HUE030806T2 - Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok - Google Patents

Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok Download PDF

Info

Publication number
HUE030806T2
HUE030806T2 HUE03724432A HUE03724432A HUE030806T2 HU E030806 T2 HUE030806 T2 HU E030806T2 HU E03724432 A HUE03724432 A HU E03724432A HU E03724432 A HUE03724432 A HU E03724432A HU E030806 T2 HUE030806 T2 HU E030806T2
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
seq
antibody
cdr
ahol ahol
ser
Prior art date
Application number
HUE03724432A
Other languages
English (en)
Inventor
Arthur Kunz
Justin Keith Moran
Joseph Thomas Rubino
Neera Jain
Eugene Joseph Vidunas
John Mclean Simpson
Paul David Robbins
Nishith Merchant
John Francis Dijoseph
Mark Edward Ruppen
Nitin Krishnaji Damle
Andrew George Popplewell
Original Assignee
Wyeth Holdings Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=29401497&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HUE030806(T2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Wyeth Holdings Llc filed Critical Wyeth Holdings Llc
Publication of HUE030806T2 publication Critical patent/HUE030806T2/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A61K31/175—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine having the group, >N—C(O)—N=N— or, e.g. carbonohydrazides, carbazones, semicarbazides, semicarbazones; Thioanalogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Description

: hord»«ó kdîpugàltnnok: a TÂhMmÂm mrttoum |#ööí| A tallm.á«jr «irgyât eljMssfc kdpÄ mommmr «ttoloxlfcus nwtflmâeï konjogátumok d&amp;tóHfi&amp;5ár8> amelynek' -:»<w<$>h a ds-ogieinsösdgök Âésyegæm tæôkkmt «z «la<»8my: kmifugáliságii ifesl«lójuk (LCF). iCbä^lelibröl, a találmányleim tárgyát:' ψά-CXXM 'ei^snyagxtKotjoiMefc caisöhesariésn kotyugsí«í«o>k képezik A tárgyát képezik a találmány szartnivfennjngáimmok áfc-sfenjpgj&amp;nmolc tísztitására szolgáló1 el járás(ok) is, a: találmány tárgyát képezik a konltigátusnokat tartalmazd ketnugátemök és a komugánmiok alkalmazásai. a találmány háttere ρβ02| A szisztémás iktnafeiógia «áljára kltejíesztett drogfoönjugátumók céispeeifîkus: eltotoxikuá szőiék> Elvileg terápiás .m% olyan: líteÉiPsröfökídálox vajé kapcsolását foglalják nmpkban, amely spéci likas egy nieghstáí'ozoti célsejrtpopidáoióra, .M .W$$0mkm nagy affinitássá) iondefaö ellenanyagok teroiészetes választást jelentettek eéizé mplekidmdazekként. A nagy affinitást. monoklönáiis ellenanyagok Imzzálérhetöségével mi éllenaoyag'-eéizásó terápiás sa«rek lehetősége Ígéretessé; vált, A monokionális ellenanyagokhoz kotyogalé: toslktssanyagok köze tartoznak texlsofc, kísmolekaiatömegő dtotoxikas szetek, biológiai váiiassk: módosító sxsféfc: és radiunaklldok Az eílenanysg'-toxio kopingkhsomkat gyakran inomm'· toxluoknak nevelik, ..míg az eileottnyagokból és kismolekulatömegű drogokból, 'mim példáid metotrexát és adnamÄ'Ät&amp;nma^feonjagäiamoM'&amp;emöimmaö-konjngätnmoknakhiyj^; Az iommomodulátomk biológiai válaszokat módosító .szereket. tartalmaznak, amelyeknek ismert módón szabályom mnkcióik vannak, mint. pókján) limföktüok,·:. bi#V#«ÄI.'Äm»k .ésékmajpiemant-^ttváló kobra venom faktor (G¥Fj. A mdíounnmm kenjugstiunok radioaktív Izotópokból állnak, amelyek terápiás szerként alkalmazhatók seítek elposztitására a sugárzásuk révén, vagy leképezésre alkalmazhatók, A citotoxikus szerek eiknaoyag-fcözvet^bdáianatsejtekhaz való eljuttatásától azt várják, hogy nem csak segíti a dapoatelteoes hatásosságokat, de megelőzi a normál szövetekben való netn célzót) felvételükéi, Ily módon növeli a terápiás Indexüket, jOÖáSj A találmány tárgyát íannonAonjngáíumok képezik, amelyek cél zóeszközként ellenanyagot tartalmaznak -és amelyek speeffiknsak rosszindulata sgjtek telszíuéu lévő detennináítsokra, koniugálva eitotoxikus szerhez^ A találmány tárgyát képezik eitotokíkos szer - ellenanyag kottjttgátnmok, ahol m ellenanyag specifikus B-sejles rosszindulaté rendelíenessépkfeen, imfopmllferativ rsraMlonességekben és krónikus gyulladásos betegségekben lévő antipnikns detetmlnáosökra. A találmány tárgyát képezife eljárások ímmön-kötdngátmtmk éidálittásám és azok terápiás alkaknazássfi} is. |Ö8Ü4j Ezámos elleoaoyag-alapü terápiát engedélyeztek klinikai alkalmazásra, különülő betegségek, köztük rák és reuomfoid artitdiisz kezelésere, vagy van klinikai kipróbálás alatt különlife rosszindulaté tetsdel ienesxégekre, közíbk tbsejles rosszindulaté rendellenességekre, mint példán! nem-Hodgkln HmlÓma, Bgy ilyen elltmsnyagmlapó terápiás szer rítnxnnab pltnxan^j, egy jelöletlen kiméra fenmán yl f+mylV-régió) ellenanyag, amely a £Ö2Ö sejtfoiÄi mUtgénre specifikus, amely a É«si^dig:föMbén:.«xpÉ^2áiódik. Ezek az ellenanyggteriapó terápiás:: szerek:: t B-ocitek eilemr koinplémeníÁözyeiítap eifotoxleiíásen (COCO) vágy ellenanyag-töggö: eellnilris ejfotexickáson (ADCO), vagy radlonnklidok, mint például *"1 vagy •alkalmazásán alapulnak, amelyek: a klinikusok és a pàS!&amp;nsek.:às$w :Wgá|liíi§.!· ife.&amp;MgMzisi problémát jelentenek, EfínekAövetkeziébert aznkség van olyast tímnun^pHigáiumök előállítására, amélyék tnegóídják a jetótegí: s*«?-ekke! kapesoktms p&amp;IÉÉÉ&amp;lftMgte ÄödÄiÄfeM%«k kezelésében, mlnrpéldáo!: «em--Modgyn limíMta (1S| tmmíyek kennyen il haíákmysn sliáibtháiőfc, és aÍndyekfcméírítettaÉsksázkaSék immunválaszt kiváltása nélkül
lOtKISj Kifejlesztettek «ivart hnomn-köajtp'áínmokaí miéldmák kekefésétxí, amelyek ez Összefoglalóan caileheántiemek vagy LI..-B3283 komplex névé« isme« Msen ándhákterláiis és daganatellenes s;mu&amp; családjuk égy tagját taAalmazzák (lásd an US 4J?%I98· számé amei'M egyestik államokbeli stmhsdakoi iratot (191¾% A legbáláSímbb caiicheamícim yrn«|: nevezik, amelysp a leírás szerfm: egyszerűen gammakdit hivatkozunk Izek a vegyületek mntIHrtelMîk''^^»«K«^k, amely reágákmható megfelelő ioipkkal diszoítldek kiálákbásáfa, és ugyanakkor luokciős csoportok beépítésére, mis« példád hidt&amp;zki vagy más íunkdős csoport, amely Mszno» egy caiieheammlo származáknak CÜsá az US 5,053,394 száma amerikai egyesült államokbeli szabadam« iratot}. A monomer caliehe&amp;obein sMrmaádkdMdöaé komegámmók alkalmazása käimÄ mknk flíbőí korlátozott veit mind a specifikál céUószerek (hoixlözdk) elérhetősége, mind a konjugációs módszerek miatt, amelyek fehérje-aggregátumok kialakulását «mdináayéáik, amiket' ti hordozóhoz konpigáíi estieheanuci« származék mennyisége itmz á dfygiélíiétisig) növekszik. Mivel a magasa^: mhefens hatásosságai, kívánatos annyi drogot töltetű a hordozóra, ami még kpnKUkmns^ a^ hótdogéÉbérje affinitásának mcgtartásávai. Az aggregéit fehérjék jelenléte, amelyen nem-speélikmán ipalkasák és immunogének lehetnék és ily módon vitivnltlibädiiid-^pÄÄdtoi^pfem, «ehezehfeé teszik e^íf®t$gj|i^ök előáliításának jéptéknövel«sét és esökkeniik á tepnékek kÂnetéséh A bordoàôfèbÉjlem Ältt eÄheurntem mennyisége (dróppiiíeíiségt a kó«|ngáeiós reáimínban kialakult aggregátum mennyiségé Is «kinyerhető végső tisztított monomét konfngáínm mennyisége mind összefügg Tehát kump«>mt$&amp;mm#li!I elérni a nagyobb drog-telítettség és a végső monomer kitermelése kOábti a konjngádós reakcióhoz adott
Az US 5.71:3,324 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi írat {Kumatoätm &amp; ggÉtél). g£}ÍÉ£ ÍIHIÍ mottomer Utiieheammm szârma/eh. hordozó kónjogátumók: előállítására,, «mélyeknek nmgásákb a drogtdnetísége^ltemovkSe és csökkent az aggtegáélőja. A ksm?«gámmökat ésljebeamfent szármázék: Is íéhérjetermeszétil hordo/ó inktibákisávaí állítják elő olyan öMatbmt, amply iosztat-puSérelt öldutof dk tároídószer· tartalma/. amely propüén-giikol vágy phtätanoi, Az Uli ö,ll3f34d számít amerikai egyesült áliámOkbeSi szabadni«» irat (öoldenberg) olyan etlenanyagok te. stmmmkonjugátumok alkalmazását tátja tel. amelyek (.7)23 antigénné/, kötődnek, azonban hatásos módot bíztositának B-séjtes rosszindulat« betegségek* mint például B-sejt i lm főmák mdoiens és agresszív fermai és lintfeíiküs leukémiák akut és krónikus .formái, kezelésére. A WÖ91/09967 számú nemzetközi közzétételt szabadalmi irat (Athwal) CkdUgratlois ellenanyag-nioiekuilkát: tár éHentmyagokah és eljárásokat «.lôàlJlt»: t^mUní^ techftologla alkaitstazásával, és terápáís alkoímttzásaikaí. Yeít<>í'.: és nttsat. (Tbé loarttai o? intstturatittay.. 7995, ill*, kötót, 1994-2094. old.) eljárásokat tárnak fél ètaànÿâg nffipitás-érieiésére, kliőnösett a BR9n ano-karcinótna ellenanyag affinliás-érleiésérö. Stégek és mtsai.. (Anal. Chem. 1997, 69, 271(1-2726. old.) tokának monokienális eáíieneamielmszármazékökboz konjegált elfenanyágek olőállkását mémtkizámsos ktx>matógttMváí ä kon|ogált cabcbatírttielti-szápttaKékek elvátaszíásátá ak eireagéiatian cabebeamieln-származékektél A eaíicheanncln-szánnazekök adagos fehöltésí épéke«; az ellenanyaghoz kayugáit álíapotukbáu ÜV-MALD1/MS, (Κ-ΜΑϋΑΙ/ΜΒ, és BSl/Mb admekkol ssintííották. Hmmati ds mtsai. (Cancer Bús í993í53t333(A3242, old»} calioheamieinok mi>ook.!miáfis elíenanpg kenjitgátnmainák előállítását és jellemzését tárják fél és azok immtinreaktivitásának és dtotodeltásának megállapítását a«t igén-pozitív íÉsgáoais^tek iránt in vitro és ja vivo, ä konjugációs jgakoíö felHitásám s konjugnínmokst séktekAöSKlppím engedték át. Az £P 0263826 stimm etnépai szabadamé irai (Laird és misai.! eipsrásokai (ár fel: oldható rebonPÄs ricin Adánc ^rRTA''VeU«öönyag koajugátumofc és THF/dienanyag koomgáttmök izolálására és tlsgtltasárá- különféle totnálogtáísás eljárások, beleértse HIC és .SEC alkalmazásával. (OÓÖbji A choloxikus .uer konjugáiutnok, különösen a caltcbeamícín konjugáturctok aggrcgációra való h|iksiííössága különösen problémás. amikor a konjugációs reakciókat az US 5,877,.?.% és US 5,773.001 számú am«$k$· egyesüli államokbeli szabadalmi iratokban ismertetett k&amp;pcsoktonoíckoiákkai végzik. Ebben az esetben-o kelétkézeu konj«übííitlíü nagy százaléka aggregált formában van, és eléggé nehéz az ezen eredeti eljárásokkal eljárás) Mäzlfeti konjugáiumok megtisztítása terápiás alkalmazásokra. Bizonyos íiörtíozófehéljék esetében még a szerény telítettség« konjugáturookat is gyakorlatilag lehetetlen elöállitask S kis íépák kivétéiévei- Ennek köven kéziében nagyon nagy szükség van « eitotoxikus szerek, mim például tcéabóhesmícmék hartipzákhoz történd konjugálására szolgáló eljárások javítására, amelyek minimalizálják az aggregáeiö mértékét és egállal lehetővé legyük u magsabb lehetséges drogtehtettséget a termék elfogadható kümneiés« nfeíieiíi. |CíÓ#j Koráid?!«· feltártak magasabb drcigteHteftségö és kitermelésű és csökkenten aggregádó?á konjugációs eifáráspkól: motsomer calicheamk-in szánnazék/hordozó éiűáj!teárá; (lásd az US 5,714,58b és lJS S,?í2j?4 számú amerikai egyesült áíiamokhcb »zabadalnn untokat. Habár ezek az eljárások olyan konjugálmn-prcparátypíokal c'.eŐ!0ényezteh, ametyekaek lényegesen bsÄbtltetl volt áz itg^sgsiomAsttalnta, később felfedezték, bogy olyan konjugáltmmkat hoznak létre, amelyök nemkívánatosán maps ágimén pSvbS% MPLC tertllet%) tartahnaznak alacsony komugáksáp frakciót LCF), amely frakció leginkább konjugálatlan ellenanyagból áll. Az LCF jelenléte a termékben az ellenanyag neat hatékony alkalmazása, mivel az nem táitaimazzá átmos ikns szeri. Ezenfelül az verssMhet a ealipeamlcsn4ordop kotpptntnmal a célpont ikőféséért és potenciálisán csökkentheti az utóbbi eéíozhaióságáí, átni a eitoroxíps szer csökkentett hatásosságát cfedrncnyezl. Tebái egy javított konjugációs eljárás kívánatos, atsfely sztgníllkáns&amp;ó: alacsonyabb szintó LUF-ei eredményezne és elfegadhstó mértékű az aggtegádójg,a moléknlá fizikai íúisidooságamak szigtiíIMtss megváltoztatása nélkül.
A T A LÁ L MÁN V ÖSSXEFIKÍLA LÁSA (001)81 A találmány tárgyát eljárások képezik monomét citoíoxíkus sz.er származék/hordozó konjugätumok (a ,,ko»jug.atornok’') előállítására, amelyek aek nagyobb a telítettségük és lényegesén esökkéní űz alacsony konjugáitságó frakciójuk fLCF). Közelebbről, a le«ás tárgyát a találmány §S«ÍÉötfóljáfáSSálCi6áHíMtin«J»otTÍér' caiichcaruícin származék -hordozó konjngátnrn doáliuása képezi, a találmány tárgyát képezik a találrnány szeműi eljárással előállítóit konjugátutnokat tartalmazó készítmények, a konjugáíutnok tisztítási djpása(ij:# tt találmány szerinti kműugálmnuk alkalmazása képezi Meg közelebbről a találmány tárgyát eljárás(Ok) képézll monomer eaíicitcumícln szánnazék-anti-COzM ellenanyag konjngátum (CMC-544) előállítására, 186891 A lalabnány tárgyát képezi eljárás PrUX-S-S-W).,, képletű monomer eídfehdWriidü* :száenia?ék/ellenan>-ag konnsgáuunök előállítására, amelyeknek 10% alá csökkentett az alacsony koipgáídágú iibikciója (LCF), ahol: Pr jelén|c»e éllsltááyág, M; jelentése hkiroíizálható kapesolómolekula, amely képes felszabadítani c eaífeheainléinrSzáfntáPköl á kpnjngátumból «bután kötődött es belepett a célsejtbe, W jelentése ealickeasnipn. m jelentése a fellőtt konjugációs termék 4 ~ 10 iö:meg%--ái alkotja; és C»X^S^VX„j«l^^.^ií^i«amicTO"S.»ármí»xék> atrmly: eljárás a kővetkező lépéseket Ibgiaha magtMrm {1} a ealieheamMtS"Száonnzék hozzáadáp 4κ e!leftärfip|ha^ tí|ol a éa|iékéía«léíS“&amp;aj^Siaaák 4,5'> Il iÖmeglHí az ellenanyagra Vôîsatkozîatva; {2) # eakelmamteimszármazék és $$ eMnanyttg: mkübállSit nemmttkitráíM:, pzöismrkömpáiibíiis, pttfierelí oldatban a körülbelül F · 4 pH tartományban monomer citotoxikus szer/ hordozó koríjttgátansot iáaáírnazó készítményt hozva tétre, ahol az oldat továbbá tartalmaz (a) elánok és (b) adalékanyagot, amelyék közöl legalább egy CV€=s karbonsav vagy sója. a következők közül kiválasztva: dekanoât, 100 mM nanonoát, 10 mM undekanoáí, 5 mM dodekanoái, és ahol a?. inkobáiás körülbelül :?ÖCC és körülbelül 35:>C közötti hőmérséklet-tartományban van végezve körülbelül s S perc és körülbelül 24 óra közötti időtartományban; és
(3) a i'2) 14jp^îiëTS: -'éti&amp;áMs'íott;.-^Qi-yusátusn kromatográfiás1 elválasztási eljárásnak való alávetése 4-10 tÖategOá:lallte|tsié|Ü mtmoingr íiítólösiktis ealicheamido/ ellenanya|jk:tííy!.igáttariök és |Ö% álátfi mennyiségű slaesooy köígtigáttitn; b|iköíó Il:Cvb|:élvál&amp;sztásám a koqltigáSa!lan: él:íénabyagtöli :CalícbéS|tímíö»az|«nazékíóÍ. és: «ggregáli koningátumoktöL jOOIÖI A taláMáüy tárgyát képezi továbbá Fu-X-^-S-Wlœ lépléttl mööoj^'«$ί$8^ηΜη·*2^ CÖ22-elleriaríyag köii|ugábsmót: tartalmazó készítmény, amelyeknek 10¾¾ alá. ósÖkkentett az alacsony kóigogákságá frakciója (LCF), ahol;
Pr jelentése ar4i-CD22 ellenanyag, X jbleniése hídrólizalható kapesolómoSekola, amely képe felszabadjam a éaliéhearn leint a konjagátümból mintán kötötlött és belépett a célsejtbe; W jelentése caHeheamtctn; m jelentése a tisztítóit konjugációs termék átlagos telítettsége, oly motion, hogy a císlmheamicm a konjugátton 4- iű tömeg%-át teszi ki; és (-X-S-S'W),,, jelentése caí icheam ic in-származék. |00l 11 A találmány tárgyát képezi lovábbá gyógyszer, amely a találmány szerinti készítmény terápiásán itatásos mennyiségi dózisát tartaímazza^ proífeatfv rendéiienesség kezelésében.:e^#:a1kate-a»á«mh jÖÖI2j Egy megvalósítási mód szettet a találmány javított konjugációs eljárása tár tel monomer citotoxikus szar számaxék/hördozo konjhgÉttmök (a attthly szrgttrbkánsan aiaesaiiyább szintű LCF-ei eredményez: (H) százalék alatt) 8 molekcsla fizikai vagy kémiai tulajdonságainak szignifikáns tneiviitosisa trÉkül. A: találmány továbbá további javításokat tár M a könjogáeias eljárásban, amely nemcsak szignifikáns javulást eredotényez az LCF szintjében, de színién szigntítkáris javulást eredményez az. aggregáeidhsm a korábban feltárt ePMsokhoz képest, és lényegesén: rnégtiöveksdetí díbgtebfpségeí hoz létre. A találmány szerinti; monomér drög-száráidzék/hörd^ (a .Aoráttgátumpk”) Μ|ϊί®Μ
Prf~X-W):K ahol:
Prjelentése fehérjetermészetű hordozó, X jelentése kápcsölóínoíekuia, amely febérfetürmészetil hordozóval reagábti képes bármilyen reaktív csoport termékét tartalmazza. W jelentés« citotoxikus szer; -3SI- jelentése a: Msztitmt konjugációs $mpék átlagos: telítettségei öiy modes, hogy a drog közö|seM a kmppttsm 7 ~ P tömegéből I alkotja; és {-X-W)«, jelentése dteiomktss szer származék. j(IÖÍőj A találmány szerint! monomer drogszármazék /hordozó kötpgétmnökaí (a .jsonjtJgatmnok”} egy rnogvolősításl mód szerint a kővetkező %és«k«t msgahao tegäalö találmány szerinti eljárással hozzák létra: (1¾ a cltotoxiktss szer származék tazáaáását; a féhétjeíermészetö hetriöKőhoz, áhöl a esotosikas m®t származék 4,5 -11 tomegPtes a Inhétjetermésztdö hordozónak; (2) &amp; eifötoxikns szer származék és s tekèrjelemtőszrii hordozd mktteáiása nemmukleolil, ;]SfM8m-komj>atis>tltsi psfeelt oldatban a kÖrölbeSöí ? ~ 9pH tartományban «mourner citoíoxtktts szer/hordoző korijugátumot hozva lm ahol m oldat továbbá táritdroaz (aj alkalmas szerves tánsoldőszert és £b) egy vagy több adalékanyagok snmíyek közülduplább egy Cs--Cia karbonsav vagy adja, és áhöl az iskobálás körülbolS!M*C ás körhibelül közötti bbsséméktet-tartömánybas van végezve körülbelül 15 pete és körülbelül 24 éra közötti idötariománybím; és (3) a (2) lépésben előállított konjugálnm kromatográfiás elválasztási eljárásnak való alávetését 400 tömagbk telítettségű ás 10% alatti raennyisega alacsony kospgáltságó irakesőjö i(LCf) monosner ciiutoxikns szar / Mtérjetermészető hordozó kopigáítonök elválasztására a konjngáladan iMtb^iepeszeto írordozótói, eiiotoxikas szer száHnazéklói, és aggregáli konjogátoínoksól (ÖllMj A leírás egy aspektusa szerint a korpgamm fehérjetermészetű hordozója a kővetkezők által alkotott «Söpörted! vae kiválasztva: hormonok, növekedési teklorofc, találmány szériát! eUenanysgók, ellenanyag Itagmensek, leírásban lekért HlestaoyttgmdiStedktandk, és azok genetikailag vagy enzimatikosan módosított megfelelői jőlliSj A találmány egy megvalósítást módja szerint a tebérletennészetü hordozó ellenanyag. Egy előnyős megvalósitás! mód szerint m ellenanyag a következők által alkotott csoportból van kiválasztva: monoklonâlis ellenanyag* kiméra ellenanyag, komán ellenanyag, humanizált ellenanyag, sgylánoö ellenanyag, Fab irpmens ás F(ab)2 írstgmens. {IHllőj Egy tsásik megyalí5sitási módszerint a: immsnizáö: ellenanyag a CB22 stgttelszlnt antigén ellen Mnypl IP»!?! előnyős megvalósítási tnőd szerint a humanizált ánti-C022 elietiáítyag CjDR-graftoli ellenanyag, ás 5/44-gLI könnyiiláne: variáld! is régiót (SEQ ID 140:1¾ és S/44-gH7 ndtezláne viroiplis régió (SEQ JD líö© tartalmaz, {Őilikj Egy másik előnyös roegyslositásí tnod: szerint a humanizált uníi-'C022 elienuoyag CDR-graliolt eílemmyág, amelyd!>Si| 10 NO: 28 szerinti szekVerseiíp könnyüiáneól tartalmaz, flMliÖj Egy még nsásik előnyös megvalósítási mód szerint a humanizált áílti-CöáS eliemmyag :COR*grsfio!t ellenanyág, arnöiy EEQ 10 NO: 30 szerinti szokveneiájti nehéziâncot íarfahmtsí, f(HÍ2Öj Egy másik előnyös megvalósítási möá: szettet a bnmanizált ünt5~€D22 eílenányag COR-grallolt elletniityag, atnely SEQ ID NO: M szerinti szekveneiájő könstyüláneot és SEQ 10 NO; 3ii szerinti szekvénöiip nehéziáneot tartaímaz. |'8Ö2I| :Egy másik megvalósítási mód szotinî a humanizált asti-CD22 ellenanyag CÖR-gradolt eíienanyag, amely variáns ellenanyag,, amely iafilttilks^letesi pt-omkolial van nyerve és megnövekedett a humán 0022 iránti vpecilkása.
[8822) Egy másik as.pektus.bun g leírás s^ft^mônomer-Âte^lfeus szetAordokó konjagáötnt MGuhozitssra alkalout/ott cnotoxlkox szer vagy a IllÄtaä*:vagy a OAISFhez kötódö és M megmtvtu'ó alküátószer, vagy a fehórjmmtéjtfc inhibitora, vagy iahsbitoni. )8(133) Λ túrás szerint a citoinyikps $?M &amp; 1#veik*z8fc' :áit$E:glk&amp;tött csoportból vas kiválasztva: be-tepa. takánok, vinkrieztln, dátumodéin, doserpkicin, epiruhiein, sszpatotnicinek, áktioonubön .ftutamfe&amp;i, azaszermek, bleomscmek, tmimkife, jiat#iein,: ^^.^^íbök/atírlsalatfítok, homlMzteriinek«. és ntaytanzmmdok, [0824| A táílbpány egy előnyős; níégvalbsfiási ps^Ja. szerint a eitőtoxlfcps szer eafieheanticim és a calieheamieio pmrna cáliebeam Mo vagy N-acëtil gamíbá calMiöamlb M rn&amp;mmM közül van kiváitssztya.
[882§) Egy még; másik megvalősbásí: mód Äs? a eilöioxtkus szer butanoii hkirMiÄl és olyan hsdáoliaálhatb kápcsolötnofekoíást keresÄ van koígagalvs îehêdeiermészetïi hordozóhoz, arses y képes a utotoxikus szar felszabadítására a konitígatumhól a kötődés és a célsejtekbe történd bejntáx után. |8ll2ó) Ezen aspektus egy elónyöv mpgvalósftásf módja szsrtoá: a IMröiíMlhatő kapsolómolekuia 4A4-äcetltlenoxi) butáovav (Aura: s (0027) A találmány gy tneg másik aspektusában ektánsavat vagy sóit vagy üekánsavat vagy sóit aikalm&amp;szuk adalékkén: a konjugációs eljárás folyamán az aggregáelö csökkentésért? ásí».:#og(el^^Ófsa8veMsér». 18828) A találmány agy még másik aspektusábátt a találmány szerinti keo)tigatumoiati: kromatográfiás elyálaszíási eljárási lépéssel tisztítjuk meg.
[8828) Egy »(vgvaiosiU'isi mód szerint a monomer drog szártnaMkmötööxő koojwgàtum elválasztására alkalmazott kromatográfiás ai választási #j;^|§imdretk^iti@i§lkS5ömato^ißä: [8838) Bgy másik megvalósítási mód szerint » monomer drögi Skárífiagékehötdozökonjogáhon elválasztására alkaisííagolí kromatográfiás alválasztási eljárás HPLG, EELC vagy Seplmcryl :S»Sb8::kröíoaiögráila, [8831 ) Egy előnyös megvalósítási mód szerint a monomer drog saarmazéksbördöM koiy ngálnot olválásktásáía alkalma»«« kromatográfiás dválaxztási eljárás hidrótób febfesöbhotssi kmmaSogftßa (HIC). Egy MÍÖnüssn előnyös megvalósítást mód szerint a HIC á kövelkezők aikakütizásávai van végtebtgtiva: Fend Sepharose iS Fast Flow ..kromatográfiás közeg, Dutll Sephatpse 4 Fast Flow krornatográfíás közegeídktil Sepltacose 4 Fost Plow Momategraöás közeg, Toyopearí Elitet-óSOM kromatográfiás közeg, Mttero-Prep: mettiHiC közeg vagy Miter«-· Ei'öp:iE0ödl HIC közeg.
[0832) Egy különösen előnyös megvalósítási mód szerire a íl£C Bofil Sepharoxe 4 Fast Flow ktooMögráfíás közeg: ;dka:mnz:V.aystl von végrehajtva.: )0033) Egv másik aspektusba?? a: Mrásáíátgya: tnpnptnor óihnoxtkus szer szárnrnzék/lmrbozó kopjngátom, amely leírás szerinti eljárással van eiéáürtva, Ezen aspektus egy előnyős magvaiöskási módja szerint M alkmmázott ejteíoxi^^^ ésna alkalmazott hordozó ellenanyag.
[8834:) A találmány egy másik előnyős megvalósítás! mődja szérmt az ellenanyág a kővetkezők által allíótöd esopörtbóí van kiválásivá: moneklonálts ellenanyag, kimérd eílananyái, hantán eMenanpg, tomsoiÄ ailenanyng, egylánco ellenanyag, Fab íragmens ás F(ab)2 Iragntens. Így különösen előnyős megvalósítási mód szerint a €1722 sejt felszíni antigén ellen irányuló hnmamzáH ellenanyag van aikastnazva, |Öi|3|| Egy traîgx alosu-Hi mód srednt 3 htmiattizáH 4«η·0Γ0;» .eftenanyag QDRijraftoUlÄaatjva,«. ës .Vl'E g|:,Í; teiívMáiu: variábilis nyirn {SEQ CD Niî-44}, és 44 SgH7 nehóztáne variants régió: (SEQ IP NO:2?r láttajtfe főOMj Egy másik megvalósítási mód s.«erim a häunanizäit antRC’1522 ôliesæspsg CDR-gmÉolji ellenanyag* : finely SEQ ÎD NO: 2S szeriül« szekvenciájó könnyüláneot tartalmaz. |iP37| Egy előnyös megvalósítást mód szerint a byt&amp;tózáit ·4^8«Β·^Ιί|·€Ι>^?«&amp;0?ί:ν màÿ §BQ: ID NO: 30 szerinti szakvsndájú nehezíáneot tartalmaz, föOSbj Egy másik előnyős laegvalóstíási ««ód széfet a hománMlt aníi-€D22 eile»«ayag COR-prftök ellenanyag, amely SEQ ID NO; 28 szerinti szék véne íájó kőouytU&amp;ieót és SEQ ED NO; 30 «sériai szekvezielájö nehézláneot tartalmaz. fŐ839f Egy még másik megvalósítási mód szerint a homanizátt asttÉ€ÍD22:ei|é«a«yag CDR-gisOoít eSíensnyag, amely vadán« ellenanyag, $&amp;££$« áÍBaítáá^iélM protokollal van «yéryéj |§: ötégnövekedett a hmbá»; CD22 iránti ;>peciS:lí:ás3.. {68461 Egy előnyős megvaSösftásEmód szerint a dtotoxÉkm; szer szírmuzék pmsiá ááífetemMl,· ¥" acetil gamma eal iehesm ;e in származék. 168411 Egy megvalósítási -mM-mtmt a eaHchetnmdt; származék Ä6^#öiSÄ8·^» S- OárkapíóQ^íéiil butanoií hidraziddal.
[6842 j Egy másik megvalósítás; mód szerint a drognak a hordozóhoz történő kapcsolására sikátazötí kápcsolómolekuli* olyan jiídrpiíZáihatő kápésöjémolelada, athdy képs ídszabadítánr a ealiehesmidE szánnazékot a konjugánmtW a kötődés és a éélsóiRkhé történő bejöíás utlö, Egy előnyös megvalósítást mód mnnt a hldrotízálható kapCs%»ión#M6!á:4<^á«e!Slfenb^|Mtáfisáv· CAeButj, |6843| A: Máimány egy másik aspektusa szerint a találmány tárgya monomer eáitoheátmdn származékAeítl-CD22 ellenanyag kopjngiimm, amelynek képiete: Fr EX-S-S-W),,,, almi; Er jehmtése &amp;n?ECÖ22 ellenanyag; X jelentése hidroíizáihaíö kapcsolémoiekuia, amdy ellenanyaggal reagálni képes bármilyen reaktív csoport termékét tartalmazza; W jelentése caikheanndn gyök, tn jelentése s tisztított ktaóogáetós termék átlagos telítettsége, oly módon, hogy a caíkheatnieit; a koojogátom 4-10 tömeg%-á; teád ki; és (OÍ-S~$-W},.s jelentése a táMímáöy szerinti eljárással létrehozott cahoheamíeítf származék. {8644| Ezen aspektus egy megv&amp;iédtás? módja szerint az eiieamtyag a köVáiy^'áMÉáte^té^pdból van ktváíaaztxót: moaokíonáíts ellenanyag, himéra ellenanyag, hnmán ellenanyag, humanizál; ellenanyag, egyiáncá ellenanyag, Fal) Bagmens és F(ab}2 fragmens. }6Ö4Sj Egy előnyös megvalőritás; mód szerim m ellenanyag olyan antoCP22 eiienanyág, amely humán CD22-re speoifljta, és olyan nehézláncot tartalmaz, ahol a variábilis dómén a következőkben megadott szekvenciák közül íeplább egy CDR-t tartalmaz: az E ábra szerinti Hl (SEQ IP NOM ) mint CDR-ΜΙ, az l.ábra szerinti H2 (SEQ IP NO:2) vagy H2* (SEQ 10 NO; 13) vagy ΗΓ (SEQ ÍDNÖH5) vagy MTy> (SEQ IP NO: lőj mint €» H2, vagy az 1 ábra szermtl H3 (SEQ IP NO;3 ) mint CPR433, és olyan könnyúiáncot tartalmaz, ahol a variábilis dómén a kővetkezőkben megadott szekvenciák közöl legalább egy CDR4 tartalmaz: az 1, ábra szerinti L l (SEQ Í.D NO:4) mint CDR-L.i, az i. ábra szerinti L2 (SEQ IP NO:5) mint CP.IM,2, vagy az l. ábra szerinti 1,3 (SEQ 11) Nf.):ö) mint CDR-1,3, j0ő4áj Egy másik elögytN megválói,itasí 1^· #léááftyá$ '*%m nehéziáneot tarmímáz, aboi a variábilis dómét; g; kő vetkezők ben mgpdott 'ktÄfejpMhb CÏM^^métem; .10 Νϋ:Ι η»nt CDR-Hl, SBQ JD NO:2 vagy- SBQ H.) NO: 13 vagy SBQ TDBOrif-**gydS'ß$·ID'NO: 16 misiCDR:-I KI, vagy SriQ ID NO:H mint CDR-H3, és olyan kőnoyálátseot Imtáliház, shot a variábilis dómén a. kővetkezők bea ?«egadmt szokvetH ;ák közöl legalább egy CDR··* tartalmaz: SE^| ID NÖ:4 mini CDR-LÍ , SEQ SD NO:5 mû« CDR··!.,?. vagy SFO ID NO:6 mint ODR-1,3 |0Ö4?| Bgy még mtVsik dör;yős megvalósítási n:őd szerint a/. aatNCD22 «Öenanyag a következők«" tartaimazza. SBQ ID NO:* mm? CDR-HI. SBQ ÍD NO:2 vagy SBQ IP NO: 13 vágy SBQ IQ NO: f $ vagy SBQ ID NO: i 6 mint CDR- H2 SBQ iD NON mint CDR-H3, SBQ 10 N0N:?ftmtC0R--úB SBQ 10 NO:é mmtCDF» L2. él? SEQJQPQíÖ mtá: CDR· 1.3 11K148I Bgy irtási!·; megvalósítsd mód szermi a humanizált aníi-CD22 ellenanyag €DR'gtaíiölCáhti-CD22 Éllenányag: Iá ittasán ákőepőr várié|iÓkt» és nentamtaándöstar OPR^kei:: mrt|l{??azo variábilis: dorne« tartalma:·?:. ital#! Igy inlslk «egyÄtdsl titad siNHot a iíutoamS# ;tat:bC£>22 élemtayág hak?«? akceptar Mérégiól: tartalmaz, ahol az ellenanyag nebézláne variábilis dómén humán akcepior régiói a humán Nes altípusé konszenzus szekvencián alapâassksÉ^ÔIidf oldaliannokdklPk1tft^^lÄi>vÄlii'#< :?1 ős 93 pozíciókban: Égy másik taegvalosiíss; mád szénot a hiiaianizált ellenanyag: mváBM nëm>%üm|?ï donor oid&amp;iláaeokaí tartalmaz a ő? ér: 69 pozícióban.
pŐSOj Bgy eRhryös atagválöskási mód szertat a €DR-graRÜ£ bürftitaizáli alüáanyag 'humán Des áltpjsé : konss^gkod BtaÄ akceptör vázrégiót tartalmazó variábilis doméni tartalmaz, és tOvábM nem*lta»átt .donor oMáijáltaokul is tartalmaz a 2. 4, 37, 38, 45 és öö pozícióba«. Bgy másik megvalósítási móri szorínt a COR-gráftólí: eiiéitanyag továbbá nem-humán donor OÎdÂn«>kai tártabbá» a 3 pozícióban }0»SI| Bgy még másik megvalósítási mód szerint a GDR-gtaltöit Änanpg Si44-|B1 ktamyöiáne váriálrilis tagiét (SBQ LONO:i9}, és 5M4-gH7 aehéziáb variábilis tagié t'SEQ Ili NO:2?) tartalmaz. pi)S2i Bgy másik előnyös megvalósítási mód Mórit® l3ÖR*^aftoIt éitenaayág 'S1Q 10 NO: 28 szeriöti s»ckveneiájá köonyölánem és SBQ !D NO: 38 széM-ÂkvmtciâjÉ^êh^làîtèôt' tartalmast, }8ÖS3| Bgy másik előnyős megvalósítási ásód Ätat » CDR-|äÄli Uliritanylíg SBQ 10 NO: W szerinti Szekvenciáid kőnnyülánem és SBQ ID IND: 30 szerinti szekvenciáid pchériíiUtaöt iáttalmsz. (09S41 Bgy megvalósítási irtod szerint az anu-CD22 CDR-gsaílok eiléntalyág variáns ellenanyag, amely afiltt h ás-érlelési protokollal van nyerve ésmégnövekedetí a humán CD22 iránti specs ritása. :|8Ö$S1 Egy tnáslk megvalósítási ínód szerint az. snsi-C022 eliéitaísyág kiníéra êSôin^Âf:k8^||l'i:iSIQ ÍP NOí ? és SBQ: IP NO: 8 szerint inonoklötiális ellenanyag kómryő- és öehésdáöb variábilis domélr szekvenéil?: tarlaimazzá, jöOSff irigy még másik síiegyálősitásl iíípl szerint m antl~CD22 ellenanyagbMd CDE-4 tartalmaz ésöakok dottor CDR szekvestciáyák áhid:; a dottor CDS. hirityző részét egy eltórb székvebétá hNyériéslti és taüfeődöképés CDR alkot. |i)0$7| Így klliotíbíióti óidhyös títagyálósítasí tnód szerint s citotoylktri szer szitmazék yágy %mm eáltakéamidn vagy N-acetii gárttma cälifeheatnicin származék:: fÖö58| Egy irtásik aspekttÎSàban leírás tárgya eljárás monötnér ckóloxikas szer származék/hnránzó konjugänan. stabil iioűbzáli keszítmenyétsek előállítására. Bzesvaspektus égy előnyös megvalósítási módja szer?« a tnonotner ciíoloxikas szer szárnrazék/hordozó kimjttgáítin? stabil liotlllzáit készítítiényét a kővetkező métiotí állmuk dó. (a) s< riK?nomer citotoxíku« szer szárinazrdonorduzé k«??jagát:ítn feloldása OQ ·· 2 i?rg/ml vCgkoncentrádóía ;iägyaszt#k védőanyagot: UM tötneg% I^ftcenírácsóbsíír, 'pctfömr tőmagsöveíá szeri 0,5-4,5 tőmogfi :kötsóímt'íóói'Óbám elekíró!&amp;:okdU0$ ! M - kencetitmoiőhítn, oldódást elósegitó anyagot #,005¾¾ *
MmggŸù. k^e^stfáöióbágs·: szert $*$0' raM ko»côdïmmôîsan és vizet tartalmazó oldatta oly módon,-. hagy a* oldat vágso pH'-jä: (b) a IbdÄldat. kin^fÄ'Seiäkfea·: +S°€ - -HÖ°C Mmétséklétsft; (cl az otdät iefagyasztása -35öO -- -50¾ fagyasztást hőmérsékleten; (d) a ingyolt oldat kezdeti fagyasztva szárítási lépégnek: WMîsÔ alávetése 20 ~ MMkÂ':éMàlege>i-S^ft4si' nyomáson -10¾ ---.40¾ p0]<;díös«érsékisi mellett 24 -·1&amp;. érán keresztiig és (e) a íd) lépásítaH btgyasAvatszárdött terítsék'.másodlagos fagyasztva szárítási lépésnek történd: aiávetése2ü - 80 mikron szátiiasiitytatsásoR -siíi^C - 1-35¾ pole-hómérsékiot maiiéit 15 « 3ö érán keresztül. jöölíOj A létt^s egy módja szerint a eaotokikus szerihordozó koojogátam- M®M&amp;1iáiásáta aikaimaMíi fagyasztás? védőanyag &amp; következők által alkotott osöpötthól van kiválasztva', akist, martost, szorblt, ino;al,: pöliédléfi-gllítök aldonsav, uronsav, aidársav.. aidózök:, kétózok, aminoenkrek, älditok, mozitok, giieeraldeitídék, arabinóz, Póz, páidÓA: ifbóz, slid», gsiaktdA plMïy hexoz, Idéz. mansóz, ialóz, heptóz, giök% irukídz, glukonssv,, szóróit, isktóz. itaóit meíli u-glukopiranozid, maltáz, izoayzktirbmssv, aszkorbinsay, lakton, szőrhöz, gltÉarmsay, eritróz, sreóz, arabinőz, ailéZpítrtSz, gtdóz, idéz, tatóz,: etfetlóz, ribdlöz, xlMóZ, pssdkóz, tegatóz, ghik:i(n-5sav. ghtkofssav, slukarinsav, galakturonsav, mstnm»o?M.av, ghikózastdtí, galaktőzamin, szapta&amp;b feehídóz, neoraminsav, itrabinánokv ÉtÉtádok, íuktook, plaktátíók:, galskmronánófe, :glakánók>: manpánok, sildnek,· láván. lakóidén, kajragee#% gsláktokarolóz, pekiinak, pslriípsav&amp;k, amilóz, palíalát, glikogén, astblopektln,: eeiudóz, dektfán, pasztdlÉt, kjtk. ag&amp;róA keratin, kóPdroitm, dsrmatá«, htalrtmasav, algasav, sasriás-gütsri, kökény dó. szaéharoz, glükóz, jáfctoz, delmtéK, etiíén-glikol, pttíiedlén-gíifcol, polipropilén-·· gdkoi. glicerin és péntaemnt. {0060} A leírás egy előnyős módja szerinti' a fagyasztás! védőanyag szadsmóz, ameiy- 1.5 éötnegSá kottegotráclóban van jelen, jCSléí l A leírás egy módja szerint! a líotilizálás áoiyamátí afisaltMZ0tt.'p^lm^'*^m^övei$;s2er:í3tóE&amp;ir40 vagy IddraaiedUkeßidnystO-dO kdzäi yäß kiválasztva, és a kotantráelőjá 0,0 lőmeg%, jOÖőlj A leírás egy másik módja szórítü a Ufolixáló tridaí^':.álkaMaiZO^:'*yktrtíBUntó«myklö^;,.s»^''íK05 M koncentrációban van jelem 100ó3j A léirás egy előnyős módja szerint oldódást éldségltöAnyagot alkalmazunk a iíoflízálási e|Msbán-Aiia Iában ez az oldódást elősegítő anyag egy felületaktív anyag. Egy különösen előnyös megvalósítási mód szerint a lelüiétaktiv anyag poHszorbát-HO, amely 0,0! iőrtteg% koncentrációban van jelen, jftoódj Ä leáis agy módja szerint az alkalmazott pufleteló szer tmmeíatnm, atneiy 0,02 Md^rtaetáráeíSban van jóién. Kívártaíds, ha az -didst pi-l-ja a iíeiltzálási óprás el^éa pM 8,ö, A- eltötoxikas smtedözó kösdugátrttoót tanainazó óldatbt ílolákba rnétjak ki +5¾Mmérsekleiétr az eljárás tttógkezáése előtt, jiOÖSj A lekás: egy ólőpyős tnódjá szériát!: á fioiákfean lévő oldatta lefagyasztják '05WG hőméf-sékleter,; a fagyóít oldat kézdeíi. Égyásziva szárítási lépésnek tesszük ki M mikron elsődleges szárítási nvomáson -30¾. poic-hóínérsékleí ióólled: -|G órar .eresztOli és a ütgyasztva szárítod termék másödiagos fsgyasAvá::szárítási lépésnek tesszük ki: óö píikt-on srara is. rsvomásos +25¾ :pö!e-'bőntérséklet mellett 24 órán keresztül, {OOéój A találmány egy indsik aspelctaslnák tárgya feészllmény, amely a találmátty szerinti eprással elóálÜtött: monomer cnotoxíkm szer szárínarék'hordózó kosdöptírtS térápiásan hatásos mannyisógét:tartalí«azza:< j080?i A leMs egy megvalósítási mMjä. tssöM s mononaer -efteteikt«?· szer szánnazék/hönlözö konfegàltanban lévő hordozó fehérjetermészetű hordozó, a kővetkezők közül kiválasztva; hormonok, növekedési itktöíbk, és éilénanyág-miibétikumok, a találmány szennt egy ellenanyag. j0O00j Egy ólónyös: megvalósítási mód szerint a fehérjetermészetű hsrdszó kamá» möaokksnálb· éiic»á«y»g, kimért* e}íéftaoy&amp;g.hmsán ellenanyag vagy humanizált ellenanyag. j0809j Egy «iönyös; megvajiäMsi mód saerí® a humaníMít elfenanyag a £022 sejfMszini antigén eífen irányok |08'?8| A találmány ezen aspektusának egy különösen akfeyös megvalósilási naklja saesiat aa íl»8'(.’V)22 ellenanyag htnnán CQ22-re specifikus, és olyan nehéz láncot tariÄ&amp;A ahol a variábilis dómén a kővetkezőkben megadta! szekvenciák közül legalább egy CDR-t tartalma?.: az li. lEtá svafisti H l ($EQ ID NI): I s mint CDR-m, az I. ábra szarinti H2 (SEQ ID N0:2) vagy H2' (SEQ ID NO: i3) vagy M2'' ISBQ IP NO 5 5} vagy U2'M (SEQ 1D NO; 18} mint CDÍ0ÍÍ2, vagy a* I,. álda szed?# W (SEQ .ID NOQj mint CDR4I3, és olyan" könayüíáncot t&amp;iaímaz, shots variábilis dómén a kövaiikezökben megadott szekvenciák közül fegaiâbb «gy CDR-t tartalma?· az I. ábra szerinti L1 (SEQ ÍDíNO:4) tnínt CDR-LK az 1. áfem«eáífeti L2 {SEQ IP NOtS) mini CDR-i.2, vagy az I, ábra szerinti 1.3 (SEQ IP NO:ö) QOE·'1.5. |88?á| másik előnyös «tegvalósitávi mod szerint az a«ti„€D22 ellenanyag oípn néhézláneot tartalmaz, ahol á: vat tahiba dómén a Következükben, megadod szekvenciák ködli legalább egy CDRH: tartahnsz: SEQ IP NO: I ín ins CDR-Hi, SEQ 10 NO:2 vagy SEQ II) NON 3 vagy SEQ ÍD'NO:i5 vagy S1QÍD NO: 16 mint CDR·· H2, vagy SEQ ll> NO:3 mmt C0H-H3, és olyan könnyiiíáncot tadairnaz, aboi a variábilis émàn a kővetkezőkbe« megadöti szckvenelák közül legalább egy QPR-t tartalmaz; SEQ ID 100:4 mink ODR-El, SEQ IP KQ:3 miítf:CÖR-IQy vagy: SEQ: IPNO:E'mint:QDR-E3. (0ö?2j Ey anég másik előnyös megvalósítási mód szériát az elienanyag-nnjiektíia a következőket tartalmazza: SEQ ID NO:I min? CláÍQfei, SEQ ID NÖ:2 vagy SEQ XD NO: 13 vagy SEQ ÎD ND:M vagy SEQ ID NQ:4b mint CDR-D2, SEQ ID NO:3 mintCDR-ÍB, SEQ ÍD'NO:4mim CDR-X.i, SEQ ID NQ:5 mint CÖR-L2, és SEQ ID NO:6 mint CDR-L3. :(8073] Egy különösen előnyös megvalósítási mód szerint a hománMÜ antl-CD22 eifenanyag CDR-graRölt humanizál; aniI-CD22 ellenanyag, és 44/S-gL i köonyöláne variábilis tégiöi (>SEQ !D NO: 19), és 44/5-gH7 nehéziám: variábilis régió (SEQ ID Nt 4:27) tartalmaz. j0074j Egy másik különösen előnyős megvalósítási módjtí szerint n humanizált anti-€D22 ellenanyag CDR-graSök ellenanyag, amely humáís CD22-rs specifikus és SEQ ÍD NO: 2§ szedni! szekvenclájö könnyüiáncot és SEQ !D NO: <ö szerinti szekvenciái;! nehézíáncot tartalmaz:. (0075( Egy másik előnyős megvalósitási: módja szerint a humanizált anti-CD22 ellenanyag CDR -graíkdí ellenanyag, amely h«ínánGD22-re specifikíts és SEQ 4P NQ: 28 szerltnkSKékveneiájű kömryáláneöt és SËQ IP NO: 30 szerinti sz.ek.veneiájú ítcbézíáítcnt tartalmaz, 100701 Egy megvalósbási méílja szerint a CDR-graHolt; elfenanyag varíáfts eiienanyag, átnelyíNk nsegnövekedeti a humán CP22 |ràï)ti speeidtása és az eitenanygg alBnitás-erfelésí prplöknlia! van nyerve, :j0077j Egy megvalósMai móe|a szeditt a mon;)rn«r citnntfekns szer eáilpireáhifetb és a gararna eáíieheáínieia vífjiyr N-aceíil gamma caliches minin közül van klválaszlya. j0ft78j Egy inegvalósbási msScija szerirn a kvszibnérây adölt esetben ktvábbl binafetiv szert is tariálAtázbát. Egy ilyen bioaktiv szer lebet üiotovtkn«. szer, ísövékédésl fákior yngÿ Itonnop. jöÖ?bj Ä találmány még másik aspektusának tárgya eljárás proliferativ rendellenességben szenvedő slang1 késelésére szolgáló eljárás, as: alanynak a találmány szerinti késziimény iesápiásaa hatásos dózisának bsadisávát A "készítmény beadimtó séttbfcuiátk fetmpáíORöiRsa«, intmvéaásím. intrimtiériásan, íldrasnédolláílsáni ítifraíékálisan, iranszdertMhsanj fmnszkutlm, ínínmazáilssn, fopMIis&amp;a, :enier;lii;san, mtravágmáiiSíín, sztiblmgválisási vágy reklállsam így előnyös megvalósítási mód szerbit a készítmény iaoavéaásan van beadva, }0Ö8Öj Egy fnegvalósMsi mód Szerint # készítsriéítyt pfoisitmtiv íeedeileoességben, mint például rákba« szenvedő htunáö ahánynak adjuk bé. Egy előnyős megvalósítási mód szerint a rák B-sejíes rosszlndidalú reítdeilgnessóg, Λ 8«sejtes rnsszindniatu tendéilenesség olyan leukémia vagy ilmíőma leket amely exprssszáija a €1322 sejtfelszíni áötigénk j008í} Egy még tóyábbi igmgyalósiíási: méá szerint íj rák kardnóma yagy szarkömsn jÖ082j A találmány egy másik aspéktusáöák tárgya eljárás 8 -sejtes rosszindulatú rendellenességben szms’zM alany kezelésére szolgáló eljárás, M ilyen rösszíndtdatá rendellenességben szenvedő páciensnek a találmány szerinti eitoioxíkm. szer szárnutzék/ami-Üi.}22 kóniugátum terápiásán hatásos dózisának beadásával. Egy előnyös megvalósítási tnód sKéritít a Ö-sejtes rosszindulatú rendellenesség. iimíöma, különösen nero-Hodgkin limfSma. {0083} Egy megvalósítási móö szerint a találmány szériád fconjugatumok előállítására alkalmazott ctíotoskus szer a kővetkezők által álkbtotí csoportból van kiválasztva: leírás szerinti caiieheasnieín, tioteps, taxánok, yjnkri&amp;öln, daunorubtcm. dokóibbíem, epkubidid, sktlnmnichh suthraMcm, aznszerinek, bieomidnek, tamoxifen, Idarohicin, ddasztatinokdurisztatirsok, hemiaszterllnek, mayianzlnoidok és eszpetntnidnek. |$084} Egy előnyös megvaiésftásl mód szerint a eitotoxikus szer gantum caliebeamtein vagy bl-aeeiii gamma cahehettmiein. (6083} Egy még raásik: megvalósítási: mód sZórlhf a kezelés magában: fbglsdia a találmány szerím! eiietovikus Szer kon jugátum beadását egy vagy több biöaktly szerrel együtt,: amely a következők közöl van kiválasztva: eiíénátiyapk, növekedési faktorok,: hormonok, dtokioek, miiMmmmtä», xtmunók, ítderíeukmok, inmrioronok és citoíoxikus szerek. jOOÖőf Egy előnyös megvalósítási rnőd szedőt a bioaktiv szer ellenanyag, és B-sejtes rosszindulatú rendellenességekben expreaszálódó se jtMszíoi antigén ellen irányul ügy előnyös megvalósítási mód szerint a B«· sejtes rosszindulatú reruleiienessagekben exgmsszáldó sejtfelszíni antigének eilen irányuló ellenanyag a következők által alkotod csoportból van; kiválasztva;: anti-CP I 9, unti-CI>20 és anti-€D33 ellenanyagok. Ilyen ellenanyagok közé tartozik a rituximab antóGMl elléhanyag pt}t«xanrM), 10087} ügy másik megvalósítási «tód szerint a bioaktiv szerek eitokinek vagy növekedési láktorok. és nem korlátozd példáik közé tartozik az interleukin 2 (11,-2), TNF, CSF, G M-CSF és G-CSF. |0Ö8§| Egy másik megvalósítási inóá szerint a: bioaktiv szerek hormonok és közéjük tartoznak osztrogérsek (dietilszttíbesztroí, ősztradioi ), andrngének (teszíoszteron, halotesztin), progesztínek (Megace, Prevent} és kerdkosztéroídók {predatkom dexámetazcsn. Iridrokortizon), jÖ08f| Ügy még másik megvalósítási mód szerint a bioaktiv szer citotöxikus szer a következők közöl ^választva, doxorubicin, daunorubieio, idárubicirt, aelaruhiein, zorubidn, mitoxanifon, spirubiein, karubidn, oogaiaoriein, menogarij, pitambicin, valrubiein, eitarabin, geracitabm, trifiuridin, sneiiabln, enoeitabin, azacítidin, iSoxitbn-idin, pentcsszíatin, trroxuridia, kapecitabln, kladribio, dedtabin, floxuridin. liodorabln, göoptotin, poronvidn, tegálufi itiázóínrini adflámiein, eiszpistiRÿ: barbopiat!n,: eiklotezianiid, dakarbazin. vihfetaÄu, viîîkrisztlfg «ytoautro»,. biemnidn, anekieretstniri, prednizos?, pmke^#o snétoiîëÂ, ßuroaraciiok, ekspoxkk tusol, taxoi srstíógnk és mKomiein. |0090[ Egy előnyös megvalósítási mód; sggÄà. «iebaxikus S2»r-áötl^©21..éítefíanjf8g koaj^lam teráglásap hatásos készriinéttyét együtt adjuk be egy wagylöfeb eitoiosikus w lattsbmáe sójával kezelési séma résgeklüh aiiol a eitotoxikös szer kombináció a kővetkezők kózit vau kiválasztva: ÇHÂP (cMöfoszÉM|&amp; d«xorubîoi% vinkrisztin, prednizon és prokas'hszin); CHOP ŐaMoibsziámM, dosoaikícijg vinkrisztin és preduizoït): €©E (cikloíbszfámid, vinkrisztin és prednizon); EAáABöp ?;(pikiofoszfaro:iá*. őöxöniMc«?, prokaîMrin., ÂpÉfc Vinkrisztin és prednízon); m-BA€ÖD {tîteioirexât bieoniiein, doxorubicin, cikkd'oszfamid, ywknsztm, déxametázon és leukovorin); PmMACE-MOEB iptedaizosp metöírexát, döxörabicin, dkbfoszmmid, etopozid. leukovorin, mekioeíamin, vinkrisztin, predidzötrésptökarijazin); ProMACE-CytaBOM t prednizén. metotrexát, doxorubicin, eikloiöszfámid, etopozid, leukovorin, dsa?abi?y bleotniein és vinkrisztin); MAC'OP-B (metotrexát, vinkrisztks, prednizors, Meomicin és leokc>vsrmJ; MDPP (mekloetamiíg yiniedsziin, prednizon és prokarhazia}; ABVD (adnarnfcttkdöxembiem, blcornidn, vinbíasztin és dakarbazin): MOPE váltakozva A B V-vet (adri&amp;iniciíVífoxorubíd??, blc.oanoin, viidóasztin); MOPP váltakozva ABVD-vei; CHfVPP (kforatnbucii, vinbbtszlin, ptokarbazin. predmzxmg jMVP-lő (ikozkunid, metomexát, etopozid); MIMI (molíl-g&amp;g, ifosz&amp;ríid, toetoirexát, etopozid); 1ABAP (dexametazon, nagy dózisé cíiaríbin és ciszpíatin); ESH®: (etopozid, rnettipttxitnzokn'. nagy dózis« eltarabm és eiszplaíin};; E1PPÇ8) (dkioíoszfámiő, etopozid, txok&amp;rb&amp;zip, pívdalxon és bteomiebt); CAMP (fomuszíin, rmtoxantron, citarabin és prednizon); C¥M fcikiofosziómíd, vinkrisztin és prednizon), és IDtlAP (dszplatitt, nagy dózisé citarabin és déxamstazon). jíM>91j Egy előnyös megvalósítási mód szerint a eitötöxikus szeívatőbüffiE cliöranyág korgnpíium térápiásán fiáídsös készítményét a fenti egy vagy több dtotóritetís szer kombmáciő beadását megelőzően adlak be, Bgy másik előnyös megvalósítási mód szerint a eitofökikns szer-anti-CSSÄ ellenanyag kotijbgáttmí terápiásán hatásos készítményét a lenti egy vagy több dtoiöxikas szer köntbináéiő beadása után adjuk: be kézéiési séma; részeként, |0092|: A taláintánv egy másik aspekmsfoak tárgya eljárás agresszív íimföaák: kezeléséi szóigáiö éláms, az ilyen kezelésre szoruló pácienanek a taiáimány: szerinti isonorner calieheamícin: szánnazéklanti-OD22 konlngátara ietápiássn hatásos dózisának égy vagy több bioaktiv szenei; együtt történő beadásával, |öi>93j A találmány még másik aspektusának nirgya a taláiniány szerint? készítmény áikalmazósá pfölifératlv rendeHettasségberi, mini példáid rákban szenvedő páciens kezelésében^ Előnyösen a ?ők B^sejtes rosszindulatú; rendcl!é«essőg, :améiy expí-esszájja a; EÏS2 antigént a ;s«jtí«iszinén, Még donyosébben a B-sejtes rosszindulatú rendellenesség kukéîTîia vagy limfénm Egy megvalósítási mód szeri?«: a rák kardnósna vagy leuké?»ía. j'ÚŐMj ÍBgy megvalósítást mMszerint: a készítmény terápiásai? Itatásos dózisát: szubkuián, Intrapedtondáiisatk Intravénásán, infraartéí'iásan, fntmmedtiilárisan, intratékálisa?·, trarsszdermálixaru transzkutá?« intrariazáiisan, topikáüaan, enteráílsan, intravagínállsan, szabii?tgväi:isan vagy rektalisajr adjuk be, j®&amp;9S:j| Bgy előnyös ínegy&amp;lősitási mód szerint a gyógyászati; készítmény terápiásán uamsos dózisát isriravéításan ad; ük be, PMj A találmány egy másik aspektosábak tárgya a taláiötátw- szerinti ?nimo?ner eglipheárniöin szárítipéké ?inti~ED22: éiísmartysg konjttgâtum aikaltmtzása B-Séjtes rosszindriiatö rendeiiéí?essé^>e??- rnbif: például Sen?“ Hodgkin li?íífömában szenvedő alany kezelésében tőidénő álkalmaPsra. Egy megvalósítási mód szerint a találmány szerinti monomer caUcheamicin äzänsÄÄIi->C032 eitéüttayag konjogtUom egy vagy több bionkttv szerre! egy tltt van beadva. pÔ9?|i; If^'i^pd^Üsír -mM .çssçiïm a bioaktiv szer a van Mválasztva: ellemmyágök* növekedés;! faktöd>te bonbOnöl, eitokinek, tmttdtaetnonok, xantioök, jô^k8yMjfeîr«Âiîr!0aôk. és eítoaMÍk«8;aKgtök. jööbkj Egy előnyös megvalósítási mód szeriül n bioaktiv szár ellenanyag, atneiy :feg|tss : itassgmtlaMá tenüelletiességekbeo expresszálódó sejtSelszün an:Igén ellen M'áíniy«^ «ϊίίΐϊ ^íti'^Í5 és tími- GD33 ellenanyagok. Egy előnyős megvalósítási mód szerűit aat Síiti^<Sfï20 «ág rjí«ïkiïsïab <RíítsxsttTÄ^. jöOÖSj Egy másik megvalósítási mód szerint a bioaktiv szerek fcfö# Iftföft&amp;it -çUo.lkift«k vagy növekedési lektorok.: mint például interleukin 2 {H..-2}, I NF, CSE, öM-CSF és êM'SF, vagy hormonok, amelyek közé tartoznak ösztrogének (dividszriíbesztrol, ösztrsdktl), sndrogének (tesztoszíeron, halotesztin}, progesztlnek ÍMegaeg, Provcna) és kottikoszieroidok hidtökörtk&amp;mk jMOÖj Egy másik megvatéxi-ási mód szerint a bioaktiv szer eitotoxikus szer a következők közit! kiválasztva: doxorubicin, dammrubicio, ídambioín, aeíanibiójn* gorubiéjib mstozattiron, epirabicm, fearcsbieln, nogalamicm, meoogaril, pitarnbSéin, valrubiem, eiíarabin, gemcitabin, tníluridin, ancitabin, enoe kabin, azaeitidin, döxsBnrMin, pentösziatirt, broxuridin. kapecitabän, kiaddbin, deebabin, Ooxuridm, iludaiabin, goagerotin, pamndais, tpgziur, tlazoibrin, adriamicin, eiszplattn, karbopläin, eiklpIbszlamM. dakarbazin, yinb!aszÉ%; vinkrisztin, rnitnxantron, bleomicin, mekloretanno, predmäon, prokarbazin metotrexát. tlurouraeiiok. etopozid, tanok taxes analógok és mitomiein. fölülj Egy előnyös töepÄMsi mM-tfóerSifti*. pàSdÂë^dîÂ.§Ää»Ä^iri6a22;ellenanyag kiMgtigátttm: terápiásán hatösos dózisát együtt adjak be egy vagy több ciiotoxikus szer kombinációval kezelési sétna i#äefedbt, ahol a cáotox'.kus szer kombináció a kővetkezők közül van kiválasztva: GNÓPP (eiklülbSkkimlili: doxontblcia, vinkrisztin, predmzim és prokarbazin}; CHOP (eikiotosztarrdd, doxomökan, vinkrlssítit! és prednizon); CÛP ieikloíbszínmid, vsukrisztús, prednkotí); GAP-BOP (cikloföszlamid, doxOsrnbléitá prokarbazin, hieninidn, vinkmzsi» és prednizon); m-BAGÓD {íneíoti-exáty:b!éomieát,:doxooáíieí8, ciklpiibsziamíd:, vinkrisztin, desamatazon és Ivokuverm}; ProMACE-MUPP IpredOizőOy metotrexát, doxorubicin, eikkdoszfámld etopozid, teaknvorin. mekk^taÄ» víjikrisztln, prétkíizon és prokarbazin); FroMACB-CytaöOM (prednizon, metotrexát, doxorubicin, piklolbsziantsdy etopozid, leukovorin, citarabin, bieomícin és vinkrisztin); MACOP-B (metotrexái, doxorböiem, tákkbbszlamld, vinkrisztin, prednizon, bieomicin és leukovorin); MOPP (ntekioetamin, vinkrisztin, prednizon és prokarbazin); ABVD tadPamicm/doxornbkio, bleomicin.. vinblasztin és dakarbazin); MOPP (mekkxnamin, vinkrisztin, prednizon és mokarbazän) váltakozva ABV>vé! (ndriafniblnAlt^orobiein, feièomlbm, vinblasztin}; MtOFF pseklöetamib, vinkrisztin, prednizon és prokarbazin} váltak ózva Λ B V D- ve I (alrianiieln/doxorobkm, bleomicin, vinblasztin, dakarbazin); CHIVFF (kMrambnctb vlnblasztinr prokarbazin, prednizon); IMW-ib (Itefsmiát, etopozid): MIME (niètiEgàg, rfoé^^id,.DHAP (dexametázon, nagy dózisü el^lbm és eiszplatio): ESIIAF (etopozid, i»^Upi^bi^Íip^iáí§p:'dó^isó eiíambin és e|sz|datin); CEFF(B) (etklöföszíamld, etopozid, pipkarbazin, ^dö1ZöSÄ¥^miai%-,ß^^(ioro.as?im, initoxáübdn, eiiarabin és pi-edmzdn); €¥Ρ-1 idkksJbszlamid, vinkrisz-io és prednizon t;}, és ΡΗ,ΑΡ (ciszpíatin, nagy dózisé eitambin és tlexam.etm'on}., (OlOfj Így «lô«yôs œégvâsM inól $mîM A toonipnéir s^ánnsí«lfesnti-eD22 ellenanyag; koigögämmös: egy yap több iMM-pr kôfsinaàek|ân&amp;k tä|jdk U teeiésl sétm. részként, (01031 Így másik; előnyős megvalósítási mód main; a monomer eaiickeamlcm származék-anti-CD22 eiienaisyag |«ajü|áíő»te?ápifcíMtes Mzm égy vagy fcfclÉsáí követően adjnk /be kezdési séma részként. (01041 Egy még másik előnyös megvalósítási mé4 Äbjhl « monomét calicheamkm sz.árm&amp;zék--.mii-€D22 ellenanyag konjugÉtsm térâpiésan hatásos dózissá!: B*séjies rosszinduístlü rendciîm'siî-égek sejtfelszíni antigénje ellen irányuló élÍéns!)yággíÍÍ eg\im adjak ke, és adod esetheti egy vagy több dtotoxikus szer kombinációját is tartalmazó kezelési séma részkén;. (01051 Egy rnisik; aspéktusbát; a találmány tárgya a iaiáisnády szerinti; monomer caiichearaicm származék/anil· CD22 ellenanyag konjugálum alkalmazása proliferativ reítÉelifcnesseg kezeievke szolgáló gyógyszer gyártására.. Egy ;iyen gyógyszer B-sejtes proliferativ rendellenesség#;teukwäre alkalmazható akár önmagában akár más Moaktfy szerekkel kombinációba«.
M ÁBRÁK RÖVID Iliíii'riTliE
(Oíoél t«4MöftÄ elfeo&amp;oysg CDR:-|e«sck omlftosav^i^tcÄ muiZja bfe pEQ kD NO: I - 6); a 2. ábtaazegér 5/44 rooaofckmálts eiienaoyagkdnpüllnc ÂtâMils dómén leyeS"^^¥^tetáÍ.át..t»i«M|á'"Sói a 3. ábra az egér 5/44 monokienáHs ellenanyag nehézMnc variábilis dornen teljes ssekveoeíípí mutatja be; a 4. ábra a CDK -t-O-ben léve glfkoKiládós hely és reakiv liai)) eltsvolitásáttak stbitégiáJZ n)«ISí|a bé; a? 5. ábra az 5/44 könnyűin««-szekvencia graíloiásdnak W vegésé; mutatja be; a 6. ábra az 5/44 nehezláne-szekvencia graftoíásákáfe teiNMéséí mutatja be; a 7. ábra a pMK R14 és a pMRM.i 0,1 vektort mutatja be; a >1 ábra a kunéra 5/44 mutánsok Blaeote vizsgáiéi! émmttényeít mulatja be; :¾ ¾ ábra a 5/44 gül és gl.l gének összerakására szolgáié ongonukkmtidokst műtétjébe; a i8, ábra a pCR2.1 ; 54 4gi 11 t és: a pt.'K2, i (544gí,!} köztes vektorosat motatja be; all. ábra további graftok előállítására alkalmazót; obgouukleetid-kaze-tákítt mutai be; a is, ábra a fluoreszcensen jelölt egér 5/44 ellenanyag és gráftól! variánsok köäöitl köotpíleíós vizsgálati el túrást t5mSáíjá;:bsj a 13. ábra ágraftojt nehéz- és kdnt)y«iás)cö|;!é§es DNS és tehet je-spk vett e iáját mutalja/be; a 14. tbRát ep ellét)ányag-Nae-g;uí)íua oáliéheamiein DM1-; koajngátnm sematikus szemléltetése; a IS- ábra CMC-544 hatását mulatjuk belAMCSv/B^seft:Jiro torna növekedésére. A CMC konjugációval kesgiteft:; CMC-S44~eí értékeltük B-sejt Hm.fóma xenógraftokban csupasz eget'ekben. Az daganat Kenograftos állatokat issíraperttoneábsan (jp> injektáltuk CMC-544 különböző bőzisalvái vagy a CMC konjugációs efját ássál késdtél*; egér ellenanyag megfelelőjével az !.. 5. és 9, napokéin Ebben a vizsgálatban, am.it az 5. ábrán mutatunk hé* .é ÜM€-344~íbt ág: egér ellenanyag megfelelőjéről kjpMituk, hogy hatásos a RAMOS B-sejl iimfóma·:; növekedésének óózisíöggó gátlására; a l'ö. fűm t tatásat mutatja % nagy fpejr limtömákra In vivo xenograft modellben; esUfSsz egerekben. Agi a 3, ábrán bemntatji.sk, a CMC-5-14 beadása (160 pg/kg) rsagy RAMOS kmfémát imrdozd egereknél szL, 5. ás 9, napokon a màî meglévő kmdma-iöíneg fokozatos regresszióját okozta, és a 20. napra 4 közül 3 daganatos egét daganatmeotes lett A dapasteèfïfessê tett egerek SI3. napig történő monitorozása nem dalt a rcgrosszáit RAMOS limloma setmmíelm:$ elleníéihen az izoiipos-iiíesztett kontrollnak, a CMA-6?6-nak nem vök semmilyen halasa n daganat-növekedésre. Az öt CMA-h/d-kezeii oaganathordozé egér közül 4et léi kelleti áldozni a IS. nap előtt, mert a daganatterheiesítk közei i5%-ot én eí a íesttőotegükre vonatkoztatva; a 17. ábra összehasonlítja a CMA és a OvJC konjugációs eljárással előállított CMC--544 hatását RL limloma növekedésére. A 4. ábra olyan reprezentatív kísérlet emdsnányeti matatja he, amelybe?! RL hmfóroát hordozó egerek két kbiönhözö dózist ISO és 320 pg/kg konjugák eaiicbeamidrO kaptak a CM A komugádös eljárással (,,OF”-nek jéíöivel és á CMC lumjogadbs eljárással |,,NFLrsék jelölve) készíteti CM€-ó44xbol a szokásos adagolási séma alkalmazásával. A 77. ábra stzt mohája he, hogy a megftgyelt daganatellenes hatásosság a vap módon dózlsfhggö voll és nem volt köíönhség sM CMC-544 preparátom hatásossága közök. Ezzel elkntéíbéO az íntmpétitoneáiísan Sóö agtkg: bázisban beadod kottjogalatian N Aceirbgannna eaijóheamídn DMRhdásiakp volt; és a lg. ábra azt mutatja be, hogy a Rtesn^-teelt nagy RL limíöma érzékeny CMC-544 kezelésre. Annak meghafôr<>55éÂ,:iO|ÿ #,fcÄSfeäd«» ka;pimnb;m beszerezhető antbC132ö RftuxsM'^díezeiés befejezése alán visszotíöp i-séjt limRstnií még reagálauk'e a CMG#44 kezelésre, RL iintlotnákat kezehhnk Rintxan^mal három héten kérésztől, A :RfhtxshrM4erápta beszüntetésével az -RL lóttínnták gyorsan yisszaítőpék ~1 g iötnegike, amikor azokat CMG-A44 löö og%g imraperiíomáHs 0« 1-, 1 és Sk säpökött, A?sttnt a h. ábrán bemutatjuk, ezek az RL íimiótnák még mindig magáítsk a:CMC*ä44-re. és az eprek ; RöSLä dáganatmentes lett &amp; Ó0. napra.
A TALÁLMÁNY RÉSZLETES LllRASA PÍÖ7j A találmány szerinti' konjugábBítök olyan kí^esolömdekídával szarmazikohatott dtotöxikus szert tartalmaznak, amely fehérjetermészetű hordozóval reagálni: képes bárrnflygfi reaktiv csoportot tanalmaz dtotoxikus szer származék “telté^tetniészetíi: iamkízd koíjpgáfnmot síkot va. Rötatlohbrlk a találmány szerinti konjugáunnok olyan kapcsok'-molekniával származékofiatotí díotoxikits szert tartalmaznak. amely iéhéijdermészetö hordozóval reagálni képes bármilyen reaktív csópoitöt tartalmaz eitoíoxikus szer származéka eiíenanyag konjngátomot alkotva. Közelebbről, az ellenanyag R-sejf.es rösszindnlatő rendellenosségekhen ezpmgszálodö sejtiefezM antipn eilm irányok Az aláhhisikhan javított eljárást ismertetünk Ilyen kottjugáímook eiMRMsára és tisztítására. áM fársöldiAzerek, adalékanyagok és spóiRkos roakciókörülméoyek együttes alkalmazása az elválasztást epfással ntehomer: citotoxlkus ellenanyag knnjngáínm kialáköiásál: eredményezi az LOP sztgnifskáns esökkettoséveL Á monomer fonnának szignifikáns terápiás értéke van az aggregálf fomtâvsf szembers, és az LCF onnimsiMlásR és az aggregáeié lényeges csökkentés»« a: kiindulási ellenanyag terápiásán étteimes módon történd hasznosMsát eredményezi az LCE-nek a magas: keni ugá It ságit : frakcióvá 1PICE j: való: verseogésénák megakadályozásává!.
L HORROZŐK jiíORj A. läldiirtäpy szérltni ^dozóKtóéizósöirelf tétönyöven tehérjet«æsétiæ8tô-: tor#>Ä/e#Ääßi«k- K ^(^OEok/ellxteerek köze tartoznak hormonok, növekedési faktorok; élióöanyagok, ellenanyag ffsgmensek, slteanyag-ndmetíkumöki és azok gesetlkáilag vagy mizimatikosan módosított rttegifelelöi, amelyeket a leírás szerint ezentúl egyenként vagy esopoilosna; „hördozókbák··^Mvezítisk, Egy hordozó lényeges tulajdonsága a képessége egy ueroklv&amp;mtos sej«?} kapcsolatos aotjgén vagy receptor felismerése es az ahhoz való Miödés, és az azt követő Interna iizáei 6 A találro&amp;ny s/ennt alkalmazható hordozók példán tátja föl tik US 5,1)53,3:94 számú amerikai egyesüli államokbeli szabadalmi iras A találmány szerinti alkalmazásra sipnyös iordozók m ellenany&amp;gok és a felfán «I lenanyag •ranneijkptrosfe jüiíiRj Számos nem-immunglobulin féMrfevázáHdkaimáztak olya« eilenanyngmbmeíikmnök iétreteMsára, amely az ellenanyag specififasával kötődik áfittgenlkás epifOpokhoz (WO :00/34784 számú; nemzetközi közzétételi fenik Például „nrinitest" vázai: terveztek, amely az uUtnungihbulin vázzal rőtem monoteíális ellenanyag nehézlánc variábilis dotnénjéböl három béta-redő debütálásával (Tramontano és misai., 1 Moi. Recognb. 7:9, 1994), Ik a fehérje 61 oldalláncút tartalmaz és alkalmazható két hípctvariábilis hurok prezentálására. Ezt a két Inukra íaudomizáiták és a termékeket szelektálták amígénkötésre, de úgy tűnik, hogy a váz valamelyes! korlátozott hasznosságó oldhatósági problémák miatt. Hurkok prezentálására szolgáló másik váz a tendamiszbrt, amely egy olyan fehérje, amely specifikusan gátolja az emlős atfa-amilázok&amp;i és 74 oklailánebóí álló, ő-száló héta-redö szendvics, amelyet kél: diszulfsd Ind tan össze (McConnell és Hoess, J. Mól, Bioi. 250,460. Ezfe váz háipn hnílfeR: tariâlmsai, dé mindmáig á hürkök: közül csak; kettői vizsgálták «reg íandom.izálási potenciáljukra. jOtlÖj Más lehériéket is lesziellek vázrégiőkéní e» használlak aifa-heiikáíis felszíneken lévó (Hord és misai., Nat. Bkstedmol. 15:772, 1997; Mord és misai., Protein ring. 8:601, 1995), aifa-héltx csoportokban lévő alfa-héilxek közön:! hurkokon lévő {K.;s és Schultz, Proc. Mad. Acad, Sei. USA 92:6552, 1995), és diszulftd-hidakkai rögzített hurkokon, mini példáid aÄipriiteuz inhibitorokba« .lévő (MarUlarid és misai,,. Biochemistry 15:8945, ! 9M( Msrkknd és mtsal, Biochemistry 55;|ÖS8, 1996;yRottgcir és: iGoltms, Gone 164:243:, 499¾ Wang és rntSsí,, í. Biol Ghésb. 276:12250, 1:995) fartdomizúlt oidailáseok prezentálására.
fólííj A találmálíy szerint alkalmazható ellenanyag hordozók: példát közé tartóznak nmrarlsonális elfetiáslyagók, poljRionális ellenanyagohs: k latéra ellenanyagok, humán ellenanyagok és humanizált ellenanyagok, és özek 'biológia! aktív fragroerssel Eíösryöseo az ilyen eltenanyagafe; proliferativ rendéllönességékbe«, mim például rákokban lévő célsejtekén és/vagy szöveteken expresszáklo sejtfelszíni ántigébék eilen trányuinak. A célsejteken lévő sejtfelszíni amigének eilen irányuló specifikus cdienanyagok nem korlátozó példái közé fattöznák a legtöbb B-seit iiroíémán töiternrelt CD22 antigén etíenl ellenanyagok· Cl 5/44, amely egy egér anth€D22 monok lonábs ellenanyag humanizált lónnája., a CD33 scjtlciszinl antigén elleni eilenanyägök, amely blzönyos liutnári mteioid daganatokon, különösen akut tnielöld ieukémtában elterjedt; ÍR67.Ő, atnëïy az arstl-GBM egér elteoanyág Intmanizált iormája (lásd az t.)S 1,773,001 szántó amerikai egyesült .liläPtpk^Kt^feddsImCisÄ!)! O tók epitélláíis eredetű dagattatott előforduló, mR67v6 jelt BEM antigén; eileni ellenanyag (lásd kí>. Bernstein és mtsai.. J. Clin. Invest. 79:1153 ( !98?) és l.D. I'íctraneln és mts:ai., J. Immunoi. 128:867-88! (B>92)); és a sok szilárd daganaton túlterrnelödö, bti3Si93 jelé t.evvis Y szétibidrát antigén ellen! humanizab: ellenanyag (lásd az U.S. Patent No 6310,185 B! számú amerikai egyesült államokbeli >./abad;rifm irmot), bzcítkisüi számos kereskedelmi forgalomban beszerezhető cUett&amp;ttyag is kbez-.k, mint például a rihmim&amp;b (Rit»isanÍM> és tra»ztnzumab (HeteeptiniMj. amelyek szintén alkalmazhatók hordozókként/eélzószerekként. A muximab <Rjtuxan,w) egv kunéra &amp;ci)i~Ci>20 «lleöa'npig, nmelpt 'JkÂîfék 14se)t limfômàk kezelésére alkalmaznak és « {HóMptl#**}. ellénsaryag, amelyet emlőrák kezelésére alkalmaznak, |0J 12} Λ találmány szerint alkalmazható hordozó leírás szerinti szemléltető példája: egy, a CB22 salítélszmi 8nögéo «lien irányuló CDR-graftoh humanizált ellenanyag molekula, amelynek jele OS/44, Ez az ellenanyag egy olyan: egér M1Í4Í522 moookioaátis ellenanyag beromúzáliÉmnilJaj amely a €ÍM£. ^JtfeMiöi: antigén elleni irányai, amely bizonyos IttiiMn limlómákón: elterjedt. À: „UDR-grafilolí ellenanyag «Mókulíf* kileieaés alatt a Idrás ezedmi eleiemben olyan ellenanyag íOoifekoíái értünk, antelyben tt nehéz- és/vagy könrsyülám: egy vagy több koinpierneotariiSBt: meghatározó régiót {€13¾ (à. leizMám ezentúl CDR) fbétééRve kívánt esetben: módosított GDR-t) lartídmaz donor ellenanyagból (például egét inonoklontdis slto&amp;ny8g|áie^*8«'«lto«»yái' :(pétdád husnán ellenanyag) nehéz.- és/vpgy kónnyüláne variábilis régiójára gndkdva. Előnyősén egy ilyen CDR-pflölt elieuappg lltithán ákeepior vázrégiókat tmalmaző variábilis êemêM vdmnlM egy vagy több tent end Statt donor CDR-t tartalmaz. 10313] Amikor a CUR-ekét gradoipsk, bármilyen nmglbléíő akceptor variábilis régió vázmgió szekvenciát alkalmazhatunk azon donor ellenanyag: ösztsiyátÁlpttsát Egyetembe véve, amelyből a UUE-ck származnak, beleértve egét, főemlős és hamán vázrégiókat, A találmány szerinti alkdmazbatő ltomén vázrégiók példái a ®1... NliWM. REt, EU, TUR:,: TEE OUf ékEÛM (Rabat es misai., Sag. of Proteins οΠηηηοηοΙ. Interest, l;S!:tM34 (IP94)}, Például a KOI,és REl^isikaltnazhatOa nenézláneesetében, RE! alkshnazhaté a kőtmydláne esetében és EU, LAY és ROM mind a nébézláne, mind akénnyaiáoe esetében aikslmazhatíl JMÍ4j 4 iáiélntány szerinti OdR-graödt elinsnyag esetében előnyös olyan ákeepíor ellenanyag aikalttmzása, amelynek « lánoái : hotnológók a donor ellenanyag láncaihoz, Az ukeeptor neMz- és. kőtmyüláse nem sztlkségszprilen kell, hogy dgyáRahből az ellenanyagból származzon, és kívánt esetben különböző láncokból származó vázrégíókai tartalmazó kompoz;! láncokat tartalmazhat,: |tm$| Továbbá &amp; találmány szerintii CDR-gmltnit elísnastyagban a ; vázregiáknak nem kell pontosát; azóstos szekveoeiiijának lenniük: az akcepte?: ellenanyagéval Példánk&amp; szokatlan oldalláncokat az abban az akeegiöC' lánc osztályban vagy 'típusban-: gyakrablsán -előforduld?· oldalláncúkra/: eserélhetjök. Más megokiááképge» m. akéepior vázrégiőkban ksválaszidt oldailáneokat ágy cserélhetünk lé, bogy: azok taegib!el|ének. a donor elléitítttyagbísri: ngyanahbatt a pozícióban lévő oicallánenak. Az ilyen cseréket a donor ellenairyág afflnításátsnk yíssKányeí'ékélíéZ szükséges:mmunálts: szinten kell: tártán!. Az ákceptor vázrégiókban esetére szoruló oldaiíáneok: ki választására: szolgáló protokollt ismertet a WO4IÄ96? számó nemzetközt közzétételi: irat. JÖílóf 4 donor oldailaoeok a donor ellenanyagból: kiválasztott oidalldhcek, ttsmz abból az edenanyagbói, amelyből á CUR~ék eredetileg származtak., P>11 ?! A leírás szerinti ellenanyag olyan seítézláneot tartalmazhat, amelyben : a variábilis dómén CUR-lTkkém : {dÄt azt Kabát: és mt«n. defmíáljM («ítófent}) olyan fl3M tartalmaz, amelyben: egy potenciális gllkoziláéids liély szekvenoíá gl lett távolává az ellenanyag antigénhez való áfííniíásáoak növelése érdekeljen, |ft:í:i:8! Más nmgoidásképpen vagy továbbá : a: leltás szerinti ellenanyag olyan nehéziáncot tmtalmazhat, aorelyben á variábilis íinroén GUR-lO-kétá (atkint: tszi Kábát és mml debniálják, (miot fent)) olyan :H25,-t tart&amp;bttaz, átnelybeb: a 60 ppzieióban llzln oldallánc van, Ez a llzin tddaUánc — amely a CDR-K2-n: bellii egy kitett pőzlcióbán váp és poteneiálisan m sntlgénkötó aünltást csökkenését: eredntéityező koniugádós szemkkel réakfÍvnák tskinbetö — sanfesátttuáiva van egy nitematlv MlnosavM,. |8Π9| BzéoífetSÍ is leírás szerinti «i|«»anyag: olyan nehMtaot amelyben a variábilis ffotnén €DR-M2-kém (amint tói&amp;abaí M mts«&amp; definiálják #t»nt fei)} täym H2m*t tartalmaz, amelyben mind a potenciális glîkozllâ hély szekvencia, mind a ői pozielöhm lévő liai« öidaliáms Szuksztituâiysi van alfemiiv snbnosavakkak i'ÔOÔJ A :l§írás simrlntl ellenanyag-molekula: lehel: teljés öli«H$ftya.g «$&amp;- hosszúságú mMP és könnyülánceai:;: annak biológiai aktív ffogíáapsa* mint: példáid bab, ntödosUo« Fáb, Fafc'« F(ab% vagy Fy Ragmens; kőnnjdliáne: vagy nehézláne mernem Vágy diniét; egylánsá ellenanyag, példán! egÿl|o# F% ämelyimn &amp; nehéz-- és tötwyőM»« variábilis: deménekel: pepiid kspesoldsnoiekuia kp Össze. MasenlőkéPpfe ambit feltártuk, a nehéz- és könoyntáns variábilis régiókat megfelelő módon kombinálhatjuk ittás ellenanyag dosnénekkeí. jM2|j A leírás saednil elienanysg^mölékula lehet olyan módosított Fab Ragmens ís? amelybeit a máteitás egy vagy több annaosav adömíójs,: begy lehetővé legyük egy effisktor vagy riporter molekiiia kapcsoláséi % öeMziáne e-ternunélisáhoa, Előnyösen a további aminosavak egy vagy két cisztáin oldalíáneoi iattgkits# módosítött esaklóréglö, amelyekhez m efiekíor vagy riporter molekaia Itoszákapcsoíbaró. jM32j A leírás szerint! enemmyag'-moiekuia konstans ripé doatátyeg ha jelen vasnak, ax eíienanyag-nmíektiki javasoi? iinkelójára iekiuietbrt yáiászthaiök ki, és kölöuösen m eíMtor iunkciökra, amelyek szükségesek lehetnék vagy sem. Például a konstans régió doatéoek lelteinek immán ígA, ígFJ, IgB, Igét vagy igái doiöéoek. Rőzgiébbről hantán igO konstans régió: doménekeí alfemazhamak, különösen igkl i és iggSá Irotipasöakap «mikor m elfeanyag-mofékaláí terápiás aikaimazásokm szánjuk és szükség van a.z fiíetianyag éfíéklnr tmkméim. Más megoldásképpen lg® és ÍgG4 tzotípisekat alkalmazhatunk, amikor u éi}enányag--atolekaíát terápiás alkalmazásokra szánjuk és «Ines szükség m ellenanyag etlektor ftmkeiöira vap azok nom klvánátósáfe 1111331 A leírás szerinti eiieUímyag-ntmiekaiának: legalább 5x10'* M. előnyösen legalább ixiíT* előnyösebben legalább M,: és: legelőnyösebben leplább Ö,Sa1 ö'(:) M a kötési affinitást: f ttMj Hgy megvalósítást mód szerint a Mtás tárgyát inmmnmxift feöipgámmok és eljárásökat képezik mm konjugátumok előállítására eilenanyttg-vatMosok vagy eileoíatyag-'íníniéiikamók alkaimazáMval. Egy előnyös tnegvalósliási mód szériái a leírás szerinti: eiienaíiya}jnneiek«ia variánsai CD22 ellen Irfeulnak és javító« a ®22 iránti affiniiástsk- ilyen vafiinsokaí €»*ek: matáliaiására szolgáló affinitás-érlelésl protokoll alkaima«ásávgl áillthainak elő (¥;ang és mtsak, JFMok Siói., 2S4, 342-483, IÓ4S), lánekeveréssei (Matks és misai, Mo/Techáökm **> 1882¾ E. tmlíl tmtíálor törzsének alkalmazásával í'Low és misai., á.Mol
Bioi.,. 25(1, 3>94bá, 198ő), DNS-kevmHsei 1 Faltea és misai. , Curr. Öpin, Bioíeeltaol, % 724-733, 1497), tíigpinxeniáeióvai (Thompson és mtsríu , k Mok Elöl, 256, 77-BS, HAM), és szexuális FCR-rol (Cranter! és tntsai. /Nature, :F>l,2S8-24b 3948).. |bl25;| batmllyen alkalmas gazdasejbvekior mndszeA sikahsaxhamnk a lebns szermti oílenanyag-ntoiekulákm lartalmazo Itordozökíit kódoló ÖMS-szekveaeiák expresspitatására, Bakteriális, például A r;o&amp; és más atikrobiális rendszereket alkalrnazbamnk --- részben: - olyan elíenanyag-tragmensek ertpiessÄtitatäsara, mini például Fab és fragntensek, és klilönbsea Pv imgatenssk és ggyláneú elienmryag-lVagmeasek, péidáüi egyláneá Fv-k. Enkarsóta, például emlős pzdas^t sapressKiés: rendszereket alkaimaabmunk nagyobb eiíenanyag-molekula, beleértve teljes ellenanyag-molekulák előállítására. Alkalmas emlős gazdaseask közé tartoznak a CEO, mtolőma, élesztő sejtek, rovar sejtek, blbridönta sejtek, NSO, VERŐ) vagy FÉR. CÖ sejlek. Az alkalmas expressZíós rendszomk közé taneznuk a tmnszgenikus állafök és növények is. a ÿfltt&amp;nfts mm$m p26j &amp; találmány sKöí'ífítL AieÉs» alkalmas: terápiás szerek szerek, ams^ek gámlják vag^mmaríkk ambntin pollmetlzMok aOXS-hez kötő# és azt megzavaró alkilálőszerek, és Olyan szerek, amelyek gátopk a ''fehé^S2Ínti|^v^mm?^i^|j.s ceilMláds hdrétjéfe mim: példáni protein-kinázek, enzimek, és clkUnekon^öáését Jh ;%iß»..:ciMQsdk«s szerek »em; kedátezó píilés köké tartoznak a botépg, ZazkiKp vmknsztin, dannomblom, dozomhicp eptrabiä«, píinomlem, axtthrampn, azaszermek, bíemaimstek, -tamoxifen, idarttötos.. dölsszteímokmkífezmüímk. pmiaszteríinek, eszpbimlciöek es nraytanzinoidok. Blöttyös cimtösiktts szerek a sàliepamielnek, amelyek a metii-tdsztdlM antitumor antibiotikumok példái. Λ találmány szerinti alkalmazásra alkalmas eaPheamkinek példák az US 4,6? I ,6$k; US 4,670,198, tiS 5.0515,364, OS 4,077,651; és US 5,(í?R.233 számit amerlkái egyesük államokbeli szabadalmi iratok, tárják ;:M. Előnyös etiíiéhemn telnek a pse eakekeamíein szMípzéköfe vagy áz H-aeétíl: gamma «sí tcheam le i » származék ok.
Ili €.A LiCtéEAMIClX SZÁRMAZÉK ··' HORDOM! KO&amp;RJGÀTUMOK p2?j S laiáimsay szsyifdi kóOíagátanmk kápisleiOd'X-'S-S-W),,;, ahol; kr jelentése fehérj eléïméazetü hordozó, X jelssttess kapcsaidmolefctde, amely lekérjetermpzetö prdözővii teagáhn képes Mrmiíyen reaktív espport teljéét tartalmazza, W: jelatriése elttdozlkus szer; mjelesmse s tisztított köpi opciós:lennék, átlagosIpf^lsége, «ly inödes, hogy:#e^|efeeamM».;ite^gÄß -4-I û iötnegp-át teszt ki; és p X-'W):,; eíioíoxikos szer számtázék pi$8| EiásyöseK X képlete ahol
Alk'és Alk2 joiémése egymásai Aiggétienől kötés vagy elágazás nélkül! ip-Cp aikiMftdáne;
Sp': jelentese köréé, -S-, -Ü-, CÖNII·, -NI ICO·, <mS, mm,mm*, vagy -X-Ari-Y-CCH?},:-X, aim! X, Y és Xplemése egymástól föggetlestnl kötés, -NR:-, -S-, vagy -Ο-, azzal a megkötéssel, hogy amikor o - 0. akkor Y és£ legalább egyike kötés kelt tegyen, és Ad jelentése 1,2-. ) ,3-, vagy 1,4-iéniíén adott esetben sztubsztiluálva egy, kettő vagy bárom csoporttal a következők közül : í€.-Cd alkll, t€.d.:,<} alkoss, (€:-€*} tioaíkoxi. balogén, lám, -COÚRV -(3ÖRHR4, ^CHiyiiöOR'V^H^COOR’, -Öi€Ä}flC:OöiHRy vagy azzal a megkötéssel hogy amikor Aik: jelentése kötés, Sp! jelentése kötés; it értéke egész szám (Hői 5 dg; R' telentése elágaz vagy el nem ágazó (€rpt lánc. adott esetben szuhsziiluálva egy vagy két csoportisl a kővetkezők közöl: -OH, (CKd) aíkoxi, IC,-0,=} tioaíkoxi. balogért. nltro, (€=-0.0 dialkilarnmo vagy (CrC:?) idâikliâmtïîiRtüm -A‘, ahol A' ; j? liíntéSv: sót kiegészítő gyógyriszatllag elfogadttatő anion;
Ar jelentése 1,2-, 1,3- vagy 1,4-lenilén adott esetben szobszdtssálva egy, keltő,vagy hárotn csoporttal á kővetkezők közök (0,-(0,} siktí. t aikosi, (tVO.>) iioalkoxi, halogén, fti$ö, -COÖR\ -CÖNHRk --
OlOH^eöÖEy -BCOHiy 'OOk', Ou.-ílíjBCONHR’ vagy -S{CH.:}t,CONHR', ahol n és R’ jeieníéSé az előbb : de Un iáit vagy 1.2·. 1,3-, 1,4-, 1,5-. !,<>-. 1.7-, 1,8-. 2,3-, 2,6- vagy 2.7-nalHlidVn vagv
ás mindegyik aaJgifctén vagy f^oítówadott^seto^atí^^lváwaKí: egy, kettő, bacons vagy «ágy esoportlsd a következők kő«®: (CrG<;j slkM, «Cr«. d alkoxk |;CrC<) tioalkoxí, halogén, rnis», PDÖRA -CQNHR5, -OCCilinCOÖR;, 'rS(CH:i},Ce)0Ry; -$pl^y2€Eíf4R\ öko! » ës R! plentése a fel défiait iszzat a megköss«!» bogy am ikor krJoRoSëse ffeoiRiss:!o, Ep1 -mát nltrogéohezkapcsolódó kötés; $p:’ Jelentése kőftfe, "S* vagy -CV, azzal a megkötessek ko^ amikor Alk2 jelentése kötés, Spé jelentése kötés; %l jekmíése fi, prp}: sikk vagy íénll adott esetben szubsztitaálya agy, kettő vagy három csoporttá! a kővetkezők közül; pgp) .alki^. Ps-Oyí alkosd, pAP) tioalkoxi, halogen, nitm, -COOEl -<MHR% -OppjpOCMl -SPBpCOOR:', "D(CM3);iCO!#»! vagy -S(CH:>)aOÖkíMR':, ahoi a és R' jelemèse a fent delsríált; Őp jeíentése egyenes vagy elágazd iásseö óivaleos vagy teivaíesíS (€^0|ί? gyök, őivsícrís vagy ttívaiesis ati! vagy heteroadl gyök, divatens vagy Mvalens Pj-Csó eikioslkl! vagy heiecoeikioahd! gyök, dsvákms vagy irívaieas ars!- vagy heteroartl-aril (Cpii4gyök, dhmleos vagy trivaksts clkloaíksl- vagy hetetoOMoalkibalk!! (C:-C:S> gyök vagy dlvalens: vagy irtvaléns (02-Cig} telítetlen alksí gyök, also! f«ss-í!, iieníl, N-oietittsIrrolií, phsdsnsl, Pmeblnsklazobl, oxazoill, pltlmklsnil, kvinolsl, izokvnsolll hlmsstslkatb&amp;zol!, minoksnsnstínilvagy íenazisill és ahol h«lSp jeíesstése tdvalens gyök,:Bp továbbá még szrdssKÖtoáiva lehet kis sréníslosrssxásriö (CrOj) dsaikiJassassso, kis szénafomszámsi (Cs-Cs) alkosi, hsösaxí vagy kss saénaíossiseátstö (€j-(¾} alkslfio csoportokká! ;és Q jeletdése ΑΝΙΕΡΟ-, -MRINíB-, HHMG*.
Pl:2§| Előnyősén Alk! .jelentésé elágazó vagy él rsem ágazó PjPsó alkiiétí-lánc; Sp' jeleniése kötés, -S-, A3-, '•OONÍ I-, PHOO- vagy *MRs;áho! E’ jelentése a fest áéEníM, aszal a otegkötésseí, hogy .amikor Aikijéletítése kötés, %!: jelentése kötés;;:
Ar jelentése 1,2-, i,3- vagy 1,4-fets.ilén adóit esetben. szuösztnuálva egy, kettő vagy három csoporttal a kővetkezők közöl; pj-Oe) aíksl, (Cr-0<> alkoss, pj-P) öosikoxs. halogén, ítíttö, -COOR’, -CONBR', · OfOMjlPÖÖRk -SpHpCCJORk -ÖpiypÖNHR’ vagy .-S{CH^ßO^» ahol tr és Epeleotése a feat köíábhán öeEaiák,, vágy Ar jelentése 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 1,6-, 1,7-, RIE, 2,3-, 2,ő- vap 2,7- tsaRllií^n sTSïodegyik äidöit CSelhcîi szobsztitaálva égy, kettő,íhárrmt vagy stégy osöporSiisl äikövotkezPk közül· p.-CÖ all;II, (CrCO alkoss, p.-CJ tiöalkóXi* halogén, nitro, -COOR', -CÖMARl -OCCHpCOORl -StCBA,€OOR\ -0(CH:,h.CONHR’ vagy SfCHjO-OK;ÍR'. j!)l3|if Ml jelentése i «'->€.<} alkit t'agy férni adott esetben SMbszrhóálva egy, kettő vagy hátéra csoporttal a kővetkezők közül; pjPJ aíkil, (p-p) alkökl, piPA isoa!kos!,: halogén, stiíro, POOR’, PQÄRI -OpIl,},Ok)OR\ -SiCHjk.COOlA -Oldí.gCONHR' vagy -SpIpPÚbiHlpAlkx és Sp: jelentése egOöt kötés; és Sp és Q jelentése a közvsfíeno! tontebb ásűniáSt, {0131} Az US 5,773,001 szásttú ámesikai egyesült állatttokheh szabadaltsti irat olyast kgpesolOraoiofcoMfcat tár tél amelyek a caüeheamscmekhöl előállítót; ssokléofl! szársstazékokkal alkalmaid tatók, ktlónösen hsdrpldokkai és rokon tsukíebfllökkál. Ezek a kaperoististolokaittk különösen hasznosak olyan esetekbe«, ahol jobb;akt! Vitást kapónk: amikor a drog és a kapesolossoiakuks Aözötii kislakot!: kapcsolat hiürolízálhatii Rgek a kaposolősrsolékólék kél ftuskelós psoporlo; tanahnaztsak. Az egyik osbport dpikíssan karbonsav, assrely a lamlöKévál valő zeaköhl® alkalmazva, A sav iimkörös ésopert, amikor nteg&amp;íelően yéőmt, amiá MíM tilgte Ifcs'höir###wlg<-8öp6í|é^ Piát például sgy elleáSávág vagy más f«ft^«?m»észető hosdoKó· líiltí pidsliáncás lévő aminnal- A másik iBpispiös csoport áltálában karbombcsoporl azaz a&amp;tehidi vagy keton, amely a ntegMeiöeü tnbdesftott terápiás szerrel réágáihál::, A katbutül csoportok a táx^oá lévő hklmxid csoporttal PSágálhittáSk, hsdráZőn: .kötést alakítva ki- iÏK a kötés: bldmilzálhatö, lehetővé téve a terápiás szer felszabadulását a koítjugáltáSbdiiáiüélsedhez való kötődés tttÉb. |IH32| A találmány szenM ütkahnazásm legelőnyösebb Mftftfeil'ífe ll^iSolómoleMk a: 4>>{4-^cetíiienosi:| bmáusav (Ac&amp;ut), ami előnyős: terméket ersütnétiyéá, ahol A kögjügátím) 3onefetm>>3AnetH: feoítmotl hidmziddal vasé reagál tatássál: ftínkciooaHzálí |i^!álíökeandéíáfed|;, y^ealtcbesmiejobol vágy N-aeetsl y-«alicheamiombol áglk^^iidn$oie.kuiáböt:# Inmán vagy hüín&amp;olzáit jgElotiertariyagmSIzb imrdozóbét
4SI
IV- MOÎ40ÂR 'WÚMé&amp;kM |ÔB3j Λ eitokssikus szerek, köíáük a cntichenmieinek természetes hkirolnb természete nehézségeket okoz a j« telheoségü és elfogadható kitetroelésö monomer drogdíOpiugátumok előállítása során* ami: szükséges a terápiás alkalmazásokhoz. A kapcsolômolekttiâk. n»m példáid m fiS 5.773,001 száte amerikai egyes;ált áSlamokbeü. szabadalmi iratban l'ekán AcBut kapcsolómolekida miatti átegnövekedett hidrotőbitás, valamint a terápiás szeri: a hordozótól (ellenanyag) elválasztó megnövekedőt kőváiens távolság súlyosbítja ezt a:problémát |ÓJ34| Λ nagyobb drogteUtettségft citotoeikus szer száitmszéklkorbözőskonjugátnmok aggregáoiiga a drogok hidiohib teanészetc miau következik be. A drogtelitsítségöt gyakran korlátozni kel a monomer termékek elfogadható mennyiségének kinyeréséhez. Bizonyos esetekben, mint például az ízb S,b7?,29b számé amerikai egyesült államokbeli sNíbádáiini imlban szereplő ktugogátornok esetében gyakran nehéz a terápiás aikahoazásekhóz hászhös ieítíeüségü konjngátmnok megíbSélö fettmáhelfe 5,0.53,394 sMmö mnerikm egyesült államokbeli szabadalmi te M» j&amp;fofet: teakct#@ir03md^«it.dibtbmzMvai a túlzók élgregácíé piám Esek á makeiókörülniények DMEA alkalmaztak tarsolilbszerként a kon|ngá«Íös reakcióban, léhát szükség van olyan eljárásokra, amelyek lehetővé: teszik magasabb. íiíöpehte^égdchermelés eléréséi aggregácló és A véle járd anyagveszteség nélkül jÖllSSj Az ággregáeid ósókkeotésének javítását az iEk§v Patent No. 5,712,314: és 5,714,S3ő szarná amerikai egyesük áiiamökbeli szabadalmi iratokban ismertetik, Ezekben a szabaöamiakban lehésjetermészetö hordozókat tárnak tel, nem kmlátbzé példákként. íshéíjékei mint például jelen eitoítudkus terápiás szerek célzására alkalmazott ihnhán vagy hulbaulzált éheasnyagokát, például bPőT.ó és más ott leltárt humanizált éHeuariyagokát, nelu-nukleohi, pmtemrkempatibiiis, puffereit oldat amely (I) íámoldószetként propilén· ghkoit és (il): legalább egy CV-Cja karbonsavat tartalmazó adalékanyagot: tartalmaz......aikalmazásátolmzt találták, bogy általában olyan monomer őkótoklkus szer szánnazék/hordozó kopjugátntnokat eredményez, amelyeknek magasairb a drrjgtelbcítségemitertnéiése és osükketu az aggregáeioja és kivált) az aktivitása. Az ob Ismerteteti előnyős savak a C> -. Ci:i savak, és a legelőnyösebb sav az okíáusav (mint például a kaprilsav), vagy a sói. AzM-bíHtesaikeinímld iöSti} észterekből vagy más összehasonlítható aktivált észterekből készített fcoojagáannok azÁtnára előnyös poíterek oldáffik á mszágt'putíerelt söoldst (PSS) vagy Nr2“hldronietll plperazin-N'Al· etánszultbítsav (HEPES ptdï Áz ilyen koojagáclős reakciókban alkalmazott: puíierslt oldatok nem tariähnazhatmk szabad mninokát vagy^^ nükleotilokol A szakentber szásnám könnyedén tneghalározhatők az ellbpdbató ptiflfcrek más llpusS köbihgämmok szántára. Más htogdldásképpen bbutanölt a további ádaiékastyag nélkül ÿatsâmmé: ':â?e?«fniàiieofii pvoiear%ompaflbUis, pnlfersll oldat sikatoazâsàoôi iis azt találták, jtogy :moft©|8ïsæ ettîletomtcm 'ketynpiomokai ^pts^&amp;rpz, amelyeknek magasabb a :É^jgiéîl»àiségÂil«nn<5lés»::!^ •aökknrtimÄM^^öJa«. ÎMMl A m&amp;tmtm koajtígáittm kitiíakitésáftöZ: szükséges lársoldöszer mennyisége: valamelyest váltósak .ifehé#ére ős a szttkoniher s«á*öte iniökölafiaa kfeérlelezgsté» nélkül meghaiátztzkatö. A teljes oldat Itífegafe vonslkoztatva :ló% - 60% küzdők előnyösen 10% ~ ·48$&amp;:: közötti ÄfegelbR^ifeabbrn körülbelül 3:0% ntetmylségben pmpfîén-gifcolî, ès a legalább egy C^Gj* karitensavat: vagy sápi, előnyösen: kapriisavat: vagy sójőiélü mM » 100 .mM közötti előnyösen 4Ô mM - ÓCfmM $s· l8^1önyös^bipi.''k|fi:bj>8|||:'M :p*M-M: mW. UMÔôfemmïôyMgben adhatő hozzá s konjugációs reakciókhoz: mooomet diotoxikus szer s^rarazék/hordôzô lioojngáitsmok nagyobb drogteíhettséggekkitsrtnoléssei ős csökkent: aggregáe iával történő előállítására. Más, jtyopilöttsgilko jf őí elférő: Ibhêije-kompÂIfe szerves oldószereket : is: alksimazhaizmk, m 1st: példáéi: etiiémgiköi ciánul, WI, PlVföCi stb, ils alkalmazható, Ask álkalnntzött tmmm Sáísolöószer valamely .rémiét vagy egészét alkalmazzuk sdwgBak a konjugációs síegybe való bevitelére, {'δ0!?1· M&amp;s megóídásfeőppeti a C^Cgs karbonsav vagy soiastak ikmeentä-äcidja: megnövelhető 1SCk3ÜÖ mM-rs és a táí^lddszetá «sÄentheiö 1~ί0%ρ*. Egy előnyős tnsgválösiMmM' szerint: a karbonsav okíánsav vagy sója. Egy: előnyös tnegvülusüási mőd szeriát a karbonsav dekátssav: vagy sója-. Bgy előnyős: raegyalősMsi mőd szerint S: karbonsav ikaprilsav vagy sója, amely 2öO kaprilsav koncentrációban van: jelen S% propilén-glIkoilal vagy enmollal együk. fÖDüj ügy skernsklv megvalósítási mód· szériáim: teljes oklal: térfogatára: vonatkoztatva i-hntsnoh: 10%. - 25% közötti, Alönyösmi 1Ä .koncentrációban adhatnák bözsi a: konjugációs reakciókhoz monomer eifofoxlkus szer származőMiordözö kotijugálamok nagyobb dregteiitettséggelíkifermelessei és csökkeni aggregációval történő előállítására. |Öl39j Ezeket a megállapodott koajagaciős reakciókörülményeket alfcaimazíük a €MA~67ő; ipemtnzumab Üzogammâ-â kialakítására, amelyet jelenleg MyMarg'^Mai forgalmaznak, Ezen kezelés aktit taiéleid leakémia (AML) kezelésére történő bevezetése éta rájöttünk: ioncserélő kromatográfia alkakmtsásával. hogy a caíícheamiem stem egyenletesen eszük el az ellenanyagom A legtöbb ealicbeamielh megközelitöleg az •öllenaayagöfc felén található, míg a másik fele a* LCB-ben van, amely csak kis mennyiségű eálfcheamicmt tartalmaz. Ennek következtében nagyon nagy szükség van a eitotokíkus szerek, mint például a eálícheamieinek hordozókhoz történő kosijugálására szolgáld : eljárások javltásám. amelyek mínítnal izáiják az aggregácsö tnéríékét : és lehetővé teszik a magasabb drogíeiheíiségeís termék szignifikánsan javított kitermelése: melléit, jöióöj Ennek specifikus példája a G5/4%lkAc-gammaroaíidmamicm BMlh AcBnt konjiígátnng anmiyte C'MC'-édö-kéírt hivatkozónk:és Aitaiánösan s M. ábráit nnnemnk he. Az 1,0? sdö% éítékre való esőkkentéső az: össze éilénanyag inennyiségére vonatkoztatva volt kiűzve a OMC-544 kiféjleszfésekttg és :köiŐnféle o|telökat: vettünk fóntoióta az aiaeststy honingáitságá ftnkéló szitsüének csökkentésére. Az mmrtmAonjugáonn más jellemzőinek, mhvt példám az amígénfcötés és eiÂkM#{.«m.8^^r*negvàîÏ0^*ia.«i:Vi^. megoldásban. A fontokká vett opeiök közé larttízrm sík eÜénanyagTOölefeala pnsükal va^ fizikai mödositáss, a kromatogí áüás elválasztási módszerek, va^ a reakeiökörülméttyék mótíosifásm (ÖÍÖÍj A ÖS/44 oüettányag reagálíaíása MAe-gaotmamahöheamicin DMH AeBtö OSu-val a régi reakciókörülmények aikalmszâsâvai (CMÛ&amp;76 Bfjárási Köröiménvekj a GMA-Óüő-köZ hasonló Itzikai hílajdonságo progteütetiség, alacsony konjngáltságá frakeiö (LCF) és aggregáeiöf iertnéket eredményozeit:.
Azonban a tanjugálárpián s megmaradt LC}· roagss szintté· (50-öö%) nemkivaratosoak vartottak. Az optimális köAOmónpkst slatisKtikos kisérkntervexési módszerrel határoztuk meg, amelyben értékeltük a lantos a rettkckmOfozókat, tnmt példáai htk«étpklet, és adalikanyag-keaceaírácid· bxen kísérletek elemzése akt domoosttilta, Itögy s eaiicheamsem-bevitelnek és az. adsjéksayag-korscenífácíénsk van a legszignifikáosabb Mása az alacsony konjugákságó frakció (LCF) és agg.regádé szintjére, míg a lémérsákloí és a |>B kisebb hatásokat váltott ki. Tovább; kísérletekben azt is kimutattak, hogy <* fohétjehordozó (ellenanyag) és íársoldószer íetattol) köncenüráeiója hasonlóan kisebb fontosságú volt (összehasonlítva a eakekearnie ta-bevlteliei! és adal^asyag-Äönosötiiefos'al) az LCF ésaggregátum; sÉntjének szabályozásában. Az LCF <10% értékre történd csökkentése érdekében a aaiícheömáhtí-száítmtxék-bevitelt megnöveltük 3%-réí ILSSi-ra (w/w) a reakcióban résztvevő ellenanyag tnannyiségére vonatkoztatva. Az adalékanyagot megváltoztattuk 200 t«M koscemrádójó okiánsuvról vagy sójáról (CMA eljárás) il'LS mM knacetOráctóiu dekánsavra vagy sójára. A konjugációs tvakeki kissé magasabb Irömérsékicten <30-35'C:> és pfl-tt (8,2-8,7} jobban ment végbe. Az ezeket a változásokat magában íöglaíó feakdókörülrnényak ICI százalék alá csökkentették az alacsony konjugáltságó frakció (1..CF) mennyiségét őrig növelték az nalioheantatiO'-teiitettséget, és ezután azokat C.MC-544 Eljárást Körülményeknek vngy „i\f‘ eljárási kÖrÜStnénpkrtek nevezzük. a leírásban. A CM:A~67ö és CMC-544 Eyárá:;l Kóröknényekkd kapott eredtnényeket az 1. táblázatban mmatjnk be
1. TÁBLÁZAT; A €MÁ-é?ó ó?ó pMl'UZÜMAB CtZOÖAMÍClN} ÉS CMC-544 ELJÁRÁSI KÖMÖLMÉNY11C ÖSSZEHASONLÍTÁSA
j0142j A eafldmamicio-hevitci növelése megnövelte az drogtolltettségei 2,5-3,0 tOínegszázálékrél 7,0-9,0 (iegtjpikasabban 7,5-8.á) tömegszA/alókra. és nem eredményezte a fehérje-aggregádó tiövokéóését a réítkcióhao. Az aggregátum és LCF pökienáSé mm a CMC-544 Eljárási KörtUtnények; jmínóglttöbh mtmékp etedményeklék, Λ CMiMdiMt reprödükálhidőan eiőihtoímk exssei az uj konjugációs eljárással íöbbpünmns léptékbe?::. {0143} A,' elűző reakciókba ax ellenanyag koncentrációja 1 # t5 tngónl közötti lehet: és a ealichéámicin: származék, példán! N-Aeet·! gumma-calicbeamiein DM H AeBut; GSu észtet i&amp;mdyet a 14: ábrán femiaiob konjugátwnok dóálUtátiára alkalmaztunk) koncentrációja körülbelül 4.5-11¾ lehel az éileríáAFag törnegére vonatkoztatva. A társoldószer etanol volt, amelyre jő eredményeket demonstráltunk minden konoeóMóíóbsn b-tói 11,4%-k (térfogat alappá». á tptÉeíőteti FBidben, BEFES-ben, N-(2-hidtöxi«til)piperaxf n·N V4*' i»aánszulfoB«<av)-bar{ (HEPBS), v*§y )Ms kompaiblMs; puBekben végezzük pH 8 * <) ériekéig 3QcC-tól. kötülbelűi ÍS'-C-ig terjedő hőmérsékleten, és 15 pereid! 24 óráig lerjedő időtartamban. A szakember könnyedén meghatározhatja a megfelelő pB-tarioirtányoktti más típusé konjugáatmok esetén. Különféle ellenanyagok esetén a ffeni emiiert adalékanyagok kohiblnáöiőinskkiséhfe W drogtebtettségeí és a monomer komugátum kitermelését, és nyilvánvaló, hogy bátmilyeo adott léliérjehordozó a pontos köttömityek vagy a választóit adalékanyagok kisebb módósilákéi jgétíplhéti m optimális eredmények déréshex.
mKONdilíMTÜM TISZTÍTÁS ÉS ELVÁLASZTÁS jói 44f A kotdngälÄ követben a monomer ktntjugátaniokat elválaszthatjuk a konjugálásán t eaki ácsoktól (mint példáid fehérjetermészetű hordozó ínóiékulákiöl/dfénányapkiöl és szabad bitóiókíküá szérycaíichéámícm} és/vagy a kunjugáwraok aggregalt tormáitól, hagyotnányós e^lfásokkák péídádl Tnéreikizárásös kiwnatográfiávnl (SEC), hidrohrh kölcsönhatási krómátógfáSáyái plíB), lonbàéi 'litográfiává! (1BG) vagy kromittofókuszáíással HT), A megtisztított konjugáiumok monomerek, és általában 4-K) íömsg% eitotoxíkus· szen/esiieheamieiní tartalmaznak. Egy előnyös íhegyalóSttási mód szerint a konjugátumokai hidroiob kölcsönhatás* kromaiogtáftával 1HIC) iilkAitjtÉ bteg, A eitotoxíkus »zeivoalichearnktiivelletiäiiyag konjugátumok Ipa« iéplékü gyártására korábban ájktstnjázptt eljárásokban (CMA-676 eljárás), az sgyétlén alkalmazott konjugálás utáni elválasztást lépés a mérétkizárásos kromatográfta (SEC) voll. Míg ez ä lépés elég Éatéköny mind az aggregált konjugáíum vllávöiiíásáíá> mind a .kiszerelés céljából történő pufíercserére. hatástalan az LCF-tanaiotp csökkentésére, Ennék iköyétkeztében a SLC-alapá eljárás iié|eS: mértékben a konjugációs reakció kémiáján alapszik a végterinék LLF^iaAaió^nakszabáiyozásárax Á ilC égy iöásík bátrányS: az oszlopra felvitt konjugáuun mtkciöeieg) téffőpttp$ií; JMiföxrttsága ítipiktiSán bem hälädB meg s feldo%ő3É:5 százalékát). Ez nagyon korlátozza a batch méretét (és ily módon á:termelési kapacitást) amelyet egy adott gyártási terület elláthat. Végezetül a SEC tisztítási eljárás a könjügátasn-oldát szigniíikáu» hígítását eredményezi, átni a kiszerelésé során elérhető fehérje-koncentrációt korlátozza, jtíldSj Amikor a eitotoxikos szer nagyon hídiOibb természetű, in int példáéi egy esiichenmicin származék, és; könjugátomban van âlkâjniii^%#;llifelife:;kôiéSdÂlààijhif!iipôtô^ùftâ (HÎC) egy előnyös jelölt a kdajügáltés konjugátatian ellenanyag hatékony elválasztására. A HlC-nck három kulcsfontosságé előnye vau a BEC-eeí szemben: (!) képes hatékonyan csökkenten! az LCF-íartaímaí és az aggregátumot Is: (2) az oszlop iéivlteii kapacitása sokkal nagyobb BIO esetén; és (3) a HJC elkerüli a termők túlzott meghlgitásái. (OI4éj Számos, az ipari léptékű alkalmazásra alkalmas nagyákapacltásg HIC közeg, mint például Batil, fénll és: Çkitl Sepharose 4 isst Flow :(Á:fnetáhátn Bioseienees, PiseátáAáy, Hl) képè$;jtSíéköttyhö,·ő&amp;éljs$Sjt8Ái::.á köiijügáiatian komponensekéi: és a konjugátüm aggregátumait á rtjonoiner köt|ugiit komponettsektöli a konjugációs eljárást kővetően.
VI. KiiSZÍTMÉ^fEK: iS KÄÄFAiSlK j.öil;á?J A. találmány tárgya továbbá terápiás vagy diagnosztikai készítmény/kiszereléS: előállítására SKöÍ$álŐ eljárás, amely magában foglalja, a találmány szerinti mmx&amp;m&amp;r ckotoxikos szer szármaxék/lmolozó kenj ugarom összekeverését gyégyászalikg elfogadható exoipienssel, hlgísószerrel vagy hordozóval, IŐI48.I A monmner díotoxlkus szer származék/hordozö kötpogáhim lehel a teráptás vagy blapöSKíikux készítmény/kiszerelés egyebeit hatóanyaga, vagy más hatóanyagok. Iétó»sfe audlött©, beleértve másellentnspig alkotóelemeket, |3é.ttMïiî aníi~€D19, antl~€ö20, aoti-€.D33, ami-'T'sejí, anti-lbhly vagy anri-EPS ellenanyagokat, vagy nem-ellenanyag alkotóelemeket, mint például dtefcinek, növekedési Ibktptpky hormonok:, tmii'hormonok, eitotosdkus szőnek és x&amp;oílnok. mm Probleraílv muiellenességek, mint például nák kezelésére alkalmazható és a találmány szerinti cIMsnlkus szer származék/hordozö konjugáíunmkkal együtt. alkalmazható eitokírtek és növekedési; faktorok kézé tartóznak az tetertmsmofc,. httsffeykinok» mint például inierieukin 3 PA2), Tblf:, ÖSF, GM-CSFéa kl-CSF. piSS)| Proliferativ rendellenességek, snint. példán! rák kezelésére szokásosan alkalmazott, és a. találmány szerinti siloioxikua szer származék/hordozo koojugáromokkal együtt alkalmazható hormonok kézé tartozóak: az •ösztrogénék· jdfeiilszíiihosztrok ösztradiol), androgynes {lesztoszteron, halofesztipk progesztinek (Megaee, Proveraj és kortikoszteroidokípredoizoa, dexametazon, hldrekorllxon|. piSl j Anlífeönaonokal,: mint például antsösztrogéneket (tárnom len), antiaadrogénoket (futamid) és antladrenális szerekeket: szokásosan alkalmaznak proliferativ rendellenességek, shnt példán! rák kezelésére, és a találmány szerinti eítotoxikas: szer származék/hosdoző konjugátumokkal együtt alkalmazhatók. 14*152:1 Proliferativ rendellenességek, mM. például rák kezelésére szokásosan alkalmazott ék a találmány szerint! eltoloxikns szer szárnmzék/hordöző konjugátumokkal együtt alkalmazható kemcderápiásfontmeoglasztikus szerek nem korlátozó példái .közé tartoznak az adriamiém, elszpíatln, karbeplatia, vinblasztin, vinkrisztín, bleomiein, metoírexát, doxorohicin, flnronraeilok, etopozld, tattól és különféle analógjuk, és mltomkio. |ÓÍS3| A gyógyászait fcésziooényeknekzkiszerelések előnyösen a találmány szerinti konjugátum terápiásán hatásos mennyiséget kel! tartalmazniuk. A leírás szerint a ..terápiásán hatásos mennyiség” kifejezés alatt a terápiás szer olyan mennyiségét értjük, amely a eélzoít betegség vagy állapot kezelésébe*, enyhítéséhez vagy megelőzéséhez szükséges, vagy detektálható: terápiás vagy preventív hatás matat Bármely kotpugatum esetében a. terápiásán hatásos dózist kezdetben akár sej tenyésztési vizsgálati eljárásokkal akár állatmodellékben becsülhetjük meg. általában rágcsálókban, oyuiakhan, kutyákban, disznókban vagy főemlősökben. Az állapnndelit nikgitna^tadnk a megfelelő boneemráeiotartomány és beadási íü meghatározására Is. Azután ezeket az inlbrmáelökst álkalmazbatpjk az emberekben történő leadás hasznos dózisainak és díjainak meghatározására. |fiS4j Egy adott hantán abmy számára a pontos mennyiség függhet a betegség snlyósságálók az alany általános egészségi állapotától, az alany korától, tömegétől és: nemétől, az étrendtől, a beadás idejétől és gyakoriságától, gyógyszerkombináeiöCkjtól, érzékenységektől és a terápia iránti toíeraneíátóbreakeiőíől. Ezt a mennyiséget rntin kísérletezéssel állapiíknjuk meg és a kezelőorvos belátásától iügg. általában a hatásos dózis a feM mg/m* és 5ö mg/or* közötti, elónyósen a Ö.l mg/tn* és 30 mg/nö közötti, előnyösebben a körülbelül IS mg/nv5 közötti, ianonfenyba esik, amely dózis a tehérjetermészebi hordozó mennyisége alapján van számítva. ;|P5S| A készítményeket ömnagnkban adhatjuk be a páciensnek, vagy más szerekkel, győgyszerelskel: vagy hormonokkal kombinálva, A találmány szerinti monomer eltotonikns szer szárrnazék/sÜenanyag konjugátum beadott dózisa íhgg a kozekmdő állapot fermtauétól,. a «nittt fefoma vagy leukémia stádiumától. Is attól. hogy a konjugáturo |>»fiWÄsam«® mär meglévő állapot kezelésére vm«lkalma«va. föl 56'} Λ dóaáá gyakorisága a fosdagátum foiéietidepiőí és a hatásának tartósságától függhet, Ha a koujugátutn leléisfldejé rövid (például 2 - M óra), szükséges lakét naponta egy vagy több- Äs beadása, Más •t8épld^k^ps^'#-ï^«gàftit»ÂÂtl^:kôMSÔ':^}dàüi2> IS t\ap% csak naponta ugpzer, hetente egyszer vagy 1 vagy 2 hävöuiä iohot szilksops^a dózis beadása. :pí;52} Egy késádmésy iártalntazhaí az ellenanyag konjugátum bádására szolgáló gyógyászatlkig elfogadható··· höMózöfifc &amp; ártó SiíOúauyagöka· indukálnia ét nm.mlwá toxikusnak lennlé, Az allájíOás hördözőfc tipikusán sagyi: iásSáa aietabólízálddé íüakíOUíoNkttiák, minf: például lekérjék, poiipepiibek:, :Hpöszóí«ák,; póiiszáéharidok, pótiieisavak, : pöhglikoisávafe, pdtetor unnsosavak, amiuosav-kojsoíimérSk és jiíaktiv vitusrészeeskék lehelnek. (0158( Qyógyászaí slag el fogadható sókat is alkalmazhatunk, például1 ásványi sókat, mint például hidrokíoridok, hídröbromidok, foszfátok és szállítók,: vágy szerves: savak síit, mint például aeetâiok, proponálok, snalőóátok ék benzoátok. ;|0flí*j ÄZ ezekben a terápiás készipoényeklmnikiszemiéaekl>eo lévé gyógyászátílag elfogadható hordozók továbbá táriahnazkaínaSi folyadékokat,: mißt példát):! vizet sóoldatet, glicerint, 'ás. Hanoit Ezenkívül segédadyapk, mini például nodvekiiib vagy esnulgéátbszerek, pH^tuflteló anyagok, és hasonlók is jelen jellemek iyéó .készítmény ékben. Ilyen hordozók pirulák, drazsék, kapszulák. folyadékok gélek, «zirupok, pépek és azuazpensiók formásban, a páciens általi lenyelés céljára, píibl Az dppyds beadási fonnák klisé fokoznák a paremeráiís boitdästä szölpló formák, például iryekefőval vagy mtuzióVMl például bóhisz Injekcióként Vágy folyamatos inluzióként. Ahol a termék stgekmós vagy mfosiős beadásra szolgál, olyan iónnál vehet léi mint például szuszpenzfo, oldat vagy emulzió olajos vagy vizes hordozóban, és tartalmazhat kiszerelésre szolgáló szerekék infot például szusspmdáió, tarfostfo, stabilizáló és/vagy diszporgálé szereken jölói5 Habár a pnfToreit kosúugátummldafok stabilitása megfelelő egy rövid időre, a bosszátávú stabilitás rossz. A konjngárnm stabilitásának jpvMäsara és a tárolási éleöaríámának növelésére m eilenanysgrdeog konjugátumof száraz formára lionhpÉhafjtik, a .pf|gí$$§ folhassmèÂselM^ttitfô feloldás céljából. Egy fehérje bofHízálásáyid: kapcsolatos problénták jól ismertek; Előfordulhat a másodlagos, harmaálagos és cegyedluges mcrkozei elvesztése: a fagyasztás! és szárítási folyatnálak: során. Ennek következtében fagyvédő szeféket alkalmazhatunk g konjogálum amorf stabill ^lőszereként: és a lébérié szerkezeti lutegrüáxánák formtattásáta t liefHizálási folyamat sorát!. Egy megvalósítási utód szerint a leírás szerint hasznos lágy védd szer eukomlkobö!, ínlni például iddig mamiit, szerbit* Isozit, polled jéss-gítfed* és ezek kombinációi. Egy nyűnk megvídósftási mód szerint a fagyvédő szer cnkorsav, beleértve aldonsav, oronsav, aldársav, és ezek kombinációi. 1016¾} Λ leírás szerinti iágyvédő szpr széhhidráf Is lehet. Az alkahtnts szénhidrátok lehetnek kát vagy több hidrokii. csoportot tartalmazó aldehid vagy keton vegyuietek, A szénhidrátok lehetnek eikhtsosak vagy lineárisak, és közéjük tartoznak például üldözök, ketózok, atnmoeukrok, alditok, Inozifok, aidonssvak, uronsavak, vagy aldársávák, vagy ezek kombinációkÄ szénhidrát lehet inono-, dl- vagy poll'Szénhidrát is, mint például dlszachmid vagy poilszceharió. Alkalmas szénhidrátok közé tartoznak például a gíieemldehldek. srabmöz. líxóie, peniôz, rite* silói, galuktó?. gülkóz, hexóz, nkvs nmtmóz, tetéz, heptôz, cink6¾ iruktèzS: ghíkőitsav, szerbit, laktóz. mannit, metd a-gl«kopi«m»?id, maliöz, î?i4t$2kuri>in*av. »szkorblnsav,· läkföik szörbbz, glukarmsav, eritröz, treóz, ar&amp;bmôz, all»?, aitróz, gnlóz. időz. taió«, entrolöz, rib«ló?., dhdőzv pszikőzy íagátőz, gihliMonstiv, glokáíinsav, galakioronsav, mansmmhSKV, gluköztmyth gálakíőzámin,,
Szaeharóz, trehalő? vagy rwxtrammsav, vagy ««ék származékai, Alkalmas poisszénhkiniíok közé taöö&amp;tái példátíí az ambhnnmk, írukiáaok, fukanok. gaiaktármk. gálák tntonánok, glnkánok, mannáitok, xitánok (mi«« példáid inaim), leván, lukoidán, karrageanô^ ^Âii^I^l^i^.jpiasft^^^^pPltoi^lfel^· amilopéktsn, eeüuíös, Min, ípÉ, keit lÄifi», dennátám hmlamnsá% alpssy. xmún^mi vagy kom#ryM, A különösen lelönyös szénhtdfámk kAzé taitozik ä sSscMróz, glükóz »óz, treh&amp;Iöz és ezek kombinációk A szacharóz: különöse« hasznos fagyvédő szer. ptóáj Előnyőse« a leírás szem«! fagyvédő szer szénhidrái: vagy eukoralkohol, amely poíihldnkns alkohol UdKU A poitbidtikns vegyit letek olyan vegyük-teig amelyek egynél több hidroxíl «soportot tartalmaznak. Előnyösen a poílkidriktA vegyüljek lineárisak, Az alkalmas pojihidrlkns vegyüidek közé Sattoznak példáid ghkoiok. mini például dílén-gUkoL poildiién-gllkö! és poHptxrpiiémgHkoL glicerin vagy peotaesiim; vagy ezek kombinációi.
jöléáj Bizonyos előnyös megvalósítási mód szerint a fagyvédő szer száeháróz, trehaióz, mamái vagy szóróit, piál): Ha égyszsr kiszeréktiy $8ÉS$É íkéstitméttyek közvetlenöl beadhatók m alanynak, A kezelendő alanyok átlátok lehetnek. Azonban az. az előnyös, ha a készítmények emberi alanyoknak történő leadásra vannak adaptálva. lőldőj A találmány szétlőtt készítinényeket Mlöníéle tnakop adhatják he, sent korlátozó péidükent orális, imravénás, irtbidnttszkttiaris, intraartériális, imrarnedullám, hmdtekáltA hítravesírMári, iTaosAistPtlIts, feanszkmán (llsd A : WÖ98/20734 számú oemzefközl közzététel; samt) szobkiáás, intpaprítoneálís, iníranagáliS, enteíális. topillliy, szubbogvális vagy rektális módon, Ilipoperojsíekd is aikdmszhaínnk a találmány széríntt készítmények beadására. Tipikusa« a késziönények elöállithatók mjektáihatő anyagokként* akár felyéköőy oldatokként, akár sznszpéhztÖkkéök 'Eölyékőny viYöanyagokbao injektálási megelőzően lörlénőijsbSdásra vagy ioisztJázpendaiáara aikahnüs szilárd fonnák szintért eiôaHlihaiôk. piMj A: készíttnények közvetlen bejuttatását általában ift|ékéiŐyáb szuhlötáh:, hdfáperitönéálisáb.: ijdravénása«: vagy mbamuszkulárlsan, vagy egy szövet inieraucíális léiébe éíáéfSMl A |ássdt»én$i)pt beadfeaii«k::sebhe is, Ákszolés dózisa léhet egyetlen dózis vagy több dózisból álló sémái plőbj Nyiívatívalb, hogy a készlhaéoyfeea lévő hatóanyag dtotoxjktss szétÿibhéîjâtetmészetô hötdÄ loá|«^mn.J|pttkémms,:ér*éké«y iebet a g&amp;sztrolnteszttRálís By készítmény a gítsziriántészílnáHs rendiméit érintő mot; adandó ·« ikÉ^ttmáppéi; -^b^ii6&amp;a;n'tk. lM!: pPá szereke?, amelyek megvédik a tehérjetermészetö hordozói a .dépidédőtoi de: ámélyek: felszahadipb ii: ktsnjngáttníKíí am:iks>ráz ttbsz.rtrbeásódott a gas?troi?«esztmähs remíszerbö!, P'Sípj A gyógyászáíiiag ellogadhatóihordtrzók alapos tárgyalásaíntégiálálható ai kéítmtglöh' s Fháiiínaeeuíieál: Seienees |Mack Pttbiisbing t'ömpsöy, bi,.k 1.99.1.) irodalmi helyen, PEPI A találmány tárgyé előnyöset) moxatmer caliehearniein származék/hnntanizált anti CPilí dieturnyag (05/44), i.;Éfe^8köh €©22 antigént axprősszáfö sejtekkel jellemzett prö)iten)tiv tondeiienességek kezelésében történő aíkalmazdsta. :{βΙ7ί| Á îalàlatiny tárgyát kápc/i továbbá CMC-544 alkalmazása » MsxhÄön ÖD22 antigént exprasszáiö sejtekkel jéiletnzéit proHteratfv rendellenességek ke/.«lécére szolágid késxitíhény vagy gyógyszer.gyártásúra. fóf72j A C-MO-Óda alkalmazható báísmlyetx olyan terápiába« is, ahol: kívánatos a leírásban ismerteted késxtímédnyéi vagy gyógyszerre! kezelt alanybatt jele« lévő 'C022.-t- áspresszöló sejtek szihÖének .csökkentése. KözeiébbrÓ! é készítmény vagy gyógyszer olyan proliferativ rendellenességekben, nevezetesen iimféreákbas és leukásnákbáts szenvedő emberek vagy állatok kezelésére van tiikalmazva, amelyek expres&amp;zápfc a CD22 antigén á séjtfelszinükőn. Ezek a űíMM expresszié sejtek koringltemoka szerveződben vagy nsmkivánstosas nagy szántban lekemek jelen a szervezel egy adott helyére lokalizálva. p|73j; A éMC>344 előnyösen alkaiwíszhgtó Bdlmfodta eredetű rassÄdufetö rondeiepexségek kezelésére Is, beleértve ilmfomákat és leukémiákat, legelőnyösebben nennHmigfcln limfêlM iMIL), akut Hntlbeltlkus leukémia (ALL), mielöma nndtlgkbg akut hmlbeita leukemia (ALL) ás krónikus llmibeítíkus íeukenőw (CLL). A ÜMCL544 áikáímtixhaté Önnmgában vagy komblnéétóbatt más hlpabtiv szerekkel. B-sejtes rosszindulatú rende denességek ben szenvedő al&amp;styok kezelésére. |bl74| A :gjAkmsi alkalmazod bioaktiv szsrek kézé tartoznak növekedési: laktoroks eitokbsk és eltomxlkus szerek. h«Ä«itly rendállenességek, rmat pékléu! rák kezelésére szokásosa« allmlmazob ás C'MCAá44-el együtt sikaimazható eitíAostkus szerek közé smtozil antraelklin, mint példán! doxtmtbieim dmumrahlem, édsntfeMn, aelsrableto, za?mbiéj% pzítuxmmon, eplrtéfcto, kanáriéin, oogalannem, menoprlk gttarnbtOíu ás yalmbm«. késestül; púisdMfc vagy pórin nnkinoxld, mM például cíiarabdb gémeMbtn, βϋ| aíicáábin, enodtsbín, ttzamtidin, de>; Muriéin, pentosztaíin, broxorldin, kapechabin, kisdribin, decitabin, tlosarldin. íludarábht, gmigerétin., pormnieiü, tegsíttr, tiazofhrin, A eikfCbS44-ei együtt kombinációban beadható más kcmoterápiás/aotlneopltótis^ szereli közé tartozik az adriatrdeln, elszpíatln, karboplaitm elklólbsz&amp;íuid, dakarbazin, virÄsztin, vinkrtszdm rnitoxanron, bleoutiem, mekloretarnin, prednizon, prokarhazia, metotrexát, EuroumciM. sropozié, taxe! és különféle analógjai, és roltoimcin, A GMG-M4 beadható ezen terápiás szerek közöl eggyel vagy többel egyítd. Más megoldásképpen a CMC-S44 mm terápiás szerek közül eggyel vagy téblud egymás után adható be. PI7S| A OM€BS44 beadható önmagában, egyszerre vagy egymás után kötPhmáeióban más bioaktiv szerekkel egyött is, mint például növekedési faktorok, eitnkínefc, szteroldok, ellenanyagok, mißt példáid anti-CD20 ellenanyag, ritnximab (Rítusán™), és kemoterápiás szerek, kezelési séma részeként. A rosszé ndu tan) íitnfbprobferativ rendellenességek kezelésre szolgáló megállapodott kezelést sémák közé tartozik a CBOPP (eikktfezhünkk doxontbiélm vinkmxüa, predmzon és prokarbazln); CHOP (eíkíotbsÁsid, doxomhíeín, vinkrlsziin és prednizon}:; -COP telkloEnzteid. vinkriszllm prednizon}; £IAP»BÖP (ctklotbszlamld, doxorubicin, prokarbazin, bleomidtt, vinimszhn és prednizon); tmltA£(2P (metod-exát, bicomleln, dosorttbieín, eiklofeszítmnd, viakriszlbt, dexametazon és feukovorín); ProMACE'MOPP (prednlzon, memtrexát, doxorubicin, eiklofbsshtmid, etopozid) feukovorin, mekloetamin, vmkrisztht, predoizotr és prokarbazltt); ProMACE'-OyttíBQM ipredoizon, ïustottesàt, émmhMn.,. ciklofeaæfemki etopozld, icukovorin, citaralílu, hieomlelu ás vinkrlsztin); MAŒ>¥~&amp; (melotresát, doxorubicin, eildolbszlamid, viiukrisztitt, rögzíted dézisó prednízon, hleomicin és leukovorin); MOPP (mekloetamui, vmkrisztin, prednizon és prokarbazin); ABV'Í) (aíiíiamiclíAlöxorubicin, ibleomiein, vmhiasztín és dákarbazln); MOPP váiíakozva A:B¥-véi (adriantiehAlöxorubicin, bieornicin, vhibiasztin) és ΜΌΡΡ váltakozva A8V~vei (adriamieinídoxornbidn, bicontfeln, vipbiasztin) és ClIiYPP (klortasbocö,. vinblasztin, prokarbazin, predtuxon}, A -terápia, magábatt fagyhat agy jndukciös terápiás szakaszt, ktmszolkláeiés terápiás szakasz és íenaíartö terápiás szakaszt M CMC^-Sdd: ibeadhadi 'teftagáfeaa, «§£&amp;*&amp;* vagy egymás: «tâft a Santi terápiás sémákkal indukciós terápiáé ápití&amp;SZ, könSZöldáelds terápiás szakaszt és tenttíárté -terápiás szakasz részeként. :jp7öj À: ssiâinlânf Szèïitrt! ko^igdömmk ibéailbatbk együtt más bioaktiv ás kemoterápiás szerekkel visszaeső :ágtd$szív 'il^il§ià|^:;'^z#iéâéra szolgáié keatbiätfeiös kemoterápiás aéma részeként. ilyen kezelési sémák közé :ütmik liSbàzS'ktaidt.aîiÂipcâl' ^gpxid); MIME (metd-gng, ifo&amp;ztàmid, metottvNàl, cîopozid); DHÄP (defemetazön,: nagy dózisd eitaDbah ciszpfeSn}; BSHAE (empozid. mettlpreétizob«, nagy dózis« öiiarabio. ás ciszpkitin}; CbPP(E) ^IkteSbsi^tmsdj etopozid, pwkarbazim pteónizon és bleomicin}; CAME (ksnmsztm, mitöxänfrim, éitarabin és |irödS;l4ön:M CVP-l (cikioibsztámid, vinkrssxtm és prednizonj és DJHAP (axzplatin, éltarabiné és dexameíazon}. Agresszív íimfömák esetében további kezdési rendek közé tartozik az í. szakaszban elsövimäSbeii feze lés PdÓ;P ibíRlöjbsz tarold, doxorubicin, vinkmztin és prerknznnHituximab (Rlteáii'^|^M^SM'.'konibln%S^í^í: 4a®$: :&amp; Ίχ szakaszban és 3. szakaszban CHOP-tituximab (Rituxan™)* CïiDP'Cy«S“S44 vagy CHOP-rlbixíagib fRittíkaitTM)-CMC'"54a követ, kiás megoidásképpen az C szakaszban léte elsovönalbeii kezelés Cöfv|pöíkiií|>S>s®3aidj vintósztin és prednbronj-riiux.imah i.RitHxa«™)-CMCV544 kombi nádéval, ami! a 2, szakaszban és 3. szakaszban COP-ntüKtmab (Rittixaa™), €ÖP~CMC-54-í vagy COP-rltnxirosb (:|8íb5eaíiP^CMO-544 kövek Egy további megvÄ^ls^läj^ÄJfiitgraas^iv lirofómák kezelése magában Rtgialhót éisíb vagy masodvonalbelil fezslést ÇMÇ4^:-dHMm^^#bg::jkbejtigàt«»>mal, amit-a 2. és: 3> szakaszban EMC-544 Lés CHDP Cetkloibszíámíd, doxorubicin. vinkmztin és prsdnizon), CM.C444 és OOP (élklofosztamid, vinktisztin és predtdzon), ÇSfÇ*S44 ·.#§: «taximé .1 Rítusa»™} vagy agyedöi fliökitnab ÇRituxatE^.} követ Egy még mástíkjtís<;gyalí^íiásb^m isäsriist agresszív límfömák kezelése magában foglslbai első- vagy mfeodvtmaíbepto dlertasyagdrog köigogáitimmal mák kezelési sémákkal amelyek nem korlátozó példái közé tartozik az ESHOP (etopozkl meínpredmxoloo, nagy dózisé (Ili.)} dtarahro, vlnkriszbn és eiszplatin); EPOCH; IMVP-íé (ifoszfamkk metotrexát, eíopozid); AStMEj MME (mouS-pg, iöiszläprids roetoirexás, eiepozid) és 1CE (tfeszkürod, elkieíbsziao'tkl és etöpozidjk A bejlélOtités szedntí^ íosszaidufeb leodslienességek keangerápláíában aíktdmazoíl ktllütsféíe dtotrodktts szerek beleértve ti sëroâfcst, dd$äpfcä| stb. részletéi megtalálhatók a. „Cancer Principles and
Pfadleé pf Öneólögy*, széiE í ¥ineent Γ. DéVita, Samgélo Helltnan, Steven Á, Rosenberg, ö, kiadás, kiadó típpinéptti : Williams^ and Mklns (200 í} és a ..Physielan’x Cancér Chemotherapy Drog Mannakt széttk,: Edward Chu és Viticeni T. De Vita, kiad-: Jones and Bartlett pOÖ2) íródaínn helyeken. |M7?| A találmány tárgyát képezi CM2 A expresszáió sejtekkel jellemzett proiilgrotiy rendellenességben szenvedd vagy annak kockázatának kited ember vagy állat alanyok kezelésére szolgáid eEáíás Is, amely eljárás taagában díglaíja: a találmány smrínti OMC'- S44 Htó^ttteönyjá^éöektl&amp;^dását.^^ypÉí· P>.CM) A találmány az alábbiakban tovább ismertetjük specifikus kiviteli példákban, amelyekkel az okaími kör korlátozása nélkül szemléllemí kívánjuk a találmányt.
It PÉLDA
ILLIálAH^AtbJlLŐLTEKptóiLLiTÁSA pi?y| CD22íelieni «Henanyagck készletet szeiéDáíml iki kríiéríuatbk: alapján; kdíddés Daudi sejtekhez, áuernahzáciö Dandi sejteken, kötődés perifériás vér nmnonukieáns seitekheii
Wft 'pemalMáó mißt Í O ^M), egét' y! % temsetbilési sebesség, iä Ä-eti szelektáltuk ki előnyös ellonanyt^M,. &amp; vMmybm%ÁS ts kimêrà s/44 ellenanyag-molekula expresszáltatása 4 S/44 jnhtipma sejtek í4S4IMtéss és RNS prejäsirslläsg :beÍ4{0k fiiUMif m: M4 hibrídómát hagynmüttyns irsbridóma: technológiával imztók íétre egerek human CD22 ieltónévei:tttÉi Inamedzáláaát kővetően, RHÍN pmpeáltönk áx S/44 lubrklóma seîtekhiü RMiasy készlet {{Jlagen, Ctstwley,, UK; katalógus m.;< 74108$ idfataaædsl&amp;gi Á kapa RlslSsből eDNS-s állítottunk ciö reverz naoszkrípelóvai,. amint alább ismertetiók. hj A C D22 tdoszhtea Miit daganatokon pl füll Immtmhlsztekéo'U&amp;i vlxsgáiatüt végeztünk. a gyakoriság és eloszlás vizsgálatára :m 5/44 aati-CDSS «sößöklöaäbs «ifôîtanyagôkkal va lé lestes alkáhnasásá vei IControll äöti-CR^:'Ä:ä«ttCÖ?%{4fcafty4göÄ te feevunhtnk a vizsgálatba a daganatok 1-sajt területeinek igazolására, |0t821 Összesest M daganatot vizsgáltunk és ezeket a következőképpen osztályöztufea 'Wísáklag Formusatlöii’ : és iiA'L osztályozási rendsxerak aikaltnazásáva! : * ? ü ïímföbl^gítgís· (ííigh/lj * 4 B*€ LL/kis ítmfocitikus !imibma {Low/A) * 3 itmroidaxmacttoiddmmuntrciUmm (Lmv/A) « I Mantle-sejtes (int/F)
t ..i&amp;Mlkulus .közepi f imÉim».$áow · IttbTR * 53 diHázungysejtes hmfvma (ha - High GJIt « 6 osíSályoxhalalktn (R) * 2 T-sejt hoOema |$ΐϋ| iikegyv©« klsgji : lltuförnavolt pozitív CD22 antigénre m 5r44 ellenanyaggal %i pg/mi köseeutrieiéhan. és tóvábbi kai pozitív lelt attúker a koneetankiöt: tnegemeítök (>>5 gg/mLre> A tnaradék két B'-sgjtes dapnstból ····· amely negatív veit 0,1 gg/mlnél ·· · nem maradt elég szövet a magasabb koneentráciőn való tesztelésre. Azonban pátóuzmnos: ieszteiésbetregy másik aali CD22 eliertartyagpl {Jete; :0/13), amely eresebb Jesiodést: adott, mini az 5/44, mind a 4S B-seites Ihsriömz pozitiven lestödött Cú22-re. i{'01:841 By rnoilen m a következíétént lehet levenni bogy a €022 antigén sxéles körben expmsszáiödik &amp;-stp limtömáknn és ezért alkalmas immuníerápiás célpont MHk-ben, e) A* 5/44 V» és V, PCR-es kloanzásn I0I85J Megsztnteözáltók az 5/44 variábilis dómén nehéz,· és könnyöláneaít koddö cöNS-székveneiákai, reverz iranszkriptazt alkalmazva a telles liNb "ben jelen lévő mRNB egyszdiü cONS képiának «kiállítására. Ext azután tempi álként alkalmaztak m egér Y-régiéx szekvenelék ampísbkalására sgeelískus ollgonukleobd: Ián« indítók alkalmazásával Fhitmeráz Láncreakcióval (PCE). IJ cBMSmdntóHs: {Ö1M1 cDNSA szintetizáltunk ti következő reagenseket iartaltnazö 20 μΐ-es reakctdlértogatlnm: .5.0 ffiM 'ffisv-11121 pH: S3, 7:5 tnM HCíl, 10 aM Intótmttók 3 mM MgCiaí ö,5 mM mindegyik áezn^irlbonnkleözid-hitósziathöi, 20 egység EMAzin, 75 ng rsnddm hexaankleotM láneinditó, 2 pg 5/44 EN1 és 200 egység Moloney Murin leukémia Vírus reverz transzkrlptáz, AO^Cmn végzep öö perces inkubálás után a reakciói: leállítottuk OíL'C'-raítPrténbuíelégltósselJjtómenkei'esztúi.
If POt
Plg?j Á cÖblS aiikvoíjált lÄMtök vetettük alá. a nehéz- és fcbmytóóncfa specifikus Ifeindkék kombinációinak alkalmazásával. ,4: szigsálszekvencia konzervált szekvenciáihoz asmeslodőnak ítervuxeít deipreráii laaéiédM*k^sk!«tei alkalmaztunk: elülső Inemdiőkósi Ezeknek a. sxetebene iáknak mindegyike sőteendben a követfeézőkd: laÂttasœ féstókötókjtóy (¾ ÈM; V« ÄÄ) .ax 5' végfői 7 mtklsotiddtti kezdve á CCCXICCACC szekvencia í$BQ Itt NO:SO), and a kapóit mRNS-ek normál transzlációját teszi lehetővé, mieiádós kodon, es 20-30 nukkmiid Ismert: éger ellenanyagok vezető szekvenciája alapján (Rabat és misai., Sequences of Proteins of immunological Interest, 5. kiadás, 1991, U.S. Department oí Health and Human Services, Public Health Service, National institutes of Health). pîSSf A 3' láncioöitók ágy vannak tervezve, .hogy átfedjék m ellenanyag 4 J-€ kapcsolódásának vázrégióját és íaíbdmítóz&amp;k: $ IlSíiW spxiár.fbshd&amp;cíéá hc%t#:£;% B€R íragmeos klónozásának elősegítéséi,  nettézláne 3' íánelnditók az ellenanyag i-C kapcsolódásának ál fedésére tervezed keverék. A 3’ lánc indító Apai restrikciós helyet tartalmaz a klónozás elősegítésére. A Íánelnditók .1* régiója kevert szekvenciát tartalmaz Ismert egér ellenanyagokban taíálbaib szekVenelák alapján (Rabat és mtsal,, 1991, tolat íbot), jÖISdj A lent Ismerteteti íánelnditók kombinációi lehetővé teszik a Vi( és V; PCR termékek közvetlen klónozását megfelelő expressdés vektorba (lásd alább), ezen nőnek kimér» (egér-humán I nehéz- és kőmfyóláoeamak emlős sejtekben tőnénó eapfesszáltatásávsí kívánt kotípusá klméra ellenanyagok előállítására. [01001 A pGR-ek inkubációi (Idő pl): a tteveikcxőképpen voltak összeállítva, Mindegyik reakció 3 következőkéi í&amp;rialmaziái ló mM lTÍs--H£ÍpH dH,; 1,3 soM MgC% 50 mM KG1, $$1¾¾ aev zselatin, 0,zS toM mindegyik dezodtihormkleöxld-i:fÍÍPiizfótbőb rd pmbi 5’ láneinditő-miSv 10 pmoí 3 láneindliő. I pl cDNb és 1 egység Taq oolimeráz, Á reakciókat 95<:£kön mkubáituk 5 percen keresztül és aztnán dklizáltak IkPC-on I percig, SScC-di 1 percig és ?2sX>on 3 percig. 30 ciklus uiárt mindegyik reákdó aiikvotjsit elemeztük agarőz gélen, jbílH f A uehczláne ¥-:régiö esetében az ampli Ókált ÜNB-temtékef csak akkor tudtuk visszanyerni, amikor az lm vázrégló kezdetéhez armcálódó láneindite-készlettei helyettesítettek a szignáiszekveneisi lánc-indító-készletei. A STagmensékéí bekionoztnk DNS szekvenálő véktőrőkbif. Meghatároztok a .Difii: szekvenciát és transzíáimk a kiköveÉeztetett ammosav-szekvenda létrehozására, Bit a kikövetkeztetett ami:?tosay--sgekvene:Íáí igazoltuk a kisérietessí? megháíai'ozop d-terminálSs iébétje-SKékvéhétávák A |,; M 3. ábra mutatja be az :|Ől4 egér moneklooáljs eilenányagréreti iköonyu- és oebéztene V-régjők DNBf iBhétijé székvenclátát.
Ili) A PCR-fragmensek molekuláris klónozása jOfpdj Az egér V-régiós: szekvcnctáktst azután: Iteklóooziuk az pMRlkSb. I és pMRRlA expressziős vektorokba (7.A és 7,B ábrái. Ezek rendre at könnyít- és nehézláne expresszél ásóra szolgáló vektóí'ök, smelyok.barnáit kappa kötíttyűlénc és .humán :gmn:ifta-4:nébésiine konstans icginkat kódoló ftNSAimtalmaxoak, A: V;.. régiétTesfrtkclés emésztéssel és ligálással szubkióntíztuk a szekscuain vektorból az espresszlós vektorba, az Sltsl és BsiWI festrikeiös helyek alkaÍmazásáyái, #ml a. pMRRMKSddcE) ptentdok eredményezte (?,B: ábra), A ttehézléoe HMS-t FGR-rel aínötíBkálíuk ö1’ lándndltót alkalmazva a szlgnálszekvenda beépítésére, tnivel ezt oesn-kaptuk titeg a kiótíozási ssraiégla sodó - egy másik saját bibridőma (jele: Ió2) egér ellenanyag ínehézlánc vezető szckvencmiái aikahsazluh. láttemdlfó szekvetsdaut kóvotkezö volt: pIQ ID N0;S1). p$93$: A hátalsó Mnoinditi aztnms volt azzal, amit sa ereded V;i gén klónozásnál alkâlnmztünk, A kapott PElGlezméket tnegesídsziöÖük aíMKVíUn és Apai enzimekkel szobldènoziîk és igazoltuk a WS-szeklVeacidák ami a :pMRRHii5d4eki) $szmiác>i sreöm&amp;tyazte (7,A ábra), KélnifMt: ppresszios véfetör ífahzsens: kö«· k»»#a e5/44 ellenanyagot hozott létre. Ezt Eipoíectamine reagens »ikálmaz|sáva| értihc: el a gyártó: prmökölpns.k az umsiiásídt: követve (InVitrogemBiie Technology, öronmpm Bolkumia., katalógus sz,: 11668-0 7 7).
II. GUKOIMÁUŐS HELY ÉS REAKTÍV L1Z1N ELTÁVOLÍTÁSA |(H94| Egy potenciális N4íspessitg|lköz!láeiös hely «zekvesciâlSg^ÂÂmg^'CÔEàEitbë^jaîôgifn^k' az ahíthosavAzekvsnciá|a ΝΎ-1 < L ábra). Az 5/44 és hagmensei (beleértve Fab) SDS-PAGB, Western-blot és s/.énhkhái testen géljei arra utaltak, Smgy ez a hely valóban glikozilasí (adatokat nem köziünk). Bzeníelü! egy hzin oldaliáneot figyeltünk meg egy exponált pozícióim« a CDR-H2-U belül, ami potenciálisan redukálja az ellenanyag kötési affinitását egy további; korpgpjös bolyét biztosítva olyan szer számira, smkfedmz az ellenanyag konjugálva lehet.
[019S| PCR-es stratégia· alkalmaztunk áonnosáV'S^íbsztttÖejEk beépítésére a CDR-M2 szekvenciába, hogy jtnegpróbáljuk eltávolitam a glfkoziláctós Iselyetés/vagy irosfetív iltziní, amint azt a 4. ábrán bemutattuk. Az N55Q, T 57A vagy 1T?V motaeivAm kódolö elülső lánclnőítoksí alkalmaztunk a glikozlládós hely eltávoítpsám; (a. ábra) és egy negyedik, a K6ÔR szabsziiláslot tartalmazó eiüM láneisiiStát hoztunk tétre a reaktivllzim oidalíiíte eitévolstására (4, abmT 4 váztégibs hátul só ECR arnplifikáétbkban.
A PGRAermékekeí megemésztettük Xhál és Api erszímékke! és belnszettáituk m;;£MRRl4(344ç]ff) '-yefclOifem (moi·: szintén ellmslíöitiuiR Xbal és Apai enzimekkel) a mutánsokat kódoló axpressziós plazmidok léírsStozására, Az N5dQ, TS7A és: T57Y mutációk slíávoltpk s giikozitációs helyet :a konszenzus N-X--T/S tmuposav*: szekveoeia roegyéltoAatásávál,: ttrtg-a KSOR mutáció hélyedesM a rpotenélâlisao: reaktív lizini a hiisoîtldm pazitiv toiiésö aminiore. A kapott éli variáns t^aztntáokaí egyhR :írsnsz;tektált!ik a :cL piazmiddai espyesskált limits dUmaro. ag \ ,o idusok létrehozására, ük A ilOMItiA: GÉMiSSk AKTí¥1TMAÍ^ AR ÉR^lCEEfeSR jtHüój A hímem gének aktivitásait CTR7 sejtekbe történd ömziens transzisktáláSí és tíz affinitásl állandók BiaCore: elemzéssel történő megísatározását::követben értékeltük. Jülü?) A kiméra 5/44 vagy :a iglíkoziiáeiós helyet vagy a reaktív iizin .dtävölöiö; rtfeüeakt affinitását BíA technológia alkalmazásával vizsgáltuk a CfiÄüc konstrukciókhoz: törtittö kbtödéssek Ακ eredményeket a R. ábrán mutatótk be. Az összes mérést a MAeoreM 2006 készüléken pltarmaeia Biosensor AB, Bppsalá, Sweden) végeztük. A vizsgálati eyámsolmíGD22nybe belógásává! végeztük Imtnobiiizáli and-egér Feen keresztül. Az ellenanyag az oldott íázishan volt. A mitüákaí, sfitndsrdókiÁ és AonöAlíökat (50μΙ) ráinjekíáknkt' azdmmoyiizáit antimgér Besre, amit az ellenanyag követei az oldott taxisban, A Äzim tnindegyik ciklus után regeneráltuk SÖgl 4ö!«M: BCÍ-el 30glAnin sebességek A kittétikat eíemzést a BlAevaluailon 34 szóétvérrei (Phannacla) vépztük, |ÖI98| A gikozilációs hely eílavblltása a T57A konsmtikcídban kissé gypmshb Pn-sefeességei és szipiikánsan lassabb otï-sebessèget eredményezett össze'nasonitivn a kimére 5/44-e!, anú megkOzelitdleg S-sztirös afirnttás lávnlfer ^uÂtôià. asm vbi hatása az aílniásra. *Sn»teí sa5R>; snivel mráíntá!, hogy ^-^hídrát eltávolítása húgába» \àmm% $tm 'bÂSàl. &amp; jkit#á#í» (Mmm Μ$ψ m?éwl%-.é aEMtási csak a J:SlÁ cserével rigyeMk meg, Egy ?febgi#|p magyarte as|: hogy fiígg^iSÍ ár áké«lri*M!f .Je!e«iéiótöh a*. S'7 ppgfpifêb«« levé treonja negatív -hS!ͧt:;gyaiSi0röJ· g-kötélé., stni megSÁinjk a freomo aianlnra való lecserélésévé}.; &amp;%$ 3 hipotézist, hogy as alant» kis méreté tnotös, és ädtebmu negatív: hatása a méretével függ üss?#. alasämasä&amp;gk a T57V mutáció alkalmazásával kapóit erddihény; s salsa helyettesítése as 57 pozfcióra seas hatásos tas eretíményekm nem mulatjuk be),
j<H99j Λ lizin eltávolítása a K60R mutáció selüjégns hatással vol t a® aíSmtáSfa, azaz égj· arginm leépítése eltávolítja a potenciális reaktív helyet az aíIMlás megváltözlatása pélfcüjL
IfSOOj A gMkoziláólhr hely és a; tdákíír ksin ekâvolMsâm szolgáié mtSáelJígt: ezért ôgprâM figyelsmte vettük a humanizálást tervezéskor.
|,fÍW>A
ΜW44 CDEAkRAFTOLÁSA
plftí'j Az 5/44 é lienanyag nehéz- és könnynlánca variábilis régiéi génjeinek a molekuláris klónozását és azok alkalmazását kintéra (egér/hrunánj 5/44 éfeaayagok elöállilására fentebb ismertettük. Az egér S/44 V;;. and VQ dómének rmkieotld- és amlítdsav-szekveseiáját a 2. és 3. ábrán (SEQ il>b!Ü:7 és 8} mutáljuk be. Ëz a példa az 5/44 ellenanyag CPR-graíkdását ismerteti hntbán váztégidkra, hogy csökkentsük a polenclális inarinaogetsiíáxt endxnekhen, Adair és misât. eljárása szerint (W09 iAi9%7számú nemzetközi közzétételi ira;.» k AZSM4 KteNVÖLÁNC CDK-CRAFIOLÁSA 1.0202] A fehétje-szekvendu egymás alá rendezés humán Les aícsoportiapp kMuvhiánc V-tégióhó! származó konszenzus szekvenciákkal 64%-os szekvermia-azonosságöt mdatóti Emuik következtében a CpE-graiMl könnyniánc létrehozásához a kiválasztod akceptor vázrógiók az Oi:2,13PÍ£9 torsán Ä nlnsöptt esitavonáh szekvencia volt. A 4-es vázrégió skeepior szekvencia a .IK i humán Eíhglb bSií'avomd szék vese lábéi; százm«toto |020d| Az egér 5/44 vázrégiók es az «kceptor szekvencia ammósav'-SkékyéStéíáiának az: összebáSöftShiÉÁi az 5. lötáu » (»tatjuk be és azt mutat]«, begy 27 eltérés van a donor és akcépíót láhéhk között. Mindegyik; püZÍCidbatí elemeztük az eget okkdiánc potenciális hozzájárulását az a»t.igé«kÖtÉÉé&amp;; «fór kÓ«v«ÜéftÜh :ákár ikteifêiten. 8· Eg Vj határfelület ptskoiódására gyakorolt hatása alapján,· Ha az egér óldáiMnóöt töntósusík tekintettük és elegendően különbözött a bumáni Oklallänctöl a mérete, polaritása vágy töltése tekintetében, ekkbr Azt: áz egér oldailáncot megtartottuk. Ezen elemzés alapján a CPR-graÜolt könnyölSné két vorzíéját ImAukjdtrQ amelyek szekvenciáját a SEQ ID NO: 19 és SEQ 1U NO:2Ö szerinti szekvencián (5. ábra) mutatjuk be.
II- AZ 5/44 NEHÉZLÁNC C DR-G R A F TOLÁSA ;|0204| Az 5-44 nehéziáne CDE-gnitknását: ugyanazon stratégia. alpján értük el, mint ami! a kömtyüiásm esetért isnterteltöuk, Az 0744 toMzIáné V-doméójit az i-es aiesnportba taribzö humán nehézláncokkal Miáliük: hotiKílögnák (?Ö%->os 8zekveneia-aKonössá|j és ezéri a Vri i^DF/bbmÉr I-es bless port csíravonal vázrégiöt: aikalmazhäk ákceptor vázrégiönak. À 4ms véztégió akceptnr szekvenciák a IH4 humán j-régló c.Nimvenal szék vette iából szarmr.zoíí> j.0205j: Az 5/a« ttebézláoc vázrégió összeha.sonliíását a vázrégiókkal a 6r ábrán : tbutaljnh/fee, aboi, az látható* hogy áz 5'44 nehézdáne 22 pozícióban tér el az. akcepJor szekvendátói. Ezek anhgeíxkötéarií gyakorolt hatásának elemzése a CPErgraboh pehézlánc ? vetziójának löhebezösahoz vezetett, unmlyek szekvenciáját a SEQ ÍD NO:23, SFQ 10 NO:24, SEQ H) NO:25, SEQ 11) NüOo és $Hj 10 NO:2? szerinti szekvenciákon (ó. ábra) méta tjük be. m, à mAwrovT smmmmÂK mummmi |020S| öénekes t««a»k a gHf és gL-í gtÄelt íüsekvenciák: kódoláslm, és egy s«at átfedd eilgonukiéotidot ««tfcit: ás bostunk lew (9, ábra), PCR-ss össsssálllás rtíédszeré; á&amp;abnaztoük a CDR-grafteît V-régiós gének létrehozására, A íöÖ μί-es reakciótérthgatok a követkeÄet tartalmazták: íö rnM tns-BC1 jp8^., 1,5 mM: MgCÍ2, Sö isM RCh ödlülM Méláin, 0,25 :«M Äbegytk. dé&amp;Airibótmkíeozsd-tríibszDtból, 1 pmol 'belső' láncindítók (TL 1'2, B, Bl, B2, B3>, 10 posai ‘küîsô’ ïàncindüôk (F 1, RI}., és 1 egység of Tâq pÄp$£ (AispliTstj,, Applied; BioSystems,, Ráttdógos szó; N80R-017!}. A ECi ciklus paraníéferek94ö€ 1 percig, 55 AD I percig ás 72 % 1 percig vdlfek, M eMdSba leîéSÂk A îeskcÂiftfekeifet azután megfuttattuk 1,5% agarózgéleo, kivágtuk és visszanyertük Ql AGEN centrifugés oszlopok sQíAspück gél extraction kis. katalógus szó 28706) aikahttazásávaí, A DNS-t 30 ui térfogatban elnaltnk. A gIT i és gLi DMA aOkvoípit (1 μΐ) azután a* InVirögsn p€R2 j ÎBlRüjeîÛ TOPD TAkibnozn vekíörba kiőnoztttk : (katalógus: sz,: Κ4500·4)Ϊ), a .gyárts) utasításai szerint. Ez a nem-ekpfessziós vektor köztes klónozásra és á nugyszaösü klón szekvenálásának elősegítésére szolgált. Vektor-specifikus íá;x:mdltókat alkalmazó DNS-szekvenálási aíkahnazütnk a gDT4 és gLl-í tartalmazó; Megléíslö klonbk azonosítására, a pCR2.1 (S4ágM2) és pCR2, l(544gLI}:pl»zzíndokat boává leste ( Sík A és B ábra). |828?j Egy oligomikiemibAszetia helyettesítéses eljárást aikahnázüoÉ; a gDd> $} 6: és % M gL2 imüîônszàll gt&amp;ftok létrehozására. A Fi. ábm mutatja &amp;: oiigöpukieotiti^zetíák: tervezését, Az egyes vadánsok létrehozásához 3 |>ΟΚ2..Ι(54%}) ί} vágy pCR2. S{544gLi); vektort eíbásítoífek: sbnMots sesízíkeiós eozimekkei (XtsítíESacli a zíehézlánc esetén, X'ínakBstESl a kbönyölüne eséíóttj,: A nagy vektoAö'agtaeast gélen megtisztítottuk agatózből és azt a&amp;ahttaztnk sz öbgönükíeótsd^zedákkái váiá iigálásta, Esek a. kazetták két komplesnenier öíigosmMéöiidből: áljtták (amint g 1.1. ábrán; femmlíátlülO, (1,5 psttoMpi koncesíráeiöbao összekeverve 7:00 μ; térfogatban 12,5-mM Tris-ECl pH' 7,5, 2.5 ?nM MgCl:;. 25 m,M Na€í, 0.25 mM ditloeritrit öldaiban. Az anneal ást viziurdön (500 tói} 3 purere 95 AD-ra történő melegítéssel majd a reakció szobahőmérsékletre vglft lássa Seb ütésével értik él Az mamáit oligonnkloolid-kazeMt azután IsFszeresre megitlgifettuk vízben, üdelőtt a íüegiéiaiöén dhaaltott vektorba; Mgáltuk, .DblS-szekvettáist alkalmaztunk a beiyes szekvencia igazolására., létrehozva a p€R2.1 (5/44^04-7) és pCR2,l (5/44-gi,2) plaAindökat. Az igazolt gralbdt szekvenciáka· agíttán szubklőnoztük az pMRR14 (hebézílna); és pMRÍO.1 tköbnyílíáirc) extztessziös vektorokba.
ÍV) A CöM-ÓRAFTDET SZEKVENCIÁK. €1)22 KÖTŐ AKTIVITÁSA fö2öS! A graftölt várlánsokaf kődolá v#torükat különböző kötnbMoiökban együtt; iranszíektákyk CDD seltskbe, együtt az éredéi kiméra elietsakyai-Dncokkai.; A kőtiákttvitásí kompetitiv vizsgáían ebárásbak basoülisebbk -imm* m etedet! egér Sí44 eliënanyagpl válő kütésbed; yérsengve Ramos sejtek kötéséért (asnelyeket az A i CC tői széreAörtk be, és egy Bnrkiti iimtbma linriöblaszt humán sejtvon&amp;i, amely felszíni 63)221 expresszál). Ezt a vizsgálati eljárást tekinteüOk a legjobb utódnak graftok ö.sszebasonbtására a seítiel.szini C022 kötésére való képességükben. Az eredményeket a 8, ábrán tntitaljuk be. Amint láthatjuk, nagyön kis kblönbség van a gmtek közóít, fnlndé|yik jobbau működik, mint » kísnéra a szülői; egér verzióval való versengésben. A 3 további hmnln: öldüiläac beépítés# á CBE>kÍ3; végére tgí-D és gi-17); látszólag net»: befolyásolja a kötést. lÜ2Ü9j A legkevesebb egér oldallânéot tartalmazó gmt kdiÉbbá«.iót válasAoüuk ki, a gEi;gH74, A gEl könnyüláne: graft 6 donor oidalláncot taríahnaz. A V2, V4, F37 es:Q45 oidaÜáneok poiendálisan főni!.::; pakoló okialMucok. A H3§ oidÄe äV^/Vi Márfelöíe»A D60 oidaHánc egy okianáoc, közei a CDR- LS*feöZ"駷 iöxydlenöí bözÄäraihat az anÄg^skStÄ««. Ezek közöl tíz oidaiklneok közül *-'V2* L3% Q# és Mö· megtalálható a más nkxsoportokbőí származó htttnán kappa gének tsiravonai szekvenciáiban. A gH'? ttéhézlátte psft4 dinier vázrőgtö elílalíáacot ta«állM2í|ip MM öldáfláncot a (DR-ΕΠ részének tekint? a CDlO i^^fíiölásbáitá· :§iÈêfks:Âêti deitnimők értelmében (lásd Adalr és mtsai. (1991), WOvi/099o" számé tïemÂkbzi közzétételi irat)), Az El és A/l őídailáöoök o &amp;$Hkh«t közeli felszíni oidölláncok. Az 148 oldaliam: potenciális pakoló okkdMne, A T93 oláailáoe a VH/VS. határfeiületeo vas?. Ezek köz»! áss oldal láncok közöl az El és A?l tnegtaiálhaíó rtomfe i-es alcsoport csiravoital gésíeibém Az 143 oidsiiánc megtalálható a 4-as homárt éáirzvonat aicst^íöftbsöj és a 173 meg!aiáiiaíó a 3-ps lámán csiravosral alcsöpAbap-($210] A kitmyüláne és oéhézlâne teljes ;DNS- és fehétjé-szekyenóiáját a 13. ábrán matatjuk be, beleértve az fetfonok mégközeöto poztelóját is a vektorokban lévő konstans régió génekbe«, és megadjuk a könnyűién«.' esetén rendi® ttSEQ 1D NO:29 és SEQ ÍD ΝΟ:3&amp;|Μ*#Μ» esetén rmftM SEQ lf> NO- 31 és SEQ 10' NODÖ szeriüü Szekvenciákon. (02ílJ: Az ezeket a kötmyiE és sehézíáne géneket kódoló DNSh kivágtak a yekiórdfcbői. A ?tehéziá?tc DNS-t fnogemésztetttik az 5 - Hindii { helyen, és azalatt megkezdőik az g, colt DNS-polimeráz Kleitosv-iragmensévsi 5' tompa vég létrehozására. Λ 3' végi EcoRl hely dhasitása a nehéziane iagíttenst sredtttéítyezte. amelyet nieghsztbotíimk agafőz gélbőlHUgpdiíyeis ntótldn éiöáíittottnk a könayöiáac fragmpost is, az 5’ Sfut hely tompa végre alakításával és a F EeoRi hetiyeL MMi ímgmgnsi DJPR-alapú : kiónoztak és stabil sejtvosutí létrehozására aSkahttaztuk Cí fO sejtekben.
3. PÉLDA ^ΪΛΜΜΛ CMdCHEAkilON PMÎI ACB1JT KONJUGÁLÁSA MDMÁNllÁLl ANT1-CD22 EÇLRNaNY ÁGHOZ CGS/44) (.033 2j Egy tipikus konjugálást reakyidbsib humanizált aotl-€022 ellenanyagot (¢).5/44} konjngáitunk NAc-gamma caiíeheamicin UMH AcBut OSpvbpz (saikheartíteit? származék), ahol a eéifehérje koncentrációja 7,5 mg/ml volt és a megcélzott estlicheamseit?származék •ebtedség 8,5 tömegszázaiak voit a fehérjére vonatkoztatva, A megcélzöttreakeiő pH Ls3:áÖ,2 volt, és az egyéb reakdókomponensek megcélzott koncenlfáciöja a következő volt: SÓ o:sM 'N-P>iti<!i0sietil)pipenizläv'N'-td”batä!tsztäiionsav) <HEPBS), 3?,$ mM nátmim-dekanoáí és 9 térmgaíéA etaooi. A reaktóöí:33'! * 2 (,'on hajtottuk végre egy órán keresztül. Ezen tipikus reakció tisztítás előt t· elemzóséstek erediÄy» a követkézé· volt: fehérje: 7,34 mg/mí; calieheamtcin telítettség 82,7 pg-'tng; »pf’SgŐEií«:: 93^330; és kostjugálatiao feifetjetLCF}: 1,07:^|U¥ teröieféó HPLC-velji jÖ2Í3j f«ÉÂ á ktilöoMe felületaktív adalékanyagok és: azok: koaeéötráeiőtííáki: hatását a; téhhék' kiteroiéiésére: és; tisztaságáriz hogy fítegiiaiázozztík azok lutiásáí a kötpugáh nionpíttef; tépneléséta (]ás(| ;á;2,: táldázaíot). Olyan rétiké lókat tuttafeurtk, stttelyekhetí mindent áiiátidőád tortotdmkS: kivéve az adalékstoyagötiéS: ktatcetttráóiőját. M ezen reakeiökböi előállított konjagátamokát ele?neztük lühérie-ktíncenlrációra, eaiiühéarrtleiP-téHteitségre^ í!g|regáttím'tar;alomr.s és LCF-rc- Iktbár az összes n-karbottsav s C„ (hexanoát) > C ;; (óodékadoátl tárípmátíybaó ellpgSŐhsiő eredmé»\yt adott, a legjobb általános etedményí {alacsony LCF, alacsony iiAF«öŐEöi:í sis it tnoriomér könjtigátun? magas kileretelése) a dekanoáttal kapttA a 31) tnM - 50 ?oM köKeentt^etőAaríöiöánybati:
3- TÁBLÁZAT: AZ ADALÉKANYAG TÉRD ESZE ΓΕΝΚΚ. KS Ια'Ν, Γ\ ) RÁCIÓJÁN A h. HATAS \ A KONJUGÁCIÓS ER1:DÖ4ÉNYBRRL
4, ÜÉLÖA, KI4ÖMAT&amp;GEAFI AS TISZTITÄ KIJÁRÁS I. m»matossráfMs ELVÄLASAÄi EMAHAS« [02Î4{ Habár a Buí Π Sepharose 4 Fast Flow közegei azonosítottuk az ms m álkaknazásra legtöbb HIC MzegkáM, eílöpdöató etedméoymkei érhetünk el a "feoHg^páflás ]feí^b%· változtatásaival; stâs gyanták, mint például Oktil Sepharose Fast Flaw, PPG-600C (Tosoh Biosep). Fractogeí LMD Prpglí IBM Processing) és^ Source 15ISO (Amershatr: Biosesetsces., PAcataway, Nj) alkalmazásával. |82IS| A tisztítás klmdulási anyaga a 7,2 átgmd tehérjét 83 pgAüg caiiéheamieiiv száfraazék teittéttséggéS, 10.1% a|#^gämaikäPtalooimai (téríflétszázalék HPLC-vei) és 5,fí% LCF-tart&amp;lommai (terííietszázalék HPLC-Vei) tartalmazó könjugátsós réáketóelégy vélt. |Ö216] Mintáit a konjugációs féákelő befejeződött, a reákoióeíogyet pégyszétesro .tpe^i^j^:MjÖ»p)'t0szfäl oldat iíökaáadásáPal P.7 M végső föSzíat könéittüráclótg (pH 8,2). Keverés ötán ezt az öldatötilésgimik 0,45-ímkröíiös szűrökön; A jaeghíglpip täigtek.'ilvl^ök Btttií JopltaroSe 4 Fast f low pszlopapAz oszlopm felvitt lekérje teljes tuennyBége 29 mg pér síi pSZÍoptértdgst: volt. 0,7 M; Mllün)PÍ>S:®ÍmÍ,#Íé»$ mosás; alán az; oszlopot lépcsős gradiens alkálntázisáVai: ektálltik, 0,7 M « 4 mM káíiuróHészfáttal, pH 8.2. A lépcsős cradiensen elnált frakciók;',! Osszeöntfüktk a további feldolgozáshoz, és az összeöntött frakció monomer könptgiiíantból állt kevesebb mit« I térületszAzaiék: aggregstennmi ss LOBel Ezt az összeöttíütt frakciót vitték fel Sephades 0-25 CAmerskanyBioscienees} sótfantto oszfepra a kiszerelcsitez megfelelő puítéreseréhez, ami 20 mM: Tris-Cl és Ï00 β näffittm-klond volt pH 8 J~on. A tpegfisïnitptt, póí&amp;resorélfCMC-S4-I preparátumnak a következők voltak a tulajdonságai: calicheamiciivtclftettség: 81 pg/mg: aggregátum: 0,433 (teriSletszázmék HPi.C-vei) LCF: 0.8% (terüielszázalék HPLC-vel). s. példa NAC-GAM1WA CAIJCHEAMION DMH ACÉLT - mm iMMÍjPíMNJHGÁTBM:
KéTÉSI ELEMZÉSE P247j A fenti: koígu^dAs eljárással i#ehözolt Itumanizált ηρΐΤ€Τ>22 cilénányag (ÖS/44):» palielléápíioíp immtmAonjttgatumot fÇMC-544) kötést vizsgálatban elemeztük, ottüák tnegháiárözásáfa, bogy a javított eljárássá! létrehozott konjogstuomsk van^Mö-áaFöSi^a^^iptpai^éttMt#^) A 3. táöíáaol azt totttatta, Ocgy a kötpogációa eliátPsnak Pines semmi Itatása az ellenanyag anílgénköto affinitására. Akár a régi, akár az új aprással előállítod OMC-S44 dmmamkoâviagàtum .hasôéfô ititiitmi kldödött seianögénheg, mpi nm-különbözött a komsgálatlan GS/44 stíentMsyagétóíi.
3. TÁBLÁZAT; A €MA ÉS CMC RGNíUGAClGS ELJÂMSSAL ELîMEUÎTOTT OMC-S44 ÄTÄ AFFINITÁSA
182181 rnommm elemzésekéi: .h^tottonk végre BlAcore 2ÖÖÖ (BÍÁeore AB, Uppsala, Sweden) alkalmazásával. -:CÖ22mPß4 kovalensen ImmőfeilkáSteÉ m N^KliÉ^kssökcMmié-aktlválk kaíbokünetit: devtTásmai bevont 'Möszenzöé :ehipre (CMS) szokásos : amin Acapsol àsl kémiâ: alkalmazásával megközelítőleg 2000 razonanciaegység; lobéi Ar€MÖ“S44rvagy G5/44 i«lstálr:RSsgkígíSeiöuk sMBipufíei'bSn (10 oiM SEBES, pH 2,4, amely.'tetalmasc liÄmM-ßMlb :Ö- mM EDTA és 0,005% poliszorbát-Sö (v-Gj) és "Mí»jsks»ák ! - 100 hM koseentrácsó-iartömáiivhae n GHSFmFe-vei bevont bloszeozor chip Mszloéfs 00 μΙΑηΙη sebességgel 3 peres»: keresztül a kötést lehetővé téve. A kötési. íSkís ritá» a megkötődött ellenanyag oisszoeHoiopt a ékig BBS piiílerreí történő mosásával momtorozbtk 15 press klőiartamoo keresztül. Az antigén felszínt &amp; öiöszeoaot· ebig roesssávai mgesdbihök 15 pl mpnetucios ptíBömsl (10 mM MaGFi és 200 JüM NaCl) 30 másodpercen kérésztől, amit 2 press stabilizációs idő követed a kővetkező ciklus eiött. A kiaetikai állandókat »^HëBâefelfegys«ê^»î8S''ï«gre{®Âôs: bfe«éáséi SÉHÉ ki egy 1;1 Raagmu» kötési görbe illesztési raoddl és a BlAevatusltöo pmgtam (3.0 verzió, BlAcorb) alkalmazásával, A€M<NS44 aiidgénkőtését felszíni piästrmnreamainesa bldmaésssi értékeltük blnszerizor cldpra kovalenseit iimnobiiizáít HB22mFe alkalrnavásávak A CMC-534 ésiö-5/4# GDSSsrtFedtea való köfese kmeítkai elernzéséMk eredményei mt matatják* hogy miután az adatokat giditálísau iiksAsttiik sgy i'á Langnmir kötési modellre a íüntepsinsziet: kompenzálásÁ után, mind a CMC*544, mind a köpiüfáíatlan Ö» haäöMi '«föttHá$$3l .k-#e®äiS*t=:« '0D224's&amp;g iCMG>G4A:iCÍ322 Ed == 200 pM; G5/44;CD22 K» - 23S ;pM}. A ékHeheamiembez vak köÖjügäÄM volt hatással a G 3/44 hatékony kötődésére a CD22ndk-bez. fő2Í9f Áramlási ciiometriávai megvizsgáltuk a CMC-544 és <15/44 kötődését Bdimíóma sejtek térszínén exnresszaii €D22-hoz is. Az antí-CI333 mAh gemtuaumab (hP67.<>) és a CMA-ŐTö çaüeheamkin konjugatuma (gentiuzumab ozogamicin) völtizölipus kontrollként alkalmazva ebben az értékelésben. Ritpxmtah (EäiuRarC% an« egy kánéra búmén IgGl anti-hums« CD20 mAb, volt a: pozitív kontroll. Tisztítói! barnán polikkmális IgGl-t és IgG4-4 ):S:alkalin:a:ztmik neptiv ködírdliként. A CiMO-SAAfes G5/4A kötődése Ramos vagy EL SCI, felszínén lévő €D224iöz. hasonló volt és megkülonböztelhetö a haraán IgGd-éélől. A* RI, BC1. a CD22 alacsonyabb 'felszíni expessziőját mutatta, mint a Ramos :B€L, Ezzel ellentétben a CMA-özö; vagy femtuzumafe kötődése akármelyik BCL-bex hasmSá: volt albumán Sgö4-éhez> aori: konzisztens ázzál, bdgg nem espesszáloak;£1333--3( (adatokat nem közlünk), Ugyanezek a sejtek: ag aidí-GHOO: viumimáb: erős köiésát mutatták. Elledtáíben a: paitügunmbbal és GMA^ő7ő-ak sem a CMG-S44, sem a G5/44: mutatott kötődést 01322' COBS' HL-60 leukémia sejtekbe? (adatokat nem kelőnk;, b?.ek az eredntéttyek arra utalnak, hogy a 05/44 calktaamicinbe?.1: való konjugálása asm befolyásolja a&amp; antigén specifnásáh Λ CMC-544 specifikusan felismeri a 0022-t humán B sejteken, de egér, patkány, kutya, sertés vagy Jbemtfc ícjrmmolgits és rhesus) B-sejteken nein tadamkat nem közlünk s,
6. PÉLDA
A CMC-S44 ÍN ViTMŰ t.S ÍN 1/ *· Ο í1 AT Á SÂIN A &amp; '£ LE AÎZES E í. ÍN VÍTRO CITOTÛXtOl'ÀS |i)22Ô| OsssehmmiUtötluk a CMAROó 4s CÍM£fo$44 «pí#ökfcöl elMllitOtt ÇMCM44 m vísm InáásÉ; GP33V TLsejt limföma sejtvöifoiak, az Rt, .ï^|i.:-|t:ï^mes növekedésére. Ilmháh 0033Αύ: ;(CAíAré?Íji eéteóh ;i2ötfpus-únesztelt oalkbearnieia konjíi|ÉllS#:#IWiit»nk á lióftjhgátgfp btttipftt« íiémApéeÍ®há: hatásaíhák vtaKgálatara. Az éttékóiésben: a. konjugiatlan N*M: gamma callchsatpiebt: P!M|L (a köumgáimttróí savas hidrolixls hatására Mszsbadmo drog) alkalmazása arra titok, hogy alkalmazott érzékeny volt a calkheamiem leíáiis hatásaira. A 4 tábládat mutatja he '&amp;m értékélfesk embméhymt calichcanhein-ekvsvalencla alapján é» m 5, táblázat mutatja be a köajngált ellenanyag-fehérje knneemrik lójaként kifejezett eredményeket A emieheamiefe eD22~kózveriten eljuttatása a CD22' sejtekhez legalább l O-uzet hatékonyabb volt a célsejtek elpusztítására, mint a konjugálailan szer önmagába«. Ás ixotfeas·-ilktszteh kontroll köfeugátmn (CMÁ-bTó) opb pÖotPÄÄ...st«t«t0^ #Ü«Íy vttgyktMiík vagy hasonló volt a kottjugálatla« eajiclfeamfejts származékhoz, Nyilvánvaló a 4 lábiázaML hogy a CMC-544 konjugációs eljárással előállítóik kótpgáfom ékviyáíeos clmtoxiktrs Itatást boa létre alsesonvaM» ellonanyág^konrenirácló melleit, «tini a CMA-676 k«8jt^.o.íá$:éPítey elóálUtö».ikoiilí^»iöt.. 4. TÁBLÁZAT: NÖVLKbDife GÁTLÁSÉ KONJUGÁLT CALSCBÉ-AMICI'NNEL (CALICHEÁMCIHÁtsa, Pn·)
*ND. mm hästärmtuk nmg 5, TÁBLÁZAT NÖVI-KEDÉS GÁTLÁSA KORRIGÁLT ELLENANYAGGAL (ellenanyag 1C», ug/mi}
*ND: nem tuuâroziuk meg /« tip miomdcMs. A CMQS44 éjâtâmi tovább vM$U»sk B-pb ibníbibs M%&amp;Bßnm: v Agátokban kát Β>$ψ. iimfôæs Apnam a RaMOSa éym.A alkslmrAufik- Μ EL limföíaa agy «etn-BurkiR NÏ1t-érè<to séjWôôââ^· ndg s RAMOS eredetileg égy BuBslit IlmibnÄel stoPtoO. Λ: 1.1 ábrád: hempdod: regreáentsdv kkéfleAëa ä €MC*544-rôl 4s egér eUeöanpg megibÍO#éröl kimtdáOnkLhdgy MAP a RAMOS B-seR limlbsna növekedésének dóxlslísgp géBÁpk. 11Ï222J A hlpantoi ellenanyag ko?gugáUsaípÍkk»R«a«Bík, hôgÿ AtásPSább,: aíkft p egér itiëgfb!éî|îé. Ebbép a viKsgáiaíbab a ealkhPmto konjugáttón lí^aigcpByabb dóxisa, amely képes pita íimfbma stöpkAéséöék; xeigmükánx «ás tora, 10 gg/kg komugált N Ac-gapsa plíebeamlcm DMH vök. Bzeei szembe« a komogáiad&amp;n ellenanyagba 05 44, 1Ö rog/kg koaeeetrPiéfeaP; Iníraparítpeáiisan a koiypg&amp;Äökb»x basonlé séma sprier beadva sem vök hatással a dagántoVvekedéímn |Q2231 HAb«ilô:Yi^^Â#ïiÈt|îô«toîik végre m Rt límföma modell oíkaMaPSávah A <>. tábíáaatpdpía be a három Seggeden kísérlet kombinált elemzését amelyekben megállapítotok a CMC-544 daganatellenes hatásait Rt NML IÜM10O mg méretűre növesztve. A CMC-544 dbaísfögp tpdp a daganatok regresszióul okozia 3 hetes idöimtant alatt. A CMC-544 mínnnáíis hatásos dógisa az RE limloma mtxieílbeo ezen vizsgálakík siahszlikai elemzésből meghatározva 20 pg/kg a ealícha&amp;rpiebkarialom alapján. ISém pb; MÉlozás a báröm vtzsgtosgyiMöe« $m A CMC-544 magasabb dózisai (00-320 ugÉg) a? Rt Ibnliora apdbeb) telles regresszíojái ólatok. Együttesen a két E-sejl limloma modellből kapott eredmények egymtebmkm demonstrálják a CMC-544 képességéi dagáttat-regfesszlá kiváltásiba.
6. lÁBLABAT: A CMC-344 Í>AÖAMÁÍBM,ÍMES HATÁSA Rt NHL ΧΕΝΟΟΚΛΠΌΚ ELLEN CSUPASZ no el Ékben
jÖÍMj Megvizsgáltuk s» ój éprássat előállított CM<M44 képesség# nagy inegáiiapödöís B«se|t limfónnt xenogratok növekedésének gátlására is, mind s. &amp;AMÖB, mtad m RE läsrdom« möáteS ÂataaæMval A daganatokat hagytuk 1J vágy 2 g daganahömegig öös'ekednt, ami mart CMÇ-044*#. vagy izötípus'lileszteit negatív kontroli kössjugätutnsi (CMM® adtsrnk ioöSíperitoneáfi&amp;an fóti gg/kg Rtmjiigáh aliékeamW» dózisban, megtartva az eredeti séma; az i ,v 5. és 4. napon történd adagolásai. Ugyanerről az adagolási rendről kotáhban kimutattuk, hogy kisebb dáfanstíok hosszútava regresszióját okozza (lásd a é. táblázatot). Amint a 16. ábrán bemutatjuk, a CMC-544 beadása nagy RAMÖi ibntomát hordozó egereknek a inár meglévő ihoímna·· tömeg fokozatos regfésszsőiát okozta, és a ab. napra 4 közöl 3 dappatos egér daganatmentes lett A dapnatinentessé tett eprek :5Ő, snspig tortéstö ntphitorozásn ném usait a regnesszáit RAMOS limloma semmIMé újranövesére, Ezzel ellentétben az tzotipasdileszSstt konrtniinak, a CMA-676-oakí ttom volt semmilyen hatása a dagamstniövekedésre, Az öt ÜMA^bAezelt dspnatbordoP egér közöl 4-et isi keilest áldozni a IS, nap élőit, nsert a daganatterhelésök közéi ! S%>öi ért el |022Sf Egy íutsoulö, CMÍM444 alkalmazó kiítéridtet haitöttnhk: vápa m RE HtftfÓma modellbetr, A CMC-544 lód pgAsg dózisé íntraperltoneáiís beadása a íésAi Ismeitetetthez kasonm séma szerint >öö% segressziót okozott az RE ílmföina soar meglévő tőtnegébén 30 nap alatt. Azoabah a 4S, napra ebben a ssopostban 2 egésy antslyekben a limloma összement, a daganat ájranővékedését mutatta. Ezek az eredraéoyak awa utálnák, hogy a CMC-544 képes a kies!, és megSlJapodost n^:îlÂô>âk: s» -kMításám is. Itt nem bemutatott
Eislétszamó vizsgáiéiban ájrakezéltiik CMMáA·#! azokat 44 RE lirutbmákat, nmelyék szórványosan visszanőttek a kezdeti CM€-S44-4ndukált tepésss# htáíg és az RE daganatok még mindig reagálták a CMC-S44-el való kezelés második sorozatára, és a ismételten regrediáStak. ily módois a €MC-S44-el történő kezelés hatásos lebet aü-sejt limlnmák snlnd kiesk inthet «ágy tömegeére, potenciálisán ismétlődő terápiával, fl, A CM A ÍR CMC KOUJECÁOÖS EIJÁfUtiSAE Et,,ÔÂELÎTOTT ÄNdUGATÜM EV ΪΪ¥Θ ŐRSZEM ASÖN Eit ÁRA 1:1)3361 A | 7. sióra olyan reprezéhtátU kísérlét erédîtiéhyél r«uiálja: l*h asnetyhéts Ri HmlÓinát hordozó égetek két különböző dózist iád és 320 ng^lmniogáit ealsebéátnleín} kaptak a CMA*ő?ókorpgáetóseljárással és a CMCP44 líopígáclós sprással előállított €M€'544vbőía szokásns adagolási séma alkalmazásával A megfigyelt daganatellenes hatásosság a várt modo« dózisfaggó voit és nem volt különbség a két CMCU44 sreparátnsn hatásossága küzőtl ipái álléhsétbest óz Ipaperhöaeálisán 160 pg/kg dózisban beadott kösyugáiatiao nacyganisna eailehéánbóm fáéi hatássaian vo|, Azonbah ki heh hangsúlyozni, hogy a koojsigab eáiiehesmiem osiusluo '^májába«. négyszer magasabb volt δ <»4?« edited eiőáílftoií £Μ€~5# esetében, mißt * :|0^Ä^!I# IpféssaJ; ^MlöMiÄ Misé -».sÄstt koojugátum eaíi«ls«iuníctn>ían&amp;|ísa: telel elsősorban a daganaieliéoes hatás kiváltásáért, a eaiioheamkiis szükséges mennyiségének bejuttatása az ú] eljárással előállított korgugatam utján a cetó ellenanyag sokkal kisebb mennyiségének alkalmazásával lehetséges, A CMO-S44 eljárással előállítóit knningatmn megnő vékádéit telítettsége valójában. az alat^tt^koi^u^iltsá^ijMcció {LCFjszigmískáns mennyiségének hiánya tm&amp;U van. 113. EH'IIXIMAB (fklTIJXAP^EEEiaZ'risNS «AUANA’Í'ÖK lOOtâtiSÉ 40227] A kővetkezőmegvizsgálandó kérdés a® volt, hogy a kereskedelmi Rmplomban beszerezhető sntiÆÎ3M Ainximab (RhuxanTP kezelés belejezáse után visszanőtt Boteji llmfömák vajon még resgálnafe-e a CMÇ-544 kezelési®. Ebből a eélhóí fejlődő (esztáíyosatlary .RL limíomőkat kezeltünk rituxmrabhai ÇEituxanTÎ*} károm hétea ket^sKtük Mindaddig amíg » rliuxiínab pilnxan™} terápiát Rdyiaüuk, az RL Ihnioms növekedése gátolt voit, A ríkmímab pitaxsoB4} terápia beszüntetésével az RL ílmtőtnák gyôfôan visszanőnek ~ 1 g tömegfec amikor azokat CMC-S44 i 60 pg/kg ijE^apgritos^llsdSzis^^lke^i^rA^i^i&amp;Jii ábrán bemutatjuk, ezek az RL fimlomák még mindig reagáltak a CMC-ALLre, és az egerek 8Ö%m daganat mente s lett a éö. napra. ily mádon s; CMC-544 képes a B»seit límtomák regressziójának kiváltására bárom dózissá!, amelyeket esak inlyamaios riiuxlmab (RítusánfSí) adagolással lehetett gátolni RMída .·} CMC-S44 ÍN tiTHO ÉSW #ίΨ%0 HATÁSA l KÖTÉSI ÉS TOXIOTÁSÍ v:í«alatöe }0228j A CMC-544-α énekeltük a CliAKkez való kötődésére és az in vííro és m vim modellekben valói hatásosságára is. A CMCA4LeiÖSSzeÍmsimiitótíük a CMA-Ő^ő-al, izötíptis-illesztsn kontroll közpgiteomái —·· hP67.6 (IgGül AeBoiAapesólt éáiicheandeineei -- és RiOiximábbák :âml egy kiütéra IgCii antLCÖSÖ mAh pmsxanrA íDLC Pharmoeütléáls, San Diego, €A.}: amejjy :k«ïÂiê4iè1îïii: fö^äliembp beszemzlietö Is a Medworld Pharmacy fChestnut Ridge, AY) cégtől vásároltunk ttteg. A kovetkéző eliettátlyagókát^allötiinaztitk a: Ö5/44 kötődőmén: vizsgálatokban:: BU 12 (Ceilteéh, Slough, UK);: BLCAM, MB23# (BátüaCruz: Biotech, Santa Cruz, CA); RFB-4: iAncel! Córp, Bayport, MB); SHCL-L Leu 14 (Beeten Diekinserg Franklin Lakes, Njj; 4KBÎ28 és To 15 (Dako Corp, Carpinteria, CAj; Mő/13 es M5/44 (Céilieeh, Slough, ÜK). A blokkolási vizsgálatokban alkalmazott további ellenanyagok voltak az SI1Ö (Immunotech, Fullerton, CA) és M17.L1, M39.I.I, M38.1.Í iCeiitech, Slough, UK), A vizsgáimra szolgáié sejtvonalak, köztük a: Ramos Rurkitt limlöma sejtvonaiat (CR 1..-(923) és az RL nem-Bodgkln limíöma (BML) sejtvortalal: (GílLA2öl): mindegyikét az American Type Culture Collection intézettől szereztük ibe. A sejtvonalákat mlkoplszmasmeotesnék határoztuk meg pölimeráz-dáoereskeiös míkopiaxtma deiekeios reagenskéazlet (Af€€, Manassas, VA) alkalmazásával. A: se-tvonsiakai szuszpsnziöban tartnttíík fenn TíPMl tápközegbon plusz löíA FBS, 10 :m.M 13LEES, 1 mM nátriam--plruvát, ö,2u<! glökoz, FenMtíin C nátrium í ÖO IJYml, és sztréptomieiu szilfái 1811 ug/mk fÖ22Rj: Azt, hogy a G$/<?4 képes-e gátolni a CD22-re ismert módon speeirikus egér monoklonáíis ellenanyagok kötődését. BiAeore eiefnzéssd értékeltük BtAeore CMS ehipre immobiíizáit ÉC-CD22 alkaltnazásávai: Összehasoniitöítűk az immobiíizáit Fe^CD22 DS/44-el való korábbi íeiftesSei és anélkül kap<Ut Iblszlni piazmonrezonaneia egységeket (RU). A biomolekuláris kölcsönhatás elemzést B1ACORK 2000 alkidinnzásávai végeztük. Az ellenunysgokat vak kontroli felszín (1-es áramlási eella, ami kontroflkérü: szolgai, nem volt fehérje kapcsolva hozzál öS: CM5 szenzormbipm aminAápesbiási kémiávalRMS RU mennyiségben numobillzált :Fm ÜD22 teszi felszín (2-es áramlási cell#IN feipüîuk át. Á kapott szenzorgramm a 2-<n= áramlási cella vàissz (P#:tnhmsz az fees âmæMsffelkt vÂæp.pti) voit. Egy raxm^&amp; vertünk M dÄör ta æiÂi cellák GP14-·«! |1SM) g|/rüi) vâiê Mstlsével, sajtóit h^itaüuk a ÇD22 ellem egér ellenanyagokat, amelyeket; korahfeanjel^^ a kötésükre. A <35/44 válasz mérése után közvetlenül egér sütECDII monokfenalts tilepapyagohai perfendáihtük egyedileg a í|SA4eMvöltáss Síiil. Az égdrániBCDIk tnAb ö 5/44-ix; vom: CD22*.h8z· való kötődése miatti második kombinál; válás:« is felvettük. Ha m egér ellenanyag a G5/44 áldd eliögiaiztöl ekém helyekre kötődne, akkor a kombinált válás:?, additív Senne. Ha a G 5/44 ClMkdtöz való kötődése zavamá- vagy megakadályoz# a jöáködSt .tUlKlWI akkor a kööd>mák válasz nem lenne additív. A mkkbdik konfeínáit mdfesék mítidegytk# kötögsittífe a é'SÍMiCÍXB- köíésötfeat# .udfesebességére”. |0230j A -GS/44 csak azon egf^hyagok kötődését blokkolta* amelyek a CD22 A / íg-sZdrü l*&amp; dömérydíte? kötődtek (SHCLJ Le« 14 ds M39), and arra utal, hogy a ÖS/44 a Cl>22 ezeu domdfyéhëkkötődik (IX, és 1 Y> ábrát A .CD22 8 / lg~szerö 3-üa dontdnjéhez (RFB>4)t s (ZD22 € epitóp/ íg-szerő 4«es dömenjéhez (Tő 15) és a CD 2.2 Ig-szerű 2 -es domdnjdlmz (4K812.9} kötődő elfettanyagakat »era blokkolta g.ö$/44*,l2ék ä? étedmdnyék arra «iuhtak#:ögy a GS/44-kőtőhe1y a GD32--a a? elsőÍ|-szer8 doménben vt»ts mért roeg#ädälyöZza ázott ante· CD22 ns Ab-ok kötődését, amelyék· a CD22 első Igáért doatéöjőt (A epitóp) ismerik fék Bgy másik, ismeretién uispedfUásü and-CD22 ellenanyagéi as Mő/134 is bibkkoit a OS?44 (Celltbek, Slough. UK), ily módon a? MOH 3-t a CD22 A epitóp/ íg*szerü 1-es döinést}dre ídfképe?te lek À? MIM4 :ei1ebâftÿ^:-:amt'CC«$/44 .égé?' szőlői ellenanyaga, ugyanolyan specltitású, adat a öSM4> gátolja &amp; GS/44 kötődését; év pozitív kontrollként szolgál. A? ami>CD19 BU12 ellenanyag szwigiisepíiv IÉ4rtet#teí-,Az ^Efadéóyefeet a 7. táblázatban logialitsk össze. }Ö23fj A CD22 egyedi dontétdeire isméit spéciin!#/egér mÂh-ok alka|ma#sáv;d megvizsgáltuk a G5/44 képességét ezen ellenanyagok B~sejtekhez va;ó kötődésének tdokkoiására, Ezenfelül megvizsgáltuk a mAb-ok.:. ké;X;sségét a <;.V’44 B-sejtekhez való kötődésének blokkolására is. őzekben a vizsgálatokba« először 1 s 10" Ramos sejtet tettünk ki egér umi-CD22 ellenanyag (lő ng/mi humanizált 05/44 vagy egér monoklonal is anil-· CD22) hatásának l sátán keret 'túl 4' O-oo, mielőtt a sejteket 05,-44 (10 pg/ml) hatásának tettük ki. A sejteket: további 1 órán kérésztől inkubáltuk 4XVon. Az eilsnanyag-'kezeiés után a B-séjíeket leeeotnfegáítuk.. megmostuk PBS-1% BSA puffernd és hozzáadtok a megfelelő máso<llagok'4l|éMdyiÍO^ (vagy MTC-kecske' ami-humán (nehéz- és könnyű lánc) vagy FiTC-kceske anti-cg.ér (nehéz* és; körinyükánd)} 500 ul tétfőgatban ! : i 00 aranyban hígítva PBS-1 % BSA pufferbers. /0 percen keresztül 4'-' C-on. A sejteket ismét ieceottifttgáhtik. niosit.sk, ds újrtt felszuszpersdáltuk PBS- lXt USA pufíerbec és 751) pi of BBS -1% formaldehid oldatot tartalmazó esőbe adtuk, A sejtekhez kapcsolódé flnoreszeeneia-intenziläst áramlási dtometriáva! mértük BD FACSon áram Sás; citotnéíer alkalosazásávái, (Ö232j Az eredmények azt tnutádák, bogy a Cf>22 t· B'Séiídk köt'ábht kitétdie G5/44*pdk az M5/44 ds M6/13 ami*CD22 mAb-ok szigítiílkáns gátlás# eredményed#, Bzzei szemben az 1FB4, lolil, HD259 és 4KÖ árui-CD22 mAb-ok B-sejtekhez való köiíládsét nent gátoikt; a Ci5/44. A H.D239 B*sejtekhez váló kötődésének G5/44 áibilií szlgpifikdas gltiásápak a hiánya váratlan voih lölőnösén: ázértí: mert a BIAcore eletnzés arra utak, hogy sr ©S/44 képes blokkolni a HD239 kötődéséi €D2;2-bőz. A H.D239 kötődés 05/44 á|táil kötődés efös gáííásáttak íí hiányát azok 0022 itAnti relatív aÖlttitásáttak a különbsége alapján magyarázitatiakv Antikor a iénri egér aKíi-€i>22 mAb-okat megvizsgáiluk a: G'SIA4- 'CI)^k:8f4ii|lekhe^ való kötődésének gátlásának: képességére,az SHQ»l és Mó/il gátolta a GS/44 kötődését, de a többt Antidé D22 ®§·: aem, A HD239 és SHCiU, kötő 6|>Ít%talt a CD22 első Igézeté dotuénjéte térképezték. Azonban se Mö/13 vagy MS244 által; fotismen epitöpekst;nem térképezték fel. À lest részletezett biökköiáai vizsgpaiök arts utáladl*:. bogy a rent) ellenanyagok a £51322 slsöigAzerá doméhjéa elhelyezkedő, összességében A.“ephópnák nevezett epitóput ismerttek tld. f0233j 24000 Rames: sefîet iOkebáitusk CM€fo44 kölönbözö ád^satval ritaxlstabbaí és asélköi §6 öfiss kereeztfti. M ém elteltével tnéetbfc a s^ntíelképességei, áunolásl eiímnetriával elemzett popídmffiOödM kizárással. Irí^mftölítífe: 3^:mè«d>· átlagos életképességét és életképesség gátlásának dózis-válaszát. A sejt-életképesség gátlásának háttér gátlás! válaszát a CNIC--S44 zéró koneentnkiéiábó! seiitiitöltak kl. Logisztikns regressziót alkalmaztunk annak tesztelésére, hegy a CMC-544 okozott-a statisztikailag szignifikáns dózisfoggő gátlást a Ransos sejtek növekedésében a 9,01 » 3 ng eabcnearnieio DMH/ml dózistartományhas. Logisztikus regressziói alkalmaztunk annak meghatâfozâsàra is, bogy a CA1C-S44 kölcsönhatása ntusimabbal statisztikailag szigni Mans volt-e. Kiszámítottuk a médián gátlás! koncentrációkat (1¾} is. és rögzítettük mindegyikkeselés hatásosságáta £MCCÍ44-ei önmagában végzett kezeléshez viszonyítva. A síattssukai elemzési a PROBIT eljárás alkalmazásával végeztük a RAS Ε2 verandában. {Ö23íj A vizsgálat eredményei aas matatták, hogy a CMC-S44 dózisíOggö gátlást okozott a Ramos sejtek növekedésében a 0,01 - 3 ng ealiclmamiein DMH/mí dózistariumányban. A CMC-544 médián gátláál koiteentsAolöplÎGÿd lstïosgabg® 11,02$ ng/ml volt <20. ábra}, Eiiuximab 2, 2t) és 200 pgórd koncentrációit adtok lmzz.á s OvK3-"544-el .teáit sejtekhez annak -beg^ « áfoxmmb kOksönhatlsa g ÇMCCÎ44 eitotoxikns aktivitásával statisztikailag skipmkáns~e:. A rltUKtmabnák Önmagában; ·..... 20 és 200 agán!
koncentrációban adva CMC-344 nélkül ··— :ns.m volt szignifikáns ásatása iS íSöitnövekedésteArendsre itt,2% és; 94,0%: a Imrdozös növekedésre szánrlivá), A CMOkSdá-eltkoíitbtnáeiÖban ;mbídbátX5nt rituxjmáb kmsentráéió; statisztikailag; «zígniMáns (» <0,0á| balra tolódást okozott « EMC-544 dózis-válasz görbe meredekségében és: metszéspontjában (20, ábra), A 2: és;200 pg/nd ritexitKabbál ^alői kombináeié okozta a legnagyobb eltolódását: dÖsiS'Válásx: görbékben. Ez: a két görbe item volt staítsittikatiag éltető egymástól, de ssignSIlkáimé különbözött; ;(p<0,0S) a 20 pgónl dóziskötuhínációiél. bgy tbásodsk vizsgálat megerősítette az első vizsgáimban megfigyelt eredményeket: (etedtttéttyeket nem: köblünk). A 2, 20 és 200 pg/ml ríínxlmah plusz CMÇ-S44 médián; gáÖlóf koncentrációja rendre 0,0022, 0.0001 és 0,0022 ng/nr! voit. A GMC-544 píesz rltuaumb median gátlás! kóeeenttáeié|a niégkOzelîtbleg négyszer hatásosabb volt, mint a CMOA44 bnmagábatr valölG^ érlékév !! m ViFO DAGANAT ELLENES AKTÎV8TÀS SAODKlf'rÁN X ENOGR A FTO K ÉS SAISZTEMÀSAN DISS&amp;EMíNÁLT D-SIáT LlMEÖMiE SÇID EGEREKBEN j023Ó| l k-22 g-os, esecsemoiamgy oélkOli nősléííy csupasz egereket teljes^^ :tedetr:besí3gátsÁtmk |4öO md.), A besugárzás tovább szuppresszáka az egeink Íínmpnfébdszsrét á da|anai Sslvételérmk: fokozására. Marom nappal a besugárzás után az égereket Szábkután injektídtuk 107 Ri, sejttel Matrigelbén (Collaborative Blóntédleai Products, Belford, MÁ. 1:1 arányban: megbigitva RPMI tápközégbení a jobboldali hátsó lágyékba. Amite a dagatiâtok elérték: a inegfoleKi méretet (o6,3:g, tipikusan 21 nappal később). CMO-514, rúuxinrmb vagy CMGR terápiát (lásd alább) adtunk steril sóoSdatbau, ös2 inl/egér ip. A drogok beadásának kezdeti napját teklnteOUk az !, napnak. Rét további dózist adltutk az 5, és 9, napon (kezelés :"p4Dx3), A CHOP terápia a kóvetkezékbé! állít elklotbszkunid (C), (CyioxarP^, BrtoöPMeyers Stptíbb k!»., Rrincetott, NJ) 40 mg/kg Ip; dtrs;>rabic!·) MCI (M), {Siittns-Aldneh. Cu„ Si Um K MO): 3*3 n;g/kg:ip; -viakrïSâüilo (O), pebsáaSieot' Ehaomaestdicats.: brvine, ·€Α) 0,5 om/kg ip, cs prcdnizon (P). (Rnxsoe .Labs.·, Colombia, OH) 0,¾ mgfkjg po,. áCBQ-t azonos beadási í*»4’ szerint adtuk mini a CMC--S4-U és a .ritoiméfcot '($4Ι>χ3Χ míg a pt^dlm#«litea«dtefc.Aden másnál' dózisban (q2Dx5). Λ daganatokat hetedt« legalább egyszer megmertük és kiszámlissttaka díaganabtömegét (g)Wí 0,5 (tömör szèle>.ség/2)(n.mmr htKtt&amp;teg). Cboportátiág aSEM-ét pimitötiank &amp; Ősszeigisöthiiotistk a hordozóval kezelt csopurtta! stathítiltetejgm Hkanctám többszörös T-WÄ, A esopöAätlagöfcai az S(k napig rögzítettük vagy aoug egy egér «I höta- pusztait (4tó méppiil $. 0§bpHS8^Oï), vagy a daganat túl nagyra asm nőtt UVg) és az egeret el keíletiahatnÍ. Káért idő titáiya ílöpltettömegét éajpá'«ttdk:«sind«n'egyes;«gérbss· «2 összes kebelét.! csínban. Λ dápnatinesiés egerek szátnli MlMa. rögzkéttílk mindén YlzsgáMbtar oúndegyik kezelési csoportban. (0236 j A CMC-544 disszenunáli ISsnfámákra gyakorolt hatásának meghatározására ikanagáfes.0:: vagy kombinációban más bioaktiv szerekkel a SÓID egérmodellt aíkalmMtuk. 2Ö4i%-öshhn ECID eprekét (pBI? SÓID) injektáltunk 106 Ramos septs! a farok vénát» keresztül (0,2 ml). 3 vagy 9 nappa! a sejtek injektálása titán a? epreknek hordozót, kemjngátamokat (CMC-544 vagy €MC4i:?Sj vagy dtttximahotadtunk íp, összesen 7 dózisban. A 3. napos adagolási rendhez az egeteket a 1. 7. és 1 I, napon öltettnfc, A 9. napos adagolási rendhez az egereket a 9., 13. és 17. napon oltónak. Λ 9. napos adagolási rendített €M£rS44: és ríittkirnab .kombinációit is adtok: ámlöt alább isatértéijük· Át egereket naponta monitornztok a· hátsó végtagyparalMsere, amikor elöltük azokat.: Kezelési ésoportopként 746 égetőt glkalmäAtmk. A csoport attapv túlélést idejét (*.ö$33|, médián, minimum és maximum túlélést is kisg#núö}*uk< A csoportok közötti túlélés-eloszlás különbsége? Í,ögAáúk teszttel határoztak ?te«g és a szigmfíkaöciát $$$ szinten í%zitetiúk, A túlélési görbéket a. Kapltm -Mtóe·· eljárás alkalmazásával alkottuk meg. p23?j A kezdeti vizsgálat a két kölönbözó adagolási tend hatását vizsgálta a dtaszemlÄ litntAmás S£H3 egerek túlélést idejére. Az első vizsgálat a drogok beadásának megkezdését a daganatseitek iutravémts injektálással történő beadását követé 3. nappalvizsgáltaimig a második vizsgálat késleltette a drog beadását a láganatsejt ityekiáiását kővető 9, nájbg (megállapodott modell). Mindegyik vixsgáMhan CMC4344A (láb gg/kgk CMA-67ÍM (160 pg/kg) vagy tituNtrnabot (20 mgffeg) adtunk 3 dózisban ip, 4 toponként t'QuDx >). A fejlődő mödsjlbSn a hordozóval kezel; egerek adagos túlélési: ideje 27 mif voit (26. ábra, á. táblázat). A CM A-676, a CM'C'544 izottpus-dtesztet! kontrolija nem növelté szlgskfifcáitsati (páti,(15) a tűIMlési időt. A EMG-S44 szigolitkánsáa uleptövelte a túlélési «kV. 41 napra, míg a rituximahnsk kiibjezetí hatása volt, a túlélési időt» 13? napra »öveivé #4j^tiftÍ(ÉIP» nagyobb oùot a ÇMCM44, p<ő,ŐS;k Késleltetve az adagolást amíg a .i^^g^NáÉék'átetét^p::«ólt''k«rt»|eui ('homing5) és: deponálödni a céiszövetekben (megáílapottett tnodell) megváitöZtatia a CMC-544 és ritaxutnab (Rioixan:'M) gredomnyeket. A CMA-Avö-nak megint nem volt <.ábra, 8, táblázat)- A rítaxitnab megnövelte az átlagos túlélési időt 62,6 tuspra, ítdg á eM€sS44 8|,5 napra jávította az átlagos túlélési időt. Horn volt szlptflkáns különbség a GMC--544 és ritusitnab hatásaMlzÖtt a megállapodott: modellben. fÖ3l!S§ 'i|y elővlzsgálatpt végeztünk annak ioeghatározására, bpgy a rlluxsroabnak (.Rhnsao™) -vaa-g. báornilyen iíatasa, akár pozitív, ek át negatív a CMC-744 túlélési válaszára. CMG--S444 (lúOpgfkg) adtunk be ritnxitnabbai iltítoxan™) (20 nrg/kg, anilt magas dőzisú dAígkömbináéiSnak pD) jeiökönk) és anéíköl. Ezenféííli ÇMG-544 aíassönyáisb dózisát (|Ö ngÉRl égyÜtt adsuk rítus itnáb (Rítnsan'm) alaesonyabb dózisával (10 mg/kg). A végyölétéket nem külön adtuk a stegfölelö 86 itgfkg vagy lő oig/kg dózisokban, a vtzsgálátbán szereplő egerek limitált száma miatt. Hz a kombinációt, CMC-544 (¾) ng/kg) ntnximabbal (Riîxxim-1“* f H) îïig'kg), közepes dózisé GR>gkmvd>lnáeiénak lelőttük, es drtsgok SCi0 egerek túlélésében alacsonyabb dózisé kombinációja lehetőségenek meghatározására tu tudtuk. A CMC-544 (;60 pgkg) ős rituximah (Rittsxans *} /20 mg/kg), önmagában adva, a fém beállított modell esetén beszámoltak szánni működőd. Mindegyik!· ateghnssz&amp;hfeftotia a túlélést, rendre 58,5 és 50,5 napra (.22. ábra. A táblázat). Kombinációban az adages nőé lés kissé (bár sinn etikai lag nem szignifikáns módon, p>Ö5Ö5). 64s4 napra ja vu is n HD kombináció esetén. .A 80 iig/kg CMC-544 és 10 me/hg rímsitrmb közepes dózist) kombináció szignifikánsan (p<0,05 vs hordozó·-keze 10 ::|í·:i;BiSSfék 34 eredm#yék ans ViSÄk, hogy » CMC-544 és rito\ímab alacsonyabb dózis« kombinációi indokoltak, 10230| Egy további kötnbmáeíós vizsgálatot hajtottunk végre CMC-544-eí és díoximabbak A köveik«# kezelési csoportokat iultatttsk: CMCbS44 49, Sö és 1|9· pg/kg; #üxbnáb (RitüAtfR) 5» 19, és 29 mg/ki( © CMC-544 40 gg/kg plusz, ritasboab (Rifuxsn™} 5 mg/kg, CMC-544 §0 pg/kg plusz rítuximab (RiwxarA«} 10 mg/kg, és CMC-544 160 pg/kg plusz rhnxsmab (Rituxatp# 20 mg/kg. A rituximab (Ritoxsn™) mindegyik dózisa kissé javította az átlagos tidélMidöí s 35 - 40 nap tartományba (mindepik; dózis p<0,05 a hordozóval íi^os túlélési ídtpveí összeháxotslitva, 23, Jbra, 19, táblázat}, A CMC-544 magas dózisa, 160 pg/kg, 85 napra növelte az átlagos túlélési időt, ami konzisztens a korábbi két. vizsgalatban beszámolt sáédményekkei. A CMC-544 kombinálása rítuximahhal t Rítusán’^) nem hozott szlpMfeáns javniást a túlélési időkben (24, ábra, 10. táblázat)- A CMC-544 (80 és 40 pg/kg} két alacsonyabb dôÂMlplitâns^n. javította az átlagos túlélési időket a CMC-544 magas dózisához képest. A. CMC-544 49 M 89 Pf&amp;g dőpss eseteben az egerek rendre 99%-a és 89%-a még tóiéit a 125. napig is. ,dlpbg%dt«%Äi44-«^^fe8t· iö9%»t>s volt, az egerek túlélése a 125. napig. .4 CMC-544 alacsonyabb dózisai ttatékogyabbak voltak thint a 160 pg-kg-Ókpaga;; dózis. {02491 A riluximab (RimxanŸ*% kornbutációban a CMC-544-el mm vök nyilvánvaló hatássál 4CMC-544 aktivitására a disséminait R-sejt modellre SÓD egerekben a tesztelt dózisokban (lásd fent), Azt fS értékellök, hegy a ríttMmabbai (Kütaxan-1») együtt beadóit CMC-544 eredményezte-e a daganatéiig»© aktivitás fokozását vagy gtRiáSát, szpbkútáu RL R bmfóma xenograft modell alkalmazásával Balb/c csupasz egerekben. A szuhkuf&amp;ö E litpfömg modellben daganatokat növesztő it/mk 300 mg-os átlagos dagttnatméreíre, ami után &amp; vizsgált két terápiás szert IP beadtuk. A CMC-544-eí 20 vagy 80 pg/kg Q4DxJ slkálmáziuk rittikimtibbai (Rítusánál vagy anélkül /20 mg/kg 04D.k3). A rituximab (Rfráxao™} együttes beadása se nem fokoz# Séiitem gátolta szigniflkánsah (p>9J5| 4 CMC-544 terápiás háfáSósságát (25, ábra). A rituxlmab (Rituxábm} önmagában beadva gátolta W: Eb R iimfóma növekedését (a daganairtövekedés 57%-ox gátlásá-¾ ΙΟ, ηρρ», p<9>95: vs!, hordozóval kékölO ebben a vizsgálatban,: hasonlóan a CMC-544 alaesdnyább dózisánál ntégfigyeititéz,
|ö24?j A CHOP (cikiofoszfninid, doxorubicin, vinkriszíin és prednízon) kombinációs kemoterápiás séma a leggyakrabban alkalmazott kezelési modalitás rtem-iindgkin ibutómás páciensek esetében. Λ CHOP daganatodén«» hatását összehasonlítottuk a CMC-544-ével megállapodott RL B bmfóma xenogratkikhan. A CHOP séma egyedi komponensen a megfelelő fnnximátis tolerált ílóztsukban ttlkabnaz-nk csupasz egetekben (adatokat netn köziünk) és azok a következők voltak: Cikküószfamki (€} 40 mg/kg IP. doeornbiein (Hí 3,3 tug-kg !P, vinkrisztut tO> 0,5 mcAg IP, és prednizon tPf 02 mg/kg PO. A CHO-t Q4Dx3 adtak ix- és a P-t PO, 02Dx3 adtak be. A CMC-544-1 IP, Q4Dx3 adtak I» Jói) ngkg eaSidteamiein ekvivaiens dózisban. A CHOP kezelés kÄlttailL B ifefc növekedés sztgtphkáns gátlását okozta 126. ábra). Azonban 3 héttel később •x daganatok viss&amp;Ätek, Imsonlo nöx#edésí sebességpl, miit Ä2»l szemben í» C?vK>544 daganatellenes hatása kompiét volt ás kitartott a kísérten időszakon kereszteli. |fc eredmények; árva üläteak, hogy a CMfö$44 hatékonyabb volt mint a CHOP kombinációs terápia, a esupasa egerskbco maximális nem-tetaJB dózisánál szàgoiHkànsan aiaesenyabb dózisban. föSáif Ezek a vizsgái;««!azt rnmtatt&amp;k, hogy a rimxnnab (R]tnsa«¥!*), a armliatt adva, szlpibkánsan tiövelló a CMC-544- Ramos B Itnioma sá|tckbaa mpgßgg#: bjfestöxabis-ÄÄÄi újabban szitsergista Mesönhátásró? fs besabmalmkliamos sítekben riRödmab (Rteá«®**} ás ginkökoBltöldok esetében. Emellett f közöl 4 további sejivonaiban smusépsis bápkeááikgátlást Egyeltek meg rítmdnmbhal (Rituxan™), amikor Ki pM dexametazotmaí kombinációban adták be, |024|| Besaámoilak arról, bbp ä; BtákltSab (Äxan»*} mm0m, 0,4 «· W pg/ml, szigniOkáns, bár kicsi (maximum 1 $%) gátlást okozó iámos smíek nákekodéséra. Bmelleí- aktív volt 8 kóxb? 6 B-sèjt ném-ÎM^sm: iimíóma sejtvonaihan «te 10 μ§/;κΙ ktméebbációi>as) mkabáiták (48 b inkuhálás}·. Oítötie és mtsál, kmmtaiták, bogy a ritaximáh (Í:ituxanTAB, 10 gg/ml, 6,2Óteos növekedést okozott sz; apoptózisbari (szemben a .1.5%-ai a hordozóval késeit: sejtekben) 24 6râs isikubáiás után Ramos setékben. A léten vizsgálatban a rítusnnubnák (Rimxá#^|: 20 és 200 ppnl dózisban nem volt hatása a Ramos sejtek nOvekedásém ami|«)r önmagában adtok. Egerekbe« nem volt jelé ááoák, hogy bánnilysp kőiesönhatás lenne a ÇMC-S44 és tltukltnäb tRituxan™) közhit, akár &amp; #$stósöált;. :pi$Éá§b$n, akár a; szishkmán xenograh: modellben, A tesztelt drogkorofeinác iók nem iniÄraltak egymás hálásával ás nem fokozták azt, Azt még meg kall határozol, hogy u egyes szerek dózisának éáökkenlése a dtexeminte ímsdéiibétl tnégváltozlalía-'e est a tnégltgyelep, (02441 A disszemmáil B-sepIimíóma modellt Rninös ; egekké: i imen es tornai tuak le. A median mteiósi itdSkei hordozóvakkezel; egerekben 34-16 napnak közöltek. Az egerekbe« hátáé láb pamlfz« alakult kj. ex a végüket járták, és bem »okkal kesébb elpusztultak. A szervek szövettani elemzése azt tana tel. hogy a leginkább érintett szervek a mellékvese, lép és a szub-araelmoidális tér, A szmhm.meh.no idális térbe való beszűrődik gyakran kitérjéd; az agyra is, .A rituximab fötomnP*} jól teljesített, amikor a betegség korai szakaszában adtuk; be a di.xsze;p|oált SÓID egerekbe;'! t20. ábrái, de kevésbé vois hatásos, amikora 0. napon a modell megállapodó« szakaxaábap adtuk be (21, ábra). A ritnximab (RimxanrM>< neve! IgO! izotiposú, legvalószínűbb módon egérgazda eflektor nmchanlzmasam kérésztől hat. Ezek közé a meehanixtnasok közé íallózik a kompiéméim közvetített eitotoxiöiiás és/yagy az eiieosnyag-ihggő eeliuiáris éitöiöxieiiás a SCID égerekben jiten .lévé:: természetes óiösejtek toborzása álján. A beinjektált Ramos daganatsejtek eleinte valószínűleg érzékényebbék iá: gazda hmïM«t“ntéchanjâ!:muâàteà" amelyeket indukál a ruuxlmab (H.it«xSatM)? miniéit ezeknek a sejtekilék: lebétöaép iefme az irlbtett szervekbe való beszarödésm. A koryugáiatlau GS/44 ellenanyagot (a CMG-ôdÀ-beS:: lévé cálzdöPöliköla) piág ue;s teszteltük a d:|asZeminált daganatmodellben SCI1> eprekben, de nem volt hatáSá,;: .andter :$*dhl»táö kbttppsió^lirádtok be. A: <1S(444:Ő!, mivel IgOd izotíptssu, nem vmhátó, hogy ákdyáljá a gazda eflektor méehauiznntsáltós ily mőddb ibébeeíidsninyézuc daganatellenes aktivitást, :(0245( Λ ciíilcheamicinnd konjugált GS/44 (CMt-644) a rituxitnabbai (Ribtxan™) ellenícies módos Vissikedett, jobb eredntényeket í»»(MóR| ^lAdsf'alfefetogsdg tnegáiíapodott szakaszában adtuk be. Annak az oka, hogy a CMC-M4 jobban teljesít a megálbuxídoti szákásxbaa, nem világos, de attoegállapodolt szakasz jobban hasonÜí a klinikai helyzeíre. A CMA-676-nak, amely izotipas-liîosxiett -nemkötó :kontroii koniugátum, mm volt szlgniPikáns hatása az áiiago» túlélési időkre, A dlSszemmáit SC1.D íníxlciíben kápotí eredmények egyértehniten arra ataktak, bogy -a CMCA544 dédisait csökkenteni kail a maximálta hatásos ddzls (maximmá ei%acioas 'dose, MBP) méghátárotoáhóz, A 160 pg/kg dózis kevésbé volt aktiv, mint az alacsonyabb S0 és 40 g/kg-os dózisok, .Nem világos, hogy sóién: vas? ex igy, <ïe a 160 pg%g dózis jóval g MBB felsti lebet, További vizsgálatokat temsztbtk ezen kérdés megvâlagædàaira, fÓ24b| Mohammad Os misai- CHOP terápiát (Ciktefoszfámid (€} 40 mg/kg IV, doxorubicin (H) 3,3 mg/kg ÍV, vinkriszim <ö> Q,5 mg&amp;g ÍV, és prsdnizon (P). 0,2 mgíkg FO) alkalmaztak egy düluz: négysejtes 'límfbma sejtvoïsak a .DLCL· szubímtán xenograft· modelljében, A. CHOP terápiához alkalmazott dózisokat a maximális tolerált dózisbast batásxrstsk .meg, A terápiái.....CHO egyszar adva IV és P, naponta adva .1 napon keresztül — aktívnak értékelték, a 25,8%-os T/C-t eredményezett Nem számollak be daganatok gyógyulásáról. A Mohammad és misai, által leírt model then kapott eredmények hasonlónak időnek a latoban ismerteteti Rí, modellben CHOP terápiával :(!.F adva, Q4Ds3) tnegdgyeitekhez. Egyik vizsgálatban sem okozott a CHOP hosszútáv« gyógyulást, ellentétben a CMC-Sdé-ek
Példa a cmc*44 stabïl msmmiêsi A CMC-544 fi; nm? beadásra sgolgifiè sialltl kiszmdèse« áliiíoUak elő Isgftószerek, excipiensek. hoifiozbk fe stabibzáidszerek boWabásávsl. À HIG kmmatogiÄäi költőén a kromdogsifiàs fmkeíOk&amp;í megvizsgáltok SE£-dM.£bvel 4s tölsb-kuliámbesszás W ekœzésssk A megfelelő- fiaksiékat 'kiszelektóljtás lösszeőnlésrs s férni elemzés alapján, sisi infooÄÄt&amp;jfctosft az aggi^gatuní-tartöbím^l, fehéfje-'koncenlráaióröí és a eaíidisamicin-AeHisbségídi. isslpiansakab stabfikaloszerekeL domaWszerekst ês pdlbrdő szereket adnak -az oldat síabillzáMsára. MW a CMG-544 számos depsááeíős öivonafon degraáalbdkat, a fizikái: instabilitást Is figyelembe kell a kiszerelések kifejlesztésekor. A kiszerelések figleszíésések egyik fii kéídése az. bogy a ealkbeamicia hidíoíidsé!: as eiiesiaavagd! misbnaiizáinl kell, síig az afifl-CO-22 diemmyag fizikai is k&amp;aias ihispÄät fer?:« ík#l 4a$pii. Bxöíiselü! muiííWítliKai^s feçH â te$»jgát$m kicsapódását,: ami Imkdvettakei: bizonyos |>;H 4s
{$24$} gjp::é}:feftaaymg*e«:Hch88»Mtt köüjügáismi kiszereibs %5leà^'^^f'#MlÂf^}és ítímímauzájjá a degradátáófc és a felírni jüsíabihíást. A, ί^|Ι{^«&amp;0ί}δ:&amp; &amp;idrofejs$gmk oOmmaíizálásám .és a kötpgátüm ídldhatóságának fenntartására pH: 8.Ô értéket választottunk. SDS-PAHi és antígénköíési ËEMA alkálmazásávaií ínyért íövábil &amp;däÄ arm uíidták, hogy a szlgn&amp;ikáöS szerkezeti integritas és az ellenanyag spécíffiása megmarad pH Szőrűiken. ünnek'Mvake/tébcn mxtMMfaX a pH
8,0 értéken váló tartására, Alternatív pttlfeék közé tartogat a dlbázlkus nátrium· vagy ÁdMSW koncemrácló-tartománya -5 - 50 mM lehet, Egy előnyös 7.5 - 8>5 pH tartományt javasolrntk az optimális sniEiiÍtásMdh®éság étdëkébëu. A vëgterm#jeîén]«gi pH specifikációja 7,0-9.0. {0240}; Habár a jmííérelt kotpigamm Aidátok sísbdüásá megfőiéló á rövidtávú stabilitás szeMpontjából, a hosszútávm stabilitás rossz. Uofiiizálási alkalmazunk a könjogáidiP tárolási kjeiének javítására. Egy tehérje Iküllízáiásával kapcsolatos problémák jól ismertek, elfordulhat a másodlagos, harmadlagos és negyedléps szerkezet elvesztése a fagyasztâsi és szárítási folyamatok során. Szacharózt alkalmazunk a kiszerelésben a könjagátots amorf stahllizálöszereként és az eitepänyag szerkezeti integritásának fönntartására a fogyasztási és szárítási folyamai sorátt. 1,5-5,0% w/v szacharóz koncentrációt alkalmaztunk, Ezenfelül polimer íömegttöveló szett, mint példlüf BexMo-40 yap^ alkalmazható a iiotilizáit pogácsák megjelenésének és izikai ;H|pÄSa»k: $|Μ,.5 iöptfg^ JlÄÄ-;äßyagök Bófííjzált pogácsákat alkotnak viszonylag Aláésony koneéntrácioban, és á liófilixáü klszcroiés iltálános sziláráatryagrláriáloráhp mmiínaÜzáMsára áikalisázháiók, Ily tnédon lehetővé téve a gyors tspászlvaAzárilnsri À kiszerelési vizsgálatokban 0,0 tömeg% Destran-40 j0250| Pöiíszorbáí-8ö-at aíkalmazánki a klszereiésoéh a kosyogáitns óldháióságánafc a dókopsára, ö,0|% előnyős koncentrációt alkalmazunk 0,005-0,05¾¾ potenciális tartománnyal Tween-t is adimk a kiszereíéshez ,01-,05 tétfogaf*·» koncentrál lóban, jOkóí I Elektrolit is jelen lehet a kiszerelésben, és a végsó tisztítási folyamat katékostyságának javítására alkalmazható. A nátrium-kíoríd tipikusan 0,0IM - 0,1 M koneennácfoban van jelen. 1ovábbi elektrolitok, mint például nátrium-szulfát is alkalmazható a nátrium-klorid helyettesltójekéHt» tőivel ez utóbbi éieltrojit könnyebben líofilbalható. Optimális esethet) a végső CMC-544 oldat i,S tŐmeg% szaéhátAid* -§β;·^^0» Dextran-40 -·, 0,0 Η ο 1 wen-804, 50 ntM nátrium-kloridot, ,01 tömeg% poliszorbáí-SCbt és SO füll: fooomdumnt tartalmaz. }$2$2| A liofilizálást megelőzően egy szemlélic-tó kiszerelés a kővetkező: CMC-544 0,5 mg/ml, SzáCbat'óz 1,5 tömeg'1«. Dex-raa-lO 0,0 tömeg'1«, náhdem-k lórid. 0,05 M, Tweet) ,01-,05 térfogat0··«, ifohs.zorbát-SO 0s0l tömeg'1«, nometamin 0,02 Jd; pH 8jO, és víz. Az oldatot boröstYánsidnü fiolákba töltjük i-5':'C I0:?€ (optimálisan ; 5VC) hőmérsékletem az oldatot lefogyasztjuk -35:>€ - ·50':7;ΐ(ορί:Ιον0ΐΗηο -45°C} hőmérsékleten: a fagyott oldatot kezdeti fagyasztva szárítási lépésnek vetjük-Ülá 2KN&amp;Ô 'tftlkÄ-lbp!l||#IÜS'"$Ö mikron! elsődleges szárbáaí nyotnáson; a lagyasz.'va szártloíí: tetrítékét -10 ''Η - -40'C, (optimálisan -30^(:) pojcbömétóéklétet) tartjuk 24-73 órán (upttînâlisatt 60 óránt keresztül; és végül iagyasztva szántott terméket másodlagos isgyasztva szárítást lépésnek tesszük ki 20-80 mikron (optimálisan 60 mikron) szárítási nyomáson -í-li) :1C - ->-35 (optimálisan t 2$7E) pole-hihtíéesékiet melkst 15 - 30 Őráp (opritnálisáo 24 órán) keresztül: Nyomáscmeiási 'W&amp;â végMI ;^^&amp;0£&amp;àr&amp; A lOßIia;Ma.si dkîus végét* a Bélákai '&amp; l^|öfe:]RÄm!glß«e:|: M lékap&amp;k-öpfcv j'0î53f A 12; Líbiákat «mim ja be g OíéjÍ€*544 esetén alkalmadon kRaetelés ë<% a k&amp;fyMaxg” esetés alksémsiîNt kAxerèlés külöabségbi, A ssNétï NksîffiadQîbfcNasreîés k&amp;SSti sAgmftkáas különbségek kiké batoAk a csökketiRR fehérje-köneenRéeio sz új ksaxeeeiésben {tk$ mg/;tsB; a îroœsiamin aíksimaNLa püRerMnt és a ú5t)?% ItyéeíkM jdímiéte. B® adteredményeA. hogy a dss&amp;soidöß OMC--544 m éj lÁSKereiésbm tisdaysUenKitboí? a yisaasoidob ^MyloiariE kis^HÏéi^téÂt^: *a*««>§?ágga! itasd a ti. és }4 tábláffidNl.
i l. TÁBLÁZAT: A .CMC-544 .JiYL01^R04>'Kj$Z^ÍÉÍÉS ÉS €M(Ás44 KISZERELÉSÉNEK AZ ÖSSZkl s ÁSÓN UTASA
12, TÁBLÁZAT: A CMC- 544 „MYLOTARO" KISZERELÉSE ÉS CMC-544 KISZERELÉSE STABILITÁSÁNAK ÉS FlZIKÁl-KBVUAl MEOHGYCI LSÉNEK AZ ÖSSZEHASONLÍTÁSA 5 :>C-ON
13. TÁBLÁZAT: A UOFÍEIZÁLT ÉS 25 A'-ON TAROLT ,Am,OTARCC KISZERELÉS ÉS: CMC KISZERELÉS STABILITÁSÁNAK ÉS EIZIKÀLKÉML41 MEGFIGYELÉSÉNEK AZ Összehasonlítása
|Ö'|S4| A lálá!í«;fey seéfeös nfedcssstâsâ és varíáfeója ösSetsríéeik a fend leírásba és eivarhafean nyilvánvaló a seakernber mâW&amp;M. A keniugáeiás «Präs« ¢5¾ eljárássá! éföállkött konjugátumok, és a konjagátutnokat igrralmasi késr:!fefeny«ií/k!saefefesék ilyen méílosAása· és váltogatásai véleményünk szerint az igénypontok oiialmi körébe tartóznak.
SZE&amp;VRNCIÀUSTA (i>255! •-1 Ι0·> WYi.-.TH HOLDING Cf íRPURATKIN.. RUNZ, ARTHUR BT AL«
-120 ' CALÍCHkAMK. IN !JhRlVAT!VT.-CARRIER CONJUGATES <16ö> 51 <i?0> ReqWiaOik version T.02
<2!ö> I <2! l > 5
<2í2> PRT <213> mease <22ü> <223> 3/44g ODR-H ! <22Ö> <22 !> <4ÖÖ> 1 Á$rt Tyr Trp île Mis I ' ' 5 <2 ! 0> '2 2\V> 17 <m> PRT <213> mouse <220'-' <223> egér recsnoklonális 5/44 CDR-H2gL ! T3 <220> <22 !> <4ö0< 2
Sly lia ASH Fro Gly ash ash Tyr Ttsr Tlir Tyr tys Arg as π Leu Lys I 'S IS ' ' IS
Sly <2;0>3 <>M> 12 <2 !3 ' PR Γ <2! 3> íwuSé <320> <223'' eg# sMooklonális S/44 CSR-'V13 <22H> <32 i> <4iX5> 3 sly sly tyr sly &amp;m Tyr sly Ala trp Phe Ala Tyr I 5 10 <3!ö> 4 <311> 16 <312> PRT <2Í3> mouse <220> - 223><mér monokionális 5/44 CD1M. 1 <220-·' <221> <400> 4
Arq ser sár Sio Ser tao Ala ash sar Tyr sly Asn Thr Phe tea ser 1 “ $ 10 ' IS <210'- 5 <21 !>?
<212> PRT <213< î»ouse <220:> <223> sger mimo&amp;ioMMs 5/44 CDK-L2 <220'-<22 \>-<4öö> 5
Oly Ile Ser ásó Are Pha Sár 1 S <210--6 <211--0 <2Í2> PR Γ <213 > mouse <220> egér monokkmáii.·? 5/44CDR-L3 «2220'' <4Ο0> 6 lm Gl η Gl y Thr Mis Gl n Pro Tyr Th r 1.............. 5 <210' ? <2H> iO <212> MRI 213 - «muse <220'· <223> egér monoklonális 5/44g VI... dornen <22 ϋ> <22!» <4Ü0> 7 tóp vaî val ve! Thr Cin Thr Pro teu ser te« pro va) Ser Phe Oly T . 5 10 r>
Asp «In val Ser île ser cys Arg ser ser «In Ser reu Ala asn Ser 20 25
Tyr « ly Asn Thr pH« téu Ser Trp Tyr Leu His tys Pro «ly «ln SSr 55 "' 40 « pro «ln Leu Leu x!e Tyr «ly fie Ser mn Arg Phe Ser <11 y val Pro »0 SS 60
äss Arq Phe ihr oly Ser Siv Ser «ly Thr Asp Phs ihr Leu Lys Ile SS ~ 70 ' W SO
Ser Thr île lys Pro Glu Asp .teu «l y Met Tyr Tyr cys Leu Glu Gl y ' SS SO SS .
<210>8 <21 r." 121 <212> ORT «213> mouse monoclonal S/44 VH domain <2202 <223 ' egér monokfonáíix 4/44 VH donion <220> <221> <400-·' 8 1¾¾ ϊΐη te»il» m»-«er Thr ψ ^ Arg Pro ||t Ais mr väl m ||t 5 er cys Ly* Ais gr öly Τντ Arg rhe ||r AS« tyr
Trp Xhi H-ts Tr» val Lvs «1.» Arg ?Γ<* ßly ^ 01* T|V TrP χ1 δ
3$ ' 4Ö «S «l y «l y TI» äs« era «iy äs» as« Tyr Thr thr Tyr tys Arg äs» lia» M ' S5 60: ||S Sly Lys Ala Thr tm Thr Als val Thr ||r Ala Ser thr Ala Tjr
Met As» Leu Ser 5er Leu Thr Ser Sl» Asp Ser Ala val Tyr Tyr Cys 8$ W: -·Α
Thr Am c-lu Ply Tyr «ly AS« ryr «ly Ala Trp «ha Ala Tyr Trp «ly ICH) ’ 105 120 »Ir «ly Thr lau val thr -Val ,$er Ser m 520
<2iO> 0 <2Π> 13 • 2 i 2> PRT ''213 ' Artinciai Ssqueeee <220> <223> cH <220' <221> <400: > 9 «ly As« ÄS« Tyr Thr Ihr Tyr i.ys Arg As« Leu Lys «ly X S 10
<2)0> 10 <251·' S3 «2\2> PRT '2.53' .Artificial Sequence <-22ü··
<323tNS5Q <22ü> <221 >
<100' SO
Gl y ásó r,l« tyr Thr Thr Tyr hys Arg As« heu iy$ « ly X ' ' $ 10 <2 s ο> n
<211: - S3 212 - PRT 2!S3> AriSfieTS Seqpeem ' 220.·'· '223 VT57A <220> <221> <4Ö0> 1 î esi V Asn Am Tyr Ala Thr tvr Lys Arg ASn te» lvs Öl y î"; 's ' * 10
<2H» 12 <2l!> .13 <212>FRT <2i$> ArtiileiäF Sequel« <220> <223> 75 7V <220> -22 S > <40S> 12
Gl y as η äs n Tyr vel thr Tyr tys Ar y As« Leu Lys <Sly 1 ' 5 10
<2 ;0> 13 <21î> 17 <212 ·- PR F <2X2> Astlf-cisl Sequence -220? <22.0 0)R -H:.' (Τ5"·?)Λ ί-Γ <220'
<22 0 <40(0 B fil y xle Äse Fro <'<1 y äs« asc Tyr Ala Thr Tyr Lys Arg Asm Lou Lys 1 S W 13 «ly -2 HT- | 4 - 2 S1> 13 <2B> HR 1 <2 \ Ai'ililçiài $ef|iiçôrç •:'220·> <223 - K60R <220> <22 i> 14 ßly Asn Ase Tyr Thr Thr Tyr Arg Arg as« lôu Lys Oly X ' S 10 <2 KO 12 <211> I?
<212> PRT <213> /\ ülik.lai .Séquence <22Ü> CDR-H2 {K.hOR)R H” <220···' <22 i>
<400> IS m fr lht l$r'mr **9 Ar® Mn \f m
Gfy <210>M:
<2H> 17 <2I2> PRT <2 ! 3'-' Aïtifiçig:1 Scquençc <220> <223> CDR.-H2 <T57A K60B) H’· <220> <221>
<40ü> US «Ty île aso » elv as« as« Tyr Aïs rhr Tyr Arg Arg Asn íj'f % 5 Iw ^ «ly <21ö> 1.7 <211 >70 <2Í2> PRT <213> fkiiYSD :>apke» <m> < r.r mm <no- <221 > <4Öö> 17
AspUe Sín Met Thr Gin ser Pro ser ser Leu Ser Als Ser Val oly 2 $ 10 mp mg Val Thr lie thr cys Trp Tyr Glrv Olrs Lys Prö |ly *·** *** 20 tys te« i.eu íls Tyr oly val rro ser Arg rhe Ser <sly Ser Oly ' 35 40 45 -
ser Oly Thr Asp rhe Thr Leu Thr Ile ser Ser Leu Cie rro Glu ASP 50 55
Phe Ala Thr Tyr Tyr cys m το <2H)> m <2H> H <2I2> PRT < i 3> Homo sapiens <rn>JK! <220> <22 r>
<400> <S ph« <*1 y Sis Sly Thr tys val Glu Ile tys Arg 1 5 10
<21ö»-19 <2H> Π3 <212> PRT íc2|3> Artiskis! Sequence <220>
<223>|W <220··' <?2V> <400··· 19 λ<5» Val Sie Val Thr Sirs ser Are Ser Ser te» Sér Ala ser val «ly
X S 10 IS ASp Arg val On· fis Tür tys Arg ser ser öl« Ser teu Ala *sn Ser 20 ^
Tyr «ly sse Thr rha tau ssr rrp Tyr ts« Hist tys rro «ly tys Ala
' 3$ 40 4S érő «1« te» u« m Tyr «ly 13« Séf Arg ||e ser «ly v*l rrr SO SS 00 ||P Arg rh« ser «ly Ser »ly S«r «ly Thr ||p ftss ft>r te» Thr ge ser ser seü sie ||ö g'îm as» pH« Ala T|r Tyr Tyr eys te» ||« v!y rhr Hl a clrt rr« Tyr Thr éhé Oty m Ol y Th r tys va! «1« ft?« tys
Î00 305 V
Arg:
<2iO> 20 <2Π> i 13 <2I2> FRF <2 ! 3> ArOOdii! Sequence <220> <223 ' gU <?!(). <22!-<400> 20 • , fcs* · »*.·* »r© δ«*1 &amp;fcr Lé« Mr Alt Sér V&amp;l öly
Asp val val vas fér pin öéi ***· ·$$ ;|sj · ASp Arg val rbr xH> rhr cys Arg S|r mr #ft Mr «W ||a Asp Sér iÖ
Tyr Sly A|« Thr * Lé« ser tré Tyr Léé Hfs Lys |« m i*s Alá pro sin tó« lé« Síé Tyr My *1* Ssr ASs ArS gf ^ val Pro SO SS ^ vi. .-r. i-«v. rt,( s«r elv #r Aöp Th« Thr M»· Thr Xls ASp vtrg yh« s«r «ly Sor oly ser «u *>3 8Ö 65 ?ö
ser ser l*ö-SU» Pro élő Asp rba Álé ||r V Tyr Cys lé« ||« «ly SS
Thr «Is «lé Pro Tyr Thr éhé öly ^ Thr ^ Va1 fi Λ LyS 100 ivS -w
Arg <210> 2! <2H>80
<2i2>PRF <2 ! 3> Horni.> sapiens <220> <223'> DP? <220'·' <221> <400''21 gin val ölé i4á Vél gin Séf Ply Als «?« v** MÉ* W* ***** f# Al* I 5 *u i3> sor Vél rys Vél ss<" Cys rys Ala ||r «ly Tyr Thr éhe ||r Trp Vél . 20 és Aü.
Ara «l é Ala Pro «ly ei.» öl y l*u «1« Trp W «ly IfP éhé «lo «ÍV
' y 35 AÖ 4S
Ara Vél Thr Vét Tér Arg Asp Thr sor Thr S*r thr val Tyr hist 6?« ' so SS í>(> í eV Sér Sor lé« Arg sor öl« Asp Thr Álé va! Tyr Tyr Pys Alt A|Ö
m ?« ?H <21ö>22 <2Π > Π
<212>PRT <2 ϊ 3> Homo sapiens <221» <22!> JH4 <220> <22 Γ' <4Ö0> 22 rro 6Íy cio Cl y Thr uni va! Thr vsl ser Per 1 5 10 <2Í0> 23 <2ü> 52 í
- 212.'· PRT <2LV· ÄrtiffelalSequsnos <22Ü> <223> gH( <220> <22 ] > <400'· 22 fölu va4 &amp;Ί « Leu Val sl a Ssr tsly a la Slu va 1^ Lys Lys Pro ©ly à l a
I s 10 M
Sar val Lys val s«r tys Lys Al a S«r €*1y Tyr Arc? Pim ||r ASn Tyr 20 50
Trp î le H vs ïrp val Arg Gin al a Pro Cil y SM «iy L|« S&amp;** T©h x^s 35 40
Gly Gly Ile Aon » Sly As« ©In Tyr Thr ihr Tyr tys Arg äs« tau $0 $$ m tys Gly Arg Ala Thr um ihr Ala äs# Thr sgr Thr sar ihr val |yr
Hat ©1« L0U ser Sér Leu Arg Ser Glu m Thr AÏS Val Tyr W Cys g § 90 w
Thr Arg ©lu ||| Tyr öTy Asa Tyr |1| Al a Trp eh«Äl*..gr Trp «ly ©1n 01y Thr teu val Thr val fer sar ' . M S T20 <2 ;Q> 24 <2M> m <m> prt <213> ArhficiiO Sequence <220 > <223> «H4 <220'· <221> <400··· 24 »1« val sie Leu Vél Sin ser sly Ala gu vat tys cys h«> fly Ala
Ser val Lys val Sör Cys Lys nia ||r si y Tyr Âr§ rhô T|r Aon Tyr
Ten al« HÙ Trp val Arg «m Ala *** m «1« oly tee slu TrMlë " ^ 4v ^ élu si y Tl « ASA rro si y äs« a*« tyr «la Thr wr Arg arg as« teu 50' ss Λ' tys si y arg Al a Thr teu Thr Ai a Asp Thr ||r Thr Ser Thr «1 Tyr èV " m mx Si» teu Ser ||r teu Arg Oer ^ ψ Thr Aïs Val Tyr ||r eye Thr arg: «lu oly tyr sly as« ryr ||| Ala Trp ehe Ala |||®1* 81« si y Thr teu Val thr val ||| ser -2 î 0 ' 23
<2H> 521 <212> PRT <21 3> Artificial Sequence <220> <223> g.H5 <220> <22l> <400> 25
, Öst vá öl« Uu Gin Ser «ly Ál* Gl« kai fcy*:Áys er« «ly ATS I § 10 IS ser val 1-ys ^|1 Ser %« i.ys Alá ||r «lÿ fyr.Arg eh« |hr As» ty» trp fî* iíis fro Val Ar« Gl« Ala Ar« «ly «1« «ly Gl« Trp 11»
Gly 21« A»G ;pr« 41y as« As« Tyr AlsThr t|^r A?f Ar§ As« Ge» öly Arg val rhr «tt ihr Ala Asp ihr Ssr ihr 5er ihr vál l^r pigt «lu t«ü §er |«r ä ao ar§ :#sr 01« ||P Thr aia v«T Tyr T|r «yy
Ihr Ar« «Tu Gl y Tyr «ly As« Tyr «ly Ala rrp Php Alá Tyr Ttp «ly 50h ‘ .ms , λΧ0
Gl« «ly rhr «su várt thr Val Ser sér " ' ns........ uo
<2 Hk· 26 <2H> ;2i <2!2>PRT <2:ί;Τ> Art®« # Seil hêaeé <220> <222> gH6 <220> • 22 ! : · <4(H):> 26 |lG val oie ceu val Gin Ser Cl y Als ||u Vai TV« ly« hr« ||y Al« Sár val s.ys val ssr cys tys Ala oly Tÿr m Thé |hr A4« Tyr trp tie His rep val αγ9 Ol« aU ere sly Gin oly t|« ele rrp'***
Gly Oly SM ASG rn Oly ||0 « m m Thr J|r Ar>S iy* ** 01« Oly Ars Ala Thr ||u The Ala asp ihr ||r Thr Ser Thr val ||r fást «ly reu ser |«r Ce« Áru ser «lu ||p The,Alá uai iyr ||f ^ ut si» |ly tyf oly «ο -rn ol| *1» TÍ|>: «Μ *la jg «Ρ <% ,w flí ;ge*.l «r V« ||f Ser <210> 21 <2il» m <2!2>PHi' <213> Arüfii ûï? SeSOONOë •'220> <223> gH? <220 > <22 i> <400> 2? |U val «U U» J*“* s«f «** *1a g“ vs? M* pm gy A's ser v#T \η-ψ ** cys "ys AÎa lf ^ ^ *** ^ ASrt: Tyf'
Trp n« «u rrp va? Ars AU^roSTy sia «1y teu «0» Trp si« e-sy aly ïîa as» m« «ty ||* as» Tyr Als w gr Ar$ m tys ehe ||,v <Oy Arg Ul Thr «et Thr *ta *s* Thr ser Thr Ser ΐ*Γ v«l: Tyr mx 4t» eau ser ||r um Afé ser «1» ||e the *1* val ryr rgr <y$
Thr arg ßl» tig Tyr Sîy ÄS» ||| Ala- rrp ehe Aïs ||< trp «ly
Ole cl y Thr tau VaT Thr Val Ser ser :îl§ ^
<2 H» 28 <211 > 239 <212>PRT <213> Artííkíal Scqueore '?.2‘)> <>,>3> Gi'iiSoSt köítryöláiK: teljes •stekveBaija <220=· <22!> <400>28 Η«»* tys te» fro val Ars le» te» val te» te» te» eh« W* ||« Pt<&amp; au ser Arg ||y Asp val sir val ||r Sla Ser Pro See ||e te» Ser AU Ser val Sly Asp Arg val Ur .rie Thr Cys Arg S|< Ser ein; Ser js; AO *»> l.ev Al» äs« Ser Tyr ÖTy Aar Thr Phe teu Ser Trp Tyr Leö His tys m .; » 60 er» Sly ty» Ala Pro «In Gew re« TU Tyr |]y *1$ $«" As* *«* Ö* m TO TS 8*' SAr Sly Val Are Asp AfS Ahe Ser sly Ser C<1 y ser ÓTy Thr Asp Phe g5 so ν>
Thr thu Thr île Ser Ser tep Sin Pro pie Asp php AÍA Thr Tyr Tyr 100 10S äiV cys tpp ||n Sly Thr NTs óin Pro Tyr Thr ehe Gl y ||| «*y ihr tys val alu xte TyS Arg Thr val Ale Ale Pro Ser v»i Phe île ?*i«. f>ro 330 57$ *" îM) .«*·«- s.«r :¾% <»5« -te« Lys Sár sly 7hr Aie s««· 74! val .£y» $.«« 14 S " .ISO ISS .160 im mn A«rt ?ft«;:*ÿr ere Arg Oil« Mè tm:v*1 Si* 'fr^.itys ta-T As» 16S .170 17$ ' 448-Alá i^ö Slo Ser Sly Asn Ser «Ir «1« Ser va! thr £lu «ln Äse ISO " |8:S 190
Ser Lvs eső ser ihr Tyr Ser te» ser ser shr tes Ihr tes Ser lyg " 0% 208 20$
Ala Äse ryr éle iys oí s tvs Vs! syr ala cvs SU* val rhr tris «ln 2lb ns ' 220 siy iím. $«r S*r: pro va! TAr s.ys s«r ehe Am &amp;r§ oly ol« ryy US 2.10 73$ '
<210' 29 <21í> 781 <212 - DNA <?.(>> Artificial Sequence <220> <223> GraftoU köinivöíáne teljes székveixeiája <22ö> <221 > <40ö>29 tregsagecq ccaccasgaa gstgcctgtt aggetgttag tgettctgtt gttctggatt 68 cctgctuxx ggggtgaegt. traagt-gaee cagsgcctat: ceagcctgaQ egcstctgta .1.20 ogaoacrggo tcaicateác ttotaoatcc agtcsgagrt ttgcaaatag ttatgggaac i$8 accrttttgT ettggt.au t gracaaacca ggtaaagécc cacaattgct catctacgga 248 atctctaacs gatt.*agtg8 tgtaccagac aggtteagcg gttceggaag tggtactgat 308 ttcacrctta cgatctcgtt tetxeagcc« gáagatttrg rcactiatta ctgrttacaa 388 egtacaeat.r agcxgtaeac attrgefceag ggtaetaaag tagaaattaa aegtacggta 420 gcg«ccí\.At etetett* at <tu<.s.g<ea srtyatgage «yttgaaate tggeactgfc 408 tctgttgtgr gretgctuaa taaettctat. eccagagagg ccaaagtaca gtygaaggtg §48 gstascgcèe tccaatcggg taaerccc&amp;g gagagtgtxa cagagcagga cagraaggac 600 agcacctaca gectxagéág eaccrtgatg ctgageaaag cagactacga gaaararaag 808 gixtacgcct gsgaagtsac eeatcagggc ctgagctcge cegteacaaa gagcttcaac ?20 âggggagagt gttagaggga gaagtgècèe cacctgctèr tcagttccsg ektgggeatt ?S8 £ ' .... 701 <2Í0> 30 <211 >46? <212> PR1 <213> Artifk iái Sequence <22Q> <223·- Gráftól! neftézlánc teljes szekvenciája -22(0->:C?7 >> <400> 30 mt Asp ohe oly éhe sor teu val ohe reu Als L.gu ils tee s.y» C>ly I s 10 il
Val 63« Cys Ole Val Oln te« Val «la Ser eV? y Al a «lu Val Lys kys 20 2 S m.
Oro 61 y Al a $er val Lvs va 1 Ser Cys Lys Ala lier öly Tyr arg Phe " 31 ' 40 45
Thr as« Tvf· trp: ils rrp Ala $m «ty Gly Leu ' $0 " SS ' 60 »<£«« ti'fe elV s5y· ίίβ AS« Pr&amp; Gly As« Ám Tyr Al s Th« Tyr $r$ I5 ?0 7$ m A«a tys ehe Sin Gl y Arg valThr Met Thr Als Asp Thr ser ihr Ser
• ·* Λ 85 90 SS •y},r ysl Tyr Met Glu Leu ser ser tsu Arg ser Gl« Asp Thr Al A Val ” 100 lös 110
Tvr TVT CVS TW Atg Glu Gl y Tyr Gly AS« Tyr Gly Ala Trp Phe Alä > IIS ilö . 12s
Tvr rrp Gly et« 6% Thr Leu val Thr Val Sér Ser Al A SAG Thr Lys ‘ .00 ‘ ISS .140 elv Pro Ser val Phe uro tea· Ala Pro Cys äer Arg ser Thr Ser Gl« X4Ï ISO ISS 160
Aer Thr Ala Ala te« Gly cys Leu val Lys Asp Tyr ehe Pro sie Pro ISS 170 175 val rhr val ser Trp As« ser Gly Ala Leu Thr ser Gly val His Thr 180 IM 160 »he Pro Ala Val reu Gl« Ser Ser Gly teu Tyr Ser Leu Ser Ser val . MS 200 205 val Thr val ?ro Ser ser ser reu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys ASP 210 215 220 val Asp Ri$ Lys Pro Ser äs« Thr Lys Val Asp tys Arg Val Glu Ser 225 230 . 235 240 tys Tvr Ally Pro Pro cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly 245 250 255
Gly Pro Ser val Phe Leo rhe pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr La« Met 260 m 220
Ile ser Arg Thr pro gSo val thr Cys Val val Val Asp Val Ser GlO
2?S » ?M
Glu Aso pro «lu val ole ph*. as»· Trp Tyr Val Asp Gly Val 61« val 290 295 300
Hi a as« Ala Lys Thr cys pro Arg Glu Glu Gin ehe As« Ser Thr Tyr 305 310 315 320
Arg val val ser val t« Thr val Leu Hls Gl« Asp Trp Leu äs» Gly 325 330 335 lys Glu Tyr Lys Cys uys val ser As« Lys Gly Le« pro Ser ser IÎ* 340 345 350
Glu Lys rhr lie Ser lys Alá Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gl« val 355 360 ' 365
Tyr rhr peu era pro Ser Gin Glu Plu Met Thr Lys As« ein val ser 370 325 380
Le« Thr Cys teu Val Lys Gly PHe Tyr pro Ser Asp Tie AIS Val Gl« 90S $90 m% 400
Trp Gl« Ser As« Gly 6t« Wo Glu mn Asn Tyr Lys Thr ihr Pro 0f>ó 405 410 415 val Leu Asp ser Asp GlV ser ehe Phe Leu Tyr ser Arg teu thr val 420 ' 925 ' 430 asp tys se« Arg Trp Gl« g * u Gly Asp val Pbe ser cys ser val Met 435 940 445
His Glu Ala Leu His As« 915 Tyr Thr Gl« lvs ser Leu ser lev 430 456 «GO
Leu Gly Lys 465 *
<·! 10> 31 <2 ! i> 2160 <212> DMA <2 ; 3> ArtHfciíií Sepenée <220> <223> Íj raliéit n#ês4ânë i«ps s®k vcnssájs <•220 '221> -4Ö0> 31 aagctsgccq ccscsatgqa cttcqgattc -setctcqtgt tcctggeaet cattcicaag 60 goagtgcagt gcgâggtgcs ai:tggt c. tag ïtaggaycâg aggutaaga» gcctqgtgo: 128 xccgtcasag tt;.cgt:§s.^a ggcïigcggt taeaggru-a cnaattaseg gattcat'cgg .1.80 gtciggcagg cuxgggaca iggcctggaa tqgateggtg qeattuatcc cgqgaasaac 240 taegctacat: ataqgagaaa atcceagggc agagtf.&amp;e«a sgaeegcgga cici tecaea 300 agcactgtet scatggigct gteatetctq agatecgaqg scaccijcagt gtacïattgt 368 aeiagagaaq gctacggt'aa itacqgagcc tggttcgcct actggggcea sgqgtacceta 420 gtcacagtcí cctcagette tacaaággge csatccgtct tccccctggc qccctgcrxc 400 aggagcicet ccgagkgcac agccgccctg ggetgectgg tc&amp;aggacta cttccccgaa 548 ccggtgxcgg tgtcgtggmz ctcaggegcc etgaccagsg gcgtgcaca« cmccggct 600 gtcctaeagt cctcaggact ctactccctx agcagegtgg tgaccgtgec ccccagcagc 660 r.tgggcacga agacetácae ttgcaacgta g&amp;tcacaagc cesgckacac caaggtggae 228 aagagagítg gíqagagqcc agcacagqga gggagggcgt ccgctgg&amp;aq ccaqgctcag 760 ccxtccsgcc tggacgcacc ccggctgtgc agccesagcc cagggeagtá aggcitgccc 840 catctgtctc etcacccgga ggcctxsg&amp;e. csccccactc atgeccaggg agagggtctt 980 cíggaítttt ccaccsggct tcgggcagcc acaqgctgga tgcccctäcc ccagqccctq 968 cqcat&amp;cagg qgcaqgtgct qcgctcagac ísigccaakag «atatccgg g&amp;qgkccctq 1020 cccctgacct iagcccacec caaagqccaa actctccact ccctcagctc agácaccctc I860 tctcctccca gatcigagta actcccaatx ttctxtxtgc agagtccaaa tatggtcccc 1148 catgeccacc atqctcaggt aagccaaccc aggcctxgcc clccagctca agöcqqgaea 1280 ggtgccetag agtagcctgc auxagggae aggsrecesgc eqggtgctga cgcatccacc 1280 tccktxtctt ccsxagcace cgagttxctg gg§gg*c<*t caotcttccc gfctccxeccá 1320 saaccca&amp;gy aeactxieat gatetccegg atecxtgaqq tcacgtgcgt; ggtggtqgac 1388 gígagccagg aagaccccga ggsxcagtte aactggtscg tggaxggcgt ggagqsgca* 1440 aat.gccaaga caaagccgcg ggaggkgtag ttcascagta cgtaecgtgt ggtxigcgtc 1S00 etcaccgtcc tgcaccagga ccggctgsac ggsaaggagt acaagtgeaa g§t>::cixkac 2560 aaaggsxtxc cgtíxtcca* cgagaaaacc atctxeaaaq ccaaaggtgg gacccacgqq 1820 gtgcgagggc cacntggaea gaggtcagct cggtccaccc tetgccctgg g&amp;gt.gaccgc 1680 tgtgccaacc tctqtcccí» cagggc&amp;gec ccgagagcca caqgtgtaea ccctgccccc 1240 atxccagg&amp;g gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcccggtsa aaggct.tcta 2808 ccccagcgac atcgccgtog agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagas: .1.860 cacgcçtccc: qtgetqqaet ccqacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtqga 1020 caagagcagg tggcaggagg ggaaígtcti -ctcatgctec gtgatgcätg aggcti-tgi:« I960 caaccsctac acacaqaaga qcctctccct gtctctgggi: aaatgagtgc cagggccggc 2848 aagcccccgc tícccgggct ctcggggtcg cgcgaggatg cttggcaçgt accci.gscta 2200 <at:acr.tccc aggcacccag catgqaaata aagcacccac cactgccctg gcccgaat^c 2180 '.ΊΟ-· J2 <2H> 94 <Ί2> dna
Arísfkíal Sequence <'22î):> <223 > :544«M TI <400> 32
aíjtgtgaggt MmtlggtK cmtmggm tZQW&amp;Mm gaagcctqqt géttccqtea 80 aagtttcgtg taaqgctagc ggctacaggt tcac M ' 210'· 33 <21i> 96
<2!2> DNA <2 ï 3> Artificial Sesaëaee <220> <223» 544gHI T2 <220> <22 Í > <4ÖÖ> S3
gtgm:a£taa tcccgggaât cagtacacta tatataaaa$ aaatcfaaag ggcagageaa 60 egHgasxsjc ggacaccsee aca&amp;gcactg tctaca II <2î0> 34
'2S I s SS -2 î 2 >Î)M: <21S.> Artificial Sequence '220> ' 223 ' 544gBi T3 <220-<221 > 400 - 34
agagaagget acqgtaatta cggaqcctqg ttcqcctact gqggecaggg taeectagtc Bô acagtrcrcct cagcttctac aaagggccca «gaaa OS <210> 35 <2 H» §4
<2 12» DNA <213> Artificial Seqaatscs <220< <223> 544 gHi Bi <226» <221> <400» 35 gg&amp;ctaat.tg cacctcacac- tgcacsccct tgagaatgag tgcg&amp;ggaae: aegagsgags. 18 atxcgaagtc catggtggcg gcaagctttt attc 94 <2 !0> 36 22 ! i > 97
<2:12» DNA <213 > Artificial :Seq*tesce <220··· <223» 344gM l B2 <220· ' <321> <400> 36 gatteccggq atSaàtgcca «cgatceatt ceaggeettg tccegqaqec tgectgaccc: 60 aatgaatcca ataatttqtg sacfctqtagc cgcfcagc ' ~ “ S?' *>·>. ·,>· 1 \4 <2Hl> 3?
<2 \ 1> 93 <2Í2>DNA <213> Artificial. Sequence <22:Û> <233> S44gHiB3 <22Ö> <22 !> <4öÖ> 3? cgtaattacc gtagccttet ctagtaccar «agtacäctge ggtgtsctcg gstctçsgag 60 ai:gaeagci:c catgtagaca gtgcttgtgg agg 93
<210> 3 S < 21 I ·· 2 S <2I2> DNA <2I3> Artificial -Sequent <220> <223> S44gHI Fl <220 .· <22 ]>
<400> 3 B gaatsaáagc ttgecgcùào « 21
<210> 39 <2 H >22 <2!2> DNA <213> Artificial Seqixmee <220> <223> 544g.Bl Ri <220> <22 i> <400> 39 mcnggge ccmgiagn ag 22
<2 !0> 40 <21 !>· 87 <212> DNA <2I3> Artificial Sequence <220> <223> S44gLl T i <22fi> 221 · <400> 30 gcttcccgff gtgacgttea agtgaecc&amp;g agcecatcca gcctqagcgc sïcegtgggç 60 gaccgggtcä ccâtcàcttg täqatcc ' B? <2103*41 '2iS> 90 <2i2> ON A <2D> Arïlnçisil <tm> 544gU Ί 2 <220:· '22 i> '4(n)> 41 taietocacá ääccä|gtsä agceccacaa tt; get cat et acggaatctc taacag&amp;ttt 60 »gtgflgtac cagacaggtt èagcggtt#« 90 <21« 42 <2 i l> 0 !
<21 2< DMA <2 i 3'·- Artificial Sequence <220> <223> S44gU T3 <220> <22 Í >' <409> 42 agstttegcë amattact e*ttac.aagg tasaeateas ecgtacacat tcggteaggg SO Mctsaagtá gaaateaase gtaeggegtg ¢: ' Si
<2!« 43 <2Ü< SS <2}2> DNA <213> Arfiticiai Sequence <22« <223> $44gU 01 <22« <22 D <40« 43
gaaegteace cqjggsagca ggaatxcaga acäacagäag caccaaeagc ctaxeagoca SÓ acrtcatgqt ggeggetteg aäteatee SS
<2K) '· 44 <2i Î' SS <212' DNA <213 > Ari iSc ia! Sequence <22« <223 ·' $44gL· 82 <22« <221> <400'··· 44 etttacctgg rttgtgc&amp;ga taccaagaea aaaaggtgtt cecataactq tttgçaagaç 60 tctgactggà tctàcàagtg atggtgäc <210* 45 <21! * 9(1
<2!2> DNA <24 3* AfS.iik.ird Sequence <220'' <223* M4glA® <220* <22 i> <#0> 45 aac&amp;gsaata agtggega.aa tcttctggct ggagsgaega gatcgsgagg gtgaaateag. 60 t**cacticc gga&amp;ccgcitg .aacctgtctg 90: = 2 ) 0 ·· 46 <24 ]> 20
<2)2' DNA <2)3 ' AmiïoùO Sequence <22o> <223* 544gL! Fi <220' <22 i> <4(sQ> 46 gptgsUeg aagcegeesc 20 <240* 4?
<21i> 21 <24 2> DNA <213* ArOÖeial sequence <220* <223* 544 gU RI <220* ' 22 2' <400* 4? geäCpcgia egtögsm e 2.1 <210*48 <211*339
<212* DNA <213* mouse <220* <223* egér Hmnôkknmlls 5644 VL :l2NB'-s.Zekc;eneláp <22ό> <221*

Claims (20)

  1. <400> 48 gatqttqtgq tgaetcaaac tceaetctec ctgeetgcca getttgg&amp;ga testas* tfct SO àtçtcttgci g&amp;t.«.tag*«s gagtcttgca a*«*8t.tatg gga&amp;caectt. tttgscttgg 120 tacctgcsca agcctggcea qtctccacag ctccccatçt atggg&amp;tttc çaacagattt ISO tetQqggtqc cagacaggct cactggcagt ggttcsggga cagatttesc aescaagau: 240 agcacaataa agectgaqqa ettqgqaatg tattactgct tacaaggtaç acatcaqccq 560 tacacgxtcg 0»§S99S§M eaagctggaa qtsaaacgt 3ϊθ <2 H» 49 <2=î> 383 <212> DNA· <2?3> mouse <22Û> <223> egér qjqqoklonális 5/49 VltI3H8*S£sfeveqDíqa <22ö> <22 i> =' 400 ··· 49 qaggtccMe: fegtóagcagtc tgggactgta ctqgcaaggc Atgggqcttc egtgasgstg 60 tcctgeaagg cttctggcta caggtttatc aactactgga ttcactgggt aaaacagagg 120 cctgggcagq gtctagaatg gattggtggc atta&amp;tcçtg gaaaitaatta tactaqgtat ISO aagaggaact tgasggqcas gqccacaêtq actgcaqtci c&amp;tccqecag cattgcctac 240 at.qgaccts.-a gcagcctgac aagtgaggac sctgcggtct M.t<-sçtgtaç «agagagggc 300 tatqgtaact àcgqgqcc?:« gtteqcttac tggogecagg ggâctctggt caccgtctcc 360 tea' ' ' ' Ml <2i 0> 3ô <21i>9 <]!2>»â <2 !3:»:Aïti0eiai Ssigscneq <r:2.0> <22.3'> o1igoiîukSe<.;nu kincinuHon belüli szekvencia <400> 30 gccgcoace % <2IO>5i <211> KH <212> DNA <2 i 3"· ADiOt-isi Sëq9#(cç <220'· •'22.3:· 5' oügOTSukkioiid iânciaditô • 400 - 5 i qcgcgcaaqc ttgccgccae catqqacttc ggattctctc rcgtgttcct ggcactcatt 60 ctcaàgggaq tqcagtgtga ggtgcagtxc gtcgagtctg g 101 SKâi^olâOqsklgéOÿpôftîqli; :Κ Ilprás kcpleD/möíKíitisf «sîitl#amie^“S2§^ia^#?1liôaspg fe«?t|ugáíwmók eDâÛiiâsfeg smdÿïïkmik :!09» alá.çMkkexsieôiaS:afteony konjagáftóágö frakciója (LCF), Sftos: Pt jqleqtgae é 0 a nanyag. X jelentése hldrölizálháté fcape;miittmj#ö0, ítnjeliy IjMsiâtsdtttm'i &amp; -M. konjugátumból miótáa kötődött éslmiépeó a »ο!Μ&amp;0 W jelentése aiikheisrndo; :s?i |e|<íS)íésg s:Î:îs?tiïok köí|ugácMs:ΐδ;«ϊ?ίί| átlagostólhéltségm oly módon, bogy a eitotdkikns drog kiMibokij a: :k0!5|tig;boor 4 P íömeg^rát aikopa; ég (OíPSS-Wjín jelentéi culich^)M^»-s%ánib#^ amely eljárás a köveiket lépésekéi fpglaljdniigáhSdt p>.&amp; !plíi^nik4n‘szárma2ék hozzáadása W sHöösbpghofc ahol 8 * £l:P«teg% az eltepatsysgra vonatkoztál va; (2¾ # ::^fôbt^iÇôt‘aî5toi#k és az ellenanyag inkubálása nemmdkieofil, pi-otein-kompanbihaj ptríéreii oldatban a kőritibelöl S - 9 pH tartományban monomer csiotoxikus szét? hordozó konjugátumoí tartalmazó készítményt hmtvírlótre. ahol az. oldat továbbá tartalmaz (at eíanolt és (b) adalékanyagot, amelyek közöl iegaMbb egy: 06*0:1$ ijdtrhonsav vagy sója, a következők közöl kiválasztva: dekanoás, 100 mM nanonoát. ?Xi t»M ondektmoáé, 3 mM dodek&amp;noát, és alto! az mkubálás körölbeioi 3CAC ás körülbelül. 3SA7 közötti höínérsöklet-· tartományban van végezve körülbelül 15 porc és körülbelül 2-t óra közötti időiarsonnmybao; és iá) a {2} lépésben előállított kottjugátura kromatográfiás tdválasgtást öljátásoak való alávetést- 4Ί0 tönteg%: telítettségű és 10% alatti otennyEégii alacsony konjugat««*:lÄöldPii'tÉèftdelkesô Ü..CF) monomer eiiotoxikos éitüeheamtcio/ ellenanyag kutyngátimxok elválasztására ö kotpfálatkm ellenartyagtóh ealtcheatnicin-szàtmâzéktôl, ás aggregih konjugátumoktöl. Zi Az I. Igénypont szerinti eljárna. -Utol az ellenanyag ti kövoikéZÖk állal álkötött csoportból van kiválasztva: Shönoklnnálm ellenanyag, klroéta ellenanyag, hmnán ellenanyag, ImmhnlÄ éllsnaityag, egytáncú ellenanyag, és biológiai aktív tiagmens, ahoi a biológiai aktív fragmeos bab, módosított Pah, Fttb\ F(ab'}2 Vágy Fv.vagy öebázíáne monomer vagy dinam 3. A 2. Igénypont szerinti eljárás, ahol a humanizált olleaaoyag a C022 ssplekzmi antigén eilen irányai. •k Az \ igénypont szerinti eljárás, ahoi az ellenanyag ÍB0 10 Ä: 19 szésánti: székyeöclát tartalmazó könnyáláöó vaibbíÜN íágios eV Sí Q 11 > NtF3; szerion ,./ekvenuat tartalmazó oehezláne variábilis tégínt tartalmaz 3. .Az i. igénypont szerinti eljárás, ahol az ellenanyag SFQ ID Nö:28 szerinti szekvenciát tartalmazó könnynláncot és SEQ1D NO:3ö szerinti szekvenciát tartalmazó ttehézláneot tartalmaz, ö. Az 1. igénypont szetáml «IjábllyülioliMilteppiiia kövÄÄet: tártaíÉi^e ϋ^.ιΡ'ίΜΟι I .miftt £08--00 mO. 10 NÖ;2 vagy IIQ 10 NO: 13 vagy SEQ 10 NO: IS vagy SEQ 10 NO: tó vagy a SEQ 10 NO:23 S9-Ó&amp; öhlalíáneal vagy a S|| ID NO: 2? 3Q-6ó. okialíáneai mint €0114¾ SË0 10 N0:3 mim CDR-B3, SBQ 10 NON mint C0R-U, SEQ ID NO:5 rmntCDR-U. és SFQ SD NO:ö mint C0R-1..3. 7; A 6; igénypont szerinti eljárás, ahol az ellenanyag a REQ 10 NO; 27 iSÖ® oidaiianemt tartalmazza mint C0R Ή2. 8, A 3, igénypht szértotí éliátis, ahol a hom8ttóll»ÉCD^.«Ífend8yag0Öt^fiblí:«l}őR8Rya^mRe!y:olya» váriátis eilooanyng, amely afinilás érlelési prmóköiiaf van nyerve és megnóvekedetí a hamán £022 Iránti speclinása, 9; Az 1, igénypont szötinti el^ás, ahol a caiteheamíeltt gajntna-eaiiebeanboift vagy N-aoeol-gatntna·' cabcbeamiahi. 5y. Az 1. vagy 9. igényem! szériáit eljárás, ahol a caiidseatnici» htrikciomtlizàlva van 3- miskaptoCvmetil teiattoil htdntzkidsl.
  2. 11. Az !. igénypont szerinti elpräs, ahol a hkiroSizálhaíö ktrpcstrlörnoktknis 4··(4-öceSiI tenoxi) bu; dosa v (AeBut). 12'.. Az h. igásypem sjsæmti eljárás, aboi a (2)(h} lépés sdétidí adalékanyag tekantPb ippye, bogy a köoeaföb-áepiái 30: ás: Sö tűM közötti.
  3. 13. Az 1. igénypont szerinti eljárás, ahol a-(3) lépés szerinti fcrösbápgpflás elválasztást eljMyíbéfetkigápsos kmtnaiögráfta (SEC).
  4. 14. Ag 1:. igéoypora szerinti eljápQ ahol a (3) lépés öljáí'és MPLÇ. WbC esgy Fephacry! S -200 krínríaíiígÉfiA
  5. 15. Az 1, igénypont szérss«! éjjtete öböl á 0} lép# sZöritSti p-oxtóíög5ÍIáá : élvipszps; eljárást hidröPb kölesönhatási knenaíográfla (H!€). lé, A II, igénypont sspribb öp#h atel a lödtölöb kölcsönhatási krom&amp;ksgsáfiávai a következők álkahnazástai van végrélpjtvítiFhenyl Sepharose 6 First Flow kvomatugráiiás közeg, Botyl Sépharoxe 4 kt.-,i Flow feroiyslögááfiás közép ÖCSyj Sapharose 4 Fasí Flow kromatográfiás; közeg, Toyopéárí-' Filter-6>«M kromatográfiás közeg, Míiéiö-Qrep meíhyl HIC közeg vagy Macro-Prep t-Butyi HIG közeg.
  6. 17. Ä lé, igénypöat: sgérfeti eljárás, ahol a hklrméh kőlpsöithatási Qönraksgsáfm (HIC) örüli Bépbárösé A Pasi Flow kromístog;állás közeg alkalmazásával vas 'végrehajtva, IS. Készítmény. amely Pf(-X«S-S-Wmi képiéül rnoftomer könjügáiélööpb tartalmaz, amelyeknek 10% alá esökkesstdt malacsööy kötpgáltságö Oötesója (LCF), ahoi: lejelentése anü-CD3z ellenanyag. X jelembe hídroiizáih&amp;tó :kpiC8öiÖbieteki.ite Sötey képes ÄsaÖäditäni ä epieteamseteszärrbazököi a konjugituntból mimért kötődött és beléped a sAssgtbe, W jelentése ciillbipataicia; m jelentése a bszíítotf konjugációs termék ál Ingos teilfctii$gj§j pj;g jmádÖ^/Hái^S cállOh^PÉln ö köftjugátüSt 4*· .1:0 tömegjét isszi kk és (-X-'S--S-W)m jelemése eaiíebeatecteszár»ía.zek. 19. A !8. Igénypont szerinti kexziónény, shot az anli-C022 dteftátiyig: g,|ÖY«tköÄ -¾¾¾ .átkötött csoportból van kiválasztva: ntonoklonáiis ellenanyag, kisnéra ellenanyag. ItUínÉl· éilétianyág, inimapiaált elienartyag, egy lánc« eikarmyag, és biológia ! akov fraesnem, ahol a biológiai aktív (ragmens Pab, módosítóit Fab, Fab', F(ab')2 vagy F v,vagy nehézlánc monnsner vagy dimer. 20. A: j# jgéhyptS!?t SáéHte: öljárás, ábö; áz anlbCD22: éjlérülttyág SEQ ÍD M(M9 As;ëiiinti sxekyénölát iádaiíbazö köühyöiáitc variábilis régiói és SEQ 11) NU:27 szerinti sgekveirciéi láttaImazo nshéziáne variábilis régiót tatlsJmsA·
  7. 21, A IS, igénydönt szerinti készítmény, ahol az anti*C022 ellenanyag SF.Q ID NO:28 uennii szekveneiát. iaAtilnpizö kbnnyiiíóneot to. SEQ ID 140:30 szerint 1 szekvenciái tartalmazó nehézláncot t&amp;rtalsnaz
  8. 22, A liáigébypoitt szerbül készítmény, almi az ellenanyag olyan nehézláxteot t&amp;ttalma/., ahol a variábilis <iomén tt kővetkező t.:í)R^ket tartalmazza: SHf| 1D NU:I mint CDR -Hi, SEQ il> MO;.2 vagy S£Q 1D NO. 13 vagy $FQ 10 NQrlS vagy SEQ ÍD NO:lb vagy a SEQ 10 NO:23 50-66. okiaüánvaí vagy a SEQ 10 NO: 2? 50-66. oldaliam:;» rmot CDR-112, SFQ ID HO:3 mini CldR-FB, és olyan körntyiHánmií: lartabnaz. aboi a variábilis dómén a következőket tarttdmaa« EEQ II) NO :4 midt CpR4:,i, SEQ © MO:| mint es SEQ 1DN0:6 raint CI.) RE .3. 23. A 18. igénypont szerinti készítmény, ahol as tmti-CD22 ellenanyag a kíjivétkóMNi;;$äitapnazz.a: SEQ IQ NO: l wißt CORE I i, SEQ ) D HO 2 vagy SEQ ID NO: 13 vagy SEQ ID NO: i 5 vagy SEQ ID NO: 16 vagy a 8¾ ID NO:23 50--66. old&amp;lláncai vagy a SEQ ID NO: 27 5tM6. oldaliâncai mint: GP10H2, SED H? :NQ:3 mint CDR-H3, SEQ ÍDNO:4 mini CDR-I.I. SEQ ID NO:5 mißt CDR-L2. és SEQ ID ND;6 mint CDR-&amp;31 24. Λ 23. igésrypont szerinti készítmény, ahol az ellenanyag a SEQ il> NO: 27 Sb-66. oldalláncúit tartalmazza mini CDR-H2. 25. A 19. igénypont szerinti készítmény, ahol a hmnanizáit miti-CD2:> ellenanyag CDR-gmEoU aatEOD22 ellenanyag. 26. A 19, igénygo«? szerinti készgmény, ahol a Irntnanizáit amECEQI ellenanyág CPE-paMi ellenanyag, amely olyan variáns ellenanyag, amely affinitás érlelési protokollal van nyerve és tnsgnövokedetí a humán CD22 iránti speciEtása.
  9. 27. A ÍS. igénypert! szerinti készítmény, ahol hvtöjüh ákéepipr yázrégiókat: és hetm hnmán donor CDR-oket tartalmazó variábilis domém tartalmaz. 28. A 37. igénypont szerinti készítmény, ahol az eifenarsykg péhézláne variábilis dómén humán akeeptor vázrégióí a SEQ 11.) NO: 21 és 22 szeriïitii'ifôkVîêP^rtîâtiiÉihôâii áz E. 28,,. 48.. 72. és 97. pozíciókban a SEQ 11) Nö:8 szerinti szekvenciában. 29. A 28, igénypont szerinti készimmny, ahol #feüeiSg továbbá sonor 0Ídal.ÍáttétÉ8t: t5aá4Íón?l Óv SEQ 1D NO: 8 68. és 70. pozícióiban. 30. A 27. igénypont: szerinti készítménye ahol az anti-CD 22 ellenanyag olyan kOnnyütáne variábilis doniént: tartalmaz, amely a SEQ ID NQ: 17 és 11 szerinti szekvencián alapuló humán akceptor vázrégióf tartalmaz és továbbá donor oidáiláneökat tartalmaz a 2,, 4% 1¾.¾ M, és OS. pozieiÄsp a SEQ ÍD NQ:7 szerinti szekvenciában. 31. A 30. igénypont szerinti készítmény, ahol a:z anii-CD 22 ellenanyag továbbá donor ©Idalláncöka: í-utabnaz a SEQ ID NO: 7 3. pozíciójában, 32; A IS- igénypont szerinti készlimény, álról az aszíE€P22 ellenanyag: SEQ $p NQ;7 szerinti szelvenetái;: íartaimazó ^nhyöMn§- vaÄÄ SEQ ID NQ:8 szerinti szekvenciái: tádaiOtazó nőbéziábfe: yártáMÍS régiót tartalmaz,
  10. 33. A EÉ :lgÉiypt«"»ÂI ghöl az 8»li-CD22 eíienattyag osímkóh donof QDR székvépetát tartalmazó hibrid C’llf tattáimaz, aboi a donor CDR hiányzó részét egy eltérő szekvencia hglyetieSíti és tnöködóképes CDR alkot. 34. A 18. Igénypont szerinti készítmény, aboi a ealieheamiein gamma-caiicheamicin vagy N-acet il-gamma-naiicheumlcin. 35. A 18. vagy 34. igénypont szerint! készítmény; ahol a éálíebeámioln: Éinkciotiábzáiva vaiiQviiparkaptp^S^mebi Ománod hldrazíddák 36. A :18, vagy 3$» igétíypöní szerion készítmény, ahol a hidröilzálhíttó kapesoiotnpiekoia 4;44^geetilRnöxi) butáasav {AeDat).
  11. 37. Gyógyszer, amely a 18. igénypont szerinti készítmény terápiásán hatásos dózisát tartalmazza. 0)2:24 espresszáió prollieratív mndplienesség kezelésében tórténó álkalmazásra. Μ, A 37. igénypont szerinti gyögyszor alkalmazásra,, ahol a késgitmÉf ter-ápiásM ^stásos dózisa sztuAuiáo, l^eiarfi«,. iàmvéïï&amp;m., «ntrasne^Älss«, .»sadenpátis&amp;n,. t«sgk«îi% miranäMiiass, fc^pten, «iiietâîisari, inosmtgipiiisan, skuhíingváiisan vágy tpktÉlsán adható N, 19, A $% ahol aíkészltmény ^bráp3á«,an van beadva, 40. Λ 37. igénypont szerinti gyóíá’szerajNmazásóSí shökkfíöiílbr&amp;tiv reó#iiehesség sík, 41. A 40, ígéhyp« szerinti gyógyszer aikáhratzásm, *Pftft£fefeegte&amp; 42. A 4 i. igénypont szerinti gyógyszer alkalMassra,.ahol a B-sejtes rosszíndutótó teódehsitésség Mii 43. A 42. igénypont szerint; gyógyszer alkalmazásra. ahol a leukémia CD22 sejtfelszíni antigént expresszál. 44. A 4L igénygöstt szerinti gyógpzér álkalmagásm, ahul a 0Aejtes rasszmdulatt rendellenesség ítofém 45. A 44. igénypont szetkrti gyógyszer alkalmazásra, ahol a limfóma €D22 sejtfelszíni antigént expresszál 4ó. A 43. igénypont szenöti gyógyszer jdkako««ásí% ahol á 13-sejtes rosszindulatú rendellenesség a követkézók által alkotott csoportból: van kiválasztva; :Mm*j#dgktfe '.Mfóm* akut itóÉéÖíkus leukémia és krónikák iirutóeitlkus leukemia. 37 A 30, igénypont szerinti gyög>vzm alkalmazásra. alktlia rák: kereíitdtua. 38. A 30. igénypont szerint; gyógyszer alkalmazásra. ahol a rák szarkóma. 49 A 30. igénypont szermti gyógyszer alkalmazásra. ahol a cidícnetomem-származék ea¾ÍPM83éiÓjÓ^|J¾iÜiïiSr cabcbeamtein vagy M-aeet i1 -ga;» o»· eaíiehe&amp;mi e in 50. A 40 igénypont szerinti gyógyszer sikaíUiazásrs^ahól kMsziteíéóy égy vágy több bioaktiv széné; együtt adható be,
  12. 51. Az Só igénypont szerinti gyógyszer alkalmazásra, ahoí az egy vagy tóbb bioaktiv sz.er a következők által alkotó« esöpotlból van; kivaiüs^vti: éiiént«íyagnk: növekedési faktorok, börmtmófe, éltokpk, apiidtökmöfiök, xantksok, mteriétikínök, interferonok és eitotoxlkus szerek. 52 Az 5 i. igénypont szerinti gyógyszer alkalmazásra, ahol a bioaktiv szer ellenanyag. 51 Az. 52 igénypont szerinti gyógyszer alkalmazásra, ahol az ellenanyag B-sejtes rosszindulatú rendellenességekben expresszálóóö sejtfelszíni antigén ellen hányni, 54, A® J3, Igéhypösi szermi :póg>wr ApiSÄra, "$M a i-seites mszÉiPiÓ· expresszákló sejtfelszíni antigének ellen irányuló ellenanyag a kővetkezők által alkotóit csoportból van kiválasztva; anti-CD 19, anti-CPSó és antí-Cf>33 ellenanyagok.
  13. 55, Az 54, igény ptmtszeriBii gyógyszer blfeaítsazssra, ahol ^Mtr€M0ótíéÚMy«f;iteÍgáfe.·
  14. 56, Az 51. igénypont szerinti gyógyszer alkalmazásra, ahol &amp; oiiokinek vagy növekedési faktorok a következők által alkotott csoportból vart kiválasztva:interlenkín 2 (11..-2), TNF, CSF, éiM-CSF és G -CSF.nak
  15. 57, Az 51. igénypont szerinti gyógyszer alkalmazásra, ahoí a hormon szietokí hormon és a következők kozó; van kiválasztva: ösztrogénck, anörogének, pmgesztinek és komkoszteroidok.
    54. Az 51. ígénypc-nt szerinti gyógyszer alkahnazásra, ahol a ciíotosokus szer a következők által alkötótl csoportból kiválasztva: doxorubicin, daunornbiein, idambícm. ailartibtel«, zoníbietn, utitosantrop, epirttfeíéiój katubteio:, liögalamycio, menogarii, piiarubieut, vaírobicln, eltamblui gerncitabt«, tri$oridí% áneitábl«, enoctrabin, äzaeilidän, doxíOorídta, pesiosztabfi, bfoxnririn, kapecitabin, kiadnom. dedtabín, ioxundin,: fititlarabln, gOugerotm, puromyeín. tegafht, tíaxoferin, adriamydo, eíspzlatíh, katboplatin. etklófeszfennft :.Éécarb&amp;2in, mltoxsntran, bléoroyd«, mekloretatrdn, /.prednizon,. prokaíba?j«, V»dotrex.àk iurouraeiiok, eiopc&amp;id, taxol, Msííbanaiógok és isitomplö, #'. Az SI. igénypont s&amp;srtsti gyógyszer sikaítuazásre,,atói &amp; készítmény kezelési rend részeként egyöt-adható' bg citotoxifcus sareék egy vagy'Âh^mbiaàdèjàV8i«ÂôIa dtotaäikas szerek .fcoaafeíbádója a követkeÄ által alkotott csoportból va» kiválasztva: A CHOPF (dklofoszfamkl, dtpmgöfclcin, viokdsztih, prebelzosvésprbkarbazin}; lydoxsaithieis, viakríszijWs ps-eddizon):; C. COP (ciklo ítész faraid, vnikrisztírs és piedni/on); F>. CAP-BOP i^skbíHís^femglj ápxördbseat, patk^^zlöfPieoöjplBk'^iiferfsztla és |>tíídaígöp:k I.·. tb-BACOI) (ntetőtrexét, bigottból«, doxombící«:, <bkiöhtszh««id, :vmktisxiin, dexantdazmvés íenkevorín); I·. ProMAŒ-MOPP (píédshzóm 8*etoítxstát:> dnxm«bieisg dklölbashmbd. etopozàh léökö'VSíla,· .jnekloetamsß) viokrlsztm, pyéíh'ddörrés
    0. ProMACEX’lytaRÛM lipredhiitótk: metettexd, doxortibiéin, dkloiteSmid,. dopæàd,· leukovorin, eit&amp;mbi«, bieamydn és vinkbsatin):: M. MAkOPvB ídjplpltgxlk dpxonibícíavcíkioíös:xlb»vid:j viakrlskibippreddlaop, bleomycia és leaköversdk
    1. MOPP ítgeklbéÉmhk y|b|öl§#|fi*.pr#hköa ékpmkasbípíit); j. ASVD sdsblpxííOiés íMatba^bí}; K. , MOPP íoteklössantm, ylskíéssíSm, padaiaa» és prokarbazi»} váltakozva AEV-vel fádííamyeííPdöxsmbivia, blso!«)feiapva3ibiss2tifi^ L. MOPP (mekkscta«»»,. vifikíléafe, ptednizon és prokarbazto) váltakozva AB¥0~veÍ fa^samíem/dsjxoi'abíem, hlcotnk In. vmblasztin bcdakarbapa); M. C hSVPP (któraoiboeií, vtnbiaszfin, prokarbaxin és predaizon); M. SMVP - ! ó (líosxfamid, mebáraxáí: és empoxid); O. MIMÉ (inetibgag, tibsaíamid, Kietetrsxät és eiopnzid); P. DHAP {dexameíazon, «agy dózis« eitóribin és cisxpía-in}; Q. ESBAP (etopazld, meiiipmdaixolon, »agy dózisti dmmbt« és elszplatm); R. CEPP(Ü) (piklöiösyOípib. etópoxid, prokarhazín. predfitzöo és bleomycin); S. CAMP tioorusztio, nhíoxantro«, dtarabln és predaizon); t. CVF··! (cíkMíbsztamid, vinkíisziio és prodólgnab
    0. BSHQP (etnpozid, níciiipredaizoio«, «agy dózis« dtambtig vinkrisztin és eiszplatlb); V. EPOCH (etopöztd. vinktisztip és doxorebieia 9b órán kérésztől «kiot^damiê |Äp: ácsaival és orális prednizorimd); W. ICE (iíoszfatnid, kmbopiatin és etopoxid), X. Ci iOP-B (c;klotósxfaodd, doxorubicin. vínkttsz-in, predfiízo« és bleostida); és Y. P/DOCE (epirobíein -vagy doxorubicin, viokrisztin, cíkkobsziainjd, és prednixon).
  16. 60. Az 5\. igénypoo? sxarimi gyógyszer alkahoasésra, «hol a készítmény kezelési mid részekÉttfite^lkus szenek egy vagy több komhmádéja előtt adható be, aböl a ettotoxikus szerek kombinációja a kővetkezők által alkotott csoportból van kiválásaivá: A. CHOPP (cikíofoszfamid, doxorubicin, vinkmziín, prednixon és prokarbazi« >; B. CHOP (cikkdoszíamld, doxortihicits, vinkriszlia és pívdaizoa): €· COP (oiklÄsziäßud, VÄrMiß és prednizon); p. CAP- iX>P (eildoibszíanrid, doxorabjeiß, pmkaíbaxia^feosjpin, vinkriszbivés pzedbizost};: mÆ&amp;ÜOD (rneiotrexst, bleemÄ, ?: Pn>MA€E--MOPP |5rsdoizr>o, nteíoPsváp doxombido, ciMofbsziaßdd, atopo tê«fc§«i8s mekioat&amp;öiíb vinMsztin, psydnison és pfok&amp;rbszibk 41 ProMACEX'ytgBöM (prednizos, .meíöíraxá^ dos<n:«bk*n, eikiöibszfetdd, eíppgzfd.. !éukovgtins cfcffsfejfe* fcisomydoJs visikmzdtä); i-L MACOP^B i^pskkrexái, predni^in.ibldöroyÄ i. MOPP Cntskfepipprin, viskdsziiiv píedibzö&amp;ésprbkarbaxin.p j, Ä^Ü#dHas»ydij^döXömbiöl», bleoßtysbgyinbiasztis! és dakarbaam); :K MOPP (mekioatamiß, ^mkrisadip píredftiK«í^ és pmk&amp;rb&amp;zin) yáiiakom ABV*ye|4Ä^ycfft^öXömfeyai ife<8ay«íö,. vinbiaszíio); L, M<SM'îmkto&amp;{atftfet^ïikrfsâ*i%;p6éRteos és pÄsdsazip) «Sitakoava ABVt>-v«|j^MÄ8to#k^j!»feie^ bleosuíeirr, v inbiaszibr és dakarbadn); M. CbiVS'S''(kksraß-bucd. viobkvadin, prokarlraxitf és gredtdzonj; K. iMWdb (iEtsxkßft id, fößiokgxdt es ekïpozld); 0; MÍMl'0aetíl~gag,:ífési8tóld,.:mMteét és eiopozid): P, CHAP ídexaroetaxor·, nagy PöäM ődadbin és Oszpiatiß); Q. ES HA P kdopozid. meiilpredniKOioo, nagy dbzisó charabin és eisxpiatin); Rv CEPF(E) (ölkißkiszüßßid, akspozid, : prekadtsz®, prödßi®® és pieomyeitrg Si. CAMPyilpSßUsKßß, arilökkbbpísícítínpbiT; és pfednizon); T, CVF- í (dkkbosxfárnid, vinkrisztin és prednizon);
    0. PSHOP ietopoxid. meuiprednizoíon, nag> drtrisn cs·arabin, vinkrisztm és ciszpiatín); V. EPOCH ieiopozid. vinkmziin és doxorubicin % órán kereszt® dkiofoszlanud bál asz dózisaivá! és órába prednizOKöidk W. ÎCE {ifoszfamid, karbopiadn és esopozid); X. CHÖP-B (dkíofoszíárnid, doxorubicin, vinkriszbn, prédáikon és bísomicin); és X. PíOOCiE (épirubieín vágy doxorabiein, vinfcnsÄ, éikiôftÂasÂêspfèda^pa). bb Az $1. igénypont szerinti gyógyszer aikahnazásra, aboi a készítmény kezeiési rend részeként citotcoakus szerek egy vágy több kombinációja után adható be, aboi a bioaktiv szerek kombinációja a kővetkezők aiiai alkok® csoportból van kiválasztva: Λ. CBOPP (eikkrlbszíámíd, doxorubicin., vinkrisztin, prednizon és prokarbazin}; B. CHOP kikkduszbanid. doXorubieiß, virifcrisxtisr ds prsdßizoß); C. COP fcikloíbszfamid. vinkmziin és prednizon); D. CAP-BOP (cíkfofoszlámid, doxorubicin, prokarbazin. bleomycin. víakriszda és prednizon.!; E. m*BACOD (metotrexáí, bleoroio«, doxoroindn, cikie-fosztanod, vinknszíin. dexarnetazon és leukovonn); E. ProMACL-MÖPP {prednizon, ntfötopyxát, doxorribieiß. cikiofoszfamjd, etopozid. iétikovprio. niekíoétamio, viakriszün, prednizon és prokarbazin); <*· PoíMACE-CytaBÖM (prednizon, meíoírexát, doxorubicin, erkioioszfatnid, etopozid. íeokoun*u, citarabi® bicosnycío és vbsknsxíiu); H. MACOF-B (metosrssâï, daxsrubMs. cikkbbsdknid, vlÄteins,Sptsdslz<«ij bieomyclR és lÄovöBn); Í. MOPP BriekiaeGaasg ÄMssbns paadmsxaí és píökarbagmX j, AB¥D (áddaSjyctí^/döx^áFfe5nvbléomycÍií, visÄsziin éa dakairbag®}; E. ΜΘΡΡ (mékiüdsabn, vldkdszíag prédák»« és prokarbsKÍSí) vaíferközva ABV-ves (adria^eijyd^örifSäeäm feiőóíöjféte, vinbiaszdn}; L. MÛPP ImeklsÄmm, viftkrisÄ* predaispa és ipakarbsKirt) vdbaEazva A8VD»veí ^dfl^äein/dTOÄÄ* biőomícnt, vinbiaszda ás dakarbazía); M. ChiVPP {Kloraoshudí, vlnblas.d:ia, prokarbazm és prédádon); N. 1ÄP-16 O. MIME ipötíBgsg, ílöszlásrsid,: íasíobmát és et<jpEdd)j P. GBAPIpexametagön. nagy dézísü citarlbm és dszpldib}; Q. EEMAP pppössidi: a^dlpradakalmg nagy dózisa dbsrahinés dszplaiin); !E CEFPP} pMofoszíkndik döpodd, prokarbazfc, predniKe^ésbleoagtón}; S. CAMP (feoiuszEo, mboxasíroín dtazabia ésprsdaizoa}; í, GVP-d {eikMtóíamíij: dakrlszba: ésipmibizöo); IfüESHöP (eiöpasdd, a^Gdprednizölon, Fagy dbzísú eitarabia,: víakríszdn és ciszplatín); SPOCH .(etöposöüfe viakîiszba fés dö5ía?í.jbíPsa 9b órán kerassSül áiklöföszfamld bblusz dózisaival és orális predmzo«n;d); W. IGE pfsazikaid, kwbopiads ésMgpö2M|;: X;. ÇBÛF-'B ((dFlaíbszIbaiid. dösoraldein, vmkdszs:®, predalzöa. és hloondda); és Y. F/DOCE {gpimbiel« vagy doxorubidxu vmkmztbs, dkíöiöszimbi, és predrnzoa). $L,Á S íd Igénypaat sgerbwi gyb^»?»Äai«ia«Äiiy ab«? .».ké^Möy'B~s«|tdSfSMáMőkíá ronddíánasségbea íabígén alien Maytílő '»ltoaftyägp:lk«^Ä:^9.''l*esd^s* és adod: esdbe« agy vagy asbb ciíöíös&amp;as szer kambindesbt tanslmaz kezdési rend részeként ahol a dsoíoxikas szar koaibimkkpa a kdveik&amp;zök közaí vnn kiválasztva: A. ClIOPP (dkíoibsztamiá, doxorubicin, vlnkrBzün, prédákon és prokadw.in}; B. C11 OF (c ik b fősz fa ín i ti, doxorubicin, vinkriszan ás prédákon); C. COF (ciklofoszfamid, vinkmzbn és prednizoni; D. CAP-B0P (dkloibszrbnád, doxofabiáin, pöiarbazán, Meomyda, väafcdsztb? Lés |S«ddz0o); E. rn-BACGD ^eioô-e^Méomleiôpiexoï^Wefe.Âôteztol^.vlBîa'tel», fámmámm és knkoveri«}; F. ProMACE-MOPF (prsdnizon, doxortÄln, dMoibsgiiraid, stepssbE 3«akovon»5 mefcleetemia, viakrísztla, prédákon és prokarbazin): G. PívsMACB^CytaBÖM ípsadaizaa, mdoPezaí, dsaarubMa. aiklolssgfámíd- eföpodd, leukovorin* dtáaabía, hkoatyeia es vnifeíszim); B. MACOF-B Caeiodexát, doxornbidxt, dkíoíbsxíbmid, viokmzbn, prcdaizoa, bleomycin és teukovodn):; i. MOPP (meklodanssn.. vmkxisdin, predxtizoxs és pf^karbazia}; 1 AB¥i3YsdriamyclaAdoxemb(cia; btearnycbp ddd&amp;sztiii és dskasbazsa); K. MÖPF laíékíöataiiaia.j vdMsziííg písdaÍKöa és prakaxbazía) váiiaköKVS: ABV*veí (adfiaaíyaíö/daxxbybícía, bifonvycin. viablasztia): L. MOPP vinfeisztirg -preétzôn és prokar&amp;sxls'j váltakozva ASVlNvel (adfiamÄ/dösorufeleäfc bíeomleln. vioblasztin és daksrbazm); M. CfclVPP (klorasobucik vinbiaszib·.. prokiirbazia és predrdzon); N IM VP-16 (iidsziamlbj idstötrósál: és etopoxid); 0> MJME (>neid^g,1f^femblpiftbt«tyésÍÉ^ibgozld); P. ÖMAP (tkx&amp;metazon, nagy dózisa ciiarihin és ciszpkain); ÏL €BBP(B> (eíkkrfösziatnisl eföpeszid, prokarbazio, preönixon és bleomycin); S.CAMP (lomoszitn.. nmoxanírorg cltarabbt és prsdniznmk ï. CVP-1 lelkkslasafamtd. vinkrísaw és prednSzon); U. BSHÛP (cíoppzid, metHraednlzolon, «agy döÄ-dktolild*' vmkrisæfeis ips^teö»)» V. ÿ:-EPOCH {etirpoxldç vinkrlszbn es doxorubicin 9b bran teesziüb eîkldS>sKiamid bóiusz dózisaival és orâîis j»pdPim«aî}; W. ICE líiössdaaiííl karlæpiâiir ês etopozld); K. CHOB4i:p!kiob>sz.f3n5!il dftxonsblein5 mkrtói«,. ptednlsöH és bteojdfcidJ; és Y. Ρ/ΡίΧ,Έ {cpirubicm vagy doxorubicin. vmkrímt«, ç-iklolbsxlkpS4 és prgdnPon). 63. A 62. igénypont szedőt} gyógyszer «Ikatosrisra, ahol a ^sejtes rasszinddlanr rsndéííenességeMíen «\prcsszaiod6 sepmiszinl antigének elle«' imnyuló eiierta«yag a kővetkezők által alköSolt asoportból vm-kiválasztva: aoti-CDI9, antl-CPJOés aotbCíBS ellenanyagok. 64. A 63. igénypont szermtí gyogywr alkítktíazásta, aböl az; ajs4CD'20''«?lteaptg..ritein5Ö»i. 65. Λ 37. igénypont szedőd gyégps^r alkáiottóssd^ ahol SK adtd£’022 ölíéoanyag SEQ ID MOdS spdotl szekvenciái tarosiowà-.ÂoyôiéSé vgdábiii»:tégtdí bs Sit| ifä MO;27 szerlPts szekveoeiál iartaloíazö néhézíáne: vötiabiiis téglát tamfeÄ... 66. A 3?. igénypont wrinri gyógyszer alkahnazásra:, ahöl az abtMIB 22 ellenanyag butnanlzáit ellenanyag és SEQ ID MO: 2$ .«-/érinti szekvenciájú könnyüláneot tártain»,: ó". Λ 37. igénypont szerin· i gyógyszer alkaisramsea. ahol az anibClQ 22 ellenanyag Idananlzáli ellenanyag és: SEQ IP Nik 36 hzeíii:ni|íszekyeneit|á sehéaMneöi tartalmaz. 6|. A: 37. igénypont s»eH«á g^gytpríalkaiaíazéara, ahol az aöíbQB22 ellenanyag SEQ 10 N0:2S szerintii szekvenciái tartitlsnazo könnvüláncot és SEQ ID NO:3Ö szerinti szekvenciát tartalmazó oebézláncoi tartalmaz. 69. A 37. Igényponííszerlnti gyó^szeráikalmsizósra, ahol az antK'D22 eiten»nya§ olyan nehézláneot tartalmaz, ahol a variábilis d®8Éa:®§βΐι-CPfUrittgftSma?.. atnelynek a szekvenciája legalább egy a következők közöl: SEC) ÍO NCBi snint CPií-HB 8BQ HÁNCS vagy SEQ ID NO: 13 vagy SEQIÓ NCO S vagy SEQ ID NÖ:I6 vagy a SEQiíö NQ:23 50-66. oldalMi-calvagy aBEQ ||3 NO: 27 JIMé. oldáOáncal:niiiiI:6I)Rd'D. SEQ IDNÖQ midi:: CBÍBM3, és olyan kömtyüláneöí tartalmaz, áltól a: variábilis dóidén: olyan €BKa mrtaknaz* amelynek a szekvenciája legalább egy: a kővetkezők közök: SEQ3D NéM mint CTR-Lt, SEQ ÍD M>.5 ntlaí CDR-L2, és SEQ 10 N0:6 mint C.DR-U. 70: A 371 igénypont szerinti gr égy.szer 8lk«ta^^dböl:-a*dnÖ42ö^-döefiá«^:-4kiÖVetfce20kei. iartalmazza; SEQ IQ NQ:Í idtint CBR-Hk SEQ ID NOÎ2 vagyiSEQQiD NOtö Vagy SEQ iD NQ:IS vagy SEQ 10 NQ:l16 vagy a SEQ 10 Nö:23 :50-o6, oldalláncai vagy a $BQ: lt> Nö: :.:27 Sd-tm oldalláncnl idint CDR-H2. SEQQO NO:3 sahst C1>1*-ID. SEQ !D NÖ:4 mim CDR-U, SBQAD NO;S mint CDR-L2, és 5>EQ ll> NO;6 Mip Cím* U. 7L,A 70:,. .pógys^r ssikajnsaAissw shdl az mb€&amp;%%Âpôbÿpg. a SE(| I|> :NÖ: 2? JCMIi,: öldísllárscai? Uüiainoäaa s?atst ΟΓ5ΗΉ2.
    22, A jf, igénypont sgétimijgyOgvszpr egy vagy több fesoaMV tönéssö &amp;l ka kms zásra. 73. A 72. igénypont s.zwnti gyógyszer alkalmáért* ísbői »· MPipíftéé ^Ílcfe^aíisfe;ϊϊί, eiien&amp;nyag konpsgáíssíi} CMC-S-H
  17. 74. Az 1. ígánynont szerinti eprás, ahol as elíes?»nyag olyan CDR-H2 szekvenciát tanaitnaz, amely a Kábát szerinti 55. pozícióban aszpaíag?ntól eltérd ansisioSáyiP tSsnájrnáz. ?5. A ?4. igénypont szerinti eljárás, ahoi a Kábát szerinti 55. pözíéibbsit iiv:® inpsnosgy giatainin. 7o. Az I. igénypont szenna eljárás, ahol as eiíestastyág ^ÿaft-CDk4i2.fMkvén6iât:^al^^.:â»iy «Kábát szerinti 57. pozícióban treoniníól eltérő aminosavitt iäilislniaä, ?7. A 70. igénypont szerint? eljárás, attól a Kábát Szerinti 55, psizíésóbas? lévő ínpipöséy vslis?,
  18. 78. Az i. igénypont szerinti eljárás, ahol az eiieöastpg olyas? CDR-H2 szetvenciát tMafeáz, atnely n Kabát szemsti 00. pozícióban iiziníoS eltérő aminosavat tásáplstsask 70. A 78. igénypont szerinti eljárás, ahol az aminosav argjali?,
  19. 80. A IS. igénypont szerinti kéaxftménv. ahol a« oikápnyAg ojyáó CEt.R.*Üi'sÂkve»Piàt Kábát szerinti 55. pozícióban aszpasagáitól eltérőss.ro mosavat tsrrtairoax. 81. A 80. igénypont szerinti készítmény, ahol a Kábát szerittb Sőápozlciiban lévő ároiáőááv gtatasaria.
  20. 82. A IS. igénypont szerint? készítmény, alsói m öítssíáísyág ölyan ßPRÄ szekvenciát Mtaisná®, árnőiy « Kabar szersístl 57. pozícióban trenn intól eltérő as?sipösayat Sstrtáitnáz. 83. A 82. igénypont szeri?«« készü?ne«sv, al?«l a Kábát szpeispi 5#> váll«, 84. A ;S. Igéísypoíít szarms? késszítniény. aísol az o!Iasxassysrg olvass ÜDH-H2 szekvenciát Sartainsaz, assáesy a Kahas szedrai ;>». pozícióban íi/intöi eKéső atnl««?s>'.e&amp;t tarlalmaz. 85. A 84, igénypont szerimi kesz.imseisy, aboi ;sz: ssssbsospv atglobk
HUE03724432A 2002-05-02 2003-05-02 Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok HUE030806T2 (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US37744002P 2002-05-02 2002-05-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HUE030806T2 true HUE030806T2 (hu) 2017-05-29

Family

ID=29401497

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUE03724432A HUE030806T2 (hu) 2002-05-02 2003-05-02 Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok
HUE11157981A HUE027590T2 (hu) 2002-05-02 2003-05-02 Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok
HUE16180729A HUE057124T2 (hu) 2002-05-02 2003-05-02 Calicheamicin származék - hordozó konjugátumok
HUS1700038C HUS1700038I1 (hu) 2002-05-02 2017-10-25 Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok

Family Applications After (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HUE11157981A HUE027590T2 (hu) 2002-05-02 2003-05-02 Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok
HUE16180729A HUE057124T2 (hu) 2002-05-02 2003-05-02 Calicheamicin származék - hordozó konjugátumok
HUS1700038C HUS1700038I1 (hu) 2002-05-02 2017-10-25 Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok

Country Status (34)

Country Link
US (6) US8153768B2 (hu)
EP (3) EP2371392B1 (hu)
JP (5) JP5153057B2 (hu)
KR (2) KR101125524B1 (hu)
CN (1) CN100482277C (hu)
AU (2) AU2003231293A1 (hu)
BE (1) BE2017C049I2 (hu)
BR (3) BR122019027974B1 (hu)
CA (2) CA2871117A1 (hu)
CR (3) CR7557A (hu)
CY (4) CY1116634T1 (hu)
DK (3) DK3127553T3 (hu)
EC (1) ECSP045445A (hu)
ES (3) ES2545745T3 (hu)
FR (1) FR17C1054I2 (hu)
HK (2) HK1162926A1 (hu)
HU (4) HUE030806T2 (hu)
IL (2) IL164946A (hu)
LT (3) LT3127553T (hu)
LU (1) LUC00044I2 (hu)
MX (1) MXPA04010792A (hu)
NL (1) NL300903I2 (hu)
NO (3) NO339730B1 (hu)
NZ (2) NZ573563A (hu)
PH (2) PH12013501159A1 (hu)
PL (5) PL224150B1 (hu)
PT (3) PT1507556T (hu)
RU (3) RU2422157C3 (hu)
SG (3) SG10201700289RA (hu)
SI (3) SI3127553T1 (hu)
TW (2) TWI438010B (hu)
UA (1) UA88599C2 (hu)
WO (1) WO2003092623A2 (hu)
ZA (2) ZA200409752B (hu)

Families Citing this family (129)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6905669B2 (en) 2001-04-24 2005-06-14 Supergen, Inc. Compositions and methods for reestablishing gene transcription through inhibition of DNA methylation and histone deacetylase
US20110045005A1 (en) * 2001-10-19 2011-02-24 Craig Crowley Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
GB0210121D0 (en) * 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products
HUE030806T2 (hu) 2002-05-02 2017-05-29 Wyeth Holdings Llc Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok
TW200539855A (en) * 2004-03-15 2005-12-16 Wyeth Corp Calicheamicin conjugates
EP1759582B1 (en) * 2004-05-26 2016-11-23 National University Corporation Kagawa University Preservative solution for cells, tissues and organs comprising rare sugar and preservation method with the use of the same
TW200621282A (en) * 2004-08-13 2006-07-01 Wyeth Corp Stabilizing formulations
TWI384069B (zh) 2004-08-27 2013-02-01 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 多胜肽之製法
US7300773B2 (en) 2004-08-27 2007-11-27 Wyeth Research Ireland Limited Production of TNFR-Ig
US7335491B2 (en) 2004-08-27 2008-02-26 Wyeth Research Ireland Limited Production of anti-abeta
CA2486285C (en) * 2004-08-30 2017-03-07 Viktor S. Goldmakher Immunoconjugates targeting syndecan-1 expressing cells and use thereof
PA8645301A1 (es) * 2004-09-10 2006-07-03 Wyeth Corp Anticuerpo anti-5t4 humanizados y conjugados anticuerpo anti-5t4/calicheamicina
EP1661584A1 (en) * 2004-11-26 2006-05-31 Heinz Dr. Faulstich Use of conjugates of amatoxins and phallotoxins with macromolecules for cancer and inflammation therapy
US20110166319A1 (en) * 2005-02-11 2011-07-07 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
US7250416B2 (en) 2005-03-11 2007-07-31 Supergen, Inc. Azacytosine analogs and derivatives
US20070003559A1 (en) * 2005-07-01 2007-01-04 Wyeth Methods of determining pharmacokinetics of targeted therapies
AU2006279891B2 (en) 2005-08-16 2010-03-11 Synta Pharmaceuticals Corp. Bis(thio-hydrazide amide) formulation
AU2006283726C1 (en) 2005-08-24 2015-05-07 Immunogen, Inc. Process for preparing maytansinoid antibody conjugates
US7700567B2 (en) 2005-09-29 2010-04-20 Supergen, Inc. Oligonucleotide analogues incorporating 5-aza-cytosine therein
ES2564241T3 (es) * 2005-12-02 2016-03-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Nanopartículas para su uso en composiciones inmunogénicas
BRPI0619476A2 (pt) * 2005-12-05 2011-10-04 Wyeth Corp composições de interleucina-11 e métodos de uso
DK1994055T3 (da) 2006-03-10 2014-08-25 Wyeth Llc Anti-5t4-antistoffer og anvendelser deraf
ATE521366T1 (de) * 2006-05-27 2011-09-15 Faulstich Heinz Dr Anwendung von amatoxin-konjugaten und phallotoxin-konjugaten mit makromolekülen zur krebstherapie und therapie von entzündungen
DK2041270T3 (da) 2006-07-13 2014-01-27 Wyeth Llc Fremstilling af glycoproteiner
SG174087A1 (en) 2006-08-21 2011-09-29 Synta Pharmaceuticals Corp Compounds for treating proliferative disorders
EP2076287A2 (en) * 2006-10-12 2009-07-08 Wyeth Methods and compositions with reduced opalescence
MX2009004519A (es) 2006-11-03 2009-05-12 Wyeth Corp Sustancias que inhiben la glucolisis en un cultivo de celulas.
MX2009005776A (es) 2006-12-01 2009-06-10 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se enlazan al cd 22 y sus usos.
EP2117601A2 (en) * 2006-12-22 2009-11-18 The Regents of the University of California Macromolecular conjugates of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator protein inhibitors and uses thereof
CA2675583A1 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 Wyeth Inflammation treatment, detection and monitoring via trem-1
KR20090127326A (ko) * 2007-03-02 2009-12-10 와이어쓰 폴리펩티드의 생산을 위한 세포 배양물 중에서 구리 및 글루타메이트의 용도
EP2465541B1 (en) 2007-05-22 2018-07-18 Wyeth LLC Improved processes for making hydrazides
PE20090309A1 (es) * 2007-06-04 2009-04-18 Wyeth Corp Conjugado portador-caliqueamicina y un metodo de deteccion de caliqueamicina
HUE031533T2 (hu) * 2007-10-19 2017-07-28 Seattle Genetics Inc CD19-kötõszerek valamint alkalmazásuk
JP2011507897A (ja) * 2007-12-21 2011-03-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド リツキシマブ抵抗性関節リウマチ患者の治療
JP2011508738A (ja) * 2007-12-26 2011-03-17 バイオテスト・アクチエンゲゼルシヤフト Ｃｄ１３８発現腫瘍細胞のターゲティングを向上させる方法及び剤
PT2242772E (pt) * 2007-12-26 2015-02-09 Biotest Ag Imunoconjugados dirigidos contra cd138 e as suas utilizações
US9011864B2 (en) * 2007-12-26 2015-04-21 Biotest Ag Method of decreasing cytotoxic side-effects and improving efficacy of immunoconjugates
EP2801584B1 (en) 2007-12-26 2019-07-10 Biotest AG Agents targeting CD138 and uses thereof
US20090186026A1 (en) * 2008-01-18 2009-07-23 Wyeth Ephrin and eph receptor agonists for modulation of bone formation and resorption
WO2009124109A1 (en) 2008-04-04 2009-10-08 The Government Of The U.S. A. As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health &Human Services Human monoclonal antibodies specific for cd22
FR2930443B1 (fr) 2008-04-29 2010-06-25 Oreal Produit extemporane de soin a base d'un lyophilisat de microorganisme et de tensioactif(s) de hlb superieur ou egal a 12
US8236319B2 (en) 2008-04-30 2012-08-07 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
ES2726945T3 (es) * 2009-06-03 2019-10-10 Immunogen Inc Métodos de conjugación
US20130012916A1 (en) * 2010-02-11 2013-01-10 Glide Pharmaceutical Technologies Limited Delivery of immunoglobulin variable domains and constructs thereof
EP3578205A1 (en) 2010-08-06 2019-12-11 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
WO2012023085A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Wyeth Llc Cell culture of growth factor-free adapted cells
US20120237975A1 (en) 2010-10-01 2012-09-20 Jason Schrum Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9309322B2 (en) 2010-11-12 2016-04-12 Scott & White Healthcare (Swh) Antibodies to tumor endothelial marker 8
US20120222979A1 (en) * 2011-03-04 2012-09-06 Elwha LLC, a limited liability company of the State of Delaware Glassy compositions
ME03353B (me) 2011-03-29 2019-10-20 Immunogen Inc Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom
EP2691101A2 (en) 2011-03-31 2014-02-05 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
AU2012302051B2 (en) 2011-08-30 2017-04-27 Astex Pharmaceuticals, Inc. Decitabine derivative formulations
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2850624A1 (en) 2011-10-03 2013-04-11 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
ES2784146T3 (es) 2011-10-21 2020-09-22 Pfizer Adición de hierro para mejorar el cultivo celular
BR112014013694A2 (pt) 2011-12-08 2017-06-13 Biotest Ag método para tratar uma doença, e, kit
KR20140102759A (ko) 2011-12-16 2014-08-22 모더나 세라퓨틱스, 인코포레이티드 변형된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 핵산 조성물
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
CA2868398A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
CN104781278B (zh) 2012-07-03 2018-06-12 华盛顿大学 针对tau的抗体
US8883979B2 (en) 2012-08-31 2014-11-11 Bayer Healthcare Llc Anti-prolactin receptor antibody formulations
NZ707091A (en) 2012-10-04 2018-12-21 Immunogen Inc Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates
US10131682B2 (en) 2012-11-24 2018-11-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to a cell binding molecules
JP6144355B2 (ja) 2012-11-26 2017-06-07 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 化学修飾ｍＲＮＡ
JP6482471B2 (ja) 2012-12-21 2019-03-13 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 親水性の自壊性リンカー及びそのコンジュゲート
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
SG11201509026VA (en) * 2013-05-02 2015-12-30 Hoffmann La Roche Combination therapy of an afucosylated cd20 antibody with a cd22 antibody-drug conjugate
EP3052106A4 (en) 2013-09-30 2017-07-19 ModernaTX, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
JP2016538829A (ja) 2013-10-03 2016-12-15 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 低密度リポタンパク質受容体をコードするポリヌクレオチド
KR20160072268A (ko) 2013-11-04 2016-06-22 화이자 인코포레이티드 항-efna4 항체-약물 접합체
WO2015063680A1 (en) * 2013-11-04 2015-05-07 Pfizer Inc. Intermediates and methods for synthesizing calicheamicin derivatives
US10464955B2 (en) 2014-02-28 2019-11-05 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Charged linkers and their uses for conjugation
EP3119876A1 (en) 2014-03-19 2017-01-25 Pfizer Inc. Method of cell culture
US9950077B2 (en) 2014-06-20 2018-04-24 Bioalliance C.V. Anti-folate receptor alpha (FRA) antibody-drug conjugates and methods of using thereof
TWI664190B (zh) 2014-06-27 2019-07-01 美商Ｃ２Ｎ醫療診斷有限責任公司 人類化抗－ｔａｕ抗體
GB201412658D0 (en) 2014-07-16 2014-08-27 Ucb Biopharma Sprl Molecules
US9925281B2 (en) 2014-08-05 2018-03-27 Case Western Reserve University Coated plant virus imaging agents
JP6731405B2 (ja) 2014-11-07 2020-07-29 ケース ウエスタン リザーブ ユニバーシティ ウイルス粒子を用いた癌免疫療法
CN113876962A (zh) 2015-04-07 2022-01-04 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 纳米粒子免疫偶联物
JP2018515457A (ja) * 2015-04-21 2018-06-14 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー カリケアマイシン構築物および使用方法
GB201506870D0 (en) 2015-04-22 2015-06-03 Ucb Biopharma Sprl Method
EP3313527B1 (en) 2015-06-29 2021-02-24 Case Western Reserve University Anticancer drug-containing plant virus particles
EP3316685A4 (en) 2015-07-02 2019-03-13 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Lyophilized Pharmaceutical Compositions
CN113350518A (zh) 2015-07-12 2021-09-07 杭州多禧生物科技有限公司 与细胞结合分子的共轭偶联的桥连接体
US9839687B2 (en) 2015-07-15 2017-12-12 Suzhou M-Conj Biotech Co., Ltd. Acetylenedicarboxyl linkers and their uses in specific conjugation of a cell-binding molecule
GB201601075D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies molecules
GB201601077D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecule
WO2017011826A1 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Case Western Reserve University Plant virus particles for delivery of antimitotic agents
GB201601073D0 (en) 2016-01-20 2016-03-02 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
WO2017051347A2 (en) 2015-09-23 2017-03-30 Pfizer Inc. Cells and method of cell culture
JP2018536404A (ja) 2015-11-09 2018-12-13 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｃｈｏ細胞において産生したポリペプチドの品質特性を操作する方法
US10472422B2 (en) 2016-01-08 2019-11-12 Abgenomics International Inc. Tetravalent anti-PSGL-1 antibodies and uses thereof
WO2017172907A1 (en) * 2016-03-29 2017-10-05 Sorrento Therapeutics, Inc. Calicheamicin antibody drug conjugates linking an amidoacetyl group to a sugar moiety on calicheamicin
SG11201808356UA (en) 2016-04-05 2018-10-30 Pfizer Cell culture process
US11623958B2 (en) 2016-05-20 2023-04-11 Harpoon Therapeutics, Inc. Single chain variable fragment CD3 binding proteins
GB201610512D0 (en) 2016-06-16 2016-08-03 Autolus Ltd Chimeric antigen receptor
WO2018017985A1 (en) 2016-07-21 2018-01-25 Case Western Reserve University Plant virus or virus-like particle constructs
CA3042695A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Case Western Reserve University Melt processed viral nanoparticle constructs
NZ752394A (en) 2016-11-14 2021-07-30 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd Conjugation linkers, cell binding molecule-drug conjugates containing the likers, methods of making and uses such conjugates with the linkers
US11590183B2 (en) 2017-03-10 2023-02-28 Case Western Reserve University Cancer immunotherapy using virus particles
WO2018167621A1 (en) 2017-03-16 2018-09-20 Pfizer Inc. Tyrosine prototrophy
KR102376863B1 (ko) 2017-05-12 2022-03-21 하푼 테라퓨틱스, 인크. 메소텔린 결합 단백질
US11672840B2 (en) 2017-05-17 2023-06-13 Case Western Reserve University Anticancer trail-targeted plant virus particles
WO2019025863A2 (en) 2017-08-03 2019-02-07 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. MEDICAMENT COMPOUND AND METHODS OF PURIFICATION
EP3681989A1 (en) 2017-09-15 2020-07-22 Bristol-Myers Squibb Company Online biomass capacitance monitoring during large scale production of polypeptides of interest
WO2019084555A1 (en) 2017-10-27 2019-05-02 Case Western Reserve University TYMOVIRUS VIRUSES AND VIRAL TYPE PARTICLES USEFUL AS NANOVECTORS FOR IMAGING AND THERAPEUTIC AGENTS
KR20200133240A (ko) 2018-03-16 2020-11-26 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 단백질 생산 동안의 대사 효소 활성 및 디술피드 결합 환원
CN110507824A (zh) * 2018-05-21 2019-11-29 荣昌生物制药（烟台）有限公司 一种抗间皮素抗体及其抗体药物缀合物
JP6936399B2 (ja) 2018-05-30 2021-09-15 アッヴィ・ステムセントルクス・エル・エル・シー 抗ｓｅｚ６抗体薬物コンジュゲート及び使用方法
JP7425049B2 (ja) 2018-09-25 2024-01-30 ハープーン セラピューティクス，インク． Ｄｌｌ３結合タンパク質および使用方法
EP3883610A4 (en) 2018-11-20 2022-11-02 Cornell University MACROCYCLIC COMPLEXES OF RADIONUCLIDES AND THEIR USE IN CANCER RADIATION THERAPY
CA3121884A1 (en) 2018-12-06 2020-06-11 Pfizer Inc. Cells with reduced inhibitor production and methods of use thereof
CA3133155A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Fundacio Privada Institut D'investigacio Oncologica De Vall Hebron Combination therapy for the treatment for cancer
US11390853B2 (en) 2019-04-26 2022-07-19 Case Western Reserve University Freeze dried viral nanoparticle constructs
WO2021024020A1 (en) 2019-08-06 2021-02-11 Astellas Pharma Inc. Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer
US11896676B2 (en) 2019-08-07 2024-02-13 Case Western Reserve University Targeting cancer cells and tissue using filamentous plant virus particles
EP4069312A4 (en) * 2019-12-04 2024-03-27 Univ New York State Res Found COMPOSITIONS AND METHODS FOR REDUCING OFF-TARGET TOXICITY OF ANTIBODY-DRUG CONJUGATES
CA3182579A1 (en) 2020-07-07 2022-01-13 Ugur Sahin Therapeutic rna for hpv-positive cancer
WO2022135666A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Treatment schedule for cytokine proteins
WO2022135667A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 BioNTech SE Therapeutic rna for treating cancer
TW202245808A (zh) 2020-12-21 2022-12-01 德商拜恩迪克公司 用於治療癌症之治療性ｒｎａ
CN112724263B (zh) * 2021-04-02 2021-08-03 上海偌妥生物科技有限公司 改造抗cd20单克隆抗体以提高其药物疗效的方法及其应用
AU2022312698A1 (en) 2021-07-13 2024-01-25 BioNTech SE Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer
TW202333802A (zh) 2021-10-11 2023-09-01 德商拜恩迪克公司 用於肺癌之治療性rna(二)
WO2023148598A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Pfizer Inc. Cysteine prototrophy
WO2024058201A1 (ja) * 2022-09-16 2024-03-21 国立研究開発法人量子科学技術研究開発機構 放射性医薬組成物の中間体の製造方法、放射性医薬組成物の中間体の精製用キット

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4671958A (en) 1982-03-09 1987-06-09 Cytogen Corporation Antibody conjugates for the delivery of compounds to target sites
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US5225539A (en) * 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4771128A (en) * 1986-10-10 1988-09-13 Cetus Corporation Method of purifying toxin conjugates using hydrophobic interaction chromatography
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
US5037651A (en) 1987-01-30 1991-08-06 American Cyanamid Company Dihydro derivatives of LL-E33288 antibiotics
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5134075A (en) * 1989-02-17 1992-07-28 Oncogen Limited Partnership Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors
GB8928874D0 (en) * 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
ATE207075T1 (de) * 1990-06-27 2001-11-15 Univ Princeton Sonden für die detektion der p53 mutante
JP3854306B2 (ja) * 1991-03-06 2006-12-06 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング ヒト化及びキメラモノクローナル抗体
US5714350A (en) * 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
US5686072A (en) * 1992-06-17 1997-11-11 Board Of Regents, The University Of Texas Epitope-specific monoclonal antibodies and immunotoxins and uses thereof
US5484892A (en) * 1993-05-21 1996-01-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Monoclonal antibodies that block ligand binding to the CD22 receptor in mature B cells
US6180377B1 (en) * 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
US5436265A (en) * 1993-11-12 1995-07-25 Merck Frosst Canada, Inc. 1-aroyl-3-indolyl alkanoic acids and derivatives thereof useful as anti-inflammatory agents
US6310185B1 (en) 1994-03-08 2001-10-30 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Recombinant human anti-Lewis Y antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
ATE306930T1 (de) * 1994-08-12 2005-11-15 Immunomedics Inc Für b-zell-lymphom und leukämiezellen spezifische immunkonjugate und humane antikörper
PT705903E (pt) 1994-08-12 2001-11-30 Myriad Genetics Inc Mutacoes no gene de susceptibilidade para o cancro da mama e do ovario ligado a 17q
US5714586A (en) * 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) * 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US7147851B1 (en) * 1996-08-15 2006-12-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized immunoglobulin reactive with α4β7 integrin
US20020141990A1 (en) * 1996-11-01 2002-10-03 Smithkline Beecham Corporation Anti-RSV human monoclonal antibodies
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
ATE383430T1 (de) 1997-03-20 2008-01-15 Us Gov Health & Human Serv Rekombinante antikörper und immunkonjugate gezielt auf cd22-tragende zellen und tumoren
US6183744B1 (en) 1997-03-24 2001-02-06 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
US6306393B1 (en) 1997-03-24 2001-10-23 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of B-cell malignancies using anti-CD22 antibodies
EP0999853B1 (en) 1997-06-13 2003-01-02 Genentech, Inc. Stabilized antibody formulation
AT408613B (de) 1998-06-17 2002-01-25 Immuno Ag Pharmazeutisches faktor vii-präparat
US6183477B1 (en) * 1998-09-04 2001-02-06 Smith & Nephew, Inc. Attachment tool for drill guide
KR100345463B1 (ko) * 1998-11-19 2003-01-08 주)녹십자 B형간염바이러스의표면항원프리-s1에대한인간화항체및이의제조방법
JP2000226336A (ja) * 1998-11-30 2000-08-15 Sankyo Co Ltd 免疫グロブリン製剤
CA2351346C (en) 1998-12-10 2015-09-01 Phylos, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
US7074403B1 (en) * 1999-06-09 2006-07-11 Immunomedics, Inc. Immunotherapy of autoimmune disorders using antibodies which target B-cells
JP2003507388A (ja) * 1999-08-17 2003-02-25 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 凍結乾燥したケーキの安定化
AU1137301A (en) * 1999-10-12 2001-04-23 Connex Gesellschaft Zur Optimierung Von Forschung Und Entwicklung Mbh Immuno-chromatographic rapid assay in order to detect acid-resistant microorganisms in the stool
US20010046496A1 (en) * 2000-04-14 2001-11-29 Brettman Lee R. Method of administering an antibody
GB0013810D0 (en) * 2000-06-06 2000-07-26 Celltech Chiroscience Ltd Biological products
HUE030806T2 (hu) 2002-05-02 2017-05-29 Wyeth Holdings Llc Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok
GB0210121D0 (en) * 2002-05-02 2002-06-12 Celltech R&D Ltd Biological products

Also Published As

Publication number Publication date
CA2483552A1 (en) 2003-11-13
US20140235835A1 (en) 2014-08-21
CY2017035I2 (el) 2018-04-04
LTC2371392I2 (lt) 2019-03-25
RU2422157C2 (ru) 2011-06-27
JP5441971B2 (ja) 2014-03-12
JP5756489B2 (ja) 2015-07-29
PL224001B1 (pl) 2016-11-30
SG10201700289RA (en) 2017-02-27
RU2602878C3 (ru) 2021-11-24
AU2009202609A1 (en) 2009-07-16
BE2017C049I2 (hu) 2022-08-09
NL300903I2 (nl) 2018-02-08
SI3127553T1 (sl) 2022-02-28
JP2015061875A (ja) 2015-04-02
RU2011108928A (ru) 2012-09-20
SI2371392T1 (sl) 2015-10-30
CR7557A (es) 2008-10-03
NO20161431A1 (no) 2005-01-25
EP3127553B1 (en) 2021-12-01
PL374523A1 (en) 2005-10-31
AU2009202609B2 (en) 2012-07-26
ZA201003874B (en) 2019-12-18
KR101125524B1 (ko) 2012-03-22
TW201231089A (en) 2012-08-01
JP6872376B2 (ja) 2021-05-19
NZ586071A (en) 2012-02-24
WO2003092623A3 (en) 2004-03-18
PL411824A1 (pl) 2015-08-17
BR122019027966B8 (pt) 2021-07-27
EP2371392B1 (en) 2015-07-08
LUC00044I1 (hu) 2017-11-03
JP2013163678A (ja) 2013-08-22
LUC00044I2 (hu) 2018-02-26
ES2593304T3 (es) 2016-12-07
US20160303252A1 (en) 2016-10-20
EP1507556A4 (en) 2009-01-07
US8747857B2 (en) 2014-06-10
IL230659A (en) 2016-02-29
IL164946A (en) 2015-06-30
RU2016141576A3 (hu) 2018-05-03
BR122019027966B1 (pt) 2020-11-17
WO2003092623A2 (en) 2003-11-13
US9351986B2 (en) 2016-05-31
PT1507556T (pt) 2016-09-28
TW200404005A (en) 2004-03-16
EP3127553A1 (en) 2017-02-08
US8835611B2 (en) 2014-09-16
US20040192900A1 (en) 2004-09-30
PL410219A1 (pl) 2015-03-30
NO339730B1 (no) 2017-01-23
CY1116634T1 (el) 2017-03-15
PL413302A1 (pl) 2016-05-23
CY1117973T1 (el) 2017-05-17
JP5153057B2 (ja) 2013-02-27
NO344509B1 (no) 2020-01-20
PL222725B1 (pl) 2016-08-31
TWI438010B (zh) 2014-05-21
CY2017035I1 (el) 2018-04-04
CN1665532A (zh) 2005-09-07
PL224844B1 (pl) 2017-02-28
KR20110050753A (ko) 2011-05-16
HUE027590T2 (hu) 2016-11-28
US20040082764A1 (en) 2004-04-29
KR101062628B1 (ko) 2011-09-07
RU2602878C2 (ru) 2016-11-20
AU2003231293A1 (en) 2003-11-17
ES2545745T3 (es) 2015-09-15
JP2005524700A (ja) 2005-08-18
CN100482277C (zh) 2009-04-29
HUE057124T4 (hu) 2022-02-28
PH12013501158A1 (en) 2015-11-09
RU2004135101A (ru) 2005-06-27
PT2371392E (pt) 2015-10-07
LT1507556T (lt) 2016-10-10
MXPA04010792A (es) 2005-03-07
NO2017061I1 (no) 2017-11-21
JP2017105801A (ja) 2017-06-15
BRPI0309868B1 (pt) 2020-04-28
RU2016141576A (ru) 2018-05-03
PH12013501159B1 (en) 2015-12-02
EP1507556B1 (en) 2016-07-27
PL224150B1 (pl) 2016-11-30
RU2678818C2 (ru) 2019-02-04
DK2371392T3 (en) 2015-08-31
HUE057124T2 (hu) 2022-04-28
BR122019027974B1 (pt) 2022-06-14
UA88599C2 (ru) 2009-11-10
FR17C1054I2 (fr) 2019-01-11
PH12013501158B1 (en) 2015-11-09
ES2916174T3 (es) 2022-06-28
PT3127553T (pt) 2022-01-24
US8153768B2 (en) 2012-04-10
NZ573563A (en) 2010-10-29
DK1507556T3 (en) 2016-09-12
KR20050006220A (ko) 2005-01-15
SG165158A1 (en) 2010-10-28
LTPA2017036I1 (lt) 2017-11-27
ZA200409752B (en) 2010-08-25
IL164946A0 (en) 2005-12-18
HUS1700038I1 (hu) 2017-11-28
FR17C1054I1 (hu) 2018-01-12
RU2422157C3 (ru) 2021-04-23
ECSP045445A (es) 2005-01-28
SG187991A1 (en) 2013-03-28
CR20120364A (es) 2012-10-05
HK1162926A1 (en) 2012-09-07
CR20130390A (es) 2013-11-08
CA2871117A1 (en) 2003-11-13
JP2012051900A (ja) 2012-03-15
PL410218A1 (pl) 2015-03-30
LT3127553T (lt) 2022-04-11
PL228741B1 (pl) 2018-05-30
CY1124900T1 (el) 2023-01-05
PH12013501159A1 (en) 2015-12-02
DK3127553T3 (da) 2022-01-31
EP2371392A1 (en) 2011-10-05
TWI379693B (en) 2012-12-21
NO20044663L (no) 2005-01-25
SI1507556T1 (sl) 2016-10-28
BRPI0309868B8 (pt) 2021-05-25
HK1070825A1 (zh) 2005-06-30
US20180339058A1 (en) 2018-11-29
BR0309868A (pt) 2005-10-18
IL230659A0 (en) 2014-03-31
US20120213804A1 (en) 2012-08-23
EP1507556A2 (en) 2005-02-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HUE030806T2 (hu) Calicheamicin származék-hordozó konjugátumok
JP6603209B2 (ja) ソルターゼ（Ｓｏｒｔａｓｅ）を用いた生存細胞のタンパク質修飾
CN103119065B (zh) 针对组织因子的人抗体药物缀合物
CN103619871B (zh) 涉及突变体难辨梭菌毒素的组合物及其方法
UA126281C2 (uk) Антитіла проти сигнал-регуляторного білка альфа та способи їх застосування
CN106999577A (zh) 溶瘤病毒和免疫检查点调节因子组合
UA126441C2 (uk) Химерні антигенні рецептори, націлені на bcma, та способи їх застосування
CN108883164A (zh) 针对tigit的抗体
JP2021118699A (ja) グリカン相互作用化合物及び使用方法
UA126656C2 (uk) Біспецифічна конструкція антитіла до psma і cd3, яке залучають t-клітини
CN105849126A (zh) 抗trop2抗体－药物偶联物
CN110267982A (zh) 具有人源化靶向部分和/或经过优化的嵌合抗原受体相互作用结构域的嵌合抗原受体效应细胞开关以及其用途
CN106237341B (zh) 一种抗体偶联药物及其制备方法和应用
CN106749662A (zh) 抗icos的抗体及其用途
HU228108B1 (en) Graft rejection suppressing agents
CN108463248A (zh) 聚糖相互作用化合物及使用方法
UA118961C2 (uk) Антитіло, яке зв&#39;язується з tl1a, та його застосування
TW201247705A (en) Anti-CD38 antibodies
CN107683289A (zh) IL13RAα2结合剂和其在癌症治疗中的用途
JP2021526837A (ja) 抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲート
HU230030B1 (hu) Fab I inhibitorok
CN105859887A (zh) 拮抗性抗il-7 受体抗体及方法
JP2009189376A (ja) 新規抗ｃｄ９８抗体
HUE033072T2 (hu) Staphylococcus aureus antigének immunogén készítményei
EP4039702A1 (en) Anti-b7-h3 antibody and application thereof