JP3754956B2 - 側鎖にブロモ基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 - Google Patents
側鎖にブロモ基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP3754956B2 JP3754956B2 JP2002362594A JP2002362594A JP3754956B2 JP 3754956 B2 JP3754956 B2 JP 3754956B2 JP 2002362594 A JP2002362594 A JP 2002362594A JP 2002362594 A JP2002362594 A JP 2002362594A JP 3754956 B2 JP3754956 B2 JP 3754956B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- atom
- chemical formula
- unit
- represented
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000005014 poly(hydroxyalkanoate) Substances 0.000 title claims description 115
- 229920000903 polyhydroxyalkanoate Polymers 0.000 title claims description 115
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 44
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 title description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 128
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 52
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 48
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 41
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 38
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 35
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 34
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 20
- 229910052700 potassium Chemical group 0.000 claims description 20
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 15
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 12
- 125000004436 sodium atom Chemical group 0.000 claims description 12
- SPBBSBZTCXPXRG-UHFFFAOYSA-N 8-bromo-3-hydroxyoctanoic acid Chemical group OC(=O)CC(O)CCCCCBr SPBBSBZTCXPXRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 4
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- QVSPXBPXZHAWKB-UHFFFAOYSA-N 11-bromo-3-hydroxyundecanoic acid Chemical group OC(=O)CC(O)CCCCCCCCBr QVSPXBPXZHAWKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FIZJNIWOPYZITC-UHFFFAOYSA-N 7-bromo-3-hydroxyheptanoic acid Chemical group OC(=O)CC(O)CCCCBr FIZJNIWOPYZITC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims 8
- STIODKHHDQTPHD-UHFFFAOYSA-N 6-bromohexan-3-ol Chemical compound CCC(O)CCCBr STIODKHHDQTPHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- NALFDJAMOZETFE-UHFFFAOYSA-N 9-bromo-3-hydroxynonanoic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)CCCCCCBr NALFDJAMOZETFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 201
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 75
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 74
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 53
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 36
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 36
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 32
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 26
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 25
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 16
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 16
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 15
- 241000723343 Cichorium Species 0.000 description 14
- 235000007542 Cichorium intybus Nutrition 0.000 description 14
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 13
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 12
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 12
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 12
- 239000013630 prepared media Substances 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 208000003464 asthenopia Diseases 0.000 description 10
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- IUDGNRWYNOEIKF-UHFFFAOYSA-N 11-bromo-undecanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCCCCBr IUDGNRWYNOEIKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PRMNZQRHYSTJDR-UHFFFAOYSA-N 6-bromo-3-hydroxyhexanoic acid Chemical group OC(=O)CC(O)CCCBr PRMNZQRHYSTJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- YYEBMOCMHWICRI-UHFFFAOYSA-N 5-phenoxypentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCOC1=CC=CC=C1 YYEBMOCMHWICRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BKJFDZSBZWHRNH-UHFFFAOYSA-N 8-bromooctanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCCCBr BKJFDZSBZWHRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000589781 Pseudomonas oleovorans Species 0.000 description 7
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 4
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 4
- BYHDDXPKOZIZRV-UHFFFAOYSA-N 5-phenylpentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC1=CC=CC=C1 BYHDDXPKOZIZRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GJMNFBCGDBGJMD-UHFFFAOYSA-N 5-phenylsulfanylpentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCSC1=CC=CC=C1 GJMNFBCGDBGJMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001508466 Pseudomonas cichorii Species 0.000 description 2
- 241001300822 Pseudomonas jessenii Species 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000704 biodegradable plastic Polymers 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 2
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 2
- FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N nonanoic acid Chemical compound CCCCCCCCC(O)=O FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IMMRMPAXYUIDLR-UHFFFAOYSA-N (R)-3-Hydroxy-5-phenylpentanoic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)CCC1=CC=CC=C1 IMMRMPAXYUIDLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KHSYYLCXQKCYQX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthalen-2-ylethanamine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C(N)C)=CC=C21 KHSYYLCXQKCYQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XEZNGIUYQVAUSS-UHFFFAOYSA-N 18-crown-6 Chemical compound C1COCCOCCOCCOCCOCCO1 XEZNGIUYQVAUSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCOCFNMFLNFNIA-ZSCHJXSPSA-N 2-(1-benzylindazol-3-yl)oxyacetic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound [NH3+]CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O.C12=CC=CC=C2C(OCC(=O)[O-])=NN1CC1=CC=CC=C1 OCOCFNMFLNFNIA-ZSCHJXSPSA-N 0.000 description 1
- HZTPKMIMXLTOSK-UHFFFAOYSA-N 2-bromohexanoic acid Chemical group CCCCC(Br)C(O)=O HZTPKMIMXLTOSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MELJYLJLJXTLGX-UHFFFAOYSA-N 2-bromononanoic acid Chemical group CCCCCCCC(Br)C(O)=O MELJYLJLJXTLGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTXOCHZZFXNSGV-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-5-(4-methylphenyl)pentanoic acid Chemical group CC1=CC=C(CCC(O)CC(O)=O)C=C1 HTXOCHZZFXNSGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKPPNJNGKKHGLI-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-5-phenoxypentanoic acid Chemical group OC(=O)CC(O)CCOC1=CC=CC=C1 ZKPPNJNGKKHGLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PGCWOTKQXIBVBQ-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-6-(4-nitrophenoxy)hexanoic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)CCCOC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 PGCWOTKQXIBVBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AAPYQLZXVZEIAM-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-9-phenoxynonanoic acid Chemical group OC(=O)CC(O)CCCCCCOC1=CC=CC=C1 AAPYQLZXVZEIAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybutyric acid Chemical compound CC(O)CC(O)=O WHBMMWSBFZVSSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPJLUCFLFLENME-UHFFFAOYSA-N 5-(2,4-dinitrophenyl)-3-hydroxypentanoic acid Chemical group OC(=O)CC(O)CCC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O CPJLUCFLFLENME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KLQPLKFMHIYFRO-UHFFFAOYSA-N 5-(2,4-dinitrophenyl)pentanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O KLQPLKFMHIYFRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYONRHRQXUQJJZ-UHFFFAOYSA-N 5-(4-methylphenyl)pentanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(CCCCC(O)=O)C=C1 UYONRHRQXUQJJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEKCHPZLXIJPFI-UHFFFAOYSA-N 6-(4-cyanophenoxy)-3-hydroxyhexanoic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)CCCOC1=CC=C(C#N)C=C1 ZEKCHPZLXIJPFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSBGMWIYDOZJNL-UHFFFAOYSA-N 6-(4-cyanophenoxy)hexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCOC1=CC=C(C#N)C=C1 DSBGMWIYDOZJNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVRVNSHHLPQGCU-UHFFFAOYSA-N 6-bromohexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCCBr NVRVNSHHLPQGCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIEMSTCGCMIJTI-UHFFFAOYSA-N 6-oxo-6-phenylhexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(=O)C1=CC=CC=C1 AIEMSTCGCMIJTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- IFHPZFRCKRBBAO-UHFFFAOYSA-N CCC(CC(C)=O)CBr Chemical compound CCC(CC(C)=O)CBr IFHPZFRCKRBBAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWZJKDJLHGHDGN-UHFFFAOYSA-N CNc1ccc[nH]1 Chemical compound CNc1ccc[nH]1 RWZJKDJLHGHDGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGBMEVRLHJFILR-UHFFFAOYSA-N C[NH+](c1ccc[nH]1)[O-] Chemical compound C[NH+](c1ccc[nH]1)[O-] JGBMEVRLHJFILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- YTBSYETUWUMLBZ-UHFFFAOYSA-N D-Erythrose Natural products OCC(O)C(O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YTBSYETUWUMLBZ-IUYQGCFVSA-N D-erythrose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C=O YTBSYETUWUMLBZ-IUYQGCFVSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde Chemical compound OC[C@@H](O)C=O MNQZXJOMYWMBOU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-ZAFYKAAXSA-N D-threo-isocitric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-ZAFYKAAXSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010056474 Erythrosis Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-FONMRSAGSA-N Isocitric acid Natural products OC(=O)[C@@H](O)[C@H](C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-FONMRSAGSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 229910021586 Nickel(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N Thiophene Chemical group C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PCBOWMZAEDDKNH-HOTGVXAUSA-N [4-(trifluoromethoxy)phenyl]methyl (3as,6as)-2-(3-fluoro-4-sulfamoylbenzoyl)-1,3,3a,4,6,6a-hexahydropyrrolo[3,4-c]pyrrole-5-carboxylate Chemical compound C1=C(F)C(S(=O)(=O)N)=CC=C1C(=O)N1C[C@H]2CN(C(=O)OCC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C[C@@H]2C1 PCBOWMZAEDDKNH-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N aldehydo-D-galacturonic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-RSJOWCBRSA-N 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N benzyl(trichloro)silane Chemical compound Cl[Si](Cl)(Cl)CC1=CC=CC=C1 GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000011087 fumaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000010128 melt processing Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L nickel dichloride Chemical compound Cl[Ni]Cl QMMRZOWCJAIUJA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 p-nitrophenoxy Chemical group 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N pentanoic acid group Chemical group C(CCCC)(=O)O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N threo-D-isocitric acid Natural products OC(=O)C(O)C(C(O)=O)CC(O)=O ODBLHEXUDAPZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
- C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
- C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/62—Carboxylic acid esters
- C12P7/625—Polyesters of hydroxy carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
- C08G63/68—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen
- C08G63/682—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing halogens
- C08G63/6822—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing halogens derived from hydroxy carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
- C08G63/68—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen
- C08G63/688—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing sulfur
- C08G63/6882—Polyesters containing atoms other than carbon, hydrogen and oxygen containing sulfur derived from hydroxy carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P11/00—Preparation of sulfur-containing organic compounds
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体と、微生物を利用するその製造方法に関する。
【０００２】
【背景技術】
これまで、多くの微生物が、ポリ-３-ヒドロキシ酪酸(ＰＨＢ)あるいはその他のポリヒドロキシアルカノエート(ＰＨＡ)を生産し、その菌体内に蓄積することが報告されている(非特許文献１参照)。これらポリヒドロキシアルカノエートなどの微生物が産生するポリマーは、従来のプラスチックと同様に、溶融加工等により各種製品の生産に利用することができる。さらに、微生物が産生するポリマー、例えば、ポリヒドロキシアルカノエートなどは、生分解性を有しており、自然界の微生物により完全分解されるという利点を有している。従って、例えば、微生物が産生するポリヒドロキシアルカノエートは、廃棄した際、従来の多くの合成高分子化合物のように自然環境にそのまま残留し、汚染を引き起こす要因となることがない。また、微生物が産生するポリヒドロキシアルカノエートは、一般に生体適合性にも優れており、医療用軟質部材等としての応用も期待されている。
【０００３】
この微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートは、その生産に用いる微生物の種類、ならびに、培地組成、培養条件等により、様々な組成や構造のものとなり得ることも知られている。これまで、主にポリヒドロキシアルカノエートの物性の改良という観点から、微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートの組成や構造の制御を試みる研究がなされてきた。
【０００４】
微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートの組成や構造の制御を目的とする研究の一つとして、近年、ユニット中に芳香環を有するポリヒドロキシアルカノエートを微生物に生産させる研究が盛んになされている。
【０００５】
(a)フェニル基もしくはその部分置換体を含むもの
・５-フェニル吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)が３-ヒドロキシ-５-フェニル吉草酸をユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている(非特許文献２及び３参照)。
【０００６】
・５-(p-トリル)吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランスが３-ヒドロキシ-５-(p-トリル)吉草酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている(非特許文献４参照)。
【０００７】
・５-(２,４-ジニトロフェニル)吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランスが３-ヒドロキシ-５-(２,４-ジニトロフェニル)吉草酸ユニット及び３-ヒドロキシ-５-(p-ニトロフェニル)吉草酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている(非特許文献５参照)。
【０００８】
(b)フェノキシ基もしくはその部分置換体を含むもの
11-フェノキシウンデカン酸を基質として、シュードモナスオレオボランスが３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニットと３-ヒドロキシ-９-フェノキシノナン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産することが報告されている(非特許文献６参照)。
【０００９】
３-ヒドロキシ-５-(モノフルオロフェノキシ)ペンタノエート(３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐ)ユニット、あるいは３-ヒドロキシ-５-(ジフルオロフェノキシ)ペンタノエート(３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐ)ユニットからなる単独重合体；少なくとも、３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐユニットあるいは３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐユニットを含有する共重合体；これらのポリマーの産生能を有するシュードモナス・プチダ；シュードモナス属を用いた、前記のポリマーの製造法に関する発明が開示されている。加えて、その発明の効果として、置換基を有する長鎖脂肪酸を資化して、側鎖末端に、１から２個のフッ素原子が置換したフェノキシ基をもつポリマーを合成することができ、また、かかるポリマーは、融点が高い上、良い加工性を保持しつつ、加えて、立体規則性、撥水性を与えることができる点を記載している。(特許文献１参照)。
【００１０】
このユニット中の芳香環上にフッ素置換を有するフッ素置換ＰＨＡ以外に、ユニット中の芳香環上にシアノ基やニトロ基が置換したポリヒドロキシアルカノエートの研究もなされている。
【００１１】
非特許文献７及び８には、シュードモナス オレオボランス ＡＴＣＣ 29347株及びシュードモナス プチダ(Ｐseudoｍonas putida)ＫＴ 2442株を用いて、オクタン酸と６-(p-シアノフェノキシ)ヘキサン酸あるいは６-(p-ニトロフェノキシ)ヘキサン酸を基質として、３-ヒドロキシ-６-(p-シアノフェノキシ)ヘキサン酸あるいは３-ヒドロキシ-６-(p-ニトロフェノキシ)ヘキサン酸をモノマーユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエートの生産が報告されている。
【００１２】
これら環上に置換基を持つ芳香環を有するユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートは、ガラス転移温度が高く、加工性も良いという、芳香環に由来するポリマー性状を維持しつつ、芳香環上に存在している置換基に由来する新たな機能も付与された、多機能のポリヒドロキシアルカノエートとなる。
【００１３】
また、その一方で、ユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートを基に、生産ポリマーに対して、前記ブロモ基を利用する化学変換により任意の官能基をポリマー側鎖に導入し、多機能のポリヒドロキシアルカノエートを得ることを目的とした研究も盛んに行われている。
【００１４】
・シュードモナス オレオボランスを用いて、側鎖にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産し、アセチル化マルトースのチオール化物を側鎖に修飾し、その溶解性や親水性の異なるポリヒドロキシアルカノエートを合成したことが報告されている(非特許文献９参照)。
【００１５】
上記の報告のように、ブロモ基は、付加反応などにおける反応性が高く、様々な官能基の導入や化学的変換を施すことが可能である。また、ポリマーの架橋反応の足がかり、架橋点ともなりうる。従って、ポリヒドロキシアルカノエートを構成するユニット内にブロモ基を有することは、ポリマーの機能材料としての応用を考える上で、非常に有用であると言うことができる。
【００１６】
この様な、ユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートは、これまでω-ブロモアルカン酸のみを原料として、或いは直鎖アルカン酸を共存させることにより微生物合成されてきた。
【００１７】
シュードモナス オレオボランスを用いて、11-ブロモウンデカン酸、８-ブロモオクタン酸、６-ブロモヘキサン酸といったω-ブロモアルカン酸とn-ノナン酸の共存下で３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートが生産されることが報告されている(非特許文献10参照)。
【００１８】
以上の他、本願発明には特開2001-288256号公報(特許文献２参照)の記載が引用されている。
【００１９】
【特許文献１】
特許第2989175号公報
【特許文献２】
特開2001-288256号公報
【非特許文献１】
生分解性プラスチック研究会編「生分解性プラスチックハンドブック」(株)エヌ・ティー・エス、1995年、p.178-197
【非特許文献２】
Ｍakroｍol.Ｃheｍ.,191号、1990年、p.1957-1965
【非特許文献３】
Ｍac roｍolecules,24号、1991年、p.5256-5260
【非特許文献４】
Ｍacroｍolecules,29号、1996年、p.1762-1766
【非特許文献５】
Ｍacroｍolecules,32号、1999年、p.2889-2895
【非特許文献６】
Ｍacroｍol.Ｃheｍ.Ｐhys.,195号、1994年、p.1665-1672
【非特許文献７】
Ｃan.Ｊ.Ｍicrobiol.,41号、1995年、p.32-43
【非特許文献８】
Ｐolyｍer International,39号、1996年、p.205-213
【非特許文献９】
Ｍacroｍol.Ｒapid Ｃoｍｍun.,20号、1999年、p.91-94
【非特許文献１０】
Ｍacroｍolecules,25号、1992年、p.1852-1857
【００２０】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、この様にして得られるユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートは、通常直鎖３-ヒドロキシアルカン酸ユニットを含む共重合体である。この様なＰＨＡはガラス転移温度が-20℃から-30℃程度と、ポリマーとして利用し得る応用範囲が限られたものとなる。この様なことから、ユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートであって、ポリマーとしての応用範囲を広げ得るような、熱的に安定な、更には物性を任意に制御し得るようなポリヒドロキシアルカノエートそのもの、及びその製造方法が求められていた。
【００２１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究の結果、以下のような発明に至った。即ち、本発明は、
[Ａ]化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットと、化学式(２)で示すユニットとを同一分子中に含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００２２】
【化２９】
【００２３】
(nは化学式中に示した範囲内の数値を表し、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００２４】
【化３０】
【００２５】
(化学式中Ｒ及びｍは下記より選択された少なくとも一種の組み合わせを構成する；Ｒはフェニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはチエニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはシクロヘキシル構造を有する残基を含んでおりｍは０〜８から選ばれた整数である。複数のユニットが存在する場合、Ｒ及びｍは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００２６】
本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、
[Ｂ]前記化学式(２)で示すユニットにおけるＲ、即ちフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基が、下記化学式(３)〜(14)で示される残基群から選ばれた少なくとも１種類であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ａ]記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００２７】
【化３１】
【００２８】
(式中、Ｒ1は芳香環への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ2(ここでＲ2は、Ｈ原子、Ｎa原子およびＫ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００２９】
【化３２】
【００３０】
(式中、Ｒ3は芳香環への置換基を示し、Ｒ3はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基、Ｃ3Ｆ7基またはＳＣＨ3基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３１】
【化３３】
【００３２】
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３３】
【化３４】
【００３４】
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ6、ＳＯ2Ｒ7(ここでＲ6は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ7は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３５】
【化３５】
【００３６】
(式中、Ｒ8は芳香環への置換基を示し、Ｒ8はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ9、ＳＯ2Ｒ10(ここでＲ9は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ10は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３７】
【化３６】
【００３８】
【化３７】
【００３９】
(式中、Ｒ11はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ11はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００４０】
【化３８】
【００４１】
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(ここでＲ13は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ14は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００４２】
【化３９】
【００４３】
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(ここでＲ16は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ17は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００４４】
【化４０】
【００４５】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、
[Ｃ]前記化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットが、化学式(15)に示す３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットおよび化学式(16)に示す３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットのうちの少なくとも１種であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ａ]または[Ｂ]記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００４６】
【化４１】
【００４７】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、
[Ｄ]前記化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットが、化学式(17)に示す３-ヒドロキシ-11-ブロモウンデカン酸ユニット、化学式(18)に示す３-ヒドロキシ-９-ブロモノナン酸ユニットおよび化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-７-ブロモヘプタン酸ユニットのうちの少なくとも１種であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ａ]または[Ｂ]記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００４８】
【化４２】
【００５０】
また本発明は、
[Ｆ]化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種及び化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種を原料として、化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットの少なくとも１種と、化学式(２)で示すユニットの少なくとも１種とを同一分子中に含み、数平均分子量が 2000 から 500000 の範囲であるポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットの少なくとも１種と、化学式(２)で示すユニットの少なくとも１種とを同一分子中に含み、数平均分子量が 2000 から 500000 の範囲であるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【００５１】
【化４３】
【００５２】
(pは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である。)
【００５３】
【化４４】
【００５４】
(化学式中Ｒ及びqは下記より選択された少なくとも一種の組み合わせを構成する；Ｒはフェニル構造を有する残基を含んでおりqは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはチエニル構造を有する残基を含んでおりqは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはシクロヘキシル構造を有する残基を含んでおりqは０〜８から選ばれた整数である；)
【００５５】
【化４５】
【００５６】
(nは各ユニット毎に独立して化学式中に示した範囲内の数値を表す。)
【００５７】
【化４６】
【００５８】
(化学式中Ｒ及びｍは下記より選択された少なくとも一種の組み合わせを構成する；Ｒはフェニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはチエニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはシクロヘキシル構造を有する残基を含んでおりｍは０〜８から選ばれた整数である。複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００５９】
本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、
[Ｇ]前記化学式(２)及び(21)におけるＲ、即ちフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基が、下記化学式(３)〜(14)で示される残基群から選ばれた少なくとも１種類であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ｆ]に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【００６０】
【化４７】
【００６１】
(式中、Ｒ1は芳香環への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ2(ここでＲ2は、Ｈ原子、Ｎa原子およびＫ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６２】
【化４８】
【００６３】
(式中、Ｒ3は芳香環への置換基を示し、Ｒ3はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基、Ｃ3Ｆ7基またはＳＣＨ3基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６４】
【化４９】
【００６５】
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６６】
【化５０】
【００６７】
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ6、ＳＯ2Ｒ7(ここでＲ6は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ7は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６８】
【化５１】
【００６９】
(式中、Ｒ8は芳香環への置換基を示し、Ｒ8はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ9、ＳＯ2Ｒ10(ここでＲ9は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ10は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７０】
【化５２】
【００７１】
【化５３】
【００７２】
(式中、Ｒ11はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ11はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７３】
【化５４】
【００７４】
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(ここでＲ13は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ14は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７５】
【化５５】
【００７６】
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(ここでＲ16は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ17は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７７】
【化５６】
【００７８】
更に、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、
[Ｈ]前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種とを含む培地中で、前記微生物を培養する前記[Ｆ]または[Ｇ]に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００７９】
更に詳細には、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、ペプチド類をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記ペプチド類として、ポリペプトンを用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８０】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種加えて、酵母エキスをも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８１】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、有機酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記有機酸或いはその塩として、ピルビン酸、オキサロ酢酸、クエン酸、イソクエン酸、ケトグルタル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、ならびにこれら有機酸の塩からなる群より選択される１つ以上を用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８２】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、アミノ酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記アミノ酸或いはその塩として、グルタミン酸、アスパラギン酸、ならびにこれらアミノ酸の塩からなる群より選択される１つ以上を用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８３】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、糖類をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記糖類として、グリセロアルデヒド、エリトロース、アラビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、グリセロール、エリトリトール、キシリトール、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マルトース、スクロース、ラクトースからなる群より選択される１つ以上の選ばれる１つ以上の糖類を用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８４】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、炭素数４から12の直鎖アルカン酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８５】
本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法における微生物の培養条件の詳細は、以下の通りである。
【００８６】
リン酸緩衝液及びアンモニウム塩或いは硝酸塩を基本とした無機塩培地に、以下に示すように種々の必要基質及び栄養素を加える。
【００８７】
目的とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産するための基質として前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種を培地あたりそれぞれ0.0005％から１％(ｗ/v)、更に好ましくは0.001％から0.2％の割合で含有していることが望ましい。
【００８８】
微生物増殖のための炭素源及び窒素源、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体生産のためのエネルギー供給源として加える上記の共存基質濃度は、通常培地あたり0.1％から５％(ｗ/v)、更に好ましくは0.2％から２％の割合で含有していることが望ましい。
本発明で用いる培地としては、リン酸塩及びアンモニウム塩或いは硝酸塩等の窒素源を含む無機塩培地ならいかなる培地でも良いが、窒素源の濃度を調節することでポリヒドロキシアルカノエート共重合体の生産性を向上せしめることが可能である。
【００８９】
培養温度としては上記の菌株が良好に増殖可能な温度であれば良く、15℃から37℃、更に好ましくは20℃から30℃程度が適当である。
【００９０】
培養は液体培養、固体培養等該微生物が増殖し、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する培養方法ならいかなる培養方法でも用いることができる。さらに、バッチ培養、フェドバッチ培養、半連続培養、連続培養等の種類も問わない。液体バッチ培養の形態としては、振とうフラスコによって振とうさせて酸素を供給する方法、ジャーファーメンターによる攪拌通気方式の酸素供給方法がある。
【００９１】
微生物にポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産・蓄積せしめる方法としては、上に示した方法の他に、一旦十分に増殖させて後に、塩化アンモニウムのような窒素源を制限した培地へ菌体を移し、目的ユニットの基質となる化合物を加えた状態で更に培養すると生産性が向上する場合がある。
【００９２】
更に本発明の製造方法においては、上記のような条件下で前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニット、及び前記化学式(２)で示すユニットを同一分子中に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を微生物細胞から回収する工程を有するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００９３】
【発明の実施の形態】
(回収方法)
微生物細胞から目的のポリヒドロキシアルカノエート共重合体を回収する方法としては、通常行なわれているポリヒドロキシアルカノエートの回収方法を適用することができる。例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、アセトンなどの有機溶媒による抽出が最も簡便ではあるが、それ以外にジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルが用いられる場合もある。また、有機溶媒が使用しにくい環境中においては、ＳＤＳ等の界面活性剤による処理、リゾチーム等の酵素による処理、次亜塩素酸塩、アンモニア、ＥＤＴＡ等の薬剤による処理、或いは超音波破砕法、ホモジナイザー法、圧力破砕法、ビーズ衝撃法、摩砕法、擂潰法、凍結融解法のいずれかの方法を用いて微生物細胞を物理的に破砕することによって、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体以外の菌体成分を除去して、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体を回収する方法を用いることもできる。
【００９４】
(微生物)
本発明の製造方法で用いる前記微生物としては、前記条件を満たす能力を有する微生物であれば如何なる微生物でも良いが、その中でも特にシュードモナス(Ｐseudoｍonas)属に属する微生物が望ましく、更に詳しくはシュードモナス チコリアイ(Ｐseudoｍonas cichorii)、シュードモナス プチダ(Ｐseudoｍonas putida)、シュードモナス フルオレセンス(Ｐseudoｍonas fluorecense)、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)、シュードモナス アルギノーサ(Ｐseudoｍonas aeruginosa)、シュードモナス スツッツェリ(Ｐseudoｍonas stutzeri)、シュードモナス ジェッセニイ(Ｐseudoｍonas jessenii)等が望ましい。更に詳しくは、さらに詳しくは、シュードモナス チコリアイ ＹＮ２株(Ｐseudoｍonas cichorii ＹＮ２；ＦＥＲＭ ＢＰ-7375)、シュードモナス チコリアイ Ｈ45株(Ｐseudoｍonas cichorii Ｈ45；ＦＥＲＭ ＢＰ-7374)、シュードモナス ジェッセニイ Ｐ161株(Ｐseudoｍonas jessenii Ｐ161；ＦＥＲＭ ＢＰ-7376)、シュードモナス プチダ Ｐ91株(Ｐseudoｍonas putida Ｐ91；ＦＥＲＭＢＰ-7373)が挙げられる。これら４種の微生物は独立行政法人 産業技術総合研究所(旧 通商産業省 工業技術院)特許生物寄託センターに寄託されており、特開2001-288256号公報(特許文献２)に記載されている微生物である。
【００９５】
なお、本発明の微生物の培養、本発明の微生物によるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の生産と菌体への蓄積、並びに、本発明における菌体からのポリヒドロキシアルカノエート共重合体の回収は、上記の方法に限定されるものではない。
【００９６】
(培地)
本発明の一方法に用いた無機塩培地(Ｍ９培地)の組成を以下に示す。
【００９７】
[Ｍ９培地]
Ｎa2ＨＰＯ4 :6.3
ＫＨ2ＰＯ4 :3.0
ＮＨ4Ｃl :1.0
ＮaＣl :0.5
(g/L、pＨ＝7.0)
【００９８】
更に、良好な増殖及びポリヒドロキシアルカノエート共重合体の生産のためには、上記の無機塩培地に培地に以下に示す微量成分溶液を0.3％(v/v)程度添加する必要がある。
【００９９】
[微量成分溶液]
ニトリロ 三酢酸:1.5；ＭgＳＯ4:3.0；ＭnＳＯ4:0.5；ＮaＣl:1.0；ＦeＳＯ4:0.1；ＣaＣl2:0.1；
ＣoＣl2:0.1；ＺnＳＯ4:0.1；ＣuＳＯ4:0.1；ＡlＫ(ＳＯ4)2:0.1；Ｈ3ＢＯ3:0.1；Ｎa2ＭoＯ4:0.1；ＮiＣl2:0.1(g/L)
【０１００】
【実施例】
以下に実施例を示す。なお、以下における「％」は特に標記した以外は重量基準である。
【０１０１】
[実施例１]
ポリペプトン(和光純薬)5.0g、５-フェニル吉草酸1.06g及び８-ブロモオクタン酸0.67gを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス ジェッセニイＰ161株の培養液を５ｍl加え、30℃、64時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１０２】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(22)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝2：92：6)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１０３】
【化５７】
【０１０４】
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソー ＨＬＣ-8220 ＧＰＣ、カラム:東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１０５】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図１に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表１に示す。
【０１０６】
【表１】
【０１０７】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１０８】
[実施例２]
実施例１で用いたＰ161株をシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株に変更した以外は実施例１と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０１０９】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(23)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：90：9)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１１０】
【化５８】
【０１１１】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１１２】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図２に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表２に示す。
【０１１３】
【表２】
【０１１４】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１１５】
[実施例３]
実施例１で用いたポリペプトンを酵母エキスに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(24)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：91：8)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１１６】
【化５９】
【０１１７】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１１８】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表３に示す。
【０１１９】
【表３】
【０１２０】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１２１】
[実施例４]
実施例１で用いた菌株であるＰ161株をシュードモナス チコリアイＨ45株に変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(25)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：93：6)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１２２】
【化６０】
【０１２３】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１２４】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表４に示す。
【０１２５】
【表４】
【０１２６】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１２７】
[実施例５]
実施例１で用いた菌株であるＰ161株をシュードモナス プチダＰ91株に変更し、培地中のポリペプトンを酵母エキスに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(26)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：91：8)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１２８】
【化６１】
【０１２９】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１３０】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表５に示す。
【０１３１】
【表５】
【０１３２】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１３３】
[実施例６]
実施例１で用いた培地中のポリペプトンをＤ-グルコースに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(27)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝3：90：7)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１３４】
【化６２】
【０１３５】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１３６】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表６に示す。
【０１３７】
【表６】
【０１３８】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１３９】
[実施例７]
実施例１で用いた培地中のポリペプトンをピルビン酸ナトリウムに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(28)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝4：89：7)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１４０】
【化６３】
【０１４１】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１４２】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表７に示す。
【０１４３】
【表７】
【０１４４】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１４５】
[実施例８]
実施例１で用いた培地中のポリペプトンをグルタミン酸ナトリウムに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(29)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：91：8)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１４６】
【化６４】
【０１４７】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１４８】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表８に示す。
【０１４９】
【表８】
【０１５０】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１５１】
[実施例９]
ポリペプトン(和光純薬)125g、５-フェニル吉草酸26.7g及び11-ブロモウンデカン酸19.9gを前記Ｍ９培地25Lに溶解し、50L容ジャーファーメンターに入れて121℃で10分間滅菌した後30℃まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス ジェッセニイ Ｐ161株の培養液を200ｍl加え、30℃、70rpｍ、通気量9.4L/分で16時間通気攪拌培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム200ｍlを加え、35℃で16時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１５２】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(30)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＝5：85：10)であることが確認された。
【０１５３】
【化６５】
【０１５４】
(化学式中aは０から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１５５】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表９に示す。
【０１５６】
【表９】
【０１５７】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１５８】
[実施例10]
ポリペプトン(和光純薬)125g、５-フェノキシ吉草酸29.1g及び８-ブロモオクタン酸5.6gを前記Ｍ９培地25Lに溶解し、50L容ジャーファーメンターに入れて121℃で10分間滅菌した後30℃まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を200ｍl加え、30℃、70rpｍ、通気量9.4L/分で15時間通気攪拌培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム250ｍlを加え、35℃で42時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１５９】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(31)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝6：87：7)であることが確認された。
【０１６０】
【化６６】
【０１６１】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１６２】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図３に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表10に示す。
【０１６３】
【表１０】
【０１６４】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１６５】
[実施例11]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び８-ブロモオクタン酸0.004gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、65時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で63時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１６６】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(32)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝6：91：3)であることが確認された。
【０１６７】
【化６７】
【０１６８】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１６９】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表11に示す。
【０１７０】
【表１１】
【０１７１】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１７２】
[実施例12]
Ｄ-グルコース1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び８-ブロモオクタン酸0.13gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した(培地１)。次に、Ｄ-グルコース1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び８-ブロモオクタン酸0.13gを前記Ｍ９培地組成から窒素源(ＮＨ4Ｃl)のみを除いた培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した(培地２)。培地１中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、40時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、培地２中に、前記の収穫した菌体を懸濁し、30℃、98時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で63時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１７３】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(33)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝22：58：20)であることが確認された。
【０１７４】
【化６８】
【０１７５】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１７６】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表12に示す。
【０１７７】
【表１２】
【０１７８】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１７９】
[実施例13]
ポリペプトン(和光純薬)5.0g、５-フェノキシ吉草酸1.2g及び11-ブロモウンデカン酸0.3gを前記Ｍ９培地1,000ｍlに溶解し、2,000ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を10ｍl加え、30℃、17時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム50ｍlを加え、35℃で45時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１８０】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(34)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝14：79：7)であることが確認された。
【０１８１】
【化６９】
【０１８２】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１８３】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図４に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表13に示す。
【０１８４】
【表１３】
【０１８５】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１８６】
[実施例14]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び11-ブロモウンデカン酸0.05gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、67時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で64時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１８７】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(35)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝5：86：9)であることが確認された。
【０１８８】
【化７０】
【０１８９】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１９０】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表14に示す。
【０１９１】
【表１４】
【０１９２】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１９３】
[実施例15]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.12g及び11-ブロモウンデカン酸0.05gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、67時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で64時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１９４】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(36)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝13：76：11)であることが確認された。
【０１９５】
【化７１】
【０１９６】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１９７】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表15に示す。
【０１９８】
【表１５】
【０１９９】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２００】
[実施例16]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-ベンゾイル吉草酸0.25g及び11-ブロモウンデカン酸0.05gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、64時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で48時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２０１】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(37)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｈ:Ｉ:Ｊ＝11：80：9)であることが確認された。
【０２０２】
【化７２】
【０２０３】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０２０４】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図５に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表16に示す。
【０２０５】
【表１６】
【０２０６】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２０７】
[実施例17]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、４-シクロヘキシル酪酸0.20g及び８-ブロモオクタン酸0.13gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、40時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で17時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２０８】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(38)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｋ:Ｌ＝88：12)であることが確認された。
【０２０９】
【化７３】
【０２１０】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０２１１】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図６に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表17に示す。
【０２１２】
【表１７】
【０２１３】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２１４】
[実施例18]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-(フェニルスルファニル)吉草酸1.28g及び11-ブロモウンデカン酸0.80gを前記Ｍ９培地1.0Lに溶解し、2.0L容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を10.0ｍl加え、30℃、16時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム100ｍlを加え、35℃で18時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２１５】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(39)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｍ:Ｎ:Ｏ＝4：86：10)であることが確認された。
【０２１６】
【化７４】
【０２１７】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図７に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比を表17に示す。
【０２１８】
【表１８】
【０２１９】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量。
【０２２０】
[実施例19]
ポリペプトン(和光純薬)125g、５-(フェニルスルファニル)吉草酸32.1g及び11-ブロモウンデカン酸19.9gを前記Ｍ９培地25Lに溶解し、50L容ジャーファーメンターに入れて121℃で10分間滅菌した後30℃まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を200ｍl加え、30℃、70rpｍ、通気量9.4L/分で16時間通気攪拌培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム150ｍlを加え、35℃で13時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２２１】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(40)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｍ:Ｎ:Ｏ＝17：63：20)であることが確認された。
【０２２２】
【化７５】
【０２２３】
(化学式中aは０から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０２２４】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表19に示す。
【０２２５】
【表１９】
【０２２６】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２２７】
[実施例20]
実施例18で得られたポリマー300ｍgを300ｍl容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン30ｍlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸６ｍl、18-クラウン-６-エーテル1001ｍgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム798ｍgをゆっくり加えて、室温で21時間攪拌した。反応終了後、水50ｍl及び亜硫酸水素ナトリウム1000ｍgを加えた。その後、1.0ｍol/L(1.0Ｎ)塩酸により液性をpＨ１にした。混合溶液中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これをメタノール200ｍlで洗浄し、更に純水200ｍlで３回洗浄した後、減圧乾燥することでポリマー313ｍgを得た。
【０２２８】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(41)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｐ:Ｑ:Ｒ＝11：81：8)であることが確認された。得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図８に示す。
【０２２９】
【化７６】
【０２３０】
(化学式中aは０から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。その結果、数平均分子量Ｍn＝13300であった。
【０２３１】
【発明の効果】
本発明の方法により、新規ポリヒドロキシアルカノエート共重合体である、側鎖にブロモ基とを有するユニットと、側鎖にフェニル構造、チオフェン構造、シクロヘキシル構造を有する残基を含むユニットを同一分子中に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法が提供された。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】実施例２で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】実施例10で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】実施例13で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】実施例16で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】実施例17で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図７】実施例18で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図８】実施例20で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体と、微生物を利用するその製造方法に関する。
【０００２】
【背景技術】
これまで、多くの微生物が、ポリ-３-ヒドロキシ酪酸(ＰＨＢ)あるいはその他のポリヒドロキシアルカノエート(ＰＨＡ)を生産し、その菌体内に蓄積することが報告されている(非特許文献１参照)。これらポリヒドロキシアルカノエートなどの微生物が産生するポリマーは、従来のプラスチックと同様に、溶融加工等により各種製品の生産に利用することができる。さらに、微生物が産生するポリマー、例えば、ポリヒドロキシアルカノエートなどは、生分解性を有しており、自然界の微生物により完全分解されるという利点を有している。従って、例えば、微生物が産生するポリヒドロキシアルカノエートは、廃棄した際、従来の多くの合成高分子化合物のように自然環境にそのまま残留し、汚染を引き起こす要因となることがない。また、微生物が産生するポリヒドロキシアルカノエートは、一般に生体適合性にも優れており、医療用軟質部材等としての応用も期待されている。
【０００３】
この微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートは、その生産に用いる微生物の種類、ならびに、培地組成、培養条件等により、様々な組成や構造のものとなり得ることも知られている。これまで、主にポリヒドロキシアルカノエートの物性の改良という観点から、微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートの組成や構造の制御を試みる研究がなされてきた。
【０００４】
微生物産生ポリヒドロキシアルカノエートの組成や構造の制御を目的とする研究の一つとして、近年、ユニット中に芳香環を有するポリヒドロキシアルカノエートを微生物に生産させる研究が盛んになされている。
【０００５】
(a)フェニル基もしくはその部分置換体を含むもの
・５-フェニル吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)が３-ヒドロキシ-５-フェニル吉草酸をユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている(非特許文献２及び３参照)。
【０００６】
・５-(p-トリル)吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランスが３-ヒドロキシ-５-(p-トリル)吉草酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている(非特許文献４参照)。
【０００７】
・５-(２,４-ジニトロフェニル)吉草酸を基質として、シュードモナス オレオボランスが３-ヒドロキシ-５-(２,４-ジニトロフェニル)吉草酸ユニット及び３-ヒドロキシ-５-(p-ニトロフェニル)吉草酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産することが報告されている(非特許文献５参照)。
【０００８】
(b)フェノキシ基もしくはその部分置換体を含むもの
11-フェノキシウンデカン酸を基質として、シュードモナスオレオボランスが３-ヒドロキシ-５-フェノキシ吉草酸ユニットと３-ヒドロキシ-９-フェノキシノナン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産することが報告されている(非特許文献６参照)。
【０００９】
３-ヒドロキシ-５-(モノフルオロフェノキシ)ペンタノエート(３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐ)ユニット、あるいは３-ヒドロキシ-５-(ジフルオロフェノキシ)ペンタノエート(３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐ)ユニットからなる単独重合体；少なくとも、３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐユニットあるいは３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐユニットを含有する共重合体；これらのポリマーの産生能を有するシュードモナス・プチダ；シュードモナス属を用いた、前記のポリマーの製造法に関する発明が開示されている。加えて、その発明の効果として、置換基を有する長鎖脂肪酸を資化して、側鎖末端に、１から２個のフッ素原子が置換したフェノキシ基をもつポリマーを合成することができ、また、かかるポリマーは、融点が高い上、良い加工性を保持しつつ、加えて、立体規則性、撥水性を与えることができる点を記載している。(特許文献１参照)。
【００１０】
このユニット中の芳香環上にフッ素置換を有するフッ素置換ＰＨＡ以外に、ユニット中の芳香環上にシアノ基やニトロ基が置換したポリヒドロキシアルカノエートの研究もなされている。
【００１１】
非特許文献７及び８には、シュードモナス オレオボランス ＡＴＣＣ 29347株及びシュードモナス プチダ(Ｐseudoｍonas putida)ＫＴ 2442株を用いて、オクタン酸と６-(p-シアノフェノキシ)ヘキサン酸あるいは６-(p-ニトロフェノキシ)ヘキサン酸を基質として、３-ヒドロキシ-６-(p-シアノフェノキシ)ヘキサン酸あるいは３-ヒドロキシ-６-(p-ニトロフェノキシ)ヘキサン酸をモノマーユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエートの生産が報告されている。
【００１２】
これら環上に置換基を持つ芳香環を有するユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートは、ガラス転移温度が高く、加工性も良いという、芳香環に由来するポリマー性状を維持しつつ、芳香環上に存在している置換基に由来する新たな機能も付与された、多機能のポリヒドロキシアルカノエートとなる。
【００１３】
また、その一方で、ユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートを基に、生産ポリマーに対して、前記ブロモ基を利用する化学変換により任意の官能基をポリマー側鎖に導入し、多機能のポリヒドロキシアルカノエートを得ることを目的とした研究も盛んに行われている。
【００１４】
・シュードモナス オレオボランスを用いて、側鎖にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産し、アセチル化マルトースのチオール化物を側鎖に修飾し、その溶解性や親水性の異なるポリヒドロキシアルカノエートを合成したことが報告されている(非特許文献９参照)。
【００１５】
上記の報告のように、ブロモ基は、付加反応などにおける反応性が高く、様々な官能基の導入や化学的変換を施すことが可能である。また、ポリマーの架橋反応の足がかり、架橋点ともなりうる。従って、ポリヒドロキシアルカノエートを構成するユニット内にブロモ基を有することは、ポリマーの機能材料としての応用を考える上で、非常に有用であると言うことができる。
【００１６】
この様な、ユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートは、これまでω-ブロモアルカン酸のみを原料として、或いは直鎖アルカン酸を共存させることにより微生物合成されてきた。
【００１７】
シュードモナス オレオボランスを用いて、11-ブロモウンデカン酸、８-ブロモオクタン酸、６-ブロモヘキサン酸といったω-ブロモアルカン酸とn-ノナン酸の共存下で３-ヒドロキシ-ω-アルカン酸ユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートが生産されることが報告されている(非特許文献10参照)。
【００１８】
以上の他、本願発明には特開2001-288256号公報(特許文献２参照)の記載が引用されている。
【００１９】
【特許文献１】
特許第2989175号公報
【特許文献２】
特開2001-288256号公報
【非特許文献１】
生分解性プラスチック研究会編「生分解性プラスチックハンドブック」(株)エヌ・ティー・エス、1995年、p.178-197
【非特許文献２】
Ｍakroｍol.Ｃheｍ.,191号、1990年、p.1957-1965
【非特許文献３】
Ｍac roｍolecules,24号、1991年、p.5256-5260
【非特許文献４】
Ｍacroｍolecules,29号、1996年、p.1762-1766
【非特許文献５】
Ｍacroｍolecules,32号、1999年、p.2889-2895
【非特許文献６】
Ｍacroｍol.Ｃheｍ.Ｐhys.,195号、1994年、p.1665-1672
【非特許文献７】
Ｃan.Ｊ.Ｍicrobiol.,41号、1995年、p.32-43
【非特許文献８】
Ｐolyｍer International,39号、1996年、p.205-213
【非特許文献９】
Ｍacroｍol.Ｒapid Ｃoｍｍun.,20号、1999年、p.91-94
【非特許文献１０】
Ｍacroｍolecules,25号、1992年、p.1852-1857
【００２０】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、この様にして得られるユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートは、通常直鎖３-ヒドロキシアルカン酸ユニットを含む共重合体である。この様なＰＨＡはガラス転移温度が-20℃から-30℃程度と、ポリマーとして利用し得る応用範囲が限られたものとなる。この様なことから、ユニット中にブロモ基を有するポリヒドロキシアルカノエートであって、ポリマーとしての応用範囲を広げ得るような、熱的に安定な、更には物性を任意に制御し得るようなポリヒドロキシアルカノエートそのもの、及びその製造方法が求められていた。
【００２１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意研究の結果、以下のような発明に至った。即ち、本発明は、
[Ａ]化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットと、化学式(２)で示すユニットとを同一分子中に含むことを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００２２】
【化２９】
(nは化学式中に示した範囲内の数値を表し、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００２４】
【化３０】
(化学式中Ｒ及びｍは下記より選択された少なくとも一種の組み合わせを構成する；Ｒはフェニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはチエニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはシクロヘキシル構造を有する残基を含んでおりｍは０〜８から選ばれた整数である。複数のユニットが存在する場合、Ｒ及びｍは、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００２６】
本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、
[Ｂ]前記化学式(２)で示すユニットにおけるＲ、即ちフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基が、下記化学式(３)〜(14)で示される残基群から選ばれた少なくとも１種類であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ａ]記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００２７】
【化３１】
(式中、Ｒ1は芳香環への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ2(ここでＲ2は、Ｈ原子、Ｎa原子およびＫ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００２９】
【化３２】
(式中、Ｒ3は芳香環への置換基を示し、Ｒ3はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基、Ｃ3Ｆ7基またはＳＣＨ3基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３１】
【化３３】
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３３】
【化３４】
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ6、ＳＯ2Ｒ7(ここでＲ6は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ7は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３５】
【化３５】
(式中、Ｒ8は芳香環への置換基を示し、Ｒ8はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ9、ＳＯ2Ｒ10(ここでＲ9は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ10は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００３７】
【化３６】
【化３７】
(式中、Ｒ11はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ11はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００４０】
【化３８】
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(ここでＲ13は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ14は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００４２】
【化３９】
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(ここでＲ16は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ17は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００４４】
【化４０】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、
[Ｃ]前記化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットが、化学式(15)に示す３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットおよび化学式(16)に示す３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットのうちの少なくとも１種であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ａ]または[Ｂ]記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００４６】
【化４１】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体は、
[Ｄ]前記化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットが、化学式(17)に示す３-ヒドロキシ-11-ブロモウンデカン酸ユニット、化学式(18)に示す３-ヒドロキシ-９-ブロモノナン酸ユニットおよび化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-７-ブロモヘプタン酸ユニットのうちの少なくとも１種であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ａ]または[Ｂ]記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体である。
【００４８】
【化４２】
また本発明は、
[Ｆ]化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種及び化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種を原料として、化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットの少なくとも１種と、化学式(２)で示すユニットの少なくとも１種とを同一分子中に含み、数平均分子量が 2000 から 500000 の範囲であるポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットの少なくとも１種と、化学式(２)で示すユニットの少なくとも１種とを同一分子中に含み、数平均分子量が 2000 から 500000 の範囲であるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【００５１】
【化４３】
(pは化学式中に示した範囲内から選ばれた整数である。)
【００５３】
【化４４】
(化学式中Ｒ及びqは下記より選択された少なくとも一種の組み合わせを構成する；Ｒはフェニル構造を有する残基を含んでおりqは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはチエニル構造を有する残基を含んでおりqは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはシクロヘキシル構造を有する残基を含んでおりqは０〜８から選ばれた整数である；)
【００５５】
【化４５】
(nは各ユニット毎に独立して化学式中に示した範囲内の数値を表す。)
【００５７】
【化４６】
(化学式中Ｒ及びｍは下記より選択された少なくとも一種の組み合わせを構成する；Ｒはフェニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはチエニル構造を有する残基を含んでおりｍは１〜８から選ばれた整数である；Ｒはシクロヘキシル構造を有する残基を含んでおりｍは０〜８から選ばれた整数である。複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００５９】
本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、
[Ｇ]前記化学式(２)及び(21)におけるＲ、即ちフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基が、下記化学式(３)〜(14)で示される残基群から選ばれた少なくとも１種類であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、前記[Ｆ]に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法である。
【００６０】
【化４７】
(式中、Ｒ1は芳香環への置換基を示し、Ｒ1はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＨ＝ＣＨ2基、ＣＯＯＲ2(ここでＲ2は、Ｈ原子、Ｎa原子およびＫ原子のいずれかを表す)、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６２】
【化４８】
(式中、Ｒ3は芳香環への置換基を示し、Ｒ3はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基、Ｃ3Ｆ7基またはＳＣＨ3基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６４】
【化４９】
(式中、Ｒ4は芳香環への置換基を示し、Ｒ4はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６６】
【化５０】
(式中、Ｒ5は芳香環への置換基を示し、Ｒ5はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ6、ＳＯ2Ｒ7(ここでＲ6は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ7は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００６８】
【化５１】
(式中、Ｒ8は芳香環への置換基を示し、Ｒ8はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ9、ＳＯ2Ｒ10(ここでＲ9は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ10は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７０】
【化５２】
【化５３】
(式中、Ｒ11はシクロヘキシル基への置換基を示し、Ｒ11はＨ原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ハロゲン原子、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、ＣＦ3基、Ｃ2Ｆ5基またはＣ3Ｆ7基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７３】
【化５４】
(式中、Ｒ12は芳香環への置換基を示し、Ｒ12はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ13、ＳＯ2Ｒ14(ここでＲ13は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ14は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７５】
【化５５】
(式中、Ｒ15は芳香環への置換基を示し、Ｒ15はＨ原子、ハロゲン原子、ＣＮ基、ＮＯ2基、ＣＯＯＲ16、ＳＯ2Ｒ17(ここでＲ16は、Ｈ原子、Ｎa原子、Ｋ原子、ＣＨ3基およびＣ2Ｈ5基のいずれかを表し、Ｒ17は、ＯＨ基、ＯＮa基、ＯＫ基、ハロゲン原子、ＯＣＨ3基およびＯＣ2Ｈ5基のいずれかを表す)、ＣＨ3基、Ｃ2Ｈ5基、Ｃ3Ｈ7基、(ＣＨ3)2-ＣＨ基または(ＣＨ3)3-Ｃ基であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい。)
【００７７】
【化５６】
更に、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、
[Ｈ]前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種とを含む培地中で、前記微生物を培養する前記[Ｆ]または[Ｇ]に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００７９】
更に詳細には、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、ペプチド類をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記ペプチド類として、ポリペプトンを用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８０】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種加えて、酵母エキスをも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８１】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、有機酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記有機酸或いはその塩として、ピルビン酸、オキサロ酢酸、クエン酸、イソクエン酸、ケトグルタル酸、コハク酸、フマル酸、リンゴ酸、乳酸、ならびにこれら有機酸の塩からなる群より選択される１つ以上を用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８２】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、アミノ酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記アミノ酸或いはその塩として、グルタミン酸、アスパラギン酸、ならびにこれらアミノ酸の塩からなる群より選択される１つ以上を用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８３】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、糖類をも含む培地中で、前記微生物を培養するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。この場合、培地中に含める前記糖類として、グリセロアルデヒド、エリトロース、アラビノース、キシロース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、グリセロール、エリトリトール、キシリトール、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マルトース、スクロース、ラクトースからなる群より選択される１つ以上の選ばれる１つ以上の糖類を用いるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８４】
また、本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法は、前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、炭素数４から12の直鎖アルカン酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００８５】
本発明のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法における微生物の培養条件の詳細は、以下の通りである。
【００８６】
リン酸緩衝液及びアンモニウム塩或いは硝酸塩を基本とした無機塩培地に、以下に示すように種々の必要基質及び栄養素を加える。
【００８７】
目的とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産するための基質として前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種を培地あたりそれぞれ0.0005％から１％(ｗ/v)、更に好ましくは0.001％から0.2％の割合で含有していることが望ましい。
【００８８】
微生物増殖のための炭素源及び窒素源、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体生産のためのエネルギー供給源として加える上記の共存基質濃度は、通常培地あたり0.1％から５％(ｗ/v)、更に好ましくは0.2％から２％の割合で含有していることが望ましい。
本発明で用いる培地としては、リン酸塩及びアンモニウム塩或いは硝酸塩等の窒素源を含む無機塩培地ならいかなる培地でも良いが、窒素源の濃度を調節することでポリヒドロキシアルカノエート共重合体の生産性を向上せしめることが可能である。
【００８９】
培養温度としては上記の菌株が良好に増殖可能な温度であれば良く、15℃から37℃、更に好ましくは20℃から30℃程度が適当である。
【００９０】
培養は液体培養、固体培養等該微生物が増殖し、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する培養方法ならいかなる培養方法でも用いることができる。さらに、バッチ培養、フェドバッチ培養、半連続培養、連続培養等の種類も問わない。液体バッチ培養の形態としては、振とうフラスコによって振とうさせて酸素を供給する方法、ジャーファーメンターによる攪拌通気方式の酸素供給方法がある。
【００９１】
微生物にポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産・蓄積せしめる方法としては、上に示した方法の他に、一旦十分に増殖させて後に、塩化アンモニウムのような窒素源を制限した培地へ菌体を移し、目的ユニットの基質となる化合物を加えた状態で更に培養すると生産性が向上する場合がある。
【００９２】
更に本発明の製造方法においては、上記のような条件下で前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニット、及び前記化学式(２)で示すユニットを同一分子中に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を微生物細胞から回収する工程を有するポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法とすることができる。
【００９３】
【発明の実施の形態】
(回収方法)
微生物細胞から目的のポリヒドロキシアルカノエート共重合体を回収する方法としては、通常行なわれているポリヒドロキシアルカノエートの回収方法を適用することができる。例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、アセトンなどの有機溶媒による抽出が最も簡便ではあるが、それ以外にジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリルが用いられる場合もある。また、有機溶媒が使用しにくい環境中においては、ＳＤＳ等の界面活性剤による処理、リゾチーム等の酵素による処理、次亜塩素酸塩、アンモニア、ＥＤＴＡ等の薬剤による処理、或いは超音波破砕法、ホモジナイザー法、圧力破砕法、ビーズ衝撃法、摩砕法、擂潰法、凍結融解法のいずれかの方法を用いて微生物細胞を物理的に破砕することによって、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体以外の菌体成分を除去して、ポリヒドロキシアルカノエート共重合体を回収する方法を用いることもできる。
【００９４】
(微生物)
本発明の製造方法で用いる前記微生物としては、前記条件を満たす能力を有する微生物であれば如何なる微生物でも良いが、その中でも特にシュードモナス(Ｐseudoｍonas)属に属する微生物が望ましく、更に詳しくはシュードモナス チコリアイ(Ｐseudoｍonas cichorii)、シュードモナス プチダ(Ｐseudoｍonas putida)、シュードモナス フルオレセンス(Ｐseudoｍonas fluorecense)、シュードモナス オレオボランス(Ｐseudoｍonas oleovorans)、シュードモナス アルギノーサ(Ｐseudoｍonas aeruginosa)、シュードモナス スツッツェリ(Ｐseudoｍonas stutzeri)、シュードモナス ジェッセニイ(Ｐseudoｍonas jessenii)等が望ましい。更に詳しくは、さらに詳しくは、シュードモナス チコリアイ ＹＮ２株(Ｐseudoｍonas cichorii ＹＮ２；ＦＥＲＭ ＢＰ-7375)、シュードモナス チコリアイ Ｈ45株(Ｐseudoｍonas cichorii Ｈ45；ＦＥＲＭ ＢＰ-7374)、シュードモナス ジェッセニイ Ｐ161株(Ｐseudoｍonas jessenii Ｐ161；ＦＥＲＭ ＢＰ-7376)、シュードモナス プチダ Ｐ91株(Ｐseudoｍonas putida Ｐ91；ＦＥＲＭＢＰ-7373)が挙げられる。これら４種の微生物は独立行政法人 産業技術総合研究所(旧 通商産業省 工業技術院)特許生物寄託センターに寄託されており、特開2001-288256号公報(特許文献２)に記載されている微生物である。
【００９５】
なお、本発明の微生物の培養、本発明の微生物によるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の生産と菌体への蓄積、並びに、本発明における菌体からのポリヒドロキシアルカノエート共重合体の回収は、上記の方法に限定されるものではない。
【００９６】
(培地)
本発明の一方法に用いた無機塩培地(Ｍ９培地)の組成を以下に示す。
【００９７】
[Ｍ９培地]
Ｎa2ＨＰＯ4 :6.3
ＫＨ2ＰＯ4 :3.0
ＮＨ4Ｃl :1.0
ＮaＣl :0.5
(g/L、pＨ＝7.0)
【００９８】
更に、良好な増殖及びポリヒドロキシアルカノエート共重合体の生産のためには、上記の無機塩培地に培地に以下に示す微量成分溶液を0.3％(v/v)程度添加する必要がある。
【００９９】
[微量成分溶液]
ニトリロ 三酢酸:1.5；ＭgＳＯ4:3.0；ＭnＳＯ4:0.5；ＮaＣl:1.0；ＦeＳＯ4:0.1；ＣaＣl2:0.1；
ＣoＣl2:0.1；ＺnＳＯ4:0.1；ＣuＳＯ4:0.1；ＡlＫ(ＳＯ4)2:0.1；Ｈ3ＢＯ3:0.1；Ｎa2ＭoＯ4:0.1；ＮiＣl2:0.1(g/L)
【０１００】
【実施例】
以下に実施例を示す。なお、以下における「％」は特に標記した以外は重量基準である。
【０１０１】
[実施例１]
ポリペプトン(和光純薬)5.0g、５-フェニル吉草酸1.06g及び８-ブロモオクタン酸0.67gを前記Ｍ９培地1000ｍlに溶解し、2000ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス ジェッセニイＰ161株の培養液を５ｍl加え、30℃、64時間培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後凍結乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルムを加え、25℃で72時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１０２】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(22)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝2：92：6)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１０３】
【化５７】
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソー ＨＬＣ-8220 ＧＰＣ、カラム:東ソー ＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１０５】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図１に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表１に示す。
【０１０６】
【表１】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１０８】
[実施例２]
実施例１で用いたＰ161株をシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株に変更した以外は実施例１と同様の方法で、目的とするポリマーを得た。
【０１０９】
得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(23)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：90：9)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１１０】
【化５８】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１１２】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図２に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表２に示す。
【０１１３】
【表２】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１１５】
[実施例３]
実施例１で用いたポリペプトンを酵母エキスに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(24)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：91：8)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１１６】
【化５９】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１１８】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表３に示す。
【０１１９】
【表３】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１２１】
[実施例４]
実施例１で用いた菌株であるＰ161株をシュードモナス チコリアイＨ45株に変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(25)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：93：6)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１２２】
【化６０】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１２４】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表４に示す。
【０１２５】
【表４】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１２７】
[実施例５]
実施例１で用いた菌株であるＰ161株をシュードモナス プチダＰ91株に変更し、培地中のポリペプトンを酵母エキスに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(26)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：91：8)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１２８】
【化６１】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１３０】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表５に示す。
【０１３１】
【表５】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１３３】
[実施例６]
実施例１で用いた培地中のポリペプトンをＤ-グルコースに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(27)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝3：90：7)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１３４】
【化６２】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１３６】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表６に示す。
【０１３７】
【表６】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１３９】
[実施例７]
実施例１で用いた培地中のポリペプトンをピルビン酸ナトリウムに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(28)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝4：89：7)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１４０】
【化６３】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１４２】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表７に示す。
【０１４３】
【表７】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１４５】
[実施例８]
実施例１で用いた培地中のポリペプトンをグルタミン酸ナトリウムに変更した以外は実施例１と同様にしてポリマーを得た。得られたポリマーの構造決定を、実施例１と同様に1Ｈ-ＮＭＲ及び13Ｃ-ＮＭＲによって行ったところ、以下の化学式(29)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＋Ｄ＝1：91：8)であることが確認された。13Ｃ-ＮＭＲにより、Ｃのユニット即ち３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットと、Ｄのユニット即ち３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットの両方が含まれていることは確認されたが、ＣユニットとＤユニットの比率は不明であった。
【０１４６】
【化６４】
ポリマーの分子量は、実施例１と同様にＧＰＣにより測定した。
【０１４８】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表８に示す。
【０１４９】
【表８】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１５１】
[実施例９]
ポリペプトン(和光純薬)125g、５-フェニル吉草酸26.7g及び11-ブロモウンデカン酸19.9gを前記Ｍ９培地25Lに溶解し、50L容ジャーファーメンターに入れて121℃で10分間滅菌した後30℃まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス ジェッセニイ Ｐ161株の培養液を200ｍl加え、30℃、70rpｍ、通気量9.4L/分で16時間通気攪拌培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム200ｍlを加え、35℃で16時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１５２】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(30)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ａ:Ｂ:Ｃ＝5：85：10)であることが確認された。
【０１５３】
【化６５】
(化学式中aは０から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１５５】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表９に示す。
【０１５６】
【表９】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１５８】
[実施例10]
ポリペプトン(和光純薬)125g、５-フェノキシ吉草酸29.1g及び８-ブロモオクタン酸5.6gを前記Ｍ９培地25Lに溶解し、50L容ジャーファーメンターに入れて121℃で10分間滅菌した後30℃まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を200ｍl加え、30℃、70rpｍ、通気量9.4L/分で15時間通気攪拌培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム250ｍlを加え、35℃で42時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１５９】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(31)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝6：87：7)であることが確認された。
【０１６０】
【化６６】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１６２】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図３に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表10に示す。
【０１６３】
【表１０】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１６５】
[実施例11]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び８-ブロモオクタン酸0.004gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、65時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で63時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１６６】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(32)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝6：91：3)であることが確認された。
【０１６７】
【化６７】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１６９】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表11に示す。
【０１７０】
【表１１】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１７２】
[実施例12]
Ｄ-グルコース1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び８-ブロモオクタン酸0.13gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した(培地１)。次に、Ｄ-グルコース1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び８-ブロモオクタン酸0.13gを前記Ｍ９培地組成から窒素源(ＮＨ4Ｃl)のみを除いた培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した(培地２)。培地１中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、40時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、培地２中に、前記の収穫した菌体を懸濁し、30℃、98時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で63時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１７３】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(33)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝22：58：20)であることが確認された。
【０１７４】
【化６８】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１７６】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表12に示す。
【０１７７】
【表１２】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１７９】
[実施例13]
ポリペプトン(和光純薬)5.0g、５-フェノキシ吉草酸1.2g及び11-ブロモウンデカン酸0.3gを前記Ｍ９培地1,000ｍlに溶解し、2,000ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を10ｍl加え、30℃、17時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム50ｍlを加え、35℃で45時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１８０】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(34)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝14：79：7)であることが確認された。
【０１８１】
【化６９】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１８３】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図４に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表13に示す。
【０１８４】
【表１３】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１８６】
[実施例14]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.23g及び11-ブロモウンデカン酸0.05gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、67時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で64時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１８７】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(35)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝5：86：9)であることが確認された。
【０１８８】
【化７０】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１９０】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表14に示す。
【０１９１】
【表１４】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０１９３】
[実施例15]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-フェノキシ吉草酸0.12g及び11-ブロモウンデカン酸0.05gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、67時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で64時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０１９４】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(36)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｅ:Ｆ:Ｇ＝13：76：11)であることが確認された。
【０１９５】
【化７１】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０１９７】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表15に示す。
【０１９８】
【表１５】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２００】
[実施例16]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-ベンゾイル吉草酸0.25g及び11-ブロモウンデカン酸0.05gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、64時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で48時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２０１】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(37)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｈ:Ｉ:Ｊ＝11：80：9)であることが確認された。
【０２０２】
【化７２】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０２０４】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図５に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表16に示す。
【０２０５】
【表１６】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２０７】
[実施例17]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、４-シクロヘキシル酪酸0.20g及び８-ブロモオクタン酸0.13gを前記Ｍ９培地200ｍlに溶解し、500ｍl容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を2.0ｍl加え、30℃、40時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム20ｍlを加え、35℃で17時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２０８】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(38)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｋ:Ｌ＝88：12)であることが確認された。
【０２０９】
【化７３】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは３,５の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０２１１】
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図６に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表17に示す。
【０２１２】
【表１７】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２１４】
[実施例18]
ポリペプトン(和光純薬)1.0g、５-(フェニルスルファニル)吉草酸1.28g及び11-ブロモウンデカン酸0.80gを前記Ｍ９培地1.0Lに溶解し、2.0L容振とうフラスコに入れてオートクレーブにより滅菌した後室温まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を10.0ｍl加え、30℃、16時間振とう培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム100ｍlを加え、35℃で18時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２１５】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(39)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｍ:Ｎ:Ｏ＝4：86：10)であることが確認された。
【０２１６】
【化７４】
(化学式中aは１から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図７に示す。また、得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比を表17に示す。
【０２１８】
【表１８】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量。
【０２２０】
[実施例19]
ポリペプトン(和光純薬)125g、５-(フェニルスルファニル)吉草酸32.1g及び11-ブロモウンデカン酸19.9gを前記Ｍ９培地25Lに溶解し、50L容ジャーファーメンターに入れて121℃で10分間滅菌した後30℃まで冷却した。調製した培地中に、予めポリペプトン0.5％を含むＭ９培地で30℃、８時間振とう培養したシュードモナス チコリアイ ＹＮ２株の培養液を200ｍl加え、30℃、70rpｍ、通気量9.4L/分で16時間通気攪拌培養した。培養後、遠心分離により菌体を収穫し、メタノールで洗浄した後減圧乾燥した。乾燥菌体を秤量後、クロロホルム150ｍlを加え、35℃で13時間攪拌することによりポリマーを抽出した。ポリマーが抽出されたクロロホルムをろ過し、エバポレーターにより濃縮した後、冷メタノールで沈殿固化した部分を集め、減圧乾燥して、目的とするポリマーを得た。
【０２２１】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(40)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｍ:Ｎ:Ｏ＝17：63：20)であることが確認された。
【０２２２】
【化７５】
(化学式中aは０から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。
【０２２４】
得られた菌体及びポリマーの重量、菌体あたりのポリマー重量比、得られたポリマーの分子量及び分子量分布を表19に示す。
【０２２５】
【表１９】
ＣＤＷ:菌体乾燥重量；ＰＤＷ:ポリマー乾燥重量；Ｐ/Ｃ:菌体乾燥重量/ポリマー乾燥重量；Ｍn:数平均分子量；Ｍｗ:重量平均分子量；Ｍｗ/Ｍn:分子量分布。
【０２２７】
[実施例20]
実施例18で得られたポリマー300ｍgを300ｍl容ナスフラスコ中に加え、ジクロロメタン30ｍlを加えて溶解した。これを氷浴下に置き、酢酸６ｍl、18-クラウン-６-エーテル1001ｍgを加えて攪拌した。次に氷浴下で過マンガン酸カリウム798ｍgをゆっくり加えて、室温で21時間攪拌した。反応終了後、水50ｍl及び亜硫酸水素ナトリウム1000ｍgを加えた。その後、1.0ｍol/L(1.0Ｎ)塩酸により液性をpＨ１にした。混合溶液中のジクロロメタンをエバポレーターにより留去した後、溶液中のポリマーを回収した。これをメタノール200ｍlで洗浄し、更に純水200ｍlで３回洗浄した後、減圧乾燥することでポリマー313ｍgを得た。
【０２２８】
得られたポリマーの構造決定を、1Ｈ-ＮＭＲ(ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ400；1Ｈ共鳴周波数:400ＭＨz；測定核種:1Ｈ；使用溶媒:ＣＤＣl3；reference:キャピラリ封入ＴＭＳ/ＣＤＣl3；測定温度:室温)によって行ったところ、以下の化学式(41)に示すユニットを含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体(Ｐ:Ｑ:Ｒ＝11：81：8)であることが確認された。得られたポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを図８に示す。
【０２２９】
【化７６】
(化学式中aは０から10の少なくともいずれかの整数を表し、bは３,５の少なくともいずれかの整数を表し、nは４,６,８の少なくともいずれかの整数を表す。)
ポリマーの分子量は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー(ＧＰＣ)により測定した(東ソーＨＬＣ-8220、カラム:東ソーＴＳＫ-ＧＥＬ ＳuperＨＭ-Ｈ、溶媒:クロロホルム、ポリスチレン換算)。その結果、数平均分子量Ｍn＝13300であった。
【０２３１】
【発明の効果】
本発明の方法により、新規ポリヒドロキシアルカノエート共重合体である、側鎖にブロモ基とを有するユニットと、側鎖にフェニル構造、チオフェン構造、シクロヘキシル構造を有する残基を含むユニットを同一分子中に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法が提供された。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】実施例２で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】実施例10で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】実施例13で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】実施例16で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】実施例17で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図７】実施例18で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
【図８】実施例20で取得されたポリエステルの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す。
Claims (15)
- 化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットと、化学式(２)で示すユニットとを同一分子中に含み、数平均分子量が 2000 から 500000 の範囲であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
- 化学式(２)におけるＲ、即ちフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基が、下記化学式(３)〜(14)で示される残基群から選ばれた少なくとも１種類であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、請求項１に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
- 前記化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットが、化学式(15)に示す３-ヒドロキシ-８-ブロモオクタン酸ユニットおよび化学式(16)に示す３-ヒドロキシ-６-ブロモヘキサン酸ユニットのうちの少なくとも１種であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、請求項１または２に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
- 前記化学式(１)に示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットが、化学式(17)に示す３-ヒドロキシ-11-ブロモウンデカン酸ユニット、化学式(18)に示す３-ヒドロキシ-９-ブロモノナン酸ユニットおよび化学式(19)に示す３-ヒドロキシ-７-ブロモヘプタン酸ユニットのうちの少なくとも１種であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、請求項１または２に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体。
- 化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種及び化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種を原料として、化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットの少なくとも１種と、化学式(２)で示すユニットの少なくとも１種とを同一分子中に含み、数平均分子量が 2000 から 500000 の範囲であるポリヒドロキシアルカノエート共重合体を生産する能力を有する微生物により生合成せしめることを特徴とする、化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニットの少なくとも１種と、化学式(２)で示すユニットの少なくとも１種とを同一分子中に含み、数平均分子量が 2000 から 500000 の範囲であるポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 化学式(２)及び(21)におけるＲ、即ちフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基が、下記化学式(３)〜(14)で示される残基群から選ばれた少なくとも１種類であり、複数のユニットが存在する場合、ユニット毎に異なっていてもよい、請求項５に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種とを含む培地中で、前記微生物を培養する請求項５または６に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、ペプチド類をも含む培地中で、前記微生物を培養する請求項７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 培地中に含める前記ペプチド類として、ポリペプトンを用いる請求項８に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、酵母エキスをも含む培地中で、前記微生物を培養する請求項７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、有機酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養する請求項７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、アミノ酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養する請求項７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、糖類をも含む培地中で、前記微生物を培養する請求項７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種に加えて、炭素数４から12の直鎖アルカン酸或いはその塩をも含む培地中で、前記微生物を培養する請求項７に記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
- 前記化学式(20)で示すω-ブロモアルカン酸の少なくとも１種、及び前記化学式(21)で示す化合物の少なくとも１種を含む培地中で、前記微生物を培養し、前記微生物が産生した前記化学式(１)で示す３-ヒドロキシ-ω-ブロモアルカン酸ユニット、及び前記化学式(２)で示すユニットを同時に分子中に含むポリヒドロキシアルカノエート共重合体を微生物細胞から回収する工程を有する請求項７〜14のいずれかに記載のポリヒドロキシアルカノエート共重合体の製造方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002362594A JP3754956B2 (ja) | 2002-02-15 | 2002-12-13 | 側鎖にブロモ基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 |
| US10/359,600 US7135540B2 (en) | 2002-02-15 | 2003-02-07 | Polyhydroxyalkanoate copolymer including unit having bromo group in side chain and method for producing the same |
| KR1020030008420A KR100562126B1 (ko) | 2002-02-15 | 2003-02-11 | 곁사슬에 브로모기를 지닌 유닛을 포함하는 신규의폴리하이드록시알카노에이트 공중합체 및 그의 제조방법 |
| EP03003418A EP1336634B1 (en) | 2002-02-15 | 2003-02-14 | Polyhydroxyalkanoate copolymer including unit having bromo group in side chain and method for producing the same |
| DE60302373T DE60302373T2 (de) | 2002-02-15 | 2003-02-14 | Polyhydroxyalkanoat Copolymer mit einer ein Bromatom enthaltenden Einheit in der Seitenkette und Verfahren zur Herstellung desselben |
| CNB031044514A CN1269867C (zh) | 2002-02-15 | 2003-02-14 | 分子中含有侧链带溴基团的单元的新的聚羟基链烷酸酯共聚物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002039255 | 2002-02-15 | ||
| JP2002310268 | 2002-10-24 | ||
| JP2002362594A JP3754956B2 (ja) | 2002-02-15 | 2002-12-13 | 側鎖にブロモ基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004196832A JP2004196832A (ja) | 2004-07-15 |
| JP3754956B2 true JP3754956B2 (ja) | 2006-03-15 |
Family
ID=27625276
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002362594A Expired - Fee Related JP3754956B2 (ja) | 2002-02-15 | 2002-12-13 | 側鎖にブロモ基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7135540B2 (ja) |
| EP (1) | EP1336634B1 (ja) |
| JP (1) | JP3754956B2 (ja) |
| KR (1) | KR100562126B1 (ja) |
| CN (1) | CN1269867C (ja) |
| DE (1) | DE60302373T2 (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3673711B2 (ja) * | 1999-12-27 | 2005-07-20 | キヤノン株式会社 | ポリヒドロキシアルカノエートおよび微生物を利用するその製造方法 |
| KR100491307B1 (ko) | 2001-05-31 | 2005-05-24 | 캐논 가부시끼가이샤 | 곁사슬에 치환 혹은 무치환 (페닐메틸)설파닐구조를 지닌 유닛을 함유하는 신규의 폴리하이드록시알카노에이트 및 그의 제조방법 |
| JP2003319792A (ja) * | 2002-02-28 | 2003-11-11 | Canon Inc | 側鎖にフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基を含むユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートの分子量制御方法、およびポリヒドロキシアルカノエート |
| JP2003310292A (ja) | 2002-04-26 | 2003-11-05 | Canon Inc | 分子中に芳香環を含む残基を有するアルカンからのポリヒドロキシアルカノエートの製造方法 |
| JP4027297B2 (ja) * | 2002-10-24 | 2007-12-26 | キヤノン株式会社 | 新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法；それを含む樹脂組成物；新規なポリヒドロキシアルカノエートを含有する荷電制御剤、静電荷像現像トナー及びバインダー樹脂組成物 |
| JP4502363B2 (ja) * | 2002-10-24 | 2010-07-14 | キヤノン株式会社 | 側鎖にビニル基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体、側鎖にカルボキシル基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体、及びそれらの製造方法 |
| JP3880566B2 (ja) * | 2002-10-24 | 2007-02-14 | キヤノン株式会社 | 側鎖に（フェニルメチル）オキシ構造を有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 |
| WO2004097417A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-11 | Canon Kabushiki Kaisha | Structured construct and producing method therefor |
| JP2004331750A (ja) * | 2003-05-02 | 2004-11-25 | Canon Inc | ポリヒドロキシアルカノエートを含有する磁性構造体及びその製造方法ならびにその用途 |
| WO2008049099A1 (en) * | 2006-10-21 | 2008-04-24 | Polyone Corporation | Thermoplastic polyhydroxyalkanoate compounds |
| US20100018674A1 (en) * | 2008-07-22 | 2010-01-28 | Donald John Enzinna | Reservoir with moveable partition for quick recovery |
| US20210015170A1 (en) * | 2019-07-15 | 2021-01-21 | Bio-On S.P.A. | Aerosol-generating articles suitable for use in aerosol-generating devices |
Family Cites Families (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2911498A1 (de) | 1979-03-23 | 1980-10-02 | Stihl Maschf Andreas | Tragbare motorkettensaege |
| EP0052460B1 (en) | 1980-11-18 | 1985-02-06 | Imperial Chemical Industries Plc | Polymer blends |
| US4477654A (en) | 1981-07-07 | 1984-10-16 | Imperial Chemical Industries Plc | 3-Hydroxybutyrate polymers |
| JPH0231681B2 (ja) | 1983-04-14 | 1990-07-16 | Japan Synthetic Rubber Co Ltd | Tetorakarubonsannoseizohoho |
| NL8603073A (nl) | 1986-12-02 | 1988-07-01 | Rijksuniversiteit | Werkwijze voor het bereiden van polyesters door fermentatie; werkwijze voor het bereiden van optisch actieve carbonzuren en esters; polyester omvattende voortbrengselen. |
| US4876331A (en) | 1987-08-18 | 1989-10-24 | Mitsubishi Kasei Corporation | Copolyester and process for producing the same |
| JPH03180186A (ja) | 1989-09-08 | 1991-08-06 | Showa Denko Kk | 共重合体およびその製造法 |
| US5191016A (en) | 1990-07-19 | 1993-03-02 | Manssur Yalpani | Functionalized poly(hydroxyalkanoates) and method of manufacturing same |
| US5200332A (en) | 1990-09-14 | 1993-04-06 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Process for preparation of copolymer |
| JPH057492A (ja) | 1990-09-14 | 1993-01-19 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | 共重合体の製造法 |
| JP2777757B2 (ja) | 1991-09-17 | 1998-07-23 | 鐘淵化学工業株式会社 | 共重合体およびその製造方法 |
| JPH0814967B2 (ja) | 1993-02-15 | 1996-02-14 | 九州日立マクセル株式会社 | ディスククリーナ |
| JPH07265065A (ja) | 1994-03-29 | 1995-10-17 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 共重合体の合成遺伝子による形質転換体および共重合体の製造方法 |
| JPH0819227A (ja) | 1994-06-30 | 1996-01-19 | Toshiba Corp | コイルブロックの切断方法およびその切断装置 |
| AU3406495A (en) | 1995-08-14 | 1997-03-12 | University Of Massachusetts Medical Center | Methods of controlling microbial polyester structure |
| JPH09191893A (ja) | 1996-01-22 | 1997-07-29 | Taisei Corp | ヒドロキシアルカン酸共重合体の製造方法 |
| US5811272A (en) | 1996-07-26 | 1998-09-22 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for controlling molecular weight of polyhydroxyalkanoates |
| US6156852A (en) | 1997-04-21 | 2000-12-05 | Monsanto Company | Hydroxy-terminated polyhydroxyalkanoates |
| JP2989175B1 (ja) * | 1998-08-31 | 1999-12-13 | 名古屋市 | ポリエステル及びその製造方法 |
| JP3684150B2 (ja) | 1999-12-27 | 2005-08-17 | キヤノン株式会社 | ポリヒドロキシアルカノエート |
| JP3673711B2 (ja) * | 1999-12-27 | 2005-07-20 | キヤノン株式会社 | ポリヒドロキシアルカノエートおよび微生物を利用するその製造方法 |
| JP2001178487A (ja) * | 1999-12-27 | 2001-07-03 | Canon Inc | 微生物ポリエステルの製造方法 |
| JP2001178484A (ja) | 1999-12-27 | 2001-07-03 | Canon Inc | ポリヒドロキシアルカン酸の製造方法 |
| US6861550B2 (en) | 2000-02-29 | 2005-03-01 | Canon Kabushiki Kaisha | Polyhydroxyalkanoate containing 3-hydroxybenzoylalkanoic acid as monomer unit, and method for producing the same |
| EP1130043B1 (en) | 2000-02-29 | 2006-01-25 | Canon Kabushiki Kaisha | Polyhydroxyalkanoate containing 3-hydroxythienylalkanoic acid as monomer unit and method for producing the same |
| AU2001285041A1 (en) | 2000-08-18 | 2002-03-04 | Metabolix, Inc. | Sulfur containing polyhydroxyalkanoate compositions and method of production |
| JP3740358B2 (ja) | 2000-08-31 | 2006-02-01 | キヤノン株式会社 | 側鎖にエポキシ基を含むポリエステルの製造方法及び架橋ポリマーの製造方法 |
| KR100462543B1 (ko) * | 2000-09-14 | 2004-12-17 | 캐논 가부시끼가이샤 | 폴리하이드록시알카노에이트 및 그 제조방법 |
| JP3720779B2 (ja) | 2001-02-28 | 2005-11-30 | キヤノン株式会社 | 側鎖にビニルフェニル構造を有する新規なポリヒドロキシアルカノエート型ポリエステル、およびその製造方法 |
| US7045321B2 (en) | 2001-03-01 | 2006-05-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Polyhydroxyalkanoate containing unit with phenylsulfanyl structure in the side chain, process for its production, charge control agent, toner binder and toner which contain novel polyhydroxyalkanoate, and image-forming method and image-forming apparatus which make use of the toner |
| JP3748537B2 (ja) | 2001-03-01 | 2006-02-22 | キヤノン株式会社 | ポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法、並びにω−（２−チエニルスルファニル）アルカン酸及びその製造方法 |
| US6777153B2 (en) | 2001-03-27 | 2004-08-17 | Canon Kabushiki Kaisha | Polyhydroxyalkanoate containing unit with thienyl structure in the side chain, process for its production, charge control agent, toner binder and toner which contain this polyhydroxyalkanoate, and image-forming method and image-forming apparatus which make use of the toner |
| KR100461511B1 (ko) | 2001-04-27 | 2004-12-14 | 캐논 가부시끼가이샤 | 신규 폴리히드록시알카노에이트, 그 제조방법, 이폴리히드록시알카노에이트를 함유하는 전하제어제,토너바인더 및 토너, 및 화상형성방법 및 이 토너를사용하는 화상형성장치 |
| KR100528749B1 (ko) | 2001-04-27 | 2005-11-15 | 캐논 가부시끼가이샤 | 곁사슬에 페닐설파닐구조 및/또는 페닐 설포닐구조를 지닌신규의 폴리하이드록시알카노에이트와, 그 생산방법,신규의 폴리하이드록시알카노에이트를 함유하는하전제어제, 토너바인더 및 토너, 그리고 상기 토너를이용하는 화상형성방법 및 화상형성장치 |
| KR100491307B1 (ko) | 2001-05-31 | 2005-05-24 | 캐논 가부시끼가이샤 | 곁사슬에 치환 혹은 무치환 (페닐메틸)설파닐구조를 지닌 유닛을 함유하는 신규의 폴리하이드록시알카노에이트 및 그의 제조방법 |
| US6869782B2 (en) | 2001-07-10 | 2005-03-22 | Canon Kabushiki Kaisha | Polyhydroxyalkanoate that comprises unit having (methylsulfanyl) phenoxy structure in side chain thereof and process for producing the same |
| JP3990880B2 (ja) | 2001-07-10 | 2007-10-17 | キヤノン株式会社 | ポリヒドロキシアルカノエート被覆リポソームの製造方法 |
| JP3689700B2 (ja) | 2002-02-28 | 2005-08-31 | キヤノン株式会社 | 側鎖にビニルフェニル構造を含んでなるユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 |
| JP2003319792A (ja) | 2002-02-28 | 2003-11-11 | Canon Inc | 側鎖にフェニル構造、チエニル構造、シクロヘキシル構造を有する残基を含むユニットを分子中に含むポリヒドロキシアルカノエートの分子量制御方法、およびポリヒドロキシアルカノエート |
-
2002
- 2002-12-13 JP JP2002362594A patent/JP3754956B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-02-07 US US10/359,600 patent/US7135540B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-02-11 KR KR1020030008420A patent/KR100562126B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2003-02-14 CN CNB031044514A patent/CN1269867C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2003-02-14 DE DE60302373T patent/DE60302373T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-02-14 EP EP03003418A patent/EP1336634B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100562126B1 (ko) | 2006-03-21 |
| EP1336634A2 (en) | 2003-08-20 |
| KR20030069060A (ko) | 2003-08-25 |
| EP1336634B1 (en) | 2005-11-23 |
| CN1438258A (zh) | 2003-08-27 |
| DE60302373D1 (de) | 2005-12-29 |
| EP1336634A3 (en) | 2004-01-07 |
| US7135540B2 (en) | 2006-11-14 |
| CN1269867C (zh) | 2006-08-16 |
| DE60302373T2 (de) | 2006-07-27 |
| US20030194789A1 (en) | 2003-10-16 |
| JP2004196832A (ja) | 2004-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3720779B2 (ja) | 側鎖にビニルフェニル構造を有する新規なポリヒドロキシアルカノエート型ポリエステル、およびその製造方法 | |
| KR100485119B1 (ko) | 폴리히드록시알카노에이트와, 그 생산방법, 및 ω-(2-티에닐설파닐)알칸산과 그 생산방법 | |
| JP3684150B2 (ja) | ポリヒドロキシアルカノエート | |
| KR100447966B1 (ko) | 3-하이드록시티에닐알칸산을 모노머유닛으로서 함유하는폴리하이드록시알카노에이트 및 그 제조방법 | |
| KR100487877B1 (ko) | 3-하이드록시벤조일알칸산을 모노머유닛으로서 함유하는폴리하이드록시알카노에이트 및 그 제조방법 | |
| KR100523110B1 (ko) | 곁사슬에 비닐페닐구조를 지닌 분자 유닛을 함유하는신규의 폴리하이드록시알카노에이트 공중합체 및 그의제조방법 | |
| KR100498221B1 (ko) | 곁사슬에 (메틸술파닐)페녹시 구조를 가지는 유닛을포함하는 신규한 폴리하이드록시알카노에이트 및 그제조방법 | |
| KR100543993B1 (ko) | 분자의 곁사슬에 페닐구조, 티에닐구조 혹은 시클로헥실구조의 잔기를 함유하는 유닛으로 이루어진 폴리하이드록시알카노에이트의 분자량의 제어방법 | |
| JP3754956B2 (ja) | 側鎖にブロモ基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 | |
| JP4502363B2 (ja) | 側鎖にビニル基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体、側鎖にカルボキシル基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体、及びそれらの製造方法 | |
| KR100491307B1 (ko) | 곁사슬에 치환 혹은 무치환 (페닐메틸)설파닐구조를 지닌 유닛을 함유하는 신규의 폴리하이드록시알카노에이트 및 그의 제조방법 | |
| JP3880566B2 (ja) | 側鎖に（フェニルメチル）オキシ構造を有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 | |
| JP3880462B2 (ja) | 側鎖にエステル基を有するユニットを分子中に含む新規なポリヒドロキシアルカノエート共重合体及びその製造方法 | |
| JP3880473B2 (ja) | （メチルスルファニル）フェノキシ構造を側鎖に有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 | |
| JP3720774B2 (ja) | （フェニルメチル）スルファニル構造を側鎖に有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 | |
| JP4812061B2 (ja) | ［（置換フェニル）メチル］スルファニル構造を側鎖に有するユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 | |
| JP2002256066A (ja) | ３−ヒドロキシ−５−（４−シアノフェノキシ）吉草酸ユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート、およびその製造方法 | |
| JP2002256064A (ja) | ３−ヒドロキシ−５−フェノキシ吉草酸ユニット及び３−ヒドロキシ−５−（４−シアノフェノキシ）吉草酸ユニットを含む新規なポリヒドロキシアルカノエート、およびその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050216 |
|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20050418 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050803 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051003 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20051130 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20051219 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081222 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091222 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091222 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20101222 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111222 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121222 Year of fee payment: 7 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |