CN103820363B - 一种屎肠球菌菌粉的制备与应用 - Google Patents

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Fujian Jinhualong Feed Co., Ltd.
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Abstract

本发明提供一种屎肠球菌菌粉的制备与应用,提供了一株筛选自猪场周边土壤的菌株,其分类命名属于肠球菌属、屎肠球菌种。经喷雾干燥制成菌粉,可作为猪饲料添加剂使用。其中屎肠球菌已于2013年10月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏代号:CGMCC?No.8296,菌株代码BBH201305001。该菌粉的生产工艺简单,成本低,可调整猪肠道菌群,提高机体的免疫细胞水平,加固肠道屏障功能,加强机体对营养物质的消化吸收,促进畜禽高效增重。

Description

-种尿肠球菌菌粉的制备与应用
技术领域
[0001] 本发明属于饲料添加剂加工领域,具体设及了一种尿肠球菌菌粉的制备与应用。
背景技术
[0002] 尿肠球菌被认为是一种可在饲料中添加的肠道益生菌。大量研究表明,益生菌的 应用是建立和维持动物肠道菌群平衡的最有效方式。在现代养殖条件下,尽早建立和维持 动物肠道的菌群平衡是提高养殖动物生长机能和抗病力的可行途径。在饲料中添加益生 菌等微生态饲料添加剂,一方面,益生菌进入消化道后,大量繁殖,并与消化道有益菌形成 强有力的优势菌群,抑制其它外来微生物在胃肠道内的定植或增殖,从而维持肠道菌体平 衡。另一方面,益生菌通过产生细菌素、过氧化氨、乳酸乃至有广谱抗菌作用的物质,能够抑 制或杀灭其它有害微生物。同时,通过提高巨隧细胞和单核细胞的活性、促进免疫细胞分泌 细胞因子,益生菌可W提高机体的免疫细胞水平。此外,益生菌能产生多种营养物质和消化 酶,或刺激腺体对消化酶的分泌,从而促进营养物质的消化。更为重要的是采用益生菌添加 剂能够加固肠道屏障功能,增加肠绒毛长度和隐窝深度,进一步加强机体对营养物质的消 化吸收,提高生长效率。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于提供一种尿肠球菌菌粉的制备与应用,该菌粉可调整猪肠道菌 群,促进畜禽高效增重,且生产工艺简单,成本低。
[0004] 为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
[000引一种尿肠球菌,所述的尿肠球菌为尿肠球菌(Enterococcusfaecium)BB肥01305001,已于2013年10月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中屯、CGMCC,其地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,菌种保 藏代号:CGMCCNo. 8296。
[0006] -种尿肠球菌的菌粉制备方法,其包括W下步骤:
[0007] a.将尿肠球菌菌种接种于MRS液体培养基,在25~40°C有氧或兼性条件下培养 8~16小时,成为种子液;
[0008] b.将步骤a所获得的种子液接种在发酵罐中进行发酵培养,采用改良的MRS液 体培养基为发酵培养基,在25~4(TC厌氧条件下,采用定时或连续补料分批发酵方式培养 8~48小时;
[000引 C.将b步骤所获得的发酵液加入质量分数为100/cMO0/0的干燥保护齐时口卵黄粉,添 加方式为:发酵液1000ml中,加入质量分数为0. 2%~0. 5%的吐溫60,然后缓缓加入干燥保 护剂,边加边揽拌,直至混匀;然后在混合匀浆中加入质量分数为5~15%的卵黄粉,边加边 揽拌,直至混匀制成菌液混合物,继续揽匀后进行喷雾干燥制成菌粉。
[0010] 所述的干燥保护剂中各组分的质量比为:阿拉伯胶:0 -糊精:薦糖:淀粉=1~10: 5~30 :1~4 :2~10〇
[0011] 改良MRS液体培养基是在每升MRS培养基中加有麦芽糖5 ~10g,蛋白腺10~15g, 牛肉膏8~lOg,酵母膏5~lOg,葡萄糖10~20.Og,憐酸氨二钟1~5g,乙酸钢1~lOg,硫酸儀 0. 2~Ig,硫酸儘0. 001~0. 2g,巧樣酸Ξ胺2~5g,吐溫80Ig,纯净水1升,调节抑值 5. 5 ~8. 0。
[0012] 所述的喷雾干燥工艺指标:进口溫度控制在155-165°C之间,出口溫度控制在 50-70°C之间,风压指数控制在25-30Mpa之间,喷雾头变频为400Hz。
[0013] 将喷雾干燥后的菌粉用生理盐水按比例稀释后计数,显示喷雾干燥后尿肠球菌菌 粉中活菌数为400-600亿/g。
[0014] 一种尿肠球菌的菌粉可作为饲料添加剂使用。
[0015] 菌株的筛选与鉴定:
[0016] 从猪场附近±壤取样,接种到MRS固体培养基平板上,于37°C厌氧环境中培养 2地,挑取平板上的单菌落接种到MRS固体培养基斜面上进行2次纯化培养得到纯化菌落。 该菌落在MRS培养基上生长良好,是兼性厌氧菌。菌落成乳白色圆形,表面较光滑,菌落直 径约0.8~2mm。革兰氏染色阳性,镜检发现,菌体呈球形,成单或成串存在,无芽抱。菌株送 交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、(CGMCC),经生理生化鉴定及16SrDNA 序列分析鉴定,确定其属于肠球菌属、尿肠球菌种(Enterococcusfaecium),命名为尿肠球 菌(Enterococcusfaecium)BB肥01305001。
[0017] 表1细胞形态及理化实验结果
[0018]
Figure CN103820363BD00041
[0019] 本发明的优点在于:可调整猪肠道菌群,提高机体的免疫细胞水平,加固肠道屏障 功能,加强机体对营养物质的消化吸收,促进畜禽高效增重,生产工艺简单,可提供成本低 的尿肠球菌菌粉。
附图说明
[0020] 图1尿肠球菌菌粉的显微结构观察,菌粉颗粒包裹均匀,分散度较好。
具体实施方式
[0021] 实施例1对尿肠球菌菌粉的显微结构观察
[0022]结论:菌粉颗粒包裹均匀,分散度较好。
[002引 实施例2:
[0024] 菌粉的稳定性检测
[00巧]1. 1菌粉的高溫耐受性
[0026] 取Ig菌粉样品,分别置于50、80、100°C下高溫干燥30分钟,60分钟,与原制剂比 较,测定制剂内尿肠球菌的存活率。
[0027] 结果:
[0028]
Figure CN103820363BD00051
[0029] 结论:本发明中的的尿肠球菌可短时间耐受50-80°C高溫;
[0030] 1. 1. 2菌粉的稳定性
[0031] 将试样放入侣锥袋中,密封遮光,于47. 5°C下恒溫培养一周,取出交进行活菌计 数。
[0032]结果:一周后检测到样品活菌浓度为180亿/g,存活率为45%。
[0033] 结论:本发明中的尿肠球菌可在较高溫度下存活。
[0034] 1. 1. 3肠溶性试验
[0035] 取样品0.Ig,加入50mlph6. 8的人工肠液中,37 °C恒溫水浴揽拌,揽拌速度为 200;r/min,分别在 30min、60min、90min、120min取样进行活菌计数。
[0036] 结果:
[0037]
Figure CN103820363BD00052
[0038] 结论:本发明中的尿肠球菌对于人工肠液有较好的耐受性。
[00測 1. 1. 4耐酸性试验
[0040] 取样品0.Ig,加入50ml人工胃液中,37°C恒溫水浴揽拌,揽拌速度为2(K)r/min, 分别在30min、60min、90min、120min取样进行活菌计数。
[0041] 结果:
[0042]
Figure CN103820363BD00053
[0043] 结论:本发明中的尿肠球菌对于人工胃液有部分耐受性,且在60min后有较好的 稳定性。
[0044] 实施例3本发明实例生猪小规模试验
[004引试验动物:断奶仔猪50头;
[0046] 试验时间:从22日龄断奶期开始,持续2周时间;
[0047] 饲料喂养:不控料自由采食,设置2个实验组,分别为不添加制剂的对照组,制剂 含量0. 3%。的试验组;
[0048]结果:
[0049]
Figure CN103820363BD00061
[0050] 结论:通过上述实验,试验组比对照组在增重、采食量上分别提高37%和15%,在料 肉比和拉稀率上分别下降16%和65%。因此,本发明对于断奶仔猪具有明显的提高采食量、 增重和降低拉稀的作用。
[0051] W上所述仅为本发明的较佳实施例,凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与 修饰,皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (3)

1. 一种屎肠球菌的菌粉制备方法,其特征在于:其包括以下步骤: a. 将屎肠球菌菌种接种于MRS液体培养基,在25~40°C有氧或兼性条件下培养8~ 16小时,成为种子液; b. 将步骤a所获得的种子液接种在发酵罐中进行发酵培养,采用改良的MRS液体培养 基为发酵培养基,在25~40°C厌氧条件下,采用定时或连续补料分批发酵方式培养8~48 小时; c. 将b步骤所获得的发酵液加入质量分数为10°/p40%的干燥保护剂和卵黄粉,添加方 式为:发酵液l〇〇〇ml中,加入质量分数为0. 2%~0. 5%的吐温60,然后缓缓加入干燥保护剂, 边加边搅拌,直至混匀;然后在混合匀浆中加入质量分数为5~15%的卵黄粉,边加边搅拌, 直至混匀制成菌液混合物,继续搅匀后进行喷雾干燥制成菌粉;所述的屎肠球菌为屎肠球 菌BBH201305001,已于2013年10月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心,菌种保藏代号:CGMCCNo. 8296 ; 所述的干燥保护剂中各组分的质量比为:阿拉伯胶:β-糊精:蔗糖:淀粉=1~1〇 : 5~30 :1 ~4 :2~10 ; 改良MRS液体培养基是在每升MRS培养基中加有麦芽糖5 ~10g,蛋白胨10~15g,牛肉膏 8~10g,酵母膏5~10g,葡萄糖10~20. 0g,磷酸氢二钾1~5g,乙酸钠l~10g,硫酸镁0. 2~ lg,硫酸锰0. 001~0. 2g,柠檬酸三胺2~5g,吐温80lg,纯净水1升,调节pH值5. 5~ 8. 0〇
2. 根据权利要求1所述的一种屎肠球菌的菌粉制备方法,其特征在于:所述的喷雾干 燥工艺指标:进口温度控制在155-165Γ之间,出口温度控制在50-70°C之间,风压指数控 制在25-30Mpa之间,喷雾头变频为400Hz。
3. -种如权利要求1所述的屎肠球菌的菌粉制备方法制备的屎肠球菌的菌粉作为饲 料添加剂使用。
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