CN116420679A - 用于测试治疗剂的人源化啮齿动物 - Google Patents

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Abstract

本文提供了与在经遗传修饰啮齿动物中体内测试包含人Fc的治疗剂(例如测试这种治疗剂在经遗传修饰啮齿动物中的药物代谢动力学和/或药物效应动力学性质)相关的方法和组合物。在一些实施方案中，所述经遗传修饰啮齿动物表达包含人Fc(例如人IgG1Fc、人IgG4Fc)的抗体。在一些实施方案中，所述啮齿动物表达完全人抗体(即具有人重链和人轻(γ或κ)链的抗体)。在某些实施方案中，所述经遗传修饰啮齿动物包含一种或多种具有人细胞外结构域的Fc受体(例如新生儿Fc受体(FcRn)、β‑2‑微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受体1α(FcεR1α)、Fcγ受体1α(FcγR1a)、Fcγ受体2a(FcγR2a)、Fcγ受体2b(FcγR2b)、Fcγ受体3a(FcγR3a)、Fcγ受体3b(FcγR3b)、Fcγ受体2c(FcγR2c))。所述受体的跨膜和细胞质结构域能够是人或非人(例如啮齿动物)的。

Description

用于测试治疗剂的人源化啮齿动物
相关申请
本申请是申请号为201980031749.3、申请日为2019年3月25日、发明名称为“用于测试治疗剂的人源化啮齿动物”的中国发明专利申请的分案申请，原申请要求2018年3月26日提交的美国临时专利申请序列号62/648,197和2018年6月25日提交的美国临时专利申请序列号62/689,628的优先权权益，所述美国临时专利申请中的每一者据此以引用的方式整体并入。
背景技术
治疗剂的安全性、功效和药物代谢动力学性质通常在所述药物向人施用之前在动物模型中加以测试。在所述临床前研究中使用大型动物诸如非人灵长类动物是昂贵的，并且适合的疾病模型经常是不可用的，此限制了所述动物在测试药物功效方面的有用性。
归因于啮齿动物的小体型和充分表征的生理学，所以它们长久以来一直被用作用于临床前测试治疗剂的动物模型。此外，啮齿动物可高度经受使用完善建立的技术进行的遗传修饰，因此，大型哺乳动物中不可用的许多疾病模型在啮齿动物中是可用的。然而，复杂治疗剂诸如抗体和Fc融合蛋白在啮齿动物中的表现经常不同于在人中的表现。举例来说，相较于当所述治疗剂向人施用时，它们在向啮齿动物施用时经常展现极其不同的药物代谢动力学性质，从而限制了啮齿动物模型作为复杂治疗剂在人中的安全性、功效和最优给药的预测者的有用性。这进而使所述动物模型在临床前测试中的有用性降低。
因此，亟需允许在啮齿动物中精确地临床前测试复杂治疗剂，产生的结果更可预测所述治疗剂在人患者中的性质的新型动物模型和方法。
发明内容
本文提供了与在经遗传修饰啮齿动物(例如小鼠或大鼠)中体内测试包含人Fc的治疗剂(例如测试所述治疗剂的药物代谢动力学和/或药物效应动力学性质以及给药方案)相关的方法和组合物。
在某些实施方案中，本文提供了经遗传修饰啮齿动物，其中施用人抗体和/或人Fc融合蛋白诱导降低的抗人Fc免疫应答(例如在小鼠中的小鼠抗人抗体或MAHA应答)。在一些实施方案中，经遗传修饰啮齿动物(例如小鼠或大鼠)表达包含人Fc(例如人IgG1 Fc、人IgG4Fc)的抗体。在一些实施方案中，啮齿动物表达完全人抗体(即具有人重链和人轻(γ或κ)链的抗体)。
在一些实施方案中，本文提供了表达一种或多种与Fc融合蛋白或抗体相互作用的人源化或部分人源化Fc受体的啮齿动物，该相互作用方式反映人患者的Fc受体将如何与Fc融合蛋白或抗体相互作用。因此，在某些实施方案中，经遗传修饰啮齿动物包含一种或多种具有人细胞外结构域的Fc受体(例如新生儿Fc受体(FcRn)、β-2-微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受体1α(FcεR1α)、Fcγ受体1α(FcγR1a)、Fcγ受体2a(FcγR2a)、Fcγ受体2b(FcγR2b)、Fcγ受体3a(FcγR3a)、Fcγ受体3b(FcγR3b)、Fcγ受体2c(FcγR2c))。所述受体的跨膜和细胞质结构域能够是人或非人(例如啮齿动物，诸如大鼠或小鼠)的。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰免疫球蛋白重链(IgH)基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)和啮齿动物ES细胞。在某些实施方案中，IgH基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含一个或多个VH基因区段、一个或多个DH基因区段和一个或多个JH基因区段(例如大鼠或小鼠VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段)；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含一个或多个编码IgG恒定结构域的CH基因区段，所述IgG恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、人或啮齿动物IgG跨膜结构域和人或啮齿动物IgG细胞质结构域。在一些实施方案中，免疫球蛋白重链恒定区中的所有CH基因区段都是人的。在一些实施方案中，免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于免疫球蛋白重链恒定区，以致啮齿动物产生包含源于VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段的可变结构域和源于CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。在某些实施方案中，基因座位于内源性啮齿动物免疫球蛋白重链基因座处。在一些实施方案中，与由啮齿动物的免疫球蛋白重链基因座中的人CH编码的Fc同种型匹配的人抗体和Fc融合蛋白在向所述啮齿动物施用时引发降低的免疫应答。举例来说，在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG1恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG1抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG2恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG2抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG3恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG3抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG4恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG4抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人κ轻链的抗体，例如表达具有人κ恒定结构域的抗体，或表达具有人κ可变结构域和恒定结构域的抗体的啮齿动物施用具有κ轻链的人抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人λ轻链的抗体，例如表达具有人λ恒定结构域的抗体，或表达具有人λ可变结构域和恒定结构域的抗体的啮齿动物施用具有λ轻链的人抗体。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰免疫球蛋白κ(Igκ)链基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)。在一些实施方案中，Igκ基因座包含：(1)免疫球蛋白κ链可变区，所述免疫球蛋白κ链可变区包含一个或多个人Vκ基因区段和一个或多个人Jκ基因区段；和(2)免疫球蛋白κ链恒定区，所述免疫球蛋白κ链恒定区包含人Cκ基因区段。在一些实施方案中，免疫球蛋白κ链可变区可操作地连接于免疫球蛋白κ链恒定区，以致啮齿动物产生包含源于人Vκ基因区段和人Jκ基因区段的轻链可变结构域和源于Cκ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。在某些实施方案中，基因座位于内源性啮齿动物免疫球蛋白κ链基因座处。在一些实施方案中，包括人κ链的人抗体在向所述啮齿动物施用时引发降低的免疫应答。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰免疫球蛋白λ(Igλ)链基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)。在某些实施方案中，Igλ基因座包含一个或多个人Vλ基因区段、一个或多个人Jλ基因区段和一个或多个Cλ基因区段。在一些实施方案中，将人Jλ基因区段和Cλ基因区段排列成一个或多个Jλ-Cλ簇。在一些实施方案中，对人Jλ基因区段和Cλ基因区段进行排列以致人Jλ基因区段共同位于一个或多个Cλ基因区段的上游。在一些实施方案中，对人Jλ基因区段和Cλ基因区段进行排列以致人Jλ基因区段和Cλ基因区段中的一些被排列成一个或多个Jλ-Cλ簇，而其他Jλ基因区段共同位于一个或多个Cλ基因区段的上游。在一些实施方案中，人Vλ基因区段和人Jλ基因区段可操作地连接于人Cλ基因区段，以致啮齿动物产生包含源于人Vλ基因区段和人Jλ基因区段的轻链可变结构域和源于Cλ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。在某些实施方案中，基因座位于内源性啮齿动物免疫球蛋白λ链基因座处。在一些实施方案中，包括人λ链的人抗体在向所述啮齿动物施用时引发降低的免疫应答。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰新生儿Fc受体(FcRn)基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)。在某一实施方案中，FcRn基因座包含编码FcRn多肽的核酸序列，所述FcRn多肽包含人细胞外结构域、啮齿动物或人跨膜结构域和啮齿动物或人细胞质结构域。在某些实施方案中，基因座位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。在一些实施方案中，啮齿动物还在它们的基因组中包含β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述β-2-微球蛋白基因座包含编码人β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码人β2M多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰Fcε受体1α(FcεR1α)基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)，所述经遗传修饰Fcε受体1α基因座包含编码FcεR1α多肽的核酸序列，所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、啮齿动物或人跨膜结构域和啮齿动物或人细胞质结构域。在一些实施方案中，编码FcεR1α多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰Fcγ受体1a(FcγR1a)α链基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)，所述经遗传修饰Fcγ受体1aα链基因座包含编码FcγR1aα链多肽的核酸序列，所述多肽包含人细胞外结构域、啮齿动物或人跨膜结构域和啮齿动物或人细胞质结构域。在一些实施方案中，编码FcγR1aα链多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物FcγR1aα链基因座处。在一些实施方案中，本文提供的经遗传修饰啮齿动物还包含功能性FcRγ链。在某些实施方案中，功能性FcRγ链是啮齿动物FcRγ链(例如经遗传修饰啮齿动物内源性FcRγ链)。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰Fcγ受体2aα链(FcγR2a)基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)，所述经遗传修饰Fcγ受体2aα链基因座包含编码人FcγR2aα链多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码FcγR2aα链多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγRα链基因座处。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰Fcγ受体2b(FcγR2b)α链基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)，所述经遗传修饰Fcγ受体2bα链基因座包含编码人FcγR2bα链多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码FcγR2bα链多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγRα链基因座处。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰Fcγ受体3a(FcγR3a)α链基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)，所述经遗传修饰Fcγ受体3aα链基因座包含编码人FcγR3aα链多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码FcγR3aα链多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγRα链基因座处。在一些实施方案中，本文提供的经遗传修饰啮齿动物还包含功能性FcRγ链。在某些实施方案中，功能性FcRγ链是啮齿动物FcRγ链(例如经遗传修饰啮齿动物内源性FcRγ链)。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰Fcγ受体3b(FcγR3b)α链基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)，所述经遗传修饰Fcγ受体3bα链基因座包含编码人FcγR3bα链多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码FcγR3bα链多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγRα链基因座处。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含经遗传修饰Fcγ受体2c(FcγR2c)α链基因座的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)，所述经遗传修饰Fcγ受体2cα链基因座包含编码人FcγR2cα链多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码FcγR2cα链多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγRα链基因座处。在某些实施方案中，本文提供了用于使用所述啮齿动物来测试人抗体和Fc融合蛋白的动物模型和方法。
在某些方面，本文提供了在它们的基因组中包含本文提供的经遗传修饰基因座的组合的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)。举例来说，在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物包含一个或多个选自以下的经遗传修饰基因座：本文提供的经遗传修饰IgH基因座、本文提供的经遗传修饰Igκ基因座、本文提供的经遗传修饰Igλ基因座、本文提供的经遗传修饰FcRn基因座、本文提供的经遗传修饰β2M基因座、本文提供的经遗传修饰FcεR1α基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR1a基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2a基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2b基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2c基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR3a基因座和/或本文提供的经遗传修饰FcγR3b基因座。在某些实施方案中，本文提供的啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座和/或本文提供的经遗传修饰Igκ基因座。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座和/或本文提供的经遗传修饰Igλ基因座。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座、本文提供的经遗传修饰Igκ和/或Igλ基因座、本文提供的经遗传修饰FcRn基因座和本文提供的经遗传修饰β2M基因座。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座、本文提供的经遗传修饰FcRn基因座、本文提供的经遗传修饰β2M基因座、本文提供的经遗传修饰FcεR1α基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR1a基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2a基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2b基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2c基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR3a基因座和/或本文提供的经遗传修饰FcγR3b基因座。
在某些实施方案中，本文提供了测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质(例如人抗体或Fc融合蛋白)的方法，所述方法包括向本文提供的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)施用所述治疗性蛋白质。在一些实施方案中，所述方法还包括测量所施用治疗性蛋白质的一种或多种药物代谢动力学性质。在一些实施方案中，一种或多种药物代谢动力学参数包括但不限于血浆浓度对时间下面积(AUC)、体内回收率(IVR)、清除率(CL)、平均滞留时间(MRT)、药剂半衰期(t1/2)以及在稳定状态下的分布容积(Vss)。在一些实施方案中，所述方法还包括测量所施用治疗性蛋白质的治疗功效(例如所施用剂量的治疗性蛋白质在动物模型中使一种或多种疾病症状减轻或消除的能力)。在一些实施方案中，所述方法还包括测量所施用治疗性蛋白质的安全性(例如所施用剂量的治疗性蛋白质在动物模型中产生一种或多种不利作用所处的程度)。在某些实施方案中，所述方法还包括测量治疗性蛋白质在啮齿动物中诱导一种或多种Fc受体介导的应答所处的程度(例如治疗性蛋白质诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)所处的程度)。在一些实施方案中，所述方法还包括测量施用治疗性蛋白质在啮齿动物中诱导抗人Fc免疫应答所处的程度。在一些实施方案中，所述方法还包括评估治疗性蛋白质的给药方案的安全性和/或功效。
在某些实施方案中，本文提供了用于测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质(例如人抗体或Fc融合蛋白)的动物模型。在一些实施方案中，动物模型包括向本文提供的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)施用治疗性蛋白质。在一些实施方案中，动物模型还包括测量所施用治疗性蛋白质的一种或多种药物代谢动力学性质。在一些实施方案中，一种或多种药物代谢动力学参数包括但不限于血浆浓度对时间下面积(AUC)、体内回收率(IVR)、清除率(CL)、平均滞留时间(MRT)、药剂半衰期(t1/2)以及在稳定状态下的分布容积(Vss)。在一些实施方案中，动物模型还包括测量所施用治疗性蛋白质的治疗功效(例如所施用剂量的治疗性蛋白质在动物模型中使一种或多种疾病症状减轻或消除的能力)。在一些实施方案中，动物模型还包括测量所施用治疗性蛋白质的安全性(例如所施用剂量的治疗性蛋白质在动物模型中产生一种或多种不利作用所处的程度)。在某些实施方案中，动物模型还包括测量治疗性蛋白质在啮齿动物中诱导一种或多种Fc受体介导的应答所处的程度(例如治疗性蛋白质诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)所处的程度)。在一些实施方案中，动物模型还包括测量施用治疗性蛋白质在啮齿动物中诱导抗人Fc免疫应答所处的程度。在一些实施方案中，动物模型还包括评估治疗性蛋白质的给药方案的安全性和/或功效。
在一些实施方案中，当向本文提供的啮齿动物施用时，所施用治疗剂引发降低的免疫应答。在一些实施方案中，所施用人抗体或Fc融合蛋白具有与由本文提供的啮齿动物的经遗传修饰IgH基因座中的人CH编码的Fc结构域的同种型和/或同种异型匹配的同种型和/或同种异型。在一些实施方案中，与由啮齿动物的免疫球蛋白重链基因座中的人CH编码的Fc同种型匹配的人抗体和Fc融合蛋白在向所述啮齿动物施用时引发降低的免疫应答。举例来说，在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG1恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG1抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG2恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG2抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG3恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG3抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人可变结构域和人IgG4恒定结构域的抗体的啮齿动物施用人IgG4抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人κ轻链的抗体，例如表达具有人κ恒定结构域的抗体，或表达具有人κ可变结构域和恒定结构域的抗体的啮齿动物施用具有κ轻链的人抗体。在一些实施方案中，向本文提供的表达具有人λ轻链的抗体，例如表达具有人λ恒定结构域的抗体，或表达具有人λ可变结构域和恒定结构域的抗体的啮齿动物施用具有λ轻链的人抗体。在一些实施方案中，药剂是人IgG1抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG1CH1、铰链、CH2和CH3结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG4抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG4 CH1、铰链、CH2和CH3结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，治疗剂是具有Igκ轻链的人抗体，并且啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰Igκ基因座。在一些实施方案中，治疗剂是具有Igλ轻链的人抗体，并且啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰Igλ基因座。
在某些方面，本文提供了包含本文提供的经遗传修饰基因座中的一者或多者的啮齿动物细胞(例如ES细胞、免疫细胞、内皮细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞、树突细胞、朗格汉斯细胞(Langerhans cell)、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞)。举例来说，在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物细胞(例如啮齿动物ES细胞)包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座和/或本文提供的经遗传修饰Igκ基因座。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物细胞(例如啮齿动物ES细胞)包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座和/或本文提供的经遗传修饰Igλ基因座。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物细胞(例如啮齿动物ES细胞)包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座、本文提供的经遗传修饰Igκ和/或Igλ基因座、本文提供的经遗传修饰FcRn基因座和本文提供的经遗传修饰β2M基因座。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物细胞(例如啮齿动物ES细胞)包含本文提供的经遗传修饰IgH基因座、本文提供的经遗传修饰FcRn基因座、本文提供的经遗传修饰β2M基因座、本文提供的经遗传修饰FcεR1α基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR1a基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2a基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2b基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR2c基因座、本文提供的经遗传修饰FcγR3a基因座和/或本文提供的经遗传修饰FcγR3b基因座。
在一些实施方案中，本文提供了制备本文提供的经遗传修饰啮齿动物(例如大鼠或小鼠)和啮齿动物ES细胞(例如大鼠或小鼠ES细胞)的方法。在某些实施方案中，所述方法包括对啮齿动物(例如大鼠或小鼠)或啮齿动物ES细胞(例如大鼠或小鼠ES细胞)的基因组进行遗传修饰以使它包含本文提供的经遗传修饰基因座中的一者或多者。
附图说明
图1A显示根据本文提供的某些示例性实施方案的示例性经修饰免疫球蛋白重链基因座的不按比例的示意性概述。如所显示，示例性小鼠重链基因座1按5′至3′顺序包含人可变区(包含人VH、人DH和人JH基因区段，为简单起见，未显示人VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org，Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458页(2001)，其以引用的方式并入本文)、小鼠内含子性增强子、小鼠Cμ基因区段、小鼠Cδ基因区段、小鼠Cγ3基因区段、小鼠Cγ1基因区段、小鼠Cγ2b基因区段、编码人IgG1细胞外结构域和小鼠IgG2a跨膜和细胞质结构域的杂合CH基因区段、小鼠Cε基因区段、小鼠Cα基因区段以及小鼠3′调控区。如所显示，示例性小鼠重链基因座2按5′至3′顺序包含人可变区(包含人VH、人DH和人JH基因区段，为简单起见，未显示人VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org，Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,AcademicPress,London,458页(2001)，其以引用的方式并入本文)、小鼠内含子性增强子、小鼠Cμ基因区段、小鼠Cδ基因区段、小鼠Cγ3基因区段、小鼠Cγ1基因区段、小鼠Cγ2b基因区段、人Cγ1基因区段(IgG1细胞外编码序列与跨膜/细胞质编码序列两者均是人的)、小鼠Cε基因区段、小鼠Cα基因区段以及小鼠3′调控区。如所显示，示例性小鼠重链基因座3按5′至3′顺序包含人可变区(包含人VH、人DH和人JH基因区段，为简单起见，未显示人VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org，Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458页(2001)，其以引用的方式并入本文)、小鼠内含子性增强子、小鼠Cμ基因区段、小鼠Cδ基因区段、小鼠Cγ3基因区段、编码人IgG4细胞外结构域和小鼠IgG1跨膜和细胞质结构域的杂合CH基因区段、小鼠Cγ2b基因区段、小鼠Cγ2a基因区段、小鼠Cε基因区段、小鼠Cα基因区段以及小鼠3′调控区。如所显示，示例性小鼠重链基因座4按5′至3′顺序包含人可变区(包含人VH、人DH和人JH基因区段，为简单起见，未显示人VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org，Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,AcademicPress,London,458页(2001)，其以引用的方式并入本文)、小鼠内含子性增强子、小鼠Cμ基因区段、小鼠Cδ基因区段、小鼠Cγ3基因区段、人Cγ4基因区段(IgG4细胞外编码序列与跨膜/细胞质结构域编码序列两者均是人的)、小鼠Cγ2b基因区段、小鼠Cγ2a基因区段、小鼠Cε基因区段、小鼠Cα基因区段以及小鼠3′调控区。如所显示，示例性小鼠重链基因座5按5′至3′顺序包含人可变区(包含人VH、人DH和人JH基因区段，为简单起见，未显示人VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org，Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458页(2001)，其以引用的方式并入本文)、人内含子性增强子、人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段、人Cγ1基因区段以及小鼠3′调控区。如所显示，示例性小鼠重链基因座6按5′至3′顺序包含人可变区(包含人VH、人DH和人JH基因区段，为简单起见，未显示人VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org，Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458页(2001)，其以引用的方式并入本文)、人内含子性增强子、人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段、人Cγ1基因区段、人Cγ2基因区段、人Cγ4基因区段以及小鼠3′调控区。如所显示，示例性小鼠重链基因座7按5′至3′顺序包含小鼠可变区(包含小鼠VH、小鼠DH和小鼠JH基因区段，为简单起见，未显示小鼠VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org)、小鼠内含子性增强子、人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段、人Cγ1基因区段以及小鼠3′调控区。如所显示，示例性小鼠重链基因座8按5′至3′顺序包含小鼠可变区(包含小鼠VH、小鼠DH和小鼠JH基因区段，为简单起见，未显示小鼠VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org)、小鼠内含子性增强子、人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段、人Cγ1基因区段、人Cγ2基因区段、人Cγ4基因区段以及小鼠3′调控区。尽管未显示，但在这些实施方案中的基因座包含功能性小鼠Adam6基因(例如Adam6a和/或Adam6b)。除非另外指示(例如对于lox位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图1B显示如实施例1.1中所述的用于创建图1A中描绘的示例性经修饰免疫球蛋白重链基因座5的示例性方法的不按比例的示意性概述。为简单起见，在每个示意图中都未显示人VH基因区段和小鼠Adam6基因。除非另外指示(例如对于lox位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图1C显示如实施例1.1中所述的用于创建图1A中描绘的示例性经修饰免疫球蛋白重链基因座6的示例性方法的不按比例的示意性概述。为简单起见，在每个示意图中都未显示人VH基因区段和小鼠Adam6基因。除非另外指示(例如对于lox位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图1D显示如实施例1.2中所述的用于创建图1A中描绘的示例性经修饰免疫球蛋白重链基因座7的示例性方法的不按比例的示意性概述。为简单起见，在每个示意图中都未显示小鼠VH基因区段。除非另外指示(例如对于lox位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图1E显示如实施例1.2中所述的用于创建图1A中描绘的示例性经修饰免疫球蛋白重链基因座8的示例性方法的不按比例的示意性概述。为简单起见，在每个示意图中都未显示小鼠VH基因区段。除非另外指示(例如对于lox位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图2A显示根据本文提供的某些示例性实施方案的示例性经修饰免疫球蛋白轻链基因座的不按比例的示意性概述。上部示例性示意图描绘包含人可变区、小鼠内含子性增强子、人Cκ恒定区基因区段以及小鼠3′增强子的Igκ基因座。底部示例性示意图描绘包含Vλ基因区段、人Jλ-Cλ串联对、人Jλ7和小鼠Cλ1基因区段、人增强子1、2和3、以及小鼠3′增强子的Igλ基因座。除非另外指示(例如对于loxp位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图2B显示如实施例1.3中所述的用于创建图2A中描绘的示例性经修饰免疫球蛋白κ链基因座的示例性方法的不按比例的示意性概述。除非另外指示(例如对于loxp位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图3A显示存在于hVs-hIgM-hIgD-hIgG3-hIgG1小鼠(基因座5)、
Figure BDA0004173473480000141
小鼠的血清中以及正常人血清中的小鼠IgG、小鼠IgM、人IgM、人IgG1和人IgG3的水平。
图3B显示hIgM相对于mIgM以及hIgD相对于mIgD的FACS图，所述FACS图用以显示hVs-hIgM-hIgD-hIgG3-hIgG1小鼠(基因座5)和
Figure BDA0004173473480000151
小鼠中的等位基因利用以及等位基因排斥的存在性。
图3C显示存在于所指示小鼠的血清中的小鼠IgG、小鼠IgM、人IgM、人IgG1和人IgG4的水平。
图3D显示在所指示小鼠中，在注射人IgG4抗体之后第0天及第34天时，小鼠抗人抗体的浓度。
图3E显示在所指示小鼠中在人IgG4抗体注射之后前34天期间，人IgG4抗体的浓度。
图4显示如实施例3中所述的用于创建示例性经修饰FcRn基因座的示例性方法的不按比例的示意性概述。除非另外指示(例如对于loxp位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图5显示如实施例3中所述的用于创建包含示例性经修饰FcRn和β2M基因座的小鼠的示例性方法的不按比例的示意性概述。除非另外指示(例如对于loxp位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图6显示相较于野生型小鼠，由包含示例性经修饰FcRn和β2M基因座的小鼠对人抗体的抗体清除(描绘为抗体浓度)。
图7显示如实施例4中所述的用于创建包含示例性经修饰FcγR1α(在图中显示为FCGR1)、FcγRIIIa、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIb、FcγRIIIb和重链基因座的小鼠的示例性方法的不按比例的示意性概述。空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图8A显示描绘携带人高亲和力FcγR和人低亲和力FcγR以及人重链恒定区的小鼠中对小鼠IgD相对于小鼠IgM、人IgD相对于人IgM的利用的FACS图。
图8B显示相较于野生型小鼠，存在于携带人高亲和力FcγR和人低亲和力FcγR以及人重链恒定区的小鼠的脾中的T细胞(mCD3阳性)和B细胞(mCD19阳性)的数目或百分比。
图8C显示相较于正常人血清，携带人高亲和力FcγR和人低亲和力FcγR以及人重链恒定区的小鼠中人IgM、人IgG1和人IgG3的血清浓度。
图9显示如实施例5中所述的用于创建包含示例性经修饰FcεR1α基因座的小鼠的示例性方法的不按比例的示意性概述。除非另外指示(例如对于loxp位点等)，否则空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
图10在左侧图版上显示证明人源化FcεR1α在包含本文公开的人源化FcεR1α基因座的示例性小鼠中的嗜碱性粒细胞的表面上表达的FACS图。在右侧图版上，该图显示相较于野生型小鼠，存在于包含本文公开的人源化FcεR1α基因座的小鼠的脾中的小鼠或人FcεR1α+嗜碱性粒细胞的百分比。
图11显示本文提供的示例性人源化FcεR1α基因座是功能性的。通过用人过敏原特异性IgE或作为阴性对照的IgG进行耳真皮内注射来使小鼠敏化。在1天之后，用在伊文思蓝染料中稀释的过敏原对小鼠进行IV激发。将耳中的伊文思蓝染料外渗测量为肥大细胞脱粒的读出数据。因为人IgE不结合小鼠FcεR1，所以包含人源化FcεR1α基因座的小鼠中的应答指示产生了功能性FcεR1α。
图12显示本文提供的示例性人源化FcεR1α基因座是功能性的。用IV注射人过敏原特异性IgE来使小鼠敏化。在1天之后，用IV注射过敏原来激发小鼠，并且在注射之后历经4小时时期监测温度变化。温度下降是全身性过敏症的读出数据。
图13显示如实施例6中所述的用于创建包含示例性人源化FcRn、β2M、FcεR1α、FcγR1α(在图中显示为FCGR1)、FcγRIIIa、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIb、FcγRIIIb、重链恒定区基因座和重链可变区基因座的小鼠的示例性方法的不按比例的示意性概述。为简单起见，在基因座F和F’中，仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V、D和J基因区段的完全谱系，参见imgt.org，Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458页(2001)，其以引用的方式并入本文。空心形状和双线表示人序列，而实心形状和单线表示小鼠序列。
具体实施方式
概要
本文提供了与在经遗传修饰啮齿动物中体内测试包含人Fc的治疗剂(例如测试所述治疗剂在经遗传修饰啮齿动物中的药物代谢动力学和/或药物效应动力学性质以及给药方案)相关的方法和组合物。在一些实施方案中，经遗传修饰啮齿动物表达包含人Fc(例如人IgG1Fc、人IgG2 Fc、人IgG3 Fc、人IgG4 Fc)或人轻链恒定区的抗体。在一些实施方案中，啮齿动物表达完全人抗体(即具有人重链和人轻(γ或κ)链的抗体)。在某些实施方案中，经遗传修饰啮齿动物包含一种或多种具有人细胞外结构域的Fc受体(例如新生儿Fc受体(FcRn)、β-2-微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受体1α(FcεR1α)、Fcγ受体1α(FcγR1a)、Fcγ受体2a(FcγR2a)、Fcγ受体2b(FcγR2b)、Fcγ受体3a(FcγR3a)、Fcγ受体3b(FcγR3b)、Fcγ受体2c(FcγR2c))。所述受体的跨膜和细胞质结构域可为人或非人(例如啮齿动物)的。
包含人Fc的治疗剂诸如治疗性人抗体和人Fc融合蛋白通常在它们向人施用之前在非人物种中加以测试。尽管所述药剂经常在非人灵长类动物或其他相对大型哺乳动物中加以测试，但所述测试是昂贵的，并且对药物开发者造成重大经济负担。此外，非人灵长类动物和其他相对大型哺乳动物经常不可经受遗传修饰，此使得在所述生物体的情况下可用的疾病模型受到限制。
相比之下，归因于啮齿动物物种(例如大鼠和小鼠)的小体型、充分表征的生理学以及可经受遗传修饰，所以它们是便于测试治疗性抗体和Fc融合蛋白的动物模型。不幸的是，相较于当向人施用时，包含人Fc区的药剂在向现有技术啮齿动物施用时经常展现极其不同的药物代谢动力学和药物效应动力学性质。举例来说，当向常规啮齿动物施用具有人Fc区的治疗剂时，Fc区中的人序列经常被啮齿动物(例如大鼠或小鼠)免疫系统鉴定为是外来的。因此，啮齿动物可发动针对所施用治疗剂的免疫应答(被称为小鼠抗人应答或MAHA)，此影响了所施用药剂的药物代谢动力学和药物效应动力学性质。此外，相比于治疗剂的人Fc区在患者中与人Fc受体的相互作用，它们在啮齿动物中可能以不同方式与啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Fc受体相互作用，此也可影响所施用药剂的药物代谢动力学和药物效应动力学性质。因此，常规啮齿动物(例如大鼠或小鼠)模型经常是人对包含人Fc的治疗剂的治疗应答的不良预测者。因此，具有人免疫球蛋白基因座区域(例如参见图1和图2中的基因座)的小鼠有助于使MAHA应答降低或消除。
具有可特异性结合药物的分子对于研究和诊断目的来说是极其有用的。当药物是人单克隆抗体时，创建具有小鼠可变序列和人恒定序列(例如图1A中的小鼠基因座8)的小鼠提供了一种用于产生抗药物抗体的改进方法。通过用人抗体注射小鼠产生的任何MAHA应答都将针对抗体的可变区。这消除了针对抗体的恒定区的背景应答，并且使得产生药物特异性抗体更加高效。
本文提供了用于开发、筛选和测试供治疗使用的人抗体和Fc融合蛋白的体内系统。在某些实施方案中，本文提供了在施用包含人Fc的治疗剂之后具有降低的啮齿动物抗人免疫应答的经遗传修饰啮齿动物。如本文所证明，这可通过使用已被遗传修饰以致它们表达与存在于所施用抗体或Fc融合蛋白中的Fc匹配的人Fc的啮齿动物来实现。所述小鼠可例如通过将编码人免疫球蛋白重链恒定区的核酸序列完全地或部分地(例如IgG CH1-H-CH2-CH3)插入在编码内源性非人免疫球蛋白重链恒定区基因区段的相应部分的序列的位置中来制备。所述动物将人Fc识别为“自身”蛋白质，因此产生针对所施用含人Fc治疗剂的免疫应答的可能性较小。
此外，在一些实施方案中，本文提供了表达能够以类似于由人患者表达的Fc受体的方式与人Fc相互作用的Fc受体的经遗传修饰啮齿动物(例如小鼠或大鼠)。举例来说，在某些实施方案中，本文提供的经遗传修饰啮齿动物表达一种或多种具有至少人细胞外结构域的Fc受体(例如跨膜和细胞质结构域可为人或啮齿动物的)。因此，在某些实施方案中，本文提供的小鼠表达人或部分人FcRn、人或部分人β2M、人或部分人FcεR1α、人或部分人FcγR1a、人或部分人FcγR2a、人或部分人FcγR2b、人或部分人FcγR3a、人或部分人FcγR3b和/或人或部分人FcγR2c。因此，相较于具有完全非人Fc受体的啮齿动物，所述小鼠能够更准确模拟人患者的人Fc应答。
因此，本文提供的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)提供了一种用于通过评估在免疫系统的内环境内的效应功能来开发、选择和测试治疗性人抗体和Fc融合蛋白的新型体内系统，所述开发、选择和测试不仅基于所选抗体对抗原的特异性和/或亲和力，而且基于所选抗体的相关整体生物功能。以这种方式，可基于在整个分子水平上以相关生物应答(例如细胞应答)评估的治疗潜力而非仅基于单独评估的单个组分进行的预测来开发和选择人治疗性候选物。因此，本文提供的啮齿动物特别地提供了一种更适于在体内预测临床人治疗性抗体功能的系统。
定义
冠词“一个(种)(a/an)”在本文中用于指代冠词的一个或超过一个(即至少一个)语法对象。举例来说，“一个(种)要素”意指一个(种)要素或超过一个(种)要素。
术语“氨基酸”意图包括无论是天然的还是合成的包括氨基官能性与酸官能性两者并且能够被包括在天然存在的氨基酸的聚合物中的所有分子。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物和同类物；具有变异侧链的氨基酸类似物；以及任何前述各物中任一者的所有立体异构体。
如本文所用，术语“抗体”可指完整抗体与其抗原结合片段两者。完整抗体是包括通过二硫键相互连接的至少两个重(H)链和两个轻(L)链的糖蛋白。每个重链包括重链可变结构域和重链恒定结构域。每个轻链包括轻链可变结构域和轻链恒定结构域。重链可变结构域和轻链可变结构域可进一步再分成被称为互补决定区(CDR)的高变结构域，所述高变结构域与被称为框架区(FR)的更保守区域交替散布。每个重链可变结构域和轻链可变结构域由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端至羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变结构域含有与抗原相互作用的结合结构域。
如本文所用的术语抗体的“抗原结合片段”和“抗原结合部分”是指抗体的一种或多种保留结合抗原的能力的片段。涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”内的结合片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、二硫键连接的Fv、Fd、单链抗体、经分离CDRH3、以及保留完整抗体的可变结构域的至少一部分的其他抗体片段。这些抗体片段可使用常规重组和/或酶促技术获得，并且可以与完整抗体相同的方式针对抗原结合加以筛选。
如本文所用，术语“血浆浓度对时间曲线下面积”或“AUC”是指在施用之后治疗剂的消除速率和程度。在一些实施方案中，AUC历经指定时期，诸如12、18、24、36、48或72小时加以确定，或对于无穷而言，使用基于曲线斜率的外推法加以确定。除非本文另外规定，否则确定关于无穷的AUC(AUC无穷)。AUC还可以每剂为基础加以计算。如同其他PK参数中的许多一样，对AUC的确定可在单一动物中，或在计算其平均值的一群动物中进行。
如本文所用，术语“清除率”或“CL”是指身体使药物消除的能力的量度，并且表示为随时间推移而清除药物的血浆体积。
短语“源于”在关于“源于”未重排可变区和/或未重排可变区基因区段的重排可变区基因使用时是指能够将所述重排可变区基因的序列向回追溯至一组未重排可变区基因区段，所述一组未重排可变区基因区段被重排以形成表达可变结构域的基因(在适用时，虑及剪接差异和体细胞突变)。举例来说，已经受体细胞突变的重排可变区基因仍然源于未重排可变区基因区段。在一些实施方案中，当内源性基因座被通用轻链或重链基因座替换时，术语“源于”指示能够将序列的来源追溯至所述重排基因座，尽管序列可能已经受体细胞突变。
如本文所用，短语“内源性基因”或“内源性基因区段”是指在引入如本文所述的破坏、缺失、替换、改变或修饰之前见于亲本或参考生物体中的基因或基因区段。在一些实施方案中，参考生物体是野生型生物体。在一些实施方案中，参考生物体是经工程改造生物体。在一些实施方案中，参考生物体是实验室繁育生物体(无论是野生型的还是经工程改造的)。
术语“体内回收率”或“IVR”是指增量回收率(K值)，其是观察到的峰值活性减去给药前水平，接着除以剂量。IVR还可以百分比为基础加以计算。平均IVR可在动物群体中测定，或单个IVR可在单一动物中测定。
如本文所用，术语“基因座”是指染色体上含有一组相关遗传元件(例如基因、基因区段、调控元件)的位置。举例来说，未重排免疫球蛋白基因座可包括免疫球蛋白可变区基因区段、一个或多个免疫球蛋白恒定区基因和指导V(D)J重组和免疫球蛋白表达的相关调控元件(例如启动子、增强子、开关元件等)。基因座可为内源性的或非内源性的。术语“内源性基因座”是指染色体上天然发现特定遗传元件的位置。在一些实施方案中，内源性基因座具有见于自然界中的序列。在一些实施方案中，内源性基因座是野生型基因座。在一些实施方案中，内源性基因座是经工程改造基因座。举例来说，内源性小鼠免疫球蛋白重链基因座是指在野生型小鼠中在小鼠染色体12上的包括免疫球蛋白重链可变区基因区段和恒定区基因的位置，内源性小鼠免疫球蛋白λ轻链基因座是指在野生型小鼠中在小鼠染色体16上的包括免疫球蛋白λ轻链可变区基因区段和恒定区基因的位置，而内源性小鼠免疫球蛋白κ轻链基因座是指在野生型小鼠中在小鼠染色体6上的包括免疫球蛋白κ轻链可变区基因区段和恒定区基因的位置。
如果未重排可变区基因区段能够重排以形成与恒定区基因联合表达为抗原结合蛋白的多肽链的重排可变区基因，那么未重排可变区基因区段可被称为“可操作地连接”于邻接恒定区基因。
术语“多核苷酸”和“核酸”可互换使用。它们是指任何长度的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的核苷酸或其类似物的聚合形式。多核苷酸可具有任何三维结构，并且可执行任何功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码或非编码区、由连锁分析确定的基因座(loci/locus)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA、核糖体RNA、核酶、cDNA、重组多核苷酸、分支多核苷酸、质粒、载体、具有任何序列的经分离DNA、具有任何序列的经分离RNA、核酸探针和引物。多核苷酸可包含经修饰核苷酸诸如甲基化核苷酸和核苷酸类似物。如果存在，那么对核苷酸结构的修饰可在聚合物的组装之前或之后赋予。多核苷酸可加以进一步修饰，诸如通过与标记组分缀合。在本文提供的所有核酸序列中，U核苷酸可与T核苷酸互换。
术语“未重排”包括免疫球蛋白可变区基因座或可变区基因区段的以下状态：其中V基因区段和J基因区段(对于重可变区，也包括D基因区段)被分开维持，但能够接合以形成包含V(D)J谱系的单一V、(D)、J的重排V(D)J基因(“可变区基因”)。
如本文所用，术语“在稳定状态下的分布容积”或“Vss”是指药物向其中进行分布的表观空间(容积)。更具体地，Vss代表动物的身体内的药物量除以在稳定状态下的血浆浓度。
如本文所用，术语“CH基因区段”(例如Cγ1基因区段、Cγ2a基因区段、Cγ2c基因区段、Cμ基因区段、Cγ2b基因区段、Cγ3基因区段、Cδ基因区段、Cε基因区段、Cα基因区段等)是指编码免疫球蛋白重链恒定区的DNA序列区段，并且可与CH基因(例如Cγ基因、Cγ2a基因、Cγ2c基因、Cγ3基因、Cγ2b基因、Cμ基因、Cδ基因、Cε基因、Cα基因等)互换使用。举例来说，Cγ1基因区段或Cγ1基因是指编码IgG1恒定区的DNA序列区段。术语“CH基因区段基因座”是指染色体上天然发现CH基因区段或CH基因的位置。
经遗传修饰基因座
在某些方面，本文提供了可用于在经遗传修饰啮齿动物中体内测试包含人Fc的治疗剂(例如测试这种治疗剂在经遗传修饰啮齿动物中的药物代谢动力学和/或药物效应动力学性质)的经遗传修饰啮齿动物(例如小鼠或大鼠)。在一些实施方案中，经遗传修饰啮齿动物包含编码包含人Fc(例如人IgG1 Fc、人IgG4 Fc)的抗体重链的经遗传修饰基因座。在一些实施方案中，啮齿动物包含编码完全或部分人轻链(例如编码γ轻链或κ轻链)的经遗传修饰基因座。在某些实施方案中，经遗传修饰啮齿动物包含一个或多个编码具有人细胞外结构域的Fc受体(例如新生儿Fc受体(FcRn)α链、β-2-微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受体1α(FcεR1α)α链、Fcγ受体1α(FcγR1a)α链、Fcγ受体2a(FcγR2a)α链、Fcγ受体2b(FcγR2b)α链、Fcγ受体3a(FcγR3a)α-链、Fcγ受体3b(FcγR3b)α链、Fcγ受体2c(FcγR2c)α链)的基因座。在某些实施方案中，由所述基因座编码的跨膜和细胞质结构域可为人或非人(例如啮齿动物)的。
人源化免疫球蛋白重链基因座
在某些方面，本文提供了包含经遗传修饰免疫球蛋白(Ig)重链基因座的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)。所述基因座通常包含可变区和恒定区。可变区包括Ig重链可变区基因区段(例如至少VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段)。恒定区基因座包括一个或多个Ig重链恒定区基因区段(CH)。在某些实施方案中，免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于免疫球蛋白重链恒定区，以致啮齿动物产生包含源于VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段的可变结构域和源于CH基因区段的重链恒定结构域的抗体。
在一些实施方案中，可变区将是未重排可变区，并且将含有未重排Ig可变区基因区段。在一些实施方案中，可变区将是重排可变区，并且因此将含有重排可变区基因。在某些实施方案中，Ig可变区基因区段是人可变区基因区段。在某些实施方案中，Ig可变区基因区段是啮齿动物(例如大鼠或小鼠)可变区基因区段(例如大鼠或小鼠可变区基因区段)。因此，在某些实施方案中，Ig重链可变区基因座将含有人Ig可变区基因区段。本领域中已描述包含人可变区基因区段的示例性可变区基因座。举例来说，所述基因座描述于美国专利号5,770,429、5,814,318、6,114,598、6,998,514、8,232,449、8,502,018和8,697,940(所述美国专利中的每一者据此以引用的方式并入)中，以及美国专利公布号2008/0098490、2012/0167237、2013/0145484、2013/0326647、2014/013275和2014/093908(所述美国专利公布中的每一者据此以引用的方式并入)中。
在某些实施方案中，Ig重链可变区基因座含有未重排人Ig重链可变区基因区段。在一些实施方案中，未重排人Ig可变区基因区段包含一个或多个人VH区段、一个或多个人DH区段和一个或多个人JH区段。在一些实施方案中，未重排人Ig可变区基因区段包含至少3个VH基因区段、至少18个VH基因区段、至少20个VH基因区段、至少30个VH基因区段、至少40个VH基因区段、至少50个VH基因区段、至少60个VH基因区段、至少70个VH基因区段或至少80个VH基因区段。在一些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含见于在自然界中出现的人IgH基因座的人VH3-74基因区段与人VH6-1基因区段之间(包括两端)的全部或大致上全部功能性人VH基因区段。在某些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含至少人VH基因区段VH3-74、VH3-73、VH3-72、VH2-70、VH1-69、VH3-66、VH3-64、VH4-61、VH4-59、VH1-58、VH3-53、VH5-51、VH3-49、VH3-48、VH1-46、VH1-45、VH3-43、VH4-39、VH4-34、VH3-33、VH4-31、VH3-30、VH4-28、VH2-26、VH1-24、VH3-23、VH3-21、VH3-20、VH1-18、VH3-15、VH3-13、VH3-11、VH3-9、VH1-8、VH3-7、VH2-5、VH7-4-1、VH4-4、VH1-3、VH1-2和VH6-1。在一些实施方案中，本文提供的非人动物具有特征在于具有单一多态性人VH基因区段、多个DH基因区段和多个JH基因区段的限定免疫球蛋白重链基因座(例如如美国专利公布号2013/0096287中所述，所述美国专利公布据此以引用的方式并入)。在一些实施方案中，VH基因区段是VH1-2或VH1-69。在一些实施方案中，本文提供的非人动物具有重排重链可变区(通用重链可变区或共同重链编码序列，例如如美国专利公布号20140245468以及美国专利号：9,204,624和9,930,871中所述，所述专利中的每一者据此以引用的方式整体并入本文)。在一些实施方案中，本文提供的非人动物包含人未重排免疫球蛋白轻链例如κ基因区段可操作地连接于在免疫球蛋白重链基因座处的重链恒定区基因(例如美国专利号9,516,868，其以引用的方式整体并入本文)。
在其他实施方案中，非人生物体可在它的种系和/或基因组中包含重链免疫球蛋白基因座，所述重链免疫球蛋白基因座包括被设计来将pH依赖性结合性质引入在所述非人生物体中产生的抗体中的组氨酸密码子插入和/或替换。在所述实施方案中的一些中，在编码CDR3的核酸序列中插入和/或替换组氨酸密码子。各种所述重免疫球蛋白基因座提供于以引用的方式并入本文的美国专利号9,301,510、9,334,334、美国专利申请公布号2013/0247236、20140013456中。
在一些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含5、10、15、20、25个或更多个(例如26、27个等)人DH基因区段。在某些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含见于在自然界中出现的人IgH基因座的人DH1-1基因区段与人DH7-27基因区段之间(包括两端)的全部或大致上全部的功能性人DH基因区段中。在某些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含至少人DH基因区段DH1-1、DH2-2、DH3-3、DH4-4、DH5-5、DH6-6、DH1-7、DH2-8、DH3-9、DH3-10、DH5-12、DH6-13、DH2-15、DH3-16、DH4-17、DH6-19、DH1-20、DH2-21、DH3-22、DH6-25、DH1-26和DH7-27。在一些实施方案中，未重排人Ig基因区段包括全部人DH基因区段。
在一些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含1、2、3、4、5、6个或更多个功能性人JH基因区段。在某些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含见于在自然界中出现的人IgH基因座的人JH1基因区段与人JH6基因区段之间(包括两端)的全部或大致上全部的功能性人JH基因区段。在某些实施方案中，经工程改造IgH基因座(或等位基因)包含至少人JH基因区段JH1、JH2、JH3、JH4、JH5和JH6。在一些实施方案中，未重排人Ig基因区段包括全部人JH基因区段。
在一些实施方案中，如本文所述的经工程改造IgH基因座不含有内源性Adam6基因。在一些实施方案中，在与在相同物种的野生型非人动物的种系基因组中所见相同的种系基因组位置中，如本文所述的经工程改造IgH基因座不含有内源性Adam6基因(或Adam6编码序列)。在一些实施方案中，如本文所述的经工程改造IgH基因座不含有人Adam6假基因。在一些实施方案中，如本文所述的经工程改造IgH基因座包含至少一个编码一种或多种非人(例如啮齿动物)Adam6多肽的核苷酸序列的插入。所述插入可在如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的外部(例如在最5’VH基因区段的上游)，在经工程改造IgH基因座内，或在非人动物、细胞或组织的种系基因组中的其他地方(例如随机引入非人Adam6编码序列)。
在一些实施方案中，经工程改造内源性免疫球蛋白重链基因座缺乏功能性内源性啮齿动物Adam6基因。在一些实施方案中，啮齿动物的包含经工程改造重链基因座的种系基因组包括一个或多个编码一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。在一些实施方案中，一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段被表达(例如在雄性生殖系统的细胞例如睾丸细胞中)。
在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列包括在与经工程改造内源性免疫球蛋白重链基因座相同的染色体上。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列包括在经工程改造内源性免疫球蛋白重链基因座中。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列在第一人VH基因区段与第二人VH基因区段之间。在一些实施方案中，第一人VH基因区段是VH1-2，并且第二人VH基因区段是VH6-1。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列代替人Adam6假基因。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列替换人Adam6假基因。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种啮齿动物ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列在人VH基因区段与人DH基因区段之间。
包含Ig重链基因区段的示例性Ig可变区例如提供于Macdonald等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 111:5147-52以及补充信息中，所述文献以及补充信息据此以引用的方式并入。所述小鼠例如描述于以引用的方式并入本文的美国专利号8,642,835和8,697,940中。
在一些实施方案中，包含未重排人Ig重链可变区基因区段的Ig重链可变基因基因座还包括人Ig重链可变区基因间序列。在一些实施方案中，Ig重链可变基因基因座包括非人(例如啮齿动物、大鼠、小鼠)Ig重链可变区基因间序列。在一些实施方案中，IgH基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。在一些实施方案中，IgH基因座包含IgM增强子(Eμ)。在一些实施方案中，IgM增强子是非人Eμ(例如啮齿动物Eμ，诸如小鼠或大鼠Eμ)。
在一些实施方案中，Ig重链可变区是包含Ig重链可变区基因的重排可变区(通用重链可变区)。在一些实施方案中，重排Ig重链可变区基因是人重排Ig重链可变区基因。示例性重排Ig重链可变区提供于美国专利公布号2014/0245468中，所述美国专利公布据此以引用的方式并入。
在某些实施方案中，免疫球蛋白恒定区包含编码IgG恒定结构域的CH基因区段，所述IgG恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域。在一些实施方案中，IgG跨膜结构域是啮齿动物IgG跨膜结构域(例如小鼠或大鼠跨膜结构域)。在某些实施方案中，跨膜结构域是人IgG跨膜结构域。在一些实施方案中，IgG细胞质结构域是啮齿动物IgG细胞质结构域(例如小鼠或大鼠细胞质结构域)。在一些实施方案中，IgG细胞质结构域是人IgG细胞质结构域。在一些实施方案中，IgG连接区是啮齿动物IgG连接区(例如小鼠或大鼠连接结构域)。在某些实施方案中，IgG连接区是人IgG连接区。
在某些实施方案中，人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域和人CH3结构域是IgG1结构域。在一些实施方案中，这种IgG1结构域由选自IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04和IGHG1*05的等位基因编码。
在某些实施方案中，人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域和人CH3结构域是IgG2结构域。在一些实施方案中，这种IgG2结构域由选自IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05和IGHG2*06的等位基因编码。
在某些实施方案中，人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域和人CH3结构域是IgG3结构域。在一些实施方案中，这种IgG3结构域由选自IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18和IGHG3*19的等位基因编码。
在某些实施方案中，人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域和人CH3结构域是IgG4结构域。在一些实施方案中，这种IgG4结构域由选自IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03和IGHG4*04的等位基因编码。
在一些实施方案中，CH基因区段编码变异人免疫球蛋白重链恒定区序列(即相对于适当参考人免疫球蛋白重链恒定区序列，包括一个或多个添加、缺失和/或取代的人免疫球蛋白重链恒定区序列)，所述变异人免疫球蛋白重链恒定区序列的特征在于相对于参考人免疫球蛋白重链恒定区，效应功能和/或对FcR的亲和力得以增强或减弱。
在一些实施方案中，CH基因区段编码特征在于对活化性和/或抑制性受体的亲和力得以改变的人免疫球蛋白重链恒定区。在一些实施方案中，CH基因区段编码特征在于例如相较于中性pH，在酸性pH下，与FcRn受体的结合得以增强或减弱的人免疫球蛋白重链恒定区。在一些实施方案中，CH基因区段完全地或部分地编码人免疫球蛋白重链恒定区，编码具有一个或多个氨基酸修饰的人免疫球蛋白重链恒定区。示例性氨基酸修饰包括但不限于在位置297处的取代(例如N297A)、在位置250处的取代(例如250E或250Q)、在位置252处的取代(例如252L、252Y、252F、252W或252T)、在位置254处的取代(例如254S或254T)、在位置256处的取代(例如256S、256R、256Q、256E、256D或256T)、在位置307处的取代(例如307P或307A)、在位置308处的取代(例如308F或308V)、在位置428处的取代(例如428L或428F)、在位置433处的取代(例如433H、433Lm、433R、433S、433P、433Q或433K)、在位置434处的取代(例如434A、434W、434H、434F或434Y)以及它们的组合。在一些实施方案中，CH基因区段编码具有一对或多对或一组或多组选自由以下组成的组的氨基酸修饰的人免疫球蛋白重链恒定区：250Q和248L(例如T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如M428L和N434S)；257I和311I(例如P257I和Q311I)；257I和434H(例如P257I和N434H)；376V和434H(例如D376V和N434H)；307A、380A和434A(例如T307A、E380A和N434A)；以及433K和434F(例如H433K和N434F)。
在一些实施方案中，CH基因区段编码包括源于超过一种人免疫球蛋白同种型(或在超过一种人免疫球蛋白同种型中出现)的区段或部分的嵌合免疫球蛋白重链恒定结构域。举例来说，这种嵌合CH区可包含源于人IgG1、人IgG2或人IgG4分子的CH2结构域与源于人IgG1、人IgG2或人IgG4分子的CH3结构域的组合。在某些实施方案中，嵌合CH区还包含嵌合铰链区。举例来说，嵌合铰链可包含源于人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“上铰链”氨基酸序列(根据EU编号，从位置216至227的氨基酸残基)与源于人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“下铰链”序列(根据EU编号，从位置228至236的氨基酸残基)的组合。在某些实施方案中，嵌合铰链区包含源于人IgG1或人IgG4上铰链的氨基酸残基和源于人IgG2下铰链的氨基酸残基。
在某些实施方案中，经修饰CH基因区段位于内源性CH基因区段基因座处。在某些实施方案中，经修饰CH基因区段位于内源性Cγ1基因区段基因座、内源性Cγ2a基因区段基因座、内源性Cγ2b基因区段基因座、内源性Cγ2c基因区段基因座或内源性Cγ3基因区段基因座处。
在啮齿动物之间，内源性免疫球蛋白重链恒定区基因结构可变化。举例来说，在内源性免疫球蛋白重链基因座处，挪威大鼠(Norwegian rat)不具有Cγ3基因区段，然而小鼠品系通常具有。即使对于相同物种，免疫球蛋白重链恒定区基因结构也可在品系之间变化。举例来说，尽管一些小鼠品系在内源性免疫球蛋白重链基因座处具有Cγ2a基因区段，但其他小鼠品系(例如具有Igh1-b等位基因的小鼠品系)代之以具有Cγ2c基因区段，并且一些小鼠品系可具有Cγ2a基因区段与Cγ2c基因区段两者。因此，本文附图、实施例和/或描述中公开的啮齿动物Cγ1、Cγ2a、Cγ2b和Cγ3基因区段是示例性啮齿动物CH基因区段，并且本领域技术人员将了解，特定恒定区基因结构将因啮齿动物品系而变化。因此，举例来说，本领域技术人员将了解，本公开涵盖包含代替或外加于任何所公开啮齿动物Cγ2a基因区段的啮齿动物Cγ2c基因区段的啮齿动物。
在一些实施方案中，经修饰CH基因区段是人Cγ1基因区段(或至少是所述人Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分)，并且它位于内源性Cγ2a基因区段基因座处。在一些实施方案中，人Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分可操作地连接于内源性啮齿动物Cγ2a基因区段的编码IgG2a跨膜和/或细胞质结构域的部分。
在一些实施方案中，经修饰CH基因区段是人Cγ1基因区段(或至少是所述人Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分)，并且它位于内源性Cγ2c基因区段基因座处。在一些实施方案中，人Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分可操作地连接于内源性啮齿动物Cγ2c基因区段的编码IgG2c跨膜和/或细胞质结构域的部分。
在一些实施方案中，经修饰CH基因区段是人Cγ4基因区段(或至少是所述人Cγ4基因区段的编码IgG4恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分)，并且它位于内源性Cγ1基因区段基因座处。在一些实施方案中，人Cγ4基因区段的编码IgG4恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分可操作地连接于内源性啮齿动物Cγ1基因区段的编码IgG1跨膜和/或细胞质结构域的部分。
在某些实施方案中，经修饰CH基因区段替换内源性CH基因区段的全部或一部分。在某些实施方案中，经修饰CH基因区段替换内源性Cγ1基因区段、内源性Cγ2a基因区段、内源性Cγ2b基因区段、内源性Cγ2c基因区段或内源性Cγ3基因区段的全部或一部分。
在一些实施方案中，经修饰CH基因区段是人Cγ1基因区段(或至少是所述人Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分)，并且它替换内源性Cγ2a基因区段基因座的全部或一部分。在一些实施方案中，人Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分替换内源性啮齿动物Cγ2a基因区段的编码IgG2a恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分，以致人Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分可操作地连接于内源性啮齿动物Cγ2a基因区段的编码IgG2a跨膜和/或细胞质结构域的部分。
在一些实施方案中，经修饰CH基因区段是人Cγ4基因区段(或至少是所述人Cγ4基因区段的编码IgG4恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分)，并且它替换内源性Cγ1基因区段基因座的全部或一部分。在一些实施方案中，人Cγ4基因区段的编码IgG4恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分替换内源性啮齿动物Cγ1基因区段的编码IgG1恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分，以致人Cγ4基因区段的编码IgG4恒定结构域的CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域的部分可操作地连接于内源性啮齿动物Cγ1基因区段的编码IgG1跨膜和/或细胞质结构域的部分。
在某些实施方案中，Ig重链恒定区包括一个或多个啮齿动物(例如大鼠或小鼠)CH基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cμ基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cδ基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ2b基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如小鼠)Cγ3基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cε基因区段。在一些实施方案中，Ig恒定区包括啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cε基因区段。在一些实施方案中，一个或多个啮齿动物恒定区基因区段是内源性恒定区基因区段。在一些实施方案中，以上所述的经修饰CH基因区段是Ig重链恒定区中仅有的经修饰CH基因区段。
在一些实施方案中，以上所述的经修饰CH基因区段是Ig重链恒定区中多个经修饰CH基因区段中的一者(例如Ig重链恒定区中2、3、4、5、6、7或8个部分或完全人源化经修饰基因区段中的一者)。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cμ基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cδ基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cγ1基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cγ2基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cγ3基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cγ4基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cε基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包括人或部分人Cα基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段，人Cγ1基因区段和人Cγ3基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区还包含人Cα基因区段。在一些实施方案中，Ig重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在一些实施方案中，IgH基因座包含人或啮齿动物(例如大鼠或小鼠)调控元件。在一些实施方案中，调控元件是内源性调控元件。在某些实施方案中，IgH基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)或人内含子性增强子(Ei)。在一些实施方案中，IgH基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)或人3′调控区(3′RR)。
在一些实施方案中，经修饰免疫球蛋白重链基因座位于内源性免疫球蛋白重链基因座处。在一些实施方案中，免疫球蛋白重链基因座替换内源性免疫球蛋白重链基因座的全部或一部分。在某些实施方案中，经修饰IgH基因座位于定位在内源性基因座的外部的转基因上。在一些实施方案中，内源性IgH基因座失活(例如通过使内源性Ig重链基因座的全部或一部分缺失、重新定位和/或倒位)。
因此，在一些实施方案中，免疫球蛋白重链基因座的一个或多个免疫球蛋白重链恒定区(或其部分)未缺失(即是完整的)。在一些实施方案中，免疫球蛋白重链基因座的一个或多个CH基因区段被改变、破坏、缺失或替换，此尤其以如本文所述的免疫球蛋白重链恒定区序列(例如编码人IgG CH1-H-CH2-CH3多肽的序列)可操作地连接于非人免疫球蛋白重链IgG恒定区基因的一个或多个跨膜和细胞质编码序列(例如M1和/或M2编码序列)，并且在一些实施方案中，以免疫球蛋白重链恒定区序列(例如编码人IgE CH1-CH2-CH3-CH4多肽的序列)可操作地连接于IgE恒定区基因的一个或多个跨膜和细胞质编码序列来达成。在一些实施方案中，免疫球蛋白重链恒定区的全部大致上全部被异源性免疫球蛋白重链恒定区替换。在一些实施方案中，异源性免疫球蛋白重链恒定区序列可操作地连接于一种或多种IgG恒定区基因的跨膜和细胞质编码序列(例如M1和M2外显子)。在一些实施方案中，异源性免疫球蛋白重链恒定区序列可操作地连接于IgE恒定区基因的跨膜和细胞质编码序列(例如M1和M2外显子)。在一些实施方案中，异源性免疫球蛋白重链恒定区序列可操作地连接于IgA恒定区基因的跨膜和细胞质编码序列(例如一个或多个M外显子)。在一些实施方案中，在包括如本文所述的可操作地连接于一种或多种恒定区基因的跨膜和细胞质编码序列的异源性免疫球蛋白重链恒定区序列的免疫球蛋白重链恒定区中，一个或多个CH基因区段(例如Cμ、Cδ等)未缺失或替换。在一些实施方案中，异源性免疫球蛋白重链恒定区序列是人免疫球蛋白重链恒定区序列。在一些实施方案中，以一个或多个异源性免疫球蛋白重链恒定区序列加以改变、破坏、缺失、替换或工程改造的免疫球蛋白重链恒定区是鼠免疫球蛋白重链恒定区。在一些实施方案中，异源性免疫球蛋白重链恒定区序列插入免疫球蛋白重链恒定区的IgG恒定区基因(例如Cγ1、Cγ2a、Cγ2b,、Cγ2c或Cγ3)的一个拷贝(即等位基因)中，所述IgG恒定区基因具有两个拷贝，从而产生关于异源性免疫球蛋白重链恒定区序列是杂合的非人动物。在一些实施方案中，提供了就包括如本文所述的异源性免疫球蛋白重链恒定区序列的免疫球蛋白重链恒定区来说是纯合的非人动物。
在一些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含一个或多个IgG编码CH基因区段，所述基因区段各自包含可操作地连接于相同或不同IgG子类的非人跨膜和细胞质结构域编码序列(例如非人IgG M1-M2)的人细胞外结构域编码序列(例如人IgG CH1-H-CH2-CH3)。
在一些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含一个或多个如本文所述的经工程改造IgG编码CH基因区段，并且还包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ恒定区基因。
在一些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含一个或多个如本文所述的经工程改造IgG编码CH基因区段，并且还包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ和Cδ恒定区基因。
在各种实施方案中，包含如本文所述的人免疫球蛋白重链恒定区序列的经工程改造IgG编码CH基因区段是选自Cγ1、Cγ2a、Cγ2b、Cγ2c或Cγ3的IgG子类的经工程改造IgG编码CH基因区段。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因区段的M1和M2外显子的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因区段的转换区域的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因区段的M1和M2外显子的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因区段的转换区域的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段的M1和M2外显子的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG4CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段的转换区域的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因区段的M1和M2外显子的序列；以及经工程改造Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段的M1和M2外显子的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因区段的转换区域的序列；以及经工程改造Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段的转换区域的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因区段的M1和M2外显子的序列；以及经工程改造Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段的M1和M2外显子的序列。
在某些实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含经工程改造Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因区段的转换区域的序列；以及经工程改造Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于非人(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段的转换区域的序列。
在各种实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含一个或多个其他修饰，包括致使除一种或多种包含编码人IgG CH1-H-CH2-CH3或人IgG CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列的IgG恒定区(例如IgG1和/或IgG2a)以外的恒定区基因(即同种型)是非功能性的，例如通过完全地或部分地缺失、完全地或部分地改变、完全地或部分地破坏、完全地或部分地替换一种或多种编码IgD、IgE、IgA和自身不含有编码如本文所述的人IgGCH1-H-CH2-CH3或人IgG CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列的IgG(例如IgG2b和/或IgG3)的免疫球蛋白恒定区基因实现。还提供了经工程改造非人胚胎、细胞以及用于制备所述非人动物、胚胎和细胞的靶向载体。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ基因区段；Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ1基因区段的M1-M2外显子的序列；以及Cδ、Cγ2a、Cγ2c、Cγ2b、Cγ3、Cε和Cα基因区段的缺失。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ基因区段；Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ1基因区段的转换区域的序列；以及Cδ、Cγ2a、Cγ2c、Cγ2b、Cγ3、Cε和Cα基因区段的缺失。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ基因区段；Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ2a基因区段的M1-M2外显子的序列；以及Cδ、Cγ1、Cγ2b、Cγ2c、Cγ3、Cε和Cα基因区段的缺失。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ基因区段；Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ2a基因区段的转换区域的序列；以及Cδ、Cγ1、Cγ2b、Cγ2c、Cγ3、Cε和Cα基因区段的缺失。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ基因区段；Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ2c基因区段的M1-M2外显子的序列；以及Cδ、Cγ1、Cγ2a、Cγ2b、Cγ3、Cε和Cα基因区段的缺失。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型(例如未修饰非人诸如大鼠或小鼠)Cμ基因区段；Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ2c基因区段的转换区域的序列；以及Cδ、Cγ1、Cγ2a、Cγ2b、Cγ3、Cε和Cα基因区段的缺失。
在各种实施方案中，如本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含一个或多个其他修饰，包括通过以下方式来对除一种或多种包含编码人IgG CH1-H-CH2-CH3或人IgG CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列的IgG恒定区(例如IgG1和/或IgG2a)以外的恒定区基因(即同种型)进行工程改造以使其被改变、修饰、替换、工程改造等：将如本文所述的人免疫球蛋白重链恒定区序列插入IgD、IgE、IgA和自身不含有编码如本文所述的人IgG CH1-H-CH2-CH3或人IgG CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列的IgG(例如IgG2b和/或IgG3)的一种或多种免疫球蛋白恒定区基因中。
还提供了经工程改造非人胚胎、细胞以及用于制备包含具有本文所述的经工程改造恒定区的免疫球蛋白基因座的非人动物、胚胎和细胞的靶向载体。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型Cμ基因区段；野生型Cδ基因区段；Cγ3基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG3CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ3基因区段的M1-M2外显子的序列；Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ1基因区段的M1-M2外显子的序列；Cγ2b基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG2 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ2b基因区段的M1-M2外显子的序列；Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ2a基因区段的M1-M2外显子的序列(和/或Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cγ2c基因区段的M1-M2外显子的序列)；Cε基因区段，所述基因区段包含在CH1-CH2-CH3-CH4外显子的位置中编码人IgECH1-CH2-CH3-CH4，并且可操作地连接于所述Cε基因区段的M1-M2外显子的序列；以及Cα基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgA1或IgA2 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cα基因区段的一个或多个M外显子的序列。
在某些实施方案中，本文提供的经工程改造免疫球蛋白重链恒定区包含野生型Cμ基因区段；野生型Cδ基因区段；Cγ3基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG3 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ3基因区段的转换区域的序列；Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG4CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ1基因区段的转换区域的序列；Cγ2b基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG2CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ2b基因区段的转换区域的序列；Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ2a基因区段的转换区域的序列(和/或Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2，并且可操作地连接于所述Cγ2c基因区段的转换区域的序列)；Cε基因区段，所述基因区段包含在CH1-CH2-CH3-CH4外显子的位置中编码人IgE CH1-CH2-CH3-CH4，并且可操作地连接于所述Cε基因区段的M1-M2外显子的序列；以及Cα基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgA1或IgA2CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于所述Cα基因区段的一个或多个M外显子的序列。
在各种实施方案中，本文提供了图1中描绘的经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座以及包含所述基因座的经遗传修饰啮齿动物(例如大鼠或小鼠)、ES和其他细胞以及组织。因此，在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含人重链可变基因区段(人重链V、D和J基因区段)；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Ei增强子；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2b基因区段；嵌合Cγ2a基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因区段的M1-M2外显子的序列(例如以致编码人IgG1的细胞外结构域的外显子可操作地连接于编码啮齿动物例如大鼠或小鼠IgG2a的跨膜和细胞质结构域的外显子)(和/或嵌合Cγ2c基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因区段的M1-M2外显子的序列(例如以致编码人IgG1的细胞外结构域的外显子可操作地连接于编码啮齿动物例如大鼠或小鼠IgG2c的跨膜和细胞质结构域的外显子))；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cε和Cα基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座1。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含如本文以及美国专利号8,642,835和8,697,940中所述的功能性Adam6基因，所述美国专利中的每一者以引用的方式整体并入本文。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含人重链可变基因区段(人重链V、D和J基因区段)；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Ei增强子；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2b基因区段；人Cγ1基因区段，所述基因区段包含编码人IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列，以致IgG1细胞外编码序列与跨膜/细胞质编码序列两者均是人的；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cε和Cα基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座2。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含如本文以及美国专利号8,642,835和8,697,940中所述的功能性Adam6基因，所述美国专利中的每一者以引用的方式整体并入本文。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含人重链可变基因区段(人重链V、D和J基因区段)；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Ei增强子；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cμ、Cδ、Cγ3基因区段；嵌合Cγ1基因区段，所述基因区段包含在CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3，并且可操作地连接于啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因区段的M1-M2外显子的序列(例如以致编码人IgG4的细胞外结构域的外显子可操作地连接于编码啮齿动物例如大鼠或小鼠IgG1的跨膜和细胞质结构域的外显子)；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ2b、Cγ2a(和/或Cγ2c)、Cε、Cα基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座3。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含如此处以及美国专利号8,642,835和8,697,940中所述的功能性Adam6基因，所述美国专利中的每一者以引用的方式整体并入本文。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含人重链可变基因区段(人重链V、D和J基因区段)；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Ei增强子；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cμ、Cδ、Cγ3基因区段；人Cγ4基因区段，所述基因区段包含编码人IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列，以致IgG4细胞外编码序列与跨膜/细胞质编码序列两者均是人的；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cγ2b、Cγ2a(和/或Cγ2c)基因区段；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Cε和Cα基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座4。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含如此处以及美国专利号8,642,835和8,697,940中所述的功能性Adam6基因，所述美国专利中的每一者以引用的方式整体并入本文。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含人重链可变基因区段(人重链V、D和J基因区段)；人Ei增强子；人Cμ、Cδ、Cγ3和Cγ1基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座5。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含如此处以及美国专利号8,642,835和8,697,940中所述的功能性Adam6基因，所述美国专利中的每一者以引用的方式整体并入本文。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含人重链可变基因区段(人重链V、D和J基因区段)；人Ei增强子；人Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2和Cγ4基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座6。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含如此处以及美国专利号8,642,835和8,697,940中所述的功能性Adam6基因，所述美国专利中的每一者以引用的方式整体并入本文。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)重链可变基因区段(啮齿动物(例如大鼠或小鼠)重链V、D和J基因区段)；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Ei增强子；人Cμ、Cδ、Cγ3和Cγ1基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座7。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含功能性Adam6基因。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
在一个实施方案中，此处提供了一种经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座，所述经遗传工程改造重链免疫球蛋白基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)重链可变基因区段(啮齿动物(例如大鼠或小鼠)重链V、D和J基因区段)；啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Ei增强子；人Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2和Cγ4基因区段；以及啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’调控区，所述调控区包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3’增强子。一示例性经遗传修饰重链基因座在图1中提供为小鼠基因座8。在一些实施方案中，经遗传修饰基因座包含功能性Adam6基因。还提供了包含所述经遗传工程改造基因座的经遗传修饰非人动物、ES细胞和其他细胞以及组织。
本文还提供了用于产生经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法。在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法包括将包括编码免疫球蛋白重链恒定结构域多肽的人IgG1 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列的约1.6kb DNA插入在Cγ2a基因区段的CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中，以使所述人IgG1CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列可操作地连接于所述Cγ2a基因区段的M1和M2外显子。
在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法包括将包括编码免疫球蛋白重链恒定结构域多肽的人IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列的约6.8kb DNA插入在Cγ2a基因区段的CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中，以使所述人IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列可操作地连接于所述Cγ2a基因区段的转换区域。
本文还提供了用于产生经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法。在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法包括将包括编码免疫球蛋白重链恒定结构域多肽的人IgG1 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列的约1.6kb DNA插入在Cγ2c基因区段的CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中，以使所述人IgG1CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列可操作地连接于所述Cγ2c基因区段的M1和M2外显子。
在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法包括将包括编码免疫球蛋白重链恒定结构域多肽的人IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列的约6.8kb DNA插入在Cγ2c基因区段的CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中，以使所述人IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列可操作地连接于所述Cγ2c基因区段的转换区域。
在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法包括将包括编码免疫球蛋白重链恒定结构域多肽的人IgG4 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列的约1.5kb DNA插入在Cγ1基因区段的CH1-H-CH2-CH3外显子的位置中，以使所述人IgG4CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列可操作地连接于所述Cγ1基因区段的M1和M2外显子。
在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法包括将包括编码免疫球蛋白重链恒定结构域多肽的人IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列的约5.8kb DNA插入在Cγ1基因区段的CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外显子的位置中，以使所述人IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列可操作地连接于所述Cγ1基因区段的转换区域。
在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白重链基因座的方法包括插入包含人Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1序列的约130kb DNA。在其他实施方案中，所述方法还包括插入包含人Cγ2和Cγ4序列的额外约43kb DNA。
在以上所述的用于产生经工程改造免疫球蛋白重链基因座的各种方法中，DNA可引入包含内源性啮齿动物(例如大鼠或小鼠)重链可变基因区段的内源性啮齿动物(例如大鼠或小鼠)免疫球蛋白重链基因座，或包含人重链可变基因区段的免疫球蛋白重链基因座中。DNA可通过同源性重组或通过本领域中已知或本文所述的其他方法来引入。
在一些实施方案中，啮齿动物(例如大鼠或小鼠)就本文所述的经修饰免疫球蛋白重链基因座来说是杂合的。在某些实施方案中，啮齿动物(例如大鼠或小鼠)就本文所述的经修饰免疫球蛋白重链基因座来说是纯合的。
人源化免疫球蛋白κ基因座
在某些方面，本文提供了包含经遗传修饰Igκ链基因座的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)。所述基因座包含κ可变区和κ恒定区。κ可变区包括Igκ链可变区基因区段(即至少Vκ基因区段和Jκ基因区段)。恒定区包括Igκ链恒定区(Cκ)基因区段。在某些实施方案中，免疫球蛋白κ链可变区诸如人Igκ可变区可操作地连接于免疫球蛋白κ链恒定区，以致啮齿动物(例如大鼠或小鼠)产生包含源于人Vκ基因区段和人Jκ基因区段的轻链可变结构域和源于Cκ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。在一些实施方案中，Igκ可变区将是未重排Igκ可变区，并且因此将含有未重排Igκ可变区基因区段。在一些实施方案中，Igκ可变区将是重排Igκ可变区，并且因此将含有重排Igκ可变区基因。在某些实施方案中，Igκ可变区基因区段是人Igκ可变区基因区段。在某些实施方案中，Igκ可变区基因区段是啮齿动物Igκ可变区基因区段(例如大鼠或小鼠可变区基因区段)。在一些实施方案中，Igκ恒定区基因座包含部分地或完全地是人的Igκ恒定区基因区段。在一些实施方案中，本文所述的Igκ链基因座位于内源性Igκ链基因座处。
在某些实施方案中，Igκ可变区含有未重排人Igκ可变区基因区段。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含至少人Vκ基因区段，所述基因区段在自然界中出现的人Igκ轻链基因座的远端可变簇(或远端臂或远端重复)中出现。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含至少人Vκ基因区段，所述基因区段在自然界中出现的人Igκ轻链基因座的近端可变簇(或近端臂或近端重复)中出现。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含人Vκ基因区段，所述基因区段在自然界中出现的人Igκ轻链基因座的远端和近端可变簇中出现。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含见于在自然界中出现的人Igκ轻链基因座的人Vκ2-40(或Vκ3D-7)基因区段与人Vκ4-1基因区段之间(包括两端)的全部或大致上全部功能性人Vκ基因区段。
在一些实施方案中，未重排人免疫球蛋白可变区基因区段包含多个人Vκ区段和一个或多个人Jκ区段。在一些实施方案中，免疫球蛋白可变区基因区段包含四个功能性Vκ区段和所有人Jκ区段。在一些实施方案中，免疫球蛋白可变区基因区段包含16个功能性Vκ区段和所有人Jκ区段。在一些实施方案中，未重排人免疫球蛋白可变区基因区段包含人Vκ区段中的全部和所有人Jκ区段。
在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35个或更多个(例如36、37、38、39、40个等)人Vκ基因区段。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含人Vκ基因区段Vκ3D-7、Vκ1D-8、Vκ1D-43、Vκ3D-11、Vκ1D-12、Vκ1D-13、Vκ3D-15、Vκ1D-16、Vκ1D-17、Vκ3D-20、Vκ6D-21、Vκ2D-26、Vκ2D-28、Vκ2D-29、Vκ2D-30、Vκ1D-33、Vκ1D-39、Vκ2D-40、Vκ2-40、Vκ1-39、Vκ1-33、Vκ2-30、Vκ2-28、Vκ1-27、Vκ2-24、Vκ6-21、Vκ3-20、Vκ1-17、Vκ1-16、Vκ3-15、Vκ1-12、Vκ3-11、Vκ1-9、Vκ1-8、Vκ1-6、Vκ1-5、Vκ5-2和Vκ4-1。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含至少人Vκ基因区段Vκ3D-7、Vκ1D-8、Vκ1D-43、Vκ3D-11、Vκ1D-12、Vκ1D-13、Vκ3D-15、Vκ1D-16、Vκ1D-17、Vκ3D-20、Vκ6D-21、Vκ2D-26、Vκ2D-28、Vκ2D-29、Vκ2D-30、Vκ1D-33、Vκ1D-39和Vκ2D-40。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含至少人Vκ基因区段Vκ2-40、Vκ1-39、Vκ1-33、Vκ2-30、Vκ2-28、Vκ1-27、Vκ2-24、Vκ6-21、Vκ3-20、Vκ1-17、Vκ1-16、Vκ3-15、Vκ1-12、Vκ3-11、Vκ1-9、Vκ1-8、Vκ1-6、Vκ1-5、Vκ5-2和Vκ4-1。
在一些实施方案中，本文提供的非人动物具有特征在于具有至多两个人VL基因区段和多个JL基因区段的限定免疫球蛋白轻链基因座(例如如美国专利公布号2013/0198880中所述的双轻链小鼠或DLC，所述美国专利公布据此以引用的方式并入)。在一些实施方案中，VL基因区段是Vκ基因区段。在一些实施方案中，VL基因区段是Vλ基因区段。在一些实施方案中，Vκ基因区段是Vκ3-20和Vκ1-39。
在一些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含1、2、3、4、5个或更多个功能性人Jκ基因区段。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含见于在自然界中出现的人Igκ轻链基因座的人Jκ1基因区段与人Jκ5基因区段之间(包括两端)的全部或大致上全部功能性人Jκ基因区段。在某些实施方案中，经工程改造Igκ轻链基因座(或等位基因)包含至少人Jκ基因区段Jκ1、Jκ2、Jκ3、Jκ4和Jκ5。
在其他实施方案中，非人生物体可在它的种系和/或基因组中包含轻链免疫球蛋白基因座，所述轻链免疫球蛋白基因座包括被设计来将pH依赖性结合性质引入在所述非人生物体中产生的抗体中的组氨酸密码子插入和/或替换。在所述实施方案中的一些中，在编码CDR3的核酸序列中插入和/或替换组氨酸密码子。各种所述轻链免疫球蛋白基因座提供于以引用的方式并入本文的美国专利号9,301,510、9,334,334、美国专利申请公布号2013/0247236、20140013456中。
包含Igκ基因区段的示例性可变区例如提供于Macdonald等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 111:5147-52以及补充信息中，所述文献以及补充信息据此以引用的方式并入。在一些实施方案中，未重排人免疫球蛋白可变区基因区段包含人Jκ区段中的全部。
在一些实施方案中，含有未重排人Igκ可变区基因区段的Igκ可变基因基因座还包括人Igκ可变区基因间序列。在一些实施方案中，Igκ可变基因基因座包括非人(例如啮齿动物、大鼠、小鼠)Igκ可变区基因间序列。在一些实施方案中，Igκ基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在一些实施方案中，Igκ可变区基因座是包含Igκ可变区基因的重排可变区基因座(通用轻链可变区)。在一些实施方案中，重排Igκ可变区基因是人重排Igκ可变区基因。通用轻链可变区的使用有助于产生双特异性抗体。示例性重排Ig轻链可变区提供于美国专利公布号2013/0185821中，所述美国专利公布据此以引用的方式并入。
在一些实施方案中，Igκ链基因座包含人或啮齿动物(例如大鼠或小鼠)调控元件。在一些实施方案中，调控元件是内源性调控元件。在某些实施方案中，Igκ链基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)或人内含子性κ增强子(Eκi)。在一些实施方案中，IgH基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)或人3′κ增强子(Eκ3′)。
在一些实施方案中，经修饰免疫球蛋白κ链基因座位于内源性免疫球蛋白κ链基因座处。在一些实施方案中，免疫球蛋白κ链基因座替换内源性免疫球蛋白κ链基因座的全部或一部分。在某些实施方案中，经修饰Igκ链基因座位于定位在内源性基因座的外部的转基因上。在一些实施方案中，内源性Igκ链基因座失活(例如通过使内源性Igκ链基因座的全部或一部分缺失、重新定位和/或倒位)。
在一些实施方案中，用于产生本文所述的经工程改造免疫球蛋白κ轻链基因座的方法包括将包括编码免疫球蛋白κ轻链恒定结构域多肽的人Igκ恒定核苷酸序列的约0.5kbDNA插入在Igκ恒定区基因的Igκ恒定外显子的位置中，以使所述人Igκ恒定核苷酸序列可操作地连接于所述Igκ恒定区基因的增强子和/或调控区。
在一些实施方案中，啮齿动物(例如大鼠或小鼠)就本文所述的经修饰免疫球蛋白κ链基因座来说是杂合的。在某些实施方案中，啮齿动物(例如大鼠或小鼠)就本文所述的经修饰免疫球蛋白κ链基因座来说是纯合的。
人源化免疫球蛋白λ基因座
在某些方面，本文提供了包含经遗传修饰Igλ链基因座的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)。所述基因座包含Igλ链可变区基因区段(即至少Vλ基因区段和Jλ基因区段)。经修饰λ基因座还包括至少一个Igλ链恒定区(Cλ)基因区段。在某些实施方案中，Vλ基因区段和Jλ基因区段诸如人Vλ基因区段和人Jλ基因区段可操作地连接于Cλ，以致啮齿动物(例如大鼠或小鼠)产生包含源于人Vλ基因区段和人Jλ基因区段的轻链可变结构域和源于Cλ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。在一些实施方案中，Vλ基因区段和Jλ基因区段将是未重排Vλ和Jλ基因区段。在一些实施方案中，Vλ基因区段和Jλ基因区段将是重排Vλ和Jλ基因区段，并且因此将呈重排可变区基因的形式。在某些实施方案中，Igλ可变区基因区段是人可变区基因区段。在某些实施方案中，Igλ可变区基因区段是啮齿动物可变区基因区段(例如大鼠或小鼠可变区基因区段)。在一些实施方案中，Igλ恒定区基因座包含部分地或完全地是人的λ恒定区基因区段。在一些实施方案中，本文所述的Igλ链基因座位于内源性Igλ链基因座处。提供了包含Igλ基因区段的示例性可变区，例如美国专利公布号2012/0073004和2002/0088016以及美国专利申请号15/803,513(2017年11月3日提交；以US2018/0125043公布)，所述专利中的每一者据此以引用的方式并入。
在一些实施方案中，含有未重排人Igκ可变区基因区段的Igλ可变基因基因座还包括人Igλ可变区基因间序列。在一些实施方案中，Igλ可变基因基因座包括非人(例如啮齿动物、大鼠、小鼠)Igλ可变区基因间序列。在一些实施方案中，Igλ基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在一些实施方案中，人Igλ轻链基因座包含来自人Igλ轻链基因座的遗传物质。在一些实施方案中，如本文所述的人Igλ轻链基因座包含至少一个人Vλ基因区段、至少一个人Jλ基因区段、至少一个人Cλ基因区段，以及一种或多种为促进所述至少一个人Vλ基因区段与所述至少一个人Jλ基因区段重排以形成编码人Vλ结构域的功能性重排人Vλ-Jλ序列所必需的序列(例如一种或多种重组信号序列)。在许多实施方案中，人Igλ轻链序列包含多个人Vλ基因区段和一种或多种为促进所述人Vλ基因区段与至少一个人Jλ基因区段重排所必需的序列。在一些实施方案中，如本文所述的人Igλ轻链序列是人Igλ轻链基因座的基因组序列(例如从细菌人工染色体分离和/或克隆)，并且含有呈种系构型的多个人Vλ基因区段。在一些实施方案中，人Igλ轻链序列包含呈种系构型的人Vλ、Jλ和Cλ序列(即如同所述人Vλ、Jλ和Cλ序列在人细胞中的Igλ轻链基因座中所出现，换句话说，Jλ和Cλ序列以JλCλ簇形式出现)。在一些实施方案中，人Igλ轻链序列完全地或部分地编码Igλ轻链多肽，所述Igλ轻链多肽在免疫球蛋白特别是由人B细胞表达的免疫球蛋白中出现。还提供了非人动物、胚胎、细胞以及用于制备在相应非人Igλ轻链序列(例如内源性啮齿动物Igλ轻链基因座)的位置中含有所述人Igλ轻链序列的非人动物、非人胚胎和细胞的靶向构建体。
在一些实施方案中，人Igλ轻链序列插入在非人动物的种系基因组内的相应非人Igλ轻链序列的位置中。在一些实施方案中，人Igλ轻链序列插入在非人Igλ轻链序列(例如非人Igλ轻链恒定区序列)的上游。在一些实施方案中，人Igλ轻链序列插入在一个或多个非人Igλ轻链序列的中间，以使所述人Igλ轻链序列与非人Igλ轻链序列并置。
在某些实施方案中，Igλ链基因座包含至少2、3、4、5、6、7、8、10、20、30或40个功能性Vλ基因区段。在一些实施方案中，基因座包含人Vλ基因区段Vλ3-10、Vλ3-9、Vλ2-8、Vλ4-3和Vλ3-1。在一些实施方案中，基因座包含Vλ2-11、Vλ3-12、Vλ2-14、Vλ3-16、Vλ3-19、Vλ3-21、Vλ3-22、Vλ2-23、Vλ3-25和Vλ3-27。在一些实施方案中，基因座包含Vλ3-27、Vλ1-36、Vλ5-37、Vλ5-39、Vλ1-40、Vλ7-43、Vλ1-44、Vλ5-45、Vλ7-46、Vλ1-47、Vλ9-49、Vλ1-51和Vλ5-52。在某些实施方案中，基因座包含Vλ10-54、Vλ6-57、Vλ4-60、Vλ8-61和Vλ4-69。在一些实施方案中，Igλ链基因座包含一对或多对人Jλ-Cλ。举例来说，在某些实施方案中，Igλ链基因座在人Vλ基因区段的下游包含人Jλ1-Cλ1、Jλ2-Cλ2、Jλ3-Cλ3、Jλ6-Cλ6和/或Jλ7-Cλ7。在一些实施方案中，Igλ链基因座在人Vλ基因区段的下游包含人Jλ1-Cλ1、Jλ2-Cλ2、Jλ3-Cλ3、Jλ6-Cλ6、人Jλ7和小鼠Cλ1，如图2A中所描绘。
在一些实施方案中，Igλ基因座是包含Igλ可变区基因的重排基因座(通用轻链可变区)。在一些实施方案中，重排Igλ可变区基因是人重排Igλ可变区基因。通用轻链可变区的使用有助于产生其中至少一个抗原结合结构域具有结合的双特异性抗体。示例性重排Ig轻链可变区提供于美国专利公布号2013/0185821中，所述美国专利公布据此以引用的方式并入。
在一些实施方案中，Igλ链基因座包含人或啮齿动物(例如大鼠或小鼠)调控元件。在一些实施方案中，调控元件是内源性调控元件。在某些实施方案中，Igλ链基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)λ增强子2.4。在一些实施方案中，Igλ链基因座包含人或啮齿动物(例如大鼠或小鼠)3′λ增强子。在一些实施方案中，Igλ链基因座包含啮齿动物(例如大鼠或小鼠)λ增强子3.1。
在一些实施方案中，经修饰免疫球蛋白λ链基因座位于内源性免疫球蛋白λ链基因座处。在一些实施方案中，免疫球蛋白λ链基因座替换内源性免疫球蛋白λ链基因座的全部或一部分。在某些实施方案中，经修饰Igλ链基因座位于定位在内源性基因座的外部的转基因上。在一些实施方案中，内源性Igλ链基因座失活(例如通过使内源性Igλ链基因座的全部或一部分缺失、重新定位和/或倒位)。
在一些实施方案中，啮齿动物(例如大鼠或小鼠)就经修饰免疫球蛋白λ链基因座来说是杂合的。在某些实施方案中，啮齿动物(例如大鼠或小鼠)就经修饰免疫球蛋白λ链基因座来说是纯合的。
在一些实施方案中，非人生物体在它的种系和/或基因组中包含轻链免疫球蛋白基因座，所述轻链免疫球蛋白基因座包含有限的轻链可变基因区段谱系(例如包含两个轻链可变基因区段的双轻链可变区)。在一些实施方案中，有限的轻链基因区段谱系中的轻链可变基因区段是人轻链基因区段。示例性双轻链可变区提供于美国专利公布号2013/0198880中，所述美国专利公布据此以引用的方式并入。在一些实施方案中，包含双轻链可变区的非人生物体用于产生双特异性抗体。
人源化CD79a和CD79b基因座
在一些实施方案中，本文所述的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)包含人或人源化B细胞抗原受体复合物相关蛋白α链(CD79a或Igα)和/或B细胞抗原受体复合物相关蛋白β链(CD79b或Igβ)基因座。含有人或人源化CD79a和CD79b基因的啮齿动物在B细胞的表面上以异二聚体形式表达人或人源化CD79a和CD79b多肽，所述多肽以非共价方式与膜表达免疫球蛋白缔合以形成B细胞受体(BCR)。BCR与抗原缔合，并且在与抗原啮合之后在信号转导和内化中起作用。在一些实施方案中，本文所述的啮齿动物包含人或人源化CD79a和CD79b基因。在某些实施方案中，如本文所述的啮齿动物还包含含有啮齿动物CD79a部分和人CD79a部分的CD79a基因，以及含有啮齿动物CD79b部分和人CD79b部分的CD79b基因，其中所述人CD79a部分编码人CD79a多肽的细胞外结构域的大致上全部(例如对应于人CD79a多肽的残基33-143的氨基酸)，并且所述人CD79b部分编码人CD79b多肽的细胞外结构域的大致上全部(例如对应于人CD79b多肽的残基29-159的氨基酸)。在一些实施方案中，啮齿动物CD79a和CD79b部分各自分别至少编码内源性CD79a和CD79b多肽的细胞内结构域；在某些实施方案中，分别编码内源性CD79a和CD79b多肽的跨膜和细胞内结构域。在一些实施方案中，人和内源性部分分别可操作地连接于内源性CD79a或CD79b启动子。
在一些实施方案中，如本文所述的啮齿动物还包含含有啮齿动物CD79a部分和人CD79a部分的嵌合CD79a基因，其中所述人CD79a部分编码包含对应于人CD79a多肽的残基33-116的氨基酸的序列，在一个实施方案中，它编码包含人CD79a多肽的氨基酸33-119的序列，在一个实施方案中，它编码包含人CD79a多肽的氨基酸33-143的序列，在一个实施方案中，它编码包含人CD79a多肽的氨基酸33-165的序列。在一些实施方案中，嵌合CD79a多肽包含人Ig C2样结构域；在一些实施方案中，嵌合CD79a多肽还包含人茎部区域；在某一实施方案中，嵌合CD79a多肽还包含人跨膜结构域；并且在一些实施方案中，嵌合CD79a多肽还包含啮齿动物(例如小鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，啮齿动物包含含有本文所述的人区域部分和编码人或啮齿动物(例如小鼠)CD79a信号肽的序列的嵌合CD79a基因；在一个实施方案中，编码信号肽的序列是编码小鼠CD79a的氨基酸1-28的小鼠CD79a序列。
在一些实施方案中，如本文所述的啮齿动物还包含含有啮齿动物CD79b部分和人CD79b部分的嵌合CD79b基因，其中所述人CD79b部分编码包含对应于人CD79b多肽的残基29-135的氨基酸的序列，在一个实施方案中，它编码包含人CD79b多肽的氨基酸29-159的序列，在一个实施方案中，它编码包含人CD79b多肽的氨基酸29-184的序列。在一些实施方案中，嵌合CD79b多肽包含人Ig V样结构域；在一些实施方案中，嵌合CD79b多肽还包含人茎部区域；在某一实施方案中，嵌合CD79b多肽还包含人跨膜结构域；并且在一些实施方案中，嵌合CD79b多肽还包含啮齿动物(例如小鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，啮齿动物包含含有本文所述的人区域部分和编码人或啮齿动物(例如小鼠)CD79b信号肽的序列的嵌合CD79b基因；在一个实施方案中，编码信号肽的序列是编码小鼠CD79b的氨基酸1-25的小鼠CD79b序列。
GenBank登录号NP_001774.1、NM_001783.3、NP_067612.1和NM_021601.3以及UniProt ID P11912提供了可从中获得所需人部分的人CD79A基因和人CD79A多肽的代表性来源序列。GenBank登录号NP_000617.1、NM_000626.2、NP_001035022.1、NM_001039933.1、NP_067613.1和NM_021602.2以及UniProt ID P40259提供了可从中获得所需人部分的人CD79B基因和人CD79B多肽的代表性来源序列。
在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)还包含一种或多种如美国专利申请公布号2011-0093963A1和2009-0053210A1；国际专利申请公布号WO 2008/027986；以及欧洲专利号2 064 325B1中所述的人CD79A和CD79B基因，所述专利中的每一者据此以引用的方式并入。在某些实施方案中，本文提供的啮齿动物包含含有内源性CD79a部分和人CD79a部分的人源化CD79a基因，以及含有内源性CD79b部分和人CD79b部分的人源化CD79b基因，其中所述人CD79a部分编码人CD79a多肽的细胞外结构域的大致上全部(例如对应于人CD79a多肽的残基33-143的氨基酸)，并且所述人CD79b部分编码人CD79b多肽的细胞外结构域的大致上全部(例如对应于人CD79b多肽的残基29-159的氨基酸)。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物包含含有内源性CD79a部分和人CD79a部分的人源化CD79a基因，以及含有内源性CD79b部分和人CD79b部分的人源化CD79b基因，其中所述人CD79a部分编码包含氨基酸33-116的序列(例如包含人CD79a多肽的氨基酸33-119的序列、包含人CD79a多肽的氨基酸33-143的序列、或包含人CD79a多肽的氨基酸33-165的序列)，并且其中所述人CD79b部分编码包含氨基酸29-135的序列(例如包含人CD79a多肽的氨基酸29-159的序列、或包含人CD79a多肽的氨基酸29-184的序列)。在一些实施方案中，内源性CD79a和CD79b部分各自分别至少编码内源性CD79a和CD79b多肽的细胞内结构域；在某些实施方案中，分别编码内源性CD79a和CD79b多肽的跨膜和细胞内结构域。
人源化新生儿Fc受体基因座
在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)表达和/或在它们的基因组中包含人源化或人新生儿Fc受体(FcRn)基因座。FcRn，也被称为布兰贝尔(Brambell)受体，是一种由内皮细胞表达，并且与β-2-微球蛋白(β2M)缔合并结合IgG抗体的Fc结构域与血清白蛋白两者的蛋白质。FcRn使IgG和血清白蛋白的半衰期延长。特别地，通过以pH依赖性方式结合IgG和血清白蛋白，FcRn能够从由内皮细胞达成的溶酶体降解中挽救这些血清蛋白质，由此使所述蛋白质的血清半衰期增加。
在一些实施方案中，FcRn基因座包含编码FcRn多肽的核酸序列，所述FcRn多肽包含人细胞外结构域、啮齿动物(例如小鼠或大鼠)跨膜结构域和啮齿动物(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，FcRn基因座包含编码FcRn多肽的核酸序列，所述FcRn多肽包含人细胞外结构域、人(例如小鼠或大鼠)跨膜结构域和啮齿动物(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，FcRn基因座包含编码FcRn多肽的核酸序列，所述FcRn多肽包含人细胞外结构域、人(例如小鼠或大鼠)跨膜结构域和人(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。
在一些实施方案中，编码FcRn多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。在某些实施方案中，编码FcRn多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。举例来说，在一些实施方案中，内源性FcRn基因座中编码细胞外结构域的核酸序列被编码人FcRn的细胞外结构域的核酸序列替换，以致包含这种基因座的啮齿动物表达具有人细胞外结构域和啮齿动物(例如大鼠或小鼠)跨膜和细胞质结构域的FcRn。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物FcRn，或不表达功能性啮齿动物FcRn。在一些实施方案中，FcRn基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在某些实施方案中，编码小鼠FcRn基因的α1、α2和α3结构域的小鼠外显子(作为前三个编码外显子的外显子3、4和5)被编码人FcRn基因的α1、α2和α3结构域的人外显子(外显子3、4和5)替换(参见图4)。在一些实施方案中，FcRn基因包含小鼠外显子1(非编码外显子)、小鼠外显子2(包含编码信号肽的核酸序列)以及人外显子3-6、小鼠外显子6和7(编码跨膜和细胞质结构域)。在一些实施方案中，由基因座编码的人源化FcRn的氨基酸序列是SEQ ID NO:16。
GenBank登录号NC_000019.10(49512279-49526428)、NM_001136019.1和NP_001129491.1提供了可从中获得所需人部分的人FcRn基因、cDNA和多肽的代表性来源序列。GenBank登录号NC_000073.6(45092992-45103846)、NM_010189.1和NP_034319.1提供了可从中获得所需小鼠部分和/或可用于设计靶向载体同源臂的小鼠FcRn基因、cDNA和多肽的代表性来源序列。
在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰FcRn基因座来说是杂合的。在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰FcRn基因座来说是纯合的。
人源化β-2-微球蛋白′
在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰啮齿动物(例如大鼠或小鼠)和ES细胞表达和/或在它们的基因组中包含编码人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的基因座。β2M是一种缺乏跨膜区域，并且与FcRn和I类MHC分子缔合的多肽。
在一些实施方案中，β2M基因座包含编码人β2M多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码人β2M多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。在某些实施方案中，编码β2M多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物β2M，或不表达功能性啮齿动物β2M多肽。在一些实施方案中，β2M基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
人源化β2M多肽、编码人源化β2M多肽的基因座和表达人源化β2M多肽的非人动物描述于美国专利公布号2013/0111617和2013/0185819中，所述美国专利公布中的每一者以引用的方式并入本文。因此，如美国专利公布号2013/0111617和2013/0185819中所述，在一些实施方案中，非人动物(例如小鼠)包含人源化β2M基因，其中所述基因包含人β2M基因的外显子2、3和4，并且在一些实施方案中，所述人源化β2M基因包含非人(例如小鼠)β2M基因的外显子1。人源化β2M基因座示意性描绘于图5中。在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰β2M基因座来说是杂合的。在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰β2M基因座来说是纯合的。
人源化Fcε受体1α
在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)表达和/或在它们的基因组中包含人源化或人Fcε受体1α(FcεR1α)基因座。FcεR1α与FcεR1β和FcεR1γ缔合以形成FcεR1，即一种在表皮朗格汉斯细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞上表达的高亲和力IgE受体。FcεR1的IgE结合位点见于FcεR1α亚单位中。
在一些实施方案中，FcεR1α基因座包含编码FcεR1α多肽的核酸序列，所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人(例如小鼠或大鼠)跨膜结构域和啮齿动物(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，FcεR1α基因座包含编码FcεR1α多肽的核酸序列，所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和啮齿动物(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，FcεR1α基因座包含编码FcεR1α多肽的核酸序列，所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。经工程改造FcεR1α基因座的一示例性实施方案描绘于图9中。
在一些实施方案中，编码FcεR1α多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。在某些实施方案中，编码FcεR1α多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。举例来说，在一些实施方案中，内源性FcεR1α基因座中编码细胞外结构域的核酸序列被编码人FcεR1α的细胞外结构域的核酸序列替换，以致包含这种基因座的啮齿动物表达具有人细胞外结构域和啮齿动物(例如大鼠或小鼠)跨膜和细胞质结构域的FcεR1α。在一些实施方案中，编码FcεR1α多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处，所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。在一些实施方案中，编码FcεR1α多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分，所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α，或不表达功能性啮齿动物FcεR1α。在一些实施方案中，FcεR1α基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在某些实施方案中，小鼠FcεRIα的小鼠编码外显子1的一部分、编码外显子2、编码外显子3、编码外显子4和编码外显子5被人FcεRIα基因的人编码外显子1的一部分、编码外显子2、编码外显子3、编码外显子4和编码外显子5替换。在一些实施方案中，FcεRIα基因包含嵌合小鼠/人外显子1(包含小鼠启动子和5’UTR)、人编码外显子2-5直至终止密码子、人3’UTR和多腺苷酸(polyA)，继之以小鼠3’UTR和多腺苷酸。在一些实施方案中，嵌合基因外显子1(部分)和2编码信号肽，外显子3和4编码FcεRIα的据信与IgE相互作用的两个Ig样结构域，并且外显子5编码蛋白质的细胞质和跨膜结构域(参见图9)。
GenBank登录号NC_000001.11(159283888-159308224)、NM_002001.3和NP_001992.1提供了可从中获得所需人部分的人FcεR1α基因、cDNA和多肽的代表性来源序列。GenBank登录号NC_000067.6(173221269-173227232)、NM_010184.1和NP_034314.1提供了可从中获得所需小鼠部分和/或可用于设计靶向载体同源臂的小鼠FcεR1α基因、cDNA和多肽的代表性来源序列。
在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰FcεR1α基因座来说是杂合的。在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰FcεR1α基因座来说是纯合的。
人源化Fcγ受体1a
在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)表达和/或在它们的基因组中包含人源化或人Fcγ受体1a(FcγR1a，经常在附图中标记为FcγR1)基因座。FcγR1a是一种在单核细胞上表达的结合IgG的Fc部分，并且导致宿主细胞的活化的高亲和力FcγR蛋白。
在一些实施方案中，FcγR1a基因座包含编码FcγR1a多肽的核酸序列，所述FcγR1a多肽包含人细胞外结构域、啮齿动物(例如小鼠或大鼠)跨膜结构域和啮齿动物(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，FcγR1a基因座包含编码FcγR1a多肽的核酸序列，所述FcγR1a多肽包含人细胞外结构域、人(例如小鼠或大鼠)跨膜结构域和啮齿动物(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。在一些实施方案中，FcγR1a基因座包含编码FcγR1a多肽的核酸序列，所述FcγR1a多肽包含人细胞外结构域、人(例如小鼠或大鼠)跨膜结构域和人(例如小鼠或大鼠)细胞质结构域。
在一些实施方案中，编码FcεR1α多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物FcγR1a基因座处。在某些实施方案中，编码FcγR1a多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物FcγR1a基因的全部或一部分。举例来说，在一些实施方案中，内源性FcγR1a基因座中编码细胞外结构域的核酸序列被编码人FcεR1α的细胞外结构域的核酸序列替换，以致包含这种基因座的啮齿动物表达具有人细胞外结构域和啮齿动物(例如大鼠或小鼠)跨膜和细胞质结构域的FcγR1a。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物FcγR1a，或不表达功能性啮齿动物FcγR1a。在一些实施方案中，FcγR1a基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
人源化FcγR1a多肽、编码人源化FcγR1a多肽的基因座和表达人源化FcγR1a多肽的非人动物描述于美国专利号9,474,255和美国专利公布号2017/0086432中，所述专利中的每一者以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰FcγR1a基因座来说是杂合的。在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰FcγR1a基因座来说是纯合的。
人源化低亲和力Fcγ受体
在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰啮齿动物(例如大鼠或小鼠)和ES细胞表达和/或在它们的基因组中包含编码人低亲和力Fcγ受体(FcγR)多肽(例如人FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa或FcγRIIIb多肽)的基因座。
在一些实施方案中，低亲和力FcγR基因座包含编码人FcγRIIa多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码人FcγRIIa多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。在某些实施方案中，编码FcγRIIa多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座的全部或一部分。在一特定实施方案中，人FcγRIIa基因包含多态性，其中所述多态性选自131His低应答多态性和131Arg高应答多态性。在一特定实施方案中，FcγRIIa多态性是131His低应答多态性。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物低亲和力FcγR多肽(例如不表达啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽，或不表达功能性啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽)。在一些实施方案中，FcγRIIa基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在一些实施方案中，低亲和力FcγR基因座包含编码人FcγRIIb多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码人FcγRIIb多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。在某些实施方案中，编码FcγRIIb多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座的全部或一部分。在一特定实施方案中，人FcγRIIb基因包含氨基酸取代，其中所述取代选自187Ile或187Thr取代。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物低亲和力FcγR多肽(例如不表达啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽，或不表达功能性啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽)。在一些实施方案中，FcγRIIb基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在一些实施方案中，低亲和力FcγR基因座包含编码人FcγRIIc多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码人FcγRIIc多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。在某些实施方案中，编码FcγRIIc多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座的全部或一部分。在一个实施方案中，FcγRIIc基因是特定等位基因变体，其中所述等位基因变体选自57终止(57Stop)变体和57Q变体。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物低亲和力FcγR多肽(例如不表达啮齿动物FcγRIIB、FcγRIV和/或FcγRIII多肽)。在一些实施方案中，FcγRIIc基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在一些实施方案中，低亲和力FcγR基因座包含编码人FcγRIIIa多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码人FcγRIIIa多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。在某些实施方案中，编码FcγRIIIa多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座的全部或一部分。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物低亲和力FcγR多肽(例如不表达啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽，或不表达功能性啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽)。在一个实施方案中，FcγRIIIa基因是特定等位基因变体，其中所述等位基因变体选自176Val变体和176Phe变体。在一特定实施方案中，FcγRIIIa等位基因变体是176Val变体。在一些实施方案中，FcγRIIIa基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在一些实施方案中，低亲和力FcγR基因座包含编码人FcγRIIIb多肽的核酸序列。在一些实施方案中，编码人FcγRIIIb多肽的核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。在某些实施方案中，编码FcγRIIIb多肽的核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座的全部或一部分。在一特定实施方案中，FcγRIIIb基因是特定等位基因变体，其中所述等位基因变体选自NA1变体和NA2变体。在另一特定实施方案中，FcγRIIIb等位基因变体是NA2变体。在一些实施方案中，啮齿动物不表达啮齿动物低亲和力FcγR多肽(例如不表达啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽，或不表达功能性啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和/或FcγRIII多肽)。在一些实施方案中，FcγRIIIb基因基因座包含非人调控元件(例如非人启动子和/或增强子)。在一些实施方案中，非人调控元件是啮齿动物调控元件(例如大鼠或小鼠启动子或增强子)。
在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)包含一种或多种如美国专利号9,221,894、9,056,130、9,089,599、8,658,154、8,883,496或8,658,853中所述的人低亲和力FcγR基因。在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)包含至少两种低亲和力人FcγR基因和内源性啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Fcγ链基因，其中所述低亲和力人FcγR基因选自由人FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa和FcγRIIIb组成的组。在某些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)包含人FcγRIIa和FcγRIIIb，以及内源性啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Fcγ链基因。在某些实施方案中，本文提供的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)包含FcγRIIa、FcγRIIIa、FcγRIIb、FcγRIIc和FcγRIIId基因，以及内源性啮齿动物(例如大鼠或小鼠)Fcγ链基因。在各种实施方案中，包含一种或多种人FcγR的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)还包含在内源性啮齿动物(例如大鼠或小鼠)FcγRIIB、FcγRIV和FcγRIII基因(即内源性啮齿动物FcγRIIb、FcγRIV和FcγRIIIα链编码序列)中的纯合性破坏。在各种实施方案中，包含一种或多种如本文所述的人低亲和力FcγR的啮齿动物(例如大鼠或小鼠)不以可检测方式表达内源性啮齿动物低亲和力FcγR多肽(例如内源性低亲和力FcγRα链多肽)。
在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰低亲和力FcγR基因座来说是杂合的。在一些实施方案中，啮齿动物就经遗传修饰低亲和力FcγR基因座来说是纯合的。
经遗传修饰非人动物和ES细胞
在某些方面，本文提供了包含本文公开的人源化基因座中的一者或多者的经遗传修饰非人动物(例如啮齿动物，诸如大鼠或小鼠)，以及可用于制备所述非人动物的经遗传修饰非人动物ES细胞。
在某些方面，本文提供了在它们的种系和/或基因组中包含本文所述的经工程改造基因座中的一者或多者的经遗传修饰非人动物和非人动物ES细胞。举例来说，在一些实施方案中，非人动物或ES细胞在它的种系和/或基因组中包含本文提供的IgH基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞还包含本文提供的Igκ和/或Igλ基因座。在一些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的CD79a和/或CD79b基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcRn基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的β2M基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcεR1α基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcγR1a基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcγR2a基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcγR2b基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcγR3a基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcγR3b基因座。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞在它们的种系和/或基因组中包含本文提供的FcγR2c基因座。在一些实施方案中，非人动物或ES细胞就本文提供的基因座例如经遗传工程改造基因座中的一者或多者来说是杂合的。在一些实施方案中，非人动物或ES细胞就本文提供的基因座例如经遗传工程改造基因座中的一者或多者来说是纯合的。
在一些实施方案中，非人动物可为任何非人动物。在一些实施方案中，非人动物是脊椎动物。在一些实施方案中，非人动物是哺乳动物。在一些实施方案中，本文所述的经遗传修饰非人动物可选自由小鼠、大鼠、兔、猪、牛(例如母牛、公牛、水牛)、鹿、绵羊、山羊、美洲驼、鸡、猫、狗、雪貂、灵长类动物(例如狨猴、恒河猴)组成的组。对于其中适合的可遗传修饰ES细胞不可易于获得的非人动物，可采用其他方法来制备包含本文所述的遗传修饰的非人动物。所述方法包括例如修饰非ES细胞基因组(例如纤维母细胞或诱导多能细胞)并采用核转移来将经修饰基因组转移至适合细胞诸如卵母细胞中，以及在非人动物中在适于形成胚胎的条件下孕育经修饰细胞(例如经修饰卵母细胞)。
在各种实施方案中，本文提供了包含经遗传工程改造免疫球蛋白重链基因座的非人动物例如啮齿动物(例如大鼠或小鼠)。所述经遗传工程改造基因座的示例性实施方案示意性描绘于图1中，并且在本文中详细描述。在一些实施方案中，本文所述的非人动物在它的基因组(例如它的种系基因组)中包括Adam6基因，所述Adam6基因编码ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段(参见例如美国专利号8,642,835和8,697,940，所述专利中的每一者以引用的方式整体并入本文)。在一些实施方案中，ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段从Adam6基因表达。在一些实施方案中，Adam6基因不源于包括Adam6基因的非人动物(例如包括大鼠Adam6基因或从另一小鼠品系获得的小鼠Adam6基因的小鼠)。在一些实施方案中，本文所述的非人动物包括异位Adam6基因。如本文所用的“异位”Adam6基因是指处于与Adam6基因在野生型非人动物中出现有所不同的情形下的Adam6基因。举例来说，Adam6基因可位于不同染色体上，位于不同基因座处，或邻近于不同序列加以定位。一示例性异位Adam6基因是位于人免疫球蛋白序列(例如人重链可变区基因区段)内的小鼠Adam6基因。在一些实施方案中，本文所述的非人动物包括插入或整合的Adam6基因。
在一些实施方案中，本文所述的非人动物包括一个或多个编码一种或多种非人Adam6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列在它的基因组(例如它的种系基因组)中的插入。
在一些实施方案中，本文所述的非人动物在它的基因组(例如它的种系基因组)中包括一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文所述的非人动物在它的基因组(例如它的种系基因组)中包括小鼠Adam6a基因和/或小鼠Adam6b基因。在一些实施方案中，本文所述的非人动物包括一个或多个编码小鼠ADAM6a、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段和/或小鼠ADAM6b、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列插入在和/或位于与内源性免疫球蛋白重链基因座相同的染色体上。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列插入在和/或位于某一位置中，以使所述一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列与人免疫球蛋白重链可变区基因区段邻接。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列插入在和/或位于某一位置中，以使所述一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列邻近于人免疫球蛋白重链可变区基因区段。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列插入在和/或位于某一位置中，以使所述一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列位于人免疫球蛋白重链可变区基因区段之间。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列插入在和/或位于第一与第二人VH基因区段之间。在一些实施方案中，第一人VH基因区段是人VH1-2，并且第二人VH基因区段是人VH6-1。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列插入在和/或位于人Adam6假基因的位置中。在一些实施方案中，一个或多个编码一种或多种非人ADAM6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列插入在人VH基因区段与人DH基因区段之间。
在一些实施方案中，本文所述的非人动物包括使ADAM6活性恢复或增强的Adam6基因。在一些实施方案中，Adam6基因使ADAM6活性恢复至包括功能性内源性Adam6基因的类似非人动物的水平。在一些实施方案中，Adam6基因使ADAM6活性增强至是不包括功能性Adam6基因的类似非人动物的ADAM6活性的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍的水平。
在一些实施方案中，本文所述的非人动物包括使雄性非人动物的生育性恢复或增强的Adam6基因。在一些实施方案中，Adam6基因使雄性非人动物的生育性恢复至包括功能性内源性Adam6基因的类似非人动物的水平。在一些实施方案中，Adam6基因使雄性非人动物的生育性恢复，以使通过使所述雄性非人动物交配来产生的幼仔的数目是由不包括功能性Adam6基因的类似雄性非人动物的类似交配产生的幼仔的数目的至少70％、至少80％、至少90％、至少95％。在一些实施方案中，Adam6基因使雄性非人动物的生育性增强，以使通过使所述雄性非人动物交配来产生的幼仔的数目包括是由不包括功能性Adam6基因的类似雄性非人动物的类似交配产生的幼仔的数目的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。
在一些实施方案中，如本文所述的非人免疫球蛋白重链基因座缺乏至少一个内源性非人Adam6基因。在一些实施方案中，至少一个内源性非人Adam6基因的缺乏使缺乏内源性非人Adam6基因的雄性小鼠中的ADAM6活性和/或生育性降低。在一些实施方案中，如本文所述的非人免疫球蛋白重链基因座包括至少一个内源性非人Adam6基因的破坏。在一些实施方案中，至少一个内源性非人Adam6基因的破坏使缺乏内源性非人Adam6基因的雄性小鼠中的ADAM6活性和/或生育性降低。
在一些实施方案中，非人动物是哺乳动物。在一些实施方案中，非人动物是例如跳鼠总科(Dipodoidea)或鼠总科(Muroidea)的小型哺乳动物。在一些实施方案中，非人动物是啮齿动物。在某些实施方案中，啮齿动物是小鼠、大鼠或仓鼠。在一些实施方案中，啮齿动物选自鼠总科。在一些实施方案中，非人动物来自选自以下的科：丽仓鼠科(Calomyscidae)(例如小鼠样仓鼠)、仓鼠科(Cricetidae)(例如仓鼠、新世界大鼠和小鼠、田鼠)、鼠科(例如真实小鼠和大鼠、沙鼠、有刺小鼠、冠毛大鼠)、马岛鼠科(Nesomyidae)(例如攀登小鼠(climbing mice)、岩石小鼠(rock mice)、白尾大鼠、马达加斯加(Malagasy)大鼠和小鼠)、刺睡鼠科(Platacanthomyidae)(例如有刺睡鼠)和鼹形鼠科(Spalacidae)(例如鼹大鼠(mole rat)、竹大鼠(bamboo rat)和鼢鼠(zokor))。在一些实施方案中，啮齿动物选自真实小鼠或大鼠(鼠科)、沙鼠、有刺小鼠和冠毛大鼠。在一些实施方案中，小鼠来自鼠科的成员。在一些实施方案中，非人动物是啮齿动物。在一些实施方案中，啮齿动物选自小鼠和大鼠。在一些实施方案中，非人动物是小鼠。
在一些实施方案中，非人动物是C57BL品系的小鼠。在一些实施方案中，C57BL品系选自C57BL/A、C57BL/An、C57BL/GrFa、C57BL/KaLwN、C57BL/6、C57BL/6J、C57BL/6ByJ、C57BL/6NJ、C57BL/10、C57BL/10ScSn、C57BL/10Cr和C57BL/Ola。在一些实施方案中，非人动物是129品系的小鼠。在一些实施方案中，129品系选自由以下品系组成的组：129P1、129P2、129P3、129X1、129S1(例如129S1/SV、129S1/SvIm)、129S2、129S4、129S5、129S9/SvEvH、129S6(129/SvEvTac)、129S7、129S8、129T1、129T2。在一些实施方案中，经遗传修饰小鼠是129品系和C57BL品系的混合体。在一些实施方案中，小鼠是129品系的混合体和/或C57BL/6品系的混合体。在一些实施方案中，混合体的129品系是129S6(129/SvEvTac)品系。在一些实施方案中，小鼠是BALB品系(例如BALB/c)。在一些实施方案中，小鼠是BALB品系和另一品系(例如C57BL品系和/或129品系)的混合体。在一些实施方案中，本文提供的非人动物可为由以上提及的品系的任何组合获得的小鼠。
在一些实施方案中，本文提供的非人动物是大鼠。在一些实施方案中，大鼠选自Wistar大鼠、LEA品系、Sprague Dawley品系、Fischer品系、F344、F6和Dark Agouti。在一些实施方案中，大鼠品系是两个或更多个选自由以下组成的组的品系的混合体：Wistar、LEA、Sprague Dawley、Fischer、F344、F6和Dark Agouti。
在某些实施方案中，经遗传修饰非人动物或ES细胞在它们的基因组和/或种系中包含本文提供的多个基因座，诸如本文提供的多个经遗传工程改造基因座。举例来说，在一些实施方案中，非人动物或ES细胞在它的种系和/或基因组中包含本文提供的IgH基因座以及本文提供的Igκ和/或Igλ基因座。在一些实施方案中，非人动物或ES细胞在它的种系和/或基因组中包含本文提供的IgH基因座、本文提供的Igκ和/或Igλ基因座，并且任选地包含本文提供的CD79a和/或CD79b基因座。在一些实施方案中，非人动物或ES细胞在它的种系和/或基因组中包含本文提供的IgH基因座、本文提供的Igκ和/或Igλ基因座、本文提供的FcRn基因座和本文提供的β2M基因座。在一些实施方案中，非人动物或ES细胞在它的种系和/或基因组中包含本文提供的IgH基因座、本文提供的Igκ和/或Igλ基因座、本文提供的FcRn基因座、本文提供的β2M基因座、本文提供的FcεR1α基因座、本文提供的FcγR1a基因座、本文提供的FcγR2a基因座、本文提供的FcγR2b基因座、本文提供的FcγR3a基因座、本文提供的FcγR3b基因座和/或本文提供的FcγR2c基因座以及它们的任何组合。
在某些方面，经遗传修饰非人动物表达由本文提供的人源化基因座编码的人源化多肽中的一者或多者。举例来说，在一些实施方案中，非人动物表达人源化Ig重链多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化Igκ多肽和/或人源化Igλ多肽。在一些实施方案中，非人动物表达人源化CD79a多肽和/或人源化CD79b多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化FcRn多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化β2M多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化FcεR1α多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化FcγR1a多肽。在某些实施方案中，非人动物或ES细胞非人动物表达人源化FcγR2a多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化FcγR2b基因座多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化FcγR3a多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化FcγR3b多肽。在某些实施方案中，非人动物表达人源化FcγR2c多肽。
经遗传修饰非人动物和ES细胞可使用本领域中已知的任何适当方法产生。举例来说，所述经遗传修饰非人动物ES细胞可使用描述于美国专利号6,586,251、6,596,541、7,105,348以及Valenzuela等(2003)“High-throughput engineering of the mouse genomecoupled with high-resolution expression analysis”Nat.Biotech.21(6):652-659中的
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技术产生，所述专利和文献中的每一者据此以引用的方式并入。修饰还可使用基因组靶向核酸酶系统诸如CRISPR/Cas系统、转录活化子样效应物核酸酶(TALEN)系统或锌指核酸酶(ZFN)系统进行。在一些实施方案中，修饰使用如例如美国专利申请号14/314,866、14/515,503、14/747,461和14/731,914中所述的CRISPR/Cas系统进行，所述专利中的每一者以引用的方式并入。制备所述经遗传修饰非人动物和ES细胞的示例性方法在本文中还提供于实施例1以及3-5中。
本文所述的ES细胞可接着用于使用本领域中已知的方法产生非人动物。举例来说，本文所述的小鼠非人动物ES细胞可用于使用如美国专利号7,294,754以及Poueymirou等,Nature Biotech 25:91-99(2007)中所述的
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方法产生经遗传修饰小鼠，所述专利和文献中的每一者据此以引用的方式并入。可使所得小鼠繁育以获得纯合性。
测试含人Fc治疗剂的方法
在某些方面，本文提供了测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质(例如人抗体或Fc融合蛋白)的方法，所述方法包括向本文提供的啮齿动物(例如本文提供的小鼠或大鼠)施用所述治疗性蛋白质。在某些实施方案中，本文提供了用于进行所述方法的动物模型。
在一些实施方案中，所施用人抗体或Fc融合蛋白具有与由本文提供的啮齿动物的经遗传修饰IgH基因座中的人CH编码的Fc结构域的同种型和/或同种异型匹配的同种型和/或同种异型。举例来说，在一些实施方案中，药剂是人IgG1抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG1 CH1、铰链、CH2和CH3结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG4抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG4 CH1、铰链、CH2和CH3结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG1抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG1 CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG2抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG2CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG3抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG3 CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG4抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG4 CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgM抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgM CH1、CH2、CH3和CH4结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgD抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgDCH1、H1、H2、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，治疗剂是具有Igκ轻链的人抗体，并且啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰Igκ基因座。在一些实施方案中，治疗剂是具有Igλ轻链的人抗体，并且啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰Igλ基因座。
在一些实施方案中，所述方法包括测量所施用治疗性蛋白质的一种或多种药物代谢动力学性质。在某些实施方案中，用于测定所施用人抗体或融合蛋白的药物代谢动力学性质的动物模型是本文提供的包含本文提供的经修饰IgH基因座的经遗传修饰啮齿动物。在某些实施方案中，用于测定所施用人抗体或融合蛋白的药物代谢动力学性质的动物模型是本文提供的包含本文提供的经修饰IgH基因座以及本文提供的经修饰Igκ基因座和/或经修饰Igλ基因座的经遗传修饰啮齿动物。在一些实施方案中，所施用人抗体或Fc融合蛋白具有与由经遗传修饰IgH基因座中的人源化CH编码的恒定结构域的同种型和/或同种异型匹配的同种型和/或同种异型。在一些实施方案中，啮齿动物还包含本文提供的经修饰FcRn基因座。在一些实施方案中，啮齿动物还包含本文提供的经修饰β2M。
在一些实施方案中，一种或多种药物代谢动力学参数包括但不限于血浆浓度对时间下面积(AUC)、体内回收率(IVR)、清除率(CL)、平均滞留时间(MRT)、药剂半衰期(t1/2)以及在稳定状态下的分布容积(Vss)。一般来说，所施用治疗剂的药物代谢动力学性质通过以下方式来测定：施用所选剂量的治疗剂(例如0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/mg、7.5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg或更大剂量)，接着测定治疗剂的血浆浓度如何随时间(例如0小时、6小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或多达30天或更多天)而变化。
在一些实施方案中，所述方法还包括测量所施用治疗性蛋白质的治疗功效(例如所施用剂量的治疗性蛋白质在动物模型中使一种或多种疾病症状减轻或消除的能力)。在一些实施方案中，动物模型是癌症模型，并且疾病症状可包括例如肿瘤尺寸、肿瘤转移和/或动物存活。在某些实施方案中，动物模型是自身免疫或炎症模型，并且疾病症状可包括例如细胞因子表达的水平、免疫细胞的增殖、组织损害和/或动物存活。在一些实施方案中，动物模型是感染性疾病模型，并且疾病症状可包括例如感染物的水平、组织损害和/或动物存活。
在一些实施方案中，所述方法还包括测量所施用治疗性蛋白质的安全性和给药(例如所施用剂量的治疗性蛋白质在动物模型中产生一种或多种不利作用所处的程度)。不利作用包括但不限于过敏反应、脱发、过敏症、贫血、缺乏食欲、失去平衡、出血、血液凝块、呼吸困难、支气管炎、瘀伤、低白血细胞计数、低红血细胞计数、低血小板计数、心脏毒性、结膜炎、便秘、咳嗽、脱水、腹泻、电解质不平衡、丧失生育性、发热、毛发脱落、心脏衰竭、感染、注射部位反应、缺铁、肾衰竭、白血球减少症、肝功能异常、肺炎、快速心跳、直肠出血、癫痫发作、重量减轻和重量增加。举例来说，在某些实施方案中，本文提供了一种使用被动皮肤过敏症(PCA)和/或被动全身性过敏症(PSA)模型来测量由治疗剂诱发的过敏反应的方法。
在某些实施方案中，所述方法还包括测量治疗性蛋白质在啮齿动物中诱导一种或多种Fc受体介导的应答所处的程度(例如治疗性蛋白质诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)所处的程度)。举例来说，在某些实施方案中，本文提供了一种筛选包含人抗体的人Fc区的治疗剂的方法，所述方法包括：(a)向本文提供的啮齿动物施用包含人抗体的Fc区的药剂，其中所述药剂结合所述啮齿动物中的靶标细胞；(b)测量天然杀伤(NK)细胞针对所述靶标细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；和(c)将步骤(b)中ADCC的量与对照进行比较，其中靶标细胞杀伤增加指示所述药剂具有增加的介导ADCC的能力。
在一些实施方案中，所述方法还包括测量施用治疗性蛋白质在啮齿动物中诱导抗人Fc免疫应答所处的程度。
在一些实施方案中，当向本文提供的啮齿动物施用时，所施用治疗剂引发降低的免疫应答。在一些实施方案中，所施用人抗体或Fc融合蛋白具有与由本文提供的啮齿动物的经遗传修饰IgH基因座中的人CH编码的Fc结构域的同种型和/或同种异型匹配的同种型和/或同种异型。举例来说，在一些实施方案中，药剂是人IgG1抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG1 CH1、铰链、CH2和CH3结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG4抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG4 CH1、铰链、CH2和CH3结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG1抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG1 CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG2抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG2 CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG3抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG3 CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgG4抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgG4 CH1、铰链、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgM抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgM CH1、CH2、CH3和CH4结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，药剂是人IgD抗体，并且啮齿动物包含经遗传修饰IgH基因座，所述经遗传修饰IgH基因座包含编码人IgDCH1、H1、H2、CH2、CH3、M1和M2结构域的CH基因区段。在一些实施方案中，治疗剂是具有Igκ轻链的人抗体，并且啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰Igκ基因座。在一些实施方案中，治疗剂是具有Igλ轻链的人抗体，并且啮齿动物包含本文提供的经遗传修饰Igλ基因座。
在某些实施方案中，本文提供的方法包括测试包含人Fc的治疗性抗体。在一些实施方案中，测试的抗体包含人重链可变结构域。在一些实施方案中，抗体包含人重链恒定结构域。在一些实施方案中，本文提供的抗体包含IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定结构域。人重链恒定结构域的序列在本领域中是已知的(参见例如Kabat,E.A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH出版号91-3242以及可在www.imgt.org处获得的IMGT数据库)。
在一些实施方案中，测试的抗体包含经修饰Fc结构域(例如改变Fc与Fc受体之间的相互作用的突变)。举例来说，在一些实施方案中，本文提供的抗体包含在位置235、236、237、239、265、267、268、269、270、298、326、327、330、332、350、351、366、392、394、405和/或407(使用EU编号系统)处对它们的Fc结构域的修饰。在一些实施方案中，修饰选自由以下组成的组：L235A、G236E、G237F、S239E、S239D、D265E、D265S、S267E、S267D、S267G、H268E、H268D、E269L、D270N、D270E、S298A、K326A、K326D、A327H、A327V、A327L、A330I、A330S、I332E、T350V、L351Y、T366L、K392M、K392L、T394W、F405A和/或Y407V(使用EU编号系统)。在一些实施方案中，抗体包含对它们的Fc结构域的多个修饰。在一些实施方案中，多个修饰选自由以下组成的组：D270N/K326D、S239E/S298A/K326A/A327H、L235A/S239E/D265E/A327H、G236E/G237F/S239E、G237F/S239E/D265E、G327F/S239E/H268D、G236E/D270N/A327V/I332E、G237F/S239E/A327H、G237F/A327L/A330I、S239D/D265S/S298A/I332E、S239E/D265S/H268D/I332E、S239E/D265S/I332E、S239E/S267E/H268D、S239E/A327L/A330I、D265E/S267D/A330S、S267G/H268E/D270E、H268D/E269L/S298A/K326A/A327H、H268D//K326A/A327H。额外Fc修饰以及Fc修饰的组合提供于美国专利号5,624,821、5,648,260、6,528,624、6,737,056、7,122,637、7,183,387、7,297,775、7,317,091、7,332,581、7,632,497、7,662,925、7,695,936、8,093,359、8,216,805、8,218,805、8,388,955和8,937,158以及美国专利公布号2005/0054832、2006/0222653、2006/0275282、2006/0275283、2007/0190063、2008/0154025、2009/0042291 2013/0108623和2013/0089541中，所述专利中的每一者据此以引用的方式并入。
在一些实施方案中，测试的抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体的两个抗原结合结构域具有不同重链可变结构域，但具有相同轻链可变结构域。在一些实施方案中，重链的Fc结构域包含修饰以有助于重链异二聚体形成和/或抑制重链同二聚体形成。所述修饰例如提供于美国专利号5,731,168、5,807,706、5,821,333、7,642,228和8,679,785中以及美国专利公布号2013/0195849中，所述专利中的每一者据此以引用的方式并入。
在一些实施方案中，在本文提供的方法中测试的抗体具有人轻链可变结构域。在一些实施方案中，轻链可变结构域是λ轻链可变结构域。在一些实施方案中，轻链可变结构域是κ轻链可变结构域。在一些实施方案中，抗体具有人轻链恒定结构域。在一些实施方案中，轻链恒定结构域是λ轻链恒定结构域。在一些实施方案中，轻链恒定结构域是κ轻链恒定结构域。人轻链恒定结构域的序列在本领域中是已知的(参见例如Kabat,E.A.,等(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department ofHealth and Human Services,NIH出版号91-3242以及可在www.imgt.org处获得的IMGT数据库)。
在某些实施方案中，治疗剂作为药物组合物例如含有连同药学上可接受的载体一起配制的人抗体或Fc融合蛋白的药物组合物的一部分向本文提供的啮齿动物施用。
本文提供的药物组合物可以固体或液体形式特别配制以进行施用，所述固体或液体形式包括适合于以下的那些形式：(1)口服施用，例如灌服剂(水性或非水性溶液或混悬液)、片剂例如以经颊、舌下和全身性吸收为目标的那些片剂、大丸剂、粉剂、颗粒剂、用于向舌部施加的糊剂；或(2)胃肠外施用，例如通过以例如无菌溶液或混悬液或持续释放制剂形式皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射。
适于胃肠外施用的药物组合物包含人抗体或Fc融合蛋白与一种或多种以下各物的组合：药学上可接受的无菌等张水性或非水性溶液、分散液、混悬液或乳液、或可即将使用之前复原成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂，所述各物可含有糖、醇、抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂、致使制剂与预定接受者的血液等张的溶质、或混悬剂或增稠剂。
可用于本文提供的药物组合物中的适合水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)以及它们的适合混合物、植物油诸如橄榄油、以及可注射有机酯诸如油酸乙酯。适当流动性可例如通过使用包覆物质诸如卵磷脂，在分散液的情况下通过维持所需粒度，以及通过使用表面活性剂加以维持。
在某些实施方案中，组合物以产生适合于所需剂量的w/v的浓度包含人抗体或Fc融合蛋白。抗体可以至少1mg/mL、至少5mg/mL、至少10mg/mL、至少15mg/mL、至少20mg/mL、至少25mg/mL、至少30mg/mL、至少35mg/mL、至少40mg/mL、至少45mg/mL、至少50mg/mL、至少55mg/mL、至少60mg/mL、至少65mg/mL、至少70mg/mL、至少75mg/mL、至少80mg/mL、至少85mg/mL、至少90mg/mL、至少95mg/mL、至少100mg/mL、至少105mg/mL、至少110mg/mL、至少115mg/mL、至少120mg/mL、至少125mg/mL、至少130mg/mL、至少135mg/mL、至少140mg/mL、至少150mg/mL、至少200mg/mL、至少250mg/mL或至少300mg/mL的浓度存在于组合物中。
在一些实施方案中，组合物通过以下方式制备：使人抗体或Fc融合蛋白与任选的生理上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，包括但不限于缓冲剂、糖、盐、表面活性剂、增溶剂、多元醇、稀释剂、粘合剂、稳定剂、盐、亲脂性溶剂、氨基酸、螯合剂、防腐剂等(Goodman andGilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,第12版,L.Brunton等；以及Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.编(1999))混合成所需最终浓度的冻干组合物或水溶液的形式。所用剂量和浓度的可接受的载体、赋形剂或稳定剂对接受者无毒，并且包括缓冲剂，诸如组氨酸、磷酸盐、柠檬酸盐、甘氨酸、乙酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苯甲基氯化铵；氯化六羟季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖以及其他碳水化合物，包括海藻糖、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子，诸如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如吐温(TWEEN)、聚山梨醇酯80、
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或聚乙二醇(PEG)。
在一些实施方案中，缓冲剂是组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、甘氨酸或乙酸盐。糖赋形剂可为海藻糖、蔗糖、甘露糖醇、麦芽糖或棉子糖。表面活性剂可为聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯80或普洛尼克F68(Pluronic F68)。盐可为NaCl、KCl、MgCl2或CaCl2。
在一些实施方案中，组合物包含缓冲剂或pH调整剂以提供改进的pH控制。这种组合物可具有在约3.0与约9.0之间，在约4.0与约8.0之间，在约5.0与约8.0之间，在约5.0与约7.0之间，在约5.0与约6.5之间，在约5.5与约8.0之间，在约5.5与约7.0之间，或在约5.5与约6.5之间的pH。在另一实施方案中，这种组合物具有约3.0、约3.5、约4.0、约4.5、约5.0、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6.0、约6.1、约6.2、约6.3、约6.4、约6.5、约6.6、约6.7、约6.8、约6.9、约7.0、约7.5、约8.0、约8.5或约9.0的pH。在一特定实施方案中，组合物具有约6.0的pH。本领域技术人员了解，组合物的pH通常不应等于待在组合物中使用的人抗体或Fc融合蛋白的等电点。通常，缓冲剂是从有机或无机酸或碱制备的盐。代表性缓冲剂包括但不限于有机酸盐，诸如柠檬酸、抗坏血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、丁二酸、乙酸或邻苯二甲酸的盐；Tris、盐酸缓血酸胺、或磷酸盐缓冲剂。此外，氨基酸组分也可在缓冲能力方面起作用。可作为缓冲剂用于组合物中的代表性氨基酸组分包括但不限于甘氨酸和组氨酸。在某些实施方案中，缓冲剂选自组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、甘氨酸和乙酸盐。在一特定实施方案中，缓冲剂是组氨酸。在另一特定实施方案中，缓冲剂是柠檬酸盐。在另一特定实施方案中，缓冲剂是甘氨酸。缓冲剂的纯度应是至少98％、或至少99％、或至少99.5％。如本文所用，术语“纯度”在组氨酸和甘氨酸的情形下是指组氨酸或甘氨酸的如本领域中所了解的化学纯度，例如如The Merck Index,第13版,O'Neil等人编(Merck&Co.,2001)中所述。
在某些实施方案中，组合物包含组氨酸作为缓冲剂。在某些实施方案中，组氨酸以至少约1mM、至少约5mM、至少约10mM、至少约20mM、至少约30mM、至少约40mM、至少约50mM、至少约75mM、至少约100mM、至少约150mM或至少约200mM组氨酸的浓度存在于组合物中。在另一实施方案中，组合物包含在约1mM与约200mM之间，在约1mM与约150mM之间，在约1mM与约100mM之间，在约1mM与约75mM之间，在约10mM与约200mM之间，在约10mM与约150mM之间，在约10mM与约100mM之间，在约10mM与约75mM之间，在约10mM与约50mM之间，在约10mM与约40mM之间，在约10mM与约30mM之间，在约20mM与约75mM之间，在约20mM与约50mM之间，在约20mM与约40mM之间，或在约20mM与约30mM之间的组氨酸。在另一实施方案中，组合物包含约1mM、约5mM、约10mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM、约100mM、约150mM或约200mM组氨酸。在一特定实施方案中，组合物可包含约10mM、约25mM组氨酸，或不包含组氨酸。
在一些实施方案中，组合物包含碳水化合物赋形剂。碳水化合物赋形剂可例如充当粘度增强剂、稳定剂、增积剂、增溶剂和/或类似剂。以重量或体积计，碳水化合物赋形剂通常在约1％至约99％之间存在，例如在约0.1％至约20％之间，在约0.1％至约15％之间，在约0.1％至约5％之间，在约1％至约20％之间，在约5％至约15％之间，在约8％至约10％之间，在约10％与约15％之间，在约15％与约20％之间，在0.1％至20％之间，在5％至15％之间，在8％至10％之间，在10％与15％之间，在15％与20％之间，在约0.1％至约5％之间，在约5％至约10％之间，或在约15％至约20％之间。在其他特定实施方案中，碳水化合物赋形剂以1％，或以1.5％，或以2％，或以2.5％，或以3％，或以4％，或以5％，或以10％，或以15％，或以20％存在。
在一些实施方案中，组合物包含碳水化合物赋形剂。适用于组合物中的碳水化合物赋形剂包括但不限于单糖，诸如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；二糖，诸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖等；多糖，诸如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、右旋糖酐、淀粉等；以及糖醇，诸如甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨糖醇(葡糖醇)等。在某些实施方案中，用于本文提供的组合物中的碳水化合物赋形剂选自蔗糖、海藻糖、乳糖、甘露糖醇和棉子糖。在一特定实施方案中，碳水化合物赋形剂是海藻糖。在另一特定实施方案中，碳水化合物赋形剂是甘露糖醇。在另一特定实施方案中，碳水化合物赋形剂是蔗糖。在另一特定实施方案中，碳水化合物赋形剂是棉子糖。碳水化合物赋形剂的纯度应是至少98％、或至少99％、或至少99.5％。
在一些实施方案中，组合物包含海藻糖。在某些实施方案中，组合物包含至少约1％、至少约2％、至少约4％、至少约8％、至少约20％、至少约30％或至少约40％海藻糖。在另一实施方案中，组合物包含在约1％与约40％之间，在约1％与约30％之间，在约1％与约20％之间，在约2％与约40％之间，在约2％与约30％之间，在约2％与约20％之间，在约4％与约40％之间，在约4％与约30％之间，或在约4％与约20％之间的海藻糖。在另一实施方案中，组合物包含约1％、约2％、约4％、约6％、约8％、约15％、约20％、约30％或约40％海藻糖。在一特定实施方案中，组合物包含约4％、约6％或约15％海藻糖。
在某些实施方案中，组合物包含赋形剂。在一特定实施方案中，组合物包含至少一种选自以下的赋形剂：糖、盐、表面活性剂、氨基酸、多元醇、螯合剂、乳化剂和防腐剂。在某些实施方案中，组合物包含盐，例如选自以下的盐：NaCl、KCl、CaCl2和MgCl2。在一特定实施方案中，组合物包含NaCl。
在一些实施方案中，组合物包含氨基酸例如赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、组氨酸，或氨基酸盐。组合物可包含至少约1mM、至少约10mM、至少约25mM、至少约50mM、至少约100mM、至少约150mM、至少约200mM、至少约250mM、至少约300mM、至少约350mM或至少约400mM氨基酸。在另一实施方案中，组合物可包含在约1mM与约100mM之间，在约10mM与约150mM之间，在约25mM与约250mM之间，在约25mM与约300mM之间，在约25mM与约350mM之间，在约25mM与约400mM之间，在约50mM与约250mM之间，在约50mM与约300mM之间，在约50mM与约350mM之间，在约50mM与约400mM之间，在约100mM与约250mM之间，在约100mM与约300mM之间，在约100mM与约400mM之间，在约150mM与约250mM之间，在约150mM与约300mM之间，或在约150mM与约400mM之间的氨基酸。在另一实施方案中，组合物包含约1mM、1.6mM、25mM、约50mM、约100mM、约150mM、约200mM、约250mM、约300mM、约350mM或约400mM的氨基酸。
在一些实施方案中，组合物包含表面活性剂。如本文所用的术语“表面活性剂”是指具有两亲性结构的有机物质；即，它们由具有相反溶解性倾向的基团组成，所述基团通常是油溶性烃链和水溶性离子性基团。视表面活性部分的电荷而定，表面活性剂可被分类为阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂。表面活性剂经常用作生物物质的各种药物组合物和制剂的湿润剂、乳化剂、增溶剂和分散剂。可任选地将药学上可接受的表面活性剂添加至组合物中以使聚集降低，所述药学上可接受的表面活性剂如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(polyoxamer)(例如泊洛沙姆188)；曲通(Triton)；辛基糖苷钠；月桂基磺基甜菜碱、肉豆蔻基磺基甜菜碱、亚油基磺基甜菜碱或硬脂基磺基甜菜碱；月桂基肌氨酸、肉豆蔻基肌氨酸、亚油基肌氨酸或硬脂基肌氨酸；亚油基甜菜碱、肉豆蔻基甜菜碱或鲸蜡基甜菜碱；月桂酰胺基丙基甜菜碱、椰油酰胺基丙基甜菜碱、亚油酰胺基丙基甜菜碱、肉豆蔻酰胺基丙基甜菜碱、棕榈酰胺基丙基甜菜碱或异硬脂酰胺基丙基甜菜碱(例如月桂酰胺基丙基甜菜碱)；肉豆蔻酰胺基丙基二甲胺、棕榈酰胺基丙基二甲胺或异硬脂酰胺基丙基二甲胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油烯基牛磺酸二钠；以及
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系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙基二醇、聚丙基二醇、以及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如/>
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PF68等)。在某些实施方案中，组合物包含聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。如果泵或塑料容器用于施用组合物，那么表面活性剂是特别有用的。药学上可接受的表面活性剂的存在缓和了蛋白质聚集的倾向。组合物可包含在约0.001％至约1％、或约0.001％至约0.1％、或约0.01％至约0.1％之间的范围内的浓度的聚山梨醇酯。在其他特定实施方案中，组合物包含0.001％或0.002％或0.003％或0.004％或0.005％或0.006％或0.007％或0.008％或0.009％或0.01％或0.015％或0.02％的浓度的聚山梨醇酯。
在一些实施方案中，组合物包含其他赋形剂和/或添加剂，包括但不限于稀释剂、粘合剂、稳定剂、亲脂性溶剂、防腐剂、佐剂等。药学上可接受的赋形剂和/或添加剂可用于本文提供的组合物中。可任选地将通常使用的赋形剂/添加剂添加至组合物中以使聚集降低，所述赋形剂/添加剂诸如是药学上可接受的螯合剂(例如但不限于EDTA、DTPA或EGTA)。如果泵或塑料容器用于施用组合物，那么这些添加剂是特别有用的。
在一些实施方案中，组合物包含防腐剂。可任选地将防腐剂以在诸如在约0.001％至约5％之间或其中任何范围或数值的任何适合浓度添加至组合物中，所述防腐剂诸如是苯酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苯甲醇、亚硝酸苯汞、苯氧乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化镁(例如但不限于氯化镁六水合物)、对羟基苯甲酸烷基酯(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯等)、苯扎氯铵、苄索氯铵、脱氢乙酸钠和硫柳汞、或它们的混合物。用于组合物中的防腐剂的浓度是足以产生微生物影响的浓度。所述浓度依赖于所选防腐剂，并且易于由熟练技术人员确定。
在一些实施方案中，组合物与人血液等张，其中组合物具有与人血液基本上相同的渗透压。所述等张组合物将通常具有从约250mOSm至约350mOSm的渗透压。等张性可通过例如使用蒸汽压型或冰冷冻型渗透计测量。组合物的张力通过使用张力调节剂来调整。“张力调节剂”是可添加至组合物中以提供组合物的等张性的那些药学上可接受的惰性物质。适于本文提供的组合物的张力调节剂包括但不限于糖、盐和氨基酸。
在某些实施方案中，组合物是大致上不含内毒素和/或相关致热物质的无热原组合物。内毒素包括局限在微生物的内部，并且仅当所述微生物被分解或死亡时才释放的毒素。致热物质还包括来自细菌和其他微生物的外膜的诱发发热的热稳定物质。如果向人施用，那么这两种物质均可导致发热、低血压和休克。由于潜在有害影响，即使低量的内毒素也必须从静脉内施用的制药药物溶液移除。对于静脉内药物施加，食品与药物管理局(“FDA”)已设置了在单一小时时期中每千克体重每剂5个内毒素单位(EU)的上限(TheUnited States Pharmacopeial Convention,Pharmacopeial Forum 26(1):223(2000))。当治疗性蛋白质以每千克体重数百或数千毫克的量施用时，如在目标蛋白质(例如抗体)的情况下可就是这样，即使痕量的有害和危险内毒素也必须被移除。在一些实施方案中，组合物中的内毒素和热原水平是小于10EU/mg，或小于5EU/mg，或小于1EU/mg，或小于0.1EU/mg，或小于0.01EU/mg，或小于0.001EU/mg。
当用于体内施用时，本文所述的组合物应是无菌的。组合物可通过各种灭菌方法灭菌，所述方法包括无菌过滤、辐射等。在某些实施方案中，组合物用预先灭菌的0.22微米过滤器进行过滤灭菌。注射用无菌组合物可根据如“Remington:The Science&Practice ofPharmacy”,第21版,Lippincott Williams&Wilkins,(2005)中所述的常规药物规范配制。包含目标蛋白质(例如抗体)诸如本文公开的那些的组合物通常将以冻干形式或以溶液形式储存。预期将包含目标蛋白质(例如抗体)的无菌组合物放置至具有无菌接入口的容器中，所述容器例如是静脉内溶液袋或具有允许重获组合物的适配器诸如可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶。在某些实施方案中，组合物以预填充注射器形式提供。
在某些实施方案中，组合物是冻干制剂。术语“经冻干”或“经冷冻干燥”包括已经受干燥程序诸如冻干的物质的状态，其中至少50％的水分已被移除。
无论所选施用途径如何，本文提供的可以适合水合形式使用的药剂和/或本文提供的药物组合物都通过为本领域技术人员所知的常规方法配制成药学上可接受的剂型。
在本文提供的方法中，人抗体、Fc融合蛋白和/或药物组合物可通过任何适合施用途径递送，包括以口服方式、如通过例如喷雾剂以经鼻方式、以经直肠方式、以阴道内方式、以胃肠外方式、以脑池内方式以及如通过粉剂、软膏剂或滴剂以外用方式，包括以经颊方式和以舌下方式递送。在某些实施方案中，药物组合物以全身性方式递送(例如通过口服或胃肠外施用)。
在某些实施方案中，可改变本文所述的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平以便确定活性成分的在动物模型、组合物和施用模式中有效实现所需治疗响应而在动物模型中无毒的量。
举例来说，在某些实施方案中，本文所述的非人动物用于确定一种或多种人抗体候选物的药物代谢动力学概况。在各种实施方案中，使一种或多种如本文所述的非人动物和一种或多种对照或参考非人动物各自暴露于一种或多种在各种剂量(例如0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/mg、7.5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg或更大剂量)下的人抗体候选物。候选治疗性抗体可通过任何所需施用途径来给药，包括胃肠外和非胃肠外施用途径。胃肠外途径包括例如静脉内、动脉内、门静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、脊柱内、鞘内、脑室内、颅内、胸膜内或其他注射途径。非胃肠外途径包括例如口服、经鼻、经皮、经肺、经直肠、经颊、经阴道、经眼。施用还可通过连续输注、局部施用、从植入物(凝胶、膜等)持续释放和/或静脉内注射来进行。在各个时间点(例如0小时、6小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或多达30天或更多天)从非人动物(人源化和对照)分离血液。可进行各种测定以使用从如本文所述的非人动物获得的样品测定所施用候选治疗性抗体的药物代谢动力学概况，包括但不限于总IgG、抗治疗性抗体应答、凝集等。
在各种实施方案中，如本文所述的非人动物用于测量阻断或调节目标多肽的活性的治疗作用，以及由于细胞变化而对基因表达的影响，或在受体多肽的情形下，对非人动物中细胞的表面上的受体多肽的密度的影响。在各种实施方案中，使如本文所述的非人动物或从其分离的细胞暴露于结合目标多肽的候选治疗剂，并且在后续一段时期之后，分析对与所述目标多肽相关的特定细胞过程例如配体-受体相互作用或信号转导的影响。
如本文所述的非人动物提供了一种用于开发和选择供在肿瘤学和/或感染性疾病中使用的人抗体的改进体内系统。在各种实施方案中，如本文所述的非人动物和对照非人动物(例如具有与如本文所述的遗传修饰不同的遗传修饰或不具有遗传修饰，即野生型)可用肿瘤(或肿瘤细胞)进行植入或用病毒(例如流感病毒、HIV、HCV、HPV等)进行感染。在植入或感染之后，可向非人动物施用候选治疗剂。在施用候选治疗剂之前，可允许肿瘤或病毒有足够时间在非人动物内的一个或多个位置中建立。另选地和/或另外，可监测所述非人动物中的免疫应答以便表征和选择可作为治疗剂开发的潜在人抗体。
制备人抗体的方法
在某些方面，本文提供了使用包含本文提供的人源化重链基因座和本文提供的人轻链基因座(例如本文提供的人源化κ和/或λ轻链基因座)的啮齿动物(例如小鼠或大鼠)制备人抗体的方法。在一些实施方案中，啮齿动物还包含本文提供的人源化CD79a基因座和/或本文提供的人源化CD79b基因座。在一些实施方案中，啮齿动物还包含本文提供的人源化FcRn基因座和/或本文提供的人源化β2M基因座。在某些实施方案中，啮齿动物还包含本文提供的人源化FcγR1a基因座。在一些实施方案中，啮齿动物还包含本文提供的人源化FcεR1α基因座。在一些实施方案中，啮齿动物还包含本文提供的人源化FcγR2b基因座、本文提供的人源化FcγR2c基因座、本文提供的人源化FcγR3a基因座和/或本文提供的人源化FcγR3b基因座。
本文提供的啮齿动物可用于使用本领域中已知的标准方法来制备抗体(例如人抗体)。举例来说，在一些实施方案中，用目标抗原使本文提供的啮齿动物免疫，所述免疫在足以使所述啮齿动物产生对所述目标抗原的免疫应答的条件下以及持续足以使所述啮齿动物产生对所述目标抗原的免疫应答的时间来进行。在一些实施方案中，目标抗原是人抗体(例如人治疗性抗体)或Fc融合蛋白(例如治疗性Fc融合蛋白)。从啮齿动物(或一种或多种细胞，例如一种或多种B细胞)分离抗体，并且使用测量例如亲和力、特异性、表位定位、阻断配体-受体相互作用的能力、抑制受体活化等的各种测定来表征。
在一些实施方案中，提供了一种在啮齿动物(例如小鼠或大鼠)中产生抗体的方法，所述方法包括以下步骤：(a)用目标抗原使如本文所述的产生人抗体的啮齿动物免疫，(b)在足以使所述啮齿动物产生对所述目标抗原的免疫应答的条件下维持所述啮齿动物，和(c)从所述啮齿动物或啮齿动物细胞回收结合所述目标抗原的抗体。在一些实施方案中，所述方法还包括破坏啮齿动物中的对抗原的免疫耐受性，或以其他方式使目标抗原缺失，例如采用使用多种引导RNA的CRISPR/Cas9系统来使与使啮齿动物免疫所用的目标抗原同源或共有目标表位的自身抗原的表达降低或消除(例如如美国专利公布号2017/0332610中所述，所述专利据此以引用的方式并入)。
在一些实施方案中，提供了一种在啮齿动物中产生编码人重链和/或轻链的核酸的方法，所述方法包括以下步骤：(a)用目标抗原使如本文所述的表达人抗体的啮齿动物免疫，(b)在足以使所述啮齿动物产生对所述目标抗原的免疫应答的条件下维持所述啮齿动物，和(c)从所述啮齿动物或啮齿动物细胞回收编码人重链和/或轻链的核酸。
在一些实施方案中，本文提供的啮齿动物可用于制备抗药物抗体(例如抗独特型抗体)。举例来说，在一些实施方案中，用人治疗性抗体使本文提供的啮齿动物免疫，所述免疫在足以使所述啮齿动物产生对所述人治疗性抗体的免疫应答的条件下以及持续足以使所述啮齿动物产生对所述人治疗性抗体的免疫应答的时间来进行。在一些实施方案中，人治疗性抗体具有与由本文提供的啮齿动物的人源化免疫球蛋白重链基因座编码的重链恒定结构域相同的重链恒定结构域。在一些实施方案中，人治疗性抗体具有与由本文提供的啮齿动物的人源化免疫球蛋白轻链基因座(例如人源化κ和/或λ轻链基因座)编码的轻链恒定结构域相同的轻链恒定结构域。在一些实施方案中，啮齿动物在它的基因组中不包含从中获得治疗性抗体的人可变区基因区段中的一者或多者(例如啮齿动物中的一个或多个免疫球蛋白基因座包含啮齿动物可变区或其部分)。从啮齿动物(或一种或多种细胞，例如一种或多种B细胞)分离抗药物抗体(例如抗独特型抗体)，并且使用测量例如亲和力、特异性、表位定位、阻断抗原-治疗性抗体相互作用的能力等的各种测定来表征。所产生的抗药物抗体(例如抗独特型抗体)可用于对人治疗性抗体的药物代谢动力学(PK)分析，或在临床前分析期间用于分析人治疗性抗体的免疫原性，或用于定位人治疗性抗体。
在一些实施方案中，提供了一种在啮齿动物(例如小鼠或大鼠)中产生抗药物抗体(例如抗独特型抗体)的方法，所述方法包括以下步骤：(a)用人治疗性抗体使如本文所述的产生包含一种或多种人恒定区的抗体的啮齿动物免疫，所述人治疗性抗体与存在于所述啮齿动物中的人恒定区是同种型匹配的，(b)在足以使所述啮齿动物产生对所述人治疗性抗体的免疫应答的条件下维持所述啮齿动物，和(c)从所述啮齿动物或啮齿动物细胞回收结合所述人治疗性抗体的抗体。
制备经遗传修饰非人动物和ES细胞的方法
在某些方面，本文提供了制备包含此处提供的经遗传修饰基因座中的一者或多者的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。举例来说，在一些实施方案中，本文提供了制备包含本文提供的人源化重链基因座和/或本文提供的人轻链基因座(例如本文提供的人源化κ和/或λ轻链基因座)的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在一些实施方案中，本文提供了制备还包含本文提供的人源化CD79a基因座和/或本文提供的人源化CD79b基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在一些实施方案中，本文提供了制备还包含本文提供的人源化FcRn基因座和/或本文提供的人源化β2M基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在一些实施方案中，本文提供了制备还包含本文提供的人源化FcεR1α基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在某些实施方案中，本文提供了制备还包含本文提供的人源化FcγR1a基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在一些实施方案中，本文提供了制备还包含本文提供的人源化FcεR1α基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在一些实施方案中，本文提供了制备还包含本文提供的人源化FcγR2a基因座、本文提供的人源化FcγR2b基因座、本文提供的人源化FcγR2c基因座、本文提供的人源化FcγR3a基因座和/或本文提供的人源化FcγR3b基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在某些实施方案中，本文提供了制备包含本文提供的人源化FcRn基因座和/或本文提供的人源化β2M基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。在某些实施方案中，本文提供了制备包含本文提供的人源化FcεR1α基因座的非人动物(例如小鼠或大鼠)和ES细胞的方法。制备本文提供的经遗传修饰非人动物和ES细胞的示例性方法在本文描述、实施例和/或附图中加以描述。
试剂盒
本文提供了一种包括一个或多个容器的包装或试剂盒，所述容器装有至少一种如本文描述、实施例和/或附图中所述的非人动物、非人细胞、DNA片段和/或靶向载体。试剂盒可用于任何适用方法(例如研究方法)中。任选地与所述一个或多个容器相伴的可为呈由监管药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构指定的形式的通知，所述通知反映(a)由该机构对用于人类施用的制造、使用或销售的核准，(b)使用说明，(c)管控材料和/或生物产品(例如如本文所述的非人动物或非人细胞)在两个或更多个实体之间的转移的协议，以及它们的组合。
额外示例性实施方案
在示例性实施方案1中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgG恒定结构域的CH基因区段，所述IgG恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述VH基因区段、所述DH基因区段和所述JH基因区段的可变结构域和源于所述CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案2中，本文提供了如实施方案1所述的啮齿动物，其中所述IgG跨膜结构域是啮齿动物IgG跨膜结构域。
在示例性实施方案3中，本文提供了如实施方案1所述的啮齿动物，其中所述IgG跨膜结构域是人IgG跨膜结构域。
在示例性实施方案4中，本文提供了如实施方案1至3中的任一者所述的啮齿动物，其中所述IgG细胞质结构域是啮齿动物IgG细胞质结构域。
在示例性实施方案5中，本文提供了如实施方案1至3中的任一者所述的啮齿动物，其中所述IgG细胞质结构域是人IgG细胞质结构域。
在示例性实施方案6中，本文提供了如实施方案1至5中的任一者所述的啮齿动物，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG1结构域。
在示例性实施方案7中，本文提供了如实施方案6所述的啮齿动物，其中所述IgG1结构域由选自IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04和IGHG1*05的等位基因编码。
在示例性实施方案8中，本文提供了如实施方案1至5中的任一者所述的啮齿动物，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG2结构域。
在示例性实施方案9中，本文提供了如实施方案8所述的啮齿动物，其中所述IgG2结构域由选自IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05和IGHG2*06的等位基因编码。
在示例性实施方案10中，本文提供了如实施方案1至5中的任一者所述的啮齿动物，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG3结构域。
在示例性实施方案11中，本文提供了如实施方案10所述的啮齿动物，其中所述IgG3结构域由选自IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18和IGHG3*19的等位基因编码。
在示例性实施方案12中，本文提供了如实施方案1至5中的任一者所述的啮齿动物，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG4结构域。
在示例性实施方案13中，本文提供了如实施方案12所述的啮齿动物，其中所述IgG4结构域由选自IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03和IGHG4*04的等位基因编码。
在示例性实施方案14中，本文提供了如实施方案6至13中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段基因座处。
在示例性实施方案15中，本文提供了如实施方案14所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段。
在示例性实施方案16中，本文提供了如实施方案6至13中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ1基因区段基因座处。
在示例性实施方案17中，本文提供了如实施方案16所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ1基因区段。
在示例性实施方案18中，本文提供了如实施方案6至13中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2b基因区段基因座处。
在示例性实施方案19中，本文提供了如实施方案18所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2b基因区段。
在示例性实施方案20中，本文提供了如实施方案6至13中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ3基因区段基因座处。
在示例性实施方案21中，本文提供了如实施方案20所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ3基因区段。
在示例性实施方案22中，本文提供了如实施方案1至21中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cμ基因区段。
在示例性实施方案23中，本文提供了如实施方案1至21中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cμ基因区段。
在示例性实施方案24中，本文提供了如实施方案1至23中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cδ基因区段。
在示例性实施方案25中，本文提供了如实施方案1至23中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cδ基因区段。
在示例性实施方案26中，本文提供了如实施方案1至25中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ1基因区段。
在示例性实施方案27中，本文提供了如实施方案1至26中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段。
在示例性实施方案28中，本文提供了如实施方案1至27中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2b基因区段。
在示例性实施方案29中，本文提供了如实施方案1至28中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ3基因区段。
在示例性实施方案30中，本文提供了如实施方案1至29中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cε基因区段。
在示例性实施方案31中，本文提供了如实施方案1至29中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案32中，本文提供了如实施方案1至31中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cα基因区段。
在示例性实施方案33中，本文提供了如实施方案1至31中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案34中，本文提供了如实施方案1至21中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案35中，本文提供了如实施方案34所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案36中，本文提供了如实施方案34或实施方案35所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案37中，本文提供了如实施方案34至36中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案38中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgM恒定结构域的CH基因区段，所述IgM恒定结构域包含人CH1结构域、人CH2结构域、人CH3结构域、人CH4结构域、IgM跨膜结构域和IgM细胞质结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述VH基因区段、所述DH基因区段和所述JH基因区段的可变结构域和源于所述CH基因区段的重链恒定结构域的IgM抗体。
在示例性实施方案39中，本文提供了如实施方案38所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cδ基因区段。
在示例性实施方案40中，本文提供了如实施方案38或39所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ3基因区段。
在示例性实施方案41中，本文提供了如实施方案38至40中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案42中，本文提供了如实施方案38至41中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段。
在示例性实施方案43中，本文提供了如实施方案38至42中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案44中，本文提供了如实施方案38至43中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案45中，本文提供了如实施方案44所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案46中，本文提供了如实施方案44或实施方案45所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案47中，本文提供了如实施方案44至46中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案48中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgD恒定结构域的CH基因区段，所述IgD恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链H1结构域、人铰链H2结构域、人CH2结构域、人CH3结构域、人IgD跨膜结构域和人IgD细胞质结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述VH基因区段、所述DH基因区段和所述JH基因区段的可变结构域和源于所述CH基因区段的重链恒定结构域的IgD抗体。
在示例性实施方案49中，本文提供了如实施方案48所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cμ基因区段。
在示例性实施方案50中，本文提供了如实施方案48或49所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ3基因区段。
在示例性实施方案51中，本文提供了如实施方案48至50中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案52中，本文提供了如实施方案48至51中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段。
在示例性实施方案53中，本文提供了如实施方案48至52中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案54中，本文提供了如实施方案48至53中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案55中，本文提供了如实施方案54所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案56中，本文提供了如实施方案54或实施方案55所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案57中，本文提供了如实施方案54至56中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案58中，本文提供了如实施方案1至57中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物内含子性增强子(Ei)。
在示例性实施方案59中，本文提供了如实施方案1至57中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人内含子性增强子(Ei)。
在示例性实施方案60中，本文提供了如实施方案1至59中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物3′调控区(3′RR)。
在示例性实施方案61中，本文提供了如实施方案1至5中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人3′调控区(3′RR)。
在示例性实施方案62中，本文提供了如实施方案1至61中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sμ转换位点。
在示例性实施方案63中，本文提供了如实施方案1至62中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ3转换位点。
在示例性实施方案64中，本文提供了如实施方案1至63中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ1转换位点。
在示例性实施方案65中，本文提供了如实施方案1至64中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2b转换位点。
在示例性实施方案66中，本文提供了如实施方案1至65中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2a和/或Sγ2c转换位点。
在示例性实施方案67中，本文提供了如实施方案1至66中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sε转换位点。
在示例性实施方案68中，本文提供了如实施方案1至67中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sα转换位点。
在示例性实施方案69中，本文提供了如实施方案1至61中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sμ转换位点。
在示例性实施方案70中，本文提供了如实施方案1至61以及69中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ3转换位点。
在示例性实施方案71中，本文提供了如实施方案1至61以及69-70中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ1转换位点。
在示例性实施方案72中，本文提供了如实施方案1至61以及69-71中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ2转换位点。
在示例性实施方案73中，本文提供了如实施方案1至61以及69-72中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ4转换位点。
在示例性实施方案74中，本文提供了如实施方案1至61以及69-73中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sε转换位点。
在示例性实施方案75中，本文提供了如实施方案1至61以及69-74中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sα转换位点。
在示例性实施方案76中，本文提供了如实施方案1至75中的任一者所述的啮齿动物，其中所述VH基因区段是啮齿动物VH基因区段，所述DH基因区段是啮齿动物DH基因区段，并且所述JH基因区段是啮齿动物JH基因区段。
在示例性实施方案77中，本文提供了如实施方案76所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物VH基因区段、所述啮齿动物DH基因区段和所述啮齿动物JH基因区段是内源性啮齿动物基因区段。
在示例性实施方案78中，本文提供了如实施方案1至75中的任一者所述的啮齿动物，其中所述VH基因区段是人VH基因区段，所述DH基因区段是人DH基因区段，并且所述JH基因区段是人JH基因区段。
在示例性实施方案79中，本文提供了如实施方案78所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含至少3个人VH基因区段。
在示例性实施方案80中，本文提供了如实施方案78或实施方案79所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含人DH基因区段中的全部。
在示例性实施方案81中，本文提供了如实施方案78至80中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含人JH基因区段中的全部。
在示例性实施方案82中，本文提供了如实施方案78至81中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白重链可变区缺乏功能性内源性啮齿动物Adam6基因。
在示例性实施方案83中，本文提供了如实施方案78至82中的任一者所述的啮齿动物，其中种系基因组还包含编码功能性啮齿动物Adam6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在示例性实施方案84中，本文提供了如实施方案83所述的啮齿动物，其中所述功能性啮齿动物Adam6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段被表达。
在示例性实施方案85中，本文提供了如实施方案83或实施方案84所述的啮齿动物，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列包括在与所述免疫球蛋白重链可变区相同的染色体上。
在示例性实施方案86中，本文提供了如实施方案83至85中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列包括在所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座中。
在示例性实施方案87中，本文提供了如实施方案83至86中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列代替人Adam6假基因。
在示例性实施方案88中，本文提供了如实施方案83至87中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列替换人Adam6假基因。
在示例性实施方案89中，本文提供了如实施方案83至88中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列在第一人VH基因区段与第二人VH基因区段之间。
在示例性实施方案90中，本文提供了如实施方案89所述的啮齿动物，其中所述第一人VH基因区段是VH1-2，并且所述第二人VH基因区段是VH6-1。
在示例性实施方案91中，本文提供了如实施方案83至86中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列在人VH基因区段与人DH基因区段之间。
在示例性实施方案92中，本文提供了如实施方案1至91中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座位于内源性免疫球蛋白重链基因座处。
在示例性实施方案93中，本文提供了如实施方案92所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座替换所述内源性免疫球蛋白重链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案94中，本文提供了如实施方案1至93中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案95中，本文提供了如实施方案1至93中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案96中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、啮齿动物IgG2a跨膜结构域和啮齿动物IgG2a细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案97中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、人IgG1跨膜结构域和人IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案98中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、啮齿动物IgG1跨膜结构域和啮齿动物IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案99中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、人IgG4跨膜结构域和人IgG4细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案100中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含完全人重链的IgG抗体。
在示例性实施方案101中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含完全人重链的IgG抗体。
在示例性实施方案102中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含含有啮齿动物可变结构域和人恒定结构域的重链的IgG抗体。
在示例性实施方案103中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含含有啮齿动物可变结构域和人恒定结构域的重链的IgG抗体。
在示例性实施方案104中，本文提供了如实施方案96至103中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座位于内源性免疫球蛋白重链基因座处。
在示例性实施方案105中，本文提供了如实施方案104所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座替换所述内源性免疫球蛋白重链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案106中，本文提供了如实施方案96至105中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案107中，本文提供了如实施方案96至105中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案108中，本文提供了如实施方案1至107中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白κ(kappa)链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座包含：(1)免疫球蛋白κ链可变区，所述免疫球蛋白κ链可变区包含人Vκ基因区段和人Jκ基因区段；和(2)免疫球蛋白κ链恒定区，所述免疫球蛋白κ链恒定区包含人Cκ基因区段，其中所述免疫球蛋白κ链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白κ链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人Vκ基因区段和所述人Jκ基因区段的轻链可变结构域和源于所述人Cκ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。
在示例性实施方案109中，本文提供了如实施方案108所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物内含子性κ增强子(Eκi)。
在示例性实施方案110中，本文提供了如实施方案108所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含人内含子性κ增强子(Eκi)。
在示例性实施方案111中，本文提供了如实施方案108至110中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物3′κ增强子(Eκ3′)。
在示例性实施方案112中，本文提供了如实施方案108至110中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含人3′κ增强子(Eκ3′)。
在示例性实施方案113中，本文提供了如实施方案108至112中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白κ链可变区包含至少6个人Vκ基因区段。
在示例性实施方案114中，本文提供了如实施方案108至113中的任一者所述的啮齿动物，其中所述免疫球蛋白κ链可变区包含人Jκ基因区段中的全部。
在示例性实施方案115中，本文提供了如实施方案108至114中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座位于内源性免疫球蛋白κ链基因座处。
在示例性实施方案116中，本文提供了如实施方案115所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白κ链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案117中，本文提供了如实施方案108至116中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案118中，本文提供了如实施方案108至116中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案119中，本文提供了如实施方案1至118中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白λ(lambda)链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含：人Vλ基因区段、人Jλ基因区段和人Cλ基因区段，其中所述人Vλ基因区段和所述人Jλ基因区段可操作地连接于所述人Cλ基因区段，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人Vλ基因区段和所述人Jλ基因区段的轻链可变结构域和源于所述人Cλ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。
在示例性实施方案120中，本文提供了如实施方案119所述的啮齿动物，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ1基因区段。
在示例性实施方案121中，本文提供了如实施方案120所述的啮齿动物，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ1基因区段。
在示例性实施方案122中，本文提供了如实施方案119所述的啮齿动物，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ2基因区段。
在示例性实施方案123中，本文提供了如实施方案122所述的啮齿动物，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ2基因区段。
在示例性实施方案124中，本文提供了如实施方案119所述的啮齿动物，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ3基因区段。
在示例性实施方案125中，本文提供了如实施方案124所述的啮齿动物，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ3基因区段。
在示例性实施方案126中，本文提供了如实施方案119所述的啮齿动物，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ6基因区段。
在示例性实施方案127中，本文提供了如实施方案126所述的啮齿动物，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ6基因区段。
在示例性实施方案128中，本文提供了如实施方案119所述的啮齿动物，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ7基因区段。
在示例性实施方案129中，本文提供了如实施方案119至128中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Cλ1基因区段、人Cλ2基因区段、人Cλ3基因区段、人Cλ6基因区段和啮齿动物Cλ1基因区段。
在示例性实施方案130中，本文提供了如实施方案129所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Jλ1基因区段、人Jλ2基因区段、人Jλ3基因区段、人Jλ6基因区段和人Jλ7基因区段。
在示例性实施方案131中，本文提供了如实施方案130所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Jλ1-Cλ1基因区段簇、人Jλ2-Cλ2基因区段簇、人Jλ3-Cλ3基因区段簇、人Jλ6-Cλ6基因区段簇和人Jλ7-啮齿动物Cλ1基因区段簇。
在示例性实施方案132中，本文提供了如实施方案119至131中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含至少7个人Vλ基因区段。
在示例性实施方案133中，本文提供了如实施方案119至132中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子2.4。
在示例性实施方案134中，本文提供了如实施方案119至133中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物3′λ增强子。
在示例性实施方案135中，本文提供了如实施方案119至134中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子3.1。
在示例性实施方案136中，本文提供了如实施方案119至135中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含人3′λ增强子。
在示例性实施方案137中，本文提供了如实施方案119至136中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座位于内源性免疫球蛋白λ链基因座处。
在示例性实施方案138中，本文提供了如实施方案137所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白λ链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案139中，本文提供了如实施方案119至138中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案140中，本文提供了如实施方案119至138中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案141中，本文提供了如实施方案1至140中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述经工程改造新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcRn多肽的核酸序列。
在示例性实施方案142中，本文提供了如实施方案141所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案143中，本文提供了如实施方案141所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案144中，本文提供了如实施方案141至143中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案145中，本文提供了如实施方案141至143中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案146中，本文提供了如实施方案141至145中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
在示例性实施方案147中，本文提供了如实施方案146所述的啮齿动物，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
在示例性实施方案148中，本文提供了如实施方案141所述的啮齿动物，其中编码所述FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案149中，本文提供了如实施方案141至148中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
在示例性实施方案150中，本文提供了如实施方案141至149中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案151中，本文提供了如实施方案141至149中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案152中，本文提供了如实施方案141至151中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述经工程改造β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在示例性实施方案153中，本文提供了如实施方案152所述的啮齿动物，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
在示例性实施方案154中，本文提供了如实施方案153所述的啮齿动物，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
在示例性实施方案155中，本文提供了如实施方案152至154中的任一者所述的啮齿动物，其中所述核酸序列包含人β2M基因的外显子2-4。
在示例性实施方案156中，本文提供了如实施方案152至155中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
在示例性实施方案157中，本文提供了如实施方案152至156中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案158中，本文提供了如实施方案152至156中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案159中，本文提供了如实施方案1至158中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述经工程改造Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
在示例性实施方案160中，本文提供了如实施方案159所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案161中，本文提供了如实施方案159所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案162中，本文提供了如实施方案159至161中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案163中，本文提供了如实施方案159至161中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案164中，本文提供了如实施方案159至163中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
在示例性实施方案165中，本文提供了如实施方案164所述的啮齿动物，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
在示例性实施方案166中，本文提供了如实施方案165所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。
在示例性实施方案167中，本文提供了如实施方案159所述的啮齿动物，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案168中，本文提供了如实施方案159至167中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
在示例性实施方案169中，本文提供了如实施方案159至168中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案170中，本文提供了如实施方案159至168中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案171中，本文提供了如实施方案1至170中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体1a(FcγR1a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体1a基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcγR1a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案172中，本文提供了如实施方案171所述的啮齿动物，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案173中，本文提供了如实施方案171所述的啮齿动物，其中所述FcγR1a多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案174中，本文提供了如实施方案171至173中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案175中，本文提供了如实施方案171至173中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcγR1a多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案176中，本文提供了如实施方案171至175中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcγR1a基因座处。
在示例性实施方案177中，本文提供了如实施方案176所述的啮齿动物，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcγR1a基因的全部或一部分。
在示例性实施方案178中，本文提供了如实施方案171所述的啮齿动物，其中编码所述人FcγR1a细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcγR1a细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案179中，本文提供了如实施方案171至178中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcγR1a。
在示例性实施方案180中，本文提供了如实施方案171至179中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR1a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案181中，本文提供了如实施方案171至179中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR1a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案182中，本文提供了如实施方案1至181中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2a(FcγR2a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2a基因座包含编码人FcγR2a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案183中，本文提供了如实施方案182所述的啮齿动物，其中编码所述FcγR2a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案184中，本文提供了如实施方案183所述的啮齿动物，其中编码所述人FcγR2a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案185中，本文提供了如实施方案182至184中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案186中，本文提供了如实施方案182至184中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案187中，本文提供了如实施方案1至186中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2b(FcγR2b)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2b基因座包含编码人FcγR2b多肽的核酸序列。
在示例性实施方案188中，本文提供了如实施方案187所述的啮齿动物，其中编码所述FcγR2b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案189中，本文提供了如实施方案188所述的啮齿动物，其中编码所述人FcγR2b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案190中，本文提供了如实施方案187至189中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2b基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案191中，本文提供了如实施方案187至189中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2b基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案192中，本文提供了如实施方案1至191中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体3a(FcγR3a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体3a基因座包含编码人FcγR3a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案193中，本文提供了如实施方案192所述的啮齿动物，其中编码所述FcγR3a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案194中，本文提供了如实施方案193所述的啮齿动物，其中编码所述人FcγR3a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案195中，本文提供了如实施方案192至194中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案196中，本文提供了如实施方案192至194中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案197中，本文提供了如实施方案1至196中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体3b(FcγR3b)基因座，所述经工程改造Fcγ受体3b基因座包含编码人FcγR3b多肽的核酸序列。
在示例性实施方案198中，本文提供了如实施方案197所述的啮齿动物，其中编码所述FcγR3b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案199中，本文提供了如实施方案197所述的啮齿动物，其中编码所述人FcγR3b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案200中，本文提供了如实施方案197至199中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3b基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案201中，本文提供了如实施方案197至199中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3b基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案202中，本文提供了如实施方案1至201中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2c(FcγR2c)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2c基因座包含编码人FcγR2c多肽的核酸序列。
在示例性实施方案203中，本文提供了如实施方案202所述的啮齿动物，其中编码所述FcγR2c多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案204中，本文提供了如实施方案203所述的啮齿动物，其中编码所述人FcγR2c多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案205中，本文提供了如实施方案202至204中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcγR2c。
在示例性实施方案206中，本文提供了如实施方案202至205中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2c基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案207中，本文提供了如实施方案202至205中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2c基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案208中，本文提供了一种啮齿动物，所述啮齿动物在它的基因组中包含经工程改造新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述经工程改造新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcRn多肽的核酸序列。
在示例性实施方案209中，本文提供了如实施方案208所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案210中，本文提供了如实施方案208所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案211中，本文提供了如实施方案208至210中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案212中，本文提供了如实施方案208至210中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案213中，本文提供了如实施方案208至212中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
在示例性实施方案214中，本文提供了如实施方案213所述的啮齿动物，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
在示例性实施方案215中，本文提供了如实施方案208所述的啮齿动物，其中编码所述人FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案216中，本文提供了如实施方案208至215中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
在示例性实施方案217中，本文提供了如实施方案208至216中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案218中，本文提供了如实施方案208至216中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案219中，本文提供了如实施方案208至218中的任一者所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在示例性实施方案220中，本文提供了如实施方案219所述的啮齿动物，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
在示例性实施方案221中，本文提供了如实施方案220所述的啮齿动物，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
在示例性实施方案222中，本文提供了如实施方案219至221中的任一者所述的啮齿动物，其中所述核酸序列包含人β2M基因的外显子2-4。
在示例性实施方案223中，本文提供了如实施方案219至222中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
在示例性实施方案224中，本文提供了如实施方案219至223中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案225中，本文提供了如实施方案219至223中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案226中，本文提供了一种啮齿动物，所述啮齿动物在它的基因组中包含经工程改造Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述经工程改造Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
在示例性实施方案227中，本文提供了如实施方案226所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案228中，本文提供了如实施方案226所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案229中，本文提供了如实施方案226至228中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案230中，本文提供了如实施方案226至228中的任一者所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案231中，本文提供了如实施方案226至230中的任一者所述的啮齿动物，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
在示例性实施方案232中，本文提供了如实施方案231所述的啮齿动物，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
在示例性实施方案233中，本文提供了如实施方案232所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。
在示例性实施方案234中，本文提供了如实施方案226所述的啮齿动物，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案235中，本文提供了如实施方案226至234中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
在示例性实施方案236中，本文提供了如实施方案226至235中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案237中，本文提供了如实施方案226至235中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案238中，本文提供了如实施方案1至237中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是小鼠。
在示例性实施方案239中，本文提供了如实施方案1至237中的任一者所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是大鼠。
在示例性实施方案240中，本文提供了一种测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的方法，所述方法包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量所施用治疗性蛋白质的一种或多种药物代谢动力学性质。
在示例性实施方案241中，本文提供了如实施方案240所述的方法，其中所述一种或多种药物代谢动力学性质选自以下中的一者或多者：血浆浓度对时间下面积(AUC)、体内回收率(IVR)、清除率(CL)、平均滞留时间(MRT)、药剂半衰期(t1/2)以及在稳定状态下的分布容积(Vss)。
在示例性实施方案242中，本文提供了一种测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的治疗功效的方法，所述方法包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量所施用治疗性蛋白质的所述治疗功效。
在示例性实施方案243中，本文提供了一种确定包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的治疗有效剂量的方法，所述方法包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用多种剂量的所述治疗性蛋白质，以及测定每种剂量的所述治疗性蛋白质的治疗功效。
在示例性实施方案244中，本文提供了一种确定包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的安全剂量的方法，所述方法包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用多种剂量的所述治疗性蛋白质，以及测定每种剂量的所述治疗性蛋白质的安全性。
在示例性实施方案245中，本文提供了一种确定包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的可耐受剂量的方法，所述方法包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用多种剂量的所述治疗性蛋白质，以及测定每种剂量的所述治疗性蛋白质的可耐受性。
在示例性实施方案246中，本文提供了一种测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的方法，所述方法包括向如实施方案148至239中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量所述啮齿动物中的一种或多种Fc受体介导的应答。
在示例性实施方案247中，本文提供了如实施方案246所述的方法，其中所述一种或多种Fc受体介导的应答包括ADCC应答。
在示例性实施方案248中，本文提供了一种筛选包含人抗体的人Fc区的治疗剂的方法，所述方法包括：(a)向如实施方案148至239中的任一者所述的啮齿动物施用包含人抗体的Fc区的药剂，其中所述药剂结合所述小鼠中的靶标细胞；(b)测量天然杀伤(NK)细胞针对所述靶标细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；和(c)将步骤(b)中ADCC的量与对照进行比较，其中靶标细胞杀伤增加指示所述药剂具有增加的介导ADCC的能力。
在示例性实施方案249中，本文提供了一种测量由啮齿动物针对包含人Fc结构域的治疗性蛋白质产生的免疫应答的方法，所述方法包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量由啮齿动物针对治疗性蛋白质产生的所述免疫应答。
在示例性实施方案250中，本文提供了如实施方案240至249中的任一者所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是人抗体。
在示例性实施方案251中，本文提供了如实施方案240至249中的任一者所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是Fc融合蛋白。
在示例性实施方案252中，本文提供了如实施方案240至251中的任一者所述的方法，其中所述人Fc结构域是人IgG1 Fc结构域。
在示例性实施方案253中，本文提供了如实施方案252所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是人IgG1抗体。
在示例性实施方案254中，本文提供了如实施方案252所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG1 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案255中，本文提供了如实施方案252至254中的任一者所述的方法，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ1基因区段。
在示例性实施方案256中，本文提供了如实施方案240至251中的任一者所述的方法，其中所述人Fc结构域是人IgG2 Fc结构域。
在示例性实施方案257中，本文提供了如实施方案256所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是人IgG2抗体。
在示例性实施方案258中，本文提供了如实施方案256所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG2 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案259中，本文提供了如实施方案256至258中的任一者所述的方法，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ2基因区段。
在示例性实施方案260中，本文提供了如实施方案240至251中的任一者所述的方法，其中所述人Fc结构域是人IgG3 Fc结构域。
在示例性实施方案261中，本文提供了如实施方案260所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是人IgG3抗体。
在示例性实施方案262中，本文提供了如实施方案260所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG3 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案263中，本文提供了如实施方案260至262中的任一者所述的方法，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ3基因区段。
在示例性实施方案264中，本文提供了如实施方案240至251中的任一者所述的方法，其中所述人Fc结构域是人IgG4 Fc结构域。
在示例性实施方案265中，本文提供了如实施方案264所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是人IgG4抗体。
在示例性实施方案266中，本文提供了如实施方案264所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG4 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案267中，本文提供了如实施方案264至266中的任一者所述的方法，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ4基因区段。
在示例性实施方案268中，本文提供了如实施方案250、252、253、255-257、259-261、263-265以及267中的任一者所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是具有κ轻链的人抗体，并且所述啮齿动物表达包含人κ轻链的抗体。
在示例性实施方案269中，本文提供了如实施方案250、252、253、255-257、259-261、263-265以及267中的任一者所述的方法，其中所述治疗性蛋白质是具有λ轻链的人抗体，并且所述啮齿动物表达包含人λ轻链的抗体。
在示例性实施方案270中，本文提供了如实施方案240至269中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物是小鼠。
在示例性实施方案271中，本文提供了如实施方案240至269中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物是大鼠。
在示例性实施方案272中，本文提供了一种用于测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的动物模型，其中所述模型包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量所施用治疗性蛋白质的一种或多种药物代谢动力学性质。
在示例性实施方案273中，本文提供了如实施方案272所述的动物模型，其中所述一种或多种药物代谢动力学性质选自以下中的一者或多者：血浆浓度对时间下面积(AUC)、体内回收率(IVR)、清除率(CL)、平均滞留时间(MRT)、药剂半衰期(t1/2)以及在稳定状态下的分布容积(Vss)。
在示例性实施方案274中，本文提供了一种用于测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的治疗功效的动物模型，所述动物模型包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量所施用治疗性蛋白质的所述治疗功效。
在示例性实施方案275中，本文提供了一种用于确定包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的治疗有效剂量的动物模型，所述动物模型包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用多种剂量的所述治疗性蛋白质，以及测定每种剂量的所述治疗性蛋白质的治疗功效。
在示例性实施方案276中，本文提供了一种用于确定包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的安全剂量的动物模型，所述动物模型包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用多种剂量的所述治疗性蛋白质，以及测定每种剂量的所述治疗性蛋白质的安全性。
在示例性实施方案277中，本文提供了一种用于确定包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的可耐受剂量的动物模型，所述动物模型包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用多种剂量的所述治疗性蛋白质，以及测定每种剂量的所述治疗性蛋白质的可耐受性。
在示例性实施方案278中，本文提供了一种用于测试包含人Fc结构域的治疗性蛋白质的动物模型，所述动物模型包括向如实施方案148至239中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量所述啮齿动物中的一种或多种Fc受体介导的应答。
在示例性实施方案279中，本文提供了如实施方案278所述的动物模型，其中所述一种或多种Fc受体介导的应答包括ADCC应答。
在示例性实施方案280中，本文提供了一种用于筛选包含人抗体的人Fc区的治疗剂的动物模型，所述动物模型包括：(a)向如实施方案148至239中的任一者所述的啮齿动物施用包含人抗体的Fc区的药剂，其中所述药剂结合所述小鼠中的靶标细胞；(b)测量天然杀伤(NK)细胞针对所述靶标细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；和(c)将步骤(b)中ADCC的量与对照进行比较，其中靶标细胞杀伤增加指示所述药剂具有增加的介导ADCC的能力。
在示例性实施方案281中，本文提供了一种用于测量由啮齿动物针对包含人Fc结构域的治疗性蛋白质产生的免疫应答的动物模型，所述动物模型包括向如实施方案1至207中的任一者所述的啮齿动物施用所述治疗性蛋白质，以及测量由啮齿动物针对治疗性蛋白质产生的所述免疫应答。
在示例性实施方案282中，本文提供了如实施方案272至281中的任一者所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是人抗体。
在示例性实施方案283中，本文提供了如实施方案272至281中的任一者所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是Fc融合蛋白。
在示例性实施方案284中，本文提供了如实施方案272至283中的任一者所述的动物模型，其中所述人Fc结构域是人IgG1 Fc结构域。
在示例性实施方案285中，本文提供了如实施方案284所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是人IgG1抗体。
在示例性实施方案286中，本文提供了如实施方案284所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG1 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案287中，本文提供了如实施方案272至286中的任一者所述的动物模型，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ1基因区段。
在示例性实施方案288中，本文提供了如实施方案272至283中的任一者所述的动物模型，其中所述人Fc结构域是人IgG2 Fc结构域。
在示例性实施方案289中，本文提供了如实施方案288所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是人IgG2抗体。
在示例性实施方案290中，本文提供了如实施方案288所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG2 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案291中，本文提供了如实施方案288至290中的任一者所述的动物模型，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ2基因区段。
在示例性实施方案292中，本文提供了如实施方案272至283中的任一者所述的动物模型，其中所述人Fc结构域是人IgG3 Fc结构域。
在示例性实施方案293中，本文提供了如实施方案292所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是人IgG3抗体。
在示例性实施方案294中，本文提供了如实施方案292所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG3 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案295中，本文提供了如实施方案292至294中的任一者所述的动物模型，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ3基因区段。
在示例性实施方案296中，本文提供了如实施方案272至283中的任一者所述的动物模型，其中所述人Fc结构域是人IgG4 Fc结构域。
在示例性实施方案297中，本文提供了如实施方案296所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是人IgG4抗体。
在示例性实施方案298中，本文提供了如实施方案296所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是包含人IgG4 Fc结构域的Fc融合蛋白。
在示例性实施方案299中，本文提供了如实施方案296至298中的任一者所述的动物模型，其中编码包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域的IgG恒定结构域的所述CH基因区段是Cγ4基因区段。
在示例性实施方案300中，本文提供了如实施方案282、284、285、287-289、291-293、295-297以及299中的任一者所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是具有κ轻链的人抗体，并且所述啮齿动物表达包含人κ轻链的抗体。
在示例性实施方案301中，本文提供了如实施方案282、284、285、287-289、291-293、295-297以及299中的任一者所述的动物模型，其中所述治疗性蛋白质是具有λ轻链的人抗体，并且所述啮齿动物表达包含人λ轻链的抗体。
在示例性实施方案302中，本文提供了如实施方案272至301中的任一者所述的动物模型，其中所述啮齿动物是小鼠。
在示例性实施方案303中，本文提供了如实施方案272至301中的任一者所述的动物模型，其中所述啮齿动物是大鼠。
在示例性实施方案304中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物胚胎干(ES)细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgG恒定结构域的CH基因区段，所述IgG恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案305中，本文提供了如实施方案304所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG跨膜结构域是啮齿动物IgG跨膜结构域。
在示例性实施方案306中，本文提供了如实施方案304所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG跨膜结构域是人IgG跨膜结构域。
在示例性实施方案307中，本文提供了如实施方案304至306中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG细胞质结构域是啮齿动物IgG细胞质结构域。
在示例性实施方案308中，本文提供了如实施方案304至306中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG细胞质结构域是人IgG细胞质结构域。
在示例性实施方案309中，本文提供了如实施方案304至308中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG1结构域。
在示例性实施方案310中，本文提供了如实施方案309所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG1结构域由选自IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04和IGHG1*05的等位基因编码。
在示例性实施方案311中，本文提供了如实施方案304至308中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG2结构域。
在示例性实施方案312中，本文提供了如实施方案311所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG2结构域由选自IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05和IGHG2*06的等位基因编码。
在示例性实施方案313中，本文提供了如实施方案304至308中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG3结构域。
在示例性实施方案314中，本文提供了如实施方案313所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG3结构域由选自IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18和IGHG3*19的等位基因编码。
在示例性实施方案315中，本文提供了如实施方案304至308中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG4结构域。
在示例性实施方案316中，本文提供了如实施方案315所述的啮齿动物ES细胞，其中所述IgG4结构域由选自IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03和IGHG4*04的等位基因编码。
在示例性实施方案317中，本文提供了如实施方案309至316中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段基因座处。
在示例性实施方案318中，本文提供了如实施方案317所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段。
在示例性实施方案319中，本文提供了如实施方案309至316中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ1基因区段基因座处。
在示例性实施方案320中，本文提供了如实施方案319所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ1基因区段。
在示例性实施方案321中，本文提供了如实施方案309至316中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2b基因区段基因座处。
在示例性实施方案322中，本文提供了如实施方案321所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2b基因区段。
在示例性实施方案323中，本文提供了如实施方案309至316中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ3基因区段基因座处。
在示例性实施方案324中，本文提供了如实施方案323所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ3基因区段。
在示例性实施方案325中，本文提供了如实施方案304至324中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cμ基因区段。
在示例性实施方案326中，本文提供了如实施方案304至324中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cμ基因区段。
在示例性实施方案327中，本文提供了如实施方案304至326中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cδ基因区段。
在示例性实施方案328中，本文提供了如实施方案304至326中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cδ基因区段。
在示例性实施方案329中，本文提供了如实施方案304至328中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ1基因区段。
在示例性实施方案330中，本文提供了如实施方案304至329中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段。
在示例性实施方案331中，本文提供了如实施方案304至330中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2b基因区段。
在示例性实施方案332中，本文提供了如实施方案304至331中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ3基因区段。
在示例性实施方案333中，本文提供了如实施方案304至332中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cε基因区段。
在示例性实施方案334中，本文提供了如实施方案304至332中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案335中，本文提供了如实施方案304至334中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cα基因区段。
在示例性实施方案336中，本文提供了如实施方案304至334中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案337中，本文提供了如实施方案304至324中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案338中，本文提供了如实施方案337所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案339中，本文提供了如实施方案337或实施方案338所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案340中，本文提供了如实施方案337至339中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案341中，本文提供了如实施方案304至340中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物内含子性增强子(Ei)。
在示例性实施方案342中，本文提供了如实施方案304至340中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人内含子性增强子(Ei)。
在示例性实施方案343中，本文提供了如实施方案304至342中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物3′调控区(3′RR)。
在示例性实施方案344中，本文提供了如实施方案304至342中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人3′调控区(3′RR)。
在示例性实施方案345中，本文提供了如实施方案304至344中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sμ转换位点。
在示例性实施方案346中，本文提供了如实施方案304至345中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ3转换位点。
在示例性实施方案347中，本文提供了如实施方案304至346中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ1转换位点。
在示例性实施方案348中，本文提供了如实施方案304至347中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2b转换位点。
在示例性实施方案349中，本文提供了如实施方案304至348中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2a和/或Sγ2c转换位点。
在示例性实施方案350中，本文提供了如实施方案304至349中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sε转换位点。
在示例性实施方案351中，本文提供了如实施方案304至350中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sα转换位点。
在示例性实施方案352中，本文提供了如实施方案304至344中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sμ转换位点。
在示例性实施方案353中，本文提供了如实施方案304至344以及352中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ3转换位点。
在示例性实施方案354中，本文提供了如实施方案304至344以及352-353中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ1转换位点。
在示例性实施方案355中，本文提供了如实施方案304至344以及352-354中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ2转换位点。
在示例性实施方案356中，本文提供了如实施方案304至344以及352-355中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ4转换位点。
在示例性实施方案357中，本文提供了如实施方案304至344以及352-356中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sε转换位点。
在示例性实施方案358中，本文提供了如实施方案304至344以及352-357中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sα转换位点。
在示例性实施方案359中，本文提供了如实施方案304至358中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述VH基因区段是啮齿动物VH基因区段，所述DH基因区段是啮齿动物DH基因区段，并且所述JH基因区段是啮齿动物JH基因区段。
在示例性实施方案360中，本文提供了如实施方案359所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物VH基因区段、所述啮齿动物DH基因区段和所述啮齿动物JH基因区段是内源性啮齿动物基因区段。
在示例性实施方案361中，本文提供了如实施方案304至358中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述VH基因区段是人VH基因区段，所述DH基因区段是人DH基因区段，并且所述JH基因区段是人JH基因区段。
在示例性实施方案362中，本文提供了如实施方案361所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含至少3个人VH基因区段。
在示例性实施方案363中，本文提供了如实施方案361或实施方案362所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含人DH基因区段中的全部。
在示例性实施方案364中，本文提供了如实施方案361至363中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含人JH基因区段中的全部。
在示例性实施方案365中，本文提供了如实施方案361至364中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述免疫球蛋白重链可变区缺乏功能性内源性啮齿动物Adam6基因。
在示例性实施方案366中，本文提供了如实施方案361至365中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中种系基因组还包含编码功能性啮齿动物Adam6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在示例性实施方案367中，本文提供了如实施方案366所述的啮齿动物ES细胞，其中所述功能性啮齿动物Adam6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段被表达。
在示例性实施方案368中，本文提供了如实施方案366或实施方案367所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列包括在与所述免疫球蛋白重链可变区相同的染色体上。
在示例性实施方案369中，本文提供了如实施方案366至368中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列包括在所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座中。
在示例性实施方案370中，本文提供了如实施方案366至369中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列代替人Adam6假基因。
在示例性实施方案371中，本文提供了如实施方案366至370中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列替换人Adam6假基因。
在示例性实施方案372中，本文提供了如实施方案366至371中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列在第一人VH基因区段与第二人VH基因区段之间。
在示例性实施方案373中，本文提供了如实施方案372所述的啮齿动物ES细胞，其中所述第一人VH基因区段是VH1-2，并且所述第二人VH基因区段是VH6-1。
在示例性实施方案374中，本文提供了如实施方案366至369中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列在人VH基因区段与人DH基因区段之间。
在示例性实施方案375中，本文提供了如实施方案304至374中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座位于内源性免疫球蛋白重链基因座处。
在示例性实施方案376中，本文提供了如实施方案375所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座替换所述内源性免疫球蛋白重链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案377中，本文提供了如实施方案304至376中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案378中，本文提供了如实施方案304至376中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案379中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、啮齿动物IgG2a跨膜结构域和啮齿动物IgG2a细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案380中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、人IgG1跨膜结构域和人IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案381中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、啮齿动物IgG1跨膜结构域和啮齿动物IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案382中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、人IgG4跨膜结构域和人IgG4细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案383中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案384中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案385中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案386中，本文提供了一种在它的基因组中包含以下的啮齿动物ES细胞：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区。
在示例性实施方案387中，本文提供了如实施方案304至386中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白κ(kappa)链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座包含：(1)免疫球蛋白κ链可变区，所述免疫球蛋白κ链可变区包含人Vκ基因区段和人Jκ基因区段；和(2)免疫球蛋白κ链恒定区，所述免疫球蛋白κ链恒定区包含人Cκ基因区段，其中所述免疫球蛋白κ链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白κ链恒定区。
在示例性实施方案388中，本文提供了如实施方案387所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物内含子性κ增强子(Eκi)。
在示例性实施方案389中，本文提供了如实施方案387所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含人内含子性κ增强子(Eκi)。
在示例性实施方案390中，本文提供了如实施方案387至389中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物3′κ增强子(Eκ3′)。
在示例性实施方案391中，本文提供了如实施方案387至389中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含人3′κ增强子(Eκ3′)。
在示例性实施方案392中，本文提供了如实施方案387至391中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链可变区包含至少6个人Vκ基因区段。
在示例性实施方案393中，本文提供了如实施方案387或实施方案392所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链可变区包含人Jκ基因区段中的全部。
在示例性实施方案394中，本文提供了如实施方案387至393中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座位于内源性免疫球蛋白κ链基因座处。
在示例性实施方案395中，本文提供了如实施方案394所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白κ链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案396中，本文提供了如实施方案387至395中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案397中，本文提供了如实施方案387至395中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案398中，本文提供了如实施方案304至397中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白λ(lambda)链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含：人Vλ基因区段、人Jλ基因区段和人Cλ基因区段，其中所述人Vλ基因区段和所述人Jλ基因区段可操作地连接于所述人Cλ基因区段。
在示例性实施方案399中，本文提供了如实施方案398所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ1基因区段。
在示例性实施方案400中，本文提供了如实施方案399所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ1基因区段。
在示例性实施方案401中，本文提供了如实施方案398所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ2基因区段。
在示例性实施方案402中，本文提供了如实施方案401所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ2基因区段。
在示例性实施方案403中，本文提供了如实施方案398所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ3基因区段。
在示例性实施方案404中，本文提供了如实施方案403所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ3基因区段。
在示例性实施方案405中，本文提供了如实施方案398所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ6基因区段。
在示例性实施方案406中，本文提供了如实施方案405所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ6基因区段。
在示例性实施方案407中，本文提供了如实施方案398所述的啮齿动物ES细胞，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ7基因区段。
在示例性实施方案408中，本文提供了如实施方案398至407中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Cλ1基因区段、人Cλ2基因区段、人Cλ3基因区段、人Cλ6基因区段和啮齿动物Cλ1基因区段。
在示例性实施方案409中，本文提供了如实施方案408所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Jλ1基因区段、人Jλ2基因区段、人Jλ3基因区段、人Jλ6基因区段和人Jλ7基因区段。
在示例性实施方案410中，本文提供了如实施方案409所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Jλ1-Cλ1基因区段簇、人Jλ2-Cλ2基因区段簇、人Jλ3-Cλ3基因区段簇、人Jλ6-Cλ6基因区段簇和人Jλ7-啮齿动物Cλ1基因区段簇。
在示例性实施方案411中，本文提供了如实施方案398至410中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含至少7个人Vλ基因区段。
在示例性实施方案412中，本文提供了如实施方案398至411中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子2.4。
在示例性实施方案413中，本文提供了如实施方案398至412中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物3′λ增强子。
在示例性实施方案414中，本文提供了如实施方案398至413中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子3.1。
在示例性实施方案415中，本文提供了如实施方案398至414中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含人3′λ增强子。
在示例性实施方案416中，本文提供了如实施方案398至415中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座位于内源性免疫球蛋白λ链基因座处。
在示例性实施方案417中，本文提供了如实施方案416所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白λ链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案418中，本文提供了如实施方案398至417中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案419中，本文提供了如实施方案398至417中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案420中，本文提供了如实施方案304至419中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的经工程改造FcRn多肽的核酸序列。
在示例性实施方案421中，本文提供了如实施方案420所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案422中，本文提供了如实施方案420所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案423中，本文提供了如实施方案420至422中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案424中，本文提供了如实施方案420至422中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案425中，本文提供了如实施方案420至424中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
在示例性实施方案426中，本文提供了如实施方案425所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
在示例性实施方案427中，本文提供了如实施方案420所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案428中，本文提供了如实施方案420至427中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
在示例性实施方案429中，本文提供了如实施方案420至428中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案430中，本文提供了如实施方案420至428中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案431中，本文提供了如实施方案420至430中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述经工程改造β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在示例性实施方案432中，本文提供了如实施方案431所述的啮齿动物ES细胞，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
在示例性实施方案433中，本文提供了如实施方案432所述的啮齿动物ES细胞，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
在示例性实施方案434中，本文提供了如实施方案431至433中的任一者所述的啮齿动物，其中所述核酸序列包含人β2M基因的外显子2-4。
在示例性实施方案435中，本文提供了如实施方案431至434中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
在示例性实施方案436中，本文提供了如实施方案431至435中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案437中，本文提供了如实施方案431至435中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案438中，本文提供了如实施方案304至437中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述经工程改造Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
在示例性实施方案439中，本文提供了如实施方案438所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案440中，本文提供了如实施方案438所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案441中，本文提供了如实施方案438至440中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案442中，本文提供了如实施方案438至440中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案443中，本文提供了如实施方案438至442中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
在示例性实施方案444中，本文提供了如实施方案443所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
在示例性实施方案445中，本文提供了如实施方案444所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。
在示例性实施方案446中，本文提供了如实施方案438所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案447中，本文提供了如实施方案438至446中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
在示例性实施方案448中，本文提供了如实施方案438至447中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案449中，本文提供了如实施方案438至447中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案450中，本文提供了如实施方案304至449中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体1a(FcγR1a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体1a基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcγR1a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案451中，本文提供了如实施方案450所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案452中，本文提供了如实施方案450所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcγR1a多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案453中，本文提供了如实施方案450至452中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案454中，本文提供了如实施方案450至452中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcγR1a多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案455中，本文提供了如实施方案450至454中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcγR1a基因座处。
在示例性实施方案456中，本文提供了如实施方案455所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcγR1a基因的全部或一部分。
在示例性实施方案457中，本文提供了如实施方案450所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcγR1a细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcγR1a细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案458中，本文提供了如实施方案450至457中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcγR1a。
在示例性实施方案459中，本文提供了如实施方案450至458中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR1a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案460中，本文提供了如实施方案450至458中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR1a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案461中，本文提供了如实施方案304至460中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2a(FcγR2a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2a基因座包含编码人FcγR2a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案462中，本文提供了如实施方案461所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcγR2a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案463中，本文提供了如实施方案462所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcγR2a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案464中，本文提供了如实施方案461至463中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案465中，本文提供了如实施方案461至463中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案466中，本文提供了如实施方案304至465中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2b(FcγR2b)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2b基因座包含编码人FcγR2b多肽的核酸序列。
在示例性实施方案467中，本文提供了如实施方案466所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcγR2b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案468中，本文提供了如实施方案467所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcγR2b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案469中，本文提供了如实施方案466至468中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2b基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案470中，本文提供了如实施方案466至468中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2b基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案471中，本文提供了如实施方案304至470中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体3a(FcγR3a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体3a基因座包含编码人FcγR3a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案472中，本文提供了如实施方案471所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcγR3a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案473中，本文提供了如实施方案472所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcγR3a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案474中，本文提供了如实施方案471至473中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案475中，本文提供了如实施方案471至473中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案476中，本文提供了如实施方案304至475中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体3b(FcγR3b)基因座，所述经工程改造Fcγ受体3b基因座包含编码人FcγR3b多肽的核酸序列。
在示例性实施方案477中，本文提供了如实施方案476所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcγR3b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案478中，本文提供了如实施方案477所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcγR3b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案479中，本文提供了如实施方案476至478中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3b基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案480中，本文提供了如实施方案476至478中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3b基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案481中，本文提供了如实施方案304至480中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2c(FcγR2c)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2c基因座包含编码人FcγR2c多肽的核酸序列。
在示例性实施方案482中，本文提供了如实施方案481所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcγR2c多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案483中，本文提供了如实施方案482所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcγR2c多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案484中，本文提供了如实施方案481至483中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcγR2c。
在示例性实施方案485中，本文提供了如实施方案481至484中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2c基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案486中，本文提供了如实施方案481至484中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2c基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案487中，本文提供了一种啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞在它的基因组中包含经工程改造新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述经工程改造新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcRn多肽的核酸序列。
在示例性实施方案488中，本文提供了如实施方案487所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案489中，本文提供了如实施方案487所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案490中，本文提供了如实施方案487至489中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案491中，本文提供了如实施方案487至489中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcRn多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案492中，本文提供了如实施方案487至491中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
在示例性实施方案493中，本文提供了如实施方案492所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
在示例性实施方案494中，本文提供了如实施方案493所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案495中，本文提供了如实施方案487至494中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
在示例性实施方案496中，本文提供了如实施方案487至495中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案497中，本文提供了如实施方案487至495中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案498中，本文提供了如实施方案487至497中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞还在它的基因组中包含经工程改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述经工程改造β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在示例性实施方案499中，本文提供了如实施方案498所述的啮齿动物ES细胞，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
在示例性实施方案500中，本文提供了如实施方案499所述的啮齿动物ES细胞，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
在示例性实施方案501中，本文提供了如实施方案498至500中的任一者所述的啮齿动物，其中所述核酸序列包含人β2M基因的外显子2-4。
在示例性实施方案502中，本文提供了如实施方案498至501中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
在示例性实施方案503中，本文提供了如实施方案498至502中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案504中，本文提供了如实施方案498至502中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案505中，本文提供了一种啮齿动物ES细胞，所述啮齿动物ES细胞在它的基因组中包含经工程改造Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述经工程改造Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
在示例性实施方案506中，本文提供了如实施方案505所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案507中，本文提供了如实施方案505所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案508中，本文提供了如实施方案505至507中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案509中，本文提供了如实施方案505至507中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案510中，本文提供了如实施方案505至509中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
在示例性实施方案511中，本文提供了如实施方案510所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
在示例性实施方案512中，本文提供了如实施方案511所述的啮齿动物ES细胞，其中所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。
在示例性实施方案513中，本文提供了如实施方案505所述的啮齿动物ES细胞，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案514中，本文提供了如实施方案505至513中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
在示例性实施方案515中，本文提供了如实施方案505至514中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案516中，本文提供了如实施方案505至514中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案517中，本文提供了如实施方案304至516中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物是小鼠。
在示例性实施方案518中，本文提供了如实施方案304至516中的任一者所述的啮齿动物ES细胞，其中所述啮齿动物是大鼠。
在示例性实施方案519中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgG恒定结构域的CH基因区段，所述IgG恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgG恒定结构域的CH基因区段，所述IgG恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述VH基因区段、所述DH基因区段和所述JH基因区段的可变结构域和源于所述CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案520中，本文提供了如实施方案519所述的方法，其中所述IgG跨膜结构域是啮齿动物IgG跨膜结构域。
在示例性实施方案521中，本文提供了如实施方案519所述的方法，其中所述IgG跨膜结构域是人IgG跨膜结构域。
在示例性实施方案522中，本文提供了如实施方案519至521中的任一者所述的方法，其中所述IgG细胞质结构域是啮齿动物IgG细胞质结构域。
在示例性实施方案523中，本文提供了如实施方案519至521中的任一者所述的方法，其中所述IgG细胞质结构域是人IgG细胞质结构域。
在示例性实施方案524中，本文提供了如实施方案519至523中的任一者所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG1结构域。
在示例性实施方案525中，本文提供了如实施方案524所述的方法，其中所述IgG1结构域由选自IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04和IGHG1*05的等位基因编码。
在示例性实施方案526中，本文提供了如实施方案519至523中的任一者所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG2结构域。
在示例性实施方案527中，本文提供了如实施方案526所述的方法，其中所述IgG2结构域由选自IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05和IGHG2*06的等位基因编码。
在示例性实施方案528中，本文提供了如实施方案519至523中的任一者所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG3结构域。
在示例性实施方案529中，本文提供了如实施方案528所述的方法，其中所述IgG3结构域由选自IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18和IGHG3*19的等位基因编码。
在示例性实施方案530中，本文提供了如实施方案519至523中的任一者所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG4结构域。
在示例性实施方案531中，本文提供了如实施方案530所述的方法，其中所述IgG4结构域由选自IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03和IGHG4*04的等位基因编码。
在示例性实施方案532中，本文提供了如实施方案524至531中的任一者所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段基因座处。
在示例性实施方案533中，本文提供了如实施方案532所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段。
在示例性实施方案534中，本文提供了如实施方案524至531中的任一者所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ1基因区段基因座处。
在示例性实施方案535中，本文提供了如实施方案534所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ1基因区段。
在示例性实施方案536中，本文提供了如实施方案524至531中的任一者所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2b基因区段基因座处。
在示例性实施方案537中，本文提供了如实施方案536所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2b基因区段。
在示例性实施方案538中，本文提供了如实施方案524至531中的任一者所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ3基因区段基因座处。
在示例性实施方案539中，本文提供了如实施方案538所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ3基因区段。
在示例性实施方案540中，本文提供了如实施方案519至539中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cμ基因区段。
在示例性实施方案541中，本文提供了如实施方案519至539中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cμ基因区段。
在示例性实施方案542中，本文提供了如实施方案519至541中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cδ基因区段。
在示例性实施方案543中，本文提供了如实施方案519至541中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cδ基因区段。
在示例性实施方案544中，本文提供了如实施方案519至543中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ1基因区段。
在示例性实施方案545中，本文提供了如实施方案519至544中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段。
在示例性实施方案546中，本文提供了如实施方案519至545中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2b基因区段。
在示例性实施方案547中，本文提供了如实施方案519至546中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ3基因区段。
在示例性实施方案548中，本文提供了如实施方案519至547中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cε基因区段。
在示例性实施方案549中，本文提供了如实施方案519至548中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案550中，本文提供了如实施方案519至549中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cα基因区段。
在示例性实施方案551中，本文提供了如实施方案519至549中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案552中，本文提供了如实施方案519至539中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案553中，本文提供了如实施方案552所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案554中，本文提供了如实施方案552或实施方案553所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案555中，本文提供了如实施方案552至554中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案556中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgM恒定结构域的CH基因区段，所述IgM恒定结构域包含人CH1结构域、人CH2结构域、人CH3结构域、人CH4结构域、IgM跨膜结构域和IgM细胞质结构域，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgM恒定结构域的CH基因区段，所述IgM恒定结构域包含人CH1结构域、人CH2结构域、人CH3结构域、人CH4结构域、IgM跨膜结构域和IgM细胞质结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述VH基因区段、所述DH基因区段和所述JH基因区段的可变结构域和源于所述CH基因区段的重链恒定结构域的IgM抗体。
在示例性实施方案557中，本文提供了如实施方案556所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cδ基因区段。
在示例性实施方案558中，本文提供了如实施方案556或557所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ3基因区段。
在示例性实施方案559中，本文提供了如实施方案556至558中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案560中，本文提供了如实施方案556至559中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段。
在示例性实施方案561中，本文提供了如实施方案556至560中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案562中，本文提供了如实施方案556至561中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案563中，本文提供了如实施方案562所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案564中，本文提供了如实施方案562或实施方案563所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案565中，本文提供了如实施方案562至564中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案566中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgD恒定结构域的CH基因区段，所述IgD恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链H1结构域、人铰链H2结构域、人CH2结构域、人CH3结构域、人IgD跨膜结构域和人IgD细胞质结构域，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgD恒定结构域的CH基因区段，所述IgD恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链H1结构域、人铰链H2结构域、人CH2结构域、人CH3结构域、人IgD跨膜结构域和人IgD细胞质结构域，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述VH基因区段、所述DH基因区段和所述JH基因区段的可变结构域和源于所述CH基因区段的重链恒定结构域的IgD抗体。
在示例性实施方案567中，本文提供了如实施方案566所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cμ基因区段。
在示例性实施方案568中，本文提供了如实施方案566或567所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ3基因区段。
在示例性实施方案569中，本文提供了如实施方案566至568中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案570中，本文提供了如实施方案566至569中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段。
在示例性实施方案571中，本文提供了如实施方案566至570中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案572中，本文提供了如实施方案566至571中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
在示例性实施方案573中，本文提供了如实施方案572所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
在示例性实施方案574中，本文提供了如实施方案572或实施方案573所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
在示例性实施方案575中，本文提供了如实施方案572至574中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
在示例性实施方案576中，本文提供了如实施方案519至575中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物内含子性增强子(Ei)。
在示例性实施方案577中，本文提供了如实施方案519至575中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人内含子性增强子(Ei)。
在示例性实施方案578中，本文提供了如实施方案519至577中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物3′调控区(3′RR)。
在示例性实施方案579中，本文提供了如实施方案519至577中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人3′调控区(3′RR)。
在示例性实施方案580中，本文提供了如实施方案519至579中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sμ转换位点。
在示例性实施方案581中，本文提供了如实施方案519至580中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ3转换位点。
在示例性实施方案582中，本文提供了如实施方案519至581中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ1转换位点。
在示例性实施方案583中，本文提供了如实施方案519至582中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2b转换位点。
在示例性实施方案584中，本文提供了如实施方案519至583中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2a和/或Sγ2c转换位点。
在示例性实施方案585中，本文提供了如实施方案519至584中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sε转换位点。
在示例性实施方案586中，本文提供了如实施方案519至585中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sα转换位点。
在示例性实施方案587中，本文提供了如实施方案519至579中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sμ转换位点。
在示例性实施方案588中，本文提供了如实施方案519至579以及587中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ3转换位点。
在示例性实施方案589中，本文提供了如实施方案519至579以及587-588中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ1转换位点。
在示例性实施方案590中，本文提供了如实施方案519至579以及587-589中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ2转换位点。
在示例性实施方案591中，本文提供了如实施方案519至579以及587-590中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ4转换位点。
在示例性实施方案592中，本文提供了如实施方案519至579以及587-591中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sε转换位点。
在示例性实施方案593中，本文提供了如实施方案519至579以及587-592中的任一者所述的啮齿动物，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座还包含人Sα转换位点。
在示例性实施方案594中，本文提供了如实施方案519至593中的任一者所述的方法，其中所述VH基因区段是啮齿动物VH基因区段，所述DH基因区段是啮齿动物DH基因区段，并且所述JH基因区段是啮齿动物JH基因区段。
在示例性实施方案595中，本文提供了如实施方案594所述的方法，其中所述啮齿动物VH基因区段、所述啮齿动物DH基因区段和所述啮齿动物JH基因区段是内源性啮齿动物基因区段。
在示例性实施方案596中，本文提供了如实施方案519至593中的任一者所述的方法，其中所述VH基因区段是人VH基因区段，所述DH基因区段是人DH基因区段，并且所述JH基因区段是人JH基因区段。
在示例性实施方案597中，本文提供了如实施方案596所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含至少3个人VH基因区段。
在示例性实施方案598中，本文提供了如实施方案596或实施方案597所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含人DH基因区段中的全部。
在示例性实施方案599中，本文提供了如实施方案596至598中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含人JH基因区段中的全部。
在示例性实施方案600中，本文提供了如实施方案596至599中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区缺乏功能性内源性啮齿动物Adam6基因。
在示例性实施方案601中，本文提供了如实施方案596至600中的任一者所述的方法，其中种系基因组还包含编码功能性啮齿动物Adam6多肽、其功能性直系同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在示例性实施方案602中，本文提供了如实施方案601所述的方法，其中所述功能性啮齿动物Adam6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段被表达。
在示例性实施方案603中，本文提供了如实施方案601或实施方案602所述的方法，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列包括在与所述免疫球蛋白重链可变区相同的染色体上。
在示例性实施方案604中，本文提供了如实施方案601至603中的任一者所述的方法，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列包括在所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座中。
在示例性实施方案605中，本文提供了如实施方案601至604中的任一者所述的方法，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列代替人Adam6假基因。
在示例性实施方案606中，本文提供了如实施方案601至605中的任一者所述的方法，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列替换人Adam6假基因。
在示例性实施方案607中，本文提供了如实施方案601至606中的任一者所述的方法，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列在第一人VH基因区段与第二人VH基因区段之间。
在示例性实施方案608中，本文提供了如实施方案607所述的啮齿动物，其中所述第一人VH基因区段是VH1-2，并且所述第二人VH基因区段是VH6-1。
在示例性实施方案609中，本文提供了如实施方案601至604中的任一者所述的方法，其中编码所述啮齿动物ADAM6多肽、其所述功能性直系同源物、所述功能性同源物或所述功能性片段的所述核苷酸序列在人VH基因区段与人DH基因区段之间。
在示例性实施方案610中，本文提供了如实施方案519至609中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座位于内源性免疫球蛋白重链基因座处。
在示例性实施方案611中，本文提供了如实施方案610所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座替换所述内源性免疫球蛋白重链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案612中，本文提供了如实施方案519至611中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案613中，本文提供了如实施方案519至611中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案614中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、啮齿动物IgG2a跨膜结构域和啮齿动物IgG2a细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、啮齿动物IgG2a跨膜结构域和啮齿动物IgG2a细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案615中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、人IgG1跨膜结构域和人IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)啮齿动物Cγ1基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)编码人IgG1CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、人IgG1跨膜结构域和人IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案616中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、啮齿动物IgG1跨膜结构域和啮齿动物IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、啮齿动物IgG1跨膜结构域和啮齿动物IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案617中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、人IgG4跨膜结构域和人IgG4细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)啮齿动物Cμ基因区段；(b)啮齿动物Cδ基因区段；(c)啮齿动物Cγ3基因区段；(d)编码人IgG4CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、人IgG4跨膜结构域和人IgG4细胞质结构域的经修饰CH基因区段；(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；(g)啮齿动物Cε基因区段；和(h)啮齿动物Cα基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
在示例性实施方案618中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含完全人重链的IgG抗体。
在示例性实施方案619中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；(ii)人内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含完全人重链的IgG抗体。
在示例性实施方案620中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含含有啮齿动物可变结构域和人恒定结构域的重链的IgG抗体。
在示例性实施方案621中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造免疫球蛋白重链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座包含：(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：(a)人Cμ基因区段；(b)人Cδ基因区段；(c)人Cγ3基因区段；(d)人Cγ1基因区段；(c)人Cγ2基因区段；(d)人Cγ4基因区段；和(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含含有啮齿动物可变结构域和人恒定结构域的重链的IgG抗体。
在示例性实施方案622中，本文提供了如实施方案614至621中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座位于内源性免疫球蛋白重链基因座处。
在示例性实施方案623中，本文提供了如实施方案622所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座替换所述内源性免疫球蛋白重链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案624中，本文提供了如实施方案614至623中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案625中，本文提供了如实施方案614至623中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白重链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案626中，本文提供了如实施方案519至625中的任一者所述的方法，所述方法还包括对所述啮齿动物的所述基因组进行修饰以使它还在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白κ(kappa)链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座包含：(1)免疫球蛋白κ链可变区，所述免疫球蛋白κ链可变区包含人Vκ基因区段和人Jκ基因区段；和(2)免疫球蛋白κ链恒定区，所述免疫球蛋白κ链恒定区包含人Cκ基因区段，其中所述免疫球蛋白κ链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白κ链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人Vκ基因区段和所述人Jκ基因区段的轻链可变结构域和源于所述人Cκ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。
在示例性实施方案627中，本文提供了如实施方案626所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物内含子性κ增强子(Eκi)。
在示例性实施方案628中，本文提供了如实施方案626所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含人内含子性κ增强子(Eκi)。
在示例性实施方案629中，本文提供了如实施方案626至628中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物3′κ增强子(Eκ3′)。
在示例性实施方案630中，本文提供了如实施方案626至628中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座还包含人3′κ增强子(Eκ3′)。
在示例性实施方案631中，本文提供了如实施方案626至630中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链可变区包含至少6个人Vκ基因区段。
在示例性实施方案632中，本文提供了如实施方案626至631中的任一者所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链可变区包含人Jκ基因区段中的全部。
在示例性实施方案633中，本文提供了如实施方案626至632中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座位于内源性免疫球蛋白κ链基因座处。
在示例性实施方案634中，本文提供了如实施方案633所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白κ链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案635中，本文提供了如实施方案626至634中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案636中，本文提供了如实施方案626至634中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白κ链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案637中，本文提供了如实施方案519至636中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含：经工程改造免疫球蛋白λ(lambda)链基因座，所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含：人Vλ基因区段、人Jλ基因区段和人Cλ基因区段，其中所述人Vλ基因区段和所述人Jλ基因区段可操作地连接于所述人Cλ基因区段，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人Vλ基因区段和所述人Jλ基因区段的轻链可变结构域和源于所述人Cλ基因区段的轻链恒定结构域的抗体。
在示例性实施方案638中，本文提供了如实施方案637所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ1基因区段。
在示例性实施方案639中，本文提供了如实施方案638所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ1基因区段。
在示例性实施方案640中，本文提供了如实施方案637所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ2基因区段。
在示例性实施方案641中，本文提供了如实施方案640所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ2基因区段。
在示例性实施方案642中，本文提供了如实施方案637所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ3基因区段。
在示例性实施方案643中，本文提供了如实施方案642所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ3基因区段。
在示例性实施方案644中，本文提供了如实施方案637所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ6基因区段。
在示例性实施方案645中，本文提供了如实施方案644所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ6基因区段。
在示例性实施方案646中，本文提供了如实施方案637所述的方法，其中所述人λ基因区段是人Jλ7基因区段。
在示例性实施方案647中，本文提供了如实施方案637至646中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Cλ1基因区段、人Cλ2基因区段、人Cλ3基因区段、人Cλ6基因区段和啮齿动物Cλ1基因区段。
在示例性实施方案648中，本文提供了如实施方案647所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Jλ1基因区段、人Jλ2基因区段、人Jλ3基因区段、人Jλ6基因区段和人Jλ7基因区段。
在示例性实施方案649中，本文提供了如实施方案648所述的啮齿动物ES细胞，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含人Jλ1-Cλ1基因区段簇、人Jλ2-Cλ2基因区段簇、人Jλ3-Cλ3基因区段簇、人Jλ6-Cλ6基因区段簇和人Jλ7-啮齿动物Cλ1基因区段簇。
在示例性实施方案650中，本文提供了如实施方案637至649中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座包含至少7个人Vλ基因区段。
在示例性实施方案651中，本文提供了如实施方案637至650中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子2.4。
在示例性实施方案652中，本文提供了如实施方案637至651中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物3′λ增强子。
在示例性实施方案653中，本文提供了如实施方案637至652中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子3.1。
在示例性实施方案654中，本文提供了如实施方案637至653中的任一者所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座还包含人3′λ增强子。
在示例性实施方案655中，本文提供了如实施方案637至654中的任一者所述的，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座位于内源性免疫球蛋白λ链基因座处。
在示例性实施方案656中，本文提供了如实施方案655所述的方法，其中所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白λ链基因座的全部或一部分。
在示例性实施方案657中，本文提供了如实施方案637至656中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案658中，本文提供了如实施方案637至656中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造免疫球蛋白λ链基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案659中，本文提供了如实施方案519至658中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述经工程改造新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcRn多肽的核酸序列。
在示例性实施方案660中，本文提供了如实施方案659所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案661中，本文提供了如实施方案659所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案662中，本文提供了如实施方案659至661中的任一者所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案663中，本文提供了如实施方案659至661中的任一者所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案664中，本文提供了如实施方案659至663中的任一者所述的方法，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
在示例性实施方案665中，本文提供了如实施方案664所述的方法，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
在示例性实施方案666中，本文提供了如实施方案665所述的方法，其中编码所述FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案667中，本文提供了如实施方案659至666中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
在示例性实施方案668中，本文提供了如实施方案659至667中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案669中，本文提供了如实施方案659至667中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案670中，本文提供了如实施方案659至669中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述经工程改造β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在示例性实施方案671中，本文提供了如实施方案670所述的方法，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
在示例性实施方案672中，本文提供了如实施方案671所述的方法，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
在示例性实施方案673中，本文提供了如实施方案670至672中的任一者所述的啮齿动物，其中所述核酸序列包含人β2M基因的外显子2-4。
在示例性实施方案674中，本文提供了如实施方案670至673中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
在示例性实施方案675中，本文提供了如实施方案560至674中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案676中，本文提供了如实施方案560至674中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案677中，本文提供了如实施方案519至676中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述经工程改造Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
在示例性实施方案678中，本文提供了如实施方案677所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案679中，本文提供了如实施方案677所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案680中，本文提供了如实施方案677至679中的任一者所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案681中，本文提供了如实施方案677至679中的任一者所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案682中，本文提供了如实施方案677至681中的任一者所述的方法，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
在示例性实施方案683中，本文提供了如实施方案682所述的方法，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
在示例性实施方案684中，本文提供了如实施方案683所述的方法，其中所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。
在示例性实施方案685中，本文提供了如实施方案677所述的方法，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案686中，本文提供了如实施方案677至685中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
在示例性实施方案687中，本文提供了如实施方案677至686中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案688中，本文提供了如实施方案677至686中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案689中，本文提供了如实施方案519至688中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体1a(FcγR1a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体1a基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcγR1a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案690中，本文提供了如实施方案689所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案691中，本文提供了如实施方案689所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案692中，本文提供了如实施方案689至691中的任一者所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案693中，本文提供了如实施方案689至691中的任一者所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案694中，本文提供了如实施方案689至693中的任一者所述的方法，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcγR1a基因座处。
在示例性实施方案695中，本文提供了如实施方案694所述的方法，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcγR1a基因的全部或一部分。
在示例性实施方案696中，本文提供了如实施方案689所述的方法，其中编码所述人FcγR1a细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcγR1a细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案697中，本文提供了如实施方案689至696中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcγR1a。
在示例性实施方案698中，本文提供了如实施方案689至697中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR1a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案699中，本文提供了如实施方案689至697中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR1a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案700中，本文提供了如实施方案519至699中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2a(FcγR2a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2a基因座包含编码人FcγR2a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案701中，本文提供了如实施方案700所述的方法，其中编码所述FcγR2a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案702中，本文提供了如实施方案701所述的方法，其中编码所述人FcγR2a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案703中，本文提供了如实施方案700至702中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案704中，本文提供了如实施方案700至702中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案705中，本文提供了如实施方案519至704中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2b(FcγR2b)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2b基因座包含编码人FcγR2b多肽的核酸序列。
在示例性实施方案706中，本文提供了如实施方案705所述的方法，其中编码所述FcγR2b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案707中，本文提供了如实施方案706所述的方法，其中编码所述人FcγR2b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案708中，本文提供了如实施方案705至707中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2b基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案709中，本文提供了如实施方案705至707中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2b基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案710中，本文提供了如实施方案519至709中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体3a(FcγR3a)基因座，所述经工程改造Fcγ受体3a基因座包含编码人FcγR3a多肽的核酸序列。
在示例性实施方案711中，本文提供了如实施方案710所述的方法，其中编码所述FcγR3a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案712中，本文提供了如实施方案711所述的方法，其中编码所述人FcγR3a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案713中，本文提供了如实施方案710至712中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3a基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案714中，本文提供了如实施方案710至712中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3a基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案715中，本文提供了如实施方案519至714中的任一者所述的方法，还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体3b(FcγR3b)基因座，所述经工程改造Fcγ受体3b基因座包含编码人FcγR3b多肽的核酸序列。
在示例性实施方案716中，本文提供了如实施方案715所述的方法，其中编码所述FcγR3b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案717中，本文提供了如实施方案716所述的方法，其中编码所述人FcγR3b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案718中，本文提供了如实施方案715至717中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3b基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案719中，本文提供了如实施方案715至717中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR3b基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案720中，本文提供了如实施方案519至719中的任一者所述的方法，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造Fcγ受体2c(FcγR2c)基因座，所述经工程改造Fcγ受体2c基因座包含编码人FcγR2c多肽的核酸序列。
在示例性实施方案721中，本文提供了如实施方案720所述的方法，其中编码所述FcγR2c多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
在示例性实施方案722中，本文提供了如实施方案721所述的方法，其中编码所述人FcγR2c多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
在示例性实施方案723中，本文提供了如实施方案720至722中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcγR2c。
在示例性实施方案724中，本文提供了如实施方案720至723中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2c基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案725中，本文提供了如实施方案720至723中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcγR2c基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案726中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含经工程改造新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述经工程改造新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcRn多肽的核酸序列，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcRn多肽的核酸序列。
在示例性实施方案727中，本文提供了如实施方案726所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案728中，本文提供了如实施方案726所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案729中，本文提供了如实施方案726至728中的任一者所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案730中，本文提供了如实施方案726至728中的任一者所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案731中，本文提供了如实施方案726至730中的任一者所述的方法，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
在示例性实施方案732中，本文提供了如实施方案731所述的方法，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
在示例性实施方案733中，本文提供了如实施方案732所述的方法，其中编码所述人FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案734中，本文提供了如实施方案726至733中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
在示例性实施方案735中，本文提供了如实施方案726至734中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案736中，本文提供了如实施方案726至734中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcRn基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案737中，本文提供了如实施方案726至736中的任一者所述的方法，所述啮齿动物还在它的基因组中包含经工程改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述经工程改造β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在示例性实施方案738中，本文提供了如实施方案737所述的方法，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
在示例性实施方案739中，本文提供了如实施方案738所述的方法，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
在示例性实施方案740中，本文提供了如实施方案737至739中的任一者所述的啮齿动物，其中所述核酸序列包含人β2M基因的外显子2-4。
在示例性实施方案741中，本文提供了如实施方案737至740中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
在示例性实施方案742中，本文提供了如实施方案737至741中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案743中，本文提供了如实施方案737至741中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造β2M基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案744中，本文提供了一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在它的基因组中包含经工程改造Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述经工程改造Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列，所述方法包括对啮齿动物的基因组进行修饰以使它包含经工程改造FcεR1α基因座，所述经工程改造FcεR1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
在示例性实施方案745中，本文提供了如实施方案744所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
在示例性实施方案746中，本文提供了如实施方案744所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
在示例性实施方案747中，本文提供了如实施方案744至746中的任一者所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
在示例性实施方案748中，本文提供了如实施方案744至746中的任一者所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
在示例性实施方案749中，本文提供了如实施方案744至748中的任一者所述的方法，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcγR1基因座处。
在示例性实施方案750中，本文提供了如实施方案749所述的方法，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
在示例性实施方案751中，本文提供了如实施方案750所述的方法，其中所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域、人跨膜结构域和人细胞质结构域。
在示例性实施方案752中，本文提供了如实施方案744所述的方法，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
在示例性实施方案753中，本文提供了如实施方案744至752中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
在示例性实施方案754中，本文提供了如实施方案744至753中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是杂合的。
在示例性实施方案755中，本文提供了如实施方案744至753中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物就所述经工程改造FcεR1α基因座来说是纯合的。
在示例性实施方案756中，本文提供了如实施方案519至755中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物是小鼠。
在示例性实施方案757中，本文提供了如实施方案519至755中的任一者所述的方法，其中所述啮齿动物是大鼠。
其它示例性实施方式：
实施方式1.一种测试人抗体的方法，所述方法包括向啮齿动物施用所述抗体，所述啮齿动物在它的基因组中包含：
免疫球蛋白重链基因座，所述免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含VH基因区段、DH基因区段和JH基因区段；和
(ii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含编码IgG恒定结构域的CH基因区段，所述IgG恒定结构域包含人CH1结构域、人铰链区、人CH2结构域、人CH3结构域、IgG跨膜结构域和IgG细胞质结构域，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述VH基因区段、所述DH基因区段和所述JH基因区段的可变结构域和源于所述CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
实施方式2.如实施方式1所述的方法，其中所述IgG跨膜结构域是啮齿动物IgG跨膜结构域。
实施方式3.如实施方式1所述的方法，其中所述IgG跨膜结构域是人IgG跨膜结构域。
实施方式4.如实施方式1至3中任一项所述的方法，其中所述IgG细胞质结构域是啮齿动物IgG细胞质结构域。
实施方式5.如实施方式1至3中任一项所述的方法，其中所述IgG细胞质结构域是人IgG细胞质结构域。
实施方式6.如实施方式1至5中任一项所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG1结构域，并且所述人抗体是IgG1抗体。
实施方式7.如实施方式6所述的方法，其中所述IgG1结构域由选自IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04和IGHG1*05的等位基因编码，并且所述人抗体的重链恒定结构域由同一等位基因编码。
实施方式8.如实施方式1至5中任一项所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG2结构域，并且所述人抗体是IgG2抗体。
实施方式9.如实施方式8所述的方法，其中所述IgG2结构域由选自IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05和IGHG2*06的等位基因编码，并且所述人抗体的重链恒定结构域由同一等位基因编码。
实施方式10.如实施方式1至5中任一项所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG3结构域，并且所述人抗体是IgG3抗体。
实施方式11.如实施方式10所述的方法，其中所述IgG3结构域由选自IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18和IGHG3*19的等位基因编码，并且所述人抗体的重链恒定结构域由同一等位基因编码。
实施方式12.如实施方式1至5中任一项所述的方法，其中所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域是IgG4结构域，并且所述人抗体是IgG4抗体。
实施方式13.如实施方式12所述的方法，其中所述IgG4结构域由选自IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03和IGHG4*04的等位基因编码，并且所述人抗体的重链恒定结构域由同一等位基因编码。
实施方式14.如实施方式6至13中任一项所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段基因座处。
实施方式15.如实施方式14所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2a或Cγ2c基因区段。
实施方式16.如实施方式6至13中任一项所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ1基因区段基因座处。
实施方式17.如实施方式16所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ1基因区段。
实施方式18.如实施方式6至13中任一项所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ2b基因区段基因座处。
实施方式19.如实施方式18所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ2b基因区段。
实施方式20.如实施方式6至13中任一项所述的方法，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段位于内源性Cγ3基因区段基因座处。
实施方式21.如实施方式20所述的啮齿动物，其中编码所述人CH1结构域、所述人铰链区、所述人CH2结构域和所述人CH3结构域的所述CH基因区段替换内源性Cγ3基因区段。
实施方式22.如实施方式1至21中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cμ基因区段。
实施方式23.如实施方式1至21中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cμ基因区段。
实施方式24.如实施方式1至23中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cδ基因区段。
实施方式25.如实施方式1至23中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cδ基因区段。
实施方式26.如实施方式1至25中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ1基因区段。
实施方式27.如实施方式1至26中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段。
实施方式28.如实施方式1至27中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ2b基因区段。
实施方式29.如实施方式1至28中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cγ3基因区段。
实施方式30.如实施方式1至29中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cε基因区段。
实施方式31.如实施方式1至29中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
实施方式32.如实施方式1至31中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含啮齿动物Cα基因区段。
实施方式33.如实施方式1至31中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
实施方式34.如实施方式1至21中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区包含人Cμ基因区段、人Cδ基因区段、人Cγ3基因区段和人Cγ1基因区段。
实施方式35.如实施方式34所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cγ2基因区段和人Cγ4基因区段。
实施方式36.如实施方式34或实施方式35所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cα基因区段。
实施方式37.如实施方式34至36中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链恒定区还包含人Cε基因区段。
实施方式38.如实施方式1至37中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物内含子性增强子(Ei)。
实施方式39.如实施方式1至37中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人内含子性增强子(Ei)。
实施方式40.如实施方式1至39中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物3′调控区(3′RR)。
实施方式41.如实施方式1至39中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人3′调控区(3′RR)。
实施方式42.如实施方式1至41中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sμ转换位点。
实施方式43.如实施方式1至42中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ3转换位点。
实施方式44.如实施方式1至43中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ1转换位点。
实施方式45.如实施方式1至44中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2b转换位点。
实施方式46.如实施方式1至45中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sγ2a和/或Sγ2c转换位点。
实施方式47.如实施方式1至46中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sε转换位点。
实施方式48.如实施方式1至47中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含啮齿动物Sα转换位点。
实施方式49.如实施方式1至41以及48中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人Sμ转换位点。
实施方式50.如实施方式1至41以及48-49中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ3转换位点。
实施方式51.如实施方式1至41以及48-50中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ1转换位点。
实施方式52.如实施方式1至41以及48-51中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ2转换位点。
实施方式53.如实施方式1至41以及48-52中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人Sγ4转换位点。
实施方式54.如实施方式1至41以及48-53中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人Sε转换位点。
实施方式55.如实施方式1至41以及48-54中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座还包含人Sα转换位点。
实施方式56.如实施方式1至55中任一项所述的方法，其中所述VH基因区段是啮齿动物VH基因区段，所述DH基因区段是啮齿动物DH基因区段，并且所述JH基因区段是啮齿动物JH基因区段。
实施方式57.如实施方式56所述的方法，其中所述啮齿动物VH基因区段、所述啮齿动物DH基因区段和所述啮齿动物JH基因区段是内源性啮齿动物基因区段。
实施方式58.如实施方式1至55中任一项所述的方法，其中所述VH基因区段是人VH基因区段，所述DH基因区段是人DH基因区段，并且所述JH基因区段是人JH基因区段。
实施方式59.如实施方式58所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含至少3个人VH基因区段。
实施方式60.如实施方式58或实施方式59所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含所述人DH基因区段中的全部。
实施方式61.如实施方式58至60中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含所述人JH基因区段中的全部。
实施方式62.如实施方式1至61中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区包含编码功能性啮齿动物Adam6多肽的核苷酸序列。
实施方式63.如实施方式1至62中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座位于内源性免疫球蛋白重链基因座处。
实施方式64.如实施方式63所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链基因座替换所述内源性免疫球蛋白重链基因座的全部或一部分。
实施方式65.如实施方式1至64中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述免疫球蛋白重链基因座来说是杂合的。
实施方式66.如实施方式1至64中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述免疫球蛋白重链基因座来说是纯合的。
实施方式67.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；
(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)啮齿动物Cμ基因区段；
(b)啮齿动物Cδ基因区段；
(c)啮齿动物Cγ3基因区段；
(d)啮齿动物Cγ1基因区段；
(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；
(f)编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、啮齿动物IgG2a跨膜结构域和啮齿动物IgG2a细胞质结构域的经修饰CH基因区段；
(g)啮齿动物Cε基因区段；和
(h)啮齿动物Cα基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
实施方式68.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；
(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)啮齿动物Cμ基因区段；
(b)啮齿动物Cδ基因区段；
(c)啮齿动物Cγ3基因区段；
(d)啮齿动物Cγ1基因区段；
(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；
(f)编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域、人IgG1跨膜结构域和人IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；
(g)啮齿动物Cε基因区段；和
(h)啮齿动物Cα基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
实施方式69.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；
(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)啮齿动物Cμ基因区段；
(b)啮齿动物Cδ基因区段；
(c)啮齿动物Cγ3基因区段；
(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、啮齿动物IgG1跨膜结构域和啮齿动物IgG1细胞质结构域的经修饰CH基因区段；
(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；
(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；
(g)啮齿动物Cε基因区段；和
(h)啮齿动物Cα基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
实施方式70.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；
(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)啮齿动物Cμ基因区段；
(b)啮齿动物Cδ基因区段；
(c)啮齿动物Cγ3基因区段；
(d)编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域、人IgG4跨膜结构域和人IgG4细胞质结构域的经修饰CH基因区段；
(e)啮齿动物Cγ2b基因区段；
(f)啮齿动物Cγ2a和/或Cγ2c基因区段；
(g)啮齿动物Cε基因区段；和
(h)啮齿动物Cα基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人VH基因区段、所述人DH基因区段和所述人JH基因区段的可变结构域和源于所述经修饰CH基因区段的重链恒定结构域的IgG抗体。
实施方式71.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；
(ii)人内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)人Cμ基因区段；
(b)人Cδ基因区段；
(c)人Cγ3基因区段；
(d)人Cγ1基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含完全人重链的IgG抗体。
实施方式72.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含人VH基因区段、人DH基因区段和人JH基因区段；
(ii)人内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)人Cμ基因区段；
(b)人Cδ基因区段；
(c)人Cγ3基因区段；
(d)人Cγ1基因区段；
(c)人Cγ2基因区段；
(d)人Cγ4基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含完全人重链的IgG抗体。
实施方式73.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；
(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)人Cμ基因区段；
(b)人Cδ基因区段；
(c)人Cγ3基因区段；
(d)人Cγ1基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含含有啮齿动物可变结构域和人恒定结构域的重链的IgG抗体。
实施方式74.如实施方式1所述的方法，其中所述啮齿动物在它的基因组中包含：
内源性免疫球蛋白重链基因座，所述内源性免疫球蛋白重链基因座包含：
(i)免疫球蛋白重链可变区，所述免疫球蛋白重链可变区包含啮齿动物VH基因区段、啮齿动物DH基因区段和啮齿动物JH基因区段；
(ii)啮齿动物内含子性增强子(Ei)；
(iii)免疫球蛋白重链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包含：
(a)人Cμ基因区段；
(b)人Cδ基因区段；
(c)人Cγ3基因区段；
(d)人Cγ1基因区段；
(c)人Cγ2基因区段；
(d)人Cγ4基因区段；和
(iv)啮齿动物3′调控区(3′RR)，
其中所述免疫球蛋白重链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白重链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含含有啮齿动物可变结构域和人恒定结构域的重链的IgG抗体。
实施方式75.如实施方式1至74中任一项所述的方法，所述啮齿动物还在它的基因组中包含：
免疫球蛋白κ(kappa)链基因座，所述免疫球蛋白κ链基因座包含：
(1)免疫球蛋白κ链可变区，所述免疫球蛋白κ链可变区包含人Vκ基因区段和人Jκ基因区段；和
(2)免疫球蛋白κ链恒定区，所述免疫球蛋白κ链恒定区包含人Cκ基因区段，
其中所述免疫球蛋白κ链可变区可操作地连接于所述免疫球蛋白κ链恒定区，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人Vκ基因区段和所述人Jκ基因区段的轻链可变结构域和源于所述人Cκ基因区段的轻链恒定结构域的抗体
其中所测试的所述人抗体包含κ轻链。
实施方式76.如实施方式75所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物内含子性κ增强子(Eκi)。
实施方式77.如实施方式75所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链基因座还包含人内含子性κ增强子(Eκi)。
实施方式78.如实施方式75至77中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链基因座还包含啮齿动物3′κ增强子(Eκ3′)。
实施方式79.如实施方式75至77中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链基因座还包含人3′κ增强子(Eκ3′)。
实施方式80.如实施方式75至79中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链可变区包含至少6个人Vκ基因区段。
实施方式81.如实施方式75或实施方式80所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链可变区包含所述人Jκ基因区段中的全部。
实施方式82.如实施方式75至81中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链基因座位于内源性免疫球蛋白κ链基因座处。
实施方式83.如实施方式82所述的方法，其中所述免疫球蛋白κ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白κ链基因座的全部或一部分。
实施方式84.如实施方式75至83中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述免疫球蛋白κ链基因座来说是杂合的。
实施方式85.如实施方式75至83中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述免疫球蛋白κ链基因座来说是纯合的。
实施方式86.如实施方式1至74中任一项所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含：
免疫球蛋白λ(lambda)链基因座，所述免疫球蛋白λ链基因座包含：
人Vλ基因区段、人Jλ基因区段和人Cλ基因区段，
其中所述人Vλ基因区段和所述人Jλ基因区段可操作地连接于所述人Cλ基因区段，以致所述啮齿动物产生包含源于所述人Vλ基因区段和所述人Jλ基因区段的轻链可变结构域和源于所述人Cλ基因区段的轻链恒定结构域的抗体，
其中所测试的所述人抗体包含λ轻链。
实施方式87.如实施方式86所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ1基因区段。
实施方式88.如实施方式87所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ1基因区段。
实施方式89.如实施方式86所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ2基因区段。
实施方式90.如实施方式89所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ2基因区段。
实施方式91.如实施方式86所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ3基因区段。
实施方式92.如实施方式91所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ3基因区段。
实施方式93.如实施方式86所述的方法，其中所述人Cλ基因区段是人Cλ7基因区段。
实施方式94.如实施方式93所述的方法，其中所述人Jλ基因区段是人Jλ7基因区段。
实施方式95.如实施方式86至94中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座包含人Cλ1基因区段、人Cλ2基因区段、人Cλ3基因区段和人Cλ7基因区段或啮齿动物Cλ1基因区段。
实施方式96.如实施方式95所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座包含人Jλ1基因区段、人Jλ2基因区段、人Jλ3基因区段和人Jλ7基因区段。
实施方式97.如实施方式86至96中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座包含至少7个人Vλ基因区段。
实施方式98.如实施方式86至97中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子2.4。
实施方式99.如实施方式86至98中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物3′λ增强子。
实施方式100.如实施方式86至99中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座还包含啮齿动物λ增强子3.1。
实施方式101.如实施方式86至100中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座还包含人3′λ增强子。
实施方式102.如实施方式86至101中任一项所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座位于内源性免疫球蛋白λ链基因座处。
实施方式103.如实施方式102所述的方法，其中所述免疫球蛋白λ链基因座替换所述内源性免疫球蛋白λ链基因座的全部或一部分。
实施方式104.如实施方式86至103中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述免疫球蛋白λ链基因座来说是杂合的。
实施方式105.如实施方式86至103中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述免疫球蛋白λ链基因座来说是纯合的。
实施方式106.如实施方式1至105中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcRn多肽的核酸序列。
实施方式107.如实施方式106所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
实施方式108.如实施方式106所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
实施方式109.如实施方式106至108中任一项所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
实施方式110.如实施方式106至108中任一项所述的方法，其中所述FcRn多肽还包含人细胞质结构域。
实施方式111.如实施方式106至110中任一项所述的方法，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
实施方式112.如实施方式111所述的方法，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
实施方式113.如实施方式106所述的方法，其中编码所述FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
实施方式114.如实施方式106至113中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
实施方式115.如实施方式106至114中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcRn基因座来说是杂合的。
实施方式116.如实施方式106至114中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcRn基因座来说是纯合的。
实施方式117.如实施方式106至116中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
实施方式118.如实施方式117所述的方法，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
实施方式119.如实施方式118所述的方法，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
实施方式120.如实施方式117至119中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
实施方式121.如实施方式117至120中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述β2M基因座来说是杂合的。
实施方式122.如实施方式117至120中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述β2M基因座来说是纯合的。
实施方式123.如实施方式1至122中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
实施方式124.如实施方式123所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
实施方式125.如实施方式123所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
实施方式126.如实施方式123至125中任一项所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
实施方式127.如实施方式123至125中任一项所述的方法，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
实施方式128.如实施方式123至127中任一项所述的方法，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
实施方式129.如实施方式128所述的方法，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
实施方式130.如实施方式123所述的方法，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
实施方式131.如实施方式123至130中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
实施方式132.如实施方式123至131中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcεR1α基因座来说是杂合的。
实施方式133.如实施方式123至131中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcεR1α基因座来说是纯合的。
实施方式134.如实施方式1至133中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含Fcγ受体1a(FcγR1a)基因座，所述Fcγ受体1a基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcγR1a多肽的核酸序列。
实施方式135.如实施方式134所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
实施方式136.如实施方式134所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含人跨膜结构域。
实施方式137.如实施方式134至136中任一项所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
实施方式138.如实施方式134至136中任一项所述的方法，其中所述FcγR1a多肽还包含人细胞质结构域。
实施方式139.如实施方式134至138中任一项所述的方法，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcγR1a基因座处。
实施方式140.如实施方式139所述的方法，其中编码所述FcγR1a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcγR1a基因的全部或一部分。
实施方式141.如实施方式134所述的方法，其中编码所述人FcγR1a细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcγR1a细胞外结构域的内源性核酸序列。
实施方式142.如实施方式134至141中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcγR1a。
实施方式143.如实施方式134至142中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR1a基因座来说是杂合的。
实施方式144.如实施方式134至142中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR1a基因座来说是纯合的。
实施方式145.如实施方式1至144中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含Fcγ受体2a(FcγR2a)基因座，所述Fcγ受体2a基因座包含编码人FcγR2a多肽的核酸序列。
实施方式146.如实施方式145所述的方法，其中编码所述FcγR2a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
实施方式147.如实施方式146所述的方法，其中编码所述人FcγR2a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
实施方式148.如实施方式145至147中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR2a基因座来说是杂合的。
实施方式149.如实施方式145至147中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR2a基因座来说是纯合的。
实施方式150.如实施方式1至149中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含Fcγ受体2b(FcγR2b)基因座，所述Fcγ受体2b基因座包含编码人FcγR2b多肽的核酸序列。
实施方式151.如实施方式150所述的方法，其中编码所述FcγR2b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
实施方式152.如实施方式151所述的方法，其中编码所述人FcγR2b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
实施方式153.如实施方式150至152中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR2b基因座来说是杂合的。
实施方式154.如实施方式150至152中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR2b基因座来说是纯合的。
实施方式155.如实施方式1至154中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含Fcγ受体3a(FcγR3a)基因座，所述Fcγ受体3a基因座包含编码人FcγR3a多肽的核酸序列。
实施方式156.如实施方式155所述的方法，其中编码所述FcγR3a多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
实施方式157.如实施方式156所述的方法，其中编码所述人FcγR3a多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
实施方式158.如实施方式155至157中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR3a基因座来说是杂合的。
实施方式159.如实施方式155至157中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR3a基因座来说是纯合的。
实施方式160.如实施方式1至159中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含Fcγ受体3b(FcγR3b)基因座，所述Fcγ受体3b基因座包含编码人FcγR3b多肽的核酸序列。
实施方式161.如实施方式160所述的方法，其中编码所述FcγR3b多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
实施方式162.如实施方式161所述的方法，其中编码所述人FcγR3b多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
实施方式163.如实施方式160至162中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR3b基因座来说是杂合的。
实施方式164.如实施方式160至162中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR3b基因座来说是纯合的。
实施方式165.如实施方式1至164中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物还在它的基因组中包含Fcγ受体2c(FcγR2c)基因座，所述Fcγ受体2c基因座包含编码人FcγR2c多肽的核酸序列。
实施方式166.如实施方式165所述的方法，其中编码所述FcγR2c多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因座处。
实施方式167.如实施方式166所述的方法，其中编码所述人FcγR2c多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物低亲和力FcγR基因的全部或一部分。
实施方式168.如实施方式165至167中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR2c基因座来说是杂合的。
实施方式169.如实施方式165至167中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物就所述FcγR2c基因座来说是纯合的。
实施方式170.如实施方式1至169中任一项所述的方法，其中所述啮齿动物是小鼠。
实施方式171.一种在它的基因组中包含新生儿Fc受体(FcRn)基因座的啮齿动物，所述新生儿Fc受体基因座包含编码包含人细胞外结构域和啮齿动物细胞质结构域的FcRn多肽的核酸序列。
实施方式172.如实施方式171所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
实施方式173.如实施方式171所述的啮齿动物，其中所述FcRn多肽还包含人跨膜结构域。
实施方式174.如实施方式169至173中任一项所述的啮齿动物，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
实施方式175.如实施方式174所述的啮齿动物，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcRn基因的全部或一部分。
实施方式176.如实施方式171所述的啮齿动物，其中编码所述人FcRn细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcRn细胞外结构域的内源性核酸序列。
实施方式177.如实施方式171至176中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcRn。
实施方式178.如实施方式171至177中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述FcRn基因座来说是杂合的。
实施方式179.如实施方式171至177中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述FcRn基因座来说是纯合的。
实施方式180.如实施方式171至179中任一项所述的啮齿动物，所述啮齿动物还在它的基因组中包含β-2-微球蛋白(β2M)基因座，所述β-2-微球蛋白基因座包含编码人或人源化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
实施方式181.如实施方式180所述的啮齿动物，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物β2M基因座处。
实施方式182.如实施方式181所述的啮齿动物，其中编码人或人源化β2M多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物β2M基因的全部或一部分。
实施方式183.如实施方式180至182中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物β2M多肽。
实施方式184.如实施方式180至183中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述β2M基因座来说是杂合的。
实施方式185.如实施方式180至183中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述β2M基因座来说是纯合的。
实施方式186.一种在它的基因组中包含Fcε受体1α(FcεR1α)基因座的啮齿动物，所述Fcε受体1α基因座包含编码包含人细胞外结构域的FcεR1α多肽的核酸序列。
实施方式187.如实施方式186所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物跨膜结构域。
实施方式188.如实施方式186所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含人跨膜结构域。
实施方式189.如实施方式186至188中任一项所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含啮齿动物细胞质结构域。
实施方式190.如实施方式186至188中任一项所述的啮齿动物，其中所述FcεR1α多肽还包含人细胞质结构域。
实施方式191.如实施方式186至190中任一项所述的啮齿动物，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
实施方式192.如实施方式191所述的啮齿动物，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列替换内源性啮齿动物FcεR1α基因的全部或一部分。
实施方式193.如实施方式186所述的啮齿动物，其中编码所述人FcεR1α细胞外结构域的核酸序列替换编码啮齿动物FcεR1α细胞外结构域的内源性核酸序列。
实施方式194.如实施方式186至193中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物不表达啮齿动物FcεR1α。
实施方式195.如实施方式186至194中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述FcεR1α基因座来说是杂合的。
实施方式196.如实施方式186至194中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物就所述FcεR1α基因座来说是纯合的。
实施方式197.如实施方式171至196中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是小鼠。
实施方式198.一种测试人抗体的方法，所述方法包括向如实施方式171至197中任一项所述的啮齿动物施用所述抗体。
实施方式199.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，所述方法还包括测量所施用人抗体的一种或多种药物代谢动力学性质。
实施方式200.如实施方式199所述的方法，其中所述一种或多种药物代谢动力学性质选自以下中的一者或多者：血浆浓度对时间下面积(AUC)、体内回收率(IVR)、清除率(CL)、平均滞留时间(MRT)、药剂半衰期(t1/2)以及在稳定状态下的分布容积(Vss)。
实施方式201.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，所述方法还包括测量所施用人抗体的治疗功效。
实施方式202.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，所述方法还包括施用多种剂量的所述人抗体，以及测定每种剂量的所述人抗体的治疗功效。
实施方式203.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，所述方法还包括施用多种剂量的所述人抗体，以及测定每种剂量的所述人抗体的安全性。
实施方式204.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，所述方法还包括施用多种剂量的所述人抗体，以及测定每种剂量的所述人抗体的可耐受性。
实施方式205.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，所述方法还包括测量所述啮齿动物中的一种或多种Fc受体介导的应答。
实施方式206.如实施方式205所述的方法，其中所述一种或多种Fc受体介导的应答是ADCC应答。
实施方式207.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，其中所述人抗体结合所述小鼠中的靶标细胞；并且所述方法还包括测量天然杀伤(NK)细胞针对所述靶标细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，以及将ADCC的量与对照进行比较，其中靶标细胞杀伤增加指示药剂具有增加的介导ADCC的能力。
实施方式208.如实施方式1至170以及实施方式198中任一项所述的方法，所述方法还包括测量由所述啮齿动物针对所述人抗体产生的免疫应答。
实施例
实施例1：包含人源化免疫球蛋白恒定区的小鼠的遗传工程改造
这个实施例说明构建一系列用于插入非人动物诸如啮齿动物(例如小鼠)的基因组中的靶向载体的示例性方法。这个实施例中所述的方法示范对基因组包含经工程改造免疫球蛋白重链恒定区和/或经工程改造免疫球蛋白轻链(κ或λ)恒定区的非人动物的产生。特别地，这个实施例示范对用于工程改造免疫球蛋白重恒定区以使非人动物表达和/或产生包括免疫球蛋白重链的抗体的靶向载体的构建，所述免疫球蛋白重链具有人可变结构域和完全地或部分地是人的恒定结构域(例如包含人部分和啮齿动物部分)。它还示范对用于工程改造免疫球蛋白轻恒定区以使非人动物表达和/或产生包括免疫球蛋白轻链的抗体的靶向载体的构建，所述免疫球蛋白轻链具有人可变结构域和完全地或部分地是人的恒定结构域(例如包含人部分和啮齿动物部分)。此外，预期所述抗体在非人动物中的B细胞的表面上形成功能性B细胞受体。含有所选经工程改造免疫球蛋白重链恒定区的各种啮齿动物品系的示意性概述阐述于图1A中，并且含有所选经工程改造免疫球蛋白轻链恒定区的各种啮齿动物品系的示意性概述阐述于图2A中。为简单起见，未显示人VH基因区段；仅示意性表示了少数基因区段–对于可能的存在的V(D)J基因区段的完全谱系，参见imgt.org；Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)；Lefranc,M.-P.和Lefranc,G.,TheImmunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458页(2001)；美国专利号8,642,835和8,697,940；或Macdonald等PNAS(2014)第111卷(14):5147-5152，其全都以引用的方式整体并入本文。
使用
Figure BDA0004173473480002281
技术(参见例如美国专利号6,586,251以及Valenzuela等,2003,Nature Biotech.21(6):652-9；所述专利和文献以引用的方式并入本文)和本领域中已知的分子生物学技术，从人和小鼠细菌人工染色体(BAC)创建含有用于插入所选啮齿动物免疫球蛋白恒定区中的人免疫球蛋白恒定区编码序列的DNA构建体和靶向载体。这个实施例中所述的方法可用于根据需要利用任何人免疫球蛋白恒定区编码序列或编码序列(或序列片段)的组合。
所靶向的BAC DNA用于对小鼠ES细胞进行电穿孔以创建经修饰ES细胞以产生表达如图1A和图2A中描绘的人或嵌合小鼠/人免疫球蛋白恒定区编码序列的小鼠。含有适当修饰的ES细胞通过定量TAQMANTM测定来鉴定(参见例如Lie和Petropoulos,1998.Curr.Opin.Biotechnology 9:43-48，其以引用的方式并入本文)。设计用于检测人序列的插入(等位基因获得GOA)和小鼠序列的缺失(等位基因丧失LOA)的特异性引物集和探针。
所靶向的ES细胞用作供者ES细胞，并且通过
Figure BDA0004173473480002291
方法引入8细胞期小鼠胚胎中(参见例如美国专利号7,294,754以及Poueymirou等(2007)F0 generationmice that are essentially fully derived from the donor gene-targeted ES cellsallowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1):91-99)。独立地携带经修饰等位基因的/>
Figure BDA0004173473480002292
(完全源于供者ES细胞的F0小鼠)通过使用等位基因修饰测定分析基因型来鉴定，所述测定检测独特基因序列例如人基因序列的存在性。使携带经修饰等位基因的所选杂合性小鼠繁育以获得纯合性。
实施例1.1：包含人重链可变区和嵌合或完全人重链恒定区的小鼠的遗传工程改造
为产生可用于人抗体测试(例如治疗性抗体的药物代谢动力学和给药研究)的啮齿动物，实施了若干方法。在第一方法中，产生了包含人重链可变区和含有嵌合(人CH1-H-CH2-CH3编码序列和小鼠M1-M2编码序列)或完全人(CH1-H-CH2-CH3-M1-M2编码序列)重链恒定区基因区段的重链恒定区的小鼠。所述小鼠可例如用于测试与由经修饰基因区段编码的免疫球蛋白恒定结构域(即恒定结构域的CH1-H-CH2-CH3部分)同种型匹配的治疗性抗体(例如在包含经遗传工程改造IgG1恒定结构域的小鼠中测试IgG1抗体)。
在一个实例中，构建了包含人重链可变区序列和嵌合人(人CH1-H-CH2-CH3)–小鼠(小鼠M1-M2)恒定区序列的小鼠，其中人IgG1的CH1-H-CH2-CH3编码序列与小鼠IgG2a的M1-M2编码序列在内源性IgG2a基因座处可操作地连接(图1A，小鼠基因座1)。简要来说，使用包括来自Blue Heron的人IgG1 CH1-H-CH2-CH3合成基因，并且由与小鼠IgG2a恒定区基因重叠的区域侧接的DNA片段构建质粒。所得质粒通过若干消化/连接/CRIPSR-Cas9等温组装步骤来克隆以产生BAC克隆，以使人IgG1 CH1-H-CH2-CH3序列可操作地连接于小鼠IgG2a恒定区基因的跨膜和细胞质编码序列(即M1和M2外显子)。BAC克隆还含有小鼠IgG2a转换区域(Sγ2a)与小鼠IgE转换区域(Sε)两者以及小鼠IgE恒定区基因区段。通过电穿孔将克隆引入小鼠ES细胞中以产生可用于产生包含图1A基因座1中描绘的免疫球蛋白基因座的小鼠的经修饰ES细胞，其中在内源性小鼠IgG2a基因座处，编码恒定结构域的人IgG1细胞外部分的核酸序列可操作地连接于编码恒定结构域的小鼠IgG2a连接性跨膜和细胞质部分的核酸序列。其余重链恒定区同种型序列是完全小鼠的。用于电穿孔的小鼠ES细胞包含人重链可变基因区段(人VH、D和JH可变基因区段)可操作地连接于小鼠重链恒定区，包括插入的鼠Adam6编码序列；参见例如以引用的方式并入本文的美国专利号8,642,835和8,697,940。
在另一实例中，构建了包含人重链可变区序列和在内源性小鼠IgG2a基因座处的完全人IgG1恒定区序列(人CH1-H-CH2-CH3-M1-M2)的小鼠(图1A，小鼠基因座2)。简要来说，使用BAC克隆RP11-448n5(Thermo Fisher Scientific)作为模板来扩增人M1-M2序列，并且在若干遗传工程改造步骤的过程中代替内源性小鼠IgG2a M1-M2序列来引入以上所述的用于产生小鼠基因座1的BAC克隆中。用于引入ES细胞中的所得BAC克隆含有以下DNA片段：所述DNA片段含有人IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2编码序列、小鼠IgG2a(Sγ2a)和IgE(Sε)转换区域以及小鼠IgE恒定区基因区段。从经遗传修饰ES细胞产生的小鼠包含图1A基因座2中描绘的免疫球蛋白基因座，其中在内源性小鼠IgG2a基因区段基因座处，编码人IgG1恒定结构域的核酸序列替换了编码内源性小鼠IgG2a恒定结构域的核酸序列。其余重链恒定区同种型序列是完全小鼠的。本文所用的小鼠ES细胞包含人重链可变基因区段(人VH、D和JH可变基因区段)可操作地连接于小鼠重链恒定区，包括插入的鼠Adam6编码序列；参见例如以引用的方式并入本文的美国专利号8,642,835和8,697,940。
在另一实例中，构建了包含人重链可变区序列和嵌合人(人CH1-H-CH2-CH3)–小鼠(小鼠M1-M2)恒定区序列的小鼠，其中人IgG4的CH1-H-CH2-CH3编码序列与小鼠IgG1的M1-M2编码序列在内源性IgG1基因座处可操作地连接(图1A，小鼠基因座3)。简要来说，使用BACCTD-3034B12(Thermo Fisher Scientific)作为模板，构建了包括由与小鼠IgG1恒定区基因重叠的区域侧接的编码人IgG4CH1-H-CH2-CH3的DNA片段的质粒。所得质粒通过若干消化/连接/CRIPSR-Cas9等温组装步骤来克隆至BMQ-263J18(The Sanger Centre)中以产生BAC克隆，以使人IgG4 CH1-H-CH2-CH3序列可操作地连接于小鼠IgG1恒定区基因的跨膜和细胞质编码序列(即M1和M2外显子)。这个BAC克隆还含有小鼠IgG1转换区域(Sγ1)和小鼠IgG2b恒定区基因区段。通过电穿孔将克隆引入小鼠ES细胞中以产生用于产生包含图1A基因座3中描绘的免疫球蛋白基因座的小鼠的经修饰ES细胞，其中在内源性小鼠IgG1基因区段基因座处，编码恒定结构域的人IgG4细胞外部分的核酸序列可操作地连接于编码恒定结构域的小鼠IgG1跨膜部分的核酸序列。其余重链恒定区同种型序列是完全小鼠的。用于电穿孔的小鼠ES细胞包含人重链可变基因区段(人VH、D和JH可变基因区段)可操作地连接于小鼠重链恒定区，包括插入的鼠Adam6编码序列；参见例如以引用的方式并入本文的美国专利号8,642,835和8,697,940。
在另一实例中，构建了包含人重链可变区序列和在内源性小鼠IgG1基因座处的完全人IgG4恒定区序列(人CH1-H-CH2-CH3-M1-M2)的小鼠(图1A，小鼠基因座4)。简要来说，使用BAC克隆CTD-3034B12(Thermo Fisher Scientific)作为模板来扩增人CH1-H-CH2-CH3-M1-M2序列，并且在若干遗传工程改造步骤的过程中代替内源性小鼠IgG1CH1-H-CH2-CH3-M1-M2序列来引入BAC克隆BMQ-263J18(The Sanger Centre)中。用于引入ES细胞中的所得BAC克隆含有以下DNA片段：所述DNA片段含有人IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2编码序列和小鼠IgG1(Sγ1)转换区域以及小鼠IgG2b恒定区基因区段。从经遗传修饰ES细胞产生的小鼠包含图1A基因座4中描绘的免疫球蛋白基因座，其中在内源性小鼠IgG1基因区段基因座处，编码人IgG4恒定结构域的核酸序列替换了编码内源性小鼠IgG1恒定结构域的核酸。其余重链恒定区同种型序列是完全小鼠的。用于电穿孔的小鼠ES细胞包含人重链可变基因区段(人VH、D和JH可变基因区段)可操作地连接于小鼠重链恒定区，包括插入的鼠Adam6编码序列；参见例如以引用的方式并入本文的美国专利号8,642,835和8,697,940。
还构建了在内源性小鼠免疫球蛋白重链基因座处包含人重链可变区以及包含完全人IgM、IgD、IgG3和IgG1基因区段的恒定区的小鼠(图1A，小鼠5)。
为产生用于靶向包含人重链可变区和人重链恒定区的小鼠ES细胞的构建体，首先产生包含在内含子性增强子(Eμ)与3’调控区(3’RR)之间的整个小鼠IgH恒定区(IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2b、IgG2a、IgE和IgA)的缺失的构建体，接着使所述构建体靶向至
Figure BDA0004173473480002321
ES细胞中。
简要来说，先前描述于Macdonald等PNAS(2014)第111卷(14):5147-5152(以引用的方式并入本文)中的指定为3hVh BACvec的BAC通过以下方式加以修饰：通过细菌同源性重组(BHR)和选择盒调换来移除3hVH的3’小鼠IgM基因，以及移除5’小鼠同源臂。3’小鼠同源臂通过对BAC RP23-351j19(Thermo Fisher Scientific)的两个BHR修饰来产生，所述修饰包括从RP23-351j19的5’末端使小鼠IgG2b、IgG2a、IgE和IgA基因缺失，以及并入独特限制位点。使这个第二构建体的限制片段连接至第一构建体中以产生最终LTVEC(MAID6022)。MAID6022从5’至3’含有：EM7 hyg盒、人IGHD/IGHJ、来自BAC CT7-302a07的小鼠IgM增强子、合成接头、独特I-CeuI位点、在3’lox2372位点的5’具有独特AscI位点的lox2372-ub-neo-lox2372盒、小鼠IgH基因座的在IgA基因的3’UTR中开始以及在3’RR的下游结束的40.5kb区域、以及独特PI-SceI位点。
这个载体被指定为MAID6022(图1B)，并且用于在下一工程改造步骤中引入人重链可变区序列。
接着，来自BAC RP11-448n5(Thermo Fisher Scientific)的人DNA通过BHR加以修饰以修整BAC的3’末端，并且插入lox2372-ub-hyg-lox2372盒。盒在3’lox2372位点的5’含有独特AscI位点。人-lox2372接合部在IgG1多腺苷酸信号的下游3.7kb处。这个构建体被指定为VI694。3’小鼠同源臂通过若干BHR步骤来从小鼠BAC RP23-351j19(Thermo FisherScientific)获得，并且连接于人BAC上。所得BAC克隆包含表1中所列的以下序列：
表1：用于产生小鼠基因座5的靶向载体(MAID 6993)的基因组坐标
Figure BDA0004173473480002331
将所得大型靶向载体电穿孔至包含人重链可变基因区段、插入的鼠Adam6编码序列以及小鼠重链恒定区序列的170Kb缺失的ES细胞中(参见图1B)。在引入人恒定区序列之后，使用Cre重组酶移除选择盒。来自图1A的小鼠基因座5的经修饰等位基因的各种序列在选择盒缺失之前的接合部列于下表2中。
表2：小鼠基因座5的经遗传修饰等位基因的接合部
Figure BDA0004173473480002332
/>
Figure BDA0004173473480002341
常规字体表示小鼠序列，粗字体表示人序列，限制酶位点/载体序列加下划线，并且loxp位点用斜体表示。
从经遗传修饰ES细胞产生的小鼠包含图1A基因座5中描绘的免疫球蛋白基因座，其中在内源性小鼠重链恒定区基因座处，编码人IgM、IgD、IgG3、IgG1恒定区基因区段的核酸序列替换了编码内源性小鼠重链恒定区基因区段的核酸。
还构建了在内源性重链基因座处包含额外人重链恒定区序列诸如人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4序列的小鼠。图1A小鼠6中描绘的这些小鼠在内源性小鼠免疫球蛋白重链基因座处包含人重链可变区和完全人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4序列。
简要来说，从人BAC CTD-3034B12(Thermo Fisher Scientific)获得42.9Kb的包含IgG2和IgG4序列的人DNA序列，并且通过若干细菌同源性重组、消化和连接步骤来修饰以添加5’和3’人同源臂。所得BAC克隆的基因组坐标列于下表3中。
表3：用于产生小鼠基因座6的靶向载体(MAID 20168)的基因组坐标
Figure BDA0004173473480002351
将所得大型靶向载体电穿孔至包含以上所述的小鼠基因座5的人重链可变区和人重链IgM、IgD、IgG3和IgG1恒定区基因区段的ES细胞中(参见图1C)。所得等位基因的各种接合部描述于下表4中。通过Cre重组酶来移除选择盒。
表4：小鼠基因座6的经遗传修饰等位基因的接合部
Figure BDA0004173473480002352
常规字体表示小鼠序列，粗字体表示人序列，限制酶位点/载体序列加下划线，并且loxp位点用斜体表示。
从经遗传修饰ES细胞产生的小鼠包含图1A基因座6中描绘的免疫球蛋白基因座，其中在内源性小鼠重链恒定区基因座处，编码人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4恒定区基因区段的核酸序列替换了编码内源性小鼠重链恒定区基因区段的核酸。
在这个实施例中产生的包含人重链可变区和嵌合或完全人重链恒定区的所有经遗传修饰ES细胞都用于使用以上所述的
Figure BDA0004173473480002361
方法来制备经遗传修饰小鼠。
实施例1.2：包含小鼠重链可变区和人重链恒定区的小鼠的遗传工程改造
为产生用于靶向包含小鼠重链可变区和人重链恒定区的小鼠ES细胞的构建体，首先产生包含在内含子性增强子(Eμ)与3’调控区(3’RR)之间的整个小鼠IgH恒定区(IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2b、IgG2a、IgE和IgA)的缺失的构建体。
简要来说，通过PCR来从BAC克隆BMQ-451A16(The Sanger Centre)扩增5.2kb 5’小鼠同源臂，并且使用等温组装来克隆至具有R6K复制起点和lox2372-ub-neo盒的质粒中。所得质粒从5’至3’含有：392bp R6K起点、独特I-CeuI位点、小鼠IgH基因座的包括DQ52、JH1-4和Eμ的5.2kb区域、独特NotI位点、lox2372-ub-neo盒以及独特AscI位点。将这个质粒消化，并且使质粒的I-CeuI-AscI片段连接至源于小鼠BAC克隆RP23-351j19(ThermoFisher Scientific)的载体中，所述载体从5’至3’含有：独特I-CeuI位点、在3’lox2372位点的5’具有独特AscI位点的lox2372-ub-hyg-lox2372盒、小鼠IgH基因座的在IgA基因的3’UTR中开始以及在3’RR的下游结束的40.5kb区域、独特PI-SceI位点、以及壮观霉素(spectinomycin)抗性(Spec)盒。所得载体从5’至3’含有：独特I-CeuI位点、5.2kb 5’小鼠同源臂(包括DQ52、JH1-4和Eμ)、独特NotI位点、lox2372-ub-neo-lox2372盒、40.5kb 3’小鼠同源臂(包括IgH 3’RR)、独特PI-SceI位点、以及Spec盒。这个载体(在图1D中描绘为MAID6577)用于在下一工程改造步骤中引入人重链可变区序列，并且还用于电穿孔至小鼠ES细胞中以产生具有整个小鼠IgH恒定区的缺失的ES细胞。
在下一工程改造步骤中，人BAC克隆RP11-448n5通过BHR加以修饰以用lox2372-ub-hyg-lox2372盒替换5.3kb的人插入物加CM盒。盒在3’lox2372位点的5’含有独特AscI位点。人-lox2372接合部在IgG1多腺苷酸信号的下游3.7kb处。这个构建体被指定为VI694。随后，VI694通过BHR加以修饰以用CM盒和独特NotI位点替换34.3kb的人插入物。NotI-人接合部在Eμ的3’，以及在IgM转换区域(Sμ)的5’。这个构建体被指定为VI695。使VI695的131.7kbNotI-AscI片段(人插入物和lox2372-ub-hyg盒)连接至MAID6577中以制备最终靶向载体MAID6739(图1A中的小鼠基因座7)。MAID6739从5’至3’含有：独特I-CeuI位点、5.2kb 5’小鼠同源臂(包括DQ52、JH1-4和Eμ)、独特NotI位点、人IgH恒定基因基因座的130kb区域(包括IgM、IgD、IgG3和IgG1基因)、lox2372-ub-hyg-lox2372盒、40.5kb 3’小鼠同源臂(在IgA的3’UTR中开始，以及在3’RR的3’结束)、独特PI-SceI位点、以及Spec盒。靶向载体的基因组坐标描绘于表5中，并且经修饰等位基因的接合序列列于表6中。
表5：用于产生小鼠基因座7的靶向载体(MAID 6739)的基因组坐标
Figure BDA0004173473480002371
表6：小鼠基因座7的经遗传修饰等位基因的接合部
Figure BDA0004173473480002372
/>
Figure BDA0004173473480002381
常规字体表示小鼠序列，粗字体表示人序列，限制酶位点/载体序列加下划线，并且loxp位点用斜体表示。
将所得大型靶向载体电穿孔至包含整个小鼠IgH恒定区的缺失(MAID 6577)的小鼠ES细胞中以插入人IgM、IgD、IgG3和IgG1基因区段。通过Cre重组酶来移除选择盒。
从经遗传修饰ES细胞产生的小鼠包含图1A基因座7中描绘的免疫球蛋白基因座，其中在内源性小鼠重链恒定区基因座处，编码人IgM、IgD、IgG3、IgG1恒定区基因区段的核酸序列替换了编码内源性小鼠重链恒定区基因区段的核酸。
在产生包含图1A基因座7中描绘的小鼠基因座的ES细胞和小鼠之后，产生了在内源性重链基因座处包含额外人重链恒定区序列诸如人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4序列的小鼠。图1A基因座8中描绘的这些小鼠在内源性小鼠免疫球蛋白重链基因座处包含小鼠重链可变区和完全人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4区域基因区段。为产生这些小鼠，使用与以上对于构建小鼠基因座6所述相同的靶向载体和方案，如图1E中所描绘。
在这个实施例中产生的包含小鼠重链可变区和嵌合或人重链恒定区的所有经遗传修饰ES细胞都用于使用以上所述的
Figure BDA0004173473480002393
方法来制备经遗传修饰小鼠。
实施例1.3：包含人轻链恒定区的小鼠的遗传工程改造
如下产生包含人轻链恒定区的经遗传工程改造小鼠。
首先，为产生包含人κ轻链恒定区的小鼠，0.5Kb的人IGKC基因由BlueHeron合成，并且含有从在IGKC基因的远端的5’UTR至在多腺苷酸尾部的下游的3’末端的基因组核酸序列。在这个序列的3’末端添加loxP-Ub-Neo-loxP选择盒。CRISPR/Cas9和等温组装技术用于将人IGKC序列引入小鼠BAC BMQ-126m16(The Sanger Centre)中。5’CM盒和小鼠IgKJ接着使用spec选择盒通过BHR来移除。所得BAC克隆的基因组坐标描述于表7中，并且经修饰等位基因的接合序列列于表8中。
表7：用于产生包含人IgKC的小鼠的靶向载体的基因组坐标
Figure BDA0004173473480002391
表8：包含人IgKC的经遗传修饰小鼠等位基因的接合部
Figure BDA0004173473480002392
Figure BDA0004173473480002401
常规字体表示小鼠序列，粗字体表示人序列，限制酶位点/载体序列加下划线，并且loxp位点用斜体表示。
如图2B中所示，将包含人IgKC区域序列的所得大型靶向载体电穿孔至包含具有人κ轻链可变基因区段可操作地连接于小鼠恒定κ恒定区的免疫球蛋白基因座的ES细胞中(参见例如Macdonald等PNAS(2014)第111卷(14):5147-5152，其以引用的方式并入本文)。通过Cre重组酶来移除选择盒。经遗传修饰ES细胞用于使用以上所述的
Figure BDA0004173473480002402
方法来制备经遗传修饰小鼠。
最后，在另一实例中，包含人λ恒定区序列的小鼠描述于2017年11月3日提交的US15/803,513(以US 2008/0125043公布)中，所述专利以引用的方式整体并入本文。
实施例1.4：包含人重链恒定区和轻链恒定区的小鼠的产生
使例如实施例1.1-1.2中所述的携带例如包含在内源性小鼠免疫球蛋白重链基因座处的完全人或嵌合重链恒定区序列的经工程改造重链恒定区的小鼠与实施例1.3中所述的包含人IgK恒定区序列和/或人IgL恒定区序列的小鼠进行繁育。繁育通过本领域中认可的标准技术来进行。携带所需经工程改造基因座的小鼠品系关于一个或多个人重链恒定区序列和一个或多个人轻链恒定区序列的存在性加以筛选。因此，使在内源性免疫球蛋白重链基因座处包含人重链可变基因区段序列和人或嵌合人/小鼠重链恒定区序列的小鼠与这个实施例中所述的包含人κ轻链可变基因区段序列和人κ轻链恒定区序列和/或人λ轻链可变基因区段序列和人λ轻链恒定区序列的小鼠进行繁育。
实施例2：用于人治疗剂的药物代谢动力学和给药研究的小鼠模型
小鼠抗人抗体(MAHA)作为一种由小鼠针对人抗体产生的免疫应答可导致给药以进行药物代谢动力学和/或功效实验的循环人单克隆抗体的快速清除。为在小鼠模型中获得完全人抗体的更加相关的PK和给药研究，测试以上在实施例1中描述的包含人IgH恒定区的小鼠规避MAHA应答的能力。就人IgH恒定区来说是杂合的小鼠展现正常B细胞发育，表达人IgM/IgD与小鼠IgM/IgD两者，并且显示完整等位基因排斥。
在一个实例中，测试如图1A基因座5中描绘的就人重链可变区来说是纯合的以及就人IgM、IgD、IgG3和IgG1恒定区基因区段来说是杂合的小鼠的MAHA应答降低。对于这些实验，所有小鼠都在再生元制药(Regeneron Pharmaceuticals)的无病原体设施中舍饲和繁育。将幼稚
Figure BDA0004173473480002411
对照小鼠(16周龄，雄性，n＝2)和幼稚hVs、hIgM、hIgD、hIgG3和hIgG1(图1A中的基因座5，20周龄，雄性，n＝4)小鼠处死，并且收集血液和脾。用ACK溶解缓冲液使脾溶解，继之以用具有5％FBS的RPMI培养基洗涤。将血液收集至血清分离管(BD，目录号365956)中，并且根据制造商说明书来收集血清。正常人血清(Quidel，目录号A113)用作ELISA的阳性对照。
如下使用ELISA来测定总人IgM抗体。将板在4℃下用2ug/ml兔抗人IgM抗体(Jackson ImmunoResearch目录号309-005-095)包被过夜，洗涤，用含1％BSA的PBS-T封闭。在PBS-T中将ChromPure人IgM标准物(Jackson ImmunoResearch目录号009-000-012)从600ng/ml至0.823ng/ml加以连续稀释，并且添加至孔中。使孔与稀释血清样品一起孵育，洗涤，并且与HRP缀合的抗人IgM抗体(Jackson ImmunoResearch#309-035-095)一起孵育。将板洗涤，并且用Opt EIA TMB底物试剂套件(BD目录号555214)加以显色。反应用1N硫酸终止，并且用Molecular Devices Spectramax M5微板读取器和SoftMax Pro软件在450nm下测量经空白校正OD。使用Prism软件分析数据。表示的数据是双重复点。此外，根据制造商说明书(分别是Invitrogen目录号BMS2092和BMS2094)进行人IgG1和人IgG3 ELISA。图3A中所示的Ig同种型水平的结果证明引入的人重链恒定同种型在具有小鼠基因座5的经遗传修饰小鼠的血清中表达。
对于流式细胞术实验，使1x106个细胞与抗小鼠CD16/CD32抗体(2.4G2，BD)一起在冰上孵育10分钟。随后用以下抗体组套在冰上标记细胞30分钟：抗小鼠FITC-CD3抗体(17A2，BD)、A700-CD19抗体(1D3，BD)、Pe-Cy7-IgM抗体(11/41，eBioscience)、PerCP-Cy5.5-IgD抗体(11-26c.2a，BioLegend)、抗人PE-IgD抗体(IA6-2，BioLegend)和BV421-IgM抗体(G20-127，BD)。在染色之后，将细胞洗涤，并且固定在2％甲醛中。在BD LSRFortessa流式细胞仪上进行数据获取，并且用FlowJo加以分析。将B细胞(CD19+)以hIgM相对于mIgM以及hIgD相对于mIgD绘图以显示等位基因利用以及等位基因排斥的存在性(图3B)。
通过Western印迹来测定从若干形式的就免疫球蛋白人恒定区来说是杂合的小鼠(例如图1A中描绘的基因座1、4、6和8小鼠)获得的血清中的抗体的分子量。使样品在4-12％Tris-甘氨酸凝胶(Invitrogen)上运行，转移至膜中，在4℃下封闭过夜，接着使用HRP缀合的抗人IgG抗体(Thermo#31412)和HRP缀合的抗小鼠IgG抗体(Thermo 31439)检测抗体，并且用ELC Western印迹检测试剂(GE Health Care#RPN2106)显色。Western印迹显示杂合性人Ig恒定区小鼠的血清中的如通过抗人IgG抗体检测的包含人免疫球蛋白恒定区的抗体的分子量类似于正常人血清中的抗体的分子量(数据未显示)。当相较于野生型和反向嵌合
Figure BDA0004173473480002432
小鼠的小鼠血清中的抗体的分子量时，杂合性人Ig恒定区小鼠的血清中的如通过抗小鼠IgG抗体检测的包含小鼠免疫球蛋白恒定区的抗体的分子量也是类似的(数据未显示)。
当测试针对相关同种型抗体的MAHA应答时，相较于对照小鼠，就hIgM、hIgD、hIgG3和hIgG1(基因座5)来说是杂合的小鼠展现降低的MAHA应答(数据未显示)。
在另一实例中，测试如图1A基因座6中描绘的就人重链可变区来说是纯合的以及就人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4恒定区来说是杂合的小鼠，或如图1A基因座8中描绘的就小鼠重链可变区来说是纯合的以及就人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4恒定区来说是杂合的小鼠的MAHA应答降低。对于这些实验，所有小鼠都在再生元制药的无特定病原体设施中舍饲和繁育。包含(1)小鼠重链可变区和人重链恒定区(mVs-hFC；图1A中的小鼠基因座8)以及(2)人重链可变区和人重链恒定区(hVs-hFC；图1A中的小鼠基因座6)的两种小鼠均分别就小鼠或人可变区来说是纯合的，以及就人重链恒定区来说是杂合的。
Figure BDA0004173473480002431
小鼠(hVs-mFc；参见以引用的方式并入本文的美国专利号8,642,835和8,697,940)就人重链可变区来说是纯合的，以及就小鼠重链恒定区来说是纯合的。在抗体注射之前将幼稚野生型对照小鼠(15周龄，雌性，n＝6)；hVs-mFc小鼠(14周龄，雄性，n＝5)；hVs-hFc小鼠：人可变序列、hIgM、hIgD、hIgG3、hIgG1、hIgG2和hIgG4小鼠(11周龄，雄性，n＝6)；以及mVs-hFc：小鼠可变序列、hIgM、hIgD、hIgG3、hIgG1、hIgG2和hIgG4小鼠(11周龄，雌性，n＝6)放血，以测定血清抗体同种型浓度(图3C)和初始小鼠抗人抗体效价(图3D，第0天)。将血液收集至血清分离管(BD，目录号365956)中，并且根据制造商说明书来收集血清。用完全人IgG4抗体以于杜贝卡氏PBS(Dulbecco's PBS)中稀释的1mg/kg的浓度皮下注射。在注射之后7天、15天、22天和34天将小鼠放血以测试MAHA(图3D；仅显示第34天数据)。
根据制造商说明书(Invitrogen，mIgM：88-50470-88，总mIgG：88-50400-88，hIgM：8850620-88，hIgG1：88-50560-22，hIgG4：88-50590-22)进行对总抗体同种型的测量(小鼠IgM、总小鼠IgG、人IgM和人IgG1、以及人IgG4 ELISA)。大多数小鼠表征概述于图3C中(一些数据未显示)。总之，在人源化Fc小鼠与野生型小鼠之间，对于小鼠IgM和IgG，似乎存在类似血清水平，并且在两种形式的人源化重链恒定区小鼠(mVs-hFc：基因座8，和hVs-hFc：基因座6)之间，hIgM、hIgG1和hIgG4的水平是类似的。
对于MAHA研究，对杂合性小鼠给与单次皮下注射hIgG4抗体，接着如下所述来操作MAHA ELISA。将Maxisorb板(Nunc目录号430341)在4℃下用1ug/ml给药的人IgG4抗体包被过夜，封闭，并且与稀释血清样品一起孵育过夜，随后与HRP缀合的抗小鼠IgG抗体(JacksonImmunoResearch，代号115-035-164)一起在室温下孵育1小时。将板用Opt EIA TMB底物试剂套件(BD目录号555214)加以显色。反应用1N硫酸终止，并且用Molecular DevicesSpectramax M5微板读取器和SoftMax Pro软件在450nm下测量OD。使用Prism软件分析数据。
如图3D中所示，相较于其他三种测试小鼠中的任一者，在注射后第34天，具有人源化IgH可变序列和IgH恒定序列(hVs-hIgM-hIgD-hIgG3-hIgG1-hIgG2-hIgG4；基因座6)的小鼠针对完全人IgG4抗体具有显著更低的MAHA效价。降低的MAHA应答还在包含人重链可变区以及嵌合小鼠-人(当注射的人抗体与人源化恒定基因相同时)或完全人重链恒定区的其他小鼠(例如图1A中描绘的其他小鼠)中观察到(数据未显示)。
通过血清ELISA来测定在第0天、2天、7天、15天、22天和34天时保持在如以上在图3D中所述的相同小鼠的血清中的给药抗体的浓度。将Maxisorb板(Nunc目录号430341)在4℃下用1ug/ml抗原包被过夜，用含BSA的PBS封闭，并且与稀释血清样品一起孵育，随后与HRP缀合的抗人IgG抗体(Jackson ImmunoResearch，代号109-035-098)一起在室温下孵育1小时。将板用Opt EIA TMB底物试剂套件(BD目录号555214)加以显色。反应用1N硫酸终止，并且用Molecular Devices Spectramax M5微板读取器和SoftMax Pro软件在450nm下测量OD。使用Prism软件分析数据。使用给药抗体作为标准物来测定浓度。
相较于不具有MAHA应答的小鼠，具有强烈MAHA应答的小鼠具有更快的给药抗体清除(图3E)。来自每种基因型的具有MAHA应答的小鼠的数目如下；6只具有mVs-hFc的小鼠中的5只，6只具有hVs-hFC的小鼠中的0只，5只具有hVs-mFc的小鼠中的4只，以及6只具有mVs-mFc的小鼠中的4只。不具有MAHA应答的小鼠在第34天时在血清中仍然具有可检测水平的给药抗体。
实施例3：包含人源化新生儿Fc受体(FcRn)的小鼠作为用于研究人抗体再循环的体内模型
通过使用
Figure BDA0004173473480002451
技术(参见例如美国专利号6,586,251以及Valenzuela等(2003)),High-throughput engineering of the mouse genome couplewith high-resolution expression analysis.Nat.Biotech.21(6):652-659，两者均以引用的方式并入本文)从人和小鼠细菌人工染色体(BAC)DNA构建独特靶向载体来使位于小鼠染色体7上的小鼠FcRn基因座人源化。来自小鼠BAC RP23-19D22(Invitrogen-ThermoFisher)的DNA通过同源性重组加以修饰以使8.3Kb的编码小鼠FcRn的细胞外部分的小鼠基因组DNA缺失，以及随后插入11.5Kb的相应人FcRn序列。因此，编码小鼠FcRn基因的α1、α2和α3结构域的小鼠外显子(外显子3、4和5)被编码人FcRn基因的α1、α2和α3结构域的人外显子(外显子3、4和5)替换(参见图4)。所得嵌合FcRn基因包含小鼠外显子1(非编码外显子)、小鼠外显子2(包含编码信号肽的核酸序列)、人外显子3-6、小鼠外显子6和7(编码跨膜和细胞质结构域)。
特别地，为产生人源化FcRn小鼠，用于构建嵌合基因的大型靶向载体包含下表9中所列的核酸序列。LoxP-Ub-Neo-LoxP盒被插入载体的内含子5中。
表9：FcRn大型靶向载体DNA的基因组坐标
Figure BDA0004173473480002461
所靶向的BAC DNA用于对包含小鼠FcRn外显子缺失的小鼠ES细胞进行电穿孔以创建用于产生表达人源化FcRn的小鼠的经修饰ES细胞(图4)。含有人FcRn外显子序列的插入的ES细胞通过定量TAQMANTM测定来鉴定(参见例如Lie和Petropoulos,1998.Curr.Opin.Biotechnology 9:43-48，其以引用的方式并入本文)。设计用于检测人序列的插入(等位基因获得GOA)和小鼠序列的缺失(等位基因丧失LOA)的特异性引物集和探针(未显示)。
选择盒可通过由熟练技术人员所知的方法移除。举例来说，携带人源化FcRn基因座的ES细胞可用表达Cre的构建体转染以移除由loxP位点侧接(floxed)的盒。选择盒可任选地通过与表达Cre重组酶的小鼠繁育来移除。任选地，选择盒保留在小鼠中。人源化FcRn等位基因在选择盒缺失之前的接合部呈现于下表10中。
表10：人源化FcRn等位基因的接合部
Figure BDA0004173473480002462
Figure BDA0004173473480002471
粗体序列表示人DNA，加下划线序列是限制酶位点或载体序列，斜体序列是loxP位点序列。
以上所述的所靶向的ES细胞用作供者ES细胞，并且通过
Figure BDA0004173473480002473
方法引入8细胞期小鼠胚胎中(参见例如美国专利号7,294,754以及Poueymirou等(2007)F0generation mice that are essentially fully derived from the donor gene-targeted ES cells allowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1):91-99)。独立地携带人源化FcRn的/>
Figure BDA0004173473480002474
(完全源于供者ES细胞的F0小鼠)通过使用等位基因修饰测定(参见上文)分析基因型来鉴定，所述测定检测独特人FcRn基因序列的存在性。使携带嵌合FcRn基因的杂合性小鼠繁育以获得纯合性。
以下描绘由经遗传修饰小鼠表达的所得嵌合FcRn蛋白的序列(SEQ ID NO:16)，其中α1、2和3结构域用斜体表示，并且信号肽和跨膜结构域用粗体表示并加下划线。成熟嵌合蛋白在以下描绘的序列的氨基酸22处开始，并且小鼠-人和人-小鼠边界用星号(*)指示。为供参考，人和小鼠蛋白质和mRNA序列的示例性Genbank登录号列于下表11中。
嵌合蛋白的序列(SEQ ID NO:16)
Figure BDA0004173473480002472
Figure BDA0004173473480002481
表11：FcRn(FCGRT)的Genbank登录号
物种 蛋白质 mRNA
小鼠 NP_034319 NM_010189
人 NP_001129491 NM_001136019
使包含嵌合FcRn基因的小鼠与详细描述于美国专利申请公布号2013/0111617中的在内源性小鼠B2M基因座处包含人源化B2M基因的小鼠繁育(图5)，所述专利以引用的方式整体并入本文。使小鼠繁育以在两个基因座处均获得纯合性。
为检测嵌合FcRn和人源化B2M的表达，将小鼠处死，并且收集脾。在用ACK溶解缓冲液(Gibco)处理之后，使脾解离，将细胞离心，洗涤并放置在板中，并且用IC固定缓冲液(eBioscience)固定，并用含有Fc封闭剂(BD)的缓冲液进行渗透化处理以为染色作准备。为检测FcRn，将细胞用内部抗人FcRn初级抗体或抗小鼠FcRn初级抗体(R&D AF6775)染色，随后用适当二级抗体(ThermoFisher 1885920或ThermoFisher 1915848)染色。将细胞洗涤，并且在LSRFortessa X-20(BD)FACS机器上分析样品。为检测B2M，将细胞用抗小鼠B2M经PE标记抗体(BioLegend克隆A16041A)或抗人B2M经PE标记抗体(BioLegend克隆2M2)染色。将细胞洗涤，并且在LSRFortessa X-20(BD)FACS机器上分析样品。
人源化FcRn/B2M小鼠表达可检测水平的嵌合蛋白(数据未显示)。然而，因为人FcRn不能结合小鼠IgG，所以确定就人FcRn和人源化B2M来说是纯合的小鼠展现血液中显著降低水平的小鼠IgG(数据未显示)。人源化FcRn/B2M小鼠表达人源化B2M蛋白(数据未显示)。
已知的是相比于人FcRn，小鼠FcRn以更高亲和力结合人Ig。为测试表达嵌合小鼠/人FcRn的小鼠是否展现与人的抗体再循环性质类似的人抗体再循环性质，将各三只野生型小鼠和以上所述的就嵌合FcRn和人源化B2M来说是纯合的小鼠用人IgG4抗体以1mg/kg皮下给药，并且使用Gyros免疫测定来测量在注射后6小时、1、2、3、8、10、14、22和30天时血清中的抗体药物水平。如图6中所示，相比于不表达人源化蛋白质的野生型小鼠，就嵌合FcRn(FcRn hu/hu)与人源化B2M(B2M hu/hu)两者来说均是纯合的小鼠显示更快抗体清除。因此，表达嵌合FcRn和人源化B2M的小鼠充当更加类似于人模型的用于研究人治疗性抗体再循环的模型，因此，充当用以研究治疗剂的药物代谢动力学和药物效应动力学概况的优异模型。
实施例4：包含人源化高亲和力和低亲和力Fcγ受体和人重链免疫球蛋白恒定区的小鼠
产生了包含高亲和力和低亲和力Fcγ受体和人源化恒定区的人源化小鼠。对于这些实验，根据本领域中的已知技术，通过繁育或重靶向ES细胞，使包含高亲和力Fcγ受体和低亲和力Fcγ受体的小鼠(这些小鼠的产生描述于U.S.8,658,154；U.S.9,056,130；U.S.8,658,853；U.S.8,883,496；U.S.9,687,566；U.S.9,089,599；U.S.9,221,894和U.S.9,474,255中，所述专利以引用的方式整体并入本文)与包含人重链恒定区(例如图1A中的小鼠基因座7)的小鼠组合在一起。使所得小鼠繁育以获得纯合性。本文所述的人源化基因座的各种示例性实施方案呈现于图7中。
在完成基因靶向后，筛选ES细胞或经遗传修饰非人动物以确认外源性目标核苷酸序列的成功并入或外源性多肽的成功表达。众多技术为本领域技术人员所知，并且包括(但不限于)Southern印迹、长片段PCR、定量PCR(例如使用TAQMAN进行的实时PCR)、荧光原位杂交、Northern印迹、流式细胞术、Western分析、免疫细胞化学分析、免疫组织化学分析等。举例来说，携带目标遗传修饰即人高亲和力FcgR和低亲和力FcgR和人重链恒定区的小鼠可通过使用Valenzuela等(2003)High-throughput engineering of the mouse genomecoupled with high-resolution expression analysis,Nature Biotech.21(6):652-659中所述的等位基因修饰测定筛选人等位基因获得来鉴定。鉴定经遗传修饰动物中的特定核苷酸或氨基酸序列的其他测定为本领域技术人员所知。
一旦如图7中所述完成了繁育或ES细胞重靶向，即对所得小鼠进行表征。对于这些实验，所有小鼠都在再生元制药的无特定病原体设施中舍饲和繁育。将幼稚野生型对照小鼠(26-36周龄，雄性和雌性，n＝2)和幼稚高亲和力和低亲和力hFcgR、hIgM、hIgD、hIgG3和hIgG1(图1A中的基因座7，19-22周龄，雄性和雌性，n＝5)小鼠处死，并且收集血液和脾。用ACK溶解缓冲液使来自血液和脾的红血细胞溶解，继之以用具有5％FBS的RPMI培养基洗涤。还将血液收集至血清分离管(BD，目录号365956)中，并且根据制造商说明书来收集血清。正常人血清(Quidel，目录号A113)用作ELISA的阳性对照。
如下使用ELISA来测定总人IgM抗体。将板在4℃下用2ug/ml驴抗人IgM抗体(Jackson ImmunoResearch目录号709-005-073)包被过夜，洗涤，用含1％BSA的PBS-T封闭。在PBS-T中将ChromPure人IgM标准物(Jackson ImmunoResearch目录号009-000-012)从500ng/ml至0.49ng/ml加以连续稀释，并且添加至孔中。使孔与稀释血清样品一起孵育，洗涤，并且与HRP缀合的抗人IgM抗体(Jackson ImmunoResearch#009-035-073)一起孵育。将板洗涤，并且用Opt EIA TMB底物试剂套件(BD目录号555214)加以显色。反应用1N硫酸终止，并且用Molecular Devices Spectramax M5微板读取器和SoftMax Pro软件在450nm下测量经空白校正OD。使用Prism软件分析数据。表示的数据是双重复点。此外，根据制造商说明书(分别是Invitrogen目录号BMS2092和BMS2094)进行人IgG1和人IgG3 ELISA。(图8C)
为进行流式细胞术实验，将1x106个细胞用可固定活力染料eFluor 455UV(ThermoFisher目录号65-0868-14)染色，并且在洗涤之后与抗小鼠CD16/CD32抗体(2.4G2，BD)一起在冰上孵育10分钟。随后用以下抗体组套在冰上标记细胞30分钟：抗小鼠FITC-CD3抗体(17A2，BD)、A700-CD19抗体(1D3，BD)、Pe-Cy7-IgM抗体(11/41，eBioscience)、PerCP-Cy5.5-IgD抗体(11-26c.2a，BioLegend)以及抗人PE-IgD抗体(IA6-2，BioLegend)和BV421-IgM抗体(G20-127，BD)。在染色之后，将细胞洗涤，并且固定在2％甲醛中。在BDLSRFortessa流式细胞仪上进行数据获取，并且用FlowJo加以分析。B细胞(CD19+)、成熟B细胞(CD19+IgD-高IgM-中)、过渡性/不成熟B细胞(CD19+IgD-中IgM-高)。(图8A和图8B)。
如图8A、图8B和图8C中所概述，人源化高亲和力和低亲和力Fcγ受体和人源化IgM、IgD、IgG3和IgG1小鼠的B细胞中的人IgM和人IgD表面表达存在显著增加。此外，这些小鼠展现正常脾B细胞群体和正常血清抗体水平。展现确切的高亲和力和低亲和力hFCγR人源化和重链恒定区人源化的这些小鼠表示一种用以研究人Fc受体效应功能的新型模型。
实施例5：用于研究人IgE抗体相互作用的包含人源化Fcε受体α(FcεRα)的小鼠
FcεR蛋白由单一α亚单位、β亚单位和两个γ亚单位组成。α亚单位FcεRIα的细胞外部分包含两个免疫球蛋白样结构域，并且即使在不存在其他亚单位下也以高亲和力结合IgE。因此，在以下概述的策略中，使FcεRIα即FcεR的α亚单位人源化。
通过使用
Figure BDA0004173473480002522
技术(参见例如美国专利号6,586,251以及Valenzuela等(2003)High-throughput engineering of the mouse genome couple withhigh-resolution expression analysis.Nat.Biotech.21(6):652-659，两者均以引用的方式并入本文)从人和小鼠细菌人工染色体(BAC)DNA构建独特靶向载体来使位于小鼠染色体1上的小鼠FcεRIα基因座人源化。来自小鼠BAC RP23-332i14(Invitrogen-ThermoFisher)的DNA通过同源性重组加以修饰以使5.7Kb的编码小鼠FcεRIα的编码区的小鼠基因组DNA缺失，以及随后插入来自BAC CTD-3064h17(Invitrogen-Thermo Fisher)的6.1Kb的人FcεRIα编码序列和人3’非翻译区(图9)。因此，小鼠FcεRIα的小鼠编码外显子1的一部分、编码外显子2、编码外显子3、编码外显子4和编码外显子5被人FcεRIα基因的人编码外显子1的一部分、编码外显子2、编码外显子3、编码外显子4和编码外显子5替换。所得嵌合FcεRIα基因包含嵌合小鼠/人外显子1(包含小鼠启动子和5’UTR)、人编码外显子2-5直至终止密码子、人3’UTR和多腺苷酸，继之以小鼠3’UTR和多腺苷酸。嵌合基因外显子1(部分)和2编码信号肽，外显子3和4编码FcεRIα的据信与IgE相互作用的两个Ig样结构域，并且外显子5编码蛋白质的细胞质和跨膜结构域(参见图9)。
特别地，为产生人源化FcεRIα小鼠，用于构建嵌合基因的大型靶向载体包含下表12中所列的核酸序列。自我缺失性新霉素盒被插入在末个编码外显子的3’。
表12：FcεRIα大型靶向载体DNA的基因组坐标
Figure BDA0004173473480002521
Figure BDA0004173473480002531
所靶向的BAC DNA用于对包含小鼠FcεRIα外显子缺失的小鼠ES细胞进行电穿孔以创建用于产生表达人源化FcεRIα的小鼠的经修饰ES细胞(图9)。含有人FcεRIα外显子序列的插入的ES细胞通过定量TAQMANTM测定来鉴定(参见例如Lie和Petropoulos,1998.Curr.Opin.Biotechnology 9:43-48，其以引用的方式并入本文)。设计用于检测人序列的插入(等位基因获得GOA)和小鼠序列的缺失(等位基因丧失LOA)的特异性引物集和探针(未显示)。
人源化FcεRIα等位基因在选择盒缺失之前的接合部呈现于下表13中。
表13：人源化FcεRIα等位基因的接合部
Figure BDA0004173473480002532
粗体序列表示人DNA，加下划线序列是限制酶位点或载体序列，斜体序列是loxP位点序列。
以上所述的所靶向的ES细胞用作供者ES细胞，并且通过
Figure BDA0004173473480002543
方法引入8细胞期小鼠胚胎中(参见例如美国专利号7,294,754以及Poueymirou等(2007)F0generation mice that are essentially fully derived from the donor gene-targeted ES cells allowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1):91-99)。独立地携带人源化FcεRIα的/>
Figure BDA0004173473480002542
(完全源于供者ES细胞的F0小鼠)通过使用等位基因修饰测定(参见上文)分析基因型来鉴定，所述测定检测独特人FcεRIα基因序列的存在性。使携带嵌合FcεRIα基因的杂合性小鼠繁育以获得纯合性。
由小鼠表达的所得FcεRIα蛋白是完全人的，并且以下描绘由经遗传修饰小鼠表达的人FcεRIα蛋白的序列(SEQ ID NO:20)，其中Ig样结构域用斜体表示，并且信号肽和跨膜结构域用粗体表示并加下划线。成熟蛋白在以下描绘的序列的氨基酸26处开始。为供参考，人和小鼠蛋白质和mRNA序列的示例性Genbank登录号列于下表14中。
人蛋白质的序列(SEQ ID NO:20)
Figure BDA0004173473480002541
表14：FCER1A的Genbank登录号
物种 蛋白质 mRNA
小鼠 NP_034314 NM_010184
人 NP_001992 NM_002001
为验证人源化FcεRIα在来自人源化FcεRIα小鼠的脾嗜碱性粒细胞的表面上的表达，将野生型(WT)或纯合性人源化FcεRIα小鼠处死，收集脾，并且在红血细胞溶解(Sigma)之后制备单细胞混悬液。接着将细胞用活/死细胞标记染色，通过Fc封闭剂来封闭，随后用以下两种抗体混合物中的一者进行抗体染色：(1)混合物1：抗小鼠CD49b抗体(PECy7缀合，EBioscience克隆DX5)、抗小鼠TCRβ抗体(APC缀合，BD克隆H57-597)、抗小鼠B220抗体(BUV395缀合，BD克隆RA3-682)和抗小鼠FcεRIα抗体(eFluor 450缀合，EBioscience克隆MAR-1)或(2)混合物2：抗小鼠CD49b抗体(PECy7缀合，EBioscience克隆DX5)、抗小鼠TCRβ抗体(APC缀合，BD克隆H57-597)、抗小鼠B220抗体(BUV395缀合，BD克隆RA3-682)和抗人FcεRIα抗体(eFluor450缀合，EBioscience克隆AER-37(CRA1))。在LSRFortessa仪器中获取细胞，并且使用FlowJo软件加以分析。将嗜碱性粒细胞鉴定为TCRβ-B220-CD49b+FcεRIα+。图10中的FACS图显示TCRβ-B220-群体，其中嗜碱性粒细胞群体由箭号标识。这个群体在野生型小鼠中仅关于小鼠FcεRIα呈阳性，并且在人源化FcεRIα小鼠中仅关于人FcεRIα呈阳性。各图显示将人或小鼠FceR1α+嗜碱性粒细胞定量为来自每种基因型的5只小鼠的脾中的活细胞的百分比(图10)。
在被动皮肤过敏症(PCA)模型中验证FcεRIα人源化小鼠。在第1天，各组野生型或人源化小鼠接受用两种过敏原特异性人IgE抗体的混合物或无关IgG抗体(阴性对照)分别向右耳和左耳中进行的真皮内注射，由此允许过敏原特异性IgE结合肥大细胞上的FcεR。在二十四小时之后，通过静脉内(IV)注射于0.5％伊文思蓝(Evan’s blue)染料中稀释的1μg过敏原来激发小鼠。在过敏原激发之后一小时，将小鼠处死，从耳组织提取伊文思蓝染料，并且使用标准曲线以分光光度方式定量。接着使耳干燥并称重。结果显示伊文思蓝染料外渗于组织中，定量为ng伊文思蓝/mg组织，作为局部肥大细胞脱粒的量度。图11中所示的数据证明人过敏原特异性IgE可在人源化FcεRIα小鼠中而非在野生型小鼠中介导局部过敏应答。
还在被动全身性过敏症(PSA)模型中验证FcεRIα人源化小鼠。在第1天，各组人源化FcεRIα小鼠接受用两种过敏原特异性人IgE抗体的混合物或无关IgG抗体(阴性对照)进行的静脉内(IV)注射，从而允许过敏原特异性IgE全身性结合FcεR1表达性细胞。在二十四小时之后，对所有小鼠进行基础核心温度测量，随后静脉内注射1μg过敏原。接着在过敏原激发之后30、60、120和240分钟时对所有小鼠进行核心温度测量，并且计算在每个时间点时相对于基础温度的核心温度变化。核心温度降低是全身性过敏症的读出数据。图12中所示的数据证明人过敏原特异性IgE可在人源化FcεRIα小鼠中介导全身性过敏应答，如通过在激发之后30-60分钟核心温度显著下降所度量。
实施例6：用于研究人治疗性抗体的人Fc受体相互作用和功效的主小鼠
为获得用于在小鼠模型中研究完全人单克隆抗体以及研究人Fc受体效应功能的更好模型，根据本文所述以及本领域中已知的技术，通过繁育或重靶向ES细胞，使如图13中所述的小鼠A(人源化hβ2M；参见实施例3)、小鼠B(hFCER1A；参见实施例5)、小鼠C(hFCRN；参见实施例3)、小鼠D(hFCGR1)、小鼠E(hFCGR2/3)和小鼠F(mVs、hIgM、hIgD、IgG3和IgG1；图1A的小鼠基因座7)，或替代地，小鼠F’(hVs、hIgM、hIgD、IgG3和IgG1；图1A的小鼠基因座5)组合在一起。所得小鼠就这些基因中的任一者或全部来说可为杂合的或纯合的。本文所述的人源化基因座的各种示例性实施方案描绘于图13中。可使图1A中描绘的具有人重链恒定区的其他小鼠与图13中的其余小鼠(小鼠A-E)繁育。因此，根据本文所述以及本领域中已知的技术，通过繁育或重靶向ES细胞，使小鼠A(人源化hb2M；参见实施例3)、小鼠B(hFCER1A；参见实施例5)、小鼠C(hFCRN；参见实施例3)、小鼠D(hFCGR1)、小鼠E(hFCGR2/3)和小鼠(mVs、hIgM、hIgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4；图1A的小鼠基因座8)，或另选地小鼠(hVs、hIgM、hIgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4；图1A的小鼠基因座6)组合在一起。还可使这些小鼠与图2A中描绘的轻链小鼠繁育。额外人免疫球蛋白恒定区通过实施例1中所述以及本领域中已知的遗传工程改造技术来添加。
以引用的方式并入
本文提及的所有出版物、专利和专利申请都据此以引用的方式整体并入，就好像已特定地和单独地指出将每个单独的出版物、专利或专利申请以引用的方式并入一样。在起冲突的情况下，将以包括本文任何定义的本申请为准。
等同物
本领域技术人员将仅使用常规实验就会认识到或能够确定本文所述的本发明的特定实施方案的许多等同物。所述等同物意图由以下权利要求涵盖。

Claims (10)

1.一种制备表达抗体的啮齿动物的方法，所述抗体包含人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域和人IgG1 CH3结构域，
所述方法包括修饰啮齿动物的基因组使其包含用编码人IgG1 CH1结构域、人IgG1铰链区、人IgG1 CH2结构域、人IgG1 CH3结构域的经修饰CH基因区段的至少一部分替换内源性Cγ2a基因区段的至少一部分。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述经修饰CH基因区段还包含人IgG1跨膜结构域。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述经修饰CH基因区段还包含人IgG1细胞质结构域。
4.一种制备表达抗体的啮齿动物的方法，所述抗体包含人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域和人IgG4 CH3结构域，
所述方法包括修饰啮齿动物的基因组使其包含用编码人IgG4 CH1结构域、人IgG4铰链区、人IgG4 CH2结构域、人IgG4 CH3结构域的经修饰CH基因区段的至少一部分替换内源性Cγ1基因区段的至少一部分。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述经修饰CH基因区段还包含人IgG1跨膜结构域。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述经修饰CH基因区段还包含人IgG1细胞质结构域。
7.一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在其基因组包含经工程改造新生儿Fc受体(FcRn)基因座，所述经工程改造新生儿FcRn基因座包含编码包含人细胞外结构域和啮齿动物细胞质结构域的FcRn多肽的核酸序列，所述方法包括修饰啮齿动物的所述基因组使其包含FcRn基因座，所述FcRn基因座包含编码包含人细胞外结构域和啮齿动物细胞质结构域的FcRn多肽的核酸序列，其中编码所述FcRn多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcRn基因座处。
8.一种制备啮齿动物的方法，所述啮齿动物在其基因组包含Fcε受体1α(FcεR1α)基因座，所述FcεR1α基因座包含编码包含人细胞外结构域和啮齿动物细胞质结构域的FcεR1α多肽的核酸序列，所述方法包括修饰啮齿动物的所述基因组使其包含经工程改造FcεR1α基因座，所述经工程改造FcεR1α基因座包含编码包含人细胞外结构域和啮齿动物细胞质结构域的FcεR1α多肽的核酸序列，其中编码所述FcεR1α多肽的所述核酸序列位于内源性啮齿动物FcεR1α基因座处。
9.一种编码FcRn多肽的核酸，所述FcRn多肽包含人细胞外结构域和啮齿动物细胞质结构域。
10.一种编码FcεR1α多肽的核酸，所述FcεR1α多肽包含人细胞外结构域和啮齿动物细胞质结构域。
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