JP2003310292A - 分子中に芳香環を含む残基を有するアルカンからのポリヒドロキシアルカノエートの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】モノマーユニットに芳香族置換基をもつポリヒ
ドロキシアルカノエートを効率よく製造する方法を提供
する。 【解決手段】一般式（１）： （式中、Ｒは置換芳香環を含む残基を示し、ｎは１〜８
から選択される任意の整数を表す）で示される置換アル
カン群より選ばれた少なくとも一種を出発化合物とし、
一般式（１）の化合物を含む培地中で、ポリヒドロキシ
アルカノエートの産生能を有する微生物を培養して、一
般式（２）： （式中、Ｒは置換芳香環を含む残基を示し、ｍは１〜８
から選択される任意の整数を表す）で示される、３−ヒ
ドロキシ置換アルカノエートユニット群より選ばれた少
なくとも一種を分子中に含むポリヒドロキシアルカノエ
ートを微生物に産生させることを特徴とする微生物を用
いたポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。但し、
一般式（１）及び一般式（２）におけるＲは、明細書中
に記載の残基である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ポリエステルの一
種であるポリヒドロキシアルカノエート（以下、ＰＨＡ
と略す場合もある）を、置換アルカン誘導体を原料とし
て生産するＰＨＡの生産方法に関する。更に詳しくは、
置換アルカン誘導体を原料としてＰＨＡを生産し菌体内
に蓄積する能力を有する微生物を用いたＰＨＡの製造方
法に関する。

【０００２】

【従来の技術】これまで、多くの微生物がポリ−３−ヒ
ドロキシ酪酸（以下、ＰＨＢと略す場合もある）あるい
はその他のＰＨＡを生産し、菌体内に蓄積することが報
告されてきた（「生分解性プラスチックハンドブッ
ク」，生分解性プラスチック研究会編，（株）エヌ・テ
ィー・エス，Ｐ１７８−１９７（１９９５））。これら
のポリマーは、従来のプラスチックと同様に、溶融加工
等により各種製品の生産に利用することができる。更
に、生分解性であるがゆえに、自然界で微生物により完
全に分解されるという利点を有していることから、従来
の多くの合成高分子化合物のように自然環境に残留して
汚染を引き起こすことがない。また、生体適合性にも優
れており、医療用軟質部材料等としての応用も期待され
ている。

【０００３】このような微生物産生ＰＨＡは、その生産
に用いる微生物の種類や培地組成、培養条件等により、
様々な組成や構造のものとなり得ることが知られてお
り、これまで主に、ＰＨＡの物性の改良という観点か
ら、このような組成や構造の制御に関する研究がなされ
てきた。

【０００４】例えば、アルカリゲネス・ユウトロファス
Ｈ１６株（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｕｓ
Ｈ１６、ＡＴＣＣ Ｎｏ．１７６９９）及びその変異株
は、その培養時の炭素源を変化させることによって、３
−ヒドロキシ酪酸（以下、３ＨＢと略す場合もある）と
３−ヒドロキシ吉草酸（以下３ＨＶと略す場合もある）
との共重合体を様々な組成比で生産することが報告され
ている（特公平６−１５６０４号公報、特公平７−１４
３５２号公報、特公平８−１９２２７号公報等）。

【０００５】また、特許公報第２６４２９３７号では、
シュードモナス・オレオボランス・ＡＴＣＣ ２９３４
７株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ
ＡＴＣＣ ２９３４７）に炭素源として非環状脂肪族
炭化水素を与えることにより、炭素数６から１２までの
３−ヒドロキシアルカノエートをモノマーユニットとす
るＰＨＡを生産することが開示されている。

【０００６】特開平５−７４９２号では、メチロバクテ
リウム属（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓ
ｐ．）パラコッカス属（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｓ
ｐ．）、アルカリゲネス属（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ
ｓｐ．）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
ｓｐ．）の微生物を、炭素数３から７の第一アルコー
ルに接触させることにより、３ＨＢと３ＨＶとの共重合
体を生産させる方法が開示されている。

【０００７】特開平５−９３０４９号公報、及び特開平
７−２６５０６５号公報では、アエロモナス・キャビエ
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｃａｖｉａｅ）をオレイン酸や
オリーブ油を炭素源として培養することにより、３ＨＢ
と３−ヒドロキシヘキサン酸（以下、３ＨＨｘと略す場
合もある）との２成分共重合体を生産することが開示さ
れている。

【０００８】特開平９−１９１８９３号公報では、コマ
モナス・アシドボランス・ＩＦＯ１３８５２株（Ｃｏｍ
ａｍｏｎａｓ ａｃｉｄｏｖｏｒａｎｓ ＩＦＯ １３
８５２）が、炭素源としてグルコン酸及び１，４−ブタ
ンジオールを用いた培養により、３ＨＢと４−ヒドロキ
シ酪酸とをモノマーユニットに持つポリエステルを生産
することが開示されている。

【０００９】ところで、先に述べたＰＨＡは、いずれも
アルキル基を側鎖とするＰＨＡ、即ち、「ｕｓｕａｌ
ＰＨＡ」である。しかし、このような微生物産生ＰＨＡ
のより広範囲な応用を考慮した場合、アルキル基以外の
置換基（例えば、フェニル基など）を側鎖に導入したＰ
ＨＡが極めて有用であることが期待される。他の置換基
の例としては、不飽和炭化水素、エステル基、アリル
基、シアノ基、ハロゲン化炭化水素、エポキシドなどが
挙げられる。これらの中でも、特に、芳香環を有するＰ
ＨＡの研究が盛んになされている。

【００１０】（ａ）フェニル基もしくはその部分置換体
を含むもの Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２４，５２５６−５２
６０（１９９１）には、５−フェニル吉草酸を基質とし
て、シュードモナス オレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）が３−ヒドロキシ−
５−フェニル吉草酸をユニットとして含むＰＨＡを生産
することが報告されている。

【００１１】具体的には、シュードモナス・オレオボラ
ンスが５−フェニル吉草酸（以下、ＰＶＡと略す）とノ
ナン酸とを基質として（モル比２：１、総濃度１０ｍｍ
ｏｌ／Ｌ）、３ＨＶ、３−ヒドロキシヘプタン酸、３−
ヒドロキシノナン酸、３−ヒドロキシウンデカン酸、３
−ヒドロキシ−５−フェニル吉草酸（以下、３ＨＰＶと
略す）をモノマーユニットとして、０．６：１６．０：
４１．１：１．７：４０．６ の量比で含むＰＨＡを、
培養液１Ｌあたり１６０ｍｇ（菌体に対する乾燥重量比
３１．６％）生産し、また、ＰＶＡとオクタン酸とを基
質として（モル比１：１、総濃度１０ｍｍｏｌ／Ｌ）、
３ＨＨｘ、３−ヒドロキシオクタン酸、３−ヒドロキシ
デカン酸、３ＨＰＶをモノマーユニットとして、７．
３：６４．５：３．９：２４．３ の量比で含むＰＨＡ
を、培養液１Ｌあたり２００ｍｇ（菌体に対する乾燥重
量比 ３９．２％）生産することが報告されている。

【００１２】関連する記述は、上記の他Ｍａｋｒｏｍｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．，１９１，１９５７−１９６５（１９９
０）、Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ，３，４９２−４９４（１９
９１）にもあり、３ＨＰＶユニットが含まれていること
に起因すると思われる、ポリマー物性の変化が認められ
ている。

【００１３】Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２９，１
７６２−１７６６（１９９６）には、５−（４’−トリ
ル）吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボラ
ンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎ
ｓ）が３−ヒドロキシ−５−（４’−トリル）吉草酸を
ユニットとして含むＰＨＡを生産することが報告されて
いる。

【００１４】Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２，２
８８９−２８９５（１９９９）には、５−（２’，４’
−ジニトロフェニル）吉草酸を基質として、シュードモ
ナスオレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅ
ｏｖｏｒａｎｓ）が３−ヒドロキシ−５−（２’，４’
−ジニトロフェニル）吉草酸及び３−ヒドロキシ−５−
（４’−ニトロフェニル）吉草酸をユニットとして含む
ＰＨＡを生産することが報告されている。

【００１５】（ｂ）フェノキシ基もしくはその部分置換
体を含むもの Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．，１９５，１
６６５−１６７２（１９９４）には、１１−フェノキシ
ウンデカン酸を基質として、シュードモナスオレオボラ
ンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎ
ｓ）が３−ヒドロキシ−５−フェノキシ吉草酸と３−ヒ
ドロキシ−９−フェノキシノナン酸のＰＨＡコポリマー
を生産することが報告されている。

【００１６】また、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２
９，３４３２−３４３５（１９９６）には、シュードモ
ナス・オレオボランスを用いて、６−フェノキシヘキサ
ン酸から３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−ｎ−酪酸お
よび３−ヒドロキシ−６−フェノキシ−ｎ−ヘキサン酸
をユニットとして含むＰＨＡを、８−フェノキシオクタ
ン酸から３−ヒドロキシ−４−フェノキシ−ｎ−酪酸、
３−ヒドロキシ−６−フェノキシ−ｎ−ヘキサン酸およ
び３−ヒドロキシ−８−フェノキシ−ｎ−オクタン酸を
ユニットとして含むＰＨＡを、１１−フェノキシウンデ
カン酸から３−ヒドロキシ−５−フェノキシ−ｎ−吉草
酸および３−ヒドロキシ−７−フェノキシ−ｎ−ヘプタ
ン酸をユニットとして含むＰＨＡを生産することが報告
されている。この報告におけるポリマーの収率を抜粋す
ると以下のとおりである。

【００１７】

【表１】

【００１８】特許公報第２９８９１７５号には、３−ヒ
ドロキシ−５−（モノフルオロフェノキシ）ペンタノエ
ート（３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐ）ユニットあるいは３−ヒド
ロキシ−５−（ジフルオロフェノキシ）ペンタノエート
（３Ｈ５（ＤＦＰ）Ｐ）ユニットからなるホモポリマ
ー、少なくとも３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐユニットあるいは３
Ｈ５（ＤＦＰ）Ｐユニットを含有するコポリマー；これ
らのポリマーを合成するシュードモナス・プチダ；シュ
ードモナス属を用いた前記のポリマーの製造法に関する
発明が開示されており、特許第２９８９１７５号公報に
は、３−ヒドロキシ−５−（モノフルオロフェノキシ）
ペンタノエート（３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐ）ユニットあるい
は３−ヒドロキシ−５−（ジフルオロフェノキシ）ペン
タノエート（３Ｈ５（ＤＦＰ）Ｐ）ユニットからなるホ
モポリマー、少なくとも３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐユニットあ
るいは３Ｈ５（ＤＦＰ）Ｐユニットを含有するコポリマ
ー；これらのポリマーを合成するシュードモナス・プチ
ダ；シュードモナス属を用いた前記のポリマーの製造法
に関する発明が開示されている。

【００１９】これらの生産は以下の様な「二段階培養」
で行なわれている。 培養時間：一段目、２４時間；二段目、９６時間 各段における基質と得られるポリマーを以下に示す。 （１）得られるポリマー：３−ヒドロキシ−５−（モノ
フルオロフェノキシ）ペンタノエートホモポリマー 一段目の基質：クエン酸、イーストエキス 二段目の基質：モノフルオロフェノキシウンデカン酸 （２）得られるポリマー：３−ヒドロキシ−５−（ジフ
ルオロフェノキシ）ペンタノエートホモポリマー 一段目の基質：クエン酸、イーストエキス 二段目の基質：ジフルオロフェノキシウンデカン酸 （３）得られるポリマー：３−ヒドロキシ−５−（モノ
フルオロフェノキシ）ペンタノエートコポリマー 一段目の基質：オクタン酸あるいはノナン酸、イースト
エキス 二段目の基質：モノフルオロフェノキシウンデカン酸 （４）得られるポリマー：３−ヒドロキシ−５−（ジフ
ルオロフェノキシ）ペンタノエートコポリマー 一段目の基質：オクタン酸あるいはノナン酸、イースト
エキス 二段目の基質：ジフルオロフェノキシウンデカン酸 その効果としては、置換基をもつ中鎖脂肪酸を資化し
て、側鎖末端が１から２個のフッ素原子で置換されたフ
ェノキシ基を有するポリマーを合成することができ、融
点が高く良い加工性を保ちながら、立体規則性、撥水性
を与えることができるとしている。

【００２０】この様なフッ素基置換体以外に、シアノ基
やニトロ基の置換体の研究もなされている。

【００２１】Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，４
１，３２−４３（１９９５）及びＰｏｌｙｍｅｒ Ｉｎ
ｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，３９，２０５−２１３（１９
９６）には、シュードモナス オレオボランス（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）ＡＴＣＣ
２９３４７株及びシュードモナス プチダ（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）ＫＴ ２４４２株を用い
て、オクタン酸とｐ−シアノフェノキシヘキサン酸或い
はｐ−ニトロフェノキシヘキサン酸を基質として、３−
ヒドロキシ−ｐ−シアノフェノキシヘキサン酸或いは３
−ヒドロキシ−ｐ−ニトロフェノキシヘキサン酸をモノ
マーユニットとして含むＰＨＡの生産が報告されてい
る。

【００２２】これらの報告は側鎖がアルキル基である一
般的なＰＨＡとは異なり、いずれもＰＨＡの側鎖に芳香
環を有しており、それに由来する物性を有するポリマー
を得る上で有益である。

【００２３】（ｃ）シクロヘキシル基をモノマーユニッ
ト中に含むＰＨＡは、通常の脂肪族ヒドロキシアルカン
酸をユニットとして含むＰＨＡとは異なる高分子物性を
示すことが期待されており、シュードモナス・オレオボ
ランスによる生産の例が報告されている（Ｍａｃｒｏｍ
ｏｌｅｃｕｌｅｓ，３０，１６１１−１６１５（１９９
７））。

【００２４】この報告によれば、シュードモナス・オレ
オボランスを、ノナン酸とシクロヘキシル酪酸あるいは
シクロヘキシル吉草酸の共存する培地中で培養すると、
シクロヘキシル基を含むユニットと、ノナン酸由来のユ
ニットを含むＰＨＡが得られている（各割合は不明）。

【００２５】その収率等に関しては、シクロヘキシル酪
酸に対して、基質濃度トータル２０ｍｍｏｌ／Ｌの条件
で、シクロヘキシル酪酸とノナン酸の量比を変化させ、
表２に示すような結果を得たと報告されている。

【００２６】

【表２】

【００２７】ＣＤＷ：乾燥菌体重量（ｍｇ／Ｌ）、ＰＤ
Ｗ：乾燥ポリマー重量（ｍｇ／Ｌ）、収率：ＰＤＷ／Ｃ
ＤＷ（％） しかしながら、この例では、培養液当たりのポリマー収
率は十分なものではなく、また、得られたＰＨＡ自体
も、そのモノマーユニット中にはノナン酸由来の脂肪族
ヒドロキシアルカン酸が混在しているものである。

【００２８】また新たなカテゴリーとして、単に物性の
変化に留まらず、側鎖に適当な官能基を有するＰＨＡを
生産し、その官能基を利用して新たな機能を生み出そう
とする研究も行なわれている。

【００２９】例えばＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３
１，１４８０−１４８６（１９９６）及び、Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ：Ｐａｒ
ｔＡ：Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６，２
３８１−２３８７（１９９８）などでは、側鎖の末端に
ビニル基を持つユニットを含むＰＨＡを合成した後、酸
化剤によりエポキシ化し、側鎖末端に反応性の高いエポ
キシ基を含むＰＨＡを合成出来たと報告されている。

【００３０】またビニル基以外にも、高い反応性が期待
されるスルフィドを持つユニットを含むＰＨＡの合成例
として、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２，８３１
５−８３１８（１９９９）においては、シュードモナス
プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｉｄａ）２
７Ｎ０１株が１１−フェニルスルファニル吉草酸を基質
とし、３−ヒドロキシ−５−（フェニルスルファニル）
吉草酸及び３−ヒドロキシ−７−（フェニルスルファニ
ル）ヘプタン酸のＰＨＡコポリマーを生産することが報
告されている。

【００３１】

【発明が解決しようとする課題】以上のように、微生物
産生ＰＨＡにおいては、その生産に用いる微生物の種類
や培地組成、培養条件等を変えることにより、何通りか
の組成・構造のものが得られているが、それらの試みの
目的は専らプラスチックとしての物性の改良であった。

【００３２】一方、前述のような、置換基を側鎖に導入
した「ｕｎｕｓｕａｌ ＰＨＡ」は、導入した置換基の
特性等に起因する、極めて有用な機能・特性を具備した
「機能性ポリマー」としての展開も期待できる。よっ
て、前記のような機能性と生分解性とを兼ね備えた優れ
たポリマーと、当該ポリマーを生産し菌体内に蓄積し得
る微生物、並びに、当該ＰＨＡを高純度で効率的に生合
成する方法の開発は極めて有用かつ重要であると考えら
れた。

【００３３】ところで、様々な置換基を側鎖に導入した
「ｕｎｕｓｕａｌ ＰＨＡ」、即ち、一般式（７）で表
されるモノマーユニットを含むＰＨＡを微生物により生
産する方法としては、先に挙げたシュードモナス・オレ
オボランスの報告例などに示される通り、導入しようと
する置換基を有した一般式（８）で表される置換脂肪酸
を化学合成したのち、これを微生物に与えて培養し、生
産されたＰＨＡを抽出する方法が一般的である。

【００３４】

【化７】

【００３５】（式中、Ｒは、芳香環を含む残基などから
なる群から選ばれた少なくとも１つであり、ｒは１〜８
から選択される任意の整数を表す）

【００３６】

【化８】

【００３７】（式中、Ｒは、芳香環を含む残基などから
なる群から選ばれた少なくとも１つであり、ｓは１〜８
から選択される任意の整数を表す）

【００３８】しかしながら、基質である置換脂肪酸を化
学合成して微生物に与えることからなるＰＨＡの一般的
な生産方法においては、置換脂肪酸のカルボキシル基が
化学反応において活性基であるため、導入しようとする
置換基の種類や数、位置等によっては、化学合成する上
で大きな制約を与える場合が数多くある。或いは、その
活性基であるがゆえに、化学合成における反応段階でカ
ルボキシル基の保護、脱保護といった煩雑な操作が必要
となり、工程が数段階にも渡る化学反応を要する場合が
多い。そのため、工業生産レベルでの合成が困難であっ
たり、あるいは、合成に多大な時間、手間及び費用を要
したりすることなどがあった。

【００３９】一方、置換脂肪酸と比較して、化学合成の
容易な置換アルカンを原料とする「ｕｎｕｓｕａｌ Ｐ
ＨＡ」の生産が可能となれば、上記した課題を解決する
ことが可能と推察された。

【００４０】これまで報告されているアルカン誘導体か
らのＰＨＡ生産は、直鎖アルカン、アルケン（二重結合
を含むアルカン）（以上Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌ．，５４，２９２４−２９３２（１９
８８））、塩素置換アルカン（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕ
ｌｅｓ，２３，３７０５−３７０７（１９９０））フッ
素置換アルカン（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．，
１６，５０１−５０６（１９９４））、アセトキシ残基
を含むアルカン（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３
３，８５７１−８５７５（２０００））を出発物質と
し、対応するＰＨＡを微生物により生合成したという例
があるに過ぎず、置換基として芳香環を含む残基を有す
るアルカンからの対応するＰＨＡの合成例は報告されて
いない。

【００４１】

【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは、
置換脂肪酸と比較して合成、あるいは、入手の容易な原
料を用いた「ｕｎｕｓｕａｌ ＰＨＡ」の生産方法を開
発すべく、鋭意検討した結果、置換脂肪酸と比較して化
学合成の容易な置換アルカンを原料とする「ｕｎｕｓｕ
ａｌ ＰＨＡ」の生産が可能であることを見出し、当該
方法を用いた新規なＰＨＡの製造方法を発明するに至っ
た。即ち、本発明は、下記一般式（１）：

【００４２】

【化９】

【００４３】（式中、Ｒは置換芳香環を含む残基を示
し、ｎは１〜８から選択される任意の整数を表す）で示
される置換アルカン群より選ばれた少なくとも一種を出
発化合物とし、前記一般式（１）の化合物を含む培地中
で、ポリヒドロキシアルカノエートの産生能を有する微
生物を培養して、下記一般式（２）：

【００４４】

【化１０】

【００４５】（式中、Ｒは置換芳香環を含む残基を示
し、ｍは１〜８から選択される任意の整数を表す）で示
される、３−ヒドロキシ置換アルカノエートユニット群
より選ばれた少なくとも一種を分子中に含むポリヒドロ
キシアルカノエートを微生物に産生させることを特徴と
する微生物を用いたポリヒドロキシアルカノエートの製
造方法であり、一般式（１）及び（２）におけるＲ、即
ち置換芳香環を含む残基が、一般式（３）：

【００４６】

【化１１】

【００４７】（式中、Ｒ１は芳香環への置換基を示し、
Ｒ１はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ
_３基、Ｃ_２Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）
_２ＣＨ基、（ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも
一種である。）で示される置換フェニルスルファニル残
基群、及び、一般式（４）：

【００４８】

【化１２】

【００４９】（式中、Ｒ２は芳香環への置換基を示し、
Ｒ２はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ
_３基、Ｃ_２Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）
_２ＣＨ基、（ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも
一種である。）で示される（置換フェニルメチル）スル
ファニル残基群であることを特徴とするポリヒドロキシ
アルカノエートの製造方法である。

【００５０】また、本発明の生産工程には、アルカン酸
化系の効果的な誘導物質であるジシクロプロピルケトン
の存在下で、微生物のアルカン酸化能力を向上せしむ工
程をさらに含んでもよい。

【００５１】

【発明の実施の形態】本発明において出発化合物として
用いられる化合物例の第一としては、一般式（９）で示
される1−[（置換フェニル）スルファニル]アルカンか
ら選択される少なくとも１種を挙げることができ、その
場合に製造されるポリヒドロキシアルカノエートとして
は、一般式（１０）で示される３−ヒドロキシ−ω−
［（置換フェニル）スルファニル］アルカノエートユニ
ットから選択される少なくとも１種を分子中に含むポリ
ヒドロキシアルカノエートを挙げることができる。

【００５２】

【化１３】

【００５３】（式中、Ｒ１は芳香環への置換基を示し、
Ｒ１はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ
_３基、Ｃ_２Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）
_２ＣＨ基、（ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも
一種であり、ｎは１〜８から選択される任意の整数を表
す）

【００５４】

【化１４】

【００５５】（式中、Ｒ１は芳香環への置換基を示し、
Ｒ１はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ
_３基、Ｃ_２Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）
_２ＣＨ基、（ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも
一種であり、ｍは１〜８から選択される任意の整数を表
す）

【００５６】本発明において出発化合物として用いられ
る化合物例の第ニとしては、一般式（１１）で示される
1−{［（置換フェニル）メチル］スルファニル}アルカ
ンから選択される少なくとも１種を挙げることができ、
その場合に製造されるポリヒドロキシアルカノエートと
しては、一般式（１２）で示される３−ヒドロキシ−ω
−｛［（置換フェニル）メチル］スルファニル｝アルカ
ノエートユニットから選択される少なくとも１種を分子
中に含むポリヒドロキシアルカノエートを挙げることが
できる。

【００５７】

【化１５】

【００５８】（式中、Ｒ２は芳香環への置換基を示し、
Ｒ２はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ
_３基、Ｃ_２Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）
_２ＣＨ基、（ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも
一種であり、ｎは１〜８から選択される任意の整数を表
す）

【００５９】

【化１６】

【００６０】（式中、Ｒ２は芳香環への置換基を示し、
Ｒ２はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ
_３基、Ｃ_２Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）
_２ＣＨ基、（ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも
一種であり、ｍは１〜８から選択される任意の整数を表
す）

【００６１】本発明の方法を更に詳細に述べれば、前記
一般式（９）及び（１１）で示される化合物いずれか一
つ以上を含む培地中で、微生物を培養する工程を含む、
前記一般式（１０）及び（１２）で示される３−ヒドロ
キシアルカン酸ユニットを一種類以上分子中に含むポリ
ヒドロキシアルカノエートの製造方法である。

【００６２】このように、本発明の製造方法において、
微生物を培養する工程、即ち微生物による該ポリヒドロ
キシアルカノエートの生産工程を含む場合、前記一般式
（９）及び（１１）で示される出発物質の式中に示すメ
チレン鎖長「ｎ」と、前記一般式（１０）及び（１２）
で示される、本発明の方法で製造されるポリヒドロキシ
アルカノエートの分子中に存在するユニットの式中示す
側鎖メチレン鎖長「ｍ」との関係は以下の数式（１）で
示すことができる。 ｍ＝ｎ−２ｌ・・・（１） （式中ｌは０≦ｌ＜（１／２）ｎなる任意の整数） 例えば、出発物質として一般式（１３）で示される、７
−（フェニルスルファニル）ヘプタンを用いた場合に
は、生産されるポリヒドロキシアルカノエートは、一般
式（１４）で示される３−ヒドロキシ−７−（フェニル
スルファニル）ヘプタン酸ユニット及び一般式（１５）
で示される３−ヒドロキシ−５−（フェニルスルファニ
ル）吉草酸ユニットを含むものとなる。

【００６３】

【化１７】

【００６４】

【化１８】

【００６５】また、本発明の方法で得られるＰＨＡは、
ポリマー分子中に含まれるユニットとして、下記一般式
（５）：

【００６６】

【化１９】

【００６７】（式中、ｐは、０〜８から選択される任意
の整数を表し、ポリマー中において、一つ以上の値をと
り得る）で示される３−ヒドロキシ−アルカン酸ユニッ
ト、あるいは、下記一般式（６）：

【００６８】

【化２０】

【００６９】（式中、ｑは、３および５から選択される
任意の整数を表し、ポリマー中において、一つ以上の値
をとり得る）で示される３−ヒドロキシ−アルカ−５−
エン酸ユニットのうち、少なくとも１種類をポリマー分
子中に含んでもよい。

【００７０】更に、本発明の方法で得られるＰＨＡの数
平均分子量は、５０００から１００００００程度であ
る。

【００７１】以下に、本発明において利用される微生
物、培養工程、回収工程等について説明する。（微生
物）

【００７２】本発明の方法で用いる微生物は、一般式
（３）及び（４）で示されるような、置換芳香環を含む
残基を有する、一般式（１）で示される置換アルカンを
出発化合物、つまりは基質原料とし、一般式（３）及び
（４）で示されるような、置換芳香環を含む残基を側鎖
に有する、一般式（２）で示される３−ヒドロキシ置換
アルカノエートユニットを分子中に含むポリヒドロキシ
アルカノエートを生産可能であれば、いかなる微生物を
も使用することができる。また、本発明の目的を達成で
きる範囲内で、必要に応じて複数の微生物を混合して用
いることもできる。

【００７３】本発明の方法で用いる微生物は、少なくと
もアルカンをアルカン酸に変換する能力が必要であり、
更にはアルカン酸からＰＨＡを生産する能力を有する微
生物である。アルカンをアルカン酸に変換する能力は通
常アルカンモノオキシゲナーゼを初発酵素とする一群の
酵素系を有することにより発現される。

【００７４】この様な微生物は、シュードモナス（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物が知られてお
り、更に詳しくは、土壌より分離した微生物であり、特
開２００１−１７８４８４号公報に開示されている菌株
であるシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｉｃｈｏｒｉｉ ＹＮ２）及び、
特開昭６３−２２６２９１号公報に開示されている菌株
であるシュードモナスオレオボランス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｏｌｅｏｖｏｒａｎｓ）ＡＴＣＣ２９３４７
が挙げられる。なお、ＹＮ２株は寄託番号「ＦＥＲＭ
ＢＰ−７３７５」として、独立行政法人 産業技術総
合研究所（旧 経済産業省 工業技術院）生命工学工業
技術研究所に寄託されている。

【００７５】（培養工程）本発明にかかるポリヒドロキ
シアルカノエート（ＰＨＡ）の製造方法の培養工程にお
いては、上記するポリヒドロキシアルカノエート産生能
を有する微生物を利用して、原料の一般式（１）で示さ
れる置換アルカン群より選ばれた少なくとも一種から、
対応する前記一般式（２）で示される３−ヒドロキシ置
換アルカノエートユニット群より選ばれた少なくとも一
種を分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートを生産
させる。

【００７６】この培養工程に利用する微生物の通常の培
養、例えば、保存菌株の作製、ＰＨＡの生産に必要とさ
れる菌数や活性状態を確保するための増殖などには、用
いる微生物の増殖に必要な成分を含有する培地を適宜選
択して用いる。例えば、微生物の生育や生存に悪影響を
及ぼすものでない限り、一般的な天然培地（肉汁培地、
酵母エキスなど）や、栄養源を添加した合成培地など、
いかなる種類の培地をも用いることができる。温度、通
気、攪拌などの培養条件は、用いる微生物に応じて適宜
選択する。

【００７７】一方、培養工程において、前記したような
ＰＨＡ生産微生物を用いて、目的とする一般式（２）で
示される３−ヒドロキシ置換アルカノエートユニット群
より選ばれた少なくとも一種を分子中に含むＰＨＡを製
造する際には、培地として、ＰＨＡ生産用の原料とし
て、このモノマーユニットに対応する、上記一般式
（１）で示される置換アルカン群より選ばれた少なくと
も一種に加えて、微生物の増殖用炭素源とを少なくとも
含んだ無機培地などを用いることができる。原料の一般
式（１）で示される置換アルカン群は、培地あたり０．
０１％〜１％（ｖ／ｖ）の範囲、より好ましくは、０．
０２％〜０．２％（ｖ／ｖ）の範囲に初期の含有率を選
択することが望ましい。

【００７８】また、培養工程において、アルカン酸化系
誘導物質であるジシクロプロピルケトンの存在下で微生
物を培養する工程を、その生産工程に含んでいても良
い。一般に、アルカン酸化系は、その代謝経路の基質で
ある直鎖アルカン、例えばオクタン、ノナン等の直鎖ア
ルカンにより効果的に誘導がかかることが知られてい
る。しかしながら、誘導物質として前記に例示したよう
な直鎖アルカンを用いる場合、生産されてくるＰＨＡ中
の中鎖脂肪族ＰＨＡユニット比率が増加することに留意
する必要がある。これは直鎖アルカンがアルカン酸化系
により直鎖アルカン酸に変換され、β酸化系を経由しＰ
ＨＡのモノマー基質となるためである。

【００７９】本発明のモノマー基質として利用される置
換アルカンについても、アルカン酸化系を誘導すること
が可能であり、前記直鎖アルカン同様にＰＨＡのモノマ
ーユニットとして取り込まれる。ここで、アルカン酸化
系はもともと直鎖アルカンの代謝系として進化してお
り、本発明における置換アルカンにおいては、アルカン
酸化系の誘導が不十分な場合もある。

【００８０】ジシクロプロピルケトンは、アルカン酸化
系において誘導物質として機能するが、その酸化系の基
質とはならない（アルカンモノオキシゲナーゼにより酸
化されない）、所謂、非代謝性誘導物質として知られて
いる（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ，１２３，５４６−５５６（１９７５））。このた
め、本発明の製造方法において、アルカン酸化系の誘導
が不十分、あるいはさらなる活性の向上が望ましく、ま
た、目的とするＰＨＡにおいて中鎖脂肪族ＰＨＡユニッ
トの組成比が低いことが望まれるときに、ジシクロプロ
ピルケトンをアルカン酸化系の好適な誘導物質として用
いることができる。この場合、ジシクロプロピルケトン
により効果的にアルカン酸化系の誘導がかるとともに、
その基質代謝は全て本発明の置換アルカンの変換に充て
られる。その結果、置換アルカン由来のモノマーユニッ
トが効果的に生産され、ＰＨＡの収率ならびに置換アル
カン由来のモノマーユニット組成比の向上を達成するこ
とが可能である。

【００８１】ジシクロプロピルケトンは、本発明に用い
る置換アルカンとともに培地に添加しても良く、またジ
シクロプロピルケトン単独で培地に添加しても良い。こ
れらの場合、培地中の増殖用基質の種類、置換アルカン
の有無ならびに濃度、１段階培養あるいは多段階培養で
あるか、多段階培養の何段階目であるか、等の条件によ
り、その含有率を適宜選択すれば良いが、通常、培地あ
たり０．００１％〜１％（ｖ／ｖ）の範囲、より好まし
くは、０．０１％〜０．１％（ｖ／ｖ）の範囲にその含
有率を選択することが望ましい。

【００８２】原料の一般式（１）で示される置換アルカ
ン群は、一般に疎水性であるため、その水溶性は必ずし
も良好ではないが、上記する微生物は、この化合物を基
質として利用できる特性を有するので、培養当初、その
溶解度を超える部分は、部分的に懸濁された状態であっ
ても、培養を継続する間に微生物が徐々にその細胞内に
取り込む結果、順次培地に溶解するので何ら問題とはな
らない。また効率的な取り込みのために微生物そのもの
が界面活性剤様の物質を分泌し、基質である置換アルカ
ンを取り込み易くする場合も見受けられる。

【００８３】なお、原料の一般式（１）で示される置換
アルカン群は、分散性を高めるため、場合によっては、
１−ヘキサデセンやｎ−ヘキサデカンのような溶媒に溶
解、あるいは、微細な懸濁物とした形状で培地中に添加
することも可能である。その際には、利用する１−ヘキ
サデセンやｎ−ヘキサデカンのような溶媒の添加濃度
は、培地に対して、その濃度は３％（ｖ／ｖ）以下にす
ることが必要である。

【００８４】培地には、微生物が増殖に利用する増殖用
基質を別途添加する。この増殖用基質は、酵母エキスや
ポリペプトン、肉エキスといった栄養素を用いることが
可能である。更に、糖類、ＴＣＡ回路中の中間体として
生じる有機酸ならびにＴＣＡ回路から一段階ないしは二
段階の生化学反応を経て生じる有機酸またはその塩、ア
ミノ酸またはその塩、炭素数４〜１２の直鎖アルカン酸
またはその塩などから、用いる菌株に応じて、炭素源と
しての有用性を考慮して、適宜選択することができる。

【００８５】これら種々の増殖用基質のうち、糖類とし
ては、グリセロアルデヒド、エリスロース、アラビノー
ス、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノー
ス、フルクトースといったアルドース、グリセロール、
エリスリトール、キシリトール等のアルジトール、グル
コン酸等のアルドン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸
等のウロン酸、マルトース、スクロース、ラクトースと
いった二糖等から選ばれる１つ以上の化合物が好適に利
用できる。

【００８６】また、有機酸あるいはその塩としては、ピ
ルビン酸、リンゴ酸、乳酸、クエン酸、コハク酸または
それらの塩からなる群から選ばれる１つ以上の化合物が
好適に利用できる。一方、アミノ酸またはその塩として
は、グルタミン酸、アスパラギン酸あるいはそれらの塩
からなる群から選ばれる１つ以上の化合物が好適に利用
できる。

【００８７】一般に、これら種々の増殖用基質の中で
も、ポリペプトンや糖類を用いるのがより好ましく、ま
た、糖類の中では、グルコース、フルクトース、マンノ
ースからなる群から選択される少なくとも一つを用いる
ことがさらに好ましい。これらの増殖用基質は、通常、
培地あたり ０．１％〜５％（ｗ／ｖ）の範囲、より好
ましくは、０．２％〜２％（ｗ／ｖ）の範囲にその含有
率を選択することが望ましい。

【００８８】微生物にＰＨＡを生産・蓄積させる培養工
程における別の方法としては、一旦十分に増殖させた後
に、塩化アンモニウムのような窒素源を制限した培地へ
菌体を移し、目的ユニットの基質となる化合物を加えた
状態でさらに培養すると生産性が向上する場合がある。
例えば、前記の異なる培養条件からなる工程を複数段接
続した多段方式の採用が挙げられる。

【００８９】より具体的には、（工程１−１）として、
一般式（１）で示される置換アルカン群、ならびに炭素
源となるポリペプトンを含む培地中で微生物を培養する
工程を対数増殖後期から定常期の時点まで続け、一旦菌
体を遠心分離等で回収した後、これに続き、（工程１−
２）として、一般式（１）で示される置換アルカン群、
ならびに炭素源となる有機酸またはその塩とを含み、窒
素源を含まない培地中で、前段の工程１−１で培養・増
殖した微生物の菌体をさらに培養する工程を行なう二段
階培養方法、あるいは、（工程１−３）として、一般式
（１）で示される置換アルカン群、ならびに炭素源とな
るグルコースを含む培地中で微生物を培養する工程を対
数増殖後期から定常期の時点まで続け、一旦菌体を遠心
分離等で回収した後、これに続き、（工程１−４）とし
て、一般式（１）で示される置換アルカン群、ならびに
炭素源となるグルコースを含み、窒素源を含まない培地
中で、前段の工程１−３で培養・増殖した微生物の菌体
をさらに培養する工程を行なう二段階培養方法、さらに
は、（工程１−５）として、一般式（１）で示される置
換アルカン群、ならびに炭素源となるポリペプトンを含
む培地中で微生物を培養する工程を対数増殖後期から定
常期の時点まで続け、一旦菌体を遠心分離等で回収した
後、これに続き、（工程１−６）として、一般式（１）
で示される置換アルカン群、ならびに炭素源となる糖類
とを含み、窒素源を含まない培地中で、前段の工程１−
５で培養・増殖した微生物の菌体をさらに培養する工程
を行なう二段階培養方法、等を利用することが一層好ま
しい。

【００９０】この二段階培養方法では、前段において、
原料の上記一般式（１）で示される置換アルカン群か
ら、対応する前記一般式（２）で示される３−ヒドロキ
シ置換アルカノエートユニット群より選ばれた少なくと
も一種を分子中に含むＰＨＡを生産させつつ、菌体の増
殖を予め行ない、後段では、窒素源を含まない培地中
で、既に培養された菌体に、主にＰＨＡの生産を行なわ
せる培養形態とすることで、細胞内に蓄積されるＰＨＡ
量をさらに高くすることができる。

【００９１】また、アルカンモノオキシゲナーゼを初発
酵素とするアルカン酸化経路の効果的な誘導物質である
ジシクロプロピルケトンを、工程１−１あるいは工程１
−２の少なくとも１工程に、また同様に工程１−３ある
いは工程１−４の少なくとも１工程に、さらに同様に工
程１−５あるいは工程１−６の少なくとも１工程に含有
せしむことで、置換アルカン群の対応する置換アルカン
酸への代謝が効果的に行われ、ＰＨＡの収量ならびに目
的ＰＨＡモノマーユニットの構成比を高くすることも可
能である。

【００９２】さらに、工程１−１、工程１−３および工
程１−５においては、置換アルカン群の代わりに、ジシ
クロプロピルケトンを単独で用いることで、アルカン酸
化系の誘導を主目的とした１段階目の培養方法とするこ
とも可能である。

【００９３】このような培養工程における温度は、上記
の菌株が良好に増殖可能な温度であればよく、例えば、
１５〜４０℃、好ましくは２０〜３５℃の範囲、より好
ましくは２０℃〜３０℃の範囲に選択することが適当で
ある。

【００９４】培養は、液体培養、固体培養など、利用す
る微生物が増殖し、培地中に含有される原料の一般式
（１）で示される置換アルカン群より選ばれた少なくと
も一種から、前記一般式（２）で示される３−ヒドロキ
シ置換アルカノエートユニット群より選ばれた少なくと
も一種を分子中に含むＰＨＡを生産する培養方法なら
ば、いかなる培養方法をも用いることができる。さらに
は、原料、炭素源、さらには酸素の供給が適正に行なわ
れるならば、バッチ培養、フェドバッチ培養、半連続培
養、連続培養などの種類も問わない。例えば、液体バッ
チ培養の形態としては、振とうフラスコによって振とう
させて酸素を供給する方法、ジャーファーメンターによ
る攪拌通気方式の酸素供給方法がある。

【００９５】上記の培養方法に用いる無機培地として
は、リン源（例えば、リン酸塩など）、窒素源（例え
ば、アンモニウム塩、硝酸塩など）等、微生物の増殖に
必要な成分を含んでいる培地であればいかなるものでも
良く、例えば、ＭＳＢ培地、Ｍ９培地等を挙げることが
できる。

【００９６】以下に本発明の一方法で用いたＭ９培地の
組成を示す。 Ｎａ_２ＨＰＯ_４ ６．２ｇ ＫＨ_２ＰＯ_４ ３．０ｇ ＮａＣｌ ０．５ｇ ＮＨ_４Ｃｌ １．０ｇ （培地１リットル中、ＰＨ ７．０） 更に、良好な増殖と、それに伴うＰＨＡの生産のために
は、上記の無機塩培地に、例えば、以下に示す微量成分
溶液を０．３％（ｖ／ｖ）程度添加して、必須微量元素
を補う必要がある。

【００９７】［微量成分溶液］ ニトリロ三酢酸 ：１．５ｇ ＭｇＳＯ_４ ：３．０ｇ ＭｎＳＯ_４ ：０．５ｇ ＮａＣｌ ：１．０ｇ ＦｅＳＯ_４ ：０．１ｇ ＣａＣｌ_２ ：０．１ｇ ＣｏＣｌ_２ ：０．１ｇ ＺｎＳＯ_４ ：０．１ｇ ＣｕＳＯ_４ ：０．１ｇ ＡｌＫ（ＳＯ_４）_２ ：０．１ｇ Ｈ_３ＢＯ_３ ：０．１ｇ Ｎａ_２ＭｏＯ_４ ：０．１ｇ ＮｉＣｌ_２ ：０．１ｇ （溶液１リットル中、ｐＨ ７．０） また、上記の培養方法においては、バッチ式培養、流動
バッチ式培養、半連続培養、連続培養、リアクター形式
培養、固体培養等、通常の微生物の培養に用いるいかな
る方法をも用いることができる。

【００９８】（抽出・精製工程）本発明にかかるＰＨＡ
生産・蓄積微生物細胞からのＰＨＡの取得には、通常行
なわれている方法を適用することができる。微生物の培
養細胞からＰＨＡを回収する方法として、有機溶媒によ
り抽出する方法が、最も簡便である。有機溶媒として
は、クロロホルム、ジクロロメタン、アセトン、ジオキ
サン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルなどを用い
て行うことができる。

【００９９】有機溶剤が使用しにくい環境中において
は、化学的な処理する方法が利用できる。

【０１００】この場合においては、ＳＤＳ等による界面
活性剤による処理、リゾチーム等の酵素による処理、Ｅ
ＤＴＡ、アンモニア等の薬剤による処理によってＰＨＡ
以外の菌体成分を除去して、ＰＨＡを回収する方法を用
いることもできる。また、次亜塩素酸ナトリウムを用い
てＰＨＡ以外の菌体成分を除去して、ＰＨＡを回収する
方法を用いることができるが、構造が変化する場合があ
る。更には、微生物細胞を物理的に破砕することによっ
て、ＰＨＡ以外の菌体成分を除去して、ＰＨＡを回収す
る方法が利用できる。この場合においては、超音波破砕
法、ホモジナイザー法、圧力破砕法、ビーズ衝撃法、摩
砕法、擂潰法、凍結融解法のいずれかを用いることがで
きる。

【０１０１】なお、本発明の微生物の培養、本発明の微
生物によるＰＨＡの生産と菌体内への蓄積、並びに、本
発明における菌体からのＰＨＡの回収は、上記の方法に
限定されるものではない。

【０１０２】

【実施例】以下に実施例を示す。なお、以下における
「％」は特に標記した以外は質量基準である。

【０１０３】（実施例１）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した1−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾
燥した。

【０１０４】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを９６ｍｇ得た。

【０１０５】得られたＰＨＡの分子量をゲルパーミエー
ションクロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ−８
２２０、カラム；東ソー ＴＳＫ−ＧＥＬ Ｓｕｐｅｒ
ＨＭ−Ｈ、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換算）に
より評価した結果、Ｍｎ＝１２５０００、Ｍｗ＝２７８
０００であった。このＰＨＡについて、核磁気共鳴装置
を用いて、下記の測定条件で分析した。 ＜測定機器＞ＦＴ−ＮＭＲ：Ｂｒｕｋｅｒ ＤＰＸ４００ 共鳴周波数：^１Ｈ＝４００ＭＨｚ ＜測定機器＞ 測定核種：^１Ｈ 使用溶媒：ＣＤＣｌ_３ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ：キャピラリー封入ＴＭＳ／ＣＤＣｌ_３ 測定温度：室温^１ Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャートを図１に、その帰属結
果（一般式（１６）参照）を表３にそれぞれ示す。

【０１０６】

【化２１】一般式（１６）：

【０１０７】

【表３】

【０１０８】表３に示す通り、３−ヒドロキシ−５−
（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９７％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１０９】（実施例２）ポリペプトン０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾
燥した。

【０１１０】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを５２ｍｇ得た。

【０１１１】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３５０００、Ｍｗ＝３２４０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを６３％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１１２】（実施例３）グルタミン酸ナトリウム０．
５％（ｗ／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５
００ｍＬ容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブに
より滅菌した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌
した１−（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．
１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュー
ドモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１
２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体
を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄し
て凍結乾燥した。

【０１１３】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを２００ｍｇ得た。

【０１１４】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２２０００、Ｍｗ＝２７８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを１０％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１１５】（実施例４）ノナン酸０．１％（ｖ／ｖ）
を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振
盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。
フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェ
ニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）
となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス・チコ
リアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク
／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分離によ
り回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥し
た。

【０１１６】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを７０ｍｇ得た。

【０１１７】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３５０００、Ｍｗ＝３２４０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１１８】（実施例５）酵母エキス０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾
燥した。

【０１１９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを４５ｍｇ得た。

【０１２０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３８０００、Ｍｗ＝３３１０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを６１％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１２１】（実施例６）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。９０時間後、菌体を遠心分離
により回収し、一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１２２】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを６５ｍｇ得た。

【０１２３】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２１０００、Ｍｗ＝２８１０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９２％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１２４】（実施例７）ポリペプトン０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。４８時間後、菌体を遠心分離
により回収し、一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１２５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを５８ｍｇ得た。

【０１２６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１０８０００、Ｍｗ＝２４５０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを７０％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
るＰＨＡであることが確認された。

【０１２７】（実施例８）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体を遠心分
離により回収した。

【０１２８】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１２９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１２５ｍｇ得た。

【０１３０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２５０００、Ｍｗ＝２７２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８７％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１３１】（実施例９）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体を遠心分
離により回収した。

【０１３２】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１３３】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１４７ｍｇ得た。

【０１３４】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２９０００、Ｍｗ＝２８６０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８９％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１３５】（実施例１０）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体を遠心分
離により回収した。

【０１３６】次いで、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まな
いＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フ
ラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フラ
スコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニル
スルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）とな
るように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に
再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養
した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メ
タノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１３７】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを７０ｍｇ得た。

【０１３８】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３８０００、Ｍｗ＝２９８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９６％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１３９】（実施例１１）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．
０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪
培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離により回
収した。

【０１４０】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）、ジシクロプロ
ピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１４１】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８ｍｇ得た。

【０１４２】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２８０００、Ｍｗ＝２７８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９４％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１４３】（実施例１２）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離
により回収した。

【０１４４】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１４５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１４ｍｇ得た。

【０１４６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２５０００、Ｍｗ＝２８２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８８％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１４７】（実施例１３）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離
により回収した。

【０１４８】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１４９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを９０ｍｇ得た。

【０１５０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３８０００、Ｍｗ＝２９８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９０％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１５１】（実施例１４）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリア
イ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分
で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になった
時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を継続
した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収した。

【０１５２】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）、
ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１５３】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを５１ｍｇ得た。

【０１５４】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２１０００、Ｍｗ＝２８３０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８０％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１５５】（実施例１５）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリア
イ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分
で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になった
時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を継続
した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収した。

【０１５６】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１５７】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１４ｍｇ得た。

【０１５８】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１１９０００、Ｍｗ＝２４５０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８９％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１５９】（実施例１６）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリア
イ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分
で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になった
時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を継続
した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収した。

【０１６０】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１６１】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを６５ｍｇ得た。

【０１６２】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３７０００、Ｍｗ＝２９９０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを７２％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１６３】（実施例１７）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離
により回収した。

【０１６４】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）、ジシクロプロ
ピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１６５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを５ｍｇ得た。

【０１６６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１１８０００、Ｍｗ＝２６２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８９％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１６７】（実施例１８）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離
により回収した。

【０１６８】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度 ０．１％（ｖ／
ｖ）、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／
ｖ）となるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を
培地中に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で
振盪培養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収
し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１６９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを６０ｍｇ得た。

【０１７０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１１００００、Ｍｗ＝２６２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを７８％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１７１】（実施例１９）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリア
イ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分
で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になった
時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を継続
した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収した。

【０１７２】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）、ジシクロプロ
ピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１７３】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８ｍｇ得た。

【０１７４】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２１０００、Ｍｗ＝２７８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８９％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１７５】（実施例２０）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリア
イ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／分
で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になった
時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を継続
した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収した。

【０１７６】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）、
ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１７７】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを３０ｍｇ得た。

【０１７８】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２２０００、Ｍｗ＝２６９０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを７２％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１７９】（実施例２１）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収した。

【０１８０】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１８１】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１２１ｍｇ得た。

【０１８２】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２１０００、Ｍｗ＝２７８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９４％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１８３】（実施例２２）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収した。

【０１８４】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１８５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１１５ｍｇ得た。

【０１８６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２１０００、Ｍｗ＝２８２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９３％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１８７】（実施例２３）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収した。

【０１８８】次いで、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まな
いＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フ
ラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フラ
スコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニル
スルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）とな
るように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に
再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養
した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メ
タノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１８９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを５１ｍｇ得た。

【０１９０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１１９０００、Ｍｗ＝２７８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９６％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１９１】（実施例２４）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離
により回収した。

【０１９２】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１９３】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１６０ｍｇ得た。

【０１９４】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１４００００、Ｍｗ＝３０８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８５％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１９５】（実施例２５）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離
により回収した。

【０１９６】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０１９７】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１１８ｍｇ得た。

【０１９８】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３８０００、Ｍｗ＝３１２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを９３％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０１９９】（実施例２６）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリ
アイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／
分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になっ
た時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％
（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を
継続した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収し
た。

【０２００】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２０１】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１６０ｍｇ得た。

【０２０２】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３９０００、Ｍｗ＝３０９０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８６％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０２０３】（実施例２７）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリ
アイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／
分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になっ
た時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％
（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を
継続した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収し
た。

【０２０４】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２０５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１２１ｍｇ得た。

【０２０６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１４１０００、Ｍｗ＝３０２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８５％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０２０７】（実施例２８）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収した。

【０２０８】次いで、ピルビン酸ナトリウム０．５％
（ｗ／ｖ）を含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まない
Ｍ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラ
スコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フラス
コを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルス
ルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となる
ように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再
懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養し
た。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタ
ノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２０９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１４５ｍｇ得た。

【０２１０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３５０００、Ｍｗ＝２８８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを７２％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０２１１】（実施例２９）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．
１になった時点で、さらにジシクロプロピルケトンを濃
度０．０５％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、振盪培養を継続した。１４時間後、菌体を遠心分離
により回収した。

【０２１２】次いで、ピルビン酸ナトリウム０．５％
（ｗ／ｖ）を含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まない
Ｍ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラ
スコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フラス
コを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルス
ルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となる
ように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再
懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養し
た。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタ
ノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２１３】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８０ｍｇ得た。

【０２１４】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２９０００、Ｍｗ＝２８８０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８１％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０２１５】（実施例３０）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリ
アイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／
分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になっ
た時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％
（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を
継続した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収し
た。

【０２１６】次いで、ピルビン酸ナトリウム０．５％
（ｗ／ｖ）を含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まない
Ｍ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラ
スコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フラス
コを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルス
ルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）、ジシ
クロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／ｖ）となる
ように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再
懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養し
た。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタ
ノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２１７】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８０ｍｇ得た。

【０２１８】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３１０００、Ｍｗ＝２８９０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを８０％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０２１９】（実施例３１）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、シュードモナス・チコリ
アイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５ストローク／
分で振盪培養した。６００ｎｍでの濁度が０．１になっ
た時点で、ジシクロプロピルケトンを濃度０．０５％
（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、振盪培養を
継続した。１４時間後、菌体を遠心分離により回収し
た。

【０２２０】次いで、ピルビン酸ナトリウム０．５％
（ｗ／ｖ）を含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まない
Ｍ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラ
スコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フラス
コを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルス
ルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）、ジシ
クロプロピルケトンを濃度０．０５％（ｖ／ｖ）となる
ように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再
懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養し
た。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタ
ノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２２１】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを７５ｍｇ得た。

【０２２２】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３１０００、Ｍｗ＝２９２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを７８％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰＨＡであ
ることが確認された。

【０２２３】（実施例３２）ノナン酸０．１％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９寒天培地上のＹＮ２株のコロニーを滅菌
した生理食塩水に懸濁し、６００ｎｍでの濁度が１．０
となるように調整した。予め作製しておいた、炭素源を
含まないＭ９寒天倍地４０枚に、上記懸濁液を塗布し，
ノナン雰囲気下で、３０℃で静置培養した。４８時間
後、菌体を回収した後，生理食塩水２ｍｌに懸濁した。

【０２２４】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含み、窒素源であるＮＨ４Ｃｌを含まないＭ９培地２０
０ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪フラスコに入れ
て、オートクレーブにより滅菌した。フラスコを室温に
戻し、フィルター滅菌した１−（フェニルスルファニ
ル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加
えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中に再懸濁し
て、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９
０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノール
にて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２２５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１０ｍｇ得た。

【０２２６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２８０００、Ｍｗ＝２８２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを４６％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であることが確認
された。

【０２２７】（実施例３３）ノナン酸０．１％を含むＭ
９寒天培地上のＹＮ２株のコロニーを滅菌した生理食塩
水に懸濁し、６００ｎｍでの濁度が１．０となるように
調製した。予め作製しておいた、炭素源を含まないＭ９
寒天培地４０枚に、上記懸濁液を塗布し、ノナン雰囲気
下で、３０℃で静置培養した。４８時間後、菌体を回収
した後、生理食塩水２ｍｌに懸濁した。

【０２２８】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−（フェニ
ルスルファニル）ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）と
なるように加えてよく攪拌し、回収された菌体を培地中
に再懸濁して、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培
養した。９０時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷
メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２２９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８１ｍｇ得た。

【０２３０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１３１０００、Ｍｗ＝３０１０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを１５％含
み、それ以外のユニットが炭素数４から１２までの飽和
・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であることが確認
された。

【０２３１】（実施例３４）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
［（４−メチルフェニル）スルファニル］ペンタンを濃
度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、
３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９０時
間後、菌体を遠心分離により回収した。次いで、グルコ
ース０．５％（ｗ／ｖ）を含み、窒素源であるＮＨ４Ｃ
ｌを含まないＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
［（４−メチルフェニル）スルファニル］ペンタンを濃
度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、
回収された菌体を培地中に再懸濁して、３０℃、１２５
ストローク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体を遠
心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍
結乾燥した。

【０２３２】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを７４ｍｇ得た。

【０２３３】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝７２８００、Ｍｗ＝１４３０００であった。
また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−
ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
［（４−メチルフェニル）スルファニル］吉草酸ユニッ
トを４０％含み、それ以外のユニットが炭素数４から１
２までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であ
るＰＨＡであることが確認された。

【０２３４】（実施例３５）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
（フェニルスルファニル）ヘプタンを濃度０．１％（ｖ
／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シュードモナス
・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０℃、１２５スト
ローク／分で振盪培養した。４８時間後、菌体を遠心分
離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾
燥した。

【０２３５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８４ｍｇ得た。

【０２３６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１２８０００、Ｍｗ＝２９４０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−（フェニルスルファニル）吉草酸ユニットを４０％及
び、３−ヒドロキシ−７−（フェニルスルファニル）ヘ
プタン酸ユニットを１７％含み、それ以外のユニットが
炭素数４から１２までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシ
アルカン酸であるＰＨＡであることが確認された。

【０２３７】（実施例３６）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
［（４−フルオロフェニル）スルファニル］ペンタンを
濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、
３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時
間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて
一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２３８】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８０ｍｇ得た。

【０２３９】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝１１８０００、Ｍｗ＝２５２０００であっ
た。また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１
Ｈ−ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５
−［（４−フルオロフェニル）スルファニル］吉草酸ユ
ニットを７６％含み、それ以外のユニットが炭素数４か
ら１２までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸
であるＰＨＡであることが確認された。

【０２４０】（実施例３７）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
［（４−シアノフェニル）スルファニル］ペンタンを濃
度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、
シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０
℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間
後、菌体を遠心分離により回収した。

【０２４１】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−［（４−
シアノフェニル）スルファニル］ペンタンを濃度０．１
％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、回収され
た菌体を培地中に再懸濁して、３０℃、１２５ストロー
ク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体を遠心分離に
より回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥し
た。

【０２４２】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを４５ｍｇ得た。

【０２４３】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝６８０００、Ｍｗ＝１３７０００であった。
また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−
ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
［（４−シアノフェニル）スルファニル］吉草酸ユニッ
トを１２％含み、それ以外のユニットが炭素数４から１
２までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であ
るＰＨＡであることが確認された。

【０２４４】（実施例３８）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
［（４−ニトロフェニル）スルファニル］ペンタンを濃
度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、
シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０
℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。９０時間
後、菌体を遠心分離により回収した。

【０２４５】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−［（４−
ニトロフェニル）スルファニル］ペンタンを濃度０．１
％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、回収され
た菌体を培地中に再懸濁して、３０℃、１２５ストロー
ク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体を遠心分離に
より回収し、冷メタノールにて一度洗浄して凍結乾燥し
た。

【０２４６】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを２０ｍｇ得た。

【０２４７】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝６８０００、Ｍｗ＝１３７０００であった。
また、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−
ＮＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
［（４−ニトロフェニル）スルファニル］吉草酸ユニッ
トを５％含み、それ以外のユニットが炭素数４から１２
までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸である
ＰＨＡであることが確認された。

【０２４８】（実施例３９）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
［（フェニルメチル）スルファニル］ペンタンを濃度
０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シ
ュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０
℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間
後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一
度洗浄して凍結乾燥した。

【０２４９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを６１ｍｇ得た。

【０２５０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝３８０００、Ｍｗ＝７５０００であった。ま
た、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−Ｎ
ＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
［（フェニルメチル）スルファニル］吉草酸ユニットを
７２％含み、それ以外のユニットが炭素数４から１２ま
での飽和・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰ
ＨＡであることが確認された。

【０２５１】（実施例４０）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
［（フェニルメチル）スルファニル］ペンタンを濃度
０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌し、シ
ュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、３０
℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。４８時間
後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一
度洗浄して凍結乾燥した。

【０２５２】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを５８ｍｇ得た。

【０２５３】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝２９０００、Ｍｗ＝５７０００であった。ま
た、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−Ｎ
ＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
［（フェニルメチル）スルファニル］吉草酸ユニットを
８１％含み、それ以外のユニットが炭素数４から１２ま
での飽和・不飽和の３−ヒドロキシアルカン酸であるＰ
ＨＡであることが確認された。

【０２５４】（実施例４１）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
｛［（４−フルオロフェニル）メチル］スルファニル｝
ペンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えて
よく攪拌し、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を
植菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養し
た。４８時間後、菌体を遠心分離により回収し、冷メタ
ノールにて一度洗浄して凍結乾燥した。

【０２５５】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを８０ｍｇ得た。

【０２５６】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝２８０００、Ｍｗ＝５５０００であった。ま
た、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−Ｎ
ＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
｛［（４−フルオロフェニル）メチル］スルファニル｝
吉草酸ユニットを７３％含み、それ以外のユニットが炭
素数４から１２までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシア
ルカン酸であるＰＨＡであることが確認された。

【０２５７】（実施例４２）ポリペプトン０．５％（ｗ
／ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ
容の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌
した。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
｛［（４−シアノフェニル）メチル］スルファニル｝ペ
ンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよ
く攪拌し、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植
菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。
４８時間後、菌体を遠心分離により回収した。

【０２５８】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−｛［（４
−シアノフェニル）メチル］スルファニル｝ペンタンを
濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、回収された菌体を培地中に再懸濁して、３０℃、１
２５ストローク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体
を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄し
て凍結乾燥した。

【０２５９】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを２６ｍｇ得た。

【０２６０】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝３２０００、Ｍｗ＝６６０００であった。ま
た、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−Ｎ
ＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
｛［（４−シアノフェニル）メチル］スルファニル｝吉
草酸ユニットを１２％含み、それ以外のユニットが炭素
数４から１２までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシアル
カン酸であるＰＨＡであることが確認された。

【０２６１】（実施例４３）グルコース０．５％（ｗ／
ｖ）を含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容
の振盪フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌し
た。フラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−
｛［（４−ニトロフェニル）メチル］スルファニル｝ペ
ンタンを濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよ
く攪拌し、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植
菌し、３０℃、１２５ストローク／分で振盪培養した。
９０時間後、菌体を遠心分離により回収した。

【０２６２】次いで、グルコース０．５％（ｗ／ｖ）を
含むＭ９培地２００ｍＬを調製し、５００ｍＬ容の振盪
フラスコに入れて、オートクレーブにより滅菌した。フ
ラスコを室温に戻し、フィルター滅菌した１−｛［（４
−ニトロフェニル）メチル］スルファニル｝ペンタンを
濃度０．１％（ｖ／ｖ）となるように加えてよく攪拌
し、回収された菌体を培地中に再懸濁して、３０℃、１
２５ストローク／分で振盪培養した。９０時間後、菌体
を遠心分離により回収し、冷メタノールにて一度洗浄し
て凍結乾燥した。

【０２６３】この凍結乾燥ペレットを２０ｍＬクロロホ
ルムに懸濁し、６０℃で２０時間攪拌してＰＨＡを抽出
した。抽出液を孔径０．４５μｍのメンブランフィルタ
ーで濾過した後、ロータリーエバポレーターで濃縮し、
濃縮液を冷メタノールで再沈殿させ、更に沈殿のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを１０ｍｇ得た。

【０２６４】得られたＰＨＡの分子量は、実施例１と同
様の方法でＧＰＣ分析を行なうことで求めた。その結
果、Ｍｎ＝２６０００、Ｍｗ＝５３０００であった。ま
た、得られたＰＨＡを実施例１と同様の方法で^１Ｈ−Ｎ
ＭＲ分析を行なったところ、３−ヒドロキシ−５−
｛［（４−ニトロフェニル）メチル］スルファニル｝吉
草酸ユニットを５％含み、それ以外のユニットが炭素数
４から１２までの飽和・不飽和の３−ヒドロキシアルカ
ン酸であるＰＨＡであることが確認された。

【０２６５】

【発明の効果】本発明により、モノマーユニットに芳香
族置換基をもつポリヒドロキシアルカノエートを効率よ
く製造することが可能となった。

【０２６６】とりわけ、芳香族置換基をもつアルカン
を、モノマーユニットに芳香族置換基をもつポリヒドロ
キシアルカノエートに変換する能力を有する微生物を用
いることで合成効率を上げることが可能となった。また
アルカン酸化系の効果的な誘導物質であるジシクロプロ
ピルケトンによりアルカン酸化系を誘導することで、置
換アルカンから置換アルカン酸への代謝能力が向上し、
これにより生産されるポリヒドロキシアルカノエートの
収率ならびに純度を向上させることが可能となった。こ
れにより、機能性ポリマーとして有用な当該ポリヒドロ
キシアルカノエートが効率的に生産でき、医用材料、撥
水性材料等の各分野への応用が期待できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１において得られたポリヒドロキシアル
カノエートの^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 本間 務 東京都大田区下丸子３丁目30番２号キヤノ ン株式会社内 (72)発明者 須川 悦子 東京都大田区下丸子３丁目30番２号キヤノ ン株式会社内 (72)発明者 矢野 哲哉 東京都大田区下丸子３丁目30番２号キヤノ ン株式会社内 Ｆターム(参考） 4B064 AE61 BA14 BA15 BA16 BH04 CA02 CB30 CD05 CD07 CD11 CD13 CE03 CE08 CE16 DA16 DA20

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（１）： 【化１】 （式中、Ｒは置換芳香環を含む残基を示し、ｎは１〜８
   から選択される任意の整数を表す）で示される置換アル
   カン群より選ばれた少なくとも一種を出発化合物とし、
   前記一般式（１）の化合物を含む培地中で、ポリヒドロ
   キシアルカノエートの産生能を有する微生物を培養し
   て、下記一般式（２）： 【化２】 （式中、Ｒは置換芳香環を含む残基を示し、ｍは１〜８
   から選択される任意の整数を表す）で示される、３−ヒ
   ドロキシ置換アルカノエートユニット群より選ばれた少
   なくとも一種を分子中に含むポリヒドロキシアルカノエ
   ートを微生物に産生させることを特徴とする微生物を用
   いたポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。但し、
   一般式（１）及び一般式（２）におけるＲ、即ち置換芳
   香環を含む残基は、一般式（３）： 【化３】 （式中、Ｒ１は芳香環への置換基を示し、Ｒ１はＨ原
   子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ_３基、Ｃ_２
   Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）_２ＣＨ基、
   （ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも一種であ
   る。）で示される置換フェニルスルファニル残基群、及
   び、一般式（４）： 【化４】 （式中、Ｒ２は芳香環への置換基を示し、Ｒ２はＨ原
   子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ_２基、ＣＨ_３基、Ｃ_２
   Ｈ_５基、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２基、（ＣＨ_３）_２ＣＨ基、
   （ＣＨ_３）_３Ｃ基から選択された少なくとも一種であ
   る。）で示される（置換フェニルメチル）スルファニル
   残基群から選ばれる。
2. 【請求項２】 一般式（１）中に示されるｎ、一般式
   （２）中に示されるｍの関係が、下記数式（１）： ｍ＝ｎ−２ｌ・・・（１） （式中ｌは０≦ｌ＜（１／２）ｎなる任意の整数）で表
   される請求項１に記載の製造方法。
3. 【請求項３】 該ポリヒドロキシアルカノエートが、ポ
   リマー分子中に含まれるユニットとして、前記一般式
   （２）で示されるユニットに加えて、下記一般式
   （５）： 【化５】 （式中、ｐは、０〜８から選択される任意の整数を表
   し、ポリマー中において、一つ以上の値をとり得る）で
   示される３−ヒドロキシ−アルカン酸ユニット、あるい
   は、下記一般式（６）： 【化６】 （式中、ｑは、３および５から選択される任意の整数を
   表し、ポリマー中において、一つ以上の値をとり得る）
   で示される３−ヒドロキシ−アルカ−５−エン酸ユニッ
   トのうち、少なくとも１種類をポリマー分子中に含む請
   求項１に記載の製造方法。
4. 【請求項４】 該ポリヒドロキシアルカノエートの数平
   均分子量が５０００から１００００００の範囲である請
   求項１から３のいずれかに記載の製造方法。
5. 【請求項５】 ジシクロプロピルケトンを含む培地中で
   該微生物を培養する工程をさらに有する、請求項１から
   ４のいずれかに記載の製造方法。
6. 【請求項６】 該培地がポリペプトンを含有している請
   求項１から５のいずれかに記載の製造方法。
7. 【請求項７】 該培地が酵母エキスを含有している請求
   項１から５のいずれかに記載の製造方法。
8. 【請求項８】 該培地が糖類を含有している請求項１か
   ら５のいずれかに記載の製造方法。
9. 【請求項９】 培地中に含有される糖類は、 グリセロアルデヒド、エリトロース、アラビノース、キ
   シロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フ
   ルクトース、グリセロール、エリトリトール、キシリト
   ール、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マ
   ルトース、スクロース、ラクトースからなる群から選択
   される１種類以上の化合物である請求項８に記載の製造
   方法。
10. 【請求項１０】 該培地が有機酸またはその塩を含有し
    ている請求項１から５のいずれかに記載の製造方法。
11. 【請求項１１】 培地中に含有される有機酸またはその
    塩は、ピルビン酸、リンゴ酸、乳酸、クエン酸、コハク
    酸、あるいはこれらの塩からなる群から選択される１つ
    以上の化合物である請求項１０に記載の製造方法。
12. 【請求項１２】 該培地がアミノ酸またはその塩を含有
    している請求項１から５のいずれかに記載の製造方法。
13. 【請求項１３】 培地中に含有されるアミノ酸またはそ
    の塩は、グルタミン酸、アスパラギン酸あるいはこれら
    の塩からなる群から選択される１つ以上の化合物である
    請求項１２に記載の製造方法。
14. 【請求項１４】 該培地が炭素数４〜１２の直鎖アルカ
    ン酸あるいはその塩を含有している請求項１から５のい
    ずれかに記載の製造方法。
15. 【請求項１５】 前記培養工程において、微生物の培養
    は、 （工程１−１）前記一般式（１）で示される置換アルカ
    ン群より選ばれた少なくとも一種ならびにポリペプトン
    を含有する培地中で微生物を培養する工程と、これに続
    く、 （工程１−２）前記一般式（１）で示される置換アルカ
    ン群より選ばれた少なくとも一種ならびに有機酸または
    その塩を含有する培地中で、前記工程１−１で培養され
    た微生物を更に培養する工程とを有する、少なくとも二
    段階以上の培養で行なう請求項１から４のいずれかに記
    載の製造方法。
16. 【請求項１６】 前記培養工程において、微生物の培養
    は、 （工程１−３）前記一般式（１）で示される置換アルカ
    ン群より選ばれた少なくとも一種ならびに糖類を含有す
    る培地中で微生物を培養する工程と、これに続く、 （工程１−４）前記一般式（１）で示される置換アルカ
    ン群より選ばれた少なくとも一種ならびに糖類を含有す
    る培地中で、前記工程１−３で培養された微生物を更に
    培養する工程とを有する、少なくとも二段階以上の培養
    で行なう請求項１から４のいずれかに記載の製造方法。
17. 【請求項１７】 前記培養工程において、微生物の培養
    は、 （工程１−５）前記一般式（１）で示される置換アルカ
    ン群より選ばれた少なくとも一種ならびにポリペプトン
    を含有する培地中で微生物を培養する工程と、これに続
    く、 （工程１−６）前記一般式（１）で示される置換アルカ
    ン群より選ばれた少なくとも一種ならびに糖類を含有す
    る培地中で、前記工程１−５で培養された微生物を更に
    培養する工程とを有する、少なくとも二段階以上の培養
    で行なう請求項１から４のいずれかに記載の製造方法。
18. 【請求項１８】 ジシクロプロピルケトンを含む培地中
    で該微生物を培養する工程をさらに有する、請求項１５
    から１７のいずれかに記載の製造方法。
19. 【請求項１９】 該微生物が、アルカンモノオキシゲナ
    ーゼを有している微生物である請求項１〜１８のいずれ
    かに記載の製造方法。
20. 【請求項２０】 該微生物が、シュードモナス・チコリ
    アイ ＹＮ２株（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｃｉｃｈｏ
    ｒｉｉ ＹＮ２；ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７５）である請
    求項１９に記載の製造方法。