RU2131435C1 - Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы - Google Patents

Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы Download PDF

Info

Publication number
RU2131435C1
RU2131435C1 RU97119762A RU97119762A RU2131435C1 RU 2131435 C1 RU2131435 C1 RU 2131435C1 RU 97119762 A RU97119762 A RU 97119762A RU 97119762 A RU97119762 A RU 97119762A RU 2131435 C1 RU2131435 C1 RU 2131435C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
diphosphate
adenosine
triphosphatase
aza
aminopurinyl
Prior art date
Application number
RU97119762A
Other languages
English (en)
Inventor
Л.А. Баранова
Ю.В. Хропов
Г.М. Пронько
Е.В. Петушкова
Original Assignee
Биологический факультет Московского государственного университета им.М.В.Ломоносова
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Биологический факультет Московского государственного университета им.М.В.Ломоносова filed Critical Биологический факультет Московского государственного университета им.М.В.Ломоносова
Priority to RU97119762A priority Critical patent/RU2131435C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2131435C1 publication Critical patent/RU2131435C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

Соли-3'-амидопроизводных (1'R, 5'R)-3'-аза-1'(6-аминопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата формулы 1, где R - остаток формулы (а, б), Cat+ - катион щелочного металла, обладают более эффективным ингибирующим действием на миозиновую АТФазу и проявляют флуоресцентные свойства. 1 табл.
Figure 00000001

где
Figure 00000002

Description

Изобретение относится к новым химическим соединениям - солям 3'-амидопроизводных (1'R, 5'R)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозил- 6'-дифосфата общей формулы
Figure 00000005

где
Figure 00000006

или
Figure 00000007

Cat+ - катион щелочного металла,
в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин-5'-трифосфатазы (АТФазы).
Данные соединения могут быть использованы в биохимии, биофизике и молекулярной биологии для изучения строения и механизма действия миозиновой АТФазы с помощью спектрофлуориметрии.
Известно, что аденозин-5'-дифосфат оказывает специфическое ингибирующее действие на миозиновую АТФазу (Ki= ≃ 52 мкМ) [1].
Однако данное соединение не обладает флуоресцентными свойствами и оказывает недостаточно высокое ингибирующее действие на фермент.
Наиболее близким к описываемым является известное соединение -1, N6-этено-2-азааденозин-5'-дифосфат в качестве специфического флуоресцентного ингибитора миозиновой АТФазы (Ki= 26 мкМ) [2].
Однако данное соединение оказывает недостаточно эффективное ингибирующее действие на фермент.
Цель изобретения - создание новых соединений в ряду производных аденозин-5'-дифосфата, оказывающих более эффективное ингибирующее действие на миозиновую АТФазу и обладающих флуоресцентными свойствами.
Цель достигается солями 3'-амидопроизводных (1'R,5'R)-3'-аза-1'- (6-аминопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата вышеуказанной общей формулы в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой АТФазы.
Соединения вышеуказанной общей формулы получают способом, основанным на известной реакции циклизации продукта периодатного окисления аденозин-5'-дифосфата с гидразидами карбоновых кислот в водно-органической среде при pH 4,5 - 5,0 [3].
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Дилитиевая соль (1'-R,5'R)-аза-1'-(6-аминопуринил- 9)-3'-дезокси-3'-(1-гидроксинафталин-2-карбоксамидо) гексопиранозитл-6'-дифосфата (1).
К раствору 52 мг (0,1 ммоль) динатриевой соли оксо-аденозин-5'- дифосфата (x 3 H2O), очищенной от примеси иодата натрия, в 5 мл 1 М литий-ацетатного буфера (pH 5,0) при перемешивании добавляют раствор 26 мг (0,13 ммоль) 1-гидроксинафталин-2-карбонилгидразина в 5 мл диметилформамида. Полученный раствор перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре, затем упаривают при пониженном давлении и температуре ≤40oC досуха, остаток растворяют в 2 мл воды, фильтруют, фильтрат упаривают в вышеуказанных условиях до объема ≃ 0,5 мл и обрабатывают 5 мл охлажденной смеси безводный этанол - безводный диэтиловый эфир (3: 1, об.) Выпавший осадок отделяют центрифугированием, промывают безводным диоксаном, затем безводным диэтиловым эфиром и высушивают в вакууме в присутствии фосфорного ангидрида. Получают 41 мг целевого продукта (выход 62%).
Физико-химические свойства полученного соединения представленны в таблице 1.
Пример 2. Дилитиевая соль (1'R,5'R)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)- 3'-дезокси-3'-(N'-[5-(диметиламино)нафталин-1-сульфонил] гидразинокарбоксамидо)гексопиранозил-6'-дифосфата (II).
В условиях, аналогичных описанным в примере 1, из 40 мг (0,13 ммоль) N'-[5-(диметиламино)нафталин-1-сульфонил] карбогидразида получают 57 мг целевого продукта (выход 70%).
Физико-химические свойства полученного соединения представлены в таблице 1.
Пример 3. Дикалиевая соль (1'R,5'R)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил- 9)-3'- дезокси-3'-(1-гидроксинафталин-2-карбоксамидо)гексопиранозил-6'- дифосфата.
Раствор 34 мг продукта, полученного в примере 1, в 1 мл воды наносят на колонку с ионообменной смолой Дауэкс 50 х 8 (1 х 4 см, K+-форма). Целевой продукт элюируют водой, полученный раствор упаривают досуха при пониженном давлении, повторно упаривают с безводным этанолом, остаток растирают с безводным диэтиловым эфиром, отделяют и высушивают в присутствии фосфорного ангидрида. Получают 30 мг целевого продукта (выход 80%).
Физико-химические свойства полученного соединения представлены в таблице 1.
Пример 4. Динатриевая соль (1'R,5'R)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'-дезокси-3'-(1- гидроксинафталин-2-карбоксамидо)гексопиранозил-6'-дифосфата.
В условиях, аналогичных описанным в примере 1, используя 2 мл 1 М натрий-ацетатного буфера (pH 5,0), получают 47 мг целевого продукта (выход 67%).
Физико-химические свойства полученного соединения представлены в таблице 1 (см. в конце описания).
Изучение ингибирования аденозин-5'-трифосфатазной активности (КФ. 3.6.1.32) соединениями I и II проводили на миозине, выделенном из скелетных мышц кролика. Активность фермента определяли по накоплению неорганического фосфата в процессе реакции, катализируемой миозиновой аденозин-5'-трифосфатазой. В состав реакционной смеси входили: 25 мМ Трис-HCl (pH 7,8); 0,5 М KCl; 10 мМ CaCl2 и 2 - 4 мМ аденозин-5'-трифосфат (АТФ).
Реакцию начинали внесением в инкубационную смесь, термостатируемую при +20oC, препарата фермента до конечной концентрации 0,1 - 0,5 мг/мл и проводили 5 - 15 минут в зависимости от препарата фермента. Определение количества образовавшегося неорганического фосфата осуществляли известным способом.
Ингибирование аденозин-5'-трифосфатазной активности проводили в стандартных условиях определения активности данного фермента с добавлением в среду соединений I и II в концентрациях от 0,05 до 0,25 мМ. Эффект ингибирования наблюдали по падению аденозин-5'-трифосфатазной активности относительно пробы, не содержащей соединений I и II.
Ингибирование миозиновой аденозин-5'-трифосфатазы под действием соединений I и II охарактеризовано константами: Ki=13 и 16 мкМ соответственно.
Как указывалось выше, наиболее близким известным структурным аналогом соединений I и II является 1, N6-этено-2-азааденозин -5'-дифосфат, оказывающий специфическое ингибирующее действие на аденозин-5'-трифосфатазу (Ki= 26 мкМ) и обладающий флуоресцентными свойствами.
Как вытекает из сравнения вышеприведенных констант ингибирования, описываемые соединения оказывают более выраженное ингибирующее действие на аденозин-5'-трифосфатазу и расширяют ассортимент зондов для изучения данного фермента с помощью спектрофлуориметрии.
Источники информации.
1. R.G.Yоunt, D.Oiala, D.Babcork "Interaction of P-N-P and P-C-P analogs of adenosine triphosphate with heavy meromyosin, myosin, and actomyosin" Biоchemistry, 1971, 10 (13) 2490.
2 H.Miyata, H. Asai "1, N6 Etheno-2-azaadenosine Triphosphate: enormous iucrease in fluorescence intensity induced by its binding to heavy meromyosin and estimation of the kinetic parameters" Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1982, 105(1) 296.
3. F.Hannsske, F.Cramer "Untersuchungen zur Struktur perjodatoxydierter Ribonucleoside and Ribonucliotide" Carbohydrate Res., 1977, 54, 75.

Claims (1)

  1. Соли 3'-амидопроизводных (1'R,5'R)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'-дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата общей формулы
    Figure 00000008

    где
    Figure 00000009

    или
    Figure 00000010

    Cat+ - катион щелочного металла,
    в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин-5'-трифосфатазы.
RU97119762A 1997-11-28 1997-11-28 Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы RU2131435C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97119762A RU2131435C1 (ru) 1997-11-28 1997-11-28 Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU97119762A RU2131435C1 (ru) 1997-11-28 1997-11-28 Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2131435C1 true RU2131435C1 (ru) 1999-06-10

Family

ID=20199459

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU97119762A RU2131435C1 (ru) 1997-11-28 1997-11-28 Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2131435C1 (ru)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1. R.G.Yount, D.Oiala, D.Babcork "Interaction of P-N-P and P-C-P analogs of adenosine triphospate with heavy meromyosin, miosin and actomyosin" Biochemistry, 1971, V. 10, N 13, p. 2490. 2. H.Miyata, H.Asai "1,N 6 -Etheno-2-azaade-nosine triphospate : enormous increase in fluorescence intensity indused by its binding to heavy me 1982, V. 105, N 1, p. 296. 3. F.Hannsske, F.Cramer "Untersuchungen zur Structur perjodatoxydiester Ribonucleoside und Ribonucleotide", Carbohydrate Res., 1977, V. 54, p. 75. 4. RU 2036928 C1 (МГУ им.М.В.Ломоносова), 09.06.95. 5. JP 53205394 A (MorinagaMilk Ind Co. ltd), 20.11.84. 6. Luo Y et al. "Photoaffinity ADP-analogs as covalently attached reporter groups of the active site of myosine subfragment 1", Biochemistry, 1995, Feb. 14, V. 34, N 6, pp. 1978-87. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5480980A (en) 7-Deaza-2'-deoxyguanosine nucleotides and nucleic acids analogs thereof
Hiratsuka New ribose-modified fluorescent analogs of adenine and guanine nucleotides available as subtrates for various enzymes
Avison The synthesis of acyl phosphates in aqueous solution
Moffatt et al. Nucleoside Polyphosphates. VIII. 1 New and Improved Syntheses of Uridine Diphosphate Glucose and Flavin Adenine Dinucleotide Using Nucleoside-5'Phosphoramidates2
Wlassoff et al. Synthesis and characterization of (d) NTP derivatives substituted with residues of different photoreagents
Hobbs et al. A general method for the synthesis of 2'-azido-2'-deoxy-and 2'-amino-2'-deoxyribofuranosyl purines
CS269962B2 (en) Method of 4,6-substituted alpha-d-maltohexa-bis-octa-oside derivatives production
Kozarich et al. Ribonucleoside phosphates via phosphorimidazolidate intermediates. Synthesis of pseudoadenosine 5'-triphosphate
Kati et al. A transition state in pieces: major contributions of entropic effects to ligand binding by adenosine deaminase
EA004513B1 (ru) Способ получения диуридинтетрафосфата или его соли
RU2131435C1 (ru) Соли 3'-амидопроизводных (1'r,5'r)-3'-аза-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-дифосфата в качестве специфических флуоресцентных ингибиторов миозиновой аденозин 5'-трифосфатазы
Lesiak et al. Synthesis and biological activities of oligo (8-bromoadenylates) as analogs of 5'-O-triphosphoadenylyl (2'. fwdarw. 5') adenylyl (2'. fwdarw. 5') adenosine
Yamazaki et al. A New Method of Chemical Modification of N6‐Amino Group in Adenine Nucleotides with Formaldehyde and a Thiol and Its Application to Preparing Immobilized ADP and ATP
US4282352A (en) Adenosine triphosphate derivative
Leonard et al. Synthesis of fluorescent nucleotide analogues: 5'-mono-, di-, and triphosphates of linear-benzoguanosine, linear-benzoinosine, and linear-benzoxanthosine.
Tsou et al. Indigogenic phosphodiesters as potential chromogenic cancer chemotherapeutic agents
Hampton et al. Evidence for species-specific substrate-site-directed inactivation of rabbit adenylate kinase by N6-(6-iodoacetamido-n-hexyl) adenosine 5'-triphosphate
Hanze Nucleic acids. V. Nucleotide derivatives of tubercidin (7-deazaadenosine)
Yamamoto et al. Phosphonylation of biomolecules with inorganic diphosphonate. II. Phosphonylation of phosphate groups on nucleoside 5'-monophosphates, deoxynucleoside 5'-monophosphates, and sugar phosphates.
Chladek et al. Synthesis and properties of nucleoside 5'-phosphoazidates derived from guanosine and adenosine nucleotides: effect on elongation factors G and Tu dependent reactions
Hoffman et al. Synthesis and properties of nucleotides containing 4-thio-D-ribofuranose
RU2130943C1 (ru) Литиевые соли (1'r,5'r)-3'-аза-3'-(азидонафталин-1-сульфамидо)-1'-(6-аминопуринил-9)-3'- дезоксигексопиранозил-6'-ди-или-трифосфатов как специфические фотоактивируемые необратимые ингибиторы na,к-аденозинтрифосфатазы
US3893998A (en) Fluorescent derivatives of cytosine-containing compounds
Hai et al. Species-or isozyme-specific enzyme inhibitors. 7. Selective effects in inhibitions of rat adenylate kinase isozymes by adenosine 5'-phosphate derivatives
JPH0573391B2 (ru)