JP2013535212A - 低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いたカテニン（カドヘリン結合型タンパク質）β１（ＣＴＮＮＢ１）遺伝子発現のＲＮＡ干渉媒介性阻害 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＣＴＮＮＢ１遺伝子の発現および／または活性のモジュレーションに対して
応答する、および／またはβ−カテニン遺伝子発現経路をモジュレートする化合物、組成
物および方法であって、形質、疾患および病状の試験、診断および処置のための化合物、
組成物および方法に関する。詳しくは、本発明は、ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現に対するＲＮ
Ａ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介し得る、または該ＲＮＡ干渉を媒介する二本鎖核酸分子、例え
ば、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄ
ｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、および低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮ
Ａ）分子などの低分子量核酸分子に関する。
【選択図】図１

Description

配列表
３７ ＣＦＲ §１．５２（ｅ）（５）に従ってＥＦＳによって提出した配列表は、引
用により本明細書に組み込まれる。ＥＦＳによって提出した配列表のテキストファイルは
、２０１１年７月２５日に作成した２，１７３，９１２バイトのサイズのファイル「Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇＳＩＲＯＮＣ２」を含む。

ベータカテニン（カドヘリン結合型タンパク質およびβ−カテニンとしても知られてい
る）は、サイトゾル内タンパク質のカテニンファミリーの構成員である。β−カテニンは
ＣＴＮＮＢ１遺伝子にコードされている。

β−カテニンは、Ｗｎｔ／Ｗｇシグナル伝達経路における枢要な役割因子であり、いく
つかの発生プロセスのメディエータである。Ｗｎｔの非存在下では、セリン／トレオニン
プロテインキナーゼであるグリコゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ−３β）がβ−カテ
ニンタンパク質を構成的にリン酸化する。Ｗｎｔが存在し、ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体（Ｆ
ｚ）の任意のファミリー構成員に結合すると、ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ（Ｄｓｈ）として
知られている細胞内シグナル伝達タンパク質が膜に漸増され、リン酸化される。ＧＳＫ−
３βは、Ｄｓｈの活性化によって阻害される。その結果、サイトゾル内のβ−カテニンレ
ベルが増大し、核にトランスロケーションされてさまざまな機能が発揮される。β−カテ
ニンは転写因子ＴＣＦおよびＬＥＦと一緒に作用し、種々のプロセスに関与している特定
の標的遺伝子を活性化させる。

β−カテニンは、増殖因子に刺激されるとリン酸化を受け、細胞接着の低減がもたらさ
れ、それにより、細胞接着、細胞同士の連絡および細胞骨格アンカーリングを媒介する多
タンパク質複合体である接着性結合装置の成分としての機能を果たす（非特許文献１）。

Ｔｈｏｍｐｓｏｎらにより、β−カテニンは、肝臓生物学の種々の局面、例えば、肝臓
の発生（胚および出生後の両方）、部分肝切除術後の肝臓再生、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ
）誘導性肝腫大、肝臓帯状分布、および肝臓癌の病因において重要な役割を果たしている
ことが示唆されている（非特許文献２）。

Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００８）により、β−カテニンは癌遺伝子としての機能を
果たすことがあり得ることがと示されている。（非特許文献３）。基底細胞癌を有する患
者では、β−カテニンレベルの増大が存在しており、関連腫瘍増殖の増大に至る。β−カ
テニン遺伝子における変異は、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、毛質性上皮腫（ＰＴＲ）、髄芽腫
（ＭＤＢ）、胚芽腫および卵巣癌の原因である。

結腸直腸癌の発生におけるβ−カテニンの役割は、腫瘍抑制因子であるＡＰＣ（大腸腺
腫性ポリポーシス）遺伝子の発現産物によって調節されることが示されている（非特許文
献４；非特許文献５）。ＡＰＣタンパク質は、通常、ＴＣＦ／ＬＥＦとともにβ−カテニ
ンに結合し、転写因子複合体を形成する。Ｍｏｒｉｎら（非特許文献６）により、ＡＰＣ
タンパク質は、結腸癌においてβ−カテニンおよびＴｃｆ−４によって媒介される転写活
性化を下方調節することが報告されている。その結果により、β−カテニンの調節はＡＰ
Ｃの腫瘍抑制効果に緊要であること、およびこの調節はＡＰＣまたはβ−カテニンのいず
れかにおける変異によって回避され得ることが示される。

β−カテニン遺伝子における変異は、β−カテニンのＮ末端の一部分の欠失をもたらす
切断、またはＧＳＫ３α／βまたはＣＫＩαによって標的化されるセリンおよびトレオニ
ン残基に影響を及ぼす点変異のいずれかである。このような変異型β−カテニンタンパク
質はリン酸化に不応性であり、したがってプロテアソーム分解が回避される。そのため、
β−カテニンが罹患細胞内に蓄積される。安定化され、核に局在するβ−カテニンは、結
腸癌のほぼすべての症例のホールマークである（非特許文献７）。Ｍｏｒｉｎらによって
、リン酸化部位を改変させるβ−カテニンの変異により、細胞はβ−カテニンのＡＰＣ媒
介性下方調節に対して非感受性となること、およびこの機構の破壊は結腸直腸腫瘍発生に
緊要であることが示された。（非特許文献８）。

また、他の研究によっても、種々のがん細胞株においてβ−カテニンの変異の検出が報
告されている（例えば、非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１：非特許文献１
２参照）さらに、β−カテニンの量は黒色腫細胞株においても異常に高いことがわかって
いる（例えば、非特許文献１３参照）。

同様に、肝細胞癌（ＨＣＣ）などの他のがんも、Ｗｎｔ／β−カテニン経路と関連して
いる。ＨＣＣは、複雑で不均質な疾患であり、世界中で毎年、６６０，０００を超える新
たな症例が計上される。数多くの報告により、Ｗｎｔシグナル伝達成分がヒトＨＣＣ患者
において活性化されていることが示されている。活性化されたＷｎｔシグナル伝達および
核内β−カテニンは、疾患の再発および予後不良と相関している（非特許文献１４）。高
い核内β−カテニン染色は、ＨＣＣ患者の１７〜６６％において記録されている（非特許
文献１５；非特許文献１６）。香港大学との共同研究において作成された約３００例のＨ
ＣＣ患者腫瘍に関するＭｅｒｃｋの内部データセットにより、ＨＣＣ患者の５０％におい
てＷｎｔシグナル伝達成分が活性化されていることが示される。外部データでは、β−カ
テニン変異の活性化がＨＣＣ患者の１３〜４０％において存在したが、Ａｘｉｎ １また
は２の変異の不活化はＨＣＣ患者の約１０％にしか存在しなかったことが示されている（
非特許文献１７）。

前臨床試験により、Ｗｎｔ／β−カテニン経路の活性化がＨＣＣの発生および維持に重
要であるという証拠が得られている。マウスにおけるＡＰＣの肝臓標的化破壊により、β
−カテニンシグナル伝達が活性化され、ＨＣＣの形成がもたらされる（非特許文献１８）
。ＧＳＫ−３βリン酸化部位がないβ−カテニン変異型の過剰発現単独では、肝細胞癌発
生に充分でないが（非特許文献１９）、腫瘍発生性変異型β−カテニンの過剰発現は、マ
ウスを、既知発癌物質であるＤＥＮ（ジエチルニトロソアミン）によって誘導されるＨＣ
Ｃに対して易罹患性にすることが示されている（非特許文献２０）。興味深いことに、マ
ウス（Ｔｒｅ−Ｍｅｔトランスジェニックマウスモデル）においてヒトＭｅｔ受容体の過
剰発現によって発生させたＨＣＣ腫瘍の９５％はβ−カテニン活性化変異を有する（非特
許文献２１）。この所見はヒト疾患に反映され、Ｗｎｔ経路が肝細胞癌発生時にＭｅｔシ
グナル伝達と協働していることが示唆される。また、高率のβ−カテニン活性化変異はＨ
ＣＣの他のトランスジェニックマウスモデルでも見られる（ＦＧＦ１９において１６％の
β−カテニン変異、ｃ−Ｍｙｃにおいて５５％、Ｈ−Ｒａｓトランスジェニックマウスに
おいて４１％）（非特許文献２２ 非特許文献２３）。

また、前臨床試験により、β−カテニンは、ＨＣＣの有効な標的であることも示されて
いる。β−カテニンｓｉＲＮＡによりヒトＨＣＣ細胞株の増殖および生存能が阻害される
（Ｚｅｎｇら ２００７）。同様に、ヒトＨＣＣ細胞株を抗Ｗｎｔ−１抗体またはＴＣＦ
４／β−カテニン拮抗薬で処理すると、アポトーシス、ｃ−Ｍｙｃ、サイクリンＤ１およ
びスルビビン発現の低減が誘導されるとともにインビボで腫瘍成長が抑制される（非特許
文献２４；非特許文献２５）。

肝細胞癌（ＨＣＣ）は、有効な治療法がない一般的な浸潤性の癌である。ＨＣＣの症例
ではＷｎｔ／β−カテニン経路が活性化されている割合が高く（約５０％）、高頻度で、
β−カテニン（すなわち、ＣＴＮＮＢ１）またはβ−カテニン破壊複合体（例えば、Ａｘ
ｉｎ１）における変異のためである。さらに、標的としてのＷｎｔ経路は努力目標であり
、現状では小分子阻害薬による薬物処置はなく、β−カテニンは、ＲＮＡｉ系治療アプロ
ーチの魅力的な標的となっていることが示されている（非特許文献２６）。

ＲＮＡ干渉（以下、本明細書において「ＲＮＡｉ」）による遺伝子発現、特にＣＴＮＮ
Ｂ１遺伝子発現の改変は、この必要性を満たすアプローチの１つである。ＲＮＡｉは、低
分子一本鎖ＲＮＡ（「ｓｓＲＮＡ」）または二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）分子によっ
て誘導される。低分子ｄｓＲＮＡ分子は、「低分子干渉核酸（「ｓｉＮＡ」）」または「
低分子干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」または「ＲＮＡｉ阻害薬」と称され、該ｓｉＮ
Ａとの配列相同性を共有するメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）の発現のサイレンシ
ングを行う。これは、一般的にＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と称され
るｓｉＮＡ含有エンドヌクレアーゼ複合体によって媒介される該ｍＲＮＡの切断によって
行われ得る。標的ＲＮＡの切断は、典型的には、ｓｉＮＡ二本鎖のガイド配列に相補的な
領域の中央部に行われる（非特許文献２７）。また、ＲＮＡ干渉は、低分子ＲＮＡ（例え
ば、マイクロＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ）媒介性遺伝子サイレンシングを伴うものであり得
、これは、おそらく、翻訳が阻害されるか、またはクロマチン構造が調節され、それによ
り標的遺伝子配列の転写が抑制されるかのいずれかである細胞機構によるものである（例
えば、非特許文献２８；非特許文献２９；非特許文献３０；および非特許文献３１参照）
。ＲＮＡｉに分野における相当な進歩にもかかわらず、依然として、ＣＴＮＮＢ１遺伝子
発現を阻害することができる薬剤、および癌などのＣＴＮＮＢ１発現と関連している疾患
を処置することができる薬剤の必要性が存在している。

Ｗｉｌｌｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．８：９５−１０２ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＭＤ．，２００７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ Ｍａｙ；４５（５）：１２９８−３０５ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ Ｐｒｅｖ．１７（８）：２１０１−８ Ｋｏｒｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７５：１７８４−１７８７ Ｍｏｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７５：１７８７−１７９０ Ｍｏｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７５：１７８７−１７９０ Ｃｌｅｖｅｒｓ，Ｈ．，２００６，Ｃｅｌｌ １２７：４６９−４８０ Ｍｏｒｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：１７８７−１７９０ Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．２１：４１０−４１３ Ｂｌａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｇｅｎｅｓ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ Ｃａｎｃｅｒ ２５：３９９−４０２ Ｓａｇａｅ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．９０：５１０−５１５ Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｃａｎｃｅｒ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ Ｐｒｅｖ．１７（８）：２１０１−８ Ｒｕｂｉｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７５：１７９０−１７９２ Ｔａｋｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ．２００８，Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｎｏｖ；９（１１）：１０１３−２４ Ｚｕｌｅｈｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１０，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．Ｊａｎ；１７６（ｌ）：４７２−８１ Ｙｕ ｅｔ ａｌ．２００９，Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ．Ｍａｙ；５０（５）：９４８−５７ Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．２００６，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｍａｙ １：１１：１９０１−１９１５ Ｃｏｌｎｏｔ ｅｔ ａｌ．２００４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｄｅｃ ７；１０１（４９）：１７２１６−２１ Ｈａｒａｄａ ｅｔ ａｌ．２００２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ａｐｒ １；６２（７）：１９７１−７． Ｎｅｊａｋ−Ｂｏｗｅｎ ｅｔ ａｌ．２０１０，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２０１０ Ｍａｙ；５１（５）：１６０３−１３ Ｔｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．２００７，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｓｅｐ １１；１０４（３７）：１４７７１−６ Ｎｉｃｈｏｌｅｓ ｅｔ ａｌ．２００２，Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．Ｊｕｎ；１６０（６）：２２９５−３０７ ｄｅ ｌａ Ｃｏｓｔｅ ｅｔ ａｌ．１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｊｕｌ ２１；９５（１５）：８８４７−５１ Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．２００９，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｅｐ ２４；８：７６ Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．２０１０，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ．Ｍａｙ １５；１２６（１０）：２４２６−３６．２０１０ Ｌｌｏｖｅｔ ｅｔ ａｌ．２００８，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ Ｏｃｔ：４８：１３１２−１３２７ Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５：１８８ Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：１８１８−１８１９； Ｖｏｌｐｅ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：１８３３−１８３７ Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：２２１５−２２１８ Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７：２２３２−２２３７

本発明は、ＣＴＮＮＢ１発現をモジュレートする新規な低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分
子を用いてＣＴＮＮＢ１遺伝子発現のモジュレーションに応答する疾患を処置する課題に
対する解決策を提供する。

本発明は、ＣＴＮＮＢ１遺伝子、特に、がんと関連しているＣＴＮＮＢ１遺伝子の発現
のモジュレーションに有用な、および低分子量核酸分子を用いたＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）
によるかかる病状の処置に有用な化合物、組成物および方法を提供する。

特に、本発明は、低分子量核酸分子、すなわち、低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子、例
えば限定されないが、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）および環状ＲＮ
Ａ分子、ならびにＣＴＮＮＢ１遺伝子および／またはＣＴＮＮＢ１遺伝子の発現および／
または活性の経路に関与している他の遺伝子の発現をモジュレートするために使用される
方法を特色とする。

一態様において、本発明は、細胞または哺乳動物においてＣＴＮＮＢ１遺伝子の発現を
阻害する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、ここで、該二本鎖ｓｉＮＡは
センス鎖とアンチセンス鎖を含むものである。アンチセンス鎖は、ＣＴＮＮＢ１遺伝子の
発現と関連しているＲＮＡの少なくとも一部分に相補的な配列を含むものである。センス
鎖は、アンチセンス鎖に相補的な配列を含むものである。種々の実施形態において、少な
くとも一方の鎖は、配列番号：１〜６３７４からなる配列の群から選択される少なくとも
１５個のヌクレオチドの配列を含むものである。一部の特定の実施形態において、アンチ
センス鎖は、表１ａに示した標的配列に対して配列相補性を有する少なくとも１５、１６
、１７、１８または１９個のヌクレオチドを含むものである。他の実施形態および／また
は同じ実施形態において、該アンチセンス鎖は、表１ｂに示したアンチセンス配列のうち
の１つの少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレオチドの配列を含むも
のである。一部の実施形態において、センス鎖は、表１ｂに示したセンス鎖配列の少なく
とも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレオチドの配列を含むものである。

本発明のこの態様の一部の特定の実施形態において、アンチセンス鎖が、本発明の標的
配列に対して配列相補性を有する表１ｃに示した修飾配列を含むものである二本鎖低分子
干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。また、一部の実施形態では、センス鎖が、表１ｃ
に示した修飾配列を含むものである。

一部の特定の実施形態において、本発明は、ｓｉＮＡがセンス鎖とアンチセンス鎖を含
むものであり；各鎖が、独立して１５〜３０ヌクレオチド長であり；該アンチセンス鎖が
：
５’−ＣＵＧＵＵＧＧＡＵＵＧＡＵＵＣＧＡＡＡ−３’（配列番号：５）；
５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９４）；
５’−ＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵＣＧＵ−３’（配列番号：１９６）；または
５’−ＣＣＡＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号：１５１）
のいずれかに相補配列を有する少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレ
オチドを含むものである、ＣＴＮＮＢ１の発現をモジュレートする二本鎖低分子干渉核酸
（ｓｉＮＡ）分子を提供する。

本発明の一部の実施形態において、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は：
５’−ＵＵＵＣＧＡＡＵＣＡＡＵＣＣＡＡＣＡＧ−３’（配列番号：４９１８）；
５’−ＡＡＧＣＡＡＣＵＧＡＡＣＵＡＧＵＣＧＵ−３’（配列番号：５１０７）；
５’−ＡＣＧＡＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣ−３’（配列番号：５１０９）；または
５’−ＡＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣＵＧＧ−３’（配列番号：５０６４）
の少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレオチドの配列を含むものであ
る。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は：
５’−ＣＵＧＵＵＧＧＡＵＵＧＡＵＵＣＧＡＡＡ−３’（配列番号：５）；
５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９４）；
５’−ＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵＣＧＵ−３’（配列番号：１９６）；または
５’−ＣＣＡＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号：１５１）
の少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレオチドの配列を含むものであ
る。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は：
５’−ＣＵＧＵＵＧＧＡＵＵＧＡＵＵＣＧＡＡＡ−３’（配列番号：５）と５’−ＵＵＵ
ＣＧＡＡＵＣＡＡＵＣＣＡＡＣＡＧ−３’（配列番号：４９１８）；または
５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９４）と５’−Ａ
ＡＧＣＡＡＣＵＧＡＡＣＵＡＧＵＣＧＵ−３’（配列番号：５１０７）；または
５’−ＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵＣＧＵ−３’（配列番号：１９６）と５’−Ａ
ＣＧＡＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣ−３’（配列番号：５１０９）；または
５’−ＣＣＡＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号：１５１）と５’−Ａ
ＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣＵＧＧ−３’（配列番号：５０６４）
のいずれかを含むものである。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は配列番号：６３７２と６３７４を含
むものである。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は配列番号：６３７０と６３６９を含
むものである。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は配列番号：２０２１と２０６８を含
むものである。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は配列番号：６３７２と６３７３を含
むものである。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は配列番号：２１４７と６３６８を含
むものである。

一部の実施形態において、本発明は、
（ａ）本発明の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
（ｂ）化合物番号１〜４６のいずれかまたはその任意の組合せを有するカチオン性脂質
化合物（ｃｏｍｐｏｎｄ）；
（ｃ）コレステロール；
（ｄ）ＤＳＰＣ；および
（ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
を含む組成物を特色とする。

一部の実施形態において、本発明は、
（ａ）本発明の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
（ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
ン−１−アミン；
（ｃ）コレステロール；
（ｄ）ＤＳＰＣ；および
（ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
を含む組成物を特色とする。

一部の実施形態において、本発明は、
（ａ）配列番号：６３７２と６３７４を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
（ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
ン−１−アミン；
（ｃ）コレステロール；
（ｄ）ＤＳＰＣ；および
（ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
を含む組成物を特色とする。

一部の実施形態において、本発明は、
（ａ）配列番号：６３７０と６３６９を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
（ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
ン−１−アミン；
（ｃ）コレステロール；
（ｄ）ＤＳＰＣ；および
（ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
を含む組成物を特色とする。

一部の実施形態において、本発明は、
（ａ）配列番号：２０２１と２０６８を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
（ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
ン−１−アミン；
（ｃ）コレステロール；
（ｄ）ＤＳＰＣ；および
（ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
を含む組成物を特色とする。

一部の実施形態において、本発明は、
（ａ）配列番号：６３７２と６３７３を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
（ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
ン−１−アミン；
（ｃ）コレステロール；
（ｄ）ＤＳＰＣ；および
（ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
を含む組成物を特色とする。

一部の実施形態において、本発明は、
（ａ）配列番号：２１４７と６３６８を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
（ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
ン−１−アミン；
（ｃ）コレステロール；
（ｄ）ＤＳＰＣ；および
（ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
を含む組成物を特色とする。

一部の実施形態において、本発明の組成物は、化合物番号１〜４６のいずれかを、以下
のモル比：
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ５６．６／３８／５．４；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ６０／３８／２；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ６７．３／２９／３．７；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ４９．３／４７／３．７；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ５０．３／４４．３／５．４；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ ４０／４８／２／
１０；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣ ４０／４８／２／１０
；および
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣ ５８／３０／２／１０
で有する任意のカチオン性脂質を含むものである。

一部の実施形態において、本発明の組成物は、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル
−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１−アミン、コレステロール、ＤＳＰＣ、お
よびＰＥＧ−ＤＭＧを、それぞれ、５０：３０：１０：２のモル比で含むものである。

一部の実施形態において、本発明の組成物は、さらに抗凍結剤を含むものである。一部
の実施形態において、抗凍結剤は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキロ
ース、ベルバスコース、マンニトール、グルコース、ラクトース、マルトース、マルトリ
オース−ヘプタオース、デキストラン、ヒドロキシエチル、デンプン、インスリン、ソル
ビトール、グリセロール、アルギニン、ヒスチジン、リシン、プロリン、ジメチルスルホ
キシドまたはその任意の組合せである。一部の実施形態では、抗凍結剤はスクロースであ
る。一部の実施形態では、抗凍結剤はトレハロースである。一部の実施形態では、抗凍結
剤はスクロースとトレハロースの組合せである。

本発明の一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡのヌクレオチドはすべて非修飾で
ある。他の実施形態では、ｓｉＮＡ分子のいずれか一方または両方の鎖の独立した１つ以
上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８
、２９または３０個）のヌクレオチド位置が修飾されている。修飾としては、核酸の糖鎖
修飾、塩基修飾、主鎖（ヌクレオチド間結合）修飾、非ヌクレオチド修飾、および／また
はその任意の組合せが挙げられる。一部の特定の場合では、プリンヌクレオチドとピリミ
ジンヌクレオチドに異なるように修飾されている。例えば、プリンヌクレオチドとピリミ
ジンヌクレオチドには、糖鎖の２’位において異なる修飾がなされ得る（すなわち、同じ
鎖または異なる鎖の糖鎖の２’位において、少なくとも１個のプリンは少なくとも１個の
ピリミジンと異なる修飾を有する）。一部の特定の場合では、プリンは、一方または両方
の鎖において非修飾であるが、一方または両方の鎖のピリミジンは修飾されている。一部
の特定の他の場合では、ピリミジンは、一方または両方の鎖において非修飾であるが、一
方または両方の鎖のプリンは修飾されている。一部の場合では、少なくとも１個の修飾ヌ
クレオチドは、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオ
チド、または２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである。一部の場合では、一方または両方
の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも５個またはそれ以上が、すべて２’−デオキ
シ−２’−フルオロまたはすべて２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドのいずれかで
ある。一部の場合では、一方または両方の鎖のプリンヌクレオチドの少なくとも５個また
はそれ以上が、すべて２’−デオキシ−２’−フルオロまたはすべて２’−Ｏ−メチルプ
リンヌクレオチドのいずれかである。一部の特定の場合では、ｓｉＮＡ分子が本明細書に
記載の１つ以上の修飾を含むものである場合、ガイド（アンチセンス）鎖の５’末端の１
、２および３位のヌクレオチドが非修飾である。

一部の特定の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、一方または両方の鎖に１、
２、３または４個のヌクレオチドの３’突出端を有する。他の実施形態では、ｓｉＮＡに
は突出端がない（すなわち、平滑端を有する）。好ましくは、ｓｉＮＡ分子は、センス鎖
とアンチセンス鎖の両方に２個のヌクレオチドの３’突出端を有するものである。突出端
は修飾されていても非修飾であってもよい。突出端の修飾ヌクレオチドの例としては、限
定されないが、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロヌク
レオチド、ロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド、または２’−デオキシヌクレオチドが
挙げられる。アンチセンス鎖の突出端ヌクレオチドは、ＣＴＮＮＢ１標的配列内のヌクレ
オチドに相補的なヌクレオチドを含むものであり得る。同様に、センス鎖の突出端は、Ｃ
ＴＮＮＢ１標的配列内に存在するヌクレオチドを含むものであり得る。一部の特定の場合
では、本発明のｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖に２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−
Ｏ−メチル）ヌクレオチドである２つの３’突出端ヌクレオチドと、センス鎖に２’−デ
オキシヌクレオチドである２つの３’突出端ヌクレオチドを有するものである。他の場合
では、本発明のｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖とセンス鎖の両方に２’−Ｏ−アルキル
（例えば、２’−Ｏ−メチル）ヌクレオチドである２つの３’突出端ヌクレオチドを有す
るものである。一部の特定の実施形態では、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドは２’−Ｏ
−メチルウリジンヌクレオチドである。また、一部の特定の場合では、突出端は、突出端
のヌクレオチド間に１つ以上のホスホロチオエート結合を含むものである。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、キャップ（本明細書では「末端キ
ャップ」とも称する）を有する。キャップは、５’末端に存在させても（５’−キャップ
）３’末端に存在させてもよく（３’−キャップ）、両末端に存在させてもよい（ｓｉＮ
Ａのセンス鎖の５’末端と３’末端など）。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖の５’末端がリン
酸化されている。リン酸基は、ホスフェート、ジホスフェート、またはトリホスフェート
であり得る。

本発明のｓｉＮＡ分子は、二本鎖である場合は、対称であっても非対称であってもよい
。このような二本鎖ｓｉＮＡの各鎖は、独立して、３〜３０個のヌクレオチドのヌクレオ
チド長の範囲であり得る。一般的に、本発明のｓｉＮＡ分子の各鎖は約１５〜３０（すな
わち、約１９、２０、２１、２２、２３または２４）ヌクレオチド長である。

二本鎖であるか、または二本鎖構造を有するものである本発明のｓｉＮＡ分子は、独立
して、約３〜約３０（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３
、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、
２７、２８、２９または３０）個の塩基対を含むものである。一般的に、本発明のｓｉＮ
Ａの二本鎖構造は、１５〜３０、より一般的には１８〜２５、なおより一般的には１９〜
２４、最も一般的には１９〜２１塩基対長である。

一部の特定の実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖を有し、式（Ａ）：

を含む二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供し、
式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖は該二本鎖核酸分子の
アンチセンス鎖であり；該アンチセンス鎖は、配列番号：４９１８、配列番号：５１０７
、配列番号：５１０９、または配列番号：５０６４の少なくとも１５、１６、１７、１８
または１９個のヌクレオチドの配列を含むものであり、該センス鎖は、該アンチセンス鎖
に対して相補性を有する配列を含むものであり；
各Ｎは、独立して非修飾もしくは化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドであり；
各Ｂは、存在する、または存在しない末端キャップであり；
（Ｎ）は、突出端ヌクレオチド（各々、独立して非修飾または化学修飾）を表し；
［Ｎ］は、リボヌクレオチドであるヌクレオチドを表し；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数であり；
Ｘ３は、１５〜３０の整数であり；
Ｘ４は、９〜３０の整数であり；
Ｘ５は、０〜６の整数であるが、Ｘ４とＸ５の和は１５〜３０であるものとする。

一実施形態において、本発明は、
（ａ）Ｎ_Ｘ４位の１個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレ
オチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである；
（ｂ）Ｎ_Ｘ４位の１個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’
−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチ
ド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである；
（ｃ）Ｎ_Ｘ３位の１個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレ
オチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである；および
（ｄ）Ｎ_Ｘ３位の１個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’
−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチ
ド、リボヌクレオチドである、
式（Ａ）の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を特色とする。

さらに、本発明は、本明細書に記載の二本鎖核酸分子を含み、薬学的に許容され得る担
体または希釈剤を含んでいてもよい組成物を提供する。

該組成物の投与は、核酸が所望の標的細胞内にインビトロまたはインビボで導入される
既知の方法によって行われ得る。

細胞、組織および生物体への本発明の核酸分子の導入に一般的に使用される手法として
は、種々の担体系、試薬およびベクターの使用が挙げられる。本発明における使用に適し
たかかる担体系の非限定的な例としては、コンジュゲート、核酸−脂質粒子、脂質ナノ粒
子（ＬＮＰ）、リポソーム、リポプレックス、ミセル、ビロソーム、ウイルス様粒子（Ｖ
ＬＰ）、核酸複合体、およびその混合物が挙げられる。

本発明の組成物は、エアロゾル剤、分散剤、液剤（例えば、注射用液剤）、クリーム剤
、軟膏、錠剤、散剤、懸濁剤などの形態であり得る。このような組成物は、任意の適当な
様式で、例えば、経口、舌下、口腔内、非経口、経鼻または経表面的に投与され得る。一
部の実施形態において、該組成物はエアロゾル化され、吸入によって送達される。

本発明の分子および組成物は、広範な治療適用用途において有用性を有する。したがっ
て、本発明の別の態様は、被検体の処置における本発明の化合物および組成物の使用に関
する。したがって、本発明は、ＣＴＮＮＢ１の作用によって、または該作用の低下によっ
て媒介される病状に苦しんでいる被検体（ヒトなど）の処置方法であって、該被検体に有
効量の本発明の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を投与することを含む方法を提供
する。一部の特定の実施形態において、該病状はがんである。

本発明のこれらおよび他の態様は、以下の詳細説明および添付の図面を参照すると明ら
かとなろう。さらに、本明細書に記載の任意の方法または組成物は、本明細書に記載の任
意の他の方法または組成物に関して行われ得ること、および異なる実施形態を組み合わせ
てもよいことが想定される。

さらに、本発明の種々の態様を説明し、より詳しく示すために本明細書全体を通して特
許、特許出願、および他の文献を挙げている。本明細書において挙げたこれらの参考文献
は各々、引用によりその全体（図面を含む）が本明細書に組み込まれる。

ＲＮＡｉに関与する標的ＲＮＡ分解の提案される非限定的な機構の図を示す。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲＰ）によって外来一本鎖ＲＮＡ（例えば、ウイルス、トランスポゾンまたは他の外因性のＲＮＡ）から生成された二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）がＤＩＣＥＲ酵素を活性化し、これによりｓｉＮＡ二本鎖が生成される。あるいはまた、合成または発現ｓｉＮＡを、直接細胞内に適切な手段によって導入してもよい。活性なｓｉＮＡ複合体が形成され、これが標的ＲＮＡを認識し、ＲＩＳＣエンドヌクレアーゼ複合体による標的ＲＮＡの分解をもたらすか、またはＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲＰ）によるさらなるＲＮＡの合成をもたらし、これによりＤＩＣＥＲが活性化され、さらなるｓｉＮＡ分子がもたらされ、それにより、ＲＮＡｉ応答が増幅され得る。 代表的なｓｉＮＡ二本鎖の一般化構造を使用した、本発明の化学修飾ｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図示した具体的な修飾は、本発明のいずれかのｓｉＮＡ分子に関して本明細書に記載した他の修飾および特徴に加えて、単独で、または図の他の修飾と組み合わせて用いることができる。図において、Ｎは、任意のヌクレオチドを表し、本明細書に記載の非ヌクレオチドであってもよい。Ｂ−Ｎ_Ｘ３−（Ｎ）_Ｘ２Ｂ−３’を有する上側の鎖は、ｓｉＮＡのセンス（またはパッセンジャー）鎖であり、Ｂ（Ｎ）_Ｘ１−Ｎ_Ｘ４−［Ｎ］_Ｘ５−５’を有する下側の鎖は、ｓｉＮＡのアンチセンス（またはガイド）鎖である。センス鎖の内部部分のヌクレオチド（または非ヌクレオチドであってもよい）をＮ_Ｘ３と表示し、アンチセンス鎖の内部部分のヌクレオチド（または非ヌクレオチドであってもよい）をＮ_Ｘ４と表示している。内部部分のヌクレオチド（または非ヌクレオチドであってもよい）は一般的には、２つの鎖間で塩基対合しているが、一部の実施形態では塩基対合していなくてもよい（例えば、ミスマッチまたはギャップを有する）。突出端領域ヌクレオチド（または非ヌクレオチドであってもよい）を括弧で表示している（Ｎ）。アンチセンス鎖の５’末端部分のヌクレオチドは［Ｎ］と表示している。末端キャップは、センス鎖の５’および／または３’末端に存在していてもよく、さらに、アンチセンス鎖の３’末端に存在していてもよい。一般的に、各鎖は独立して約１５〜約３０ヌクレオチド長の範囲であり得るが、突出端ヌクレオチドの存在に応じて種々であり得る。一部の特定の実施形態において、Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数であり；Ｘ３は、１５〜３０の整数であり；Ｘ４は、９〜３０の整数であり；Ｘ５は、０〜６の整数であるが、Ｘ４とＸ５の和は１５〜３０であるものとする。ｓｉＮＡ構築物のセンス鎖とアンチセンス鎖のヌクレオチドに対する種々の修飾を示す。（Ｎ）突出端ヌクレオチド位置は、本明細書に記載のように化学修飾されていてもよく（例えば、２’−Ｏ−メチル、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ、ＬＮＡ、ユニバーサル塩基など）、対応する標的核酸配列に由来するものまたはそうでないもののいずれであってもよい。また、図示した構築物は、本明細書に記載のホスホロチオエート結合を含むものであってもよい。例えば、ホスホロチオエート結合は、任意のＮ、（Ｎ）および／または［Ｎ］の位置間に存在し得る。かかるホスホロチオエートの組込みは、プリン「Ｒ」とピリミジン「Ｙ」の位置間に、または一般にピリミジン結合の安定化のために使用され得る。さらに、図に示していないが、図示した構築物は、センス鎖の５’末端から９番目の位置またはガイド鎖の５’末端に対して１１番目の位置（ガイド鎖の５’末端から内側に数えて１１個目のヌクレオチド位置）にリボヌクレオチドを含むものであってもよい。同様に、アンチセンス鎖は、５’末端から１４番目の位置にリボヌクレオチドを含むものであってもよく、あるいはまた、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド（例えば、２’−Ｏ−メチルプリン）がこの位置に存在しないように選択または設計してもよい。さらに、図に示していないが、アンチセンス鎖の５’末端位置は、本明細書に記載の末端リン酸基を含むものであってもよい。アンチセンス鎖は、一般的に、本発明の任意の標的核酸配列（本明細書の表１ａに示したものなど）に相補的な配列を含むものである。 図２に示した代表的なｓｉＮＡ二本鎖に適用される修飾の特定の組合せの非限定的な例を示す。代表的な構造の下側に示した表は、（Ν）_Ｘ１、（Ν）_Ｘ２、Ν_Ｘ３、Ν_Ｘ４、および／または［Ｎ］_Ｘ５ヌクレオチド（および非ヌクレオチドであってもよい）位置の具体的な組合せを示す。例えば、５個以上（例えば、５、６、７、８、９または１０個またはそれ以上）のΝ_Ｘ３と５個以上（例えば、５、６、７、８、９または１０個またはそれ以上）のΝ_Ｘ４のピリミジン「Ｙ」とプリン「Ｒ」のヌクレオチドの組合せを明示しており、これらの各々は、独立して、存在していてもよいホスホロチオエート置換に加えて特定の（Ｎ）_Ｘ１および／または（Ν）_Ｘ２、図に示した置換を有するものであってもよい。５’末端アンチセンス鎖の［Ｎ］ヌクレオチドは、一般的にはリボヌクレオチドであるが、プリン「Ｒ」ヌクレオチドであるかピリミジン「Ｙ」ヌクレオチドであるかに応じて修飾型であっても非修飾型であってもよい。 本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２と３に示した代表的な構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示した任意の構造に適用され得る。 図４Ａに示した実施例（構築物１、２および３）は、１９個の代表的な塩基対を有する；しかしながら、本発明の種々の実施形態は、本明細書に記載の任意の数の塩基対を含むものであり得る。括弧内の領域は、例えば、約１、２、３または４ヌクレオチド長、好ましくは約２個のヌクレオチドを含むヌクレオチド突出端を表す。構築物１および２は、独立してＲＮＡｉ活性に使用され得る。構築物２は、ポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーを含むものであってもよく、該リンカーは生分解性リンカーとして設計してもよい。一実施形態において、構築物２に示したループ構造は、インビボおよび／またはインビトロで構築物１の形成をもたらす生分解性リンカーを含むものであり得る。別の例では、同じ原理で構築物２を作製するために構築物３が使用され得、この場合、活性なｓｉＮＡ構築物２をインビボおよび／またはインビトロで生成させるためにリンカーが使用され、活性なｓｉＮＡ構築物１をインビボおよび／またはインビトロで生成させるために別の生分解性リンカーを使用してもよい。そのため、ｓｉＮＡ構築物の安定性および／または活性は、インビボまたはインビトロおよび／またはインビトロで使用するためのｓｉＮＡ構築物の設計に基づいてモジュレートされ得る。 本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２と３に示した代表的な構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示した任意の構造に適用され得る。 図４Ｂに示した例は、一部相補性に起因する突出端、隆起部、ループ、および幹部−ループを含むものであり得る本発明の異なる型の二本鎖核酸分子（マイクロＲＮＡなど）を表す。隆起部、ループ、および幹部−ループを有するかかるモチーフは、一般的に、ｍｉＲＮＡの特徴である。隆起部、ループ、および幹部−ループは、一部相補性の任意の度合い（本発明の二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖内の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれ以上のヌクレオチドのミスマッチまたは隆起部など）に起因するものであり得る。 本発明の種々のｓｉＮＡ構築物の非限定的な例を示す。図２と３に示した代表的な構造の基準は、図４Ａ〜Ｃに示した任意の構造に適用され得る。 図４Ｃに示した例は、２個のヌクレオチドの３’−突出端を有する２１個のヌクレオチドの２つの配列のうち１９個の塩基対の二本鎖を含む本発明のモデル二本鎖核酸分子を表す。上側の鎖（１）はセンス鎖（パッセンジャー鎖）を表し、真ん中の鎖（２）はアンチセンス（ガイド鎖）を表し、下側の鎖（３）は標的ポリヌクレオチド配列を表す。２個のヌクレオチドの突出端（ＮＮ）は、標的ポリヌクレオチドに由来する配列を含むものであり得る。例えば、ガイド鎖の３’−（ＮＮ）配列は、標的ポリヌクレオチドの５’−［ＮＮ］配列に相補的であり得る。また、パッセンジャー鎖の５’−（ＮＮ）配列は、標的ポリヌクレオチド配列の５’−［ＮＮ］配列と同じ配列を含むものであり得る。他の実施形態では、突出端（ＮＮ）は、標的ポリヌクレオチド配列に由来するものでなく、例えば、ガイド鎖の３’−（ＮＮ）配列は標的ポリヌクレオチドの５’−［ＮＮ］配列に相補的でなく、パッセンジャー鎖の５’−（ＮＮ）配列は標的ポリヌクレオチド配列の５’−［ＮＮ］配列と異なる配列を含むものであり得る。さらなる実施形態では、（ＮＮ）ヌクレオチド（あれば）は化学修飾されたもの、例えば、２’−Ｏ−メチル、２’−デオキシ−２’−フルオロ、および／または本明細書における他の修飾体である。さらに、パッセンジャー鎖は、パッセンジャー鎖のＮ位にリボヌクレオチドを含むものであってもよい。図示した代表的な１９塩基対合２１量体二本鎖では、Ｎ位はパッセンジャー鎖の３’末端から内側に９個のヌクレオチドであり得る。しかしながら、異なる長さの二本鎖では、Ｎ位は、ガイド鎖の５’末端を基準にしてガイド鎖の５’末端から内側に１１個のヌクレオチド位置を数え、パッセンジャー鎖の対応する塩基対合ヌクレオチドを選出することにより決定される。Ａｇｏ２による切断は、矢印で示した１０位と１１位の間で起こる。さらなる実施形態では、ガイド鎖の５’末端を基準にしてガイド鎖の５’末端から内側に１０および１１のヌクレオチド位置を数え、パッセンジャー鎖内の対応する塩基対合ヌクレオチドを選出することにより、２個のリボヌクレオチドＮＮが１０位と１１位に存在させる。 例えば本発明のｓｉＮＡ配列の５’および／または３’末端を安定化させるため使用され得る種々の安定化化学構造（１〜１０）の非限定的な例、例えば、（１）［３−３’］−逆位デオキシリボース；（２）デオキシリボヌクレオチド；（３）［５’−３’］−３’−デオキシリボヌクレオチド；（４）［５’−３’］−リボヌクレオチド；（５）［５’−３’］−３’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド；（６）３’−グリセリル；（７）［３’−５’］−３’−デオキシリボヌクレオチド；（８）［３’−３’］−デオキシリボヌクレオチド；（９）［５’−２’］−デオキシリボヌクレオチド；および（１０）［５−３’］−ジデオキシリボヌクレオチド（Ｘ＝Ｏの場合）を示す。図に示した修飾型および非修飾型の主鎖化学構造に加え、このような化学構造は、本明細書に記載の種々の糖鎖および塩基ヌクレオチドの修飾と組み合わせることができる。 ヌクレアーゼ抵抗性であるがＲＮＡｉ活性を媒介する能力は保持している本発明の化学修飾ｓｉＮＡ構築物を同定するために使用されるストラテジーの非限定的な一例を示す。化学修飾は、ｓｉＮＡ構築物に、知識に基づいた設計パラメータに基づいて導入される（例えば、２’−修飾、塩基修飾、主鎖修飾、末端キャップ修飾などが導入される）。修飾型構築物は、適切な系（例えば、ヌクレアーゼ抵抗性についてはヒト血清（表示）、またはＰＫ／送達パラメータについては動物モデル）において試験される。並行して、ｓｉＮＡ構築物はＲＮＡｉ活性について、例えば、細胞培養系において（ルシフェラーゼレポーターアッセイ）および／または内因性ｍＲＮＡに対して試験される。次いで、特定の特徴を有するがＲＮＡｉ活性は保持しているリードｓｉＮＡ構築物が特定され、さらに修飾され、もう一度アッセイされてもよい。この同じアプローチを使用し、薬物動態学的プロフィール、送達およびＲＮＡｉ活性が改善されたｓｉＮＡ−コンジュゲート分子が同定され得る。 線状の二本鎖構築物ならびにその非対称誘導体を含む、本発明のリン酸化ｓｉＮＡ分子の非限定的な例を示す。 本発明の化学修飾末端リン酸基の非限定的な例を示す。 本発明のコレステロールコンジュゲート型ｓｉＮＡ分子を合成するために使用され得るコレステロール連結ホスホルアミダイトの非限定的な例を示す。コレステロール部分がｓｉＮＡ分子のセンス鎖の５’末端に連結された一例を示す。 核酸鎖に連結された５’および３’逆位無塩基キャップが一実施形態を示す。

Ａ．用語および定義
本出願書類で用いる場合、以下の専門用語および定義を適用する。

用語「無塩基の」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。該用語は、一般的に、糖鎖部分の１’位の核酸塩基が欠失しているか、または
核酸塩基の代わりに水素原子（Ｈ）もしくは他の非核酸塩基化学基を有する糖鎖部分をい
い、例えば、Ａｄａｍｉｃら，米国特許第５，９９８，２０３号を参照のこと。一実施形
態において、本発明の無塩基部分は、リボース、デオキシリボース、またはジデオキシリ
ボース糖鎖である。

用語「非環式ヌクレオチド」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認めら
れたその意味を示す。該用語は、一般的に、非環式リボース糖鎖を有する任意のヌクレオ
チド、例えば、リボースの炭素／炭素結合または炭素／酸素結合（あれば）が独立して、
または組合せでヌクレオチドに存在しないものをいう。

用語「アルキル」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。該用語は、一般的に、飽和または不飽和の炭化水素、例えば、直鎖、分枝鎖の
アルケニル、アルキニル基および環式基をいうが、芳香族基は除外される。前述のことに
かかわらず、アルキルはまた、非芳香族の複素環式基も指す。好ましくは、アルキル基は
１〜１２個の炭素を有するものである。より好ましくは、炭素数が１〜７、より好ましく
は炭素数が１〜４の低級アルキルである。アルキル基は、置換型であっても非置換型であ
ってもよい。置換型である場合、置換基（１つまたは複数）は、好ましくは、ヒドロキシ
ル、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、＝０、＝Ｓ、ＮＯ_２、ＳＨ、ＮＨ_２、ま
たはＮＲ_１Ｒ_２（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、独立して、ＨもしくはＣ１〜Ｃ４アルキルで
ある）である。

語句「細胞周期のチェックポイントに干渉する薬剤」は、細胞周期のチェックポイント
のシグナルを伝達するプロテインキナーゼを阻害し、それによりがん細胞をＤＮＡ損傷剤
に対して感作させる化合物をいう。

語句「受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に干渉する薬剤」は、ＲＴＫを阻害し、した
がって発癌および腫瘍進行に関与している機構を阻害する化合物をいう。

語句「アンドロゲン受容体モジュレータ」は、機構に関係なくアンドロゲンのその受容
体に対する結合を妨げる、または該結合を阻害する化合物をいう。

語句「血管新生阻害薬」は、機構に関係なく新たな血管の形成を阻害する化合物をいう
。

用語「アリール」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。該用語は、一般的に、共役π電子系を有する少なくとも１つの環を有する芳香
族基をいい、炭素環式アリール、複素環式アリールおよびビアリール基（これらはすべて
、置換されていてもよい）を包含する。アリール基の好ましい置換基（１つまたは複数）
は、ハロゲン、トリハロメチル、ヒドロキシル、ＳＨ、ＯＨ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４アルコ
キシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、ＮＨ_２、な
らびにＮＲ_１Ｒ_２基（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、独立して、ＨもしくはＣ１〜Ｃ４アルキ
ルである）である。

用語「アルキルアリール」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められ
たその意味を示す。該用語は、一般的に、アリール基（上記のもの）に共有結合により連
接されたアルキル基（上記のもの）をいう。炭素環式アリール基は、芳香族環の環内原子
がすべて炭素原子である基である。該炭素原子は置換されていてもよい。複素環式アリー
ル基は、芳香族環に環内原子として１〜３個のヘテロ原子を有し、残りの環内原子が炭素
原子である基である。好適なヘテロ原子としては酸素、イオウおよび窒素が挙げられ、か
かるヘテロ原子を有する複素環式アリール基の例としては、フラニル、チエニル、ピリジ
ル、ピロリル、Ｎ−低級アルキルピロロ、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルなど（
すべて、置換されていてもよい）が挙げられる。好ましくは、該アルキル基はＣ１〜Ｃ４
アルキル基である。

用語「アミド」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味
を示す。該用語は、一般的に、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｒをいい、式中、Ｒは、アルキル、ア
リール、アルキルアリールまたは水素のいずれかである。

語句「アンチセンス領域」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められ
たその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、標的核酸配列に対し
て相補性を有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列をいう。また、ｓｉＮＡ分子のアンチ
センス領域は、該ｓｉＮＡ分子のセンス領域に対して相補性を有する核酸配列を含むもの
であってもよい。一実施形態では、ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域をアンチセンス鎖ま
たはガイド鎖と称する。

語句「非対称ヘアピン型」は、アンチセンス領域と、ヌクレオチドまたは非ヌクレオチ
ドを含むものであり得るループ部分と、センス領域とを含み、センス領域が、アンチセン
ス領域と塩基対合してループを有する二本鎖を形成するのに充分な相補ヌクレオチドを有
する範囲でアンチセンス領域よりも少ないヌクレオチドを含む線形ｓｉＮＡ分子をいう。
例えば、本発明の非対称ヘアピン型ｓｉＮＡ分子は、細胞内またはインビトロ系において
ＲＮＡｉを媒介するのに充分な長さ（例えば、約１５〜約３０個、または約１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もし
くは３０個のヌクレオチド）を有するアンチセンス領域と、
約４〜約１２（例えば、約４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２）個のヌクレ
オチドを含むループ領域と、アンチセンス領域に相補的な約３〜約２５（例えば、約３、
４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１
９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）個のヌクレオチドを有するセンス領域と
を含むものであり得る。また、非対称ヘアピン型ｓｉＮＡ分子は、５’末端リン酸基（化
学修飾されていてもよい）を含むものであってもよい。非対称ヘアピン型ｓｉＮＡ分子の
ループ部分は、ヌクレオチド、非ヌクレオチド、リンカー分子またはコンジュゲート分子
（本明細書に記載）を含むものであってもよい。

用語「生分解性の」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその
意味を示す。該用語は、一般的に、生物学的系内における分解、例えば、酵素的分解また
は化学的分解をいう。

用語「生分解性リンカー」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められ
たその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、ある分子を別の分子
に連結させるために設計され、生物学的系内における分解を受け易いリンカー分子をいう
。該リンカーは、核酸系リンカーであっても非核酸系リンカーであってもよい。例えば、
生分解性リンカーは、リガンドまたは生物学的に活性な分子を本発明のｓｉＮＡ分子に結
合させるために使用され得る。あるいはまた、生分解性リンカーは、本発明のｓｉＮＡ分
子のセンス鎖とアンチセンス鎖を連結するために使用され得る。生分解性リンカーは、そ
の安定性が具体的な目的（特定の組織または細胞型への送達など）のためにモジュレート
され得るように設計される。核酸系の生分解性リンカー分子の安定性は、種々の化学物質
、例えば、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、ならびに化学修飾されたヌク
レオチド（２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロ、２’−アミノ、２’−Ｏ−アミノ、２’
−Ｃ−アリル、２’−Ｏ−アリル、および他の２’修飾または塩基修飾ヌクレオチドなど
）の組合せを使用することによりモジュレートされ得る。生分解性核酸リンカー分子は、
二量体、三量体、四量体またはそれより長鎖の核酸分子（例えば、約２、３、４、５、６
、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２
０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド）であってもよく、リン系結合（例えば、ホスホ
ロアミダートまたはホスホジエステル結合）を有する単一ヌクレオチドを含むものであっ
てもよい。また、生分解性核酸リンカー分子は、核酸主鎖、核酸糖鎖、または核酸塩基の
修飾を含むものであってもよい。

語句「生物学的に活性な分子」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認め
られたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、系内の生物学的
応答を誘起もしくは改良し得る、および／または他の生物学的に活性な分子の薬物動態特
性および／または薬力学的特性をモジュレートし得る化合物または分子をいう。生物学的
に活性な分子の例としては、単独、または他の分子（例えば限定されないが、治療上活性
な分子、例えば、抗体、コレステロール、ホルモン、抗ウイルス薬、ペプチド、タンパク
質、化学療法薬、小分子、ビタミン類、補因子、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌ
クレオチド、酵素性核酸、アンチセンス核酸、オリゴヌクレオチドを形成する三重鎖、ポ
リアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、他のポリエーテル、２−５Ａキメラ、
ｓｉＮＡ、ｄｓＲＮＡ、アロザイム、アプタマー、デコイおよびその類似体など）と併用
されるｓｉＮＡ分子が挙げられる。

語句「生物学的系」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその
意味を示す。該用語は、一般的に、生物学的供給源、例えば限定されないがヒトまたは動
物に由来する精製形態または未精製形態の物質をいい、該系には、ＲＮＡｉ活性に必要と
される成分が含まれている。したがって、この語句は、例えば、細胞、組織、被検体もし
くは生物体またはその抽出物を包含する。また、該用語は、生物学的供給源に由来する再
構成物質も包含する。

語句「平滑端」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味
を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、突出端ヌクレオチドを有しない
二本鎖ｓｉＮＡ分子の末端をいう。例えば、平滑端を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子の２つの
鎖は、末端に突出端ヌクレオチドがなく、互いに一直線に並んで塩基対がマッチしている
。本発明のｓｉＮＡ二本鎖分子は平滑端を、該二本鎖の一方または両方の末端（例えば、
アンチセンス鎖の５’末端、センス鎖の５’末端に位置する末端または該二本鎖の両末端
）に含むものであってもよい。

用語「キャップ」（本明細書において「末端キャップ」とも称する）は、本明細書で用
いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子
に関して、該用語は、本発明の１種類以上の核酸分子の１つ以上の末端に組み込まれ得る
化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドであり得る部分をいう。このような末端修飾
により、核酸分子がエキソヌクレアーゼ分解から保護され、細胞内における送達および／
または局在化が補助され得る。キャップは、５’末端（５’−キャップ）または３’末端
（３’−キャップ）に存在させてもよく、本発明の任意の核酸分子の両末端に存在させて
もよい。キャップは、本発明の核酸分子のセンス鎖の５’末端、３末端および／または５
’末端と３’末端に存在させてもよい。さらに、キャップは、本発明の核酸分子のアンチ
センス鎖の３’末端に存在させてもよい。非限定的な例において、５’−キャップとして
は、限定されないが、ＬＮＡ；グリセリル；逆位デオキシ無塩基残基（部分）；４’，５
’−メチレンヌクレオチド；１−（β−Ｄ−エリトロフラノシル）ヌクレオチド、４’−
チオヌクレオチド；炭素環式ヌクレオチド；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチ
ド；Ｌ−ヌクレオチド；α−ヌクレオチド；修飾塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエー
ト結合；トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−セコヌクレオチド
；非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；非環式３，５−ジヒドロキシペンチ
ルヌクレオチド；３’−３’−逆位ヌクレオチド部分；３’−３’−逆位無塩基部分；３
’−２’−逆位ヌクレオチド部分；３’−２’−逆位無塩基部分；１，４−ブタンジオー
ルホスフェート；３’−ホスホロアミダート；ヘキシルホスフェート；アミノヘキシルホ
スフェート；３’−ホスフェート；３’−ホスホロチオエート；ホスホロジチオエート；
または橋状結合性もしくは非橋状結合性メチルホスホネート部分が挙げられる。３’−キ
ャップの非限定的な例としては、限定されないが、ＬＮＡ；グリセリル；逆位デオキシ無
塩基残基（部分）；４’、５’−メチレンヌクレオチド；１−（β−Ｄ−エリトロフラノ
シル）ヌクレオチド；４’−チオヌクレオチド；炭素環式ヌクレオチド；５’−アミノ−
アルキルホスフェート；１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート；３−アミノプロ
ピルホスフェート；６−アミノヘキシルホスフェート；１，２−アミノドデシルホスフェ
ート；ヒドロキシプロピルホスフェート；１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド
；Ｌ−ヌクレオチド；α−ヌクレオチド；修飾塩基ヌクレオチド；ホスホロジチオエート
；トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド；非環式３’，４’−セコヌクレオチド；３，
４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド；３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５
’−５’−逆位ヌクレオチド部分；５’−５’−逆位無塩基部分；５’−ホスホロアミダ
ート；５’−ホスホロチオエート；１，４−ブタンジオールホスフェート；５’−アミノ
；橋状結合性および／または非橋状結合性５’−ホスホロアミダート；ホスホロチオエー
トおよび／またはホスホロジチオエート；橋状結合性または非橋状結合性メチルホスホネ
ート；ならびに５’−メルカプト部分（さらなる詳細については、Ｂｅａｕｃａｇｅおよ
びＩｙｅｒ，１９９３，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ４９，１９２５を参照のこと；引用に
より本明細書に組み込まれる）が挙げられる。図５は、種々のキャップの非限定的な例を
いくつか示す。

用語「細胞」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味を
示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、その通常の生物学的意味で用いて
おり、多細胞生物体全体を指すのではない（例えば、具体的には、人間を指すのではない
）。細胞は、生物体、例えば、鳥類、植物および哺乳動物、例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ
、類人猿、サル、ブタ、イヌ、およびネコに存在するものであり得る。細胞は、原核生物
系（例えば、細菌細胞）であっても真核生物系（例えば、哺乳動物または植物の細胞）で
あってもよい。細胞は、体細胞起源または生殖細胞系起源、全能性または多能性、分裂性
または非分裂性であり得る。また、細胞は、生殖体もしくは胚、幹細胞または完全に分化
した細胞に由来するものであってもよく、これらを構成するものであってもよい。

語句「化学修飾」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、一般的な天然ｓｉＲＮＡまた
はＲＮＡのヌクレオチドと異なるヌクレオチドの化学構造の任意の修飾をいう。用語「化
学修飾」は、本明細書に記載の、あるいは当該技術分野で知られているような、糖鎖、塩
基またはヌクレオチド間結合における天然のｓｉＲＮＡまたはＲＮＡの付加、置換または
修飾を包含する。一部の特定の実施形態において、用語「化学修飾」は、特定の生物学的
系内に天然に存在しているＲＮＡの特定の形態（例えば、２’−Ｏ−メチル修飾またはイ
ノシン修飾）をいう場合があり得る。

用語「ＣＴＮＮＢ１」は、カテニン（カドヘリン結合型タンパク質）β１を指し、これ
は、ＣＴＮＮＢ１タンパク質、ＣＴＮＮＢ１ペプチド、ＣＴＮＮＢ１ポリペプチド、ＣＴ
ＮＮＢ１調節ポリヌクレオチド（例えば、ＣＴＮＮＢ１ ｍｉＲＮＡおよびｓｉＮＡ）を
コードしている遺伝子、変異型ＣＴＮＮＢ１遺伝子、およびＣＴＮＮＢ１遺伝子のスプラ
イスバリアント、ならびに遺伝子発現および／または活性のＣＴＮＮＢ１経路に関与して
いる他の遺伝子である。したがって、用語「ＣＴＮＮＢ１」に関する本明細書に記載の各
実施形態は、用語「ＣＴＮＮＢ１」（該用語は本明細書において定義している）に包含さ
れるタンパク質、ペプチド、ポリペプチド、および／またはポリヌクレオチド分子のすべ
てに適用可能である。包括的に、かかる遺伝子標的は、本明細書において一般的に「標的
」配列（例えば、表１ａに示した標的配列）に言及している。

用語「相補性」または「相補的な」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に
認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、一般的に、
ある核酸配列と別の核酸配列間での、従来のワトソン−クリック型または本明細書に記載
の他の非従来型の結合のいずれかによる水素結合（１つまたは複数）の形成または存在を
いう。本発明の核酸（ｎｕｃｌｅｉｃ）分子に関連して、核酸分子のその相補配列との結
合自由エネルギーは、該核酸の該当する機能（例えば、ＲＮＡｉ活性）が進行することを
可能にするのに充分なものである。核酸分子の結合自由エネルギーの測定は当該技術分野
でよく知られている（例えば、Ｔｕｒｎｅｒら，１９８７，ＣＳＨ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎ
ｔ．Ｂｉｏｌ．ＬＩＩ ｐｐ．１２３−１３３；Ｆｒｉｅｒら，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：９３７３−９３７７；Ｔｕｒｎｅｒら，１９８
７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０９：３７８３−３７８５を参照のこと）。完璧に
相補的とは、核酸配列の連続している残基のすべてが、第２の核酸配列内の同じ数の連続
している残基と水素結合することを意味する。一部相補性は、種々のミスマッチまたは非
塩基対合ヌクレオチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個もしくは
それ以上のミスマッチ、非ヌクレオチドリンカーまたは非塩基対合ヌクレオチド）を核酸
分子内に含むものであり得、これにより、核酸分子のセンス鎖もしくはセンス領域とアン
チセンス鎖もしくはアンチセンス領域間、または核酸分子と対応する標的核酸分子のアン
チセンス鎖間もしくはアンチセンス領域間に生成される隆起部、ループまたは突出端がも
たらされ得る。かかる一部相補性は相補性％で表すことができ、非塩基対合ヌクレオチド
の数、すなわち、関与しているヌクレオチドの総数に応じて約５０％、６０％、７０％、
８０％、９０％などと求められる。かかる一部相補性は、核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）
がその機能（例えば、配列特異的ＲＮＡｉを媒介する能力）維持している範囲で許容され
る。

用語「組成物」または「製剤」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認め
られたその意味を示す。これらの用語は、一般的に、細胞または被検体（例えば、ヒトな
ど）への投与（例えば、全身性または局所投与）に適した形態の、例えば、薬学的に許容
され得る担体または希釈剤との組成物または製剤をいう。好適な形態は、一部において、
用途または進入経路（例えば、経口、経皮、吸入もしくは注射）に依存する。かかる形態
は、該組成物または製剤が標的細胞（すなわち、負電荷を有する核酸が送達に望ましい細
胞）に到達するのを妨げないものであるのがよい。例えば、血流中に注射される組成物は
、可溶性であるのがよい。他の要素は、当該技術分野で知られており、毒性および該組成
物または製剤の奏功を妨げる形態などの考慮事項が挙げられる。本明細書で用いる場合、
医薬製剤は、ヒト使用および獣医学的使用のための製剤を包含する。本発明の核酸分子を
用いた製剤に適した薬剤の非限定的な例としては：脂質ナノ粒子（例えば、Ｓｅｍｐｌｅ
ら，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，Ｆｅｂ；２８（２）：１７２−６参照
）；Ｐ−糖タンパク質阻害薬（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｐ８５など）；生分解性ポリマー（徐
放送達のためのポリ（ＤＬ−ラクチド−コグリコリド）ミクロスフィアなど（Ｅｍｅｒｉ
ｃｈ，ＤＦら，１９９９，Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，８，４７−５８））；およ
び負荷ナノ粒子（ポリブチルシアノアクリレートで作製されたもの）が挙げられる。本発
明の核酸分子のための送達ストラテジーの他の非限定的な例としては、Ｂｏａｄｏら，１
９９８，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８７，１３０８−１３１５；Ｔｙｌｅｒら，１９９
９，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，４２１，２８０−２８４；Ｐａｒｄｒｉｄｇｅら，１９９５
，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．，９２，５５９２−５５９６；Ｂｏａｄｏ，１９９５，Ａｄｖ．Ｄ
ｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．，１５，７３−１０７；Ａｌｄｒｉａｎ−Ｈｅｒｒ
ａｄａら，１９９８，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２６，４９１０−４９１
６；およびＴｙｌｅｒら，１９９９，ＰＮＡＳ ＵＳＡ．，９６，７０５３−７０５８に
記載された物質が挙げられる。「薬学的に許容され得る組成物」または「薬学的に許容さ
れ得る製剤」は、その所望の活性に最も適した身体位置での本発明の核酸分子の有効な分
布を可能にする組成物または製剤をいうものであり得る。

語句「細胞傷害剤／細胞増殖抑制薬」は、主に細胞の機能発揮を直接妨げることにより
、細胞死を引き起こすか、または細胞増殖を抑止する化合物、あるいは細胞の有糸分裂（
ｍｙｔｏｓｉｓ）を阻害するか、または妨げる化合物をいい、アルキル化剤、腫瘍壊死因
子、インターカレータ、低酸素活性化性化合物、微小管阻害薬／微小管安定化剤、有糸分
裂キネシンの阻害薬、ヒストンデアセチラーゼの阻害薬、有糸分裂の進行に関与している
キナーゼの阻害薬、代謝拮抗薬；生物学的応答の改良薬；ホルモン／抗ホルモン療法剤、
造血系増殖因子、モノクローナル抗体ターゲテッド治療用薬剤、トポイソメラーゼ阻害薬
、プロテアソーム阻害薬およびユビキチンリガーゼ阻害薬が挙げられる。

語句「エストロゲン受容体モジュレータ」は、機構に関係なくエストロゲンのその受容
体に対する結合を妨げる、または該結合を阻害する化合物をいう。

用語「遺伝子」または「標的遺伝子」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般
に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、ポリペプチドの生成に必要なコード
配列の一部分の長さまたは全長を含む核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）配列をいう。
また、標的遺伝子は、その核酸配列のＵＴＲまたは非コード領域を含むものであってもよ
い。また、遺伝子または標的遺伝子は、機能性ＲＮＡ（ｆＲＮＡ）または非コードＲＮＡ
（ｎｃＲＮＡ）、例えば、小分子（ｓｍａｌｌ ｔｅｍｐｏｒａｌ）ＲＮＡ（ｓｔＲＮＡ
）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮ
Ａ（ｓｉＲＮＡ）、小核小体ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、ト
ランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）およびその前駆体ＲＮＡをコードするものであってもよ
い。かかる非コードＲＮＡは、機能性または調節性の細胞プロセスに関与しているｆＲＮ
ＡまたはｎｃＲＮＡの活性のモジュレーションにおけるｓｉＮＡ媒介性ＲＮＡ干渉の標的
核酸分子の機能を果たすものであり得る。したがって、疾患をもたらす異常なｆＲＮＡま
たはｎｃＲＮＡの活性は、本発明のｓｉＮＡ分子によってモジュレートされ得る。また、
ｆＲＮＡおよびｎｃＲＮＡを標的化するｓｉＮＡ分子は、遺伝子（ｇｅｎｅｔｉｃ）イン
プリンティング、転写、翻訳、または核酸プロセッシング（例えば、アミノ基転移、メチ
ル化など）などの細胞プロセスに介在することにより、被検体、生物体または細胞の遺伝
子型または表現型を操作または改変するために使用され得る。標的遺伝子は、細胞に由来
する遺伝子、内因性遺伝子、導入遺伝子、または外因性遺伝子（感染後の細胞内に存在す
る病原体（例えば、ウイルス）の遺伝子など）であり得る。標的遺伝子を含む細胞は、任
意の生物体、例えば、植物、動物、原生動物、ウイルス、細菌または真菌に由来するもの
、またはこれらに含有されているものであり得る。植物の非限定的な例としては、単子葉
植物、双子葉植物、または裸子植物が挙げられる。動物の非限定的な例としては、脊椎動
物または非脊椎動物が挙げられる。真菌の非限定的な例としては、カビまたは酵母が挙げ
られる。概説については、例えば、ＳｎｙｄｅｒおよびＧｅｒｓｔｅｉｎ，２００３，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，３００，２５８−２６０を参照のこと。

語句「ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬」は、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリ
ル−ＣｏＡレダクターゼの阻害薬をいう。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬という用語
は、本明細書で用いる場合、あらゆる薬学的に許容され得るラクトンおよび開環型の酸形
態（すなわち、ラクトン環が開環してその遊離酸が形成されている場合）ならびにＨＭＧ
−ＣｏＡレダクターゼ阻害活性を有する化合物の塩およびエステルの形態を包含し、した
がって、かかる塩、エステル、開環型の酸およびラクトン形態の使用は本発明の範囲に含
まれる。

語句「相同配列」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。該用語は、一般的に、１種類以上のポリヌクレオチド配列、例えば、遺伝子、
遺伝子転写物および／または非コードポリヌクレオチドなどによって共有されたヌクレオ
チド配列をいう。例えば、相同配列は、関連しているが異なるタンパク質（遺伝子ファミ
リーの異なる構成員、異なるタンパク質エピトープ、異なるタンパク質アイソフォームな
ど）をコードする２種類以上の遺伝子または完全に相違する遺伝子によって共有されたヌ
クレオチド配列であり得る。相同配列は、２種類以上の非コードポリヌクレオチド、例え
ば、非コードＤＮＡまたはＲＮＡ、調節配列、イントロン、および転写の制御部位または
調節部位などによって共有されたヌクレオチド配列であってもよい。また、相同配列は、
１つより多くのポリヌクレオチド配列によって共有された配列領域を含むものであり得る
。相同性は、完璧に同一（１００％）である必要はなく、一部相同配列も、本発明の範囲
であることが想定され、本発明の範囲に含まれる（例えば、少なくとも９５％、９４％、
９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、
８３％、８２％、８１％、８０％など）。相同性パーセントは、２つの配列間でマッチし
ているヌクレオチドの数を比較対象の全長で除算して１００を乗算したものである。

語句「改善されたＲＮＡｉ活性」は、インビトロおよび／またはインビボで測定された
ＲＮＡｉ活性の増大をいい、該ＲＮＡｉ活性は、ｓｉＮＡがＲＮＡｉを媒介する能力およ
び本発明のｓｉＮＡの安定性の両方の反映である。本発明において、このような活性の成
果は、全ＲＮＡ ｓｉＲＮＡまたは複数のリボヌクレオチドを含有するｓｉＮＡと比べて
、インビトロおよび／またはインビボでの増大したものであり得る。一部の場合では、ｓ
ｉＮＡ分子の活性または安定性が低下している（すなわち、１０倍未満である）ものがあ
り得るが、ｓｉＮＡ分子の全体的な活性はインビトロおよび／またはインビボで向上して
いる。

用語「阻害する」、「下方調節する」、または「低減させる」は、本明細書で用いる場
合、当該技術分野で一般に認められたその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関し
て、該用語（ｈｅ ｔｅｒｍ）は、一般的に、遺伝子の発現、または１種類以上のタンパ
ク質もしくはタンパク質サブユニットをコードしているＲＮＡ分子もしくは同等ＲＮＡ分
子のレベル、または１種類以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性を、
本発明の核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）の非存在下で観察されるものよりも低下させるこ
とをいう。また、下方調節は、転写後サイレンシング（ＲＮＡｉ媒介性切断など、または
ＤＮＡのメチル化パターンもしくはＤＮＡのクロマチン構造の改変により）と関連してい
るものであり得る。ｓｉＮＡ分子による阻害、下方調節または低減は、不活性な分子、弱
毒化分子、スクランブル配列を有するｓｉＮＡ分子、またはミスマッチを有するｓｉＮＡ
分子に関するものであってもよく、あるいはまた、核酸が存在しない系に関するものであ
ってもよい
語句「細胞の増殖および生存のシグナル伝達の阻害薬経路」は、細胞表面受容体および
該表面受容体の下流のシグナル伝達カスケードを阻害する医薬用薬剤をいう。

用語「インテグリン遮断薬」は、生理学的リガンドがα_ωβ_３インテグリンに結合する
ことを選択的に拮抗、阻害または反作用する化合物、生理学的リガンドがα_ωβ_５インテ
グリンに結合することを選択的に拮抗、阻害または反作用する化合物、生理学的リガンド
がα_ωβ_３インテグリンとα_ωβ_５インテグリンの両方に結合することを拮抗、阻害また
は反作用する化合物、および毛管内皮細胞で発現される特定のインテグリン（１種類また
は複数種）の活性を拮抗、阻害または反作用する化合物をいう。また、該用語は、α_ωβ
．_６、α_ωβ．_８、α_１β．_１、α_２β．_１、α_５β．_１、α_６β_１、およびα_６β_４イ
ンテグリンの拮抗薬も指す。また、該用語は、α_ωβ_３、α_ωβ_５、α_ωβ．_６、α_ωβ
．_８、α_１β．_１、α_２β．_１、α_５β．_１、α_６β_１、およびα_６β_４インテグリンの
任意の組合せの拮抗薬も指す。

用語「断続的」または「断続的に」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に
認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、規則的間隔または不規則的間隔のいず
れかで定期的に停止および開始させることをいう。

用語「ヌクレオシド間結合」または「ヌクレオシド間リンカー」または「ヌクレオチド
間結合」または「ヌクレオチド間リンカー」は、本明細書において互換的に用いており、
当該技術分野で知られた任意のリンカーまたは２つのヌクレオシド単位間の結合をいい、
例えば限定されないが、ホスフェート、ホスフェート類似体、ホスホネート、グアニジウ
ム、ヒドロキシルアミン、ヒドロキシルヒドラジニル、アミド、カルバメート、アルキル
、および置換アルキル結合が挙げられる。ヌクレオシド間結合は核酸分子の主鎖を構成し
ている。

用語「哺乳動物の」または「哺乳動物」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一
般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、任意の温血脊椎動物種、例えば、
ヒト、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ハムスター、モルモット、ウサギ、家畜動物などを
いう。

語句「定量吸入器」またはＭＤＩは、缶、該缶に蓋をするねじ込み式キャップおよび該
キャップに配設された製剤を計量する弁を備えたユニットをいう。ＭＤＩシステムとして
は、適当なチャネル付（ｃｈａｎｎｅｌｉｎｇ）デバイスが挙げられる。好適なチャネル
付デバイスは、例えば、弁作動器と、柱状路または円錐様路（これを介して、医薬が充填
キャニスターから計量弁によって患者の鼻または口に送達され得る）とを備えたものであ
る（マウスピース型作動器）。

用語「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲＮＡ」は、本明細書で用いる場合、当該技術分
野で一般に認められたその意味を示す。該用語は、一般的に、標的メッセンジャーＲＮＡ
の発現を、ｍＲＮＡの切断、翻訳の抑制／阻害または異質染色質サイレンシングのいずれ
かによって調節する低分子二本鎖ＲＮＡをいう（例えば、Ａｍｂｒｏｓ，２００４，Ｎａ
ｔｕｒｅ，４３１，３５０−３５５；Ｂａｒｔｅｌ，２００４，Ｃｅｌｌ，１１６，２８
１−２９７；Ｃｕｌｌｅｎ，２００４，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，１０２，３−
９；Ｈｅら，２００４，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，５，５２２−５３１；Ｙｉｎｇ
ら，２００４，Ｇｅｎｅ，３４２、２５−２８；およびＳｅｔｈｕｐａｔｈｙら，２００
６、ＲＮＡ、１２：１９２−１９７を参照のこと）。

用語「モジュレートする」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められ
たその意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、遺伝子の発現、また
は１種類以上のＲＮＡ分子（コードもしくは非コード）のレベル、または１種類以上のＲ
ＮＡ分子もしくはタンパク質もしくはタンパク質サブユニットの活性を、該発現、レベル
または活性が、モジュレーションをもたらす分子の非存在下で観察されるものよりも大き
くなる、または小さくなるように上方調節または下方調節する場合をいう。例えば、用語
「モジュレートする」は、一部の実施形態では、例えば遺伝子発現の阻害を指すものであ
り得、他の実施形態では、その増強または上方調節を指すものであり得る。

語句「修飾ヌクレオチド」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められ
たその意味を示す。該用語は、一般的に、当該技術分野で一般的に知られた非修飾（また
は天然）ヌクレオチドの塩基、糖鎖および／またはリン酸基の化学構造内に修飾を含むヌ
クレオチドをいう。修飾ヌクレオチドの非限定的な例は、本明細書および米国特許出願第
１２／０６４，０１４号に記載されている。

語句「選択的ＣＯＸ−２阻害薬であるＮＳＡＩＤ」は、本明細書における解釈上、細胞
アッセイまたはミクロソームアッセイによって評価されるＣＯＸ−１の場合のＩＣ_５０に
対するＣＯＸ−２の場合のＩＣ_５０の比率によって測定したとき、ＣＯＸ−１よりもＣＯ
Ｘ−２の阻害に対して少なくとも１００倍の特異性を有するＮＳＡＩＤをいう。

語句「非塩基対合」は、二本鎖ｓｉＮＡ分子のセンス鎖またはセンス領域とアンチセン
ス鎖またはアンチセンス領域との間でヌクレオチドが塩基対合されていないヌクレオチド
のことをいい；例えば限定されないが、ミスマッチ、突出端、一本鎖ループなどが包含さ
れ得る。

用語「非ヌクレオチド」は、核酸鎖内の１つ以上のヌクレオチド単位の代わりに組み込
まれ得る任意の基または化合物（例えば限定されないが、無塩基部分またはアルキル鎖）
をいう。該基または化合物は、一般的に認識されているヌクレオチド塩基（アデノシン、
グアニン、シトシン、ウラシルまたはチミンなど）を含有しておらず、したがって、１’
位に核酸塩基がないという点で「無塩基」である。

用語「ヌクレオチド」は、当該技術分野で一般的に認知されているとおりに用いている
。ヌクレオチドは、一般的に、核酸塩基、糖鎖およびヌクレオシド間結合（例えば、ホス
フェート）を含む。塩基は、天然塩基（標準）であっても修飾塩基であっても塩基類似体
であってもよく、これらは、当該技術分野でよく知られている。かかる塩基は、一般的に
、ヌクレオチドの糖鎖部分の１’位に存在している。さらに、ヌクレオチドは非修飾であ
ってもよく、糖鎖、ヌクレオシド間結合、および／または塩基部分が修飾されていてもよ
い（互換的にヌクレオチド類似体、修飾ヌクレオチド、非天然ヌクレオチド、非標準ヌク
レオチドなどとも称される；例えば、米国特許出願第１２／０６４，０１４号を参照のこ
と）。

用語「突出端」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味
を示す。例示的な二本鎖核酸分子に関して、該用語は、一般的に、二本鎖核酸分子の２つ
の鎖が塩基対合されていないヌクレオチド配列の末端部分をいう（例えば、図４を参照の
こと）。突出端は、存在している場合、典型的には、ｓｉＮＡ二本鎖の一方または両方の
鎖の３’末端に存在している。

用語「非経口」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味
を示す。該用語は、一般的に、消化管経由以外の様式で分子、薬物、薬剤または化合物を
投与する方法または手法をいい、皮膚上、皮下、血管内（例えば、静脈内）、筋肉内、ま
たは髄腔内注射または注入手法などが挙げられる。

語句「経路標的」は、遺伝子の発現または活性の経路に関与している任意の標的をいう
。例えば、任意の所与の標的は、生物学的経路内に関連経路標的を有し得、関連経路標的
としては、上流遺伝子、下流遺伝子または変更遺伝子が挙げられ得る。このような経路標
的遺伝子により、本明細書における疾患、病状および形質の処置において相加的または相
乗的効果がもたらされ得る。

用語「ホスホロチオエート」は、酸素原子の代わりに１個以上のイオウ原子を含むヌク
レオチド間リン酸結合をいう。したがって、ホスホロチオエートという用語は、ホスホロ
チオエートヌクレオチド間結合およびホスホロジチオエートヌクレオチド間結合のどちら
も指す。

「プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬」は、プレニル−タンパク質トラン
スフェラーゼ酵素、例えば、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓ
ｅ）、ゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉ）、
およびゲラニルゲラニル−タンパク質トランスフェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−ＩＩ
，Ｒａｂ ＧＧＰＴａｓｅとも称される）の任意の１種類または任意の組合せを阻害する
化合物をいう。

語句「レチノイド受容体モジュレータ」は、機構に関係なくレチノイドのその受容体に
対する結合を妨げる、または該結合を阻害する化合物をいう。

用語「リボヌクレオチド」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められ
たその意味を示す。該用語は、一般的に、β−Ｄ−リボフラノース部分の２’位にヒドロ
キシル基を有するヌクレオチドをいう。

用語「ＲＮＡ」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められた意味を示
す。一般的に、ＲＮＡという用語は、少なくとも１つのリボフラノシド部分を含む分子を
いう。該用語には、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、単離されたＲＮＡ、例えば、一部精製
ＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え作製されたＲＮＡ、ならびに天然に
存在するＲＮＡと１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換および／または改変によっ
て異なる改変ＲＮＡが包含され得る。かかる改変としては、ｓｉＮＡの末端（１つまたは
複数）または内部などの例えば該ＲＮＡの１つ以上のヌクレオチドへの非ヌクレオチド物
質の付加が挙げられ得る。また、本発明のＲＮＡ分子内のヌクレオチドは、天然に存在し
ないヌクレオチドまたは化学合成されたヌクレオチドまたはデオキシヌクレオチドなどの
非標準ヌクレオチドを含むものであってもよい。このような改変ＲＮＡは、類似体または
天然に存在するＲＮＡの類似体と称されることがあり得る。

語句「ＲＮＡ干渉」または用語「ＲＮＡｉ」は、細胞内での遺伝子発現を阻害または下
方調節する生物学的プロセスをいい、これは、当該技術分野で一般的に知られており、低
分子干渉核酸分子によって媒介される。例えば、ＺａｍｏｒｅおよびＨａｌｅｙ，２００
５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９，１５１９−１５２４；ＶａｕｇｈｎおよびＭａｒｔｉｅｎ
ｓｓｅｎ，２００５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０９，１５２５−１５２６；Ｚａｍｏｒｅら，
２０００，Ｃｅｌｌ，１０１，２５−３３；Ｂａｓｓ，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１１
，４２８−４２９；Ｅｌｂａｓｈｉｒら，２００１，Ｎａｔｕｒｅ，４１１，４９４−４
９８；ならびにＫｒｅｕｔｚｅｒら，ＰＣＴ国際出願公開第００／４４８９５号；Ｚｅｒ
ｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚら，ＰＣＴ国際出願公開第０１／３６６４６号；Ｆｉｒｅ，ＰＣ
Ｔ国際出願公開第９９／３２６１９号；Ｐｌａｅｔｉｎｃｋら，ＰＣＴ国際出願公開第０
０／０１８４６号；ＭｅｌｌｏおよびＦｉｒｅ，ＰＣＴ国際出願公開第０１／２９０５８
号；Ｄｅｓｃｈａｍｐｓ−Ｄｅｐａｉｌｌｅｔｔｅ，ＰＣＴ国際出願公開第９９／０７４
０９号；およびＬｉら，ＰＣＴ国際出願公開第００／４４９１４号；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，
２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，２００２，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ，２９７，２２１５−２２１８；ならびにＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２９７，２２３２−２２３７；ＨｕｔｖａｇｎｅｒおよびＺａｍｏｒｅ，２００２，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ，２９７，２０５６−６０；ＭｃＭａｎｕｓら，２００２，ＲＮＡ，８、８４
２−８５０；Ｒｅｉｎｈａｒｔら，２００２，Ｇｅｎｅ ＆ Ｄｅｖ．，１６，１６１６
−１６２６；ならびにＲｅｉｎｈａｒｔ ＆ Ｂａｒｔｅｌ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ
，２９７，１８３１）を参照のこと。さらに、ＲＮＡｉという用語は、配列特異的ＲＮＡ
干渉を示すために用いている他の用語、例えば、転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害
、転写阻害、または後成的などと等価であることを意図する。例えば、本発明のｓｉＮＡ
分子は、転写後レベルまたは転写前レベルのいずれかで、後成的遺伝子サイレンシングを
行うために使用され得る。非限定的な例において、本発明のｓｉＮＡ分子による遺伝子発
現の後成的モジュレーションは、遺伝子発現を改変するためのクロマチン構造またはメチ
ル化パターンのｓｉＮＡ媒介性改良の結果、起こるものであり得る（例えば、Ｖｅｒｄｅ
ｌら，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６７２−６７６；Ｐａｌ−Ｂｈａｄｒａら，
２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６６９−６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８−１８１９；Ｖｏｌｐｅら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ
，２９７，１８３３−１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７
，２２１５−２２１８；およびＨａｌｌら，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３
２−２２３７を参照のこと）。別の非限定的な例では、本発明のｓｉＮＡ分子による遺伝
子発現のモジュレーションは、ＲＩＳＣもしくは翻訳阻害によるＲＮＡ（コードＲＮＡも
しくは非コードＲＮＡのいずれか）のｓｉＮＡ媒介性切断の結果、起こるものであり得る
か（当該技術分野で知られている）、またはモジュレーションは、転写阻害の結果、起こ
るものであり得る（例えば、Ｊａｎｏｗｓｋｉら，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１，２１６−２２２を参照のこと）。

語句「ＲＮＡｉ阻害薬」は、細胞または生物体においてＲＮＡ干渉性の機能または活性
を下方調節、低減または阻害し得る任意の分子をいう。ＲＮＡｉ阻害薬は、ＲＮＡｉ（例
えば、標的ポリヌクレオチドのＲＮＡｉ媒介性切断、翻訳阻害、もしくは転写サイレンシ
ング）を、ＲＮＡｉ経路の任意の成分（例えば、ＲＩＳＣなどのタンパク質成分、または
ｍｉＲＮＡもしくはｓｉＲＮＡなどの核酸成分）の機能と相互作用すること、または該機
能を妨げることによって下方調節、低減または阻害し得るものである。ＲＮＡｉ阻害薬は
、ｓｉＮＡ分子、アンチセンス分子、アプタマー、またはＲＩＳＣの機能と相互作用する
、もしくは該機能を妨げる小分子、ｍｉＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡまたは細胞もしくは生
物体のＲＮＡｉ経路の任意の他の成分であり得る。ＲＮＡｉ（例えば、標的ポリヌクレオ
チドのＲＮＡｉ媒介性切断、翻訳阻害、または転写サイレンシング）を阻害することによ
り、本発明のＲＮＡｉ阻害薬は、標的遺伝子の発現をモジュレートする（例えば、上方調
節または下方調節する）ために使用され得る。

語句「センス領域」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその
意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、ｓｉＮＡ分子のアンチセン
ス領域に対して相補性を有する該ｓｉＮＡ分子のヌクレオチド配列をいう。また、ｓｉＮ
Ａ分子のセンス領域は、標的核酸配列と相同性または配列同一性を有する核酸配列を含む
ものであり得る。一実施形態において、ｓｉＮＡ分子のセンス領域はセンス鎖またはパッ
センジャー鎖とも称される。

語句「低分子干渉核酸」、「ｓｉＮＡ」、「低分子干渉ＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「
低分子干渉核酸分子」、「低分子干渉オリゴヌクレオチド分子」、または「化学修飾され
た低分子干渉核酸分子」は、ＲＮＡ干渉「ＲＮＡｉ」または遺伝子サイレンシングを配列
特異的様式で媒介することにより、遺伝子発現またはウイルス複製を阻害または下方調節
し得る任意の核酸分子をいう。これらの用語は、個々の核酸分子、複数のかかる核酸分子
、またはかかる核酸分子のプールのいずれも示し得る。ｓｉＮＡは、自己相補性のセンス
鎖とアンチセンス鎖を含む二本鎖核酸分子であり得、この場合、アンチセンス鎖は、標的
核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含むもので
あり、センス鎖は、標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含むも
のである。ｓｉＮＡは、二本鎖、非対称二本鎖、ヘアピン型または非対称ヘアピン型二次
構造を有し、自己相補性のセンス領域とアンチセンス領域を有するポリヌクレオチドであ
ってもよく、この場合、アンチセンス領域は、別々の標的核酸分子またはその一部分のヌ
クレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含むものであり、センス領域は、標的核酸
配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含むものである。ｓｉＮＡは、２つ
以上のループ構造と、自己相補性のセンス領域およびアンチセンス領域を含む幹部とを有
する環状の一本鎖ポリヌクレオチドであってもよく、この場合、アンチセンス領域は、標
的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含むもの
であり、センス領域は、標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列を含
むものであり、該環状ポリヌクレオチドがインビボまたはインビトロのいずれかでプロセ
ッシングされると、ＲＮＡｉを媒介し得る活性なｓｉＮＡ分子が生成され得る。また、ｓ
ｉＮＡは、標的核酸分子またはその一部分のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配
列を有する一本鎖ポリヌクレオチドを含むものであってもよく（例えば、かかるｓｉＮＡ
分子が、該ｓｉＮＡ分子内に標的核酸配列またはその一部分に対応するヌクレオチド配列
の存在を必要としない場合）、この場合、該一本鎖ポリヌクレオチドは、さらに末端リン
酸基、例えば、５’−リン酸基（例えば、Ｍａｒｔｉｎｅｚら，２００２，Ｃｅｌｌ，１
１０，５６３−５７４およびＳｃｈｗａｒｚら，２００２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌ
ｌ，１０，５３７−５６８を参照のこと）、または５’，３’−二リン酸基などを含んで
いてもよい。

用語「被検体」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意味
を示す。該用語は、一般的に、本発明の核酸分子が投与され得る生物体をいう。被検体は
、哺乳動物または哺乳動物細胞（例えば、ヒトまたはヒト細胞）であり得る。また、該用
語は生物体をいい、これは、採取された細胞のドナーもしくはレシピエントまたは細胞そ
れ自体である。

語句「全身投与」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。該用語は、一般的に、血流中の薬物のインビボでの全身性の吸収または蓄積、
続いて全身への分布をいう。

用語「標的」は、ＣＴＮＮＢ１に言及している場合、任意のＣＴＮＮＢ１標的タンパク
質、ペプチドまたはポリペプチド（表５に示したＧｅｎｂａｎｋ受託番号にコードされて
いるものなど）をいう。また、該用語は、任意の標的タンパク質、ペプチドまたはポリペ
プチド（表５に示したＧｅｎｂａｎｋ受託番号を有する配列にコードされているタンパク
質、ペプチド、またはポリペプチドなど）をコードしている核酸配列または標的ポリヌク
レオチド配列も指す。対象の標的としては、標的ＤＮＡまたは標的ＲＮＡなどの標的ポリ
ヌクレオチド配列が挙げられ得る。また、用語「標的」は、種々のアイソフォーム、変異
型標的遺伝子、標的ポリヌクレオチドのスプライスバリアント、標的多型、および非コー
ド配列（例えば、ｎｃＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｔＲＮＡ、ｓＲＮＡ）または本明細書に記
載の他の調節ポリヌクレオチド配列などの他の配列も包含することを意図する。

語句「標的部位」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。該用語は、一般的に、例えばｓｉＮＡ構築物（そのアンチセンス領域内に標的
配列に相補的な配列を含む）によって媒介される切断のために「標的化される」標的核酸
分子（例えば、ＲＮＡ）内の配列をいう。

語句「治療有効量」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその
意味を示す。該用語は、一般的に、細胞、組織、系、動物またはヒトに生物学的または医
学的応答が誘起される化合物または組成物の量であって、研究者、獣医、医師または他の
臨床師によって模索される量をいう。例えば、所与の臨床処置を、疾患または障害と関連
している測定可能なパラメータに少なくとも２５％の低減が見られたとき有効であるとみ
なす場合、該疾患または障害の処置のための薬物の治療有効量は、該パラメータに少なく
とも２５％の低減をもたらすのに必要な量である。

語句「ユニバーサル塩基」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められ
たその意味を示す。ユニバーサル塩基という用語は、一般的に、天然のＤＮＡ／ＲＮＡの
各塩基と、ほとんどまたは全く区別なく塩基対を形成するヌクレオチド塩基類似体をいう
。ユニバーサル塩基の非限定的な例としては、Ｃ−フェニル、Ｃ−ナフチルおよび他の芳
香族誘導体、イノシン、アゾールカルボキサミド、ならびにニトロアゾール誘導体（３−
ニトロピロール、４−ニトロインドール、５−ニトロインドール、および６−ニトロイン
ドールなど）が挙げられ、当該技術分野で知られている（例えば、Ｌｏａｋｅｓ，２００
１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２９，２４３７−２４４７を参照
のこと）。

用語「上方調節する」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたそ
の意味を示す。本発明の例示的な核酸分子に関して、該用語は、遺伝子の発現、または１
種類以上のタンパク質もしくはタンパク質サブユニットをコードしているＲＮＡ分子もし
くは同等ＲＮＡ分子のレベル、または１種類以上のＲＮＡ、タンパク質もしくはタンパク
質サブユニットの活性を、本発明の核酸分子（例えば、ｓｉＮＡ）の非存在下で観察され
るものよりも上に増大させることをいう。一部の特定の場合では、ｓｉＮＡ分子による遺
伝子発現の上方調節または促進は、不活性分子または減弱分子の存在下で観察されるレベ
ルより上になるものである。他の場合では、ｓｉＮＡ分子による遺伝子発現の上方調節ま
たは促進は、例えば、スクランブル配列またはミスマッチを有するｓｉＮＡ分子の存在下
で観察されるレベルより上になるものである。さらに他の場合では、本発明の核酸分子に
よる遺伝子発現の上方調節または促進は、該核酸分子の存在下の方が非存在下よりも大き
くなるものである。一部の場合では、遺伝子発現の上方調節または促進は、ＲＮＡ媒介性
遺伝子サイレンシングの阻害（上方調節対象の遺伝子の発現を下方調節、阻害またはサイ
レンシングするコードＲＮＡ標的または非コードＲＮＡ標的のＲＮＡｉ媒介性の切断また
はサイレンシングなど）と関連するものである。遺伝子発現の下方調節は、例えば、コー
ドＲＮＡまたはそのコードタンパク質によって、例えば、負のフィードバック効果または
アンタゴニスト効果などによって誘導され得る。遺伝子発現の下方調節は、例えば、対象
遺伝子に対して調節的制御を有する非コードＲＮＡによって、例えば、翻訳阻害、クロマ
チン構造、メチル化、ＲＩＳＣ媒介性ＲＮＡ切断または翻訳阻害による該遺伝子の発現の
サイレンシングによって誘導され得る。そのため、対象遺伝子を下方調節、抑制またはサ
イレンシングする標的の阻害または下方調節は、治療的使用のために対象遺伝子の発現を
上方調節するために使用され得る。

用語「ベクター」は、本明細書で用いる場合、当該技術分野で一般に認められたその意
味を示す。ベクターという用語は、一般的に、１種類以上の核酸分子を送達するために使
用される任意の核酸系および／またはウイルス系の発現系または手法をいう。

Ｂ．本発明のｓｉＮＡ分子
本発明は、ＣＴＮＮＢ１に標的化されるｓｉＮＡを含み、ＣＴＮＮＢ１発現と関連して
いる疾患、例えば、悪性疾患および／または癌を処置するために使用され得る組成物およ
び方法を提供する。本発明の特定の態様および実施形態において、本発明の核酸分子は、
表１ａおよび表１ｂに示された配列の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むもの
である。該ｓｉＮＡはいくつかの形態で提供され得る。例えば、該ｓｉＮＡは、１種類以
上のｓｉＮＡ化合物として単離されたものであってもよく、ＤＮＡプラスミド内の転写カ
セットの形態であってもよい。また、該ｓｉＮＡは化学合成されたものであってもよく、
例えば限定されないが、表１ｃおよび表６に示したような修飾を含むものであってもよい
。したがって、種々の実施形態において、本発明の核酸の少なくとも一方の鎖または１つ
の領域は、配列番号：１〜６３７４からなる配列の群から選択される少なくとも１５個の
ヌクレオチドの配列を含むものである。該ｓｉＮＡは、単独で投与してもよく、他のｓｉ
ＮＡ分子またはＣＴＮＮＢ１関連の疾患もしくは病状を処置するための慣用的な薬剤と共
投与してもよい。

本発明のｓｉＮＡ分子は、ＲＮＡ転写物との相互作用によって、あるいはまた、特定の
遺伝子配列との相互作用によって（この場合、かかる相互作用により、転写レベルもしく
は転写後レベルのいずれかで遺伝子サイレンシングのモジュレーション（例えば限定され
ないが、ＲＮＡｉなど）がもたらされる）、または標的のクロマチン構造またはメチル化
パターンをモジュレートし、標的のヌクレオチド配列を有する標的遺伝子の転写を抑制し
、それによりサイレンシングが媒介される細胞プロセスによって、遺伝子サイレンシング
、具体的にはＣＴＮＮＢ１を媒介するために使用され得る。より具体的には、標的は、Ｃ
ＴＮＮＢ１ ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはｍＲＮＡのいずれかである。

一態様において、本発明は、細胞または哺乳動物においてＣＴＮＮＢ１遺伝子の発現を
阻害するための低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。該ｓｉＮＡは一本鎖であっ
ても二本鎖であってもよい。二本鎖の場合、該ｓｉＮＡはセンス鎖とアンチセンス鎖を含
むものである。アンチセンス鎖は、ＣＴＮＮＢ１遺伝子の発現で形成されるｍＲＮＡの少
なくとも一部分に相補的である。センス鎖は、アンチセンス鎖に相補領域を含むものであ
る。具体的な実施形態において、アンチセンス鎖は、表１ｂに示したアンチセンス配列の
少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むものである。一般的に、二本鎖ｓｉＮＡは
、表１ｂのセンス鎖の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列と、表１ｂのアンチセンス
鎖の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むものである。本発明のｓｉＮＡのヌク
レオチドの１個以上が修飾されていてもよい。修飾を有するさらなる実施形態において、
本発明の一部のｓｉＮＡは、表１ｃに示した配列の群から選択される少なくとも１個のヌ
クレオチド配列を含むものである。他の実施形態において、該ｓｉＮＡは、表１ｃに示し
た配列の群から選択される少なくとも２つの配列を含むものであり、該少なくとも２つの
配列のうち１つは、該少なくとも２つの配列のうちの別の配列に相補的であり、該少なく
とも２つの配列のうち１つは、ＣＴＮＮＢ１遺伝子の発現で生成されるｍＲＮＡの配列に
相補的である。本発明の特定の修飾ｓｉＮＡの例を表１ｃに示す。

本発明の二本鎖ＲＮＡ分子は、対称であっても非対称であってもよい相補的な２つの相
違する別々の鎖、すなわち２本の一本鎖ＲＮＡ分子を含むものであってもよく、２つの相
補的な部分（例えば、センス領域とアンチセンス領域）が、塩基対合しており、かつ１つ
以上の一本鎖「ヘアピン型」領域（すなわち、ループ）によって共有結合されており、例
えば、一本鎖低分子ヘアピン型ポリヌクレオチドまたは環状の一本鎖ポリヌクレオチドに
なっている１つの一本鎖分子を含むものであってもよい。

リンカーは、ポリヌクレオチドリンカーであってもよく、非ヌクレオチドリンカーであ
ってもよい。一部の実施形態において、リンカーは非ヌクレオチドリンカーである。一部
の実施形態において、本発明のヘアピン型または環状のｓｉＮＡ分子には１つ以上のルー
プモチーフが含まれており、該ｓｉＮＡ分子のループ部分の少なくとも１つは生分解性で
ある。例えば、本発明の一本鎖ヘアピン型ｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子のループ部分
のインビボでの分解によって、１、２、３または４個のヌクレオチドを含む３’末端突出
端（３’末端ヌクレオチド突出端など）を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子が生成され得るよう
に設計される。あるいはまた、本発明の環状ｓｉＮＡ分子は、ｓｉＮＡ分子のループ部分
のインビボでの分解によって、約２個のヌクレオチドを含む３’末端突出端（３’末端ヌ
クレオチド突出端など）を有する二本鎖ｓｉＮＡ分子が生成され得るように設計される。

本発明の対称ｓｉＮＡ分子において、センス（パッセンジャー）鎖およびアンチセンス
（ガイド）鎖の各鎖は、独立して、約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８
、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）ヌ
クレオチド長である。一般的に、本発明の対称ｓｉＮＡ分子の各鎖は、約１９〜２４（例
えば、約１９、２０、２１、２２、２３または２４）ヌクレオチド長である。

非対称ｓｉＮＡ分子において、該分子のアンチセンス領域（または鎖）は、約１５〜約
３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５
、２６、２７、２８、２９または３０）ヌクレオチド長であり、そのセンス領域は約３〜
約２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５）ヌクレオチド長
である。一般的に、本発明の非対称ｓｉＮＡ分子の各鎖は約１９〜２４（例えば、約１９
、２０、２１、２２、２３または２４）ヌクレオチド長である。

また他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は一本鎖ヘアピン型ｓｉＮＡ分子を
含むものであり、該ｓｉＮＡ分子は、約２５〜約７０（例えば、約２５、２６、２７、２
８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、４０、４５、５０、５５、６０
、６５または７０）ヌクレオチド長である。

さらに他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は一本鎖の環状ｓｉＮＡ分子を含
むものであり、該ｓｉＮＡ分子は、約３８〜約７０（例えば、約３８、４０、４５、５０
、５５、６０、６５または７０）ヌクレオチド長である。

さらに他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は一本鎖の非環状ｓｉＮＡ分子を
含むものであり、該ｓｉＮＡ分子は、独立して約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、
１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９また
は３０）ヌクレオチド長である。

種々の対称実施形態において、本発明のｓｉＮＡ二本鎖は、独立して、約１５〜約３０
（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２
６、２７、２８、２９または３０）個の塩基対を含むものである。一般的に、本発明のｓ
ｉＮＡの二本鎖構造は、１５〜３０、より一般的には１８〜２５、なおより一般的には１
９〜２４、最も一般的には１９〜２１塩基対長である。

また他の実施形態において、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子が非対称である場合、該ｓｉ
ＮＡ分子は、約３〜２５（例えば、約３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、
１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５
）個の塩基対を含むものである。一般的に、本発明のｓｉＮＡの二本鎖構造は、１５〜２
５、より一般的には１８〜２５、なおより一般的には１９〜２４、最も一般的には１９〜
２１塩基対長である。

さらに他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子がヘアピン型または環状構造であ
る場合、該ｓｉＮＡ分子は、約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９
、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）個の塩基
対を含むものである。

本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖とアンチセンス鎖、またはセンス領域とアンチセンス
領域は相補的であり得る。また、アンチセンス鎖またはアンチセンス領域は、ＣＴＮＮＢ
１標的ＲＮＡのヌクレオチド配列またはその一部分に相補的であり得る。該ｓｉＮＡのセ
ンス鎖またはセンス領域は、ＣＴＮＮＢ１遺伝子またはその一部分のヌクレオチド配列を
含むものであり得る。一部の特定の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス領
域またはセンス鎖は、該ｓｉＮＡ分子のアンチセンス領域またはアンチセンス鎖のＣＴＮ
ＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列（例えば限定されないが、表５に示すＧＥＮＢＡＮＫ受
託番号に代表される配列など）に相補的である部分に相補的である。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖または
センス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域間に完璧な相補性を有するものであ
る。他の実施形態または同じ実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖
は、対応する標的核酸分子に完璧に相補的である。

また他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、該ｓｉＮＡ分子のセンス鎖また
はセンス領域とアンチセンス鎖またはアンチセンス領域間、あるいは該ｓｉＮＡ分子のア
ンチセンス鎖またはアンチセンス領域と、対応する標的核酸分子間に、一部相補性（すな
わち、１００％未満の相補性）を有するものである。したがって、一部の実施形態におい
て、本発明の二本鎖核酸分子は、一方の鎖に、他方の鎖のヌクレオチドに相補的なヌクレ
オチドを約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２
、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）個有するものである。他の実
施形態において、該分子は、二本鎖核酸分子のセンス領域に、アンチセンス領域のヌクレ
オチドに相補的なヌクレオチドを約１５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、
１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０）個有
するものである。一部の特定の実施形態において、本発明の二本鎖核酸分子は、アンチセ
ンス鎖に、その対応する標的核酸分子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチドを約１
５〜約３０（例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４
、２５、２６、２７、２８、２９または３０）個を有するものである。

他の実施形態において、該ｓｉＮＡ分子に１つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミス
マッチおよび／または付加が含有されていてもよい；しかしながら、該ｓｉＮＡ分子は、
例えば、ＲＮＡｉを媒介するその活性を維持しているものとする。非限定的な例において
、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加は、ループまたは隆起部、あるいはまた
、ウォッブル（ｗｏｂｂｌｅ）または他の択一的な（非ワトソン−クリック）塩基対をも
たらすものであり得る。したがって、一部の実施形態において、例えば、本発明の二本鎖
核酸分子は、一方の鎖または領域に、他方の鎖または領域とミスマッチであるか、または
塩基対合していないヌクレオチドを１個以上（例えば、１、２、３、４、５、または６個
）有するものである。他の実施形態において、本発明の二本鎖核酸分子は、各鎖または各
領域内に、他方の鎖または領域とミスマッチであるか、または塩基対合していないヌクレ
オチドを１個以上（例えば、１、２、３、４、５、または６個）有するものである。好ま
しい実施形態において、本発明のｓｉＮＡに含有されるミスマッチは３つ以下である。該
ｓｉＮＡのアンチセンス鎖に標的配列に対するミスマッチが含有されている場合、ミスマ
ッチ領域は相補性領域の中心に存在していないことが好ましい。

他の実施形態において、該ｓｉＮＡ分子に、表１ｂに示した配列に対する１つ以上のヌ
クレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加が含有されていてもよいが、該
ｓｉＮＡ分子は、例えば、ＲＮＡｉを媒介するその活性を維持しているものとする。非限
定的な例において、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加は、ループまたは隆起
部、あるいはまた、ウォッブルまたは他の択一的な（非ワトソン−クリック）塩基対をも
たらすものであり得る。

また、本発明は、第１鎖と第２鎖が互いに相補的であり、少なくとも一方の鎖が表１ｂ
の配列のポリヌクレオチド配列に高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズ可能であ
り、その任意のヌクレオチドは非修飾であるか、または化学修飾されている以外は本明細
書において上記のとおりである二本鎖核酸（ｓｉＮＡ）分子を含むものである。

ハイブリダイゼーション手法は当業者によく知られている（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ
ら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）参照のこと）。好ましい
ストリンジェントハイブリダイゼーション条件としては、５０％ホルムアミド、５×ＳＳ
Ｃ（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウ
ム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト液、１０％硫酸デキストラン、および２０マイクログ
ラム／ｍｌの剪断処理した変性サケ精子ＤＮＡを含む溶液中、４２℃で一晩のインキュベ
ーション；続いて、０．１×ＳＳＣ中、約６５℃でのフィルターの洗浄が挙げられる。

具体的な一実施形態において、第１鎖は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的なヌクレオ
チドを約１５、１６、１７、１８、１９、２０または２１個有し、少なくとも一方の鎖が
表１ｂのポリヌクレオチド配列にハイブリダイズ可能である。より好ましい実施形態にお
いて、第１鎖は、他方の鎖のヌクレオチドに相補的なヌクレオチドを約１５、１６、１７
、１８、１９、２０または２１個有し、少なくとも一方の鎖が配列番号：１、配列番号：
１０４９、配列番号：４３、配列番号：１０９１、配列番号：５１、配列番号：１０９９
、配列番号：５３、または配列番号：１１０１に高ストリンジェンシー条件下でハイブリ
ダイズ可能であり、その任意のヌクレオチドは非修飾であるか、または化学修飾されてい
る。

一部の特定の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、約１〜約４（例えば、約１
、２、３または４）個のヌクレオチドの突出端を含むものである。突出端のヌクレオチド
は同じヌクレオチドであっても異なるヌクレオチドであってもよい。一部の実施形態にお
いて、突出端は二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の３’末端に存在している。例えば
、本発明の二本鎖核酸分子は、二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖／領域の３’末端、セン
ス鎖／領域の３’末端、またはアンチセンス鎖／領域とセンス鎖／領域の両方にヌクレオ
チド突出端または非ヌクレオチド突出端を含むものであり得る。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子の突出端部分を構成するヌクレオチド
は、ＣＴＮＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列を主体とした配列を含むものであり、ここで
、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖／領域の突出端部分を構成するヌクレオチドは
、ＣＴＮＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列内のヌクレオチドに相補的であり得る、および
／または本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖／領域の突出端部分を構成するヌクレオチドは
、ＣＴＮＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列内のヌクレオチドを含むものであり得る。した
がって、一部の実施形態において、突出端は、ＣＴＮＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列の
一部分に相補的な２個のヌクレオチドの突出端を構成している。しかしながら、他の実施
形態では、突出端は、ＣＴＮＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列の一部分に相補的でない２
個のヌクレオチドの突出端を構成している。一部の特定の実施形態において、突出端は、
ＣＴＮＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列の一部分に相補的でない３’−ＵＵ突出端を構成
している。他の実施形態では、突出端は、アンチセンス鎖の３’末端ではＵＵ突出端を構
成しており、センス鎖の３’末端ではＴＴ突出端を構成している。他の実施形態では、突
出端は、本明細書の実施例、表および図に記載のヌクレオチドを含むものである。

本明細書に記載のｓｉＮＡ分子が３’末端ヌクレオチド突出端を有する任意の実施形態
において、突出端は、１つ以上の核酸の糖鎖位置、塩基位置または主鎖位置が化学修飾さ
れていてもよい。本発明の二本鎖核酸（ｓｉＮＡ）分子の突出端部分の修飾ヌクレオチド
の代表的だが限定されない例としては：２’−Ｏ−アルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル
）、２’−デオキシ、２’−デオキシ−２’−フルオロ、２’−デオキシ−２’−フルオ
ロアラビノ（ＦＡＮＡ）、４’−チオ、２’−Ｏ−トリフルオロメチル、２’−Ｏ−エチ
ル−トリフルオロメトキシ、２’−Ｏ−ジフルオロメトキシ−エトキシ、ユニバーサル塩
基、非環式、または５−Ｃ−メチルヌクレオチドが挙げられる。より好ましい実施形態に
おいて、突出端ヌクレオチドは各々、独立して、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’
−Ｏ−メチルヌクレオチド、２’−デオキシ（ｄｅｘｏｙ）−２−フルオロヌクレオチド
、または２’−デオキシリボヌクレオチドである。一部の場合では、突出端ヌクレオチド
は、１つ以上のホスホロチオエート結合によって連結されている。

また他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、平滑端を有する（すなわち、ヌ
クレオチド突出端なし）二本鎖核酸分子を含むものであり、この場合、両方の末端が平滑
であるか、あるいはまた一方の末端が平滑である。一部の実施形態において、本発明のｓ
ｉＮＡ分子は、例えば、アンチセンス鎖の５’末端とセンス鎖の３’末端が全く突出端ヌ
クレオチドを有しない場合１つの平滑端を含むものであり得る。別の例では、該ｓｉＮＡ
分子は、例えば、アンチセンス鎖の３’末端とセンス鎖の５’末端が全く突出端ヌクレオ
チドを有しない１つの平滑端を含むものである。他の実施形態では、本発明のｓｉＮＡ分
子は、例えば、アンチセンス鎖の３’末端とセンス鎖の５’末端ならびにアンチセンス鎖
の５’末端とセンス鎖の３’末端が全く突出端ヌクレオチドを有しない２つの平滑端を含
むものである。

本発明のｓｉＮＡ分子の任意の実施形態または態様において、センス鎖および／または
アンチセンス鎖は、さらに、キャップ（本明細書に記載のもの、または当該技術分野で知
られたものなど）を、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の３’末端、５’末端、ま
たは３’末端と５’末端の両方に有するものであり得る。あるいは、ヘアピン型ｓｉＮＡ
分子の場合のように、キャップは、該ポリヌクレオチドの末端ヌクレオチドのいずれか一
方に存在していても両方に存在していてもよい。一部の実施形態において、キャップは、
二本鎖ｓｉＮＡ分子のセンス鎖の末端の一方または両方（ｏｎｅ ｏｆ ｂｏｔｈ ｏｆ
ｅｎｄｓ ｏｆ）に存在している。他の実施形態では、キャップは、アンチセンス（ガ
イド）鎖の３’末端に存在している。好ましい実施形態では、キャップは、センス鎖の３
’末端とセンス鎖の５’末端に存在している。

かかる末端キャップの代表的だが非限定的な例としては、逆位無塩基ヌクレオチド、逆
位デオキシ無塩基ヌクレオチド、逆位ヌクレオチド部分、図５に示した基、グリセリル修
飾、アルキルもしくはシクロアルキル基、複素環、または当該技術分野で一般的に知られ
た任意の他のキャップが挙げられる。

本発明のｓｉＮＡ分子の実施形態はいずれも、５’リン酸末端基を有するものであって
もよい。一部の実施形態では、該ｓｉＮＡ分子に末端リン酸基がない。

本発明のｓｉＮＡ分子または構築物はいずれも、１つ以上の化学修飾を含むものであっ
てもよい。修飾は、インビトロまたはインビボでの特性、例えば、安定性、活性、毒性、
免疫応答（例えば、インターフェロン応答、炎症性もしくは炎症促進性のサイトカイン応
答、あるいはＴｏｌｌ様受容体（ＴｌＦ）応答の刺激の抑制）および／またはバイオアベ
イラビリティなどを改善するために使用され得る。

本出願人は、本明細書において、対応する非修飾型ｓｉＮＡ分子と比べてＲＮＡｉの活
性および／または安定性が改善された化学修飾ｓｉＮＡ分子を説明する。本明細書におい
て開示する種々の化学修飾ｓｉＮＡモチーフにより、非修飾型または修飾が最小限の活性
なｓｉＲＮＡと実質的に同様のＲＮＡｉ活性を維持する能力がもたらされる（例えば、Ｅ
ｌｂａｓｈｉｒら，２００１，ＥＭＢＯ Ｊ．，２０：６８７７−６８８８を参照のこと
）と同時に、治療適用用途における使用に適したヌクレアーゼ抵抗性および薬物動態特性
がもたらされる。

種々の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は修飾を含むものであり、この場合、
センスおよび／またはアンチセンス鎖に存在している任意（例えば、１つ以上または全部
）のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである（例えば、１個のヌクレオチドが修飾されて
いる、いくつかのヌクレオチド（すなわち、複数もしくは１個より多く）が修飾されてい
る、または全部のヌクレオチドが修飾ヌクレオチドである。一部の実施形態において、本
発明のｓｉＮＡ分子は、化学修飾により一部修飾されたものである（例えば、約１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８
、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、
３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４
５、４６、４７、４８、４９、５０、５５または５９個のヌクレオチドが修飾されている
）。一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、修飾ヌクレオチドである少なく
とも約８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２
、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８ま
たは６０個のヌクレオチドを含むものである。他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ
分子は、化学修飾により完全に修飾されたものである（例えば、１００％修飾されている
）、すなわち、該ｓｉＮＡ分子にはリボヌクレオチドが全く含有されていない。一部の実
施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖のヌクレオチドの１個以上が修飾され
ている。同じ実施形態または他の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセン
ス鎖のヌクレオチドの１個以上が修飾されている。

単一のｓｉＮＡ分子内の化学修飾は同じであっても異なっていてもよい。一部の実施形
態において、少なくとも一方の鎖が少なくとも１つの化学修飾を有する。他の実施形態に
おいて、各鎖は、同じであっても異なっていてもよい少なくとも１つの化学修飾（例えば
、糖鎖、塩基、または主鎖（すなわち、ヌクレオチド間結合）の修飾）を有する。他の実
施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、少なくとも２、３、４、５個またはそれ以上
の異なる化学修飾を含むものである。

本発明における使用に適した化学修飾の非限定的な例は、米国特許出願第１０／４４４
，８５３号；同第１０／９８１，９６６号；同第１２／０６４，０１４号およびこれらに
挙げられた参考文献に開示されており、糖鎖、塩基およびリン酸基、非ヌクレオチドの修
飾、および／またはその任意の組合せが挙げられる。

本発明の特定の具体的な実施形態において、少なくとも１個の修飾ヌクレオチドは、２
’−デオキシ−２−フルオロヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチド、２’−Ｏ−ア
ルキル（例えば、２’−Ｏ−メチル）ヌクレオチド、またはロックド核酸（ＬＮＡ）ヌク
レオチド（当該技術分野で一般的に認知されている）である。

本発明のまた他の実施形態において、少なくとも１個のヌクレオチドは、リボ様Ｎｏｒ
ｔｈｅｒｎまたはＡ型ヘリックス立体配置を有するものである（例えば、Ｓａｅｎｇｅｒ
，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ編，１９８４参照）。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ立体配置を有するヌ
クレオチドの非限定的な例としては、ロックド核酸（ＬＮＡ）ヌクレオチド（例えば、２
−０、４’−Ｃ−メチレン−（Ｄ−リボフラノシル）ヌクレオチド）；２’−メトキシエ
トキシ（ＭＯＥ）ヌクレオチド；２’−メチル−チオ−エチルヌクレオチド、２’−デオ
キシ−２’−フルオロヌクレオチド；２’−デオキシ−２’−クロロヌクレオチド；２’
−アジドヌクレオチド；２’−Ｏ−トリフルオロメチルヌクレオチド；２’−Ｏ−エチル
−トリフルオロメトキシヌクレオチド；２’−Ｏ−ジフルオロメトキシ−エトキシヌクレ
オチド；４’−チオヌクレオチドおよび２’−Ｏ−メチルヌクレオチドが挙げられる。

種々の実施形態において、二本鎖ｓｉＮＡ分子に存在しているピリミジンヌクレオチド
の大部分（例えば、５０％より多く）は糖鎖修飾を含むものである。一部の同じおよび／
または他の実施形態において、二本鎖ｓｉＮＡ分子に存在しているプリンヌクレオチドの
大部分（例えば、５０％より多く）は糖鎖修飾を含むものである。

一部の実施形態において、アンチセンス鎖内のピリミジンヌクレオチドは２’−Ｏ−メ
チルまたは２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、アンチセン
ス鎖内に存在しているプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルヌクレオチドまたは２’−
デオキシヌクレオチドである。他の実施形態において、センス鎖内のピリミジンヌクレオ
チドは２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、センス鎖内に存
在しているプリンヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルまたは２’−デオキシプリンヌクレオ
チドである。

本発明の一部の特定の実施形態において、センス鎖上の相補領域内のピリミジンヌクレ
オチドはすべて、２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。一部
の特定の実施形態において、アンチセンス鎖の相補領域内のピリミジンヌクレオチドはす
べて、２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。一部の特定の実
施形態において、センス鎖上の相補領域内のプリンヌクレオチドはすべて、２’−デオキ
シプリンヌクレオチドである。一部の特定の実施形態において、アンチセンス鎖上の相補
領域内のプリンはすべて、２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである。一部の特定の実
施形態において、センス鎖上の相補領域内のピリミジンヌクレオチドはすべて、２’−デ
オキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである；アンチセンス鎖の相補領域内の
ピリミジンヌクレオチドはすべて、２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオ
チドである；センス鎖上の相補領域内のプリンヌクレオチドはすべて、２’−デオキシプ
リンヌクレオチドであり、アンチセンス鎖上の相補領域内のプリンはすべて、２’−Ｏ−
メチルプリンヌクレオチドである。

一部の実施形態において、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも
５個またはそれ以上が２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。
一部の実施形態において、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも５
個またはそれ以上が２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである。一部の実施形態に
おいて、一方または両方の鎖のプリンヌクレオチドの少なくとも５個またはそれ以上が２
’−デオキシ−２’−フルオロプリンヌクレオチドである。一部の実施形態において、一
方または両方の鎖のプリンヌクレオチドの少なくとも５個またはそれ以上が２’−Ｏ−メ
チルプリンヌクレオチドである。

一部の特定の実施形態において、プリンとピリミジンは、糖鎖の２’位が異なるように
修飾されている（すなわち、同じ鎖または異なる鎖の糖鎖の２’位において、少なくとも
１個のプリンは少なくとも１個のピリミジンと異なる修飾を有する）。例えば、一部の場
合では、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくとも５個またはそれ以上
が２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドであり、一方または両方の鎖
の少なくとも５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレ
オチドである。他の場合では、一方または両方の鎖のピリミジンヌクレオチドの少なくと
も５個またはそれ以上が２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドであり、一方または両
方の鎖の少なくとも５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−
フルオロプリンヌクレオチドである。

種々の修飾および修飾パターンを有するかかるｓｉＮＡ分子のセンス鎖およびアンチセ
ンス鎖のさらなる非限定的な例を図２と３に示す。

上記のいずれかの修飾またはその組合せ（引用した参考文献のものを含む）が本発明の
任意のｓｉＮＡ分子に適用され得る。

本発明の修飾ｓｉＮＡ分子では、該ｓｉＮＡ分子内の種々の位置に修飾を含めることが
できる。一部の実施形態において、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は修飾ヌクレオチドを、
該ｓｉＮＡ二本鎖内の内部塩基対合位置に含んでいる。他の実施形態では、本発明の二本
鎖ｓｉＮＡ分子は修飾ヌクレオチドを、該ｓｉＮＡ分子の非塩基対合領域または突出端領
域に含んでいる。また他の実施形態では、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子は修飾ヌクレオチ
ドを、該ｓｉＮＡ分子の末端位置に含んでいる。例えば、かかる末端領域としては、該ｓ
ｉＮＡ分子のセンスおよび／またはアンチセンス鎖（または領域）の３’位および／また
は５’位が挙げられる。さらに、本発明の修飾ｓｉＮＡ分子はいずれも、修飾を、該ｓｉ
ＮＡ二本鎖の一方または両方のオリゴヌクレオチド鎖（例えば、センス鎖、アンチセンス
鎖、または両鎖）内に有するものであり得る。さらに、本発明のｓｉＮＡ分子の化学修飾
に関して、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子の各鎖は１つ以上の化学修飾を有していてもよく
、その結果、各鎖は異なる化学修飾パターンを含むものになる。

一部の特定の実施形態において、本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子の各鎖は、異なる化学修
飾パターン、例えば、本明細書に記載のいずれかのＳｔａｂ修飾化学構造（表９参照）ま
たはその任意の組合せ、すなわち、規定の安定化化学構造（Ｓｔａｂｉｌｚａｔｉｏｎ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）（Ｓｔａｂ）の異なる組合せのセンス鎖とアンチセンス鎖を含むも
のである。さらに、異なる修飾パターンが生じ得る修飾スキームの非限定的な例を表９に
示す。表９にＳｔａｂと示した安定化化学構造は、センス／アンチセンス化学構造の任意
の組合せで組み合わせることができる（Ｓｔａｂ ７／８、Ｓｔａｂ ７／１１、Ｓｔａ
ｂ ８／８、Ｓｔａｂ １８／８、Ｓｔａｂ １８／１１、Ｓｔａｂ １２／１３、Ｓｔ
ａｂ ７／１３、Ｓｔａｂ １８／１３、Ｓｔａｂ ７／１９、Ｓｔａｂ ８／１９、Ｓ
ｔａｂ １８／１９、Ｓｔａｂ ７／２０、Ｓｔａｂ ８／２０、Ｓｔａｂ １８／２０
、Ｓｔａｂ ７／３２、Ｓｔａｂ ８／３２、もしくはＳｔａｂ １８／３２など、また
は任意の他の安定化化学構造の組合せ）。

本発明の任意のｓｉＮＡにおいて、該ｓｉＮＡ分子のガイド鎖またはガイド領域（アン
チセンス鎖またはアンチセンス領域としても知られている）の５’末端の１個以上（例え
ば、１、２、３、４または５個）のヌクレオチドはリボヌクレオチドである。

一部の特定の実施形態において、本発明は、ＣＴＮＮＢ１の発現をモジュレートする二
本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、該ｓｉＮＡがセンス鎖とアンチセンス鎖
を含むものであり；各鎖が、独立して１５〜３０ヌクレオチド長であり；該アンチセンス
鎖が：
５’−ＣＵＧＵＵＧＧＡＵＵＧＡＵＵＣＧＡＡＡ−３’（配列番号：５）；
５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９４）；
５’−ＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵＣＧＵ−３’（配列番号：１９６）；または
５’−ＣＣＡＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号：１５１）
のいずれかに相補配列を有する少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレ
オチドを含むものである、二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を提供する。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子のアンチセンス鎖は：
５’−ＵＵＵＣＧＡＡＵＣＡＡＵＣＣＡＡＣＡＧ−３’（配列番号：４９１８）；
５’−ＡＡＧＣＡＡＣＵＧＡＡＣＵＡＧＵＣＧＵ−３’（配列番号：５１０７）；
５’−ＡＣＧＡＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣ−３’（配列番号：５１０９）；または
５’−ＡＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣＵＧＧ−３’（配列番号：５０６４）
の少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレオチドの配列を含むものであ
る。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子のセンス鎖は：
５’−ＣＵＧＵＵＧＧＡＵＵＧＡＵＵＣＧＡＡＡ−３’（配列番号：５）；
５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９４）；
５’−ＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵＣＧＵ−３’（配列番号：１９６）；または
５’−ＣＣＡＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号：１５１）
の少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレオチドの配列を含むものであ
る。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は：
５’−ＣＵＧＵＵＧＧＡＵＵＧＡＵＵＣＧＡＡＡ−３’（配列番号：５）と５’−ＵＵＵ
ＣＧＡＡＵＣＡＡＵＣＣＡＡＣＡＧ−３’（配列番号：４９１８）；または
５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９４）と５’−Ａ
ＡＧＣＡＡＣＵＧＡＡＣＵＡＧＵＣＧＵ−３’（配列番号：５１０７）；または
５’−ＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵＣＧＵ−３’（配列番号：１９６）と５’−Ａ
ＣＧＡＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣ−３’（配列番号：５１０９）；または
５’−ＣＣＡＧＧＡＵＧＡＵＣＣＵＡＧＣＵＡＵ−３’（配列番号：１５１）と５’−Ａ
ＵＡＧＣＵＡＧＧＡＵＣＡＵＣＣＵＧＧ−３’（配列番号：５０６４）
のいずれかを含むものである。

上記のいずれかの修飾またはその組合せ（引用した参考文献のものを含む）がこれらの
任意の実施形態に適用され得る。

一部の特定の実施形態において、配列番号：５、配列番号：４９１８、配列番号：１９
４、配列番号：５１０７、配列番号：１９６、配列番号：５１０９、配列番号：１５１、
または配列番号：５０６４の該少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌクレ
オチドの配列のヌクレオチドは、連続したヌクレオチド鎖を形成している。

一部の実施形態において、該ｓｉＮＡ分子に、配列番号：５、配列番号：４９１８、配
列番号：１９４、配列番号：５１０７、配列番号：１９６、配列番号：５１０９、配列番
号：１５１、または配列番号：５０６４の少なくとも１５、１６、１７、１８または１９
個のヌクレオチド配列に対する１つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、ミスマッチおよび
／または付加が含有されていてもよい；しかしながら、該ｓｉＮＡ分子は、例えば、ＲＮ
Ａｉを媒介するその活性を維持しているものとする。非限定的な例において、該欠失、置
換、ミスマッチおよび／または付加は、ループまたは隆起部、あるいはまた、ウォッブル
または他の択一的な（非ワトソン−クリック）塩基対をもたらすものであり得る。

本発明の一部の特定の実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖を有し、下記式（
Ａ）：

を含む二本鎖ｓｉＮＡ分子を提供し、
式中、上側の鎖は該二本鎖核酸分子のセンス鎖であり、下側の鎖はアンチセンス鎖であ
り；該アンチセンス鎖は、配列番号：４９１８、配列番号：５１０７、配列番号：５１０
９、または配列番号：５０６４の少なくとも１５、１６、１７、１８または１９個のヌク
レオチドの配列を含むものであり、該センス鎖は、該アンチセンス鎖に対して相補性を有
する配列を含むものであり；
各Ｎは、独立して非修飾もしくは化学修飾ヌクレオチドまたは非ヌクレオチドであり；
各Ｂは、存在する、または存在しない末端キャップであり；
（Ｎ）は、突出端ヌクレオチド（各々、独立して非修飾または化学修飾）を表し；
［Ｎ］は、リボヌクレオチドであるヌクレオチドを表し；
Ｘ１およびＸ２は、独立して、０〜４の整数であり；
Ｘ３は、１５〜３０の整数であり；
Ｘ４は、９〜３０の整数であり；
Ｘ５は、０〜６の整数であるが、Ｘ４とＸ５の和は１５〜３０であるものとする。

一部の特定の実施形態において、配列番号：４９１８、配列番号：５１０７、配列番号
：５１０９、または配列番号：５０６４の該少なくとも１５、１６、１７、１８または１
９個のヌクレオチドの配列のヌクレオチドは、連続したヌクレオチド鎖を形成している。

一部の実施形態において、式ＡのｓｉＮＡ分子は、配列番号：４９１８、配列番号：５
１０７、配列番号：５１０９、または配列番号：５０６４の少なくとも１５、１６、１７
、１８または１９個のヌクレオチド配列に対する１つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、
ミスマッチおよび／または付加が含有されていてもよい；しかしながら、該ｓｉＮＡ分子
は、例えば、ＲＮＡｉを媒介するその活性を維持しているものとする。非限定的な例にお
いて、該欠失、置換、ミスマッチおよび／または付加は、ループまたは隆起部、あるいは
また、ウォッブルまたは他の択一的な（非ワトソン−クリック）塩基対をもたらすもので
あり得る。

一実施形態において、本発明は、
（ａ）Ｎ_Ｘ４位の１個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレ
オチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである；
（ｂ）Ｎ_Ｘ４位の１個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’
−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチ
ド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである；
（ｃ）Ｎ_Ｘ３位の１個以上のピリミジンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−
２’−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレ
オチド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである；および
（ｄ）Ｎ_Ｘ３位の１個以上のプリンヌクレオチドが、独立して、２’−デオキシ−２’
−フルオロヌクレオチド、２’−Ｏ−アルキルヌクレオチド、２’−デオキシヌクレオチ
ド、リボヌクレオチド、またはその任意の組合せである、
式（Ａ）の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）を特色とする。

一部の特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）Ｎ_Ｘ４位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチド
が２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）Ｎ_Ｘ４位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−
Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）Ｎ_Ｘ３位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２
’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；および
（ｄ）Ｎ_Ｘ３位１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−デ
オキシヌクレオチドである、
式（Ａ）の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を特色とする。

一部の特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）Ｎ_Ｘ４位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２
’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｂ）Ｎ_Ｘ４位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌ
クレオチドである；
（ｃ）Ｎ_Ｘ３位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２
’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）Ｎ_Ｘ３位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドがリボヌ
クレオチドである、
式（Ａ）の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を特色とする。

一部の特定の実施形態において、本発明は、
（ａ）Ｎ_Ｘ４位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２
’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである；
（ｂ）Ｎ_Ｘ４位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−
Ｏ−アルキルヌクレオチドである；
（ｃ）Ｎ_Ｘ３位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のピリミジンヌクレオチドが２
’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである；および
（ｄ）Ｎ_Ｘ３位の１、２、３、４、５個またはそれ以上のプリンヌクレオチドが２’−
デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、
式（Ａ）の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を特色とする。

一部の特定の実施形態において、本発明は、さらに１つ以上のホスホロチオエートヌク
レオチド間結合を含む式（Ａ）の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を特色とする。

一部の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、該核酸分子のアンチセンス鎖
またはアンチセンス領域の５’末端に末端リン酸基を含むものである。

種々の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、Ｘ５＝０、１、２または３；
各Ｘ１およびＸ２＝１または２；Ｘ３＝１８、１９、２０、２１、２２または２３、およ
びＸ４＝１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３を含むものである。

一部の特定の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子はＸ５＝３を含むものであ
る。他の実施形態では、式Ａを有するｓｉＮＡ分子はＸ５＝０を含むものである。

一部の特定の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子はＸ１＝２およびＸ２＝２
を含むものである。

種々の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、Ｘ５＝０、Ｘ１＝２、および
Ｘ２＝２を含むものである。他の実施形態では、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、Ｘ５＝３
、Ｘ１＝２、およびＸ２＝２を含むものである。

具体的な一実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、Ｘ５＝３；各Ｘ１および
Ｘ２＝２；Ｘ３＝１９、およびＸ４＝１６を含むものである。

別の具体的な実施形態では、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、Ｘ５＝０；各Ｘ１およびＸ
２＝２；Ｘ３＝１９、およびＸ４＝１９を含むものである。

一部の特定の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、センス鎖またはセンス
領域の３’末端と５’末端にキャップ（Ｂ）を含むものである。

一部の特定の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖または
アンチセンス領域の３’末端にキャップ（Ｂ）を含むものである。

種々の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、センス鎖またはセンス領域の
３’末端と５’末端にキャップ（Ｂ）およびアンチセンス鎖またはアンチセンス領域の３
’末端にキャップ（Ｂ）を含むものである。

また他の実施形態では、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、該二本鎖核酸分子のセンス（上
側の）鎖の５’末端のみにキャップ（Ｂ）を含むものである。

一部の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、さらに、ヌクレオチド間に１
つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むものである。一部の特定の実施形
態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、第１末端（Ｎ）と、該核酸分子のセンス鎖、
アンチセンス鎖、またはセンス鎖とアンチセンス鎖の両方の３’末端上の隣接ヌクレオチ
ドとの間に１つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含むものである。例えば
、該二本鎖核酸分子は、Ｘ１および／またはＸ２＝２を含み、ホスホロチオエートヌクレ
オチド間結合を有する突出端ヌクレオチド位置（例えば、（ＮｓＮ）（式中、「ｓ」はホ
スホロチオエートを示す）を有するものであり得る。

一部の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子のヌクレオチドの１個以上はユニ
バーサル塩基を有するものである。

一部の特定の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖の５’
末端から１４位のヌクレオチドがプリンである場合、該１４位にリボヌクレオチドを有す
るものである。他の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖の
５’末端から１４位のヌクレオチドがピリミジンヌクレオチドである場合、該１４位にリ
ボヌクレオチド、２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドまたは２’−Ｏ−メチル
ヌクレオチドを有するものである。

一部の実施形態において、式Ａを有するｓｉＮＡ分子は、アンチセンス鎖（下側の鎖）
内に、ＣＴＮＮＢ１標的ポリヌクレオチド配列（これも、アンチセンス（下側の）鎖Ｎお
よび［Ｎ］ヌクレオチドに対して相補性を有する）内のヌクレオチドに相補的な（Ｎ）ヌ
クレオチドを含むものである。

一部の特定の実施形態において、本発明の１つ以上のｓｉＮＡ分子は、ＵＳＳＮ６１／
４０８，４２８およびＵＳＳＮ６１／４０８，３０３（どちらも引用により本明細書に組
み込まれる）に図示および記載された修飾基準に従って修飾される。

本発明のｓｉＮＡに適用可能であると上記において論考した上記の任意の修飾、または
その組合せ（引用した参考文献のものを含む）は、本発明のｓｉＮＡ分子の任意の実施形
態に適用可能である。

Ｃ．ｓｉＮＡ分子の作製／合成
本発明のｓｉＮＡは、当業者に知られたいくつかの手法を用いて得ることができる。例
えば、該ｓｉＮＡは、化学合成され得るものであってもよく、プラスミドにコードされた
ものであってもよい（例えば、ヘアピン型ループを有する二本鎖に自動的にフォールディ
ングする配列として転写される）。また、該ｓｉＮＡは、長鎖ｄｓＲＮＡ（例えば、約２
５ヌクレオチド長より大きいｄｓＲＮＡ）を大腸菌ＲＮａｓｅ ＩＩまたはダイサーによ
って切断することにより作製したものであってもよい。これらの酵素により、ｄｓＲＮＡ
はプロセッシングされて生物学的に活性なｓｉＲＮＡになる（例えば、Ｙａｎｇら，ＰＮ
ＡＳ ＵＳＡ ９９：９９４２−９９４７（２００２）；Ｃａｌｅｇａｒｉら ＰＮＡＳ
ＵＳＡ ９９：１４２３６（２００２）Ｂｙｒｏｎら Ａｍｂｉｏｎ Ｔｅｃｈ Ｎｏ
ｔｅｓ；１０（１）：４−６（２００９）；Ｋａｗａｓｋｉら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉ
ｄｓ Ｒｅｓ．，３１：９８１−９８７（２００３），ＫｎｉｇｈｔおよびＢａｓｓ，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２９３：２２６９−２２７１（２００１）ならびにＲｏｂｅｒｓｔｏｎら
，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２４３：８２（１９６９）を参照のこと。

１．化学合成
好ましくは、本発明のｓｉＮＡは化学合成されたものである。オリゴヌクレオチド（例
えば、一部の特定の修飾オリゴヌクレオチドまたはリボヌクレオチドがないオリゴヌクレ
オチドの一部分）は、例えば、Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら，１９９２，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２１１，３−１９、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，ＰＣＴ国際出願公開
第９９／５４４５９号、Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．２３，２６７７−２６８４、Ｗｉｎｃｏｔｔら，１９９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏ．，７４，５９、Ｂｒｅｎｎａｎら，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉ
ｏｅｎｇ．，６１，３３−４５、およびＢｒｅｎｎａｎ，米国特許第６，００１，３１１
号に記載された、当該技術分野で知られたプロトコルを用いて合成される。オリゴヌクレ
オチドの合成では、一般的な核酸用保護基およびカップリング基（５’末端にジメトキシ
トリチル、および３’末端にホスホルアミダイトなど）が利用される。

修飾のないｓｉＮＡ分子は、Ｕｓｍａｎら，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，
１０９，７８４５；Ｓｃａｒｉｎｇｅら，１９９０，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，１８，５４３３に記載の手順を用いて合成される。この合成では、一般的な核酸用
保護基およびカップリング基が利用される（５’末端にジメトキシトリチル、および３’
末端にホスホルアミダイトなど、これらは、本発明の一部の特定のｓｉＮＡ分子に使用さ
れ得る）。

一部の特定の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、米国特許第６，９９５，２
５９号、同第６，６８６，４６３号、同第６，６７３，９１８号、同第６，６４９，７５
１号、同第６，９８９，４４２号、および米国特許出願第１０／１９０，３５９号に記載
の方法に従って合成され、脱保護され、解析される。

非限定的な合成の一例において、小規模合成は、３９４ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．製の合成装置にて、０．２μｍｏｌ規模プロトコルを使用し、２’
−Ｏ−メチル化ヌクレオチドでは２．５分間のカップリング工程を、２’−デオキシヌク
レオチドまたは２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドでは４５秒間のカップリン
グ工程を用いて行われる。表１０に、合成サイクルで使用した試薬の量および接触時間の
概略を示す。

あるいはまた、本発明のｓｉＮＡ分子は、別々に合成し、合成後に、例えば、ライゲー
ションによって（Ｍｏｏｒｅら，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６，９９２３；Ｄｒａ
ｐｅｒら，ＰＣＴ国際出願公開第９３／２３５６９号；Ｓｈａｂａｒｏｖａら，１９９１
，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９，４２４７；Ｂｅｌｌｏｎら，
１９９７，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１６，９５１；Ｂｅ
ｌｌｏｎら，１９９７，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．８，２０４）、あるいは
合成および／または脱保護後にハイブリダイゼーションによって、一緒に連接してもよい
。

また、本発明の種々のｓｉＮＡ分子を、Ｓｃａｒｉｎｇｅら，米国特許第５，８８９，
１３６号；同第６，００８，４００号；および同第６，１１１，０８６号の教示を用いて
合成することもできる。

２．ベクター発現
あるいはまた、標的ＣＴＮＮＢ１分子をコードする遺伝子と相互作用して下方調節する
本発明のｓｉＮＡ分子を、ＤＮＡまたはＲＮＡベクター内に挿入した転写単位（例えば、
Ｃｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ．，１２，５１０を参照のこと）から発現させて送
達してもよい。組換えベクターは、ＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターであり得る
。ｓｉＮＡ発現ウイルスベクターは、限定されないが、アデノ随伴ウイルス、レトロウイ
ルス、アデノウイルス、またはアルファウイルスをベースにして構築され得る。

一部の実施形態では、ｐｏｌ ＩＩＩ系構築物を用いて本発明の核酸分子を発現させる
。該ｓｉＮＡ分子配列の転写は、真核生物のＲＮＡポリメラーゼＩ（ｐｏｌ Ｉ）、ＲＮ
ＡポリメラーゼＩＩ（ｐｏｌ ＩＩ）、またはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ（ｐｏｌ ＩＩ
Ｉ）のプロモーターにより駆動させることができる（例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，米国特
許第５，９０２，８８０号および同第６，１４６，８８６号を参照のこと）。（また、Ｉ
ｚａｎｔおよびＷｅｉｎｔｒａｕｂ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９，３４５；Ｍｃ
ＧａｒｒｙおよびＬｉｎｄｑｕｉｓｔ，１９８６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．，ＵＳＡ ８３，３９９；Ｓｃａｎｌｏｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８，１０５９１−５；Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂｅｔら，１９９
２，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２，３−１５；Ｄｒｏｐｕｌｉｃら，１９
９２，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６６，１４３２−４１；Ｗｅｅｒａｓｉｎｇｈｅら，１９９１
，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６５，５５３１−４；Ｏｊｗａｎｇら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９，１０８０２−６；Ｃｈｅｎら，１９９２，Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２０，４５８１−９；Ｓａｒｖｅｒら，１９９０
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４７，１２２２−１２２５；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，１９９５，Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２３，２２５９；Ｇｏｏｄら，１９９７，Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ，４，４５も参照のこと。ｐｏｌ ＩＩまたはｐｏｌ ＩＩＩプロモータ
ーによる転写物は、あらゆる細胞において高レベルで発現される；所与の細胞型における
所与のｐｏｌ ＩＩプロモーターのレベルは、近くに存在している遺伝子調節配列（エン
ハンサー、サイレンサーなど）の性質に依存する。また、原核生物のＲＮＡポリメラーゼ
プロモーターも使用されるが、原核生物のＲＮＡポリメラーゼ酵素は、適切な細胞におい
て発現させるものとする（Ｅｌｒｏｙ−ＳｔｅｉｎおよびＭｏｓｓ，１９９０，Ｐｒｏｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７，６７４３−７；ＧａｏおよびＨｕａｎｇ
１９９３，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２１，２８６７−７２；Ｌｉｅｂ
ｅｒら，１９９３，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２１７，４７−６６；Ｚｈｏｕら
，１９９０，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１０，４５２９−３７）。数名の研究者ら
により、かかるプロモーターにより発現させた核酸分子は、哺乳動物の細胞において機能
を果たし得ることが示されている（例えば、Ｋａｓｈａｎｉ−Ｓａｂｅｔら，１９９２，
Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２，３−１５；Ｏｊｗａｎｇら，１９９２，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９，１０８０２−６；Ｃｈｅｎら，１
９９２，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２０，４５８１−９；Ｙｕら，１９９
３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０，６３４０−４；Ｌ’Ｈｕｉ
ｌｌｉｅｒら，１９９２，ＥＭＢＯ Ｊ．，１１，４４１１−８；Ｌｉｓｚｉｅｗｉｃｚ
ら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，９０，８０００−
４；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２３，２
２５９；Ｓｕｌｌｅｎｇｅｒ ＆ Ｃｅｃｈ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６２，１５
６６）。より具体的には、Ｕ６核内低分子（ｓｎＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲ
ＮＡ）およびアデノウイルスＶＡ ＲＮＡをコードしている遺伝子に由来するものなどの
転写単位が、細胞内に高濃度の所望のＲＮＡ分子（ｓｉＮＡなど）を生成させるのに有用
である（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，上掲；ＣｏｕｔｕｒｅおよびＳｔｉｎｃｈｃｏｍｂ，１９
９６，上掲；Ｎｏｏｎｂｅｒｇら，１９９４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，２
２，２８３０；Ｎｏｏｎｂｅｒｇら，米国特許第５，６２４，８０３号；Ｇｏｏｄら，１
９９７，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，４，４５；Ｂｅｉｇｅｌｍａｎら，ＰＣＴ国際出願公開
第９６／１８７３６号。上記のｓｉＮＡ転写単位は、哺乳動物の細胞内への導入のための
多種多様なベクター内に、例えば限定されないが、プラスミドＤＮＡベクター、ウイルス
ＤＮＡベクター（アデノウイルスもしくはアデノ随伴ウイルスベクターなど）、またはウ
イルスＲＮＡベクター（レトロウイルスもしくはアルファウイルスベクターなど）に組み
込まれ得る（概説については、ＣｏｕｔｕｒｅおよびＳｔｉｎｃｈｃｏｍｂ，１９９６（
上掲）を参照のこと）。

本発明のｓｉＮＡ分子を発現させるために使用されるベクターは、ｓｉＮＡ二本鎖の一
方または両方の鎖をコードするものであってもよく、自己ハイブリダイズしてｓｉＮＡ二
本鎖になる単一の自己相補的鎖をコードするものであってもよい。本発明のｓｉＮＡ分子
をコードしている核酸配列は、該ｓｉＮＡ分子の発現を可能にする様式で作動可能に連結
され得る（例えば、Ｐａｕｌら，２００２，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
，１９，５０５；ＭｉｙａｇｉｓｈｉおよびＴａｉｒａ，２００２，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，４９７；Ｌｅｅら，２００２，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９，５００；ならびにＮｏｖｉｎａら，２００２，Ｎａｔｕｒｅ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，事前にオンライン公開されたｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ７２５
参照）。

Ｄ．担体／送達系
本発明のｓｉＮＡ分子は標的細胞または標的組織に直接添加するか、またはカチオン性
脂質と複合体形成させてもよく、リポソーム内に封入してもよく、該ｓｉＮＡ分子を発現
する組換えプラスミドもしくはウイルスベクターとして、あるいは別の様式で送達しても
よい。核酸分子の送達方法は、Ａｋｈｔａｒら，１９９２，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏ．，２，１３９；Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｓｅ
ｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ａｋｈｔａｒ編
，１９９５，Ｍａｕｒｅｒら，１９９９，Ｍｏｌ．Ｍｅｍｂｒ．Ｂｉｏｌ．，１６，１２
９−１４０；ＨｏｆｌａｎｄおよびＨｕａｎｇ，１９９９，Ｈａｎｄｂ．Ｅｘｐ．Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．，１３７，１６５−１９２；ならびにＬｅｅら，２０００，ＡＣＳ Ｓｙ
ｍｐ．Ｓｅｒ．，７５２，１８４−１９２に記載されている。Ｂｅｉｇｅｌｍａｎらの米
国特許第６，３９５，７１３号およびＳｕｌｌｉｖａｎらのＰＣＴ国際公開第９４／０２
５９５号には、さらに、核酸分子の一般的な送達方法が記載されている。このようなプロ
トコルは、事実上いずれの核酸分子の送達にも使用することができる。核酸分子は細胞に
、当業者に知られた多種多様な方法によって、例えば限定されないが、リポソーム内への
封入、イオン導入、または他の媒体（生分解性ポリマー、ヒドロゲル、シクロデキストリ
ン（例えば、Ｇｏｎｚａｌｅｚら，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，
１０，１０６８−１０７４；Ｗａｎｇら，ＰＣＴ国際出願公開第０３／４７５１８号およ
び同第０３／４６１８５号を参照のこと）、ポリ（乳酸−コ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ
）およびＰＬＣＡミクロスフィア（例えば、米国特許６，４４７，７９６および米国特許
出願公開公報番号ＵＳ２００２１３０４３０を参照のこと）、生分解性ナノカプセル、な
らびに生体接着性ミクロスフィアなど）への組込みによって、またはタンパク質性ベクタ
ー（Ｏ’ＨａｒｅおよびＮｏｒｍａｎｄ，ＰＣＴ国際出願公開第００／５３７２２号）に
よって投与され得る。

一態様において、本発明は、本明細書に記載のｓｉＮＡ分子を内包する担体系を提供す
る。一部の実施形態において、担体系は、脂質系の担体系、カチオン性脂質、もしくはリ
ポソーム核酸複合体、リポソーム、ミセル、ビロソーム、脂質ナノ粒子またはその混合物
である。他の実施形態では、担体系は、ポリマー系の担体系（カチオン性ポリマー−核酸
複合体など）である。さらなる実施形態では、担体系は、シクロデキストリン系の担体系
（シクロデキストリンポリマー−核酸複合体など）である。さらなる実施形態では、担体
系は、タンパク質系の担体系（カチオン性ペプチド−核酸複合体など）である。好ましく
は、担体系は脂質ナノ粒子（「ＬＮＰ」）製剤である。

一部の特定の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、米国特許出願第１１／３５
３，６３０号、同第１１／５８６，１０２号、同第６１／１８９，２９５号、同第６１／
２０４，８７８号、同第６１／２３５，４７６号、同第６１／２４９，８０７号、同第６
１／２９８，０２２号、同第６１／３５１３７３号、同第６１／３４７６４０号、同第６
１／３４５７５４号、同第６１／３２２０５４号、同第１２／６４０３４２号、および同
第１２／６１７０７９号、ならびにＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳｌ０／０２００１３
およびＰＣＴ／ＵＳ０９／０５３３３６に記載されているような脂質ナノ粒子組成物を用
いて製剤化される。一部の特定の好ましい実施形態では、本発明のｓｉＮＡ分子は、カチ
オン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣを４０／４８／２／１０の
比で、またはカチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣを４０／４８
／２／１０の比で含む脂質ナノ粒子組成物を用いて製剤化される。より一部の特定の実施
形態では、カチオン性脂質がＤＬｉｎＤＭＡ（表１２参照）であり、ＰＥＧがＰＥＧ−Ｄ
ＭＧであり、製剤のＮ／Ｐ比が２．８である。より好ましい実施形態において、カチオン
性脂質はＤＬｉｎＤＭＡである（表１１および１２参照）。

種々の実施形態において、表１１に示した脂質ナノ粒子配合物は、本明細書に記載の任
意のｓｉＮＡ分子またはｓｉＮＡ分子の組合せに適用される。一部の実施形態において、
本発明は、配合物ＬＮＰ−０５１；ＬＮＰ−０５３；ＬＮＰ−０５４；ＬＮＰ−０６９；
ＬＮＰ−０７３；ＬＮＰ−０７７；ＬＮＰ−０８０；ＬＮＰ−０８２；ＬＮＰ−０８３；
ＬＮＰ−０６０；ＬＮＰ−０６１；ＬＮＰ−０８６；ＬＮＰ−０９７；ＬＮＰ−０９８；
ＬＮＰ−０９９；ＬＮＰ−１００；ＬＮＰ−１０１；ＬＮＰ−１０２；ＬＮＰ−１０３；
またはＬＮＰ−１０４（表１１参照）のいずれかとして製剤化された本発明のｓｉＮＡ分
子を含む組成物を特色とする。

一部の特定の他の実施形態において、本発明は、米国特許出願第６１／１８９，２９５
号、同第６１／２０４，８７８号、同第６１／２３５，４７６号、同第６１／２４９，８
０７号、および同第６１／２９８，０２２号に記載のカチオン性脂質配合物のいずれかを
用いて製剤化された本発明のｓｉＮＡ分子を含む組成物を特色とする。

他の実施形態において、本発明は、本発明のｓｉＮＡ分子のコンジュゲートおよび／ま
たは複合体を特色とする。かかるコンジュゲートおよび／または複合体は、生物学的系内
（細胞など）への該ｓｉＮＡ分子の送達を助長するために使用され得る。本発明によって
提供されるコンジュゲートおよび複合体は、細胞膜を通過して治療用化合物を運搬するこ
と、薬物動態特性を改変すること、および／または本発明の核酸分子の局在化をモジュレ
ートすることにより、治療活性を付与し得るものである。かかるコンジュゲートの非限定
的な例は、米国特許出願公開公報番号ＵＳ２００８／０１５２６６１Ａ１およびＵＳ２０
０４／０１６２２６０Ａ１（例えば、ＣＤＭ−ＬＢＡ、ＣＤＭ−Ｐｉｐ−ＬＢＡ、ＣＤＭ
−ＰＥＧ、ＣＤＭ−ＮＡＧなど）ならびに米国特許出願第１０／４２７，１６０号、同第
１０／２０１，３９４号、同第６１／３２２４２２号、および同第６１／３１５２２３号
；ならびに米国特許第６，５２８，６３１号；同第６，３３５，４３４号；同第６，２３
５，８８６号；同第６，１５３，７３７号；同第５，２１４，１３６号；および同第５，
１３８，０４５号に記載されている。

種々の実施形態において、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が本発明のｓｉＮＡ化合
物に共有結合され得る。結合されるＰＥＧは任意の分子量であり得る（好ましくは約１０
０〜約５０，０００ダルトン（Ｄａ））。

また他の実施形態において、本発明は、ポリ（エチレングリコール）脂質（ＰＥＧ修飾
型もしくは長時間循環性のリポソームまたはステルス（ｓｔｅａｌｔｈ）リポソーム）と
本発明のｓｉＮＡ分子とを内包している表面修飾されたリポソームを含む組成物または製
剤を特色とする（例えば、ＰＣＴ国際出願公開第９６／１０３９１号；Ａｎｓｅｌｌら，
ＰＣＴ国際出願公開第９６／１０３９０号；Ｈｏｌｌａｎｄら，ＰＣＴ国際出願公開第９
６／１０３９２号に開示されているようなもの）。

また、一部の実施形態では、本発明のｓｉＮＡ分子は、ポリエチレンイミンおよびその
誘導体、例えば、ポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール−Ｎ−アセチルガラクト
サミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ＧＡＬ）またはポリエチレンイミン−ポリエチレングリコール
−トリ−Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＰＥＩ−ＰＥＧ−ｔｒｉＧＡＬ）誘導体などを用
いて製剤化または複合体形成され得る。一実施形態において、本発明の核酸分子は、米国
特許出願公開公報番号２００３００７７８２９に記載のようにして製剤化される。

他の実施形態では、本発明のｓｉＮＡ分子を、膜破壊剤（米国特許出願公開公報第２０
０１０００７６６６号に記載のものなど）と複合体形成させる。また、さらに他の実施形
態では、膜破壊剤（１種類または複数種）と該ｓｉＮＡ分子を、カチオン性脂質またはヘ
ルパー脂質分子（米国特許第６，２３５，３１０号に記載の脂質など）と複合体形成させ
る。

一部の特定の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、米国特許出願公開公報第２
００３０７７８２９号；同第２００５０２８７５５１号；同第２００５０１６４２２０号
；同第２００５０１９１６２７号；同第２００５０１１８５９４号；同第２００５０１５
３９１９号；同第２００５００８５４８６号；および同第２００３０１５８１３３号；な
らびにＰＣＴ国際出願公開第００／０３６８３号および同第０２／０８７５４１号に記載
のような送達系と複合体形成させる。

一部の実施形態において、本発明のリポソーム製剤は、米国特許第６，８５８，２２４
号；同第６，５３４，４８４号；同第６，２８７，５９１号；同第６，８３５，３９５号
；同第６，５８６，４１０号；同第６，８５８，２２５号；同第６，８１５，４３２号；
同第６，５８６，００１号；同第６，１２０，７９８号；同第６，９７７，２２３号；同
第６，９９８，１１５号；同第５，９８１，５０１号；同第５，９７６，５６７号；同第
５，７０５，３８５号；ならびに米国特許出願公開公報第２００６／００１９９１２号；
同第２００６／００１９２５８号；同第２００６／０００８９０９号；同第２００５／０
２５５１５３号；同第２００５／００７９２１２号；同第２００５／０００８６８９号；
同第２００３／００７７８２９号、同第２００５／００６４５９５号、同第２００５／０
１７５６８２号、同第２００５／０１１８２５３号；同第２００４／００７１６５４号；
同第２００５／０２４４５０４号；同第２００５／０２６５９６１および２００３／００
７７８２９に記載された化合物および組成物と製剤化または複合体形成させた本発明のｓ
ｉＮＡ分子（例えば、ｓｉＮＡ）を含む。

あるいはまた、本発明のｓｉＲＮＡを発現する上記に論考したような組換えプラスミド
およびウイルスベクターを、本発明の分子の送達に使用してもよい。ｓｉＮＡ分子発現ベ
クターの送達は、全身性（静脈内もしくは筋肉内投与など）によるもの、被検体から取り
出された標的細胞に投与した後、該被検体に再導入することによるもの、または所望の標
的細胞への導入が可能であり得る任意の他の手段によるものであり得る（概説については
、Ｃｏｕｔｕｒｅら，１９９６，ＴＩＧ．，１２、５１０を参照のこと）。また、かかる
組換えプラスミドは、直接投与してもよく、適当な送達試薬とともに、例えば、Ｍｉｒｕ
ｓ Ｔｒａｎｓｉｔ ＬＴ１親油性試薬；リポフェクチン；リポフェクタミン；セルフェ
クチン；ポリカチオン（例えば、ポリリジン）またはリポソーム脂質系の担体系、カチオ
ン性脂質、もしくはリポソーム核酸複合体、ミセル、ビロソーム、脂質ナノ粒子などとと
もに投与してもよい。

Ｅ．キット
また、本発明は、核酸をキットの形態で提供する。キットには容器が含まれ得る。キッ
トには、典型的には、本発明の核酸を、その投与のための使用説明書とともに含む。一部
の特定の場合では、該核酸は、標的化部分が結合されたものであり得る。標的化部分（例
えば、抗体、タンパク質）を結合させる方法は、当業者に知られている。一部の特定の場
合では、該核酸は化学修飾されている。他の実施形態では、キットに、１種類より多くの
本発明のｓｉＮＡ分子を含む。キットには、本発明のｓｉＮＡ分子を薬学的に許容され得
る担体または希釈剤とともに含めてもよい。キットに、さらに賦形剤を含めてもよい。

Ｆ．治療的使用／医薬組成物
現在のＣＴＮＮＢ１の研究における一連の知見により、ＣＴＮＮＢ１活性をアッセイす
るための方法の必要性、および研究、診断および治療での使用のためのＣＴＮＮＢ１発現
を調節することができる化合物の必要性が示されている。後述するように、本発明の核酸
分子は、アッセイにおいて、ＣＴＮＮＢ１レベルと関連している疾患状態を診断するため
に使用され得る。また、該核酸分子および医薬組成物は、ＣＴＮＮＢ１ ＲＮＡレベルと
関連している疾患状態を処置するために使用され得る。

１．ＣＴＮＮＢ１と関連している疾患状態
ＣＴＮＮＢ１発現のモジュレーションと関連したものであり得る具体的な疾患状態とし
ては、充実性腫瘍などの種々の癌が挙げられる。かかる癌の非限定的な例としては：胆管
癌、膀胱癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、骨肉腫、脳の癌、グリオーム、星状細胞腫、乳癌
、化生性癌、子宮頚がん、子宮頸部扁平上皮癌、直腸癌、結腸直腸癌、結腸癌、遺伝性非
ポリポーシス性結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮内膜癌、
子宮内膜間質肉腫、食道癌、食道扁平上皮癌、食道腺癌、眼内黒色腫、ブドウ膜黒色腫、
胆嚢癌、胆嚢腺癌、腎細胞癌、明細胞腎細胞癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、ウィルムス腫
瘍、白血病、急性リンパ球性（ｌｙｍｏｃｙｔｉｃ）白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血
病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性（Ｃ
ＭＭＬ）、肝臓癌、肝臓癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、胆管癌、胚芽腫、肺がん、非小細胞
肺がん（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞
型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前駆
Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、鼻咽腔癌（ＮＰ
Ｃ）、神経芽腫、口腔咽頭癌、口腔扁平上皮癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、膵管腺癌、偽
乳頭状（ｐｓｅｕｄｏｐａｐｉｌｌａｒｙ）新生物、腺房細胞癌、前立腺癌、前立腺腺癌
、皮膚癌、黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫、小腸の癌、胃癌、胃癌、消化管間質腫瘍（
ＧＩＳＴ）、子宮癌、および子宮肉腫が挙げられる。

本発明のｓｉＮＡ分子が標的ＣＴＮＮＢ１ ｍＲＮＡを分解（したがって、上記の疾患
を抑止）し得るものであることは理解されよう。疾患の抑止は、被検体において疾患の進
行を直接測定することにより評価することができる。また、該疾患と関連している病状の
変化または逆転を観察することにより推断してもよい。さらに、本発明のｓｉＮＡ分子を
予防法として使用してもよい。したがって、本発明の核酸分子および医薬組成物の使用は
、ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現の調節と関連しているこれらおよび他の疾患を改善、処置、予
防および／または治癒するために使用され得る。

２．医薬組成物
本発明のｓｉＮＡ分子により、多種多様な治療的、予防的、美容的、獣医学的、診断的
、標的確認、ゲノム知得、遺伝子操作、および薬理ゲノミクス適用用途に有用な試薬およ
び方法が提供される。

ａ．製剤
したがって、本発明はまた、一態様において、記載のｓｉＮＡ分子の医薬組成物、すな
わち、薬学的に許容され得る担体または希釈剤中の組成物を提供する。このような医薬組
成物は、上記の化合物の塩、エステル、またはかかるエステルの塩、例えば、酸付加塩、
例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、酢酸およびベンゼンスルホン酸の塩を含むも
のである。他の塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、マンガン、アンモニウムお
よびカルシウムの塩が挙げられる。このような製剤または組成物には、当該技術分野で一
般的に知られた薬学的に許容され得る担体または希釈剤が含まれ得る。

一実施形態において、本発明は、配列番号：５の少なくとも１５個のヌクレオチドの配
列を含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物を特色とする。別の実施形態では、本発明は、配
列番号：４９１８の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むｓｉＮＡ分子を含む医
薬組成物を特色とする。また別の実施形態では、本発明は、配列番号：１９４の少なくと
も１５個のヌクレオチドの配列を含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物を特色とする。さら
に別の実施形態では、本発明は、配列番号：５１０７の少なくとも１５個のヌクレオチド
の配列を含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物を特色とする。別の実施形態では、本発明は
、配列番号：１９６の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むｓｉＮＡ分子を含む
医薬組成物を特色とする。別の実施形態では、本発明は、配列番号：５１０９の少なくと
も１５個のヌクレオチドの配列を含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物を特色とする。別の
実施形態では、本発明は、配列番号：１５１の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を
含むｓｉＮＡ分子を含む医薬組成物を特色とする。また別の実施形態では、本発明は、配
列番号：５０６４の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むｓｉＮＡ分子を含む医
薬組成物を特色とする。さらに別の実施形態では、本発明は、式（Ａ）を含むｓｉＮＡ分
子を含む医薬組成物を特色とする。

本発明のｓｉＮＡ分子は、好ましくは、被検体に投与する前に、当該技術分野で知られ
た手法に従って医薬組成物として製剤化される。本発明の医薬組成物は、少なくとも滅菌
されており、パイロジェンフリーであることを特徴とする。本発明の医薬組成物の調製方
法は、当該技術分野の技能の範囲内であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，第１７版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ
Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９８５）に記載されている。

一部の実施形態において、本発明の医薬組成物（例えば、ｓｉＮＡおよび／またはその
ＬＮＰ製剤）は、さらに、慣用的な医薬用賦形剤および／または添加剤を含む。好適な医
薬用賦形剤としては、保存料、フレーバー剤、安定剤、酸化防止剤、オスモル濃度調整剤
、バッファー、およびｐＨ調整剤が挙げられる。好適な添加剤としては、生理学的に生体
適合性のバッファー（例えば、塩酸トリメチルアミン）、キレート剤（例えば、ＤＴＰＡ
もしくはＤＴＰＡ−ビスアミドなど）またはカルシウムキレート錯体（例えば、カルシウ
ムＤＴＰＡ、ＣａＮａＤＴＰＡ−ビスアミドなど）の添加が挙げられ、あるいは、カルシ
ウムもしくはナトリウム塩（例えば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グル
コン酸カルシウムもしくは乳酸カルシウム）を添加してもよい。また、酸化防止剤および
懸濁化剤を使用してもよい。

局所投与のための製剤の種々の型の非限定的な例としては、軟膏、ローション剤、クリ
ーム剤、ゲル剤、フォーム剤、経皮パッチによる送達のための調製物、粉末剤、スプレー
剤、エアロゾル剤、カプセル剤または吸入器もしくは吹送器での使用のためのカートリッ
ジ剤または滴剤（例えば、点眼薬または点鼻薬）、噴霧化される液剤／懸濁剤、坐薬、膣
坐薬、貯留注腸剤およびチュアブル錠もしくはサッカブル錠もしくはペレット剤（例えば
、アフタ性潰瘍の処置用）またはリポソームもしくはマイクロカプセル封入調製物が挙げ
られる。

軟膏、クリーム剤およびゲル剤は、例えば、水性または油性の基剤を用い、適当な増粘
剤および／またはゲル化剤および／または溶媒の添加を伴って製剤化され得る。したがっ
て、かかる基剤の非限定的な例としては、例えば、水および／または油類、例えば、液状
パラフィンあるいは植物油（ラッカセイ油もしくはヒマシ油など）、または溶媒（ポリエ
チレングリコールなど）が挙げられ得る。基剤の性質に応じて、種々の増粘剤およびゲル
化剤が使用され得る。かかる薬剤の非限定的な例としては、軟質パラフィン、ステアリン
酸アルミニウム、セトステアリルアルコール、ポリエチレングリコール、羊毛脂、蜜蝋、
カルボキシポリメチレンおよびセルロース誘導体および／またはグリセリルモノステアレ
ートおよび／または非イオン性乳化剤が挙げられる。

一実施形態において、ローション剤は、水性または油性基剤を用いて製剤化され得、ま
た、一般的に１種類以上の乳化剤、安定化剤、分散化剤、懸濁化剤または増粘剤が含まれ
る。

一実施形態において、外用粉末剤は、任意の適当な粉末基剤、例えば、タルク、ラクト
ースまたはデンプンの補助を伴って形成され得る。滴剤は、水性または非水性の基剤を用
いて製剤化され得、また、１種類以上の分散化剤、可溶化剤、懸濁化剤または保存料が含
まれる。

経口使用が意図される組成物は、医薬組成物の製造のための当該技術分野で知られた任
意の方法に従って調製され得、かかる組成物に、医薬品として洗練された口当たりのよい
調製物を得るために甘味剤、フレーバー剤、着色剤または保存剤などの１種類以上を含有
させてもよい。錠剤は、活性成分を、錠剤の製造に適した無毒性の薬学的に許容され得る
賦形剤と混合された状態で含む。このような賦形剤は、例えば、不活性な希釈剤；炭酸カ
ルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなど
；造粒剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチ、またはアルギン酸；結合剤、例えば、
デンプン、ゼラチンまたはアカシア；ならびに滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウ
ム、ステアリン酸またはタルクであり得る。錠剤は、コーティングされていなくてもよく
、既知の手法によってコーティングされていてもよい。一部の場合では、かかるコーティ
ングは、胃腸管内での崩壊と吸収を遅延させ、それにより長期間にわたって持続作用をも
たらすための既知の手法によって調製され得る。例えば、グリセリルモノステアレート（
ｍｏｎｏｓｔｅｒａｔｅ）またはグリセリルジステアレートなどの時間遅延物質が使用さ
れ得る。

また、経口使用のための製剤は、活性成分を不活性な固形希釈剤（例えば、炭酸カルシ
ウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合した硬質ゼラチンカプセル剤として、あ
るいは活性成分を水または油性媒体（例えば、ピーナッツ油、液状パラフィンもしくはオ
リーブ油と混合した軟質ゼラチンカプセル剤）として提示され得る。

水性懸濁剤は、活性物質を、水性懸濁剤の製造に適した賦形剤との混合物の状態で含む
。かかる賦形剤は、懸濁化剤、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチル
セルロース、ヒドロプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロ
リドン、トラガントゴムおよびアカシアゴムである；分散化剤または湿潤剤は、天然に存
在するホスファチド、例えば、レシチン、あるいはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合
生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）；またはエチレンオキシドと長鎖脂
肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、また
はエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから得られる部分エステルとの縮合生成
物（ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートなど）、またはエチレンオキシドと
、脂肪酸およびヘキシトール無水物から得られる部分エステルとの縮合生成物（例えば、
ポリエチレンソルビタンモノオレエート）であり得る。また、水性懸濁剤には、１種類以
上の保存料（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピル）、１種類以上
の着色剤、１種類以上のフレーバー剤、および１種類以上の甘味剤（スクロースまたはサ
ッカリンなど）が含有され得る。

油性懸濁剤は、活性成分を、植物油（例えば、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油もし
くはココナッツ油）、または鉱油（液状パラフィンなど）に懸濁させることにより製剤化
され得る。油性懸濁剤には、増粘剤、例えば、蜜蝋、硬質パラフィンまたはセチルアルコ
ールが含有され得る。甘味剤およびフレーバー剤は、口当たりのよい経口調製物を得るた
めに添加され得る。このような組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤の添加によっ
て保存され得る。

また、本発明の医薬組成物は水中油型の乳剤の形態であってもよい。油相は、植物油ま
たは鉱油またはこれらの混合物であり得る。好適な乳化剤は、天然に存在するゴム（例え
ば、アカシアゴムまたはトラガントゴム）、天然に存在するホスファチド、例えば、ダイ
ズ、レシチン、および脂肪酸およびヘキシトール無水物から得られるエステルまたは部分
エステル、例えば、ソルビタンモノオレエート、ならびに前記部分エステルとエチレンオ
キシドとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）であり
得る。また、乳剤に甘味剤およびフレーバー剤を含有させてもよい。

シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコ
ール、ソルビトール、グルコースまたはスクロースを用いて製剤化され得る。また、かか
る製剤には、粘滑剤、保存料およびフレーバー剤および着色剤も含有され得る。医薬組成
物は、滅菌された注射用の水性または油性懸濁剤の形態であってもよい。この懸濁剤は、
既知の技術に従い、上記に示した適当な分散化剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて製
剤化され得る。また、滅菌された注射用調製物は、無毒性の非経口に（ｐａｒｅｎｔａｌ
ｌｙ）許容され得る希釈剤または溶媒中の滅菌された注射用の液剤または懸濁剤（例えば
、１，３−ブタンジオール中の液剤）であり得る。中でも、使用可能な許容され得るビヒ
クルおよび溶媒は、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液である。また、滅菌
された固定油も、溶媒または懸濁媒体として慣用的に使用されている。この目的には、任
意の無刺激性固定油（例えば、合成のモノ−またはジグリセリド）が使用され得る。また
、オレイン酸などの脂肪酸は、注射用剤の調製に有用性が見い出されている。

また、本発明の核酸分子は、例えば、薬物の経直腸投与のための坐薬の形態で投与され
得る。このような組成物は、薬物を適当な非刺激性賦形剤と混合することにより調製され
得、該賦形剤は、通常の温度では固体であるが直腸温度では液状となり、したがって、直
腸内で融解して薬物を放出するものである。かかる物質としては、ココアバターおよびポ
リエチレングリコールが挙げられる。

本発明の核酸分子は、滅菌された媒体にて非経口投与してもよい。薬物は、使用される
ビヒクルおよび濃度に応じてビヒクル中に懸濁させるか、または溶解させるかのいずれか
であり得る。好都合には、局所麻酔薬、保存料および緩衝剤などの佐剤をビヒクル中に溶
解させるのがよい。

他の実施形態において、肺経由送達における使用のための本明細書において提供するｓ
ｉＮＡならびにＬＮＰ組成物および製剤は、さらに、１種類以上の界面活性剤を含む。本
発明の組成物の取込みを向上させるための好適な界面活性剤または界面活性剤成分として
は、とりわけ、合成および天然の、ならびに完全体および切断型の界面活性体プロテイン
Ａ、界面活性体プロテインＢ、界面活性体プロテインＣ、界面活性体プロテインＤならび
に界面活性体プロテインＥ、ジ−飽和ホスファチジルコリン（ジパルミトイル以外）、ジ
パルミトイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロー
ル、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセ
リン；ホスファチジン酸、ユビキノン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホス
ファチジルコリン、パルミトイル−リゾホスファチジルコリン、デヒドロエピアンドロス
テロン、ドリコール、スルファチジン（ｓｕｌｆａｔｉｄｉｃ）酸、グリセロール−３−
ホスフェート、ジヒドロキシアセトンリン酸、グリセロール、グリセロ−３−ホスホコリ
ン、ジヒドロキシアセトン、パルミテート、シチジン二リン酸（ＣＤＰ）ジアシルグリセ
ロール、ＣＤＰコリン、コリン、コリンリン酸；ならびに界面活性剤成分の天然担体ビヒ
クルである天然および人工の層状体、ω−３脂肪酸、ポリエン酸、ポリエノン酸、レシチ
ン、パルミチン酸、エチレンまたはプロピレンオキシド、ポリオキシプロピレン、モノマ
ー型およびポリマー型のポリオキシエチレン、モノマー型およびポリマー型のポリ（ビニ
ルアミン）と、デキストランおよび／またはアルカノイル側鎖との非イオン性ブロックコ
ポリマー、Ｂｒｉｊ ３５、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ならびに合成界面活性剤ＡＬＥＣ
、Ｅｘｏｓｕｒｆ、ＳｕｒｖａｎおよびＡｔｏｖａｑｕｏｎｅが挙げられる。このような
界面活性剤は、製剤中で単独で、もしくは多成分界面活性剤の一部として、本明細書の医
薬組成物中の核酸成分の５’末端および／または３’末端に共有結合された付加物として
のいずれかで使用され得る。

ｂ．併用
本発明によるｓｉＮＡおよび医薬製剤は、被検体に単独で投与してもよく、１種類以上
の他の治療用薬剤（例えば、抗がん剤）と併用して使用してもよく、該他の治療用薬剤を
含めてもよい。したがって、本開示の化合物と他の抗がん剤または化学療法剤との併用は
本発明の範囲に含まれる。かかる薬剤の例は、Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａ
ｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ｂｙ Ｖ．Ｔ．Ｄｅｖｉｔａ ａｎ
ｄ Ｓ．Ｈｅｌｌｍａｎ（編集者），第６版（２００１年２月１５日），Ｌｉｐｐｉｎｃ
ｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓを見るとよい。
当業者には、どの薬剤の組合せが有用であり得るかが、関与する具体的な薬物および癌の
特性に基づいて認識され得よう。かかる抗がん剤としては、限定されないが、以下のもの
：エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノイド受容
体モジュレータ、細胞傷害剤／細胞増殖抑制薬、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トラン
スフェラーゼ阻害薬、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬および他の血管新生阻害薬、細
胞の増殖および生存のシグナル伝達の阻害薬、アポトーシス誘導剤ならびに細胞周期のチ
ェックポイントに干渉する薬剤が挙げられる。また、本発明のｓｉＮＡは、ＨＣＣの処置
に使用される任意の治療用薬剤（例えば限定されないが、ソラフェニブ）との併用にも有
用である。本発明の化合物は、放射線療法剤と共投与される場合に特に有用である。

さらなる実施形態において、したがって、本発明は、本発明のｓｉＮＡ分子（例えば限
定されないが、配列番号：５、配列番号：４９１８、配列番号：１９４、配列番号：５１
０７、配列番号：１９６、配列番号：５１０９、配列番号：１５１、もしくは配列番号：
５０６４の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列；または式（Ａ）を含むｓｉＮＡ分子
など）あるいはその薬学的に許容され得る塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能性の誘導
体を、１種類以上の抗がん剤または化学療法剤と一緒に含む併用を提供する。

一部の特定の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、既知の抗がん剤、例えば以
下のもの：エストロゲン受容体モジュレータ、アンドロゲン受容体モジュレータ、レチノ
イド受容体モジュレータ、細胞傷害剤、抗増殖剤、プレニル−タンパク質トランスフェラ
ーゼ阻害薬、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬、ＨＩＶプロテアーゼ阻害薬、逆転写酵
素阻害薬、および他の血管新生阻害薬との併用にも有用である。

本発明の化合物と併用して使用され得るエストロゲン受容体モジュレータの例としては
、限定されないが、タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８
１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチ
ル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキ
シ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプ
ロパノエート、４，４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニル−ヒ
ドラゾン、およびＳＨ６４６が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得るアンドロゲン受容体モジュレータの例としては
、限定されないが、フィナステリドおよび他の５α−レダクターゼ阻害薬、ニルタミド、
フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、および酢酸アビラテロンが挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得るかかるレチノイド受容体モジュレータの例とし
ては、限定されないが、ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−
シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＩＬＸ２３−７５５３、トラン
ス−Ｎ−（４’−ヒドロキシフェニル）レチンアミド、およびＮ−４−カルボキシフェニ
ルレチンアミドが挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る細胞傷害剤の例としては、限定されないが、セ
ルテネフ、カケクチン、イホスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、
アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモダルシトール、ラニムスチン、ホテムスチ
ン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチ
ン、トシル酸インプロスルファン、トロホスファミド、ニムスチン、塩化ジブロスピジウ
ム、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イ
ロフルベン、デキシホスファミド、シス−アミンジクロロ（２−メチル−ピリジン）白金
、ベンジルグアニン、グルホスファミド、ＧＰＸ１００、（トランス，トランス，トラン
ス）−ビス−μ−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−μ−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビ
ス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン、三
酸化ヒ素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメ
チルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビサントレン、ミトザン
トロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラスト
ン、３’−デアミノ−３’−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシカルミノマ
イシン、アンナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、および４−
デメトキシ−３−デアミノ−３−アジリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン
（国際公開第００／５００３２号参照）が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る低酸素活性化性化合物の一例はチラパザミンで
ある。

本発明の化合物と併用して使用され得るプロテアソーム阻害薬の例としては、限定され
ないが、ラクタシスチンおよびボルテゾミブが挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る微小管阻害薬／微小管安定化剤の例としては、
限定されないが、パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３’，４’−ジデヒドロ−４’−デ
オキシ−８’−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキセル、リゾキシン、ドラスタチン
、イセチオン酸ミボブリン、アウリスタチン、セマドチン、ＲＰＲ１０９８８１、ＢＭＳ
１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ
−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビ
ンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−
Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、エポチロン（例えば、
米国特許第６，２８４，７８１号および同第６，２８８，２３７号参照）ならびにＢＭＳ
１８８７９７が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得るトポイソメラーゼ阻害薬の一例としては、限定
されないが、トポテカン、ヒカプトアミン（ｈｙｃａｐｔａｍｉｎｅ）、イリノテカン、
ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３’，４’−Ｏ−エキソ（ｅｘｏ）−ベンジリ
デン−シャールトルーシン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３
，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−
５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ
［デ］ピラノ［３’，４’：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０，１３
（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ラルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル
］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、
ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２’−ジメチルアミノ
−２’−デオキシ−エトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−
９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カ
ルボキサミド、アスラクリン、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２
−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロオキシ
−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキソヒドロフロ（３
’，４’：６，７）ナフト（２，３−ｄ）−１，３−ジオキソル−６−オン、２，３−（
メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］−フェナ
ントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソギノリ
ン（ｇｕｉｎｏｌｉｎｅ）−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７
，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［
４，５，１−デ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２（ジエチルアミノ）エチルアミ
ノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミ
ド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキサミド、６−［［
２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−
ｃ］キノリン−７−オン、およびディメスナが挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る有糸分裂キネシンの阻害薬、特にヒト有糸分裂
キネシンＫＳＰの例としては、限定されないが、ＰＣＴ公開公報第０１／３０７６８号、
同第０１／９８２７８号、同第０３／０５０，０６４号、同第０３／０５０，１２２号、
同第０３／０４９，５２７号、同第０３／０４９，６７９号、同第０３／０４９，６７８
号、同第０４／０３９７７４号、同第０３／０７９９７３号、同第０３／０９９２１１号
、同第０３／１０５８５５号、同第０３／１０６４１７号、同第０４／０３７１７１号、
同第０４／０５８１４８号、同第０４／０５８７００号、同第０４／１２６６９９号、同
第０５／０１８６３８号、同第０５／０１９２０６号、同第０５／０１９２０５号、同第
０５／０１８５４７号、同第０５／０１７１９０号、米国特許出願公開第２００５／０１
７６７７６号に記載の阻害薬が挙げられる。一実施形態において、有糸分裂キネシンの阻
害薬としては、限定されないが、ＫＳＰの阻害薬、ＭＫＬＰ１の阻害薬、ＣＥＮＰ−Ｅの
阻害薬、ＭＣＡＫの阻害薬、Ｋｉｆｌ４の阻害薬、Ｍｐｈｏｓｐｈｌの阻害薬およびＲａ
ｂ６−ＫＩＦＬの阻害薬が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る「ヒストンデアセチラーゼ阻害薬」の例として
は、限定されないが、ＴＳＡ、オキサムフラチン、ＰＸＤ１０１、ＭＧ９８、バルプロ酸
およびスクリプタイドが挙げられる。他のヒストンデアセチラーゼ阻害薬に対するさらな
る参考文献は、下記の論文；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｔ．Ａ．ら Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４６（
２４）：５０９７−５１１６（２００３）を見るとよい。

本発明の化合物と併用して使用され得る有糸分裂の進行に関与しているキナーゼの阻害
薬の例としては、限定されないが、オーロラキナーゼの阻害薬、Ｐｏｌｏ様キナーゼ（Ｐ
ＬＫ）の阻害薬（特に、ＰＬＫ−１の阻害薬）、ｂｕｂ−１の阻害薬およびｂｕｂ−Ｒ１
の阻害薬が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る抗増殖剤の例としては、限定されないが、アン
チセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド（Ｇ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳ
ＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、およびＩＮＸ３００１など）、ならびに代謝拮抗薬（エノシタ
ビン、カルモフール、テガフール、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキサ
ート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスファート、ホス
テアビン（ｆｏｓｔｅａｂｉｎｅ）ナトリウム水和物、ラルチトレキセド、パルチトレキ
シド、エミテフール、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネ
ルザラビン、２’−デオキシ−２’−メチリデンシチジン、２’−フルオロメチレン−２
’−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾフリル）スルホニル］−
Ｎ’−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（
Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マ
ンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテイナシジン、トロキサシタビン
、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［
５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−
Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチ
ル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−
１，１１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリ
エン−９−イル酢酸エステル、スワインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、
メチオニナーゼ、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パリミトイル−１−Ｂ−Ｄ−ア
ラビノフラノシルシトシンおよび３−アミノピリジン−２−カルボキサルデヒドチオセミ
カルバゾンなど）が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得るモノクローナル抗体ターゲテッド治療用薬剤の
例としては、がん細胞特異的または標的細胞特異的モノクローナル抗体に結合させた細胞
傷害剤または放射性同位体を有する治療用薬剤（例えば、Ｂｅｘｘａｒなど）が挙げられ
る。

本発明の化合物と併用して使用され得る（ｔｈａｔ ｍａｙ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｈａ
ｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ）ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬の例としては、限定さ
れないが、ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，２３１，９３８
号、同第４，２９４，９２６号および同第４，３１９，０３９号参照）、シムバスタチン
（ＺＯＣＯＲ（登録商標）；米国特許第４，４４４，７８４号、同第４，８２０，８５０
号および同第４，９１６，２３９号参照）、ｐｒａｖａスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（
登録商標）；米国特許第４，３４６，２２７号、同第４，５３７，８５９号、同第４，４
１０，６２９号、同第５，０３０，４４７号および同第５，１８０，５８９号参照）、フ
ルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）；米国特許第５，３５４，７７２号、同第４，
９１１，１６５号、同第４，９２９，４３７号、同第５，１８９，１６４号、同第５，１
１８，８５３号、同第５，２９０，９４６号および同第５，３５６，８９６号参照）なら
びにアトルバスタチン（ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）；米国特許第５，２７３，９９５号
、同第４，６８１，８９３号、同第５，４８９，６９１号および同第５，３４２，９５２
号参照）が挙げられる。本発明の方法に使用され得るこれらおよびさらなるＨＭＧ−Ｃｏ
Ａレダクターゼ阻害薬の構造式Ｍ．Ｙａｌｐａｎｉ，「Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗ
ｅｒｉｎｇ Ｄｒｕｇｓ」，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｐｐ．８５−
８９（１９９６年２月５日）の第８７頁ならびに米国特許第４，７８２，０８４号および
同第４，８８５，３１４号に記載されている。

本発明の化合物と併用して使用され得るプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害
薬の例としては、限定されないが、以下の刊行物および特許：国際公開第９６／３０３４
３号、同第９７／１８８１３号、同第９７／２１７０１号、同第９７／２３４７８号、同
第９７／３８６６５号、同第９８／２８９８０号、同第９８／２９１１９号、同第９５／
３２９８７号、米国特許第５，４２０，２４５号、同第５，５２３，４３０号、同第５，
５３２，３５９号、同第５，５１０，５１０号、同第５，５８９，４８５号、同第５，６
０２，０９８号、欧州特許公開第０６１８２２１号、同第０６７５１１２号、同第０６０
４１８１号、同第０６９６５９３号、国際公開第９４／１９３５７号、同第９５／０８５
４２号、同第９５／１１９１７号、同第９５／１２６１２号、同第９５／１２５７２号、
同第９５／１０５１４号、米国特許第５，６６１，１５２号、国際公開第９５／１０５１
５号、同第９５／１０５１６号、同第９５／２４６１２号、同第９５／３４５３５号、同
第９５／２５０８６号、同第９６／０５５２９号、同第９６／０６１３８号、同第９６／
０６１９３号、同第９６／１６４４３号、同第９６／２１７０１号、同第９６／２１４５
６号、同第９６／２２２７８号、同第９６／２４６１１号、同第９６／２４６１２号、同
第９６／０５１６８号、同第９６／０５１６９号、同第９６／００７３６号、米国特許第
５，５７１，７９２号、国際公開第９６／１７８６１号、同第９６／３３１５９号、同第
９６／３４８５０、同第９６／３４８５１号、同第９６／３００１７号、同第９６／３０
０１８号、同第９６／３０３６２号、同第９６／３０３６３号、同第９６／３１１１１号
、同第９６／３１４７７号、同第９６／３１４７８号、同第９６／３１５０１号、同第９
７／００２５２号、同第９７／０３０４７号、同第９７／０３０５０号、同第９７／０４
７８５号、同第９７／０２９２０号、同第９７／１７０７０号、同第９７／２３４７８号
、同第９７／２６２４６号、同第９７／３００５３号、同第９７／４４３５０号、同第９
８／０２４３６号、および米国特許第５，５３２，３５９号において知得され得るものが
挙げられる。血管新生に対するプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害薬の役割の
一例については、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ．ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９
，ｐｐ．１３９４−１４０１（１９９９）を参照のこと。

本発明の化合物と併用して使用され得る血管新生阻害薬の例としては、限定されないが
、チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１
）およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）の阻害薬、上皮由来、線維芽細胞由来また
は血小板由来増殖因子の阻害薬、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害薬、イ
ンテグリン遮断薬、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、多硫酸ペントサン
、シクロオキシゲナーゼ阻害薬、例えば、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（アス
ピリンおよびイブプロフェンなど）ならびに選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬（セ
レコキシブおよびロフェコキシブなど）が挙げられる（ＰＮＡＳ，Ｖｏｌ．８９，ｐ．７
３８４（１９９２）；ＪＮＣＩ，Ｖｏｌ．６９，ｐ．４７５（１９８２）；Ａｒｃｈ．Ｏ
ｐｔｈａｌｍｏｌ，Ｖｏｌ．１０８，ｐ．５７３（１９９０）；Ａｎａｔ．Ｒｅｃ，Ｖｏ
ｌ．２３８，ｐ．６８（１９９４）；ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．３７２，ｐ．
８３（１９９５）；Ｃｌｉｎ，Ｏｒｔｈｏｐ．Ｖｏｌ．３１３，ｐ．７６（１９９５）；
Ｊ Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，Ｖｏｌ．１６，ｐ．１０７（１９９６）；Ｊｐｎ．
Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，Ｖｏｌ．７５，ｐ．１０５（１９９７）；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．，Ｖｏｌ．５７，ｐ．１６２５（１９９７）；Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．９３，ｐ．７０５
（１９９８）；Ｉｎｔｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．２，ｐ．７１５（１９９８）
；Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２７４，ｐ．９１１６（１９９９））、ステロイ
ド系抗炎症薬（コルチコステロイド、鉱質コルチコイド、デキサメタゾン、プレドニゾン
、プレドニゾロン、メチルプレド、ベタメタゾンなど）、カルボキシアミドトリアゾール
、コンブレタスタチンＡ−４、スクアラミン、６−Ｏ−クロロアセチル−カルボニル）−
フマギロール、サリドマイド、アンギオスタチン、トロポニン−１、アンギオテンシンＩ
Ｉ拮抗薬（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら，Ｊ Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１０５：１４１−１
４５（１９８５）参照）、およびＶＥＧＦに対する抗体（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１７，ｐｐ．９６３−９６８（１９９９年１０月）；Ｋｉｍら，
Ｎａｔｕｒｅ，３６２，８４１−８４４（１９９３）；国際公開第００／４４７７７号；
および同第００／６１１８６号参照）。

また、血管新生をモジュレートまたは阻害する他の治療用薬剤も本発明の化合物と併用
して使用され得、凝固系およびフィブリン溶解系をモジュレートまたは阻害する薬剤が挙
げられる（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａ．Ｍｅｄ．３８：６７９−６９２（２０００）の概
説を参照のこと）。本発明の化合物と併用して使用され得るかかる凝固経路およびフィブ
リン溶解経路をモジュレートまたは阻害する薬剤の例としては、限定されないが、ヘパリ
ン（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８０：１０−２３（１９９８）参照）、低分子量ヘ
パリンおよびカルボキシペプチダーゼＵ阻害薬（活性トロンビン活性化性フィブリン溶解
阻害薬［ＴＡＦＩａ］の阻害薬としても知られている）（Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ Ｒｅｓ
．１０１：３２９−３５４（２００１）参照）が挙げられる。ＴＡＦＩａ阻害薬は、ＰＣ
Ｔ公開第０３／０１３，５２６号および米国特許出願第６０／３４９，９２５号（２００
２年１月１８日出願）に記載されている。

本発明の化合物と併用して使用され得る細胞周期のチェックポイントに干渉する薬剤の
例としては、限定されないが、ＡＴＲ、ＡＴＭ、ＣｈｋｌおよびＣｈｋ２キナーゼの阻害
薬ならびにＣｄｋおよびｃｄｃキナーゼ阻害薬が挙げられ、特に、７−ヒドロキシスタウ
ロスポリン、フラボピリドール、ＣＹＣ２０２（Ｃｙｃｌａｃｅｌ）およびＢＭＳ−３８
７０３２が例示される。

本発明の化合物と併用して使用され得る受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）に干渉する
薬剤の例としては、限定されないが、ｃ−Ｋｉｔ、Ｅｐｈ、ＰＤＧＦ、Ｆｌｔ３およびＣ
ＴＮＮＢ１の阻害薬が挙げられる。さらなる薬剤としては、Ｂｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎおよ
びＨｕｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，４１１：３５５−３６５，２００１に記載のＲＴＫの阻
害薬が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る細胞の増殖および生存のシグナル伝達経路の阻
害薬の例としては、限定されないが、ＥＧＦＲの阻害薬（例えば、ゲフィチニブおよびエ
ルロチニブ）、ＥＲＢ−２の阻害薬（例えば、トラスツズマブ）、ＩＧＦＲの阻害薬、サ
イトカイン受容体の阻害薬、ＣＴＮＮＢ１の阻害薬、ＰＩ３Ｋの阻害薬（例えば、ＬＹ２
９４００２）、セリン／トレオニンキナーゼ（例えば限定されないが、国際公開第０２／
０８３０６４号、同第０２／０８３１３９号、同第０２／０８３１４０号、米国特許出願
公開第２００４−０１１６４３２号、国際公開第０２／０８３１３８号、米国特許出願公
開第２００４−０１０２３６０号、国際公開第０３／０８６４０４号、同第０３／０８６
２７９号、同第０３／０８６３９４号、同第０３／０８４４７３号、同第０３／０８６４
０３号、同第２００４／０４１１６２号、同第２００４／０９６１３１号、同第２００４
／０９６１２９号、同第２００４／０９６１３５号、同第２００４／０９６１３０号、同
第２００５／１００３５６号、同第２００５／１００３４４などに記載のＡｋｔの阻害薬
）、Ｒａｆキナーゼの阻害薬（例えば、ＢＡＹ−４３−９００６）、ＭＥＫの阻害薬（例
えば、ＣＩ−１０４０およびＰＤ−０９８０５９）ならびにｍＴＯＲの阻害薬（例えば、
Ｗｙｅｔｈ ＣＣＩ−７７９）が挙げられる。かかる薬剤としては、小分子阻害薬化合物
および抗体拮抗薬が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得るアポトーシス誘導剤の例としては、限定されな
いが、ＴＮＦ受容体ファミリー構成員（例えば、ＴＲＡＩＬ受容体）の活性化薬が挙げら
れる。

本発明の化合物と併用して使用され得る選択的ＣＯＸ−２阻害薬であるＮＳＡＩＤの例
としては、限定されないが、米国特許第５，４７４，９９５号、同第５，８６１，４１９
号、同第６，００１，８４３号、同第６，０２０，３４３号、同第５，４０９，９４４号
、同第５，４３６，２６５号、同第５，５３６，７５２号、同第５，５５０，１４２号、
同第５，６０４，２６０号、Ｕ．Ｓ．５，６９８，５８４号、同第５，７１０，１４０号
、国際公開第９４／１５９３２号、米国特許第５，３４４，９９１号、同第５，１３４，
１４２号、同第５，３８０，７３８号、同第５，３９３，７９０号、同第５，４６６，８
２３号、同第５，６３３，２７２号、および同第５，９３２，５９８号（これらはすべて
、引用により本明細書に組み込まれる）に開示されたＮＳＡＩＤが挙げられる。

本発明の化合物との併用に特に有用なＣＯＸ−２の阻害薬としては：３−フェニル−４
−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノン；および５−クロロ
−３−（４−メチルスルホニル）−フェニル−２−（２−メチル−５−ピリジニル）ピリ
ジン；またはその薬学的に許容され得る塩が挙げられる。

ＣＯＸ−２の特異的阻害薬と報告されており、したがって本発明に有用である化合物と
しては、限定されないが：パレコキシブ、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）およびＢＥＸＴ
ＲＡ（登録商標）またはその薬学的に許容され得る塩が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得る血管新生阻害薬の例としては、限定されないが
、エンドスタチン、ユークレイン（ｕｋｒａｉｎ）、ランピルナーゼ、ＩＭ８６２、５−
メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−
オキサスピロ［２，５］オクタ−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、アセチルジ
ナナリン、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾｙｌ）−フ
ェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１
、スクアラミン、コンブレタスタチン、ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化マンノ
ペンタノースリン酸、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロ
ロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］−カルボニルイミノ］−ビス−（
１，３−ナフタレンジスルホネート）、および３−［（２，４−ジメチルピロル−５−イ
ル）メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）が挙げられる。

本発明の化合物と併用して使用され得るチロシンキナーゼ阻害薬の例としては、限定さ
れないが、Ｎ−（トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソオキサゾル−４−カル
ボキサミド、３−［（２，４−ジメチルピロル−５−イル）メチリデニル）インドリン−
２−オン、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン、４−（３−ク
ロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）
プロポキシｌ］キナゾリン、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキ
シエトキシ）−４−キナゾリンアミン、ＢＩＢＸ１３８２、２，３，９，１０，１１，１
２−ヘキサヒドロ−１０−（ヒドロキシメチル）−１０−ヒドロキシ−９−メチル−９，
１２−エポキシ−１Ｈ−ジインドロ［１，２，３−ｆｇ：３’，２’，１’−ｋｌ］ピロ
ロ［３，４−ｉ］［１，６］ベンゾジアゾシン−１−オン、ＳＨ２６８、ゲニステイン、
イマチニブ（ＳＴＩ５７１）、ＣＥＰ２５６３、４−（３−クロロフェニルアミノ）−５
，６−ジメチル−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンメタンスルホネート、４−（３
−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、４−（４
’−ヒドロキシフェニル）アミノ−６，７−ジメトキシキナゾリン、ＳＵ６６６８、ＳＴ
Ｉ５７１Ａ、Ｎ−４−クロロフェニル−４−（４−ピリジルメチル）−１−フタラジンア
ミン、およびＥＭＤ１２１９７４が挙げられる。

抗がん化合物以外の化合物との併用も、本発明の組成物および方法に包含される。例え
ば、本発明の特許請求の範囲に記載の化合物とＰＰＡＲ−γ（すなわち、ＰＰＡＲ−ガン
マ）作動薬およびＰＰＡＲ−δ（すなわち、ＰＰＡＲ−デルタ）作動薬との併用は、特定
の悪性疾患の処置に有用である。ＰＰＡＲ−γおよびＰＰＡＲ−δは、核ペルオキシソー
ム増殖因子活性化型受容体γおよびδである。内皮細胞でのＰＰＡＲ−γの発現およびそ
の血管新生における関与が文献に報告されている（Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ．３１：９０９−９１３（１９９８）；Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：９
１１６−９１２１（１９９９）；Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ．Ｓｃｉ
．４１：２３０９−２３１７（２０００）参照）。ごく最近、ＰＰＡＲ−γ作動薬は、イ
ンビトロでＶＥＧＦに対する血管新生応答を阻害することが示された；トログリタゾンお
よびロシグリタゾンマレイン酸はどちらも、マウスにおいて、網膜の新血管形成の発達を
抑止する（Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｍｏｌ．１１９：７０９−７１７（２００１））。本
発明の化合物と併用して使用され得るＰＰＡＲ−γ作動薬およびＰＰＡＲ−γ／α作動薬
の例としては、限定されないが、チアゾリジンジオン（ＤＲＦ２７２５、ＣＳ−０１１、
トログリタゾン、ロシグリタゾン、およびピオグリタゾンなど）、フェノフィブラート、
ゲムフィブロジル、クロゲムフィブロジル、ＧＷ２５７０、ＳＢ２１９９９４、ＡＲ−Ｈ
０３９２４２、ＪＴＴ−５０１、ＭＣＣ−５５５、ＧＷ２３３１、ＧＷ４０９５４４、Ｎ
Ｎ２３４４、ＫＲＰ２９７、ＮＰ０１１０、ＤＲＦ４１５８、ＮＮ６２２、ＧＩ２６２５
７０、ＰＮＵ１８２７１６、ＤＲＦ５５２９２６、２−［（５，７−ジプロピル−３−ト
リフルオロメチル−１，２−ベンゾイソオキサゾル−６−イル）オキシ］−２−メチルプ
ロピオン酸（ＵＳＳＮ０９／７８２，８５６に開示）、ならびに２（Ｒ）−７−（３−（
２−クロロ−４−（４−フルオロフェノキシ）フェノキシ）プロポキシ）−２−エチルク
ロマン−２−カルボン酸（ＵＳＳＮ６０／２３５，７０８および６０／２４４，６９７に
開示）が挙げられる。

本発明の別の実施形態は、癌処置のための遺伝子療法との併用での本開示の化合物の使
用である。癌を処置するための遺伝子的ストラテジーの概説については、Ｈａｌｌら（Ａ
ｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ ６１：７８５−７８９（１９９７））およびＫｕｆｅら（
Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第５版，ｐｐ ８７６−８８９，ＢＣ Ｄｅｃｋｅｒ
，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，２０００）を参照のこと。遺伝子療法は、任意の腫瘍抑制遺伝子を
送達するために使用され得る。かかる遺伝子の例としては、限定されないが、ｐ５３（こ
れは、組換えウイルス媒介性遺伝子導入によって送達され得る（例えば、米国特許第６，
０６９，１３４号参照））、ｕＰＡ／ｕＰＡＲ拮抗薬（「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ−Ｍｅｄ
ｉａｔｅｄ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｕＰＡ／ｕＰＡＲ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ
Ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｔｕｍｏｒ
Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ」，Ｇｅｎｅ Ｔ
ｈｅｒａｐｙ，Ａｕｇｕｓｔ ５（８）：１１０５−１３（１９９８））、およびインタ
ーフェロンγ（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：２１７−２２２（２０００））が挙げられ
る。

また、本発明の化合物を、固有の多剤耐性（ＭＤＲ）の阻害薬、特に、輸送体タンパク
質の高レベル発現と関連しているＭＤＲの阻害薬と併用して投与してもよい。かかるＭＤ
Ｒ阻害薬としては、ｐ−糖タンパク質（Ｐ−ｇｐ）の阻害薬、例えば、ＬＹ３３５９７９
、ＸＲ９５７６、ＯＣ１４４−０９３、Ｒ１０１９２２、ＶＸ８５３およびＰＳＣ８３３
（バルスポダール）が挙げられる。

本発明の化合物を、単独または放射線療法との本発明の化合物の使用に起因するもので
あり得る悪心または嘔吐、例えば、急性、遅延型、後期および期待的嘔吐を処置するため
に、制吐剤と併せて使用してもよい。嘔吐の予防または処置のため、本発明の化合物を、
他の制吐剤、特に、ニューロキニン−１受容体拮抗薬、５ＨＴ３受容体拮抗薬、例えば、
オンダンセトロン、グラニセトロン、トロピセトロンおよびザチセトロン、ＧＡＢＡＢ受
容体作動薬、例えば、バクロフェン、コルチコステロイド、例えば、デカドロン（デキサ
メタゾン）、ケナログ、アリストコート、ナサリド、プレフェリド（Ｐｒｅｆｅｒｉｄ）
、ベネコルテン（Ｂｅｎｅｃｏｒｔｅｎ）またはその他のもの（米国特許第２，７８９，
１１８号、同第２，９９０，４０１号、同第３，０４８，５８１号、同第３，１２６，３
７５号、同第３，９２９，７６８号、同第３，９９６，３５９号、同第３，９２８，３２
６号および同第３，７４９，７１２号に開示されたものなど）、抗ドパミン薬、例えば、
フェノチアジン（例えば、プロクロルペラジン、フルフェナジン、チオリダジンおよびメ
ソリダジン）、メトクロプラミドまたはドロナビノールと併せて使用してもよい。一実施
形態では、ニューロキニン−１受容体拮抗薬、５ＨＴ３受容体拮抗薬およびコルチコステ
ロイドから選択される制吐剤が、本発明の化合物の投与によるものであり得る嘔吐の処置
または予防のための佐剤として投与される。

本発明の化合物と併せて使用するニューロキニン−１受容体拮抗薬は、例えば、米国特
許第５，１６２，３３９号、同第５，２３２，９２９号、同第５，２４２，９３０号、同
第５，３７３，００３号、同第５，３８７，５９５号、同第５，４５９，２７０号、同第
５，４９４，９２６号、同第５，４９６，８３３号、同第５，６３７，６９９号、同第５
，７１９，１４７号；欧州特許公開第０３６０３９０号、同第０３９４９８９号、同第０
４２８４３４号、同第０４２９３６６号、同第０４３０７７１号、同第０４３６３３４号
、同第０４４３１３２号、同第０４８２５３９号、同第０４９８０６９号、同第０４９９
３１３号、同第０５１２９０１号、同第０５１２９０２号、同第０５１４２７３号、同第
０５１４２７４号、同第０５１４２７５号、同第０５１４２７６号、同第０５１５６８１
号、同第０５１７５８９号、同第０５２０５５５号、同第０５２２８０８号、同第０５２
８４９５号、同第０５３２４５６号、同第０５３３２８０号、同第０５３６８１７号、同
第０５４５４７８号、同第０５５８１５６号、同第０５７７３９４号、同第０５８５９１
３号、０５９０１５２号、同第０５９９５３８号、同第０６１０７９３号、同第０６３４
４０２号、同第０６８６６２９号、同第０６９３４８９号、同第０６９４５３５号、同第
０６９９６５５号、同第０６９９６７４号、同第０７０７００６号、同第０７０８１０１
号、同第０７０９３７５号、同第０７０９３７６号、同第０７１４８９１号、同第０７２
３９５９号、同第０７３３６３２号および同第０７７６８９３号；ＰＣＴ国際特許公開第
９０／０５５２５号、同第９０／０５７２９号、同第９１／０９８４４号、同第９１／１
８８９９号、同第９２／０１６８８号、同第９２／０６０７９号、同第９２／１２１５１
号、同第９２／１５５８５号、同第９２／１７４４９号、同第９２／２０６６１号、同第
９２／２０６７６号、同第９２／２１６７７号、同第９２／２２５６９号、同第９３／０
０３３０号、同第９３／００３３１号、同第９３／０１１５９号、同第９３／０１１６５
号、同第９３／０１１６９号、同第９３／０１１７０号、同第９３／０６０９９号、同第
９３／０９１１６号、同第９３／１００７３号、同第９３／１４０８４号、同第９３／１
４１１３号、同第９３／１８０２３号、同第９３／１９０６４号、同第９３／２１１５５
号、同第９３／２１１８１号、同第９３／２３３８０号、同第９３／２４４６５号、同第
９４／００４４０号、同第９４／０１４０２号、同第９４／０２４６１号、同第９４／０
２５９５号、同第９４／０３４２９号、同第９４／０３４４５号、同第９４／０４４９４
号、同第９４／０４４９６号、同第９４／０５６２５号、同第９４／０７８４３号、同第
９４／０８９９７号、同第９４／１０１６５号、同第９４／１０１６７号、同第９４／１
０１６８号、同第９４／１０１７０号、同第９４／１１３６８号、同第９４／１３６３９
号、同第９４／１３６６３号、同第９４／１４７６７号、同第９４／１５９０３号、同第
９４／１９３２０号、同第９４／１９３２３号、同第９４／２０５００号、同第９４／２
６７３５号、同第９４／２６７４０号、同第９４／２９３０９号、同第９５／０２５９５
号、同第９５／０４０４０号、同第９５／０４０４２号、同第９５／０６６４５号、同第
９５／０７８８６号、同第９５／０７９０８号、同第９５／０８５４９号、同第９５／１
１８８０号、同第９５／１４０１７号、同第９５／１５３１１号、同第９５／１６６７９
号、同第９５／１７３８２号、同第９５／１８１２４号、同第９５／１８１２９号、同第
９５／１９３４４号、同第９５／２０５７５号、同第９５／２１８１９号、同第９５／２
２５２５号、同第９５／２３７９８号、同第９５／２６３３８号、同第９５／２８４１８
号、同第９５／３０６７４号、同第９５／３０６８７号、同第９５／３３７４４号、同第
９６／０５１８１号、同第９６／０５１９３号、同第９６／０５２０３号、同第９６／０
６０９４号、同第９６／０７６４９号、同第９６／１０５６２号、同第９６／１６９３９
号、同第９６／１８６４３号、同第９６／２０１９７号、同第９６／２１６６１号、同第
９６／２９３０４号、同第９６／２９３１７号、同第９６／２９３２６号、同第９６／２
９３２８号、同第９６／３１２１４号、同第９６／３２３８５号、同第９６／３７４８９
号、同第９７／０１５５３号、同第９７／０１５５４号、同第９７／０３０６６号、同第
９７／０８１４４号、同第９７／１４６７１号、同第９７／１７３６２号、同第９７／１
８２０６号、同第９７／１９０８４号、同第９７／１９９４２および９７／２１７０２号
；ならびに英国特許出願公開第２２６６５２９号、同第２２６８９３１号、同第２２６９
１７０号、同第２２６９５９０号、同第２２７１７７４号、同第２２９２１４４号、同第
２２９３１６８号、同第２２９３１６９号、および同第２３０２６８９号に充分に記載さ
れている。かかる化合物の調製は、前述の特許および公開公報（引用により本明細書に組
み込まれる）に充分に記載されている。

一実施形態では、本発明の化合物と併せての使用のためのニューロキニン−１受容体拮
抗薬は：２−（Ｒ）−（１−（Ｒ）−（３，５−ビス（トリフルオロメチル）−フェニル
）エトキシ）−３−（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−４−（３−（５−オキソ−１Ｈ
，４Ｈ−１，２，４−トリアゾロ）メチル）モルホリン、またはその薬学的に許容され得
る塩（これは、米国特許第５，７１９，１４７号に記載されている）から選択される。

また、本発明の化合物は、ビスホスホネート（ビスホスホネート、ジホスホネート、ビ
スホスホン酸およびジホスホン酸を包含すると理解されたい）と併用する癌（例えば、骨
の癌）の処置または予防にも有用であり得る。ビスホスホネートの例としては、限定され
ないが：エチドロネート（Ｄｉｄｒｏｎｅｌ）、パミドロネート（Ａｒｅｄｉａ）、アレ
ンドロネート（Ｆｏｓａｍａｘ）、リセドロネート（Ａｃｔｏｎｅｌ）、ゾレドロネート
（Ｚｏｍｅｔａ）、イバンドロネート（Ｂｏｎｉｖａ）、インカドロネートまたはシマド
ロネート、クロドロネート、ＥＢ−１０５３、ミノドロネート、ネリドロネート、ピリド
ロネートおよびチルドロネート（その任意のあらゆる薬学的に許容され得る塩、誘導体、
水和物および混合物を含む）が挙げられる。

また、本発明の化合物を、貧血の処置に有用な薬剤と投与してもよい。かかる貧血処置
剤は、例えば、連続赤血球生成（ｅｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ）受容体活性化薬（エポエ
チンアルファなど）である。

また、本発明の化合物を、好中球減少症の処置に有用な薬剤と投与してもよい。かかる
好中球減少症処置剤は、例えば、好中球の生成および機能を調節する造血系増殖因子、例
えば、ヒト顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）である。Ｇ−ＣＳＦの例としては、フ
ィルグラスチムおよびＰＥＧ−フィルグラスチムが挙げられる。

また、本発明の化合物を、免疫学的増強薬（レバミゾール、イソプリノシンおよびザダ
キシンなど）と投与してもよい。

また、本発明の化合物は、アロマターゼ阻害薬と併用する乳癌の処置または予防にも有
用であり得る。アロマターゼ阻害薬の例としては、限定されないが：アナストロゾール、
レトロゾールおよびエキセメスタンが挙げられる。

また、本発明の化合物は、他のｓｉＮＡ療法薬と併用する癌の処置または予防にも有用
であり得る。

また、本発明の化合物を、γ−セクレターゼ阻害薬および／またはＮＯＴＣＨシグナル
伝達の阻害薬と併用して投与してもよい。かかる阻害薬としては、国際公開第０１／９０
０８４号、同第０２／３０９１２号、同第０１／７０６７７号、同第０３／０１３５０６
号、同第０２／３６５５５号、同第０３／０９３２５２号、同第０３／０９３２６４号、
同第０３／０９３２５１号、同第０３／０９３２５３号、同第２００４／０３９８００号
、同第２００４／０３９３７０号、同第２００５／０３０７３１号、同第２００５／０１
４５５３号、ＵＳＳＮ１０／９５７，２５１、国際公開第２００４／０８９９１１号、同
第０２／０８１４３５号、同第０２／０８１４３３号、同第０３／０１８５４３号、同第
２００４／０３１１３７号、同第２００４／０３１１３９号、同第２００４／０３１１３
８号、同第２００４／１０１５３８号、同第２００４／１０１５３９号および同第０２／
４７６７１号（例えば、ＬＹ−４５０１３９）に記載された化合物が挙げられる。

また、本発明の化合物は、ＰＡＲＰ阻害薬と併用する癌の処置または予防にも有用であ
り得る。

また、本発明の化合物は、以下の治療用薬剤：アバレリクス（Ｐｌｅｎａｘｉｓ ｄｅ
ｐｏｔ（登録商標））；アルデスロイキン（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；アルデスロ
イキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））；アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商
標））；アリトレチノイン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標））；アロプリノール（Ｚｙｌ
ｏｐｒｉｍ（登録商標））；アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；アミホス
チン（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））；アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）
）；三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標））；アスパラギナーゼ（Ｅｌｓｐａｒ（
登録商標））；アザシチジン（Ｖｉｄａｚａ（登録商標））；塩酸ベンダムスチン（Ｔｒ
ｅａｎｄａ（登録商標））；ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）（Ａｖａｓｔｉｎ
（登録商標））；ベキサロテンカプセル剤（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ベキサ
ロテンゲル剤（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標））；ブレオマイシン（Ｂｌｅｎｏｘａｎ
ｅ（登録商標））；ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；ブレフェルディンＡ
；静脈内ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））；経口ブスルファン（Ｍｙｌｅ
ｒａｎ（登録商標））；カルステロン（Ｍｅｔｈｏｓａｒｂ（登録商標））；カペシタビ
ン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）
）；カルムスチン（ＢＣＮＵ（登録商標）、ＢｉＣＮＵ（登録商標））；カルムスチン（
Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））；カルムスチンとポリフェプロサン ２０ インプラント
（Ｇｌｉａｄｅｌ Ｗａｆｅｒ（登録商標））；セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録
商標））；セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅ
ｒａｎ（登録商標））；シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））；クラドリビン
（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標）、２−ＣｄＡ（登録商標））；クロファラビン（Ｃｌ
ｏｌａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓ
ａｒ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録
商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ Ｔａｂｌｅｔ（登録商標））；シタラ
ビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））；リポソームシタラビン（ＤｅｐｏＣｙｔ（登
録商標））；デカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））；ダクチノマイシン、ア
クチノマイシンＤ（Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；ダルテパリンナトリウム注射剤（
Ｆｒａｇｍｉｎ（登録商標））；ダルベポエチンα（Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））；ダ
サチニブ（Ｓｐｒｙｃｅｌ（登録商標））；リポソームダウノルビシン（ＤａｎｕｏＸｏ
ｍｅ（登録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登
録商標））；ダウノルビシン、ダウノマイシン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；
デガレリクス（Ｆｉｒｍａｇｏｎ（登録商標））；デニロイキンジフチトクス（Ｏｎｔａ
ｋ（登録商標））；デクスラゾキサン（Ｚｉｎｅｃａｒｄ（登録商標））；塩酸デクスラ
ゾキサン（Ｔｏｔｅｃｔ（登録商標））；ジデムニンＢ；１７−ＤＭＡＧ；ドセタキセル
（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ（
登録商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録
商標））；ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ ＰＦＳ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録
商標））；リポソームドキソルビシン（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））；プロピオン酸ドロモ
スタノロン（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ（登録商標））；プロピオン酸ドロモスタノ
ロン（Ｍａｓｔｅｒｏｎｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；エクリズマブ注射剤（
Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））；エリオットＢ液（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ Ｓｏｌｕｔ
ｉｏｎ（登録商標））；エルトロンボパグ（Ｐｒｏｍａｃｔａ（登録商標））；エピルビ
シン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標））；エポエチンα（ｅｐｏｇｅｎ（登録商標））；エ
ルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））；エストラムスチン（Ｅｍｃｙｔ（登録商標
））；エチニルエストラジオール；エトポシドリン酸（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標）
）；エトポシド、ＶＰ−１６（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））；エベロリムス錠剤（Ａｆ
ｉｎｉｔｏｒ（登録商標））；エキセメスタン（Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標））；フェ
ルモキシトール（Ｆｅｒａｈｅｍｅ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（登録商標））；Ｆｉｌｇｒａ
ｓｔｉｍ（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標））；フロクスウリジン（動脈内）（ＦＵＤＲ（
登録商標））；フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））；フルオロウラシル、５−
ＦＵ（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標））；フルベストラント（Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標
））；ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ゲムシタビン（
Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））；ゲムツヅマブオゾガミシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標
））；酢酸ゴセレリン（Ｚｏｌａｄｅｘ Ｉｍｐｌａｎｔ（登録商標））；酢酸ゴセレリ
ン（Ｚｏｌａｄｅｘ（登録商標））；酢酸ヒストレリン（Ｈｉｓｔｒｅｌｉｎ ｉｍｐｌ
ａｎｔ（登録商標））；ヒドロキシ尿素（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））；イブリツモマブ
チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録
商標））；イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖ
ｅｃ（登録商標））；インターフェロンα２ａ（Ｒｏｆｅｒｏｎ Ａ（登録商標））；イ
ンターフェロンα−２ｂ（Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（登録商標））；イオベングアンＩ １２３
注射剤（ＡｄｒｅＶｉｅｗ（登録商標））；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商
標））；イキサベピロン（Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標））；ラパチニブ錠剤（Ｔｙｋｅｒ
ｂ（登録商標））；レナリドミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標））；レトロゾール（Ｆ
ｅｍａｒａ（登録商標））；ロイコボリン（Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標）、Ｌｅ
ｕｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標））；酢酸ロイプロリド（Ｅｌｉｇａｒｄ（登録商標））；
レバミゾール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ（登録商標））；ロムスチン、ＣＣＮＵ（ＣｅｅＢＵ
（登録商標））；メクロレタミン、ナイトロジェンマスタード（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登
録商標））；酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））；メルファラン、Ｌ−Ｐ
ＡＭ（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；メルカプトプリン、６−ＭＰ（Ｐｕｒｉｎｅｔｈ
ｏｌ（登録商標））；メンサ（Ｍｅｓｎｅｘ（登録商標））；メンサ（Ｍｅｓｎｅｘ ｔ
ａｂｓ（登録商標））；メトトレキサート（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標））；
メトキサレン（Ｕｖａｄｅｘ（登録商標））；８−メトキシソラレン；ミトマイシンＣ（
Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ミトタン（Ｌｙｓｏｄｒｅｎ（登録商標））；ミト
ザントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；ミトラマイシン；ナンドロロンフェ
ンプロピオナート（Ｄｕｒａｂｏｌｉｎ−５０（登録商標））；ネララビン（Ａｒｒａｎ
ｏｎ（登録商標））；ニロチニブ（Ｔａｓｉｇｎａ（登録商標））；ノフェツモマブ（Ｖ
ｅｒｌｕｍａ（登録商標））；オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））；オプレ
ルベキン（Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標））；オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録
商標））；パクリタキセル（Ｐａｘｅｎｅ（登録商標））；パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ
（登録商標））；パクリタキセルタンパク質結合粒子（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））
；パリフェルミン（Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（登録商標））；パミドロネート（Ａｒｅｄｉａ
（登録商標））；パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））；パゾパニブ錠剤（Ｖ
ｏｔｒｉｅｎｔｔｍ（登録商標））；ペガデマーゼ（Ａｄａｇｅｎ（Ｐｅｇａｄｅｍａｓ
ｅ Ｂｏｖｉｎｅ）（登録商標））；ペガスパルガーゼ（Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標）
）；ペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））；ペメトレキセド二ナトリ
ウム（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標））；ピ
ポブロマン（Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））；プレリキサホル（Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商
標））；プリカマイシン、ミトラマイシン（Ｍｉｔｈｒａｃｉｎ（登録商標））；ポルフ
ィマールナトリウム（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ（登録商標））；プララトレキサート注射剤（
Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標））；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；キ
ナクリン（Ａｔａｂｒｉｎｅ（登録商標））；ラパマイシン；ラスブリカーゼ（Ｅｌｉｔ
ｅｋ（登録商標））；塩酸ラロキシフェン（Ｅｖｉｓｔａ（登録商標））；リツキシマブ
（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ロミデプシン（Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標））；ロミ
プロスチム（Ｎｐｌａｔｅ（登録商標））；サルグラモスチム（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商
標））；サルグラモスチム（Ｐｒｏｋｉｎｅ（登録商標））；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖ
ａｒ（登録商標））；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；マレイン酸ス
ニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標））；タルク（Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ（登録商標））；
タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登
録商標））；テムシロシムス（Ｔｏｒｉｓｅｌ（登録商標））；テニポシド、ＶＭ−２６
（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））；テストラクトン（Ｔｅｓｌａｃ（登録商標））；チオグア
ニン、６−ＴＧ（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ（登録商標））；チオプリン；チオテパ（Ｔｈ
ｉｏｐｌｅｘ（登録商標））；トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標））；トレミフ
ェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標））；トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；
トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））；トランス−レチ
ノイン酸；トラスツヅマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））；トレチノイン、ＡＴＲ
Ａ（Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））；トリエチレンメラミン；ウラシルマスタード（Ｕ
ｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ Ｃａｐｓｕｌｅｓ（登録商標））；バルルビシン（Ｖａｌ
ｓｔａｒ（登録商標））；ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））；ビンクリスチ
ン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））；ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））
；ボリノスタット（Ｚｏｌｉｎｚａ（登録商標））；ウォルトマニン；およびゾレドロネ
ート（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））と併用する癌の処置にも有用であり得る。

また、本発明は、配列番号：５、配列番号：４９１８、配列番号：１９４、配列番号：
５１０７、配列番号：１９６、配列番号：５１０９、配列番号：１５１もしくは配列番号
：５０６４少なくとも１５個のヌクレオチドの配列；または式（Ａ）を含む本発明のｓｉ
ＮＡ分子および／またはその薬学的に許容され得る塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能
性の誘導体を別のＣＴＮＮＢ１阻害薬と一緒に含む併用を提供する。

上記の併用は、医薬製剤の形態での使用のために簡便に提示され得、したがって、上記
の併用を薬学的に許容され得る希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物は、本発明のさ
らなる態様を表す。

かかる併用の個々の化合物は、逐次または同時のいずれかで、別々の医薬製剤または併
合医薬製剤にて投与され得る。一実施形態において、該個々の化合物は併合医薬製剤にて
同時投与される。

したがって、記載の分子は、当該技術分野で知られた他のＣＴＮＮＢ１阻害薬などの、
被検体または生物体において本明細書に記載の疾患、障害、病状および形質を予防または
処置するための１種類以上の既知の化合物、処置薬または手順と併用して使用され得る。

３．治療適用用途
現在のＣＴＮＮＢ１の研究における一連の知見により、治療的使用のためのＣＴＮＮＢ
１発現が調節され得る方法の必要性が示されている。

したがって、本発明の一態様は、ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現の作用または該作用の喪失に
よって媒介される病状に苦しんでいる被検体（例えば限定されないが、ヒト）の処置方法
であって、前記被検体に有効量の本発明の二本鎖ｓｉＮＡ分子を投与することを含む方法
を含む。この態様の一実施形態では、該ｓｉＮＡ分子は、配列番号：５、配列番号：４９
１８、配列番号：１９４、配列番号：５１０７、配列番号：１９６、配列番号：５１０９
、配列番号：１５１もしくは配列番号：５０６４少なくとも１５個のヌクレオチドの配列
；または式（Ａ）を含むものである。この態様の別の実施形態では、該病状はがんである
か、または癌によって引き起こされるものである。したがって、一部の特定の実施形態に
おいて、本発明の分子および組成物は、癌を処置するための方法に有用である。本発明の
この態様によって処置可能ながんとしては、胆管癌、膀胱癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、
骨肉腫、脳の癌、グリオーム、星状細胞腫、乳癌、化生性癌、子宮頚がん、子宮頸部扁平
上皮癌、直腸癌、結腸直腸癌、結腸癌、遺伝性非ポリポーシス性結腸直腸癌、結腸直腸腺
癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、子宮内膜癌、子宮内膜間質肉腫、食道癌、食道扁平上
皮癌、食道腺癌、眼内黒色腫、ブドウ膜黒色腫、胆嚢癌、胆嚢腺癌、腎細胞癌、明細胞腎
細胞癌、移行上皮癌、尿路上皮癌、ウィルムス腫瘍、白血病、急性リンパ球性白血病（Ａ
ＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性（ＣＬＬ）、慢性骨髄性（ＣＭＬ
）、慢性骨髄単球性（ＣＭＭＬ）、肝臓癌、肝臓癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、胆管癌、胚
芽腫、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリ
ンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非
ホジキンリンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ細胞リンパ腫、多発性
骨髄腫、鼻咽腔癌（ＮＰＣ）、神経芽腫、口腔咽頭癌、口腔扁平上皮癌、骨肉腫、卵巣癌
、膵臓癌、膵管腺癌、偽乳頭状 新生物、腺房細胞癌、前立腺癌、前立腺腺癌、皮膚癌、
黒色腫、悪性黒色腫、皮膚黒色腫、小腸の癌、胃癌、胃癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）
、子宮癌、子宮肉腫が挙げられる。

一実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は：脳の癌、乳癌、子宮頚がん、結腸直腸
癌、腎細胞癌、白血病、肝細胞癌、肺がん、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、卵巣癌、膵
臓癌、前立腺癌、黒色腫および胃癌から選択される癌の処置または予防するための方法に
有用である。一部の特定の実施形態において、本発明の化合物は、乳癌、結腸直腸癌、肝
細胞癌、肺がん；および前立腺癌の処置に有用である。特別な一実施形態では、本発明の
化合物は肝細胞癌の処置に有用である。

別の実施形態では、本発明のｓｉＮＡ分子は、がん細胞および癌の転移の予防またはモ
ジュレーションのための方法に有用である。特に、本発明のｓｉＮＡ分子は、脳の癌、乳
癌、子宮頚がん、結腸直腸癌、腎細胞癌、白血病、肝細胞癌、肺がん、Ｂ細胞リンパ腫、
多発性骨髄腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、黒色腫および胃癌の転移を予防またはモジュ
レートするための方法に有用である。

一部の特定の実施形態において、該ｓｉＮＡ分子の投与は局所投与または全身投与によ
るものである。他の実施形態において、本発明は、被検体または生物体を本発明のｓｉＮ
Ａ分子と、該当する組織または細胞（肺の細胞および組織など）に対する局所投与によっ
て、例えば、肺経由送達によって接触させることを特色とする。また他の実施形態では、
本発明は、被検体または生物体を本発明のｓｉＮＡ分子と、該被検体または生物体の該当
する組織または細胞（がん性の組織または細胞）への全身投与によって（該ｓｉＮＡの静
脈内または皮下投与などによって）接触させることを特色とする。

また、本発明のｓｉＮＡ分子は、エキソビボ適用における試薬としても使用される。例
えば、該ｓｉＮＡ試薬は、治療効果のために被検体に移植される組織または細胞内に導入
される。該細胞および／または組織は、後でその外植片を受容する生物体または被検体に
由来するものであってもよく、移植前の別の生物体または被検体に由来するものであって
もよい。該ｓｉＮＡ分子は、細胞または組織内の１つ以上の遺伝子の発現を、該細胞また
は組織がインビボで移植されたら所望の表現型が得られるように、または機能が発揮され
るようにモジュレートするために使用され得る。一実施形態では、患者由来の特定のＣＴ
ＮＮＢ１標的細胞を抽出する。抽出したこの細胞を、該細胞内の特定のヌクレオチド配列
を標的化するＣＴＮＮＢ１ ｓｉＮＡと、該細胞による該ｓｉＮＡの取込みに適した条件
下で接触させる（例えば、カチオン性脂質、リポソームなどの送達試薬を使用するか、ま
たは細胞内へのｓｉＮＡの送達を助長するエレクトロポレーションなどの手法を使用する
）。次いで、該細胞を同じ患者または他の患者に再導入して戻す。

治療適用用途では、医薬有効用量の本発明のｓｉＮＡ分子または医薬組成物が被検体に
投与される。医薬有効用量は、疾患状態を予防する、その発生を抑止する、または疾患状
態を処置する（症状をある程度、好ましくはあらゆる症状を緩和する）ために必要とされ
る用量である。当業者は、被検体の体格および体重、疾患の進行または浸透の程度、被検
体の年齢、健康状態および性別、投与経路ならびに投与が局所であるか全身性であるかな
どの要素を考慮することにより、所与の被検体に投与される本発明のｓｉＮＡの治療有効
用量を容易に決定することができよう。一般的に、負電荷ポリマーの効力に応じて０．１
μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の量の活性成分が投与される。最適な投与スケジ
ュールは、患者の体内の薬物蓄積の測定値から計算され得る。本発明のｓｉＮＡ分子は、
単回用量で投与してもよく、反復用量で投与してもよい。

本発明のｓｉＮＡ分子は、１ヶ月に１回、週に１回、１日１回（ＱＤ）投与してもよく
、１ヶ月、１週間または１日の間に多数回（例えば限定されないが、１日２回（ＢＩＤ）
、１日３回（ＴＩＤ）、２週間に１回など）の用量に分けてもよい。当業者は、投与の反
復率を、測定された滞留時間および体液または組織中の薬物の濃度に基づいて容易に推定
することができよう。

また、投与は連続的であってもよく（すなわち、毎日）、断続的であってもよい。例え
ば、本発明の化合物の断続的投与は、１週間に１〜６日の投与であってもよく、サイクル
での投与を意味するものであってもよく（例えば、連続２〜８週間の毎日の投与、次いで
１週間までの投与なしの休薬期間）、隔日での投与を意味するものであってもよい。

Ｇ．投与
該組成物または製剤は、さまざまな様式で投与され得る。本発明の投与方法の非限定的
な例としては、経口、口腔内、舌下、非経口（すなわち、関節内、静脈内、腹腔内、皮下
、もしくは筋肉内）、局所経直腸投与または他の局所投与が挙げられる。一実施形態にお
いて、本発明の組成物は、吹送および吸入によって投与され得る。該投与は、単回用量で
行っても分割用量で行ってもよい。一部の実施形態において、医薬組成物は、ボーラス注
射によって静脈内または腹腔内投与される（例えば、米国特許第５，２８６，６３４号を
参照のこと）。脂質核酸粒子は、疾患部位への直接注射によって投与してもよく、疾患部
位から遠位の部位への注射によって投与してもよい（例えば、Ｃｕｌｖｅｒ，ＨＵＭＡＮ
ＧＥＮＥ ＴＨＥＲＡＰＹ，ＭａｒｙＡｎｎ Ｌｉｅｂｅｒｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｕｂｌｉ
ｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．ｐｐ．７０−７１（１９９４）を参照のこと）。一実施
形態において、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、本明細書に記載し
た、および当該技術分野で一般的に知られた細胞、被検体または生物体に投与される。

１．インビボ投与
本発明の任意の処置方法において、該ｓｉＮＡは被検体に、本明細書に記載のようにし
て、あるいは当該技術分野で知られているようにして、単独療法剤として単独で、または
本明細書に記載した、もしくは当該技術分野で知られたさらなる治療薬との併用でのいず
れかで、全身投与され得る。全身投与としては、例えば、当該技術分野で一般的に知られ
た肺経由（吸入、噴霧化など）、静脈内、皮下、筋肉内、カテーテル法、鼻咽頭経由、経
皮、または経口／胃腸投与が挙げられ得る。

本発明の任意の処置方法または予防方法において、該ｓｉＮＡは被検体に対し、本明細
書に記載のようにして、あるいは、当該技術分野で知られているようにして、単独療法剤
として単独で、または当該技術分野で知られたさらなる治療薬との併用でのいずれかで、
局所投与または局所組織に投与され得る。局所投与としては、例えば、当該技術分野で一
般的に知られた吸入、噴霧化、カテーテル法、埋入、直接注射、経真皮／経皮適用、貼付
剤、ステント挿入、点耳剤／点眼剤、または該当組織への門脈投与、または任意の他の局
所投与手法、方法もしくは処置が挙げられ得る。

一実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、肝臓に、
当該技術分野で一般的に知られているようにして投与される（例えば、Ｗｅｎら，２００
４，Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．，１０，２４４−９；Ｍｕｒａｏら
，２００２，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，１９，１８０８−１４；Ｌｉｕら，２００３，ｇｅ
ｎｅ Ｔｈｅｒ，１０，１８０−７；Ｈｏｎｇら，２００３，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ．，５４，５１−８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，２００４，Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ
．，１４９，１６１１−７；およびＭａｔｓｕｎｏら，２００３，ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．
，１０，１５５９−６６を参照のこと）。

一実施形態において、本発明は、単球およびリンパ球などの造血系細胞への本発明のｓ
ｉＮＡ分子の送達方法の使用を特色とする。このような方法は、Ｈａｒｔｍａｎｎら，１
９９８，Ｊ．Ｐｈａｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８５（２），９２０−９２８；
Ｋｒｏｎｅｎｗｅｔｔら，１９９８，Ｂｌｏｏｄ，９１（３），８５２−８６２；Ｆｉｌ
ｉｏｎおよびＰｈｉｌｌｉｐｓ，１９９７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ
．，１３２９（２），３４５−３５６；ＭａおよびＷｅｉ，１９９６，Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ
．，２０（１１／１２），９２５−９３０；ならびにＢｏｎｇａｒｔｚら，１９９４，Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２（２２），４６８１−８に詳細に記
載されている。

一実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、真皮また
は小胞に、直接または経表面的（例えば、局所的）に、当該技術分野で一般的に知られて
いるようにして投与される（例えば、Ｂｒａｎｄ，２００１，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏ
ｌ．Ｔｈｅｒ．，３，２４４−８；Ｒｅｇｎｉｅｒら，１９９８，Ｊ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒ
ｇｅｔ，５，２７５−８９；Ｋａｎｉｋｋａｎｎａｎ，２００２，ＢｉｏＤｒｕｇｓ，１
６，３３９−４７；Ｗｒａｉｇｈｔら，２００１，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，９
０，８９−１０４；ならびにＰｒｅａｔおよびＤｕｊａｒｄｉｎ，２００１，ＳＴＰ Ｐ
ｈａｒｍａＳｃｉｅｎｃｅｓ，１１，５７−６８を参照のこと）。一実施形態において、
本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、直接または経表面的に、アルコー
ル（例えば、エタノールまたはイソプロパノール）、水を含み、さらなる薬剤（ミリスチ
ン酸イソプロピルおよびカルボマー９８０など（ｓｕｃｈ））を含んでいてもよい水性ア
ルコールゲル製剤を用いて投与される。他の実施形態では、該ｓｉＮＡは、鼻腔に経表面
投与するために製剤化される。経表面用調製物は、罹患領域に１日１回以上の適用によっ
て投与され得る；皮膚領域全体の閉鎖包帯が好都合に使用され得る。連続または長期送達
は、接着性レザーバ系によって行われ得る。

一実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子はイオン導入的に、例えば、特定の器官ま
たは区画（例えば、目、眼底、心臓、肝臓、腎臓、膀胱、前立腺、腫瘍、ＣＮＳなど）に
投与される。イオン導入的送達の非限定的な例は、例えば、国際公開第０３／０４３６８
９号および同第０３／０３０９８９号（これは、引用によりその全体が本明細書に組み込
まれる）に記載されている。

一実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、肺に、本
明細書に記載のようにして、および当該技術分野で一般的に知られているようにして投与
される。別の実施形態では、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤または組成物は、肺の
組織および細胞に、米国特許出願公開第２００６／００６２７５８号；同第２００６／０
０１４２８９号；および同第２００４／００７７５４０号に記載のようにして投与される
。

２．エアロゾル剤および送達デバイス
ａ．エアロゾル製剤
本発明の組成物は、単独、または他の適当な成分との併用でのいずれかで、エアロゾル
製剤に作製され（すなわち、「霧状にされ」得）、吸入によって（例えば、鼻腔内または
気管内）投与され得る（Ｂｒｉｇｈａｍら，Ａｍ．Ｊ．Ｓｃｉ．，２９８：２７８（１９
８９）参照）。エアロゾル製剤は、許容され得る加圧された噴射剤中（例えば、ジクロロ
ジフルオロメタン、プロパン、窒素など）に収容され得る。

一実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子およびその製剤は肺経由送達によって、例
えば、吸入デバイスまたはネブライザによって投与されるエアロゾル製剤または噴霧乾燥
製剤の吸入によって投与され、該当する肺系組織内への該核酸分子の速やかな局所取込み
をもたらす。微粉化核酸組成物の呼吸用乾燥粒子を含む固形微粒状組成物は、乾燥または
凍結乾燥させた核酸組成物を磨砕し、次いで、この微粉化組成物を、例えば４００メッシ
ュスクリーンに通して大型凝集塊を分解または解離させることにより調製され得る。本発
明のｓｉＮＡ組成物を含む固形微粒状組成物に、エアロゾルの形成を助長する機能を果た
す分散化剤ならびに他の治療用化合物を含めてもよい。好適な分散化剤はラクトースであ
り、これは、該核酸化合物と任意の適当な比率（例えば、重量基準で１対１の比）でブレ
ンドされ得る。

本発明のｓｉＮＡ分子または組成物を含むスプレー剤組成物は、例えば、加圧パック（
定量吸入器など）から適当な液化噴射剤の使用を伴って送達される水性の液剤もしくは懸
濁剤として、またはエアロゾル剤として製剤化され得る。一実施形態において、吸入に適
した本発明のエアロゾル剤組成物は懸濁剤または液剤のいずれかであり得、一般的には、
配列番号：５、配列番号：４９１８、配列番号：１９４、配列番号：５１０７、配列番号
：１９６、配列番号：５１０９、配列番号：１５１、もしくは配列番号：５０６４の少な
くとも１５個のヌクレオチドの配列；または式（Ａ）を含むｓｉＮＡ分子と、適当な噴射
剤（例えば、フルオロカーボンまたは水素含有クロロフルオロカーボンまたはその混合物
、特に、ヒドロフルオロアルカン、特に、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，
１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロ−ｎ−プロパン、またはその混合物）を含むも
のである。エアロゾル剤組成物には、界面活性剤などの、当該技術分野でよく知られたさ
らなる製剤用賦形剤を含めてもよい。非限定的な例としては、オレイン酸、レシチンまた
はオリゴ乳酸またはその誘導体（Ｗ０９４／２１２２９およびＷ０９８／３４５９６に記
載のものなど）ならびに共溶媒（例えば、エタノール）が挙げられる。一実施形態におい
て、本発明の医薬エアロゾル製剤は、本発明の化合物と、噴射剤としてフルオロカーボン
または水素含有クロロフルオロカーボンまたはその混合物（界面活性剤および／または共
溶媒と組み合わせてもよい）とを含むものである。

本発明のエアロゾル製剤は、適当な緩衝剤の添加によって緩衝されたものであってもよ
い。

エアロゾル製剤には、製剤が滅菌状態に調製されていない場合、保存料などの添加剤を
含めてもよい。非限定的な例としては、安息香酸メチルヒドロキシ、酸化防止剤、フレー
バー、揮発油、緩衝剤および乳化剤および他の製剤用界面活性剤が挙げられる。一実施形
態では、分解を低減させるため、およびより安全な生体適合性の本発明の非液状微粒状懸
濁剤組成物（例えば、ｓｉＮＡおよび／またはそのＬＮＰ製剤）を提供するため、フルオ
ロカーボンまたはパーフルオロカーボン担体が使用される。別の実施形態では、ネブライ
ザを構成するデバイスにより、含フッ素化学物質（これは静菌性であり、それにより適合
性のデバイス内での微生物の増殖の可能性を減少させる）を含む本発明の組成物（例えば
、ｓｉＮＡおよび／またはそのＬＮＰ製剤）を送達する。

吸入器または吹送器における使用のための本発明の組成物を含むカプセル剤およびカー
トリッジ剤は、例えばゼラチン製であり、本発明の化合物と適当な粉末基剤（ラクトース
またはデンプンなど）の吸入用粉末ミックスを含むように製剤化され得る。一実施形態に
おいて、各カプセル剤またはカートリッジ剤は、配列番号：５、配列番号：４９１８、配
列番号：１９４、配列番号：５１０７、配列番号：１９６、配列番号：５１０９、配列番
号：１５１、もしくは配列番号：５０６４の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列；ま
たは式（Ａ）を含むｓｉＮＡ分子と、１種類以上の賦形剤とを含む。別の実施形態では、
本発明の化合物は、ラクトースなどの賦形剤なしで提示され得る。

本発明のエアロゾル剤組成物は、呼吸器系内に、呼吸用サイズの粒子（例えば、吸入す
ると鼻、口および喉頭を通過するのに充分小さいサイズの粒子）を含む製剤として、肺の
気管支および肺胞を介して投与され得る。一般に、呼吸用粒子は、サイズが約０．５〜１
０ミクロンの範囲である。一実施形態において、該微粒状範囲は１〜５ミクロンであり得
る。別の実施形態では、微粒状範囲は２〜３ミクロンであり得る。エアロゾル剤中に含ま
れた呼吸用でないサイズの粒子は、喉に堆積されて嚥下される傾向にあり、したがって、
エアロゾル剤中の呼吸用でない粒子の量は最小限になる。経鼻投与では、鼻腔内での保持
を確実にするため、１０〜５００ｕｍの範囲の粒径が好ましい。

一部の実施形態において、本発明のｓｉＮＡ組成物は、鼻に、例えば鼻炎の処置のため
に加圧エアロゾル製剤、水性製剤によって経表面投与され、加圧ポンプまたは噴霧化によ
って鼻に投与される。好適な製剤は、この目的のための希釈剤または担体として水を含む
ものである。一部の特定の実施形態では、肺または鼻への本発明の組成物の投与のための
水性製剤は、例えば、緩衝剤、張度改良剤などの慣用的な賦形剤を用いて提供され得る。

ｂ．デバイス
本発明のｓｉＮＡ分子は、上記に論考したような粒子および／またはエアロゾル剤とし
て製剤化および送達され得、当業者に知られた種々のエアロゾル化デバイスから施薬され
得る。

本発明のｓｉＮＡ分子または製剤を含む液状または非液状粒子のエアロゾル剤は、任意
の適当な手段によって、例えば、ネブライザ（例えば、米国特許４，５０１，７２９を参
照のこと）（超音波式または空気ジェット式ネブライザなど）を構成するデバイスを用い
て作製され得る。

本発明のｓｉＮＡ分子または製剤と界面活性剤とを含む固形粒子エアロゾル剤は、任意
の固形微粒状エアロゾル発生器を用いて作製され得る。本発明のｓｉＮＡ分子に使用され
る固形粒子エアロゾル発生器の型の一例は吹送器である。実例としてのエアロゾル発生器
の第２の型は、定量吸入器（「ＭＤＩ」）を構成しているものである。本明細書において
教示する該ｓｉＮＡ分子または製剤を内包するＭＤＩは、当該技術水準の方法によって調
製され得る（例えば、Ｂｙｒｏｎ（上記）および国際公開第９６／３２０９９号参照）。

また、該ｓｉＮＡ分子を、流動体ディスペンサー（国際公開第０５／０４４３５４号に
説明および図解されているものなど）からの送達のための流動体製剤として製剤化しても
よい。

本発明の一部の特定の実施形態では、意識があり自発呼吸する被検体および調節呼吸下
のあらゆる年齢の被検体に対する適用において、ネブライザデバイスが使用される。ネブ
ライザデバイスは、肺への経表面および全身性のターゲテッド薬物送達のために使用され
得る。一実施形態において、ネブライザを構成するデバイスは、本発明のｓｉＮＡ分子ま
たは製剤を肺または肺系組織に局所送達するために使用される。別の実施形態では、ネブ
ライザを構成するデバイスは、本発明のｓｉＮＡ分子または製剤を全身送達するために使
用される。

Ｈ．本発明のｓｉＮＡ分子の他の適用／使用
本発明のｓｉＮＡ分子はまた、診断適用、研究適用および／または医薬（ｍｅｄｉｃａ
ｎｔ）の製造のためにも使用され得る。

一態様において、本発明は、被検体の疾患、形質または病状の診断方法であって、被検
体に本発明の組成物を、該被検体の該疾患、形質または病状の診断に適した条件下で投与
することを含む方法を特色とする。

一実施形態において、本発明のｓｉＮＡ分子は、被検体または生物体の形質、疾患また
は病状と関連しているハプロタイプ多型によって生じるＣＴＮＮＢ１タンパク質の発現を
下方調節または阻害するために使用される。ＣＴＮＮＢ１遺伝子またはＣＴＮＮＢ１タン
パク質もしくはＲＮＡレベルの解析は、かかる多型を有する被検体、または本明細書に記
載の形質、病状もしくは疾患が発生するリスクのある被検体を特定するために使用され得
る。このような被検体は、処置に対して、例えば、本発明のｓｉＮＡ分子および標的遺伝
子発現に関連する疾患の処置に有用な任意の他の組成物での処置に対して寛容である。そ
のため、ＣＴＮＮＢ１のタンパク質またはＲＮＡレベルの解析を用いて、被検体の処置に
おける処置の型および治療過程が決定され得る。ＣＴＮＮＢ１のタンパク質またはＲＮＡ
レベルのモニタリングは、処置の転帰を予測するため、ならびに形質、障害、病状または
疾患と関連している特定のＣＴＮＮＢ１タンパク質のレベルおよび／または活性をモジュ
レートする化合物および組成物の有効性を判定するために使用され得る。

別の実施形態では、本発明は、医薬の製造における使用のための本発明による二本鎖核
酸の使用を含む。一実施形態において、医薬は、ＣＴＮＮＢ１の作用または該作用の喪失
によって媒介される病状の処置における使用のためのものである。一実施形態では、医薬
は、癌の処置のための使用のためのものである。一実施形態では、医薬は、脳の癌、乳癌
、子宮頚がん、結腸直腸癌、腎細胞癌、白血病、肝細胞癌、肺がん、Ｂ細胞リンパ腫、多
発性骨髄腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、黒色腫および胃癌の処置のための使用のための
ものである。特別な一実施形態では、本発明の化合物は肝細胞癌の処置に有用である。

一部の特定の実施形態において、少なくとも一方の鎖が配列番号：５、配列番号：４９
１８、配列番号：１９４、配列番号：５１０７、配列番号：１９６、配列番号：５１０９
、配列番号：１５１もしくは配列番号：５０６４少なくとも１５個のヌクレオチドの配列
；または式（Ａ）を含むものであるｓｉＮＡは、癌、例えば限定されないが、脳の癌、乳
癌、子宮頚がん、結腸直腸癌、腎細胞癌、白血病、肝細胞癌、肺がん、Ｂ細胞リンパ腫、
多発性骨髄腫、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、黒色腫および胃癌などの処置方法における使
用のためのものである。

Ｉ．実施例
次に、本発明を、以下の非限定的な例とともに説明する。当業者には、本質的に同じ結
果が得られるように変更または修正可能なさまざまなノンクリティカルパラメータが容易
に認識されよう。

ＣＴＮＮＢ１に対するｓｉＮＡ活性体の設計、合成および同定
ＣＴＮＮＢ１ ｓｉＮＡの合成
一連のｓｉＮＡ分子を設計し、合成し、ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現に対する有効性につい
て評価した。特定のＣＴＮＮＢ１配列を設計し、米国特許出願第６０／１８２，６０４号
に示された方法によって選択した。他の配列を設計し、プロプライエタリアルゴリズムを
用いて選択した。ヒトｓｉＮＡの特定のＣＴＮＮＢ１配列の設計のための主な基準は、（
ｉ）２つの種（ヒトとアカゲザル）間の相同性、および（ｉｉ）プロプライエタリアルゴ
リズムで測定したときの高い有効性スコアとした。ＣＴＮＮＢ１ ＲＮＡレベルに対する
ｓｉＮＡの効果。選択したｓｉＮＡの標的配列を表１ａに示す（標的配列）。表１ａの標
的配列に対応するｓｉＮＡ配列のセンス鎖およびアンチセンス鎖を表１ｂに示す。合成し
た種々の化学修飾ｓｉＮＡを表１ｃに示す。

標的配列の各オリゴヌクレオチドについて、ｓｉＮＡの２つの個々の相補鎖を、固相合
成を用いて別々に合成し、次いで、逆相固相抽出（ＳＰＥ）によって別々に精製した。相
補鎖をアニーリングさせて二本鎖（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ／ｄｕｐｌｅｘ）を形成
し、所望の濃度で選択したバッファーにて送達した。

簡単には、一本鎖オリゴヌクレオチドを自動固相合成装置で、当該技術分野で一般的に
知られた手順にてホスホルアミダイト化学反応を用いて合成した（例えば、米国特許出願
第１２／０６４，０１４号を参照のこと）。合成用カラムには、第１ヌクレオシド残基（
天然または化学修飾体）を用いて誘導体化した固相支持体を充填した。合成は、酸不安定
性５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基の脱トリチル化によって５’−ヒドロキシルを放出さ
せることにより開始した。好適に保護したホスホルアミダイトと適当な活性化剤（アセト
ニトリル中）を、合成用カラムに同時に送達すると、５’−ヒドロキシルへのアミダイト
のカップリングがもたらされた。次いで、カラムを溶媒（アセトニトリルなど）で洗浄し
た。酸化性溶液（ヨウ素溶液など）をカラム中にポンプ輸送し、亜リン酸トリエステル結
合Ｐ（ＩＩＩ）をそのホスホトリエステルＰ（Ｖ）類似体に酸化させた。未反応の５’−
ヒドロキシル基を、２，６−ルチジンおよびＮ−メチルイミダゾールの存在下、無水酢酸
などの試薬を用いてキャップした。次のホスホルアミダイトの組込みのため、脱トリチル
化工程により伸長サイクルを再開させた。このプロセスを、所望の配列が合成されるまで
繰り返した。合成は、最後の５’末端保護基（トリチルまたは５’−Ｏ−ジメトキシトリ
チル）を用いて終結させた。

合成が終了したら、固相支持体と結合オリゴヌクレオチドをアルゴン圧下または真空下
で乾燥させた。水性塩基を添加し、スクシニル結合の切断が行われるまで混合物を加熱し
、リン酸シアノエチル保護基を除去し、環外アミン保護の脱保護を行った。

以下のプロセスを、リボヌクレオチドを含まない単独鎖において行った。固相支持体を
水性塩基で処理した後、混合物を濾過し、固相支持体を、脱保護された粗製合成物質から
分離した。次いで、固相支持体を水ですすぎ洗浄し、これを濾液と合わせた。塩基性溶液
が得られることにより、５’−Ｏ−ジメトキシトリチル基が保持され、５’末端の位置に
残存することが可能になる（トリチル−オン）。

リボヌクレオチドを含む単独鎖には、以下のプロセスを行った。固相支持体を水性塩基
で処理した後、混合物を濾過し、固相支持体を脱保護された粗製合成物質から分離した。
次いで、固相支持体をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ですすぎ洗浄し、これを濾液と
合わせた。この混合物に、トリエチルアミン三フッ化水素酸塩などのフッ化物試薬を添加
し、溶液を加熱した。反応液を適当なバッファーでクエンチし、最後の５’末端位置に５
’−Ｏ−ジメトキシトリチル基を有する粗製単独鎖の溶液を得た。

各粗製単独鎖のトリチル−オン溶液を、クロマトグラフィー精製（ＳＰＥ ＲＰＣ精製
など）を用いて精製した。トリチル基の疎水性の性質により、所望の完全長オリゴ体が、
非トリチル化切断型の不完全配列よりも強力に保持されることが可能になる。不完全配列
は、少量割合のアセトニトリルなどの適当な溶媒を用いて樹脂から選択的に洗い流した。
次いで、保持されたオリゴヌクレオチドを、トリフルオロ酢酸を用いてカラム上で脱トリ
チル化し、酸不安定性トリチル基を除去した。残留している酸をカラムから洗い流し、塩
交換を行い、物質の最終脱塩を開始させた。完全長オリゴ体を、水性有機溶媒を用いて精
製形態で回収した。次いで、最終生成物を、純度（ＨＰＬＣ）、実体（Ｍａｌｄｉ−ＴＯ
Ｆ ＭＳ）および収率（ＵＶ Ａ_２６０）について解析した。オリゴ体を凍結乾燥または
真空濃縮によって乾燥させた
アニーリング：生成物の解析に基づき、乾燥させたオリゴ体を適切なバッファーに溶解
させた後、等モル量（理論消衰係数を用いて計算）のセンスおよびアンチセンスオリゴヌ
クレオチド鎖を混合した。次いで、この溶液を、二本鎖の純度（クロマトグラフィー法に
より）および所望の終濃度について解析した。解析でいずれかの鎖が過剰であることが示
された場合は、過剰でないさらなる鎖を、二本鎖形成が完全になるまで滴定した。解析に
よって目的の生成物純度が得られたことが示された場合、該物質を送達し、使用可能状態
とした。

以下は、このプロトコルを用いて合成した、またはこのプロトコルを用いて、もしくは
当該技術分野で知られた方法を用いて合成され得る種々の修飾ｓｉＮＡを示す表である。

表中：
Ａ、Ｃ、ＧおよびＵ＝リボースＡ、Ｃ、ＧまたはＵ
ａ、ｇ、ｃおよびｕ＝２’−デオキシ−２’−フルオロＡ、Ｇ、ＣまたはＵ
Ａ、Ｕ、ＣおよびＧ＝２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）Ａ、Ｕ、Ｃ、またはＧ
Ａ、Ｕ、Ｃ、およびＧ＝デオキシＡ、Ｕ、Ｃ、またはＧ
Ｂ＝逆位無塩基
Ｔ＝チミジン
Ｉ＝イノシン
ｓ＝ホスホロチオエート結合。

市販の調製物のさらなる合成工程
アニーリング工程後に解析によって標的生成物の純度が得られたことが示されたら、該
物質を、濃縮および脱塩のためにタンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）システムに移す
（これをアニーリング工程の前に行うのとは反対）。

限外濾過：アニーリング生成物の溶液を、適切な分子量カットオフ膜を含むＴＦＦシス
テムを用いて濃縮する。濃縮後、この生成物の溶液をダイアフィルトレーションによって
Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水を用いて、濾液の電導度が水のものになるまで脱塩する。

凍結乾燥：濃縮された溶液をボトルに移し、フラッシュ凍結させ、凍結乾燥機に取り付
ける。次いで、生成物をフリーズドライして粉末にする。ボトルを凍結乾燥機から取り出
すと、使用可能状態になっている。

初期スクリーニングプロトコル（９６ウェルプレートトランスフェクション）
細胞培養物の調製：
ヒトヘパトーマ細胞株ＨｅｐＧ２、アカゲザル腎臓上皮細胞株、ＬＬＣ−ＭＫ２派生株
およびＨｕｈ７細胞株を、改変イーグル培地中で培養した。培養培地にはすべて、１０％
ウシ胎仔血清、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリンお
よび１％重炭酸ナトリウムを補給した。
トランスフェクションおよびスクリーニング
細胞を、処理済組織培養９６ウェルプレートのすべてのウェル内に、３５００（Ｈｅｐ
Ｇ２およびＬＬＣ−ＭＫ２派生株およびＨｕｈ７）細胞／ウェルの最終計数で、１００μ
Ｌの適切な培養培地中にプレーティングした。細胞は、プレーティング後、５％ＣＯ_２の
存在下で３７℃にて一晩培養した。

翌日、ｓｉＮＡとＲＮＡｉＭａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む複合体を、以下のよ
うにして作製した。ＯＰＴＩ−ＭＥＭ中で３３倍に希釈したＲＮＡｉＭａｘの溶液を調製
した。並行して、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ中１２０ｎＭの終濃度までの試験用のｓｉＮＡの溶液
を調製した。室温で５分間のＲＮＡｉＭａｘ／ＯＰＴＩ−ＭＥＭ溶液のインキュベーショ
ン後、各ｓｉＮＡについて、等容量のｓｉＮＡ溶液とＲＮＡｉＭａｘ溶液を一緒に添加し
た。

混合すると、ｓｉＮＡの濃度が６０ｎＭであるｓｉＮＡ／ＲＮＡｉＭａｘ溶液が生成さ
れた。この溶液を室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、２０μＬ
の溶液を、該当する各ウェルに添加した。各ウェル内のｓｉＮＡの終濃度を１０ｎＭとし
、各ウェル内のＲＮＡｉＭａｘの最終容量を０．３ｕｌとした。

低濃度スクリーニングのため、ｓｉＮＡを２００、１５０、１００または７５ｐＭ／ウ
ェルでトランスフェクトした。１２点用量応答曲線試験のため、一連のｓｉＮＡを、３０
ｎＭから初めて６倍連続希釈または４０ｎＭから初めて４倍連続希釈する。トランスフェ
クションはすべて、生物学的に多数の連で設定した。

ＲＮＡｉＭａｘ−ｓｉＮＡ複合体とのインキュベーション時間は２４時間とし、トラン
スフェクションとスクリーニングおよび用量応答曲線試験のための収集とで培地は変えな
かった。持続アッセイでは、ＲＮＡｉＭａｘ−ｓｉＮＡ複合体とのインキュベーション時
間は２４、７２および１２０時間とした。トランスフェクションと２４時間および７２時
間の時間点での収集とで培地は変えなかった。１２０時間の時間点のトランスフェクショ
ンの７２時間後に培地を新鮮培地と交換した。

Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−Ｃｔおよび逆転写反応
所望の時間点で培養培地を吸引し、培養プレートのウェルから廃棄した。トランスフェ
クト細胞を、ウェル１つあたり５０ｕＬのＤＰＢＳ溶液で１回洗浄した。５０マイクロリ
ットル／ウェルのＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｃｅｌｌ
ｓ−ｔｏ−ＣＴ（商標）Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号
４３９９００２）の溶解溶液（ＤＮａｓｅ Ｉを補給）をプレートに直接添加し、細胞を
溶解させた。５マイクロリットル／ウェルの同キットの停止溶液をプレートに添加すると
、５分間後にＤＮａｓｅ Ｉが失活した。この溶解プレートを室温で少なくとも２分間イ
ンキュベートした。このプレートは、４℃で２時間、もしくは−８０℃で２ヶ月保存する
ことができる。

逆転写プレートの各ウェルには、１０ｕＬの２×逆転写酵素バッファー、１ｕＬの２０
×逆転写酵素および２ｕＬのヌクレアーゼ無含有水が必要であった。２×逆転写バッファ
ー、２０×逆転写酵素ミックス、およびヌクレアーゼ無含有水を混合することにより、逆
転写マスターミックスを調製した。１３ｕＬの逆転写マスターミックスを、逆転写プレー
トの各ウェル（セミスカート付き）内に分注した。各細胞プレートに対して別途の逆転写
プレートを準備した。各細胞プレートに対して別途の逆転写プレートを準備した。上記の
細胞溶解手順による溶解物１つあたり７ｕＬを、逆転写プレートの各ウェルに添加した。
プレートを密封し、遠心機でスピンさせ（１０００ｒｐｍで３０秒間）、内容物を逆転写
プレートの底に沈降させた。プレートをサーモサイクラー内に、３７℃で６０分間、９５
℃で５分間、およびプレートをサーモサイクラーから取り出すまで４℃で置いた。取り出
したら、すぐに使用しない場合は、プレートを−２０℃で凍結させた。

持続アッセイでは、同様のプロトコルに従ったが、細胞をトランスフェクションの１、
３または５日後に溶解させた。Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−Ｃｔ（商標）Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてｃＤＮＡを作製した。

定量的ＲＴ−ＰＣＲ（Ｔａｑｍａｎ）
一連のプローブおよびプライマーを使用し、ＣＴＮＮＢ１およびＧＡＰＤＨの遺伝子の
種々のｍＲＮＡ転写物を検出した。ここに記載の実験のためのＴａｑｍａｎプローブおよ
びプライマーはすべて、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．により事前に
確認済の組として供給されたものである（表２参照）。

アッセイは、ＡＢＩ ７９００機器において製造業者の使用説明書に従って行った。Ｔ
ａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｃｅｌｌｓ−ｔ
ｏ−ＣＴ（商標）Ｋｉｔ，Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，カタログ番号４３９
９００２に備えられたもの）を使用した。ＰＣＲ反応は、５０℃で２分間、９５℃で１０
分間の後、９５℃で１５秒間および６０℃で１分間を４０サイクル行った。

各実験において、増幅曲線の対数増殖期にベースラインを設定し、ベースラインと増幅
曲線の交点に基づいて、機器によりＣｔ（サイクル数）値が割り当てられた。

計算
対象遺伝子の発現レベルおよび遺伝子発現の阻害％（％ＫＤ）を、比較Ｃｔ法を用いて
計算した。

ΔＣｔ＝Ｃｔ_標的−Ｃｔ_{ＧＡＰＤＨ}
ΔΔＣｔ（ｌｏｇ２（変化倍数））＝ΔＣｔ_{（標的ｓｉＮＡ）}−ΔＣｔ_{（ＮＴＣ）}
相対発現レベル＝２^{−ΔΔＣｔ}
％ＫＤ＝１００×（１−２^{−ΔΔＣｔ}）
最も関連性のある対照であるため、特に記載のない限り、非標的化用対照ｓｉＮＡを、
遺伝子発現の阻害（ノックダウン）パーセントを計算する比較対象の値として選択した。

さらに、標準化データ（これは、細胞の一般的な健全状態およびＲＮＡ抽出の質を反映
する）のみを調べた。これは、処理細胞内の２種類の異なるｍＲＮＡ（第１のものは標的
ｍＲＮＡであり、第２のものは標準化体ｍＲＮＡである）のレベルを調べることにより行
った。これにより、単に対象遺伝子のノックダウンであるよりむしろ、細胞に毒性の可能
性があり得るｓｉＮＡの排除が可能であった。これは、各ウェル内のＧＡＰＤＨのＣｔを
、プレート全体のＧＡＰＤＨのＣｔと比較することにより行った。

ＩＣ_５０の計算はすべて、Ｒ．２．９．２ソフトウェアを用いて行った。データは、単
純なリガンド結合に対するシグモイド用量応答（傾き可変）式を用いて解析した。阻害（
ノックダウン）パーセントの計算ではすべて、計算は、特に記載のない限り、非標的化対
照（Ｃｔｒｌ ｓｉＮＡ）で処理した試料における対象遺伝子の標準化発現レベルに相対
して行った。

タンパク質レベルは、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＶｅｒｓａＤｏｃ Ｉｍａｇｅｒを該機器のプ
ロトコルに従って用いて定量した。ピクセル計数は、各レーンにおいて同一面積サイズを
用いて行った。次いで、各試料を適切な対照処理試料と比較し、対照と比較した残留タン
パク質パーセントに変換した。

ＣＴＮＮＢ１タンパク質レベルに対するリードｓｉＮＡの効果をユニバーサル対照の効
果と、スチューデントの両側Ｔ−検定を用いて比較し、Ｐ値を得た。Ｐ＜０．０５を有意
とみなした。

結果：
ＣＴＮＮＢ１ ｓｉＮＡは、先に記載のとおりにして設計し、合成した。種々のｓｉＮ
ＡをＨｅｐＧ２、ＭＫ２ＤおよびＨｕｈ７細胞においてスクリーニングした。ヒト細胞に
おいて種々の修飾ＣＴＮＮＢ１ ｓｉＮＡで処理したときのＣＴＮＮＢ１遺伝子発現デー
タのｌｏｇ２（変化倍数）を表３ａに示す。各スクリーニングは２４時間目に行った。定
量的ＲＴ−ＰＣＲを使用し、ＣＴＮＮＢ１ ｍＲＮＡレベルを評価し、データを、ＧＡＰ
ＤＨ（ユビキタス発現「ハウスキーピング」遺伝子）の発現レベルに対して標準化した。
次いで、各処理を非ＣＴＮＮＢ１標的化対照に対して標準化した。

一次スクリーニングで大きなｌｏｇ２（変化倍数）を有した表３ａのｓｉＮＡのサブセ
ットを、Ｈｕｈ７細胞において再スクリーニングした。結果を表３ｂに示す。

ＣＴＮＮＢ１ ｓｉＮＡは、先に記載のとおりにして設計し、合成した。種々のｓｉＮ
ＡをＭＫ２Ｄ細胞においてスクリーニングした。ヒト細胞において種々の修飾ＣＴＮＮＢ
１ ｓｉＮＡで処理したときのＣＴＮＮＢ１遺伝子発現データのｌｏｇ２（変化倍数）を
表３ｃに示す。各スクリーニングは２４時間目に行った。定量的ＲＴ−ＰＣＲを使用し、
ＣＴＮＮＢ１ ｍＲＮＡレベルを評価し、データを、ＧＡＰＤＨ（ユビキタス発現「ハウ
スキーピング」遺伝子）の発現レベルに対して標準化した。次いで、各処理を非ＣＴＮＮ
Ｂ１標的化対照に対して標準化した。

表３ａおよび３ｂの選択した高ランキングｓｉＮＡを、有効性と効力について、Ｈｕｈ
７細胞においてさらに解析した（用量応答曲線を使用）。これらのｓｉＮＡの結果を表４
に示す。効力５０は、５０％の標的ｍＲＮＡのノックダウンがもたらされるｓｉＮＡトラ
ンスフェクション濃度の計算値である。２４時間の曝露時間後にＩＣ_５０を求めた。

表３ａおよび３ｂのさらなるｓｉＮＡを、有効性と効力について、ＭＫ２Ｄ細胞におい
て用量応答曲線を用いてさらに解析した。これらのｓｉＮＡの結果を表５に示す。効力５
０は、５０％の標的ｍＲＮＡのノックダウンがもたらされるｓｉＮＡトランスフェクショ
ン濃度の計算値である。２４時間の曝露時間後にＩＣ_５０を求めた。

ｓｉＮＡのインビトロ血清安定性の測定
ｓｉＮＡを、Ｈ_２Ｏで５０μＭ〜１００μＭストック溶液として再構成させ、ヒト血清
（３７℃まで予備加温）に終濃度２０μｇ／ｍＬまで添加する。次いで、混合物を３７℃
で０、１および２時間インキュベートする。各時間点の終了時、等容量のＰｈｅｎｏｍｅ
ｎｅｘ Ｌｙｓｉｓ−Ｌｏａｄｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒと混合することにより反応を停止さ
せる。オリゴヌクレオチドを、９６ウェル形式でＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｏｌｉｄ Ｐ
ｈａｓｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎによって精製し、Ｌａｂｃｏｎｃｏ Ｔｒｉａｄ Ｌｙ
ｏ−００４１７で乾固するまで凍結乾燥させる。この凍結乾燥試料を１５０μＬの１ｍＭ
ＥＤＴＡ（ＲＮａｓｅ無含有Ｈ_２Ｏを用いて調製）中で再構成させる。次いで、試料溶
液を、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｏｒｂｉｔｒａｐでの液体クロマトグラフィー／質量
分析（ＬＣ／ＭＳ）解析のために１ｍＭ ＥＤＴＡで５倍に希釈する。ｓｉＮＡの血清中
代謝産物を、測定された分子量に基づいて調べた。

サイトカイン誘導の試験
脂質ナノ粒子（ＤＬｉｎＤＭＡ／コレステロール／Ｓ−ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ
（４０／４８／２／１０の比））中に負荷した本発明の種々のｓｉＮＡの免疫賦活効果を
評価するため、Ｃ５７Ｂ１／６マウスに、単回３ｍｐｋ用量のＬＮＰ製剤化ｓｉＮＡを尾
静脈注射によって投与する。血清または血漿試料を投与の３時間後と２４時後に収集する
。これらの試料中のサイトカインおよびケモカインレベルを、ＳｅａｒｃｈＬｉｇｈｔ
ＩＲ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ａｒｒａｙ（Ａｕｓｈｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）を製
造業者の使用説明書に従って用いて測定する。測定したサイトカインおよびケモカインは
、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＫＣ、ＩＬ−１０、ＩＦＮγ、ＴＮＦ、ＧＭＣＳ
Ｆ、ＭＩＰ−１β、ＭＣＰ−１／ＪＥ、およびＲＡＮＴＥＳである。

マウスにおける有効性試験
マウスに、尾静脈注射によってＬＮＰ封入ｓｉＮＡまたはビヒクル対照を、２つの異な
る３週間投与スキーム：１回の１ｍｇ／ｋｇ用量を連続３日間または単回６ｍｇ／ｋｇ用
量／週を用いてＩＶ投与する。一部の実験では、マウスに、１００ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤの
用量のソラフェニブを毎日３週間、共投与する。全身腫瘍組織総量をマイクロ−ＣＴスキ
ャンイメージングによって測定する。最後のｓｉＮＡ投与（２３日目）の５日後に動物を
致死させ、各動物から正常肝臓組織と腫瘍組織をＲＮＡ精製のために収集する。全ＲＮＡ
を、ＲＮｅａｓｙ ９６キット（Ｑｉａｇｅｎ，カタログ番号７４１８２）を用いて精製
する。全ＲＮＡからｃＤＮＡを、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓ
ｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（カタログ番号：４３６８８１３）を用いて作
製する。定量的ＰＣＲ反応を、ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅ
ｒ Ｍｉｘ（カタログ番号：４３０４４３７）を用いて行う。ヒトＣＴＮＮＢ１のＴａｑ
Ｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｈｓ００３５５０４５＿ｍ１）
およびヒトＧＡＰＤＨのＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙを
使用し、腫瘍組織内の両方の転写物のｍＲＮＡレベルをモニタリングする。マウスＣＴＮ
ＮＢ１のＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｍｍ００４８３
０３３＿ｍ１）およびマウスＧＡＰＤＨのＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ Ａｓｓａｙを使用し、肝臓組織内の両方の転写物のｍＲＮＡレベルをモニタリングす
る。ＣＴＮＮＢ１の発現レベルをＧＡＰＤＨに対して標準化し、技術的変動を最小限にす
る。

非ヒト霊長類における薬力学試験
アカゲザルに、単回２．５ｍｐｋ用量のｓｉＮＡ負荷脂質ナノ粒子を静脈内注入によっ
て投与する。標的ｍＲＮＡのノックダウンをモニタリングするため、投与前と投与後の種
々の時間点で、１６ＴゲージＭｅｎｇｈｉｎｉ針を用いて各動物について約２０ｍｇの組
織の肝臓の生検を行う。また、投与前と投与後の異なる時間点で全血および血清／血漿を
収集し、処置と関連する潜在毒性をモニタリングする。手順はすべて、ＵＳＤＡ Ａｎｉ
ｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ａｃｔ（９ ＣＦＲ，パート１、２および３）に概要が示され
た規定ならびにＴｈｅ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ（ＩＬＡＲ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，１９９６，Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ）に明記された条件を順守したものである。
この肝臓生検組織由来の全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ９６キット（Ｑｉａｇｅｎ，カタロ
グ番号７４１８２）を用いて精製した。全ＲＮＡからｃＤＮＡを、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃ
ｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（カタログ番
号：４３６８８１３）を用いて作製した。定量的ＰＣＲ反応を、ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖ
ｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（カタログ番号：４３０４４３７）を用いて
行った。ヒトＣＴＮＮＢ１のＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａ
ｙ（Ｈｓ００３５５０４５＿ｍ１）およびアカゲザルＧＡＰＤＨのＴａｑＭａｎ Ｇｅｎ
ｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｒｈ０２６２１７４５＿ｇ１）を使用し、肝臓
生検組織内の両方の転写物のｍＲＮＡレベルをモニタリングする。ＣＴＮＮＢ１の発現レ
ベルをＧＡＰＤＨに対して標準化し、技術的変動を最小限にする。

ｓｉＮＡを含むＬＮＰ製剤（ＤＬｉｎＤＭＡ／コレステロール／Ｓ−ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭ
Ａ／ＤＳＰＣ（４０／４８／２／１０の比））を試験する。ＣＴＮＮＢ１遺伝子発現のＬ
ｏｇ２（変化倍数）を投与後３、７、１４および２８日目に求める。サルの投与前ＣＴＮ
ＮＢ１発現レベルは最初の投与の７日前に測定する。

マウスにおける薬力学試験
マウスに、尾静脈注射によってＬＮＰ封入ｓｉＮＡまたはビヒクル対照を、単回０．３
３ｍｇ／ｋｇを用いてＩＶ投与した。各処置を施与した５匹の動物をｓｉＮＡ投与の２、
７、１４および２１日後に致死させ、各動物から肝臓組織をＲＮＡ精製のために収集した
。全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ９６キット（Ｑｉａｇｅｎ，カタログ番号７４１８２）を
用いて精製した。全ＲＮＡからｃＤＮＡを、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒ
ｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（カタログ番号：４３６８８１３）
を用いて作製した。定量的ＰＣＲ反応を、ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ
Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（カタログ番号：４３０４４３７）を用いて行った。マウスＣＴＮ
ＮＢ１のＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｍｍ００４８３
０３３＿ｍ１）およびマウスＧＡＰＤＨのＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ
ｎ Ａｓｓａｙを使用し、両方の転写物のｍＲＮＡレベルをモニタリングした。ＣＴＮＮ
Ｂ１の発現レベルをＧＡＰＤＨに対して標準化し、技術的変動を最小限にした。データを
表６に示す。

非ヒト霊長類における薬力学試験
アカゲザルに、単回３．３４ｍｇ／ｍ^２体表面積の用量のｓｉＮＡ負荷脂質ナノ粒子を
静脈内注入によって投与した。標的ｍＲＮＡのノックダウンをモニタリングするため、投
与前と投与後の種々の時間点で、１６ＴゲージＭｅｎｇｈｉｎｉ針を用いて各動物につい
て約２０ｍｇの組織の肝臓の生検を行った。また、投与前と投与後の異なる時間点で全血
および血清／血漿を収集し、処置と関連する潜在毒性をモニタリングする。手順はすべて
、ＵＳＤＡ Ａｎｉｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ａｃｔ（９ ＣＦＲ，パート１、２および
３）に概要が示された規定ならびにＴｈｅ Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕ
ｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ（ＩＬＡＲ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏ
ｎ，１９９６，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ）に明記された条件を順
守した。この肝臓生検組織由来の全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ ９６キット（Ｑｉａｇｅｎ
，カタログ番号７４１８２）を用いて精製した。全ＲＮＡからｃＤＮＡを、Ｈｉｇｈ Ｃ
ａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｋｉｔ（カ
タログ番号：４３６８８１３）を用いて作製した。定量的ＰＣＲ反応を、ＴａｑＭａｎ
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（カタログ番号：４３０４４３７）
を用いて行った。ヒトＣＴＮＮＢ１のＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
Ａｓｓａｙ（Ｈｓ００３５５０４５＿ｍ１）およびアカゲザルＧＡＰＤＨのＴａｑＭａｎ
Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ（Ｒｈ０２６２１７４５＿ｇ１）を使用
し、肝臓生検組織内の両方の転写物のｍＲＮＡレベルをモニタリングした。ＣＴＮＮＢ１
の発現レベルをＧＡＰＤＨに対して標準化し、技術的変動を最小限にした。データを表７
に示す。ｓｉＮＡを含むＬＮＰ製剤（ＤＬｉｎＤＭＡ／コレステロール／Ｓ−ＰＥＧ−Ｃ
−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ（４０／４８／２／１０の比））を試験した。ＣＴＮＮＢ１遺伝子発
現のＬｏｇ２（変化倍数）を投与後２日目と７日目に求めた。サルの投与前ＣＴＮＮＢ１
発現レベルは最初の投与の６日前に測定する。

低分子干渉核酸脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤
Ａ．ＬＮＰ製剤に関するＬＮＰプロセスの一般記載：
脂質ナノ粒子を衝突噴流プロセスによって調製した。この粒子は、アルコールに溶解さ
せた脂質を、クエン酸バッファーに溶解させたｓｉＮＡと混合することにより形成させた
。脂質溶液は、カチオン性脂質、ヘルパー脂質（コレステロール）、ＰＥＧ（例えば、Ｐ
ＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ、ＰＥＧ−ＤＭＧ）脂質、およびＤＳＰＣを、アルコール（例えば、エ
タノール）中に５〜１５ｍｇ／ｍＬ（目標９〜１２ｍｇ／ｍＬ）の濃度で含むものとした
。脂質の比率は、カチオン性脂質を２５〜９８（目標３５〜６５）のモルパーセント範囲
を有するものとし、ヘルパー脂質は、０〜７５（目標３０〜５０）のモルパーセント範囲
を有するものとし、ＰＥＧ脂質は１〜１５（目標１〜６）のモルパーセント範囲を有し、
ＤＳＰＣは０〜１５（目標０〜１２）のモルパーセント範囲を有するものとした。ｓｉＮ
Ａ溶液は、１種類以上のｓｉＮＡ配列を、クエン酸ナトリウム緩衝塩溶液（３．５〜５の
範囲のｐＨを有する）中に０．３〜０．６ｍｇ／ｍＬの（目標０．３〜０．９ｍｇ／ｍＬ
）の濃度範囲で含むものとした。この２つの溶液を１５〜４０℃（目標３０〜４０℃）の
範囲の温度まで加熱し、次いで、衝突噴流混合機内で混合すると、即座にＬＮＰが形成さ
れた。Ｔ字部内径（ｔｅｅＩＤ）は０．２５〜１．０ｍｍの範囲であり、総流速は１０〜
６００ｍＬ／分とした。流速とチューブ内径の組合せは、ＬＮＰの粒径を３０〜２００ｎ
ｍに制御する効果を有した。次いで、ＬＮＰ懸濁液を緩衝溶液と高ｐＨで、１：１〜１：
３（ｖｏｌ：ｖｏｌ）（だが１：２（ｖｏｌ：ｖｏｌ）を目標にした）の範囲の混合比で
混合した。この緩衝溶液を１５〜４０℃（目標３０〜４０℃）の範囲の温度にした。この
ＬＮＰ懸濁液を、さらに緩衝溶液と高ｐＨで、１：１〜１：３（ｖｏｌ：ｖｏｌ）（だが
１：２（ｖｏｌ：ｖｏｌ）を目標にした）の範囲の混合比で混合した。緩衝溶液は、１５
〜４０℃（目標３０〜４０℃）の範囲の温度にした。混合ＬＮＰを３０分〜２時間保持し
た後、アニオン交換濾過工程を行った。インキュベーション時の温度は１５〜４０℃（目
標３０〜４０℃）の範囲にした。インキュベーション後、ＬＮＰ懸濁液を０．８ｕｍフィ
ルターに通して濾過した（アニオン交換分離工程を含む）。このプロセスでは、１ｍｍ
ＩＤ〜５ｍｍ ＩＤの範囲のチューブ内径および１０〜２０００ｍＬ／分の流速を使用し
た。ＬＮＰを濃縮し、限外濾過プロセスによってダイアフィルトレーションし、このとき
、アルコールが除去され、クエン酸バッファーが最終バッファー溶液（リン酸緩衝生理食
塩水など）と交換された。限外濾過プロセスには、タンジェンシャルフロー濾過形式（Ｔ
ＦＦ）を使用した。このプロセスでは、３０〜５００ＫＤの名目分子量カットオフ範囲の
膜を使用した。膜形式は、中空繊維またはフラットシートカセットとした。適正な分子量
カットオフを用いたＴＦＦプロセスにより、ＬＮＰが保持液中に保持され、濾液または透
過液中にアルコール；クエン酸バッファー；および最終バッファー廃物が含有された。Ｔ
ＦＦプロセスは、初期濃度からｓｉＮＡ濃度１〜３ｍｇ／ｍＬまでの多工程プロセスであ
る。濃縮後、ＬＮＰ懸濁液を最終バッファーに対して１０〜２０容量でダイアフィルトレ
ーションし、アルコールを除去してバッファー交換を行った。次いで、この物質をさらに
１〜３倍に濃縮した。ＬＮＰプロセスの最終工程は、濃縮ＬＮＰ溶液の滅菌濾過および生
成物のバイアル封入とした。

解析手順：
１）ｓｉＮＡ濃度
ｓｉＮＡ二本鎖の濃度を、強アニオン交換高速液体クロマトグラフィー（ＳＡＸ−ＨＰ
ＬＣ）により、Ｗａｔｅｒｓ ２６９５ Ａｌｌｉａｎｃｅシステム（Ｗａｔｅｒ Ｃｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍｉｌｆｏｒｄ ＭＡ）を２９９６ ＰＤＡ検出器とともに用いて
測定した。ＬＮＰ（あるいは、ＲＮＡｉ送達媒体（ＲＤＶ）とも称する）を、０．５％Ｔ
ｒｉｔｏｎ Ｘ−１００で処理して全ｓｉＮＡを遊離させ、ＳＡＸ分離により、Ｄｉｏｎ
ｅｘ ＢｉｏＬＣ ＤＮＡＰａｃ ＰＡ ２００（４×２５０ｍｍ）カラム（２５４ｎｍ
でＵＶ検出）を用いて解析した。移動相は、Ａ：２５ｍＭ ＮａＣｌＯ_４，１０ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ，２０％ＥｔＯＨ，ｐＨ７．０と、Ｂ：２５０ｍＭ ＮａＣｌＯ_４，１０ｍＭ Ｔ
ｒｉｓ，２０％ＥｔＯＨ，ｐＨ７．０で構成し、０から１５分までの線形勾配および流速
を１ｍｌ／分とした。ｓｉＮＡ量は、ｓｉＮＡ標準曲線との比較により求めた。

２）封入速度
蛍光試薬ＳＹＢＲ ＧｏｌｄをＲＮＡ定量に使用し、ＲＤＶの封入速度をモニタリング
した。Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を伴う、または伴わないＲＤＶを使用し、遊離ｓｉＮＡ
および全ｓｉＮＡの量を調べた。アッセイは、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５ｅマイクロプ
レート分光測光器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）
製）を用いて行われる。試料を４８５ｎｍで励起し、蛍光放射を５３０ｎｍで測定した。
ｓｉＮＡ量は、ｓｉＮＡ標準曲線との比較により求められる。

封入速度＝（１−遊離ｓｉＮＡ／全ｓｉＮＡ）×１００％
３）粒径および多分散性
１μｇのｓｉＮＡを内包しているＲＤＶを、１×ＰＢＳで最終容量３ｍｌまで希釈した
。試料の粒径および多分散性を、動的光散乱法によりＺｅｔａＰＡＬＳ機器（Ｂｒｏｏｋ
ｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｌｔｓｖｉｌｌｅ
，ＮＹ）を用いて測定した。散乱強度は、Ｈｅ−Ｎｅレーザーで２５℃にて９０°の散乱
角で測定した。

４）ゼータ電位の解析
１μｇのｓｉＮＡを内包しているＲＤＶを、１ｍＭ Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ７．４
）で最終容量２ｍｌまで希釈した。試料の電気泳動移動度をＺｅｔａＰＡＬＳ機器（Ｂｒ
ｏｏｋｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈｏｌｔｓｖｉ
ｌｌｅ，ＮＹ）（電極および光源としてＨｅ−Ｎｅレーザーを有する）を用いて調べた。
ゼータ電位の計算では、スモルコフスキー限界を想定した。

５）脂質の解析
個々の脂質濃度を、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により、Ｗａ
ｔｅｒｓ ２６９５ Ａｌｌｉａｎｃｅシステム（Ｗａｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
，Ｍｉｌｆｏｒｄ ＭＡ）をコロナ荷電エアロゾル検出器（ＣＡＤ）（ＥＳＡ Ｂｉｏｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ，Ｃｈｅｌｍｓｆｏｒｄ，ＭＡ）とともに用いて測定した。ＲＤ
Ｖ内の個々の脂質を、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ−ＣＩ８（５０×４．６ｍｍ
，１．８μｍ粒径）カラムをＣＡＤとともに用いて６０℃で解析した。移動相は、Ａ：０
．１％ＴＦＡ（Ｈ_２Ｏ中）とＢ：０．１％ＴＦＡ（ＩＰＡ中）で構成した。勾配は、６０
％移動相Ａおよび４０％移動相Ｂで時間０から４０％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂに１
．００分まで；４０％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂで１．００から５．００分まで；４
０％移動相Ａおよび６０％移動相Ｂで５．００分から２５％移動相Ａおよび７５％移動相
Ｂに１０．００分まで；２５％移動相Ａおよび７５％移動相Ｂで１０．００分から５％移
動相Ａおよび９５％移動相Ｂに１５．００分まで；および５％移動相Ａおよび９５％移動
相Ｂで１５．００から６０％移動相Ａおよび４０％移動相Ｂに２０．００分まで変化させ
、流速は１ｍｌ／分とした。個々の脂質濃度は標準曲線との比較により求め、ＲＤＶ内の
すべての脂質成分が二次曲線にフィットした。各脂質のモル分率を、その分子量に基づい
て計算した。

Ｂ．表１１の種々の製剤の一般的なＬＮＰ調製物
表１１のｓｉＮＡナノ粒子懸濁液を、ｓｉＮＡおよび／または担体分子を２０ｍＭクエ
ン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．０）に約０．４０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させるこ
とにより調製した。脂質溶液は、カチオン性脂質（例えば、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ
−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１−アミン，表１２の構造参照）
、ＤＳＰＣ、コレステロールおよびＰＥＧ−ＤＭＧ（表１１に示した比率）の混合物を無
水エタノールに、約８ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させることにより調製した。リン酸部に対
する窒素の比率は６：１と概算された。

ほぼ等容量のｓｉＮＡ／担体溶液と脂質溶液を、２つのＦＰＬＣポンプを同じ流速で用
いて混合Ｔ字コネクタに送達した。背圧弁ワイス（ｗａｉｓ）を使用し、所望の粒径に調
整した。得られた乳状混合物を滅菌ガラスビン内に収集した。次いで、この混合物を等容
量のクエン酸バッファーで、続いて等容量のＰＢＳ（ｐＨ７．４）で希釈し、イオン交換
膜に通して濾過し、混合物中の遊離ｓｉＮＡ／担体（あれば）を除去した。ＰＢＳ（７．
４））に対する限外濾過を使用し、エタノールを除去してバッファーを交換した。所望の
容量まで濃縮し、０．２μｍフィルターに通して滅菌濾過することにより最終ＬＮＰを得
た。得られたＬＮＰを、粒径、ゼータ電位、アルコール含量、総脂質含量、封入核酸およ
び総核酸濃度に関して特性評価した。

ＬＮＰ製造プロセス
非限定的な例において、ＬＮＰを、バルクで以下のようにして調製した。このプロセス
は、（１）脂質溶液の調製；（２）ｓｉＮＡ／担体溶液の調製；（３）混合／粒子の形成
；（４）インキュベーション；（５）希釈；（６）限外濾過および濃縮からなるものとし
た。

１．脂質溶液の調製
２Ｌ容のガラス試薬ビンとメスシリンダーを脱パイロジェン処理した。脂質を室温まで
昇温させた。このガラス試薬ビン内に、８．０ｇの（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチ
ル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１−アミンをピペットで移し、１．２ｇの
ＤＳＰＣ、３．５ｇのコレステロール、０．９ｇのＰＥＧ−ＤＭＧを添加した。この混合
物に１Ｌのエタノールを添加する。試薬ビンを、加熱した水浴（５０℃を超えない温度）
中に入れた。脂質懸濁液を撹拌バーで撹拌した。この懸濁液中に、丸底フラスコの口の１
つから密封アダプターを付けて熱電対プローブを入れた。懸濁液を透明になるまで３０〜
４０℃で加熱した。この溶液を室温まで放冷した。

２．ｓｉＮＡ／担体溶液の調製
滅菌容器（Ｃｏｒｎｉｎｇ保存ビン）内に、水補正因子（およそ１．２）の０．４倍の
ｇ数のｓｉＮＡ粉末を量り入れた。このｓｉＮＡを、脱パイロジェン処理した２Ｌ容ガラ
ス試薬ビンに移した。この秤量容器をクエン酸バッファー（２０ｍＭ，ｐＨ５．０）で３
回すすぎ洗浄し、すすぎ液をこの２Ｌ容ガラスビンに入れ、１Ｌになるまでクエン酸バッ
ファーで分量供給（ＱＳ）した。ｓｉＮＡ溶液の濃度を、ＵＶ分光計により以下の手順を
用いて測定した。該溶液から２０μＬを取り出し、希釈し、５０倍の１０００μＬにし、
クエン酸バッファーでのブランク測定後にＵＶ読み値をＡ２６０ｎｍで記録した。これを
繰り返した。注：２つの試料の読み値が整合している場合は、平均をとり、ｓｉＮＡの消
散係数に基づいて濃度が計算され得る。最終濃度が０．４０±０．０１ｍｇ／ｍＬの範囲
外である場合、さらにｓｉＮＡ／担体粉末を添加すること、またはさらにクエン酸バッフ
ァーを添加することにより濃度が調整され得る。このプロセスは、適用可能な場合は第２
のｓｉＮＡで反復してもよい。

ｓｉＮＡ／担体溶液を２種類以上のｓｉＮＡ二本鎖および／または担体のカクテルでは
なく単独ｓｉＮＡ二本鎖で構成した場合、ｓｉＮＡ／担体を２０ｍＭクエン酸バッファー
（ｐＨ５．０）に溶解させ、０．４ｍｇ／ｍＬの最終濃度を得た。

次いで、脂質溶液とエタノール溶液をＰａｌｌ Ａｃｒｏｐａｋ ２０ ０．８／０．
２μｍ滅菌フィルターＰＮ １２２０３に通して滅菌濾過し、Ｍａｓｔｅｒ Ｆｌｅｘ
Ｐｅｒｉｓｔａｌｔｉｃ Ｐｕｍｐ Ｍｏｄｅｌ ７５２０−４０を用いて脱パイロジェ
ン処理したガラス槽内に入れ、封入プロセスのための滅菌出発物質を得た。濾過プロセス
は、２０ｃｍ^２の膜面積で８０ｍＬ規模にて実施した。流速は２８０ｍＬ／分とした。こ
のプロセスは、チューブ直径と濾過面積を増大させることにより拡大することができる。

３．粒子形成−混合工程
ツーバレルシリンジ駆動型ポンプ（Ｈａｒｖａｒｄ ３３ Ｔｗｉｎ Ｓｙｒｉｎｇｅ
）を使用し、滅菌脂質／エタノール溶液と、滅菌ｓｉＮＡ／担体またはｓｉＮＡ／担体カ
クテル／クエン酸バッファー（２０ｍＭクエン酸バッファー，ｐＨ５．０）溶液を、０．
５ｍｍ ＩＤ Ｔ−混合機（混合ステージＩ）内で、等しいまたはほぼ等しい流速で混合
した。得られた排出ＬＮＰ懸濁液には、４０〜５０ｖｏｌ％のエタノールが含まれていた
。４５ｖｏｌ％エタノール排出懸濁液を得るため、滅菌脂質／エタノールと、滅菌ｓｉＮ
Ａ／担体またはｓｉＮＡ／担体カクテル／クエン酸バッファー溶液を、それぞれ、５４ｍ
Ｌ／分および６６ｍＬ／分の流速で、排出混合物の総流速が１２０ｍＬ／分となるように
混合した。

４．希釈
混合ステージＩの排出流は直接、４ｍｍ ＩＤ Ｔ−混合機（混合ステージＩＩ）内に
供給され、ここで、高ｐＨの緩衝溶液（２０ｍＭクエン酸ナトリウム，３００ｍＭ塩化ナ
トリウム，ｐＨ６．０）により１：１（ｖｏｌ：ｖｏｌ％）の比率で希釈された。この緩
衝溶液は３０〜４０℃の範囲の温度であり、４ｍｍ Ｔ−混合機に蠕動ポンプ（Ｃｏｌｅ
Ｐａｒｍｅｒ ＭａｓｔｅｒＦｌｅｘ Ｌ／Ｓ ６００ ＲＰＭ）によって１２０ｍＬ
／分の流速で送達した。

混合ステージＩＩの排出流は直接、６ｍｍ ＩＤ Ｔ−混合機（混合ステージＩＩＩ）
内に供給され、ここで、高ｐＨ緩衝溶液（ＰＢＳ，ｐＨ７．４）により１：１（ｖｏｌ：
ｖｏｌ％）の比率で希釈された。この緩衝溶液は１５〜２５℃の範囲の温度であり、６ｍ
ｍ Ｔ−混合機に蠕動ポンプ（Ｃｏｌｅ Ｐａｒｍｅｒ ＭａｓｔｅｒＦｌｅｘ Ｌ／Ｓ
６００ ＲＰＭ）によって２４０ｍＬ／分の流速で送達された。

５．インキュベーションおよび遊離ｓｉＮＡの除去
混合ステージＩＩＩの排出流は、３０分間のインキュベーションのための混合後に保持
した。インキュベーションは３５〜４０℃の温度で行い、プロセス内懸濁液を光から保護
した。インキュベーション後、遊離の（封入されていない）ｓｉＮＡを、Ｍｕｓｔａｎｇ
Ｑクロマトグラフィーフィルター（カプセル）でのアニオン交換によって除去した。使
用前、クロマトグラフィーフィルターを、逐次、１Ｎ ＮａＯＨ、１Ｍ ＮａＣｌ、およ
び最終の１２．５ｖｏｌ％エタノール溶液（ＰＢＳ中）のフラッシュ液で前処理した。最
終フラッシュ液のｐＨは、ｐＨ＜８が確実であることが確認された。次いで、インキュベ
ーションしたＬＮＰ流を、Ｍｕｓｔａｎｇ Ｑフィルターによって蠕動ポンプ（Ｃｏｌｅ
Ｐａｒｍｅｒ ＭａｓｔｅｒＦｌｅｘ Ｌ／Ｓ ６００ ＲＰＭ）によっておよそ１０
０ｍＬ／分の流速で濾過した。濾過流を、以下の限外濾過および濃縮のために滅菌ガラス
容器内に受容した。

６．限外濾過、濃縮および滅菌濾過
限外濾過プロセスは時限的プロセスであり、流速は注意深くモニタリングしなければな
らない。これは２工程プロセスであり；最初は、希釈物質を採取し、およそ０．３〜０．
６ｍｇ／ｍＬの濃度のｓｉＮＡにおよそ８倍濃縮する濃縮工程である。

第１の工程では、限外濾過膜１００ｋＤａ ＰＥＳ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｌａｂｓ）が
取り付けられたリングスタンドを蠕動ポンプ（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ ＫｒｏｓＦｌｏＩＩ
Ｓｙｓｔｅｍ）に装着した。９．２Ｌの滅菌蒸留水をレザーバに添加し；３Ｌをドレイン
排出して廃棄し、残りを透過液中にドレイン排出して廃棄した。５．３Ｌの０．２５Ｎ水
酸化ナトリウムをレザーバに添加し、１．５Ｌをドレイン排出して廃棄し、３．１Ｌを透
過液中にドレイン排出して廃棄した、残りの水酸化ナトリウムを、消毒のために系内に保
持し（少なくとも１０分間）、次いでポンプをドレイン排出した。９．２Ｌの７０（ｖ／
ｖ）％イソプロピルアルコールをレザーバに添加し、１．５Ｌをドレイン排出して廃棄し
、残りを透過液中にドレイン排出して廃棄した。６Ｌのコンディショニングバッファー（
リン酸緩衝生理食塩水中１２．５％エタノール）を添加し、１．５Ｌをドレイン排出して
廃棄し、残りを、廃液が中性ｐＨ（７〜８）になるまで透過液中にドレイン排出した。膜
の流出値を記録し、次いでポンプをドレイン排出した。

希釈ＬＮＰ溶液をレザーバ内に１．１Ｌの印まで入れた。ポンプを２．３Ｌ／分で作動
させた。５分間の再循環後、透過液ポンプを６２．５ｍＬ／分で作動させ、液レベルをレ
ザーバ内で、およそ９５０ｍＬに一定にした。希釈ＬＮＰ溶液を９．８Ｌから１．１Ｌま
で１４０分間で濃縮し、希釈ＬＮＰ溶液がすべてレザーバに移されたらポンプを一時停止
した。

第２工程は、エタノール／水性バッファーをリン酸緩衝生理食塩水に交換するダイアフ
ィルトレーション工程とした。この工程中、およそ１０〜２０ダイアフィルトレーション
容量のリン酸緩衝生理食塩水を使用した。ダイアフィルトレーション後、２回目の濃縮を
行い、ＬＮＰ懸濁液をおよそ１〜１．５ｍｇ／ｍＬのｓｉＲＮＡに３倍濃縮した。濃縮さ
れた懸濁液を滅菌プラスチックＰＥＴＧビン内に収集した。次いで、最終懸濁液を、逐次
、Ｐａｌｌ ０．４５ｕｍ ＰＥＳフィルターおよびＰａｌｌ ０．２ｕｍ ＰＥＳフィ
ルターによって最終滅菌のために濾過した後、バイアルに充填した。

得られたＬＮＰを、粒径、ゼータ電位、アルコール含量、総脂質含量、封入核酸および
総核酸濃度に関して特性評価した。

Ｃ．新規なカチオン性脂質の合成
新規なカチオン性脂質の合成は、脂質酸（ｉ）を出発物質とする線形プロセスである。
Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンにカップリングさせると、ワインレブアミドｉｉが
得られる。グリニャール付加によりケトンｉｉｉが生成される。チタン媒介性還元的アミ
ノ化によりｉｖの型の最終生成物が得られる。

一般スキーム１

単一炭素ホモログ化カチオン性脂質ｖの合成は、脂質ケトン（ｉｉｉ）を出発物質とす
る線形プロセスである。該ケトンのニトリル（ｉｖ）への変換は、ＴＯＳＭＩＣおよびカ
リウムｔｅｒｔ−ブトキシドでの処理によって行われる。該ニトリルを第１級アミンに還
元した後、還元的アミノ化を行うと最終のカチオン性脂質ｖが得られる。

一般スキーム２

二炭素ホモログ化カチオン性脂質ｖｉｉｉの合成は、脂質ケトン（ｉｉｉ）を出発物質
とする線形プロセスである。該ケトンのα，β−不飽和アミドｖｉへの変換は、ピーター
ソン条件下で行われる。該α，β−不飽和の共役還元は、ＬＳ−セレクトリドを用いて行
われ、アミドｖｉｉが得られる。該アミドを水素化アルミニウムリチウムで還元すると、
最終のカチオン性脂質ｖｉｉｉが得られる。

一般スキーム３

シクロプロピル含有脂質は一般スキーム４に従って調製される。不飽和ワインレブアミ
ドｉｉをシモンズ・スミスシクロプロパン化条件に供すると、シクロプロピル含有ワイン
レブアミドｉｘが得られる。これを、一般スキーム１〜３に概略を示したようにして最終
生成物にする。

一般スキーム４

アリル型アミンカチオン性脂質ｘｖの合成は、アルデヒドｘを出発物質とする線形プロ
セスである。酢酸ｔ−ブチルを付加すると、β−ヒドロキシエステルｘｉが生成される。
該ヒドロキシル官能部をフルオロ基に変換させた後、酸処理を行うと、β−フルオロ酸ｘ
ｉｉが生成される。該酸をワインレブアミドに変換させた後、グリニャール付加を行うと
、β−フルオロケトンｘｉｖが得られる。還元的アミノ化により、同時脱離がもたらされ
、所望のアリル型アミンｘｖが生成される。

一般スキーム５

２０，２３−ノナコサジエン−１０−アミン，Ｎ，Ｎ−ジメチル−，（２０Ｚ，２３Ｚ
）（化合物１）

１１，１４−エイコサジエン酸，（１１Ｚ，１４Ｚ）−（５０ｇ，１６２ｍｍｏｌ）、
Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３１．６ｇ，３２４ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ
（４４．１ｇ，３２４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ_３Ｎ（４５．２ｍＬ，３２４ｍｍｏｌ）、および
ＥＤＣ（６２．１ｇ，３２４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（８１０ｍＬ）中で混合し、周囲温度で
一晩撹拌した。次いで、反応液を５×７００ｍＬの水で洗浄し、次いで１×６００ｍＬの
１Ｍ ＮａＯＨ洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、セライトに通して濾過し、エバポレ
ートし、５３．０６ｇ（９３％）の１１，１４−エイコサジエンアミド，Ｎ−メトキシ−
Ｎ−メチル−，（１１Ｚ，１４Ｚ）を透明な金色の油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４
００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ５．３５（ｍ，４Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．１８
（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｍ，２Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，２Ｈ），２．０５（
ｍ，４Ｈ），１．６３（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．２６（ｍ，１８Ｈ），０．８９（ｔ
，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ）．

１１，１４−エイコサジエンアミド，Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−，（１１Ｚ，１４Ｚ
）−１（４ｇ，１１．３８ｍｍｏｌ）を、２５０ｍＬ容フラスコ内の乾燥ＴＨＦ（５０．
０ｍｌ）に溶解させた。次いで、１Ｍのノニルマグネシウムブロミド（２２．７６ｍｌ，
２２．７６ｍｍｏｌ）を窒素下、周囲温度で添加した。１０分後、過剰の飽和水性ＮＨ_４
Ｃｌで反応液をゆっくりクエンチした。反応液を分液漏斗内でヘキサンと水にて洗浄し、
振り、下側の水層を廃棄し、上側の層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、エバポレー
トし、粗製ケトンを金色の油状物として得た。上記の粗製ケトンに、ジメチルアミン（Ｔ
ＨＦ中２Ｍ）（１４．２２ｍｌ，２８．４ｍｍｏｌ）を添加した後、Ｔｉ（Ｏ−ｉ−Ｐｒ
）_４（６．６７ｍｌ，２２．７６ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌状態にした。翌日、Ｅｔ
ＯＨ（５０ｍｌ）を添加した後、ＮａＢＨ_４（０．６４６ｇ，１７．０７ｍｍｏｌ）を添
加した。５分間の撹拌後、全反応液を、３３０ｇシリカカラムに合わせた４０ｇシリカカ
ラムに注入した。１０分間は１００％ＤＣＭで、次の３０分間は０から１５％のＭｅＯＨ
／ＤＣＭで溶出させると、２０，２３−ノナコサジエン−１０−アミン，Ｎ，Ｎ−ジメチ
ル−，（２０Ｚ，２３Ｚ）（１）（２．４５ｇ，５．４７ｍｍｏｌ，４８．１％収率）が
かすかに金色の油状物として収集された。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ
５．３５（ｍ，４Ｈ），２．７８（ｍ，２Ｈ），２．２３（ｍ，１Ｈ），２．２１（ｓ
，６Ｈ），２．０５（ｍ，４Ｈ），１．４５−１．１６（ｍ，３８Ｈ），０．８９（ｍ，
６Ｈ）。ＨＲＭＳ Ｃ３１Ｈ６１Ｎの計算値４４８．４８７７，実測値４４８．４８７２
。

化合物２〜３０は新規なカチオン性脂質であり、上記の一般スキーム１に従って調製し
た。

（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ノニルヘニコサ−１２，１５−ジエン−
１−アミン（化合物３１）

ケトンｉｉｉ（４．０ｇ，９．５５ｍｍｏｌ）、ＴＯＳＭＩＣ（２．４ｇ，１２．４ｍ
ｍｏｌ）を含むジメトキシエタン（４５ｍＬ）の溶液を０℃まで冷却し、カリウムｔｅｒ
ｔ−ブトキシド（１９．１ｍｍｏｌ，１９．１ｍＬの１ＭのｔＢｕＯＨ溶液）で処理した
。９０分後、反応液をヘキサンと水間に分配した。有機部分を水で洗浄し、硫酸ナトリウ
ム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。この物質をフラッシュクロマトグ
ラフィーによって精製し（０から５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、所望の生成物を得た（
約２０％の出発物質（ｓ．ｍ．）を含有）。この混合物を次の工程に、そのままの状態で
持ち越した。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＝４３０．６。

水素化アルミニウムリチウム（２３．９ｍｍｏｌ，２３．９ｍＬの１ＭのＴＨＦ溶液）
をニトリルｉｖ（３．４２ｇ，８ｍｍｏｌ）に直接、周囲温度で添加し、反応液を２０分
間撹拌した。反応液を１００ｍＬのＴＨＦで希釈し、０℃まで冷却し、硫酸ナトリウム十
水和物溶液を用いて注意深くクエンチした。固形物を濾別し、ＴＨＦで洗浄した。濾液を
真空にてエバポレートし、直接、次の反応に粗製状態で持ち越した。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ
）＝４３４．６。

第１級アミン（３．４５ｇ，６．２ｍｍｏｌ）のジクロロエタン（１００ｍＬ）溶液を
ホルムアルデヒド（１．６ｍＬ，２１．７ｍｍｏｌ）で処理した後、トリアセトキシ水素
化ホウ素ナトリウム（６．６ｇ，３１ｍｍｏｌ）で処理した。５分後、反応液をジクロロ
メタンと１Ｎ ＮａＯＨ間に分配した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し
、真空にてエバポレートした。粗製混合物を逆相分取用クロマトグラフィー（Ｃ８カラム
）によって精製し、（１２Ｚ，１５Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ノニルヘニコサ−１２
，１５−ジエン−１−アミンを得た。ＨＲＭＳ 計算値４６２．５０３３，実測値４６２
．５０２６。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ５．３５（ｍ，４Ｈ），２
．７８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），２．１８（ｓ，６Ｈ），２．０５（ｍ，６Ｈ），
１．３（ｍ，３９Ｈ），０．８９（ｍ，６Ｈ）。

（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１
−アミン（化合物３２）

シリルアミドのピーターソン試薬（３．１ｇ，１６．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３５ｍＬ
）に溶解させ、−６３℃まで冷却した。この溶液にｎＢｕＬｉ（１６．７ｍｍｏｌ，６．
７ｍＬの２．５Ｍ溶液）を添加した。反応液を周囲温度まで３０分間昇温させた。ケトン
（５．０ｇ，１１．９ｍｍｏｌ）を第２のフラスコ内のＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解させた
。ピーターソン試薬を−６０℃のケトン溶液に移した。反応液を−４０℃まで１時間昇温
させ、次いで、０℃まで３０分間昇温させた。重炭酸ナトリウムを用いて反応液をクエン
チし、さらに水で希釈し、水／ヘキサン間に分配した。有機部分をブラインで洗浄し、硫
酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。フラッシュクロマトグ
ラフィーによって精製し（０から４０％までのＭＴＢＥ／ヘキサン）、α，β−不飽和ア
ミドｖｉを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ５．７５（ｓ，１Ｈ）
，５．３６（ｍ，４Ｈ），３．０１（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｔ
，２Ｈ），２．２８（ｔ，２Ｈ），２．０５（ｍ，６Ｈ），１．３５（ｍ，３４Ｈ），０
．８９（ｍ，６Ｈ）。

α，β−不飽和アミドｖｉ（１ｇ，２．１ｍｍｏｌ）とＬＳ−セレクトライド（４．１
ｍｍｏｌ，４．１ｍＬの１Ｍ溶液）を密封チューブ内で合わせ、６０℃まで２４時間加熱
した。反応液を周囲温度まで冷却し、塩化アンモニウム溶液とヘプタン間に分配した。有
機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートし、アミドｖｉｉ
を得た。この中間体を直接、次の反応に粗製状態で持ち越した。

アミドｖｉｉ（２．８５ｇ，５．８ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化アルミニウムリチウム
（８．７ｍｍｏｌ，８．７ｍＬの１Ｍ溶液）を添加した。反応液を周囲温度で１０分間撹
拌し、次いで、硫酸ナトリウム十水和物溶液をゆっくり添加することによってクエンチし
た。固形物を濾過し、ＴＨＦで洗浄し、濾液を真空にてエバポレートした。粗製混合物を
逆相分取用クロマトグラフィー（Ｃ８カラム）によって精製し、（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ
，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１−アミン（化合物３２）を
油状物として得た。ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）計算値４７６．５１９０，実測値４７６．５１８
９。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ５．３７（ｍ，４Ｈ），２．７８（
ｔ，２Ｈ），２．４２（ｍ，８Ｈ），２．０５（ｑ，４Ｈ），１．２８（ｍ，４１Ｈ），
０．８９（ｍ，６Ｈ）。

Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−（２−オクチルシクロプロピル）ヘプタデカン−８−アミン（
化合物３３）

０℃まで冷却したオレイン酸（１ｇ，３．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５００ｍＬ）溶液に
、ＣＤＩ（０．６３ｇ，３．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を周囲温度まで３０分間昇
温させた後、０℃まで冷却し、まずトリエチルアミン（０．３９ｇ，３．９ｍｍｏｌ）で
、次いでジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（０．３８ｇ，３．９ｍｍｏｌ）で処理した
。１時間後、反応液を水とヘプタン間に分配した。有機部分を硫酸マグネシウム上で乾燥
させ、濾過し、真空にてエバポレートし、粗製ワインレブアミドｉｉを得、これを直接、
次の反応に持ち越した。

ジエチル亜鉛（７０．３ｍｍｏｌ，７０．３ｍＬの１Ｍ溶液）のジクロロメタン（１３
０ｍＬ）溶液を−１℃まで冷却し、ＴＦＡ（８．０ｇ，７０．３ｍｍｏｌ）の滴下で処理
した。３０分後、ジヨードメタン（１８．８ｇ，７０．３ｍｍｏｌ）を添加し、これを氷
浴内で３０分間熟成させた。この溶液に、ワインレブアミドｉｉ（７．６ｇ，２３．４ｍ
ｍｏｌ）を添加した。反応液を周囲温度まで昇温させ、１時間撹拌した。塩化アンモニウ
ム溶液（１００ｍＬ）を用いて反応液をクエンチし、有機層を分配して取り出し、１０％
チオ硫酸ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポ
レートした。精製はフラッシュクロマトグラフィーとし（０から３０％までのＭＴＢＥ／
ヘプタン）、所望の生成物ｉｘを得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ
３．７２（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｓ，３Ｈ），２．４８（ｔ，２Ｈ），１．６５（ｍ，
２Ｈ），１．３９（ｍ，２２Ｈ），１．１８（ｍ，２Ｈ），０．９１（ｔ，３Ｈ），０．
６８（ｍ，２Ｈ），０．５９（ｍ，１Ｈ），−０．３２（ｍ，１Ｈ）。

ワインレブアミドｉｘの化合物３３への変換は、上記の化合物１について記載のものと
同様の様式で行った（ノニルグリニャール付加の後、還元的アミノ化）。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ
＋Ｈ）＝４３６．６。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ２．２５（ｓ，６
Ｈ），１．３０（ｍ，４５Ｈ），０．９１（ｍ，６Ｈ），０．６８（ｍ，２Ｈ），０．５
９（ｍ，１Ｈ），−０．３１（ｍ，１Ｈ）。

化合物３４〜４３は新規なカチオン性脂質であり、上記の一般スキーム１〜４に従って
調製した。

（１１Ｅ，２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチルノナコサ−１１，２０，２３−トリエ
ン−１０−アミン（化合物４４）

−７８℃まで冷却したＬＤＡ（９５ｍｍｏｌ，４７．５ｍＬの２Ｍ溶液）のＴＨＦ（１
２７ｍＬ）溶液に、酢酸ｔ−ブチルを添加した。反応液を１５分間撹拌した後、アルデヒ
ドｘを添加した。直ちに塩化アンモニウム溶液を用いて反応液をクエンチし、周囲温度ま
で昇温させ、水／ペンタン間に分配した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過
し、真空にてエバポレートした。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ−ｔＢｕ）＝３２５．４。

ヒドロキシケトンｘｉ（７ｇ，１８．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０ｍＬ）に
溶解させ、０℃まで冷却し、デオキソフルオル（７．３ｇ，３３．１ｍｍｏｌ）で処理し
た。反応液を撹拌しながら１６時間、周囲温度まで昇温させた後、重炭酸ナトリウム溶液
を用いてクエンチした。反応液を分配し、有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過
し、真空にてエバポレートした。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍｏｔ
ａｇｒａｐｈｙ）（０から５％までの酢酸エチル／ヘキサン）により、フルオロエステル
を得た。

フルオロエステル中間体（６ｇ，１５．６ｍｍｏｌ）（ジクロロメタン中）を塩化水素
（１５７ｍｍｏｌ，３９．２ｍＬの４Ｍのジオキサン溶液）で処理し、反応液を周囲温度
で１６時間撹拌した。反応液を真空にてエバポレートし、所望のβ−フルオロ酸ｘｉｉを
得た。ＬＣ／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＝３２７．３。

フルオロカルボン酸ｘｉｉ（５．１ｇ，１５．７ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（６．０ｇ，３１
．４ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３．１ｇ，３１．４ｍｍ
ｏｌ）、トリメチルアミン（４．０ｇ，３９．２ｍｍｏｌ）、およびＨＯＡｔ（４．３ｇ
，３１．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（７８ｍＬ）中で合わせ、周囲温度で１６時間撹拌した。
反応液を水／ＤＣＭ間に分配し、有機部分を水（３×）とＮａＯＨ溶液（１×）で洗浄し
、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバポレートした。粗製物質を逆相分
取用クロマトグラフィーによって精製し、所望のワインレブアミドｘｉｉｉを得た。ＬＣ
／ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＝３７０．４。

ワインレブアミドｘｉｉｉ（４．３ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液
を、ノニルマグネシウムブロミド（２３．４ｍｍｏｌ，２３．４ｍＬの１Ｍ溶液）で周囲
温度にて処理した。１時間後に塩化アンモニウム溶液を用いて反応液をクエンチし、水と
ペンタン間に分配した。有機部分を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空にてエバ
ポレートした。この物質を次の工程に粗製状態で持ち越した。

ケトンｘｉｖ（５．１ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）をジメチルアミン（２９．３ｍｍｏｌ，
１４．７ｍＬの２ＭのＴＨＦ溶液）とチタン（ＩＶ）イソプロポキシド（６．７ｇ，２３
．５ｍｍｏｌ）で処理し、反応液を周囲温度で１６時間撹拌した。反応混合物にエタノー
ル（５０ｍＬ）を添加した後、水素化ホウ素ナトリウム（０．６７ｇ，１７．６ｍｍｏｌ
）を添加した。反応液を直接シリカカラムに負荷し、フラッシュクロマトグラフィーによ
って精製した（０から１５％までのＭｅＯＨ／ＤＣＭ）。この物質は、分取用逆相クロマ
トグラフィーによる２回目の精製が必要であり、（１１Ｅ，２０Ｚ，２３Ｚ）−Ｎ，Ｎ−
ジメチルノナコサ−１１，２０，２３−トリエン−１０−アミンを得た。ＨＲＭＳ 計算
値４４６．４７２０，実測値４４６．４７２４。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ
_３）δ ５．４８（ｍ，１Ｈ），５．３７（ｍ，４Ｈ），５．２３（ｍ，１Ｈ），２．７
８（ｔ，２Ｈ），２．５８（ｍ，１Ｈ），２．２２（ｓ，６Ｈ），２．０４（ｍ，６Ｈ）
，１．５６（ｍ，１Ｈ），１．３０（ｍ，３１Ｈ），０．８９（ｍ，６Ｈ）。

化合物４５は、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，２８，１７２
−１７６、国際公開第２０１０／０４２８７７号、同第２０１０／０４８５３６号、同第
２０１０／０８８５３７号、および同第２００９／１２７０６０号に記載のＤＬｉｎＫＣ
２ＤＭＡである。

化合物４６は、国際公開第２０１０／０５４４０１号、および同第２０１０／１４４７
４０号に記載のＭＣ３である。

Ｄ．脂質ナノ粒子組成物
以下の本発明の脂質ナノ粒子組成物（ＬＮＰ）：
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ５６．６／３８／５．４；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ６０／３８／２；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ６７．３／２９／３．７；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ４９．３／４７／３．７；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ ５０．３／４４．３／５．４；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−Ｃ−ＤＭＡ／ＤＳＰＣ ４０／４８／２／１
０；
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣ ４０／４８／２／１０；
および
カチオン性脂質／コレステロール／ＰＥＧ−ＤＭＧ／ＤＳＰＣ ５８／３０／２／１０
は、オリゴヌクレオチド、特に本発明のｓｉＮＡ分子の送達に有用である。

当業者には、本発明が、課題を遂行するため、ならびに記載の目的および利点ならびに
本発明に固有の目的および利点を得るために充分適合したものであることが容易に認識さ
れよう。現時点で代表的な好ましい実施形態である本明細書に記載の方法および組成物は
、例示的であり、本発明の範囲に対する限定を意図しない。当業者には、本発明の精神に
包含され、特許請求の範囲によって規定される本発明の変形例および他の使用が思いつく
であろう。

Claims (39)

1. ＣＴＮＮＢ１の発現を阻害する単離された二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子であ
   って、
   （ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖とアンチセンス鎖を含むものであり；
   （ｂ）各鎖が、独立して１５〜３０ヌクレオチド長であり；
   （ｃ）少なくとも一方の鎖が、配列番号：１９４の少なくとも１５個のヌクレオチドの
   配列を含むものである、
   単離された二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
2. ＣＴＮＮＢ１の発現を阻害する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、
   （ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖とアンチセンス鎖を含むものであり；
   （ｂ）各鎖が、独立して１５〜３０ヌクレオチド長であり；
   （ｃ）該アンチセンス鎖が、５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（
   配列番号：１９４）に相補的な配列を有する少なくとも１５個のヌクレオチドを含むもの
   である、
   二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
3. ＣＴＮＮＢ１の発現を阻害する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、
   （ａ）該ｓｉＮＡがセンス鎖とアンチセンス鎖を含むものであり；
   （ｂ）各鎖が、独立して１５〜３０ヌクレオチド長であり；
   （ｃ）該アンチセンス鎖が、５’−ＡＡＧＣＡＡＣＵＧＡＡＣＵＡＧＵＣＧＵ−３’（
   配列番号：５１０７）の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むものであり；該ヌ
   クレオチドのうち１つ以上が化学修飾されていてもよい、
   二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
4. センス鎖が、５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９
   ４）の少なくとも１５個のヌクレオチドの配列を含むものであり；該ヌクレオチドのうち
   １つ以上が化学修飾されていてもよい、
   請求項３に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
5. ＣＴＮＮＢ１の発現を阻害する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子であって、該ｓ
   ｉＮＡが：
   ５’−ＡＣＧＡＣＵＡＧＵＵＣＡＧＵＵＧＣＵＵ−３’（配列番号：１９４）と５’−
   ＡＡＧＣＡＡＣＵＧＡＡＣＵＡＧＵＣＧＵ−３’（配列番号：５１０７）を含むものであ
   る、
   二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
6. 少なくとも１個のヌクレオチドが化学修飾ヌクレオチドである、請求項１、２、３、４
   または５に記載の、二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
7. 少なくとも１個の非ヌクレオチドをさらに含む、請求項１、２、３、４または５に記載
   の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
8. 少なくとも１個のヌクレオチドがユニバーサル塩基を含むものである、請求項１、２、
   ３、４または５に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
9. 少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を有する、請求項１、２、３
   、４または５に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
10. 少なくとも一方の鎖の３’末端、５’末端または３’と５’の両末端にキャップを含む
    、請求項１、２、３、４または５に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
11. 一方または両方の鎖に１個以上の３’−突出端ヌクレオチドを含む、請求項１、２、３
    、４または５に記載の、二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
12. アンチセンス鎖の５’末端がリン酸化されている、請求項１、２、３、４または５に記
    載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
13. 少なくとも一方の鎖の３’−突出端ヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルヌクレオチドであ
    る、請求項１１に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
14. ２’−Ｏ−メチルヌクレオチドがホスホロチオエートヌクレオチド間結合により連結さ
    れている、請求項１３に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
15. 化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロヌクレオチドである、請求項
    ６に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
16. 化学修飾ヌクレオチドが２’−デオキシヌクレオチドである、請求項６に記載の二本鎖
    低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
17. 化学修飾ヌクレオチドが２’−Ｏ−アルキルヌクレオチドである、請求項６に記載の二
    本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
18. 一方または両方の鎖の５個以上のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フ
    ルオロピリミジンヌクレオチドである、請求項１、２、３、４または５に記載の二本鎖低
    分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
19. 一方または両方の鎖の５個以上のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルピリミジ
    ンヌクレオチドである、請求項１、２、３、４または５に記載の二本鎖低分子干渉核酸（
    ｓｉＮＡ）分子。
20. 一方または両方の鎖の５個以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオ
    ロプリンヌクレオチドである、請求項１、２、３、４または５に記載の二本鎖低分子干渉
    核酸（ｓｉＮＡ）分子。
21. 一方または両方の鎖の５個以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレ
    オチドである、請求項１、２、３、４または５に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ
    ）分子。
22. 一方または両方の鎖の５個以上のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレ
    オチドである、請求項１８に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
23. 一方または両方の鎖の５個以上のプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオ
    ロヌクレオチドである、請求項１９に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
24. 配列番号：６３７２と６３７４を含む二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
25. 配列番号：６３７０と６３６９を含む二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
26. 配列番号：２０２１と２０６８を含む二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
27. 配列番号：６３７２と６３７３を含む二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
28. 配列番号：２１４７と６３６８を含む二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
29. １つ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、請求項２４、２５、２６、
    ２７または２８に記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子。
30. 請求項１、２、３、５、２４、２５、２６、２７または２８に記載の二本鎖低分子干渉
    核酸（ｓｉＮＡ）が薬学的に許容され得る担体または希釈剤中に含まれてなる組成物。
31. （ａ）配列番号：６３７２と６３７４を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
    （ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
    ン−１−アミン；
    （ｃ）コレステロール；
    （ｄ）ＤＳＰＣ；および
    （ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
    を含む組成物。
32. （ａ）配列番号：６３７０と６３６９を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
    （ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
    ン−１−アミン；
    （ｃ）コレステロール；
    （ｄ）ＤＳＰＣ；および
    （ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
    を含む組成物。
33. （ａ）配列番号：２０２１と２０６８を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
    （ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
    ン−１−アミン；
    （ｃ）コレステロール；
    （ｄ）ＤＳＰＣ；および
    （ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
    を含む組成物。
34. （ａ）配列番号：６３７２と６３７３を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
    （ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
    ン−１−アミン；
    （ｃ）コレステロール；
    （ｄ）ＤＳＰＣ；および
    （ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
    を含む組成物。
35. （ａ）配列番号：２１４７と６３６８を有する二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）；
    （ｂ）（１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエ
    ン−１−アミン；
    （ｃ）コレステロール；
    （ｄ）ＤＳＰＣ；および
    （ｅ）ＰＥＧ−ＤＭＧ
    を含む組成物。
36. （１３Ｚ，１６Ｚ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−ノニルドコサ−１３，１６−ジエン−１
    −アミン、コレステロール、ＤＳＰＣ、およびＰＥＧ−ＤＭＧが、それぞれ５０：３０：
    １０：２のモル比を有する、請求項３１、３２、３３、３４または３５に記載の組成物。
37. スクロース、トレハロース、またはその任意の組合せをさらに含む、請求項３１、３２
    、３３、３４または３５に記載の組成物。
38. ＣＴＮＮＢ１の作用または該作用の喪失によって媒介される病状に苦しんでいるヒト被
    検体を処置する方法であって、前記被検体に、有効量の請求項２４、２５、２６、２７ま
    たは２８のいずれかに記載の二本鎖低分子干渉核酸（ｓｉＮＡ）分子を投与することを含
    む方法。
39. 該病状が癌である、請求項３９に記載の方法。

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