TWI829679B - 用於測試治療藥劑之人類化囓齒動物 - Google Patents
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- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
Abstract
本案提供與在經遺傳修飾囓齒動物體內活體內測試含有人類Fc之治療藥劑有關的方法以及組合物(意即在經遺傳修飾囓齒動物體內測試此一治療藥劑的藥動學及/或藥效學特性)。在一些具體例中，經遺傳修飾囓齒動物表現含有人類Fc(例如人類IgG1 Fc、人類IgG4 Fc)的抗體。在一些具體例中，囓齒動物表現完全人類抗體(意即具有人類重鏈與人類輕(γ或κ)鏈的抗體)。在某些具體例中，經遺傳修飾囓齒動物包含一或多個帶有一個人類胞外域的Fc受體(例如新生兒Fc受體(FcRn)、β-2-微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受體1 α(FcεR1α)、Fcγ受體1α(FcγR1a)、Fcγ受體2a(FcγR2a)、Fcγ受體2b(FcγR2b)、Fcγ受體3a(FcγR3a)、Fcγ受體3b(FcγR3b)、Fcγ受體2c(FcγR2c))。此等受體的跨膜域以及細胞質域可為人類或非人類(例如囓齒動物)。
Description
相關申請案
本申請案主張於2018年3月26日提申之美國臨時專利申請案序號62/648,197之優先權，以及於2018年6月25日提申之美國臨時專利申請案序號62/689,628之優先權，其各自以整體引用的方式併入。
本案提供與在經遺傳修飾囓齒動物體內活體內測試含有人類Fc之治療藥劑有關的方法以及組合物(意即在經遺傳修飾囓齒動物體內測試此一治療藥劑的藥動學及/或藥效學特性)。
在治療藥劑被投與給人類之前，通常在動物模型中測試其安全性、效力以及藥動學特性。在這類臨床前研究中，使用較大型之動物(諸如非人類靈長類動物)所費不貲，而且通常並沒有適宜的疾病模型可供使用，這限制了此等動物在測試藥物效力時的有用性。
基於囓齒動物的身材小且經充分特徵鑑定過的生理學，牠們長期被用作為臨床前測試治療藥劑的動物模型。此外，囓齒動物極度適合使用已充分建立之技術作遺傳修飾，因此在囓齒動物中已有許多無法在較大型之哺乳動物中使用的疾病模型。但是，複合治療藥劑(諸如抗體以及Fc融合蛋白)在囓齒動物中與它們在人類中的行為經常有別。例如，此類治療藥劑在被投與給囓齒動物時，經常表現出與它們被投與給人類時差異相當大的藥動學特性，這限縮了囓齒動物模型在人類體內作為複合治療藥劑之安全性、效力與最佳給藥的有用性。復而降低了此等動物模型在臨床前測試中的有用性。
因此，非常需要能在囓齒動物中精確臨床前測試複合治療藥劑的新動物模型以及方法，其產生更能預測此等治療藥劑在人類患者中之特性的結果。
本文提供與在經遺傳修飾囓齒動物(例如小鼠或大鼠)體內活體內測試包含人類Fc之治療藥劑有關的方法以及組合物(例如測試此等治療藥劑的藥動學及/或藥效學以及給藥方案)。
在某些具體例中，本文提供經遺傳修飾囓齒動物，其中投與人類抗體及/或人類Fc融合蛋白引起降低的抗-人類Fc免疫反應(例如，小鼠抗-人類抗體或小鼠體內的MAHA反應)。在一些具體例中，經遺傳修飾囓齒動物(例如小鼠或大鼠)表現包含人類Fc(例如人類IgG1 Fc、人類IgG4 Fc)的抗體。在一些具體例中，囓齒動物表現完全人類抗體(例如具有人類重鏈以及人類輕(γ或κ)鏈的抗體)。
在一些具體例中，本文提供表現一或多種人類化或部分人類化Fc受體的囓齒動物，該等Fc受體與Fc融合蛋白或抗體以反映人類患者之Fc受體與此等Fc融合蛋白或抗體交互作用的方式交互作用。因此，在某些具體例中，經遺傳修飾囓齒動物包含一或多個帶有一個人類胞外域的Fc受體，例如新生兒Fc受體(FcRn)、β-2-微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受體1α(FcεR1α)、Fcγ受體1α(FcγR1a)、Fcγ受體2a(FcγR2a)、Fcγ受體2b(FcγR2b)、Fcγ受體3a(FcγR3a)、Fcγ受體3b(FcγR3b)、Fcγ受體2c(FcγR2c)。此等受體的跨膜域以及細胞質域可以是人類或非人類(例如囓齒動物，諸如大鼠或小鼠)。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾免疫球蛋白重鏈(IgH)基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)以及囓齒動物ES細胞。在某些具體例中，該IgH基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，含有一或多個VH基因段、一或多個DH基因段與一或多個JH基因段(例如，大鼠或小鼠VH基因段、DH基因段與JH基因段)；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含一或多個編碼含有人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、 人類或囓齒動物IgG跨膜域與人類或囓齒動物IgG細胞質域的IgG恆定域之CH基因段。在一些具體例中，免疫球蛋白重鏈恆定區中的所有CH基因段為人類。在一些具體例中，免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，以使得囓齒動物產生含有衍生自VH基因段、DH基因段與JH基因段之可變域，以及衍生自CH基因段之重鏈恆定域的IgG抗體。在某些具體例中，基因座座落在內源性囓齒動物免疫球蛋白重鏈基因座處。在一些具體例中，當與囓齒動物免疫球蛋白重鏈基因座中之人類CH所編碼的Fc同型配對的人類抗體以及Fc融合蛋白被投與給囓齒動物時，引起減低的免疫反應。例如，在一些具體例中，人類IgG1抗體被投與給本文提供的囓齒動物，該囓齒動物表現具有人類可變域以及人類IgG1恆定域的抗體。在一些具體例中，人類IgG2抗體被投與給本文提供的囓齒動物，該囓齒動物表現具有人類可變域以及人類IgG2恆定域的抗體。在一些具體例中，人類IgG3抗體被投與給本文提供的囓齒動物，該囓齒動物表現具有人類可變域以及人類IgG3恆定域的抗體。在一些具體例中，人類IgG4抗體被投與給本文提供的囓齒動物，該囓齒動物表現具有人類可變域以及人類IgG4恆定域的抗體。在一些具體例中，帶有κ輕鏈的人類抗體被投與給本文提供的囓齒動物，該囓齒動物表現具有人類κ輕鏈的抗體(例如表現具有人類κ恆定域的抗體或表現具有人類κ可變域與恆定域的抗體)。在一些具體例中，具有λ輕鏈的人類抗體被投與給本文提供的囓齒動物，該囓齒動物表現具有人類λ輕鏈的抗體(例如表現具有人類λ恆定域的抗體或表現具有人類λ可變域與恆定域的抗體)。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾免疫球蛋白κ(Igκ)鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)。在一些具體例中，該Igκ基因座包含：(i)免疫球蛋白κ鏈可變區，含有一或多個人類Vκ基因段與一或多個人類Jκ基因段；以及(ii)免疫球蛋白κ鏈恆定區，含有一個人類Cκ基因段。在一些具體例中，免疫球蛋白κ鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白κ鏈恆定區，以使得囓齒動物產生含有衍生自人類Vκ基因段與人類Jκ基因段之輕鏈可變域，以及衍生自Cκ基因段之輕鏈恆定域的抗體。在某些具體 例中，基因座座落在內源性囓齒動物免疫球蛋白κ鏈基因座處。在一些具體例中，當包括人類κ鏈的人類抗體被投與給此等囓齒動物時，引起降低的免疫反應。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾免疫球蛋白λ(Igλ)鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)。在某些具體例中，該Igλ基因座包含一或多個人類Vλ基因段、一或多個人類Jλ基因段以及一或多個Cλ基因段。在一些具體例中，人類Jλ基因段以及Cλ基因段經排列成一或多個Jλ-Cλ簇。在一些具體例中，人類Jλ基因段以及Cλ基因段經排列，以使得人類Jλ基因段全都座落在一或多個Cλ基因段的上游。在一些具體例中，人類Jλ基因段以及Cλ基因段經排列以使得人類Jλ基因段以及Cλ基因段中的一些被排列成一或多個Jλ-Cλ簇，而其他Jλ基因段全都座落在一或多個Cλ基因段的上游。在一些具體例中，人類Vλ基因段與人類Jλ基因段可操作地連結至人類Cλ基因段，以使得囓齒動物產生含有衍生自人類Vλ基因段與人類Jλ基因段之輕鏈可變域，以及衍生自Cλ基因段之輕鏈恆定域的抗體。在某些具體例中，基因座座落在內源性囓齒動物免疫球蛋白λ鏈基因座處。在一些具體例中，當包括人類λ鏈的人類抗體被投與給此等囓齒動物時，引起降低的免疫反應。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾新生兒Fc受體(FcRn)基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)。在某些具體例中，FcRn基因座包含編碼FcRn多肽的核酸序列，該FcRn多肽包含一個人類胞外域、一個囓齒動物或人類跨膜域以及一個囓齒動物或人類細胞質域。在某些具體例中，該基因座座落在內源性囓齒動物FcRn基因座處。在一些具體例中，該等囓齒動物在其基因體內進一步包含β-2-微球蛋白(β2M)基因座，其包含編碼人類β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。在一些具體例中，編碼人類β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾Fcε受體1α(FcεR1α)基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)，該基因座包含編碼FcεR1α多肽之核酸序列，該FcεR1α多肽含有一個人類胞外域、一個囓齒動物或人類跨膜域以及一個囓齒動物或人類細胞質域。在一些具體例中，編碼FcεR1α多肽之核酸序列座落在內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾Fcγ受體1a(FcγR1a)α鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)，該基因座包含編碼FcγR1a α鏈多肽之核酸序列，該FcγR1a α鏈多肽含有一個人類胞外域、一個囓齒動物或人類跨膜域以及一個囓齒動物或人類細胞質域。在一些具體例中，編碼FcγR1a α鏈多肽之核酸序列座落在內源性囓齒動物FcγR1a α鏈基因座處。在一些具體例中，本文提供之經遺傳修飾囓齒動物進一步包含一個功能性FcR γ-鏈。在某些具體例中，該功能性FcR γ-鏈為囓齒動物FcR γ-鏈(例如對經遺傳修飾囓齒動物為內源性的FcR γ-鏈)。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾Fcγ受體2a(FcγR2a)α鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)，該基因座包含編碼人類FcγR2a α鏈多肽之核酸序列。在一些具體例中，編碼FcγR2a α鏈多肽之核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR α鏈基因座處。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾Fcγ受體2b(FcγR2b)α鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)，該基因座包含編碼人類FcγR2b α-鏈多肽之核酸序列。在一些具體例中，編碼FcγR2b α-鏈多肽之核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR α-鏈基因座處。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾Fc γ受體3a(FcγR3a)α-鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)，該基因座包含編碼人類FcγR3a α-鏈多肽之核酸序列。在一些具體例中，編碼FcγR3a α-鏈多肽之核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR α-鏈基因座處。在一些具體例中，本文提供之經遺傳修飾囓齒動物進一步包含一個功能性FcR γ-鏈。在某些具體例中，該功能性FcR γ-鏈為囓齒動物FcR γ-鏈(例如對經遺傳修飾囓齒動物為內源性的FcR γ-鏈)。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾Fcγ受體3b(FcγR3b)α-鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)，該基因座包含編碼人類FcγR3b α-鏈多肽之核酸序列。在一些具體例中，編碼FcγR3b α-鏈多肽之核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR α-鏈基因座處。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含經遺傳修飾Fcγ受體2c(FcγR2c)α-鏈基因座的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)，該基因座包含編碼人類FcγR2c α-鏈多肽之核酸序列。在一些具體例中，編碼FcγR2c α-鏈多肽之核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR α-鏈基因座處。在某些具體例中，本文提供使用此等囓齒動物測試人類抗體與Fc融合蛋白的動物模型以及方法。
在某些態樣中，本文提供在其基因體內包含本文提供之經遺傳修飾基因座組合的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)。例如，在一些具體例中，本文提供的囓齒動物包含一或多個選自以下之經遺傳修飾基因座：一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座、一個本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座、一個本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcRn基因座、一個本文提供之經遺傳修飾β2M基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcεR1α基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR1a基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2a基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2b基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2c基因座、一個本文提供之經遺傳修飾 FcγR3a基因座，及/或一個本文提供之經遺傳修飾FcγR3b基因座。在某些具體例中，本文提供的囓齒動物包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座及/或一個本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座。在一些具體例中，本文提供的囓齒動物包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座及/或一個本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座。在一些具體例中，本文提供的囓齒動物包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座、一個本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座及/或一個本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcRn基因座以及一個本文提供之經遺傳修飾β2M基因座。在一些具體例中，本文提供的囓齒動物包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcRn基因座、一個本文提供之經遺傳修飾β2M基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcεR1α基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR1a基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2a基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2b基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2c基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR3a基因座，及/或一個本文提供之經遺傳修飾FcγR3b基因座。
在某些具體例中，本文提供測試包含人類Fc域(例如人類抗體或Fc融合蛋白)之治療性蛋白的方法，包含向本文提供之囓齒動物(例如小鼠或大鼠)投與治療性蛋白。在一些具體例中，該方法進一步包含測量所投與治療性蛋白的一或多個藥動學特性。在一些具體例中，該一或多個藥動學參數包括，但不限於血漿濃度相對時間下的面積(AUC)、活體內回收(IVR)、廓清率(CL)、平均滯留時間(MRT)、藥劑半衰期(t1/2)以及穩態下的分布體積(Vss)。在一些具體例中，該等方法進一步包含測量所投與治療性蛋白的治療效力(例如所投與劑量之治療性蛋白在動物模型中降低或消除一或多種疾病症狀的能力)。在一些具體例中，該等方法進一步包含測量所投與治療性蛋白的安全性(例如所投與劑量之治療性蛋白在動物模型中產生一或多種不良效應的程度)。在某些具體例中，該方法進一步包含測量治療性蛋白在囓齒動物體內誘發一或多種Fc受體媒介反應的程度(例如治療性蛋白誘發抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)的程度)。在一些具體例中，該方法進一步包含測量投與治療性蛋白在囓齒動物體內誘發抗-人類Fc免疫反應的程 度。在一些具體例中，該方法進一步包含評估治療性蛋白之給藥方案的安全性及/或效力。
在某些具體例中，本文提供測試包含人類Fc域(例如人類抗體或Fc融合蛋白)之治療性蛋白的動物模型。在一些具體例中，動物模型包含向本文提供的囓齒動物(例如小鼠或大鼠)投與治療性蛋白。在一些具體例中，該動物模型進一步包含測量所投與治療性蛋白的一或多個藥動學特性。在一些具體例中，一或多個藥動學參數包括，但不限於血漿濃度相對時間下的面積(AUC)、活體內回收(IVR)、廓清率(CL)、平均滯留時間(MRT)、藥劑半衰期(t1/2)以及穩態下的分布體積(Vss)。在一些具體例中，該動物模型進一步包含測量所投與治療性蛋白的治療效力(例如所投與劑量之治療性蛋白在動物模型中降低或消除一或多種疾病症狀的能力)。在一些具體例中，該動物模型進一步包含測量所投與治療性蛋白的安全性(例如所投與劑量之治療性蛋白在動物模型中產生一或多種不良效應的程度)。在某些具體例中，該動物模型進一步包含測量治療性蛋白在囓齒動物體內誘發一或多種Fc受體媒介反應的程度(例如治療性蛋白誘發抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)的程度)。在一些具體例中，該動物模型進一步包含測量投與治療性蛋白在囓齒動物體內誘發抗-人類Fc免疫反應的程度。在一些具體例中，該動物模型進一步包含評估治療性蛋白之給藥方案的安全性及/或效力。
在一些具體例中，所投與治療性蛋白當投與給本文提供的囓齒動物時引起降低的免疫反應。在一些具體例中，所投與的人類抗體或Fc融合蛋白具有與在本文提供之囓齒動物的經遺傳修飾IgH基因座中之人類CH編碼的Fc域的同型及/或異型相匹配的同型及/或異型。在一些具體例中，與在囓齒動物的免疫球蛋白重鏈基因座中之人類CH編碼的Fc同型匹配的人類抗體或Fc融合蛋白當被投與給此等囓齒動物時引起降低的免疫反應。例如，在一些具體例中，人類IgG1抗體被投與給本文提供之表現具有人類可變域與人類IgG1恆定域之抗體的囓齒動物。在一些具體例中，人類IgG2抗體被投與給本文提供之表現具有人類可變域與人類IgG2恆定域之抗體的囓齒動物。在一些具體例中，人類IgG3抗體被投與給本文提供之表現具有人 類可變域與人類IgG3恆定域之抗體的囓齒動物。在一些具體例中，人類IgG4抗體被投與給本文提供之表現具有人類可變域與人類IgG4恆定域之抗體的囓齒動物。在一些具體例中，具有κ輕鏈的人類抗體被投與給本文提供之表現具有人類κ輕鏈的抗體(例如表現具有人類κ恆定域的抗體，或表現具有人類κ可變域與恆定域的抗體)的囓齒動物。在一些具體例中，具有λ輕鏈的人類抗體被投與給本文提供之表現具有人類λ輕鏈的抗體(例如表現具有人類λ恆定域的抗體，或表現具有人類λ可變域與恆定域的抗體)的囓齒動物。在一些具體例中，該藥劑為人類IgG1抗體，且該囓齒動物包含含有編碼人類IgG1CH1、鉸鏈、CH2與CH3域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，該藥劑為人類IgG4抗體，且該囓齒動物包含含有編碼人類IgG4 CH1、鉸鏈、CH2與CH3域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，該治療藥劑為具有Igκ輕鏈的人類抗體，且該囓齒動物包含本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座。在一些具體例中，該治療藥劑為具有Igλ輕鏈的人類抗體，且該囓齒動物包含本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座。
在某些態樣中，本文提供包含一或多個本文提供之經遺傳修飾基因座的囓齒動物細胞(例如ES細胞、免疫細胞、內皮細胞、B細胞、NK細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、蘭氏細胞、嗜酸性球、肥大細胞以及嗜鹼性球)。例如，在一些具體例中，本文提供的囓齒動物細胞(例如囓齒動物ES細胞)包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座及/或一個本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座。在一些具體例中，本文提供的囓齒動物細胞(例如囓齒動物ES細胞)包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座及/或一個本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座。在一些具體例中，本文提供的囓齒動物細胞(例如囓齒動物ES細胞)包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座、一個本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座及/或一個本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcRn基因座，以及一個本文提供之經遺傳修飾β2M基因座。在一些具體例中，本文提供的囓齒動物細胞(例如囓齒動物ES細胞)包含一個本文提供之經遺傳修飾IgH基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcRn基因座、一個本文提供之經遺傳β2M基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcεR1α基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR1a基因座、一個本文 提供之經遺傳修飾FcγR2a基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2b基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR2c基因座、一個本文提供之經遺傳修飾FcγR3a基因座及/或一個本文提供之經遺傳修飾FcγR3b基因座。
在一些具體例中，本文提供製造本文提供之經遺傳修飾囓齒動物(例如大鼠或小鼠)以及囓齒動物ES細胞(例如大鼠或小鼠ES細胞)的方法。在某些具體例中，該方法包含遺傳修飾囓齒動物(例如大鼠或小鼠)或囓齒動物ES細胞(例如大鼠或小鼠ES細胞)的基因體，以使得其包含一或多個本文提供之經遺傳修飾基因座。
圖1A顯示根據本文提供的某些例示性具體例的例示性經修飾免疫球蛋白重鏈基因座的示意性概述，未按比例繪製。如所示，例示性小鼠重鏈基因座1以5'至3'順序包含人類可變區(包含人類VH、人類DH以及人類JH基因段，為簡明起見，未顯示人類VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org,Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)，以引用的方式併入本文)、小鼠內含子性增強子、小鼠Cμ基因段、小鼠Cδ基因段、小鼠Cγ3基因段、小鼠Cγ1基因段、小鼠Cγ2b基因段、編碼人類IgG1胞外域合小鼠IgG2a跨膜和細胞質域的混合CH基因段、小鼠Cε基因段、小鼠Cα基因段以及小鼠3'調節區。如所示，例示性小鼠重鏈基因座2以5'至3'順序包含人類可變區(包含人類VH、人類DH以及人類JH基因段，為簡明起見，未顯示人類VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org,Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)，以引用的方式併入本文)、小鼠內含子性增強子、小鼠Cμ基因段、小鼠Cδ基因段、小鼠Cγ3基因段、小鼠Cγ1基因段、小鼠Cγ2b基因段、人類Cγ1基因段(IgG1胞外與跨膜/細胞質編碼序列均為人類)、小鼠Cε基因段、小鼠Cα基因段，以及小鼠3'調節區。如 所示，例示性小鼠重鏈基因座3以5'至3'順序包含人類可變區(包含人類VH、人類DH以及人類JH基因段，為簡明起見，未顯示人類VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org,Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)，以引用的方式併入本文)、小鼠內含子性增強子、小鼠Cμ基因段、小鼠Cδ基因段、小鼠Cγ3基因段、編碼人類IgG4胞外域和小鼠IgG1跨膜與細胞質域的混合CH基因段、小鼠Cγ2b基因段、小鼠Cγ2a基因段、小鼠Cε基因段、小鼠Cα基因段，以及小鼠3'調節區。如所示，例示性小鼠重鏈基因座4以5'至3'順序包含人類可變區(包含人類VH、人類DH以及人類JH基因段，為簡明起見，未顯示人類VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org,Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)，以引用的方式併入本文)、小鼠內含子性增強子、小鼠Cμ基因段、小鼠Cδ基因段、小鼠Cγ3基因段、人類Cγ4基因段(IgG4胞外與跨膜/細胞質域編碼序列均為人類)、小鼠Cγ2b基因段、小鼠Cγ2a基因段、小鼠Cε基因段、小鼠Cα基因段，以及小鼠3'調節區。如所示，例示性小鼠重鏈基因座5以5'至3'順序包含人類可變區(包含人類VH、人類DH以及人類JH基因段，為簡明起見，未顯示人類VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org,Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)，以引用的方式併入本文)、人類內含子性增強子、人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段、人類Cγ1基因段，以及小鼠3'調節區。如所示，例示性小鼠重鏈基因座6以5'至3'順序包含人類可變區(包含人類VH、人類DH以及人類JH基因段，為簡明起見，未顯示人類VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org,Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)，以引用的方式併入本文)、人類內含子性增強子、人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段、人類Cγ1基因段、人類Cγ2基因段、人類Cγ4基因段，以及小鼠3'調節區。如所示，例示性小鼠重鏈基因座7以5'至3'順序包含小鼠可變區(包含小鼠VH、小鼠DH以及小鼠JH基因段，為簡明起見，未顯示小鼠VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org)、小鼠內含子性增強子、人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段、人類Cγ1基因段，以及小鼠3'調節區。如所示，例示性小鼠重鏈基因座8以5'至3'順序包含小鼠可變區(包含小鼠VH、小鼠DH以及小鼠JH基因段，為簡明起見，未顯示小鼠VH基因段；僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org)、小鼠內含子性增強子、人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段、人類Cγ1基因段、人類Cγ2基因段、人類Cγ4基因段，以及小鼠3'調節區。儘管未顯示，但這些具體例中的基因座包含功能性小鼠Adam6基因(例如，Adam 6a及/或Adam6b)。除非另有指明(例如，關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖1B顯示如實例1.1中所述用於產生圖1A中描繪的例示性經修飾免疫球蛋白重鏈基因座5的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。為簡明起見，在每個示意圖中未顯示人類VH基因段和小鼠Adam6基因。除非另有指明(例如，關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖1C顯示如實例1.1中所述用於產生圖1A中描繪的例示性經修飾免疫球蛋白重鏈基因座6的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。為簡明起見，在每個示意圖中未顯示人類VH基因段和小鼠Adam6基因。除非另有指明(例如，關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖1D顯示如實例1.2中所述用於產生圖1A中描繪的例示性經修飾免疫球蛋白重鏈基因座7的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。為簡明起見，在每個示意圖中未顯示小鼠VH基因段。除非另有指明(例如， 關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖1E顯示如實例1.2中所述用於產生圖1A中描繪的例示性經修飾免疫球蛋白重鏈基因座8的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。為簡明起見，在每個示意圖中未顯示小鼠VH基因段。除非另有指明(例如，關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖2A顯示根據本文提供的某些例示性具體例的例示性經修飾免疫球蛋白輕鏈基因座的示意性概述，未按比例繪製。上方例示性示意圖描繪Igκ基因座，其包含人類可變區、小鼠內含子性增強子、人類Cκ恆定區基因段以及小鼠3'增強子。下方例示性示意圖描繪Igλ基因座，其包含Vλ基因段、人類Jλ-Cλ串聯對、人類Jλ7與小鼠Cλ1基因段、人類增強子1、2和3以及小鼠3'增強子。除非另有指明(例如，關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖2B顯示如實例1.3中所述用於產生圖2A中所示例示性經修飾免疫球蛋白κ鏈基因座的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。除非另有指明(例如，關於loxp位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖3A顯示小鼠IgG、小鼠IgM、人類IgM、人類IgG1以及人類IgG3存在於Vs-hIgM-hIgD-hIgG3-hIgG1小鼠(基因座5)、VELOCIMMUNE®小鼠的血清中以及在正常人類血清中的含量。
圖3B顯示hIgM對mIgM以及hIgD對mIgD的FACS圖，以顯示hVs-hIgM-hIgD-hIgG3-hIgG1小鼠(基因座5)以及VELOCIMMUNE®小鼠中的對偶基因利用以及存在對偶基因排除。
圖3C顯示小鼠IgG、小鼠IgM、人類IgM、人類IgG1以及人類IgG4存在於指定小鼠血清中的含量。
圖3D顯示在注射人類IgG4抗體之後，於第0天以及第34天時在指定小鼠體內小鼠抗人類抗體的濃度。
圖3E顯示在注射人類IgG4抗體之後，於前34天期間在指定小鼠體內的人類IgG4抗體濃度。
圖4顯示如實例3中所述用於產生例示性經修飾FcRn基因座的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。除非另有指明(例如，關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖5顯示如實例3中所述用於產生含有例示性經修飾FcRn和β2M基因座的小鼠的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。除非另有指明(例如，對於loxp位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖6顯示與野生型小鼠相比，受到包含例示性經修飾FcRn和β2M基因座的小鼠的人類抗體之抗體廓清(描繪為抗體濃度)。
圖7顯示如實例4中所述用於產生小鼠的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製，該小鼠包含例示性經修飾Fcγ1α1A(在圖中顯示為FCGR1)、FcγRIIIa，FcγRIIa，FcγRIIc，FcγRIIb，FcγRIIIb和重鏈基因座。空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖8A顯示FACS圖，其描繪了在帶有人類高親和力FcγR和人類低親和力FcγR以及人類重鏈恆定區的小鼠中小鼠IgD對小鼠IgM，人類IgD對人類IgM的利用。
圖8B顯示與野生型小鼠相比，帶有人類高親和力FcγR和人類低親和力FcγR以及人類重鏈恆定區的小鼠脾臟中存在的T細胞(mCD3陽性)和B細胞(mCD19陽性)的數量或百分率。
圖8C顯示與正常人類血清相比，帶有人類高親和力FcγR和人類低親和力FcγR以及人類重鏈恆定區的小鼠中人類IgM、人類IgG1和人類IgG3的血清濃度。
圖9顯示如實例5中所述用於產生包含例示性經修飾FcεR1α基因座的小鼠的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製。除非另有指明(例如，關於lox位點等)，否則空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
圖10，在左圖顯示FACS圖，證明人類化FoεR1α表現在包含本文揭示之人類化FcεR1α基因座的例示性小鼠中的嗜鹼性球表面上。在右圖，該圖顯示與野生型小鼠相比，包含本文揭示之人類化FcεR1α基因座的小鼠脾臟中存在的小鼠或人類FcεR1α+嗜鹼性球的百分率。
圖11顯示本文提供的例示性人類化FcεR1α基因座具功能性。透過皮內耳注射用人類過敏原特異性IgE或IgG作為陰性對照來致敏小鼠。1天後，用稀釋於Evans氏藍色染料中的過敏原對小鼠進行IV攻毒。測量耳中的Evans氏藍色染料外滲作為肥大細胞去顆粒作用的讀數。由於人類IgE不與小鼠FcεR1結合，因此包含人類化FcεR1α基因座的小鼠的反應表明產生了功能性FcεR1α。
圖12顯示本文提供的例示性人類化FcεR1α基因座具功能性。用IV注射人類過敏原特異性IgE來致敏小鼠。1天後，用IV注射過敏原攻毒小鼠，並在注射後4小時內監測溫度變化。溫度下降是全身性過敏的讀數。
圖13顯示如實例6中所述用於產生小鼠的例示性方法的示意性概述，未按比例繪製，該小鼠包括例示性人類化FcRn、β2M、FcεR1α、FcγR1α(圖中顯示為FCGR1)、FcγRIIIa、FcγRIIa、FcγRIIc、FcγRIIb、FcγRIIIb、重鏈恆定區基因座以及重鏈可變區基因座。為簡明起見，在基因座F與F’中僅少數基因段示意表示-對於可能存在的V、D和J基因段的完整序目參見imgt.org,Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)，以及Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)，以引用的方式併入本文。空心形狀和雙線表示人類序列，而實心形狀和單線表示小鼠序列。
本文提供與在經遺傳修飾囓齒動物體內活體內測試包含人類Fc之治療藥劑的方法以及組合物(例如在經遺傳修飾囓齒動物體內測試此等治療藥劑之藥動學及/或藥效學特性與給藥方案)。在一些具體例中，經遺 傳修飾囓齒動物表現包含人類Fc(例如人類IgG1 Fc、人類IgG2 Fc、人類IgG3 Fc、人類IgG4 Fc)或人類輕鏈恆定區的抗體。在一些具體例中，該等囓齒動物表現完全人類抗體(亦即具有人類重鏈與人類輕鏈(γ或κ)的抗體)。在某些具體例中，經遺傳修飾囓齒動物包含一或多個帶有人類胞外域的Fc受體，例如新生兒Fc受體(FcRn)、β-2-微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受體1α(FcεR1α)、Fcγ受體1α(FcγR1a)、Fcγ受體2a(FcγR2a)、Fcγ受體2b(FcγR2b)、Fcγ受體3a(FcγR3a)、Fcγ受體3b(FcγR3b)、Fcγ受體2c(FcγR2c)。此等受體的跨膜域以及細胞質域可以是人類或非人類(例如囓齒動物)。
包含人類Fc的治療藥劑(諸如治療性人類抗體以及人類Fc融合蛋白)通常在它們被投與給人類之前於非人類物種中進行測試。僅管此等藥劑常常在非人類靈長類動物或其他相對大型哺乳動物中進行測試，但這些測試所費不貲且對於藥物開發商來說設下一個明顯的財務重擔。此外，非人類靈長類動物與其他相對大型哺乳動物通常並不適合遺傳修飾，這限制了在此等生物體中可供使用的疾病模型。
相對地，因為囓齒動物物種(例如大鼠與小鼠)體型小、生理學經充分特徵鑑定且適於遺傳修飾，它們是用於測試治療性抗體與Fc融合蛋白的便利動物模型。可惜的是，含有人類Fc區的藥劑在被投與給現有囓齒動物時常常表現出比被投與給人類時更為不同的藥動學與藥效學特性。舉例來說，當帶有人類Fc區的治療藥劑被投與給習用囓齒動物時，Fc區中的人類序列經常被囓齒動物(例如大鼠或小鼠)免疫系統識別為外來物。因此，囓齒動物可能產生對抗所投與治療藥劑的免疫反應(又稱為小鼠抗-人類反應或MAHA)，其影響到所投與藥劑的藥動學與藥效學特性。再者，治療藥劑的人類Fc區在囓齒動物體內與囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Fc受體的交互作用可能不同於在患者體內與人類Fc受體的交互作用，這可能也影響到所投與藥劑的藥動學與藥效學特性。因此，就對於含有人類Fc的治療藥劑的人類治療反應來說，習知囓齒動物(例如大鼠或小鼠)模型是不佳的預測指標。故而，具有人類免疫球蛋白基因座區(例如參見圖1及圖2中的基因座)的小鼠可能有助於降低或消除MAHA反應。
可特異地結合藥物的分子對於研究以及診斷目的來說極其有用。創造出帶有小鼠可變以及人類恆定的小鼠(例如圖1A中的小鼠基因座8)提供一種用於在藥物為人類單株抗體時產生抗-藥物抗體的改善方法。透過將小鼠注射人類抗體所產生的任何MAHA反應將會指向抗體的可變區。這消除了對抗抗體恆定區的背景反應並且讓生成藥物特異性抗體更有效率。
本文提供用於開發、篩選以及測試人類抗體與Fc融合蛋白供治療使用的活體內系統。在某些具體例中，本文提供經遺傳修飾囓齒動物，其在投與包含人類Fc的治療藥劑之後具有降低的囓齒動物抗-人類免疫反應。如本文所證明，這可透過使用已經被遺傳修飾的囓齒動物，使牠們表現與所投與抗體或Fc融合蛋白中存在的Fc相匹配的人類Fc而達致。例如，可以經由插入編碼人類免疫球蛋白重鏈恆定區(完整或一部分)的核酸序列(例如IgG CH1-H-CH2-CH3)來取代編碼內源性非人類免疫球蛋白重鏈恆定區基因段的對應部分的序列來做出此等小鼠。此等動物將人類Fc識別為「自身」蛋白並因而較不會發展成對抗所投與含人類Fc治療劑的免疫反應。
另外，在一些具體例中，本文提供表現Fc受體的經遺傳修飾囓齒動物(例如小鼠或大鼠)，該Fc受體能夠與人類Fc以類似於人類患者所表現之Fc受體般交互作用。舉例來說，在某些具體例中，本文提供的經遺傳修飾囓齒動物表現一或多種Fc受體，該一或多種Fc受體具有至少一個人類胞外域(例如跨膜域與細胞質域可以是人類或囓齒動物)。因此，在某些具體例中，本文提供的小鼠表現人類或部分人類FcRn、人類或部分人類β2M、人類或部分人類FcεR1α、人類或部分人類FcγR1a、人類或部分人類FcγR2a、人類或部分人類FcγR2b、人類或部分人類FcγR3a、人類或部分人類FcγR3b，及/或人類或部分人類FcγR2c。此等小鼠因而能夠比帶有完全非人類Fc受體的囓齒動物更精確地模擬人類患者的人類Fc反應。
故而，本文提供的囓齒動物(例如小鼠或大鼠)提供一種用於開發、篩選以及測試治療性人類抗體與Fc融合蛋白的新穎活體內系統，其不僅僅是基於對抗原的特異性及/或親和力，還基於經由評估效應子功能在免疫系統內布環境內所選抗體的相關完整生物功能。據此，可以基於對具 有相關生物反應(例如細胞反應)之完整分子層次而非單單基於分別評估的個別組份進行預測的治療潛力來開發出並篩選出人類治療性候選物。因此，本文提供的囓齒動物具體提供一種更適於預測臨床人類治療性抗體活體內功能的系統。
冠詞「一(a與an)」在本文中用於意指一或超過一個(亦即至少一個)該冠詞的文法受詞。舉例而言，「一個元件」表示一個元件或超過一個元件。
術語「胺基酸」意欲含括所有分子，不論是天然或合成，其包括胺基官能性以及酸官能性且能夠被納入天然胺基酸的聚合物中。例示性胺基酸包括天然胺基酸；其類似物、衍生物與同類物(congener)；具有不同側鏈的胺基酸類似物；以及前述任一者的全部任一種立體異構體。
如本文所用，術語「抗體」可意指完整抗體及其抗原結合片段。完整抗體為包括透過雙硫鍵交互連結之至少兩個重(H)鏈以及兩個輕(L)鏈的糖蛋白。各個重鏈包括重鏈可變域以及重鏈恆定域。各個輕鏈包括輕鏈可變域以及輕鏈恆定域。重鏈可變域以及輕鏈可變域可進一步區分成超變域，名為互補決定區(CDR)，錯落有較守恆的區域(名為架構區(FR))。各個重鏈可變域與輕鏈可變域由三個CDR以及四個FR所構成，按下列順序從胺基端往羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈與輕鏈的可變域含有與抗原交互作用的結合域。
如本文所用，術語抗體的「抗原結合片段」以及「抗原結合部分」意指抗體的一或多個片段，其保有結合至抗原的能力。含括在術語抗體的「抗原結合片段」內的結合片段實例包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、雙硫連結的Fv、Fd、單鏈抗體、經單離CDRH3，以及保留完整抗體之至少一部分可變域的其它抗體片段。這些抗體片段可以使用習知重組及/或酵素技術取得，並且可以針對抗原結合以與完整抗體類似的方式進行篩選。
如本文所用，術語「血漿濃度相對時間曲線下面積」或「AUC」意指治療藥劑在投與之後消退的速率與程度。在一些具體例中，AUC是在指定時間期間內(諸如12、18、24、36、48或72小時或無窮盡)使用外推法基 於曲線斜率來決定。除非另有明確指明，否則AUC是針對無窮盡來測定(AUCINF)。AUC也可以依據劑量基礎來算出。與其他PK參數相同，AUC的測量可以在單一動物中，或在一群動物(算出平均)中進行。
如本文所用，術語「廓清率」或「CL」意指身體消除藥物之能力的一種量度，且表示為藥物隨著時間廓清的血漿體積。
當涉及到重排可變區基因「衍生自」未重排可變區及/或未重排可變區基因段使用時，片語「衍生自」意指查出重排可變區基因序列回推至未重排可變區基因段組的能力，未重排可變區基因段經重排以形成表現可變域的基因(若適用的話，是剪接差異性與體細胞突變的原因)。例如，經歷過體細胞突變的經重排可變區基因仍是衍生自未重排可變區基因段。在一些具體例中，若內源性基因座被通用輕鏈或重鏈基因座所取代，則術語「衍生自」指明查出該重排基因座序列來源的能力，即便該序列已經歷過體細胞突變。
如本文所用，片語「內源性基因」或「內源性基因段」意指在引入如本文所述之瓦解、刪除、取代、變化或修飾之前於母本或參考生物體中所發現的基因或基因段。在一些具體例中，參考生物體為野生型生物體。在一些具體例中，參考生物體為經改造生物體。在一些具體例中，參考生物體為經實驗室育種的生物體(不論為野生型或經改造)。
術語「活體內回收」或「IVR」意指遞增回收(K-值)，其是觀察到的峰活性減去給藥前水平並接著除以劑量。IVR也可以依據百分率來計算。可以在動物群中決定平均IVR，或在單一動物中決定個別IVR。
如本文所用，術語「基因座」意指在含有一組相關基因要素(例如基因、基因段、調節要素)之染色體上的位置。例如，未重排免疫球蛋白基因座可包括免疫球蛋白可變區基因段、一或多個免疫球蛋白恆定區基因以及引導V(D)J重排與免疫球蛋白表現的相關調節要素(例如啟動子、增強子、切換要素等)。基因座可以是內源性或非內源性。術語「內源性基因座」意指特定遺傳要素在自然界中所處之染色體上的位置。在一些具體例中，內源性基因座具有自然界中所發現的序列。在一些具體例中，內源性基因座為野生型基因座。在一些具體例中，內源性基因座是經改造基因座。例 如，內源性小鼠免疫球蛋白重鏈基因座意指小鼠12號染色體上包括免疫球蛋白重鏈可變區基因段以及野生型小鼠的恆定區基因的位置，內源性小鼠免疫球蛋白λ輕鏈基因座意指小鼠16號染色體上包括免疫球蛋白輕鏈可變區基因段以及野生型小鼠的恆定區基因的位置，而內源性小鼠免疫球蛋白κ輕鏈基因座意指在小鼠6號染色體上包括免疫球蛋白κ輕鏈可變區基因段以及野生型小鼠的恆定區基因的位置。
若未重排可變區基因段能夠重排而形成與恆定區基因一起表現作為抗原結合蛋白之多肽鏈的經重排可變區基因，則未重排可變區基因段可以稱為「可操作地連結」至連續恆定區基因。
術語「聚核苷酸」以及「核酸」可交替使用。它們意指具有任何長度的核苷酸聚合形式(核苷酸為去氧核醣核苷酸或核醣核苷酸或其類似物)。聚核苷酸可具有任何三維結構，且可執行任何功能。下列為聚核苷酸的非限制性實例：基因或基因段的編碼或非編碼區、由鏈分析所界定的基因座(等)、外顯子、內含子、信使RNA(mRNA)、轉運RNA、核醣體RNA、核醣酵素、cDNA、重組聚核苷酸、分支聚核苷酸、質體、載體、具有任何序列的經單離DNA、具有任何序列的經單離RNA、核酸探針以及引子。聚核苷酸可包含經修飾核苷酸，諸如甲基化核苷酸以及核苷酸類似物。若有的話，可以在聚合物組裝之前或之後給予核苷酸結構修飾。聚核苷酸可經進一步修飾，諸如透過與標記組份接合。在本文提供的全部核酸序列中，U核苷酸可與T核苷酸交替。
術語「未重排」包括免疫球蛋白可變區基因座或可變區基因段的狀態，其中V基因段與J基因段(就重可變區還有D基因段)維持分離但能夠結合而形成含有V(D)J序目之單一V、(D)、J的重排V(D)J基因(「可變區基因」)。
如本文所用，術語「穩態下的分布體積」或「Vss」意指藥物分布其中的表觀空間(體積)。更具體來說，Vss表示藥物在穩態下於動物身體中的體積除以血漿濃度。
如本文所用，術語「CH基因段」(例如Cγ1基因段、Cγ2a基因段、Cγ2c基因段、Cμ基因段、Cγ2b基因段、Cγ3基因段、Cδ基因段、Cε基因 段、Cα基因段等)意指一段DNA序列，其編碼免疫球蛋白重鏈恆定區且可與CH基因(例如Cγ基因、Cγ2a基因、Cγ2c基因、Cγ3基因、Cγ2b基因、Cμ基因、Cδ基因、Cε基因、Cα基因等)交替使用。例如，Cγ1基因段或Cγ1基因意指一段編碼IgG1恆定區的DNA序列。術語「CH基因段基因座」意指CH基因段或CH基因在染色體上所天然發現的一個位置。
在某些態樣中，本文提供用於在經遺傳修飾囓齒動物中活體內測試包含人類Fc之治療藥劑的經遺傳修飾囓齒動物(例如在經遺傳修飾囓齒動物中測試此一治療藥劑的藥動學及/或藥效學特性)。在一些具體例中，經遺傳修飾囓齒動物包含經遺傳修飾基因座，該等基因座編碼含有人類Fc(例如人類IgG1 Fc、人類IgG4 Fc)的抗體重鏈。在一些具體例中，該等囓齒動物包含經遺傳修飾基因座，該等基因座編碼完全或部分人類輕鏈(例如編碼γ輕鏈或κ輕鏈)。在某些具體例中，經遺傳修飾囓齒動物包含一或多個編碼帶有人類胞外域之Fc受體的基因座，Fc受體為例如新生兒Fc受體(FcRn)α-鏈、β-2-微球蛋白多肽(β2M)、Fcε受體1α(FcεR1α)α-鏈、Fcγ受體1α(FcγR1a)α-鏈、Fcγ受體2a(FcγR2a)α-鏈、Fcγ受體2b(FcγR2b)α-鏈、Fcγ受體3a(FcγR3a)α-鏈、Fcγ受體3b(FcγR3b)α-鏈、Fcγ受體2c(FcγR2c)α-鏈。在某些具體例中，由此等基因座所編碼的跨膜域以及細胞質域可以是人類或非人類(例如囓齒動物)。
在某些態樣中，本文提供包含經遺傳修飾免疫球蛋白(Ig)重鏈基因座的囓齒動物(例如小鼠或大鼠)。此等基因座通常包含一個可變區以及一個恆定區。該可變區包括Ig重鏈可變區基因段(例如至少一個VH基因段、一個DH基因段以及一個JH基因段)。該恆定區基因座包括一或多個Ig重鏈恆定區基因段(CH)。在某些具體例中，免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生包含衍生自VH基因段、DH基因段以及JH基因段的可變域，以及衍生自CH基因段的重鏈恆定域。
在一些具體例中，可變區將會是未重排可變區且將含有未重排Ig可變區基因段。在一些具體例中，可變區將會是經重排可變區且因此將 含有將重排可變區基因。在某些具體例中，Ig可變區基因段為人類可變區基因段。在某些具體例中，Ig可變區基因段為囓齒動物(例如大鼠或小鼠)可變區基因段(例如大鼠或小鼠可變區基因段)。因此，在某些具體例中，Ig重鏈可變區基因座將含有人類Ig可變區基因段。包含人類可變區基因段的例示性可變區基因座已描述於技藝中。例如，此等基因座描述於美國專利案第5,770,429號、第5,814,318號、第6,114,598號、第6,998,514號、第8,232,449號、第8,502,018號與第8,697,940號，其各自以引用的方式併入，以及在美國專利公開第2008/0098490號、第2012/0167237號、第2013/0145484號、第2013/0326647號、第2014/013275號與第2014/093908號，其各自以引用的方式併入。
在某些具體例中，Ig重鏈可變區基因座含有未重排人類Ig重鏈可變區基因段。在一些具體例中，未重排人類Ig可變區基因段包含一或多個人類VH段、一或多個人類DH段以及一或多個人類JH段。在一些具體例中，未重排人類Ig可變區基因段包含至少3個VH基因段、至少18個VH基因段、至少20個VH基因段、至少30個VH基因段、至少40個VH基因段、至少50個VH基因段、至少60個VH基因段、至少70個VH基因段或至少80個VH基因段。在一些具體例中，經改造IgG基因座(或對偶基因)包含出現在自然界中之人類IgH基因座的人類VH3-74基因段與人類VH6-1基因段(包括兩者在內)之間所發現的所有或基本上所有功能性人類VH基因段。在一些某些具體例中，經改造IgH基因座(或對偶基因)包含至少人類VH基因段VH3-74、VH3-73、VH3-72、VH2-70、VH1-69、VH3-66、VH3-64、VH4-61、VH4-59、VH1-58、VH3-53、VH5-51、VH3-49、VH3-48、VH1-46、VH1-45、VH3-43、VH4-39、VH4-34、VH3-33、VH4-31、VH3-30、VH4-28、VH2-26、VH1-24、VH3-23、VH3-21、VH3-20、VH1-18、VH3-15、VH3-13、VH3-11、VH3-9、VH1-8、VH3-7、VH2-5、VH7-4-1、VH4-4、VH1-3、VH1-2以及VH6-1。在一些具體例中，本文提供的非人類動物具有有限的免疫球蛋白重鏈基因座，其特徵在於單一多形VH基因段、複數個DH基因段以及複數JH個基因段(如在美國專利公開第2013/0096287號中所述，以引用的方式併入)。在一些具體例中，VH基因段為VH1-2或VH1-69。在一些具體例中，本文提供的非人類動物具有重排重鏈 可變區(通用重鏈可變區或常見重鏈編碼序列，例如美國專利公開第20140245468號與美國專利第9,204,624號和第9,930,871號中所述，其各自以整體引用的方式併入)。在一些具體例中，本文提供的非人類動物包含人類未重排免疫球蛋白輕鏈，例如在免疫球蛋白重鏈基因座處可操作連接至重鏈恆定區基因的κ基因段(例如美國專利第9,516,868號，以整體引用的方式併入)。
在又其他具體例中，非人類生物體可在其生殖系及/或基因體內包含重鏈免疫球蛋白基因座，該基因座包括被設計成為此非人類生物體中所產生之抗體引入pH依賴性結合特性的組胺酸密碼子插入及/或取代。在此等具體例的一些中，在編碼CDR3的核酸序列中插入及/或取代組胺酸密碼子。不同的此等重鏈免疫球蛋白基因座提供於美國專利第9,301,510號、第9,334,334號、美國專利公開第2013/0247236號、第20140013456號，以引用的方式併入本文。
在一些具體例中，經改造IgH基因座(或對偶基因)包含5、10、15、20、25或更多個(例如26、27個等)人類DH基因段。在一些某些具體例中，經改造IgH基因座(或對偶基因)包含出現在自然界中之人類IgH基因座的人類DH1-1基因段與人類DH7-27基因段(包括兩者在內)之間所發現的所有或基本上所有功能性人類DH基因段。在一些某些具體例中，經改造IgH基因座(或對偶基因)包含至少人類DH基因段DH1-1、DH2-2、DH3-3、DH4-4、DH5-5、DH6-6、DH1-7、DH2-8、DH3-9、DH3-10、DH5-12、DH6-13、DH2-15、DH3-16、DH4-17、DH6-19、DH1-20、DH2-21、DH3-22、DH6-25、DH1-26以及DH7-27。在一些具體例中，未重排人類Ig基因段包括所有人類DH基因段。
在一些具體例中，經改造IgH基因座(或對偶基因)包含1、2、3、4、5、6或更多個功能性人類JH基因段。在一些某些具體例中，經改造IgH基因座(或對偶基因)包含出現在自然界中之人類IgH基因座的人類JH1基因段與人類JH6基因段(包括兩者在內)之間所發現的所有或基本上所有功能性人類JH基因段。在一些某些具體例中，經改造IgH基因座(或對偶基因)包含至少一個JH基因段JH1、JH2、JH3、JH4、JH5與JH6。在一些具體例中，未重排人類Ig基因段包括所有人類JH基因段。
在一些具體例中，如本文所述的經改造IgH基因座不含有內源性Adam6基因。在一些具體例中，在與相同物種之野生型非人類動物之生殖系基因體中所發現到相同的生殖系基因體位置中，如本文所述的經改造IgH基因座不含有內源性Adam6基因(或Adam6-編碼序列)。在一些具體例中，如本文所述的經改造IgH基因座不含人類Adam6假基因。在一些具體例中，如本文所述的經改造IgH基因座含有至少一個核胺酸序列插入，其編碼一或多個非人類(囓齒動物)Adam6多肽。該插入可以在如本文所述經改造免疫球蛋白重鏈基因座之外(例如最5' VH基因段的上游)、在經改造IgH基因座之內或在非人類動物之生殖系基因體的他處(例如隨機引入非人類Adam6編碼序列)、細胞或組織。
在一些具體例中，經改造內源性免疫球蛋白重鏈基因座缺少一個功能性內源性囓齒動物Adam6基因。在一些具體例中，包含經改造重鏈基因座之囓齒動物的生殖系基因座包括一或多個編碼一或多個囓齒動物ADAM6多肽的核苷酸序列、其功能性異種同源物(ortholog)、功能性同源物或功能性片段。在一些具體例中，(例如在雄性生殖系統的細胞中，例如睪丸細胞中)表現該一或多個囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段。
在一些具體例中，編碼一或多個囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的一或多個核苷酸序列被納入與經改造內源性免疫球蛋白重鏈基因座相同的染色體上。在一些具體例中，編碼一或多個囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的一或多個核苷酸序列被納入經改造內源性免疫球蛋白重鏈基因座中。在一些具體例中，編碼一或多個囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的一或多個核苷酸序列介於第一人類VH基因段以及第二人類VH基因段之間。在一些具體例中，第一人類VH基因段為VH1-2而第二人類VH基因段為VH6-1。在一些具體例中，編碼一或多個囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的一或多個核苷酸序列取代人類Adam6假基因。在一些具體例中，編碼一或多個囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性 同源物或功能性片段的一或多個核苷酸序列取代人類Adam6假基因。在一些具體例中，編碼一或多個囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的一或多個核苷酸序列介於人類VH基因段以及人類DH基因段之間。
例如在Macdonald et al.,Proc.Nat1.Acad.Sci.USA 111：5147-52與附錄資訊中提供包含Ig重鏈基因段的例示性Ig可變區，其以引用的方式併入。此等小鼠描述於例如美國專利第8,642,835號與第8,697,940號，以引用的方式併入本文。
在一些具體例中，包含未重排人類Ig重鏈可變區基因段的Ig重鏈可變基因基因座也包括人類Ig重鏈可變區基因間序列。在一些具體例中，Ig重鏈可變基因基因座包括非人類(例如囓齒動物、大鼠、小鼠)Ig重鏈可變區基因間序列。在一些具體例中，IgH基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。在一些具體例中，IgH基因座包含IgM增強子(Eμ)。在一些具體例中，IgM增強子為非人類Eμ(例如囓齒動物Eμ，諸如小鼠或大鼠Eμ)。
在一些具體例中，Ig重鏈可變區為包含Ig重鏈可變區基因的重排可變區(通用重鏈可變區)。在一些具體例中，重排Ig重鏈可變區基因為人類重排Ig重鏈可變區基因。例示性重排Ig重鏈可變區提供於美國專利公開第2014/0245468號中，其以引用的方式併入。
在某些具體例中，免疫球蛋白恆定區包含編碼IgG恆定域的CH基因段，該IgG恆定域包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域。在一些具體例中，IgG跨膜域為囓齒動物IgG跨膜域(例如小鼠或大鼠跨膜域)。在某些具體例中，跨膜域為人類IgG跨膜域。在一些具體例中，IgG細胞質域為囓齒動物IgG細胞質域(例如小鼠或大鼠細胞質域)。在一些具體例中，IgG細胞質域為人類IgG細胞質域。在一些具體例中，IgG連接區為囓齒動物IgG連接區(例如小鼠或大鼠連接域)。在某些具體例中，IgG連接區為人類IgG連接區。
在某些具體例中，人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG1域。在一些具體例中，這樣的一個IgG1域是由選自下列的對偶基因所編碼：IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04以及IGHG1*05。
在某些具體例中，人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG2域。在一些具體例中，這樣的一個IgG2域是由選自下列的對偶基因所編碼：IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05以及IGHG2*06。
在某些具體例中，人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG3域。在一些具體例中，這樣的一個IgG3域是由選自下列的對偶基因所編碼：IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18以及IGHG3*19。
在某些具體例中，人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG4域。在一些具體例中，這樣的一個IgG4域是由選自下列的對偶基因所編碼：IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03以及IGHG4*04。
在一些具體例中，CH基因段編碼變異人類免疫球蛋白重鏈恆定區序列(意即相對於適當參考人類免疫球蛋白重鏈恆定區序列包括一或多個加入、刪除及/或置換的人類免疫球蛋白重鏈恆定區序列)，其特徵在於對FcR的效應子功能及/或親和力相對於參考人類免疫球蛋白重鏈恆定區有所增強或減少。
在一些具體例中，CH基因段編碼人類免疫球蛋白重鏈恆定區，其特徵在於對活化及/或抑制受體的親和力改變。在一些具體例中，CH基因段編碼人類免疫球蛋白重鏈恆定區，其特徵在於對FcRn受體的結合增加或減少，例如在酸性pH下相較於中性pH。在一些具體例中，CH基因段編碼人類免疫球蛋白重鏈恆定區(整體或一部分)，編碼帶有一或多個胺基酸修飾的人類免疫球蛋白重鏈恆定區。例示性胺基酸修飾包括，但不限於在下列位置的置換：位置297(例如N297A)、位置250(例如250E或250Q)、位置 252(例如252L、252Y、252F、252W或252T)、位置254(例如254S或254T)、位置256(例如256S、256R、256Q、256E、256D或256T)、位置307(例如307P或307A)、位置308(例如308F或308V)、位置428(例如428L或428F)、位置433(例如433H、433Lm、433R、433S、433P、433Q或433K)、位置434(例如434A、434W、434H、434F或434Y)，及其組合。在一些具體例中，CH基因段編碼帶有一或多對或一或多群選自以下組成之群之胺基酸修飾的人類免疫球蛋白重鏈恆定區：250Q與248L(例如T250Q與M248L)；252Y、254T與256E(例如M252Y、S254T與T256E)；428L與434S(例如M428L與N434S)；257I與311I(例如P257I與Q311I)；257I與434H(例如P257I與N434H)；376V與434H(例如D376V與N434H)；307A、380A與434A(例如T307A、E380A與N434A)；以及433K與434F(例如H433K與N434F)。
在一些具體例中，CH基因段編碼嵌合免疫球蛋白重鏈恆定域，其包括衍生自(或存在於)超過一種人類免疫球蛋白同型之段或部分。例如，這樣的一個嵌合CH區可含有一個衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4分子的CH2域，其與一個衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4分子的CH3域合併。在一些某些具體例中，嵌合CH區進一步包含一個嵌合鉸鏈區。例如，嵌合鉸鏈可包含一個衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4鉸鏈區的「上鉸鏈」胺基酸序列(依據EU編號從位置216至227的胺基酸殘基)，其與一個衍生自人類IgG1、人類IgG2或人類IgG4鉸鏈區的「下鉸鏈」序列(依據EU編號從位置228至236的胺基酸殘基)合併。在一些某些具體例中，嵌合鉸鏈區包含衍生自人類IgG1或人類IgG4上鉸鏈的胺基酸殘基以及衍生自人類IgG2下鉸鏈的胺基酸殘基。
在某些具體例中，經修飾CH基因段位在內源性CH基因段基因座處。在某些具體例中，經修飾CH基因段位在內源性Cγ1基因段基因座處、內源性Cγ2α基因段基因座處、內源性Cγ2b基因段基因座處、內源性Cγ2c基因段基因座處或內源性Cγ3基因段基因座處。
囓齒動物間的內源性免疫球蛋白重鏈恆定區基因結構可能有所不同。例如，褐鼠在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處不具有Cγ3基因段，而小鼠品系一般來說則有。就算是相同的物種，品系之間的免疫球蛋白重 鏈恆定區基因結構可能不同。舉例來說，一些小鼠品系在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處具有Cγ2a基因段，而其他小鼠品系(例如帶有Igh1-b對偶基因的小鼠品系)則具有Cγ2c基因段，且一些小鼠品系可能同時具有Cγ2a與Cγ2c基因段。本文圖式、實例及/或說明中揭示的囓齒動物Cγ1、Cγ2a、Cγ2b與Cγ3基因段因此為例示性囓齒動物CH基因段，而習於技藝者將理解囓齒動物品系的特定恆定區基因結構將會不同。故例如，習於技藝者將理解到，揭示內容預期含有囓齒動物Cγ2c基因段取代任何所揭示Cγ2a基因段或除了Cγ2a基因段之外含有囓齒動物Cγ2c基因段。
在一些具體例中，經修飾CH基因段為人類Cγ1基因段(或編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ1基因段的至少一部分)，且其座落在內源性Cγ2a基因段基因座處。在一些具體例中，編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ1基因段部分可操作地連結至編碼IgG2a跨膜域及/或細胞質域之內源性囓齒動物Cγ2a基因段部分。
在一些具體例中，經修飾CH基因段為人類Cγ1基因段(或編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ1基因段的至少一部分)，且其座落在內源性Cγ2c基因段基因座處。在一些具體例中，編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ1基因段部分可操作地連結至編碼IgG2c跨膜域及/或細胞質域之內源性囓齒動物Cγ2c基因段部分。
在一些具體例中，經修飾CH基因段為人類Cγ4基因段(或編碼IgG4恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ4基因段的至少一部分)，且其座落在內源性Cγ1基因段基因座處。在一些具體例中，編碼IgG4恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ4基因段部分可操作地連結至編碼IgG1跨膜域及/或細胞質域之內源性囓齒動物Cγ1基因段部分。
在某些具體例中，經修飾CH基因段取代全部或部分內源性CH基因段。在某些具體例中，經修飾CH基因段取代全部或部分內源性Cγ1基因段、內源性Cγ2a基因段、內源性Cγ2b基因段、內源性Cγ2c基因段，或內源性Cγ3基因段。
在一些具體例中，經修飾CH基因段為人類Cγ1基因段(或編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ1基因段的至少一部 分)，且其取代全部或部分內源性Cγ2a基因段基因座。在一些具體例中，編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域的部分人類Cγ1基因段取代編碼IgG2a恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之內源性囓齒動物Cγ2a基因段部分，使得編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ1基因段部分可操作地連結至編碼IgG2a跨膜域及/或細胞質域之內源性囓齒動物Cγ2a基因段部分。
在一些具體例中，經修飾CH基因段為人類Cγ4基因段(或編碼IgG4恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ4基因段的至少一部分)，且其取代全部或部分內源性Cγ1基因段基因座。在一些具體例中，編碼IgG4恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域的部分人類Cγ4基因段取代編碼IgG1恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之內源性囓齒動物Cγ1基因段部分，使得編碼IgG4恆定域之CH1域、鉸鏈區、CH2域與CH3域之人類Cγ4基因段部分可操作地連結至編碼IgG1跨膜域及/或細胞質域之內源性囓齒動物Cγ1基因段部分。
在某些具體例中，Ig重鏈恆定區包括一或多個囓齒動物(例如大鼠或小鼠)CH基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cμ基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cδ基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ2b基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如小鼠)Cγ3基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cε基因段。在一些具體例中，Ig恆定區包括囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cε基因段。在一些具體例中，一或多個囓齒動物恆定區基因段為內源性恆定區基因段。在一些具體例中，上文所述的經修飾CH基因段僅為在Ig重鏈恆定區中的經修飾CH基因段。
在一些具體例中，上文所述的經修飾CH基因段為Ig重鏈恆定區中複數個經修飾CH基因段中的一者(例如2、3、4、5、6、7或8個經修飾 基因段中的一者，它們在Ig重鏈恆定區中為部分或完全人類化)。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cμ基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cδ基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cγ1基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cγ2基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cγ3基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cγ4基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cε基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類或部分人類Cα基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區包括人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ1基因段以及人類Cγ3基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段以及人類Cγ4基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。在一些具體例中，Ig重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在一些具體例中，IgH基因座包含人類或囓齒動物(例如大鼠或小鼠)調節要素。在一些具體例中，調節要素為內源性調節要素。在某些具體例中，IgH基因座包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)或人類內含子性增強子(intronic cnhancer,Ei)。在一些具體例中，IgH基因座包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)或人類3'調節區(3' RR)。
在一些具體例中，經修飾免疫球蛋白重鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處。在一些具體例中，免疫球蛋白重鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白重鏈基因座。在某些具體例中，經修飾IgH基因位在座落於內源性基因座以外的轉基因上。在一些具體例中，內源性IgH基因座為不活化的(例如透過刪除、改位及/或逆位全部或部分內源性Ig重鏈基因座)。
因此，在一些具體例中，免疫球蛋白重鏈基因座的一或多個免疫球蛋白重鏈恆定區(或其部分)未刪除(意即完整的)。在一些具體例中，免疫球蛋白重鏈基因座的一或多個CH基因段經改變、瓦解、刪除、刪除或取代(尤其是)成如本文所述之可操作地連結至非人類免疫球蛋白重鏈IgG恆定區基因之跨膜與細胞質編碼序列(例如M1及/或M2編碼序列)的免疫球蛋白重鏈恆定區序列(例如編碼人類IgG CH1-H-CH2-CH3多肽的序列)，且在一 些具體例中，可操作地連結至IgE恆定區基因之跨膜與細胞質編碼序列的免疫蛋白重鏈恆定區序列(例如編碼人類IgE CH1-CH2-CH3-CH4多肽的序列)。在一些具體例中，所有或基本上所有免疫球蛋白重鏈恆定區經異源性免疫球蛋白重鏈恆定區取代。在一些具體例中，異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列可操作地連結至一或多個IgG恆定區基因的跨膜與細胞質編碼序列(例如M1與M2外顯子)。在一些具體例中，異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列可操作地連結至IgE恆定區基因的跨膜與細胞質編碼序列(例如M1與M2外顯子)。在一些具體例中，異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列可操作地連結至IgA恆定區基因的跨膜與細胞質編碼序列(例如M外顯子[等])。在一些某些具體例中，於包括可操作地連結至本文所述一或多個恆定區基因之跨膜與細胞質編碼序列之異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列的免疫球蛋白重鏈恆定區中，一或多個CH基因段(例如Cμ、Cδ等)未被刪除或取代。在一些具體例中，異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列是人類免疫球蛋白重鏈恆定區序列。在一些具體例中，經一或多個異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列改變、瓦解、刪除、取代或改造的免疫球蛋白重鏈恆定區是鼠類免疫球蛋白重鏈恆定區。在一些具體例中，異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列被插入至免疫球蛋白重鏈恆定區之具有兩個IgG恆定區基因複本之IgG恆定區基因(例如Cγ1、Cγ2a、Cγ2b、Cγ2c或Cγ3)的一個複本(意即對偶基因)中，產生相對於異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列為異型合子的非人類動物。在一些具體例中，提供就免疫球蛋白重鏈恆定區來說為同型合子的非人類動物，其包括如本文所述異源性免疫球蛋白重鏈恆定區序列。
在一些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含一或多個編碼IgG的CH基因段，其各自包含人類胞外域編碼序列(例如人類IgG CH1-H-CH2-CH3)可操作地連結至相同或不同IgG子類的非人類跨膜與細胞質域編碼序列(例如非人類IgG M1-M2)。
在一些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含一或多個編碼經改造IgG的CH基因段，且進一步包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ恆定區基因。
在一些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含一或多個編碼經改造IgG的CH基因段，且進一步包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ與Cδ恆定區基因。
在不同具體例中，包含如本文所述之人類免疫球蛋白重鏈恆定區序列的編碼經改造IgG的CH基因段是選自Cγ1、Cγ2a、Cγ2bCγ2c或Cγ3之IgG子類之編碼經改造IgG的CH基因段。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2a基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1與M2外顯子的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2a基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2c基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1與M2外顯子的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2c基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ1基因段，其含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1與M2外顯子的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ1基因段，其含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2 取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2a基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1與M2外顯子的序列；以及經改造Cγ1基因段，其含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1與M2外顯子的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2a基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區的序列；以及經改造Cγ1基因段，其含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2c基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1與M2外顯子的序列；以及經改造Cγ1基因段，其含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1與M2外顯子的序列。
在一些某些具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含經改造Cγ2c基因段，其含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區的序列；以及經改造Cγ1基因段，其含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代非人類(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區的序列。
在不同具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含又一或多個修飾，該又一或多個修飾包括使一或多個IgG恆定區以外之包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3或人類CH1-H-CH2-CH3-M1-M2(例如 IgG1及/或IgG2a)的序列的恆定區基因(意即同型)成為無功能性，例如經由整體或部分刪除、整體或部分改變、整體或部分瓦解、整體或部分取代一或多個編碼IgD、IgE、IgA與IgG的免疫球蛋白恆定區基因(其本身不含有如本文所述編碼人類IgG CH1-H-CH2-CH3或人類IgG CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列(例如IgG2b及/或IgG3))。也提供用於製造此等非人類動物、胚胎與細胞的經改造非人類胚胎、細胞以及靶向載體。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ基因段、包含編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3取代該Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ1基因段，並且刪除Cδ、Cγ2a、Cγ2c、Cγ2b、Cγ3、Cε與Cα基因段。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ基因段、包含編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代該Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ1基因段，並且刪除Cδ、Cγ2a、Cγ2c、Cγ2b、Cγ3、Cε與Cα基因段。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ基因段、包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代該Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ2a基因段，並且刪除Cδ、Cγ1、Cγ2b、Cγ2c、Cγ3、Cε與Cα基因段。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ基因段、包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代該Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ2a基因段，並且刪除Cδ、Cγ1、Cγ2b、Cγ2c、Cγ3、Cε與Cα基因段。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ基因段、包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代該Cγ2c基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可 操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ2c基因段，並且刪除Cδ、Cγ1、Cγ2a、Cγ2b、Cγ3、Cε與Cα基因段。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型(例如未修飾非人類，諸如大鼠或小鼠)Cμ基因段、包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代該Cγ2c基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ2c基因段，並且刪除Cδ、Cγ1、Cγ2a、Cγ2b、Cγ3、Cε與Cα基因段。
在不同具體例中，如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含又一或多個修飾，該又一或多個修飾包括使一或多個IgG恆定區以外之包含編碼人類IgG CH1-H-CH2-CH3或人類IgG CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列(例如IgG1及/或IgG2a)的恆定區基因(例如同型)經由將如本文所述之人類免疫球蛋白重鏈恆定區序列插入至IgD、IgE、IgA與IgG的一或多個免疫球蛋白恆定區基因(其本身不含有如本文所述編碼人類IgG CH1-H-CH2-CH3或人類IgG CH1-H-CH2-CH3-M1-M2的序列(例如IgG2b及/或IgG3))中被改造為經改變、修飾、置換、改造等。
也提供用於製造此等包含帶有如本文所述經改造恆定區之免疫球蛋白基因座之非人類動物、胚胎與細胞的經改造非人類胚胎、細胞以及靶向載體。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型Cμ基因段、野生型Cδ基因段、含有編碼人類IgG3 CH1-H-CH2-CH3取代Cγ3基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ3基因段、含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3取代Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ1基因段、含有編碼人類IgG2 CH1-H-CH2-CH3取代Cγ2b基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ2b基因段、含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ2a基因段(及/或含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代Cγ2c基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cγ2c基因段)、含有編碼人類IgE CH1-CH2-CH3-CH4取代Cε基因段之CH1-CH2-CH3-CH4外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cε基因段，以及含有編碼人類IgA1或IgA2 CH1-H-CH2-CH3取代Cα基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M外顯子(等)之序列的Cα基因段。
在一些某些具體例中，本文提供之經改造免疫球蛋白重鏈恆定區包含野生型Cμ基因段、野生型Cδ基因段、含有編碼人類IgG3 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代Cγ3基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ3基因段、含有編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ1基因段、含有編碼人類IgG2 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代Cγ2b基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ2b基因段、含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ2a基因段(及/或含有編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2取代Cγ2c基因段之CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子且可操作地連結至切換區之序列的Cγ2c基因段)、含有編碼人類IgE CH1-CH2-CH3-CH4取代Cε基因段之CH1-CH2-CH3-CH4外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的Cε基因段，以及含有編碼人類IgA1或IgA2 CH1-H-CH2-CH3取代Cα基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M外顯子(等)之序列的Cα基因段。
在不同具體例中，本文提供圖1中所示之經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，以及包含此等基因座的經遺傳修飾囓齒動物(例如大鼠或小鼠)、ES與其他細胞，以及組織。因此，在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含人類重鏈可變基因段(人類重鏈V、D與J基因段)、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Ei增強子、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2b基因段、包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ2a基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子並且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的嵌合Cγ2a基因段(例如使得編碼人類IgG1胞外域的外顯子可操作地連結至編碼例如大鼠或小鼠之囓齒動物IgG2a之跨 膜域與細胞質域的外顯子)(及/或包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3取代囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ2c基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的嵌合Cγ2c基因段)(例如使得編碼人類IgG1胞外域的外顯子可操作地連結至編碼例如大鼠或小鼠之囓齒動物IgG2c之跨膜域與細胞質域的外顯子)、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cε與Cα基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座1。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含如本文與在美國專利第8,642,835號和第8,697,940號中所述的功能性Adam6基因，其各自以全文引用的方式併入。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含人類重鏈可變基因段(人類重鏈V、D與J基因段)、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Ei增強子、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2b基因段、包含編碼人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2以使得IgG1胞外與跨膜/細胞質編碼序列為人類、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cε與Cα基因段的Cγ1基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座2。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含如本文與在美國專利第8,642,835號和第8,697,940號中所述的功能性Adam6基因，其各自以全文引用的方式併入。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含人類重鏈可變基因段(人類重鏈V、D與J基因段)、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Ei增強子、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cμ,、Cδ、Cγ3基因段、包含編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3取代囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ1基因段之CH1-H-CH2-CH3外顯子並且可操作地連結至M1-M2外顯子之序列的嵌合Cγ1基因段(例如使得編碼人類IgG4胞外域的外顯子可操作地連結至編碼例如大鼠或小鼠之囓齒動物IgG1之跨膜域與細胞質域的外顯子)、囓齒動物 (例如大鼠或小鼠)Cγ2b、Cγ2a(及/或Cγ2c)、Cε、Cα基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座3。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含如本文與在美國專利第8,642,835號和第8,697,940號中所述功能性Adam6基因，其各自以全文引用的方式併入。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含人類重鏈可變基因段(人類重鏈V、D與J基因段)、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Ei增強子、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cμ、Cδ、Cγ3基因段、包含編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2以使得IgG4胞外與跨膜/細胞質編碼序列為人類之序列的人類Cγ4基因段、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cγ2b、Cγ2a(及/或Cγ2c)基因段、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Cε與Cα基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座4。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含如本文與在美國專利第8,642,835號和第8,697,940號中所述功能性Adam6基因，其各自以全文引用的方式併入。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含人類重鏈可變基因段(人類重鏈V、D與J基因段)、人類Ei增強子、人類Cμ、Cδ、Cγ3與Cγ1基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座5。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含如本文與在美國專利第8,642,835號和第8,697,940號中所述功能性Adam6基因，其各自以全文引用的方式併入。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含人類重鏈可變基因段(人類重鏈V、D與J基因段)、人類Ei增強子、 人類Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2與Cγ4基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座6。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含如本文與在美國專利第8,642,835號和第8,697,940號中所述功能性Adam6基因，其各自以全文引用的方式併入。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)重鏈可變基因段(囓齒動物(例如大鼠或小鼠)重鏈V、D與J基因段)、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Ei增強子、人類Cμ、Cδ、Cγ3與Cγ1基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座7。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含功能性Adam6基因。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
在一個具體例中，本文提供經遺傳改造重鏈免疫球蛋白基因座，其包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)重鏈可變基因段(囓齒動物(例如大鼠或小鼠)重鏈V、D與J基因段)、囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Ei增強子、人類Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1、Cγ2與Cγ4基因段，以及包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'增強子的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'調節區。例示性經遺傳修飾重鏈基因座提供於圖1中作為小鼠基因座8。在一些具體例中，經遺傳修飾基因座包含功能性Adam6基因。亦提供包含此等經遺傳改造基因座的經遺傳修飾非人類動物、ES細胞以及其他細胞與組織。
本文亦提供製造經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法。在一些具體例中，製造如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法包括插入約1.6kb的DNA，其包括編碼免疫球蛋白重鏈恆定域多肽之人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列取代Cγ2a基因段的CH1-H-CH2-CH3外顯子，使得該人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列可操作地連結至該Cγ2a基因段的M1與M2外顯子。
在一些具體例中，製造如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法包括插入約6.8kb的DNA，其包括編碼免疫球蛋白重鏈恆定域多肽之人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列取代Cγ2a基因段的CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子，使得該人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列可操作地連結至該Cγ2a基因段的切換區。
本文亦提供製造經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法。在一些具體例中，製造如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法包括插入約1.6kb的DNA，其包括編碼免疫球蛋白重鏈恆定域多肽的人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列取代Cγ2c基因段的CH1-H-CH2-CH3外顯子，使得該人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列可操作地連結至該Cγ2c基因段的M1與M2外顯子。
在一些具體例中，製造如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法包括插入約6.8kb的DNA，其包括編碼免疫球蛋白重鏈恆定域多肽之人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列取代Cγ2c基因段的CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子，使得該人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列可操作地連結至該Cγ2c基因段的切換區。
在一些具體例中，製造如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法包括插入約1.5kb的DNA，其包括編碼免疫球蛋白重鏈恆定域多肽之人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列取代Cγ1基因段的CH1-H-CH2-CH3外顯子，使得該人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3核苷酸序列可操作地連結至該Cγ1基因段的M1與M2外顯子。
在一些具體例中，製造如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法包括插入約5.8kb的DNA，其包括編碼免疫球蛋白重鏈恆定域多肽之人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列取代Cγ1基因段的CH1-H-CH2-CH3-M1-M2外顯子，使得該人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2核苷酸序列可操作地連結至該Cγ1基因段的切換區。
在一些具體例中，製造如本文所述之經改造免疫球蛋白重鏈基因座的方法包含插入約130kb的DNA，其包括人類Cμ、Cδ、Cγ3、Cγ1序列。 在其他具體例中，該等方法進一步包含插入額外約43kb的DNA，其包含人類Cγ2與Cγ4序列。
在上述製造經改造免疫球蛋白重鏈基因座的不同方法中，DNA可以被引入包含內源性囓齒動物(例如大鼠或小鼠)重鏈可變基因段的內源性囓齒動物(例如大鼠或小鼠)免疫球蛋白重鏈基因座，或包含人類重鏈可變基因段的免疫球蛋白重鏈基因座。DNA可以經由同源重組或經由技藝中已知或本文所述的其他方法被引入。
在一些具體例中，囓齒動物(例如大鼠或小鼠)對於本文所述之經修飾免疫球蛋白重鏈基因座來說為異型合子。在某些具體例中，囓齒動物(例如大鼠或小鼠)對於本文所述之經修飾免疫球蛋白重鏈基因座來說為同型合子。
在某些態樣中，本文提供包含經遺傳修飾Igκ鏈基因座的囓齒動物(例如小鼠或大鼠)。此等基因座包含一個κ可變區以及一個κ恆定區。κ可變區包括Igκ鏈可變區基因段(意即至少一個Vκ基因段以及一個Jκ基因段)。恆定區包括一個Igκ鏈恆定區(Cκ)基因段。在某些具體例中，免疫球蛋白κ鏈可變區(諸如人類Igκ可變區)可操作地連結至免疫球蛋白κ鏈恆定區，使得囓齒動物(例如大鼠或小鼠)產生包含衍生自人類Vκ基因段與人類Jκ基因段的輕鏈可變域，以及衍生自Cκ基因段的輕鏈恆定域。在一些具體例中，Igκ可變區將會是未重排Igκ可變區，且因而將含有未重排Igκ可變區基因段。在一些具體例中，Igκ可變區將會是重排Igκ可變區，且因而將含有重排Igκ可變區基因。在某些具體例中，Igκ可變區基因段為人類Igκ可變區基因段。在某些具體例中，Igκ可變區基因段為囓齒動物Igκ可變區基因段(例如大鼠或小鼠可變區基因段)。在一些具體例中，Igκ恆定區基因座包含Igκ恆定區基因段，其為部分或完全人類。在一些具體例中，本文所述之Igκ鏈基因座位在內源性Igκ鏈基因座處。
在某些具體例中，Igκ可變區含有未重排Igκ可變區基因段。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含至少一個人類Vκ基因段，其存在於自然界存在之人類Igκ輕鏈基因座的遠端可變簇(或 遠端臂，或遠端複製)中。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含至少一個人類Vκ基因段，其存在於自然界存在之人類Igκ輕鏈基因座的近端可變簇(或近端臂，或近端複製)中。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含人類Vκ基因段，其存在於自然界存在之人類Igκ輕鏈基因座的遠端與近端可變簇中。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含全部或基本上全部功能性人類Vκ基因段，其於自然界存在之人類Igκ輕鏈基因座的人類Vκ 2-40(或Vκ 3D-7)以及人類Vκ 4-1基因段之間(包括兩者)之間被發現到。
在一些具體例中，未重排人類免疫球蛋白可變區基因段包含複數個人類Vκ段以及一或多個人類Jκ段。在一些具體例中，免疫球蛋白可變區基因段包含四個功能性Vκ段以及全部人類Jκ段。在一些具體例中，免疫球蛋白可變區基因段包含16個功能性Vκ段以及全部人類Jκ段。在一些具體例中，未重排人類免疫球蛋白可變區基因段包含全部人類Vκ段以及全部人類Jκ段。
在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30，35或更多個(例如36、37、38、39、40等)人類Vκ基因段。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含人類Vκ基因段Vκ 3D-7、Vκ 1D-8、Vκ 1D-43、Vκ 3D-11、Vκ 1D-12、Vκ 1D-13、Vκ 3D-15、Vκ 1D-16、Vκ 1D-17、Vκ 3D-20、Vκ 6D-21、Vκ 2D-26、Vκ 2D-28、Vκ 2D-29、Vκ 2D-30、Vκ 1D-33、Vκ 1D-39、Vκ 2D-40、Vκ 2-40、Vκ 1-39、Vκ 1-33、Vκ 2-30、Vκ 2-28、Vκ 1-27、Vκ 2-24、Vκ 6-21、Vκ 3-20、Vκ 1-17、Vκ 1-16、Vκ 3-15、Vκ 1-12、Vκ 3-11、Vκ 1-9、Vκ 1-8、Vκ 1-6、Vκ 1-5，Vκ 5-2以及Vκ 4-1。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含至少人類Vκ基因段Vκ 3D-7、Vκ 1D-8、Vκ 1D-43、Vκ 3D-11、Vκ 1D-12、Vκ 1D-13、Vκ 3D-15、Vκ 1D-16、Vκ 1D-17、Vκ 3D-20、Vκ 6D-21、Vκ 2D-26、Vκ 2D-28、Vκ 2D-29、Vκ 2D-30、Vκ 1D-33，Vκ 1D-39以及Vκ 2D-40。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含至少人類Vκ基因段Vκ 2-40、Vκ 1-39、Vκ 1-33、Vκ 2-30、Vκ 2-28、 Vκ 1-27、Vκ 2-24、Vκ 6-21、Vκ 3-20、Vκ 1-17、Vκ 1-16、Vκ 3-15、Vκ 1-12、Vκ 3-11、Vκ 1-9、Vκ 1-8、Vκ 1-6、Vκ 1-5，Vκ 5-2以及Vκ 4-1。
在一些具體例中，本文提供的非人類動物具有受限的免疫球蛋白輕鏈基因座，特徵在於不超過兩個人類VL基因段以及複數個JL基因段(例如雙輕鏈小鼠，或DLC，如美國專利公開第2013/0198880號中所述，其以引用的方式併人)。在一些具體例中，VL基因段為Vκ基因段。在一些具體例中，VL基因段為Vλ基因段。在一些具體例中，Vκ基因段為Vκ 3-20與Vκ 1-39。
在一些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含1、2、3、4、5或更多個功能性人類Jκ基因段。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含在存在於自然界中人類Igκ輕鏈基因座之人類Jκ1與人類Jκ5基因段(包括兩者)之間發現的所有或基本上所有功能性人類Jκ基因段。在一些某些具體例中，經改造Igκ輕鏈基因座(或對偶基因)包含至少Jκ基因段Jκ1、Jκ2、Jκ3、Jκ4以及Jκ5。
在又其他具體例中，非人類生物體可在其生殖系及/或基因體內包含包括插入及/或取代組胺酸密碼子的輕鏈免疫球蛋白基因座，組胺酸密碼子被設計成為非人類生物體中產生之抗體引入pH依賴性結合特性。在此等具體例中的一些中，組胺酸密碼子被插入及/或取代編碼CDR3的核酸序列。不同此等輕鏈免疫球蛋白基因座提供於美國專利第9,301,510號、第9,334,334號、美國專利申請公開第2013/0247236號、第20140013456號，以引用的方式併入本文。
包含Igκ基因段的例示性可變區提供於例如Macdonald et al.,Proc.Natl.Acαd.Sci.USA 111：5147-52及附錄資訊中，其以引用的方式併入。在一些具體例中，未重排人類免疫球蛋白可變區基因段包含所有人類Jκ段。
在一些具體例中，含有未重排人類Igκ可變區基因段的Igκ可變基因基因座也包括人類Igκ可變區基因間序列。在一些具體例中，Igκ可變基因基因座包括非人類(例如囓齒動物、大鼠、小鼠)Igκ可變區基因間序列。在一些具體例中，Igκ基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及 /或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在一些具體例中，Igκ可變區基因座為包含Igκ可變區基因(通用輕鏈可變區)的重排可變區基因座。在一些具體例中，重排Igκ可變區基因為人類重排Igκ可變區基因。使用通用輕鏈可變區有助於產生雙特異性抗體。例示性重排Ig輕鏈可變區提供於美國專利公開第2013/0185821號中，其以引用的方式併入。
在一些具體例中，Igκ鏈基因座包含人類或囓齒動物(例如大鼠或小鼠)調節要素。在一些具體例中，調節要素為內源性調節要素。在某些具體例中，Igκ鏈基因座包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)或人類內含子性κ增強子(Eκi)。在一些具體例中，IgH基因座包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)或人類3 ' κ增強子(Eκ3' )。
在一些具體例中，經修飾免疫球蛋白κ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白κ鏈基因座處。在一些具體例中，免疫球蛋白κ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白κ鏈基因座。在某些具體例中，經修飾κ鏈基因座位在座落於內源性基因座之外之轉基因上。在一些具體例中，內源性Igκ鏈基因座不活化(例如透過刪除、改位及/或逆位全部或部分內源性Igκ重鏈基因座)。
在一些具體例中，製造經改造如本文所述免疫球蛋白κ輕鏈基因座的方法包括插入約0.5kb的DNA，該DNA包括一個編碼免疫球蛋白κ輕鏈恆定域多肽取代Igκ恆定區基因之Igκ恆定外顯子的人類Igκ恆定核苷酸序列，使得該人類Igκ恆定核苷酸序列可操作地連結至該Igκ恆定區基因的增強子及/或調節區。
在一些具體例中，囓齒動物(例如大鼠或小鼠)對於本文所述的經修飾免疫球蛋白κ鏈基因座來說為異型合子。在某些具體例中，囓齒動物(例如大鼠或小鼠)對於本文所述的經修飾免疫球蛋白κ鏈基因座來說為同型合子。
在某些態樣中，本文提供包含經遺傳修飾Igλ鏈基因座的囓齒動物(例如小鼠或大鼠)。此等基因座包含Igλ鏈可變區基因段(意即至少一個Vλ基因段以及一個Jλ基因段)。經修飾λ基因座進一步包括至少一個Igλ鏈恆定區(Cλ)基因段。在某些具體例中，Vλ基因段以及Jλ基因段(諸如人類Vλ基因段以及人類Jλ基因段)可操作地連結至Cλ，使得囓齒動物(例如大鼠或小鼠)產生包含衍生自人類Vλ基因段與人類Jλ基因段的輕鏈可變域，以及衍生自Cλ基因段的輕鏈恆定域。在一些具體例中，Vλ基因段與Jλ基因段將會是未重排Vλ與Jλ基因段。在一些具體例中，Vλ基因段與Jλ基因段將會是重排Vλ與Jλ基因段，且因此將呈重排可變區基因的形式。在某些具體例中，Igλ可變區基因段為人類可變區基因段。在某些具體例中，Igλ可變區基因段為囓齒動物可變區基因段(例如大鼠或小鼠可變區基因段)。在一些具體例中，Igλ恆定區基因座包含一個λ恆定區基因段，其為部分或完全人類。在一些具體例中，本文所述之Igλ鏈基座位在一個內源性Igλ鏈基因座處。包含Igλ基因段的例示性可變區提供於例如美國專利公開第2012/0073004號以及第2002/0088016號，以及美國專利申請第15/803,513號(2017年11月3日提申，公開為US2018/0125043)，其各自以引用的方式併入。
在一些具體例中，包含未重排人類Igκ可變區基因段的Igλ可變基因基因座也包括人類Igλ可變區基因間序列。在一些具體例中，Igλ可變區基因座包括非人類(例如囓齒動物、大鼠、小鼠)Igλ可變區基因間序列。在一些具體例中，Igλ基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在一些具體例中，人類Igλ輕鏈基因座包含來自人類Igλ輕鏈基因座的遺傳材料。在一些具體例中，如本文所述之人類Igλ輕鏈基因座包含至少一個人類Vλ基因段以及至少一個人類Jλ基因段、至少一個人類Cλ基因段，以及一或多個促使重排所必須的序列(例如重組該至少一個人類Vλ基因段與該至少一個人類Jλ基因段的訊號序列(等)以形成功能性重排Vλ-Jλ人類序列，其編碼人類Vλ域)。在許多具體例中，人類Igλ輕鏈序列包含複數個人類Vλ基因段以及一或多個促使該人類Vλ基因段與該至少一個人類Jλ基因段 重排所必要的序列。在一些具體例中，如本文所述之人類Igλ輕鏈序列是人類Igλ輕鏈基因座的基因體序列(例如由細菌人工染色體分離及/或選殖而來)，並含有複數個呈生殖系構形的人類Vλ基因段。在一些具體例中，人類Igλ輕鏈序列包含呈生殖系構形的人類Vλ、Jλ與Cλ序列(意即因為該人類Vλ、Jλ與Cλ序列存在於人類細胞的Igλ輕鏈基因座中，換言之，Jλ與Cλ序列以Jλ Cλ簇存在)。在一些具體例中，人類Igλ輕鏈序列編碼Igλ輕鏈多肽(整體或部分)，其中Igλ輕鏈多肽存在於免疫球蛋白中，尤其是由人類B細胞表現的免疫球蛋白中。亦提供製造含有該人類Igλ輕鏈序列取代對應非人類Igλ輕鏈序列(例如內源性囓齒動物Igλ輕鏈基因座)的非人類動物、非人類胚胎以及細胞的非人類動物、胚胎、細胞以及靶向構築體。
在一些具體例中，插入人類Igλ輕鏈序列取代非人類動物之生殖系基因體內的對應非人類Igλ輕鏈序列。在一些具體例中，人類Igλ輕鏈序列被插入至非人類Igλ輕鏈序列(例如非人類Igλ輕鏈恆定區序列)的上游。在一些具體例中，人類Igλ輕鏈序列被插入至一或多個非人類Igλ輕鏈序列的中間，使得該人類Igλ輕鏈序列與非人類Igλ輕鏈序列並列。
在某些具體例中，Igλ輕鏈基因座包含至少2、3、4、5、6、7、8、10、20、30或40個功能性Vλ基因段。在一些具體例中，該基因座包含人類Vλ基因段Vλ3-10、Vλ3-9、Vλ2-8、Vλ4-3以及Vλ3-1。在一些具體例中，該基因座包含Vλ2-11、Vλ3-12、Vλ2-14、Vλ3-16、Vλ3-19、Vλ3-21、Vλ3-22、Vλ2-23、Vλ3-25以及Vλ3-27。在一些具體例中，該基因座包含Vλ3-27、Vλ1-36、Vλ5-37、Vλ5-39、Vλ1-40、Vλ7-43、Vλ1-44、Vλ5-45、Vλ7-46、Vλ1-47、Vλ9-49、Vλ1-51以及Vλ5-52。在某些具體例中，該基因座包含Vλ10-54、Vλ6-57、Vλ4-60、Vλ8-61以及Vλ4-69。在一些具體例中，Igλ鏈基因座包含一或多個人類Jλ-Cλ對。例如，在某些具體例中，Igλ鏈基因座在人類Vλ基因段下游包含人類Jλ1-Cλ1、Jλ2-Cλ2、Jλ3-Cλ3、Jλ6-Cλ6及/或Jλ7-Cλ7。在一些具體例中，Igλ鏈基因座在人類Vλ基因段下游包含人類Jλ1-Cλ1、Jλ2-Cλ2、Jλ3-Cλ3、Jλ6-Cλ6、人類Jλ7與小鼠Cλ1，如圖2A中所示。
在一些具體例中，Igλ基因座為包含Igλ可變區基因(通用輕鏈可變區)的重排基因座。在一些具體例中，重排Igλ可變區基因為人類重排Igλ 可變區基因。使用通用輕鏈可變區促使雙特異性抗體產生，其中至少一個抗原結合域具有結合。例示性重排Ig輕鏈可變區提供於美國專利公開第2013/0185821號，其以引用的方式併入。
在一些具體例中，Igλ鏈基因座包含人類或囓齒動物(例如大鼠或小鼠)調節要素。在一些具體例中，調節要素為內源性調節要素。在某些具體例中，Igλ鏈基因座包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)λ增強子2.4。在一些具體例中，Igλ鏈基因座包含人類或囓齒動物(例如大鼠或小鼠)3'λ增強子。在一些具體例中，Igλ鏈基因座包含囓齒動物(例如大鼠或小鼠)λ增強子3.1。
在一些具體例中，經修飾免疫球蛋白λ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白λ鏈基因座處。在一些具體例中，免疫球蛋白λ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白λ鏈基因座。在某些具體例中，經修飾Igλ鏈基位在座落於內源性基因座之外的轉基因上。在一些具體例中，內源性Igλ鏈基因座不活化(例如透過刪除、改位及/或逆位全部或部分內源性Igλ鏈基因座)。
在一些具體例中，囓齒動物(例如大鼠或小鼠)對於經修飾免疫球蛋白λ鏈基因座來說為異型合子。在某些具體例中，囓齒動物(例如大鼠或小鼠)對於經修飾免疫球蛋白λ鏈基因座來說為同型合子。
在一些具體例中，非人類生物體在其生殖系及/或基因體內包含一個輕鏈免疫球蛋白基因座，該基因座包含輕鏈可變基因段的有限序目(例如雙輕鏈可變區，含有兩個輕鏈可變基因段)。在一些具體例中，輕鏈基因段之有限序目中的輕鏈可變基因段為人類輕鏈基因段。例示性雙輕鏈可變區提供於美國專利公開第2013/0198880號，其以引用的方式併入。在一些具體例中，包含雙輕鏈可變區的非人類生物體用於生產雙特異性抗體。
在一些具體例中，本文所述之囓齒動物(例如小鼠或大鼠)包含人類或人類化B細胞抗原受體複合體-相關蛋白α鏈(CD79a或Igα)及/或B細胞抗原受體複合體-相關蛋白β鏈(CD79b或Igβ)基因座。含有人類或人類化CD79a與CD79b基因的囓齒動物表現如B細胞表面上之雜二聚體的人類或人 類化CD79a與CD79b多肽，其與膜表現的免疫球蛋白以非共價方式締合而形成B細胞受體(BCR)。BCR與抗原締合並且在與抗原接合之後以信號傳導和內化的方式發揮作用。在一些具體例中，本文所述的囓齒動物包含人類或人類化CD79a以及CD79b基因。在一些某些具體例中，如本文所述的囓齒動物進一步包含含有囓齒動物CD79a部分與人類CD79a部分的CD79a基因，以及含有囓齒動物CD79b部分與人類CD79b部分的CD79b基因，其中人類CD79a部分編碼人類CD79a多肽的實質上全部胞外域(例如對應於人類CD79a多肽之殘基33-143的胺基酸)，而人類CD79b部分編碼人類CD79b多肽的實質上全部胞外域(例如對應於人類CD79b多肽的殘基29-159的胺基酸)。在一些具體例中，囓齒動物CD79a與CD79b部分各自分別編碼內源性CD79a與CD79b多肽的至少胞內域；在一些某些具體例中，分別編碼內源性CD79a與CD79b多肽的跨膜域與胞內域。在一些具體例中，人類以及內源性部分分別可操作地連結至內源性CD79a或CD79b啟動子。
在一些具體例中，如本文所述的囓齒動物進一步包含一個嵌合CD79a基因，其包含囓齒動物CD79a部分與人類CD79a部分，其中人類CD79a部分編碼包含對應於人類CD79a多肽之殘基33-116的胺基酸的序列，在一個具體例中，其編碼包含人類CD79a多肽之胺基酸33-119的序列，在一個具體例中，其編碼包含人類CD79a多肽之胺基酸33-143的序列，在一個具體例中，其編碼包含人類CD79a多肽之胺基酸33-165的序列。在一些具體例中，嵌合CD79a多肽包含人類Ig C2-樣域；在一些具體例中，嵌合CD79a多肽也包含人類柄區；在一些具體例中，嵌合CD79a多肽也包含人類跨膜域；且在一些具體例中，嵌合CD79a多肽進一步包含囓齒動物(例如小鼠)細胞質域。在一些具體例中，囓齒動物包含嵌合CD79a基因，其含有本文所述之人類區部分以及編碼人類或囓齒動物(例如小鼠)CD79a訊號肽的序列；在一個具體例中，編碼訊號肽的序列為編碼小鼠CD79a之胺基酸1-28之小鼠CD79a序列。
在一些具體例中，如本文所述的囓齒動物進一步包含一個嵌合CD79b基因，其包含囓齒動物CD79b部分與人類CD79b部分，其中人類CD79b部分編碼包含對應於人類CD79b多肽之殘基29-135的胺基酸的序 列，在一個具體例中，其編碼包含人類CD79b多肽之胺基酸29-159的序列，在一個具體例中，其編碼包含人類CD79b多肽之胺基酸29-184的序列。在一些具體例中，嵌合CD79b多肽包含人類Ig V-樣域；在一些具體例中，嵌合CD79b多肽也包含人類柄區；在一些具體例中，嵌合CD79b多肽也包含人類跨膜域；且在一些具體例中，嵌合CD79b多肽進一步包含囓齒動物(例如小鼠)細胞質域。在一些具體例中，囓齒動物包含嵌合CD79b基因，其含有本文所述之人類區部分以及編碼人類或囓齒動物(例如小鼠)CD79b訊號肽的序列；在一個具體例中，編碼訊號肽的序列為編碼小鼠CD79b之胺基酸1-25的小鼠CD79b序列。
GenBank登錄號NP_001774.1、NM_001783.3、NP_067612.1與NM_021601.3，以及UniProt ID P11912提供人類CD79A基因以及人類CD79A多肽的代表性來源序列，自其可獲得所欲的人類部分。GenBank登錄號NP_000617.1、NM_000626.2、NP_001035022.1、NM_001039933.1，NP_067613.1與NM_021602.2，以及UniProt ID P40259提供人類CD79B以及人類CD79B多肽的代表性來源序列，自其可獲得所欲的人類部分。
在一些具體例中，本文提供的囓齒動物(例如小鼠或大鼠)進一步包含一或多個如下列中所述的人類CD79A與CD79B基因：美國專利申請公開第2011-0093963 A1號與第2009-0053210 A1號；國際專利申請公開第WO 2008/027986號；以及歐洲專利第2 064 325 B1號，其各自以引用的方式併入。在一些某些具體例中，本文提供的囓齒動物包含人類化CD79a基因，其含有一個內源性CD79a部分與一個人類CD79a部分；以及人類化CD79b基因，其含有一個內源性CD79b部分與一個人類CD79b部分，其中該人類CD79a部分編碼人類CD79a多肽之實質上全部胞外域(例如對應於人類CD79a多肽之殘基33-143的胺基酸)而人類CD79b部分編碼人類CD79b多肽之實質上全部胞外域(例如對應於人類CD79b多肽29-159的胺基酸)。在一些具體例中，本文提供之囓齒動物包含人類化CD79a基因，其含有一個內源性CD79a部分與一個人類CD79a部分；以及人類化CD79b基因，其含有一個內源性CD79b部分與一個人類CD79b部分，其中該人類CD79a部分編碼含有胺基酸33-116的序列(例如含有人類CD79a多肽之胺基酸33-119的序列、含有胺 基酸33-143的序列，或含有胺基酸33-165的序列)，且其中該人類CD79b部分編碼含有胺基酸29-135的序列(例如含有人類CD79a多肽之胺基酸29-159的序列，或含有胺基酸29-184的序列)。在一些具體例中，內源性CD79a與CD79b部分各自分別編碼內源性CD79a與CD79b多肽的至少胞內域；在一些某些具體例中，分別編碼內源性CD79a與CD79b多肽的跨膜域和胞內域。
在一些具體例中，本文提供的囓齒動物(例如小鼠或大鼠)表現及/或在其基因體內包含人類化或人類新生兒Fc受體(FcRn)基因座。FcRn又稱為布蘭貝爾(Brambell)受體，是一種由內皮細胞表現且與β-2-微球蛋白(β2M)締合並結合至IgG抗體以及血清白蛋白的Fc域的蛋白質。FcRn延長IgG以及血清白蛋白的半衰期。具體來說，透過以pH依賴性的方式結合IgG以及血清白蛋白，FcRn能夠挽救血清蛋白免於受到內皮細胞的溶小體降解，從而增加此等蛋白質的血清半衰期。
在一些具體例中，FcRn基因座包含編碼FcRn多肽的核酸序列，FcRn多肽含有人類胞外域、囓齒動物(例如小鼠或大鼠)跨膜域與囓齒動物(例如小鼠或大鼠)細胞質域。在一些具體例中，FcRn基因座包含編碼FcRn多肽的核酸序列，FcRn多肽含有人類胞外域、人類(例如小鼠或大鼠)跨膜域與囓齒動物(例如小鼠或大鼠)細胞質域。在一些具體例中，FcRn基因座包含編碼FcRn多肽的核酸序列，FcRn多肽含有人類胞外域、人類(例如小鼠或大鼠)跨膜域與人類(例如小鼠或大鼠)細胞質域。
在一些具體例中，編碼FcRn多肽的核酸序列座落在一個內源性囓齒動物FcRn基因座處。在某些具體例中，編碼FcRn多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcRn基因。例如，在一些具體例中，在內源性FcRn基因座中編碼胞外域的核酸序列取代為編碼人類FcRn之胞外域的核酸序列，使得含有此一基因座的囓齒動物表現帶有人類胞外域以及囓齒動物(例如大鼠或小鼠)跨膜域和細胞質域的FcRn。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物FcRn，或不表現功能性囓齒動物FcRn。在一些具體例中，FcRn基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在 一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在某些具體例中，小鼠FcRn基因之編碼α1、α2與α3域的小鼠外顯子(外顯子3、4與5，其為頭三個編碼外顯子)替代為編碼人類FcRn基因之α1、α2與α3域的人類外顯子(外顯子3、4與5)(參見圖4)。在一些具體例中，FcRn基因包含小鼠外顯子1(非編碼外顯子)、小鼠外顯子2(包含編碼訊號肽的核酸序列)，以及人類外顯子3-6、小鼠外顯子6與7(編碼跨膜域與細胞質域)。在一些具體例中，由該基因座所編碼之人類化FcRn的胺基酸序列為SEQ ID NO：16。
GenBank登錄號NC_000019.10(49512279-49526428)、NM_001136019.1與NP_001129491.1提供人類FcRn基因、cDNA與多肽的代表性來源序列，自其可獲得所欲的人類部分。GenBank登錄號NC_000073.6(45092992-45103846)、NM_010189.1與NP_034319.1提供小鼠FcRn基因、cDNA與多肽的代表性來源序列，可自其獲得所欲的小鼠部分及/或其可用於設計靶向載體同源臂。
在一些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾FcRn基因座來說為異型合子。在某些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾FcRn基因座來說為同型合子。
在一些具體例中，本文所述之經遺傳修飾囓齒動物(例如大鼠或小鼠)以及ES細胞表現及/或在其基因體含有編碼人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的基因座。β2M是一個缺少跨膜區且與FcRn和第I型MHC分子締合的多肽。
在一些具體例中，β2M基因座包含編碼人類β2M多肽的核酸序列。在一些具體例中，編碼人類β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。在某些具體例中，編碼β2M多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物β2M基因。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物β2M，或不表現功能性囓齒動物β2M多肽。在一些具體例中，β2M基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例 中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
人類化β2M多肽、編碼人類化β2M多肽的基因座以及表現人類化β2M多肽的非人類動物描述於美國專利公開第2013/0111617號與第2013/0185819號，其各自以引用的方式併入本文。因此，如在美國專利公開第2013/0111617號與第2013/0185819號中所述，在一些具體例中，非人類動物(例如小鼠)包含人類化β2M基因，其中該基因包含人類β2M基因的外顯子2、3與4，而在一些具體例中，人類化β2M基因包含非人類(例如小鼠)β2M基因的外顯子1。人類化β2M基因座概述於圖5中。在一些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾β2M基因座來說為異型合子。在一些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾β2M基因座來說為同型合子。
在一些具體例中，本文提供之囓齒動物(例如小鼠或大鼠)表現及/或在其基因體含有人類化或人類Fcε受體1α(FcεR1α)基因座。FcεR1α與FcεR1β和FcεR1γ締合而形成FcεR1，一種表現於表皮蘭氏細胞、嗜酸性球、肥大細胞與嗜鹼性球上之IgE的高親和力受體。FcεR1的IgE結合位點被發現是在FcεR1α次單位中。
在一些具體例中，FcεR1α基因座包含編碼FcεR1α多肽的核酸序列，FcεR1α含有一個人類胞外域、一個囓齒動物(例如小鼠或大鼠)跨膜域以及一個囓齒動物(例如小鼠或大鼠)細胞質域。在一些具體例中，FcεR1α基因座包含編碼FcεR1α多肽的核酸序列，FcεR1α多肽含有一個人類胞外域、一個人類跨膜域以及一個囓齒動物(例如小鼠或大鼠)細胞質域。在一些具體例中，FcεR1α基因座包含編碼FcεR1α多肽的核酸序列，FcεR1α多肽含有一個人類胞外域、一個人類跨膜域以及一個人類細胞質域。經改造FcεR1α基因座的一個例示性具體例顯示於圖9中。
在一些具體例中，編碼FcεR1α多肽的核酸序列座落在一個內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。在某些具體例中，編碼FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因。例如，在一些具體例中，在內源性FcεR1α基因座中編碼胞外域的核酸序列代替為編碼人類FcεR1α的 胞外域的核酸序列，使得包含這樣一個基因座的囓齒動物表現帶有人類胞外域以及囓齒動物(例如大鼠或小鼠)跨膜域和細胞質域的FcεR1α。在一些具體例中，編碼含有一個人類胞外域、一個人類跨膜域與一個人類細胞質域之FcεR1α多肽的核酸序列座落在一個內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。在一些具體例中，編碼含有一個人類胞外域、一個人類跨膜域與一個人類細胞質域之FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物FcεR1α，或不表現功能性囓齒動物FcεR1α。在一些具體例中，FcεR1α基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在某些具體例中，小鼠FcεR1α之小鼠編碼外顯子1、編碼外顯子2、編碼外顯3、編碼外顯子4與編碼外顯子5的部分被取代成人類FcεR1α基因之人類編碼外顯子1、編碼外顯子2、編碼外顯子3、編碼外顯子4與編碼外顯子5的部分。在一些具體例中，FcεR1α基因包含嵌合小鼠/人類外顯子1(含有小鼠啟動子與5' UTR)、人類編碼外顯子2-5至停止密碼子、人類3' UTR與聚A，接著是小鼠3' UTR與聚A。在一些具體例中，嵌合基因外顯子1(部分)以及2編碼訊號肽、外顯子3與4編碼FcεR1α的兩個Ig樣域(感信與IgE交互作用)，以及外顯子5編碼蛋白質的細胞質域和跨膜域(參見圖9)。
GenBank登錄號NC_000001.11(159283888-159308224)，NM_002001.3與NP_001992.1提供人類FcεR1α基因、cDNA與多肽的代表性來源序列，自其可獲得所欲人類部分。GenBank登錄號NC_000067.6(173221269-173227232)，NM_010184.1與NP_034314.1提供小鼠FcεR1α基因、cDNA與多肽的代表性來源序列，自其可獲得所欲小鼠部分及/或可用於設計靶向載體同源臂。
在一些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾FcεR1α基因座來說為異型合子。在某些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾FcεR1α基因座來說是同型合子。
在一些具體例中，本文提供之囓齒動物(例如小鼠或大鼠)表現及/或在其基因體內包含人類化或人類Fcγ受體1a(FcγR1a，在圖式中經常標為FcγR1)基因座。FcγR1a是表現在單核球上的高親和力FcγR蛋白，其結合至IgG的Fc部分上並且活化宿主細胞。
在一些具體例中，FcγR1a基因座包含編碼FcγR1a多肽的核酸序列，FcγR1a多肽含有一個人類胞外域、一個囓齒動物(例如小鼠或大鼠)跨膜域以及一個囓齒動物(例如小鼠或大鼠)細胞質域。在一些具體例中，FcγR1a基因座包含編碼FcγR1a多肽的核酸序列，FcγR1a多肽含有一個人類胞外域、一個人類(例如小鼠或大鼠)跨膜域以及一個囓齒動物(例如小鼠或大鼠)細胞質域。在一些具體例中，FcγR1a基因座包含編碼FcγR1a多肽的核酸序列，FcγR1a多肽含有一個人類胞外域、一個人類(例如小鼠或大鼠)跨膜域以及一個人類(例如小鼠或大鼠)細胞質域。
在一些具體例中，編碼FcγR1α多肽的核酸序列座落在一個內源性囓齒動物FcγR1a基因座處。在某些具體例中，編碼FcγR1a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcγR1a基因。例如，在一些具體例中，在內源性FcγR1a基因座中編碼胞外域的核酸序列代替為編碼人類FcγR1α之胞外域的核酸序列，使得含有此一基因座的囓齒動物表現帶有一個人類胞外域與一個囓齒動物(例如大鼠或小鼠)跨膜域與細胞質域的FcγR1a。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物FcγR1a，或不表現功能性囓齒動物FcγR1a。在一些具體例中，FcγR1a基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
人類化FcγR1a多肽、編碼人類化FcγR1a多肽的基因座以及表現人類化FcγR1a多肽的非人類動物描述於美國專利第9,474,255號與美國專利公開第2017/0086432號中，其各自以引用的方式併入本文。
在一些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾FcγR1a基因座來說為異型合子。在某些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾FcγR1a基因座來說為同型合子。
在一些具體例中，本文所述之經遺傳修飾囓齒動物(例如大鼠或小鼠)以及ES細胞表現及/或在其基因體內包含編碼人類低親和力Fcγ受體(FcγR)多肽(例如人類FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa或FcγRIIIb多肽)的基因座。
在一些具體例中，低親和力FcγR基因座包含編碼人類FcγRIIa多肽的核酸序列。在一些具體例中，編碼人類FcγRIIa多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。在某些具體例中，編碼FcγRIIa多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座。在一個特定具體例中，人類FcγRIIa基因含有多形性，其中該多形性選自131His低反應多形性以及131Arg高反應多形性。在一個特定具體例中，FcγRIIa多形性為131His低反應多形性。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物低親和力FcγR多肽(例如不表現囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或FcγRIII多肽，或不表現功能性囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或FcγRIII多肽)。在一些具體例中，FcγRIIa基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在一些具體例中，低親和力FcγR基因座包含編碼人類FcγRIIb多肽的核酸序列。在一些具體例中，編碼人類FcγRIIb多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。在某些具體例中，編碼人類FcγRIIb多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座。在一個特定具體例中，人類FcγRIIb基因包含一個胺基酸置換，其中該置換選自187Ile或187Thr置換。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物低親和力FcγR多肽(例如不表現囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或FcγRIII多肽，或不表現功能性囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或FcγRIII多肽)。在一些具體例中，FcγRIIb基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在一些具體例中，低親和力FcγR基因座包含編碼人類FcγRIIc多肽的核酸序列。在一些具體例中，編碼人類FcγRIIc多肽的核酸序列座落 在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。在某些具體例中，編碼人類FcγRIIc多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座。在一個具體例中，FcγRIIc基因是一個特異性對偶基因變異體，其中該對偶基因變異體選自57Stop變異體與57Q變異體。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物低親和力FcγR多肽(例如不表現囓齒動物FcγRIIB、FcγRIV及/或FcγRIII多肽)。在一些具體例中，FcγRIIc基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在一些具體例中，低親和力FcγR基因座包含編碼人類FcγRIIIa多肽的核酸序列。在一些具體例中，編碼人類FcγRIIIa多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。在某些具體例中，編碼人類FcγRIIIa多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物低親和力FcγR多肽(例如不表現囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或FcγRIII多肽，或不表現功能性囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或FcγRIII多肽)。在一個具體例中，FcγRIIIa基因是一個特異性對偶基因變異體，其中該對偶基因變異體選自176Val變異體及176Phe變異體。在一個特定具體例中，FcγRIIIa對偶基因變異體為176Val變異體。在一些具體例中，FcγRIIIa基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在一些具體例中，低親和力FcγR基因座包含編碼人類FcγRIIIb多肽的核酸序列。在一些具體例中，編碼人類FcγRIIIb多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。在某些具體例中，編碼FcγRIIIb多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座。在一個特定具體例中，FcγRIIIb基因是一個特異性對偶基因變異體，其中該對偶基因變異體選自NA1變異體及NA2變異體。在另一個特定具體例中，FcγRIIIb對偶基因變異體為NA2變異體。在一些具體例中，囓齒動物不表現囓齒動物低親和力FcγR多肽(例如不表現囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或FcγRIII多肽，或不表現功能性囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV及/或 FcγRIII多肽)。在一些具體例中，FcγRIIIb基因基因座包含非人類調節要素(例如非人類啟動子及/或增強子)。在一些具體例中，非人類調節要素為囓齒動物調節要素(例如大鼠或小鼠啟動子或增強子)。
在一些具體例中，本文提供之囓齒動物(例如大鼠或小鼠)包含一或多個如美國專利第9,221,894號、第9,056,130號、第9,089,599號、第8,658,154號、第8,883,496號或第8,658,853號中所述的人類低親和力FcγR基因。在一些具體例中，本文提供之囓齒動物(例如大鼠或小鼠)包含至少兩個低親和力人類FcγR基因以及一個內源性囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Fcγ-鏈基因，其中該等低親和力人類FcγR基因選自人類FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa以及FcγRIIIb組成之群。在一些某些具體例中，本文提供之囓齒動物(例如大鼠或小鼠)包含人類FcγRIIa與FcγRIIIb，以及一個內源性囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Fcγ-鏈基因。在一些某些具體例中，本文提供之囓齒動物(例如大鼠或小鼠)包含FcγRIIa、FcγRIIIa、FcγRIIb、FcγRIIc以及FcγRIIId基因，以及一個內源性囓齒動物(例如大鼠或小鼠)Fcγ-鏈基因。在不同具體例中，包含一或多個FcγR的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)進一步包含一個在內源性囓齒動物(例如大鼠或小鼠)FcγRIIB、FcγRIV與FcγRIII基因(亦即內源性囓齒動物FcγRIIb、FcγRIV與FcγRIII α-鏈編碼序列)的同型合子瓦解。在不同具體例中，包含一或多個如本文所述人類低親和力FcγR的囓齒動物(例如大鼠或小鼠)不偵測到表現內源性囓齒動物低親和力FcγR多肽(例如內源性低親和力FcγR α-鏈多肽)。
在一些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾低親和力FcγR基因座來說為異型合子。在某些具體例中，囓齒動物對於經遺傳修飾低親和力FcγR基因座來說為同型合子。
在某些態樣中，本文提供包含一或多個本文揭示之人類化基因座的經遺傳修飾非人類動物(例如囓齒動物，諸如大鼠或小鼠)，以及可用於製造此等非人類動物的經遺傳修飾非人類動物ES細胞。
在某些態樣中，本文提供在其生殖系及/或基因體內包含一或多個本文所述經改造基因座的經遺傳修飾非人類動物以及非人類動物ES細 胞。例如，在一些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因座包含本文提供之IgH基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞進一步包含本文提供之Igκ及/或Igλ基因座。在一些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之CD79a及/或CD79b。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcRn基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之β2M基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcεR1α基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcγR1a基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcγR2a基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcγR2b基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcγR3a基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcγR3b基因座。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之FcγR2c基因座。在一些具體例中，非人類動物或ES細胞對於一或多個本文提供之基因座(例如經遺傳改造基因座)來說為異型合子。在一些具體例中，非人類動物或ES細胞對於一或多個本文提供之基因座(例如經遺傳改造基因座)來說為同型合子。
在一些具體例中，非人類動物可以是任一種非人類動物。在一些具體例中，非人類動物是脊椎動物。在一些具體例中，非人類動物是哺乳動物。在一些具體例中，本文所述之經遺傳修飾非人類動物可選自下列組成之群：小鼠、大鼠、兔、豬、牛(例如母牛、公牛、水牛)、鹿、綿羊、山羊、駱馬、雞、貓、狗、雪貂、靈長類動物(例如狨猴、恆河猴)。就非人類動物來說若適宜的話，可遺傳修飾ES細胞不是簡單可用的，可採用其他方法來製造包含本文所述之遺傳修飾的非人類動物。此等方法包括，例如修飾非ES細胞基因體(例如纖維母細胞或誘導型全能細胞)以及採用核轉移以將經修飾基因體轉移至適當細胞，諸如卵母細胞，並且於非人類動物中在適當條件下使經修飾細胞(例如經修飾卵母細胞)發育而形成胚胎。
在不同具體例中，本文提供包含經遺傳改造免疫球蛋白重鏈基因座的非人類動物，如囓齒動物(例如大鼠或小鼠)。此等經遺傳改造基因座的例示性具體例概述於圖1中並且在本文中詳細說明。在一些具體例中，本文所述之非人類動物在其基因體(例如其生殖系基因體)內包括Adam6基因，該基因編碼ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段(參見例如美國專利第8,642,835號與第8,697,940號，其各自以整體引用的方式併入本文)。在一些具體例中，ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段是由Adam6基因所表現。在一些具體例中，不是源於包括Adam6基因的非人類動物(例如包括大鼠Adam6基因或得自另一個小鼠品系之小鼠Adam6基因的小鼠)。在一些具體例中，本文所述之非人類動物包括異位Adam6基因。「異位」Adam6基因如本文所用意指一個在不同於在野生型非人類動物中出現之Adam6基因的Adam6基因。例如，Adam6基因可以位在不同染色體上，位在不同基因座處，或座落鄰近於不同序列。例示性異位Adam6基因是位在人類免疫球蛋白序列(例如人類重鏈可變區基因段)內的小鼠Adam6基因。在一些具體例中，本文所述之非人類動物包括被插入或被併入的Adam6基因。
在一些具體例中，本文所述之非人類動物包括在其基因體(例如其生殖系基因體)內插入一或多個編碼一或多個非人類Adam6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在一些具體例中，本文所述之非人類動物在其基因體(例如其生殖系基因體)內包括一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。在一些具體例中，本文所述之非人類動物在其基因體(例如其生殖系基因體)內包括一個小鼠Adam6a基因及/或小鼠Adam6a基因。在一些具體例中，本文所述之非人類動物包括一或多個編碼小鼠ADAM6a、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段，及/或小鼠ADAM6b、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在一些具體例中，一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被插 入及/或位在與內源性免疫球蛋白重鏈基因座相同的染色體上。在一些具體例中，一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被插入及/或位在一個位置中，以使得該一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列與人類免疫球蛋白重鏈可變區基因段相接。在一些具體例中，一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被插入及/位在一個位置中，使得該一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列與人類免疫球蛋白重鏈可變區基因段相鄰。在一些具體例中，一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被插入及/或位在一個位置中，使得該一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列位在人類免疫球蛋白重鏈可變區基因段之間。在一些具體例中，一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被插入及/或位在第一與第二人類VH基因段之間。在一些具體例中，第一人類VH基因段為人類VH1-2，而第二人類VH基因段為人類VH6-1。在一些具體例中，一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被插入及/或被定位而取代人類Adam9假基因。在一些具體例中，一或多個編碼一或多個非人類ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被插入人類VH基因段與人類DH基因段之間。
在一些具體例中，本文所述之非人類動物包括回復或提高ADAM6活性的一個Adam6基因。在一些具體例中，Adam6基因將ADAM6活性回復至相當於包括功能性、內源性Adam6基因之非人類動物的程度。在一些具體例中，Adam6基因將ADAM6活性提高到相當於不包括功能性Adam6基因之非人類動物之ADAM6活性的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍水準。
在一些具體例中，本文所述之非人類動物包括在雄性非人類動物中回復或提高生育力的Adam6基因。在一些具體例中，Adam6基因在雄性非人類動物中將生育力回復至相當於包括功能性內源性Adam6基因之非人類動物的程度。在一些具體例中，Adam6基因在雄性非人類動物中回復生育力，使得因為使該雄性非人類動物交配所生下之鼠仔數目相當於不包括功能性Adam6基因之雄性非人類動物交配所生下之鼠仔數目的至少70%、至少80%、至少90%、至少95%。在一些具體例中，Adam6基因在雄性非人類動物中提高生育力，使得因為使該雄性非人類動物交配所生下之鼠仔數目相當於不包括功能性Adam6基因之雄性非人類動物交配所生下之鼠仔數目的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍。
在一些具體例中，如本文所述之非人類免疫球蛋白重鏈基因座缺少至少一個內源性非人類Adam6基因。在一些具體例中，缺少至少一個內源性非人類Adam6基因在缺少內源性非人類Adam6基因的雄性小鼠中降低ADAM6活性及/或生育力。在一些具體例中，如本文所述之非人類免疫球蛋白重鏈基因座包括瓦解至少一個內源性非人類Adam6基因。在一些具體例中，瓦解至少一個內源性非人類Adam6基因在缺少內源性非人類Adam6基因的雄性小鼠中降低ADAM6活性及/或生育力。
在一些具體例中，非人類動物為哺乳動物。在一些具體例中，非人類動物為小型哺乳動物，例如跳鼠超科或鼠超科。在一些具體例中，非人類動物為囓齒動物。在某些具體例中，囓齒動物為小鼠、大鼠或倉鼠。在一些具體例中，囓齒動物選自鼠超科。在一些具體例中，非人類動物來自選自麗倉鼠科(Calomyscidae)(例如小鼠樣倉鼠)、倉鼠科(Cricetidae)(例如倉鼠、新世界大鼠與小鼠、田鼠)、鼠科(Muridae)(例如真小鼠與大鼠、沙鼠、小刺毛鼠、蓬鼠)、馬島鼠科(Nesomyidae)(例如攀鼠、岩鼠、白尾大鼠、馬島大鼠與小鼠)、刺睡鼠科(Platacanthomyidae)(例如刺山鼠)，以及鼴形鼠科(Spalacidae)(例如鼴鼠、竹鼠與鼢鼠)之科。在一些具體例中，囓齒動物選自真小鼠或大鼠(鼠科)、沙鼠、刺鼠以及蓬鼠。在一些具體例中，小鼠 是選自鼠科的成員。在一些具體例中，非人類動物為囓齒動物。在一些具體例中，囓齒動物選自小鼠與大鼠。在一些具體例中，非人類動物為小鼠。
在一些具體例中，非人類動物為C57BL品系的小鼠。在一些具體例中，C57BL品系選自C57BL/A、C57BL/An、C57BL/GrFa、C57BL/KaLwN、C57BL/6、C57BL/6J、C57BL/6ByJ、C57BL/6NJ、C57BL/10、C57BL/10ScSn、C57BL/10Cr與C57BL/Ola。在一些具體例中，非人類動物為129品系的小鼠。在一些具體例中，129品系選自由以下品系組成之群：129P1、129P2、129P3、129X1、129S1(例如129S1/SV、129S1/SvIm)、129S2、129S4、129S5、129S9/SvEvH、129S6(129/SvEvTac)、129S7、129S8、129T1、129T2。在一些具體例中，經遺傳修飾小鼠為129品系與C57BL品系的混合。在一些具體例中，小鼠是129品系的混合及/或C57BL品系的混合。在一些具體例中，129品系為129S6(129/SvEvTac)品系的混合。在一些具體例中，小鼠為BALB品系(例如BALB/c)。在一些具體例中，小鼠為BALB品系與另一個品系(例如C57BL品系及/或129品系)的混合。在一些具體例中，本文提供之非人類動物可以是衍生自前述品系之任一組合的小鼠。
在一些具體例中，本文提供之非人類動物為大鼠。在一些具體例中，大鼠是選自韋斯大鼠(Wistar rat)、LEA品系、史-道二氏(Sprague Dawley)品系、費雪品系(Fischer strain)、F344、F6以及深色野鼠。在一些具體例中，大鼠品系為選以下組成之群的兩個或更多個品系的混合：韋斯大鼠、LEA、史-道二氏、費雪、F344、F6以及深色野鼠。
在某些具體例中，經遺傳修飾非人類動物或ES細胞在其基因體及/或生殖系內包含多個本文提供的基因座，諸如多個本文提供之經遺傳改造基因座。例如，在一些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之IgH基因座，以及本文提供之Igκ及/或Igλ基因座。在一些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之IgH基因座、本文提供之Igκ及/或Igλ基因座，以及視情況本文提供之CD79a及/或CD79b基因座。在一些具體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之IgH基因座、本文提供之Igκ及/或Igλ基因座、本文提供之FcRn基因座，以及本文提供之β2M基因座。在一些具 體例中，非人類動物或ES細胞在其生殖系及/或基因體內包含本文提供之IgH基因座、本文提供之Igκ及/或Igλ基因座、本文提供之FcRn基因座、本文提供之β2M基因座、本文提供之FcεR1α基因座、本文提供之FcγR1a基因座、本文提供之FcγR2a基因座、本文提供之FcγR2b基因座、本文提供之FcγR3a基因座、本文提供之FcγR3b基因座，及/或本文提供之FcγR2c基因座及其組合。
在某些態樣中，經遺傳修飾之非人類動物表現一或多種由本文提供之人類化基因座所編碼的人類化多肽。例如，在一些具體例中，非人類動物表現Ig重鏈多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化Igκ多肽及/或人類化Igλ多肽。在一些具體例中，非人類動物表現人類化CD79a多肽及/或人類化CD79b多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化FcRn多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化β2M多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化FcεR1α多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化FcγR1a多肽。在某些具體例中，非人類動物或ES細胞非人類動物表現人類化FcγR2a多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化FcγR2b基因座多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化FcγR3a多肽。在某些具體例中，非人類動物表現人類化FcγR3b多肽。在某些具體例中，非人動物表現人類化FcγR2c多肽。
經遺傳修飾非人類動物以及ES細胞可以使用技藝中熟知的任一種適當方法產生。例如，此等經遺傳修飾非人類動物ES細胞可以使用VELOCIGENE®技術產生，其描述於美國專利第6,586,251號、第6,596,541號、第7,105,348號以及Valenzuela et al.(2003)“High-throughput engineering of the mouse genome coupled with high-resolution expression analysis”Nat.Biotech.21(6)：652-659中，其各自以引用的方式併入。也可以使用基因體靶向核酸酶系統進行修飾，諸如CRISPR/Cas系統、轉錄活化因子樣效應子核酸酶(TALEN)系統或鋅指核酸酶(ZFN)系統。在一些具體例中，使用例如在美國專利申請第14/314,866號、第14/515,503號、第14/747,461號以及第14/731,914號中所述的CRISPR/Cas系統進行修飾，其各自以引用的方式併 入。本文亦在實例1與3-5中提供製造此等經遺傳修飾非人類動物以及ES細胞的方法。
使用技藝中熟知的方法，本文所述的ES細胞接而可用來產生非人類動物。例如，使用如美國專利第7,294,754號以及Poueymirou et al.,Nature Biotech 25：91-99(2007)中所述的VELOCIMOUSE®方法(其各自以引用的方式併入)，本文所述之小鼠非人類動物ES細胞可用來產生經遺傳修飾小鼠。所產生的小鼠可以繁殖成同型合子。
在某些具體例中，本文提供測試包含人類Fc域之治療性蛋白(例如人類抗體或Fc融合蛋白)的方法，包含向本文提供的囓齒動物(例如本文提供的小鼠或大鼠)投與治療性蛋白。在某些具體例中，本文提供用於實施此等方法的動物模型。
在一些具體例中，所投與人類抗體或Fc融合蛋白具有與在本文提供之囓齒動物的經遺傳修飾IgH基因座中之人類CH編碼的Fc域的同型及/或異型匹配的同型及/或異型。例如，在一些具體例中，藥劑為人類IgG1抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG1 CH1、鉸鏈、CH2與CH3域之CH基因段的經遺傳修飾CH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG4抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG4 CH1、鉸鏈、CH2與CH3域之CH基因段的經遺傳修飾CH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG1抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG1 CH1、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾CH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG2抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG2 CH1、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾CH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG3抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG3 CH1、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾CH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG4抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG4 CH1、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾CH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgM抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgM CH1、鉸鏈、CH2、CH3與CH4域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgD抗體而囓齒動物包含含有編碼人 類IgD CH1、H1、H2、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，治療藥劑為具有Igκ輕鏈的人類抗體而囓齒動物包含本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座。在一些具體例中，治療藥劑為具有Igλ輕鏈的人類抗體而囓齒動物包含本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座。
在一些具體例中，該方法包含測量所投與治療性蛋白的一或多個藥動學特性。在某些具體例中，用來決定所投與人類抗體或融合蛋白之藥動學特性的動物模型為本文所提供的經遺傳修飾囓齒動物，其包含本文提供的經修飾IgH基因座。在某些具體例中，用來決定所投與人類抗體或融合蛋白之藥動學特性的動物模型為本文所提供的經遺傳修飾囓齒動物，其包含本文提供的經修飾IgH基因座與經修飾Igκ基因座及/或經修飾Igλ基因座。在一些具體例中，所投與人類抗體或Fc融合蛋白具有與在經遺傳修飾IgH基因座中人類化CH編碼之恆定域的同型及/或異型匹配的同型及/或異型。在一些具體例中，囓齒動物進一步包含本文提供的經修飾FcRn基因座。在一些具體例中，囓齒動物進一步包含本文提供的經修飾β2M。
在一些具體例中，一或多個藥動學參數包括，但不限於血漿濃度相對時間下的面積(AUC)、活體內回收(IVR)、廓清率(CL)、平均滯留時間(MRT)、藥劑半衰期(t½)以及穩態下分布體積(Vss)。大體上，所投與治療藥劑的藥動學特性是透過投與選定劑量(例如0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/mg、7.5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg或更多)的治療藥劑來決定，然後確定治療藥劑的血漿濃度如何隨著時間變化(例如0小時、6小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天或至多30天或更多天)。
在一些具體例中，該等方法進一步包含測量所投與治療性蛋白的治療效力(例如所投與劑量之治療性蛋白在動物模型中降低或消除一或多個疾病症狀的能力)。在一些具體例中，動物模型為癌症模型而疾病症狀可包括例如腫瘤大小、腫瘤轉移及/或動物存活率。在某些具體例中，動物模型為自體免疫或發炎模型，且疾病症狀可包括例如細胞激素表現含量、免疫細胞增生、組織損傷及/或動物存活率。在一些具體例中，動物模型為 傳染病模型而疾病症狀可包括例如傳染媒介物含量、組識損傷及/或動物存活率。
在一些具體例中，該等方法進一步包含測量所投與治療性蛋白的安全性以及給藥(例如所投與治療性蛋白的投與劑量在動物模型中產生一或多種不良效應的程度)。不良效應包括，但不限於過敏反應、脫髮、過敏、貧血、缺乏食慾、喪失平衡、出血、血塊、呼吸困難、支氣管炎、瘀血、白血球計數低下、紅血球計數低下、血小板計數低下、心臟毒性、結膜炎、便祕、咳嗽、脫水、腹瀉、電解質失衡、喪失生育力、發熱、掉髮、心臟衰竭、感染、注射部位反應、缺鐵、腎臟衰竭、白血球減少症、肝臟功能不全、肺炎、心跳快速、直腸出血、癲癇、體重喪失以及體重增加。例如，在某些具體例中，本文提供一種使用被動性皮膚過敏(PCA)及/或被動性全身性過敏(PSA)模型來測量由治療藥劑引起之過敏反應的方法。
在某些具體例中，該方法進一步包含測量治療性蛋白在囓齒動物中誘發一或多個Fc受體媒介反應的程度(例如治療性蛋白誘發抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)的程度)。例如，在某些具體例中，本文提供一種篩選含有人類抗體之人類Fc區之治療藥劑的方法，該方法包含：(a)向本文提供之囓齒動物投與包含人類抗體之Fc區的藥劑，其中該藥劑結合至囓齒動物體內的目標細胞；(b)測量自然殺手(NK)細胞對抗目標細胞的抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)；以及(c)將步驟(b)中的ADCC量與對照相比，其中目標細胞殺滅增加表明該藥劑媒介ADCC的能力增加。
在某些具體例中，該方法進一步包含測量投與治療性蛋白在囓齒動物體內誘發抗人類Fc免疫反應的程度。
在一些具體例中，所投與治療藥劑當被投與給本文提供之囓齒動物時引起降低的免疫反應。在一些具體例中，所投與人類抗體或Fc融合蛋白具有與在經遺傳修飾IgH基因座中人類化CH編碼之Fc域的同型及/或異型匹配的同型及/或異型。例如，在一些具體例中，藥劑為人類IgG1抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG1 CH1、鉸鏈、CH2與CH3域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG4抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG4 CH1、鉸鏈、CH2、CH3域之CH基因段的經遺傳修飾 IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG1抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG1 CH1、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG2抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG2 CH2、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG3抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG3 CH1、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgG4抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgG4 CH1、鉸鏈、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgM抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgM CH1、鉸鏈、CH2與、CH3與CH4域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，藥劑為人類IgD抗體而囓齒動物包含含有編碼人類IgD CH1、H1、H2、CH2、CH3、M1與M2域之CH基因段的經遺傳修飾IgH基因座。在一些具體例中，治療藥劑為具有Igκ輕鏈的人類抗體而囓齒動物包含本文提供之經遺傳修飾Igκ基因座。在一些具體例中，治療藥劑為具有Igλ輕鏈的人類抗體而囓齒動物包含本文提供之經遺傳修飾Igλ基因座。
在某些具體例中，本文提供的方法包括測試包含人類Fc的治療性抗體。在一些具體例中，所測試抗體包含人類重鏈可變域。在一些具體例中，抗體包含人類重鏈恆定域。在一些具體例中，本文提供的抗體包含IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恆定域。人類重鏈恆定域的序列為技藝中所熟知(參見例如Kabat,E.A.,et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生及公共服務部，NIH公開資料第91-3242號以及可在www.imgt.org取得的IMGT數據庫)。
在一些具體例中，所測試抗體包含經修飾Fc域(例如，改變Fc與Fc受體之間交互作用的突變)。例如，在一些具體例中，本文提供之抗體包含在下列位置對其Fc域的修飾：235、236、237、239、265、267、268、269、270、298、326、327、330、332、350、351、366、392、394，405及/或407(使用EU編號系統)。在一些具體例中，修飾選自由下列組成之群：L235A、G236E、G237F、S239E、S239D、D265E、D265S、S267E、S267D、S267G、H268E、H268D、E269L、D270N、D270E、S298A、K326A、K326D、 A327H、A327V、A327L、A330I、A330S、I332E、T350V、L351Y、T366L、K392M、K392L、T394W，F405A及/或Y407V(使用EU編號系統)。在一些具體例中，該等抗體包含多個對其Fc域的修飾。在一些具體例中，多個修飾選自由下列組成之群：D270N/K326D、S239E/S298A/K326A/A327H、L235A/S239E/D265E/A327H、G236E/G237F/S239E、G237F/S239E/D265E、G327F/S239E/H268D、G236E/D270N/A327V/I332E、G237F/S239E/A327H、G237F/A327L/A330I、S239D/D265S/S298A/I332E、S239E/D265S/H268D/I332E、S239E/D265S/I332E、S239E/S267E/H268D、S239E/A327L/A330I、D265E/S267D/A330S、S267G/H268E/D270E、H268D/E269L/S298A/K326A/A327H、H268D//K326A/A327H。其他Fc修飾以及Fc修飾的組合提供於下列美國專利中：第5,624,821號、第5,648,260號、第6,528,624號、第6,737,056號、第7,122,637號、第7,183,387號、第7,297,775號、第7,317,091號、第7,332,581號、第7,632,497號、第7,662,925號、第7,695,936號、第8,093,359號、第8,216,805號、第8,218,805號、第8,388,955號與第8,937,158號，以及以下美國專利公開中：第2005/0054832號、第2006/0222653號、第2006/0275282號、第2006/0275283號、第2007/0190063號、第2008/0154025號、第2009/0042291號、第2013/0108623號與第2013/0089541號，其各自以引用的方式併入。
在一些具體例中，所測試抗體為雙特異性抗體。在一些具體例中，雙特異性抗體的兩個抗原結合域具有不同的重鏈可變域但具有相同的輕鏈可變域。在一些具體例中，重鏈的Fc域包含修飾以促使重鏈雜二聚體形成及/或抑制重鏈同二聚體形成。例如在美國專利案第5,731,168號、第5,807,706號、第5,821,333號、第7,642,228號與第8,679,785號，以及在美國專利公開第2013/0195849號中提供此等修飾，其各自以引用的方式併入。
在一些具體例中，在本文提供之方法中所測試的抗體具有人類輕鏈可變域。在一些具體例中，輕鏈可變域為λ輕鏈可變域。在一些具體例中，輕鏈可變域為κ輕鏈可變域。在一些具體例中，抗體具有人類輕鏈恆定域。在一些具體例中，輕鏈恆定域為λ輕鏈恆定域。在一些具體例中，輕鏈恆定域為κ輕鏈恆定域。人類輕鏈恆定域的序列為技藝中熟知(參見例如 Kabat,E.A.,et al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，美國衛生及公共服務部，NIH公開資料第91-3242號以及可在www.imgt.org取得的IMGT數據庫)。
在某些具體例中，治療藥劑作為醫藥組合物的一部份被投與給本文提供之囓齒動物，醫藥組合物為例如含有人類抗體或Fc融合蛋白與醫藥上可接受載劑一起調配的醫藥組合物。
本文提供的醫藥組合物可經特別調配以供呈固體或液體形式投藥，包括那些適用於下列者：(1)經口投藥，例如灌藥(水性或非水性溶液或懸浮液)、錠劑，例如那些針對經頰、舌下與全身性吸收、食團、粉劑、顆粒劑、糊劑以施用至舌；或(2)非經腸投藥，例如透過皮下、肌肉內、靜脈內或硬膜上注射，作為例如無菌溶液或懸浮液，或持續釋放調配物。
適於非經腸投藥的醫藥組合物包含人類抗體或Fc融合蛋白組合一或多種醫藥上可接受無菌等張水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液，或無菌粉劑，其可在使用前被還原至無菌可注射溶液或分散液中，其可含有糖、醇、抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、使調配物與預期接受者的血液等張的溶質或懸浮或增稠劑。
可在本文提供之醫藥組合物中採用的適宜水性與非水性載劑實例包括水、乙醇、多元醇(諸如甘油、丙二醇、聚乙二醇以及類似物)及其適當混合物、植物油(諸如橄欖油)，以及可注射有機酯(諸如油酸乙酯)。例如可透過使用包衣材料(諸如卵磷脂)，藉由在分散液的情況下維持所需粒徑並透過使用界面活性劑來維持適當流動性。
在某些具體例中，就適於預期劑量來說，組合物包含呈w/v濃度的人類抗體或Fc融合蛋白。抗體可以依下列濃度存在於組合物中：至少1mg/mL、至少5mg/mL、至少10mg/mL、至少15mg/mL、至少20mg/mL、至少25mg/mL、至少30mg/mL、至少35mg/mL、至少40mg/mL、至少45mg/mL、至少50mg/mL、至少55mg/mL、至少60mg/mL、至少65mg/mL、至少70mg/mL、至少75mg/mL、至少80mg/mL、至少85mg/mL、至少90mg/mL、至少95mg/mL、至少100mg/mL、至少105mg/mL、至少110mg/mL、至少115mg/mL、至少120mg/mL、至少125mg/mL、至少130mg/mL、至少 135mg/mL、至少140mg/mL、至少150mg/mL、至少200mg/mL、至少250mg/mL，或至少300mg/mL。
在一些具體例中，透過將人類抗體或Fc融合蛋白與視情況選用之生理上可接受載劑、賦形劑或安定劑混合來製備呈具有預期最終濃度之凍乾組合物或水性溶液形式的組合物，生理上可接受載劑、賦形劑或安定劑包括，但不限於緩衝劑、醣類、鹽、界面活性劑、增溶劑、多元醇、稀釋劑、黏合劑、安定劑、鹽、親脂性溶劑、胺基酸、螯合劑、防腐劑或類似物(Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,12th edition,L.Brunton,et al.and Remington's Pharmaceutical Sciences,16th edition,Osol,A.Ed.(1999))。可接受載劑、賦形劑或安定劑在所採用的劑量與濃度下對接受者無毒，且包括緩衝劑，諸如組胺酸、磷酸鹽、檸檬酸、甘胺酸、乙酸以及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸與甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲基氯化銨；羥基氯苯胺；氯化本索寧；苯酚、丁基或苄基醇；對羥苯甲酸烷基酯，諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇以及m-甲酚)；低分子量(低於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣以及其他碳水化合物，包括海藻糖、葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子性界面活性劑，諸如TWEEN、聚山梨醇酯80、PLURONICS®或聚乙二醇(PEG)。
在一些具體例中，緩衝劑為組胺酸、檸檬酸、磷酸鹽、甘胺酸或乙酸。醣類賦形劑可以是海藻糖、蔗糖、山梨醇、麥芽糖或棉子糖。界面活性劑可以是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯80或Pluronic F68。鹽可以是NaCl、KCl、MgCl2或CaCl2。
在一些具體例中，組合物包含緩衝或pH調節劑以提供改善pH控制。這樣的一個組合物具有下列的pH：介於約3.0與約9.0、介於約4.0與約8.0、介於約5.0與約8.0、介於約5.0與約7.0、介於約5.0與約6.5、介於 約5.5與約8.0、介於約5.5與約7.0，或介於約5.5與約6.5。在又一個具體例中，這樣的一個組合物有下列的pH：約3.0、約3.5、約4.0、約4.5、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5、約5.6、約5.7、約5.8、約5.9、約6.0、約6.1、約6.2、約6.3、約6.4、約6.5、約6.6、約6.7、約6.8、約6.9、約7.0、約7.5、約8.0、約8.5或約9.0。在一個特定具體例中，組合物具有約6.0的pH。習於技藝者了解，組合物的pH通常不等於要在組合物中使用之人類抗體或Fc融合蛋白的等電點。典型地，緩衝劑是由有機或無機酸或有機或無機鹼製備的鹽類。代表性緩衝劑包括，但不限於有機酸鹽，諸如檸檬酸、抗壞血酸、葡萄糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或酞酸的鹽；Tris、三羥甲基胺基甲烷鹽酸鹽或磷酸鹽緩衝劑。此外，胺基酸組份也可以在緩衝力方面發揮作用。可用於組合物中作為緩衝劑的代表性胺基酸組份包括，但不限於甘胺酸與組胺酸。在某些具體例中，緩衝劑是選自組胺酸、檸檬酸、磷酸、甘胺酸與乙酸。在一個特定具體例中，緩衝劑為組胺酸。在另一個特定具體例中，緩衝劑為檸檬酸。在又另一個特定具體例中，緩衝劑為甘胺酸。緩衝劑的純度應為至少98%，或至少99%，或至少99.5%。如本文所用，術語「純度」在組胺酸以及甘胺酸的情況下意指組胺酸或甘胺酸的化學純度，如同技藝中所了解，例如如在The Merck Index,13th ed.,O'Neil et al.ed.(Merck & Co.,2001)中所述。
在某些具體例中，組合物包含組胺酸作為緩衝劑。在某些具體例中，組胺酸以下列濃度存在於組合物中：至少約1mM、至少約5mM、至少約10mM、至少約20mM、至少約30mM、至少約40mM、至少約50mM、至少約75mM、至少約100mM、至少約150mM，或至少約200mM組胺酸。在另一個具體例中，組合物包含介於約1mM與約200mM、介於約1mM與約150mM、介於約1mM與約100mM、介於約1mM與約75mM、介於約10mM與約200mM、介於約10mM與約150mM、介於約10mM與約100mM、介於約10mM與約75mM、介於約10mM與約50mM、介於約10mM與約40mM、介於約10mM與約30mM、介於約20mM與約75mM、介於約20mM與約50mM、介於約20mM與約40mM，或介於約20mM與約30mM組胺酸。在又一個具體例中，組合物包含約1mM、約5mM、約10mM、約20mM、 約25mM、約30mM、約35mM、約40mM、約45mM、約50mM、約60mM、約70mM、約80mM、約90mM、約100mM、約150mM或約200mM組胺酸。在一個特定具體例中，組合物可包含約10mM、約25mM或無組胺酸。
在一些具體例中，組合物包含碳水化合物賦形劑。碳水化合物賦形劑可以扮演例如作為黏度增強劑、安定劑、增積劑、增溶劑及/或類似者。碳水化合物賦形劑通常以重量或體積計介於約1%至約99%存在，例如介於約0.1%至約20%、介於約0.1%至約15%、介於約0.1%至約5%、介於約1%至約20%、介於約5%至約15%、介於約8%至約10%、介於約10%與約15%、介於約15%與約20%、介於0.1%至20%、介於5%至15%、介於8%至10%、介於10%與15%、介於15%與20%、介於約0.1%至約5%、介於約5%至約10%，或介於約15%至約20%。在又其他特定具體例中，碳水化合物賦形劑以1%、或以1.5%、或以2%、或以2.5%、或以3%、或以4%、或以5%、或以10%、或以15%或以20%存在。
在某些具體例中，組合物包含碳水化合物賦形劑。適用於組合物的碳水化合物賦形劑包括，但不限於單醣，諸如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖與類似物；雙醣，諸如乳醣、蔗糖、海藻糖、纖維二糖與類似物；聚醣，諸如棉子糖、松三糖、麥芽糊精、聚葡萄糖、澱粉與類似物；以及醛糖醇，諸如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳醣醇、木糖醇山梨糖醇(葡萄醣醇)與類似物。在某些具體例中，用於本文提供之組合物中的碳水化合物賦形劑選自蔗糖、海藻糖、乳糖、甘露醇與棉子糖。在一個特定具體例中，碳水化合物賦形劑為海藻糖。在另一個特定具體例中，碳水化合物賦形劑為甘露醇。在又另一個特定具體例中，碳水化合物賦形劑為蔗糖。在又另一個特定具體例中，碳水化合物賦形劑為棉子糖。碳水化合物賦形劑的純度應為至少98%、或至少99%或至少99.5%。
在一些具體例中，組合物包含海藻糖。在某些具體例中，組合物包含至少約1%、至少約2%、至少約4%、至少約8%、至少約20%、至少約30%或至少約40%海藻糖。在另一個具體例中，組合物包含介於約1%與約40%、介於約1%與約30%、介於約1%與約20%、介於約2%與約40%、介於約2%與約30%、介於約2%與約20%、介於約4%與約40%、介於約4% 與約30%，或介於約4%與約20%海藻糖。在又一個具體例中，組合物包含約1%、約2%、約4%、約6%、約8%、約15%、約20%、約30%或約40%海藻糖。在一個特定具體例中，組合物包含約4%、約6%或約15%海藻糖。
在某些具體例中，組合物包含賦形劑。在一個特定具體例中，組合物包含至少一個選自下列的賦形劑：糖、鹽、界面活性劑、胺基酸、多元醇、螯合劑、乳化劑與防腐劑。在某些具體例中，組合物包含鹽，例如選自下列的鹽：NaCl、KCl、CaCl2與MgCl2。在一個特定具體例中，組合物包含NaCl。
在一些具體例中，組合物包含胺基酸，例如離胺酸、精胺酸、甘胺酸、組胺酸或胺基酸鹽。組合物可包含至少約1mM、至少約10mM、至少約25mM、至少約50mM、至少約100mM、至少約150mM、至少約200mM、至少約250mM、至少約300mM、至少約350mM，或至少約400mM胺基酸。在另一個具體例中，組合物可包含介於約1mM與約100mM、介於約10mM與約150mM、介於約25mM與約250mM、介於約25mM與約300mM、介於約25mM與約350mM、介於約25mM與約400mM、介於約50mM與約250mM、介於約50mM與約300mM、介於約50mM與約350mM、介於約50mM與約400mM、介於約100mM與約250mM、介於約100mM與約300mM、介於約100mM與約400mM、介於約150mM與約250mM、介於約150mM與約300mM，或介於約150mM與約400mM胺基酸。在又一個具體例中，組合物包含約1mM、1.6mM、25mM、約50mM、約100mM、約150mM、約200mM、約250mM、約300mM、約350mM，或約400mM胺基酸。
在一些具體例中，組合物包含界面活性劑。如本文所用，術語「界面活性劑」意指具有兩親結構的有機物質；亦即，它們由相反溶解傾向的基團組成，通常是油溶性烴鏈和水溶性離子基團。界面活性劑可分為陰離子，陽離子和非離子界面活性劑，這取決於界面活性部分的電荷。界面活性劑通常用作為各種醫藥組合物與製備生物材料用的潤濕劑、乳化劑、增溶劑和分散劑。醫藥上可接受的界面活性劑如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或80)；泊洛沙姆(polyxamer)(例如泊洛沙姆188)；Triton；辛基糖 苷鈉；月桂基-、肉荳蔻基-、亞麻仁油基-或硬脂基-磺基甜菜鹼；月桂基-、肉荳蔻基-、亞麻仁油基-或硬脂基-肌胺酸；亞麻仁油基-、肉荳蔻基-、或十六基-甜菜鹼；月桂醯胺基丙基-、椰油醯胺基丙基-、亞麻仁油醯胺基丙基-、肉荳蔻醯胺基丙基-、棕櫚醯胺基丙基-或異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺丙基)；肉荳蔻醯胺基丙基-、棕櫚醯胺基丙基-或異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺；甲基椰油醯基鈉，或甲基油基-牛磺酸二鈉；和MONAQUA®系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)、聚乙二醇、聚丙二醇，以及乙烯和丙二醇的共聚物(例如，PLURONICS®PF68等)，可視情況加入組合物中以減少聚集。在某些具體例中，組合物包含聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯40、聚山梨醇酯60或聚山梨醇酯80。如果使用泵或塑料容器來施用組合物，則界面活性劑尤其有用。醫藥上可接受界面活性劑的存在減少蛋白質聚集的傾向。組合物可包含聚山梨醇酯，其濃度範圍介於約0.001%至約1%，或約0.001%至約0.1%，或約0.01%至約0.1%。在其他特定具體例中，組合物包含聚山梨醇酯，其濃度為0.001%、或0.002%、或0.003%、或0.004%、或0.005%、或0.006%、或0.007%、或0.008%、或0.009%、或0.01%、或0.015%或0.02%。
在一些具體例中，組合物包含其他賦形劑及/或添加劑，包括但不限於稀釋劑、黏合劑、安定劑、親脂性溶劑、防腐劑、佐劑或類似物。醫藥上可接受賦形劑及/或添加劑可用於本文提供的組合物中。視情況將常用的賦形劑/添加劑(例如醫藥上可接受螯合劑，例如但不限於EDTA、DTPA或EGTA)加入組合物中以減少聚集。如果使用泵或塑料容器來施用組合物，這些添加劑尤其有用。
在一些具體例中，組合物包含防腐劑。防腐劑(例如苯酚、間甲酚、對甲酚、鄰甲酚、氯甲酚、苄醇、亞硝酸苯基汞、苯氧基乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化鎂(例如但不限於六水合物)、對羥基苯甲酸烷基(甲基、乙基、丙基、丁基等)酯、苯扎氯銨、苄索氯銨，脫氫乙酸鈉和硫柳汞，或其混合物可視情況以任何適宜濃度加入組合物中，例如介於約0.001%至約5%，或其中的任何範圍或數值。組合物中使用的防腐劑濃度是足以產生微生物效應的濃度。這樣的濃度取決於所選擇的防腐劑，並且容易由技術人員所決定。
在一些具體例中，組合物與人類血液等張，其中組合物具有與人類血液基本上相同的滲透壓。這些等張組合物通常將會具有約250mOSm至約350mOSm的滲透壓。等張性可以透過例如使用蒸氣壓或冰冷型滲透壓計來測量。透過使用張力調節劑來調整組合物的張力。「張力調節劑」是那些可以被加入組合物中以提供組合物等張性的醫藥上可接受惰性物質。適用於本文提供之組合物的張力調節劑包括但不限於醣，鹽和胺基酸。
在某些具體例中，組合物是無熱原組合物，其基本上不含內毒素及/或相關的致熱物質。內毒素包括限制在微生物內的毒素，並且僅在微生物分解或死亡時被釋放。致熱物質還包括來自細菌和其他微生物外膜的發熱誘導的熱穩定物質。如果被投與人類，這兩種物質都可引起發熱、低血壓和休克。基於潛在的有害效應，必須從靜脈內投與的藥物溶液中移除少量的內毒素。食品藥物管理局(「FDA」)針對靜脈內藥物注射的單一小時時段內，每劑量每千克體重設定5個內毒素單位(EU)為上限(The United States Pharmacopeial Convention,Pharmacopeial Forum 26(1)：223(2000))。當治療性蛋白以每千克體重數百或數千毫克的量投與時，如感興趣的蛋白質(例如抗體)的情況一樣，甚至必須移除痕量的有害和危險內毒素。在一些具體例中，組合物中的內毒素和熱原含量少於10EU/mg，或少於5EU/mg，或少於1EU/mg、或少於0.1EU/mg、或少於0.01EU/mg，或少於0.001EU/mg。
當用於活體內投藥時，本文所述的組合物應是無菌的。組合物可以透過各種滅菌方法滅菌，包括無菌過濾、輻射等。在某些具體例中，用預先滅菌的0.22微米過濾器對組合物進行過濾滅菌。注射用無菌組合物可根據如「Remington：The Science & Practice of Pharmacy」，第21版，Lippincott Williams & Wilkins,(2005)中所述的常規醫藥實務來調配。包含感興趣蛋白質(例如抗體)的組合物(諸如本文揭示的那些)通常以凍乾形式或溶液形式儲存。預期將包含感興趣蛋白質(例如抗體)的無菌組合物置入具有無菌進入口的容器中，例如具有允許取出組合物的適配器(例如可透過皮下注射針頭刺穿的塞子)的靜脈內溶液袋或小瓶。在某些具體例中，以預填充注射器提供組合物。
在某些具體例中，組合物為凍乾調配物。術語「凍乾」或「冷凍乾燥」包括已進行乾燥程序(諸如冷凍乾燥)的物質狀態，其中已移除至少50%水氣。
不論所選定的投與路徑為何，本文提供的藥劑(其可呈適宜水合形式來使用)及/或本文提供的醫藥組合物可以透過習於技藝者熟知的方法被調配成醫藥上可接受劑型。
在本文提供的方法中，人類抗體、Fc融合蛋白及/或醫藥組合物可以透過任何適宜的投藥路徑遞送，包括經口、經鼻(例如藉由噴霧)、直腸、陰道內、非經腸、腦池內與局部(如藉由粉劑，軟膏或滴劑，包括經頰和舌下)。在某些具體例中，通常(例如，透過經口或非經腸投藥)遞送醫藥組合物。
在某些具體例中，活性成份在本文所述之醫藥組合物中的實際劑量含量可能會改變，以為了確定在動物模型中有效達到預期治療反應、組合物和投藥模式的活性成份量，而不會在動物模型中產生毒性。
例如，在某些具體例中，本文所述之非人類動物被用來決定一或多個人類抗體候選物的藥動學概況。在不同具體例中，如本文所述之一或多種非人類動物以及一或多種對照或參考非人類動物各自暴露於一或多種呈不同劑量的人類抗體(例如0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.3mg/kg、0.4mg/kg、0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/mg、7.5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg或更多)。候選治療性抗體可以經由任何預期投藥路徑被給藥，包括非經腸和非-非經腸投藥路徑。非經腸路徑包括例如靜脈內、動脈內、門靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、脊柱內、鞘內、腦室內、顱內、胸膜內或其他注射路徑。非-非經腸路徑包括例如經口、經鼻、穿皮、肺、直腸、經頰、陰道、眼部。投藥還可以透過連續輸注、局部給藥、從植入物(膠，膜或類似物)持續釋放及/或靜脈內注射。在不同的時間點(例如0小時、6小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天，或至多30天或更多天)從非人類動物(人類化和對照)分離血液。可以使用如本文所述的非 人類動物獲得的樣品進行各種分析以確定所投與的候選治療性抗體的藥動學概況，包括但不限於總IgG、抗治療性抗體反應、凝集等。
在不同具體例中，如本文所述的非人類動物用於測量感興趣多肽阻斷或調節活性的治療效果，以及由於細胞變化對基因表現的影響，或者在受體多肽的情況下，非人動物細胞中細胞表面上的受體多肽密度。在不同具體例中，將如本文所述的非人類動物或自其分離的細胞暴露於結合感興趣多肽的候選治療劑，在隨後一段時間後，分析與該感興趣多肽相關的特定細胞過程的影響，例如配位體-受體交互作用或信號轉導。
如本文所述之非人類動物提供了改良的活體內系統，供用於開發和篩選用於腫瘤學及/或傳染病的人類抗體。在不同具體例中，如本文所述之非人類動物和對照非人類動物(例如，具有與如本文所述不同的遺傳修飾或無遺傳修飾，即野生型)可以被移植腫瘤(或腫瘤細胞)或感染病毒(例如流感、HIV、HCV、HPV等)。移植感染後，可以投與非人類動物候選治療劑。在投與候選治療劑之前，可允許腫瘤或病毒有足夠的時間在非人類動物體內的一個或多個位置建立。或者及/或另外，可以在這樣的非人類動物中監測免疫反應，以便特徵鑑定和篩選可以開發作為治療劑的潛在人類抗體。
在某些態樣中，本文提供使用囓齒動物(例如小鼠或大鼠)製造人類抗體的方法，該囓齒動物包含本文提供的人類化重鏈基因座及本文提供的人類輕鏈基因座(例如本文提供的人類化κ及/或λ輕鏈基因座)。在一些具體例中，囓齒動物進一步包含本文提供之人類化CD79a基因座及/或本文提供之人類化CD79b基因座。在一些具體例中，囓齒動物進一步包含本文提供之人類化FcRn基因座及/或本文提供之人類化β2M基因座。在某些具體例中，囓齒動物進一步包含本文提供之人類化FcγR1a基因座。在一些具體例中，囓齒動物進一步包含本文提供之人類化FcεR1α基因座。在一些具體例中，囓齒動物進一步包含本文提供之人類化FcγR2b基因座、本文提供之人類化FcγR2c基因座、本文提供之人類化FcγR3a基因座，及/或本文提供之人類化FcγR3b基因座。
本文提供之囓齒動物可用於使用技藝中已知的標準方法製造抗體(例如人類抗體)。舉例來說，在一些具體例中，本文提供之囓齒動物在足以使囓齒動物對感興趣目標抗原產生免疫反應的條件和時間下用感興趣抗原予以免疫。在一些具體例中，感興趣抗原是人類抗體(例如人類治療性抗體)或Fc融合蛋白(例如治療性Fc融合蛋白)。自囓齒動物(或一或多個細胞，例如一或多個B細胞)分離抗體，並使用各種測量例如親和力、特異性、表位定位、阻斷配體-受體交互作用的能力、抑制受體活化等的分析來進行特徵鑑定。
在一些具體例中，提供在囓齒動物(例如小鼠或大鼠)中產生抗體的方法，該方法包括以下步驟：(a)用感興趣抗原免疫產生如本文所述之產生人類抗體的囓齒動物、(b)在足以使囓齒動物對感興趣抗原產生免疫反應的條件下保持囓齒動物，以及(c)從囓齒動物或囓齒動物細胞回收結合感興趣抗原的抗體。在一些具體例中，該方法進一步包括在囓齒動物體內破壞對抗原的免疫耐受性或以其他方式刪除感興趣抗原，例如採用多個引導RNA的CRISPR/Cas9系統來減少或消除與囓齒動物接受免疫之感興趣抗原同源或共享感興趣表位的自體抗原表現(例如，如美國專利公開第2017/0332610號中所述，併入作為參考資料)。
在一些具體例中，提供在囓齒動物中產生編碼人類重鏈及/或輕鏈的核酸的方法，該方法包括以下步驟：(a)用感興趣抗原免疫表現如本文所述之人類抗體的囓齒動物、(b)將囓齒動物保持在足以使囓齒動物對感興趣抗原產生免疫反應的條件下，以及(c)從囓齒動物或囓齒動物細胞中回收編碼人類重鏈及/或輕鏈的核酸。
在一些具體例中，本文提供的囓齒動物可用於製造抗藥物抗體(例如，抗個體基因型抗體)。例如，在一些具體例中，本文提供的囓齒動物在足以使囓齒動物對所述人類治療性抗體產生免疫反應的條件和時間下用人類治療性抗體予以免疫。在一些具體例中，人類治療性抗體具有與由本文提供之囓齒動物的人類化免疫球蛋白重鏈基因座編碼的重鏈恆定域相同的重鏈恆定域。在一些具體例中，人類治療性抗體具有與由本文提供之囓齒動物的人類化免疫球蛋白輕鏈基因座(例如人類化κ及/或λ輕鏈基因座) 編碼的輕鏈恆定域相同的輕鏈恆定域。在一些具體例中，囓齒動物在其基因體內不包含衍生治療性抗體的一個或多個人類可變區基因段(例如，囓齒動物中的一或多個免疫球蛋白基因座包含囓齒動物可變區或其部分)。從囓齒動物(或一或多個細胞，例如一或多個B細胞)分離抗藥物抗體(例如，抗個體基因型抗體)，並使用各種測量例如親和力、特異性、表位定位、阻斷抗原-治療性抗體交互作用的能力等的分析來進行特徵鑑定。所產生的抗藥物抗體(例如抗個體基因型抗體)可用於人類治療性抗體的藥動學(PK)分析，或用來分析人類治療性抗體在臨床前分析期間的免疫原性，或用來定位人類治療性抗體。
在一些具體例中，提供在囓齒動物(例如，小鼠或大鼠)中產生抗藥物抗體(例如，抗個體基因型抗體)的方法，該方法包括以下步驟：(a)用與囓齒動物中存在之人類恆定區同型匹配的人類治療性抗體免疫如本文所述之產生包含人類恆定區之抗體的囓齒動物、(b)在足以使囓齒動物對人類治療性抗體產生免疫反應的條件下維持囓齒動物，以及(c)從囓齒動物或囓齒動物細胞中回收結合人類治療性抗體的抗體。
在某些態樣中，本文提供製造包含本文提供之一或多個經遺傳修飾基因座的非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法。例如，在一些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如，小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞包含本文提供之人類化重鏈基因座及/或本文提供之人類輕鏈基因座(例如，本文提供之人類化κ及/或λ輕鏈基因座)。在一些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞進一步包含本文提供之人類化CD79a基因座及/或本文提供之人類化CD79b基因座。在一些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞進一步包含本文提供之人類化FcRn基因座及/或本文提供之人類化β2M基因座。在一些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞進一步包含本文提供之人類化FcRγ1α基因座。在某些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非 人類動物及ES細胞進一步包含本文提供之人類化FcγR1a基因座。在一些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞進一步包含本文提供之人類化FcεR1α基因座。在一些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞進一步包含本文提供之人類化FcγR2a基因座、本文提供之人類化FcγR2b基因座、本文提供之人類化FcγR2c基因座、本文提供之人類化FcγR3a基因座，及/或本文提供之人類化FcγR3b基因座。在某些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞包含本文提供之人類化FcRn基因座及/或本文提供的人類化β2M基因座。在某些具體例中，本文提供製造非人類動物(例如小鼠或大鼠)及ES細胞的方法，該非人類動物及ES細胞包含本文提供之人類化FcγR1α基因座。本文提供之製造經遺傳修飾非人類動物與ES細胞的例示性方法描述於本文的發明說明、實例及/或圖式中。
本文提供包裝或套組，其包含一個或多個容器，填充有如本文發明說明、實例及/或圖式中所述之至少一種非人類動物、非人類細胞，DNA片段及/或靶向載體。套組可以用於任何適用的方法(例如研究方法)。視情況與這些容器相關聯的可以是由管理藥品或生物製品的製造，使用或銷售的政府機構規定形式的貼示，該貼示反映(a)該機構批准製造，使用或銷售供人類給藥、(b)使用說明書、(c)管理兩個或多個實體及其組合之間的材料及/或生物製品(例如本文所述的非人類動物或非人類細胞)轉移的合約書。
在例示性具體例1中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含VH基因段，DH基因段和JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含編碼IgG恆定域的CH基因段，該IgG恆定域包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域和IgG細胞質域，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆 定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自VH基因段、DH基因段和JH基因段的可變域和衍生自CH基因段的重鏈恆定域。
在例示性具體例2中，本文提供具體例1之囓齒動物，其中IgG跨膜域為囓齒動物IgG跨膜域。
在例示性具體例3中，本文提供具體例1之囓齒動物，其中IgG跨膜域為人類IgG跨膜域。
在例示性具體例4中，本文提供具體例1至3中任一項之囓齒動物，其中IgG細胞質域為囓齒動物IgG細胞質域。
在例示性具體例5中，本文提供具體例1至3中任一項之囓齒動物，其中IgG細胞質域為人類IgG細胞質域。
在例示性具體例6中，本文提供具體例1至5中任一項之囓齒動物，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域與人類CH3域為IgG1域。
在例示性具體例7中，本文提供具體例6之囓齒動物，其中IgG1域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04以及IGHG1*05。
在例示性具體例8中，本文提供具體例1至5中任一項之囓齒動物，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域與人類CH3域為IgG2域。
在例示性具體例9中，本文提供具體例8之囓齒動物，其中IgG2域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05以及IGHG2*06。
在例示性具體例10中，本文提供具體例1至5中任一項之囓齒動物，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域與人類CH3域為IgG3域。
在例示性具體例11中，本文提供具體例10之囓齒動物，其中IgG3域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17，IGHG3*18以及IGHG3*19。
在例示性具體例12中，本文提供具體例1至5中任一項之囓齒動物，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域與人類CH3域為IgG4域。
在例示性具體例13中，本文提供具體例12之囓齒動物，其中IgG4域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03以及IGHG4*04。
在例示性具體例14中，本文提供具體例6至13中任一項之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ2a或Cγ2c基因段基因座處。
在例示性具體例15中，本文提供具體例14之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ2a或Cγ2c基因段。
在例示性具體例16中，本文提供具體例6至13中任一項之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ1基因段基因座處。
在例示性具體例17中，本文提供具體例16之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ1基因段。
在例示性具體例18中，本文提供具體例6至13中任一項之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ2b基因段基因座處。
在例示性具體例19中，本文提供具體例18之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ2b基因段。
在例示性具體例20中，本文提供具體例6至13中任一項之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ3基因段基因座處。
在例示性具體例21中，本文提供具體例20之囓齒動物，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ3基因段。
在例示性具體例22中，本文提供具體例1至21中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cμ基因段。
在例示性具體例23中，本文提供具體例1至21中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cμ基因段。
在例示性具體例24中，本文提供具體例1至23中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cδ基因段。
在例示性具體例25中，本文提供具體例1至23中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cδ基因段。
在例示性具體例26中，本文提供具體例1至25中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ1基因段。
在例示性具體例27中，本文提供具體例1至26中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段。
在例示性具體例28中，本文提供具體例1至27中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ2b基因段。
在例示性具體例29中，本文提供具體例1至28中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ3基因段。
在例示性具體例30中，本文提供具體例1至29中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cε基因段。
在例示性具體例31中，本文提供具體例1至29中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例32中，本文提供具體例1至31中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cα基因段。
在例示性具體例33中，本文提供具體例1至31中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例34中，本文提供具體例1至21中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段及人類Cγ1基因段。
在例示性具體例35中，本文提供具體例34之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段及人類Cγ4基因段。
在例示性具體例36中，本文提供具體例34或具體例35之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例37中，本文提供具體例34至36中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例38中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含VH基因段，DH基因段和JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含編碼IgM恆定域的CH基因段，該IgM恆定域包含人類CH1域、人類CH2域、人類CH3域、人類CH4域、人類IgM跨膜域和IgM細胞質域，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgM抗體，該抗體包含衍生自VH基因段、DH基因段和JH基因段的可變域和衍生自CH基因段的重鏈恆定域。
在例示性具體例39中，本文提供具體例38之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cδ基因段。
在例示性具體例40中，本文提供具體例38或39之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ3基因段。
在例示性具體例41中，本文提供具體例38至40中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ1基因段。
在例示性具體例42中，本文提供具體例38至41中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段。
在例示性具體例43中，本文提供具體例38至42中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ4基因段
在例示性具體例44中，本文提供具體例38至43中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段及人類Cγ1基因段。
在例示性具體例45中，本文提供具體例44之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段及人類Cγ4基因段。
在例示性具體例46中，本文提供具體例44或具體例45之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例47中，本文提供具體例44至46中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例48中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含VH基因段，DH基因段和JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含編碼IgD恆定域的CH基因段，該IgD恆定域包含人類CH1域、人類鉸鏈H1域、人類鉸鏈H2域、人類CH2域、人類CH3域、人類IgD跨膜域和人類IgD細胞質域，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgD抗體，該抗體包含衍生自VH基因段、DH基因段和JH基因段的可變域和衍生自CH基因段的重鏈恆定域。
在例示性具體例49中，本文提供具體例48之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cμ基因段。
在例示性具體例50中，本文提供具體例48或49之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ3基因段。
在例示性具體例51中，本文提供具體例48至50中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ1基因段。
在例示性具體例52中，本文提供具體例48至51中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段。
在例示性具體例53中，本文提供具體例48至52中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ4基因段。
在例示性具體例54中，本文提供具體例48至53中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段及人類Cγ1基因段。
在例示性具體例55中，本文提供具體例54之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段及人類Cγ4基因段。
在例示性具體例56中，本文提供具體例54或具體例55之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例57中，本文提供具體例54至56中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例58中，本文提供具體例1至57中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物內含子性增強子(Ei)。
在例示性具體例59中，本文提供具體例1至57中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類內含子性增強子(Ei)。
在例示性具體例60中，本文提供具體例1至59中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物3'調節區(3'RR)。
在例示性具體例61中，本文提供具體例1至5中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類3'調節區(3'RR)。
在例示性具體例62中，本文提供具體例1至61中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物Sμ切換位點。
在例示性具體例63中，本文提供具體例1至62中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物Sγ3切換位點。
在例示性具體例64中，本文提供具體例1至63中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物Sγ1切換位點。
在例示性具體例65中，本文提供具體例1至64中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物Sγ2b切換位點。
在例示性具體例66中，本文提供具體例1至65中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物Sγ2a及/或Sγ2c切換位點。
在例示性具體例67中，本文提供具體例1至66中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物Sε切換位點。
在例示性具體例68中，本文提供具體例1至67中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個囓齒動物Sα切換位點。
在例示性具體例69中，本文提供具體例1至61中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類Sμ切換位點。
在例示性具體例70中，本文提供具體例1至61與69中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類Sγ3切換位點。
在例示性具體例71中，本文提供具體例1至61及69至70中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類Sγ1切換位點。
在例示性具體例72中，本文提供具體例1至61及69至71中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類Sγ2切換位點。
在例示性具體例73中，本文提供具體例1至61及69至72中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類Sγ4切換位點。
在例示性具體例74中，本文提供具體例1至61及69至73中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類Sε切換位點。
在例示性具體例75中，本文提供具體例1至61及69至74中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含一個人類Sα切換位點。
在例示性具體例76中，本文提供具體例1至75中任一項之囓齒動物，其中VH基因段為囓齒動物VH基因段，DH基因段為囓齒動物DH基因段而JH基因段為囓齒動物JH基因段。
在例示性具體例77中，本文提供具體例76之囓齒動物，其中囓齒動物VH基因段、囓齒動物DH基因段以及囓齒動物JH基因段為內源性囓齒動物基因段。
在例示性具體例78中，本文提供具體例1至75中任一項之囓齒動物，其中VH基因段為人類VH基因段，DH基因段為人類DH基因段而JH基因段為人類JH基因段。
在例示性具體例79中，本文提供具體例78之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈可變區包含至少3個人類VH基因段。
在例示性具體例80中，本文提供具體例78或具體例79之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈可變區包含所有人類DH基因段。
在例示性具體例81中，本文提供具體例78至80中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈可變區包含所有人類JH基因段。
在例示性具體例82中，本文提供具體例78至81中任一項之囓齒動物，其中免疫球蛋白重鏈可變區缺少功能性內源性囓齒動物Adam6基因。
在例示性具體例83中，本文提供具體例78至82中任一項之囓齒動物，其中生殖系基因體進一步包含編碼功能性囓齒動物Adam6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在例示性具體例84中，本文提供具體例83之囓齒動物，其中表現功能性囓齒動物Adam6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段。
在例示性具體例85中，本文提供具體例83或具體例84之囓齒動物，其中編碼囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被納入與免疫球蛋白重鏈可變區相同的染色體上。
在例示性具體例86中，本文提供具體例83至85中任一項之囓齒動物，其中編碼囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被納入與經改造免疫球蛋白重鏈基因座相同的染色體上。
在例示性具體例87中，本文提供具體例83至86中任一項之囓齒動物，其中其中編碼囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列取代人類Adam6假基因。
在例示性具體例88中，本文提供具體例83至87中任一項之囓齒動物，其中編碼囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列取代人類Adam6假基因。
在例示性具體例89中，本文提供具體例83至88中任一項之囓齒動物，其中編碼囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列介於第一人類VH基因段以及第二人類VH基因段之間。
在例示性具體例90中，本文提供具體例89之囓齒動物，其中第一人類VH基因段為VH1-2而第二人類VH基因段為VH6-1。
在例示性具體例91中，本文提供具體例83至86中任一項之囓齒動物，其中編碼囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列介於人類VH基因段以及人類DH基因段之間。
在例示性具體例92中，本文提供具體例1至91中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座座落在一個內源性免疫球蛋白重鏈基因座處。
在例示性具體例93中，本文提供具體例92之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白重鏈基因座。
在例示性具體例94中，本文提供具體例1至93中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例95中，本文提供具體例1至93中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例96中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段：(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、囓齒動物IgG2a跨膜域與囓齒動物IgG2a細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
在例示性具體例97中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、人類IgG1跨膜域與人類IgG1細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
在例示性具體例98中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基 因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、囓齒動物IgG1跨膜域與囓齒動物IgG1細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
在例示性具體例99中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、囓齒動物IgG4跨膜域與囓齒動物IgG4細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
在例示性具體例100中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有完全人類重鏈的IgG抗體。
在例示性具體例101中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有完整人類重鏈的IgG抗體。
在例示性具體例102中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含含有囓齒動物可變域以及人類恆定域的重鏈。
在例示性具體例103中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含含有囓齒動物可變域以及人類恆定域的重鏈。
在例示性具體例104中，本文提供具體例96至103中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處。
在例示性具體例105中，本文提供具體例104之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白重鏈基因座。
在例示性具體例106中，本文提供具體例96至105中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例107中，本文提供具體例96至105中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例108中，本文提供具體例1至107中任一項之在其基因體內進一步包含經改造免疫球蛋白κ鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白κ鏈基因座包含：(1)免疫球蛋白κ鏈可變區，包含人類Vκ基因段與人類Jκ基因段；以及(2)免疫球蛋白κ鏈恆定區，包含人類Cκ基因段，其中免疫球蛋白κ鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白κ鏈恆定區，使得該囓齒動物產生抗體，該抗體包含衍生自人類Vκ基因段與人類Jκ基因段的輕鏈可變域，以及衍生自人類Cκ基因段的輕鏈恆定域。
在例示性具體例109中，本文提供具體例108之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含囓齒動物內含子性κ增強子(Eκi)。
在例示性具體例110中，本文提供具體例108之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含人類內含子性κ增強子(Eκi)。
在例示性具體例111中，本文提供具體例108至110中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含囓齒動物3' κ增強子(Eκ3' )。
在例示性具體例112中，本文提供具體例108至110中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含人類3' κ增強子(Eκ3' )。
在例示性具體例113中，本文提供具體例108至112中任一項之囓齒動物，其中該免疫球蛋白κ鏈可變區包含至少6個人類Vκ基因段。
在例示性具體例114中，本文提供具體例108至113中任一項之囓齒動物，其中該免疫球蛋白κ鏈可變區包含全部人類Jκ基因段。
在例示性具體例115中，本文提供具體例108至114中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白κ鏈基因座處。
在例示性具體例116中，本文提供具體例115之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白κ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白κ鏈基因座。
在例示性具體例117中，本文提供具體例108至116中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白κ鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例118中，本文提供具體例108至116中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白κ鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例119中，本文提供具體例1至118中任一項之在其基因體進一步包含經改造免疫球蛋白λ鏈基因座的囓齒動物，該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含：人類Vλ基因段、人類Jλ基因段以及人類Cλ基因段，其中人類Vλ基因段與人類Jλ基因段可操作地連結至人類Cλ基因段，使得該囓齒動物產生抗體，該抗體包含衍生自人類Vλ基因段與人類Jλ基因段的輕鏈可變域，以及衍生自人類Cλ基因段的輕鏈恆定域。
在例示性具體例120中，本文提供具體例119之囓齒動物，其中人類Cλ基因段為人類Cλ1基因段。
在例示性具體例121中，本文提供具體例120之囓齒動物，其中人類Jλ基因段為人類Jλ1基因段。
在例示性具體例122中，本文提供具體例119之囓齒動物，其中人類Cλ基因段為人類Cλ2基因段。
在例示性具體例123中，本文提供具體例122之囓齒動物，其中人類Jλ基因段為人類Jλ2基因段。
在例示性具體例124中，本文提供具體例119之囓齒動物，其中人類Cλ基因段為人類Cλ3基因段。
在例示性具體例125中，本文提供具體例124之囓齒動物，其中人類Jλ基因段為人類Jλ3基因段。
在例示性具體例126中，本文提供具體例119之囓齒動物，其中人類Cλ基因段為人類Cλ6基因段。
在例示性具體例127中，本文提供具體例126之囓齒動物，其中人類Jλ基因段為人類Jλ6基因段。
在例示性具體例128中，本文提供具體例119之囓齒動物，其中人類Jλ基因段為人類Jλ7基因段。
在例示性具體例129中，本文提供具體例119至128中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Cλ1基因段、人類Cλ2基因段、人類Cλ3基因段、人類Cλ6基因段與囓齒動物Cλ1基因段。
在例示性具體例130中，本文提供具體例129之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Jλ1基因段、人類Jλ2基因段、人類Jλ3基因段、人類Jλ6基因段與人類Jλ7基因段。
在例示性具體例131中，本文提供具體例130之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Jλ1-Cλ1基因段簇、人類Jλ2-Cλ2基因段簇、人類Jλ3-Cλ3基因段簇、人類Jλ6-Cλ6基因段簇與人類Jλ7-囓齒動物Cλ1基因段簇。
在例示性具體例132中，本文提供具體例119至131中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含至少7個人類Vλ基因段。
在例示性具體例133中，本文提供具體例119至132中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子2.4。
在例示性具體例134中，本文提供具體例119至133中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物3' λ增強子。
在例示性具體例135中，本文提供具體例119至134中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子3.1。
在例示性具體例136中，本文提供具體例119至135中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含人類3' λ增強子。
在例示性具體例137中，本文提供具體例119至136中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白λ鏈基因座處。
在例示性具體例138中，本文提供具體例137之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白λ鏈基因座。
在例示性具體例139中，本文提供具體例119至138中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白λ鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例140中，本文提供具體例119至138中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白λ鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例141中，本文提供具體例1至140中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造新生兒Fc受體(FcRn)基因座，該基因座含有編碼含有人類胞外域之FcRn多肽的核酸序列。
在例示性具體例142中，本文提供具體例141之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例143中，本文提供具體例141之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例144中，本文提供具體例141至143中任一項之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例145中，本文提供具體例141至143中任一項之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例146中，本文提供具體例141至145中任一項之囓齒動物，其中編碼FcRn多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcRn基因座處。
在例示性具體例147中，本文提供具體例146之囓齒動物，其中編碼FcRn多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcRn基因。
在例示性具體例148中，本文提供具體例141之囓齒動物，其中編碼FcRn胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcRn胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例149中，本文提供具體例141至148中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物不表現囓齒動物FcRn。
在例示性具體例150中，本文提供具體例141至149中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為異型合子。
在例示性具體例151中，本文提供具體例141至149中任一項之囓齒動物，其中囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為同型合子。
在例示性具體例152中，本文提供具體例141至151中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，該基因座含有編碼人類或人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在例示性具體例153中，本文提供具體例152之囓齒動物，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。
在例示性具體例154中，本文提供具體例153之囓齒動物，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物β2M基因。
在例示性具體例155中，本文提供具體例152至154中任一項之囓齒動物，其中該核酸序列包含人類β2M基因的外顯子2-4。
在例示性具體例156中，本文提供具體例152至155中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物不表現囓齒動物β2M多肽。
在例示性具體例157中，本文提供具體例152至156中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為異型合子。
在例示性具體例158中，本文提供具體例152至156中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為同型合子。
在例示性具體例159中，本文提供具體例1至158中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造Fcε受體1α(FcεR1α)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列。
在例示性具體例160中，本文提供具體例159之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例161中，本文提供具體例159之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例162中，本文提供具體例159至161中任一項之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例163中，本文提供具體例159至161中任一項之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例164中，本文提供具體例159至163中任一項之囓齒動物，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。
在例示性具體例165中，本文提供具體例164之囓齒動物，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因。
在例示性具體例166中，本文提供具體例165之囓齒動物，其中FcεR1α多肽包含人類胞外域、人類跨膜域以及人類細胞質域。
在例示性具體例167中，本文提供具體例159之囓齒動物，其中編碼人類FcεR1α胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcεR1α胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例168中，本文提供具體例159至167中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcεR1α。
在例示性具體例169中，本文提供具體例159至168中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為異型合子。
在例示性具體例170中，本文提供具體例159至168中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為同型合子。
在例示性具體例171中，本文提供具體例1至170中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體1a(FcγR1a)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcγR1a多肽的核酸序列。
在例示性具體例172中，本文提供具體例171之囓齒動物，其中FcγR1a多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例173中，本文提供具體例171之囓齒動物，其中FcγR1a多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例174中，本文提供具體例171至173中任一項之囓齒動物，其中FcγR1a多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例175中，本文提供具體例171至173中任一項之囓齒動物，其中FcγR1a多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例176中，本文提供具體例171至175中任一項之囓齒動物，其中編碼FcγR1a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcγR1a基因座處。
在例示性具體例177中，本文提供具體例176之囓齒動物，其中編碼FcγR1a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcγR1a基因。
在例示性具體例178中，本文提供具體例171之囓齒動物，其中編碼人類FcγR1a胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcγR1a胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例179中，本文提供具體例171至178中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcγR1a。
在例示性具體例180中，本文提供具體例171至179中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR1a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例181中，本文提供具體例171至179中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR1a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例182中，本文提供具體例1至181中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2a(FcγR2a)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2a多肽的核酸序列。
在例示性具體例183中，本文提供具體例182之囓齒動物，其中編碼FcγR2a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例184中，本文提供具體例183之囓齒動物，其中編碼人類FcγR2a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例185中，本文提供具體例182至184中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR2a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例186中，本文提供具體例182至184中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR2a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例187中，本文提供具體例1至186中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2b(FcγR2b)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2b多肽的核酸序列。
在例示性具體例188中，本文提供具體例187之囓齒動物，其中編碼FcγR2b多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例189中，本文提供具體例188之囓齒動物，其中編碼人類FcγR2b多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例190中，本文提供具體例187至189中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR2b基因座來說為異型合子。
在例示性具體例191中，本文提供具體例187至189中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR2b基因座來說為同型合子。
在例示性具體例192中，本文提供具體例1至191中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體3a(FcγR3a)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR3a多肽的核酸序列。
在例示性具體例193中，本文提供具體例192之囓齒動物，其中編碼FcγR3a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例194中，本文提供具體例193之囓齒動物，其中編碼人類FcγR3a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例195中，本文提供具體例192至194中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR3a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例196中，本文提供具體例192至194中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR3a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例197中，本文提供具體例1至196中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體3b(FcγR3b)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR3b多肽的核酸序列。
在例示性具體例198中，本文提供具體例197之囓齒動物，其中編碼FcγR3b多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例199中，本文提供具體例197之囓齒動物，其中編碼人類FcγR3b多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例200中，本文提供具體例197至199中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR3b基因座來說為異型合子。
在例示性具體例201中，本文提供具體例197至199中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR3b基因座來說為同型合子。
在例示性具體例202中，本文提供具體例1至201中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2c(FcγR2c)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2c多肽的核酸序列。
在例示性具體例203中，本文提供具體例202之囓齒動物，其中編碼FcγR2c多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例204中，本文提供具體例203之囓齒動物，其中編碼人類FcγR2c多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例205中，本文提供具體例202至204中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcγR2c。
在例示性具體例206中，本文提供具體例202至205中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR2c基因座來說為異型合子。
在例示性具體例207中，本文提供具體例202至205中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcγR2c基因座來說為同型合子。
在例示性具體例208中，本文提供在其基因體內包含經改造新生兒Fc受體(FcRn)基因座的囓齒動物，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcRn多肽的核酸序列。
在例示性具體例209中，本文提供具體例208之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例210中，本文提供具體例208之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例211中，本文提供具體例208至210中任一項之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例212中，本文提供具體例208至210中任一項之囓齒動物，其中FcRn多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例213中，本文提供具體例208至212中任一項之囓齒動物，其中編碼FcRn多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcRn基因座處。
在例示性具體例214中，本文提供具體例213之囓齒動物，其中編碼FcRn多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcRn基因。
在例示性具體例215中，本文提供具體例208之囓齒動物，其中編碼人類FcRn胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcRn胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例216中，本文提供具體例208至215中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcRn。
在例示性具體例217中，本文提供具體例208至216中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為異型合子。
在例示性具體例218中，本文提供具體例208至216中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為同型合子。
在例示性具體例219中，本文提供具體例208至218中任一項之囓齒動物，在其基因體內進一步包含β-2-微球蛋白(β2M)基因座，該基因座包含編碼人類或人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在例示性具體例220中，本文提供具體例219之囓齒動物，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。
在例示性具體例221中，本文提供具體例220之囓齒動物，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物β2M基因。
在例示性具體例222中，本文提供具體例219至221中任一項之囓齒動物，其中該核酸序列包含人類β2M基因的外顯子2-4。
在例示性具體例223中，本文提供具體例219至222中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物不表現囓齒動物β2M多肽。
在例示性具體例224中，本文提供具體例219至223中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為異型合子。
在例示性具體例225中，本文提供具體例219至223中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為同型合子。
在例示性具體例226中，本文提供在其基因體內包含經改造Fcε受體1α(FcεR1α)基因座的囓齒動物，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列。
在例示性具體例227中，本文提供具體例226之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例228中，本文提供具體例226之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例229中，本文提供具體例226至228中任一項之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例230中，本文提供具體例226至228中任一項之囓齒動物，其中FcεR1α多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例231中，本文提供具體例226至230中任一項之囓齒動物，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。
在例示性具體例232中，本文提供具體例231之囓齒動物，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因。
在例示性具體例233中，本文提供具體例232之囓齒動物，其中FcεR1α多肽包含人類胞外域、人類跨膜域以及人類細胞質域。
在例示性具體例234中，本文提供具體例226之囓齒動物，其中編碼人類FcεR1α胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcεR1α胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例235中，本文提供具體例226至234中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcεR1α。
在例示性具體例236中，本文提供具體例226至235中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為異型合子。
在例示性具體例237中，本文提供具體例226至235中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為同型合子。
在例示性具體例238中，本文提供具體例1至237中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物為小鼠。
在例示性具體例239中，本文提供具體例1至237中任一項之囓齒動物，其中該囓齒動物為大鼠。
在例示性具體例240中，本文提供一種測試含有人類Fc域之治療性蛋白的方法，該方法包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與該治療性蛋白，並且測量所投與治療性蛋白的一或多個藥動學特性。
在例示性具體例241中，本文提供具體例240之方法，其中該一或多個藥動學特性選自下列一或多個：血漿濃度相對時間下的面積(AUC)、活體內回收(IVR)、廓清率(CL)、平均滯留時間(MRT)、藥劑半衰期(t1/2)以及穩態下的分布體積(Vss)。
在例示性具體例242中，本文提供測試包含人類Fc域之治療性蛋白的治療效力的方法，該方法包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與該治療性蛋白，並且測量所投與治療性蛋白的治療效力。
在例示性具體例243中，本文提供一種決定包含人類Fc域之治療性蛋白之治療有效劑量的方法，該方法包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與複數個劑量之該治療性蛋白，並且決定每個劑量之治療性蛋白的治療效力。
在例示性具體例244中，本文提供一種決定包含人類Fc域之治療性蛋白之安全劑量的方法，該方法包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與複數個劑量之該治療性蛋白，並且決定每個劑量之治療性蛋白的安全性。
在例示性具體例245中，本文提供一種決定包含人類Fc域之治療性蛋白的可耐受劑量的方法，該方法包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與複數個劑量的該治療性蛋白，並且決定每個劑量之治療性蛋白的耐受性。
在例示性具體例246中，本文提供一種測試包含人類Fc域之治療性蛋白的方法，該方法包含向具體例148至239中任一項之囓齒動物投與治療性蛋白，並且在該囓齒動物體內測量一或多個Fc受體媒介反應。
在例示性具體例247中，本文提供具體例246之方法，其中該一或多個Fc受體媒介反應包含ADCC反應。
在例示性具體例248中，本文提供一種篩選包含人類抗體之人類Fc區之治療藥劑的方法，該方法包含：(a)向具體例148至239中任一項 之囓齒動物投與包含人類抗體之Fc區的藥劑，其中該藥劑結合至囓齒動物體內的目標細胞；(b)測量自然殺手(NK)細胞對抗目標細胞的抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)；以及(c)將步驟(b)中的ADCC量與對照相比，其中目標細胞殺滅增加表明該藥劑媒介ADCC的能力增加。
在例示性具體例249中，本文提供一種測量由囓齒動物產生對抗包含人類Fc域之治療性蛋白的免疫反應的方法，該方法包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與治療性蛋白，並且測量由囓齒動物產生對抗治療性蛋白的免疫反應。
在例示性具體例250中，本文提供具體例240至249中任一項之方法，其中該治療性蛋白為人類抗體。
在例示性具體例251中，本文提供具體例240至249中任一項之方法，其中該治療性蛋白為Fc融合蛋白。
在例示性具體例252中，本文提供具體例240至251中任一項之方法，其中該人類Fc域為人類IgG1 Fc域。
在例示性具體例253中，本文提供具體例252之方法，其中該治療性蛋白為人類IgG1抗體。
在例示性具體例254中，本文提供具體例252之方法，其中該治療性蛋白為包含人類IgG1 Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例255中，本文提供具體例252至254中任一項之方法，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ1基因段。
在例示性具體例256中，本文提供具體例240至251中任一項之方法，其中該人類Fc域為人類IgG2 Fc域。
在例示性具體例257中，本文提供具體例256之方法，其中該治療性蛋白為人類IgG2抗體。
在例示性具體例258中，本文提供具體例256之方法，其中該治療性蛋白為包含人類IgG2 Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例259中，本文提供具體例256至258中任一項之方法，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ2基因段。
在例示性具體例260中，本文提供具體例240至251中任一項之方法，其中該人類Fc域為人類IgG3 Fc域。
在例示性具體例261中，本文提供具體例260之方法，其中該治療性蛋白為人類IgG3抗體。
在例示性具體例262中，本文提供具體例260之方法，其中該治療性蛋白為包含人類IgG3 Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例263中，本文提供具體例260至262中任一項之方法，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ3基因段。
在例示性具體例264中，本文提供具體例240至251中任一項之方法，其中該人類Fc域為人類IgG4 Fc域。
在例示性具體例265中，本文提供具體例264之方法，其中該治療性蛋白為人類IgG4抗體。
在例示性具體例266中，本文提供具體例264之方法，其中該治療性蛋白為包含人類IgG4Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例267中，本文提供具體例264至266中任一項之方法，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ4基因段。
在例示性具體例268中，本文提供具體例250、252、253、255-257、259-261、263-265以及267中任一項之方法，其中該治療性蛋白為帶有κ輕鏈的人類抗體，而囓齒動物表現含有人類κ輕鏈的抗體。
在例示性具體例269中，本文提供具體例250、252、253、255-257、259-261、263-265以及267中任一項之方法，其中該治療性蛋白為帶有λ輕鏈的人類抗體，而囓齒動物表現含有人類λ輕鏈的抗體。
在例示性具體例270中，本文提供具體例240至269中任一項之方法，其中該囓齒動物為小鼠。
在例示性具體例271中，本文提供具體例240至269中任一項之方法，其中該囓齒動物為大鼠。
在例示性具體例272中，本文提供一種用於測試包含人類Fc域之治療性蛋白的動物模型，其中該模型包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與治療性蛋白，並且測量所投與治療性蛋白的一或多個藥動學特性。
在例示性具體例273中，本文提供具體例272之動物模型，其中該一或多個藥動學特性選自下列一或多個：血漿濃度相對時間下的面積(AUC)、活體內回收(IVR)、廓清率(CL)、平均滯留時間(MRT)、藥劑半衰期(t1/2)以及穩態下的分布體積(Vss)。
在例示性具體例274中，本文提供一種測試包含人類Fc域之治療性蛋白的治療效力的動物模型，該動物模型包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與該治療性蛋白，並且測量所投與治療性蛋白的治療效力。
在例示性具體例275中，本文提供一種決定包含人類Fc域之治療性蛋白之治療有效劑量的動物模型，該動物模型包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與複數個劑量之該治療性蛋白，並且決定每個劑量之治療性蛋白的治療效力。
在例示性具體例276中，本文提供一種決定包含人類Fc域之治療性蛋白之安全劑量的動物模型，該動物模型包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與複數個劑量之該治療性蛋白，並且決定每個劑量之治療性蛋白的安全性。
在例示性具體例277中，本文提供一種決定包含人類Fc域之治療性蛋白的可耐受劑量的動物模型，該動物模型包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與複數個劑量之該治療性蛋白，並且決定每個劑量之治療性蛋白的耐受性。
在例示性具體例278中，本文提供一種測試包含人類Fc域之治療性蛋白的動物模型，該動物模型包含向具體例148至239中任一項之囓 齒動物投與治療性蛋白，並且在該囓齒動物體內測量一或多個Fc受體媒介反應。
在例示性具體例279中，本文提供具體例278之動物模型，其中該一或多個Fc受體媒介反應包含ADCC反應。
在例示性具體例280中，本文提供一種用於篩選包含人類抗體之人類Fc區之治療藥劑的動物模型，該動物模型包含：(a)向具體例148至237中任一項之囓齒動物投與包含人類抗體之Fc區的藥劑，其中該藥劑結合至小鼠體內的目標細胞；(b)測量自然殺手(NK)細胞對抗目標細胞的抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)；以及(c)將步驟(b)中的ADCC量與對照相比，其中目標細胞殺滅增加表明該藥劑媒介ADCC的能力增加。
在例示性具體例281中，本文提供一種測量由囓齒動物產生對抗包含人類Fc域之治療性蛋白的免疫反應的動物模型，該動物模型包含向具體例1至207中任一項之囓齒動物投與治療性蛋白，並且測量由囓齒動物產生對抗治療性蛋白的免疫反應。
在例示性具體例282中，本文提供具體例272至281中任一項之動物模型，其中該治療性蛋白為人類抗體。
在例示性具體例283中，本文提供具體例272至281中任一項之動物模型，其中該治療性蛋白為Fc融合蛋白。
在例示性具體例284中，本文提供具體例272至283中任一項之動物模型，其中該人類Fc域為人類IgG1 Fc域。
在例示性具體例285中，本文提供具體例284之動物模型，其中該治療性蛋白為人類IgG1抗體。
在例示性具體例286中，本文提供具體例284之動物模型，其中該治療性蛋白為包含人類IgG1 Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例287中，本文提供具體例272至286中任一項之動物模型，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ1基因段。
在例示性具體例288中，本文提供具體例272至283中任一項之動物模型，其中該人類Fc域為人類IgG2 Fc域。
在例示性具體例289中，本文提供具體例288之動物模型，其中該治療性蛋白為人類IgG2抗體。
在例示性具體例290中，本文提供具體例288之動物模型，其中該治療性蛋白為包含人類IgG2 Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例291中，本文提供具體例288至290中任一項之動物模型，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ2基因段。
在例示性具體例292中，本文提供具體例272至283中任一項之動物模型，其中該人類Fc域為人類IgG3 Fc域。
在例示性具體例293中，本文提供具體例292之動物模型，其中該治療性蛋白為人類IgG3抗體。
在例示性具體例294中，本文提供具體例292之動物模型，其中該治療性蛋白為包含人類IgG3 Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例295中，本文提供具體例292至294中任一項之動物模型，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ3基因段。
在例示性具體例296中，本文提供具體例272至283中任一項之動物模型，其中該人類Fc域為人類IgG4 Fc域。
在例示性具體例297中，本文提供具體例296之動物模型，其中該治療性蛋白為人類IgG4抗體。
在例示性具體例298中，本文提供具體例296之動物模型，其中該治療性蛋白為包含人類IgG4 Fc域的Fc融合蛋白。
在例示性具體例299中，本文提供具體例296至298中任一項之動物模型，其中編碼包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域以及IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段為Cγ4基因段。
在例示性具體例300中，本文提供具體例282、284、285、287-289、291-293、295-297以及299中任一項之動物模型，其中該治療性蛋白為帶有κ輕鏈的人類抗體，而囓齒動物表現含有人類κ輕鏈的抗體。
在例示性具體例301中，本文提供具體例282、284、285、287-289、291-293、295-297以及299中任一項之動物模型，其中該治療性蛋白為帶有λ輕鏈的人類抗體，而囓齒動物表現含有人類λ輕鏈的抗體。
在例示性具體例302中，本文提供具體例272至301中任一項之動物模型，其中該囓齒動物為小鼠。
在例示性具體例303中，本文提供具體例272至301中任一項之動物模型，其中該囓齒動物為大鼠。
在例示性具體例304中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物胚胎幹(ES)細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含VH基因段、DH基因段與JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含編碼含有人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域與IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例305中，本文提供具體例304之囓齒動物ES細胞，其中該IgG跨膜域為囓齒動物IgG跨膜域。
在例示性具體例306中，本文提供具體例304之囓齒動物ES細胞，其中該IgG跨膜域為人類IgG跨膜域。
在例示性具體例307中，本文提供具體例304至306中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該IgG細胞質域為囓齒動物IgG細胞質域。
在例示性具體例308中，本文提供具體例304至306中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該IgG細胞質域為人類IgG細胞質域。
在例示性具體例309中，本文提供具體例304至308中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG1域。
在例示性具體例310中，本文提供具體例309之囓齒動物ES細胞，其中該IgG1域是由選自下列的對偶基因編碼：IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04以及IGHG1*05。
在例示性具體例311中，本文提供具體例304至308中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG2域。
在例示性具體例312中，本文提供具體例311之囓齒動物ES細胞，其中該IgG2域是由選自下列的對偶基因編碼：IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05以及IGHG2*06。
在例示性具體例313中，本文提供具體例304至308中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG3域。
在例示性具體例314中，本文提供具體例311之囓齒動物ES細胞，其中該IgG3域是由選自下列的對偶基因編碼：IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18以及IGHG3*19。
在例示性具體例315中，本文提供具體例304至308中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為IgG4域。
在例示性具體例316中，本文提供具體例315之囓齒動物ES細胞，其中該IgG4域是由選自下列的對偶基因編碼：IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03以及IGHG4*04。
在例示性具體例317中，本文提供具體例309至316中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段座落在內源性Cγ2a或Cγ2c基因段基因座處。
在例示性具體例318中，本文提供具體例317之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ2a或Cγ2c基因段。
在例示性具體例319中，本文提供具體例309至316中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ1基因段基因座處。
在例示性具體例320中，本文提供具體例319之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ1基因段。
在例示性具體例321中，本文提供具體例309至316中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ2b基因段基因座處。
在例示性具體例322中，本文提供具體例321之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ2b基因段。
在例示性具體例323中，本文提供具體例309至316中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ3基因段基因座處。
在例示性具體例324中，本文提供具體例323之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ3基因段。
在例示性具體例325中，本文提供具體例304至324中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cμ基因段。
在例示性具體例326中，本文提供具體例304至324中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cμ基因段。
在例示性具體例327中，本文提供具體例304至326中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cδ基因段。
在例示性具體例328中，本文提供具體例304至326中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cδ基因段。
在例示性具體例329中，本文提供具體例304至328中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ1基因段。
在例示性具體例330中，本文提供具體例304至329中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段。
在例示性具體例331中，本文提供具體例304至330中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ2b基因段。
在例示性具體例332中，本文提供具體例304至331中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ3基因段。
在例示性具體例333中，本文提供具體例304至332中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cε基因段。
在例示性具體例334中，本文提供具體例304至332中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例335中，本文提供具體例304至334中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cα基因段。
在例示性具體例336中，本文提供具體例304至334中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例337中，本文提供具體例304至324中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段以及人類Cγ1基因段。
在例示性具體例338中，本文提供具體例337之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段以及人類Cγ4基因段。
在例示性具體例339中，本文提供具體例337或具體例338之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例340中，本文提供具體例337至3339中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例341中，本文提供具體例304至340中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物內含子性增強子(Ei)。
在例示性具體例342中，本文提供具體例304至340中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類內含子性增強子(Ei)。
在例示性具體例343中，本文提供具體例304至342中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物3'調節區(3'RR)。
在例示性具體例344中，本文提供具體例304至342中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類3'調節區(3'RR)。
在例示性具體例345中，本文提供具體例304至344中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sμ切換區。
在例示性具體例346中，本文提供具體例304至345中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ3切換區。
在例示性具體例347中，本文提供具體例304至346中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ1切換區。
在例示性具體例348中，本文提供具體例304至347中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ2b切換區。
在例示性具體例349中，本文提供具體例304至348中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ2a及/或Sγ2c切換區。
在例示性具體例350中，本文提供具體例304至349中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sε切換區。
在例示性具體例351中，本文提供具體例304至350中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sα切換區。
在例示性具體例352中，本文提供具體例304至344中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sμ切換區。
在例示性具體例353中，本文提供具體例304至344以及352中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ3切換區。
在例示性具體例354中，本文提供具體例304至344以及352至353中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ1切換區。
在例示性具體例355中，本文提供具體例304至344以及352至354中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ2切換區。
在例示性具體例356中，本文提供具體例304至344以及352至355中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ4切換區。
在例示性具體例357中，本文提供具體例304至344以及352至356中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sε切換區。
在例示性具體例358中，本文提供具體例304至344以及352至357中任一項之囓齒動物，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sα切換區。
在例示性具體例359中，本文提供具體例304至358中任一項之囓齒動物ES細胞，其中VH基因段為囓齒動物VH基因段，DH基因段為囓齒動物DH基因段，而JH基因段為囓齒動物JH基因段。
在例示性具體例360中，本文提供具體例359之囓齒動物ES細胞，其中囓齒動物VH基因段、囓齒動物DH基因段以及囓齒動物JH基因段為內源性囓齒動物基因段。
在例示性具體例361中，本文提供具體例304至358中任一項之囓齒動物ES細胞，其中VH基因段為人類VH基因段，DH基因段為人類DH基因段，而JH基因段為人類JH基因段。
在例示性具體例362中，本文提供具體例361之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈可變區包含至少3個人類VH基因段。
在例示性具體例363中，本文提供具體例361或具體例362之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈可變區包含所有人類DH基因段。
在例示性具體例364中，本文提供具體例361至363中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈可變區包含所有人類JH基因段。
在例示性具體例365中，本文提供具體例361至364中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該免疫球蛋白重鏈可變區缺少一個功能性內源性囓齒動物Adam6基因。
在例示性具體例366中，本文提供具體例361至365中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該生殖系基因體進一步包含編碼一個功能性囓齒動物Adam6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在例示性具體例367中，本文提供具體例366之囓齒動物ES細胞，其中表現該功能性囓齒動物Adam6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段。
在例示性具體例368中，本文提供具體例366或具體例367之囓齒動物ES細胞，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被納入與免疫球蛋白重鏈可變區相同的染色體上。
在例示性具體例369中，本文提供具體例366至368中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被納入經改造免疫球蛋白重鏈基因座。
在例示性具體例370中，本文提供具體例366至369中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列取代人類Adam6假基因。
在例示性具體例371中，本文提供具體例366至370中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列取代人類Adam6假基因。
在例示性具體例372中，本文提供具體例366至371中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列介於第一人類VH基因段以及第二人類VH基因段之間。
在例示性具體例373中，本文提供具體例372之囓齒動物ES細胞，其中第一人類VH基因段為VH1-2而第二人類VH基因段為VH6-1。
在例示性具體例374中，本文提供具體例366至369中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列介於人類VH基因段以及人類DH基因段之間。
在例示性具體例375中，本文提供具體例304至374中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處。
在例示性具體例376中，本文提供具體例375之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白重鏈基因座。
在例示性具體例377中，本文提供具體例304至376中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例378中，本文提供具體例304至376中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例379中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，其編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、囓齒動物IgG2a跨膜域與囓齒動物IgG2a細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例380中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、人類IgG1跨膜域及人類IgG1細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；以及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例381中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、囓齒動物IgG1跨膜域及囓齒動物IgG1細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；以及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例382中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、人類IgG4跨膜域及人類IgG4細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；以及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例383中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例384中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例385中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含囓齒動物VH基因段、囓齒動物DH基因段及囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例386中，本文提供在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含囓齒動物VH基因段、囓齒動物DH基因段及囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區。
在例示性具體例387中，本文提供具體例304至386中任一項之在其基因體進一步包含經改造免疫球蛋白κ鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白κ鏈基因座包含：(1)免疫球蛋白κ鏈可變區，包含人類Vκ基因段及人類Jκ基因段；以及(2)免疫球蛋白κ鏈恆定區，包含人類Cκ基因段，其中該免疫球蛋白κ鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白κ鏈恆定區。
在例示性具體例388中，本文提供具體例387之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含囓齒動物內含子性κ增強子(Eκi)。
在例示性具體例389中，本文提供具體例387之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含人類內含子性κ增強子(Eκi)。
在例示性具體例390中，本文提供具體例387至389中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含囓齒動物3'κ增強子(Eκ3' )。
在例示性具體例391中，本文提供具體例387至389中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含人類3'κ增強子(Eκ3' )。
在例示性具體例392中，本文提供具體例387至391中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈可變區包含至少6個Vκ基因段。
在例示性具體例393中，本文提供具體例387至392中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈可變區包含所有Jκ基因段。
在例示性具體例394中，本文提供具體例387至393中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白κ鏈基因座處。
在例示性具體例395中，本文提供具體例394之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白κ鏈基因座。
在例示性具體例396中，本文提供具體例387至395中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白κ鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例397中，本文提供具體例387至395中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白κ鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例398中，本文提供具體例304至397中任一項之在其基因體內進一步包含經改造免疫球蛋白λ鏈基因座的囓齒動物ES細胞，該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含：人類Vλ基因段、人類Jλ基因段及人類Cλ基因段，其中人類Vλ基因段及人類Jλ基因段可操作地連結至人類Cλ基因段。
在例示性具體例399中，本文提供具體例398之囓齒動物ES細胞，其中該人類Cλ基因段為人類Cλ1基因段。
在例示性具體例400中，本文提供具體399之囓齒動物ES細胞，其中該人類Jλ基因段為人類Jλ1基因段。
在例示性具體例401中，本文提供具體例398之囓齒動物ES細胞，其中該人類Cλ基因段為人類Cλ2基因段。
在例示性具體例402中，本文提供具體例401之囓齒動物ES細胞，其中該人類Jλ基因段為人類Jλ2基因段。
在例示性具體例403中，本文提供具體例398之囓齒動物ES細胞，其中該人類Cλ基因段為人類Cλ3基因段。
在例示性具體例404中，本文提供具體例403之囓齒動物ES細胞，其中該人類Jλ基因段為人類Jλ3基因段。
在例示性具體例405中，本文提供具體例398之囓齒動物ES細胞，其中該人類Cλ基因段為人類Cλ6基因段。
在例示性具體例406中，本文提供具體例405之囓齒動物ES細胞，其中該人類Jλ基因段為人類Jλ6基因段。
在例示性具體例407中，本文提供具體例398之囓齒動物ES細胞，其中該人類Jλ基因段為人類Jλ7基因段。
在例示性具體例408中，本文提供具體例398至407中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Cλ1基因段、人類Cλ2基因段、人類Cλ3基因段、人類Cλ6基因段及囓齒動物Cλ1基因段。
在例示性具體例409中，本文提供具體例408之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Jλ1基因段、人類Jλ2基因段、人類Jλ3基因段、人類Jλ6基因段及人類Jλ7基因段。
在例示性具體例410中，本文提供具體例409之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Jλ1-Cλ1基因段簇、人類Jλ2-Cλ2基因段簇、人類Jλ3-Cλ3基因段簇、人類Jλ6-Cλ6基因段簇及人類Jλ7-囓齒動物Cλ1基因段簇。
在例示性具體例411中，本文提供具體例398至410中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含至少7個人類Vλ基因段。
在例示性具體例412中，本文提供具體例398至411中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子2.4。
在例示性具體例413中，本文提供具體例398至412中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物3'λ增強子。
在例示性具體例414中，本文提供具體例398至413中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子3.1。
在例示性具體例415中，本文提供具體例398至414中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含人類3'λ增強子。
在例示性具體例416中，本文提供具體例398至415中任一項之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白λ鏈基因座處。
在例示性具體例417中，本文提供具體例416之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白λ鏈基因座。
在例示性具體例418中，本文提供具體例398至417中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白λ鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例419中，本文提供具體例398至417中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白λ鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例420中，本文提供具體例304至419中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含新生兒Fc受體(FcRn)基因座，該FcRn基因座包含編碼含有人類胞外域之經改造FcRn多肽的核酸序列。
在例示性具體例421中，本文提供具體例420之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例422中，本文提供具體例420之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例423中，本文提供具體例420至422中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例424中，本文提供具體例420至422中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例425中，本文提供具體例420至424中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcRn多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcRn基因座處。
在例示性具體例426中，本文提供具體例425之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcRn多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcRn基因。
在例示性具體例427中，本文提供具體例420之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcRn胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcRn胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例428中，本文提供具體例420至427中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcRn。
在例示性具體例429中，本文提供具體例420至428中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為異型合子。
在例示性具體例430中，本文提供具體例420至428中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為同型合子。
在例示性具體例431中，本文提供具體例420至430中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，該基因座包含編碼人類或人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在例示性具體例432中，本文提供具體例431之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。
在例示性具體例433中，本文提供具體例432之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物β2M基因。
在例示性具體例434中，本文提供具體例431至433中任一項之囓齒動物，其中該核酸序列包含人類β2M基因的外顯子2-4。
在例示性具體例435中，本文提供具體例431至434中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物β2M多肽。
在例示性具體例436中，本文提供具體例431至435中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為異型合子。
在例示性具體例437中，本文提供具體例431至435中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為同型合子。
在例示性具體例438中，本文提供具體例304至437中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造Fcε受體1α(FcεR1α)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列。
在例示性具體例439中，本文提供具體例438之囓齒動物ES細胞，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例440中，本文提供具體例438之囓齒動物ES細胞，其中FcεR1α多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例441中，本文提供具體例438至440中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例442中，本文提供具體例438至440中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcεR1α多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例443中，本文提供具體例438至442中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。
在例示性具體例444中，本文提供具體例443之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因。
在例示性具體例445中，本文提供具體例444之囓齒動物ES細胞，其中FcεR1α多肽包含人類胞外域、人類跨膜域及人類細胞質域。
在例示性具體例446中，本文提供具體例438之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcεR1α胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcεR1α胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例447中，本文提供具體例438至446中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcεR1α。
在例示性具體例448中，本文提供具體例438至447中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為異型合子。
在例示性具體例449中，本文提供具體例438至447中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為同型合子。
在例示性具體例450中，本文提供具體例304至449中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體1a(FcγR1a)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcγR1a多肽的核酸序列。
在例示性具體例451中，本文提供具體例450之囓齒動物ES細胞，其中FcγR1a多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例452中，本文提供具體例450之囓齒動物ES細胞，其中FcγR1a多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例453中，本文提供具體例450至452中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcγR1a多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例454中，本文提供具體例450至452中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcγR1a多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例455中，本文提供具體例450至454中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcγR1a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcγR1a基因座處。
在例示性具體例456中，本文提供具體例455之囓齒動物ES細胞，其中編碼該FcγR1a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcγR1a基因。
在例示性具體例457中，本文提供具體例450之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcγR1a胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcγR1a胞外域的核酸序列。
在例示性具體例458中，本文提供具體例450至457中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcγR1a。
在例示性具體例459中，本文提供具體例450至458中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR1a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例460中，本文提供具體例450至458中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR1a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例461中，本文提供具體例304至460中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2a(FcγR2a)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2a多肽的核酸序列。
在例示性具體例462中，本文提供具體例461之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcγR2a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例463中，本文提供具體例462之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcγR2a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例464中，本文提供具體例461至463中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR2a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例465中，本文提供具體例461至463中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR2a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例466中，本文提供具體例304至465中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2b(FcγR2b)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2b多肽的核酸序列。
在例示性具體例467中，本文提供具體例466之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcγR2b多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例468中，本文提供具體例467之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcγR2b多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例469中，本文提供具體例466至468中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR2b基因座來說為異型合子。
在例示性具體例470中，本文提供具體例466至468中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR2b基因座來說為同型合子。
在例示性具體例471中，本文提供具體例304至470中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體3a(FcγR3a)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR3a多肽的核酸序列。
在例示性具體例472中，本文提供具體例471之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcγR3a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例473中，本文提供具體例472之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcγR3a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例474中，本文提供具體例471至473中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR3a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例475中，本文提供具體例471至473中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR3a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例476中，本文提供具體例304至475中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體3b(FcγR3b)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR3b多肽的核酸序列。
在例示性具體例477中，本文提供具體例476之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcγR3b多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例478中，本文提供具體例477之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcγR3b多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例479中，本文提供具體例476至478中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR3b基因座來說為異型合子。
在例示性具體例480中，本文提供具體例476至478中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR3b基因座來說為同型合子。
在例示性具體例481中，本文提供具體例304至480中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體進一步包含經改造Fcγ受體2c(FcγR2c)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2c多肽的核酸序列。
在例示性具體例482中，本文提供具體例481之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcγR2c多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例483中，本文提供具體例482之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcγR2c多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例484中，本文提供具體例481至483中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcγR2c。
在例示性具體例485中，本文提供具體例481至484中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR2c基因座來說為異型合子。
在例示性具體例486中，本文提供具體例481至484中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcγR2c基因座來說為同型合子。
在例示性具體例487中，本文提供在其基因體內包含經改造新生兒Fc受體(FcRn)基因座的囓齒動物ES細胞，該基因座包含編碼含有人類胞外域的FcRn多肽的核酸序列。
在例示性具體例488中，本文提供具體例487之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例489中，本文提供具體例487之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例490中，本文提供具體例487至489中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例491中，本文提供具體例487至489中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcRn多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例492中，本文提供具體例487至491中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcRn多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcRn基因座處。
在例示性具體例493中，本文提供具體例492之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcRn多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcRn基因。
在例示性具體例494中，本文提供具體例493之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcRn胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcRn胞外域的核酸序列。
在例示性具體例495中，本文提供具體例487至494中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcRn。
在例示性具體例496中，本文提供具體例487至495中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為異型合子。
在例示性具體例497中，本文提供具體例487至495中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為同型合子。
在例示性具體例498中，本文提供具體例487至497中任一項之囓齒動物ES細胞，在其基因體內進一步包含經改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，該基因座包含編碼人類或人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在例示性具體例499中，本文提供具體例498之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。
在例示性具體例500中，本文提供具體例499之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物β2M基因。
在例示性具體例501中，本文提供具體例498至500中任一項之囓齒動物，其中該核酸序列包含人類β2M基因的外顯子2-4。
在例示性具體例502中，本文提供具體例498至501中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物β2M多肽。
在例示性具體例503中，本文提供具體例498至502中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為異型合子。
在例示性具體例504中，本文提供具體例498至502中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為同型合子。
在例示性具體例505中，本文提供在其基因體內包含經改造Fcε受體1α(FcεR1α)基因座的囓齒動物ES細胞，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列。
在例示性具體例506中，本文提供具體例505之囓齒動物ES細胞，其中該FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例507中，本文提供具體例505之囓齒動物ES細胞，其中該FcεR1α多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例508中，本文提供具體例505至507中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例509中，本文提供具體例505至507中任一項之囓齒動物ES細胞，其中FcεR1α多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例510中，本文提供具體例505至509中任一項之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。
在例示性具體例511中，本文提供具體例510之囓齒動物ES細胞，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因。
在例示性具體例512中，本文提供具體例511之囓齒動物ES細胞，其中該FcεR1α多肽包含人類胞外域、人類跨膜域及人類細胞質域。
在例示性具體例513中，本文提供具體例505之囓齒動物ES細胞，其中編碼人類FcεR1α胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcεR1α胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例514中，本文提供具體例505至513中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcεR1α。
在例示性具體例515中，本文提供具體例505至514中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為異型合子。
在例示性具體例516中，本文提供具體例505至514中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為同型合子。
在例示性具體例517中，本文提供具體例304至516中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物為小鼠。
在例示性具體例518中，本文提供具體例304至516中任一項之囓齒動物ES細胞，其中該囓齒動物為大鼠。
在例示性具體例519中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含VH基因段、DH基因段及JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含編碼含有人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域與IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，含有VH基因段、DH基因段及JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含編碼含有人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域與IgG細胞質域之IgG恆定域的CH基因段，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至該免疫球蛋白重鏈恆定區，以使得該囓齒動物生產含有衍生自VH基因段、DH基因段與JH基因段之可變域以及衍生自CH基因段之重鏈恆定域的IgG抗體。
在例示性具體例520中，本文提供具體例519之方法，其中該IgG跨膜域為囓齒動物IgG跨膜域。
在例示性具體例521中，本文提供具體例519之方法，其中該IgG跨膜域為人類IgG跨膜域。
在例示性具體例522中，本文提供具體例519至521中任一項之方法，其中該IgG細胞質域為囓齒動物IgG細胞質域。
在例示性具體例523中，本文提供具體例519至521中任一項之方法，其中該IgG細胞質域為人類IgG細胞質域。
在例示性具體例524中，本文提供具體例519至523中任一項之方法，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域為IgG1域。
在例示性具體例525中，本文提供具體例524之方法，其中該IgG1域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG1*01、IGHG1*02、IGHG1*03、IGHG1*04及IGHG1*05。
在例示性具體例526中，本文提供具體例519至523中任一項之方法，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域為IgG2域。
在例示性具體例527中，本文提供具體例526之方法，其中該IgG2域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG2*01、IGHG2*02、IGHG2*03、IGHG2*04、IGHG2*05及IGHG2*06。
在例示性具體例528中，本文提供具體例519至523中任一項之方法，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域為IgG3域。
在例示性具體例529中，本文提供具體例528之方法，其中該IgG3域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG3*01、IGHG3*02、IGHG3*03、IGHG3*04、IGHG3*05、IGHG3*06、IGHG3*07、IGHG3*08、IGHG3*09、IGHG3*10、IGHG3*11、IGHG3*12、IGHG3*13、IGHG3*14、IGHG3*15、IGHG3*16、IGHG3*17、IGHG3*18及IGHG3*19。
在例示性具體例530中，本文提供具體例519至523中任一項之方法，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域為IgG4域。
在例示性具體例531中，本文提供具體例530之方法，其中該IgG4域由選自下列的對偶基因編碼：IGHG4*01、IGHG4*02、IGHG4*03及IGHG4*04。
在例示性具體例532中，本文提供具體例524至531中任一項之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段座落在內源性Cγ2a或Cγ2c基因段基因座處。
在例示性具體例533中，本文提供具體例532之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ2a或Cγ2c基因段。
在例示性具體例534中，本文提供具體例524至531中任一項之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ1基因段基因座。
在例示性具體例535中，本文提供具體例534之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ1基因段。
在例示性具體例536中，本文提供具體例524至531中任一項之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ2b基因段基因座。
在例示性具體例537中，本文提供具體例536之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ2b基因段。
在例示性具體例538中，本文提供具體例524至531中任一項之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ3基因段基因座。
在例示性具體例539中，本文提供具體例538之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ3基因段。
在例示性具體例540中，本文提供具體例519至539中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cμ基因段。
在例示性具體例541中，本文提供具體例519至539中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cμ基因段。
在例示性具體例542中，本文提供具體例519至541中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cδ基因段。
在例示性具體例543中，本文提供具體例519至541中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cδ基因段。
在例示性具體例544中，本文提供具體例519至543中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ1基因段。
在例示性具體例545中，本文提供具體例519至544中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段。
在例示性具體例546中，本文提供具體例519至545中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ2b基因段。
在例示性具體例547中，本文提供具體例519至546中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cγ3基因段。
在例示性具體例548中，本文提供具體例519至547中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cε基因段。
在例示性具體例549中，本文提供具體例519至548中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例550中，本文提供具體例519至549中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含囓齒動物Cα基因段。
在例示性具體例551中，本文提供具體例519至549中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例552中，本文提供具體例519至539中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段及人類Cγ1基因段。
在例示性具體例553中，本文提供具體例552之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段及人類Cγ4基因段。
在例示性具體例554中，本文提供具體例552或具體例553之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例555中，本文提供具體例552至554中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例556中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含VH基因段、DH基因段及JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含編碼含有人類CH1域、人類CH2域、人類CH3域、人類CH4域、人類IgM跨膜域與人類IgM細胞質域之IgM 恆定域的CH基因段，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，含有VH基因段、DH基因段及JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含編碼含有人類CH1域、人類CH2域、人類CH3域、人類CH4域、人類IgM跨膜域與人類IgM細胞質域之IgM恆定域的CH基因段，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至該免疫球蛋白重鏈恆定區，以使得該囓齒動物生產含有衍生自VH基因段、DH基因段與JH基因段之可變域以及衍生自CH基因段之重鏈恆定域的IgM抗體。
在例示性具體例557中，本文提供具體例556之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cδ基因段。
在例示性具體例558中，本文提供具體例556或557之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ3基因段。
在例示性具體例559中，本文提供具體例556至558中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ1基因段。
在例示性具體例560中，本文提供具體例556至559中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段。
在例示性具體例561中，本文提供具體例556至560中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ4基因段。
在例示性具體例562中，本文提供具體例556至561中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段及人類Cγ1基因段。
在例示性具體例563中，本文提供具體例562之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段及人類Cγ4基因段。
在例示性具體例564中，本文提供具體例562或具體例563之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例565中，本文提供具體例562至564中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例566中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白 重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含VH基因段、DH基因段及JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含編碼含有人類CH1域、人類鉸鏈H1域、人類鉸鏈H2域、人類CH2域、人類CH3域、人類IgD跨膜域與人類IgD細胞質域之IgD恆定域的CH基因段，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，含有VH基因段、DH基因段及JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含編碼含有人類CH1域、人類鉸鏈H1域、人類鉸鏈H2域、人類CH2域、人類CH3域、人類IgD跨膜域與人類IgD細胞質域之IgD恆定域的CH基因段，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至該免疫球蛋白重鏈恆定區，以使得該囓齒動物生產含有衍生自VH基因段、DH基因段與JH基因段之可變域以及衍生自CH基因段之重鏈恆定域的IgD抗體。
在例示性具體例567中，本文提供具體例566之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cμ基因段。
在例示性具體例568中，本文提供具體例566或567之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ3基因段。
在例示性具體例569中，本文提供具體例556至568中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ1基因段。
在例示性具體例570中，本文提供具體例566至569中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段。
在例示性具體例571中，本文提供具體例566至570中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ4基因段。
在例示性具體例572中，本文提供具體例566至571中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段及人類Cγ1基因段。
在例示性具體例573中，本文提供具體例572之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段及人類Cγ4基因段。
在例示性具體例574中，本文提供具體例572或具體例573之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段。
在例示性具體例575中，本文提供具體例572至574中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cε基因段。
在例示性具體例576中，本文提供具體例519至575中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物內含子性增強子(Ei)。
在例示性具體例577中，本文提供具體例519至575中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類內含子性增強子(Ei)。
在例示性具體例578中，本文提供具體例519至577中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物3'調節區(3'RR)。
在例示性具體例579中，本文提供具體例519至577中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類3'調節區(3'RR)。
在例示性具體例580中，本文提供具體例519至579中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sμ切換位點。
在例示性具體例581中，本文提供具體例519至580中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ3切換位點。
在例示性具體例582中，本文提供具體例519至581中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ1切換位點。
在例示性具體例583中，本文提供具體例519至582中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ2b切換位點。
在例示性具體例584中，本文提供具體例519至583中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sγ2a及/或Sγ2c切換位點。
在例示性具體例585中，本文提供具體例519至584中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sε切換位點。
在例示性具體例586中，本文提供具體例519至585中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sα切換位點。
在例示性具體例587中，本文提供具體例519至579中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sμ切換位點。
在例示性具體例588中，本文提供具體例519至579及587中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ3切換位點。
在例示性具體例589中，本文提供具體例519至579及587至588中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ1切換位點。
在例示性具體例590中，本文提供具體例519至579及587至589中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ2切換位點。
在例示性具體例591中，本文提供具體例519至579及587至590中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sγ4切換位點。
在例示性具體例592中，本文提供具體例519至579及587至591中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sε切換位點。
在例示性具體例593中，本文提供具體例519至579及587至592中任一項之囓齒動物，其中該經改造免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sα切換位點。
在例示性具體例594中，本文提供具體例519至593中任一項之方法，其中VH基因段為囓齒動物VH基因段，DH基因段為囓齒動物DH基因段而JH基因段為囓齒動物JH基因段。
在例示性具體例595中，本文提供具體例594之方法，其中囓齒動物VH基因段、囓齒動物DH基因段及囓齒動物JH基因段為內源性囓齒動物基因段。
在例示性具體例596中，本文提供具體例519至593中任一項之方法，其中VH基因段為人類VH基因段，DH基因段為人類DH基因段而JH基因段為人類JH基因段。
在例示性具體例597中，本文提供具體例596之方法，其中該免疫球蛋白重鏈可變區包含至少3個人類VH基因段。
在例示性具體例598中，本文提供具體例596或具體例597之方法，其中該免疫球蛋白重鏈可變區包含全部人類DH基因段。
在例示性具體例599中，本文提供具體例596至具體例598中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈可變區包含全部人類JH基因段。
在例示性具體例600中，本文提供具體例596至599中任一項之方法，其中該免疫球蛋白重鏈可變區缺少一個功能性內源性囓齒動物Adam6基因。
在例示性具體例601中，本文提供具體例596至600中任一項之方法，其中該生殖系基因體進一步包含編碼功能性囓齒動物Adam6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列。
在例示性具體例602中，本文提供具體例601之方法，其中表現該功能性囓齒動物Adam6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段。
在例示性具體例603中，本文提供具體例601或具體例602之方法，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被納入與免疫球蛋白重鏈可變區相同的染色體上。
在例示性具體例604中，本文提供具體例601至603中任一項之方法，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列被納入經改造免疫球蛋白重鏈基因座中。
在例示性具體例605中，本文提供具體例601至604中任一項之方法，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列取代人類Adam6假基因。
在例示性具體例606中，本文提供具體例601至605中任一項之方法，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列取代人類Adam6假基因。
在例示性具體例607中，本文提供具體例601至606中任一項之方法，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列介於第一人類VH基因段以及第二人類VH基因段之間。
在例示性具體例608中，本文提供具體例607之方法，其中第一人類VH基因段為VH1-2而第二人類VH基因段為VH6-1。
在例示性具體例609中，本文提供具體例601至604中任一項之方法，其中編碼該囓齒動物ADAM6多肽、其功能性異種同源物、功能性同源物或功能性片段的核苷酸序列介於人類VH基因段以及人類DH基因段之間。
在例示性具體例610中，本文提供具體例519至609中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處。
在例示性具體例611中，本文提供具體例610之方法，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白重鏈基因座。
在例示性具體例612中，本文提供具體例519至611中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例613中，本文提供具體例519至611中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例614中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、囓齒動物IgG2a跨膜域與囓齒動物IgG2a細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段、人類DH基因段及人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、囓齒動物IgG2a跨膜域與囓齒動物IgG2a細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中該免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至該免疫球蛋白重鏈恆定區，以使得該囓齒動物生產含有衍生自人類VH基因段、人類DH基因段與人類JH基因段之人類可變域以及衍生自經修飾CH基因段之重鏈恆定域的IgG抗體。
在例示性具體例615中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH 基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、人類IgG1跨膜域與人類IgG1細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、人類IgG1跨膜域與人類IgG1細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域的IgG抗體。
在例示性具體例616中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、囓齒動物IgG1跨膜域與囓齒動物IgG1細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、 囓齒動物IgG1跨膜域與囓齒動物IgG1細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域的IgG抗體。
在例示性具體例617中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、人類IgG4跨膜域與人類IgG4細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、人類IgG4跨膜域與人類IgG4細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域的IgG抗體。
在例示性具體例618中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白 重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有完整人類重鏈的IgG抗體。
在例示性具體例619中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有完整人類重鏈的IgG抗體。
在例示性具體例620中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造囓齒動物重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii) 免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有具囓齒動物可變域以及人類恆定域之重鏈的IgG抗體。
在例示性具體例621中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座之囓齒動物的方法，該經改造囓齒動物重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，使得其包含經改造免疫球蛋白重鏈基因座，該經改造免疫球蛋白重鏈基因座包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有具囓齒動物可變域以及人類恆定域之重鏈的IgG抗體。
在例示性具體例622中，本文提供具體例614至621中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處。
在例示性具體例623中，本文提供具體例622之方法，其中經改造免疫球蛋白重鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白重鏈基因座。
在例示性具體例624中，本文提供具體例614至623中任一項之方法，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例625中，本文提供具體例614至623中任一項之方法，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白重鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例626中，本文提供具體例519至625中任一項之方法，其進一步包含修飾囓齒動物的基因體，以使得在其基因體進一步包含經改造免疫球蛋白κ鏈基因座，該經改造免疫球蛋白κ鏈基因座包含：(1)免疫球蛋白κ鏈可變區，包含人類Vκ基因段與人類Jκ基因段；以及(2)免疫球蛋白κ鏈恆定區，包含人類Cκ基因段，其中免疫球蛋白κ鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白κ鏈恆定區，使得該囓齒動物產生抗體，該抗體包含衍生自人類Vκ基因段與人類Jκ基因段的輕鏈可變域，以及衍生自人類Cκ基因段的輕鏈恆定域。
在例示性具體例627中，本文提供具體例626之方法，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含囓齒動物內含子性κ增強子(Eκi)。
在例示性具體例628中，本文提供具體例626之方法，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含人類內含子性κ增強子(Eκi)。
在例示性具體例629中，本文提供具體例626至628中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含囓齒動物3'κ增強子(Eκ3' )。
在例示性具體例630中，本文提供具體例626至628中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含人類3'κ增強子(Eκ3' )。
在例示性具體例631中，本文提供具體例626至630中任一項之方法，其中該免疫球蛋白κ鏈可變區包含至少6個人類Vκ基因段。
在例示性具體例632中，本文提供具體例626至631中任一項之方法，其中該免疫球蛋白κ鏈可變區包含全部人類Jκ基因段。
在例示性具體例633中，本文提供具體例626至632中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白κ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白κ鏈基因座處。
在例示性具體例634中，本文提供具體例633之方法，其中該經改造免疫球蛋白κ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白κ鏈基因座。
在例示性具體例635中，本文提供具體例626至634中任一項之方法，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白κ鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例636中，本文提供具體例626至634中任一項之方法，其中囓齒動物就經改造免疫球蛋白κ鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例637中，本文提供具體例519至636中任一項之在其基因體進一步包含經改造免疫球蛋白λ鏈基因座的方法，該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含：人類Vλ基因段、人類Jκ基因段及人類Cλ基因段，其中該人類Vλ基因段與人類Jλ基因段可操作地連結至人類Cλ基因段，使得該囓齒動物產生包含衍生自人類Vλ基因段與人類Jλ基因段的輕鏈可變域，以及衍生自人類Cλ基因段的輕鏈恆定域的抗體。
在例示性具體例638中，本文提供具體例637之方法，其中人類Cλ基因段為人類Cλ1基因段。
在例示性具體例639中，本文提供具體例638之方法，其中人類Jλ基因段為人類Jλ1基因段。
在例示性具體例640中，本文提供具體例637之方法，其中人類Cλ基因段為人類Cλ2基因段。
在例示性具體例641中，本文提供具體例640之方法，其中人類Jλ基因段為人類Jλ2基因段。
在例示性具體例642中，本文提供具體例637之方法，其中人類Cλ基因段為人類Cλ3基因段。
在例示性具體例643中，本文提供具體例642之方法，其中人類Jλ基因段為人類Jλ3基因段。
在例示性具體例644中，本文提供具體例637之方法，其中人類Cλ基因段為人類Cλ6基因段。
在例示性具體例645中，本文提供具體例644之方法，其中人類Jλ基因段為人類Jλ6基因段。
在例示性具體例646中，本文提供具體例637之方法，其中人類Jλ基因段為人類Jλ7基因段。
在例示性具體例647中，本文提供具體例637至646中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Cλ1基因段、人類Cλ2基因段、人類Cλ3基因段、人類Cλ6基因段與囓齒動物Cλ1基因段。
在例示性具體例648中，本文提供具體例647之方法，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Jλ1基因段、人類Jλ2基因段、人類Jλ3基因段、人類Jλ6基因段與人類Jλ7基因段。
在例示性具體例649中，本文提供具體例648之囓齒動物ES細胞，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Jλ1-Cλ1基因段簇、人類Jλ2-Cλ2基因段簇、人類Jλ3-Cλ3基因段簇、人類Jλ6-Cλ6基因段簇與人類Jλ7-囓齒動物Cλ1基因段簇。
在例示性具體例650中，本文提供具體例637至649中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座包含至少7個人類Vλ基因段。
在例示性具體例651中，本文提供具體例637至650中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子2.4。
在例示性具體例652中，本文提供具體例637至651中任一項之方法，其中該經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物3'λ增強子。
在例示性具體例653中，本文提供具體例637至652中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子3.1。
在例示性具體例654中，本文提供具體例637至653中任一項之方法，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含人類3'λ增強子。
在例示性具體例655中，本文提供具體例637至654中任一項之，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白λ鏈基因座處。
在例示性具體例656中，本文提供具體例655之方法，其中經改造免疫球蛋白λ鏈基因座取代全部或部分內源性免疫球蛋白λ鏈基因座。
在例示性具體例657中，本文提供具體例637至656中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白λ鏈基因座來說為異型合子。
在例示性具體例658中，本文提供具體例637至656中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造免疫球蛋白λ鏈基因座來說為同型合子。
在例示性具體例659中，本文提供具體例519至658中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造新生兒Fc受體(FcRn)基因座，該基因座含有編碼具有人類胞外域之FcRn多肽的核酸序列。
在例示性具體例660中，本文提供具體例659之方法，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例661中，本文提供具體例659之方法，其中FcRn多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例662中，本文提供具體例659至661中任一項之方法，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例663中，本文提供具體例659至661中任一項之方法，其中FcRn多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例664中，本文提供具體例659至663中任一項之方法，其中編碼FcRn多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcRn基因座處。
在例示性具體例665中，本文提供具體例664之方法，其中編碼FcRn多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcRn基因。
在例示性具體例666中，本文提供具體例665之方法，其中編碼FcRn胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcRn胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例667中，本文提供具體例659至666中任一項之方法，其中囓齒動物不表現囓齒動物FcRn。
在例示性具體例668中，本文提供具體例659至667中任一項之方法，其中囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為異型合子。
在例示性具體例669中，本文提供具體例659至667中任一項之方法，其中囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為同型合子。
在例示性具體例670中，本文提供具體例659至669中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，該基因座含有編碼人類或人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在例示性具體例671中，本文提供具體例670之方法，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。
在例示性具體例672中，本文提供具體例671之方法，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物β2M基因。
在例示性具體例673中，本文提供具體例670至672中任一項之囓齒動物，其中該核酸序列包含人類β2M基因的外顯子2-4。
在例示性具體例674中，本文提供具體例670至673中任一項之方法，其中該囓齒動物不表現囓齒動物β2M多肽。
在例示性具體例675中，本文提供具體例560至674中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為異型合子。
在例示性具體例676中，本文提供具體例560至674中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為同型合子。
在例示性具體例677中，本文提供具體例519至676中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造Fcε受體1α(FcεR1α)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列。
在例示性具體例678中，本文提供具體例677之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例679中，本文提供具體例677之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例680中，本文提供具體例677至679中任一項之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例681中，本文提供具體例677至679中任一項之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例682中，本文提供具體例677至681任一項之方法，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。
在例示性具體例683中，本文提供具體例682之方法，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因座。
在例示性具體例684中，本文提供具體例683之方法，其中FcεR1α多肽包含人類胞外域、人類跨膜域以及人類細胞質域。
在例示性具體例685中，本文提供具體例677之方法，其中編碼人類FcεR1α胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcεR1α胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例686中，本文提供具體例677至685中任一項之方法，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcεR1α。
在例示性具體例687中，本文提供具體例677至686中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為異型合子。
在例示性具體例688中，本文提供具體例677至686中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為同型合子。
在例示性具體例689中，本文提供具體例519至688中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體1a(FcγR1a)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcγR1a多肽的核酸序列。
在例示性具體例690中，本文提供具體例689之方法，其中FcγR1a多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例691中，本文提供具體例689之方法，其中FcγR1a多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例692中，本文提供具體例689至691中任一項之方法，其中FcγR1a多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例693中，本文提供具體例689至691中任一項之方法，其中FcγR1a多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例694中，本文提供具體例689至693中任一項之方法，其中編碼該FcγR1a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcγR1a基因座處。
在例示性具體例695中，本文提供具體例694之方法，其中編碼該FcγR1a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcγR1a基因。
在例示性具體例696中，本文提供具體例689之方法，其中編碼人類FcγR1a胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcγR1a胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例697中，本文提供具體例689至696中任一項之方法，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcγR1a。
在例示性具體例698中，本文提供具體例689至697中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR1a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例699中，本文提供具體例689至697中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR1a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例700中，本文提供具體例519至699中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2a(FcγR2a)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2a多肽的核酸序列，在例示性具體例701中，本文提供具體例700之方法，其中編碼FcγR2a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例702中，本文提供具體例701之方法，其中編碼人類FcγR2a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例703中，本文提供具體例700至702中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR2a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例704中，本文提供具體例700至702中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR2a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例705中，本文提供具體例519至704中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2b(FcγR2b)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2b多肽的核酸序列。
在例示性具體例706中，本文提供具體例705之方法，其中編碼FcγR2b多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例707中，本文提供具體例706之方法，其中編碼人類FcγR2b多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例708中，本文提供具體例705至707中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR2b基因座來說為異型合子。
在例示性具體例709中，本文提供具體例705至707中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR2b基因座來說為同型合子。
在例示性具體例710中，本文提供具體例519至709中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體3a(FcγR3a)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR3a多肽的核酸序列。
在例示性具體例711中，本文提供具體例710之方法，其中編碼FcγR3a多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例712中，本文提供具體例711之方法，其中編碼人類FcγR3a多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例713中，本文提供具體例710至712中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR3a基因座來說為異型合子。
在例示性具體例714中，本文提供具體例710至712中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR3a基因座來說為同型合子。
在例示性具體例715中，本文提供具體例519至714中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體3b(FcγR3b)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR3b多肽的核酸序列。
在例示性具體例716中，本文提供具體例715之方法，其中編碼FcγR3b多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例717中，本文提供具體例716之方法，其中編碼人類FcγR3b多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例718中，本文提供具體例715至717中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR3b基因座來說為異型合子。
在例示性具體例719中，本文提供具體例715至717中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR3b基因座來說為同型合子。
在例示性具體例720中，本文提供具體例519至719中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造Fcγ受體2c(FcγR2c)基因座，該基因座包含編碼人類FcγR2c多肽的核酸序列。
在例示性具體例721中，本文提供具體例720之方法，其中編碼FcγR2c多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物低親和力FcγR基因座處。
在例示性具體例722中，本文提供具體例721之方法，其中編碼人類FcγR2c多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物低親和力FcγR基因。
在例示性具體例723中，本文提供具體例720至722中任一項之方法，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcγR2c。
在例示性具體例724中，本文提供具體例720至723中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR2c基因座來說為異型合子。
在例示性具體例725中，本文提供具體例720至723中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcγR2c基因座來說為同型合子。
在例示性具體例726中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造新生兒Fc受體(FcRn)基因座之囓齒動物的方法，該經改造FcRn基因座包含編碼含有人類胞外域之FcRn多肽的核酸序列，該方法包含修飾囓齒動物的基因體，以使得其含有新生兒Fc受體(FcRn)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcRn多肽的核酸序列。
在例示性具體例727中，本文提供具體例726之方法，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例728中，本文提供具體例726之方法，其中FcRn多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例729中，本文提供具體例726至728中任一項之方法，其中FcRn多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例730中，本文提供具體例726至728中任一項之方法，其中FcRn多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例731中，本文提供具體例726至730中任一項之方法，其中編碼FcRn多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcRn基因座處。
在例示性具體例732中，本文提供具體例731之方法，其中編碼FcRn多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcRn基因。
在例示性具體例733中，本文提供具體例732之方法，其中編碼人類FcRn胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcRn胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例734中，本文提供具體例726至733中任一項之方法，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcRn。
在例示性具體例735中，本文提供具體例726至734中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為異型合子。
在例示性具體例736中，本文提供具體例726至734中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcRn基因座來說為同型合子。
在例示性具體例737中，本文提供具體例726至736中任一項之方法，在其基因體內進一步包含經改造β-2-微球蛋白(β2M)基因座，該基因座包含編碼人類或人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
在例示性具體例738中，本文提供具體例737之方法，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物β2M基因座處。
在例示性具體例739中，本文提供具體例738之方法，其中編碼人類或人類化β2M多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物β2M基因。
在例示性具體例740中，本文提供具體例737至739中任一項之囓齒動物，其中該核酸序列包含人類β2M基因的外顯子2-4。
在例示性具體例741中，本文提供具體例737至740中任一項之方法，其中該囓齒動物不表現囓齒動物β2M多肽。
在例示性具體例742中，本文提供具體例737至741中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為異型合子。
在例示性具體例743中，本文提供具體例737至741中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造β2M基因座來說為同型合子。
在例示性具體例744中，本文提供一種製造在其基因體內包含經改造Fcε受體1α(FcεR1α)基因座之囓齒動物的方法，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列，該方法包含修飾囓齒動物之基因體，以使得其含有經改造FcεR1α基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列。
在例示性具體例745中，本文提供具體例744之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物跨膜域。
在例示性具體例746中，本文提供具體例744之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含人類跨膜域。
在例示性具體例747中，本文提供具體例744至746中任一項之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含囓齒動物細胞質域。
在例示性具體例748中，本文提供具體例744至746中任一項之方法，其中FcεR1α多肽進一步包含人類細胞質域。
在例示性具體例749中，本文提供具體例744至748中任一項之方法，其中編碼FcεR1α多肽的核酸序列座落在內源性囓齒動物FcεR1α基因座處。
在例示性具體例750中，本文提供具體例749之方法，其中編碼人類FcεR1α多肽的核酸序列取代全部或部分內源性囓齒動物FcεR1α基因。
在例示性具體例751中，本文提供具體例750之方法，其中該FcεR1α多肽包含人類胞外域、人類跨膜域以及人類細胞質域。
在例示性具體例752中，本文提供具體例744之方法，其中編碼人類FcεR1α胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcεR1α胞外域的內源性核酸序列。
在例示性具體例753中，本文提供具體例744至752中任一項之方法，其中該囓齒動物不表現囓齒動物FcεR1α。
在例示性具體例754中，本文提供具體例744至753中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為異型合子。
在例示性具體例755中，本文提供具體例744至753中任一項之方法，其中該囓齒動物就經改造FcεR1α基因座來說為同型合子。
在例示性具體例756中，本文提供具體例519至755中任一項之方法，其中該囓齒動物為小鼠。
在例示性具體例757中，本文提供具體例519至755中任一項之方法，其中該囓齒動物為大鼠。
本實例說明建構一系列靶向載體的例示性方法，該等靶向載體是用於插入至非人類動物(例如囓齒動物，例如小鼠)的基因體內。本實例中所述的方法說明產生非人類動物，其基因體內包含經改造免疫球蛋白重鏈恆定區及/或經改造免疫球蛋白輕鏈(κ或λ)恆定區。特別地，本實例說明建構用於改造免疫球蛋白重恆定區的靶向載體，使得非人類動物表現及/或產生包括具有人類可變域和完全或部分(包含人類部分和囓齒動物部分)人類恆定域的免疫球蛋白重鏈的抗體。也說明用於改造免疫球蛋白輕恆定區的靶向載體，使得非人類動物表現及/或產生包括具有人類可變域和完全或部分(例如包括人類部分和囓齒動物部分)人類恆定域的免疫球蛋白輕鏈的抗體。此外，預期此類抗體在非人類動物的B細胞表面上形成功能性B細胞受體。含有經選定、經改造免疫球蛋白重鏈恆定區的各種囓齒動物品系的示意性歸納列於圖1A中，而含有經選定、經改造免疫球蛋白輕鏈恆定區的各種囓齒動物品細的示意性歸納列於圖2A中。為簡明起見，未顯示人類VH基因段；僅示意性地呈現少數基因段-關於可能存在的V(D)J基因段的完整 序目，參見imgt.org；Lefranc,M.-P.,Exp.Clin.Immunogenet.,18,100-116(2001)；Lefranc,M.-P.and Lefranc,G.,The Immunoglobulin FactsBook,Academic Press,London,458 pages(2001)；美國專利第8,642,835號與第8,697,940號；或Macdonald et al.PNAS(2014)vol.111(14)：5147-5152，全部以整體引用的方式併入本文。
使用VELOCIGENE®技術(例如參見美國專利第6,586,251號與Valenzuela et al.,2003,Nature Biotech.21(6)：652-9；以引用的方式併入本文)和技藝中已知的分子生物學技術，從人類和小鼠細菌人工染色體(BAC)產生含有人類免疫球蛋白恆定區編碼序列的DNA建構體和靶向載體，以供插入至選定囓齒動物免疫球蛋白恆定區。本實例中所述的方法可根據需要用於利用任何人類免疫球蛋白恆定區編碼序列或編碼序列(或序列片段)的組合。
靶向BAC DNA被用來電穿孔小鼠ES細胞以產生經修飾ES細胞，供產生表現人類或嵌合小鼠/人類免疫球蛋白恆定區編碼序列的小鼠所用，如圖1A和圖2A所示。透過定量TAQMANTM分析鑑定含有適當修飾的ES細胞(參見，例如Lie and Petropoulos,1998.Curr.Opin.Biotechnology 9：43-48，以引用的方式併入本文)。設計特異性引子組和探針用於檢測插入的人類序列(獲得對偶基因，GOA)以及刪除的小鼠序列(失去對偶基因，LOA)。
將靶向ES細胞用作為供體ES細胞，並透過VELOCIMOUSE®方法引入至8細胞期小鼠胚胎中(參見，例如美國專利第7,294,754號和Poueymirou et al.(2007)F0 generation mice that are essentially fully derived from the donor gene-targeted ES cells allowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1)：91-99)。使用修改過的對偶基因分析，透過基因分型鑑定出獨立地帶有經修飾對偶基因的VELOCIMICE®(完全衍生自供體ES細胞的F0小鼠)，該修改過的對偶基因分析測定獨特基因序列(例如人類基因序列)的存在。帶有經修飾對偶基因的選定異型合子小鼠被育種成同型合子。
為了產生可用於人類抗體測試(例如，治療性抗體的藥動學和給藥研究)的囓齒動物，實施了幾種方法。在第一個方法中，產生包含人類重鏈可變區和重鏈恆定區的小鼠，該重鏈恆定區包含嵌合(人類CH1-H-CH2-CH3編碼序列和小鼠M1-M2編碼序列)或完全人類(CH1-H-CH2-CH3-M1-M2編碼序列)重鏈恆定區基因段。舉例來說，此類小鼠可用於測試與經修飾基因段編碼之免疫球蛋白恆定域(即恆定域的CH1-H-CH2-CH3部分)同型匹配的治療性抗體(例如，在包含經遺傳改造IgG1恆定的小鼠體內測試IgG1抗體)。
在一個實例中，建構包含人類重鏈可變區序列和嵌合人類(人類CH1-H-CH2-CH3)-小鼠(小鼠M1-M2)恆定區序列的小鼠，其中人類IgG1的CH1-H-CH2-CH3編碼序列在內源性IgG2a基因座處與小鼠IgG2a的M1-M2編碼序列可操作地連結(圖1A，小鼠基因座1)。簡言之，使用包括來自Blue Heron的人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3合成基因並且側接與小鼠IgG2a恆定區基因重疊之區域的DNA片段來建構質體。經由消化/接合/CRIPSR-Cas9等溫組裝的幾個步驟，選殖出所得質體以產生BAC純系，使得人IgG1 CH1-H-CH2-CH3序列可操作地連結至小鼠IgG2a恆定區基因的跨膜和細胞質編碼序列(亦即M1和M2外顯子)。BAC純系還含有小鼠IgG2a切換區(Sγ2a)和小鼠IgE切換區(Sε)，以及小鼠IgE恆定區基因段。經由電穿孔將純系引入小鼠ES細胞中而產生經遺傳修飾ES細胞，其可用於產生包含圖1A，基因座1中所示的免疫球蛋白基因座的小鼠，其中編碼恆定域的人類IgG1胞外部分的核酸序列在內源性小鼠IgG2a基因座處可操作地連結至編碼恆定域之小鼠IgG2a連接跨膜部分和細胞質部分的核酸序列。剩餘的重鏈恆定區同型序列是完全小鼠。用於電穿孔的小鼠ES細胞包含可操作地連結至小鼠重鏈恆定區的人類重鏈可變基因段(人類VH、D，與JH可變基因段)，包括被插入的鼠類Adam6編碼序列；參見，例如美國專利第8,642,835號和第8,697,940號，以引用的方式併入本文。
在另一個實例中，建構在內源性小鼠IgG2a基因座處包含人類重鏈可變區序列和完全人類IgG1恆定區序列(人類CH1-H-CH2-CH3-M1-M2)的小鼠(圖1A，小鼠基因座2)。簡而言之，使用BAC 純系RP11-448n5(Thermo Fisher Scientific)作為模板來擴增人類M1-M2序列，並且在被引入BAC純系的幾個遺傳改造步驟的過程中用來產生上述小鼠基因座1代替內源性小鼠IgG2a M1-M2序列。用於引入ES細胞的所得BAC純系包含具有人類IgG1 CH1-H-CH2-CH3編碼序列、小鼠IgG2a(Sγ2a)和IgE(Sε)切換區，以及小鼠IgE恆定區基因段的DNA片段。由經遺傳修飾ES細胞產生的小鼠包含圖1A，基因座2中描繪的免疫球蛋白基因座，其中編碼人類IgG1恆定域的核酸序列在內源性小鼠IgG2a基因段基因座處取代編碼內源性小鼠IgG2a恆定域的核酸序列。剩餘的重鏈恆定區同型序列是完全小鼠。本文使用的小鼠ES細胞包含可操作地連結至小鼠重鏈恆定區的人類重鏈可變基因段(人類VH、D和JH可變基因段)，包括被插入的鼠類Adam6編碼序列；參見，例如，美國專利第8,642,835號和第8,697,940號，併入本文作為參考資料。
在又一個實例中，建構包含人類重鏈可變區序列和嵌合人類(人類CH1-H-CH2-CH3)-小鼠(小鼠M1-M2)恆定區序列的小鼠，其中人類IgG4的CH1-H-CH2-CH3編碼序列在內源性IgG1基因座處與小鼠IgG1的M1-M2編碼序列可操作地連結(圖1A，小鼠基因座3)。簡言之，使用BAC CTD-3034B12(Thermo Fisher Scientific)作為模板，建構質體，其包括編碼人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3的DNA片段，側接與小鼠IgG1恆定區基因重疊的區域。經由消化/接合/CRIPSR-Cas9等溫組裝的幾個步驟將所得質體選殖到BMQ-263J18(The Sanger Center)中以產生BAC純系，從而使人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3序列可操作地連結至小鼠IgG1恆定區基因的跨膜和細胞質編碼序列(即M1和M2外顯子)。此BAC純系還含有小鼠IgG1切換區(Sγ1)和小鼠IgG2b恆定區基因段。經由電穿孔將純系引入小鼠ES細胞中而產生經遺傳修飾ES細胞，以供產生包含圖1A，基因座3中描繪的免疫球蛋白基因座的小鼠，其中編碼恆定域的人類IgG4胞外部分的核酸序列在內源性小鼠IgG1基因段基因座處可操作地連結至編碼恆定域的小鼠IgG1跨膜部分的核酸序列。剩餘的重鏈恆定區同型序列是完全小鼠。用於電穿孔的小鼠ES細胞包含可操作地連結至小鼠重鏈恆定區的人類重鏈可變基因段(人類VH、D和JH 可變基因段)，包括被插入的鼠類Adam6編碼序列；參見，例如美國專利第8,642,835號和第8,697,940號，以引用的方式併入本文。
在又另一個實例中，建構在內源性小鼠IgG1基因座處包含人類重鏈可變區序列和完全人類IgG4恆定區序列(人類CH1-H-CH2-CH3-M1-M2)的小鼠(圖1A，小鼠基因座4)。簡言之，使用BAC純系CTD-3034B12(Thermo Fisher Scientific)作為模板來擴增人類CH1-H-CH2-CH3-M1-M2序列，並且在引入至BAC純系BMQ-263.J18(The Sanger Centre)的遺傳改造的幾個步驟過程中取代內源性小鼠IgG1 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2序列。用於引入ES細胞的所得BAC純系包含含有人類IgG4 CH1-H-CH2-CH3-M1-M2編碼序列和小鼠IgG1(Sγ1)切換區，以及小鼠IgG2b恆定區基因段的DNA片段。由經遺傳修飾ES細胞產生的小鼠包含圖1A，4中描繪的免疫球蛋白基因座，其中編碼人類IgG4恆定結構域的核酸序列在內源性小鼠IgG1基因段基因座處取代編碼內源性小鼠IgG1恆定域的核酸序列。剩餘的重鏈恆定區同型序列是完全小鼠。用於電穿孔的小鼠ES細胞包含可操作地連結至小鼠重鏈恆定區的人類重鏈可變基因段(人類VH、D和JH可變基因段)，包括被插入的鼠類Adam6編碼序列；參見，例如美國專利第8,642,835號和第8,697,940號，以引用的方式併入本文。
也建構在內源性小鼠免疫球蛋白重鏈基因座處包含含有完整人類IgM、IgD、IgG3和IgG1基因段之人類重鏈可變區和恆定區的小鼠(圖1A，小鼠5)。
為了產生用於靶向包含人類重鏈可變區和人類重鏈恆定區的小鼠ES細胞的建構體，首先產生在內含子性增強子(Eμ)與3'調節區(3'RR)之間包含整個小鼠IgH恆定區(IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2b、IgG2a，IgE和IgA)刪除的建構體，然後靶向至VELOCIMMUNE® ES細胞中。
簡言之，先前描述於Macdonald et al.PNAS(2014)vol.111(14)：5147-5152(以引用的方式併入本文)中的BAC(被命名為3hVh BACvec)是透過經由細菌同源性重組(BHR)與選擇匣交換而移除3hVH的3'小鼠IgM基因，還有移除5'小鼠同源臂來進行修飾。透過BAC RP23-351j19(Thermo Fisher Scientific)的兩次BHR修飾來製造3'小鼠同源臂，其包括從 RP23-351j19的5'末端刪除小鼠IgG2b、IgG2a、IgE和IgA基因，並且併入獨特的限制位點。將這第二個建構體的限制片段接合到第一建構體中以製造出最終LTVEC(MAID6022)。MAID6022從5'至3'含有：EM7 hyg匣、人類IGHDs/IGHJs、來自BAC CT7-302a07的小鼠IgM增強子、合成連接子、獨特I-CeuI位點、在3'lox2372位點的5處具有獨特AscI位點的lox2372-ub-neo-lox2372匣、小鼠IgH基因座的40.5kb區域(始於IgA基因的3'UTR並止於3'RR的下游)，以及獨特PI-SceI位點。
這個載體被命名為MAID6022(圖1B)，並在下一個改造步驟中用於引入人類重鏈可變區序列。
接下來，透過BHR來修飾BAC RP11-448n5的人類DNA(Thermo Fisher Scientific)，以修整BAC的3'末端並插入lox2372-ub-hyg-lox2372匣。該匣在3'lox2372位點的5'處含有獨特AscI位點。人類-lox2372連接是在IgG1聚A信號下游的3.7kb。此建構體命名為VI694。經由幾個BHR步驟從小鼠BAC RP23-351j19 Thermo Fisher Scientific獲得3'小鼠同源臂，並接合至人類BAC上。所得到的BAC純系包含下面序列，列於表1中：
將所得到的大靶向載體電穿孔到ES細胞中，該等ES細胞包含人類重鏈可變基因段、被插入的鼠類Adam6編碼序列和小鼠重鏈恆定區序列的170Kb刪除(參見圖1B)。在引入人類恆定區序列後，使用Cre重組酶移除篩選匣。在篩選匣刪除之前，圖1A的小鼠基因座5的經修飾對偶基因之不同序列的連接列於下表2中。
由經遺傳修飾ES細胞產生的小鼠包含圖1A，基因座5中描繪的免疫球蛋白基因座，其中編碼人類IgM、IgD、IgG3、IgG1恆定區基因段的核酸序列在內源性小鼠重鏈恆定區基因座處取代編碼內源性小鼠重鏈恆定區基因段的核酸。
也在內源性重鏈基因座處建構包含額外人類重鏈恆定區序列(例如人類IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4序列)的小鼠。圖1A中描繪的這些小鼠(小鼠6)在內源性小鼠免疫球蛋白重鏈基因座處包含人類重鏈可變區和完全人IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4序列。
簡言之，從人類BAC CTD-3034B12(Thermo Fisher Scientific)獲得包含IgG2和IgG4序列的42.9Kb人類DNA序列，並經由細菌同源性重組、消化和接合的數個步驟進行修飾，以添加5'和3'人類同源臂。所得BAC純系的基因體座標列於下表3中。
將所得到的大靶向載體電穿孔到包含上述小鼠基因座5之人類重鏈可變區和人類重鏈IgM、IgD、IgG3和IgG1恆定區基因段的ES細胞中 (參見圖1C)。所得到的對偶基因的各種連接描述於下表4中。透過Cre重組酶移除篩選匣。
由經遺傳修飾ES細胞產生的小鼠包含圖1A，6中描繪的免疫球蛋白基因座，其中編碼人IgM、IgD、IgG3、IgG1，IgG2和IgG4恆定區基因段的核酸序列在內源性小鼠重鏈恆定區基因座處取代編碼內源性小鼠重鏈恆定區基因段的核酸序列。
在本實例中產生之包含人類重鏈可變區和嵌合或完全人類重鏈恆定區的所有經遺傳修飾ES細胞被用於使用上述VELOCIMOUSE®方法來製備經遺傳修飾小鼠。
為了產生用於靶向包含小鼠重鏈可變區和人類重鏈恆定區之小鼠ES細胞的建構體，首先產生在內含子性增強子(Eμ)與3'調節區(3'RR)之間包含整個小鼠IgH恆定區(IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2b、IgG2a、IgE和IgA)刪除的建構體。
簡言之，透過PCR從BAC純系BMQ-451A16(The Sanger Center)擴增5.2kb 5'小鼠同源臂，並使用等溫組裝被選殖到具有R6K複製起 點和lox2372-ub-neo匣的質體中。所得到的質體從5'至3'含有：392bp R6K ori、獨特I-CeuI位點、小鼠IgH基因座的5.2kb區域(包括DQ52、JH1-4和Eμ)、獨特NotI位點、lox2372-ub-neo匣和獨特AscI位點。將這個質體消化，並將質體的I-CeuI-AscI片段接合至小鼠BAC純系RP23-351j19(Thermo Fisher Scientific)的載體中，該載體從5'至3'含有：獨特I-CeuI位點、在3'lox2372位點的5'具有獨特AscI位點的lox2372-ub-hyg-lox2372匣、小鼠IgH基因座的40.5kb區域(始於IgA基因的3'UTR並止於3'RR的下游)、獨特PI-SceI位點和觀黴素抗性(Spec)匣。所得到的載體從5'至3'含有：獨特I-CeuI位點、5.2kb 5'小鼠同源臂(包括DQ52、JH1-4和Eμ)、獨特NotI位點、lox2372-ub-neo-lox2372匣、40.5kb 3'小鼠同源臂(包括IgH 3'RR)、獨特PI-SceI位點和Spec匣。這個載體(在圖1D中描繪為MAID6577)在下一個改造步驟中用於引入人類重鏈可變區序列，並且還用於電穿孔到小鼠ES細胞中以產生帶有整個小鼠整個小鼠IgH恆定區刪除的ES細胞。
在下一個改造步驟中，透過BHR修飾人類BAC純系RP11-448n5，以用lox2372-ub-hyg-lox2372匣來替換5.3kb的人類插入物和CM匣。該匣在3'lox2372位點的5'含有獨特AscI位點。人類-lox2372連接在IgG1聚A信號下游3.7kb。這個建構體命名為VI694。隨後，藉由BHR修飾VI694，以用CM匣和獨特NotI位點替換34.3kb的人類插入物。NotI-人類連接在Eμ的3'以及IgM切換區(Sμ)的5'。這個建構體被命名為VI695。將VI695的131.7kb NotI-AscI片段(人類插入物和lox2372-ub-hyg匣)接合到MAID6577中以製備最終靶向載體MAID6739(圖1A中的小鼠基因座7)。MAID6739從5'到3'含有：獨特I-CeuI位點、5.2kb 5'小鼠同源臂(包括DQ52、JH1-4，和Eμ)、獨特NotI位點、人類IgH恆定基因基因座的130kb區域(包括IgM、IgD、IgG3和IgG1基因)、lox2372-ub-hyp-lox2372匣、40.5kb 3'小鼠同源臂(始於IgA的3'UTR，以及止於3'RR的3')、獨特PI-SceI位點和Spec匣。靶向載體的基因體座標如表5所示，經修飾對偶基因的連接序列列於表6中。
將得到的大靶向載體電穿孔到包含整個小鼠IgH恆定區(MAID 6577)刪除的小鼠ES細胞中，以插入人類IgM、IgD、IgG3和IgG1基因段。透過Cre重組酶移除篩選匣。
由經遺傳修飾ES細胞產生的小鼠包含圖1A，基因座7中描繪的免疫球蛋白基因座，其中編碼人IgM、IgD、IgG3、IgG1恆定區基因段的核酸序列在內源性小鼠重鏈恆定區基因座處取代編碼內源性小鼠重鏈恆定區基因段的核酸。
在產生包含圖1A，基因座7中描繪的小鼠基因座的ES細胞和小鼠之後，產生在內源性重鏈基因座處包含額外人類重鏈恆定區序列(諸如人類IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4序列)的小鼠。這些小鼠，如圖1A，基因座8中描繪，在內源性小鼠免疫球蛋白重鏈基因座處包含小鼠重鏈可變區和完全人類IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4區基因段。為了產生這些小鼠，如上所述使用相同的靶向載體和方案來建構小鼠基因座6，如圖1E所示。
在本實例中，包含本實例中產生之小鼠重鏈可變區和嵌合或人類重鏈恆定區的所有經遺傳修飾ES細胞被用來使用上述VELOCIMOUSE®方法製備經遺傳修飾的小鼠。
如下產生包含人類輕鏈恆定區的經遺傳改造小鼠。
首先，為了產生包含人類κ輕鏈恆定區的小鼠，透過BlueHeron合成0.5Kb的人類IGKC基因，並且含有從IGKC基因遠端的5'UTR至聚A尾下游3'末端的基因體核酸序列。在此序列的3'末端處添加loxP-Ub-Neo-loxP篩選匣。使用CRISPR/Cas9和等溫組裝技術將人類IGKC序列引入小鼠BAC BMQ-126m16(The Sanger Center)。然後使用spec篩選匣藉由BHR移除5'CM匣和小鼠IgKJ。所得BAC純系的基因體座標描述於表7中，而經修飾對偶基因的連接序列列於表8中。
如圖2B中所示，將包含人類IgKC區序列的所得大靶向載體電穿孔至ES細胞，該等ES細胞包含免疫球蛋白基因座，其中人類κ輕鏈可變基因段可操作地連結至小鼠恆定κ恆定區(參見，例如Macdonald et al.PNAS(2014)vol.111(14)：5147-5152，以引用的方式併入本文)。透過Cre重組酶移 除篩選匣。使用上述VELOCIMOUSE®方法將經遺傳修飾ES細胞用於製備經遺傳修飾小鼠。
最後，在另一個實例中，包含人類λ恆定區序列的小鼠描述於2017年11月3日提申的US 15/803,513(作為US 2008/0125043公開)，其以整體引用的方式併入本文。
帶有經改造重鏈恆定區(例如，例如實例1.1-1.2中描述在內源性小鼠免疫球蛋白重鏈基因座處包含完全人類或嵌合重鏈恆定區序列)的小鼠與包含實例1.3中描述之人類IgK恆定區序列及/或人類IgL恆定區序列的小鼠育種。藉由技藝中公認的標準技術進行育種。針對人類重鏈恆定區序列和人類輕鏈恆定區序列的存在來對帶有預期經改造基因座的小鼠品系進行篩選。因此，將在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處包含人類重鏈可變基因段序列和人類或嵌合人類/小鼠重鏈恆定區序列的小鼠與本實例中描述之包含人類κ輕鏈可變基因段序列和人類κ輕鏈恆定區序列及/或人類λ輕鏈可變基因段序列和人類λ輕鏈恆定區序列一起育種。
小鼠抗人類抗體(MAHA)(一種因為小鼠對抗人類抗體所產生的免疫反應)可能導致因為藥動學及/或效力實驗而投藥之循環人類單株抗體快速廓清。為了在小鼠模型中獲得完全人類抗體更為相關的PK和給藥研究，測試了包含上面實例1中描述之人類IgH恆定區的小鼠規避MAHA反應的能力。就人類IgH恆定區為異型合子的小鼠表現出正常B細胞發育，表現人類和小鼠IgM/IgD，並證明完整無損的對偶基因排除。
在一個實例中，如圖1A、基因座5中所示，測試就人類重鏈可變區為同型合子，但就人類IgM、IgD、IgG3和IgG1恆定區基因段為異型合子的小鼠的MAHA反應降低。關於這些實驗，圈養所有小鼠並在Regeneron Pharmaceuticals的無病原體設施中育種。犧牲素樸VELOCIMMUNE®對照小鼠(16週齡大，雄性，n=2)以及素樸hVs、hIgM、hIgD、hIgG3與hIgG1(圖1A中的基因座5，20週齡大，雄性，n=4)小鼠，並且收取血液和脾臟。用ACK溶解緩衝液來溶解脾臟，然後用含有5% FBS的RPMI培養基洗滌。將血液收 集到血清分離管(BD,cat#365956)中，並按照製造商說明書來收集血清。正常人類血清(Quidel,cat#A113)用作ELISA的陽性對照。
如下使用ELISA分析總人類IgM抗體。在4℃下將盤用2μg/ml兔抗人類IgM抗體(Jackson ImmunoResearch cat # 309-005-095)塗覆過夜，洗滌，用PBS-T中的1% BSA阻斷。將ChromPure人類IgM標準品(Jackson ImmunoResearch cat # 009-000-012)在PBS-T中從600ng/ml連續稀釋至0.823ng/ml並加入孔中。將孔與經稀釋血清樣品一起培育、洗滌，並與HRP綴合的抗人類IgM抗體(Jackson ImmunoResearch # 309-035-095)一起培育。洗滌盤並用Opt EIA TMB受質試劑組(BD cat # 555214)顯色。用1N硫酸終止反應，並用Molecular Devices Spectramax M5微量盤讀取儀和SoftMax Pro軟體在450nm下測量經空白品校正的OD。使用Prism軟體分析數據。所呈現的數據是二重複點。此外，根據製造商說明書(分別為Invitrogen cat # BMS2092和BMS2094)進行人類IgG1和人類IgG3 ELISA。圖3A中顯示的Ig同型含量的結果證明，被引入的人類重鏈恆定同型在小鼠基因座5的經遺傳修飾小鼠血清中表現。
關於流式細胞術實驗，將1x106個細胞與抗小鼠CD16/CD32(2.4G2,BD)在冰上一起培育10分鐘。隨後用以下抗體組在冰上標記細胞30分鐘：抗小鼠FITC-CD3(17A2,BD)、A700-CD19(1D3,BD)、Pe-Cy7-IgM(11/41,eBioscience)、PerCP-Cy5.5-IgD(11-26c.2a,BioLegend)、抗人類PE-IgD(IA6-2,BioLegend)和BV421-IgM(G20-127,BD)。染色後，洗滌細胞並在2%甲醛中固定。在BD LSRFortessa流式細胞儀上進行數據擷取並用FlowJo分析。針對hIgM對mIgM和hIgD對mIgD來繪製B細胞(CD19+)，以顯示出對偶基因利用和對偶基因排除的存在(圖3B)。
透過西方墨點法分析從就免疫球蛋白人類恆定區為異型合子的幾種小鼠形式(例如，圖1A中描繪的基因座1、4、6和8小鼠)獲得的血清中的抗體分子量。將樣品在4-12% Tris-甘胺酸凝膠(Invitrogen)上運行、轉移至膜、在4℃下阻斷過夜，然後使用HRP綴合的抗人類IgG(Thermo # 31412)和HRP綴合的抗小鼠IgG(Thermo 31439)偵測抗體，並用ELC Western Blotting Detection Reagents(GE Health Care # RPN2106)顯色。西方墨點顯 示，如藉由異型合子人類Ig恆定區小鼠血清中抗人類IgG抗體所檢測到，包含人類免疫球蛋白恆定區的抗體的分子量與正常人類血清中的抗體分子量相近(數據未示出)。當與野生型和反向嵌合VELOCIMMUNE®小鼠之小鼠血清中的抗體分子量相比時，如藉由異型合子人類Ig恆定區小鼠血清中的抗小鼠IgG所檢測到，包含小鼠免疫球蛋白恆定區的抗體分子量也是相似的(數據未顯示)。
當測試對抗相關同型抗體的MAHA反應時，與對照小鼠相比，hIgM、hIgD、hIgG3和hIgG1(基因座5)為異型合子的小鼠表現出降低的MAHA反應(數據未顯示)。
在另一個實例中，人類重鏈可變區為同型合子而人類IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4恆定區為異型合子的小鼠(如圖1A，基因座6中所示)，或小鼠重鏈可變區為同型合子而人類IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4恆定區為異型合子的小鼠(如圖1A，基因座8所示)測試MAHA反應的降低。關於這些實驗，圈養所有小鼠並在Regeneron Pharmaceuticals的無特定病原體設施中育種。包含(1)小鼠重鏈可變區和人類重鏈恆定區(mVs-hFC；圖1A中的小鼠基因座8)以及(2)人類重鏈可變區和人類重鏈恆定區(hVs-hFC；圖1A中的小鼠基因座6)的小鼠分別就小鼠或人類可變區來說為同型合子，但就人類重鏈恆定區為異型合子。VELOCIMMUNE®小鼠(hVs-mFc；參見美國專利第8,642,835號和第8,697,940號，以引用的方式併入本文)就人類重鏈可變區為同型合子而就小鼠重鏈恆定區是同型合子。素樸WT對照小鼠(15週齡大，雌性，n=6)；hVs-mFc小鼠(14週齡大，雄性，n=5)；hVs-hFc小鼠：人類可變hIgM、hIgD、hIgG3、hIgG1、hIgG2和hIgG4小鼠(11週齡大，雄性，n=6)；以及mVs-hFc：小鼠可變hIgM、hIgD、hIgG3、hIgG1、hIgG2和hIgG4小鼠(11週齡大，雌性，n=6)在抗體注射前採血以確定血清抗體同型濃度(圖3C)和初始小鼠抗人類效價(圖3D，第0天)。將血液收集到血清分離管(BD,cat#365956)中，並按照製造商說明書收集血清。以在杜貝可氏PBS中稀釋的1mg/kg濃度皮下注射完全人類IgG4抗體。在注射後7天、15天、22天和34天對小鼠進行採血以測試MAHA(圖3D；僅顯示第34天數據)。
根據製造商說明書(Invitrogen，mIgM：88-50470-88，總mIgG：88-50400-88，hIgM：8850620-88，hIgG1：88-50560-22，hIgG4：88-50590-22)進行總抗體同型(小鼠IgM、總小鼠IgG、人類IgM和人類IgG1以及人類IgG4 ELISA)的測量。大多數小鼠特徵鑑定歸納在圖3C中(一些數據未顯示)。總之，在人類化Fc小鼠和野生型小鼠之間，小鼠IgM和IgG的血清含量顯示為相似，並且兩種人類化重鏈恆定區小鼠形式(mVs-hFc：基因座8，及hVs-hFc：基因座6)的hIgM、hIgG1和hIgG4含量相似。
關於MAHA研究，異型合子小鼠給與單次皮下注射hIgG4抗體，然後如下所述進行MAHA ELISA。4℃下將Maxisorb盤(Nunc cat.# 430341)在用1μg/ml給藥的人類IgG4抗體塗覆過夜、阻斷，並與經稀釋血清樣品一起培育過夜，然後與HRP綴合的抗小鼠IgG抗體(Jackson ImmunoResearch,code # 115-035-164)在室溫下一起培育1HR。用Opt EIA TMB受質試劑組(BD cat # 555214)使盤顯色。用1N硫酸終止反應，且用Molecular Devices Spectramax M5微量盤讀取儀和SoftMax Pro軟體在450nm下測量OD。使用Prism軟體分析數據。
如圖3D中所示，與任何其他三種測試的小鼠相比，帶有人類化IgH可變和IgH恆定(hVs-hIgM-hIgD-hIgG3-hIgG1-hIgG2-hIgG4；基因座6)的小鼠在注射後第34天對完全人類IgG4抗體具有顯著更低的MAHA效價。在包含人類重鏈可變區和嵌合小鼠-人類(當注射的人類抗體與人類化恆定基因相同時)或完全人類重鏈恆定區的其他小鼠(例如，在圖1A中描述的其他小鼠)中也觀察到MAHA反應降低(數據未顯示)。
就如上文圖3D中所述的相同小鼠，在第0天、第2天、第7天、第15天，第22天和第34天，藉由血清ELISA對血清中剩餘的給藥抗體濃度進行測量。在4℃下將Maxisorb盤(Nunc cat.# 430341)用1ug/ml抗原塗覆過夜、用PBS中的BSA阻斷，並與經稀釋血清樣品一起培育，然後在室溫下與HRP綴合的抗人類IgG抗體(Jackson ImmunoResearch,code # 109-035-098)一起培育歷時1HR。用Opt EIA TMB受質試劑組(BD cat # 555214)使盤顯色。用1N硫酸終止反應，並用Molecular Devices Spectramax M5微量盤讀取儀和 SoftMaxPro軟體在450nm下測量OD。使用Prism軟體分析數據。使用給藥抗體作為標準品來測定濃度。
與沒有MAHA反應的小鼠相比，具有強烈MAHA反應的小鼠有更快的給藥抗體廓清(圖3E)。每種基因型之具有MAHA反應的小鼠數量如下：帶有mVs-hFc的6隻小鼠中有5隻、帶有hVs-hFC的6隻小鼠中有0隻、帶有hVs-mFc的5隻小鼠中有4隻，以及帶有mVs-mFc的6隻小鼠中有4隻。在第第34天，沒有MAHA反應的小鼠在血清中仍然具有可檢測到的給藥抗體含量。
位於小鼠7號染色體上的小鼠FcRn基因座是透過使用VELOCIGENE®技術(參見，例如美國專利第6,586,251號以及Valenzuela et al.(2003)，High-throughput engineering of the mouse genome couple with high-resolution expression analysis.Nat.Biotech.21(6)：652-659，均以引用的方式併人本文)從人類和小鼠細菌人工染色體(BAC)DNA建構獨特靶向載體而被人類化。藉由同源性重組修飾小鼠BAC RP23-19D22(Invitrogen-Thermo Fisher)的DNA，以刪除編碼小鼠FcRn的胞外部分的8.3Kb小鼠基因體DNA，隨後插入11.5Kb的對應人類FcRn序列。因此，編碼小鼠FcRn基因的α1、α2和α3域的小鼠外顯子(外顯子3、4和5)取代成編碼人類FcRn基因的α1、α2和α3域的人類外顯子(外顯子3、4和5)(參見圖4)。得到的嵌合FcRn基因包含小鼠外顯子1(非編碼外顯子)、小鼠外顯子2(包含編碼訊號肽的核酸序列)、人類外顯子3-6、小鼠外顯子6和7(編碼跨膜域和細胞質域)。
特別地，為了產生人類化FcRn小鼠，用於建構嵌合基因的大靶向載體包含下表9中列出的核酸序列。將LoxP-Ub-Neo-LoxP匣插入載體的內含子5中。
使用靶向BAC DNA電穿孔小鼠ES細胞(該等小鼠ES細胞包含小鼠FcRn外顯子中的刪除)以產生經修飾ES細胞，供用於產生表現人類化FcRn的小鼠(圖4)。透過定量TAQMANTM分析鑑定含有人類FcRn外顯子序列插入的ES細胞(參見，例如Lie and Petropoulos,1998.Curr.Opin.Biotechmology 9：43-48，以引用的方式併入本文)。設計特異性引子組和探針用於偵測人類序列的插入(獲得對偶基因，GOA)和小鼠序列的缺失(失去對偶基因，LOA)(未顯示)。
可以透過習於技術者已知的方法移除篩選匣。例如，帶有人類化FcRn基因座的ES細胞可以用表現Cre的建構體轉染，以便移除經flox處理之匣。篩選匣可視情況藉由育種至表現Cre重組酶的小鼠中而被移除。視情況，篩選匣保留在小鼠體內。人類化FcRn對偶基因在篩選匣刪除之前的連接呈現在下表10中。
將上述靶向ES細胞用作供體ES細胞，並藉由VELOCIMOUSE®方法引入8細胞期小鼠胚胎中(參見，例如美國專利第7,294,754號以及Poueymirou et al.(2007)F0 generation mice that are essentially fully derived from the donor gene-targeted ES cells allowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1)：91-99)。使用檢測獨特人類FcRn基因序列存在的修改過的對偶基因分析(見上文)，藉由基因分型鑑定獨立地帶有人類化FcRn的VELOCIMICE®(完全衍生自供體ES細胞的F0小鼠)。帶有嵌合FcRn基因的異型合子小鼠被育種成同型合子。
由經遺傳修飾小鼠表現的所得嵌合FcRn蛋白的序列如下所示(SEQ ID NO：16)，其中α1、2和3域為斜體，而訊號肽和跨膜域為粗體和標示底線。成熟的嵌合蛋白始於下述序列的胺基酸22，而小鼠-人類和人類-小鼠的邊界用星號(*)標出。作為參考，人類和小鼠蛋白質與mRNA序列的例示性Genbank登錄號列於下表11中。
嵌合蛋白的序列(SEQ ID NO：16)
將含有嵌合FcRn基因的小鼠與在內源性小鼠B2M基因座處含有人類化B2M基因的小鼠育種(圖5)，詳情描述於美國專利申請公開第2013/0111617號中，以整體引用的方式併入本文。育種出在兩個基因座處均為同型合子的小鼠。
為了偵測嵌合FcRn和人類化B2M的表現，犧牲小鼠，並收集脾臟。在用ACK溶解緩衝液(Gibco)處理後，將脾臟解離、將細胞離心，洗 滌並置於盤中，且用IC固定緩衝液(eBioscience)固定，並用含有Fc阻斷(BD)的緩衝液滲透供染色準備。為了偵測FcRn，用內部抗人類FcRn一級抗體或抗小鼠FcRn一級抗體(R&D AF6775)將細胞染色，然後用合適的二級抗體(ThermoFisher 1885920或ThermoFisher 1915848)染色。洗滌細胞並在LSRFortessa X-20(BD)FACS機器上分析樣品。為了偵測B2M，用抗小鼠B2M PE標記的抗體(BioLegend clone A16041A)或抗人類B2M PE標記的抗體(BioLegend clone 2M2)將細胞染色。洗滌細胞並在LSRFortessa X-20(BD)FACS機器上分析樣品。
人類化FcRn/B2M小鼠表現可偵測含量的嵌合蛋白(數據未示出)。然而，由於人類FcRn不能結合小鼠IgG，確定人類FcRn和人類化B2M為同型合子的小鼠在血液中展現出小鼠IgG含量顯著降低(數據未顯示)。人類化FcRn/B2M小鼠表現人類化B2M蛋白(數據未顯示)。
已知小鼠FcRn以比人類FcRn更高的親和力結合人類Ig。為了測試表現嵌合小鼠/人類FcRn的小鼠是否展現出與人類相似的人類抗體再循環特性，每種野生型小鼠以及針對上述嵌合FcRn和人類化B2M為同型合子的小鼠中的三隻以1mg/kg皮下投與人類IgG4抗體。並使用陀螺免疫分析在注射後6小時、1天、2天、3天、8天、10天、14天，22天和30天測量血清中的抗體藥物含量。如圖6中所示，嵌合FcRn(FcRn hu/hu)和人類化B2M(B2M hu/hu)皆為同型合子的小鼠表現出比不表現人類化蛋白的野生型小鼠更快的抗體廓清。因此，表現嵌合FcRn和人類化B2M的小鼠用作研究人類治療性抗體再循環的模型，其更類似於人類者，因此，作為研究治療劑的藥動學和藥效學概況的優秀模型。
產生包含高親和力和低親和力Fcγ受體和人類化恆定區的人類化小鼠。關於這些實驗，依據技藝中的已知技術，將含有高親和力Fcγ受體和低親和力Fcγ受體的小鼠(這些小鼠的產生描述於US 8,658,154；US 9,056,130；US 8,658,853；US 8,883,496；US 9,687,566；US 9,089,599；US 9,221,894和US 9,474,255中，以全文引用的方式併入本文)與含有人類重鏈恆 定區的小鼠(例如，圖1A中的小鼠基因座7)藉由育種或再靶向ES細胞組合在一起。將所得小鼠育種成同型合子。本文描述的人類化基因座的各種例示性具體例顯示於圖7中。
在基因靶向完成後，篩選ES細胞或經遺傳修飾非人類動物以便確認感興趣的外源性核苷酸序列已成功併入或表現外源性多肽。許多技術為習於技藝者已知的，包括(但不限於)南方墨點、長PCR、定量PCR(例如，使用TAQMAN的即時PCR)、螢光原位雜交、北方墨點、流式細胞術、西方墨點、免疫細胞化學、免疫組織化學等。例如，帶有感興趣遺傳修飾(亦即人類高親和力FcgR和低親和力FcgR與人類重鏈恆定區)的小鼠可以透過使用下文中所述的修改對偶基因分析來篩選人類對偶基因的獲得來鑑定：Valenzuela et al.(2003)High-throughput engineering of the mouse genome coupled with high-resolution expression analysis,Nature Biotech.21(6)：652-659。鑑定經遺傳修飾動物中特定核苷酸或胺基酸序列的其他分析為是習於技藝者已知的。
在如圖7中所述完成育種或ES細胞再靶向後，對所得小鼠進行特徵鑑定。關於這些實驗，圈養所有小鼠並在Regeneron Pharmaceuticals的無特定病原體設施中飼養。犧牲素樸WT對照小鼠(26-36週齡大，雄性和雌性，n=2)以及素樸高親和力和低親和力hFcgR、hIgM、hIgD、hIgG3和hIgG1(圖1A中的基因座7，19-22週齡大，雄性和雌性，n=5)小鼠，收取血液和脾臟。用ACK溶解緩衝液溶解來自血液和脾臟的紅血球，然後用含有5% FBS的RPMI培養基洗滌。亦將血液收集到血清分離管(BD,cat#365956)中，並按照製造商說明書收集血清。正常人類血清(Quidel,cat#A113)用作ELISA的陽性對照。
如下使用ELISA分析總人類IgM抗體。在4℃下將盤用2μg/ml驢抗人類IgM抗體(Jackson ImmunoResearch cat # 709-005-073)塗覆過夜、洗滌、用PBS-T中的1% BSA阻斷。將ChromPure人類IgM標準品(Jackson ImmunoResearch cat # 009-000-012)在PBS-T中從500ng/ml連續稀釋至0.49ng/ml並加入孔中。將孔與經稀釋血清樣品一起培育、洗滌，並與HRP綴合的抗類人IgM抗體(Jackson ImmunoResearch # 009-035-073)一起培育。用Opt EIA TMB受質試劑組(D cat # 555214)洗滌盤並顯色。用1N硫酸終止反應，並用Molecular Devices Spectramax M5微量盤讀取儀和SoftMax Pro軟體在450nm下測量經空白品校正的OD。使用Prism軟體分析數據。呈現的數據是二重複點。此外，根據製造商說明書(分別為Invitrogen cat # BMS2092和BMS2094)進行人類IgG1和人類IgG3 ELISA(圖8C)。
關於流式細胞術實驗，將1x106個細胞用Fixable Viability Dye eFluor 455UV(ThermoFisher cat # 65-0868-14)染色，且在洗滌後與抗小鼠CD16/CD32(2.4G2,BD)在冰上一起培育歷時10分鐘。隨後用以下抗體組在冰上標記細胞歷時30分鐘：抗小鼠FITC-CD3(17A2,BD)、A700-CD19(1D3,BD)、Pe-Cy7-IgM(11/41,eBioscience)、PerCP-Cy5.5-IgD(11-26c.2a,BioLegend)和抗人類PE-IgD(IA6-2,BioLegend)與BV421-IgM(G20-127,BD)。染色後，洗滌細胞並在2%甲醛中固定。在BD LSRFortessa流式細胞儀上進行數據擷取並用FlowJo分析。B細胞(CD19+)、成熟B細胞(CD19+IgD-高IgM-int)、過渡/未成熟B細胞(CD19+IgD-int IgM-高)。(圖8A和8B)。
如圖8A，8B和8C中所歸納，人類化高親和力和低親和力Fcγ受體和人類化IgM、IgD、IgG3和IgG1小鼠的B細胞中人類IgM與人類IgD表面表現顯著增加。此外，這些小鼠展現出正常的脾臟B細胞群和正常的血清抗體含量。這些展現出高親和力和低親和力hFcγR的精確人類化以及重鏈恆定區的人類化的小鼠，代表了一種研究人類Fc受體效應子功能的新模型。
FcεR蛋白由單個α次單元、一個β次單元以及兩個γ次單元組成。α次單元的胞外部分FcεRIα包含兩個免疫球蛋白樣域，並且即使在沒有其他次單元的情況下也以高親和力結合IgE。因此，在下面概述的策略中，FcεRIα，FcεR的α次單元為人類化的。
位於小鼠1號染色體上的小鼠FcεRIα基因座是使用VELOCIGENE®技術(參見例如美國專利第6,586,251號以及Valenzuela et al.(2003)High-throughput engineering of the mouse genome couple with high-resolution expression analysis.Nat.Biotech.21(6)：652-659，均以引用的 方式併入本文)，透過從人類和小鼠細菌人工染色體(BAC)DNA建構獨特靶向載體而被人類化。藉由同源性重組修飾小鼠BAC RP23-332i14(Invitrogen-Thermo Fisher)的DNA以刪除編碼小鼠FcεRIα編碼區的5.7Kb小鼠基因體DNA，且隨後插入6.1Kb的人類FcεRIα編碼序列和BAC CTD-3064h17(Invitrogen-Thermo Fisher)的人類3'未轉譯區(圖9)。因此，小鼠FcεRIα的小鼠編碼外顯子1、編碼外顯子2、編碼外顯子3、編碼外顯子4和編碼外顯子5部分被人類FcεRIα基因的人類編碼外顯子1、編碼外顯子2、編碼外顯子3、編碼外顯子4和編碼外顯子5所取代。得到的嵌合FcεRIα基因包含嵌合小鼠/人類外顯子1(包含小鼠啟動子和5'UTR)、通過終止密碼子的人類編碼外顯子2-5、人類3'UTR和聚A，然後是小鼠3'UTR和聚A。嵌合基因外顯子1(部分)和2編碼訊號肽，外顯子3和4編碼FcεRIα的兩個Ig樣域(咸信它們與IgE交互作用)，而外顯子5編碼蛋白質的細胞質域和跨膜域(參見圖9)。
具體地，為了產生人類化FcεRIα小鼠，用於建構嵌合基因的大靶向載體包含下表12中列出的核酸序列。將自我刪除的新黴素匣插入最後一個編碼外顯子的3'。
使用靶向BAC DNA電穿孔小鼠ES細胞，該等小鼠ES細胞包含小鼠FcεRIα外顯子中的刪除，以產生經修飾ES細胞，供用於產生表現人類化FcεRIα的小鼠(圖9)。透過定量TAQMANTM分析鑑定含有人類FcεRIα外顯子序列插入的ES細胞(參見，例如Lie and Petropoulos,1998.Curr.Opin.Biotechnology 9：43-48，以引用的方式併入本文)。設計特異性引子組和探針用於檢測人類序列的插入(獲得對偶基因，GOA)和小鼠序列的缺失(失去對偶基因，LOA)(未顯示)。
人類化FcεRIα對偶基因在篩選匣刪除之前的連接呈現在下表13中。
將上述靶向ES細胞用作供體ES細胞，並透過VELOCIMOUSE®方法引入8細胞期小鼠胚胎中(參見，例如美國專利第7,294,754號和Poueymirou et al.(2007)F0 generation mice that are essentially fully derived from the donor gene-targeted ES cells allowing immediate phenotypic analyses Nature Biotech.25(1)：91-99)。使用修改過的對偶基因分析(見上文)，透過基因分型鑑定獨立地帶有人類化FcεRIα的VELOCIMICE®(完全衍生自供體ES細胞的F0小鼠)，該等對偶基因分析測定獨特人類FcεRIα基因序列的存在。帶有嵌合FcεRIα基因的異型合子小鼠被育種成同型合子。
由小鼠表現的所得FcεRIα蛋白質是完全人類的，並且透過經遺傳修飾小鼠表現的人類FcεRIα蛋白質的序列如下所示(SEQ ID NO：20)，其中Ig樣域為斜體，而訊號肽和跨膜域為粗體和標示底線。成熟蛋白質始於下文所示序列的胺基酸26。作為參考，人類和小鼠蛋白質與mRNA序列的例示性Genbank登錄號列在下表14中。
人類蛋白質的序列(SEQ ID NO：20)
為了驗證人類化FcεRIα在人類化FcεRIα小鼠的脾臟嗜鹼性球表面上的表現，犧牲野生型(WT)或同型合子人類化FcεRIα小鼠，收取脾臟並且在紅血球溶解(Sigma)之後製備單細胞懸浮液。然後將細胞用活/死細胞標記物染色、用Fc阻斷劑阻斷，然後用兩種抗體混合物中的一種進行抗體染色：(1)混合物1：抗小鼠CD49b抗體(PECy7綴合的，EBioscience clone DX5)、抗-小鼠TCRβ(APC綴合的，BD clone H57-597)、抗小鼠B220(BUV395綴合的，BD clone RA3-682)和抗小鼠FcεRIα(eFluor 450綴合的，Bioscience clone MAR-1)，或(2)混合物2：抗小鼠CD49b抗體(PECy7綴合的，EBioscience clone DX5)、抗小鼠TCR β(APC綴合的，BD clone H57-597)、抗小鼠B220(BUV395綴合的，BD clone RA3-682)和抗人類FcεRIα(eFluor 450綴合的，EBioscience clone AER-37(CRA1))。在LSRFortessa儀器中擷取細胞並使用FlowJo軟體分析。嗜鹼性球被鑑定為TCRβ-B220-CD49b+FcεRIα+。圖10中的FACS圖顯示了TCRβ-B220-群體，其中嗜鹼性球群由箭頭標識。該群體僅在WT小鼠中對小鼠FcεRIα呈陽性，並且僅在人類化FcεRIα小鼠中對人類FcεRIα呈陽性。該等圖顯示了人類或小鼠FceR1α+嗜鹼性球的定量，作為來自各基因型的5隻小鼠的脾臟中活細胞的百分比(圖10)。
在被動性皮膚過敏(PCA)模型中驗證FcεRIα人類化小鼠。在第1天，WT組或人類化小鼠組分別接受皮內注射兩種過敏原特異性人類IgE抗體的混合物或不相干IgG抗體(陰性對照)至右耳和左耳中，從而允許過敏原特異性IgE結合肥大細胞上的FcεR。24小時後，藉由靜脈內(IV)注射稀釋在0.5% Evan氏藍色染料中的1μg過敏原來攻毒小鼠。過敏原攻毒後1小時，犧牲小鼠，從耳組織中萃取Evan氏藍色染料，並使用標準曲線進行分光光度法定量。然後將耳朵乾燥並稱重。結果顯示，Evan氏藍色染料在組織中 的外滲量化為ng Evan氏藍色/mg組織，作為局部肥大細胞去顆粒反應的量度。圖11中顯示的數據證明，人類過敏原特異性IgE可媒介人類化FcεRIα小鼠的局部過敏反應，但在WT小鼠中不會。
也在被動性全身性過敏(PSA)模型中驗證FcεRIα人類化小鼠。在第1天，人類化FcεRIα小鼠組接受靜脈內(IV)注射，其具有兩種過敏原特異性人IgE抗體的混合物，或不相干IgG抗體(陰性對照)，允許過敏原特異性IgE結合全身性的FcεR1-表現細胞。在24小時後，對所有小鼠進行基礎核心溫度測量，然後IV注射1μg過敏原。接著在過敏原攻毒後30、60、120和240分鐘對所有小鼠進行核心溫度測量，並計算每個時間點相對於基礎溫度的核心溫度變化。核心溫度降低是全身性過敏的顯示讀值。圖12中顯示的數據證明，人類過敏原特異性IgE可媒介人類化FcεRIα小鼠的全身性過敏反應，如透過攻毒後30-60分鐘核心溫度顯著下降所測量的。
為了要在小鼠模型中獲得用於研究完全人類單株抗體和人類Fc受體效應子功能的更好模型，如圖13中所述的小鼠A(人類化hβ2M；參見實例3)、小鼠B(hFCER1A；參見實例5)、小鼠C(hFCRN；參見實例3)、小鼠D(hFCGR1)、小鼠E(hFCGR2/3)和小鼠F(mVs、hIgM、hIgD、IgG3和IgG1；圖1A的小鼠基因座7)或小鼠F'(hVs、hIgM、hIgD、IgG3和IgG1；圖1A的小鼠基因座5)藉由育種或再靶向ES細胞依據本文中所述還有技藝中已知的技術而組合在一起。關於任何或所有這些基因，所得小鼠可以是異型合子或同型合子。本文描述的人類化基因座的各種例示性具體例描繪於圖13中。圖1A中描繪的帶有人類重鏈恆定區的其他小鼠可以與圖13中的其餘小鼠(小鼠A-E)進行育種。因此，小鼠A(人類化hb2M；參見實例3)、小鼠B(hFCER1A；參見實例5)、小鼠C(hFCRN；參見實例3)、小鼠D(hFCGR1)、小鼠E(hFCGR2/3)和小鼠(mVs、hIgM、hIgD、IgG3、IgG1、IgG2和IgG4；圖1A的小鼠基因座8)或者小鼠(hVs，hIgM，hIgD，IgG3 IgG1，IgG2和IgG4；圖1A的小鼠基因座6)藉由育種或再靶向ES細胞依據本文中所述還有技藝中已知的技術而組合在一起。這些還可以與圖2A中描繪的輕鏈小鼠育種。經 由實例1中所述和技藝中已知的遺傳改造技術添加額外的人類免疫球蛋白恆定區。
本文提到的所有出版物、專利案和專利申請案均透過整體引用而被併入，如同每個單獨的出版物，專利案或專利申請案具體且單獨地指出為透過引用而被併入。在相衝突的情況下，本申請案(包括本文中的任何定義)將主導。
習於技藝者將認知到或能夠使用不超過常規實驗來確定本文所述的本發明特定具體例的許多等效物。這些等效物意欲受到以下申請專利範圍所涵蓋。
本申請案含有序列表，序列表已呈ASCII格式以電子的方式呈交並且以全文引用的方式併入。在2019年3月20日產生的該份ASCII抄本被命名為RPB-01970_(28744-01970)_SL.txt且大小為11,590位元組。
<110> 美商再生元醫藥公司(REGENERON PHARMACEUTICALS,INC.)
<120> 用於測試治療藥劑之人類化囓齒動物
<130> RPB-01970(28744-01970)
<140> TW 108110297
<141> 2019-03-25
<150> US 62/689,628
<151> 2018-06-25
<150> US 62/648,197
<151> 2018-03-26
<160> 20
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
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<223> 人工序列的說明：合成寡核苷酸
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<223> 人工序列的說明：合成聚核苷酸
<400> 14
<210> 15
<211> 100
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的說明：合成聚核苷酸
<400> 15
<210> 16
<211> 363
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的說明：合成多肽
<400> 16
<210> 17
<211> 104
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的說明：合成聚核苷酸
<400> 17
<210> 18
<211> 90
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的說明：合成寡核苷酸
<400> 18
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<211> 122
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的說明：合成聚核苷酸
<400> 19
<210> 20
<211> 257
<212> PRT
<213> 智人
<400> 20
Claims (44)
- 一種測試人類抗體的方法，包含向囓齒動物投與該抗體，該囓齒動物在其基因體內包含：免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含VH基因段，DH基因段和JH基因段；以及(ii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含編碼IgG恆定域的CH基因段，該IgG恆定域包含人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域、人類CH3域、IgG跨膜域和IgG細胞質域，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自VH基因段、DH基因段和JH基因段的可變域和衍生自CH基因段的重鏈恆定域，其中被測試的人類抗體包含存在於囓齒動物免疫球蛋白重鏈恆定區中的人類同型之人類CH1、人類CH2及人類CH3域，且其中該免疫球蛋白重鏈基因座係座落在內源性免疫球蛋白重鏈基因座處。
- 如請求項1之方法，其中該IgG跨膜域為囓齒動物或人類IgG跨膜域。
- 如請求項1之方法，其中該IgG細胞質域為囓齒動物或人類IgG細胞質域。
- 如請求項1之方法，其中人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域為(i)IgG1域且人類抗體為IgG1抗體；(ii)IgG2域且人類抗體為IgG2抗體；(iii)IgG3域且人類抗體為IgG3抗體；及/或(vi)IgG4域且人類抗體為IgG4抗體。
- 如請求項1之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段位在內源性Cγ2a、Cγ2c、Cγ1、Cγ2b或Cγ3基 因段基因座處。
- 如請求項1之方法，其中編碼人類CH1域、人類鉸鏈區、人類CH2域以及人類CH3域的CH基因段取代內源性Cγ2a、Cγ2c、Cγ1、Cγ2b或Cγ3基因段基因。
- 如請求項1之方法，其中免疫球蛋白重鏈恆定區包含人類Cμ基因段、人類Cδ基因段、人類Cγ3基因段以及人類Cγ1基因段。
- 如請求項7之方法，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cγ2基因段以及人類Cγ4基因段。
- 如請求項8之方法，其中免疫球蛋白重鏈恆定區進一步包含人類Cα基因段及/或人類Cε基因段。
- 如請求項1之方法，其中免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物或人類內含子性增強子(Ei)。
- 如請求項1之方法，其中免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物或人類3'調節區(3' RR)。
- 如請求項1之方法，其中免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含囓齒動物Sμ、Sγ3、Sγ1、Sγ2b、Sγ2a、Sγ2c、Sε及/或Sα切換位點。
- 如請求項1之方法，其中免疫球蛋白重鏈基因座進一步包含人類Sμ、Sγ3、Sγ1、Sγ2、Sγ4、Sε及/或Sα切換位點。
- 如請求項1之方法，其中VH基因段為囓齒動物VH基因段，DH基因段為囓齒動物DH基因段，而JH基因段為囓齒動物JH基因段。
- 如請求項14之方法，其中囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段以及囓齒動物JH基因段為內源性囓齒動物基因段。
- 如請求項1之方法，其中VH基因段為人類VH基因段，DH基因段為人類DH基因段，而JH基因段為人類JH基因段。
- 如請求項1之方法，其中免疫球蛋白重鏈可變區包含編碼功能性囓齒動物Adam6多肽的核苷酸序列。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類 JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、囓齒動物IgG2a跨膜域與囓齒動物IgG2a細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)囓齒動物Cγ1基因段；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)經修飾CH基因段，編碼人類IgG1 CH1域、人類IgG1鉸鏈區、人類IgG1 CH2域、人類IgG1 CH3域、人類IgG1跨膜域與人類IgG1細胞質域；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、囓齒動物IgG1跨膜域與囓齒動物IgG1細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b基因段；(f)囓齒動物Cγ2a及/或Cγ2c基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含： (i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)囓齒動物Cμ基因段；(b)囓齒動物Cδ基因段；(c)囓齒動物Cγ3基因段；(d)經修飾CH基因段，編碼人類IgG4 CH1域、人類IgG4鉸鏈區、人類IgG4 CH2域、人類IgG4 CH3域、人類IgG4跨膜域與人類IgG4細胞質域；(e)囓齒動物Cγ2b及/或Cγ2c基因段；(f)囓齒動物Cγ2a基因段；(g)囓齒動物Cε基因段；及(h)囓齒動物Cα基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含衍生自人類VH基因段、人類DH基因段和人類JH基因段的可變域和衍生自經修飾CH基因段的重鏈恆定域。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使 得囓齒動物產生含有完全人類重鏈的IgG抗體。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含人類VH基因段，人類DH基因段和人類JH基因段；(ii)人類內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生含有完整人類重鏈的IgG抗體。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含含有囓齒動物可變域以及人類恆 定域的重鏈。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內包含：內源性免疫球蛋白重鏈基因座，其包含：(i)免疫球蛋白重鏈可變區，其包含囓齒動物VH基因段，囓齒動物DH基因段和囓齒動物JH基因段；(ii)囓齒動物內含子性增強子(Ei)；(iii)免疫球蛋白重鏈恆定區，其包含：(a)人類Cμ基因段；(b)人類Cδ基因段；(c)人類Cγ3基因段；(d)人類Cγ1基因段；(c)人類Cγ2基因段；(d)人類Cγ4基因段；以及(iv)囓齒動物3'調節區(3'RR)，其中免疫球蛋白重鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白重鏈恆定區，使得囓齒動物產生IgG抗體，該抗體包含含有囓齒動物可變域以及人類恆定域的重鏈。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內進一步包含：免疫球蛋白κ鏈基因座，其包含：(1)免疫球蛋白κ鏈可變區，其包含人類Vκ基因段及人類Jκ基因段；以及(2)免疫球蛋白κ鏈恆定區，其包含人類Cκ基因段，其中免疫球蛋白κ鏈可變區可操作地連結至免疫球蛋白κ鏈恆定區，使得囓齒動物產生抗體，該抗體包含衍生自人類Vκ基因段及人類Jκ基因段的輕鏈可變域以及衍生自人類Cκ基因段的輕鏈恆定域其中所測試的人類抗體包含κ輕鏈。
- 如請求項26之方法，其中免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含囓齒動物或人類內含子性κ增強子(Eκ)。
- 如請求項26之方法，其中免疫球蛋白κ鏈基因座進一步包含 囓齒動物或人類3' κ增強子(Eκ3' )。
- 如請求項26之方法，其中免疫球蛋白κ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白κ鏈基因座處。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內進一步包含：免疫球蛋白λ鏈基因座，其包含：人類Vλ基因段、人類Jλ基因段以及人類Cλ基因段，其中人類Vλ基因段與人類Jλ基因段可操作地連結至人類Cλ基因段，使得該囓齒動物產生抗體，該抗體包含衍生自人類Vλ基因段與人類Jλ基因段的輕鏈可變域，以及衍生自人類Cλ基因段的輕鏈恆定域，其中所測試的人類抗體包含λ輕鏈。
- 如請求項30之方法，其中免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Cλ1基因段、人類Cλ2基因段、人類Cλ3基因段與人類Cλ7基因段或囓齒動物Cλ1基因段。
- 如請求項31之方法，其中免疫球蛋白λ鏈基因座包含人類Jλ1基因段、人類Jλ2基因段、人類Jλ3基因段以及人類Jλ7基因段。
- 如請求項30之方法，其中免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子2.4。
- 如請求項30之方法，其中免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物或人類3' λ增強子。
- 如請求項30之方法，其中免疫球蛋白λ鏈基因座進一步包含囓齒動物λ增強子3.1。
- 如請求項30之方法，其中免疫球蛋白λ鏈基因座座落在內源性免疫球蛋白λ鏈基因座處。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內進一步包含新生兒Fc受體(FcRn)基因座，該基因座含有編碼含有人類胞外域之FcRn多肽的核酸序列。
- 如請求項37之方法，其中編碼FcRn胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcRn胞外域的內源性核酸序列。
- 如請求項37之方法，其中該囓齒動物在其基因體內進一步包含β-2-微球蛋白(β2M)基因座，該基因座含有編碼人類或人類化β-2-微球蛋白(β2M)多肽的核酸序列。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內進一步包含Fcε受體1α(FcεR1α)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcεR1α多肽的核酸序列。
- 如請求項40之方法，其中編碼人類FcεR1α胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcεR1α胞外域的內源性核酸序列。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內進一步包含Fcγ受體1a(FcγR1a)基因座，該基因座包含編碼含有人類胞外域之FcγR1a多肽的核酸序列。
- 如請求項42之方法，其中編碼人類FcγR1a胞外域的核酸序列取代編碼囓齒動物FcγR1a胞外域的內源性核酸序列。
- 如請求項1之方法，其中該囓齒動物在其基因體內進一步包含：(i)Fcγ受體2a(FcγR2a)基因座，包含編碼人類FcγR2a多肽的核酸序列；(ii)Fcγ受體2b(FcγR2b)基因座，包含編碼人類FcγR2b多肽的核酸序列；(iii)Fcγ受體3a(FcγR3a)基因座，包含編碼人類FcγR3a多肽的核酸序列；(vi)Fcγ受體3b(FcγR3b)基因座，包含編碼人類FcγR3b多肽的核酸序列。
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