JP2017537626A5

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Publication number: JP2017537626A5
Application number: JP2017529610A
Authority: JP
Filing date: 2015-12-03
Publication date: 2019-01-17
Anticipated expiration: 2035-12-03

Claims

（ｃ）（ｉ）ポリヌクレオチド中の標的配列とハイブリダイズ可能なガイド配列、（ｉｉ）ステム配列を含むｃｒＲＮＡセグメントと、
（ｄ）ステム配列と部分的または完全に相補的であるヌクレオチド配列を含むｔｒａｃｒＲＮＡセグメントと
を含む合成ガイドＲＮＡであって、
１つまたは複数の修飾を含み、ｇＲＮＡ機能性を有する合成ガイドＲＮＡ。
前記修飾のうち１つまたは複数が、安定性増強性修飾を含む、請求項１に記載の合成ガイドＲＮＡ。
前記安定性増強性修飾が、２’−Ｏ−メチル部分、Ｚ塩基、２’−デオキシヌクレオチド、ホスホロチオエートヌクレオチド間連結、ホスホノ酢酸（ＰＡＣＥ）ヌクレオチド間連結またはチオホスホノ酢酸（チオＰＡＣＥ）ヌクレオチド間連結またはそれらの組合せを含む、請求項２に記載の合成ガイドＲＮＡ。
３’−ホスホロチオエート基を有する２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、３’−ホスホノ酢酸基を有する２’−Ｏ−メチルヌクレオチド、３’−チオホスホノ酢酸基を有する２’−Ｏ−メチルヌクレオチドおよび３’−ホスホノ酢酸基を有する２’−デオキシヌクレオチドからなる群から選択される１つまたは複数の修飾を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の合成ガイドＲＮＡ。
単一ＲＮＡ鎖または２つの別個のＲＮＡ鎖ならびに各ＲＮＡ鎖の５’末端に、各ＲＮＡ鎖の３’末端に、または各ＲＮＡ鎖の５’末端および３’末端の両方に１つまたは複数の修飾を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の合成ガイドＲＮＡ。
５’末端に、または３’末端に、または５’および３’末端の各々に、７以下の連続する修飾されたヌクレオチドを含む、請求項５に記載の合成ガイドＲＮＡ。
前記修飾のうち１つまたは複数が、塩基対形成熱安定性を変更する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の合成ガイドＲＮＡであって、前記１つまたは複数の修飾が、２−チオウラシル（２−チオＵ）、４−チオウラシル（４−チオＵ）、２−アミノアデニン、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、５−メチルウリジン、５−メチルシチジン、ロックド核酸修飾（ＬＮＡ）、２’−デオキシ、ホスホロチオエート連結、ジチオリン酸連結、ボラノホスホネート連結、ホスホノ酢酸連結、チオホスホノ酢酸連結およびアンロックド核酸修飾（ＵＬＮＡ）から独立に選択される、合成ガイドＲＮＡ。
前記修飾のうちの１つまたは複数が、特異性変更性修飾である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の合成ガイドＲＮＡ。
前記特異性変更性修飾が、ガイド配列中に位置する、請求項８に記載の合成ガイドＲＮＡ。
前記特異性変更性修飾が、２−チオウラシル、４−チオウラシル、２−アミノアデニン、２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、ＬＮＡ、ホスホロチオエート連結、ジチオリン酸連結、ボラノホスホネート連結、ホスホノ酢酸連結、チオホスホノ酢酸連結、ＵＬＮＡ、２’−デオキシ、５−メチルウリジン、５−メチルシチジンまたはそれらの組合せを含む、請求項９に記載の合成ガイドＲＮＡ。
蛍光色素または標識を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の合成ガイドＲＮＡ。
前記蛍光色素または標識が、合成ガイドＲＮＡのステム−ループと結合している、請求項１１に記載の合成ガイドＲＮＡ。
ＤＮＡ配列を修飾するためにゲノム編集する、または対象の遺伝子の発現を調節する、または標的ポリヌクレオチドを切断するための方法であって、ＤＮＡ配列、対象の遺伝子または標的ポリヌクレオチドを、ＣＲＩＳＰＲ関連タンパク質および前述の請求項のいずれか１項に記載の合成ガイドＲＮＡと接触させること、ならびにＤＮＡ配列、対象の遺伝子または標的ポリヌクレオチドを編集、調節または切断することを含む、方法。
ｉｎｖｉｔｒｏで実施され、合成ガイドＲＮＡが、ガイド配列中全体に１５以上の２’−Ｏ−メチル修飾を含む、請求項１３に記載の方法。
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の合成ガイドＲＮＡを２種以上含むＲＮＡ分子のセットまたはライブラリー。