CN103981117B - 一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
本发明涉及一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用。屎肠球菌WEI‑10分离自60日龄仔猪粪便，能够耐受低pH环境和高浓度猪胆盐，可以在胃肠消化液中长时间保持活性，而且对大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直径达到30‑40mm。将上述发酵液通过高速管式离心机收集菌体后，与专用保护剂混合，真空冷冻干燥冻干44h后结束，获得的干燥菌粉用粉碎机破碎后与同样粒度的麸皮按照一定比例混合，获得微生态制剂产品。该产品用作微生物饲料添加剂添加于畜禽饲料中，可以调节畜禽肠道微生态平衡，提高畜禽的生产性能和抗病能力，有望成为饲用抗生素的替代产品。
Description
技术领域
本发明涉及一株屎肠球菌，特别是涉及一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用。
背景介绍
饲料是动物的食品和人类的间接食品，饲料安全工程无疑是食品安全工程的重要一环。我国已启动“饲料安全工程”，并禁用了一批毒性和残留较大的饲料添加剂产品。加快新型饲料添加剂的开发与生产，特别是是替代饲用抗生素的饲料添加剂的生产是实现健康养殖及养殖业可持续发展的有力保障。微生态制剂作为一种绿色、安全的饲料添加剂成为产业化发展的热点，是替代饲用抗生素的主要产品之一，已成为研制热点和未来的发展方向。
目前市售微生态制剂产品良莠不齐，很多产品所用菌种对胃肠消化液、胆盐耐受能力差，真正能够到达小肠发挥功效的菌种很少。另一方面，很多产品的活菌数并未达到其标注的最低活菌数，致使产品的效果也会大打折扣。究其原因是所用菌种未经严格筛选，菌种发酵时未能实现低成本、高产量的优化培养，进而导致菌种的益生功效不明显，发酵结束时活菌数达不到预期要求。此外，为了保证微生态制剂产品的活性，发酵后的菌体必须经过适当的后处理才能保证产品在保藏、运输和使用过程中微生物活性不会损失太大。针对乳酸菌而言，太过激烈的后处理条件，如喷雾干燥、流化床干燥等常规干燥方法会导致菌体的大量死亡。最适合乳酸菌后处理的工艺是真空冷冻干燥法，这种方法虽然成本稍高，但是可以保证干燥后活菌数损失最小，保存时间最长。因此，分离、筛选对胃肠消化液和胆盐具有高度耐受性的优良益生菌株，并优化优良菌株的低成本、高产量的发酵工艺和后处理工艺是开发乳酸菌微生态制剂的必由之路。
屎肠球菌是农业部《饲料添加剂品种目录》所列菌种，是微生态制剂常用乳酸菌菌种。屎肠球菌产酸，能够调节肠道菌群，维持肠道微生态平衡。在动物体内对病原微生物有拮抗作用，能够增强动物机体的免疫功能，产生有益的代谢产物，激活酸性蛋白酶的活性，参与机体的新陈代谢，防止有害物质产生。
因此，筛选一株高抗逆性屎肠球菌，并开发一种低成本、高产量，能长期保持活性的屎肠球菌微生态制剂，对于发展绿色饲料，保证食品安全具有重要的意义。
发明内容
本发明的第一个目的是提供了一株高抗逆性屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No7746。
从健康仔猪粪便中分离、筛选得到一株乳酸菌，经16S rDNA测序鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10，并于2013年6月19日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，编号为CGMCC No.7746，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所邮编：100101电话：86-10-64807596。
屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746属革兰氏阳性细菌，圆形或椭圆形，呈链状排列，无芽孢，无鞭毛。生长温度范围在30-40℃，适宜pH值的范围6.0-8.0，是兼性厌氧乳酸菌。该菌株在MRS培养基中生长良好，繁殖速度快，生长曲线如图1所示，2h后进入对数期，12h菌数增殖达到最高，稳定期活菌数为6.5×108-7.8×108CFU／mL。
屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746在pH为2-3的人工胃液中保持3h，存活率85％；在人工胃肠消化液中保持26h，活菌数可以维持在107CFU／mL，这个时间符合肠道生理周期，能够保证菌体发挥益生作用；在猪胆盐浓度为20g/L的人工猪胆盐溶液中，保持3h，存活率为65％，这个胆盐浓度远远高于动物体内的0.3g/L的平均胆盐浓度。
上述特性评价试验中，所述人工胃液包括如下成分：每1000mL水中含有胃蛋白酶3g，NaCl2g，调pH至2-3；所述人工胃肠消化液包括如下成分：人工胃液pH调至3，人工肠液包括如下成分：每1000mL水中含有胰蛋白酶10g，KH2PO47g，调pH至7.5，测试过程中，菌体在人工胃液中保持2h，然后接入人工肠液中保持24h；所述人工猪胆盐溶液成分包括：每1000mL水中含有胰蛋白酶1g，猪胆盐20g，NaCl5g，调pH至7.0。
屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746对大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直径达到30-40mm。
本发明的第二个目的是提供了一株高抗逆性屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的大规模发酵培养方法。
本发明所提供的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的大规模发酵培养方法，是将屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746接种到该菌的专用液体培养基中，30-40℃下静置或不通气培养。所述专用液体培养基的配方为：每1000mL水中含有：糖蜜10-30g，玉米浆粉20-40g，柠檬酸铵1-3g，三水合乙酸钠2-8g，七水合硫酸镁0.1-0.5g，一水合硫酸锰0.02-0.08g，三水合磷酸氢二钾1-3g，吐温800.5-1.5g，pH值为8-8.5。
在上述培养方法中，接种比例为1％；培养温度为37℃；静置或不通气培养，培养时间为10-12h。
优选的专用液体培养基的配方为：每1000mL水中含有：糖蜜21.88g，玉米浆粉31.56g，柠檬酸铵2g，三水合乙酸钠5g，七水合硫酸镁0.2g，一水合硫酸锰0.05g，三水合磷酸氢二钾2g，吐温801.04g，pH值为8。
在50L发酵罐条件下，利用上述培养基在37℃，50rpm，不通气条件下发酵获得的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746发酵液活菌数达到2×109-3×109CFU／mL，而在同样条件下，屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746在MRS培养基中的活菌数为7.2×108CFU／mL，优化后的培养基使得活菌数提高2.7-4倍。
本发明的第三个目的是提供屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCCNo.7746作为微生态制剂的制备方法，其特征在于：将屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCCNo.7746按照上述培养基和培养条件发酵获得的发酵液通过高速管式离心机收集菌体后，与保护剂混合均匀，先于-70℃预冻，然后置于真空冷冻干燥机中干燥后获得活性菌粉，活菌数为2×1011-3×1011CFU／g，以同样粒度的麸皮为载体可以稀释为含有不同活菌数的微生态制剂产品。
所述管式离心机收集菌体的转速为15000-20000rpm。
所述用于真空冷冻干燥处理的菌体保护剂配方为：每1000mL水中含有：脱脂奶粉100g，谷氨酸钠10g，海藻糖10g，甘油30g。保护剂与离心后的菌泥按照体积质量比5∶1混合均匀，于-70℃预冻2-3h，然后置于真空冷冻干燥机中真空冻干44h后结束，冻干参数如下：真空度小于30Pa，冷阱温度为-40℃至-50℃。
基于上述特性，本发明提供的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCCNo.7746具有显著的益生特性，动物服用后可以通过胃液和胆盐，并在肠道中存活。按照上述培养方法和后处理方法制备的微生态制剂产品，用作畜禽微生物饲料添加剂，可以调节畜禽肠道微生态平衡，提高畜禽生产能力、抗病能力，最终减少饲用抗生素的使用。
附图说明
图1为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746在MRS培养基中的生长曲线。
图2为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746对人工胃肠消化液的耐受性。图中前2h是菌株在人工胃液中的存活曲线，随后的24h是菌株从人工胃液转接至人工肠液后的存活曲线。
图3为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746最适发酵初始pH值的 优化。
图4为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746最适发酵温度的优化。
图5为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746最适工业级复合碳源的优化。
图6为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746最适氮源的优化。
图7为屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746在50L发酵罐条件下的生长曲线。
具体实施方式
实施例一：屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的分离和鉴定
称取60日龄健康仔猪的粪便1g，放入盛有99mL灭菌的0.85％生理盐水的三角瓶中(三角瓶中预先放入20粒无菌玻璃珠)，37℃，180rpm震荡30min，吸取1mL悬浊液做十倍递增梯度稀释，选取2-3个适宜稀释度，吸取1mL稀释液于无菌培养皿中，每个稀释度做两个平行；向加有稀释液的培养皿中加入融化后冷却至46℃的MRS琼脂培养基，小心转动培养皿使试样与培养基充分混合，37℃培养48-72h。从培养皿上挑选不同形态的菌落划线纯化，分别保藏并进行16S rDNA的测序鉴定。
实施例二：屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746耐受低pH胃液、人工胃肠消化液和猪胆盐
从屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的保藏斜面(MRS培养基)挑一环菌苔接于装有100mL液体MRS培养基的250mL三角瓶中，于37℃，静置培养12h，将菌液在6000rpm的条件下离心10min，弃去上清，用灭菌的0.85％的生理盐水洗涤一次，再用同体积生理盐水悬浮。吸取10mL悬浮菌液分别接于装有90mL pH分别为1、2、3、4、5的人工胃液和90mL人工猪胆盐溶液的250mL三角瓶中，猪胆盐浓度分别为3g／L、5g/L、10g/L、15g／L、20g／L，以不加胆盐的样品为对照。然后在37℃，静置培养180min，分别于初始接种、30min、60min、120min、180min对培养物进行活菌计数，绘制活菌数变化曲线，计算菌株在不同pH人工胃液和不同浓度人工胆盐中保温180min时的存活率。菌液在人工胃液中保温2h后吸取10mL菌悬液接于装有90mL人工肠液的250mL三角瓶中，同样在37℃，静置培养，分别于初始接种、3h、6h、21h、24h对培养物进行活菌计数，绘制活菌数变化曲线。测定结果显示，屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746在pH高于1的人工胃液中保持180min(3h)，存活率达到80％以上；在浓度为20g／L的人 工猪胆盐溶液中保持180min(3h)，存活率超过60％；在人工胃肠消化液中保持26h，活菌数可以维持在107CFU／mL，这个时间符合肠道生理周期，能够保证菌体发挥益生作用。上述结果表明，屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746能够耐受酸性环境，耐受高浓度猪胆盐，并且能够在胃肠消化液中保持足够长的存活时间，说明屎肠球菌(Enterococcus Faecium)WEI-10CGMCC No.7746是一株高抗逆性益生乳酸菌，可以经过畜禽的胃、十二指肠后保持活性，并最终进入小肠定殖。
实施例三：屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的抑菌活性
1.培养液上清的制备
从屎肠球菌(Enterococcus Faecium)WEI-10CGMCC No.7746的保藏斜面(MRS培养基)挑一环菌苔接种于液体MRS培养基中，37℃，静置培养12h，取1mL菌液12000rpm离心1min，取上清液。
2.抑菌活性检测平板的制备
将15mL完全熔化的LB琼脂培养基倒入培养皿中，待其凝固后垂直放上牛津杯；另取完全熔化的LB琼脂培养基，待其冷却到55℃时加入指示菌混匀，取10mL混有指示菌的培养基倒入放有牛津杯的培养皿中，待完全凝固后拔出牛津杯，制成检测平板。所述指示菌包括大肠杆菌、沙门氏菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌。
3.抑菌活性的测定
取200μL培养液上清加入检测平板的孔中，4℃放置24h后放入37℃培养箱中培养20h，测量抑菌圈直径大小为30-40mm。
实施例四：屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的最适发酵培养条件的优化
一、屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的最适生长环境条件的优化
1、最适初始pH值的优化
考察不同初始pH值对屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746生长的影响。从屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的保藏斜面(MRS培养基)挑一环菌苔接于装有100mL液体MRS培养基的250mL三角瓶中，于37℃，静置培养11h，以1％的接种量分别接于装有300mL pH为5.5，6.0，6.5，7.0，7.5，8.0，8.5的液体 MRS培养基的500mL三角瓶中，于37℃，静置培养16h，开始培养后分别于2h、4h、6h、10h、12h、14h、16h取样测定OD600，并于培养结束时测定每个样品的活菌数。优化结果表明，屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746最适生长初始pH值范围为8.0-8.5。
2、最适发酵温度的优化
考察不同温度对屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746生长的影响。从屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的保藏斜面(MRS培养基)挑一环菌苔接于装有100mL液体MRS培养基的250mL三角瓶中，于37℃，静置培养11h，以1％的接种量接于装有300mL pH为8.0的液体MRS培养基的500mL三角瓶中，分别于25℃、30℃、37℃、40℃、42℃、45℃、48℃，静置培养10h，开始培养后分别于2h、4h、6h、8h、10h取样测定OD600，并于培养结束时测定每个样品的活菌数。优化结果表明，屎肠球菌(Enterococcusfaecium)WEI-10CGMCC No.7746最适生长温度范围为37-40℃。
3、最适转速的优化
考察不同转速对屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746生长的影响。从屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的保藏斜面(MRS培养基)挑一环菌苔接于装有100mL液体MRS培养基的250mL三角瓶中，于37℃，静置培养11h，以1％的接种量接于装有300mL pH为8.0的液体MRS培养基的500mL三角瓶中，于37℃，转速分别调至50rpm、100rpm、200rpm，并以静置培养为对照，培养10h，开始培养后分别于2h、4h、6h、8h、10h取样测定OD600，并于培养结束时测定每个样品的活菌数。优化结果表明，不同转速对屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746生长的影响没有显著差异，表明屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的生长对氧气的需求不显著，实际发酵过程中为了节省能源，可以在无需通气的条件下发酵。
二、屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的最适发酵培养基组分的优化
1、最适碳源的优化
采用上述最适生长条件，考察了屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCCNo.7746对单一碳源，包括葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘油和工业上常用的复合碳源，包括糖蜜、乳清粉、葡萄糖浆、低聚异麦芽糖和糊精的利用情况。采用与上述同样的接种方法，固定氮源为蛋白胨10g／L，牛肉粉5g／L，酵母粉5g／L，含有不同碳源(含量均为20g／L)的培养基的pH值均为8.0，培养温度为37℃，静置培养10h，开始培养后分别于2h、4h、6h、8h、 10h取样测定OD600，并于培养结束时测定每个样品的活菌数。综合考虑原料成本和菌体生长情况，最终确定屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746生长的最适碳源为糖蜜。
2、最适氮源的优化
采用上述最适生长条件，考察了屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCCNo.7746对蛋白胨、牛肉膏、玉米浆、玉米浆粉、酵母膏、尿素、硝酸钠和硫酸铵等几种氮源的利用情况。采用与上述同样的接种方法，固定碳源为蔗糖20g／L，含有不同氮源(含量按照每种氮源的含氮量与MRS培养基中的含氮量一致的原则进行换算)的培养基的pH值均为8.0，培养温度为37℃，静置培养10h，开始培养后分别于2h、4h、6h、8h、10h取样测定OD600，并于培养结束时测定每个样品的活菌数。综合考虑原料成本和菌体生长情况，最终确定屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746生长的最适氮源为玉米浆粉。
3、Plackett-Burman试验
用于培养屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的发酵培养基中含有8种组分，利用Plackett-Burman设计从8种原料中筛选出对活菌产量有显著影响的因素。各因素及其水平见表1，Plackett-Burman试验设计及结果见表2，数据的回归分析及显著性分析见表3。表3的分析结果表明，玉米浆粉是影响屎肠球菌(Enterococcusfaecium)WEI-10CGMCC No.7746发酵活菌产量的最显著因素，其余因素的影响作用依次为糖蜜、吐温80、三水合磷酸氢二钾、一水合硫酸锰、七水合硫酸镁、柠檬酸铵、三水合乙酸钠。其中糖蜜、玉米浆粉、七水合硫酸镁、吐温80对活菌数的影响是正相关，柠檬酸铵、三水合乙酸钠、一水合硫酸锰、三水合磷酸氢二钾对活菌数的影响是负相关。选取糖蜜、玉米浆粉和吐温80做进一步优化试验。
表1Plackett-Burman试验设计因子水平
表2Plackett-Burman试验设计及结果
表3回归系数及影响因子的显著性分析
3、最陡爬坡试验
响应面拟合方程只有在考察的临近区域里才能充分近似真实情况，故应先逼近最大产区后再建立有效的拟合方程。根据Plaekett-Burman试验筛选出的3个影响屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746活菌数的重要因素，运用最陡爬坡试验找出活菌产量最大的区域。最陡爬坡试验结果见表4。由表4可知，当糖蜜浓度为20g／L、玉米浆粉浓度为30g/L、吐温80浓度为1g／L时，活菌数产量最大，当条件处于其两边或更远时活菌数产量逐渐下降。由此可以确定活菌数达到最大值的发酵培养基中三种主要影响因素的浓度应当为糖蜜20g／L、玉米浆粉30g／L、吐温801g/L附近的区域。
表4最陡爬坡实验结果
4、Box-Behnken优化设计实验结果
根据最陡爬坡试验结果，将糖蜜浓度为20g／L、玉米浆粉浓度为30g／L、吐温80浓度为1g／L作为中心条件采用Box—Behnken法进一步优化，各因素水平见表5，优化设计结果见表6。采 用Design—Expert软件对表6中的活菌数数据进行分析，得到模拟曲线，对应的模拟方程为：Y=17.88+0.51X1+0.89X2+0.33X8-0.15X1X2+0.17X1X8+0.075X2X8-0.64X12-1.34X22-2.67X82。对模拟方程进行方差分析，结果见表7。由表7可知，模拟方程的P<0.05，说明模拟方程对活菌数的影响是显著的。模拟方程的交叉项对活菌数的影响均不显著，而三个因素的一次项及二次项对活菌数影响显著，这说明各因素与活菌数的关系并不是简单的线性关系，而是一个复杂的二次关系。
通过利用Design-Expert软件绘制的响应面曲线分析，响应面曲线存在着活菌数的最大值，运用软件预测出活菌数达到最大值的条件为：糖蜜21.88g/L，玉米浆粉31.56g／L，吐温801.04g／L，活菌数最大为18.13×108CFU／mL。
为了验证上述优化结果的可靠性，根据筛选出的最佳发酵培养基和发酵条件，进行了两次平行实验，活菌数分别为17.89×108CFU／mL和17.93×108CFU／mL。实验值和理论值基本一致，说明上述优化方法具有较好的实用性和可靠性。
表5Box-Behnken设计各因素水平
表6Box-Behnken设计及结果
表7模拟方程中各参数的回归系数
实施例五：屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的发酵培养
从屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的保藏斜面(MRS培养基)挑一环菌苔接于装有300mL上述优化好的专用发酵培养基的500mL三角瓶中，于37℃，静置培养10-12h，以1％的接种量接于装有30L pH为8.0的专用液体发酵培养基的50L发酵罐中，于37℃进行发酵培养，发酵过程中，转速控制在50rpm，不通气培养10-12h，pH降至4.7左右，发酵结束，发酵液活菌数大于2×109CFU／mL，而在同样条件下，屎肠球菌(Enterococcusfaecium)WEI-10CGMCC No.7746在优化前的MRS培养基中的活菌数为7.2×108CFU／mL，优化后的培养基使得活菌数提高2.7-4倍。所述专用液体发酵培养基为实施例四中优化获得的最优发酵培养基，配方为：每1000mL水中含有：糖蜜21.88g，玉米浆粉31.56g，柠檬酸铵2g，三水合乙酸钠5g，七水合硫酸镁0.2g，一水合硫酸锰0.05g，三水合磷酸氢二钾2g，吐温801.04g，pH值为8。
实施例六：屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的发酵液的真空冷冻干燥处理
按照实施例五制作的屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746的发酵液经过高速管式离心机，在15000-20000rpm的条件下离心收集菌体。为了降低真空冷冻干燥处理成本，提高冻干后菌粉产品的存活率，选择了4种保护剂配方(见表8)加以比较。将4种经灭菌的保护剂按照体积质量比5∶1与离心后的菌体均匀混合，置于-70℃预冻2-3h，放入温度已经降至-40℃-50℃的真空冷冻干燥仪的冷阱中，打开真空泵，抽真空度至10Pa，冻干44h左右。取出菌粉，测定活菌数，计算存活率，结果表明，保护剂2适合用于屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10CGMCC No.7746发酵液的真空冷冻干燥处理，存活率可达85％，菌粉活菌数大于2×1011CFU／g。
表8保护剂编号及配方
Claims (5)
1.一株屎肠球菌，其特征在于，所述的屎肠球菌(Enterococcus faecium)为WEI-10，保藏编号为CGMCC No. 7746。
2.一种屎肠球菌的培养方法，将屎肠球菌(Enterococcus faecium)WEI-10 CGMCC No.7746接种到该菌的专用液体培养基中，30-40℃下静置或不通气培养，其特征在于，专用液体培养基的配方为：每1000mL水中含有：糖蜜10-30g，玉米浆粉20-40g，柠檬酸铵1-3g，三水合乙酸钠2-8g，七水合硫酸镁0.1-0.5g，一水合硫酸锰0.02-0.08g，三水合磷酸氢二钾1-3g，吐温80 0.5-1.5g, pH值为8-8.5。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述专用液体培养基的配方为：每1000mL水中含有：糖蜜21. 88g，玉米浆粉31.56g，柠檬酸铵2g，三水合乙酸钠5g，七水合硫酸镁0.2g，一水合硫酸锰0.05g，三水合磷酸氢二钾2g，吐温80 1.04g，pH值为8。
4.根据权利要求2或3所述培养方法，其特征在于：菌种接种比例为1%，培养温度为37℃，静置或不通气培养，培养时间为10-12h。
5.权利要求1所述屎肠球菌在制备调节畜禽肠道微生态平衡的微生态制剂产品中的应用。
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