JP6615830B2 - 重鎖抗体を作製するマウス - Google Patents
重鎖抗体を作製するマウスInfo
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Description
本発明の分野は、重鎖抗体が作製される遺伝子改変された非ヒト動物、特に、免疫グロブリンγ(IgG)遺伝子のCH1ドメイン(またはCH1ドメインとヒンジ領域)をコードしている配列内にヌクレオチド配列の欠失を含むが、機能性CH1ドメインを欠いていないIgMを発現できる遺伝子改変された動物、特に、野生型IgM分子(すなわち、CH1ドメインを有する)の作製能を有するが、機能性CH1ドメイン(またはCH1ドメインとヒンジ領域)が欠如している重鎖IgG抗体が作製されるマウスである。
ほとんどの動物では、正常な免疫グロブリン重鎖は、その同系の(cognate)軽鎖とカップリングされている場合でのみ良好に発現される。ヒトでは、重鎖可変部、CH1、または重鎖可変部とCH1ドメインの配列を欠いている機能不全性の重鎖によって症状発現する重鎖病で孤立重鎖が見られる。軽鎖が欠如している重鎖は、特定の種の魚類およびラクダに見られる。かかる重鎖は、機能性CH1ドメインを欠いており、重鎖可変ドメインにおいて非ヒト特徴を有する。ラクダまたは特定の種の魚類に見られるVHHドメインを模倣するラクダ化遺伝子を発現するようにマウスを改変することにより(一部において、IgMおよびIgG CH1ドメインを除去し、重鎖可変領域をラクダおよび/または特定の種の魚類のものと類似するように適合させることにより)、ラクダ化抗体を作製する試みがなされている。しかしながら、ラクダ化抗体では、非ラクダ動物において免疫応答が誘導されることが予測される。
遺伝子改変された細胞、非ヒト胚、非ヒト動物ならびにそれらを作製および使用するための方法および組成物を提供する。ここで、該動物は、免疫グロブリンG(IgG)において機能性CH1配列を欠くように遺伝子改変され、任意選択で、該改変IgGにおいて機能性IgGヒンジ領域を欠くように改変され、ここで、該細胞、胚および動物には機能性IgM CH1配列が含まれている。一部の態様では、該マウスは、内因性マウス免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントの1つ以上または全部の、1つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントでの置き換えを含むものである。一部の態様では、内因性マウスV、DおよびJ遺伝子セグメントの全部が、1つ以上のヒトV、1つ以上のヒトDおよび1つ以上のヒトJ遺伝子セグメントで置き換えられている。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
生殖系列遺伝子改変を含むマウスであって、該生殖系列遺伝子改変は、IgGのCH1をコードしているヌクレオチド配列の欠失を含み、該マウスは、
CH1ドメインを含むIgMを発現し、
CH1ドメインおよび軽鎖を欠いているIgG抗体を血清中で発現し、かつ
CH1ドメインをコードしている配列を含むIgG mRNAを発現できない、
マウス。
(項目2)
前記CH1をコードしている前記ヌクレオチド配列の前記欠失が、IgG1遺伝子内に存在している、項目1に記載のマウス。
(項目3)
機能性免疫グロブリン軽鎖遺伝子の遺伝子座を含む、項目1に記載のマウス。
(項目4)
軽鎖を欠いている前記IgG抗体が、ヒト可変ドメインと、CH1ドメインを欠いているマウス定常ドメインとを含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目5)
軽鎖を欠いている前記IgG抗体が、マウス可変ドメインと、CH1ドメインを欠いているマウス定常ドメインとを含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目6)
IgG2a遺伝子の欠失を含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目7)
IgG2b遺伝子の欠失を含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目8)
IgG2a遺伝子の欠失およびIgG2b遺伝子の欠失を含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目9)
IgG2a遺伝子の欠失およびIgG2b遺伝子の欠失を含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目10)
1つ以上の内因性マウス重鎖可変領域遺伝子セグメントの1つ以上のヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントでの置き換えを含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目11)
前記1つ以上のヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントがヒトVH1ファミリー遺伝子セグメントである、項目10に記載の遺伝子改変マウス。
(項目12)
前記VH1ファミリー遺伝子セグメントが、ヒトVH遺伝子セグメント1−8、1−18、および1−69のFR1、FR2およびFR3遺伝子セグメントと少なくとも90%同一であるFR1、FR2およびFR3領域を含む、項目11に記載の遺伝子改変マウス。
(項目13)
さらに、ヒトD遺伝子セグメントおよびヒトJ遺伝子セグメントを含む、項目11に記載の遺伝子改変マウス。
(項目14)
項目11に記載の遺伝子改変マウスであって、該マウスが、FR4をコードしている再構成免疫グロブリン遺伝子を含み、該FR4が、ヒトD1−7/J4、D3−16/J6、D4−4/J4、D6−6/J4、D6−6/J2、D6−7/J4、またはD6−19/J6によってコードされたFR4と少なくとも90%同一である、遺伝子改変マウス。
(項目15)
1つ以上の内因性マウス重鎖可変領域遺伝子セグメントの1つ以上のラクダ化ヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントでの置き換えを含む、項目1に記載の遺伝子改変マウス。
(項目16)
マウスにおいて体細胞変異重鎖抗体を作製するための方法であって、該方法は、
a.マウスを抗原で免疫化する工程であって、ここで、該マウスは、再構成されていないヒトまたはマウス重鎖免疫グロブリンの可変領域遺伝子セグメントを含み、機能性IgG CH1ドメインをコードする少なくとも1つの対立遺伝子のヌクレオチド配列を欠いており、かつCH1ドメインを含むIgMを発現する、工程;
b.該マウスを、該抗原に対する免疫応答が起こるのに充分な条件下で維持する工程;および
c.該マウスから体細胞変異重鎖抗体を単離する工程であって、ここで、該体細胞変異重鎖抗体は、該ヒトまたはマウス重鎖免疫グロブリンの可変領域遺伝子セグメントに由来する可変ドメインを含み、かつ該抗原に特異的に結合する、工程
を含む、方法。
(項目17)
V、DおよびJ遺伝子セグメントの全部または実質的に全部の1つ以上のヒトV、ヒトDおよびヒトJ遺伝子セグメントでの置き換えを含む遺伝子改変マウスであって、該1つ以上のヒトV、DおよびJ遺伝子セグメントは、内因性マウス遺伝子座でマウス重鎖定常領域遺伝子の遺伝子座に作動可能に連結されており、該マウス重鎖定常領域遺伝子の遺伝子座は、完全長IgM遺伝子、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3およびその組合せから選択されるIgG遺伝子内のCH1ドメインをコードしているヌクレオチド配列内に欠失を含むIgG遺伝子を含み、該マウスは、CH1領域を有するIgMを含むB細胞受容体を発現し、該IgMは、同系のλまたはκ軽鎖と会合している重鎖を含む、遺伝子改変マウス。
(項目18)
前記1つ以上のヒトV、DおよびJ遺伝子セグメントが、VH1、VH3、VH4およびその組合せから選択される可変領域ファミリー由来のヒト遺伝子セグメントを含む、項目17に記載の遺伝子改変マウス。
(項目19)
前記1つ以上のヒト遺伝子セグメントが、1−2、1−8、1−18、1−46、1−69、3−21、3−72、4−59およびその組合せから選択される、項目18に記載の遺伝子改変マウス。
(項目20)
前記1つ以上のヒトV、DおよびJ遺伝子セグメントが、D1−7、D3−16、D4−4、D6−6、D6−7、D6−19、J2、J3、J4およびその組合せを含む、項目18に記載の遺伝子改変マウス。
詳細説明
本発明は記載の特定の方法および実験条件に限定されず、したがって、方法および条件は種々であり得る。本明細書で用いる専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のためにすぎず、本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ限定されるため、限定を意図するものでない。
CH1ドメインを欠いている抗体、例えば、重鎖抗体、すなわち、軽鎖を欠いている抗体を作製する遺伝子改変された非ヒト動物を提供する。該遺伝子改変された非ヒト動物は、機能性免疫グロブリン重鎖ドメイン(CH1ドメイン)、例えば、IgG1 CH1ドメインの欠如を含む遺伝子改変を含むものであり、一部の実施形態では、機能性CH1ドメインを欠いている該免疫グロブリン重鎖においてヒンジ領域の欠失を含むさらなる改変を含むものであり、該非ヒト動物は機能性IgMを発現する。他の改変としては、IgG1およびIgM以外のアイソタイプを非機能性にすること、例えば、IgD、IgG3、IgG2a、IgG2b、IgAおよびIgEに対して遺伝子における欠失、または遺伝子の欠失を行なうことが挙げられる。また、遺伝子改変された非ヒト胚、細胞、ならびに非ヒト動物、非ヒト胚および細胞を作製するための標的化構築物も提供する。
ラクダ類、特定の魚類および病的状態における観察結果により、ある状況下では、同系の軽鎖の非存在下において、重鎖定常領域のCH1ドメインを欠いている抗体が発現され得ることが示されているが、抗体産生B細胞の正常な発生には、一般的にCH1ドメインの存在が必要とされる。IgMを含む重鎖アイソタイプにはすべてCH1ドメインが含まれている。サロゲート軽鎖および同系の軽鎖はともに、IgMの状況の重鎖のCH1ドメインを介して所与の重鎖と相互作用すると考えられる。重鎖抗体の発生が構造の完全性またはIgMアイソタイプ重鎖の機能性に依存する範囲では、IgMの構造の完全性または機能の破壊は望ましくないであろう。
対象免疫原で非ヒト動物を免疫化することによる抗体の作製に充分な多様性をもたらすために、B細胞発生中に提示されたときにIgMの状況で有効に選択に残り得る適当な数の再構成された重鎖可変領域が維持されていることが望ましい。したがって、免疫グロブリン重鎖に非機能性CH1ドメインまたは非機能性CH1ドメインと非機能性ヒンジ領域を含む遺伝子改変された非ヒト動物は、両方のIgM対立遺伝子にCH1欠失を含むべきではない。
抗体はヒト治療薬として有用である。また、重鎖抗体、すなわち、軽鎖を欠いている抗体もヒト治療薬として有用である。重鎖抗体は軽鎖を欠いているため小型になり、したがって、軽鎖を含む抗体よりも良好な組織浸透を示すが、従来の抗体と比較すると類似した、またはより有利な薬物動態プロフィールを有し、類似したエフェクター機能が保持されていることが予測される。また、重鎖抗体は小型になるため、所与の容量でより高い用量での投与が可能になる。よく使用される抗体投与方法は皮下注射であり、所与の投薬量の抗体に対する投与容量の低減により、患者に有益性がもたらされ、大容量の皮下注射による合併症および痛みが回避され得る。
本発明者らは、通常のヒトまたはマウス重鎖可変領域(hVRまたはmVR)が、機能性CH1ドメインを欠いているIgGの状況のインビトロ系において発現され得ることを確立した。本発明者らは、野生型マウスIgMを有するマウスの再構成されていないhVRミニ遺伝子座からhVRを発現させた。発現されたhVRはCH1ドメインを欠いているIgG2b上にクローニングされ(その結果、hVR−IgG2bΔCH1が発現される)、hVR−IgG2bΔCH1構築物で一過的にトランスフェクトしたCHO細胞によって分泌され、野生型IgMを有するマウスにおいて選択されたhVRは、機能性CH1ドメインを欠いているIgGにスイッチされると、すなわち、重鎖抗体として細胞によって発現され分泌され得ることが有効に確立された。
本発明の重鎖抗体のヒト化型を生成させるためには、該改変についてホモ接合性である動物を抗原で免疫化し、動物の特異的免疫応答が確立されたら、該免疫化動物の脾臓の細胞を適当な不死細胞(例えば、骨髄腫細胞)と融合させてハイブリドーマ細胞を得る。あるいはまた、該免疫化動物のB細胞から直接抗体を得てもよい。ハイブリドーマ細胞(または例えば、単離したB細胞)由来の上清みを、酵素免疫測定法(ELISA)によって抗体の存在についてスクリーニングし、抗原に特異的な抗体が所望の特徴に基づいて選択され得る。
重鎖抗体が発現される動物を作製するための遺伝子改変は、実例としての該マウスを使用することにより簡便に示される。本発明による遺伝子改変マウスはさまざまな様式で作製され得、その具体的な実施形態を以下に論考する。
実施例1:重鎖抗体のインビトロ発現
分子生物学的手法(例えば、Maniatisら 1982.Molecular Cloning:A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor Laboratory参照)を用いてヒト可変領域とマウスIgG2b(mIgG2b)定常領域と融合させ、キメラ重鎖構築物を作製した。各構築物のヒト可変遺伝子セグメントは、両方のエキソン(すなわち、リーダー配列+成熟配列)、(内因性マウス免疫グロブリン重鎖の遺伝子座の3つのhVR遺伝子セグメントでの置き換えを含むナイーブRAGマウスから単離されたIgMのhVRから同定)、全hDH遺伝子セグメント、および全hJH遺伝子セグメントを含む完全長ヒト可変遺伝子セグメントとした。IgM抗体の軽鎖はマウス軽鎖とした。
A.マウスIgG1−CH1−ヒンジ標的化ベクター(図3)の調製
VELOCIMMUNE(登録商標)マウス(後述)のES細胞由来のC57BL/6対立遺伝子に対して、マウスIgG1定常ドメインのCH1とヒンジ領域の欠失を導入するための標的化構築物を構築した。
VELOCIMMUNE(登録商標)マウス(後述)のES細胞由来の129/SvEvTac対立遺伝子に対してマウスIgG1定常ドメインのCH1の欠失を導入するための第2の標的化構築物を、この実施例のセクションAに記載のものと同様の様式で構築した。
A.IgG1−CH1−ヒンジ標的化ベクターでのマウスES細胞の標的化
マウスES細胞を、上記の標的化構築物(すなわち、IgG1遺伝子のCH1とヒンジ領域の欠失を導入する標的化構築物)で標的化した。ES細胞はVELOCIMMUNE(登録商標)マウス由来のものとした。このマウスは、129系統とC57BL/6系統の50/50混合型であり、マウス重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントの再構成されていないヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントでの置き換えを含む遺伝子改変を有する。C57BL/6との交配に使用した129系統は、マウス重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントのヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントでの置き換えを含む系統である。
同様の様式で、マウスES細胞を、実施例2のセクションB(図2も参照のこと)に記載のCH1標的化構築物で標的化した。ES細胞はVELOCIMMUNE(登録商標)マウス(129/SvEvTac系統とC57BL/6系統の50/50混合型であり、マウス重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントの再構成されていないヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントでの置き換えを含む遺伝子改変を有するマウス)由来のものとした。C57BL/6との交配に使用した129/SvEvTac系統は、マウス重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントのヒト重鎖および軽鎖可変領域遺伝子セグメントでの置き換えを含む系統である。
A.IgG1−CH1−ヒンジ欠失を有するマウス
上記の標的とされるES細胞をドナーES細胞として使用し、8細胞期のマウス胚にVELOCIMOUSE(登録商標)での方法によって導入した(例えば、米国特許第7,294,754号およびPoueymirouら(2007)F0 generation mice that are essentially fully derived from the donor gene−targeted ES cells allowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1):91−99参照)。標的とされるC57BL/6 IgG1対立遺伝子を有するVELOCIMICE(登録商標)(完全にドナーES細胞に由来するF0マウス)を、欠失しているヒンジおよびCH1領域の上流および下流に位置する配列の存在を検出する変形型の対立遺伝子アッセイ(Valenzuelaら,上掲)を用いて遺伝子型分類することにより確認した。
同様の様式で、IgG1 CH1領域の欠失を有する標的とされるES細胞をドナーES細胞として使用し、8細胞期のマウス胚にVELOCIMOUSE(登録商標)での方法によって導入した(例えば、米国特許第7,294,754号およびPoueymirouら(2007)F0 generation mice that are essentially fully derived from the donor gene−targeted ES cells allowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1):91−99参照)。標的とされる129SvEv/Tac対立遺伝子を有するVELOCIMICE(登録商標)(完全にドナーES細胞に由来するF0マウス)を、欠失しているCH1領域の上流および下流に位置する配列の存在を検出する変形型の対立遺伝子アッセイ(Valenzuelaら,上掲)を用いて遺伝子型分類することにより確認した。
A.IgG1−ΔCH1−Δヒンジマウス
CH1とヒンジの欠失を含むと上記で確認されたマウス幼獣と野生型幼獣を交配し、交配マウス由来の血清をウエスタンブロッティングのために調製し、血清中に発現されたいずれかのIgGを、抗mIgG1抗体を用いて同定した。簡単には、マウス血清の10μLの1:100希釈物を還元性SDS−PAGEに使用し、ゲルをPVDF膜に移した。ブロットを0.05%Tween−20を含む5%脱脂乳含有Tris緩衝生理食塩水(TBST;Sigma)で一晩ブロックし、TBSTで4回洗浄し(1回あたり5分間の洗浄)、次いで、一次抗体(HRPにコンジュゲートさせたヤギ抗mIgG1,Southern Biotech)(1%脱脂乳含有TBST中で1:1,000に希釈)に室温で2時間曝露した。ブロットを6回洗浄した(1回あたり5分間の洗浄)。ブロットを5分間、SuperSignal(商標) West Pico Chemiluminescent Substrate(Thermo Scientific)を用いて発色させ、次いでフィルムに1分間露光した。
同様の様式で、CH1欠失についてホモ接合性のマウス幼獣と野生型幼獣を交配した。交配マウス由来の血漿および血清(5匹のホモ接合型;2匹の野生型について)をウエスタンブロッティングのために調製し、血清中に発現されたいずれかのIgGを、抗mIgG1抗体を用いて同定した(上記のとおりに)。IgG1−ΔCH1欠失についてホモ接合性のマウス由来の血清および血漿のウエスタンブロットでは、混合物バンド:約45kD(CH1ドメインを欠いている一本鎖IgG1の予測サイズ)のバンド1つ、および約75kD(CH1ドメインを欠いている二量体IgGの予測サイズ)にバンド1つが示された(データ表示せず)。この結果は、一方または両方いずれかの重鎖の遺伝子座に由来するIgG1−ΔCH1重鎖が発現されるホモ接合性のVELOCIMICE(登録商標)と整合している。この結果により、機能性IgM遺伝子とCH1ドメインを欠いているIgG遺伝子を有する遺伝子改変マウスは、該動物の免疫系の末梢リンパ球画分において重鎖抗体を発現できることが確立される。
CH1−ヒンジ欠失についてヘテロ接合性のVELOCIMICE(登録商標)同士を交配し、該欠失についてホモ接合性のマウスを得た。4匹のマウス幼獣が、IgG1 ΔCH1−Δヒンジについてホモ接合性であると確認された。これらの4匹のマウスと野生型マウスを交配し、交配マウス由来の血清を、ウエスタンブロッティングのために調製し、血清中に発現されたいずれかのIgGを、抗mIgG1抗体を用いて同定した(上記のとおりに)。図9は、この実験で使用したPVDF膜から発色させたフィルムを示す。血清を1:5および1:10に希釈し、10μLの各希釈物を各マウスに対して並列でゲルに負荷した。ゲル画像の上部において、レーンに各マウスならびにIgG1(1)およびIgG2a(2a)対照の表示をしている。
A.IgG1−CH1−ヒンジ欠失についてホモ接合性のマウス
IgG1 ΔCH1−Δヒンジについてホモ接合性のマウス改変を、V−D−J組換えおよび重鎖遺伝子の使用について、脾細胞から単離されたRNAを用いて逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(RT−PCR)によって解析した。
同様の様式で、IgG1 ΔCH1改変についてホモ接合性のマウスを、V−D−J組換えおよびヒト重鎖遺伝子の使用について、脾細胞から単離されたRNAを用いて逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(RT−PCR)によって解析した。
Claims (22)
- 内因性非ヒト動物スイッチ領域と、CH1ドメインを欠くIgGアイソタイプをコードする改変された内因性非ヒトIgG定常領域遺伝子とを含む改変された内因性非ヒト動物定常領域に作動可能に連結された、再構成されたヒト重鎖可変領域遺伝子、
を含む、非ヒト動物B細胞。 - 前記内因性非ヒト動物定常領域がさらに、CH1ドメインを含むIgMアイソタイプをコードする内因性非ヒト動物IgM定常領域遺伝子を含む、請求項1に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記IgG遺伝子が、IgG1遺伝子、IgG2a遺伝子、および/または、IgG3遺伝子である、請求項1または請求項2に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記IgG遺伝子がIgG1遺伝子である、請求項3に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記B細胞が、本質的に、N末端からC末端に向かって、IgG1ヒンジ領域に作動可能に連結されたヒト可変ドメイン、IgG1 CH2ドメイン、および、IgG1 CH3ドメイン、からなるIgG1重鎖を含むIgG1抗体を分泌する、請求項4に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記IgG遺伝子がIgG2遺伝子である、請求項3に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記細胞が、本質的に、N末端からC末端に向かって、IgG2ヒンジ領域に作動可能に連結されたヒト可変ドメイン、IgG2 CH2ドメイン、および、IgG2 CH3ドメイン、からなるIgG2重鎖を含むIgG2抗体を分泌する、請求項6に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記IgG遺伝子がIgG3遺伝子である、請求項3に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記B細胞が、本質的に、N末端からC末端に向かって、IgG3ヒンジ領域に作動可能に連結されたヒト可変ドメイン、IgG3 CH2ドメイン、および、IgG3 CH3ドメイン、からなるIgG3重鎖を含むIgG3抗体を分泌する、請求項8に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記IgG遺伝子が、CH1ドメインおよびヒンジ領域を欠くIgGアイソタイプをコードする、請求項1〜9のいずれか一項に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記B細胞が、本質的に、N末端からC末端に向かって、IgG CH2ドメインに作動可能に連結されたヒト可変ドメイン、および、IgG CH3ドメイン、からなるIgG重鎖を含むIgG抗体を分泌する、請求項10に記載の非ヒト動物B細胞。
- 前記内因性非ヒトIgG定常領域がさらに、
(b)内因性IgG2a定常領域遺伝子の欠失;
(c)内因性IgG2b定常領域遺伝子の欠失;
(d)内因性IgG3定常領域遺伝子の欠失;
(e)内因性IgE定常領域遺伝子の欠失;
(f)内因性IgA定常領域遺伝子の欠失;および
(g)内因性IgD定常領域遺伝子の欠失
を含む、請求項1〜4および10〜11のいずれか一項に記載の非ヒト動物B細胞。 - 前記非ヒト動物B細胞が、ラットB細胞またはマウスB細胞である、請求項1〜12のいずれか一項に記載の非ヒト動物B細胞。
- 内因性非ヒト動物スイッチ領域と、CH1ドメインを欠く非ヒト動物IgGアイソタイプをコードする改変された非ヒト動物IgG定常領域遺伝子とを含む改変された非ヒト動物定常領域に作動可能に連結された、再構成されたヒト重鎖可変領域遺伝子、
を含む、核酸。 - 前記非ヒト動物定常領域がさらに、CH1ドメインを含む非ヒト動物IgMアイソタイプをコードする非ヒト動物IgM定常領域遺伝子を含む、請求項14に記載の核酸。
- 前記IgG遺伝子が、IgG1遺伝子、IgG2a遺伝子、および/または、IgG3遺伝子である、請求項14または請求項15に記載の核酸。
- 前記IgG遺伝子がIgG1遺伝子である、請求項16に記載の核酸。
- 前記IgG遺伝子がIgG2遺伝子である、請求項16に記載の核酸。
- 前記IgG遺伝子がIgG3遺伝子である、請求項16に記載の核酸。
- 前記非ヒト動物IgG定常領域がさらに、
(b)内因性IgG2a定常領域遺伝子の欠失;
(c)内因性IgG2b定常領域遺伝子の欠失;
(d)内因性IgG3定常領域遺伝子の欠失;
(e)内因性IgE定常領域遺伝子の欠失;
(f)内因性IgA定常領域遺伝子の欠失;および
(g)内因性IgD定常領域遺伝子の欠失
を含む、請求項14〜17のいずれか一項に記載の核酸。 - 前記IgG遺伝子が、CH1ドメインおよびヒンジ領域を欠くIgGアイソタイプをコードする、請求項14〜20のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記非ヒト動物がラットまたはマウスである、請求項14〜20のいずれか一項に記載の核酸。
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