TW202128758A - 多專一性融合蛋白及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種多專一性融合蛋白，其不包含Fc區且能夠專一性結合於至少二種抗原。在一個實施例中，本發明提供一種多專一性融合蛋白，其包含以下結構式(I)及(II)：N'-A-L1-X-C' (I)；及N'-B-L1-Y-C' (II)。該多專一性融合蛋白可結合於癌細胞及免疫細胞且能夠增強免疫細胞之活性。因此，該融合蛋白可用作抗癌劑。

Description

多專一性融合蛋白及其用途
發明領域
本發明係關於結合於細胞之多專一性融合蛋白、製得該多專一性融合蛋白之方法、包含該等多專一性融合蛋白之組成物及其用途。
發明背景
抗體及/或以抗體為主之藥劑現為廣泛多種疾病及病症之治療選擇。目前有至少70種抗體在美國及/或歐盟獲得批准，大量新型分子處於臨床前研究及臨床試驗中。然而，研究界及臨床界仍持續搜尋新型、更好及更安全之治療劑。
一般而言，抗體為單專一性且結合於一個抗原決定基或抗原。另一方面，多專一性抗體具有結合多個抗原或多個抗原決定基之能力(韓國特許公開專利公開案第10-2016-0035065號)。然而，許多技術障礙已阻礙多專一性抗體之開發；因此，極少有多專一性抗體經批准作為治療劑。因此，仍需要更好的多專一性抗體及有效產生多功能及穩定的多專一性抗體之方法。
發明概要技術問題
因此，作為研究開發增強免疫活性之多專一性抗體之新結構的結果，本發明者開發出呈異二聚體形式之多專一性融合蛋白，其中抗體之Fc區經由抗體之重鏈可變區及輕鏈可變區組成之抗體可變區取代。另外，本發明者確認該融合蛋白作為抗癌劑係有效的，且因此完成本發明。問題之解決方案
為實現以上目標，本發明之一個態樣提供一種多專一性融合蛋白，其包含以下結構式(I)及(II)： N'-A-L1-X-C' (I)；及N'-B-L1-Y-C' (II) 其中，在以上結構式(I)及(II)中，該N'為該融合蛋白之N端，該C'為該融合蛋白之C端，該A及B中之每一者專一性結合於第一抗原，該L1為包含至少一個Cys之肽連接子，X為抗體可變重鏈(VH)區或抗體可變輕鏈(VL)區，Y為抗體可變輕鏈(VL)區或抗體可變重鏈(VH)區，且該X及Y形成專一性結合於第二抗原之抗體可變區。
本發明之另一態樣提供一種用於治療或預防癌症之醫藥組成物，其包含該融合蛋白作為活性成分。本發明之效果
根據本發明之多專一性融合蛋白可專一性結合於二個或多於二個抗原。另外，經構築以包括專一性結合於免疫細胞之抗體可變區及專一性結合於癌抗原之抗體可變區的多專一性融合蛋白可用作抗癌劑。
較佳實施例之詳細說明定義
如本文所用，術語「多專一性融合蛋白」係指結合於至少一或多種標靶或抗原之物質。特定言之，例如當解離常數(KD)≤10-7 M時，融合蛋白可專一性結合於或選擇性結合於抗原。在一個實施例中，當KD≤10-8 M或當KD≤10-9 M時，融合蛋白可以高親和力專一性結合於抗原。多專一性融合蛋白可包括抗體及衍生自抗體之分子。
在一個實施例中，多專一性融合蛋白或其抗原結合區域可為非人類抗體之「人類化」形式，其為包括包含天然CDR之人類免疫球蛋白的嵌合抗體。另外，多專一性融合蛋白或抗原結合區域可包含「完全人類抗體」或「人類抗體」之一部分。另外，在一個實施例中，多專一性融合蛋白或抗原結合區域可為「單株抗體」或其部分。
如本文所用，術語「抗體」係指專一性結合於抗原且引起抗原-抗體反應之物質。另外，抗體亦被稱為免疫球蛋白。抗體可指選自IgG、IgE、IgM、IgD及IgA之任一者，且可為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，其為IgG、IgA1或IgA2之子類。另外，抗體可為激動性抗體或拮抗性抗體。
本文所用之術語「Fab」或「Fab區」係指結合於抗原之抗體區。習知IgG通常包含二個Fab區。各Fab區典型地由重鏈及輕鏈中之每一者之一個可變區及一個恆定區構成。更特定言之，Fab區中之重鏈之可變區及恆定區為VH及CH1區，且Fab區中之輕鏈之可變區及恆定區為VL及CL區。Fab區中之VH、CH1、VL及CL可以各種方式排列以根據本揭露內容賦予抗原結合能力。
本文所用之術語「重鏈」係指約50-70 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括具有約120至130個或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括恆定區。恆定區可為稱為alpha (α)、delta (δ)、epsilon (ε)、gamma (γ)及mu (µ)之五種不同類型中之一者。α、δ及γ含有大約450個胺基酸，而µ及ε含有大約550個胺基酸。
本文所用之術語「輕鏈」係指約25 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括具有約100至約110個或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括恆定區。輕鏈之恆定區域可為稱為kappa (κ)或lambda (λ)之二種不同類型中之一者。輕鏈之恆定區被稱為「CL」。重鏈C區域(CH區域)自胺基端至羧基端(例如：CH1、CH2、CH3及其類似物)編號。此等類別抗體之CL及CH1中之任何區可用於本揭露內容中。在某一實施例中，本文提供之CL及CH1區係IgG類型(例如IgG1)。本文提供之Fab區中之代表性CL區具有以下胺基酸序列：TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO.: 59)。本文提供之Fab區中之代表性CH1區具有以下胺基酸序列：ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV (SEQ ID NO.: 60)。
本文中之術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區，包括天然序列Fc區、重組型Fc區及變異型Fc區。在一個實施例中，變異型Fc區可具有與天然序列Fc區相比之至少一個胺基酸取代，例如天然序列Fc區中之約一個至約十個胺基酸取代或約一個至約五個胺基酸取代。變異型Fc區可具有與天然序列Fc區之至少約80%同源性、至少約90%同源性或至少約95%同源性。
本文所用之術語「抗原」係抗體可選擇性結合之結構。靶標抗原可為多肽、碳水化合物、核酸、脂質、半抗原或其他天然存在或合成之化合物。特定言之，抗原為多肽且可為存在於細胞上或細胞中之蛋白質。
本文所用之術語「載體」係指用於攜帶或表現核酸序列之物質，該核酸序列包括編碼如本文所描述之多專一性融合蛋白(例如抗體)之核酸序列。特定言之，載體包括表現載體、質體、噬菌體載體、病毒載體、游離基因體及人工染色體。
如本文中可互換使用之術語「多核苷酸」或「核酸」係指具有任何長度之核苷酸之聚合物。特定言之，多核苷酸包括DNA及RNA。多專一性融合蛋白
本發明之一個態樣提供一種多專一性融合蛋白，其中抗體之Fc區經抗體之可變區取代。
本發明提供一種新穎多專一性融合蛋白，其具有多個結合於細胞之結合區域。此等融合蛋白在本文中可被稱為「抗體類細胞接合子(ALiCE)」。本發明中所提供之ALiCE分子具有二個抗原結合區域。第一抗原結合區域具有二個Fab區，且第二抗原結合區域具有Fv區。ALiCE分子之實例顯示於圖3a、圖3b、圖3c、圖3g及圖3h中。
Fv及Fab區可經由重鏈之鉸鏈區連接。一般而言，在該分子中，第一抗原結合區域包含Fab區，且第二抗原結合區域一般在CH2及CH3區域一般會位於天然抗體結構中之位置上連接(直接或間接)至第一抗原結合區域。舉例而言，在一個實施例中，第一重鏈之C端包含VH區域而非CH2區域，且第二重鏈之C端包含VL區域而非CH2區域。
本文所揭露之多專一性融合蛋白提供優於習知抗體及現有多專一性抗體(例如雙專一性抗體)之許多優勢。由於其多個抗原結合區域及整體組態設計，本發明中所提供之多專一性融合蛋白可用作使多個細胞聚在一起之細胞接合子。舉例而言，第一抗原結合區域可結合於第一細胞上表現之抗原，且第二抗原結合區域可結合於第二細胞上表現之抗原。因此，多專一性融合蛋白可有效地使二個細胞聚在一起。
本發明中所提供之多專一性融合蛋白可適用於結合及活化免疫細胞。舉例而言，在一個實施例中，ALiCE分子之二價Fab部分保留習知抗體之功能性，但第二無Fc單價抗原結合區(亦即，Fv區)能夠識別、接合、重導向及/或活化免疫系統之效應細胞，諸如T細胞。
在另一實施例中，ALiCE分子之Fv部分保留習知抗體之功能性，且Fab區能夠識別、接合、重導向及/或活化免疫系統之效應細胞，諸如T細胞。舉例而言，ACE-05及ACE-31均為由抗PD-L1及抗CD3區域構成之ALiCE分子，然而，ACE-05經由其Fab區結合於PD-L1且經由其Fv區結合於CD3。另一方面，ACE-31經由其Fab區結合於CD3且經由其Fv區結合於PD-L1。
在一個實施例中，缺失完全功能Fc區或缺失完全CH2及/或CH3區會消除或降低Fc介導之效應細胞毒性。在一個實施例中，Fv部分之VH鏈與VL鏈之間的天然相互作用可促進ALiCE分子之異二聚化而無需經由人工工程改造賦予非所要免疫原性。
多專一性融合蛋白之一個實施例可呈包含二個抗原結合區域之形式，其中第一抗原結合區域包含二個抗體Fab區，且第二抗原結合區域包含抗體Fv區。在此情況下，二個Fab區中之每一者包括二個部分。第一部分包含抗體可變重鏈(VH)區及抗體CH1區。另外，第二部分包含抗體可變輕鏈(VL)區及抗體輕鏈恆定區(CL)。二個Fab區中之每一者能夠結合於抗原。第二抗原結合區域之Fv區包含VH區及VL區。
另外，多專一性融合蛋白之一個實施例可包含以下四種多肽： (a)第一多肽及第二多肽，其各自包含抗體輕鏈， (b)第三多肽，其包含第一VH區、第一CH1區及第二VH區，以及 (c)第四多肽，其包含第三VH區、第二CH1區及VL區。
在此情況下，第一多肽以及第三多肽之第一VH區及第一CH1區形成第一抗原結合Fab區，且第二多肽以及第四多肽之第三VH區及第二CH1區形成第二抗原結合Fab區，第三多肽之第二VH區及第四多肽之VL區形成抗原結合Fv區。
據確認，C端Fv亦在二種不同重鏈類鏈(第三及第四多肽)之異二聚化中起重要作用。由於VH區與VL區之間的相互作用比VL-VL相互作用強得多，因此出現VH-VL結合。因此，可進行異二聚化以產生本發明之多專一性融合蛋白。異二聚化之效率極高，且哺乳動物細胞中所表現及純化之大部分多專一性融合蛋白呈異二聚體形式。據確認，異二聚化之效率為99%或大於99%。
另外，此結構提供標靶與效應細胞之間的最佳突觸距離。二個N端Fab區與C端Fv區之間的距離經估計為40 Å。此外，本文所提供之多專一性融合蛋白具有比其他已知雙專一性抗體(諸如BiTE、DART及其他以ScFv為主之雙專一性抗體形式)更多的摺疊複雜度(分子大小)，且因此預期該融合蛋白具有經改善之熱力學穩定性。特定言之，Fv區之VH區及VL區存在於獨立多肽上。多專一性融合蛋白之特徵
在一個實施例中，據估計在本文所提供之多專一性融合蛋白中，二個N端Fab區與C端Fv區之間的距離經估計為處於約40 Å至約70 Å範圍內。在一個實施例中，據估計在本文所提供之多專一性融合蛋白中，二個N端Fab區與C端Fv區之間的距離為約42 Å。在一些其他實施例中，據估計在本文所提供之多專一性融合蛋白中，二個N端Fab區與C端Fv區之間的距離為約60 Å。
作為多專一性融合蛋白之實施例，第一抗原結合區域對於第一抗原之結合親和力可高於第二抗原結合區域對於第二抗原之結合親和力。舉例而言，ACE-05與人類PD-L1之結合動力學類似於親本抗PD-L1抗體(亦即來自Y生物製劑公司(Y-Biologics Inc.)之YBL-007)之結合動力學。相比之下，ACE-05對於CD3之結合親和力遠低於親本抗CD3抗體(來自美國百進生技(BioLegend, USA)之UCHT1)之結合親和力。
在一個實施例中，本文所提供之多專一性融合蛋白能夠以約1 μM或更小、約100 nM或更小、約40 nM或更小、約20 nM或更小、約10 nM或更小、約1 nM或更小、約0.1 nM或更小、50 pM或更小、10 pM或更小或1 pM或更小之解離常數(KD )結合於一或多個標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，本文所提供之多專一性融合蛋白能夠以約20 nM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，多專一性融合蛋白能夠以約10 nM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，多專一性融合蛋白能夠以約1 nM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，多專一性融合蛋白能夠以約0.5 nM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，本文所提供之多專一性融合蛋白能夠以約0.1 nM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，本文所提供之多專一性融合蛋白能夠以約50 pM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，本文所提供之多專一性融合蛋白能夠以約25 pM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，本文所提供之多專一性融合蛋白能夠以約10 pM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。在一個實施例中，本文所提供之多專一性融合蛋白能夠以約1 pM或更小之解離常數(KD )結合於標靶、抗原或抗原決定基。
在一個實施例中，多專一性融合蛋白對於第一抗原之KD 可為多專一性融合蛋白對於第二抗原之KD 的至少約2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、50倍或更多倍。在一些實施例中，多專一性融合蛋白對於第一抗原之KD 可為多專一性融合蛋白對於第二抗原之KD 的約10、102 、103 或104 倍。
本發明之多專一性融合蛋白可呈化學改性形式。在一個實施例中，融合蛋白可藉由糖基化、乙醯化、PEG化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護基/阻隔基之衍生化、蛋白水解分裂及/或細胞配位體或其他蛋白質之結合而經化學改性。此等許多化學改性可藉由已知技術進行。Fv 存在於C 端處之多專一性融合蛋白
融合蛋白之一個實施例可包括以下結構式(I)及(II)： N'-A-L1-X-C' (I)；及 N'-B-L1-Y-C' (II) 其中，在以上結構式(I)及(II)中， 該N'為該融合蛋白之N端， 該C'為該融合蛋白之C端， 該A及B中之每一者對第一抗原具有專一性， 該L1為包含至少一個Cys之一肽連接子， X為一抗體可變重鏈(VH)區或一抗體可變輕鏈(VL)區， Y為一抗體可變輕鏈(VL)區或一抗體可變重鏈(VH)區，以及 該X及Y形成專一性結合於第二抗原之抗體可變區(Fv)。
在此情況下，A及B中之每一者為抗體Fab區，且可由以下構成：(i)包含抗體可變重鏈(VH)區及抗體CH1區之第一部分；以及(ii)包含抗體可變輕鏈(VL)區及抗體輕鏈恆定區(CL)之第二部分。
在一個實施例中，A及B可藉由二個Fab區結合於同一抗原。另外，A及B可結合於同一抗原之同一抗原決定基。另外，A及B結合於同一抗原之不同抗原決定基。在另一實施例中，A及B結合於不同抗原。
在另一實施例中，第一抗原結合區域及第二抗原結合區域結合於不同抗原，其中第一抗原結合區域可結合於第一抗原，且第二抗原結合區域可結合於第二抗原。圖3b及圖3c示出該等ALiCE分子之實例。此處，在ACE-05之情況下，第一抗原結合區域(二個Fab區)結合於癌抗原(PD-L1)，且第二抗原結合區域經由諸如CD3之抗原結合於諸如T細胞之免疫細胞。另外，在ACE-31之情況下，第一抗原結合區域(二個Fab區)經由諸如CD3之抗原結合於諸如T細胞之免疫細胞。另外，第二抗原結合區域結合於癌抗原(PD-L1)。該等ALiCE分子可將免疫細胞(例如T細胞)接合至癌細胞且因此用作用於治療癌症之治療劑。結構式 ( I )
另外，結構式(I)可包括以下結構式(I')及(I'')： N'-A'-L1-X-C' (I')；及 N'-A''-C' (I'') 其中，在以上結構式(I')及(I'')中， A'為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區，或為一抗體之一輕鏈區；以及 A''為一抗體之一輕鏈區，或為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區， 其中，該A'及A''結合形成抗體之可變區，其中該可變區專一性結合於第一抗原。在此情況下，輕鏈區可包括輕鏈可變區及輕鏈恆定區。另外，N'、L1、X及C'如上文所定義。結構式 ( II )
另外，結構式(II)可包括以下結構式(II')及(II'')： N'-B'-L1-Y-C' (II')；及 N'-B''-C' (II'') 其中，在以上結構式(II')及(II'')中， B'為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區，或為一抗體之一輕鏈區；以及 B''為一抗體之一輕鏈區，或為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區， 其中，該B'及B''結合形成抗體之可變區，其中該可變區專一性結合於第一抗原。在此情況下，輕鏈區可包括輕鏈可變區及輕鏈恆定區。另外，N'、L1、Y及C'如上文所定義。Fv 存在於N 端處之多專一性融合蛋白
融合蛋白之另一實施例可包括以下結構式(III)及(IV)： N'-X-L2-A-C' (III) N'-Y-L2-B-C' (IV) 其中，在以上結構式(III)及(IV)中， 該N'為該融合蛋白之N端， 該C'為該融合蛋白之C端， 該A及B中之每一者專一性結合於一第一抗原， 該L2為包含至少一個Cys之一肽連接子， X為一抗體可變重鏈(VH)區或一抗體可變輕鏈(VL)區， Y為一抗體可變輕鏈(VL)區或一抗體可變重鏈(VH)區，以及 該X及Y形成專一性結合於第二抗原之抗體可變區(Fv)。
在此情況下，A及B中之每一者為抗體Fab區，且可由以下構成：(i)包含抗體可變重鏈(VH)區及抗體CH1區之第一部分；以及(ii)包含抗體可變輕鏈(VL)區及抗體輕鏈恆定區(CL)之第二部分。
另外，結構式(III)可包括以下結構式(III')及(III'')： N'-X-L1-A'-C' (III')；以及 N'-A''-C' (III'') 其中，在以上結構式(III')及(III'')中， A'為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區，或為一抗體之一輕鏈區；以及 A''為一抗體之一輕鏈區，或為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區； 其中，該A'及A''結合形成抗體之可變區，其中該可變區對第一抗原具有專一性。
另外，結構式(IV)可包括以下結構式(IV')及(IV'')： N'-Y-L1-B'-C' (IV')；以及 N'-B''-C' (IV'') 其中，在以上結構式(IV')及(IV'')中， B'為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區，或為一抗體之一輕鏈區；以及 B''為一抗體之一輕鏈區，或為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區； 其中，該B'及B''結合形成抗體之可變區，其中該可變區對第一抗原具有專一性。連接子
在此情況下，L1及L2可包含衍生自免疫球蛋白之鉸鏈區。另外，L1及L2可包含1、2或3個Cys。
特定言之，L1及L2中之每一者可具有以下結構式(V)： (L1')n-鉸鏈-(L1'')m (V) 其中，該L1'及L1''中之每一者為由1至15個胺基酸構成之一連接子， n及m為整數0或1，且 該鉸鏈為衍生自一免疫球蛋白之一鉸鏈區。
在一個實施例中，抗體鉸鏈區為IgG鉸鏈區。本文所提供之IgG鉸鏈區可選自例如各種IgG亞型之抗體鉸鏈區。下表列舉具有可包括於本文所提供之彈性肽區中之核心鉸鏈序列之例示性IgG亞型。 [表1]
IgG亞型 核心鉸鏈序列 SEQ ID NO.:
IgG1 EPKSCDKTHTCPPCP 55
IgG2 ERKCCVECPPCP 56
IgG3 ELKTPLDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3 57
IgG4 ESKYGPPCPSCP 58
[表2]
鉸鏈區序列 SEQ ID NO.:
DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP 385
DKTHTCPPCPAPELLGGP 386
DKTHTCPPCPPCPAPELLG 387
鉸鏈可經修飾以引入額外二硫鍵。鉸鏈區可包含超過二個二硫鍵。鉸鏈區可包含偶數個二硫鍵，諸如二個、四個、六個、八個或十個二硫鍵，四個、六個、八個或十個二硫鍵，或四個二硫鍵。在一個實施例中，鉸鏈區可例如包含奇數個二硫鍵，諸如一個、三個、五個、七個或九個二硫鍵，三個、五個、七個或九個二硫鍵，或三個二硫鍵。圖3g示出多專一性融合蛋白之代表性實例，其中鉸鏈區經製備使得在多專一性融合蛋白之重鏈之間形成二個及三個二硫鍵。
鉸鏈區包含胺基酸序列(PPC)n ，其中n為整數。在一些實施例中，n可為偶數，諸如2、4、6、8或10，例如4、6、8或10，例如4。在其他實施例中，n可為奇數，諸如1、3、5、7或9，例如3、5、7或9，例如3。另外，鉸鏈之間的二硫鍵係形成於一個鉸鏈區之半胱胺酸殘基與另一鉸鏈區之半胱胺酸殘基之間。
L1'及L1''中之每一者可為由1至20個胺基酸組成之肽。具體言之，L1'及L1''可為胺基酸，諸如(G4S)p (p為整數1至10)。具體言之，L1'及L1''可為(G4S)1 、(G4S)2 、(G4S)3 或(G4S)4 。
L1'及/或L1''之長度可變化。在一些實施例中，L1'及/或L1''為5個胺基酸長。在另一實施例中，L1'及/或L1''為9個胺基酸長。在另一實施例中，L1'及/或L1''為10個胺基酸長。下表示出L1'及/或L1''之代表性實例。 [表3]
連接子序列 SEQ ID NO.:
GGGGS 112
GGGGSGGGGS 113
GGSGGGGSG 114
第一抗原
第一抗原可為癌抗原(腫瘤專一性抗原)，或存在於免疫細胞表面上之蛋白質，或可為細胞介素。第一抗原可為PD-L1、PD-1、EGFR、TNFR、BCMA、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123、cMET、DLL3、GD2、連結蛋白-4、RANKL、SLAMF7、TROP2、密連蛋白18.2、TNFR、TNF、CD3、HER2、CD20、CD19、CTLA-4、VEGFR、VEGF、NCAM1、ICAM-1、ICAM-2、CEACAM6、癌胚抗原(CEA)、CA-125、α胎蛋白(AFP)、MUC-1、上皮腫瘤抗原(ETA)、黑色素瘤相關抗原(MAGE)、未成熟層黏連蛋白受體、 TAG-72、HPV E6/E7、BING-4、鈣活化氯通道2、細胞週期蛋白-B1、9D7、Ep-CAM、EphA3、間皮素、SAP-1、存活素或病毒衍生之抗原。
特定言之，第一抗原可為癌抗原。在此情況下，癌抗原可為選自由以下組成之群之任一者：PD-L1、EGFR、BCMA、CD19、CD20、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123、HER2、cMET、DLL3、GD2、連結蛋白-4、RANKL、SLAMF7、TROP2、密連蛋白18.2、MUC-1、間皮素、EpCAM及CEA。
在此情況下，在一個實施例中，第一抗原可為調節T細胞功能之細胞表面分子。在另一實施例中，第一抗原可為免疫檢查點抑制劑。另外，第一抗原可為癌抗原。
另外，第一抗原可為表現於免疫細胞表面上之蛋白質，諸如淋巴球及單核球。特定言之，其可為表現於細胞中之蛋白質，該細胞諸如T細胞、B細胞、樹突狀細胞、粒細胞、巨核細胞、單核球及NK細胞。另外，第一抗原可為表現於CD8+ T細胞或CD4+ T細胞中之蛋白質。
在以上結構式中，A及B可識別同一抗原。另外，A及B可識別不同抗原。
在一個實施例中，A及/或B可專一性結合於選自由以下組成之群的任一抗原：PD-L1、HER2、CD19、CD20、EGFR、CD3、TNF及CTLA-4。具體言之，A及/或B可包含選自以下之任一可變區：PD-L1 ： 1)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 5 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 6 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 7 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 9 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 10 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 11 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 2)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 171 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 172 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 173 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 3)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 314 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 315 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 316 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 4)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列；HER2 ： 5)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 118 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 119 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 120 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 121 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 122 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 123 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 6)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD19 ： 7)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 140 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 141 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 142 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 152 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 153 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 154 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 8)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 62 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 63 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 64 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 66 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 67 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 68 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD20 ： 9)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 223 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 224 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 225 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 227 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 228 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 229 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 10)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 436 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 437 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 438 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 441 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 442 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 443 (VL-CDR3)之胺基酸序列；EGFR ： 11)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 12)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 245 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 246 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 247 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 249 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 250 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 251 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 13)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 256 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 257 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 258 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 260 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 261 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 262 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 14)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD3 ： 15)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 326 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 327 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 328 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 338 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 339 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 340 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 16)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 17)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 18)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 396 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 397 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 398 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 402 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 403 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 404 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 19)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 410 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 20)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 150 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 21)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 70 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 71 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 72 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 74 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 75 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 76 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 22)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 84 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 23)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 295 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 296 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 297 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 299 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 300 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 301 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 24)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 87 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 25)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 26)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 183 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 27)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 187 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 188 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 189 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 191 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 192 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 193 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 28)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 29)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 211 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 30)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 306 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 307 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 308 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 310 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 311 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 312 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 31)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 349 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 350 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 351 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 353 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 354 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 355 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 32)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 359 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 360 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 361 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 363 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 364 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 365 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 33)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 197 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 198 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 199 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 201 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 202 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 203 (VL-CDR3)之胺基酸序列；TNF ： 34) 一VH區，其包含SEQ ID NO.: 124 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 125 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 126 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 127 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 128 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 129 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 35) 一VH區，其包含SEQ ID NO.: 280 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 281 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 282 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 284 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 285 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 286 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 36) 一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；以及CTLA-4 ： 37) 一VH區，其包含SEQ ID NO.: 369 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 370 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 371 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 373 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 374 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 375 (VL-CDR3)之胺基酸序列；
此外，A或B可包含選自以下之任一可變區：PD-L1 ： 1)SEQ ID NO.: 4之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 8之一輕鏈可變(VL)區； 2)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 170之一輕鏈可變(VL)區； 3)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 313之一輕鏈可變(VL)區； 4)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 333之一輕鏈可變(VL)區； 5)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區；HER2 ： 6)SEQ ID NO.: 51之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 52之一輕鏈可變(VL)區； 7)SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；CD19 ： 8)SEQ ID NO.: 139之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 151之一輕鏈可變(VL)區； 9)SEQ ID NO.: 61之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 65之一輕鏈可變(VL)區；CD20 ： 10)SEQ ID NO.: 222之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 226之一輕鏈可變(VL)區； 11)SEQ ID NO.: 435之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 440之一輕鏈可變(VL)區；EGFR ： 12)SEQ ID NO.: 233之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 237之一輕鏈可變(VL)區； 13)SEQ ID NO.: 244之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 248之一輕鏈可變(VL)區； 14)SEQ ID NO.: 255之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 259之一輕鏈可變(VL)區；CD3 ： 15)SEQ ID NO.: 325之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 337之一輕鏈可變(VL)區； 16)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區； 17)SEQ ID NO.: 162之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 166之一輕鏈可變(VL)區； 18)SEQ ID NO.: 395之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 401之一輕鏈可變(VL)區； 19)SEQ ID NO.: 406之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 409之一輕鏈可變(VL)區； 20) SEQ ID NO.: 143之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 147之一輕鏈可變(VL)區； 21) 2)SEQ ID NO.: 69之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 73之一輕鏈可變(VL)區； 22)SEQ ID NO.: 77之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 81之一輕鏈可變(VL)區； 23)SEQ ID NO.: 294之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 298之一輕鏈可變(VL)區； 24)SEQ ID NO.: 85之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 86之一輕鏈可變(VL)區； 25)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 180之一輕鏈可變(VL)區； 26)SEQ ID NO.: 186之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 190之一輕鏈可變(VL)區； 27)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 206之一輕鏈可變(VL)區； 28)SEQ ID NO.: 210之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 212之一輕鏈可變(VL)區； 29)SEQ ID NO.: 215之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 216之一輕鏈可變(VL)區； 30)SEQ ID NO.: 305之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 309之一輕鏈可變(VL)區； 31)SEQ ID NO.: 348之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 352之一輕鏈可變(VL)區； 32)SEQ ID NO.: 358之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 362之一輕鏈可變(VL)區； 33)SEQ ID NO.: 196之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 200之一輕鏈可變(VL)區；TNF ： 34)SEQ ID NO.: 53之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 54之一輕鏈可變(VL)區； 35)SEQ ID NO.: 279之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 283之一輕鏈可變(VL)區； 36)SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；CTLA-4 ： 37)SEQ ID NO.: 368之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 372之一輕鏈可變(VL)區；第二抗原
第二抗原可為癌抗原(腫瘤專一性抗原)，或存在於免疫細胞表面上之蛋白質，或可為細胞介素。第二抗原可為PD-L1、PD-1、EGFR、BCMA、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123、cMET、DLL3、GD2、連結蛋白-4、RANKL、SLAMF7、TROP2、密連蛋白18.2、TNFR、TNF、CD3、HER2、CD20、CD19、CTLA-4、VEGFR、VEGF、NCAM1、ICAM-1、ICAM-2、CEACAM6、癌胚抗原(CEA)、CA-125、α胎蛋白(AFP)、MUC-1、上皮腫瘤抗原(ETA)、黑色素瘤相關抗原(MAGE)、未成熟層黏連蛋白受體、 TAG-72、HPV E6/E7、BING-4、鈣活化氯通道2、細胞週期蛋白-B1、9D7、Ep-CAM、EphA3、間皮素、SAP-1、存活素或病毒衍生之抗原。特定言之，第二抗原可為存在於免疫細胞表面上之蛋白質。Fv 形成區
其特徵在於上文所描述之X及Y結合形成抗體之Fv。在此情況下，Fv可專一性結合於預定抗原。在此情況下，X及Y可為對抗原具有專一性之輕鏈可變區或重鏈可變區。另外，X及Y可包含輕鏈及重鏈之CDR。
X及Y結合形成Fv，且Fv可專一性結合於上文所描述之第二抗原。在一個實施例中，藉由X及Y之結合所形成之Fv可專一性結合於選自由以下組成之群的任一抗原：PD-L1、HER2、CD19、CD20、EGFR、CD3、TNF及CTLA-4。特定言之，X及Y可分別包含選自以下之任一可變區中之可變重鏈(VH)區或可變輕鏈(VL)區：PD-L1 ： 1)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 5 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 6 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 7 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 9 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 10 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 11 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 2)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 171 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 172 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 173 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 3)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 314 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 315 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 316 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 4)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列；HER2 ： 5)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 118 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 119 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 120 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 121 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 122 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 123 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 6)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD19 ： 7)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 140 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 141 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 142 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 152 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 153 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 154 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 8)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 62 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 63 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 64 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 66 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 67 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 68 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD20 ： 9)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 223 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 224 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 225 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 227 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 228 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 229 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 10)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 436 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 437 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 438 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 441 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 442 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 443 (VL-CDR3)之胺基酸序列；EGFR ： 11)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 12)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 245 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 246 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 247 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 249 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 250 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 251 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 13)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 256 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 257 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 258 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 260 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 261 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 262 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 14)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD3 ： 15)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 326 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 327 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 328 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 338 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 339 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 340 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 16)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 17)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 18)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 396 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 397 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 398 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 402 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 403 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 404 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 19)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 410 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 20)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 150 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 21)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 70 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 71 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 72 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 74 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 75 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 76 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 22)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 84 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 23)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 295 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 296 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 297 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 299 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 300 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 301 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 24)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 87 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 25)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 26)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 183 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 27)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 187 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 188 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 189 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 191 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 192 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 193 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 28)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 29)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 211 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 30)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 306 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 307 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 308 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 310 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 311 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 312 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 31)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 349 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 350 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 351 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 353 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 354 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 355 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 32)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 359 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 360 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 361 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 363 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 364 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 365 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 33)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 197 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 198 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 199 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 201 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 202 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 203 (VL-CDR3)之胺基酸序列；TNF ： 34)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 124 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 125 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 126 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 127 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 128 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 129 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 35)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 280 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 281 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 282 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 284 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 285 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 286 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 36)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；以及CTLA-4 ： 37)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 369 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 370 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 371 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 373 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 374 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 375 (VL-CDR3)之胺基酸序列。Fv 形成區
此外，X或Y可為選自以下之任一可變區中之可變重鏈(VH)區或可變輕鏈(VL)區：PD-L1 ： 1)SEQ ID NO.: 4之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 8之一輕鏈可變(VL)區； 2)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 170之一輕鏈可變(VL)區； 3)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 313之一輕鏈可變(VL)區； 4)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 333之一輕鏈可變(VL)區； 5)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區；HER2 ： 6)SEQ ID NO.: 51之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 52之一輕鏈可變(VL)區； 7)SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；CD19 ： 8)SEQ ID NO.: 139之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 151之一輕鏈可變(VL)區； 9)SEQ ID NO.: 61之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 65之一輕鏈可變(VL)區；CD20 ： 10)SEQ ID NO.: 222之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 226之一輕鏈可變(VL)區； 11)SEQ ID NO.: 435之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 440之一輕鏈可變(VL)區；EGFR ： 12)SEQ ID NO.: 233之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 237之一輕鏈可變(VL)區； 13)SEQ ID NO.: 244之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 248之一輕鏈可變(VL)區； 14)SEQ ID NO.: 255之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 259之一輕鏈可變(VL)區；CD3 ： 15)SEQ ID NO.: 325之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 337之一輕鏈可變(VL)區； 16)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區； 17)SEQ ID NO.: 162之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 166之一輕鏈可變(VL)區； 18)SEQ ID NO.: 395之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 401之一輕鏈可變(VL)區； 19)SEQ ID NO.: 406之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 409之一輕鏈可變(VL)區； 20)SEQ ID NO.: 143之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 147之一輕鏈可變(VL)區； 21) 2)SEQ ID NO.: 69之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 73之一輕鏈可變(VL)區； 22)SEQ ID NO.: 77之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 81之一輕鏈可變(VL)區； 23)SEQ ID NO.: 294之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 298之一輕鏈可變(VL)區； 24)SEQ ID NO.: 85之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 86之一輕鏈可變(VL)區； 25)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 180之一輕鏈可變(VL)區； 26)SEQ ID NO.: 186之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 190之一輕鏈可變(VL)區； 27)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 206之一輕鏈可變(VL)區； 28)SEQ ID NO.: 210之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 212之一輕鏈可變(VL)區； 29)SEQ ID NO.: 215之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 216之一輕鏈可變(VL)區； 30)SEQ ID NO.: 305之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 309之一輕鏈可變(VL)區； 31)SEQ ID NO.: 348之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 352之一輕鏈可變(VL)區； 32)SEQ ID NO.: 358之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 362之一輕鏈可變(VL)區； 33)SEQ ID NO.: 196之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 200之一輕鏈可變(VL)區；TNF ： 34)SEQ ID NO.: 53之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 54之一輕鏈可變(VL)區； 35)SEQ ID NO.: 279之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 283之一輕鏈可變(VL)區； 36)SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；CTLA-4 ： 37)SEQ ID NO.: 368之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 372之一輕鏈可變(VL)區。添加CH3 之Fv 區
X及/或Y可進一步包含CH3。在此情況下，CH3可為衍生自免疫球蛋白之CH3區。在此情況下，CH3可結合於X及/或Y之N端或C端。特定言之，CH3可包括於X及Y之C端處。另外，CH3可僅包括於X之C端處或可僅包括於Y之C端處。
CH3區之存在可提供多專一性融合蛋白之Fc受體結合能力。可將KiH(臼包杵)結構引入至與Fv區連接之CH3區中。圖1A示出抗CD3 UCHT1、抗PD-L1度伐利尤單抗及抗CTLA-4伊匹單抗之可變區域之「臼包杵」結構。A 及B 與X /Y 之組合之實例
A及B可經設計以能夠專一性結合於選自上文所描述之第一抗原之任一抗原。X/Y可經設計以能夠專一性結合於選自上文所描述之第二抗原之任一抗原。
在一個實施例中，A及B專一性結合於任一種選自由以下組成之群的第一抗原：PD-L1、EGFR、CD20、HER2、TNF、CD19、CD3及CTLA4，且藉由X及Y之結合所形成之Fv專一性結合於任一種選自由以下組成之群的第二抗原：PD-L1、EGFR、CD20、HER2、TNF、CD19、CD3及CTLA4，其中A及B以及由X及Y所形成之Fv的特徵可在於不結合於同一抗原。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之HER2且可專一性結合於作為第二抗原之TNF。
在一個實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之PD-L1且可專一性結合於作為第二抗原之CD3。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之EGFR且可專一性結合於作為第二抗原之CD3。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之CD20且可專一性結合於作為第二抗原之CD3。
在一個實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之CD3且可專一性結合於作為第二抗原之PD-L1。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之HER2且可專一性結合於作為第二抗原之CD3。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之CD19且可專一性結合於作為第二抗原之CD3。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之PD-L1且可專一性結合於作為第二抗原之CTLA-4。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之PD-L1且可專一性結合於作為第二抗原之PD-1。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之PD-1且可專一性結合於作為第二抗原之PD-L1。
在另一實施例中，多專一性融合蛋白可專一性結合於作為第一抗原之CD20且可專一性結合於作為第二抗原之CTLA-4。多專一性融合蛋白之實驗結果 基於VH -VL 異二聚體形成之ALiCE 分子之產生
儘管CH3區域在抗體組裝中具有重要作用，但本發明者假定VH及VL區域之自主組裝及穩定Fv複合物之形成不僅可用於促進二個HC之專一性異二聚化，而且可用於引入額外位點以結合於第二抗原。為測試此情況，親本IgG之二個HC之Fc區域經對第二抗原具有專一性之IgG之VH及VL區域置換以分別產生ACE-HC-VH及ACE-HC-VL(圖3A)。
作為測試系統，本發明者使用抗CD3抗體UCHT1及抗PD-L1抗體YBL-007，且YBL-007為由本發明者構築的抗PD-L1抗體，其具有類似於阿維單抗之信號阻斷能力的PD-L1/PD-1信號阻斷能力(圖4)。親本YBL-007之LC用於ACE-LC，且VH-CH1及YBL-007 HC之鉸鏈區融合至UCHT1之VH或VL以產生ALiCE之二個HC。將編碼ACE-HC-VH、ACE-HC-VL及ACE-LC之各種組合之表現載體轉染至FreeStyle 293-F細胞中，且藉由SDS-PAGE及西方墨點法分析此等分子在培養基中之表現(圖5)。
如所預期，各鏈可能由於摺疊及分泌問題而不表現(圖5，色帶1至3)。另外，在UCHT1 VH區域之CDR 3迴路中具有杵結構之ACE-HC-VH鏈由於不適當之杵-杵相互作用而不可組裝成均二聚體(圖5，色帶4)，而在同一ACE-HC-VL鏈之間的均二聚體形成幾乎未偵測到(圖5，色帶5)。
另外，適當組裝之複合物僅在ACE-HC-VL、ACE-HC-VH及ACE-LC一起存在時高度表現及分泌(圖5，色帶6)。所得ALiCE(抗PD-L1 Fab×抗CD3 Fv；在下文中稱為ACE-05)在FreeStyle 293-F細胞中短暫表現且藉由CH1親和層析純化，且產率為約20~30 mg/L。在還原及非還原條件下，藉由毛細電泳分析使用Bioanalyzer分析套組(P230及P80套組)確認ACE-LC、ACE-HC-VH及ACE-HC-VL鏈以2:1:1之比率存在於ACE-05中(圖6及圖7)。
經由使用LC-ESI/TOF進行的尺寸排阻層析及質譜分析(MS)之分析結果顯示ACE-05為均質異四聚體(圖6及圖8)。特定言之，觀測到的主峰之質量(123,997 Da)非常接近於ACE-05之異四聚體結構之理論質量(123,942 Da)。與以上相比，ACE-05-HC-VH均二聚體+二個ACE-05-LC(其為均四聚體結構)之質量為125,597 Da，且ACE-05-HC-VL均二聚體+二個ACE-05-LC之質量為122,287 Da(圖8)。根據此等結果，經確認在經純化ACE-05中不存在可偵測到的均四聚體複合物。
另外，本發明者產生ACE-31(使用UCHT1及YBL-007之抗CD3 Fab×抗PD-L1 Fv)及ACE-00(使用抗HER2 mAb[赫賽汀(Herceptin)]及抗TNF-α mAb[修美樂(Humira)]之抗HER2 Fab×抗TNF-α Fv)且研究ALiCE平台是否可一般應用於不同抗體對。類似於ACE-05，將ACE-31及ACE-00裝配至對應的異四聚體複合物、ACE-HC-VL、ACE-HC-VH及二個ACE-LC中，且以均質形式分泌(圖6及圖9)。
在蛋白質表現期間，出現少量聚集(或寡聚物之摺疊異常) (圖10)。然而，容易藉由陽離子交換層析(CEX)移除此等聚集體，且在CEX純化之後並未出現進一步聚集。使用熱穩定性分析及暴露於各種pH條件(pH 6-8)或在室溫下長期培養(7天)進行之對ACE-05之穩定性測試顯示，ACE-05具有類似於IgG之穩定且均質的結構(圖11及圖12)。作為T 細胞接合子之ALiCE 之結合動力學及同時結合能力
發現ALiCE之外結合區域與內結合區域之間的距離為約60 Å，其為形成腫瘤與效應細胞之間的免疫突觸橋之可能距離(Arnett, K.L.等人, 《美國國家科學院院刊(Proc Natl Acad Sci U S A )》, 101:16268-16273, 2004) (圖3及圖13)。此等發現表明不同於單價BiTE，ALiCE之二個Fab臂可優先以高結合能力結合於腫瘤抗原，之後經工程改造之主幹Fv與腫瘤浸潤T細胞上之第二抗原結合。
因此，充當腫瘤專一性T細胞接合子之ALiCE可潛在地增強抗腫瘤功效同時降低脫靶T細胞細胞毒性。為了測試此情形，使用Biacore 8K系統(GE Healthcare)藉由表面電漿子共振(SPR)分析ACE-05(抗PD-L1 Fab×抗CD3 Fv)及ACE-31(抗CD3 Fab×抗PD-L1 Fv)與PD-L1及CD3之結合動力學，且將其與YBL-007(抗PD-L1親本(親本)抗體)、UCHT1 (抗CD3親本抗體)及BiTE-05 (抗PD-L1×抗CD3)與同一抗原之結合動力學相比(圖14及圖15)。
本發明者確認ACE-05與PD-L1之結合親和力(KD ) (6.78×10-10 M)類似於YBL-007之結合親和力(6.46×10-10 M)，但其高於BiTE-05之結合親和力(1.39×10-9 M)。此可能係由於ACE-05及YBL-007中之二個PD-L1結合位點。類似地，包含二價抗CD3 Fab臂之ACE-31 (2.39×10-10 M)及UCHT1 (2.65×10-10 M)二者對於CD3之結合親和力高於BiTE-05之結合親和力(1.01×10-9 M)。
相比之下，ACE-05之單價主幹Fv對於CD3之結合親和力(2.15×10-8 M)及ACE-31對於PD-L1之結合親和力(2.72×10-8 M)分別比親本抗體UCHT1對於CD3之結合親和力(2.65×10-10 M)及親本抗體YBL-007對於PD-L1之結合親和力(6.46×10-10 M)低了40至80倍。另外，ACE-05之主幹Fv對於CD3之結合親和力及ACE-31至PD-L1之結合親和力比BiTE-05對於CD3之結合親和力(1.01×10-9 M)及BiTE-05對於PD-L1之結合親和力(1.39×10-9 M)低得多，此可能係由於Fab臂與主幹Fv之第二抗原結合區之間的位阻。
然而，使用Octet QKe系統(Pall Forte Bio)之BLI(生物層光干涉量測術)及流式細胞儀(GE Healthcare)，本發明者確認ACE-05及ACE-31同時結合於PD-L1及CD3二者(圖16及圖17)，其指示二個相應抗原之結合親和力視ALiCE互補位(連接至抗原之抗體分子位點)之價數而定。
接下來，本發明者研究ALiCE互補位之價數對腫瘤及T細胞結合的影響。ACE-05或ACE-31對於Karpas-299腫瘤細胞之PD-L1及Jurkat T細胞之CD3的表觀結合親和力與對於PD-L1及CD3之活體外結合親和力一致。
特定言之，與對應ACE-31之結合親和力(對於PD-L1+ Karpas-299細胞之KD =20.58 nM及對於CD3+ Jurkat T細胞之KD =856 pM)相比，ACE-05展現對於PD-L1之較強結合親和力(對於PD-L1+ Karpas-299細胞之KD =31.45 pM)及對於CD3之較弱結合親和力(對於CD3+ Jurkat T細胞之KD =52.44 nM)。另一方面，ACE-05及ACE-31均不結合於PD-L1- Raji細胞(圖18A)。ACE -05 之增強的腫瘤細胞殺死及降低的非專一性T 細胞毒性
為了比較藉由ACE-05、ACE-31及BiTE-05之在靶T細胞活化及脫靶T細胞活化，本發明者將野生型(WT) PD-L1- HEK細胞或經基因工程改造之PD-L1+ HEK細胞與表現NFAT-螢光素酶報導體基因之PD-1- Jurkat T細胞共培養(圖19)。接著，在用T細胞接合子ACE-05、ACE-31或BiTE-05處理之後，量測NFAT螢光素酶報導體活性以評估Jurkat T細胞活化。
有趣地，當與PD-L1+ HEK細胞及PD-1- Jurkat T細胞共培養時，ACE-05展現最高在靶NFAT活化。另一方面，當與WT PD-L1- HEK細胞及PD-1- Jurkat T細胞共培養時，BiTE-05及ACE-31展現比ACE-05更高的脫靶T細胞活化，其藉由在不存在PD-L1靶向之情況下直接結合於Jurkat T細胞上之CD3來介導(圖20)。
由於ACE-05、ACE-31、BiTE-05及YBL-007結合於如上文所描述之PD-L1(即使以不同結合親和力結合)，本發明者使用穩定表現PD-1及NFAT-螢光素酶報導體之JurkatT細胞及表現人類PD-L1及經工程改造細胞表面蛋白質之CHO-K1細胞來評估抑制PD-L1/PD-1活性之能力。在此情況下，以上經工程改造細胞表面蛋白質經設計而以獨立於抗原之方式活化同源T細胞受體(TCR) (Cheng, Z.J.J.等人, 《癌症研究(Cancer Res.)》, 75 (2015))。
另外，相較於在用YBL-007處理後，在用ACE-05或BiTE-05處理細胞培養物之後T細胞活化較高，其可僅破壞PD-L1/PD-1相互作用(圖21)。此等結果可能可歸因於ACE-05及BiTE-05之雙靶專一性，其可同時抑制PD-L1/PD-1相互作用及PD-L1/CD3介導之T細胞重導向。
另外，含有二價抗PD-L1 Fab臂之ACE-05的T細胞活化效率(EC50 =0.21 nM)比含有單價抗PD-L1 scFv之BiTE-05的T細胞活化效率(EC50 =1.09 nM)高5倍。然而，ACE-31在再活化T細胞中之有效性比ACE-05、BiTE-05及YBL-007之有效性小得多，其反映ACE-31對於PD-L1之親和力與其他3個分子相比較低(圖21)。
接下來，本發明者使用人類效應細胞(周邊血液單核細胞(PBMC)或經分離T細胞)比較ACE-05、ACE-31及BiTE-05針對PD-L1+ 腫瘤細胞(HCC827或MDA-MB-231)之細胞溶解能力。與對與經工程改造CHO-K1細胞共培養之PD-L1+ Jurkat T細胞之NFAT報導體分析一致，用ACE-05培育效應細胞(PBMC或CD3+ T細胞)顯示針對PD-L1+ HCC827(EC50 =1.97 pM)及MDA-MB-231(EC50 =8.37 pM)細胞之最強效在靶殺死活性(圖22至圖26)。
由於CD8+ 細胞毒性T細胞常常被視為實體腫瘤中之主要效應細胞，因此本發明者測試在ACE-05處理時，自PBMC分離之CD8+ T細胞是否具有細胞毒性。一致地，將ACE-05與CD8+ T細胞及PD-L1+ MDA-MB-231一起培育顯示最有效細胞溶解活性，且顯示最高位準之顆粒酶B分泌，其導致與穿孔蛋白合作之靶腫瘤細胞之直接蛋白分解及凋亡蛋白酶介導之細胞凋亡(圖27及圖28)。
另外，本發明者研究ACE-05是否可在PD-L1+ 腫瘤細胞存在下刺激人類效應細胞之活化及擴增。為此目的，本發明者用PD-L1+ MDA-MB-231細胞及1 nM ACE-05或IgG培育人類CD3+ T細胞24小時，且接著監測活化標記物CD69及CD25之表面表現。在ACE-05及PD-L1+ 腫瘤細胞存在下，早期活化標記物CD69在CD4+ 及CD8+ T細胞二者上上調，但不由IgG上調(圖29)。
另外，CD25(晚期活化標記物)在PD-L1+ 腫瘤細胞存在下藉由ACE-05在CD3+ T細胞中高度上調(圖30)。T細胞之活化及其隨後分化成效應細胞亦與T細胞簇聚及聚集相關(Zhou, J.等人, 《公共科學圖書館：綜合(PLoS One )》, 13:e0191634, 2018)。因此，本發明者將CytoLight染色人類CD3+ T細胞與PD-L1+ MDA-MB-231細胞及1 nM ACE-05、ACE-31、BiTE-05或IgG一起培育90小時，且接著量測簇聚面積。
因此，經確認ACE-05可刺激PD-L1+ 腫瘤細胞上之CD3+ T細胞之簇聚，且可比ACE-31或BiTE-05更有效地誘導T細胞活化(圖31)。此外，ACE-05強烈誘導CD3+ T細胞增殖/擴增(圖32)。
另一方面，本發明者意外地確認，儘管針對二種癌細胞株(HCC827及MDA-MB-231)，ACE-05之在靶腫瘤殺死能力高於BiTE-05之在靶腫瘤殺死能力，但經釋放之介白素(IL)-2及干擾素(IFN)-γ之位準在經BiTE-05處理之PBMC中比在經ACE-05處理之組中高得多(圖33)。此等結果表明，儘管自活化效應細胞釋放之細胞介素引起T細胞細胞毒性，但其在PD-L1+ 腫瘤細胞存在下之腫瘤殺死活性視雙專一性T細胞接合子對於腫瘤細胞上之PD-L1的親和力而定，從而引起T細胞之重導向。
為了進一步確認此等假設，本發明者製備對於CD3具有不同結合親和力(ACE-05＞ACE-49＞ACE-47＞ACE-56)但對於PD-L1具有相同結合親和力之ACE-05變異體(圖34)。對於CD3具有最高親和力之ACE-05在NFAT報導體分析中顯示最高脫靶T細胞活化，且對於對於CD3具有降低之結合親和力的ACE-05變異體則連續降低脫靶T細胞活化。
出人意料地，在PD-L1+ 腫瘤細胞存在下CD3+ T細胞之在靶腫瘤殺死能力對於ACE-05及ACE-05變異體而言類似(圖35及圖36)。與藉由抗HER2/CD3雙專一性抗體(Li, J.等人, 《科學轉化醫學(Sci Transl Med )》, 11 (2019))使毒性細胞介素釋放與T細胞細胞細胞溶解活性解偶聯之先前結果一致，細胞介素釋放可能與ACE-05之T細胞細胞溶解活性斷開連接，該活性可主要由分泌顆粒酶B及穿孔蛋白介導。此等觀測結果共同表明，ALiCE結合於腫瘤PD-L1用於T細胞接合及免疫檢查點抑制之能力對於其抗腫瘤作用較為關鍵，只要ALiCE甚至以低親和力結合於CD3即可。
為了評估藉由ACE-05、ACE-31及BiTE-05之脫靶T細胞活化，在不存在PD-L1+ 腫瘤細胞之情況下用ACE-05、ACE-31或BiTE-05處理CD4+ 或CD8+ T細胞之後量測細胞介素IL-2及IFN-γ之分泌。有趣地，僅BiTE-05強烈誘導IL-2及IFN-γ自CD4+ T細胞之分泌，不管BiTE-05對於CD3之親和力低於ACE-31之親和力之事實(圖37；未偵測到IL-6及TNF-α)。
已報導，藉由CD3抗體結合誘導之CD3的簇聚及/或多聚化對於T細胞活化比對於CD3抗體之CD3結合親和力更為關鍵(Minguet, S.等人, 《免疫學(Immunity )》, 26:43-54, 2007)。不同於作為均質異四聚體複合物之ACE-05及ACE-31，凝膠過濾分析指示BiTE-05製備含有多種摺疊異常多聚形式(圖38)。實際上，BiTE-05之此等多聚組分可甚至在無腫瘤細胞之情況下直接活化CD4+ 及CD8+ T細胞(圖39)且可產生非專一性脫靶T細胞毒性或細胞介素釋放症候群(CRS)。
另外，藉由使用自PBMC分離之PD-L1- Raji腫瘤細胞與CD3+ T細胞進行腫瘤殺死分析來確認ACE-05之PD-L1+ 腫瘤專一性T細胞細胞毒性(圖40)。綜合而言，此等發現指示，與BiTE-05相比，ACE-05對於腫瘤細胞之較高親和力使在靶T細胞活化增加，且均質異四聚體ACE-05展現降低之非專一性T細胞毒性。人類化小鼠模型中ALiCE 之活體內抗腫瘤功效
在移植有PD-L1+ HCC827腫瘤細胞之PBMC-復原NCG小鼠中研究ALiCE之活體內抗腫瘤功效。簡言之，將自二個健康供體分離之PBMC植入雌性NCG小鼠中3天，之後在右後側腹處皮下接種PD-L1+ HCC827腫瘤細胞。當腫瘤可觸知(第4天)時，向小鼠靜脈內注射3個劑量之ACE-05或BiTE-05 (0.5 mg/kg體重)或3個劑量之YBL-007或IgG(5.0 mg/kg體重)。
在用ACE-05處理之10隻小鼠中之9隻中，預立之腫瘤在第12天完全消退(圖41)。另外，本發明者監測作為副作用標誌之體重變化。經BiTE-05處理之小鼠顯示體重之顯著降低(~20%)，而經ACE-05或YBL-007處理之小鼠未顯示體重之顯著降低(圖42)。
本發明者推測，經BiTE-05處理之小鼠的體重減輕可歸因於在第一次投與BiTE-05之後細胞介素釋放之峰值。此外，藥物動力學分析顯示ACE-05在大鼠及食蟹獼猴中具有比BiTE-05長得多的半衰期(圖43)。劑量遞增分析揭示甚至極低劑量之ACE-05 (0.05 mg/kg體重)亦引起PD-L1+ HCC827腫瘤之完全消退(圖44)。
本發明者進一步研究ACE-05及BiTE-05在hCD3ε轉殖基因(TG)小鼠中之活體內T細胞毒性及抗腫瘤功效，其中T細胞經基因工程改造以表現hCD3ε及mCD3ε二者。IL-2及IFN-γ二者為多效性細胞介素，其為針對抗腫瘤免疫經由多種機制之重要效應分子。
然而，亦已報導IL-2之免疫相關之不良作用及IFN-γ之免疫回避功能(Berraondo, P.等人, 《英國癌症雜誌(Br J Cancer) 》, 120:6-15, 2019)。另外，已提出自活化抗原呈遞細胞(APC)(諸如巨噬細胞、樹突狀細胞或B細胞)釋放之促炎性細胞介素IL-6及TNF-α為細胞介素釋放症候群(CRS)毒性之中心介體(Shimabukuro-Vornhagen, A.等人, 《癌症免疫療法雜誌(J Immunother Cancer )》, 6, 56 (2018))。因此，為了評估脫靶T細胞毒性，本發明者將單次劑量之ACE-05、BiTE-05或IgG注射至hCD3ε TG小鼠中，且每6小時量測血清細胞介素、IL-2、IFN-γ、IL-6及TNF-α。
類似於在PBMC及HCC827細胞之共培養物中觀測到的細胞介素釋放，向無腫瘤攜帶之hCD3ε小鼠投與BiTE-05誘導比ACE-05更大程度的細胞介素釋放(尤其為IL-2、IFN-γ及IL-6)且在投與之後6小時顯示出峰值細胞介素位準(圖45)。另外，用BiTE-05處理之無腫瘤攜帶hCD3ε小鼠顯示出重度體重減輕，而用ACE-05或IgG處理之小鼠顯示出之體重減輕少得多(圖46)，此確認ACE-05之低脫靶細胞毒性。
與移植有PD-L1+ HCC827腫瘤細胞之PBMC-復原NCG小鼠中之ACE-05的抗腫瘤功效一致，已確認對移植有hPD-L1+ CT26腫瘤之hCD3ε TG小鼠的ACE-05處理有效地減小腫瘤大小，從而引起在六個小鼠中之一者中經15天完全消退，而不引起體重之顯著改變(圖47及圖48)。其後，本發明者在研究結束時自各小鼠收集腫瘤且分析腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)。
不同於自經YBL-007處理之組及經UCHT1處理之組中收集之腫瘤樣品，由於剩餘腫瘤之大小及重量小，因此僅二個腫瘤樣品能夠在經ACE-05處理之組中分析(圖49)。有趣地，經確認與UCHT1處理相比，ACE-05處理增加腫瘤微環境中之活CD45+ 淋巴細胞及CD3+ T細胞之數目(圖50及圖51)。另外，ACE-05及YBL-007誘導CD8+ T細胞而非CD4+ T細胞之增殖及擴增(圖52及圖53)，其可能係由於其對PD-1及PD-L1相互作用之抑制(Beyrend, G.等人, 《癌症免疫療法雜誌》, 7, 217 (2019))。
另外，本發明者使用電腦模擬之免疫原性預測工具研究ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL鏈之T細胞I類MHC免疫原性。不分析ACE-05-LC之免疫原性，因為其與天然抗體LC之免疫原性相同。首先，本發明者研究可使用百分等級(基於0.3之截斷值)呈現於MHC I類分子上之ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL之經處理肽(圖54及圖55，左圖)。
在其之後，藉由使用MHC-I結合預測分析所收集之肽序列來確定免疫原性評分。ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL鏈中之可能免疫原性肽(評分＞0)列於圖56及圖57(右圖)中。ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL鏈之潛在免疫原性肽主要發現於可變區域內之CDR、FR及CH1中。
未發現連接ACE-05之鉸鏈與第二VH或VL之人工接合點為免疫原性抗原決定基。綜合而言，此等結果表明ACE-05顯示經由腫瘤專一性在靶T細胞活化及長期藥物動力學概況之增強的抗腫瘤功效及並非不加區別的細胞毒性，此歸因於ACE-05之二價抗PD-L1 Fab臂與腫瘤細胞上之PD-L1的高親和力結合及單價抗CD3主幹Fv與T細胞上之CD3的低親和力結合。編碼多專一性融合蛋白之多核苷酸
本發明之另一態樣為提供編碼以上結構式(I)、(I')、(I'')、(II)、(II')或(II'')之多核苷酸。
多核苷酸可呈RNA或DNA形式。其可為雙股或單股，且若為單股，則其可為編碼股或非編碼(反義)股。
另外，多核苷酸可包括編碼標記物之序列或標籤序列。標籤序列之一個實施例為六組胺酸標籤。
在以化學方式合成核苷酸序列之情況下，可使用此項技術中熟知之合成方法，例如Engels及Uhlmann, 《應用化學(Angew Chem IntEd Engl.)》, 37:73-127, 1988中所描述之方法，且包括三酯、亞磷酸酯、胺基磷酸酯及H-磷酸酯法，PCR及其他自動引子(autoprimer)法，固體支撐物上合成寡核苷酸法及其類似者。
根據一個實施例，多肽可包含核酸序列，其具有與編碼結構式(I)、(I')、(I'')、(II)、(II')或(II'')之多核苷酸至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約86%、至少約87%、至少約88%、至少約89%、至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或至少約100%一致性。
另外，多核苷酸可進一步包含編碼信號序列或前導序列之核酸。如本文所用，術語「信號序列」係指引導感興趣的蛋白質之分泌的信號肽。信號肽在宿主細胞中轉譯之後裂解。特定言之，信號序列為使ER(內質網)跨膜蛋白之遷移起始的胺基酸序列。
信號序列之特徵為此項技術中所熟知，且信號序列通常包括16至30個胺基酸殘基，但可包括更多或更少胺基酸殘基。習知信號肽係由三個區組成：鹼性N端區、中心疏水區及更極性之C端區。中心疏水區包含4至12個疏水性殘基，其在不成熟多肽之遷移期間經由膜脂質雙層固定信號序列。
在起始之後，信號序列藉由通常已知為信號肽酶之細胞酶類在ER之內腔內裂解。在此情況下，信號序列可為tPa(組織纖維蛋白溶酶原活化)、HSV gD(疱疹單純型病毒糖蛋白D之信號序列)或生長激素之分泌信號序列。較佳地，可使用包括哺乳動物及其類似物之高級真核細胞中所用的分泌信號序列。另外，其可藉由取代在宿主細胞中具有高表現頻率之密碼子來使用。負載有編碼融合蛋白之多核苷酸的載體
本發明之另一態樣提供一種載體，其包含編碼上文所描述之結構式(I)、(I')、(I'')、(II)、(II')或(II'')之多核苷酸。
載體可引入至宿主細胞中且重組並插入至宿主細胞基因體中。或者，將載體理解為意謂包含能夠自發複製為游離基因體之多核苷酸序列的核酸。載體包括線性核酸、質體、噬質體、黏質體、RNA載體、病毒載體及其類似者。病毒載體之實例包括反轉錄病毒、腺病毒及腺相關病毒，但不限於此。
特定言之，載體可為質體DNA、噬菌體DNA及其類似者，且可為商業開發之質體(pUC18、pBAD、pIDTSAMRT-AMP及其類似者)、大腸桿菌 (E. coli )衍生之質體(pYG601BR322、pBR325、pUC118、pUC119及其類似者)、枯草桿菌 (Bacillus subtilis )衍生之質體(pUB110、pTP5及其類似者)、酵母衍生之質體(YEp13、YEp24、YCp50及其類似者)、噬菌體DNA (Charon4A、Charon21A、EMBL3、EMBL4、λgt10、λgt11、λZAP及其類似者)、動物病毒載體(反轉錄病毒、腺病毒、痘瘡病毒及其類似者)、昆蟲病毒載體(桿狀病毒及其類似者)。由於載體視宿主細胞而具有蛋白質之不同表現量及修飾及其類似者，因此出於該目的，較佳選擇及使用最適合之宿主細胞。
如本文所用，術語感興趣的蛋白質之「基因表現」或「表現」應理解為係指DNA序列之轉錄、mRNA轉錄物之轉譯及融合蛋白產物或其片段之分泌。適用表現載體可為RcCMV (Invitrogen，Carlsbad)或其變異體。表現載體可包括用於促進感興趣之基因在哺乳動物細胞中連續轉錄的人類CMV(巨細胞病毒)啟動子，及用於在轉錄之後增加RNA之穩態位準的牛生長激素聚腺苷酸化信號序列。表現融合蛋白之經轉型細胞
本發明之另一態樣提供一種經轉型細胞，將載體引入至該細胞中。
經轉型細胞之宿主細胞可包括原核細胞、真核細胞、哺乳動物細胞、植物細胞、昆蟲細胞、真菌細胞或細胞來源，但不限於此。大腸桿菌可用作原核細胞之實例。另外，酵母可用作真核細胞之實例。另外，CHO細胞、F2N細胞、CSO細胞、BHK細胞、Bowes黑色素瘤細胞、海拉(HeLa)細胞、911細胞、AT1080細胞、A549細胞、HEK 293細胞或HEK293T細胞或其類似者可用作哺乳動物細胞，但不限於此，且可使用可用作熟習此項技術者已知之哺乳動物宿主細胞的所有細胞。
另外，當將表現載體引入至宿主細胞中時，可使用CaCl2 沈澱法、Hanahan法(其藉由在CaCl2 沈澱法中使用稱為DMSO(二甲亞碸)之還原物質而增加效率)、電穿孔法、磷酸鈣沈澱法、原生質體融合法、使用碳化矽纖維之攪動法、農桿菌(Agrobacteria)介導之轉型法、使用PEG之轉型法，硫酸葡聚糖、脂染胺及乾燥/抑制介導之轉型法及其類似者。
如上文所描述，宿主細胞之糖基化相關基因經由熟習此項技術者已知之方法操縱以最佳化作為治療劑之融合蛋白之特性且出於其他目的，且因此可調節融合蛋白之糖鏈模式(例如唾液酸、海藻糖基化、糖基化)。包含融合蛋白之醫藥組成物
本發明之另一態樣為提供用於治療或預防癌症之醫藥組成物，其包含上文所描述之多專一性融合蛋白作為活性成分。
特定言之，該癌症可為選自由以下組成之群之任一者：胃癌、肝癌、肺癌、大腸直腸癌、乳癌、前列腺癌、卵巢癌、胰臟癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、喉癌、急性骨髓白血病、腦腫瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤、頭頸癌、唾液腺癌及淋巴瘤。
在此情況下，癌症可為其中任何一種選自由PD-L1、EGFR及HER2組成之群的蛋白質過度表現的癌症。
醫藥組成物之較佳劑量視患者之病況及體重、疾病之嚴重程度、藥物之形式、投與途徑及持續時間而變化，但可由熟習此項技術者適當選擇。在本發明之用於治療或預防癌症或感染性疾病之醫藥組成物中，可根據用途、調配、組合之目的及其類似者以任何量(有效量)包括活性成分，只要其可展現抗癌活性或可對感染性疾病展現治療效果即可。典型有效量將以組成物之總重量計在0.001重量%至20.0重量%範圍內確定。此處，「有效量」係指能夠誘導抗癌效果或感染性疾病治療效果之活性成分的量。該有效量可在一般熟習此項技術者技術範圍內以實驗方式確定。
如本文所用，術語「治療」可在包括治療性治療及預防性治療二者之意義上使用。在此情況下，預防可在緩解或減輕個體之病理性病況或疾病之意義上使用。在一個實施例中，術語「治療」包括任何給藥或施用形式以治療哺乳動物(包括人類)之疾病。另外，該術語包括抑制或減緩疾病或疾病進展；且包括藉由恢復或修復受損或缺陷功能而部分或完全緩解疾病之含義；或刺激低效過程；或緩解疾病之嚴重程度。
如本文所用，術語「功效」可藉由一或多個參數確定，諸如在一段時間內之存活期或無病存活期(諸如1、5或10年)。另外，參數可包括抑制個體中之至少一個腫瘤之大小。
藥物動力學參數(諸如生物可用性)及基礎參數(諸如清除率)亦可影響功效。因此，「經增強之功效」(例如經改良之功效)可歸因於經增強之藥物動力學參數及經增強之功效，且可藉由比較測試動物或人類個體中之清除率與腫瘤生長，或藉由比較諸如存活期、復發率或無病存活期之參數來量測。
在本文中，「治療有效量」或「醫藥學上有效量」為有效預防或治療目標疾病之化合物或組成物之量，且係指以適用於醫學治療之合理收益/風險比足以治療該疾病且不引起副作用之量。有效量之位準可視患者之健康狀況、疾病之類型及嚴重程度、藥物之活性、對藥物之敏感性、投與方法、投與時間、投與途徑及分泌速率、治療持續時間、包括組合或同時使用之藥物的因素及醫學領域中熟知之其他因素而確定。在一個實施例中，治療有效量係指有效治療癌症之藥物之量。
在此情況下，醫藥組成物可進一步包含醫藥學上可接受之載劑。醫藥學上可接受之載劑可為任何載劑，只要其為適用於遞送至患者之無毒物質即可。可包括蒸餾水、醇、脂肪、蠟及惰性固體作為載劑。另外，藥理學上可接受之佐劑(緩衝劑、分散劑)可包括於醫藥組成物中。
特定言之，醫藥組成物可藉由此項技術中已知之習知方法根據投與途徑以非經腸調配物形式製備，該調配物包括除活性成分以外的醫藥學上可接受之載劑。在本文中，「醫藥學上可接受」意謂本申請案(處方)之個體在不抑制活性成分之活性的情況下不具有超過可調適之毒性。
當醫藥組成物以非經腸調配物形式製備時，醫藥組成物可根據此項技術中已知之方法與適合之載劑一起調配成注射劑、經皮投與劑、鼻用吸入劑及栓劑形式。當調配為注射劑時，可使用無菌水、乙醇、多元醇(諸如甘油或丙二醇)或其混合物作為適合載劑，且較佳地，可使用林格氏溶液、含有三乙醇胺之PBS(磷酸鹽緩衝鹽水)或注射用無菌水、等張溶液(諸如5%右旋糖)及其類似者。醫藥組成物之調配物為此項技術中已知的，且特定言之，可參考《雷明頓氏藥物科學(Remington's Pharmaceutical Sciences)》(第19版, 1995)。將此文件視為本說明書之一部分。
醫藥組成物之較佳劑量可視患者之病況、體重、性別及年齡、患者之嚴重程度及投與途徑而定在0.01 µg至10 g/1 kg體重/天之範圍內，或在0.01 mg至1 g之範圍內。投與可一日一次進行或分成若干次進行。該劑量不應理解為在任何態樣中限制本發明之範疇。
可以施用(開處)醫藥組成物之個體為哺乳動物及人類，且尤其人類為較佳的。除活性成分以外，本發明之醫藥組成物可進一步包括任何化合物或天然提取物，其已驗證安全性以便增加及強化抗癌活性且已知對感染性疾病具有抗癌活性或治療效果。用於組合投與之醫藥組成物
本發明之另一態樣提供一種醫藥組成物，其進一步包含上文所描述之多專一性融合蛋白及抗癌劑。
融合蛋白包括醫藥學上可接受之載劑。在此情況下，醫藥組成物可經調配以適用於向個體投與之途徑。多專一性融合蛋白之用途
本發明之另一態樣提供多專一性融合蛋白用於治療或預防癌症之用途。
該癌症可選自由以下組成之群：胃癌、肝癌、肺癌、大腸直腸癌、乳癌、前列腺癌、卵巢癌、胰臟癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、喉癌、急性骨髓白血病、腦腫瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤、頭頸癌、唾液腺癌及淋巴瘤。
本發明之另一態樣提供多專一性融合蛋白用作細胞接合子之用途。用於預防及治療癌症之方法
本發明之另一態樣提供一種用於治療或預防癌症之方法，其包含向個體投與多專一性融合蛋白。
該個體可為患有癌症或感染性疾病之個體。另外，個體可為哺乳動物，且較佳可為人類。多專一性融合蛋白如上文所描述。
多專一性融合蛋白可以視患者之病況及副作用之存在或不存在而定的各種方法及量向個體投與，且投與之最佳途徑、劑量及投與頻率可由熟習此項技術者在適當範圍內選擇。另外，融合蛋白可與已知對所治療疾病具有治療效果之其他藥物或生理學活性物質組合投與，或可調配成與其他藥物一起之組合調配物形式。生產融合蛋白之方法
本發明之另一態樣提供一種產生多專一性融合蛋白之方法，其包含培養上文所描述之經轉型細胞。特定言之，生產方法可包含i)培養經轉型細胞以獲得培養物；及ii)自培養物回收融合蛋白。
培養經轉型細胞之方法可使用此項技術中熟知之方法進行。特定言之，培養物可在分批製程中培養或在饋料分批或反覆饋料分批製程中連續培養。
可使用此項技術中已知之用於純化免疫球蛋白以回收融合蛋白的任何方法，例如層析(離子交換層析；親和層析，尤其蛋白A；篩分管柱層析及κ選擇親和層析，在其之後，在專一性抗原之情況下，藉由親和層析純化)、離心、差別溶解或用於蛋白質純化之其他標準技術。在某一實施例中，使用κ選擇(例如，由GE Healthcare Life Science開發之κ選擇)純化Fab (κ)片段或含有Fab片段之多專一性融合蛋白。另外，本文所提供之多專一性融合蛋白可融合至本文所描述之異源多肽序列或此項技術中已知之其他序列以促進純化。實施方式
在下文中，將參考以下實例更詳細描述本發明。然而，提供以下實例僅為說明本發明，且本發明之範疇不限於此。I . 構築多專一性融合蛋白 實例1 . 構築多專一性融合蛋白ALiCE
ALiCE變異體ACE-05 (抗PD-L1 Fab×抗CD3 Fv)、ACE-31 (抗CD3 Fab×抗PD-L1 Fv)、ACE-18 (抗CD20 Fab×CD3 Fv)及ACE-00 (抗HER2 Fab×抗TNF-α Fv)之HC對，亦即ACE-HC-VH及ACE-HC-VL係使用親本抗體YBL-007 (抗PD-L1)、UCHT1 (抗CD3)、利妥昔單抗(rituximab) (抗CD20)、赫賽汀(抗HER2)及修美樂(抗TNF-α)作為模板，藉由PCR擴增編碼VHA-CH1-鉸鏈、VHB及VLB之序列來生成。
根據製造商說明書使用ElectraTM 選殖系統(ATUM) (Engler, C.等人, 《公共科學圖書館：綜合》, 3, e3647 (2008))將二個PCR片段對VHA-CH1-鉸鏈及VHB或VHA-CH1-鉸鏈及VLB次選殖至內部生成之哺乳動物表現載體p293F中，且接著轉型至DH5α勝任細胞(#CP010, Enzynomics)中。用於構築ALiCE HC之PCR引子經設計以在5'端處在鉸鏈與VHB或VLB之間包括短連接子(G4S)，且在3'端處包括Sap I限制位點，其為ElectraTM 選殖系統所必需的。
用於ALiCE構築之LC (ACE-LC)與親本抗體之輕鏈變化一致。對編碼N端處含有前導肽之LC的序列進行PCR擴增且次選殖至含有Nhe I/Xho I限制位點之p293表現載體中。將所得構築體轉型至DH5α勝任細胞(#CP010, Enzynomics)中且藉由定序確認。
另外，基於實例21中所描述之序列藉由與上文相同之方法選殖其他ALiCE變異體ACE-02、ACE-03、ACE-06、ACE-10、ACE-11、ACE-16、ACE-20、ACE-21、ACE-23、ACE-25、ACE-26、ACE-28、ACE-30、ACE-32及ACE-33。實例 2 . ALiCE 之表現及純化
為了產生ALiCE變異體，亦即在C端處含有6x-His標籤之ACE-00、ACE-05、ACE-18、ACE-31及BiTE-05，使用聚伸乙亞胺(PEI; #23996-1, Polysciences)以1:4之DNA比PEI比率(w/w)將以1:1:2之比率編碼ACE-HC-VH、ACE-HC-VL及ACE-LC或編碼BiTE-05之質體轉染至FreeStyle 293-F細胞(#R79007, ThermoFisher)中以形成聚合複合體(Xie, Q.等人, 《細胞工程技術(Cytotechnology)》, 65:263-271, 2013)。對於短暫性轉染，將1 mg質體DNA轉染至2×106 個Freestyle 203-F細胞中，隨後在37℃及5% CO2 下伴隨振盪(120 rpm)在Freestyle 293表現培養基(#12338018, Gibco)中培養。
藉由在4℃下以4,800 rpm離心培養物30分鐘且隨後藉由使用0.22 µm TOP-過濾器(Millipore)過濾上清液移除碎片，來純化ALiCE分子及BiTE-05。將含有ALiCE分子之上清液裝載至CaptureSelect CH1-XL預裝填管柱(#494346201, ThermoFisher)上，而將含有BiTE-05之上清液裝載至Ni-NTA瓊脂糖樹脂(#R90101, ThermoFisher)上。
將ALiCE分子用0.1 M甘胺酸(pH 3.0)自管柱溶離，而將BiTE-05用3 M咪唑/20 mM磷酸鈉(pH 6.0)溶離。使用Slide-A-Lyzer透析盒套組(#66372, ThermoFisher)對經溶離之ALiCE分子及BiTE-05進行針對磷酸鹽緩衝鹽水(PBS；pH 7.4)之透析。亦採用凝血酶裂解捕獲套組(#69022, Merk)以自BiTE-05移除6x-His標籤以供SPR結合動力分析。
另外，藉由與上文相同之方法獲得其他ALiCE變異體ACE-02、ACE-03、ACE-06、ACE-10、ACE-11、ACE-16、ACE-20、ACE-21、ACE-23、ACE-25、ACE-26、ACE-28、ACE-30、ACE-32及ACE-33。實例 3 . ALiCE 之結構分析 實驗實例1 . 對抗體結構之PyMOL 分析
抗CD3抗體UCHT (PBD ID: 1XIW)、抗PD-L1抗體度伐利尤單抗及抗CTLA-1抗體伊匹單抗(PBD ID: 5TRU)之結構自蛋白質資料庫(PBD，www.rcsb.org)下載且使用PyMOL軟體(Schrodinger有限責任公司，PyMOL分子圖形系統(The PyMOL Molecular Graphics System)，版本1.8. (2015))進行觀測。實驗實例3 .2 . 異二聚ALiCE 之結構分析
ALiCE分子藉由以下表徵：SDS-PAGE；使用Agilent 2100生物分析儀(Agilent Technology)之自動毛細電泳法(CE)；使用Superdex 200A管柱(GE Healthcare Life Science)之分析型尺寸排阻層析(SEC)；及使用MabPac SCX-10管柱(ThermoFisher)之分析型陽離子交換層析(CEX)。藉由二個不同ALiCE HC形成異二聚體藉由在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE及CE分析ALiCE分子來評估。
對於CE分析，根據製造商方案，將蛋白質分析溶液混合物裝載至微流體蛋白質晶片上且使用生物分析儀蛋白質230分析套組(Agilent)在還原及非還原條件下藉由分子量分離。另外，在還原條件下使用生物分析儀蛋白質80分析套組(Agilent)測定ACE-05中之各種鏈之化學計量比。
使用2100 Expert軟體(Agilent Technology)分析自五次獨立實驗確定之各鏈對ACE-05之貢獻(總計%)的平均值及相對標準差(% CV)，且使用GraphPad Prism 8軟體進行標繪。使用Superdex 200A管柱(GE Healthcare Life Science)藉由SEC(緩衝液，PBS pH 7.4)及使用MabPac SCX-10管柱(ThermoFisher)藉由CEX(緩衝液，50 mM乙酸鈉pH 5.0)分析ALiCE分子之品質及構形。使用GraphPad Prism 8軟體標繪且分析資料。
因此，包括抗CD3抗體UCHT1(PDB ID: 1XIW)、抗PD-L1抗體度伐利尤單抗(PDB ID: 5X8M)及抗CTLA4抗體伊匹單抗(PDB ID: 5TRU)之各種VH及VL複合物之晶體結構明確表明，VH及VL相互作用之關鍵決定子為VH之CDR3區，其藉由形成「臼中杵」結構結合於VL之CDR1、CDR2及CDR3區(圖1)。此外，已確認在VH-VL界面處由靜電相互作用包圍之疏水性相互作用促成VH及VL區域之自主組裝及Fv複合物之穩定(圖2)。實驗實例 4 . ALiCE 之質譜
藉由液相層析電噴霧電離及飛行時間(LC-ESI/TOF)，使用ZORBAX 300SBP-C8 (2.1×50 nm；Agilent)管柱之分析來確認經純化ACE-05之分子量。移動相係由水及乙腈之梯度組成，在35分鐘內始於5%乙腈(起始條件)至100%乙腈，在整個操作期間具有0.2%甲酸之恆定濃度。
流動速率為0.1 ml/min。使用Micro A-TOF III質譜儀(Bruker Daltonics，Germany)及電噴霧電離(ESI)在負模式下進行質譜偵測。使用以下MS參數：毛細管電壓，4500 V；霧化器壓力，0.8 psi；乾燥氣體流速，5.5/min；及乾燥氣體溫度，190℃。實驗實例 5 . ALiCE 之穩定性分析
ACE-05、BiTE-05、YBL-007及UCHT1之熱穩定性使用熱螢光(Thermofluor)分析(Lavinder, J.J.等人, 《美國化學會志(J Am Chem Soc)》, 131:3794-3795, 2009)用SYPRO橙色染料分析。特定言之，將各純化抗體之3 µM溶液與10 µl經1:25稀釋之SYPRO橙色染料(#S6650, ThermoFisher)混合，且在25℃下將50 µl各混合物培育30分鐘。藉由使用C100熱循環儀，以1℃/min之速率自室溫加熱至99℃來使樣品變性，且每分鐘記錄CYPRO染料染色的變性蛋白質之量(亦即，各1℃溫度變化)。使用CFX 96 ORM系統(BioRad)計算熔融溫度(TM)。藉由在室溫下使經CEX純化之ACE-05暴露於各種pH條件(pH 6，20 mM磷酸鈉；pH 7.4，PBS；pH 8，20 mM Tris-HCl)或長培育(7天)，且接著使用MabPac SCX-10分析管柱(ThermoFisher)藉由CEX-HPLC分析來評估蛋白質穩定性。使用GraphPad Prism 8軟體標繪資料。實例6 . 測定ALiCE 之結合能力 實例6 .1 . ALiCE 分子之結合動力學分析
ALiCE分子與各種抗原之結合動力學係藉由表面電漿子共振使用配備有認證級別之CM5系列S感測器晶片(#BR100399，GE Healthcare)之Biacore 8K系統來量測。含有3 mM乙二胺四乙酸(EDTA)及0.05%(V/V) P20清潔劑(HBS-EP+)之HEPES緩衝鹽水(0.01 M HEPES，0.15 M NaCl)用作反應物及操作緩衝液(#BR100669，GE Healthcare)。
根據製造商說明書，將抗原PD-L1-his(0.1 µg/ml；內部合成)及CD3εδ-flag-his (0.2 µg/ml；#CT038-H2508H, Sino Biological)固定在CM5感測器晶片(#BR100399，GE Healthcare)之表面上。在其之後，將稀釋於HBS-EP+緩衝液中之雙專一性T細胞接合子(ACE-05、BiTE-05及ACE-31)及親本mAb(YBL-007及UCHT1)在30 µl/min之流動速率下以12種不同濃度(0、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128、256及512 nM)施用於抗原固定化傳感器晶片上持續300秒。藉由用HBS-EP+操作緩衝液洗滌300秒來使結合於傳感器晶片之分析物解離。
締合(M-1 s-1 ，Ka )及解離(S-1 ，Kd )二者均經300秒間隔量測。平衡解離常數(M，KD )經計算為解離速率比締合速率之比率(kd /ka )。動力學參數係藉由Biacore Insight Evaluation軟體之全局擬合函數，使用單價配位體-分析物相互作用的1:1結合模型及二價配位體-分析物相互作用的1:2結合模型來確定。實例 6 . 2 . 同時結合分析
為同時分析ACE-05及ACE-31針對CD3及PD-L1之雙重結合，在Octet QKe系統(Pall Forte Bio)進行BLI (生物膜層光干涉術) (Abdiche, Y.等人, 《分析生物化學(Anal Biochem)》, 377:209-217, 2008)。將第一配位體PD-L1-Fc(2 µg/ml；內部合成)及CD3εδ-flag-his (3 µg/ml；#CT038-H2508H，Sino Biological)分別裝載至水合AHC(#18-5064，Pall Forte Bio)或Ni-NTA(#18-5013，Pall Forte Bio)生物感測器上，直至結合達到0.5至1.0 nM。
將生物感測器接著用動力學緩衝液(含有0.1%牛血清白蛋白[BSA]及0.02% Tween-20之PBS)洗滌2分鐘(ACE-05)或1分鐘(ACE-31)以移除任何未結合蛋白，浸沒於30 nM ACE-05或15 nM ACE-31中以分析締合，且用PBS洗滌7分鐘(ACE-05)或2分鐘(ACE-31)以量測解離。隨後將裝載有第一配位體及ACE-05或ACE-31之生物感測器浸沒於含有第二配位體之溶液(亦即200 nM CD3εδ-flag-his (ACE-05)或120 nM PD-L1-Fc (ACE-31))中以量測締合，之後用PBS洗滌3分鐘(ACE-05)或2分鐘(ACE-31)以量測解離。使用GraphPad Prism軟體8標繪感測器圖譜資料。II . ALiCE 功效之確認：活體外分析 實例 7 . 流式細胞量測術
為評估細胞表面PD-L1之位準，本發明者培育PD-L1+ 癌細胞(HCC827、MDA-MB-231及Karpas-299)及PD-L1- Raji細胞(均為0.5×106 個細胞/100 µl)與1:50 (v/v)稀釋之藻紅素(PE)-Cy7結合的抗PD-L1抗體(#55817，BD Bioscience)。螢光異硫氰酸鹽(FITC)結合的抗CD3抗體(#130-113-138，Miltenyi Biotech)用於評估CD3於Jurkat T細胞(0.5×106 個細胞/100 µl)上之位準。
細胞用1 ml FACS緩衝液(含有1%胎牛血清[FBS]之PBS)洗滌二次且藉由流式細胞量測術(BD FACSCanto II)分析PD-L1或CD3之細胞表面表現。藉由培育20 nM ACE-05、ACE-31或ACE-18 (CD20 Fab×CD3 Fv，對照ACE)與CD3+ Jurkat T細胞1小時來研究ACE-05及ACE-31對於細胞表面上之PD-L1及CD3的雙重結合能力。用1 ml FACS緩衝液洗滌二次之後，將細胞與PD-L1-Fc(75 µg/100 µl)一起培育且用1 ml FACS緩衝液洗滌二次。
接著使用Alexa 647-結合之抗人類Fc抗體(#109-605-098，Jackson ImmunoResearch)偵測PD-L1-Fc。ALiCE (ACE-05及ACE-31)對於PD-L1+ Karpas-299及PD-L1- Raji癌細胞及CD3+ JurkatT細胞之表觀結合親和力係藉由以ACE-05 (對於Karpas-299細胞而言，0.000932、0.003729、0.014915、0.059662、0.59459、3.81及15.27 nM；對於Raji細胞而言，1.56、15.625、156.25及1562 nM；對於Jurkat細胞而言，1.1、3.3、9.9、29.6、88.9、266.7、800及2400 nM)或ACE-31 (對於Karpas-299細胞而言，0.594、3.81、15.27、61.03、244.37、977.5及3910 nM；對於Raji細胞而言，1.56、15.625、156.25及1562 nM；對於Jurkat細胞而言，0.011、0.033、0.101、0.304、0.914、2.743、8.320、24.691及74.074 nM)之指示濃度處理此等細胞(0.5×106 個細胞/100 µl)來量測。
細胞表面結合之ACE-05或ACE-31係在與針對人類Fab片段之Alexa 647結合之抗體(#109-606-097，Jackson Immunoresearch)一起培育之後藉由流式細胞量測術(CytoPLEX-LX)來偵測。使用FlowJo 10軟體(FlowJo，LLC)分析流式細胞量測術資料，且使用GraphPad Prism 8軟體標繪幾何平均值。實例8 . 對藉由ALiCE (ACE -05 及ACE -31 ) 之Jurkat T 細胞活化之分析
為了評估ACE-05及ACE-31是否重導向針對目標細胞表面上之PD-L1的T細胞活化，將PD-L1- WT HEK細胞或經基因工程改造之PD-L1+ HEK細胞(7×104 個細胞/孔)接種至塗佈有聚-L-離胺酸(#P4707，Sigma)之白底培養盤上。在預培育此等細胞24小時之後，添加在NFAT反應元素之控制下表現螢火蟲螢光素酶基因之PD-1- Jurkat T細胞(2×105 個細胞/孔)及ACE-05、ACE-31或BiTE-05之連續稀釋液，且將細胞在37℃及5% CO2 下培育6小時。根據製造商方案，接著藉由進行Bio-Glo螢光素酶分析(#G7940，Promega)量測藉由T細胞活化誘導之螢光素酶聚集。標繪以相對光單位(RLU)表示之所得資料且使用GraphPad Prism 8軟體分析。實例 9 . 在靶 T 細胞活化
為評估在靶專一性T細胞活化，將自人類PBMC (#SER-PBMC-200-F，Zenbio)分離之PD-L1+ MDA-BM-231癌細胞(1×105 個細胞/孔)及CD3+ T細胞(1×106 個細胞/孔)共培養於含有5% FBS之培養基中，向該培養基添加1 nM ACE-05、BiTE-05、ACE-31或IgG。根據製造商說明書，將CD3+ T細胞用遠紅追蹤劑(Trace Far Red) (#C34564，ThermoFisher)染色。在培育24或48小時之後，收穫T細胞且用APC結合之抗CD4抗體(#130-113-210，MiltenyBiotec)、FITC結合之抗CD8抗體(#130-110-677，MiltenyBiotec)、PE-Vio 770結合之抗CD69抗體(#130-122-5-4，MiltenyBiotec)及PE結合之抗CD25抗體(#341009, BD Bioscience)標記。T細胞亞群及活化T細胞係藉由流式細胞量測術(BD FACSCanto II)藉助於FlowJo 10軟體(FlowJo, LLC)鑑別。實例 10 . PD - 1 / PD - L1 阻斷生物分析
根據製造商方案(#J1250，Promega)進行PD-1/PD-L1阻斷生物分析。簡言之，將生物分析套組中之一小瓶PD-L1/aAPC+ CHO-K1細胞懸浮於冷凍儲備液之回收培養基(含有10% FBS之90%哈姆氏(Ham's) F-12)中，接種於白底培養盤上，且在37℃下培育隔夜。向各孔中添加在分析緩衝液(含有1% FBS之RPMI 1640)中穩定表現人類PD-1及NFAT-螢光素酶報導體之Jurkat T細胞以及0、0.006、0.032、0.16、0.8、4或20 nM濃度之ACE-05、BiTE-05、ACE-31、YBL-007或IgG。6小時之後，使用Bio-Glo螢光素酶分析系統(#G7940，Promega)量測NFAT介導之螢光素酶活性。標繪RLU(相對光單位)資料且使用GraphPad Prism 8軟體分析。實例 11 . 腫瘤殺死分析
將HCC827 (ATCC CRL2868)、MDA-MB-231 (ATCC HTB-26)、Karpas-299 (#06072604, Sigma)及Raji (ATCC CCL86)癌細胞在37℃、5% CO2 下培育於補充有10% FBS之RPMI-1640培養基中。用於本發明實例中之所有健康供體PBMC及CD8+ T細胞係購自AllCells (#PB004F及#PB009-3F)、Zenbio (#SER-PBMC-200-F)及Lonza (#3W-270)。使用Pan T細胞分離套組(#130-096-535，Miltenyi Biotec)及CD8+ T細胞分離套組(#130-096-495，Miltenyi Biotec)自人類PBMC製劑分離CD3+ T細胞及CD8+ T細胞。
藉由量測自死亡癌細胞釋放之乳酸脫氫酶(LDH)來評估針對表現PD-L1之癌細胞的PBMC或T細胞細胞毒性。藉由將PD-L1+ MDA-MB-231癌細胞(1×104 個細胞/孔)及T細胞以10:1 (CD3+ T細胞)或5:1(CD8+ T細胞)之E:T(效應物:標靶)比率與指定蛋白質(ACE-05、ACE-31、BiTE-05或IgG)一起共培育來研究雙專一性T細胞接合子之在靶腫瘤細胞殺死能力。
培育48至72小時之後，根據製造商說明書使用CytoTox96非放射性細胞毒性分析套組(#G1780，Promega)量測自死亡腫瘤細胞釋放之LDH。使用以下等式計算死亡腫瘤細胞之百分比： [等式1] 細胞毒性% (死亡腫瘤細胞%) = (實驗-標靶自發-效應物自發) / (標靶最大值-標靶自發) × 100%
另外，PBMC亦用作效應細胞(E:T比率，25:1)以研究PD-L1+ HCC827腫瘤細胞殺死能力。為評估脫靶T細胞細胞毒性，將PD-L1- HEK293或Raji癌細胞與CD3+ T細胞及1 nM ACE-05、BiTE-05、ACE-31、IgG或ACE-18一起共培養。培育48至72小時之後，如上文所描述量測及計算自PD-L1- 細胞釋放之LDH。實例 12 . T 細胞簇聚
藉由使用IncuCyte活細胞分析系統(Sartorius，USA)精確定量T細胞及PD-L1+ 腫瘤細胞簇聚來評估T細胞活化及分化。根據製造商方案自人類PBMC分離CD3+ T細胞且用CytoLight試劑(#4706，Sartorius)標記。將PD-L1+ MDA-MB-231細胞(4×103 個細胞/孔)及CD3+ T細胞以10:1之E:T比率連同1 nM ACE-05、ACE-31、BiTE-05或IgG一起共培養。在90小時培育期期間每6小時獲得活細胞影像，且使用IncuCyte軟體量測指示T細胞活化之紅色螢光簇之平均面積(μm2 )。使用GraphPad Prism 8軟體標繪自四次重複實驗獲得之資料。實例 13 . T 細胞擴增分析
使用T細胞增殖分析研究在PD-L1+ 腫瘤細胞存在下的ACE-05誘導之初級人類T細胞擴增。根據製造商說明書，將自PBMC分離之CD3+ T細胞用遠紅細胞追蹤劑(Cell Trace Far Red) (#C34564，ThermoFisher)染色。將PD-L1+ MDA-MB-231癌細胞以1×105 個細胞/孔之濃度接種於24孔培養盤中。次日，將預培育之MDA-MB-231細胞用預溫熱杜氏(Dulbecco's) PBS洗滌一次，接著用分析培養基(含有1% FBS之RPMI-1640)置換。接著將含有細胞跟蹤劑染色之CD3+ T細胞(1×106 個細胞/孔)及1 nM ACE-05、IgG或ACE-18(CD20×CD3，作為陰性對照)的混合物添加至24孔培養盤中之MDA-MB-231細胞。在培育96小時之後，收穫T細胞且藉由流式細胞量測術使用BD FACSCanto II系統分析。基於所獲得之流式細胞量測術資料使用FlowJo 10軟體(FlowJo, LLC)觀測T細胞之擴增。實例14 . 在不存在腫瘤細胞之情況下對藉由多聚T 細胞接合子之脫靶T 細胞活化的分析
為在不存在靶腫瘤細胞之情況下評估藉由T細胞接合子之非專一性脫靶T細胞活化，將自人類PBMC(#4W-270C，Lonza)分離之CD3+ T細胞(1×106 個細胞/孔)培養於含有5% FBS之培養基中，向該培養基直接添加1 nM ACE-05、BiTE-05或多聚ACE-05。藉由混合5 μl CH1珠粒(#1943462250，ThermoFisher)與1 nM ACE-05來製備簇聚之ACE-05。在培育48小時之後，收穫T細胞且用FITC結合之CD4抗體(#130-114-531，MiltenyBiotec)及CD69-PE-Vio 770 (#130-122-5-4，MiltenyBiotec)抗體標記。T細胞亞群及活化T細胞係藉由流式細胞量測術(BD FACSCanto II)藉助於FlowJo 10軟體(FlowJo, LLC)鑑別。實例15 . 對自免疫細胞釋放之細胞介素的分析
在存在或不存在PD-L1+ 腫瘤細胞之情況下研究自活化免疫細胞(PBMC及CD4+ T細胞)釋放之細胞介素IL-2、IFN-γ、IL-6及TNF-α之位準。特定言之，在PD-L1+ HCC827癌細胞存在之在靶條件下，將人類PBMC與HCC827癌細胞以25:1之E:T比率連同1 nM ACE-05、BiTE-05、ACE-31或IgG一起共培養72小時。在藥物投與之後0、6、12、18、24、48及72小時時收集樣品。在其之後，使用ELISA套組分析細胞介素IL-2 (#431004，BioLegend)、IFN-γ (#430104，BioLegend)之濃度。
對於脫靶條件，將1 nM ACE-05、BiTE-05、ACE-31或IgG直接添加至使用CD4+ T細胞分離套組(#130-096-533，Miltenyi Biotec)自人類PBMC分離之CD4+ T細胞。在培育72小時之後，如上文所描述藉由ELISA量測所釋放之細胞介素。
為量測顆粒酶B，將PBMC衍生CD8+ T細胞及MDA-MB-231細胞以5:1之E:T比率連同各種濃度(0、6.4、32、160、800及4000 pM)之ACE-05、BiTE-05、ACE-31或IgG一起共培養。48小時之後，使用ELISA套組(#DGZB00，R&D Systems)量測分析培養基中所聚集之顆粒酶B。使用微量培養盤讀取器量測各上清液之光密度(OD)，且使用GraphPad Prism 8軟體分析細胞介素之濃度。III . 確認 ALiCE 之功效：活體內分析 實例16 . 大鼠及猴中之藥物動力學分析
經由尾部靜脈向年齡為6-7週之雄性史-道二氏大鼠(Sprague-Dawley rat)注射單次10-mg/kg劑量之ACE-05、BiTE-05或hIgG (n=3/組)。在藥物投與之後10及30分鐘；1、2、4、8及24小時；及3、5及9天，自各動物收集血液樣品(各為150 µl)。在其之後，將樣品以10,000-13,000 rpm離心2分鐘。在-80℃下儲存各血漿樣品之70 µl等分試樣。
向年齡為20-24個月之雄性食蟹獼猴靜脈內投與單一5-mg/kg劑量之ACE-05、BiTE-05或hIgG (n=3/組)。在藥物投與之後10及30分鐘；1、2、4、8及24小時；及2、3、4、8、12及15天，自各猴收集血液樣品(各為150 µl)。使用Gyrolab xPlore自動免疫分析系統進行藥物動力學分析。
為分離ACE-05或人類IgG，將經生物素標記之抗人類IgG CH1奈米抗體固定於抗生蛋白鏈菌素塗佈之Gyrolab Bioaffy CD200 (#P0004180，Gyros Protein Technologies)的表面上，且將血清樣品裝載於其上。類似地，使用經生物素標記之PD-L1-Fc以捕獲BiTE-05。使用Alexa 647結合之抗κ抗體(#316514，Novus)偵測所捕獲之ACE-05及人類IgG，且使用Alexa 647結合之抗His抗體(#362611，Novus)偵測BiTE-05。
使用Gyrolab軟體計算樣品之濃度，且使用Phoenix WinNonlin軟體計算t1 /2 值。實例17 . 確認人類化小鼠模型中之ALiCE 之抗癌效果
在PBMC-重構人類化NCG (NOD/scid IL-2Rγ剔除式)小鼠模型中評估ALiCE針對PD-L1+ HCC827腫瘤之抗腫瘤功效。特定言之，將年齡為7-8週之雌性NCG小鼠(Crown Bioscience)隨機分成四組，各組10隻小鼠。使各小鼠靜脈內移植自二個健康供體分離之5×106 個細胞/100 µl PBMC。三天後，使小鼠在其右側腹區處皮下接種5×106 個PD-L1+ HCC827腫瘤細胞。當腫瘤體積達到~50 mm3 時(4天後)，使小鼠每隔一天(Q2d，總計3次劑量)注射ACE-05或BiTE-05或每三天(Q3d，總計3次劑量)注射YBL-007或IgG。每2天量測腫瘤尺寸及體重且使用GraphPad Prism 8軟體分析。實例 18 . 活體內細胞介素分析
將年齡為6-7週之雌性非腫瘤攜帶之hCD3ε TG小鼠分成4組，各組6隻小鼠，且接著經由尾部靜脈注射單次0.5-mg/kg劑量之ACE-05或BiTE-05或5 mg/kg劑量之IgG。在0、6、12、24及48小時時自各動物收集用於細胞介素分析之血液樣品且儲存在-80℃下。根據製造商方案，使用BD細胞珠粒陣列(CBA)小鼠炎症套組(#552364，BD Bioscience)及小鼠Th1/Th2細胞介素套組(#551287，BD Bioscience)分析各個所收集血漿樣品中之各種細胞介素。使用GraphPad Prism 8軟體分析細胞介素之位準。實例 19 . 對腫瘤浸潤淋巴細胞之分析
在攜帶表現hPD-L1之CT26腫瘤之hCD3ε TG小鼠中分析腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)。特定言之，使小鼠在其右側腹區處皮下接種5×105 個CT26-hPD-L1細胞。當皮下腫瘤體積達到~90 mm3 時，開始腹膜內(i.p)投與測試調配物(ACE-05，1 mg/kg；YBL-007，3 mg/kg；UCHT1，2 mg/kg)且持續一週二次達2週(BIW，總計4次劑量)。在最後一次注射之後一週，自小鼠收集腫瘤。使用淋巴細胞標誌物(mCD45、mCD4、mCD8及hCD3)藉由流式細胞量測術分析腫瘤組織中之活淋巴細胞及T細胞。使用GraphPad Prism 8軟體分析結果。實例 20 . 電腦模擬之免疫原性預測
使用基於電腦網路模擬之預測程式MHC-I結合預測(http://tools.iedb.org/mhci/)及I類免疫原性(http://tools.iedb.org/immunogenicity/)研究ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL鏈之I類免疫原性。對於MHC-I結合，使用免疫抗原決定基資料庫(IEDB)預測ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL之抗原決定基候選物。選擇具有0.3百分等級截斷值(percentile rank cut-off)之8-10mer肽作為呈現於MHC I類分子上之可能的肽。接著使用MHC-I結合預測程式獲得免疫原性評分。鑑別免疫原性肽以及其在ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL鏈內之位置。IV . 多專一性融合蛋白之實例 實例21 . 根據標靶之融合蛋白之實例
本實例揭示如本文所提供之例示性多專一性融合蛋白，詳言之多專一性融合蛋白ACE-00、ACE-02、ACE-03、ACE-04、ACE-05、ACE-09、ACE-10、ACE-11、ACE-12、ACE-18、ACE-19、ACE-31及多種多專一性融合蛋白。另外，除其中第一抗原及第二抗原之結合位點相較於以上融合蛋白之結合位點為相反的ACE-00r、ACE-02r、ACE-03r、ACE-04r、ACE-05r、ACE-09r、ACE-10r、ACE-11r、ACE-12r、ACE-18r、ACE-19r、ACE-31r以外，說明多種多專一性融合蛋白之組態及表現。在各例示性多專一性融合蛋白中靶向第一及第二抗原之組分概述於下表4中。 [表4]
多專一性融合蛋白 靶向組分
第一抗原結合區域 第二抗原結合區域
ACE-00 曲妥珠單抗(Trastuzumab) (抗Her2 Ab) 阿達木單抗(Adalimumab)
ACE-01 抗CD19 Ab 抗CD3小鼠OKT3
ACE-02 抗CD19 Ab 抗CD3人類化12F6
ACE-03 抗CD19 Ab 抗CD3人類化OKT3
ACE-04 抗PD-L1 Ab 抗CD3嵌合OKT3 Fab
ACE-05 抗PD-L1 Ab 抗CD3 Ab
ACE-06 抗PD-L1 Ab 佛拉魯單抗(Foralumab)
ACE-07 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-08 抗PD-L1 Ab 抗CD3 2C11
ACE-09 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-10 抗CD20 抗CD3 UCHT1
ACE-11 西妥昔單抗(Cetuximab)(抗EGFR Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-12 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-13 抗PD-L1 Ab 抗PD-1 Ab
ACE-14 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-15 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-16 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-17 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-18 抗CD20 Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-19 抗EGFR Ab 抗CD3 UCHT1
ACE-20 馬妥珠單抗(Matuzumab)(抗EGFR Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-21 紮魯姆單抗(Zalutumumab)(抗EGFR Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-22 利妥昔單抗(抗CD20 Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-23 抗PD-L1 Ab 佛拉魯單抗(抗CD3 Ab)
ACE-24 曲妥珠單抗(抗Her2 Ab) 阿達木單抗(抗TNF Ab)
ACE-25 曲妥珠單抗(抗Her2 Ab) 阿達木單抗(抗TNF Ab)
ACE-26 西妥昔單抗(抗EGFR Ab) 抗CD3 SP34
ACE-27 抗PD-L1 Ab 抗CD3 SP34
ACE-28 西妥昔單抗(抗EGFR Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-29 西妥昔單抗(抗EGFR Ab) 抗CD3 SP34
ACE-30 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-31 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-32 西妥昔單抗(抗EGFR Ab) 抗CD3 SP34
ACE-33 抗CD3 UCHT 抗PD-L1 Ab
ACE-34 抗PD-L1 Ab 小鼠抗CD3
ACE-35 抗PD-L1 Ab 小鼠抗CD3
ACE-36 抗PD-L1 Ab 伊匹單抗(抗CTLA4 Ab)
ACE-37 利妥昔單抗(抗CD20 Ab) 伊匹單抗(抗CTLA4 Ab)
ACE-38 西妥昔單抗(抗EGFR Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-39 西妥昔單抗(抗EGFR Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-40 西妥昔單抗(抗EGFR Ab) 抗CD3 UCHT1
ACE-00r 阿達木單抗(抗TNF Ab) 曲妥珠單抗(抗Her2 Ab)
ACE-01r 抗CD3小鼠OKT3 抗CD19 Ab
ACE-02r 抗CD3人類化12F6 抗CD19 Ab
ACE-03r 抗CD3人類化OKT3 抗CD19 Ab
ACE-04r 抗CD3嵌合OKT3 Fab 抗PD-L1 Ab
ACE-05r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-06r 佛拉魯單抗(抗CD3 Ab) 抗PD-L1 Ab
ACE-07r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-08r 抗CD3 2C11 抗PD-L1 Ab
ACE-09r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-10r 抗CD3 UCHT1 抗CD20 Ab
ACE-11r 抗CD3 UCHT1 西妥昔單抗(抗EGFR Ab)
ACE-12r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-13r 抗PD-1 Ab 抗PD-L1 Ab
ACE-14r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-15r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-16r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-17r 抗CD3 UCHT1 抗PD-L1 Ab
ACE-18r 抗CD3 UCHT1 抗CD20 Ab
ACE-19r 抗CD3 UCHT1 抗EGFR Ab
ACE-20r 抗CD3 UCHT1 馬妥珠單抗(抗EGFR Ab)
ACE-21r 抗CD3 UCHT1 紮魯姆單抗(抗EGFR Ab)
ACE-22r 抗CD3 UCHT1 利妥昔單抗(抗CD20 Ab)
ACE-23r 佛拉魯單抗(抗CD3 Ab) 抗PD-L1 Ab
ACE-24r 阿達木單抗(抗TNF Ab) 曲妥珠單抗(抗Her2 Ab)
ACE-25r 阿達木單抗(抗TNF Ab) 曲妥珠單抗(抗Her2 Ab)
ACE-26r 抗CD3 SP34 西妥昔單抗(抗EGFR Ab)
ACE-27r 抗CD3 SP34 抗PD-L1 Ab
ACE-28r 抗CD3 UCHT1 西妥昔單抗
ACE-29r 抗CD3 SP34 西妥昔單抗
ACE-30r 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT
ACE-31r 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT
ACE-32r 抗CD3 SP34 西妥昔單抗
ACE-33r 抗PD-L1 Ab 抗CD3 UCHT
ACE-34r 小鼠抗CD3 抗PD-L1 Ab
ACE-35r 小鼠抗CD3 抗PD-L1 Ab
ACE-36r 伊匹單抗 抗PD-L1 Ab
ACE-37r 伊匹單抗 利妥昔單抗
ACE-38r 抗CD3 UCHT1 西妥昔單抗
ACE-39r 抗CD3 UCHT1 西妥昔單抗
ACE-40r 抗CD3 UCHT1 西妥昔單抗
用於胺基酸序列中之格式：加粗 ：VH或VL；加粗及加下劃線 ：CDR；斜體 ：抗體鉸鏈區； 小寫字母：可撓性連接子； [方括號]：CH1； [方括號及加下劃線]：CL。 加雙下劃線：CH3實例21 .1 . 製備ACE -00
ACE-00包含二個不同重鏈類鏈(ACE-00-VH及ACE-00-VL)及二個相同輕鏈(ACE-00-LC)。用於構築ACE-00之抗Her2區域的親本抗體為曲妥珠單抗，且用於構築ACE-00之抗TNF α區域的親本抗體為阿達木單抗。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -00 -VH 胺基酸序列 ： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 115)ACE -00 -VL 胺基酸序列 ： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 116)ACE -00 -LC 胺基酸序列 ( 抗CD19 抗體輕鏈 ) ： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK[ RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 117)
靶向Her2之二價Fab區及靶向TNF α之單價Fv區的VH及VL胺基酸序列列於表5中： [表5]
Fab區(抗Her2) VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 51) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 52)
CDR H1：GFNIKDTY (SEQ ID NO.: 118) CDR L1：QDVNTA (SEQ ID NO.: 121)
CDR H2：IYPTNGYT (SEQ ID NO.: 119) CDR L2：SAS (SEQ ID NO.: 122)
CDR H3：SRWGGDGFYAMDY (SEQ ID NO.: 120) CDR L3：QQHYTTPPT (SEQ ID NO.: 123)
Fv區(抗TNF α) VH： EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 53) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 54)
CDR H1：GFTFDDYA (SEQ ID NO.: 124) CDR L1：QGIRNY (SEQ ID NO.: 127)
CDR H2：ITWNSGHI (SEQ ID NO.: 125) CDR L2：AAS (SEQ ID NO.: 128)
CDR H3：AKVSYLSTASSLDY (SEQ ID NO.: 126) CDR L3：QRYNRAPYT (SEQ ID NO.: 129)
實例 21 . 2 . 製備 ACE - 01
ACE-01包含二個不同重鏈類鏈(ACE-01-VH及ACE-01-VL)及二個相同輕鏈(ACE-01-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -01 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 136 ) QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSS ACE -01 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 137 ) QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGPQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR ACE -01 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 138 ) DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
第一抗原結合區域(靶向CD19之二價Fab區)及第二抗原結合區域(靶向CD3之單價Fv區)之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表6中： [表6]
Fab區(抗CD19) VH：QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 139) VL： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 151)
CDR H1：SYWMN (SEQ ID NO.: 140) CDR L1：QSVDYDGDSY (SEQ ID NO.: 152)
CDR H2：IWPGDGDT (SEQ ID NO.: 141) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 153)
CDR H3：ARRETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO.: 142) CDR L3：QQSTEDPWT (SEQ ID NO.: 154)
Fv區(抗CD3) VH： QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 143) VL： QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR (SEQ ID NO.: 147)
CDR H1：GYTFTRYT (SEQ ID NO.: 144) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 148)
CDR H2：INPSRGYT (SEQ ID NO.: 145) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 149)
CDR H3：ARYYDDHYCLDY (SEQ ID NO.: 146) CDR L3：QQWSSNPFTF (SEQ ID NO.: 150)
實例 21 . 3 . 製備 ACE - 02
ACE-02包含二個不同重鏈類鏈(ACE-02-VH及ACE-02-VL)及二個相同輕鏈(ACE-02-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -02 -VH 胺基酸序列 ： QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO.: 88)ACE -02 -VL 胺基酸序列 ： QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASSSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQITR (SEQ ID NO.: 89)ACE -02 -LC 胺基酸序列 ( 抗CD19 抗體輕鏈 ) ： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK[ RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 90)
靶向CD19的第一抗原結合區域二價Fab區及人類化12F6之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表7中： [表7]
Fab區(抗CD19) VH：QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 61) VL： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 65)
CDR H1：SYWMN (SEQ ID NO.: 62) CDR L1：QSVDYDGDSY (SEQ ID NO.: 66)
CDR H2：QIWPGDGDTNYNGKFKG (SEQ ID NO.: 63) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 67)
CDR H3：RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO.: 64) CDR L3：QQSTEDPWT (SEQ ID NO.: 68)
Fv區(抗CD3) VH： QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO.: 69) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASSSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQITR (SEQ ID NO.: 73)
CDR H1：GYTFTSYT (SEQ ID NO.: 70) CDR L1：SSSVSY (SEQ ID NO.: 74)
CDR H2：INPSSGYT (SEQ ID NO.: 71) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 75)
CDR H3：ARWQDYDVYFDY (SEQ ID NO.: 72) CDR L3：QQWSSNPPT (SEQ ID NO.: 76)
編碼ACE-02-VH、ACE-02-VL及ACE-02-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 100、SEQ ID NO.: 101及SEQ ID NO.: 102之核苷酸序列。實例 21 . 4 . 製備 ACE - 03
ACE-03包含抗CD19及人類化抗CD3 OKT3區域。ACE-03包含二個不同重鏈類鏈(ACE-03-VH及ACE-03-VL)及二個相同輕鏈(ACE-03-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -03 -VH 胺基酸序列 ： QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP VQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO.: 91)ACE -03 -VL 胺基酸序列 ： QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR (SEQ ID NO.: 92)ACE -03 -LC 胺基酸序列 ( 抗CD19 抗體輕鏈 ) ： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK[ RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 90)
靶向CD19的第一抗原結合區域二價Fab區及人類化OKT3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表8中： [表8]
Fab區(抗CD19) VH：QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 61) VL： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 65)
CDR H1：SYWMN (SEQ ID NO.: 62) CDR L1：QSVDYDGDSY (SEQ ID NO.: 66)
CDR H2：QIWPGDGDTNYNGKFKG (SEQ ID NO.: 63) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 67)
CDR H3：RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO.: 64) CDR L3：QQSTEDPWT (SEQ ID NO.: 68)
Fv區(抗CD3) VH： VQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO.: 77) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR (SEQ ID NO.: 81)
CDR H1：GYTFTRYT (SEQ ID NO.: 78) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 82)
CDR H2：INPSRGYT (SEQ ID NO.: 79) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 83)
CDR H3：ARYYDDHYCLDY (SEQ ID NO.: 80) CDR L3：QQWSSNPFT (SEQ ID NO.: 84)
編碼ACE-03-VH、ACE-03-VL及ACE-03-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 103、SEQ ID NO.: 104及SEQ ID NO.: 102之核苷酸序列。實例 21 . 5 . 製備 ACE - 04
ACE-04包含二個不同重鏈類鏈ACE-04-VH (VL-CL-VH-CH1)及ACE-04-VL (VH-CH1-VL-CL)及二個相同輕鏈(ACE-04-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -04 -VH 胺基酸序列 ： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC] (SEQ ID NO.: 93)ACE -04 -VL 胺基酸序列 ： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEIN [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 94)ACE -04 -LC 胺基酸序列 ( 抗PD -L1 抗體輕鏈 ) ： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 95)
靶向PD-L1的第一抗原結合區域二價Fab區及嵌合OKT3 Fab區的第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表9中： [表9]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 4) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 8)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 5) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 9)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 6) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 10)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 7) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 11)
Fv區(抗CD3) VH： QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 85) VL： QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR (SEQ ID NO.: 86)
CDR H1：GYTFTRYT (SEQ ID NO.: 78) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 82)
CDR H2：INPSRGYT (SEQ ID NO.: 79) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 83)
CDR H3：ARYYDDHYCLDY (SEQ ID NO.: 80) CDR L3：QQWSSNPF (SEQ ID NO.: 87)
編碼ACE-04-VH、ACE-04-VL及ACE-04-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 105、SEQ ID NO.: 106及SEQ ID NO.: 107之核苷酸序列。實例 21 . 6 . 製備 ACE - 05
ACE-05包含二個不同重鏈類鏈(ACE-05-VH及ACE-05-VL)及二個相同輕鏈(ACE-05-LC)。ACE-05在可撓性肽區中含有G4S連接子(GGGGS之胺基酸序列，SEQ ID NO: 112)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -05 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 213 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -05 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 214 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -05 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表10中： [表10]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
進行三轉染以用ACE-05-VH、ACE-05-VL及ACE-05-LC(以0.5:0.5:1 w/w比率)之DNA轉染宿主細胞。編碼ACE-05-VH、ACE-05-VL及ACE-05-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 20、SEQ ID NO.: 21及SEQ ID NO.: 22之核苷酸序列。實例 21 . 7 . 製備 ACE - 06
ACE-06包含二個不同重鏈類鏈(ACE-06-VH及ACE-06-VL)及二個相同輕鏈(ACE-06-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -06 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 155 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS ACE -06 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 156 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR ACE -06 -LC ( 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表11中： [表11]
Fab區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH： QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 162) VL： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 166)
CDR H1：GFKFSGYG (SEQ ID NO.: 163) CDR L1： QSVSSY (SEQ ID NO.: 167)
CDR H2：IWYDGSKK (SEQ ID NO.: 271) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 168)
CDR H3：ARQMGYWHFDL (SEQ ID NO.: 165) CDR L3：QQRSNWPPLT (SEQ ID NO.: 169)
實例 21 . 8 . 製備 ACE - 07
ACE-07包含二個不同重鏈類鏈(ACE-07-VH及ACE-07-VL)及二個相同輕鏈(ACE-07-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -07 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 174 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -07 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 175 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGCTKLEIKR ACE -07 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表12中： [表12]
Fab區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 176) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGCTKLEIKR (SEQ ID NO.: 180)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 179) CDR L3：QQGNTLPW (SEQ ID NO.: 183)
實例 21 . 9 . 製備 ACE - 08
ACE-08包含二個不同重鏈類鏈(ACE-08-VH及ACE-08-VL)及二個相同輕鏈(ACE-08-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -08 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 184 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRCLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS ACE -08 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 185 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPCTKLEIKR ACE -08 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表13中： [表13]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRCLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 186) VL：QMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPCTKLEIKR (SEQ ID NO.: 190)
CDR H1：GFTFSGYG (SEQ ID NO.: 187) CDR L1：QDISNY (SEQ ID NO.: 191)
CDR H2：ITSSSINI (SEQ ID NO.: 188) CDR L2：YTN (SEQ ID NO.: 192)
CDR H3：ARFDWDKNY (SEQ ID NO.: 189) CDR L3：QQYYNYPWT (SEQ ID NO.: 193)
實例 21 . 10 . 製備 ACE - 09
ACE-09包含二個不同重鏈類鏈(ACE-09-VH及ACE-09-VL)及二個相同輕鏈(ACE-09-LC)。與ACE-05相比，ACE-09在可撓性肽區中不含有G4S連接子(GGGGS之胺基酸序列)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -09 -VH 胺基酸序列 ( 無G4S 連接子 ) ：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 96)ACE -09 -VL 胺基酸序列 ( 無G4S 連接子 ) ：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 97)ACE -09 -LC 胺基酸序列 ( 抗PD -L1 抗體輕鏈 ) ：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 95)
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表14中： [表14]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 4) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 8)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 5) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 9)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 6) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 10)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 7) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 11)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 12) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 16)
CDR H1：GYSFTGYTMN (SEQ ID NO.: 13) CDR L1：RASQDIRNYLN (SEQ ID NO.: 17)
CDR H2：LINPYKGVST (SEQ ID NO.: 14) CDR L2：YTSRLHS (SEQ ID NO.: 18)
CDR H3：SGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 15) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 19)
編碼ACE-09-VH、ACE-09-VL及ACE-09-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 108、SEQ ID NO.: 109及SEQ ID NO.: 107之核苷酸序列。實例 21 . 11 . 製備 ACE - 10
ACE-10包含二個不同重鏈類鏈(ACE-10-VH及ACE-10-VL)及二個相同輕鏈(ACE-10-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -10 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 23 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -10 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 24 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -10 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 25 ) QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD20之二價Fab區及靶向CD3之單價Fv區的VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表15中： [表15]
Fab區(抗CD20) VH：QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 26) VL： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 30)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 27) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 31)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 28) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 32)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 29) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 33)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 12) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 16)
CDR H1：GYSFTGYTMN (SEQ ID NO.: 13) CDR L1：RASQDIRNYLN (SEQ ID NO.: 17)
CDR H2：LINPYKGVST (SEQ ID NO.: 14) CDR L2：YTSRLHS (SEQ ID NO.: 18)
CDR H3：SGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 15) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 19)
編碼ACE-10-VH、ACE-10-VL及ACE-10-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 34、SEQ ID NO.: 35及SEQ ID NO.: 36之核苷酸序列。實例 21 . 12 . 製備 ACE - 11
ACE-11具有與ACE-05及ACE-10相同的整體結構，且包含二個不同重鏈類鏈(ACE-11-VH及ACE-11-VL)及二個相同輕鏈(ACE-11-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -11 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 37 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -11 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 38 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -11 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 39 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表16中： [表16]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 40) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELKR (SEQ ID NO.: 44)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 41) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 45)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 42) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 46)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 43) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 47)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 12) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 16)
CDR H1：GYSFTGYTMN (SEQ ID NO.: 13) CDR L1：RASQDIRNYLN (SEQ ID NO.: 17)
CDR H2：LINPYKGVST (SEQ ID NO.: 14) CDR L2：YTSRLHS (SEQ ID NO.: 18)
CDR H3：SGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 15) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 19)
編碼ACE-11-VH、ACE-11-VL及ACE-11-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 48、SEQ ID NO.: 49及SEQ ID NO.: 50之核苷酸序列。實例 21 . 13 . 製備 ACE - 12
ACE-12包含具有GGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 113)及GGSGGGGSG (SEQ ID NO: 114)之胺基酸序列的G4S連接子，而ACE-05包含在可撓性肽區中具有GGGGS之胺基酸序列的G4S連接子。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE - 12 - VH 胺基酸序列 ( 具有 10 個殘基 GGGGSGGGGS ) ：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 98)ACE -12 -VL 胺基酸序列 ( 具有9 個殘基GGSGGGGSG ) ：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggsggggsgDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 99)ACE -12 -LC 胺基酸序列 ( 抗PD -L1 抗體輕鏈 ) ：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 95)
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及UCHT1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表17中： [表17]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 4) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 8)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 5) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 9)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 6) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 10)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 7) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 11)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 12) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 16)
CDR H1：GYSFTGYTMN (SEQ ID NO.: 13) CDR L1：RASQDIRNYLN (SEQ ID NO.: 17)
CDR H2：LINPYKGVST (SEQ ID NO.: 14) CDR L2：YTSRLHS (SEQ ID NO.: 18)
CDR H3：SGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 15) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 19)
編碼ACE-12-VH、ACE-12-VL及ACE-12-LC之DNA序列分別具有SEQ ID NO.: 110、SEQ ID NO.: 111及SEQ ID NO.: 107之核苷酸序列。實例 21 . 14 . 製備 ACE - 13
ACE-13包含二個不同重鏈類鏈(ACE-13-VH及ACE-13-VL)及二個相同輕鏈(ACE-13-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -13 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 194 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFLRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTTTFDSWGQGTLVTVSS ACE -13 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 195 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIVMTQTPLSLPVTPGEAASISCRSSQSLLDSEDGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSHRASGVPDRFSGSGSGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQRRDFPFTFGQGTKVDIKR ACE -13 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表18中： [表18]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗PD-1) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFLRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTTTFDSWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 196) VL： DIVMTQTPLSLPVTPGEAASISCRSSQSLLDSEDGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSHRASGVPDRFSGSGSGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQRRDFPFTFGQGTKVDIKR (SEQ ID NO.: 200)
CDR H1：GFTFLRYA (SEQ ID NO.: 197) CDR L1：QSLLDSEDGNTY (SEQ ID NO.: 201)
CDR H2：ISYDGRYK (SEQ ID NO.: 198) CDR L2：TLS (SEQ ID NO.: 202)
CDR H3：TTTTFDS (SEQ ID NO.: 199) CDR L3：MQRRDFPFT (SEQ ID NO.: 203)
實例 21 . 15 . 製備 ACE - 14
ACE-14包含二個不同重鏈類鏈(ACE-14-VH及ACE-14-VL)及二個相同輕鏈(ACE-14-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -14 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 204 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -14 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 205 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFACGTKLEIKR ACE -14 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表19中： [表19]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 176) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFACGTKLEIKR (SEQ ID NO.：206)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 179) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 16 . 製備 ACE - 15
ACE-15包含二個不同重鏈類鏈(ACE-15-VH及ACE-15-VL)及二個相同輕鏈(ACE-15-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -15 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 208 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGCGTTLTVFS ACE -15 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 209 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGCVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -15 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表20中： [表20]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGCGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 210) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGCVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 212)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 17 . 製備 ACE - 16
ACE-16包含二個不同重鏈類鏈(ACE-16-VH及ACE-16-VL)及二個相同輕鏈(ACE-16-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -16 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 1 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -16 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 2 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -16 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 3 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表21中： [表21]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 4) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 8)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 5) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 9)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 6) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 10)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 7) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 11)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 12) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 16)
CDR H1：GYSFTGYTMN (SEQ ID NO.: 13) CDR L1：RASQDIRNYLN (SEQ ID NO.: 17)
CDR H2：LINPYKGVST (SEQ ID NO.: 14) CDR L2：YTSRLHS (SEQ ID NO.: 18)
CDR H3：SGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 15) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 19)
實例 21 . 18 . 製備 ACE - 17
ACE-17包含二個不同重鏈類鏈(ACE-17-VH及ACE-17-VL)及二個相同輕鏈(ACE-17-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -17 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 217 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -17 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 218 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -17 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表22中： [表22]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 19 . 製備 ACE - 18
ACE-18包含二個不同重鏈類鏈(ACE-18-VH及ACE-18-VL)及二個相同輕鏈(ACE-18-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -18 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 219 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -18 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 220 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -18 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 221 ) QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*]
靶向CD20之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表23中： [表23]
Fab區(抗CD20) VH：QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 222) VL： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 226)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 223) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 227)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 224) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 228)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 225) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 229)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 20 . 製備 ACE - 19
ACE-19包含二個不同重鏈類鏈(ACE-19-VH及ACE-19-VL)及二個相同輕鏈(ACE-19-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -19 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 230 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -19 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 231 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -19 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表24中： [表24]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 21 . 製備 ACE - 20
ACE-20包含二個不同重鏈類鏈(ACE-20-VH及ACE-20-VL)及二個相同輕鏈(ACE-20-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -20 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 241 ) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHWMHWVRQAPGQGLEWIGEFNPSNGRTNYNEKFKSKATMTVDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCASRDYDYDCRYFDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS *ACE -20 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 242 ) QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHWMHWVRQAPGQGLEWIGEFNPSNGRTNYNEKFKSKATMTVDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCASRDYDYDCRYFDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -20 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 243 ) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVTYMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSHIFTFGQGTKVEIKR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表25中： [表25]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHWMHWVRQAPGQGLEWIGEFNPSNGRTNYNEKFKSKATMTVDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCASRDYDYDCRYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 244) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVTYMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSHIFTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 248)
CDR H1：GYTFTSHW (SEQ ID NO.: 245) CDR L1：SSVTY (SEQ ID NO.: 249)
CDR H2：FNPSNGRT (SEQ ID NO.: 246) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 250)
CDR H3：ASRDYDYDCRYFDY (SEQ ID NO.: 247) CDR L3：QQWSSHIFT (SEQ ID NO.: 251)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 22 . 製備 ACE - 21
ACE-21包含二個不同重鏈類鏈(ACE-21-VH及ACE-21-VL)及二個相同輕鏈(ACE-21-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -21 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 252 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGPggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -21 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 253 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGPggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -21 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 254 ) AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKR TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表26中： [表26]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 255) VL： AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 259)
CDR H1：GFTFSTYG (SEQ ID NO.: 256) CDR L1：QDISSA (SEQ ID NO.: 260)
CDR H2：IWDDGSYK (SEQ ID NO.: 257) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 261)
CDR H3：ARDGITMVRGVMKDYFDY (SEQ ID NO.: 258) CDR L3：QQFNSYPLT (SEQ ID NO.: 262)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 23 . 製備 ACE - 22
ACE-22包含二個不同重鏈類鏈(ACE-22-VH及ACE-22-VL)及二個相同輕鏈(ACE-22-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -22 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 263 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -22 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 264 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -22 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 221 ) QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD20之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表27中： [表27]
Fab區(抗CD20) VH：QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 222) VL： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 226)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 223) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 227)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 224) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 228)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 225) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 229)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 24 . 製備 ACE - 23
ACE-23包含二個不同重鏈類鏈(ACE-23-VH及ACE-23-VL)及二個相同輕鏈(ACE-23-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -23 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 269 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS ACE -23 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 270 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR ACE -23 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表28中： [表28]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 162) VL： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 166)
CDR H1：GFKFSGYG (SEQ ID NO.: 163) CDR L1：QSVSSY (SEQ ID NO.: 167)
CDR H2：IWYDGSKK (SEQ ID NO.: 271) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 168)
CDR H3：ARQMGYWHFDL (SEQ ID NO.: 165) CDR L3：QQRSNWPPLT (SEQ ID NO.: 169)
實例 21 . 25 . 製備 ACE - 24
ACE-24包含二個不同重鏈類鏈(ACE-24-VH及ACE-24-VL)及二個相同輕鏈(ACE-24-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -24 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 272 ) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS ACE -24 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 273 ) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR ACE -24 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 274 ) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向HER2之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向TNF之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表29中： [表29]
Fab區(抗HER2) VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 275) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 287)  
CDR H1：GFNIKDTY (SEQ ID NO.: 276) CDR L1：QDVNTA (SEQ ID NO.: 288)
CDR H2：IYPTNGYT (SEQ ID NO.: 277) CDR L2：SAS (SEQ ID NO.: 289)
CDR H3：SRWGGDGFYAMDY (SEQ ID NO.: 278) CDR L3：QQHYTTPPT (SEQ ID NO.: 290)
Fv區(抗TNF) VH：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 279) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 283)
CDR H1：GFTFDDYA (SEQ ID NO.: 280) CDR L1：QGIRNY (SEQ ID NO.: 284)
CDR H2：ITWNSGHI (SEQ ID NO.: 281) CDR L2：AAS (SEQ ID NO.: 285)
CDR H3：AKVSYLSTASSLDY (SEQ ID NO.: 282) CDR L3：QRYNRAPYT (SEQ ID NO.: 286)
實例 21 . 26 . 製備 ACE - 25
ACE-25包含二個不同重鏈類鏈(ACE-25-VH及ACE-25-VL)及二個相同輕鏈(ACE-25-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -25 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 291 ) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGPggggsggggs EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS ACE -25 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 273 ) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR ACE -25 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 274 ) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向HER2之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向TNF之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表30中： [表30]
Fab區(抗HER2) VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 275) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 287)
CDR H1：GFNIKDTY (SEQ ID NO.: 276) CDR L1：QDVNTA (SEQ ID NO.: 288)
CDR H2：IYPTNGYT (SEQ ID NO.: 277) CDR L2：SAS (SEQ ID NO.: 289)
CDR H3：SRWGGDGFYAMDY (SEQ ID NO.: 278) CDR L3：QQHYTTPPT (SEQ ID NO.: 290)
Fv區(抗TNF) VH：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 279) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 283)
CDR H1：GFTFDDYA (SEQ ID NO.: 280) CDR L1：QGIRNY (SEQ ID NO.: 284)
CDR H2：ITWNSGHI (SEQ ID NO.: 281) CDR L2：AAS (SEQ ID NO.: 285)
CDR H3：AKVSYLSTASSLDY (SEQ ID NO.: 282) CDR L3：QRYNRAPYT (SEQ ID NO.: 286)
實例 21 . 27 . 製備 ACE - 26
ACE-26包含二個不同重鏈類鏈(ACE-26-VH及ACE-26-VL)及二個相同輕鏈(ACE-26-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -26 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 292 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA ACE -26 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 293 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL ACE -26 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表31中： [表31]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv區(抗CD3) VH：EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 294) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 298)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 295) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 299)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 296) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 300)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 297) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 301)
實例 21 . 28 . 製備 ACE - 27
ACE-27包含二個不同重鏈類鏈(ACE-27-VH及ACE-27-VL)及二個相同輕鏈(ACE-27-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -27 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 302 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGPggggs EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA ACE -27 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 303 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL ACE -27 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 304 ) QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL[RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]*
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表32中： [表32]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 313)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CD TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 314) R L1：
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 315)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 316)
Fv區(抗CD3) VH：EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 305) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 309)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 306) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 310)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 307) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 311)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 308) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 312)
實例 21 . 29 . 製備 ACE - 28
ACE-28包含二個不同重鏈類鏈(ACE-28-VH及ACE-28-VL)及二個相同輕鏈(ACE-28-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -28 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 317 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -28 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 318 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -28 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表33中： [表33]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 30 . 製備 ACE - 29
ACE-29包含二個不同重鏈類鏈(ACE-29-VH及ACE-29-VL)及二個相同輕鏈(ACE-29-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -29 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 319 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGP]ggggsEVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -29 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 320 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGP]ggggsQAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -29 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表34中： [表34]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv區(抗CD3) VH： EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 294) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 298)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 295) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 299)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 296) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 300)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 297) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 301)
實例 21 . 31 . 製備 ACE - 30
ACE-30包含二個不同重鏈類鏈(ACE-30-VH及ACE-30-VL)及二個相同輕鏈(ACE-30-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -30 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 322 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -30 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 323 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -30 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 324 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表35中： [表35]
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
Fv區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 333)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
實例 21 . 32 . 製備 ACE - 31
ACE-31包含二個不同重鏈類鏈(ACE-31-VH及ACE-31-VL)及二個相同輕鏈(ACE-31-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -31 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 344 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -31 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 345 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -31 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 324 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表36中： [表36]
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 333)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
實例 21 . 33 . 製備 ACE - 32
ACE-32包含二個不同重鏈類鏈(ACE-32-VH及ACE-32-VL)及二個相同輕鏈(ACE-32-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -32 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 342 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsggggsEVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA ACE -32 -VL 胺基酸序列 ) (SEQ ID NO .: 293 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL ACE -32 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表37中： [表37]
Fab區(EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL：DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv region (Anti-CD3) VH：EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 294) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 298)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 295) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 299)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 296) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 300)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 297) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 301)
實例 21 . 34 . 製備 ACE - 33
ACE-33包含二個不同重鏈類鏈(ACE-33-VH及ACE-33-VL)及二個相同輕鏈(ACE-33-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -33 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 341 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -33 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 323 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -33 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 324 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表38中： [表38]
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
Fv區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR(SEQ ID NO.: 333)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
實例 21 . 35 . 製備 ACE - 34
ACE-34包含二個不同重鏈類鏈(ACE-34-VH及ACE-34-VL)及二個相同輕鏈(ACE-34-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -34 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 346 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRGLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS ACE -34 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 347 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPGTKLEIK ACE -34 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表39中： [表39]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR(SEQ ID NO.: 170)  
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRGLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 348) VL：DIQMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPGTKLEIK (SEQ ID NO.: 352)
CDR H1：GYGMH (SEQ ID NO.: 349) CDR L1：QASQDISNYLN (SEQ ID NO.: 353)
CDR H2：YITSSSINIKYADAVKG (SEQ ID NO.: 350) CDR L2：YTNKLAD(SEQ ID NO.: 354)
CDR H3：FDWDKN (SEQ ID NO.: 351) CDR L3：QQYYNYPWT (SEQ ID NO.: 355)
實例 21 . 36 . 製備 ACE - 35
ACE-35包含二個不同重鏈類鏈(ACE-35-VH及ACE-35-VL)及二個相同輕鏈(ACE-35-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -35 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 356 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVKLQQSGSELGKPGASVKLSCKTSGYIFTDHYISWVKQKPGESLQWIGNVYGGNGGTSYNQKFQGKATLTVDKISSTAYMELSSLTSEDSAIYYCARRPVATGHAMDYWGQGIQVTVSS ACE -35 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 357 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIVLTQTPATLSLIPGERVTMTCKTSQNIGTILHWYHQKPKEAPRALIKYASQSIPGIPSRFSGSGSETDFTLSINNLEPDDIGIYYCQQSRSWPVTFGPGTKLEIK ACE -35 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表40中： [表40]
Fab區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR(SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CD3) VH：QVKLQQSGSELGKPGASVKLSCKTSGYIFTDHYISWVKQKPGESLQWIGNVYGGNGGTSYNQKFQGKATLTVDKISSTAYMELSSLTSEDSAIYYCARRPVATGHAMDYWGQGIQVTVSS (SEQ ID NO.: 358) VL： DIVLTQTPATLSLIPGERVTMTCKTSQNIGTILHWYHQKPKEAPRALIKYASQSIPGIPSRFSGSGSETDFTLSINNLEPDDIGIYYCQQSRSWPVTFGPGTKLEIK (SEQ ID NO.: 362)
CDR H1：DHYIS (SEQ ID NO.: 359) CDR L1：KTSQNIGTILH (SEQ ID NO.: 363)
CDR H2：NVYGGNGGTSYNQKFQG (SEQ ID NO.: 360) CDR L2：YASQSIP (SEQ ID NO.: 364)
CDR H3：RPVATGHAMDY (SEQ ID NO.: 361) CDR L3：QQSRSWPVT (SEQ ID NO.: 365)
實例 21 . 37 . 製備 ACE - 36
ACE-36包含二個不同重鏈類鏈(ACE-36-VH及ACE-36-VL)及二個相同輕鏈(ACE-36-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -36 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 366 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS ACE -36 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 367 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLG EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK ACE -36 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 157 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CTLA-4之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表41中： [表41]
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 376)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fv區(抗CTLA4) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 368) VL： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 372)
CDR H1：GFTFSSYT (SEQ ID NO.: 369) CDR L1：QSVGSSY (SEQ ID NO.: 373)
CDR H2：ISYDGNNK (SEQ ID NO.: 370) CDR L2：GAF (SEQ ID NO.: 374)
CDR H3：ARTGWLGPFDY (SEQ ID NO.: 371) CDR L3：QQYGSSPWT (SEQ ID NO.: 375)
實例 21 . 38 . 製備 ACE - 37
ACE-37包含二個不同重鏈類鏈(ACE-37-VH及ACE-37-VL)及二個相同輕鏈(ACE-37-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -37 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 377 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS ACE -37 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 378 ) QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLG EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK ACE -37 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 221 ) QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD20之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CTLA-4之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表42中： [表42]
Fab區(抗CD20) VH：QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 222) VL： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 226)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 223) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 227)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 224) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 228)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 225) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 229)
Fv區(抗CTLA-4) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 368) VL：EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 372)
CDR H1：GFTFSSYT (SEQ ID NO.: 369) CDR L1：QSVGSSY (SEQ ID NO.: 373)
CDR H2：ISYDGNNK (SEQ ID NO.: 370) CDR L2：GAF (SEQ ID NO.: 374)
CDR H3：ARTGWLGPFDY (SEQ ID NO.: 371) CDR L3：QQYGSSPWT (SEQ ID NO.: 375)
實例 21 . 39 . 製備 ACE - 38
ACE-38包含二個不同重鏈類鏈(ACE-38-VH及ACE-38-VL)及二個相同輕鏈(ACE-38-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -38 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 381 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -38 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 382 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -38 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表43中： [表43]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 40 . 製備 ACE - 39
ACE-39包含二個不同重鏈類鏈(ACE-39-VH及ACE-39-VL)及二個相同輕鏈(ACE-39-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -39 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 383 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -39 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 384 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -39 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表44中： [表44]
Fab區(EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 41 . 製備 ACE - 40
ACE-40包含二個不同重鏈類鏈(ACE-40-VH及ACE-40-VL)及二個相同輕鏈(ACE-40-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -40 -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 381 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -40 -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 384 ) QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -40 -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 232 ) DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向EGFR之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表45中： [表45]
Fab區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fv區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 42 . 製備 ACE - 00r
ACE-00r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-00r-VH及ACE-00r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-00r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -00r -VH 胺基酸序列 ：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 388)ACE -00r -VL 胺基酸序列 ：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 389)ACE -00r -LC 胺基酸序列 ：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 390)
靶向TNF之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向HER2之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表46中： [表46]
Fab區(抗TNF α) VH： EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 279) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 283)
CDR H1：GFTFDDYA (SEQ ID NO.: 280) CDR L1：QGIRNY (SEQ ID NO.: 284)
CDR H2：ITWNSGHI (SEQ ID NO.: 281) CDR L2：AAS (SEQ ID NO.: 285)
CDR H3：AKVSYLSTASSLDY (SEQ ID NO.: 282) CDR L3：QRYNRAPYT (SEQ ID NO.: 286)
Fv區(抗Her2) VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 275) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 389)
CDR H1：GFNIKDTY (SEQ ID NO.: 276) CDR L1：QDVNTA (SEQ ID NO.: 288)
CDR H2：IYPTNGYT (SEQ ID NO.: 277) CDR L2：SAS (SEQ ID NO.: 289)
CDR H3：SRWGGDGFYAMDY (SEQ ID NO.: 278) CDR L3：QQHYTTPPT (SEQ ID NO.: 290)
實例 21 . 43 . 製備 ACE - 01r
ACE-01r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-01r-VH及ACE-01r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-01r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -01r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 391 ) QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS ACE -01r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 392 ) QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGPDIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK ACE -01r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 393 ) QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
第一抗原結合區域(靶向CD3之二價Fab區)及第二抗原結合區域(靶向CD19之單價Fv區)之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表47中： [表47]
Fv區(抗CD19) VH：QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 139) VL： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 151)
CDR H1：SYWMN (SEQ ID NO.: 140) CDR L1：QSVDYDGDSY (SEQ ID NO.: 152)
CDR H2：IWPGDGDT (SEQ ID NO.: 141) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 153)
CDR H3：ARRETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO.: 142) CDR L3：QQSTEDPWT (SEQ ID NO.: 154)
Fab區(抗CD3) VH： QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 143) VL： QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR (SEQ ID NO.: 147)
CDR H1：GYTFTRYT (SEQ ID NO.: 144) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 148)
CDR H2：INPSRGYT (SEQ ID NO.: 145) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 149)
CDR H3：ARYYDDHYCLDY (SEQ ID NO.: 146) CDR L3：QQWSSNPFTF (SEQ ID NO.: 150)
實例 21 . 44 . 製備 ACE - 02r
ACE-02r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-02r-VH及ACE-02r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-02r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -02r -VH 胺基酸序列 ：QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVS S (SEQ ID NO.: 394)ACE -02r -VL 胺基酸序列 ：QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 399)ACE -02r -LC 胺基酸序列 ：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASSSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQITR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 400)
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD19之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表48中： [表48]
Fv區(抗CD19) VH：QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 139) VL： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 151)
CDR H1：SYWMN (SEQ ID NO.: 140) CDR L1：QSVDYDGDSY (SEQ ID NO.: 152)
CDR H2：QIWPGDGDTNYNGKFKG (SEQ ID NO.: 141) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 153)
CDR H3：RETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO.: 142) CDR L3：QQSTEDPWT (SEQ ID NO.: 154)
Fab區(抗CD3) VH： QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTSYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSSGYTKYNQKFKDRFTISADKSKSTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARWQDYDVYFDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO.: 395) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTMTCRASSSVSYMHWYQQTPGKAPKPWIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPPTFGQGTKLQITR (SEQ ID NO.: 401)
CDR H1：GYTFTSYT (SEQ ID NO.: 396) CDR L1：SSSVSY (SEQ ID NO.: 402)
CDR H2：INPSSGYT (SEQ ID NO.: 397) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 403)
CDR H3：ARWQDYDVYFDY (SEQ ID NO.: 398) CDR L3：QQWSSNPPT (SEQ ID NO.: 404)
實例 21 . 45 . 製備 ACE - 03r
ACE-03r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-03r-VH及ACE-03r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-03r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -03r -VH 胺基酸序列 ：VQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 405)ACE -03r -VL 胺基酸序列 ：VQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 407)ACE -03r -LC 胺基酸序列 ：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 408)
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD19之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表49中： [表49]
Fv區(抗CD19) VH：QVQLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIWPGDGDTNYNGKFKGKATLTADESSSTAYMQLSSLASEDSAVYFCARRETTTVGRYYYAMDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO.: 139) VL： DIQLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYLNWYQQIPGQPPKLLIYDASNLVSGIPPRFSGSGSGTDFTLNIHPVEKVDAATYHCQQSTEDPWTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 151)
CDR H1：SYWMN (SEQ ID NO.: 140) CDR L1：QSVDYDGDSY (SEQ ID NO.: 152)
CDR H2：IWPGDGDT (SEQ ID NO.: 141) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 153)
CDR H3：ARETTTVGRYYYAMDY (SEQ ID NO.: 142) CDR L3：QQSTEDPWT (SEQ ID NO.: 154)
Fab區(抗CD3) VH： VQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKVKDRFTISTDKSKSTAFLQMDSLRPEDTAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSS (SEQ ID NO.: 406) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR (SEQ ID NO.: 409)
CDR H1：GYTFTRYT (SEQ ID NO.: 144) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 148)
CDR H2：INPSRGYT (SEQ ID NO.: 145) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 149)
CDR H3：ARYYDDHYCLDY (SEQ ID NO.: 146) CDR L3：QQWSSNPFT (SEQ ID NO.: 410)
實例 21 . 46 . 製備 ACE - 04r
ACE-04r包含二個不同重鏈類鏈ACE-04r-VH (VL-CL-VH-CH1)及ACE-04r-VL (VH-CH1-VL-CL)及二個相同輕鏈(ACE-04r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -04r -VH 胺基酸序列 ：QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC] (SEQ ID NO.: 411)ACE -04r -VL 胺基酸序列 ：QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 413)ACE -04r -LC 胺基酸序列 ：QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEIN [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC](SEQ ID NO.: 414)
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表50中： [表50]
Fv 區 ( 抗 PD - L1 ) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 376)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
Fab區(抗CD3) VH： QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 412) VL： QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEIN (SEQ ID NO.: 415)
CDR H1：GYTFTRYT (SEQ ID NO.: 144) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 148)
CDR H2：INPSRGYT (SEQ ID NO.: 145) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 149)
CDR H3：ARYYDDHYCLDY (SEQ ID NO.: 146) CDR L3：QQWSSNPF (SEQ ID NO.: 416)
實例 21 . 47 . 製備 ACE - 05r
ACE-05r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-05r-VH及ACE-05r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-05r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -05r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 417 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -05r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 418 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL ACE -05r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 419 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表51中： [表51]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 376)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
實例 21 . 48 . 製備 ACE - 06r
ACE-06r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-06r-VH及ACE-06r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-06r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下： ACE-06r-VH胺基酸序列 (SEQ ID NO.: 420)QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE-06r-VL胺基酸序列 (SEQ ID NO.: 421)QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE-06r-LC胺基酸序列 (SEQ ID NO.: 422)EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表52中： [表52]
Fv區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2： GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH： QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 162) VL： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 166)
CDR H1：GFKFSGYG (SEQ ID NO.: 163) CDR L1： QSVSSY (SEQ ID NO.: 167)
CDR H2：IWYDGSKK (SEQ ID NO.: 271) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 168)
CDR H3：ARQMGYWHFDL (SEQ ID NO.: 165) CDR L3：QQRSNWPPLT (SEQ ID NO.: 169)
實例 21 . 49 . 製備 ACE - 07r
ACE-07r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-07r-VH及ACE-07r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-07r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -07r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 423 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -07r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 424 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -07r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 425 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGCTKLEIKR SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表53中： [表53]
Fv區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 176) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGCTKLEIKR (SEQ ID NO.: 180)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 179) CDR L3：QQGNTLPW (SEQ ID NO.: 183)
實例 21 . 50 . 製備 ACE - 08r
ACE-08r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-08r-VH及ACE-08r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-08r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -08r -HC -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 426 ) EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRCLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -08r -HC -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 427 ) EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRCLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -08r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 428 ) QMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPCTKLEIKR SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表54中： [表54]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRCLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 186) VL：QMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPCTKLEIKR (SEQ ID NO.: 190)
CDR H1：GFTFSGYG (SEQ ID NO.: 187) CDR L1：QDISNY (SEQ ID NO.: 191)  
CDR H2：ITSSSINI (SEQ ID NO.: 188) CDR L2：YTN (SEQ ID NO.: 192)
CDR H3：ARFDWDKNY (SEQ ID NO.: 189) CDR L3：QQYYNYPWT (SEQ ID NO.: 193)
實例 21 . 51 . 製備 ACE - 09r
ACE-09包含二個不同重鏈類鏈(ACE-09-VH及ACE-09-VL)及二個相同輕鏈(ACE-09-LC)。與ACE-05相比，ACE-09在可撓性肽區中不含有G4S連接子(GGGGS之胺基酸序列)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -09r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 429 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -09r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 430 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL ACE -09r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 431 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表55中： [表55]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO.: 376)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
實例 21 . 52 . 製備 ACE - 10r
ACE-10r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-10r-VH及ACE-10r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-10r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -10r -VH 胺基酸序列 ：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 432)ACE -10r -VL 胺基酸序列 ：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 433)ACE -10r -LC 胺基酸序列 ：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] (SEQ ID NO.: 419)
靶向CD3之二價Fab區及靶向CD20之單價Fv區的VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表56中： [表56]
Fv區(抗CD20) VH QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 222) VL QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 226)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 223) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 227)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 224) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 228)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 225) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 229)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H1 ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
實例 21 . 53 . 製備 ACE - 11r
ACE-11r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-11r-VH及ACE-11r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-11r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -11r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 434 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA ACE -11r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 439 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK ACE -11r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 419 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表57中： [表57]
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT(SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 435) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 440)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 436) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 441)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 437) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 442)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 438) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 443)
實例 21 . 54 . 製備 ACE - 12r
ACE-12r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-12r-VH及ACE-12r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-12r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -12r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 444 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -12r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 445 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggsggggsgQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL ACE -12r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 431 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表58中： [表58]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL(SEQ ID NO.: 376)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
實例 21 . 55 . 製備 ACE - 13r
ACE-13r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-13r-VH及ACE-13r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-13r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -13r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 446 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFLRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTTTFDSWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -13r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 447 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFLRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTTTFDSWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -13r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 448 ) DIVMTQTPLSLPVTPGEAASISCRSSQSLLDSEDGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSHRASGVPDRFSGSGSGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQRRDFPFTFGQGTKVDIKR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]*
靶向PD-1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表59中： [表59]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗PD-1) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFLRYAMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGRYKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTTTFDSWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 196) VL： DIVMTQTPLSLPVTPGEAASISCRSSQSLLDSEDGNTYLDWYLQKPGQSPQLLIYTLSHRASGVPDRFSGSGSGTDFTLEISRVEAEDVGVYYCMQRRDFPFTFGQGTKVDIKR (SEQ ID NO.: 200)
CDR H1：GFTFLRYA (SEQ ID NO.: 197) CDR L1：QSLLDSEDGNTY (SEQ ID NO.: 201)
CDR H2：ISYDGRYK (SEQ ID NO.: 198) CDR L2：TLS (SEQ ID NO.: 202)
CDR H3：TTTTFDS (SEQ ID NO.: 199) CDR L3：MQRRDFPFT (SEQ ID NO.: 203)
實例 21 . 56 . 製備 ACE - 14r
ACE-14r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-14r-VH及ACE-14r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-14r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -14r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO : 449 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -14r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 450 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -14r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 451 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFACGTKLEIKR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表60中： [表60]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKCLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 176) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFACGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 206)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 179) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 57 . 製備 ACE - 15r
ACE-15r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-15r-VH及ACE-15r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-15r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -15r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 452 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGCGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -15r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 453 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGCGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -15r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 454 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGCVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表61中： [表61]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGCGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 210) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGCVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 212)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 58 . 製備 ACE - 16r
ACE-16r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-16r-VH及ACE-16r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-16r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -16r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 455 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -16r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 456 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -16r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 457 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表62中： [表62]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 59 . 製備 ACE - 17r
ACE-17r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-17r-VH及ACE-17r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-17r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -17r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 458 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -17r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 459 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -17r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 457 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表63中： [表63]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 60 . 製備 ACE - 18r
ACE-18r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-18r-VH及ACE-18r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-18r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -18r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 460 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSQVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA ACE -18r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 461 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSQIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK ACE -18r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 431 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD20之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表64中： [表64]
Fv區(抗CD20) VH：QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 222) VL： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 226)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 223) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 227)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 224) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 228)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 225) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 229)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 61 . 製備 ACE - 19r
ACE-19r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-19r-VH及ACE-19r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-19r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -19r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 462 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA ACE -19r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 463 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP GGGGSDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK ACE -19r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 419 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表65中： [表65]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 62 . 製備 ACE - 20r
ACE-20r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-20r-VH及ACE-20r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-20r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -20r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 464 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHWMHWVRQAPGQGLEWIGEFNPSNGRTNYNEKFKSKATMTVDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCASRDYDYDCRYFDYWGQGTLVTVSS ACE -20r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 465 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVTYMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSHIFTFGQGTKVEIKR ACE -20r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 324 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表66中： [表66]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSHWMHWVRQAPGQGLEWIGEFNPSNGRTNYNEKFKSKATMTVDTSTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCASRDYDYDCRYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 244) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVTYMYWYQQKPGKAPKLLIYDTSNLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSHIFTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 248)
CDR H1：GYTFTSHW (SEQ ID NO.: 245) CDR L1：SSVTY (SEQ ID NO.: 249)
CDR H2：FNPSNGRT (SEQ ID NO.: 246) CDR L2：DTS (SEQ ID NO.: 250)
CDR H3：ASRDYDYDCRYFDY (SEQ ID NO.: 247) CDR L3：QQWSSHIFT (SEQ ID NO.: 251)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 63 . 製備 ACE - 21r
ACE-21r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-21r-VH及ACE-21r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-21r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -21r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 466 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSS ACE -21r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 467 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsAIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKR ACE -21r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 324 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表67中： [表67]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 255) VL： AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 259)
CDR H1：GFTFSTYG (SEQ ID NO.: 256) CDR L1：QDISSA (SEQ ID NO.: 260)
CDR H2：IWDDGSYK (SEQ ID NO.: 257) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 261)
CDR H3：ARDGITMVRGVMKDYFDY (SEQ ID NO.: 258) CDR L3：QQFNSYPLT (SEQ ID NO.: 262)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 64 . 製備 ACE - 22r
ACE-22r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-22r-VH及ACE-22r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-22r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -22r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 468 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA ACE -22r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 469 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK ACE -22r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 431 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD20之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表68中： [表68]
Fv區(抗CD20) VH：QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 222) VL： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 226)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 223) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 227)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 224) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 228)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 225) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 229)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 65 . 製備 ACE - 23r
ACE-23r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-23r-VH及ACE-23r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-23r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -23r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 470 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -23r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 471 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -23r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 422 ) EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表69中： [表69]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFKFSGYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKKYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQMGYWHFDLWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 162) VL： EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPPLTFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 166)
CDR H1：GFKFSGYG (SEQ ID NO.: 163) CDR L1：QSVSSY (SEQ ID NO.: 167)
CDR H2：IWYDGSKK (SEQ ID NO.: 271) CDR L2：DAS (SEQ ID NO.: 168)
CDR H3：ARQMGYWHFDL (SEQ ID NO.: 165) CDR L3：QQRSNWPPLT (SEQ ID NO.: 169)
實例 21 . 66 . 製備 ACE - 24r
ACE-24r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-24r-VH及ACE-24r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-24r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -24r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 472 ) EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS ACE -24r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 473 ) EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK ACE -24r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 390 ) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向TNF之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向HER2之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表70中： [表70]
Fv區(抗HER2) VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 275) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 287)
CDR H1：GFNIKDTY (SEQ ID NO.: 276) CDR L1：QDVNTA (SEQ ID NO.: 288)
CDR H2：IYPTNGYT (SEQ ID NO.: 277) CDR L2：SAS (SEQ ID NO.: 289)
CDR H3：SRWGGDGFYAMDY (SEQ ID NO.: 278) CDR L3：QQHYTTPPT (SEQ ID NO.: 290)
Fab區(抗TNF) VH：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 279) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 283)
CDR H1：GFTFDDYA (SEQ ID NO.: 280) CDR L1：QGIRNY (SEQ ID NO.: 284)
CDR H2：ITWNSGHI (SEQ ID NO.: 281) CDR L2：AAS (SEQ ID NO.: 285)
CDR H3：AKVSYLSTASSLDY (SEQ ID NO.: 282) CDR L3：QRYNRAPYT (SEQ ID NO.: 286)
實例 21 . 67 . 製備 ACE - 25r
ACE-25r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-25r-VH及ACE-25r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-25r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -25r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 474 ) EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGPggggsggggs EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS ACE -25r -HC -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 475 ) EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK ACE -25r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 390 ) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向TNF之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向HER2之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表71中： [表71]
Fv區(抗HER2) VH：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 275) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 287)
CDR H1：GFNIKDTY (SEQ ID NO.: 276) CDR L1：QDVNTA (SEQ ID NO.: 288)
CDR H2：IYPTNGYT (SEQ ID NO.: 277) CDR L2：SAS (SEQ ID NO.: 289)
CDR H3：SRWGGDGFYAMDY (SEQ ID NO.: 278) CDR L3：QQHYTTPPT (SEQ ID NO.: 290)
Fab區(抗TNF) VH：EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYAMHWVRQAPGKGLEWVSAITWNSGHIDYADSVEGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVSYLSTASSLDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 279) VL： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQRYNRAPYTFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO.: 283)
CDR H1：GFTFDDYA (SEQ ID NO.: 280) CDR L1：QGIRNY (SEQ ID NO.: 284)
CDR H2：ITWNSGHI (SEQ ID NO.: 281) CDR L2：AAS (SEQ ID NO.: 285)
CDR H3：AKVSYLSTASSLDY (SEQ ID NO.: 282) CDR L3：QRYNRAPYT (SEQ ID NO.: 286)
實例 21 . 68 . 製備 ACE - 26r
ACE-26r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-26r-VH及ACE-26r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-26r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -26r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 476 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA* ACE -26r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 477 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK* ACE -26r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 478 ) QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表72中： [表72]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fab區(抗CD3) VH：EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 294) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 298)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 295) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 299)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 296) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 300)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 297) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 301)
實例 21 . 69 . 製備 ACE - 27r
ACE-27r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-27r-VH及ACE-27r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-27r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -27r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 479 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGPggggs QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -27r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 480 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL ACE -27r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 304 ) QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表73中： [表73]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 313)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CD TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 314) R L1:
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 315)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 316)
Fab區(抗CD3) VH：EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 305) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 309)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 306) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 310)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 307) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 311)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 308) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 312)
實例 21 . 70 . 製備 ACE - 28r
ACE-28r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-28r-VH及ACE-28r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-28r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -28r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 481 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -28r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 482 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -28r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 419 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表74中： [表74]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 71 . 製備 ACE - 29r
ACE-29r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-29r-VH及ACE-29r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-29r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -29r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 483 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGP]ggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -29r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 484 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPPCPAPELLGGP]ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -29r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 478 ) QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表75中： [表75]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fab區(抗CD3) VH： EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 294) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 298)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 295) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 299)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 296) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 300)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 297) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 301)
實例 21 . 72 . 製備 ACE - 30r
ACE-30r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-30r-VH及ACE-30r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-30r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -30r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 485 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -30r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 486 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -30r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 487 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表76中： [表76]
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
Fab區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 333)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
實例 21 . 73 . 製備 ACE - 31r
ACE-31r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-31r-VH及ACE-31r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-31r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -31r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 488 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -31r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 489 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -31r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 487 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表77中： [表77]
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
Fab區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR (SEQ ID NO.: 333)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
實例 21 . 74 . 製備 ACE - 32r
ACE-32r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-32r-VH及ACE-32r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-32r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -32r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 490 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA *ACE -32r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 491 ) EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK *ACE -32r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 478 ) QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表78中： [表78]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL：DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
 Fab區(抗CD3) VH：EVKLLESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTYAMNWVRQAPGKGLEWVARIRSKYNNYATYYADSVKDRFTISRDDSQSILYLQMNNLKTEDTAMYYCVRHGNFGNSYVSWFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 294) VL： QAVVTQESALTTSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYANWVQEKPDHLFTGLIGGTNKRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCALWYSNLWVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 298)
CDR H1：GFTFNTYA (SEQ ID NO.: 295) CDR L1：TGAVTTSNY (SEQ ID NO.: 299)
CDR H2：IRSKYNNYAT (SEQ ID NO.: 296) CDR L2：GTN (SEQ ID NO.: 300)
CDR H3：VRHGNFGNSYVSWFAY (SEQ ID NO.: 297) CDR L3：ALWYSNLWV (SEQ ID NO.: 301)
實例 21 . 75 . 製備 ACE - 33r
ACE-33r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-33r-VH及ACE-33r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-33r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -33r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 492 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsggggsEVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS ACE -33r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 493 ) QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR ACE -33r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 487 ) QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR [TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向PD-L1之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD3之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表79中： [表79]
Fv區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 325) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 337)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 326) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 338)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 327) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 339)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFDV (SEQ ID NO.: 328) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 340)
Fab區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 329) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR(SEQ ID NO.: 333)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 330) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 334
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 331) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 335)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 332) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 336)
實例 21 . 76 . 製備 ACE - 34r
ACE-34r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-34r-VH及ACE-34r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-34r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -34r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 494 ) EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRGLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -34r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 495 ) EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRGLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -34r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 496 ) DIQMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPGTKLEIK [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表80中： [表80]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR(SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLVESGGGLVQPGKSLKLSCEASGFTFSGYGMHWVRQAPGRGLESVAYITSSSINIKYADAVKGRFTVSRDNAKNLLFLQMNILKSEDTAMYYCARFDWDKNYWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 348) VL：DIQMTQSPSSLPASLGDRVTINCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTNKLADGVPSRFSGSGSGRDSSFTISSLESEDIGSYYCQQYYNYPWTFGPGTKLEIK (SEQ ID NO.: 352)
CDR H1：GYGMH (SEQ ID NO.: 349) CDR L1：QASQDISNYLN (SEQ ID NO.: 353)
CDR H2：YITSSSINIKYADAVKG (SEQ ID NO.: 350) CDR L2：YTNKLAD(SEQ ID NO.: 354)
CDR H3：FDWDKN (SEQ ID NO.: 351) CDR L3：QQYYNYPWT (SEQ ID NO.: 355)
實例 21 . 77 . 製備 ACE - 35r
ACE-35r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-35r-VH及ACE-35r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-35r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -35r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 497 ) QVKLQQSGSELGKPGASVKLSCKTSGYIFTDHYISWVKQKPGESLQWIGNVYGGNGGTSYNQKFQGKATLTVDKISSTAYMELSSLTSEDSAIYYCARRPVATGHAMDYWGQGIQVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -35r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 498 ) QVKLQQSGSELGKPGASVKLSCKTSGYIFTDHYISWVKQKPGESLQWIGNVYGGNGGTSYNQKFQGKATLTVDKISSTAYMELSSLTSEDSAIYYCARRPVATGHAMDYWGQGIQVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR ACE -35r -LC 胺基酸序列 )(SEQ ID NO .: 499 ) DIVLTQTPATLSLIPGERVTMTCKTSQNIGTILHWYHQKPKEAPRALIKYASQSIPGIPSRFSGSGSETDFTLSINNLEPDDIGIYYCQQSRSWPVTFGPGTKLEIK [SVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表81中： [表81]
Fv區(抗PD-L1) VH： QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL：QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVLR(SEQ ID NO.: 170)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CD3) VH：QVKLQQSGSELGKPGASVKLSCKTSGYIFTDHYISWVKQKPGESLQWIGNVYGGNGGTSYNQKFQGKATLTVDKISSTAYMELSSLTSEDSAIYYCARRPVATGHAMDYWGQGIQVTVSS (SEQ ID NO.: 358) VL： DIVLTQTPATLSLIPGERVTMTCKTSQNIGTILHWYHQKPKEAPRALIKYASQSIPGIPSRFSGSGSETDFTLSINNLEPDDIGIYYCQQSRSWPVTFGPGTKLEIK (SEQ ID NO.: 362)
CDR H1：DHYIS (SEQ ID NO.: 359) CDR L1：KTSQNIGTILH (SEQ ID NO.: 363)
CDR H2：NVYGGNGGTSYNQKFQG (SEQ ID NO.: 360) CDR L2：YASQSIP (SEQ ID NO.: 364)
CDR H3：RPVATGHAMDY (SEQ ID NO.: 361) CDR L3: QQSRSWPVT (SEQ ID NO.: 365)
實例 21 . 78 . 製備 ACE - 36r
ACE-36r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-36r-VH及ACE-36r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-36r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -36r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 500 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS ACE -36r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 501 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLG QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL ACE -36r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 502 ) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CTLA-4之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向PD-L1之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表82中： [表82]
Fv區(抗PD-L1) VH：QMQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGRIIPILGIANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAKPRDGYNLVAFDIWGQGTMVTVSS (SEQ ID NO.: 158) VL： QLVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGAAPKLLIYGDINRPSGVPDRFSGSKSGISASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGGVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO.: 376)
CDR H1：GGTFSSYA (SEQ ID NO.: 159) CDR L1：SSNIGAGYD (SEQ ID NO.: 171)
CDR H2：IIPILGIA (SEQ ID NO.: 160) CDR L2：GDI (SEQ ID NO.: 172)
CDR H3：AKPRDGYNLVAFDI (SEQ ID NO.: 161) CDR L3：QSYDSSLSGGV (SEQ ID NO.: 173)
Fab區(抗CTLA4) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 368) VL： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 372)
CDR H1：GFTFSSYT (SEQ ID NO.: 369) CDR L1：QSVGSSY (SEQ ID NO.: 373)
CDR H2：ISYDGNNK (SEQ ID NO.: 370) CDR L2：GAF (SEQ ID NO.: 374)
CDR H3：ARTGWLGPFDY (SEQ ID NO.: 371) CDR L3：QQYGSSPWT (SEQ ID NO.: 375)
實例 21 . 79 . 製備 ACE - 37r
ACE-37r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-37r-VH及ACE-37r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-37r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -37r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 503 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA ACE -37r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 504 ) QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLG QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK ACE -37r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 502 ) EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK [RSVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CTLA-4之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向CD20之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表83中： [表83]
Fv區(抗CD20) VH：QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSA (SEQ ID NO.: 222) VL： QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.: 226)
CDR H1：GYTFTSYN (SEQ ID NO.: 223) CDR L1：SSVSY (SEQ ID NO.: 227)
CDR H2：IYPGNGDT (SEQ ID NO.: 224) CDR L2：ATS (SEQ ID NO.: 228)
CDR H3：ARSTYYGGDWYFNV (SEQ ID NO.: 225) CDR L3：QQWTSNPPT (SEQ ID NO.: 229)
Fab區(抗CTLA-4) VH：QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYTMHWVRQAPGKGLEWVTFISYDGNNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCARTGWLGPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO.: 368) VL：EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVGSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGAFSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO.: 372)
CDR H1：GFTFSSYT (SEQ ID NO.: 369) CDR L1：QSVGSSY (SEQ ID NO.: 373)
CDR H2：ISYDGNNK (SEQ ID NO.: 370) CDR L2 GAF (SEQ ID NO.: 374)
CDR H3：ARTGWLGPFDY (SEQ ID NO.: 371) CDR L3：QQYGSSPWT (SEQ ID NO.: 375)
實例 21 . 80 . 製備 ACE - 38r
ACE-38r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-38r-VH及ACE-38r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-38r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -38r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 505 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -38r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 506 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK ACE -38r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 419 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表84中： [表84]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 81 . 製備 ACE - 39r
ACE-39r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-39r-VH及ACE-39r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-39r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -39r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 507 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA ACE -39r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 508 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -39r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 419 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表85中： [表85]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fab區(抗CD3) VH：EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL：DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
實例 21 . 82 . 製備 ACE - 40r
ACE-40r包含二個不同重鏈類鏈(ACE-40r-VH及ACE-40r-VL)及二個相同輕鏈(ACE-40r-LC)。此等三種類型之多肽之胺基酸序列如下：ACE -40r -VH 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 509 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsQVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -40r -VL 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 510 ) EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS [ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC]DKTHTCPPCPPCPAPELLGGP ggggsDILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK GQPREPQVYTSPPSRDELTKNQVSLRCHVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTKPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKACE -40r -LC 胺基酸序列 (SEQ ID NO .: 419 ) DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR [RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC]
靶向CD3之第一抗原結合區域二價Fab區及靶向EGFR之第二抗原結合區域單價Fv區之VH及VL胺基酸序列及其中之CDR序列列於下表86中： [表86]
Fv區(抗EGFR) VH：QVQLKQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGNTDYNTPFTSRLSINKDNSKSQVFFKMNSLQSNDTAIYYCARALTYYDYEFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.: 233) VL： DILLTQSPVILSVSPGERVSFSCRASQSIGTNIHWYQQRTNGSPRLLIKYASESISGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQNNNWPTTFGAGTKLELK (SEQ ID NO.: 237)
CDR H1：GFSLTNYG (SEQ ID NO.: 234) CDR L1：QSIGTN (SEQ ID NO.: 238)
CDR H2：IWSGGNT (SEQ ID NO.: 235) CDR L2：YAS (SEQ ID NO.: 239)
CDR H3：ARALTYYDYEFAY (SEQ ID NO.: 236) CDR L3：QQNNNWPTT (SEQ ID NO.: 240)
Fab區(抗CD3) VH： EVQLQQSGPELVKPGPSMKISCKASGYSFTGYTMNWVKQSHGKNLEWMGLINPYKGVSTYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTTLTVFS (SEQ ID NO.: 215) VL： DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDIRNYLNWYQQKPDGTVKLLIYYTSRLHSGVPSKFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPWTFAGGTKLEIKR (SEQ ID NO.: 216)
CDR H1：GYSFTGYT (SEQ ID NO.: 177) CDR L1：QDIRNY (SEQ ID NO.: 181)
CDR H2：INPYKGVS (SEQ ID NO.: 178) CDR L2：YTS (SEQ ID NO.: 182)
CDR H3：ARSGYYGDSDWYFD (SEQ ID NO.: 211) CDR L3：QQGNTLPWT (SEQ ID NO.: 207)
根據前述內容，應瞭解，儘管本文中已描述特定實施例用於說明之目的，但在不偏離本文所提供之精神及範疇的情況下可進行各種修改。上文所提及之所有參考文獻均以全文引用之方式併入本文中。
(無)
圖1為示出抗CD3 UCHT1、抗PD-L1度伐利尤單抗(durvalumab)及抗CTLA-4伊匹單抗(ipilimumab)之可變區域之「臼包杵(Knob-in-Hole)」結構的圖式。此處，CDR環表示為「VH CDR3」、「VL CDR1」、「VL CDR2」及「VL CDR3」。
圖2示出UCHT1之可變區域片段之間相互作用之近距視圖。具體言之，VH-VL特定相互作用中所涉及之結構顯示於右側，且示出由靜電相互作用(頂部)、疏水性相互作用及杵-臼相互作用(底部)形成之可變區域片段。
圖3a為ALiCE之結構之示意圖。
圖3b、圖3c、圖3d、圖3e及圖3f分別示出指示用於PD-L1及CD3結合之可變區域的ACE-05、ACE-31、BiTE-05、YBL-007及UCHT1之示意圖。
圖3g為ACE-11及ACE-19之示意圖。
圖3h為ACE-28之示意圖。
圖4示出具有活性之抗PD-L1抗體(YBL-007)，其中其PD-L1/PD-1信號阻斷能力類似於阿維單抗(avelumab)之信號阻斷能力。
圖5a示出藉由SDS-PAGE及西方墨點法確認有無ACE-HC-VH、ACE-HC-VL及ACE-LC之表現。
圖5b為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE確認ACE-18之圖式。
圖5c及圖5d為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE確認ACE-11及ACE-19之圖式。
圖5e為在還原及非還原條件下藉由毛細電泳法(CE)確認ACE-11及ACE-19之圖式。
圖5f為藉由SEC-HPLC分析ACE-11及ACE-19之結果。
圖5g為藉由SEC-HPLC分析ACE-19之結果。
圖5h為藉由原態PAGE確認ACE-19部分之圖式。
圖5i為在還原及非還原條件下藉由CE確認圖5g中獲得之ACE-19部分之圖式。
圖6為能夠專一性結合於PD-L1及CD3之多專一性融合蛋白之示意圖，且為經由毛細電泳分析及尺寸排阻層析確認ACE-LC、ACE-HC-VH及ACE-HC-VL之圖式。
圖7a為經由毛細電泳分析確認ACE-05之ACE-LC、ACE-HC-VH及ACE-HC-VL之圖式。作為該分析之結果，經確認ACE-LC、ACE-HC-VH及ACE-HC-VL以2:1:1之比率存在。
圖7b為藉由SEC-HPLC分析ACE-10及ACE-18之結果。
圖7c為在還原及非還原條件下藉由CE確認ACE-11及ACE-19之結果。
圖7d為在還原及非還原條件下藉由CE確認ACE-11之結果。
圖7e為在還原及非還原條件下藉由CE確認ACE-19之結果。
圖7f為藉由SEC-HPLC分析ACE-19之結果。
圖7g為使用SEC-FPLC將ACE-19純化成複合物及純化ACE-19之後藉由SEC-HPL分析之結果。
圖7h為根據SDS之存在及不存在情況及加熱條件藉由原態PAGE確認ACE-19及複合物之圖式。
圖8為使用LC-ESI/TOF進行的尺寸排阻層析及質譜分析(MS)之結果。因此，經確認ACE-05為均質異四聚體。
圖9為ACE-00之示意圖，且為經由毛細電泳分析及尺寸排阻層析確認ACE-LC、ACE-HC-VH及ACE-HC-VL之圖式。
圖10為在不同條件下使用陽離子交換層析(CEX)分析ACE-05之結果。
圖11a為確認ACE-05之熱穩定性之圖式。
圖11b為確認ACE-11及ACE-19之熱穩定性之圖式。
圖12為經由CEX-HPLC分析確認ACE-05之穩定性之圖式。
圖13為ACE-05之免疫突觸橋之示意圖。
圖14a為確認ACE-05及ACE-31之結合能力之圖式。
圖14b為確認ACE-19之結合能力之圖式。
圖14c為確認ACE-11及ACE-19之結合能力之圖式。
圖15a為確認ACE-05及ACE-31之結合能力之圖式。
圖15b為確認ACE-19結合於EGFR之能力之圖式。
圖15c為確認ACE-19結合於CD3之能力之圖式。
圖16a為確認ACE-05同時結合於PD-L1及CD3之圖式。
圖16b及圖16c為確認ACE-19同時結合於EGFR及CD3之圖式。
圖17為示出ACE-05及ACE-31結合於Jurkat T細胞之能力之圖式。
圖18a為示出ACE-05及ACE-31結合於Karpas-299細胞、Jurkat T細胞及Raji細胞之能力之圖式。
圖18b為示出ACE-18結合於Raji細胞之能力之圖式。
圖18c為示出ACE-18結合於CD20+ Raji細胞或CD20R- Raji細胞之能力之圖式。
圖18d為示出細胞中CD20之表現量之圖式，該表現量係藉由使用各細胞中之抗CD20抗體之細胞結合能力表現。
圖18e為確認ACE-18於Karpass-299細胞上之殺死能力之圖式。
圖18f為確認ACE-18於Raji細胞上之殺死能力之圖式。
圖18g為確認ACE-18於Toledo細胞及Jeko-1細胞上之殺死能力之圖式。
圖18h為確認ACE-19於SW48細胞、HCT116細胞及HT29細胞上之殺死能力及經由流式細胞量測術確認腫瘤中所存在之EGFR之表現量的圖式。
圖19為確認引入PD-L1表現載體之HEK細胞之圖式。
圖20為藉由量測NFAT-螢光素酶報導體活性評估ACE-05及ACE-31之Jurkat T細胞活化之圖式。
圖21為藉由量測NFAT-螢光素酶報導體活性比較ACE-05及ACE-31以及其他物質之活性之圖式。
圖22為比較ACE-05、ACE-31及BiTE-05於PD-L1+ 腫瘤細胞(HCC827)上之細胞溶解能力之圖式。
圖23為比較ACE-05、ACE-31及BiTE-05於PD-L1+ 腫瘤細胞(MDA-MB-231)上之細胞溶解能力之圖式。
圖24為經由流式細胞儀確認HCC827及MDA-MB-231中之PD-L1表現之圖式。
圖25a為量測ACE-05之抗癌活性之圖式。
圖25b為量測同時投與ACE-11及PBMC之後殺死腫瘤細胞之能力之圖式。
圖26a為確認ACE-05是否具有專一性靶向活化T細胞之能力之圖式。
圖26b為確認ACE-18是否具有專一性靶向活化T細胞之能力之圖式。
圖27為確認ACE-05、ACE-31及BiTE-05是否具有活化T細胞之能力之圖式。
圖28為確認ACE-05、ACE-31及BiTE-05對CD8+ T細胞中顆粒酶B之釋放的影響之圖式。
圖29為確認ACE-05是否具有專一性靶向活化T細胞之能力之圖式。
圖30為確認ACE-05、ACE-31及BiTE-05是否具有專一性靶向活化T細胞之能力之圖式。
圖31為確認ACE-05、ACE-31及BiTE-05對T細胞聚集及活性的影響之圖式。
圖32為確認ACE-05、ACE-31及BiTE-05對T細胞刺激的影響之圖式。
圖33為確認在用ACE-05、ACE-31及BiTE-05處理之後自PBMC分泌之細胞介素的圖式。
圖34為量測ACE-05及其變異體、ACE-47 (ACE-05之K55Q變異體)、ACE-49 (ACE-05之D104N變異體)及ACE-56 (K55Q, ACE-05之D104N變異體)之結合親和力的圖式。
圖35為確認ACE-05及其變異體之脫靶Jurkat T細胞活化之圖式。
圖36為確認ACE-05及其變異體之PD-L1 HCC827癌細胞殺死能力之圖式。
圖37為確認ACE-05、ACE-31及BiTE-05在CD4+ 及CD8+ T細胞中分泌脫靶細胞介素之能力的圖式。
圖38為藉由SEC-HPLC分析BiTE-05之結果。
圖39為確認當不存在癌細胞時，根據本發明實例之融合蛋白活化脫靶T細胞之程度之圖式。
圖40為確認根據本發明實例之融合蛋白是否非專一性殺死癌細胞之圖式。
圖41為確認小鼠中之ACE-05、YBL-007及BiTE-05之癌細胞殺死作用的圖式。
圖42為示出在投與ACE-05、YBL-007及BiTE-05之後小鼠之體重變化的圖式。
圖43為對ACE-05及BiTE-05之藥物動力學分析之結果。
圖44為根據ACE-05之濃度確認抗癌效果之圖式。
圖45為確認在不患有癌症之小鼠中由ACE-05分泌細胞介素之圖式。
圖46為確認在不患有癌症之小鼠中因ACE-05所致之體重變化的圖式。
圖47為確認ACE-05之抗癌效果之圖式。
圖48為確認在投與ACE-05、YBL-007及UCHT1之後小鼠之體重變化的圖式
圖49為確認在投與ACE-05、YBL-007及UCHT1之後腫瘤大小變化之圖式。
圖50為確認在投與ACE-05、YBL-007及UCHT1之後獲得的腫瘤中所存在之CD45+ 淋巴球之圖式。
圖51為確認在投與ACE-05、YBL-007及UCHT1之後CD45+ 淋巴球之數目及CD3+ T細胞之百分比的圖式。
圖52為確認在投與ACE-05、YBL-007及UCHT1之後CD4+ 及CD8+ T細胞之百分比的圖式。
圖53為在投與ACE-05、YBL-007及UCHT1之後經由流式細胞量測術確認腫瘤中所存在之CD4+ 及CD8+ T細胞之百分比的圖式。
圖54為經由流式細胞量測術確認腫瘤中所存在之EGFR及PD-L1之表現量的圖式。
圖55為確認ACE-19對SW48、HT29及HCT116細胞之影響的圖式。
圖56及圖57為對ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL中可呈現於MHC I類分子上之肽的分析結果，以便確認ACE-05-HC-VH及ACE-05-HC-VL之免疫原性。
圖58及圖59為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE確認ACE-02及ACE-03之圖式。
圖60為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE(左側)及CE(右側)確認ACE-05及ACE-16之圖式。
圖61至圖63為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE確認ACE-06、ACE-10及ACE-11之圖式。
圖64為在還原及非還原條件下藉由西方墨點法(頂部圖及中間圖)及SDS-PAGE(底部圖)確認ACE-15之圖式。此處，色帶1為待裝載之ACE-05培養物之總上清液，色帶2為待裝載之ACE-15培養物之總上清液，且色帶3為待裝載之ACE-05之經純化蛋白質。另外，頂部圖示出使用抗CH1抗體之西方墨點影像，且中間圖示出使用抗κ抗體之西方墨點影像。
圖65及圖66為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE及西方墨點法確認ACE-20及ACE-21之圖式。
圖67為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE確認ACE-23之圖式。
圖68示出在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE及CE且藉由SEC-HPLC分析ACE-25之結果。
圖69為在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE及西方墨點法確認ACE-26之ACE-VH-LC、ACE-VL-LC及ACE-VH-VL-LC之圖式。
圖70示出在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE及CE分析ACE-26之結果。
圖71示出在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE、西方墨點法及CE分析ACE-28之結果。
圖72示出在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE及西方墨點法分析包含CH3區之ACE-28的結果。
圖73示出在還原及非還原條件下藉由CE分析包含CH3區之ACE-28的結果。
圖74及圖75示出在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE、西方墨點法及CE分析ACE-30及ACE-32之結果。
圖76示出在還原及非還原條件下藉由SDS-PAGE及CE分析ACE-33之結果。
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Claims (29)

  1. 一種多專一性融合蛋白，其中一抗體之一Fc區經一抗體之一可變區取代。
  2. 如請求項1之多專一性融合蛋白，其中該融合蛋白包含以下結構式(I)及(II)： N'-A-L1-X-C' (I)；及 N'-B-L1-Y-C' (II) 其中， N'為該融合蛋白之N端， C'為該融合蛋白之C端， A及B中之每一者專一性結合於一第一抗原， L1為包含至少一個Cys之一肽連接子， X為一抗體重鏈可變(VH)區或一抗體輕鏈可變(VL)區， Y為一抗體輕鏈可變(VL)區或一抗體重鏈可變(VH)區，以及 X及Y形成專一性結合於一第二抗原之一抗體可變區。
  3. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中A及B中之每一者為一抗體Fab區，且由以下各者構成： (i)包含一抗體重鏈可變(VH)區及一抗體CH1區之一第一部分；以及 (ii)包含一抗體輕鏈可變(VL)區及一抗體輕鏈恆定(CL)區之一第二部分。
  4. 如請求項3之多專一性融合蛋白，其中該結構式(I)包括以下結構式(I')及(I'')： N'-A'-L1-X-C' (I')；及 N'-A''-C' (I'') 其中， A'為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區，或為一抗體之一輕鏈區；以及 A''為一抗體之一輕鏈區，或為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區， 其中，A'及A''結合形成一抗體之一可變區，其中該可變區專一性結合於一第一抗原；以及 N'、L1、X及C'係如請求項2中所定義。
  5. 如請求項3之多專一性融合蛋白，其中該結構式(II)包括以下結構式(II')及(II'')： N'-B'-L1-Y-C' (II')；及 N'-B''-C' (II'') 其中，在以上結構式(II')及(II'')中， B'為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區，或為一抗體之一輕鏈區；以及 B''為一抗體之一輕鏈區，或為一抗體之一重鏈區且包含一可變區及一CH1區， 其中，B'及B''結合形成一抗體之一可變區，其中該可變區專一性結合於一第一抗原；以及 N'、L1、Y及C'係如請求項2中所定義。
  6. 如請求項1之多專一性融合蛋白，其中該融合蛋白包括以下結構式(III)及(IV)： N'-X-L2-A-C' (III)；及 N'-Y-L2-B-C' (IV) 其中， N'為該融合蛋白之N端， C'為該融合蛋白之C端， A及B中之每一者專一性結合於一第一抗原， L2為包含至少一個Cys之一肽連接子， X為一抗體重鏈可變(VH)區或一抗體輕鏈可變(VL)區， Y為一抗體輕鏈可變(VL)區或一抗體重鏈可變(VH)區，以及 X及Y形成專一性結合於一第二抗原之一抗體可變區。
  7. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中L1包含衍生自一免疫球蛋白之一鉸鏈區。
  8. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中L1包含2或3個Cys。
  9. 如請求項7之多專一性融合蛋白，其中L1具有以下結構式(V)： (L1')n-鉸鏈-(L1'')m (V) 其中，該L1'及L1''中之每一者為由1至15個胺基酸構成之一連接子， n及m為整數0或1，以及 鉸鏈為衍生自一免疫球蛋白之一鉸鏈區。
  10. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中該第一抗原及該第二抗原分別為選自由以下組成之群的任一者：PD-L1、EGFR、BCMA、CD22、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD52、CD56、CD123、cMET、DLL3、GD2、連結蛋白-4、RANKL、SLAMF7、TROP2、密連蛋白18.2、TNFR、TNF、CD3、HER2、CD20、CD19、CTLA-4、VEGFR、VEGF、NCAM1、ICAM-1、ICAM-2、CEACAM6、癌胚抗原(CEA)、CA-125、α胎蛋白(AFP)、MUC-1、上皮腫瘤抗原(ETA)、黑色素瘤相關抗原(MAGE)、未成熟層黏連蛋白受體、TAG-72、HPV E6/E7、BING-4、鈣活化氯通道2、細胞週期蛋白-B1、9D7、Ep-CAM、EphA3、間皮素、SAP-1、存活素及病毒衍生之抗原。
  11. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中該第一抗原為一癌抗原。
  12. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中該第二抗原為表現於一免疫細胞之表面上之一蛋白質。
  13. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中該等結構式中之A及B識別相同抗原，或識別不同抗原。
  14. 如請求項13之多專一性融合蛋白，其中A或B包含選自於由以下所組成之群的任一可變區：PD-L1 ： 1) 一VH區，其包含SEQ ID NO.: 5 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 6 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 7 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 9 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 10 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 11 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 2) 一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 171 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 172 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 173 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 3)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 314 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 315 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 316 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 4)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列；HER2 ： 5)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 118 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 119 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 120 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 121 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 122 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 123 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 6)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD19 ： 7)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 140 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 141 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 142 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 152 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 153 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 154 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 8)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 62 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 63 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 64 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 66 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 67 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 68 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD20 ： 9)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 223 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 224 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 225 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 227 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 228 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 229 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 10)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 436 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 437 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 438 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 441 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 442 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 443 (VL-CDR3)之胺基酸序列；EGFR ： 11)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 12)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 245 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 246 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 247 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 249 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 250 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 251 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 13)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 256 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 257 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 258 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 260 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 261 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 262 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 14)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD3 ： 15)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 326 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 327 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 328 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 338 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 339 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 340 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 16)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 17)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 18)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 396 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 397 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 398 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 402 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 403 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 404 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 19)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 410 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 20)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 150 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 21)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 70 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 71 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 72 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 74 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 75 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 76 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 22)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 84 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 23)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 295 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 296 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 297 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 299 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 300 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 301 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 24)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 87 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 25)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 26)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 183 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 27)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 187 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 188 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 189 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 191 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 192 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 193 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 28)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 29)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 211 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 30)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 306 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 307 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 308 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 310 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 311 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 312 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 31)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 349 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 350 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 351 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 353 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 354 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 355 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 32)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 359 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 360 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 361 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 363 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 364 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 365 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 33)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 197 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 198 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 199 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 201 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 202 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 203 (VL-CDR3)之胺基酸序列；TNF ： 34)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 124 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 125 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 126 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 127 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 128 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 129 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 35)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 280 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 281 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 282 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 284 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 285 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 286 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 36)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；以及CTLA-4 ： 37)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 369 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 370 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 371 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 373 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 374 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 375 (VL-CDR3)之胺基酸序列。
  15. 如請求項14之多專一性融合蛋白，其中A或B包含選自於由以下所組成之群的任一可變區：PD-L1 ： 1)SEQ ID NO.: 4之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 8之一輕鏈可變(VL)區； 2)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 170之一輕鏈可變(VL)區； 3)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 313之一輕鏈可變(VL)區； 4)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 333之一輕鏈可變(VL)區； 5)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區；HER2 ： 6)SEQ ID NO.: 51之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 52之一輕鏈可變(VL)區； 7) SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；CD19 ： 8) SEQ ID NO.: 139之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 151之一輕鏈可變(VL)區； 9) SEQ ID NO.: 61之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 65之一輕鏈可變(VL)區；CD20 ： 10) SEQ ID NO.: 222之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 226之一輕鏈可變(VL)區； 11) SEQ ID NO.: 435之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 440之一輕鏈可變(VL)區；EGFR ： 12) SEQ ID NO.: 233之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 237之一輕鏈可變(VL)區； 13) SEQ ID NO.: 244之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 248之一輕鏈可變(VL)區； 14)SEQ ID NO.: 255之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 259之一輕鏈可變(VL)區；CD3 ： 15)SEQ ID NO.: 325之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 337之一輕鏈可變(VL)區； 16)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區； 17)SEQ ID NO.: 162之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 166之一輕鏈可變(VL)區； 18)SEQ ID NO.: 395之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 401之一輕鏈可變(VL)區； 19)SEQ ID NO.: 406之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 409之一輕鏈可變(VL)區； 20)SEQ ID NO.: 143之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 147之一輕鏈可變(VL)區； 21) 2)SEQ ID NO.: 69之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 73之一輕鏈可變(VL)區； 22)SEQ ID NO.: 77之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 81之一輕鏈可變(VL)區； 23)SEQ ID NO.: 294之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 298之一輕鏈可變(VL)區； 24)SEQ ID NO.: 85之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 86之一輕鏈可變(VL)區； 25)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 180之一輕鏈可變(VL)區； 26)SEQ ID NO.: 186之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 190之一輕鏈可變(VL)區； 27)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 206之一輕鏈可變(VL)區； 28)SEQ ID NO.: 210之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 212之一輕鏈可變(VL)區； 29)SEQ ID NO.: 215之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 216之一輕鏈可變(VL)區； 30)SEQ ID NO.: 305之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 309之一輕鏈可變(VL)區； 31)SEQ ID NO.: 348之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 352之一輕鏈可變(VL)區； 32)SEQ ID NO.: 358之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 362之一輕鏈可變(VL)區； 33)SEQ ID NO.: 196之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 200之一輕鏈可變(VL)區；TNF ： 34)SEQ ID NO.: 53之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 54之一輕鏈可變(VL)區； 35)SEQ ID NO.: 279之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 283之一輕鏈可變(VL)區； 36)SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；以及CTLA-4: 37)SEQ ID NO.: 368之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 372之一輕鏈可變(VL)區。
  16. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中X或Y包含選自於由以下所組成之群的任一可變區中之一可變重鏈區或一可變輕鏈區：PD-L1 ： 1)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 5 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 6 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 7 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 9 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 10 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 11 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 2)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 171 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 172 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 173 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 3)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 159 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 160 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 161 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 314 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 315 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 316 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 4)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列；HER2 ： 5)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 118 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 119 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 120 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 121 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 122 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 123 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 6)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD19 ： 7)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 140 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 141 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 142 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 152 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 153 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 154 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 8)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 62 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 63 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 64 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 66 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 67 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 68 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD20 ： 9)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 223 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 224 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 225 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 227 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 228 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 229 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 10)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 436 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 437 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 438 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 441 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 442 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 443 (VL-CDR3)之胺基酸序列；EGFR ： 11)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 12)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 245 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 246 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 247 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 249 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 250 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 251 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 13)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 256 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 257 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 258 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 260 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 261 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 262 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 14)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 234 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 235 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 236 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 238 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 239 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 240 (VL-CDR3)之胺基酸序列；CD3 ： 15)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 326 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 327 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 328 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 338 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 339 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 340 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 16)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 330 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 331 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 332 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 334 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 335 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 336 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 17)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 18)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 396 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 397 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 398 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 402 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 403 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 404 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 19)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 410 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 20)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 144 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 145 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 146 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 148 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 149 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 150 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 21)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 70 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 71 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 72 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 74 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 75 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 76 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 22)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 84 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 23)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 295 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 296 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 297 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 299 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 300 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 301 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 24)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 78 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 79 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 80 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 82 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 83 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 87 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 25)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 163 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 271 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 165 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 167 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 168 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 169 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 26)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 183 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 27)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 187 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 188 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 189 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 191 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 192 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 193 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 28)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 179 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 29)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 177 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 178 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 211 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 181 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 182 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 207 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 30)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 306 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 307 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 308 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 310 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 311 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 312 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 31)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 349 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 350 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 351 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 353 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 354 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 355 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 32)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 359 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 360 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 361 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 363 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 364 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 365 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 33)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 197 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 198 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 199 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 201 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 202 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 203 (VL-CDR3)之胺基酸序列；TNF ： 34)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 124 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 125 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 126 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 127 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 128 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 129 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 35)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 280 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 281 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 282 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 284 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 285 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 286 (VL-CDR3)之胺基酸序列； 36)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 276 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 277 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 278 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 288 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 289 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 290 (VL-CDR3)之胺基酸序列；以及CTLA-4 ： 37)一VH區，其包含SEQ ID NO.: 369 (VH-CDR1)、SEQ ID NO.: 370 (VH-CDR2)及SEQ ID NO.: 371 (VH-CDR3)之胺基酸序列，以及一VL區，其包含SEQ ID NO.: 373 (VL-CDR1)、SEQ ID NO.: 374 (VL-CDR2)及SEQ ID NO.: 375 (VL-CDR3)之胺基酸序列。
  17. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中X或Y為選自於由以下所組成之群的任一可變區中之一可變重鏈(VH)區或一可變輕鏈(VL)區：PD-L1 ： 1)SEQ ID NO.: 4之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 8之一輕鏈可變(VL)區； 2)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 170之一輕鏈可變(VL)區； 3)SEQ ID NO.: 158之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 313之一輕鏈可變(VL)區； 4)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 333之一輕鏈可變(VL)區； 5)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區；HER2 ： 6) SEQ ID NO.: 51之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 52之一輕鏈可變(VL)區； 7) SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；CD19 ： 8) SEQ ID NO.: 139之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 151之一輕鏈可變(VL)區； 9) SEQ ID NO.: 61之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 65之一輕鏈可變(VL)區；CD20 ： 10) SEQ ID NO.: 222之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 226之一輕鏈可變(VL)區； 11) SEQ ID NO.: 435之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 440之一輕鏈可變(VL)區；EGFR ： 12)SEQ ID NO.: 233之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 237之一輕鏈可變(VL)區； 13)SEQ ID NO.: 244之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 248之一輕鏈可變(VL)區； 14)SEQ ID NO.: 255之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 259之一輕鏈可變(VL)區；CD3 ： 15)SEQ ID NO.: 325之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 337之一輕鏈可變(VL)區； 16)SEQ ID NO.: 329之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 376之一輕鏈可變(VL)區； 17)SEQ ID NO.: 162之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 166之一輕鏈可變(VL)區； 18)SEQ ID NO.: 395之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 401之一輕鏈可變(VL)區； 19)SEQ ID NO.: 406之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 409之一輕鏈可變(VL)區； 20)SEQ ID NO.: 143之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 147之一輕鏈可變(VL)區； 21) 2)SEQ ID NO.: 69之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 73之一輕鏈可變(VL)區； 22)SEQ ID NO.: 77之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 81之一輕鏈可變(VL)區； 23)SEQ ID NO.: 294之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 298之一輕鏈可變(VL)區； 24)SEQ ID NO.: 85之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 86之一輕鏈可變(VL)區； 25)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 180之一輕鏈可變(VL)區； 26)SEQ ID NO.: 186之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 190之一輕鏈可變(VL)區； 27)SEQ ID NO.: 176之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 206之一輕鏈可變(VL)區； 28)SEQ ID NO.: 210之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 212之一輕鏈可變(VL)區； 29)SEQ ID NO.: 215之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 216之一輕鏈可變(VL)區； 30)SEQ ID NO.: 305之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 309之一輕鏈可變(VL)區； 31)SEQ ID NO.: 348之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 352之一輕鏈可變(VL)區； 32)SEQ ID NO.: 358之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 362之一輕鏈可變(VL)區； 33)SEQ ID NO.: 196之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 200之一輕鏈可變(VL)區；TNF ： 34)SEQ ID NO.: 53之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 54之一輕鏈可變(VL)區； 35)SEQ ID NO.: 279之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 283之一輕鏈可變(VL)區； 36)SEQ ID NO.: 275之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 287之一輕鏈可變(VL)區；以及CTLA-4 ： 37)SEQ ID NO.: 368之一重鏈可變(VH)區及SEQ ID NO.: 372之一輕鏈可變(VL)區。
  18. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中X及Y中之至少一者進一步包含CH3。
  19. 如請求項2之多專一性融合蛋白，其中A及B專一性結合於選自由以下組成之群的該第一抗原：PD-L1、EGFR、CD20、HER2、TNF、CD19、CD3及CTLA4；以及 藉由X及Y之結合所形成之Fv專一性結合於選自由以下組成之群的該第二抗原：PD-L1、EGFR、CD20、HER2、TNF、CD19、CD3及CTLA4，以及 其中A及B以及由X及Y所形成之該Fv並不結合於相同抗原。
  20. 一種多核苷酸，其編碼結構式(I)、(I')、(I'')、(II)、(II')或(II'')。
  21. 一種載體，其包含如請求項20之多核苷酸。
  22. 一種轉型細胞，其中引入如請求項21之載體。
  23. 一種用於治療或預防癌症之醫藥組成物，其包含如請求項1至19中任一項之多專一性融合蛋白作為一活性成分。
  24. 如請求項23之醫藥組成物，其中該癌症為過度表現選自由PD-L1、EGFR及HER2組成之群的任一蛋白質之癌症。
  25. 如請求項23之醫藥組成物，其中該癌症為選自由以下組成之群的任一者：胃癌、肝癌、肺癌、大腸直腸癌、乳癌、前列腺癌、卵巢癌、胰臟癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、喉癌、急性骨髓白血病、腦腫瘤、神經母細胞瘤、視網膜母細胞瘤、頭頸癌、唾液腺癌及淋巴瘤。
  26. 如請求項23之醫藥組成物，其進一步包含一抗癌劑。
  27. 一種如請求項1至19中任一項之多專一性融合蛋白之用途，其用於治療癌症。
  28. 如請求項1至19中任一項之多專一性融合蛋白之用途，其用作一細胞接合子。
  29. 一種用於治療癌症之方法，其包含向一個體投與如請求項1至19中任一項之多專一性融合蛋白。
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