JP6884889B2 - 細菌株を含む組成物 - Google Patents
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Description
すなわち本発明は以下に関する。
〔1〕神経変性障害の治療または予防方法に使用するための、Roseburia属の細菌株を含む組成物。
〔2〕組成物が、パーキンソン病、例えば、進行性核上性麻痺、進行性核上性麻痺、スティール・リチャードソン・オルシェフスキー症候群、正常圧水頭症、脳血管性または動脈硬化性パーキンソニズム及び薬物誘発性パーキンソニズム;アルツハイマー病、例えば、ベンソン症候群;多発性硬化症;ハンチントン病;筋萎縮性側索硬化症;ルー・ゲーリック病;運動ニューロン疾患;プリオン病;脊髄小脳変性症;脊髄性筋萎縮症;認知症、例えば、レビー小体、脳血管性及び前頭側頭型認知症;原発性進行性失語;軽度認知障害;HIV関連認知障害;及び大脳皮質基底核変性症;からなる群から選択される疾患または状態の治療もしくは予防方法に使用するためのものである、上記〔1〕に記載の組成物。
〔3〕組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するためのものである、上記〔2〕に記載の組成物。
〔4〕組成物が、早期発症型の神経変性疾患の治療または予防方法に使用するためのものである、上記〔1〕〜〔3〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔5〕組成物が、ニューロン死の低減またはニューロンの保護に使用するためのものである、上記〔1〕〜〔4〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔6〕組成物が、神経変性障害の発症または進行の予防または遅延方法に使用するためのものである、上記〔1〕〜〔5〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔7〕組成物が、神経変性障害の治療または予防において、IL−6レベル及び/またはNFκBレベルの低減方法に使用するためのものである、上記〔1〕〜〔6〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔8〕脳損傷の治療方法に使用されるための、Roseburia属の細菌株を含む組成物。
〔9〕脳損傷が、脳卒中、例えば、脳虚血、限局性脳虚血、虚血性脳卒中または出血性脳卒中である、上記〔8〕に記載の組成物。
〔10〕細菌株が、Roseburia hominisである、上記〔1〕〜〔9〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔11〕細菌株が、Roseburia hominisの細菌株の16s rRNA配列に少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、上記〔1〕〜〔10〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔12〕細菌株が、配列番号1、2または3に少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、上記〔1〕〜〔8〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔13〕細菌株が、配列番号3に少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有し、または前記細菌株が、配列番号3によって表される16s rRNA配列を有する、上記〔10〕に記載の組成物。
〔14〕組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するための、Roseburia hominis種の細菌株を含む、上記〔1〕に記載の組成物。
〔15〕細菌株が、Roseburia intestinalis種である、上記〔1〕〜〔9〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔16〕細菌株が、Roseburia intestinalisの細菌株の16s rRNA配列に少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、上記〔15〕に記載の組成物。
〔17〕細菌株が、配列番号5に少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、上記〔15〕または〔16〕に記載の組成物。
〔18〕組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するための、Roseburia intestinalis種の細菌株を含む、上記〔1〕〜〔9〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔19〕細菌株が、Roseburia faecis種である、上記〔1〕〜〔9〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔20〕細菌株が、Roseburia faecisの細菌株の16s rRNA配列に少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、上記〔19〕に記載の組成物。
〔21〕細菌株が、配列番号6に少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、上記〔19〕または〔20〕に記載の組成物。
〔22〕組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するための、Roseburia faecis種の細菌株を含む、上記〔1〕〜〔9〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔23〕組成物が、経口投与用である、上記〔1〕〜〔22〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔24〕組成物が、1または2以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、上記〔1〕〜〔23〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔25〕細菌株が、凍結乾燥されている、上記〔1〕〜〔24〕のいずれか1項に記載の組成物。
〔26〕上記〔1〕〜〔9〕、〔14〕、〔18〕、及び〔22〕のいずれか1項の使用のための、上記〔1〕〜〔25〕のいずれか1項に記載の組成物を含む食品。
〔27〕上記〔1〕〜〔9〕、〔14〕、〔18〕、及び〔22〕のいずれか1項の使用のための、上記〔1〕〜〔25〕のいずれか1項に記載の組成物を含むワクチン。
〔28〕Roseburia属の細菌株を含む組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、神経変性障害の治療または予防方法。
〔29〕神経変性障害の治療または予防に使用するための、受託番号NCIMB 42383として寄託されたRoseburia hominis株またはその派生物の細胞。
〔30〕細胞が、上記〔1〕〜〔7〕のいずれか1項で定義される方法に使用するためのものである、上記〔19〕に記載の細胞。
〔31〕神経変性障害が、パーキンソン病である、上記〔19〕に記載の細胞。
〔32〕神経変性障害の治療または予防に使用するための、受託番号NCIMB 43043として寄託されたRoseburia intestinalis株またはその派生物の細胞。
〔33〕細胞が、上記〔1〕〜〔7〕のいずれか1項で定義される方法に使用するための、上記〔32〕に記載の細胞。
〔34〕神経変性障害が、パーキンソン病である、上記〔32〕に記載の細胞。
本発明の組成物は、Roseburia属の細菌株を含む。実施例は、この属の細菌が、神経変性障害の治療または予防に有用であることを示している。好ましい細菌株は、Roseburia hominis、Roseburia faecis及びRoseburia intestinalis種のものである。
実施例に示すように、本発明の細菌組成物は、神経変性障害の治療に有効である。特に、本発明の組成物による治療は、神経増殖を増加させ、ドーパミン作動性ニューロンを破壊する作用物質に対する神経保護物質として作用する。従って、本発明の組成物は、ニューロン死の結果である神経変性障害の治療または予防に有用であり得る。
腸と脳の間の通信(微生物叢−腸−脳軸)は、双方向神経液性通信システムを介して生じる。腸に住む微生物叢が、脳の発達を調節し、微生物叢−腸−脳軸を介して行動表現型を産生できることが最近のエビデンスにより示されている。実際、多くの論評が、中枢神経系機能性の維持における微生物叢−腸−脳軸の役割を示唆し、中枢神経系障害及び状態の発症における微生物叢−腸−脳軸の機能不全を含意する[17]、[20]、[29]。
タウオパチーは、ヒト脳内の神経原線維またはグリア原線維のもつれにおけるタウタンパク質の病理学的凝集に関連する神経変性疾患である。アルツハイマー病は、タウ病理学の一例である。シヌクレイノパチー(α−シヌクレイノパチーとも呼ばれる)は、ニューロン、神経線維またはグリア細胞におけるα−シヌクレインの凝集の異常蓄積によって特徴付けられた神経変性疾患である。パーキンソン病は、シヌクレイノ病理学の一例である。
パーキンソン病は、神経細胞の異種集団(ドーパミン産生細胞)の変性によって神経病理学的に特徴付けられた一般的な神経変性疾患である。パーキンソン病の臨床診断には、運動緩慢、及び以下の中核症状:安静時振戦;筋硬直及び姿勢反射障害のうちの少なくとも1つを必要とする。疾患の進行中に提示または発症し得る他の兆候及び症状は、自律神経障害(唾液漏、脂漏、便秘、排尿障害、性機能、起立性低血圧、多汗症)、睡眠障害及び嗅覚または温度覚の乱れである。パーキンソン病は、微生物叢−腸−脳軸の機能不全により発症または持続し得る神経変性疾患である。従って、好ましい実施形態では、本発明の組成物は、対象におけるパーキンソン病の治療または予防に使用される。
DSM−5では、用語「認知症」は、用語「重度神経認知障害」及び「軽度神経認知障害」と置き換えられた。神経認知障害は、異種クラスの精神疾患である。最も一般的な神経認知障害は、アルツハイマー病、続いて、脳血管性認知症、またはその2つの混合形態である。他の形態の神経変性障害(例えば、レビー小体病、前頭側頭型認知症、パーキンソン型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、及びウェルニッケ・コルサコフ症候群)は、認知症に伴う。
上に概説されたように、微生物叢−腸−脳軸は、多くの異なる生理系によって調節される。微生物叢−腸−脳軸は、多くのシグナル伝達分子によって調節される。これらのシグナル伝達分子レベルの変化は、神経変性疾患をもたらす。本発明者らによって行われた実験は、Roseburia種、特に、Roseburia hominisの投与が、インドール及びキヌレニンのレベルを調節することができることを示唆する。これらの代謝産物の調節異常は、神経変性疾患、例えば、パーキンソン病をもたらし得る。
微生物叢−腸−脳軸のシグナル伝達は、免疫応答及び炎症性因子及びマーカーの変更によって調節される。したがって、ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、免疫応答を調節し得る。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、循環神経免疫シグナル伝達分子の全身レベルを調節する。ある特定の好ましい実施形態では、本発明の組成物は、炎症性サイトカイン産生及び炎症を調節する。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、炎症状態を調節する。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、IL−6産生及び分泌を減少させる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、NFκBプロモーターの活性化を減少させる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、強力な炎症誘発性エンドトキシンリポ多糖(LPS)によるIL−6産生の活性化を調節することができる。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、LPS及びα−シヌクレイン変異タンパク質、例えば、A53TによるNFκBプロモーターの活性化を調節することができる。サイトカインの循環レベルの増加は、様々な神経変性障害、例えば、パーキンソン病、認知症及びアルツハイマー病に密接に関連する。ある特定の実施形態では、本発明の組成物は、神経変性障害の治療において、IL−6レベル及び/またはNFκBレベルの低減に使用される。
実施例は、本発明の組成物が、神経保護であり、HDAC阻害活性を有することを示している。HDAC2は、脳卒中からの機能回復の重要な標的であり[36]、HDAC阻害は、白質傷害を予防することができるため[37]、本発明の組成物は、脳損傷の治療に有用であり得る。
好ましくは、本発明の組成物は、本発明の細菌株による腸への送達及び/または腸への部分もしくは全体定着を可能にするために胃腸管に投与されるべきである。概して、本発明の組成物は、経口で投与されるが、これらは、経直腸的に、鼻腔内に、または頬側もしくは舌下経路を介して投与されてよい。
概して、本発明の組成物は、細菌を含む。本発明の好ましい実施形態では、組成物は、凍結乾燥形態で調合される。例えば、本発明の組成物は、本発明の細菌株を含む顆粒またはゼラチンカプセル、例えば、硬質ゼラチンカプセルを含んでいてよい。
本発明において使用される細菌株は、例えば、参照文献[48〜50]に詳述されている標準の微生物学的技術を使用して培養され得る。
本発明者らは、本発明の細菌株が、神経変性障害の治療または予防に有用であることを確認した。これは、本発明の細菌株が宿主免疫系に対して有する効果の結果である可能性が高い。従って、本発明の組成物は、ワクチン組成物として投与した場合、神経変性障害の予防にも有用であり得る。ある特定のかかる実施形態では、本発明の細菌株は、殺傷、不活性化、または弱毒化されてよい。ある特定のかかる実施形態では、組成物は、ワクチンアジュバントを含んでよい。ある特定の実施形態では、組成物は、注射を介して、例えば、皮下注射を介して投与される。
本発明の実施は、別途示さない限り、当業者の範囲内の、化学、生化学、分子生物、免疫学及び薬理学の従来の方法を用いる。かかる技術は、文献において完全に説明されている。例えば、参照文献[51]及び[52〜58]などを参照されたい。
実施例1−細菌接種原がIL−6分泌を減少させる効能。
概要
炎症性サイトカインの活性化は、神経変性疾患におけるニューロン損傷に関連していた。リポ多糖(LPS)は、炎症性サイトカインIL−6の公知の刺激因子である。ヒト膠芽腫星状細胞腫細胞を、LPSと組み合わせて、本発明による細菌株を含む組成物で処理し、IL−6のレベルを調節するそれらの能力を観察した。
細菌株
Roseburia hominis MRx0001
MG U373は、悪性腫瘍由来のヒト膠芽腫星状細胞腫であり、Sigma−Aldrich(カタログ番号08061901−1VL)から購入した。MG U373ヒト膠芽腫星状細胞腫細胞を、10%のFBS、1%のPen Strep、4mMのL−Glut、1×MEM非必須アミノ酸溶液、及び1×ピルビン酸ナトリウムを補充したMEM(Sigma Aldrich、カタログ番号M−2279)中で増殖させた。
増殖させた後、MG U373細胞を、100,000個の細胞/ウェルで24ウェルプレートに播種した。細胞を、LPS(1ug/mL)のみまたはMRx0001からの10%の細菌上清と共に、24時間処理した。細胞を未処置培地でインキュベートした対照でも行った。細胞を、MRx0001またはYCFAのみからの10%の細菌上清と共に、24時間処理した。細胞を未処置培地でインキュベートした対照でも行った。その後、無細胞上清を回収し、4℃にて3分間、10,000gで遠心分離した。IL−6は、製造者の指示に従って、Peprotech製のヒトIL−6 ELISAキット(カタログ番号900−K16)を用いて測定した。
これらの実験の結果を図1及び図9に示す。LPS及び細菌株による神経芽腫細胞の処置は、LPSで処置しなかった対照細胞と同じレベルに、IL−6の分泌レベルの減少をもたらした(図1)。Roseburia hominisによる神経芽腫細胞の処置は、対照で処置した細胞で観察されたレベルを下回る、IL−6の分泌レベルの減少をもたらした(図9)。
概要
NFκBプロモーターの活性化は、IL−1β、IL−1α、IL−18、TNFα及びIL−6を含む炎症性サイトカインの産生をもたらす。NFκBプロモーターは、TLR4リガンドを刺激することで、α−シヌクレイン及びLPSによって活性化することができる。α−シヌクレインの突然変異、例えば、α−シヌクレインA53Tは、家族性パーキンソンに関与している。LPSによる神経細胞の処置は、環境因子に起因するパーキンソン病を模擬する。本発明による細菌株を含む組成物がNFκBプロモーターの活性化を阻害する能力を調査した。
細菌株
Roseburia hominis MRx0001
ヒトHekブルーTLR4は、InvivoGen(カタログ番号hkb−htlr4)から購入した。ヒトHekブルーTLR4を、10%のFBS、1%のPen Strep、4mMのL−Glut、ノルモシン及び1×HEKブルー選択溶液を補充したDMEM高グルコース(Sigma Aldrich、カタログ番号D−6171)中で増殖させた。
増殖させた後、ヒトHekブルー細胞を、25,000個の細胞/ウェルで4連で96ウェルプレートに播種した。一組の細胞を、α−シヌクレイン A53T(1ug/mL)のみ、またはMRx0001由来の10%の細菌上清と共に22時間処理した。第2組の細胞を、LPS(10ng/mL、Salmonella enterica血清型Typhimurium由来、Sigma Aldrich、カタログ番号L6143)のみ、またはMRx0001由来の10%の細菌上清と共に22時間処理した。その後、細胞をスピンダウンし、20ulの上清を200ulのQuanti Blue試薬(InvivoGen、カタログ番号rep−qb2)と混合し、2時間インキュベートし、吸光度を655nmで読み取った。
これらの実験の結果を図2及び3に示す。図2は、α−シヌクレインによるNFκBプロモーターの活性化が、MRx0001によって阻害されることを示す。図3は、LPSによるNFκBプロモーターの活性化が、MRx0001によって阻害されることを示す。
概要
本発明による細菌株を含む組成物が抗酸化能力を変更する能力を調査した。細菌株の抗酸化能力は、周知のABTS(2,2’−アジノ−ビス(3−エチルベンゾチアゾリン−6−スルホン酸))アッセイを用いて確立した。
Roseburia hominis MRx0001
細菌細胞(106個またはそれ以上)を回収し、遠心分離した。それらを、アッセイ緩衝液(ペレット体積の3倍を用いて)中で再懸濁した。懸濁液を氷上で5分間超音波処理した後、12,000×gで10分間スピンダウンした。上清を除去し、製造者の指示に従って、Sigma Aldrichが製造したABTSアッセイキット(コードCS0790)を用いて測定した。
これらの実験の結果を図4に示す。図4は、MRx0001が、Troloxと比較して、おおよそ1mMの抗酸化能力を有することを示す。
概要
本発明による細菌株を含む組成物が脂質過酸化レベルを変更する能力を調査した。チオバルビツール酸反応物質アッセイ(TBAR)を使用して、脂質過酸化の副生成物を測定した。
細菌株
Roseburia hominis MRx0001
細菌細胞(106個またはそれ以上)を回収し、遠心分離し、洗浄工程を等張食塩水で行った後、ペレットを塩化カリウムアッセイ緩衝液中で再懸濁した。懸濁液を氷上で10分間超音波処理した後、10,000×gで10分間スピンダウンした。上清を除去し、脂質過酸化レベルを、チオバルビツール酸反応物質アッセイを用いて評価した。
実験の結果を図5に示す。図5は、MRx0001が、おおよそ18%まで脂質過酸化を阻害することができることを示し、これは、陽性対照であるブチル化ヒドロキシトルエン(1%のw/v)の抗酸化能力よりも高い。
概要
本発明による細菌株を含む組成物がヒストン脱アセチル化酵素活性を変更する能力を調査した。ヒストン脱アセチル化酵素の調節異常は、加齢による神経変性疾患に関連する病因に関与していた。
細菌株
Roseburia hominis MRx0001
細胞株HT−29を使用したのは、ヒストン脱アセチル化酵素が存在するからである。
定常期細菌培養の無細胞上清は、遠心分離、及び0.22uMのフィルターの濾過によって単離した。HT−29細胞をコンフルエンスの3日後に使用し、実験を開始する24時間前に1mLのDTSにステップダウンした。HT−29細胞を、DTSで希釈した10%の無細胞上清でチャレンジし、これを放置して、48時間インキュベートした。その後、ヌクレアーゼタンパク質を、Sigma Aldrichヌクレアーゼ抽出キットを用いて抽出し、HDAC活性測定前に試料を急速凍結した。HDAC活性は、Sigma Aldrich(UK)キットを用いて蛍光分析的に評価した。
実験の結果を図6に示す。図6は、MRx0001が、ヒストン脱アセチル化酵素活性のレベルを減少させることができることを示す。
概要
本発明の細菌がインドールを産生する能力を調査した。インドールは、炎症及び酸化ストレスの弱毒化に関与していた。
細菌株
Roseburia hominis MRx0001
ATCC 11775は、インドールを産生することが知られる細菌基準株である。
定常期の無傷細菌細胞を、6mMのトリプトファンで48時間インキュベートした。酵素トリプトファナーゼを有する細菌種は、インドールを産生する基質として、トリプトファンを利用する。48時間のインキュベーション期間の後、上清を除去し、コバックの試薬に添加し、インドールを定量化した。標準、原液及び試薬は、社内で検証された標準化法を用いて調製した。
実験の結果を図7に示す。図7は、MRx0001が、おおよそ0.25mMの濃度で、トリプトファンからインドールを産生する能力を有することを示す。
概要
本発明の細菌がキヌレニンを産生する能力を調査した。キヌレニン経路の調節異常は、免疫系の活性化及び潜在的に神経毒性な化合物の蓄積をもたらすことがある。キヌレニン代謝の変化は、パーキンソン病の発症に関与し得る。
Roseburia hominis MRx0001
DSM 17136は、キヌレニンを産生することが知られるBacteroides copricolaの株である。
定常期細菌培養の無細胞上清は、遠心分離、及び0.22uMのフィルターの濾過によって単離し、使用するまで凍結した。キヌレニン標準、原液及び試薬は、社内で検証された標準化法を用いて調製した。試料をトリクロロ酢酸で処理し、10,000×gで4℃にて10分間遠心分離した。上清を回収し、96ウェルプレートに分配した。エールリッヒ試薬をキヌレニン検出に使用し、1:1の比で添加した。
実験の結果を図8に示す。図8は、MRx0001が、おおよそ50μMの濃度で、キヌレニンを産生する能力を有することを示す。
本明細書に記載されている少なくとも1つの細菌株を含有する本明細書に記載されている組成物を、25℃または4℃の密閉容器に貯蔵し、容器を30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、90%または95%の相対湿度を有する雰囲気に置く。1ヵ月、2ヵ月、3ヵ月、6ヵ月、1年、1.5年、2年、2.5年または3年後、標準のプロトコルによって決定されるコロニー形成単位で測定したとき、細菌株の少なくとも50%、60%、70%、80%または90%が残存する。
概要
炎症性サイトカインの活性化は、神経変性疾患におけるニューロン損傷に関連していた。リポ多糖(LPS)は、炎症性サイトカインIL−6の公知の刺激因子である。ヒト膠芽腫星状細胞腫細胞を、LPSと組み合わせて、本発明による細菌株を含む組成物で処理し、IL−6のレベルを調節するそれらの能力を観察した。
細菌株
Roseburia intestinalis株A
Roseburia faecis株B
MG U373は、悪性腫瘍由来のヒト膠芽腫星状細胞腫であり、Sigma−Aldrich(カタログ番号08061901−1VL)から購入した。MG U373ヒト膠芽腫星状細胞腫細胞を、10%のFBS、1%のPen Strep、4mMのL−Glut、1×MEM非必須アミノ酸溶液、及び1×ピルビン酸ナトリウムを補充したMEM(Sigma Aldrich、カタログ番号M−2279)中で増殖させた。
増殖させた後、MG U373細胞を、100,000個の細胞/ウェルで24ウェルプレートに播種した。細胞を、以下の条件で24時間処理した:
・LPS(1ug/mL)
・株A由来の10%の細菌上清を有するLPS
・株B由来の10%の細菌上清を有するLPS
・YCFA培地を有するLPS
・YCFA
これらの実験の結果を図10及び12に示す。LPS及び細菌株A及びBによる神経芽腫細胞の処置は、LPSで処置しなかった対照細胞と同じレベルに、IL−6の分泌レベルの減少をもたらした(図10A及び12A)。
概要
NFκBプロモーターの活性化は、IL−1β、IL−1α、IL−18、TNFα及びIL−6を含む炎症性サイトカインの産生をもたらす。NFκBプロモーターは、TLR4リガンドを刺激することで、α−シヌクレイン及びLPSによって活性化することができる。α−シヌクレインの突然変異、例えば、α−シヌクレインA53Tは、家族性パーキンソンに関与している。LPSによる神経細胞の処理は、環境因子に起因するパーキンソン病を模擬する。本発明による細菌株を含む組成物がNFκBプロモーターの活性化を阻害する能力を調査した。
細菌株
Roseburia intestinalis株A
Roseburia faecis株B
ヒトHekブルーTLR4は、InvivoGen(カタログ番号hkb−htlr4)から購入した。ヒトHekブルーTLR4を、10%のFBS、1%のPen Strep、4mMのL−Glut、ノルモシン及び1×HEKブルー選択溶液を補充したDMEM高グルコース(Sigma Aldrich、カタログ番号D−6171)中で増殖させた。
増殖させた後、ヒトHekブルー細胞を、25,000個の細胞/ウェルで4連で96ウェルプレートに播種した。一組の細胞を、α−シヌクレインA53T(1ug/mL)のみ、または株Aまたは株B由来の10%の細菌上清と共に22時間処理した。第2組の細胞を、LPS(10ng/mL、Salmonella enterica血清型Typhimurium由来、Sigma Aldrich、カタログ番号L6143)のみ、または株Aまたは株B由来の10%の細菌上清と共に22時間処理した。その後、細胞をスピンダウンし、20ulの上清を200ulのQuanti Blue試薬(InvivoGen、カタログ番号rep−qb2)と混合し、2時間インキュベートし、吸光度を655nmで読み取った。
これらの実験の結果を図11及び13に示す。
配列番号1(Roseburia hominis株A2−181 16SリボソームRNA遺伝子、部分配列−AY804148)
配列番号2(Roseburia hominis株A2−183 16S rRNA遺伝子、基準株A2−183T−AJ270482)
配列番号3(Roseburia hominis株433のコンセンサス16S rRNA配列)
配列番号5(コンセンサス16S rRNA配列、株A Roseburia intestinalis)
配列番号6(コンセンサス16S rRNA配列、株B Roseburia faecis)
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- 組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するためのものである、請求項1に記載の組成物。
- 組成物が、早期発症型のパーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、ルー・ゲーリック病、運動ニューロン疾患、プリオン病、脊髄小脳変性症、脊髄性筋萎縮症、認知症、原発性進行性失語、軽度認知障害、HIV関連認知障害、又は大脳皮質基底核変性症の治療または予防方法に使用するためのものである、請求項1または2に記載の組成物。
- 組成物が、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、ルー・ゲーリック病、運動ニューロン疾患、プリオン病、脊髄小脳変性症、脊髄性筋萎縮症、認知症、原発性進行性失語、軽度認知障害、HIV関連認知障害、又は大脳皮質基底核変性症の発症または進行の予防または遅延方法に使用するためのものである、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 脳卒中、例えば、脳虚血、限局性脳虚血、虚血性脳卒中または出血性脳卒中の治療方法に使用されるための、ロゼブリア(Roseburia)属の細菌株を含む組成物。
- 細菌株が、ロゼブリア ホミニス(Roseburia hominis)である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号3に少なくとも96%、97%、98%、99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有し、または前記細菌株が、配列番号3によって表される16s rRNA配列を有する、請求項6に記載の組成物。
- 組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するための、ロゼブリア ホミニス(Roseburia hominis)種の細菌株を含む、請求項1に記載の組成物。
- 細菌株が、ロゼブリア インテスティナリス(Roseburia intestinalis)種である、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号5に少なくとも99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、請求項9に記載の組成物。
- 組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するための、ロゼブリア インテスティナリス(Roseburia intestinalis)種の細菌株を含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 細菌株が、ロゼブリア ファエシス(Roseburia faecis)種である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組成物。
- 細菌株が、配列番号6に少なくとも99%、99.5%または99.9%同一である16s rRNA配列を有する、請求項12に記載の組成物。
- 組成物が、パーキンソン病の治療または予防方法に使用するための、ロゼブリア ファエシス(Roseburia faecis)種の細菌株を含む、請求項1または2に記載の組成物。
- 組成物が、経口投与用である、請求項1〜14のいずれか1項に記載の組成物。
- 組成物が、1または2以上の薬学的に許容される賦形剤または担体を含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の組成物。
- 細菌株が、凍結乾燥されている、請求項1〜16のいずれか1項に記載の組成物。
- 食品である、請求項1〜17のいずれか1項に記載の組成物。
- 細菌株が、受託番号NCIMB 42383として寄託されたロゼブリア ホミニス(Roseburia hominis)株である、請求項1〜4、及び8のいずれか1項に記載の組成物。
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