JP3538525B2 - 安定なクレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 - Google Patents
安定なクレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、クレアチンキナー
ゼ（ＣＫ）活性測定用の安定な液状試薬を提供するもの
である。
ゼ（ＣＫ）活性測定用の安定な液状試薬を提供するもの
である。
【０００２】
【従来の技術】ＣＫは、生体内では骨格筋、脳、心筋な
どの組織に分布する酵素であり、これらの臓器における
障害や壊死に伴って血清中のＣＫ量は増減する。例え
ば、血清中のＣＫ活性は、進行性筋ジストロフィー症、
多発性筋炎、心筋梗塞、甲状腺機能低下症などにおいて
上昇し、甲状腺機能亢進症において低下することから、
重要な臨床検査項目の１つである。従来よりＣＫ活性の
測定法としては種々の方法が報告されているが、ドイツ
臨床化学会、スカンジナビア臨床化学会、フランス臨床
生物学会、国際臨床化学連合および日本臨床化学会等が
定めている方法は、次のとおりである。まず、基質であ
るクレアチンリン酸とＡＤＰに対して血清中のＣＫが作
用してクレアチンとＡＴＰが生成され、次いで、該ＡＴ
Ｐがグルコースの存在下にヘキソキナーゼ（ＥＣ２．
７．１．１）あるいはグルコキナーゼ（ＥＣ２．７．
１．２）等の共役酵素の酵素反応によってグルコース−
６−リン酸に変換され、該グルコース−６−リン酸が補
酵素ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（Ｎ
ＡＤＰ）あるいはニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド（ＮＡＤ）と共にグルコース−６−リン酸デヒドロゲ
ナーゼ（ＥＣ１．１．１．４９）の共役酵素の酵素反応
によって還元型ＮＡＤＰ（ＮＡＤＰＨ）あるいは還元型
ＮＡＤ（ＮＡＤＨ）と６−ホスホグルコン酸に変換され
る。このＮＡＤＰＨあるいはＮＡＤＨの生成速度を分光
学的に測定することによりＣＫ活性を求める方法であ
り、測定法としては、原理的に最も優れ、感度、再現性
も良いこと、および多数検体処理が可能であることから
好ましい方法である。
どの組織に分布する酵素であり、これらの臓器における
障害や壊死に伴って血清中のＣＫ量は増減する。例え
ば、血清中のＣＫ活性は、進行性筋ジストロフィー症、
多発性筋炎、心筋梗塞、甲状腺機能低下症などにおいて
上昇し、甲状腺機能亢進症において低下することから、
重要な臨床検査項目の１つである。従来よりＣＫ活性の
測定法としては種々の方法が報告されているが、ドイツ
臨床化学会、スカンジナビア臨床化学会、フランス臨床
生物学会、国際臨床化学連合および日本臨床化学会等が
定めている方法は、次のとおりである。まず、基質であ
るクレアチンリン酸とＡＤＰに対して血清中のＣＫが作
用してクレアチンとＡＴＰが生成され、次いで、該ＡＴ
Ｐがグルコースの存在下にヘキソキナーゼ（ＥＣ２．
７．１．１）あるいはグルコキナーゼ（ＥＣ２．７．
１．２）等の共役酵素の酵素反応によってグルコース−
６−リン酸に変換され、該グルコース−６−リン酸が補
酵素ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（Ｎ
ＡＤＰ）あるいはニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド（ＮＡＤ）と共にグルコース−６−リン酸デヒドロゲ
ナーゼ（ＥＣ１．１．１．４９）の共役酵素の酵素反応
によって還元型ＮＡＤＰ（ＮＡＤＰＨ）あるいは還元型
ＮＡＤ（ＮＡＤＨ）と６−ホスホグルコン酸に変換され
る。このＮＡＤＰＨあるいはＮＡＤＨの生成速度を分光
学的に測定することによりＣＫ活性を求める方法であ
り、測定法としては、原理的に最も優れ、感度、再現性
も良いこと、および多数検体処理が可能であることから
好ましい方法である。
【０００３】ＣＫ活性を正確に測定するには賦活剤／活
性化剤としてチオール化合物を添加することが必須要件
であることはよく知られた事実であり、これまでＣＫ活
性化剤としてＮ−アセチルシステイン、システイン、２
−メルカプトエタノール、２−メルカプトエチルアミ
ン、還元型グルタチオン、ジチオトレイトール、ジチオ
エリトリトール、臭化２−アミノエチルイソチオウロニ
ウム、チオグリコール酸、チオグリセロールなどが用い
られている。しかしながら、従来のＣＫ活性測定試薬
は、特開昭５９−１９８９９９の第５欄１２〜１５行に
「ＣＫの活性測定にシステイン、Ｎ−アセチルシステイ
ン、グルタチオン、メルカプトエタノール等のＳＨ化合
物を不可欠とするものであるが、これらの物質の水溶液
は酸化されやすくＳＨ基は速やかに消失し、それに伴っ
てＣＫ活性の測定値は低下するものであった。」と記載
されているように、溶液状態では室温保存安定性が乏し
く、そのため凍結乾燥品として保存し、用時溶解液で液
状化して用いるのが一般的であるが、その場合でも液状
化してからの試薬の室温（１８〜３５℃）での安定性は
長くとも２日間程度であり、溶液状態での安定性は必ず
しも十分ではなかった。
性化剤としてチオール化合物を添加することが必須要件
であることはよく知られた事実であり、これまでＣＫ活
性化剤としてＮ−アセチルシステイン、システイン、２
−メルカプトエタノール、２−メルカプトエチルアミ
ン、還元型グルタチオン、ジチオトレイトール、ジチオ
エリトリトール、臭化２−アミノエチルイソチオウロニ
ウム、チオグリコール酸、チオグリセロールなどが用い
られている。しかしながら、従来のＣＫ活性測定試薬
は、特開昭５９−１９８９９９の第５欄１２〜１５行に
「ＣＫの活性測定にシステイン、Ｎ−アセチルシステイ
ン、グルタチオン、メルカプトエタノール等のＳＨ化合
物を不可欠とするものであるが、これらの物質の水溶液
は酸化されやすくＳＨ基は速やかに消失し、それに伴っ
てＣＫ活性の測定値は低下するものであった。」と記載
されているように、溶液状態では室温保存安定性が乏し
く、そのため凍結乾燥品として保存し、用時溶解液で液
状化して用いるのが一般的であるが、その場合でも液状
化してからの試薬の室温（１８〜３５℃）での安定性は
長くとも２日間程度であり、溶液状態での安定性は必ず
しも十分ではなかった。
【０００４】したがって、近年、試薬調製の煩雑さがな
く、調製のミスもなく、緊急検査時において迅速に対応
できる長期安定なＣＫ活性測定用液状試薬が望まれてい
る。最近公開された特開平８−２４２８９３号公報に
は、ＣＫ活性化剤（ＳＨ化合物）であるチオグリセロー
ル、２−メルカプトエタノール、２−メルカプトエタン
スルホン酸またはその塩から選ばれたＳＨ化合物の１つ
を試薬に配合することにより、液状試薬を安定に保存し
うることが記載されているが（２０℃、１カ月保存で安
定）、本発明者らの検討によれば、この方法においても
３７℃で１カ月保存した場合、充分な安定化が得られな
い。また、ＣＫ活性測定用第二試薬のクレアチンリン酸
を安定化を図る方法として、ｐＨ７．５〜１０の弱アル
カリ液にする方法（特公平５−１７８３８号公報を参
照）、無機リン酸塩水溶液にする方法（特開昭５９−１
９８９９９号公報を参照）などが開示されているが、本
発明者らの検討によれば、この方法においても３７℃で
１カ月保存した場合、充分な安定化が得られない。本発
明者らは上記問題に鑑み鋭意検討を進めた結果、ＣＫ活
性測定用試薬に対する優れた安定化剤を見出し、該安定
化剤を配合することにより液状で長期保存において安定
な本発明ＣＫ活性測定用試薬を完成させるに至った。
く、調製のミスもなく、緊急検査時において迅速に対応
できる長期安定なＣＫ活性測定用液状試薬が望まれてい
る。最近公開された特開平８−２４２８９３号公報に
は、ＣＫ活性化剤（ＳＨ化合物）であるチオグリセロー
ル、２−メルカプトエタノール、２−メルカプトエタン
スルホン酸またはその塩から選ばれたＳＨ化合物の１つ
を試薬に配合することにより、液状試薬を安定に保存し
うることが記載されているが（２０℃、１カ月保存で安
定）、本発明者らの検討によれば、この方法においても
３７℃で１カ月保存した場合、充分な安定化が得られな
い。また、ＣＫ活性測定用第二試薬のクレアチンリン酸
を安定化を図る方法として、ｐＨ７．５〜１０の弱アル
カリ液にする方法（特公平５−１７８３８号公報を参
照）、無機リン酸塩水溶液にする方法（特開昭５９−１
９８９９９号公報を参照）などが開示されているが、本
発明者らの検討によれば、この方法においても３７℃で
１カ月保存した場合、充分な安定化が得られない。本発
明者らは上記問題に鑑み鋭意検討を進めた結果、ＣＫ活
性測定用試薬に対する優れた安定化剤を見出し、該安定
化剤を配合することにより液状で長期保存において安定
な本発明ＣＫ活性測定用試薬を完成させるに至った。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は液状で長期保
存において安定なＣＫ活性測定用試薬を提供することを
目的とする。
存において安定なＣＫ活性測定用試薬を提供することを
目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、ＣＫ活性測定
用液状試薬に、安定化剤として、２−メルカプトエチル
アミン、システイン、還元型グルタチオン、シスタミ
ン、シスチンまたはその塩類からなる群より選ばれる少
なくとも１つの化合物を配合した安定なＣＫ活性測定用
液状試薬を提供する。また本発明は、ＣＫ活性測定用液
状試薬に、ＣＫ活性化剤として、Ｎ−アセチルシステイ
ン、システイン、２−メルカプトエタノール、２−メル
カプトエチルアミン、還元型グルタチオン、ジチオトレ
イトール、ジチオエリトリトール、臭化２−アミノエチ
ルイソチオウロニウム、チオグリコール酸およびチオグ
リセロールまたはこれらの塩の中から選ばれる少なくと
も１つの化合物を配合し、ならびに安定化剤として、２
−メルカプトエチルアミン、システイン、還元型グルタ
チオン、シスタミン、シスチンまたはその塩類からなる
群より選ばれる少なくとも１つの化合物を配合したこと
を特徴とする安定なＣＫ活性測定用液状試薬を提供す
る。
用液状試薬に、安定化剤として、２−メルカプトエチル
アミン、システイン、還元型グルタチオン、シスタミ
ン、シスチンまたはその塩類からなる群より選ばれる少
なくとも１つの化合物を配合した安定なＣＫ活性測定用
液状試薬を提供する。また本発明は、ＣＫ活性測定用液
状試薬に、ＣＫ活性化剤として、Ｎ−アセチルシステイ
ン、システイン、２−メルカプトエタノール、２−メル
カプトエチルアミン、還元型グルタチオン、ジチオトレ
イトール、ジチオエリトリトール、臭化２−アミノエチ
ルイソチオウロニウム、チオグリコール酸およびチオグ
リセロールまたはこれらの塩の中から選ばれる少なくと
も１つの化合物を配合し、ならびに安定化剤として、２
−メルカプトエチルアミン、システイン、還元型グルタ
チオン、シスタミン、シスチンまたはその塩類からなる
群より選ばれる少なくとも１つの化合物を配合したこと
を特徴とする安定なＣＫ活性測定用液状試薬を提供す
る。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明のＣＫ活性測定用液状試薬
は、通常、第一試薬と第二試薬とからなる。第一試薬は
ＡＤＰ、グルコース、ＮＡＤＰまたはＮＡＤ、およびヘ
キソキナーゼまたはグルコキナーゼ、さらにグルコース
−６−リン酸デヒドロゲナーゼ等の共役酵素を主成分と
して含有する緩衝液からなり、これに賦活剤、キレート
剤、防腐剤等の添加剤が適宜配合される。第二試薬はク
レアチンリン酸を主成分とし、これに賦活剤、キレート
剤、防腐剤等の添加剤を適宜配合した水溶液である。本
発明で用いる上記安定化剤は通常第一試薬に配合し、ま
たこの第一試薬には、さらに上記ＣＫ活性化剤を配合す
るのが好ましい。なお、これら安定化剤とＣＫ活性化剤
としては一部同一化合物が両方に分類されており、その
場合は該化合物を単独で配合してもよい。例えば、２−
メルカプトエチルアミン、システインまたは還元型グル
タチオンを単独で配合すれば液状試薬の安定化とＣＫ活
性化の両機能が達成される。本発明の安定化剤の使用濃
度は、安定化が得られる濃度以上の濃度であれば特に限
定されるものではない。ＣＫ活性測定用液状第一試薬中
に、本発明の安定化剤を、例えば、濃度０．５ｍＭ以
上、好ましくは１〜１００ｍＭとなるように添加すれば
よい。本発明における第一試薬の主成分および添加剤は
ｐＨ５．５〜７．４の緩衝液に溶解して使用するが、使
用しうる緩衝液としては、例えば、イミダゾール−酢
酸、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒ
ドロキシメチル）メタン−酢酸、トリス−酢酸、トリエ
タノールアミン−酢酸などの通常使用される緩衝液が挙
げられる。第二試薬は、その主成分および添加剤をｐＨ
１０〜１２の水溶液、例えば、ＮａＯＨ水溶液、ＫＯＨ
水溶液に溶解して調製されるが、必要に応じてｐＨ１０
〜１２の緩衝液に溶解してもよい。
は、通常、第一試薬と第二試薬とからなる。第一試薬は
ＡＤＰ、グルコース、ＮＡＤＰまたはＮＡＤ、およびヘ
キソキナーゼまたはグルコキナーゼ、さらにグルコース
−６−リン酸デヒドロゲナーゼ等の共役酵素を主成分と
して含有する緩衝液からなり、これに賦活剤、キレート
剤、防腐剤等の添加剤が適宜配合される。第二試薬はク
レアチンリン酸を主成分とし、これに賦活剤、キレート
剤、防腐剤等の添加剤を適宜配合した水溶液である。本
発明で用いる上記安定化剤は通常第一試薬に配合し、ま
たこの第一試薬には、さらに上記ＣＫ活性化剤を配合す
るのが好ましい。なお、これら安定化剤とＣＫ活性化剤
としては一部同一化合物が両方に分類されており、その
場合は該化合物を単独で配合してもよい。例えば、２−
メルカプトエチルアミン、システインまたは還元型グル
タチオンを単独で配合すれば液状試薬の安定化とＣＫ活
性化の両機能が達成される。本発明の安定化剤の使用濃
度は、安定化が得られる濃度以上の濃度であれば特に限
定されるものではない。ＣＫ活性測定用液状第一試薬中
に、本発明の安定化剤を、例えば、濃度０．５ｍＭ以
上、好ましくは１〜１００ｍＭとなるように添加すれば
よい。本発明における第一試薬の主成分および添加剤は
ｐＨ５．５〜７．４の緩衝液に溶解して使用するが、使
用しうる緩衝液としては、例えば、イミダゾール−酢
酸、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒ
ドロキシメチル）メタン−酢酸、トリス−酢酸、トリエ
タノールアミン−酢酸などの通常使用される緩衝液が挙
げられる。第二試薬は、その主成分および添加剤をｐＨ
１０〜１２の水溶液、例えば、ＮａＯＨ水溶液、ＫＯＨ
水溶液に溶解して調製されるが、必要に応じてｐＨ１０
〜１２の緩衝液に溶解してもよい。
【０００８】本発明の第一試薬に配合される共役酵素で
あるヘキソキナーゼ（以下、ＨＫと略記する）として
は、その由来は特に限定されるものではなく、例えば、
微生物由来（ベーカーズイースト、バチルス属等）のも
のや動物由来のものを使用することができる。また、Ｈ
Ｋよりもグルコースに対して基質特異性が高いグルコキ
ナーゼ（以下、ＧＫと略記する）も使用することがで
き、その由来は特に限定されるものではなく、微生物由
来のものや動物由来のものを使用することができる。他
の共役酵素であるグルコース−６−リン酸デヒドロゲナ
ーゼ（Ｇ６ＰＤＨ）においても、その由来は特に限定さ
れるものではなく、微生物由来（ロイコノストックメセ
ンテロイテス、ベーカーズイースト等）のものや動物由
来のものを使用することができる。本発明の第一試薬お
よび第二試薬には、エチレンジアミン四酢酸（以下、Ｅ
ＤＴＡと略記する）、グリコールエーテルジアミン四酢
酸（以下、ＧＥＤＴＡと略記する）、エチレンジアミン
二酢酸（以下、ＥＤＤＡと略記する）、ヒドロキシエチ
レンジアミン三酢酸（以下、ＥＤＴＡ-ＯＨと略記す
る）、ビスヒドロキシベンジルエチレンジアミン二酢酸
（以下、ＨＢＥＤと略記する）、ジアミノプロパン四酢
酸（以下、メチル-ＥＤＴＡと略記する）、トリエチレ
ンテトラミン六酢酸（以下、ＴＴＨＡと略記する）、ジ
アミノプロパノール四酢酸（以下、ＤＰＴＡ-ＯＨと略
記する）、およびジエチレントリアミン五酢酸（以下、
ＤＴＰＡと略記する）等およびこれらの塩から選ばれる
少なくとも１種類のキレート剤を配合することができ
る。本発明の第一試薬には、賦活剤として、酢酸マグネ
シウム、硫酸マグネシウムおよび塩化マグネシウムから
選ばれる少なくとも１種類のマグネシウム塩を配合する
ことができる。また、防腐剤として、例えば、アジ化ナ
トリウムなどを配合することができる。本発明の試薬に
は、さらにＣＫ活性測定に正誤差を与えるアデニル酸キ
ナーゼ（以下、ＡＫと略記する）を抑えるためのＡＫ阻
害剤として、アデノシン一リン酸（以下、ＡＭＰと略記
する）、ジアデノシンペンタホスフェート（以下、ＡＰ
５Ａと略記する）等が配合される。これらは通常第一試
薬に配合される。
あるヘキソキナーゼ（以下、ＨＫと略記する）として
は、その由来は特に限定されるものではなく、例えば、
微生物由来（ベーカーズイースト、バチルス属等）のも
のや動物由来のものを使用することができる。また、Ｈ
Ｋよりもグルコースに対して基質特異性が高いグルコキ
ナーゼ（以下、ＧＫと略記する）も使用することがで
き、その由来は特に限定されるものではなく、微生物由
来のものや動物由来のものを使用することができる。他
の共役酵素であるグルコース−６−リン酸デヒドロゲナ
ーゼ（Ｇ６ＰＤＨ）においても、その由来は特に限定さ
れるものではなく、微生物由来（ロイコノストックメセ
ンテロイテス、ベーカーズイースト等）のものや動物由
来のものを使用することができる。本発明の第一試薬お
よび第二試薬には、エチレンジアミン四酢酸（以下、Ｅ
ＤＴＡと略記する）、グリコールエーテルジアミン四酢
酸（以下、ＧＥＤＴＡと略記する）、エチレンジアミン
二酢酸（以下、ＥＤＤＡと略記する）、ヒドロキシエチ
レンジアミン三酢酸（以下、ＥＤＴＡ-ＯＨと略記す
る）、ビスヒドロキシベンジルエチレンジアミン二酢酸
（以下、ＨＢＥＤと略記する）、ジアミノプロパン四酢
酸（以下、メチル-ＥＤＴＡと略記する）、トリエチレ
ンテトラミン六酢酸（以下、ＴＴＨＡと略記する）、ジ
アミノプロパノール四酢酸（以下、ＤＰＴＡ-ＯＨと略
記する）、およびジエチレントリアミン五酢酸（以下、
ＤＴＰＡと略記する）等およびこれらの塩から選ばれる
少なくとも１種類のキレート剤を配合することができ
る。本発明の第一試薬には、賦活剤として、酢酸マグネ
シウム、硫酸マグネシウムおよび塩化マグネシウムから
選ばれる少なくとも１種類のマグネシウム塩を配合する
ことができる。また、防腐剤として、例えば、アジ化ナ
トリウムなどを配合することができる。本発明の試薬に
は、さらにＣＫ活性測定に正誤差を与えるアデニル酸キ
ナーゼ（以下、ＡＫと略記する）を抑えるためのＡＫ阻
害剤として、アデノシン一リン酸（以下、ＡＭＰと略記
する）、ジアデノシンペンタホスフェート（以下、ＡＰ
５Ａと略記する）等が配合される。これらは通常第一試
薬に配合される。
【０００９】本発明のＣＫ活性測定用液状試薬における
各成分の反応液中の濃度は次の範囲のものが好ましい。
例えば、ＨＫ（またはＧＫ）は０．１〜４０ Ｕ／ｍ
Ｌ、Ｇ６ＰＤＨは０．１〜４０Ｕ／ｍＬ、クレアチンリ
ン酸（以下、ＣＰと略記する）は２〜７０ｍＭ、ＡＤＰ
は０．１〜２０ｍＭ、ＮＡＤまたはＮＡＤＰは０．０５
〜２０ｍＭ、グルコースは１〜２００ｍＭ、ＣＫ活性化
剤は１〜１００ｍＭ、マグネシウム塩類は０．５〜３０
ｍＭ、ＡＭＰは０．２〜２０ｍＭ、ＡＰ５Ａは１〜１０
０μＭ、キレート剤は０．１〜２０ｍＭ、アジ化ナトリ
ウムは０．５〜５０ｍＭの範囲から適宣選択される。次
に実施例および比較例をあげて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものでは
ない。
各成分の反応液中の濃度は次の範囲のものが好ましい。
例えば、ＨＫ（またはＧＫ）は０．１〜４０ Ｕ／ｍ
Ｌ、Ｇ６ＰＤＨは０．１〜４０Ｕ／ｍＬ、クレアチンリ
ン酸（以下、ＣＰと略記する）は２〜７０ｍＭ、ＡＤＰ
は０．１〜２０ｍＭ、ＮＡＤまたはＮＡＤＰは０．０５
〜２０ｍＭ、グルコースは１〜２００ｍＭ、ＣＫ活性化
剤は１〜１００ｍＭ、マグネシウム塩類は０．５〜３０
ｍＭ、ＡＭＰは０．２〜２０ｍＭ、ＡＰ５Ａは１〜１０
０μＭ、キレート剤は０．１〜２０ｍＭ、アジ化ナトリ
ウムは０．５〜５０ｍＭの範囲から適宣選択される。次
に実施例および比較例をあげて本発明を更に詳細に説明
するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものでは
ない。
【００１０】
実施例１
（第一試薬）イースト由来のＨＫ（ベーリンガー・マン
ハイム社製）３．５Ｕ／ｍＬ、ロイコノストックメセン
テロイテスＧ６ＰＤＨ（ベーリンガー・マンハイム社
製）１．６Ｕ／ｍＬ、ＡＤＰ２．５ｍＭ、ＮＡＤＰ２．
５ｍＭ、グルコース２５ｍＭ、ジチオトレイトール［Ｃ
Ｋ活性化剤］２５ｍＭ、酢酸マグネシウム１２．５ｍ
Ｍ、ＡＭＰ６．２５ｍＭ、ＡＰ５Ａ１２．５μＭ、アジ
化ナトリウム５ｍＭ、ＥＤＴＡ２．５ｍＭに、さらに安
定化剤として２−メルカプトエチルアミン（以下、ＭＥ
Ａと略記する）をそれぞれ０、０.１、０.５、１、５、
１０、５０および１００ｍＭ添加した１２８ｍＭイミダ
ゾール−酢酸緩衝液（ｐＨ６．４）を３７℃で２１日間
間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）ＣＰ１５５ｍＭ、アジ化ナトリウム５ｍ
Ｍ、ＥＤＴＡ２．５ｍＭに水酸化ナトリウムでｐＨ１１
に調整したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求めた。その結果を表１
に示す。表中のＣＫ残存率（％）とは、調製直後の第一
試薬を用いて測定したＣＫ活性値の平均値を１００％と
した場合の測定時のＣＫ活性の相対値を示す。
ハイム社製）３．５Ｕ／ｍＬ、ロイコノストックメセン
テロイテスＧ６ＰＤＨ（ベーリンガー・マンハイム社
製）１．６Ｕ／ｍＬ、ＡＤＰ２．５ｍＭ、ＮＡＤＰ２．
５ｍＭ、グルコース２５ｍＭ、ジチオトレイトール［Ｃ
Ｋ活性化剤］２５ｍＭ、酢酸マグネシウム１２．５ｍ
Ｍ、ＡＭＰ６．２５ｍＭ、ＡＰ５Ａ１２．５μＭ、アジ
化ナトリウム５ｍＭ、ＥＤＴＡ２．５ｍＭに、さらに安
定化剤として２−メルカプトエチルアミン（以下、ＭＥ
Ａと略記する）をそれぞれ０、０.１、０.５、１、５、
１０、５０および１００ｍＭ添加した１２８ｍＭイミダ
ゾール−酢酸緩衝液（ｐＨ６．４）を３７℃で２１日間
間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）ＣＰ１５５ｍＭ、アジ化ナトリウム５ｍ
Ｍ、ＥＤＴＡ２．５ｍＭに水酸化ナトリウムでｐＨ１１
に調整したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求めた。その結果を表１
に示す。表中のＣＫ残存率（％）とは、調製直後の第一
試薬を用いて測定したＣＫ活性値の平均値を１００％と
した場合の測定時のＣＫ活性の相対値を示す。
【表１】
表１に示されるように、安定化剤２−メルカプトエチル
アミン無添加の試薬では、３７℃、２１日間保存後、用
時調製したものに対するＣＫ残存率は４．５％に低下し
たが、２−メルカプトエチルアミン１ｍＭ添加したもの
では、２４．６％、５ｍＭ以上添加したものでは、９０
％以上のＣＫ残存率が得られた。
アミン無添加の試薬では、３７℃、２１日間保存後、用
時調製したものに対するＣＫ残存率は４．５％に低下し
たが、２−メルカプトエチルアミン１ｍＭ添加したもの
では、２４．６％、５ｍＭ以上添加したものでは、９０
％以上のＣＫ残存率が得られた。
【００１１】実施例２
（第一試薬）ＣＫ活性化剤としてチオグリセロール２５
ｍＭを用い、安定化剤としてＬ−システイン（０〜５０
ｍＭ）を使用する以外は実施例１と同様に調製し、３７
℃で２１日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製したものを第二試薬
とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。結果を表
２に示す。
ｍＭを用い、安定化剤としてＬ−システイン（０〜５０
ｍＭ）を使用する以外は実施例１と同様に調製し、３７
℃で２１日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製したものを第二試薬
とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。結果を表
２に示す。
【表２】
表２に示されるように、安定化剤Ｌ−システイン無添加
の試薬では、３７℃、２１日間保存後、用時調製したも
のに対するＣＫ残存率は１６％に低下したが、Ｌ−シス
テイン１ｍＭ添加したものでは４３％、５ｍＭ以上添加
したものでは８０％以上のＣＫ残存率が得られた。
の試薬では、３７℃、２１日間保存後、用時調製したも
のに対するＣＫ残存率は１６％に低下したが、Ｌ−シス
テイン１ｍＭ添加したものでは４３％、５ｍＭ以上添加
したものでは８０％以上のＣＫ残存率が得られた。
【００１２】実施例３
（第一試薬）ＣＫ活性化剤としてＮ−アセチルシステイ
ン、チオグリセロールまたはジチオトレイトールのいず
れか１つ(２５ｍＭ)を用い、安定化剤として２−メルカ
プトエチルアミン、シスタミン、Ｌ−システイン、シス
チンまたは還元型グルタチオンのいずれか１つ（２５ｍ
Ｍ）を用いる以外は実施例１と同様に調製し、３７℃で
２１日間保存したものを第一試薬とした。なお、比較例
として本発明の安定化剤の代わりに類似化合物であるシ
ステイン酸またはタウリンを用いたものも調製した。 （第二試薬）実施例１と同様に調製したものを第二試薬
とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。結果を表
３〜５に示す
ン、チオグリセロールまたはジチオトレイトールのいず
れか１つ(２５ｍＭ)を用い、安定化剤として２−メルカ
プトエチルアミン、シスタミン、Ｌ−システイン、シス
チンまたは還元型グルタチオンのいずれか１つ（２５ｍ
Ｍ）を用いる以外は実施例１と同様に調製し、３７℃で
２１日間保存したものを第一試薬とした。なお、比較例
として本発明の安定化剤の代わりに類似化合物であるシ
ステイン酸またはタウリンを用いたものも調製した。 （第二試薬）実施例１と同様に調製したものを第二試薬
とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。結果を表
３〜５に示す
【表３】
【表４】
【表５】
表３、４および５に示されるように、安定化剤として２
−メルカプトエチルアミン、シスタミン、Ｌ−システイ
ン、シスチンおよび還元型グルタチオンのいずれかを添
加したものは安定化剤の無添加のものに比べて高いＣＫ
残存率を示し、優れた安定化効果が得られた。また比較
例でのシステイン酸またはタウリンを用いた場合には、
所望の安定化効果が充分には達成されなかった。
−メルカプトエチルアミン、シスタミン、Ｌ−システイ
ン、シスチンおよび還元型グルタチオンのいずれかを添
加したものは安定化剤の無添加のものに比べて高いＣＫ
残存率を示し、優れた安定化効果が得られた。また比較
例でのシステイン酸またはタウリンを用いた場合には、
所望の安定化効果が充分には達成されなかった。
【００１３】実施例４
（第一試薬）ＣＫ活性化剤として本発明におけるＮ−ア
セチルシステイン（表中、ＮＡＣ；以下括弧内同様）、
還元型グルタチオン（ＧＳＨ）、Ｌ−システイン、チオ
グリセロール、臭化２−アミノエチルイソチオウロニウ
ム臭化水素塩（ＡＥＴ）、チオグリコール酸、ジチオト
レイトール（ＤＴＴ）またはジチオエリトリトール（Ｄ
ＴＥ）のいずれか１つ(２５ｍＭ)を用い、安定化剤とし
て２−メルカプトエチルアミン（ＭＥＡ）（１０ｍＭ）
を用いる以外は実施例１と同様に調製し、３７℃で２８
日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製したものを第二試薬
とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。なお、比
較例としてＭＥＡ無添加の場合も同時に試験した。それ
らの結果を表６に示す。
セチルシステイン（表中、ＮＡＣ；以下括弧内同様）、
還元型グルタチオン（ＧＳＨ）、Ｌ−システイン、チオ
グリセロール、臭化２−アミノエチルイソチオウロニウ
ム臭化水素塩（ＡＥＴ）、チオグリコール酸、ジチオト
レイトール（ＤＴＴ）またはジチオエリトリトール（Ｄ
ＴＥ）のいずれか１つ(２５ｍＭ)を用い、安定化剤とし
て２−メルカプトエチルアミン（ＭＥＡ）（１０ｍＭ）
を用いる以外は実施例１と同様に調製し、３７℃で２８
日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製したものを第二試薬
とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。なお、比
較例としてＭＥＡ無添加の場合も同時に試験した。それ
らの結果を表６に示す。
【表６】
表６に示されるように、安定化剤として２−メルカプト
エチルアミンを添加した場合にはいずれのＣＫ活性化剤
についてもそれらの添加によりＣＫ残存率はより改善さ
れた。安定化剤無添加の場合には、本発明のＣＫ安定化
剤でもある還元型グルタチオンおよびＬ−システインを
添加した場合のみＣＫ残存率は改善されたが、他のＣＫ
活性化剤を添加しても安定化効果が認められなかった。
エチルアミンを添加した場合にはいずれのＣＫ活性化剤
についてもそれらの添加によりＣＫ残存率はより改善さ
れた。安定化剤無添加の場合には、本発明のＣＫ安定化
剤でもある還元型グルタチオンおよびＬ−システインを
添加した場合のみＣＫ残存率は改善されたが、他のＣＫ
活性化剤を添加しても安定化効果が認められなかった。
【００１４】実施例５
（第一試薬）ＣＫ活性化剤としてチオグリセロール（２
５ｍＭ）および安定化剤としてＬ−システイン（１０ｍ
Ｍ）を使用した以外は実施例１と同様に調製したものを
第一試薬とした。 （第二試薬）ｐＨを６．６〜１２に調整した以外は実施
例１と同様に調製し、３７℃で３５日間保存したものを
第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。結果を表
７に示す。
５ｍＭ）および安定化剤としてＬ−システイン（１０ｍ
Ｍ）を使用した以外は実施例１と同様に調製したものを
第一試薬とした。 （第二試薬）ｐＨを６．６〜１２に調整した以外は実施
例１と同様に調製し、３７℃で３５日間保存したものを
第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。結果を表
７に示す。
【表７】
表７に示されるようにｐＨ６．６およびｐＨ８．４に調
整したものはＣＫ残存率がそれぞれ１３．５％および８
９．１％となり、安定性が劣ったが、ｐＨ１０以上に調
整したものは９５％以上ものＣＫ残存率が得られた。
整したものはＣＫ残存率がそれぞれ１３．５％および８
９．１％となり、安定性が劣ったが、ｐＨ１０以上に調
整したものは９５％以上ものＣＫ残存率が得られた。
【００１５】実施例６
（第一試薬）ＣＫ活性化剤としてチオグリセロール（５
０ｍＭ）および安定化剤としてＬ−システイン（１０ｍ
Ｍ）を使用した以外は実施例１と同様に調製し、３７℃
で３１日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製し、３７℃で３１日
間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。
０ｍＭ）および安定化剤としてＬ−システイン（１０ｍ
Ｍ）を使用した以外は実施例１と同様に調製し、３７℃
で３１日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製し、３７℃で３１日
間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。
【００１６】実施例７
（第一試薬）ＣＫ活性化剤および安定化剤としてＬ−シ
ステイン（５０ｍＭ）を使用した以外は実施例１と同様
に調製し、３７℃で３１日間保存したものを第一試薬と
した。 （第二試薬）実施例１と同様に調製し、３７℃で３１日
間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。
ステイン（５０ｍＭ）を使用した以外は実施例１と同様
に調製し、３７℃で３１日間保存したものを第一試薬と
した。 （第二試薬）実施例１と同様に調製し、３７℃で３１日
間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。
【００１７】比較例１
特開平８−２４２８９３の実施例２の記載に従って調製
した。 （第一試薬）１２８ｍＭイミダゾール−酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ６．７）にチオグリセロール１００ｍＭ、ＡＤＰ２．
６ｍＭ、ＨＫ（オリエンタル酵母社製）３．９Ｕ／ｍ
Ｌ、Ｇ６ＰＤＨ（オリエンタル酵母社製）８．０Ｕ／ｍ
Ｌ、ＮＡＤＰ２．６ｍＭ、グルコース２１ｍＭ、酢酸マ
グネシウム１０ｍＭ、ＡＭＰ６．５ｍＭ、ＡＰ５Ａ１３
μＭ、アジ化ナトリウム０．１％、ＥＤＴＡ−２Ｎａ２
ｍＭとなるように溶解した後、水酸化ナトリウムでｐＨ
６．７に調整し、３７℃で３１日間保存したものを第
一試薬とした。 （第二試薬）１０ｍＭビシン（Ｂｉｃｉｎｅ）−水酸化
ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．５）にＣＰ１５５ｍＭ、グ
ルコース２１ｍＭ、酢酸マグネシウム１０ｍＭ、アジ化
ナトリウム０．１％、ＥＤＴＡ−２Ｎａ２ｍＭとなるよ
うに溶解した後、水酸化ナトリウムでｐＨ９．０に調整
し、３７℃で３１日間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求め、実施例１の場合と
同様に、調製直後の第一試薬のＣＫ活性値（１００％）
との相対値として残存率を算出した。
した。 （第一試薬）１２８ｍＭイミダゾール−酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ６．７）にチオグリセロール１００ｍＭ、ＡＤＰ２．
６ｍＭ、ＨＫ（オリエンタル酵母社製）３．９Ｕ／ｍ
Ｌ、Ｇ６ＰＤＨ（オリエンタル酵母社製）８．０Ｕ／ｍ
Ｌ、ＮＡＤＰ２．６ｍＭ、グルコース２１ｍＭ、酢酸マ
グネシウム１０ｍＭ、ＡＭＰ６．５ｍＭ、ＡＰ５Ａ１３
μＭ、アジ化ナトリウム０．１％、ＥＤＴＡ−２Ｎａ２
ｍＭとなるように溶解した後、水酸化ナトリウムでｐＨ
６．７に調整し、３７℃で３１日間保存したものを第
一試薬とした。 （第二試薬）１０ｍＭビシン（Ｂｉｃｉｎｅ）−水酸化
ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．５）にＣＰ１５５ｍＭ、グ
ルコース２１ｍＭ、酢酸マグネシウム１０ｍＭ、アジ化
ナトリウム０．１％、ＥＤＴＡ−２Ｎａ２ｍＭとなるよ
うに溶解した後、水酸化ナトリウムでｐＨ９．０に調整
し、３７℃で３１日間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求め、実施例１の場合と
同様に、調製直後の第一試薬のＣＫ活性値（１００％）
との相対値として残存率を算出した。
【００１８】比較例２
特公平５−３８６００の実施例３の記載に基づいて調製
した。 （第一試薬）イースト由来のＨＫ（ベーリンガー・マン
ハイム社製）３．５Ｕ／ｍＬ、ロイコノストックメセン
テロイテスＧ６ＰＤＨ（ベーリンガー・マンハイム社
製）１．６Ｕ／ｍＬ、ＡＤＰ２．５ｍＭ、ＮＡＤＰ２．
５ｍＭ、グルコース２５ｍＭ、Ｎ−アセチルシステイン
１８．２５ｍＭ、チオグリセロール６．２５ｍＭ、酢酸
マグネシウム１２．５ｍＭ、ＡＭＰ６．２５ｍＭ、ＡＰ
５Ａ１２．５μＭ、アジ化ナトリウム０．１％、ＥＤＴ
Ａ２．５ｍＭを添加した１２８ｍＭイミダゾール−酢酸
緩衝液（ｐＨ６．４）を３７℃で３１日間保存したもの
を第一試薬とした。 （第二試薬）ＣＰ１５５ｍＭ、アジ化ナトリウム０．１
％、ＥＤＴＡ２．５ｍＭに水酸化ナトリウムでｐＨ１１
に調整し、３７℃で３１日間保存したものを第二試薬と
した。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求め、上記比較例１の場
合と同様にして残存率を算出した。前記実施例６、実施
例７、比較例１および比較例２における測定結果を表８
に示す。なお、いずれの実施例および比較例において
も、３種の試料をそれぞれ試験に供した。
した。 （第一試薬）イースト由来のＨＫ（ベーリンガー・マン
ハイム社製）３．５Ｕ／ｍＬ、ロイコノストックメセン
テロイテスＧ６ＰＤＨ（ベーリンガー・マンハイム社
製）１．６Ｕ／ｍＬ、ＡＤＰ２．５ｍＭ、ＮＡＤＰ２．
５ｍＭ、グルコース２５ｍＭ、Ｎ−アセチルシステイン
１８．２５ｍＭ、チオグリセロール６．２５ｍＭ、酢酸
マグネシウム１２．５ｍＭ、ＡＭＰ６．２５ｍＭ、ＡＰ
５Ａ１２．５μＭ、アジ化ナトリウム０．１％、ＥＤＴ
Ａ２．５ｍＭを添加した１２８ｍＭイミダゾール−酢酸
緩衝液（ｐＨ６．４）を３７℃で３１日間保存したもの
を第一試薬とした。 （第二試薬）ＣＰ１５５ｍＭ、アジ化ナトリウム０．１
％、ＥＤＴＡ２．５ｍＭに水酸化ナトリウムでｐＨ１１
に調整し、３７℃で３１日間保存したものを第二試薬と
した。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求め、上記比較例１の場
合と同様にして残存率を算出した。前記実施例６、実施
例７、比較例１および比較例２における測定結果を表８
に示す。なお、いずれの実施例および比較例において
も、３種の試料をそれぞれ試験に供した。
【表８】
表８に示されるように、比較例１（チオグリセロール；
１００ｍＭを使用）、比較例２（Ｎ−アセチルシステイ
ン（ＮＡＣ）；１８．２５ｍＭ、チオグリセリン；６．
２５ｍＭを使用）においては、３７℃に３１日間保存し
た試薬では、用時調製したものに対するＣＫ残存率はい
ずれも４％以下に低下していたが、本発明のＣＫ活性測
定用液状試薬においては、３７℃にて３１日間保存した
後もＣＫ残存率はいずれも約９０％以上であった。
１００ｍＭを使用）、比較例２（Ｎ−アセチルシステイ
ン（ＮＡＣ）；１８．２５ｍＭ、チオグリセリン；６．
２５ｍＭを使用）においては、３７℃に３１日間保存し
た試薬では、用時調製したものに対するＣＫ残存率はい
ずれも４％以下に低下していたが、本発明のＣＫ活性測
定用液状試薬においては、３７℃にて３１日間保存した
後もＣＫ残存率はいずれも約９０％以上であった。
【００１９】実施例８
（第一試薬）実施例５と同様に調製し、７℃および３７
℃で２１日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製し、７℃および３７
℃で２１日間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。
℃で２１日間保存したものを第一試薬とした。 （第二試薬）実施例１と同様に調製し、７℃および３７
℃で２１日間保存したものを第二試薬とした。 （ＣＫ活性測定）実施例１と同様に測定した。
【００２０】比較例３
市販品の液状ＣＫ活性測定試薬キットＡ（残存有効期
間；９ヶ月）を７℃および３７℃で２１日間保存したも
のを使用した。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求めた。前記実施例８お
よび比較例３のいずれも２種の試料を各々試験した。そ
れらの結果を表９に示す。表中の残存率（％）は７℃で
保存した測定試薬を用いて測定したＣＫ活性値の平均値
を１００％とした場合の３７℃保存品のＣＫ活性相対値
を示す。
間；９ヶ月）を７℃および３７℃で２１日間保存したも
のを使用した。 （ＣＫ活性測定）市販の管理血清８μＬに第一試薬３２
０μＬを加え、３７℃に５分間予備加温を行なった後、
第二試薬８０μＬを添加後２分から５分間における生成
するＮＡＤＰＨの３４０ｎｍでの１分間当たりの吸光度
変化より検体中のＣＫ活性値を求めた。前記実施例８お
よび比較例３のいずれも２種の試料を各々試験した。そ
れらの結果を表９に示す。表中の残存率（％）は７℃で
保存した測定試薬を用いて測定したＣＫ活性値の平均値
を１００％とした場合の３７℃保存品のＣＫ活性相対値
を示す。
【表９】
表９に示されるように、市販品Ａにおいては、３７℃で
２１日間保存した試薬では、７℃で２１日間保存したも
のに対するＣＫ残存率が９０％以下に低下していたが、
本発明のＣＫ活性測定用液状試薬においては、３７℃に
２１日間保存した後もＣＫ残存率は９７％以上であっ
た。
２１日間保存した試薬では、７℃で２１日間保存したも
のに対するＣＫ残存率が９０％以下に低下していたが、
本発明のＣＫ活性測定用液状試薬においては、３７℃に
２１日間保存した後もＣＫ残存率は９７％以上であっ
た。
【発明の効果】本発明のＣＫ活性測定用液状試薬は長期
間安定に保存することができ、例えば、３７℃などの苛
酷条件下で２１日間保存した場合においても試薬の性能
が劣化することなく使用可能である。
間安定に保存することができ、例えば、３７℃などの苛
酷条件下で２１日間保存した場合においても試薬の性能
が劣化することなく使用可能である。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 特開 昭61−88899（ＪＰ，Ａ)
特開 平９−70298（ＪＰ，Ａ)
特開 昭61−289900（ＪＰ，Ａ)
特開 平９−191899（ＪＰ，Ａ)
特開 平10−179195（ＪＰ，Ａ)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12Q 1/00 - 1/70
ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤ
Ｓ（ＳＴＮ)
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (4)
- 【請求項１】 クレアチンキナーゼ（ＣＫ）活性測定用
液状試薬に、安定化剤として、２−メルカプトエチルア
ミン、システイン、シスタミン、シスチンまたはその塩
類からなる群より選ばれる少なくとも１種とＣＫ活性化
剤として、ジチオトレイトール、ジチオエリトリトール
およびチオグリセロールまたはこれらの塩の中から選ば
れる少なくとも１種を配合したことを特徴とする安定な
ＣＫ活性測定用液状試薬。 - 【請求項２】 ＣＫ活性測定用液状試薬が第一試薬と第
二試薬とからなるキット形態であって、第一試薬がアデ
ノシン二リン酸（ＡＤＰ）、グルコース、ニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）またはニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）および
共役酵素を主成分として含有する緩衝液からなり、第二
試薬がクレアチンリン酸含有液からなり、該第一試薬に
２−メルカプトエチルアミン、システイン、シスタミ
ン、シスチンまたはその塩類からなる群から選ばれる少
なくとも１種の安定化剤とジチオトレイトール、ジチオ
エリトリトールおよびチオグリセロールまたはこれらの
塩の中から選ばれる少なくとも１種のＣＫ活性化剤を配
合したことを特徴とする請求項１に記載の試薬。 - 【請求項３】 第二試薬のｐＨが１０〜１２の範囲であ
る請求項２に記載の試薬。 - 【請求項４】 第一試薬に、エチレンジアミン四酢酸、
グリコールエーテルジアミン四酢酸、エチレンジアミン
二酢酸、ヒドロキシエチレンジアミン三酢酸、ビスヒド
ロキシベンジルエチレンジアミン二酢酸、ジアミノプロ
パン四酢酸、トリエチレンテトラミン六酢酸、ジアミノ
プロパノール四酢酸およびジエチレントリアミン五酢酸
またはこれらの塩の中から選ばれる少なくとも１種のキ
レート剤をさらに配合したことを特徴とする請求項２に
記載の試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14629097A JP3538525B2 (ja) | 1997-06-04 | 1997-06-04 | 安定なクレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14629097A JP3538525B2 (ja) | 1997-06-04 | 1997-06-04 | 安定なクレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10327895A JPH10327895A (ja) | 1998-12-15 |
| JP3538525B2 true JP3538525B2 (ja) | 2004-06-14 |
Family
ID=15404348
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14629097A Expired - Fee Related JP3538525B2 (ja) | 1997-06-04 | 1997-06-04 | 安定なクレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3538525B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19755079A1 (de) * | 1997-12-11 | 1999-06-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Stabilisiertes Reagenz und Verfahren zur Bestimmung von Creatin-Kinase |
| EP1013774B8 (de) * | 1998-12-22 | 2006-12-06 | Olympus Life and Material Science Europa GmbH | Flüssigreagenz für den Nachweis von Kreatinkinase |
| JP4723311B2 (ja) * | 2005-08-17 | 2011-07-13 | シスメックス株式会社 | クレアチンキナーゼ活性測定用試薬 |
| JP5315079B2 (ja) | 2009-02-13 | 2013-10-16 | 大陽日酸株式会社 | 酵素反応試薬、酵素反応試薬キット及び酵素反応用の液の保存方法 |
| JP5982608B2 (ja) * | 2010-03-31 | 2016-08-31 | 株式会社シノテスト | クレアチンキナーゼ活性の測定試薬 |
| CN105974117B (zh) * | 2016-05-04 | 2017-09-01 | 同昕生物技术（北京）有限公司 | Ck‑mb校准品稀释液及其在临床ck检测中的应用 |
-
1997
- 1997-06-04 JP JP14629097A patent/JP3538525B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10327895A (ja) | 1998-12-15 |
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