CN1163938A - 一种定量测定肌酸激酶的方法及其所用的试剂 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是提供一种用于定量测定肌酸激酶且在溶液状态下耐贮性提高的试剂以及定量测定肌酸激酶并测量稳定的方法。所公开的是，定量测定肌酸激酶的方法，它包括：激活水培养基中样本的肌酸激酶，与三价磷化合物和含硫氢基化合物共存，然后测定肌酸激酶的活性；稳定含硫氢基化合物的方法，包括将三价磷化合物与含硫氢基化合物共存；以及用于定量测定肌酸激酶的试剂，它包括三价磷化合物、含硫氢基化合物和肌酸激酶的反应底物。

Description

一种定量测定肌酸激酶 的方法及其所用的试剂

本发明涉及一种定量测定肌酸激酶的方法。本发明还涉及一种用于稳定硫氢基化合物的方法以及一种定量测定肌酸激酶的试剂，它含有稳定的硫氢基化合物。

肌酸激酶存在于全身的肌肉组织和大脑中，肌酸激酶活性的测定是临床诊断肌肉疾病、神经疾病、脑病和心脏疾病的常规检查的基本项目之一。

肌酸激酶[EC2.7.3.2]是一种催化下面反应(I)的酶 其中CK是肌酸激酶，CP是磷酸肌酸，ADP是腺苷二磷酸，C是肌酸，以及ATP是三磷酸腺苷。

通常，定量测定肌酸激酶有多种不同的方法。一种方法是用多种方式测定反应(I)向左时形成的磷酸肌酸或腺苷二磷酸(以下称ADP)来定量测定肌酸激酶的活性。

测定磷酸肌酸的一种常用方法是测定水解所得的无机磷酸测定腺苷二磷酸的已知方法是在磷酸烯醇丙酮酸存在下将丙酮酸激酶作用于腺苷二磷酸，然后将所得的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼进行反应，接着测定所得的腙；或者，在还原型辅酶II[以下称NAD(P)H]存在下将乳酸脱氢酶作用于上述的丙酮酸形成辅酶II[以下称NAD(P)]，然后进行测定。

另一种方法是用多种方式测定反应(I)向右时形成的肌酸或三磷酸腺苷(以下称为ATP)来定量测定肌酸激酶的活性。

测定肌酸的已知方法是与如一种色素发生反应。本领域技术人员所熟知的测定三磷酸腺苷的方法是用萤光素酶(日本公开未审专利申请号105,199/82)，或在3-磷酸-D-甘油酸和NAD(P)H存在下将磷酸甘油酸激酶和甘油醛磷酸脱氢酶作用于三磷酸腺苷，然后测定所得到的NAD(P)(日本公开未审专利申请号34,119/84)，或者在葡萄糖和NAD(P)存在下将已糖激酶或葡萄激酶和葡糖-6-磷酸脱氢酶作用于三磷酸腺苷，然后测定所得到的NAD(P)H[测定人血中的肌酸激酶的推荐方法，“Rinsho Kagaku”(ClinicalChemistry，19(2)，184，(1990)(以下称作“推荐方法”)]。

由于人们知道血清中的大多数肌酸激酶是以非活性形式存在的，为了精确定量测定其活性，首先必须激活这些酶。众所周知在水培养基中有一种激活剂存在下预温育肌酸激酶从而使无活性形式的肌酸激酶激活。常用的激活剂为含硫氢基的化合物如N-乙酰半胱氨酸、二硫苏糖醇、还原型谷胱甘肽和疏基乙醇等。

但是，用于定量测定肌酸激酶的试剂组分包括用作肌酸激酶激活剂的一种含硫氢基化合物，此组分在水培养基中稳定性差，且用一种溶解于水培养基的试剂测得的肌酸激酶的活性在试剂长期贮存时会逐渐减弱，因此难以将溶于水培养基的试剂作为实际的测定方式。

这种弱稳定性主要是导致用作肌酸激酶激活剂的含硫氢基化合物特别是N-乙酰半胱氨酸渐渐氧化形成一种二硫化物。众所周知这种二硫化物，尤其是N-乙酰半胱氨酸会抑制肌酸激酶的活性[ClinicalChemistry，22(5)，650，(1976)]。为了提高这种N-乙酰半胱氨酸的稳定性，已知可将除N-乙酰半胱氨酸的含硫氢基化合物与N-乙酰半胱氨酸共存(Japanese ExaminedPatent Publication No.38,600/93)，但尽管使用这种方法，仍难以长期维持这种化合物的稳定性，主要是由于共存的含硫氢基化合物本身稳定性差。

此外，通过用含硫氢基化合物在样本中激活肌酸激酶来定量测定肌酸激酶的常规方法具有如下缺点，即使由含硫氢基化合物如N-乙酰半胱氨酸生成的微量氧化物也能抑制肌酸激酶的活性，而且除N-乙酰半胱氨酸外的一些含硫氢基化合物不仅激活样本中肌酸激酶且激活其它激酶，从而导致定量测定的误差。因此，需要找到一种定量测定肌酸激酶的更为优秀的方法。

近来，发现了许多用于临床检验的溶于水培养基的试剂，如未冻干试剂，这些试剂市场上可以买到。本发明的目的在于提供一种测定误差较小的定量测定肌酸激酶的方法，以及具有极好稳定性的用于定量测定肌酸激酶的试剂。

进一步研究的结果，本发明人发现在定量测定由含硫氢基化合物激活的肌酸激酶的方法中加入一种三价磷的化合物可以稳定地定量测定肌酸激酶，且三价磷化合物与一种定量测定肌酸激酶的试剂包括含硫氢基化合物共存可使含硫氢基化合物稳定，用贮存的试剂可抑制所测的肌酸激酶活性的下降。

根据本发明所述，提供了一种定量测定样本中肌酸激酶的方法，包括将样本中的肌酸激酸与水培养基中的三价磷化合物和含硫氢基化合物共存以激活肌酸激酶，然后测定被激活的肌酸激酶的活性；一种将三价磷化合物与含硫氢基化合物共存以激活肌酸激酶，然后测定被激活的肌酸激酶的活性，一种将三价磷化合物与含硫氢基化合物共存，使含硫氢基化合物稳定的方法；以及用于定量测定肌酸激酶的试剂，它包括三价磷化合物、含硫氢基化合物和肌酸激酶的反应底物。

本发明可使含硫氢基化合物保持稳定并提供了测定肌酸激酶用的试剂，该试剂即使长期存于水培养基中也有极好的稳定性。而且，还提供了定量测定肌酸激酶的方法且提高了测定的稳定性。

根据本发明所述，通过将一种三价磷化合物与含硫氢基化合物共存可使含硫氢基化合物稳定。

本发明所用的三价磷化合物包括膦，二膦等。

这里所说的膦包括取代的或未取代的膦。未取代的膦为PH₃(膦)。取代的膦可以有1至3个相同或不同的取代基，例如，可以选自于取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳香基、取代的或未取代的芳香族杂环基、取代的或未取代的氨基、取代的或未取代的氨基甲酰、取代的或未取代的烷氧基、取代的或未取代的酰基、取代的或未取代的磺基，等等。被1、2、3个取代基取代的取代膦分别是指伯膦、仲膦和叔膦。

这里所说的二膦包括取代的或未取代的二膦。未取代的二膦为P₂H₄(二膦)。取代的二膦可以有1至4个相同或不同的取代基，例如，可以选自于取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳香基、取代的或未取代的芳香族杂环基、取代的或未取代的氨基、取代的或未取代的氨基甲酰、取代的或未取代的烷氧基、取代的或未取代的酰基、取代的或未取代的磺基，等。

取代的或未取代的烷基中的烷基部分可以是含1至10个碳原子的直链或支链烷基，优选1至6个碳原子。如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等。

取代的烷基可以有1至3个相同或不同的取代基，例如，可从芳香基，芳香族杂环基、烷氧基、酰基、氨基、羟基、羧基、磺基、磷酰、氰基、卤素等中选择。

取代烷基中的芳香基包括苯基、萘基等。芳香族杂环基团包括吡啶基、嘧啶基、萘胺基(naphthilydinyl)、呋喃基、噻吩基、吡唑啉基、咪唑基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基等。烷氧基中的烷基部分与上述的含义相同。酰基可以是含1至6个碳原子的直链或支链的链烷醇，如包括甲酰、乙酰、丙酰、丁酰、异丁酰、戊酰、异戊酰、新戊酰等。芳香基包括苯酰、萘酰、糠酰、噻吩甲酰、烟碱等。卤素指氟、氯、溴或碘。

取代的或未取代的芳香基中的芳香基部分与上述含义相同。取代的芳香基可有1至5个相同或不同的取代基，如可选自于烷基、烷氧基、酰基、羧基、烷氧羰基、氰基、氨基、磺基、磷酰、卤素等。烷基、烷氧基、酰基和卤素与上述含义相同，烷氧羰基中烷基部分与上述的含义一样。

取代的或未取代的芳香族杂环基中的芳香族杂环基部分与上述的含义相同。取代的芳香族杂环基可以有1至3个相同或不同的取代基，这些取代基与上述取代的芳香基的取代基相同。

取代的氨基或取代的氨基甲酰可以有1至2个相同或不同的取代基，如可从以下选择，取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳香基、取代的或未取代的芳香族杂环基、酰基、烷氧羰基等。

取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳香基、取代的或未取代的芳香族杂环基、酰基、烷氧羰基与上述的含义相同。

取代的或未取代的烷氧基中的烷氧基部分与上述的含义相同。取代的烷氧基可以有1至2个相同或不同的取代基，例如可以选自于氨基、羟基、磺基、磷酰、氰基、卤素等。卤素的含义与上述相同。

取代的磺基可以有一个取代基，它可选自于取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳香基、取代的或未取代的芳香族杂环基，等等。

取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的芳香基、取代的或未取代的芳香族杂环基的含义与上述相同。

伯膦包括如甲基膦、乙基膦、丙基膦、异丁基膦、苯基膦、2-萘基膦、2-苯并呋喃膦、2-乙胺膦、4-(膦甲基)咪唑、1，2，4-丁三醇三(膦)、(苯磺酰基)膦、氨基甲酰膦等。

仲瞵包括如二甲膦、二乙膦、二异丙基膦、二异戊基膦、二苯基膦、3，3′-膦二基二丙酸，4-(膦甲基)咪唑、4，4′-膦二基二苯甲酸等。

叔膦包括如三甲膦、三乙膦、三丁基膦、三己基膦、三苯基膦、甲基二苯基膦、二甲基苯基膦、膦三基三二甲胺、膦三基三二乙胺、三(2-甲苯基)膦、三(3-甲苯基)膦、三(4-甲苯基)膦、三(4-甲氧苯基)膦、膦三基三乙酸、3，3′，3″-膦三基三丙酸、4，4′，4″-膦三基三苯甲酸、三(羟甲基)膦、2，2′，2″-膦三基三乙基氰化物、乙基(苯基)丙基膦、乙酰基二乙基膦等。

这儿所提及的膦可从Tokyo Kasei Kogyo K.K.，Pierce Co.，Ltd.，等的商品中容易买到。

含硫氢基的化合物是肌酸激酶的激活剂，且任何一种激活肌酸激酶的含硫氢基化合物均可用于本发明中。含硫氢基的化合物的例子包括，例如，氨基酸或肽如N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、还原型谷胱甘肽等；醇如二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、疏基乙醇、硫甘油等；羧酸如疏基乙酸等；糖化物如硫葡糖等；硫脲鎓盐如2-氨乙基异硫脲鎓溴化物等。含硫氢基化合物中特别优选N-乙酰半胱氨酸。可以将两种或两种以上的这些含硫氢基化合结合在一起使用。

水培养基包括如缓冲液、含生理盐水的液体等，其中优选缓冲液。

只要缓冲液不抑制肌酸激酶活化和肌酸激酶的活性，缓冲液可以是任何一种。例如Tris-HCl缓冲盐、咪唑-醋酸盐缓冲液、磷酸缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、苹果酸盐缓冲液、草酸盐缓冲液、酞酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、醋酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、Good缓冲液等。

为了使水培养基中的含硫氢基化合物稳定，对于1mM的含硫氢基化合物，应加入0.005至5mM的三价磷化合物，优选0.01至2mM。

根据本发明所述定量测定肌酸激酶的试剂包括三价磷化合物、含硫氢基化合物以及肌酸激酶的反应底物，如需要该试剂还可包括其他酶的反应底物、酶、辅酶、激活剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂、着色剂等。

根据反应的方向不同，肌酸激酶的反应底物可以是肌酸磷酸和ADP，或者肌酸和ATP。

其它酶的底物包括如3-磷酸-D-甘油酸、葡萄糖、磷酸烯醇丙酮酸、虫荧光素等。

酶包括，如己糖激酶、葡糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、黄递酶、超氧歧化酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶、虫荧光素酶等。

辅酶包括，如辅酶II、还原型辅助酶II等。

激活剂包括，如镁盐，如醋酸镁、硫酸镁等。

防腐剂包括，如常用的为叠氮化钠。

稳定剂包括，如金属螯合剂，比如乙二胺四乙酸(以下称作EDTA)等，以及其它常用的稳定剂比如，多糖如可溶性淀粉及其衍生物，蛋白质如白蛋白、球蛋白等，水溶性高分子化合物如聚乙二醇等。也可包括羟胺及其盐，和醛净化剂及其盐，有报道用葡糖-6-磷酸脱氢酶(日本公开未审专利申请号59,566/95)，和腺苷-5′-磷酸(以下称为AMP)以及P¹，P⁵-二腺苷-5¹-五磷酸(以下称为AP5A)作为稳定剂能抑制样本中其它酶如腺苷酸激酶的作用。

表面活性剂包括，如三硝基甲苯X-100等。

着色剂包括，如2，4-二硝基酚肼等。

根据本发明所述用于定量测定肌酸激酶的试剂可以用作所谓的“一种试剂”体系，但如为了便于自动分析等的需要则可将其划分为“两种试剂”体系。

也即是说，定量测定肌酸激酶用的试剂可以试剂盒的形式出现，包括：(1)包括三价磷的化合物和含硫氢基的化合物的试剂和(2)包含肌酸激酶的反应底物的试剂。盒中的每一种试剂进一步优选包含一种水培养基。

水培养基包括，如缓冲液、含生理盐水的液体等，其中优选缓冲液。

所用的缓冲液可为任意一种，只要它不会抑制肌酸激酶活化和肌酸激酶的活性。例如Tris-HCl缓冲液、咪唑-醋酸盐缓冲液、磷酸缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、苹果酸盐缓冲液、草酸盐缓冲液、酞酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、醋酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、Good′s缓冲液等，优选咪唑-醋酸盐缓冲液。

缓冲液的浓度优选1mM至2M，更好的优选为10至200mM。

三价磷的化合物的浓度优选0.01至500mM，更好的优选为0.05至250mM，最佳优选为0.1至150mM。含硫氢基化合物的浓度优选0.1至100mM，更好的优选为0.5至50mM，最佳优选为1至30mM。

如果所推荐的方法适用于肌酸激酶的测定，那么试剂优选试剂盒的形式，包括：(1)一种试剂(以下称试剂1)含缓冲液、三价磷化合物、含硫氢基化合物、己糖激酶或葡糖激酶、葡糖-6-磷酸脱氢酶、辅酶II、葡萄糖、腺苷二磷酸且可任意选择一种激活剂、防腐剂、稳定剂、缓冲液等。和(2)一种试剂(以下称试剂2)包括磷酸肌酸和任选一种稳定剂等。

试剂1的实例包括，三价磷化合物，优选0.01至500mM，更好的优选为0.05至250mM，最佳优选为0.1至150mM；含硫氢基化合物，优选0.1至100mM，更好的优选为0.5至50mM，最佳优选为1至30mM；己糖激酶(或葡糖激酶)优选0.1至40U/ml，更好的优选为0.2至20U/ml；葡糖-6-磷酸脱氢酶优选0.1至40U/ml，更好的优选为0.2至20U/ml；腺苷二磷酸优选0.1至20mM，更好的优选为0.2至10mM；辅酶II优选0.05至20mM，更好的优选为0.1至10mM；葡萄糖优选1至200mM，更好的优选为2至100mM；镁盐为0.5至30mM，更好的优选为2至15mM；腺苷-5′-磷酸优选0.2至20mM，更好的优选为0.5至15mM，P¹，P⁵-二腺苷-5¹-五磷酸优选1至100mM，更好的优选为2至50mM，乙二胺四乙酸优选0.1至20mM，更好的优选为0.2至10mM；叠氮化钠优选0.5至50mM，更好的优选为1至30mM；以及咪唑-醋酸盐缓冲液优选1mM至2M，更好的优选为10至200mM。

试剂2的实例包括磷酸肌酸。磷酸肌酸的浓度优选15至1000mM，更好的优选为30至700mM。

使用时优选试剂1的量为1至20体积，试剂2为1体积。

按照常规，本发明的试剂可包括未举例说明的添加剂，如激活剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、酶、着色剂、表面活性剂。

虽然本发明的试剂的部分或全部成分可以冻干形式提供，溶解后再复原，但优选的为液体试剂。

根据本发明定量测定样本中肌酸激酶的方法可照下述进行，将样本中的肌酸激酶与水培养基中的三价磷化合物和含硫氢基化合物共存，从而激活矶酸激酶；然后测定被激活的肌酸激酶的活性。

作为样本，可以使用含有肌酸激酶的任何样本。样本包括血浆、血清等，还包括用提取液从脑、肌肉、心脏得到的提取物等。提取中所用的提取液包括水、盐水、上述的缓冲液等。

激活样本中的肌酸激酶的步骤可依如下进行：将含肌酸激酶的样本加入包含含硫氢基化合物、三价磷化合物和其它任意的激活剂、防腐剂、稳定剂等的水培养基中，然后在10至50℃预温育所得的水培养基1至15分钟，优选25至40℃预温育3至6分钟。

样本中的肌酸激酶经预温育被激活后，将含肌酸激酶的反应底物的试剂加入水培养基中，这样所形成的水培养基在10至50℃温育1至15分钟，优选于25至40℃温育3至6分钟。通过测定由底物所形成的产物的浓度便可测得肌酸激酶的活性。尽管产物的浓度可用本领域技术人员所熟知的方法直接测定，但也可以将本领域技术人员所熟知的方法中的产物转化为另一种化合物，再用本领域技术人员所熟知的方法测定其浓度。

为了测定肌酸激酶，优选采用上述所推荐的方法，由于它极具原理、具有敏感性、可重复性、适用于自动分析和处理大量样本的特点，因而最为常用。

以下详细阐述所推荐的方法。

此方法的原理如下面的反应式(II)所示：

                                 (II)其中HK的己糖激酶，G6PDH为葡糖-6-磷酸脱氢酶，G是葡萄糖，G6P为葡糖-6-磷酸，6PGA的6-磷酸葡糖酸。

样本中的肌酸激酶测定如下，将样本加入包括含硫氢基的化合物、三价磷化合物、己糖激酶(或葡糖激酶)，葡糖-6-磷酸脱氢酶、腺苷二磷酸、辅酶II、葡萄糖、咪唑-醋酸盐缓冲液和任意的前面所述的激活剂、防腐剂、稳定剂等的试剂中，然后于10至50℃预温育1至15分钟，优选在25至40℃预温育3至6分钟。

样本中的肌酸激酶经预温育被激活后，将作为肌酸激酶的反应底物的含磷酸肌酸的试剂加入样本中，再将样本在10至50℃温育1至15分钟，优选于25至40℃温育3至6分钟，然后通过在340nm对产物还原型辅酶II进行光学测定，从而测出肌酸激酶的活性。或者，还原型辅酶II可在与另一种化合物如四唑盐反应后再测定，或通过将还原型辅酶II与另一种化合物反应生成过氧化氢再测定(日本公开未审专利申请号248,399/88)，或者用黄递酶[EC1.6.99.1或2]或超氧歧化酶[EC1.15.1.1]催化还原型辅酶II的反应可以生成过氧化氢(日本公开未审专利申请号128,799/89)。

使用的己糖激酶包括，如来源于酶母、遗传上重组酵母、芽孢杆菌等。葡糖激酶较己糖激酶具有较高的专一性，它也可使用。不论什么来源的任何葡糖激酶均可使用。而且，也可以使用无论什么来源的葡糖-6-磷酸脱氢酶。

                         实施例

下面所提及的实施例是对本发明详细说明，而不是限定本发明的范围。实施例1

制备含下述组分的试液。试液I：

咪唑-醋酸盐缓冲液(PH6.6)   115mM

乙二胺四乙酸               2.3mM

醋酸镁                     11.5mM

N-乙酰半胱氨酸             23mM

腺苷二磷酸                 2.3mM

腺苷一磷酸                 5.8mM

P¹，P⁵-二脲苷-5¹-五磷酸11.5μm

盐酸羧基甲氧胺             10mM

葡萄糖                     23mM

辅酶II                     2.3mM

己糖激酶                   3.45U/ml

葡糖-6-磷酸脱氢酶          1.725U/ml试液II：

磷酸肌酸                   345mM

制备后立即将表1中的磷酸化合物按所示的浓度加入试液I中，再在10℃贮存6个月(贮存剂)。6个月后，制备一种含同样成分的试剂(新鲜试剂)，根据本方法“Rinsho Kagako”将贮存的和新鲜的试剂都用于在标准血清中的肌酸激酶的活性(ClinicalChemistry，19(2)，184，1990)，如下：将50μl标准血清加入2.25ml试液I中，将此混合物在37℃预温育5分钟，然后再加入试液II，置于分光光度计的反应池中保持37℃。两分钟后，由于反应溶液在340nm有吸收，对它监测的时间要超过3分钟。按常用的方法用吸收时随时间变化的还原型辅酶II的分子消退系数测定肌酸激酶的活性。结果如表1所示。贮存试剂的剩余试剂的活性以相对值表示，表明新鲜试剂的试剂活性为100％。

                       表1磷化合物                      浓度    剩余试剂活性

                          (％)        (％)无                                        52.0三苯膦                         1          87.5三(2-甲苯基)膦                 1          91.0三(3-甲苯基)膦                 1          90.4三(4-甲苯基)膦                 1          88.9三(4-甲氧苯基)磷               1          87.54，4′，4″-膦三基三苯甲酸     10         96.1三-n-丁膦                      1          84.0三-n-己膦                      1          84.6三(羟甲基)膦                   10         97.93，3′，3″-膦三基三丙酸       10         98.02，2′，2″-膦三基三乙基氰化物 10         97.3膦三基三二甲胺                 10         95.0膦三基三二乙胺                 10         94.3实施例2

制备含下列成分的试剂盒。试液I：

咪唑-醋酸盐缓冲液(PH6.6)   115mM

乙二胺四乙酸               2.3mM

醋酸镁                     11.5mM

N-乙酰半胱氨酸             23mM

腺苷二磷酸                 2.3mM

腺苷一磷酸                 5.8mM

P¹，P⁵-二脲苷-5¹-五磷酸11.5mM

盐酸羧基甲氧胺             10mM

葡萄糖                     23mM

辅酶II                     2.3mM

己糖激酶                   3.45U/ml

葡糖-6-磷酸脱氢酶          1.725U/ml

二硫苏糖醇                 10mM

3，3′，3″-膦三基三丙酸   10mM试液II：

磺酸肌酸                   345mM实施例3

将实施例2中所制备的试剂盒A在10℃贮存6个月。为了对比，制备一种与试剂盒A的成分相同但不含3，3′，3″-膦三基三丙酸的试剂(称作试剂盒B)并按同样的方式贮存。

贮存后，用试剂盒A和B按实施例1中同样的方法测定剩余试剂的活性。结果如表2所示。

          表2试剂盒            剩余试剂的活性(％)试剂盒B                 76.5试剂盒A                 96.6

Claims (16)

1 一种定量测定样本中肌酸激酶的方法，包括下列步骤：

将样本中的肌酸激酶与水培养基中的三价磷化合物和含硫氢基化合物共存，以激活肌酸激酶；然后测定被激活的肌酸激酶的活性。

2 根据权利要求1所述的方法，其中三价磷化合物选自于取代的或未取代的膦和取代的或未取代的二瞵。

3 根据权利要求1所述的方法，其中含硫氢基化合物为N-乙酰半胱氨酸。

4 根据权利要求1所述的方法，其中水培养基为缓冲液。

5 一种稳定水培养基中的含硫氢基化合物的方法，包括将三价磷化合物与含硫氢基化合物共存。

6 根据权利要求5所述的方法，其中三价磷化合物选自于取代的或未取代的膦以及取代的或未取代的二膦。

7 根据权利要求5所述的方法，其中含硫氢基化合物为N-乙酰半胱氨酸。

8 根据权利要求5所述的方法，其中水培养基为缓冲液。

9 一种定量测定肌酸激酶的试剂，包括三价磷化合物、含硫氢基化合物和肌酸激酶的反应底物。

10 根据权利要求9所述的试剂，其中三价磷化合物选自于取代的或未取代的膦以及取代的或未取代的二膦。

11 根据权利要求9所述的试剂，其中含硫氢基化合物为N-乙酰半胱氨酸。

12 根据权利要求9所述的试剂，还包括缓冲液。

13 一种定量测定肌酸激酶的试剂盒，包括含三价磷化合物和含硫氢基化合物的试剂以及含肌酸激酶反应底物的试剂。

14 根据权利要求13所述的试剂盒，其中三价磷化合物选自于取代的或未取代的膦以及取代的或未取代的二膦。

15 根据权利要求13所述的试剂盒，其中含硫氢基化合物为N-乙酰半胱氨酸。

16  根据权利要求13所述的试剂盒，其中试剂还包括缓冲液。