JPH07203991A - カリウムイオンの定量方法 - Google Patents
カリウムイオンの定量方法Info
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- JPH07203991A JPH07203991A JP6005955A JP595594A JPH07203991A JP H07203991 A JPH07203991 A JP H07203991A JP 6005955 A JP6005955 A JP 6005955A JP 595594 A JP595594 A JP 595594A JP H07203991 A JPH07203991 A JP H07203991A
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- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
Abstract
(57)【要約】
【構成】 試料中のカリウムイオンをグリセロールデヒ
ドロゲナーゼを用いて定量する方法において、試料を、
グルタミン酸及びアデノシン三リン酸の存在下、グルタ
ミンシンセターゼで前処理することを特徴とするカリウ
ムイオンの定量方法。 【効果】 アンモニウムイオン又はヒドロキシルアミン
を含む試料においても微量濃度のカリウムイオンを定量
できる。
ドロゲナーゼを用いて定量する方法において、試料を、
グルタミン酸及びアデノシン三リン酸の存在下、グルタ
ミンシンセターゼで前処理することを特徴とするカリウ
ムイオンの定量方法。 【効果】 アンモニウムイオン又はヒドロキシルアミン
を含む試料においても微量濃度のカリウムイオンを定量
できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、臨床検査に有用なカリ
ウムイオンの定量方法に関する。
ウムイオンの定量方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】カリウムイオンの定量方法にグリセロー
ルデヒドロゲナーゼが用いられることが特表平１−５０
３５９６号公報に開示されているが、試料中にアンモニ
ウムイオンが存在するとグリセロールデヒドロゲナーゼ
反応を妨害するので正確な定量ができない。
ルデヒドロゲナーゼが用いられることが特表平１−５０
３５９６号公報に開示されているが、試料中にアンモニ
ウムイオンが存在するとグリセロールデヒドロゲナーゼ
反応を妨害するので正確な定量ができない。
【０００３】試料中のアンモニウムイオンを消去する方
法として、グルタミン酸デヒドロゲナーゼを用いて試料
を前処理する方法が知られている〔臨床化学分析II（含
窒素成分）、第２版、東京化学同人１９７９年刊〕。ア
デノシン三リン酸（ＡＴＰ）の存在下、グルタミン酸と
アンモニウムイオンを基質としてグルタミンを生産する
グルタミンシンセターゼが知られている（酵素ハンドブ
ック、丸尾文治ら編、1982年、朝倉書店刊）が、試料中
のアンモニウムイオンの消去に用いられた例はない。
法として、グルタミン酸デヒドロゲナーゼを用いて試料
を前処理する方法が知られている〔臨床化学分析II（含
窒素成分）、第２版、東京化学同人１９７９年刊〕。ア
デノシン三リン酸（ＡＴＰ）の存在下、グルタミン酸と
アンモニウムイオンを基質としてグルタミンを生産する
グルタミンシンセターゼが知られている（酵素ハンドブ
ック、丸尾文治ら編、1982年、朝倉書店刊）が、試料中
のアンモニウムイオンの消去に用いられた例はない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】グルタミン酸デヒドロ
ゲナーゼを用いて試料の前処理を行い試料中のアンモニ
ウムイオンを消去する方法は、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ
を必要とするので、これらの物質がグリセロールデヒド
ロゲナーゼ反応に影響を及ぼすことやＮＡＤＨのバック
グランドが高くなりすぎることがカリウムイオンの定量
に支障となる。そのため、試料中のカリウムイオンをグ
リセロールデヒドロゲナーゼで定量する方法には適用で
きない。
ゲナーゼを用いて試料の前処理を行い試料中のアンモニ
ウムイオンを消去する方法は、ＮＡＤＨ又はＮＡＤＰＨ
を必要とするので、これらの物質がグリセロールデヒド
ロゲナーゼ反応に影響を及ぼすことやＮＡＤＨのバック
グランドが高くなりすぎることがカリウムイオンの定量
に支障となる。そのため、試料中のカリウムイオンをグ
リセロールデヒドロゲナーゼで定量する方法には適用で
きない。
【０００５】本発明は、アンモニウムイオン又はヒドロ
キシルアミンを含む試料においても微量濃度のカリウム
イオンを定量することが可能な、グリセロールデヒドロ
ゲナーゼを用いたカリウムイオンの定量方法を提供する
ことを目的とする。
キシルアミンを含む試料においても微量濃度のカリウム
イオンを定量することが可能な、グリセロールデヒドロ
ゲナーゼを用いたカリウムイオンの定量方法を提供する
ことを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明のカリウムイオン
の定量方法は、試料中のカリウムイオンをグリセロール
デヒドロゲナーゼを用いて定量する方法において、試料
を、グルタミン酸及びＡＴＰの存在下、グルタミンシン
セターゼで前処理することを特徴とするものである。
の定量方法は、試料中のカリウムイオンをグリセロール
デヒドロゲナーゼを用いて定量する方法において、試料
を、グルタミン酸及びＡＴＰの存在下、グルタミンシン
セターゼで前処理することを特徴とするものである。
【０００７】本発明によれば、アンモニウムイオン又は
ヒドロキシルアミンを含む試料においても微量濃度のカ
リウムイオンを定量することができる。本発明におい
て、試料はどのようなものでもよいが、血液、尿等の体
液を用いることができる。以下に本発明のカリウムイオ
ンの定量方法の好ましい態様について説明する。
ヒドロキシルアミンを含む試料においても微量濃度のカ
リウムイオンを定量することができる。本発明におい
て、試料はどのようなものでもよいが、血液、尿等の体
液を用いることができる。以下に本発明のカリウムイオ
ンの定量方法の好ましい態様について説明する。
【０００８】試料に必要により水性媒体を加えた後、１
〜１０ｍＭのＡＴＰ、１〜１０ｍＭのグルタミン酸、２
〜５０ｍＭのマグネシウム、１〜１００ＫＵ／ｌ、好ま
しくは１〜５０ＫＵ／ｌのグルタミンシンセターゼを添
加した後、２０〜４０℃で３〜５分間反応させ前処理を
行う。該反応液に、好ましくはキレート剤の存在下、
０．２〜５０ｍＭの補酵素、０．０５〜２ＫＵ／ｌのグ
リセロールデヒドロゲナーゼ、２〜５００ｍＭのグリセ
ロールデヒドロゲナーゼの基質を添加し、８〜５０℃で
１〜５分間反応させる。該グリセロールデヒドロゲナー
ゼ活性を測定することにより、対応するカリウムイオン
を定量することができる。なお、該反応に用いる補酵
素、グリセロールデヒドロゲナーゼ、グリセロールデヒ
ドロゲナーゼの基質のうち、少なくとも一つを前処理反
応の後に添加するのであれば、残りは前処理反応の前に
添加しておいてもよい。
〜１０ｍＭのＡＴＰ、１〜１０ｍＭのグルタミン酸、２
〜５０ｍＭのマグネシウム、１〜１００ＫＵ／ｌ、好ま
しくは１〜５０ＫＵ／ｌのグルタミンシンセターゼを添
加した後、２０〜４０℃で３〜５分間反応させ前処理を
行う。該反応液に、好ましくはキレート剤の存在下、
０．２〜５０ｍＭの補酵素、０．０５〜２ＫＵ／ｌのグ
リセロールデヒドロゲナーゼ、２〜５００ｍＭのグリセ
ロールデヒドロゲナーゼの基質を添加し、８〜５０℃で
１〜５分間反応させる。該グリセロールデヒドロゲナー
ゼ活性を測定することにより、対応するカリウムイオン
を定量することができる。なお、該反応に用いる補酵
素、グリセロールデヒドロゲナーゼ、グリセロールデヒ
ドロゲナーゼの基質のうち、少なくとも一つを前処理反
応の後に添加するのであれば、残りは前処理反応の前に
添加しておいてもよい。
【０００９】水性媒体としては、アンモニウムイオン、
カリウムイオンを含まない緩衝液であればどのようなも
のでもよく、グリシン緩衝液、トリス緩衝液、グッド緩
衝液、ベロナール緩衝液、バルビタール緩衝液、２０ｍ
Ｍ以下のホウ酸緩衝液等があげられる。これらの緩衝液
は、２０〜１０００ｍＭで、ｐＨは７〜９．５であるこ
とが好ましい。
カリウムイオンを含まない緩衝液であればどのようなも
のでもよく、グリシン緩衝液、トリス緩衝液、グッド緩
衝液、ベロナール緩衝液、バルビタール緩衝液、２０ｍ
Ｍ以下のホウ酸緩衝液等があげられる。これらの緩衝液
は、２０〜１０００ｍＭで、ｐＨは７〜９．５であるこ
とが好ましい。
【００１０】本発明に用いるグルタミンシンセターゼ
は、酵素番号6.3.1.2 に属するグルタミンシンセターゼ
であればどのようなものでもよく、動物の臓器、植物の
種子、微生物等から採取される天然の酵素又はそれらを
遺伝子操作等で改変したものがあげられる。キレート剤
としては、銅、銀、亜鉛、水銀、鉄等の重金属と結合で
きるものであればどのようなものでもよく、エチレンジ
アミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２−ヒドロキシエチルエチ
レンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、１，２−ジアミノ
シクロヘキサン四酢酸、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、ジ
エチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、グリコールエ
ーテルジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＧＥＤ
ＴＡ）、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、ジヒド
ロキシエチルグリシン（ＤＨＥＧ）、エチレンジアミン
二プロピオン酸塩酸塩（ＥＤＤＰ）、１，２−ビス（ｏ
−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テ
トラ酢酸テトラカリウム塩（ＢＡＰＴＡ）、ヒドロキシ
エチルイミノ二酢酸（ＨＩＤＡ）等があげられる。グル
タミンシンセターゼ反応時にキレート剤を共存させる場
合は、特にマグネシウムとの結合力が弱いＧＥＤＴＡ、
ＥＤＤＡ、ＤＨＥＧ、ＥＤＤＰ、ＨＩＤＡ、ＢＡＰＴＡ
を用いることが好ましい。これらのキレート剤の添加に
より、該定量方法の検量線の直線性を改善するとともに
定量濃度範囲の上限を広げることができる。
は、酵素番号6.3.1.2 に属するグルタミンシンセターゼ
であればどのようなものでもよく、動物の臓器、植物の
種子、微生物等から採取される天然の酵素又はそれらを
遺伝子操作等で改変したものがあげられる。キレート剤
としては、銅、銀、亜鉛、水銀、鉄等の重金属と結合で
きるものであればどのようなものでもよく、エチレンジ
アミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、２−ヒドロキシエチルエチ
レンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、１，２−ジアミノ
シクロヘキサン四酢酸、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、ジ
エチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、グリコールエ
ーテルジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＧＥＤ
ＴＡ）、エチレンジアミン二酢酸（ＥＤＤＡ）、ジヒド
ロキシエチルグリシン（ＤＨＥＧ）、エチレンジアミン
二プロピオン酸塩酸塩（ＥＤＤＰ）、１，２−ビス（ｏ
−アミノフェノキシ）エタン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テ
トラ酢酸テトラカリウム塩（ＢＡＰＴＡ）、ヒドロキシ
エチルイミノ二酢酸（ＨＩＤＡ）等があげられる。グル
タミンシンセターゼ反応時にキレート剤を共存させる場
合は、特にマグネシウムとの結合力が弱いＧＥＤＴＡ、
ＥＤＤＡ、ＤＨＥＧ、ＥＤＤＰ、ＨＩＤＡ、ＢＡＰＴＡ
を用いることが好ましい。これらのキレート剤の添加に
より、該定量方法の検量線の直線性を改善するとともに
定量濃度範囲の上限を広げることができる。
【００１１】補酵素としては、ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチド（ＮＡＤ）があげられる。またグリセロ
ールデヒドロゲナーゼの逆反応を用いるときには、還元
型ＮＡＤ（ＮＡＤＨ）を補酵素として用いる。本発明に
おいて、グリセロールデヒドロゲナーゼは、酵素番号1.
1.1.6 に属するグリセロールデヒドロゲナーゼであれば
どのような酵素でもよいが、細菌由来の酵素が好まし
く、これらの酵素を遺伝子操作、タンパク質修飾等によ
り改変した酵素でもよい。実施例に用いられた市販のグ
リセロールデヒドロゲナーゼは本発明の定量方法に好適
である。
ジヌクレオチド（ＮＡＤ）があげられる。またグリセロ
ールデヒドロゲナーゼの逆反応を用いるときには、還元
型ＮＡＤ（ＮＡＤＨ）を補酵素として用いる。本発明に
おいて、グリセロールデヒドロゲナーゼは、酵素番号1.
1.1.6 に属するグリセロールデヒドロゲナーゼであれば
どのような酵素でもよいが、細菌由来の酵素が好まし
く、これらの酵素を遺伝子操作、タンパク質修飾等によ
り改変した酵素でもよい。実施例に用いられた市販のグ
リセロールデヒドロゲナーゼは本発明の定量方法に好適
である。
【００１２】グリセロールデヒドロゲナーゼの基質とし
ては、通常グリセロール、１，２−プロパンジオール、
２，３−ブタンジオールを用いるが、グリセロールデヒ
ドロゲナーゼの逆反応を用いるときは、基質にジヒドロ
キシアセトン（２量体）等を用いる。グリセロールデヒ
ドロゲーゼ活性の測定法はどのようなものでもよいが
（酵素ハンドブック、丸尾文治ら編、1982年、朝倉書店
刊）、正反応の場合は生成するＮＡＤＨ量又はＮＡＤＰ
Ｈ量の変化、逆反応の場合は減少するＮＡＤＨ量の変化
を定量することにより、該酵素活性を測定する。なお、
逆反応を用いる場合は、内因性のグリセロールを消去す
る前処理を行うか、基質を過剰に加える必要がある。
ては、通常グリセロール、１，２−プロパンジオール、
２，３−ブタンジオールを用いるが、グリセロールデヒ
ドロゲナーゼの逆反応を用いるときは、基質にジヒドロ
キシアセトン（２量体）等を用いる。グリセロールデヒ
ドロゲーゼ活性の測定法はどのようなものでもよいが
（酵素ハンドブック、丸尾文治ら編、1982年、朝倉書店
刊）、正反応の場合は生成するＮＡＤＨ量又はＮＡＤＰ
Ｈ量の変化、逆反応の場合は減少するＮＡＤＨ量の変化
を定量することにより、該酵素活性を測定する。なお、
逆反応を用いる場合は、内因性のグリセロールを消去す
る前処理を行うか、基質を過剰に加える必要がある。
【００１３】なお、本発明においては水性媒体中に、ポ
リエチレングリコールアルキルフェニルエーテル、ポリ
オキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物等の界面活
性剤、アルブミン、塩化マグネシウム、塩化カルシウム
等の可溶化剤等を加えてもよい。
リエチレングリコールアルキルフェニルエーテル、ポリ
オキシエチレンポリオキシプロピレン縮合物等の界面活
性剤、アルブミン、塩化マグネシウム、塩化カルシウム
等の可溶化剤等を加えてもよい。
【００１４】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に具体的に説
明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定される
ものではない。 （実施例１） 夾雑物存在下での定量 （１）カリウムイオン検量線用標準液の調製 塩化ナトリウム（和光純薬工業製）及び塩化カリウム
（和光純薬工業製）を蒸留水で希釈し、カリウム濃度
２、４、６ｍＭ、ナトリウム濃度１４０ｍＭのナトリウ
ムマトリックスのカリウムイオン検量線用標準液を調製
した。 （２）カリウムイオンの定量 試験管にカリウムイオン検量線用標準液０．０４０ｍｌ
及び塩化アンモニウム（和光純薬工業製）２ｍＭ水溶液
０．０４０ｍｌを入れた（対照試験は塩化アンモニウム
非添加）。この試料液にグルタミンシンセターゼ（ユニ
チカ製）１６Ｕ／ｍｌ、Ｌ−グルタミン酸（和光純薬工
業製）１．２ｍｇ／ｍｌ、塩化マグネシウム（和光純薬
工業製）０．５ｍｇ／ｍｌ、ＡＴＰ（オリエンタル酵母
工業製）２ｍｇ／ｍｌ、ＮＡＤ（オリエンタル酵母工業
製）２ｍｇ／ｍｌ、グリセロール（ベーリンガーマンハ
イム製）１２ｍｇ／ｍｌ含有３００ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ８．５、２５℃）２．０ｍｌを加え３７℃で５分
間インキュベーションしアンモニウムイオンを消去し
た。
明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定される
ものではない。 （実施例１） 夾雑物存在下での定量 （１）カリウムイオン検量線用標準液の調製 塩化ナトリウム（和光純薬工業製）及び塩化カリウム
（和光純薬工業製）を蒸留水で希釈し、カリウム濃度
２、４、６ｍＭ、ナトリウム濃度１４０ｍＭのナトリウ
ムマトリックスのカリウムイオン検量線用標準液を調製
した。 （２）カリウムイオンの定量 試験管にカリウムイオン検量線用標準液０．０４０ｍｌ
及び塩化アンモニウム（和光純薬工業製）２ｍＭ水溶液
０．０４０ｍｌを入れた（対照試験は塩化アンモニウム
非添加）。この試料液にグルタミンシンセターゼ（ユニ
チカ製）１６Ｕ／ｍｌ、Ｌ−グルタミン酸（和光純薬工
業製）１．２ｍｇ／ｍｌ、塩化マグネシウム（和光純薬
工業製）０．５ｍｇ／ｍｌ、ＡＴＰ（オリエンタル酵母
工業製）２ｍｇ／ｍｌ、ＮＡＤ（オリエンタル酵母工業
製）２ｍｇ／ｍｌ、グリセロール（ベーリンガーマンハ
イム製）１２ｍｇ／ｍｌ含有３００ｍＭトリス緩衝液
（ｐＨ８．５、２５℃）２．０ｍｌを加え３７℃で５分
間インキュベーションしアンモニウムイオンを消去し
た。
【００１５】次に、グリセロールデヒドロゲナーゼ（オ
リエンタル酵母工業製）を１Ｕ／ｍｌ、３７℃で予めイ
ンキュベートしておいた３０ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
Ｍトリス緩衝液（ｐＨ９．０、２５℃）１ｍｌを前記溶
液に添加し、攪拌した後、３４０ｎｍにおける吸光度変
化量を分光光度計（日立製作所製：ＵＶ３４００）で測
定した。得られた検量線を図１に示した。
リエンタル酵母工業製）を１Ｕ／ｍｌ、３７℃で予めイ
ンキュベートしておいた３０ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍ
Ｍトリス緩衝液（ｐＨ９．０、２５℃）１ｍｌを前記溶
液に添加し、攪拌した後、３４０ｎｍにおける吸光度変
化量を分光光度計（日立製作所製：ＵＶ３４００）で測
定した。得られた検量線を図１に示した。
【００１６】図１に示された検量線は、対照試験で得ら
れた検量線と一致したため、アンモニア等夾雑物存在下
においても、適切な夾雑物の消去法を用いればカリウム
イオンを正確に定量することができることを示してい
る。また、得られた検量線による検出限界は、参考例１
に示した塩化アンモニウム不存在下でグルタミンシンセ
ターゼによる前処理を行わない測定法の検出限界と差が
なかった。
れた検量線と一致したため、アンモニア等夾雑物存在下
においても、適切な夾雑物の消去法を用いればカリウム
イオンを正確に定量することができることを示してい
る。また、得られた検量線による検出限界は、参考例１
に示した塩化アンモニウム不存在下でグルタミンシンセ
ターゼによる前処理を行わない測定法の検出限界と差が
なかった。
【００１７】（実施例２） 血清中のカリウムイオンの
定量 試験管に血清試料〔炎光光度法で４．４ｍＭのカリウム
イオンを含むことが確認されている〕０．０４０ｍｌを
とり、これにグルタミンシンセターゼ（ユニチカ製）１
０Ｕ／ｍｌ、Ｌ−グルタミン酸（和光純薬工業製）５ｍ
Ｍ／ｌ、硫酸マグネシウム（和光純薬工業製）５ｍＭ／
ｌ、ＡＴＰ（オリエンタル酵母工業製）５ｍＭ／ｌ、Ｎ
ＡＤ（オリエンタル酵母工業製）２．５ｍＭ／ｌ、グリ
セロール（ベーリンガーマンハイム製）１０ｇ／ｌ含有
２５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ９．０、２５℃）２．０
ｍｌを加え３７℃で５分間インキュベーションしアンモ
ニウムイオンを消去した。
定量 試験管に血清試料〔炎光光度法で４．４ｍＭのカリウム
イオンを含むことが確認されている〕０．０４０ｍｌを
とり、これにグルタミンシンセターゼ（ユニチカ製）１
０Ｕ／ｍｌ、Ｌ−グルタミン酸（和光純薬工業製）５ｍ
Ｍ／ｌ、硫酸マグネシウム（和光純薬工業製）５ｍＭ／
ｌ、ＡＴＰ（オリエンタル酵母工業製）５ｍＭ／ｌ、Ｎ
ＡＤ（オリエンタル酵母工業製）２．５ｍＭ／ｌ、グリ
セロール（ベーリンガーマンハイム製）１０ｇ／ｌ含有
２５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ９．０、２５℃）２．０
ｍｌを加え３７℃で５分間インキュベーションしアンモ
ニウムイオンを消去した。
【００１８】次に、予め３７℃にプレインキュベーショ
ンしたグリセロールデヒドロゲナーゼ（オリエンタル酵
母工業製）１．２Ｕ／ｍｌ、２５ｍＭＥＤＴＡを含む１
００ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ９．０、２５℃）１ｍｌを
前記溶液に添加し、攪拌した後、３４０ｎｍにおける吸
光度変化量（反応開始４〜５分）を分光光度計（日立製
作所製：ＵＶ３４００）で測定し、検量線からカリウム
イオン量を測定した。血清中には４．６ｍＭのカリウム
イオンが存在することが確認された。
ンしたグリセロールデヒドロゲナーゼ（オリエンタル酵
母工業製）１．２Ｕ／ｍｌ、２５ｍＭＥＤＴＡを含む１
００ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ９．０、２５℃）１ｍｌを
前記溶液に添加し、攪拌した後、３４０ｎｍにおける吸
光度変化量（反応開始４〜５分）を分光光度計（日立製
作所製：ＵＶ３４００）で測定し、検量線からカリウム
イオン量を測定した。血清中には４．６ｍＭのカリウム
イオンが存在することが確認された。
【００１９】（参考例１） 夾雑物不存在下で前処理を
行わない定量 （１）カリウムイオン検量線用標準液の調製 塩化カリウム（和光純薬工業製）を蒸留水で希釈し２、
４、６ｍＭのカリウム検量線用標準液を調製した。 （２）カリウムイオンの定量 試験管にカリウムイオン検量線用標準液０．０４０ｍｌ
をとり、これにＮＡＤ（オリエンタル酵母工業製）１．
６ｍｇ／ｍｌ、グリセロール（ベーリンガーマンハイム
製）１０ｍｇ／ｍｌ及び２０ｍＭＥＤＴＡを含む３００
ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．５、２５℃）を加えた。次
に、グリセロールデヒドロゲナーゼ（オリエンタル酵母
工業製）１Ｕ／ｍｌを含む水溶液１ｍｌを前記溶液に添
加し、攪拌した後、３４０ｎｍにおける吸光度の変化量
を分光光度計（日立製作所製：ＵＶ３４００）で測定し
た。
行わない定量 （１）カリウムイオン検量線用標準液の調製 塩化カリウム（和光純薬工業製）を蒸留水で希釈し２、
４、６ｍＭのカリウム検量線用標準液を調製した。 （２）カリウムイオンの定量 試験管にカリウムイオン検量線用標準液０．０４０ｍｌ
をとり、これにＮＡＤ（オリエンタル酵母工業製）１．
６ｍｇ／ｍｌ、グリセロール（ベーリンガーマンハイム
製）１０ｍｇ／ｍｌ及び２０ｍＭＥＤＴＡを含む３００
ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．５、２５℃）を加えた。次
に、グリセロールデヒドロゲナーゼ（オリエンタル酵母
工業製）１Ｕ／ｍｌを含む水溶液１ｍｌを前記溶液に添
加し、攪拌した後、３４０ｎｍにおける吸光度の変化量
を分光光度計（日立製作所製：ＵＶ３４００）で測定し
た。
【００２０】
【発明の効果】本発明により、アンモニウムイオン又は
ヒドロキシルアミンを含む試料においても微量濃度のカ
リウムイオンを定量することが可能な、グリセロールデ
ヒドロゲナーゼを用いたカリウムイオンの定量方法が提
供される。
ヒドロキシルアミンを含む試料においても微量濃度のカ
リウムイオンを定量することが可能な、グリセロールデ
ヒドロゲナーゼを用いたカリウムイオンの定量方法が提
供される。
【図１】本発明方法により得られたカリウムイオンの検
量線。
量線。
Claims (3)
- 【請求項１】 試料中のカリウムイオンをグリセロール
デヒドロゲナーゼを用いて定量する方法において、試料
を、グルタミン酸及びアデノシン三リン酸の存在下、グ
ルタミンシンセターゼで前処理することを特徴とするカ
リウムイオンの定量方法。 - 【請求項２】 試料がアンモニウムイオンを含むもので
ある請求項１記載の定量方法。 - 【請求項３】 試料が体液である請求項１記載の定量方
法。
Priority Applications (4)
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|---|---|---|---|
| JP6005955A JPH07203991A (ja) | 1994-01-24 | 1994-01-24 | カリウムイオンの定量方法 |
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| EP95906491A EP0744468A4 (en) | 1994-01-24 | 1995-01-20 | METHOD FOR DETERMINING POTASSIUM IONS |
| US08/666,521 US5719036A (en) | 1994-01-24 | 1995-01-20 | Quantitative determination method for potassium ions |
Applications Claiming Priority (1)
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| JP6005955A JPH07203991A (ja) | 1994-01-24 | 1994-01-24 | カリウムイオンの定量方法 |
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| JPH07203991A true JPH07203991A (ja) | 1995-08-08 |
Family
ID=11625324
Family Applications (1)
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