.10, 74.66, 73.15, 72.85, 72.65, 71.09, 67.80, 62.26, 51.21, 37.09, 35.90, 32.95, 32.68, 32.44, 30.55, 30.51, 30.47, 30.40, 30.35, 30.28, 30.26, 30.17, 30.11, 30.00, 26.67, 26.63, 23.38, 14.47. HRMS (ESI-TOF) for C₄₇H₇₆FNO₁₀Na⁺ [M + H]⁺ calcd 834.5526, found 834.5538。

フッ素化ドナー３８の合成

化合物３２：１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノース１の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、４−メトキシフェノールおよびＢＦ_３ＯＥｔ_２を０℃にて添加し、反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。このように得られた溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで直接抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサンの溶液から再結晶させ、３２を白色の固体として得た。

化合物３３：３２の乾燥ＭｅＯＨ溶液に、触媒量のナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）を添加し、周囲温度にて３時間撹拌した。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０を添加することによって反応物を中和し、濾過し、このように得られた溶液を濃縮乾燥させ、３３を白色の固体として得て、これを、それ以上精製することなく次の反応のために直接使用した。

化合物３４：３３の乾燥共溶媒（ＤＭＦおよびＣＨ_３ＣＮ）溶液に、ベンズアルデヒド（benazldehyde）ジメチルアセタールおよび触媒量のナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）を添加した。反応物を周囲温度にて１６時間撹拌した。Ｅｔ_３Ｎを添加することによって溶液を中和し、濃縮した。混合物を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサンの溶液から再結晶させ、３４を白色の固体として得た。

化合物３５：３４の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液に、水素化ナトリウム（鉱油中６０％）を０℃にて添加した。反応物を１時間撹拌し、それに続いて臭化ベンジルを添加し、反応物をアルゴン下で周囲温度にて１６時間撹拌した。溶液をＭｅＯＨによってクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサンの溶液から再結晶させ、３５を白色の固体として得た。

化合物３６：３５のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、トリエチルシランおよびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を０℃にて添加した。反応物を周囲温度にて３時間撹拌した。溶液をＨ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで直接洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。生成物をＡｃＯＥｔ−ヘキサンの溶液から再結晶させ、３６を白色の固体として得た。

化合物３７：３６のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）を添加した。反応物を４５℃にて１６時間撹拌し、溶液をＨ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで直接洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物３７を無色の油として得た。

化合物３８：３７の乾燥共溶媒（トルエン、Ｈ_２ＯおよびＣＨ_３ＣＮ）溶液に、硝酸セリウムアンモニウム（ＣＡＮ）を添加した。反応物を周囲温度にて１０分間撹拌した。溶液を酢酸エチルで抽出し、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＨ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物３８を無色の油として得た。

フッ素化類似体４３の合成

化合物３９：ドナー３８、ジメチルスルフィド、４Å分子篩および２−クロロピリジンの無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物を−４５℃にてアルゴン下で添加した。反応物を−４５℃にて２０分間、０℃にて２０分間、および周囲温度にてさらに２０分間撹拌し、それに続いてＣＨ_２Ｃｌ_２中のアクセプター１８を添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、分子篩を除去した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、３９を得た。

化合物４０：３９のピリジン／Ｈ_２Ｏ（１０：１）溶液に、トリフェニルホスフィンを添加した。反応物を４５℃にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。混合物を、従前の精製をせずに次のステップのために使用した。

化合物４１：化合物４０の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルウンデカン酸、Ｅｔ_３Ｎ、ＥＤＣおよびＨＢＴｕを添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４１を得た。

化合物４２：化合物４１の酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ、４：１）溶液に、６０℃にて１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４２を得た。

化合物４３

デアセトニド誘導体４２を水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）（触媒）を含有する共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３、４：１）に溶解し、Ｈ_２雰囲気中で１６時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、触媒を除去し、蒸発乾固させ、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＬＨ２０で溶出させ、４３を得た。¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz) δ: 7.09 (1H, d, J = 8.4 Hz), 6.96-6.99 (2H, m), 6.91-6.92 (2H, m), 6.82-6.84 (2H, m), 4.84 (1H, t, J = 3.6 Hz), 4.25 (0.5H, t, J = 9.0 Hz), 4.15-4.18 (2H, m), 3.82-3.85 (2H, m), 3.75-3.77 (1H, m), 3.69-3.72 (1H, m), 3.64-3.68 (2H, m), 3.50-3.54 (2H, m), 3.44 (1H, dd, J = 9.6, 3.6 Hz), 2.54 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.17 (2H, t, J = 7.8 Hz), 1.50-1.64 (7H, m), 1.22-1.27 (41H, m), 0.84 (3H, t, J = 7.2 Hz). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz) δ: 175.28, 160.20, 158.61, 156.16, 154.30, 138.67, 130.28, 120.70, 120.64, 119.04, 116.81, 116.66, 99.94, 90.61, 89.41, 75.04, 72.72, 72.59, 72.56, 72.42, 72.37, 70.82, 70.66, 67.82, 61.21, 51.10, 37.05, 35.83, 32.91, 32.61, 32.36, 30.46, 30.43, 30.39, 30.33, 30.27, 30.19, 30.18, 30.09, 30.03, 29.92, 26.63, 26.55, 23.32, 14.41. HRMS (ESI-TOF) for C₄₇H₇₅F₂NO₉H⁺ [M + H]⁺ calcd 836.5498, found 836.5483。

フッ素化ドナー４８の合成

化合物４４：３２の乾燥ピリジン溶液に、トリフェニルメチルクロリドを添加した。反応物を６０℃にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４４を得た。

化合物４５：４４のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液に、水素化ナトリウム（鉱油中６０％）を０℃にて添加した。反応物を１時間撹拌し、それに続いて臭化ベンジルを添加し、アルゴン下で周囲温度にて１６時間撹拌した。反応物をＭｅＯＨによってクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４５を得た。

化合物４６：４５の酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ、４：１）溶液に、７５℃にて３時間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、４６を得た。

化合物４７：４６のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）を添加した。反応物を４５℃にて１６時間撹拌し、溶液をＨ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで直接洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物４７を得た。

化合物４８：４７の乾燥共溶媒（トルエン、Ｈ_２ＯおよびＣＨ_３ＣＮ）溶液に、硝酸セリウムアンモニウム（ＣＡＮ）を添加した。反応物を周囲温度にて１０分間撹拌した。溶液を酢酸エチルで抽出し、Ｈ_２Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびＨ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、化合物４８を無色の油として得た。

フッ素化類似体５３の合成

化合物４９：ドナー４８、ジメチルスルフィド、４Å分子篩および２−クロロピリジンの無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物を−４５℃にてアルゴン下で添加した。反応物を−４５℃にて２０分間、０℃にて２０分、および周囲温度にてさらに２０分撹拌し、それに続いてＣＨ_２Ｃｌ_２中のアクセプター１８を添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、分子篩を除去した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、溶液をＨ_２Ｏおよびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、１０：１）によって精製し、４９を得た。

化合物５０：４９のピリジン／Ｈ_２Ｏ（１０：１）溶液に、トリフェニルホスフィンを添加した。反応物を４５℃にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。混合物を、従前の精製をせずに次のステップのために使用した。

化合物５１：化合物５０の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液に、４−（４−フルオロフェノキシ）フェニルウンデカン酸、Ｅｔ_３Ｎ、ＥＤＣおよびＨＢＴｕを添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、５１を得た。

化合物５２：化合物５１の溶液を酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ、４：１）に溶解し、６０℃にて１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した。

化合物５３

デアセトニド誘導体５２を、水酸化パラジウム担持炭素（２０％Ｐｄ）（触媒）を含有する共溶媒（ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ_３、４：１）に溶解し、Ｈ_２雰囲気中で１６時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、触媒を除去し、蒸発乾固させ、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＬＨ２０で溶出させ、５３を得た。¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz) δ: 7.51 (0.6H, d, J = 8.4 Hz), 7.09-7.11 (2H, m), 6.97-7.00 (2H, m), 6.91-6.94 (2H, m), 6.83-6.85 (2H, m), 4.85 (1H, d, J = 3.6 Hz), 4.49-4.59 (2H, m), 4.15-4.18 (1H, m), 3.85 (1H, dd, J = 10.8, 4.8 Hz), 3.61-3.71 (3H, m), 3.52-3.58 (2H, m), 3.43 (1H, d, J = 9.6, 3.6 Hz), 3.36 (1H, t, J = 9.0 Hz), 2.55 (2H, t, J = 7.8 Hz), 2.18 (2H, t, J = 7.8 Hz), 1.51-1.64 (6H, m), 1.23-1.39 (39H, m), 0.85 (3H, t, J = 7.2 Hz). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz) δ: 175.06, 174.98, 159.99, 158.40, 155.94, 154.09, 154.08, 138.48, 130.09, 120.52, 120.46, 118.85, 116.63, 116.47, 100.02, 83.18, 82.04, 74.72, 74.31, 72.44, 72.38, 71.78, 71.67, 69.58, 69.54, 50.88, 50.79, 36.88, 36.83, 35.64, 32.64, 32.42, 32.17, 30.29, 30.24, 30.20, 30.14, 30.08, 30.01, 29.99, 29.91, 29.85, 29.74, 26.42, 26.38, 23.13, 14.26. HRMS (ESI-TOF) for C₄₇H₇₅F₂NO₉H⁺ [M + H]⁺ calcd 836.5483, found 836.5498。

α−ガラクトシルセラミド類似体の合成

α−ガラクトシルセラミド類似体の合成、試薬および条件は下記の通りであった。ａ、チオクレゾール、ＢＦ_３ＯＥｔ_２、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、１６時間。ｂ、ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、室温、３時間、２ステップ９０％。ｃ、トリフェニルメチルクロリド、ピリジン、６０℃、１６時間、６４％。ｄ、ＢｎＢｒ、ＮａＨ、ＤＭＦ、０℃、１６時間、７５％。ｅ、８０％ＡｃＯＨ、７０℃、３時間、９２％。ｆ、Ａｃ_２Ｏ、ピリジン、０℃、５時間、９９％。ｇ、ＮＢＳ、８０％アセトン、室温、１時間、７０％。ｈ、Ｔｆ_２Ｏ、２−ｃｌ−ｐｙｒ．、Ｍｅ_２Ｓ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−４５℃、１６時間、６０％。ｉ、ＰＰｈ_３、ｐｙｒ／Ｈ_２Ｏ、５０℃。ｊ、ＥＤＣ、ＨＢＴｕ、Ｅｔ_３Ｎ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、室温、１６時間、８０％。ｋ、ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、９０％。ｌ、８０％ＡｃＯＨ、７０℃、１６時間、５０％。ｍ、Ｈ_２、Ｐｄ（ＯＨ）_２、ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、７０％。

化合物５５：１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノース５４（４０ｇ、１０２．５ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（２００ｍＬ）に、ｐ−トルエンチオール（１５．４ｇ、１２３ｍｍｏｌ）およびＢＦ_３ＯＥｔ_２（１５．４ｍＬ、１２３ｍｍｏｌ）を０℃にて添加し、反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。このように得られた溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液、ブラインで直接抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。それに続くＡｃＯＥｔ−ヘキサンの溶液中の再結晶化によって、５５を白色の固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 7.39 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.10 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 5.38 (d, 1H, J = 3.3 Hz), 5.19 (t, 1H, J = 10.0, 10.0 Hz), 5.11 (dd, 1H, J = 10.0, 3.3 Hz), 4.62 (d, 1H, J = 10.0 Hz), 4.16 (dd, 1H, J = 11.3, 6.6 Hz), 4.09 (dd, 1H, J = 11.3, 6.6 Hz), 3.88 (t, 1H, J = 6.6, 6.6 Hz), 2.32 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.95 (s, 3H). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 170.62, 170.45, 170.32, 169.68, 138.70, 133.36, 129.86, 128.83, 87.20, 74.55, 72.24, 67.48, 67.41, 61.79, 21.38, 21.09, 20.90, 20.86, 20.82. HRMS (ESI-TOF) for C₂₁H₂₆O₉SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 477.1190, found 477.1236。

化合物５６：５５の乾燥ＭｅＯＨ溶液（５００ｍＬ）に、触媒量のナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）を添加し、周囲温度にて３時間撹拌した。Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ−１２０を添加することによって反応物を中和し、濾過し、このように得られた溶液を濃縮乾燥させ、５６（２６．３ｇ、２ステップ、９０％）を白色の固体として得て、これを次の反応のために、それ以上精製することなく直接使用した。¹H NMR (MeOD, 600 MHz): δ 7.45 (d, 2H, J = 8.1 Hz), 7.12 (d, 2H, J = 8.1 Hz), 4.50 (d, 1H, J = 9.6 Hz), 3.89 (d, 1H, J = 3.3 Hz), 3.75 (dd, 1H, J = 11.4, 6.0 Hz), 3.70 (dd, 1H, J = 11.4, 6.0 Hz), 3.57 (t, 1H, J = 9.6 Hz), 3.53 (t, 1H, J = 6.0 Hz), 3.48 (dd, 1H, J = 9.6, 3.3 Hz), 2.31 (s, 3H). ¹³C NMR (MeOD, 150 MHz): δ 138.55, 133.03, 132.26, 130.67, 90.83, 80.72, 76.49, 71.15, 70.55, 62.73, 21.22. HRMS (ESI-TOF) for C₁₃H₁₈O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 309.0767, found 309.0748。

化合物５７：５６（２６．３ｇ、９１．９ミリモル）の乾燥ピリジン溶液（１１３ｍＬ）に、トリフェニルメチルクロリド（３２ｇ、１１６ミリモル）を添加した。反応物を６０℃にてアルゴン下で１６時間撹拌した、溶媒の除去の後、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ、１：１：０．１）によって精製し、５７（３１．１ｇ、６４％）を白色の粉末として得た。¹H NMR (MeOD, 600 MHz): δ 7.53 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 7.45 (m, 6H), 7.27 (m, 6H), 7.22 (m, 6H), 7.04 (d, 2H, J = 7.5 Hz), 4.57 (d, 1H, J = 9.5 Hz), 3.69 (d, 1H, J = 3.3 Hz), 3.53-3.59 (m, 3H, J = 9.5, 8.4, 1.2 Hz), 3.42 (dd, 1H, J = 9.5, 3.3 Hz), 3.12 (dd, 1H, J = 8.4, 1.2 Hz), 2.26 (s, 3H). ¹³C NMR (MeOD, 150 MHz): δ 145.62, 138.26, 132.69, 132.62, 130.78, 130.10, 128.92, 128.18, 90.62, 88.14, 79.78, 76.43, 71.38, 71.30, 65.81, 21.29. HRMS (ESI-TOF) for C₃₂H₃₂O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 551.1863, found 551.1840。

化合物５８：５７（３１．１ｇ、５８．７ミリモル）の乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液（３００ｍＬ）に、水素化ナトリウム（鉱油中６０％）（８．５ｇ、２１１．３ミリモル）を４℃にて添加した。反応物を１時間撹拌し、それに続いて臭化ベンジル（２５．３ｍＬ、２１１．３ミリモル）を添加し、次いで、アルゴン下で周囲温度にて１６時間撹拌した。反応物をＭｅＯＨによってクエンチし、蒸発乾固させた。残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏおよびブラインで抽出し、次いで、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。溶媒の除去の後、混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、１０：１）によって精製し、５８（３５ｇ、７５％）を白色の粉末として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 7.42 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.37 (d, 8H, J = 7.8 Hz), 7.18-7.34 (m, 20H, J = 7.8 Hz), 7.11 (m, 2H), 6.92 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 4.83 (d, 1H, J = 11.4 Hz), 4.71-4.76 (m, 2H), 4.66-4.70 (m, 2H), 4.51 (d, 1H, J = 9.6 Hz), 4.48 (d, 1H, J = 11.4 Hz), 3.88 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 3.83 (t, 1H, J = 9.6 Hz), 3.54 (dd, 1H, J = 9.6, 6.3 Hz), 3.51 (dd, 1H, J = 9.6, 2.4 Hz), 3.30 (t, 1H, J = 6.3 Hz), 3.21 (dd, 1H, J = 9.6, 6.3 Hz), 2.25 (s, 3H). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 144.07, 138.89, 138.58, 138.56, 137.14, 131.92, 130.65, 129.73, 128.83, 128.61, 128.57, 128.53, 128.22, 128.04, 127.91, 127.89, 127.82, 127.43, 127.23, 88.13, 87.13, 84.38, 77.71, 77.50, 75.79, 74.32, 74.15, 73.07, 63.00, 21.29. HRMS (ESI-TOF) for C₅₃H₅₀O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 821.3271, found 821.3228。

化合物５９：５８（３１．５ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）の酢酸水溶液（ＡｃＯＨ：Ｈ_２Ｏ、４：１）溶液（１０００ｍＬ）に、７５℃にて２時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、２：１）によって精製し、５９（２０．２ｇ、９２％）を無色の油として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 7.43 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.38 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 7.26-7.35 (m, 13H), 7.02 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 4.95 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.82 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.75 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.74 (d, 1H, J = 9.6 Hz), 4.72 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.62 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.57 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 3.90 (t, 1H, J = 9.6 Hz), 3.82 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 3.81 (dd, 1H, J = 11.1, 6.6 Hz), 3.58 (dd, 1H, J = 9.6, 3.0 Hz), 3.50 (dd, 1H, J = 11.1, 6.6 Hz), 3.40 (t, 1H, J = 6.6 Hz), 2.87 (s, 3H). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 138.53, 138.49, 138.35, 137.63, 132.43, 130.20, 129.85, 128.72, 128.61, 128.57, 128.55, 128.43, 128.04, 128.02, 127.99, 127.86, 88.24, 84.49, 78.94, 77.74, 75.89, 74.33, 73.45, 73.26, 62.50, 21.32. HRMS (ESI-TOF) for C₃₄H₃₆O₅SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 579.2176, found 579.2193。

化合物６０：５９（３．１ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の乾燥ピリジン溶液（１０ｍＬ）に、無水酢酸（０．７ｍＬ、６．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、次いで、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、５：１）によって精製し、６０（３．３ｇ、９９％）を白色の固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600 MHz): δ 7.45 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.37 (d, 2H, J = 7.0 Hz), 7.26-7.35 (m, 13H), 7.00 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 4.96 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.81 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.75 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.74 (d, 1H, J = 9.3Hz), 4.72 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.61 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.54 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.24 (dd, 1H, J = 11.2, 6.5 Hz), 4.09 (dd, 1H, J = 11.2, 6.5 Hz), 3.89 (t, 1H, J = 9.3 Hz), 3.81 (d, 1H, J = 2.5 Hz), 3.57 (dd, 1H, J = 9.3, 2.5 Hz), 3.55 (t, 1H, J = 6.5 Hz), 2.28 (s, 3H), 1.97 (s, 3H). ¹³C NMR (CDCl₃, 150 MHz): δ 170.84, 138.46, 138.33, 137.60, 132.57, 130.31, 129.73, 128.70, 128.57, 128.46, 128.33, 128.00, 127.89, 127.80, 88.32, 84.40, 77.55, 76.14, 75.90, 74.43, 73.47, 73.32, 63.63, 21.32, 21.05. HRMS (ESI-TOF) for C₃₆H₃₈O₆SNa⁺ [M + Na]⁺ calcd 621.2281, found 621.2322。

化合物６１：６０（１０２ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のアセトン水溶液（アセトン：Ｈ_２Ｏ、４：１）溶液（２ｍＬ）に、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を周囲温度にて１時間撹拌した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、チオ硫酸ナトリウム（ＮａＳ_２Ｏ_３）水溶液、ブラインで抽出し、次いで、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、２：１）によって精製し、６１（６４ｍｇ、７６％）を白色の固体として得た。

化合物６２：ガラクトシルドナー６１（５．８ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）、ジメチルスルフィド（１．１ｍＬ、１５．６ｍｍｏｌ）、４Å分子篩（１ｇ）および２−クロロピリジン（３．６ｍＬ、３９ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（３０ｍＬ）に、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（２ｍＬ、１１．９ｍｍｏｌ）を−４５℃にてアルゴン下で添加した。反応物を−４５℃にて２０分間、０℃にて２０分間、および周囲温度にてさらに２０分間撹拌し、それに続いて１０ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中のガラクトシルアクセプター１８の添加を行った。反応物を周囲温度にてアルゴン下で１６時間撹拌した。セライト５４５を通して溶液を濾過し、分子篩を除去した。溶媒の除去の後、残渣をＡｃＯＥｔで希釈し、Ｈ_２Ｏ、ブラインで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、次いで、蒸発乾固させた。混合物をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ、１５：１）によって精製し、６２を無色の油（４ｇ、６０％）として得た。¹H NMR (CDCl₃, 600MHz) δ: 7.37-7.24 (m, 15H), 4.95 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 4.86 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.71 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.11 (dd, J = 10.7 Hz, 7.6 Hz, 1H), 4.08 (m, J = 4.4 Hz, 1H), 4.05 (dd, J = 10.1 Hz, 3.6 Hz, 1H), 4.02 (dd, J = 10.7 Hz, 3.5 Hz, 1H), 4.01(dd, J = 10.5 Hz, 2.4 Hz, 1H), 4.00 (dd, J = 9.2 Hz, 4.4 Hz, 1H), 3.95 (dd, J = 10.1 Hz, 2.7 Hz, 1H), 3.92 (dd, J = 7.6 Hz, 3.5 Hz, 1H), 3.83 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.69 (dd, J = 10.5 Hz, 6.6 Hz, 1H), 3.40 (ddd, J = 9.2 Hz, 6.6 Hz, 2.4 Hz, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.60 (s, 3H), 1.50 (m, 2H), 1.35 (s, 3H), 1.34-1.20 (m, 32H), 0.85 (t, J = 6.8 Hz, 3H) . ¹³C NMR (CDCl₃, 150MHz) δ: 170.79, 138.95, 138.37, 128.67, 128.58, 128.55, 128.47, 128.00, 127.83, 127.80, 127.74, 127.70, 108.39, 98.96, 78.77, 77.93, 76.71, 75.46, 75.02, 74.73, 73.83, 73.15, 69.83, 69.13, 63.91, 59.93, 32.13, 29.90, 29.87, 29.83, 29.81, 29.77, 29.57, 29.52, 28.40, 26.73, 25.91, 22.90, 21.03, 14.34. HRMS (ESI-TOF) for C₅₀H₇₁FN₃O₉Na⁺ [M + Na]⁺ calcd 880.5083, found 880.5050。

化合物 K691: ¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz): δ 7.26 (t, 2H, J = 8.4 Hz), 7.09 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.02 (t, 1H, J = 7.2 Hz), 6.92 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 6.86 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 4.85 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 4.16 (dd, 1H, J = 9.6, 4.8 Hz), 3.88 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 3.84 (dd, 1H, J = 10.8, 4.2 Hz), 3.74-3.78 (m, 2H), 3.63-3.73 (m, 4H), 3.48-3.54(m, 2H), 2.54 (t, 2H, J = 7.8 Hz), 2.17 (t, 2H, J = 7.8 Hz), 1.49-1.64 (m, 6H), 1.19-1.35 (m, 39H). 0.83 (t, 3H, J = 7.2 Hz). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz): δ 175.53, 158.77, 155.96, 138.90, 130.48, 130.42, 123.71, 119.74, 119.18, 100.77, 75.32, 72.74, 72.06, 71.22, 70.70, 69.91, 68.09, 62.59, 51.48, 37.19, 36.04, 32.99, 32.81, 32.57, 30.63, 30.57, 30.52, 30.47, 30.40, 30.37, 30.30, 30.23, 30.12, 26.82, 26.76, 23.50, 14.52. HRMS (MALDI-TOF) for C₄₇H₇₇NO₁₀H⁺ [M + H]⁺ calcd 816.5620, found 816.5621。

化合物 K705: ¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz): δ 7.55 (d, 1H, J = 9.0 Hz), 7.12 (t, 2H, J = 8.4 Hz), 7.08 (dd, 1H, J = 19.2, 9.0 Hz), 6.87 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 6.75-6.78 (m, 1H), 6.67-6.68 (m, 1H), 4.86 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 4.14-4.18 (m, 1H), 3.88 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 3.84 (dd, 1H, J = 10.8, 4.2 Hz), 3.74-3.79 (m, 2H), 3.64-3.74 (m, 4H), 3.48-3.54 (m, 2H), 2.55 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 2.17 (t, 2H, J = 7.8 Hz), 1.49-1.64 (m, 6H), 1.19-1.38 (m, 38H). 0.83 (t, 3H, J = 6.6 Hz). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz): δ 175.40, 155.21, 155.07, 155.05, 154.99, 152.17, 152.08, 150.53, 150.44, 147.91, 147.82, 146.30, 146.22, 139.64, 130.55, 119.83, 118.26, 118.13, 114.55, 114.52, 114.51, 114.49, 108.40, 108.27, 100.63, 75.27, 72.65, 71.87, 71.10, 70.57, 69.78, 67.99, 62.49, 51.34, 37.12, 35.94, 32.98, 32.69, 32.40, 30.53, 30.51, 30.47, 30.40, 30.35, 30.28, 30.25, 30.18, 30.11, 30.00, 26.69, 26.64, 23.39, 14.47. HRMS (MALDI-TOF) for C₄₇H₇₅F₂NO₁₀H⁺ [M + H]⁺ calcd 852.5432, found 852.5443。

化合物 K706: ¹H NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 600 MHz): δ 7.08 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 6.99-7.03 (m, 1H), 6.93-6.97 (m, 1H), 6.79-6.85 (m, 3H), 4.86 (d, 1H, J = 4.2 Hz), 4.17 (dd, 1H, J = 10.2, 4.2 Hz), 3.88 (d, 1H, J = 3.6 Hz), 3.85 (dd, 1H, J = 10.8, 4.8 Hz), 3.75-3.79 (m, 2H), 3.64-3.74 (m, 4H), 3.49-3.55(m, 2H), 2.53 (t, 2H, J = 7.8 Hz), 2.17 (t, 2H, J = 7.2 Hz), 1.50-1.65 (m, 6H), 1.20-1.38 (m, 38H). 0.84 (t, 3H, J = 7.2 Hz). ¹³C NMR (MeOD-CDCl₃ 1:1, 150 MHz): δ 175.36, 160.26, 160.19, 158.64, 158.57, 156.27, 155.90, 155.82, 154.24, 154.16, 141.26, 141.24, 141.18, 141.16, 138.59, 130.27, 123.22, 123.15, 117.51, 112.03, 112.01, 111.88, 111.86, 106.07, 105.92, 105.89, 105.74, 100.57, 75.27, 72.63, 71.78, 71.05, 70.52, 69.73, 67.97, 62.48, 51.28, 37.09, 35.81, 33.01, 32.64, 32.38, 30.49, 30.47, 30.42, 30.36, 30.31, 30.24, 30.21, 30.13, 30.07, 29.95, 26.65, 26.59, 23.36, 14.46. HRMS (MALDI-TOF) for C₄₇H₇₅F₂NO₁₀H⁺ [M + H]⁺ calcd 852.5432, found 852.5446。

生物学的研究

マウスにおける糖脂質類似体の注射

全ての糖脂質を、１〜２ｍｇ／ｍｌの濃度で１００％ＤＭＳＯに溶解した。ｉｎ ｖｉｖｏでの実験のために、マウスへの１００μｌの希釈した糖脂質または１００μｌの１％ＤＭＳＯの注射の直前に、全ての化合物を食塩水中で１０μｇ／ｍｌに希釈した。６〜１２週齢の病原体を有さないＣ５７ＢＬ／６雌性マウスを、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｔａｉｐｅｉ、Ｔａｉｗａｎ）から得た。Ｊα１８ノックアウト（ＫＯ）Ｂ６マウスは、谷口克博士（理化学研究所免疫アレルギー科学総合研究センター、横浜、日本）の厚意によりご提供頂いた。全てのマウスを、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｏｒｇａｎｉｓｍｉｃ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ（Ｔａｉｐｅｉ、Ｔａｉｗａｎ）の病原体が存在しない育生施設において保持した。

マウスサイトカイン／ケモカイン分泌の決定

Ｂ６ＷＴまたはＪα１８ＫＯマウスに、０．１μｇ／マウスまたは１μｇ／マウスでビヒクルまたは糖脂質を静脈内注射した。サイトカイン／ケモカインの測定のために、注射の２時間および１８時間後においてＢｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）マウスサイトカインキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＮＹ）によって血清を集め、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００（商標）システム（Ｌｕｍｉｎｅｘ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）によって読み取った。

特定の糖脂質刺激の後のマウス免疫細胞のＦＡＣＳ分析

特定の糖脂質（１μｇ／マウス）またはビヒクル（ＰＢＳ中の１％ＤＭＳＯ）で処置したＢ６ＷＴまたはＪα１８ＫＯマウスを注射の７２時間後に屠殺し、これらの脾臓を収集した。脾臓を７０ｕｍのストレーナーを介してプレスし、赤血球の溶解の後、アジド（０．０５％）を含有するＰＢＳ緩衝液に有核細胞を再懸濁させ、示した細胞表面抗原を認識する抗体で４℃にて３０分間染色した。洗浄の後、脾細胞をＦＡＣＳ分析に供した。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８０、およびＣＤ８６に対する抗体を、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから得た。

ｍＣＤ１ｄおよび糖脂質の間の二元複合体の結合強度

ＥＬＩＳＡプレート上にコーティングした異なる濃度のｍＣＤ１ｄ^ジ−糖脂質複合体を、ビオチンとコンジュゲートした飽和量のＬ３６３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）と共にインキュベートし、それに続いてストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定を行った。Ｌ３６３抗体および示したｍＣＤ１ｄ^ジ−糖脂質複合体の間のＫＤを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してＬ３６３抗体結合曲線のスキャッチャード変換の線形回帰から計算した。Ｌ３６３は、同様の結合強度を伴ってｍＣＤ１ｄ^ジ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体およびｍＣＤ１ｄ^ジ−７ＤＷ８−５複合体を認識することが見出された。次に、二元複合体のＫＤを下記のように決定した。異なる濃度の糖脂質を、固定量のｍＣＤ１ｄ二量体と共に３７℃にて一晩インキュベートし、次いで、ｍＣＤ１ｄ^ジ−糖脂質複合体を９６ウェルＥＬＩＳＡプレート上に４℃にて一晩コーティングした。洗浄し、ＢＳＡで室温にて（ＲＴ）１時間ブロックした後、ビオチンとコンジュゲートしたＬ３６３抗体を、ＲＴにて３０分間添加し、それに続いて、ストレプトアビジン−ＨＲＰと共に室温にて３０分間インキュベートし、ＥＬＳＩＡリーダーで検出した。二元複合体のＫＤ値を、Ｌ３６３抗体結合曲線のスキャッチャード変換の線形回帰から計算した。

ヒトｉＮＫＴ細胞の展開

ヒトナイーブＶα２４^＋ｉＮＫＴ細胞を、１００ｎｇ／ｍｌでの示した糖脂質またはＤＭＳＯでパルスした自己未熟ＣＤ１４^＋ＤＣと共に２日目に１８時間培養した。３日目に、懸濁細胞を新たな皿に移し、５０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在下で培養し、３日毎に新鮮な培地で補充した。Ｖα２４^＋／Ｖβ１１^＋細胞の百分率を、フローサイトメトリーによって９日目に決定した。展開の後の総細胞数を、Ｇｕａｖａ ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）で計算し、ＶｉａＣｏｕｎｔモジュール（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）を含有するＣｙｔｏＳｏｆｔ（商標）ソフトウェアを有するＧｕａｖａシステムによって検出した。

Ｖα１４＋ｉＮＫＴ細胞への様々なＣＤ１ｄ−負荷した糖脂質の結合アビディティー

手短に言えば、マウスＣＤ１ｄ：Ｉｇ二量体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を、１：１０のモル比での糖脂質、またはビヒクルで３７℃にて一晩負荷した。マウス１．２Ｖα１４^＋ｉＮＫＴ細胞を、アジド（０．０５％）を含有する緩衝液中で様々な用量の二量体−糖脂質複合体と４℃にて３０分間インキュベートした。次いで、これらの細胞を、抗マウスＩｇＧ１−ＰＥｍＡｂ（Ａ８５−１）で４℃にてさらに３０分間染色し、それに続いて洗浄し、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定化し、結合したｍＣＤ１ｄ二量体複合体をフローサイトメトリーによって検出した。結合曲線、およびスキャッチャード変換の線形フィットを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによってプロットした。

Ｖα２４＋ｉＮＫＴ細胞とのＣＤ１ｄ−負荷した糖脂質の結合アビディティー

１００ｎｇ／ｍｌで７ＤＷ８−５によって展開されたＶα２４^＋ｉＮＫＴ細胞へのヒトＣＤ１ｄ−糖脂質複合体の結合アビディティーを、上記のように決定した。^１９

ヒトＶα２４＋ｉＮＫＴ細胞系および未熟単球由来の樹状細胞の単離および生産

Ｖα２４^＋ｉＮＫＴ細胞およびＣＤ１４^＋細胞を、上記のように末梢血細胞から単離した。^１９２日のインキュベーションの後、未熟ＤＣを、３００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）および１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在下で、ＣＤ１４^＋細胞から生じさせた。

７ＤＷ８−５またはＣ１によって展開されたＶα２４^＋ｉＮＫＴ細胞系は、下記のように生じさせた。２，０００ラドによる照射の後、未熟ＤＣを、１日間に１００ｎｇ／ｍｌで７ＤＷ８−５またはＣ１の存在下で同質遺伝子的Ｖα２４^＋ｉＮＫＴ細胞と共に同時培養した。細胞を５０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２の存在下で、脂質除去の後で１０〜１４日間展開させた。同じ手順を、ｉＮＫＴ細胞のさらなる刺激および展開のために１回繰り返した。７ＤＷ８−５またはＣ１−展開されたｉＮＫＴ細胞系は、Ｖα２４Ｔ細胞抗原受容体（＞９５％純度）を発現していることが示された。

ｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄスワッピングアッセイ

マウスＤＮ３Ａ４−１．２Ｖα１４^＋ｉＮＫＴハイブリドーマ細胞またはＣ１−展開されたＶα２４^＋ｉＮＫＴ細胞を、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、および０．０１μｇ／ｍｌで、ｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ細胞）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ細胞）によって提示された示した糖脂質抗原でパルスした。１８時間後、上清をサイトカイン分泌の測定のために収集した。Ｖα１４^＋ｉＮＫＴ細胞から放出されたＩＬ−２を、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定した。Ｖα２４^＋ｉＮＫＴ細胞から分泌したＩＦＮ−γ、ＩＬ−４およびＩＬ−２を、Ｂｅａｄｌｙｔｅ（登録商標）ヒトサイトカインキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＮＹ、ＵＳＡ）およびＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００（商標）読取りシステムを使用して検出した。

コンピューターモデリングおよびシミュレーション

そのそれぞれのｉＮＫＴ ＴＣＲにα−ＧａｌＣｅｒを提示するヒトおよびマウス両方のＣＤ１ｄ（ｈＣＤ１ｄおよびｍＣＤ１ｄ）の結晶構造を、ＲＣＳＢタンパク質データバンク（www.rcsb.org；ＰＤＢコード３ＨＵＪ、３ＱＵＸ、３ＱＵＹ、３ＱＵＺ、および３ＨＥ６）から回収した。３ＱＵＸの骨格原子に参照することによってこれらの結晶構造を重ね合わせた。３ＨＥ６および３ＨＵＪから得た２つのα−ＧａｌＣｅｒ三元構造を使用して、異なるＧＳＬから構成される他の三元複合体を創出した。Ｃ３４を含有する三元構造は、Ｍｅａｓｔｒｏ（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ ＬＬＣ、ＵＳＡ）上のアシル鎖を修飾することによって、Ｃ１を含有する三元構造に由来した。Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃを担持する三元構造は、それぞれ、Ｃ１およびＣ３４のＯ４キラリティーを反転させることによって創出した。それぞれ、マウスおよびヒトについて、残りの新規な三元複合体についてのモデリングを、３ＱＵＸおよび３ＨＵＪからのこれらのＧＳＬおよびＣＤ１ｄ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ構造を使用して構築した。全ての構造を、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｗｉｚａｒｄ（Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ ＬＬＣ、ＵＳＡ）を使用して処理し、脂質テイルをさらに精密化し、ＭａｃｒｏＭｏｄｅｌのコンホメーションサーチ、ならびにデフォルトの方法および水の溶媒中のＯＰＬＳ２００５力場を伴うエネルギー最小化を使用して立体的衝突を最小化した。ｉＮＫＴ ＴＣＲへのＧＳＬの結合モードを、半経験的自由エネルギー力場を使用してＡｕｔｏｄｏｃｋ４．２によって再コンピュータ計算し、シミュレーションの間のコンホメーションを評価した。溶媒中の結合の推定される自由エネルギーを、Ａｕｔｏｄｏｃｋ４．２中に構築した等式によってコンピュータ計算した。

△Ｇ＝△Ｖ^Ｌ（結合−非結合）＋△Ｖ^Ｐ（結合−非結合）＋△Ｖ^ＰＬ（結合−非結合＋△Ｓ_ｃｏｎｆ）

式中、Ｌは、「リガンド」を指し、Ｐは、「タンパク質」を指し、Ｖは、分散／反発、水素結合、および静電学について評価を含む対でのエネルギー用語を指し、△Ｓ_ｃｏｎｆは、結合によって失ったコンホメーションエントロピーの推定である。Ａｕｔｏｄｏｃｋ４を実行するための全ての必要とされる入力ファイルは、ＭＧＬＴｏｏｌｓ上で調製した。６０×６０×６０Å^３のグリッドボックスおよび様々な原子タイプのエネルギーマップを生じさせた。各分子のドッキングランにおいて、全てのヒドロキシル基を自由回転に設定し、２個の脂質テイルをこれらの従前に精密化したポーズに割り当てた。Ｌａｍａｒｃｋｉａｎ遺伝的アルゴリズム（５．０×１０^７エネルギー評価および２７，０００世代の最大数、ならびに０．０２の変異率、０．８のクロスオーバー率）を、サーチのために用いた。結果をＭＧＬＴｏｏｌｓで可視化し、個々の残基への水素結合の寄与を、組込み関数によって得た。グラフによる表示は、Ｍａｅｓｔｒｏ上で完成させた。
例：有効性の実証

ヒトｉＮＫＴ細胞の活性化におけるＣ１、Ｃ３４、Ｋ６９１、Ｋ７０５およびＫ７０６の能力を比較するために、ヒトＶα２４−制限されたＮＫＴ細胞を、磁気ビーズによってＰＢＭＣから単離し、組換えヒトＩＬ−２（５０μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートした。２日後、ｉＮＫＴ細胞を、Ｃ１、Ｃ３４、Ｋ６９１、Ｋ７０５およびＫ７０６を含む異なる糖脂質（１μｇ／ｍＬ）で負荷した自己単球由来のＤＣと共に９６ウェルにおいて３日間同時培養した。上清を集め、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイによってサイトカイン／ケモカインを決定した。図１３Ａに示すように、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−４分泌のレベルを、異なる糖脂質について示した。ＩＦＮ−γ／ＩＬ−４の比は、Ｃ１よりＣ３４、Ｋ６９１、およびＫ７０６について有意により高かった（図１３Ｂ）が、これは、Ｃ３４、Ｋ６９１、およびＫ７０６が、ヒト免疫系においてＣ１よりＴＨ１に偏っており、Ｋ７０６は、Ｃ３４よりそうであることを示唆する。さらに、全ての糖脂質は、あるレベルでＧＭ−ＣＳＦ分泌を誘導したが、これは、これらの糖脂質が骨髄性細胞の活性化を促進することができることを示す。これらの糖脂質はまた、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３の産生を誘導した。まとめると、Ｋ７０６は、Ｃ１、およびＣ３４として、最も高いＩＦＮ−ｇ／ＩＬ−４比でサイトカイン、ならびに匹敵するレベルのＩＦＮ−ｇ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を誘導したが、これはＫ７０６が、ヒトｉＮＫＴ細胞のＴＨ１に偏った免疫応答の誘導においてＣ１およびＣ３４より強力であり得ることを示す。（一方向ＡＮＯＶＡを使用して統計的評価を行った。^＊ Ｃ１と比較してＰ＜０．０５。＃、Ｃ３４と比較してＰ＝０．００２、スチューデントｔ検定を使用）。
Ｇｌｃヘッドを有するスフィンゴ糖脂質（ＧＳＬ）は免疫モジュレーターである

以前に、０．１μｇ／マウスの７ＤＷ８−５は免疫刺激のために十分であったが、^１９グルコース類似体７ＤＷ８−５−Ｇｌｃについて、免疫応答を誘導するために、より高い投与量（１μｇ／マウス）が必要とされた（図６）。このように、新規に合成した糖脂質の生物活性を、１μｇ／マウスでの糖脂質のｉ．ｖ．注射の２時間および１８時間後に、Ｂ６マウスにおいて試験した。図２および図７に示されているように、マンノース類似体７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、任意のサイトカイン／ケモカインを誘導することができなかった。αＧｌｃを有するＧＳＬと比較して、αＧａｌを有するＧＳＬは、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦαおよびＩＰ−１０を含むより高いレベルのサイトカインおよびケモカインを誘導した。同様の傾向が、異なるグリコシル基を有するαＧａｌＣｅｒおよびＣ３４類似体について留意された（図２Ａ、２Ｂおよび図７）。

Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃはサイトカインおよびケモカインの両方をトリガーしたが、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは、非常に低いレベルのＴｈ１およびＴｈ２サイトカイン、相対的に高レベルのＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧケモカインを誘導した。ｉＮＫＴ細胞以外の他の免疫細胞が７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによるケモカイン誘導の一因となり得る可能性を探るために、ｉＮＫＴ細胞を持たないＪα１８ＫＯマウスに、１μｇ／マウスで７ＤＷ８−５−Ｇｌｃまたは７ＤＷ８−５を注射した。^２５注射の２時間後および１８時間後に集めたマウス血清は、７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによるサイトカインの誘導を示さなかった（図２Ａ、２Ｂおよび図７）。驚いたことに、７ＤＷ８−５ではなく７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは、Ｊα１８ＫＯマウスにおいてＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧを含むいくつかのケモカインの分泌をトリガーした。これらの知見は、Ｊα１８ＫＯマウスにおいてｉＮＫＴ細胞以外の免疫細胞が、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで処置されたＷＴマウスおよびＪα１８ＫＯマウスにおけるケモカインの産生の一因となったに違いないことを示唆した。

次に、本発明者らは、糖脂質刺激の３日後にＷＴマウスにおける免疫細胞の展開／活性化を分析した。総Ｔ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の数は、αＧｌｃを有するＧＳＬで処置されたマウスより、αＧａｌヘッドを有するＧＳＬで処置されたマウスにおいてより多かった（図２Ｃ、８Ｅおよび８Ｆ）。これは、より多くのサイトカイン／ケモカインが、マウスにおいてαＧｌｃを有するＧＳＬより、αＧａｌを有するＧＳＬによって誘導されたという観察と一致した（図２Ａ、２Ｂおよび７）。αＧｌｃを有するＧＳＬの間の免疫刺激性活性のさらなる比較は、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃの両方が、サイトカイン／ケモカインの誘導（図２Ａ、２Ｂおよび７）およびＤＣの展開／活性化（図８Ｂ〜８Ｄ）において７ＤＷ８−５−Ｇｌｃより良好であったことを明らかにした。Ｃ３４−Ｇｌｃは、７ＤＷ８−５−ＧｌｃよりＣＤ８０^＋またはＣＤ８６^＋ＤＣを約２倍超活性化した（図８Ｃおよび８Ｄ）が、これらは同様の数の総脾細胞およびＤＣを誘導した（図８Ａおよび８Ｂ）。７ＤＷ８−５−Ｇｌｃと比較して、Ｃ１−Ｇｌｃは、約１．３倍超脾細胞およびＤＣを展開させただけでなく（図８Ａおよび８Ｂ）、約３．５倍超ＣＤ８０^＋ＤＣ、ならびに約３倍超ＣＤ８６^＋ＤＣを活性化させた（図８Ｃおよび８Ｄ）。ＤＣの展開／活性化の増加は、ｉｎ ｖｉｖｏでの７ＤＷ８−５−Ｇｌｃと比較して、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃによってトリガーされたより強い免疫原性の一因となり得る。対照的に、７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、任意のタイプの免疫細胞を展開させなかった（図２Ｃおよび８）が、これはサイトカイン／ケモカインの誘導が存在しないことと一致する（図２Ａ、２Ｂおよび７）。

予想外に、７ＤＷ８−５−ＧｌｃがＪα１８ＫＯマウスにおいてケモカインを誘導したことを本発明者らはまた観察した（図７）。７ＤＷ８−５−Ｇｌｃまたは７ＤＷ８−５のｉ．ｖ．注射の３日後の、Ｊα１８ＫＯマウス脾細胞のＦＡＣＳ分析によって、ＣＤ１１ｃ^ｈｉ単球に由来するＤＣが、７ＤＷ８−５ではなく７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって有意に展開し、活性化したことが明らかとなった（図９Ｂ〜９Ｄ）。７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによる刺激の後で、総脾細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞における有意差は留意されなかった（図９Ａ、９Ｅおよび９Ｆ）。これらの知見は、単球が、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで処置されたＪα１８ＫＯマウスにおけるケモカイン、例えば、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧの誘導に関与し得ることを示した。

上記のように、マウスにおいて、αＧａｌを有する糖脂質類似体は、特に、７ＤＷ８−５および７ＤＷ８−５−Ｇｌｃの間の比較について、αＧｌｃを有する糖脂質類似体より強い免疫モジュレーターであった。同様の傾向がまたヒトｉＮＫＴ細胞に当てはまるかを調査するために、末梢血から単離したＶα２４^＋ｉＮＫＴ細胞を、２日目に１００ｎｇ／ｍｌにて示した糖脂質でパルスした未熟ＤＣと共にインキュベートした。３日目の抗原除去の後、ＩＬ−２の存在下でヒトｉＮＫＴ細胞を培養した。展開されたｉＮＫＴ細胞の数を、９日目にＧｕａｖａ ＶｉａＣｏｕｎｔ試薬を使用して計数した。驚いたことに、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトｉＮＫＴ細胞を展開することにおいて、７ＤＷ８−５より有意に（ｐ＝０．０００９）良好であった（図２Ｄ）。まとめると、これらの知見は、αＧａｌを有するＧＳＬの生物活性が、αＧｌｃを有するＧＳＬと比較して、マウスにおいてより強力であったが、ヒトにおいてより強力でなかったことを示唆した。
ｍＣＤ１ｄおよび糖脂質の間の二元相互作用

７ＤＷ８−５および７ＤＷ８−５−Ｇｌｃの免疫調節活性における差異についての根拠を理解するために、本発明者らは、糖脂質と複合体化したｍＣＤ１ｄに結合することができるＬ３６３ｍＡｂを使用して、ｍＣＤ１ｄおよび特定の糖脂質の間の二元相互作用の結合強度を測定した。^２６固定比率での様々な濃度のｍＣＤ１ｄ^ジ−糖脂質複合体を、飽和量のＬ３６３−ビオチン抗体と共にインキュベートし、それに続いて、ストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定を行った（図１０Ａ）。Ｌ３６３および示したｍＣＤ１ｄ^ジ−糖脂質複合体の間の解離定数（ＫＤ）は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してプロットのスキャッチャード変換の線形回帰から計算した（図１０Ａ）。Ｌ３６３は、ｍＣＤ１ｄ^ジ−７ＤＷ８−５複合体と同様の結合強度でｍＣＤ１ｄ^ジ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体を認識することが見出された（図１０Ｂ）。次に、本発明者らは、異なる濃度の糖脂質を固定量のｍＣＤ１ｄ二量体およびＬ３６３−ビオチン抗体と共にインキュベートし、それに続いてストレプトアビジン−ＨＲＰ検出およびＥＬＩＳＡ測定によって、二元複合体のＫＤを決定した（図１０Ｃ）。Ｌ３６３検出で読み出した情報から引き出した結合曲線のスキャッチャード変換からＫＤを計算した（図１０Ｄ）。驚くほどのことではないが、７ＤＷ８−５と同一の脂質テイルを有する７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは、同様の強度を伴ってｍＣＤ１ｄ二量体に結合したが、これらの結合アビディティーは、αＧａｌＣｅｒより約２０倍大きかった。これは、二元相互作用の強度が、７ＤＷ８−５および７ＤＷ８−５−Ｇｌｃの間の示差的な免疫活性化能力を説明することができなかったことを示した。
ＣＤ１ｄ−ＧＳＬ複合体およびｉＮＫＴ細胞の間の三元相互作用

次に、本発明者らは、マウスおよびヒトにおけるＣＤ１ｄ−糖脂質（glcolipid）複合体およびｉＮＫＴ ＴＣＲの間の三元相互作用を測定した。異なる濃度のｍＣＤ１ｄ^ジ−糖脂質およびｈＣＤ１ｄ^ジ−糖脂質複合体を、固定量のそれぞれ、ＤＮ３Ａ４−１．２マウスｉＮＫＴハイブリドーマ細胞およびヒトＶα２４^＋／Ｖβ１１^＋ｉＮＫＴ細胞と共にインキュベートした。示した濃度での結合した複合体のレベルを、抗ｍＩｇＧ１二次抗体によって検出し、フローサイトメトリーによって分析した（図３Ａおよび３Ｂ）。三元複合体のＫＤを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して図３Ａおよび３Ｂにおけるプロットのスキャッチャード変換から計算した。図３Ｃに示されているように、ｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５複合体は、ｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体より、ｉＮＫＴ ＴＣＲとの約１０倍より強い相互作用を示した。これは、ｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ複合体（１７．１±０．８％）より高い百分率のＣ１−パルスした脾細胞が、ｍＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５複合体（３６．２±５．０％）によって染色されたという観察と一致した（図１１）。ｍＣＤ１ｄと複合体化したとき、Ｃ１（ＫＤ：１．２４０±０．００３ｎＭ）およびＣ３４（ＫＤ：０．７３５±０．０１０ｎＭ）の両方は、それぞれ、Ｃ１−Ｇｌｃ（ＫＤ：５．１３７±０．１１０ｎＭ）およびＣ３４−Ｇｌｃ（ＫＤ：７．９６０±１．２６９ｎＭ）より、ｉＮＫＴ ＴＣＲに対してより強い三元相互作用を示した（図３Ｃ）。

ヒトにおいて、αＧｌｃを有するＧＳＬ（Ｃ１−ＧｌｃのＫＤ：８．５５０±０．６１７；Ｃ３４−Ｇｌｃ：０．３７８±０．０１９；７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ：０．４８１±０．００８ｎＭ）は、αＧａｌを有するＧＳＬ（Ｃ１のＫＤ：１６．４１０±４．２００；Ｃ３４：０．４９８±０．００５；７ＤＷ８−５：０．７７７±０．０２２ｎＭ）より、ｈＣＤ１ｄとの複合体においてＶα２４^＋／Ｖβ１１^＋ｉＮＫＴ ＴＣＲに対してより強い三元相互作用を示した（図３Ｄ）。このように、脂質テイルのタイプに関わらず、αＧａｌを有するＧＳＬは、αＧｌｃを有するＧＳＬより、マウスｉＮＫＴ ＴＣＲとより強い三元相互作用を示したが、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲとより弱い三元相互作用を示した（図３Ｃおよび３Ｄ）。これは、αＧａｌを有するＧＳＬが、マウスにおいてより高いレベルのサイトカイン／ケモカインおよび免疫細胞のより大きな展開（図２Ａ〜２Ｃ、７および８）、一方、ヒトにおいてより小さなｉＮＫＴ細胞展開（図２Ｄ）をトリガーしたという観察を説明し得る。まとめると、ｉＮＫＴ ＴＣＲ、ＣＤ１ｄおよびＧＳＬの間の三元相互作用は、糖脂質の生物活性についてＣＤ１ｄおよびＧＳＬの間の二元相互作用より関連性のあるように思われる。
ｉＮＫＴ細胞に対してヒト対マウスＣＤ１ｄ分子をスワッピングする効果

種特異的応答を説明するために、本発明者らは、ヒト対マウスｉＮＫＴ細胞に対する、異なるグリコシル基を有するＧＳＬの刺激性活性への、ヒト対マウスＣＤ１ｄ分子をスワッピングする効果を検査した。マウスｉＮＫＴハイブリドーマ細胞（図４Ａ）またはＣ１−展開されたヒトＶα２４^＋ｉＮＫＴ細胞（図４Ｂ）を、ｍＣＤ１ｄ（Ａ２０−ＣＤ１ｄ）またはｈＣＤ１ｄ（ＨｅＬａ−ＣＤ１ｄ）によって提示された示した糖脂質でパルスした。２４時間後に上清を収集し、サイトカイン分泌を測定した。ｍＣＤ１ｄによって、またはｈＣＤ１ｄによって提示されようと、αＧａｌを有するＧＳＬは、αＧｌｃを有するＧＳＬより、マウスｉＮＫＴ細胞からのＩＬ−２分泌を誘導した（図４Ａ）。これは、αＧａｌを有するＧＳＬが、血清サイトカイン分泌を誘導するのにαＧｌｃを有するＧＳＬより強力であったというｉｎ ｖｉｖｏでの知見と一致した（図２および７）。対照的に、ｍＣＤ１ｄまたはｈＣＤ１ｄによって提示されたとき、αＧｌｃを有するＧＳＬは、αＧａｌを有するＧＳＬより、ヒトｉＮＫＴ細胞からのより多くのＩＬ−２分泌をトリガーした（図４Ｂ）。同様の傾向がまた、ヒトｉＮＫＴ細胞からのＩＦＮ−γおよびＩＬ−４分泌について観察された（図１２Ａおよび図１２Ｂ）。異なるグリコシル基を有するＧＳＬの種特異的刺激性活性は、ＣＤ１ｄよりむしろマウス対ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲによって影響された。比較すると、７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、ｍＣＤ１ｄまたはｈＣＤ１ｄによるその提示に関わらず、マウスおよびヒトｉＮＫＴ細胞を刺激して、任意のサイトカインを分泌させることができなかった。特に、αＧｌｃを有する全てのＧＳＬは、ＩＦＮ−γ対ＩＬ−４の比に基づいて、Ｃ１より有意により多くのＴｈ１に歪められた応答をトリガーした（図１２Ｃ）。加えて、脂質テイルに関わらず、αＧｌｃを有するＧＳＬは、ヒトにおいて、αＧａｌを有するＧＳＬよりＴｈ１偏向性であるようであった（図１２Ｃ）。これらの知見は、グリコシル基の４’−ＯＨにおける修飾が、Ｔｈ１方向へのヒトｉＮＫＴ細胞の応答を選択的に誘導することができたことを示した。
ＣＤ１ｄ−ＧＳＬ−ｉＮＫＴ ＴＣＲの三元複合体の構造的モデリング

マウスおよび人における三元複合体の示差的な結合アビディティーをさらに説明するために、それぞれ、マウスおよびヒトＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体のＸ線構造に基づいてコンピューターモデリングを行った（ＰＤＢアクセスコード３ＨＵＪ、３ＱＵＸ、３ＱＵＹ、３ＱＵＺ、および３ＨＥ６）。

（１）糖ヘッド基の相互作用

図３Ａおよび３Ｂに示されているように、Ｍａｎを有するＧＳＬは、ＣＤ１ｄと複合体化したとき、マウスおよびヒトｉＮＫＴ細胞に結合することができなかった。マンノースにおける垂直の２’ＯＨは、ｉＮＫＴ ＴＣＲ（人においてＳｅｒ３０およびマウスにおいてＡｓｎ３０）に対して立体障害を創出し、ｉＮＫＴ ＴＣＲ（人においてＧｌｙ９６およびＡｓｐ１５１、ならびにマウスにおいてＧｌｙ９６およびＡｓｐ１５３）に向かってガラクトースの２’ＯＨによって最初に形成された２個の水素結合を失った。Ｇａｌを有するＧＳＬに関しては、マウスおよびヒトについてＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲへのＣ１の結合を、それぞれ、図５Ａおよび５Ｂにおいて示した。水素結合（Ｈ結合）相互作用の形成が、ＣＤ１ｄのヒトＡｓｐ８０（マウスＡｓｐ８０）、ヒトＴｈｒ１５４（マウスＴｈｒ１５６）、ヒトＡｓｐ１５１（マウスＡｓｐ１５３）、およびｉＮＫＴ ＴＣＲのヒトＧｌｙ９６（マウスＧｌｙ９６）を含めて大部分の保存された残基において観察された。他方、Ｃ１の３’ＯＨ／４’ＯＨと、ヒトおよびマウスｉＮＫＴ ＴＣＲとのＨ結合相互作用は、かなり異なった。マウスｉＮＫＴ ＴＣＲの残基Ａｓｎ３０は、Ｃ１の３’−および４’−ＯＨへの結合について重大であった。Ａｓｎ３０の自由エネルギー寄与は、ＭＧＬＴｏｏｌｓを使用して−２．２７〜−３．３８Ｋｃａｌ／ｍｏｌであると推定した。比較すると、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲのＳｅｒ３０は、Ｃ１の４’−ＯＨからより遠位であり、３’−ＯＨのみとより弱いＨ結合相互作用がもたらされ、一方、Ｈ結合は、Ｃ１の４’−ＯＨおよびＰｈｅ２９の骨格Ｃ＝Ｏ基の間で形成することができた（図５Ｂ）。Ｃ１の３’−ＯＨを有するＳｅｒ３０および４’−ＯＨを有するＰｈｅ２９の自由エネルギー寄与を、約−１．２３〜−１．６３Ｋｃａｌ／ｍｏｌであるとコンピュータ計算した。このように、４’ＯＨの軸（Ｇａｌ）方向から赤道（Ｇｌｃ）方向への変化によって、ｉＮＫＴ ＴＣＲのマウスＡｓｎ３０およびヒトＰｈｅ２９とのＨ結合相互作用が失われる。それぞれ、Ｃ１およびＣ３４と比較して、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃは、マウスＡｓｎ３０とのＨ結合相互作用を欠き、自由エネルギーの減少をもたらした（ＭＧＬＴｏｏｌｓによって計算する−０．７〜−０．９Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）。これは、ガラクトースがグルコースヘッドに変化したとき、ＫＤ測定におけるマウス三元相互作用の低下と一致した（図３Ｃ）。これに反して、ヒト三元相互作用は、グルコースを有するＧＳＬについてより大きかった（図３Ｄ）。コンピューターモデリングに基づいて、本発明者らは、グルコースの赤道方向４’−ＯＨが、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ｐｈｅ５１およびｈＣＤ１ｄ−Ｔｒｐ１５３によってトラップされた結晶水とのより強い相互作用（約−１．８４Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）による、Ｐｈｅ２９相互作用（−０．４Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）の喪失を補償することができたことを見出した（図５Ｃ）。マウスにおいて疎水性スペースの形成およびトラップされた水分子を伴わずに、三元相互作用は、Ｇａｌを有するＧＳＬよりＧｌｃを有するＧＳＬについてより弱い。

（２）脂質テイルの相互作用

Ｃ３４のアシルテイルにおける２個の芳香族環は、ＣＤ１ｄのＰｈｅ７０およびＴｒｐ６３と芳香族相互作用を形成することができた。このように、Ｃ１からＣ３４へのアシルテイルの変化は、ＣＤ１ｄとの相互作用（モデリングによって−１．８〜−２．４Ｋｃａｌ／ｍｏｌ）を増加させることができた。さらに、芳香族相互作用からのより高いエネルギーは、Ｃ３４またはＣ３４−Ｇｌｃのアシル鎖をＣＤ１ｄ内のＡ’チャネルのより低い位置（Ｃｙｓ１２近傍）に駆動し、ヘッド基の配向に対して僅かな撹乱をもたらすことができた（図５Ｄ）。したがって、マウスｉＮＫＴ ＴＣＲおよびグルコースヘッドの赤道方向４’−ＯＨの間の親和力を伴わずに、ｉＮＫＴ ＴＣＲへのｍＣＤ１ｄ−Ｃ３４−Ｇｌｃの結合は、ｍＣＤ１ｄ−Ｃ１−Ｇｌｃより少し弱かった（図３Ｃ）。これは、マウスにおいて、なぜＣ３４−ＧｌｃがＣ１−Ｇｌｃより強力でなかった一方で、Ｃ３４はＣ１より優れていたかを説明し得る。

（３）ＡＵＴＯＤＯＣＫ４を使用したコンピュータ計算した自由エネルギー

ヒトおよびマウスＣＤ１ｄ−ｉＮＫＴ ＴＣＲに結合した各ＧＳＬの自由エネルギーを、３連でコンピュータ計算した。各ラウンドにおいて、ＧＳＬをヒトおよびマウスＣＤ１ｄ−Ｃ１−ｉＮＫＴ ＴＣＲにドッキングさせ、一番上にランクした自由エネルギーを選択した。図５Ｅに示されているように、コンピュータ計算した自由エネルギーは、一般に、マウス（図３Ｃ）およびヒト（図３Ｄ）について測定したＫＤ値の傾向と相関した。

種々の手段を使用して、本発明の組成物を製剤化することができる。製剤および投与のための技術は、「Remington: The Science and Practice of Pharmacy」、第２０版、Lippincott Williams & Wilkins、Philadelphia、PA（１９９５年）において見出し得る。ヒトまたは動物への投与のために、調製物は、ＦＤＡによって必要とされるものと匹敵する無菌性、発熱性、ならびに一般の安全性および純度の標準に合致すべきである。医薬製剤の投与は、本明細書に記載のような種々の方法で行うことができる。
サイトカイン誘導、ならびにＧＳＬ、ＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲの間の三元相互作用

αＧａｌＣｅｒと比較して、αＧｌｃＣｅｒは、マウスｉＮＫＴ細胞増殖に対してより刺激性でないが、ヒトｉＮＫＴ細胞増殖を刺激するのにより強力であるようであることが報告された。本発明者らの研究において、マウスおよびヒトにおけるαＧａｌＣｅｒおよびαＧｌｃＣｅｒの間の示差的な活性はまた、サイトカイン誘導、ならびにＧＳＬ、ＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲの間の三元相互作用について観察された。さらに、αＧａｌまたはαＧｌｃヘッドを担持するフェニルＧＳＬは、同様の種特異的活性を示した。このように、脂質テイルに関わらず、αＧａｌを有するＧＳＬは、マウスにおいて、αＧｌｃを有するＧＳＬより良好であったが、人においてより悪かった。これは、マウスにおける糖脂質の生物活性が、マウスおよびヒトの間のＣＤ１ｄおよびｉＮＫＴ ＴＣＲの高度に相同の配列に関わらず、ヒトにおける糖脂質の生物活性に翻訳することができないことを示した。^３０

ｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄスワッピングアッセイによって示されるように、種特異的応答は、マウスおよび人の間のｉＮＫＴ ＴＣＲにおける差異に起因する可能性が最も高かった。ｍＣＤ１ｄまたはｈＣＤ１ｄによって提示されたαＧａｌを有するＧＳＬは、マウスｉＮＫＴ細胞を刺激するのにαＧｌｃを有するＧＳＬより強力であったが、ヒトｉＮＫＴ細胞についてより刺激性でなかった。ＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲの結晶構造によると、ｉＮＫＴ ＴＣＲのＣＤＲ１α領域におけるガラクトースヘッドの４’−ＯＨと接触した残基は、マウス（Ａｓｎ３０）およびヒト（Ｐｈｅ２９）の間で保存されなかった。本発明者らのコンピューターモデリングは、軸方向から赤道方向への４’−ＯＨの変化が、マウスにおいて４’ＯＨおよびｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ａｓｎ３０の間の水素結合の喪失をもたらすことができたことを明らかにした。これに反して、グルコースの赤道方向４’−ＯＨは、ヒトｉＮＫＴ ＴＣＲ−Ｐｈｅ５１およびｈＣＤ１ｄ−Ｔｒｐ１５３によってトラップされた結晶水とのより強い相互作用による、Ｐｈｅ２９相互作用の喪失を補償することができた。このように、αＧｌｃを有するＧＳＬから構成される三元相互作用は、ヒトにおいて、αＧａｌを有するＧＳＬより強かったが、マウスにおいてより弱かった。まとめると、マウスおよびヒトＣＤ１ｄ−ＧＳＬ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体の構造的モデリングは、種特異的生物活性についての優れた説明を提供し、コンピュータ計算した自由エネルギーの変化は、三元複合体の測定した結合アビディティーの傾向とよく相関した。

同じテイルを有するが、異なるグリコシル基を有する本発明者らの対の類似体と対照的に、種特異的免疫応答はまた、他の場合では、同じグリコシル基であるが異なる脂質テイルにおいて見られた。同様に、マウスおよび人の間の２つのＣ−グリコシド類似体の優先的活性を形づくったのはＣＤ１ｄの代わりにｉＮＫＴ ＴＣＲであったが、これは三元複合体の結合強度とよく相関した。本発明者らの糖脂質について、マウスおよび人における生物学的応答を予想することにおいて、三元相互作用はまた二元相互作用より重要であった。７ＤＷ８−５および７ＤＷ８−５−Ｇｌｃの両方は、おそらくフェニル環およびフッ化物原子（fluoride atom）とＣＤ１ｄＡ’ポケットとの接触の増加によって、ｍＣＤ１ｄとＣ１より非常に強く結合した。同じ脂質テイルを有する２つの糖脂質は、ＣＤ１ｄに対して同様の結合強度を示したのにも関わらず、これらは異なる免疫刺激性効力を示した。７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは、人において７ＤＷ８−５より良好であったが、マウスにおいてより悪く、これは三元複合体の結合アビディティーと良好な関係を有した。７ＤＷ８−５および７ＤＷ８−５−Ｇｌｃに加えて、他の２対の類似体（Ｃ１対Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４対Ｃ３４−Ｇｌｃ）の生物活性はまた、マウスおよび人における三元相互作用の強度と良好に相関した。すなわち、αＧａｌを有するＧＳＬは、マウスにおいてαＧｌｃを有するＧＳＬより強い三元相互作用および免疫刺激性活性を示したが、この傾向は人において反対であった。したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの三元相互作用の測定を使用して、ｉｎ ｖｉｖｏでの本発明者らの新規な糖脂質の免疫刺激性効力を予想することができた。

αＧｌｃを有するＧＳＬの間のさらなる比較は、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃの両方が、マウスにおいてサイトカイン誘導において７ＤＷ８−５−Ｇｌｃより良好であったことを明らかにした。しかし、マウス三元複合体の結合アビディティーは、Ｃ３４−Ｇｌｃおよび７ＤＷ８−５−Ｇｌｃについて匹敵した。これらの知見は、ＫＤ以外の要因がまた免疫応答をｉｎ ｖｉｖｏでモジュレートし得ることを示唆した。実際は、Ｃ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃの両方は、７ＤＷ８−５−ＧｌｃよりＣＤ８０^＋またはＣＤ８６^＋ＤＣを活性化したが、これは、マウスにおけるＣ１−ＧｌｃおよびＣ３４−Ｇｌｃのより強い生物活性の一因となり得る。まとめると、三元相互作用の強度および免疫細胞の展開／活性化を含むいくつかの要因は、免疫刺激をｉｎ ｖｉｖｏでレギュレートすることができた。

αＧａｌまたはαＧｌｃを有するＧＳＬと対照的に、αＭａｎＣｅｒおよび７ＤＷ８−５−Ｍａｎは、マウスおよびヒトの両方において、ｉＮＫＴ細胞増殖、サイトカイン／ケモカイン、および／または免疫細胞の展開／活性化を誘導することができなかった。これは、ｉＮＫＴ細胞中のＣＤ１ｄ−７ＤＷ８−５−Ｍａｎ二量体による染色が存在しないことによって示されるように、マウスのｉＮＫＴ ＴＣＲも、ヒトのｉＮＫＴ ＴＣＲも、αＭａｎヘッドを認識することができなかったという事実に起因し得る。７ＤＷ８−５−Ｍａｎと比較して、７ＤＷ８−５−Ｇｌｃは、マウスにおいてたとえ非常に低いレベルにおいてであっても、Ｔｈ１およびＴｈ２サイトカインを誘導することができた。比較すると、大量のＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧケモカインは、ＷＴおよびＪα１８ＫＯマウスにおいて７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによってトリガーされたが、これは、ｉＮＫＴ細胞以外の特定のタイプの免疫細胞がこれらのケモカイン分泌の一因となり得ることを示す。実際に、単球は、Ｊα１８ＫＯマウスにおいて７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによって有意に展開／活性化された。単球は、刺激に応答してこれらのケモカインを産生することができることが報告されてきたが、これは、単球が７ＤＷ８−５−Ｇｌｃ処置されたマウスにおいてケモカイン分泌のために関与し得ることを示唆する。それにも関わらず、本発明者らは、Ｊα１８ＫＯマウス中に存在する他の可能性のある源がまた役割を果たし得ることを除外できなかった。Ｖα１０ＮＫＴ細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでαＧａｌＣｅｒおよびαＧｌｃＣｅｒに応答してＩＦＮ−γおよびＩＬ−４を産生することができたが、^３８ＩＦＮ−γは、αＧａｌＣｅｒで処置されたＪα１８ＫＯマウスの血清中に分泌された。^３９本発明者らは、７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで処置されたＪα１８ＫＯマウスからの任意のサイトカイン産生を検出することができなかった。これらの知見は、Ｖα１０ＮＫＴ細胞がマウスにおいて７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによってトリガーされるケモカインに貢献しないことを暗示した。

しかし、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦαを含むサイトカインおよびケモカインの大部分は、７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃで刺激されたＪα１８ＫＯマウスにおいて産生されなかった。ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞などの免疫細胞は、Ｊα１８ＫＯマウスにおいていずれも展開されなかった。このように、ｉＮＫＴ細胞は、上記のサイトカイン／ケモカイン誘導、および７ＤＷ８−５または７ＤＷ８−５−Ｇｌｃによる免疫細胞展開において中心的存在であり続けた。

要約すれば、αＧｌｃを有するＧＳＬは、ヒトにおいてαＧａｌを有するＧＳＬと比較してより強い三元相互作用を担持し、よりＴｈ１偏向性の免疫をトリガーした。しかし、αＧｌｃを有するＧＳＬは、マウスにおいてαＧａｌを有するＧＳＬより刺激性でなかった。種特異的応答は、種の間の三元複合体の示差的な結合アビディティーに起因したが、これは、ｍＣＤ１ｄ対ｈＣＤ１ｄスワッピングアッセイによって支持されるように、マウスのｉＮＫＴ ＴＣＲおよびヒトのｉＮＫＴ ＴＣＲの間の差異を反映する。これは、マウスおよび人におけるＣＤ１ｄ−αＧａｌＣｅｒ−ｉＮＫＴ ＴＣＲ複合体の結晶構造に基づいたコンピューターモデリングによる予測と一致した。^{２７〜２９}ＣＤ１ｄ−糖脂質複合体およびｉＮＫＴ ＴＣＲの間の三元相互作用に加えて、展開／活性化された単球はまた、特に、αＧｌｃを有するＧＳＬについて、免疫応答をｉｎ ｖｉｖｏでモジュレートすることができた。

本発明者らの研究から、グリコシル基上の４’ＯＨ方向の変化は、マウスおよびヒトにおいて異なる生物活性をもたらした。これは、αＧａｌＣｅｒヘッドの４’ＯＨに導入された芳香族基がマウスにおけるｉＮＫＴ細胞サイトカイン産生に影響を与えることができたという報告と一致していたが、ヒトにおけるこれらの効果は調査されなかった。グリコシル基の６位における変化はまた、生物学的応答に対する可変の効果を示した。^{２９、４１}これらの知見は、本発明者らの研究と一緒に、新規なＧＳＬの将来の設計および合成のための新規な方向を提供した。

本出願を通して、様々な公開資料、特許および公表された特許出願が引用される。本出願において参照するこれらの公開資料、特許および公表された特許出願の発明は、参照によりその全体が本発明に組み込まれている。本明細書において公開資料、特許、または公表された特許出願を引用することは、公開資料、特許、または公表された特許出願が従来技術であるということを認めたものではない。

本明細書において引用した全ての公開資料および特許出願は、それぞれの個々の公開資料または特許出願が参照により組み込まれていると特におよび個々に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれている。

上記の発明を、理解を明確とする目的のために例示および例証として詳しく記載してきたが、本発明の教示に照らし合わせて、添付の特許請求の範囲の精神または範囲を逸脱することなく特定の変化および修正をそれに対して行い得ることは当業者には容易に明らかである。

Claims (46)

1. 式（Ｉ）の構造を有する免疫アジュバント化合物、
   

   

   
   または薬学的に許容されるその塩
   ［式中、
   Ｒ^１は、−ＯＨまたはハロゲンであり、
   Ｒ^２は、−水素またはハロゲンであり、
   Ｒ^３は、−ＯＨ、水素またはハロゲンであり、
   Ｒ^４が、式（ＩＩＩ）：
   

   

   
   の構造を有し、ここで、
   ｊは、０、１、２、３、または４であり、
   Ｒ ^８ は、Ｆであり、そしてｋは、２、３、４、または５であり、
   Ｒ^７ は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ_２、−Ｎ_３、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、および任意選択で置換されているアシルからなる群から選択され、
   Ｒ^５は、水素、ハロゲン、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアルケニル、任意選択で置換されているアルキニル、任意選択で置換されているカルボシクリル、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロシクリル、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているアルコキシ、任意選択で置換されているアミノ基、および任意選択で置換されているアシルからなる群から独立に選択され、
   ｎは、１〜１５（両端を含む）の整数であり、そして
   ｍは、１〜２０（両端を含む）の整数であり、ただし、該化合物は、以下：
   

   

   
   

   

   
   

   

   
   のいずれかの１つではない］。
2. Ｒ^３が、−ＯＨである、請求項１に記載の化合物。
3. Ｒ^３が、ハロゲンである、請求項１に記載の化合物。
4. Ｒ^１が、−ＯＨである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
5. Ｒ^１が、ハロゲンである、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
6. ｊが、０であり、ｋが、２または３である、請求項１に記載の化合物。
7. Ｒ^７が、Ｆであり、ｊが、１、２または３である、請求項１に記載の化合物。
8. Ｒ^７ が、Ｆであり、ｋが、２または３であり、ｊが、１、２または３である、請求項１に記載の化合物。
9. 下記の１つから選択される、請求項１に記載の化合物。
   

   

   
   および
   

   
10. （ｉ）ヒト被験体に抗原と共に共投与したとき、免疫応答を刺激するのに十分な量の請求項１から９のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩、および（ｉｉ）薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
11. 抗原の免疫原性を増強させることを必要とする被験体において抗原の免疫原性を増強させるための組み合わせ物であって、該抗原と、請求項１から９のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を含むアジュバント組成物とを含む、組み合わせ物。
12. 免疫応答を刺激することを必要とするヒト被験体において免疫応答を刺激するための薬学的に許容されるキャリア中の免疫アジュバント組成物であって、請求項１から９のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、免疫アジュバント組成物。
13. 前記アジュバント組成物が、ワクチンアジュバントである、請求項１１に記載の組み合わせ物。
14. 前記アジュバント組成物が、ヒトにおいてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞の量を高めることができる量で投与されることを特徴とする、請求項１１に記載の組み合わせ物。
15. 前記アジュバント組成物の投与が、ヒトにおいてサイトカインおよび／またはケモカイン産生を増加させる、請求項１２に記載の免疫アジュバント組成物。
16. 前記サイトカイン産生が、下流の免疫細胞をトランス活性化するのに十分である、請求項１５に記載の免疫アジュバント組成物。
17. 前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の１つまたは複数を含む、請求項１６に記載の免疫アジュバント組成物。
18. 前記サイトカインが、Ｔｈ１サイトカインを含む、請求項１５に記載の免疫アジュバント組成物。
19. 前記Ｔｈ１サイトカインが、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、およびインターロイキン１２を含む群の少なくとも１つから選択される、請求項１８に記載の免疫アジュバント組成物。
20. 前記ケモカインが、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧを含む群の少なくとも１つから選択される、請求項１５に記載の免疫アジュバント組成物。
21. 前記抗原／アジュバント組成物の投与が、抗がん効果を有する、請求項１１に記載の組み合わせ物。
22. 前記抗がん効果が、肺がん、乳がん、ヘパトーム、白血病、固形腫瘍および癌腫からなる群からのがんに向けられている、請求項２１に記載の組み合わせ物。
23. ヒトにおけるＴｈ１サイトカインの増加が、Ｔｈ２サイトカインのいかなる増加をも上回る、請求項１１に記載の組み合わせ物。
24. インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高めることを必要とするヒト被験体においてインバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞産生を高めるための医薬組成物であって、請求項１から９のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む、医薬組成物。
25. サイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激することを必要とするヒト被験体においてサイトカインおよび／またはケモカイン産生を刺激するための医薬組成物であって、請求項１から９のいずれかに記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を含み、該医薬組成物が、サイトカイン／ケモカイン産生を増加させるのに十分な量で投与されることを特徴とする、組成物。
26. 前記サイトカイン産生が、下流の免疫細胞をトランス活性化するのに十分である、請求項２５に記載の医薬組成物。
27. 前記下流の免疫細胞が、樹状細胞（ＤＣ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、Ｂ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の１つまたは複数を含む、請求項２６に記載の医薬組成物。
28. 前記サイトカインが、Ｔｈ１サイトカインを含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
29. 前記サイトカインが、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα、インターロイキン２、およびインターロイキン１２から選択される、請求項２８に記載の医薬組成物。
30. 前記ケモカインが、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＫＣ、ＭＣＰ−１、ＩＰ−１０およびＭＩＧから選択される、請求項２５に記載の医薬組成物。
31. ワクチンアジュバントである、請求項１０に記載の医薬組成物。
32. 抗がん治療剤である、請求項１０に記載の医薬組成物。
33. 前記化合物が、Ｔｈ２サイトカインの最小の増加を伴って、ヒトにおいてＴｈ１サイトカインを増加させることができる、請求項１０に記載の医薬組成物。
34. 被験体において免疫応答を増強させるための組み合わせ物であって、１種もしくは複数種の抗原を含むワクチン、および免疫原性的に有効な量の請求項１０に記載の医薬組成物を含む、組み合わせ物。
35. 前記１種もしくは複数種の抗原が、細菌性抗原、ウイルス抗原、真菌抗原、原生動物抗原、プリオン抗原、ネオ抗原、腫瘍抗原および自己抗原からなる群から選択される、請求項３４に記載の組み合わせ物。
36. 前記ワクチンが、核酸、タンパク質、ペプチド、糖タンパク質、炭水化物、融合タンパク質、脂質、糖脂質、炭水化物−タンパク質コンジュゲート；細胞もしくはその抽出物；死細胞もしくは弱毒化細胞、もしくはその抽出物；腫瘍細胞もしくはその抽出物；ウイルス粒子；およびアレルゲンまたはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項３４に記載の組み合わせ物。
37. 前記抗原が、腫瘍抗原である、請求項３４に記載の組み合わせ物。
38. 抗原の量が、体重１ｋｇ当たり０．１μｇ〜１００ｍｇの範囲で投与されることを特徴とする、請求項３４に記載の組み合わせ物。
39. 前記式（Ｉ）の化合物の量が、体重１ｋｇ当たり１０〜１００μｇの範囲である、請求項３４に記載の組み合わせ物。
40. 前記医薬組成物が、式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容されるキャリアを含む共製剤化された薬学的に許容される組成物である、請求項３４に記載の組み合わせ物。
41. 請求項１から９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩を含む製造品。
42. 請求項１から９のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩、および使用説明書を含むキット。
43. 抗原の免疫原性を増強させることを必要とする被験体において抗原の免疫原性を増強させるための組成物であって、該抗原を含み、該組成物が請求項１から９のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を含むアジュバント組成物と共に投与されることを特徴とする、組成物。
44. 抗原の免疫原性を増強させることを必要とする被験体において抗原の免疫原性を増強させるためのアジュバント組成物であって、請求項１から９のいずれか１項に記載の化合物または薬学的に許容されるその塩を含み、該組成物が該抗原と共に投与されることを特徴とする、組成物。
45. 被験体において免疫応答を増強させるための組成物であって、１種もしくは複数種の抗原を含むワクチンを含み、該組成物が免疫原性的に有効な量の請求項１０に記載の医薬組成物と共に投与されることを特徴とする、組成物。
46. 被験体において免疫応答を増強させるための組成物であって、免疫原性的に有効な量の請求項１０に記載の医薬組成物を含み、該組成物が１種もしくは複数種の抗原を含むワクチンと共に投与されることを特徴とする、組成物。
    

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