JPH09509664A - ４−ｎ−置換シアル酸およびそれらのシアロシド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 シアロシドを含む新規なアジド基、およびそれらの調製方法が提供される。その方法および得られる化合物は、インフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの阻害に関して、薬物学的に興味あるものであるかもしれない。

Description

【発明の詳細な説明】 ４−Ｎ−置換シアル酸およびそれらのシアロシド類 発明の分野 シアル酸は、ウイルス、毒素、接着タンパク質、抗体およびレクチンに対する レセプター決定基として役立つ糖タンパク質および糖脂質において、他の糖にグ リコシド結合したものとして見いだされる一群の酸性の炭素９個のケト糖である 。合成シアロシドおよびそれらの類似体の設計は、薬物学的興味を有する。本発 明は、シアロシドを含む新規なアジド、アミノおよびアシルアミノ基、それらの 調製法、およびインフルエンザ・シアリダーゼ活性の阻害におけるそれらの使用 方法を提供する。 技術的背景 シアリダーゼは、ウイルスのタンパク質コートおよび細菌の外膜に存在する酵 素である。それらは、宿主細胞表面に見い出されるシアル酸で終結する糖タンパ ク質および糖脂質の炭水化物部分を処理するのに役立つ。これらの糖タンパク質 および糖脂質部分の処理は、病原体複製サイクルにとって重大である。この特定 の宿主−病原体種の特定の例は、インフルエンザウイルスと赤血球である。イン フルエンザウイルスは、細胞表層の炭水化物への付着をとおして赤血球に結合す る。具体的には、ウイルスは、宿主（赤血球）細胞上のシアリルオリゴ糖と相互 作用する２種の表層糖タンパク質、赤血球凝集素とノイラミニダーゼ（シアリダ ーゼ）をもつ膜エンベロープを有する。細菌シアリダーゼによる赤血球や宿主細 胞の前処理が、ウイルスの吸着および／または感染を阻止するので、シアル酸が 、レセプター決定基の必須の構成であることを示唆していることは、以前より知 られていた（Burnet，F．M．and Stone，J． D.，Aust．J．Exp．Biol．Med．Sci.，25，227-233（1947）and Stone，J．D.， Aust．J．Exp．Biol．Med．Sci.，26，48-64(1948)）。赤血球凝集素は、シアル 酸、ガラクトースおよびＮ−アセチルグルコサミンを含む宿主細胞構造体に付着 する。レセプターからシアル酸を加水分解するノイラミニダーゼ機能、および感 染細胞の高い病原体レベルにおけるこのノイラミニダーゼ活性は、宿主膜からの 出芽ウイルスの溶離を助け、かくして病原体の複製を促進する。 ４−アミノ−および−グアニジノ−２，３−デヒドロシアル酸が、最近、イン フルエンザウイルス・ノイラミニダーゼの非常に強力な阻害剤であることが示さ れ、抗ウイルス薬として有用になるかもしれない。これらの非天然化合物の高い 結合力は、デヒドロシアル酸の４−アミノまたはグアニジノ基と、ノイラミニダ ーゼの活性部位のカルボキシル残基との間の静電的相互作用から生じることが示 された。また、そのような相互作用は、糖タンパク質および糖脂質の末端炭水化 物構造を表すケトシド様結合されたシアロシドにおいて可能であるにちがいない （M．von Itzstein et al.，Nature，418-423(1993)）。 M．von Itzstein et al.，Carbohydrate Research，244: 181-185(1993)は、 メチル（５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−２，６−アンヒ ドロ−４−アジド−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト− ノン−２−エン）オナート（３）の調製方法を開示している。この化合物のさら なる反応に関しては、いかなる開示も示唆もない。 発明の概要 本発明は、反応式 ［式中、Ｒ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり、 Ｒ²は、アジドもしくは水素であり、 Ｒ³は、ＨまたはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり 、そして Ｒ⁴は、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルである］ にしたがう、４−アジド−２，３−デヒドロシアル酸または４−デオキシ−２， ３−デヒドロシアル酸（Ｉ）の、対応する４−アジド−２−クロロシアル酸また は４−デオキシ−２−クロロシアル酸（ＩＩ）への塩化水素化の方法を提供する が、その方法は、４−アジド−２，３−デヒドロシアル酸または４−デオキシ− ２，３−デヒドロシアル酸を、極性非プロトン性溶媒または有機カルボン酸溶媒 の存在下、反応条件下で無水塩化水素と接触させることを含む。この方法は、さ らに塩化リチウムの存在によって増進される。 さらに、本発明は、構造ＩＩの４−アジド−２−クロロシアル酸または４−デ オキシ−２−クロロシアル酸を提供する。 さらに、本発明は、構造ＩＩＩの化合物を提供する。 式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷 移金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニ ウムイオンであり； Ｒ²は、アジド、アシル基が炭素原子１〜８個を含むアシルアミノ、アミノ、 水素もしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり ； Ｒ⁵は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり； Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換アルコキシ、 一、二もしくはオリゴ糖、またはＲ^7'がＨでない場合、Ｒ^{7 '} と一緒になってアルキリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈ でなければならないが、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者ともに、Ｈである場合はない； そして Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アル キル、アリール、または、隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒になってア ルキリデンであり； この場合、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカ ルビルもしくは置換ヒドロカルビルである。 さらに、本発明は、構造ＩＶの化合物を提供する。 式中、 Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷 移金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニ ウムイオンであり； Ｒ²は、アジド、アシル基が炭素原子１〜８個を含むアシルアミノ、アミノ、 グアニジノもしくは水素であり；そして Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり ； Ｒ⁸は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビル、炭素原子１〜 ８個を含むアシルであり； Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもし くは置換ヒドロカルビルであり； Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹である。 さらに、本発明は、式ＩＩＩの化合物とシアリダーゼを接触させることを含む シアリダーゼ活性を阻害する方法を提供する。 式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷移金属の一、二また は多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニウムイオンであり； Ｒ²は、アミノもしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈであり； Ｒ⁵は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり； Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換ア ルコキシ、一、二もしくはオリゴ糖、またはＲ^7'がＨでない場合にはＲ^7'と一緒 になってアルキリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈでなけ ればならないが、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者ともに、Ｈである場合はなく；そして Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、または隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒にな ってアルキリデンであり； この場合、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカ ルビルもしくは置換ヒドロカルビルである。 さらに、本発明は、シアリダーゼ耐性をもつ式ＩＩＩの化合物を提供する。 式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷 移金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニ ウムイオンであり； Ｒ²は、アミノもしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈであり； Ｒ⁵は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり； Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換アルコキシ、 一、二もしくはオリゴ糖、またはＲ^7'がＨでない場合のＲ^7'と一緒になってアル キリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈでなければならない が、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者ともに、Ｈである場合はなく Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、または隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒にな ってアルキリデンであり； この場合、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカ ルビルもしくは置換ヒドロカルビルである。 図の簡単な説明 図１は、実施例において調製された化合物の化学構造を示す。 図２は、４−アミノ−シアロシド１２（パネルＡ）および４−アミノ−チオシ アロシド１４（パネルＢ）によるαＤＮｅｕＡｃ２，６βＤＬａｃＮＡｃのイン フルエンザ・ノイラミニダーゼ加水分解に対する阻害を示す。 発明の詳細な記述 本発明は、（１）４−アジド、アミノおよびアセトアミド−置換シアリル二糖 の最初の簡潔な合成；（２）Ｏ−結合シアロシドのシアル酸の４位におけるアジ ドもしくはアセトアミド基が、ノイラミニダーゼの加水分解作用に対する耐性を 付与するという発見；そして（３）インフルエンザ・ノイラミニダーゼの強力な ４−アミノ−シアロシドおよび４− アミノ−チオシアロシド阻害剤の同定を提供する。 本発明の方法の出発材料は、既知化合物である。例えば、メチル（５−アセト アミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−２，６−アンヒドロ−４−アジド− ３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノン−２−エン）オ ナート、Ｒ¹がメチルであり、Ｒ²がアジドであり、Ｒ³がメチルであり、そして Ｒ⁴がアセチルである一般式Ｉの化合物では、合成経路は、既知の市販されてい るＮ−アセチル−ノイラミン酸（１）から出発する。実施例１，２および３で実 施されたこの合成は、合成経路１において具体的に説明される。 本発明の方法は、一般構造Ｉの化合物（Ｉにおいて、Ｒ¹がＣＨ₃であり、Ｒ² がＮ₃であり、Ｒ³がＣＨ₃であり、そしてＲ⁴がＣＨ₃ＣＯである 特定の化合物４）の、一般構造ＩＩの化合物（ＩＩにおいて、Ｒ¹がＣＨ₃であり 、Ｒ²がＮ₃であり、Ｒ³がＣＨ₃であり、そしてＲ⁴がＣＨ₃ＣＯである特定の化合 物５）への転化について、実施例４で具体的に説明される。 本発明の方法、すなわち一般構造Ｉの化合物の一般構造ＩＩの化合物への転化 の方法にとっては、無水塩化水素の給源が必要である。これは、無水塩化水素ガ スそれ自体を含んでもよいし、あるいは、例えば分子ふるいによって、水を含有 する塩化水素のイン・サイチューでの脱水を伴ってもよい。 本方法は、実質的に無水条件下で不活性ガス雰囲気下、例えば窒素もしくはア ルゴン下で実施される。 本方法は、溶媒中、例えば、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチ ルアセトアミド、ジメチルスルホキシドのような非プロトン性有機溶媒、および 塩化メチレン、クロロホルムおよび四塩化炭素のようなハロゲン化有機溶媒、ま たは酢酸のような有機カルボン酸溶媒中で実施される。アセトニトリルが好適で ある。 本方法は、一般に、０℃〜２５℃において、長時間かけて、すなわち２４時間 〜６日以上で行われる。 塩化リチウムが、場合により本方法の反応媒体に添加されてもよい。それは、 反応に利用できる塩化物濃度を増大するのに役立つ。その存在は、必ずしも必要 ではない。 化合物ＩＩの新規化合物ＩＩＩおよびＩＶへの転化は、実施例６〜１４によっ て具体的に説明される。化合物ＩＩの、他の種類のＩＩＩ化合物への転化は、技 術上既知の方法によって実施される。例えば、ＸがＣ Ｒ⁹Ｒ¹⁰である場合のＩＩＩを調製するためには、化合物ＩＩは、適当なカルボ アニオンと反応させられる。ＸがＮＲ¹¹である場合のＩＩＩを調製するためには 、化合物ＩＩは、適当なアミンと反応させられる。エステル官能基は、加水分解 でき、その結果Ｒ¹は、Ｈまたは種々の塩に転化できる。 Ｒ⁴がアシルもしくはアルキルである化合物ＩＩＩおよびＩＶは、技術上既知 の方法による加水分解によって、Ｒ⁴がＨである化合物に転化できる。 シアリダーゼ活性を阻害する方法において、特に有用な化合物は、ＸがＳであ り、Ｒ¹がＮａであり、Ｒ²がＮＨ₂であり、Ｒ³がＣＨ₃であり、Ｒ⁴がＨであり、 Ｒ⁵がＣＨ₃であり、Ｒ⁶およびＲ^6'の１つがＯＨであり、その他がＨであり、そ してＲ⁷およびＲ^7'がＨであるか、またはＸがＯであり、Ｒ¹がＮａであり、Ｒ² がＮＨ₂であり、Ｒ³がＣＨ₃であり、Ｒ⁴がＨであり、Ｒ⁵がＨであり、Ｒ⁶および Ｒ^6'の１つがＯＨであり、その他がＨであり、そしてＲ⁷およびＲ^7'がＨである 一般構造ＩＩＩをもつ。これらは、実施例１１および１３において調製される。 ノイラミニダーゼ加水分解活性に対して耐性な好適な化合物は、ＸがＳであり、 Ｒ¹がＮａであり、Ｒ²がＨ、アジドもしくはアセトアミドであり、Ｒ³がＣＨ₃で あり、Ｒ⁴がＨであり、Ｒ⁵がＣＨ₃であり、Ｒ⁶およびＲ^6'の１つがＯＨであり、 その他がＨであり、そしてＲ⁷がＨである一般構造ＩＩＩの化合物である。 ノイラミニダーゼ加水分解活性に対して耐性なその他の好適な化合物は、Ｘが Ｏであり、Ｒ¹がＮａであり、Ｒ²がアジドであり、Ｒ³がＣＨ₃であり、Ｒ⁴がＨ であり、Ｒ⁵がＨかＣＨ₃であり、Ｒ⁶およびＲ^6'の１ つがＯＨであり、その他がＨであり、そしてＲ⁷がＨである一般構造ＩＩＩの化 合物である。 さらに、ノイラミニダーゼ加水分解活性に対して耐性なその他の好適な化合物 は、ＸがＯであり、Ｒ¹がＮａであり、Ｒ²がアセトアミドであり、Ｒ³がＣＨ₃で あり、Ｒ⁴がＨであり、Ｒ⁵がＨであり、Ｒ⁶およびＲ^6'の１つがＯＨであり、そ の他がＨであり、そしてＲ⁷がＨである場合、ならびにＸがＯであり、Ｒ¹がＮａ であり、Ｒ²がアセトアミドであり、Ｒ³がＣＨ₃であり、Ｒ⁴がＨであり、Ｒ⁵が ＣＨ₃であり、Ｒ⁶が２−（トリメチルシリル）エトキシであり、Ｒ^6'がＨであり 、そしてＲ⁷がＨである一般構造ＩＩＩの化合物である。 図１は、実施例において調製された化合物の化学構造を示す。一般構造ＩＩＩ では、置換基のコーディングは、次のとおりである： 化合物８ Ｘ＝Ｓ，Ｒ¹＝Ｍｅ，Ｒ²＝Ｎ₃、Ｒ³＝Ｍｅ、Ｒ⁴＝ＣＨ₃Ｃ Ｏ、Ｒ⁵＝Ｍｅ、Ｒ⁶＝Ｈ、Ｒ^6'は、Ｒ^7'と一緒になった イソプロピリデンオキシであり、そして両Ｒ^7'＝イソプ ロピリデン、 化合物９ Ｘ＝ＯおよびＲ⁵＝Ｈ以外は８と同じ、 化合物１０ Ｘ＝Ｏ，Ｒ¹＝Ｎａ，Ｒ²＝Ｎ₃、Ｒ³＝Ｍｅ、Ｒ⁴、Ｒ⁵、 Ｒ⁶とＲ^6'の１つはＨであり、その他がＯＨであり、そし てＲ⁷とＲ^7'＝Ｈ、 化合物１１ Ｒ²＝ＮＨＣ（＝Ｏ）ＣＨ₃以外は１０と同じ、 化合物１２ Ｒ²＝ＮＨ₂以外は１０と同じ、 化合物１３ Ｘ＝Ｓ，Ｒ¹＝Ｎａ，Ｒ²＝Ｎ₃、Ｒ³＝Ｍｅ、Ｒ⁴＝Ｈ 、Ｒ⁵＝Ｍｅ、Ｒ⁶とＲ^6'の１つはＨであり、その他がＯＨであ り、そしてＲ⁷とＲ^7'＝Ｈ、 化合物１４ Ｒ²＝ＮＨ₂以外は１３と同じ。 チオシアロシドによるノイラミニダーゼの阻害 ノイラミニダーゼ阻害剤としての問題のチオシアロシドの有効性を測定するた めに、インキュベーションは、ノイラミニダーゼ、チオシアロシド阻害剤、およ び¹⁴Ｃ−標識基質、¹⁴Ｃ−標識αＤＮｅｕＡｃ（２−６）βＤＧａｌ（１−４） ＤＧｌｃＮＡｃ（Ａ）を含めて行われた。 実験１ ¹⁴Ｃ−標識αＤＮｅｕＡｃ（２−６）βＤＧａｌ（１−４）ＤＧｌｃ（Ａ）の 調製 この化合物は、Unversagt，C．et al.，J．C.，J．Am．Chem．Soc．1990，112 ，9308-9309記載のように作成された。¹⁴Ｃ−標識Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサ ミン（¹⁴Ｃ−Ｄ−ＧｌｃＮＡｃ、５０ｕＣｉ、NEN，MA）を、ＭｎＣｌ₂（１０ｍ ｍｏｌｅ）、カコジル酸ナトリウム（５０ｍｍｏｌｅ）およびガラクトシルトラ ンスフェラーゼ（５Ｕ，ＥＣ．２．４．１．２２，Sigma Chemical Company，St ．Louis，MO）を含むバッファー（１．７ｍｌ，ｐＨ７．４）に溶解されたＤ− ＧｌｃＮＡｃ（１３．５ｍｇ，６１．１ｍｍｏｌｅ）およびＵＤＰ−ガラクトー ス（４５．３ｍｇ，８０ｍｍｏｌｅ）と混合し、そして３７℃で２４時間インキ ュベートした。反応混合液を、上端に充填されたＣｈｅｌｅｘ樹脂（５００ｍｇ ）を含むＤｏｗｅｘ燐酸塩樹脂カラム（２００〜４００メッシュ）を通過させた 。カラムを、脱イオン水（３０ｍｌ）で溶出し、そして溶出液を濃縮して乾燥残 渣とし、それを、ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃ（５０ｍｇ，Sigma Chemical Co.）、ウシ ・アルカリホスファターゼ（６Ｕ）、ウシ 血清アルブミン（５ｍｇ）およびＧａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃ２，６シアリルト ランスフェラーゼ（５００ｍＵ，Ｅ．Ｃ．２．４．９９．５）を含む１００ｍＭ カコジル酸ナトリウムバッファー（２．５ｍｌ，ｐＨ６．５）中に溶解し、そし て３７℃で２４時間インキュベートした。反応混合液を水で１２ｍｌまで希釈し 、Ｄｏｗｅｘ燐酸塩樹脂（２００−４００メッシュ）のカラムに適用し、そして 水（７５ｍｌ）で溶出した。次いで、溶出バッファーを、５ｍＭリン酸ナトリウ ムバッファー（ｐＨ６．８）に変え、画分（７．５ｍｌ）を回収した。画分のサ ンプル（１０μｌ）を、シンチレーション液（３ｍｌ，Ｆｏｒｍｕｌａ ９８９ ，NEN，MA）で希釈し、そして放射能を測定した。生成物は、画分１７−３０に 出現した。これらを蓄え、乾燥残渣になるまで濃縮して、水に再溶解し、そして 脱イオン水で平衡化し、溶出するＳｅｐｈａｄｅｘＧ−１５カラム（７５ｍｌ） に適用した。放射能をもつ画分（２ｍｌ）を蓄え、凍結乾燥して無色の物質（３ ８ｍｇ）を得た。 阻害剤の阻害定数を、阻害剤の存在または不在下で、ノイラミニダーゼととも に、４種の異なる濃度におけるＡの溶液をインキュベーション（３７℃）するこ とによって決定した。反応後、反応混合液を、脱イオン水で希釈し、Ｄｏｗｅｘ 樹脂のカラムを通過させた。カラムを、さらに、脱イオン水で溶出した。これら の条件下では、遊離のＬａｃＮＡｃのみが溶出する。溶出液を、シンチレーショ ン液（１０ｍｌ，Ｆｏｒｍｕｌａ ９８９，NEN，MA）で希釈し、放射能を測定 し、そして、遊離された遊離ＬａｃＮＡｃ量を決定した。 実施例 一般的方法 特に記さない限り、すべての試薬は、Aldrich Chemical Co.（St．Louis，MO ）から購入された。薄層クロマトグラフィーは、Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０Ｆ₂₅₄ (EM Science)のプレコーティングされたプレートで実施し、スポットは、エ タノール中５％硫酸含有液のスプレー、続く加熱によって現像した。カラムクロ マトグラフィーは、シリカゲル６０（２３０−４００メッシュ、EM Science）で 実施した。¹ＨＮＭＲスペクトルを、３００，５００もしくは６００ＭＨｚ（Ｇ Ｅ Ｏｍｅｇａ−３００，ＧＥ Ｏｍｅｇａ ５００もしくはＢｒｕｋｅｒ Ａ Ｍ−５００，ＡＭＸ−６００）で記録し、そして¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルを、７ ５．４８もしくは１２５．７４ＭＨｚ（３００および５００ＭＨｚ、それぞれプ ロトンに対して）における上記機器操作によって記録した。有機溶媒中の水素お よび炭素の化学シフトは、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）に比較して表される。 水素および炭素原子は、還元末端ユニットから数えられる。酸化重水素もしくは 重水素化メタノール中の化合物溶液では、水素化学シフト値は、ＨＯＤシグナル （２９６°Ｋにおいて４．７５ｐｐｍ，内部アセトン２．２３ｐｐｍ）に比較し て表され、そして炭素化学シフトは、１，４−ジオキサンの化学シフトを６６． ９ｐｐｍにセットした分光計の重水素ロックを用いて、外部ＴＭＳに比較して表 される。 本主題の事柄のために、次の用語および略語が用いられる：“ｓｅｃ”は、秒 を意味し、“ｍｉｎ”は、分を意味し、“ｈ”は、時間を意味し、“ｄ”は、日 を意味し、“ｍｌ”は、ミリリットルを意味し、そして“ｇ”は、グラムを意味 する。 実施例１ メチル （５−アセトアミド−３，５−ジデオキシ−２，４，７，８， ９−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクトノヌロピラノシル ）オナート ２：化合物２を、公表された方法（Baggett，N; Marsden，B．J．C arbohydr．Res.（1982）110，11-18; Hasegawa，A.; Ohki，H.; Nagahama，T.; Ishida，H.; Kiso，M．Carbohydr．Res.（1991）212，277-281）にしたがって調 製した。無水メタノール（３５０ｍｌ）中Ｎ−アセチル−ノイラミン酸（１）（ １５．０ｇ，Chemica Alta Ltd.，Edmonton，Alberta，Canada）および酸性樹脂 （１５．０ｇ，Ａ リルで洗浄、BioRad，Richmond，CA，USA）を、室温で１８時間撹拌した。次い で、樹脂を濾過し、濾液を蒸発乾固し、そして残渣を、ピリジン（１００ｍｌ） および無水酢酸（５０ｍｌ）に溶解した。２０時間後、反応混合液を、砕氷上に 注入し、生成物を、ジクロロメタンで抽出した。その有機層を分離し、氷冷０． ５Ｍ塩酸で洗浄し、この操作を、水層が酸性になるまで繰り返した。次いで、有 機層を、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、 濾過、蒸発して、泡状残渣（２１．６ｇ）を得た。 実施例２ メチル ７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−２，３−ジデヒドロ−２，３，５ −トリデオキシ−４’，５’−ジヒドロ−２’−メチルオキサゾロ［５，４−ｄ ］−Ｄ−グリセロ−Ｄ−タロ−２−ノヌロピラノシドナート ３：化合物３を、 文献の方法（Schreider，E.; Zbiral，E.; Kleineidam，R．G.; Schauer，R．Li ebigs Ann．Chem．（1991）129-134）にしたがって調製した。トリフルオロメタ ンスルホン酸トリメチルシリル（１３．０ｇ，Aldrich Chemical Co．Inc.，Mil waukee，WI）を含む 無水アセトニトリル（１５０ｍｌ）中化合物２（１４．４ｇ）を、５０℃で３時 間加熱した。反応混合液を、氷浴中で冷却し、無水炭酸ナトリウム（１３．０ｇ ）とともに３時間撹拌した。次いで、その反応混合液を濾過し、乾燥残渣まで濃 縮し、そして残渣を、ＣＨ₂Ｃｌ₂に再溶解し、重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した 。有機層を、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過、蒸発して、シロップ状物質（９．０ｇ ）を得た。生成物３の構造は、公表されたＮＭＲデータ（Schreiner et al.）と 比較して確認された。 実施例３ メチル （５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−２，６−ア ンヒドロ−４−アジド−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラク ト−ノン−２−エン）オナート ４： 化合物４を、公表された方法（von Itzs tein，M.; Jin，B.; Wu，W．Y.; Chandler，M．Carbohydr．Res．（1993）244， 181-185）にしたがって調製した。ｔ−ブタノール（５０ｍｌ）中化合物３（５ ．７ｇ）の溶液に、アジ化トリメチルシリル（７．６５ｍｌ，Aldrich Chemical Co．Inc.，Milwaukee，WI）を添加し、８０℃で４時間加熱した。反応混合液を 、濃縮乾固し、そして残渣を、ジクロロメタンに溶解し、水および飽和塩化ナト リウム溶液で洗浄した。次いで、溶媒を蒸発し、生成物を、溶離液として酢酸エ チル−ヘキサン−エタノール（１０：１５：１）を用いるクロマトグラフィーに よって精製した。生成物の収量は、５．０ｇであった。４の構造は、公表された ＮＭＲデータ（von Itzstein et al.）と比較して確認された。 実施例４ メチル （５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−４ −アジド−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノヌロピ ラノシルクロリド）オナート ５： 無水ＨＣｌガス（Aldrich Chemical Co．I nc.，Milwaukee，WI）を、４Å分子ふるい（５．０ｇ）と塩化リチウム（１．０ ｇ）を含むアセトニトリル（５０ｍｌ）中４（２．０ｇ）の氷冷溶液中に、２０ 分間通気した。次いで、その溶液を、周囲温度で４日間撹拌した。反応混合液を 、氷浴中で冷却し、ＨＣｌガスを、さらに１０分間通気し、反応を、さらに２日 間継続した。次いで、反応混合液を減圧蒸発して乾固し、そして残渣を、ジクロ ロメタンで抽出した。ジクロロメタン溶液を、氷冷水（２ｘ）、次いで飽和重炭 酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過、濃縮して乾燥残渣 （１．６ｇ）を得た。粗生成物の¹Ｈ−ＮＭＲでは、生成物が、化合物５を８５ ％超、出発物質４を約１０％を含むことを示した。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：５.６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９.６Ｈｚ，ＮＨ）、５ .４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２.８，７.２Ｈｚ，Ｈ−７）、５.１９（ｍ，１Ｈ，Ｈ −８）、４.５２（ｄｄ，Ｊ＝２.８，１１.０Ｈｚ，Ｈ−６）、４.４０（ｄｄ， Ｊ＝３.２，１２.８Ｈｚ，Ｈ−９ａ）、４.２６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、４.１０ （ｄｄ，Ｊ＝５.６，１２.８Ｈｚ，Ｈ−９ｂ）、３.８８（ｓ，Ｃ））ＣＨ₃）、 ３.７６（ｍ，Ｈ−５）、２．７９（ｄｄ，Ｊ＝４.８，１４.３Ｈｚ，Ｈ−３ｅ ｑ）、２.１４，２.０７，２.０６および２.０３（４ｘｓ，ＣＨ３ＣＯＯ−）。 実施例５ ６，７−ジデオキシ−１，２；３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−６−チオ −α−Ｄ−ガラクトヘプトピラノース ６： これを、特許出願 U.S.S.N.07/90 4,233に記載のように調製した。０℃で、ＣＨ₂Ｃｌ₂ （１５０ｍｌ）中７−デオキシ−１，２；３，４＝ジ−Ｏ−イソプロピリジン− α−Ｄ−グリコ−Ｄ−ガラクトヘプトピラノース（Lemieux et al.，Can．J．Ch em．60，81-86（1981）のように調製）（７．８ｇ）の溶液に、ピリジン（１０ ｍｌ）と無水トリフルオロメタンスルホン酸（１０．２ｇ）を添加し、反応混合 液を、０℃で１時間撹拌した。その反応混合液を、ジクロロメタンで希釈し、そ して水、氷冷１Ｍ塩酸および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。溶媒を蒸発 し、粗生成物を、チオ酢酸カリウム（５．５ｇ，Janssen Chemica，New Brunswi ck，NJ）を含むＤＭＦ（１５０ｍｌ）に溶解し、そして室温で１８時間撹拌した 。溶媒を蒸発し、残渣をジクロロメタンに溶解し、そして水、氷冷１Ｍ塩酸およ び飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。酢酸エチル−ヘキサン（１：１２）を 用いるシリカゲルでのクロマトグラフィーによる精製で、６，７−ジデオキシ− １，２；３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−６−アセチルチオ−α−Ｄ−グリ セロ−Ｄ−ガラクトヘプトピラノース（５．６ｇ）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：５.５８（ｄ，Ｈ−１）、４.５８（ｄｄ，Ｈ−３ ）、４.３７（ｄｄ，Ｈ−４）、４.２９（ｄｄ，Ｈ−２）、３.８８（ｄｄ，Ｈ −５）、３.７４（ｍ，Ｈ−６）、２.３１（ｓ，Ｓ−Ａｃ）、１.５２，１.４５ ，１.３３および１.３２（イソプロピリデン メチル）、１.４３（ｄ，Ｈ−７ ）。 上記残渣の一部（４．６ｇ）を、３０％水酸化アンモニウム（４．６ｍｌ）と ジチオトレイトール（２．８ｇ）を含む０℃の乾燥メタノール（４０ｍｌ）中に 溶解した。０℃で１６時間後、溶媒を蒸発し、残渣を ＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解し、無水ＭｇＳＯ₄で乾燥し、そして濃縮した。シリカゲルカ ラムでのクロマトグラフィー（酢酸エチル−ヘキサン＝１：２０）による生成物 の精製で、表題の生成物６（３．３ｇ）を得た。 ＤＣｌ₃）δ：５.５４（ｄ，Ｈ−１）、４.６５−４.５９（ｍ，２Ｈ）、４.３ ０（ｄｄ，１Ｈ）、３.４５（ｄｄ，１Ｈ）、３.１２（ｍ，Ｈ−６）、１.６６ （ｄ，ＳＨ）、１.４（ｄ，Ｈ−７）、１.５３，１.４４，１.３５および１.３ ３（イソプロピリデン メチル）。¹³Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：１０９.１， １０８.６，９６.８，７３.６，７１.１，７０.９７，７０.４，３３.６３，２ ６.０，２５.９，２４.９，２４.４，２１.７。計算値Ｃ₁₃Ｈ₂₂Ｏ₅Ｓ：Ｃ，５３ .７９；Ｈ，７.５８：実測値Ｃ，５３.９０；Ｈ，７.７１。 実施例６ メチル ５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−４−アジド− ２−メチルチオ−３，４，５−トリデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト −ノヌロピラノシロナート ７： ナトリウムチオメトキシド（１．１３ｇ，１ ６．２ｍｍｏｌ，Aldrich Chemical Co．Inc.，Milwaukee，WI）を、分子ふるい （４Å、１．０ｇ）を含むアセトニトリル（２０ｍｌ）中化合物５（１．６ｇ） の溶液に添加し、乾燥窒素雰囲気下で４０時間撹拌した。次いで、その反応混合 液を、濃縮乾固し、残渣を、ジクロロメタンに懸濁し、氷冷ＨＣｌに注入した。 有機層を分離し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで 乾燥し、そして濃縮して乾燥残渣（１．４ｇ）を得た。粗生成物の¹Ｈ−ＮＭＲ では、塩化物５中に存在する微量の４とともに、主成分７の存在 を確認した。粗物質の純度は、続いてのグリコシル化反応には十分であることが 分かった。分析的に純粋な７は、溶出液として酢酸エチル−ヘキサン−エタノー ル（１０：１５：１）を用いるシリカゲルカラムでのクロマトグラフィーによっ て得られた。 ＩＲ（ＣＨＣｌ₃）ｃｍ^-1：２１０３（Ｎ₃）、１７４２（エステル）。¹Ｈ−Ｎ ＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：５.６０（ｄ，Ｊ＝９.６Ｈｚ，ＮＨ）、５.３８（ｍ，１ Ｈ，Ｈ−８）、５.３０（ｄｄ，Ｊ＝１.８，９.０Ｈｚ，Ｈ−７）、４.３０（ｄ ｄ，Ｊ＝２.７，１２.２Ｈｚ，Ｈ−９ａ）、４.１７（ｄｄ，Ｊ＝４.６，１２. ２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、４.０７（ｄｄ，Ｊ＝１.９，１０.６Ｈｚ，Ｈ−６）、４. ０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４）、３.８１（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ₃）、３.３０（ｍ， １Ｈ，Ｈ−５）、２.７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.６，１２.９Ｈｚ，Ｈ−３ｅｑ ）、２.１６，２.１５，２.１０，２.０４および１.９９（５ｘｓ，４ｘＣＨ₃Ｃ ＯＯ−およびＳ−ＣＨ₃）、１.７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１.８，１２.９Ｈｚ， Ｈ−３ａｘ）。 実施例７ メチル ５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−４−アジド− ２−メチルチオ−３，４，５−トリデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト −ノヌロピラノシロナート（２−Ｓ−６）−７−デオキシ−１，２；３，４−ジ −Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−ガラクトヘプトピラノース ８： 水素化ナ トリウム（２３ｍｇ）を、無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）中６（２９０ｍｇ）の冷溶液 （−２０℃）に添加した。５分後、ＤＭＦ（５ｍｌ）中粗５（４９２ｍｇ）の溶 液を添加し、その反応混合液を、−２０℃で４時間撹拌した。次いで、それを、 減圧下で 蒸発乾固し、残渣を、ジクロロメタンおよび水で抽出し、一緒に合わせた。ジク ロロメタン層を分離し、氷冷０．５ＭＨＣｌ、次に飽和重炭酸ナトリウム溶液で 洗浄した。溶媒の蒸発後得られた混合物を、溶出液として酢酸エチル−ヘキサン −エタノール（１０：１５：１）を用いるシリカゲルカラムでのクロマトグラフ ィーによって精製して、純粋な８（３５０ｍｇ）を得た。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：５.５７（ｄ，Ｊ＝８.４Ｈｚ，ＮＨ）、５.５０ （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，Ｈ−１）、５.３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−８）、５.２ ８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２.２，８.４Ｈｚ，Ｈ−７）、４.５５（ｄｄ，Ｊ＝２.７ ，８.０Ｈｚ，Ｈ−３）、４.４０−４.１７（３Ｈ，Ｈ−９'ａ，ｂ，Ｈ−２，Ｈ −４）、４.１３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６'）、４.００（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４'）、３ .８１（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ₃）、３.４９（ｄｄ，Ｊ＝１.９，８.０Ｈｚ，Ｈ −５）、３.３８−３.１８（Ｈ−６，Ｈ−５'）、２.７８（ｄｄ，Ｊ＝４.３， １２.５Ｈｚ，Ｈ−３'ｅｑ）、２.１６，２.１３，２.０６および１.９８（４ｘ ｓ，ＣＨ₃ＣＯＯ）、１.７９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２.４Ｈｚ，Ｈ−３'ａｘ）、１ .４８，１.４４，１.３２および１.３１（４ｓ，４−イソプロピリデン メチル ）、１.４６（ｄ，Ｈ−７）。 実施例８ メチル ５−アセトアミド−７，８，９−トリ−Ｏ−アセチル−４−アジド− ３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノヌロピラノシド） オナート（２−６）−１，２；３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−ガ ラクトヘプトピラノース ９： 臭化メチルスルフェニル（１，２−ジクロロエ タン中１Ｍ）を、−３０℃で、アセ トニトリル−ジクロロメタン混合液（４：１，２５ｍｌ）中、７（８５０ｍｇ） 、１，２；３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−ガラクトピラノース（ ６５５ｍｇ，Pfanstiehl Laboratories，Inc.，Waukegan，IL）、トリフルオロ メタンスルホン酸銀（５１８ｍｇ）および粉末３Å分子ふるい（１．５ｇ）の溶 液に添加した。続いて、その溶液を、−３８℃で１６時間撹拌した。飽和重炭酸 ナトリウム溶液（３ｍｌ）を添加し、反応混合液を、室温で１０分間撹拌した。 次いで、それを、Ｃｅｌｉｔｅパッドで濾過し、残渣を、ジクロロメタンで洗浄 した。濾液を、飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾 燥し、そして濃縮して乾燥残渣を得た。酢酸エチル−ヘキサン−エタノール（１ ０：１５：１）を用いるシリカゲルでのクロマトグラフィーによるこの生成物の 精製では、未反応の１，２；３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−ガラ クトピラノース（４００ｍｇ）、次に純粋な９（２１６ｍｇ）、およびグリカル ４を約１０％混入した９の混合物（４３１ｍｇ）を得た。 ＩＲ（ＣＨＣｌ₃）ｃｍ^-1：２１０４（Ｎ₃），１７４７（エステル）。¹Ｈ−Ｎ ＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：５.５１（broad ｄ，２Ｈ，Ｊ＝４.３Ｈｚ，Ｈ−１，Ｎ Ｈ）、５.３９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−８'）、５.２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.９，８. ２Ｈｚ，Ｈ−７'）、４.５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝Ｈ−３）、４.３５−４.２０（ ｍ，Ｈ−２，Ｈ−４，Ｈ−９'ａ，ｂ，Ｈ−６'）、３.９５−３.７５（Ｈ−４' ，Ｈ−６，Ｈ−５，ＣＯＯＣＨ₃）、３.５９（ｍ，Ｈ−６ｂ？）、３.３７（ｍ ，Ｈ−５'）、２.６７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.４，１３.２Ｈｚ，Ｈ−３'ｅｑ） 、２.１５，２.１３，２.０４および１.９８（４ｘｓ，４ｘＣＨ₃ＣＯＯ）、１. ７ ４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３.３Ｈｚ，Ｈ−３'ａｘ）、１.５３，１.４２，１.３２ および１.３１（４ｘｓ，４−イソプロピリデン メチル）。 実施例９ ５−アセトアミド−４−アジド−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ− Ｄ−ガラクト−ノヌロピラノシロン酸（２−６）−α−Ｄ−ガラクト−ピラノー スのナトリウム塩 １０： シアロシド９（純度９０％，４２５ｍｇ）を、メタ ノール（２５ｍｌ）に溶解し、続いて、０．５Ｍナトリウムメトキシド溶液（０ ．２ｍｌ）を添加した。４時間後、反応混合液を、酸性樹脂で中和し、蒸発乾固 し、水（５ｍｌ）に再溶解し、そしてＢｉｏｇｅｌＰ−２によるゲル浸透クロマ トグラフィーによって精製し、純粋なメチル （５−アセトアミド−４−アジド −３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノヌロピラノシロ ナート（２−６）−１，２；３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−ガラ クト−ピラノース（２７０ｍｇ）を得た。この一部（１１０ｍｇ）を、５０％ト リフルオロ酢酸水溶液（１０ｍｌ）に溶解し、氷浴温度に１時間、次いで、室温 で４時間維持した。次に、それを蒸発乾固し、水に再溶解し、水で平衡化し溶出 するＢｉｏｇｅｌＰ２（２０−４００メッシュ，１８００ｍｌ）のカラムに適用 し、そしてＵ．Ｖ．活性（２２０ｎｍ）画分（７．５ｍｌ、１１９−１２６）を 蓄え、凍結乾燥した（７８ｍｇ，１０のメチルエステル）。前述のＣｈｅｌｅｘ 樹脂（７６０ｍｇ）によるメチルエステル（６５ｍｇ）の加水分解で、シアロシ ド１０（７１ｍｇ）を得た。¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ：１７６.０，１７４.３，１０１.４，９７.５，９３.４，７ ４.６，７４.０，７３.７，７２.９，７２.８，７０.４，７０. １，６９.９，６９.４，６９.２，６５.１，６４.９，６３.７，６０.６，５１. １，３８.３，２３.１。 実施例１０ ４，５−ジアセトアミド−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガ ラクト−ノヌロピラノシロン酸（２−６）−α−Ｄ−ガラクト−ピラノースのナ トリウム塩 １１： 化合物１０（１６２ｍｇ）を、１０％Ｐｄ−Ｃ（４８ｍｇ ）を含むメタノール（１５ｍｌ）に溶解し、水素雰囲気下で１８時間放置した。 続いて、それを、Ｃｅｌｉｔｅパッドで濾過し、濃縮して乾燥残渣とし、ピリジ ン（１ｍｌ）と無水酢酸（０．５ｍｌ）を含むＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ｍｌ）に再溶解 した。１５分後、メタノール（０．５ｍｌ）を添加し、反応混合液を、ＣＨ₂Ｃ ｌ₂で希釈し、そして水、氷冷塩酸および飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した 。これから得られる残渣を、メタノール中０．５Ｍナトリウムメトキシドを用い て脱Ｏ−アセチル化し、酸性樹脂で中和し、濃縮して得た残渣を、５０％ＣＦ₃ ＣＯＯＨ水溶液に溶解し、そして氷浴温度で１６時間放置した。次に、それを蒸 発乾固し、水に再溶解し、前記ＢｉｏｇｅｌＰ−２のカラムに適用して、１０の メチルエステル（７５ｍｇ）を得た。この一部（６５ｍｇ）を、Ｃｈｅｌｅｘ樹 脂（６５０ｍｇ）を用いて加水分解して、１０（７４ｍｇ）を得た。¹³ Ｃ ＮＭＲ δ：１７５.０，１７４.１，１７３.７，１００.７，９６.８， ９２.７，７３.９，７３.６，７３.５，７３.０，７２.１，６９.７，６９.３， ６９.２，６８.６，６４.３，６４.１，６３.０，５０.２，４８.８，３７.９， ２２.２。 実施例１１ ５−アセトアミド−４−アミノ−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ− Ｄ−ガラクト−ノヌロピラノシロン酸（２−６）−α−Ｄ−ガラクト−ピラノー スのナトリウム塩 １２： 化合物１０（２６ｍｇ）を、１０％Ｐｄ−Ｃ（２０ ｍｇ）を含む９０％エタノール水溶液（１５ｍｌ）に溶解し、水素雰囲気下で１ ６時間放置した。続いて、それを、Ｃｅｌｉｔｅパッドで濾過し、濃縮して乾燥 残渣とし、水に再溶解して、凍結乾燥した（１２ｍｇ）。その構造は、¹ＨＮＭ Ｒによって確認された。 実施例１２ ５−アセトアミド−４−アジド−２−チオ−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ− グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノヌロピラノシロン酸（２−Ｓ−６）−７−デオキシ −α，β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ヘプトピラノースのナトリウム塩 １ ３： シアロシド８（３７０ｍｇ）を、無水メタノール（１５ｍｌ）に溶解し、 続いて、０．５Ｍナトリウムメトキシド溶液（０．２ｍｌ）を添加した。２時間 後、その溶液をＨ⁺樹脂で中和し、濾過、蒸発して、メチル （５−アセトアミ ド−４−アジド−２−チオ−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガ ラクト−ノヌロピラノシル）オナート（２−Ｓ−６）−７−デオキシ−１，２； ３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α，−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ヘプ トピラノース ３９を得た。その残渣を、５０％ＣＦ₃ＣＯＯＨ水溶液（１０ｍ ｌ）に溶解し、室温で４時間、次に４℃で１６時間放置した。その溶液を蒸発乾 固し、ＢｉｏｇｅｌＰ−２（２００−４００メッシュ、１８００ｍｌ）のカラム で精製した。これにより、１３のメチルエステル（１９６ｍｇ）を得た。メチル エステル（１８５ｍｇ）の加水 分解を、Ｃｈｅｌｅｘ樹脂（１．０ｇ、４０℃、３日）を用いて実施して、１３ （１８５ｍｇ）を得た。その構造は、¹ＨＮＭＲによって確認された。 実施例１３ ５−アセトアミド−４−アミノ−２−チオ−３，４，５−トリデオキシ−Ｄ− グリセロ−Ｄ−ガラクト−ノヌロピラノシロン酸（２−Ｓ−６）−７−デオキシ −α，β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−ヘプトピラノースのナトリウム塩 １ ４： 化合物１３（２５ｍｇ）を、２０％Ｐｄ（ＯＨ）₂−Ｃ（２５ｍｇ）を含 む９０％エタノール水溶液（１０ｍｌ）に溶解し、水素雰囲気下で９０分間撹拌 した。反応混合液を、濃縮乾固し、水に再溶解し、そして水で平衡化し、溶出さ れるＳｅｐｈｄｅｘＧ−１５のカラムに適用した。２２０ｎｍにおけるＵ．Ｖ． 吸収で証明される生成物を含む画分を、プールし、凍結乾燥した（１２ｍｇ）。¹³ Ｃ−ＮＭＲ δ：１７５.４，１７３.８，９７.１，９２.６，８７.０，８６. ９，７７.３，７５.１，７３.３，７２.５，７２.３，７２.２，７２.１，６９. ９，６９.５，６９.１，６８.６，６８.０，６７.９，６２.７，５１.１，４８. ０，３９.９，３９.６，３７.４，２２.４，２０.６，２０.４。 実施例１４ 比色法ノイラミニダーゼ・アッセイによって測定されるシアリダーゼ基質の加 水分解 ノイラミニダーゼの活性を、放射能標識した基質を用いて測定した。放射能標 識アッセイでは、阻害剤の存在（３種の阻害剤濃度で）または不在下で、ノイラ ミニダーゼとともに、４種の異なる濃度（その酵素に 対するＡのＫｍの約０．５、１、２および４倍において）におけるＡの溶液を、 ２０または３０分間インキュベーション（３７℃）することによって、１２と１ ４に対する阻害定数（Ｋｉ）を測定した。これに続いて、遊離した遊離ＬａｃＮ ａｃの量を算定した。これらのノイラミニダーゼ反応に使用されるバッファーは 、１００ｍＭＮａＯＡｃ−５ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄（ｐＨ５．５）であった。１２と １４の両方についてのこれらのインフルエンザＡ・ノイラミニダーゼのアッセイ に使用されたＡの４種の濃度は、１．０，２．０，４．０および８．０ｍＭであ った。阻害剤濃度は、０．０７，０．１４および０．２８ｍＭであった。 ノイラミニダーゼ濃度は、総反応容積６０μｌ中インフルエンザＡウイルス５ ３μｇであった。反応後、反応混合液を、脱イオン水（１ｍｌ）で希釈し、Ｄｏ ｗｅｘ樹脂のカラム（リン酸塩型、２００−４００メッシュ、脱イオン水中１ｇ ／ｍｌの樹脂懸濁液２ｍｌ）を通過させた。そのカラムを、さらに、脱イオン水 （２ｍｌ）で溶出した。これらの条件下では、遊離のＬａｃＮＡｃのみが溶出し た。溶出液を、シンチレーション液（１０ｍｌ，Ｆｏｒｍｕｌａ ９８９，NEN ，MA）で希釈し、放射能を液体シンチレーションカウンターを用いて、２または ５分間測定した。Ａの加水分解に関するＬｉｎｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋプロット から、阻害定数Ｋｉを、技術上既知の方法により算出した。 図２、パネルＡは、１２の不在（Ｉ＝０）および３種の濃度での存在下におけ る、Ａのインフルエンザウイルス・ノイラミニダーゼ加水分解を示す。パネルＢ は、１４についての同様のプロットを示す。これらの結果から、１２および１４ の両方とも、インフルエンザ・ノイラミニダーゼの良好な阻害剤（それぞれ、Ｋ ｉ＝１００および５１ｍＭ）である ことが、立証される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９６年１月３１日 【補正内容】 式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷 移金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニ ウムイオンであり； Ｒ²は、アジド、アシル基が炭素原子１〜８個を含むアシルアミノ、アミノ、 水素もしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり ； Ｒ⁵は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり； Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換アルコキシ、 一、二もしくはオリゴ糖、または、Ｒ^7'がＨでない場合にはＲ^7'と一緒になって アルキリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈでなければなら ないが、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者とも に、Ｈである場合はなく；そして Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アル キル、アリール、または、隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒になってア ルキリデンであり； 式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷移金属の一、二また は多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニウムイオンであり； Ｒ²は、アミノもしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈであり； Ｒ⁵は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり； Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換アルコキシ、 一、二もしくはオリゴ糖、またはＲ^7'がＨでない場合にはＲ^7'と一緒になってア ルキリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈでなければならな いが、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者ともに、Ｈである場合はなく；そして Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、または隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒にな ってアルキリデンであり； この場合、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカ ルビルもしくは置換ヒドロカルビルである。 さらに、本発明は、シアリダーゼ耐性をもつ式ＩＩＩ ２． さらに、塩化リチウムの存在下で反応を遂行することを含む、請求の範 囲１の方法。 ３． 構造ＩＩ 式中、 Ｒ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり、 Ｒ²は、アジドであり、 Ｒ³は、ＨまたはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり 、そして Ｒ⁴は、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルである、 の化合物。 ４． 構造 式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷 移金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニ ウムイオンであり； Ｒ²は、アジド、アシル基が炭素原子１〜８個を含むアシルアミノ、アミノ、 水素もしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₁₀アルキルであり ； Ｒ⁵は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり： Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換アルコキシ、 一、二もしくはオリゴ糖、またはＲ^7'がＨでない場合にはＲ^7'と一緒になってア ルキリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈでなければならな いが、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者ともに、Ｈである場合はなく；そして Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アル キル、アリール、または、隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒になってア ルキリデンであり； この場合、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカ ルビルもしくは置換ヒドロカルビルである、 の化合物。 ５． 構造 式中、 Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷 移金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニ ウムイオンであり； Ｒ²は、アジド、アシル基が炭素原子１〜８個を含むアシルアミノ、アミノも しくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり ； Ｒ⁸は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビル、炭素原子１〜 ８個を含むアシルであり；

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｈ 15/04 8615−4Ｃ Ｃ０７Ｈ 15/04 15/203 8615−4Ｃ 15/203

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 反応式 ［式中、Ｒ¹は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり； Ｒ²は、アジドもしくは水素であり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り；そして Ｒ⁴は、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルである］ にしたがう、４−アジド−２，３−デヒドロシアル酸または４−デオキシ−２， ３−デヒドロシアル酸（Ｉ）の、対応する４−アジド−２−グロロシアル酸また は４−デオキシ−２−クロロシアル酸（ＩＩ）への塩化水素化の方法であって、 ４−アジド−２，３−デヒドロシアル酸または４−デオキシ−２，３−デヒドロ シアル酸を、極性非プロトン性溶媒または有機カルボン酸溶媒の存在下の反応条 件下で無水塩化水素と接触 させることを含む方法。 ２． さらに、塩化リチウムの存在下で反応を遂行することを含む、請求の範 囲１の方法。 ３． 請求の範囲１の構造ＩＩ生成物の４−アジド−２−クロロシアル酸また は４−デオキシ−２−クロロシアル酸。 ４． 構造 の化合物。式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷 移金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニ ウムイオンであり； Ｒ²は、アジド、アシル基が炭素原子１〜８個を含むアシルアミノ、アミノ、 水素もしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり ； Ｒ⁵は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルで あり； Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換アルコキシ、 一、二もしくはオリゴ糖、または、Ｒ^7'がＨでない場合にはＲ^7'と一緒になって アルキリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈでなければなら ないが、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者ともに、Ｈである場合はなく；そして Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アル キル、アリール、または、隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒になってア ルキリデンであり； この場合、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカ ルビルもしくは置換ヒドロカルビルである。 ５． 構造 の化合物。式中、 Ｒ¹は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ルキル、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷移 金属の一、二または多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニウ ムイオンであり； Ｒ²は、アジド、アシル基が炭素原子１〜８個を含むアシルアミノ、アミノ、 グアニジノもしくは水素であり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈ、炭素原子１〜８個を含むアシル、またはＣ₁〜Ｃ₂₀アルキルであり ； Ｒ⁸は、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビル、炭素原子１〜 ８個を含むアシルであり； Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもし くは置換ヒドロカルビルであり；そして Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹である。 ６． 式ＩＩＩ の化合物とシアリダーゼを接触させることを含むシアリダーゼ活性を阻害する方 法。式中、 Ｘは、酸素、硫黄、ＣＲ⁹Ｒ¹⁰、もしくはＮＲ¹¹であり； Ｒ¹は、Ｈ、アルカリ金属、アルカリ土類金属もしくは遷移金属の一、二また は多価カチオン、またはアンモニウムもしくは置換アンモニウムイオンであり； Ｒ²は、アミノもしくはグアニジノであり； Ｒ³は、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであ り； Ｒ⁴は、Ｈであり； Ｒ⁵は、Ｈ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカルビルもしくは置換ヒドロカルビルであり； Ｒ⁶およびＲ^6'は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₂₀アルコキシもしくは置換アルコキシ、 一、二もしくはオリゴ糖、または、Ｒ^7'力用でない場合にはＲ^7'と一緒になって アルキリデンオキシであるが、但しＲ⁶およびＲ^6'の１つは、Ｈでなければなら ないが、Ｒ⁶およびＲ^6'は、両者ともに、Ｈである場合はなく；そして Ｒ⁷およびＲ^7'は、Ｈ、または隣接するＲ⁶、Ｒ^6'Ｒ⁷もしくはＲ^7'と一緒にな ってアルキリデンであり； この場合、Ｒ⁹、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、独立して、Ｈ、またはＣ₁〜Ｃ₂₀ヒドロカ ルビルもしくは置換ヒドロカルビルである。 ７． シアリダーゼ耐性をもつ請求の範囲４の化合物。