BRPI0619476A2 - composições de interleucina-11 e métodos de uso - Google Patents

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Paul F Schendel
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Abstract

COMPOSIçõES DE INTERLEUCINA-11 E MéTODOS DE USO. A presente invenção refere-se a métodos para o tratamento e/ou a prevenção de trombocitopenia incluindo trombocitopenia associada à lesão hepática induzida por fármaco trombocitopenia associado à destruição da medula óssea induzida por fármaco. Os métodos de tratamento da invenção incluem a administração de interleucina-11 a um indivíduo que sofre de trombocitopenia ou está suscetível à mesma e/ou que recebe ou está para receber um tratamento envolvendo um agente terapêutico conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia. Também são fornecidas composições farmacêuticas e kits úteis para realizar estes métodos de tratamento.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI- ÇÕES DE INTERLEUCINA-11 E MÉTODOS DE USO".
Pedidos Correlatos
O presente pedido reivindica a prioridade do Pedido Provisório N° 60/742.658, depositado em 6 de dezembro de 2005 e do Pedido Provisó- rio N° 60/842.294 depositado em 5 de setembro de 2006, ambos intitulados "Interleukin-11 Compositions and Methods of Use". Cada um dos pedidos provisórios está aqui incorporado em sua integridade a título de referência.
Antecedentes da Invenção
As plaquetas são importantes para manter a homeostasia e para iniciar a formação de coágulo sangüíneo em locais de lesão. As plaquetas também liberam fatores de crescimento no local da formação do coágulo que, entre diversas funções, aceleram o processo de cicatrização. Em paci- entes sofrendo de níveis reduzidos de plaquetas (uma condição conhecida como trombocitopenia), a incapacidade de formar coágulos é a conseqüên- cia mais imediata. Trombocitopenia grave resulta em um padrão típico de sangramento: múltiplas petéquias na pele, freqüentemente mais evidente nas pernas inferiores; pequenas equimoses espalhadas em locais de trauma secundário; sangramento mucoso incluindo sangramento nasal, sangramen- to gengival, sangramento nos tratos gastrointestinal e genitourinário; e san- gramento excessivo após cirurgia. Sangramento gastrointestinal pesado e sangramento do sistema nervoso central (CNS) podem levar a risco de vida.
A trombocitopenia se manifesta se uma das etapas no processo trombopoiético sofrer interferência resultando em produção de plaquetas insuficiente, distribuição anormal de plaquetas, destruição aumentada de plaquetas, e/ou consumo aumentado de plaquetas. A diferenciação e prolife- ração de células hematopoiéticas podem sofrer a interferência de causas congênitas ou adquiridas, e essas causas podem variar bastante. Por e- xemplo, a hipoplasia amegacariocítica congênita pode diminuir seletivamen- te a produção de megacariócitos, as células responsáveis pela produção de plaquetas, dessa forma resultando em trombocitopenia. Níveis baixos de plaquetas circulantes também pode ocorrer depois de exposição a um agen- te ou fármaco químico ou tratamento com o mesmo. Esta trombocitopenia induzida por fármaco geralmente é tratada com a suspensão parcial ou total do agente agressor.
A trombocitopenia pode ser uma complicação potencialmente fatal de muitas terapias para câncer que incluem irradiação gama, exposição terapêutica à radiação, tratamento com fármaco quimioterapêutico citotóxi- ca, e transplante de medula óssea. O diagnóstico da trombocitopenia em pacientes com câncer geralmente é complicado pelo fato de que tais pacien- tes freqüentemente são tratados com vários fármacos e também podem re- ceber procedimento que intensificam a toxicidade dos fármacos. A tromboci- topenia induzida por fármaco pode portanto limitar os benefícios da quimio- terapia para malignidades potencialmente curáveis impedindo a administra- ção apropriada de fármacos nas doses e no programa ideais, o que pode levar a um aumento na morbidade por câncer ou mesmo na mortalidade. Sumário da Invenção
A presente invenção abrange o reconhecimento de que certos agentes quimioterapêuticos, e em particular conjugados de porções direcio- nadoras protéicas com agentes citotóxicos, apresentam riscos particulares em relação ao desenvolvimento de trombocitopenia. A invenção fornece um novo sistema para o controle de pacientes que sofrem de trombocitopenia induzida pela administração de tal agente. Em particular, a presente inven- ção fornece composições farmacêuticas e métodos que são úteis para a prevenção e/ou para o tratamento de trombocitopenia, tal como trombocito- penia induzida por fármaco (por exemplo trombocitopenia induzida por qui- mioterápicos, particularmente quimioterápicos conjugados). As composições farmacêuticas e os métodos de tratamento inventivos também podem ser usados para prevenir ou tratar trombocitopenia associada à lesão hepática (por exemplo, lesão hepática induzida por fármaco). Alternativamente ou adicionalmente, as composições farmacêuticas e os métodos de tratamento inventivos podem ser usados para prevenir ou tratar trombocitopenia asso- ciada à destruição da medula óssea (por exemplo, destruição da medula óssea induzida por fármaco). Mais especificamente, em um aspecto, a presente invenção for- nece métodos para aliviar a trombocitopenia em um indivíduo compreen- dendo uma etapa de: administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de interleucina-11 ao indivíduo sofrendo de trombocitopenia ou suscetível à mesma, onde a trombocitopenia é associada à administração ao indivíduo de um conjugado compreendendo uma porção direcionadora e de um fár- maco citotóxico. A interleucina-11 usada nos métodos da presente invenção pode ser, por exemplo, interleucina-11 humana recombinante.
Em certas modalidades dos métodos da presente invenção, a etapa de administrar compreende administrar uma quantidade terapeutica- mente eficaz de interleucina-11 a um indivíduo que sofre de câncer ou de uma doença cancerosa.
Em certas modalidades, a porção direcionadora no conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia, compreende um anticorpo, tal como um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo an- ti-Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combinações dos mesmos. O fármaco citotóxico no conjugado pode ser uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina. Por exemplo, o conjugado pode ser um con- jugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y- caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina, ou um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.
Em certas modalidades dos métodos da presente invenção, a interleucina-11 é administrada antes da administração do conjugado.
Em certas modalidades, a administração de interleucina-11 de acordo com os métodos da invenção previne, reduz, alivia ou detém a trom- bocitopenia no indivíduo. Trombocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo menos em parte, resultante de destruição da me· dula óssea. Alternativamente ou adicionalmente, trombocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo menos em parte, resultante de lesão hepática. Em tais modalidades, a administração de interleucina-11 pode prevenir, reduzir, aliviar ou deter uma lesão hepática e/ou uma infla- mação associada à lesão hepática no indivíduo.
Em um outro aspecto, a presente invenção fornece composi- ções farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente efi- caz de interleucina-11, pelo menos um conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia, e pelo menos um veículo fisiologicamente aceitável, onde o conjugado compreende uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico. Em certas modalidades, a interleucina-11 incluída em uma com- posição farmacêutica da presente invenção compreende interleucina-11 humana recombinante. Em algumas modalidades, interleucina-11, pelo me- nos um conjugado e pelo menos um veículo fisiologicamente aceitável são combinados como uma ou mais preparações para a administração simultâ- nea ou seqüencial da interleucina-11 e do conjugado.
A porção direcionadora no conjugado pode ser um anticorpo (por exemplo, um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticor- po anti-Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quais- quer combinações dos mesmos), e o fármaco citotóxico pode ser uma cali- queamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um deri- vado de esperamicina. Por exemplo, o conjugado incluído em uma composi- ção farmacêutica da invenção pode ser um conjugado de anticorpo anti- CD22-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina, um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina, ou um conjugado de anticorpo anti-CD30- caliqueamicina.
Em certas modalidades, a administração de uma composição farmacêutica da presente invenção a um indivíduo previne, reduz ou detém a trombocitopenia no indivíduo. Como mencionado acima, o indivíduo pode sofrer de câncer ou de uma doença cancerosa. Trombocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo menos em parte, resultante de destruição da medula óssea. Alternativamente ou adicionalmente, trom- bocitopenia produzida por administração do conjugado pode ser, pelo me- nos em parte, resultante de lesão hepática. Em tais modalidades, a adminis- tração de uma composição farmacêutica da presente invenção pode preve- nir, reduzir, aliviar ou deter uma lesão hepática e/ou uma inflamação associ- ada à lesão hepática no indivíduo.
Em um outro aspecto, a presente invenção fornece um kit com- preendendo: interleucina-11 e pelo menos um conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia. O conjugado compreende uma porção direcio- nadora (por exemplo, um anticorpo como descrito acima) e um fármaco cito- tóxico (por exemplo, uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina ou um derivado de esperamicina). Trombocitopenia que resulta da administração do conjugado pode resultar, pelo menos em parte, de lesão hepática. Alternativamente ou adicionalmente, trombocitopenia que resulta da administração do conjugado pode resultar, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea.
Estes e similares objetivos, vantagens e aspectos da presente invenção tornar-se-ão aparentes para os especialistas na técnica que lerem a descrição detalhada a seguir.
Breve Descrição do Desenho
A Figura 1 é um gráfico mostrando os efeitos de IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC-544 em camundongos nus. Os resulta- dos apresentados nesta Figura foram obtidos da maneira descrita no exem- plo 1. Camundongos nus receberam veículo isolado, CMC-544 (200 μ/kg) isolado, IL-11 isolado, IL-11 (125 μg/kg sc) depois da administração de CMC-544 (200 μ/kg bid), ou IL-11 (250 μ/kg sc) antes e depois da adminis- tração de CMC-544 (200 μ/kg).
A Figura 2 é um gráfico mostrando os efeitos de IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC-544 em camundongos nus. Os resulta- dos apresentados nesta Figura foram obtidos da maneira descrita no exem- plo 1. Camundongos nus receberam veículo isolado, CMC-544 (160 μ/kg) isolado, IL-11 (250 μ/kg sc) depois da administração de CMC-544 (160 μ/kg), ou IL-11 (250 μ/kg sc) antes e depois da administração de CMC-544 (160 μ/kg).
A Figura 3 é um gráfico mostrando os efeitos da administração intravenosa de CMC-544 sobre a contagem de plaquetas de macacos cino- molgos. Os resultados apresentados foram obtidos em uma experiência on- de 9 macacos receberam uma dose de CMC-544 a 4,28 mg/m2 (25 μ/kg de caliqueamicina) por semana durante quatro semanas (a administração de CMC-544 está representada por setas no gráfico). As contagens de plaque- tas foram feitas em função do tempo.
A Figura 4 é um gráfico mostrando os efeitos de IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC-544 em macacos cinomolgos. As con- centrações de plaquetas estão representadas em função do dia do procedi- mento. Os detalhes das experiências apresentados neste gráfico estão des- critos no exemplo 2. Quatro (4) macacos de teste receberam IL-11 (repre- sentados por símbolos escuros no gráfico) e 4 (quatro) macacos de controle receberam o veículo isolado (representado por símbolos vazios no gráfico) seguindo um programa de administração similar.
A Figura 5 representa dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre o aumento de enzimas hepáticas induzido por CMC-544(ALT) em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 5(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resul- tados apresentados na Figura 5(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 e IL-11.
A Figura 6 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre as contagens aumentadas de neutrófilos do sangue periférico as- sociadas a CMC-544 em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 6(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 6(B) foram obti- dos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 e IL-11.
A Figura 7 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre a albumina sérica diminuída associada a CMC-544 em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 7(A) foram obtidos para 4 (quatro) maca- cos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 7(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 and IL-11.
A Figura 8 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos de IL- 11 sobre a redução de massa de células vermelhas (hemoglobina) associa- da a CMC-544 em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 8(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 8(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 e IL-11.
A Figura 9 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos da ad- ministração de IL-11 em combinação com CMC-544 sobre a fosfatase alca- Iina em macacos cinomolgos. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 2. Os resultados apresentados na Figura 9(A) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de controle que receberam CMC-544 e o veículo isolado. Os resultados apresentados na Figura 9(B) foram obtidos para 4 (quatro) macacos de teste que receberam CMC-544 and IL-11.
A Figura 10 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos da administração de PBS (veículo), CMC-544 ou carboplatina sobre os níveis de plaquetas circulantes (Figura 10(A)) e de trombopoietina circulante (TPO) (Figura 10(B)) em camundongos nus. Detalhes das experiências estão des- critos no exemplo 5.
A Figura 11 apresenta um gráfico que permite a comparação dos efeitos da administração de PBS (veículo), CMC-544 ou carboplatina sobre os níveis de plaquetas circulantes e sobre os níveis de trombopoietina circulante em camundongos nus. Detalhes das experiências estão descritos no exemplo 5.
A Figura 12 apresenta dois gráficos mostrando os efeitos da administração de CMC-544 (Figura 12(A)) e de CMC-544 + NEUMEGA (Fi- gura 12(B)) sobre a contagem de plaquetas (do pré-estudo ao dia 10) em macacos cinomolgos tratados da maneira descrita no segundo estudo do exemplo 2. A Figura 13 representa dois gráficos mostrando os efeitos da administração de CMC-544 (Figura 13(A)) e de CMC-544 + NEUMEGA (Fi- gura 13(B)) sobre AST (do pré-estudo ao dia 14) em macacos cinomolgos tratados da maneira descrita no segundo estudo do exemplo 2.
Descrição Detalhada de Certas Modalidades Preferidas
Como mencionado acima, a presente invenção abrange o reco- nhecimento de que quimioterápicos conjugados podem causar riscos parti- culares para o desenvolvimento de trombocitopenia nos pacientes. Tais con- jugados geralmente incluem uma porção direcionadora protéica ligada a um agente citotóxico. De acordo com a presente invenção, a porção direciona- dora protéica pode vetorizar o quimioterápico conjugado para metabolismo preferencial no fígado, onde o agente citotóxico pode induzir uma lesão que resulta em trombocitopenia ou que exacerba a mesma. Conjugados conten- do anticorpos ou outras proteínas bastante glicosiladas podem ser particu- larmente problemáticos neste sentido.
A presente invenção envolve a descoberta de que a administra- ção de interleucina-11 pode bloquear a diminuição induzida por fármaco nas plaquetas circulantes no sangue periférico (isto é, trombocitopenia). Além disso, foi verificado que a administração de IL-11 bloqueia a lesão hepática induzida por fármaco, e limita a inflamação associada à lesão hepática. Por conseguinte, a presente invenção fornece composições farmacêuticas e mé- todos para a prevenção e/ou o tratamento de trombocitopenia induzida por fármaco, tal como aquele resultante de lesão hepática e/ou de destruição da medula óssea.
No contexto da presente invenção, um conjugado compreende uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico. Conjugados cuja admi- nistração resulta em trombocitopenia incluem qualquer um de uma varieda- de de conjugados de fármacos conhecidos ou suspeitos de causar, ocasio- nar, ou estimular a ocorrência de trombocitopenia ou de estarem associados a um ou mais sintomas de trombocitopenia. De acordo com a presente in- venção, a administração de IL-11 antes, depois, ou concomitante com a administração de um ou mais destes conjugados alivia a trombocitopenia. Especificamente, tal administração previne, reduz, retarda, trata ou detém a trombocitopenia. Como será observado pelo versado na técnica, a adminis- tração de IL-11 pode prevenir, reduzir ou deter a trombocitopenia prevenin- do, reduzindo ou detendo a destruição ou o consumo aumentado de plaque- tas e/ou prevenindo, reduzindo ou detendo a produção diminuída de plaque- tas pela medula óssea.
I. Trombocitopenia resultante da administração de conjuga- dos
No contexto da presente invenção, trombocitopenia, em um sen- tido amplo, refere-se a uma condição fisiológica nos mamíferos geralmente caracterizada por uma contagem anormalmente baixa das plaquetas san- güíneas, tipicamente resultante em fácil contusão e sangramento anormal dos capilares. Nos seres humanos, a contagem de plaquetas no sangue cir- culante normalmente varia entre 150 e 400 milhões por mililitro de sangue (ou 150 a 400 x 109/l).
As plaquetas são produzidas na medula óssea por células gran- des chamadas megacariócitos por meio de um processo chamado endomi- tose (Y. Nagata et a!., J. Cell Biol., 1997, 139: 449-457; L. Roy et ai, Blood, 2001, 97: 2238-2247). Em resposta a uma contagem diminuída de plaquetas circulantes, a taxa do processo endomitótico aumenta, e o número de me- gacariócitos na medula óssea pode aumentar até 3 vezes (L.A. Harker, J. Clin. Invest., 1968, 47: 458-465). Este mecanismos, por sua vez, causa a produção e a liberação na circulação de plaquetas adicionais. Ao contrário, em resposta a uma contagem elevada de plaquetas circulantes, a taxa en- domitótica diminui, e o número de megacariócitos na medula óssea pode diminuir 50%. O mecanismo de retroalimentação fisiológico exato pelo qual a massa de plaquetas circulantes regula a taxa endomitótica e número de megacariócitos na medula óssea ainda não é totalmente conhecido. Entre- tanto, acredita-se que o principal fator circulante envolvido no circuito de re- troalimentação, e portanto na produção de plaquetas, é a trombopoietina (K. Kaushansky et ai, Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 1995, 92: 3234-3238; K. Kaushansky, Thromb. Haemost., 1995, 74: 521-525), que é produzido por hepatócitos no fígado (F.J. de Sauvage et ai, Nature1 1994, 369; 533-538; R. Sungaran et ai, Blood1 1997, 89: 101-107; S. Nomura et ai, Exp. Hema- tol., 1997, 25: 565-572). Portanto, no contexto da presente invenção, a trombocitopenia pode resultar de destruição da medula óssea, lesão hepáti- ca, ou uma combinação das duas.
Em algumas modalidades, a administração de um conjugado resulta, pelo menos em parte, em lesão hepática, que finalmente resulta em trombocitopenia. Conjugados cuja administração resulta em lesão hepática geralmente incluem os agentes citotóxicos conjugados cuja administração causa, ocasiona ou estimula uma lesão hepática ou está associada a um ou mais sintomas de lesão hepática. Em certas modalidades, tais conjugados possuem uma porção direcionadora que é ou inclui uma proteína; em algu- mas modalidades a porção direcionadora é um ou inclui um anticorpo.
Lesão hepática de acordo com a presente invenção inclui não apenas degeneração ou necrose das células parenquimatosas do fígado (hepatócitos) (por exemplo, que resulta de lesão ou dano causado por um certo fator), mas também fenômenos indesejáveis causados por reação bio- lógica ao dano ou lesão, tais como mobilização, infiltração, ativação das cé- lulas de Kupffer, leucócitos, e similares, inchaço do fígado, fibrose do tecido hepático etc., que podem ocorrer isolados ou em combinação. Lesão, defei- to ou disfunção hepática que totalmente ou menos que totalmente causada, ocasionada ou estimulada pela administração de um ou mais conjugados é considerada pelo menos em parte induzida por fármaco. Por conseguinte, antes da administração de um ou mais conjugados, o indivíduo pode ter um fígado saudável (isto é, um fígado que não apresenta sinais detectáveis de lesão, defeito, dano ou disfunção) ou, alternativamente, o indivíduo pode apresentar um nível existente de lesão/dano/defeito/disfunção hepática (por exemplo, devido a doenças, vírus, produtos químicos, fármacos, ou outros fatores).
Em certas modalidades, a administração de IL-11 antes, depois, ou concomitante com a administração de um ou mais conjugados previne, reduz, retarda, trata ou detém a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida pelo conjugado.
Em algumas modalidades, a administração de um conjugado resulta, alternativamente (ou em alguns casos adicionalmente), pelo menos em parte, em destruição da medula óssea, o que produz trombocitopenia. Conjugados cuja administração resulta em destruição da medula óssea in- cluem os agentes citotóxicos conjugados cuja administração causa, ocasio- na, estimula a destruição da medula óssea ou está associada a um ou mais sintomas de destruição da medula óssea. Destruição da medula óssea (isto é, lesão, defeito ou disfunção da medula óssea) inclui qualquer condição afetando a medula óssea que resulta em produção de plaquetas anormal- mente baixa.
De acordo com a presente invenção, a administração de IL-11 antes, depois, ou concomitante com a administração de um ou mais conju- gados previne, reduz, retarda, trata ou detém a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea. Em certas modalida- des, a administração de IL-11 de acordo com a presente invenção previne, reduz ou detém a produção diminuída de plaquetas devido à destruição da medula óssea. Antes da administração do conjugado que induz destruição da medula óssea, o indivíduo pode ter uma medula óssea saudável (isto é, uma medula óssea que não apresenta sinais detectáveis de destruição, le- são, defeito ou disfunção) ou alternativamente, o indivíduo pode apresentar um nível existente de destruição/defeito/disfunção da medula óssea (por exemplo, devido a um câncer, tal como leucemia ou linfoma; infecção viral ou anemia aplásica ou causada por produtos químicos tóxicos, radioterapia ou quimioterapia anterior).
II. Conjugados
Um conjugado geralmente é uma molécula resultante da ligação de pelo menos duas outras moléculas. A ligação entre as duas moléculas pode ser covalente ou não-covalente. Como já mencionado acima, um con- jugado nesta invenção compreende uma porção direcionadora e um fárma- co citotóxico.
Porções direcionadoras são entidades que possuem algum grau de atração para um alvo de interesse quando compreendida em um conju- gado. Uma porção direcionadora normalmente apresenta grande afinidade e/ou especificidade para o alvo, isto é, ela especificamente e/ou eficiente- mente reconhece, interage com, se liga a, ou marca o alvo nas condições ou circunstâncias de sua exposição ao alvo. Um alvo pode ser um tecido ou órgão específico no corpo, um tipo específico de células ou um componente celular específico (por exemplo, receptor ou antígeno de superfície celular). As porções direcionadoras podem ser desejavelmente entidades atóxicas estáveis que retêm suas propriedades em condições in vitro e/ou in vivo. A interação entre uma porção direcionadora e um alvo pode ser covalente ou não-covalente. Mais freqüentemente, a interação entre uma porção direcio- nadora e um alvo é não-covalente. Exemplos de interações não-covalentes incluem, porém sem limitação, interações hidrófobas, interações eletrostáti- cas, interações dipolares, interações de van der Waals, e ligação de hidro- gênio. Independente da natureza da interação, a ligação entre um alvo e uma porção direcionadora em um conjugado é de preferência seletiva, es- pecífica, e suficientemente forte para permitir que o fármaco desempenhe seu papel (por exemplo, exercer sua atividade anticâncer se o fármaco cito- tóxico for um quimioterápico).
Em um conjugado, um fármaco citotóxico pode ser associada a porção direcionadora em qualquer uma de várias maneiras. Em muitas mo- dalidades, o fármaco é covalentemente ligado à porção direcionadora. Co- mo será observado pelos especialistas na técnica, o fármaco e a porção di- recionadora podem ser ligados um ao outro seja diretamente ou indireta- mente (por exemplo, através de um ligador).
Em certas modalidades, o fármaco citotóxico e a porção direcio- nadora são ligados direta e covalentemente um ao outro. A ligação covalen- te direta pode se dar através de uma ligação tal como uma ligação amida, éster, carbono-carbono, dissulfeto, carbamato, éter, tioéter, uréia, amina, ou carbonato. A ligação covalente pode ser obtida aproveitando-se os grupos funcionais presentes no fármaco e na porção direcionadora. Grupos funcio- nais adequados que podem ser usados para ligar as duas porções incluem, porém sem limitação, aminas, anidridos, grupos hidróxi, grupos carbóxi, e tióis. Um agente ativador, tal como uma carbodiimida, pode ser usado para formar uma ligação direta. Uma ampla gama de agentes ativadores são co- nhecidos na técnica e são adequados para ligar um fármaco e uma porção direcionadora.
Em outras modalidades, o fármaco citotóxico e a porção dire- cionadora são ligadas indireta e covalentemente uma à outra por meio de um grupo ligador. Isto pode ser efetuado usando-se qualquer número de agentes bifuncionais adequados bem-conhecidos na técnicatura, que inclu- em Iigadores homofuncionais e heterofuncionais (vide, por exemplo, Pierce Catalog and Handbook). O uso de um ligador bifuncional difere do uso de um agente ativador pelo fato de o primeiro resultar em uma porção Iigadora estar presente no conjugado resultante, ao passo que o último resulta em um acoplamento direto entre as duas porções envolvidas na reação. O pa- pel do ligador bifuncional pode ser o de permitir a reação entre duas porções de outra forma inertes. Alternativamente ou adicionalmente, o ligador bifun- cional, que vem a fazer parte do produto reacional, pode ser selecionado de modo a conferir algum grau de flexibilidade conformacional ao conjugado. Alternativamente ou adicionalmente, o ligador bifuncional pode ser selecio- nado de modo que a ligação formada entre o fármaco e a porção direciona- dora sejam hidrolisáveis (para exemplos de tais ligadores, vide por exemplo as Patentes US NoS 5.773.001, 5.739.116 e 5.877.296). Estes ligadores são de preferência usados quando se observa uma atividade mais alta do fár- maco depois da hidróiise da porção direcionadora. Mecanismos exemplifica- tivos pelos quais um fármaco é clivado a partir da porção direcionadora (por exemplo, anticorpo) incluem hidróiise no pH ácido dos Iisossomas (hidrazo- nas, acetais, e amidas similares a cis-aconitatos), clivagem peptídica por enzimas lisossômicas (as captepsinas e similares enzimas lisossômicas), e redução de dissulfetos.
Um exemplo de um conjugado adequado reside na conjugação de hidrazidas e similares nucleófilos aos aldeídos gerados por oxidação dos carboidratos que ocorrem naturalmente em anticorpos. Conjugados conten- do hidrazona podem ser feitos com grupos carbonila introduzidos que pro- porcionam as propriedades desejadas de liberação de fármaco. Os conju- gados também podem ser feitos com um Iigador que possui um dissulfeto em uma extremidade, uma cadeia alquila no meio, e um derivado de hidra- zina na outra extremidade. As antraciclinas constituem um exemplo de cito- toxinas que podem ser conjugadas a anticorpos usando esta tecnologia.
Ligadores contendo grupos funcionais diferentes de hidrazonas têm o potencial de ser clivados no meio ácido dos lisossomas. Por exemplo, os conjugados podem ser feitos de Iigadores reativos com tiol que contêm um sítio diferente de uma hidrazona que é clivável intracelularmente, tais como ésteres, amidas, e acetais/cetais. Camptotecina é um agente citotóxi- co que pode ser conjugado usando esses ligadores. Cetais feitos a partir de uma cetona de 5 a 7 membros no anel e que tem um dos átomos de oxigê- nio ligado ao agente citotóxico e o outro a um Iigador para ligação a um anti- corpo também podem ser usados. As antraciclinas constituem mais uma vez um exemplos de um agente citotóxico adequado para uso com esses ligado- res.
Um outro exemplo de uma classe de ligadores sensíveis ao pH são os cis-aconitatos, que possuem um grupo ácido carboxílico justaposto a um grupo amida. O ácido carboxílico acelera a hidrólise de amida nos lisos- somas ácidos. Ligadores que obtêm um tipo similar de aceleração da taxa de hidrólise com vários outros tipos de estruturas também podem ser usa- dos. Os maitansinóides constituem um exemplo de citotoxina que podem ser usados com ligadores ligados em C-9.
Um outro método de liberação potencial para conjugados de fármacos é a hidrólise enzimática de peptídios pelas enzimas lisossômicas. Em um exemplo, um peptídio é ligado por meio de uma ligação amida ao álcool para-aminobenzílico e em seguida um carbamato ou carbonato é feito entre o álcool benzílico e o agente citotóxico. Clivagem do peptídio leva ao colapso, ou auto-imolação, do aminobenzil carbamato ou carbonato. Os a- gentes citotóxicos exemplificados com esta estratégia incluem antraciclinas, taxanos, mitomicina C, e as auristatinas. Em um exemplo, um fenol também pode ser liberado por colapso do Iigador no lugar do carbamato. Em uma outra variação, redução de dissulfeto é usada para iniciar o colapso de um para-mercaptobenzil carbamato ou carbonato.
Muitos agentes citotóxicos têm pouca, quando têm, solubilidade em água e isso pode limitar a carga de fármaco no conjugado devido à a- gregação ao conjugado. Uma abordagem para superar este problema é adi- cionar grupos solubilizantes ao ligador. Podem ser usados conjugados feitos com um ligador consistindo em PEG e um dipeptídio, inclusive aqueles ten- do um diácido de PEG1 um ácido de tiol, ou um ácido de maleimida ligado à porção direcionadora (por exemplo, anticorpo), um espaçador dipeptídico, e uma amida ligada à amina de uma antraciclina ou um análogo de duocarmi- cina. Um outro exemplo são conjugados que são feitos com um dissulfeto ligador contendo PEG ligado a um agente citotóxico e amida ligada a um anticorpo. Abordagens que incorporam grupos PEG podem ser vantajosas para superar a agregação e os limites na carga de fármaco. A. Anticorpos direcionadores
Em certas modalidades, o conjugado compreende um anticorpo como porção direcionadora. Estes tipos de conjugados geralmente são chamados de imunoconjugados, com os conjugados que têm um radiosóto- po como o fármaco sendo chamados de radioimunoconjugados e aqueles tendo um agente quimioterapêutico como o fármaco sendo chamados de quimioimunoconjugados. De um modo geral, um anticorpo com esta finali- dade pode ser qualquer imunoglobulina (isto é, uma molécula de imunoglo- bulina intata, uma porção ativa de uma molécula de imunoglobulina etc.) que se liga a um epítopo específico. O termo abrange anticorpos monoclonais e composições de anticorpo com especificidade poliepitópica (isto é, anticor- pos policlonais).
Os anticorpos direcionadores podem ser provenientes de prati- camente qualquer espécie de mamífero (por exemplo, camundongo, ser humano, primata, cachorro etc.) e podem ser produzidos por vários métodos bem-conhecidos na técnicatura (por exemplo, anticorpos murinos via hibri- domas, anticorpos humanos via hibridomas de camundongos transgênicos etc.).
Exemplos de anticorpos que podem ser usados na formação de conjugados úteis na presente invenção incluem anticorpos monoclonais (mAbs), por exemplo, anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados, anti- corpos primatizados, anticorpos revestidos, anticorpos humanos e fragmen- tos biologicamente ativos dos mesmos. Como já mencionado acima, o termo anticorpo é usado amplamente para indicar tanto moléculas de anticorpo quanto uma variedade de moléculas derivadas de anticorpo. Tais moléculas derivadas de anticorpo geralmente compreendem pelo menos uma região determinante de complementaridade (CDR) de uma região variável de ca- deia pesada ou de cadeia leve, incluindo moléculas tais como fragmentos Fab, fragmentos F(ab')2, fragmentos Fd1 fragmentos Fabc, anticorpos Sc (anticorpos de cadeia simples), diacorpos, cadeias simples leves de anticor- po individual, cadeias pesadas de anticorpo individual, fusões quiméricas entre cadeias de anticorpo e similares moléculas, e similares. Anticorpos miméticos com afinidade de ligação para um antígeno mas não tendo uma ou mais CDRs tradicionais também podem ser usados na formação de con- jugados úteis na presente invenção.
Em certas modalidades, um anticorpo direcionador de um con- jugado é direcionado contra um ou mais antígenos da superfície celular ex- pressos em células e/ou tecidos alvo em distúrbios proliferativos tal como câncer.
Exemplos de anticorpos específicos direcionados contra antíge- nos da superfície celular incluem, sem limitação, anticorpos contra o antíge- no CD22, que é superexpresso na maioria dos Iinfomas de células B; G5/44, uma forma humanizada de um anticorpo monoclonal anti-CD22 murino; an- ticorpos contra o antígeno CD33 da superfície celular, que é predominante em certos tumores mielóides humanos, especialmente leucemia mielóide aguda (vide, por exemplo, os Pedidos de Patentes US NoS 2004-0192900 e 2004-0082764, cada um deles aqui incorporado em sua integridade a título de referência); hP67.6, uma forma humanizada do anticorpo murino anti- CD33 (vide Patente US N0 5.773.001, que está aqui incorporada em sua integridade a título de referência); um anticorpo contra o antígeno PEM en- contrado em muitos tumores de origem epitelial designados mP67.6 (vide, por exemplo, I.D. Bernstein et aí., J. Clin. Invest., 1987, 79: 1153-1159 e I.D. Bernstein et al., J. Immunol., 1992, 128: 867-881, cada um deles está aqui incorporado em sua integridade a título de referência), e um anticorpo hu- manizado contra o antígeno do carboidrato de Lewis Y superexpresso em muitos tumores sólidos e designado hu3S193 (vide, por exemplo, a Patente US Nº 6.310.185, que aqui incorporada em sua integridade a título de refe- rência).
Outros anticorpos adequados incluem anticorpos direcionados contra o antígeno oncofetal 5T4. O antígeno 5T4 é uma glicoproteína trans- membranosa alta glicosilada de 72 kDa compreendendo um núcleo não gli- cosalisado de 42 kDa (Hole et ai, Br. J. Câncer, 1988, 57: 239-246; Hole et al., Int. J. Câncer, 1990, 45: 179-184; WO 89/07947; Patente US Nº 5.869.053, cada um deles aqui incorporado em sua integridade a título de referência). O 5T4 inclui um domínio extracelular caracterizado por duas re- petições ricas em Ieucina (LRRs) e uma região hidrófila intermediária, que é um antígeno acessível para terapia direcionada (Myers et al., J. Biol. Chem., 1994, 269: 9319-9324). Outros anticorpos adequados incluem anticorpos direcionados contra o antígeno CD30, que é superexpresso em uma varie- dade de malignidades hematológicas. O CD30 é um alvo atraente para tera- pia de câncer porque ele tem expressão mínima em tecidos normais. SGN- 30 é um exemplo de um anticorpo anti-CD30 que mostrou induzir atividade anticâncer direta em células tumorosas expressando CD30 (A. Forero et al., J. Clin. Oncol., 2005: Vol. 23, No. 16S: 6601).
Além disso, existem vários anticorpos comercialmente disponí- veis direcionados contra antígenos de superfície celular, tais como rituximab (Rituxan™) e trastuzumab (Herceptin™), que podem ser usados como por- ções direcionadoras em conjugados quimioterapêuticos. Rituximab (Ritu- xan™) é um anticorpo anti-CD20 quimérico usado para tratar vários Iinfomas de células B e trastuzumab (Herceptin™) é um anticorpo anti-Her2 humani- zado usado para tratar câncer de mama. Em certas modalidades da invenção, uma porção direcionadora de um agente quimioterapêutico é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis Y, um anticorpo anti-CD30, ou um anti- corpo anti-5T4.
B. Fármacos citotóxicos
Fármacos citotóxicos adequados incluem qualquer uma de uma grande variedade de substâncias, moléculas, compostos, agentes, ou fato- res que são tóxicos para células vivas. Administrada como um conjugado a um paciente, um fármaco citotóxico adequada é associada à trombocitope- nia. Trombocitopenia pode resultar, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida por fármaco. Alternativamente ou adicionalmente, trombocitopenia pode resultar pelo menos em parte, de destruição da medula óssea induzida por fármaco.
Como será observado pelo versado na técnica, um fármaco cito- tóxico pode ser um composto sintético ou um composto natural; uma molé- cula simples ou um complexo de moléculas diferentes. Fármacos citotóxicos adequadas podem pertencer a qualquer uma de várias classes de compos- tos incluindo, porém sem limitação, moléculas pequenas, peptídios, sacarí- deos, esteróides, anticorpos, proteínas de fusão, polinucleotídeos anti- sentido, ribozimas, RNAs interferentes pequenos, peptidomiméticos, e simi- lares. Quando fármacos citotóxicos são usados no tratamento de câncer ou de uma doença cancerosa, elas podem ser selecionadas entre as seguintes classes de fármacos anticâncer: agentes alquilantes, fármacos antimetabóli- tos, antibióticos antimitóticos, agentes antitumorais alcaloidais, hormônios e anti-hormônios, interferons, fármacos antiinflamatórias não-esteróides, e vários outros agentes antitumorais.
Exemplos de fármacos adequadas para uso em imunoconjuga- dos incluem os taxanos, maitansinas, CC-1065 e duocarmicinas, as calique- amicinas e similares enediinas, e as auristatinas. Outros exemplos incluem os antifolatos, alcalóides de vinca, e as antraciclinas. Toxinas vegetais, ou- tras proteínas bioativas, enzimas (isto é, ADEPT), radioisótopos, fotossensi- bilizadores tais como aqueles empregados em terapia fotodinâmica, também podem ser usados em imunoconjugados. Além disso, conjugados podem ser feitos usando veículos secundários como o agente citotóxico, tais como Iipossomas ou polímeros, por exemplo.
Em certas modalidades, o fármaco citotóxico pertence à família enediina de antibióticos. Como família, os antibióticos de enediina são os agentes antitumorais mais potentes descobertos até hoje. Alguns membros são 1000 vezes mais potentes que a adriamicina, um dos antibióticos anti- tumorais mais eficazes clinicamente usados (Y.S. Zhen et al., J. Antibiot., 1989,42:1294-1298).
Em certas modalidades, o fármaco citotóxico é um membro da família enediina de caliqueamicinas. Originalmente isoladas de um extrato delíquido do microorganismo de solo Micromonospora echinospora ssp. ca- lichensis, as caliqueamicinas foram detectadas em um rastreamento por po- tentes agentes prejudiciais a DNA (M.D. Lee et a!., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3464-3466; M.D. Lee et al., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3466-3468; W.M. Maiese et al., J. Antibiot., 1989, 42: 558-563; M.D. Lee et al., J. Antibi- ot., 1989, 42: 1070-1087).
As caliqueamicinas caracterizam-se por uma estrutura de nú- cleo de trissulfeto alílico de enediina bicíclica rígida e complexa ligada atra- vés de ligações glicosila a uma cadeia oligossacarídeo. A porção oligossaca- rídeo contém inúmeros derivados de açúcar substituído, e um anel tetrahi- dropirano substituído. Foi relatado que as porções de núcleo contendo ene- diina (ou aglicona) e as porções carboidrato de caliqueamicinas possuem funções diferentes na atividade biológica dessas moléculas. Sem a intenção de se ater a qualquer teoria particular, foi observado que geralmente se a- credita que a porção de núcleo cliva o DNA, ao passo que a porção oligos- sacarídeo das caliqueamicinas servem como um sistema de reconhecimento e distribuição e guia o fármaco até um sulco menor do DNA de cordão duplo onde o fármaco se ancora. Uma vez posicionado no sulco menor do DNA, o núcleo de enediina sofre um rearranjo eletrônico (ciclização de Bergman) para formar um dirradical 1,4-benzenóide transitório. A formação do dirradi- cal intermediário pode ser desencadeada pela presença de agentes reduto- res tais como NADPH ou ditiotrietol. A espécie de dirradical fornece a força propulsora termodinâmica para a reação de clivagem do DNA promovendo a separação do átomo de hidrogênio das desoxirriboses. A reação dos radi- cais centralizados no carbono da desoxirribose resultantes com oxigênio molecular inicia um processo que resulta em clivagens de DNA de cordão simples e de DNA de cordão duplo ("Enediyne Antibiotics as Antitumor A- gents", Doyle & Borders1 1995, Marcel-Dekker: New York; N. Zein et ai, Sci- ence, 1988, 240: 1198-1201; N. Ikemoto et ai., Proc. Natl. Acad. Sci., EUA, 1995, 92: 10506-10510; A.G. Myers et ai., J. Am. Chem. Soc., 1994, 116: 1255-1271: M.D. Lee et ai., Acc. Chem. Res., 1991, 24: 235-243; Y. Xu et ai., Biochemistry, 1997, 36: 14975-14984). Clivagem de DNA de cordão du- plo é um tipo de dano que geralmente não é restaurável ou não é facilmente restaurável para a célula e na maior parte das vezes é letal.
Por causa de suas propriedades químicas e biológicas, diversos análogos das caliqueamicinas foram testados em modelos pré-clínicos como agentes antitumorais potenciais. Seu desenvolvimento como terapias com um único agente não foi adiante por causa das toxicidades retardadas que limitam a faixa de dose terapêutica para tratamento. No entanto, sua potên- cia torna-os particularmente úteis para quimioterapia direcionada por conju- gado, onde os limites na expressão do conjugado alvo podem requerer alta potência para atingir eficácia (C. Liu & R.V.J. Chri, Exp. Opin. Invest. Drugs, 1997, 6: 169-172; R.V.J. Chari et ai., Câncer Res., 1995, 55: 4079-4084).
Por conseguinte, em certas modalidades da presente invenção, o quimioterápico compreende um conjugado de anticorpo-caliqueamicina.
Será percebido que o termo "caliqueamicina" pode se referir a qualquer membro da família de agentes antibacterianos e antitumorais co- nhecidos como caliqueamicinas, por exemplo, como descrito nas Patentes US Nos 4.970.198 e 5.108.912 (cada uma delas aqui incorporada em sua integridade a título de referência). Análogos ou derivados de caliqueamici- nas, tais como, por exemplo, derivados N-acílicos descritos na Patente US N0 5.079.233 (que está aqui incorporada em sua integridade a título de refe- rência); análogos dissulfeto de caliqueamicina (por exemplo, como descrito nas Patentes US NoS 5.606.040 e 5.770.710, cada delas estando aqui incor- porada em sua integridade a título de referência); derivados de dihidro (por exemplo, como descrito na Patente US N0 5.037.651, que está aqui incorpo- rada em sua integridade a título de referência); e derivados N-acetilados (por exemplo, como descrito na Patente US N0 5.079.233, que está aqui incorpo- rada em sua integridade a título de referência) podem ser empregados.
Vários conjugados anticorpo-caliqueamicina foram preparados e testados quanto as suas propriedades antitumorais (L.M. Hinmam et al., Câncer Res., 1993, 53: 3336-3342; P.R. Hamann et al., Bioconj. Chem., 2005, 16: 346-353; N.K. Damle & P. Frost, Curr. Opin. Pharmacol., 2003, 3: 386-390). Em certas modalidades, um conjugado de anticorpo- caliqueamicina pode ser incluído em uma composição farmacêutica da in- venção ou usado em um método de tratamento da invenção; tais conjuga- dos incluem os conjugados descritos nas Patentes US Nos 5.773.001, 5.739.116, 5.712.374, 5.714.586, e 5.877.296; no pedido PCT WO 03/092623, cada um deles estando aqui incorporado em sua integridade a título de referência.
Em certas modalidades da presente invenção, o conjugado anti- corpo-caliqueamicina é CMC-544. O CMC-544 é direcionado para CD22 ex- presso por malignidades de linfóide Β. O CMC-544 compreende um anticor- po monoclonal (mAb) lgG4 anti-CD22 humanizado, G5/44, covalentemente ligado à /V-acetil-y-caliquemicina dimetil hidrazida (CaIichDMH) via um Iiga- dor ácido 4-(4'-acetilfenóxi)butanóico lábil a ácido. O CMC-544 pode ser preparado, por exemplo, da maneira descrita em J.F. DiJoseph et al., Blood, 2004, 103: 1807-1814 e nos Pedidos de Patente US N°s 2004-0082764A1 e 2004-0192900A1, cada um deles aqui incorporado em sua integridade a títu- lo de referência.
Em outras modalidades, o conjugado anticorpo-caliqueamicina é CMD-193, que está descrito no Pedido de Patente US N0 10/080.587 (aqui incorporado em sua integridade a título de referência). O CMD-193 é N- acetil-y-caliqueamicina dimetil hidrazida covalentemente ligado ao anticorpo anti-Lewis Y G193 com a carga média de conjugado de caliqueamicina de cerca de 5 a cerca de 7 moles de caliqueamicina por mol de anticorpo e fra- ção conjugada baixa (LCF) do conjugado menor que cerca de 10%.
Em outras modalidades, o conjugado anticorpo-caliqueamicina é MYLOTARG®, também conhecido como, CMA-676, CMA, ou gemtuzumab ozogamicina (vide, por exemplo, E.L. Sievers et a!., Blood, 1999, Blood, 93: 3678-3584, e Patentes US NoS 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116, 5.767.285, 5.773.001, 5.877.296 e Pedido de Patente US N0 2004-0152632, cada um deles estando aqui incorporado a título de referência). MYLOTARG® já foi aprovado para o tratamento de leucemia mielóide aguda em pacientes ido- sos. O conjugado consiste em um anticorpo contra CD33 que é ligado à ca- liqueamicina por meio de um Iigador hidrolisável por ácido. O análogo dissul- feto da N-acetil-y-caliqueamicina semi-sintética é usado na conjugação (Pa- tentes US N°s 5.606.040 e 5.770.710).
Em outras modalidades, o conjugado anticorpo-caliqueamicina é CME-548 (vide, por exemplo, o Pedido de Patente US N0 11/221.902 (aqui incorporado a título de referência)).
Em certas outras modalidades, o fármaco citotóxico pertence à família enediina de esperamicinas. As esperamicinas foram identificadas em culturas de Actinomadura verrucosospora (M. Konishi et al., J. Antibiot., 1985, 38: 1605-1609), e a elucidação de suas estruturas foi reportada (J. Golik etal., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3461-3462; J. Golik etal., J. Am. Chem. Soc., 1987, 109: 3462-3464). O mecanismo pelo qual estas molécu- las produzem citotoxicidade foi investigado e verificou-se que ele é similar àquele das caliqueamicinas e envolvem a participação de uma espécie dir- radial que leva à formação de ruturas de DNA de cordão simples e de cor- dão duplo (B.H. Long etal., Proc. Natl. Acad. Sei. EUA, 1989, 86: 2-6).
Em certas modalidades da presente invenção, o conjugado quimioterapêutico é um conjugado anticorpo-esperamicina. Como será ob- servado, o termo "esperamicina" pode referir-se a qualquer membro da famí- lia esperamicina de agentes antibacterianos e antitumorais conhecidos na técnicatura; análogos ou derivados destas esperamicinas também podem ser empregados (vide, por exemplo, as Patentes US NoS 4.675.187, 4.539.203, 4.554.162, and 4.837.206, cada uma delas estando aqui incorpo- rada em sua integridade a título de referência).
III. lnterleucina-11
A presente invenção fornece métodos de administração de, e composições farmacêuticas compreendendo, interleucina-11 (IL-11).
Interleucina-11 é um membro de uma família de fatores de crescimento que inclui hormônio do crescimento, fator estimulante de colô- nia de granulócitos (G-CSF), e similares fatores de crescimento. IL-11 tam- bém é um membro de uma família de citocinas que inclui IL-6, fator inibitório de leucemia (LIF), oncostatina M (OSM)1 e fator neurotrófico ciliar (CNTF), que sinalizam todos através de uma subunidade receptora comum, gp130 (S. Neben & K. Turner, Stem Cells, 1993, 11: 156-162). IL-11, que é produ- zida naturalmente pelas células estromatosas da medula óssea, é um fator de crescimento trombopoiético que, em conjunto com outros fatores, estimu- la a proliferação de células-tronco hematopoiéticas e células progenitoras de megacarióxitos e induz a maturação resultando em produção aumentada de plaquetas.
Tipicamente, os métodos e as composições inventivas utilizam IL-11 em uma forma ativa, e geralmente em uma forma ativa substancial- mente livre de associação a outras proteínas ou materiais proteináceos de mamíferos.
lnterleucina-11 (ou IL-11), usada de acordo com a presente in- venção, geralmente é uma proteína isolada compreendendo a seqüência de polipeptídios inteira da IL-11 do tipo selvagem ou mutante ou um fragmento ativo da mesma. Uma proteína ou polipeptídio pode ser considerado isolado em virtude de sua origem ou manipulação, por exemplo se (a) estiver pre- sente em uma célula hospedeira como o produto de expressão de uma por- ção de um vetor de expressão; ou (b) estiver ligado a uma proteína ou por- ção química diferente daquela à qual ele está ligado na natureza; ou (c) não ocorrer na natureza. Alternativamente ou adicionalmente, um polipeptídio ou proteína isolada pode ser um polipeptídio ou proteína que é produzida ou preparada (inclusive por síntese química) pela mão do homem. Os especia- listas na técnica vão perceber que um polipeptídio ou proteína do tipo selva- gem tem uma seqüência de aminoácidos normal encontrada na natureza, ao passo que um polipeptídio ou proteína mutante tem uma seqüência de ami- noácidos que é idêntica àquela do tipo selvagem na maioria das posições, mas que inclui um ou mais diferenças (por exemplo, substituições, adições, deleções, alterações ou combinações das mesmas) em locais precisos. Um mutante pode ter mais de uma diferença mas, como pode ser observado pelos especialistas na técnica, a similaridade de seqüência com o tipo sel- vagem como um todo é mantida.
Em certas modalidades, a IL-11 utilizada de acordo com a pre- sente invenção tem a seqüência da IL-11 humana natural ou de outros ma- míferos (por exemplo, camundongo, rato, coelho, macaco, cachorro, gato, porco, vaca, cavalo e similares). A clonagem molecular e a caracterização da interleucina-11 murina foi apresentada por J.C. Norris et ai, (Exp. Hema- tol., 1996, 24: 1369-1376, que está aqui incorporado em sua integridade a título de referência). A seqüência de cDNA e a seqüência de aminoácidos (código de uma letra) de clones de primata (macaco saudável) e de clones humanos do polipeptídio IL-11 podem ser encontradas nas Patentes US N°s 5.371.193, 5.700.664, 5.854.028 e 6.066.317 (cada uma delas estando aqui incorporada em sua integridade a título de referência). A seqüência de nu- cleotídeo de primata compreende 1100 pares de bases, incluindo uma se- qüência não-codificadora 5' de 72 bases e uma seqüência não-codificadora 3' de 431 bases. A seqüência de nucleotídeo humana contém similarmente uma única estrutura de leitura comprida de 597 nucleotídeos. Tanto a prote- ína IL-11 de primata quanto a proteína IL-11 humana têm uma massa mole- cular de aproximadamente 19.000 dáltons; 178 aminoácidos de comprimen- to; e são não-glicosiladas. Um polinucleotídeo que codificado IL-11 de pri- mata ou ser humano foi descrito na Patente US N0 5.215.895 (que está aqui incorporada em sua integridade a título de referência).
Por conseguinte, em certas modalidades, a IL-11 incluída em uma composição farmacêutica ou usada em um método de tratamento da presente invenção compreende IL-11 murina. Em outras modalidades, a IL- 11 compreende IL-11 de primata. Em ainda outras modalidades, a IL-11 compreende IL-11 humana. Em algumas modalidades, o tipo de proteína IL- 11 utilizada coincide com aquela da espécie alvo (isto é, a espécie de indiví- duo que vai passar pelo tratamento com IL-11). Por exemplo, em algumas modalidades, a IL-11 humana é usada em composições e métodos para tratamento de seres humanos.
Em outras modalidades, a seqüência de aminoácidos da IL-11 a ser usada nas composições e métodos da presente invenção é suficiente- mente homóloga à IL-11 natural (por exemplo, a uma ou mais seqüências publicadas nas referências citadas acima e/ou listadas em bancos de dados estabelecidos tais como GenBank, SwissProt etc.). Tipicamente, polipeptí- dios ou proteínas são considerados suficientemente homólogos à IL-11 na- tural se eles compartilharem identidade de seqüência geral de pelo menos 35% com a IL-11. Em certas modalidades, a identidade de seqüência é pelo menos 40%, 60%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais. Os cál- culos da percentagem de homologia ou identidade de duas seqüências de aminoácidos podem ser efetuados por alinhamento das duas seqüências para fins de comparação otimizada (por exemplo, hiatos podem ser introdu- zidos em uma ou ambas de uma primeira e uma segunda seqüência de a- minoácidos para alinhamento ótimo e as seqüências não homólogas podem ser desconsideradas para fins de comparação). Em certas modalidades, o comprimento de uma seqüência de referência alinhada para fins de compa- ração é pelo menos 30%, 40%, 60%, 80%, 90%, 95% ou mais, por exemplo, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% do comprimento da seqüência de referência.
Os resíduos de aminoácido nas posições de aminoácidos correspondentes são então comparados. Quando uma posição na primeira seqüência é ocu- pada pelo mesmo resíduo de aminoácidos que a posição correspondente na segunda seqüência, então as moléculas são idênticas (ou homólogas) na- quela posição. A percentagem de identidade entre as duas seqüências é função do número de posições idênticas compartilhadas pelas seqüências, levando-se em consideração o números de hiatos, e o comprimento de cada hiato, que precisam ser introduzidos para alinhamento ótimo das duas se- qüências.
A comparação de seqüências e a determinação da percentagem de identidade entre duas seqüências podem ser efetuadas usando um algo- ritmo matemático. Por exemplo, a percentagem de identidade entre duas seqüências de aminoácidos pode ser determinada usando o algoritmo de Needleman e Wunsch (J. Mol. Biol., 1970, 48: 444-453), que foi incorporado no programa GAP no pacote de software GCG (disponível em http://www.gcq.com), usando uma matriz Blossum 62 ou uma matriz PAM250, e um peso de hiato de 16, 14, 12, 10, 8, 6, ou 4 e um peso de comprimento de 1, 2, 3, 4, 5, ou 6. A percentagem de identidade entre duas seqüências de aminoácidos também pode ser determinada usando o algo- ritmo de Meyers e Miller (CABIOS, 1989, 4: 11-17), que foi incorporado no programa ALIGN (versão 2.0), usando uma tabela de resíduo de peso PAM120, um comprimento de intervalo de penalidade de 12 e um intervalo de penalidade 4.
Comparada com a seqüência de aminoácidos da IL-11 natural, uma seqüência suficientemente homóloga pode incluir uma ou mais substi- tuições conservadoras, adições, alterações ou deleções de um ou mais re- síduos de aminoácidos. Como será entendido pelos especialistas na técni- ca, substituições conservadoras geralmente representam substituições que são fisicamente ou funcionalmente similares ao resíduo de referência cor- respondente, por exemplo, que têm um tamanho, formato, carga elétrica, propriedades químicas, inclusive a capacidade de formar ligações covalen- tes ou de hidrogênio, ou outros fatores similares. Em algumas modalidades, substituições conservadoras são aquelas que satisfazem os critérios defini- dos para uma "mutação pontual aceita" por Dayhoff et ai ("Atlas of Protein Sequence and Structure", 1978, Nat. Biomed. Res. Foundation, Washington, DC, Suppl. 3, 22: 354-352). Técnicas para tais substituições, inserções ou deleções de resíduos individuais ou conjuntos de resíduos são bem- conhecidas na literatura (vide, por exemplo, a Patente US N0 4.518.584).
Em algumas modalidades da invenção, a seqüência de aminoá- cidos da IL-11 a ser usada nas composições e métodos da presente inven- ção é um fragmento ativo da seqüência natural de IL-11 ou um fragmento ativo de uma seqüência que é suficientemente homóloga à seqüência natu- ral de IL-11.
Fragmentos ativos de IL-11 geralmente têm uma seqüência que é idêntica ou suficientemente homóloga à IL-11 mas inclui menos aminoáci- dos que a proteína de comprimento integral, e retém a capacidade de blo- quear a trombocitopenia, lesão hepática e/ou inflamação associada à lesão hepática. Especificamente, um fragmento ativo de IL-11, para os propósitos da presente invenção, pode ser um fragmento que retém a capacidade de prevenir, aliviar, reduzir ou deter a trombocitopenia; prevenir, aliviar, reduzir ou deter uma lesão hepática; limitar uma inflamação associada à lesão he- pática; ou qualquer combinação destes, quando administrado a um indiví- duo. Tipicamente, um fragmento ativo pode compreender um domínio ou motivo da proteína de comprimento integral tendo atividade. Um fragmento ativo pode ser de polipeptídio que tem, por exemplo, 10, 25, 50, 100, 150, 175, 177, 178, 180, 185, 190, 195, 200 ou mais aminoácidos de comprimen- to. Quando aplicado à IL-11, o termo "fragmento ativo" refere-se a qualquer peptídio compreendendo uma seqüência de aminoácidos suficientemente homóloga à seqüência de aminoácidos da IL-11 natural ou derivada da mesma, que inclui menos aminoácidos que a proteína de comprimento inte- gral, e retém a capacidade de prevenir, aliviar, reduzir ou deter a tromboci- topenia; prevenir, aliviar, reduzir ou deter uma lesão hepática; limitar uma inflamação associada à lesão hepática; ou qualquer combinação destes, quando administrado a um indivíduo.
Fragmentos ativos particulares de IL-11 têm seqüências de a- minoácidos substancialmente idênticas a uma porção da seqüência de ami- noácidos da seqüência da IL-11 natural. Estas seqüências substancialmente idênticas contêm um número significativo de resíduos de aminoácidos que são (i) idênticos a, ou (ii) substituições conservadoras de resíduos de ami- noácidos alinhados de modo que elas incluem o domínio estrutural relevante e/ou a atividade funcional da IL-11. Por exemplo, seqüências de aminoáci- dos que contêm um domínio estrutural comum apresentando pelo menos cerca de 60% ou 65% de identidade, pelo menos 75% de identidade, ou pe- lo menos 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 100% de identidade com um domínio relevante de IL-11 podem ser substancialmente idênticas.
A interleucina-11 a ser usada nas composições e métodos da presente invenção pode ser obtida por qualquer método adequado. Métodos de produção de polipeptídios ou proteínas são bem-conhecidos na técnica- tura. Por exemplo, a IL-11 pode ser obtida como uma proteína homogênea purificada de uma linhagem celular mamífera que a secreta; ou pode ser sintetizada quimicamente. Alternativamente, a interleucina-11 pode ser pro- duzida por técnicas recombinantes para possibilitar a produção de uma grande quantidade de IL-11 ativa pura útil para aplicações terapêuticas (co- mo descrito nas Patentes US N°s 5.215.895, 5.31.193, 5.700.664, 5.854.028 and 6.066.317, cada uma delas aqui incorporada em sua integridade a título de referência).
Por exemplo, a IL-11 incluída em uma composição farmacêutica da invenção ou usada em um método de tratamento da invenção pode ser produzida em uma célula hospedeira por métodos de DNA recombinante. As células hospedeiras podem ser células de mamíferos ou não mamíferos. Células mamíferas adequadas incluem, porém sem limitação, células de cultura de tecido mamíferas não humanas tais como células de ovário de hamster chinês (CHO), células COS de macaco, e células NHI3T3 de fibro- blasto de camundongo; e células de cultura de tecido humanas tais como células HeLa, células HL-60, células 293 renais, e células S431 epidérmicas. Células hospedeiras não mamíferas incluem células de bactérias tais como Escherichia coli, Bacillus subtilis, cepas atenuadas de Salmonella typhimuri- um, e similares; células de levedura tais como Saccharomyees eerevisiae, Schizosaceharomyees pombe, cepas de Kluyveromyees, Candida, ou qual- quer cepa de levedura capaz de expressar proteínas; células de inseto tais como Spodoptera frugiperda.
Em certas modalidades, a IL-11 incluída em uma composição farmacêutica da invenção ou usada em um método de tratamento da inven- ção é IL-11 humana produzida em Eseheriehia coli (E. coli) por métodos de DNA recombinante. A proteína produzida por este método tem 177 aminoá- cidos de comprimento e difere do comprimento de 178 aminoácidos da IL-11 nativa somente por faltar-lhe o resíduo prolina amino-terminal. Esta altera- ção não mostrou resultar em diferenças mensuráveis na bioatividade seja in vitro ou in vivo (Patente US N0 6.066.317).
IL-11 humana recombinante produzida por este método é cha- mada de Oprelvekin (S.V. Sitaraman & A.T. Gewirtz, Curr. Opin. Invest. Drugs, 2001, 2: 1395-1400). Oprelvekin1 é o ingrediente ativo em NEUME- GA® (Wyeth), o primeiro e único fator de crescimento plaquetário comerci- almente disponível até hoje. Em novembro de 1997, o FDA liberou o Oprel- vekin para a prevenção de trombocitopenia grave e para a redução da ne- cessidade de transfusões de plaquetas subseqüente à quimioterapia mie- Iossupressora em pacientes suscetíveis com malignidades não-mielóides (J.A. Kaye, Stem Cells, 1996, 14 Suppl. 1: 256-260). NEUMEGA® (Oprelve- kin) pode ajudar a prevenir as contagens de plaquetas progressivamente mais baixas causadas por quimioterapia. Em particular, o tratamento com NEUMEGA® pode ajudar pacientes com câncer a manter a dose planejada de quimioterapia no tempo (PDOT), evitando assim a redução da dose e atrasos da dose, e pode ajudar a reduzir a necessidade de transfusão de plaquetas. NEUMEGA® (OpreIvekin) também apresentou potente atividade trombopoiética em modelos animais de hematopoiese comprometida, inclu- indo camundongos e primatas não humanos moderadamente a severamen- te mielossuprimidos. Nestes modelos, o NEUMEGA® melhorou os nadires de plaquetas e acelerou as recuperações de plaquetas comparado com con- troles.
IV. Métodos de tratamento
Em um aspecto, a presente invenção refere-se a métodos e/ou sistemas para o controle de trombocitopenia induzida por fármaco incluindo trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de lesão hepática induzi- da por fármaco e trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de des- truição da medula óssea induzida por fármaco. Especificamente, a invenção fornece métodos e/ou sistemas para aliviar a trombocitopenia (isto é, para prevenir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia).
Em geral, os métodos de prevenção visam retardar ou prevenir o aparecimento de uma condição médica. Nestes métodos, a terapia é tipi- camente administrada antes do aparecimento da condição para uma ação profilática. Os métodos de tratamento em geral, visam (1) aliviar ou deter a progressão, o agravamento, ou a deterioração dos sintomas de uma condi- ção médica; (2) causar a melhora de um ou mais sintomas da condição; e/ou (3) curar a condição. Nestes métodos, a terapia é tipicamente adminis- trada depois do início da condição, para uma ação terapêutica.
Os métodos da presente invenção incluem a etapa de: adminis- trar uma quantidade terapeuticamente eficaz de interleucina-11 a um indiví- duo com necessidade do mesmo. Indivíduos ou pessoas apropriados que recebem a terapia da invenção incluem seres humanos ou outros mamíferos (por exemplo, camundongos, ratos, coelhos, cachorros, gatos, gado bovino, gado suíno, gado caprino, cavalos ou primatas) que sofrem ou podem vir a sofrer, ou estão suscetíveis, a uma doença ou distúrbio (por exemplo, trom- bocitopenia, lesão hepática ou destruição da medula óssea) mas podem ter ou não a doença ou distúrbio ou os sintomas da doença ou distúrbio. Em algumas modalidades, o indivíduo às vezes é um paciente humano.
Os métodos da presente invenção geralmente envolvem a ad- ministração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente parti- cular. Uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para obter (em princípio, para um indivíduo de características equiparáveis, tais como espécie, tipo de corpo, tamanho, dimensão da doença ou distúr- bio, grau ou tipo de sintomas, histórico de sensibilidade, e/ou estado geral de saúde) uma resposta biológica ou médica ou benefício terapêutico dese- jados em um tecido, sistema ou indivíduo. Por exemplo, uma resposta dese- jável pode incluir um ou mais de: retardar ou prevenir o aparecimento de uma condição médica, doença ou distúrbio, aliviar ou deter a progressão, o agravamento, ou a deterioração dos sintomas da condição, causar melhoras dos sintomas da condição, e curar a condição. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um quimioterápico é tipicamente uma quantidade suficiente para obter um retardamento, uma redução ou uma melhora desejada do progresso de um tumor. Uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de IL-11 pode ser diferente dependendo da resposta desejada. Por exemplo, uma quantidade de IL-11 eficaz para pre- venir a trombocitopenia pode ser diferente de uma quantidade de IL-11 efi- caz para tratar a trombocitopenia, e pode ser diferente das quantidades para prevenir ou tratar lesão hepática ou destruição da medula óssea. Similar- mente, uma quantidade de IL-11 eficaz para tratar trombocitopenia induzida por um primeiro fármaco pode ser diferente de uma quantidade de IL-11 efi- caz para prevenir trombocitopenia induzida por um segundo fármaco dife- rente, etc.
Também, será observado que, quando combinações de agentes terapêuticos são administradas, a quantidade de qualquer agente individual necessária na combinação pode ser diferente da quantidade necessária da- quele mesmo agente para obter seu efeito terapêutico isolado. Em alguns casos, sinergias entre os agentes terapêuticos usados em uma combinação podem reduzir as quantidades necessárias; em outros casos, interações inibitórias podem aumentar as quantidades necessárias. Por conseguinte, de um modo geral, quantidades terapeuticamente eficazes de uma combi- nação de agentes podem utilizar quantidades absolutas dos agentes dife- rentes daquelas que constituem quantidades terapeuticamente eficazes dos agentes individualmente.
Os métodos da presente invenção podem ser usados para pre- venir o aparecimento de trombocitopenia (por exemplo, em um indivíduo passando ou que vá passar por uma terapia envolvendo um conjugado tera- pêutico cuja administração resulta ou pode resultar em trombocitopenia). Alternativamente, os métodos da presente invenção podem ser usados para tratar trombocitopenia (por exemplo, em um indivíduo que tenha recebido e/ou esteja recebendo uma terapia envolvendo um conjugado terapêutico cuja administração resulta trombocitopenia). Será observado que contagens de plaquetas diferentes podem assegurar um diagnóstico de trombocitope- nia para diferentes espécies de mamíferos. Nos seres humanos, a conta- gem de plaquetas no sangue circulante normalmente varia entre 150 e 400 milhões por mililitro de sangue (ou 150 a 400 χ 109/l).
Exames de laboratório usados para diagnosticar trombocitope- nia (ou para avaliar os efeitos dos métodos de tratamento da presente in- venção) incluem contagem de sangue total. Uma análise de contagem de células pode ser feita manualmente, observando uma lâmina preparada com uma amostra do sangue do paciente em um microscópio, ou automatica- mente, usando um analisador automático (por exemplo, um instrumento Coulter Model S-pIus). Uma contagem de sangue total normalmente fornece informações sobre as concentrações das diferentes células presentes no sangue, inclusive plaquetas.
A. Lesão hepática
Certas modalidades da presente invenção fornecem métodos e composições para administração a um indivíduo sofrendo de ou suscetível à trombocitopenia resultante de lesão hepática induzida por fármaco. Um indi- víduo pode estar sofrendo de ou pode estar suscetível à lesão hepática se esse indivíduo tiver sido diagnosticado com lesão hepática (por exemplo, tiver sido testado e ter sido verificado que ele tem lesão hepática); for sus- peito de ter lesão hepática (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas indicativos de lesão hepática, tiver um ou mais fatores de risco, ou estiver sendo testado quanto à lesão hepática); for clinicamente sabido que ele tem tendência a sofrer de lesão hepática (por exemplo, tiver um histórico de le- são hepática); ou tiver recebido, estar recebendo ou estar para receber um tratamento envolvendo um agente terapêutico cuja administração resulta em lesão hepática. Indivíduos que já passaram por uma terapia para lesão he- pática também podem ser considerados como sofrendo de ou estando sus- cetível à lesão hepática.
Lesão hepática pode incluir qualquer lesão, defeito ou disfunção do fígado causada por um fator particular (por exemplo, um conjugado) ou uma combinação de fatores. Por exemplo, lesão hepática inclui, porém sem limitação, degeneração ou necrose das células parenquimatosas do fígado; mobilização, infiltração, ativação das células de Kupffer, leucóticos, e simila- res; inchaço do fígado; fibrose do tecido hepático; assim como qualquer rea- ção biológica ou condição que resulta da lesão (incluindo, porém sem limita- ção, inflamação e esplenomegalia).
Em certas modalidades, os métodos e as composições farma- cêuticas da presente invenção são usados para prevenir ou tratar lesão he- pática induzida por fármaco que resulta em trombocitopenia. Por exemplo, os métodos e as composições farmacêuticas da invenção podem ser usa- dos para prevenir o aparecimento de lesão hepática induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo a ser submetido a um tratamento envolvendo um conjugado cuja administração resulta em lesão hepática). Alternativa- mente ou adicionalmente, os métodos e as composições farmacêuticas da invenção podem ser usados para tratar lesão hepática induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo que tenha recebido um tratamento envolven- do um conjugado cuja administração resulta em lesão hepática).
Lesão hepática pode ser diagnosticada de acordo com técnicas estabelecidas. Por exemplo, lesão hepática freqüentemente é diagnosticada usando um conjunto de exames de sangue de laboratório bioquímicos clíni- cos criados para fornecer informações sobre o estado do fígado do indiví- duo. Como o fígado produz a maior parte das proteínas plasmáticas no cor- po, medir a quantidade de proteína total e/ou a quantidade de albumina (o principal constituinte de proteína total e uma proteína produzida especifica- mente pelo fígado) no sangue nos dá informações a respeito do estado de funcionamento do fígado. Quando o fígado é lesionado, ele pode deixar de produzir fatores de coagulação do sangue: o tempo de protrombina pode ser medido para diagnosticar distúrbios de coagem do sangue, geralmente san- gramento, resultantes de lesão hepática. A concentração de bilirubina sérica também pode ser medida como uma indicação do estado do fígado do paci- ente. A bilirubina é o principal produto de decomposição que resulta da des- truição de células sangüíneas vermelhas velhas (assim como outras fontes). Ela é removida do sangue pelo fígado, quimicamente modificada por um processo denominado conjugação, secretada na bile, passada para o intes- tino e até certo ponto reabsorvida do intestino. Muitas doenças e condições hepáticas diferentes podem fazer com que as concentrações de bilirubina sérica sejam elevadas. Também podem ser feitos exames de sangue para medir uma ou mais de alanina transaminase (ALT), fosfatase alcalina (ALP), aspartato transaminase (AST),e gama glutamil transpeptidase (GGT). ALT é uma enzima presentes nos hepatócitos. Quando uma célula hepática é Iesi- onada, esta enzima vaza para o sangue, onde ela pode ser medida. A ALT aumenta drasticamente em uma lesão hepática aguda, tal como hepatite viral ou superdosagem de acetaminofeno. As elevações geralmente são medidas em múltiplos do limite superior de normal (ULN). A ALP é uma en- zima presente nas células que revestem os dutos biliares do fígado. Se hou- ver uma obstrução no duto biliar (por exemplo, cálculos biliares), os níveis de ALP no plasma vão aumentar. AST é similar à ALT no sentido de ser uma outra enzima associada às células parenquimatosas do fígado, que é aumentada na lesão hepática aguda. GGT é uma enzima cujos níveis po- dem ser elevados com níveis subclínicos ainda menores de disfunção hepática.
Alternativamente ou adicionalmente, estes exames de laborató- rio para o diagnóstico de lesão hepática podem ser usados para avaliar os efeitos dos métodos da presente invenção.
Em certas modalidades da presente invenção, a lesão hepática a lesão hepática é associada à (isto é, inclui, é acompanhada de ou resulta em) inflamação. Inflamação é uma conseqüência natural de lesão do tecido adulto e da tentativa inicial do corpo de se curar sozinho. Durante a fase ini- cial da inflamação, neutrófilos e macrófagos são atraídos para o local da lesão/inflamação. Uma vez ativados, eles produzem grandes quantidades de espécie de oxigênio reativo (ROS) através de uma explosão respiratório consumidora de oxigênio. Uma finalidade desses produtos celulares é des- truir o tecido lesionado, eliminar os organismos invasores e prevenir a infec- ção. Apesar deste efeito benéfico, a produção prolongada de níveis altos de ROS pode prejudicar a cicatrização e causar dano adicional e severo do te- cido e sua deterioração. Os métodos e as composições farmacêuticas da presente in- venção podem ser usados para prevenir ou limitar a inflamação associada à lesão hepática induzida por fármaco. Por exemplo, os métodos e as compo- sições farmacêuticas da invenção podem ser usados para limitar a extensão ou o grau de inflamação de outra forma observado depois da administração de um conjugado que produz lesão hepática.
A extensão da inflamação e/ou dos efeitos dos métodos e com- posições da invenção podem ser avaliados usando qualquer um de varieda- de de exames adequados conhecidos na técnicatura. Estes exames incluem ensaios que medem a taxa de sedimentação dos eritrócitos (ESR)1 que ser- ve de maneira conveniente para pesquisar qualquer processo inflamatório no corpo; ensaios que medem a proteína C-reactiva (CRP, cuja produção pelo fígado aumenta até mil vezes em resposta a um insulto); e ensaios que medem as contagens de neutrófilos.
B. Destruição da medula óssea
Certas modalidades da presente invenção referem-se a méto- dos e composições para administração a um indivíduo que sofre de ou seja suscetível à trombocitopenia resultante de destruição da medula óssea in- duzida por fármaco. Um indivíduo pode estar sofrendo de ou estar suscetível à destruição da medula óssea se esse indivíduo tiver sido diagnosticado com destruição da medula óssea (por exemplo, tiver sido testado e verifica- do que ele apresenta lesão, defeito ou disfunção da medula óssea); for sus- peito de ter destruição da medula óssea (por exemplo, apresentar um ou mais sintomas de destruição da medula óssea); ou tiver recebido, estiver recebendo ou estiver para receber um tratamento envolvendo um conjugado cuja administração resulta em destruição da medula óssea.
Destruição da medula óssea pode incluir qualquer lesão, defeito ou disfunção da medula óssea causada por um fator particular (por exemplo, conjugado) ou uma combinação de fatores que resulta na produção diminuí- da ou defeituosa de plaquetas. Por exemplo, destruição da medula óssea inclui, porém sem limitação, degeneração ou necrose de megacariócitos, produção diminuída de megacariócitos, e alteração ou lesão da medula ós- sea produzindo um ambiente desfavorável para a produção de plaquetas a partir de megacariócitos.
Em certas modalidades, os métodos e as composições farma- cêuticas da invenção são usados para prevenir ou tratar destruição da me- dula óssea induzida por fármaco que resulta em trombocitopenia. Por e- xemplo, os métodos e as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser usados para prevenir a destruição da medula óssea induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo a ser submetido a um tratamento envolvendo um conjugado cuja administração resulta na destruição da me- dula óssea) ou para tratar destruição da medula óssea induzida por fármaco (por exemplo, em um indivíduo que tenha recebido um tratamento envolven- do um conjugado cuja administração resulta em destruição da medula ós- sea).
Destruição da medula óssea pode ser diagnosticada de acordo com técnicas estabelecidas. Por exemplo, destruição da medula óssea pode ser diagnostica avaliando-se a celularidade e morfologia de células eritróides residuais em um aspirado ou biópsia da medula óssea. A atividade da me- dula óssea também pode ser determinada por métodos radiográficos ou mé- todos de imagem que incluem imagem por ressonância magnética (MRI) e tomografia por emissão de pósitrons (PET).
C. Seleção de indivíduos
Em certas modalidades, indivíduos adequados para receber um tratamento de acordo com a presente invenção incluem indivíduos que so- frem de trombocitopenia induzida por fármaco; indivíduos clinicamente cons- tatados como tendo tendência a sofrer de trombocitopenia induzida por fár- maco; indivíduos que tenham recebido, estejam recebendo ou estejam para receber um tratamento envolvendo um agente terapêutico conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia. Indivíduos adequados podem já ter recebido ou não tratamento tradicional para a condição.
Antes da administração de uma terapia ou composição da in- venção, o indivíduo pode ser testado quanto à trombocitopenia, lesão hepá- tica, inflamação, e/ou destruição da medula óssea, usando um ou mais dos métodos descritos acima. Os mesmos métodos ou métodos similares po- dem ser usados para determinar os efeitos do tratamento/composição far- macêutica da invenção no indivíduo.
Indivíduos que sofrem de ou são suscetíveis à trombocitopenia induzida por fármaco podem estar com câncer ou com uma doença cance- rosa. Em algumas modalidades, a trombocitopenia no indivíduo resulta, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida por um conjugado quimiotera- pêutico. Alternativamente ou adicionalmente, a trombocitopenia resulta, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea induzida por um conjugado quimioterapêutico.
Em geral, câncer ou doença cancerosa refere-se a ou descreve uma condição fisiológica em mamíferos que é tipicamente caracterizada por crescimento celular descontrolado. Exemplos de cânceres incluem, porém sem limitação, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, e leucemia. Mais particularmente, exemplos de tais cânceres incluem carcinoma de células escamosas, câncer de pulmão de pequenas células, câncer de pulmão de não-pequenas células, câncer de pâncreas, glioblastoma multiforme, mela- noma, mieloma múltiplo, linfoma não-Hodgkin, câncer de esôfago/oral, cân- cer cervical, câncer de ovário, câncer endometrial, câncer de próstata, cân- cer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon e câncer retal, câncer ósseo, câncer renal, Ieucemias mielóide, linfocítica, mielocítica, e linfoblástica, e câncer de cabeça e pescoço, para mencionar alguns.
Em algumas modalidades, indivíduos adequados para receber uma terapia e/ou uma composição farmacêutica da invenção incluem paci- entes com câncer que sofrem de ou sejam suscetíveis à trombocitopenia. Tais pacientes com câncer podem incluir indivíduos diagnosticados com câncer (por exemplo, testados e verificados que têm câncer), indivíduos suspeitos de ter câncer (por exemplo, apresentando um ou mais sintomas indicativos de câncer, tendo um ou mais fatores de risco, ou sendo avalia- dos quanto à presença de câncer). Alternativamente ou adicionalmente, pa- cientes com câncer podem incluir indivíduos que já receberam terapia para câncer. D. Dosagem e administração
A administração de IL-11 (e/ou outro agente), de acordo com os métodos da presente invenção, pode consistir em uma dose única ou em uma pluralidade de doses durante um período de tempo. A administração de interleucina-11 antes da administração de CMC-544 resulta na prevenção de lesão hepática e trombocitopenia associadas a CMC-544 (vide exemplo 1), e na redução de inflamação associada a CMC-544 (vide exemplo 2). Por con- seguinte, em certas modalidades, a IL-11 é antes da administração do con- jugado que produz trombocitopenia. Alternativamente ou adicionalmente, a IL-11 pode ser administrada concorrentemente com a administração do con- jugado e/ou subseqüente à administração do conjugado.
As administrações da invenção podem ser efetuadas de qual- quer maneira conveniente tal como por injeção (subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, ou outra) ou por administração oral.
Dependendo da via de administração, as doses eficazes podem ser calculadas segundo o peso corporal, a área superficial do corpo ou o tamanho do órgão. Otimização das dosagens apropriadas pode ser feita fa- cilmente pelo versado na técnica, por exemplo, à luz dos dados farmacoci- néticos em estudos pré-clínicos ou experiências clínicas com humanos. O regime de dosagem final geralmente vai ser determinado pelo médico assis- tente, que pode considerar vários fatores que modificam a ação dos fárma- cos, por exemplo, a atividade específica do fármaco, a severidade da lesão e a sensibilidade do paciente, a idade, a condição, o peso corporal, o sexo e a dieta do paciente, a severidade de qualquer infecção presente, o tempo de administração e similares fatores clínicos. À medida em que os estudos são conduzidos, vão surgir outras informação referentes aos níveis de dosagem apropriados e à duração do tratamento.
Também será observado que, nos métodos da presente inven- ção, a IL-11 e/ou outros agentes terapêuticos (por exemplo, conjugados) podem ser empregados em terapias combinadas (isto é, podem ser adminis- trados concorrentemente com, antes de, ou subseqüente a uma ou mais terapias desejadas de procedimentos médicos). A combinação particular de terapias (terápicos ou procedimentos) a ser empregada em um regime com- binado normalmente vai levar em consideração a compatibilidade dos terá- picos e/ou procedimentos desejados e o efeito terapêutico desejado que se deseja obter.
Por exemplo, nas modalidades em que o conjugado é usado no tratamento de câncer, os métodos da presente invenção podem ser empre- gados em combinação com outros procedimentos que incluem cirurgia, ra- dioterapia (por exemplo, radiação γ, radioterapia com feixes de neurônios, radioterapia com feixes de elétrons, terapia com próton, braquiterapia, e isó- topos radioativos sistêmicos), terapia endócrina, hipertermia e crioterapia.
Alternativamente ou adicionalmente, os métodos da presente invenção podem ser empregados em combinação com outros agentes, por exemplo para atenuar um ou mais efeitos adversos (por exemplo, antieméti- cos, analgésicos, fármacos contra náusea), outras fármacos quimioterapêu- ticos aprovados, incluindo, porém sem limitação, fármacos alquilantes (me- cloretamina, clorambucila, ciclofosfamida, melfalano, ifosfamida), antimeta- bólitos (metotrexato), antagonistas de purina e antagonistas de pirimidina (6-mercaptopurina, 5-fluoruracila, citarabila, gencitabina), venenos de fuso (vimblastina, vincristina, vinorelbina, paclitaxel), podofilotoxinas (etoposida, irinotecano, topotecano), antibióticos (doxorubicina, bleomicina, mitomicina), nitrosouréias (carmustina, lomustina), íons inorgânicos (cisplatina, carbopla- tina), enzimas (asparaginase), e hormônios (tamoxifeno, leuprolida, flutami- da, e megestrol), para mencionar alguns. Para uma discussão mais comple- ta de terapias atuais para câncer, vide The Merck Manual, 17th Ed. 1999, cujas seções de terápicos contra câncer estão aqui incorporadas a título de referência.
Os métodos da presente invenção também podem ser empre- gados junto com uma ou mais combinações de agentes citotóxicos como parte de um regime de tratamento, onde a combinação de agentes citotóxi- cos é selecionada, por exemplo, de CHOPP (cciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, prednisona, e procarbazina); CHOP (ciclofosfamida, doxorubici- na, vincristina, e prednisona); COP (ciclofosfamida, vincristina, e predniso- na); CAP-BOP (ciclofosfamida, doxorubicina, procarbazina, bleomicina, vin- cristina, e prednisona); m-BACOD (metotrexato, bleomicina, doxorubicina, ciclofosfamida, vincristina, dexametasona, e leucovorina); ProMACE-MOPP (prednisona, metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, etoposida, leucovo- rina, mecloetamina, vincristina, prednisona, e procarbazina); ProMACE- CytaBOM (prednisona, metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, etoposida, leucovorina, citarabina, bleomicina, e vincristina); MACOP-B (metotrexato, doxorubicina, ciclofosfamida, vincristina, prednisona, bleomicina, e leucovo- rina); MOPP (mecloetamina, vincristina, prednisona, e procarbazina); ABVD (adriamicina/doxorubicina, bleomicina, vimblastina, e dacarbazina); MOPP (mecloetamina, vincristina, prednisona e procarbazina) alternando com ABV (adriamicina/doxorubicina, bleomicina, e vimblastina); MOPP (mecloetamina, vincristina, prednisona, e procarbazina) alternando com ABVD (adriamici- na/doxorubicina, bleomicina, vimblastina, e dacarbazina); ChIVPP (cloram- bucil, vimblastina, procarbazina, e prednisona); IMVP-16 (ifosfamida, meto- trexato, e etoposida); MIME (metil-gag, ifosfamida, metotrexato, e etoposi- da); DHAP (dexametasona, citaribina em alta dose, e cisplatina); ESHAP (etoposida, metilpredisolona, alta dose high-dose citarabina, e cisplatina); CEPP(B) (ciclofosfamida, etoposida, procarbazina, prednisona, e bleomici- na); CAMP (lomustina, mitoxantrona, citarabina, e prednisona); CVP-1 (ciclo- fosfamida, vincristina, e prednisona), ESHOP (etoposida, metilpredisolona, citarabina em alta dose, vincristina e cisplatina); EPOCH (etoposida, vincris- tina, e doxorubicina por 96 horas com doses de bolo de ciclofosfamida e prednisona oral), ICE (ifosfamida, ciclofosfamida, e etoposida), CEPP(B) (ciclofosfamida, etoposida, procarbazina, prednisona, e bleomicina), CHOP- B (ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina, prednisona, e bleomicina), CEPP-B (ciclofosfamida, etoposida, procarbazina, e bleomicina), e P/DOCE (epirubicina ou doxorubicina, vincristina, ciclofosfamida, e prednisona).
Alternativamente ou adicionalmente, os métodos da presente invenção podem ser empregados junto com terapias envolvendo a adminis- tração de um ou mais agentes bioativos selecionados do grupo que consiste em anticorpos, fatores de crescimento (por exemplo, fator de necrose turno- ral (TNF), fator estimulante de colônias (CSF)1 fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF) ou fator estimulante de colônias de granulócitos- macrófagos (GM-CSF)), hormônios (por exemplo, estrogênios, androgênios, progestinas, e corticosteróides), citocinas, anti-hormônios, xantinas, interleu- cinas (por exemplo, IL-2), e interferons.
E. Mecanismos
A cinética de diminuição de plaquetas fornece um guia grosseiro do mecanismo da trombocitopenia, apesar de a cinética de diminuição de plaquetas ser um critério altamente variável e poder ser dependente da enti- dade química usada. Por exemplo, camundongos tratados com ciclofosfa- mida mostraram desenvolver um nadir de plaquetas no dia 3 (G. Hangoc et al., Blood, 1993, 81: 965-972); e camundongos tratados com carboplatina e irradiação apresentam um nadir no dia 9 (J.P. Leonard et al., Blood, 1994, 83: 1499-1506). Com base nos presentes exemplos, a carboplatina isolada deu um nadir de 11. Todos esses agentes afetam a produção de plaquetas, mas eles têm efeitos muito diferentes no tempo do nadir de plaquetas. Efei- tos similares foram reportados em macacos. Foi verificado que a carboplati- na dá um nadir de plaquetas no dia 13-14 (F.J. Schlerman et al., Stem Cells 1996, 14: 517-532), mas o ACNU (isto é, cloridrato de 3-[(4-amino-2-metil-5- pirimidinil)metil]-1-(2-cloroetil)-1-nitrosouréia) não produz um nadir antes do dia 21 (M. Saitoh et al., J. Interferon and Cytokine Res., 2000, 20: 539-545). Em seres humanos, CHOP mostrou produzir um nadir em torno do dia 9. Apesar das diferenças, acredita-se que a trombocitopenia produzida por es- ses agentes quimioterapêuticos clássicos, todos eles sendo toxinas da me- dula óssea, resulta da rutura da produção de plaquetas na medula óssea.
Os mecanismos da trombopoiese também são muito complexos e podem ser impactados de muitas maneiras diferentes. Muitos agentes quimioterapêuticos têm efeitos diretos sobre os megacariócitos e sobre os progenitores mefacariocíticos humanos (CFU-megs). Como os megacarióci- tos não se dividem, eles não podem necessariamente interromper a produ- ção de plaquetas imediatamente quando atingidos por uma toxina específica para ciclo. Se os efeitos do agente químico forem direcionados mais para os progenitores e para os megacariócitos prematuros, o efeito sobre as plaque- tas periféricas é reduzido e o nadir ocorre mais tarde. Se os efeitos forem diretamente sobre os megacariócitos e afetarem proteínas assim como DNA, os efeitos sobre as plaquetas circulantes podem ocorrer mais rapida- mente.
Alternativamente, o CMC-544 (e outros conjugados de proteína similares) pode ter um nítido impacto sobre o fígado (transaminases libera- das) e sobre a produção de TPO no fígado (níveis reduzidos de TPO). A produção de TPO parece diminuir logo depois da administração de CMC- 544. É de se esperar que isto resulte em uma redução imediata na estimula- ção de megacariócitos e uma redução associada da produção de plaquetas. Entretanto, como a meia-vida da plaqueta é de cerca de 5 dias nos seres humanos, a cinética sugere que este não seja o único mecanismo da trom- bocitopenia.
Os efeitos do oprelvekin (IL-11) observados nos presentes e- xemplos são consistentes com os efeitos conhecidos como agente protetor do fígado (em animais, vide por exemplo, W.L. Trepicchio et ai, Toxicol. Pa- thol., 2001, 29: 242-249; e em seres humanos, vide por exemplo, R. Ghalib et ai, Hepatology, 2003, 37: 1165-1171). Sua capacidade de melhorar a queda de plaquetas associada ao tratamento com CMC-544, quando IL-11 é dada profilaticamente mas não quando ela é dada concomitantemente, tam- bém é consistente com a cinética conhecida de produtos plaquetários indu- zidos por IL-11. A administração de IL-11 6 horas depois da administração de CMC-544 pode ter sido muito tardia para produzir efeito protetor total so- bre o fígado, mas independente disso pode ter algum efeito positivo.
Trombocitopenia associada ao tratamento usando CMC-544 (e outros conjugados de proteína similares) pode resultar, pelo menos em par- te, de rutura da produção de TPO secundária à lesão hepática e é distinta daquela causada por agentes quimioterapêuticos convencionais que rom- pem a produção de plaquetas Iesionando células da medula óssea. V. Composições farmacêuticas e kits
Em um outro aspecto, a presente invenção fornece composi- ções farmacêuticas compreendendo uma quantidade terapeuticamente efi- caz de interleucina-11 (IL-11) e pelo menos um veículo ou excipiente fisiolo- gicamente aceitável.
Um veículo ou excipiente fisiologicamente aceitável geralmente é um meio veículo ou um excipiente que não bloqueia a eficácia da atividade biológica dos ingredientes ativos da composição e que não excessivamente tóxico para o hospedeiro nas concentrações às quais ele é administrado. O termo inclui solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibac- terianos, agentes isotônicos, agentes retardadores de absorção, e similares. O uso de tais meios e agentes para a formulação de substâncias farmaceu- ticamente ativas é bem-conhecido na técnicatura (vide, por exemplo, "Re- mington's Pharmaceutical Sciences", E.W. Martin, 18th Ed., 1990, Mack Pu- blishing Co.: Easton, PA, que está aqui incorporado em sua integridade a título de referência).
Em certas modalidades, a IL-11 é o único ingrediente ativo em uma composição farmacêutica da invenção. Em outras modalidades, a composição farmacêutica compreende ainda um ou mais outros agentes terapêuticos (por exemplo, um ou mais conjugados). Em ainda outras moda- lidades, a composição farmacêutica compreende ainda uma combinação de agentes terapêuticos. Um ou mais conjugados incluídos em uma composi- ção farmacêutica da invenção podem induzir lesão hepática e/ou destruição da medula óssea.
A. Formulações
Em certas modalidades, uma composição farmacêutica da pre- sente invenção é administrada nas quantidades e pelo tempo necessários para obter um resultado desejado. Por exemplo, uma composição farmacêu- tica pode ser administrada nas quantidades e pelo tempo necessários para prevenir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia induzida por fármaco em um indivíduo (por exemplo, trombocitopenia resultante da administração de um conjugado). Mais especificamente, uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada nas quantidades e pelo tempo para preve- nir, reduzir, aliviar ou deter a destruição anormalmente alta das plaquetas circulantes e/ou a produção diminuída de plaquetas pela medula óssea.
Uma composição farmacêutica da presente invenção também pode ser administrada nas quantidades e pelo tempo necessários para pre- venir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de lesão hepática induzida por fármaco. Alternativamente ou adicio- nalmente, uma composição farmacêutica pode ser administrada nas quanti- dades e pelo tempo necessários para prevenir, reduzir, aliviar ou deter a trombocitopenia resultante, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea induzida por fármaco.
Em certas composições, interleucina-11 (IL-11), um ou mais conjugados e um ou mais veículos ou excipientes fisiologicamente aceitá- veis são combinados em uma ou mais preparações para administração si- multânea ou seqüêncial da IL-11 e dos conjugados. Mais especificamente, uma composição da invenção pode ser formulada de maneira que a IL-11 e os conjugados possam ser administrados ao mesmo ou independentemente um do outro (por exemplo, a composição pode compreender uma ou mais preparações em recipientes individuais).
As composições farmacêuticas, de acordo com a presente in- venção, podem ser administradas usando qualquer quantidade e qualquer via de administração eficaz para prevenir, aliviar, reduzir ou deter a trombo- citopenia que de outra forma seria observada na ausência de administração de IL-11.
Como já mencionado acima, a quantidade exata de composição farmacêutica a ser administrada pode variar de indivíduo para indivíduo, de- pendendo da espécie, da idade, e da condição geral do indivíduo, da severi- dade da condição, do agente terapêutico particular, do modo de administra- ção, da severidade da trombocitopenia e/ou da lesão hepática ou destruição da medula óssea que ele induz, e similares fatores.
As formulações farmacêuticas ótimas desejáveis podem ser de- terminadas dependendo da via de administração e da dosagem desejada. Tais formulações podem influenciar o estado físico, a estabilidade, a taxa de liberação in vivo, e taxa de depuração in vivo dos compostos administrados. As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser formuladas na forma de unidade de dosagem para facilidade de administra- ção e uniformidade da dosagem. A expressão "forma unitária de dosagem" refere-se tipicamente a uma unidade fisicamente distinta de IL-11 isolada, conjugado, isolado, ou combinação de IL-11 e conjugado apropriada para o paciente a ser tratado. Ficará entendido, no entanto, que a dosagem diária total das composições da presente invenção geralmente será decidida pelo médico assistente dentro do escopo de critério médico razoável.
Depois da formulação com um ou mais veículos ou excipientes fisiologicamente aceitáveis apropriados em uma dosagem desejada (ou do- sagens desejadas), as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser administradas a seres humanos ou outros mamíferos por qual- quer via adequada. Por exemplo, as composições farmacêuticas da presen- te invenção podem ser administradas por via oral, parenteral, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular ou subcutânea, dependendo da condição sen- do tratada (por exemplo, trombocitopenia resultante de destruição da medu- la óssea ou trombocitopenia resultante de lesão hepática) por administração de pelo menos um agente terapêutico.
Preparações injetáveis, por exemplo, suspensões aquosas ou oleaginosas injetáveis estéreis, podem ser formuladas de acordo com pro- cedimentos estabelecidos, por exemplo, usando agentes dispersantes ou umectantes adequados, e agentes suspensores. As preparações injetáveis estéreis também podem ser soluções, suspensões ou emulsões injetáveis estéreis em um diluente ou solvente parenteralmente aceitável atóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solven- tes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer1 solução de cloreto de sódio U.S.P. e isotônica. Além disso, óleos fixos esté- reis são convencionalmente empregados como solvente ou meio de sus- pensão. Para tanto pode ser empregado qualquer óleo fixo doce inclusive monoglicerídeos ou diglicerídeos sintéticos. Ácidos graxos tais como ácido oléico também podem ser usados na preparação de injetáveis.
As formulações injetáveis da invenção podem ser esterilizadas, por exemplo, por filtração através de um filtro retentor de bactérias, ou pela incorporação de agentes esterilizantes na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas ou dispersadas em água estéril ou outro meio injetável estéril antes de serem usadas.
Para prolongar o efeito de um fármaco, geralmente é desejável reduzir a absorção do fármaco de uma injeção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser obtido, por exemplo, através do uso de uma suspensão líquida de material cristalino ou amorfo com pobre solubilidade em água. A taxa de absorção do fármaco depende então de sua taxa de dissolução querpor sua vez, pode depender do tamanho do cristal e da forma cristalina. Alternativa- mente, a absorção retardada de uma forma de fármaco administrada por via parenteral é obtida por dissolução ou suspensão do fármaco em um veículo oleoso. Formas de depósito injetáveis são feitas por formação de matrizes microencapsuladas do fármaco em polímeros biodegradáveis tais como poli- lactídeo-poliglicolídeo. Dependendo da proporção de fármaco para polímero e da natureza do polímero particular empregado, a taxa de liberação do fár- maco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem poli(ortoésteres) e poli(anidridos). Formulações de depósito injetá- veis também podem ser preparados por aprisionamento do fármaco em Ii- possomas ou microemulsões que são compatíveis com os tecidos do corpo.
Formas de dosagem líquidas para administração oral incluem, porém sem limitação, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xa- ropes e elixires farmaceuticamente aceitáveis. Além dos ingredientes ativos, as formas de dosagem líquidas podem conter diluentes inertes comumente usados na técnica tais como, por exemplo, água ou outros solventes, agen- tes solubilizantes e emulsificantes tais como álcool etílico, álcool isopropílico etil carbonato, etil acetato, álcool benzílico, benzil benzoato, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, dimetilformamida, óleos (em particular óleos de algodão, amendoim, milho, germe, oliva, rícino, e gergelim), glicerol, álcool tetrahidro- furfurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitana, e mistu- ras dos mesmos. Além de diluentes inertes, as composições orais também podem incluir adjuvantes tais como agentes umectantes, agentes emulsifi- cantes e suspensores, agentes adoçantes, flavorizantes, e perfumantes.
Formas de dosagem sólidas para administração oral incluem cápsulas, comprimidos, pílulas, pós, e grânulos. Nestas formas de dosagem sólidas, o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um excipien- te ou veículo farmaceuticamente aceitável inerte tal como citrato de sódio ou fosfato dicálcico e/ou (a) cargas ou extensores tais como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol, e ácido silícico; (b) aglutinantes tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidinona, sa- carose, e acácia; (c) umectantes tais como gliceroí; (d) agentes desintegran- tes tais como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos, e carbonato de sódio; (e) agentes retardado- res de solução tais como parafina, (f) aceleradores de absorção tais como compostos de amônio quaternário; (g) agentes umectantes tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de gliceroí; (h) absorventes tais como caulina e bentonita; e (i) lubrificantes tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, Iauril sulfato de só- dio, e misturas dos mesmos. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, a forma de dosagem também pode compreender agentes tamponantes.
Composições sólidas de tipo similar também podem ser empre- gadas com cargas em cápsulas de gelatina mole e dura usando excipientes tais como lactose ou açúcar lácteo assim como polietileno glicóis de alto pe- so molecular e similares. As formas de dosagem sólidas como comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas, e grânulos podem ser preparadas com revesti- mentos e envoltórios tais como revestimentos entéricos e similares revesti- mentos bem-conhecidos na técnicatura de formulação farmacêutica. Elas podem opcionalmente conter agentes opacificantes e também podem ter uma composição tal que liberam os ingredientes ativos apenas, ou preferen- cialmente, em uma certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de maneira retardada. Exemplos de composições de revestimento que podem ser usa- das incluem substâncias poliméricas e ceras. Composições sólidas de tipo similar também podem ser empregadas com cargas em cápsulas de gelatina mole e dura usando excipientes tais como lactose ou açúcar lácteo assim como polietileno glicóis de alto peso molecular e similares.
Os compostos ativos (por exemplo, IL-11 e/ou um ou mais con- jugados) também podem estar em forma microencapsulada com um ou mais excipientes como observado acima. As formas de dosagem sólidas como comprimidos, drágeas, cápsulas, pílulas, e grânulos podem ser preparadas com revestimentos e envoltórios tais como revestimentos entéricos, revesti- mentos para controle da liberação e similares revestimentos bem- conhecidos na técnica de formulação farmacêutica. Nestas formas de dosa- gem sólidas o composto ativo pode ser misturado com pelo menos um dilu- ente inerte tal como sacarose, Iactose ou amido. Tais formas de dosagem também podem compreender, como é comum na prática, substâncias adi- cionais que não diluentes inertes, por exemplo, lubrificantes de tabletagem e similares adjuvantes de tabletagem tais como estearato de magnésio e celu- lose microcristalina. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as formas de dosagem também podem compreender agentes tamponantes. Elas po- dem opcionalmente conter agentes opacificantes e também podem uma composição tal que elas liberam os ingredientes ativos somente, ou prefe- rencialmente, em uma certa parte do trato intestinal, opcionalmente, de ma- neira retardada. Exemplos de composições de revestimento que podem ser usadas incluem substâncias poliméricas e ceras. B. Kits
Em ainda um outro aspecto, a presente invenção fornece paco- tes ou kits farmacêuticos compreendendo um ou mais recipientes (por e- xemplo, frascos, ampolas, tubos de ensaio, balões ou garrafas) contendo um ou mais componentes das composições farmacêuticas da invenção, por exemplo, possibilitando a administração simultânea ou seqüêncial da inter- leucina-11 e dos conjugados.
Em certas modalidades, um kit da invenção inclui um ou mais agentes terapêuticos aprovados adicionais para uso como uma terapia combinada (por exemplo, uma ou mais fármacos anticâncer descritos aci- ma). Opcionalmente associada a estes recipientes pode vir um aviso no formato determinado por um órgão governamental regulador da produção, uso ou venda de produtos farmacêuticos, aviso este que indica a aprovação do parte do órgão para produção, uso ou venda para administração huma- na.
Os diferentes componentes podem ser fornecidos em forma só- lida (por exemplo, liofilizada) ou líquida. Cada componente geralmente será adequado na quantidade contida em seu respectivo recipiente ou oferecido em uma forma concentrada. Os kits também podem incluir meios para a re- constituição dos componentes liofilizados. Os recipientes individuais do kit são de preferência mantidos bem-guardados para venda comercial.
Exemplos
Os exemplos a seguir descrevem alguns modos preferidos de fa- zer e praticar a presente invenção. No entanto, deve ficar entendido que es- ses exemplos são ilustrativos apenas e não pretendem limitar o escopo da invenção. Além disso, a menos que a descrição em um exemplo esteja a- presentada no tempo passado, o texto, assim como o resto do relatório, não sugere que as experiências tenham sido efetivamente realizadas nem que os dados tenham sido efetivamente obtidos.
Exemplo 1: Efeito da IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC- 544 em camundongos nus
Desenho Experimental:
O efeito da IL-11 (NEUMEGA®) sobre a trombocitopenia induzi- da por CMC-544 está mostrado no presente exemplo. A dose inicial de IL-11 foi administrada i.p. diariamente (250 mg/kg) começando até 2 dias antes, ou BID (125 mg/kg) começando até 8 horas depois da administração de CMC-544 (considerado dia 0). A IL-11 foi dada diariamente por até 8 dias após a administração de CMC-544. No dia O, os camundongos foram mistu- rados para obter valores de plaquetas da linha basal e então receberam veí- culo ou CMC-544 a 4 mg/camundongo i.p. Doses mais altas ou mais baixas de CMC-544 também foram administradas. Sangue foi coletado em vários ocasiões até 3 dias depois da administração do fármaco.
Procedimentos:
Uma agulha calibre 25 foi inserida na veia terminal do camun- dongo e em seguida retirada permitindo a passagem de uma gota de san- gue. Uma amostra de 5 μΙ de sangue foi coletada para análise. Os valores das plaquetas foram quantificados usando um contador de partículas Beck- man Coulter Z1 de limiar duplo (Fullerton, CA). Os valores limiares foram estabelecidos para medir as plaquetas dos camundongos segundo as espe- cificações do fabricante.
Como mostrado nas figuras 1 e 2, a administração de IL-11 antes da admi- nistração de CMC-544 previne a redução induzida por CMC na contagem de plaquetas em camundongos nus. Exemplo 2: Efeitos da IL-11 sobre a trombocitopenia induzida por CMC- 544 em macacos A - Primeiro estudo Desenho Experimental:
Dez (10) macacos (macacos cinomolgos) foram misturados ini- cialmente no dia 9 para selecionar 8 (oito) deles com os valores sangüíneos mais normais para serem colocados em estudo. Os macacos selecionados foram divididos em 2 grupos de 4 cada. Um grupo de macacos de testes foi pré-tratado com IL-11 por 5 dias antes de receber o CMC-544. O outro gru- po de macacos (ou macacos de controle) foi tratado com o veículo de con- trole solução salina estéril. Isto forneceu o controle apropriado para o es- tresse envolvido na aplicação de IL-11 aos macacos com a finalidade de discernir entre os potenciais efeitos colaterais do veículo e/ou da IL-11 (isto é, efeitos sobre parâmetros sangüíneos ou hematológicos) se eles fossem ocorrer. Ambos os grupos receberam CMC-544 no dia 1. A administração de IL-11 ao grupo de teste também ocorreu no dia de e continuou por 4 dias após a administração de CMC-544. O grupo de teste recebeu um total de 10 doses de IL-11. Ambos os grupos de macacos foram monitorados por 6 dias depois do CMC-544 quando então sofreram eutanásia.
Sangue foi coletado para análise no dia -11 (pré-teste), no dia -5 (época da primeira administração de IL-11), no dia 1 (época da administra- ção de CMC-544), nos dias 3, 4, 5 (época do nadir de plaquetas para o CMC-544), e no dia 7 (fim do estudo). Para cada dia que requer a coleta de uma amostra de sangue e administração de fármaco, o sangue foi coletado antes da administração de IL-11 ou CMC-544. No dia 1, a IL-11 foi adminis- trada imediatamente depois da administração do CMC-544.
Mais especificamente, o grupo de teste de macacos foi subme- tido aos seguintes procedimentos: no dia -11: coleta de 6 ml de sangue; no dia -5: coleta de 2 ml de sangue, administração de IL-11; no dia -4: adminis- tração de IL-11; no dia -3: administração de IL-11; no dia -2: administração de IL-11; no dia -1: administração de IL-11; no dia 1 (coleta de 2 ml de san- gue, administração de IL-11 e CMC-544); no dia 2: administração de IL-11; no dia 3: coleta de 2 ml de sangue, administração de IL-11; no dia 4: coleta de 6 ml de sangue, administração de IL-11; no dia 5: coleta de 2 ml de san- gue, administração de IL-11; no dia 7: coleta de 6 ml de sangue, eutanásia, e necrópsia.
Procedimentos:
Administração do fármaco: IL-11 foi administrada a 125 mg/kg (como uma solução) por injeção subcutânea. A IL-11 foi reconstituída fresca com água estéril e administrada dentro de 3 horas da reconstituição. O vo- lume da dose foi de 0,25/kg. A IL-11 foi administrada depois de coletadas todas as amostras de sangue programadas. O CMC-544 foi administrado a 25 mg/kg (dose baseada no teor de caliqueamicina DMH) por via intraveno- sa como uma solução. O volume da dose foi de 1 ml/kg. Os macacos foram anestesiados com cetamina (10 mg/kg) antes da injeção de iv de CMC-544 através de um cateter de retenção. O CMC-544 foi administrado depois de coletadas todas as amostras de sangue programadas e imediatamente an- tes da administração da IL-11.
Coletas de amostra de sangue: Nos dias -11, 4 e 7, um total de 6 ml de sangue foram coletados de acordo com o seguinte procedimento: 3 ml foram coletados em um tubo de ponta vermelha (soro) para análise quí- mica clínica e 3 ml em um tubo de ponta da cor de alfazema (EDTA anticoa- gulante) para CBC (contagem sangüínea completa). Nos dias -5, 1, 3, e 5, 2 ml de sangue tratado com EDTA (em tubos de ponta da cor de alfazema) foram coletados para determinação das plaquetas. O sangue total coletado foi de 8 ml na primeira semana, 12 ml na segunda semana, e 6 ml na terceira semana. O volume de sangue total de um macaco está estimado em 5,4% do peso corporal (54 ml/kg). Portan- to, os macacos pesando > 2,5 kg tiveram menos de 10% do volume de san- gue retirados por semana.
III Efeitos:
Os macacos foram monitorados diariamente quanto à saúde e um veterinário da equipe era informado da condição dos mesmos caso fos- sem observados efeitos desfavoráveis. 0"consumo de comida foi monitora- do diariamente.
IL-11 (125 mg/kg s.c.) já fora previamente administrada aos ma- cacos sem relato de efeitos adversos (F.J. Schlerman et al., "The effect of rhlL-11 on Platelet Aggregation in vitro and ex vivo following Subcutaneous Administration to Non-Human Primates for 14 Days", Genetics Institute Re- port n° P98034-14; A.G. Bree et al., "Thrombopoietic Activity of Recombinant Human lnterleukin-11 Alone or in Combination with Recombinant Human Granulocyte-Colony Stimulating Factor in a Novel Myelosuppressed Non- Human Primate Model", Genetics Institute Report η° P99029-14; A.G. Bree et al., "Thrombopoietic Activity of a Normal or Short Course of Recombinant Human lnterleukin-11 in Combination with a Normal or Delayed Course of Reeombinant Human Granulocyte-Colony Stimulating Factor in a One-Cycle Myelosuppressed Non-Human Primate Model, Genetics Institute Report n9 P99030-14).
Estudos anteriores com CMC-544 à dose de 25 mg/kg reporta- ram consumo reduzido de comida, êmese (75% dos macacos no dia 4 pós- administração do CMC-544) e alterações fecais tais como fezes líquidas, mucóides, moles e/ou reduzidas (do dia 4 ao dia 7 em > 50% dos macacos). Frutas frescas e agentes antidiarréicos (Kao-pectato) foram oferecidos no caso de inapetência e alterações fecais, respectivamente. Os macacos que apresentaram efeitos colaterais não previstos (diferentes dos 3 sintomas mencionados acima) foram encaminhados ao veterinário assistente para consulta. Eutanásia:
Os macacos foram abatidos por uma superdosagem de barbitú- ricos (100 mg/kg i.v.).
Necrópsia:
Amostras de tecidos post-mortem do fígado, da medula óssea (esternebra), do pulmão (uma seção de cada lado do pulmão), e do baço foram coletadas e fixadas em 10% de formalina. Esfregaços da medula ósse foram coletados de uma costela aberta.
Hematologia:
Os parâmetros de hematologia e coagulação foram avaliados duas vezes nos dias 1, 3, 4, 5 e 7 da fase de pré-teste e da fase de adminis- tração. O volume médio de plaquetas (MPV) foi avaliado somente durante esses intervalos da fase de administração. Nos animais que receberam so- mente CMC-544, alterações relacionadas ao composto em animais individu- ais em relação aos seus valores de pré-teste ocorreram nas contagens de plaquetas (PLT), neutrófilos (NEU), monócitos (MONO), e eosinófilos (EOS). Nos animais que receberam rhulL-11 (NEUMEGA®), alterações relacionadas à rhulL-11 foram observadas em parâmetros da massa de células vermelha (hemoglobina, HGB, hematócito, HCT, e contagem de células sangüíneas vermelhas, RBC).
Estas diminuições em PLT (31% a 69% em relação à primeira contagem no pré-teste) foram observadas em todos os animais que só re- ceberam CMC-544 nos dias 3, 4, 5 e (exceto para um animal) no dia 7 da fase de administração, com o nadir geralmente observado no dia 4 ou 5 a- pós a administração de CMC-544. Nesses mesmos animais, ligeiros aumen- tos em PLT (30% a 126%) no dia 1 da fase de administração precederam estas diminuições subseqüentes. Ao contrário, todos os macacos que rece- beram rhulL-11 antes do CMC-544, tiveram o PLT ligeiramente a modera- damente aumentado em todos os intervalos da fase de administração (48% a 272%), em relação ao primeiro valor do pré-teste). Estes aumentos tive- ram seu pico no dia 4, 5 ou 7 nesses animais. Estas diferenças em PLT en- tre grupos dão suporte ao fato de que pré-tratamento com rhulL-11 previne ou melhora as diminuições na contagem de plaquetas associadas a CMC- 544.
Nos machos que receberam pré-tratamento com rhuIL-11, o MPV em geral também foi maior em todos os intervalos da fase de adminis- tração que nos machos que receberam somente CMC-544. No entanto, este padrão não foi observado na única fêmea que recebeu pré-tratamento com rhuIL-11 comparada com aquele que recebeu somente CMC-544; portanto, não foram tiradas conclusões referentes aos efeitos associados ao compos- to sobré o MPV.
Em todos os animais que receberam apenas CMC-544, aumen- tos brandos a moderados no NEU acima das contagens pré-teste (85% a 212% em relação ao primeiro valor de pré-teste) foram observados em um ou mais intervalos da fase de administração. Igualmente, aumentos acima das contagens pré-teste em MONO (39% a 386%) e EOS (50% a 538%, em relação ao primeiro valor de pré-teste) ocorreram durante a fase de adminis- tração nesses mesmos animais. Ao contrário, aumentos na fase de adminis- tração acima dos valores de pré-teste ocorreram em apenas 1 de 4 animais que receberam pré-tratamento com rhuIL-11, (a única fêmea) em NEU (164% a 284%) e EOS (143%) no dia 4 e/ou 5, e em 2 de 4 animais (macho ou fêmea) que receberam pré-tratamento com rhuIL-11 em MONO (93% a 329%). Estas diferenças entre os grupos na incidência de contagens au- mentadas de leucócitos sugerem melhora ou prevenção parcial de uma res- posta inflamatória em animais que receberam rhuIL-11 antes do CMC-544. A alteração em NEU foi associada à hematopoiese ligeiramente aumentada extramedularmente no baço em alguns animais individuais que receberam apenas CMC-544.
Em todos os animais que receberam rhuIL-11 antes do CMC- 544, diminuições em parâmetros de massa de células vermelhas (hemoglo- bina, hematócrito, contagem de células sangüíneas vermelhas) foram ob- servadas em quase todos a todos os intervalos da fase de administração (machos: 12% a 32%; fêmea: 22% a 42% em relação aos primeiros valores de pré-teste). Essas alterações em geral ultrapassaram aquelas em quase todos os intervalos para os receberam somente CMC-544 e eram um efeito previsto da alta dosagem de rhulL-11 em macacos. Não foram observadas diferenças significativas nas contagens de reticulócitos ou nos índices de células vermelhas entre os animais que receberam CMC-544 com ou sem rhulL-11, e nenhuma correlação entre essas diminuições na massa de célu- las vermelhas e hipocelularidade histológica da medula óssea.
As diferenças em outros parâmetros hematológicos nos animais que receberam rhulL-11 comparados com animais que receberam apenas CMC-544 não dignas de nota devido aos seus valores absolutos e/ou gran- deza bastante coincidentes.
Química clínica:
Os parâmetros da química sérica foram avaliados uma vez no pré-teste e nos dias 4 e 7. Nos animais que receberam apenas CMC-544, ocorreram aumentos associados ao composto (em relação aos valores de pré-teste) na alanina aminotransferase (ALT). Em um animal que recebeu apenas CMC-544, e em todos os animais que receberam rhulL-11 (NEU- MEGA®), também ocorreram aumentos na fosfatase alcalina (AP); estes aumentos associados ao composto foram considerados parcialmente asso- ciados ao pré-tratamento com rhull_-11. Em todos os animais, ocorreram diminuições na albumina (ALB); a grandeza destas diminuições foi consis- tentemente maior com e relacionada à administração de rhulL-11.
Os aumentos em ALT (68% a 750%) ocorreram em 3 de 4 ani- mais que receberam apenas CMC-544. Estes aumentos ocorreram nos dias 4 e/ou 7 em relação à concentração de pré-teste de cada animal e sugeri- ram lesão hepática associada a CMC-544 mínima branda. Dando suporte à ocorrência de lesão hepática e correlacionando com as alterações em ALT nestes animais foram necrose hepatocelular multifocal branda microscópica (principalmente centrilobular) e necrose celular simples no macaco com o maior aumento em ALT (8,5 vezes, fêmea), e necrose celular simples bran- da em um outro animal (macho) com um leve aumento (1,7 vez) em ALT. A ocorrência destes aumentos em ALT nos animais que receberam apenas CMC-544 e não naqueles que receberam pré-tratamento com rhulL-11 deu suporte limitado (devido ao pequeno número de animais para avaliar) à me- lhora de lesão hepática com pré-tratamento com rhull_-11.
Aumentos em AP ocorreram em ambos os intervalos da fase de administração (em relação às concentrações de pré-teste) em um animal que recebeu CMC-544 (122% a 242%) e em todos os animais que recebe- ram pré-tratamento com rhulL-11 (276% a 589%). A maior incidência e grandeza de aumento de AP nos animais que receberam rhulL-11 e nos a- nimais que receberam CMC-544 indicou que alteração está parcialmente associada à rhulL-11. Aumentos similares em AP nos macacos subseqüente à administração de rhulL-11 foram anteriormente observados.
As diminuições em ALB que foram brandas a moderadas (17% a 45%) ocorreram em ambos os intervalos da fase de administração em to- dos animais que receberam pré-tratamento com rhulL-11. Estas diminuições correspondiam aos aumentos na massa de células vermelhas nesses ani- mais, como anteriormente reportado em macacos que receberam rhulL-11. Ao contrário, diminuições em ALB ocorreram em apenas alguns animais que receberam apenas CMC-544, e em um ou ambos os intervalos da fase de administração e foram leves a moderados (até 24%). A maior incidência e grandeza dessas diminuições nos animais que receberam rhulL-11 em rela- ção àqueles que receberam apenas CMC-544 indicou que diminuição está parcialmente associada à rhulL-11 e notavelmente exacerbada ou suplanta- da com a administração de rhulL-11 nos animais que receberam CMC-544.
As diferenças em outros valores da química sérica nos animais que receberam o composto comparados com os controles foram atribuídas à variação randômica devido a sua pequena grandeza, direção, ausência de padrão associado à dosagem, e/ou coincidência geral dos valores individu- ais.
B - Segundo estudo
Foi realizado um segundo estudo, cujo Desenho Experimental está apresentado na Tabela 1. Em resumo, foram usadas 8 macacas, 4 das quais receberam uma única dose i.v. de CMC-544 (no dia 1; 25 μg/kg) e as outras 4 receberam uma única dose i.v. de CMC-544 (no dia 1; 25 μg/kg) e 5 doses subcutâneas de NEUMEGA (125 μg/kg/dia) nos dias 1-5. Foram reali- zados estudos hematológicos, da maneira descrita acima, duas vezes pré- estudo e nos dias de administração 1 a 8, dia 10, dia 12 e dia 14 (sempre antes da administração de NEUMEGA). Foram efetuados exames de coagu- lação e química sérica, da maneira descrita acima, duas vezes pré-estudo e nos dias de administração 7 e 14.
A figura 12 mostra as alterações nas contagens de plaquetas observadas em ambos os grupos de macacos. O aparecimento e a grande- za das diminuições das contagens de plaquetas se mostraram equiparáveis entre os animais que receberam CMC-544 com ou sem NEUMEGA. O nadir ocorreu no dia 3 ou 4 pós-dose (apenas CMC-544: 70% a 87%; CMC-544 + NEUMEGA: 75% a 84% abaixo dos último valor de pré-teste). Resolução essencialmente completa destas diminuições (dentro de 90% do segundo valor de pré-teste) ocorreu no dia 7 ou 8 em todos os animais que recebe- ram CMC-544 + NEUMEGA, mas somente em um animal que recebeu ape- nas CMC-544.
Tabela 1. Desenho Ex perimental
<table>table see original document page 58</column></row><table>
a. Equivalentes de caliqueamicina (~ 82,5 μg/mg de proteína).
b. conversão mg/m2 FDA: http://www.fda.gov/cder/cancer/animalframe.htm
c. Volume da dose 1 ml/kg (CMC-544 administrado no dia 1, ~9 a.m).
d. 0,025 ml/kg de NEUMEGA administrado uma vez ao dia (~ 3 p.m), dias 1- 5.
Um ligeiro aumento no AST foi observado no dia 14 em todos os animais, e no dia 7 na maioria dos animais que receberam apenas CMC- 544 (39 - 124% acima do último valor do pré-estudo) (vide figura 13). O au- mento correspondente em ALT ocorreu em 2 desses quatro animais (82%- 198%). Os aumentos nessas enzimas séricas associadas ao fígado que fo- ram de grandeza em geral menor ocorreram nesses intervalos em 1 ou 2 dos 4 animais que receberam CMC-544 + NEUMEGA (AST: 35-79%; ALT: 66%).
Uma diminuição leve a moderada na contagem de reticulócitos foi observada em todos os animais (8-56%) em geral nos dias 3-5. Estas diminuições foram associadas a diminuições leves a moderadas na massa de células vermelhas (até 22%) começando no dia 4. A incidência e o apa- recimento entre os animais que receberam apenas CMC-544 e os animais que receberam CMC-544 + NEUMEGA foram similares em termos de gran- — deza, e portanto, são consideradas principalmente associadas ao CMC-544 (assim como parcialmente associadas à coleta de sangue).
Um aumento leve a moderado em GLOB foi observado para ambos os grupos de animais (apenas CMC-544: 17-42%; CMC-544 + NEU- MEGA: 19-52%) tanto no dia 7 quanto no dia 14 sem um padrão de resolu- ção consistente em qualquer dos grupos.
Um aumento moderado transitório em fibrinogênio foi observado por volta do dia 7 em todos os animais que receberam CMC-544 + NEU- MEGA (197% a 327% acima dos valores de pré-estudo. Estes aumentos em fibrinogênio mostraram resolução parcial rápida em relação aos valores de pré-teste no dia 14. Aumentos equiparáveis em fibrinogênio foram observa- dos em estudos anteriores em macacos que receberam NEUMEGA. Estes aumentos foram atribuídos à reação de fase aguda transitória induzida pela IL-11.
Uma leve diminuição em albumina (17% a 23%) foi observada no dia 7 em todos os animais que receberam NEUMEGA e uma resolução parcial ocorreu por volta do dia 14. Esta leve diminuição é atribuída a uma resposta de fase aguda transitória. Embora uma expansão do volume de plasma também possa ter contribuído.
Os resultados obtidos neste segundo estudo mostraram que a resolução das diminuições da contagem de plaquetas associadas ao CMC- 544 ocorreram um pouco mais cedo nos macacos que receberam NEUME- GA por 5 dias começando 6 horas depois da única dose de CMC-544, do que na maioria dos animais que receberam apenas CMC-544. Os aumentos associados ao CMC nas enzimas séricas associadas ao fígado, AST e ALT ocorreram com uma grandeza e incidência um pouco menor nos animais que receberam CMC-544 + NEUMEGA do que nos animais que receberam apenas CMC-544. As alterações associadas ao NEUMEGA (diminuição em albumina, aumento transitório em fibrinogênio) observadas no presente es- tudo foram consistentes com aquelas já relatadas.
Exemplo 3: Efeito de conjugados de caliqueamicina sobre os níveis das plaquetas no camundongo Desenho Experimental:
No dia O, os camundongos foram misturados para obter valores de plaquetas da linha basal. Os camundongos então receberam veículo, CMC- 544 ou outros conjugados de caliqueamicina a 4 mg/camundongo i.v. ou i.p. Doses mais altas ou mais baixas também foram administradas. Sangue foi coletado em 72 horas (dia 3), 96 horas (dia 4), e 168 horas (dia 8) depois da administração do fármaco. Procedimentos:
Uma agulha calibre 25 foi inserida na veia terminal do camun- dongo e em seguida retirada permitindo a passagem de uma gota de san- gue. Uma amostra de 5 μl de sangue foi coletada para análise. Sangue foi coletado no dia O, antes da administração do fármaco, e nos dias 3, 4, e 8, para um total de 4 coletas de 5 μΙ cada (total de 20 μl).
Aplicação: CMC-544 ou outros conjugados de caliqueamicina serão administrados uma vez por uma via intraperitoneal ou intravenosa a uma dose de 4 μg de caliqueamicina DMH. O volume da dose será de 200 μl para qualquer das vias de administração.
Coleta de sangue: 5 μl de sangue serão coletadas da veia ter- minal.
Dor ou desconforto: não se prevê dor nem desconforto mas se ocorrerem, o veterinário assistente deverá ser consultado.
Toxicidade para o animal ou efeitos desfavoráveis: não foram observados efeitos tóxicos patentes do CMC-544 nos camundongos quando administrado a uma dose de 4 pg ou menos. Disposição dos animais:
O estudo será encerrado depois da coleta de sangue final no dia 8 após a administração do fármaco. Os camundongos abatidos por eutaná- sia por inalação de CO2.
Exemplo 4: Estudo de CMC-544 em pacientes com linfoma não-Hodgkin de células B (NHL)
CMC-544 é um agente quimioterapêutico direcionado por anti- corpo composto de um anticorpo monoclonal, que especificamente vetoriza o antígeno CD22, conjugado à caliqueamicina, um potente antibiótico anti- tumoral citotóxico. As células malignas da linhagem de linfócitos B maduros expressam CD22; CMC-544 pode ser útil para tratar linfomas de origem nas células B.
Métodos: uma experiência com aumento progressivo da dose, fase I, de CMC-544 está em andamento em pacientes com NHL de células B reinci- dente ou refratário em 13 partes da Europa e Estados Unidos. O CMC-544 é administrado por via intravenosa a cada 3-4 semanas a doses de 0,4, 0,8, 1,34, 1,8, e 2,4 mg/m2. Dados de segurança e farmacocinéticos de referên- cia e dados preliminares de eficácia (avaliados usando o "International Workshop to Standardize Response Criteria for NHL") estão sendo coleta- dos.
A aceitação de pacientes com qualquer tipo de NHL de células B, exceto com linfomas de Burkitt e linfoblásticos, é permitida na fase de aumento progressivo da dose (1 - 6 pacientes por grupo). Depois de identifi- cada a dose tolerada máxima (MTD), 15 pacientes com linfoma folicular e 15 pacientes com linfoma de células B grandes difusas serão admitidos em um grupo de MTD expandida.
Resultados: em junho de 2005, 34 pacientes (8 mulheres, idade média de 71 anos; 26 homens, idade média de 62 anos; número de tratamentos ante- riores, média 4, faixa 2-11) foram admitidos. O aumento progressivo da dose foi baseado no 1o ciclo de avaliações de segurança dos grupos de pa- cientes. As toxicidades limitadoras da dose (DTLs) foram reportadas para níveis de dose de 1,34 mg/m2 (trombocitopenia grau 4, 2/11 pacientes), 1,8 mg/m2 (hemorragia requerendo transfusão de plaquetas, 1/6 pacientes) e 2,4 mg/m2 (trombocitopenia grau 4, 1/6 pacientes; neutropenia grau 4 por 7 dias, 1/6 pacientes).
Assim, a MTD, o nível de dose antes daquele onde ocorreram = 33% de DTLs1 foi de 1,8 mg/m2. Os eventos adversos mais comuns associ- ados à fármaco (AEs, todos os graus) foram: trombocitopenia (65%), astenia (47%), náusea (41%), neutropenia (29%), exames de função hepática ele- vada (27%), anorexia (14%), e epistaxe (12%). AEs grau 3-4 que ocorreram com uma freqüência = 10% incluíram: trombocitopenia (38%), astenia (12%), e neutropenia (12%). O nadir da trombocitopenia foi de 9 ± 2 dias e as contagens de plaquetas foram recuperadas espontaneamente. Não foi reportado qualquer episódio importante de hemorragia. Nos níveis de dose de 1,8 e 2,4 mg/m2, os dados sugeriram um componente dose-dependente da recuperação de plaquetas para os níveis da linha basal e foram necessá- rios atrasos da dose entre doses sucessivas. As exposições ao CMC-544 e à caliqueamicina total no soro aumentaram com a dose. A depuração depois da 2a e 3a doses diminuíram aproximadamente 8 -14 vezes comparada com a 1a dose, e a meia-vida aumentou de aproximadamente 1 dia para 4 dias. Os dados disponíveis sugeriram uma associação de exposições a CMC-544 e/ou níveis de caliqueamicina totais de pico com diminuições nas contagens de plaquetas. Por conseguinte, os pacientes no grupo de MTD expandida receberam 1,8 mg/m2 de CMC-544 a intervalos de 4 semanas. Atividade antitumoral preliminar foi observada na maioria dos grupos. Respostas com- pletas e/ou parciais foram observadas nos grupos de 0,8 mg/m2 (1/3 pacien- tes), 1,34 mg/m2 (3/9 pacientes), 1,8 mg/m2 (2/5 pacientes), e 2,4 mg/m2 (2/5 pacientes), e nos 6 primeiros pacientes no grupo de MTD expandida (4/6 pacientes).
Exemplo 5: Comparação dos efeitos do CMC-544 e da carboplatina so- bre as plaquetas e a trombopoietina no camundongo
Veículo (PBS), carboplatina (125 mg/kg i.p.) ou CMC-544 (200 mg/kg i.p) foram, cada um deles, administrados a camundongos nus no dia 0. Sangue foi coletado da maneira descrita acima no dia 0, dia 4, dia 7, dia 11 e dia 13 para medir os níveis de plaquetas circulantes e de trombopoieti- na (TPO) circulante.
Como mostrado nas figuras 10 e 11, que apresentam os resul- tados obtidos nessas experiências, foi verificado que o CMC-544 causa trombocitopenia em camundongos com nadir no dia 3 ou 4 após o tratamen- to; ao passo que a carboplatina causa trombocitopenia com nadir no dia 10 ou 11 após o tratamento.
Sabe-se que quimioterapia convencional causa trombocitopenia acompanhada de níveis aumentos de trombopoietina (TPO) circulante. Nas presentes experiências, foi verificado que a administração de carboplatina causa níveis aumentos de trombopoietina (TPO) circulante ao passo que foi observada uma redução significativa nos níveis de TPO circulante no caso de CMC-544, sugerindo que o CMC-544 pode inibir a produção de TPO. A inibição mediada por CMC-544 da produção de TPO pode estar associada aos seus efeitos sobre a função hepática.
Exemplo 6: Trombocitopenia induzida por CMC-544 e sua melhora com o uso de Oprelvekin (NEUMEGA®)
CMC-544 demonstrou atividade antitumoral significativa em ex- periências pré-clínicas e clínicas em pacientes com Iinfoma não-Hodgkin B (B-NHL) (J.F. DiJoseph et ai, Blood, 2004, 103: 1807-1814; J.F. DiJoseph et ai, Clin. Câncer Res., 2004, 10: 8620-8629; J.F. DiJoseph et ai, Câncer Immunol. Immunother., 2005, 54: 11-24; J.F. DiJoseph et ai, Clin. Câncer Res., 2006, 12: 242-249; A Advani et al., Blood, 2005, 106: 230). Nessas experiências, trombocitopenia foi relatada como o evento adverso Iimitativo da dose mais comum. O presente estudo não clínico oferece introvisões na trombocitopenia observada associada ao tratamento com CMC-544 de paci- entes com B-NHL.
In vitro, o CMC-544 não se ligou nem causou agregação plaque- tária em plasma rico em plaquetas de origem humana ou murina. Quando administrado a camundongos, uma única dose de CMC-544 resultou em uma redução de 50% a 75% no número de plaquetas circulantes com um nadir no dia 3 ou 4. Os valores das plaquetas voltaram ao normal no máximo no dia 12. Efeitos similares também foram observados em macacos cino- molgos com nadires no dia 4 ou 5. O anticorpo anti-CD22 não conjugado, G5/44 (anticorpo lgG4 humanizado) não teve qualquer efeito sobre as pla- quetas circulantes. A trombocitopenia induzida por CMC-544 nos camun- dongos foi associada a uma redução concomitantes nos níveis circulantes de trombopoietina (TPO) com um nadir no dia 4. Ao contrário, tratamento com um agente quimioterapêutico citotóxico conhecido, carboplatina, causou trombocitopenia nos camundongos porém com um nadir no dia 11. Ao con- trário da trombocitopenia induzida por CMC-544, a trombocitopenia induzida por carboplatina foi associada a um aumento nos níveis de TPO circulante.
Pré-tratamento subcutâneo de camundongos com oprelvekin (NEUMEGA® / rhlL-11) (250 ug/kg) reduziu significativamente a dimensão da trombocitopenia associada a CMC-544. Quando avaliado em macacos cinomolgos, o pré-tratamento subcutâneo diário com oprelvekin (125 ug/kg) por 5 dias preveniu completamente a trombocitopenia associada a CMC-544 mas também suprimiu as elevações nas aminotransferases hepáticas séri- cas associadas ao tratamento com CMC-544 isolado. A administração con- corrente de oprelvekin com CMC-544 não conseguiu prevenir a trombocito- penia inicial mas acelerou a recuperação completa das contagens de pla- quetas até os níveis pré-tratamento e também suprimiu as elevações nas aminotransferases hepáticas séricas circulantes.
Este estudo fornece ainda evidências de que o uso profilático de oprelvekin pode melhorar a trombocitopenia induzida por CMC-544, aumen- tando potencialmente o benefício terapêutico do CMC-544 em pacientes com B-NHL.
Alguns dos resultados apresentados nesta seção foram apre- sentados no encontro anual da Sociedade Americana de Hematologia ("A- merican Society of Hematology"), 9-12 de dezembro de 2006, Orlando, Fl., no seguinte abstract: "Thrombocytopenia induced by CMC-544 and its ame- lioration using oprelvekin (NEUMEGA®/ recombinant human interleukin-11", de John F DiJoseph, Dana Walker, Maureen M Dougher, Doug C Armellino, Dave Clarke & Nitin K Damle. Outras modalidades
Outras modalidades da invenção tornar-se-ão aparentes para os especialistas na técnica a partir de uma consideração do relatório descritivo ou da prática da invenção descrita neste relatório. Espera-se que o relatório e os exemplos sejam como apenas como exemplificativos, o verdadeiro es- copo da invenção estando indicado pelas reivindicações a seguir.

Claims (66)

1. Método para aliviar trombocitopenia em um indivíduo, o mé- todo compreendendo uma etapa de: administrar uma quantidade terapeuti- camente eficaz de interleucina-11 ao indivíduo, em que a trombocitopenia é associada à administração ao indivíduo de um conjugado compreendendo uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, em que o indivíduo sofre de câncer ou de uma doença cancerosa.
3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a por- ção direcionadora compreende um anticorpo.
4. Método de acordo com a reivindicação 3, em que o anticorpo é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis Y1 um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combina- ções dos mesmos.
5. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o fár- maco citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.
6. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.
7. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.
8. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina.
9. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.
10. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.
11. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que inter- leucina-1 1 compreende interleucina-11 humana recombinante.
12. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a in- terleucina-1 1 é administrada antes da administração do conjugado.
13. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o re- ferido método previné, reduz, alivia ou detém a trombocitopenia no indiví- duo.
14. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a trombocitopenia é pelo menos em parte resultante de destruição da medula óssea.
15. Método de acordo com a reivindicação 14, em que a porção direcionadora compreende um anticorpo.
16. Método de acordo com a reivindicação 15, em que o anticor- po é um anticorpo"anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti- Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer com- binações dos mesmos.
17. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o fárma- co citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.
18. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.
19. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.
20. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina.
21. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.
22. Método de acordo com a reivindicação 14 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.
23. Método de acordo com a reivindicação 14, em que interleu- cina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.
24. Método de acordo com a reivindicação 14, em que a inter- leucina-11 é administrada antes da administração do conjugado.
25. Método de acordo com a reivindicação 14, em que o referido método previne, reduz, alivia ou detém a trombocitopenia que pelo menos em parte, é resultante de destruição da medula óssea.
26. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a trombocitopenia é pelo menos em parte resultante de lesão hepática.
27. Método de acordo com a reivindicação 26, em que a porção direcionadora compreende um anticorpo.
28. Método de acordo com a reivindicação 27, em que o anticor- po é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti- Lewis Y, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer com- binações dos mesmos.
29. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o fárma- CO-citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.
30. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.
31. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.
32. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y caliqueamicina.
33. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.
34. Método de acordo com a reivindicação 26 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.
35. Método de acordo com a reivindicação 26, em que interleu- cina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.
36. Método de acordo com a reivindicação 26, em que a inter- leucina-11 é administrada antes da administração do conjugado.
37. Método de acordo com a reivindicação 26, em que o referido método previne, reduz, alivia ou detém a trombocitopenia pelo menos em parte resultante de lesão hepática.
38. Método de acordo com a reivindicação 37, em que o referido método ainda previne, reduz, alivia ou detém uma lesão hepática no indiví- duo.
39. Método de acordo com a reivindicação 37, em que o referido método ainda previne, reduz, alivia ou detém uma inflamação associada à lesão hepática no indivíduo.
40. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de interleucina-11, pelo menos um conjugado cuja administração resulta em trombocitopenia, e pelo menos um veículo fisiolo- gicamente aceitável, em que o conjugado compreende uma porção direcio- nadora e um fármaco citotóxico.
41. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que a porção direcionadora compreende um anticorpo.
42. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 41, em que o anticorpo é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combinações dos mesmos.
43. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o fármaco citotóxico é uma caliqueamicina, um derivado de calique- amicina, uma esperamicina, ou um derivado de esperamicina.
44. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD22- caliqueamicina.
45. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD33- caliqueamicina.
46. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y- caliqueamicina.
47. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.
48. Método de acordo com a reivindicação 26 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.
49. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que interleucina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.
50. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40 ou 49, em que a interleucina-11, o pelo menos um conjugado, e um veículo fisiologicamente aceitável são combinados como uma ou mais preparações para administração simultânea ou seqüêncial da interleucina-11 e do pelo menos um conjugado.
51. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que a administração da referida composição a um indivíduo previne, re- duz ou detém a trombocitopenia no indivíduo.
52. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 51, em que o indivíduo sofre de câncer ou de uma doença cancerosa.
53. Composição farmacêutica de aeordo com a reivindicação 40, em que a trombocitopenia produzida pela administração do pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea.
54. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 40, em que a trombocitopenia produzida pela administração de pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de lesão hepática.
55. Kit compreendendo: interleucina-11; e pelo menos um conjugado cuja administração a um indivíduo resulta em trombocitopenia no indivíduo, em que o conjugado compreende uma porção direcionadora e um fármaco citotóxico.
56. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que a porção dire- cionadora compreende um anticorpo.
57. Kit de acordo com a reivindicação 56, em que o anticorpo é um anticorpo anti-CD22, um anticorpo anti-CD33, um anticorpo anti-Lewis, um anticorpo anti-5T4, um anticorpo anti-CD30, ou quaisquer combinações dos mesmos.
58. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o fármaco ci- totóxico é uma caliqueamicina, um derivado de caliqueamicina, uma espe- ramicina, ou um derivado de esperamicina.
59. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD22-caliqueamicina.
60. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-CD33-caliqueamicina.
61. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-Lewis Y-caliqueamicina.
62. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que o conjugado é um conjugado de anticorpo anti-5T4-caliqueamicina.
63. Método de acordo com a reivindicação 55 em que o conju- gado é um conjugado de anticorpo anti-CD30-caliqueamicina.
64. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que interleucina-11 compreende interleucina-11 humana recombinante.
65. Kit de acordo-com a reivindicação 55, em que a trombocito- penia produzida pela administração do pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de destruição da medula óssea.
66. Kit de acordo com a reivindicação 55, em que a trombocito- penia produzida pela administração do pelo menos um conjugado resulta, pelo menos em parte, de lesão hepática.
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