JP2007049931A - クレアチンキナーゼ活性測定用試薬 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】アミノメタンスルホン酸と、CK活性化剤とを含有するCK活性測定用試薬を提供する。
【選択図】なし
Description
日本臨床化学会「臨床化学」第33巻補冊1号(2004)
本明細書におけるアミノメタンスルホン酸は、アミノメタンスルホン酸塩をも含む。アミノメタンスルホン酸塩としては、例えばカリウム塩、ナトリウム塩、アンモニウム塩(メチルアミン、ジメチルアミン、メチルエチルアミン、トリエチルアミンなどのアミンとの塩を含む)などが挙げられる。
また、CK活性測定用試薬は第一試薬及び第二試薬の二試薬からなることが好ましい。この場合、第一試薬及び/又は第二試薬が凍結乾燥した状態であってもよく、両方の試薬が溶液状態であってもよい。
CKを含む試料に上記成分を含むCK活性測定用試薬を添加することにより、図1に示すような反応系が構築される。図1において、CK活性化剤によって活性化されたCKは、クレアチンリン酸及びADPからクレアチン及びATPを生成する反応を触媒する(反応1)。試薬に含まれるHK又はGKは、試薬に含まれるグルコース及び反応1で生成したATPからグルコース−6−リン酸(G6P)及びADPを生成させる(反応2)。さらに試薬に含まれるG6PDHは、反応2で生成したG6P及びNAD又はNADPから6−ホスホ−D−グルコン酸及びNADH又はNADPHを生成させる(反応3)。NADH又はNADPHが生成すると、試料と試薬との混合液の波長340nm付近での吸光度が上昇する。この吸光度の上昇をモニターすることにより、試料中のCKの活性を測定することができる。
以下にCK活性測定用第一試薬及び第二試薬の基本組成を示す。
<第一試薬>pH6.6
イミダゾール 125mM
酢酸マグネシウム 12.5mM
CyDTA 2.0mM
ADP 2.5mM
AMP 6.25mM
AP5A 12.5μM
グルコース 25mM
NADP 2.5mM
G6PDH 1875U/L
ヘキソキナーゼ 3750U/L
NAC 30mM
<第二試薬A>pH9.0
クレアチンリン酸 150mM
以下にCK活性測定用第一試薬及び第二試薬の基本組成を示す。
<第一試薬A>pH6.6
イミダゾール 125mM
酢酸マグネシウム 12.5mM
CyDTA 2.0mM
ADP 2.5mM
AMP 6.25mM
AP5A 12.5μM
グルコース 30mM
NADP 2.5mM
G6PDH 1875U/L
ヘキソキナーゼ 3750U/L
NAC 30mM
<第二試薬>pH9.0
クレアチンリン酸 150mM
NAC以外のSH化合物を含むCK活性測定用試薬を用いて、アミノメタンスルホン酸によるSH化合物の安定性を評価した。
イミダゾール 125mM
酢酸マグネシウム 12.5mM
EDTA 2.5mM
ADP 2.5mM
AMP 6.25mM
AP5A 12.5μM
グルコース 30mM
NADP 2.5mM
G6PDH 1875U/L
ヘキソキナーゼ 3750U/L
なお、pHは6.6に調整した。
Claims (8)
- アミノメタンスルホン酸と、クレアチンキナーゼ活性化剤とを含有するクレアチンキナーゼ活性測定用試薬。
- 前記クレアチンキナーゼ活性化剤が、N−アセチル−L−システイン(NAC)、N−グアニル−L−システイン、システアミン、ジチオスレイトール(DTT)、システイン、グルタチオン、メルカプトコハク酸、チオグルコース、ジチオエリスリトール、メルカプト酢酸、2−メルカプトエタノール、臭化2−アミノエチルイソチオウロニウム、2−メルカプトエタンスルホン酸及びチオグリセロールからなる群より選択される少なくとも一つである請求項1記載のクレアチンキナーゼ活性測定用試薬。
- グルコース−6−リン酸脱水素酵素(G6PDH)、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP)、ヘキソキナーゼ又はグルコキナーゼ、グルコース、アデノシン二リン酸(ADP)及びクレアチンリン酸からなる群より選ばれる少なくとも一つの化合物をさらに含有する請求項1又は2記載のクレアチンキナーゼ活性測定用試薬。
- クレアチンキナーゼのM型サブユニットに特異的に結合する抗体をさらに含有する請求項1〜3の何れかに記載のクレアチンキナーゼ活性測定用試薬。
- クレアチンキナーゼ活性化剤、グルコース−6−リン酸脱水素酵素(G6PDH)、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP)、ヘキソキナーゼ又はグルコキナーゼ、グルコース及びアデノシン二リン酸(ADP)を含有する第一試薬と、アミノメタンスルホン酸及びクレアチンリン酸を含有する第二試薬とからなるクレアチンキナーゼ活性測定用試薬キット。
- アミノメタンスルホン酸、クレアチンキナーゼ活性化剤、グルコース−6−リン酸脱水素酵素(G6PDH)、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NAD)又はニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸(NADP)、ヘキソキナーゼ又はグルコキナーゼ、グルコース及びアデノシン二リン酸(ADP)を含有する第一試薬と、クレアチンリン酸を含有する第二試薬とからなるクレアチンキナーゼ活性測定用試薬キット。
- 劣化したクレアチンキナーゼ活性化剤を、アミノメタンスルホン酸と接触させることによってクレアチンキナーゼを活性化できる状態にする方法。
- クレアチンキナーゼ活性化剤とアミノメタンスルホン酸とを共存させることにより、クレアチンキナーゼ活性化剤を安定化する方法。
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