JP2023536461A - 抗ｃｄ９３構築物およびその使用 - Google Patents

抗ｃｄ９３構築物およびその使用 Download PDF

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ダイナミキュア バイオテクノロジー エルエルシー
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Abstract

本出願は、ＣＤ９３に結合する抗ＣＤ９３構築物（例えば、抗ＣＤ９３抗体）、抗ＣＤ９３のアミノ酸配列をコードする核酸分子、核酸分子を含むベクター、ベクターを含む宿主細胞、抗ＣＤ９３構築物を調製する方法、抗ＣＤ９３構築物を含む医薬組成物、および抗ＣＤ９３構築物または組成物を使用する方法を提供する。ＣＤ９３（表面抗原分類９３）は、ヒトにおいてＣＤ９３遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＣＤ９３は、細胞間接着プロセスだけでなく宿主防御においても役割を果たすＣ型レクチン膜貫通受容体である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年７月２９日に出願された米国仮出願第６３／０５８，３５９号、２０２０年９月２８日に出願された米国仮出願第６３／０８４，４７４号、および２０２１年６月２日に出願された国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０３５５４２の優先権を主張し、これらの内容はすべての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
技術分野
本開示は、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３抗体など）およびその使用に関する。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読形式（ＣＲＦ）（ファイル名：１９３８５２０００２４３ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年７月２８日、サイズ：１８５ＫＢ）。
本出願の背景
ＣＤ９３（表面抗原分類９３）は、ヒトにおいてＣＤ９３遺伝子によってコードされるタンパク質である。ＣＤ９３は、細胞間接着プロセスだけでなく宿主防御においても役割を果たすＣ型レクチン膜貫通受容体である。ＣＤ９３は、最初はＣ１ｑの受容体であると考えられていたが、現在は代わりに細胞間接着およびアポトーシス細胞のクリアランスに関与すると考えられている。このタンパク質の細胞内細胞質尾部は、ＣＤ９３機能に関与し得る２つの高度に保存されたドメインを含む。実際、高度に荷電した膜近傍ドメインは、膜貫通タンパク質を細胞骨格に連結することおよび細胞骨格の再構築において役割を果たすことが知られているタンパク質であるモエシンと相互作用することが見出されている。このプロセスは、接着、遊走および食作用にとって極めて重要であると思われる。
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、特許出願および公開特許出願の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願の簡潔な概要
以下の概要は例示にすぎず、決して限定することを意図するものではない。すなわち、以下の概要は、新規分子およびその使用のハイライト、利点および長所を紹介するために提供される。したがって、以下の概要は、特許請求される主題の本質的な特徴を特定することを意図しておらず、特許請求される主題の範囲を決定する際に使用することも意図していない。
一態様では、本出願は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗ＣＤ９３構築物を提供し、該抗体部分は、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントとＣＤ９３の結合エピトープについて競合し、
ａ）ＶＨ－２は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｂ）ＶＨ－２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｃ）ＶＨ－２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｄ）ＶＨ－２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｅ）ＶＨ－２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｆ）ＶＨ－２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｇ）ＶＨ－２は、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｈ）ＶＨ－２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｉ）ＶＨ－２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｊ）ＶＨ－２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｋ）ＶＨ－２は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｌ）ＶＨ－２は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｍ）ＶＨ－２は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｎ）ＶＨ－２は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；または
ｏ）ＶＨ－２は、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｐ）ＶＨ－２は、配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
別の態様における本出願は、ＣＤ９３に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ９３構築物であって、
ａ）配列番号１３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２９および３０７～３１２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３０、および３１３～３１８のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号４５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号４６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号６１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号６２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号７７に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号７８に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号９３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号９４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１０９に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１１０に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１２５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１２６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１４１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１５７および３６０～３６２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１５８、および３６３～３６５のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｋ）配列番号１７３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１７４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｌ）配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１９０、および３５０～３５２のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｍ）配列番号２０５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２０６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｎ）配列番号２２１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２２２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｏ）配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｐ）配列番号３０７～３１２のいずれか１つに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３１３～３１８のいずれか１つに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；または
ｑ）配列番号３１９～３２１のいずれか１つに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３２２～３２４のいずれか１つに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３
を含む。
上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２８７、３０７～３１２および３１９－３２１のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；および／または、ＶＬは、配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２８８、３１３～３１８および３２２～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２９および３０７～３１２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３０および３１３～３１８のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号４６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号６２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号７８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号９４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１２５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１２６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１４２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１５７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１５８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１７３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１７４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１９０および３５０～３５２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２０５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２０６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２２１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２２２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８８および３２２～３２４のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗体部分は、全長抗体、二重特異性抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、Ｆｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合物、ダイアボディ(diabody)、トリボディ(tribody)、およびテトラボディ(tetrabody)からなる群より選択される抗体またはその抗原結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体部分は全長抗体である。
上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗体部分は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ由来のＦｃフラグメント、ならびにそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択されるＦｃフラグメントを有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４由来のＦｃフラグメントおよびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して低下したエフェクター機能を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して増強されたエフェクター機能を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、血清半減期が延長している。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、血清半減期が減少している。
上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗体部分は、ＩＧＦＢＰ７（ヒトＩＧＦＢＰ７など）へのＣＤ９３の結合を遮断する。
上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗体部分は、ＭＭＲＮ２（ヒトＭＭＲＮ２など）へのＣＤ９３の結合を遮断する。
上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、抗体部分は、ａ）ＩＧＦＢＰ７へのＣＤ９３の結合および／またはｂ）ＭＭＲＮ２へのＣＤ９３の結合を遮断する。
上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかによるいくつかの実施形態では、ＣＤ９３はヒトＣＤ９３である。
別の態様における本出願は、上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物を提供する。
別の態様における本出願は、上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかをコードする単離された核酸を提供する。
別の態様における本出願は、上記の単離された核酸のいずれかを含むベクターを提供する。
別の態様における本出願は、上記の単離された核酸またはベクターのいずれかを含む単離された宿主細胞を提供する。
別の態様における本出願は、治療剤または標識に連結された、上記の抗ＣＤ９３構築物のいずれかを含む免疫コンジュゲートを提供する。
別の態様における本出願は、抗ＣＤ９３構築物を産生する方法であって、ａ）請求項２５に記載の単離された宿主細胞を、抗ＣＤ９３構築物を発現するのに有効な条件下で培養することと、ｂ）発現された抗ＣＤ９３構築物を宿主細胞から得ることとを含む方法を提供する。
別の態様における本出願は、個体における疾患または状態を処置する方法であって、有効量の上記の抗ＣＤ９３構築物または医薬組成物のいずれかを個体に投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、異常な血管構造に関連する。いくつかの実施形態では、疾患または状態はがんである。いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんはＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、がんはＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、がんは腫瘍低酸素を特徴とする。いくつかの実施形態では、がんは局所進行がんまたは転移がんである。いくつかの実施形態では、がんは、リンパ腫、結腸がん、脳がん、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、前立腺がん、子宮頸がん、腎がん、膀胱がん、胃がん、非小細胞肺がん、黒色腫、および膵臓がんからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物を個体に非経口投与する。いくつかの実施形態では、本方法は、第二の治療を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、第二の治療は、手術、放射線、遺伝子治療、免疫療法、骨髄移植、幹細胞移植、ホルモン治療、標的化治療、寒冷療法、超音波治療、光ダイナミック療法、および化学療法からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、第二の治療は免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は免疫調節剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫調節剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１抗体を含む。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
図１は、ヒトまたはカニクイザルＣＤ９３に対する１６Ｅ４およびＭＭ０１の結合親和性を示す。
図２は、ＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞に対する様々な抗ＣＤ９３抗体の結合を示す。
図３Ａ～図３Ｄは、様々な濃度のｍＩｇＧアイソタイプと比較した、１６Ｅ４およびＭＭ０１によるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の阻害を示す。 図３Ａ～図３Ｄは、様々な濃度のｍＩｇＧアイソタイプと比較した、１６Ｅ４およびＭＭ０１によるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の阻害を示す。
図４Ａ～図４Ｆは、対照と比較した、様々な抗ＣＤ９３抗体によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。 図４Ａ～図４Ｆは、対照と比較した、様々な抗ＣＤ９３抗体によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。 図４Ａ～図４Ｆは、対照と比較した、様々な抗ＣＤ９３抗体によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。 図４Ａ～図４Ｆは、対照と比較した、様々な抗ＣＤ９３抗体によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。
図５Ａ～図５Ｂは、Ｏｃｔｅｔ競合による様々な抗ＣＤ９３抗体のエピトープビニングの結果を示す。
図６Ａ～図６Ｂは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって測定されたヒトおよびカニクイザルＣＤ９３に対する様々な抗ＣＤ９３抗体の交差結合活性を示す。 図６Ａ～図６Ｂは、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって測定されたヒトおよびカニクイザルＣＤ９３に対する様々な抗ＣＤ９３抗体の交差結合活性を示す。
図７Ａ～図７Ｂは、ＫａｂａｔナンバリングによるＶＨおよびＶＬ ＣＤＲのアラインメントを示す。上から順に、図７Ａの配列は配列番号３９３～４０６であり、図７Ｂの配列は配列番号４０７～４２０である。
図８Ａ～図８Ｂは、ＶＢＡＳＥ２ツールによって決定されたＶＨおよびＶＬ ＣＤＲのアラインメントを示す。上から順に、図８Ａの配列は配列番号３９３～４０６であり、図８Ｂの配列は配列番号４０７～４２０である。
図９は、ヒトＣＤ９３に対する１０Ｂ１および７Ｆ３の結合親和性を示す。
図１０は、ヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞への１６Ｅ４、１０Ｂ１および７Ｆ３の結合、ならびにＣＨＯ－Ｋ１細胞への結合の欠如を示す。
図１１Ａ～図１１Ｂは、５０μｇ／ｍＬのｍＩｇＧアイソタイプと比較した、１６Ｅ４、１０Ｂ１および７Ｆ３によるＣＤ９３とＭＭＲＮ２との間の相互作用の阻害を示す。
図１２は、対照（ＩｇＧ２ａ）と比較した、異なるＭＭＲＮ２濃度での７Ｆ３によるＣＤ９３とＭＭＲＮ２との間の相互作用の阻害を示す。
図１３は、対照（ＩｇＧ１）と比較した、７Ｆ３によるＣＤ９３とＭＭＲＮ２との間の相互作用の阻害を示す。
図１４は、様々な濃度のｍＩｇＧ１アイソタイプと比較した、７Ｆ３によるＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用の阻害を示す。
図１５Ａ～図１５Ｂは、対照と比較した、２つの濃度での１６Ｅ４および７Ｆ３によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。 図１５Ａ～図１５Ｂは、対照と比較した、２つの濃度での１６Ｅ４および７Ｆ３によるＨＵＶＥＣチューブ形成の阻害を示す。
図１６は、ＶＥＧＦも認識する例示的な多重特異性抗ＣＤ９３構築物を示す。
図１７は、例示的な抗ＣＤ９３構築物で処置したマウスにおける腫瘍体積を示す。
図１８は、ヒト化１７Ｂ１０抗ＣＤ９３抗体で処置したマウスにおける腫瘍体積を示す。
図１９は、フローサイトメトリーによって決定されたヒト血清の存在下での初代ＨＵＶＥＣ細胞への抗ＣＤ９３抗体の結合を示す。
図２０は、フローサイトメトリーによって決定されたヒト血清の非存在下での初代ＨＵＶＥＣ細胞への抗ＣＤ９３抗体の結合を示す。
図２１は、フローサイトメトリーアッセイによって決定されたヒト血清の存在下でのｈＣＤ９３ ＣＨＯ細胞への抗ＣＤ９３抗体の結合を示す。
図２２は、フローサイトメトリーアッセイによって決定されたＵ９３７細胞への抗ＣＤ９３抗体の結合を示す。
図２３は、ＨＵＶＥＣチューブ形成における例示的なヒト化１７Ｂ１０抗体の阻害効果を示す。 図２４は、ＨＵＶＥＣチューブ形成における例示的なヒト化１７Ｂ１０抗体の阻害効果を示す。
図２５Ａ～図２５Ｂは、ヒトＣＤ９３を過剰発現するＣＨＯ細胞に対する例示的なヒト化１７Ｂ１０抗体の結合を示す。 図２５Ａ～図２５Ｂは、ヒトＣＤ９３を過剰発現するＣＨＯ細胞に対する例示的なヒト化１７Ｂ１０抗体の結合を示す。
図２６Ａ～図２６Ｂは、ＫＧ１ａおよびＵ９３７細胞に対する例示的なヒト化１７Ｂ１０抗体の結合を示す。
図２７は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定されたマウスＣＤ９３細胞表面発現ＣＨＯ細胞へのヒト化抗ＣＤ９３抗体１７Ｂ１０の結合を示す。
図２８は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定されたマウスＣＤ９３細胞表面発現ＨＥＫ細胞への例示的なヒト化１７Ｂ１０抗体の結合を示す。
図２９は、例示的なヒト化１６Ｅ４抗体およびヒト化７Ｆ３抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す。
図３０は、ヒトＣＤ９３（ｈＣＤ９３）に対する例示的なヒト化１６Ｅ４および７Ｆ３抗体の結合のＥＬＩＳＡ分析を示す。
図３１は、ヒトＣＤ９３（ｈＣＤ９３）に対する例示的なｈ７Ｆ３（ヒト化７Ｆ３）抗体の結合のＥＬＩＳＡ分析を示す。
図３２は、ｈＣＤ９３に対する例示的なハイブリドーマまたはヒト化１６Ｅ４抗体の結合のＥＬＩＳＡ分析を示す。
図３３は、ｈＣＤ９３に対する例示的なハイブリドーマまたはヒト化１７Ｂ１０抗体の結合のＥＬＩＳＡ分析を示す。
図３４は、ｈＣＤ９３に対する例示的なヒト化１７Ｂ１０の結合のＥＬＩＳＡ分析を示す。
図３５は、ＣＨＯ－ｈＣＤ９３細胞に対する１６Ｅ４－ｈＩｇＧ１および７Ｆ３－ｈＩｇＧ１抗体の結合のＦＡＣＳ分析を示す。
図３６は、ＣＨＯ－ｈＣＤ９３細胞へのヒト化７Ｆ３の結合のＦＡＣＳ分析を示す。
図３７は、ＣＨＯ－ｈＣＤ９３細胞へのｈ１６Ｅ４（ヒト化１６Ｅ４）の結合のＦＡＣＳ分析を示す。
図３８は、ＨＵＶＥＣ細胞へのヒト化７Ｆ３の結合のＦＡＣＳ分析を示す。
図３９は、ＫＧ１ａ細胞へのヒト化７Ｆ３の結合のＦＡＣＳ分析を示す。
図４０は、ＫＧ１ａ細胞へのヒト化１６Ｅ４の結合のＦＡＣＳ分析を示す。
図４１は、ｈＣＤ９３に対する例示的な１６Ｅ４抗体および７Ｆ３抗体の結合の動態の特徴づけを示す。
図４２は、ｈＣＤ９３に対する例示的なヒト化１６Ｅ４抗体の結合の動態の特徴づけを示す。
図４３は、ｏｃｔｅｔによるヒトＣＤ９３ならびにフローサイトメトリーによって測定されたヒトＣＤ９３発現ＣＨＯ細胞、ＨＵＶＥＣ細胞またはＫＧ１ａ細胞に対する例示的な１６Ｅ４および７Ｆ３抗体の結合親和性の要約を示す。
図４４は、ＣＨＯ－ｈＣＤ９３細胞へのヒトＭＭＲＮ２の結合に対するヒト化７Ｆ３の遮断効果のＦＡＣＳ分析を示す。
図４５は、ＣＨＯ－ｈＣＤ９３細胞へのＭＭＲＮ２の結合に対するヒト化１６Ｅ４および７Ｆ３抗体の遮断効果のＦＡＣＳ分析を示す。
図４６は、ＨＵＶＥＣ細胞へのヒトＩＧＦＢＰ７の結合に対する例示的なヒト化７Ｆ３抗体の遮断効果のＦＡＣＳ分析を示す。
図４７は、ヒトＣＤ９３へのヒトＩＧＦＢＰ７の結合に対する例示的な７Ｆ３抗体または１６Ｅ４抗体の遮断効果のＯｃｔｅｔ分析を示す。
図４８は、ヒトＣＤ９３へのヒトＩＧＦＢＰ７の結合に対する例示的な１６Ｅ４抗体の遮断効果のＯｃｔｅｔ分析を示す。
図４９は、ＨＵＶＥＣチューブ形成に対する例示的なヒト化７Ｆ３および１６Ｅ４抗体の効果を示す。 図５０は、ＨＵＶＥＣチューブ形成に対する例示的なヒト化７Ｆ３および１６Ｅ４抗体の効果を示す。
図５１は、例示的な抗ＣＤ９３抗体の特性の概要を示す。
本発明の詳細な説明
本出願は、ＣＤ９３に特異的に結合する新規な抗ＣＤ９３構築物（例えば、抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体）、抗ＣＤ９３構築物を調製する方法、構築物を使用する方法（例えば、疾患または状態を処置する方法）を提供する。
抗ＣＤ９３抗体（例えば、ＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用を遮断する抗ＣＤ９３抗体）は、腫瘍またはがんを効果的に処置し、異常な腫瘍血管新生を遮断し、未熟かつ漏出性の腫瘍血管を正常化し、腫瘍における機能的血管網を促進し、血管成熟を促進し、好ましい腫瘍微小環境を促進し、腫瘍における免疫細胞浸潤を増加させ、腫瘍灌流を増加させ、腫瘍における過形成を減少させ、腫瘍を第二の治療に感作させ、および／または第二の薬剤の送達を促進し得る。例えば、ＷＯ２０２１０６２１２８Ａ１を参照されたい。その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される抗ＣＤ９３構築物は、腫瘍のサイズを縮小させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物は、腫瘍における免疫細胞浸潤を促進する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物は、腫瘍における血管成熟を促進する。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される抗ＣＤ９３構築物は、腫瘍を第二の治療に対して感作させるか、または第二の薬剤の送達を容易にする。
Ｉ．定義
「抗体」という用語は、その最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、全長抗体およびその抗原結合フラグメントを含むがこれらに限定されない様々な抗体構造を包含する。「抗体部分」という用語は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。
全長抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と呼ばれることがある。両方の鎖の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変なループを含む（ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、およびＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）。本明細書に開示される抗体および抗原結合フラグメントのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ １９９７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８５；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ １９８９；Ｋａｂａｔ １９８７；Ｋａｂａｔ １９９１）の慣例によって定義または同定され得る。重鎖または軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存されており、超可変ループを支持するための足場を形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として公知の隣接するストレッチの間に介在する。重鎖および軽鎖の定常領域は抗原結合に関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラスまたはアイソタイプは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭであり、それぞれα、δ、ε、γおよびμ重鎖の存在を特徴とする。主要な抗体クラスのいくつかは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）、またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分けられる。
本明細書で使用される「抗原結合フラグメント」という用語は、例えば、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボディ）、１またはそれを超えるＣＤＲを含む抗体の一部から形成された多重特異性抗体、ラクダ状単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、または抗原に結合するが完全な抗体構造を含まない任意の他の抗体フラグメントを含む抗体フラグメントを指す。抗原結合フラグメントは、親抗体または親抗体フラグメント（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合する同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合フラグメントは、フラグメント異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域にグラフトされた特定のヒト抗体由来の１またはそれを超えるＣＤＲを含み得る。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。このフラグメントは、１つの重鎖可変領域ドメインと１つの軽鎖可変領域ドメインとが密接に非共有結合した二量体からなる。これらの２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（それぞれ重鎖および軽鎖からの３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、抗原を認識して結合する能力を有するが、結合部位全体よりも低い親和性であることが多い。
「単鎖Ｆｖ」（「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」とも略される）は、単一のポリペプチド鎖に連結されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体フラグメントである。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」または「相補性決定領域」という用語は、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方の可変領域内に見られる不連続な抗原結合部位を意味することを意図している。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７）；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）；Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）；Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）；およびＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１）に記載されており、ここで、定義は、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体またはグラフト抗体またはその改変体のＣＤＲを指すためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義および使用される用語の範囲内であることが意図される。上記で引用した参考文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として以下の表１に示す。ＣＤＲ予測アルゴリズムおよびインターフェースは当技術分野で公知であり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）；Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１－Ｄ３０７（２０１０）；およびＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２－Ｄ４３８（２０１５）。この段落で引用された参考文献の内容は、本出願で使用するため、および本明細書の１またはそれを超える請求項中の包含の可能性のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義に基づく。例えば、ＣＤＲ配列は、ＶＢＡＳＥ２ツール（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｖｂａｓｅ２．ｏｒｇ／ｖｂａｓｅ２．ｐｈｐ、組込みＶ遺伝子データベースであるＲｅｔｔｅｒ Ｉ，Ａｌｔｈａｕｓ ＨＨ，Ｍｕｎｃｈ Ｒ，Ｍｕｌｌｅｒ Ｗ：ＶＢＡＳＥ２も参照されたい。Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００５ Ｊａｎ １；３３（データベース発行）：Ｄ６７１－４、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）によって決定され得る。
Figure 2023536461000002
「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位置ナンバリング」という表現およびその変形は、上記のＫａｂａｔらの抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたは超可変領域（ＨＶＲ）の短縮または挿入に対応するより少ないまたは追加のアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）および重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔナンバリングは、抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同性領域でのアラインメントによって、所与の抗体について決定され得る。
本明細書中で他に示されない限り、免疫グロブリン重鎖における残基のナンバリングは、上記のＫａｂａｔらにおけるＥＵインデックスのナンバリングである。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義されるＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（ＨＶＲ）由来の残基が、所望の抗体特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基で置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含むことができる。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照のこと。
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体であり、および／または本明細書に開示されるヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製されている。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）。また、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能なのは、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６－９５（１９９１）に記載される方法である。ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５：３６８－７４（２００１）も参照のこと。ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してそのような抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば免疫化異種に抗原を投与することによって調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）に関する米国特許第６，０７５，１８１号および第６，１５０，５８４号を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関するＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）も参照のこと。
本明細書で同定されるポリペプチドおよび抗体配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」または「相同性」は、任意の保存的置換を配列同一性の一部として考慮して配列を整列させた後の、比較されるポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技術の範囲内である様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＭＵＳＣＬＥ（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４；Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５（１）：１１３，２００４を使用して生成される。
「相同」とは、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。２つの比較された配列の両方の位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合、例えば、２つのタンパク質分子のそれぞれの位置がリジンによって占められている場合、または２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子はその位置で相同である。二つの配列間の相同性のパーセントは、比較した位置の数で割った２つの配列が共有する一致または相同位置の数を１００倍した関数である。例えば、２つの配列中の１０個の位置のうち６個が一致または相同である場合、２つの配列は６０％相同である。例として、タンパク質配列ＳＧＴＳＴＤおよびＴＧＴＳＤＡは、５０％の相同性を共有する。一般に、２つの配列が最大の相同性を得るように並べられた場合に比較が行われる。
「定常ドメイン」という用語は、抗原結合部位を含む免疫グロブリンの他の部分、可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメイン（集合的にＣＨ）ならびに軽鎖のＣＨＬ（またはＣＬ）ドメインを含む。
任意の哺乳動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）およびラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。
「ＣＨ１ドメイン」（「Ｈ１」ドメインの「Ｃ１」とも呼ばれる）は、通常、約アミノ酸１１８から約アミノ酸２１５に及ぶ（ＥＵナンバリングシステム）。
「ヒンジ領域」は、一般に、ヒトＩｇＧ１のＧｌｕ２１６～Ｐｒｏ２３０に対応するＩｇＧ中の領域として定義される（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１－２０６（１９８５））。他のＩｇＧアイソタイプのヒンジ領域は、重鎖間Ｓ－Ｓ結合を形成する最初および最後のシステイン残基を同じ位置に配置することによってＩｇＧ１配列と整列させることができる。
ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）は、通常、約アミノ酸２３１から約アミノ酸３４０に及ぶ。ＣＨ２ドメインは、別のドメインと密接に対になっていないという点で独特である。むしろ、２つのＮ結合分枝炭水化物鎖が、インタクトな天然ＩｇＧ分子の２つのＣＨ２ドメインの間に挟まれている。炭水化物は、ドメイン－ドメイン対合の代替物を提供し、ＣＨ２ドメインの安定化を助け得ると推測されている。Ｂｕｒｔｏｎ，Ｍｏｌｅｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１６１－２０６（１９８５）。
「ＣＨ３ドメイン」（「Ｃ２」ドメインとも呼ばれる）は、Ｆｃ領域中のＣＨ２ドメインに対してＣ末端側の残基のストレッチ（すなわち、約アミノ酸残基３４１から抗体配列のＣ末端、典型的にはＩｇＧのアミノ酸残基４４６または４４７まで）を含む。
本明細書における「Ｆｃ領域」または「フラグメント結晶化可能領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域および改変体Ｆｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端まで伸びるように定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリングシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって除去され得る。したがって、インタクトな抗体の組成物は、すべてのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、およびＫ４４７残基を有するおよび有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本明細書中に記載される抗体において使用するための好適な天然配列Ｆｃ領域としては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が挙げられる。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃＲＮ、およびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含むものであり、これらの受容体の対立遺伝子改変体および選択的にスプライシングされた形態を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、これらは主にその細胞質ドメインが異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する。（Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３－２３４（１９９７）を参照のこと。ＦｃＲＮは、抗体の血清半減期の増加を可能にする血液への抗体の再利用にとって重要である。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５－３４（１９９４）；およびｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０－４１（１９９５）で概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語に包含される。
本明細書で使用される「エピトープ」という用語は、抗体または抗体部分が結合する抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。２つの抗体または抗体部分は、抗原に対する競合的結合を示す場合、抗原内の同じエピトープに結合し得る。
本明細書で使用される場合、第一の抗体またはそのフラグメントは、第一の抗体またはそのフラグメントが等モル濃度の第一の抗体またはそのフラグメントの存在下で第二の抗体またはそのフラグメントの標的抗原結合を少なくとも約５０％（例えば、少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％のいずれか１つ）阻害する場合、標的抗原への結合について第二の抗体またはそのフラグメントと「競合」し、またはその逆も同様である。交差競合に基づく抗体の「ビニング」のための高スループットプロセスは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ０３／４８７３１に記載されている。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」および「に特異的である」という用語は、生物学的分子を含む不均一な分子集団の存在下で標的の存在を決定する、標的と抗体または抗体部分との間の結合などの測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであり得る）を特異的に認識する抗体または抗体部分は、他の標的への結合よりも高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続時間でこの標的に結合する抗体または抗体部分である。いくつかの実施形態では、無関係な標的に対する抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定して、標的に対する抗体の結合の約１０％未満である。いくつかの実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１０－５ Ｍ、≦１０－６ Ｍ、≦１０－７ Ｍ、≦１０－８ Ｍ、≦１０－９ Ｍ、≦１０－１０ Ｍ、≦１０－１１ Ｍ、または≦１０－１２ Ｍの解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、異なる種由来のタンパク質の間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含み得るが、それを必要としない。抗体または抗原結合ドメインの結合特異性は、当技術分野で公知の方法によって実験的に決定することができる。そのような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＢＬＩ、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）－試験およびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、分子Ａ（例えば、本明細書中に記載されるような抗ＣＤ９３構築物）は、分子Ｂ（例えば、ＣＤ９３）と分子Ｃ（例えば、ＩＧＦＢＰ７またはＭＭＲＮ２）の結合を「遮断する」ことは、直接遮断と間接遮断の両方を指す。例えば、ＩＧＦＢＰ７またはＭＭＲＮ２の結合に関与するＣＤ９３上の結合部位の少なくとも一部を占めることによってＣＤ９３およびＩＧＦＢＰ７またはＭＭＲＮ２の結合を直接遮断する代わりに、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物は、ＣＤ９３およびＩＧＦＢＰ７／ＭＭＲＮ２が結合できないようにＣＤ９３の構造を変化させることによってＣＤ９３およびＩＧＦＢＰ７またはＭＭＲＮ２の結合を遮断し得る。
「単離された」または「精製された」抗体（または構築物）は、その産生環境の構成要素（例えば、天然または組換え）から同定、分離および／または回収されたものである。好ましくは、単離されたポリペプチドは、その産生環境からの他のすべての構成要素と会合していない。
本明細書に記載の構築物、抗体、またはその抗原結合フラグメントをコードする「単離された」核酸分子は、それが産生された環境においてそれが通常会合している少なくとも１つの汚染核酸分子から同定および分離される核酸分子である。好ましくは、単離された核酸は、産生環境に関連するすべての構成要素と会合していない。本明細書中に記載されるポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、それが自然界で見出される形態または状況以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する本明細書に記載のポリペプチドおよび抗体をコードする核酸とは区別される。単離された核酸は、その核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、その核酸分子は染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物における作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、必要に応じてオペレーター配列、およびリボソーム結合部位が含まれる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用することが公知である。
核酸は、別の核酸配列と機能的関係に置かれた場合に「作動可能に連結される」。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドのためのＤＮＡに作動可能に連結されており；プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されており；またはリボソーム結合部位は、翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に作動可能に連結されている。一般に、「作動可能に連結されている」とは、連結されているＤＮＡ配列が連続していることを意味し、分泌リーダーの場合、連続しており、リーディングフレーム内にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは連続している必要はない。連結は、好都合な制限部位でのライゲーションによって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが従来の慣例に従って使用される。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
本明細書で使用される「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクト、形質転換または形質導入された細胞である。細胞は、初代対象細胞およびその子孫を含む。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」および「宿主細胞培養物」という用語は互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞および継代数を問わずそれに由来する子孫が含まれる。子孫は、親細胞と核酸含有量が完全に同一でなくてもよく、変異を含有してもよい。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体子孫が本明細書に含まれる。
「免疫コンジュゲート」という用語は、本明細書に記載の抗体部分などの抗体に対する治療剤または検出可能な標識の共有結合への言及を含む。連結は、リンカー（ペプチドリンカーなど）を介して直接的または間接的であり得る。
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチである。本出願の目的のために、有益なまたは所望の臨床結果には、それだけに限らないが、以下のうちの１つまたは複数が含まれる：疾患に起因する１またはそれを超える症状の緩和、疾患の程度の縮小、疾患の安定化（例えば、疾患の悪化の予防または遅延）、疾患の拡大（例えば、転移）の予防または遅延、疾患の再発の予防または遅延、疾患の進行の遅延または減速、疾患状態の改善、疾患の寛解（部分的または全体）の提供、疾患を処置するに必要な１またはそれを超える他の医薬の用量の低下、疾患の進行の遅延、生活の質の向上もしくは改善、体重増の増加、および／または生存期間の延長。がん（例えば、腫瘍体積など）の病理学的結果の減少も「処置」に包含される。本出願の方法は、処置のこれらの態様のいずれか１またはそれを超える態様を企図する。
がんの文脈において、「処置する」という用語は、がん細胞の増殖を阻害すること、がん細胞の複製を阻害すること、全体的な腫瘍負荷を軽減すること、および疾患に関連する１またはそれを超える症状を改善することのいずれかまたはすべてを含む。
「阻害」または「阻害する」という用語は、任意の表現型特性の減少もしくは停止、またはその特性の発生率、程度もしくは可能性の減少もしくは停止を指す。「低減する」または「阻害する」ことは、基準と比較して活性、機能、および／または量を減少、低減または停止することである。特定の実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、２０％またはそれを超える全体的な減少を引き起こす能力を意味する。別の実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、５０％またはそれを超える全体的な減少を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施形態では、「低減する」または「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える全体的な減少を引き起こす能力を意味する。
本明細書で使用される「基準」は、比較目的で使用される任意の試料、標準、またはレベルを指す。基準は、健康および／または非疾患の試料から得ることができる。いくつかの例では、基準は、未処理試料から得ることができる。いくつかの例では、基準は、個体の非疾患または非処置の試料から得られる。いくつかの例では、基準は、個体または患者ではない１またはそれを超える健康な個体から得られる。
本明細書で使用される場合、「疾患の発症を遅延させる」とは、疾患（がんなど）の発症を延期、妨害、緩徐、阻止、安定化、抑制および／または延期することを意味する。この遅延は、処置される疾患および／または個体の病歴に応じて、様々な時間長であり得る。当業者に明らかなように、十分なまたは有意な遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で予防を包含し得る。例えば、転移の発生などの後期がんが遅延され得る。
本明細書で使用される「予防する」は、疾患の素因を有し得るが、疾患とまだ診断されていない個体における疾患の発生または再発に関して予防を提供することを含む。
本明細書で使用される場合、機能または活性を「抑制する」ことは、関心のある条件またはパラメータを除いて他の点では同じ条件と比較した場合、または別の条件と比較した場合に、機能または活性を減少させることである。例えば、腫瘍成長を抑制する抗体は、抗体の非存在下での腫瘍の成長速度と比較して、腫瘍の成長速度を低減させる。
「対象」、「個体」、および「患者」という用語は、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、げっ歯類、または霊長類を含むがこれらに限定されない哺乳動物を指すために本明細書では互換的に使用される。いくつかの実施形態では、個体はヒトである。
薬剤の「有効量」は、所望の治療的または予防的結果を達成するために、必要な投与量および期間で有効な量を指す。具体的な用量は、選択される特定の薬剤、従うべき投薬レジメン、他の化合物と組み合わせて投与されるかどうか、投与のタイミング、画像化される組織、およびそれが担持される物理的送達系のうちの１つまたは複数に応じて変化し得る。
本出願の物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストが個体において所望の応答を誘発する能力などの因子に従って変化し得る。治療有効量はまた、物質／分子、アゴニストまたはアンタゴニストの任意の毒性または有害効果よりも治療上有益な効果が上回る量である。治療有効量は、１またはそれを超える投与で送達され得る。
「予防有効量」は、所望の予防結果を達成するために、必要な投与量および期間で有効な量を指す。必ずしもそうとは限らないが、典型的に予防用量は疾患の前または疾患の初期段階で対象に使用されるので、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
「医薬製剤」および「医薬組成物」という用語は、有効成分（複数可）の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される個体に対して許容できないほど毒性である追加の構成要素を含まない調製物を指す。そのような製剤は無菌であり得る。
「薬学的に許容され得る担体」は、個体への投与のための「医薬組成物」を一緒に含む治療剤と共に使用するための、当技術分野で慣用的な非毒性の固体、半固体または液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤または担体を指す。薬学的に許容され得る担体は、使用される投与量および濃度でレシピエントに非毒性であり、製剤の他の成分と適合性である。薬学的に許容され得る担体は、使用される製剤に適している。
「無菌」製剤は、無菌であるか、または生きている微生物およびその胞子を本質的に含まない。
１またはそれを超えるさらなる治療剤と「組み合わせて」投与することは、任意の順序での同時（同時発生の）および連続または逐次投与を含む。
「同時発生的に（concurrently）」という用語は、本明細書では、投与の少なくとも一部が時間的に重複するか、または１つの治療剤の投与が他の治療剤の投与と比較して短期間内に入る２またはそれを超える治療剤の投与を指すために使用される。例えば、２またはそれを超える治療剤は、約６０分以下、例えば約３０、１５、１０、５、または１分のいずれか以下の時間間隔で投与される。
「逐次」という用語は、本明細書では、１またはそれを超える他の薬剤の投与を中止した後に１またはそれを超える薬剤の投与が連続する２またはそれを超える治療剤の投与を指すために使用される。例えば、２またはそれを超える治療剤の投与は、約１５分を超える、例えば約２０、３０、４０、５０もしくは６０分、１日、２日、３日、１週間、２週間もしくは１ヶ月のいずれかまたはそれを超える時間間隔で投与される。
本明細書で使用される場合、「と組み合わせて」とは、別の処置モダリティに加えて１つの処置モダリティを投与することを指す。したがって、「と組み合わせて」は、個体への他の処置モダリティの投与前、投与中または投与後の１つの処置モダリティの投与を指す。
「添付文書」という用語は、治療用製品の市販パッケージに通例含まれる説明書であって、そのような治療用製品の使用に関する適応症、用法、用量、投与、併用療法、禁忌および／または警告に関する情報を含む説明書を指すために使用される。
「製造品」は、少なくとも１つの試薬、例えば疾患または障害（例えば、がん）を処置するための医薬品、または本明細書に記載のバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む任意の製造品（例えば、パッケージまたは容器）またはキットである。特定の実施形態では、製造品またはキットは、本明細書に記載の方法を実施するためのユニットとして促進、配布、または販売される。
本明細書で記載される本出願の実施形態は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」ことを含むことが理解される。
本明細書における値またはパラメータの「約」への言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする変動を含む（および説明する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」という記載を含む。
本明細書で使用される場合、値またはパラメータ「ではないもの」への言及は、一般に、値またはパラメータ「以外」を意味し、説明する。例えば、本方法がタイプＸのがんを処置するために使用されないとは、本方法がタイプＸ以外のがんを処置するために使用されることを意味する。
ここでいう「約Ｘ～Ｙ」は、「約Ｘ～約Ｙ」と同義である。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ｏｒ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。
ＩＩ．抗ＣＤ９３構築物
本出願は、本明細書に記載のＣＤ９３に特異的に結合する抗ＣＤ９３抗体部分を含む抗ＣＤ９３構築物を提供する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号１３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２９および３０７～３１２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３０、および３１３～３１８のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２９および３０７～３１２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３０および３１３～３１８のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号４５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号４６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号４６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号６１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号６２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号６２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号７７に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号７８に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号７８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号９３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号９４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号９３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号９４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号１０９に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１１０に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号１２５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１２６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１２５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１２６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号１４１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１４１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１４２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号１５７および３６０～３６２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１５８、および３６３～３６５のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１５７および３６０～３６２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１５８、および３６３～３６５のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１５７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１５８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３６２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３６５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号１７３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１７４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１７３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１７４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１９０、および３５０～３５２のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１９０および３５０～３５２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１８９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１９０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４７のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３４９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３５２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２００のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２０５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２０６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２０５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２０６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２２１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２２２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２２１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２２２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８８および３２２～３２４のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２８７、および３１９～３２１のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１９～３２１のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２２～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３２０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３２０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３２０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３２１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３２１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３２１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体断片と競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、配列番号２９、および３０７～３１２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３０、および３１３～３１８のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０７～３１２のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３～３１８のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号３１２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）アミノ酸配列ＲＩＦＰＧＤＧＤＸ１Ｘ２ＹＸ３ＧＫＦＫＧ（配列番号２３３）を含むＨＣ－ＣＤＲ２（式中、Ｘ１Ｘ２はＡＮまたはＴＤであり、および／またはＸ３はＮまたはＤである）、およびｉｉｉ）ＴＧＡＡＹＸ１ＦＤＰＦＰＹ（配列番号２３４）のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１はＤまたはＥである）を含み；ＶＬは、ｉ）アミノ酸配列ＳＳＸ１ＫＳＬＬＨＳＸ２ＧＸ３ＴＹＬＹ（配列番号２３５）を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＳまたはＴであり、Ｘ２はＮまたはＳであり、および／またはＸ３はＶまたはＩである）、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＷＸ２Ｎ（配列番号２３６）を含むＨＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＳまたはＴであり、および／またはＸ２はＬまたはＭである）、ｉｉ）アミノ酸配列ＲＩＸ１ＰＧＤＧＤＸ２Ｘ３ＹＸ４ＧＫＦＫＧ（配列番号２３７）を含むＨＣ－ＣＤＲ２（式中、Ｘ１はＹまたはＦであり、Ｘ２Ｘ３はＴＤまたはＡＮであり、および／またはＸ４はＮまたはＤである）、およびｉｉｉ）配列番号３５、１６３および１７９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み；ＶＬは、ｉ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＫＳＬＬＨＳＸ４ＧＸ５ＴＹＬＹ（配列番号２３８）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１Ｘ２Ｘ３はＳＳＳ、ＳＳＴ、またはＲＦＳであり、Ｘ４はＮまたはＳであり、および／またはＸ５＝ＶまたはＩである）、ｉｉ）アミノ酸配列Ｘ１ＭＳＮＬＡＳ（配列番号２３９）を含むＬＣ－ＣＤＲ２（式中、Ｘ１はＲまたはＱである）、およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＡＱＸ１ＬＥＸ２ＰＸ３Ｔ（配列番号２４０）を含むＬＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１はＭまたはＮであり、Ｘ２はＲまたはＬであり、および／またはＸ３はＦまたはＷである）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号３８、１６６および１８２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＶＸ２Ｈ（配列番号２４１）を含むＨＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＡまたはＳであり、および／またはＸ２はＭまたはＩである）、ｉｉ）アミノ酸配列ＹＩＸ１ＰＹＸ２ＤＸ３ＴＸ４ＹＮＥＫＦＫＧ（配列番号２４２）を含むＨＣ－ＣＤＲ２（式中、Ｘ１はＦまたはＮであり、Ｘ２はＮまたはＳであり、Ｘ３はＧまたはＹであり、および／またはＸ４はＥまたはＱである）、およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＲＸ１ＤＧＮＰＹＸ２ＭＤＹ（配列番号２４３）を含むＨＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１はＴまたはＡであり、および／またはＸ２はＴまたはＡである）を含み；ＶＬは、ｉ）ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＸ１（配列番号２４４）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＡまたはＶである）、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１５または２２１に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）ＫＡＳＱＸ１ＶＸ２ＴＸ３ＶＸ４（配列番号２４５）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＮまたはＤであり、Ｘ２はＧまたはＳであり、Ｘ３はＮまたはＡであり、および／またはＸ４はＡまたはＶである）、ｉｉ）ＳＡＳＹＲＸ１Ｘ２（配列番号２４６）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２（式中、ａ）Ｘ１はＦもしくはＹでありＸ２はＩもしくはＴであるか、またはｂ）Ｘ１Ｘ２はＦＩまたはＹＴである）、ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号２４７）を含むＬＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４はＹＮＲＮまたはＨＹＳＴであり、および／またはＸ５はＩまたはＦである）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６、１１８または２１４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）ＫＡＳＱＸ１ＶＸ２ＴＸ３ＶＸ４（配列番号２４５）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＮまたはＤであり、Ｘ２はＧまたはＳであり、Ｘ３はＮまたはＡであり、および／またはＸ４はＡまたはＶである）、ｉｉ）ＳＡＳＹＲＸ１Ｘ２（配列番号２４６）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２（式中、ａ）Ｘ１はＦもしくはＹでありＸ２はＩもしくはＴであるか、またはｂ）Ｘ１Ｘ２はＦＩまたはＹＴである）、ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号２４７）を含むＬＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４はＹＮＲＮまたはＨＹＳＴであり、および／またはＸ５はＩまたはＦである）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６、１１８または２１４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号１１８に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）ＫＡＳＱＸ１ＶＸ２ＴＸ３ＶＸ４（配列番号２４５）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＮまたはＤであり、Ｘ２はＧまたはＳであり、Ｘ３はＮまたはＡであり、および／またはＸ４はＡまたはＶである）、ｉｉ）ＳＡＳＹＲＸ１Ｘ２（配列番号２４６）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２（式中、ａ）Ｘ１はＦもしくはＹでありＸ２はＩもしくはＴであるか、またはｂ）Ｘ１Ｘ２はＦＩまたはＹＴである）、ｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＸ５Ｔ（配列番号２４７）を含むＬＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４はＹＮＲＮまたはＨＹＳＴであり、および／またはＸ５はＩまたはＦである）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号６、１１８または２１４に示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２１４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）Ｘ１ＡＳＱＳＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＳＹＭＸ７（配列番号２４８）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＫまたはＲであり、Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６はＤＹＡＧＤまたはＳＴＳＳＹであり、および／またはＸ７はＮまたはＨである）、ｉｉ）Ｘ１ＡＳＮＬＥＳ（配列番号２４９）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２（式中、Ｘ１はＡまたはＹである）、およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＸ６Ｔ（配列番号２５０）を含むＬＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５はＱＴＮＥＤまたはＨＳＷＥＩであり、および／またはＸ６はＲまたはＦである）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は配列番号２２または５４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体部分は重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ＶＨは、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２もしくは１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）Ｘ１ＡＳＱＳＶＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＳＹＭＸ７（配列番号２４８）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１（式中、Ｘ１はＫまたはＲであり、Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６はＤＹＡＧＤまたはＳＴＳＳＹであり、および／またはＸ７はＮまたはＨである）、ｉｉ）Ｘ１ＡＳＮＬＥＳ（配列番号２４９）のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２（式中、Ｘ１はＡまたはＹである）、およびｉｉｉ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＸ６Ｔ（配列番号２５０）を含むＬＣ－ＣＤＲ３（式中、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５はＱＴＮＥＤまたはＨＳＷＥＩであり、および／またはＸ６はＲまたはＦである）を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は配列番号２２または５４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＬＣ－ＣＤＲ３は、配列番号５４に示されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、構築物は、抗体部分は、全長抗体、二重特異性抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、ＶＨＨ、Ｆｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合物、ダイアボディ、トリボディ、およびテトラボディからなる群より選択される抗体またはその抗原結合フラグメントを含むか、またはそれらである。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は全長抗体である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分はｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、上記の抗ＣＤ９３抗体部分は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ならびにそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択される免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、上記の抗ＣＤ９３抗体部分または全長抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ならびにそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択される免疫グロブリンのＦｃフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して低下したエフェクター機能を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して増強されたエフェクター機能を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して血清半減期が増加するように変更されている。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して血清半減期が低下するように変更されている。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、本明細書に記載の抗体部分のいずれかのヒト化抗体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、抗ＣＤ９３融合タンパク質を含むか、または抗ＣＤ９３融合タンパク質である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、多重特異性抗ＣＤ９３構築物（二重特異性抗体など）を含むか、または多重特異性抗ＣＤ９３構築物である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、抗ＣＤ９３免疫コンジュゲートを含むか、または抗ＣＤ９３免疫コンジュゲートである。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ＣＤ９３およびＩＧＦＢＰ７の結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７はヒトＩＧＦＢＰ７である。いくつかの実施形態では、ＩＧＦＢＰ７へのＣＤ９３の結合は、抗ＣＤ９３抗体とＣＤ９３またはＣＤ９３発現細胞とのプレインキュベーション後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも多く遮断される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体およびＣＤ９３の用量は、約１：１０、１：６、１：３、１：１．５、１：１、４：３、２：１または５：１の比である。いくつかの実施形態では、ＣＤ９３のＩＧＦＢＰ７への結合は、約５０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、２μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、０．８μｇ／ｍｌ、０．６μｇ／ｍｌまたは０．４μｇ／ｍｌの濃度での抗ＣＤ９３抗体のプレインキュベーション後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも多く遮断される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ＣＤ９３およびＭＭＲＮ２の結合を遮断する。いくつかの実施形態では、ＭＭＲＮ２はヒトＭＭＲＮ２である。いくつかの実施形態では、ＭＭＲＮ２はＭＭＲＮ２４９５－６７４フラグメントである。いくつかの実施形態では、ＭＭＲＮ２へのＣＤ９３の結合は、抗ＣＤ９３抗体とＣＤ９３またはＣＤ９３発現細胞とのプレインキュベーション後に、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれよりも多く遮断される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ＣＤ９３およびＭＭＲＮ２の結合を遮断しない。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ＩＧＦＢＰ７およびＭＭＲＮ２の両方へのＣＤ９３の結合を遮断する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用を遮断しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ＣＤ９３とＭＭＲＮ２との間の相互作用を遮断しない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ＩＧＦＢＰ７またはＭＭＲＮ２のいずれかの間の相互作用を遮断しない。
いくつかの実施形態では、ＣＤ９３はヒトＣＤ９３である。
ａ）抗体親和性
抗体部分の結合特異性は、当技術分野で公知の方法によって実験的に決定することができる。そのような方法は、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ－、ＲＩＡ－、ＥＣＬ－、ＩＲＭＡ－、ＥＩＡ－、ＢＬＩ、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）－試験、フローサイトメトリーおよびペプチドスキャンを含むが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、抗体部分とＣＤ９３との結合のＫＤは、約１０－７ Ｍ～約１０－１２ Ｍ、約１０－７ Ｍ～約１０－８ Ｍ、約１０－８ Ｍ～約１０－９ Ｍ、約１０－９ Ｍ～約１０－１０ Ｍ、約１０－１０ Ｍ～約１０－１１ Ｍ、約１０－１１ Ｍ～約１０－１２ Ｍ、約１０－７ Ｍ～約１０－１２ Ｍ、約１０－８ Ｍ～約１０－１２ Ｍ、約１０－９ Ｍ～約１０－１２ Ｍ、約１０－１０ Ｍ～約１０－１２ Ｍ、約１０－７ Ｍ～約１０－１１ Ｍ、約１０－８ Ｍ～約１０－１１ Ｍ、約１０－９ Ｍ～約１０－１１ Ｍ、約１０－７ Ｍ～約１０－１０ Ｍ、約１０－８ Ｍ～約１０－１０ Ｍ、または約１０－７ Ｍ～約１０－９ Ｍである。いくつかの実施形態では、抗体部分とＣＤ９３との間の結合のＫＤは、約１０－７ Ｍ、１０－８ Ｍ、１０－９ Ｍ、１０－１０ Ｍ、１０－１１ Ｍ、または１０－１２ Ｍのいずれか１つよりも強い。いくつかの実施形態では、ＣＤ９３はヒトＣＤ９３である。
いくつかの実施形態では、抗体部分とＣＤ９３との間の結合のＫｏｎは、約１０３ Ｍ－１ｓ－１～約１０８ Ｍ－１ｓ－１、約１０３ Ｍ－１ｓ－１～約１０４ Ｍ－１ｓ－１、約１０４ Ｍ－１ｓ－１～約１０５ Ｍ－１ｓ－１、約１０５ Ｍ－１ｓ－１～約１０６ Ｍ－１ｓ－１、約１０６ Ｍ－１ｓ－１～約１０７ Ｍ－１ｓ－１、または約１０７ Ｍ－１ｓ－１～約１０８ Ｍ－１ｓ－１である。いくつかの実施形態では、抗体部分とＣＤ９３との間の結合のＫｏｎは、約１０３ Ｍ－１ｓ－１～約１０５ Ｍ－１ｓ－１、約１０４ Ｍ－１ｓ－１～約１０６ Ｍ－１ｓ－１、約１０５ Ｍ－１ｓ－１～約１０７ Ｍ－１ｓ－１、約１０６ Ｍ－１ｓ－１～約１０８ Ｍ－１ｓ－１、約１０４ Ｍ－１ｓ－１～約１０７ Ｍ－１ｓ－１、または約１０５ Ｍ－１ｓ－１～約１０８ Ｍ－１ｓ－１である。いくつかの実施形態では、抗体部分とＣＤ９３との間の結合のＫｏｎは、約１０３ Ｍ－１ｓ－１、１０４ Ｍ－１ｓ－１、１０５ Ｍ－１ｓ－１、１０６ Ｍ－１ｓ－１、１０７ Ｍ－１ｓ－１または１０８ Ｍ－１ｓ－１のいずれか１つ以下である。いくつかの実施形態では、ＣＤ９３はヒトＣＤ９３である。
いくつかの実施形態では、抗体部分とＣＤ９３との間の結合のＫｏｆｆは、約１ ｓ－１～約１０－６ ｓ－１、約１ ｓ－１～約１０－２ ｓ－１、約１０－２ ｓ－１～約１０－３ ｓ－１、約１０－３ ｓ－１～約１０－４ ｓ－１、約１０－４ ｓ－１～約１０－５ ｓ－１、約１０－５ ｓ－１～約１０－６ ｓ－１、約１ｓ－１～約１０－５ ｓ－１、約１０－２ ｓ－１～約１０－６ ｓ－１、約１０－３ ｓ－１～約１０－６ ｓ－１、約１０－４ ｓ－１～約１０－６ ｓ－１、約１０－２ ｓ－１～約１０－５ ｓ－１、または約１０－３ ｓ－１～約１０－５ ｓ－１である。いくつかの実施形態では、抗体部分とＣＤ９３との間の結合のＫｏｆｆは、少なくとも約１ｓ－１、１０－２ ｓ－１、１０－３ ｓ－１、１０－４ ｓ－１、１０－５ ｓ－１または１０－６ ｓ－１のいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＣＤ９３はヒトＣＤ９３である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分または抗ＣＤ９３構築物の結合親和性は、既存の抗ＣＤ９３抗体（例えば、抗ヒトＣＤ９３抗体、例えば、ＭＭ０１）よりも高い（例えば、ＫＤ値がより小さい）。
ｂ）キメラ抗体またはヒト化抗体
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分はキメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス由来の可変領域）およびヒト定常領域を含む。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合フラグメントが含まれる。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する１またはそれを超える可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、必要に応じて、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。
ヒト化抗体およびその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に概説されており、例えば以下にさらに記載されている：Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号、および第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフトを記載）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「ガイド選択」アプローチを記載）。
ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域としては以下が挙げられるが、これらに限定されない：「ベストフィット」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）；軽鎖可変領域または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照）；およびＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照）。
マウス由来抗体のヒト化は、一般的かつ日常的に使用されている技術であることが理解される。したがって、配列表に開示される抗ＣＤ９３抗体のいずれかおよび全てのヒト化フォーマットは、前臨床または臨床の状況で使用することができることが理解される。参照される抗ＣＤ９３抗体またはその抗原結合領域のいずれかのヒト化フォーマットがそのような前臨床または臨床の状況で使用される場合、ヒト化フォーマットは、元の非ヒト化フォーマットと同一または類似の生物学的活性およびプロファイルを有すると予想される。
ｃ）ヒト抗体
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分はヒト抗体（ヒトドメイン抗体またはヒトＤＡｂとして知られている）である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１），Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）、およびＣｈｅｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７（４）：９１２－２１（２０１０）に記載されている。完全ヒト単一ドメイン抗体（またはＤＡｂ）を産生することができるトランスジェニックマウスまたはラットは、当技術分野で公知である。例えば、ＵＳ２００９０３０７７８７Ａ１、米国特許第８，７５４，２８７号、ＵＳ２０１５０２８９４８９Ａ１、ＵＳ２０１００１２２３５８Ａ１、およびＷＯ２００４０４９７９４を参照のこと。
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、染色体外に存在するか、または動物の染色体にランダムに組み込まれた、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含む。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、米国特許第６，０７５，１８１号および第６，１５０，５８４号（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載）；米国特許第５，７７０，４２９号（ＨｕＭａｂ（登録商標）を記載）；米国特許第７，０４１，８７０号（Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）を記載）、および米国特許出願番号２００７／００６１９００（ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）を記載）を参照のこと。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに改変され得る。
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）もまた、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロミエローマ細胞株が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されているものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）に記載されている。
ヒト抗体（例えば、ヒトＤＡｂ）はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって作製され得る。次いで、そのような可変ドメイン配列を所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
ｄ）ライブラリー由来抗体
本明細書中に記載される抗ＣＤ９３抗体部分は、所望の１つまたは複数の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で公知である。そのような方法は、例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍらのＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説されており、さらに例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；ａｎｄ Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）に記載されている。単一ドメイン抗体ライブラリーを構築するための方法が記載されており、例えば米国特許第７３７１８４９号を参照。
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組み替え、次いでこれを、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されるように抗原結合ファージについてスクリーニングできる。ファージは、典型的には、ｓｃＦｖフラグメントまたはＦａｂフラグメントのいずれかとして抗体フラグメントを提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されているように、免疫化を一切することなく、ナイーブレパートリーをクローニングして（例えば、ヒト由来）、広範囲の非自己抗原および自己抗原に対する単一の抗体供給源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）によって記載されるように、幹細胞から再編成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再編成を達成することによって、ナイーブライブラリーを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号および同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体フラグメントは、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと見なされる。
ｅ）置換、挿入、欠失および改変体
いくつかの実施形態では、１またはそれを超えるアミノ酸置換を有する抗体改変体が提供される。置換変異誘発のための関心部位としては、ＨＶＲ（またはＣＤＲ）およびＦＲが挙げられる。保存的置換を「好ましい置換」という見出しの下で表２に示す。より実質的な変化は、「例示的な置換」という見出しの下で表２に提供されており、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、その産物を、所望の活性、例えば、保持された／改善された抗原結合、低下した免疫原性、または改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。
Figure 2023536461000003
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従ってグループ分けされ得る：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
１つのタイプの置換改変体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１またはそれを超える超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択された得られた改変体（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低下）に改変（例えば、改良）を有する、および／または親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持する。例示的な置換改変体は親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して簡便に生成することができる。簡潔には、１またはそれを超えるＨＶＲ残基を変異させ、改変体抗体をファージ上に提示し、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。
例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲに変更（例えば、置換）を行ってもよい。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドン（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照）によってコードされる残基および／またはＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）において行われ得、得られた改変体ＶＨまたはＶＬは結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築して再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性は、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド特異的変異誘発）のいずれかによって成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。次に、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性または分子挙動を有する任意の抗体改変体を同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６残基）をランダム化するＨＶＲ指向アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンまたはヒスチジン走査変異誘発またはモデリングを使用して特異的に同定され得る。特に、ＨＣ－ＣＤＲ３およびＬＣ－ＣＤＲ３がしばしば標的化される。
いくつかの実施形態では、置換、挿入または欠失は、そのような変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１またはそれを超えるＨＶＲ内で起こり得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変更（例えば、本明細書で提供される保存的置換）をＨＶＲにおいて行うことができる。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＣＤＲの外側であり得る。
変異誘発の標的となり得る抗体の残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されている「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＧｌｕなどの荷電残基）の残基または群が同定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置き換えられて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうか決定される。さらなる置換を、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入することができる。あるいは、またはさらに、抗体と抗原との間の接触点を同定するための抗原－抗体複合体の結晶構造である。そのような接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的化または排除され得る。改変体をスクリーニングして、それらが抗体の所望の特性を含むかどうかを決定することができる。
アミノ酸配列挿入には、１つの残基から１００個またはそれを超える残基を含有するポリペプチドに及ぶ長さのアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入改変体には、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
ｆ）グリコシル化改変体
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、構築物がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１またはそれを超えるグリコシル化部位が作成または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって都合よく達成され得る。
抗体部分がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物は変更され得る。哺乳動物細胞によって産生されるネイティブ抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって一般に結合している分岐型の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６－３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。いくつかの実施形態では、抗体部分のオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体改変体を作製するために行われ得る。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する。例えば、そのような抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％または２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定した場合のＡｓｎ２９７に結合した全ての糖構造の合計（例えば、複合、ハイブリッドおよび高マンノース構造）に対する、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位に位置するアスパラギン残基を指すが（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）；Ａｓｎ２９７はまた、抗体におけるわずかな配列変化に起因して、位置２９７の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、位置２９４と３００との間に位置する場合がある。そのようなフコシル化改変体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開番号ＵＳ ２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体改変体に関連する刊行物の例としては以下が挙げられる：ＵＳ ２００３／０１５７１０８；ＷＯ ２０００／６１７３９；ＷＯ ２００１／２９２４６；ＵＳ ２００３／０１１５６１４；ＵＳ ２００２／０１６４３２８；ＵＳ ２００４／００９３６２１；ＵＳ ２００４／０１３２１４０；ＵＳ ２００４／０１１０７０４；ＵＳ ２００４／０１１０２８２；ＵＳ ２００４／０１０９８６５；ＷＯ ２００３／０８５１１９；ＷＯ ２００３／０８４５７０；ＷＯ ２００５／０３５５８６；ＷＯ ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９－１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３－５４５（１９８６）；米国特許出願番号ＵＳ ２００３／０１５７１０８ Ａ１，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；およびＷＯ ２００４／０５６３１２ Ａ１，Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０－６８８（２００６）；およびＷＯ２００３／０８５１０７）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、二分オリゴ糖を有する。そのような抗体改変体は、フコシル化の減少および／またはＡＤＣＣ機能の改善を有し得る。そのような抗体改変体の例は、例えばＷＯ ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；およびＵＳ ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体改変体も提供される。そのような抗体改変体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体改変体は、例えばＷＯ １９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）；ＷＯ １９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；およびＷＯ １９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｇ）Ｆｃ領域改変体
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、Ｆｃフラグメントを含む。
「Ｆｃ領域」、「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃフラグメント」または「Ｆｃ」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端非抗原結合領域を指す。この用語は、天然Ｆｃ領域および改変体Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、重鎖のＣｙｓ２２６からカルボキシル末端まで延在する。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、Ｆｃ領域の構造または安定性に影響を及ぼすことなく、存在しても存在しなくてもよい。本明細書において別段の指定がない限り、ＩｇＧまたはＦｃ領域中のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されているように、ＥＵインデックスとも呼ばれる抗体のＥＵナンバリングシステムに従う。
いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択される免疫グロブリンに由来する。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択される免疫グロブリンに由来する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して減少したエフェクター機能（例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のレベルによって測定して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％または９５％減少したエフェクター機能）を有する。
いくつかの実施形態では、ＦｃフラグメントはＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントは、Ｌ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃフラグメントはＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｎ２９７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｎ２９７Ｇ変異を含む。
いくつかの実施形態では、１またはそれを超えるアミノ酸修飾を抗体部分のＦｃ領域に導入し、それによってＦｃ領域改変体を生成することができる。Ｆｃ領域改変体は、１またはそれを超えるアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、すべてではないが一部のエフェクター機能を有し、これにより、インビボでの抗体部分の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害である適用の望ましい候補となる。ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために、インビトロおよび／またはインビボ細胞傷害アッセイを行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現を、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表２に要約する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩを参照のこと）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替において、または、加えて、目的とする分子のＡＤＣＣ活性は、インビボにおいて、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて評価され得る。抗体がＣ１ｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを行うこともできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号および国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合およびインビボでのクリアランス／半減期の決定もまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）を参照のこと）。
エフェクター機能が低下した抗体には、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９のうちの１またはそれを超える置換がされたものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体には、残基２６５および２９７がアラニンに置換されたいわゆる 「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７および３２７のうちの２つまたはそれを超える置換を有するＦｃ変異体が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｎ２９７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｎ２９７Ｇ変異を含む。
ＦｃＲへの結合が改善または減少した一定の抗体改変体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、およびＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照のこと。）
いくつかの実施形態では、ＦｃフラグメントはＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントは、Ｌ２３４Ａ変異および／またはＬ２３５Ａ変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントは、Ｌ２３５Ａ変異および／またはＧ２３７Ａ変異を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃフラグメントはＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントである。いくつかの実施形態では、Ｆｃフラグメントは、Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントである。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＤＣＣを改善する１またはそれを超えるアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の２９８、３３３および／または３３４の位置の置換（残基のＥＵナンバリング）を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ ９９／５１６４２、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変更（すなわち、改善または減少のいずれか）をもたらすＦｃ領域に変更が加えられる。
いくつかの実施形態では、抗体部分改変体は、半減期を変更するおよび／または新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合を変化させる１またはそれを超えるアミノ酸置換を含む改変体Ｆｃ領域を含む。半減期が増加し、母体ＩｇＧの胎児への移行（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））を担う新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を変更する１またはそれを超える置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ改変体には、Ｆｃ領域残基のうちの１またはそれより多くに置換（例えばＦｃ領域残基４３４の置換）を有するものが含まれる（米国特許第７，３７１，８２６号）。
Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＦｃ領域改変体の他の例に関するＷＯ ９４／２９３５１も参照のこと。
ｈ）システイン操作抗体改変体
いくつかの実施形態では、抗体の１またはそれを超える残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体部分、例えば「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。それらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基はそれによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書にさらに記載されるように、抗体を薬物部分またはリンカー－薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして免疫コンジュゲートを作製するために使用され得る。いくつかの実施形態では、以下のいずれか１またはそれを超える残基がシステインで置換され得る：重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）；および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作された抗体部分は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成され得る。
ｉ）抗体誘導体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体部分は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性のために、製造において利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分岐していても分岐していなくてもよい。抗体に結合するポリマーの数は様々であり得、１よりも多くのポリマーが結合する場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下で診断に使用されるかどうかなどを含むがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、１またはそれを超える生物学的に活性なタンパク質、ポリペプチドまたはそれらのフラグメントを含むようにさらに改変され得る。「生物活性」または「生物学的に活性」は、本明細書で互換的に使用される場合、特定の機能を実行するための体内の生物学的活性を示すことを意味する。例えば、タンパク質、ＤＮＡなどの特定の生体分子との組み合わせ、次いでそのような生体分子の活性の促進または阻害を意味し得る。いくつかの実施形態では、生物活性タンパク質またはそのフラグメントは、疾患または状態の予防または処置のために活性薬物物質として患者に投与されるタンパク質およびポリペプチド、ならびに診断目的に使用されるタンパク質およびポリペプチド、例えば診断試験またはインビトロアッセイで使用される酵素、ならびに疾患を予防するために患者に投与されるタンパク質およびポリペプチド（ワクチンなど）を含む。
多重特異性抗ＣＤ９３構築物
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、本明細書に記載の抗ＣＤ９３抗体部分のいずれか１つによる抗ＣＤ９３抗体部分と、第二の抗原を特異的に認識する第二の結合部分（第二の抗体部分など）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３分子は、抗ＣＤ９３抗体部分と、第二の抗原を特異的に認識する第二の部分（第二の抗体部分など）とを含む。
いくつかの実施形態では、第二の抗原は免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、第二の抗原はＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１である。
いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）である。いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＰＤ－Ｌ１トラップまたはＰＤ－１トラップである。例えば、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８ Ｊｕｎ ８；９（１）：２２３７を参照のこと。
いくつかの実施形態では、第二の抗原は腫瘍抗原である。
いくつかの実施形態では、第二の抗原は血管新生剤である。いくつかの実施形態では、血管新生剤はＶＥＧＦ（例えば、ヒトＶＥＧＦ）抗体である。いくつかの実施形態では、血管新生剤はＶＥＧＦ受容体である。いくつかの実施形態では、血管新生剤はＶＥＧＦＲ１（例えば、ヒトＶＥＧＦＲ１）である。いくつかの実施形態では、血管新生剤はＶＥＧＦＲ２（例えば、ヒトＶＥＧＦＲ２）である。
いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＶＥＧＦ受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＶＥＧＦＲ１および／またはＶＥＧＦＲ２のＥＣＤを含む。いくつかの実施形態では、第二の部分はＶＥＧＦトラップを含む。例えば、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００２ Ａｕｇ ２０；９９（１７）：１１３９３－８を参照のこと。
いくつかの実施形態では、第二の抗体部分および抗ＣＤ９３抗体部分は、結合部分の適切な機能を可能にする任意の操作可能な形態で、本明細書に記載の任意のリンカーなどのリンカーを介して互いに融合される。いくつかの実施形態では、リンカーはＧＳリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２２５～２３２および３３８からなる群より選択される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）本明細書に記載の抗ＣＤ９３抗体部分のいずれか１つによる抗ＣＤ９３抗体部分；ｂ）ＰＤ－Ｌ１を特異的に認識する第二の抗体部分（抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分）を含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗ＣＤ９３全長抗体であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３全長抗体と、ｂ）抗ＣＤ９３全長抗体の重鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分は、両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分は、両方の重鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体の重鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＣＤ９３抗体部分（本明細書に記載の抗ＣＤ９３抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の重鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗ＣＤ９３全長抗体であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３全長抗体と、ｂ）抗ＣＤ９３全長抗体の軽鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分は、両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分は、両方の軽鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－Ｌ１全長抗体の軽鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＣＤ９３抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の軽鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）本明細書に記載の抗ＣＤ９３抗体部分のいずれか１つによる抗ＣＤ９３抗体部分；ｂ）ＰＤ－１を特異的に認識する第二の抗体部分（抗ＰＤ－１抗体部分）を含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗ＣＤ９３全長抗体であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３全長抗体と、ｂ）抗ＣＤ９３全長抗体の重鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＰＤ－１抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－抗体部分は、両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体部分は、両方の重鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－１全長抗体の重鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＣＤ９３抗体部分（本明細書に記載の抗ＣＤ９３抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の重鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗ＣＤ９３全長抗体であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３全長抗体と、ｂ）抗ＣＤ９３全長抗体の軽鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＰＤ－１抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体部分は、両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体部分は、両方の軽鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＰＤ－１抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＰＤ－１抗体部分と、ｂ）抗ＰＤ－１全長抗体の軽鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＣＤ９３抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の軽鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）本明細書に記載の抗ＣＤ９３抗体部分のいずれか１つによる抗ＣＤ９３抗体部分；ｂ）ＶＥＧＦを特異的に認識する第二の結合部分を含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗ＣＤ９３全長抗体であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３全長抗体と、ｂ）抗ＣＤ９３全長抗体の重鎖の少なくとも一方または両方に融合したＶＥＧＦを特異的に認識する第二の結合部分とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、第二の結合部分は、両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、第二の結合部分は、両方の重鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＶＥＧＦ抗体部分と、ｂ）抗ＶＥＧＦ全長抗体の重鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＣＤ９３抗体部分（本明細書に記載の抗ＣＤ９３抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の重鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の重鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む抗ＣＤ９３全長抗体であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３全長抗体と、ｂ）抗ＣＤ９３全長抗体の軽鎖の少なくとも一方または両方に融合したＶＥＧＦを特異的に認識する第二の結合部分とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、第二の結合部分は、両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦを特異的に認識する第二の結合部分は、両方の軽鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含む全長抗体を含む抗ＶＥＧＦ抗体部分であって、２つの重鎖はそれぞれ重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖はそれぞれ軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＶＥＧＦ抗体部分と、ｂ）抗ＶＥＧＦ全長抗体の軽鎖の少なくとも一方または両方に融合した抗ＣＤ９３抗体部分（本明細書に記載の抗体部分のいずれかなど）とを含む多重特異性（例えば、二重特異性）抗ＣＤ９３構築物である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の軽鎖のＮ末端に融合される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、両方の軽鎖のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態では、ａ）２つの重鎖および２つの軽鎖を含むＣＤ９３を特異的に認識する全長抗体であって、２つの重鎖がそれぞれ、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、２つの軽鎖がそれぞれ、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、全長抗体と、ｂ）配列番号３２５のアミノ酸配列を含むＶＥＧＦ結合部位とを含む抗ＣＤ９３構築物であって、ＶＥＧＦ結合部位が全長抗体の重鎖の一方または両方に融合されている抗ＣＤ９３構築物が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合部分は、全長抗体の両方の重鎖のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合部分は、リンカーを介して全長抗体に融合される。いくつかの実施形態では、リンカーはＧＳリンカーであるか、または配列番号２２５～２３２および３３８からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号３３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、配列番号２８７、および３１９～３２１のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、全長抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ（ヒトＩｇＧ１アイソタイプなど）を有する。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号３４２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３４３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号２９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号２９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分
例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分には、ＷＯ２０１９２２８５１４Ａ１、ＷＯ２０１９２２７４９０Ａ１およびＷＯ２０２００１９２３２Ａ１に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物に使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＰＤ－Ｌ１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２５５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１部分は、配列番号２８１、２８２、または２８３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２８４、２８５、または２８６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物において使用される抗ＰＤ－Ｌ１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ａ）ＶＨは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）ＶＬ は、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２５５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２５６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８１、２８２、または ２８３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８４、２８５または２８６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、第二の抗体部分および抗ＣＤ９３抗体部分は、結合部分の適切な機能を可能にする任意の操作可能な形態で、本明細書に記載の任意のリンカーなどのリンカーを介して互いに融合される。
例示的な抗ＰＤ－１抗体部分
例示的な抗ＰＤ－１抗体部分としては、ＷＯ２０１８１３３８４２およびＷＯ２０１８１３３８３７に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物に使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＰＤ－１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２６１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２６２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１部分は、配列番号２７５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２７６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物において使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ａ）ＶＨは、配列番号２５７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２５８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２５９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）ＶＬ は、配列番号２６０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２６１のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２６２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、第二の抗体部分は、配列番号２７５に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号２７６に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含むマウス抗体に由来するヒト化抗体部分を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物に使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＰＤ－１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２６７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１部分は、配列番号２７７に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２７８に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物において使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ａ）ＶＨは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２６４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）ＶＬ は、配列番号２６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２６７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２６８のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１抗体部分は、配列番号２７７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号２７８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含むマウス抗体に由来するヒト化抗体部分を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物に使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＰＤ－１の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２７４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＰＤ－１部分は、配列番号２７９に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２８０に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物において使用される抗ＰＤ－１抗体部分（ｓｃＦｖなど）は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、ａ）ＶＨは、配列番号２６９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２７１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２もしくは１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ｂ）ＶＬ は、配列番号２７２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２７３のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２７４のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に全部で約５、４、３、２、または１個までのアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、第二の抗体部分は、配列番号２７９に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号２８０に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含むマウス抗体に由来するヒト化抗体部分を含む。
いくつかの実施形態では、第二の抗体部分および抗ＣＤ９３抗体部分は、結合部分の適切な機能を可能にする任意の操作可能な形態で、本明細書に記載の任意のリンカーなどのリンカーを介して互いに融合される。
ＶＥＧＦを特異的に認識する例示的な結合部分
ＶＥＧＦを特異的に認識する例示的な結合部分には、アバスチン、ラムシルマブもしくはＶＥＧＦトラップ（アフリベルセプト）、またはその改変体もしくは機能的部分が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物に使用されるＶＥＧＦを特異的に認識する結合部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗体部分（ｓｃＦｖなど）であり、ＶＨは、配列番号３２６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３２７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３２８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３３１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物に使用されるＶＥＧＦを特異的に認識する結合部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗体部分（ｓｃＦｖなど）であり、ＶＨは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、配列番号３３５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗ＣＤ９３構築物に使用されるＶＥＧＦを特異的に認識する結合部分は、配列番号３２５のアミノ酸配列を含む。
抗ＣＤ９３融合タンパク質
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、抗ＣＤ９３抗体部分（例えば、抗ＣＤ９３ ｓｃＦｖ）および第二の部分を含む。
いくつかの実施形態では、第二の部分は、半減期延長部分を含む。いくつかの実施形態では、半減期延長部分は、アルブミン結合部分（例えば、アルブミン結合抗体部分）である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分および半減期延長部分は、リンカー（「リンカー」の章に記載されるリンカーのいずれかなど）を介して連結される。
いくつかの実施形態では、第二の部分は、受容体の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）である。いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＰＤ－Ｌ１トラップまたはＰＤ－１トラップである。例えば、Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ．２０１８ Ｊｕｎ ８；９（１）：２２３７を参照のこと。いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＶＥＧＦ受容体の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。いくつかの実施形態では、第二の部分は、ＶＥＧＦＲ１および／またはＶＥＧＦＲ２のＥＣＤを含む。いくつかの実施形態では、第二の部分はＶＥＧＦトラップを含む。例えば、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００２ Ａｕｇ ２０；９９（１７）：１１３９３－８を参照のこと。
抗ＣＤ９３免疫コンジュゲート
本出願はまた、抗ＣＤ９３抗体部分（本明細書に記載の任意のＣＤ９３抗体部分など）および第二の薬剤を含む抗ＣＤ９３免疫コンジュゲートを提供する。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は治療剤である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は標識である。
リンカー
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物は、２つの部分（例えば、上記の多重特異性構築物中の抗ＣＤ９３抗体部分および半減期延長部分、抗ＣＤ９３抗体部分および第二の結合部分）の間に１またはそれを超えるリンカーを含む。抗ＣＤ９３構築物に使用されるリンカー（複数可）の長さ、柔軟性の程度および／または他の特性は、１またはそれを超える特定の抗原またはエピトープに対する親和性、特異性またはアビディティを含むがこれらに限定されない特性に何らかの影響を及ぼし得る。例えば、より長いリンカーは、２つの隣接するドメインが互いに立体的に干渉しないことを確実にするように選択され得る。いくつかの実施形態では、リンカー（ペプチドリンカーなど）は、隣接するドメインが互いに対して自由に動くことができるように、柔軟な残基（グリシンおよびセリンなど）を含む。例えば、グリシン－セリンダブレットは、適切なペプチドリンカーであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーは非ペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーはペプチドリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは切断不可能なリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは切断可能なリンカーである。
他のリンカーの考慮事項には、得られる化合物の物理的または薬物動態学的特性、例えば溶解度、親油性、親水性、疎水性、安定性（安定性がより高いまたはより低いおよび計画された分解）、剛性、柔軟性、免疫原性、抗体結合の調節、ミセルまたはリポソームに組み込まれる能力などへの影響が含まれる。
ペプチドリンカー
ペプチドリンカーは、天然に存在する配列または天然に存在しない配列を有し得る。例えば、重鎖のみの抗体のヒンジ領域に由来する配列が、リンカーとして使用され得る。例えば、ＷＯ１９９６／３４１０３を参照されたい。
ペプチドリンカーは、任意の適切な長さであり得る。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、７５、１００またはそれを超えるアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、約１００、７５、５０、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５個以下またはそれよりも少ないアミノ酸長のいずれかである。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーの長さは、約１アミノ酸～約１０アミノ酸、約１アミノ酸～約２０アミノ酸、約１アミノ酸～約３０アミノ酸、約５アミノ酸～約１５アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５アミノ酸、約５アミノ酸～約３０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３０アミノ酸長、約３０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、または約１アミノ酸～約１００アミノ酸のいずれかである。
このようなペプチドリンカーの本質的な技術的特徴は、前記ペプチドリンカーがいかなる重合活性も含まないことである。二次構造の促進の非存在を含むペプチドリンカーの特徴は当技術分野で公知であり、例えばＤａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９８）３７，９２６６－９２７３），Ｃｈｅａｄｌｅ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９２）２９，２１－３０）およびＲａａｇ ａｎｄ Ｗｈｉｔｌｏｗ（ＦＡＳＥＢ（１９９５）９（１），７３－８０）に記載されている。「ペプチドリンカー」との関連における特に好ましいアミノ酸はＧｌｙである。さらに、いかなる二次構造も促進しないペプチドリンカーが好ましい。ドメインの互いに対する連結は、例えば、遺伝子工学によって提供することができる。融合され操作可能に連結された二重特異性一本鎖構築物を調製し、それらを哺乳動物細胞または細菌において発現させるための方法は、当技術分野で周知である（例えば、国際公開第９９／５４４４０号、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．１９８９ ａｎｄ １９９４またはＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）。
ペプチドリンカーは、プロテアーゼ、特にマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）によって切断されない安定なリンカーであり得る。
リンカーは、柔軟なリンカーであってもよい。例示的な柔軟なリンカーとしては、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ（配列番号２２５）、グリシン－セリンポリマー（例えば、（ＧＳ）ｎ（配列番号２２６）、（ＧＳＧＧＳ）ｎ（配列番号２２７）、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２８）、および（ＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２９）を含み、ｎは少なくとも１の整数である）、グリシン－アラニンポリマー、アラニン－セリンポリマー、および当技術分野で公知の他の柔軟なリンカーが挙げられる。グリシンおよびグリシン－セリンポリマーは比較的構造化されていないため、成分間の中性テザーとして機能することができる。グリシンは、アラニンよりも有意に多くのｐｈｉ－ｐｓｉ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限されない（Ｓｃｈｅｒａｇａ，Ｒｅｖ．Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｃｈｅｍ．１１ １７３－１４２（１９９２）を参照のこと）。当業者は、抗体融合タンパク質の設計が、全体または部分的に柔軟であるリンカーを含むことができ、その結果、リンカーが、柔軟なリンカー部分、ならびに所望の抗体または融合タンパク質構造を提供するために柔軟性が低い構造を与える１またはそれを超える部分を含み得ることを認識するであろう。
さらに、例示的なリンカーはまた、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号２２８）などのアミノ酸配列を含み、ｎは１～８の整数である（例えば、（ＧＧＧＧＳ）３（配列番号２３０；以下「（Ｇ４Ｓ）３」または「ＧＳ３」という）、または（ＧＧＧＧＳ）６（配列番号２３１；以下「（Ｇ４Ｓ）６」または「ＧＳ６」という）。いくつかの実施形態では、ペプチドリンカーは、（ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳ）ｎ（配列番号２３２）のアミノ酸配列を含み、ｎは１～３の整数である。
非ペプチドリンカー
２つの部分のカップリングは、両方の構成要素がそれぞれの活性、例えば、それぞれ抗ＣＤ９３多重特異性抗体中のＣＤ９３および第二の薬剤への結合を保持する限り、２つの分子を結合する任意の化学反応によって達成され得る。この結合は、多くの化学的機構、例えば共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合および錯化を含み得る。いくつかの実施形態では、結合は共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接縮合または外部架橋分子の組み込みのいずれかによって達成することができる。多くの二価または多価連結剤は、この文脈においてタンパク質分子をカップリングするのに有用であり得る。例えば、代表的なカップリング剤は、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼンおよびヘキサメチレンジアミンなどの有機化合物を含むことができる。この列挙は、当技術分野で公知の様々な種類のカップリング剤を網羅することを意図するものではなく、むしろ、より一般的なカップリング剤の例である（Ｋｉｌｌｅｎ ａｎｄ Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５－２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５－２１６（１９８２）；およびＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照）。
本出願において適用され得るリンカーは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用を記載しているＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４４：２０１－２０８（１９８４）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書で使用される非ペプチドリンカーとしては：（ｉ）ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノ－プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－プリジル－ジチオ）－トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル－６［３－（２－ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ＃２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３－（２－ピリジルジチオ）－プロピアンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．＃２１６５－Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣにコンジュゲートしたスルホ－ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスルホ－スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．＃２４５１０）が挙げられる。いくつかの実施形態では、リンカーはＰＥＧ含有リンカーである。
上記のリンカーは、異なる属性を有する構成要素を含み、したがって、異なる生理化学的特性を有する二重特異性抗体をもたらし得る。例えば、アルキルカルボキシレートのスルホ－ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシレートのスルホ－ＮＨＳエステルよりも安定である。ＮＨＳエステル含有リンカーは、スルホ－ＮＨＳエステルよりも可溶性が低い。また、リンカーＳＭＰＴは、立体障害ジスルフィド結合を含み、安定性の高い抗体融合タンパク質を形成することができる。ジスルフィド結合はインビトロで切断されて利用可能な抗体融合タンパク質が少なくなるため、ジスルフィド結合は一般に、他の結合よりも安定性が低い。特に、スルホ－ＮＨＳは、カルボジイミド・カップリングの安定性を高めることができる。カルボジイミド・カップリング（ＥＤＣなど）は、スルホ－ＮＨＳと組み合わせて使用すると、カルボジイミド・カップリング反応単独よりも加水分解に対して耐性の高いエステルを形成する。
ＩＩＩ．調製方法
いくつかの実施形態では、ＣＤ９３に特異的に結合する抗ＣＤ９３構築物または抗体部分、および抗ＣＤ９３構築物または抗体部分の調製中に産生されるポリヌクレオチド、核酸構築物、ベクター、宿主細胞、または培養培地などの組成物を調製する方法が提供される。本明細書中に記載される抗ＣＤ９３構築物または抗体部分または組成物は、下記において、より具体的には実施例において一般的に記載されるようないくつかのプロセスによって調製され得る。
抗体の発現および産生
本明細書に記載される抗体（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体、抗ＣＤ９３二重特異性抗体、および抗ＣＤ９３抗体部分を含む）は、以下および実施例に記載されるものを含む、当技術分野における任意の公知の方法を使用して調製することができる。
モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に均一な抗体の集団から得られ、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する可能性のある変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、別々の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製され得るか、または組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）によって作製され得る。ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物、例えばハムスターまたはラマを上記のように免疫化して、免疫化に使用したタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生することができるリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫化することができる。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９－１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）。ラクダにおける免疫化については実施例１も参照されたい。
免疫化剤は、典型的には、抗原タンパク質またはその融合改変体を含む。一般に、ヒト起源の細胞が望まれる場合は末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用されるか、または、非ヒト哺乳動物供給源が望まれる場合は脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を使用してリンパ球を不死化細胞株と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成する。Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９８６），ｐｐ．５９－１０３。
不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウス骨髄腫細胞株が使用される。このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合されていない親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１またはそれを超える物質を含有する適切な培養培地に播種されて成長する。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマの培養培地には、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる物質であるヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンが含まれる（ＨＡＴ培地）。
好ましい不死化骨髄腫細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高レベル産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性であるものである。これらの中でも、ネズミ骨髄腫株、例えば、ＭＯＰＣ－２１およびＭＰＣ－１１マウス腫瘍（Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能）、およびＳＰ－２細胞（およびその誘導体、例えばＸ６３－Ａｇ８－６５３）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖａ．ＵＳＡ．から入手可能）に由来するものが好ましい。ヒト骨髄腫およびマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７））。
ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロ結合アッセイ、例えばフローサイトメトリー、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって決定される。
ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、所望の抗原に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、モノクローナル抗体の結合親和性および特異性は、免疫沈降によって、またはインビトロ結合アッセイ、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、もしくはＢＬＩによって決定することができる。そのような技術およびアッセイは、当技術分野において公知である。例えば、結合親和性は、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析によって決定され得る。
所望の特異性、親和性および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、限界希釈手順によってクローンをサブクローニングし、標準的な方法（Ｇｏｄｉｎｇ、上記）によって成長させることができる。この目的に適した培養培地には、例えば、Ｄ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞を、哺乳動物において腫瘍としてインビボで成長させることができる。
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えばプロテインＡ－セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって培養培地、腹水、または血清から適切に分離される。
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ法、例えば米国特許第４，８１６，５６７号明細書に記載されている方法によって、上記に記載されているように作製され得る。モノクローナル抗体をコードするｍＲＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡに特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなｍＲＮＡの好ましい供給源として働く。単離されると、ｃＤＮＡは発現ベクターに入れられてもよく、発現ベクターはその後、免疫グロブリンタンパク質を産生しない大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、そのような組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体を合成する。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総説論文としては、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６－２６２（１９９３）およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１－１８８（１９９２）が挙げられる。
さらなる実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２－５５４（１９９０）に記載されている技術を使用して生成された抗体ファージライブラリーから抗体を単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７（１９９１）には、ファージライブラリーを使用したマウス抗体およびヒト抗体の単離がそれぞれ記載されている。その後の刊行物は、鎖シャッフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９－７８３（１９９２））、ならびにコンビナトリアル感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１：２２６５－２２６６（１９９３））を、非常に大きなファージライブラリーを構築するための戦略として記載している。したがって、これらの技術は、モノクローナル抗体を単離するための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代替法である。
ＤＮＡはまた、例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖定常ドメインおよび軽鎖定常ドメインのコード配列を置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全部または一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合することによって改変され得る。典型的には、そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代わりに使用されるか、または抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに使用されて、抗原に対して特異性を有する１つの抗原結合部位および異なる抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製する。
本明細書に記載のモノクローナル抗体は一価であってもよく、その調製は当技術分野で周知である。例えば、１つの方法は、免疫グロブリン軽鎖および改変重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖架橋を防ぐために、一般にＦｃ領域の任意の点でトランケートされる。あるいは、関連するシステイン残基は、架橋を防ぐために、別のアミノ酸残基で置換されていてもよく、または欠失されていてもよい。インビトロ法はまた、一価抗体を調製するのにも適している。そのフラグメント、特にＦａｂフラグメントを産生するための抗体の消化は、当技術分野で公知の日常的な技術を用いて達成することができる。
キメラ抗体またはハイブリッド抗体はまた、架橋剤を含む方法を含む合成タンパク質化学における公知の方法を使用してインビトロで調製され得る。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を使用して、またはチオエーテル結合を形成することによって構築され得る。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオラートおよびメチル－４－メルカプトブチルイミデートが挙げられる。
抗体部分をコードする核酸分子
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物または抗体部分のいずれか１つをコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載されるような方法のいずれか１つを使用して調製されるポリヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗体部分（例えば、抗ＣＤ９３抗体部分）の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗体部分（例えば、抗ＣＤ９３抗体部分）の重鎖をコードするポリヌクレオチドおよび軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。いくつかの実施形態では、第一の核酸分子は、重鎖をコードする第一のポリヌクレオチドを含み、第二の核酸分子は、軽鎖をコードする第二のポリヌクレオチドを含む。
いくつかのこのような実施形態では、重鎖および軽鎖は、１つの核酸分子から、または２つの別個の核酸分子から、２つの別個のポリペプチドとして発現される。いくつかの実施形態では、例えば抗体がｓｃＦｖである場合、単一ポリヌクレオチドは、共に連結された重鎖と軽鎖の両方を含む単一ポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、抗体部分（例えば、抗ＣＤ９３抗体部分）の重鎖または軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されると重鎖または軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上述のように、リーダー配列は、天然の重鎖または軽鎖リーダー配列であってもよく、または別の異種リーダー配列であってもよい。
いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドはＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡはｍＲＮＡである。
核酸分子は、当技術分野で従来の組換えＤＮＡ技術を使用して構築され得る。いくつかの実施形態では、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクターである。
核酸構築物
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドのいずれか１つを含む核酸構築物が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製された核酸構築物が提供される。
いくつかの実施形態では、核酸構築物は、ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは遺伝子に対応し、プロモーターは遺伝子の野生型プロモーターである。
ベクター
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＣＤ９３抗体部分）または本明細書に記載の核酸構築物のいずれか１つの重鎖および／または軽鎖をコードする任意のポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製されたベクターが提供される。抗体、ｓｃＦｖ、融合タンパク質または本明細書に記載される構築物の他の形態（例えば、抗ＣＤ９３ ｓｃＦｖ）などの抗ＣＤ９３構築物のいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターも提供される。そのようなベクターとしては、限定されないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、ベクターは、重鎖をコードする第一のポリヌクレオチド配列および軽鎖をコードする第二のポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖および軽鎖は、２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。いくつかの実施形態では、重鎖および軽鎖は、例えば抗体がｓｃＦｖである場合など、単一のポリペプチドの一部として発現される。
いくつかの実施形態では、第一のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第二のベクターは、軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第一のベクターおよび第二のベクターは、同様の量（同様のモル量または同様の質量など）で宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、５：１～１：５のモル比または質量比の第一のベクターおよび第二のベクターが宿主細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターについて１：１～１：５の質量比が使用される。いくつかの実施形態では、重鎖をコードするベクターと軽鎖をコードするベクターについて１：２の質量比が使用される。
いくつかの実施形態では、ＣＨＯもしくはＣＨＯ由来細胞またはＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現に最適化されたベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ Ｄｅｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０－８８９（２００４）に記載されている。
宿主細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意のポリペプチド、核酸構築物および／またはベクターを含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製された宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、発酵条件下で、本明細書に記載の抗体部分のいずれかを産生することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＣＤ９３抗体部分）は、原核細胞、例えば細菌細胞；または真核細胞、例えば真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞で発現され得る。そのような発現は、例えば、当技術分野で公知の手順に従って行われ得る。ポリペプチドを発現するために使用され得る例示的な真核細胞には、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ－Ｓ、ＤＧ４４.Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞、ＣＨＯＺＮ（登録商標）およびＦＵＴ８ ＣＨＯ細胞を含む）；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；およびＮＳＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体部分（例えば、抗ＣＤ９３抗体部分）は、酵母で発現され得る。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５号を参照されたい。いくつかの実施形態では、特定の真核宿主細胞は、抗体部分の重鎖および／または軽鎖に所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。
所望の宿主細胞への１またはそれを超える核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを含むがこれらに限定されない任意の方法によって達成され得る。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞に一過性または安定にトランスフェクトされ得る。
本出願はまた、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドまたはベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ９３抗体を含む宿主細胞を提供する。目的の抗体、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする遺伝子を単離する目的で、異種ＤＮＡを過剰発現することができる任意の宿主細胞を使用することができる。哺乳動物宿主細胞の非限定的な例には、ＣＯＳ、ＨｅＬａおよびＣＨＯ細胞が含まれるが、これらに限定されない。ＰＣＴ公開番号ＷＯ８７／０４４６２も参照されたい。適切な非哺乳動物宿主細胞には、原核生物（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはＢ．ｓｕｂｔｉｌｌｉｓ）および酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ；またはＫ．ｌａｃｔｉｓ）が含まれる。
いくつかの実施形態では、抗体部分は無細胞系で産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４９８：２２９－４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：５３８－４５（２００４）；Ｅｎｄｏら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．２１：６９５－７１３（２００３）に記載されている。
培養培地
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗体部分、ポリヌクレオチド、核酸構築物、ベクター、および／または宿主細胞を含む培養培地が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法を使用して調製された培養培地が提供される。
いくつかの実施形態では、培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよび／またはチミジン（例えば、ＨＡＴ培地）を含む。いくつかの実施形態では、培地は血清を含まない。いくつかの実施形態では、培地は血清を含む。いくつかの実施形態では、培地はＤ－ＭＥＭまたはＲＰＭＩ－１６４０培地である。いくつかの実施形態では、培地は化学的に規定された培地である。いくつかの実施形態では、化学的に規定された培地は、宿主細胞株に対して最適化される。
抗体部分の精製
抗ＣＤ９３構築物（例えば、抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体）は、任意の適切な方法によって精製され得る。そのような方法には、アフィニティーマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィの使用が含まれるが、これらに限定されない。適切なアフィニティーリガンドとしては、ＲＯＲ１ ＥＣＤおよび抗体定常領域に結合するリガンドが挙げられる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、または抗体アフィニティカラムを使用して定常領域に結合し、Ｆｃフラグメントを含む抗ＣＤ９３構築物を精製することができる。疎水性相互作用クロマトグラフィ、例えばブチルまたはフェニルカラムもまた、抗体などのいくつかのポリペプチドの精製に適し得る。イオン交換クロマトグラフィ（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィおよび／または陽イオン交換クロマトグラフィ）もまた、抗体などのいくつかのポリペプチドの精製に適し得る。混合モードクロマトグラフィ（例えば、逆相／陰イオン交換、逆相／陽イオン交換、親水性相互作用／陰イオン交換、親水性相互作用／陽イオン交換など）もまた、抗体などのいくつかのポリペプチドの精製にも適し得る。ポリペプチドを精製する多くの方法が当技術分野で公知である。
Ｖ．処置方法
個体における疾患または状態を処置する方法、または個体における免疫応答を調節する方法も本明細書で提供される。本方法は、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物を個体（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、個体において疾患もしくは状態を処置するかまたは免疫応答を調節する方法であって、有効量の本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物を個体に投与することを含む方法が提供される。例示的な疾患または状態には、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）およびがんが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、個体における疾患または状態（ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＣＮＶ、またはがんなど）を処置する方法であって、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、有効量の抗ＣＤ９３構築物を個体に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、個体における疾患または状態（ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＣＮＶ、またはがんなど）を処置する方法であって、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、有効量の抗ＣＤ９３構築物を個体に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３ ＶＨは、ｉ）配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、抗ＣＤ９３ ＶＬは、ｉ）配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２９および３０７～３１２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３０および３１３～３１８のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、個体における疾患または状態（ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＣＮＶ、またはがんなど）を処置する方法であって、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、有効量の抗ＣＤ９３構築物を個体に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号４５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号４６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、個体における疾患または状態（ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＣＮＶ、またはがんなど）を処置する方法であって、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、有効量の抗ＣＤ９３構築物を個体に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号７８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、個体における疾患または状態（ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＣＮＶ、またはがんなど）を処置する方法であって、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含み、該抗体部分は、ＣＤ９３の結合エピトープについて、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントと競合し、該ＶＨ－２は、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、該ＶＬ－２は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、有効量の抗ＣＤ９３構築物を個体に投与することを含む方法が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３抗体部分は、重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＣＤ９３抗体に由来するヒト化抗体であり、ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨは、配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８８および３２２～３２４のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％（例えば、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％のいずれか１つ）の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む。
いくつかの実施形態では、上記のアミノ酸置換は、本出願の表２に示される「例示的な置換」に限定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、本出願の表２に示される「好ましい置換」に限定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物のいずれか１つを対象に投与することを含む、腫瘍を処置する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、抗ＣＤ９３構築物の非存在下における腫瘍成長と比較して、少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または９０％よりも多く、腫瘍成長を遅らせる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物のいずれか１つを対象に投与することを含む、対象の腫瘍のサイズを減少する方法が提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍のサイズを減少させることは、対象における腫瘍体積を減少させることを指す。いくつかの実施形態では、腫瘍のサイズを減少させることは、対象における腫瘍の寸法（例えば、直径）を減少させることを指す。いくつかの実施形態では、腫瘍サイズは、抗ＣＤ９３構築物が投与されていない対象における対応腫瘍のサイズと比較して、少なくとも約２％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９０％よりも多く、減少される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物のいずれか１つを対象に投与することを含む、対象における１またはそれを超える腫瘍を排除する方法が提供される。いくつかの実施形態では、腫瘍の排除は、抗ＣＤ９３構築物の約３日後、約１週間後、約２週間後、約３週間後、約４週間後、約５週間後、約６週間後、約７週間後、約８週間後、または約８週間よりも後に起こる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物のいずれか１つを対象に投与することを含む、対象の腫瘍への免疫細胞浸潤を促進する方法が提供される。いくつかの実施形態では、本方法は、抗ＣＤ９３構築物が投与されていない対象における免疫細胞浸透と比較して、腫瘍への免疫細胞浸透を少なくとも約２％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９０％よりも多く増大させる。
疾患または状態
本明細書に記載の方法は、異常な血管構造に関連する任意の疾患または状態に適用可能である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は、新生血管形成に関連する。いくつかの実施形態では、疾患または状態は皮膚乾癬である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は良性腫瘍である。いくつかの実施形態では、疾患または状態はがんである。
新生血管形成に関連する疾患
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、新生血管形成に関連する。本明細書に記載の「新生血管形成」は、既存の血管系から新しい血管系が発達する現象を指す。
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、眼の新生血管形成に関連する。
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、ウェット型ＡＭＤとしても知られる脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）である。脈絡膜血管新生は、脈絡膜に由来する新しい血管がブルッフ膜の断裂を介して網膜下色素上皮（sub-ＲＰＥ）または網膜下腔に成長することを含み得、これは視力喪失の主な原因であり得る。ＣＮＶは、数週間以内に顕著な中心視力の突然の悪化を引き起こす可能性がある。起こり得る他の症状には、色覚障害（color disturbance）、および変視症（直線が波状に見える歪み）が含まれる。新しい血管の出血は、ＣＮＶの症状の発症を加速させ得る。ＣＮＶは、眼の後ろの圧迫感も含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法および医薬組成物は、新生血管形成に関連するＣＮＶまたは眼の状態を処置するために使用される。
ＡＭＤの進行した「ウェット」形態（新生血管または滲出性）はあまり一般的ではないが、患者の中心視力の急速かつ高頻度の実質的な喪失を引き起こし得る。ＡＭＤのウェット形態では、脈絡膜新生血管が形成され、網膜色素上皮の下および中を通って成長し得る血管のネットワークに発達する。これは網膜下腔への血漿の漏出および／または出血を伴うので、これが黄斑で起こる場合、中心視力の重度の突然の喪失が起こり得る。「ＡＭＤ」という用語は、別段の指定がない限り、ドライ型ＡＭＤまたはウェット型ＡＭＤのいずれかであり得る。本出願は、ＡＭＤ、ウェット型ＡＭＤおよび／またはドライ型ＡＭＤの処置または予防を企図する。
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）後の黄斑浮腫である。
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）である。糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）は、黄斑内の血管からの流体の漏出による糖尿病における網膜の腫脹である。黄斑は網膜の中心部分であり、網膜錐体が豊富な小さな領域であり、色を検出し、昼間の視覚が依存する特殊な神経終末である。黄斑浮腫が発症すると、中心視野の中央またはすぐ側にかすみが生じる。糖尿病性黄斑浮腫からの視力喪失は、数ヶ月にわたって進行し、明確に焦点を合わせることを不可能にする可能性がある。ＤＭＥの一般的な症状は、霧視、浮遊物、複視、および処置されない場合は最終的には失明である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法および医薬組成物は、ＤＭＥを処置するために使用される。
いくつかの実施形態では、疾患または状態は網膜静脈閉塞である。網膜静脈閉塞は、網膜から血液を運び去る小静脈の閉塞である。網膜は、光画像を神経信号に変換し、それらを脳に送る内眼（inner eye）の背部の組織の層である。網膜静脈閉塞は、動脈の硬化（アテローム性動脈硬化症）および血栓の形成によって引き起こされることが最も多い。網膜のより小さい静脈（分枝静脈またはＢＲＶＯ）の閉塞は、しばしば、アテローム性動脈硬化症によって肥厚または硬化した網膜動脈が交差して網膜静脈に圧力をかける場所で起こる。網膜静脈閉塞の症状には、一方の眼の全部または一部における突然のかすみまたは視力喪失が含まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法および医薬組成物は、網膜静脈閉塞症を処置するために使用される。
いくつかの実施形態では、疾患または状態は、ＤＭＥ患者における糖尿病性網膜症（ＤＲ）である。
がん
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される疾患または状態は、がんである。本明細書中に記載される方法のいずれかを使用して処置され得るがんには、任意のタイプのがんが含まれる。本出願に記載の薬剤で処置されるがんのタイプには、癌腫、芽細胞腫、肉腫、良性および悪性腫瘍、ならびに悪性疾患、例えば肉腫、癌腫、および黒色腫が含まれるが、これらに限定されない。成人腫瘍／がんおよび小児腫瘍／がんも含まれる。
様々な実施形態において、がんは、早期がん、非転移性がん、原発性がん、進行がん、局所進行がん、転移性がん、寛解状態のがん、再発性がん、アジュバント状況におけるがん、ネオアジュバント状況におけるがん、または治療に対して実質的に難治性のがんである。
いくつかの実施形態では、がんは固形腫瘍である。
いくつかの実施形態では、がんは、ＣＤ９３＋腫瘍内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、腫瘍中の内皮細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％がＣＤ９３陽性である。いくつかの実施形態では、がんは、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、がんは、がんを有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。
いくつかの実施形態では、がんはＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、がんは、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、がんは、がんを有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。
いくつかの実施形態では、がん（例えば、固形腫瘍）は、腫瘍低酸素を特徴とする。いくつかの実施形態では、がんは、少なくとも約１％、２％、３％、４％、または５％のピモニダゾール陽性率（すなわち、ピモニダゾール陽性面積を全腫瘍面積で割ったもの）を特徴とする。
本出願の方法によって処置され得るがんの例としては、限定されないが、肛門がん、星細胞腫（例えば、小脳および大脳）、基底細胞癌、膀胱がん、骨がん、（骨肉腫および悪性線維性組織球腫）、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、脳幹神経膠腫、小脳または大脳星細胞腫（例えば、星細胞腫、悪性神経膠腫、髄芽腫および神経膠芽腫）、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、脳がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん（例えば、子宮がん）、食道がん、眼がん（例えば、眼内黒色腫および網膜芽細胞腫）、胃部（胃）がん、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん（例えば、肝癌およびヘパトーム（heptoma））、肝臓がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌、および肺の扁平上皮癌）、髄芽腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症候群、鼻咽頭がん、神経芽腫、卵巣がん、膵臓がん、副甲状腺がん、腹膜のがん、下垂体腫瘍、直腸がん、腎がん、腎盂および尿管がん（移行細胞がん）、横紋筋肉腫、皮膚がん（例えば、非黒色腫（例えば、扁平上皮癌）、黒色腫およびメルケル細胞癌）、小腸がん、扁平上皮がん、精巣がん、甲状腺がん、および結節硬化症が挙げられる。がんのさらなる例は、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，§ｏｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．，２０１１（ＩＳＢＮ ９７８－０－９１１９１０－１９－３）；Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，§ｏｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．，２０１８（ＩＳＢＮ ９７８－０－９１１－９１０４２－１）（Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌｓのインターネット・ウェブサイトの２０１８ 年デジタルオンライン版）；およびＳＥＥＲ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｃｏｄｉｎｇ ａｎｄ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ ２０１６に見出すことができ、これらはそれぞれ、あらゆる目的のためにその全体が参照により組み込まれる。
対象
いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物（ヒトなど）である。
いくつかの実施形態では、対象は、ＣＤ９３＋内皮細胞を含む異常な血管を含む組織を有する。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織中の内皮細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％がＣＤ９３陽性である。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。
いくつかの実施形態では、対象は、ＩＧＦＢＰ７＋血管を含む異常な血管を含む組織を有する。いくつかの実施形態では、組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。
いくつかの実施形態では、対象は、異常な血管構造に基づく処置のために選択される。いくつかの実施形態では、異常な血管構造は、ＣＤ９３＋内皮細胞を特徴とする（例えば、ＣＤ９３＋ＣＤ３１＋細胞を測定することによる）。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織中の内皮細胞の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％がＣＤ９３陽性である。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。いくつかの実施形態では、異常な血管を有する組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＣＤ９３＋内皮細胞を含む。
いくつかの実施形態では、異常な血管構造は、ＩＧＦＢＰ７＋血管の異常なレベルを特徴とする。いくつかの実施形態では、組織は、対象の正常組織よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。いくつかの実施形態では、組織は、異常な血管を有しない対象または対象の群における対応する臓器よりも少なくとも２０％、４０％、６０％、８０％、または１００％多いＩＧＦＢＰ７＋血管を含む。
いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１つの以前の治療を有する。いくつかの実施形態では、以前の治療は、放射線治療、化学療法および／または免疫療法を含む。いくつかの実施形態では、対象は、以前の治療に対して抵抗性、難治性、または再発性である。
抗ＣＤ９３構築物の投薬および投与方法
個体に投与される本明細書に記載の疾患または障害を処置するために使用される抗ＣＤ９３構築物の投薬レジメン（特定の投与量および頻度など）は、特定の抗ＣＤ９３構築物（例えば、抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体、例えば、抗ＣＤ９３融合タンパク質）、投与様式、および処置される疾患または状態の種類によって異なり得る。いくつかの実施形態では、疾患または状態の種類はがんである。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、客観的応答（部分応答または完全応答など）をもたらすのに有効な量である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体において完全応答をもたらすのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体において部分応答をもたらすのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）で処置された個体の集団の中で、約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６４％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％のいずれかを超える全奏効率をもたらすのに十分な量である。本明細書中に記載される方法の処置に対する個体の応答を、例えば、ＲＥＣＩＳＴレベルに基づいて決定することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体の無増悪生存を延長するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、個体の全生存を延長するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）で処置された個体の集団の中で、約５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％のいずれかを超える臨床的利益をもたらすのに十分な量である。
いくつかの実施形態では、単独でのまたは第二、第三および／もしくは第四の薬剤と組み合わせた抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、処置前の同じ対象の対応する腫瘍サイズ、がん細胞の数、または腫瘍成長速度と比較して、または処置を受けていない（例えば、プラセボ処置を受けている）他の対象の対応する活性と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくは１００％のいずれかだけ腫瘍のサイズを減少させる、がん細胞の数を減少させる、または腫瘍の成長速度を低下させるのに十分な量である。精製酵素を用いたインビトロアッセイ、細胞ベースのアッセイ、動物モデル、またはヒト試験などの標準的な方法を使用して、この効果の大きさを測定することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、組成物が個体に投与された場合に毒物学的効果を誘発するレベル（すなわち、臨床的に許容され得る毒性レベルを超える効果）未満であるか、または潜在的な副作用を制御または耐容することができるレベルである量である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（例えば、抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体）の有効量は、同じ投薬レジメンに従った組成物の最大耐量（ＭＴＤ）に近い量である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％、または９８％のいずれかよりも多い。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、処置を受けていない個体と比較して、疾患または状態の進行を（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％）遅らせるかまたは阻害する量である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、疾患または状態は感染症である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物（抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体など）の有効量は、処置を受けていない個体と比較して、状態（例えば、移植）の副作用（自己免疫応答）を（例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、または５０％）減少させる量である。
上記態様のいずれかのいくつかの実施形態において、抗ＣＤ９３構築物（例えば、抗ＣＤ９３モノクローナル抗体または多重特異性抗体）の有効量は、総体重の１ｋｇあたり約０．００１μｇ～約１００ｍｇ、例えば、約０．００５μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１μｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、または約０．０１μｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲である。
いくつかの実施形態では、処置は、１回よりも多くの抗ＣＤ９３構築物の投与（例えば、約２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、または１０回の抗ＣＤ９３構築物の投与）を含む。いくつかの実施形態では、２回の投与を約１週間以内に行う。いくつかの実施形態では、２回目の投与は、１回目の投与の完了の少なくとも約１、２、３、４、５、６、または７日後に行われる。いくつかの実施形態では、２回目の投与は、１回目の投与の完了の約１～１４日後、１～１０日後、１～７日後、２～６日後、または３～５日後に行われる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、１週間に約１～３回（例えば、１週間に約１回、１週間に約２回、または１週間に約３回）投与される。
抗ＣＤ９３構築物は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、肺内、経口、吸入、小胞内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜、および経皮を含む様々な経路を介して個体（ヒトなど）に投与することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、個体に投与されている間、医薬組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、組成物の持続連続放出製剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は皮下投与される。いくつかの実施形態では、組成物は静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は経口投与される。
併用療法
本出願はまた、疾患または状態（がんなど）を処置するために抗ＣＤ９３構築物を個体に投与する方法であって、第二の薬剤または治療を投与することをさらに含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は、疾患または状態を処置するための標準的なまたは一般的に使用される薬剤または治療である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は化学療法剤を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は手術を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は放射線治療を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は免疫療法を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は細胞治療（例えば、免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）を含む細胞治療）を含む。いくつかの実施形態では、第二の薬剤または治療は血管新生阻害剤を含む。
いくつかの実施形態では、第二の薬剤は化学療法剤である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は代謝拮抗剤である。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は５－ＦＵである。
いくつかの実施形態では、第二の薬剤は免疫チェックポイント調節剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調節剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－Ｌ２、ＰＤ－１、ＣＤ４７、ＴＩＧＩＴ、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、４－１ＢＢ、およびＢ７Ｈ４からなる群より選択される免疫チェックポイントタンパク質の阻害剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントタンパク質はＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、第二の薬剤は、抗ＰＤ－１抗体またはそのフラグメントである。
いくつかの実施形態では、第二の治療は免疫療法である。いくつかの実施形態では、免疫療法は、キメラ抗原受容体を発現する免疫細胞を投与することを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞など）である。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体は腫瘍抗原に結合する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療と同時に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療と同時発生的に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療と逐次投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療の前に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療の後に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療と同じ単位剤形で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療とは異なる単位剤形で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療と同じ単位剤形で投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ９３構築物は、第二の薬剤または治療とは異なる単位剤形で投与される。
ＶＩ．組成物、キットおよび製造品
本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物または抗ＣＤ ９３抗体部分、抗体部分をコードする核酸、抗体部分をコードする核酸を含むベクター、または核酸もしくはベクターを含む宿主細胞のいずれか１つを含む組成物（製剤など）も本明細書で提供される。
本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物の適切な製剤は、所望の純度を有する抗ＣＤ９３構築物または抗ＣＤ９３抗体部分を必要に応じた薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で混合することによって得ることができる。許容され得る担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などを含む。皮下投与に適した凍結乾燥製剤は、国際公開第９７／０４８０１号に記載されている。そのような凍結乾燥製剤は、適切な希釈剤を用いて高タンパク質濃度に再構成することができ、再構成された製剤は、本明細書で画像化、診断、または処置される個体に皮下投与することができる。
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成される。
本明細書に記載の抗ＣＤ９３構築物または抗ＣＤ９３抗体部分のいずれか１つを含むキットも提供される。キットは、本明細書に記載の細胞組成物または処置を調節する方法のいずれかに有用であり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ９３に特異的に結合する抗ＣＤ９３構築物を含むキットが提供される。
いくつかの実施形態では、キットは、抗ＣＤ９３構築物を個体に送達することができるデバイスをさらに含む。非経口送達などの適用のためのデバイスの１つのタイプは、組成物を対象の体内に注射するために使用されるシリンジである。吸入デバイスは、特定の適用にも使用され得る。
いくつかの実施形態では、キットは、疾患または状態、例えばがん、感染症、自己免疫疾患、または移植を処置するための治療剤をさらに含む。
本出願のキットは適切な包装中にある。適切な包装には、バイアル、ボトル、瓶、可撓性包装（例えば、密封されたマイラーまたはプラスチックバッグ）などが含まれるが、これらに限定されない。キットは、必要に応じて、緩衝液および解釈情報などの追加の成分を提供し得る。
したがって、本出願は製造品も提供する。製造品は、容器と、容器上のまたは容器に関連付けられたラベルまたは添付文書とを含むことができる。適切な容器には、バイアル（密封バイアルなど）、ボトル、瓶、可撓性包装などが含まれる。一般に、容器は組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグであってもよいし、皮下注射針で穿刺可能な栓を有するバイアルであってもよい）。ラベルまたは添付文書は、組成物が個体における特定の状態を画像化、診断または処置するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、組成物を個体に投与し、個体を画像化するための指示をさらに含む。ラベルは、再構成および／または使用のための指示を示し得る。組成物を保持する容器は、再構成された製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与から）を可能にする複数回使用バイアルであり得る。添付文書は、診断用製品の市販パッケージに通例含まれる指示であって、そのような診断用製品の使用に関する適応症、用法、用量、投与、禁忌および／または警告に関する情報を含む指示を指す。さらに、製造品は、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液などの薬学的に許容され得る緩衝液を含む第二の容器をさらに含み得る。さらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの観点から望ましい他の材料を含んでもよい。
キットまたは製造品は、複数の単位用量の組成物および使用についての指示を含み得、薬局、例えば病院の薬局および調剤薬局での保管および使用に十分な量で包装され得る。
当業者は、本発明の範囲および主旨の範囲内でいくつかの実施形態が可能であることを認識するであろう。以下の非限定的な例を参照して、本発明をより詳細に説明する。以下の実施例は、本発明をさらに例示するが、当然のことながら、その範囲を限定するものとして解釈されるべきでは決してない。
例示的な実施形態
実施形態１．重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗ＣＤ９３構築物であって、該抗体部分が、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントとＣＤ９３の結合エピトープについて競合し、
ａ）ＶＨ－２は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｂ）ＶＨ－２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｃ）ＶＨ－２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｄ）ＶＨ－２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｅ）ＶＨ－２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｆ）ＶＨ－２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｇ）ＶＨ－２は、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｈ）ＶＨ－２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｉ）ＶＨ－２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｊ）ＶＨ－２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｋ）ＶＨ－２は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｌ）ＶＨ－２は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｍ）ＶＨ－２は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｎ）ＶＨ－２は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
ｏ）ＶＨ－２は、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；または
ｐ）ＶＨ－２は、配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、ＶＬ－２は、配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む。
実施形態２．実施形態１に記載の抗ＣＤ９３構築物であって、
ａ）ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｂ）ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｃ）ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｄ）ＶＨは、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｅ）ＶＨは、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｆ）ＶＨは、ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｇ）ＶＨは、ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｈ）ＶＨは、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｉ）ＶＨは、ｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｊ）ＶＨは、ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｋ）ＶＨは、ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｌ）ＶＨは、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｍ）ＶＨは、ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｎ）ＶＨは、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
ｏ）ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、または
ｐ）ＶＨは、配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬは、配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、抗ＣＤ９３構築物。
実施形態３．ＶＨが、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬが、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態４．ＶＨが、ｉ）配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬが、ｉ）配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態５．ＶＨが、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；ＶＬが、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態６．ＶＨが、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態７．ＶＨが、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態８．ＶＨが、ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態９．ＶＨが、ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１０．ＶＨが、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１１．ＶＨが、ｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１２．ＶＨが、ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１３．ＶＨが、ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１４．ＶＨが、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１５．ＶＨが、ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１６．ＶＨが、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１７．ＶＨが、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、ＶＬが、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、実施形態２に記載の抗ＣＤ９３構築物
実施形態１８．ＣＤ９３に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ９３構築物であって、
ａ）配列番号１３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｂ）配列番号２９および３０７～３１２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３０、および３１３～３１８のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｃ）配列番号４５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号４６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｄ）配列番号６１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号６２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｅ）配列番号７７に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号７８に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｆ）配列番号９３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号９４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｇ）配列番号１０９に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１１０に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｈ）配列番号１２５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１２６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｉ）配列番号１４１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｊ）配列番号１５７および３６０～３６２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１５８、および３６３～３６５のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｋ）配列番号１７３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１７４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｌ）配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１９０、および３５０～３５２のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｍ）配列番号２０５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２０６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｎ）配列番号２２１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２２２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｏ）配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
ｐ）配列番号３０７～３１２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３１３～３１８のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；または
ｑ）配列番号３１９～３２１のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３２２～３２４のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む、抗ＣＤ９３構築物。
実施形態１９．ＶＨが、配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２８７、３０７～３１２および３１９～３２１のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；および／または、ＶＬが、配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２８８、３１３～３１８および３２２～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、実施形態１～１８のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２０．実施形態１９に記載の抗ＣＤ９３構築物であって、
ａ）ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｂ）ＶＨは、配列番号２９および３０７～３１２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３０、および３１３～３１８のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｃ）ＶＨは、配列番号４５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号４６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｄ）ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号６２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｅ）ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号７８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｆ）ＶＨは、配列番号９３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号９４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｇ）ＶＨは、配列番号１０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｈ）ＶＨは、配列番号１２５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１２６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｉ）ＶＨは、配列番号１４１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１４２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｊ）ＶＨは、配列番号１５７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１５８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｋ）ＶＨは、配列番号１７３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１７４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｌ）ＶＨは、配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号１９０、および３５０～３５２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｍ）ＶＨは、配列番号２０５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２０６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｎ）ＶＨは、配列番号２２１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２２２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｏ）ＶＨは、配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
ｐ）ＶＨは、配列番号３０７～３１２のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３１３～３１８のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、または
ｑ）ＶＨは、配列番号３１９～３２１のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；ＶＬは、配列番号３２２～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２１．抗体部分が、全長抗体、二重特異性抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、Ｆｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合物、ダイアボディ、トリボディ、およびテトラボディからなる群より選択される抗体またはその抗原結合フラグメントである、実施形態１～２０のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２２．抗体部分が全長抗体である、実施形態２１に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２３．抗体部分が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ由来のＦｃフラグメント、ならびにそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択されるＦｃフラグメントを有する、実施形態１～２２のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２４．Ｆｃフラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからのＦｃフラグメントからなる群より選択される、実施形態２３に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２５．Ｆｃフラグメントが、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して低下したエフェクター機能を有する、実施形態２３または実施形態２４に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２６．Ｆｃフラグメントが、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して増強されたエフェクター機能を有する、実施形態２３または実施形態２４に記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２７．抗体部分が、ＩＧＦＢＰ７へのＣＤ９３の結合を遮断する、実施形態１～２６のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２８．抗体部分が、ＭＭＲＮ２へのＣＤ９３の結合を遮断する、実施形態１～２６のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態２９．ＣＤ９３がヒトＣＤ９３である、実施形態１～２２のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物。
実施形態３０．実施形態１～２９のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
実施形態３１．実施形態１～２８のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物またはその一部をコードする単離された核酸。
実施形態３２．実施形態３１に記載の単離された核酸を含むベクター。
実施形態３３．実施形態３１に記載の単離された核酸または実施形態３２に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。
実施形態３４．治療剤または標識に連結された実施形態１～２９のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物を含む免疫コンジュゲート。
実施形態３５．抗ＣＤ９３構築物を産生する方法であって、
ａ）実施形態３３に記載の単離された宿主細胞を、抗ＣＤ９３構築物を発現するのに有効な条件下で培養することと、
ｂ）発現された抗ＣＤ９３構築物を宿主細胞から得ることとを含む、方法。
実施形態３６．個体における疾患または状態を処置する方法であって、個体に、有効量の実施形態１～２９のいずれか一つに記載の抗ＣＤ９３構築物、または実施形態３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
実施形態３７．疾患または状態が異常な血管構造に関連する、実施形態３６に記載の方法。
実施形態３８．疾患または状態ががんである、実施形態３６または実施形態３７に記載の方法。
実施形態３９．がんが固形腫瘍である、実施形態３８に記載の方法。
実施形態４０．がんがＣＤ９３＋内皮細胞を含む、実施形態３８または実施形態３９に記載の方法。
実施形態４１．がんがＩＧＦＢＰ７＋血管を含む、実施形態３８～４０のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４２．がんがＭＭＲＮ２＋血管を含む、実施形態３８～４１のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４３．がんが腫瘍低酸素を特徴とする、実施形態３８～４２のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４４．がんが局所進行がんまたは転移がんである、実施形態３８～４３のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４５．がんが、リンパ腫、結腸がん、脳腫瘍、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、前立腺がん、子宮頸がん、腎がん、膀胱がん、胃がん、非小細胞肺がん、黒色腫、および膵臓がんからなる群より選択される、実施形態３８～４４のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４６．抗ＣＤ９３構築物を前記個体に非経口投与する、実施形態３６～４５のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４７．第二の治療を投与することをさらに含む、実施形態３６～４６のいずれか一つに記載の方法。
実施形態４８．第二の治療が、手術、放射線、遺伝子治療、免疫療法、骨髄移植、幹細胞移植、ホルモン治療、標的化治療、寒冷療法、超音波治療、光ダイナミック療法、および化学療法からなる群より選択される、実施形態４７に記載の方法。
実施形態４９．第二の治療が免疫療法である、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５０．免疫療法が、免疫調節剤を投与することを含む、実施形態４９に記載の方法。
実施形態５１．免疫調節剤が免疫チェックポイント阻害剤である、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５２．免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１抗体を含む、実施形態５１に記載の方法。
実施形態５３．個体がヒトである、実施形態３６～５２のいずれか一つに記載の方法。
以下の実施例は、本出願の純粋に例示を意図しており、したがって、決して本出願を限定すると見なされるべきではない。以下の実施例および詳細な説明は、限定ではなく例示として提供される。
実施例１．マウス抗ヒトＣＤ９３モノクローナル抗体の作製
４匹のＮＺＢＷＦ１マウスをヒトＣＤ９３組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）で免疫した。マウスに、１００μｇの抗原と１００μＬの完全フロイントアジュバントとの混合物による１回の初回免疫を腹腔内投与し、続いて１００μＬの不完全フロイントアジュバントと混合した１００μｇの抗原の２回の追加免疫を腹腔内投与した。血清力価を試験し、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳアッセイによって確認した。脾臓採取の５日前に、８０ｕｇの抗原による最終的なＩＰブーストをマウスに送達した。免疫したマウス由来の脾臓細胞の単一細胞懸濁物をマウス骨髄腫細胞株に融合した。融合ハイブリドーマ上清を、ＥＬＩＳＡアッセイによってヒトＣＤ９３タンパク質への特異的結合についてスクリーニングし、続いてＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞を用いたＦＡＣＳスクリーニングを行った。簡潔には、ＦＡＣＳスクリーニングのために、ハイブリドーマ上清中のＣＤ９３結合抗体の存在を、ＰＥで標識したヤギ抗マウスポリクローナル抗体によって明らかにした。ＦＡＣＳ陽性ＣＤ９３特異的ハイブリドーマをサブクローニングし、ＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳアッセイによってさらに確認した。精製モノクローナル抗体を、機能的ＩＧＦＢＰ ７／ＣＤ９３遮断およびＨＵＶＥＣチューブ形成アッセイによって特徴づけた。得られたハイブリドーマ１６Ｅ４、１７Ｂ１０および７Ｆ３を代表的な抗体クローンとして同定した。
実施例２．ＣＤ９３モノクローナル抗体のクローニングおよび配列決定
試料調製
全ＲＮＡをハイブリドーマ細胞株培養物（２×１０６細胞）から単離した。ＲＮＡを処理して異常な転写物を除去し、オリゴ（ｄＴ）プライマーを使用して逆転写した。得られたｃＤＮＡの試料を、フレームワーク１および重鎖または軽鎖のいずれかに特異的な定常領域プライマー対を使用して別々のＰＣＲで増幅した。反応産物をアガロースゲルで分離し、サイズ評価し、回収した。場合によっては、第二のネステッドＰＣＲを実施して、所望のフラグメント（複数可）の収量を増加させた。ＴＡクローニング戦略を使用して、アンプリコンをｐＣＲ（登録商標）４－ＴＯＰＯベクターにクローニングした。１５個のコロニーを選択し、ベクターＤＮＡ配列に特異的なプライマーを使用してプラスミドＤＮＡを増幅した。各クローニングされた挿入物のＰＣＲ産物サイズをゲル電気泳動によって評価し、ＰＣＲクリーンアップキットを使用し、蛍光色素ターミネーターおよびキャピラリーベースの電気泳動を用いたサイクル配列決定を使用して、配列決定のために６つの反応物を調製した。ＰＣＲ産物およびＴＡクローニング多重プラスミドＤＮＡの両方をサンガー配列決定に供した。
配列解析
すべての構築物からのＤＮＡ配列データを分析し、重鎖および軽鎖のコンセンサス配列を決定した。Ｋａｂａｔナンバリングによる、またはＶＢＡＳＥ２ツールに基づいて決定された、ＶＨおよびＶＬ ＣＤＲのアラインメントについては、図７Ａ～図７Ｂおよび図８Ａ～図８Ｂを参照されたい。表３および４は、様々な抗体およびコンセンサス配列のＶＨおよびＶＬ ＣＤＲを列挙する。
Figure 2023536461000004
Figure 2023536461000005
Figure 2023536461000006
Figure 2023536461000007
Figure 2023536461000008
コンセンサス配列は、アーチファクトおよび／またはプロセス汚染を排除するために既知の可変領域配列と比較される。次いで、コンセンサス配列をオンラインツールを使用して分析して、配列が生産性免疫グロブリンをコードできることを検証する。
実施例３．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって測定されたヒトおよびカニクイザルＣＤ９３に対する抗ＣＤ９３抗体の結合親和性
Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用したバイオレイヤー干渉法により、抗ＣＤ９３抗体の結合親和性を決定した。ヒトＣＤ９３組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１２５８９－Ｈ０８Ｈ）またはカニクイザルＣＤ９３タンパク質（社内で作製）を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用してビオチン化ＣＤ９３タンパク質をロードした（５μｇ／ｍｌで３００秒）。ベースラインを１倍動態緩衝液（kinetics buffer）（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）中で６０秒間安定化した後、段階希釈した抗ＣＤ９３抗体を捕捉タンパク質と３００秒間会合させた。センサーを１倍動態緩衝液中で６００秒間解離させた。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。
図１および図９に示されるように、１６Ｅ４、１０Ｂ１、７Ｆ３および参照抗体ＭＭ０１はすべて、ヒトＣＤ９３に効果的に結合する。１６Ｅ４およびＭＭ０１はカニクイザルＣＤ９３にも結合する（図１）。１０Ｂ１および７Ｆ３はカニクイザルＣＤ９３にも結合する（データは示さず）。
実施例４．蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定されたヒトＣＤ９３を細胞表面発現するＣＨＯ細胞への抗ＣＤ９３抗体の結合
ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏｓ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を抗ＣＤ９３抗体および参照抗体ＭＭ０１（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１２５８９－ＭＭＯ１）と共に１０μｇ／ｍｌで４℃にて３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。抗体１６Ｅ４、１０Ｂ１および７Ｆ３を、ＣＨＯ－Ｋ１細胞への結合について同様に試験した。
図２および図１０に示されるように、１５個すべてのハイブリドーマクローン、同様にまた、市販の抗体ＭＭ０１は、（抗ＣＤ９３ ｍＡｂおよびコントロールに対応するピークの分離によって証明されるように）ｈＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞に結合し、ＣＨＯ－Ｋ１細胞と１６Ｅ４、１０Ｂ１または７Ｆ３との間には、（ピークの分離が存在しないことによって証明されるように）結合が存在しない。
実施例５．抗ＣＤ９３抗体処理によるヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞におけるＩＧＦＢＰ７／ＣＤ９３遮断アッセイ
ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞（ウェルあたり１×１０５個）を、４℃で３０分間、段階濃度の抗ＣＤ９３抗体またはアイソタイプ対照で処理した。次いで、細胞をＨＩＳタグ付きヒトＩＧＦＢＰ７組換えタンパク質（０．１μｇ／ｍｌ）と共に４℃でさらに３０分間インキュベートした。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１μｇ／ｍｌのウサギ抗ＩＧＦＢＰ７抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１３１００－Ｒ００３）と共に４℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＰＥコンジュゲート抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料を分析し、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗでデータを取得した。
図３Ａ～図３Ｄに示すように、１６Ｅ４ ｍＡｂは、０．４μｇ／ｍｌの最低濃度を含む様々な濃度でＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用を効果的に遮断する（抗ＣＤ９３ ｍＡｂと陰性対照に対応するピーク間の分離の減少によって証明される）。図１４は、７Ｆ３が５０μｇ／ｍｌでＣＤ９３とＩＧＦＢＰ７との間の相互作用を効果的に遮断することを示す（対照ピークの「肩」の消失によって証明される）。
実施例６．抗ＣＤ９３抗体処理によるヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞におけるＭＭＲＮ２／ＣＤ９３遮断アッセイ
ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞（ウェルあたり１×１０５個）を、４℃で３０分間、５０ μｇ／ｍｌの抗ＣＤ９３抗体（１６Ｅ４、１０Ｂ１、および７Ｆ３）またはアイソタイプ対照で処理した。次いで、細胞をＨｉｓタグ付きＭＭＲＮ２組換えタンパク質またはビオチン化ＭＭＲＮ２タンパク質（０．１～０．５μｇ／ｍｌ）と共に４℃でさらに３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、抗ＨｉｓコンジュゲートＡＰＣまたはストレプトアビジンコンジュゲートＡＰＣと１：５００の比で４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料を分析し、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗでデータを取得した。
図１１Ａ～図１１Ｂに示されるように、７Ｆ３ ｍＡｂは、ＭＭＲＮ２とＣＤ９３との間の相互作用を効果的に遮断する（７Ｆ３ ｍＡｂと対照に対応するピーク間の分離の減少によって証明される；図１１Ａ：０．５μｇ／ｍｌのＭＭＲＮ２；図１１Ｂ：０．１μｇ／ｍｌ）。１６Ｅ４および１０Ｂ１は、ＭＭＲＮ２とＣＤ９３との間の相互作用の有意な遮断を示さない。
７Ｆ３ ｍＩｇＧ１、５Ｈ９ ｍＩｇＧ２ａおよび１６Ｅ４ ｍＩｇＧ２ａによるＣＤ９３／ＭＭＲＮ２の遮断を、ＩｇＧ２ａを陰性対照として用い、０．１μｇ／ｍｌ ＭＭＲＮ２４９５－６７４および０．５μｇ／ｍｌの高さのＭＭＲＮ２４９５－６７４（社内で製造）で上記のようにさらに試験した。
図１２に示すように、７Ｆ３は、０．１μｇ／ｍｌのＭＭＲＮ２４９５－６７４および０．５μｇ／ｍｌのＭＭＲＮ２４９５－６７４でＣＤ９３／ＭＭＲＮ２相互作用を効果的に遮断する（７Ｆ３ピークの左へのシフトによって証明される）。図１３に示すように、７Ｆ３はまた、０．１μｇ／ｍｌのＭＭＲＮ２でＣＤ９３／ＭＭＲＮ２相互作用を効果的に遮断する（７Ｆ３ピークの左へのシフトによって証明される）。
実施例７．ＨＵＶＥＣチューブ形成阻害アッセイ
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を、低血清成長サプリメント（ＬＳＧＳ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を補充した培地２００中、３７℃、５％ ＣＯ２で培養した。９６ウェルプレートを５０μｌのＧｅｌｔｒｅｘ低成長因子基底膜マトリックス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングし、３７℃で３０分間インキュベートした。チューブ形成に対するハイブリドーマ抗体の効果を調べるために、２×１０４個のＨＵＶＥＣ細胞をマトリックス被覆プレートに播種し、精製ハイブリドーマ抗体の存在下または非存在下、３７℃、５％ ＣＯ２で１８時間インキュベートした。アバスチン－ＩＬ１０融合タンパク質を対照として使用した。光学顕微鏡を用いて画像を得た。
図４Ａ～図４Ｆおよび図１５Ａ～図１５Ｂに示されるように、１０Ｂ１、１６Ｅ４、５Ｈ９、１６Ｇ９、１９Ｅ１２および７Ｆ３を含むハイブリドーマ抗体は、４μｇ／ｍｌおよび／または８μｇ／ｍｌの濃度でチューブ形成を効果的に阻害する。具体的には、１０Ｂ１または１６Ｅ４で処理したＨＵＶＥＣの総チューブ長は、陰性対照の総チューブ長と比較して４５％および６１．５％に減少する。８μｇ／ｍｌの７Ｆ３で処理したＨＵＶＥＣの総チューブ長は、陰性対照と比較して７１．７％に減少し、４μｇ／ｍｌで７３．５％に減少する。１０Ｂ１は、同じ用量でアバスチンと同等の阻害効果を達成した。
実施例８．Ｏｃｔｅｔ競合による抗ＣＤ９３抗体のエピトープビニングアッセイ
Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用して抗ＣＤ９３抗体エピトープのビンを決定した。ヒトＣＤ９３組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１２５８９－Ｈ０８Ｈ）を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサーチップ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用してビオチン化ヒトＣＤ９３タンパク質を捕捉した（５μｇ／ｍｌで３００秒）。ベースラインを１倍動態緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）中で６０秒間安定化した後、一次抗ＣＤ９３抗体（１０μｇ／ｍｌ）を捕捉タンパク質と３００秒間会合させた。次いで、一連の二次抗ＣＤ９３抗体（１０μｇ／ｍｌ）を抗原および一次抗体複合体とさらに３００秒間会合させた。各結合事象についてシグナルを記録し、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。
図５Ａ～図５Ｂに示されるように、５Ｈ９、１０Ｂ１、１６Ｅ４、１６Ｇ９、１９Ｅ１２、１６Ｂ６、およびＭＭ０１は、それらの間で結合ペアとして働き、それらがＣＤ９３における異なるエピトープに結合することを示す。
実施例９．バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイによって測定された抗ＣＤ９３ ｍＡｂのヒトおよびカニクイザルＣＤ９３抗原交差結合活性
Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用したバイオレイヤー干渉法により、抗ＣＤ９３抗体の結合親和性を決定した。ヒトＣＤ９３組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１２５８９－Ｈ０８Ｈ）またはカニクイザルＣＤ９３タンパク質（社内で作製）を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用してビオチン化ＣＤ９３タンパク質をロードした（５μｇ／ｍｌで３００秒）。ベースラインを１倍動態緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）中で６０秒間安定化した後、段階希釈での抗ＣＤ９３抗体を捕捉タンパク質と３００秒間会合させた。次いで、センサーを１倍動態緩衝液中で６００秒間解離させた。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。
図６Ａ～６Ｂに示すように、５Ｈ９、１２Ｈ４、１６Ｂ６、１６Ｅ４、１６Ｇ９、１７Ａ７、１７Ｂ１０、１７Ｅ６、１９Ｂ５、１９Ｅ１２、２０Ｃ７ならびにＭＭ０１はカニクイザルＣＤ９３と交差反応したが、７Ｃ１０、１６Ａ１、および１７Ｇ１１はカニクイザルＣＤ９３と交差反応しなかった。
表５は、様々な抗ＣＤ９３抗体の特性の概要である。
Figure 2023536461000009
実施例１０．抗ＣＤ９３抗体のヒト化およびＶＥＧＦを阻害する抗ＣＤ９３構築物の作製
例示的なヒト化抗ＣＤ９３重鎖可変配列および軽鎖可変配列を生成した。配列表の配列番号３０７～３２４および３４７～３６５を参照されたい。１６Ｅ４、１７Ｂ１０、１６Ａ１および７Ｆ３ヒト化重鎖可変領域配列および軽鎖可変領域配列のＣＤＲ配列を分析し、表６～７に示した。
Figure 2023536461000010
Figure 2023536461000011
Figure 2023536461000012
Figure 2023536461000013
Figure 2023536461000014
表６および７に示すヒト化重鎖可変領域配列の１つとヒト化軽鎖可変領域配列の１つとをペアリングすることによって、様々なヒト化１６Ｅ４、１７Ｂ１０、１６Ａ１および７Ｆ３を作製した。
ヒト化１６Ｅ４および７Ｆ３のＳＤＳ－ＰＡＧＥ安定性分析を図２９に示す。還元条件下および非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥを実施して、ヒト化１６Ｅ４および７Ｆ３抗体の安定性を評価した。ヒト化１６Ｅ４および７Ｆ３抗体を暗所で４０℃にて２週間および４週間インキュベートした。最終試料をＳＤＳ－ＰＡＧＥで泳動し、クマシーブルーで染色して、インキュベーション中に起こり得る抗体の視覚的変化を評価した。親ハイブリドーマ１６Ｅ４を陽性対照として泳動した。インキュベーションの０日後、２週間後または４週間後にこのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によって観察された組換えヒト化１６Ｅ４および７Ｆ３に有意な変化はなかった。
ＶＥＧＦも標的とする抗ＣＤ９３構築物を設計し、生成した。図１６を参照されたい。例えば、ＶＥＧＦトラップ（アフィベルセプト、例えば配列番号３２５）を、７Ｆ３およびそのヒト化配列（例えば、配列番号２８７、２８８および３１９～３２４）のいずれかの重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む全長ヒトＩｇＧ１抗体の２つの重鎖のＣ末端に、リンカーＧＳＤＫＴＨＴ（配列番号３３８）を介して融合した。例示的な重鎖および軽鎖配列については、配列番号３４２および３４３を参照されたい。いくつかの実施形態では、重鎖または軽鎖は、重鎖または軽鎖のＮ末端に融合したシグナルペプチド（例えば、配列番号３４４、３４５、または３４６）をさらに有する。
実施例１１．１７Ｂ１０抗体を使用した動物研究
１．同系Ｂ１６Ｆ１０モデル
抗ＣＤ９３ １７Ｂ１０抗体の抗腫瘍効果を、ＢｉｏｃｙｔｏｇｅｎのＢ１６Ｆ１０黒色腫の同系マウスモデルで評価した。１７Ｂ１０抗体は、ＯｃｔｅｔおよびＦＡＣＳ分析に基づいてマウスＣＤ９３と強く交差反応しなかったが、ＣＤ９３－ＨＥＫ細胞に対して高タンパク質濃度でいくらかの結合を示した。
同系マウスモデルのために、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、無血清培地中のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（０．２ｘ１０６）のマウス細胞株を移植した。腫瘍が４０～５０ｍｍ３に達したら、マウス（試験物品あたりｎ＝８）を群に無作為に割り当てた。抗ＣＤ９３抗体（およびアイソタイプ対照）を、０、３、７、および１０日目に０．３ ｍｇ／マウスで腹腔内投与した。有効性を、全体的な腫瘍体積に基づいて評価した。動物の全般的な健康が試験物品によって影響されないことを確実にするために、体重を測定した。この研究で使用した１７Ｂ１０をハイブリドーマ細胞で発現させ、プロテインＧカラムで精製した。１６Ｇ９および１６Ａ１を比較として使用した。各群の腫瘍体積を図１７に示す。１７Ｂ１０および１６Ｇ９群のマウスは、１６Ａ１群およびＩｇＧ１対照群のマウスと比較してより小さい腫瘍体積を示し、より良好な抗腫瘍効果を示唆した。
２．ルイス肺癌
ルイス肺癌（ＬＬＣ）の同系マウスモデルにおいて、ヒト化抗ＣＤ９３ １７Ｂ１０抗体の抗腫瘍効果を評価した。マウスＩｇＧ１ Ｆｃを含むヒト化１７Ｂ１０をＥｘｐｉＨＥＫ細胞で組換え産生した。抗体をプロテインＧカラムを使用して精製し、次いで濃縮し、緩衝液を１倍ＰＢＳへと交換した。ヒト化１７Ｂ１０抗体は、ＯｃｔｅｔおよびＦＡＣＳ分析に基づいてマウスＣＤ９３と強く交差反応しなかったが、高タンパク質濃度で結合を示した。
同系マウスモデルのために、雌Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、無血清培地中のＬＬＣ腫瘍細胞（０．２ｘ１０６）のマウス細胞株を移植した。腫瘍が４０～５０ｍｍ３に達したら、マウス（試験物品あたりｎ＝７）を群に無作為に割り当てた。抗ＣＤ９３抗体（およびアイソタイプ対照）を、０、３、７、および１０日目に０．３ ｍｇ／マウスで腹腔内投与した。有効性を、全体的な腫瘍体積に基づいて評価した。動物の全般的な健康が試験物品によって影響されないことを確実にするために、体重を測定した。
図１８は、ベースラインからの腫瘍体積＋／－ＳＥＭを示す。図１８は、１７Ｂ１０群のマウスがアイソタイプ対照群のマウスと比較してより低い腫瘍体積を示したことを実証する。
３．ノックインマウスモデル開発
ノックインマウスモデルを２つの方法を用いて開発した。ノックインモデルは、マウスＣＤ９３タンパク質をヒトＣＤ９３タンパク質で置き換えるように設計された。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を利用して、マウスＣＤ９３の５’ＵＴＲのＡＴＧ付近を標的とするガイドＲＮＡ＃１、および３’ＵＴＲの開始付近を標的とするガイドＲＮＡ＃２で２つの切断を行った。相同組換え修復は、ドナーを使用して、マウス５’ＵＴＲをＣＤ９３ヒトｃＤＮＡとインフレームで融合し、内因性ＣＤ９３プロモーターからの発現を可能にした。ＳＴＯＰコドンの下流の修復により、ＣＤ９３ハイブリッド転写物がマウス３’ＵＴＲを含むことが確実になった。純粋なＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスをノックインモデルのバックグラウンドとして使用した。胚性幹細胞クローンを作製し、ノックインヒトＣＤ９３遺伝子を用いて増殖させた。配列確認に続いて、胚盤胞注入を実施してキメラファウンダーを確立した。そこから、ヘテロ接合体およびホモ接合体仔を同定するための遺伝子型決定を用いて育種を進めた。
あるいは、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９を利用して、ＣＤ９３の細胞外ドメイン（Ｓ２５－Ｎ５７２）に対応するＣＤ９３のマウスエキソン１を除去した。相同組換え修復において、ドナーＤＮＡは、Ｔ２６－Ｋ５８０由来のＣＤ９３のヒト配列を含有した。得られた構築物は、マウス膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを有するＣＤ９３のヒト化細胞外ドメインを含むタンパク質を発現した。Ｃ５７ＢＬ／６マウス胚性幹細胞を、配列確認後のノックインモデルのために利用した。Ｏｚｇｅｎｅは、その独自のＧｏ－Ｇｅｒｍｉｌｉｎｅ胚盤胞を注射に使用してキメラファウンダーを確立した。ヘテロ接合体マウスおよびホモ接合体マウスを確実にするために、遺伝子型決定および表現型決定を行った。
実施例１２．フローサイトメトリーによって決定されるＣＤ９３発現細胞に結合する抗ＣＤ９３抗体
組換え親抗ＣＤ９３抗体を、ヒト血清の存在下または非存在下でＨＵＶＥＣ細胞に結合する能力について評価した。ハイブリドーマ細胞から得られた１６Ｅ４、７Ｆ３、１６Ａ１、および１７Ｂ１０配列を、ヒトＣＨ１ドメインならびにマウスＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ Ｆｃドメインと組換え発現させた。抗体を、プロテインＧセファロースを使用して精製した。得られた抗体を、ＣＤ９３を発現する種々の細胞に対するその結合能について試験した。ＨＵＶＥＣ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１２６０４－０１３）とのインキュベーションによって剥離した。細胞を培地でクエンチし、次いで計数した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ ＢＳＡを含む氷冷ＰＢＳ）に再懸濁し、ヒト血清を２０％（最終体積１０％）まで添加し、氷上に約２０分間置いた。ウェルあたり５×１０４個の細胞を１００μＬ培地に播種し、氷上で１００μＬの段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に２時間インキュベートした。次いで、細胞を１２００ｒｐｍで５分間スピンすることによって細胞を洗浄した。培地を廃棄し、細胞を２００μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。洗浄工程を繰り返し、細胞を１００μＬの二次抗体、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）に再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液で１：５００に希釈した。プレートを遮光し、４℃で１時間インキュベートした。次いで、細胞を再度洗浄し、次いで、２００μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を再度洗浄し、２００μＬの固定溶液（１％ホルムアルデヒドを含むＰＢＳ）に再懸濁した。試料を箔で覆い４℃で保存し、次いで、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。血清含有試料で得られた結果を図１９に示す。無血清試料からの結果を図２０に示す。
図１９および図２０は、１６Ｅ４、７Ｆ３、および１７Ｂ１０が実験条件下でＨＵＶＥＣ細胞に首尾よく結合したことを示す。血清含有試料（図１９）は、血清の存在なしで実施した試料（図２０）と同様の結合能力を示し、ＨＵＶＥＣ細胞に対するこれらの抗体のＦｃ結合の影響がほとんどないことを示唆した。
ＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１２６０４－０１３）とのインキュベーションによって剥離した。細胞を培地でクエンチし、次いで計数した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ ＢＳＡを含む氷冷ＰＢＳ）に再懸濁し、ヒト血清を２０％（最終体積１０％）まで添加し、氷上に約２０分間置いた。ウェルあたり５×１０４個の細胞を１００μＬで播種し、氷上で１００μＬの段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に２時間インキュベートした。次いで、試料を１２００ ｒｐｍで５分間回転させることによって試料を洗浄した。培地を破棄し、細胞を２００μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を再び洗浄し、１００μＬの二次抗体、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）に再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液で１：５００に希釈した。プレートを箔で覆い、同様のものから保護し、氷上で１時間インキュベートした。細胞を再度洗浄し、２００μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を再度洗浄し、２００μＬの固定溶液（１％ホルムアルデヒドを含むＰＢＳ）に再懸濁した。試料を箔で覆い４℃で保存し、次いで、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。結果を図２１に示す。
図２１は、１６Ｅ４、７Ｆ３、１６Ａ１および１７Ｂ１０が実験条件下でヒトＣＤ９３ ＣＨＯ細胞に首尾よく結合したことを示す。１６Ｅ４、７Ｆ３、および１７Ｂ１０は、ｈＣＤ９３ ＣＨＯ細胞に対して同様の結合親和性を有し、一方、１６Ａ１は、他の抗体と比較して、ヒトＣＤ９３に対する親和性が比較的低下していた。
Ｕ９３７細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｇｉｂｃｏカタログ番号１２６０４－０１３）とのインキュベーションによって剥離した。細胞を培地でクエンチし、次いで計数した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ ＢＳＡを含む氷冷ＰＢＳ）に再懸濁し、約２０分間氷上に置いた。ウェルあたり５×１０４個の細胞を１００μＬで播種し、氷上で１００μＬの段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に２時間インキュベートした。次いで、試料を１２００ｒｐｍで５分間回転させることによって試料を洗浄した。培地を破棄し、細胞を２００μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を再び洗浄し、１００μＬの二次抗体、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）に再懸濁し、ＦＡＣＳ緩衝液で１：５００に希釈した。プレートを光から保護するために箔で覆い、氷上で１時間インキュベートした。次いで、試料を再度洗浄し、２００μＬの氷冷ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞を再度洗浄し、２００μＬの固定溶液（１％ホルムアルデヒドを含むＰＢＳ）に再懸濁した。試料を箔で覆い４℃で保存し、続いてＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。
図２２は、１６Ｅ４、７Ｆ３、および１７Ｂ１０が実験条件下でＵ９３７細胞に首尾よく結合したことを示す。
実施例１３．１７Ｂ１０抗体の細胞ベースのアッセイ分析
１．ヒトＣＤ９３を過剰発現するＣＨＯ細胞に対するヒト化１７Ｂ１０の結合
マウスＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインならびにヒトＣＨ１ドメインを含有するキメラＦｃを含む様々なヒト化１７Ｂ１０抗体を、ＥｘｐｉＨＥＫにおいて、３つのヒト化重鎖の１つと３つのヒト化軽鎖の１つとを組み合わせることによって作製した（実施例１０、表６～７を参照のこと）。得られた抗体を、ＦＡＣＳ分析を使用して、ヒトＣＤ９３を過剰発現するＣＨＯ細胞への結合について試験した。結果を図２５Ａ～２５Ｂに示す。示されるように、試験されたすべての抗体（すなわち、Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ１Ｌ３、Ｈ２Ｌ１、Ｈ２Ｌ２、Ｈ２Ｌ３、Ｈ３Ｌ１、Ｈ３Ｌ２、Ｈ３Ｌ３）は、ヒトＣＤ９３を過剰発現するＣＨＯ細胞に効果的に結合する。
２．ＫＧ１ａおよびＵ９３７細胞へのヒト化１７Ｂ１０の結合
ヒト化１７Ｂ１０（ＶＨ３ＶＬ３、すなわちＨ３Ｌ３）のＫＧ１ａおよびＵ９３７細胞への結合を、実施例１２に記載されるように試験した。２バッチの１７Ｂ１０抗体を用いて実験を繰り返した。図２６Ａ～図２６Ｂは、１７Ｂ１０がＫＧ１ａおよびＵ９３７の両方に高い親和性で結合したことを示す。
３．ヒト化１７Ｂ１０（ＶＨ３ＶＬ３）のマウスＣＨＯ細胞への結合
親１７Ｂ１０抗体および配列番号３４９のＶＨ配列および配列番号３５２のＶＬ配列を有するヒト化１７Ｂ１０、ならびに、マウスＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインとヒトＣＨ１ドメインとを含有するキメラＦｃをＥｘｐｉＨＥＫにおいて作製した。マウスＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を親１７Ｂ１０抗体またはヒト化１７Ｂ１０抗ＣＤ９３抗体（５０μｇ／ｍＬ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。
図２７は、ヒト化１７Ｂ１０が５０μｇ／ｍＬでマウスＣＤ９３を発現する細胞に結合したことを示す。
４．ヒト化１７Ｂ１０（ＶＨ３ＶＬ３）のｍＣＤ９３ ＨＥＫへの結合
マウスＣＤ９３発現ＨＥＫ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を段階希釈した親１７Ｂ１０およびヒト化１７Ｂ１０（（Ｈ３Ｌ３）抗ＣＤ９３抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８コンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。
図２８は、親１７Ｂ１０およびヒト化１７Ｂ１０（Ｈ３Ｌ３）の両方が、５０μｇ／ｍＬでマウスＣＤ９３発現ＨＥＫ細胞に結合したことを示す。
４．ＨＵＶＥＣチューブ形成アッセイ
ヒト化１７Ｂ１０抗ＣＤ９３抗体（Ｈ３Ｌ３）による血管新生の阻害をＨＵＶＥＣチューブ形成アッセイで試験した。ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を、低血清成長サプリメント（ＬＳＧＳ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を補充した培地２００中、３７℃、５％ ＣＯ２で培養した。９６ウェルプレートを５０μｌのＧｅｌｔｒｅｘ低成長因子基底膜マトリックス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングし、３７℃で３０分間インキュベートした。チューブ形成に対するヒト化１７Ｂ１０抗体の効果を調べるために、１×１０４個のＨＵＶＥＣ細胞をマトリックス被覆プレートに播種し、様々な濃度の精製抗体の存在下または非存在下、３７℃、５％ ＣＯ２で１８時間インキュベートした。細胞をカルセインＡＭで染色し、画像を収集した。図２３～図２４は、ヒト化１７Ｂ１０が対照と比較して特定の濃度でチューブ形成を阻害したことを示す。
４．１７Ｂ１０抗体の遮断能力
１７Ｂ１０抗体（親およびヒト化）を細胞ベースのアッセイで試験した。
親およびヒト化１７Ｂ１０抗体は、ＣＤ９３へのＩＧＦＢＰ７結合またはＣＤ９３へのＭＭＲＮ２結合を有意に遮断しなかった（データは示さず）。
実施例１４．抗ＣＤ９３抗体のＥＬＩＳＡ結合分析
ハイブリドーマ産生親１６Ｅ４および７Ｆ３を、抗体の組換えキメラバージョンと比較した。Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ９３を９６ウェルプレートに１倍ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで４℃で一晩コーティングした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で洗浄し、ウェルをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液で３７℃で１時間ブロッキングした。精製した抗体をＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で段階希釈し、受容体上で３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＨＲＰコンジュゲート抗マウスＦｃをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液で希釈し、ハイブリドーマ産生１６Ｅ４および７Ｆ３（図３０の１６Ｅ４－Ｈｙｂ、７Ｆ３－Ｈｙｂ）を含むウェルに加えた。ヒト化１６Ｅ４および７Ｆ３抗体（図３０の１６Ｅ４－ｈＩｇＧ１および７Ｆ３－ｈＩｇＧ１）を含むウェルに、ＨＲＰコンジュゲート抗ヒトＦｃを３７℃で１時間添加した。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＣＤ９３に結合する抗体の間接的検出のために、ＨＲＰ基質を添加した。図３０は、組換えキメラ抗体が、この方法のもとでの親抗体よりも強いＣＤ９３に対する親和性を有したことを示す。
ヒト化７Ｆ３抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ９３を９６ウェルプレートに１倍ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで４℃で一晩コーティングした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で洗浄し、ウェルをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液で３７℃で１時間ブロッキングした。精製した７Ｆ３抗体をＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で段階希釈し、受容体上で３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＨＲＰコンジュゲート抗ヒトＦｃ抗体を３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＣＤ９３に結合する抗体の間接的検出のために、ＨＲＰ基質を添加した。図３１は、ＥＬＩＳＡによって、処理試料または未処理試料のいずれについても差が観察されなかったことを示す。
ヒト化１６Ｅ４抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ９３を９６ウェルプレートに１倍ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで４℃で一晩コーティングした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で洗浄し、ウェルをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液で３７℃で１時間ブロッキングした。精製した１６Ｅ４抗体をＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で段階希釈し、受容体上で３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＨＲＰコンジュゲート抗ヒトＦｃ抗体を３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＣＤ９３に結合する抗体の間接的検出のために、ＨＲＰ基質を添加した。図３２は、ＥＬＩＳＡによって、処理試料または未処理試料のいずれについても差が観察されなかったことを示す。
ハイブリドーマ（図３３の１７Ｂ１０－Ｈｙｂ）によって産生された１７Ｂ１０抗体を、組換え親１７Ｂ１０－ｈＦｃ（図３３の１７Ｂ１０－ｈＩｇＧ １）およびヒト化１７Ｂ１０－ｍＦｃ（図３３のｈ１７Ｂ１０－Ｈ３Ｌ３）と比較して、ヒトＣＤ９３への結合を決定した。Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ９３を９６ウェルプレートに１倍ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで４℃で一晩コーティングした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で洗浄し、ウェルをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液で３７℃で１時間ブロッキングした。精製した１７Ｂ１０抗体をＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（Ｂｏｓｔｏｎ ＢｉｏＰｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．）で段階希釈し、受容体上で３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＨＲＰコンジュゲート抗マウスＦｃをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液で希釈し、ハイブリドーマ産生１７Ｂ１０を含むウェルに加えた。組換え１７Ｂ１０抗体を含むウェルに、ＨＲＰコンジュゲート抗ヒトＦｃを３７℃で１時間添加した。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で洗浄した。ＣＤ９３に結合する抗体の間接的検出のために、ＨＲＰ基質を添加した。図３３は、マウスＦｃ含有分子が、ヒトＦｃを含む組換え親１７Ｂ１０よりもヒトＣＤ９３に対する結合が弱かったことを示す。
キメラ１７Ｂ１０分子を、ヒト化ＣＤＲおよびヒトＣＨ１ドメインを用いるが、マウスＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを用いて作製した。この分子を、ヒトＣＤ９３に結合する能力についてマウスＭＭＲＮ２－ｍＦｃと比較した。Ｈｉｓタグ付きヒトＣＤ９３を９６ウェルプレートに１倍ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬで４℃で一晩コーティングした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液（Ｔｗｅｅｎを含むＰＢＳ；Ｂｏｓｔｏｎ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔカタログ番号ＢＢ－１７１）で３回洗浄し、次いで、ウェルを室温で１時間、２００μＬのＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中５％ ＢＳＡ（ＶＷＲカタログ番号０３３２））でブロッキングした。次いで、プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、精製した１７Ｂ１０抗体およびマウスＭＭＲＮ２－ｍＦｃをＥＬＩＳＡブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中５％ ＢＳＡ）で段階希釈し、１００ｒｐｍのオービタルシェーカー上、室温で２時間受容体上でインキュベートした。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、ＨＲＰコンジュゲート抗マウスＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１１５－０３５－１６４）を１７Ｂ１０およびマウスＭＭＲＮ２－ｍＦｃに室温で１００ｒｐｍのオービタルシェーカー上で１時間添加した。ＨＲＰコンジュゲート抗マウスＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１１５－０３５－１６４）を、ウェルに、室温で１００ｒｐｍのオービタルシェーカー上で１時間添加した。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、ウェルあたり１００μＬのＴＭＢ（ＳｅｒａＣａｒｅカタログ番号５１２０－００７７）を添加し、１～５分間混合させ、次いで、１００μＬの硫酸１．０ Ｎ（ＶＷＲカタログ番号ＢＤＨ ７２３２－１）を添加することによって停止させた。吸光度を４５０ ｎｍで測定した。二次ＨＲＰ Ａｂのみを含む対照ウェルから平均バックグラウンドシグナルを差し引くことによって吸光度シグナルを補正した。図３４は、ＥＬＩＳＡによって、１７Ｂ１０がマウスＭＭＲＮ２－ｍＦｃよりも良好にヒトＣＤ９３－ｈｉｓに結合したことを示す。
実施例１５．抗ＣＤ９３抗体のＦＡＣＳ細胞ベースの結合分析
ヒトＣＤ９３を細胞表面で発現する ＣＨＯ細胞への抗ＣＤ９３抗体７Ｆ３および１６Ｅ４の結合を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定した。ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を段階希釈した抗ＣＤ９３抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。組換え１６Ｅ４は０．２４ｎＭのＥＣ５０で細胞に結合し、組換え７Ｆ３抗体は０．４ｎＭのＥＣ５０で結合した（図３５）。
ヒトＣＤ９３を細胞表面で発現する ＣＨＯ細胞へのヒト化７Ｆ３抗ＣＤ９３抗体の結合を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定した。ヒト化７Ｆ３抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。高温処理によるＣＤ９３に対する７Ｆ３抗体の親和性の変化はなかった（図３６）。
ヒト化１６Ｅ４抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。ヒト化１６Ｅ４を４０℃でインキュベートしても、抗体のＣＤ９３発現細胞への結合は減少しなかった（図３７）。
ヒト化７Ｆ３抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ＨＵＶＥＣ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。ヒト化７Ｆ３を４０℃でインキュベートしても、抗体のＨＵＶＥＣ細胞への結合は減少しなかった（図３８）。
ＫＧ１ａ細胞への７Ｆ３抗ＣＤ９３抗体の結合を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定した。ヒト化７Ｆ３抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ＫＧ１ａ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。７Ｆ３を４０℃でインキュベートしても、抗体のＫＧ１ａ細胞への結合は減少しなかった（図３９）。
ヒト化１６Ｅ４抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ＫＧ１ａ細胞を、細胞表面上のＣＤ９３の完全性を維持するＴｒｙｐＬＥ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とのインキュベーションによって剥離した。次いで、細胞を段階希釈抗ＣＤ９３抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７コンジュゲート抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）と共に４℃において３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、試料をＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒで取得し、ＮｏｖｏＥｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって分析した。１６Ｅ４を４０℃でインキュベートしても、抗体のＫＧ１ａ細胞への結合は減少しなかった（図４０）。
実施例１６．抗ＣＤ９３抗体Ｏｃｔｅｔ結合分析
Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用したバイオレイヤー干渉法により、抗ＣＤ９３抗体の結合親和性を決定した。ヒト化７Ｆ３抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ヒトＣＤ９３組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１２５８９－Ｈ０８Ｈ）を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用してビオチン化ＣＤ９３タンパク質をロードした（５μｇ／ｍｌで３００秒）。ベースラインを１倍動態緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）中で６０秒間安定化した後、段階希釈での抗ＣＤ９３抗体を捕捉タンパク質と３００秒間会合させた。次いで、センサーを１倍動態緩衝液中で６００秒間解離させた。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。ＣＤ９３に対するヒト化７Ｆ３抗体の結合親和性は、４０℃でのインキュベーションによって影響されなかった（図４１）。
Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用したバイオレイヤー干渉法により、抗ＣＤ９３抗体の結合親和性を決定した。ヒト化１６Ｅ４抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ヒトＣＤ９３組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１２５８９－Ｈ０８Ｈ）を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用してビオチン化ＣＤ９３タンパク質をロードした（５μｇ／ｍｌで３００秒）。ベースラインを１倍動態緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）中で６０秒間安定化した後、段階希釈での抗ＣＤ９３抗体を捕捉タンパク質と３００秒間会合させた。次いで、センサーを１倍動態緩衝液中で６００秒間解離させた。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。ＣＤ９３に対するヒト化１６Ｅ４抗体の結合親和性は、４０℃でのインキュベーションによって影響されなかった（図４２）。
１６Ｅ４および７Ｆ３の結合親和性の概要を図４３に示す。
実施例１７．抗ＣＤ９３抗体遮断機能分析
７Ｆ３抗ＣＤ９３抗体によるヒトＣＤ９３を細胞表面発現する ＣＨＯ細胞へのＭＭＲＮ２結合の遮断を、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定した。ヒト化７Ｆ３抗体を暗所で４０℃にて２週間または４週間保存した。ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞（ウェルあたり１×１０５個）を、４℃で３０分間、段階希釈した抗ＣＤ９３ ７Ｆ３抗体またはアイソタイプ対照で処理した。次いで、細胞を０．１μｇ／ｍｌのｈＭＭＲＮ２４９５－６７４と共にインキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＡＰＣコンジュゲート抗Ｈｉｓタグ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）と共に４℃で３０分間インキュベートして、ＭＭＲＮ２結合を検出した。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料を分析し、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗでデータを取得した。組換えｈｉｓタグ付きｈＭＭＲＮ２４９５－６７４を、日常的な手順に従ってＥ．Ｃｏｌｉ内で生成した。７Ｆ３の４０℃でのインキュベーションは、ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞へのＭＭＲＮ２結合を遮断する７Ｆ３の能力に影響を及ぼさなかった（図４４）。
また、ヒト化７Ｆ３および１６Ｅ４抗ＣＤ９３抗体によるヒトＣＤ９３を細胞表面発現する ＣＨＯ細胞へのＭＭＲＮ２結合の遮断も、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイによって決定した。ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞（ウェルあたり１×１０５個）を、４℃で３０分間、段階希釈した抗ＣＤ９３ ７Ｆ３もしくは１６Ｅ４抗体またはアイソタイプ対照で処理した。次いで、細胞を０．１μｇ／ｍｌのｈＭＭＲＮ２４９５－６７４と共にインキュベートした。ＡＰＣコンジュゲート抗Ｈｉｓタグ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を使用して、ＭＭＲＮ２結合を検出した。次いで、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、１μｇ／ｍｌのＡＰＣコンジュゲート抗Ｈｉｓタグ抗体と共に４℃で３０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料を分析し、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗでデータを取得した。組換えｈｉｓタグ付きｈＭＭＲＮ２４９５－６７４を、日常的な手順に従ってＥｘｐｉ＿ＨＥＫ内で生成した。ヒト化７Ｆ３は、ヒトＣＤ９３を発現するＣＨＯ細胞へのＭＭＲＮ２結合を遮断することができたが、ヒト化１６Ｅ４は遮断することができなかった（図４５）。
ヒト化７Ｆ３抗ＣＤ９３抗体によるＨＵＶＥＣ細胞の細胞表面へのＩＧＦＢＰ７結合の遮断をＦＡＣＳによって決定した。ＨＵＶＥＣ細胞（ウェルあたり１×１０５個）を、４℃で３０分間、段階希釈したヒト化抗ＣＤ９３ ７Ｆ３抗体またはアイソタイプ対照で処理した。次いで、細胞をＨｉｓタグ付きヒトＩＧＦＢＰ７組換えタンパク質（０．１μｇ／ｍｌ）と共に４℃でさらに３０分間インキュベートした。インキュベーション後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＡＰＣコンジュゲート抗Ｈｉｓタグ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）と共に４℃で３０分間インキュベートして、ＩＧＦＢＰ７結合を検出した。ＦＡＣＳ緩衝液を用いて２回洗浄した後、試料を分析し、ＮｏｖｏＣｙｔｅ Ｆｌｏｗでデータを取得した。図４６に示されるように、７Ｆ３抗体は、ＨＵＶＥＣ細胞に対するＩＧＦＢＰ７の結合を遮断した。
７Ｆ３および１６Ｅ４によるＣＤ９３へのＩＧＦＢＰ７結合の遮断を、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）を使用して決定した。抗ＣＤ９３抗体７Ｆ３および１６Ｅ４によるｈＣＤ９３へのＩＧＦＢＰ７結合の遮断を、Ｏｃｔｅｔ ＱＫｅ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用するバイオレイヤー干渉法で決定した。ヒトＣＤ９３組換えタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．、カタログ番号１２５８９－Ｈ０８Ｈ）を、ＥＺ－ＬＩＮＫ ＮＨＳ－ＰＥＧ４ビオチン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてビオチン化した。ストレプトアビジンバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）を使用してビオチン化ＣＤ９３タンパク質をロードした（５μｇ／ｍｌで３００秒）。ベースラインを１倍動態緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ）中で６０秒間安定化した後、抗ＣＤ９３抗体および陰性対照抗体（９Ｆ９）（９０μｇ／ｍＬ）を捕捉タンパク質と３００秒間会合させた。ＩＧＦＢＰ７を添加して３００秒間会合させた。次いで、センサーを１倍動態緩衝液中で６００秒間解離させた。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ １１．１ソフトウェアでデータ分析を行った。ハイブリドーマならびにヒト化７Ｆ３および１６Ｅ４抗体は、ヒトＣＤ９３へのＩＧＦＢＰ７会合を阻止することができた（図４７および図４８）。
実施例１８．抗ＣＤ９３抗体チューブ形成分析
ヒト化７Ｆ３および１６Ｅ４抗ＣＤ９３抗体による血管新生の阻害をＨＵＶＥＣチューブ形成アッセイで試験した。ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を、低血清成長サプリメント（ＬＳＧＳ，Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を補充した培地２００中、３７℃、５％ ＣＯ２で培養した。９６ウェルプレートを５０μｌのＧｅｌｔｒｅｘ低成長因子基底膜マトリックス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングし、３７℃で３０分間インキュベートした。チューブ形成に対するヒト化７Ｆ３および１６Ｅ４抗体の効果を調べるために、２×１０４個のＨＵＶＥＣ細胞をマトリックス被覆プレートに播種し、精製抗体（４０μｇ／ｍＬ）の存在下または非存在下、３７℃、５％ ＣＯ２で１８時間インキュベートした。細胞をカルセインＡＭで染色し、画像を収集した。図４９および図５０は、対照と比較して、ヒト化１６Ｅ４が９２．５％のチューブ形成を示し、一方、ヒト化７Ｆ３は７２．５％のチューブ形成を示したことを示す。
実施例１９．ＫＩマウスモデルにおけるＣＤ９３抗体の抗腫瘍効果
抗ＣＤ９３抗体の抗腫瘍効果を、当該技術分野における従来技術を使用してＢ１６Ｆ１０メラノーマ同系ｈＣＤ９３ ＫＩマウスモデルにおいて評価した。研究に使用したマウスは、マウスにおけるマウスＣＤ９３の半分がヒトＣＤ９３によって完全に置き換えられるような、ヘテロ接合ヒトＣＤ９３ノックインを有する。
同系マウスモデルのために、ヘテロ接合ヒトＣＤ９３ ＫＩ－Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、無血清培地中のＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（０．２×１０６）のマウス細胞株を移植した。腫瘍が４０～５０ｍｍ３に達したら、マウス（試験物品あたりｎ＝８）を群に無作為に割り当てた。ｈ１６Ｅ４（ヒト化１６Ｅ４、ＶＨ４＋ＶＬ６）、ｈ７Ｆ３（ヒト化７Ｆ３、ＶＨ３＋ＶＬ３）、１７Ｂ１０キメラ（ｍ１７Ｂ１０－ｈＩｇＧ１）を含む抗ＣＤ９３抗体およびアイソタイプ対照抗体を、１５ｍｇ／ｋｇマウスで、腹腔内に隔週で４週間投与した。腫瘍体積および体重を各マウスについて測定した。研究が完了したら、腫瘍を外科的に取り出し、秤量し、測定し、細胞分析のために急速凍結した。抗ＣＤ９３抗体の抗腫瘍有効性を、全体的な腫瘍体積に基づいて評価し、動物の全体的な健康を確かめるために、研究全体を通して体重を測定した。
Figure 2023536461000015
表８から分かるように、試験されたすべてのＣＤ９３抗体は、注射５日後もの早さで腫瘍成長を有意に遮断し、腫瘍成長の２．６～２．８倍の減少をもたらした。試験された３種類のＣＤ９３抗体の抗腫瘍効果において、有意な差異は見出されなかった。
本研究は、本開示のＣＤ９３抗体が、インビボで腫瘍を阻害することができることを確認するものである。
１６Ｅ４、７Ｆ３、１６Ａ１および１７Ｂ１０の特性の概要については、図５１を参照されたい。
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Figure 2023536461000039
Figure 2023536461000040
Figure 2023536461000041
Figure 2023536461000042
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Claims (53)

  1. 重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体部分を含む抗ＣＤ９３構築物であって、前記抗体部分が、第二の重鎖可変領域（ＶＨ－２）および第二の軽鎖可変領域（ＶＬ－２）を含む抗体または抗体フラグメントとＣＤ９３の結合エピトープについて競合し、
    ａ）前記ＶＨ－２は、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｂ）前記ＶＨ－２は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｃ）前記ＶＨ－２は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｄ）前記ＶＨ－２は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｅ）前記ＶＨ－２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｆ）前記ＶＨ－２は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｇ）前記ＶＨ－２は、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｈ）前記ＶＨ－２は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｉ）前記ＶＨ－２は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｊ）前記ＶＨ－２は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｋ）前記ＶＨ－２は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｌ）前記ＶＨ－２は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｍ）前記ＶＨ－２は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｎ）前記ＶＨ－２は、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；
    ｏ）前記ＶＨ－２は、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む；または
    ｐ）前記ＶＨ－２は、配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬ－２は、配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、抗ＣＤ９３構築物。
  2. 請求項１に記載の抗ＣＤ９３構築物であって、
    ａ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｂ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｃ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｄ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｅ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｆ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｇ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｈ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｉ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｊ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｋ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｌ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｍ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、または
    ｎ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、
    ｏ）前記ＶＨは、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、またはＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬは、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、またはＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、または
    ｐ）前記ＶＨは、配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３を含み、前記ＶＬは、配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、および配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３を含む、抗ＣＤ９３構築物。
  3. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬが、ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  4. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１７または３０４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８または３０５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬが、ｉ）配列番号２０、３０１、３０２、３０３、または３０６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  5. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み；前記ＶＬが、ｉ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  6. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  7. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  8. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  9. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  10. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  11. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号１３２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  12. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号１４８、３５５、または３５８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１４９または３５６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１５０、３５７または３５９のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  13. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  14. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号１８０または３５３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１８１または３５４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  15. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  16. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  17. 前記ＶＨが、ｉ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＨＣ－ＣＤＲ３、または前記ＨＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含み、前記ＶＬが、ｉ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ１、ｉｉ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ２、およびｉｉｉ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含むＬＣ－ＣＤＲ３、または前記ＬＣ－ＣＤＲ中に最大５、４、３、２、または１個のアミノ酸置換を含むその改変体を含む、請求項２に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  18. ＣＤ９３に特異的に結合する抗体部分を含む抗ＣＤ９３構築物であって、
    ａ）配列番号１３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｂ）配列番号２９および３０７～３１２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３０、および３１３～３１８のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｃ）配列番号４５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号４６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｄ）配列番号６１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号６２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｅ）配列番号７７に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号７８に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｆ）配列番号９３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号９４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｇ）配列番号１０９に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１１０に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｈ）配列番号１２５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１２６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｉ）配列番号１４１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１４２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｊ）配列番号１５７および３６０～３６２のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１５８、および３６３～３６５のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｋ）配列番号１７３に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１７４に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｌ）配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号１９０、および３５０～３５２のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｍ）配列番号２０５に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２０６に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｎ）配列番号２２１に示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２２２に示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｏ）配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれかに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；
    ｐ）配列番号３０７～３１２のいずれか１つに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３１３～３１８のいずれか１つに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３；または
    ｑ）配列番号３１９～３２１のいずれか１つに示される配列を有するＶＨ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２およびＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに配列番号３２２～３２４のいずれか１つに示される配列を有するＶＬ鎖領域内にＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列をそれぞれ含むＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２およびＬＣ－ＣＤＲ３を含む、抗ＣＤ９３構築物。
  19. 前記ＶＨが、配列番号１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２８７、３０７～３１２および３１９～３２１のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；および／または、前記ＶＬが、配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２８８、３１３～３１８および３２２～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  20. 請求項１９に記載の抗ＣＤ９３構築物であって、
    ａ）前記ＶＨは、配列番号１３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号１４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｂ）前記ＶＨは、配列番号２９および３０７～３１２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号３０、および３１３～３１８のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｃ）前記ＶＨは、配列番号４５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号４６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｄ）前記ＶＨは、配列番号６１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号６２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｅ）前記ＶＨは、配列番号７７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号７８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｆ）前記ＶＨは、配列番号９３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号９４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｇ）前記ＶＨは、配列番号１０９のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号１１０のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｈ）前記ＶＨは、配列番号１２５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号１２６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｉ）前記ＶＨは、配列番号１４１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号１４２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｊ）前記ＶＨは、配列番号１５７のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号１５８のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｋ）前記ＶＨは、配列番号１７３のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号１７４のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｌ）前記ＶＨは、配列番号１８９および３４７～３４９のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号１９０、および３５０～３５２のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｍ）前記ＶＨは、配列番号２０５のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号２０６のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｎ）前記ＶＨは、配列番号２２１のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号２２２のアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｏ）前記ＶＨは、配列番号２８７および３１９～３２１のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号２８８、および３２２～３２４のいずれかのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、
    ｐ）前記ＶＨは、配列番号３０７～３１２のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号３１３～３１８のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、または
    ｑ）前記ＶＨは、配列番号３１９～３２１のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含み；前記ＶＬは、配列番号３２２～３２４のいずれか１つのアミノ酸配列、または少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む改変体を含む、抗ＣＤ９３構築物。
  21. 前記抗体部分が、全長抗体、二重特異性抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメント（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、Ｆｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合物、ｓｃＦｖ－Ｆｖ融合物、ダイアボディ、トリボディ、およびテトラボディからなる群より選択される抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１～２０のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  22. 前記抗体部分が全長抗体である、請求項２１に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  23. 前記抗体部分が、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ由来のＦｃフラグメント、ならびにそれらの組み合わせおよびハイブリッドからなる群より選択されるＦｃフラグメントを有する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  24. 前記Ｆｃフラグメントが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびそれらの組み合わせおよびハイブリッドからのＦｃフラグメントからなる群より選択される、請求項２３に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  25. 前記Ｆｃフラグメントが、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して低下したエフェクター機能を有する、請求項２３または請求項２４に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  26. 前記Ｆｃフラグメントが、対応する野生型Ｆｃフラグメントと比較して増強されたエフェクター機能を有する、請求項２３または請求項２４に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  27. 前記抗体部分が、ＩＧＦＢＰ７へのＣＤ９３の結合を遮断する、請求項１～２６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  28. 前記抗体部分が、ＭＭＲＮ２へのＣＤ９３の結合を遮断する、請求項１～２７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  29. 前記ＣＤ９３がヒトＣＤ９３である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物。
  30. 請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物と、薬学的に許容され得る担体とを含む医薬組成物。
  31. 請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物またはその一部をコードする単離された核酸。
  32. 請求項３１に記載の単離された核酸を含むベクター。
  33. 請求項３１に記載の単離された核酸または請求項３０に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。
  34. 治療剤または標識に連結された請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物を含む免疫コンジュゲート。
  35. 抗ＣＤ９３構築物を産生する方法であって、
    ａ）請求項３３に記載の単離された宿主細胞を、前記抗ＣＤ９３構築物を発現するのに有効な条件下で培養することと、
    ｂ）前記発現された抗ＣＤ９３構築物を前記宿主細胞から得ることとを含む、方法。
  36. 個体における疾患または状態を処置する方法であって、前記個体に、有効量の請求項１～２９のいずれか一項に記載の抗ＣＤ９３構築物、または請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  37. 前記疾患または状態が異常な血管構造に関連する、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記疾患または状態ががんである、請求項３６または請求項３７に記載の方法。
  39. 前記がんが固形腫瘍である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記がんがＣＤ９３＋内皮細胞を含む、請求項３８または請求項３９に記載の方法。
  41. 前記がんがＩＧＦＢＰ７＋血管を含む、請求項３８～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記がんがＭＭＲＮ２＋血管を含む、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記がんが腫瘍低酸素を特徴とする、請求項３８～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記がんが局所進行がんまたは転移がんである、請求項３８～４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記がんが、リンパ腫、結腸がん、脳腫瘍、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、食道がん、前立腺がん、子宮頸がん、腎がん、膀胱がん、胃がん、非小細胞肺がん、黒色腫、および膵臓がんからなる群より選択される、請求項３８～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記抗ＣＤ９３構築物を前記個体に非経口投与する、請求項３６～４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 第二の治療を投与することをさらに含む、請求項３６～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記第二の治療が、手術、放射線、遺伝子治療、免疫療法、骨髄移植、幹細胞移植、ホルモン治療、標的化治療、寒冷療法、超音波治療、光ダイナミック療法、および化学療法からなる群より選択される、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記第二の治療が免疫療法である、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記免疫療法が、免疫調節剤を投与することを含む、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記免疫調節剤が免疫チェックポイント阻害剤である、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ－１抗体を含む、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記個体がヒトである、請求項３６～５２のいずれか一項に記載の方法。
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Family Cites Families (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
CA2103059C (en) 1991-06-14 2005-03-22 Paul J. Carter Method for making humanized antibodies
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
EP0739981A1 (en) 1995-04-25 1996-10-30 Vrije Universiteit Brussel Variable fragments of immunoglobulins - use for therapeutic or veterinary purposes
JPH11510170A (ja) 1995-07-27 1999-09-07 ジェネンテック インコーポレーテッド タンパク質の処方
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
PT994903E (pt) 1997-06-24 2005-10-31 Genentech Inc Metodos e composicoes para glicoproteinas galactosiladas
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1068241E (pt) 1998-04-02 2007-11-19 Genentech Inc Variantes de anticorpos e respectivos fragmentos
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
KR100508289B1 (ko) 1998-04-21 2005-08-17 마이크로메트 에이지 Ｃｄ１９×ｃｄ３ 특이 폴리펩티드 및 그의 용도
MXPA01007170A (es) 1999-01-15 2002-07-30 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con funcion efectora alterada.
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
JP2003516755A (ja) 1999-12-15 2003-05-20 ジェネンテック・インコーポレーテッド ショットガン走査、すなわち機能性タンパク質エピトープをマッピングするための組み合わせ方法
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
MXPA03002974A (es) 2000-10-06 2004-05-05 Kyowa Hakko Kogyo Kk Celulas que producen composiciones de anticuerpo.
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
ES2295228T3 (es) 2000-11-30 2008-04-16 Medarex, Inc. Roedores transcromosomicos transgenicos para la preparacion de anticuerpos humanos.
MXPA04001072A (es) 2001-08-03 2005-02-17 Glycart Biotechnology Ag Variantes de glicosilacion de anticuerpos que tienen citotoxicidad celulares dependiente de anticuerpos incrementada.
EP1433793A4 (en) 2001-09-13 2006-01-25 Inst Antibodies Co Ltd METHOD FOR CREATING A CAMEL ANTIBODY LIBRARY
BR0213761A (pt) 2001-10-25 2005-04-12 Genentech Inc Composições, preparação farmacêutica, artigo industrializado, método de tratamento de mamìferos, célula hospedeira, método para a produção de uma glicoproteìna e uso da composição
EP1461423B1 (en) 2001-12-03 2008-05-14 Amgen Fremont Inc. Antibody categorization based on binding characteristics
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
WO2003085119A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
US7691568B2 (en) 2002-04-09 2010-04-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Antibody composition-containing medicament
WO2003085107A1 (fr) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cellules à génome modifié
AU2003236019A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism
ATE503829T1 (de) 2002-04-09 2011-04-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
GB0228210D0 (en) 2002-12-03 2003-01-08 Babraham Inst Single chain antibodies
RS51318B (sr) 2002-12-16 2010-12-31 Genentech Inc. Varijante imunoglobulina i njihova upotreba
CA2510003A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
CA2542046A1 (en) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Fused protein composition
EP1705251A4 (en) 2003-10-09 2009-10-28 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd PROCESS FOR PRODUCING ANTIBODY COMPOSITION BY RNA INHIBITION OF FUNCTION OF $ G (A) 1,6-FUCOSYLTRANSFERASE
SI1678314T1 (sl) 2003-10-22 2013-01-31 Keck Graduate Institute Metode za sintetiziranje heteromultimernih polipeptidov pri kvasovkah s strategijo razmnoĺ˝evanja haploidnih celic
CA2544865C (en) 2003-11-05 2019-07-09 Glycart Biotechnology Ag Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
NZ550217A (en) 2004-03-31 2009-11-27 Genentech Inc Humanized anti-TGF-beta antibodies
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
EP2374817B1 (en) 2004-04-13 2017-09-06 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
AU2005286607B2 (en) 2004-09-23 2011-01-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
EP2465870A1 (en) 2005-11-07 2012-06-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
CA2638117A1 (en) 2006-01-25 2007-08-30 Erasmus University Medical Center Rotterdam Generation of heavy-chain only antibodies in transgenic animals
EP2016101A2 (en) 2006-05-09 2009-01-21 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
WO2008100328A2 (en) * 2006-07-13 2008-08-21 Burnham Institute For Medical Research METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETING gC1qR/p32
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
US20100122358A1 (en) 2008-06-06 2010-05-13 Crescendo Biologics Limited H-Chain-only antibodies
CN110079550A (zh) 2009-12-10 2019-08-02 瑞泽恩制药公司 生产重链抗体的小鼠
CA2942697A1 (en) 2014-03-21 2015-09-24 Lynn Macdonald Non-human animals that make single domain binding proteins
WO2018133837A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Anti-pd-1 antibodies and uses thereof
JP2021525806A (ja) 2018-06-01 2021-09-27 タユー ファシャ バイオテック メディカル グループ カンパニー， リミテッド 疾患または状態を処置するための組成物およびそれらの使用
WO2019227490A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. Compositions and methods for imaging
US20190389960A1 (en) * 2018-06-25 2019-12-26 The Research Foundation For The State University Of New York Compositions and methods for c1q targeted therapy
EP3826673A4 (en) 2018-07-26 2022-03-09 Tayu Huaxia Biotech Medical Group Co., Ltd. IMAGING COMPOSITIONS AND METHODS
BR112022005711A2 (pt) 2019-09-26 2022-06-21 Univ Colorado Regents Métodos e composições para tratar uma doença ou transtorno

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