JP2021063082A - Ｓｉｒｐ−アルファドメインまたはそのバリアントを有する構築物 - Google Patents

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Abstract

【課題】細胞（例えば、がん細胞もしくは免疫系の細胞）を標的とする、標的細胞の食作用を増加させる、制御性Ｔ細胞等の免疫細胞を除去する、又はそれらの任意の組合せに有用である、野生型ＳＩＲＰ−αより高い親和性でＣＤ４７に結合する高親和性ＳＩＲＰ−αＤ１ドメイン又はそのバリアントを提供する。【解決手段】野生型ＳＩＲＰ−αＤ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、並びに野生型ＳＩＲＰ−αＤ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−αＤ１ドメイン、又はその断片を含むＳＩＲＰ−αＤ１バリアントを含むポリペプチドを提供する。【選択図】図３

Description

相互参照
本出願は、２０１５年８月７日に出願された米国仮特許出願第６２／２０２，７７２号
、２０１５年８月７日に出願された米国仮特許出願第６２／２０２，７７５号、２０１５
年８月７日に出願された米国仮特許出願第６２／２０２，７７９号、２０１６年１月８日
に出願された米国仮特許出願第６２／２７６，８０１号、２０１５年１２月１０日に出願
された米国仮特許出願第６２／２６５，８８７号、２０１６年１月８日に出願された米国
仮特許出願第６２／２７６，７９６号、及び２０１６年６月６日に出願された米国仮特許
出願第６２／３４６，４１４号の利益を主張する。これらの出願はそれぞれ参照すること
によってそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。いくつかの実施形
態では、該野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインは、配列番号１〜１０のいずれか１つの配
列を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインは、野生型ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残
基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に１〜９個の
さらなるアミノ酸の変異を含む。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントは、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２Ｔ
ＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶ
ＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ９ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１０ＫＦＲＫＧＳＰ
ＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４９）を含み、ここで、Ｘ１はＶ
、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ３はＩ、Ｆ、Ｓ、または
Ｔであり、Ｘ４はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱ
であり、Ｘ７はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ８はＬ、Ｔ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ９はＡ
であり、Ｘ１０はＶまたはＩであり、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１の
配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ酸置
換を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７
８〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ
−α Ｄ１バリアントは、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡ
ＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ
７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２ＡＤＡＧ
ＴＹＹＣＸ１３ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２
１８）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２はＡ、Ｖ、Ｌ、またはＩで
あり、Ｘ３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、Ｘ４はＥ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ５はＫま
たはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７はＨ、Ｒ、またはＰであり、Ｘ８はＳ、Ｇ
、Ｌ、またはＴであり、Ｘ９は任意のアミノ酸であり、Ｘ１０は任意のアミノ酸であり、
Ｘ１１は任意のアミノ酸であり、Ｘ１２は任意のアミノ酸であり、Ｘ１３はＶまたはＩで
あり、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−
α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形
態では、Ｘ９はＡである。いくつかの実施形態では、Ｘ９はＮである。いくつかの実施形
態では、Ｘ１０はＩである。いくつかの実施形態では、Ｘ９はＮであり、Ｘ１０はＰであ
る。いくつかの実施形態では、Ｘ９はＮであり、Ｘ１１は、Ｓ、Ｔ、またはＣ以外の任意
のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１１はＴである。いくつかの実施形態で
は、Ｘ１１は、Ｔ以外のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１２はＰである。
いくつかの実施形態では、Ｘ９はＮであり、Ｘ１２はＰ以外の任意のアミノ酸である。い
くつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ
１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧ
ＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩ
ＧＸ９ＩＴＸ１０ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１１ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳ
ＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１９）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２
はＡ、Ｖ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、Ｘ４はＥ、Ｌ、ま
たはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７はＨ、Ｒ、また
はＰであり、Ｘ８はＳ、Ｇ、Ｌ、またはＴであり、Ｘ９はＮであり、Ｘ１０はＰ以外の任
意のアミノ酸であり、Ｘ１１はＶまたはＩであり、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、
配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つ
のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは
、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ
３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＸ４ＥＧＸ５ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ６Ｔ
ＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ７ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳ
ＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５２）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩ
であり、Ｘ２はＡ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ３はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ４はＫ
またはＲであり、Ｘ５はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ６はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ７
はＡであり、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩ
ＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を有する。いくつかの
実施形態では、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２はＡまたはＩであり、Ｘ３はＩまたはＦで
あり、Ｘ４はＫまたはＲであり、Ｘ５はＨまたはＰであり、Ｘ６はＬまたはＴであり、Ｘ
７はＡである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号
１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも３つのアミノ
酸置換を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番
号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも４つのアミ
ノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列
番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも５つのア
ミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配
列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも６つの
アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、
配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも７つ
のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、Ｘ１はＩである。いくつかの実施形
態では、Ｘ２はＩである。いくつかの実施形態では、Ｘ３はＦである。いくつかの実施形
態では、Ｘ４はＲである。いくつかの実施形態では、Ｘ５はＰである。いくつかの実施形
態では、Ｘ６はＴである。いくつかの実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、及
びＸ６の各々は、野生型アミノ酸ではない。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントは、配列番号８１〜８５のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。いくつ
かの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ１Ｉ
ＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡ
ＲＥＬＩＹＮＱＸ４ＥＧ Ｘ５ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ６ＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ７
ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配
列番号２１２）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２はＶ、Ｉ、または
Ｌであり、Ｘ３はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ４はＫまたはＲであり、Ｘ５はＨ、Ｐ
、またはＲであり、Ｘ６はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ７はＡであり、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対し
て、少なくとも２つのアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチド
は、ヒトＣＤ４７に対して、ＫＤ約５ｘ１０−９Ｍ未満で結合する。いくつかの実施形態
では、該ポリペプチドは、さらに、該ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に連結されたＦ
ｃドメインモノマーを含み、該Ｆｃドメインモノマーは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、また
はＩｇＧ４のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインモノマーは、野
生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、少なくとも１つの変
異を含む。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１３５、配列番号１３
６、または配列番号１３７のいずれか１つのアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態
では、該Ｆｃドメインモノマーは、（ａ）野生型ヒトＩｇＧ１に対して、以下のアミノ酸
置換のうちの１つ：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ
３９４Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ
、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５
６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ
３６８Ｙ、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ
、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９
９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ
４０７Ｈ、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、もしくはＫ４０９Ｉ、ま
たは、（ｂ）（ｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異、（ｉｉ）ヒト
ＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異、（ｉｉ
ｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２
９７Ａの変異、（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異、（ｖ）ヒ
トＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異、（ｖｉ）ヒトＩｇＧ
２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異、（ｖｉｉ）ヒ
トＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及
びｄｅｌＧ２３６の変異、もしくは（ｖｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２
２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異
を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメイ

ンモノマーは、（ａ）野生型ヒトＩｇＧ１に対して、以下のアミノ酸置換のうちの１つ：
Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５
Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３
５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、
Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８
Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３
９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、
Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７
Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、またはＫ４０９Ｉを含み、かつ（ｂ）該Ｆｃ
ドメインモノマーは、さらに、（ｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変
異、（ｉｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７
Ａの変異、（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２
３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異、（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａ
の変異、（ｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異、（
ｖｉ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変
異、（ｖｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ
、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異、または（ｖｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域
に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ
２９７Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、食作用アッセイに
おいて、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域を有するポリペプチドと比較して、食作用の低下を
示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインモノマーは、第二のＦｃドメインモノマ
ーを含む第二のポリペプチドに連結され、Ｆｃドメインダイマーを形成する。いくつかの
実施形態では、該第二のＦｃドメインモノマーは、さらなるポリペプチドに連結される。
いくつかの実施形態では、該さらなるポリペプチドは、抗体可変ドメインを含む。いくつ
かの実施形態では、該抗体可変ドメインは、細胞上で発現される抗原を標的とする。いく
つかの実施形態では、該細胞は、がん細胞である。いくつかの実施形態では、該抗体可変
ドメインは、免疫細胞調節に関与する細胞表面タンパク質を標的とする。いくつかの実施
形態では、該さらなるポリペプチドは、治療用タンパク質を含む。いくつかの実施形態で
は、該治療用タンパク質は、サイトカイン、インターロイキン、抗原、ステロイド、抗炎
症薬、または免疫調節薬である。いくつかの実施形態では、該さらなるポリペプチドは、
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、さ
らに、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）（配列番号１２）を含む。いくつかの実施形態では
、該ＨＳＡは、配列番号１２に対して、Ｃ３４ＳまたはＫ５７３Ｐのアミノ酸置換を含む
。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１５２〜１５９のいずれか１つ
のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、さらに、アルブ
ミン結合ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、該アルブミン結合ペプチドは、ＤＩ
ＣＬＰＲＷＧＣＬＷ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では
、該ポリペプチドは、さらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーを含む。いく
つかの実施形態では、該ＰＥＧポリマーは、該ポリペプチドのシステイン置換とつながっ
ている。
ある特定の実施形態において、本明細書に開示するのは、ポリペプチドであって、シグ
ナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリアントであるとともに、アミノ酸配列Ｅ
ＥＸ１Ｘ２ＱＸ３ＩＱＰＤＫＸ４ＶＸ５ＶＡＡＧＥＸ６Ｘ７Ｘ８ＬＸ９ＣＴＸ１０ＴＳＬ
Ｘ１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ１２ＲＸ１３ＬＩＹＮＱＸ１４Ｘ１５ＧＸ１６ＦＰ
ＲＶＴＴＶＳＸ１７Ｘ１８ＴＸ１９ＲＸ２０ＮＭＤＦＸ２１ＩＸ２２ＩＸ２３Ｘ２４ＩＴ
Ｘ２５ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ２６ＫＸ２７ＲＫＧＳＰＤＸ２８Ｘ２９ＥＸ３０ＫＳＧＡＧＴ
ＥＬＳＶＲＸ３１ＫＰＳ（配列番号４７）を含み、Ｘ１はＥまたはＧであり、Ｘ２はＬ、
Ｉ、またはＶであり、Ｘ３はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ４はＳまたはＦであり、Ｘ５は
ＬまたはＳであり、Ｘ６はＳまたはＴであり、Ｘ７はＡまたはＶであり、Ｘ８はＩまたは
Ｔであり、Ｘ９はＨ、Ｒ、またはＬであり、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ１
１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ１２はＡまたはＧであり、Ｘ１３はＥ、Ｖ、または
Ｌであり、Ｘ１４はＫまたはＲであり、Ｘ１５はＥまたはＱであり、Ｘ１６はＨ、Ｐ、ま
たはＲであり、Ｘ１７はＤまたはＥであり、Ｘ１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１
９はＫまたはＲであり、Ｘ２０はＥまたはＮであり、Ｘ２１はＳまたはＰであり、Ｘ２２
はＳまたはＲであり、Ｘ２３はＳまたはＧであり、Ｘ２４は任意のアミノ酸であり、Ｘ２
５は任意のアミノ酸であり、Ｘ２６はＶまたはＩであり、Ｘ２７はＦ、Ｌ、またはＶであ
り、Ｘ２８はＤであるか、または存在せず、Ｘ２９はＴまたはＶであり、Ｘ３０はＦまた
はＶであり、Ｘ３１はＡまたはＧであり、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列を有す
る野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を有する
該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント、ならびに、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むＦｃバリアントであるとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独
立して、（ｉ）Ｎ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ、
Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉｉ）Ｌ２３４
Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（
ｉｖ）Ｎ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖ）Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１
Ｓの変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９
７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３
４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域、または（
ｖｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ
２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である該Ｆｃバリアントを含むポリペプチ
ドである。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインダイマーの該Ｆｃドメインモノマー
の１つは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇ
Ｇ１のＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、または１３５〜１３７のいずれか１つのアミノ
酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の
野生型版と比較してＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施
形態では、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ２のＦｃバリアントは、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２
のＦｃ領域の野生型版と比較して、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、
及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態
では、該ＩｇＧ４のＦｃバリアントは、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域の野生型版と比較して、
ＣＤ１６ａ及びＣＤ３２ｂのＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつ
かの実施形態では、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ２のＦｃバリアントは、ヒトＩｇＧ１または
ＩｇＧ２のＦｃ融合の野生型版と比較して、Ｃ１ｑに対する結合の除去または減少を示す
。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、Ｆｃγ受容体に対して、ＫＤ約５ｘ１
０−６Ｍ超で結合する。
ある特定の実施形態において、本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含むポリペ
プチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃドメイ
ンダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、
Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉ
ｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、
または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、
及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択されるポリペプチドである
。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインモノマーの少なくとも１つは、Ｌ２３４Ａ、
Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である
。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインモノマーの少なくとも１つは、Ａ３３０Ｓ、
Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ領域である。いくつかの
実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較してＦｃγ
受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアン
トは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較して、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２
ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す。い
くつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧのＦｃ融合の野生型版と比較し
て、Ｃ１ｑに対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメ
インモノマーの少なくとも１つは、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、
ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。いくつか
の実施形態では、該Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域と比較して、Ｆｃ
γ受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリア
ントは、そのヒトＩｇＧ４のＦｃ領域の野生型版と比較して、ＣＤ１６ａ及びＣＤ３２ｂ
のＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃ
バリアントは、Ｆｃγ受容体に対して、ＫＤ約５ｘ１０−６Ｍ超で結合する。いくつかの
実施形態では、該ポリペプチドは、さらに、ＣＤ４７結合ポリペプチドを含む。いくつか
の実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較して、Ｆ
ｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７
結合ポリペプチドは、げっ歯類及び非ヒト霊長類において、急性貧血を引き起こさない。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７結合ポリペプチドは、ヒトにおいて、急性貧血を引
き起こさない。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７結合ポリペプチドは、シグナル制御
タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）ポリペプチドまたはその断片である。いくつかの実施形態
では、該ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶ
ＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱ
Ｘ５ＥＧＸ６ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ７ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ８ＩＴＰＡＤＡＧＴ
ＹＹＣＸ９ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５１）
を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、ここで、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２は
ＡまたはＩであり、Ｘ３はＩまたはＦであり、Ｘ４はＥまたはＶであり、Ｘ５はＫまたは
Ｒであり、Ｘ６はＨまたはＰであり、Ｘ７はＬまたはＴであり、Ｘ８はＮ以外の任意のア
ミノ酸であり、Ｘ９はＶまたはＩである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−αポリ
ペプチドは、Ｘ１がＶまたはＩであり、Ｘ２がＡまたはＩであり、Ｘ３がＩまたはＦであ
り、Ｘ４がＥであり、Ｘ５がＫまたはＲであり、Ｘ６がＨまたはＰであり、Ｘ７がＬまた
はＴであり、Ｘ８がＮではなく、Ｘ９がＶであるＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。
ある特定の実施形態において、本明細書に開示するのは、ポリペプチドであって、シグ
ナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリアントであるとともに、非自然発生の高
親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、自然発生のＤ１ドメインの親和性より少なく
とも１０倍高い親和性でヒトＣＤ４７に結合する該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント、及び
Ｆｃドメインモノマーであるとともに、第二のＦｃドメインモノマーを含む第二のポリペ
プチドに連結されてＦｃドメインを形成し、該Ｆｃドメインが除去または減少されたエフ
ェクター機能を有する該Ｆｃドメインモノマーを含むポリペプチドである。いくつかの実
施形態では、該非自然発生の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインは、残基８０にアミノ
酸の変異を含む。
ある特定の実施形態において、本明細書に開示するのは、シグナル制御タンパク質α（
ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリアントを含むポリペプチドであって、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリ
アントが、ＫＤ２５０ｎＭ未満で第一の種由来のＣＤ４７に結合し、該ＳＩＲＰ−α Ｄ
１バリアントが、ＫＤ２５０ｎＭ未満で第二の種由来のＣＤ４７に結合し、かつ、該第一
の種由来のＣＤ４７に対するＫＤと、該第二の種由来のＣＤ４７に対するＫＤが互いに１
００倍以内であり、該第一の種と第二の種が、ヒト、げっ歯類、及び非ヒト霊長類からな
る群から選択される該ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントは、少なくとも３つの異なる種由来のＣＤ４７に結合する。いくつかの実
施形態では、該非ヒト霊長類はカニクイザルである。
ある特定の実施形態において、本明細書に開示するのは、ポリペプチドであって、（ａ
）ＫＤ２５０ｎＭ未満でヒトＣＤ４７に結合するシグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−
α）Ｄ１ドメイン、及び（ｂ）該ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインのＮ末端またはＣ末端に連
結されたＦｃドメインモノマーを含み、げっ歯類及び非ヒト霊長類において急性貧血を引
き起こさないポリペプチドである。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、ヒトＳ
ＩＲＰ−αの非自然発生のバリアントである。いくつかの実施形態では、該ポリペプチド
のインビボ投与は、投与後第一週の間に５０％未満のヘモグロビンの減少をもたらす。い
くつかの実施形態では、該ポリペプチドのヒトでの投与は、投与後第一週の間に５０％未
満のヘモグロビンの減少をもたらす。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、さら
に、少なくとも１つのＦｃバリアントを含むとともに、該Ｆｃバリアントは、（ｉ）Ｌ２
３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領
域、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される。いくつかの
実施形態では、該Ｆｃバリアントは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９
７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバ
リアントは、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦ
ｃ領域である。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ
、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４
のＦｃ領域である。
ある特定の実施形態において、本明細書に開示するのは、疾患または障害を有する個体
の治療方法であって、本明細書に開示するポリペプチドを当該対象に投与することを含む
方法である。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。いくつかの実施形態では、該ポリペプ
チドは、シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリアントを含むとともに、該
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、アミノ酸配列ＥＥＸ１Ｘ２ＱＸ３ＩＱＰＤＫＸ４ＶＸ
５ＶＡＡＧＥＸ６Ｘ７Ｘ８ＬＸ９ＣＴＸ１０ＴＳＬＸ１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ
１２ＲＸ１３ＬＩＹＮＱＸ１４Ｘ１５ＧＸ１６ＦＰＲＶＴＴＶＳＸ１７Ｘ１８ＴＸ１９Ｒ
Ｘ２０ＮＭＤＦＸ２１ＩＸ２２ＩＸ２３Ｘ２４ＩＴＸ２５ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ２６ＫＸ２
７ＲＫＧＳＰＤＸ２８Ｘ２９ＥＸ３０ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＸ３１ＫＰＳ（配列番号４
７）を含み、ここで、Ｘ１はＥまたはＧであり、Ｘ２はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ３は
Ｖ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ４はＳまたはＦであり、Ｘ５はＬまたはＳであり、Ｘ６はＳ
またはＴであり、Ｘ７はＡまたはＶであり、Ｘ８はＩまたはＴであり、Ｘ９はＨ、Ｒ、ま
たはＬであり、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦで
あり、Ｘ１２はＡまたはＧであり、Ｘ１３はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ１４はＫまたは
Ｒであり、Ｘ１５はＥまたはＱであり、Ｘ１６はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１７はＤま
たはＥであり、Ｘ１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１９はＫまたはＲであり、Ｘ２
０はＥまたはＮであり、Ｘ２１はＳまたはＰであり、Ｘ２２はＳまたはＲであり、Ｘ２３
はＳまたはＧであり、Ｘ２４は、任意のアミノ酸であり、Ｘ２５は、任意のアミノ酸であ
り、Ｘ２６は、ＶまたはＩであり、Ｘ２７はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ２８はＤである
か、または存在せず、Ｘ２９はＴまたはＶであり、Ｘ３０はＦまたはＶであり、Ｘ３１は
ＡまたはＧであり、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１〜１０のいずれか１
つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ
酸置換を有し、かつ、該ポリペプチドは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃドメ
インダイマーを含むＦｃバリアントを含み、ここで、各Ｆｃドメインモノマーは、独立し
て、（ｉ）Ｎ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２
３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉｉ）Ｌ２３４Ａ、
Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｖ
）Ｎ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖ）Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの
変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａ
の変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ
、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域、または（ｖｉ
ｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９
７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、該ポリペプ
チドは、Ｆｃバリアントを含むとともに、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノ
マーを有するＦｃドメインダイマーを含み、各Ｆｃドメインモノマーは、独立して、（ｉ
）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１の
Ｆｃ領域、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ
２のＦｃ領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄ
ｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される。い
くつかの実施形態では、該ポリペプチドは、シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）
Ｄ１バリアントであるとともに、非自然発生の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであ
り、自然発生のＤ１ドメインの親和性より少なくとも１０倍高い親和性でヒトＣＤ４７に
結合する該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント、及びＦｃドメインモノマーであるとともに、
第二のＦｃドメインモノマーを含む第二のポリペプチドに連結されてＦｃドメインを形成
し、該Ｆｃドメインが除去または減少されたエフェクター機能を有する該Ｆｃドメインモ
ノマーを含む。いくつかの実施形態では、該非自然発生の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ド
メインは、残基８０にアミノ酸の変異を含む。いくつかの実施形態では、該ポリペプチド
は、シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリアントを含み、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントは、ＫＤ２５０ｎＭ未満で第一の種由来のＣＤ４７に結合し、該ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントは、ＫＤ２５０ｎＭ未満で第二の種由来のＣＤ４７に結合し、か
つ、該第一の種由来のＣＤ４７に対するＫＤと、該第二の種由来のＣＤ４７に対するＫＤ
は互いに１００倍以内であり、該第一の種と第二の種は、ヒト、げっ歯類、及び非ヒト霊
長類からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、（ａ）Ｋ
Ｄ２５０ｎＭ未満でヒトＣＤ４７に結合するシグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）
Ｄ１ドメイン、及び（ｂ）該ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインのＮ末端またはＣ末端に連結さ
れたＦｃドメインモノマーを含むとともに、該ポリペプチドは、げっ歯類及び非ヒト霊長
類において急性貧血を引き起こさない。いくつかの実施形態では、該疾患または障害は、
がん、自己免疫疾患、または炎症性疾患である。いくつかの実施形態では、該疾患または
障害は、がんであり、該がんは、固形腫瘍がん、血液がん、急性骨髄性白血病、慢性リン
パ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリ
ンパ腫、多発性骨髄腫、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、肺がん、気管
支がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸及び直腸のがん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃ
ｅｒ、ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、胆のうがん、消化管間質腫瘍がん、甲状腺がん
、頭頸部がん、口腔咽頭がん、食道がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん、メルケル細胞がん
、ウイルス誘導性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎臓がん、腎細胞がん、腎
盂がん、白血病、リンパ腫、非上皮性悪性腫瘍、神経膠腫、脳がん、及び上皮性悪性腫瘍
から選択される。いくつかの実施形態では、該疾患または障害は、自己免疫疾患または炎
症性疾患であり、該自己免疫疾患または炎症性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、脊
椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性炎症性または自己免疫性疾患、移植片対
宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、進行性
全身性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血性再灌流、クローン病、子宮内膜症、糸球体
腎炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、喘息、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎
、及び炎症性自己免疫筋炎から選択される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２
２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの
実施形態では、該方法は、さらに、少なくとも１つのさらなる薬剤を投与することを含む
。いくつかの実施形態では、該少なくとも１つのさらなる薬剤は、抗体、腫瘍関連抗原、
または非抗体治療薬である。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのさらなる薬剤が
投与される。いくつかの実施形態では、該少なくとも２つのさらなる薬剤は、２つの抗体
を含む。いくつかの実施形態では、該少なくとも２つのさらなる薬剤は、抗体及び腫瘍関
連抗原を含む。いくつかの実施形態では、該少なくとも１つのさらなる薬剤は、抗体であ
る。いくつかの実施形態では、該抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。いくつ
かの実施形態では、該抗体は、ヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形
態では、該抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形態では、該
抗体は、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＣＤ３８
抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１
抗体、抗ＣＤ２７４抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗４−１ＢＢ抗体、
抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗ＦＺＤ７抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＤ３８抗体
、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＢＡＦＦ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体
、または抗ＶＥＧＦＲ２抗体から選択される。いくつかの実施形態では、該抗体は、抗Ｈ
ＥＲ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＰＤ
−１抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体から選択される。いくつかの実施
形態では、該少なくとも１つのさらなる薬剤は、少なくとも１つの抗体であり、該抗体は
、セツキシマブ、ネシツムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＥ
ＤＩ０６８０、ＭＥＤ１６４６９、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＥ
ＤＩ６３８３、ＲＧ７８８８、イピリムマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ＰＦ−０５
０８２５６６、エノビリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、バンチクツマブ（ｖ
ａｎｔｉｃｔｕｍａｂ）、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、モガマリズマブ（ｍ
ｏｇａｍａｌｉｚｕｍａｂ）、ＳＡＲ６５０９８４、ダラツムマブ、トラスツズマブ、ト
ラスツズマブエムタンシン、ペルツズマブ、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、リ
ツキシマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、ＲＧ７１５５、ＦＰＡ００８、パニツム
マブ、ブレンツキシマブベドチン、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ベリムマブ、ベバシズマブ
、デノスマブ、パニツムマブ、ラムシルマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズ
マブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ピディリズマ
ブ、またはＢＭＳ−９３６５９から選択される。いくつかの実施形態では、該抗体はトラ
スツズマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列
番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、ま
たは１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体は
リツキシマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配
列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、
または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体
はセツキシマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、
配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７
、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実

施形態では、該抗体はダラツムマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２
２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの
実施形態では、該抗体はベリムマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２
２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの
実施形態では、ｎ該抗体はベバシズマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜
１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつ
かの実施形態では、該抗体はデノスマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜
１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつ
かの実施形態では、該抗体はパンチムマブ（ｐａｎｔｉｍｕｍａｂ）である。いくつかの
実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１０４
、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか
１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はラムシルマブである。いくつか
の実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１０
４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれ
か１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はネシツムマブである。いくつ
かの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はニボルマブである。いくつ
かの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はペンブロリズマブである。
いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９
８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９
のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はアベルマブである。
いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５、９
８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９
のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はアテゾリズマブであ
る。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜８５
、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１
５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はデュルバルマブ
である。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号７８〜
８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２
〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はＭＥＤＩ０
６８０である。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号
７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または
１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体はピデ
ィリズマブである。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列
番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、ま
たは１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、該抗体は
ＢＭＳ−９３６５９である。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント
は、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１
３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する。いくつかの実施形態では、
該少なくとも１つのさらなる薬剤は、腫瘍関連抗原であり、該腫瘍関連抗原は、免疫反応
を誘発する。いくつかの実施形態では、該少なくとも１つのさらなる薬剤は、抗体であり
、該抗体は、ＨＬＡ／ペプチドまたはＭＨＣ／ペプチド複合体を標的とする。いくつかの
実施形態では、該抗体は、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ１、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミ
リー（ＭＡＧＥ−Ａ３）、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ
７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミ
ニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥｐｈＡ３、ＳＡＰ
−１、ＢＩＮＧ−４、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、メソテリン、
ＢＲＣＡ１／２（変異）、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３（変異）、Ｒａ
ｓ（変異）、β−カテニン（変異）、ＴＧＦ−βＲＩＩ（変異）、ＨＰＶ Ｅ６、もしく
はＥ７を含むＨＬＡ／ペプチドまたはＭＨＣ／ペプチド複合体を標的とする。いくつかの
実施形態では、該抗体は、ＥＳＫ１、ＲＬ１Ｂ、Ｐｒ２０、または３．２Ｇ１である。
本発明の新規特徴は、添付の特許請求の範囲に具体的に記載する。本発明の特徴及び利
点のより良い理解は、本発明の原理を利用した例示的な実施形態、及び添付図面の以下の
詳細な説明を参照することによって得られる。
第二のＦｃドメインモノマーとともにＦｃドメインを形成する第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを含むＳＩＲＰ−α構築物を示す図である。 第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアント及び第二のＦｃドメインモノマーにつながれた抗体可変ドメインを含み、該第一のＦｃドメインモノマー及び該第二のＦｃドメインモノマーが結合してＦｃドメインを形成するＳＩＲＰ−α構築物を示す図である。 第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアント及び第二のＦｃドメインモノマーにつながれた治療用タンパク質を含み、該第一のＦｃドメインモノマー及び該第二のＦｃドメインモノマーが結合してＦｃドメインを形成するＳＩＲＰ−α構築物を示す図である。 図４Ａは、穴の変異を有する第二のＦｃドメインモノマーとともにＦｃドメインを形成する、ノブの変異を有する第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを含むＳＩＲＰ−α構築物を示す図である。図４Ｂは、ノブの変異を有する第二のＦｃドメインモノマーとともにＦｃドメインを形成する、穴の変異を有する第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを含むＳＩＲＰ−α構築物を示す図である。 図５Ａは、ＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを含むＳＩＲＰ−α構築物を示す図である。図５Ｂは、図５Ａに示す構築物のホモダイマーであるＳＩＲＰ−α構築物を示す図である。 ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを含む単官能及び二官能ＳＩＲＰ−α構築物に関するＳＰＲ結合データを示す。 様々な濃度のＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物の存在下での、ヒト単球由来マクロファージによるＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ腫瘍細胞の食作用を示す。 様々な濃度のＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物の存在下での、ヒト単球由来マクロファージによるＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ腫瘍細胞の食作用を示す。 様々な濃度のＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物の存在下での、ヒト単球由来マクロファージによるＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ腫瘍細胞の食作用を示す。 一定期間にわたるＳＩＲＰ−αポリペプチドの半減期の安定性を示す。 ＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物の血球凝集反応アッセイデータを示す。 ＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物及び抗ｍＰＤ−Ｌ１で処理されたマウス同系腫瘍モデルの生存曲線を示す。 抗ｍＰＤ−Ｌ１と組み合わせてＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物で処理されたマウス同系腫瘍モデルの腫瘍体積分析を示す。 ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物に対する様々な濃度のＣ１ｑ補体の結合を示す。 様々な濃度のＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物の存在下での、ヒト単球由来マクロファージによるＭＭ１Ｒ細胞の食作用を示す。 様々な濃度のＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物の存在下での、ヒト単球由来マクロファージによるＭＭ１Ｒ細胞の食作用を示す。 様々な濃度のＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物の存在下での、ヒト単球由来マクロファージによるＮ８７細胞の食作用を示す。 Ｐ８３Ｖの変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントの分子量分析を示す。 リツキシマブとともに、またはリツキシマブなしで、様々なＳＩＲＰ−α構築物で処理されたがんのＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウスモデルにおけるヒトＧＦＰ−Ｌｕｃ−Ｒａｊｉリンパ腫細胞の腫瘍増殖を示す。 図１９Ａに示す腫瘍の腫瘍体積の散布図を示す。 図１９Ａに示す処理マウスのヘモグロビン値を示す。 ＳＩＲＰ−αの野生型ＩｇＧ１のＦｃ構築物またはＳＩＲＰ−αのＩｇＧ１のＦｃバリアント構築物のいずれかで処理されたマウスから採取した赤血球数を示す。
定義
用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定される特定の値の許容誤差範囲内
であることを意味し、値を測定し、または決定する方法、すなわち計測システムの限界に
部分的に依存する。例えば、「約」は、当該技術の実行につき、１または１以上の標準偏
差内を意味することができる。代替として、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０
％、最大５％、または最大１％の範囲を意味することができる。代替として、特に生物系
または生物学的過程に関して、該用語は、値の１０倍以内、好ましくは５倍以内、より好
ましくは２倍以内を意味することができる。別段に記載のない限り、本出願及び特許請求
の範囲に特定の値が記載される場合、用語「約」は、該特定の値に対する許容可能な誤差
範囲内を意味することが想定されるものとする。
本明細書で使用される用語は、特定の場合を説明する目的のためのみであり、限定する
ことを意図するものではない。本明細書で使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「
ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそれ以外を示さない限り、複数形も同様に含むことが意図さ
れる。さらに、用語「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」、
「ｈａｖｉｎｇ（有する）」、「ｈａｓ（有する）」、「伴う」、またはその変異形が詳
細な説明または特許請求の範囲で使用される限り、かかる用語は、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎ
ｇ（含む）」という用語と同様に包括的であることが意図される。
本明細書で使用される、用語「抗体」は、無傷の抗体、抗体断片（所望の生物活性（例
えば、エピトープ結合）を示すという条件で）、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗
体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体様タンパク
質を指す。
本明細書で使用される、用語「抗体可変ドメイン」は、相補性決定領域（ＣＤＲ、例え
ば、ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、及びＣ
ＤＲ Ｈ３）ならびにフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体の軽鎖及び
重鎖の部分を指す。
本明細書で使用される、用語「リンカー」は、２つの要素、例えば、タンパク質ドメイ
ン間の結合を指す。いくつかの実施形態では、リンカーは共有結合またはスペーサの場合
がある。用語「スペーサ」は、２つのポリペプチドもしくはポリペプチドドメイン間にス
ペースもしくは可撓性（またはスペースと可撓性の両方）を与えるために、２つのポリペ
プチドもしくはポリペプチドドメイン間に生じる部分（例えば、ポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）ポリマー）またはアミノ酸配列（例えば、１〜２００のアミノ酸配列）を指す
。いくつかの実施形態では、アミノ酸スペーサは、ポリペプチドの一次配列の一部である
（例えば、当該ポリペプチド骨格を介して間隔をあけたポリペプチドまたはポリペプチド
ドメインにつながれる）。
本明細書で使用される、用語「治療有効量」は、疾患、例えば、がん、例えば、固形腫
瘍または血液がんを有する患者の治療において所望の治療効果を達成するのに十分かつ有
効である、本明細書に記載のポリペプチドまたはポリペプチドを含む医薬組成物、例えば
、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインもしくはそのバリアントを有するポリペプチドの量を指す
。いくつかの実施形態では、治療有効量のポリペプチドは、有害な副作用を回避する。
本明細書で使用される、用語「医薬組成物」は、活性成分及び賦形剤もしくは希釈剤（
または賦形剤と希釈剤の両方）を含み、該活性成分が適切な投与方法で投与されるように
する医薬処方または製剤処方を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される医
薬組成物は、該ポリペプチドと適合する医薬的に許容される成分を含む。いくつかの実施
形態では、該医薬組成物は、経口投与用の錠剤もしくはカプセル剤形態、または、例えば
、注射による静脈内もしくは皮下投与用の水性形態である。
本明細書で使用される、用語「対象」、「個体」、及び「患者」は、互換的に用いられ
、脊椎動物、例えば、哺乳類を指す。哺乳類としては、マウス、サル、ヒト、家畜、競技
動物、及び愛玩動物が挙げられるが、これらに限定されない。インビボで得られる、また
はインビトロで培養される生物学的実体の組織、細胞、及びそれらの後代もまた包含され
る。該用語のいずれも医療専門家の指導を必要としない。
本明細書で使用される、用語「親和性」または「結合親和性」は、２分子間の結合相互
作用の強さを指す。一般に、結合親和性は、分子とその結合パートナー、例えば、高親和
性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントとＣＤ４７間の非共有結合性相互作用の合計の強さを指
す。別段の指示がない限り、結合親和性は、結合対のメンバー間の１：１の相互作用を反
映する固有の結合親和性を指す。２分子間の結合親和性は、通常、解離定数（ＫＤ）また
は会合定数（ＫＡ）によって示される。互いに対して低い結合親和性を有する２分子は、
一般にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、高いＫＤを示す。互いに対して高
親和性を有する２分子は、一般に容易に結合し、より長く結合されたままである傾向があ
り、小さいＫＤを示す。いくつかの実施形態では、２つの相互作用分子のＫＤは、既知の
方法及び技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定される。ＫＤは、ｋ
ｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算することができる。
本明細書で使用される、用語「〜より小さいＫＤ」は、記載されたＫＤ値に対して、数
値的に小さいＫＤ値及び増加する結合親和性を指す。本明細書で使用される、用語「〜よ
り大きいＫＤ」は、記載されたＫＤ値に対して、数値的に大きいＫＤ値及び減少する結合
親和性を指す。
本明細書で使用される、用語「急性貧血」は、化合物の投与または治療後の最初の５日
間の３０％の赤血球量またはヘモグロビンの減少を指す。
Ｉ．シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメイン及びそのバリアント
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される該ポリペプチ
ドである。
シグナル制御タンパク質α（「ＳＩＲＰ−α」または「ＳＩＲＰ−アルファ」）は、骨
髄細胞の膜で広く発現されるＩｇスーパーファミリーに属する膜貫通糖タンパク質である
。ＳＩＲＰ−αは、体内の多くの細胞型で広く発現されるタンパク質であるＣＤ４７と相
互作用する。ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７の相互作用は、さもなければ免疫系によって認識さ
れることがある「自己」細胞の貪食を防ぐ。腫瘍細胞でのＣＤ４７の高発現は、急性骨髄
性白血病及びいくつかの固形腫瘍がんにおいて、生存にとって負の予後因子として作用し
得ることが認められている。
天然のＳＩＲＰ−αは、３つの高度に相同な免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメイン
、すなわち、Ｄ１、Ｄ２、及びＤ３を含む。該ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン（「Ｄ１ドメ
イン」）は、ＳＩＲＰ−αの膜遠位、すなわち細胞外ドメインを指し、ＣＤ４７に対する
ＳＩＲＰ−αの結合を媒介する。本明細書で使用される、用語「ＳＩＲＰ−αポリペプチ
ド」は、ＣＤ４７に結合することが可能な任意のＳＩＲＰ−αポリペプチドまたはその断
片を指す。野生型ヒトＳＩＲＰ−αには少なくとも１０種のバリアントがある。表１は、
該１０種の天然に存在する野生型ヒトＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインバリアントのＤ１ドメ
インのアミノ酸配列を示す（配列番号１〜１０）。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−
αポリペプチドは、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩ
ＲＰ−αポリペプチドは、野生型Ｄ１ドメイン、例えば、配列番号１〜１０に示されるも
のを含む。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、野生型ヒトＳＩＲＰ
−αのＤ２もしくはＤ３ドメイン（またはＤ２及びＤ３ドメインの両方）（表３）を含む
。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
本明細書で使用される、用語「高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント」、「高親和性
ＳＩＲＰ−αバリアント」、または「ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント」は、ＳＩＲＰ−α
Ｄ１ドメイン、またはＳＩＲＰ−αポリペプチドのＣＤ４７結合部分を含み、ＣＤ４７
に対する親和性が野生型ＳＩＲＰ−αより高いポリペプチドを指す。高親和性ＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントは、野生型ＳＩＲＰ−αに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換、
欠失、もしくは挿入（またはそれらの組合せ）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント
は、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では
、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１〜１０に示される野生型Ｄ１ド
メインに対して、１つ以上のアミノ酸置換、挿入、付加、または欠失を含む。表２は、各
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインバリアント（配列番号１３〜２２）における例示的なアミノ
酸置換を示す。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインポリペプチドま
たは高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、該Ｄ１ドメインの断片を含む。いくつか
の実施形態では、該ＳＩＲＰ−αポリペプチドの断片または高親和性ＳＩＲＰ−αバリア
ントの断片は、長さ１０アミノ酸未満、長約１０アミノ酸、長さ約２０アミノ酸、長さ約
３０アミノ酸、長さ約４０アミノ酸、長さ約５０アミノ酸、長さ約６０アミノ酸、長さ約
７０アミノ酸、長さ約８０アミノ酸、長さ約９０アミノ酸、長さ約１００アミノ酸、また
は長さ約１００アミノ酸超のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインの断片は、ＣＤ４７に対する結合能を保持している。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開示のポリ
ペプチドは、野生型ヒトＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより高い結合親和性でＣＤ４７に結
合する。いくつかの実施形態では、該高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然に
存在するＤ１ドメインの親和性の少なくとも１倍（例えば、少なくとも１．５倍、２倍、
２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、５倍、または５倍超）の親和性でヒトＣＤ４７に結合
する。いくつかの実施形態では、該高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然に存
在するＤ１ドメインの親和性の少なくとも１倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、
１０００倍、または１０００倍超）の親和性でヒトＣＤ４７に結合する。
本明細書で使用される、用語「最適化親和性」または「最適化結合親和性」は、高親和
性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含めた本明細書に開示するポリペプチドとＣＤ４７間
の最適化された結合相互作用の強さを指す。例えば、いくつかの実施形態では、該ポリペ
プチドは、主に、またはより高い親和性でがん細胞のＣＤ４７に対して結合し、非がん細
胞のＣＤ４７に対しては、実質的に結合しないか、またはより低い親和性で結合する。い
くつかの実施形態では、該ポリペプチドとＣＤ４７間の結合親和性は、該相互作用が、臨
床的に意義のある毒性を引き起こさないか、または最大限の親和性で結合するバリアント
と比較して毒性を減少させるように最適化される。いくつかの実施形態では、本明細書に
提供するポリペプチドとＣＤ４７間の最適化結合親和性を達成するため、高親和性ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントを含む該ポリペプチドは、ＣＤ４７に対して、最大限に達成可能
であるよりも低い結合親和性を有するように開発される。いくつかの実施形態では、本明
細書に開示する高親和性ＳＩＲＰ−αバリアントは、げっ歯類、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）
、及びヒトＣＤ４７と交差反応する。
本明細書で使用される、用語「免疫原性」は、それが外来抗原であるかのように宿主に
おいて免疫反応を引き起こすタンパク質（例えば、治療用タンパク質）の性質を指す。タ
ンパク質の免疫原性は、インビトロＴ細胞増殖アッセイ等の様々な異なる方法で、インビ
トロでアッセイすることができる。
本明細書で使用される、用語「最小限の免疫原性」は、例えば、アミノ酸置換によって
、該アミノ酸置換が導入される前（例えば、未修飾のタンパク質）の免疫原性より低く（
例えば、少なくとも１０％、２５％、５０％、または１００％低く）なるように修飾され
たタンパク質（例えば、治療用タンパク質）の免疫原性を指す。いくつかの実施形態では
、タンパク質（例えば、治療用タンパク質）は、最小限の免疫原性を有するように修飾さ
れ、それが外来抗原であっても、宿主の免疫反応を全く、またはほとんど引き起こさない
。
いくつかの実施形態では、該高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、最小限の免疫
原性を有する。いくつかの実施形態では、対象に投与される本開示のＳＩＲＰ−αポリペ
プチドは、当該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントの親和性を増加させるアミノ酸の変化を除
いて、該対象の生体試料におけるＳＩＲＰ−αポリペプチドのものと同じアミノ酸配列を
有する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するポリペプチドのバリアントは、抗
ＣＤ４７抗体または野生型ＳＩＲＰ−αと比較して副作用のリスクを低下させる。いくつ
かの実施形態では、本明細書に開示するポリペプチドのバリアントは、抗ＣＤ４７抗体ま
たは野生型ＳＩＲＰ−αと比較して貧血のリスクを低下させる。いくつかの実施形態では
、本明細書に開示するポリペプチドのバリアントは、げっ歯類または非ヒト霊長類（ＮＨ
Ｐ）試験において、急性貧血を引き起こさない。
表２は、各Ｄ１ドメイン配列に対する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントにおける
特異的なアミノ酸置換を示す。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バ
リアントは、表２に示す置換の１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４、またはそれを超える）を含む。いくつかの実施形態では、
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大１４のア
ミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは
、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大１０のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態で
は、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大７つ
のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントは、野生型Ｄ１ドメインの配列に対して、少なくとも９０％（例えば、少なく
とも９２％、９５％、９７％、または９７％超）のアミノ酸配列同一性を有する。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、２つ以上の野生
型Ｄ１ドメインまたはそのバリアントの部分（例えば、１つの野生型Ｄ１ドメインまたは
そのバリアントの部分及び別の野生型Ｄ１ドメインまたはそのバリアントの部分）を含む
キメラ高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントである。いくつかの実施形態では、キメラ
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、野生型Ｄ１ドメインまたはそのバリアントの
少なくとも２つの部分（例えば、３、４、５、またはそれを超える部分）を含み、該部分
の各々は、異なる野生型Ｄ１ドメイン由来である。いくつかの実施形態では、キメラ高親
和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、さらに、表２に示すアミノ酸置換の１つ以上を含
む。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＤＶＥ
Ｘ１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１３）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、また
はＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＡ、Ｉ、
またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、
Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ
１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり
、Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＧＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＤＶＥ
Ｘ１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１６）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、また
はＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＡ、Ｉ、
またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、
Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ
１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり
、Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号４の配列を有する野生型ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＦＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＤＶＥ
Ｘ１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１７）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、また
はＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＡ、Ｉ、
またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、
Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ
１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり
、Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号５の配列を有する野生型ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＰＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＤＶＥ
Ｘ１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１８）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、また
はＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＡ、Ｉ、
またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、
Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ
１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり
、Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号６の配列を有する野生型ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＤＶＥ
Ｘ１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、また
はＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＡ、Ｉ、
またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、
Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ
１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり
、Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号９の配列を有する野生型ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
上記実施形態のいずれかにおいて、ポリペプチドは、配列番号１３、１６〜１８、及び
２１のいずれか１つであって、Ｘ１がＬ、Ｉ、またはＶである配列を有する高親和性ＳＩ
ＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、ま
たはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＡまたはＶである。上記実施形
態のいずれかにおいて、Ｘ４はＡ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおい
て、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＥ、
Ｖ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＫまたはＲである。上記
実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＥまたはＱである。上記実施形態のいずれかにおい
て、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０はＬ、Ｔ
、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＫまたはＲである。上記
実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１２はＶまたはＩである。上記実施形態のいずれかにお
いて、Ｘ１３はＦ、Ｌ、Ｖである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１４はＦまたは
Ｖである。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１、４
〜６、及び９のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して
、６個以下のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１、４〜６、及び９のいずれか
１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親
和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１、
４〜６、及び９のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少
なくとも１００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポ
リペプチドは、配列番号１、４〜６、及び９のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は
、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１
０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は
、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約
１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐ
Ｍ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＴＥＸ
１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１４）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、または
Ｖであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ、Ｉ、ま
たはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ
７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１
０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり、
Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−
α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＬＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＴＥＸ
１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１５）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、または
Ｖであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ、Ｉ、ま
たはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ
７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１
０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり、
Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号３の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−
α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＴＥＸ
１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＧＫＰＳ（配列番号１９）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、または
Ｖであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ、Ｉ、ま
たはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ
７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１
０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり、
Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号７の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−
α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＴＥＸ
１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２２）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、または
Ｖであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ、Ｉ、ま
たはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ
７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１
０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり、
Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号１０の配列を有する野生型ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
本開示の本態様における上記実施形態のいずれかにおいて、該ポリペプチドは、配列番
号１４、１５、１９、及び２２のいずれか１つであって、Ｘ１がＬ、Ｉ、またはＶである
配列を有する。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩである。上記
実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＡまたはＶである。上記実施形態のいずれかにおい
て、Ｘ４はＶ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ５はＩ、Ｔ、
Ｓ、またはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬである
。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれか
において、Ｘ８はＥまたはＱである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＨ、Ｐ、
またはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０はＳ、Ｔ、またはＧである。
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれか
において、Ｘ１２はＶまたはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１３はＦ、
Ｌ、またはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１４はＦまたはＶである。い
くつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２、３、７、及び１
０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、６個以下
のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２、３、７、及び１０のいずれ
か１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合
親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２
、３、７、及び１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインよ
り少なくとも１００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、
該ポリペプチドは、配列番号２、３、７、及び１０のいずれか１つの配列を有する野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合
する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその
断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１
０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合
する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその
断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎ
Ｍ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１
００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する
。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１２ＫＸ１３ＲＫＧＳＰＤＴＥＸ
１４ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２０）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ、または
Ｖであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＡ、Ｉ、ま
たはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ
７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１
０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＶまたはＩであり、
Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ１４はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含み、該バリアントは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−
α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２０であって、Ｘ１がＬ、Ｉ、
またはＶである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２
はＶ、Ｌ、またはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＡまたはＶである
。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＡ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のい
ずれかにおいて、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて
、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＫまたはＲ
である。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＥまたはＱである。上記実施形態のい
ずれかにおいて、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
１０はＳ、Ｔ、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＫまたはＲ
である。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１２はＶまたはＩである。上記実施形態の
いずれかにおいて、Ｘ１３はＦ、Ｌ、またはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて
、Ｘ１４はＦまたはＶである。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチド
は、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、６個以下の
アミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いく
つかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつか
の実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ
１ドメインより少なくとも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの
実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １
ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、
１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの
実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５
００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜
５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１０
０ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＸ１Ｘ２ＱＸ３ＩＱＰＤＫＸ４ＶＸ５ＶＡＡＧＥＸ６Ｘ７Ｘ８ＬＸ９ＣＴＸ１０ＴＳ
ＬＸ１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ１２ＲＸ１３ＬＩＹＮＱＸ１４Ｘ１５ＧＸ１６Ｆ
ＰＲＶＴＴＶＳＸ１７Ｘ１８ＴＸ１９ＲＸ２０ＮＭＤＦＸ２１ＩＸ２２ＩＸ２３ＮＩＴＰ
ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ２４ＫＸ２５ＲＫＧＳＰＤＸ２６Ｘ２７ＥＸ２８ＫＳＧＡＧＴＥＬＳ
ＶＲＸ２９ＫＰＳ（配列番号２３）であって、Ｘ１はＥまたはＧであり、Ｘ２はＬ、Ｉ、
またはＶであり、Ｘ３はＶ、Ｌ、または、Ｉであり、Ｘ４はＳまたはＦであり、Ｘ５はＬ
またはＳであり、Ｘ６はＳまたはＴであり、Ｘ７はＡまたはＶであり、Ｘ８はＩまたはＴ
であり、Ｘ９はＨまたはＲであり、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ１１はＩ、
Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ１２はＡまたはＧであり、Ｘ１３はＥ、Ｖ、またはＬであり
、Ｘ１４はＫまたはＲであり、Ｘ１５はＥまたはＱであり、Ｘ１６はＨ、Ｐ、またはＲで
あり、Ｘ１７はＤまたはＥであり、Ｘ１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１９はＫま
たはＲであり、Ｘ２０はＥまたはＤであり、Ｘ２１はＳまたはＰであり、Ｘ２２はＳまた
はＲであり、Ｘ２３はＳまたはＧであり、Ｘ２４はＶまたはＩであり、Ｘ２５はＦ、Ｌ、
Ｖであり、Ｘ２６はＤであるか、または存在せず、Ｘ２７はＴまたはＶであり、Ｘ２８は
ＦまたはＶであり、Ｘ２９はＡまたはＧである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
トを含み、該バリアントは、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩ
ＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有する。
本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＬ、Ｉ、またはＶである。
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＶ、Ｌ、またはＩである。上記実施形態のいず
れかにおいて、Ｘ４はＳまたはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ５はＬま
たはＳである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＳまたはＴである。上記実施形
態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡまたはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
８はＩまたはＴである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＨまたはＲである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態の
いずれかにおいて、Ｘ１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。上記実施形態のいずれかにお
いて、Ｘ１２はＡまたはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１３はＥ、Ｖ、
またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１４はＫまたはＲである。上記実
施形態のいずれかにおいて、Ｘ１５はＥまたはＱである。上記実施形態のいずれかにおい
て、Ｘ１６はＨ、Ｐ、またはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１７はＤま
たはＥである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧである
。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１９はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれ
かにおいて、Ｘ２０はＥまたはＤである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２１はＳ
またはＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２２はＳまたはＲである。上記実
施形態のいずれかにおいて、Ｘ２３はＳまたはＧである。上記実施形態のいずれかにおい
て、Ｘ２４はＶまたはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２５はＦ、Ｌ、Ｖ
である。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２６はＤであるか、または存在しない。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２７はＴまたはＶである。上記実施形態のいずれかに
おいて、Ｘ２８はＦまたはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２９はＡまた
はＧである。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１〜
１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、６個以
下のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列
を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ
４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１〜１０のいず
れか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い
結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番
号１〜１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なく
とも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５
ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満
、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ
、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１
ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、ま
たは約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開示のポリ
ペプチドは、さらに、表３に示す野生型ＳＩＲＰ−αの配列番号２４の配列を有するＤ２
ドメイン、配列番号２５の配列を有するＤ３ドメイン、または配列番号２４の配列を有す
るＤ２ドメイン、及び配列番号２５の配列を有するＤ３ドメインを含む。いくつかの実施
形態では、該高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、さらに、Ｄ２ドメインの断片も
しくはバリアント、またはＤ３ドメインの断片もしくはバリアントを含む。いくつかの実
施形態では、該高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、さらに、Ｄ２ドメインの断片
またはバリアント、及びＤ３ドメインの断片またはバリアントを含む。いくつかの実施形
態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、リンカーを介してＤ２またはＤ３ド
メインにつながれる。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント
は、リンカーを介してＤ２及びＤ３ドメインにつながれる。
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開示のポリ
ペプチドは、該ポリペプチドの薬物動態学的特性を改善、例えば、血清半減期を延長する
ために、Ｆｃドメインモノマー、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）もしくはそのバリアント
、血清結合タンパク質もしくはペプチド、または有機分子、例えば、ポリマー（例えば、
ＰＥＧポリマー）に結合される。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントは、ダイマー化することができないＦｃドメインモノマーに結合される。いく
つかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマー、ＨＳＡタンパク質、血清結合タンパク質も
しくはペプチド、及びＰＥＧ等の有機分子は、本明細書に記載のポリペプチドの血清半減
期を延長する働きをする。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントを含む本開示のポリペプチドは、表４に示す配列番号２６〜３６のいずれの配列も含
まない。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド及びポリペプチド構築物は、
インビトロで免疫アッセイ等の結合アッセイに使用される。例えば、いくつかの実施形態
では、本明細書に記載のポリペプチド及びポリペプチド構築物は、液相で使用されるか、
または固相担体に結合される。いくつかの実施形態では、イムノアッセイに使用されるポ
リペプチドは、様々な方法で検出可能に標識される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド及びポリペプチド構築物は、
様々な担体に結合され、特定の抗原発現細胞の存在を検出するために用いられる。担体の
例としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナ
イロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、なら
びにマグネタイトが挙げられる。該担体の性質は、可溶性でも不溶性でもよい。
様々な異なる標識及び標識方法が知られている。標識の例としては酵素、放射性同位体
、蛍光化合物、コロイド金属、化学発光化合物、及び生物発光化合物が挙げられる。本明
細書に開示するポリペプチドに標識を結合するために様々な技術が利用可能である。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは低分子量ハプテンに結合される。これらハ
プテンは、その後第二の反応によって特異的に検出される。例えば、いくつかの実施形態
では、該ハプテンであるビオチンは、アビジンとともに使用されるか、または、該ハプテ
ンであるジニトロフェノール、ピリドキサール、もしくはフルオレセインは、特定の抗ハ
プテン抗体（例えば、それぞれ、抗ジニトロフェノール抗体、抗ピリドキサール抗体、及
び抗フルオレセイン抗体）で検出される。
ＩＩ．グリコシル化が変化した高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される該ポリペプチ
ドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する組成物におけるポリペプチドは、グリコ
シル化が減少した、または最小限である高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。
１０種の野生型ヒトＳＩＲＰ−αタンパク質の各々のＤ１ドメイン（表１の配列番号１〜
１０）は、配列Ｎ８０ＩＴＰのアミノ酸Ｎ８０で、単一の潜在的Ｎ結合型グリコシル化部
位を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞におけるＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インの発現は、１６ｋＤａ（非グリコシル化）の主要なバンド及びＥｎｄｏ Ｈｆで除去
されたより高分子量の軽微なバンドという結果になる。Ｅｎｄｏ Ｈｆは、エンドグリコ
シダーゼＨとマルトース結合タンパク質の組み換えタンパク質融合物である。Ｅｎｄｏ
Ｈｆは、高マンノースのキトビオースコア内及びいくつかのハイブリッドオリゴ糖内でＮ
結合型糖タンパク質から切断する。このことは、アミノ酸位置８３のプロリンが、グリコ
シル化の効率を下げることができ、異なるグリコシル化度、ひいては不均一度のタンパク
質をもたらすことを意味する。医薬品開発にとって、不均一性はプロセス開発における課
題を生じさせる場合がある。従って、高親和性ＳＩＰＲ−α Ｄ１バリアントの均一な非
グリコシル化形態を生成する可能性を調べるため、いくつかの実施形態では、ＳＩＰＲ−
α Ｄ１バリアントのアミノ酸Ｎ８０はＡｌａに変異させられる。いくつかの実施形態で
は、非グリコシル化高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを製造するため、高親和性Ｓ
ＩＲＰ−α Ｄ１バリアントのアミノ酸Ｎ８０は、任意の天然及び非天然アミノ酸を含め
た任意のアミノ酸で置換され、例えば、Ｎ８０Ａ及びＮ８０Ｑである。いくつかの実施形
態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、Ｎ８０Ａの変異及び少なくとも１つ
のさらなる変異（例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０の
またはそれを超えるさらなる変異）を含む。いくつかの実施形態では、該さらなる変異は
、ＣＤ４７の結合部位にある。いくつかの実施形態では、該さらなる変異は、Ｄ１ドメイ
ンの疎水性コアにある。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する組成物におけるポリペプチドは、野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインと比較してグリコシル化が増加した高親和性ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含む。最終産物の均質性を高める別の選択肢は、アミノ酸Ｎ８０でのグ
リコシル化の効率を高め、野生型と比較してグリコシル化が増加した高親和性ＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントを生成することである。いくつかの実施形態では、配列ＮＩＴＰ８３
のアミノ酸Ｐ８３が、アミノ酸Ｎ８０でのグリコシル化度に影響を与える。いくつかの実
施形態では、Ｐ８３を任意のアミノ酸に変更することが、Ｎ８０でのグリコシル化の効率
を高める。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントのアミノ酸
Ｐ８３は、天然及び非天然アミノ酸を含めた任意のアミノ酸で置換され、例えば、Ｐ８３
Ｖ、Ｐ８３Ａ、Ｐ８３Ｉ、及びＰ８３Ｌである。いくつかの実施形態では、本開示のポリ
ペプチドは、例えば、当該細胞株の遺伝子操作（例えば、遺伝子組み換え酵母もしくは哺
乳類宿主）もしくはキフネンシンの添加等の細胞培養条件の変更によって、または原核生
物（Ｅ．ｃｏｌｉ等）等の元々グリコシル化しない宿主を使用することによって、当該細
胞によって発現されるタンパク質をグリコシル化しないように最適化される細胞で発現さ
れる。
表５は、各Ｄ１ドメインバリアント配列に対する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
トにおける特異的なアミノ酸置換を示す。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントは、表５に示す置換の１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０、１１、１２、１３、１４、またはそれを超える）を含む。いくつかの実施
形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、グリコシル化されないか、または最小限
にグリコシル化される。いくつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、
完全にグリコシル化されるか、またはほぼ完全にグリコシル化される。いくつかの実施形
態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大
１４のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリ
アントは、野生型Ｄ１ドメインに対して、最大１０のアミノ酸置換を含む。いくつかの実
施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、野生型Ｄ１ドメインに対して、
最大７つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の高親和性ＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントは、野生型Ｄ１ドメインの配列に対して、少なくとも９０％（例えば
、少なくとも９２％、９５％、９７％、または９７％超）のアミノ酸配列同一性を有する
。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、２つ以上の野生
型Ｄ１ドメインまたはそのバリアントの部分（例えば、１つの野生型Ｄ１ドメインまたは
そのバリアントの部分及び別の野生型Ｄ１ドメインまたはそのバリアントの部分）を含む
キメラ高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントである。いくつかの実施形態では、キメラ
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、野生型Ｄ１ドメインまたはそのバリアントの
少なくとも２つの部分（例えば、３、４、５、またはそれを超える部分）を含み、該部分
の各々は、異なる野生型Ｄ１ドメイン由来である。いくつかの実施形態では、キメラ高親
和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、さらに、表５に示すアミノ酸置換の１つ以上を含
む。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＤＶＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３７）であって、Ｘ１はＬ、
Ｉ、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４は
Ａ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬ
であり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲで
あり、Ｘ１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであ
り、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、
Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり
、Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリ
アントは、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なく
とも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＧＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＤＶＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４０）であって、Ｘ１はＬ、
Ｉ、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４は
Ａ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬ
であり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲで
あり、Ｘ１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであ
り、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、
Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり
、Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリ
アントは、配列番号４の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なく
とも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＦＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＤＶＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４１）であって、Ｘ１はＬ、
Ｉ、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４は
Ａ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬ
であり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲで
あり、Ｘ１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであ
り、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、
Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり
、Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリ
アントは、配列番号５の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なく
とも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＰＩＲＩＧＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＤＶＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４２）であって、Ｘ１はＬ、
Ｉ、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４は
Ａ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬ
であり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲで
あり、Ｘ１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであ
り、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、
Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり
、Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリ
アントは、配列番号６の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なく
とも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ１０ＴＸ１
１ＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＤＶＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４５）であって、Ｘ１はＬ、
Ｉ、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４は
Ａ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬ
であり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲで
あり、Ｘ１０はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであ
り、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、
Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり
、Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリ
アントは、配列番号９の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なく
とも１つのアミノ酸置換を有する。
本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、ポリペプチドは、配列番号３７、
４０〜４２、及び４５のいずれか１つであって、Ｘ１がＬ、Ｉ、またはＶである配列を有
するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＶ
、Ｌ、またはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＡまたはＶである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＡ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のいずれ
かにおいて、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
６はＥ、Ｖ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＫまたはＲであ
る。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＥまたはＱである。上記実施形態のいずれ
かにおいて、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０
はＬ、Ｔ、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＫまたはＲであ
る。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１２は、Ｎ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ
、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれか
において、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ
、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１４はＶまたはＩ
である。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１５はＦ、Ｌ、Ｖである。上記実施形態の
いずれかにおいて、Ｘ１６はＦまたはＶである。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するポリペプチドは、配列番号１、４〜６、
及び９のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、１０
個以下のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に提供するポリペプチ
ドは、配列番号１、４〜６、及び９のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１、４〜６、及び９のいずれか
１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親
和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１、
４〜６、及び９のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少
なくとも１００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポ
リペプチドは、配列番号１、４〜６、及び９のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は
、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１
０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は
、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約
１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐ
Ｍ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＴＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３８）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ
、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ
、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬで
あり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであ
り、Ｘ１０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２は、Ｎ、Ａ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであ
り、Ｘ１３は、Ｐ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ
、Ｖ、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであ
り、Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バ
リアントは、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少な
くとも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＬＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＴＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号３９）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ
、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ
、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬで
あり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであ
り、Ｘ１０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、Ｃ
、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり
、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ
、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり、
Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリア
ントは、配列番号３の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なくと
も１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＴＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＧＫＰＳ（配列番号４３）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ
、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ
、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬで
あり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであ
り、Ｘ１０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、Ｃ
、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり
、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ
、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり、
Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリア
ントは、配列番号７の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なく
とも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＸ３ＩＬＨＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＴＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４６）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ
、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＶ
、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬで
あり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであ
り、Ｘ１０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、Ｃ
、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり
、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ
、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり、
Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリア
ントは、配列番号１０の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少な
くとも１つのアミノ酸置換を有する。
本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、ポリペプチドは、配列番号３８、
３９、４３、及び４６のいずれか１つであって、Ｘ１がＬ、Ｉ、またはＶである配列を有
するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＶ
、Ｌ、またはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＡまたはＶである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＶ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のいずれ
かにおいて、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
６はＥ、Ｖ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＫまたはＲであ
る。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＥまたはＱである。上記実施形態のいずれ
かにおいて、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０
はＳ、Ｔ、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＫまたはＲであ
る。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１２はＮ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、
Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれかに
おいて、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、
Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１４はＶまたはＩで
ある。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶである。上記実施形
態のいずれかにおいて、Ｘ１６はＦまたはＶである。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２、３、７、及び１０のいずれか
１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して１０個以下のアミノ酸置
換を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチ
ドは、配列番号２、３、７、及び１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
Ｄ１ドメインに対して７個以下のアミノ酸置換を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント
を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２、３、７、及び１０のいずれ
か１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合
親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２
、３、７、及び１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインよ
り少なくとも１００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、
該ポリペプチドは、配列番号２、３、７、及び１０のいずれか１つの配列を有する野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合
する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその
断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１
０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合
する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその
断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎ
Ｍ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１
００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する
。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＸ１ＱＸ２ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＸ３ＴＬＲＣＴＸ４ＴＳＬＸ５ＰＶＧＰ
ＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ６ＬＩＹＮＱＸ７Ｘ８ＧＸ９ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ１０ＴＸ１
１ＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ１２ＩＴＸ１３ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１４ＫＸ１５ＲＫＧＳＰ
ＤＴＥＸ１６ＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４４）であって、Ｘ１はＬ、Ｉ
、またはＶであり、Ｘ２はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＡまたはＶであり、Ｘ４はＡ
、Ｉ、またはＬであり、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬで
あり、Ｘ７はＫまたはＲであり、Ｘ８はＥまたはＱであり、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲであ
り、Ｘ１０はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１１はＫまたはＲであり、Ｘ１２はＮ、Ａ、Ｃ
、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹであり
、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ
、Ｗ、またはＹであり、Ｘ１４はＶまたはＩであり、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶであり、
Ｘ１６はＦまたはＶである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリア
ントは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なく
とも１つのアミノ酸置換を有する。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号４４であって、Ｘ１がＬ、Ｉ、
またはＶである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２
はＶ、Ｌ、またはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＡまたはＶである
。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＡ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のい
ずれかにおいて、Ｘ５はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて
、Ｘ６はＥ、Ｖ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＫまたはＲ
である。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＥまたはＱである。上記実施形態のい
ずれかにおいて、Ｘ９はＨ、Ｐ、またはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
１０はＳ、Ｔ、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＫまたはＲ
である。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１２はＮ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、
Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれ
かにおいて、Ｘ１３はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、
Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１４はＶまたは
Ｉである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１５はＦ、Ｌ、またはＶである。上記実
施形態のいずれかにおいて、Ｘ１６はＦまたはＶである。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ
−α Ｄ１ドメインに対して１０個以下のアミノ酸置換を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリ
アントを含む。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野
生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して７個以下のアミノ酸置換を有するＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いく
つかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつか
の実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号８の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ
１ドメインより少なくとも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの
実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １
ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、
１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの
実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５
００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜
５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１０
０ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
別の態様において、本開示は、
ＥＥＸ１Ｘ２ＱＸ３ＩＱＰＤＫＸ４ＶＸ５ＶＡＡＧＥＸ６Ｘ７Ｘ８ＬＸ９ＣＴＸ１０ＴＳ
ＬＸ１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ１２ＲＸ１３ＬＩＹＮＱＸ１４Ｘ１５ＧＸ１６Ｆ
ＰＲＶＴＴＶＳＸ１７Ｘ１８ＴＸ１９ＲＸ２０ＮＭＤＦＸ２１ＩＸ２２ＩＸ２３Ｘ２４Ｉ
ＴＸ２５ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ２６ＫＸ２７ＲＫＧＳＰＤＸ２８Ｘ２９ＥＸ３０ＫＳＧＡＧ
ＴＥＬＳＶＲＸ３１ＫＰＳ（配列番号４７）であって、Ｘ１はＥまたはＧであり、Ｘ２は
Ｌ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ３はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ４はＳまたはＦであり、Ｘ
５はＬまたはＳであり、Ｘ６はＳまたはＴであり、Ｘ７はＡまたはＶであり、Ｘ８はＩま
たはＴであり、Ｘ９はＨ、Ｒ、またはＬであり、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬであり、
Ｘ１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ１２はＡまたはＧであり、Ｘ１３はＥ、Ｖ、ま
たはＬであり、Ｘ１４はＫまたはＲであり、Ｘ１５はＥまたはＱであり、Ｘ１６はＨ、Ｐ
、またはＲであり、Ｘ１７はＤまたはＥであり、Ｘ１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、
Ｘ１９はＫまたはＲであり、Ｘ２０はＥまたはＮであり、Ｘ２１はＳまたはＰであり、Ｘ
２２はＳまたはＲであり、Ｘ２３はＳまたはＧであり、Ｘ２４は任意のアミノ酸であり、
Ｘ２５は任意のアミノ酸であり、Ｘ２６はＶまたはＩであり、Ｘ２７はＦ、Ｌ、Ｖであり
、Ｘ２８はＤであるか、または存在せず、Ｘ２９はＴまたはＶであり、Ｘ３０はＦまたは
Ｖであり、Ｘ３１はＡまたはＧである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み
、該バリアントが、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
Ｄ１ドメインに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有するポリペプチドを特徴と
する。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号４７であって、Ｘ１がＥまたは
Ｇである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＬ、
Ｉ、またはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＶ、Ｌ、またはＩである
。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＳまたはＦである。上記実施形態のいずれか
において、Ｘ５はＬまたはＳである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＳまたは
Ｔである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡまたはＶである。上記実施形態の
いずれかにおいて、Ｘ８はＩまたはＴである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９は
Ｈ、Ｒ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ、また
はＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦである。
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１２はＡまたはＧである。上記実施形態のいずれか
において、Ｘ１３はＥ、Ｖ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１４
はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１５はＥまたはＱである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１６はＨ、Ｐ、またはＲである。上記実施形態のいず
れかにおいて、Ｘ１７はＤまたはＥである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１８は
Ｓ、Ｌ、Ｔ、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１９はＫまたはＲで
ある。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２０はＥまたはＮである。上記実施形態のい
ずれかにおいて、Ｘ２１はＳまたはＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２２
はＳまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２３はＳまたはＧである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２４はＮ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ
、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれかにおいて
、Ｘ２５はＰ、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ
、Ｗ、またはＹである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２６はＶまたはＩである。
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２７はＦ、Ｌ、Ｖである。上記実施形態のいずれか
において、Ｘ２８はＤであるか、または存在しない。上記実施形態のいずれかにおいて、
Ｘ２９はＴまたはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３０はＦまたはＶであ
る。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３１はＡまたはＧである。
いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１〜１０のいず
れか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミ
ノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号
１〜１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、７
個以下のアミノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列
を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ
４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１〜１０のいず
れか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い
結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番
号１〜１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なく
とも１０００倍高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５
ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満
、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ
、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１
ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、ま
たは約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＸ２ＶＡＡＧＥＸ３ＡＸ４ＬＸ５ＣＴＸ６ＴＳＬＸ７Ｐ
ＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ８ＲＸ９ＬＩＹＮＱＸ１０Ｘ１１ＧＸ１２ＦＰＲＶＴＴＶＳ
Ｘ１３Ｘ１４ＴＫＲＸ１５ＮＭＤＦＳＩＸ１６ＩＸ１７Ｘ１８ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ
１９ＫＦＲＫＧＸ２０Ｘ２１Ｘ２２ＤＸ２３ＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列
番号４８）であって、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２はＬまたはＳであり、Ｘ３はＴまた
はＳであり、Ｘ４はＴまたはＩであり、Ｘ５はＲまたはＨであり、Ｘ６はＡ、Ｖ、または
Ｉであり、Ｘ７はＩ、Ｒ、Ｙ、ＫまたはＦであり、Ｘ８はＧまたはＡであり、Ｘ９はＥま
たはＶであり、Ｘ１０はＫまたはＲであり、Ｘ１１はＥ、ＤまたはＱであり、Ｘ１２はＨ
またはＰであり、Ｘ１３はＤまたはＥであり、Ｘ１４はＳ、ＬまたはＴであり、Ｘ１５は
ＮまたはＥであり、Ｘ１６はＲまたはＳであり、Ｘ１７はＧまたはＳであり、Ｘ１８はＮ
またはＡであり、Ｘ１９はＶまたはＩであり、Ｘ２０はＳ、ＩまたはＭであり、Ｘ２１は
Ｐであるか、または存在せず、Ｘ２２はＤまたはＰであり、Ｘ２３はＶまたはＴである配
列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント、またはその断片を含む。
別の態様において、本開示は、
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭ
ＤＦＳＩＲＩＧＸ９ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１０ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧ
ＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４９）であって、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２
はＡ、Ｉ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ３はＩ、Ｆ、Ｓ、またはＴであり、Ｘ４はＥ、Ｖ、ま
たはＬであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７はＨ、Ｐ、また
はＲであり、Ｘ８はＬ、Ｔ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ９はＡであり、Ｘ１０はＶまたはＩ
である配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントが、配列番号１
のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも
１つのアミノ酸置換を有するポリペプチドを特徴とする。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号４９であって、Ｘ１がＶ、Ｌま
たはＩである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２は
Ａ、Ｉ、Ｖ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＩ、Ｆ、Ｓ、ま
たはＴである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＥ、Ｖ、またはＬである。上記
実施形態のいずれかにおいて、Ｘ５はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおい
て、Ｘ６はＥまたはＱである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＨ、Ｐ、または
Ｒである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＬ、Ｔ、ＳまたはＧである。上記実
施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＡである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０
はＶまたはＩである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、各Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６
、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、及びＸ１０が野生型アミノ酸ではない配列番号４９に対して、少な
くとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、また
は１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のいずれか１
つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置
換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のい
ずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミ
ノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配列を有す
る野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ４７に
結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配
列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い結合親和性で
ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれ
か１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い
結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、
１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−
１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５
０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５
００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１
０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
別の態様において、本開示は、
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
ＷＦＲＧＡＧＰＡＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ８ＴＫＲＥＮＭ
ＤＦＳＩＳＩＳＸ９ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１０ＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴ
ＥＬＳＶＲＡＫＰＳ、（配列番号５０）であって、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２はＶま
たはＩであり、Ｘ３はＩまたはＦであり、Ｘ４はＥまたはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲで
あり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７はＨまたはＰであり、Ｘ８はＳまたはＴであり、Ｘ
９はＮまたはＡであり、Ｘ１０はＶまたはＩである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリ
アントを含み、該バリアントが、配列番号２のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するポリペプチドを特
徴とする。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５０であって、Ｘ１がＶまたは
Ｉである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＶま
たはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＩまたはＦである。上記実施形
態のいずれかにおいて、Ｘ４はＥまたはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
５はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＥまたはＱである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＨまたはＰである。上記実施形態のいずれかにお
いて、Ｘ８はＳまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＮまたはＡで
ある。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０はＶまたはＩである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、各Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６
、Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、及びＸ１０が野生型アミノ酸ではない配列番号５０に対して、少な
くとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０
％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、また
は１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２のいずれか１
つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置
換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２のい
ずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミ
ノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２のいずれか１つの配列を有す
る野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ４７に
結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２のいずれか１つの配
列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い結合親和性で
ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２のいずれ
か１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い
結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、
１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−
１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５
０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５
００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１
０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
別の態様において、本開示は、
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５ＥＧＸ６ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ７ＴＫＲＮＮＭＤ
ＦＳＩＲＩＧＸ８ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ９ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥ
ＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５１）であって、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２はＡまたは
Ｉであり、Ｘ３はＩまたはＦであり、Ｘ４はＥまたはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲであり
、Ｘ６はＨまたはＰであり、Ｘ７はＬまたはＴであり、Ｘ８はＮ以外の任意のアミノ酸で
あり、Ｘ９はＶまたはＩである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バ
リアントが、配列番号１のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイ
ンに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するポリペプチドを特徴とする。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５１であって、Ｘ１がＶまたは
Ｉである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＡま
たはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＩまたはＦである。上記実施形
態のいずれかにおいて、Ｘ４はＥまたはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
５はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＨまたはＰである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＬまたはＴである。上記実施形態のいずれかにお
いて、Ｘ８はＮまたはＡである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＶまたはＩで
ある。いくつかの実施形態では、Ｘ４はＶではない。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５１であって、Ｘ８がＡである
配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ
１はＶまたはＩである。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡで
あり、Ｘ２はＡまたはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ
３はＩまたはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ４はＥま
たはＶである。いくつかの実施形態では、Ｘ４はＶではない。上記実施形態のいずれかに
おいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ５はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、
Ｘ８はＡであり、Ｘ６はＨまたはＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡ
であり、Ｘ７はＡまたはＶである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、
Ｘ９はＶまたはＩである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５１であって、Ｘ８がＡである
配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ
１はＩである。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ
２はＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ３はＦである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ４はＶである。上記実施形態のいず
れかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ５はＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
８はＡであり、Ｘ６はＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ
７はＴである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ８はＡであり、Ｘ９はＩである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、各Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６
、Ｘ７、Ｘ８、及びＸ９が野生型アミノ酸ではない配列番号５１に対して、少なくとも８
５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１
％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００
％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のいずれか１
つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置
換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のい
ずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミ
ノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配列を有す
る野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ４７に
結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配
列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い結合親和性で
ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれ
か１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い
結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未満、５ｘ１０−９Ｍ未満、
１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−
１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５
０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５
００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１
０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
別の態様において、本開示は、
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＸ４ＥＧＸ５ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ６ＴＫＲＮＮＭＤＦ
ＳＩＲＩＧＸ７ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳ
ＶＲＡＫＰＳ（配列番号５２）であって、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２はＡ、Ｉ
、またはＬであり、Ｘ３はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ４はＫまたはＲであり、Ｘ５
はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ６はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ７はＮまたはＡである配
列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントが、配列番号１の配列を
有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を有す
るポリペプチドを特徴とする。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５２であって、Ｘ１がＶ、Ｌま
たはＩである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２は
Ａ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＩ、Ｔ、Ｓ、または
Ｆである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＫまたはＲである。上記実施形態の
いずれかにおいて、Ｘ５はＨまたはＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６は
Ｌ、Ｔ、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＮまたはＡである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５２であって、Ｘ１がＶまたは
Ｉである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＡま
たはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＩまたはＦである。上記実施形
態のいずれかにおいて、Ｘ４はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
５はＨまたはＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＬまたはＴである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＮまたはＡである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５２であって、Ｘ７がＡである
配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ
１はＶまたはＩである。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡで
あり、Ｘ２はＡまたはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ
３はＩまたはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ４はＫま
たはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ５はＨまたはＰで
ある。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ６はＬまたはＴである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号５２であって、Ｘ７がＡである
配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ
１はＩである。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ
２はＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ３はＦである。上
記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ４はＲである。上記実施形態のいず
れかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ５はＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ
７はＡであり、Ｘ６はＴである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、各Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６
、及びＸ７が野生型アミノ酸ではない配列番号５２に対して、少なくとも８５％の配列同
一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、
９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一
性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のいずれか１
つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置
換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号１のい
ずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミ
ノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配列を有す
る野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ４７に
結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれか１つの配
列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い結合親和性で
ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号１のいずれ
か１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い
結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、断片は、長さ１０アミノ酸
未満、長さ約１０アミノ酸、長さ約２０アミノ酸、長さ約３０アミノ酸、長さ約４０アミ
ノ酸、長さ約５０アミノ酸、長さ約６０アミノ酸、長さ約７０アミノ酸、長さ約８０アミ
ノ酸、長さ約９０アミノ酸、長さ約１００アミノ酸、または長さ約１００アミノ酸超のポ
リペプチドを含む。断片は、ＣＤ４７に対する結合能を保持する。好ましくは、ＳＩＲＰ
−α Ｄ１バリアントポリペプチド及びその断片は、ＳＩＲＰ−αポリペプチドがＣＤ４
７に結合するより高い親和性でＣＤ４７に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未
満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０
Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１０
０ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎ
Ｍ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐ
Ｍ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
別の態様において、本開示は、
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
ＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＸ４ＥＧＸ５ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ６ＴＫＲＥＮＭＤＦ
ＳＩＳＩＳＸ７ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶ
ＲＡＫＰＳ（配列番号２１２）であって、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２はＶ、Ｉ
、またはＬであり、Ｘ３はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ４はＫまたはＲであり、Ｘ５
はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ６はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ７はＡである配列を有す
るＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該バリアントが、配列番号２のいずれか１つの
配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸置換
を有するポリペプチドを特徴とする。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２１２であって、Ｘ１がＶ、Ｌ
またはＩである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２
はＶ、Ｉ、またはＬである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＩ、Ｔ、Ｓ、また
はＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＫまたはＲである。上記実施形態
のいずれかにおいて、Ｘ５はＨまたはＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６
はＳ、Ｔ、またはＧである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２１２であって、Ｘ１がＶまた
はＩである配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ２はＶ
またはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ３はＩまたはＦである。上記実施
形態のいずれかにおいて、Ｘ４はＫまたはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、
Ｘ５はＨまたはＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ６はＳまたはＴである。
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２１２であって、Ｘ７がＡであ
る配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、
Ｘ１はＶまたはＩである。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡ
であり、Ｘ２はＶまたはＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡでありＸ
３はＩまたはＦである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ４はＫま
たはＲである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ５はＨまたはＰで
ある。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ６はＳまたはＴである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２１２であって、Ｘ７がＡであ
る配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、
Ｘ１はＩである。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、
Ｘ２はＩである。上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ３はＦである。
上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ４はＲである。上記実施形態のい
ずれかにおいて、Ｘ７はＡであり、Ｘ５はＰである。上記実施形態のいずれかにおいて、
Ｘ７はＡであり、Ｘ６はＴである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、各Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６
、及びＸ７が野生型アミノ酸ではない配列番号２１２に対して、少なくとも８５％の配列
同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同
一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを有する。
いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２のいずれか１
つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、１０個以下のアミノ酸置
換を含む。いくつかの実施形態では、本開示の本態様のポリペプチドは、配列番号２のい
ずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、７個以下のアミ
ノ酸置換を含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２のいずれか１つの配列を有す
る野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０倍高い結合親和性でＣＤ４７に
結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２のいずれか１つの配
列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１００倍高い結合親和性で
ＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２のいずれ
か１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより少なくとも１０００倍高い
結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、断片は、長さ１０アミノ酸
未満、長さ約１０アミノ酸、長さ約２０アミノ酸、長さ約３０アミノ酸、長さ約４０アミ
ノ酸、長さ約５０アミノ酸、長さ約６０アミノ酸、長さ約７０アミノ酸、長さ約８０アミ
ノ酸、長さ約９０アミノ酸、長さ約１００アミノ酸、または長さ約１００アミノ酸超のポ
リペプチドを含む。断片は、ＣＤ４７に対する結合能を保持する。好ましくは、ＳＩＲＰ
−α Ｄ１バリアントポリペプチド及びその断片は、ＳＩＲＰ−αポリペプチドがＣＤ４
７に結合するより高い親和性でＣＤ４７に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ １ｘ１０−８Ｍ未
満、５ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−９Ｍ未満、５ｘ１０−１０Ｍ未満、１ｘ１０−１０
Ｍ未満、または１ｘ１０−１１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＫＤ約５００ｎＭ〜１０
０ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎ
Ｍ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐ
Ｍ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭでＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳ
ＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩ
ＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＸ９Ｘ１０Ｘ
１１Ｘ１２ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１３ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡ
ＫＰＳ（配列番号２１８）であって、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２はＡ、Ｖ、Ｌ
、またはＩであり、Ｘ３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、Ｘ４はＥ、Ｌ、またはＶであり
、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７はＨ、Ｒ、またはＰであり、
Ｘ８はＳ、Ｇ、Ｌ、またはＴであり、Ｘ９は任意のアミノ酸であり、Ｘ１０は任意のアミ
ノ酸であり、Ｘ１１は任意のアミノ酸であり、Ｘ１２は任意のアミノ酸であり、Ｘ１３は
ＶまたはＩである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含み、該ＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対し
て少なくとも２つのアミノ酸置換を有するポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号２１２であって、Ｘ９がＡであ
る配列を有する。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＮである。
本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１０はＩである。本開示の本態様
の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＮであり、Ｘ１０はＰである。本開示の本態
様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＮであり、Ｘ１１は、Ｓ、Ｔ、またはＣ以
外の任意のアミノ酸である。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１
はＴである。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１１はＴ以外の任意
のアミノ酸である。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ１２はＰであ
る。本開示の本態様の上記実施形態のいずれかにおいて、Ｘ９はＮであり、Ｘ１２はＰ以
外の任意のアミノ酸である。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭ
ＤＦＳＩＲＩＧＸ９ＩＴＸ１０ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１１ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧ
ＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１９）であって、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり
、Ｘ２はＡ、Ｖ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、Ｘ４はＥ、
Ｌ、またはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７はＨ、Ｒ
、またはＰであり、Ｘ８はＳ、Ｇ、Ｌ、またはＴであり、Ｘ９はＮであり、Ｘ１０はＰ以
外の任意のアミノ酸であり、Ｘ１１はＶまたはＩである配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含み、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生
型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも２つのアミノ酸置換を有するポリペプ
チドである。
本開示の別の態様において、配列番号４８のアミノ酸配列を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントポリペプチド、またはその断片を含む組成物を開示する。いくつかの実施形態
では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、ＳＩＲＰ−αポ
リペプチドがＣＤ４７に結合する親和性と比較して高い親和性でＣＤ４７に結合する。い
くつかの実施形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドは、ＫＤ １ｘ１
０−８Ｍ未満もしくは１ｘ１０−９Ｍ未満、１ｘ１０−１０Ｍ未満、または１ｘ１０−１
１Ｍ未満でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、上記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリ
アントポリペプチドは、第二のポリペプチドに結合または融合される。いくつかの実施形
態では、該第二のポリペプチドとしては、制限なく、Ｆｃポリペプチド、Ｆｃバリアント
、ＨＳＡポリペプチド、アルブミンペプチド、ＰＥＧポリマー、または上記の断片が挙げ
られる。
上記を制限することなく、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポ
リペプチドは、表６に示す配列番号５３〜８７及び２１３のいずれか１つから選択される
。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、表６に示す任意のバリアントに対して、
少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、表６の配列番号８０、８１、または８５
に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％
、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％
、９９％、または１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン
を含む。
ＩＩＩ．Ｆｃドメインバリアント及び融合構築物
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
細胞表面抗原を標的とする抗体は、免疫細胞におけるＦｃ受容体（ＦｃＲ）の係合に関
与する免疫刺激及びエフェクター機能を誘発することができる。ＩｇＧ（ガンマ受容体）
、ＩｇＥ（イータ受容体）、ＩｇＡ（アルファ受容体）、及びＩｇＭ（ミュー受容体）を
含めた特定の抗体クラスに特異的な複数のＦｃ受容体がある。細胞表面におけるＦｃ受容
体に対するＦｃ領域の結合は、抗体被覆粒子の食作用（抗体依存性細胞媒介食作用、また
はＡＤＣＰ）、免疫複合体の除去、キラー細胞による抗体被覆細胞の溶解（抗体依存性細
胞媒介細胞傷害性、またはＡＤＣＣ）、ならびに炎症性メディエーターの放出、胎盤通過
、及び免疫グロブリン産生の制御を含めた多くの生物学的反応を誘発することができる。
さらに、補体のＣ１成分の抗体に対する結合は、当該補体系を活性化することができる。
補体の活性化は、細胞病原体の溶解にとって重要な場合がある。しかしながら、補体の活
性化はまた、炎症反応を刺激する場合もあり、自己免疫過敏症や他の免疫疾患に関与する
場合もある。ある特定のＦｃ受容体に対する結合能が低減または除去されたバリアントＦ
ｃ領域は、局所細胞や組織を損傷も破壊もせずに、リガンド機能を標的化、活性化、また
は中和することによって作用する治療抗体及びＦｃ融合ポリペプチド構築物を開発するの
に有用である。
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ポリペプチド構築物は、エフェクター機
能が除去または低減されたＦｃドメインを形成するＦｃドメインモノマーに連結された非
天然の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーとは、第二及び第三の抗体定常ドメイ
ン（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３）を含むポリペプチド鎖を指す。いくつかの実施形態では
、Ｆｃドメインモノマーはまた、ヒンジドメインも含む。いくつかの実施形態では、該Ｆ
ｃドメインモノマーは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、及びＩｇＤを含めた任意の免
疫グロブリン抗体アイソタイプのものである。さらに、いくつかの実施形態では、Ｆｃド
メインモノマーは、任意のＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ
、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）のものである。いくつかの実施形
態では、Ｆｃドメインモノマーは、野生型Ｆｃドメインモノマー配列から１０個もの変化
（例えば、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜４個のアミノ酸置換、付加もしくは挿入、欠
失、またはそれらの組合せ）を含み、これがＦｃドメインとＦｃ受容体間の相互作用を変
化させる。
本明細書で使用される、用語「Ｆｃドメイン」は、２つのＦｃドメインモノマーのダイ
マーを指す。野生型Ｆｃドメインでは、２つのＦｃドメインモノマーは、２つのＣＨ３抗
体定常ドメイン間の相互作用、及び２つのダイマー化されたＦｃドメインモノマーのヒン
ジドメイン間で形成する１つ以上のジスルフィド結合によってダイマーになる。いくつか
の実施形態では、Ｆｃドメインは、エフェクター機能を欠くように、例えば、「デッドＦ
ｃドメイン」に変異される。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインにおける各Ｆｃドメ
インモノマーは、ＣＨ２抗体定常ドメインにアミノ酸置換を含み、当該ＦｃドメインとＦ
ｃ受容体、例えば、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、またはＦｃ
ε（ＦｃεＲ）間の相互作用または結合を低下させる。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、表２、５
、及び６に示すバリアントのいずれか）は、免疫グロブリンのＦｃドメインモノマーまた
はＦｃドメインモノマーの断片に融合される。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン
のＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメインモノマ
ーとともにＦｃドメインを形成することが可能である。いくつかの実施形態では、免疫グ
ロブリンのＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメイ
ンモノマーとともにＦｃドメインを形成することができない。いくつかの実施形態では、
ＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインの断片は、本開示のポリペプチドに融合され、
該ポリペプチドの血清半減期を延長する。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチ
ドに融合されたＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、第二のＦｃ
ドメインモノマーとダイマーになり、Ｆｃ受容体に結合するＦｃドメインを形成するか、
または代替的に、ＦｃドメインモノマーがＦｃ受容体に結合する。いくつかの実施形態で
は、当該ポリペプチドの血清半減期を延長させるためにポリペプチドに融合されたＦｃド
メインまたは該Ｆｃドメインの断片は、いずれの免疫系関連の反応も誘導しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供するＳＩＲＰ−αポリペプチドまたは構築物
は、第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバ
リアント及び第二のＦｃドメインモノマーにつながれた抗体可変ドメインを含み、該第一
及び第二のＦｃドメインモノマーが結合してＦｃドメイン（例えば、ヘテロダイマーＦｃ
ドメイン）を形成する。Ｆｃドメインとは、免疫グロブリンのＣ末端に見られるタンパク
質構造である。Ｆｃドメインは、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用によってダイマー
化される２つのＦｃドメインモノマーを含む。野生型Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体、例え
ば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩ
ｂ、及びＦｃγＲＩＶに結合する最小限の構造を形成する。
該Ｆｃドメインは、抗体をその抗原に結合することに直接関与しないが、抗体依存的細
胞毒性における該抗体の関与等の様々なエフェクター機能に関与する場合がある。いくつ
かの実施形態では、本開示のＳＩＲＰ−αポリペプチドまたは構築物のＦｃドメインは、
エフェクター機能の低下、例えば、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の低下、
補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）の減少、抗体依存性細胞媒介食作用（ＡＤＣＰ）の低下、
またはそれらの任意の組合せにつながるアミノ酸置換、付加もしくは挿入、欠失、または
それらの任意の組合せを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＳＩＲＰ−αポリペプ
チドまたは構築物は、ヒトＦｃ受容体に対する結合の減少（例えば、最小限の結合または
結合がないこと）及び補体タンパク質Ｃ１ｑに対する結合の減少（例えば、最小限の結合
または結合がないこと）を特徴とする。いくつかの実施形態では、本開示のＳＩＲＰ−α
構築物は、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、Ｆｃ
γＲＩＩＩＢ、またはそれらの任意の組合せ、及びＣ１ｑに対する結合の減少（例えば、
最小限の結合または結合がないこと）を特徴とする。抗体依存性エフェクター機能、例え
ば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰ、またはそれらの任意の組合せを変化または低下させる
ため、いくつかの実施形態では、本開示のＳＩＲＰ−α構築物のＦｃドメインは、ＩｇＧ
クラスのものであり、１つ以上のアミノ酸置換を、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２
３６、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ａ３
２７、Ａ３３０、Ｐ３３１、またはＰ３２９に含む（ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵイ
ンデックスに従う（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓ
ｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔ
ｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）））。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非天然Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物
は、天然のＦｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、Ｃ
Ｄ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のＦｃγ受容体の少なくとも１つに対する結合の減
少または除去を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載のポリペプチド構築物は
、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対
する結合の減少または除去を示す。
ＣＤＣとは、補体カスケードが抗体のＦｃに結合する補体成分Ｃ１ｑによって活性化さ
れる細胞傷害性の形態を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非天然Ｆｃ領
域を含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、
Ｃ１ｑ結合において少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％
、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える減少を示す。いくつかの実施形態
では、本明細書に記載の非天然Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を
含むポリペプチド構築物と比較して、ＣＤＣの減少を示す。いくつかの実施形態では、本
明細書に記載の非天然Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリ
ペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％
、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるＣＤＣの減少を示す。い
くつかの場合において、本明細書に記載の非天然Ｆｃバリアントを含むポリペプチド構築
物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、無視できるほどのＣＤＣを
示す。
いくつかの実施形態では、本明細書のＦｃバリアントは、野生型配列と比較して、最小
限にグリコシル化されるか、グリコシル化が減少している。いくつかの実施形態では、脱
グリコシル化は、Ｎ２９７Ａの変異で、またはＮ２９７をＮではない任意のアミノ酸に変
異させることによって達成される。いくつかの実施形態では、脱グリコシル化は、モチー
フＮ−Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３であって、Ｎ＝アスパラギン、Ｘａａ１＝Ｐ（プロ
リン）以外の任意のアミノ酸、Ｘａａ２＝Ｔ（スレオニン）、Ｓ（セリン）またはＣ（シ
ステイン）、及びＸａａ３＝Ｐ（プロリン）以外の任意のアミノ酸であるモチーフの破壊
によって達成される。１つの実施形態では、Ｎ−Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３モチーフ
は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１に従って示される残基２９７〜３００を指す。
いくつかの実施形態では、Ｎ、Ｘａａ１、Ｘａａ２、またはＸａａ３のいずれか１つ以上
に対する変異は、当該Ｆｃバリアントの脱グリコシル化をもたらす。
いくつかの実施形態では、抗体ＩｇＧ定常領域のバリアント（例えば、Ｆｃバリアント
）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しているか、または、食作用を誘導す
る能力が低下している。いくつかの実施形態では、抗体ＩｇＧ定常領域のバリアント（例
えば、Ｆｃバリアント）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しており、かつ
、食作用を誘導する能力が低下している。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメイ
ンは、「デッド」Ｆｃドメインに特有である、エフェクター機能を欠くように変異される
。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、該ＦｃドメインとＦｃγ受容体間
の相互作用を最小限にすることが分かっている特定のアミノ酸置換を含む。いくつかの実
施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体由来であり、アミノ酸置換Ｌ２３４
Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１に
よってＥＵナンバリングシステムで示される）の１つ以上を含む。いくつかの実施形態で
は、１つ以上のさらなる変異がかかるＩｇＧ１のＦｃバリアントに含まれる。ヒトＩｇＧ
１のＦｃバリアントに対するかかるさらなる変異の非限定的な例としては、Ｅ３１８Ａ及
びＫ３２２Ａが挙げられる。いくつかの例では、ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントは、野生
型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、も
しくは４つ、またはそれより少ない変異を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上の
さらなる欠失がかかるＩｇＧ１のＦｃバリアントに含まれる。例えば、いくつかの実施形
態では、表７の配列番号８８に示されるＦｃのＩｇＧ１重鎖定常領域のＣ末端のリジンが
削除され、例えば、当該ポリペプチドが細菌細胞または哺乳類細胞で産生される際に該ポ
リペプチドの均質性を高める。いくつかの例では、ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントは、野
生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、
もしくは４つ、またはそれより少ない欠失がある。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ１の
Ｆｃバリアントは、配列番号１３５、配列番号１３６、または配列番号１３７のいずれか
１つの配列を有する。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４抗体由来
であり、アミノ酸置換Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、またはＡ３３０ＳとＰ３３１Ｓの両方を
含む。前述のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）に従って定義され
る。アミノ酸残基のＫａｂａｔナンバリングは、所与の抗体に対して、「標準」Ｋａｂａ
ｔ番号配列を備えた抗体の配列の相同領域でのアラインメントによって決定され得る。い
くつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａ
のアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）によってＥＵナンバリングシス
テムで示される）の１つ以上を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ配列を含む。いくつかの実施形態
では、１つ以上のさらなる変異がかかるＩｇＧ２のＦｃバリアントに含まれる。ヒトＩｇ
Ｇ２のＦｃバリアントに対するかかるさらなる変異の非限定的な例としては、Ｖ２３４Ａ
、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ３０９Ｌ、及びＨ２６８Ａ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（
１９９１）によってＥＵナンバリングシステムで示される）が挙げられる。いくつかの例
では、ヒトＩｇＧ２のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ２配列と比較して、合計で最
大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３つ、またはそれより少ない変異を有す
る。いくつかの実施形態では、１つ以上のさらなる欠失がかかるＩｇＧ２のＦｃバリアン
トに含まれる。例えば、いくつかの実施形態では、表７の配列番号８９に示されるＦｃの
ＩｇＧ２重鎖定常領域のＣ末端のリジンが削除され、例えば、当該ポリペプチドが細菌細
胞または哺乳類細胞で産生される際に該ポリペプチドの均質性を高める。いくつかの例で
は、ヒトＩｇＧ２のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ２配列と比較して、合計で最大
１２、１１、１０、９、８、７、６、５、もしくは４つ、またはそれより少ない欠失があ
る。
該ＦｃバリアントがＩｇＧ４のＦｃバリアントである場合、いくつかの実施形態では、
かかるＦｃバリアントは、Ｓ２２８Ｐの変異（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）に
よって示される）を含む。いくつかの例では、ヒトＩｇＧ４のＦｃバリアントは、野生型
ヒトＩｇＧ４配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、
３、２、または１つの変異を有する。
いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ＩｇＧ１のＦｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ
、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、もしくはＮ２９７Ａの少なくとも１つ、または、ＩｇＧ２の
Ｆｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、もしくはＮ２９７Ａの少なくとも１つを含む。
いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ＩｇＧ１のＦｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ、
Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、もしくはＮ２９７Ａの少なくとも２つ、または、ＩｇＧ２のＦ
ｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、もしくはＮ２９７Ａの少なくとも２つを含む。い
くつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ＩｇＧ１のＦｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ
２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、もしくはＮ２９７Ａの少なくとも３つを含むか、または、ＩｇＧ
２のＦｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａからなる。いくつかの実施
形態では、該Ｆｃバリアントは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９
７Ａからなる。
いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較し
て対象のＦｃ受容体に対する結合の減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリア
ントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して対象のＦｃ受容体に対する結合の除去を
示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比
較して、食作用の低下を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、野生型ヒ
トＩｇＧのＦｃ領域と比較して、食作用の除去を示す。
配列番号８８及び配列番号８９は、ＦｃのＩｇＧ１及びＩｇＧ２重鎖定常領域のアミノ
酸配列を示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントは、表７に示す配列番号９０〜
９５の任意のバリアントである。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
抗体依存性細胞媒介細胞傷害性は、本明細書ではＡＤＣＣとも呼ばれ、ある特定の細胞
傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び好中球）に存在するＦｃ受容体
（ＦｃＲ）に結合した分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保
有標的細胞に特異的に結合し、その後、該標的細胞を殺傷することを可能にする細胞傷害
性の形態を指す。抗体依存性細胞媒介食作用は、本明細書ではＡＤＣＰとも呼ばれ、ある
特定の食細胞（例えば、マクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分
泌されたＩｇが、これら食作用エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、
その後、該標的細胞を取り込んで消化することを可能にする細胞傷害性の形態を指す。標
的細胞の表面に対するリガンド特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、該細胞傷害性細胞または食
細胞を刺激することができ、かかる殺傷に使用することができる。いくつかの実施形態で
は、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含
むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの減少を示す。いくつかの実
施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ
領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、
３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるＡＤＣＣ
またはＡＤＣＰの減少を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアン
トを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、
ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの除去を示す。
補体依存性細胞傷害性は、本明細書ではＣＤＣとも呼ばれ、補体カスケードが抗体のＦ
ｃに結合する補体成分Ｃ１ｑによって活性化される細胞傷害性の形態を指す。いくつかの
実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆ
ｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％
、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるＣ１ｑ
結合の減少を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポ
リペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＣＤＣの減
少を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントを含むポリペプチ
ド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１
０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％また
はそれを超えるＣＤＣの減少を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載のＦｃバ
リアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較
して、無視できるほどのＣＤＣを示す。
本明細書におけるＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、Ｆｃγ
受容体に対する結合の減少を示すものを含む。例えば、いくつかの実施形態では、Ｆｃバ
リアントは、実施例で示す通り、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域によって示されるＦｃγ受
容体に対する結合より低い、Ｆｃγに対する結合を示す。いくつかの例では、Ｆｃバリア
ントは、Ｆｃγ受容体に対する結合の減少が、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％
、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または
１００％（エフェクター機能の完全な除去）である。いくつかの実施形態では、該結合の
減少は、任意の１つ以上のＦｃγ受容体、例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ
、ＣＤ３２ｃ、またはＣＤ６４に対してである。
いくつかの例では、本明細書に開示するＦｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇＧのＦ
ｃ領域と比較して、食作用の低下を示す。かかるＦｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇ
ＧのＦｃ領域と比較して、食作用の低下を示し、該食作用活性の低下は、例えば、１０％
、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％
、９７％、９８％、９９％、または１００％である。いくつかの例では、Ｆｃバリアント
は、その野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、食作用の除去を示す。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するＦｃバリアントは、１つ以上の融合パー
トナーに結合される。いくつかの場合において、該融合パートナーは、治療部分である。
いくつかの場合において、該融合パートナーは、発現されたタンパク質の標的化、精製、
スクリーニング、提示等を可能にするように選択される。いくつかの実施形態では、該融
合パートナーはまた、Ｆｃ受容体への結合度または食作用の低下度にも影響を与える。本
明細書に記載するように、いくつかの実施形態では、Ｆｃバリアントが融合パートナーに
結合された場合、それは以下に示すポリペプチド構築物を形成する。
いくつかの実施形態では、融合パートナーは、リンカー配列を介して該Ｆｃバリアント
配列に連結される。いくつかの実施形態では、該リンカー配列は、一般に少数のアミノ酸
、例えば、１０個未満のアミノ酸を含むが、より長いリンカーもまた利用される。いくつ
かの場合において、該リンカーは、１０、９、８、７、６、もしくは５個未満のアミノ酸
、またはそれより短い長さを有する。いくつかの場合において、該リンカーは、少なくと
も１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、もしくは３５個のアミノ酸
、またはそれより長い長さを有する。任意に、いくつかの実施形態では、開裂可能なリン
カーが使用される。
いくつかの実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃバリアントタンパク質及び任意の関
連する融合パートナーを所望の細胞位置または細胞外媒体に誘導する標的化またはシグナ
ル配列である。いくつかの実施形態では、ある特定のシグナル配列は、増殖培地、または
細胞の内膜と外膜間に位置する細胞周辺腔内のいずれかに分泌されるタンパク質を標的と
する。いくつかの実施形態では、融合パートナーは、精製またはスクリーニングを可能に
するペプチドまたはタンパク質をコードする配列である。かかる融合パートナーとしては
、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）システム（例えば、Ｎｉ＋
２アフィニティーカラム）とともに使用するためのポリヒスチジンタグ（Ｈｉｓタグ）（
例えば、Ｈｉｓ６及びＨｉｓ１０）または他のタグ、ＧＳＴ融合物、ＭＢＰ融合物、Ｓｔ
ｒｅｐ−ｔａｇ、細菌酵素ＢｉｒＡのＢＳＰビオチン化標的配列、及び抗体に標的化され
るエピトープタグ（例えば、ｃ−ｍｙｃタグ、ｆｌａｇタグ等）が挙げられるがこれらに
限定されない。
いくつかの実施形態では、かかるタグは、精製、スクリーニング、またはその両方に有
用である。例えば、いくつかの実施形態では、ＦｃバリアントはＨｉｓタグを用い、それ
をＮｉ＋２アフィニティーカラムに固定化することによって精製され、次に精製後、同じ
Ｈｉｓタグを用いて抗体をＮｉ＋２被覆プレートに固定化し、ＥＬＩＳＡや他の結合アッ
セイを本明細書の他の箇所に記載の通りに行う。いくつかの実施形態では、融合パートナ
ーは、本明細書に記載のＦｃバリアントをスクリーニングする選択方法の使用を可能にす
る。
様々な選択方法を可能にする様々な融合パートナーが利用可能である。例えば、Ｆｃバ
リアントライブラリのメンバーをｇｅｎｅ ＩＩＩタンパク質に融合させることによって
、ファージ提示法を採用することができる。いくつかの実施形態では、融合パートナーは
、Ｆｃバリアントが標識されるようにする。代替的に、いくつかの実施形態では、融合パ
ートナーは、発現ベクターの特定の配列に結合し、該融合パートナー及び関連するＦｃバ
リアントが、それらをコードする核酸と共有結合的または非共有結合的に連結されるよう
にする。
いくつかの実施形態では、融合パートナーが治療部分の場合、該治療部分は、例えば、
ペプチド、タンパク質、抗体、ｓｉＲＮＡ、または小分子である。本開示のＦｃバリアン
トに結合される治療抗体の非限定的な例としては、ＣＤ４７を認識する抗体が挙げられる
がこれらに限定されない。本開示のＦｃバリアントに結合される治療用ペプチドの非限定
的な例としては、ＳＩＲＰ−αポリペプチドを含めたＣＤ４７結合ポリペプチドが挙げら
れるがこれらに限定されない。かかる例では、該ＣＤ４７結合ポリペプチドは、本開示の
Ｆｃバリアントに結合または融合される。ＣＤ４７結合ポリペプチドの例としては、抗Ｃ
Ｄ４７抗体またはその断片、及びＣＤ４７のリガンド、例えば、ＳＩＲＰ−αまたはその
断片が挙げられるがこれらに限定されない。ＣＤ４７結合ポリペプチドのさらなる例とし
ては、天然に存在する形態のＳＩＲＰ−α及びその突然変異体が挙げられるがこれらに限
定されない。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含むポリペ
プチドであって、該Ｆｃバリアントが、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃドメイ
ンダイマーを含み、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５
Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉ）Ａ３
３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、または（ｉ
ｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９
７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される該ポリペプチドである。いくつ
かの実施形態では、該Ｆｃドメインモノマーは同一である（すなわち、ホモダイマー）。
いくつかの実施形態では、該Ｆｃドメインモノマーは異なる（すなわち、ヘテロダイマー
）。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインダイマーのＦｃドメインモノマーの少なくと
も１つは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩ
ｇＧ１のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインダイマーのＦｃドメイ
ンモノマーの少なくとも１つは、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からな
るヒトＩｇＧ２のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ヒト
ＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較してＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示
す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と
比較して、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のＦｃγ受
容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアント
は、ヒトＩｇＧのＦｃ融合の野生型版と比較して、Ｃ１ｑに対する結合の除去または減少
を示す。いくつかの実施形態では、ＦｃドメインダイマーのＦｃドメインモノマーの少な
くとも１つは、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及
びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である。いくつかの実施形態では、該
Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域と比較して、Ｆｃγ受容体に対する結
合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、そのヒトＩ
ｇＧ４のＦｃ領域の野生型版と比較して、ＣＤ１６ａ及びＣＤ３２ｂのＦｃγ受容体に対
する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、Ｆｃ
γ受容体に対して、ＫＤ約５ｘ１０−６Ｍ超で結合する。
いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、さらに、ＣＤ４７結合ポリペプチドを
含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版
と比較してＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す。いくつかの実施形態では
、該ＣＤ４７結合ポリペプチドは、げっ歯類及び非ヒト霊長類において、急性貧血を引き
起こさない。いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７結合ポリペプチドは、ヒトにおいて、
急性貧血を引き起こさない。
いくつかの実施形態では、該ＣＤ４７結合ポリペプチドは、シグナル制御タンパク質α
（ＳＩＲＰ−α）ポリペプチドまたはその断片である。いくつかの実施形態では、該ＳＩ
ＲＰ−αポリペプチドは、アミノ酸配列
ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５ＥＧＸ６ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ７ＴＫＲＮＮＭＤ
ＦＳＩＲＩＧＸ８ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ９ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥ
ＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５１）であって、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２はＡまたは
Ｉであり、Ｘ３はＩまたはＦであり、Ｘ４はＥまたはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲであり
、Ｘ６はＨまたはＰであり、Ｘ７はＬまたはＴであり、Ｘ８はＮ以外の任意のアミノ酸で
あり、Ｘ９はＶまたはＩである配列を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。いくつ
かの実施形態では、該ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、Ｘ１がＶまたはＩであり、Ｘ２がＡ
またはＩであり、Ｘ３がＩまたはＦであり、Ｘ４がＥであり、Ｘ５がＫまたはＲであり、
Ｘ６がＨまたはＰであり、Ｘ７がＬまたはＴであり、Ｘ８がＮでなく、Ｘ９がＶであるＳ
ＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、ポリペプチドであって、非自
然発生の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、自然発生のＤ１ドメインの親和性
より少なくとも１０倍高い親和性でヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
ト、及び第二のＦｃドメインモノマーを含む第二のポリペプチドに連結されてＦｃドメイ
ンを形成するＦｃドメインモノマーであり、該Ｆｃドメインが除去または減少されたエフ
ェクター機能を有する該Ｆｃドメインモノマーを含むポリペプチドである。いくつかの実
施形態では、該非自然発生の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインは、残基８０にアミノ
酸の変異を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
トであって、この場合、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、ＫＤ２５０ｎＭ未満で第一
の種由来のＣＤ４７に結合し、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、ＫＤ２５０ｎＭ未満
で第二の種由来のＣＤ４７に結合し、かつ、該第一の種由来のＣＤ４７に対するＫＤと、
該第二の種由来のＣＤ４７に対するＫＤは互いに１００倍以内であり、該第一の種と第二
の種は、ヒト、げっ歯類、及び非ヒト霊長類からなる群から選択される。いくつかの実施
形態では、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、少なくとも３つの異なる種由来のＣＤ４
７に結合する。いくつかの実施形態では、該非ヒト霊長類はカニクイザルである。
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、（ａ）ＫＤ２５０ｎＭ未満で
ヒトＣＤ４７に結合するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、及び（ｂ）該ＳＩＲＰ−α Ｄ１
ドメインのＮ末端またはＣ末端に連結されたＦｃドメインモノマーを含むポリペプチドで
あって、この場合、該ポリペプチドは、げっ歯類及び非ヒト霊長類において急性貧血を引
き起こさない。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、ヒトＳＩＲＰ−αの非自然
発生のバリアントである。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドのインビボ投与は、
投与後第一週の間に５０％未満のヘモグロビンの減少をもたらす。いくつかの実施形態で
は、該ポリペプチドのヒトでの投与は、投与後第一週の間に５０％未満のヘモグロビンの
減少をもたらす。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、さらに、少なくとも１つ
のＦｃバリアントを含むとともに、該Ｆｃバリアントは、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ
、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉ）Ａ３３
０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、または（ｉｉ
ｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７
Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択されるＦｃドメインモノマーを含む。い
くつかの実施形態では、該Ｆｃドメインモノマーは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７
Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である。いくつかの実施形態
では、該Ｆｃドメインモノマーは、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異から
なるヒトＩｇＧ２のＦｃ領域である。
本開示のＳＩＲＰ−α構築物は、従来の遺伝的または化学的方法、例えば、化学的結合
を用いて、リンカーによってＦｃドメインモノマーのＮ末端につながれたそのＣ末端を有
するＳＩＲＰ−αドメインまたはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、リン
カー（例えば、スペーサ）は、該ポリペプチドと該Ｆｃドメインモノマー間に挿入される
。いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開示のポリ
ペプチドは、ダイマーを形成することができないＦｃドメインモノマーに融合される。い
くつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、ダイマー、例えば、ヘテロダイマーを
別のＦｃドメインモノマーと形成することができるＦｃドメインモノマーに融合される。
いくつかの実施形態では、本発明のポリペプチドは、Ｆｃドメインモノマーに融合され、
この融合タンパク質はホモダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、本開示のポリ
ペプチドが第一のＦｃドメインモノマーに融合され、異なるタンパク質またはペプチド（
例えば、抗体可変領域）が第二のＦｃドメインモノマーに融合される。いくつかの実施形
態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントは、第一のＦｃドメインモノ
マーにつながれ、治療用タンパク質（例えば、サイトカイン、インターロイキン、抗原、
ステロイド、抗炎症薬、または免疫調節薬）は、第二のＦｃドメインモノマーにつながれ
る。いくつかの実施形態では、該第一及び第二のＦｃドメインモノマーはヘテロダイマー
を形成する。
上記を制限することなく、いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポ
リペプチド（例えば、表２、５、及び６に示すバリアントのいずれか）は、Ｆｃポリペプ
チドまたはＦｃバリアントポリペプチド、例えば、Ｆｃドメインモノマーに融合される。
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチド及び融合されたＦｃバリアントポリペプチド
を含むポリペプチドの例としては、表８に示す配列番号９６〜１３７、２１４、及び２１
６が挙げられるがこれらに限定されない。
Figure 2021063082
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Figure 2021063082
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いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、表８に示す任意のバリアントに対して、
少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、
９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、
または１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、表８の配列番号９８〜１０４、１０７〜
１１３、１１６〜１２２、または１３５〜１３７に対して、少なくとも８５％の配列同一
性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性
）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、（ａ）シグナル制御タンパク質α（ＳＩ
ＲＰ−α）Ｄ１バリアントを含むとともに、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、アミノ
酸配列
ＥＥＸ１Ｘ２ＱＸ３ＩＱＰＤＫＸ４ＶＸ５ＶＡＡＧＥＸ６Ｘ７Ｘ８ＬＸ９ＣＴＸ１０ＴＳ
ＬＸ１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ１２ＲＸ１３ＬＩＹＮＱＸ１４Ｘ１５ＧＸ１６Ｆ
ＰＲＶＴＴＶＳＸ１７Ｘ１８ＴＸ１９ＲＸ２０ＮＭＤＦＸ２１ＩＸ２２ＩＸ２３Ｘ２４Ｉ
ＴＸ２５ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ２６ＫＸ２７ＲＫＧＳＰＤＸ２８Ｘ２９ＥＸ３０ＫＳＧＡＧ
ＴＥＬＳＶＲＸ３１ＫＰＳ（配列番号４７）を含み、ここで、Ｘ１はＥまたはＧであり、
Ｘ２はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ３はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ４はＳまたはＦであ
り、Ｘ５はＬまたはＳであり、Ｘ６はＳまたはＴであり、Ｘ７はＡまたはＶであり、Ｘ８
はＩまたはＴであり、Ｘ９はＨ、Ｒ、またはＬであり、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ、またはＬで
あり、Ｘ１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ１２はＡまたはＧであり、Ｘ１３はＥ、
Ｖ、またはＬであり、Ｘ１４はＫまたはＲであり、Ｘ１５はＥまたはＱであり、Ｘ１６は
Ｈ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１７はＤまたはＥであり、Ｘ１８はＳ、Ｌ、Ｔ、またはＧで
あり、Ｘ１９はＫまたはＲであり、Ｘ２０はＥまたはＮであり、Ｘ２１はＳまたはＰであ
り、Ｘ２２はＳまたはＲであり、Ｘ２３はＳまたはＧであり、Ｘ２４は任意のアミノ酸で
あり、Ｘ２５は任意のアミノ酸であり、Ｘ２６はＶまたはＩであり、Ｘ２７はＦ、Ｌ、ま
たはＶであり、Ｘ２８はＤであるか、または存在せず、Ｘ２９はＴまたはＶであり、Ｘ３
０はＦまたはＶであり、Ｘ３１はＡまたはＧであり、該ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは
、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を有し、かつ、該ポリペプチドは、（ｂ）２つの
Ｆｃドメインモノマーを有するＦｃドメインダイマーを含むＦｃバリアントを含み、ここ
で、各Ｆｃドメインモノマーは、独立して、（ｉ）Ｎ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１
のＦｃ領域、（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ
１のＦｃ領域、（ｉｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異
を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｖ）Ｎ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領
域、（ｖ）Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖｉ）Ａ
３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖｉｉ
）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異を含む
ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域、または（ｖｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ
２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である
。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＳＩ
ＲＰ−α Ｄ１バリアント、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃドメインダイマー
を含むＦｃバリアントを含み、この場合、該Ｆｃドメインダイマーの該Ｆｃドメインモノ
マーの１つは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒト
ＩｇＧ１のＦｃ領域を含む。
Ｆｃドメインモノマーのダイマー化
いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチド（例えば、表２
、５、及び６に示すバリアントのいずれか）は、第一のＦｃドメインモノマーにＮ末端ま
たはＣ末端で融合される。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃドメインモノマーは、
Ｆｃドメインまたはダイマーを形成することができない。いくつかの実施形態では、該第
一のＦｃドメインモノマーは、第二のＦｃドメインモノマーに結合し、Ｆｃドメインまた
はダイマーを形成する。いくつかの実施形態では、該第一及び第二のＦｃドメインモノマ
ーは、該第一及び第二のドメインモノマー間のヘテロダイマー化を促進するアミノ酸置換
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインの２つのＦｃドメインモノマーの各々は、該２
つのモノマーのヘテロダイマー化を促進するアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態で
は、ＳＩＲＰ−α構築物は、例えば、第一のＦｃドメインモノマーに融合されたＳＩＲＰ
−α Ｄ１バリアントポリペプチドを含む第一のサブユニット及び第二のＦｃドメインモ
ノマーを含む（例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドも任意の他のポリペ
プチドも含まない）第二のサブユニットから形成される。いくつかの実施形態では、構築
物は、Ｆｃドメインに連結された単一のＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドを有
する（例えば、単一アーム）。いくつかの実施形態では、構築物は、Ｆｃドメインに連結
された２つのＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドを有する（例えば、ダブルアー
ム）。いくつかの実施形態では、ＫＤ約５００ｎＭを有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
トが、ダブルアームの構築物に特に有用である。いくつかの実施形態では、ＫＤ約５０ｎ
Ｍを有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、ダブルアームの構築物に特に有用である。
いくつかの実施形態では、ＫＤ約５ｎＭを有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、ダブ
ルアームの構築物及び単一アームの構築物に有用である。いくつかの実施形態では、ＫＤ
約５００ｐＭを有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、ダブルアームの構築物及び単一
アームの構築物に有用である。いくつかの実施形態では、ＫＤ約１００ｐＭを有するＳＩ
ＲＰ−α Ｄ１バリアントが、ダブルアームの構築物及び単一アームの構築物に有用であ
る。いくつかの実施形態では、ＫＤ約５０ｐＭを有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが
、ダブルアームの構築物及び単一アームの構築物に有用である。いくつかの実施形態では
、ＫＤ約１０ｐＭを有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、ダブルアームの構築物及び
単一アームの構築物に有用である。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーのヘテロダイマー化は、２つのＦｃド
メインモノマーに、異なるが適合性のある置換、例えば、「ノブと穴」の残基対及び荷電
残基対を導入することによって促進される。該ノブと穴の相互作用は、ヘテロダイマーの
形成を優先するのに対し、ノブとノブ及び穴と穴の相互作用は、立体的衝突のため、及び
有利な相互作用の欠失のためにホモダイマー形成の妨げになる。穴とは、タンパク質の元
のアミノ酸が、側鎖の体積が小さい異なるアミノ酸で置換された場合にできる空間を指す
。ノブとは、タンパク質の元のアミノ酸が、側鎖の体積が大きい異なるアミノ酸で置換さ
れた場合にできる突起を指す。例えば、いくつかの実施形態では、置換されるアミノ酸は
、ＦｃドメインモノマーのＣＨ３抗体定常ドメインにあり、２つのＦｃドメインモノマー
のダイマー化に関与する。いくつかの実施形態では、ノブと穴のアミノ酸が２つのＦｃド
メインモノマーのヘテロダイマー化を促進または優先するために作用するように、１つの
ＣＨ３抗体定常ドメインの穴は、別のＣＨ３抗体定常ドメインのノブを収容するように形
成される。いくつかの実施形態では、１つのＣＨ３抗体定常ドメインの穴は、別のＣＨ３
抗体定常ドメインの元のアミノ酸をより良好に収容するように形成される。いくつかの実
施形態では、１つのＣＨ３抗体定常ドメインのノブは、別のＣＨ３抗体定常ドメインの元
のアミノ酸とさらなる相互作用を生じるように形成される。
いくつかの実施形態では、穴は、チロシンやトリプトファン等の大きな側鎖を有するア
ミノ酸を、アラニン、バリン、またはスレオニン等の小さな側鎖を有するアミノ酸で置換
することによって、例えば、ＣＨ３抗体定常ドメインのＹ４０７Ｖの変異によって作られ
る。同様に、いくつかの実施形態では、ノブは、小さな側鎖を有するアミノ酸を、大きな
側鎖を有するアミノ酸で置換することによって、例えば、ＣＨ３抗体定常ドメインのＴ３
６６Ｗの変異によって作られる。いくつかの実施形態では、一方のＦｃドメインモノマー
は、ノブの変異であるＴ３６６Ｗを含み、他方のＦｃドメインモノマーは、穴の変異であ
るＴ３６６Ｓ、Ｌ３５８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態では、高親和性
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開示のポリペプチドは、ノブの変異であるＴ３６
６Ｗを含むＦｃドメインモノマーに融合され、不要なノブとノブのホモダイマー形成を制
限する。ノブと穴のアミノ酸対の例は、表９に含まれるがこれに限定されず、ノブと穴の
ＦｃバリアントとＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物の例は表１０に示される。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
ノブと穴の方法に加えて、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーのダイマー
化を制御するため、静電ステアリングもまた用いられる。静電ステアリングとは、より高
次のタンパク質分子の形成を制御するため、ペプチド、タンパク質ドメイン、及びタンパ
ク質の反対に荷電したアミノ酸間の有利な静電相互作用を利用することを指す。具体的に
は、静電ステアリングを用いてＦｃドメインモノマーのダイマー化を制御するため、ＣＨ
３とＣＨ３の界面を構成する１つ以上のアミノ酸残基は、当該相互作用が、導入された特
定の荷電アミノ酸に応じて静電的に有利または不利になるように、正または負に荷電した
アミノ酸残基で置換される。いくつかの実施形態では、該界面の正に荷電したアミノ酸、
例えば、リジン、アルギニン、またはヒスチジンは、負に荷電したアミノ酸、例えば、ア
スパラギン酸またはグルタミン酸で置換される。いくつかの実施形態では、該界面の負に
荷電したアミノ酸は、正に荷電したアミノ酸で置換される。いくつかの実施形態では、該
荷電アミノ酸は、相互作用するＣＨ３抗体定常ドメインの一方または両方に導入される。
いくつかの実施形態では、２つのＦｃドメインモノマーの相互作用するＣＨ３抗体定常ド
メインへの荷電アミノ酸の導入は、荷電アミノ酸間の相互作用に起因する静電ステアリン
グ効果によって制御される通りに、Ｆｃドメインモノマーのヘテロダイマーの選択的形成
を促進する。静電ステアリングのアミノ酸対の例が表１１に含まれるが、これらに限定さ
れない。
Figure 2021063082
Ｆｃドメインモノマーのヘテロダイマー化を制御するために用いられる他の方法は、特
に二重特異性抗体の構築との関連で利用可能である。
いくつかの実施形態では、第一のＦｃドメインモノマー及び第二のＦｃドメインモノマ
ーは、それぞれ、以下のアミノ酸置換の１つ以上を含む：ヒトＩｇＧ１の配列に対して、
Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５
Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３
５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、
Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８
Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３
９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、
Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７
Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、及びＫ４０９Ｉ。
いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは：（ａ）野生型ヒトＩｇＧ１に対し
て、以下のアミノ酸置換の１つ：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ
３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ
、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５
６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ
３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ
、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９
８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ
４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、もしくはＫ
４０９Ｉ、または、（ｂ）（ｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異、
（ｉｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの
変異、（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７
Ａ、及びＮ２９７Ａの変異、（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変
異、（ｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異、（ｖｉ
）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異、
（ｖｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ
２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異、もしくは（ｖｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に
対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２
９７Ａの変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマーは：（ａ）野生型
ヒトＩｇＧ１に対して、以下のアミノ酸置換の１つ：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８
Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３
４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５１Ｎ、Ｌ３５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、
Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４
Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３
７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、
Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５
Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４
０９Ｔ、またはＫ４０９Ｉを含み、かつ（ｂ）さらに、（ｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に
対して、Ｎ２９７Ａの変異、（ｉｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ
２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異、（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異、（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領
域に対して、Ｎ２９７Ａの変異、（ｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ及
びＰ３３１Ｓの変異、（ｖｉ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１
Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異、（ｖｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、
Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅｌＧ２３６の変異、または（ｖｉｉｉ）
ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、
ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含む。
いくつかの実施形態では、該第一及び第二のＦｃドメインモノマーは、異なるアミノ酸
置換を含む。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃドメインモノマーは、Ｔ３６６Ｗを
含む。いくつかの実施形態では、該第二のＦｃドメインモノマーは、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６
８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態では、該第一のＦｃドメインモノマー
は、Ｄ３９９Ｋを含む。いくつかの実施形態では、該第二のＦｃドメインモノマーは、Ｋ
４０９Ｄを含む。
ＩＶ．血清アルブミン
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
血清アルブミンへの融合は、タンパク質製剤の薬物動態を改善することができ、いくつ
かの実施形態では、本明細書に記載の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開
示のポリペプチドは、血清アルブミンとつながれる。
血清アルブミンは、哺乳類の血中に豊富な球状タンパク質である。血清アルブミンは、
肝臓で産生され、血清タンパク質の約半分を構成し得る。それはモノマーであり、血中に
可溶である。血清アルブミンの最も重要な機能の一部には、ホルモン、脂肪酸、及び他の
タンパク質の体内での輸送、ｐＨの中和、ならびに血管と体内組織間の体液の適切な分布
に必要な浸透圧の維持が含まれる。好ましい実施形態では、血清アルブミンは、ヒト血清
アルブミン（ＨＳＡ）である。いくつかの実施形態では、ＨＳＡは、本開示のポリペプチ
ドのＣ末端につながれ、該ポリペプチドの血清半減期を延長する。いくつかの実施形態で
は、ＨＳＡのＮ末端は、本開示のポリペプチドのＣ末端につながれる。いくつかの実施形
態では、ＨＳＡは、直接またはリンカーを介してのどちらかで、ポリペプチドのＣ末端に
つながれる。いくつかの実施形態では、ＨＳＡは、直接またはリンカーを介してのどちら
かで、ポリペプチドのＮ末端につながれる。
いくつかの実施形態では、ヒト血清アルブミンは、表１２に示すＵｎｉＰｒｏｔ識別番
号Ｐ０２７６８のアミノ酸（ａａ）配列２５〜６０９（配列番号１２）を含む。いくつか
の実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、表２、５、及び６に
示す任意のＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント）につながれたＨＳＡは、ＵｎｉＰｒｏｔ識別
番号Ｐ０２７６８の配列のアミノ酸２５〜６０９（配列番号１２）を含む。いくつかの実
施形態では、該ＨＳＡは、配列番号１２に対して、Ｃ３４ＳまたはＫ５７３Ｐの置換を含
む。いくつかの実施形態では、該ＨＳＡは、配列番号１２に対して、Ｃ３４Ｓ及びＫ５７
３Ｐの置換を含む。
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、血清アルブミンは、本開示のポリペプチドに遺伝子的に融合
されるか、または、化学的方法、例えば、化学的結合によって該ポリペプチドにつながれ
る。いくつかの実施形態では、スペーサが該ポリペプチドと該ＨＳＡ間に挿入される。ス
ペーサのいくつかの例は、本明細書の他の箇所に詳細に記載する。いくつかの実施形態で
は、スペーサはＡまたはＡＡＡＬである。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチ
ドにおけるＨＳＡの融合は、該ポリペプチドの長期の保持をもたらすばかりでなく、半減
期も延長する。
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチド及び融合されたＨＳＡを含むポリペプチド
としては、表１３に示す配列番号１５０〜１５９が挙げられるがこれらに限定されない。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、表１３に示す任意のバリアントに対して
、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％
、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％
、または１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、該ポリペプチドは、表１３の配列番号１５４、１５５、及び
１５９に対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、
８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ド
メインを含む。
Ｖ．アルブミン結合ペプチド
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
血清タンパク質への結合は、タンパク質製剤の薬物動態を改善することができ、特に、
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、血清タンパク質結合ペプチ
ドまたはタンパク質に融合される。
本明細書で使用される、用語「アルブミン結合ペプチド」は、血清アルブミンタンパク
質に対する親和性及びこれに結合する機能を有する約１２〜１６個のアミノ酸のアミノ酸
配列を指す。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、ヒト、マウス、また
はラット由来である。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、表２、５
、及び６に示す任意のバリアント）を含む本開示のポリペプチドは、血清アルブミンに対
して結合活性を示すアルブミン結合ペプチドに融合され、該ポリペプチドの半減期を延長
する。本明細書に記載の方法及び組成物に使用することができる様々なアルブミン結合ペ
プチドが利用可能である。いくつかの実施形態では、該アルブミン結合ペプチドは、ＤＩ
ＣＬＰＲＷＧＣＬＷ（配列番号１６０）の配列を含む。いくつかの実施形態では、アルブ
ミン結合ペプチドは、本開示のポリペプチドに遺伝子的に融合されるか、または、化学的
方法、例えば、化学的結合によって該ポリペプチドに結合される。
いくつかの実施形態では、リンカー（例えば、スペーサ）は、該ポリペプチドと該アル
ブミン結合ペプチド間に挿入され、該融合タンパク質のさらなる構造的及び空間的可撓性
を可能にする。具体的なリンカー（例えば、スペーサ）及びそれらのアミノ酸配列は、本
明細書にさらに詳細に記載する。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペプチドは、
本開示のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合される。１つの例では、アルブミン結
合ペプチドのＮ末端は、ペプチド結合を介して本開示のポリペプチドのＣ末端に直接融合
される。別の例では、アルブミン結合ペプチドのＣ末端は、ペプチド結合を介して本開示
のポリペプチドのＮ末端に直接融合される。いくつかの実施形態では、アルブミン結合ペ
プチドの本開示のポリペプチドへの融合は、該ポリペプチドの長期の保持をその血清アル
ブミンに対する結合を介してもたらす。
ＶＩ．ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン（例えば、表２、５、
及び６に示す任意のバリアント）を含むポリペプチドは、ポリマー（例えば、ポリエチレ
ングリコール、ＰＥＧ）に融合される。いくつかの実施形態では、ポリマーのタンパク質
製剤に対する結合は、当該宿主の免疫系から該タンパク質製剤を「マスクする」。さらに
、いくつかの実施形態では、ある特定のポリマー、例えば、親水性ポリマーは、疎水性タ
ンパク質及び薬物に水溶性を与える。例えば、いくつかの実施形態では、かかるポリマー
としては、ＰＥＧ、ポリシアル酸鎖、及びＰＡＳ鎖分子が挙げられる。いくつかの実施形
態では、ＰＥＧ等のポリマーは、ポリペプチドのシステイン置換または付加と共有結合さ
れる。いくつかの実施形態では、該ポリペプチドのシステイン置換は、表２、５、及び６
に示す配列のいずれか１つの配列に対して、Ｉ７Ｃ、Ａ１６Ｃ、Ｓ２０Ｃ、Ｔ２０Ｃ、Ａ
４５Ｃ、Ｇ４５Ｃ、Ｇ７９Ｃ、Ｓ７９Ｃ、またはＡ８４Ｃである。いくつかの実施形態で
は、該ポリペプチドのシステイン残基の付加は、ペプチド合成、遺伝子組み換え、分子ク
ローニング、またはそれらの任意の組合せを用いて導入される。いくつかの実施形態では
、該ポリマー、例えば、ＰＥＧは、システイン−マレイミド結合を用いてシステイン残基
に結合される。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ等のポリマーは、化学的結合等の従来の
化学的方法を用いて、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドに、Ｎ
末端もしくはＣ末端のいずれか、または内部の位置に共有結合される。
ＶＩＩ．二重特異性構築物
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
いくつかの実施形態では、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、表２、５
、及び６に示す任意のバリアント）を有するポリペプチドは、二重特異性構築物を含む。
二重特異性構築物とは、２つの標的相互作用ドメインを有する構築物を指す。いくつかの
実施形態では、二重特異性構築物は、Ｆｃドメイン及び２つの標的相互作用ドメイン、す
なわち（１）ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアント（例えば、表２、５、及
び６に示す任意のバリアント）及び（２）抗体可変ドメインを含む。いくつかの実施形態
では、二重特異性構築物は、第一のポリペプチド及び第二のポリペプチドを含む。いくつ
かの実施形態では、該第一のポリペプチドは、式Ａ−Ｌ−Ｂを有し、この場合、ＡはＳＩ
ＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを含み、Ｌはリンカーであり、Ｂは第一の
Ｆｃドメインモノマーを含む。いくつかの実施形態では、該第二のポリペプチドは、式Ａ
’−Ｌ’−Ｂ’を有し、この場合、Ａ’は抗体可変ドメインを含み、Ｌ’はリンカーであ
り、Ｂ’は第二のＦｃドメインモノマーを含む。いくつかの実施形態では、該第一及び第
二のポリペプチドの配向は、それぞれ、Ｂ−Ｌ−Ａ及びＢ’−Ｌ’−Ａ’である。いくつ
かの実施形態では、該第一及び第二のＦｃドメインモノマーは結合して該二重特異性構築
物のＦｃドメインを形成する。いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、任意の免
疫グロブリン抗体アイソタイプのものである（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ
、及びＩｇＤ）。ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインのバリアントは、野生型ヒトＳＩＲＰ−α
のＤ１ドメイン及び該野生型Ｄ１ドメインに対して１つ以上のアミノ酸置換を含む（例え
ば、表２、５、及び６に示す任意のＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント）。いくつかの実施形
態では、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、野生型ヒトＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインより
高い結合親和性でＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態では、二重特異性構築物にお
ける該抗体可変ドメインは、細胞抗原を標的とする（例えば、がん細胞の細胞抗原）。
抗体可変ドメインは、相補性決定領域（ＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２
、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２、及びＣＤＲ Ｈ３）ならびにフレームワ
ーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体の軽鎖及び重鎖の部分を指す。抗体の可変ド
メインは、当該抗体に特定の抗原に対する結合能を付与することができる。多くの異なる
抗体可変ドメイン分子を構築することができる。いくつかの実施形態では、使用される抗
体可変ドメイン分子としては、一本鎖Ｆｖが挙げられるがこれに限定されない。
いくつかの実施形態では、二重特異性構築物における該抗体可変ドメインは、細胞抗原
を標的とする（例えば、がん細胞または免疫細胞の細胞抗原）。いくつかのタンパク質は
、非がん細胞よりもがん細胞においてより高レベルで発現される。例えば、がん抗原は、
タンパク質であって、がん細胞によって優先的に発現され（例えば、それは非がん細胞よ
りもがん細胞においてより高レベルで発現され）、いくつかの例では、それはがん細胞の
みで発現される。いくつかの実施形態では、タンパク質、例えば、高親和性ＳＩＲＰ−α
ドメインまたはそのバリアントとともにＦｃドメインを生成する抗体可変ドメインによっ
て標的化されるがん細胞によって発現されるタンパク質としては、５Ｔ４、ＡＧＳ−１６
、ＡＬＫ１、ＡＮＧ−２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ｃ−ｆｍｓ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＡ６、
ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ
３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、Ｃ
Ｄ９８、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＳ１、ＣＸＣＲ４
、ＤＬＬ−４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−１、ＥＮＰＰ３、ＥｐｈＡ３、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２
、フィブロネクチン、ＦＲ−アルファ、ＧＣＣ、ＧＤ２、グリピカン−３、ＧＰＮＭＢ、
ＨＥＲ−２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ−ＤＲ、ＩＣＡＭ−１、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−３Ｒ、ＬＩ
Ｖ−１、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＮａＰｉ２ｂ、Ｎｅｃｔｉｎ−４、Ｎｏｔ
ｃｈ ２、Ｎｏｔｃｈ １、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤＧＦＲ−ａ、ＰＳ、ＰＳＭＡ
、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＴＥＭ１、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＤＫＫ
−１、またはＣＳＦ−１Ｒが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態で
は、該二重特異性構築物における抗体可変ドメインは、ヒトタンパク質に結合するように
操作されない。
いくつかの実施形態では、該二重特異性構築物のＦｃドメインにおける第一及び第二の
Ｆｃドメインモノマーの各々は、該第一及び第二のＦｃドメインモノマーのヘテロダイマ
ー化を促進する１つ以上のアミノ酸置換を含む。Ｆｃドメインモノマーのヘテロダイマー
化を促進する方法は、本明細書にさらに詳細に記載されており、例えば、ノブと穴の方法
及び静電ステアリング方法を参照されたい。
いくつかの実施形態では、該二重特異性構築物のＦｃドメインは、「デッドＦｃドメイ
ン」に特有である、１つ以上のエフェクター機能を欠くように変異される。いくつかの実
施形態では、該二重特異性構築物のＦｃドメインは、ＩｇＧ１抗体由来であり、配列番号
１６１（表１４）の配列に対して、アミノ酸置換Ｌ１４Ａ、Ｌ１５Ａ、及びＧ１７Ａを含
んで該ＦｃドメインとＦｃγ受容体間の相互作用または結合を低下させる。いくつかの実
施形態では、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体由来であり、アミノ酸置換Ｌ２３４
Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１に
よってＥＵナンバリングシステムで示される）の１つ以上を含む。いくつかの実施形態で
は、本明細書に記載のＦｃバリアントは、最小限にグリコシル化されるか、グリコシル化
が減少している。いくつかの実施形態では、脱グリコシル化は、Ｎ２９７Ａの変異で、ま
たはＮ２９７をＮではない任意のアミノ酸（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）によ
ってＥＵナンバリングシステムで示される）に変異させることによって達成される。いく
つかの実施形態では、該二重特異性構築物は、それが、異なる細胞型によって発現される
タンパク質（例えば、Ｆｃ受容体等の受容体）に対して選択的結合を有するように設計さ
れる。抗体のヒンジ、定常ドメイン（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３定常ドメイン）、または
ヒンジならびに定常ドメインにおけるアミノ酸置換が、異なる細胞型（例えば、制御性Ｔ
細胞及びエフェクターＴ細胞）に発現される特定の受容体（例えば、Ｆｃ受容体）に対す
る抗体の結合親和性を効果的に変更することができることが研究で証明されている。アミ
ノ酸置換Ａ１１１Ｓ及びＰ１１２Ｓ（表１４の配列番号１６２に対して）を有するＩｇＧ
２は、野生型ＩｇＧ２と比較して、ＦｃγＲＩＩＩａ １３１ Ｈに対する結合の有意な
減少を示す。いくつかの実施形態では、本明細書のＦｃバリアントは、最小限にグリコシ
ル化されるか、グリコシル化が減少している。いくつかの実施形態では、脱グリコシル化
は、Ｎ２９７Ａの変異で、またはＮ２９７をＮではない任意のアミノ酸（Ｋａｂａｔ，
ｅｔ ａｌ．（１９９１）によってＥＵナンバリングシステムで示される）に変異させる
ことによって達成される。いくつかの実施形態では、二重特異性構築物は、ＩｇＧ２また
はＩｇＧ４サブクラスのＦｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ２サブク
ラスのＦｃドメインを含む二重特異性構築物は、配列番号１６２（表１４）に対して、ア
ミノ酸置換Ａ１１１Ｓ及びＰ１１２Ｓを含む。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアン
トは、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａのアミノ酸置換（Ｋａｂａｔ， ｅｔ
ａｌ．（１９９１）によってＥＵナンバリングシステムで示される）の１つ以上を含むヒ
トＩｇＧ２のＦｃ配列を含む。
Figure 2021063082
リンカーを介して第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイ
ンまたはそのバリアント及び第二のＦｃドメインモノマーを含み、該第一及び第二のＦｃ
ドメインモノマーが結合してＦｃドメインを形成するＳＩＲＰ−α構築物の例は、図１に
示される。いくつかの実施形態では、該第二のＦｃモノマーに対して結合されるタンパク
質または抗体可変ドメインはない。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α構築物は、リ
ンカーを介して第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインま
たはそのバリアント、及びリンカーを介して第二のＦｃドメインモノマーにつながれた抗
体可変ドメインを含み、該第一及び第二のＦｃドメインモノマーが結合してＦｃドメイン
を形成する（図２に示す通り）。いくつかの実施形態では、ＳＩＲＰ−α構築物は、リン
カーを介して第一のＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまた
はそのバリアント、及びリンカーを介して第二のＦｃドメインモノマーにつながれた治療
用タンパク質（例えば、サイトカイン、インターロイキン、抗原、ステロイド、抗炎症薬
、または免疫調節薬）を含み、該第一及び第二のＦｃドメインモノマーが結合してＦｃド
メインを形成する（図３に示す通り）。いくつかの実施形態では、前述のＳＩＲＰ−α構
築物（例えば、図１〜３に示すＳＩＲＰ−α構築物）のＦｃドメインの２つのＦｃドメイ
ンモノマーの各々は、該２つのモノマーのヘテロダイマー化を促進するアミノ酸置換を含
む。２つのＦｃドメインモノマーのヘテロダイマー化を促進する異なる方法（例えば、ノ
ブと穴の方法、静電ステアリング方法）及びＦｃドメインのアミノ酸置換は、本明細書に
詳細に記載されている。例えば、図４Ａは、ノブの変異、例えば、Ｔ３６６Ｗを含んで不
要なノブとノブのホモダイマー形成を制限するＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを有するＳＩＲＰ−α構築物を示す。図４Ｂ
は、穴の変異、例えば、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３５８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含むＦｃドメインモ
ノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインまたはそのバリアントを有するＳＩＲＰ
−α構築物を示す。いくつかの実施形態では、同様のＦｃドメインのヘテロダイマー化方
法が、図２及び３に記載の構築物におけるＦｃドメインに適用される。いくつかの実施形
態では、ＳＩＲＰ−α構築物は、ＦｃドメインモノマーにつながれたＳＩＲＰ−α Ｄ１
ドメインまたはそのバリアントの融合タンパク質を含む（図５Ａに示す通り）。いくつか
の実施形態では、この融合タンパク質はホモダイマーを形成する（図５Ｂに示す通り）。
融合パートナーに結合された本明細書のＦｃバリアントは、好ましくは、天然または野
生型（非変異）抗体Ｆｃ領域を含む同様のポリペプチド構築物と比較して、少なくとも１
つのＦｃγ受容体、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４に
対する結合の減少または除去を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載のＦｃバ
リアントまたは融合パートナーは、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、
及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合の減少または除去を示す。
いくつかの実施形態では、融合パートナーに結合された本開示のＦｃバリアントは、天
然または野生型（非変異）Ｆｃ領域を含む同様のポリペプチド構築物と比較して、補体成
分Ｃ１ｑ及びＣＤＣに対する結合の減少を示す。いくつかの場合において、該Ｆｃバリア
ントは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％
、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそ
れを超えるＣ１ｑ結合の減少を示す。いくつかの場合において、該Ｆｃバリアントは、天
然または野生型（非変異）Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＣＤＣの減少
を示す。いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプ
チド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５
０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超えるＣＤＣの減少を示す。
ＶＩＩＩ．リンカー
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
本開示において、リンカーは、ポリペプチドもしくはタンパク質ドメインまたは関連す
る非タンパク質部分間の結合もしくは接続を示すために使用される。いくつかの実施形態
では、リンカーは、Ｆｃドメインモノマー、アルブミン結合ペプチド、もしくはＨＳＡ、
及び高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントの間の結合または接続である。いくつかの実
施形態では、該リンカーは、２つのポリペプチドが、互いに直列につながれるように、該
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントのＣ末端及び該ＦｃドメインモノマーのＮ末端、該アルブ
ミン結合ペプチド、または該ＨＳＡを接続する。
いくつかの実施形態では、リンカーは、単純な共有結合、例えば、ペプチド結合、合成
ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー、または化学反応から形
成される任意の種類の結合、例えば、化学的結合である。リンカーがペプチド結合の場合
、いくつかの実施形態では、１つのタンパク質ドメインのＣ末端のカルボン酸基は、別の
タンパク質ドメインのＮ末端のアミノ基と縮合反応で反応し、ペプチド結合を形成する。
いくつかの実施形態では、ペプチド結合は、従来の有機化学反応による合成手段から、ま
たは宿主細胞からの自然産生によって形成され、この場合、直列の両方のタンパク質（例
えば、Ｆｃドメインモノマー及び高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント）のＤＮＡ配列
をコードする核酸分子は、宿主細胞の必要な分子機構（例えば、ＤＮＡポリメラーゼ及び
リボソーム）によって、両方のタンパク質をコードする隣接ポリペプチドに直接転写及び
翻訳され得る。
リンカーが合成ポリマー（例えば、ＰＥＧポリマー）の場合、いくつかの実施形態では
、該ポリマーは、２つのタンパク質の接続末端で末端アミノ酸と反応するように、各末端
を反応性の化学官能基で官能化される。
リンカー（上述したペプチド結合以外）が化学反応からなる場合、いくつかの実施形態
では、化学官能基（例えば、アミン、カルボン酸、エステル、アジド、または他の官能基
）は、１つのタンパク質のＣ末端及び別のタンパク質のＮ末端にそれぞれ合成的に結合さ
れる。いくつかの実施形態では、該２つの官能基は次いで合成化学手段で反応して化学結
合を形成し、ひいては該２つのタンパク質を接続する。
スペーサ
本開示において、いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインモノマー、アルブミン結合ペ
プチド、もしくはＨＳＡ、及び本開示のポリペプチド間のリンカーは、約１〜２００アミ
ノ酸を含むアミノ酸スペーサである。適切なペプチドスペーサとしては、柔軟なアミノ酸
残基、例えば、グリシン及びセリンを含むペプチドリンカーが挙げられる。リンカー配列
の例は、表１５に示される。いくつかの実施形態では、スペーサはモチーフ、例えば、Ｇ
Ｓ、ＧＧ、ＧＧＳ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧＳ（配列番号１６３）、ＧＧＳＧ（配列番号１６４
）、またはＳＧＧＧ（配列番号１６５）の複数または反復モチーフを含む。いくつかの実
施形態では、スペーサはＧＳのモチーフ、例えば、ＧＳ、ＧＳＧＳ（配列番号１６６）、
ＧＳＧＳＧＳ（配列番号１６７）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１６８）、ＧＳＧＳＧＳ
ＧＳＧＳ（配列番号１６９）、またはＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号１７０）を含
む２〜１２個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、スペーサはＧＧＳのモチーフ
、例えば、ＧＧＳ、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号１７１）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１
７２）、及びＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号１７３）を含む３〜１２個のアミノ酸
を含む。いくつかの実施形態では、スペーサはＧＧＳＧ（配列番号１６４）のモチーフ、
例えば、ＧＧＳＧ（配列番号１６４）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１７４）、またはＧ
ＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号１７５）を含む４〜１２個のアミノ酸を含む。いくつ
かの実施形態では、スペーサはＧＧＧＧＳ（配列番号１６３）のモチーフ、例えば、ＧＧ
ＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１７６）を含む。いくつかの実施形態では、スペ
ーサはグリシン及びセリン以外のアミノ酸を含み、例えば、ＡＡＳ（配列番号１７７）、
ＡＡＡＬ（配列番号１７８）、ＡＡＡＫ（配列番号１７９）、ＡＡＡＲ（配列番号１８０
）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８１）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配
列番号１８２）、ＡＥＡＡＡＫＥＡＡＡＫＡ（配列番号１８３）、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱ
ＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）、ＧＧＧＧＡＧＧＧＧ（配列番号１８５）、ＧＥＮ
ＬＹＦＱＳＧＧ（配列番号１８６）、ＳＡＣＹＣＥＬＳ（配列番号１８７）、ＲＳＩＡＴ
（配列番号１８８）、ＲＰＡＣＫＩＰＮＤＬＫＱＫＶＭＮＨ（配列番号１８９）、ＧＧＳ
ＡＧＧＳＧＳＧＳＳＧＧＳＳＧＡＳＧＴＧＴＡＧＧＴＧＳＧＳＧＴＧＳＧ（配列番号１９
０）、ＡＡＡＮＳＳＩＤＬＩＳＶＰＶＤＳＲ（配列番号１９１）、またはＧＧＳＧＧＧＳ
ＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＥＧＧＧＳＧＧＧＳ（配列番号１９２）を含
む。
いくつかの実施形態では、スペーサはモチーフ、例えば、ＥＡＡＡＫ（配列番号１９３
）の複数または反復モチーフを含む。いくつかの実施形態では、スペーサはモチーフ、例
えば、プロリンリッチ配列の複数または反復モチーフ、例えば、Ｘが任意のアミノ酸（例
えば、Ａ、Ｋ、またはＥ）であり、ｎが１〜５である（ＸＰ）ｎ、及びＰＡＰＡＰ（配列
番号１９４）を含む。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
いくつかの実施形態では、用いる該ペプチドスペーサ及びアミノ酸の長さは、関与する
２つのタンパク質及び最終的なタンパク質融合ポリペプチドにおける所望の柔軟度に応じ
て調整される。いくつかの実施形態では、該スペーサの長さは、適切なタンパク質の折り
たたみを確保し、凝集体の生成を避けるように調整される。いくつかの実施形態では、Ｈ
ＳＡと本明細書に開示するポリペプチド間のスペーサ等のスペーサは、ＡまたはＡＡＡＬ
（配列番号１７８）である。
ＩＸ．ベクター、宿主細胞、及びタンパク質産生
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドは、宿主細胞から産生される。宿主細
胞とは、それらの対応する核酸から本明細書に記載のポリペプチド及び融合ポリペプチド
を発現するのに必要な細胞成分、例えば、細胞小器官を含む媒体を指す。いくつかの実施
形態では、該核酸は、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リン
酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、感染等によって宿主細胞に導入され
た核酸ベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸ベクターの選択は、使用され
る宿主細胞に依存する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核生物（例えば、細菌
）または真核生物（例えば、哺乳類）起源のいずれかのものである。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例
えば、表２、５、及び６に示す任意のバリアント）ならびに融合パートナー、例えば、Ｆ
ｃバリアント、ＨＳＡ、及びアルブミン結合ペプチドを含むポリペプチド構築物は、核酸
、好ましくは、該ポリペプチド構築物（例えば、Ｆｃバリアント、リンカー、及び融合パ
ートナー）をコードする核酸を含む発現ベクターとともに形質転換された宿主細胞を、該
ポリペプチド構築物の発現を誘導するまたは引き起こすのに適切な条件下で培養すること
によって産生される。いくつかの実施形態では、発現に適切な条件は、選択された発現ベ
クターと宿主細胞によって変化する。いくつかの実施形態では、哺乳類細胞、細菌、昆虫
細胞、及び酵母が挙げられるがこれらに限定されない多種多様な適切な宿主細胞が用いら
れる。例えば、本開示において用途を見出す様々な細胞株は、アメリカン・タイプ・カル
チャー・コレクションより入手可能なＡＴＣＣ（登録商標）の細胞株カタログに記載され
ている。いくつかの実施形態では、本開示のＦｃバリアントは、当該細胞株の遺伝子操作
もしくはキフネンシンの添加等の細胞培養条件の変更によって、または原核生物（Ｅ．ｃ
ｏｌｉ等）等の元々グリコシル化しない宿主を使用することによって、当該細胞によって
発現されるタンパク質をグリコシル化しないように最適化される細胞で発現され、いくつ
かの場合において、該Ｆｃのグリコシル化配列の修飾は必要ではない。
核酸ベクター構築物及び宿主細胞
本開示のポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸配列は、様々な方法によって調
製することができる。これらの方法としては、オリゴヌクレオチド媒介型（または部位特
異的）突然変異生成及びＰＣＲ突然変異生成が挙げられるがこれらに限定されない。いく
つかの実施形態では、本開示のポリペプチドをコードする核酸分子は、標準的な技術、例
えば、遺伝子合成を用いて得られる。別の方法として、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイ
ンをコードする核酸分子は、標準的な技術、例えば、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（商標）突然
変異生成を用いて特定のアミノ酸置換を含めるために変異される。いくつかの場合におい
て、核酸分子は、ヌクレオチドシンセサイザーまたはＰＣＲ技術を用いて合成される。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物、例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
ト（例えば、表２、５、及び６に示す任意のバリアント）ならびに融合パートナー、例え
ば、Ｆｃバリアント、ＨＳＡ、及びアルブミン結合ペプチドを含むポリペプチド構築物を
コードする核酸は、該タンパク質を発現させるために発現ベクターに組み込まれる。タン
パク質発現のために様々な発現ベクターを利用することができる。発現ベクターは、自己
複製、染色体外ベクター、または宿主ゲノムに統合するベクターを含み得る。ベクターは
また、様々な成分またはエレメントを含むこともできる。例えば、いくつかの実施形態で
は、該ベクター成分としては、転写及び翻訳調節配列、例えば、プロモーター配列、リボ
ソーム結合部位、シグナル配列、転写開始及び終止配列、翻訳開始及び終止配列、３’及
び５’非翻訳領域（ＵＴＲ）、ならびにエンハンサーまたはアクチベーター配列、複製起
点、選択マーカー遺伝子、ならびに目的のポリペプチドをコードする核酸配列、及び転写
終止配列が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、発現ベクター
は、制御または調節配列、選択マーカー、任意の融合パートナー、さらなるエレメント、
またはそれらの任意の組合せに作動可能に連結されたタンパク質を含む。用語「作動可能
に連結された」とは、該核酸が、別の核酸配列と機能的な関係に配置されることを意味す
る。一般に、これらの発現ベクターは、Ｆｃバリアントをコードする核酸に作動可能に連
結された転写及び翻訳調節核酸を含み、通常、該タンパク質を発現するために使用される
宿主細胞に適切である。抗生物質抵抗性遺伝子や蛍光タンパク質遺伝子等であるがこれら
に限定されない選択遺伝子またはマーカーは、発現ベクターを含む宿主細胞を、例えば、
抗生物質または蛍光発現によって選択するために使用することができる。様々な選択遺伝
子が利用可能である。
いくつかの実施形態では、ベクターの成分または要素は、発現ベクターが宿主細胞型と
適合するように最適化される。本開示で用途を見出す発現ベクターとしては、哺乳類細胞
、細菌、昆虫細胞、酵母、及びインビトロ系でタンパク質発現を可能にするものが挙げら
れるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドを産生するため、哺乳類細胞が宿
主細胞として用いられる。哺乳類細胞型の例としては、ヒト胚腎臓（ＨＥＫ）（例えば、
ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ ２９３Ｆ）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｈｅ
Ｌａ、ＣＯＳ、ＰＣ３、Ｖｅｒｏ、ＭＣ３Ｔ３、ＮＳ０、ＳＰ２／０、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ
、ＭＤＣＫ、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０、Ｔ４７Ｄ、Ｎ
Ｓ０（内因的にいかなる免疫グロブリン鎖も産生しないマウス骨髄腫細胞系）、ＣＲＬ７
Ｏ３Ｏ、及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実
施形態では、本開示のポリペプチドを産生するため、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が宿主細胞として
用いられる。Ｅ．ｃｏｌｉ株の例としては、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ（登録商標
）３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ λ １７７６（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，５３７、
Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３）（ＡＴＣＣ（登録商標）ＢＡＡ−１０２５）、及びＥ
．ｃｏｌｉ ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ（登録商標）３１，６０８）が挙げられるがこれらに
限定されない。
異なる宿主細胞は、タンパク質産物の翻訳後プロセシング及び修飾（例えば、グリコシ
ル化）に特徴的で特異的な機序を有する。いくつかの実施形態では、発現されたポリペプ
チドの正確な修飾及びプロセシングを確実にするために適切な細胞株または宿主系が選択
される。ベクターがタンパク質産生用の宿主細胞に導入されると、宿主細胞は、プロモー
ターの誘導、形質転換体の選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅に応じて修
飾した通常の栄養培地で培養される。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物、例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
ト（例えば、表２、５、及び６に示す任意のバリアント）ならびに融合パートナー、例え
ば、Ｆｃバリアント、ＨＳＡ、及びアルブミン結合ペプチドを含むポリペプチド構築物は
、当該発現構築物が、レトロウイルスやアデノウイルス等のウイルスを用いて当該哺乳類
細胞に導入される系を含めた哺乳類の発現系で発現される。いくつかの実施形態では、ヒ
ト、マウス、ラット、ハムスター、または霊長類細胞が利用される。適切な細胞としては
、既知の研究細胞も含まれ、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＨＯ、ＣＯＳ、及
び２９３細胞が挙げられるがこれらに限定されない。別の方法として、いくつかの実施形
態では、タンパク質は細菌細胞で発現される。細菌の発現系は当該技術分野で周知であり
、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉ
ｌｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｃｒｅｍｏｒｉｓ、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ
ｕｓ ｌｉｖｉｄａｎｓが含まれる。いくつかの場合において、Ｆｃバリアントを含むポ
リペプチド構築物は、Ｓｆ９及びＳｆ２１細胞等であるがこれらに限定されない昆虫細胞
、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｈ
ａｎｓｅｎｕｌａ及びＹａｒｒｏｗｉａ属由来の微生物であるがこれらに限定されない酵
母細胞で産生される。いくつかの場合において、Ｆｃバリアントを含むポリペプチド構築
物は、無細胞翻訳系を用いてインビトロで発現される。原核性（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）
及び真核性（例えば、小麦胚芽、ウサギ網状赤血球）の両方の細胞由来のインビトロ翻訳
系が利用可能であり、いくつかの実施形態では、目的のタンパク質の発現レベル及び機能
特性に基づいて選択される。例えば、当業者によって理解されるように、インビトロ翻訳
は、いくつかのディスプレイ技術、例えば、リボソームディスプレイに必要である。さら
に、いくつかの実施形態では、該Ｆｃバリアントは、液相ペプチド合成及び固相ペプチド
合成等であるがこれらに限定されない化学合成法によって産生される。細菌抽出物等の非
グリコシル化系を用いるインビトロ転写の場合、該Ｆｃは、天然のグリコシル化部位が存
在していてもグリコシル化されず、ひいては、該Ｆｃの不活化が同等に得られる。
いくつかの実施形態では、ポリペプチド構築物は、天然に存在するアミノ酸と同じよう
な方法で機能する非天然のアミノ酸、アミノ酸類似物、アミノ酸模倣体、またはそれらの
任意の組合せを含む。天然にコードされたアミノ酸とは、通常、２０の通常のアミノ酸（
アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グル
タミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェ
ニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリン
）ならびにピロリシン及びセレノシステインを指す。アミノ酸類似体とは、天然に存在す
るアミノ酸と同じ基本化学構造、例えば、水素に結合した炭素、カルボキシル基、アミノ
基、及びＲ基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキ
シド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。いくつかの実施形態では、かかる類似体は
、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または修飾されたペプチド骨格を有するが、
通常は、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持している。
タンパク質の産生、回収、及び精製
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドを産生するために用いられる宿主細胞
は、選択された宿主細胞の培養に適した培地で増殖させる。哺乳類宿主細胞に適した培地
の例としては、最小必須培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、Ｅ
ｘｐｉ２９３（商標）発現培地、胎児ウシ血清（ＦＢＳ）が補充されたＤＭＥＭ、及びＲ
ＰＭＩ−１６４０が挙げられる。細菌宿主細胞に適した培地の例としては、選択剤等の必
要な栄養素補充物、例えば、アンピシリンを含むルリアブロス（ＬＢ）が挙げられる。い
くつかの実施形態では、宿主細胞は、適切な温度、例えば、約２０℃〜約３９℃、例えば
、約２５℃〜約３７℃、好ましくは３７℃、及びＣＯ２レベル、例えば、約５％〜１０％
で培養される。いくつかの実施形態では、培地のｐＨは、主に宿主生物に応じて約ｐＨ６
．８〜ｐＨ７．４、例えば、ｐＨ７．０である。誘導プロモーターが発現ベクターに使用
される場合、タンパク質発現は、該プロモーターの活性化に適切な条件下で誘導され得る
。
いくつかの実施形態では、タンパク質の回収は、例えば、浸透圧衝撃、超音波処理、ま
たは溶解による宿主細胞の破壊を伴う。細胞が破壊されると、細胞残屑は、遠心分離また
は濾過によって除去される。該タンパク質は、その後さらに精製され得る。いくつかの実
施形態では、本開示のポリペプチドは、様々なタンパク質精製法によって、例えば、クロ
マトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラ
フィー、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、またはタン
パク質精製の任意の他の標準的な技術によって精製される。例えば、いくつかの実施形態
では、該タンパク質は、アフィニティーカラム、例えば、プロテインＡカラム（例えば、
ＰＯＲＯＳプロテインＡクロマトグラフィー）とクロマトグラフィーカラム（例えば、Ｐ
ＯＲＯＳ ＨＳ−５０カチオン交換クロマトグラフィー）を適切に選択し組み合わせるこ
と、濾過、限外濾過、脱塩、及び透析手順によって単離ならびに精製される。いくつかの
実施形態では、ポリペプチドは、精製を容易にするため、ペプチド等のマーカー配列に結
合される。マーカーアミノ酸配列の例は、ニッケル官能化アガロースアフィニティーカラ
ムにマイクロモルの親和性で結合することができるヘキサヒスチジンペプチド（Ｈｉｓ６
タグ）である。別の方法として、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質由来のエピト
ープに対応するヘマグルチニン「ＨＡ」タグを用いることができる。
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリア
ント（例えば、表２、５、及び６に示す任意のバリアント）ならびに融合パートナー、例
えば、Ｆｃバリアント、ＨＳＡ、及びアルブミン結合ペプチドを含むポリペプチド構築物
は、対象（例えば、ヒト）の細胞によって、例えば、遺伝子治療との関連で、本開示のポ
リペプチドをコードする核酸分子を含むウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベク
ター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、変異ワクシニアウ
イルスアンカラ（ＭＶＡ）等のワクシニアウイルスベクター））、アデノ随伴ウイルスベ
クター、及びアルファウイルスベクター）等のベクターを投与することによって産生され
る。該ベクターは、一旦対象の細胞内に入ると（例えば、形質転換、トランスフェクショ
ン、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、直接マイクロインジェクション、
感染等によって）、本明細書に開示するポリペプチドの発現に用いることができる。いく
つかの場合において、ポリペプチドは細胞から分泌される。いくつかの実施形態では、疾
患または障害の治療が望ましい結果であれば、さらなる措置は必要ない。いくつかの実施
形態では、該タンパク質の回収が望まれる場合、該対象から採血され、様々な方法によっ
て該血液から該タンパク質が精製される。
Ｘ．医薬組成物及び医薬品
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ド
メインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型シグナル制御タンパク質α（
ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
本開示は、本明細書に記載のポリペプチド、例えば、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリ
アントを有するポリペプチドを含む医薬組成物を特徴とする。いくつかの実施形態では、
本開示の医薬組成物は、本開示のポリペプチドを治療用タンパク質として含む。いくつか
の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドを含む本開示の医薬組成物は、治療にお
いて、他の薬剤または組成物（例えば、治療薬、生物製剤、小分子、またはそれらの任意
の組合せ）と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、１つ以上のさらなる治
療効果のある薬剤、例えば、小分子、化学的化合物、または生体化合物、例えば、ｓｉＲ
ＮＡ、短いポリペプチド、及び治療効果のある抗体を含むがこれらに限定されないポリヌ
クレオチド及びポリペプチドは、任意に、本明細書に記載のポリペプチドの医薬組成物に
処方される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド構築物の製剤は、
保存のため、所望の純度を有する本明細書に記載のポリペプチド構築物を、任意の、医薬
的に許容される担体、賦形剤、または安定剤とともに凍結乾燥製剤または水溶液の形態で
混合することによって調製される。いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、本
開示のポリペプチドをコードする核酸分子（ＤＮＡもしくはＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ）
、またはかかる核酸分子を含むベクターを含む。
医薬組成物における許容される担体、賦形剤、または安定剤は、好ましくは、投与され
る用量及び濃度でレシピエントに対して非毒性である。いくつかの実施形態では、許容さ
れる担体、賦形剤、及び安定剤としては、緩衝剤、例えば、リン酸、クエン酸、ＨＥＰＥ
Ｓ、ＴＡＥ、及び他の有機酸、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン、保存剤
（例えば、塩化ヘキサメトニウム、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩
化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコー
ル、アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシ
ノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）、低分子量（例
えば、約１０残基未満）のポリペプチド、タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ゼ
ラチン、デキストラン、及び免疫グロブリン、親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロ
リドン、アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、ヒスチジン、及びリジン、単糖類、二
糖類、及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロース、及びソルビト
ール、キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハ
ロース、またはソルビトール、甘味料及び他の矯味矯臭剤、充填剤、例えば、微結晶性セ
ルロース、ラクトース、トウモロコシ及び他のデンプン、結合剤、添加剤、着色剤、塩形
成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）、非イオ
ン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、ならびにポ
リエチレングリコール（ＰＥＧ）、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドを含む医薬組成物は、水溶性
の形態であり、例えば、酸及び塩基の付加塩の両方を含むことが意図される医薬的に許容
される塩として存在する。用語「医薬的に許容される酸付加塩」とは、遊離の塩基の生物
学的有効性を維持し、他の面では不適切でなく、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫
酸、硝酸、リン酸等、及び有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビ
ン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息
香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホ
ン酸、サリチル酸等で形成される塩を指す。用語「医薬的に許容される塩基付加塩」とし
ては、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄
、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩等の無機塩基から誘導されるものが挙げられる。
特に好ましいのは、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、及びマグネシウ
ム塩である。医薬的に許容される有機非毒性塩基から誘導される塩としては、一級、二級
、及び三級アミン、天然に存在する置換アミンを含めた置換アミン、環状アミン、ならび
に塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルア
ミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、及びエタノールアミンの塩が挙げられる
。インビボ投与に使用される製剤は、好ましくは無菌である。これは、除菌膜を通す濾過
または他の方法によって達成することができる。
いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、注射製剤の形態で非経口投与される
。いくつかの実施形態では、注射用の医薬組成物は、無菌溶液または任意の医薬的に許容
される液体を媒体として用いて処方される。医薬的に許容される媒体としては、滅菌水、
生理食塩水、及び細胞培地（例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、α改変
イーグル培地（α−ＭＥＭ）、及びＦ−１２培地）が挙げられるがこれらに限定されない
。様々な製剤方法が利用可能である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、免疫リポソームとして処
方される。リポソームは、哺乳類に治療薬を送達するのに有用な、様々な種類の脂質、リ
ン脂質、または界面活性剤を含む小胞である。抗体またはＦｃ融合物を含むリポソームは
、当技術分野で既知の様々な方法によって調製することができる。いくつかの実施形態で
は、リポソームの成分は、生体膜の脂質配置と同様の二重層構造で配置されている。いく
つかの実施形態では、リポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、及びＰＥ
Ｇ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた
逆相蒸発法により生成される。いくつかの実施形態では、リポソームは、所望の直径を有
するリポソームを得るために所定の細孔サイズのフィルターを通して押し出される。いく
つかの実施形態では、化学療法剤または他の治療効果のある薬剤は、任意に、リポソーム
内に含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド構築物及び他の治療効果のあ
る薬剤は、コアセルベーション技術、界面重合（例えば、ヒドロキシメチルセルロースも
しくはゼラチンマイクロカプセルを用いて、またはポリ（メタクリル酸メチル）マイクロ
カプセルを用いて）、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロス
フェア、マイクロエマルション、ナノ粒子、及びナノカプセル）、ならびにマクロエマル
ションが挙げられるがこれらに限定されない方法によって調製されるマイクロカプセルに
封入される。
いくつかの実施形態では、徐放性製剤が調製される。徐放性製剤の好適な例としては、
固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、これらのマトリックスは、成形物
品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放マトリックスの例と
しては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル
）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸とＬ−グルタミ
ン酸ガンマエチルのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰ
ＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドからなる注射用ミク
ロスフェア）等の分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロ
キシ酪酸、及びポリ−ＤＬ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド（ＰＬＧ）のマトリックス内に
組み込まれた所望の生物活性分子からなるミクロスフェアベースの送達系であるＰｒｏＬ
ｅａｓｅ（登録商標）（Ａｌｋｅｒｍｅｓから市販されている）が挙げられる。いくつか
の徐放性製剤は、数か月、例えば、１〜６か月にわたる分子の放出を可能にする一方、他
の製剤は、本開示の医薬組成物をより短期間、例えば、数日から数週間放出する。
いくつかの実施形態では、製剤処方中の本明細書に記載のポリペプチドの濃度は、約０
．１〜１００重量％まで様々である。いくつかの場合において、本明細書に記載のポリペ
プチドの濃度は、０．００３〜１．０モルの範囲である。いくつかの場合において、製剤
処方中の該ポリペプチドの濃度は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約１０
ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬまたは約２０ｍｇ／ｍＬ〜約３０ｍｇ／ｍＬ）まで様々で
ある。いくつかの実施形態では、患者を治療するため、本明細書に記載のポリペプチドの
治療有効用量が投与される。用語「治療有効用量」は、それが投与される効果を生じる用
量を指す。正確な用量は、当該治療の目的に依存する。いくつかの実施形態では、用量は
、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重またはそれ以上、例えば、０．１、１、５、１０、１
５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｍｇ／ｋｇ体重に及ぶ。いくつかの
実施形態では、ポリペプチド構築物の分解、全身送達対局所送達、及び新たなプロテアー
ゼ合成速度、ならびに年齢、体重、全身状態、性別、食事、投与時間、薬物相互作用、及
び状態の重症度に合わせて調節が必要である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び製剤は、それを必要とする対象
に対して投与される。いくつかの実施形態では、かかる投与はインビボで行われる。いく
つかの実施形態では、かかる投与はエキソビボで行われる。いくつかの実施形態では、本
明細書に記載のポリペプチドを含む医薬組成物の投与は、経口、皮下、静脈内、鼻腔内、
耳内（ｉｎｔｒａｏｔｉｃａｌｌｙ）、経皮、局所（例えば、ゲル、軟膏、ローション剤
、クリーム剤等）、腹腔内、筋肉内、肺内（例えば、Ａｒａｄｉｇｍから市販されている
吸入可能技術ＡＥＲｘ（登録商標）、またはＩｎｈａｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓか
ら市販されている肺送達システムＩｎｈａｎｃｅ（商標））、経膣、非経口、直腸、また
は眼内が挙げられるがこれらに限定されない様々な方法で行われる。いくつかの実施形態
では、該医薬組成物は、導入の方法に応じて適切に処方される。
いくつかの実施形態では、遺伝子治療用の医薬組成物は、許容される希釈剤中にあるか
、または、遺伝子導入媒体が埋め込まれた徐放性マトリックスを含む。いくつかの実施形
態では、インビボ遺伝子導入媒体として使用されるベクターとしては、レトロウイルスベ
クター、アデノウイルスベクター、ポックスウイルスベクター（例えば、変異ワクシニア
ウイルスアンカラ等のワクシニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、及
びアルファウイルスベクターが挙げられるがこれらに限定されない。
ＸＩ．経路、用量、及び投与
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドを治療用タンパク質として含む医薬組
成物は、例えば、静脈内投与、非経口投与、皮下投与、筋肉内投与、動脈内投与、髄腔内
投与、または腹腔内投与用に処方される。いくつかの実施形態では、該医薬組成物は、経
口、経鼻、スプレー、エアロゾル、直腸、または膣投与用に処方されるか、またはそれを
介して投与される。注射製剤に対しては、各種の有効な医薬担体が利用可能である。
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドをコードする核酸分子またはかかる核
酸分子を含むベクターを含む医薬組成物は、遺伝子導入法によって投与される。様々な遺
伝子導入法が利用可能である。いくつかの実施形態では、インビボ遺伝子導入及び発現に
使用されるベクターとしては、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ポッ
クスウイルスベクター（例えば、変異ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）等のワクシ
ニアウイルスベクター）、アデノ随伴ウイルスベクター、及びアルファウイルスベクター
が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチド
をコードするｍＲＮＡ分子は、直接対象に投与される。
本開示の医薬組成物の用量は、投与経路、治療される疾患、及び当該対象の身体特性、
例えば、年齢、体重、全身状態を含めた要因に依存する。いくつかの実施形態では、単回
投与に含まれる本開示のポリペプチドの量は、有意な毒性を誘導することなく疾患を効果
的に予防、遅延、または治療する量である。いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成
物は、本開示のポリペプチドを０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．０１、０．１
、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３
０、３５、４０、４５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４０
０、４５０、または５００ｍｇ／ｋｇ）、より具体的な実施形態では、約０．１〜約５０
ｍｇ／ｋｇ、より具体的な実施形態では、約１〜約３０ｍｇ／ｋｇに及ぶ用量含む。いく
つかの実施形態では、用量は、当該対象の疾患の程度及び異なるパラメータに応じて医師
によって適応される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療薬及びポリペプチドの毒性は、標準的
な医薬手順によって、細胞培養または実験動物において、例えば、ＬＤ５０（集団の５０
％に対して致死的な用量）またはＬＤ１００（集団の１００％に対して致死的な用量）を
測定することによって決定される。いくつかの実施形態では、これらの細胞培養アッセイ
及び動物実験から得られるデータは、ヒトでの使用に対して非毒性である用量範囲を処方
するのに使用される。本明細書に記載のタンパク質の用量は、好ましくは、毒性がほとん
どまたは全くない有効用量を含む循環濃度の範囲内にある。いくつかの実施形態では、用
量は、用いられる剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で異なる。いくつか
の実施形態では、正確な処方、投与経路、及び用量は、当該患者の状態を考慮して個々の
医師によって選択される。
いくつかの実施形態では、該医薬組成物は、用量処方と適合する方法で、疾患もしくは
障害の症状の改善または矯正をもたらすのに治療上有効であるような量で投与される。い
くつかの実施形態では、医薬組成物は、様々な剤形、例えば、静脈内投与形態、皮下投与
形態、及び経口投与形態（例えば、摂取可能な溶液、薬物放出カプセル剤）で投与される
。一般に、治療用タンパク質は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、例えば、１〜５０ｍｇ／ｋ
ｇで投与される。いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチドを含む医薬組成物は、
それを必要とする対象に対して、例えば、毎日、毎週、毎月、半年ごと、毎年１回以上（
例えば、１〜１０回以上）、または医学的に必要に応じて投与される。用量は、単回また
は複数回投薬レジメンのいずれかで与えることができる。いくつかの実施形態では、投与
間のタイミングは、病状が改善されるにつれて減少するか、または、当該患者の健康状態
が悪化するにつれて増加する。
ＸＩＩ．治療方法
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
いくつかの実施形態において、本明細書にさらに開示するのは、野生型ＳＩＲＰ−α
Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、
残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基
に少なくとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、また
はその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドを投与することを含
む治療方法である。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＳＩＲＰ−αまたはＣＤ４７活性と関連した疾患
または障害、例えば、がん及び免疫疾患（例えば、自己免疫疾患及び炎症性疾患）に罹患
した患者を治療するために使用される医薬組成物ならびに治療方法を提供する。いくつか
の実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、対象に対して、該対象の標的細胞（
例えば、がん細胞）の食作用を増加させる方法で投与される。いくつかの実施形態では、
該ポリペプチドは、対象に対して、該対象のがん細胞を殺傷する方法で投与される。いく
つかの実施形態では、該ポリペプチドは、対象に対して、該対象の制御性Ｔ細胞を除去す
る方法で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチドは、対象
に対して、該対象の造血幹細胞の生着を増加させる方法で投与され、該方法は、該対象の
ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７間の相互作用を調節することを含む。いくつかの実施形態では、
本明細書に記載のポリペプチドは、対象に対して、該対象の免疫反応を変化させる（例え
ば、免疫反応を抑制する）方法で投与される。いくつかの実施形態では、前述の方法は、
疾患の他の治療方法を伴う。いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、ポ
リペプチド（例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント）と第二の治療薬の組合せである。
いくつかの実施形態では、該組合せは、ポリペプチド（例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリ
アント）と第二の治療薬を含み、該第二の治療薬は抗体である。いくつかの実施形態では
、該組合せは、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、
ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残
基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択さ
れる残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイ
ン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント、ならびに抗体を含む。いくつ
かの実施形態では、該組合せは、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、
１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有する
ポリペプチド、ならびに抗体を含む。
いくつかの実施形態では、前述の方法は、ポリペプチドの投与が治療選択である疾患の
治療方法とともに使用される。上記の非限定的な例としては、抗体またはタンパク質断片
の使用が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、抗体またはタンパク質断片は、
本明細書に開示するＦｃバリアントポリペプチドと組み合わせて投与される。いくつかの
実施形態では、本明細書に開示するポリペプチド構築物は、他の薬剤の食作用を改善する
ために用いられる。
治療方法は、疾患（例えば、がん）を有する対象に対して、（ｉ）ＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド及び任意に（ｉｉ）抗体を投与することを含む。いくつか
の実施形態では、対象における疾患（例えば、がん）の治療の前に、該対象のＳＩＲＰ−
αのアミノ酸配列（複数可）が、例えば、該ＳＩＲＰ−α遺伝子をコードする２つの対立
遺伝子の各々から決定される。本治療方法において、当該対象由来の生体試料におけるＳ
ＩＲＰ−αポリペプチドのアミノ酸配列（複数可）は最初に決定される。該対象は次に、
治療有効量の本開示のポリペプチドを投与される。いくつかの実施形態では、投与される
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、当該ＳＩＲＰ−αポリペプチドのＣＤ４７に
対する親和性を高めるアミノ酸変化の導入を除いて、当該対象の生体試料におけるＳＩＲ
Ｐ−αポリペプチドのものと同じアミノ酸配列を有する。該ポリペプチドにおける高親和
性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、好ましくは、該ポリペプチドの投与後に当該対象に
おいて最小限の免疫原性を有する。
いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に開示するポリペプチドに加えて投与され
る。いくつかの実施形態では、該抗体は、該ポリペプチドと同時投与される。いくつかの
実施形態では、該抗体は、同時に、例えば、該ポリペプチドと該抗体を両方とも有する医
薬組成物で投与される。別の方法として、該抗体は、該ポリペプチドの投与の前または後
のいずれかに投与される。いくつかの実施形態では、該ポリペプチド及び該抗体は、実質
的に同時に（例えば、互いに１週間、６、５、４、３、２、１日、１２、６、３、２、１
時間以内、または実質的に同時に）投与され、次いで抗体を単独で投与する。いくつかの
実施形態では、該抗体を最初に投与し、次いで該ポリペプチド及び該抗体を実質的に同時
に（すなわち、互いに１週間、６、５、４、３、２、１日、１２、６、３、２、１時間以
内、または実質的に同時に）投与する。
同時投与されるもしくは組成物で供給されるまたは本明細書に開示の方法で供給される
抗体とは、がん細胞等の細胞やＴ細胞（例えば、制御性Ｔ細胞）等の免疫系の細胞を標的
とする抗体を指す。抗体は、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ、
ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、またはＩｇＤのものであり得る。いくつかの実施形態では、該
抗体は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形態では、該抗体は、ヒ
トＩｇＧ２アイソタイプ抗体である。いくつかの実施形態では、該抗体は、ヒトＩｇＧ４
アイソタイプ抗体である。
用語「抗体」は、本明細書では最も広義に使用され、それらが所望の活性を示す限り、
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）
、抗体断片、及び抗体様タンパク質を含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包
含する。「抗体断片」には、インタクトな抗体の一部、好ましくは、インタクトな抗体の
抗原結合領域または可変領域が含まれる。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ
（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、二重特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、及び多重
特異性抗体が挙げられる。モノクローナル抗体とは、実質的に同種の抗体の集団から得ら
れる抗体を指し、例えば、該集団における個別の抗体は、微量で存在し得る可能性のある
自然発生の突然変異を除いて同じ一次配列を有する。モノクローナル抗体は、高度に特異
的であり、単一の抗原部位（例えば、がん抗原のエピトープ）に対することができる。異
なるエピトープに対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、
各モノクローナル抗体は、一般に、抗原上の単一のエピトープに対するものである。「モ
ノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特
徴を示すものであり、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈される
べきではない。いくつかの実施形態では、本開示の組成物における抗体は、抗体依存性細
胞食作用（ＡＤＣＰ）または抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を引き起こす。かかる方
法を用いて治療される疾患の非限定的な例としては、血液がん等のがん、例えば、白血病
（例えば、急性骨髄性白血病）、免疫障害（例えば、対象の障害のある、もしくは減少し
た免疫反応を高めるため、または対象の過活性な免疫反応を制限するため）、及び病原性
感染が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、本明細書に記載のポリペプチド
（例えば、ＳＩＲＰ−ａ Ｄ１バリアント）、及びがん抗原を標的とする抗体を投与する
ことを含む。いくつかの実施形態では、抗体または抗体様タンパク質によって標的化され
るがん抗原は、当該表面のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ分子との複合体の細胞内腫
瘍関連抗原（ＴＡＡ）由来の露出したペプチドである（ＭＨＣ／ペプチド複合体としても
知られる）。かかるがん抗原、例えば、本開示の組成物における抗体または抗体様タンパ
ク質によって標的化されるがん細胞の表面に露出されるＨＬＡ分子との複合体のペプチド
の非限定的な例としては：ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ１、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミ
リー（ＭＡＧＥ−Ａ３）、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ
７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミ
ニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥｐｈＡ３、ＳＡＰ
−１、ＢＩＮＧ−４、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、メソテリン、
ＢＲＣＡ１／２（変異）、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３（変異）、Ｒａ
ｓ（変異）、β−カテニン（変異）、ＴＧＦ−βＲＩＩ（変異）、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７が
挙げられる。かかる抗体の例としては、ＥＳＫ１（ＷＴ−１）、ＲＬ１Ｂ（Ｈｅｒ２−Ｅ
７５）、Ｐｒ２０（ＰＲＡＭＥ）、及び３．２Ｇ１（ｈＣＧβ）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにがん抗原を標的とする抗体を投与することを含
む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ド
メインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン
に対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残
基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ
酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ
１バリアントを含むポリペプチド、ならびにＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ１、ＳＳＸ−２
、ＭＡＧＥファミリー（ＭＡＧＥ−Ａ３）、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メラン−Ａ／Ｍ
ＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−
７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、Ｅ
ｐｈＡ３、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビ
ン、メソテリン、ＢＲＣＡ１／２（変異）、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５
３（変異）、Ｒａｓ（変異）、β−カテニン（変異）、ＴＧＦ−βＲＩＩ（変異）、ＨＰ
Ｖ Ｅ６、Ｅ７を標的とする抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明
細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸
の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基
３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群か
ら選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ
１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチド、
ならびにＥＳＫ１（ＷＴ−１）、ＲＬ１Ｂ（Ｈｅｒ２−Ｅ７５）、Ｐｒ２０（ＰＲＡＭＥ
）、及び３．２Ｇ１（ｈＣＧβ）である抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９の配列
を有するポリペプチド及びがん抗原を標的とする抗体を投与することを含む。いくつかの
実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７
〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配
列を有するポリペプチド、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ１、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥフ
ァミリー（ＭＡＧＥ−Ａ３）、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、
ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟
ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥｐｈＡ３、Ｓ
ＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、メソテリ
ン、ＢＲＣＡ１／２（変異）、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３（変異）、
Ｒａｓ（変異）、β−カテニン（変異）、ＴＧＦ−βＲＩＩ（変異）、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ
７を標的とする抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示す
る方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３
５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有するポリペプチド、ならび
にＥＳＫ１（ＷＴ−１）、ＲＬ１Ｂ（Ｈｅｒ２−Ｅ７５）、Ｐｒ２０（ＰＲＡＭＥ）、及
び３．２Ｇ１（ｈＣＧβ）である抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、がん細胞によって発現されるタンパク質に
結合することによって、がん細胞を標的化する。いくつかのタンパク質は、非がん細胞よ
りもがん細胞において高レベルで発現される。例えば、がん抗原は、がん細胞によって優
先的に発現されるタンパク質であり（例えば、それは非がん細胞よりもがん細胞において
高レベルで発現され）、いくつかの例では、それはがん細胞のみで発現される。タンパク
質、例えば、本開示の組成物における抗体によって標的化されるがん細胞によって発現さ
れるタンパク質の非限定的な例としては：４−１ＢＢ、５Ｔ４、ＡＧＳ−１６、ＡＬＫ１
、ＡＮＧ−２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ｃ−ｆｍｓ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＡ６、ＣＣＲ４、
ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３
２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ
７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＬＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＳ１、
ＣＴＬＡ−４、ＣＸＣＲ４、ＤＬＬ−４、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ−１、ＥＮＰＰ３、ＥｐｈＡ
３、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、フィブロネクチン、ＦＲ−アルファ、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容
体、ＧＣＣ、ＧＤ２、グリピカン−３、ＧＰＮＭＢ、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ−Ｄ
Ｒ、ＩＣＡＭ−１、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−３Ｒ、ＬＡＧ−３、ＬＩＶ−１、メソテリン、
ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＮａＰｉ２ｂ、Ｎｅｃｔｉｎ−４、Ｎｏｔｃｈ ２、Ｎｏｔｃｈ
１、ＯＸ４０、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤＧＦＲ−α、ＰＳ、ＰＳＭＡ
、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＴＥＭ１、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＤＫＫ
−１、ＣＳＦ−１ Ｒ、またはそれらの任意の組合せが挙げられる。いくつかの実施形態
では、本明細書に記載のポリペプチドは、チェックポイント阻害剤、例えば、ＣＴＬＡ−
４の抗体阻害剤（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）、ＰＤ−１の抗体阻害剤（例
えば、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＫ３４７５、別名ペンブロリズマブ、ＢＭＳ９３
６５５９、及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ならびにＬＡＧ−３の抗体阻害剤（例えば、ＢＭ
Ｓ９８６０１６）と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにがん細胞によって発現されるタンパク質を標的
とする抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は
、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生
型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基
５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少
なくとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはそ
の断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチド、ならびに４−１ＢＢ、
５Ｔ４、ＡＧＳ−１６、ＡＬＫ１、ＡＮＧ−２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ｃ−ｆｍｓ、
ｃ−Ｍｅｔ、ＣＡ６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２７
、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ
５２、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＬＤＮ
１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＳ１、ＣＴＬＡ−４、ＣＸＣＲ４、ＤＬＬ−４、ＥＧＦＲ、Ｅ
ＧＰ−１、ＥＮＰＰ３、ＥｐｈＡ３、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、フィブロネクチン、ＦＲ−
アルファ、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体、ＧＣＣ、ＧＤ２、グリピカン−３、ＧＰＮＭＢ、Ｈ
ＥＲ−２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ−ＤＲ、ＩＣＡＭ−１、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−３Ｒ、ＬＩＶ
−１、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＮａＰｉ２ｂ、Ｎｅｃｔｉｎ−４、Ｎｏｔｃ
ｈ ２、Ｎｏｔｃｈ １、ＯＸ４０、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤＧＦＲ−
α、ＰＳ、ＰＳＭＡ、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＴＥＭ１、ＶＥＧＦＲ、ＣＤ２５、
ＣＤ２７Ｌ、ＤＫＫ−１、ＣＳＦ−１ Ｒ、またはそれらの任意の組合せを標的とする抗
体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残
基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも
１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を
含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチド、ならびにＣＴＬＡ−４の抗体阻
害剤（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）、ＰＤ−１の抗体阻害剤（例えば、ニボ
ルマブ、ピディリズマブ、ＭＫ３４７５、別名ペンブロリズマブ、ＢＭＳ９３６５５９、
及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）、またはＬＡＧ−３の抗体阻害剤（例えば、ＢＭＳ９８６０１
６）である抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、及びがん細胞によって発現されるタンパク質を標
的とする抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法
は、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１
３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有するポリペプチド、及び４−１Ｂ
Ｂ、５Ｔ４、ＡＧＳ−１６、ＡＬＫ１、ＡＮＧ−２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ｃ−ｆｍ
ｓ、ｃ−Ｍｅｔ、ＣＡ６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ
２７、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、
ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９８、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＬ
ＤＮ１８．２、ＣＬＤＮ６、ＣＳ１、ＣＴＬＡ−４、ＣＸＣＲ４、ＤＬＬ−４、ＥＧＦＲ
、ＥＧＰ−１、ＥＮＰＰ３、ＥｐｈＡ３、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、フィブロネクチン、Ｆ
Ｒ−アルファ、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体、ＧＣＣ、ＧＤ２、グリピカン−３、ＧＰＮＭＢ
、ＨＥＲ−２、ＨＥＲ３、ＨＬＡ−ＤＲ、ＩＣＡＭ−１、ＩＧＦ−１Ｒ、ＩＬ−３Ｒ、Ｌ
ＡＧ−３、ＬＩＶ−１、メソテリン、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＮａＰｉ２ｂ、Ｎｅｃｔｉ
ｎ−４、Ｎｏｔｃｈ ２、Ｎｏｔｃｈ １、ＯＸ４０、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ
２、ＰＤＧＦＲ−α、ＰＳ、ＰＳＭＡ、ＳＬＴＲＫ６、ＳＴＥＡＰ１、ＴＥＭ１、ＶＥＧ
ＦＲ、ＣＤ２５、ＣＤ２７Ｌ、ＤＫＫ−１、ＣＳＦ−１ Ｒ、またはそれらの任意の組合
せを標的とする抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示す
る方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３
５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列を有するポリペプチド、ならび
にＣＴＬＡ−４の抗体阻害剤（例えば、イピリムマブ、トレメリムマブ）、ＰＤ−１の抗
体阻害剤（例えば、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＫ３４７５、別名ペンブロリズマブ
、ＢＭＳ９３６５５９、及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）、またはＬＡＧ−３の抗体阻害剤（例
えば、ＢＭＳ９８６０１６）である抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、本明細書に記載のポリペプチド
（例えば、ＳＩＲＰ−ａ Ｄ１バリアント）、及び免疫腫瘍学の抗体を投与することを含
む。いくつかの実施形態では、本開示の組成物に使用される抗体としては、セツキシマブ
、ネシツムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、
ＭＥＤ１６４６９、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ６３８３、
ＲＧ７８８８、イピリムマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ＰＦ−０５０８２５６６、
エノビリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、バンチクツマブ（ｖａｎｔｉｃｔｕ
ｍａｂ）、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、モガマリズマブ（ｍｏｇａｍａｌｉ
ｚｕｍａｂ）、ＳＡＲ６５０９８４、ダラツムマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエ
ムタンシン、ペルツズマブ、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、リツキシマブ、オ
ファツムマブ、オビヌツズマブ、ＲＧ７１５５、ＦＰＡ００８、パニツムマブ、ブレンツ
キシマブベドチン、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ベリムマブ、ベバシズマブ、デノスマブ、
パニツムマブ、ラムシルマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマ
ブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ピディリズマブ、またはＢＭ
Ｓ−９３６５９、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＳ１抗体、抗
ＣＤ３８抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗
ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＤ２７４抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ１３
７抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗ＦＺＤ７抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗Ｃ
ＣＲ４抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗Ｂ
ＡＦＦ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、または抗ＶＥＧＦＲ２抗体が挙げられるがこれらに限定さ
れない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ
１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６
、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるア
ミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α
Ｄ１バリアントを含むポリペプチド、ならびに抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗Ｃ
Ｄ１９抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＲＡＮ
ＫＬ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＤ２７４抗体、抗
ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗ＦＺＤ
７抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳ
Ｆ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＢＡＦＦ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、または抗ＶＥＧＦＲ２抗体
である抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は
、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生
型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基
５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少
なくとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはそ
の断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチド、ならびにセツキシマブ
、ネシツムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、
ＭＥＤ１６４６９、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ６３８３、
ＲＧ７８８８、イピリムマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ＰＦ−０５０８２５６６、
エノビリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、バンチクツマブ（ｖａｎｔｉｃｔｕ
ｍａｂ）、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、モガマリズマブ（ｍｏｇａｍａｌｉ
ｚｕｍａｂ）、ＳＡＲ６５０９８４、ダラツムマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエ
ムタンシン、ペルツズマブ、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、リツキシマブ、オ
ファツムマブ、オビヌツズマブ、ＲＧ７１５５、ＦＰＡ００８、パニツムマブ、ブレンツ
キシマブベドチン、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ベリムマブ、ベバシズマブ、デノスマブ、
パニツムマブ、ラムシルマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマ
ブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ピディリズマブ、またはＢＭ
Ｓ−９３６５９である抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにトラスツズマブである抗体を投与することを含
む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにリツキシマブである抗体を投与することを含む
。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにセツキシマブである抗体を投与することを含む
。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにダラツムマブである抗体を投与することを含む
。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにベリムマブである抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにベバシズマブである抗体を投与することを含む
。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにデノスマブである抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにパンチムマブ（ｐａｎｔｉｍｕｍａｂ）である
抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにラムシルマブである抗体を投与することを含む
。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにネシツムマブである抗体を投与することを含む
。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにニボルマブである抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにペンブロリズマブである抗体を投与することを
含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにアベルマブである抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにアテゾリズマブである抗体を投与することを含
む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにデュルバルマブである抗体を投与することを含
む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにＭＥＤＩ０６８０である抗体を投与することを
含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにピディリズマブである抗体を投与することを含
む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに
対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基
６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸
の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１
バリアントを含むポリペプチド、ならびにＢＭＳ−９３６５９である抗体を投与すること
を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびに抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗Ｃ
Ｄ１９抗体、抗ＣＳ１抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＲＡＮ
ＫＬ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＤ２７４抗体、抗
ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗ＦＺＤ
７抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＣＲ４抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳ
Ｆ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＢＡＦＦ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、または抗ＶＥＧＦＲ２抗体
である抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は
、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３
７、または１５２〜１５９の配列を有するポリペプチド、ならびにセツキシマブ、ネシツ
ムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ＭＥＤ１
６４６９、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ６３８３、ＲＧ７８
８８、イピリムマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ＰＦ−０５０８２５６６、エノビリ
ツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、バンチクツマブ（ｖａｎｔｉｃｔｕｍａｂ）
、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、モガマリズマブ（ｍｏｇａｍａｌｉｚｕｍａ
ｂ）、ＳＡＲ６５０９８４、ダラツムマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシ
ン、ペルツズマブ、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、リツキシマブ、オファツム
マブ、オビヌツズマブ、ＲＧ７１５５、ＦＰＡ００８、パニツムマブ、ブレンツキシマブ
ベドチン、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ベリムマブ、ベバシズマブ、デノスマブ、パニツム
マブ、ラムシルマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、アベルマブ、アテ
ゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ピディリズマブ、またはＢＭＳ−９３
６５９である抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびに抗体トラスツズマブである抗体を投与す
ることを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７、配列番号７８〜８
５、９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜
１５９のいずれか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにリツキシマブである抗体を
投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにセツキシマブである抗体を投与すること
を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにダラツムマブである抗体を投与すること
を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにベリムマブである抗体を投与することを
含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにベバシズマブである抗体を投与すること
を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにデノスマブである抗体を投与することを
含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにパンチムマブ（ｐａｎｔｉｍｕｍａｂ）
である抗体を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにラムシルマブである抗体を投与すること
を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにネシツムマブである抗体を投与すること
を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにニボルマブである抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにペンブロリズマブである抗体を投与する
ことを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにアベルマブである抗体を投与することを
含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにアテゾリズマブである抗体を投与するこ
とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにデュルバルマブである抗体を投与するこ
とを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにＭＥＤＩ０６８０である抗体を投与する
ことを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにピディリズマブである抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、配列番号７８〜８５、９８〜１
０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいず
れか１つの配列を有するポリペプチド、ならびにＢＭＳ−９３６５９である抗体を投与す
ることを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示するポリペプチドは、リツキシマブの抗腫瘍
活性を高める。いくつかの実施形態では、本明細書に開示するポリペプチドは、Ｒａｊｉ
−ＮＳＧ異種移植モデルにおけるリツキシマブの抗腫瘍活性を高める。いくつかの実施形
態では、本明細書に開示するポリペプチドは、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるリツキシ
マブが媒介するＢ細胞の枯渇を高める。
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチド及び医薬組成物は、様々ながん治療に
用いられる。本開示に従う治療に適したがんとしては、固形腫瘍がん、血液がん、急性骨
髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、非ホジキン
リンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、子宮内
膜がん、肺がん、気管支がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸及び直腸のがん、胃がん（ｓｔ
ｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ、ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、胆のうがん、消化管間質
腫瘍がん、甲状腺がん、頭頸部がん、口腔咽頭がん、食道がん、黒色腫、非黒色腫皮膚が
ん、メルケル細胞がん、ウイルス誘導性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎臓
がん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、リンパ腫、非上皮性悪性腫瘍、神経膠腫、脳がん
、及び上皮性悪性腫瘍が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、
本開示に従う治療に適したがん性状態には、転移性がんが含まれる。いくつかの実施形態
では、本開示に従う治療に適したがんは、固形腫瘍または血液がんである。
いくつかの実施形態では、抗体は、免疫系の細胞によって発現されるタンパク質に結合
することによって、Ｔ細胞等の免疫系の細胞、例えば、制御性Ｔ細胞を標的とする。いく
つかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、本明細書に記載のポリペプチド（例え
ば、ＳＩＲＰ−ａ Ｄ１バリアント）、及び免疫系の細胞を標的とする抗体を投与するこ
とを含む。免疫系の細胞によって発現されるタンパク質の例としては、４１ＢＢ、ＣＤ４
０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１６３、ＣＤ２０６、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＴＩＭ−３、ＢＴＬＡ
、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ−３、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、Ｈ
ＶＥＭ、ＣＣＲ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、ＫＩｒｇ１、Ｎｒｐ１、ＣＤ２７８、Ｇｐｒ
８３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１５４、ＣＤ１６０、及びＰＤ１Ｈが挙げられるがこれらに限定
されない。いくつかの実施形態では、抗体は、それが、免疫系の他の細胞と比較して、Ｔ
細胞（例えば、制御性Ｔ細胞）によって発現されるタンパク質（例えば、受容体）に対し
て選択的結合を有するように設計される。いくつかの実施形態では、本開示の組成物にお
ける抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４サブクラスのＦｃドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、対象における免疫反応を変化させることを
含む。該方法は、当該対象に対して、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリ
ペプチド及び抗体を投与し、それによって該対象における免疫反応を変化させることを含
む。いくつかの実施形態では、該免疫反応を変化させることは、免疫反応を抑制すること
を含む。
いくつかの実施形態では、本開示のポリペプチド及び医薬組成物は、免疫疾患を治療す
るための様々な療法に用いられる。本開示に従う治療に適した自己免疫疾患及び炎症性疾
患としては、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体
媒介性炎症性または自己免疫性疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、アテロー
ム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、進行性全身性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚
血性再灌流、クローン病、子宮内膜症、糸球体腎炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、喘
息、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎、及び炎症性自己免疫筋炎が挙げられるが
これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、細胞へのポリペプチドの送達は、本明細書に記載の組成物の
１つ以上を該細胞に接触させることを伴う。
かかる治療選択の有効用量は、投与方法、標的部位、当該患者の生理的状態、該患者が
ヒトであるか動物であるか、投与される他の薬剤、及び治療が予防的か治療的かどうかを
含めた多くの異なる要因によって異なる。いくつかの実施形態では、該患者はヒトである
が、非ヒト哺乳類、例えば、イヌ、ネコ、ウマ等のコンパニオンアニマル、ウサギ、マウ
ス、ラット等の実験動物等もまた治療される。いくつかの実施形態では、治療用量は、安
全性及び有効性を最適にするように漸増される。
いくつかの実施形態では、治療用量は、宿主の体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋ
ｇ、より通常は、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇに及ぶ。いくつかの実施形態では、例えば、
用量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは３０ｍｇ／ｋｇ体重であるか、または１〜３０ｍｇ／
ｋｇの範囲内である。いくつかの実施形態では、例示的な治療計画は、毎週１回もしくは
２週間に１回、または月１回もしくは３〜６か月に１回の投与を伴う。いくつかの実施形
態では、本明細書に記載の治療薬及びポリペプチド構築物は、複数回投与される。いくつ
かの実施形態では、投与間隔は、毎週、毎月、または毎年である。いくつかの実施形態で
は、間隔はまた、当該患者の治療実体の血中レベルを測定することによって指示されるた
めに不定期である。別の方法として、本明細書に記載の治療薬またはポリペプチド構築物
は、徐放性製剤として投与され、この場合、より低頻度の投与が可能である。いくつかの
実施形態では、用量及び頻度は、患者における該ポリペプチドの半減期に応じて異なる。
予防的適用においては、いくつかの実施形態では、比較的低い用量が、比較的低頻度の
間隔で長い期間にわたって投与される。いくつかの実施形態では、患者は、残りの生涯に
わたって治療を受け続ける。他の治療的適用においては、疾患の進行が低減もしくは終止
されるまで、好ましくは、当該患者が疾患の症状の部分的もしくは完全な寛解を示すまで
、比較的短い間隔での比較的高い用量が必要とされる。その後、いくつかの実施形態では
、該患者は、予防的投与計画を施される。
本明細書で使用される、用語「治療」、「治療すること」等は、効果を得る目的のため
に薬剤を投与すること、または処置を行うことを指す。いくつかの実施形態では、該効果
は、疾患もしくはその症状を完全にまたは部分的に予防するという点で予防的である。い
くつかの実施形態では、該効果は、疾患もしくは該疾患の症状の部分的または完全な治癒
に影響を与えるという点で治療的である。
ＸＩＩＩ．キット
いくつかの実施形態において、本明細書に開示するのは、野生型シグナル制御タンパク
質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にアミノ酸の変異、ならびに野生型
ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５
３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からなる群から選択される残基に少な
くとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン、またはその
断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、同様に本明細書に開示するのは、Ｆｃバリアントを含む
ポリペプチドであって、該Ｆｃバリアントは、２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃ
ドメインダイマーを含むとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｌ２３
４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域
、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ
領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２
３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、該ポリペプ
チドである。
同様に提供するのは、本明細書に記載のポリペプチド及びその使用説明書を含むキット
である。任意に、該キットは、さらに少なくとも１つのさらなる試薬を含むことができる
。非限定的な例として、化学療法剤または抗腫瘍抗体が少なくとも１つのさらなる薬剤の
役割を果たすことができる。いくつかの実施形態では、キットは、該キットの内容物の意
図される用途を示すラベルを含む。ラベルという用語には、当該キット上に供給される、
もしくは当該キットとともに供給される、または他の方法で当該キットに添付する、任意
の書面または記録物が含まれる。
いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを
含むポリペプチド、任意に（ｉｉ）抗体、ならびに（ｉｉｉ）疾患を有する対象に対して
（ｉ）及び（ｉｉ）（提供される場合）を投与するための説明書を含む。いくつかの実施
形態では、キットは、（ｉ）高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチド
、及び（ｉｉ）疾患を有する対象に対して（ｉ）を抗体、例えば、該キットに提供されて
いない抗体とともに投与するための説明書を含む。いくつかの実施形態では、キットは、
（ｉ）抗体、及び（ｉｉ）疾患を有する対象に対して（ｉ）を高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ
１バリアントを含むポリペプチドとともに投与するための説明書を含む。
いくつかの実施形態では、該キットは、例えば、固形腫瘍がん、血液がん、急性骨髄性
白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、非ホジキンリン
パ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、子宮内膜が
ん、肺がん、気管支がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸及び直腸のがん、胃がん（ｓｔｏｍ
ａｃｈ ｃａｎｃｅｒ、ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、胆のうがん、消化管間質腫瘍
がん、甲状腺がん、頭頸部がん、口腔咽頭がん、食道がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん、
メルケル細胞がん、ウイルス誘導性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎臓がん
、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、リンパ腫、非上皮性悪性腫瘍、神経膠腫、脳がん、上
皮性悪性腫瘍、及びそれらの任意の組合せ等のがんを有する対象を治療するために使用さ
れる。いくつかの実施形態では、該キットは、固形腫瘍がんまたは血液がんを有する対象
を治療するために使用される。
いくつかの実施形態では、該キットは、免疫疾患を有する対象を治療するために使用さ
れる。いくつかの実施形態では、該免疫疾患は、自己免疫疾患または炎症性疾患であり、
例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介
性炎症性または自己免疫性疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、アテローム性
動脈硬化症、シェーグレン症候群、進行性全身性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血性
再灌流、クローン病、子宮内膜症、糸球体腎炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、喘息、
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎、炎症性自己免疫筋炎、またはそれらの任意の
組合せである。
実施例１−ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチド
本開示のポリペプチドの生成
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開示のポリペプチドは、従来の分子ク
ローニング及びタンパク質発現技術を用いて生成される。野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメ
インに対するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントにおける可能性のあるアミノ酸置換は表２及
び５に示される。本開示のポリペプチドをコードする核酸分子は、周知の分子生物学的手
法を用いて、細菌または哺乳類細胞での発現のために最適化したベクターにクローニング
する。タンパク質発現の誘導後、細胞を回収し、発現されたポリペプチドを、アフィニテ
ィーカラムクロマトグラフィーを用いて該細胞培養上清から精製する。精製されたポリペ
プチドをその後ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析し、次いでクマシーブルー染色で期待されたサイ
ズのタンパク質バンドの存在を確認する。
精製されたポリペプチドは、当技術分野で利用可能な技術、例えば、ファージ提示、酵
母提示、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、シンチレーション近接アッセイ、ＥＬＩＳＡ、
ＯＲＩＧＥＮイムノアッセイ（ＩＧＥＮ）、蛍光消光、蛍光移動、または任意の適切なバ
イオアッセイを用いてＣＤ４７に対する結合についてスクリーニングする。所望のポリペ
プチドは、ＣＤ４７、例えば、ヒトＣＤ４７に、野生型ＳＩＲＰ−αより高い親和性で結
合する。
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドの結合親和性
一連の実験で、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン及び高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バ
リアントのポリペプチドは、従来の分子クローニング及びタンパク質発現技術を用いて生
成した。ヒトＣＤ４７に対する結合は、ＳＰＲを用いて以下のように測定した。簡潔には
、ヒトＣＤ４７（Ｒ ａｎｄ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号４６７０−ＣＤまたは
モノマー細胞外ドメイン、ＥＣＤとして自家製造）の野生型ＳＩＲＰ−α及びＳＩＲＰ−
α Ｄ１バリアントポリペプチドバリアントへの結合は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ１００計器
（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）またはＰｒｏｔｅｏｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ−ｒａｄ、
Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、カリフォルニア州）にて、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０を補充したリ
ン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）（ＰＢＳＴ）を泳動緩衝液として用いて分析
した。リガンド２００〜１０００ＲＵを１０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）
中で、ＢｉａｃｏｒｅチップＣＭ４センサーまたはＰｒｏｔｅｏｎ ＧＬＣチップ上に、
メーカーの推奨に従い標準的なアミン結合によって固定化した。アナライト（またはＳＩ
ＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチド）のいくつかの濃度、例えば、少なくとも０．１
ｘ〜１０ｘＫＤの値に及ぶものを、流量１００μＬ／分で２分間注入し、その後１０分間
の解離時間を続けた。各アナライトの注入後、３０秒間注入した２：１のＰｉｅｒｃｅ
ＩｇＧ溶出緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号２１００４）と
４ＭのＮａＣｌの混合物を用いて表面を再生した。表面の完全な再生は、ベースラインの
解析及び当該実験の開始時と終了時に同じアナライトを注入することによって確認した。
すべてのセンサーグラムは、参照表面及び緩衝液の注入を用いて二重に参照し、１：１の
Ｌａｎｇｍｕｉｒに当てはめた。アナライトは主に、モノマーの、ＦｃなしのＣＤ４７
ＥＣＤまたはＳＩＲＰ−αのいずれかであった。チップ上のリガンドは、モノマーの場合
もＦｃ融合物の場合もある。結合データを表１６に示す。すべてのＳＰＲアッセイは２５
℃で行った。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
位置５４でグルタミン酸またはアスパラギン酸残基を有することが、マウスＣＤ４７に
対するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドの結合を改善することも見出されてい
る。非限定的な例として、以下の表１７で特定されるＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリ
ペプチドは、マウスＣＤ４７に対して高親和性結合を示す。いくつかのＳＩＲＰ−α Ｄ
１バリアントポリペプチドのヒトＣＤ４７に対する結合親和性は、必要に応じてヒトＣＤ
４７の代わりに用いられたマウスＣＤ４７タンパク質で、前述した通りＳＰＲを用いてマ
ウスＣＤ４７に対する結合親和性と比較した。結果を表１８に示す。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
ある特定のＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドに存在する部分的なグリコシル
化を最小限にするか、または排除することができるＮ８０Ａの変異は、かかる変異を含む
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドに関連した均一性を高める機能的利益を与え
ることもまた見出されている。ＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドがＥ．ｃｏｌｉで発
現された場合、哺乳類系と比べてＥ．ｃｏｌｉではグリコシル化系の不足のため、Ｎ８０
のグリコシル化は生じない。表１９は、Ｅ．ｃｏｌｉで産生されたＳＩＲＰ−α Ｄ１バ
リアントポリペプチドとヒトＣＤ４７間の有効な結合が依然として生じ得ることを示して
おり、ひいては、脱グリコシル化は、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが依然としてＣＤ４
７と結合することができる結合親和性に影響を及ぼさないことを示す。Ｎ８０Ａの変異に
加えて、脱グリコシル化は、Ｎ８０をＮではない任意のアミノ酸に変異させることによっ
て、または、モチーフＮ−Ｘａａ１−Ｘａａ２であって、Ｎ＝アスパラギン、Ｘａａ１＝
Ｐ（プロリン）以外の任意のアミノ酸、Ｘａａ２＝Ｔ（スレオニン）、Ｓ（セリン）また
はＣ（システイン）であるとともに、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドの残基
８０〜８２を指すモチーフの破壊によって達成することができる。Ｐ８３をバリンに変異
させるか、Ｐではない他の残基に変異させることによって、Ｎ８０でのグリコシル化の増
加を引き起こすことができ、均一にグリコシル化されたＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポ
リペプチドを生成することができる。
アミノ酸Ｐ８３はまた、グリコシル化度に影響を与えることができる。Ｐ８３を任意の
アミノ酸に変更することで、Ｎ８０でのグリコシル化の効率を高めることができる。位置
８３にバリン（Ｖ）を有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（配列番号２１３）は、ＨＥ
Ｋ２９３ＦＳ哺乳類細胞で発現させた。発現されたタンパク質のサイズを、野生型アミノ
酸残基（例えば、プロリン、Ｐ）を位置８３に有するＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（配
列番号７１）と比較した。発現されたタンパク質のタンパク質ゲルでの分子量分析（図１
８）は、Ｐ８３Ｖの変異を有するバリアント（配列番号２１３、レーン２）が、位置８３
で未変異のバリアント（レーン１）と比較して高分子量（例えば、約２２ｋＤａ）を有す
ることを示している。図１８に示す通り、残基８３がＶａｌに変異された場合、哺乳類細
胞宿主で発現されたＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドは、主により高分子量（約２２
ｋＤａ）の分子であり、Ｎ８０でのグリコシル化の効率を上げることができることを示し
ている。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
実施例２−単一アーム及び二重特異性ＳＩＲＰ−αポリペプチドの生成
（ｉ）ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合タンパク質及び（ｉｉ）ＣＤ４７と抗原、例えば、ＥＧ
ＦＲの両方に結合するために抗原結合ドメイン等のポリペプチドに融合されたＦｃドメイ
ンモノマーのヘテロダイマーを含む構築物の能力は、本実施例で前述したようにＳＰＲに
よって測定した。ヘテロダイマーを形成するためのＦｃ融合タンパク質を表２０に示す。
３種の単官能（例えば、１つの標的に結合する）ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物を試験した。
これらの融合タンパク質は、図６ＡにおいてＡ、Ｂ、Ｃで示す。第一の単官能ＳＩＲＰ−
α−Ｆｃ融合物（「Ａ」）は、配列番号１３６のホモダイマーであった。第二及び第三の
単官能ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物は、（ｉ）ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物及び（ｉｉ）それ
に融合されたさらなるポリペプチドがないＦｃドメインモノマーのヘテロダイマーであっ
た。これらは、図４Ａ及び４Ｂに示すノブと穴の変異の操作方法を用いて生成した。一方
の単官能ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物（「Ｂ」）は、配列番号１３９（Ｆｃバリアント）及
び配列番号１４２（ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物）のヘテロダイマー化から形成した。別の
単官能ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物（「Ｃ」）は、配列番号１３９（Ｆｃバリアント）及び
配列番号１３８（ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物）のヘテロダイマー化から形成した。二官能
（例えば、２つの標的に結合する）ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物（「Ｄ」）は、配列番号１
２７（ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物）及び配列番号１４４（Ｆｃバリアントに連結されたエ
ルビタックスの抗原結合領域）のヘテロダイマー化から形成した。配列番号２２０は、エ
ルビタックス抗体の軽鎖を表す。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
簡潔には、ＣＤ４７を上述したようにアミン化学によってＰｒｏｔｅｏｎ ＧＬＣチッ
プ上に固定化した。第一の注入では、アナライト（例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びエルビ
タックス）をＰＢＳＴ中３０ｕＬ／分で、６０秒間１００ｎＭで注入し、ＣＤ４７表面へ
の結合をＳＰＲで測定した。第二の注入では、１００ｎＭのＥＧＦＲ−ＥＣＤ（ＨＥＫ２
９３細胞中で産生された上皮成長因子受容体の細胞外ドメイン）を注入し、ＥＧＦＲ−Ｅ
ＣＤのＣＤ４７結合アナライトに対する結合を測定した。エルビタックスは、チップ上の
ＣＤ４７に結合せず、それ故、これは、図６Ｂに「エルビタックス」と表示した曲線で示
し、図６Ａで図示するように、第二の注入でのＥＧＦＲに結合することができなかった。
ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物（例えば、Ａ、Ｂ、及びＣ）はＣＤ４７に結合したが、図６Ｂ
に「Ａ」、「Ｂ」、及び「Ｃ」と表示した曲線で示し、図６Ａで図示するように、第二の
注入でのＥＧＦＲに結合しなかった。「Ｂ」及び「Ｃ」と表示された曲線で示されるよう
に、モノマータンパク質、または１つのＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを備えたタンパク質
（例えば、Ｂ及びＣ）の、チップ上で利用可能な同じＣＤ４７部位に結合したより多くの
量の分子に起因するダイマータンパク質（例えば、Ａ）より高い共鳴単位は、固定化ＣＤ
４７に対する結合及びＥＧＦＲ−ＥＣＤに対する無視できる結合を示している（例えば、
単官能性）。ヘテロダイマーのＳＩＲＰ−α−エルビタックス−Ｆｃは、チップ上のＣＤ
４７に結合し、また、図６Ｂに「Ｄ」と表示した曲線で示すように、第二の注入でＥＧＦ
Ｒ−ＥＣＤに結合することができ、固定化ＣＤ４７に対する結合及びＥＧＦＲ−ＥＣＤの
結合を示した（例えば、二官能性）。
実施例３−マウスにおけるＣＤ４７に対する高結合親和性を備えたポリペプチドの試験
様々ながん、例えば、固形腫瘍及び血液がんの遺伝子組み換えマウスモデルを用いて、
本開示のポリペプチドのＣＤ４７に対する結合を試験する。本開示のポリペプチドをマウ
スに注射し、これを後に解剖し、このポリペプチドとＣＤ４７の複合体の存在を検出する
。ＳＩＲＰ−αまたはＣＤ４７に特異的な抗体をこの検出に用いる。
実施例４−免疫原性に関するポリペプチドの試験
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドを、免疫原性アッセイで試
験する。これらのポリペプチドは、Ｔ細胞増殖アッセイにおいてインシリコ及びインビト
ロの両方で試験し、このうちいくつかは市販されている。インビトロＴ細胞増殖アッセイ
で最小限の免疫原性反応を引き起こし、野生型ＳＩＲＰ−αより高いＣＤ４７に対する結
合親和性を示すポリペプチドを、さらなる開発のために選択する。
実施例５−インビボ毒性に関するポリペプチドの試験
野生型ＳＩＲＰ−αより高いＣＤ４７に対する結合親和性の様々な程度を示す異なる高
親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む異なるポリペプチドを動物のがんモデル（例
えば、マウスがんモデル）に注射し、この生物において異なる結合親和性の毒性に対する
影響をアッセイする。非ヒト霊長類（ＮＨＰ）を用いて同様に高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ
１バリアントを試験することができるが、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＣＤ４７とマウスＣＤ
４７に対する交差反応性のレベルは異なる場合がある。
実施例６−ＦｃバリアントのＦｃγ受容体結合
標的機能を調節するそれらの能力に加えて、治療用モノクローナル抗体及びＦｃ含有融
合タンパク質はまた、２つの主要な免疫エフェクター機構、すなわち抗体依存性細胞傷害
性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発することができる。ＡＤＣＣ
は、活性化Ｆｃγ受容体に結合するＦｃ領域によって媒介され、本明細書に記載のＦｃバ
リアントを含むポリペプチド構築物をＦｃγ受容体結合について試験した。以下の表２１
に示すように、これらのポリペプチド構築物は、対応する野生型ＩｇＧのＦｃと比較して
、１つ以上のＦｃγ受容体に対する結合の低下を示した。ＩｇＧ１に関しては、ＩｇＧ１
のＦｃのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異が、野生型ＩｇＧ
１、またはこれらの変異の１つ以上を欠く構築物と比較して、Ｆｃγ受容体ＣＤ１６ａ、
ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４に対する結合の著しい減少をもたら
した。従って、非グリコシル化の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ（例えば、Ｉ
ｇＧ１ ＡＡＡ）、または脱グリコシル化変異Ｎ２９７Ａは、試験したＦｃγ受容体に対
する結合の完全な損失をもたらす。Ｆｃγ受容体結合は、食作用にとって重要であること
が知られているため、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異は、
このＦｃバリアントを含む構築物の食作用の低下をもたらすことができる。
本実施例では、以下の材料及び方法を用いた。Ｆｃバリアント構築物に対するヒトＦｃ
γ受容体ＲＩ（ＣＤ６４）、ＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）、ＲＩＩＢ／Ｃ（ＣＤ３２ｂ／ｃ）
、及びＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）（Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、それぞれカタログ番号
１２５７−ＦＣ−０５０、１３３０−ＣＤ−０５０、１８７５−ＣＤ−０５０、及び４３
２５−ＦＣ−０５０）の結合は、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６ 計器（Ｂｉｏ−ｒａｄ、
Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、カリフォルニア州）にて、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０を補充したリ
ン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）を泳動緩衝液として用いて分析した。最小限
にビオチン化したＦｃ構築物の約４００共鳴単位（ＲＵ）を、アビジン−ニュートラビジ
ン相互作用によってＮＬＣセンサーチップ（Ｂｉｏ−ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、カリフ
ォルニア州）のフローセルに固定化した。ビオチン化は、Ｐｉｅｒｃｅ ＥＺ−Ｌｉｎｋ
Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ− ＬＣ−ＬＣ−ビオチン及びリンカー：タンパク質の等モル比を
用い、メーカーの指示に従って行った。アナライト（ｈＦｃγＲ）を公称濃度０、６１、
１８５、５５５、１６６６、及び５０００ｎＭで、「ワンショット」のカイネティックモ
ードで注入した。会合及び解離時間を、それぞれ９０秒間及び６００秒間監視した。各注
入の後、２：１ｖ／ｖのＰｉｅｒｃｅ ＩｇＧ溶出緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ、カタログ番号２１００４）と４ＭのＮａＣｌの混合物を用いて表面を再生した
。表面の完全な再生は、この実験の開始時と終了時にこれらＦｃバリアントを注入するこ
とによって確認した。バイオセンサーのデータは、スポット間のデータ（固定化タンパク
質を含まない）を反応スポットのデータ（固定化タンパク質）から引き、次に、緩衝液「
ブランク」アナライト注入の反応をアナライト注入のそれから引くことによって、二重に
参照した。二重参照データは、単純な結合等温線を用いて均衡分析に当てはめた。ＫＤ，
ａｐｐ。ｈＦｃγＲＩに対して強い結合を有するＦｃ分子について、データを同様に包括
的に単純なラングミュアモデルに当てはめ、ＫＤ，ａｐｐ値を、見かけの反応速度定数の
比から計算した（ＫＤ ａｐｐ＝ｋｄ，ａｐｐ／ｋａ，ａｐｐ）。
表２１に示すように、ＩｇＧ２のＦｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９
７Ａは、野生型ＩｇＧまたはこれらの変異を欠く構築物と比較して、Ｆｃγ受容体ＣＤ１
６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４に対する結合の著しい減少を
もたらした。従って、非グリコシル化の変異Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓまたは脱グリコシ
ル化変異Ｎ２９７Ａは、試験したＦｃγ受容体に対する結合の完全な損失をもたらした。
Ｆｃγ受容体結合は、食作用にとって重要であることが知られているため、Ａ３３０Ｓ、
Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異は、このＦｃバリアントの食作用の低下をもたらすこ
とが予測される。ＩｇＧ４及び様々な変異に関する結合データも同様に提供する。
Figure 2021063082
実施例７−ＦｃバリアントのＣ１ｑ結合の測定
補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）は、補体タンパク質Ｃ１ｑ及びこの補体カスケードの
活性化によって媒介される。様々なＳＩＲＰ−α Ｆｃ構築物に対する様々な濃度のＣ１
ｑ補体の結合は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。ＳＩＲＰ
−α Ｆｃ融合物は、ｐＨ７．４のＰＢＳ中、５μｇ／ｍＬで調製し、Ｎｕｎｃ Ｉｍｍ
ｕｌｏｎ ４ＨＢＸ ＥＬＩＳＡ ９６ウェルプレートの重複ウェルを（５０μＬ／ウェ
ルを用いて）４℃で一夜被覆するのに用いた。翌日、プレートを洗浄用緩衝液（ＰＢＳ及
び０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）で５回洗浄し、ブロッキング用緩衝液（ＰＢＳ及び０．
５％ＢＳＡ）２００μＬ／ウェルとともに室温で１時間インキュベートした。プレートを
５回洗浄し、室温で２時間、０、０．１３、０．４１、１．２３、３．７、１１．１、３
３．３、１００μｇ／ｍＬのＣ１ｑのアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．５％ ＢＳＡ、０．
０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０、０．２５％ ＣＨＡＰＳ、５ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．３５
％ ＮａＣｌ）とともにインキュベートした。プレートを洗浄し、５０μＬ／ウェルのＨ
ＲＰ結合ヒツジ抗ヒトＣ１ｑの２．０μｇ／ｍＬのアッセイ緩衝液とともに１時間インキ
ュベートした。プレートを５回洗浄し、ＴＭＢ（１−ステップＵｌｔｒａ ＴＭＢ−ＥＬ
ＩＳＡ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉ．、カタログ番号３４０２８）とともに約１０分間インキ
ュベートした。最後に、５０μＬ／ウェルのＰｉｅｒｃｅ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉ．停止
溶液（０．１６Ｍ硫酸、カタログ番号Ｎ６００）を加え、プレートを５７０ｎｍの参照と
ともに４５０ｎｍの吸光度を読み取った。ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物を欠くウェルは、プ
レートに対するＣ１ｑまたはＨＲＰ結合検出抗体の非特異的結合を照合するために実行し
た。Ｃ１ｑを欠くウェルは、ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物またはプレートに対するＨＲＰ結
合検出抗体の非特異的結合を照合するために実行した。
図１４に示す通り、野生型ＩｇＧ１（配列番号１２３）及び野生型ＩｇＧ２（配列番号
１２６）の両方は、用量依存的にＣ１ｑに結合した。反対に、ＩｇＧ１のバリアントであ
るＩｇＧ１＿ＡＡＡ（配列番号１２４）、ＩｇＧ１＿Ｎ２９７Ａ（配列番号１２５）、及
びＩｇＧ１＿ＡＡＡ＿Ｎ２９７Ａ（配列番号９６）は、有意に低下した、最小限に検出可
能なＣ１ｑ結合活性を示した。同様に、ＩｇＧ２のバリアントであるＩｇＧ２＿Ａ３３０
Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（配列番号１２７）、ＩｇＧ２＿Ｎ２９７Ａ（配列番号１２８）、及びＩ
ｇＧ２＿Ｎ２９７Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（配列番号１２６）はまた、有意に低下し
た、最小限に検出可能なＣ１ｑ結合活性を示した。ＩｇＧ１及びＩｇＧ２バリアントのこ
の低下した最小限に検出可能なＣ１ｑ結合活性は、Ｃ１ｑに結合しない野生型ＩｇＧ４（
配列番号１３０）に匹敵した。
実施例８−野生型Ｆｃ及びＦｃバリアントの産生
本明細書に記載の方法を本開示の実施形態に従って用い、野生型Ｆｃポリペプチド及び
表７のＦｃバリアントを産生した。
実施例９−ＳＩＲＰ−αバリアント及びＦｃバリアントポリペプチドの産生
本明細書に記載の方法を本開示の実施形態に従って用い、以下の表２２に示す以下のＳ
ＩＲＰ−α Ｄ１バリアント−Ｆｃバリアントポリペプチドを産生した。ヒトＣＤ４７に
対する結合は、実施例１に記載した方法で測定した。
Figure 2021063082
実施例１０−ＳＩＲＰ−α−Ｆｃバリアントの食作用
食作用の定量的測定値を得るため、食作用アッセイを利用し、初代ヒトマクロファージ
及びＧＦＰ＋またはＣＦＳＥ標識腫瘍細胞を、本明細書に記載のＦｃバリアントポリペプ
チド構築物とともに培養した。以下の材料及び方法を用いた。
腫瘍細胞株の培養
ＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ細胞、ＭＭ１Ｒ、及びＮ８７を、１０％熱不活性
化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、
及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）を補充したＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）を含む増殖
培地に維持した。ＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ及びＮ８７細胞を接着単層として
増殖させ、ＭＭ１Ｒ細胞を懸濁中で増殖させた。
ヒト単球由来マクロファージの誘導及び培養
全血軟膜をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）で１：２に希釈した。希釈血
液を２つのチューブに分け、２０ｍｌのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈ
ｅａｌｔｈｃａｒｅ）に重層した。チューブを４００ｘｇで３０分間遠心分離した。末梢
血単核細胞（ＰＢＭＣ）をその界面から回収し、４０ｍｌのＰＢＳの添加によって２回洗
浄し、１００ｘｇで１０分間遠心分離し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳと０．５％ウシ血清ア
ルブミン（Ｇｉｂｃｏ））に再懸濁した。ＣＤ１４＋単球は、単球単離キットＩＩ（Ｍｉ
ｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）及びＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用
いてメーカーのプロトコルに従って、陰性選択によって精製した。ＣＤ１４＋単球を、１
５ｃｍの組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に、ディッシュあたり１０００万細胞で、
１０％ヒトＡＢ血清（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、及び１
％Ｇｌｕｔａｍａｘを補充したＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）からなる２５ｍｌの分化培地に播
種した。細胞を７〜１０日間培養した。
インビトロ食作用アッセイ
ＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ及びＮ８７細胞を、２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄
し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ（Ｇｉｂｃｏ）で１０分間３７℃でインキュ
ベートすることによって培養プレートから外した。細胞は、細胞スクレーパ（Ｃｏｒｎｉ
ｎｇ）で取り外し、遠心分離し、ＰＢＳで洗浄し、ＩＭＤＭに再懸濁した。ＭＭ１Ｒ及び
Ｎ８７細胞を、メーカーの指示に従って、Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ ＣＦＳＥ細胞増殖キット
（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で標識し、ＩＭＤＭに再懸濁した。マクロファージを、
２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔで、２０分間３
７℃でインキュベートすることによって培養プレートから外した。細胞は、細胞スクレー
パ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で取り外し、ＰＢＳで洗浄し、ＩＭＤＭに再懸濁した。
食作用アッセイは、１００，０００ ＤＬＤ−１ ＧＦＰルシフェラーゼ、ＭＭ１Ｒ、
またはＮ８７細胞、１０００ｎＭ〜６４ｐＭの５倍連続希釈のＳＩＲＰ−α−Ｆｃバリア
ント、及びセツキシマブ（Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ）、ダラツムマブ、また
は同じアイソタイプの対照抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を１μｇ／ｍｌ含
む超低付着Ｕ底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に組み立てた。プレートを、５パ
ーセント二酸化炭素の加湿インキュベータ内で、３７℃で３０分間プレインキュベートし
、その後５０，０００個のマクロファージを添加した。プレートを、５パーセント二酸化
炭素の加湿インキュベータ内で、３７℃で２時間インキュベートした。細胞を、４００ｘ
ｇで５分間の遠心分離によってペレット化し、２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。
マクロファージを、１０μｌのヒトＦｃＲブロッキング試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏ
ｔｅｃ）、０．５μｌの抗ＣＤ３３ ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及び０．５μ
ｌの抗ＣＤ２０６ ＡＰＣ−Ｃｙ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含む５０μｌのＦＡＣＳ緩
衝液中、１５分間、氷上にて染色した。細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、２
５０μｌのＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳで１：１０００に希釈された５０μｌの固定可能な生
存率解析用染料ｅＦｌｕｏｒ ５０６（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中、３０分間、氷上に
て染色した。細胞を２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、７５μｌのＣｙｔｏｆｉ
ｘ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、３０分間、氷上にて固定した。細胞を１７５μ
ｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、７５μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。細胞をＦＡＣＳ
Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、それに続くＦｌｏｗｊｏ １０
．７（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）によるデータ解析で分析した。死細胞をｅ５０６陰性集団でゲ
ーティングすることによって除いた。貪食された腫瘍細胞を含むマクロファージを、ＣＤ
３３、ＣＤ２０６、及びＧＦＰまたはＣＦＳＥ陽性細胞として特定した。それぞれのＦｃ
バリアントに融合されたＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインバリアントを含む５つのポリペプチ
ド構築物をインビトロ食作用について試験した。
１） （配列番号１０５）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ
ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ
ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＶ
ＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤ
ＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＡＳＴＦＲＶＶＳＶ
ＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥ
ＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧ
ＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣ
ＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
２） （配列番号１２７）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ
ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ
ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＥ
ＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ
ＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦ
ＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＴＫ
ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ
ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧ
ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
３） （配列番号９６）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ
ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ
ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＤ
ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣ
ＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧ
ＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷ
ＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
４） （配列番号１２４）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ
ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ
ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＤ
ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣ
ＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧ
ＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷ
ＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
５） （配列番号１３４）
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬＦＰＶＧＰＩＱＷＦＲ
ＧＡＧＰＧＲＶＬＩＹＮＱＲＱＧＰＦＰＲＶＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮ
ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＩＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＡ
ＡＡＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣ
ＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧ
ＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷ
ＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮ
ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
結果
図７は、配列番号１０５（ＦｃバリアントＩｇＧ２＿Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｎ２９
７Ａ）及び配列番号１２７（ＦｃバリアントＩｇＧ２＿Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ）の存在
下、ヒト単球由来マクロファージによるＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ腫瘍細胞の
食作用を示す。とりわけ、図７は、配列番号１０５（ＦｃバリアントＩｇＧ２＿Ａ３３０
Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｎ２９７Ａ）（対照抗体ＩｇＧ１，ｋの存在下または非存在下）は、単
剤としてはこの食作用アッセイにおいて食作用が減少しているが、セツキシマブ（ＣＴＸ
）の食作用を増加させることができる（配列番号１０５＋ＣＴＸ）ことを示している。対
照的に、ＦｃバリアントＩｇＧ２＿Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（配列番号１２７＋ＩｇＧ１
，ｋ）のポリペプチドは、単剤として測定可能な食作用活性を有する。腫瘍細胞を貪食し
ＧＦＰ＋であったマクロファージの割合はｙ軸（図７）に示される。配列番号１０５及び
配列番号１２７の添加に由来するＣＤ４７結合部位の濃度は、ｘ軸に示される。ＤＬＤ−
１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ細胞及びマクロファージを示された濃度の配列番号１０５、
配列番号１０７及びＣＴＸ（１ｕｇ／ｍＬ）ならびに対照抗体（ＩｇＧ１，ｋ）とともに
インキュベートした。細胞を同様にＰＢＳプラスセツキシマブ（ＰＢＳ＋ＣＴＸと表示し
たライン）またはＰＢＳプラス同じアイソタイプの対照抗体（ＰＢＳ＋ＩｇＧ１ｋと表示
したライン）とともにインキュベートした。
図８は、配列番号９６（ＦｃバリアントＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７
Ａ、Ｎ２９７Ａ及び配列番号１２４（ＦｃバリアントＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ
、Ｇ２３７Ａ）の存在下、ヒト単球由来マクロファージによるＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシ
フェラーゼ腫瘍細胞の食作用を示す。とりわけ、図８は、ＦｃバリアントＬ２３４Ａ、Ｌ
２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｎ２９７Ａ（配列番号９６）及びＦｃバリアントＩｇＧ１ Ｌ２
３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ（配列番号１２４）は、単剤としてはこの食作用アッセ
イにおいて食作用が減少していることを示している。これらは、それぞれ、配列番号９６
＋ＩｇＧ１，ｋ及び配列番号１２４＋ＩｇＧ１，ｋと表示したラインで表されている。興
味深いことに、配列番号９６及び配列番号１２４の両方のポリペプチドは、腫瘍特異的抗
体ＣＴＸの食作用を増加させた。図８に示す通り、腫瘍細胞を貪食しＧＦＰ＋であったマ
クロファージの割合は、ｙ軸に示される。配列番号９６及び配列番号１２４の添加に由来
するＣＤ４７結合部位の濃度は、ｘ軸に示される。ＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ
細胞及びマクロファージをＣＴＸ １μｇ／ｍＬ及び示された濃度の配列番号９６（配列
番号９６＋ＣＴＸと表示したライン）または配列番号１２４（配列番号１２４＋ＣＴＸと
表示したライン）とともにインキュベートした。セツキシマブの食作用に対する非特異的
な影響を特定するため、細胞をセツキシマブと同じアイソタイプの対照抗体及び示された
濃度の配列番号９６（配列番号９６＋ＩｇＧ１，ｋと表示したライン）または配列番号１
２４（配列番号１２４＋ＩｇＧ１，ｋと表示したライン）とともにインキュベートした。
細胞を同様にＰＢＳプラスセツキシマブ（ＰＢＳ＋ＣＴＸと表示したライン）またはＰＢ
Ｓプラス同じアイソタイプの対照抗体（ＰＢＳ＋ＩｇＧ１ｋと表示したライン）とともに
インキュベートした。
図９は、配列番号１３４（ＦｃバリアントＩｇＧ４＿Ｓ２２８Ｐ）の存在下、ヒト単球
由来マクロファージによるＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ腫瘍細胞の食作用を示す
。とりわけ、図９は、配列番号１３４の構築物が、インビトロ食作用において単剤として
かなりの食作用活性を有することを示している。図９に示す通り、腫瘍細胞を貪食しＧＦ
Ｐ＋であったマクロファージの割合は、ｙ軸に示される。配列番号１３４の添加に由来す
るＣＤ４７結合部位の濃度は、ｘ軸に示される。ＤＬＤ−１−ＧＦＰ−ルシフェラーゼ細
胞及びマクロファージを示された濃度の配列番号１３４（配列番号１３４＋培地と表示し
たライン）とともにインキュベートした。細胞を同様に対照抗体とともにインキュベート
した（ＩｇＧ１，ｋ、黒い四角）。
実施例１１−ＳＩＲＰ−αバリアント及びＨＳＡポリペプチドの産生
さらに、本明細書に記載の方法を本開示の実施形態に従って用い、以下の表２３に示す
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドをＨＳＡポリペプチドに融合することによっ
て発現させた。ヒトＣＤ４７に対する結合は、実施例１に記載した方法で測定した。
Figure 2021063082
実施例１２−ＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドに関連した半減期の延長
表２４及び図１０に示すように、Ｆｃ及びＨＳＡの融合物を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バ
リアントポリペプチドは、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント単独と比較して、延長された半
減期を有することができる。例えば、配列番号１０４で表されるＦｃに融合されたＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントポリペプチド及び配列番号１５９で表されるＨＳＡに融合された
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドは、配列番号８５で表されるＦｃにもＨＳＡ
にも融合されていないＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドに対して延長された半
減期を有する。この半減期の延長は、Ｆｃ及びＨＳＡに融合されて長期の循環と関連し得
るＦｃＲｎに結合する、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドの能力に起因し得る
。
Figure 2021063082
本実施例に用いた方法は以下の通りである。簡潔には、体重約２５グラムのＣＤ−１雄
マウスをＨａｒｌａｎ Ｌａｂｓから入手し、配列番号１０４、配列番号１５９、及び配
列番号８５で表される化合物の単回投与ＰＫ試験に用いた。各化合物を作用用量５ｍｇ／
ｍＬで処方した。この用量の体積を、各マウスの体重に基づいて調整し、各マウスが１、
３、及び１０ｍｇ／ｋｇ投与されるようにした。これらの化合物をマウスの尾静脈を介し
て静脈内投与した。３匹のマウスに、各時点で、各用量レベルで各化合物を投与した。投
与後、以下の８つの時点でマウスを採血した：０．２５、１、４、８、２４、４８、７２
、及び１２０時間。全血５００μＬを眼窩採血によってマイクロテイナーチューブに採取
した。全血検体を３０分間静置して血清分離させた。検体を次に１０分間、４℃、ＲＣＦ
１０００で遠心分離した。血清を次に０．５ｍＬのチューブに処理の４０分以内に移し、
分析まで凍結保存した。
配列番号１０４についてのデータをヒトＦｃ ＥＬＩＳＡプロトコルを用いて得た。簡
潔には、Ｉｍｍｕｌｏｎ ４ＨＢＸ ＥＬＩＳＡ ９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３８５５）を、２μｇ／ｍｌ、１００μｌ／ウェル
の精製ＣＤ４７の１ｘ抗原被覆緩衝液（ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号６２４８）で一夜、室温にて被覆した。ウェルを２００〜３
００μＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ緩衝食塩水＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）
（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２０ｘ、カタログ番号２８３６０）で５回洗浄
した。ウェルを２００μＬ／ウェルの７．５％ＢＳＡのＰＢＳ溶液（ＧＩＢＣＯ、カタロ
グ番号１５２６０−０３７）で１〜２時間ブロックした。ウェルを２００〜３００μＬ／
ウェルの１ｘＴＢＳＴで５回洗浄した。５０μＬ／ウェルの標準曲線、精度管理（ＱＣ）
、及びＴＢＳで１：４に希釈された正常ＣＤ１マウス血清で希釈した未知の検体を加えた
。標準曲線、ＱＣ、及び未知の検体を室温で１時間インキュベートした。標準曲線の濃度
は以下の通りであった：０．２５００μｇ／ｍＬ、０．１２５０μｇ／ｍＬ、０．０６２
５μｇ／ｍＬ、０．０３１３μｇ／ｍＬ、０．０１５６μｇ／ｍＬ、０．００７８μｇ／
ｍＬ、０．００３９μｇ／ｍＬ、０．００２０μｇ／ｍＬ、０．００１０μｇ／ｍＬ、０
．０００５μｇ／ｍＬ、０．０００２５μｇ／ｍＬ、及び０．０００００μｇ／ｍＬ。精
度管理（ＱＣ）は、凍結し等分した。本アッセイが良好に行われるようにするために対照
の役割を果たす標準曲線の直線上の「高」、「中」、及び「低」濃度での標準曲線タンパ
ク質は以下の通りであった：ＱＣ高＝０．１２５μｇ／ｍｌ、ＱＣ中＝０．０１６μｇ／
ｍｌ、及びＱＣ低＝０．００４μｇ／ｍｌ。
次に、ウェルを２００〜３００μＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴで５回洗浄した。１ｘＴＢ
ＳＴ＋１％ＢＳＡで希釈した、５０μＬ／ウェルの０．２５ｕｇ／ｍＬ Ａｂｂｅｘａヤ
ギ抗ヒトＩｇＧのＦｃポリクローナル抗体（１１．６ｍｇ／ｍＬストック、Ａｂｂｅｘａ
カタログ番号ａｂｘ０２３５１１）を加え、室温で１時間インキュベートした。プレート
を２００〜３００μＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴで５回洗浄した。ＴＢＳＴ＋１％ＢＳＡで
希釈した、５０μＬ／ウェルの０．１２５μｇ／ｍＬ ＺｙＭａｘ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎウサギ抗ヤギＩｇＧ−ＨＲＰ結合（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番
号８１−１６２０）を加え、室温で１時間インキュベートした。ウェルを２００〜３００
μＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴで６回洗浄した。以下の段階及び試薬を室温で行った。０μ
Ｌ／ウェルの室温１−ステップＵｌｔｒａ ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉ
ｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３４０２８）を加え、十分に発色するまで室温で２〜５分
間インキュベートした。５０μＬ／ウェルの室温停止溶液（０．１６Ｍ硫酸、Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ｎ６００）を直ちに加え、よく混合した。プレー
トを分光光度計でＯ．Ｄ．４５０及びＯ．Ｄ．５７０で直ちに読み取った。Ｏ．Ｄ．５７
０の測定値は、バックグラウンドの測定値であり、Ｏ．Ｄ．４５０の測定値から差し引い
た。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｏｆｔＭａｘ ＰｒｏまたはＧｒａｐｈ
Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍのようなソフトウェアプログラムを用いて、標準曲線の値を４つのパ
ラメータを当てはめた曲線を用いてプロットし、未知の検体の濃度を、本ソフトウェアを
用いて標準曲線から補間した。
配列番号８５についてのデータを、ＨｉｓタグＥＬＩＳＡプロトコルを用いて得た。Ｉ
ｍｍｕｌｏｎ ４ＨＢＸ ＥＬＩＳＡ ９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ、カタログ番号３８５５）を、２μｇ／ｍｌ、１００μＬ／ウェルの精製ＣＤ
４７の１ｘ抗原被覆緩衝液（ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ、カタログ番号６２４８）で一夜、室温にて被覆した。ウェルを２００〜３００μＬ／
ウェルの１ｘＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ緩衝食塩水＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）（Ｔｈｅｒ
ｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２０ｘ、カタログ番号２８３６０）で５回洗浄した。ウェ
ルを２００μＬ／ウェルの７．５％ＢＳＡのＰＢＳ溶液（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号１５
２６０−０３７）で１〜２時間ブロックした。ウェルを２００〜３００μＬ／ウェルの１
ｘＴＢＳＴで５回洗浄した。５０μＬ／ウェルの標準曲線、精度管理（ＱＣ）、及びＴＢ
Ｓで１：４に希釈された正常ＣＤ１マウス血清で希釈した未知の検体を加えた。標準曲線
、ＱＣ、及び未知の検体を室温で１時間インキュベートした。標準曲線の濃度は以下の通
りであった：０．１２５００μｇ／ｍＬ、０．０６２５０μｇ／ｍＬ、０．０３１２５μ
ｇ／ｍＬ、０．０１５６３μｇ／ｍＬ、０．００７８１μｇ／ｍＬ、０．００３９１μｇ
／ｍＬ、０．００１９５μｇ／ｍＬ、０．０００９８μｇ／ｍＬ、及び０．０００００μ
ｇ／ｍＬ。精度管理（ＱＣ）は、凍結し等分した。本アッセイが良好に行われるようにす
るために対照の役割を果たす標準曲線の直線上の「高」、「中」、及び「低」濃度での標
準曲線タンパク質は以下の通りであった：ＱＣ高＝０．０２μｇ／ｍｌ、ＱＣ中＝０．０
１μｇ／ｍｌ、及びＱＣ低＝０．００５μｇ／ｍｌ。
その後、ウェルを２００〜３００μＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴで５回洗浄した。ＴＢＳ
Ｔ＋１％ＢＳＡで希釈した、５０μＬ／ウェルの０．２μｇ／ｍＬ Ａｂｃａｍウサギ抗
６ｘＨｉｓタグ−ＨＲＰ結合ポリクローナル抗体（１ｍｇ／ｍＬストック、ａｂｃａｍカ
タログ番号ａｂ１１８７）を加え、室温で１時間インキュベートした。プレートを２００
〜３００ｕＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴで６回洗浄した。その後、以下の段階及び薬剤を室
温で行った。５０μＬ／ウェルの室温１−ステップＵｌｔｒａ ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（Ｔ
ｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３４０２８）を加え、十分に発色する
まで室温で３〜５分間インキュベートした。５０μＬ／ウェルの室温停止溶液（０．１６
Ｍ硫酸、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ｎ６００）を直ちに加え、よ
く混合した。プレートを分光光度計でＯ．Ｄ．４５０及びＯ．Ｄ．５７０で直ちに読み取
った。Ｏ．Ｄ．５７０の測定値は、バックグラウンドの測定値であり、Ｏ．Ｄ．４５０の
測定値から差し引いた。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏ
またはＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ等のソフトウェアプログラムを用いて、標準曲線
の値を４つのパラメータを当てはめた曲線を用いてプロットし、未知の検体の濃度を、本
ソフトウェアを用いて標準曲線から補間した。
配列番号１５９についてのデータをＨＳＡ ＥＬＩＳＡプロトコルを用いて得た。Ｉｍ
ｍｕｌｏｎ ４ＨＢＸ ＥＬＩＳＡ ９６ウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔ
ｉｆｉｃ、カタログ番号３８５５）を、２ｕｇ／ｍｌ、１００ｕｌ／ウェルの精製ＣＤ４
７の１ｘ抗原被覆緩衝液（ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
、カタログ番号６２４８）で一夜、室温にて被覆した。ウェルを２００〜３００μＬ／ウ
ェルの１ｘＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ緩衝食塩水＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）（Ｔｈｅｒｍ
ｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ２０ｘ、カタログ番号２８３６０）で５回洗浄した。ウェル
を２００μＬ／ウェルのＬｉ−Ｃｏｒ Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液（ＴＢＳ）（
Ｌｉ−Ｃｏｒ、カタログ番号９２７−５００００）で２時間ブロックし、アルブミンを含
むブロッキング緩衝液を使用しなかった。ウェルを２００〜３００μＬ／ウェルの１ｘＴ
ＢＳＴで５回洗浄した。５０ｕＬ／ウェルの標準曲線、精度管理（ＱＣ）、及び未知の検
体をＴＢＳで１：４に希釈された正常ＣＤ１マウス血清で希釈して加えた。標準曲線、Ｑ
Ｃ、及び未知の検体を室温で１時間インキュベートした。
標準曲線の濃度は以下の通りであった：３．２０μｇ／ｍｌ、１．６０μｇ／ｍｌ、０
．８０μｇ／ｍｌ、０．４０μｇ／ｍｌ、０．２０μｇ／ｍｌ、０．１０μｇ／ｍｌ、０
．０５μｇ／ｍｌ、０．０２５μｇ／ｍｌ、及び０．００μｇ／ｍｌ。精度管理（ＱＣ）
は、凍結し等分し、本アッセイが良好に行われるようにするために対照の役割を果たす標
準曲線の直線部の「高」、「中」、及び「低」濃度での標準曲線タンパク質は以下の通り
であった：ＱＣ高＝０．６μｇ／ｍｌ、ＱＣ中＝０．３μｇ／ｍｌ、ＱＣ低＝０．１５μ
ｇ／ｍｌ、及びＱＣ低＝０．０１μｇ／ｍｌ。
その後、ウェルを２００〜３００μＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴで５回洗浄した。１ｘＴ
ＢＳＴで希釈した、５０μＬ／ウェルの１μｇ／ｍｌ Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ／Ｐｉｅｒｃｅウサギ抗ＨＳＡ−ＨＲＰ結合（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
、カタログ番号ＰＡ１−２６８８７）を加え、室温で１時間インキュベートした。プレー
トを２００〜３００μＬ／ウェルの１ｘＴＢＳＴで６回洗浄した。その後、以下の段階及
び試薬を室温で行った。５０μＬ／ウェルの室温１−ステップＵｌｔｒａ ＴＭＢ−ＥＬ
ＩＳＡ基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３４０２８）を加え、
十分に発色するまで室温で３〜５分間インキュベートした。５０μＬ／ウェルの室温ＴＭ
Ｂ停止溶液（０．１６Ｍ硫酸溶液、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号Ｎ
６００）を加え、よく混合した。プレートを分光光度計でＯ．Ｄ．４５０及びＯ．Ｄ．５
７０で直ちに読み取った。Ｏ．Ｄ．５７０の測定値は、バックグラウンドの測定値であり
、Ｏ．Ｄ．４５０の測定値から差し引いた。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｓｏ
ｆｔＭａｘ ＰｒｏまたはＧｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ等のソフトウェアプログラム
を用いて、標準曲線の値を４つのパラメータを当てはめた曲線を用いてプロットし、未知
の検体の濃度を本ソフトウェアを用いて標準曲線から補間した。
実施例１３−ＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドによって示される血球凝集の減少
図１１に示す通り、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドは血球凝集の減少また
は除去を示した。具体的には、血球凝集が生じた場合、赤い点の代わりに、陽性対照Ｂ６
Ｈ１２に対して示されるように、拡散した赤い彩色が示される。図１１で試験したＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントポリペプチドについては、血球凝集の減少または除去があった。
本実施例に用いた方法は以下の通りであった。ヒト全血軟膜をスタンフォード大学血液
センターから受け取り、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、Ｇｉｂｃｏ）で１：２に希釈し
た。希釈血液を２つのチューブに分け、２０ｍｌのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ
（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に重層した。チューブを４００ｘｇで３０分間遠心分離
した。上清を除去し、赤血球ペレットを、３０ｍＬのＰＢＳを添加して３５００ＲＰＭで
遠心分離することによって２回洗浄した。その後、血球凝集アッセイを以下の通り行った
。ヒト赤血球をＰＢＳで希釈し、９６ウェルのポリスチレンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）
に、体積７５μＬにウェル当たり４００万細胞で移した。示したタンパク質の５倍連続希
釈を、体積７５μＬのＰＢＳで、最終濃度１０００ｎＭ〜０．４８８ｎＭでウェルに加え
た。陰性対照として、ＰＢＳ単独をウェルの１列に加えた。赤血球はウェルの底に沈殿し
、確立した小ペレットを生じた。陽性対照として、細胞を抗ＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２（ｅ
ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で処理した。この抗体は、８〜６３ｎＭの濃度で、大きく拡散し
た細胞ペレットの形成で示される血球凝集を引き起こした。試験した構築物の中で、Ｉｇ
Ｇ２ベースのポリペプチド（配列番号１０９及び配列番号１１３）は、４及び８ｎＭでわ
ずかな血球凝集を引き起こした。すべての他のポリペプチド構築物（ＩｇＧ１ベース及び
ＨＳＡベース）については、血球凝集が認められなかった。
実施例１４−マウス同系腫瘍モデルにおける配列番号２１１の抗腫瘍活性
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから入手したＣ５７ＢＬ／６マウ
ス（７〜１０週齢雌）を用いた。マウス結腸腺がん細胞株ＭＣ３８を凍結ストックから戻
し、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン−ストレプトマイシン、及びＬ−グルタミンを含む
ＲＰＭＩ １６４０中で増殖させた。細胞を遠沈し、添加剤を含まない無血清培地に濃度
２Ｅ＋０７細胞／ｍＬで再懸濁した。−７日目（すなわち、計画した実施日の７日前）、
これらマウスに、１匹当たり１００μＬ（２．０ｘ１０６細胞）の新たに調製したＭＣ３
８のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を左脇腹に皮下注射により移植した。腫瘍が平均体
積約５０ｍｍ３に達したときに、腫瘍が定着し、中程度の体重の５０匹の動物を５つの処
理群（第１〜５群、ｎ＝１０匹ずつ）に無作為化した。第１日目に開始し、第１〜５群の
マウスをそれぞれ、媒体（ＰＢＳ）、抗ｍＰＤ−Ｌ１（クローン１０Ｆ．９Ｇ２、２００
μｇ）、配列番号２１１（２００μｇ）、抗ｍＰＤ−Ｌ１（２００μｇ）＋配列番号２１
１（１００μｇ）、または抗ｍＰＤ−Ｌ１（２００μｇ）＋配列番号２１１（２００μｇ
）で処理した。投与は、第１、４、及び７日目に０．０５ｍＬ／マウスの腹腔内（ＩＰ）
注射によって施した。
配列番号２１１は、配列番号２０６をＦｃドメインモノマーに遺伝子的に融合すること
によって生成した。配列番号２０６は、マウスＣＤ４７に対する結合に改良が示される変
異を含む。結合データを表１８に示す。
配列番号２１１
ＥＥＥＬＱＩＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＩＴＳＬＲＰＶＧＰＩＱＷＦＲ
ＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＲＤＧＰＦＰＲＶＴＴＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＡ
ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＩＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＤ
ＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣ
ＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲ
ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧ
ＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷ
ＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮ
ＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
最大４２日目まで、試験期間を通じて臨床観察と体重を監視した。腫瘍サイズを週２回
、及び試験完了時に測定し、直交する短寸法（幅、Ｗ、及び高さ、Ｈ）ならびに長寸法（
長さ、Ｌ）をマイクロキャリパー（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ、イリノイ州オーロラ）を用いて測
定した。腫瘍体積（ｍｍ３）は、楕円球体の体積の式（ＬｘＷｘＨ／２）を用いて計算し
た。実験動物は、試験の間、個々の動物において腫瘍体積が２，５００ｍｍ３を超えた（
またはこれに近づいた）場合、無痛サクリファイスに供した。４２日目まで試験に残った
動物の数を生存率分析に用いた。
腫瘍は、５つのすべての群で様々な割合で増殖した。媒体または配列番号２１１（２０
０μｇ）を投与されたマウス（それぞれ第１群及び第３群）のうち、サクリファイスは第
４週中（２５日目から）に始まり、これらの群のすべての動物は、第５週の終わり（３５
日目）までに死亡した。抗ｍＰＤ−Ｌ１（単独または配列番号２１１と併用、第２群、第
４群、及び第５群）を投与されたマウスのうち、サクリファイスは第５週中（２９日目ま
たは３２日目から）に始まったが、これら動物のサブセット（４０〜７０％）は予定した
試験の終了（４２日目）まで生存した。図１２は、本試験期間中、各処理群についての生
存曲線を示す。数字的には、抗ｍＰＤ−Ｌ１プラス配列番号２１１の２００μｇの処理群
が、生存動物数が最も多く、抗ｍＰＤ−Ｌ１プラス配列番号２１１の１００μｇの処理群
と抗ｍＰＤ−Ｌ１単独群が続き、それぞれ、１０匹中７匹（７０％）、１０匹中５匹（５
０％）、及び１０匹中４匹（４０％）のマウスが４２日目に残った（表２５）。生存期間
の中央値は、媒体（第１群）及び配列番号２１１単独（第３群）処理でそれぞれ、２９日
及び３０．５日であった。生存期間の中央値は、抗ｍＰＤ−Ｌ１単独（第２群）及び抗Ｐ
Ｄ−Ｌ１プラス配列番号２１１の１００μｇ（第４群）処理で４２日まで延長した。抗ｍ
ＰＤ−Ｌ１プラス配列番号２１１の２００μｇ処理（第５群）の生存期間の中央値は、５
０％を超える動物が本試験の終了時（４２日目）に残ったため、決定されなかった。
Figure 2021063082
腫瘍は、媒体処理群で急速な増殖を示し、有効な治療がない場合、進行中の腫瘍増殖を
示した。配列番号２１１の２００μｇ（第３群）の投与で、媒体投与と比較して、断続的
な時点（７日目及び１４日目、生及び正規化の両方の腫瘍体積について）でのみ有意な腫
瘍増殖の減衰がもたらされた。２００μｇの抗ｍＰＤ−Ｌ１単独または配列番号２１１と
の併用（第２、４、及び５群）投与で、媒体投与と比較して、４日目または７日目（それ
ぞれ、生または正規化腫瘍体積について）から有意な腫瘍増殖の減衰がもたらされた（図
１３及び表２６）。配列番号２１１の抗ｍＰＤ−Ｌ１レジメンへの添加（第２群対第４群
または第２群対第５群）で、抗ｍＰＤ−Ｌ１処理単独を超えるさらなる腫瘍増殖阻害が生
じた。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を含む２２日目の腫瘍体積を表２６に示す。２２日目を
、この日がすべての動物が生存していた最後の時点であるため比較に用いる。１日目に対
する２２日目の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）は、抗ｍＰＤ−Ｌ１プラス配列番号２１１の２
００μｇ群、抗ｍＰＤ−Ｌ１プラス配列番号２１１の１００μｇ群、及び抗ｍＰＤ−Ｌ１
単独群についてそれぞれ、８３％、８１％、及び７７％であった（表２６）。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
実施例１５−がん治療用の併用療法の最適化
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプチドを、チェックポイント阻害
剤と併用し、様々ながん、例えば、固形腫瘍及び血液がんのマウスモデルを治療する。が
んは、免疫系によって認識される場合があり、ある状況下では、この免疫系が腫瘍の除去
に関与し得る。ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、及びＬＡＧ−３等の共抑制分子の遮断は、腫瘍
に対するＴ細胞の応答の増幅に関与し得る。本明細書に記載のポリペプチドは、チェック
ポイント阻害剤、例えば、ＣＴＬＡ−４の抗体阻害剤（例えば、イピリムマブ、トレメリ
ムマブ）、ＰＤ−１の抗体阻害剤（ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＫ３４７５、別名ペ
ンブロリズマブ、ＢＭＳ９３６５５９、及びＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ならびにＬＡＧ−３
の抗体阻害剤（例えば、ＢＭＳ９８６０１６）と組み合わせて投与される。
ＢＡＬＢ／ｃマウス（例えば、リンパ腫モデル）において定着したＡ２０腫瘍をＣＴＬ
Ａ−４の抗体阻害剤及び本明細書に提供するＩｇＧのＦｃバリアントに融合した高親和性
ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、ＳＩＲＰ−α構築物）で処理する。第１日目に
開始し、マウスを媒体（ＰＢＳ）、トレメリムマブ（２００μｇ）＋ＳＩＲＰ−α構築物
（１００μｇ）、またはトレメリムマブ（２００μｇ）＋ＳＩＲＰ−α構築物（２００μ
ｇ）で処理する。投与は、第１、４、及び７日目に０．０５ｍＬ／マウスで腹腔内（ＩＰ
）注射によって施す。併用療法に対する腫瘍反応は、腫瘍体積を測定することによって毎
日決定する。４日目に、併用療法で処理されたマウスの腫瘍体積に有意な改良が見られな
い場合、トレメリムマブをイピリムマブに置き換える。同様に、７日目に、併用療法で処
理されたマウスの腫瘍体積に有意な改良が見られない場合、トレメリムマブをイピリムマ
ブに置き換える。トレメリムマブとイピリムマブは同じチェックポイントタンパク質を標
的とするが、それらは、それらの異なるＦｃ領域に起因して異なる治療効果及びＳＩＲＰ
−α構築物との相乗効果を有することが期待される。トレメリムマブはＩｇＧ２抗体であ
り、補体を固定するのにより効果的であり得る一方、イピリムマブはＩｇＧ１抗体であり
、活性化Ｔ細胞の除去を防ぐのに有用であり得る。
実施例１６−上皮マーカーを発現するがんの治療方法
ＩｇＧのＦｃバリアントに融合した高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、
表２、５、及び６に示す任意のバリアント）等のＳＩＲＰ−αポリペプチド構築物は、上
皮細胞マーカーを発現するがんを治療するために投与される。例えば、ＳＩＲＰ−α Ｄ
１構築物によるＣＤ４７シグナル伝達の遮断に起因する食作用の増加は、マクロファージ
の存在に依存し得る。従って、がん細胞で、またはがん細胞上で発現される上皮マーカー
を標的とする抗体と組み合わせたＳＩＲＰ−α Ｄ１ポリペプチド構築物の投与は、がん
の治療に用いられ、副作用のリスク、例えば、上皮細胞の食作用のリスクを、皮膚周辺で
マクロファージの存在が少ないために軽減する。
上皮マーカー、例えば、ＥＧＦＲまたはＥｐＣＡＭを発現するがんのマウスモデルに、
上皮マーカーを標的とする抗体、例えば、抗ＥＧＦＲ抗体または抗ＥｐＣＡＭ抗体と組み
合わせたＳＩＲＰ−α構築物を投与する。上皮マーカーを標的とする抗体は、がん性細胞
及び非がん性細胞、例えば、皮膚周辺の非がん性細胞をともに認識し得る。しかしながら
、皮膚周辺の非がん性細胞は、皮膚付近でマクロファージの存在が少ないために食作用の
影響を受けにくいと予想される。
実施例１７−単一アームのＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物による食作用
単一のＳＩＲＰ−α分子を有するＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物（例えば、単一アーム分子
）（図１、４Ａ、及び４Ｂに示す）によって誘導される食作用の定量的な測定値を得るた
め、実施例８に記載した方法を用いて、異なる細胞型ＭＭ１Ｒ及びＮ８７細胞での食作用
アッセイを行った。
６種の単一アーム構築物をインビトロ食作用について試験した。これら単一アーム構築
物は、ノブと穴の方法を用いて生成する。配列番号１３６のホモダイマーＳＩＲＰ−α
Ｆｃ融合物をダブルアーム比較（対照）として用いた。第一の単一アームＳＩＲＰ−α
Ｆｃ融合物（例えば、Ａ）は、配列番号１３９（Ｆｃバリアント）及び配列番号１３８（
ＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物）のヘテロダイマーから形成した。第二の単一アームＳＩＲＰ
−α Ｆｃ融合物（例えば、Ｂ）は、配列番号１４１（Ｆｃバリアント）及び配列番号１
４０（ＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物）のヘテロダイマーから形成した。第三の単一アームＳ
ＩＲＰ−α Ｆｃ融合物（例えば、Ｃ）は、配列番号１３９（Ｆｃバリアント）及び配列
番号１４２（ＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物）のヘテロダイマーから形成した。第四の単一ア
ームＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物（例えば、Ｄ）は、配列番号１４１（Ｆｃバリアント）及
び配列番号１４３（ＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物）のヘテロダイマーから形成した。第五の
単一アームＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物（例えば、Ｅ）は、配列番号１４７（Ｆｃバリアン
ト）及び配列番号１４６（ＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物）のヘテロダイマーから形成した。
第六の単一アームＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物（例えば、Ｆ）は、配列番号１４９（Ｆｃバ
リアント）及び配列番号１４８（ＳＩＲＰ−α Ｆｃ融合物）のヘテロダイマーから形成
した。モノマーとして試験された場合、ＳＩＲＰ−α単一アームのＣＤ４７結合親和性（
ＫＤ）は以下の通りである：約１０ｐＭ（Ａ、Ｂ）、約１００ｐＭ（Ｃ、Ｄ）、及び約５
ｎＭ（Ｅ、Ｆ）。これらの配列を以下の表２７に示す。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
Figure 2021063082
図１５〜１７は、非極性化ヒト単球由来マクロファージによる多発性骨髄腫株１Ｒ（Ｍ
Ｍ１Ｒ）及び胃がん株Ｎ８７の食作用を示す。図１５〜１６において、「＋」及び「−」
は、それぞれ、ダラツムマブ（Ｄａｒａ）の添加または非存在を示す。図１７では、「＋
」及び「−」は、それぞれ、ハーセプチン／トラスツズマブ（Ｈｅｒ）の添加及び非存在
を示す。
図１５は、構築物Ａが対照抗体（ＩｇＧ１，ｋ）の存在下、例えば、「Ａ−」で、単剤
としては食作用が減少している一方、ダラツムマブ（Ｄａｒａ）の食作用、例えば、「Ａ
＋」を増加させることができることを示す。同様に、構築物Ｂが対照抗体（ＩｇＧ１，ｋ
）の存在下、例えば、「Ｂ−」で、単剤としては食作用が減少している一方、ダラツムマ
ブ（Ｄａｒａ）の食作用、例えば、「Ｂ＋」を増加させることができる。ＭＭ１Ｒを貪食
しＣＦＳＥ＋であるマクロファージの割合はｙ軸に示される。構築物Ａ、Ｂ、または対照
構築物の添加に由来するＣＤ４７結合部位の濃度は、ｘ軸に示される。食作用のレベルは
、対照構築物（これはダブルアームのＳＩＲＰ−αである）に匹敵する。抗ＣＤ４７抗体
、例えば、Ｂ６Ｈ１２（１００ｎＭ）とのインキュベーションに起因する食作用のレベル
は、Ｄａｒａとのインキュベーション、例えば、ＰＢＳ＋に匹敵する。示されるように、
単一アームのＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物は、ダブルアームのＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物に
匹敵するＤａｒａの食作用を増加させることができる。
図１６は、構築物Ｃが対照抗体（ＩｇＧ１，ｋ）の存在下、例えば、「Ｃ−」で、この
食作用アッセイにおいて単剤としては食作用が減少している一方、ダラツムマブ（Ｄａｒ
ａ）の食作用、例えば、「Ｃ＋」を増加させることができることを示す。同様に、構築物
Ｄが対照抗体（ＩｇＧ１，ｋ）の存在下、例えば、「Ｄ−」で、この食作用アッセイにお
いて単剤としては食作用が減少している一方、ダラツムマブ（Ｄａｒａ）の食作用、例え
ば、「Ｄ＋」を増加させることができる。ＭＭ１Ｒを貪食しＣＦＳＥ＋であるマクロファ
ージの割合はｙ軸に示される。構築物Ｃ、Ｄ、または対照構築物の添加に由来するＣＤ４
７結合部位の濃度は、ｘ軸に示される。食作用のレベルは、対照構築物（これはダブルア
ームのＳＩＲＰ−αである）に匹敵する。抗ＣＤ４７抗体、例えば、Ｂ６Ｈ１２（１００
ｎＭ）とのインキュベーションに起因する食作用のレベルは、Ｄａｒａとのインキュベー
ション、例えば、ＰＢＳ＋に匹敵する。示されるように、単一アームのＳＩＲＰ−α−Ｆ
ｃ融合物は、ダブルアームのＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物に匹敵するＤａｒａの食作用を増
加させることができる。示されるように、単一アームのＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物は、ダ
ブルアームのＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物に匹敵するＤａｒａの食作用を増加させることが
できる。
図１７は、低親和性単一アームＳＩＲＰ−α構築物（Ｅ、Ｆ）の存在下、上記実施例と
同様に行われる食作用を示す。示されるように、ハーセプチンと組み合わせたこれらの低
親和性単一アームＳＩＲＰ−α構築物（Ｅ、Ｆ）は、ハーセプチン単独（ＰＢＳ＋）に匹
敵するＮ８７細胞の食作用を示した。従って、ＣＤ４７に対する５ｎＭの親和性は、単一
アームのＳＩＲＰ−α−Ｆｃ融合物にとって、ハーセプチンとの組み合わせでインビトロ
食作用をさらに高めるには十分ではない。
実施例１７−高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントの交差反応性
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントのポリペプチドを前述の通り生成した。ヒト、
マウス、及びラットＣＤ４７に対する結合は、実施例１に記載の通り、Ｂｉａｃｏｒｅ
Ｔ１００計器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＰｒｏｔｅｏｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ
−ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、カリフォルニア州）で測定されるＳＰＲを用いて測定した
。配列番号２１５は、ヒト、マウス、またはラットＣＤ４７に結合しない組み換えＳＩＲ
Ｐ−α Ｄ１バリアントであり、これを陰性対照として利用した。
Figure 2021063082
Figure 2021063082
配列番号２１５：ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩ
ＰＲＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＲＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮ
ＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥ
ＬＳＶＲＡＫＰＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭ
ＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲ
ＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩ
ＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦ
ＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶ
ＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
実施例１８−マウス異種移植片腫瘍モデルにおける高親和性ＳＩＲＰ−α構築物の抗腫
瘍活性
免疫不全ＮＯＤ ｓｃｉｄガンマ（ＮＳＧ）マウス（ＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉ
ｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪ、５０匹雌プラス予備）を６〜１０週齢の動物とし
て入手した。ヒトリンパ腫細胞株ＧＦＰ−Ｌｕｃ−Ｒａｊｉ細胞を、１０％ウシ胎児血清
、ペニシリン、ストレプトマイシン、及びＬ−グルタミンを含むＲＰＭＩ １６４０中で
増殖させた。細胞を次いで遠沈し、添加剤を含まない無血清培地に濃度１．０ｘ１０７細
胞／ｍＬで再懸濁し、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（Ｔｒｅｖｉｇｅｎ、メリーランド州ゲ
イサーズバーグ）と１：１で混合した。−１１日目（すなわち、計画した実施日の１１日
前）、これらマウスに、１匹当たり２００μＬ（１．０ｘ１０６細胞）の新たに調製した
ＧＦＰ−Ｌｕｃ−Ｒａｊｉ：Ｍａｔｒｉｇｅｌ混合物を左脇腹に皮下注射により移植した
。腫瘍が平均体積約５５ｍｍ３に達したときに、腫瘍が定着し、中程度の体重の５０匹の
動物を５つの処理群（第１〜５群、ｎ＝１０匹ずつ）に無作為化した。第１日目に開始し
、第１〜５群をそれぞれ、（１）配列番号２１５［１０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、３ｘ／週
］、（２）配列番号１０４（１０ｍｐｋ、３ｘ／週）、（３）リツキシマブ（５ｍｐｋ、
２ｘ／週）＋配列番号１００（１０ｍｐｋ、３ｘ／週）、（４）リツキシマブ（５ｍｐｋ
、２ｘ／週）＋配列番号１０４（１０ｍｐｋ、３ｘ／週）、または（５）リツキシマブ（
５ｍｐｋ、２ｘ／週）＋配列番号２１５（１０ｍｐｋ、３ｘ／週）で処理した。投与は、
０．０５ｍＬ／マウスで腹腔内（ＩＰ）注射によって施した。すべての動物に対して、投
与は実施日に開始し、合計３１日間続けて施した（１〜３１日目）。
臨床観察は、１日２回（朝と夕方）記録した。さらなる所見は観察された通りに記録し
た。体重は、電子天秤（Ｏｈａｕｓ ＳＣＯＵＴ（登録商標）ＰＲＯ）を用いて週３回測
定した。腫瘍サイズを週３回、及び試験完了時に測定し、直交する短寸法（幅、Ｗ、及び
高さ、Ｈ）及び長寸法（長さ、Ｌ）をマイクロキャリパー（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ、イリノイ
州オーロラ）を用いて測定した。腫瘍体積（ｍｍ３）は、楕円球体の体積の式（ＬｘＷｘ
Ｈ／２）を用いて計算した。血液検体は、１日目（ベースライン、群の割り当ての前）に
２０匹から、及び８日目（第１週）及び３１日目（終了時）にすべての動物から採取した
。血液検体を各採血日に完全血球算定（ＣＢＣ）に供した。
配列番号２１５のＳＩＲＰ−α構築物は、ＣＤ４７に対する測定可能な結合を示さない
（表２８参照）。配列番号２１５を投与された群（第１群）の腫瘍は、３１日を通して直
線的に増殖し（図１９Ａ）、同じモデルのＰＢＳ媒体群で認められた腫瘍と同様であった
（データは示さず）。この観察は、有効な治療の非存在下での進行中の腫瘍増殖を示して
いる。
第１群と第５群（リツキシマブを含むまたは含まない配列番号２１５）間、及び第２群
と第４群（リツキシマブを含むまたは含まない配列番号１０４）間の比較で、これらの併
用治療が、生の値（９日目から）及び正規化した値（７日目から）の両方で有意な腫瘍体
積の減衰をもたらしたことが明らかになる。１６日目では、第３群（配列番号１００＋リ
ツキシマブ）及び第４群（配列番号１０４＋リツキシマブ）のマウスの大多数はもはや検
出可能な腫瘍を有しておらず、これら２つの併用治療は同様の有効性を示した。対照的に
、第５群（配列番号２１５＋リツキシマブ）の動物では、１８日目以降、腫瘍増殖が回復
したように見えた。本試験期間にわたり、５つのすべての群の腫瘍体積（平均＋／−ＳＥ
Ｍ及び個々の散布図）を図１９Ａ及び図１９Ｂにそれぞれ示す。
完全血球算定（ＣＢＣ）値（赤血球、ヘモグロビン、ヘマトクリット、血小板等）を投
与前（１日目）、投与後１週間（９日目）、及び投与後４週間（３１日目）に測定した。
５つの群間で、パラメータに第１週でも第４週でも有意差はなかった。ヘモグロビン（Ｈ
ＧＢ）値を図１９Ｃに示す。これらの結果は、高親和性ＳＩＲＰ−α構築物が、がんのイ
ンビボマウスモデルにおいて腫瘍増殖を効果的に減衰し、リツキシマブと相乗作用するこ
とができることを示している。さらに、抗ＣＤ４７に基づいた抗体治療とは対照的に、高
親和性ＳＩＲＰ−α構築物で処理した試験群のいずれにも急性貧血発作は認められなかっ
た。
実施例１９：ＳＩＲＰ−α Ｆｃバリアント構築物は赤血球毒性の低下を示す
赤血球の損失はＣＤ４７を標的とする場合に懸案事項である。赤血球毒性に対するＳＩ
ＲＰ−α Ｆｃバリアント構築物の影響を調べるため、マウスを野生型ＩｇＧ１のＦｃ構
築物（配列番号２１６）またはＩｇＧ１の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及
びＮ２９７Ａ（ＩｇＧ１＿ＡＡＡ＿Ｎ２９７Ａ）を有するＩｇＧ１のＦｃバリアント構築
物（配列番号９６）のいずれかを含む高親和性ＳＩＲＰ−αバリアント構築物で処理した
。マウスを６匹の５群に割り当て、１日目と７日目（図２０の実線矢印参照）に（１）Ｐ
ＢＳ、（２）１０ｍｇ／ｋｇの配列番号２１６（野生型ＩｇＧ１のＦｃ）、（３）３０ｍ
ｇ／ｋｇの配列番号２１６、（４）１０ｍｇ／ｋｇの配列番号９６（ＩｇＧ１＿ＡＡＡ＿
Ｎ２９７Ａ）、または（５）３０ｍｇ／ｋｇの配列番号９６のいずれかで処理した。ベー
スラインの完全血球算定（ＣＢＣ）測定は、−７日目にすべての動物から、及び１日目に
６匹のうちの３匹からとった。採血（図２０参照）は、各群から３匹のマウスの間で交代
で行い、１週間に許容される採血量を超えないようにした。図２０に示す通り、ＳＩＲＰ
−α Ｄ１バリアント構築物を含む野生型ＩｇＧ１での処理は、赤血球数の用量依存的減
少をもたらした。反対に、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント構築物を含むＩｇＧ１＿ＡＡＡ
＿Ｎ２９７Ａでの処理は、ＰＢＳで処理された対照群と同様の赤血球数となった。
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し、説明してきたが、かかる実施形態は例示
目的で提供されただけであることが当業者には明らかであろう。ここで、当業者は、多数
の変化形、変更、及び置換を本発明から逸脱することなく想定するであろう。本明細書に
記載される本発明の実施形態に対する種々の代替手段が、本発明の実施において採用され
得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許
請求の範囲に含まれる方法及び構造、ならびにそれらの等価物が、それらにより包含され
ることが意図される。

Claims (156)

  1. 野生型シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１ドメインに対して残基８０にア
    ミノ酸の変異、ならびに野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残基６、残基２７
    、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び残基９２からな
    る群から選択される残基に少なくとも１つのさらなるアミノ酸の変異を有するＳＩＲＰ−
    α Ｄ１ドメイン、またはその断片を含むＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含むポリペプ
    チド。
  2. 前記野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインが、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列を
    有する、請求項１に記載のポリペプチド。
  3. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインが、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、残
    基６、残基２７、残基３１、残基４７、残基５３、残基５４、残基５６、残基６６、及び
    残基９２からなる群から選択される残基に１〜９個のさらなるアミノ酸の変異を含む、請
    求項１に記載のポリペプチド。
  4. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、アミノ酸配列
    ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
    ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭ
    ＤＦＳＩＲＩＧＸ９ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１０ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧ
    ＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号４９）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり
    、Ｘ２はＡ、Ｉ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ３はＩ、Ｆ、Ｓ、またはＴであり、Ｘ４はＥ、
    Ｖ、またはＬであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７はＨ、Ｐ
    、またはＲであり、Ｘ８はＬ、Ｔ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ９はＡであり、Ｘ１０はＶま
    たはＩであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型
    ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を有する、請求項
    １に記載のポリペプチド。
  5. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５のいずれか１つのアミノ酸
    配列を有する、請求項４に記載のポリペプチド。
  6. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、アミノ酸配列
    ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
    ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭ
    ＤＦＳＩＲＩＧＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１３ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥ
    ＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１８）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、
    またはＩであり、Ｘ２はＡ、Ｖ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであ
    り、Ｘ４はＥ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり
    、Ｘ７はＨ、Ｒ、またはＰであり、Ｘ８はＳ、Ｇ、Ｌ、またはＴであり、Ｘ９は任意のア
    ミノ酸であり、Ｘ１０は任意のアミノ酸であり、Ｘ１１は任意のアミノ酸であり、Ｘ１２
    は任意のアミノ酸であり、Ｘ１３はＶまたはＩであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
    トが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少なくとも
    ２つのアミノ酸置換を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
  7. Ｘ９がＡである、請求項６に記載のポリペプチド。
  8. Ｘ９がＮである、請求項６に記載のポリペプチド。
  9. Ｘ１０がＩである、請求項６に記載のポリペプチド。
  10. Ｘ９がＮであり、Ｘ１０がＰである、請求項６に記載のポリペプチド。
  11. Ｘ９がＮであり、Ｘ１１がＳ、Ｔ、またはＣ以外の任意のアミノ酸である、請求項６に
    記載のポリペプチド。
  12. Ｘ１１がＴである、請求項６に記載のポリペプチド。
  13. Ｘ１１がＴ以外のアミノ酸である、請求項６に記載のポリペプチド。
  14. Ｘ１２がＰである、請求項６に記載のポリペプチド。
  15. Ｘ９がＮであり、Ｘ１２がＰ以外の任意のアミノ酸である、請求項６に記載のポリペプ
    チド。
  16. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、アミノ酸配列
    ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
    ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５Ｘ６ＧＸ７ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ８ＴＫＲＮＮＭ
    ＤＦＳＩＲＩＧＸ９ＩＴＸ１０ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ１１ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧ
    ＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１９）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩ
    であり、Ｘ２はＡ、Ｖ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ３はＩ、Ｓ、Ｔ、またはＦであり、Ｘ４
    はＥ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲであり、Ｘ６はＥまたはＱであり、Ｘ７は
    Ｈ、Ｒ、またはＰであり、Ｘ８はＳ、Ｇ、Ｌ、またはＴであり、Ｘ９はＮであり、Ｘ１０
    はＰ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ１１はＶまたはＩであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１
    バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して少
    なくとも２つのアミノ酸置換を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
  17. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、アミノ酸配列
    ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
    ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＸ４ＥＧＸ５ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ６ＴＫＲＮＮＭＤＦ
    ＳＩＲＩＧＸ７ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳ
    ＶＲＡＫＰＳ（配列番号５２）を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２は
    Ａ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ３はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ４はＫまたはＲであり
    、Ｘ５はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ６はＬ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ７はＡであり、前
    記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ
    １ドメインに対して少なくとも２つのアミノ酸置換を有する、請求項１に記載のポリペプ
    チド。
  18. Ｘ１がＶまたはＩであり、Ｘ２がＡまたはＩであり、Ｘ３がＩまたはＦであり、Ｘ４が
    ＫまたはＲであり、Ｘ５がＨまたはＰであり、Ｘ６がＬまたはＴであり、Ｘ７がＡである
    、請求項１７に記載のポリペプチド。
  19. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
    Ｄ１ドメインに対して、少なくとも３つのアミノ酸置換を有する、請求項１７に記載の
    ポリペプチド。
  20. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
    Ｄ１ドメインに対して、少なくとも４つのアミノ酸置換を有する、請求項１７に記載の
    ポリペプチド。
  21. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
    Ｄ１ドメインに対して、少なくとも５つのアミノ酸置換を有する、請求項１７に記載の
    ポリペプチド。
  22. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
    Ｄ１ドメインに対して、少なくとも６つのアミノ酸置換を有する、請求項１７に記載の
    ポリペプチド。
  23. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α
    Ｄ１ドメインに対して、少なくとも７つのアミノ酸置換を有する、請求項１７に記載の
    ポリペプチド。
  24. Ｘ１がＩである、請求項１７に記載のポリペプチド。
  25. Ｘ２がＩである、請求項１７に記載のポリペプチド。
  26. Ｘ３がＦである、請求項１７に記載のポリペプチド。
  27. Ｘ４がＲである、請求項１７に記載のポリペプチド。
  28. Ｘ５がＰである、請求項１７に記載のポリペプチド。
  29. Ｘ６がＴである、請求項１７に記載のポリペプチド。
  30. Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６の各々が野生型アミノ酸ではない、請求項１
    ７に記載のポリペプチド。
  31. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号８１〜８５のいずれか１つのアミノ酸
    配列を有する、請求項１７に記載のポリペプチド。
  32. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、アミノ酸配列ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＳ
    ＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱ
    Ｘ４ＥＧ Ｘ５ＦＰＲＶＴＴＶＳＥＸ６ＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＸ７ＩＴＰＡＤＡＧ
    ＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号２１２）
    を含み、ここで、Ｘ１はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ２はＶ、Ｉ、またはＬであり、Ｘ３
    はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ４はＫまたはＲであり、Ｘ５はＨ、Ｐ、またはＲであ
    り、Ｘ６はＳ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ７はＡであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアン
    トが、配列番号２の配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対して、少なくと
    も２つのアミノ酸置換を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
  33. ヒトＣＤ４７に対して、ＫＤ約５ｘ１０−９Ｍ未満で結合する、請求項１に記載のポリ
    ペプチド。
  34. さらに、前記ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に連結されたＦｃドメインモノマーを
    含み、前記Ｆｃドメインモノマーが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ領
    域である、請求項１に記載のポリペプチド。
  35. 前記Ｆｃドメインモノマーが、野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃ
    領域に対して、少なくとも１つの変異を含む、請求項３４に記載のポリペプチド。
  36. 配列番号１３５、配列番号１３６、または配列番号１３７のいずれか１つのアミノ酸配
    列を有する、請求項３５に記載のポリペプチド。
  37. 前記Ｆｃドメインモノマーが、（ａ）野生型ヒトＩｇＧ１に対して、以下のアミノ酸置
    換の１つ：Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、Ｙ４０７Ｖ、Ｔ３６６Ｙ、Ｔ３９４Ｗ
    、Ｆ４０５Ｗ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｖ、Ｌ３５１Ｔ、Ｌ３５１Ｈ、Ｌ３５
    １Ｎ、Ｌ３５１Ｋ、Ｐ３５３Ｓ、Ｓ３５４Ｄ、Ｄ３５６Ｋ、Ｄ３５６Ｒ、Ｄ３５６Ｓ、Ｅ
    ３５７Ｋ、Ｅ３５７Ｒ、Ｅ３５７Ｑ、Ｓ３６４Ａ、Ｔ３６６Ｅ、Ｌ３６８Ｔ、Ｌ３６８Ｙ
    、Ｌ３６８Ｅ、Ｋ３７０Ｅ、Ｋ３７０Ｄ、Ｋ３７０Ｑ、Ｋ３９２Ｅ、Ｋ３９２Ｄ、Ｔ３９
    ４Ｎ、Ｐ３９５Ｎ、Ｐ３９６Ｔ、Ｖ３９７Ｔ、Ｖ３９７Ｑ、Ｌ３９８Ｔ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ
    ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｎ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｈ、Ｆ４０５Ｒ、Ｙ４０７Ｔ、Ｙ４０７Ｈ
    、Ｙ４０７Ｉ、Ｋ４０９Ｅ、Ｋ４０９Ｄ、Ｋ４０９Ｔ、もしくはＫ４０９Ｉ、または
    （ｂ）（ｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異、（ｉｉ）ヒトＩｇＧ
    １のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａの変異、（ｉｉｉ）ヒ
    トＩｇＧ１のＦｃ領域に対して、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａ
    の変異、（ｉｖ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域に対して、Ｎ２９７Ａの変異、（ｖ）ヒトＩｇ
    Ｇ２のＦｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異、（ｖｉ）ヒトＩｇＧ２のＦ
    ｃ領域に対して、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異、（ｖｉｉ）ヒトＩｇ
    Ｇ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅ
    ｌＧ２３６の変異、もしくは（ｖｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域に対して、Ｓ２２８Ｐ
    、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含む
    、請求項３５に記載のポリペプチド。
  38. 食作用アッセイにおいて、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域のポリペプチドと比較して食作
    用の低下を示す、請求項３５に記載のポリペプチド。
  39. 前記Ｆｃドメインモノマーが、第二のＦｃドメインモノマーを含む第二のポリペプチド
    に連結され、Ｆｃドメインダイマーを形成する、請求項３５に記載のポリペプチド。
  40. 前記第二のＦｃドメインモノマーが、さらなるポリペプチドに連結される、請求項３９
    に記載のポリペプチド。
  41. 前記さらなるポリペプチドが、抗体可変ドメインを含む、請求項４０に記載のポリペプ
    チド。
  42. 前記抗体可変ドメインが、細胞上で発現される抗原を標的とする、請求項４１に記載の
    ポリペプチド。
  43. 前記細胞ががん細胞である、請求項４２に記載のポリペプチド。
  44. 前記抗体可変ドメインが、免疫細胞調節に関与する細胞表面タンパク質を標的とする、
    請求項４３に記載のポリペプチド。
  45. 前記さらなるポリペプチドが、治療用タンパク質を含む、請求項４０に記載のポリペプ
    チド。
  46. 前記治療用タンパク質が、サイトカイン、インターロイキン、抗原、ステロイド、抗炎
    症薬、または免疫調節薬である、請求項４５に記載のポリペプチド。
  47. 前記さらなるポリペプチドが、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む、請求項４５に記
    載のポリペプチド。
  48. さらに、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）（配列番号１２）を含む、請求項１に記載のポ
    リペプチド。
  49. 前記ＨＳＡが、配列番号１２に対して、Ｃ３４ＳまたはＫ５７３Ｐのアミノ酸置換を含
    む、請求項４８に記載のポリペプチド。
  50. 配列番号１５２〜１５９のいずれか１つのアミノ酸配列を有する、請求項４８に記載の
    ポリペプチド。
  51. さらに、アルブミン結合ペプチドを含む、請求項１に記載のポリペプチド。
  52. 前記アルブミン結合ペプチドが、ＤＩＣＬＰＲＷＧＣＬＷ（配列番号１６０）のアミノ
    酸配列を含む、請求項５１に記載のポリペプチド。
  53. さらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーを含む、請求項１に記載のポリペ
    プチド。
  54. 前記ＰＥＧポリマーが、前記ポリペプチドのシステイン置換とつながっている、請求項
    ５３に記載のポリペプチド。
  55. ポリペプチドであって、（ａ）シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリア
    ントであるとともに、アミノ酸配列
    ＥＥＸ１Ｘ２ＱＸ３ＩＱＰＤＫＸ４ＶＸ５ＶＡＡＧＥＸ６Ｘ７Ｘ８ＬＸ９ＣＴＸ１０ＴＳ
    ＬＸ１１ＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＸ１２ＲＸ１３ＬＩＹＮＱＸ１４Ｘ１５ＧＸ１６Ｆ
    ＰＲＶＴＴＶＳＸ１７Ｘ１８ＴＸ１９ＲＸ２０ＮＭＤＦＸ２１ＩＸ２２ＩＸ２３Ｘ２４Ｉ
    ＴＸ２５ＡＤＡＧＴＹＹＣＸ２６ＫＸ２７ＲＫＧＳＰＤＸ２８Ｘ２９ＥＸ３０ＫＳＧＡＧ
    ＴＥＬＳＶＲＸ３１ＫＰＳ（配列番号４７）を含み、ここで、Ｘ１はＥ、またはＧであり
    、Ｘ２はＬ、Ｉ、またはＶであり、Ｘ３はＶ、Ｌ、またはＩであり、Ｘ４はＳ、またはＦ
    であり、Ｘ５はＬ、またはＳであり、Ｘ６はＳ、またはＴであり、Ｘ７はＡ、またはＶで
    あり、Ｘ８はＩ、またはＴであり、Ｘ９はＨ、Ｒ、またはＬであり、Ｘ１０はＡ、Ｖ、Ｉ
    、またはＬであり、Ｘ１１はＩ、Ｔ、Ｓ、またはＦであり、Ｘ１２はＡ、またはＧであり
    、Ｘ１３はＥ、Ｖ、またはＬであり、Ｘ１４はＫ、またはＲであり、Ｘ１５はＥ、または
    Ｑであり、Ｘ１６はＨ、Ｐ、またはＲであり、Ｘ１７はＤ、またはＥであり、Ｘ１８はＳ
    、Ｌ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ１９はＫ、またはＲであり、Ｘ２０はＥ、またはＮであり
    、Ｘ２１はＳ、またはＰであり、Ｘ２２はＳ、またはＲであり、Ｘ２３はＳ、またはＧで
    あり、Ｘ２４は任意のアミノ酸であり、Ｘ２５は任意のアミノ酸であり、Ｘ２６はＶ、ま
    たはＩであり、Ｘ２７はＦ、Ｌ、またはＶであり、Ｘ２８はＤであるか、または存在せず
    、Ｘ２９はＴ、またはＶであり、Ｘ３０はＦ、またはＶであり、Ｘ３１はＡ、またはＧで
    あり、配列番号１〜１０のいずれか１つの配列を有する野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイ
    ンに対して、少なくとも２つのアミノ酸置換を有する前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント
    、ならびに（ｂ）２つのＦｃドメインモノマーを有するＦｃドメインダイマーを含むＦｃ
    バリアントであるとともに、各Ｆｃドメインモノマーが、独立して、（ｉ）Ｎ２９７Ａの
    変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａ
    の変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ
    、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｖ）Ｎ２９７Ａの変異を含
    むヒトＩｇＧ２のＦｃ領域、（ｖ）Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの変異を含むヒトＩｇＧ２
    のＦｃ領域、（ｖｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ
    ２のＦｃ領域、（ｖｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、及びｄｅ
    ｌＧ２３６の変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域、または（ｖｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２
    ３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩ
    ｇＧ４のＦｃ領域である前記Ｆｃバリアントを含む前記ポリペプチド。
  56. 前記Ｆｃドメインダイマーの前記Ｆｃドメインモノマーの１つが、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３
    ５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を含む、請求項
    ５５に記載のポリペプチド。
  57. 配列番号９８〜１０４、１０７〜１１３、１１６〜１２２、または１３５〜１３７のい
    ずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項５５に記載のポリペプチド。
  58. 前記Ｆｃバリアントが、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較してＦｃγ受容体に対
    する結合の除去または減少を示す、請求項５５に記載のポリペプチド。
  59. 前記ＩｇＧ１またはＩｇＧ２のＦｃバリアントが、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２のＦｃ
    領域の野生型版と比較して、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣ
    Ｄ６４のＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す、請求項５５に記載のポリペ
    プチド。
  60. 前記ＩｇＧ４のＦｃバリアントが、前記ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域の野生型版と比較して
    、ＣＤ１６ａ及びＣＤ３２ｂのＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す、請求
    項５５に記載のポリペプチド。
  61. 前記ＩｇＧ１またはＩｇＧ２のＦｃバリアントが、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ２のＦｃ
    融合の野生型版と比較して、Ｃ１ｑに対する結合の除去または減少を示す、請求項５５に
    記載のポリペプチド。
  62. 前記Ｆｃバリアントが、Ｆｃγ受容体に対して、ＫＤ約５ｘ１０−６Ｍ超で結合する、
    請求項５５に記載のポリペプチド。
  63. Ｆｃバリアントを含むポリペプチドであって、前記Ｆｃバリアントが、２つのＦｃドメ
    インモノマーを有するＦｃドメインダイマーを含み、各Ｆｃドメインモノマーが、独立し
    て、（ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩ
    ｇＧ１のＦｃ領域、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａの変異からなるヒト
    ＩｇＧ２のＦｃ領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５
    Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択され
    る、前記ポリペプチド。
  64. 前記２つのＦｃドメインモノマーが同一である、請求項６３に記載のポリペプチド。
  65. 前記Ｆｃドメインモノマーの少なくとも１つが、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ
    、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である、請求項６３に記載のポ
    リペプチド。
  66. 前記Ｆｃドメインモノマーの少なくとも１つが、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９
    ７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ２のＦｃ領域である、請求項６３に記載のポリペプチド。
  67. 前記Ｆｃバリアントが、前記ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較して、Ｆｃγ受容
    体に対する結合の除去または減少を示す、請求項６３に記載のポリペプチド。
  68. 前記Ｆｃバリアントが、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較して、ＣＤ１６ａ、Ｃ
    Ｄ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ、及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合の除去ま
    たは減少を示す、請求項６７に記載のポリペプチド。
  69. 前記Ｆｃバリアントが、前記ヒトＩｇＧのＦｃ融合の野生型版と比較して、Ｃ１ｑに対
    する結合の除去または減少を示す、請求項６３に記載のポリペプチド。
  70. 前記Ｆｃドメインモノマーの少なくとも１つが、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ
    、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域で
    ある、請求項６３に記載のポリペプチド。
  71. 前記Ｆｃバリアントが、野生型ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域と比較して、Ｆｃγ受容体に対
    する結合の除去または減少を示す、請求項７０に記載のポリペプチド。
  72. 前記Ｆｃバリアントが、そのヒトＩｇＧ４のＦｃ領域の野生型版と比較して、ＣＤ１６
    ａ及びＣＤ３２ｂのＦｃγ受容体に対する結合の除去または減少を示す、請求項７１に記
    載のポリペプチド。
  73. 前記Ｆｃバリアントが、Ｆｃγ受容体に対して、ＫＤ約５ｘ１０−６Ｍ超で結合する、
    請求項６３に記載のポリペプチド。
  74. さらに、ＣＤ４７結合ポリペプチドを含む、請求項６３に記載のポリペプチド。
  75. 前記Ｆｃバリアントが、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の野生型版と比較してＦｃγ受容体に対
    する結合の除去または減少を示す、請求項７４に記載のポリペプチド。
  76. 前記ＣＤ４７結合ポリペプチドが、げっ歯類及び非ヒト霊長類において急性貧血を引き
    起こさない、請求項７４に記載のポリペプチド。
  77. 前記ＣＤ４７結合ポリペプチドが、ヒトにおいて急性貧血を引き起こさない、請求項７
    ４に記載のポリペプチド。
  78. 前記ＣＤ４７結合ポリペプチドが、シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）ポリペ
    プチドまたはその断片である、請求項７４に記載のポリペプチド。
  79. 前記ＳＩＲＰ−αポリペプチドが、アミノ酸配列
    ＥＥＥＬＱＸ１ＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＸ２ＴＳＬＸ３ＰＶＧＰＩＱ
    ＷＦＲＧＡＧＰＧＲＸ４ＬＩＹＮＱＸ５ＥＧＸ６ＦＰＲＶＴＴＶＳＤＸ７ＴＫＲＮＮＭＤ
    ＦＳＩＲＩＧＸ８ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＸ９ＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥ
    ＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５１）を含み、ここで、Ｘ１はＶまたはＩであり、Ｘ２はＡ
    またはＩであり、Ｘ３はＩまたはＦであり、Ｘ４はＥまたはＶであり、Ｘ５はＫまたはＲ
    であり、Ｘ６はＨまたはＰであり、Ｘ７はＬまたはＴであり、Ｘ８はＮ以外の任意のアミ
    ノ酸であり、Ｘ９はＶまたはＩであるＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む、請求項７８
    に記載のポリペプチド。
  80. 前記ＳＩＲＰ−αポリペプチドが、Ｘ１がＶまたはＩであり、Ｘ２がＡまたはＩであり
    、Ｘ３がＩまたはＦであり、Ｘ４がＥであり、Ｘ５がＫまたはＲであり、Ｘ６がＨまたは
    Ｐであり、Ｘ７がＬまたはＴであり、Ｘ８がＮではなく、Ｘ９がＶであるＳＩＲＰ−α
    Ｄ１バリアントを含む、請求項７９に記載のポリペプチド。
  81. ポリペプチドであって、シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリアントで
    あるとともに、非自然発生の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ヒトＣＤ４７
    に結合する自然発生のＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインの親和性より少なくとも１０倍高い親
    和性でヒトＣＤ４７に結合する前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント、ならびにＦｃドメイ
    ンモノマーであるとともに、第二のＦｃドメインモノマーを含む第二のポリペプチドに連
    結されてＦｃドメインを形成し、前記Ｆｃドメインが、除去または減少されたエフェクタ
    ー機能及び除去または減少されたＣ１ｑ結合を有する前記Ｆｃドメインモノマーを含む前
    記ポリペプチド。
  82. 前記非自然発生の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインが、残基８０にアミノ酸の変異
    を含む、請求項８１に記載のポリペプチド。
  83. シグナル制御タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）Ｄ１バリアントを含むポリペプチドであっ
    て、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、ＫＤ２５０ｎＭ未満で第一の種由来のＣＤ４
    ７に結合し、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、ＫＤ２５０ｎＭ未満で第二の種由来
    のＣＤ４７に結合し、かつ、前記第一の種由来のＣＤ４７に対する前記ＫＤと、前記第二
    の種由来のＣＤ４７に対する前記ＫＤが互いに１００倍以内であり、前記第一の種と前記
    第二の種が、ヒト、げっ歯類、及び非ヒト霊長類からなる群から選択される、前記ポリペ
    プチド。
  84. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、少なくとも３つの異なる種由来のＣＤ４７に結
    合する、請求項８３に記載のポリペプチド。
  85. 前記非ヒト霊長類がカニクイザルである、請求項８３に記載のポリペプチド。
  86. （ａ）ＫＤ２５０ｎＭ未満でヒトＣＤ４７に結合するシグナル制御タンパク質α（ＳＩ
    ＲＰ−α）Ｄ１ドメイン、及び（ｂ）前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインのＮ末端またはＣ
    末端に連結されたＦｃドメインモノマーを含むポリペプチドであって、げっ歯類及び非ヒ
    ト霊長類において急性貧血を引き起こさない前記ポリペプチド。
  87. ヒトＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインの非自然発生のバリアントである、請求項８６に記載
    のポリペプチド。
  88. 前記ポリペプチドのインビボ投与が、投与後第一週の間に５０％未満のヘモグロビンの
    減少をもたらす、請求項８６に記載のポリペプチド。
  89. 前記ポリペプチドのヒトでの投与が、投与後第一週の間に５０％未満のヘモグロビンの
    減少をもたらす、請求項８６に記載のポリペプチド。
  90. さらに、少なくとも１つのＦｃバリアントを含むとともに、前記Ｆｃバリアントが、（
    ｉ）Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ１
    のＦｃ領域、（ｉｉ）Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａの変異からなるヒトＩｇＧ
    ２のＦｃ領域、または（ｉｉｉ）Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄ
    ｅｌＧ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域から選択される、請
    求項８３に記載のポリペプチド。
  91. 前記Ｆｃバリアントが、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＮ２９７Ａの変異
    からなるヒトＩｇＧ１のＦｃ領域である、請求項９０に記載のポリペプチド。
  92. 前記Ｆｃバリアントが、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びＮ２９７Ａの変異からなるヒト
    ＩｇＧ２のＦｃ領域である、請求項９０に記載のポリペプチド。
  93. 前記Ｆｃバリアントが、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ
    ２３６、及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ４のＦｃ領域である、請求項９０に記載
    のポリペプチド。
  94. 疾患または障害を有する個体の治療方法であって、請求項１〜９３のいずれか一項に記
    載のポリペプチドを前記個体に投与することを含む、前記方法。
  95. 前記疾患または障害が、がん、自己免疫疾患、または炎症性疾患である、請求項９４に
    記載の方法。
  96. 前記疾患または障害が、がんであり、前記がんが、固形腫瘍がん、血液がん、急性骨髄
    性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、非ホジキンリ
    ンパ腫、ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、膀胱がん、膵臓がん、子宮頸がん、子宮内膜
    がん、肺がん、気管支がん、肝臓がん、卵巣がん、結腸及び直腸のがん、胃がん（ｓｔｏ
    ｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ、ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、胆のうがん、消化管間質腫
    瘍がん、甲状腺がん、頭頸部がん、口腔咽頭がん、食道がん、黒色腫、非黒色腫皮膚がん
    、メルケル細胞がん、ウイルス誘導性がん、神経芽細胞腫、乳がん、前立腺がん、腎臓が
    ん、腎細胞がん、腎盂がん、白血病、リンパ腫、非上皮性悪性腫瘍、神経膠腫、脳がん、
    及び上皮性悪性腫瘍から選択される、請求項９４に記載の方法。
  97. 前記疾患または障害が、自己免疫疾患または炎症性疾患であり、前記自己免疫疾患また
    は前記炎症性疾患が、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデ
    ス、抗体媒介性炎症性または自己免疫性疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、
    アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、進行性全身性硬化症、強皮症、急性冠症
    候群、虚血性再灌流、クローン病、子宮内膜症、糸球体腎炎、重症筋無力症、特発性肺線
    維症、喘息、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎、及び炎症性自己免疫筋炎から選
    択される、請求項９４に記載の方法。
  98. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項９４に記載の方法。
  99. さらに、少なくとも１つのさらなる薬剤を投与することを含む、請求項９８に記載の方
    法。
  100. 前記少なくとも１つのさらなる薬剤が、抗体、腫瘍関連抗原、または非抗体治療薬であ
    る、請求項９９に記載の方法。
  101. 少なくとも２つのさらなる薬剤が投与される、請求項１００に記載の方法。
  102. 前記少なくとも２つのさらなる薬剤が、２つの抗体を含む、請求項１０１に記載の方法
    。
  103. 前記少なくとも２つのさらなる薬剤が、抗体及び腫瘍関連抗原を含む、請求項１０１に
    記載の方法。
  104. 前記少なくとも１つのさらなる薬剤が抗体である、請求項１００に記載の方法。
  105. 前記抗体がヒトＩｇＧ１アイソタイプ抗体である、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記抗体がヒトＩｇＧ２アイソタイプ抗体である、請求項１０４に記載の方法。
  107. 前記抗体がヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体である、請求項１０４に記載の方法。
  108. 前記抗体が、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＳ１抗体、抗Ｃ
    Ｄ３８抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ
    −Ｌ１抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、抗ＣＤ２７４抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ１３７
    抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗ＦＺＤ７抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＣ
    Ｒ４抗体、抗ＣＤ３８抗体、抗ＣＳＦ１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＢＡ
    ＦＦ抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、または抗ＶＥＧＦＲ２抗体から選択される、請求項１０４に
    記載の方法。
  109. 前記抗体が、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗ＣＤ１９抗体、抗ＣＳ１抗体、抗Ｃ
    Ｄ３８抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗ＲＡＮＫＬ抗体、または抗ＰＤ−Ｌ１抗体から選択され
    る、請求項１０８に記載の方法。
  110. 前記少なくとも１つのさらなる薬剤が、少なくとも１つの抗体であり、前記抗体が、セ
    ツキシマブ、ネシツムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＥＤＩ
    ０６８０、ＭＥＤ１６４６９、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ
    ６３８３、ＲＧ７８８８、イピリムマブ、トレメリムマブ、ウレルマブ、ＰＦ−０５０８
    ２５６６、エノビリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）、バンチクツマブ（ｖａｎ
    ｔｉｃｔｕｍａｂ）、バルリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）、モガマリズマブ（ｍｏｇ
    ａｍａｌｉｚｕｍａｂ）、ＳＡＲ６５０９８４、ダラツムマブ、トラスツズマブ、トラス
    ツズマブエムタンシン、ペルツズマブ、エロツズマブ（ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、リツキ
    シマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、ＲＧ７１５５、ＦＰＡ００８、パニツムマブ
    、ブレンツキシマブベドチン、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ベリムマブ、ベバシズマブ、デ
    ノスマブ、パニツムマブ、ラムシルマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ
    、アベルマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、ＭＥＤＩ０６８０、ピディリズマブ、
    またはＢＭＳ−９３６５９から選択される、請求項１０４に記載の方法。
  111. 前記抗体がトラスツズマブである、請求項１１０に記載の方法。
  112. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１１１に記載の方法。
  113. 前記抗体がリツキシマブである、請求項１１０に記載の方法。
  114. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１１３に記載の方法。
  115. 前記抗体がセツキシマブである、請求項１１０に記載の方法。
  116. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１１５に記載の方法。
  117. 前記抗体がダラツムマブである、請求項１１０に記載の方法。
  118. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１１７に記載の方法。
  119. 前記抗体がベリムマブである、請求項１１０に記載の方法。
  120. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１１９に記載の方法。
  121. 前記抗体がベバシズマブである、請求項１１０に記載の方法。
  122. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１２１に記載の方法。
  123. 前記抗体がデノスマブである、請求項１１０に記載の方法。
  124. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１２３に記載の方法。
  125. 前記抗体がパンチムマブ（ｐａｎｔｉｍｕｍａｂ）である、請求項１１０に記載の方法
    。
  126. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１２５に記載の方法。
  127. 前記抗体がラムシルマブである、請求項１１０に記載の方法。
  128. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１２７に記載の方法。
  129. 前記抗体がネシツムマブである、請求項１１０に記載の方法。
  130. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１２９に記載の方法。
  131. 前記抗体がニボルマブである、請求項１１０に記載の方法。
  132. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１３１に記載の方法。
  133. 前記抗体がペンブロリズマブである、請求項１１０に記載の方法。
  134. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１３３に記載の方法。
  135. 前記抗体がアベルマブである、請求項１１０に記載の方法。
  136. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１３５に記載の方法。
  137. 前記抗体がアテゾリズマブである、請求項１１０に記載の方法。
  138. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１３７に記載の方法。
  139. 前記抗体がデュルバルマブである、請求項１１０に記載の方法。
  140. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１３９に記載の方法。
  141. 前記抗体がＭＥＤＩ０６８０である、請求項１１０に記載の方法。
  142. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１４１に記載の方法。
  143. 前記抗体がピディリズマブである、請求項１１０に記載の方法。
  144. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１４３に記載の方法。
  145. 前記抗体がＢＭＳ−９３６５９である、請求項１１０に記載の方法。
  146. 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号７８〜８５、９８〜１０４、１０７〜
    １１３、１１６〜１２２、１３５〜１３７、または１５２〜１５９のいずれか１つの配列
    を有する、請求項１４５に記載の方法。
  147. 前記少なくとも１つのさらなる薬剤が腫瘍関連抗原であり、前記腫瘍関連抗原が免疫反
    応を誘発する、請求項１１０に記載の方法。
  148. 前記少なくとも１つのさらなる薬剤が抗体であり、前記抗体が、ＨＬＡ／ペプチドまた
    はＭＨＣ／ペプチド複合体を標的とする、請求項１１０に記載の方法。
  149. 前記抗体が、ＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ１、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリー（ＭＡ
    ＧＥ−Ａ３）、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、メラン−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲ
    Ｐ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体
    、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＥｐｈＡ３、ＳＡＰ−１、ＢＩ
    ＮＧ−４、Ｅｐ−ＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、メソテリン、ＢＲＣＡ１
    ／２（変異）、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３（変異）、Ｒａｓ（変異）
    、β−カテニン（変異）、ＴＧＦ−βＲＩＩ（変異）、ＨＰＶ Ｅ６、もしくはＥ７を含
    むＨＬＡ／ペプチドまたはＭＨＣ／ペプチド複合体を標的とする、請求項１４８に記載の
    方法。
  150. 前記抗体が、ＥＳＫ１、ＲＬ１Ｂ、Ｐｒ２０、または３．２Ｇ１である、請求項１４９
    に記載の方法。
  151. がんの治療用の請求項１に記載のポリペプチド。
  152. 自己免疫疾患の治療用の請求項１に記載のポリペプチド。
  153. 炎症性疾患の治療用の請求項１に記載のポリペプチド。
  154. がんの治療用薬剤の製造のための請求項１に記載のポリペプチドの使用。
  155. 自己免疫疾患の治療用薬剤の製造のための請求項１に記載のポリペプチドの使用。
  156. 炎症性疾患の治療用薬剤の製造のための請求項１に記載のポリペプチドの使用。
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