ES2610908T3 - Cepas de bifidobacterium bifidum para su aplicación en enfermedades gastrointestinales - Google Patents

Abstract

Una formulación probiótica que comprende una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como depósito DSM nº 24514, para ser usada en el tratamiento del síndrome de intestino irritable o de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por evacuación de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile, y combinaciones de las mismas.

Description

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DESCRIPCION

Cepas de bifidobacterium bifidum para su aplicacion en enfermedades gastrointestinales

Hasta la fecha, las enfermedades correlacionadas con un trastorno funcional del tracto gastrointestinal y/o que estan correlacionadas con una actividad inflamatoria gastrointestinal no deseable son enfermedades comunes con predominio generalizado. Las enfermedades de ambos grupos se caracterizan por dolor abdominal, malestar, distension, hinchazon, diarrea, estrenimiento, trastorno digestivo, urgencia de defecacion y/o numero reducido y/o aumentado de evacuaciones intestinales, sensacion de evacuacion incompleta y/o combinaciones de los mismos, conduciendo con ello a un bienestar general significativamente reducido de las personas afectadas. En particular, con respecto al smdrome de intestino irritable (SII) sigue faltando un tratamiento eficaz (Brenner y Chey, 2009). Varias medicaciones para el SII han sido retiradas o restringidas debido a efectos adversos para la salud. Ademas, las terapias actuales estan dirigidas fundamentalmente a smtomas aislados y no alivian el SII ni mejoran en general la calidad de vida (CDV).

Se cree de forma generalizada que las enfermedades que estan correlacionadas con un trastorno funcional del tracto gastrointestinal, tal como el SII o la enfermedad inflamatoria intestinal, van acompanadas de (i) un desequilibrio de la microbiota intestinal (Kassinen et al., 2007) y/o (ii) una barrera intestinal disfuncional del tracto gastrointestinal (Marshall et al., 2004). Se cree que esto da como resultado una reduccion de las bacterias probioticas, tales como Bifidobacteria, en el tracto gastrointestinal. Ademas, se cree que una barrera intestinal disfuncional causa la entrada no deseable de bacterias patogenas facultativas en la mucosa, lo que puede llevar subsiguientemente a una actividad inflamatoria gastrointestinal. Estudios recientes proponen que esta inflamacion desencadena smtomas tfpicos de SII, tales como dolor, motilidad y disfuncion del intestino.

El desequilibrio de la microbiota intestinal se caracteriza principalmente por un numero reducido de microorganismos no patogenos de origen humano, tales como las Bifidobacteria, mientras que aumenta el numero de microorganismo patogenos facultativos, tales como las Enterobacteria (Jian-Min et al., 2004). Se cree que este desequilibrio lleva a una mayor produccion de compuestos gaseosos y de acidos grasos de cadena corta, dismotilidad, flatulencia y dolor de las personas afectadas. Asf, para devolver a la microbiota intestinal al equilibrio o mejorar la barrera intestinal, se presta especial atencion a las bacterias probioticas. Los “probioticos”, que comprenden bacterias probioticas de origen humano no patogeno han sido definidos como alimentos y farmacos microbianos vivos que, tras ser ingeridos en ciertas cantidades ejercen efectos salutfferos que van mas alla de su nutricion basica inherente. Tradicionalmente se han usado mezclas de diversos microorganismos, particularmente especies de Lactobacillus y Streptococcus, en productos lacteos fermentados o farmacos para promover la salud.

Se han realizado muchos estudios sobre este asunto; sin embargo, dado que el desequilibrio de la microbiota intestinal es tan solo una cara de la moneda, no es de extranar que la mayona de terapias que se centran simplemente en la administracion de probioticos al tracto gastrointestinal no haya tenido exito en el alivio de todos los smtomas de los pacientes aquejados de un trastorno funcional del tracto gastrointestinal. Por ejemplo, el SII se diagnostica por los criterios de Roma III, que son, basicamente: dolor o malestar abdominal al menos 3 dfas por mes durante los tres ultimos meses con smtomas que comenzaron al menos hace 6 meses combinados con al menos dos criterios de (a) defecacion menos dolorosa, (b) inicio asociado con un cambio en la frecuencia de las deposiciones o (c) en la consistencia de las heces y es acompanado a menudo por hinchazon o distension, y dificultades de evacuacion intestinal, ya sean por estrenimiento y/o diarrea. Junto con estos smtomas, los pacientes pueden adolecer de un menoscabo de la funcion social y personal y de una menos calidad de vida. No obstante, aunque smtomas tales como dolor/malestar, distension/hinchazon o urgencia de defecacion sean en gran medida eliminados, es muy deseable una mejora en la calidad de vida (CDV) relacionada con la salud general del paciente. Hasta la fecha, ninguno de los tratamientos proporcionados, incluyendo los de probioticos y otros, ha sido capaz de mejorar los smtomas de dolor/malestar, distension/hinchazon y trastorno digestivo simultaneamente con la CDV.

En este sentido, tiene que considerarse el segundo aspecto importante en el desarrollo de un trastorno funcional del tracto gastrointestinal, que concierne a una barrera intestinal disfuncional del tracto gastrointestinal caracterizada por una mayor permeabilidad de la misma. Una teona muy popular en este sentido es que las perturbaciones en el intestino permiten que microorganismos patogenos —que podnan dominar en caso de un desequilibrio de la microbiota intestinal— atraviesen la barrera y penetren en la mucosa, causando con ello reacciones inflamatorias. Con base en esta hipotesis, se han realizado varios estudios que se centran en el tratamiento y el alivio de la reaccion inflamatoria y sus efectos en el tracto gastrointestinal. El documento EP 1 141235, por ejemplo, describe una cepa UCC35624 del Bifidobacterium longum infantis (B. infantis) para su aplicacion en suplementos nutricionales y en farmacos que mostraron una intensa capacidad de estimular una respuesta antiinflamatoria en el anfitrion disminuyendo los niveles de IL-8 (Whorwell et al., 2006) y normalizando la proporcion IL-10/IL-12 (O'Mahony et al., 2005). Sin embargo, diferentes fuentes cuestionan si el efecto del B. infantis puede ser atribuido a propiedades antiinflamatorias directas. Ademas, aunque el Lactobacillus salivarius tambien ha demostrado intensos efectos antiinflamatorios in vitro y en un modelo de ratones —comparable a B. Infantis— no ha demostrado efectos significativos en el alivio del SII y sus smtomas.

Cabe senalar que la eficacia de los probioticos es muy espedfica a la cepa y solo ciertas cepas podfan ser capaces de mejorar el SII y sus smtomas. Hasta la fecha, varios estudios han examinado los efectos de los probioticos en

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smtomas de enfermedades que estan correlacionadas con un trastorno funcional del tracto gastrointestinal, tales como el SII (O'Mahony et al., 2005, Kajander et al., 2005; Williams et al., 2008; Guyonnet et al., 2007). Sin embargo, solo algunos podfan mostrar un beneficio significativo. Ademas, ninguna cepa probiotica demostro un efecto de alivio significativo de los smtomas del smdrome de intestino irritable y una calidad de vida mejorada simultaneamente. Estos hallazgos podnan atribuirse al hecho de que la eficacia de los probioticos es muy espedfica a la cepa. Se acepta de forma generalizada que las propiedades de una cepa probiotica no pueden ser transferidas a otra (Brenner y Chey, 2009). Por lo tanto, es importante reconocer que no pueden predecirse la eficacia y el efecto de una sola cepa probiotica, lo que subraya la importancia de los ensayos y la demostracion de la eficacia de una sola cepa. Con este fin se describen metodos en la seccion experimental.

Nunca antes un estudio probiotico ha demostrado una reduccion de los smtomas anteriormente mencionados (dolor/distension/hinchazon/urgencia/trastorno digestivo) y una mejora simultanea de la calidad de vida de un paciente en una enfermedad como el SII. Asf, hay una necesidad significativa de una terapia que mejore los smtomas de dolor/malestar, distension/hinchazon, urgencia y trastorno digestivo de un paciente que adolece de un trastorno funcional del tracto gastrointestinal, teniendo en cuenta que se refuerza la funcionalidad de la pared intestinal.

Por lo tanto, la presente invencion proporciona una formulacion probiotica que comprende una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514, para ser usada en el tratamiento del smdrome de intestino irritable o de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por evacuacion de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile, y combinaciones de las mismas. Dicha cepa fue aislada de una muestra fecal de un adulto sano; las propiedades generales de la cepa fueron dadas a conocer por Guglielmetti et al. (“Implication of an outer surface lipoprotein in adhesion of Bifidobacterium bifidum to Caco-usa2 cells”, Applied and Environmental Microbiology, vol. 74, n° 15, 2008, paginas 4695-4702 y “Study of the adhesion of Bifidobacterium bifidum MIMBb75 to human intestinal cell lines”, Curr. Microbiology, vol. 59, 2009, paginas 167-172).

En la presente invencion, el Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, mejoro significativamente los smtomas de dolor/malestar abdominal, distension/hinchazon, urgencia y trastorno digestivo de una enfermedad gastrointestinal, en particular del SII. El alivio del SII general junto con una mejora de los smtomas aislados de dolor/malestar, distension/hinchazon, urgencia y trastorno digestivo con una mejora simultanea de la CDV con la cepa para su uso segun la invencion fue un resultado inesperado, ya que en la tecnica anterior es sabido y aceptado que la eficacia de un probiotico es muy espedfica a la cepa, e incluso miembros estrechamente relacionados de una especie de una cepa de Bifidobacterium no tienen propiedades comparables ni estan tan siquiera inactivos en las enfermedades gastrointestinales (Brenner y Chey, 2009). Sin entrar en consideraciones teoricas, los inventores creen que la notabilfsima e inesperada eficacia del Bifidobacterium bifidum MIMBb75, definido en las reivindicaciones, es debida a su capacidad de impedir que las bacterias patogenas atraviesen la barrera intestinal del tracto gastrointestinal y su penetracion de la mucosa. Suponiendo que la disfuncion de la barrera intestinal sea debida a “agujeros” o partes debilitadas en la pared intestinal a traves delas cuales los microorganismos patogenos podnan entrar en la mucosa, los inventores creen que la adhesion de las celulas de Bifidobacterium bifidum MIMBb75 a la pared intestinal reduce la permeabilidad de la barrera, mejorando con ello la pared intestinal en un modo de accion de “tapado de agujeros”. Ademas, es muy importante que tambien se mantenga la reduccion de los smtomas o de la propia enfermedad durante la fase de eliminacion, es decir, la fase posterior al fin de la terapia, en la que, por ejemplo, no se administra al sujeto o paciente ninguna formulacion probiotica adicional para su uso segun la invencion. En caso de que la cepa contenida en la formulacion probiotica para su uso segun la invencion, el efecto positivo de la cepa se mantiene en caso de smtomas globales de SII, dolor/malestar abdominal, distension/hinchazon y trastorno digestivo durante la fase de eliminacion, segun se explicara con detalle posteriormente y tambien se lo presenta en la seccion de Ejemplos y las Figuras.

Asf, la presente invencion proporciona una formulacion probiotica que comprende una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514, para ser usada en el tratamiento del smdrome de intestino irritable, o de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por evacuacion de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile, y combinaciones de las mismas. Dicha cepa es especialmente para su uso como mecanismo medico probiotico en alimentos y/o medicamento para aliviar, impedir y/o tratar dolor abdominal, hinchazon, obstipacion, trastorno digestivo, numero reducido de evacuaciones intestinales, numero aumentado de evacuaciones intestinales, sensacion de evacuacion incompleta, smtomas globales de SII y/o combinaciones de los mismos. La utilidad de la cepa en el alivio, la evitacion y/o el tratamiento de un sujeto que adolezca de dolor abdominal, malestar, distension, trastorno digestivo, hinchazon, urgencia y/o numero reducido y/o aumentado de evacuaciones intestinales, sensacion de evacuacion incompleta, smtomas globales de SII y/o combinaciones de los mismos puede ser evaluada usando una escala de Likert de 7 puntos, que es usada comunmente en estudios clmicos y es divulgada tambien en la presente memoria. La calidad de vida (CDV) de un paciente puede ser evaluada usando el cuestionario SF-12 estandar, que es tambien conocido para una persona experta en la tecnica y en estudios clmicos y es un estandar aceptado para medir la CDV. Ademas, en caso de smtomas globales de SII, dolor/malestar abdominal, distension/hinchazon, el efecto positivo de la cepa dada a conocer en la presente memoria se mantiene durante la fase de eliminacion, segun se explicara con detalle a continuacion y tambien se presenta en la seccion de Ejemplos y las Figuras.

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Segun la invencion, la formulacion probiotica definida en las reivindicaciones es usada para tratar el smdrome de intestino irritable, o una enfermedad seleccionada del grupo constituida por evacuacion de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile y combinaciones de las mismas, siendo la enfermedad, preferentemente, la evacuacion de intestino irritable.

En realizaciones alternativas, las celulas de la cepa son viables o no viables. Con celulas no viables, la preparacion del producto es mas simple; las celulas pueden ser incorporadas facilmente en productos farmaceuticos, y los requisitos de almacenamiento son mucho menos limitados que en el caso de las celulas viables. Las celulas pueden ser muertas termicamente o mediante exposicion a un pH alterado o su sometimiento a presion.

La invencion proporciona asf una formulacion probiotica que comprende una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514, para ser usada en un tratamiento definido en las reivindicaciones.

En una realizacion preferente, la formulacion probiotica comprende, ademas, al menos un prebiotico. Preferentemente, el prebiotico es inulina o un fructooligosacarido.

En cualquiera de las realizaciones mencionadas anteriormente, la formulacion probiotica puede comprender, ademas, al menos un compuesto farmaceuticamente aceptable, un vehmulo ingerible, un adyuvante, un componente bacteriano, una entidad farmacologica, un compuesto biologico y/o una protema y/o peptido, en particular una protema y/o peptido que sea rico en glutamina/glutamato, un lfpido, un hidrato de carbono, una vitamina, un elemento mineral y/o traza; opcionalmente, dicho al menos un compuesto farmaceuticamente aceptable es un miembro seleccionado del grupo constituido por una o mas vitaminas, tales como vitaminas del grupo B, uno o mas minerales, tales como calcio o magnesio, uno o mas hidratos de carbono, tales como lactosa, maltodextrina, inulina, dextrosa, manitol, maltosa, dextrina, sorbitol, fructosa y una mezcla de los mismos. Preferentemente, el vehmulo ingerible es una capsula, un comprimido, polvo o un producto alimenticio; opcionalmente, el producto alimenticio es un producto lacteo, leche acidificada, yogur, yogur helado, elaboraciones a base de yogur, tales como yogur bebible fermentado, yogur bebible, queso, nata fermentada, postres a base de leche, leche fermentada o leche humanizada, leche en polvo, leche concentrada, pasta, salsa, bebida de queso y otros.

En una realizacion, la formulacion probiotica comprende, ademas, una protema y/o peptido, en particular una protema y/o peptido que es rica en glutamina/glutamato, un lfpido, un hidrato de carbono, una vitamina, un elemento mineral y/o traza.

En cualquiera de las realizaciones anteriores, la cepa puede estar presente en la formulacion probiotica a mas de 101 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 unidades formadoras de colonias (ufc) por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio, preferentemente la cepa esta presente a mas de 107 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio, mas preferentemente la cepa esta presente a mas de 108 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio, aun mas preferentemente la cepa esta presente a mas de 109 ufc o mas de 1010 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio. Una “unidad de polvo” denota una cantidad de polvo que comprende mas de 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 unidades formadoras de colonias (ufc), preferentemente mas de 107 ufc, mas preferentemente mas de 108 ufc, aun mas preferentemente mas de 109 ufc o mas de 1010 ufc. Asf, una unidad de polvo representa la cantidad que comprende la dosis diaria estandar de un paciente; sin embargo, la dosis diaria puede aumentarse o reducirse debido a varias razones y de varias formas que se describen a continuacion. Una cantidad tfpica en peso de una unidad de polvo debena ser facilmente ingerible y digerible, oscilando de mg a varios gramos, por ejemplo 5 g, 10 g, 15 g o mas. Una unidad de polvo tambien puede ser mezclada con cualquier producto alimenticio mencionado en la presente memoria y tambien con otro producto alimenticio que sea considerado adecuado por una persona experta en la tecnica. Asf, la cantidad de ufc por cantidad en peso de polvo puede ser mucho mayor que la dosis diaria estandar en una cantidad de polvo que se considere facilmente ingerible y digerible. Aqrn, el polvo tendra que ser diluido con otros componentes permitidos en la formulacion probiotica segun se ha descrito anteriormente. Una “unidad de producto alimenticio” o “producto alimenticio” en general denota una cantidad tfpica en peso o volumen que es considerada la cantidad estandar o tfpica del producto alimenticio particular usada como vehmulo ingerible, una cantidad tfpica propuesta como porcion de consumo para ser comida o bebida, una unidad de envasado o comparable. Una “unidad de vehmulo ingerible” denota, por ende, un comprimido, una capsula, un supositorio o comparable o una unidad de polvo o una unidad de producto alimenticio, que denota una cantidad tfpica en peso o volumen que es considerada la cantidad estandar o tfpica del producto alimenticio particular usada como vehmulo ingerible, una cantidad tfpica propuesta como porcion de consumo para ser comida o bebida, una unidad de envasado o comparable.

En cualquiera de las realizaciones anteriores, la cantida 1 diaria de la cepa administrada a un paciente en la formulacion probiotica no es, preferentemente, inferior a 10 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o

producto alimenticio, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 ufc, preferentemente no menos de 107 ufc,

mas preferentemente no menos de 108 ufc, aun mas preferentemente no menos de 109 ufc o no menos de 1010 ufc.

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La formulacion probiotica segun cualquiera de las realizaciones anteriores es para ser usada en el tratamiento del smdrome de intestino irritable o de una enfermedad, seleccionada, por ejemplo, del grupo constituido por evacuacion de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile y combinaciones de las mismas. Preferentemente, la enfermedad es el smdrome de intestino irritable. Dicha cepa es espedficamente para ser usada como probiotico, en alimentos, un dispositivo medico y/o un medicamento para aliviar, prevenir y/o tratar dolor abdominal, hinchazon, obstipacion, trastorno digestivo, numero reducido de evacuaciones intestinales, numero aumentado de evacuaciones intestinales, sensacion de evacuacion incompleta, smtomas globales de SII y/o combinaciones de los mismos.

Un metodo de produccion de la formulacion probiotica para ser usada segun la invencion comprende al menos las siguientes etapas:

a) fermentar y/o madurar la cepa Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514, en un medio lfquido de cultivo rico en protemas,

b) cosechar las celulas por centrifugacion, estabilizacion, liofilizacion, trituracion y tamizado de las celulas,

c) opcionalmente, mezclar/combinar las celulas con uno o mas miembros del grupo constituido por un prebiotico, un compuesto farmaceuticamente aceptable, un adyuvante, un componente bacteriano, una entidad farmacologica, un compuesto biologico, una protema y/o peptido, etcetera, e

d) introducir las celulas de la etapa b) o la mezcla de la etapa c) en un vehmulo ingerible.

El Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, pertenece al genero de las Bifidobacteria que son grampositivas, carecen de motilidad, a menudo bacterias anaerobias ramificadas generalmente presentes en el tracto gastrointestinal y la vagina. Comunmente se afslan de las heces de bebes y adultos sanos. Si se hace referencia a las cepas, tambien se quiere decir las celulas de la cepa. Ya se ha descrito que las Bifidobacteria contribuyen a la digestion, estan asociadas con una menor incidencia de alergias y tambien pueden desempenar un papel en la prevencion de algunas formas de crecimiento tumoral. Las Bifidobacteria pertenecen a la familia Bifidobacteriaceae de las Actinobacteria. El deposito de Bifidobacterium bifidum MIMBb75 se efectuo en el DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Alemania) el 26 de enero de 2011 y se deposito como deposito DSM n° 24514.

Una “enfermedad” es cualquier condicion de un sujeto, tambien denominado paciente o ser humano, que esta alterada en comparacion con la condicion de un sujeto que es considerado sano. En general, una enfermedad definida en las reivindicaciones esta correlacionada con un trastorno funcional del tracto gastrointestinal, con actividad inflamatoria gastrointestinal no deseable, con desequilibrio de la microbiota intestinal, reduccion de bifidobacteria en el tracto gastrointestinal, barrera intestinal disfuncional del tracto gastrointestinal y/o combinaciones de los mismos. Las enfermedades que son abordadas por la cepa en la formulacion probiotica pueden ser seleccionadas del grupo constituido por evacuacion de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, smdrome de intestino irritable, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile y combinaciones de los mismos. un “smtoma” o “smtoma individual” es la forma en que se manifiesta una enfermedad de un sujeto, tal como dolor abdominal, malestar, distension, hinchazon, trastorno digestivo, urgencia y/o numero reducido y/o aumentado de evacuaciones intestinales, sensacion de evacuacion incompleta, smtomas globales de SII y/o combinaciones de los mismos y una calidad de vida global reducida. Los “smtomas globales del SII” comprenden una evaluacion general de todos los smtomas individuales mencionados anteriormente con respecto al SII. Un “paciente” (= persona o ser humano o animal) es un sujeto no sano que ingiere la formulacion probiotica para ser usada segun la invencion que comprende una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514 por razones de tratamiento, ya que el paciente, persona, ser humano o animal, adolece de cualquier enfermedad definida en las reivindicaciones. Asf, un paciente (= persona) esta necesitado de una nueva terapia, tal como una terapia con la cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514.

La formulacion probiotica para su uso en la presente invencion es para su uso como probiotico, en alimentos y/o en un medicamento y comprende una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514. La formulacion probiotica para su uso en la presente invencion tambien puede ser considerada una formulacion farmaceutica. “Alimento” denota, en principio, cualquier forma de una sustancia o material que sea ingerible y digerible por un ser humano y, preferentemente, tambien por un animal. En general, esto comprende sustancias o materiales que pueden ser comidos o bebidos para proporcionar soporte nutricional para el cuerpo y/o placer. En el caso de un ser humano, estas sustancias pueden ser de origen vegetal, microbiano o animal. Opcionalmente, en la formulacion probiotica puede haber comprendidos al menos un compuesto farmaceuticamente aceptable, un vehmulo ingerible, un adyuvante, un componente bacteriano, una entidad farmacologica, un compuesto biologico y/o una protema y/o peptido, en particular una protema y/o peptido que sea rica en glutamina/glutamato, un lfpido, un hidrato de carbono, una vitamina, un elemento mineral y/o traza; opcionalmente, dicho al menos un compuesto farmaceuticamente aceptable es un miembro seleccionado del grupo constituido por una o mas vitaminas, tales como las vitaminas del grupo B, uno o mas minerales, tales como calcio o magnesio, uno

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o mas hidratos de carbono, tales como lactosa, maltodextrina, inulina, dextrosa, manitol, maltosa, dextrina, sorbitol, fructosa y una mezcla de los mismos. En general, los medicamentos y otros productos terapeuticos son sometidos a normas y procedimientos de autorizacion mas estrictos. Estos procedimientos de autorizacion no son necesarios en caso de un alimento. Segun se ha explicado ya anteriormente, un “probiotico”, en el sentido de la invencion, comprende bacterias probioticas de origen humano no patogeno y ha sido definido como un alimento microbiano vivo y como suplementos medicos que, tras su ingestion en ciertas cantidades, ejercen efectos salutiferos que van mas alla de su nutricion basica inherente. Tradicionalmente se han usado mezclas de diversos microorganismos, particularmente especies de Lactobacillus y Streptococcus, en productos lacteos fermentados o farmacos para promover la salud. El probiotico para ser usado en la presente invencion comprende la cepa Bifidobacterium bifidum MIMBb75, definida en las reivindicaciones. Sin embargo, tambien puede haber presentes adicionalmente otras cepas que han sido consideradas probioticos utiles en la formulacion probiotica para ser usada en la presente invencion como un componente bacteriano. Estas son, por ejemplo, cepas probioticas de las especies Lactobacillus, Bifidobacterium, Saccharomyces, Streptococcus o mezclas de las mismas. Asf, un “componente bacteriano” denota una cepa o una celula de una cepa probiotica viable o no viable, segun se ha mencionado anteriormente, y puede ser usado, ademas, para compuestos tales como moleculas biologicas, polisacaridos, lfpidos, etcetera, de origen bacteriano o producidos por fermentacion o expresion bacterianas. Incluso el material muerto de cualquier especie bacteriana puede ser entendido como compuesto bacteriano.

La formulacion probiotica para ser usada en la invencion puede comprender al menos un prebiotico o una combinacion de dos, tres, cuatro o incluso mas prebioticos diferentes. Un “prebiotico” en el sentido de la invencion esta previsto que sirva de nutriente a la cepa que ha de ser usada en la invencion y para mantenerlos en un estado viable y sano despues de descongelarse partiendo de la liofilizacion. Por gramo de celulas microbianas, es decir, por gramo de cepa, es necesario en general, 2 - 5 g, preferentemente ~2,5 g, mas preferentemente al menos 2,5 g, aun mas preferentemente al menos 3 g, siendo lo mas preferible al menos 4 g de prebiotico. En general, se usan como prebiotico ingredientes alimentarios no digeribles por los seres humanos, tales como ciertos hidratos de carbono. Ejemplos de prebiotico comprenden hidratos de carbono, preferentemente oligosacaridos, inulina, fructooligosacaridos, galactooligosacaridos, zaragatona, oligofructosa, isomaltooligosacaridos xilooligosacaridos, sojaligosacaridos, maltodextrina, glucooligosacaridos, mananoligosacaridos, arabinogalactano, arabinxilano, lactosacarosa, glucomanano, lactulosa, polidextrosa, oligodextrano, gentioligosacaridos, oligosacaridos pecticos, goma xantana, goma arabiga, hemicelulosa, almidon resistente y sus derivados, y mezclas y/o combinaciones de los mismos.

La formulacion probiotica para ser usada en la invencion puede comprender al menos un compuesto farmaceuticamente aceptable, al menos un vehfculo ingerible, al menos un adyuvante, al menos un componente bacteriano, al menos una entidad farmacologica, al menos un compuesto biologico y/o al menos una protema y/o peptido, en particular una protema y/o peptido que sea rica en glutamina/glutamato, un lfpido, un hidrato de carbono, una vitamina, un elemento mineral y/o traza.

Un “compuesto farmaceuticamente aceptable” denota un producto qmmico o compuesto biologico lfquido, solido o gaseoso que es aceptable en una composicion o formulacion farmaceutica caracterizada por una buena tolerabilidad por la fisiologia y el cuerpo humanos y tambien animales que es farmacologicamente inactiva o que no tiene ningun efecto danino en la fisiologfa del receptor. Al menos uno, dos, tres, cuatro, cinco o incluso mas compuestos farmaceuticamente aceptables diferentes pueden estar presentes en la formulacion probiotica para su uso en la invencion en cantidades diferentes. La cantidad puede ser ajustada por el fabricante segun las necesidades espedficas de la cepa de Bifidobacterium bifidum que se use y segun cierta aplicacion, via de administracion o posologfa. Ejemplos de compuestos farmaceuticamente aceptables incluyen prebioticos, hidratos de carbono, ifpidos, vitaminas, minerales, elementos traza, aminoacidos, acidos nucleicos, maltodextrina, inulina, lactosa, glucosa, sacarosa, maltosa, dextrina, dextrosa, fructosa, sorbitol, fructooligosacarido, manitol, almidon de mafz, celulosa cristalina, goma arabiga, fosfato de calcio, alginatos, silicato de calcio, celulosa microcristalina, celulosa, polivinilpirrolidona, goma tragacanto, gelatina, preferentemente gelatina bovina, jarabe, aminosalicilato, sulfasalazina, acido 5-aminosalidlico, acido 4-aminosalidlico, benzalazina, sal de diclorhidrato, olsalazina, balsalazida, subsalicilato de bismuto, metil celulosa, carboximetil celulosa, esteres de acido metilhidroxibenzoico, esteres de acido propilhidroxibenzoico, talco, estearatos de magnesio, polfmeros inertes, agua y aceites minerales, iodo, magnesio, complejo de aspartato-ascorbato de magnesio, quelato aminoacido de magnesio, cinc, quelato aminoacido de cinc, selenio, complejo aminoacido de selenio, cobre, quelato aminoacido de cobre, manganeso, quelato aminoacido de manganeso, cromo, polinicotinato de cromo, molibdeno, quelato aminoacido de molibdeno, potasio, complejo de aspartato-ascorbato de potasio, colina, bitartrato de colina, inositol, vanadio, sulfato de vanadilo, boro, aspartato-citrato de boro, bioflavonoides dtricos, goma de celulosa modificada, sflice, estearina vegetariana, dioxido de titanio, estearato de magnesio, siendo preferentemente dichos al menos uno, dos, tres, cuatro, cinco o incluso mas compuestos farmaceuticamente aceptables un miembro seleccionado del grupo constituido por una o mas vitaminas, taeles como las vitaminas B, uno o mas minerales, tales como magnesio y calcio, uno o mas hidratos de carbono, gelatina, preferentemente gelatina bovina, manitol, dextrina, fructosa, sorbitol, un prebiotico, maltosa, maltodextrina, inulina, dextrosa, hierro, lactosa y una mezcla de los mismos. Ademas, la formulacion probiotica puede comprender materiales de carga, aglutinantes, lubricantes, humectantes, desintegrantes, emulsionantes, dispersantes, conservantes, edulcorantes y aromatizantes farmaceuticamente aceptables que son conocidos para una persona experta en la tecnica.

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La formulacion probiotica para el uso en esta invencion puede ser formulada de modo que, tras su administracion a un paciente, la cepa o las celulas sean liberadas rapida, continua o lentamente. Ejemplos de vitaminas que pueden estar comprendidas en la formulacion probiotica para el uso en la invencion son vitaminas hidrosolubles y no hidrosolubles, tales como vitamina A (por ejemplo, retinol, retinal y carotenoides, incluyendo beta caroteno), vitamina B1 (tiamina), vitamina B2 (riboflavina), vitamina B3 (por ejemplo, niacina, niacinamida, nicotinamida), vitamina B5 (acido pantotenico), vitamina B6 (por ejemplo, piridoxina, piridoxamina, piridoxal), vitamina B7 (biotina), vitamina Bg (por ejemplo, acido folico, acido folmico), vitamina B12 (por ejemplo, cianocobalamina, hidroxicobalamina, metilcobalamina), vitamina C (acido ascorbico), vitamina D (por ejemplo, ergocalciferol, colecalciferol), vitamina E (por ejemplo, tocoferoles, tocotrienoles), vitamina K (por ejemplo, filoquinona, menaquinonas); preferentemente hay vitaminas del grupo B comprendidas en la formulacion probiotica para su uso en la invencion, tales como vitamina Bi (tiamina), vitamina B2 (riboflavina), vitamina B3 (por ejemplo, niacina, niacinamida, nicotinamida), vitamina B5 (acido pantotenico), vitamina B6 (por ejemplo, piridoxina, piridoxamina, piridoxal), vitamina B7 (biotina), vitamina Bg (por ejemplo, acido folico, acido folinico), vitamina B12 (por ejemplo, cianocobalamina, hidroxicobalamina, metilcobalamina) y mezclas de las mismas. Ejemplos de minerales comprendidos en la formulacion probiotica para su uso en la invencion son magnesio, calcio, cinc, selenio, hierro, cobre, manganeso, cromo, molibdeno, potasio, vanadio, boro, titanio; preferentemente, estan presentes magnesio y/o calcio. Un “elemento traza” es un elemento qmmico que solo se necesita en cantidades muy bajas para el crecimiento, el desarrollo y/o la fisiolog^a del organismo, preferentemente de un organismo humano. “Hidratos de carbono” son compuestos organicos que consisten unicamente en carbono, hidrogeno y oxfgeno y que tienen la formula empmca Cm(H2O)n, en la que la proporcion atomica entre hidrogeno y oxfgeno es 2:1. “Lfpidos” son compuestos biologicos no hidrosolubles al menos parcialmente debido a una parte larga hidrofoba del hidrato de carbono. Los lfpidos son una parte muy importante de las membranas celulares en los sistemas biologicos.

Un “vetuculo ingerible”, en el sentido de la invencion, es un vehfculo que es usado para la administracion a un paciente de la formulacion probiotica para su uso en la invencion que contribuye a ingerir la formulacion probiotica y la cepa. La expresion “producto lacteo”, segun se usa en la presente memoria, se pretende que signifique que incluye un medio que comprende leche de origen animal y/o vegetal. La leche de origen animal incluye leche de vaca, de oveja, de cabra y de bufala. Como leche de origen vegetal se puede mencionar cualquier sustancia fermentable de origen vegetal que pueda ser usada segun la invencion, en particular que se originen en habas de soja, arroz o cereales. Un posible vehfculo ingerible es un miembro seleccionado del grupo constituido por una capsula, un comprimido, polvo, granulos, pastillas, una capsula de oblea en forma de pfldora, un elixir, una emulsion, una solucion, un jarabe, una suspension, una capsula de gelatina blanda y dura, un supositorio, un polvo envasado de forma aseptica o un producto alimenticio; opcionalmente, el producto alimenticio es un producto lacteo, leche acidificada, yogur, yogur helado, elaboraciones a base de yogur, tales como yogur bebible fermentado, yogur bebible, queso, nata fermentada, postres a base de leche, leche fermentada o leche humanizada, leche en polvo, leche concentrada, pasta, salsa, bebida de queso y otros. Un “adyuvante”, en el sentido de la invencion, es un agente farmacologico o inmunologico que modifica el efecto de otros agentes, tales como farmacos o vacunas, o de la formulacion probiotica para su uso en la presente invencion mientras tiene pocos efectos directos —en caso de tenerlos— cuando se da por sf solo.

“Entidad farmacologica” esta relacionado con un compuesto qmmico o biologico que es farmaceuticamente activo a la vez que es farmaceuticamente tolerable al paciente, tal como bisacodilo, loperamida, aminosalicilato, sulfasalazina, acido 5-aminosalidlico, acido 4-aminosalidlico, benzalazina, sal de diclorhidrato, olsalazina, balsalazida, subsalicilato de bismuto o mezclas de los mismos. Tal compuesto puede ser cualquier compuesto que promueva los efectos beneficiosos de la formulacion probiotica para su uso segun la invencion directa o indirectamente. Directamente significa que la propia cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75 es protegida, estando soportados su crecimiento o su adhesion a la barrera intestinal. Indirectamente significa que sustancias o compuestos adicionales —es decir, entidades farmacologicas que se sabe que son utiles en la profilaxis y/o el tratamiento de una enfermedad correlacionada con un trastorno funcional del tracto gastrointestinal, con una actividad inflamatoria gastrointestinal no deseable, con un desequilibrio de la microbiota intestinal, con una reduccion de Bifidobacteria en el tracto gastrointestinal y/o una barrera intestinal disfuncional del tracto gastrointestinal, o para su uso para aliviar, prevenir y/o tratar a un sujeto que adolece de dolor abdominal, malestar, distension, hinchazon, trastorno digestivo, urgencia y/o numero reducido y/o aumentado de evacuaciones intestinales, sensacion de evacuacion incompleta y/o combinaciones de los mismos— pueden estar comprendidas solas o en combinacion con otras entidades farmacologicas en la formulacion probiotica. En particular, una entidad farmacologica puede estar comprendida en la formulacion probiotica que sea un medicamento conocido para tratar el smdrome de intestino irritable, o una enfermedad seleccionada del grupo constituido por evacuacion de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile y combinaciones de las mismas. Ejemplos de tal entidad farmacologica conocidos para una persona experta en la tecnica pueden encontrarse en la Rote Liste (Lista Roja) de Alemania (2010) o en cualquier otro registro farmaceutico. Un “compuesto biologico” puede ser cualquier compuesto biologico, tal como un compuesto vegetal, animal o microbiano de hidrato de carbono, aminoacido, lfpido, acido nucleico, protema, peptido, compartimento celular, fosfolfpidos, polieter. “Protema”, “peptido” o “polipeptido” han de ser entendidos segun su significado general de ser una composicion lineal de aminoacidos proteinogenicos o no proteinogenicos, en la que las protemas pueden comprender tambien una o mas subunidades y sustancias cataltticamente relevantes, tales como vitaminas, minerales o sustancias.

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“Unidad formadora de colonias” (ufc) es una medida de celulas bacterianas viables de la cepa del Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion. La formulacion probiotica para el uso en la invencion puede comprender la cepa a mas de 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 unidades formadoras de colonias (ufc) por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio, preferentemente la cepa esta presente a mas de 107 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio, mas preferentemente la cepa esta presente a mas de 108 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio, aun mas preferentemente la cepa esta presente a mas de 1o9 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio. La cantidad diaria de la cepa administrada a un paciente en la formulacion probiotica no es inferior a 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 ufc, preferentemente no menos de 107 ufc, mas preferentemente no menos de 108 ufc, aun mas preferentemente no menos de 109 ufc o no menos de 1010 ufc. La cantidad diaria puede incrementarse dependiendo de la condicion fisiologica del paciente; es decir, en caso de smtomas severos. Aqm, puede aumentarse la cantidad porque la cantidad diaria se duplique, se triplique o se multiplique. Por el contrario, la cantidad diaria puede reducirse, a la mitad o ser dividida por dos, por tres o cuatro por ejemplo en caso de intolerancia, o medicacion adicional, o las cantidades diarias mencionadas anteriormente pueden no ser administradas a diario, sino cada segundo o tercer dfa, o semanalmente. La formulacion probiotica puede tomarse a cualquier hora que sea considerada conveniente por el paciente, tal como por la manana, a mediodfa, por la tarde o de noche, siendo la hora, preferentemente, por la manana, por ejemplo despues de despertar, o por la noche, por ejemplo antes de acostarse. Si la formulacion probiotica comprende un vehfculo ingerible que es un producto alimenticio, la administracion se lleva a cabo segun la naturaleza del vetuculo ingerible, es decir, del producto alimenticio. Si la formulacion probiotica comprende un vetuculo ingerible tal como una capsula de comprimido o un vetuculo ingerible comparable, la administracion se realiza oralmente acompanada por una bebida o agua, preferentemente por agua.

En general, la formulacion probiotica para ser usada en la invencion es administrada segun la forma espedfica del probiotico, el alimento o el medicamento. Asf, normalmente, la formulacion probiotica para ser usada en la invencion es administrada oralmente, preferentemente de forma parenteral, o a traves del recto.

El metodo para producir la formulacion probiotica para ser usada en la invencion comprende al menos las siguientes etapas:

a) fermentar y/o madurar una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514, en un medio lfquido de cultivo rico en protemas,

b) cosechar las celulas de las cepas anteriormente mencionadas por centrifugacion, estabilizacion, liofilizacion, trituracion y tamizado de las celulas,

c) opcionalmente, mezclar/combinar las celulas con uno o mas miembros del grupo constituido por un prebiotico, un compuesto farmaceuticamente aceptable, un adyuvante, un componente bacteriano, una entidad farmacologica, un compuesto biologico, una protema y/o peptido, e

d) introducir las celulas de la etapa b) o la mezcla de la etapa c) en un vetuculo ingerible.

En primer lugar, debena senalarse que la fermentacion y la maduracion de la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion se pueden llevar a cabo mediante medios y metodos estandar que son conocidos para una persona experta en la tecnica, segun se describe en “Probiotics and Health Claims”, Wolfgang Kneifel, Seppo Salminen, John Wiley & Sons; 1a edicion (7 de enero de 2011).

En general, un medio para la maduracion y/o el fermento de la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion comprende al menos agua, dextrosa, extracto de levadura y minerales. El medio estandar usado para madurar y/o fermentar la cepa es caldo MRS (Difco, Detroit, Michigan, EE. UU.) complementado con clorhidrato de L-cistema al 0,05% (cMRS). La persona experta es perfectamente consciente del hecho de que tambien pueden usarse otros medios para la maduracion, el fermento y el precultivo de organismos bacterianos, tales como cepas de Bifidobacterium bifidum. Opcionalmente, antes de la etapa a), la cepa es madurada en un precultivo en un matraz oscilante. Con este fin, se inocula una unica celula de la cepa en un volumen de al menos 200 mL, preferentemente de al menos 300 mL, mas preferentemente de al menos 400 mL, aun mas preferentemente de al menos 500 mL y siendo lo mas preferible de al menos 600 mL de un medio estandar mencionado anteriormente. Este precultivo es madurado generalmente anaerobicamente de noche a 37°C a 220 rpm.

El precultivo puede ser usado entonces completa o parcialmente para la inoculacion de una fermentacion mayor en un prefermentador en un volumen de al menos 500 L, preferentemente de al menos 600 L, mas preferentemente de al menos 700 L, aun mas preferentemente de al menos 800 L, siendo lo mas preferible de al menos 1000 L. Tras la fermentacion de la cepa en un prefermentador, el cultivo celular que contiene dicha cepa es transferido, al menos parcialmente, al fermentador principal, que tiene al menos un volumen de al menos 5000 L, preferentemente de al menos 7500 L, mas preferentemente de al menos 10.000 L, aun mas preferentemente de al menos 15.000 L, y siendo lo mas preferible de al menos 20.000 L. Tambien en el prefermentador y en el fermentador principal, se usa el medio estandar anteriormente mencionado para la fermentacion y el cultivo de la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion. La fermentacion y el cultivo se detienen, y las celulas son cosechadas despues del

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agotamiento de los hidratos de carbono comprendidos en el medio que sirve de nutriente para la cepa. En general, la densidad celular despues del agotamiento es al menos 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 celulas/mL, preferentemente al menos 107 celulas/mL, mas preferentemente al menos 108 celulas/mL, aun mas preferentemente al menos 109 celulas/mL o al menos 1010 celulas/mL. Las personas expertas conocen metodos de determinacion de la densidad celular o la biomasa, tal como la determinacion de biomasa como peso seco usando procedimientos estandar de secado y determinacion gravimetrica de tubos de vidrio pesados de antemano, o mediante medicion de la densidad optica usando un espectrofotometro (tal como el Hitachi U-1100, Japon) con una absorcion de 578 nm.

El prefermentador y el fermentador principal pueden derivarse de un biorreactor estandar adecuado para el cultivo, la fermentacion, la maduracion y/o el procesamiento de la cepa de Bifidobacterium bifidum segun se define en las reivindicaciones. Suministradores de biorreactores estandar son, por ejemplo, Applikon Biotechnology B.V. (Schiedam, Holanda), Infors (Bottmingen, Suiza), Bioengineering (Wald, Suiza) y Sartorius Stedim Biotech GmbH (Gotinga, Alemania). Tanto la prefermentacion como la fermentacion principal se llevan a cabo por lotes, lo que significa que generalmente ningun medio ni otros componentes se reponen durante la fermentacion.

Despues de la fermentacion principal, las celulas son cosechadas mediante centrifugacion, tal como usando una centrifugadora o separador discoidal que tiene una capacidad operativa de aproximadamente 2000 - 15.000 L/h, proporcionado por el GEA Westfalia Separator Group GmbH (Oelde, Alemania) u otros. Las celulas son estabilizadas, liofilizadas, trituradas y tamizadas subsiguientemente usando aplicaciones y medios estandar, que son muy conocidos para una persona experta en la tecnica. La liofilizacion da un concentrando que tiene un volumen de 500 L a 1.000 L, preferentemente de 600 L a 800 L, y que tiene un peso de aproximadamente 100 kg a 200 kg, preferentemente de ~ 150 kg.

Despues, las celulas son opcionalmente mezcladas con un prebiotico y/o al menos uno o mas miembros del grupo constituido por un compuesto farmaceuticamente aceptable, un vehmulo ingerible, un adyuvante, un componente bacteriano, una entidad farmacologica, un compuesto biologico y/o una protema y/o peptido y/o mezclas de los mismos, en particular una protema y/o peptido que sea rica en glutamina/glutamato, un Kpido, un hidrato de carbono, una vitamina, un elemento mineral y/o traza; opcionalmente, dicho al menos un compuesto farmaceuticamente aceptable es un miembro seleccionado del grupo constituido por una o mas vitaminas, tales como vitaminas del grupo B, uno o mas minerales, tales como calcio o magnesio, uno o mas hidratos de carbono, tales como lactosa, maltodextrina, inulina, dextrosa, manitol, maltosa, dextrina, sorbitol, fructosa, y una mezcla de los mismos en diferentes cantidades.

Para obtener las formulaciones probioticas para ser usadas en la invencion, en general, 15 - 40 g, preferentemente 18 - 35 g, mas preferentemente 20 - 30 g, aun mas preferentemente 22 - 28 g, siendo lo mas preferible 25 g de las celulas o la cepa de Bifidobacterium bifidum se mezclen con 50 - 100 g, preferentemente con 60 - 90 g, mas preferentemente con 65 - 85 g, aun mas preferentemente con 70 - 80 g, siendo lo mas preferible con 75 g de uno o mas miembros del grupo constituido por un prebiotico, un hidrato de carbono, un compuesto farmaceuticamente aceptable o mezclas de los mismos como nutriente para las celulas o la cepa, y son mezcladas opcionalmente con 30 - 70 g, preferentemente con 35 - 65 g, mas preferentemente con 40 - 60 g, aun mas preferentemente con 45 - 55 g, siendo lo mas preferible con 50 g de uno o mas miembros del grupo constituido por un compuesto farmaceuticamente aceptable, un vehmulo ingerible, un adyuvante, un componente bacteriano, una entidad farmacologica, un compuesto biologico y/o una protema y/o peptido, en particular una protema y/o peptido que sea rica en glutamina/glutamato, un lfpido, un hidrato de carbono, una vitamina, un mineral, un elemento traza y/o mezclas de los mismos para la mejora de la capacidad de vertido de la formulacion probiotica. Preferentemente, 15 - 40 g, preferentemente 18 - 35 g, mas preferentemente 20 - 30 g, aun mas preferentemente 22 - 28 g, siendo lo mas preferible 25 g de celulas o de la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion se mezclan con 50 - 100 g, preferentemente con 60 - 90 g, mas preferentemente con 65 - 85 g, aun mas preferentemente con 70 - 80 g, siendo lo mas preferible con 75 g de un hidrato de carbono, una mezcla de hidratos de carbono, un prebiotico o una mezcla de los mismos, y, opcionalmente, con 30 - 70 g, preferentemente con 35 - 65 g, mas preferentemente con 40 - 60 g, aun mas preferentemente con 45 - 55 g, siendo lo mas preferible con 50 g de uno o mas miembros del grupo constituido por un compuesto farmaceuticamente aceptable, un hidrato de carbono, una vitamina, un mineral, un elemento traza y/o mezclas de los mismos. Mas preferentemente, 15 - 40 g, preferentemente 18 - 35 g, mas preferentemente 20 - 30 g, aun mas preferentemente 22 - 28 g, siendo lo mas preferible 25 g de celulas o de la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion se mezclan con 50 - 100 g, preferentemente con 60 - 90 g, mas preferentemente con 65 - 85 g, aun mas preferentemente con 70 - 80 g, siendo lo mas preferible con 75 g de un hidrato de carbono, inulina, un fructooligosacarido o una mezcla de los mismos y, opcionalmente, con 30 - 70 g, preferentemente con 35 - 65 g, mas preferentemente con 40 - 60 g, aun mas preferentemente con 45 - 55 g, siendo lo mas preferible con 50 g de uno o mas miembros del grupo constituido por una vitamina, tal como una vitamina del grupo B, uno o mas minerales, tales como calcio o magnesio, uno o mas hidratos de carbono, tales como lactosa, maltodextrina, inulina, dextrosa, manitol, fructooligosacarido, manitol, maltosa, dextrina, sorbitol, fructosa y una mezcla de los mismos. Aun mas preferentemente, 25 g de celulas o de la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion se mezclan con 75 g de un miembro seleccionado del grupo constituido por un hidrato de carbono, un prebiotico, maltodextrina, inulina, dextrosa, manitol, maltosa, dextrina, sorbitol, fructosa y una mezcla de los mismos, y se mezclan con 50 g de un miembro seleccionado del grupo constituido por celulosa, un compuesto farmaceuticamente aceptable, un vehmulo ingerible, un adyuvante, un componente bacteriano, una entidad

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farmacologica, un compuesto biologico y/o una protema y/o peptido, en particular una protema y/o peptido que sea rica en glutamina/glutamato, un l^pido, un hidrato de carbono, una vitamina, un mineral, un elemento traza y una mezcla de los mismos, siendo lo mas preferible que 25 g de celulas o de la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion se mezclen con 75 g de maltodextrina, y se mezclen con 50 g de celulosa. La mezcla/combinacion de los componentes con las celulas o la cepa para su uso en la invencion tras fermentar y/o madurar la cepa, la cosecha, la estabilizacion, la liofilizacion, la trituracion y el tamizado pueden llevarse a cabo mediante tecnicas, aplicaciones y medios estandar que son conocidos para una persona experta en la tecnica, usandose preferentemente un mezclador de columna. Por supuesto, tambien pueden usarse cantidades mayores o menores en la mezcla/combinacion, dependiendo del volumen del dispositivo usado para mezclar/combinar, siempre que la proporcion de los componentes corresponda a las proporciones mencionadas anteriormente. Una proporcion tfpica, por ejemplo, es 25% de cepa, 75% de prebiotico o hidrato de carbono o maltodextrina y 50% de compuesto farmaceuticamente aceptable, tal como celulosa.

Por ejemplo, 50 mg-300 mg, preferentemente 75 mg-250 mg, mas preferentemente 100 mg-200 mg, aun mas preferentemente 120 mg-175 mg, siendo lo mas preferible que 150 mg de las celulas o la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion o de las formulaciones probioticas mencionadas anteriormente para su uso en la invencion sean introducidas en una unidad de vehmulo ingerible, por ejemplo en una capsula, un comprimido, una pastilla, una capsula de oblea en forma de pfldora, un elixir, una emulsion, una solucion, un jarabe, una suspension, una capsula de gelatina blanda y dura, un supositorio, un polvo envasado de forma aseptica o un producto alimenticio, tal como un producto lacteo, leche acidificada, yogur, yogur helado, elaboraciones a base de yogur, tales como yogur bebible fermentado, yogur bebible, queso, nata fermentada, postres a base de leche, leche fermentada o leche humanizada, leche en polvo, leche concentrada, pasta, salsa, bebida de queso y otros, preferentemente 50 mg, preferentemente 75 mg, mas preferentemente 100 mg, aun mas preferentemente 120 mg and siendo lo mas preferible que 150 mg de las celulas o la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion o de las mezclas mencionadas anteriormente sean introducidos en una capsula, un comprimido, una pastilla, una capsula de oblea en forma de pfldora, una capsula de gelatina blanda y dura, un supositorio, mas preferentemente en una capsula, una capsula de gelatina blanda y dura. Por ello, tras la introduccion en la unidad de vehfculo ingerible, es decir, la capsula, el comprimido, el polvo, los granulos, las pastillas, una capsula de oblea en forma de pfldora, un elixir, una emulsion, una solucion, un jarabe, una suspension, una capsula de gelatina blanda y dura, un supositorio, un polvo envasado de forma aseptica o un producto alimenticio, tal como un producto lacteo, leche acidificada, yogur, yogur helado, elaboraciones a base de yogur, tales como yogur bebible fermentado, yogur bebible, queso, nata fermentada, postres a base de leche, leche fermentada o leche humanizada, leche en polvo, leche concentrada, pasta, salsa, bebida de queso comprende mas de 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 ufc, preferentemente mas de 107 ufc, mas preferentemente mas de 108 ufc, aun mas preferentemente mas de 109 ufc o mas de 1010 ufc. En cualquier caso, la cantidad en peso puede ser ajustada segun la concentracion de ufc, de modo que la cantidad de las celulas o la cepa de Bifidobacterium bifidum para su uso en la invencion, en el producto final, tal como una capsula, un comprimido, polvo, granulos, una pastilla, una capsula de oblea en forma de pfldora, un elixir, una emulsion, una solucion, un jarabe, una suspension, una capsula de gelatina blanda y dura, un supositorio, un polvo envasado de forma aseptica o un producto alimenticio corresponda a mas de 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 ufc, preferentemente mas de 107 ufc, mas preferentemente mas de 108 ufc, aun mas preferentemente mas de 109 ufc o mas de 1010 ufc. En caso de que la cantidad de ufc sea inferior a 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 ufc, 107 ufc, 108 ufc, incluso 109 ufc o menos de 1010 ufc, el paciente puede adaptar las cantidades anteriormente mencionadas de ufc administrando mas de una unidad de vehfculo ingerible.

En una realizacion ejemplar, 25 mg de celulas de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, es decir, al menos 109 ufc de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, 75 mg de maltodextrina y 50 mg de celulosa son introducidos en una capsula de gelatina, preferentemente en una capsula de gelatina bovina. Preferentemente, la capsula anteriormente descrita con 25 mg de celulas de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, que comprende al menos 109 ufc de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, 75 mg de maltodextrina y 50 mg de celulosa, es administrada una vez al dfa. En general, los vehfculos ingeribles debenan ser de calidad entre estandar y alta, debenan satisfacer los requisitos de higiene de los suplementos alimenticios y pueden ser obtenidos de diversos fabricantes. Las capsulas, por ejemplo capsulas de gelatina bovina, pueden obtenerse, por ejemplo, en Capsugel (Bornem, Belgica).

En otra realizacion preferente, 25 mg de celulas de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, que preferentemente comprenden al menos 109 ufc de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, y 2 g maltodextrina son mezclados y son considerados una unidad de polvo. Preferentemente, se administra una vez al dfa la unidad de polvo recien descrita con 25 mg de celulas de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514, es decir, al menos 109 ufc de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositado como deposito DSM n° 24514.

Con independencia del vehfculo ingerible particular elegido por el paciente, la cantidad diaria de las celulas o la cepa de Bifidobacterium bifidum administrada a un paciente en la formulacion probiotica no es inferior a 101 ufc, opcionalmente no menos de 102, 103, 104, 105 o 106 ufc, preferentemente no menos de 107 ufc, mas

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preferentemente no menos de 108 ufc, aun mas preferentemente no menos de 109 ufc o no menos de 1010 ufc. Anteriormente se presentan dosis alternativas.

Ejemplos

1. Estudio doble ciego, aleatorizado y controlado por placebo para evaluar la eficacia del Bifidobacterium bifidum MIMBb75 en pacientes que padecen smdrome de intestino irritable

1.1 Vision general

Ciento veintidos pacientes fueron aleatorizados con exito para recibir ya fuera placebo (N=62) o Bifidobacterium bifidum MIMBb75 (N=60) (tambien considerados el “grupo de Bifidobacteria"). Los sujetos consumieron bien 1*109 ufc/capsula o bien placebo una vez al dfa durante cuatro semanas. La severidad del SII y de los smtomas individuals de SII fue registrada diariamente en una escala de Likert de 7 puntos.

1.2 Poblacion del estudio

Los pacientes fueron reclutados de los principales investigadores y mediante anuncios. El protocolo de estudio nutricional fue presentado ante el Comite de Etica de la Colegio Bavaro de Medicos. Para su inclusion se consideraron sujetos clmicamente poco llamativos con edades entre 18 y 68 anos con SII leve a moderado (criterios de Roma III). Los individuos con enfermedad gastrointestinal organica inflamatoria, enfermedades sistemicas, cancer, enfermedades autoinmunitarias, diabetes, intolerancia o inmunodeficiencia conocidas a la lactosa, cirugfa abdominal adicional conocida, salvo apendectomfa, con sigmoidoscopia o colonoscopia no libres de enfermedad en los cinco ultimos anos cuando contaban con mas de 50 anos de edad, a los que se les diagnosticara hipertiroidismo, que usaran antipsicoticos o corticosteroides sistemicos durante al menos 3 meses antes del comienzo del estudio, que padecieran un trastorno psiquiatrico importante, enfermedad celiaca o embarazo fueron excluidos.

1.3 Diseno del estudio

Este estudio fue llevado a cabo como un estudio nutricional prospectivo, multicentrico, aleatorizado, doble ciego controlado por placebo de dos brazos. En todo el estudio, los pacientes registraban diariamente sus smtomas globales de SII, asf como sus smtomas individuales de SII usando un diario de paciente. Ademas, los pacientes eran interrogados en el despacho del medico en cuanto a sus smtomas globales e individuales de SII (visitas 2-4) y su calidad de vida (visitas 3 y 4). Las visitas al medico tuvieron lugar en la seleccion, despues de dos semanas (fase de arranque), despues de 6 semanas (fin del tratamiento) y despues de 8 semanas (fin de la fase de eliminacion) (Figura 1). Una vez que los pacientes dieron su consentimiento informado por escrito, pudieron acceder al examen de seleccion en el dfa 1 (visita 1), que incluia un historial medico completo y un reconocimiento ffsico. Se tomo una muestra de sangre para su analisis en un laboratorio central, incluyendo una prueba de embarazo. En la visita de seleccion los pacientes recibieron la instruccion de que mantuvieran sus habitos alimentarios y de estilo de vida en todo el estudio. Se les entrego un diario de paciente.

En la segunda visita (dfa 15), los diarios fueron revisados. Los pacientes que tuvieron al menos 2 dfas con dolor leve a moderado durante la segunda semana del arranque y que cumplfan todos los criterios de inclusion y que no violaban ninguno de los criterios de exclusion fueron aleatorizados 1:1 para recibir ya fuera B. bifidum MIMBb75 o placebo. El tratamiento fue asignado segun una lista de aleatorizacion por bloques generada por ordenador con un tamano de bloque de 4. El tamano de bloque no fue divulgado a los investigadores. Durante el periodo de intervencion, los pacientes recibieron durante 4 semanas bien una capsula diaria que comprendfa la formulacion probiotica o un placebo de aspecto identico. La asignacion fue ciega tanto a los pacientes como al personal del centro.

Al final de la fase de tratamiento (visita 3, dfa 43), los investigadores recogieron el producto no usado del estudio y las bolsitas vacais para confirmar el cumplimiento. Los diarios fueron recogidos y revisados.

Despues de una fase de eliminacion libre de suplementos nutricionales (visita 4, dfa 57), se llevo a cabo un reconocimiento ffsico completo y se tomo una muestra de sangre. Se permitieron bisacodilo y loperamida como medicacion de rescate. No se permitieron otros probioticos ni otras medicaciones que pudieran influir en la eficacia del producto del estudio.

1.4 Preparacion del probiotico

El suplemento nutricional fue preparado segun las condiciones de un buen procedimiento de fabricacion (GMP). El B. bifidum MIMBb75 fue madurado en un medio de cultivo lfquido rico en protemas, cosechado mediante centrifugacion, estabilizado, liofilizado, triturado y tamizado. Las bacterias en forma de polvo seco fueron mezcladas con un compuesto farmaceuticamente aceptable e introducidas en capsulas de 1*109 ufc. Las capsulas de placebo capsules paredan identicas y conteman maltodextrina.

1.5 Definiciones de los criterios de valoracion

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La variable primaria de eficacia definida prospectivamente fue la evaluacion global por parte del sujeto de los smtomas del SII usando una escala de Likert de 7 puntos. Se pidio a los pacientes que respondieran diariamente la pregunta: “Si usted considera sus smtomas de SII (por ejemplo, dolor/malestar abdominal, distension/hinchazon, trastorno digestivo, urgencia, habitos intestinales) en general, ^como se ha visto afectado estos smtomas durante las ultimas 24 horas?” Las posibles respuestas oscilaban entre 0 (nada en absoluto), 1 (muy leve), 2 (leve), 3 (moderado), 4 (intenso), 5 (muy intenso) y 6 (intolerable).

Las variables secundarias de eficacia inclrnan los smtomas individuales del SII solos, tales como “dolor/malestar abdominal”, “distension/hinchazon”, “trastorno digestivo” y “urgencia”, registrados en la misma escala de Likert de 7 puntos. Las puntuaciones de los smtomas individuales fueron ademas combinadas en una puntuacion compuesta de smtomas como la media aritmetica de tres puntuaciones de smtomas individuales. Ademas, en el diario se documentaron diariamente el numero reducido y/o aumentado de evacuaciones intestinales, la sensacion de evacuacion intestinal incompleta y la ingesta de otras medicaciones.

Al final del tratamiento y nuevamente al final del estudio, los medicos preguntaron a los pacientes sobre la evaluacion global de la eficacia y la tolerabilidad. La eficacia fue evaluada por la siguiente pregunta: “Por favor, considere como se sintio durante el tratamiento de 4 semanas en cuanto a su bienestar general, a los smtomas de malestar/dolor abdominal y habitos intestinales alterados. En comparacion con la manera en la que se ha sentido habitualmente antes de tomar la medicacion del estudio, ^como calificana el alivio de sus smtomas durante las ultimas 4 semanas?” Las posibles respuestas eran: “completamente aliviado (1), considerablemente aliviado (2), algo aliviado (3), sin cambios (4) o peor (5)”. Tanto “completamente aliviado” como “considerablemente aliviado” fueron definidas como “alivio adecuado”. La calidad de vida en relacion con la salud fue evaluada mediante el uso del cuestionario SF-12 antes del tratamiento y al final del tratamiento.

Los acontecimientos adversos fueron registrados en todo el estudio y en las visitas 3 y 4, el medico pregunto sobre la evaluacion global de la tolerabilidad. Los valores del laboratorio y los signos vitales fueron examinados en la visita de seleccion y al final del estudio.

1.6 Metodos estadfsticos

3.6.1 Estimacion del tamano de la muestra

Se considero que una reduccion de la evaluacion global del sujeto (SGA) de al menos un 20% en la escala de Likert de 7 puntos es un efecto de tratamiento relevante. En funcion de datos publicados (Whorwell, 2006), se prevefa una diferencia de 0,6 puntos en la SGA de smtomas del SII entre B. bifidum MIMBb75 y placebo en la escala de Likert de 7 puntos (por ejemplo, 3,0 en el grupo de placebo y 2,4 en el grupo de Bifidobacteria). La desviacion tfpica fue estimada con 1,0 usando los mismos datos. Con estas premisas, un ensayo de Wilcoxon-Mann-Whitney con un nivel bilateral de significacion de a= 0,05 y una potencia de 1-p = 0,8 requena un tamano de muestra de 47 pacientes por grupo. Con una tasa estimada de abandono del 15-20% tras la aleatorizacion, se planearon 110 pacientes aleatorizados y se reclutaron 132 pacientes para tener en cuenta posibles abandonos antes del inicio del estudio.

1.6.2 Analisis estad^stico

El objetivo primario de este estudio era demostrar una reduccion significativa de la SGA de los smtomas generales del SII al final del tratamiento en el grupo de Bifidobacteria con respecto al placebo. La SGA fue calculada para cada sujeto como la media aritmetica en la referencia, durante el periodo de tratamiento y durante la fase de eliminacion. Para dar cuenta de las posibles diferencias en los valores de referencia, se definio como criterio diana primario el cambio con respecto a la referencia calculado como puntuacion media durante 4 semanas de tratamiento menos la puntuacion media durante la fase de arranque (semanas 1-2). Se uso el ensayo no parametrico de Van Elteren estatificado por centros de estudio para la comparacion de los brazos de tratamiento. Se considero que P<0,05 era estadfsticamente significativo.

El analisis primario se baso en la poblacion a la que estaba previsto tratar, en la que estaban incluidos todos los pacientes aleatorizados con exito. Los valores ausentes posteriores a los de referencia fueron imputados por el valor de referencia para el criterio primario y estos pacientes fueron evaluados como no respondedores. Se llevo a cabo un analisis adicional por protocolo con fines de soporte.

Los analisis descriptivos de los criterios diana secundarios se basaron en los datos disponibles. Las diferencias de tratamiento fueron sometidas a ensayo mediante el uso del ensayo no parametrico de Wilcoxon para variables continuas o mediante el ensayo exacto de Fisher para variables binarias. Todos los valores p son bilaterales.

Las variables secundarias de eficacia inclrnan una respuesta basada en una regla del 50% de alivio de los smtomas durante el tratamiento (al menos mejora en dos de cuatro semanas dentro del periodo de tratamiento y mejora definida como una reduccion de al menos un punto con respecto a la referencia). Todos los analisis estadfsticos se llevaron a cabo usando la version 9.1.3 de SAS para Windows, SAS Institute Inc., Cary, Carolina del Norte, EE. UU.

1.7 Resultados

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1.7.1 Sujetos

Un total de 132 pacientes estuvieron incluidos en el estudio, y 122 pacientes fueron aleatorizados con exito para recibir ya fuera placebo (N=62) o B. bifidum MIMBb75 (N=60). Todos los pacientes aleatorizados fueron analizados en cuanto a la prevision de tratamiento (ITT) (N=122). Un paciente sin visitas posteriores a la aleatorizacion fue excluido de analisis de acontecimientos adversos. Segun el protocolo, fue analizado un total de 103 pacientes (49 placebo, 54 verum) (Figura 2).

1.7.2 Caracteristicas de referenda

En terminos de caracteristicas de referencia, no hubo diferencias significativas entre los grupos. 21,5% fueron clasificados como SII con predominio de diarrea, 19,8% como SII con predominio de estrenimiento y 58,7% como alternantes, sin diferencias significativas entre las Bifidobacteria y el grupo de placebo.

La demograffa estuvo bien equilibrada entre los grupos de tratamiento, siendo mujeres aproximadamente el 67% de los pacientes, y un peso medio de 71 kg correspondiente a un IMC de 24. Los pacientes teman una media de 41 anos en el grupo de placebo y de 37 anos en el grupo de Bifidobacteria (Tabla 1).

Placebo Verum

N(%) o media ± DT N(%) o media ± DT

N=122(62+60)

Edad

40,98 ± 12,80 36,65 ± 12,42

Mujeres

41 (66,1) 41 (68,3)

Altura (cm)

169,50 ± 8,75 170,78 ± 9,47

Peso (kg)

70,79 ± 15,54 70,45 ± 16,02

IMC

24,60 ± 5,19 24,02 ± 4,45

Tipo de SII (N=122 (61 +60))

Con predominio de diarrea

12 (19,4) 14 (23,3)

Con predominio de estrenimiento

15 (24,2) 9 (15,0)

De tipo alternante

34 (54,8) 37 (61,7)

Tabla 1: Caracteristicas demograficas de la poblacion a la que estaba previsto tratar (ITT). DT - desviacion ripica, IMC - fndice de masa corporal.

1.7.3 Evaluacion global del sujeto (SGA) de los s^ntomas del SII

El criterio primario de valoracion fue la reduccion de la SGA de smtomas del SII en el diario de evaluacion global del sujeto. El B. bifidum MIMBb75 mejoro significativamente los smtomas globales del SII en -0,88 puntos [95% intervalo de confianza (IC): -1,07; -0,69] (de 2,95 en la fase de arranque a 2,07 en la fase de tratamiento) comparado con solo -0,16 puntos [95% IC: -0,32; 0,00] (de 2,79 en la fase de arranque a 2,63 en la fase de tratamiento) en el grupo de placebo (p<0,0001) usando la escala de Likert de 7 puntos. La evaluacion de la SGA se semana en semana mostro un beneficio significativo para los pacientes dentro del grupo de Bifidobacteria para cada semana individual a partir de la segunda semana de tratamiento hasta el fin del estudio (Figura 3).

1.7.4 Criterios secundarios de valoracion

Los criterios secundarios de valoracion incluyeron cambios en los smtomas individuales del SII, tales como “dolor/malestar”, “distension/hinchazon”, “trastorno digestivo”, “urgencia”, “numero reducido y/o aumentado de evacuaciones intestinales” y “sensacion de evacuacion incompleta”, en una escala de Likert de 7 puntos. El B. bifidum MIMBb75 mostro una reduccion significativa de dolor/malestar en -0,82 puntos [95% IC: -1.01; -0,63] en contraposicion con -0,18 [95 %IC: -0,35; -0,01] en el grupo de placebo (p<0,0001), y distension/hinchazon en -0,92 puntos [95% IC: -1.15; -0,69] en contraposicion con -0,21 [95% IC: -0,37; -0,05] en el grupo de placebo (p<0,0001) durante el tratamiento. La reduccion persistio durante la fase de eliminacion. La urgencia se redujo significativamente en -0,67 puntos [95% iC: -0,86; -0,48] en contraposicion con -0,21 [95% IC: -0,35; -0,07] en el grupo de placebo (p=0,0001) durante el tratamiento, pero no durante la fase de eliminacion. No pudo detectarse ningun efecto en cuanto a la frecuencia de las deposiciones ni a la sensacion de evaluacion incompleta del intestino (Figura 4).

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La evaluacion de los smtomas individuales del SII de dolor/malestar y distension/hinchazon de forma semana mostro un beneficio significativo para los pacientes con el grupo de Bifidobacteria en comparacion con el placebo para cada semana individual a partir de la segunda semana de tratamiento hasta el fin del estudio. Se mostro una diferencia significativa en la urgencia entre el grupo de Bifidobacteria y el de placebo entre las semanas cuatro y seis (Figuras

5 y 6).

El trastorno digestivo fue medido mediante el elemento “satisfaccion de las deposiciones” en el cuestionario en la consulta del medico. La satisfaccion de las deposiciones disminuyo de 3,89 a 2,44 en el grupo de Bifidobacteria en contraposicion con 3,69 a 6,47 en el grupo de placebo (p=0,0002) despues del tratamiento. La reduccion persistio durante la fase de eliminacion (2,33 en el grupo de Bifidobacteria en contraposicion con 3,47 en el grupo de placebo,

p<0,0001).

1.7.5 Puntuacion compuesta

Se calculo una puntuacion compuesta para los smtomas individuales del SII (dolor/malestar, distension/hinchazon, urgencia). Durante la fase de arranque, la puntuacion fue comparable en ambos grupos. Los pacientes dentro del grupo de Bifidobacteria se beneficiaron significativamente del consumo de B. bifidum MIMBb75 en contraposicion con placebo (-0,80 en el grupo de Bifidobacteria; -0,20 en el grupo de placebo; p<0,0001). Esta mejora tambien se conservo durante la fase de eliminacion (-0,85 en el grupo de Bifidobacteria; -0,31 en el grupo de placebo;

p<0,0001).

1.7.6 Respondedores al tratamiento

Los respondedores totales fueron definidos como pacientes que experimentaron una mejora de la puntuacion semanal media de al menos 1 punto en la escala de Likert para el parametro primario (SGA de smtomas del SII) en al menos dos semanas del periodo de tratamiento de 4 semanas (regla del 50%). Los respondedores al dolor abdominal fueron definidos usando la misma regla del 50% para una mejora media de al menos un punto para la evaluacion de “dolor/malestar”. Las tasas de los respondedores totales fueron del 56,7% en el grupo de Bifidobacteria y de solo el 21,0% en el grupo de placebo (p=0,0001). La diferencia entre los brazos de tratamiento fue solo un poco menos pronunciada cuando se considero unicamente el smtoma de “dolor/malestar”, calculandose que las tasas de los respondedores son del 48,3% en el grupo de Bifidobacteria y de solo el 24,2% en el grupo de placebo (p=0,008) (Figura 7).

1.7.7 Eficacia global en la consulta del medico

La evaluacion global de la eficacia fue significativamente mejor en el grupo de Bifidobacteria con respecto al de placebo. Al fin del tratamiento, el 43,3% de los pacientes en el grupo de Bifidobacteria logro un alivio adecuado, en comparacion con solo el 8,1 % en el grupo de placebo (p<0,0001). Al f in del estudio, se documento un alivio adecuado para el 46,7% en el grupo de Bifidobacteria y el 11,3% de los pacientes en el grupo de placebo (p<0,0001; Figura 8).

1.7.8 Calidad de vida relacionada con la salud

La evaluacion de las puntuaciones de sumas de SF-12 mostro una ganancia significativa en la calidad de vida dentro del grupo de Bifidobacteria. La suma de la salud ffsica mejoro en 3,99 en el grupo de Bifidobacteria y en solo 1,08 en el grupo de placebo en comparacion con la referencia (p=0,0185). La suma de la salud mental mejoro en 5,78 en el grupo de Bifidobacteria y en solo 1,58 en el grupo de placebo en comparacion con la referencia (p=0,0083).

1.7.9 Acontecimientos adversos

Solo se documentaron 36 acontecimientos adversos con una relacion sospechada con el producto de estudio, 13 en el grupo de placebo y 23 en el de tratamiento, pero no pudieron detectarse diferencias significativas en el perfil de efectos secundarios de B. bifidum MIMBb75 en contraposicion con el placebo.

1.7.10 Compendio

El B. bifidum MIMBb75 redujo significativamente la evaluacion global del sujeto (SGA) de los smtomas del SII en - 0,88 puntos [95% IC: -1.07; -0,69] en comparacion con solo -0,16 [95% IC: -0,32; 0,00] puntos en el grupo de placebo (p<0,0001). El B. bifidum MIMBb75 tambien mejoro significativamente los smtomas individuales del SII de dolor/malestar, distension/hinchazon, trastorno digestivo y urgencia. La evaluacion de las puntuaciones de sumas de SF-12 mostraron una ganancia significativa en la calidad de vida dentro del grupo de Bifidobacteria. Ademas, documentaron un alivio adecuado el 46,7% de los pacientes en el grupo de Bifidobacteria y solo el 11,3% de los pacientes en el grupo de placebo (p<0,0001). Las tasas de respondedores totales fueron del 56, 7% en el grupo de Bifidobacteria y solo del 21,0% en el grupo de placebo (p=0,0001). El B. bifidum MIMb75 fue bien tolerado y los acontecimientos adversos no fueron diferentes de los del placebo.

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1.8 Conclusion

El B. bifidum MIMBb75 alivia de forma efectiva el SII global, y mejora tambien los smtomas individuals del SII. Considerando la alta eficacia del B. bifidum MIMBb75 en el SII, junto con el buen perfil de efectos secundarios, el B. bifidum MIMBb75 es un candidate promisorio para una terapia del SII.

Este estudio aleatorizado doble ciego controlado por placebo indica que el B. bifidum MIMBb75 tiene efectos beneficiosos en el tratamiento del SII. En este estudio, el B. bifidum MIMBb75 mejoro significativamente el SII global y sus smtomas relacionados, tales como dolor/malestar e hinchazon, en comparacion con el placebo. Ademas, el B. bifidum MIMBb75 tambien mejoro significativamente la calidad de vida. Estos beneficios persistieron dentro de la fase de eliminacion, libre de consumo. Las tasas de respondedores totales fueron predominantemente elevadas, siendo del 56,7% en el grupo de Bifidobacteria en comparacion con solo el 21,0% en el grupo de placebo (p=0,0001). Al final del estudio se documento un alivio adecuado para el 46,7% en el grupo de Bifidobacteria y de solo el 11,3% de los pacientes en el grupo de placebo (p<0,0001). Hasta la fecha, varios estudios han examinado los efectos de las Bifidobacteria en el SII y sus smtomas. Sin embargo, solo algunos podfan mostrar un beneficio significativo. Ademas, hasta donde saben los inventores, ninguna cepa probiotica podfa demostrar aliviar significativamente el smdrome de intestino irritable y mejorar simultaneamente la calidad de vida. Aunque algunos estudios podnan no haber llegado a demostrar eficacia debido a un tamano pequeno de la muestra y a errores de aleatorizacion, varias cepas probioticas diferentes mostraron reiteradamente que no produdan ninguna mejora significativa en el SII. Recientemente, Brenner et al. (2009) publicaron una resena sistematica de ensayos controlados aleatorizados (RCT) dirigidos a la evaluacion de la eficacia, la seguridad y la tolerabilidad de los probioticos en el tratamiento del SII. En los analisis se incluyeron un total de 16 RCT. De esos, exclusivamente una cepa de Bifidobacteria demostro eficacia para la mejora de los smtomas de SII en dos estudios debidamente disenados. Estos hallazgos pueden ser atribuidos al hecho de que la eficacia de los probioticos es muy espedfica a la cepa y a que solo algunas cepas podnan ser capaces de mostrar su eficacia en el SII.

En conclusion, el B. bifidum MIMBb75 mejora el SII global, asf como sus smtomas de SII junto con un buen perfil de efectos secundarios.

Breve descripcion de los dibujos

Figura 1: Esquema del estudio.

Figura 2: Diagrama de flujo del estudio.

Figura 3: Comparacion de los efectos de placebo y de B. bifidum MIMBb75 en los smtomas globales de SII (por SGA, registrados en una escala de 0-6) semana a semana. Mejora significativa de los smtomas globales de SII en el grupo de Bifidobacteria con respecto al placebo.

Figura 4: Comparacion de la reduccion de smtomas de SII (B. bifidum MIMBb75 con respecto al placebo) sobre cambios de puntuacion media desde la referencia a la fase de tratamiento.

Figura 5: Comparacion de los efectos de placebo y de B. bifidum MIMBb75 en el dolor o el malestar (registrados en una escala de Likert de 0-6) semana a semana. Mejora significativa en el grupo de Bifidobacteria con respecto al grupo de placebo.

Figura 6: Comparacion de los efectos de placebo y de B. bifidum MIMBb75 en la distension/hinchazon (registradas en una escala de 0-6) semana a semana. Mejora significativa en el grupo de Bifidobacteria con respecto al grupo de placebo.

Figura 7: Respondedores totales durante el tratamiento (ITT).

Figura 8: Alivio adecuado tras el tratamiento (ITT).

Claims (11)

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   REIVINDICACIONES

   1. Una formulacion probiotica que comprende una cepa de Bifidobacterium bifidum MIMBb75, depositada como deposito DSM n° 24514, para ser usada en el tratamiento del smdrome de intestino irritable o de una enfermedad seleccionada del grupo constituido por evacuacion de intestino irritable, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, pouchitis, colitis postinfecciosa, enfermedad diarreica, diarrea asociada al Clostridium difficile, y combinaciones de las mismas.
2. 2. La formulacion probiotica utilizable de la reivindicacion 1 en la que dicho tratamiento comprende aliviar,

   prevenir y/o tratar dolor abdominal, hinchazon, obstipacion, trastorno digestivo, numero reducido de evacuaciones intestinales, numero aumentado de evacuaciones intestinales, sensacion de evacuacion

   incompleta, o combinaciones de los mismos.
3. 3. La formulacion probiotica utilizable de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2 que, ademas, comprende al menos inulina y/o un fructooligosacarido.
4. 4. La formulacion probiotica utilizable de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 que, ademas, comprende al menos un compuesto farmaceuticamente aceptable; un vehmulo ingerible; un adyuvante; un componente bacteriano; una entidad farmacologica; un compuesto biologico; y/o una protema y/o un peptido, preferentemente una protema y/o peptido que es rica en glutamina/glutamato; un lfpido; un hidrato de carbono; una vitamina; un elemento mineral y/o traza.
5. 5. La formulacion probiotica utilizable de la reivindicacion 4 en la que dicho al menos un compuesto

   farmaceuticamente aceptable es un miembro seleccionado del grupo constituido por una o mas vitaminas, preferentemente vitaminas del grupo B; uno o mas minerales, preferentemente calcio o magnesio; uno o mas hidratos de carbono, preferentemente un hidrato de carbono seleccionado del grupo constituido por lactosa, maltodextrina, inulina, dextrosa, manitol, maltosa, dextrina, sorbitol, fructosa, y una mezcla de los mismos.
6. 6. La formulacion probiotica utilizable de las reivindicaciones 4 o 5 en la que el vehmulo ingerible es una capsula, un comprimido, polvo o un producto alimenticio.
7. 7. La formulacion probiotica utilizable de la reivindicacion 6 en la que el producto alimenticio es un producto

   lacteo, leche acidificada, yogur, yogur helado, leche en polvo, leche concentrada, pasta, salsa o bebida de

   queso.
8. 8. La formulacion probiotica utilizable de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 7 en la que la cepa esta presente a mas de 101 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio.
9. 9. La formulacion probiotica utilizable de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 7 en la que la cepa esta presente a mas de 102, 103, 104, 105 o 106 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio.
10. 10. La formulacion probiotica utilizable de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9 en la que la cantidad diaria de la cepa que ha de administrarse a un paciente no es inferior a 101 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio.
11. 11. La formulacion probiotica utilizable de una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10 en la que la cantidad diaria de la cepa que ha de administrarse a un paciente no es inferior a 102, 103, 104, 105 o 106 ufc por capsula o comprimido o por unidad de polvo o producto alimenticio.