CN101828114B - 妇科癌症的检出方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的课题在于提供妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出方法和检出用试剂盒。本发明的课题可通过妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出方法解决，该方法的特征在于：对β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4、以及N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2进行分析。通过本发明的检出方法，在没有自觉症状的卵巢癌病期的早期阶段-I期和II期中，也可以高率地检出卵巢癌患者，还可以检出子宫体癌患者。

Description

妇科癌症的检出方法
技术领域
本发明涉及妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出方法，其特征在于：对β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4、或者N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2进行分析。本说明书中的上述“分析”包含对分析对象物质的量进行定量或半定量的确定的“测定”、和判定分析对象物质是否存在的“检出”两者。 
背景技术
妇科癌症包含子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、子宫肉瘤、绒毛癌(绒毛性疾病)等。其中的大多难以通过症状来进行早期发现，而早期通过手术等的外科疗法，5年存活率显著升高。因此，人们希望开发可早期发现这些妇科癌症的肿瘤标志物。 
例如，卵巢癌是在腹部的卵巢中产生的癌症，因此即使生成肿瘤，早期也几乎未见自觉症状。因此，卵巢癌患者大多是在发生转移之后的病期发展阶段、例如III期或IV期发现，在这些患者中，即使进行治疗，5年存活率也降低。卵巢癌患者的治疗是进行通过手术切除卵巢或大网膜的外科疗法、放射线疗法、以及使用抗癌药的化学疗法。卵巢癌的病期未发展的I期或II期中，通过外科疗法切除卵巢或其周围的组织，有可能完全地治疗。而病期发展的III期或IV期时，已发生向淋巴结或肝脏的转移，因此无法通过手术完全除去癌细胞，要结合采用放射线疗法或化学疗法。但是难以通过放射线疗法或化学疗法完全抑制转移的癌症，与在I期或II期发现的患者比较，5年存活率极低。因此人们希望在病期的早期阶段发现卵巢癌患者。 
如上所述，卵巢癌在早期阶段几乎没有自觉症状，因此在病期的发展阶段，大多是通过超声波等的图像诊断进行诊断。并且，诊断卵巢癌患者的卵巢癌诊断标志物最广泛采用被称为CA125的糖蛋白的测定。已知在卵巢癌的4种组织类型(浆液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、类内膜性卵巢癌、透明细胞性卵巢癌)中，CA125特别在浆液性腺癌中的阳性率高，是对卵巢癌特异性高的标志物，在病期发展的阶段中，很多患者显示CA125阳性。但是早期癌症中的阳性率低，在欧美，人们尝试在健康检查中通过CA125的血液检查进行早期诊断，但其有效性尚未得到证明。
子宫体癌是在子宫内侧的子宫内膜上发生的癌症，无法在常规妇科诊察中进行的细胞诊断测试中发现。子宫体癌的治疗也是进行通过手术除去癌变部位的外科疗法、放射线疗法、使用抗癌药的化学疗法、以及激素疗法。子宫体癌的病期根据癌症的扩散方式分为I～IV期，I～III期的病期是进行外科疗法，通过进行早期治疗，5年存活率高。因此，期待在病期的早期阶段发现子宫体癌患者。 
上述子宫体癌的诊断标志物使用CA125和CA602等糖蛋白、或作为胰腺癌标志物使用的CA19-9。但是，这些肿瘤标志物的子宫体癌的检出率非常低，并不有效。 
另一方面，人们报道了在各种癌细胞和癌组织中，各种蛋白质的表达亢进或低下。例如有报道称：与1型糖链的合成相关的糖转移酶-β1-3半乳糖转移酶-5(以下称为β3Gal-T5)在大肠癌细胞和胰腺癌细胞、或大肠癌组织中表达(专利文献1或非专利文献1)。并报道了与L-选择素配体的合成有关的糖转移酶-N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2(以下称为GlcNAc6ST-2)在粘液性大肠癌中异位表达(非专利文献2)、以及在粘液性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌中异位表达(非专利文献3)。 
但是，这些报告只显示上述糖转移酶在癌细胞或癌组织中表达，并未具体显示在血液中作为癌的标记物有用。特别是糖转移酶通常并不分泌到细胞外，特别作为使用血液的癌标志物有用的可能性低。另外，并没有显示β3Gal-T5与卵巢癌和子宫体癌的相关性、以及GlcNAc6ST-2与子宫体癌的相关性的报告，并且对于β1-3半乳糖转移酶家族之一的β1-3半乳糖转移酶-4(以下称为β3Gal-T4)，也未报道其与卵巢癌和子宫体癌的相关性。 
专利文献1：国际公开第00/50608号小册子 
非专利文献1：Seko A等人.“Cancer Research”1996年(美国)第56卷，3468～3473页 
非专利文献2：Seko A等人.“Glycobiology”2002年(美国)第12卷，379～388页 
非专利文献3：Kanoh A等人.“Glycoconjugate Journal”2006年(荷兰)第23卷，453～460页 
发明内容
发明所要解决的课题
本发明人等为了探索可早期发现妇科癌症、特别是卵巢癌患者或子宫体癌患者的的检出标志物，对于各种细胞内的蛋白质作为卵巢癌标志物的可能性进行了深入的研究。结果令人吃惊地发现：β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或者GlcNAc6ST-2可在早期病期的卵巢癌患者的血液中高比例检出。特别是β3Gal-T4和/或β3Gal-T5在卵巢癌的所有的组织类型中(浆液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、类内膜性卵巢癌、透明细胞性卵巢癌)中显示高的阳性率。进一步发现：分泌β3Gal-T4和/或β3Gal-T5的癌细胞以及分泌GlcNAc6ST-2的癌细胞不完全重叠，通过将β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、以及GlcNAc6ST-2的检出组合，卵巢癌的检出率显著升高。 
并且还发现：子宫体癌症患者中，β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或者GlcNAc6ST-2在子宫体癌症患者的血液中高比例检出。特别是β3Gal-T4和/或β3Gal-T5与以往的子宫体癌的标志物CA125、CA602和CA19-9比较，显示高的阳性率。并且发现：分泌β3Gal-T4和/或 β3Gal-T5的癌组织、以及分泌GlcNAc6ST-2的癌组织不完全重叠，通过将β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、以及GlcNAc6ST-2的检出组合，子宫体癌患者的检出率显著升高，从而完成了本发明。 
需要说明的是，上述非专利文献3中公开：GlcNAc6ST-2在粘液性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌的组织中异位表达。但是，非专利文献3中报告：无法确认GlcNAc6ST-2在浆液性卵巢癌、类内膜性卵巢癌的癌组织中的表达。即，非专利文献3只公开了GlcNAc6ST-2在粘液性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌的组织中特异性表达，从卵巢癌患者的血液中检出GlcNAc6ST-2是预想之外的。并且，虽然GlcNAc6ST-2无法通过组织染色从浆液性卵巢癌、类内膜性卵巢癌的癌组织中检出，但GlcNAc6ST-2可从浆液性卵巢癌、类内膜性卵巢癌患者的血液中高率地检出，这对于本领域的技术人员来讲是未预期的。 
因此，本发明的课题在于提供妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌患者的检出方法以及检出用试剂盒。 
解决课题的手段
本发明涉及妇科癌症的检出方法，其特征在于：对β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4、以及N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2进行分析。 
本发明还涉及妇科癌症的检出方法，其特征在于：对β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4进行分析。 
本发明进一步涉及妇科癌症的检出方法，其特征在于：对N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2进行分析。 
本发明的检出方法的优选方式中，使用与β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体。 
本发明的检出方法的优选方式中，使用与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体。 
本发明的检出方法的优选方式中，上述妇科癌症是卵巢癌或子宫 体癌。 
本发明的妇科癌症的检出方法中，被检试样可以使用由人的机体分离的生物体试样、或来自生物体的试样，例如尿、血液、血清、血浆、脊髓液、唾液、细胞、组织或器官、或它们的调节物(例如活检标本、特别是卵巢的活检标本)等。通过从上述由人的机体中分离的被检试样中检出β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4、或N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2，本发明的检出方法可以作为妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的体外诊断方法使用。 
本发明涉及妇科癌症的检出用试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有与β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体或其片段、以及与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体或其片段。 
本发明还涉及妇科癌症的检出用试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有与β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体或其片段。 
本发明又涉及妇科癌症的检出用试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体或其片段。 
本发明的检出用试剂盒的优选方式中，上述妇科癌症是卵巢癌或子宫体癌。 
本发明涉及卵巢癌的检出方法，其特征在于：对β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4、以及N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2进行分析。 
本发明还涉及卵巢癌的检出方法，其特征在于：对β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4进行分析。 
本发明进一步涉及卵巢癌的检出方法，其特征在于：对N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2进行分析。 
本发明的检出方法的优选方式中，使用与β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体。 
本发明的检出方法的优选方式中，使用与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体。 
本发明还涉及卵巢癌的检出用试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有与β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体或其片段、以及与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体或其片段。 
本发明涉及卵巢癌的检出用试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有与β1-3半乳糖转移酶-5和/或β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体或其片段。 
本发明还涉及卵巢癌的检出用试剂盒，其特征在于：该试剂盒含有与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体或其片段。 
发明效果
目前为止，广泛采用糖蛋白CA125或CA546作为卵巢癌的检出标志物来进行检出。根据本发明的检出方法，与这些以往的卵巢癌的检出标志物比较，在卵巢癌的病期的早期阶段-I期和II期中，可高率地检出卵巢癌患者。即，本发明的检出方法可以检出由较小的癌分泌的β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2，因此在健康检查中，可发现没有自觉症状的I期的卵巢癌。而根据对β3Gal-T4和/或β3Gal-T5进行分析的本发明的检出方法，与以往的方法相比较，可以高率地检出粘液性卵巢癌、类内膜性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌，特别是可以高率地检出对化学疗法具有难治性(抗性)的粘液性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌。 
并且，通过将对β3Gal-T4和/或β3Gal-T5进行分析的本发明的检出方法、以及对GlcNAc6ST-2进行分析的本发明的检出方法组合，可以使卵巢癌患者的检出率显著升高。特别是在卵巢癌的病期的早期阶段-I期和II期的患者中，组合的效果显著，作为组织类型，类内膜性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌中，通过进行上述的组合可使检出率显 著升高。 
子宫体癌是采用CA125、CA602和CA19-9作为检出标志物，根据本发明的检出方法，与这些以往的子宫体癌的检出标志物比较，在病期的早期阶段-I期中可高率地检出子宫体癌患者。即，本发明的检出方法可以检出由较小的癌分泌的β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2，因此可以发现在妇科诊察中的细胞诊断测试中难以发现的子宫体癌患者。 
并且，通过将对β3Gal-T4和/或β3Gal-T5进行分析的本发明的检出方法、以及对GlcNAc6ST-2进行分析的本发明的检出方法组合，可以使子宫体癌患者的检出率显著升高。 
本发明的检出方法也可用于手术后复发的监控、放射线疗法以及化学疗法的治疗效果的监控。 
附图说明
图1是蛋白质印迹法确认β3Gal-T5的单克隆抗体和多克隆抗血清的特异性的照片。A是使β3GalT-1(泳道1)、β3GalT-2(泳道2)、β3GalNAc-T1(泳道3)、β3Gal-T4(泳道4)、β3Gal-T5(泳道5)、β3GalT-6(泳道6)进行电泳，进行宝石橙(Sypro Orange)(ィンビトロジェン公司)染色。B显示使用β3Gal-T5的单克隆抗体对各蛋白质进行的蛋白质印迹。C显示使用β3Gal-T5的多克隆抗血清对各蛋白质进行的蛋白质印迹。 
图2是蛋白质印迹法确认GlcNAc6ST-2的单克隆抗体和多克隆抗血清的特异性的照片。A是使GlcNAc6ST1(泳道1)、GlcNAc6ST-2(泳道2)、GlcNAc6ST3(泳道3)、GlcNAc6ST4(泳道4)、GlcNAc6ST5(泳道5)、Gal6ST(泳道G)和Ch6ST1(泳道C)进行电泳，进行宝石橙(SyproOrange)(ィンビトロジェン公司)染色。B表示使用GlcNAc6ST-2的单克隆抗体对各蛋白质进行的蛋白质印迹。C表示使用GlcNAc6ST-2的多克隆抗血清对各蛋白质进行的蛋白质印迹。 
图3的A表示通过使用β3Gal-T5的单克隆抗体和多克隆抗血清的夹层ELISA法得到的β3Gal-T5的校准曲线。B表示通过使用GlcNAc6ST-2的单克隆抗体和多克隆抗血清的夹层ELISA法得到的GlcNAc6ST-2的校准曲线。 
图4是通过RT-PCR确认ES-2细胞(泳道1)、MCAS细胞(泳道2)、RMG-I细胞(泳道3)、RMG-II细胞(泳道4)、和RMUG-L细胞(泳道5)的5株卵巢癌细胞株中的β3Gal-T4和β3Gal-T5的mRNA的表达。 
图5的A表示通过使用β3Gal-T5的单克隆抗体和多克隆抗血清的夹层ELISA法得到的β3Gal-T5的校准曲线。作为标准物质的非改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白的稀释液是使用在PBS-0.1％Tween-20(PBS-T)中加入10％正常人血清得到的稀释液。B表示通过使用GlcNAc6ST-2的单克隆抗体和多克隆抗血清的夹层ELISA法得到的GlcNAc6ST-2的校准曲线。作为标准物质的大肠杆菌GlcNAc6ST-2蛋白的稀释液是使用在PBS-0.1％Tween-20(PBS-T)中加入10％正常人血清得到的稀释液。 
具体实施方式
[1]妇科癌症的检出方法 
妇科癌症包含子宫颈癌、子宫体癌、卵巢癌、外阴癌、阴道癌、子宫肉瘤、绒毛癌(绒毛性疾病)等，本发明的检出方法可以检出这些妇科癌症患者。检出率特别高的癌症例如有卵巢癌和子宫体癌，以下的说明中是以卵巢癌和子宫体癌为例进行阐述，但本发明并不限于这两种癌症。 
[1-1]关于卵巢癌 
卵巢是位于子宫两侧的拇指大小的椭圆形器官，卵巢癌是在该卵巢发生的癌症，大多为上皮性。根据卵巢癌的发展程度对卵巢癌的病期(阶段)进行分类，如下所述，可分类为I期～IV期。 
I期：癌局限于卵巢。即，癌症只停留于一侧或两侧卵巢的状态。 
II期：癌位于一侧或两侧，发展到骨盆内。即，癌症转移至卵巢的周围、也就是说转移至输卵管、子宫、直肠、膀胱等的腹膜的状态。 
III期：(1)伴随着腹膜的种植，癌症越过盆腔发展；(2)转移至腔腹膜淋巴结、腹股沟淋巴结；(3)向肝脏表面转移；(4)向大、小肠的组织学转移。可见上述(1)～(4)的任意一种情况。即，癌症转移至卵巢周围(不仅是骨盆内的腹膜，也向上腹部转移，或转移至后腹膜淋巴结)的状态。 
IV期：(1)癌症的远处转移；(2)证明癌细胞存在于胸水中；(3)肝实质转移。可见上述(1)～(3)的任意一种情况。即，癌症转移至腹腔外、或者转移至肝脏的状态。 
卵巢癌在早期没有自觉症状，因此在I期和II期发现的大约占1/3左右，2/3在III期或IV期才被发现。在III期或IV期发现时已向盆腔外转移，因此无法通过外科疗法完全除去癌，难以完全治疗。 
另一方面，卵巢癌的组织类型多样，大致可分为浆液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、类内膜性卵巢癌、透明细胞性卵巢癌。这些卵巢癌中，浆液性卵巢癌被认为最多，以往的卵巢癌标志物大多是检出该浆液性卵巢癌。另外，从对化学疗法的感受性的角度考虑，粘液性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌对抗癌药的抗性高。 
[1-2]关于子宫体癌 
子宫体癌是在子宫的上皮-子宫的内膜发生的癌，是上皮性的癌症。根据子宫体癌的发展程度对子宫体癌的病期(阶段)进行分类，如下所述，可分类为I期～IV期。 
I期：癌只在子宫体部可见。即，在子宫颈部、其它部位未见癌症。 
II期：癌越过子宫体，扩散到子宫颈部。即，并未扩散到子宫外。 
III期：癌扩散到子宫外，但并未越过骨盆扩散。可见转移至盆腔内或主动脉周围的淋巴结。 
IV期：癌越过骨盆扩散至身体的其它部位，或侵润膀胱或肠的内 腔。 
子宫体癌无法通过在妇科诊察中进行的子宫颈癌的细胞诊断测试中发现。但是如果在I期～III期发现，则可以采取手术的外科疗法，越早期治疗效果越好。 
[1-3]β3Gal-T4和/或β3Gal-T5的分析 
本发明的检出方法中，通过对β3Gal-T4和/或β3Gal-T5进行分析，可以检出妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌。即，本发明的检出方法中，通过分析β3Gal-T4，可以检出妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌。本发明的检出方法中，通过分析β3Gal-T5，可以检出妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌。本发明的检出方法中，通过分析β3Gal-T4和β3Gal-T5，可以检出妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌。 
β3Gal-T4属于β1-3半乳糖转移酶家族，是合成神经节苷脂GA1、GM1或GD1b的酶。而β3Gal-T5与β3Gal-T4的底物特异性不同，可以合成Galβ1-3GlcNAc结构。 
如后述的实施例所示，β3Gal-T4和β3Gal-T5的mRNA在很多卵巢癌的细胞中表达，表达β3Gal-T4和β3Gal-T5的mRNA的卵巢癌细胞株并不完全重复，在所研究的卵巢癌细胞株中，见到了任意一种mRNA的表达。并且，本发明人在5名卵巢癌患者的卵巢癌组织中测定了β3Gal-T4和β3Gal-T5的酶活性，从全部患者的卵巢癌组织中检出了β3Gal-T4和β3Gal-T5的酶活性。 
而对于后述的实施例中的免疫β3Gal-T5蛋白得到的单克隆抗体和多克隆抗血清，研究其与其它的β1-3半乳糖转移酶的反应性时，可知由该单克隆抗体和多克隆抗血清构建的ELISA体系可以检出β3Gal-T4和β3Gal-T5两种酶。 
卵巢癌有：向血液中释放β3Gal-T4和β3Gal-T5的卵巢癌细胞、只释放β3Gal-T4的卵巢癌细胞、以及只释放β3Gal-T5的卵巢癌细胞，由上述ELISA体系测定的、存在于卵巢癌患者的血清中的β1-3半乳糖转移酶是β3Gal-T4和/或β3Gal-T5。 
子宫体癌有：向血液中释放β3Gal-T4和β3Gal-T5的子宫体癌细胞、只释放β3Gal-T4的子宫体癌、以及只释放β3Gal-T5的子宫体癌，由上述ELISA体系测定的、存在于子宫体癌患者的血清中的β1-3半乳糖转移酶是β3Gal-T4和/或β3Gal-T5。 
本发明的检出方法中，对β3Gal-T4和/或β3Gal-T5进行分析的方法只要是可以定量或半定量地确定β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或者可判定β3Gal-T4和/或β3Gal-T5是否存在即可，没有特别限定，例如可以是使用β3Gal-T4和/或β3Gal-T5的抗体或其片段的免疫学方法(例如酶联免疫测定法、胶乳聚集免疫测定法、化学发光免疫测定法、荧光抗体法、放射免疫测定法、免疫沉淀法、免疫组织染色法、或蛋白质印迹法等)、生物化学方法(例如酶学测定法)、或测定mRNA量的分子生物学方法等。 
采用免疫学分析方法作为β3Gal-T4和β3Gal-T5的分析方法时，可以使用与β3Gal-T4和β3Gal-T5结合的单克隆抗体或多克隆抗体。或者也可以将与β3Gal-T4特异性结合的单克隆抗体或多克隆抗体、与β3Gal-T5特异性结合的单克隆抗体或多克隆抗体组合使用。 
采用免疫学分析方法作为β3Gal-T4的分析方法时，可以使用与β3Gal-T4特异性结合的单克隆抗体或多克隆抗体，还可以使用与β3Gal-T4和β3Gal-T5结合的单克隆抗体或多克隆抗体。 
并且，采用免疫学分析方法作为β3Gal-T5的分析方法时，可以使用与β3Gal-T5特异性结合的单克隆抗体或多克隆抗体，还可以使用与β3Gal-T4和β3Gal-T5结合的单克隆抗体或多克隆抗体。 
单克隆抗体或多克隆抗体是使用β3Gal-T4或β3Gal-T5作为免疫抗原，除此之外可以按照公知的方法制备，例如单克隆抗体可以按照Koehler和Milstein的方法(Nature 256：495～497，1975)制备。多克隆抗体例如还可以将β3Gal-T4或β3Gal-T5的蛋白单独或与BSA、KLH等结合作为抗原，单纯或与弗氏完全佐剂等佐剂混合，在兔的皮内进行定期免疫。在血液的抗体效价升高时采血，可直接作为抗血清或按 照公知的方法将抗体纯化后使用。为了获得与β3Gal-T4和β3Gal-T5结合的单克隆抗体或多克隆抗体，可以同样地将β3Gal-T4和β3Gal-T5对小鼠或兔进行免疫，获得抗体。 
采用酶学测定法作为β3Gal-T4或β3Gal-T5的分析方法时，例如可按照Miyazaki等人[Miyazaki等人.，J.Biol.Chem.，(1997)272，24794～24799]以及瀬古等人[Seko等人.，Cancer Res.，(1996)56，3468～3473]的方法，测定β3Gal-T4或β3Gal-T5酶活性，由此分析GlcNAc6ST-2的量或是否存在。 
为获得β3Gal-T5的单克隆抗体或多克隆抗体可使用的免疫抗原，可以将含有SEQ ID NO：33的氨基酸序列的蛋白质的全部或部分肽作为免疫抗原使用。具体来说，可以使用由生物体试样纯化的抗原、基因工程制备的重组抗原、或化学合成的部分肽等。使用在大肠杆菌或酵母等中表达的重组抗原时，为了使表达容易，可以制成与其它蛋白质例如SOD或TrpE等的融合抗原。为了使纯化容易，还可以与His-Tag等结合表达。特别优选β3Gal-T5的除去细胞质内区域和跨膜区域的部分的表达，例如优选以含有上述SEQ ID NO：33所示的氨基酸序列第27号～第310号氨基酸的肽作为重组抗原来表达。使用该含有第27号～第310号氨基酸的肽作为重组抗原进行免疫，则可以获得可与β3Gal-T4和β3Gal-T5结合的单克隆抗体或多克隆抗体。 
可在本发明的妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出方法中使用的、与β3Gal-T4和β3Gal-T5结合的抗体只要是至少与β3Gal-T4和β3Gal-T5结合的抗体即可，没有限定，可以是与其它的β1-3半乳糖转移酶结合的抗体，优选为与β3Gal-T4和β3Gal-T5特异性结合的抗体。另外，可在本发明的妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出方法中使用的、与β3Gal-T4结合的抗体只要是至少与β3Gal-T4结合的抗体即可，没有限定，可以是与其它的β1-3半乳糖转移酶结合的抗体，优选为与β3Gal-T4特异性结合的抗体。可在本发明的妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出方法中使用的、与β3Gal-T5结合的抗 体只要是至少与β3Gal-T5结合的抗体即可，没有限定，可以是与其它的β1-3半乳糖转移酶结合的抗体，优选为与β3Gal-T5特异性结合的抗体。 
为获得β3Gal-T4的单克隆抗体或多克隆抗体可使用的免疫抗原，可以将含有SEQ ID NO：34的氨基酸序列的蛋白质的全部或部分肽作为免疫抗原使用。 
[1-4]GlcNAc6ST-2的分析 
本发明的检出方法中，通过对GlcNAc6ST-2进行分析，可以检出妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌。GlcNAc6ST-2属于糖质6-O-磺基转移酶家族，是将磺基从腺苷-3’-磷酸-5’磷酰硫酸中转移至各种糖蛋白的GlcNAc残基中的酶。在健康人中，在末梢淋巴结的高内皮细胞中特异性表达，是与L-选择素配体的合成有关的酶。 
本发明人在5名卵巢癌患者的卵巢癌组织中测定了GlcNAc6ST-2的酶活性，从全部患者的卵巢癌组织中检出了GlcNAc6ST-2活性。 
在本发明的检出方法中，对GlcNAc6ST-2进行分析的方法只要是可定量或半定量地确定GlcNAc6ST-2、或者可判定GlcNAc6ST-2是否存在即可，没有特别限定，例如可以是使用GlcNAc6ST-2抗体或其片段的免疫学方法(例如酶联免疫测定法、胶乳聚集免疫测定法、化学发光免疫测定法、荧光抗体法、放射免疫测定法、免疫沉淀法、免疫组织染色法、或蛋白质印迹法等)、生物化学方法(例如酶学测定法)、或测定mRNA量的分子生物学方法等。 
采用免疫学分析方法作为GlcNAc6ST-2的分析方法时，可以使用GlcNAc6ST-2的单克隆抗体或多克隆抗体。单克隆抗体或多克隆抗体是使用GlcNAc6ST-2作为免疫抗原，除此之外可按照公知的方法制备，单克隆抗体例如可以按照Koehler和Milstein的方法(Nature 256：495-497，1975)制备。多克隆抗体例如可以将GlcNAc6ST-2的蛋白质单独或与BSA、KLH等结合作为抗原，单纯或与弗氏完全佐剂等佐剂混合，在兔的皮内进行定期免疫。在血液的抗体效价升高时采血，可直接作为抗血清或按照公知的方法将抗体纯化后使用。 
采用酶学测定法作为GlcNAc6ST-2的分析方法时，例如可按照瀬古等人[Seko等人.，Glycobiology(2002)12，379～388]的方法测定GlcNAc6ST-2酶活性，由此分析GlcNAc6ST-2的量或是否存在。 
为获得单克隆抗体或多克隆抗体可使用的免疫抗原，可以将含有SEQ ID NO：35的氨基酸序列的蛋白质的全部或部分肽作为免疫抗原使用。具体来说，可以使用由生物体试样纯化的抗原、基因工程制备的重组抗原、或化学合成的部分肽等。使用在大肠杆菌或酵母等中表达的重组抗原时，为了使表达容易，可以制成与其它蛋白质例如SOD或TrpE等的融合抗原。为了使纯化容易，还可以与His-Tag等结合表达。还优选GlcNAc6ST-2的除去细胞质内区域和跨膜区域的部分的表达，例如优选以含有上述SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列第28号～第386号氨基酸的肽作为重组抗原来表达。 
可在本发明的妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌检出方法中使用的、与GlcNAc6ST-2结合的抗体只要是至少与GlcNAc6ST-2结合的抗体即可，没有限定，可以是与其它的N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶结合的抗体，优选为与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体。 
[1-5]免疫学分析方法 
采用酶联免疫测定法、夹层法作为免疫学分析方法时，可如下进行。以GlcNAc6ST-2的情形为例进行说明。 
首先，在微量板或珠等不溶性载体上固定与GlcNAc6ST-2结合的抗体(捕获抗体或一次抗体)。接着，为了防止与捕获抗体或不溶性载体的非特异性吸附，用适当的封闭剂(例如牛血清白蛋白或明胶等)进行不溶性载体的封闭。将含有GlcNAc6ST-2的被检试样与一次反应液一起加入到固定有捕获抗体的板或珠上，使GlcNAc6ST-2与捕获抗体接触、结合(一次反应步骤)。然后用适当的清洗液(例如含有表面活性剂的磷酸缓冲液)清洗未与捕获抗体结合的抗原或杂质。接着添加标记抗体(二次抗体)，使标记抗体与被捕获的抗原结合(二次反应步骤)，其中，该标记抗体是与捕获的GlcNAc6ST-2结合的抗体、和辣根过氧化物酶(HRP)等酶结合而得到的。通过该反应，在微量板等载体上形成捕获抗体-GlcNAc6ST-2-标记抗体的免疫复合物。用清洗液清洗未结合的标记抗体，添加对应于标记抗体中的酶的显色底物或发光底物，使酶与底物反应，由此检出信号。还可以不直接标记二次抗体，而是标记与二次抗体结合的抗体，来检出信号。 
标记抗体的酶例如有：辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、以及荧光素酶等。除酶以外，也可以使用吖啶鎓衍生物等发光物质、铕等荧光物质、I125等放射性物质等。还可以结合标记物质适当选择底物或发光诱导物质。并且，本发明的标记抗体也可包含结合有半抗原或低分子量的肽、凝集素等可用于检出抗原抗体反应信号的物质的抗体。 
β3Gal-T4和/或β3Gal-T5的夹层法中，通过将与GlcNAc6ST-2结合的抗体置换为与β3Gal-T4和/或β3Gal-T5结合的抗体，可按照同样的方法构建β3Gal-T4和/或β3Gal-T5的免疫学分析方法。 
夹层ELISA中使用的抗体，一次抗体或二次抗体的任意一种只要是与要分析的蛋白质特异性结合的抗体，另一种抗体则可以是与要分析的蛋白质以外的蛋白质结合(具有交叉反应)的抗体。例如，对β3Gal-T4和β3Gal-T5进行分析时，一次抗体或二次抗体的任意一种只要是与β3Gal-T4和β3Gal-T5特异性结合的抗体，则可以特异性分析β3Gal-T4和β3Gal-T5。在分析GlcNAc6ST-2时，一次抗体或二次抗体的任意一种只要是与GlcNAc6ST-2特异性结合的抗体，则可以特异性分析GlcNAc6ST-2；在分析β3Gal-T4时，一次抗体或二次抗体的任意一种只要是与β3Gal-T4特异性结合的抗体，则可以特异性分析β3Gal-T4。在分析β3Gal-T5时，一次抗体或二次抗体的任意一种只要是与β3Gal-T5特异性结合的抗体，则可以特异性分析β3Gal-T5。 
对上述夹层法中使用的一次抗体或二次抗体的种类没有特别限 定，例如有：多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体、或这些抗体的抗体片段等。抗体片段例如有：F(ab’)2、Fab’、Fab或Fv等。这些抗体片段例如可按照常规方法、用蛋白分解酶(例如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶等)消化抗体，接着按照常规的蛋白质分离纯化方法纯化来获得。 
本发明的妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出方法中，用于β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2分析的被检试样例如有：具含有β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2的可能性的生物体试样或来自生物体的试样，例如有：尿、血液、血清、血浆、脊髓液、唾液、细胞、组织或器官、或它们的调节物(例如活检标本、特别是卵巢的活检标本)等，优选血液、血清、血浆或卵巢的活检标本，特别优选血液、血清或血浆(以下可称为血液)。健康人的血液、血清、血浆中几乎不存在β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2，在卵巢癌患者或子宫体癌患者中，自病期的早期释放到血液中，因此适合作为用于检出卵巢癌或子宫体癌患者的被检试样。 
本发明的检出方法中，可通过测定β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2是否存在，或者β3Gal-T4和/或β3Gal-T5的量或GlcNAc6ST-2的量来检出卵巢癌或子宫体癌。例如使用卵巢或子宫的活检试样作为被检试样时，通过使用单克隆抗体或多克隆抗体的免疫组织染色法确认卵巢或子宫中的β3Gal-T4和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2的表达，由此可以判定是否患有卵巢癌或子宫体癌。 
使用血液等作为被检试样时，自怀疑患卵巢癌或子宫体癌的患者采血，直接用全血、或者制成血清或血浆，测定其中的GlcNAc6ST-2的量，与自健康人采集的血液等中的GlcNAc6ST-2的量进行比较，可以判定上述患者是否患有卵巢癌或子宫体癌。更具体地说，与健康人的GlcNAc6ST-2的量进行比较，上述患者的GlcNAc6ST-2的量显著多时，可以判定上述患者为卵巢癌。对于β3Gal-T4和β3Gal-T5、β3Gal-T4、或β3Gal-T5，同样与健康人比较，可判定卵巢癌。 
例如，进行后述的夹层法的ELISA时，求出健康人的β3Gal-T4 和/或β3Gal-T5、或GlcNAc6ST-2的平均值，求出标准偏差(SD)。用于癌症患者检出的阀值(cut off)只要是可以检出各癌症的值即可，没有特别限定。例如根据癌症的种类，可以将超过平均值的检样判定为阳性，也可以将平均值±SD、平均值±2SD或平均值±3SD作为阀值。 
根据本发明的检出方法检出妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌时，最优选特异性检出卵巢癌或子宫体癌。但是，例如在健康检查中通过血液检查进行卵巢癌的早期诊断时，优选为可一次筛选卵巢癌患者或子宫体癌患者的标志物，即，优选为可在卵巢癌患者或子宫体癌患者中检出尽量多的患者的标志物。如后述实施例所示，本发明的检出方法可以高率地检出手术已确认为卵巢癌的卵巢癌患者(不包含并发其它癌的患者)或确认为子宫体癌的子宫体癌患者，具备作为癌症的标志物的有用性。 
[2]妇科癌症的检出用试剂盒 
本发明的妇科癌症、特别是卵巢癌或子宫体癌的检出用试剂盒含有与β3Gal-T4和β3Gal-T5特异性结合的抗体、以及与GlcNAc6ST-2特异性结合的抗体或其片段。上述抗体可以使用单克隆抗体或多克隆抗体的任意一种。上述抗体片段只要具有与β3Gal-T4和β3Gal-T5特异性结合的能力、或者保持与GlcNAc6ST-2特异性结合的能力即可，没有特别限定，例如可以使用Fab、Fab’、F(ab’)2或Fv。 
本发明的检出用试剂盒也可含有与β3Gal-T4和β3Gal-T5特异性结合的抗体或其片段、与β3Gal-T4特异性结合的抗体或其片段、与β3Gal-T5特异性结合的抗体或其片段、或者与GlcNAc6ST-2特异性结合的抗体或其片段。 
本发明的检出用试剂盒还可含有与β3Gal-T4特异性结合的抗体或与β3Gal-T5特异性结合的抗体，以此代替上述与β3Gal-T4和β3Gal-T5特异性结合的抗体，或者一起含有。 
本发明的检出用试剂盒可根据所采用的免疫学方法，以所需形式 含有与β3Gal-T4和β3Gal-T5特异性结合的抗体、或与GlcNAc6ST-2特异性结合的抗体、或它们的片段。 
例如为使用标记抗体的免疫学方法、例如酶联免疫测定法、化学发光免疫测定法、荧光抗体法、或放射免疫测定法等时，可以以用标记物标记的标记抗体或标记抗体片段的形式含有。标记物的具体例子有：作为酶的过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-D-半乳糖苷酶、或葡糖氧化酶等，作为荧光物质的异硫氰酸荧光素或稀土类金属螯合物等，作为放射性同位素的3H、14C、或125I等，其它有生物素、抗生物素蛋白、或化学发光物质等。为酶或化学发光物质等时，其本身单独无法产生可测定的信号，因此优选选择并含有分别对应的适当的底物等。 
实施例 
以下给出实施例和比较例进行本发明的具体说明，但它们并不限定本发明的范围。 
《实施例1：抗β3Gal-T5抗体的制备》 
(A)可溶性β3Gal-T5蛋白的制备(免疫用抗原的制备) 
(A-1)β3Gal-T5表达载体的构建 
通过PCR，使用下述b3Gal-T5的正向引物和b3Gal-T5的反向引物，由人大肠cDNA文库扩增编码缺损细胞质和跨膜区域的肽的cDNA片段。所得cDNA片段是编码含有β3Gal-T5的第27号～第310号氨基酸序列的肽的cDNA。 
b3Gal-T5的正向引物：5’-tttgtcgacAGTCTAAATCCTTTCAAAG-3’(SEQ ID NO：1) 
b3Gal-T5的反向引物：5’-tttaagcttCAGACAGGCGGACAATC-3’(SEQID NO：2) 
序列中，小写字母记载的序列是含有限制酶切位点的序列，该限制酶切位点用于与表达载体连接。将所得cDNA克隆在pQE9载体(キァゲン公司)的克隆位点上，通过克隆的载体来转化大肠杆菌M15。由Prism 310遗传分析仪(Prism 310 Genetic Analyzer，ァプラィド·バィ ォシステムズ公司)确定所得的质粒的核苷酸序列。 
(A-2)β3Gal-T5蛋白的表达和纯化 
重组β3Gal-T5蛋白如下制备。将培养过夜的转化大肠杆菌M15稀释为1/100，加入到15L的LB培养基(含有100μg/mL氨苄青霉素和25μg/mL卡那霉素)中，一边剧烈搅拌一边在30℃下培养3小时。以终浓度0.1mM向培养液中添加异丙基β-D-1-硫代半乳糖吡喃糖苷(以下称为IPTG)，在18℃下诱导表达16小时。通过离心收集大肠杆菌，在缓冲液A[200mL 6M胍-HCl、20mM磷酸钾缓冲液(pH 8.0)、10mM 2-巯基乙醇、和20mM咪唑]中用超声波破碎。所得匀浆物在25℃下静置16小时。在5,000g下离心20分钟，然后将上清铺入3mL的Ni-NTA琼脂糖(キァゲン公司)中，偶而混合，同时放置30分钟。将树脂装入塑料柱中，用60mL的缓冲液A洗涤。然后，重组蛋白用含有0.25M咪唑的缓冲液A洗脱。将洗脱物用8M尿素-PBS透析，用Microcon YM-10(ミリポァ公司)浓缩。最终得到2.5mg重组蛋白。将所得蛋白称为改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白。 
(B)非改性可溶性β3Gal-T5蛋白的制备(筛选用抗原的制备) 
使用实施例1中制备的转化大肠杆菌M15来制备非改性β3Gal-T5蛋白。将300mL大肠杆菌的培养液用0.1mM IPTG诱导表达，然后收集菌体，在25mL 20mM磷酸钾缓冲液(pH 8.0)(含有0.3mM NaCl和10mM咪唑)中进行超声波破碎。向所得匀浆物中添加2.5mL 5％Triton X-100，将混合物在冰中放置30分钟。离心后向上清中加入0.3mLNi-NTA琼脂糖，偶而混合，同时放置30分钟。将树脂装入塑料柱中，用5mL含有0.5％TritonX-100的缓冲液B(20mM磷酸钾缓冲液(pH8.0)、0.3M NaCl和20mM咪唑)洗涤，进一步用5mL缓冲液B洗涤。重组蛋白用含有0.25M咪唑的缓冲液B洗脱。使用Microcon YM-10(ミリポァ公司)，将洗脱物用PBS洗涤，浓缩。根据SDS-PAGE推定，0.36mg所得的蛋白质内，重组β3Gal-T5蛋白大约为10％的收率。该组分含有 足够的β3Gal-T5。将所得蛋白质称为非改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白。 
(C)单克隆抗体和多克隆抗体的制备 
β3Gal-T5的单克隆抗体和多克隆抗体在株式会社医学生物学研究所制备。单克隆抗体如下制备。将上述改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白每隔3天对4只小鼠的脚趾进行免疫，共免疫3次。按照规定方法，使小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤融合，使用上述非改性β3Gal-T5蛋白作为抗原，进行生产抗体的杂交瘤的筛选。克隆1株杂交瘤，该1株杂交瘤生产与非改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白反应的单克隆抗体。按照规定方法，在5只小鼠的腹腔内接种杂交瘤，得到25ml腹水。腹水是使用Sephacryl S-300凝胶过滤(1.4×68cm；用TBS平衡和洗脱：GEヘルスケァ公司)进行纯化，得到21mg的β3Gal-T5单克隆抗体。 
多克隆抗体是每隔1周，将上述改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白对兔进行免疫，共免疫6次，以β3Gal-T5多克隆抗血清的形式获得。 
(D)单克隆抗体和多克隆抗体的特异性的确认 
为了确认所得的单克隆抗体和多克隆抗体对β3Gal-T5的特异性，研究与β3GalT-1、β3GalT-2、β3Gal-T4、β3GalT-6、和β3GalNAc-T1的反应性。首先制备各重组蛋白。β3GalT-1的引物是使用下述引物，除此之外反复进行上述(A-1)的步骤，构建表达载体。β3GalT-2、β3Gal-T4、β3GalT-6和β3GalNAc-T1是使用Super Script人脑cDNA文库代替人大肠cDNA文库作为cDNA文库、引物是使用下述引物，除此之外反复进行上述(A-1)的步骤，构建表达载体。 
β3Gal-T1的正向引物：5’-tttggatccAGTATAACTCGCCCTACTT-3’(SEQ ID NO：3) 
β3Gal-T1的反向引物：5’-tttaagcttCCTAACATCTGAGATG-3’(SEQ IDNO：4) 
β3Gal-T2的正向引物：5’-tttggatccCTGCCAGGCAGAGCTGGA-3’(SEQ ID NO：5) 
β3Gal-T2的反向引物：5’-tttaagcttAATGTAGTTTACGGTGG-3’(SEQID NO：6) 
β3GalNAc-T1的正向引物：5’-tttggatccAGCCTTCCCCACTACAATG-3’(SEQ ID NO：7) 
β3GalNAc-T1的反向引物：5’-tttaagcttAATAATGGCATGTGGTGT-3’(SEQ ID NO：8) 
β3Gal-T4的正向引物：5’-tttggatccTTGGGGGAGGAGCTGCTG-3’(SEQ ID NO：9) 
β3Gal-T4的反向引物：5’-tttgtcgacTCAGCTCTGAAGCCAGGC-3’(SEQID NO：10) 
β3Gal-T6的正向引物：5’-tttggatccGACCCCAGGGCGATGTCG-3’(SEQ ID NO：11) 
β3Gal-T6的反向引物：5’-tttaagcttGGCTCAGGGGATGCCCT-3’(SEQID NO：12) 
各重组蛋白是将上述(A-2)的步骤进行若干变更来制备。具体来说，将培养过夜的各转化M15以1/100的浓度加入到含有15mL抗生素的LB培养基中，在30℃下培养3小时。向培养液中添加终浓度0.1mM的IPTG，在18℃下诱导表达16小时。收集大肠杆菌，在10mL缓冲液A中进行超声波破碎。匀浆物在25℃下静置16小时。离心后向上清中加入0.5mL的Ni-NTA琼脂糖(キァゲン公司)，放置30分钟。将树脂用10mL的缓冲液A洗涤，用含有0.25M咪唑的缓冲液A洗脱重组蛋白。结果，β3GalT-1、β3GalT-2、β3Gal-T4、β3GalT-6和β3GalNac-T1的收量分别为0.03mg、0.03mg、0.06mg、0.70mg和1.8mg。 
接着，通过蛋白质印迹法确认反应性。将所得的各300ng蛋白质用聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，转印在硝基纤维素膜上。封闭后与抗β3Gal-T5单克隆抗体(1μg/mL)反应。漂洗后，使膜与HRP标记抗小鼠IgG/IgM兔抗体(0.3μg/mL：Jackson ImmunoReseach)反应。使用ECL蛋白质印迹检出试剂(GEヘルスケァ公司)，通过化学发光检出。 
多克隆抗血清的反应特性是将各50ng蛋白质进行电泳，将多克隆 抗血清稀释至1,000倍，进行反应，漂洗后进一步与HRP标记抗兔Ig抗体(0.3μg/mL)反应，与单克隆抗体同样地通过化学发光进行检出。 
如图1所示，单克隆抗体与β3Gal-T5强烈反应。除此之外也与β3GalT-1和β3Gal-T4反应。而多克隆抗体与β3Gal-T5强烈反应，也与β3Gal-T4反应。 
《实施例2：卵巢癌细胞中的β3Gal-T4和β3Gal-T5的mRNA的表达》 
使用5种卵巢癌细胞株，通过RT-PCR研究卵巢癌细胞中的β3Gal-T4和β3Gal-T5的mRNA的表达。ES-2细胞(卵巢透明细胞癌)购自ATCC，MCAS细胞(卵巢粘液性囊腺癌)、RMG-I细胞(卵巢中肾腺癌)、RMG-II细胞(卵巢中肾腺癌)、以及RMUG-L(卵巢粘液性囊腺癌)购自人类科学研究资源库(ヒュ一マンサィェンス研究資源バンク)。 
使用ISOGEN(ニッポンジ一ン公司)溶解回收的细胞，分离总RNA。使用低聚dT引物和SuperScriptIII(ィンビトロジェン公司)，由所得RNA合成cDNA。cDNA量通过β肌动蛋白的cDNA量来校正。 
β3Gal-T4和β3Gal-T5的表达是分别添加下述引物，在95℃下温育2分钟，然后通过PCR确认。PCR是使用GoTaq DNA聚合酶(プロメガ公司)，以20μL的容量进行95℃30秒、62℃1分钟、72℃2分钟的29个循环。 
β3Gal-T4的PCR的正向引物：5’-ATTCTTGCTGGGAGAGCCGAAC-3’(SEQ ID NO：13) 
β3Gal-T4的PCR的反向引物：5’-AAGTACAGAAGAGGCACTTCCTC-3’(SEQ ID NO：14) 
β3Gal-T5的PCR的正向引物：5’-GGAAACGAAAGAGGTGGACCAG-3’(SEQ ID NO：15) 
β3Gal-T5的PCR的反向引物：5’-GAGCTCCTCCAATCTGATGTTCA-3’(SEQ ID NO：16) 
如图4所示，β3Gal-T4的mRNA在ES-2细胞、MCAS细胞、RMG-I细胞和RMUG-L细胞中表达。而β3Gal-T5的mRNA在ES-2细胞、RMG-I 细胞、RMG-II细胞和RMUG-L细胞中表达。 
5株卵巢癌细胞株中，β3Gal-T4的mRNA和β3Gal-T5的mRNA在4株卵巢癌细胞株中表达。另外，5株卵巢癌细胞株中，有β3Gal-T4和β3Gal-T5的任意一种mRNA表达。 
《实施例3：GlcNAc6ST-2抗体的制备》 
(A)可溶性GlcNAc6ST-2蛋白的制备(免疫用抗原的制备) 
(A-1)GlcNAc6ST-2表达载体的构建 
通过PCR，使用下述GlcNAc6ST2的正向引物和GlcNAc6ST2的反向引物，由之前获得的全长cDNA(Glycobiology，2002，12，379～388页)扩增编码缺损细胞质和跨膜区域的肽的cDNA片段。所得cDNA片段是编码含有GlcNAc6ST-2的第28号～第386号氨基酸序列的肽的cDNA。 
GlcNAc6ST2的正向引物：5’-tttgtcgacAGCCACAACATCAGCT-3’(SEQ ID NO：17) 
GlcNAc6ST2的反向引物：5’-tttaagcttAGTGGATTTGCTCAG-3’(SEQID NO：18) 
序列中，小写字母记载的序列是含有限制酶切位点的序列，该限制酶切位点用于与表达载体连接。将所得cDNA克隆在pQE9载体(キァゲン公司)的克隆位点上，通过克隆的载体来转化大肠杆菌M15。由Prism 310遗传分析仪(ァプラィド·バィォシステムズ公司)确定所得的质粒的核苷酸序列。 
(A-2)GlcNAc6ST-2蛋白的表达和纯化 
使用GlcNAc6ST-2表达载体代替β3Gal-T5的表达载体，以1.25L进行IPTG诱导表达的培养，除此之外反复进行上述实施例1的(A-2)的步骤，最终得到3.5mg的GlcNAc6ST-2蛋白。将所得蛋白称为大肠杆菌GlcNAc6ST-2蛋白。 
(B)通过巴斯德毕赤氏酵母制备可溶性GlcNAc6ST-2蛋白(筛选用抗 原的制备) 
通过单克隆抗体筛选中使用的酵母进行GlcNAc6ST-2蛋白的制备。通过PCR，使用下述GlcNAc6ST2-毕赤氏的正向引物和GlcNAc6ST2-毕赤氏的反向引物，由之前获得的全长cDNA(Glycobiology，2002，12，379～388页)扩增编码缺损细胞质和跨膜区域的肽的cDNA片段。 
GlcNAc6ST2-毕赤氏的正向引物：5’-tttcctaggTACAGCCACAACATCAG-3’(SEQ ID NO：19) 
GlcNAc6ST2-毕赤氏的反向引物：5’-tttgcggccgcTTAGTGGATTTGCTCAGG-3’(SEQ ID NO：20) 
将所得cDNA插入pPIC9-His载体的最佳克隆位点上，通过Prism310遗传分析仪确定核苷酸序列。重组GlcNAc6ST-2蛋白的生产和纯化按照已报道的方法(Glycobiology，15，943～951页，2005)进行。由500mL缓冲甲醇复合培养基中的培养物获得300μg重组蛋白。该组分含有足够的GlcNAc6ST-2活性。将所得蛋白称为酵母GlcNAc6ST-2蛋白。 
(C)单克隆抗体和多克隆抗体的制备 
使用大肠杆菌GlcNAc6ST-2蛋白作为免疫原，使用酵母GlcNAc6ST-2蛋白作为单克隆抗体的筛选抗原，除此之外反复进行上述实施例1的(C)的步骤，获得生成单克隆抗体的1株杂交瘤以及多克隆抗血清。在5只小鼠的腹腔内接种杂交瘤，得到13mL腹水。腹水使用蛋白A-琼脂糖亲和层析(0.9×7.9cm，用PBS平衡，GEヘルスケァ公司)进行纯化，得到12.6mg抗体。 
(D)单克隆抗体和多克隆抗体的特异性的确认 
为了确认所得的单克隆抗体和多克隆抗体对GlcNAc6ST-2的特异性，研究与GlcNAc6ST1、GlcNAc6ST3、GlcNAc6ST4、GlcNAc6ST5、Gal6ST和Ch6ST1的反应性。首先制备各重组蛋白。引物是使用下述引物，除此之外反复进行本实施例(A-1)的步骤，构建表达载体。 
GlcNAc6ST1的正向引物：5’-tttgtcgacTACAAGTGGCACAAG-3’(SEQID NO：21) 
GlcNAc6ST1的反向引物：5’-tttgtcgacCCCTTTTAGAGACGG-3’(SEQID NO：22) 
GlcNAc6ST3的正向引物：5’-tttgtcgacTCCCGGCCAGGGCCCTC-3’(SEQ ID NO：23) 
GlcNAc6ST3的反向引物：5’-tttaagcttCAGTCAGGCGATGCCCA-3’(SEQ ID NO：24) 
GlcNAc6ST4的正向引物：5’-tttgtcgacGGCGGCCGCGACGG-3’(SEQID NO：25) 
GlcNAc6ST4的反向引物：5’-tttaagcttGGGAGGCTACGTGGCGC-3’(SEQ ID NO：26) 
GlcNAc6ST5的正向引物：5’-tttgtcgacTCCCGGCCAGGGCCCTC-3’(SEQ ID NO：27) 
GlcNAc6ST5的反向引物：5’-tttaagcttGCTACAACTGTGGCCTC-3’(SEQ ID NO：28) 
Gal6ST的正向引物：5’-tttgtcgacACCTTCACCGCCAAGTC-3’(SEQ IDNO：29) 
Gal6ST的反向引物：5’-tttaagcttCACGAGAAGGGGCGGAA-3’(SEQID NO：30) 
Ch6ST1的正向引物：5’-tttgtcgacATATCAAGGGTCTCAGA-3’(SEQID NO：31) 
Ch6ST1的反向引物：5’-tttaagcttCTACGTGACCCAGAAGGT-3’(SEQID NO：32) 
IPTG的表达诱导是使用15mL的培养液，除此之外反复进行上述实施例1(D)的β3GalT-1等的表达和纯化的步骤，得到各重组蛋白。GlcNAc6ST1、GlcNAc6ST3、GlcNAc6ST4、GlcNAc6ST5、Gal6ST和Ch6ST1的收量分别为0.20mg、1.2mg、0.26mg、0.83mg、0.26mg和0.13mg。 
[表1] 
*用％表示阳性率。 
接着进行蛋白质印迹。使用200ng作为电泳的抗原量，除此之外反复进行上述实施例1(D)的蛋白质印迹的步骤。 
如图2所示，单克隆抗体只与GlcNAc6ST-2强烈反应。而多克隆抗血清与全部的抗原反应。 
《实施例4：β3Gal-T5和GlcNAc6ST-2的夹层ELISA的构建》 
使用免疫上述β3Gal-T5蛋白得到的单克隆抗体和多克隆抗血清、以及免疫GlcNAc6ST-2蛋白得到的单克隆抗体和多克隆抗血清，通过夹层ELISA法进行β3Gal-T5和GlcNAc6ST-2的免疫学分析方法的构建。 
(A)β3Gal-T5检出系统 
将50μL用PBS稀释为1μg/mL的β3Gal-T5单克隆抗体加入到96孔黑色高结合平板(コ一ニング公司)中，在4℃固定16小时。用含有1％BSA的PBS在25℃下将表面封闭1小时。在PBS-0.1％吐温-20(PBS-T)中添加1％BSA，用所得稀释液将作为标准物质的非改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白稀释为250ng/mL、125ng/mL、62.5ng/mL、16ng/mL、4.0ng/mL，加入50μL，在25℃下温育2小时。用PBS-T清洗3次，然 后加入50μL稀释为1000倍的β3Gal-T5多克隆抗血清，在25℃下温育1.5小时。用PBS-T清洗3次，然后加入用PBS-T稀释的驴的HRP标记抗兔Ig抗体(0.3μg/mL：GEヘルスケァ公司)，在25℃下温育1小时。将孔用PBS-T清洗4次，加入100μL SuperSignal ELISA PicoChemiluminescent Substrate(ピァス公司)，用Plate CHAMELEON V(ハィデックス公司)计数化学发光。 
(B)GlcNAc6ST-2检出系统 
以GlcNAc6ST-2的单克隆抗体的浓度3μL/mL进行固定、将GlcNAc6ST-2的多克隆抗血清稀释至3000倍、以及使用大肠杆菌GlcNAc6ST-2蛋白作为标准物质，除此之外反复进行上述的(A)步骤，构建GlcNAc6ST-2的夹层ELISA。 
如图3所示，在获得了β3Gal-T5检出系统和GlcNAc6ST-2检出系统的同时，获得了直线性良好的校准曲线。 
(C)β3Gal-T5检出系统的校准曲线的改善 
将作为标准物质的非改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白的稀释液由PBS-0.1％吐温-20(PBS-T)的稀释液变更为在PBS-0.1％吐温-20(PBS-T)中添加10％正常人血清所得的稀释液，除此之外反复进行上述(A)的步骤，得到了β3Gal-T5的校准曲线。结果如图5A所示。在β3Gal-T5蛋白的低浓度区域中，直线性得到改善。所添加的血清除了正常人血清之外，使用牛、马、绵羊、山羊等血清也具有同样的效果。 
(D)GlcNAc6ST-2检出系统的校准曲线的改善 
将作为标准物质的大肠杆菌GlcNAc6ST-2蛋白的稀释液由PBS-0.1％吐温-20(PBS-T)的稀释液变更为在PBS-0.1％吐温-20(PBS-T)中添加10％正常人血清所得的稀释液，除此之外反复进行上述(B)的步骤，得到了GlcNAc6ST-2的校准曲线。结果如图5A所示。在GlcNAc6ST-2蛋白的低浓度区域中，直线性得到改善。 
《实施例5：通过β3Gal-T5检出系统对卵巢癌患者血清的测定》 
通过β3Gal-T5检出系统对60例卵巢癌患者和8例健康女性的检样的血清进行测定。卵巢癌患者的血清使用开腹手术确诊为I期～IV期病期的患者的血清，对于57例，可通过组织学检查判定卵巢癌的组织类型。这些卵巢癌患者未见卵巢癌以外的癌症的发生。 
将患者和健康人的血清用PBS-T稀释10倍加入，以此代替作为标准物质的改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白，除此之外反复进行实施例4(A)的步骤。由图3(A)的校准曲线确定血清中的β3Gal-T5的值。阳性的判定是以健康成年女性的平均+2SD的值作为阀值。 
需要说明的是，对于免疫实施例1(D)中的β3Gal-T5蛋白得到的单克隆抗体和多克隆抗血清与其它β1-3半乳糖转移酶的反应性进行研究，通过该单克隆抗体和多克隆抗血清进行的ELISA，可以检出β3Gal-T4和β3Gal-T5两种酶。 
《实施例6：通过GlcNAc6ST-2检出系统对卵巢癌患者血清的测定》 
对于实施例5中测定的60例卵巢癌患者病例和8例健康成年女性的检样的血清，通过GlcNAc6ST-2检出系统进行测定。 
将患者血清用PBS-T稀释10倍加入，以此代替作为标准物质的大肠杆菌GlcNAc6ST-2蛋白，除此之外反复进行实施例4(B)的步骤。由图3(B)的校准曲线确定血清中的GlcNAc6ST-2的值。阳性的判定是以健康成年女性的平均+2SD的值作为阀值。 
《比较例1》 
对于实施例5中测定的60例卵巢癌患者和8例健康成年女性的检样的血清进行以往的卵巢癌标志物-CA125的测定。 
CA125的测定是使用ェクル一シス试剂CA125II(ロシュ·ダィァグノスティックス株式会社)的试剂盒，按照所附的说明书进行测定。 
《比较例2》 
对于实施例5中测定的60例卵巢癌患者和8例健康成年女性的检样的血清，进行以往的卵巢癌标志物-CA546的测定。 
CA546的测定是使用プレ一トカィノスCA546试剂(株式会社カィノス)的试剂盒，按照所附说明书进行测定。 
《解析例1》 
按照卵巢癌的各病期、或组织类型分类，对实施例4和5以及比较例1和2的阳性率进行分析。结果如表1所示。 
在病期I和II的早期卵巢癌中，通过β3Gal-T5检出系统得到的阳性率为87.1％，通过GlcNAc6ST-2检出系统得到的阳性率为74.2％，与CA125或CA546的阳性率比较，可以高率地检出卵巢癌。并且，β3Gal-T5检出系统和/或GlcNAc6ST-2检出系统为阳性的检样是96.8％，通过将β3Gal-T5检出系统和GlcNAc6ST-2检出系统的免疫学分析方法组合，可以高率地检出早期的卵巢癌患者。 
并且，按照卵巢癌的组织类型分类时，根据β3Gal-T5检出系统的免疫学分析方法，粘液性卵巢癌显示100％、类内膜性卵巢癌显示84.6％、透明细胞性卵巢癌显示87.5％的阳性率。这些阳性率比CA125或CA546的阳性率高，特别是β3Gal-T5检出系统的免疫学分析方法可以高率地检出化学疗法难治性(抗性)的粘液性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌。 
在类内膜性卵巢癌和透明细胞性卵巢癌中，通过将β3Gal-T5检出系统的免疫学分析方法和GlcNAc6ST-2检出系统的免疫学分析方法组合，阳性率分别达到100％和93.8％，可以高率地检出这些组织类型的卵巢癌。 
《实施例7：通过β3Gal-T5检出系统对子宫体癌患者血清的测定》 
通过β3Gal-T5检出系统对30例子宫体癌患者和40例健康成年女性 的检样的血清进行测定。子宫体癌患者中的26人使用手术确诊为I期-III期病期的患者的血清。这些子宫体癌患者中，1例并发子宫颈癌，其它29例未见子宫体癌以外的癌症的发生。 
将子宫体患者和健康人的血清用PBS-T稀释10倍加入，以此代替作为标准物质的改性大肠杆菌β3Gal-T5蛋白，除此之外反复进行实施例4(C)的步骤。由图5(A)的校准曲线确定血清中的β3Gal-T5的值。30例子宫体癌患者的结果如表2所示。阳性的判定是以健康成年女性的平均+SD的值作为阀值进行判定。需要说明的是，健康女性的平均值为2.1ng/mL，阀值为5.4ng/mL。30例中，18例(60％)为阳性。 
《实施例8：通过GlcNAc6ST-2检出系统对子宫体癌患者血清的测定》 
对于实施例7中测定的30例子宫体癌患者和40例健康成年女性的检样的血清，通过GlcNAc6ST-2检出系统进行测定。 
将患者血清用PBS-T稀释10倍加入，以此代替作为标准物质的大肠杆菌GlcNAc6ST-2蛋白，除此之外反复进行实施例4(D)的步骤。由图5(B)的校准曲线确定血清中的GlcNAc6ST-2的值。30例子宫体癌患者的结果如表2所示。阳性的判定是以健康成年女性的平均+2SD的值作为阀值进行判定。健康女性的平均值为2.0ng/mL，阀值为7.8ng/mL。30例中的10例(33％)为阳性。 
《比较例3》 
对于实施例7中测定的30例子宫体癌患者中的9例的血清进行以往的子宫体癌标志物-CA125的测定。 
CA125的测定是使用ェクル一シス试剂CA125II(ロシュ·ダィァグノスティックス株式会社)的试剂盒，按照所附的说明书进行测定。测定值35U/mL以上判定为阳性。结果如表2所示。13例中的5例(38.5％)为阳性。 
《比较例4》 
对于实施例7中测定的30例子宫体癌患者中的19例的血清进行以往的子宫体癌标志物-CA602的测定。 
CA602的测定是使用プレ一トカィノスCA602试剂(株式会社カィノス)的试剂盒，按照所附的说明书进行测定。测定值63U/mL以上的检样判定为阳性。结果如表2所示。19例中的5例(26.3％)为阳性。 
《比较例5》 
对于实施例7中测定的30例子宫体癌患者中的23例的血清进行胰腺癌标志物和子宫体癌标志物-CA19-9的测定。 
CA19-9的测定是使用ェクル一シス试剂CA19-9(ロシュ·ダィァグノスティックス株式会社)的试剂盒，按照所附的说明书进行测定。测定值37U/mL以上判定为阳性。结果如表2所示。24例中的4例(16.7％)为阳性。 
[表2] 
  检样编号   病期   等级3)   CA602   CA125   CA19-9   GlcNAc6ST2   β3Gal-T4/T5
  1   1A   G1   4   NT   8   15.2   0
  2   1B   G2   48   NT   22   262   0
  3   2A   G1   9   NT   7   0   25.1
  4   3C   G1   NT2)   22   82   17.9   41.1
  5   2A   G1   19   93   12   15.1   62.9
  6   1B   G1   94   NT   88   0   49.9
  7   3A   癌肉瘤   614   NT   13   16.0   0
  8   1B   G1   6   NT   ＜1   0   0
  9   1A   G1   25   NT   24   0   0
  10   3C   G3   NT   830   1145   3.0   0
  11   3A   G3   NT   81   13   0   0
  12   1B   G3   NT   28   22   23.6   21.3
  13   1B   G1   21   26   19   0   0
  14   1B   G1   15   NT   NT   9.8   26.4
  15   1A   G1   8   NT   7   4.0   24.7
  16   1B   G1   NT   NT   NT   6.4   0
  17   1A   G1   NT   4   28   0   0
  18   2A   G1   20   NT   28   3.2   31.8
  19   1B   G1   9   NT   19   6.0   32.3
  20   1C   G2   22   22   ＜1   0   0
  21   1A   G1   29   NT   7   5.8   24.7
  22   1B   G2   12   NT   8   6.3   20.9
  23   1C   G1   81   NT   100   28.6   29.7
  24   2A   G1   NT   15   ＜1   5.1   9.2
  25   3A1)   G1   92   NT   NT   O   21.8
  26   3A   G3   409   NT   15   0   0
  27       NT   214   19   0   13.1
  28       NT   84   NT   63.3   22.9
  29       NT   11   NT   0.4   9.0
  30       NT   25   NT   28.8   11.2
1)：并发子宫颈癌 
2)：NT：未测试 
3)：等级表示组织分化度，具体表示子宫体癌的恶性度。G1(等级1)指高分化型，是表示组织学接近于正常的腺体结构的形态的类型，而G3(等级3)指低分化型，是无序增殖的类型。 
《解析例2》 
上述表2的结果作为分别的各标志物的阳性率，汇总于表3. 
[表3] 
子宫体癌血清的测定结果 
  标志物   检样数(a)   阳性检样数(b)   阳性率％(b/a×100)
  CA602   19   5   26.3
  CA125   13   5   38.5
  CA19-9   24   4   16.7
  GlcNAcST2   30   10   33.3
  β3Gal-T4/T5   30   18   60.0
  GlcNAcST2+β3Gal-T4/T5   30   21   70.0
以往作为子宫体癌的肿瘤标志物使用的CA602、CA125和CA19-9的阳性率分别为26.3％、38.5％、16.7％。与此相对，β3Gal-T5检出系统的阳性率为60％，显示高的阳性率。GlcNAc6ST-2检出系统的阳性率为33.3％，比CA602和CA19-9高，比CA125低。但是如表2的检样编号1、2和12所示，可以检出以往的标志物无法检出的子宫体癌患者，显示了有效性。并且，β3Gal-T5检出系统和/或GlcNAc6ST-2检出系统为阳性的检样为70％，通过将β3Gal-T5检出系统和GlcNAc6ST-2检出系统的免疫学分析方法组合，可以高率地检出子宫体癌患者。 
《实施例9》 
对于6例子宫体癌患者的血清，通过β3Gal-T5检出系统进行测定。对于6例本实施例和实施例7中进行测定的30例，分为病期I期和病期II～IV期，将阳性率汇总于表4. 
[表4] 
每个病期的β3Gal-T5检出系统的阳性率 
  病期   检样数(a)   阳性检样数(b)   阳性率％   (b/a×100)
  I期   21   12   57.1
  II～IV期   15   11   73.3
如表4所示，在病期I的早期子宫体癌中，β3Gal-T5检出系统的阳性率为57.1％，即使在病期的早期也可以高率地检出子宫体癌。 
产业实用性 
本发明的卵巢癌的检出方法和卵巢癌的检出试剂盒可以高率地检出妇科癌症、特别是卵巢癌患者或子宫体癌。 
以上按照特定的方式对本发明进行了说明，本领域技术人员可以了解的变形或改良也包含在本发明的范围内。 
序列表
<110>国立大学法人东京工业大学
<120>妇科癌症的检出方法
<130>TIT-807
<150>JP 2007-219046
<151>2007-08-24
<150>JP 2008-063641
<151>2008-03-13
<160>35
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>b3Gal-T5的正向引物
<400>1
tttgtcgaca gtctaaatcc tttcaaag                                         28
<210>2
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>b3Gal-T5的反向引物
<400>2
tttaagcttc agacaggcgg acaatc                                           26
<210>3
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T1的正向引物
<400>3
tttggatcca gtataactcg ccctactt                                          28
<210>4
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T1的反向引物
<400>4
tttaagcttc ctaacatctg agatg                                             25
<210>5
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T2的正向引物
<400>5
tttggatccc tgccaggcag agctgga                                           27
<210>6
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T2的反向引物
<400>6
tttaagctta atgtagttta cggtgg                                           26
<210>7
<211>28
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3GalNAc-T1的正向引物
<400>7
tttggatcca gccttcccca ctacaatg                                          28
<210>8
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3GalNAc-T1的反向引物
<400>8
tttaagctta ataatggcat gtggtgt                                           27
<210>9
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T4的正向引物
<400>9
tttggatcct tgggggagga gctgctg                                          27
<210>10
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T4的反向引物
<400>10
tttgtcgact cagctctgaa gccaggc                                         27
<210>11
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T6的正向引物
<400>11
tttggatccg accccagggc gatgtcg                                           27
<210>12
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T6的反向引物
<400>12
tttaagcttg gctcagggga tgccct                                            26
<210>13
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T4的PCR的正向引物
<400>13
attcttgctg ggagagccga ac                                                22
<210>14
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T4的PCR的反向引物
<400>14
aagtacagaa gaggcacttc ctc                                               23
<210>15
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T5的PCR的正向引物
<400>15
ggaaacgaaa gaggtggacc ag                                                22
<210>16
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>3Gal-T5的PCR的反向引物
<400>16
gagc tcctcc aatctgatgt tca                                              23
<210>17
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST2的正向引物
<400>17
tttgtcgaca gccacaacat cagc t                                            25
<210>18
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST2的反向引物
<400>18
tttaagctta gtggatttgc tcag                                              24
<210>19
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST2-毕赤氏的正向引物
<400>19
tttcctaggt acagccacaa catcag                                           26
<210>20
<211>29
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST2-毕赤氏的反向引物
<400>20
tttgcggccg cttagtggat ttgctcagg                                          29
<210>21
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST1的正向引物
<400>21
tttgtcgact acaagtggca caag                                               24
<210>22
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST1的反向引物
<400>22
tttgtcgacc ccttttagag acgg                                               24
<210>23
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST3的正向引物
<400>23
tttgtcgact cccggccagg gccctc                                             26
<210>24
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST3的反向引物
<400>24
tttaagcttc agtcaggcga tgccca                                            26
<210>25
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST4的正向引物
<400>25
tttgtcgacg gcggccgcga cgg                                               23
<210>26
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST4的反向引物
<400>26
tttaagcttg ggaggctacg tggcgc                                            26
<210>27
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST5的正向引物
<400>27
tttgtcgact cccggccagg gccctc                                            26
<210>28
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>GlcNAc6ST5的反向引物
<400>28
tttaagcttg ctacaactgt ggcctc                                            26
<210>29
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Gal6ST的正向引物
<400>29
tttgtcgaca ccttcaccgc caagtc                                            26
<210>30
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Gal6ST的反向引物
<400>30
tttaagcttc acgagaaggg gcggaa                                            26
<210>31
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Ch6ST1的正向引物
<400>31
tttgtcgaca tatcaagggt ctcaga                                            26
<210>32
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>Ch6ST1的反向引物
<400>32
tttaagcttc tacgtgaccc agaaggt                                            27
<210>33
<211>310
<212>PRT
<213>人类
<400>33
Met Ala Phe Pro Lys Met Arg Leu Met Tyr Ile Cys Leu Leu Val Leu
1               5                   10                  15
Gly Ala Leu Cys Leu Tyr Phe Ser Met Tyr Ser Leu Asn Pro Phe Lys
            20                  25                  30
Glu Gln Ser Phe Val Tyr Lys Lys Asp Gly Asn Phe Leu Lys Leu Pro
        35                  40                  45
Asp Thr Asp Cys Arg Gln Thr Pro Pro Phe Leu Val Leu Leu Val Thr
    50                  55                  60
Ser Ser His Lys Gln Leu Ala Glu Arg Met Ala Ile Arg Gln Thr Trp
65                  70                  75                  80
Gly Lys Glu Arg Met Val Lys Gly Lys Gln Leu Lys Thr Phe Phe Leu
                85                  90                  95
Leu Gly Thr Thr Ser Ser Ala Ala Glu Thr Lys Glu Val Asp Gln Glu
            100                 105                 110
Ser Gln Arg His Gly Asp Ile Ile Gln Lys Asp Phe Leu Asp Val Tyr
        115                 120                 125
Tyr Asn Leu Thr Leu Lys Thr Met Met Gly Ile Glu Trp Val His Arg
    130                 135                 140
Phe Cys Pro Gln Ala Ala Phe Val Met Lys Thr Asp Ser Asp Met Phe
145                 150                 155                 160
Ile Asn Val Asp Tyr Leu Thr Glu Leu Leu Leu Lys Lys Asn Arg Thr
                165                 170                 175
Thr Arg Phe Phe Thr Gly Phe Leu Lys Leu Asn Glu Phe Pro Ile Arg
            180                 185                 190
Gln Pro Phe Ser Lys Trp Phe Val Ser Lys Ser Glu Tyr Pro Trp Asp
        195                 200                 205
Arg Tyr Pro Pro Phe Cys Ser Gly Thr Gly Tyr Val Phe Ser Gly Asp
    210                 215                 220
Val Ala Ser Gln Val Tyr Asn Val Ser Lys Ser Val Pro Tyr Ile Lys
225                 230                 235                 240
Leu Glu Asp Val Phe Val Gly Leu Cys Leu Glu Arg Leu Asn Ile Arg
                245                 250                 255
Leu Glu Glu Leu His Ser Gln Pro Thr Phe Phe Pro Gly Gly Leu Arg
            260                 265                 270
Phe Ser Val Cys Leu Phe Arg Arg Ile Val Ala Cys His Phe Ile Lys
        275                 280                 285
Pro Arg Thr Leu Leu Asp Tyr Trp Gln Ala Leu Glu Asn Ser Arg Gly
    290                 295                 300
Glu Asp Cys Pro Pro Val
305                 310
<210>34
<211>378
<212>PRT
<213>人类
<400>34
Met Gln Leu Arg Leu Phe Arg Arg Leu Leu Leu Ala Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Val Ile Val Trp Thr Leu Phe Gly Pro Ser Gly Leu Gly Glu Glu Leu
            20                  25                  30
Leu Ser Leu Ser Leu Ala Ser Leu Leu Pro Ala Pro Ala Ser Pro Gly
        35                  40                  45
Pro Pro Leu Ala Leu Pro Arg Leu Leu Ile Pro Asn Gln Glu Ala Cys
    50                  55                  60
Ser Gly Pro Gly Ala Pro Pro Phe Leu Leu Ile Leu Val Cys Thr Ala
65                  70                  75                  80
Pro Glu Asn Leu Asn Gln Arg Asn Ala Ile Arg Ala Ser Trp Gly Gly
                85                  90                  95
Leu Arg Glu Ala Arg Gly Leu Arg Val Gln Thr Leu Phe Leu Leu Gly
            100                 105                 110
Glu Pro Asn Ala Gln His Pro Val Trp Gly Ser Gln Gly Ser Asp Leu
        115                 120                 125
Ala Ser Glu Ser Ala Ala Gln Gly Asp Ile Leu Gln Ala Ala Phe Gln
    130                 135                 140
Asp Ser Tyr Arg Asn Leu Thr Leu Lys Thr Leu Ser Gly Leu Asn Trp
145                 150                 155                 160
Ala Glu Lys His Cys Pro Met Ala Arg Tyr Val Leu Lys Thr Asp Asp
                165                 170                 175
Asp Val Tyr Val Asn Val Pro Glu Leu Val Ser Glu Leu Val Leu Arg
            180                 185                 190
Gly Gly Arg Trp Gly Gln Trp Glu Arg Ser Thr Glu Pro Gln Arg Glu
        195                 200                 205
Ala Glu Gln Glu Gly Gly Gln Val Leu His Ser Glu Glu Val Pro Leu
    210                 215                 220
Leu Tyr Leu Gly Arg Val His Trp Arg Val Asn Pro Ser Arg Thr Pro
225                 230                 235                 240
Gly Gly Arg His Arg Val Ser Glu Glu Gln Trp Pro His Thr Trp Gly
                245                 250                 255
Pro Phe Pro Pro Tyr Ala Ser Gly Thr Gly Tyr Val Leu Ser Ala Ser
            260                 265                 270
Ala Val Gln Leu Ile Leu Lys Val Ala Ser Arg Ala Pro Leu Leu Pro
        275                 280                 285
Leu Glu Asp Val Phe Val Gly Val Ser Ala Arg Arg Gly Gly Leu Ala
    290                 295                 300
Pro Thr Gln Cys Val Lys Leu Ala Gly Ala Thr His Tyr Pro Leu Asp
305                 310                 315                 320
Arg Cys Cys Tyr Gly Lys Phe Leu Leu Thr Ser His Arg Leu Asp Pro
                325                 330                 335
Trp Lys Met Gln Glu Ala Trp Lys Leu Val Gly Gly Ser Asp Gly Glu
            340                 345                 350
Arg Thr Ala Pro Phe Cys Ser Trp Phe Gln Gly Val Leu Gly Ile Leu
        355                 360                 365
Arg Cys Arg Ala Ile Ala Trp Leu Gln Ser
    370                 375
<210>35
<211>386
<212>PRT
<213>人类
<400>35
Met Leu Leu Pro Lys Lys Met Lys Leu Leu Leu Phe Leu Val Ser Gln
1               5                   10                  15
Met Ala Ile Leu Ala Leu Phe Phe His Met Tyr Ser His Asn Ile Ser
            20                  25                  30
Ser Leu Ser Met Lys Ala Gln Pro Glu Arg Met His Val Leu Val Leu
        35                  40                  45
Ser Ser Trp Arg Ser Gly Ser Ser Phe Val Gly Gln Leu Phe Gly Gln
    50                  55                  60
His Pro Asp Val Phe Tyr Leu Met Glu Pro Ala Trp His Val Trp Met
65                  70                  75                  80
Thr Phe Lys Gln Ser Thr Ala Trp Met Leu His Met Ala Val Arg Asp
                85                  90                  95
Leu Ile Arg Ala Val Phe Leu Cys Asp Met Ser Val Phe Asp Ala Tyr
            100                 105                 110
Met Glu Pro Gly Pro Arg Arg Gln Ser Ser Leu Phe Gln Trp Glu Asn
        115                 120                 125
Ser Arg Ala Leu Cys Ser Ala Pro Ala Cys Asp Ile Ile Pro Gln Asp
    130                 135                 140
Glu Ile Ile Pro Arg Ala His Cys Arg Leu Leu Cys Ser Gln Gln Pro
145                 150                 155                 160
Phe Glu Val Val Glu Lys Ala Cys Arg Ser Tyr Ser His Val Val Leu
                165                 170                 175
Lys Glu Val Arg Phe Phe Asn Leu Gln Ser Leu Tyr Pro Leu Leu Lys
            180                  185                 190
Asp Pro Ser Leu Asn Leu His Ile Val His Leu Val Arg Asp Pro Arg
        195                 200                 205
Ala Val Phe Arg Ser Arg Glu Arg Thr Lys Gly Asp Leu Met Ile Asp
    210                 215                 220
Ser Arg Ile Val Met Gly Gln His Glu Gln Lys Leu Lys Lys Glu Asp
225                 230                 235                 240
Gln Pro Tyr Tyr Val Met Gln Val Ile Cys Gln Ser Gln Leu Glu Ile
                245                 250                 255
Tyr Lys Thr Ile Gln Ser Leu Pro Lys Ala Leu Gln Glu Arg Tyr Leu
            260                 265                 270
Leu Val Arg Tyr Glu Asp Leu Ala Arg Ala Pro Val Ala Gln Thr Ser
        275                 280                 285
Arg Met Tyr Glu Phe Val Gly Leu Glu Phe Leu Pro His Leu Gln Thr
    290                 295                 300
Trp Val His Asn Ile Thr Arg Gly Lys Gly Met Gly Asp His Ala Phe
305                 310                 315                 320
His Thr Asn Ala Arg Asp Ala Leu Asn Val Ser Gln Ala Trp Arg Trp
                325                 330                 335
Ser Leu Pro Tyr Glu Lys Val Ser Arg Leu Gln Lys Ala Cys Gly Asp
            340                 345                 350
Ala Met Asn Leu Leu Gly Tyr Arg His Val Arg Ser Glu Gln Glu Gln
        355                 360                 365
Arg Asn Leu Leu Leu Asp Leu Leu Ser Thr Trp Thr Val Pro Glu Gln
    370                 375                 380
Ile His
385

Claims (4)

1.一种卵巢癌的诊断用夹层ELISA试剂盒，其特征在于：
该试剂盒含有与β1-3半乳糖转移酶-5特异性结合的2种抗体或其片段、或者与β1-3半乳糖转移酶-5和β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的2种抗体或其片段，对血液、血清或血浆中的β1-3半乳糖转移酶-5、或者β1-3半乳糖转移酶-5和β1-3半乳糖转移酶-4进行分析，其中，所述2种抗体是夹层法中使用的一次抗体和二次抗体，所述抗体的片段是F(ab')2、Fab'、Fab或Fv。
2.一种卵巢癌的诊断用夹层ELISA试剂盒，其特征在于：
该试剂盒含有与β1-3半乳糖转移酶-5特异性结合的2种抗体或其片段、或者与β1-3半乳糖转移酶-5和β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的2种抗体或其片段、以及与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的2种抗体或其片段，其中，所述2种抗体是夹层法中使用的一次抗体和二次抗体，所述抗体的片段是F(ab')2、Fab’、Fab或Fv。
3.与β1-3半乳糖转移酶-5特异性结合的2种抗体或其片段、或者与β1-3半乳糖转移酶-5和β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体或其片段在制备用于诊断卵巢癌的试剂盒中的应用，用于对血液、血清或血浆中的β1-3半乳糖转移酶-5、或者β1-3半乳糖转移酶-5和β1-3半乳糖转移酶-4进行分析，其中，所述抗体的片段是F(ab')2、Fab’、Fab或Fv。
4.与β1-3半乳糖转移酶-5特异性结合的2种抗体或其片段、或者与β1-3半乳糖转移酶-5和β1-3半乳糖转移酶-4特异性结合的抗体或其片段、以及与N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2特异性结合的抗体或其片段在制备用于诊断卵巢癌的试剂盒中的应用，用于对血液、血清或血浆中的β1-3半乳糖转移酶-5、或者β1-3半乳糖转移酶-5和β1-3半乳糖转移酶-4、以及N-乙酰葡糖胺6-O-磺基转移酶-2进行分析，其中，所述抗体的片段是F(ab')2、Fab’、Fab或Fv。
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US11377485B2 (en) 2009-12-02 2022-07-05 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
US10087236B2 (en) 2009-12-02 2018-10-02 Academia Sinica Methods for modifying human antibodies by glycan engineering
WO2011130332A1 (en) 2010-04-12 2011-10-20 Academia Sinica Glycan arrays for high throughput screening of viruses
JP2012021943A (ja) * 2010-07-16 2012-02-02 National Cancer Center 子宮体がんの検査方法、子宮体がんの検査薬、並びに子宮体がん抗原に対する抗体
JP5849254B2 (ja) 2011-07-26 2016-01-27 国立研究開発法人産業技術総合研究所 上皮性卵巣癌マーカー検出用抗体及び上皮性卵巣癌判定方法
EP2738250B1 (en) * 2011-07-26 2017-11-15 National Institute of Advanced Industrial Science And Technology Anti-beta1,6-N-acetylglucosaminyltransferase 5B antibody for detecting epithelial ovarian cancer and method for diagnosing epithelial ovarian cancer
WO2013152301A1 (en) * 2012-04-05 2013-10-10 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. O-glycan pathway ovarian cancer signature
US10130714B2 (en) 2012-04-14 2018-11-20 Academia Sinica Enhanced anti-influenza agents conjugated with anti-inflammatory activity
AU2013306098A1 (en) 2012-08-18 2015-02-12 Academia Sinica Cell-permeable probes for identification and imaging of sialidases
EP3013365B1 (en) 2013-06-26 2019-06-05 Academia Sinica Rm2 antigens and use thereof
WO2014210564A1 (en) 2013-06-27 2014-12-31 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
CN105682666B (zh) 2013-09-06 2021-06-01 中央研究院 使用醣脂激活人类iNKT细胞
DE102013020391A1 (de) * 2013-12-10 2015-06-11 Polysecure Gmbh Markierter Schichtaufbau, Verfahren zu dessen Herstellung und Verwendung desselben
EP3094352B1 (en) 2014-01-16 2020-09-23 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10150818B2 (en) 2014-01-16 2018-12-11 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
TWI687428B (zh) 2014-03-27 2020-03-11 中央研究院 反應性標記化合物及其用途
US10118969B2 (en) 2014-05-27 2018-11-06 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
KR20220151036A (ko) 2014-05-27 2022-11-11 아카데미아 시니카 항-ｃｄ20 글리코항체 및 이의 용도
AU2015267045B2 (en) 2014-05-27 2021-02-25 Academia Sinica Anti-HER2 glycoantibodies and uses thereof
AU2015267052A1 (en) 2014-05-27 2016-12-15 Academia Sinica Compositions and methods relating to universal glycoforms for enhanced antibody efficacy
US11332523B2 (en) 2014-05-28 2022-05-17 Academia Sinica Anti-TNF-alpha glycoantibodies and uses thereof
CN107001404B (zh) 2014-09-08 2021-06-29 中央研究院 使用醣脂激活人类iNKT细胞
US9975965B2 (en) 2015-01-16 2018-05-22 Academia Sinica Compositions and methods for treatment and detection of cancers
US10495645B2 (en) 2015-01-16 2019-12-03 Academia Sinica Cancer markers and methods of use thereof
KR20170104617A (ko) 2015-01-24 2017-09-15 아카데미아 시니카 신규한 글리칸 콘주게이트 및 이를 사용하는 방법
WO2017100796A1 (en) * 2015-12-11 2017-06-15 SINACA, Academia Modulation of globoseries glycosphingolipid synthesis and cancer biomarkers
AU2017231749A1 (en) 2016-03-08 2018-09-20 Academia Sinica Methods for modular synthesis of N-glycans and arrays thereof
CN109963868B (zh) 2016-08-22 2023-11-14 醣基生医股份有限公司 抗体、结合片段及使用方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004045750A1 (en) * 2002-11-19 2004-06-03 Universite Catholique De Louvain Method for producing pores in a thin polyimide sheet

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2888587B2 (ja) * 1990-03-06 1999-05-10 コニカ株式会社 癌関連ヒト由来ガラクトース転移酵素に特異的なモノクローナル抗体、それを産生するハイブリドーマ及びそれを用いた検体中の癌関連ヒト由来ガラクトース転移酵素の測定方法
US5955282A (en) * 1998-04-03 1999-09-21 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Human galactosyltransferases
JP2000245464A (ja) 1999-02-25 2000-09-12 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 新規ポリペプチド
WO2002099140A1 (en) * 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis, Inc. GLRAs AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004045750A1 (en) * 2002-11-19 2004-06-03 Universite Catholique De Louvain Method for producing pores in a thin polyimide sheet

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ectopic expression of N-acetylglucosamine 6-O-sulfotransferase 2 in chemotherapy-resistant ovarian adenocarcinomas;Akira Kanoh et al.;《Glycoconjugate Journal》;20060701;第23卷(第5-6期);摘要 *
Junko Yoshiki et al..High expression of uridine diphosphate-galactose:Lc3Cer β1-3 galactosyltransferase in human uterine endometrial cancer-derived cells as measured by enzyme-linked immunosorbent assay and thin-layer chromatography-immunostaining.《Jpn. J. Cancer Res.》.1997,第88卷(第7期),摘要. *
Saitoh Eiko et al.Galactosyltransferase associated with tumor in patients with ovarian cancer:Fators involved in elevation of serum galactosyltransferase.《INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY》.2003,第23卷(第2期),303-310. *

Also Published As

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